BR102018005192A2

BR102018005192A2 - Globulina imune, método para preparar uma globulina imune, método para tratar infecção, método para fornecer imunoterapia e composição de plasma agrupado

Info

Publication number: BR102018005192A2
Application number: BR102018005192-0A
Authority: BR
Inventors: James Mond; Adam S. Grossman
Original assignee: Adma Biologics, Inc.
Priority date: 2017-03-15
Filing date: 2018-03-15
Publication date: 2020-12-08
Also published as: US20220023339A1; CA2998067C; US20190241646A1; MX2022010156A; IL309034A; EP3375789A1; IL293466A; AU2018201803A1; DK3375789T3; US11897943B2; EP3375789B1; IL293466B1; KR20190129932A; US11084870B2; AU2018201803B2; EP4032903A1; IL258116A; ES2907222T3; MX2018003159A; US10259865B2

Abstract

a presente invenção refere-se a composições e métodos para o tratamento de infecção causada por streptococcus pneumonia. em particular, a invenção fornece globulina hiperimune humana e composições da mesma para prevenir ou tratar infecção pneumocócica. a invenção fornece métodos para produzir globulina hiperimune que contém altas titulações de anticorpos antipneumocócicos opsonofagocíticos, composições que contêm a mesma e métodos para utilizar as composições para a prevenção e o tratamento de infecção pneumocócica. a invenção fornece adicionalmente métodos para prevenir ou tratar infecção pneumocócica (por exemplo, infecções respiratórias superiores (por exemplo, bronquite, otite, sinusite, etc.) em sujeitos imunocomprometidos através da administração de composições de globulina hiperimune da invenção (por exemplo, que contêm uma titulação elevada de anticorpos antipneumocócicos opsonofagocíticos) a sujeitos imunocomprometidos.

Description

GLOBULINA IMUNE, MÉTODO PARA PREPARAR UMA GLOBULINA IMUNE, MÉTODO PARA TRATAR INFECÇÃO, MÉTODO PARA FORNECER IMUNOTERAPIA E COMPOSIÇÃO DE PLASMA AGRUPADO

CAMPO

[0001] A presente invenção se refere a composições e métodos para o tratamento de infecção causada por ou associada à Streptococcus pneumonia. Em particular, a invenção fornece globulina hiperimune humana e composições da mesma para prevenir ou tratar infecção pneumocócica. A invenção proporciona métodos de produção de imunoglobulina contendo altos títulos de anticorpos antipneumocócicos opsônicos, composições contendo os mesmos, e métodos de uso das composições para a prevenção e tratamento de infecção pneumocócica (por exemplo, infecções do trato respiratório superior (por exemplo, sinusite, otite média), faringite, etc. (por exemplo, em um sujeito imunocomprometido))).

FUNDAMENTOS

[0002] Existem muitos componentes para o sistema imune, todos os quais cooperam para rejeitar patógenos invasores estrangeiros. Enquanto a maioria das pessoas tem sistemas imunológicos intactos que servem para protegê-las da grande variedade de organismos infecciosos que comumente infectam pessoas, incluindo vírus, bactérias e fungos, muitas pessoas têm imunidade prejudicada ou comprometida.

[0003] As imunodeficiências primárias (PIDs) são um grupo de mais de 200 distúrbios geneticamente hereditários caracterizados por deficiências em componentes individuais do sistema imune inato ou adaptativo com um resultado clínico de uma suscetibilidade aumentada à infecção. Por exemplo, um defeito no sistema imune humoral que prejudica a capacidade do corpo de produzir anticorpos torna a pessoa suscetível a muitas infecções. Para ser considerada uma imunodeficiência primária, a causa da deficiência imunológica não deve ser de natureza secundária (por exemplo, causada por outras doenças, tratamento medicamentoso ou exposição ambiental a toxinas). A maioria das imunodeficiências primárias são distúrbios genéticos e são diagnosticadas em crianças, embora formas menos graves possam não ser reconhecidas até a idade adulta. Cerca de 1 em 500 pessoas nascem com uma imunodeficiência primária.

