HUE033072T2 - Staphylococcus aureus antigének immunogén készítményei - Google Patents

Description

STAPHYLOCOCCUS AURFXS WfiGifNLK IM&HÍN0GÉN K.ÉS2ÍTMfcN¥«I AMMmámMÉm

Az emberek a Si&amp;phyUKoecu* mrmzt i.S'. aur<?.<o.! természetes előfordulási helyei. Az egészséges személyek# képes kolonizálni a S. mtwus a borim, az nrrNtn és 3 torokban, ak;h peízisztcasen {10*3$%}, szakaszosan (20-72 fel vbetegséggel nem járó ní-mi-hotdözó állapotban ($-70%). Lásd Vattdenbergh és mtsat, í. üim. Mfetxz 37 .M3> 3140 CVS 9). A betegség Akkor következik be, amikor u személyek immunt endszere károsodik, az immunológiai gátak sérti lése miatt, mint példáid műtét ólait, tartós katéterek vagy más eszközök behelyezése, trauma, sebek. Az emiatti Ő; ettimix fertőzés különféle betegségeket okozhat, tani az enyhe bdrfertŐzCfektöí endoezrduis, osteomyelitis. bad ere ima, sepstí. és magas. hataíozuni rátájú egy eb betegségekig terjedhet. A «agy emberi rezervoár fokozza az adaptált patogétt klonúIN síposok ovokkkhának és elterjedésének a lehetőségéi:. A (.írató pozitív A. uun/it.* és 5 i'>>uamhk* hokin. zol. mtam invazív szisilktkokkttsz fertőzések különösen aggasztóak, unuű ezek növekvő kozeyes/oegOg' s km karúin: jelentenek világszerte Közelebbről a S. <mreus felelős mkcfnz (nosocomial) fertőző»'*. töo' 'ette l f i' eklord rkfoi a kÖzÖs»egs k’mdukfeu fuiözesekben növekszik. Például az invazív meticiHin-rezisztens L ann-m (MRSA) etöíörduiásáf 3125 per iŐÖÖOO személy-értékre becsüllek 2005-ben az Egyesüli Alkum Eban. beleéri ve I StAO halálesetet, tád Kíeveas R.M. és retsak. JAM A, 298 1763*73 (2007). A sztótilohokkus* betegségek drámaian növekedtek az elméit 20 évben; ez a növekedés párhuzamos m intravaszkuláns eszközök és invazív eljárások alkalmazásával. A betegség etöihr&amp;iíás emelkedésé?: még inkább ^aggasztóvá tette az mít!l>ioíi.ktim-r«zíszie«e.ia páthozamos emelkedése; tehát sürgősen szükség van:.vaginákban vagy poltklonáiis vagy rnonofclonaíis dkmanyago.k kiváltására alkalmazható immanogén készítményekre, sme-Ivek passzív immunitást biztosítanak a smfílökofcfcuxz fertőzés és kapcsolódé betegségek megelőzésére vágy-kezelésére, A ó\ eurem aobgénjeót tttrinlmaző tnmmnogétt készítményeket tárnak tel a WO-OOVí 1 3222-A2szát»ó nem-jkőMzI közzétéfeH Iratban,.. A tapadási faktor A (‘clumping factor A\ CifA) egy S. <meus sejt fel hoz: kapesolődó adhezin, amely közvetíti a sztífitiokokkoszok kötődését a fibrhmgénbez és vérlémezkékhez. A baktérium sejtfölszínén ospresszálődik, és ágy vélik, hogy ott elősegíti a patogenezrsí azáltal, hogy kötődik a szöveti károsodás helyen lerakódon Íibrtnogénhez és ilörfehez. A ClfA erőteljesen konzervált, és még a legeltérőbb fermája Is fe2iő% azonosság) kifejezést keresztreakíívtiásí mutat mind monokíonáíis, mind poiikioaáiís ellenanyagokkal ily módon a ClfA egy ésszefö jélöh vakema-kotsipotmoskénr a .¾ &amp;mms ellen. Azonban a ClfA:- sg«^mít;i't^tál|íHtása miatt a ClfA kiszerelése problémás, mivel könnyen kibomlik a iárolás ideje alatt, A teljes hosszösá&amp;ö ClfA számos régiót és dómén* tatlaimsz; egy Nncrmiaalis szekreuos domém s„S" dóméit); amit egy iigaadnmkőtő A régió kövei, amely három dómén! Lola kosz (Ni, N2, amely egy EF-kez motívumot tartalmaz, és N3r, amit egy R régió követ, amely szerimtiszparíai dipeplid ismétlődéseket tartalmaz; amit egy LPXTG motívumot tartalmazó sejUabkötő régió („W" régió); egy hidrofób .membránon átívelő dómén („M” régiók és pozitívan töltött aminosavakattartalmazó töltőd C-íerroioális,{„C” régió) követ. Az Ni régió proteáz-érzékeny helyet tartalmaz* A CifA: instabilitását lóként a CifA ΉI -lsen történő elimitásánítk tudják be, ami Ml-et és N2N3-t tartalmazó fr&amp;gmonseket eredményez. A ClfA szerkezetéi és működésé) az US 20Ö?ÖÜ87(M4Á I számó amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben (PavHak és mtsai. 2007. április íí&amp;J: tárják fel. Λ< tin tibetegség 'Lat <«-.<. ,"u \epcs s/hrhokokU-s/ rnkt>>ots amzf"üsOk salában kepernk hurokoo1'-«acchattd n<M|niík p<v. \.x-1* «ríh, CPi ietmelcsére -s nmeK ís^íí>hkoij.t a baktemrmot és fokozza a rezc-z-tem ki >>s a si/ύ» selevnk U< sunmnend-xere s tab taté4 v. m>\ r v < b a bnMettans scsut wdőhu'okba burkolja, ami a baktérimoot rexisziertssé teszt a ibgoeítóiosrai és imnudiyiam: elpusztítással szemben,: Arburkot nun f,»t«}triiA· baktérit nnx ermkerr ehbeh &amp; k«'<x -íozí *<t A brrnkpols zm .durtdok gyakran b>n?<n virislesvu faktorok sok bakteriális patogén «.elében, beleértve a Havmophh'us my/memm:4, Streptococcus fwtmotitat'-i és B-csoportos sztreptokokk úszókat, A A. auruus legtöbb klinikai kólámmá 5-ös vagy $-a» szerotípusú burokka} rendelkezik. A 5-¾. típusú {CP5} ás 8ms típusú (C^> burokpoliszaccharldok hasonló trozaccftünd isméi iódö egységekké! rendelkeznek* amelyek Nmcctü marmózamimirortsavhöi. N-aeeíii L-iukózummbél és N-seeüi li-fuközátrimbói állnak. Lásd poumier, I.M. és mis:?!., Itifea. Immun. 45:97-93 (1984) es Moreau* M„ és nucai.. Carbohydrate Res: 201:285--297 t I bí5th \-í ironos cuki ok vf rendelkezik de a .iikofjduevkhrn t u/ U acetiléné hehmben eltérő két CPsxero-iógiíuiag eltérd trtintözatű ítntmmreakfívítást mosat. A 5 MnR p? ötéin (m;n aév«n Proteus *b\ 1*505. P.105A és üRLiOAl amanpit ABC transzportéit együk komponense, Ez a protein expresszálódik Aj viva. As <5. uurem a mangánt kofakforként hasznosítja egy olyan enzimben, amely tokom* a A. mreus túlélését mmtrofií sejtekben. Az MntC tehát fontos az in iw túlélésében a 5. uuruus Arúví". f<>i>untán. Hasonlóképpen a CSfA-hoz, ez a protein is instabil oldatban. Azonban ellentétben szClfA-vak «méh kepes aggregáloöni, vagy hidrolizivvel elhasadn!va8-MútC degmdácKs elsődleges mechanizmust?. a demamídátódáv amikor bázikus pH-ttak év'vagy szobahőmérséklet körüli (körülbelül 25yC) vagy magasabb hőmérsékletnek vau ki téve. tűmek megfelelően sürgős szükség nemcsak S. aurms fertőzés elleni vakcinákra, de különösen fokozott antigén-stabilitású vakcinákr«. Λ találmány tárgy* Uoliliaálf muiti-ítmigen immunogen készítmény, amint:a mellékel? igénypontok délkelé!* ph V antigének. asnehek polípepudck es poi?v',?cehntufoh, L'boek közön közvetlenül a baktériumból nyerhetők, a szakember számára ismert Izolálás; eljárások alkalmazásával, vagy s.zintofjkns ptotokoiiok alkalmazásával állíthatók elő, vagy rekombtnáns htot? A hi hetek dö génmémőki eljárások atkahuazásával, amelyek szintén {vmertv-k a 'Zdeaber <t'.irata, s<i ' t' eiobÍMut bec"u sst.'-uuk <-, kombu)<\ κ'\ο<>| Ivenfelni a Scsras tápmat Ιεϊχζ k e> át tso\ unni ,ns \ < sz π ntk 'a » t s.taífkkckkuv. tsknum e V' νίκη ?«>k ^rtadbkukkusx í'a.\ us-urn által okozott betegség súlyosságának csökkentesére vagy kialakulásának késleltetésére; és eljárások sinafikikokkuaz baktériummal tömén fertőzés által okozott betegség legalább egy tünete súlyosságának csökkentésére vagy kialakulásának késleltetésére.

Egy megvalósítás? mód merőn a ieirá$ tárgyú Hohlisáh ímnum-agén késaitmény, amely tartalmaz: (a) legalább bárom sonmonenu a osetwrők által alkoun. t^vOstbOi ktsaiasz.sa t/<'5a,t biaphslococcns aureas ?leadási lúktot A („CifA”} {Xílijsqptki, izolált Staphylococcus aureus tapadási faktor 0 („CifB") polipeptid. 5-ös íiixisú burtJkpoliszítecharld {CP5)-protein konjugöiufn. S-es típusú btjtokptiiiszsaccharicl (CP§)-profein konjugátuns, és izolált Staphylococcus autens MntO polipeptid. -b) b,0 : t>,o pK« értékű pi?fieri, és {y} töitő-anyagcit. Bizonyos megvulósitási mód szerint « Cil'A jx’Upeptűi lényegében degrsdálatlan marad legalább 1 honupon keresztdl 37°C-on.

Egy mégvaÍöHtáss mod s/erim a mdiUzolí íammnogén készítmény kevesebb mini 3 százatok vígét t&amp;mhmtz a* immunogén kevímneov tdies tomegere vonatkoztatva %« v ed, ahol a ClfA polipeptid υ,Ο-” <. 0,027°··« és íi,í45*&amp; a- 0,26¾ v vt ko/öm, a i.Pf-nronin hoojugáíaro 0,04% a 0,013¾ és ÜA2 &amp; 0.,13¾¾ w.% közötti, a €1*8-proteio konjugátmn o,o4% í 0,013¾ és 0,42 .* 0,13% w% közödi és a puffer 2,54% a 0.?í>% w/w közöld.

Egy megvalósítási mód szeri m a leírás tárgya IkdiSizálí immunogén készítmény, amely tartalmaz; (a) ClfA p-jiípepUüet, (bt €% pvi? n hon-udiunm;, (d ('Pb orme.n konu;,'Atomot. uH bt -ztklh puffan, pit ¢.,0 ,s 0,5; teiszuchorozt, ίΗρη.χ,,,ηΜ 80~a,,?>(,’) v.'ti Bí/n syos men tls so,tss mod sa d ,í üO pidipeptid lém egében dograddatiso marad legalább 3 hónapon keteszmi 3?*C-on.

Eg> megsafo nas ruv * -er 11 a H-.t í nz},s í >>00/40 m« ks;o' köpném , mely tartalma/· (a) C!í\ poíipept.del 0,0**°« * 0,(.0 '% e- *' I''', * ü 36% vy v. között, tb) * P profom konjugainmot 0314°« 0,01114¾ és 0,42 á 0,;3% v>.v- kö/ötl. ίχ) CPS-protein korijugát úrnőt 0,04% -' 0,(03% és 0,42 e 0,13% sv/cv között: íd> hlsztidín pufiért, pH 6.0 i 0,5, 2,54% t 0,76% wAv köpött; (e) szacharózt 97% ± 2,0% wöv között: (!) poliszéiba! 80-sí 0,21 % .t. 0,0400 w/w között:; és (gl vizet 2% * 1% w/w között.

Egy megvalósítási mód szermí a leírás tárgya folyékony ímtnunögén ni-antigén készítmény, amely találmány szerinti hofüizált Immunogen készítmény vizes hígitószerben való feloldásával van gyártva, amely féloldali készítmény végső pH-ja 0,0 .* 0,5.

Egy megvalósítási mód szériái a lukas sátgya folyékony htnmtrmgén készítmény, amely leírás szerinti íioftii-zált stmmmogén készítmény feloldásával van gyártva, amely turcalnw,: (a) CítA polipeptidel 4(3 pg/m! ± 4 ug/mi os iUfOpgóru v döug/mi közötti kouömtrációhun; íb) a €P5-proíeuí konjugánsmor 2tipg/roí o 2pg/ml és 4ööj.tg,;ml >. 40pg.br!,: között; koncentrációban; (e) a CP8-prol«tn konjugátomot 2Üggími * 2pg/ml és dífOpg/mi * 4í)pg/mi közötti koncentrációban; (dl ahisztídítt pufféi·, tOm-Vi .* 5roM konceatrádóban; (e) pofiazetMt 80-ai 0,1% &amp; 0,05% (0meg/||i|«gát <w/v) tóbépoirádéban; és (¾) szadbai^al 9% 4 4*5% w/v kunoentmoiéban. Egy tnásrk tnogvaíósitáar mód szerint a poiiszarbát S0 0,01% 0,00554 tömeg/térfogat (w/v) koacentddöjó és a vzachatóz 4,5¾ «> * 1,5% w vkorimmkádópi.

Egy megvalósítási mód sz.ento a leírás tárgya folyékony készifnény, atneiy tartalmaz; (a.) felöl* dcut lioEbzáit ClfA pnlipeptidet; (b) CPá-proíeirt konjugatunKO; (e) CPS-proteio konjugátumot; (d) bisztidin puffért, pH 6,0 4· 0,5; (e> póiiszurbál S(í-ai; (f) szacharózt; esfgí vizes biglíószert.

Egy megvalósítási mód szerint a leírás tárgya folyékony immunogén készítmény, amely bírás szeriülí iiofdí-záit imtnuaogén készítmény feloldásával van gyáttva, amely tartalmaz: (a) a időidéit líofllizáli: ClfA poiípepltdei 40 pg/mi t: 4 pg/tnl és SOOugOrd i 8Ögg/ntí közóm koneentrádólmo; (b) a €95-protein konpsgátnmm 20pg/mi ,t, 2pg/sni és 400pg/ml 4 40pg/rnl közötti keirtenOádóbsn; fc) a CES-proteitt konjugáfomot Oöpgonl 4 2pgóni és 4Ööpg0rii r, -tOpgOni közötti koncentrádóbtm; (d) a bisztidin pufiért, iOmM 4,5t«M könceotrácicíbao; fé> peliszoróát 80-at 6,1% 4 0,05% íömégOerfogst <w/v> koncentrációban; (0 szacharózt 9% * 4,5% w/v koneentrádóban; és (g) vizes bigitószert. Egy másik megvalósítási mód szerint a poliszorbáí 80 0,01% r. 0,005% tOmegdérfogat (w/v) koueenfok ióíó és a szacharóz 4,5% z 1,5¾« w.A koncén!-rádójó.

Egy megvalósítási mód szerint a lékás tárává eljárás immuttogén készítmény éíöáilítására, amely magában í'ögkdja a következő lépéseket: (a) vizes oldatban kombmáisi; {1} .ClfA pobpeptidet; fii) CP5-protein kotijngátnmoí, fűi) CEbsproteiu kmjugáíumot, (tv) 6,0 * 0*6 pKa éttékö puffod és ív) töltőanyagot; és (b) az (a) lépés-szerinti kombináció iinlllizálását, ami kevesebb mint 3 tömegszázalék vizet tartalmazó pogácsát eredmé- fives. Bizonyos megvalósítás? módok szerint as eljárás továbbá magában foglalja (vi> felületaktív anyag kombinálását as. (a) lépésben. Bizonyos magvafésSási módok szerint az eljárás továbbá magában foglalja az (a) lépés szénáéi komi;ío?kio sferíiizáiását a (b) lépés szerinti liofiiizáíást megelőzőét?. Bizonyos megvalósítási módok szeriné á vizes oldat lÖtnM *: IntM hisztidiní, pH ő,ö * ö,5, 9%·* 4,5¾ w/v szacharózt és 0,1¾ a·. 0,05% sv/v and poliszorbát 8ö-at tartalmaz, Egy másik megvalósítási «aki szánni a pöMszorbát 80 0,01% * 0,005% w/v koüeeutiüeiőjú és a szacharóz.4,5% z 1,5%: w/v koneetstmclőjő.

Bizonyos megvalósítási módok szerint a (b) lépés szerinti lioftlizálás a kővetkező lépéseket foglalja magában: (i) az (a) íépés szerinti sterilizált kombináció (a) íefttgyaszíását 0,3%: a 0,03%' per perc sebességgel, amíg eléri a -50%' * S°C«t 400 millibar - 40 millibar nyomáson; és azután a kombináció -SÖG * 5%'-on tartását 60 perc * 6 percen keresztül, (it) a kombináció tetupóráíását a hőmérséklet -10%; * 5%l~ra való növelésével 0,3%' * 0,03%: per perc sebességed; majd a hőmérséklet -10%: ?.· 5%:-on való tartását 130 perc * 13 percen keresztül, majd a hőmérséklet csőkkeniésőf 0,3%: .?·. 0,03%: per perc sebességgel míg eléri a - 50C ± 5%)-ot, és a Míntsr-sékhst -5ÖC ·.-:·. 5%: on tartásál ISO perc i 18 percen kérésziül; (ni) a kombináció megszorítását a nyomás 50 míÜÍToíx (mTorr) értékre történő csökkentésével és 30 percen kérésztől ott tartásával, majd a hőmérséklet emelésével -30% * 5%:-ra Ö^'C * 0,03%: per pere sebességgel, és azután a hőmérséklet -30% ·£ 5*0-on való (a«á-sát 1930 pere 4402 percen keresztöl; (tv) A kombináció tovább szárítását a hőmérséklet 30%: * 5%í-ra emelésével 0,2%: .* (1,02%: per pere sebességgel a nyomás 200 mTorr-ra való emelésével, ős azután a hömérséíklet 30% * 5%:-on való vattásat 720 pere -fc 72 percen kérésztől; és (v) a hőmérséklet 5%: v 5%.:-ra való csökkentésé! 0,5%: s. 0,05'%' per perc sebességgel. Bizonyos megvalósítási módok szerint a iioillizáiás fiolába» történik. Bizonyos megvalósítási módok szerint a fiola le van dttgözva a lioftlizálás után. Bizonyos megvalósítási módok szerint a fiola fél van töltve ntirogétvgázzttl a fiola ledngózását megelőzően, Bizonyos megvalósítási módok szerint az eljátás továbbá magában foglalja a következő lépést: te) a (t>) lépés szerinti llofilízált kombináció feloldását vizes közegben. Bizonyos megvalósítás? módok szerint a td lépés szerinti feloldott kombináció monokli busa 25ü mOshí -. 25mOsM és 30U mOsM s- 30 mÖsM kőzőt-l. Bizonyos megsaíossbbó módok szerint a találmány szerinti unmmtogén készítmény találmány szerinti immunogen készítmény előállt! ás ára szolgáló bármilyen eljárással van gyártva. ügy megvalósifásí móri szerint a találmány tárgya liofüuáh itnmanogén készítmény, amely tartalmaz; (a) legalább négy komponenst a következők állni alkotott csoportból kiválasztva: izolált Stuphybcowus aurrux tapadás? faktor A ('Qf/Vi polipeptid, izolált Siuphyhcocctu aun-us tapadási faktor B ÍCIÍB) polipeptid, $-ös típusú burokpoliszaccharíd tCPcfő.'liklís? kortíngáfum, S~&amp;s ítposú bum*, polisz uetuííd íCP8}-CKM(,, konjugáUtm, és izolált Siaphyiacoccm aurem !vin;C poHpeptíd; fii) 6,0 .t Ö.ó pfea értékű puffért, és (c) töltőanyagot Bízón; os megvalósítás; unxi szerint a Cif'A polipeptid lényegében degradáld lan marad legalább 1 hónapot! keresztül 3?%>0ϊί.

Egy megvalósítási mód szerint a találmány tárgya Hoftlizáit irarounogén készítmény, amely tartalmaz: (a) izolált Su^thylm-ifcem mtmis tapadási faktor A {C!fA} pol (pepiidet; (h) S-ős típusú (CBS) hurokpoliszáceharídot €RMísrhez konjugálva íOM-CRM^); (ej 8-as típusú (CBS) bmokpoliszaceharidot €RMwrhez. konjtígálva íOBS-CRMjstj); (d) izolált Mutfs polipepridet; íe) ö.O * 8,6 pKa értékű puffért, és (I) töltőanyagot. Bizonyos megvalósítási módok szerint a ClfA polipeptid lényegében dsgradáíatlan marad legalább I hónapon kérésziül 3 ?%%m

Egy megvalósítási mód szerint a találmány tárgya Itoftlizálí immunogen készítmény, amely tartalmaz: köve- xebh mint 3 százalék vizet az ifttmunogén készítmény teljes tömegére votmíkoztatva {% w/w}> ahol a CifA poltpeptki 0,09-¾ t ..;s 0.85% * 0,26% wriv kirítt, &amp; CP5-CRM,W 0,049¾ .¾ 0,013% és 0,42 > 0.13%

Ww közötti, a CPS-cRM!·^ 0.04%.* 0,013% és 0,42 * 0,53% w/w közötti, az MntC 0,00% a 03)27% és 0,84% A 0J5%t* w közölő évpfoV· * '5% ϊ 0 Α> «π ίί,ΟΑΟίϊ ügy megvalósítási mód szerint a találmány tárgya iíoEEzSltímrmtnogéo készítmény, amely i^mlnmx: (a): CifA polipeptidet; <b> CES-CRM*? konjugátumoí; {!>} CFít-CRM,^ konjugátumot; (0) MnC poiípeptidet; ie> hiszíidm pu&amp;brí; if) szacharózt; (g 5 poiiszorhát 80-at; és (6) vizet Bizonyos megvalósítási módok szer iát a CifA polipeptid lényegében degradá lattan marad legalább;) hónapon kérésztől ;37*€-oo, ügy megvalósítási mód szerint a nuálmánv tárgya Isoftlizálí únosanoger, készítmény, amely tartalmaz; (&amp;) CitA polrvfotlet ifi» *. 'í ο,<>%% λ, 0,84% í ífovfo höoxí tfo 4 py kysyugAtnmet 0,04% - 0,03.39¾ Pa 0,42 * 0,13¾¾ wAv között; (e) COR-CRM)*? könjugálomol (fífofo. ;-. 0J)I3% és 0,4:3 .:. (3433¾ vfov kozótí; pb Mfot pfojpcptídet o,Ö9% < 0,0.%^ vs 0,84% -a 0,30% v v, közeit; (e) husiid in puíVri 3,33¾ d 0.999« w/w koncentrációban; (í) szacharózt 95% &amp; 2% wóv koncentrációban; (!) po itszorbáí EtKit 0,2i*0 -t 0,00.5% vv/w koncentrációban; és (g) vizet 2% i. 5¾¾ w/w koncentrációban, Bizonyos megvalósítási módok szerint a CifA poiipeptid lényegében degradáíatlan marad legalább .1 hónapon kérésztől 37fC~ott,

Egy meg valósítási mód szerint a leírás tárgya folyékony ítnmnnogén totra-antigen készítmény, amely találmány szerinti liohiizált tmmuaogén készítmény-vizes higitószcrhcn való félokíásávaí van gyártva, amely feini-dott készítmény végső pM-ja 6,1 * 0,5,

Egy megvalósítási mód szerint a leírás tárgya folyékony ktmutnogén készítmény, amely tarlaimaz; (a) a CifA polipeptidet 40 pg/ml a 4 pg/mi és OÖOgg/mi A· ítOpgord közötti konceníráciöbun: (b) a CPS-CRM^y konjugátumoi >0pgfod a, 2pgéni és 4Ö0ggőni a ÓOpgOní közötti koncentrációban; (ej a COk-CRM^ konjügáiumov zOtig ml ^ 2pg ml és %>0pg/m; ÍOgg'ml közölt; k-meenírációban; <d) az MntC poiípeptidet •I0.ug:mi4pg/mi é* SÖOpg/m: a áOpg/ml köríti koncentrációban; (e) a hísztidin puffért lOm.M ,-t 5mM kon-eentrációbatt; (f) pollszorbát 80-at 0.01% A 0,0039¾ tömag/térftígat (w;v) koncentrációban; és (g) szseharózl l^o ρ'ολ \ kenuit 1 ót m ► tnást< f ngt tlóstíavi mxi a.π x a poh\,o bal fo O0i% . 0 !Χ%’« \\,v koncentrációul és a szarba ró z 4,5% 1· |.S% «év kuncenirációjá.

Egy megvalósítási mód szerint a leírás tárgya folyékony tmmunogén készítmény, antciy tartalmaz: fa t feloldott íiofilizslt CifA polípepridek «b) CE5-CR24;,>; kottjtigátumot; (b) CPB-CRM^, konjagátumoí; tc> MntC poítpemidet, sói hisztidin e.itk'O, t, 3 pót szót but fo at; (ft s?a<.i:.x<.vt, és tg) vtzes hnotsszeri

Egy megvalósítási mötí szerint a leírás lárgya foiyékotty bw.nmgén készítmény, «mely fartalmaz: {a? a lel· oldod bolslizáit CifA poiipepttdet 40 gg/mi t- 4 pgfmí és kOOngórtl 4. gÖpg/ml közötti koncentrációban; (b) a CEö-CRM,«? konjagátumot 20ug/mi 2pg;ml és 400pgítnl r 40pg>'ml közötti koncentrációban; <c> a CPfo CRMW? konjugámmot 20g;p)vd 20pg/tnl ésOOOggfmí * 40gg/mi közötti koneentráctóban; (d) az izolált MntC polipeptidet <H)pg.0nldggj'ml és BOOpg/tni A ÜÖpgi'ml közötti koncentrációban; (e) a bisztidín paflbtt I.ÖmM a SmM kofteenttöcsóbatt; (f) poltsznrbáí $0»» 0,1% -t.0,05% fótrteg/térlbgat l>v/v) konceníráeióban; és {g) szátte rózt 0% a 4,5% %v/v koneetttrácíóban; és fbj vizes higttószterf, ügy másik megvalósítási mód szerint a poitxzorbáf SO 0,01%.A 0,005% sv/v konconMeiójó és a szacharóz 4,5% * 1,5% w/v koneeníráetö|á.

Egy megvmlósiíási mód szerint a taláintásty tárgyat eljárás immonogétt készítmény előállítására, amely magában foglalja a következő lépéseket; (aj vizes oldalban kombinálni: fi) CifA polipeptidet, (ti) CP5-CRMtw konjugíltumot, (itt)konjogáfontot, (tv) MntC polipeptidet.; (v) 6,0 a 0,6 pKa éríékő ptdTer és (vi) töltőanyagot; es φ} raj lépés szerint· hotohmnem jiofil Szólását, ami kevesebb mint 3 tömegN/ázoick vizel iirtalowo ρον,Α&amp;όΐ ensbuzmez. Bízom us megvalósítást módok szerint az eljárás továbbá magában foglalja s v! I íciíiíeukus anykoíiíbináiiixu az (a! lépesben Bizonyos megvalósítási módok szerint ax eljárás továbbá magában foglalja az fa) lépég szcrbt» kombináció sterilizálását &amp;fb) lépés szerinti Ifofilizaiást megelőzően. Bizonyos megvalósítást módok szerint a vizes oldat lÖmM a 5roM hiszi idiot, pH 6,0 .* 0,5,9% -¾ 1 % w/v szacharóz* és 0,1% &amp; 0,02% w/v poiiszorbát 80~at tartalmaz. Más megvalósítási módok szerint a poiiszorbát Sö 0,01% &amp; 0,001% w/v konceotríktőjü és a szacharóz 4,5% * 0,45% w/v koimenlráciojü, Bizonyos megvalósítás! módok szerint a (hl lépés szerfod Sfoílüzálás a köv'«tkead> lépéseket töghfija magáhtm; fi) az fai lépés szerinti sterilizált kombináció fa) iefsgyaszíását 0,3%' 4 0,(.0% per perc sebességgel, amíg eléri a -50%! * 5%% 400 millibar 40 millibar .nyomáson; és tsznbin a kombmaciö -50%' . 5'0-on tartásál 60 pete « a percen kertivel I, p/l a kombi náció te‘operálását a hőmérséklet -UTÓ * 5%'-ra való növelésével 0,3% *· 0,05%' per pere sebességgel; és azután a kombináció -10eC a: 5%!··οο tartását 120 perc .·.·. 12 percen kérésztől; azután a hőmérséklet csökkentését 01« é< <)v< j.,'perc sebe"wgs·' tn"geiéua s0t 5't -ot. esamt&amp;r a 'moi-Ow-el,*' %p\ ''Cm Gittáit 5 80 \"é . 18 puoet! keres, töt o " .t kombiim.,m magszaníssár a nyomás n> η , -S'>n union' értéke, tor léno v'jbkketnésé'.cl és 30 percen keresztül ott lartarásai; majd a hőmérséklet emde..csel -30%' t 5%Va 0,2%' ' 0,02%' per pe'C sebesseggel, o a ottan a hométvl let -30%' a 5'C-on való antío/r %20 perc r-|02 petcen keresztül; (ív) a kombináció megszáritását a hőmérséklet 3íb€ λ 5'C-rrt való növelésével Ö,2°C * 0,02% per pen sebességgel; és azután a nyomás emelését 200 rnTon'-ra és a hőmérséklet WC ·. SXWsn való tartását ?2Ö perc 172 percen keresztül; fv) a hőmérséklet 5% A S%Wa való csökkentését 0,5%) * o.»5'C per perc sebességgel. Bizony.is megvatósitási módok szerint a fiofitlizálás. fiolában történik. Bizonyos- .megvalosb&amp;ri módolt szerint a Oda le van dogózva a Itöíüizátás mán. Bizonyos megvalósítást módok szerint a fiola fel van töltve oitro-génguzzal a fiola ledugézásáí ínegclózóen. Bizonyos megvalósítási módok szerint az eljárás továbbá magában foglalja a következő lépést; te) a φ) lépés szerinti iiofifizáit kombináció feloldását vizes közegben. Bizonyos megvaknntósi tnódok s/.cmrt a fc) lépés szerinti feloldott kombináció ozmpiaíitása 250 mOsM e 25trtOsM és 30b ioOsM t 30 mOsM közötti. Bizonyos megvalósítási módok szerint tt találmány szerinti immtmogén készítmény találmány szerinti immunogen kdaalimétty előállítására szolgáló bármilyen eljárással van gyártva. Λ OífA polipeptid NI, N2 és M3 dómért! tatttdtöaz, Bizonyos megvalósítási mérlek szerint &amp; CSÍÁ pohpeptid fihrinogónkötö dómén! tartalmaz Bizonyos megvalósítási módok szerint a fibrinugénkOíő dómén módosítva lett of> i-’.ídon, bogv csökkentett szttifen kótődjoo a fi bt mogenhe x összcbasonihva a fibrínogén Cífió naíív fibrinogéíikölfv doménjét való kötése esetén megfigyelttel. Bizonyos megvalósítási módok szerint a fiönnogcnkötö dómén csökkentett kötődést mutat a ftbtinotténbez azáltal, hogy töninosavíszobsztitócióval rém deikezik ;·. Tyr 338, Tyr 25tc Pro 336, f.ys 389, Aía 254 és He 387 közül egy vagy több pozícióban. Bizonyos megvalósítási módok szerint a Tyr 338, Tyr 25ö, Pro 336, tys 389, Akt 254 és He 33? pozícióban ievó amisto-sav-sziíbszíiiéclők közöl egy vagy több az A kora vagy Ser-re való szabsztitóciö. Bizonyos megvalösiíást módok s.mrint a Tyr 338 Ál&amp;-ta vari szobsztlmálvg, A f.'Pő-protcdn kotíjngátutn CB5-CRM ;,e, A CPk-protein kosijógáinm CP8-í.'RM><o

Bizonyos megvalósítási módok szedni a lioftlizáh immtmogén készitméítv puffere s/ukcinátöt tartalmaz 6,0 e- 0.4 pH-η, Bizonyos megvalósítási módok szerint a puffer hisztídSnt tartalmaz 6,0 ά 6,3 pH-η, Blznoyos meg-valósítási módok szerint a töltőanyag a szacharóz, trehaiöz, marmitöt, giiein e>. szorbitoí állat alkotott csoportból var. kiválasztva. Bizonyos megvalósítási módok szerint a töltőanyag szacharóz. Bizonyos megvaiösttásl módok sprint a töitöáayog szacharóz 96% &amp; 0,2% wAv kooeetttráeióban. Bizonyos megvalósítási módok sprint a íioíi-ikáít ionná nogén készítmény fdöfciaktiv anyagai tv tartalma/.. Bizonyos megvaióktes; módok szerint a feldiet-aktív anyag a potexantcr, a polioxletilén alkti étet és poiiomeídón szerbi íáo zsírsav észtet áiud .dkotuit csoportból van kiválasztva. Bizonyos megvaiőeitási módúi·, szerin· a puiinxietüén szorbiíún zsírsav észter a polís/orbá? 80. Bi/onvo·· nRoío.dÓMS-.í; í nmdok s/er'ni a peiis/mbat 80 0, k\> 0,05¾ vv v koncé on,te te só tőire-cm· éten ko szerelések esetiben Más mmpveJősifáííi módok szerint a pokszorbát S0 0,01% -> 0,0055 s vv.'v koncentrációja.

Bs ’'ifísos megváló·, t,t s mndoh szó rt a -míte /s í on nommon kés/titnéo) ad a\w ss ki tsimoz 'b/>\nos megvalósítási módok szét mi az adjuván·· iSCOMLATfiiX'*1.

Bizonyos megvalósítási módok szerint a folyékony készítmény \ tzcs hígsic-./,:ee \ íz O ,\<n>ö.s tnegva.ló5tk&amp;. módok szerint a vizes higitószer alacsony sói úttal mit óidat. Bizonyos megvalósítási rrsodok szerint az alacsony sótartalmú oldat őőmM * IQmM nátdatn-kíoridoí tumdui&amp;z. Bizonyos megvalósítási módok szerint a vizes higitószer pohsz.orbáí 8Ö-at tartalmaz. Bizonyos megvalósítási módok szerint ;s vizes hignószer ad kíván sí tartalmaz. Bizonyos megvalósítási módok szerint az adjnváns ISCOMATRIX’'',

MiMá!kil^jí.taerMék§ \z j eKt i tovMni'mans ólig pmipepbd khlónbo/ő tétmásnak sematikuscn sgramjót mutatja be ás feltárja a RtCl^kte i> ’ o > I' ’ te χΛ hennák, l A 1 ábra a ϋοΠΗ/ηϋ Óit Λ protein küidnhözó tetekmk ΠοΓ) a koncentráció-változását mutatja be öss/eha-mohivá <5 in vckon> n íuteldó'khd, In t' ortekkem >tkv's' ,uu íüggvért vében Λ pane' tetei s/ I te>05i- 57.i és 1..56051-44. .8 panel; tétet sz. 06051-72, (’ panel; tétéi az, 130051-81-1. Opattéi: tétetsz. 56054-Hi-2. A 3.ábra a iiotuizák DS L4Ü184-M méretkizárásos kmmatogonnnfyaít mutatja be í ·;· 0 időpontban, Összehasonlítva 2-8VC. 25 0 és három hónapon keresztül tárolt pogácsákkal. Λ 4 ,ü ia mmotMíárpvo' keomatogr&amp;K}.nokav stsutatju be, amelyek összehasonlítják a íioftiizáii kiszeretéseket a boltit v,hs etem telseOny <"0'A i .W,te · -a 4 u teltei.

Az 5. ábra. nonkzáii ClfA pH (A panel), százalékos nedvességtartalom (8 panel) és optikai demtíás (C panel), amely az aggrvgóció mértéke, hlsztogramjait mutatja be, különböző időpontokban andnosav hőmérsékleti kprüíntényok kéfeött,. A ő, ábra ClfA dimer százalék (A partéi), monomer százalék (B panel) és degradáltam {basitáSj százalék {C panel) his/togramjaű mutatjaK*. MI-H01 v'-vel meghatározva szobahOttvr.ékíeten való 54 őrás kevettetés után. Az A-íéttgeSy mutatja a poíiszorhát So 10,000, 0.0] 1)0, ti,005 és 0,100% >ν·'»> és szacharóz (5, 4,5 és 6% wAv) kdiörtbözó koncentrációit tartalma « ki szere ksekcf \ bBSO-at nem tarkón';·/,· krczereié\ rsnelk.us/t mulatott a dmer-UaktkoíásszázttléKában a Sevenetés után { > panel), A 7, ábraCifA degradálni (hasítás) százaíék (A panel), dimer százalék (8 panel) és monomer dinre? százalék (C parsel) hlsztngratnjaü tnutatja be, SE-flPIXl-vei tnögjhaiározva különböző töltőanyagot tartalmazó kiszerelések eveten, az kIö függvényében, A 8, ábra u Cii'A tisztaságát (A panel), &amp; ITd erősségét (asnígeidtás) (8 pánel). és s CBS erősségét tant nen tá\' te o,,reiá anitatja be kttlomoto tdöpomok \tn megás dő.ns; mb máit pogκ\ak ]„\)idas,P Vvato-őö. .A 9, ábra s ClfA tisztaságé!· (A panel), &amp; CP5 erősségét (atttigemtási (8 panel), és s CPH erősségét santigemfás) {C párnái) mutátja be különböző időpontokban alacsony db/i-te dobi ízált pogácsák feloldását kővetően. A Kí, ábra ( HA koncemrádöjút (A jsmwi) As százalékos tisztaságát (B panel) és a CÍM és CP8 (C panel) komüíiíHtkiqiás mutatja be <1,4 és 24 órával a kioldást követően szobahömérsekieten. k Π a a a. v HA kv'^corttraeKf'&amp;i (A p -m 5 ϊ és szazTekus U&amp;H.- >?gát <B p.meit és a CT* é« OPS (C' ptnelj koiicemrávióTt mutatja be 1,2, és 3 fagyas/sási-tbiohmsztási ciklust «táa, A 12. ábra rCÜA mbfi tétté*? ms's a eltuK an dCrm/mus (CDi görbéiéi muíaíja tv pH o.vHm (A panelt és 7,0-sa (B par el), A 13 ábra fCUA több tételeinek a CD olvadásai: mosatja tje' a pH függvényében. A 14. ábra aClíA saját irsptoián iluoiwetmciéjáit A panel) ás ANS flmwwcenciájái IB t?:wel) nmtaijaíppH :bgg\ én seben a? rCUA»' es twCit'A esetéi·· m A t $ ab a dííTcféí „ Uts s 'kenreiö Kató ra in >\ < Dos. ‘ «, (vadasokat mu’.a be a pH '«^y«avöt)«»:as:;aárA:«í és raí.'ií'A cselében. A Ki. ábra 0DJS.. olvadást mutat be rtsOiíA esetében a pH függvényében. A I ' abra metCknmuv', ΠΡΙ C4 matat be a pH függvényében as rntClíA «setében hat héten keresztül (A pátiéi) és ρί 1 es í H)?s, stabilitást folyékony wiCti'A esetében (B pariéi), A 5 8. ábra a MnfC saját trtptofáa fluoreszcenciáját mutatja be (A panel) és a Tw! követését (B pimelp A }9. ábra a TR! J követését mutatja be DAC olvadásokból á pl f iüggvényébén óz MrtíC esetében (A panel) és kél fő termába esemény termo grammját (B és C panel), Á 20. ábra Μηίί' OD,:;. cl·, adásokat motto be a pH függvényében, A 21, ábra mtCH'A (A pastel) és MntC «8 panel) A 22, ábm rsaCHA síahiíHAsI eredményeit mutatja be RP-HPLC-vel 5X*on (A pafiéi és 2SH2-öh 0 pátiéi} ez MntC esetén ICX-tíPtC-vel SKTon ;C panel) és 25K;~ost (D pastel), A: 23, ábra CFS-CRM^ stabilitási eredményéit mutatja be >"C-é!i és 25':<CMn (A és € panel) és: C.P8-CRMjsH O'C-on és 23*C-ott {B és D panel) kltkmhözb plTkors ne fe lomét rát alkalmazásával. A 24, ábra különböző töltőanyagokkal tázatoü minták ozmolal'stás (A pastel) és: OD)W (8 pástéi) mérését «ΙΟΙ::!®. ŐS:, A 2$, ábra stabilitási tesztelést mulat be a lé Kőanyag függvényében RIMiPLC alkalmazásává? magas dózisö (Λ panel) és alacsony dózist) (B panel) lúifíiízák kiszerelések esetében és ii:X íbl.C ad Tokai az MntC mtfióség :C pasai): vlasgiiíatáifi; A 2S. ábra kevesietés sstási adatokat mutat Ív mind a négy antigénre: mttigén-koncsnífáeié (rmClíA és MntC a? A panelen; CPS-CKM^á* CPfS-CRMij; is H panelen), rwCHA és MntC tBzsnsága RB-HR-C-vel (B panel), MntC íisztasága fEX-HPÍ,.C~v«i {C pastel), pH (D panel) és ÜDjm (B panel). A 2.7, ábra predíof;iímUvós és peszt-liofilizadns adatoka: mutat be mind a négy antigénre, RiMiPLC adatok roíCIlA és MntC esetéit íA partéi), nefeintfieirlás eredmények CF.1-CBM5,o sB panel) és CP8*CRMjyj {C panel) cselén, OCX-MPLC adatok MntC esetén 4,5¾ srach&amp;tóz (D panel) és 4C1 aumnisoi/1 ^v szacharóz (E panel) oikalm&amp;zásihül, DSC adatok (F panel) és a rsnCll'A (G panel) és kofijsigátmtjok (H panel) százalékos hatásossá-gai: A 28. ábra mngas és aíacmny dózisé kiszerelések oamoialitását ttuttatjts be Λ 2U ábra RfMIT £ íu-ztasagi adaíoktsl mosat be MntC eseteit (A pa.sei'· es i'zaCÜ'A v-., ten (ts i'ouri) IPX HPI..C tisztasági adatokat MntC cselén (C panel), és MntC feloldás mám kinetikáját (D panel) és az rwí.'HA degradációját (E pattéi). A 30, ábra feloldás utáni antigén-koncentrációkat (A-0 pátiéi) és pH stabilitást (E panel) mulat be, Λ 41 ábra n/ am j «< k,n<. emuk t s f \ H pare!) c·, Osztásán 11 v> í > pa tel) butibbá as utam vmza n ereset mutatja be. Λ 32. ábra feloldás mám rwí HA (A panel) és MntC US panel) tisztaságot, rwCIfA (C panel) és Mm€ U~> panel) koncentrációt, CP5*CRMt,j (£ panel) és CPb-CRM;..? (F panelt koncentrációt, és pH stabilitási (0 panel) mutat be, .A 33. abtt! fagyasztás- fehiy.wta utáni rmClf'A és MmO tisztaságot RlMiPLC-vsí (A panel). Mnu tíszi.}-s&amp;goHbX-HFU -ve* {0 peneip rv'gea-konv.íntrácíokx: <ί osDpmk ; se ml ,bth am ü pavRmutó be, A 3d é'Av kevmetés u">ot ' >»v Ha <?» Matt' ti?/:as, :>n RP-Hl'i >' \zi ΐ \ ρη,Ί'> MntC tisztaságot 1LX-HPLC-vd tlí panel), antigén -koncentrációkat (C és Γ3 panel s és pH-t (F panel) es 01 I;s,yi (F panel) mutat be. Λ 33. ábra íSíOMATRlX’Xd visszaoldötl MntC degradációját mutatja be IMCC-on (A pund) és iBAO-on |B panel) CT.X-HPI.C-V&amp;I elemezve 24 óta didiével, fSCOMATROf “-al v:w.i»1d>Mt )mi.' b'A tisztaságát CHX-HFLC-ve! elemezve (C és D panel), .iSCOMATRIX^-al vissaaoldott MntC tisztaságát 2-40008 H; pattéi) és 2:v;€ou <F pane;? RP-'HPlC-ve) elemezve, a CPS-CPMjo? és CPH-C'RM;*: konjt)gnt«m-könee;v,ráeibkaé ÍRCOMA fktX'"~;tí 2-8t.0 panel) ex BBC-ísn ;|Ί panel), es ratCífA és Mmc koncentrációkat ÍSCOM ATRI X'-al 2-SX-oft 0 panel) és 25'C-öíí Q panel), A 36. ábra visszaddott kiszerelések ISCOMATRJX**' koTícettírúeiéil mutatja be 23 éra után 2-tPC-on {A panel) és 2S''C-on (8 panel?, ISCOMzVí RIX"* részecskeméreteit (C panel), és pH stabilitását (D partd). Á 37. ábra ISCOMATRl'X'Xd vlsszaoldott MntC tisztaságát (A panel) és deaaotidádóját mutatja be RP-HPLC-vei elemezve 4 éra elteltével esa mi gén· 4;o neentrácíéka t 1SCOM ATR .1X* %?! (C és D panel). A 38. ábra visszaoldott kiszerelések fSCÖMATRIX^ részeeskeméseíét4Apattéi) és pH stabilitását (I) panel) jimut&amp;lja be 4 Ara elteltével A 39 A-.1 abrak a ClfA egymás alá rendezését mutatja be X. aimus kt'ildnbb?.Ö törzsei között ÍSEQ IB NO: 62,64, óik 84, 70, 104, 66, 78, bo, U, %\ 72, 74, ?fi, bt), 44, §2, 92,96, m, 100, 102, 106, és Kbh a felumtetés sorrendjében? A 40 \-i absák a t Tó mo név Ja rét d»y*«*t n utat'a be S különböző törzset kbzbtt iSEO ID NO:: 26. 28, 32, 18, 54, 34,3b. 30. 16, >0, 22, 34, 38,40,42,44.46,48.50. 52. 56, 58, és 60, a féitönfetés spptmli-bcn). A 41. A-C ábrák az Matt:' egymás alá rendezését mutatja be X. tmteus különbbz.ó törzset közölt ÍSBQ ÍD NO 3, »8, Itt, 4,6, 14 és 12, a feltüntetés sorrendjében). 4 42, ábra i.1tB szék verte :ák,r mutat K? 7 <ntm>s hthonbózo Fm zamból, A 43, ábra MntC szekvenciák a· mntai ’ne X mrens különböző törzseiből.

