JP6731405B2 - ウイルス粒子を用いた癌免疫療法 - Google Patents
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Description
本出願は、2014年11月7日出願の米国特許仮出願第62/076,543号、2015年1月26日出願の米国特許仮出願第62/107,617号、および2015年5月11日出願の米国特許仮出願第62/159,389号の優先権を主張するものであり、それらの仮出願は、参照により本明細書に組み入れられる。
本発明は、米国国立衛生研究所によって授与されたNIHトレーニング・グラントNo
.5T32AI007363−22、NIHトレーニング・グラントNo.T32 HL105338、およびグラントNo.NIH 1 U54 CA151662、ならびに米国国立科学財団によって授与されたグラントNo.CMMI 1333651の下、米国政府の支援によってなされた。米国政府は、本発明において特定の権利を有する。
転移癌は、原発組織にかかわらず、一様に予後不良である。従来の化学および放射線療法は、後期疾患にはほとんど無効である。腫瘍免疫学の新興分野は、新しい治療選択を提起している。免疫チェックポイント阻害剤、キメラ抗原受容体細胞療法、および腫瘍関連抗原癌ワクチンなど、抗腫瘍免疫の誘導を探求する新規治療薬は、有望であるが、癌の免疫療法の開発は初期段階にあり、免疫療法は、他の癌療法と同じく、最適な効力のために組み合わせるのが相応しいようである。各癌のタイプは、特有であるが、多くの固形腫瘍は、肺に転移する。診断的切開を制限した選択肢が、転移の疑われる部位または確認された腫瘍への免疫刺激性試薬の直接適用である。このアプローチ、つまりインサイチュ・ワクチン療法は、局所微小環境を調整することができ、T細胞チェックポイント阻害抗体などの治療と同様に、免疫抑制を緩和して、腫瘍によって発現される抗原に対して抗腫瘍免疫を強化することができる。
本発明者らは、本来は肺感染性疾患モデルで観察される、ウイルスおよびウイルス様粒子、ならびにそれらの特有の治療特性が新しい適用例、つまり肺癌などの癌の処置に用いられ得るか否かを検討した。原発性肺癌は、米国では、乳癌に次ぐ二番目に多い癌である。さらに、乳房、膀胱、結腸、腎臓、黒色腫、および前立腺などの他の主要な癌のほとんどは、肺に転移することが多い。米国では黒色腫の罹患率が上昇しており、転移性疾患では予後不良で現在、5年生存率が10%未満であるため、それらの研究は黒色腫に集中している。Flaherty et al, N Engl J Med., 363(9):809−19 (2010)。本発明者らは、抗腫瘍免疫介在性の効力が、乳癌、卵巣癌、および結腸癌のモデルに適用されるか否か、原発部位および転移部位の両方が処置されるか否かについても研究した。
他に定義されていなければ、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって共通して理解されるものと同じ意義を有する。本発明の記載で用いられる用語法は、特定の実施形態のみを記載しており、本発明の限定を意図するものではない。本明細書で言及された全ての発行物、特許出願、特許、および他の参考資料は、全体として参照により組み入れられる。
本発明の記載および添付の特許請求の範囲で用いられる単数形「a」、「an」および「the」は、他に明確な断りがなければ、複数形も包含するものとする。加えて、エンドポイントによる数値範囲の列挙は、その範囲内に含まれる全ての数値を包含する(例えば、1〜5は、1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5などを包含する)。