[0004] A infusão intravenosa de imunoglobulina demonstrou reconstituir a capacidade dos indivíduos com defeito imune de se defender contra a infecção. Uma vez que a imunoglobulina é reunida de muitos doadores, os títulos de anticorpos para os muitos organismos infecciosos para os quais a proteção deve ser procurada variam muito e podem ou não ser amplos para atender às necessidades imunes em caso de infecção em um indivíduo imune comprometido.

[0005] A maioria das imunoglobulinas comercialmente disponíveis são derivadas do plasma humano coletado, processado e distribuído para venda pela indústria de sangue e produtos de plasma. A primeira preparação de imunoglobulina G humana (IgG) purificada usada clinicamente foi a globulina do soro imune produzida na década de 1940 (Cohn, E. J., et al "J. Am Chem. Soc., 68:459-475 (1946)) e Oncely, J. L. et al., J. Am Chem Soc. 71:541-550 (1949). A gamaglobulina produzida por este método mostra uma distribuição molecular com um alto peso molecular, quando analisada por meio de cromatografia de exclusão de tamanho de alta resolução.

[0006] Demonstrou-se que a imunoglobulina padrão (IVIG) tem variabilidade de lote para lote para atividade opsônica a um organismo comensal muito comum que é onipresente na pele humana, S. epidermidis (L. A. Clark e C. S. F. Easmon, J. Clin. Pathol. 39:856 (1986)). Por exemplo, no estudo de Clark e Easmon, um terço dos lotes IVIG testados apresentaram atividade opsônica pobre com o complemento, e apenas dois dos quatorze foram opsônicos sem complemento. Assim, apesar do fato de que os lotes IVIG foram feitos de grandes reuniões de doadores de plasma, um bom anticorpo opsônico para S. epidermidis não estava uniformemente presente.

[0007] O IVIG geralmente foi bem-sucedido para prevenir infecções severas do trato respiratório inferior em pacientes imunes comprometidos. Entretanto, apesar do fato de os pacientes imunocomprometidos receberem IVIG parecem ter níveis aceitáveis de imunoglobulina total, bem como níveis de anticorpo anti-S. pneumonia para prevenir infecções bacterianas graves causadas por S. pneumonia, existe uma porcentagem significativa de pacientes que sofrem infecções do trato respiratório superior e infecções não respiratórias que são debilitantes, reduzem sua qualidade de vida, levam ao aumento do uso de antibióticos que não são eficazes e também levam a gastos médicos aumentados, Favre et al., Allergy 2005 60:385-390).

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0008] A presente invenção se refere a composições e métodos para o tratamento de infecção causada por Streptococcus Pneumonia. Em particular, a invenção fornece imunoglobulina humana e composições da mesma para prevenir ou tratar infecção pneumocócica. A invenção proporciona métodos de produção de imunoglobulina contendo títulos elevados de anticorpos antipneumocócicos com atividade opsônica (por exemplo, para uma grande quantidade de sorotipos S. pneumonia), composições contendo os mesmos e métodos de utilização das composições para prevenção e tratamento de infecção pneumocócica. A invenção proporciona ainda métodos de prevenção ou tratamento de infecção pneumocócica (por exemplo, infecções respiratórias superiores (por exemplo, faringite, otite média, sinusite, etc.)) em sujeitos imunocomprometidos (por exemplo, através da administração de composições de imunoglobulina da invenção (por exemplo, contendo um alto teor de anticorpos antipneumocócicos opsônicos) para sujeitos imunocomprometidos que não foram adequadamente protegidos por infusões regulares de IVIG padrão).

[0009] Numa modalidade, é um objetivo da invenção proporcionar uma nova composição de imunoglobulina preparada a partir de doadores de plasma de acordo com os métodos da invenção (por exemplo, doadores de plasma humano (por exemplo, doadores de plasma humano saudáveis) que foram vacinados com um ou mais vacinas pneumocócicas de acordo com os métodos aqui descritos) que contém um título elevado de anticorpos antipneumocócicos específicos, com atividade opsônica quando comparados a uma amostra de controle.