AJaMÍ?«á»Q)Í54kÍM.&amp;MM

Mielőtt a találmány szerinti eljárásokat és kezelést módszertant Ismertetjük, nyilvánvaló. hogy a találmány nem koíiátözédik az ísoaenetett konkrét dtarásokra es kiserlet» körtiSményckre. és ily mértmt az eljárások és körllin'Cf'Sí'k v A:kv4»4n<;k Az :S intivanvaío, img\ tz nt .4k.dmázott fu-nsinnayua az adott nrgvalAsu.Nt tro ·:Α iéRss.»,. Nzolpal, t"> ’όί tek,mhcíó korkrn -enek

Hal’.é: a leírásban ismertetett eljárásokhoz és anyagokhoz hasonlóak vagy azokkal ekvivalensek is a lkaira az-hmök a találmány gyakorlatba vételéhez és teszteléséhez, sssnertetjük az clbnyb;. eljárásokat és anyagokat. A leírásban alkalmazott kifejezéseknek a szakterületeit ismert jelentése van és ismertek a szakember színné* \}< azonban a Kényí k- n ex k k- 'gke-tu-c-t ί:λ>« koejezétovít es jelentésül et megadjuk az alábbm! t m Λ leírásban, és a csalok igénypontokban a határozathat és határost névelő egyes számú formái nmem ól ecu: · tödben magukban í'o^Jaíják a többes számú rriereneuíkal, amennyiben a tartalom nyilvánvalóan másként kövei a* h mez Ils módos például a/ „ehará»"'m \ mmthoző h vatko-msok naagnkban topjainak m vágj több editöst éx-'vagy ás ismerteteti típusa lépésekéi és'vagy antetyek nyilvánvalóak a szakember számára a kiinis elolvasása után, és így tovább. A ,,\toék -lm vágj , rv,A<> tohuuy k íMeok eg> ,tootí értek stáOvnktokn éttehnezhető tartomanváí %~ lenti, egy ilyen mi tömény eg.j nagy sági ancien belüli lehet, tipikusan 20‘Vm., tipikus abban iö%~ra ás még tipika-ssbban 50f-ra as. adott értéktől vagy ttmontönytoS \ζ ,,ΙοπηΙνίηΓ s u;> , ntoekbrdtUdeg" kifejezés áltál meg-eupédhetft vamhiluus a siz-rait nfatfe/e* κ·1 Utgg, vs n\dx msato a szakembes számára. Arm kos égj tartományra híváskoraink á leírásban, minden «gyes tartományon beiül! égés?, ásóin Is a találmány megvalósítási módjának lek intendő, kgv „ellenanyag" olyan immunglobulin molekula, amely képes specifikusan kötőum eőlmolekniához, uhut péklóul szénhidráthoz. poliaukieottdhoz, Hpldhez. polipepOdhez, stb. legalább egy anügeníélkmerö helyen ke-resztül, ami a? immunglobulin molekula variábilis, téglájában helyezkedik el. A leírás szerinti értelemben, hacsak inasképpen nem jeleztük, a kifejezés alatt ősi emlők nem csak monoklonáíis ellenanyag, de génméirsöki álon módosított ellenanyagok la (például kimérs, humanizált és/vagy et&amp;ktor funkciókban,, stabilitásban és más biológiát aktivitásban szármaséköftatott) és azok tragman&amp;eí (mint például Eab; babk b{ab'}2, kV}-, egylttncú tSef-v) ev dmtutt rOenattsaenk, beleértve e-ipa es tesz ellenanyagokat), e* sllemmyag-részíetet tartalmazó íhziős fehérjék, mnhivakns ellenanyagok, muluspeeiukus ellenanyagok (például hispedíikns eikmauyagok, mindad-dig, atníi.·: nnmuják a kívánt biológiai aktivitást! és a leírásban ismertetett ellunanyag-ásígmonsek: és a? immunglobulin tnoiekttia bármely más módosított kontkoráetop amely antlgslnfélismerilEgy ellenanyag bármely ellenanyag-osztályba tartozhat, mint például IgO, IgA vagy iglvf (vagy ezek alosztálya), ás az ellenanyag aem keli, hogy bármilyen adott osztályba tartozzon. Az dlmmnvag-nehézlánc konstans doménjének az turőnösav-szekvendájató! függően az immunglobulinokat különbőzéi osztályokban sorolhatjuk be. Embere k-ben bt íl inmmngíobuiíö osztály vats; IgA, IgD, tgC, IgG és IgM, és ezek közöl többet tovább csoportosíthatunk alosztályokba (izoiipusok). például Igéi 1, SgGl IgG 3, lgG4, IgAl és IgAl Az immunglobulinok különböző osztályainak megtelek! nehézláue konstans doméneket sorrendben alfa, deka, epszilon, gamma én mú néven nevezzük. Az immunglobulinok különböző osztályainak az alegység-szerkezete és háromdimenziós konílgurá-dója jéi ismert.

Az „slleaauyag-íhtgmensek" &amp; teljes hosszúságú ellenanyagnak csak egy részletét tartalmazzák, ahol a részlet dónyösen megtartja a txlszíd legalább egy, előnyösen a legtöbb vagy östntzís funkdőjáb amellyel normálisan rendelkezik, tusikor a teljes ellenanyagban: vau jelen-

Az „antigén" kifejezés alatt általában biológiai molekulát értünk, rendszeriül proteint, pepiidet, poliszaeeharklot, ftpidet Vágy koítjugáíumet, amely legalább egy olyan eplíopot tartalmaz, amelyhez egy felismerő ellenauyag képes szelektíven kötődni; vagy bizonyos esetekben hmnanogén anyagot, amely képes stimuláló! ellenanyagok vagy T-sejíes-válasz kisiskolását, vágy mindkettőt egy állatban, beleértve olyan készítményeket, amelyek injektálva vagy adszorbeáíva vannak az állatban. Az immunválaszt a teljes molekula dlél? aányulhaö Vágy a molekula egy vagy több különböző részlete ellen (például epitőp vagy hapten). A kifejezés vonatkozhat egyedi molekulára vagy antigeníkas molekulák homogén vagy heterogén populációjára. Egy ami- gént eiknanyacok.. T-sejt receptorok vagy a speallkus hmnoráüs és-Vagy ceüu lárts immunitás. más «lemet Is-mernek, te! Az „antigén" hiílpe/vs óságában ingád ps az ibszes rokon un n gén iktat epítöpov. agy amisen adott q.móppm búm) ilyen eplmp-térképező módszer aikaímazásávaí azonosíthatjuk, amelyek jól ismerlek a szekterü·· leien, Lásd példáid „Epitope Mapping Protect) Is itt Methods ni Molecular Biology", 66, kőiét i.szerk.: Okán E. Morris, 1996) kiad.: Humana Etess, Tosocvy, fv j. Például Iseeárl:; ep kúpokat nagyszámú pepiid -szilárd hordo-ión való sncgr/aps'ii/'.d a,.Ha baka őzt .intek sue a, ahol a peptide! megjelelnek a piote-n mohAtUa nooL-a nrk. is a peptidek eiknunvagnkkai történő teug&amp;ltaíávávaj, nőkéiben a peptide's a hordozóhoz unnak kapcsolva, ilyen módszerek smert-'k s s/í-km-nma*)!, e» példáid a következők oantnK-sl l ο »1 MR,4'; χ/,»η»η. an etikai, vgyv&amp;üh ajiamokhüt v»obadaí."n mit, Gebeit «. mt«a. ; ií!k4's ív>r \<jt: »v,M Vs t S- Rí Ρ·ο^.αθ(ί.;, öeyseu ás Püsai. 09861 Molee Imnmnol. 21:709-.71.5. Masunióképpen kenforntáuós epilöpokat is azonos Itha-«nők az aminosav&amp;k térbeli konfotmúetőjának azonosításával, unni például rön-goo-¾sIs/taíiográíMval és 3-d* " -vart magntagnvses ií-mn.imm 3 iám példád etiópé Skg nnp ihoawi ' soon inni 1 zenit iái a jelen találmány céljaim egy „antigén’' alatt emiattiink olyan proteint is. amely módosításokat tartalmaz a natív szek-vc-rm iájában, mint például deiéctókat. addiciókss . < "uhs/uu.eiOt.it Ritáit''nt Um/matts lermeszetüekeb de lehetnek nem-konzervatlvak is), mindaddig, amíg megtartja a képességéi immunválasz kiváltására. Ezek a ηκί-dv-da A kiesnek sAHidékosák, ms n primo;! vLxpetif kj» und,sec jen- twut t sg\ ».p<.f titka? az intézi? pn' vcöárák révén, vagy góntoérnökí módosítás útján, vagy {ehetnek véletlenszerűek, mini példáid az antigénekéi termelő gazdák mutációi révén. Ezenfelül az antigén származhat, nyerhető vágj izolálható mikrobából. például bakwtiumbo!, vngy lehet egy teljes organizmus ita-sonlóképpcn égj s>kponnkk.otk! vagy poi inuk lent id* amely antigént ex presszók mim például nuk iemso v-im ;n u n i zác.) ós alkalmazásokba», is beleértendő a deftniesóbá. Szintes ikos antigének is Ide értendők, példáid poiíepitóppk* szt||éiyexÖ '.epjilóp^ vagy sziüiétí- •kas eredetű antigének (Besgosano és ml.m 0993} Eur, 7. Imsnuno!, 23:277? 278 L Bergmamt és mtsaí, {1996} J. ltomon»:)!, 157,'3242 3249; Suisrbiér} ,4. (1997) Immtínui. and Ceil Biol. 75:-402 »108; Gardner és mtsai. (1998.) 32i.is World .AIDS Conference, Genova, Ewitxerisnd; Jón. 28 - Juí. 199S}.

Ae „ati.itsvsms" kdéjezés aiatí olyan vegyilletet vstgy keveréket étttitsk. tistsely ínkoxs·) ísz sustigésve isiots isrs»· mtsnválaszL amint tovább ismertetjük és szemiéítetillk a leírásba». A „baklerémia" baktétiumok állandó jekmléíe a vérben. A bakterémia útaktkoihat szepüeémiává szép-szissé, anrt tettözésrt-ek tekiPíisetO és a bstkíérittmok áíistndé jeleníéte a vérben a hozzá kapcsolódó kltntkai jelek-keíAünetekkei. Nem minden baktérium képes túléltti a vérben. Amelyek képesek, speeifiktts genetikai tttiajdon» 'Ságokkal tsmielkezsek, amelyek biztosítják ezt a képességet. Továbbá a gazda l'aktorok is fotstas-szerepet játszanak, A „btmskpoítszstccharid" sslaíi a poisszaedrarsd Ihíííoí értjük, anteiy a seltfelcas kívül körbeveszi a legtöbb sztaítíokokkusz izoiátumot. Például a »9 mmtm psptkioglikán kompíesböi álló sejttábkompímenst taríahnaZí amely lehetővé teszi hogy az oty^rtíztnns iúléljea kedvezőtlen oztuotikus körülmények között és égf edi 4010001-savat iattalmaza peptidogiikánboz kapessMva, A sej tilt ion kívül vékony poliszaecharki burok fedi i>e&amp; legtöbb ál amrks izolátumní. Ez a semdőgsaiisg különleges borok alkalmazható a &amp; mtmm ktOőubőzö kolaiamaínak szerotipizálására. A kltnikatlag jelentős izolátornak Isgtőhbjétöí kimniart#:, hogy kétl^ía ibotsk Opusét á-Ss szerotíptts (CP5) és 8-as szerotipus <C!>8). A leírás szértrtíi értelemben a *koR)i^um<e&amp;»:' áfeÍÜP:':».::lív^t .^«kulídőtmg-teatotnMy^,^. pöEszaeebaridot és bordozőiehérjét tartalmaznak, ahol a burokpoiiszacehtsrki konjogáiva vats a bordozófebétjé- |b&amp; A köiyagtomok tartalmazhatnak vagy sem bizonyos mennyiségű szabad bvifokpalís^sshtóibt. A leírás szeműt értelemben a „szabad htttok^xiiiszaeeharkP akid olyan poltSKtccharklot értünk, amely nem kövttlensen kapestilódík a ktmjitgsllt btöa>kíMdisaa(ccbörki~lKit<kii«bdidf{bbex {azaz· «ent-kovafeosen kötődik, adsxerlteáktdtk vagy beburköittdtk}. A „szabad btnrökpölísmehamí." „szabad pelíszaccharid” és „szabad szacdtarid" kifejezések felcserélhető módon alkalmazhatók és ugyanaz értendő aktnak, Függetlenül a iutrdozófehárje termászetát&amp;h az akár közveí lentik, akár kapcsoiómolekokin keresztit tehet kOftjugáíva a hurok poliszaccharidhoz, A leírás szerinti értelemtxm a „koojugáhn1', „kotijugálí" és „konjugálás'' kifejezések dián szí a folyamatot· értjük, ami által s bakteriális bmxdfpdisjsacchmid kovalensen hozzákapesülödik ktmjygáiás fökazzá a baktertáüs bmokpoiíszaediartd immunogenmlsát. A konjugálárt az. alább ismerteiéit eljárásokkal vagy a szakterületen ismeri folyamatokkal hajthatjuk végre,

Amint: fent ismertessük, a találmány tárgyát Imrdezóíehérjéhez konjagáit ál áttrem 5-os szerodptssá burok-pbiiszaeebsiidokat <CP5) tartalmazó konjagáitimok ás hordexófehérjáhez konjngált ál (turnus 8-&amp;s szermlpusti ::::bt^kpollszaochar^^M:lt^^^:;tonjn|átnmok'képemk, A találmány egy megvalósítási módját S. (turnus 5-#s szetottpusá burekpoiiszaedwsi képezi CÉk^rbez konjugálva és SI aureus 8-as, szerotipusú bnmkpnií-szsecharid konjagálva CRM;,>?-itez. ahol: az 5-is típusú ixtrokpoliszaecharid molekulatömege át) kDa ás 800 kDa közötti; a §-as tipusá httrtskpóliszaeditaid stolekalatömege 5ö ás ?00 kPa közötti; az imtmiftögén konjtigáítimök molekulatömege körülbelül mint körülbelül 30% szabad poiisssaccharidet tsdaimaz a teles pofeacéharid mennyiségre vonatkoztatva, Egy tnegvaió:.it.isi mód szered a kod}a|^tm«ök---kev^^b::míftt:tlfilM6t 25%, körülbelül 20%, körülbelül 1554 körülbelül |0%, vagy körülbelül 5¾¾ szabad polissstccbandot tartalmaznak a teljes poiiszíicekartd mennyiségre vonatkoztatva, Egy megvalósítási mód szerint «? 5-ös vágj. S-m ííposü pohszaecharkl molekulatömege körütbcs-Ilii 50 kDa is kört! Ilidül 1000 kPa közön;: körülbelül *0 KDa ás körülbelül 500 kDa közötti; körülbelül 50 kPa és körei beiül 200 kDa közibe ás körülbelül 75 kPa és körülbelül 150 kDa közöld. 1 yy ínegvak'S'feSi mód szermi a homüg.uum moleknkdömcge körülbelül 50 kPa és .körülbelül 500 kDa közöm. Egy megvalósítási mód szerint a ktinjugátum medekulmömeue körülbelül 200 kPa ás körlJlixiHll 5ÖÖ0 kPa közötti. Egy megvalósítási mód szerint az mmmrmgco koujugátom nküekulatömege körülbelül 40(1 kPa ás kömén n' ?%ö kf). k ->zöth 1 gv megva’nsU; ι mos \vr m az inmmixgfen koujngátom molekulatömege körűibe' kd 500 kDa és körülbelül: 2500 kDa közötti. így megvnkWtth; mód szét int az tirammogén kotijugáínm molekulatömege körülbelül 600 kDa ás körülbelül 2700 kDa közötti. Egy megvalósítási mód szerint: az immunogén koniugáium molekulatömege körülbelül 700 kPa és körülbelül 2700 kPa közötti. Egy megvalósítási mod szét lm az. immunogén konjugábim molektdatömege körülbelül 1000 kPa és körülbelül 20(H) kPa közötti; körülbelül 1800 kDa és körülbelül 2500 kPa közötti; körülbelül i 100 kDa és körülbelül 2200 kPa közötti; körülbelül 5000 kDa es körülbelül 2700 kDa közötti; köriilfe fel 1 ltot) ki >a es kötüUxmi 2400 kPa közölt;; köridődül I Afe kPa és körülbelül 2í>0o kPa közötii; körülbelül l.Hsü kPa es körüibeüd 26t»o kDa közötti; körülbelül K>0u kDa ás körülbelül 3000 kDa közötti.

Enm-k megfelelően a találmány szerinti I rnmtmmvn km nugátotokra levő hordozóiéból m a t'EM,,.?, és a CRMií' kovalensen kapcsolva van a hurokjxdiszacdiandhoz kari>aiuát kapcsolással, amid kupéimlássál vagy mmdl ette vei, A I hu ioz.ö le hérj ében levő, búid indus.,xeh<u'k'.ho> konjugálásra alkalmas lízn olduU.mrok szse mát a kot;gigáit itzmek tartományával jellemezhetjük. Például egy adott unmunogén készítményben a CRM a )0 \,v.si s - 15 ín 't tártálmazttat kováiéit?"» sai > v. Ka a I prli-·zrc O arxdfev Egy m,,s k ι \ni vzett p-ifto méter kifejtésére aat, hogy a CRM»« N«íísek 12-40%-a van kovalensen kapcsolva a bi^ohpö1ÍSMCchart||te2í Bizögyós rmtgyalósitási módok szerint a CRMm t^sze a polisziteckaridbyz; kapcsok CRM^ptteh 5 * 2S l|l(k tamiontz kováid isms kapcsolva a poiiszaeeharidhoz. Rkomyos ntegyalödtási módok szefmt a €RMW réssé a peliszaccharidhoz kapcsok CRM^-nek 5-20 iizini tartalmaz kovalensen hágcsóivá a políszaecdntfldhoz, Biz»* hvos megvalósítási smkiok szerint a CRM,« rém: a poiiszaecharidhoz kapcsok heidozófehérjének 10 - 25 üz,mt tertahnaz kovalense» kapcsolva a poiiszaeeharklhoz. Bizonyos ntegyálésitási módok szerjot a €RMs« része á pöliszocdterídhoz kapcsok hordo/ófehérjének 8 - IS iizini tartalmaz kovalensen kapcsolva a pcdiszaecharidhoz. Poklául egy adok inummogén készítményben a CRM(>>? a 30 közül I S * 22 imát tartalmazhat kovalensem kept csolva a hatohpoliszacehamihoz. Egy sitásík mód ezen parameter kifejezésére az, hogy a €RM·^ Halnék· 46* 08%-a van kovalensen kapcsolva a btawkpoltszaceharidhpz. Bizonyos megvalósítási módok szériát a CRMÍS> &amp; 10 közöl 5 15 lizmt tartalmaikat kovaieasen kapcsolva a CPS-hoz. Egy másik mód ezer# paraméter kifejezésére az, hogy &amp;· €:RM>«? lödnek 12-40%-a van kovalensen kapcsolva» CS}tíum Bizottyos megvalósítói módok szerint a €%Mw ·&amp;·39 közül 18 - 22 íiziai tartalmaz kovalensen kapcsolva s CM-höz, Egy másik mód ezen paraméter kifejezésére az, hogy a CRM!?i? Üzirmk 40-00%-a van kovalensen kapcsolva a CRS-höz.

Amim feni tárgyaSmk, a h«rokpoiis?ar:chariához koTsjugált hordozóíéhérjéheo lévő lizin-otelaMacok száma jellemezhető a konjogáit iizhtek tertományával, amit moláris arányként fejezhetünk ki Béláéul a CRMs<irh(tz; konjagáíí iizinck mólaránya a CP8 immunogen konjugátutnbatt körülbelül 18:1 éskdrülisdüí 22:1 közötti tehet, Egy megvalósítási mód szerint a CRM,,.-hcz. konjugált hzittek mólaránya a CÉH immunogen konjugálumban;· körül hd ül S5;i cs körülbelül Iá 1 köröm tehet Bizonyos megvalósítást módok szerint a ORMj*- hoz konjugálí fizinek móiaránya a CBS immunagéa konjugátumbat} körülbelül 14:1 és körülbelül 213:1; körülbelül 12:1 és körülbelül 18:1; körülbelül 10:1 és körülbelül ló:!; körülbelül 8:1 és körülbelül í4:í; körülbelül 6:1 és körülbelül 12:1; körülbelül 4:1 és körülbelül 10:1: körülbelül 20:1 és körülbelül 26:1; körülbelül 22:3 és körülbelül 28:3; körülbelül 2^:1 és kötnie-' ü. 10 í LmüüvUk m < <s körülbelül 33:1, ko”ülbeHü 28'1 és körülbelül -t 5. körülbelül 30:1 és körülbelül 36:1; körülbelül 3:1 es körülbelül 10:1; körülbelül S;i és körülbelül 20:1; körülijeiül fb:l és. körülbelül 20:1: vagy körülhelü) UH és körülbelül 20:1 közötti lehel. Továbbá &amp; CRM^-j-hez korija-été i /i se1' móítaártya a < θ'» η n un' Vo t g.t, mkrs körűibe lel 4 i et kötulbddi 2* közötti tehet 1 tó mogsutesu í-.-λ mod »zet!nt a t HM *«Ky korpsult nemek möhnánsa a ΓΓ3 nnmenogevf konjugütumban kotd-, 'tol N I c^ körölbeUV 30 I kO’óit' 'ehet Így mesn do^tesi ütöd szerint a CKkW-hez horgugált Ir.oel mólaránya a CP5 immunogén konjugáiumban körülbelül 4:1 és körülbelül 2ö:l; körülbelül 6:1 és körülbelül 20:1; körülbelül ?:í és körülbelül 20 C körülbelül 8 I és körülbelül 20:1; körüibdö! 10:1 és körülbelül 2t):!; körülbelül ll:t és körülbelül 20; I; körülbelül 12:1 és körül hetei 20:1; körülbelül 13; s és körülbelül 20:1: körülbelül 14:3 és körülbelül 20:1; körülbelül ;S:i és kötülbeiili 30:1; körülbelül 16:1 és körülbelül 20:1; körülbelül !?:! és körülbelül 20:1; körülbelül 18:1 és körülbelül 20:1; körülbelül 5:3 és körülbelül 18:1; körülbelül Ή és körülbelül ló: 1; vagy körülbelül 9:1 és körilibdíll Ϊ4:! közötti lehel.

Bgv másik mód tt burokpoíiszaechttridhoz kenjugálí hordozótéhérjélxm lévő lízin-otdailáneok számának |d-lemzéséte a kímjugólt iízinek tmtontánya lehel. Például egy adott CP8 nnmonogén hétmüményben a OtMs,.? a 11 közül 5 - 15 liziöt tarsaíniazhat kovalensen kapcsolva a btaokpoiiszttecharidboz., Mtis megoldásképpen e:zt a paratiteum százalékosan aöhatjtsk meg. Például egy adott CT8 vmmtnogén kotutigánmibati a kotijngált lizroek s, kSzateka CCS es 5Üfo közotli lehet. Bizonyos megvaiíoütad tmxiok szermt a Érmek 2éb5(>’‘<í-a lehet kovalensen kapcsolva a í'EH-hoz. Még más megoldásképpen a CRMj«? íizinek 30-56%-»: » CRM^? lizhtek 10-40%-»; a .CRMw iixioek 10-30%-* a CHMm iizmek 2<M0%-a; 8 CRM{9v űrinek25-40%-a: a CRM,* liziaefc 30-40%-a; a CRM,* főinek 10.-30%.»; a CRM}*;iőöt«k 15-30%-a; a CRMj* fizinek 20-30%-a; a CRM»? főinek 25-30%-a; 8 CRMm tőinek Hlri.M-áa; vagy a C8M(W űrinek 10-12%-a lehet kovalensen kapcsolva a CPk-hox. Továbbá egy adok CP.5 immunogen konjugátumban &amp; CRM,* a 39 közül 3 8 - 22 úrim tartalmazhat kovalense» kpiKisoiva a l:apok|»átszaceíca ídÍ5ioz. Más megoldásképpen ezt a paramétert százalékosan adhatjuk meg, Például egv adott CP5 immunogéo konjugátumhso a konjtigált lizinek százaléka 40% és 60% kőrikii leket. Bizonyos megvalósítási módok szériát a löktek 40-ő0%vS lehet kovalensen kapcsolva a CP5-hdz. Még más megofdáskép-sx:o a ClíM(<;? lizinek 30-50%-a; a CRM,* iizínek 20-40%-a; a CRM,* űrinek I0-:3O%-ö; a CRMm 1 leinek S0-?ö%-a:« CRMW lizinek 35-65%-a; a CHMiW főinek 30-60%-a; aCRM,w lizinek 25-$5%-a; &amp; CRM,* lizinek 20-50%*: a CRMW* lizinek 15-45%-a; a CRMm lizinek 10-40%-a; a CRM,« tőinek 4O-?0%~a; vagy a CRMi«y lizinek 4S-?S%-a lehet kov&amp;íetiseh kapcsolva a €P5-höz, Λ bm'ökpoliszaedíariti'dáixmak a hotdozőiehérje Hzinjéhez való kapcsolási gyakorisága egy másik paraméter a burokpoi iszaccImrki konjugátumok jellemzésére. Példán! egy megvalósítási mád szerint legalább egy kovalens kapcsolás fordul «16 a CRM,* és a pollszseehark! között a imrokpoűszaceharid legalább ndnden 5-10 szaccbarsd ismétlődő egysegére, ügy másik megvalósítási mád szerint legalább egy kovalens kapesolíss tördel elő a CRM; i- és a barokpobszaeeiiaríd között minden 5-10 szacéharki ismétlődő egységem; minden 3-7 szaecharid ismétlődő egy ségte. minden 3-8 szaecharid ismétlődő egységre; minden 4-0 szaecharid ismétlődő egységre, minden b-J I ssacchnttd ismétlődő egységre; mtnden 7-12 szaecharid ismétlődő egységre; minden 8-13 t-zseehariö ismétlődő egységre; minden 0-14 szaccharid ismétlődő egységre; minden 10-15 szaccharid ismétlődő egy, cg; e, mtndeo 2-á szaeehand ismétlődő egységre, mtnden 5-7 szaccharid ismétlődő egységre; minden ->0 szaccharid ismétlődő egységre; mindet; 6-10 szaccharid ismétlődő egységre; minden ?-í I szaecharid ismét-iődő egységre; nunden 8- = 7 szart hátid ssísmíocío emsémé, minden 9-13 xzacehaud ismétlődő egységre; minden 10-14 szaccharid ismétlődő egységre; minden 10-7.0 szntxbarid ismétlődő egységre; minden 5Ί0 szaccharid ismétlődő egységre a barokpofezaceharidban. ügy másik megvalósítási mód szerint legalább egy kovalens kapcsolás fordul elő a CRM>·?? és a burokpoliszaccharid között a burok poítszaccharíd minden 2, 3„ 4. 5, f>. 7, B. 0, I(?, t!, 12.13. 14, 15, 16, 17. 15, 10 vagy 20 sxscchand ismétiödő egységére, Λ poiíszaeeharkiok kémiai akt)válását és a I cs tozoish:-* j.ácv tom-nő azt kövem konjugálását hagyományos eszközökkel érjük ei. Lásd például az US 4.673,574 és I ;S 4,902,506 szántó amerikai egyesüli államokbeli szabadalmi iratokat. Más megoldásképpen egyéb akii válási és konjugálást eljárások is alkalmazhatók. A Jaxdozófeheije' vagy „protetn hordozó" t$ leírás vonni értelemben bármelyen olyan fehérjét jelent, amely konjagáihatő antigénhez, (mini példám bntokpoliszaccisa^dokhoz), amely ellen '.mmunválaöz kívánatos. Aotsgéít, mim például poliszaecharid konjugálása hordozói ebé tjéhez; az antigén ímmunogénné teheti. A hordo-zöfehérjék előnyöseit olyan fehérjék, amelyek nem toxikusait és nem reaktogének és keltő mennyiségben és tisztaságban élesít rntm, k hordozoteher ék pelen kőzv uravo,d toxn vx, toxotdvk \,> u .-uí tmru's keresztreagáíó anyag -CRM a tetanusz. díiléria, permssz.isz, í'srudofnonas fajok. 6' eo/í. Skiphyhr^cryx fajok és Simpiococcm latok ioxmjai közül. A bordozófehérjéknek alkalmasnak keli lenniük szokásos konjugálást eljárásokra, ügy előnyős megvalósítási mód szemű CRM alkaimaz-ank hordozófehérjekánt; A ORM( i A \ ;h, Siuíiii Nv ) t dtiVma ‘ >yiu egy nem toxikus variánsa iazuz toxoid.!, nmeivel a Conml· Jiphtheri'i \ 1 w totzséte'k tjkíő kazunmsosav- és élesztőkivönat-alapü tápkdzegben aövesz- teít tény even's hói van izolálva Λ C8MiW- ο../ouu-a ahraszuressel, ammonstím-szutla» k<v - apással és tortcw tdo

Jcroiftatogiáfiávai történik. A Cotymbfíctemm diphthctiae €?(,.>:) törzs tenyészete, amely a CRMj.r; protein! termeli, letétbe le» helyezve az America», ‘type Culture Collects»»· (Rockville, Maryland) htfézetéuéi, ÓS Φ ATCC l>2d I hozzáférési szárny kap! a. Más díftérm ioxoldok szíttól alkalmasak itordnzófehérjekéni történd alkalmazásra.

Mis alkalmas Ítordozöfeítérjék közé tartoznak makttváú bakteriális taxinak, mini például telatmsz toxoid, pertussztsz: toxols?, kőim toxokí t pekkmi ammtazt a WOSÖÖdóÖS'tíSl számú nemzetközi közzétételt irat ismer* teli), E, sóit LT« A; eoA $T, és a Pseudfimms omtgmosobói származó exotoxí n A, Bakt erláíia kSisb membrán fehérjék, mint pékiátd a külső membrán komplex c (OMBCJ, portnok, Uaoszíemo kötő fehérjék, pneumoíixtn, pnenmokokkitsz Msami protein Λ tííxpA), ptteumokokkosz adhezm protein (PsttfVk Cx (U$Mb mtvmimm {toxin A) és cüoioxin (toxin B) vagy lAumopkilm m/haiman protein D is alkaltmsdtatói Más fehérjék* mint például sztrepíokokkttsz C5a peptkiaz. (SO*), ovaibunrtm kürtösesiga hemoeíamn <KLHt„ szarvasmarha szérum* albumin (BSA) vagy a tuberkttítu tisztított lehérje5zátmaz.éka I hkp) is alkalmazható itordozöfehórjeként A iiorokpoliszaeetiaridnak a ImMozéfehorjeíuv tót lenó konjugálása «tán a ptrUszaeehsdddeherje könjogáíttmokal megtisztítjuk (dúsítjuk a poiiarttedísriddehérje kcmjupium mennyiségére vonatkozóan) kíllöti-11% módszerekkel. Ezen módszerek közé tartoznak, például koneentráioÁimfsltrúié műveletek, kícsapáa'eltklá, osz.lopknsmaiojgráfia, és mélységi szörés. lásd az alábbi példákat. Múltán az egyedi konjugámmökat tnegliszh'íoúuk, azokat kombinálhatjuk a találmány szerinti immunogen készítmény formulikzására, amelyet például vakcinaként alkalmazhatunk. A találmány szerinti immunogen ke-azmweuv kiszerelését a vzakterúleíen «smert eljárások alkalmazásav&amp;l eikéglik el

Megjegyezzitks hogy a leírásban az olyan kifejezések, mim például a „tartalmaz", tótahsutzztC, „tartahtutr zó", „magában foglal", „magában foglaló" és hasonlók jelentése az USA szabadalmi gyakorlatában aiktdmuzott; például jelenthetik, hogy „befoglal", „benne foglalt" „benne lévő" és hasonlók. Az Ilyen kifejezések az adott alkotóelemek var;·, ail-ofóeiem-lászleíeI ulkafowavjí jelentik, anélkül, hogy más alkotóelemeket kizárnánk Az óban kifejezések, mim péidátd „lényegeben emtből ilSe" es „lényegében áll vnnmu" jeiemese az USA szabit-dalmi gyakorlatéban Alkalmazóit, példát! I lehetővé tesznek további alkotórészeket vagy lépéseket, amelyek nem seszik el az találmány újdonságát vagy alapvető jellegzetességéi, azaz kizárják a technika állása nem említett alkotóelemeit vagy lépéseit, mint például a technika állása leírásban idézett dokumentumait, különösen mivel hoes exn dehomuimmrm sd{0 a szabadalmazmto π rgvöosuax; ít'ődok de fi múlása odd mi uj, nem n\ iKánva-16, felialálói jdlégii a technika állásához viszonyúvá, például leírásban idézett dokumentumokhoz kópesí, .Az. „all vtuihof' és „vmtpol álló" kifejezések jelentése az USA szabadnám: gyuUuiatáV-mt alkalmazott; nevezetesen ezek a kitetezétó kszároak. Ennek megfelelően az ilyen kifejezések u/ admt alkotóelemek vagy alkotóelem-készletek alkalmazását jelentik, és minden más alkotóelem kizárását.

Egy skettzervuóv rminos&amp;v-azttbsztinkíó" alatt egy fehérje egy vagy több amlnosAV-oidaltáneának hasonló fizikai és/vagy kémsai tulajdonságú más araíaosav-öldalláticart való helyettesítését értjük. A szekvenciában található amino .as<ns szubsztiftense »,%<· ovi -'sztaiy bármely m tagja, .uuehhe az ít»trov*v tartozik IVUiaoi a nampoláros (huiroíbbt anttnosavak köze íztt-.v.ih az alsóin, lenein, izoleoein, vahn, ntoíin. fstulalímm, stiptoíM és metioinm Aromás gy;öröszerkezetekeí tartalmazó aminosavak a fesilaianin, trsptolan és ür<>zm A p« hatos semleges ammosavuk közé tartozik a gítein, szerin, íreonirt, tisztein. titozi»* nxzparagin és ghnaniin. A pozitiven·· töltött (bázikns) aminosavak közé tartozik az argintn, hzin és hisztiéin. A negatívan iöltött (savas) ammosavak közé tartozik az aszpiBagtnsav és gítrtamútsav. Az ilyen változtatásoktól netn várható, hogy befidyáaolják a molekulatömeget. .«nini ar pvdtakíuaimdgs'l chk!AA'-r;Ví:w,e; meg van hfoaro^x va-ν a/ izoeíektromcs pontot. Különösen előnyös szubsztitúciók: Lys Arg helyen és fordítva, oly módún, hogy a pozitív {öltés megmaradjon; Glu A ψ helyed ns forditv,;. oly rné-son, heg;, a nemittv tones megmaradjon. Se! i ír HeSy.ett, oh nődön, hogy a szabad -OH megmaradjon, és Gin Asn helyett, oly módon, hogy a szabad NH; nn-govaradjon,

A, h-mmee-h a lat! olyan m bérieket értünk, ahol egy narjobh lahérjéink . -0, gm, fokos dmnénlei maradnak üteg. Például a €1ÍA és CÜB proteinek akár k dosném is iarmiouizitatnitk, ha a szignáiszekveneiát is beleértjük. A* ΝΤΝ2Ή3, N2N3, NÍM2. Ni, N2 vagy m doméneknek megfelelő polipeptitkk. mindegyiket a ClfA vagy CIS íragmensének tekintjük, A ,foragmensM jeleni továbbá olyan proteint vagy peíipepridet is, amely legalább 4 armmwav-oídaiíáncbói (előnyösen legalább 10 ammosav-oldailáncbóh legalább 15 ammossv-ofdaiiánchól, legalább 20 amíiKtsav-oidol láncból,, legalább 25 immmsuv-okiaífánehök legalább 40 ajríinoaav-okiaikVoebóS, legalább 50 amínösav-oidaiiáncbói, legalább 50 ammosav-oldalláncbói, legalább 70 atmmssav-oldaiíáitcböi, legalább $0 amiwtsav-okialláttebói, legalább 00 ammosav-okialláaehók legalább 100 smmosav-oldaitónebóL legalább 125 amhmsav-oidoliárseöó! vagy legalább 15b ammösav-oldaiiúnobóí) álló amtno$áv^géky«(tolák'tmi1-ma* a szülőt proteinből vagy poiipeptidböl, vagy olyan mikkinsítv, amely legalább 10 bázispárból (előnyösen legalább 20 bázispárttól, legalább 30 bázispárt»!. legalább 40 házaspárból, legalább 50 bázispárból, legalább 50 bázispárból, legalább 100 bázispárból, legalább 200 bázispárttól) álló nokleotkbszekvenciát tartalmaz a sAííüí pokiemsavbóL bgy ellenanyag „funkcionális aktivitásit"' vagy „funkcionális ellenanyag’* a leírás szerint i értelemben olyan edenatsv vm nient, aauk tn.mrmrn \pvs \pe<. tíknvr kmódm eg> antigénhez íuvábht funkuok ismertek a szakterületen én ezek kézé tartozhatnak az ummmrend^zer további komponensei, amelyek kiváltják a paíogének kint áfásét vagy elpusztítását, mint például opszonizáetó, AfK'C vagy kon ; ρ i e me m - !·; or vetített ciwtoxicttós út* ján. Az. antígénkötbdés után bármely azt kővető ellenanyag-fűnk elét az ellenanyag re-régiója közvetíthet. Az ellenanyag opszunofagocílózís vizsgálati eljárás (ΟΡΛ; egy m vm-» eljárás, amely a baktériumok ót vitro lg-ko;ni)ieíB«ot*asszisz!áii effekfor sejtek t fehérvérsejtek) általi elpusztításának mérésére lett tervezve, ily módon ni ónozva a biológia? folyamatot. Az ellenanyag-kötés közvetlenül is gátolhatja azon antigén biológiai aktivitását, amelyhez kötődik, példán! olyan ellenanyagok, amelyek kötődnek a ClfA-hoz. semlegesíthetik annak eo/imatíkus funkcióit. Bizonyos megvalósítást modok szerint egy- .,funkdonáírt elfetnmvag" alatt oíyau ellenanyagot ériünk, amely baktériumok állati h&amp;íásosisáp modellben való elpusztításával mérve fímkehmáiís, vagy uh a?; vpívenoöv-vítozís eidius; vszsgaiab eljarm-ivu . amely demorsityilja, hogv az ellem? «vágok elpuszibják. a baktériumokat. Λ 6' ονίΠΛ burokpo 1 Iszaechorkiok iaoSekolalömege egy szetnpnt; áz. nnmtiíiogén készítményben történd alkalmazáskor. Például nagy moiekaíatdmegú burokpoliszaechttrídok képesek lehetnek bizonyos ellenanyag-immunválaszok kiváltására az antigemknx felszínen jelen lévé epitópok nagyobb valenciája miatt. A „ángy inoiefculaiömegü burokpoliszaeehandok" Izolálása a iaiáitnány tárgykörébe tartozik &amp; találmány szerinti készítményekben és eljárásokban történd alkalmazásra, Például a találmány egy megvalósítási módja szerint az 5fos típusú nagy moiekul&amp;totnegii poliszmxbamíok izolálása körülbelül 50 és körülbelül 400 StDa közötti tartoroány-ha esd molektílatdmeggej a találmány tárgykörébe tartozik. A találmány egyf: megvalósítási Jtitklja szerint az 5-ös tlpusö ua^y mokíkolatörnegíi poíiszaedtaridok izolálása körülbelül 20 es körülbelül HX)0 kDa közötti tarítt* tnányba eső srtnlekuiatötaegge! a találmány tárgykörébe tatlozík, A találmány egy megvalósítási módja szerint az 5fos tipsvm nagy molekníatömegil buixtkpoíiszaecharkiök izolálása és tisztítása körülbelüli 50 és körúlbeiüi 380 kDa közötti tartományba <;$<6 nsolekulatötfccggei ;t találmány tán.yykötélx; tartozik. Egy Ort'gvalóíüáai re ód szerint az 5-ös. tipüsí) nagy mofektd&amp;í&amp;niegii burokpoliszaccharidok izolálása át: tisziiífoa 70 ét. 300 kDa közölt! tartományba eső tnoiekolatömeggei a találmány tárgykörébe tartozik. Egy megvalósítási mód szerint az. S-ös. típusú nagy fnoiekultúömegö barokpoliszacchandok izolálása és tisztítása *10 és 250 kDa közötti tartományba esó möiekuistötneggal ti találmány tárgykörébe tetőzik. Egy megvalósítási mód szerint az 5-ös típusú nagy ínotskuiatöníegü burokpoinzaedtartdok izolálása és tisztítást! 9t) és ISO kX>a kozortí tartományba esó molekula-tömeggel a talútmány tárgykörébe tartozik. Egy megvalósítás; mód szerint az 5-ös típusú nagy molekulatömegü burokpoiiszsedtaridok Izolálása és tisztítása 00 és 14(1 kDa közötti tartományi eső molekulatömeggel a találmány tárgykörébe tartozik. Egy megvalósítást rnőti szerint az 5-ös típusú stagy taolekniatötnegíl bunokpoli-sz&amp;eeharidok izolálása és liszti-ásít 510 és í20 kDa közötti tartományba eső ftxúákiilaUSöteggd a találmány tárgykörébe tartozik. A találmány szennti eljárásokkal megtisztítható nagy molekulatömeg!) 5-ös szerotipusú bttrok-poliszacchsrid más tartományai közé tartoznak körülbelül 70 kDa és körülbelül 100 kDa molekulatömeg; 70 kDa és 110 kDa molekulatömeg; 78 kDa és 120 kDa molekulatömeg; 70 kDa és 130 kDa molekulatömeg; 70 kDa és Mi) kDa molekulatömeg; 78 kDa és i 50 kDa molekulatömeg; 70 kDa és 160 kDa molekulatömeg; 00 kDa ét; 110 kDa molekulatömeg; 08 kDa és 120 kDa molekulatömeg; Sí) kDa és 130 kDa molekulatömeg; 00 kDa és 140 kDa molekulatömeg; 08 kDa és ISO kDa molekulatömeg; 80 kDa és 160 kDa molekulatömeg; 90 kDa és 1 i0 kDa molekulatömeg; 98 kDa és 120 kDa molekulatömeg.; 90 kDa és 130 kDa molekulatömeg; 90 kDa és 148 kDa molekulatömeg; 90 kDa ás 150 kDa «K-iekakabrasg; 90 kDa és 160 kDa mofekniatöírcg; 100 kDa és 120 kDa molekulatömeg; 100 kDa és 130 kDa molekulatömeg; 100 kDa és 140 kDa tsolekula-ömeg; 180 kDa és 150 kDa molekulatömeg; 100 kDa ás 160 kDa ínoUskulafömeg közötti mérettartományok; és hasonló k ivén a to* mól c k u s akin teg-t artm t ányok.