本発明は、ウイルスまたはウイルス様粒子の治療有効量を、治療を必要とする対象に投与することによる、該対象における癌を処置する方法を提供する。理論に束縛されるのを望むものではないが、ウイルス粒子は、癌への免疫応答を誘発することから、抗癌作用を有すると思われる。「癌」または「悪性疾患」は、同義的用語として用いられ、細胞の未制御で異常な増殖、罹患した細胞を局所に、または血流およびリンパ系を通して身体の他の部分に伝播する(即ち、転移する)能力、ならびに複数の特徴的な構造的および/または分子的特性のいずれか、を特徴とする複数の疾患のいずれかを指す。「癌細胞」は、複数のステップでの新生物発達の早期、中間、または進行段階の細胞を指す。新生物発達の早期、中間および進行段階の特性は、顕微鏡検査法を利用して記載されてきた。新生物発達の三段階それぞれでの癌細胞は一般に、転座、反転、欠失、同腕染色体、モノソミー、および過剰染色体をはじめとする異常な核型を有する。癌細胞は、「過形成細胞」、即ち悪性発達の早期段階にある細胞、「形成異常細胞」、即ち新生物発達の中間段階にある細胞、および「新生物細胞」、即ち新生物発達の進行段階にある細胞を包含する。癌の例は、肉腫、乳癌、肺癌、脳癌、骨癌、肝臓癌、腎臓癌、結腸癌および前立腺癌である。幾つかの実施形態において、該ウイルス粒子は、非限定的に黒色腫、乳癌、結腸癌、肺癌、および卵巣癌からなる群から選択される癌を処置するのに用いられる。幾つかの実施形態において、該ウイルス粒子は、肺癌を処置するのに用いられる。吸入が、肺癌を処置する際にウイルスまたはウイルス様粒子を投与する好ましい方法である。しかし、吸入されたウイルス粒子は、全身免疫応答を刺激する能力の結果として、肺以外の癌を処置することができる。例えば幾つかの実施形態において、該ウイルス粒子は、癌が生じた最初の部分以外の1つまたは複数の部位に伝播した転移癌を処置するのに用いられる。他の実施形態において、該ウイルスまたはウイルス様粒子は、他の組織内の腫瘍の付近に投与され得る。
幾つかの実施形態において、該ウイルス粒子は、カーゴ分子を負荷されるか、またカーゴ分子に結合される。種々の異なるタイプのカーゴ分子が、ウイルス粒子中に負荷され得るか、またはウイルス粒子に結合され得る。ウイルス粒子中に負荷されたカーゴ分子は、ウイルスカプシド内に収まるために十分、小さくなければならない(即ち、典型的な正二十面体カプシドでは10nm以下のサイズを有する)。本発明の好ましいカーゴ分子としては、抗腫瘍剤が挙げられる。あるいはウイルス粒子中に負荷されるというよりむしろ、カーゴ分子をウイルス粒子に結合させることができる。カーゴ分子は、直接的または間接的にウイルス粒子に連結され得る(例えば、リンカー基を介して)。幾つかの実施形態において、カーゴ分子は、該薬剤と反応し得る官能基に直接結合している。例えば、アミノまたはスルフヒドリル基などの求核基は、酸無水物もしくは酸ハロゲン化物などのカルボニル含有基と、または良好な脱離基(例えば、ハロゲン化物)を含有するアルキル基と反応し得る。あるいは適切な化学的リンカー基が用いられ得る。リンカー基は、該薬剤またはウイルス粒子のいずれかで置換基の化学反応性を上昇させ、それによりカップリング効率を上昇させるよう働き得る。カーゴ分子をウイルス粒子に結合させるための部位として適した好ましい基は、ウイルス外被タンパク質中に存在する1つまたは複数のリシン残基である。
本発明の構築物は、インビボで用いられる場合、好ましくは混合物および医薬的に許容し得る担体を含む医薬組成物として投与される。負荷されるピコルナウイルスは、0.001〜99.9wt%、より好ましくは約0.01〜99wt%、より好ましくは0.1〜95wt%の量で医薬組成物中に存在し得る。
実施例1:植物由来ウイルス様ナノ粒子免疫療法によるインサイチュ・ワクチン療法は転移癌を抑制する
現在の治療法は多くの場合、転移癌には無効であり、新興の免疫療法は、有望ではあるが、開発の初期段階である。インサイチュ・ワクチン療法は、免疫系が腫瘍に対して効果的に応答し得るように、腫瘍に直接適用された免疫刺激性試薬で免疫抑制性微小環境を修飾する工程を指す。本発明者らは、ウイルス様ナノ粒子での肺腫瘍担持マウスの処置が、肺の免疫環境を調整して、B16F10転移様病変の発達を予防し得ると仮定した。この実施例は、ササゲモザイクウイルス(CPMV)由来の自己組織化ウイルス様粒子の吸入が、静脈内チャレンジ後のマウスの肺において、腫瘍の発達を抑制することを示している。CPMV処置マウスとPBS処置マウスとの腫瘍量の不均等は顕著であり、その効果は、Ifn−γ−/−、Il−12−/−、またはNOD/scid/Il2Rγ−/−マウスでは認められなかったため、免疫介在性である。効力はまた、Ly6G+細胞の非存在下では欠如していた。