[00010] A invenção não é limitada pelo tipo de amostra de controle utilizada. Por exemplo, numa modalidade, uma amostra de controle é imunoglobulina preparada a partir de uma Vacinação de Pre de doador(es) de plasma humano saudável (por exemplo, de modo que os níveis de Pre-imunização de títulos de anticorpos opsônicos específicos de antipneumocócicos dos doadores de plasma humano são utilizados como linha de base para medir o aumento dos títulos antipneumocócicos específicos, os anticorpos opsônicos após a imunização). Noutra modalidade, uma amostra de controle é uma imunoglobulina preparada a partir de uma mistura de amostras de plasma obtidas a partir de doadores de plasma humano aleatórios (por exemplo,100, 300, 500, 1.000 ou mais doadores aleatórios de plasma humano) que não tenham sido vacinados com uma vacina antipneumocócica (por exemplo, de modo que os níveis de títulos de anticorpos opsônicos específicos dos antipneumocócicos dos doadores de plasma humano não vacinados são utilizados como uma linha de base para medir o aumento nos títulos de anticorpos opsônicos específicos antipneumocócicos presentes em doadores de plasma humano vacinados de acordo com os métodos da invenção). Os versados na técnica apreciarão que outras amostras de controle podem ser utilizadas. A invenção não está limitada pelo método ou ensaio utilizado para medir o título opsônico (por exemplo, opsonofagocítico) do anticorpo presente. Na verdade, uma variedade de ensaios pode ser usada incluindo, mas não limitada a, aqueles aqui descritos (por exemplo, no Exemplo 1).

[00011] Numa modalidade, é um objetivo da invenção proporcionar uma nova composição de imunoglobulina contendo um título elevado de anticorpos opsônicos e antipneumocócicos. Constitui um outro objetivo da invenção proporcionar uma nova composição de imunoglobulina intravenosa contendo um título elevado de anticorpos opsônicos, antipneumocócicos (por exemplo, “globulina hiperimune antipneumocócica”) e métodos de produção e utilização dos mesmos (por exemplo, para prevenir e/ou tratar a infecção pneumocócica (por exemplo, em pacientes imunocomprometidos)). O termo "alto título" neste contexto significa a presença de anticorpo antipneumocócico opsônico em uma quantidade que é 2 vezes maior ou maior, por exemplo, 3, 5, 7, 10, 15, 20 ou mais vezes maior que a encontrada em uma amostra de controle.

[00012] Por conseguinte, uma nova composição de imunoglobulina (por exemplo, globulina hiperimune antipneumocócica) contendo um título elevado de anticorpos opsônicos e antipneumocócicos da invenção é diferente das preparações padrão/convencionais de imunoglobulina (por exemplo, IVIG padrão e convencional) e é diferente de outras preparações de IVIG (por exemplo, outras preparações de IVIG hiperimune), na medida em que tem um título elevado de anticorpos antipneumocócicos opsônicos e humanos que são funcionalmente e amplamente reativos contra uma multidão de sorotipos S. pneumonia e melhorar a fagocitose e matar a S. pneumonia (por exemplo, in vitro e/ou in vivo (por exemplo, os anticorpos são opsonofagocíticos)), independentemente da quantidade total de anticorpos antipneumocócicos de ligação (por exemplo, medido por ELISA) que estão presentes na composição.