Amim (ént tárgyaitok, a S. /t.w.v.s burokpotlszaíxharidok molekulatömege agy szempont az immunogen készítményben történő aikaltnazáskor. Például nagy molekulatömegíj burokpoiiszaceharidok képesek lehelnek bizonyos ídieuauyag-imBUfnvúiaszok kiváltására az sutigenikus felszíneit jelen lévé eptíópok nagyobb valenciája miatt. A találmány egy megvalósítási módja szerint a 8-as típusú nagy molekulatömeg!) btuokpoiiszaccharidok izolálása és tisztításit körülbelül 20 és körülbelül 1000 kDa közötti tartományba eső moiekalaKimegge! a találmány tárgykörébe tartozik, Λ találmány egy megvalósítási módja szerint a H as típusú «agy melekolatömegü burokpoiiszaccbaridok izolálása és tisztítása körülbelül 50 és körülbelül 700 kDa közötti tartományba eső molekulatömeggel a találmány tárgykörébe tartozik, egy megvalósítási mód szerint a 8-as típusú nagy molekulatömeg·) bmokfxdisz&amp;ccharídok izolálása és tisztítása 50 és 309 kDa közötti tartományba eső molekulatömeggel a találmány tárgykörébe tartozik. Egy megvalósítási mód szerit)!: ti 8-as típusú nagy molekulatömegé bttrokpoít-szaceharidok izolálása és tiszt kása 70 és 380 kDa között) tartományba eső molekulatömeggel a találmány tárgykörébe tartozik. Egy megvalósítási mód szerint a 8-as típusú stagy molokulatömegá biuokpoítszaceharidok izolálása és tisztítása 90 ét; 250 kDa közötti tartományba eső molekulatömeggel a találmány tárgykörébe tartozik. Egy megvalósítási mód szerint a 8-as típusú nagy moíekulatömegü bumkpoliszaccbnridok izolálása és tisztítása 90 és ISO kDa kózötu tartományba eső molekulatömeggel a találmány tárgykörébe tartozik, Egy megvalósítási mód szerint a 8-as típusú nagy moíekulatömegü burokpollszacdmridok izolálása és tisztítása 90 és. 120 kDa között) tartományba eső molekulatömeggel a találmány tárgykörűbe tartozik. Egy megvalósítási utód szerint a 8-as típusú nagy molekuiatömegő burokpoliszacd-atldok. izolálása és tisztítása 80 és 120 kDa közötti tartományba éísö molekulatömeggé! a találmány tárgykörébe tartozik, Λ találmány szerinti eljárásokkal megtisztítható nagy molekulaiőmegii 8~as szerűi ipustr bmokpoliszaccharícl más tartományai közé tartoznak kőrtiibídüi 70 kDa és körillbdiíi I0Ö kDa molekulatömeg; 70 kDa és ! 1Ö kDa molekulatömeg; 70 kDa és i20 kDa molekulatömeg; 70 köti és 130 kDa «wlektdaiőmeg; 70 kDa és 140 kDa molekulatömeg; ?0 kDa és ISO kDa rocdekulatfimeg; 70 kDa és 160 kDa nKdekulatömeg; B0 kDa és 1 Í0 kDa molekulatömeg; 00 kDa és 120 kí>a motekislatöawg: 00 kDa és 130 kDa molekulatömeg; 80 kDa és 140 kDa molekulatömeg: 00 kDa és ISO kDa mokdatlatömeg; §0 kDa és 160 kDa molekulatömeg; 00 kDa és 510 kDa molekulatömeg; 90 kDa és 120 kDa molekulatömeg; 90 kDa és 130 kDa molekulatömeg; 90 kDa és 140 kDa omlekulatömeg; 90 kDá és 150 kDa molekulatömeg; 90 kDa és 160 kDa molekulatömeg; ÍOO kDa és 120 kDa molekulatömeg; ÍOÖ kDa és Ül) kDa molekuiatömag; iOÖ kDa és 140 kDa molekulatömeg: 100 kDa és 150 kDa molekulatömeg; 100 kDa és 160 kDa molekulatömeg közém mérettartományok; és hasonló kívánatos molekulatömeg-tart ományok,

Egy immunogen készítményre adott „immunválasz^' immorális és/vggy sejt-közvetítetí immunválasz. kialakulása egy alanyba?* ajdeatöséggel híré készimséu>4>esv iév<V fm>lekuíákrsi (például antigénre. mint például pro-léimé vagy poiiszaedtaridta). A találmány céljaim a «hui»orálts immunválasz/ ellenanyag-közvetített immunvá-lasö és níagáhan foglalja a íaláhmbty szerinti tmmuoogéu készítményekben lévő antigéneké affinitással rendelkező ellenanyag kialakulását, mig a „sejt-közvetített immunválaszt'' a T-iítnfoettak evvagy más tehet vet sejtek közvetítik, A „sejbközveiitett immunválaszt" antígenikos epitöpok prezentálása váltja ki asszociálva Ees vagy íl-és osztályba tartozó 16 híszlökompatthtlHásl komplex (MHQ molekulákkal. Ez amígén-SfXíCÍÍlkas CD4t T segítő sejteket vagy CDIÉ dtotoxíkus T íorifoctía sejteket („CTíA) aktivál. A CTL-sk specifikusaik sí fő bisztíikompatibíitíási komplex í'Ml-íC) vagy 014! által ködeit fehérjékkel asszociálom prezentált és a sejtek feí-szfuéö exptesszált fxsptid vagy iipkl antigénekre. A CTL-ék indukálják és elősegítik az mtraeeSinhtrts mikrobák in trace Halár is elpusztítását, vagy az. ilyen mikrobákká! fertőzőit sejtek IMsét, A celluiárís upmumMs égy másik aspektust segítő 1-sejtek éksj|;gÖ|^áp^$fíjk«si.T-igjték segítenek stimuíáím nem-specifikus effekíor sejtek őt akcióját és fókuszálják az aktivitásukat a klasszikus vagy nem-kiassztkus MM€ tt .dckaDkt im assz λ ti! pepiK’-«nrtgerekst a íeís/HtOkőn prezentáló sejtekkel Ί/emben, A ..sejt-közvetített immunválasz” alatt értjük a citokmek, kemokinek és aktivál! 'Ds^pík ésévagy más fehérvérsejtek által termelt más Ilyen molekulák termelését, beleértve a CD4-i- és CDS-r T-sejtekbői származókat. Egy adott aníigétt vagy Készítmény képessége» scjt-közvetlíetl imnumuíégiat válasz slímutálására. számos uzyeaiaü eljárással nme határozhatja. tűim például iimtoproHíeráeiós (limfodía aktiválás) vizsgalati eljárásokkal. CTL diotmdkns sejt v Iz.sgáksli djárásokkai, az antigénre spec Hikes T-itmfodták meréstSe; szcnz.kízált alanyban, vagy T-sejtek általi citokso ív·iücSc .elűz«nttgemte' vainújra-sumulalí-st hevem*η H·.<.'! vizsgálat Újítások jélismertek a \ akk-u.rUr la r jvkhui Erűi. son e,s mtsat., i, Imtmi to’ 11Wl) - 4|}οΜ|9*ί, tx*·' «,> mt»i, Ear 1

Irururmi ttU’M) '4 vpO-íjDo

Az „immunogen" kitejezés alatt egy antigén vagy vakcina képességét értjük immunválasz kiváltására* akár: huuwuhv akar sett-kozvetíted, vagy mindkettő.

Az „immunogén mennyiség", vagy „immunológiaiiag itatásos mennyiség” vagy „dózis", amelyek mindegyike fcksoroíneio a km as szerinti értelemben, általában az s.tHyeu vary imrotsnoger készítmény .von ηκηηχ izedet jekmtí, and elegendő mumm válasz kiváltására. akár eeilaláris ^T-scjtes), akár Immorális (B-sojtes vagy ellenanyag) válasz, vagy mindkettő, a szakember számára ismert szokásos vizsgálati eljárásokkal mérve.

Egy készítményben tévő adott knnjngáíum mennyiségei általában a teljes poliszaecbaridra vonatkoztatva számítjuk. amely konjugáit és konjugábtkm abban konmgáímubsn. Például egy CE5 konjugátum 20¾. szabad poliszacchariddaí körülbelül SO íme kosi; egált CP5 ptdismccharldot és körülbelül 20 meg nem-k»ojug&amp;íí CP5 polc zmnrturiönt lartahnnzhat egy 100 meg CPS poliszra. eh.t· hl dózisban. A kmijUttáttunban kxí feherjet általában nem vesszük figyelembe, amikot a kotijtigáíum dózisét szunitjuk. A kotmtgálam mennyisége változhat a szizfilokokkosz szerűttpustői függően. Általába» mindegyik dózis 0,01*100 meg pohszacchsndot tartalmaz, s.lón-.övén 0 Mfi meg-ot, es meg eiónyc»<oboa i-ÍO 'txp ni Az irmmmogen ké >/!önu»'K"s g-us különbőzé polkzaeehárid kennponerisék „imn naiogén mennyisége'" e is érhet és mindegyik 0,01 meg, 0,i tneg. 0,25 meg, 0,5 meg. I meg, 2 meg, 3 meg, 4 meg, 5 meg, 0 meg, 7 meg, 8 meg, 9 meg, 10 meg. 5 5 meg, 20 meg, 30 meg, 40 meg.5Ö meg, 60 meg, 70 meg, 30 meg, <K> meg vagy komi be Oil 100 mcg-oi íartalmazb&amp;i bármely adott polismccbarki gatigéiiböli:

Egy másik megvalósítási mod >. zéróit a?. immunogen készitttiényben lévő protein komponensek „immunogen mennyisége" a körűibe Ki! íö meg es körtiíhelü! 100 meg kiköti! tartományba eshet minden protein antigén esetéhen. Egy előnyős megvalósítási mód szerint az: Imrounogén készüinényben lévő protein komponensek . .mmuinogén mennyisége" a körülbelül ?Ő meg <» korifibeííU 200 tmg Uí/őtti tartományba vshet minden protein antigén esetében. Az immunogen készítményben tévő különböző protein komponensek „inmumogén mennyisége’' eltérhet és mindegyik 10 meg. 20 tneg, 10 meg, 40 meg, 50 meg, 60 meg, 70 meg, Hü tneg, 90 meg, 100 meg, Í25 meg, 150 meg, 175 meg vagy körülbelül 300 meg-ot tartalmazhat bármely adott protein antigénből, légy antigén immunogénkéttt való hatásosságát mérhetjük a B-seü aktivitás szintjének mérésével az antigénre specifikus keringő eUemmyagoi·: sziittjéttek mérésével a szérumban immunológiai vizsgálati eljárások, immtmpreeipítáeíós vizsgálati eisárások, funkekmáiís ellenanyag vizsgálati eljárások, mint például m vfőo opszortikus vizsgálati eljárás és sok más, szakterületen ismert vizsgálati eljárás alkalmazásával. Egy antigén T-sejtes imnnmogénként való hatásosságának másik mértékét mérhetjük akár proliferate» vizsgálati eljárással, eitoiitíkus vizsgálati eljárásokkal, mint példán! krónvfeiszabadnlásí vizsgálati eljárással a Γ-sejt specifikus célsejt iizálására való kéjsességének météséro, Ezenfelül a találmány szerint ηζ. «immunogen mennyiséget'’ definiálhatják az: indukált antigén·specifikus ellenanyag szérnrnsziníjértek a mérésével is az antigén beadása után, vagy az Így indukált ellenanyagok adóit fehérvérsejtek opsznnoiagoeitikus képességének fokozására való képességének mérésével, amint ismertetjük a leírásban. Azz immunválasz, védő szintjét mérhetjük az immunizált gazdának a heHgektáií antigénnel való pröbafertözéséveí. Oékiául ha az antigén, amelyre immunválasz kívánatos, egy baktérium, az antigén Jmmunogen mennyiséin;" aha! kiváltott védelem szintjét mérhetjük a bakteriális sejtekkel próba fertőzött állatok százalékos túlélésének vagy százalékos halálozásának detektálásával. Egy megvalósítást mód szerint a védelem mértékét mérhetjük a bakteriál!·; fertőzéssel kapcsolatos legalább egy tünet mérésével, pékiául. a lértö/evsd kapcsolatos, lázzal. A multi-sóimén vagy1 multi-hompereas y&amp;kcisaban vagy usmunogén készítményekbe'·) lévő minden egyes antigén mennyisége eltérhet a többi komponenshez képest és meabacu.vtMtö n vmíotv· >,»un.h.s ismert ehárnvokkJ \z ívni ehamsok keze t.nu'ztnímO pekhtd az <em,mo>ict im o> rom, ti< >*» iroi.ro »ág meresere -/oíg.i « e táv <ok.

Az „mm.un<<gén készítmény' k> les ezé» alatt báimeK vW-ivas/no készít; vert értünk, at uh mttigeof tartalmaz, példán! mikroorganizmust, vagy annak komponensét, amely készítmény alkalmazható immunválasz kiudm.UA danvbar Λ ukdrrary -zen ott )mmum geo készítmények alkalmazhatok A «.erem fertózésm érzékeny emlmr kezelésére, az ímmtmogén készítmények szisztémás, ír&amp;nszdermális vagy rmskózáUs útvonalon történő beadása révén. Ezen beadások közé tartozhat injekció az intramnszktdárís {í.m.k íntraperitoneáSis ílp.t, tntrttdermáíis (i;d;) vagy' szubkuíán útvonalon; kaparnak vagy más tmnszdermália eszközzel történő beadás; -vagy tnukózáiis beadás az oráiis/altmeuíária, respírajtonkus vagy gemtomíttáris {rakatba, Egy megvalósítási inód Sprint intranazális beadási alkalmazunk a &amp; eurmts nagoíarmpaUs Jekidétótiek kezelésért:, %·«^0ΐνη.-fertőzést a legkorábbi stádiumban gyöngítve. Egy megvalósítási mód szerint aa immunogen kevciunénv alkalmazható vagy poiiklonáiis vagy mcmoklonsliy elSgoppgok indnkálására. amelyek alkalmazhatók az állat passzív védelmére vagy kezeié séfé.

Egy Síkitt immunogen készítmény komponenseinek az optimális mennyiségéi szokásos vizsgásatokkal Min-pithíítjuk meg alanyok megfeleli' immun* ahs/uínak megfigyelésével. Λ kezdeti v a ke in ázást kővetően -u alanyok egy vagy több megerősíti immunizálási kaphatnak megfelelő időközönként. A leírás egy megvalósítási média szét int a ,V. mmm/s lioillizálr kmnunogétt készítmény rekombinans ál űíirem lapadási faktor A (ClfAj frogmen-1 tartalmaz {NIN2N3, vágj·' ezek kombinációi). A leírás zgs további megvalósítási módja szerint a 5’. aun-us líoftlizah imunmogért készítmény mkombináns ál m/zeio'tapadási faktor A (ClfA) fVagmensf, izolált CRM ^--hez konmgáu 5-ös tip ásó b árok poll szao; inamiokaí és Izolált CRMi-jv-hez konjogáll 8-as típusú buTokpolismeoharidokuí tartalmsze A találmány szenntí lmonmoe'n készítőn η* A o^abbá tartaínwá un tk eg> * ag> több tvvabbf „'mntuomo-dulátorT, amelyek olyan szerek, amelyek zavarják vagy megváltoztatják az immunrendszert, oly módon, hogy' a immorális és/vagy sejt-közvetített Immunitás feHtí-szstbályozAsa vagy tilttl-s./abályozása figyelhető meg. Egy előnyös megvalósítási mód szerűd az immunrendszer htimoráiis és-’vagy sejt-közvetített ágának a felöl» szabályozása az előnyös. Blzonyo». imnmnmodidúturok példái közé tartozik például egy adjnváns vagy·· cítokío, vágj· ISCOMATRÍX** fCSl. Limited, Parkvííle, AnstmUa), amelyet többek között az UE 5,254,339 számú ame-rikal egyesöít államokbeli szabadalmi iratbajt ismerteinek, A taíáisnány azerimi vakefnában síkaímazfeató adiovánsok nem korlátozó pékiát közé tartozik a Rlöl adjováns módszer (Ribi !nc.v Hamilton, Mom.), alum, ásványi gélek, mim például aiumfuium-fctdrmdd géb o)aj-a-vizbeo emtdztók, yíz-az-olajban emulziók, mint például Enetmd-féie komplett és «komplett adjavánsok, Block kopoiímer {Cytfix, Állama Ga.), QS-21 (Cambridge Bioteeb lae„ Cambridge Masad, SAB->M (Ghirsxn Bmeryvtlkt Caltílh AMEHI.GEN3P adjováns, szoponin. Qail A vagy más szapoítm: frakesö, monotnsxioní lipid A, és Avridbte lipid-smbs adjuváns A találmány szerinti vakcinában ktazstos olapa*vizbeíí emulziók nem korlátozd példái közé tartoznak a módosított SBAMÚ2 és SEAM 1/3 kiszerelések. A módosított SBAMÓ2 egy olaj-a-vízben emulzió, amely 5¾¾ (ν/γ) szkvalént (Bigma), 1¾ {v/v'j SRAM# 85 detergeftst(!€í Surfactants), ő*?%{v/v) poiiszotbát 80 detergenst (1CI Surfactants), 2,5% (v/v): etttnoií, 2ÜÖ ugfinl -C|ail A4, 1ÖÍ) ngósí koiesztermt. és 0,55-¾ (v/v) fecit int tartalmaz A módosított' SEAM 1/2 egy oíaj-a-vízban emulzió*, amely 55-¾ (v/v) szkvaléni, 1% (v/v) SPA-N® 85 detergenst, 0,7% (v/v) ixííiszorbát §Ö detergensb 2,5% (v/v) elásott, 100 pg/mi Quit Á»5 és 50 μ górd koleszterint tartalmaz. A találmány szerint} készítményben alkalmazható más ^Immunmoduiátorok" közé tartozik például egy vagy több interleukin, interferon, vagy1 más ismert dtokmek vagy kemokinek. Egy megvalósítást mód szerint az adjaváns dkiodesttm származék vagy polsaumnos polimer lehet, mim például az US é, 165,905 éa 6,610,310 szántó amerikai egyesíti! államok ítéli szabadalmi Iratokban ismertetettek. Nyilvánvaló, bogy az: alkalmazandó immuamodu-lator *. adp-'ans fan, »./ η,,ην,ΐο., j snívnek a vakemaí ag> fnsntunogétt készítményt be lógják adni, a beadás ütjától, és a beadandó injekciók számától. A tJiiálmány ey\ még fov.»bb( ntegvak-sitás' «H'ldje szerint a S. aumu.s liofillzáh tmmunogén készítmény jcmí íf'irans 5 ufiUüt topáróns Ísvím \ i, HA, basme tst, t/olált í’RVfio-bez konj.» ált 5-ös tipUMi burokjx'íi-s^ík\ Ina i tokét <. v i (>|,df i. PAí, 'k, U' u ,usb 3 ups-u burokpoüszaed' u .dókat és res.ombtnáí'1- V.ots pro telni (más néveo rB.foáA.! tartalmaz. Bizonyos megvalósítási módok a* MfoC protein iipklfo, Bizonyos megvalósítási módok az MmC protons non· lipkiák. f.gy másik megvalósítási mód szerint a -S', aurms immttnogért készítmény rekomhmán? S. „«"to tapadao ta'-tn A. (OifÁi ffagrtK0-¾ t>,!! V5N \ \ay, ,y,4, kombinál unk rekötnbmánx S. aureus tapadási tbktor B iOíBt fragmtms ÍNSNŐN 3. vagy ezek kombinációi), és izolált CR&amp;Whttt kotyugált 5-os típusú hutokpoiRzacdwriaok «s ixoláli CRM ivrit** Komugáit 8-as típusú .burnkftofo szaccharicfok steril kiszerelése ífelyudéi·;, honii/ált. DNS vakcina, trnmrfennálís preparátum). A találmány egy ntegvalóisiásí módja szerint a X aureus imtmsnogén készítmény rekomhmáns X mreus tapadási faktor A (CkA.! Ihtgmenst (küN2No, vagy ezek kombitíácfoi), 5, aurám MmC vaskóid proteint, izolált ORMj^-haz konjugáit >ös tipniö berokpoliszaeehandokas és izolált CRMjoj-hez konjugáit S-as típus» burok-poitszaeehgndokat tartalmaz. bay megvalósítási mód szerint a ,¾. «to imrmmogén készítmény rekomhínáns N. aureus tapadási iaktor Λ (ÓRA) ftagmerts (NIN2N3, vagy ezek fomtbmácídi), rekombimfos S. aureus tapadást faktor B {CifA} foagnmns (N INáNÁ vagy1 özek kombinációi), &amp; mreus MntC vaskötö protein, izolált CRM,-,^-hez. konjugáit $-ö,v típus» butokpoüszacektridok es izolált CRM^-he* konjogáit 8-as tiporni borokpoli-szaeebarkiok steril kiszerelése {folyadék, iioftlixáit, DNS vakcina, iottxidermáíts preparátum}. A leírás egy mcgvaiósifosi módja szerint s 5. aureus immunogen készítmény rekombmánx A, aureus tapadási faktor B (ClfB) tíagmeost ÍN 5 N2N3, vagy' ezek kombinációi), és izolált CRM^-hez konjugáit 5-ós típusú burokpolíszacch&amp;náokatés izolált CRM^-he* konjugáit 8-as típusú burokpoliszacehíiridokat tartalmaz. A leírás egy megvalósítási módja szériái a 5, aureus immunege» készítmény rekombináns S. aureus tapadási faktor B (CB'á) feagmettsí ÍNSN2N3. vagy ezek kombinációi}, A aurms M'tttC vaskőid proteint, izolált CRIMfeo-hes konjugáit 5-ös típusú burokpolíszaeeharidokat és izolál! CRM^-jte*. ktnsjugált feas típusé bmokpolí-szaecbaridokst tartalmaz. A leírás egy megvalósítási módja szerint a S. aurem imnttmogén készítmény S. aureus MntC vaskőid protemí, izolált CRM s^-hez konjugáit 5-ös típusú bürokpoíiszaccharidokat és ízeiéit CRM^r-hez konjugáit 8-as típusú b utók po üssatce t; ári dók aí tartalmaz. A &amp; aureus „invazív betegség" baktériumok izolálása normálisan steril helyről ahol a betegség ezzel kapcsolatos klinikai jelel tünetei elöfordaítuA A normálisan steril testheíyek közé tartozik a vér, CőF, pletttális folyadék, pertkardiáüs folyadék, perítoneáiA folyadék, tAlk-ti folyadék, esőnk belső szervbeh hely (nyirokcsomó. agy, szív, máj, lép, üvegiest folyadék, vese, hasnyálmirigy, pete leszek), vagy más normálisan steril helyek Az invazív betegségeket jellemző klinikai ál lapot ok közé tartózik a bakíerémta, tsdőgyalladás, eeíkühfez, oszteomielií Isz, «ndnkardíii'sz, szeptikus sokk és mások.

Az „izolált" kifejezés azt jelenti, hogy az anyag van í&amp;velitva az eredeti környezetéből (például a természetes kömye/eChoí, ha termeszeibe» eiólbrdulo, vagy a z,s.-dt organizmusból, ha rekomómaos entitás, vag\ az egyik kőtrvtvvo- agí, m v-ó körnuvethe van pCu·) P>\d>mleg> „wltlCbo skr-tNk/oechand, pom ·η nepttd lényegében mentes sejtes anyagtól vagy más, abból a sejtből vagy szövetből származó szennyező proteinektől, amelyből a protein származik, vagy lényegében mentes kémiai profon zűröktől vagy más vegyszerektől íamikor kémiai Non szintetizált, vagy' másképpen jelen van a kémiai reakció részeként. A jelem Událmány szerint; s proteinek vagy poSiszae&amp;h&amp;ndek a bakfcriáíís sejtektől vagy sejttőrrueiéktöl izolálnvk lehetnek, oly módon, hogy immunogen készitneíny gytutásara al,k,thn,is fonttáhao vannak Az „szoiáh** vag\ „-zotaktö' kifejezés magában fogja ihat tisztítást, beleértve például a proteinek vagy burctkpoítszue-charidök tisztítási eljárásait, amim a leírásban Ismertetjük. A „lényegében mentes sejtes anyagoktól'' kifejezés magában foglal olyan poIipeptid.''ptoiein preparátumokat, amelyekben a poiipeptidet/fehérjét elválasztottuk azon sejt sejtbeit komponenseitől, amelyből <u izoláltok. vagy íeknnthmaos úton előállítottuk, ily módon esy berokpohs/ueeharid, protetn vugs pepiid* amely „lényegében monies sejtes anyagoktól'’, a hurokpo iiszacehttrki, protem vagy pepiid olyan preparátumait foglalta magában, am ebe1 Pen kevesebb ínon körülbelül 30%. 2tl%, 18%^ 5"«, 2.^vagy ivt- tömegje vonatkozatva) szennyező protein vagy·' poliszavcharid vagy más sejtve anyag van. Amikor a poilpeplid/prolein rekombhuou. úton van előállítva, a?, előnyösen lényegében mentes a tenyésztő tápközegíői, azaz. a tenyésztő tápkózeg kevesebb mim körülbelül 20%, Kt% vagy 5%-ás képezi a protein-preparátum térfogatának. Amikor a poüpeptíd /protein vagy políszaecbatid kémiai szintézissé! van előállítva, az előnyösen lényegében mentes a kémia! prekorzoroktöi vagy más vegyszerektől, azaz el van választva azoktól a kémiai prekoreortikió! vagy más vegyszerekül!, amelyek részt vesznek a protein vagy poitszaeeharid szintézisében; Ennek megfelelően &amp; pöiipeptki/prötam vagy políszaeeharid ilyen preparátumai kevesebb mint koröiheííií 30%, 28%, 18%, 5% (tt száma tömegre vonatkoztatva) kémiai pteknrzort agy vernéimet mralmaznak a jdentOMgie, poüpeptíd bnéeia vagy pobszaeehadd mellett,

Egy „nem-konzefsam ammosav-szahsztimf. alatt egy teher* egy van töhhonmuMs oldal! mo task eltérő fizikai és A agy kémiai tulajdonságú más aminosav-oídalianccai való helyettesítését értjük, a fent dmlniáit jellegzetességek alkalmazásává!, A „győgytfszatíiag elfogadható hordozó" kifejezés alatt szövetségi, állami vagy más engedélyező itatóság által sóval a 'ton tags az l SA Ou'g)s/orköso\ékn nagy más .malőr vám elfogadóit t,ust,wetkiVmben tel»o~ ϊóig allaíi, beleértve emberi valamint tsem-einhvf ermósökben történő alkalmazásra szolgáló hordozni értőnk. A „a vafo/n”' k-uoe 'v alatt hígító szeri, udjovái -a i vcspícnsl. vagy hordoz tv:- doVi értőnk, amefyei &amp; gyógv aszalt ks. zárnény be vart adva. Az ilyen gyógyászati hordozok lehetnek steril folyadékok, mint például viz és olajok, beleért ve a petróleum, állati, növényi vagy' szintetikus eredetiteket Vizet, sőoldatokás, és vizes dévtróz és glicerin oldatokat alkalmazhatunk folyékony hordozókként, különösen ínjekiáiható oldatok esetében. Az alkalmas gyógyászati sxeipíeosek. közé tartozik a keményítő, glükóz, laktóz, szacharóz, zseStám. maláta, rizs, liszt, mész.' kőpor, sziiíkagél, nádríum-nzteatát, giicerm-mrsnesztearát, (alkum, nátrium*Mortd, sovány tejpor, glicerin, propilén, gljkok víz, etanoi és hasonlók. A készítmény kiváni cselben tartalmazhat kis mennyiségű nedvesítő, térfo-gatnővek\ enmlgeálő szert, vagy pli pu&amp;eió szereket. Essek a készítmények: oldatok, szuszpenziók, emulziók, fenntartott felszabadulása kiszerelések és hasonlók formáját veheiik fel. Az alkalmas gyógyászati hordozók példáit a „Remington’s Pharmaceutical Sciences''t h. W. Martin) irodalmi hely istnertéü. A kíszetsléstfek tsteg keli felelnie a beadás módjának. A „protein", „polfpeptíd" és „pepiid*' kifejezések amioosÍiv-oidaiiámxsk polimerére vonatkoznak, és nem korlátozódnak a termék minimális hosszússágára. ily módon peptidek, oligopéptldek, dimerek, mu kimerek és hasonlók is belemtoznak a definícióba. Mind a teljes hosszúságú proteinek, mind a íragmenseik a beletartoznak a ítermieióba. Á kifejezések magokban foglalják egy·' natív szekvencia módosításait, mint pékiánl delédőit, addi-cióit és sztibsztltócíóit (általában konzervatív tarmészetőeket, de lehetnek neimkonzervatívak is), előnyösen oly módon, hogy a protein megtartja a képességét immunválasz kiváltására az állatban, amelybe a protein be lett adva. S/imén beleértendők a poszt-e^re^/íós inódssitásék, példán! glíkozilácíó, aéétíláoió, ipidáeíó, íoszfonláció és hasonlók, A „védő'* ímtmmváiai, iknt egv mim «ίον,η ki v/penny képessegei értjük .tnnunv,d.»s. ksvákővíM, mar humorúi iá, akár sejl-kőzvctitest, amely az, alany fertőzéstől való megvédését szolgálja. A biztosítót! védelemnek nem keli abszolútnak lennie, azaz a fertőzést nem kdi teljesen megelőznie vagy megszüntetnie, hu statisztikailag szignifikáns javulás van az alanyok kontroli populációjához hasonlítva, olyan fertőzött álatokban, amelyeknek fjein ídt beadva:a vakcina vagy immnnogén készítmény, Λ védelem korlátozódhat a iériÓ2és tünetei megjeleni' se súlyosságának vagy gyorsasának az enyhítésére. ÁHalában &amp; „védő immun válav" magában foglalhatja az adott antigénre specifikus ellenanyag-szinték növekedésének mdukáláss.t az alanyok legalább 30%-ábau, beleértve valamekkora ráérhető funkcionális dfenanyag-válas» mindegyik antigénre. Egy adott esetben a „védő immun válás/' ifiagában foglalhatta az adott antigénre specifikus ellenanyag-szintek lm meres növekedésének vagy negye seres növekedésének mdakáiősst 82 alanyok legalább 50%-ábatt, beleéri ve valamekkora mérhető í kimos is ' tvn.fnv<jg-VvVamf Tisxkevsl antigéné Aszom οχ u' *vt»K > tási me,ot >z, ni >pxz- t-, kulim anyagok korrelálnak a védő lm;mm válasszal. Ily módon a védő immunválasz vizsgálható a bakferk;oi;;xá!n csökkenésének sí térésével opsxonoíagoehurts vizsgákéi eljárásban, példán! amelyeket alább knuertevünk í\ib-nydsen a baktérium szám csökkenése legalább IÖ%, 25%, 50¾. 65%. 75%, 80X .533«. 90%. 95% vagy több. Λ „rekomhináns” kifejezés alatt a leírás sserínti értelemben egyszerűen bármilyen proteint. polipeptidsty vagy jelentőséggel bíró géni espresszáló sejtet énünk, amely génmérnöki módszerekkel lelt előállítva, Λ „tekombináns” kifejezés alfát protein vagy poiipeptid vonatkozásában rekombináns polmukieoíkl exptvsszáltalásávaS előállított polipepiidet értünk. A találmány szerinti immunogen készítményekben alkalmamét pont? ineket izolálhatjuk természete-, óvrásoxbfU vágj/ génmérnökí módszerekkel állíthatjuk ciö, mint például xekombináns ClfA, rekombináns CliB vagy rekombináns tvintC. A „rekombináns'' kifejezés alatt a leírás szerint; értelemben továbbá olyan rtukleinsav-tnolekaláí értünk, amely az eredete vagy manipuláció révén nem kapcsolatos a polinukleotid egészével vagy részfetévvl, mnellycl &amp; természetben kapcsolatos. A „rekombináns” kifejezés alatt gazdasejt vonatkozásában olyan gassd&amp;sejtet értünk, amelybe rekombináns polímskfeoiid lett bejuttatva. A rekombinans ClfA frCli'A) és rekombinttas GifB (rClfB) a leírás szerinti értelemben a találmány szerinti ímmuoogén készítményekben történő alkalmazásra szolgáló CífA-t vagy CifB-t jelenti. Bizonyos megvalósítási módok szerint az rCIfA a ClfA egy fkagmense, amely egy vagy több N domént tartahimz, például &amp;JN2N3, N2N3, M2 vagy N3, es a leírás szerint „rekotnbíaáns Of'A"-nak vagy „rClf'A" -mth nevezzük. Egy megvalósítási mód szerint az rCBB a ClíB .egy fragment®, amely s CífB egy vasty több N doménjét tartalmazza, példáit! ΜIN2N3, N2N3, K2 vagy Né. és a leírás szerint „rekombináns CbB'-nek vagy „f€iiB”-«ek nevezzük.

Az „alany" kifejezés alatt emlőst, madarat, halat, Miliőt, vagy bármely más állatot értünk. Az „alany" kifejezés magában foglalja az, embert is. Az „alany" kifejezés alatt magában foglalja a házi kedvenceket is. A házi kedvencek nem korlátozó példái közé tartoznak: kutyák, macskák, sertések, nyitlak, patkányok, egerek, lutőege-rek, hötesögök. tengerimalacok, görények, madarak, kígyók, gvtkok, hidak* ttfeaósök és békák. Az „alany'' kifejezés magában foglalja a haszonállatokat is. A haszonállatok nem korlátozó példái köze tartoznak: alpakka, bölény, teve, szarvasmarha, szarvas, sertés, ló, tárna, öszvér, szamár, join kecske, nyál, rénszarvas, jak*.-csirke, liba és pulyka, A leltár szét inti értelemben a „kezek-s” kifejezés alatt {beleértve a variánsait, például „kezel” vagy „kezelt”) a következők bármely ikét vagy többet: ért jük: <1) fertőzés vagy ójm-fertőződés megelőzését, mint hagyományos vakcina esetében, (ii) tünetek súlyosságának csökkentését vagy azok dia átélései, és (lit) a kérdéses kórokozó vagy rendellenesség lényegi vagy teljes megszüntetését. Ily módon a kezelést végezhetjük proftlakttknsan fa fertőzést tnegelozőest) vagy terápiásán fa fertőzési követően). A találmány szerint prof'dala ikus vagy terápiás kezeléseket alkalmazhatunk. A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint a találmány tárgyát olyan készítmények és eljárások képeik, amelyek gszdaáíiatot míkrobiális fertőzés {például baktérium, mint például Staphylococcus faji «Men kezeinek, beleértve profllakíikusan éa/vagy terápiásán ítmnuatzáhmk, A találmány szerinti eljárások hasznosuk profi iakftktts ésfvagy terápiás itmmmstás kiváltásba .-alanyban, A találmány szerint i eijárások aikjd:tfta*l«Wák alanyokon orvos-biológiai kutatási alktsf mázasokban is, A „vakcina’' vagy „vskcina-készítrnésy" kifejezések, amelyek felcserélhető módon alkalmazhatók, olya» gyógyászait készítményeket jelentenek, amelyet legalább egy, átkábanimmunválaszt indtrkákVimmíáis|én készítményt tartalmaznak. mmm^tirrn A találmány tárgyát &amp; íwmcr-bó! származó antigénnel tartalmazó liofsíitáit hmmmogén készítmények ke-tanuk. Bizonyos megvalósítási módok szerint a lioftSizált immmmgén készítmény legalább négy antigént tartalmaz, Az antigének az organizmusból biológiai izolációs eljárással izoláltak tehernek, vagy aziofeitkus vagy rekombináns Sión Sebeinek előállítva. Az antigének lel^tnn;póMp<ef)fi^^ poiíszacchartdok, vagy ezek kombinációi, Ezeket az immuaegón készítményeket alkalmazhatjuk vakcina gyártására, alanyok szta ft lökök kosz organizmus által okozott fertőzések ellen! immunizálására. Az ezekben a készítményekben való alkalmazásra aíkal-tnas komponenseket részletesebben is ismerietjiik alábbi A ő. uarttus humán betegségek széles kórének kótokozőtít, amelyek a felületiMrferUkésektől az életveszélyes áüapomk terjednek, mini például tüdőgyulladás, szepszis és endekarditisz. Lásd Lovvy N. Eng. .!, kled. .h-éósSó'Sígíioog! Invazív betegig esetében a $. mu-em-'. izolálhatjuk normálisan steril testije ivekből, befeért-ve vér, agy-gerincvelői folyadék CSF, pleural Is folyadék, peri kard iái is folyadék, periloneálís folyadék, izületi folyadék, csont, belső szén beli hely tm Irokcaomó, agy, szív, máj, lén, nvogtést folyadék, vese, hasnyálmirigy, petefészek), vagy más normálisan steril helyek, Hz olyan életveszélyéé klinikai állapotokhoz vezethet, mint pe'daol l\,kteremta. t«dóg>uiíad.o <.eii mez osztenmehtmk undokodé tv es ,,*pt km so A y f'hóitok, •dov'k ne gvormeaek a i eg ve ezé ly ez ieieta· bboh :v ,K aureus fertőzésekre

leírás megvalósítást módjai kiválasztott antigént vagy antigéneket ismertetnek bofllizált immunogén ké-szöményekbe i, behetUc izolált V a >taus tanán, > Aktot A pé t<U pulim M dk, t/oia í ,< mór m koouvoieher-jeficz konjngált 5-ös ópium knokpoliszaechtirkio;, izolált .V. iwi« hovdozófehétjéhez. konjugáít 8-as típusú burokpol iszacchatklen, izolált aurrus tapadási faktor B (ClfB) poiípeptkíoí, Izolálj k. aureus MntC proteint. A lioftlizáit imonioogen készítmények bizonyos kiszereléseit tesztek ük a OlíA proteut megnövekedett stabilitásának demonstrálására. A boftií/aít ímme en.eo kéa/ttioeoyeh mzs-nyo, fesoO'U -eg tevuelíök a Mmk pm e n stabilitásának demonstrálására. A liofiiízáSt immunogen készítmények bizonyos kiszereléseit teszteltük art a is, hogy a ÜP5-prmein konjugáfemok és n CES-protein konjugátumoh stabilak voh«k a hof'-Hzálás után. Hőnek tnegivíeióen egy·1 lioftiizáit immunoién készítmény tartalmaz: izolált Ő. tarsus tapadási fektor A (011 \ í pohpeputfet I gv lm fii Szák immunogen re- zömén, tártaim tz ;z» A é <««,'«, topndnst faktor Λ κ Is ti poftpepfiöet, izolált S {túrni* 5-ös típusú bnmkpnHszaeebsrkbf hordozótéhérjébez koojngálva, izolált S. aun-us k-as típusú burokpoltszaccharídoi Imrdozoíahdtjáhez konjugálva. légy íiotllizált Immunogen készhmény -ártalma z: szolalt A aureus tapadási faktor A {ClfAt polipeydidet, izolált a annus utpudási faktor B tCllBj poiirzpikku zolalt A '«"so < osbpuMí c ««kpohsz k < bm dot hordozd* bet g hm knujagatvu, 'zoiáttó' tm ms kuss típusú buvokpoKsz&amp;vcharkiot hordozóiehétjéhez konjugáíva. Fgy ítotllizölt intnnmogén készítmény tartalmaz; izolált ő. ifursm tapadást íakior A (ClfA) polipertidet, izolált ő‘. amvíct tapadási faktor B jClíB) pot’pcpttdcí, i/oÁlí V atm-ur Mok proteint tzaiák A autvus 5-os típusú hnrtskpolissuecttaridőt hordozófehérjéhez: honjugáha, izolált $ mire as 8-a* típusú barohpohszncchurídiít hordozöíéhériébez kottjugáíva, Egy ikiílii-zálí immunogen készítmény tartalmaz; izolált S, aweus tapadási faktor A (CMA) poiipeptidet, izolált A' aureus MntC proteint, izolált S, aureus r-iH típusú burokpoltszacoherídot hordozófehétjéhez kottjugáíva. izolált S. eureus ÍNas típusú burokpoiiszaceharídot hordozófekérjéhez konjugáíva. Egy íiofilizólí ímmunogén készítmény tartalmaz: izolált 5. aureus tapadási faktot B (OíBj poiipeptidet, izolált S emeus 5-ös típusú burokpoli-szaecharídof bonjexúfeh&amp;jéhe% konjugáíva, izolált S, aurem 8-as típusú burokpolüszaceharídot hotdozóíehérjé-hez konjugáíva. Egy iumumogén készítmény tartalmaz; izolált &amp; mrem tapadási ihfctor B (€iíB) polspepíídet, izolált Λ'. aureus MtttC proteint, izolált 6'. aureus 5-ös típusú imtxtkpoliszaecharídot hordozófehér-jéhez konjugáíva, izolált SI aureus 8-as típusú burokpoliszacebarídot hordozó tehérjéhez konjugáíva. Egy Hofdi-záit immuaogéo kész-thuény tartalmaz; izolált 5. em>vus MntC proteint, izolál; S aureus S-ös típusú burokpok-szaceharídot hordozó fehérjéhez ki··ttjógáivá, izolált A, aureus 8-as típusú burokpo 1 ixzaeeharídot hordozóíehérjé-κ-, vooi igáivá í gs ' isfJtro.S rntmtnogvn kús/tímeor tanain,t noda.i a aun-us tapadási faktor Á (OHA) poiipeptidet, izoJáa A. aureus tapadási faktor 8 (ClfB) poiipeptidet, izolált S' aureus MráC proteint,

Bizonyos megvakBitási utódok szór itt t a fenti kombinációk továbbá tartalma/nak legalább egyet a következő sut igének közöl CkeS. DsqA. K.esK, RrkN, KrkN2, RkaS, RrkN. KnkA, SdtC SdrD, SdrE, Öppsa. DltD, HtsA, LtaS, ísdA, isdB, ÁdC, Sdríó SdrG, SdrH, SvíÁ, SpA, bbi, nha-hemoli/io (hla), béta-hemosizlo, Ebrcsnek be kötő protein A (fnbA), fibíonektin-kötó protein 8 (ftibBj, k oaguláz, r lg. snap, Pánton* Valentine ievkockím (pvl), aifti-iOMn s's variánsai gamnnHovin títígl és van.:ca, mimmtdntnmán» ÁBt' íranvporkT, Mg2= transzportot', Ni .ABC transzportét', RAF, autói izin, laminin receptorok, IsaA/PtsA, IsaBiPisö, SPOiUE, SsaA, Ehpb. SasA, Sasi', SssB, Ff B ÍFIB), SBí, Hpáz, BBP, csont sziaio kütö protein íí, aureobz.m prekursor (AURvbeppi Cna, és íragroenset, mint például M5S,TSST-t, atecA, polt-M~aoeti!glu.kóz.atiiiiu fPbfAG/dPNAÖ) esopoliszacc barid, CehD, f;bh,A, HbbB, SSF^I, S.SF^2, MBF, vitrottektín kötö protein, Bar A, Es:;< A, EsxB, Eotemtoxio A, Bsxetmojtm 8, Buieroioxin C í és új aatolizin.

Adinváosok . AVAWA*M*»VAyiSWW^\ A leírás szeriutt lioftíizáit úntutinogért kész.iúmútyck bizonyos tncgvalósítást modok szerint ta«aímitzíiak egy vagy több adjttvánsí is. Bizonyos megvalósítást suúáok szentit tiz, adiiiváns a szárított íioFdizált készitniény kouspotiense. Más megvalúsítási módok szerint az itdjuváas az ójm-fcloídott íioililzáit készítmónybez adható hozzá a készitmúny púeiensnok töftónó...beadását- ntegeíözóeh, Bgy adjnvána olyan anyagp amely íbkozza az irnímmváiaszí, amikor együtt van beadva ínnnuaogenneí vagy antigénnel. Számos eitpkínr|i vagy Imtfokmról kimutatták, hogy ininmntnodniáió aktivitása vas, ás ily nakion aíkaimazbafö adjnvátsském, nem koriátozó péklá -ik küzd tartoznak az tateríankia i m, l-β,.2,.4, á, ö, 7, 8, 10, 12 {lásd péidáoi az US S,?23,i27 száttiú anteríkai egyesült úllamokbeií sznbadaimi írntotk 13, 14,13, tó, 17 és i S ÁH annak mutáns tonnái); az. isiterferoa-o., fi és γ; grantdoeita/makrofág kolútíiastimttíáió faktor (lásd póídátd az US 3,Ö7§,996 szátnú amerikai egyesült áiia-mokbeií szabadabni iratot ás az ATC€ 39900 letéti számot); tnaktoíág kolúmastimuláíó íáktor (M€Si·); giannlocíta koíöniasttmuiáió Mtor fCCSF); ea a ttítnomtdcrózis faktor a és |i A btláimány szerint hasznos még más adjovánsok példái közé íartozusk a keatokinak, atneiyek nem korlátozó példát közé tartózik az MCF-b Mlb- in, MiP-lfl és RANl'ES; adhéziós .molekulák, mint például szeiektm, példán! L-szeiektin, F»szelektm és E szeiektin; amein-szerít molekulák, például CD34, OlyCAM i és MadCAM-i; az mtegrín család tagja, mint például Lí'A-í, VLA-Í, Mac-1 és pl50,95; az imfmmgkfbulm szoperesalád tagja, mint példán.! PBCAM, ICÁM- ok, IC AMd, IGAM-2 és ÍCAM-3. CD2 és LFA-3; kosíiímdáns molekulák, mint például B7-I, B7-2,CD4Ö és OMOL. növekedési faktort beleértve vaszktüáris növekedési i&amp;fctö§:*igpg|; pOyefct^i jfisktor, nbroblasxt nt?-vekedési fcktor, epídermálís növekedési iaktor, PI3ÖF, BL-!, és vaszkuJáris mdotéltális növekedési fitor, receptor molekulák. beleértve kas., TNP receptor, fit, Apo-L p55« WSLU, DR3, TRAMP, Apo-3, AIR, LÁSD, MORF* DR4, DR5, KILLER. TRAIL R2, TRÍCK2, és DK6; és Kaszpáx(iCE), A* Immunválasz fokozására alkalmazott alkalmas sdjuváttsok nem korlátod példái közé tartozik s*.MPL™ 1343-dez.adiáir monofoszfotü lipid A; CmHamilton, MT>. amelyet az US 4,912,094 számú amerikai egye-MÜtállamokbeli szsbadairm irat ismertet, Adjuvánskéní alkalmazhatók más szintetikus lipid A analógok vagy aminotdkíl glukózaim» foszfát vegyölelek (AGP), vagy ezek származékai vagy analógjai, amelyek besxetézhfo tök a Corixa (Kamikon, MT) régtől, és amelyeket az US 6,113,918 számé amerikai egyesült államokbeli szaba* dalmt Irntbao ismertetnek, Egy ilyen AGP a 2*[{R)~2-te{radekam>Möxítetmdekíiaodamtm>}-ettl-2"dezoai“3A.>'-rosítboo*4*OjtR)3-tefr8déksttotloxtte{rad«kanoi!j[-3-((Rb>3-ttílTadekanotloxitetra(lekanoil-amtfto|-lvÍ>-gldkepfeanozai, amely 529 néven is ismert (régebben RC529). Fi* az S29x;s adjuváos vizes formában íAP) vagy stabil emulzióként (Spy van kiszerelve. Még más adjuvant közé tartoznak a memniil peptidek, mint például áZ.:N-acetSl~mttra*«H»L-treooil-E)-izogítstamin (thr-MDP?, U-aeeHb.nortrtomttdi-L-alanin-'-S'CU'Nr ediatttín (MTP-PH); olaj-a-vtebea emttlziók, mini például 'MF59 (US 6,299,884 számó « mokbeil szabadalmi írat) (amely $% szkvaiétü, 0,5¾ polisxorbát 8ö~at és 0,5¾ 'SPAN'” 85~t tartalmaz (adott esetben tartalmaz különböző mennyiségű MEP-PE-tí miktoihtkhzáívs szobmikt-nn emulzióvá például Model ΠΟΥ míkrofluidtzálóvai {Mierofktidios, Newton, MA)}, és SAP (amely 10¾ szkvalént,.0,4% pollszorbát 8Ö~at, 5% pluron-blokk polimert 1121, és thr-MDIM tartalmaz, akár mikroilnídizáiva sznbmikron emulzióvá, akár vortexelve, nagyobb részecskeméretO emulziót létrehozva); («komplett EretmeM'éie adja vonat (IFA); alutnlmurtt-vók (slum), mini példán! aUnmmmo-hkkoMd, íüumküutftdbszlúí. aiumtntnm'Szulibt: Amphsgen; Avrtdine; i..l21/azkvöíén: lYMtid-polilafcltd-ghfcozjd; Pluronic poiiolok; élőit Bordereiig; szaponmok, mi»r péídáni STIMULON™ QS-2Í t'Amigemes, framingham, MA.k amelyet az US 5,057,540 számú amerikai egyesük államokbeli szabadalmi iratban ismenemelg TSBÖMATRÜC** (GSL Limited, Parkvíile, Australia), amelyet az. US 5,254.339 számú amerika; egyes.tilt államokbeli szabadalmi iratban ismerteitssk, és imnsunstitnuialó komplexek {ISCOMATRIX'’'); Mymhocujrium ntbenmhsk; bakteriális iípopoliS^seéhártdok; szintetikus polinukieotídok, mint például CpG «miivamot tartalmazó oiigotmkieotidok utóidéul US 6,207,046 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat?; IC'31 (lnterce.il AG. Vienna, Austria), amelyet az EP 1.,296,713 és BP i,326,034 szánm európai szabadalmi jratok ismertetnek; pertnsxzisz. toxin (PTt vagy mutánsa, kolera toxin vagy mutánsa (például US 7,285,281, 7,332,174, 7.,301,355 és 7,384.640 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi iratok); vagy K coli hó-febtíts toxin (LTj vagy mutánsa, ktílónösen i..T~K63, LT-R72 (US 6,149,919, 7,115,730 és 7,291,588 szúrná amerikai egyesiül állatm>kbe1i szabadaíml iratók).