CPMVナノ粒子は、腫瘍微小環境内の顆粒球細胞によって急速に取り込まれて、ロバストな活性化およびサイトカイン/ケモカイン産生をもたらした。CPMVナノ粒子は、安定していて非毒性であり、高度にスケーラブルで、薬物および抗原によって修飾可能である。これらの特性が、その生来の免疫原性および免疫原性の低い腫瘍への著しい効力と合わさることで、CPMVは、肺に転移した癌への魅力的な新規免疫療法として提起される。加えて、CPMVは、皮膚黒色腫、転移性乳癌、結腸癌、および卵巣癌をはじめとする様々な他の腫瘍モデルにおいて明確な処置効力を呈した。これは、ウイルス様ナノ粒子が治療効力の立証された癌免疫療法として用いられるという最初の報告である。
eCPMV生成および特徴づけ
外被タンパク質前駆体VP60およびそれを成熟形態に切断する24Kウイルスプロテイナーゼの遺伝子を含むバイナリープラスミドpEAQexpress−VP60−24Kで形質転換されたアグロバクテリウム・ツメファシエンスLBA4404の培養物を用いたニコチアナ・ベンサミアーナ植物のアグロインフィルトレーションを通して、eCPMVカプシドを生成した。インフィルトレーションの6日後に、葉を回収して、確立した手順を利用してeCPMVを抽出した。粒子濃度を、UV/vis分光法を利用して測定し(ε280nm=1.28mg−1mLcm−1)、粒子の完全性を透過型電子顕微鏡測定および高速タンパク質液体クロマトグラフィー(fast protein liquid chromatography)によって決定した。
雌C57BL/6J(01C55)を、米国国立癌研究所またはJackson Laboratoryから購入した。雌Il−12p35−/−(002692)、Ifn−γ−/−(002287)、BALB/c(000651)、およびNOD/scid/Il2Rγ−/−(005557)マウスは、Jackson Laboratoryから購入した。マウスの試験は全て、 Institutional Animal Care and Use Committee of Dartmouthに従って実施した。
B16F10ネズミ黒色腫細胞株を、Dr.David Mullins(Geisel School of Medicine at Dartmouth College,ニューハンプシャー州ハノーバー所在)から得た。4T1−ルシフェラーゼネズミ乳癌細胞は、Ashutosh Chilkoti (Duke University,ノースカロライナ州ダーラム所在)によって提供された。B16F10、4T1−luc、およびCT26を、完全培地(10%FBSおよびペニシリン/ストレプトマイシンを補充されたRPMI)で培養した。ID8−Defb29/Vegf−A同所性重度卵巣癌細胞を、過去に記載された通り、ピルビン酸ナトリウムを補充された完全培地で培養した。Lizotte et al., Oncoimmunology, 3:e28926. eCollection 2014。細胞を採取して、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)で洗浄して、腫瘍モデルに応じて以下の手法で注射した:1.25×l05個の生存細胞をPBS200μL中で尾静脈に静脈内注射(B16F10転移肺)、1.25×l05個の生存細胞をPBS30μL中で右側腹部に皮内注射(B16F10側腹部)、1×l05個の生存細胞をPBS30μL中で右側腹部に皮内注射(CT26側腹部)、2×l06個の生存細胞をPBS200μL中で腹腔内注射(ID8−Defb29/Vegf−A腹腔卵巣)。4T1−luc腫瘍チャレンジの場合、1×l05個の生存細胞をPBS30μL中で0日目に左乳房脂肪パッドに注入し、腫瘍が肺に自然に転移したことが確定された16日目に、腫瘍を外科的に摘出した。原発性4T1−luc腫瘍の完全な摘出が、バイオルミネッセンス造影によって確認された。B16F10およびID8−Defb29/Vegf−Aは、C57BL6J株の同系であるが、CT26および4T1−lucは、BALB/cバックグランドの同系である。