[00013] Isso é surpreendente, uma vez que os dados gerados e divulgados aqui indicaram que não houve correlação consistente ou previsível entre o título total de anticorpos IgG antipneumocócicos e o título de anticorpos opsônicos antipneumocócicos presentes no plasma ou imunoglobulina preparada a partir de doadores vacinados. Devido à surpreendente identificação da grande discordância entre a quantidade total de ligação do título de anticorpo antipneumocócico IgG e o título de anticorpos antipneumocócicos opsônicos presentes no plasma, ou imunoglobulina preparada a partir do mesmo, do plasma de doador vacinado aqui divulgado, um outro objetivo da invenção é fornecer uma composição de plasma e/ou imunoglobulina (por exemplo, globulina hiperimune antipneumocócica) contendo títulos de anticorpos antipneumocócicos opsônicos funcionais significativamente elevados (por exemplo, independentemente da quantidade total de anticorpos de ligação de título de anticorpos pneumocócicos (por exemplo, reunindo plasma e/ou imunoglobulina colhidos de plasma de doador vacinado, ou reunindo plasma de doador vacinado junto com imunoglobulina obtida de doadores não vacinados que podem não ter um alto título de anticorpos antipneumocócicos opsônicos que quando reunidos com o plasma doador de anticorpos antipneumocócicos de título significativamente elevado e/ou imunoglobulina não diluem o título opsônico total para um nível não protetor)) em comparação com uma amostra de controle. A invenção inclui o soro/plasma, assim como a imunoglobulina (por exemplo, globulina hiperimune) preparada a partir da mesma contendo títulos de anticorpos opsônicos antipneumocócicos opsônicos bastante elevados e amplamente reativos. Numa modalidade, a invenção proporciona plasma/soros e/ou imunoglobulina preparada a partir dos mesmos contendo um título de anticorpo opsônico específico antipneumocócico elevado que é pelo menos 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 7 vezes, 10 vezes ou mais, a pelo menos 55% ou mais (por exemplo,60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ou mais) de sorotipos de S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F) em comparação com os títulos de anticorpos opsônicos específicos para antipneumocócicos para os mesmos sorotipos presentes em uma amostra de controle (imunoglobulina preparada a partir de uma mistura de amostras de plasma obtidas de doadores aleatórios de plasma humano (por exemplo, 100, 300, 500, 1.000 ou mais doadores aleatórios de plasma humano) que não foram vacinados com uma vacina antipneumocócica).

[00014] Em outra modalidade, a invenção proporciona uma composição de globulina hiperimune (por exemplo, IVIG) contendo título de anticorpos opsônicos amplamente reativos, específicos para 70% ou mais dos sorotipos de S. pneumonia selecionados dos sorotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F e 23, ou seja, 2 vezes ou mais (por exemplo, 3-25 vezes ou mais) que o título de anticorpos opsônicos específicos para os mesmos sorotipos de S. pneumonia presentes em uma amostra de controle (por exemplo, imunoglobulina preparada a partir de uma mistura de amostras de plasma obtidas de doadores aleatórios de plasma humano (por exemplo, 100, 300, 500, 1.000 ou mais doadores aleatórios de plasma humano) que não foram vacinados com uma vacina antipneumocócica. Em outra modalidade, a invenção proporciona
plasma/soros e/ou imunoglobulina preparada a partir do mesmo contendo um título de anticorpo opsônico específico antipneumocócico entre 1:64 e 1:8192 (por exemplo, para pelo menos 50% ou mais (por exemplo,60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ou mais) de sorotipos de S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F).

[00015] É também um objetivo da invenção proporcionar uma nova composição da imunoglobulina (por exemplo, globulina hiperimune antipneumocócica) contendo um título elevado de anticorpos opsônicos e antipneumocócicos que aumentam a imunidade in vivo e/ou preventiva e terapeuticamente inibe a infecção (por exemplo, infecção do trato respiratório superior), em pacientes com sistema imune comprometido que não respondem adequadamente a infusões regulares de IVIG convencional.