Bizonyos megvalósítási utódok szerint az adjuváns ISC'OMATRIX*” (lásd példáit! Davis és twtsaí... Prop. Hali, Arad. Seb, 2004, 101(29):10697-1(17(12}.

MiikidisliilIxlG C'lpí; íkmétt-tsüervezMés A tapadási faktor A (ClfA) egy .7. ourcm felszíni protein, amely a gazda mátrix proteinjeihez kötődéssel kapcsolatos egy ílbrinogén kötést helyen keresztül A ClfA a fehérjék egy olyan családjának a tagja, amelyek €·· íermmtííts LPXTG (SF.Q 1D NO: 125) motívumot tattal műdnek, amely tehetővé teszi. hogy a fehérje kovalensen kapc:nd6djoty a sejt felszínére. Λ üí£Á a fehérjék; egy másik családjaim is tartozik {'Microbial Surface Components Recognizing Adhesive Matrix Molecule', vagy MSCRAMM), amelyek gazdafehérjék kötésével kapcsolatosak, mint példád íibruxígéo {amelyet a ClfÁ köt), a írbronéktio kötő proteinek (FnhA ás FnbB), a kollagén Mis) proteinek (Caa) és mások. Eres fehérjék ttendegyikéheo közös 8¾ asmmdenomáits szignáiszekvencia, ami közueiííí a transzportei a sejt {hisztisére. Az MSCRAMM-ok tartainiaxoak egy A-domént is, amely egy őmkekmáíis régió, mi az aktív helyet tarntlrttaatra {pékiátd Isbrrnogérg f^rooaktm, eltfeNm,Lera-fia). Az A-domént egy szems aszpariát ismétlődésekből (SD ismétlődések) álló régid követi, amelyről ügy vélik, hogy átér a peptkioglíkárs rétege?!. A SD ismétlődést egy membrán-régió követi, amely tsmimazza az LPX'TO (SEQ ID NO: 12$) motívumot a proteinnek a pepitdogítkánhoz való kovalens kötésére, A CifA-t az. US 6,008,541 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat ismerteti, A ClfA Hgandumkötö régiója az A-domén NIN2N3 részét tartalmazza Π. ábra), amely a 40-559. amúsosa-vakat öleli fel, A.-ClfA N-rloménjeit a feövetkesxiképt?eo azonositoíták; az N I a 45-220, oídalláneokat iogiaíjtt magában; az N2 a 229-369, oldalláncúkat foglalja «tagiban; és az R3 a 370-559. oldal láncokat foglalja magában. Üsd Deivansyagsm és mtsai. £MBÖ ,1. 21:6660-6672 (2002). A hivatkozás inegkőnnyitésére az NIH2N3 Ooméneket N123-nak nevezhetjük, hasonksképpen as N3N3-ai N23-nak rmvazbetjiOk. A rekombináns N1N2N3· készítményekben az NI domeat proteáz érzékenynek találták, és könnyért iehasad vagy Indrolteátődtk, ami az. N2N34 hagyja meg stabil SigíUKlumköfö rekoruhináns fmgmenskénb Lásd Deivanayagam és mtsai EMRU 3. 21 :6660-6072 t'2t)03). A ClfA Á-öomén ilbrittogénkötö N2N3 Fragtnensének a kristályszerkezete feltárta, hogy máid az N2, tnind az Ni alapvetően arai-parallel béta láncokból áll. Az ami-pamitel Iséte láncok melleit az N2 dómén egyetlen csavarulatnyl ullá-héllxeí és két 3W héííxet íattalmaz és az N3 dómén három 3.,e he isset tárták máz. Lásd Delv&amp;nayagrsm és mtsai, F.MBÖ 3. 21:6660-66 K>.; 700?) Λζ N2 és N3 szekvencia egymás alá rendezése csupán 13% szék vette iaazímosságoi és 369¾ szekvencia-has-öftióságm mutat a teljes hosszúságán. Lásd Deísattasagam Ss mtsat 1 Mint 1 21 6660-6672 *,2002' \z N2 es M d>xoa vk m. .dug tája ha m .0 a klasszikust IgCVtekervényhez, és az. IgO-tekervém- áj variánsának javasolták Lásd De-vanayagaro és mtsai. LMBO 3. 21:6660-6672 (2002), A leírás tárgyáí képe?! készítmény, amely stabil Staphylococcus aureus tapadási faktor A (,.ΟΙίΑ”) poiípeptidsu tartalmaz, és eljárások annak előállítására, amely alkalmas ttnmunogén készítményként vagy vaket-hakértl. A találmány tárgyát ke peri továbbá készítmény, amely stabil CbA polipepíkkfe CP5 konjugámmokat és CPS kon jo gátit tnot tartalmaz. i,.sri-:mífgén' ). és eljárások annak előállítására, amely alkalmas immunogen készítményként vagy vakcinákéin. Λ találmány tárgyát képezi továbbá készilsnény, amely slabHClíA polipepíideí, COS kodugálutnokat és COS kom unikumot es MrsíC polipeptkiet tartalma? {,.tetra-anligén,!), és eljárások annak előállítására, amely alkalmas imtmmogér köszasmövként sags sasenuAvtt X t if6 - smert nődön instabil protetn, amely könnyen eihaattódik az Ni es N2 domének között, Λ bejelentet, tátgya olyan ClfA kiszerelés, amely lehetővé teszi hogy a CÜ'A N1N2R3 lényegében degradálni km maradjon gyorsítóit stressz körülmények között legalább bárom hónapon keresztül,. Bizonyos megvalósítási módok szerint a kiszerelés Hoílhzáh készítmény, amely kevesebb spint három százalék vizet tartalmaz, A „ftofthzált készítmény” kifejezés alatt a 3%-rsál kevesebb vizet iartalnwő kiszerelést értjtsk, és nem tekinthető ágy, hogy tt készítményt korlátozza arm az eljárásra, amellyel elő tett állítva, például lioialMíás vagy egy keverék bármely ipás szteMsi eljárása, vagy száraz alkotódénak %szcúihtása, A gyors ttok stressz kbrüfmcaj eh sfett niton hómétxéUet, plí és'sagv ionerösseg körülményeket érfímk. amit általában alkalmaznak egy kiszerelés stabilitásának a tesztelésére, például 3?°C több bélen kerasztíll vagy tovább. iíy módon egy «Mtgv&amp;iósitásS mód szerint a találmány tárgyat lényegében degmdáiaibm Cil'A pmtetnt és kevesebb -judi»· 3H vizet tariaimazö síabii készítmény képest. Egy megvalósítási mód szerint «· találmány tárgyát lényegében degradáiítdan ClfA proteint* 5-ds· típusát barok|á>liszácchttríd *CP5) ktmjugáwmot, CM' konpigáltmtöí; és kevesebb mint 3% vizet tartalmazó stabil készítmény képezi. Egy megvalósítási rood szénát a találmány tárgyét lényegében dogradálalíau HÍA proteint, 5-Ö* típusú bmokpohszacehand (0P$) konjugátamoi. * 'id xotij .^ttumot Mt ft' 0¾ «tetőt es kev z^ebb mset 3* <- % 'et tus \dm x ό \t<'hd k 'vtí nénv kv pw t A OtA pro lein bármely Staphylococcus törzsbér szuimlwx tégy rekombmans pebp-tybd tehet I'yy tekombmáns ClfA pol ipeptití lehet vad típusé szekvcadájtt, íaríaamzhát egy vagy több mutációt, vagy lehet legalább OíhÍvbtm ítz.ptM)á í«bttK>sav--szekvencj5Íjtt » vad típusú szekvenciával. Az. I. táblázat Ixiotutat sstástossS ífírreuv törzset és a megfeleld ClfA DNS- és protein-szekvenciákat k Táblázat ClfA törzsek és szekvenciák felsorolása

CífA szekmmm A lapad-tej Otktot protein A, jele ClfA, német megkCmvtók, megwk^emdtí-k cs részletesen elemeztek molekuláris színien (Me Dévái és nmen. Mól IVöt.Tohkd, i í: 7:37-248 f 1994); McDevitt és misaL Mol Microbiol, ló go-.,0,)7 i'«%.)) ^ p ,>/<·, s<. Π' betegségei ok<' " a ohmmá: vá;»w<> CHA ammösm -ζΜλ« eta szekvencia-azonosítóit az 5. táblázásban mutatjuk be. A ,5?. ntevm PFBSA9237 törzséből való vad típus# GlfA teljes .hosszúságit amhosav-szekveneiáját (beleértve a uigoálazekvenciát) a SEQ 113 NO: 130 szekvencián mm ííuíiik be. f / a szekvenna títöztot mutra ,< 338, poziemt; ag sünt ly álommá vgíkvoít ClfA motelt lormasáKui,· A .9. mr«us WKSAÖ237 törzsből való vad tfpusü CHA-t kódoló teljes hosszúságú gént, amely tartalmazza az NO tégiót, a/ ruitétlódó regből ét. a horgony raguit, a Η) No Ϊ31 szekvencián mutatjuk be. A ClfA 3 MCA mutált iomuját m SFQ ID NO I ’ > -,χ hennán :m.í Újuk be Azonban megizgyzvödo, nogv t urozmro! mamnra < dó változás, ómen, a SkQ il) NO ΓΌ vet» ss sad üpasú Or\ 118 poruiojabau következik be, és amelyet YslS.-Vrutk «evezünk. s 123. pozícióban mutatjuk be a SHQ .ID NO: 123 szekvencián. Ezenfelül a SEQ fD NO: 121 aminosav-szekvendán bemutatott mutál! formájú ClfA a ClfA érett fomtája a szignáiszekveneía nélkül, d> tróo.m ez ok.uza az ékeiért a mm.sett>ptíOe!,v<lb.ín a NI Q í:)V\p i){} és $1 0 itt Ni t iJMüzetti,

Egy megvalósítási mód szerint a CHA protein a SfO 10 NO: 131 szekvencia* tártuimassía* amely a übrinogón-köíést megszüntető Υ388Λ mutációt tartalmaz.. it fart» tv os megvalósítási módok szerint a CUA proteinnek nem kell teljes hosszúságúnak lennie ó:itartá!«iazA hatja az 50-597. aminusavatat <a SEQ ID NO; 110 szekvencia számozása szerint, de alapulhat bármelyik ClfA proteinen).

Bizonyos megvalót-itasi módok szertnt a ClfA protein ΝΊ domént, N2 dómén! és NI dómén* tartalmaz, vagy lényegében azokból áll Bizonyos megvalósítási módok szerint a OlíA protein N doméot tartalmaz, AzN dómén alatt N i domém, N2 dómén! és M3 áomént értőnk, A C IfA proteineket. eljárásokat azok előállításúm és alkalmazására a jelen bejelentéssel együtt függő, US ől/2ldt|?4 számó amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés ismerteti, amelynek bejelentési napja 2009 jömus 22, ClfA proteineket ismertet a PCI IjSóoi04)395lö számú nemzetközi közzétételi irat is. A siahii a lan azt énjük, Stogv a CífA k-nyeuében degraöáiathu marad gyorsítót! vagy más stressz körülmények között és hosszabb időn keresztül, mim például tárolás közben. A lényegében degradáhtten alatt: azt értjük, hogy a CífA poiipeptidek összes populációjának legalább 79%, 8í>%, 99%, 953» vagy 99a,«~u íartalmaz NI szekvenciákat és tovább! N2 és vagy N3 szekvenciát. Az intakt alatt azt értjük, bogy a ClfA protein tártaímazzzt legalább az Ni, N2 és NI dotnénekol. Bizonyos megvalósítási módok szerint a CHA poiipepttd lényegében degradáld lan marad legalább Kél héten, legalább egy·· hónapon vagy legalább három hónapon kérésztől 37''€*m,

Bizonyos megvalósítási modok szerűt! a tttiáimány szermii hofdizalt készítmény intakt CiiA-t tartalmaz olyan mennyiségben, amely kevesebb mim egy tömegszázaléka (!%jsvAvM a IsoiríizáU ímmtmogér, készítmény teljes tömegétiek. Bizonyos megvalósítást módok szerint ClfA mennyisége 0,09% a 0-027% és 0,85% a-. ö,2ó% közötti,

CtfM: nmté$*$$e:rvez&amp;déx ACíiBegv 5 cmn-h·· ρκικίη rmeh ilt* re,ön kötő ik tvilusen; ren-ü ikvzf\, és k.v.ötiaazó' ouu» , zsouuv ínak a kialakulását plazma jdenléséhen, -9 Cl03 egy MSC8AMM protein, és mutatja a jellegzetes MSCRAMM domenvzervezódett. beleértve egy A-dnntönt )-., randy egv fu^ketonans rego. anu az skfv Ik-ívoí tztuvnutzra (például Obrínogér). iibronektin, eia^ztm, keratin!. Az A-domént egy szerin aszpartá! isn-étKidésekböí (SO is- mMŐdések) álló régió követi, amelytől ügy vélik, hogy átér a peptídögiikán rétegen. Λ SD ismétlődéi egy foembfon*régió követi, amely tartalmam ax LPXTG (SKQ ID Mö: 125} motívumot a proteinnek « flsAídóglikánhoz való kovalens kötéfofo.Á GífBi a WO 9W27ÍÖ9 szántó »<mxetkO» fcösaéféfeH S tatban és a* BS 6,680,195 számú >»«eril?af egyesítik éiiatTiókfeeli szabadalmiiratban^i§mérteti|;

Az CHB N-termináíis A-dtmténjásak szerveződése nagyon hasonló a ClfA~ban található szerveződéshez. Az A dómért a három akioménhö! áll. NL N2és N3. A ClfB ligandnmkötő régiójaaz A-domén NIN2TB részét tádfomezsa,; amely a 44*585, aminosavaksí öleli fel, A hivatkozás megkönnyítésére az NIN2N3 doraéttefcef N I23mafe nevexbetjílk, Itastmlókóppen az N2N3-at N23-nak nevezhetjük. A CltB M-dommjeit. a kővetkezőképpen azonosították; a?. Ni á 44-197. oidaliáncökat foglalja magában; ax N2 a 1933475. oldalláneokat foglalja magában; és az N3 a 375-585. oldalláncúkat foglalja magában. A ClfA-han ex A dómén kristályszerkezetétől azt találták,, hogy a?, mMmmgiolmim-tekervény egy egyedi változata, és analógiás módon ugyanéi; tételezhető fel a CHB esetében is. Lásd Deivanayagam és mtsaí,, EMBC) 3. 21:6660-00/2 (5002), Még ha a CUB és CICA A dóraénjéinek a szerveződése jtssonló is, e szekvencia-azonosság csupán 26%. Lásd Ni Lidid» és mssai., Mól Microbiol 30:345-357 (2002). €/8 szekvencia A ClfB-t kódoló gént fÖ adhéziós géakénl osztályozták, A Y, <mnm32, számos beteg áliapodáj fepcsoiatos tómének CÜB szekvenciáit a 42. ábráit foglaljtsk össze. További szekvenciákat » ClenBank-toi szereztünk be. mí$ MSX:8,tMM-<>k Más \tM'RAMM-ohat és megfonfo'ltattjok « találmány szerinti immunogen készítményben tör térté alkalmazásra. Például a szeri n-aszpsttál ismét lodes tSdri gnéeind?, az SdrC, SdrD ds SdrE rokonok a primer szekvenciájukban és szerkezeti szerveződésükben a ClfA és CííB proteinekkel és a sejt felszínen lokalizálódnak. A* SdrC í*K> és AdrP pmn· n,k vnkf .erodált proteinek, amelyeknek s/igoáBzekvenvnt vm az N-terminalisán ás l.PXTCi (SFiQ ID NO 12 5 > mo-ivuni, hidrofób dómén és pózt! svan töltött oldd láncok a C-íennt«á3isán. Mindegy isiiknek van egy HD Ismétlődése is, amely elegendó bosszúságé E régiót íartalmax ahhoz, hogy lehetővé tegye a B motívumokkal együtt a íígaadumkőtő dómén A régió hatékony cvpteNS.es6;a: » seít fdsxínén. Mink hogy SdrCk SdrD és SdrL proteinek A fogtója a sejt felszánt» tafálható, a proteinek kölcsönhatásba léphetnek a plazmában lévő proteinekkel az exiraeeliyláris mátrixszal vagy « gazdasejtek Msemé» fovó molekulákkal. Az Sdr proteinek korlátozott mértékben sanmosav-átasonióságot rmtíatnnk a ClfA-va- és CHB-vel, Ugyanúgy mint a ClfA és CifB, az SdrC, SdrD és SdrE extraceliuláris mátrix proteinek kation-függő íigandumkötését mutatja.

Az stir gének szorosait kapcsoltak és tandem helyezkednek el. Az. Sdr proíeinek (SdrC, SdrD, SdrE, Cü'A és *. ílBsjcIíemzoeo; c- 4 régiói íartalmuzruk, ahol erősen konzervált atninosev-sxekveneta van, amely alkalmaz-tutfo a TYTFTÖYVD (SEQ IX) NO: 1261 konazenaus motivnm levezetésére. A motívum kisebb variációt mutat a különböző fehérjék között. Ez a variáció, egy&amp;t &amp; motívum konszenzus szekvenciájával az US 0,680,195 szántó amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irtában keríti jvmem-ié&amp;ns. A Cif-Sdr proteinekben ez. n ír.tnivtnn eí-vzn kettxc1 ->vb s motivum alkalma h tío n rmnogón \ s\e-fftuT.·. ekXsen n í les spe-óarru rnrroniv- ^ biztosítására bskteriálÍN fertőzések ellen, és alkalmazható amigeoként is íttonoklouális cs pohkionáiia ellenanyagok len-velésében. Egy Ilyen ellenanyag alkalmazható széles spektrumé immunitás biztosítására.

Az Sdr proteinek különböznek s CHA-tól és CÍÍB-től 2-5 további 130-113 oldaíláncnyl ismétlődő szekvencí-ábsn (B tsotivunu'kí az A régtó es -u R teg-.o között. Műk*egyik B-moíczom fo-PNicenzus Ca'"-köí6 FF-kCz hurkot tartaímaz, amely normálisan eukarióia fehórjékbett talál Itató meg. Az SdrD öt B-motivumát tartalmazó fekombmáns protein szerkezed integritásáról kimutatták bisANS fluoreszcencia elemzéssel, hogy Ca^-íttggő, rum arm utak hogs a/ HP tavek fii akció? uh-. ;k, A wkot a Cff'n eltávolították s szerkezet öss/eomimi feheke~ fedettat) konformációjára, Az credit! szerkezet vksKMHí Cas* hozzáadásával Az Sdr proteinek C-terminál is ÍP doménje! 132-171) SD oldalláncút tartalmaznak. Ezefcel követik a konzervál faihoz horgonyző rögük, amelyek irilemztadv a Gmm pozitR bstaértumok tmm.C" el z.m tetején'

Az Sdr és Clf proteinekben ez a B motívum erőse·! konzervált, míg degenerált verzió fordát elő a ftbrtmektta kötő MSCRAMMokban, valamint a kollagén kötó Orta proteinben. A B motívumok, együtt az R régiókkal szükségesek a lígtmdumköfő dómén bizonyos távolságra történd prezentálásához ti «ejiíelszífie». Az ismételt B motívumok egy közös «evező az itt ismertetett SD ismétlődéses proteinek között. Ezek a motívumok különböző szómban megtalálhatók a 1TBSA023? törzsiről származó három Sár proteinben. Egyértelmű különbség van. az, egyedi B motívumok között. A legkonzerváitabb egységek azok, amelyek az R rágtok mellet he iv őzikédnek el (SdrC B2, Sd?i) B5 és Sdtii B3 5 Ezek eltérnek tt többitől számos helyen, különösen a C-terminális félő kön. Egy figyelemreméltó szerkezeti részlet az, hogy az egymás melletti 8 ismétlődéseket mindig egy, a C-termmálison lévőprolin oidaliáne választja el, de soha nines prolin tez utolsó B ismétlődések és az. R régió között. Ehelyett ezt a kapesölórészt egy rövid savas szakasz jellemzi. Ezek a különbségek azt bizonyítják, hogy' a végső egységek* .sgertoe#·. vagy lla&amp;clpglÉs szerette van, összehasonlítva a többi B egységgel .Az RdrB és EdrE N~ terminális B motívumai eltávolodtak egymástól, és számos aminosav-eitérés van, beleértve kis ioszérciókai és deiéctőkaí, mig a fennmaradó belső B motívumok erősebben konzervállak. Megjegyezzük, hogy mindhárom Sdr protein legalább egy B motívumot tartalmaz mindegyik lapból

Az Sdr nrofemek C-tertninális R-domépjeí 132*170 S.D oldaíiómxR tartalmaznak. Ezeket követik a koszor-vált Ibihez horgonyáé régiok. amelyek jellemzőek·a Gram pozitív bajklériumok számos felszíni fehérjére

Mas Sdti> e olt usie-udn,! őkr v e orgat'ízntnsokhől származhatnak a találmány szerinti itntmmogén kő-szitménybea förTenö alkalmazásra, amelyek közé tartozik az SdrD azó', swat USA3ÖÖ FPR3757 törzsből (proféin elérést szánta SAUSA300 05-17); NCTC8325 lőrzsböl (protein elérési száma SAOUHSC 00545); MW2 lőrsbol fptotem -*Í0!rs! szama \t\v ÍP í ?), bt SS VI hs törzsből (protein elérési száma SASÖV'Ö és Muőti töm-bőt (protein elérési szánta SA V0Só2).

További MSCRAMM-ok, amelyek figyelembe vehetők a találmány szerinti immunogén készítményben történő alkalmazásra, közé tartozik az EkeS, 1 V.qA, KesK, KrkR, KrkN2, kk&amp;S, RrkN. és Kok A. Ezeket az, MSCRAMM-osai a WÜ 02,102820 számó nemzetközi közzététeii iratban ismertetik. Tovább», Gen Bank elérési számmal azmiosstmí M$CRAMM*ok közé fari.oz.lk az NP.373261.1, NP.3731?!.!, NP 374246.1. NP. 374248.1, NP. .37484 i.i. NP .374866.I, NP..375140.1, NP.. 375614.1, NP..5756I5.1, NP.375707.1, NO 375765.1 és HP..375773 1.

Az invazív betegségeket okoztts képes sztaftínkokkusz mikroorgamznmsok általában képesek bnrokpolí-szaccbarid (‘capsule polysaccharide) CP) termelésére is, amely beburkolja a baktériumot és fokozza a rezisztenciáját a gazda veleszületett immunrendszere általi kiürítéssel szemben. Á CP a bakteriáíis sejtet védőburökha burkolja, ami a baktériumot rezisztenssé teszi &amp; fegocitóztsaal és míracelfnlárís elpusztítással szemísett. A burkot nem tartalmazó baktériumok ér»ék«nyebhe&amp; a fagocitözísra, A httrokpoiíszacehartdok gyakran fontos vtrulenehs faktorok sok bakteriális paíogén esetében, beleértve a fimmophilm m/fete/erne-t, és B-csoporíos sztreptokokkuszokat A burokjjoiiszacehsridot aikaimaz.hatjok &amp; köíönbözö baktériumfajok «veröttptzáiására. Λ tipizálási általában .pveifikns a-Os/érmnou! > »gy tnonoklonáíis ellenanyaggal való reakcióval érjük «3, amely a barokpois-szaceharid specifikus szerkezete vagy egyedi epitöpja elie·) kit tenne itstve, A beburkol; baktériumok sima ko-lámákban hajlamosat növekedni, míg a burkukat elvesztett baktériumok kólóméi durvának tűnnek. Λ műkőid hío/e.u B'kmakat etdser kmtsrko!n,ík ncve/Aik ka ’ ") m .Ven opusa A m/mst erím-m beburkolt ea ritkán kapcsolatos betegséggé!, A V. üí(í-uíís legtöbb klinikai izolálutna 5-ös vagy 8-ss szerodposó burokkal rendelkezik. A 5-ös típusa. (€PS) cs 8-as típusú (CP8) burokpoiisxaecharidok hasonló irtsaaccharkl ismétlődő egységekké! rendelkeznek, amelyek N-aeetií numnézamlnnrönsashóL N-seetií Ldukóianmnböi és N-aeetií D-iúkózaminbó! állnak. Lásd Pounder, LM. és misís!., infect .immun. 450)/-03 (1084) és Moreau, M„ és tmsai.. Carbohydrate Res. 201:285-291 ; :οο;η k 1 cí CF azonos cokinkkal mndelkívA, de a euket ok\ Abett és se 0-<veli1aeíd hdyéíxr éttér, anu s.?m>kigtailag eltérő mintázató ituoMtureakuvitást hoz létre.

Bizonyos megvalósítási módok szerint a találmány szerint) :%% és/vagy Ras szorotípusö bírtak pali*, szaccbaridt'k O&amp;cetfiéit&amp;k Bizonyos megvalósítási módok szeriül az 5-ös típusú burokpoliszaecharid vagy ohyo-xv.vxbutd Omeetfiac-r-janak mettéke b,M0ö%, 20-100%, 5ö-un>%, 40-100%, 50 Kí0%, 60 UJ0%, /0-4:00-%. 80-1 OOV **0-100%. ·*(*- 90% 60-90®« ?0-'»0% vagy 8tf-90% Bízonvos megvuiösltest módok szerint ,t 8-as típusú tforokpoliszacdumd vagy oligoszaccharíd Ü-aeetilációjának mértéke 3iM0O%s .20-100%, 30«IÖ0%> 40-1 í>0·'o. 50-100%, 60-100%. 70-t0ö%. Ü0-tuó%, 00-300*0, 50- 90%, «0*·Μ< 70#(M, ttty 80-90%. Bizonyos megvalósítási módok szeriül az S»s és 8-as Opusét burakpolimsccharid vagy oligoszsaösharid O-acetikkiójának mértéke 10-160%, 20-100%, 30-100%, 40-f00%, 50-300%, 60-190%, 70-300%, 80-109%, 90-!0U%. 50- 90%,. 60-900¾. 70-90«« vagy 80-90%. A polis/.jerimnd vagy oSigoszaeekaríd O-aeeltíáltságának &amp; mértékét bármely szakterületen ismert: eljárássiti meghatározhatjuk. példát)! proton NMR-ei t Lmneretmet és .lones 1996, Carbohydrate Research 296; 83-96* lenes és Letnercinier 2002, .1 lörarmaeentka! and Biomedical Analysis 30; 3233-Í247, WO 05)033148 vagy W<) 00 '/,i mi nemzetköz) közzétételi trafók), kgv másik általánosan alkalmazott eljárnál ismertet fiestritv (1949) j. Bioi. Orem. 180:249-261.

Bizonyos megvalósítási módok szerint a találmány szerinti 5-ós é&amp;'vagy 8ms szomtípnsú btirokptsli-smcharidkík alkalmazhatók olyan tdlenísnyagok termeltetésére, amelyek baktériumok állati lutiásosságí modell-bets calo elpusztításával mérve fankcmnálisak, vagy·- olyan opszotiofiagoctldzis elölésí vizsgálati eljárásbajt, amely demonstrálja, hogy az ellenanyagok elpusztítják a baktériumokat. Az ilyen fotskeionalitást nem figyelhetjük meg olyan vizsgálat) eljárás alkalmazásával, amely önmagábiát az eltetmyagok ídíAgöbét mónl* nem jelien)/.) az O-aeetiiáció hatásosságban játszott fontosságát.

Burák epMemiaiégitt

Az adott burok szerotiposoktti klinikai izolálatnok monitorozásává! hozhatják kapcsolatba ixaegsegge!. A $, aureus nyolc azonosított szerotlpusa (Karakmvs és Vson (1982)) közöl csak az 1-es és 2-eS szerotlpus erősen beburkolt, es ezeket ritkán izolálják. Lásd Capsular Polysaccharides of Staphylococcus aureus, 285-293, oki, J.8. Robbins, J.C. Hill és J.C. SadoB'{szerk,í, „Seminars in infectious disease”, 4. Kötet, „Bacterial Vaccines” kiad.; Thieme Stratton, Inc. New York. A. vizsgálatok a ó. aureus klmskat tzoíáíumok 8S-9Ö%-árdl mutatta ki, hogy CF5~öí vagy CP8-at expresszálnah (Arbeit RD, és mfsai., Dlagn, Microbiol. Infect. DR. (1984) Apr;2(2):85-9I; Karatawa WW, és mtsai., .3. din. Microbiol. (1985) Sep;22(3);445-?; Essawí T, én mtsat..

Trop. Med. Ιοί. Health. (1998) jul;3('7):576-83: Na'was.T„ és mtsak, J. ül in. Microbiol. (1998) .)6(7):414-20). A fegtöbb €B3 # CPS O'SpMljslzáihaíó törzs genetikailag a ca$>!8 fókuszon mutációkat tartalmazó 5-ös vagy 8-as i^iiÍ&amp;.'C)Bd^yáró) Φϊμ&amp;ζ és mtsaí,,, (2006), Mol Microbiol. Feb. 59G);948-9ÓÖ). Bizonyos törzsek gyorsan elvesssik a burkukat néhány m vitro passzálás aktit, a buroktermefés klinikát diagnózisára alkalmazott tápközeg IbUgas fesztét fconotmiráetójáoíik reprcsszáló hutása miatt. Beszámoltak arról, Imgy a nem-borkos izelálumuk tehenekhety való passzáiás során. Lásd Opdebeck, LP. és miaui, 1. Med. Microbiol. 10:275-278 (1985). Bizonyos nem-típizálható törzsek burok-pozítívak lettek megfelelő tenyésztési köríthnények közön. C1*S és CF8 szerkezet . VlWlVlWlSWWlWWWWlSVlW^WlSWNNNS^ A CP5 ás CP8 ismétlődő egységeit egyaránt ,2 'aeot'amidod2Hkoto.v:i-0-!fttssttttírortíRtv, 2-aeen«ntdo>-2-dezost!· t,~fekőz és 2-8eetsmído-2-dezöst-D-ftíkóz alkotja. Lásd €. Jones és wnsal, Carbohydr. Rés. 340:1097-1 100 (2005). Habár a CPS es CP8 hason id eukür-ősszeiérelti, immunológiai lag eltérőnek mutatkoztak. Giikozidos kötésekében és az ufonsav O^aeetilációjának a helyében térnek el. Megfigyelték az egyik FueNAc oldal lánc tórz.sfitggŐ részleges N-aswiációjáb Lásd izianabos és mtsai., PNAS V98:9365(2001). 51 mreus hiiMkpalh'ziti'eharidob h?tmmog0kéi$itmé$&amp;m A 5. i!«« bttmkpnliszaeehat'tdok molekulatömege fontos szempont azimmnoogén készítményekben való aihaSmazaskm'. Á ratg;- molekulatömegé burokpoíiszaeeh&amp;ndok képesek bizonyos tdlenanyag-tmnnmváiászöl:; kiváltására az amigemkus ielsztinen jelen lévő opitópok nagyobb valenciája miatt. A leírás szerinti eljárások sokkal nagyobb molekulatömegé 5-ő.·; típusú és 8-us típusú burokpoliszaecharidok izolálását és tisztítását; teszik lehetővé, mim ami korábban elérhető volt,

MnfCVSliC /nvái-kötő (Saliva fiiodínn) unitéin .Az MnlGSitC ' nyál-kötő protein egy ABC transzportéi· protem, és vannak homológjai a 0pUfennitUs4)&amp;t· és S aureus-ban, A jelen találmány szerint MntC-nek nevezzük. Fz a fehérje egy 32 kDá-os lipoprotein, és a bakteriális sejtfalban található. Lásd Sellrnan és mtsai.. és Coekayne és rnisaL Infect, Immun. 66; 3?ő7{!998)> A 5. epidertnidis-ben egy vas-szubályozott opsron kornponesrse. Idgyelemae méltó homológját mutat a mind az, ádhezinekhéZj beiéérfve a PimA-t a S, parmenguis-ból, mind az ABC bmszporterek családjának igazoltan vagy feltetelezéítöb Vás-tmn&amp;zporí funketójú hpoprotemjehez (lAvd a 3. táblázatot a &amp; miruK törzsökért és szekvom étákért), S, s « rests A/íítC'proíbOt

Az. MntC S> aurmx kontológia nyál-kóló proteinként ismén és az US 5.801,234 számú amerikai egyesítő ái* iáiOökbeli szabadalmi iratban tárták fel, és alkui mázható a találmány szerinti immunogen készítményekben. Λ MntCzSítCrnyái-^fcötő protein S: amsrn homológjának a íbhérjeszekveoeiája tnegísíáíható a OenBíutk MP 371155 elérést szám alatt a MuSO (más néven SAV0631) törzsből, A szekventííUíazxínósitója SE<2 1D MÖ'íié. A, Mt(5í) törzs teljes gesiomja nukleotid-azekveiKáájánitk a hozzáférési száma bi€ 002758.2. .4 GetiBtmk NP 371155 hozzáférési számú fehérje-szekvenciát kódoló DMS-szekvenoia koordinátái a 704988¾ 705917 (SÍK) IDNO.135). Bizonyos megvalósítási módok szerint az MntC bMerminálísn le van hasítvúijabtjttt a SFQ 1D NQ:1 19 (polipeptid-ózekveneia) és SEQ ID NO: 136 (a poiipeptidot kódoló nukleoííd-szekveneía) mutatja. A S. mraus ktilththözö törzseiből szárrascsó MntC szekvenciákat a 4;>. ábrán foglaljak össze. &amp; ψίφ^$&amp; Μ!Cprtfód» A MttfCíBtíC/ nyál-kötó protein S. epidemiidis homológját SitC-ként ismerik és Selíman és rtítsat.. (Selíttran és tntsak, Infect imrtmn. 2O0S October; 73(10): 659I-$6W)) tárták fel. A MmCSitC/nyái-kölő protein S. <>pkkrmk&amp; homológjának ti kíktje-szzkveneiája niegtalálhalö a GenBank YP i 87S86. i elérési szám alatt ímés néven SRRE029Ö), Á szekveasia-asíokosdója SEQ 113 NO:í I?. A RFÓ2A Hívj» teljes aeoomja nmskotsd- szék<. ík'í,\í v uk a hozzáférési szenta \fC 0029^0. A GcnBank YP! 87886.1 hozzáféred .szómé fsbetjo-sssekvendát kódoló DNÍFszekvsnda koordinátái a 2930.)0-293959 (SBQ 10 NO: 133). Á Sitt. N-terminális csonkolt ver/tóját a BEQ ID MO: 121 (polipeptid-szekvenda} is SBQ ID NO: 127 (a puli pepiidet kódok'? önkiéül id sszekvendu) mutatja Más lehetséges SnC molekulák külön ide organizmusokból származhatnak a találmány szeméi immunodén ké<szííményben történd alkalmazásra, amelyek némelyikét felsoroljuk a 2. mblázathsn,

2^1ÁbiúM

A, mri'us vaskóid proteinek A találmány szerinti bnmunogén készítményekben törté# alkalmazásrá mási® antigén a A mrexx feisaitn protein, vaskóid determináns B (IstlB). Ezt a MSCRAMM-t Mazmantan és miatti, írták k CMazmaniao, SK. és mtsst., Eme. Matt, Ae#. Sci, USA 99:2293-2298 í'2Ö02)} és azt kővetőért tesztelték és kimutatták. hogy hatásos vskeinajeiőitkéftt a fertőzés egénnodelíjéhen és Rhesus makákö immimogerótást vmgáiajban. Kuk! itt ás smash (Rukhm KA. és míssU Mentám- and immunity, Voi. ?4> No. 4. 2215 -2323. (2ÖÖó)), Ez ttz. isdB molekuláidén van a S, aureus különbözés törzseiben, beleértve a MRSA352 törzset (protein hozzáférési szám CAG4Ö194.I); Newmatt töméi (protetst hozzáférési szám BAF673Í2J); MSSÁ476 törzs (protein hozzá térés i szám CAG42&amp;37.1); Mm3 törzs (protein hozzáférési szám B AF7SOÖ3.1}; RF122 törzs (protein hozzáférést szám CAÍ8Ö6ÍM. I >. A találmány szerinti immunogen készítmények:. tartalmazhatnak egyet vagy többet a kővetkező antigének közül: Opp3a, DítD, HtsA, LhtS. isdA, IsdB, IsdC. SdrF, SÖrO, SdrlA Síi A, SpA. $hi, aSfa-hemoíizso (hia). hda-hettiolizin, fibronekiimkötő protein A (fnbA), ftbtoneki ín-Kötö protein B (InhR). koaguíáz. Fig, map, Fanton-Valetttine íeokocídin (púi), alfa-foain és variánsai, gamma-toaití (híg) és variánsai, tea, imtnundommáas ABC transzportéi’, Mg2t transzportért Ki ABC transzportén RAF. antofem, Satnínio receptorok, ImA/PisÁ, IsaB/FisB, SFOIIIE, Ss»A, EbpS, SasA, SaxF, SasH, EF8 (RE), EBI, Npáx, EBP, csont sziaio kőtö protein H, ttoreoiizin prekursor (AURj/Seppl :€«a, és fragmensei, mim példáid MSS, TSBT-E mecA, poii-N-acetilgiukózamin (PNAG/dP'NAö) ezopoliszaeehttríd, OehO, EbhA, EbhB, SSP-f, SSP-2, HBP, viíronektia kötö proteitg HarA, EsxA, EsxB, Entertnozio A. Eníeroíoxtn 8, EnSerotoxín Cl és áj ttutoíizim A találmány bizonyos megva lósítás i tntkljat szerint amikor az ínmi ttnogén készítniény a CP$ és/vagy CF8 bizonyos Pennáit Ptrtalntarza, sem tartalmazhat tovább* i-NAG-ot: %y megvalósítási mód szerint a találmány szerinti iiofihzAit immunogen készítmény továbbá tartalmaz adjuváns, puffer, fagyvédő* só, kétértékű kation, nem-ionos dtrtergens, szabad gyok oxidáció inhibitora, tölfö-fnyag vagy hordozó közöl legalább egye- Λ találmány szerinti itnmunogéa készítmények továbbá tartalmazhatnak így vagy' több f&amp;ttóshószert a szüdilokokkasz pro tóin antigének es burokpol íszac e h at ki-protein kopj u gátőrnek mellett, Az FDA megkövetelj, hogy a többáóztsú (multí-dózts; üoiás biológiai termékek tartalmazzanak fattósiTószert, ann alól csak néhány kivétel van, A tartósítószert tartalmazó vakcina termékek közé tartoznak a benzetóníum klorídot (anthrax), e~ fenoxietnnoli (l>TaP. BepA, Lyme* Polio fparenteráiis}), fenolt (Pneumo, Typhoid (pateoteráiis.), Vaccinia) és dmerozált (DTsP, DT, Td* HepB, Hib< influenza, JE, Meoíug, Pneumo, Rabies! tartalmazó vakcinák. Az injektálható drogok esetén engedélyezett tartósítószerek közé tartoznak példáéi a klórhutaítoi, m-krezol, metilparabén, prop's!párákéig 2-fönoxietímoí, bettzeféniutn kíoríd, benzalkóniunt klórid, beozeesav, hettz.il alks-hol, femd, ttmerozál és feuíihigttny-nibrát. A találmány szerinti kiszerelések továbbá tartalmazhatnak egy vagy többet paffon só, kétértékű kation,, nem* ionos detergcns, íag> védő szar, mint például énkor, töltőanyag. és tmtiozidáns, mint példát!I szabad gyök gyok-tbgó vagy keíáior szer közül, vagy ezek bármilyen többszörös kombinációját. Bármelyik komponens, például keiátor megválasztása meghatározhatja, hog>-· egy másik komponens (példáid gyökfögój kivónátos-e vagy sóm, A beadásra kiszerelt végső készítménynek sterilnek és pirogén-menfesnek keli lennie. A szakember empirikusan határozhatja meg, hogy ezek és más kompottetssek tnilyén fmmbmációí tesznekópintálRak a tartósítószert tartalmazó találmány szerinti immunogen készítményben, különféle faktorok, tniní például a szükséges tárolási es beadási körülmények függvényében.

Bizonyos meg valósítási módok szettől ts lioítiizált készítmény továbbá olyan pufiért íartalmaz, amelynek a pKa értéke 6,0 e·. Ö,ó és a mennyisége kevesebb mint 3% (w/w). Bizonyos megvalósítási módok szerint a kiszerelés körűikéin! é,ö és körülbelül 9,0, előnyösen körülbelül 7,5 és körülbelül ?,S közötti pH tartontányba vett patiereive. Bizonyos megvalósítási módok szerint a puller Rencontráciéja 2*54% * 0,76% (wAv). Bizonyos: megvalósítási módok szerint a puller szokemátot tartalmaz 6,0 * 0,ó pH-a, Bizonyos megvalósítási módok szerint a pnflér hisztidint tartalmaz 6*0 -t-. 0*6 pH-a. Bizonyos megvalósítási módok szerint a puffer híszísdint tartalmaz ó,5 &amp; Ö,ó pH~n. A táblázat fefeörolja pnfTerek néhány nem korlátozó példáját, amelyek alkalmazhatók a; találmány gyakorlatba vételéhez, .3. l'áblázát: Ptülérek

Bizonyon megvalósítási módok szerint kívánatos lehet a találmány szerinti boíHizak imníiioogén készítmény vagy kiszerelés pH-ján&amp;k a beállítása. Egy találmány szerící:: kiszerelés ρί ϊ -jái a szakterületen szokásos módszerekkel állíthatjuk be. Λ kiszerelés ρί-ί-ját 3,0 ás 8,0 közé állíthatjuk be. Bizonyos megvalósítási módok szerint a kiszerelés pH-ja 3,0 és 6,0,4.0 és 6,0, 5.0 és 7,0. vagy 5,0 és 8,0 közötti lehet, vagy oda állíthatjuk be. bgy másik megvalósítási mód szerint a kiszerelés pH-ja körülbelül 3,0, körülbelül 3,5, körülbelül 4,0, körülbelül 4,5, körülbelül 5,0, körülbelül 5,5, körülbelül 5,8, körülbelül 0,0, körülbelül 6,5, körülbelül ?,o, körüliéiül 7.5, vagy körülbelül 8,0 -ebet vagy oda állíthatjuk be. Bizonyos megvalósítási módok szériái a pH a 4,5 - 7,5, vagy 4,5 6,5. 5,0 - 5,4, 5,4 - 5,5, 5.5 - 5,6, 5,6 - 5.7, 5,7 - 5,8, 5,8 - 5,9, 5,9 - 0,0, 6,0 - 6,í. 6,i - 8,2, 6,2 - 0,3, 6.3 6,4,6.4 - 6.5, 6,5 - 6,6, 6,6 6,7. 627 · 6,8, 6.8 6,9. 6,9 - 7,0. 6,5 - 7,0, 7,0 ·· 7.5 vagy 7,5 - 8,0 tartományba euheí, vagy oda ííHithaíjok be. Egy specifikus megvaiósifési mód szerint a kiszerelés pH-ja körülbelül 6,0. Egy specifikus meg'valósítási mód szerint s kiszerelés pH-ja körülbelül 6.5. A hofsíizáH imrtumogén készítmény töltőanyagot tartalmaz.. A töltőanyag általában a készítmény tömegének biztosításai és a drog vizeid izáiását szolgálja, ami általában olyan kis mennyiségű dózisonként, hegy a drog száraz csapadéka láthatatlan vagy síig látható, és/vagy inegakíidályozzíi az hatóanyagok kifújódását a fiolából, mint példán! a tíofiiizálá;; tblyamán. A iOitöanyag a drog kicsapódását is elősegíti. A iöítöanyagoh fagyvédő szerként is szolgálhatnak. Különféle fagyvédő szereket ismerteinek hagyományos tankönyvek, irdal pékián! a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 2. kőiét. 19. kiadás 11995), Töltőanyagok nem korlátozó példái közé tartoznak ti cukoralkohoíok, mini példáit! alditol, mannitol, szerbitől, mozitól és poík'tiiém&amp;ítkoí. cnkorsavak, mint példán! aídonsav, urousav és ahiársav, és szénhidráink, mmt például áldozok, kötözök, amittocukrok, akntoiok, inoziíolok, aidonsavak, uron&amp;avak, a lóársavak. mono·, dl- vagy poliszéníuórátok, güeeraldehidek, arabtnóz, lixóz, pentóz, ribóz, xilóz, galaktóz, gtdkóz., hexöz, k!6z, mannóz, talóz, hepíóx glükóz, írtiktóz, zlukonsav, szói bitói, iaktóz, mannitol, meíii «-gíukopirsmozid, maitóz, tzoaszkorbinsav, aszkorbinsav. lakmtt, szőrhöz, ginkarlnsav, eritróz. íreóz, arabínóz, alíóz, aitróz. gulóz, ióóx, itdóz, eritntlóz. ribulóz, stlulóz, pszikóz, tagatóz. gltikiironsav, glukotisav, glukársav, galakíuronsav. tnannoronsav, gkikóz.ionit·, gaiakiOzanun. szacharóz, nehalóz. neuramtnsav, arabintmok, feuktánok, foké nők, gaiaktánok, galaktutonánok. ginkánok, mannáitok, xílánok. (tnint példán! husiin}. ieváo, fukmóán, karrageenán, gaiaktokarolóz, pehttnek, pcktlnsavak, amilöz, puHnhirt, glikogén, amilopektin. cellulóz, dextrán, posztokká, kitin, asaróz, keratin, kortdroitm. dermatán, hiaktroraav, algasav, xantángumi vagy keményítő.

Bizonyos megvalósítási módok szerint a töltőanyag &amp; szacharóz, mannitol, glicitt és szorbitol egyike vagy több ezek közül. Bizonyos megvalósítási módok szerint a töltőanyag szacharóz. Bizonyos megvalósítási módok szerin· a szacharóz konceuftációja nagyobb mint 91 % (w;\v). Bizonyos megvalósítási módok szerint a szacharóz koncé ni rác iója 9683 a 2,0% (wtw).