B16F10を静脈内にチャレンジされたWT、Il−12−/−、Ifn−γ−/−、NOD/scid/Il2Rγ−/−、およびLy6G欠失マウスに挿管して、腫瘍チャレンジ後3、10および17日目にPBS50μL中のeCPMV 100μgを気管内注射した。肺チャレンジ実験の場合、転移様病変およびチロシナーゼ発現の定量のために、マウスを21日目に安楽死させた。4T1−luc担持マウスに、16日目に(原発性腫瘍摘出と同日)、そして再度23日目に(腫瘍摘出後7日目)、PBS50μL中のeCPMV 20μgを気管内注射した。B16F10側腹部腫瘍に、腫瘍が10mm2に達したら腫瘍チャレンジ後7日目に、そして再度14日目に、eCPMV 100μgを腫瘍内注射した。CT26側腹部腫瘍に、腫瘍が10mm2に達したら腫瘍チャレンジ後8日目に、そして再度15日目に、eCPMV 100μgを腫瘍内注射した。側腹部腫瘍の径を1日おきに測定し、腫瘍の径が200mm2に達したら、マウスを安楽死させた。ID8−Defb29/Vegf−AマウスにeCPMV 100μgを、腫瘍チャレンジ後7日目に開始して1週間に1回IP注射し、マウスが腹水の増加により35gに達したら、マウスを安楽死させた。
抗マウス抗体は、BiolegendのCD45(30−F11)、MHC−II(M5114.15.2)、CD86(GL−1)、CD11b(M1/70)、F4/80(BM8)、およびLy6G (1A8)、ならびにeBioscienceのCD16/CD32(93)に特異性があった。WTおよびB16F10肺腫瘍担持マウスにAlexa488標識CPMV粒子100μgを気管内注射し、その24時間後に麻酔した。肺を採取し、Miltenyiマウス肺溶解キット(cat#130−095−927)を用いて単一細胞懸濁液に溶解した。赤血球細胞を150mM NH4Cl、10mM KHCO3、および0.5mM EDTAの溶解緩衝液を用いて除去した。フローサイトメトリーを、MACSQuantアナライザー(Miltenyi)で実施した。データを、FlowJoソフトウエア バージョン8.7を用いて解析した。
全肺を溶解して、総RNAを、RNeasyキット(Qiagen、74104)を用いて抽出した。cDNAを、iScript(商標)cDNA合成キット(Bio−Rad、170−8891)を用いて合成した。iQ(商標)SYBR(登録商標)Green Supermix(Bio−Rad、170−8882)を0.5μM濃度のプライマーと共に用いて、CFX96(商標)Real−Time PCR Detection System(Bio−Rad)で、q−PCRを実施した。mRNA転写産物の倍率変化を、ΔΔCT法を利用して計算し、全ての試料をマウスGapdhに正規化した。
インビボサイトカインデータの場合、全ての肺ホモジネートを、腫瘍チャレンジ後8日目であるeCPMV粒子100μg吸入後24時間目に、B16F10肺腫瘍担持マウスから採取した。インビトロサイトカインの結果では、骨髄由来樹状細胞(BMDC)およびチオグリコラート刺激腹腔マクロファージ(両者ともC57BL6マウス由来)を、eCPMVまたはPBS 20μgのいずれかと共に、96ウェル丸底プレート内の完全培地200μL中で1×106細胞/ウェルで培養した。上清を、24時間インキュベーションの後に採取した。サイトカインを、マウス32plex Luminexアッセイ(MPXMCYTO70KPMX32、Millipore)を用いて定量した。
マウスに、Bio−X−Cellから購入したmAb除去Ly6G(clone 1A8)(cat#BE0075−1) を注射し、eCPMV処置の1日前と、その後、生存実験の期間に1週間に1回、500μg用量でIP投与した。肺内の標的細胞集団の95%を超える除去が、フローサイトメトリーにより確認された。
マウスに、PBS中のホタルD−ルシフェリン(PerkinElmer cat#122796)を150mg/kgでIP注射し、10分間静置した。Xenogen VivoVision IVIS Bioluminescent and Fluorescent Imagerプラットフォームを用いて造影を実施し、Living Image 4.3.1ソフトウエア(PerkinElmer)で分析した。
他に断りがなければ、実験は全て4〜12個の生物学的重複測定で少なくとも2回反復し、結果は反復測定間で類似していた。図は、p<0.05の統計学的有意性を*として、p<0.01を**として、p<0.001を***として表す。p値<0.05は、統計学的に有意と見なした。棒グラフのデータは、対応がないスチューデントt検定を利用して計算した。エラーバーは、表された実験の中でアッセイされたそれぞれの試料の平均の標準誤差を表す。側腹部腫瘍の成長曲線を、二要因分散分析を利用して解析した。生存実験では、生存解析に関してログランク・マンテル・コックス検定を利用した。統計解析は、GraphPad Prism 4ソフトウエアを用いて実施した。
eCPMVナノ粒子は生来の免疫原性である
気道の病原感染の処置としてVLPを用いた過去に発表された研究は、種々のシステムを利用し、様々な度合いの免疫調整能力を報告している。加えてこれらの試験は多くの場合、VLPに含まれる抗原への免疫応答に注目しており、粒子自体の生来の免疫原性ではなく、それはVLPに関しては決定的に示されていない。Bessa et al., Eur J Immunol. 38(1): 114−26 (2008)。その上、一部のVLPが他よりも刺激性であるかについては、分かっていない。これらの理由で、そして本発明者らが提案した新規な免疫療法としてのeCPMV(eCPMVは、RNAが欠如した「空の」ササゲモザイクウイルス粒子を指す)の使用のために、本発明者らは最初、生来の免疫原性の測定を探求した。eCPMV VLPを、C57BL6マウスから採取された骨髄由来樹状細胞(BMDC)および初代マクロファージのインビトロ培養物に添加した。eCPMV粒子と共に24時間培養して、BMDC(図1A)およびマクロファージ(図1B)の両方を、Il−β、Il−6、Il−12p40、Cc13(MIP1−α)、およびTnf−αをはじめとする標準的炎症促進性サイトカインを高レベルで分泌するように誘導して、本発明者らにeCPMVが生来の免疫刺激性であると結論づけさせた。
次に、肺微小環境に及ぼすeCPMV吸入の免疫調整作用を、免疫細胞の組成と、サイトカインおよびケモカインレベルの変化の両方に関して決定した。CD11b活性化マーカ(Costantini et al., Int Immunol., 22(10):827−38 (2010))(図2Aの上のパネル)およびCD86共刺激マーカのアップレギュレーションによる評価で、eCPMVへの非腫瘍担持マウス肺の暴露による、暴露後24時間目のLy6G+好中球の有意な活性化が明らかとなった。該粒子のAlexa488標識は、細胞の追跡を可能にし、それにより本発明者らは、それが、特にeCPMVを取り込む、このCD11b+Ly6G+活性化好中球サブセットであることを確認することができた。
本発明者らは次に、肺のeCPMV粒子の生来の免疫原性が、高悪性度の転移性肺癌のB16F10静脈内モデルにおいて抗腫瘍免疫を誘導し得るか否かを検討した。実際に、eCPMV 100μgの1週間に1回の気管内注射(図3A)は、転移様腫瘍病変の数(図3のBおよびC)およびチロシナーゼ発現(図3D)の両方による評定として、腫瘍量の有意な減少をもたらした。チロシナーゼ関連タンパク質1(Tyrp1)は、メラノサイト特異的遺伝子であり(Zhu et al., Cancer Res., 73(7):2104−16 (2013))、肺におけるその発現は、B16F10腫瘍細胞に制限され、腫瘍発達の定量的測定が可能で、転移様病変の様々なサイズに関して対照として働く。
本発明者らは、以下のトランスジェニックマウス:Il−12−/−、Ifn−γ−/−、およびNOD/scid/IL2Rγ−/−において、図3に記載された実験計画を再度実施することにより、免疫系が処置効力に必要か否かを決定した。eCPMV処置マウスとPBS処置マウスの間の肺腫瘍量の有意差が、Il−12(図4A)、Ifn−γ(図4B)の非存在下で、またはT、BおよびNK細胞が欠如したNSGマウスにおいて(図4C)、観察されなかった。