Bizonyos megvalósítási módok szerint a laláltttány szerinti, parerheráiis beadással kompatibilis lioftltxált sagv visszaoidott , «fii z í t Cv-<,temem kts/mdiSe eg\ vag> több he'ertékü katíoni tarttemm, amelyek non korlátozó példába MgOI-. C&amp;CU és Mn€i?.. körülbelül 0,1 mhi és kötüíheiüi Hl fflM közelii mrtootenyba m<y koncentrációban, ahol a?. S mM-ig terjedő koncentráció az sSöayös;

Bizonyos megvaióxuáH módok szerint a találmány szerinti, parentcráhs beadással kompatibilis ludilízah vagy visszaoidott íioftHxáh kés/mnény kiszerelése egy vagy több sót tartalmaz, amelyek nem korlátozó példája a natrium-klorid, káhma-klnrid, müríum-szülitü! és kálium-szulfát. és az olyan tonerösségbea van jelen, ami fiziológiásán elfogadható «z alany számára parenteráíls beadás iáján, és olyan végkoncemráctőbao van, ami a kiválasztott ion erősséget vagy ozmolaritást biztosítja a végső kiszerelésben. Λ kiszerelés végső icnerösségéf s<m·- ö/moíantá^t fohb te ti ve te határozhatja mev teteídául t palim Ίο vegyük uyhlbo- származó ionok λ má. nem puffereíö sók. Egy előnyős só, aMaO, 2SO mM-ig terjedő tartományba eső komx'nlráeióhuo van jelen. almi a sókoncentráció ágy van mowtersziva, hogy kiege^ rttss e tM'hi komponenst (oá klóul enktokifi cU műdön, hogy a kiszerelés végső teljes oxmoíaritása kotnpailhiiís legyen a parun tenths {például ínífamoszkulátis vagy szubkután injekció) beadással, és elősegítse az iammnogérí kevítasény kiszerelés imraunogéi. komponenseinek hosszá távú stabilitásúi különböző hőínérsékieli íartományokbao A sememes kiszerelések tolerálhatják az egy vans iőbh fagy védő szm megnő, címlett mennyiségei; a kívánt segd) ozsrmtente;n szintek fi umamn-aru

Bizonyos megvalósítási módok szerint a találmány szerinti, parentetelis beadással kompatibilis boti Sáráit vagy visszaoidott ÜoillkáH készítmény kiszerelése egy vagy több fagyvédő szert tartalmaz, amelyek nem korlátozó módon a diszaccbaridok tpéldán! Uikíöz, nsalíóz, szacharóz vagy trekilóz} és poiihldroxi szénhidrogének (például dulcitol, glicerin. mannitol és szorbítoi) közül \«n kivétesz; ni

Bizonyos megvalósítóm módok szerint a visszaoldou iiotítizák kiszerelés ozmoiarítása körülbelül a300 mOs/L és körülbelül 8ÖÖ mOs/E közötti tartományba esik, ahol az előnyős tartomány a körülbelül 250 mOs/L és körülbelül 500 niOs/L, vagy körülbelül 300 mOs/L és körül belül A0ÍÍ mOs/L közötti. ügy visszaoldott liotrlizált kiszerelés tartalmazhat például körülbelül 0¾¾ és köríti bellii 250¾ közötti szacharózt, körülbelül 35¾ és körülbelül 15%, és körülbelül 5 ős körülbelül 105¾ kozott! szacharózt. Más megokiásképpen egy visszaoidott Itofilizáít kiszerelés tartalmazhat például körülbelül 3% és körülbelül 12% közötti szorbiíolt. Ha egy olyan sót adunk, mint {jőidáni a náírmm-kiorid. akkor a szacharóz vagy szóróitól hatásos tartománya relatíve c^ökketebeiü, vagy sebt. Ezek és más ilyen ozmoiahtásí és ozmokiritási szempontok a szakember köteles tudásának tészét képzik.

Bizonyos. megvalósítást módok s/orms a lomb, szermii, ősre óiéra te; beadással kompmtemte boülizait vagy visszaoldoít líoíílizalt Msaííméfty egy vagy ;öbh szabad gyök oxidációs inhibitort cs/vagy kelátor szert tartalmaz. A szabad gyök gyökibgök és kelátorok széles választéka Ismert a szakterületen és alkalmazhatók a letess szerinti kiszerelésekben és alkalmazási eljárásokban. A nem korlátozó pékiák közé tartoznak az etanol, EDU'A, BDTA/etanol kombináció, trretanoiafmn, mannitol, Ittezddtn, glicerin, nátrranneitrát, mozitoMtexafosz-ilit, tripolifbszfat, aszkorbinsav/aszkorbát, borostyánköaav/szukcimtt, aimasav/maieák deszlerái. EPDHA és DTPA, és a fentiek közül keltő vagy több különböző kombinációi. Bizonyos megvalósítást módok szerint legalább egy nem-redukáíó szabad gyök gyöktogm adhltunk olyan koncentrációban, ami hatásosan fokozza a kiszerelés hosszt! távú stabilitását. Egy vagy több szabad gyök gyökfogót/kciátort is adhatunk különböző kombinációkban, mint példán! gvöktogóí és kéiértékii kallóul. A kclátot megválasztása meghatározhatja azt. hogy szükség van-e gyök fogóra, vagy sem.

Bizonyos omgvafestósl tnödok szerint a iioölizólt immunogén készítmény felületaktív anyagot tartalmaz kevesebb mim 0,5% (vyAv) koncentrációban. Bizonyos mepáiősitüsi módok szerint a Selülefaktiv anyag kon- centnknójá 0,21% s. Ö,CM% ίνν·%ν). Λ ielüietakíív anyagoknak számos nem korlátozó terepe van a kiszerelések-Ka, be eertve pelcíaai mmt adjitvmt*.. vintageOkwet t'&amp; N&amp;ylubthzalövor. óddávd hi/vryov megvalósítási módok sasró a felületaktív smug í.nfkibib.'ahxzetkux működik annak megakadátWiiis&amp;n, hogy a;og hatóanyag, azaz ά Of A protdn Irozzátapadjou a tartály vagy fecóomdö falához és ily módot) nvm lenne visszanyerhető vagy bejnttatbaio. A felökóakov anyagokat a lehetséges aggregbe tó megakadályozására is alkalmazzuk, például akkor és ha a CifA protein éomhoéstv kérdi a dugókból származó sztíikon kenőanyaggal. A? imtmmogén kéxzítmé-nyékben és vakcinákban történő alkalmazásra szolgák? ieíOíot&amp;kttv anyagokat ismertetik a,?. Axearated és Dupuis, Vaccine, 2«(200») öiD-SÜS irodaimi helyen. Rövidem a feltiietakíiv anyag nern korlátozó példái közé tartoznak a iipopoliszacebaridok rUPS), szaponinok, dímetií dioktaáecil ammonium bromid (DDAB), blokk polimerek, vagy poiosamerek, amelyek eitlémoxid (EO) és propilén-ovid (PO) tandem polimerei, szofbiián éMerok, amelyek lehetnek szorbitan mono vágj- tri-oleátok és amelyek ésater kötéssel kapcsolt szorhiiolböi és. oiajsavbóí készülnek és eioxiisitak (oz ptílisaorMiok, mint például poliszát 80), foszioíipkiek, mint például leeitip, és manttsd-öieálok, atneíyek oiajsav és manniioí észteret. iíkóhyos megvalósítási módok szerint &amp; ieÜlietatóiV anyag egy vagy több a következők által alkotott ese-portból .kiválasztva: pólósamét, polioxietilén alkui éter, neat korlátozó példát közé tartoznak a Brij 58, Sri) 35, valamint másik, mint.-például Triton X-KlO; Triton Χ*Ι14} BF40, Span 85 és a nem-ionos felületaktív anyagok Riutoaie sorozata ipéidátd Tronic 120, és poltux tett lén szerbitán zsírsav észter, atnelyek közé tartónak a peissKorbátok, Bizonyos megvalósítási módok szerint a MiSíetaktív anyag poiiszotbát-80 (Tween Sö), pnliszorbát-óo (Tweeo bök poliszorbát-4b (T weett 40} vagy poíiszorhát-2í) (Tween 20), Bizonytgs tnegvairtsbási módok szvrini a pohszorbát 80 (Tween 80} koncentrációja 0,205¾ * 0,042% (wöv).

Bizonyos megvalósítási módok szedni, különösen mneíyekben a íktíilizáli: készitmény ootn rtptditnáz adjuvénst, a vizes bigitószer adjuvánsí tartalmaz, Bizonyos megvaíósiiási módok szerint az aöjuváns ISCGMATRIX"*.

Bizonyos megvalósítási módok szerint, különösen amelyekben a liofilszáh készítmény nem tartalmaz feKílet-ttktlv anyagól, a blgltóssteríciuietaktiv anyagot iattabna?, mint például poliazorbát 80-at.

Bizonyos megvalósítási medok szerint a folyékony mumusogen készítmény intakt Κ..ΊΓΛ poiipentideí tartalmaz, amint fent kun monk ..nzíoxka koncentrációja ótH.t. rm 2ug roles Söüne v\ 8o ig ni -ezőití beleértve például 2Öpgmd * 2ugóuL 40gg/ml .* 4pgönt, 20öug/ml * 20|tgftnl, 4Ö0gg/ml * dOgg/mi, óíXlpgzrol * döag/mi és SÖOpganl - 80ug.'ml közötti. Bizonyos rocgvalósaíás! módok szeren a folyékony nnrouoeg.én készítmény miakt CífÁ pohpvptidet tartalmaz, amelynek a koncentrációja éöpg.'roí a ágg-mi és SOOftg'mS i bOgg/ml közötti Bizonyos megsutasítási módok szerint a íMvekociv imtmmogén keszjtntény tartalmaz (aj stttakt rClfA polípepfidef. amint feni ismeríettök, amelynek a konrertreciója 20pg.nl dpgdn! és SÖO-tg ml t bOgg/inl közötti. H'icéttve például 2öggónl -t- 2gg/mk úöpg-'tnl t 4ug/írtl, 2üGpg/mi .t. 20ug/mL áooug/ml s. 40ue, ni ó, otgp,' oOug n! á> SCOng-ml ' SOpg mi -öztí«n (b) CPS-CRM»*·; konjogátumot iöpg^mt * Ipg'mi és éOOggö);] .!·. 40p« ml közötti koucenlrációban, beleértve péidátst lOpg/ati * ipg/ml, 20pgúrJ ·. 2pg/ml. 1ö0ug/m; s- tOttg/tn!. 200pg./mi ± 20ttgóní és 400cgén! s- 40pg/mi te) CP8-CRMktmjugátutnot Kmg.'mi -i ípg'ml és áOOpg'ml a 4Öpg/in! közötti kotKetarációban, beleértve példáit! löngöaj z ipg/mí, 20ftgí'mi s- 2pg.'ítxl, SOOpgOni + iOugbíil. 20öug/mÍ ·. 20pg.'nd és OOÖpgóni 4öpg/mi, (d) lusztidtn puffért Itörtlibeiül 5 mM és körttlbellil 50 tnM közötti, körülbeiüi 5 aiM és körülbelül 25 ttsM közötti, és körüíbeiíi! 5 ttM és kötöíbelöi 15 mM közötti koncemráctóban, (e) poiiszorbáí 80-at körüíbelöí 0,055¾ és köritibeítd 0,5%, körűibe*»! οΟ"^β ró \ >rók<H s! ) körülbelül 0.,‘ ' es körülbelül 0,2½ tősreg'íerfögd fwS) kö.'ust: koncentrációban; és (1) szacharózt körülbelül 0% és kőrülbdül 25% szacharóz, kösd beiül 3% ¢.¼ kőrtiibeüii 55%, és körülbelül 5 ·.?> körülbelül ;0%w:\ közötti koncessuádöbas:. Más stiegvairóisá;·;: módok szedni a poliszorbát SO 0,ő S % .·, 0,0'.)5% rósveg'téríöstaí (w/v) koswct-tráeiéjó és a szacharóz 4,::¾¾ λ 1,5% w/v koncéra-iációjú. Bizcmyo» megvtdősítást módok szerint &amp; folyékony isntmmogéu kdsdtm&amp;sy tansshrusz fa) intakt rOfA polípeptidef, amist te? ismertettük. umelyrsek a koncén nációja SOggörn .:. .rtoasd és Sööiig/nd i- Söpörni közötti, beleértve fxrki.vd rógy mi ; róíg mg -Kmg’irtl -fc aug/mi, 20öns mi * 2%«.mL dOőjtg. tnl a dOgg-ml, όθθμί'/m! s óOpg'ns! et $0(Hg s'-s ' HOug mi, lb's t PS-CRVl^ k&amp;»i»gnti.n.ot ΙΟμρ ml ípgmi ró 4d(lpg/rts1 -átifigoö közötti rómeeníraeróróm, beleértve péKiául róüg/m; ;· ins'ni -'Opg/tnl s. Rpg/nd, KH\ug/mi í. lön&amp;'mi, 200ug,snl t adagról és -1ö0ug/tn; s-. áöstg/roí, (e) CPÍM.'RM^r ktmjngátütrsot iöpg/mi a Ipg/ml és 4tiöisgnti ; 4Cmgn;i között; koncentrációba;:, beleértve példás! löpg/mi a fpg/mi, éOpeótsi =; róg/nsi. löötsg ne ' lögg mi, 200ne srd * róag H es όΚϊμρ sní t 4őag/mí, (si; ivItsíC poll pepiidet 30 »R ntí a. 3μρΑη1 és RÖOtíg/ítti ^ SOggöni k<vötsi ke»n«"n H>vbatt. beleérne például 3Őpg/mi ·,ί·. 2pg/t»U 4Qpg/mt * 4pg/rtsí, 20Őpg m' 1 2<>pg -síi 4tsí)as> tűi -rósu' n k ööO^grtsi f óOpgröl es HOOpgg'nsI a Sí'ftgoni, te) hhzndiíi paffért körülbelül 5 mM es körülbelül 50 t«M, körülbelül S nM és körülbelül 25 mM. és körülbelül S biM és körülbelül 15 mM közötti koncmmacíőbass, ti) pnhszoebát 3Ö-at körülbelül 0,05% és körülbelül 0,5%, körülbelül 0,075¾¾ és körülbelül 0,35%, és körülbelül öj% és körülbelül 0.2¾¾ tömeg/térfogat (w/v) közötti koneestfáctöhím; és (g> szacharózt körűibeiui 04c és körülbelül 25% szacharóz, körtilbelöi 3% és körülbelül 15%, és körülbelül 5 és körül beiül H>% w.-v között: konc«;iukiéb;m. %y másik megvalósítási mód szedni <·; poliszorbát SO 0,01% -t 0,005% tösmg/íédbgai fvv/vt kortee»trádójö és a szacharóz 4,5% a 1,550 w/v kmeeuttííeiőjó.

Bi?.ív:yo>. sttegvalösítasl módok szériái, különösen azokban az esetekben, amikor sem a iicdllizáít készítmény seta a hsgstoszcí nem tartalmaz sdjuvánst, a Ibivékony immuaogén készítményt adjovánssai koíabiuáipik. Egy snegvakssitswi mód szerint sí talöimötty tárgja eljárás immunogén készlímény eíöállltásstra, aínely snagá^tndbg'· iísljti a következő léréséket: la) vires oldatbatt kombinálni; (i s tapadási faktor A i.-tCIfA'l poiipeptidet, fii)CP5-CRM konjugammot, (isi) C1'S-('RM5sí koajiígátsstaot. íiv) MmC polípeptkíet.; (v\s 6,0 i 0,6 pK.tt ésséka pufiéit és (vi) töltöanyagsot; é» ;b) :sz ::) lépés szormti kombináció íiofilizálásáf,mú kevesebb mint 3 fömeg% vizet nshd'nazó pogác..at e:<dmén>ez Λ találmány szennti tmnumogén készittnéstyek. hasznosak SiapkykKttmux tiureus fertőzés megelőzésében vaus kezelésében történő alkalmazásra. Bizonyos megvadósitásí módok szedm n pogácsa fehér szinti és szivacsos állagé, A , hoíiUzálás" alatt artyag iag>,!í,'tv..-scas:táaára(kttndeszíkkaíás) szolgáló folyamatot érátok, Általában a iiöríbzáiási folyamat magábnn fos.-lsslja nnyttg fagyasztását, majd a környezeti styonsás csökkentését és elegendő hő bíztoiiitasaí, hogy az anyagban lévő fagyott víz. elszüblótiátjors. Bizonyos esetekben a iiofilMlás magában fogía* '-Τ'? kezdeti htgy nsztííj; lépést, ocy rrs sses szántást (szubbmactóst ieya-st. ee> szekunder szántást, amittek e «élje a megtnaradt végső víznyomók eltávolítása. Bizunyos esetekben egy temperáiási lépést is álkaimazask a pögtk-sti jdletnzőinek javítására es a szubíimáiás javítására. Lásd a „Lyophiiizatson of Bittphítrmaeeatieals”, íszerk.; Henry Costatlno és Miehad Bikái, kiad,: Λ APS Press, Ariinkon Va, 2004 irodalmi helyet a liotriizálás iészleteseblt tárgyalásáén. A „pogácsa" ('cake') alatt általába» a szántóit anyagot értjük amely a Isofllizáiási folyamat tsfáss marad. A pogácsa kinézete foggá fogyasztással kapott szilárd mátrix szerkezetétől és ktsksnféle paraméterek befolyásolták a üoíiíizálásl bdvsjmat fotyntnan. A tcntpesálasi lépés aSkalsvaza''tí a liofsiszalasj eisárásban pyaferan egységeset>ö pogácsa megjelenést eredményez.

Bizímyos nmgvatóskási módok szerint féUlictaktiv anyagot például polkzorhát SO-ai kombinálunk az rCífA-v;d, pufimé! és töltőanyaggal az. (a) lépésben. Bizonyos megvalósítási módok szerint a felületaktív anyag kon-centráeitya kőróibótöl 0,1% * 0,05% s w/vk Mis megvalósítási módiik saserint a Sólöleikiv söíyng kmicantraosó-

Bizonyos megvalósítási módok szerint a* <a> lépésbe» kialakult vlees kombiiméit) intakt srCtfA polipeptídet tartalmaz 2í(ug/nd A 2pg/mí és SöOpg/roi « SOgg/ml közötti krmeentráeiöbao, beleértve például 2%tg/m! .t. Spgriní, 40pg/mi :¾ égg/ml, 20Öpsprol 4- 2(lpgó«1, 4ÖOpg/mí .a- 4Qpgémi óböggöuS ά óöpgrini és SOOpgg/trti 4 SOpgéml- Bizonyos megvalósítási módok szerint az (a) lépésbe»"-kialakult vizes kombináció tartalmaz intakt rClfA poíipepíidct lOggrin! a- Spg/mí és SÖÖpg/ml &amp; §0pg/ml közötti honetnáriietöbao, beleértve például 2Öpg/mS ;t 2pg/mi, döpg/ml v 4pg'mi, JÖOpg/m! -t 20pgém!, 4ÍK>pg/ml s 40pg/tui, 6d0ug/mi * ööpgóiti és SÖOng/mi ,e ÖOpg/ml kősónk €F5-€RMR!·; konjagátamot iöpg/mi £ ipgönl és 400pgüni íAOpg/ml közötti koncom rációba», beleértve például í(ípg/ml *, Ipg/mk 2Öug/mí a 2pg/tni, KUlpg/tni * töpg/ml, 200pgönl 2Öugí'mt és 400gg/ml .ο 4i)ggóni, CPkAiRM^·? konjugátomot tögg/ml * Igg/ml és dOOpgrinl * éOpgótti közötti koncentrációban, beleértve például ÍÖpg/ml £ htg/mk 2üiig.mí a 2pg/tnh I00pg/mi 4 lOggóni, 2í%tgönl -.·;·. 20ug/mi és 40öpg/nvl * 4Öpg/ml hísztldin puffért 10 «tM * 5 mM koncentrációban, políszpdbát HO-at 0,1% 4 0,05% töffiögdértbgat (w/v) koncentrációban ös szacharózt 4% a 4.5% w/v koncentrációban. Egy másik megvalósítási mód s/o int n poüszorbát SO 0,01%0,005% tv v koncentrációi» és a szacharóz 4,54¾ -.η 1,5% u-t kom eetártkriójó.

Bizonyos megvalósítási mödók széf int az tál lépésben kialakult vizes kombináció rCífA- pofipeptideí 4ögg/m! .* 4pg/m! és SÖOgg'nd * 80pg/tni közötlí koncentrációban, beleértve például 4Ögg/ml -ápg/ml, 2Ö0gg.'mí 2Öpg/nd. 400,»g/tnl * éOngónL 600pg/ml á bOpg/rni és SOdugóni > 80ug/ml közötti, CP5-CRkV? konjngaíttmot lÖpgcd Ipgmi és 4Ö0pg, ml + P'gg no közötti kou-'entmcOe,»!, beirertte példa»! iöttgörd * ipg/tnk 20pg/mí .t. 2pg/mi, iOOng/tnl s. iOppóni, zOOpg/mi c 2ó»gm:| &amp;; 400gg'nti .t 4Öftg/'ml,· CPIbCRMj*» kottjugátamot iOggöni ,s Igg/nsi ós 4Ö8pgíftu c 4Upg/ml közötti koneenfrámóban, bedeértve pel-dánl i íbtg/mi c-. 1 pgönl, SÖpgónl ó 2pg/nti, lööpg/nti w lOggimí, 201)p.g/mi 2öpg.-mi és 40öpg/ml ó. 40ggirnt, MntC poüpeptkiet 40pg/mí *·. 4pg/mi és PsÖOpg/mi -i köpg/sr.i közötti koncentrációban, beleértve példán! 40pg/m! sv 4pgí‘mL zOOpgótd *. 2öpgf'mS, ö00gg/mi &amp; üOpg/ml, and SÖÖrvg/ml i kOgg/mi, híszüdin pulfárt 10 mV! s " mM koncé nmetoiua, '|'oltszo!\tí 80mt 0,10e + 0,0^% tör\gtéfR*ga! ;o \! 'onccfttracjöbatf es ,/«cha* rözf -s 4.5% sv/v koncentrációba». Egy másik megvalósítási mód szerint a poliszorfaát 80 Ü,tH% c 0,005% íótfteg/téríbgát («/v s kostcentrációjú és a szadntróz 4,5% » 1,55¾ w/v koneenlritciójú.

Bizonyos megvalósítást módok szerint st Irofiiizálási lépés a kővetkező lépésekéi foglalja magában: (i) a vize:; kombináció ie fagyasztását, (it itt vizes kombináció temperáiósát, és (iii) a kombináció száriiét-ár két fázisban. Egy megvalósítási ntód szerint az (i) fagyasztást a vizes kombináció hőmérsékletének 0,3eC * 0,03°C per perc lépésekkel csökkentésével van végrehajtva, amíg eléri a <5ÖeC s 5'C bőmérsékletet 400 millibar .¾ 4Ö mill ihat nyösttátös; majd tart,trr óöpoc ·. ó pctcen keicszbíi, (ttl tt íentjOtalas a Itömcnvkkt *|0X j vV-m valóetstcie-stseí van vcm*'f«a;t%a 0 ,>*' o.ttf , per |x<tr svbessépgel, tnajd a nómctaékkt ntkHtsál m t t 5S( Ott b'O per», r i' ",'i, v"í k'"as/!pi, tnas-i a nön^ersekkt fszkUméséve! ó„tt' , 0,03% per perc sebességgel amtg eléri - 50%' .s 5 'C-ol. és azután a hőmérséklet -50C. -t 5 í.-on tartásával iád perc 18 percen keresztül; (iii) a szárítás elad íázt-a a nvomt- 4o mtí! for, ,m tor) ettrko outenö c&amp;okkemeví\s*! es <5 petéén, ^cte-zfííí ott t,irtását a i van végrehajtva, majd a hőmérséklet emdósévd - 30°C -* 5*C-ra 0,2¾ * 0,02¾ per perc sebességgel, és azután a hőmérséklet tartásával 1020 perc - 102 percen keresztül, es (ív) a mariim masniik fsztsa a hőmérséklet ?·(ΓΧ * S^rra emelésével 0,2¾ * 0,02¾ per perc sebességgel vm végrehajtva, majd a nyomás 2ÖÖmTorrmavaló é##iésévsl, és azután a hőmérséklet 30¾ * 5*C-on való tartásával 720 perc .* 72 percen keresztül. Bizonyos ::ái^^Í#Í|ái:mőd# szerint a fogyasztás kOrtiíheiüi 1013 tnhar-on (XatmVvan végrehajtva. Bizonyos megvdó-siási mtRiok sprint a fogyasztás maximum 1013 mbar-on (1 stm) ven végrehajtva, Bizonyos megvalósítási módok sz,mnt a szárítási idő körülbelül 2öÖ0 perc. Bizonyos megvalósítási módok szerűn a szárítási idő maximum 2000 perc lehet. Bizonyos megvalósítási módok szerint a szániáin hóntérséüe· -+OC a. 5'SC, 5Ö“C .1 f'T vagy ő()'V 'v 5¾ A végső szárítás, fervs utnr a íbfih/alr kvs.ntmétty honé-sők'vtet tocsokkenííílk 5M'-r» 0,5¾ *. 0,05*0 per perc sebességgel. Bizonyos megvalósítási mód szerint a íioítlixálás Hokiban történik, Bizonyos megvalósítási mód szeríní a fiola le van dugózva a fiofihzáiás után. Bizonyos; megvalósítási módok szerint a fiola lei Vén töltve nrtrogéngáz.zd a fiola iedogőzását megelőzően, és részleges vákunmbst) vart ledugózva, mint például 00*t>atmoszfétiku;> momAw»

Egy megvalósítás! mód szerűit a folyamai magában foglalja a liofslizáh készítmény vizes higitószerbeo való feioSdíisát. ahol a visszaoldott készítmény ozmolaiiuKa <00 ntOsm a; 30 mösnt. Bizonyos megvalósítási módok szerint tt vtzes ttigiíószer viz. Bizonyos ntegvalóstiási nankik ·> térim a vizes hígs.-'-zerbOmVi Nzt 1

Egy megvalósítási mód szerint a beje leni és tárgya tt fent ismertetett eíjárásstd gyártón immunogen készítmény. htzotM'v my'dm. <tód'k no <«tdalm&amp;ns vetmis kivreréíésyggvrvagy több további,patentetaárcise-adásra alkalmas slabiHzálószeri tartalmaz, példád legalább egy tíol t-SH) csoportot tartalmazó tednkálőszert (például dsdem. N-aeetii císztem, redukálj gl maison, nátriunvtksglíiköiát, tiosznifát, motKtítogíteertn, vagy ezek kévétekét). 'Máik megoklásképpeu vagy adott esetben a találmány szerinti tartósítószert tartalmazó hmmmogétt készítmények tovább stabilizál hatók az oxigénnek tt tároló tartályból történő eltávolításával, a kiszerelés fénytől való véddmévd (például hatna öveguntályok alkalmazásával). A ialdrnány szerinti tartósítószert tartalmazó immunogén készítmény kiszerelések tartalmazhatnak egy vagy fÖ|É gyóg^ddrilag éiibgádhatő hordozót vagy exdpterssí, amelyek közé bármilyen olyan éxdpietss bdetárto-zik, ami Önmagában netn indukál immunválaszt. Az alkalmas exeiptensek ttom koriátoző példát közé tartoznak makromolekulák, mint például fehérjék, poiiszaecharkiok, goltíojsaváh, poligHkobavak, polimer amitőmyak, atnmosav'kopoíhnerek, szacharóz (Paoíetri és .misük, 2001, Vaccine, i9;2i 18), trehdöz. iaktóz. és lípsd aggregó-tumok (mint például oiajcseppek vagy íiposzőmák). Az ilyen hordozók jói ismertük a szakember számára. Gyógyászatjlag elfogadható «sapienseket tárgyal például Gennaro, 2000. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 2ö,ki adás, ISBN :0683306472,

Egy -megvalósítási mód szeriní a leírás tárgya folyékony immunogén készítmény, amely találmány szerinti iiofíiizáil: íntmimogén készifmény, amint &amp; leírásban ismenetjOk, vizes higítöszerbsu való feloldásával van gyártva. Bizonyos megvalósítási tsódok: szerint a vizes htgitószer víz. Más megvalósítási módok szerint a vizes higitószer alacsony sótartalma oldat. Az. alacsony sótamímá oldat alatt olyan vizes oldatot értünk, amelynek a sokotKxmU'ációiít köröíhefüi í mM e$ kőmiK'd 'oO <rM közötti, előnyösen körüiheml 1 tuM ev korelhekf tön *«M között! Bizmrce, me oak' tt< é m«>dok ''Vont a só náttítmokíoijd Bizonjo- mtavdódUM modo», -/ersnt az alacsony sóUwtahuú okid nátrinm-kloridot tenaínmz óí) itiM ·.·: 6 nt,M koncendációban. Bizonyos megvalósí-lási módok szmnt a folyékony mmajnogén keszutneny pH-ja o,0 a. 0,6 Bizonyos megvalósítási modok szerint a 'folyékony S,S * 0,6. A Jdgifósxeri’ anyagot sznszpestdálnl hígítani vagy szotobíiízáíni képes folyadékot ériünk, Bizonyos megvtrióstfási módok szerint αχ anyag CifA polípeptídet tartalmazó Hőül ízéit készítmény. Bizonyos megvalósítási módok szertrd ahlgítészer vixos és sxokibilixáija a íiofiiixáit készítményt A találmány szerinti viaszaoidotí lioitlízáfs immunogen készítmény alanynak történd közvetlen bejuttatását eléritetjúk parenterólis beadással {mífamtíszksi^stm, smraperitoneáMsam imtíHlermáitsaf},. sztibkt«ápvÍmmyÉt^ san vagy sxnveí ittterstíeiáiis terébe*; vagy rektális, orális, vaginába, topíkálís, transzdermálts, íntraoazáiís, oktt-iáris, aorális, paimonárls vágj1 más nyálkahártyát beadással. Bgy eiőúyös megvalósítási mód szerint a párenterális beadás mtramnszkttiáris injekcióval történik, például az alany combjába vagy felkarjába. Az injek ció lehet tővel (például hipodamtíás-tövéig de ínás oasgoidásképpen Kimentés injekciót is tdkidmazbanmk. Bgy tipikus miramuszkolárís dózis 0,5 ml, A találmány szerinti·kés&amp;itmönyek előállíthatok killöniele formákba», például Injektálásra aká; folyékony okiatokként, akár szuszgenzíókkéttt. í-le.y adott bm-nunoeén kév/ítmcny komponenseinek az optimális tTíennylségét ázökássts vizsgálatokkal álla-ptf-nmol »<.g a'atívos m<.gt\i'fo u ummvaias/nmak rnegítgyelévevei A kezdeti vakcmazast kővetően az alanyok egy vagy több megerósifo immunizálást kaphatnak megfelelő időközönként.

Csemagotés és ik>mfi>musk A -aláiiriány szerinti ínmmnogén készítményeket egységdózis formában vagy töbhdöxíxos (példán! lit dózis, 4 dózis, vagy több) tormában csomagolhatjuk. Bizonyos megvalósítási módiik szerint a dózis 0,5 mb dózis a Költ-lizáif mmmnogén k-, .ntuns tisszaoidasá után I ásd példán a \\thM0> bv?óó$ szarna nemzetközi közzsdeteb íííiwí. A készitménvek. Hokikban lehelnek, vagy más alkalmas tartályokban, vagy előretöttött bojatMö eszközökben lehetnek, például egy vagy többkomponensű tecskondőkben, amelyeket tövei vagy anélkül biztosíthatunk. A fecskendő tipikusa», de nem szükségszerűen egyetlen dózist tartalmaz a találmáity szerinti tartóslíóSKert lariail mázó Immunodén készítményből, habár többdoz^ts elöretöitött fecskendők is elképzelhetők. Hasonlóképpen a dobi tartalmazhat egyetlen dózist, de más megoldásképpen több dózis! is tartalmazhat, A hatásos dözísléribgtdokal könnyen meghatámzhaíjnk, de a visszaoldoö iíofdizák készítmény egy injektú-^ ^ 'ív 0,5 ml Bizonyos megvalósítási módok szerint a dózis humán alanynak töt#* nő beadásra van kiszerelve. Bizonyos megvalósítási módok szerint a dózis felnőtt, tinédzser, kamasz, kísgyeb* m«| vagy csecsemő (azaz nem több isim egy éves) faunán alanynak történő beadást* van kiszerelve, és előnyös megvalósítási módok szerint infekcióval van beadva. A leink; szerinti immunogén készítmények lehelnek bolti izáltsk és visszaoldottak, példán! a fagyasztva-szárítás szakteriiieton ismert számos eljárása egyikének alkalmazásával száraz, szabályos ahtká (például gömb alakú) részecskék kialakítására, mint például mikropeilefek vagy mikrogyöngyők, amelyek részecske jellegzé-íességcit, mítn például az átlagos átmérőjét az előállításukra alkalmazod pontos eljárás variálásával váktszthafe juk meg és szabályozhatjuk. Az hnittunogón készítmények továbbá adjuvaost tarisltnszhainak, amely Mott est?b tusa együtt állíthaíó elő vagy különálló szabályos alakú {példán! gömb alakó) részecskék, mini például mikropelietek vagy mikrogyöngyöl tormájában állíthatjuk elő, Egy megvalósítási ntód szeriní a találmány tárgyát képezi továbbá ünmunogén készítmény készlet, amely tartalmaz egy első komponenst, amely tartalmazza a lioflíizált mmnmogén készítményt és adott esetben továbbá tartalmaz egy vagy több tartósítószert a találmány szerint, és egy második komponenst, amely steril, vizes oldatot tartalmaz nz első komponens visszttoidására.

Bizonyos megvalósítási módok szerint a vim; oldat egy vagy több tartósítószert tartalmaz, és adott esetben-legalább egy adjuvánst tartalmaz (lásd például a WÖ2ÖÖ9/18955G számit nemzetközi közzétételi iratot).

Egy még másik megvalósítást mőd szerint a többdázkm·:, formátum tartálya a következők által alkotott csoportból nem korlátozó motion kjválasKíva: általános laboratórium üvegeuényzet, fiaskók, csőrös poharak, osztásos mérőhengerek, fermentorok, hioreaktorok, csövek, csővezetékek, zacskók, beföites üvegek, fiolák, iktla-xátőesxkozök (például gumidugók, csavaros kupakok), ampullák, fecskendők, kettő- vagy tőhbrekeszos fecskendők, fecskendő dugók, fecskendő dugattyúk, gumi záaSeszközök,, múanyag záróeszkdzők, üveg xáróeszkő-zök, patronok és hasonlók. A találmány sgeí'inii tartály nem korlátozódik a gyártás anyagára, és beletartoznak olyan anyagok, mint például üveg, térnekfpéldátii acél, rozsdamentes acél, ahimmium, sub.) és pófhnerék (például iemtopiaszúkus anyagok, elasztomerek, iennopl&amp;sztikns-elasztomerek}. Egy előnyös megvalósítási mód szerint a taríáh ege * ml.-c* Schott fjpe 1 Üveg fi óla butií dugóval Λ szakember számára nyilvánvaló, hogy fent ismertetett formátom semmiképpen nem egy kimerítő lista, bánom csupán iránymutatásként szolgálnak a szakember számára azon formátumokkal kapcsolatosan, amelyek elérhetők a jelen találmány számára A miál·· tuány szerinti aikaimazmea elképzelhető további forrná tóm ok megtalálhatok tabomórinm: eszközökéi árusító és gyártó cégek pubhkus katalógusaiban, mim például az. Ütmed States Plastic Corp, (Lima, Olt), VWR.

Egy megvalósítási mód szerint a találmány tárgyát immunogen készítmények képzik, amelyek legalább négy antigént tartalmaznak S. aureus organizmusból. kiilőf'-lMc ,»f ! Sv szK'ket alkalmazhatunk a találmáns szerinti ounnmercn készítmény ímm m» v,euítasanak megái tapitásáta. Például ;n vitro o porom kér vizsgálati eljárást hajthatunk végre szUtfliokokkusz sejtek, a kérdéses antigénekre specifikus ellenanyagokat tartalmazó hővel ioaktiváit szérum és szögén komplement-fórt# keverékének együttes inkubáíásávaí. Opszonofagocitóxis megy végbe frissen Izolált polimorfonuklerkís sejtek (PMN-ek) vagy rliffereneiálörkm eíTsktor sejtek, mint például HL6Ö és az: etleumiyssg^unpletrresi/szta--fílokokknsz sejt keverék infcwbálása folyamán. Az. ellenanyaggal és komplementtel beburkolt bakteriális sejtek elpusztulnak az ops?.on<rtágoeltőxis hatására. Az opszomdagoeitözis· után visszanyeri Ódé lő baktériumok kóló-nlaalkotö egységeit rtcokmy forming units’, eía) meghatározhatjuk a vizsgálati keverék kíszélesztésévei, A litereket azon legnagyobb hígítás reeíprokakéttl adjuk meg, ami 50%-os baktérium-pusztulást eredményez, vizsgálati komrolíokkai összehasonlítva.

Teljes sejtes BUSA vizsgálati eljárást is alkalmazhatunk az antigén irt vöm imumutigerutásátiak és feíszirá kitettségének megálktpilásíkm, ahol a jelentőséggel biró bakteriális törzsei (öl mmm) lemezre visszük fel, mint például %-mérÓltelyes lemezre, és immunizált állatból származó tesztszérumokaí teagállatunk a bakteriális sejtekkel, fia egy, a íeszfanfigénre specifikus ellenanyag reagál az antigén felszíni kitettsége epitópjávaí, azt detektálhatjuk a szakember számára ismert szokásos éljáútsókkáL A kívánt in vitro aktivitást mutató bármilyen antigént tesztelhetünk ?« two áilatfertőzeses modeílben. Bízó-nyess megvalósítási módok szerint az immunogen készítményeket alkalmazhatjuk állat (például egér) imamiúzá-fására a szakember számára ismert immunizálási utakon {például intraoazáíis, parenteral# orális, rekíáiís, vagmáhr, tmmzdcT-mnhv miniperisoneáíls, intravénás, szubkután. stb.t. Az állatnak egy adott Stnphylec<*eai$ sp. immtsnogén készítménnyel való immunizálását kővetően az állami megfertőzzek Stv/pfiyinoiccm so -el és v izsgáijuk a sztaftlokokkus? fertőzés elleni rezisztenetara.

Egy megvalósítási mód szerint pafogón-mentes egrieket ismmmlzálhattmk és fertőzhetünk S mamm-al Fél- ckuíl egerekéi immunizálunk a kívánt ion egén immunogen készítményben lévő egy vagy több dóméval Ba kos stoen az * sereket megfertőzzük S. ív-í m si, e* momunoz mk a túlélést a fertoze·, mans sdiS fhggvenyöN")

Mmm&amp;átösteípmmk A találmány tárgyát képezik eljárások gazda immunizálására sztárt lokokkusz fertőzés megelőzésére. Egyes Anyós megvalósítási Riód szerint a gazda ember. Ily módon gardának vagy alanynak leírás szerinti feununogéu készítmény immunogenikus ment» bégét sójuk be. Egy Immunögén készítmény mmmaogenikus menny bégéi dózis-válasz vizsgálat elvégzésével határozhatjuk meg, atne isisen alanyokat íimnimizáíuíik az immmmgen készítmény növekvő mennyiségével és elemezzük as immunválaszt az optimális dózis meghatározása érdekében. A vizsgálta kiindulási pontjait áilatmoddíefc immunizálási adataiból következtethetjük ki. A dózis mennyisége változhat az egyén spécik km. ál iámnál ói .tüggoen, A mennyiséget a szakember szamára ismert rutinszerű pnV báikozasokiml havai»bánok mez B.mnyos megváló''í* a.> módok szerint egv gstöaa A vtaískkohAuv Sedó zés, betegség vagy állapot mcedŐ2é*érs való ioítnnnízálási eljárása humán, állatorvosi, Miatt vagy mezőgazdasági kezdést foglal magában, l'.gv másik megvalósítási mód tárgya eljárás gazda immunizálására SfaphyltKoix'ui sp.-é kapcsolatos siöaflíokokbusz fertőzés, betegség vagy állapot megelőzésére alanyban, amely eljárás magában foglalja pofik louáhs vagy-· monokkmáH» ellenanyag preparátum előállítását a találmány szerinti immunodén k,u»tmiényböl, vs az eiienanyag-készíímény alkalmazását passzív immunitás kialakítására az alanyban.

Az immunogén készítmény immunológiaiiag hatásos mennyiségéi adjuk be megfelelő számú dózisban az alanynak immunválasz kiváltására. A kezelt egyénnek nem szabad &amp; szt&amp;ítktkokkasz Strtőzés súlyosabb tüneteit, mutatnia. A áúzisniennyiség változhat az egyén specifikus állapotától, mint például kottától és séiyátői fóggöen, Ezt a mennyiséget n szakembc»· a isméit ott mezes r ptóbálközAsokkal határozhatjuk meg,

Fgy manv.ík' náci mod s/nnt ,o«k a páciensek. akiknek a találmány szenmi immunogen készítmények let-tök beadva a ,S. mv-mu hordozóvi arányok csökkenését mutatják. A hordozóság ilyen csökkenése vagy a nem-hordozóként íöhöst idő elnyújtott időtartama az imtmmogén készítmény beadása Után jelentős az orvosi szükségesség szempontjából. Például megállapíthatjuk a /?. aureus hordozás általános csökkenését a hordozókban á A. m&amp;mts multi-antigén vakcina egy dózisának beadása után. Példán! egy nappal az ímmotmgén készítmény beadását megelőzően ÍS-5Ö éves iclaöttek egy csoportját szkrísiefestjük hordozásra nazális és toruk tamponnal majd tenyésztéssel a hordozói státusz meghatározására. Azt követben a csoportnak beadhatjuk a találmány szeriníi immunodén készítményt és egy csoportnak pádig kontrolit. Nazális és torok tamponokat veszünk le egy 12 hetes időszakon keresztül, és havonta az imnntnogén készítmény beadásál követő 6 hónapig és összehasonlítjuk a piacebóval. Az egyik elsődleges végpont a hordozót arányok összehasonlítása a páciensekben az immunogén kvsjmuony beadását a plaeebóhoz hasonlítva 3 hónapos időközökkel az immunizálás után, A s&amp;iíJifoktiÁ kmz fertőzést MatimMiJzi

Számos állatmodellt bemutatunk alább a leírás szerinti ímomnogéo készítmények bármelyike hatásosságának mcgáliapitásébsn történd aíkaimazásrti.

Egér m'puE mmfed {pmsilr mg? ekiér)

Pexszfv Immunizdléií modell

Egereket immunizálunk passzívan inírapetítoneáiísau (kp.) immun igö-vel vagy mönöklónáiis ellenanyaggal. Az egereket azután 24 Arával később megfertőzzük S. aureus Sétáik dózisával. A-bakteriális fertőzést intra-vénásan íi.v.) vagy ép, adjak be. biztosítva, hogy bármilyen túlélés az ellenanyag és a baktériotnök specifikus ín vivo kölcsönhatása miatt kővetkezőn be. A bakteriális fertőd dózisát ügy határozzuk mer;: hogy a leíátis szép-szís eléréshez szükséges dózis az immunizálaban komroii egerekének a megsózz lísölcg 30%* a legyen, A túlélési vizsgálatok statisztikái elemzését Kaplau-Meier elemzéssel hajthatjuk végre. iftíííííííí^ ^

Ebben a modellben egereket {például Swiss Webster egeteket) aktívan irmrnmizáiorik írttraperttoneáSisao Ci.p.) vagy sznhkután {s,c.) cátamigámMtl 0,és 6 hét idöközötskéot (vagy más teoníb megfeleljen távoli vak* eíaázási renddel) és azt követben megfertőzünk S ímrms~&amp;) a 8. héten az intravénás hton, A bakteriális fettőzés dózisát ágy kalibráljuk, hogy megközelítőleg 20% túlélés legyen a kontrol! csoportban 10*14 napos időszak alatt. A túlélési vizsgalatok statisztikai elemzését Kaplau-Meier elemzéssel hajthatjuk végre. l'míké' mdohiií-tiUísz motkti (pamfamtiy «kifej A ti aureus fetal okozott fertőzd endokardbisz (lé) passzív imrouni/áeids módúikét alkalmazzák korábban amink htmutafe Te, hogy a Cit.A kepes üde rnnmevalasz K volt a t a t \ a xuluo es mtssi,, Antin erő Agents ,¾ Chemo. bt) ?1I -51B {3006). Az 1E ezen modelljébe?! avulókat vagy pathfeoekid. aikaltnaznak klinikai fertőzés i-einmláklsár.!, ami centrális vénás katétert, baktenhmét és távoli szervek hematogért megfertőzését foglalja magában. Káté erezett starti aortas vegetációval rendelkező nyugiknak vagy patkányoknak a céíantfgéttre specifikus monokíonáils vagy polik tonális ellenanyag egyel len vagy több Intravénás injekcióját adjuk be. Azt követően az állatokat megfertőzzük i.v. S', aureus vagy 5, rpiiiormum törzzsel. A fertőzés mán hegyöjtjök a szívet, szív vegetációk, é;; további szövetek, beleértve a vesét és vért, ás tenyésztjük azokat. .Azután magtnérjtik a sztafilokokku::/ fertőzés, gyakorisagát a szivszöceíekhen vésőkben és vérben. Egy vizsgalatban amikor állatokat fertőztek MESE A ICC 33984 vagy MESA 6'M> törzsekkel, szigniitkáíts csökkenést mutattak ki ts fertőzés! arányokban akár aCIÍA elleni pofiidénál is ellenanyag készijményk akár nmnoktooáiis elkmauya--got alkalmaztak. Lásd Vernachío és mísak, Antmfero. .Agents &amp; Chemo, 50:51 Kői8 (2806), A fertőzd endokardhisz mode üt adaptáltuk aktív Innntmizáciős vizsgálatokra is nyálakban ás patkányokba?* egyaránt, Nyuíakat vagy patkányokat inmíuoizátonh intratnu&amp;zkutáman vagy aztrbkmáo a oáktníigénnei és: megy fertőzőnk S'. sitmzY-ai két héttel később az intravénás ötön

Piekmsfritm. motelt A pielonefritlsz modellben egereket irrnnunizáfunk a 0., 3, és 6, héten (vagy más megfelelően távoli immunt*· zjuős renddel) a célam vetne" A/l követ.xr r, feln>>tot, nvgurttvzdk u> sags tv >1 niSVVnó törzzsel, 4B dra elteltével a veséket begyújtják és ieszátniáistsk a bakteriális C!:U értékeket.