本発明者らは、eCPMV処置効力がB16F10転移肺モデルに制限されるか否か、または免疫調整性抗腫瘍効果が他のモデルに通用し得るかどうかの確認を探求した。移植可能であるが、真に転移性のモデルである4T1 BALB/c同系乳癌モデルを、最初に用いた。乳房脂肪パッド中で定着された4T1腫瘍は、16日目までに肺に転移し、その時点で原発腫瘍が外科的に除去され、eCPMV処置が開始され、肺腫瘍発達に影響を及ぼすために気管内に注射された。4T1細胞はまた、ルシフェラーゼを発現し、それにより本発明者らは、転移性肺腫瘍の発達を追跡することができた。eCPMV粒子を気管内に処置されたマウスは、肺腫瘍の発生を有意に遅延させ、生存を有意に延長した(図5A)。eCPMVおよびPBS処置群のマウスは、外科的摘出日に、同等の原発性乳房脂肪パッド腫瘍量を有した。それゆえ腫瘍発達および生存における差は、処置によるものであった。いずれの群のマウスも、原発性乳房脂肪パッド腫瘍の再発に見舞われなかった。
eCPMVナノ粒子は、驚くほど高度に免疫療法性があり、腫瘍免疫環境を明確に調整する。該粒子に暴露されたBMDCおよびマクロファージは、選択的な炎症促進性サイトカインをロバストに分泌した(図1AおよびB)。eCPMV粒子を植物内で産生させ、その後、植物混入物を、ポリビニル−ポリピロリドンを用いて抽出し、PEG沈殿およびスクロース勾配超遠心分離を通してeCPMVを単離し、最後に、該粒子をウルトラペレッティング(ultrapelleting)により濃縮した。純度をUV/Vis吸収、透過型電子顕微鏡測定(TEM)、高速タンパク質液体クロマトグラフィー(FPLC)、およびSDSゲル電気泳動によりチェックした。Wen et al., Biomacromolecules, 13(12):3990−4001 (2012)。混入物は、これらの手順の際には検出されなかった。その後、粒子をPBSに再懸濁させた。加えて、eCPMVは、TLR3/7を刺激し得るRNAが完全に欠如している。それゆえ本発明者らは、eCPMVの高い免疫原性が、ウイルス外被タンパク質のサイズ、形状、または生来の免疫認識によるものと結論づけている。これは、エンドトキシンのような免疫原性混入物、または精製工程で除去することが困難なウイルス核酸を含み得る大腸菌または他の系の中で製造される異なるウイルス様またはタンパク質ケージナノ粒子である。
図6に示される通り、本発明者らは、皮膚の黒色腫を定着させ、それに直接eCPMV粒子を注射した(100μg/注射。矢印は注射日を示す)。マウスの半数において、これが腫瘍の完全な消失をもたらしている。治癒したマウスにおいて、その後、本発明者らは、4週間は無処置で、同じ腫瘍細胞で再チャレンジしたが、本発明者らは、反対の側腹部に腫瘍細胞を注射した。それらのマウスのほとんどが、続発腫瘍を発生しなかった。明瞭にするために、原発腫瘍に粒子を直接注射したが、続発腫瘍を担持するマウスは、処置を受けなかった。それらは、全身の抗腫瘍免疫記憶のみに依存しなければならなかった。eCPMVは、最初の腫瘍において局所適用されたが、全身免疫を誘導した。「再チャレンジ」マウスは、直接注射され、退縮および消失したB16F10皮膚腫瘍を過去に有したマウスであった。
Claims (8)
- エンプティ・ササゲモザイクウイルスナノ粒子の治療有効量を含む、癌の処置における使用のためのワクチンであって、
前記ワクチンは、腫瘍への直接適用または腫瘍の付近への適用のためのものであり、
前記エンプティ・ササゲモザイクウイルスナノ粒子が、薬物も抗原も保持しない、
ワクチン。 - 前記エンプティ・ササゲモザイクウイルスナノ粒子の治療有効量が、免疫応答を刺激するのに有効な量である、請求項1に記載のワクチン。
- 前記癌が転移癌である、請求項1または2に記載のワクチン。
- 前記癌が、黒色腫、乳癌、結腸癌、肺癌、および卵巣癌からなる群から選択される、請求項1〜3のいずれか1項に記載のワクチン。
- 前記癌が肺癌であり、前記エンプティ・ササゲモザイクウイルスナノ粒子が吸入によって投与される、請求項4に記載のワクチン。
- 前記癌が皮膚黒色腫であり、前記エンプティ・ササゲモザイクウイルスナノ粒子が腫瘍内投与される、請求項4に記載のワクチン。
- 抗癌剤と組み合わせて投与される、請求項1〜6のいずれか1項に記載のワクチン。
- 前記抗癌剤がドキソルビシンを含む、請求項7に記載のワクチン。
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