St3AhAíhtMUL€iM.k A következő pöidákktsí demon o femk ,t rChwen binnyr negvfeósíü·-·! módjait. Azonban nuKanvodu. hogy ezek a példák; csak. a szemléltetést s«iígáiják ér nem >vho\ e<, nem tekinthetők a taláim&amp;ov fe bt w fenn k r * oltalmi köreitek teljes meghatározójának. Nyilvánvaló, hogy amikor tipikus reakciókörülményeket (például hómérsekfeí. reakcióidő, slb.) adtursk üteg, a megadott mrtosuám.ok alatti és feletti körülmény ek is alkalmazna* tők, habár általában kevésbé kényeimében, λ tenásbas említett minden rész és százalék tömeg alaptan van, és mindéit hv>mer.sek letel Celsius fokban fejezünk ke hacsak másképpen Pent határozzak meg.

Ezenkívül az alábbi példák szokásos módszerekkel lettek végrehajtva, amelyek jól ismertek és rutinszernek a szakember számára, kivéve ahol másképpen részletesem ísmertetjök. Az alábbi példák csak szemléltetik a talál* mányi, ás semmiképpen sem tekinthetők a találmány oltalmi körét korlátozónak.

Feltárunk egy stabil iioiihzáií íri-aniigén kiszerelést, amely tartalmaz rekombtnáns tapadási faktor A-t írOÍÁ\ 5-ős típusú burokpoliszaceStarid könjagátumot (CP5-CR Szt^/t és 8-as típusú bnrokpdiszaocharkl hímlurásnmnl (CPk-CRM)·^}. arait Stapk$!k«'o<vu-> aw&amp;us vakcinaként vagy immunogen készítményként fej-le&amp;zmstünk ki, f.gv előnyös megvalósítási arád szerint az rCJfA a felszínen ezprcsszáU viruleneiafaktor tm-tálta-kát formája, amely úgy vart megváííoztatva, hogy csökkenje» a kötési affinitása a dbrínogenhez (V :>SRA) {rCífAísk \ CPv; os CP8 közönséges polözaccharldok, amelyek Uimkai i/oiáUtmökb.m találhatók meg, es ebben a vakcinában a CRM;?·? hoMozóíehésjéhez vannak kmg agáiva.

Az elkészített. Ho fii szóit pogácsák vizuálisan msgfeieiók voltak, és a hatóanyagok stabilak voltuk a liofíbzáít pogácsák, visszaokkCa «tán. Ezenfelíti a tiolllimlt kiszerelés több léidének (magas és alacsony dózisokéi is átfogóan) egyhónapos tóroiása valós időben (2-íPCt és gyorsított íffR'C és .>7*0) hőmérsékleteken azt mutatós, hogy a lioíllízáU írt-antigén kiszerelés stabil maradi. Emellett három fagy asztási-(elóivasztás; ciklus és a vissza-oídás «tán szobahőmérsékleten végzett 24-órás stabilitási teszi a hatóanyagok stabilitását matatta ezen körülmények között.

Szintén feltárunk egy stabil lioisiizáit tetts-atttigda kiszerelést, amely tartalmaz tokonibinána tapadási faktor A-ΐ (rCSfA), CP5-('’RM:i<rb €Pk~€RM;».-t és Mni€ l, amit St&amp;phyheocctf< Jfra; vakcinaként vagy tmmunogén készítményként fejlesztettünk Ki Fry előnyös megvalósítási mod szét int a CifA a teRrmen cvotesszáit viraienetabíktoí mutál irtott formája, amah o,<,\ \ n mcgváltsvkr.vt, hoto > sMAemrrí ,, Κοκ t «tfmt-tásu a nlvatogénitez (YsékA s Rs.y, ciónyős tnegvalösií:ás) mód szerint az MntC nem iipidsít. Egy előnyős meg-valósítási mód szerint az, MotC rckombináits, Amint a íri-antigén kiszerelés is, a iiofiiizáit tetra-aotigén kiszerelésnek n.»gv ménekben fokozódott« smbdeaza összehasonlítva az ugyanazon .tat t véneket tan.dnrsz© folyékony.: kís^j%iésé|í|éj,..... í, példát preformníázásí módszerek kólón Ve iíioi'z'kí·' eszközöké; ,du,\„tn i'V abszorpciós spék O'szkopta, fluoreszcens speMnávkopta, cnv kniárts dikroizmus (CD) és differenciái is szkvnndö kaíorrmetria (DSC) alkalmaztunk a Siopheiomíxm tapadási faktor A (Cli'A) protein jellemafomek megvizsgálására a szerkezeti stabilitása vonatkozásában. A hőmérséklet és pH voltak ózok a változó paraméterek, amelyeket alkalmaztunk a proíetrt stresszeiésére, hogy segítsen jellemezni a CifA protein sajátos szerkezeti viselkedését. Azután ezeket az adatokat alkalmaztuk olyan; e\cípiem.eh szkrioelésére, amelyek stabilizálhatják a proteint F/eafeiül kőtoaí vizsgalatokat végeztünk a CifA dózis- és pll-íbggő affinitására AlPO* és Á1(Oí1>;í irárá, A ieírásban feltárt adatokat ídkaimaztwk a OÍÍA orvosi alkalmazásokban történő alkalmazásra szolgáló kiszerelésének, rmotpéldáid vakcina «agy jromtmogéo készítmény kifejlesztésére. Míg a találmány tárgya bármilyen és minden tapadási faktor A (CifA) protein és tt ClfA-t tartalmazó kiazéré-íések, a következő példákban olyan CifA variánst alkalmaztunk, amely tartalmazza a CifA NIN2N3 doménjeit és az Y33SA szabsz; ihtriól, amely tirozin helyére szubszdtuált aksniní tartalmaz a teljes hosszúsága CUA 33. peziotőjában és amely nem képes Irbrtnogénhez kötődni, A kiindulási biofizikai jellemzéshez a mintákat 10 mM puffét ben állítottuk össze (ecetéi, sxukcinát vagy foszfát) 150 mM NaCl-han, A CifA tnegközeStiídcges eéikoncentfáeiója 0,1 mg/mL volt a fluoreszcencia, 0.2 mg/ml, a cirkuláris dikroizmus (CD) és 0,5 tng/mL az UV abszorpciós spektroszkópiát. vizsgálatokhoz.. A protein·'köoeéntráe lókat a kereskedelmi forgalomban beszerezhető mödosöcm Cowry protein vizsgálati él*· ic^í-és mtaak, J. Aki Cherrt,,, !ö,V2b5->?5| S©51]1 vagy (>V abszotbaueta vpekboszkopiávót látároztnk meg. A Cirkuláris Dikfoíznms tCi.)> méréseket Jaseo J-810 spektropolariméter aiktdmairésávai végeztük a ClfA protein mtmunogén készítményben vagy vakcinában felvet· másodlagos szerkezetének a megállapítására. Λ pH-nak « ClfA szerkezetére gyakorol; hatása· a CG spektrumok kvalitatív eltéréseinek megfigyelésével vizsgáltuk meg, amikor a fehérje az 5,0 S.ö pH tartományban volt kiszerelve. Ezenkívül hőmérsékleti perturbáció» vizsgálatokat is végeztünk lÖX-réí ^C-tg 21knra-am, hogy megfigyeljük a protein konformációs stabilitást a másodlagos szerkezet vonatkozásában. Λ 2 i k nm-es hullámhosszat ágért választottuk, mert a ClfA ismert N21N3 szerkezete nagy mennyiségűt fhrerfö szerkezetet tartalmaz. A CD szkénék kísérleti paramétere· közé tartozott a I9S - 200 am httilárnliosss-tattomásty, 2ő nm/perc szkenneiési sebesség, két másodpere vái&amp;szádb, lom sávszélesség ás· hármas 13} akkumtdáeió. A hőmérsékleti pesturbációs kísérteteket a Jaseo szoftver ‘Variable Temperáimé’ módjával. végeztük, 15¾%¾ hőmérséklet-emelkedés, egy másodpere válaszidő és l om sávszélesség alktsltnazásával.

Sajat tripfofán Ouores/cencm etmssrms spektroszkópiát nlkahna/turtk &amp; CífA protein hurmadlagos szerkezete változásának a monitorozására a h^netséklet függvény ebest ·'· / elj,r ást alkalmaztuk &amp; iénttiesA-uezef \<tbN· zásainak megfigyelésére Is a valósidejű és gyorsított vizsgálatokban, A ftttoreszeerts spektinmokat ATI QM-t (Bnms άíré·, RI) fiuorométeren vettük fel 295 um gerjesztés·*;:! As alkalmazott ftdiétjekoneenoáció ~0,í mg/mb voií. Á Iriptoíán emissziós spektrumának jellemzőit 330 ~ 350 nm között monitoroztuk i-vtn üthosszu kvarek-fveSCíKto, A ΐΐηοηη,νχ utó »Jutok t; lüV - 850' között vették íef ílépésekkel· AJ1 e 5,0 között; pH értekek sorozatára Κ,οηίοΉ kt^ef leteket végeztünk paiTerek vakként tömmé alkalmazásával a hattér korrigálása érdekében, A készülék'beállítások közé tartozott s gerjesztési és emissziós sávszélesség rendre 4 nm és 3 üm utekK'l egy másodpere mtegtnu<"< kh>, és 20u nm - 400 nm adatgy oftesl hu! íámhow-tártomáoy. Az AIPO.H tartalmazó kiszerelések esetében eíü-oldak {háromszögletű} követiát alkalmaztunk a minta turbkíiiása miatti problémák eikerttlésére. Az adatok elemzését az. Origókéi 7.0 alkalmazásával végeztük másodrendű poiítiomiálís I ϊ-pontos Savhsky-Golsy függvény alkalmazásával Hőmérséklet; perhírbáekts kísérleteket aikateaaaottk második derivált IJV abszorpciós spektroszkópiával a Clf A hurnmllagos szerkezeiének vizsgáltán egy másik módszereként a protein stabilitás megél Sapkására. Többe ho liánt hosszt! DVMáthatö abszorpciós spektrumokat vettünk fel a 200 wm~40ö two tartományban Peltier hömér-sékletszabályozóval ellátott Agilent 8453 UV látháíó diódasoros spektrométerrel 100 pL térfogatú ϊ-cnt úthosz-szó kvarckilvetfál. alkalmaztunk mindegyik kísérletben. Az olvadási kísérletekhez négy percet hagytunk mindegyik hőmérséklet-váltás titán, amit elegendőnek tekintettünk az egyensúly elérésére, A 350 ms-es optikai denzifás adatokat is felvettük a hőmérséklet fiíggvényébew. hogy' monitorozzuk a ClfA protein lehetséges aggmgációjáb A spektrumok elemzését a CHHMSTATIOH™ szoftverrel (Agilent) végezlük. A második derivált spektrumokat kilencpontost adatszóró alkalmazásával állítottuk elő és harmadrendű ftavitzky-öoiay poiinotntálisra illesztettük. A derivált spektrumokat 97 adatponttal interpoláltak mindén ügyen egy-ttmtométeres intervallumban, ami megközeittöUg 0v0l nm hatásos felbontást: biztosított nem aggregált körülmények között, MiCRöCAl. OfíiGIN'" 6.0-t alkalmaztunk a derivált spektrumok csúcs pozícióinak a kiválasztására. Azonosítottuk a VnkAm n tirozm C- umíofán arnunm v-oíd JIjíko,\πz^ tregte.eio C‘W~ poncsókat (Kueftzoe* mtsuí, J Phartn Sri. 2005, 92(0): 1805 - 1820 módszere alapján), e? ábrázoltok a hőmérséklet függvényében, V.erc ksmu-íz. ka ícatögrafrái haiíotturk ,u-c)H ínhíO'l tiPKOSsVvl os.dop, 7,8íem x 30em, 5pm, rendelési szám: 08541 alkalmazásával, a kőveikezö körülmények alkalmazásával; áramlási sebesség, 0,5 ml./pere; max. nyomás, 60 Bar; futási ídö, ;>i) pere; mobil fázis, Celigfo PBb. pH 7,4; injektált iéríogat, 100 μί.; deíéktör, UV 2S0, 260, 214 «»»> 4 r»n sávssáteég esetben; reterenchg 340 am, 16 nm sávszélesség; bP)érséklM,25^ Λ ClfA fehérje olvadáspontját (Τ,„> differetsdáiis szkenndö kaiotimetnávaí (DSC) határozná: meg. A Gt'A minta DSC profEül illeszkedő púderrel szemben mérlük meg. átnőhet og> .makkor készüettünh rnmi a CiC\ mintát, kivéve, hogy azt a térfogatot. arsis a h&amp;sőaayag (CífA) foglal; volna el, puffferrel helyettesítettük. A ké-szülék besllftíl'.as a következők voltak NíUmioUaí sebesség, 2Ö0"X' óra; vxenneiési tartmmun. tO-oö t, szűrő pon<idusok, S másodperei Feedback oxv, úur·, Mediám. Mmdett egyes »zken után a DSC oeiUktt es a fecskendőt kiöblítettük í-s alkalommá: injekeids vízzé! tWFi). Bármilyen Ojraszkemteiési kisérírtben a ecíiatisztítási Ciklus magaban Cglaka tUM Oontreő (.I)í\\-« t .moratoríes Ltd.. Fast Sussex, UK) alkaín.nmAf, nog> m nősítsük a cella tisztaságát a kővetkező bocs ás hoz.

Mikrokaiorimetriás kapilláris DSC··! alkalmaztunk az exc.lpiensek oagy-teIjesitményü szkriuelésére, Mindegyik szknaelési kísérletben 10 rjM szukcmáí poffér, Ifö mM NaC'k pH 6,0 puflerben lévő CSÍA-i alkalmaztunk a változass kiszámításának alapjanl. Λ kiísxöiagos Γ„-ί msohkah DSC mintákból állapítottuk meg, és azután az. átlagolt 'lfc,-t összehasonlító·tok a kiszerelésnek az ugyanabban a DSC futtatásban axeipiens sélkíd kapott átlagos I «-ével, Mindegyik eycipicnsdíoncentrácíó hatását összdiasoníitotíuk á T™ változásának hatásával. A T«, pozitív váll ozását egy exupiens jelenlétében a CstA termális stabilitására gyakorolt pozitív hötásnak tekintettük. Λ AG kiszámításához AC.-t szón ikonunk a manuálisan kiválasztott pro- és poszMranzfeiós alapvonalakból és azután AH-í és TK;~t számiíoftunk a görbe és az alapvonal közötti terület integrálásával. A AG görbéi a Mieroca! .DSC szoftverrel sxánmottyk, 2, példa: OfA drog termék prefomitíázása: eredmények A gyógyásza*üag releváns hőmérsékleti (lö - 85“C) és pH (4„ö - 8,0) stresszt gyakoroltunk rdreg termékre <ClfA folyadék kiszerelése) és a hatóanyagra fkiszereíetiett ClfA protein folyékony fázisban) hogy azöttositsok az. érzékenységüket.

Saját tsipíofán olvadási fluoreszcens termálís vizsgálatokat Itajtotmnk végre ClfA mintákon különböző pH-kon pH 4,0-töl pH 8,0-ig és fluoreszcens emissziós görbéket véltünk fel. Ezekhez a kísérletekhez a ClfA áltaíú-hsn ö.l mgöoi - 0,2 mg/tní koncentrációié volt. Az egyes görbék inflexiós pontját azonosítottak az olvadási hőmérsékletként (T«) és kilistáztuk a 4. táblázatban. H)*C-ort a nagyobb pH~jó niínfák nagyobb hullámhossza-kon mutatták a: osöes pozíciókat, amt utalva, hogy a tnptofánreidaíiéneok jobban érintkeztek az oldészefrei· Ezenfelül a magasabb pH ériékeken a ClfA alacsonyabb T,s értékeket mutatott, alacsonyabb stablütásm utalva összehasonlítva az alacsonyabb pH értékekkel, mint példán) pH5,S és 64), Egy pH panel fiHömabbc8f2-es iéj>é-sekkel (S. táblázat) pH 5<$ - óm között a TCfS fokozatos növekedését mutatta a pH csökkenésével.

Cirkuláris Dikroizmus (CDi spektroszkópiát alkalmaztunk a CifA másodlagos szerkezetének a vizsgálatára a pH függvényében. A pH 7,0*en és pH 8,0-on felvett spektrumok különösen jól definiált mimuiomokatnmtatfak A20Ö rttn-en és 220 nnven. Ezen megfigyelés egy valószínű magyarázata az, hogy a mítdtntatt -228 hai~nél 'az Ismert N2W szerkezet fi-redö komponense miatt lehet, és a mmitmnn -200 not-éí a vóletteszéfllkhekemdett forma minimumát közeim, amit általában 195 am körül leket látni. Ezek a megfigyelések alátámasztják azokat fluoreszcens adatokat, miszerint a ΟΙΆ protein kissé lobban'.fej vas tekemdve pH AÖ-etrés pH 8.0-mn, A CifA CD olvadását pH 4,0 - 8,0 között KPC-85KC között végeztük és a moláris elíipticítást mutató görbéket vattánk fel az abs/orbsncia függvényében minden pH pontra. Megfigyeltek a görbék alakját a különböző pH értékekért. A pH 6,0-os és afölötti adatok mindegyike láthatóan hasonló átmenettel mndeíkezéE, amelyeket vizuálisan 55*C körülinek leheled becsülni. A pH 5,0-ösés 5,5-es görbéknek magasabb átmenete volt. Ezenfelül a pH 5.0 matatta a legnagyobb mértékű változási < el íipf itatási értékekbe»), a iegtmgyohh ttövekedéáre nfalvti a fb «••.tó iartalombraj. Mi vei a megnövekedőit fbredö az aggregálödotí mintákban tipikus* a pH 5,0 azt andathaíja. bogy a CifA protein a magasabb hőmérsékleteken a leglutjíamosahb az asszodáeiöra. 550 ntrt-ra okikat deoziiást (Óik;**) mértünk az, Agilent §453 UV-látinttó spektrofotométer alkííimazásávai és derékszögű fényszórást méritek a Oimttm Téekttoiogy Mentammai spekírofiuoroméM álkaímazásávál a hőmérséklet függvényben hogy olyan tészeeskemeret-növekedésí figyeljünk meg, amely összefiígghet st jelía-ten/hásnk növekedésé vei és lehetséges módon korrelál a CifA protein aggregáe lójával. Értékelhető átmeneteket figyeltünk meg a hőmérsékleti görbékbe» pH 4,0, 5,0 és 5,5 ériékem a pH 4,0 esőiében volt a legnagyobb a változás ménéke (legnagyobb aggregáetó), Elleniéiben ezzel, a pH 6X0 és magasabb csak kis* fokozatosán:· eátel-kedö változásokat matatod, ami kismértékű ön-asszociációs eseményekre utal. A derékszögű fényszórás olyan módszer, amely érzékenyebb, mint az ODs« az oligomarizáeió (aggregáetó) detektálására Az ezzel a módszerrel szerzett adatok szerint a CICA aggregációjának legkorábbi megjelenését pH 5,0-ört és 5,5-en láttok, miközben a magasabb pH értékek akár 15VC késést is mutatlak a részecskeméret növekedésében. A CifA szerkezeti stabilitását jellemeztük dífiérenetáíis szkenneiö kaiotimetrtávai (DSC). ami az. eníaipis váítozását átéri kealórtolCC-ban mérve. A DM: elemzés szerint a CifA kitekeredésél reverzibilisnek figyeltük meg egyetlen átmenettel körülbelül 55;5vC-aál Ezen átmenet eníalpiáját megközelítőleg lö kCalösml-nak szánt ítodtjk. A CifA T* értékét megmértük a koncentráció függvényében is, amit konzisztensen meghatámxhatunk 8,1 mgönl.-tÖl 1,0 mg/mL-íg, A CifA E* ériekéről megfigyeltük, hogy' nem változott a növekvő iéhérjekoneeniráel· övei. ami arra uink hogy 8 ClfA teglnfeább monomarként létezik. Ez a megfigyelés konzisztens az alább ismerte-tett nnbetk izárasos kíöínatográMs adatokkal, A CllA T* &amp;ték&amp; meghatároztak kapilláris t>S€~veí ts a pH fííggvényébcn (6. táblázat). Ezekben a kíséríe-tekints* a ClfA Γ„ értékéről megdőltök, hogy platót ért el pH 5,0 ét* 8,0 között körülbelül SosSö^Eben, habár a })k lefele tertttól ahogyan s pH növekszik, A ClfA. Tst értéke pH 4,0-e« csak 50,8¾ volt* *m» a. ClfA szerkezeti instabilitására utal eseti pH-η, Ezekhez a DSC kísértetekhez a ClfA kmK.egírádép 1,0 mgAnt ypfti A. Cli'A HSiC-egi meghtsíározott T1K értekéi összehasonliöítak a triptöfán {Trp) fluoreszcencia csócs eitöiőáássaí flásd· lent) meghatározót! T«> értékké!, A Trp fltieaeszeeneiáyal meghatározott T,., konzisztens volt a DSC-veí megba» tározóit T,„ pH 4,0 és pH 5,5 között, Azonban a Bp fluoreszcenciával meghal árazott T,„ élesen esőkként amikör a pl I megnövekedőit 6,Ő-r<4 ILÖ-ra Ennek egy tehetséges magyarázata'-az, hegy az N'3 dómén kiteketedik amint a pl Ϊ növekszik 6,0-ról 8,ö-ra. Csak kát teiptotan van a OifA-bart, amely mindkettő nz: Na doménhen található, A Trp fluoreszcenciával mért Tw éles-csökkenése. amikor a pH-t megnöveltük ödWö! 8,0-ra» arts utal, hogy ezek az oldalláncúk polárosahh:l^tyé^^*áiik^ÍÉk»*«** általában a tehéné kiíekemdéséhekajete, 6. Táblázat

A ClfA drog terméket előre sziiikoitozott, előre íöltőtt fecskendőben szállíthattuk. A feeskeötlő hengeda és dugattyúján lévő szilikonolaj áltat okozott aggregselö megalstdáíyozására, valamint többek között a Mérje üvegfdöletre való adszorpciójának* megákadályozására gyakran peitszerbát 8Ö-a? (PS80) alkalmaznak a végső: drog termék kiszerelésben. Mivel a PS80 egy deiergens, amely potenciálisan destabilizálhat egy fehérjét, érté-keltük a ClfA T„, értékét PS«) jelenlétében, A 7, táblázat kapilláris DSC kísértelek eredményeit fogkdja össze UO mg/ml ClfA -val poliszodtól. 80 jelenlétében vagy hiányában, ami azt mutatta, hogy a PS8Ö jelenléte csökken -lett a körülbelül C'C-aJ ΟΓΑ Γ.„ értékéi, ami siatkzlikaüag különbözik a ClfA PSkö nélküli kiszerelésének T.„ ériékétöi. ?. Táblázat

Értékeltük az AlPO, hatását Is a ClfA Τ» értékére. Az AlPO<is kötött ClfA Tw ériekének méréséhez ö,l reg/mL ClfA-t szendtönk ki szuhetaáMóoidaíban pH S,(höty amelyben 5¾ CifA legnagyobb része kötve vök az alumíniumra. A kötött OfA ?ai értékéi illeszkedő puffsrrel izemben mértük, amely ugyanolyan koncentrációjú aiutniniutmfoxzfáíöí tartalmazott. A kísérlet eredménye azt mutatta, hogy1 a CifA T* értéke stem változott észrevehetően amikor alumínium-foszfátra kötödöít (azaz Sb.HAC ± Ö.Í2N€), összehasonlítva a nem kötödött ÜífA- val {am όδ,ΙΗΧΙΤ A drog tennék puScr-típusa, koncentrációja és tonérössége megválasztásának alátámasztására &amp; T* változását meghatároztuk magasMaesony sótartsimá kiszerelésekben és kiilönhözö koncentntciójü hisztMln és szukcinát puffért'.tartalmazó kiszerelésekben, A 8, táblázat azt mutatja, hogy a GMA T,* .-értéke növekedett amikor a NaCÍ koncentráció vagy a szukeinát puffer koneeturácio uövekedeft. Azonban a ClfÁ Ts. értéke nem növekedett az egyik tesztelt hísztidin-sóoktat puffer kiszereléssel sem. 8. Táblázni

kanért gyógyászati stabil izálószerek, mint például a CifA T„. értékére gyakorolt hatásokra, összehasonlítva az alap-kiszereléssel (0,6 mg/ml, OfA 10 mM szukenuit púderben, 150 mM NaCi, pH ód).). A 9. táblázat azt mutatja, hogy a CifA TTO értékének a növekedése függött a CaCh, trehaíóz, szacharóz. szerbitől, mannitol és glutaminsav koncentrációjától. Az arginin azonban csökkentette a CifA Tw értékét. A proJtnmfc ^eg^.^n'tllkinas hatása a CUA T* értékere. Az eseipiensek fehérjékre gyakorolt hatása fehérjeftiggö, ily mádon a szakember nem tudhatja, hogy egy exetpiensnek milyen hatása lesz a priori A szacharóz, szerbből CaCb és magas koncentrációié NaCi nemcsak a iVeí növelte, növelte a AC«-t is 4"C~al. A iö. táblázat mutatta az eseipiensek additív hatását a CifA 7« értékének T’C - :F€-al való növelésére, még PS8Ó jelenlétében is, 9, Táblázat

] 0.7 ábl&amp;Kat

A ClfA vs Λ lp<), ns no uWfm töltéséi .» hHm uiok a klódéi» pred klórénak a pH iuggveryeben 4,0 os £,0 Livim A tízsgábtlh v .tkohmzoti puffer όικΗοπΗ, a/ ,κϋιί (pH 4,0 - 5,0), szukám ípl ί 5λ - 6,5 i v* tésztái (pH 7,0 - 8„G) voltak, a ΠΓΑ zéla potenciái profilja a zéró Hihés pontját valahol pH 4,0 és 5,0 között keresztezi. (A zeta potencies &amp; szerek elektrokémiai potenciálisnak « meröszáma kolloid rendszerben. Üsd Lykieroa. ,1, „fundamentals of interface and t.téíiakl beumu;", 2 kínok 5.200. «.-.'Id,, 1005). Fz konzisztens azzal a lénnyel, kopp i, (ΊΓΑ pl énékö a 4-os tatton-my abo feszcvi van iVen felél az AIPO.s zeta rotém.'ité ptuíUjat h konzisz-temmek találtak a -5,3 ' 5,S pl értékével. li\ módon a legjobb kötődés oil fordulhat elő. ahol a két entitásnak * lkaiéig a nettó tokosé, darvon pH 4,5 - 50 Wot, V Loop vu^á'mí ellátóm m i uab.iL, "ögv a fegjohfc kötődés pH 5,0-ön következeit be mind a 0,02b, miad a 0,10ο ms/raL ClfA koncom melónál. Hlleoiéies trend volt az. Ai(Oíi)s görbére, ahol a pH 5,0 mulatta a legalacsonyabb kötődését. Az AíiOHb sosem érte el a 1005:> kötődést egy ik teszteli pH éneken sem. Λ1Ρ*){ Looce'eráeíö ín raid u 5.0,25, tűrt, u.'ö mp, mL) kötési kísérleteket haüotmuk \me t'KA-yirt γ·Π \o, 5.5 és 0,0 értéken. f->en kísérletek szettét a CH'A pH 6,0 érieken érzékel lennek tűnt a protein koncenfrác iónt, ko<V!szuns<m 50% kötődést tóxe ei, mu, a protein pH 3,0-őn növekedést mulatóit a kötődésben az ÁiKté növekedésével együtt htéglkytéíük. hogy a ClfA a legtöbb kötődést pH 5,0-ön és alacsonyabb protein koncenü-eKiknél éri el. és a kötődés esőkként ahogy a koncentrációk növekedtek. Fzenfelül a pH 5.5 és 6,0 egyaránt, ugyanazt a iremim mutatta, de a kötődés nem volt megfelelő ezen pH értékeké egyikén sem, még a iegsíacso-rtyabb dózisnál sem.

Annak megprobáiösára. hogy fokozzak a kötődést pH 6,0-on, kiválasztottunk tes«e!ésre néhány exeípísost a különböző NaCi koncentrációk melleit, köztük a 150 mM Hatéi, 500 mM MaO, 500 mM gHciss, 500 mM lizin, 20 >nM Mpí.'S; es 1 í»M ΠΊ \ \/ excmsemok üüi sokai a kánonná ndapion’xaguk miatt választottunk: ki, tűivel 0,0-an mind a CifA, mind az AIPCL egyaránt negativan töltött. Módosított Lowry vizsgálati eljárni alkalmaztunk a »zAzalékos kötődőit protein tesztelésére, A vizsgálatieljárás szenté egyik cxcipiensröl sem figyeltük meg. hogy kifejezett javulást mutatott volna a 150 mM NaCJ kontrolihoz hasonlítva. Ö, példavUdlMzáh.OfA drog termék forstolázásm ősszefoghslás A OfA-t ismert módon instabil proteinnel tartják, ami azt jelenti, hogy könnyen hídról tzálódik vagy „elbasi-tődiíC az. Ni dómén és N2 dómén között és legalább kél frogmens alakul M, amelyek egyike tartalmazza az NI dóméul és a másik tartalmazza az N2N3 dnméní. A stabilitás alatt a hidmSizáiatian ClfA relatív mennyiségét értjük, amely lényegében degradáíatiati ClfA-t tartalmaz, összebasönlltva &amp; degradáció;. termékekkel, amelyek például az NI és M2M3 pepuklíragmeosek, Minél nagyobb a lényegében degradálatkm ClfA relatív mennyisége, annál stabilabb a fehérje.

Megfigyelték, bogy a ClfA protein folyékony kiszerelésben (lásd fent) elhasad az N i és K2N3 döntőitek között, amint az méret kizárásos IIPLC-vel látszik. A gondosan megválasztott excípiensekke! végzett szkrínelés után vizsgáitok a liofiíizálást mint a folyékony kiszerelés alternatíváját, a foiyadékbeii instabilitás alapján. A ClfA hatóanyag négy tételéi vizsgáitok meg módosítót! íiofiíizáeíós kiszerelés alkalmazásával, amely 10 mM szukcinátot, pH 6,0, 0.01% poliszOíMt: 80-at és 4,5% sznebarőzt (töltőanyag) tartalmazott injekciós vízben (WF1) (kevés vagy semennyi NaCI-tei). Mind a négy léte! eredménye az! mutatta, hogy a fagyaszíva-szánioti CifA kia/ettéés sikere >et si κ jb/flta a proteint az eih,tsi;u,Us s. 1b r* ,f> ,u három hmnpon Kerosztüi xalősioeíu é-gyomftoit (37*0 hőmérsékleten, A kiszerelés elemzése fordított fázisú HbLC-vei azt demonstrálta, hogy a iíotl-lizálás megakadályozott más luódosiiásokat is, mint például a dezamidáeíöt ás oxidációt ss &amp; megfigyelt idő pontokban. Ezenfelül m visro hatásosság! fesztek (azaz BÍOVbRIS teszlek) feltárták, hogy a OfA megtartotta a hatásosságai a három hmiáp alatt A íioíihxáis drog termékeket jellemeztük biofizikai tpH. nedves»ontartaIont Karl FEher cooiotoenta [lásd Schötx, Eugen, frmenias' J. of Anal. Chens., 348 (4i 269-27i, Apr. ?994'j, 014,-8, ozmolsahiás, cirkuláris dihroizm·», UV nbszorbancia spektroszkópia, diilereneiáüa sz.keorteíő ksionntetrla} eljárásokkal, síválasztási í'p,VfS\ok:><td tH 19 t \ e < 1 .u.ism^ágs t ΒΚΆ IRIS) eh erőse v kai ss. hogy monitorozzuk s hm*. ,1-./1¾. a-szárká? ttata-salt o kiszerelésre (dsog termék} és magára a proteinre (drog hatóanyag). Több elemzés eredménye arra utalt, hogy η fehérje jel‘egzetességei hasonlóak voltak a Uofiiízalas dót! és után, .Ezenkívül bevetés, fagyu,vtás-ieh-K.ts'tavév ev-piem. ithrrneiéss kíserlemhct végv/ihnk a IkdiitzáciOs ktszere’és előzetesopnm,'1i,'dav.n.í 4 példa; Liofiiszáit CSfA drog termék íarfttuíázás»: iíoíMzálás Λ iiofdlzalási megelőzően fiolákat töltöttünk meg ösö μ! folyékony kiszerelésekkel. Λ liofsUzálás mán szak-séges volt meghatározni a fecskendővel végzett visszaoídás térfogatát, oly módon, hogy kiméri térfogat figyelembe vegye a fecskendő holítérfögatáí. 1 bhen a Mseik then fecskendőkéi töltöttünk meg 6,33. 0.6<>, ö,ö5 u-Ü,?ö ml. topjtóvserre;, A hirtószert kinyomtuk a fecskendőből a hoitlízált fiolákba és a vlsszaoidoft folyadékot vísszaszivtuk a fecskendőbe. Azután a folyadékot kinyomtuk és megmértük mérlegen. Feltételezve hogy a folyadék sűrűsége megközelítőleg I g/mt, meghatároztuk, hogy a fiolának körül be no 0,65 n;L vakcinát kel! tar-talmassiía annak érdekében, hogy megközelítőleg 0,5 ml. vakcinái juttasson be a páciensbe. A Ö,5 ml. feletti tél lovatok ss, elfogadhatok, de a tnegközeiAMej. T5 *nl ,-néi kisebb térfogatok neat előnyösek Kél létei, a L36Ö51-&amp;M és 1.36051-81-2 pre-iioftlmlk Iblyéktttty kiszerelés szűrési kinyerését monitorozíitk: SE -I IHX-vel. Az, alkalmazod szűrő a Milítpore 0,22 μηι RkföE peptbráp vpft·.-A ClfA kinyerés mindkét tétéi esetében >09yá volt.

Vinis Genesis El.35 i.yophílizer készülékei alkalmaztuk a leírásban szereplő nshtdegyll klszérelés osetébon, Egy szemléltető, nem korfátozö líofilizálási futást ciklus paraméterei! bemutatjuk a íl. tábhtzatban. A L38Ö5I-44 sz, tétel (l)S 1.3SS 12-50) esetén nem volt íemperálási lépés, míg a pévvel készítettük, II. Táblázat.

Λ tKidvességtarteimal Kari Fisher modssertel mér;iik mintakemeneéhez csatlakoztatott Brinkman» cotsíoxnetet aík^ni(VxB,í\ F S w mi open”.,!» kan * mk ,s nedv,.'-'-'^ eL'mif a^u s: andméből a Kari Hsrbx veiké í m> siémz rse.ne*vgi.;s veer, standardé- alkalmaztunk a rendszer hatékonyságának a monitorozására. A kemence alkalmazásával a viz standardot 230°€*οη mérttik ás a fa^yasztva-száritott mintákat }; 3''C-on mérjük. Általában agy sikeres iaüynsztsa-szárilápi cikk·;; ti lehető legkevesebb vizm tartalmazza, mi-köbben megtartja az összes többi kívánatos temtekje Hernádi. 10 vcleüenszcrűen kiválasztott Hofsiizáiás titánt kiszerelést megvizsgáltunk m hidegeik téléiből és értékeltük a látható itslajdotsságaikra. Λ pogácsa minősége összshasonilihaíő volt a -ételek között, azonban a 06051*44 sz. tétel, amelyet iempendási lépés nélkül készítettünk, nagyobb zsugorodást mutatott mim a többi tétel, amelyséí volt temperáláss íéjsés. Ak.Hába» a pogácsák fehérek és szivacsosak voltak. 16 szerkezeti in-egritást matatva. 10 egyedi Hofilszáeiás ;érmék íáthatd tuiaj-áonságnit mutatjuk be egy adott kiszerelési léteiből (temperáklssai) a 12. táblázatban. 12. Táblázat

A kiszerelések fizikai tofajdoitságttit jellemeztük a Ikd'dizáiás előtt és után» A mintákat a ikdiíizálás «tán megközelítőleg 630 μί sóoldattaí oldottuk vissza (a 44-us leteli 150 mM NsCHel oídotiuk visszst, míg « többi tételt SÖ mM N«C14eí oldottuk vissza) A vlsszaoidós rtíáu özomiafifás közei volt a fiziológiás célértékhez, --290 ort'áam, amikor 50-mM RaC'í alktdrnazásávsrt öídoöwk vísMa, MegOgyeiíOk^ hogj·· st pH megmaradt 6,0 * 0,31 '.értékűm,' amikor a liöíiíizáll pogácsákat hfgMszsmd visszaoidottuk. Ezenfelül a visszaoidáss idd mindegyik tétel-esetében kevesebb volt 30 másodpercnél Átmeneti iníkrobisborékok jöttek létre a hlgitészeroek a pogácsákhoz való hozzá,adásakor a fedugózáskor alkalomzoP nirtogénea feitíSítés eredményeként;

Egy TA lastoimeots Modulated DSC készüléket alkaimaztunka íioftlixálás előtt » folyadék övegátmérseti hömérsékfetének {Tg5} jellemzésére, .A TgTt ázott hőmérsékletként definiáljuk, amelyen egy amorf szilárd töré-keov, övcgszerii állapotba kertit magas szűnő hidrogén-kötésekkel a lehűlés során, Á Tg" felett a molekuláris fíaiditás szintje nagyobb. A Tg' kísérletes meghatározása footos &amp; Uoftlizáeíós ciklus opiitntdizálásáhozi utónak érdekében, hogy jé minőségű pogácsát és stabil terméket kapjunk. Modulált DSC készüléket atka Imaztunk a Tg' mérésekhez a fagypont alatti hémérsékkaeketi vaíé szkeouolési stabilitása miatt, Λ pogácsák ővegáf menetét ("Tg') és ncdvességtanalmát ligyelembe vetítik a liofíiizádóa eljárás optimalizáiá-sánái. Fontos, hogy a minta az övegátmenet felett legyen a iíoOiízálás tesnperálási fázisában, A íiofílízálás tem-perátási lépese -ΙΟ'Ό-οη volt. ami az összes kiszerelés -34,{C'C a OJCC-os *Tg" értéke felett van, .Az is fontos, hogy a lioltfizálási eljárás megfelelően megszáritsa a pogácsát, hogy megakadályozzuk a fehérje és a víz közölt! -reakciókat, tan· által csőkkeu a termék stabilitásút és tárolhatósága, Λ linftUzáláxi eljárás kevesebb mini 1% (azaz 0. 425« i: O.iTCl vizet eredményezett az összes kiszerelésben, 5. példa: Liofiíizáit OfA drog tennék tar mohi zása: hőmérsékleti stabilitás MICRÜCAL VT-Differential Scanning Calorimeter (DSC) készüléket alkalmaztunk « OfA-saját hőroérsék* ieti stabilitásának a jellemzésére. A lOC-ról M>öcC~ra történés hőmérséklet-emelés feltárta azt a hőmérsékletet, amelynél a protein felolvad és a kneksredóshéz (feh)lvadás) szükséges etnalpla-változást (AH). Ez információt nvúji a fehérje feitekeredést jcüesnzőirői (azaz másodlagos és harm ad ing·." szerkezetéről) és arról, hogy a konformáció megváltozott-e a liefílizáiás után.

MtcroC&amp;l Capillary DSC-t alkalmazó differenciális szkenneíő ka lóriméinál (IKi ugvrtímk a ClfA Ikdtli-zálas előtti és utáni tételeivel, hogy összehasonlítsuk a kiszerelések olvadáspontjait {?,,,}. Mindegyik teszteli tétel r'fí r„ era Kt kel ex kitoketvdés' <. of alt Jak".; i AH) mm,.mit 1k l'h/á'.i- dón é 5 .'tár,, ami arra utal, hogy a 1·' -me álinlat-os ialtekeredss,* nem -.?!<>/<. ét meg a íiöíih'tbx ehruoi az utánra. .Az átlagos T.K a Uoíifirálás elotí 55,.CC 1 ti 14°C volt. őxszehasnnhivs a líöíilizáiás utáni 55,2(.. < UJ ővC-aí, Az átlagos All liolliizálás előtt 1. vtixlö' - 0,1?^ Iő!'ral moo'C volt, ess/ehesonííiva a Ik-r'dváfes uiars ΙΛΚΙ04 - 0,1:' itf cd tnoi,,J>C-8l ü, példát Liofiltzált Cií'A drog termék formuiázáss: antigén másodlagos szerkezet A Cirkuláris Dikrotstmust (CD) alkalma'tünk a protein ma odltmos széfet zetotek a mvgdl,tintására niítk:-eey<k síszerck'sbcn a hot' vaU előtt ex non Vlmdegytx k su letet i,is. ··} 510 prkoop<d a on'tótén sérv/, il, A CD szkénék kísérleti p&amp;t&amp;méiesv kézé tartozott a 190 - T>9 unt hullámhossz-tartomány, 20 nre/perc szkennelési sebesség, két másodperc válaszidő, I am sávszélesség és 3 akkumuláció. Szűktinától, szacharózt és HaCl-t tartalmazó^ azonos putfer-tnátrixot alkalmaztunk a hattér levonására. A Cirkuláris Dikroíznuis (CD) a lehelje másodlagos szerkezed elemek, mint például a-helfe: és j'i-rédő snekt-mos syksmv'ivnt biztosam A jiotíkOias ofom os utáni t It \ tevék e't senek ,tz ö»szcnason' last-, a/f »tu telte, hogy a líot'rtlzáJás előtti és utáni spektrumok általáíto;· alakja nem változott, ami arra utak hogy az összes tétéi megtartotta a másodlagos szerkezeiét a lioilh’zJiáas és visszaüld áss Sólyamat alatt. ?. példa: UofdiaaHt OfA drog termék farmuiázása: aatigén harroadtages szórtamét M,is;xkk derivált UV abszorpciós spektroszkópiát ulktdmaztonk az anogén hannadlagös szerkezetének vizsgák iá e-p miss-h műövéi ok got a prote a >í,i 'listás imgatkptle á".s ’ ohlná is előtt es után i ,>bb ha! mrhnsv i UV-l;it hasd abszorpciós spektrumokat vsuüuk ki a 300 nm - 4í!C? nm tartományban Ági iont 8453 UV-iátható diódasoros spektrométerrel. tOO gL térfogaté 1 -cm üthosszú kvarckü vattát alkalmaztunk mindegyik kísérletben, A spektrumok elemzését a Cf-IEMSTATIONT* szoftverrel í.Aglkmt) végeztük. A második derivált spekínt·· mokaí kilencpontos adatszóró a lkain: .írásával áiliíotutk dó és h&amp;reuörcnciö Savsizky-Coiav polinomiáiísra illesztettük, A derivált spektrumokat 9ί> adatponttal interpoláltuk minden egyes agy-nanométeres intervallumban, ami megközelítőkig ö,öl nm hatásos felbontást biztosított nem aggregéit Lórii;menyek között. MiCROCAL ÖRiGIN,v ó.Ö-t alkalmaztunk &amp; ck rh.dt spektrumok csúcs pozícióinak a kiválasztására, Azonosítottuk &amp; lenihtlamn, ttrozstt és tripiofán aminosav-oídslláncoknak megfelelő csúcs pozíciókat és ábrázoltuk a hőmérséklet függvényében, A négy köríti három tételben (-44, -31 -1 és -81-2 szó kitelek) láttunk valamekkora eltérési a tenHalanindirozíst íegmkktn idoö air - 2"0 son) í ísofilizáiás után Azonban a -?2sz. tétel jé átfedést mutatott, Hz.a Int tartalmazta n Uyunponb maradvány Nsí.'l-r (átvitel a bulk móüixhől). 8, példái Uöfilizáll CifA drag termék form utazása: szerkezeti stabilitás: Ní hasítás Méretkizárásos HPLC-t. alhaünuztttök a iiobüzálás előtti termék kiindulási a visszaoldott liofiiízálás utáni tennék, es a Különböző bomraókleten tabuit is.,.,z,soídon drog termék m illőségének a megáiispííásáns. Ez. az eljárás képes detektálni a különböző méretű CifA fajtákat, beleértve monomer, dimer, oligomer (nagyobb mini a dinien és degradáns (az NS es C2N; dóménak közönt hasítás miatt) fajtákat, és ily módon ezt alkalmaztuk a Uo'il zakV. előtti fölyeku-r, kiwie r- A stabil Hasnak a nftítz .1 n exV.do-kbez való hasonlítását',! Λ sT \ foljekonj ec bulit ab ti zttelesei 2-íOV <' m'í os > R i -,η-htl párát két HPi C módszeitd monitofoztuk, Méretkizárásos HSX.C-i sikál máztunk az N i e-. \3N.4 don end. k<Vöíts hasítás detektálására, míg fordított fázisú HPLC-t alkaimezüir-k a protein mindenféle kémiai degradáeiöjának (azaz dezamldáeió, oxidáció) sdöheli monitorozására, A 2. ábra A. B, C és. D paneljei szemléltetik a négy boti módi CifA tétel elsőrendű kinetikai gödiéit összehasonlítva a folyékony in egíe lg Ibikkel, mindegyiket ? -8' t', 3s X es t" C-on mknbuiw, ev időben monitorozó t SE-HPLC-veí. .Az eredményeket ln[Cj vs, idő görbéken ábrázoltuk, »hol C az. intakt am igen koneentrádöja (dimer t monomer) miközben kizárjuk a hasított degrodatrsokai Mind a segg ímeí a liofllizait férmék l-onzózkn-. ,-mh<-llíását mutatta mindbarom inkubációs hőmérsékletén. amint azt a í minimális változási mutálja akár három hónapig ts. Ezzel el lm a étben a hofíhzálas eiéíts fohek-'iy mtnUm annvos mértékű nooekuiest munarak í deg-radáeioban a növekvő hőmérséklettel. Megjegyzendő, hogy a I.3ŐÖ5 i-44 sz, tétel folyékony megfelelője (L5Ó051-37-1) az ti folyékony kiszerelés (miieméiben u pre-ík> kb.zcre léssel), amely 10 aiM r.zukci;xu. pii 6,0, 0,01<! 1 Fölíszorbát őo és 150 mM NaOt paBoit tutain-az <2 Λ tbia) ózonban a -37-1 sz, tété-, nhai,;m>} ttendjal a hömérsékíei függvényében hasonlóak a Itoftltzálás előtti folyadékukéhoz. A Stábra a boilbzált DSAAÖI84-ŐI SE HM,C kroustiogyasnuijait mutatja bé I -s 0 hlöpottfban, össaahááöú-litva 2-8-C, 2$*C és $TC-m bárotn hónapot) keresztül tárolt pogácsákkal. Az egymásra helyezett: kfomotopammok profilja! azonosnak tűnnek, iáthalő növekedés nélkül a dimer vagy degradáns esáeáökbttn, J másik háton· líolilízált tétel hasonló'eredményeket mutatott. i ívéhez sík eg> folyékony ; izalfs és egy houlizák OSf \ Mw elé* összehasonlítását Reprezentatív SIARPLC krnn&amp;iogrttmmokat ««{arunk be a4. ábrán, őssxehasonUtva a Ifoíiiizáh kiszerelést a iiofdizáiás előtti folyadékokkal Í-RV, T és. *} i -on négy-botén keatessd&amp;lt tárolás utón, Á hoftlizali minták jő átfedést mutat-rak Mindhárom hőmérsékleten, különösen a lö monomer csúcstól közvetlenül jobbra eső degradáns régió környékén. tel elleniéiben a folyékony kiszerelések kifejezett növekedést mulattak &amp; degradáns csúcsokban (4. ábra, bekarikázva}, Emellett a Mofiíízák csúcsok oligomer csücsök minimális jelenlétét csiícstoS bálra, 4, ábrák atoeiy jelenség közös voit az összes liofiiizáh tétel cselén, % példát Lioffiizált CifA drog termék foranlázása: szerkezeti stabilitási fehérje módosulások A fordítóit lázisü HPLC a fehérje minőség és integritás jellemzéséré őljáíi&amp;.;

Az anslítok elválasztása a kölönhözö fajták kklrolbbitásának különbségén alapszik, ami szignifikánsan eltérhet fehérjéről fehérjére. Ennek eredményeként a fordított fázisú HRLC tipikusan jé elválasztást ad a hasítás tneltett a jelentőséggel bíró protein és például a protein degmíánsok, szekyeneiarnH%®tt!t protein ífetm például dezamidádő és oxidáció) és maradvány gazdasejt pmíein-szennyezödesek között. Ezt &amp; vizsgálati épttsí alkalmaztuk a stabilitási vizsgálatokban a protein minőség időbeli adatainak megszerzésére.

Amint az SB-BPLC adatokkal is, a fordított fázisú kroro&amp;togrammok hasonló profilokat mutatnak a ikstlltzáit termék három hónapos 37*€, 25°C és 2-8'C tároíása eceten ősszvteísonbtsu t fossert koszihh ktszoreuWI A kőid Íróit stabilitási vizsgálat során snoai tető ztok a pll-t. nedv ew-gei es Olk,, t A pl 1 értekeknek ' Ö.Ö3 egységen helül keli maradniuk a cél pH-hoz, és a nedvességnek <3% kell tennie. Az ODt^A 0¾ aggregük ré* szöcskék általi fényszórás méziéke. Tipikfossn a detektálható aggregátumok hiánya <0,03 01½^ számokat: erecb ményez. Az 5. ábra A, B és 0 paneljei több iioftlizáh tétel kombinált adatait mutatják he. ami azt demonstrálja, hogy mindhárom paraméter jó stabilitást mutat három hónapon keresztül, tik példa; Liofiiizáft CifA drog termék fomtsiázósa; hatásosság BíOV'ERJS-sef rm-ghatármeva hí vitro hatásosság! vizsgalat! dsarast alkalmaztunk a Olt A protein funkcionális epitopta niognenadásanak ínoraPsi. návsKí a suidítási vizsrala· ki válasz tett «k-poai púban. \ BÍOX i hív phufe; mot .til. umuziuk one i ('•"ha Khpen -t ví/sg.ilali eíjartohou olyan szendvics formatumor alkalmaztunk anieKbcti egy mouokion.d-s dtenatiyagoí {m.Ab 12-4} aikahnaztunk az antigén befogására és egy ónunk, egy eltérd epitóp ellen termeltetett monoklonálts ellenanyagot froAh 55EC6) alkalmaztunk az aní igén jelen létének detektálására HOL. detekc jóval. A 12-4 monokionális ellenanyag egy olyan ellenanyag, amely a CILA 14.1 doménjél ismefi fel és kőit, míg a I5HC6 mAb a CifA N2 doméuiét ismeri fel és köti, A BIOVERIS ellenanyag kompetíciós vizsgálati rendszert alkalmaztuk a CifA hatásosságának monitorozására az 1,36051-81- I Í.DS 140184-61} és 1.,36051-11-2 íDS 1..-10114-62) tételekben három hónapon keresztül. Sem » lioftlízáhv sem a Iiofdizáiás előtti folyékony kiszerelések nem mutattak hatásosság csökkenés; a 3 hónapos időszakban 2-*^,.2$^:éE3.?*Ctoh. .1.3, példa: Uofiüzált OfA drog termék formolázása; exetpensek hatása

Miután megállapítottuk a CifA stabilitását, tovább; vizsgálatokat terveztünk (_ 1} a kiszerelés kotnponeasetnek ttiegbatámzására, (2j exciptensek szkríneiésére a pogácsa kinézetének optimalizálásra, (3} a kiszerelést eljárás megértésre a folyamat-tervezés voaaíkozásábatt. és (4) &amp; hatóanyag és a drog lennék fagyasztás-felolvasztás iránti toleranctáláasik megvízsgálásám.

Itedts/mhát ffo A188(fi littaboi u géziünk hot hzae;Os p ifié; tnatMxb m, ütnek 0.3 mg ml CH'Á-t es !Ö mM szukdnatot. pH 6.0 n.síalma/ot;, re í köz ben v.n'alfuk a sraeha-óz-tartaí.nat x% ~ 4.:^0 * 6V&amp; xs s enekd,kei 2 í'i>80 kom* *m y. ok s ϋ ; ( Ά ΟίΗ,^ν , >! v \ \ π tornát' n< i >f- k I ft .t kWíiZttt «a1*! ju ' Λ^γκ* hogy (3) meghatározzak a poiiszorbáí szakscgepégél &amp; lioftüzálas előtti folyékony kiszerelésben, O beállítsuk a poíiszorba! f oumítrüdöltithofiiizálás előtti folyékony kiszerelésben. és G) beállítsuk a szacharóz kottcent-rációját ;s iiofihzálá.s dott? folyélony ksszerel-dx-n κ,ί/χχχχ k:''Ub.'ií"! <.rge. mA s-,α iSiSíGi- P'-d's ér vzauxeóz kotteemrrxk'kla;. á ö ábra Λ, &amp; es C pat.etK ntutaijt·. be a dimer szazaiéi. monomé) szazuiel e\ >ieg\td.í"s .amatás)’»,-,z í af'k <.<v í ng"iv%t,u Sí -’HM Γ u . -oras K'^ertv'v' otái síí'í'iho'u'i Akut! az -* 34 bt ; \ ) . * m. * 11 v ob -.'nil a/ P AJ í , ü 6,0, 0,005% mö) és 1.401840-62 <200 pg'sni ClfA, 4,5% szacharóz, 30 xnM s/ukemát pH 6.0. 0.0)% PS80) kiszerelések e;-etéixm. A PíACxS nem tattal trazó kiszerelések meeenKákádéit százalékos dimer kialakulást mutattak. a rázaíés után a i - U mintához viszonyítva (6 D ábra), kiág a Higakcsonynhb PSSO mennyiség HUkAb) estében m a ói ménbe n maor-s szépe ’ mesőbb mhí a t o e'-eteti, ami arra utak hogy a PAk , Sunyó-, vo.i o k vAxr Ϊ <or ' η . AS!) Tvik s ,ν > oe'S Sí -Hí 1 t <. ur^ r&amp;gyoób mennyiségi) oh < unu «η gyobh mim o dlmerek} jekmletet mmutta, sop. a PSSO-aí tandmnzó minták nem, A políszotbát 80 javasait no itv > v'Íi.'híii > ' tkok 'V ííoíví its eg Λ vaek a,, μ'Γο dx nennsisvge t \ x a es o%s m is mumtmk semmi különbséget a Ska.' tdmokbtm. Ime'd&amp;tt a százalékos monomer és degrades nem tűm nagemév-íekoeu mee.wdtozotmnk a 1AS0 jelenlétében χϊο- leányában, vagy a változó menny bégé éz.iteharözzsl.

Km eted vizsgalatokat hajm-ínnk végre atma» narghafározásárs, hogy a különböző eaespiensekstek vstn-e kát ess i;-.ii;)t.,í a (.'h'A-fít a gyártás) ohao'.t.bon n kis/.erdcs kevoréa folyamán. A küióíibózO escipienaek közé tanozoti sr n )<,)> !ö>s,s *\ ttvhvJv" os"\ (.s o s ,·.! v ' í", into'Ii) konfbn'.n 0\t 4* <j'vAtciMiöz C'v Λο tra ií'itoi »víí'v^5 i ációbar A/ vXOig 0' 'k. <s u mtv.,m,Kkí') wloahoutm, ailaima/t*iaalkjánváissztöbokkk Im4dtez a kmériekikhez a kisgoívio··. λ lapja Ο fA 0,:¾ ingóol 10 ?t)M uukemát. pH 0,0 és pohszorbáí S0 0,01% voit. A mim táka* tsxmniázRik, tárokuk éjszákká keroszílU ΑΓ'Γόο és vizsgáístokat a kóvetkező roggtti kezdtük tiK-g A kiszc-íekl.wkct 30 mi, Shot! type i üvegftoiákba mktuk West 4432 szikká buti) dugókkal cs a VWR Mieraphae Shaker kószikékTu is>gzii<'i!tik. A nokskai ibiya?namsan kevettatük 500 RT'M-ei .szohahötnérsékieteo, ás mimáksst veltüxsk: 5 - u. 2,4, 8 és 24 oratüi eaSF-HS'i C-t alkuinsaztank az ehódieycá drágáim ebciiá.-ként.

Számos tétek {L3Ó05Í-9Ó-1, 06501-96-2. 1..36051-96-3, 1,36031-96-4, UŐ05I-1Ö0-I és 06031- 1004í megv'izsgákijiik a keverési vizsgálatukban a««ak iTi«g!(átáiw.ására, hogy a szaébtiróz, trekalóz és szacha-rózÁtanníio; gyaktrrol-e hatás; a ClfA stabilt!bóra, 34 6tán keresztit kevertetve szobaiiomérsékielea, A ?. ábra A. B és C paneljén a százalékos dttgradána t hasítás i, százalékot, dínua és s;záza!ékos monomer értékeket muíaí-jtik ba SB-5'ÍPLC-vel mhxiegyik kiszerelés ésHbáíí az idó függvényében. Nem latiunk jeientós degmdáciét a szncbaríkzipsl Önmagihan os a xzuelsamz manmtoj m-makt\m. azonban a mehatoz kiszerelés a dugmdaeió szagai-fikásts fokozódását: mnfaua: A thtnerizáclós aráay összebasoísMlíiató volt a OfA mindkét OS tétele esetben On-anagábao szacharózzal, de a tékdtOl fdggö tióvékedést láttunk a trehálómi ás szae-harózzmannhoiíal, A ítiono-mer változásai mutatkozik a demdánsekban ás dimerekben is.

bzaelnroz, metiumn, glidn es rnuntmol kuiónbózo komhm&amp;mois azertíltOk ki CIfA-vaí es az; kövemet» icsz-ieidk a OlA stabilitására gyorsítóit slahiüíási lesztekkeí. A gyorsslott sfabilisásl lesztek a kiszerelés (folyékony vagy ikrfsUziis)tárolását foghdják magakhan olyan bömérsékleieo, atns magasabb, mint a lemezeit tárolást hö-mérséklei, és a CHA predem kiőbeií mosítÍorozását a degradáció jeleire, A iioíHiz.aií ClíA esetében a javasolt tárolási hósoérsékSe; 2~8Λ€, ily módon 26''C és 3?'0 lenne „gyorsitotf' körülménynek tekinthető. Nyolc kiszerelést készítettünk el (lásd a i 3. tábiáztsttst}, atttelyek mindegyike iattaimazriti 0.300 tng/m! C!fA4s 10 mM szukcmáiöt pH 6A és {KíÜsxofiíSt SO-st és szacharóz nrelbai», giicin és manóit»! különböző kombinációit, sírok hatásának megvizsgálására (t) a QtA iiofslizsbts doni folyékony stabilitására, (2) a IhMlHzél; pogácsák -hm W-zm ás - 3) a he ábráit .Name-v khwucsc V metumim a fah-érjeO.sidáeió megukedályoztksása való képessege iyutt választót! uh, a dúld a* alta'am·? stablii/masi tulajdonságai miatt &amp; kizárt térlögar tévén, és,·» ntsxmóinlí a pogácsa kmézeténd javítására vdc képessége mbut. A folyékony kiszereléseket gyorsított vizsgáimba vormtk, ás most köröztük vgy .hőtan keresztül bivíiPl O-vei, ós RlMlil-C-vd kél Hőt dtekével. A Íioftiizáií pogácsákat 2-íH'C ás íVPC-öíí tároltuk és kőt hónap eiieitévd motniorortuk A pogácsa kinézetét vizuálisát) értékesítik a csak szachárpá tpiSátaké kiszereléshez! hasonhíva. :-11,:1¾¾]¾¾¾

Λ :?d;>C, :;S':C és o'M'-otí tartott folyékony minták méreikízárásos adatai egy hét után azt mulatták, hogy egyik vizsgált exetpiens sem javította &amp; Cíi'A stabilitását (a hasítás vonatkozásában) összehasonlítva a csak sza-chartert tartalmazó kontrollal (1Ö1M kiszerelés). A t ~ 0 pontban mindegyik kiszerd&amp;neh nagyon hasonló pro-· ilíjft volt. Mindegyik kiszereld kismértékű veszteséget mutatóit a fö csúcs tnagasságáhan a hómersékiet: Rtggvé-nyében, a fö estksot szegélyező kisebb csúcsok egyidejű ttövekedésévői kapcsoíva^ antőiyekoí: a degradáció.·* termékek okoztak, Megik;· ellik hogy a k hiba sete éNC'piensek jelenléte nem matatott semmilyen kifejezett javulást* csak sznebstfőrt tartalmazó kiszereléshez: képest

Hotőiiett a kiszereléseket lícdiiirttíluk és megvizsgáltuk a pogácsák kinézetére, A csak szacharózt tartahsazó kontrolihoz; hasonlítva egyik excipiens sem biztosított semmilyen javulási a teszteli arányokban a pogácsák vizuális minőségében. A koídizáit pogácsákat is alávetettük stabilitási tesztelésnek és megvizsgáltok dőgradáci-óra (Hasítás) Síi-HPLC-vel két hónap leteltével 2~<ó:€ és 3? Ákost. Az eredmények arra utaltak, bogy a kíszereió-sck/stííbilaksasítstk:.: 12. példa.' Liofüizáí? ÖÍA drog tennék forntalázása; fagyasrtás-feiohasztás í-dgyasztád-tdoiveszrád s izsgálamkat végeztünk a í.'ifA protein több tételével (azaz 1,401 <d-63, -Óé és --65), A kiszerelés 0.2 mg/mi ClfA-t. 10 n-M szükemátot, pH 6,0, 4{íftA szacharózt w/v és 0,01% poíiszwrbát SO-at v/v tartalmazott, A vizsgálatot bárom ágra osztottuk: (I) a nem d-rmalázoá CifA (hatóanyag) 3x fagyasztása-fetch,ssznvt, νΆ n ’oncoSez-v: kll - .thog tersek) z\ t n.vuszm'-r-feioivsrtztav*, :.¾ a hatOvunag harc őzen .ói. „' <ssz, ss>. v- k I > \ < s /táv és d tv termekhe \ sk> ualaz< sa rundon lek is v stas: után Az e e;n? > HP! t' iák máz < v d \ 'géztni

\ vizsgalat ceití;tehőfíz stabil utónak a meg.diaptiasa u it hatóanyag ős -aor termek formájában :o;>h íV gyastoas-i'eio! vasalási ciklus «ián. Λ támlákat mindegyik felolvasztás után eleme síi· k SR-HPLC alkalmazásává!, hogy detektáijsmk bármilyeu változást a ClfA degradádójábatt (hMftSísj;. '·Αμ· hogy á h&amp;om fa*· gyamás-íbioívasztásí esemény: nem motelon növekedés a degrádáeíölxm a három vizsgált tétel közül kettőben-3 harmadik teíoivaa misig, A? egyik tetei kifejezettért nagyobb változásokat mutatott mim a többe

Lh példa: Liofdisált CLRÁ/CPS/CPÖ (trósmtigén) drog termák b>rns«lá«á»a A ClfA Itonitgöikssíti ttkt&amp;nl s&amp;hmzolassmsk sikere alapjáíHttvábbt drog kmnákeket szeteitöak ki a CiíA-ttok €P$ és síanísiokokkns?. iintígénekkei ás kotijngárninokk&amp;l való kombinálásával. A folyékony kiszerelés bizonyos megvaiösitásSi mádj&amp;i íiiöfthzáeíö elölt és íiofthzáeíó után) 200pg rClfAiíi-t és lÖOpg CP5*CRM CkS-CRkí!<.» knojiígátumof t&amp;Eteismtznak 0.5 ml termékben. Bizonyos megvalósítási módokban a folyékony kiszerelés iÖÖpg rCiíAmA és 5(híg CPS-CRMív? és CPk-eRM**; koufugáttimot tartalma 0,5 t»l termékben. íkülöiiiéfe töliőunyagokst: értékeltünk, beleéftv«-«Í»chí«rö3«,. misnsfioit és tmixdözt. Azt figyeltük meg, hogy a .-zadxifoz btziosgja a legjobb stabilitást n hvwwM v ízsuahsioio pogácsa kbaszet es KA kinn ú lohadok stabilam-alapján. Λ három különböző pl hu tanon tétel alapjait a folyékony kiszerelések rövid tava gyorsított stabilitása arra mali, hogy a pH O.í) az optimális. Λ CP5- és. CPÖ-CRM;»- kcmjiigámtr-ok siuöiiak voltak az 5,0- 7,0 pl! i&amp;ítoraányban Különféle, pH 6 köröl put'fmdö pofe-rendszereket teszteltünk, beleértve sznkcinátot és insztidinh Nem figyeltünk snog különbséget az rCHAfx olvadási hőmérsékletében f fav) a .hdztkbn vagy·· szukciuát pufferek atka.!-m&amp;zásávai, Mindkét puffer kompatibilis volt a €P5 és CPS CRM -«? konjogútunmkkal A ídmM sznkeimtt pofiért ipH ö.ö) választottuk ki a továbbiakra.

Poliszorbát hibát (PSkö) teszteltünk keverési vizsgálatokban mint potenciális stabllízálöszeri. A keverési vizsgálatok imitáljak a száll has közbeni n> trust és stresszt. ami 'skálában ts dl merek vagy nagyobb öbgemereh mennyiségének növekedéshez, vezethet. Ezen kísérletek eredménye arra mait, hogy a PESO megakadályozza a ClfA aggregét’lőj át. 0,01% (0.005 -0,!5%) pohszotbát éíbst választót! ónk a továbbiakra. A hofstlzáh termék vtsszaaidás,tra a fiziológiás ozmolalitást ínznz 250'300 mOsM) elérő higinVoert válasza iounnk. Pgs nsegvak'Sita^i mód szedte 00 snVt S'.ifia válau/toím ö '-sipiíosza'mö \ <-,api&amp;n, hov.v i u > -' ,ol-, ns nmn Ö,5mt do -st lehet beudm, fiánként fyé4 - thénml töhw-etsogatv-t \áU<'tetnmk, Anr sk hszv- sns&amp;-s, hng> 0,04 - 0,θ!·> ni V',ss.\x4övtf térfogai fal (Arrl.-es ckVU adyrA be O.öA unkád fecskemkíj töké-\s so'foyai sí vnlav.í,atunk \ itnysoszor ktelest úgy határoztuk ms:g, begy- optimális ieyy^n t-omM k<O,untuksorúd a hoffnzáh ftl-»«tigén pogácsa visszaokiás&amp;m a -300 mOsM fiziológiást megközelítő ozonba Siitfe eléréséhez. Λ kiszerelésben lévő 4.5-)-0 szacharóz jelentemen ho/záláru! a folyékony drog termék ozmoiahtásához, körülbelül 110<) ntOsM .Í^telaltfá^.éf«din^ye3^áibyáltóh»d'be«ítóáfet-^lktll. ; A; ImlllMlisi pxtrameten.kei úgy vatasAottuk meg. hogy olyan pogsicsat boztsanak létre, amely nem olvad viasAt vagy zsugorodik, esetne!) tiszta v>kk«oí etvdméavez pllo.O = <U étiekkelM> juM Nat 14c! vaiő tászául»losmatt, 14, péhlití Tri-nntigén drog ierniék ínrntulózád eljárása %y szemléltető 1 sceteiest keszamítunk, a.ne’v ϊ·ι joM \,ukc;náoé. pH o,o, 4,5% szxichzrozi és 0,010<> jmbszotpat hb-wi Zit,! tky ioszmíik kit nme O „ ·. ,α π movm.zntí a kvüvsuk n^b ^1 per 2 ml tuba, es bolUizáhiO az alább ismertetett dkho aikalmazásavai A HonKzsn p^gáesokza hlgitös,-·érként 60 mM MáCldzS elötöltött leeskendökkd oldottak v;ssz.a.

Egy megvniösitási mód szerbit a folyékony khz.erdésí a kővetkezőképpen állítottuk össze: ía> 25% szadin- :·*$*»· lOömM azukdnáí: pH í\ö, i% PS8ö-<h$ ΨΨί lett kímdsiaáiva K)t»M sz-ukdnátot, 4,5% szacharózt és 0,01% M8Ím kstpvs,|b;j A js^tóeíö :insit55yh«gu rCUAwHE. föPS^önjagátmwot· és CP8 krmjugámnmt adtmtk az (a) szerinti keverékhez, amis azután (e) slmlizáhuak 0,22jum szűrön keresztül. td) Mindegyik lloftiizáeiés dokit iHe&amp;söltöttfSnk Ο,Ο,Νοί.ί third leszúrt oldattak (?) Iksfiiizaltufc a 14, tábláz*» szerbül parante-terekkel. (í) iedog'V-uik, (g) iezártbkes (h) felcímkéztük, A Itdíilíijp drog pemtóket 2*8%'*«« tároltuk. Í4, -ábiá/sf: íioítUzádos mkhts

Kés kísérleti eket de..-ed hatíottunk végre n ható- és segédanyagok kiszerelési eljárásra, szűrés urán vi<,;,,m·

Svfe'tiZ un í of 'i,'1 AM í >t ik Ή "I'Ko -'H \ Hv dKiA'e 'M< λ < ki í Ό Eton < ' \ i <,s x Pn ? <„ \g koniugátumök komxmtv&amp;ok:! voltak ;.té0% a célhoz köpést) Ezért U-mpmsetisek Slíniártos vészáré-érésé a tor-mulázástól a Ho buzi fásig több mid b^-rutk bizonyult mindegyik kiszemelés étidében. Az vadulok detnzeve (DESIGN EXPERT szoftver alkalmazásával) a következőkre mit: in) az zQí'k;?; tiszttiyáüál nem beibivásolja ;»X'.*CÍfA« koncén! rációja a wo.gálail charás kút Issem belük áttol az: maoMmy dvzss (7öpg ml) -97% m-tdmálls inért tisztaságot mutatóit, és magas dózis tSkéug/ml) ' 97% m&amp;xim.tUs mén tisztaságot mmstott \b) a <.'«> da CPS konjugásnmok koncentráció befolyásolhatja az egyedi konjugruumok vieszattyerésél, de mindazonáltal a vizsgálati cíjáták korlátám beiül maradt és te) a bárom közti! egyik kompoítettst sem befolyásolj» a 1¾ dö: kott-cemráctö. Az eredményeket a 15- táblázatban mutáljuk be. 15, táblázat: Tzmmtigdn kfezer«k^-élewzés#ÍtotljAá.ötfc

Mái kiserlcfekbea a pH ? (S/Möl 6,3-ig mfrúbm,.* cél a 6,0)» a saukcinátoi <5mM - !5mM, a cél a lOmMk * pollszorhat 80-sa (0,005% - 0,15%, a céN 0,ÍH%) ás a szaeharda (3V0% - 6 0%, a cél a 4,$%) variéHuk a kiszerelésben. Az eívdmények, amelyeket a 16, táblásaiba» mutatunk be, arra uittinak, hagy a hatóanyag drag 1etmékgte.gr€i f&amp;ttt i !0)7-a6,?p«/mi), CPS-CRM*? kon jttg&amp;ttitn {i79,$*64,0|«gfwL} és CP8-CRM;»» kottjugálnro »* h8,2 10 Sí ml 0 «%«*!*< ki aumw a 16. táblázat. Trí*Amigén kiszerelés elemzése inaktív anyagokra

Λ szemléltető kiszerelési tételek adatait a 1és i 8. táblázatban mutatjuk be. Három ssmmiébetö téfdt 'wercl-tOttK ki. íöitöitünk be és UofíiizáitHttk a magas tkvisháí (PíOínt/mL rCífÁek 20öp<vm? CP5- és CPk-€KM:<.·. kom jgautmt és kutot a/ a.acsony dértsbbí mi >OitAw sOuy ml CPv é.-> í'{%rKfci^¥· koít}tiy.atm»> A Riskeselések lova! á#í kntmttmökm belöl varrnak a Isataság. erősség. nedvesség* kinézet és pH szempont-· jáb6i. b>s<ik«> «>'. adatokat alkalmaztuk a kbzejm szirtid dózisok be fogyására. 17. táblázat; t -··' ö adatok eietuzéss &amp; magas döxlsü kíszereUbekhol

i <S\ táblázaí' t M 0 adatok demzés.e az aláásom dózisa kiszerelésekből

, ' iák pébls; Trí·.antigén drag termék stabilitása

Stabditasí > Izsódat! eljárásokat se^ezaít k Itoídváít rp-aistigeti kozere lesek ka 'ételee Λ .ortos. hr \ í/azá-kü' eljárások a fordított lá/tsa kiomutoy.ana tpehhtd RfMIPLO sóit a/ rCífkw ckoa?gre λ· ίό-ζ'.ίο,ϊμa, e-· nefeiometrla a C73*CRM»; és CPfrCRM,*} «featgre. Λ Sioítlisák pogácsákat jTC-TC-ra. 25*C*s és oT'C-ra scan*. <-s V vvíic*s'ítc 'd<'ponN>*r.0s ea-STR/dik Λ pogácsákat ksktvetíestöU tesztelést megeíözóess oldottuk fd. A isii iri&amp;'ViVssk ;h'<' í'MitsSiCN \bUo>císí u k i.\m cíosaegdvs) (koncemduo} ás nviasapainss, es a konja-c it'cnok c <s5Scí.cíií'!í 11! j svn.kí-Λ ne· v in' s. niinis fon»,.bon való tárolás mán t8 e* ó, aha) V k’H'3í>> kan" «rnrácsojá* is íisniasdka is a CPvCRM;v/€?&amp;-€ 3A tm honomstmáóját (aajttgeökas). tneghdinwO.sk RP-HPl.C'Sci ás oeíeiostsdnOval akár hátosin hónapos üfósz&amp;kt® kermkik A Ζ'ΧΜΓΟοη iárpft mintákon vigccu honán·* regress,-h'. dem/.íS arra ni at hogy 3 romsak 'stabilak, tnkdmysn hat hónapig (8, cs 9. ábrás A mss-íSákai snind tsvtgas (UööS6*3d ás 06686-23 k misid alacsony (0()680--3-2 ós 06051(1195-2.) dózisokban inssídtök i k-Κ'Λ mb lázast 5.

ló, táblázat: 400 pg/usS..· rCIfAm*el, 200 og/snL CRS- ósO-'d- kossjsfátejnnkkaí kiszerdí Tvt-AstíísgóB (1.36086--3.-1) sksótUhsa

20. táblázat- 400 pg/ioL rOfAío-d, 200 pg/mL CTP5- ós CPU- koníagstuötokkáí kiszerelt Tn-Assügds (06686-26) stíslíOOáss

21. tábkteai; 1ÖÖ ftgfmL rC.UAm-vk Síi jsgbfíb CF5- cs í P8~ k«í*jttgáasm«kkaS kísxm'ít Tri-Auíigén i L36686-3-2) stabilitása

ÍJ. táblássát; 1 <10 Sig/mL rOlAm-A, 5» jig/mL C.P5- és CP8- koajiigáitimakka! kistereit TH-Aniigéi! {L360S1- 54(02:.1 stabilitása

Rbs.ií o vP'iti's < »g.<;h * ij i Csokit \<α<,λι f . k0íiu'£.h a s'iígu kt< A'tctevkR kikxonk s s OOmM N a Cl bigitih/crrd <<s inkubáfcmk voKshÓmcrRkkies kükvanözö akiig ék a i ~ 0. 4 őrs 24 <m a .U'svr.ío' 8 c'cauv'b.i. rCíOVo Os íb.i.: ..Iasi, is ( CPS-<'RM.-crOss^rv i?.l 25 tabkk rat). Maps iki/isO (400 ug/ml. f€U'A,*ít, 200 μρ«Ι, CM>CSMk·? és 2.00 Mg/mk CPS-CRMi*;) és alacsony J< '< tt (200gj ni ItAx. 5<lug mi. 0*5- ORM,«, ^ CPS-CRM,^ kí*«teki«*U«t vt/sulhmk Mmóket d«t&amp; a komponensek stabilitását mutatta 24 óra szobahOmérsekicten való kikabáiás után (visszaoldás utón}, ammi a Rí. ábrás láthatjuk. 23. 200 ííg/mL CPS - és €1>X- kaaj a gá totókká! ksswirdtt rkÁidigéíi {.06686-25) rösjd tóvá .«shiHtós»

24. táMá*»!: 4ító μ»ί«ϊΙ rCd'Am-d. 200$*g/»ftL CP5-- és €¥%- ko«j»wí'mssH>kkíd MsKweft Tn-A*Hígé« {06686-3-1) rövid tóvá stóhöitósm

|2&amp;.tófeítoít 100 fig/mL γΠ{'λ»μ.>ϊ, 50 kg/ml, CT5* és CPS- koajagáíMöiykkal ^ísxtrs'íi TmAa&amp;gés i i .tóídkO-Ai ípmö tóv» «sd>iHtó«a

f ög>4.v.4'i-vkΚλνίλ> u v'.dakka· . vettunk A «.<< Jurist) íü-AnfH'é» duu tórmekst (4(K> kg>mL Ό *%íf V í! id i *·%, \M s *<,£'·»« iü ni CA> >'R\t )nAHüf wgvtvtK U' pKdsas8s.«u<toak-v^uií.' 4¾¾ ?s . k μ,;Au-, -i SÍA<;' um-vs;*'' és usítós%rs, és CRS-CRM^P^CRMm erSssápi. -βρΦΚΜΒφ p«| lluxcitiíí'k (»vg udt>v<fct λ.' <.$><> v npouenv* ^um^mtódojdKiik ami ma mai. Osy a drog termek Smtáaava-gaj stabbak a károm dkk;»on kcrcszud il i. ábra. 26. íábíáaÁt|;: 26. íábláa-ak A* 136606'25 fe^asfiSíás^elolvassBtés adaíasöak ö$m*fs>gtóisHst

Μ, példa: CI..F VCkí'CPd MN CC tnrra~sn%é»í drog termők; <R \ felit?mz-ése S lC; \ \ keres -mtvlt/a tvt , tn ; h.vot us" <<H,n k r\A ktfejkszksefez váciéit sm; elves továbbá V ·Η'ΐ{ν- M* u ptco'tt l t,t nhw.t m I keik ( λ > tel <. s >s "-a n ϋ>.\Κ'ό.\! tekint \ u >, ot tgCk Wi λ címke nélkülire exerehhk (rwCóX'i, Λ CPs- es OOMPHCM,-. ugyanaz maradt a hordozófehérje x"- a .szacCaarió Ismétlődő egységek tekintetében. A drog lennék kokmbözé komponenseinek megvál-o/ása ment azis/iemaukus ex racionális megkiVcUlést aíkaimaammk sí', áj tlmg tennék loiermlszasaho·:··, amely koropatthílH mind a négy hétébnyaggtb A fotrmdázáx elolt oikj/íitfi. «.ózv tartozott tz <mf mmel e le n\ a. í k w zlez k< '« η-Ίοη.·».-! .mm-.-.end, kuvakstas; <t so cmta/on ,s >g térnek stab ‘na < mik >'\ teb, , a \v>\n« vU' ί 'ífuki a krszere esi <. ,n.'> kik ,%, izsr \ vizsgálatokat &amp; kővetkező dózisokkal íervezini· : 5 >tOU4íiO*'OU ?U0 Mia : IM-CRM l"OR-C KSÍ .éx

20ö 200100 ifid tg mi. rnOliX Mi A UC-CRM B kóla lkai jellemzést végeztünk tohb ortogonális módszerrel {Cirkuláris Dikromm-s, timumszcímcls, kapilláris differenciális. szkstmelő kaim ηηηΐτη· és OD.-.íO az t-ChAm kél tételén í 1.40(84-77 ex 1..40756-20: mátrix: 10 mM sKukcinftt pH 6,0, 20 mM MaCH és az o»ClfA kél léteién (1.402..27-.10 és b4o256-zS; msínx; 10 mM hssz-idm pH. 6,5). A kapott adatok a kővetkezőket -nutmvák: i) dsszohasoMilknm a? íOHa?» és rn-CIIA, 2i létei-ιοί léteire konzisztenciát mindegyik rClt'A konstrukcióban. ét. .V; a pH tnunkataftományl a jövőre nézve.

CukuDris Dikreizmuxt (CDi athanna«unh zz rCUA külánböxö vételeméi .-.z oss«ehssonlMaása pB.ő.O és 7.0 énekeken (12. ábra), A CD szkénék mindkét pll-n azt nmiaitók, hogy az rCJt'Am éx r«;ClfA ΐΐχχζρ:dexaiett; kleknek hasonló n máeookígo N?erke.-eie spekinimok auedexe aaipjan. i'meiíett eivégeztiik a fehérjék CD ^olvadását ivog>· Osseehasoniitsiik a letelek hóniérsékleti stóbiíitását a: pH függvényében. A 13. Ibrán iétiiafó erednié;ivek sara mainak. í)Ogy mindegyik tétel éxxzehastsnii'iiiaiéi a más^iagos XKsrkezele íekshietében. Az eredmények aiea H otaitakx img> a pH f,0 - ",0 az xipítméHs förtnnlázátd tartomány ezen edjitriis ttittpph. A saját tripicdVm iluoreszceneiát alkalmaitidt rCIfAm és xwClfA íta^edlá^a- sxktíkfe2éf^6k:^i6 la^ntácié szerzésére. A két pixÁetn téieléít Öoottxazceneta olvadásnak \etett0kalá a Ütés megíílSiipiiásáfá, Fontos megizgyezoi. hogj· az rCÜA kél trtptofám ímtalmaz. amelyek fehérje pgyiniamm Ni> tkanénjében találhatók: ily módon az eljárás iKíátdi erre a régióra lokahAiiédnnk. A 14.A ábra Akt mutatja, hogy íií: r€MA teszteli tételeinek össznSnisoíiHliiaté a hótnérsékieti síshiliiása, amiböi arra lehet következtéink hogy « szerkezetük ;x Itoxt-ialö. kítixo fiuotexAxnem oivadasokal is végeztünk thhb rCiíA tetelets cay hidreiéh festék, a^ jAinUíno-HEiaftaién'Xzalftmáf (ANS) alkalmazásával. Ahogyan a fehérje szerkezete kitekeredik &amp; hö-mérséklef emelkedésével, az ANS kétiklik s fehérje újonnan eiéketaiö hidrotOh íhiíjaihoz, növelve ezáltal az: emlsszióx inttmzfiást A 14.B ábrán a? z\tsS szignálon alapuló olvadási hőmérsékletek hasonlóak a pH ttiggvr·· íiyéhen az összes tesztelt protein tétel eseté per Λ DSC adatok magén .st tették, hogy az ό'.ΊΓΛ összes tesztel-tetejének az olvadási hSmérséÜuie haxmsió volt a pH Ihguvétiyéhen (IS. éhre>,. és hogs a pH v-7 eg> ió taito-ntány a lövőre nézve. Az OD Is alkaimszíuk az aggreg adó tuontlortvssáta a hófacnvéklet én pH logevenyé-ben Π6. ábra.}. Az rwCIfA 1..-10776--29 ;.z. téléi ítnáirts: 10 mM hiszi id A pH 6.7Ί olvadás, ·. -t pH fílggvétizében azt mutatta, begy aa egyedid! aggregates esemény ez.zei az eljárással pH -i.o-en voU. Két drog h&amp;íwnvag teteii -. -*'75n-7S, I 40»:o éA a kai uozmnh az rsC.' \ Olyek-e'x stabilitásánál megália-pilására a pH függvényében, hisziidsttben SAakoaái hehen. Λ kiszerelések -KK) pg-rnl. rnik'llA, 10 mM hisztkim (pH tartomány 5,5 - ?.?>, A5% szacharóz, és 0,0111¾ pniRzorháí 80 Ossitek-tclik-k vyftak. Kel további kiszerelés iö v\l ^i.k. o a >t, pH e-,5 n vrwa' dsstwfc>\orls\ d dpp}* a htsmmmk pll «ο, e\ !<> m.M iVszíhtot, pH 8.0 a osagae pH vizsgálatára (mindkét kiszerelés tssrialmaxeal 4,5% szacharózt és ö.(H%FS8<M). Méretkizarásoís HT’LCo aikahnaenmk a? rmCIfA hotafát-ártak myniíerotÁsara hal héten kérésziül 25°C-on. Az eredmények arra ut&amp;irnk, -6,5 snsitaha a Hgiisssísbb degtadádés sebességet Ttupd a -28. «sitid a ΑΡ sz, léted esetében (ΓΛΑ ábra), Ez. a sebesség összhangban v«fc« szukaná) pH 0.0 kiszereld,sejtével, ami ami bbií, bogy a hisztsdin .ugyartöiya» .kompatibilis az rnsCiízCviil mint a szadidnál, Ezenfelül a* ösw kiszerelés pH-ja stabil maradt 0¾ nem volí aggyog%abdp5okfálhafó OD^m&amp;i&amp;spíaz egész vizsgálat foíyá«t§tU'l?.8 ábraj, Í7, példát Tctraustitigen drog íerméfcCMatC jelknszése

Ellentétben a? CifA-vaí, amely képes Indviizrovl degradálódni a.·? MmC dez<nnidalu-Ja.e.xa! degtmkkxhk ily módos fontos volt sxteglsauirozm az MntC stabilitását a pH-h tartományán, Az MotÜ-vd végzett saját Idpiófásv iluomszmtdds kísérletek arra utaltak, hogy két tó esemény következik be, 1,..1 » 4is - 55:'C és "{,„2 .«= 05 - T5M' t!8 ábra). A T1H! követese pH 5,o és 6.0 értéken voíc a lepmas?a*.ihk amit a pH 7.0 követett Λ/ adatok pH 5,0 - T,d mtttikatttrmmányra utaltak. Végezfönfe I>íSG-t ts az MmC reprezentatív tóteldve), Á szemléltető temsogrsm isink két fó termálts eseményt .mutatnak. amelyeket tovább íéhét dekonvoimáhn (19. ábra). Ás első olvadást hőmérséklet ().„)} követésével »yiíván«dó, hogy a pH 5.0 és 6.0 rendelkezik a legjobb hőmérsékleti stabilitással, amit a pH 7,0 követ t O. ábra). Összhangban a flnoreszcendás eredntényekkd, ezek az átlátok pH S.O - ?,0 munkatárson)ássyí javasolnak Az OD-*: adatok is alátámasztják ezeket a sr-egtn>yeiéackef (Ό ábud. Λ dezamsdáoö eíentzese lEX-HPf Ü-vd megerősítene. bog)·' a magas pH és magas hőmérséklet fokozta az MatC .dezam s dácsájának a sebességét. 1.8. példa: Tel ra-rnntigén dnss; termék: fortnsdázAsi lejkszíés (puffer) A fetn k-meíteiets tri <inhgé« kiszerelésekben a C05 ós (. ΓΜ kosrjugátuin hatóanyagokaí pH 7,0-es ukeeutban ti ríossíottíík X s-zubenun pattéi ,érd.-jer ». »st se mn biztosit m praVer-kapaeisast sCe\<. sv, >dd pH-koti. Tehát kísérleteket végeztünk O’5 év CSC kotuugntumokkaí 10 mM aisz;idisiboss pH n.7-eo áiru-kiszerelve. Mivel a hatöímyagok mm iizü-ödnel, jói nHO.Son. am; lassabb SZá-ést és&amp;kömmzáit feltétje u-vz-teNeg. .rodmétne ~ iv’t"m t*· ' ι!»s >\ (< t (Oovisaciö a' <> b\ Mttt . boo te t < vr-re- rekssek bisztidinben való kiértékeléséííek, az sagvötttetöség érdekében. A píoHormstláz&amp;ss jeflenszést vtrvgak«okbo: tneghztaroztuk azt,.hogy xt·' mn'lfA e\ Mmk'pH rntinkataiio-tsáriyti pgyarlrtt 5-7 volt, A: kpnjiígátom DS ntáírts ategváltozfatása bssztidinte szükségessé tette ezen puffer-rendszer és féke lesei o drog temtekben. brtekebák az zttí igenek degtodáeit>s sebességét tetra-vsmsgön kiszeteles-ként a? te» Sugg sem ebi', .egy nopaiiap-bi.uk uz v-tái-m,- > khzesviési pH-t KvSetesi kKé 'eteket haitom»;k végre a fsihktnkíív am-ttp kiszetelcsben való szükségességének megbatározása·;:, Λ ftoftitzálasr.i elére tekintse ál&amp;bi!tzái6szefe.kat éstöltoanyagokai ersékeirítok az at-iigértekkö! való kompatibilitásra.

Magas dózisft létra-antigén kiszereléseket áíibotímvk eló, ametyvk 400..-100.200/200 pg/ml. fmCIDx MtdD'CFO-C'RMw^CPS-CRMjvs-t tart&amp;lntaztisk, a plí függvényében hisztidin pniTerben. RP-HPLC-t tiikabnazttsttk az ro?ClfA proteitt dssgradációjának detektálására, és II-X-HPLC-f aíkalmsztunk az MntC dezaütidédójának desektátátára, A 21. ábm a két fehérje szemiéltelö kromaíogtaminjalt ma tatja be és a:-:), t-ogy iogyW) nomtotr z, >- szók i <- d.g ;,Hi v : ,s>\ía Λ» s*«<'HA owten a haMso’ p ovst o < ík mek sió vhe< e évocs mellett jelentek rsep, snsg a,· MmC eseisss a dezassndaís csúcs e fö esuestp Ixsir.) v^H nx gidai into A ,M ábíán mindkét protein degmdáiódónak nsolaíkozott idővel 25 'C-on. A KtNzerelesek siábiiitászt 0. I s. 2 beuc mtJn«o'<'?tuk 2-8^-»«) es ö, 3 ' napié, .d-'C-on, 2' C-on az.

rwCOA 3/t mmatuv tmgy a növekvő pH esőik "mette ..¾ metem h s\hasának a sebesí-éeé; (52 Λ és B abrak kezel elleniéiben a npvek\ ö pH csökkentette az MmO dezamidáció sebességét (2 e.C és I> ábra). Mimiké' roechaniz-πηχ s'woHívíí 'x<m vypnrexxrali ^ S t -on bm a pH-teg^o Ox.n * χοη )<,Hx‘ \m M A CPS- ás CPS-CRMjy; konjngátamok antigén basái kötönbözo pH-ko» -MóC ex ávC-on u-HétouKifta alkalmazásával montforozíuk. 2~íT€-or! znkKlkéí konj&amp;gámm megtartotta az. antigentiását s kísérlet 2 bams időtartama akut <2? A és B abrak 25'Oon a CI^-CBM»** twnt mulatott v&amp;tassr egy bérnél, azonban a ORS-CRM^ megközelítőleg 18% csökkenést matatott az nnheensásban pH 5,5-1¾ (2?.C és D ábra). 19. pékbe Teínt-arttigérs drog termék: fortmdázusi fejlesztés {tftbósmyag} ddOnfOCvjöOCÖO ue'n'iL rflfClfA/MmOCP5*OlM ^.-ΌΡίΙ-ΟΙΜ=<.·?-* tartalmazá kiszereléseket teszteltOnk i'ilt'vi* << 3 t, íxek Λίΐϊ <r ztak Π I s x/ádm. " 4,Ά ϊκΊγ- >> < -> 5*’« . νιη,κΗ p\ χ/unhat <\ *t , mmmltol H - néhaié A. 5· 5'J<. gjtem t’\- behálóz·, 6' gUeio ΊΜ behaki/t es ")-5.5% szaehato/t BSMi 'Kdhui

Mhrdégyík léí&amp;esfbtós taryipiazptt IÖ--mKÍ6teidint i% 0.0 f*« poiiv*>fbát 88-at (a %es kiszerelés kivételeit <X a ->,s>szvtdv»ek ρΗ-tái 6,'-uak menük Λ kix/m-knk ahkvott,-át áss itt tik áhbon tvpz 4 2 ml..-es imáikba Flurotec'beivoftfeiO 44?2·5θ dugókkal és a fiolákat gyengédért ráztatok 6 napon keresztül szobafeömét sék lete».

Egyik ΐάΜ$® Míám toStgailÉft^io^r^eséM: növekedési az ággregált IhítRákbsn (2 4 B ábsxú. Az ozmolaiitási mérések· kitnussttták, bogy &amp; glictiHartaiffiy kisatmiéseknek-a. tszMétgm 290 mOsrn oztneíaitóst tiíeghsbadó értéke volt (24,A ábrák Á visszanyerések N98% voltak a CICA és MftíC, v95?é> is CRk-CRlVbiiv «s >93% s CP0"CRMs>; esetén, ami tatad jóval a vizsgalati eljárás variabilitásán: belül van. Az MmC ílezníítidseipjúí πκη} borozó SEX-HPLC elemzés növekedést mutatott 0 nap rázatás után. ne mindegyik kiszerelés f jsoukt xvbe e.e>xx. f"t1 non, et z un Sva hr ,.. egy 1 ado** "vetpterts spgv ruspanr- «.umhusatm xetn íuv'tolta xgymxretsa a tblxatnat.a végeA'ót; .>z MnA és >->>CsfA R1‘ H01 C esnnzv·..·' xetn mauaou arsgiiiOkans vakolásokat 3 iuouHSvgrsmm protlkil t\ai, A gbcái arsal-uú udraökat kizártuk az ere ipsémmé Sültek iisté;arél a magas ozínuSahiás tniatb A szacbaiózt, tr-'balozh maratavít v» glSx-av. énekehiVi S Sah Uralt drrhehekkém n a SH!. táblázatiba s anerteteít kiszerelésekkel. A kir vese leseket S'.oOhzáHul·:. és íuindegyisi·! teezteSttti. stabilukra 2-0"C, 25<:C ,v.:'C és SO'C-on, mapae dózimk OP-HOLt.' adatai a 25.A ábrán nem uratatíak ΑίίοζΑ egy .hónap éltekével Sl -ttí'áC, 25®C és 2?!X''an 'üA >n n rujCijA xtkxi n mtiott az . xe xü V»'3vah»n. x' >* tn^mntp! vaxbAtoz laszervlés tnunuta a lei,·.· nagyobb változást. iAuelleit ttz MntC «Isfi válksties k nvtgnövekedett a marmitoi/sxaeharoz sisze-'elévbeo Az. . Av >l\ sesiCteb'is valtoz. \ «ab. rk <*. t«OHA c s»o s 3.»w«svO\lvn. »k, . 'nuutnl ".\íi' kiszerelés·,, nmeteken .¾ legnagyobb vake.vxt imit-uv. £5 B ríva). 2*. táblázat; kiszerelések

i£X-HPLC-í is tdkdmazhmk az Matt' minőségiek monitorozására. A 25.C .ábrán trmagats őözis 24Πο*ΐ* 1»ifchi mintái ttom mutatnak semmilyen változást ti kiszerelésekben egy hónap éltekével, A 25 és 3?'X?~*n tor-tett mimák hason iA etedm&amp;jyeto produkáltak (nem mutatjuk). Azosharr dsÖ^C-on miod a magas, minő aat*fe< crony dózis ,¾ legmagasabb változást sóddá: .5 mannitol ^zuihardz kombinációk profilja esetében. A CP5 és CP8 künjugátumok ne tV lömet das etvdntvuy·,'; ;;cís matattak x'mmtfyen változást e.z anttgem'üshan egyik isó-trétvékkoett s.e'\teg<. memodtekv. .el Mívd a szacharóz v<dt a fó rxumefis-idbil ezekben.·. Msét letekben, 3 hatóamto: máímokaí állandóan tartóit :u m-vl hiszi, leimnél, pH <\5 és O,0b‘« PRSo-d. es a ',0 · ód!’-·» tartományban változó szacharóz kosKcntráetAkkat szénátok kt, ο» kolstb\sk )k, A ói nett .» tan'··, v d~oJie: v - . v.ítt&amp;v lep** szatsast klem, kmeze es ''edvm-.-eg-¢3r«a'o 0 toltak A teszt etedmotoe''ara .taí.K. iugv a tn mi ,en kis/ 0 Anti ben alkalmazott I o . οζκόίο tóz k\-neeníradöbartOBsSrr elfoga-flnm volt a u-tm-sóimén hiszem lésben :s, 20, példa: Tdra-antigán drog tömték; tosmiiiózast iVj levzí és (poliszorbái 80)

Keverési -kísérletet: terveztünk is a oíszosImí RC* •'.tPseg.sveemk toeehal eozzdva *♦ *' i K >a vies se* boszinssögámtk Isíazoíására, Amim a .28 táblázatban tsaterfetjnk, monovabns és SA4ag kiszereléseket értékei* tank 0. (M).| és 0.03% PSSÖ*»f. A mintákat altkvotokok Schott type l 2 mL-tfS fiolákba fiuroteu-bevonatos 4433/3Ö dugókkal, és keveitettük 21 mats kuesztoi «i/ohihoMiersekteten VWk vertexes' hesztdekid (Mode* IX Vódk) sík) PPM jMiízato stav; X-zn kasét! komo diókat vobaromemeNlehs. kdreztimt-, % mat a a késés» mintákkal párhuzamosan. Tbhb fiolát összdintötíártk az egyes kiszerefésekbíM és elemezték. 28, táblázni: kiszerelések keverést kísérlethez

Az antigéin.h koncentrációját megvizsgáltuk visszanyerésre a kevertetés után. A négy ani igén egyikének adatat sets utaltak keverés utáni változásra a koncentráctóban, demonstrálva. hogy rtíttes veszteség egyik mintában set;.;, bdéérfvo a PSSO-a; netn tartalmazó mintákat is (26.Á és B ábra). Az r/oClí A és M«i€ tisztasági elemzésé RIMB'I C·', Ί í err mdvUoít séf.-vast vgs k letérje eaCU'-'x 1' sem a késet n utat» tds <' áhtat Az Mait ttvznwi-p IbX-UPi.b alkalmazásával hasonló csökkenést roumtott <a dezmnidndé mise; t tnonnvaieiu kiszerelésekben,, am;kos összehasonliiotbik :t PS80 bzimeitet (26,D ábrák Egy érdd-.es megógyeié* az SImC IHX-MPI.C' tisztasági ad.trdbast az, hogy re,i> η o '< * le t: s k i,:< :'ei ésk-érs; a degradáció tárni megfelel &amp; de/amidádónak} sebessé- ;Η· azigoínkáss·^ íKsseifiisoriíítva i·.? ietra*ai»ílgéfi kiszerdealísí) lévő MmC-vd. Arra tekintettek hogy sí". öss/ss fe-renfk’sfe &amp;/->íHn volt a pikk' n msv kmm.ecAS, h<-η a? MmC kokspniiatasba k*p eg> asásm aftisgáiotd, >n«.i lelassítja a protein tetanifelbiíinak ;s feossfel. Λ kUrzt-relásek pH értőiéi n/mn·!! áUantl&amp;ik maradiak '26.H ábra}* és a/ OD;<;, mérések «ess lártak Sd í-ovdmdfo;· a/ smgmgikiobsm a keverés után (26, b sásra). ti, péitia: Te tra-aa ligán drog lesssék; ÜoRfeiás

Kg> ΓΛ 5ΐϊ=ΐ5íssrsis-iííís MixiulztCv oslieseiKd morssíng Cak *x vkr itnDSO kávák-se' dl-dm&amp;znid ö ho6-ifess olmt a iiv fek kivetek s> áng a icon; aOo.os ekfetsek, eik- n/í^u, ,i ΐ ' u,mck"6! „ 29 u feal-baji sgáisoíunk be. A 1.44130-3^- i ár 39-2 ?z felek képviselik a magas ás sífecrny céidózísá, 4.5"» szscharó!! tartalmazd kiszereléseket, A L44 :3·)·«5 sz. -étel mánál keretezik a szacharóz koncentrációt ás az exoipienst 3% sags m- ,, me-ftn> o^Kn laitslma.vák IVek a í makik ,»144 30-39-1 3?, sete) maps. ^ fesüin »Uv > a i avu-ro CífA CPS-ORM »·> í'PÍO< RA·,, MsnC I··o eerasvse. asm* va,<'o ws >m t '0' » o> -A'M, Mnuivg; ’k os/em m T/ értéke -33 - -.fee volt, ásni tipikus a szacinsrógra a ;>zakinidak>mbsns iaközöUekre. 29, táblásak 8 toszereléseU T,,' «iáméi

\ obVi sí 5 v ΐ.ín k ! <' 1 í s' k nb,n'/asi o sí sk 11 \ íí s íva ícir λ ív < u iíü\ k árum ,! m sokn? a unn u n }f\t . J m /nra, fem,n s >\ívi< mtva-a'aht^'.v, som a iiofjiízaa ,-,¾ *, nedvességet szívjanak lel sí levegőből. .3 mán értékes a 6? "0 R.' tartományban sokak, ásni npíkus cm, szadni-toz kiszerelés ecetefe. 5«. tablá/anjmítlt/ait kittet < fe-k \ k wert»' .......... .......................................... .. „„„,......

\ lk ilnácis oh u, t i Wo< fv>g 5' í C\ Vk ti íhlÁ/n okim slap I x tv 1 « ku k'v o 1¾ Ί ím. s ló volt, mlixífeso szadxmö/s alkalmazott sdífeyagkdii. A 31. kiblázar definiálja a létra-asnígén kiszerelések Cíttón:;Λ·>á!'a alicafin:u:oif lioi'ih/Odo^ cskkss laru-snílpjaít. 3í. táblásat; bofsth.á ('kis vikhs;, pars isiét kirk

Uonitaácíős vtas«áfe»«ok»t Yégezblnk a következő paraméterek Összehasonlítására; 5 -k:>“>·> ssaciwróz v$. 4f;>> nmmutoi.'ihv szacharóz, és 2. konzervatív ouhíizáeios ciklus vs. gyorsabb. agresszív eikías.

Moauv&amp;kw át\ig termék kiszereléseket e* teirasut%tin kiszerelés mintákat is énéksiUbtk, Mindegyik kisxe* rdés 10 n-M hisztkiíot. pH 6.5 os 0,0 Γ';, j-ShÖ-: tanninm/ott. Λ dózisok 400 μ ívni L retCífA és MtrtÜ, és 200 ug. srsl. CP.1* és CP§AVkMív·· konjugatum önkiik i iöOOzáiás dd:i es utáni .kssivifeiési-kvi hasottHiottisxtk össze a sose. , >0 s ,/> lse í , í v,e-s\ . k, kras„\;‘\,0 \s szil, pH, Π \ HM 0 Miit»' Oé *im 'Hciota, RP Hd π \μ g; és r?«CÍÍA í;\stií.v„iéra. aeisionuvria a kopjv>ik;a;v-visszünyetesí<.·. nedvesség, OD?w csapadék detektálására és vS<loxiK, s/kenniiu k< >rs nzu!,i(DH'i λ·,;savé? ettíkeió>i ' \z t ί na* ott sd om'Lü a 5’ is,knv ό úi a 35. táblázatban ismerteti tik. 32. táblásai; bofibsneiíS i.okRos paraméterek thsssö ciklus)

33* táblázat: SiottltxMös dklns paraméterek (gyors dklits)

Λ pogácsák kinézetét a }4, táblázatban émmieuok. Minden mannitol-tartalmú pogácsa vizuálisan elegáns pogáesát eredményezek mimikát eiMnssoi. Λ szacharóz kiszrrdes·.·,;!'. a várakozásnak me&amp;fdeíden sdíooaíihmó pogácsádon mm attak ο Ικ-ζζζύ cíkíucc'ik de ;i tö’.id ae.rossz.iv ctkhs részlegesen összeesett pogácsákat hozott tófű \ po K'^a v 'saim oh öcs suták kg ; ·.-·/ íiuk ' *\ I .ísCC'Kk's ' i°, ·.hí. \ inban í- HkionOok íO!M)íU mm ír a1' dók to aka.- nyabb rsed'.<ss<.gí<>; ah) a a <. <. H i\ m t nm.ug.dur &amp; o \t'0? Ό, A/ RP--HPl.C illesztelek &amp; á'-’.Á ábrán nem mötattak xálíozáái m: seb i;A da Moth tim'hmimiom: o Ιμ·%«Μρ didi: és «tán. oá o ne&amp;snrnetnás eredmények sent tártak fel változási a tJ'5*€RM197 f2?.H ábra) es CPS-CRMI*?'? O't ) Huenitaspb.» í Íiollh'í i tnr hgsetk' ul a <>’ kv ságx ekcjps.t <<i \ ' Dm) tm az demonstrálják, hogy a demmbdáls Msl€ Ionnak megmítrcidmk -2,52a szinten a ikoHimd;b, után a tetra-i-inogén kisderedé» esőiébe·). A pH ugyanaz maradt n UotHbmie.s otán. és m detektáltunk említésre málló növekedést az t)|>,^ ertekbe' egsts houhzált'S inán mmtabun se « « ti &amp; csapadék .hiányára utal* Rasies mtsgjegyeatní amn^ batt, hogy ez. 01½. nem deteklága a kisebb oldható aggregátumokat. A. DSC adatok arra utaltak, hogy nem volt szerkezeti perturbáció az antigénekben trwelí.A és kiüti') egyik etkkts eredntrayeképpen star, amit a? o is adási nomémékbock sához/ssnak hiánya bizonyított O? F ábra). Λ kotthigáiumektd nem monitorostul., mivé! azok nem vídtanak ki erős <>;vadast szignált Vegézcbll az amseinek % i,<; afr$ -visdv hatásosságát összehasonlítottak a t < i It mis» e öt. es mao a 1 un. nt\ - .- >,d m Ημ a >ti Az omt' :-\ t ·. s sgaltttk monos a len e* Mm rsmvn kiszeniiOsK'n )¾. rk a kotsjugátuínoka; csak moaovsiens kiszerelésekben % szag.átok, mert &amp; Mm-uotmen kotnbi- rtáeio .A'rmékdinerfnoítetáf adu;:. Az eredt «enyek -t...s tmttaitíík. he·;;;. az összes stzsgfdt «sima (majtniU}! es szacharóz.) jóvai a vizsgáin? t djdr&amp;s hibahatárán he in! volt, amiket Awzzdv.umrditonuk a hoóhzáhss ciódi 4s utóm miuiákat (ntmd a lassít, hisad agyőm ciklus esetében), és hogy a? rmCl&amp;V £3?.Ci ahra) <n. koajugátumok (27.H ábra} stabilak voltak ezen kötlSitnónyek között. 34. táblázat; ropogó estik kiné/t ti

22, példa: Tetra-aísiigtb) drag forrnék: visszaoirhh Λ s'" ), \iu hfgiioszernek t >> mkt NsCM .<;!.(· * utunk > jAetö a,'V>' (Wt!) Λ ,’S, abta azt demonstrál' m, hogy -vaukor ezzel n hu tows el -kijük .« -,j. «tud a run-as t4ód a(jO 200 200 ugnjL rmCífA Moh' t'P> CR»M»5.^CI>8-CRMj$A mául az alacsony (200 200/(00000 ugónh r?«GtA/MníC/CP5'€RM ^dCOk-CRM dói'is a fiZ.kdégíóS tadoma-vyhs esn ozmobéntá',; m-av.-a, Á v isszíKáo.i.ó térfogatot 0,7 fttL-nok választottuk, ami 0,73 mL vegféríogaou emímé-nez.

Nbutan e-O trV N,i( i ni !'./,!'ó.,o.gui<, ia m',-, cs alacsony dó/un íetra-armgén vakemáküt tariopuok stabm-tás: vizsgálatokhoz a-GC-on és 25®C-o« -18 órán keresztül. Á 30 A ábrán khö adatok: azt mutálják, hogy1 az Mu?C Rb HPi.O-voí :ioie.\t,s.U s.vtasaga Adto/atla» maradt 4S mán kip-es/mi 2-íOC és, 25"C-om Az rmOifA s.röii tói: ?s ót t' I uizae: d . S'? on, A. gv η» :i:,zfz sg <,.-ύ .kant .: 24 óra;- időpontban tdAB&amp;ht v> Π ,V HPLC-t aik.iifn.ummk az Matt osz:usógát?nk mtmit>v<j zására, amelynek »csökkenése a tiezam Idáidé «övekedé' \vt j.ucnu id'5 C óNuk A ok u! i 4abü nv <,<k e 8 ·Λο« '3% notntndh.s tisztaság-csökkenessd. 25 T-y« az -Matt stabd maradt 4 óráig, de vu'«;íik\t«\.u) csökkent a tisztaság (00® o aia'í 24 eiidfóveí Az adatok kinetika) elemzése a kővetkezőket mutatta: 0,03 7¾ gs 0,26 % degradáció óránként 2-86Γ-οη és 25'Co« az MmO (20,D ab; 'i, és tgöi 'a es. 0,1 ó ®a dogs .«dues,» Ο) Ζίό-ο.ηί ,'.8 V on és 25' 0»o« az tzm'itA (íö.h &amp;h) vi esueöett Tovább) ΐ|^,:#'ΐΐίΛ.-Ι»^ az vliozoO ©gyik kómérsékisipu som 4 8 óta ebé ti ev el (3Ö,A'Í> ábta). A píl is stabil maradi 48 órán-keresztül (30,£ ábra). A oKctna sksbd maisat a -víssstoidás után 4 órán keresetűi szobahootet-ek.eíen e. akar 34 urán kzfcvuti ΒΉΤ-οη, &amp; visszarskiiMi vakcina mind a <4 aní igenjének demise alapján, 23, páida: Tetra-ssíilígén drog sens ék: iiafilktáláí »i&amp;m Λ tdra-aotigv-n ksxzerdasek botíÜssáiAx auur íb s> ;z neo-visszás'!} érésé· ekmoztSSk kés · izxzísksKorözaod (két :ípapal· -h kés skvz oov dózissal k dl·:}* a íblviPaJt U'pmikizévó.ik xzioéabok töiuSfsd 6- iü'Sns/aiaxbd ;Hit A >·· \ „, :i vsi'sv. azt muiaoa, kogv sn'í'ki vök uAztevg >'>í\ sk «mí^ssiPOi von a Oüíiíi/ahs uí&amp;« Hasost-óképpen a 3 i :í.· és D ábra a;tf: psüiissfja, Bogv nem vök vsvhíí»is stö. rwCifA vapv MnlC í.i;i2.ías;*giibafi a Iksíiikzáias «láni min* sókban. 24. péi*3a: Tseira^gbέΐρβ drogknosiék: kiszerdéssiabíSSdsa A köveik^ teíra-aniipí} UszorcSésekcs tesAékök: ÍJ 400/400^00/200 pgmsL t/nCifA^MmCAr'Pí'CRM^-'m-C’UM«·., •2} 2*>0/200/i00?t00 μ&amp;ηιΐ f«CifA>’M{aCA;P?-CRM«%.vCPB^,8M,<«, vap: 3> 40 40 20 20 ag mi spjí'O'A MmO 0P5-CRM.<r OPS-CRMjs-ssdóikava 2-8vC. 2^'C 0* X' ( -nn Az (h <a <v2* kiszerelések síabiktk snkak mmditdrom iwnwtsík'.zten oat hónapon keresztit Λ O) kRzeiek's " hon,apó» stabilisai miíiaa<Mi 2-8 Y-on O 5 iadazaf) Az ebben a vszagcYn kan ss Ad mazes! ssaseainagíík az I4d25>v30 mCíi'A stetra-anogeo topivzeoiaiiv. isseik L44124-64 MmC saross-antigén reprezesoasiv sates}, 7CF2C-1002 CP5-CRMto? {heíiinsgéti reprezentatív téld i és<i-CB-3-9 CPE-CRM;:;* {Is j-anssgéo rvprezetsia·; v lései} voltak. 25, .tábláxa&amp;A ietra-smtigón kiszerelésS4ién»pös stsiMi}Sóss(3)

Á 3&amp;, táblását ismerteti a stabiMa* vizsgálódra sllitómtsxou tcirat-antipn. byfdtzdi híaz,etdCdekíéíek'sí,

Mi fáid&amp;nU; A stabilitási via&amp;gáiato&amp;UaX' alkaUMaxntí: kisxmd&amp;seRisíxserbíiése

A 37, láhiáasit é$;38, táblásait 6 hónapos stabilitást adatok összefoglalását imastja be rendre a magas és ala* psfii> Maisok c$etá«. Hot hónap eheitevel msünket dóm megtorlóba a pogácsa kinéstsíék gyorsan víssapoídó' dód a H> rovottéi, a ;>H 0,5 <U m,r s^i e< a nodu'NMYMrtjlom megmaradt' 5 ;>'V Ae oaCito, MmC kP5-CRNíi-s; ís v'Pd"CRMs·)'; erőssége rusot váltomit. Baic'ik'U ax o'sQÍA és MntC sív.-asáp én ékei tcegmaradiak a t é -öli hmvMvr A tett a a r,uA ’ nag,» *,·- ra s< r> do/kas ’> '?eiek\ek ah »n„„ m utkotUs. &amp; Κον,,ο" \a és gyorsítod tároló:;· körűiméi· vek köröd három hónapon keres/iül, Hasonlói:éppen a kivételesek egy máxvölk oi( a i λ < a dóm vk-u s,< Ηί·Η,ο ! nmm j : k\ ,y\ s. t?'Y~v>, h<u {o;)y^,n k<.fevUÖ <,,3ö tobkvet c éíí>é íáb í: í í - á#»:íksí<i ΐίίΐΐΐΐéjíe íj m|y? |:é|í: j íss^í-söÍ| íáíxyMííá í4^«?= Ϊ 2 iíöti

A Hoddzáh drog termék srddnx ihat hónapos stabilitása 2-8:C'-cr; azt matatta, hogy mindegyik tesztelt paraméter ugyanaz maradt a vizsgálat tartama alatt (41. táblázat). A drog termék mátrix lavasölt tárolási ideje 12 héaap. 41< táblázat; Tetra-antígé» drag termék mátrix líoMzáh kkzerelésö saíL44í3b-5?*;2)

iiofiitz&amp;lt k "s no <m s t mskok'gí 5 magas do/ru d ΉΙ Hl <9-1 s éa * ζ„ m \ <. ars·,, d 4-d V ív „/s k^/ere-léseket visszsoidoUtmk (k'? mi 60 mM NaCl hígítószfcrrel és teszteltük a svibüikdár 3.4HC és 25'C-or,, A mintákat t''-0,4 és 24 óránál ekme/tük. A ktinkus vizsgálati eljárások a pH. rmQÍA tisztesiig RP-HPLC-veh áfeiC osztásiig ITiX-UPLC-ve!, mflíA és MntO erősség lfcX-Hn.C-ve! és CP5/CP8 fcotdugámm antigenitás nefeiomatrióvai voltuk. A degradáció roonkorozots fő mechanizmusai az m€!t>\ protein hasítása és az Mull' demnridációia voltak. A ,12. A ás B ábrás msiKSkét refcömhtnáns fehérje tisztasága megmaradt 2-ÍP’C-ott 24 drib krevriíl msnJket <m, tsban A >5 t-os inkubációnál mindkét főhet se mUozatiart .maradt 4 óráséi, de csökkent 24 óránál. Λ proteinek (42.C és D ábra) és konjugátumok (32.E és!' ábra) erőssége, és a pl·1 (32.G ábra) szintén állandó volt 24 éra tnán 24* ésJFCrom Röviden, a négy antigén kiszerelései stabilak voltak a vlsszaoldás után 4 órán kerestető! szohahőmérsékletart és akár 24 órán kereseti 2-PfXöo, a vlsszaoldás utáni kiszerelések elem-rése alapján. 25, példa; Teira-anfsgén drog termék: határvizsgálatök

Határvizsgálatokat ('edge study’) tervezőink a magas és aiaesdtvy kiszerelések behatárolására; á kiszerelés robosztusságának demonstrálására, A 42. táblázat részletezi a kiszereléseket. A hatóanyagokat a magas dózisnál (400-'4(K):;2íKi/3t)Ü gg/ml.. wClfA'MntC/OM-CRM^^CJ^CRM^y) 3D%-kttl magasabb, és az alacsony dózisnál 1:200/200/ KKVi 00 gg/mi. rmCIfAAtniC T/P5-CEbWCPS-CKMm) 30%-kaí alacsonyabb értéken variáltuk. A nem ható anyagokat 6,0 - ?.u között variáltuk a pH, 5 - 15 mM közöd a hisztiéit·, 3 - ó% között a szacharóz és 0,005 - 0,0155¾ között a PSkO esetében·;,. 42, táblázati Határvizsgálat terve

A határk (szereléseket liöítlizálíuk, és stabilitásra elhelyeztük 2-8”C. 25”C és 37*C-t>m A 43-46, táblázatok* ban bemutatott eredmények arra utalnak, hogy mindegyik határit (szerelés stabil volt 3 hónapon rom hőmérsékleteit, megerősítve a létra-antigén kiszerelés robosztusságát. 43,táMá»ií: HalársíabJHtös: i»agasdc«ís

44- Alázat; Haiár s^csíisty dfels

4$, sábsái'ítí: Határ siahtíitást mag3<4Klars<>ny

4&amp; íáfefe&amp;S:: Határ stabilitás; aiaa^ny/mngns

24 pölste; Teira-sndgés drog' termák; fagyasztssdtdolvasztás stabilitás A teira^íííígért n:mgas tiöxisü (L44130*88-1} és alacsony dő*isá {144130^88-2). Ikdilrááiás előtti folyékony kiszereléseket lefagyasztottunk &amp;.. fráolvasstotmok Schott typo I fiolákban 4 cikluson keresztül, A mintákat mim&amp;m alkalommá] losakibb 24 órára fagyasztottuk. le -?0f'ü-o« és azmáo felolvasztottuk szobabránvrsvkkkm. Az.olvadáta ciklus akut a tintákat gondosan nmnltoreKi.uk.hogy a kiolvadt folyékony kisxotxdések ne- k-gyonok hosszö időn keresztül szobahőmérsékleten. űrt annak Mzioskárárá tctrák, jtogy gg adaíok m. mutassák az wClfA hasítását ás az MrttO dezamidácíoját •szöháhfeiáysákl^g^slil; !«lgt|álá$| egyik fagYösaásdékdYaszsás sorozatot (három párhuzamaiban végezi ah) SsszsóuíihtSk. és elemeztük RP-HPÍ.V-v^l vs/ twCIÍA é-· VkuC tNzttmghm. IkX-IÍPLC'Vei ,;Z rtoOI'A cs NítttO koncentrációjára, IEX-HPÍ..C-vel a:·'. MtstC tn.zísságam e\ oeN kenek rival ;· C RS és CPU Mmjugámso koncentráciojam. Négy fagyaszíae-X a'wi'.ííj' v k'a~ után s u·· , lu, ott .v s >' < \ λ MmC K M ffR v ad mert t vtasag . (<‘ \ Axa) as az v * <. U.X-. ΗΊ t'-w' mórt ds; :asagv, -v3' R ábra; i'.z.NOukskeppefi ,o .amgeisek sooevnbaeiái ; Ή .ό ') -^pra) e-> a pH (33, b abra) kmi/iszteíis maradt négy higy&amp;sz.uHdé.Í0ho«tztáa etkhts ttlun, X7, példa: Tetra-SíStsgéo drog tennék; keverés utáni stabilitás A k<;v«rés otául stabilitási vizsgálatok célja annak biztosítása volt. hogy s 0,01¾ poíiszorbás Si.•'a· taríatma* taö tetra-anfigén kiszerelés nőm mutatja adszorpció* problémák semmi jelét nz edény zárószerhez,elével Magas >Λν·>>η boftbzakí elolts resm-asmpén kiszetelestAet ti 4ti ti} top) áílömtauk eio 0, υ,0ιΛ' év Ο,ΐΠ**» poliszorbát íkkd, e\ &amp; mmtakaí 34 mars ke>z.v,íil! késet tettük szohaMmozákleseíi ItoHiszaejós fiola dugó edényteudszer bon. Kontrnil snintákar tartottunk ugyanazon a köroyezxsri kötnórsókbpn, de kevertetésnélkül. A kevertetéshé® ¥ WR 0VX-25OO rmiUhiobe vonexer készülékei áiihotmnk ?00 RPM-re puizáSó üzemmódban, A pniiszorbát 80 koncentrációját: a 0 - 8,83% tammtáztybá állítottak. Λ fontosabb vizsgálati eljártok a ktávetkozök voltak: RfXHFLC az rwCtiÉA busátás á;gNlMC>íSégradáétö{kí~ véve a dezamidáetót) detektálására, IvX-IIPíX az MntC dczamidíkló monitorozására. a négy-antigén kuncent-'rációja, és pH év 00..,., A 34,A és 8 ábra azt mutatja. hogy az rwCH'A és MntC tisztasága hasonló maradt a km értek'.; okos, A*t ss bemsuattuh a 34.0 és D ábrán, hogy mind a ttégy antsgént vtsszmyartok akevertetés útim, Λ pH megmaradt (34.8 ábra}. és a kevu^ídés ttem segíti ok) az antigének aggrggádójáf. amint ODj<.,.· vél -m 'iti'vi^/Uik (34 F ábra). Minden adat arra utal, ítógy a kiszerelés k^ipatlblöa'avKdP^üdós. edéaysamhyarroh

Bar a holsbz.}v v .k ry kupak item tartaiew «./tlrkotst, a ksszereíes érmtkezésbo karolhat sz.iítkoínsa! a vak* eiftn visszaoldásám év ;x;jo5íatásáta szolgáló óvogfocskendók dtsgóbs. 38. példa: Telra-aHtlgé» drog tertssék: ISCÖMATRIX™ vizsgáiátok hkgvtzagábok ; mag^s dözivó mtra-amií-én kiszerelés (40(040(1/3(10-20(1 pgOrtL !VzíGÍfA/rl>305A/CF5·-CRM i^CP8*CRM«Ί stabiHííBát vís^zaoidás alán Ki roM biszikllttbm; pH ó»5 20 egy-Sihvnd. ÍSCOMATRJX,'<-üJ 60 mM NaO-iel év anélkül. Λ stabilitást 2·4Γ'€ és 2S"(.'-oí'í rmmitoruKitrk 24 árán keresztül. V M t(C ti··/,, vacut v ( A HPH ul , Ι,οηυοϊκ t -or ,>r ÍSCüMA 1KIS. " \aOI le' o*- sonrzdl \at! >nval hasonló dezamldáeios sebesi.ége: mttfaíoít (3X8 ábra}. -Az ÍRC'OMATRIX!': só rtélkhi iavvabb dezamidaetös sebességeit 'mutatod. 5'XXon a dezassndádó sebessége drasztlküsan csökkent (3á A ábra). Nem volt lehetséges az i'ífíCÍS nszsas.xg kázsotien nss'tmy f..ógi 'tieKbv4a.rora»a az (S( ΌΜΛΙ R!X)M miértére ne sasa ou.m (3S.C ábra), RzomkMk'iő hlógitíbék egymásra ifleszrese .«na utalt, bs-gs az twORA íb vstksa nem >.akozom atni stablKiáSfo akti 24 áráig 25öC-on (3?.D ábra). Hason tó eredményeket lámmk umiden mintám 2-h'C-<>n. Nem detektáltunk változást az MníC (isztaságában 24 árti éltekével 2-8eC-oo (3.5.B ábra) és 35"C-on (F ábra) RP-HPIX-vcf (35.C ábra). Nem figyeltünk meg változást &amp; in CP5-CRMt^ és CF8-CRMtr? ktmjugáíum koncentrációban 24 óm ebekével 2-8'C*on (3S.G ábra} és 25°C-o» (35.H ábra). Nerc figyeltünk meg változást az rrnCifA vagy MntC konc«mráclóban '24 óra elteltével 2-í>aC'«n OS.I ábra) és 2SX/ (35J ábra).

Az, SSCt rMAFRlX’'* knueentracsok nem mit óztak 31 ,oí ket'",oa a C-e' (3o v abn) e\ 2: r -on <s36 B <iNa3 \RCOMA fhU\<m icv.esVtvefK'ie X- C.-iei nos xedek -- X. n " te és Xx*' reNn o 5 túr Ό (3o ( ábra). Mindegyik populáció miomdiszper?; voh ίχ' 0,2), A vlsszmé-don kiszevekAsok pINja állandó maradi a sis-btiuasi vizsgálat során 15éJ) ar·.!·;·).

Ktenviititík ax sW 01' dw'im id <í ,.>-u ‘én \iszu„k· v > > -|P s '0 m tsí r«A !JA }ΡίΟν\ 0í"> í'f<\ít}·, t Pb CRk-üO .sibiHíévK visszaolöss utón sí! nsM fclsztidiohérs. pl·! 6,5 70 egyYgml ISt.'OMATRlX ; t-O fali NaCld is anélkül Néni detektáltunk vájt ez év; a/ Motel sisztasápPa!; RP-liPLC-vei 4 óra eitekevd 2-%'O-on (3?. A ábra}· Nens OgveíUlok meg növekedési az Matté 4snasokd;k:ojáb;n· CkX -HP! 0 vei 4 nes eleké', sd ' R- 0 mu >' B a uvss Maxi a nées am Yen kmmentibeima aís< tidA ; na a is a stáb Sün, v'KsgkiíA stsfísfi (37vC«s Dábmk

Az tS<X!\iATUV<M részecskemérete NsCI-ki rtsbvektxk'U 4 óm didiével és NaQ nélkül á! htodé marsaik de nYndké; ereiben nsgesibb voít, mim. a?. ISCOMATiXIX*" ísmixtgáKtn <;3kΛ ábra). A eAíaevrédoIs mosták prékliszperzek vréí&amp;k ( -0,3) A visszoo Idolt hiszetviéssk pü-j-a állandó Piaradt 4 őrs keni sávéi (.3843 révv 29, példa: Teíra-aotigén drop, iermél: IdgÜész.er össxrésasímií'íás Rö%3 távú stabilsiá:;: vizsgalatot haj tót is; rét ve ere maesosiy. köíeges és magas skszisé MrdC-vol &amp; íetra-antigén kiszerelésbe», hogr mszehasni.íksah ís 6QtnM NaCi-i 4,ö% izaeiHeoes vszbvn, ez a vizei, mint higitó-s/.ert, Mindegyik lsszerekH 4.33¾ szacharózt, 0.4!% PSkö-sí es a 47. táblázatban megadott kímceotísteréjá Vuvt% gént tmtishrsazott pli 6,5-». 43;. táfekkaí: Telra-autigéti drog termék kiszere lések.

A fsoiíslsa 2-8e€«on tároltuk a kísérlet megkezdés· megelőzőért, és teszteltük stabilitásra :>""€ és 2S”C-o« 7 ét 7 nap mm Is ével A kiszereléseket,s követkézé vizsgálati eéárások alkemts ázásává; hatod mtítuk össze <Έ>1 . ;Pi. <v Msm' siéénmsdáejPra m vériv-ap s b 1' HP! <' a Y re' és t H'A ρvnasaara ,i \ \1n ( es Oí \ syv í sárinké ói a, és íK4éiometns a konjngátytn Mmeeréváetorá. Az, eredmények részietek a ük-dm táblázatban adjuk . ír, % MotC dvza ntMc os Mvssege ·»,ν< vt > vei ή Jtwom b* s % \aí'i-.d v vsxao'don kimerülésben, cs a sn ins-v doze» VrtC-nel u i: ieguagv e<nb.. .Ymssd.x x»s s« Pér vége a három .kvi- vast közÜimMmdett más eiéílúidöy Ösázékasötd Itltaíé volt.

Μ, UMiumi Alaestmy tUmm MmC (!2§42Y«3b-A) rövid táv« slabiíitási <íssz,ebíglíí!0|a 60 tnM AaO alkídmaxissáv;tl logitoszerként

49. iúbiáxat: Aiacsowy díctísó MnüC (S25426-939-A) rövid iává stsÍMÜi&amp;sí SwmVí»f»k'ija vizhcti 4,5% sassihatrOx aHiídmaxásával hígítös-afriiííBi

50. (áhiázsit,' Ai«csöi*y'tlíizáé MíhC {rlS426-íBfr-A} rövid t»v« síabjtííási iH&amp;?.e&amp;>gfcílíija vfe aikaimstóísá- val higftósxerkést Sí-" MeM/tss^eSöS:

Sí, táMikaíi Közepes d&amp;dsé Maí€ (i2S42&amp;40ík8} rövid iává síabílííási össs;efi>glald.(a ¢0 NaCf

k«l ma«4sávai IdgStteerksM N? ~ Sem teszteltük

$2. táblázat: Köztes őiUhü MntC {125426-036-Ö) rövid iává stabilis'd o^efógteiÖM» vMntö JévS 4,5% szacharóz alkalmazásával Mgitöszerkéni

.NT - se*» teszteltük STíáS>lá«d; Közepes dáxtsá M»tC (125426-036-8) rövid iává $tet|diMá&amp;i összefoglald}* viz alkalmazásával

Mgitdszvrkted

NT - New teszteltek 54. táblázat; Magas dózisé Mate (12542$^36»C> r&amp;vSd iává stabilitási SsswsSígjaiál» éü ítíiiS NaCÍI afisib·

taazásá va S Is ígííés*erkéM NT - Nerfi teszieiiíík

”” '77 ................. —.... SS. táblázat: Magas üázísú M»tCít25426-ö36*Q rövid £áv« stabilitási feszeíeglaiéja vízben tóvő <j,S% szach&amp;rbx aSk{U«uixásftvaí hígltászerkáitf NT - Nem k

Síi, táblásai: Magas dózisé MntC (125426-036-0 rövid iává stabilitási ösvzetbgísdöjz viz alkalmazásával hígítöszerként

Jík példa; Teíra-antigén drog termék; alternatív kiszerelések

Stabilitási vizsgálati eljárásokat végeztünk &amp; tetra-satigéü drog termék több különböző kívze«öésé«, amint <m-0 tdbláimtbsfi lamndatjok. 57. tábísxst: Tetra-antigén drog tértnék kiszerelések

A liofilizált kiszereléseket 0,7 ml, viszel oldottak vissz® ékitéSzteJttík stábÜMsra 5*€-ors és 25*C-o» I, 3 és 6M«sp elteltével és 40*C-on I és 3'hónap «Ítéltével A kiszereléseket a kővetkező vizsgálati eljárások alkalma-•ásáséval· hasonlítottuk össze: Kari kiseher nedvesség, tisztaság, szia, részecskék detektálását C£J£4tPL MntC dezsaddáeiéra és tisztaságra, R.P-KPLC MniC és CtfA tisztaságra, IE.X MntC és CJfA koncentrációra, és aeteíometriáv&amp;l a konjugáíuin köftsemrácmra. A százalékos nedvesség tartalom magasabb volt a 4S org/mí ss»' ámén tartalmazó kiszerelésben, A víz mennyisége a pogácsában a pogácsa teljes tömegérték &amp; százaléka, ily módon a 90 mg/mi szaebarézt tartáintazó pogácsák roboaztnsabbak voltak a nedvesség sssszalékában a szarba-réz kétszeres mennyisége miau. Az eredmények részleteit az 58-66. táblázatban adjak öreg. 58, .iáb&amp;kmt: A 1243NT8-A t.eírn.'aitügéti kiszerelés siabiliíási fósszf-FegSaSój»

NT - Nem ieízrekük NMO RS1 - Nem több mint -íz EP Reíe-íCí-vk Standard i 59. táh bízat; A 124369--8-8 Íeír-a-assísgáíí kiszc-rafe stísbi?iíáw dsszefogiaíéja

NT ~ ¥<'&amp;m WMíd&amp;k NMO RSl - Nsíji söbb ínint az EP Referencia Standard í 60, táblásai: A 3 2436?· 8-Ü íííns--a»Egéö kx^yureMt: sísíjüilásá Sssxef'ogijsiója

NT - NemísííSölsíIk NMO RSI - Nerc több m'mi az E? 1 6i, táblázat; A i243átt~S~D fetra-afitügési kiszerelés stabilitási összes ffigJaKljjíí

N f - Mm) fesziéitólk

NMO RSi · Ní'-rt több irtbí az BP Referens;a Sfendard I 62. táblázat; Λ 124363-8~E {«tí-a-astígéíi fc*82*r«lés stabilitási fmmhigízikijít

NT - N<?m tcssíTtlk KMO RSI - Hen; í-bfeh mist az EP R^fsTnacis Standard í 63. táblám: A I24369-8-F tetra-entígéa kiszerel*# stetóiiUsi &amp;fszefegiftlój*

NT - Nem teszfelrSk

NMO RSi - Nem több mist az E? Referenda Standard I 64.. íÁhíámf, A 12436Í?-S-G teírs-antígéa kiszureUs stabilitás» ftsAiefo^toMj»

NT - hk'-n \z:\v.V'kXík NMÜ P&amp;í Net» íöbbmlsí sz EP :%éfácmiá&amp;$MkáMúl 65, ÍÁbíázM: A 124A69-S-H kiszerelés sí&amp;bíHtáíj <te$gef&amp;'gísiója

MT · Nem tesztehiik. NMO RSÍ - Níí-í ídbh fr-ini az ív.F! Refereíjda Ss&amp;oáard 1 ύίκ táblásai; A 124369-S-l, fetra-a;stiíg<hi kiszerelés stabilitási iíMzeJoglaíépi

NT ·· Nam Ísszkl-ök NMO RSJ Nos több rcií-s az EP Ref^sáöla Standard í

Claims (4)

1. A szekvesíeiaífefában tatálttaíA szabad szövegek fordítása, <210 > 14 <223> Bánnély rapinosáv <210> 109 <223> Mesterséges szekvencia leírása; szintetikus láncindíió '210> 110 <223> Mesterséges szekvencia leírása; szintetikus láneindító <2io> m <223> Mesterséges szekvencia leírása; szintetikus iáncindlto <2! 0> U2 <223> Mesterséges szekvencia leírása: szintetikus iáncindítö <400> M2 <223> Mesterséges szekvencia leírása: szintetikus lánci.ndító <4Ö0> 1!3 <223> Mesterséges szekvencia leírása: szintetikus lándnditő v2Uí> 125 ^22.3^ Mesterséges szekvencia leírása: szintetikus. :|fop.tid: "'223 v Bársrtely arniíKssav "210·· 126 <223 > Mesterséges szekvencia leírása; szintetikus peptid <210" 12?<223> Mesterséges .szekvencia bírása: szintetikus pepiid <2I0> 128 <223> Mesterséges szekvencia leMsat szintetikus pepiid: <21Ü> 529 <223> Mesterséges szekvencia leírása: szintetikus peptid1 Szabadalmi igénypontok L Líotsiizáít imnmnogén készítmény, atneiy tartalmaz: (a) szoláít ÜUfphyioiOi'Cfix aunw tapadási faktor A (CiteV) pob pepi idei, (b) izolált Siitphylococcus aureus MntC poiipepíidet, íc) 5-ös típusú (CP5) burokpoiiszaceharid - CRMs.y> knnjagátumot. iá) 8-as típusú (CP8) burokpofisz&amp;ccharíd CRMj.s·; konjngáíntnot (e) 6,0 * 0,6 pKa értékű puliért, és ff) töltőanyagot ahol a CifA polipeptki NI, N2 és N3 doinént tartalmaz. 2 Az 1 igénypont szerinti liofili/ák úntntiaogén IfészMtény, ahoí a ktkszípRány tovslbbá turtalmaz izolált SkiphyÍocVíxus atovus tapadás: faktor B-t (CHB) is.
2. 3. Az 1-2. igénypontok bármelyike szerinti liofdizált imisunogán készítmény, ahol a CifA polipeptiá fibnnogénkötö dotnenje csökkentett kötődést mutat a fibrrnogénhe/, a 1 sr 338, Tyr· 256, Pro 336, Lys 3¾¾ Alá '254 és íle 387 pozícióban Mvö ummosav-^zubsztitúciók közöl egy vagy több miatt, 4, A 3, igénypont szerinti HofiffeáJí" immuaogén készítmény. ahol a Tyr 338, Tyr 356. Pro 336, tys 389, Alá '254 és He 387 pözieiéban lévő arínno^vvsssufesztMetók kMl vagy több íáció. #, A 4. igénypont szerinti liofiiteált únmu?ioj|ép-késztonény^ JhofaTyr 338 Alan yait sKubsktítúáiya,
3. 6, Az 1-5. igénypontok bártnélyíke amely kevesebb Mint 3 száza lék vizet tartalmaz az imnmtKsgén készítntéiry teyea tötuégére Vímátoztatva (% w/w), aböl a ClfA poiípeptid 03)9% M 0,027% és 0,85% * 0,26% w/w közötti a CP$-C'kMm konjugátum 0,0-1% 0.013% és 0,42 * 0,13% whv közöttív a CP8~C14M!V~ boniugéípíu ÖÉ4% 1; 0,013% és 0,43 -i·. 0,135¾ wAv közötti és a puffer 2,545¾ ± 0,765» wAv közötti. 7, .A* S~6> igényppníok bármelyike szerinti iiofiüzált immunogen készítmény, ahol a puffer hisztidínt tartat* mire ρϊί 6pT 0,6 értéken. :8;, Az:T-7, igénypontok bármelyike szerinti iiofilizált immunogén készítmény, ahol a töltőanyag a szadiirróz, írelisióz, mannisok glidn és szerbitől által alkotott csoportból van kiválasztva. 9. A 8, igénypont szerinti Iiofilizált immunogén készítmény, ahol a töltőanyag szacharóz, 1Ö. A 9, igénypont szerinti iiofilizált ímmunogén készítmény, ahol a töltőanyag szacharóz 06% -i 0,060% w.Av mennyiségben. 4:1, Az 1 -10. igénypontok bármelyike szerinti iiofilizált iínmutKsgén készítmény, amely továbbá teíiUdoktív anyagot is tartalmaz, 43/AH. igénypont szerinti íioillízáíí immunogen készítmény* altöl a felölétáktiv anyag a poiMamér, a pollözietilén alki 1 éter és ipöliöxietiléitszotbitáíi zsimáy észter áliákailaaött eSopörtbói van kiválasztva, 13 A 1,2« jgéíiypotrí:Szerinti: :ÍÍöí}liiZá|t: itbibunógén kdazitodny* áhöí a polioxleíilén szorbitán zsírsav észter poüszorbát 80, 14; A: 13. igénypont szerinti ::liöll:iizáí:t immunogén készítmény, ahole ppiiszötbát 80 mennyísép 0,01% * öp9S%:w/Y.
4. 15. Az 1-14/igét5yjmniök:::bái'meíyík&amp; szerisiti ahol a készbmöby továbbá aOjuvánst isisrtaimaz- 16. .A 15. igénypont szerinti Iiofilizált itmnunogén készítmény. áhöi áz átlinvánsíszapoifiit/ Mlgárás Ímmtíbögén készítmény előállítására, amely magában foglalja a következe lépéseket: (a) vizes oldatban kombinálni: p) CHA pohpeptidet, ahol a ClfA poíipeptíd 141, N2 és N3 domént tartalmaz, (ii) CPS-CRM;.iv konjugálumoí, pit) CPS-CRMj*?koniugátumot, (tv) MntC polipeptklei, tv) 6,0 10,6 pKa értékű puffért és (vi) töltőanyagot:; és <b) az la) lépés szerinti kombináció iíoiliizálását, ami kevesebb tűim 3 tömegszázakík vizet tartalmazó pogácsái eredményez/