[00016] É também outro objetivo vantajoso da presente invenção que, embora as reuniões padrão de imunoglobulina de doadores normais (por exemplo, usados para gerar IVIG padrão/convencional comercialmente disponível) não possuem níveis consistentes, reproduzíveis e totalmente protetores de anticorpos opsônicos para S. pneumonia, uma composição de globulina hiperimune (por exemplo, globulina hiperimune antipneumocócica) contendo um título elevado de anticorpos opsônicos, antipneumocócicos da invenção, quando administrada por via intravenosa, fornece anticorpos específicos, funcionais (por exemplo, não meramente vinculativos) que promovem fagocitose e morte de S. pneumonia por fagócitos. A invenção não é limitada pelo sorotipo ou número de sorotipos de S. pneumonia para o qual os anticorpos opsônicos funcionais, presentes dentro de uma composição de globulina hiperimune (por exemplo, IVIG) da invenção promove a fagocitose e/ou morte. De fato, é um outro objetivo da invenção que uma composição (por exemplo, uma composição de plasma hiperimune e/ou uma globulina hiperimune (por exemplo, composição IVIG)) da invenção contém anticorpos opsônicos amplamente reativos para pelo menos 7 de 12, 8 de 12, 9 de 12, 10 de 12, 11 de 12 ou todos 12 de 12 dos seguintes sorotipos de S. pneumonia: 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F. Ou seja,
a invenção proporciona composições e métodos de obtenção dos mesmos que compreendem um título de anticorpo específico antipneumocócico opsônico elevado que é pelo menos 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 7 vezes, 10 vezes, ou mais do que o título de anticorpo específico antipneumocócico opsônico presente em uma amostra de controle (por exemplo, para pelo menos 55% ou mais (por exemplo,60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ou mais)) dos sorotipos pneumocócicos selecionados dos sorotipos 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, e 23F). Numa modalidade, a invenção proporciona uma imunoglobulina (por exemplo, uma globulina hiperimune IVIG) contendo título de anticorpos opsônicos amplamente reativos, específicos para 70% ou mais dos sorotipos de S. pneumonia selecionados dos sorotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F e 23, ou seja, 2 vezes ou mais (por exemplo,3-25 vezes ou mais) que o título de anticorpos opsônicos específicos para os mesmos sorotipos de S. pneumonia presentes em uma amostra de controle (por exemplo, imunoglobulina preparada a partir de uma mistura de amostras de plasma obtidas de doadores aleatórios de plasma humano (por exemplo,100, 300, 500, 1.000 ou mais doadores aleatórios de plasma humano) que não tenham sido vacinados com uma vacina antipneumocócica, ou, imunoglobulina preparada a partir de uma Vacinação de Pre de doador(es) saudáveis de plasma humano (por exemplo, níveis de imunização de títulos de anticorpos opsônicos específicos de sorotipos dos doadores de plasma humano são utilizados como linha de base para medir o aumento dos títulos de anticorpos opsônicos específicos do sorotipo após imunização). Em outra modalidade, a invenção proporciona uma imunoglobulina (por exemplo, uma composição de globulina hiperimune (por exemplo, IVIG)) que contém um título elevado de anticorpos opsônicos amplamente reativos a pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, 95%, 98% ou mais de cada sorotipo presente numa vacina ou uma pluralidade de vacinas utilizadas para imunizar um ou mais doadores de plasma a partir dos quais a composição de imunoglobulina é derivada.

[00017] É uma vantagem adicional e objetivo da invenção fornecer uma composição de globulina hiperimune (por exemplo, IVIG) contendo anticorpos opsônicos amplamente reativos, específicos para S. pneumonia para um paciente (por exemplo, um paciente imunocomprometido (por exemplo, um paciente com PIDD)) para tratar ou prevenir a infecção pneumocócica no paciente (por exemplo, inibindo o crescimento de S. pneumonia e/ou a depuração de S. pneumonia do sangue do paciente). Outra vantagem e objetivo da invenção é fornecer uma composição de globulina hiperimune (por exemplo, IVIG) da invenção contendo anticorpos opsônicos amplamente reativos, específicos para S. pneumonia para um paciente (por exemplo, um paciente imunocomprometido (por exemplo, um paciente com PIDD)) para tratar a infecção pneumocócica no paciente (por exemplo, melhorando ou aumentando a depuração de S. pneumonia do sangue do paciente). É uma vantagem adicional e objetivo da invenção fornecer uma composição de globulina hiperimune (por exemplo, IVIG) da invenção contendo anticorpos opsônicos amplamente reativos, específicos para S. pneumonia para um paciente (por exemplo, um paciente imunocomprometido (por exemplo, um paciente com PIDD)) para prevenir infecções do trato respiratório superior no paciente que não podem ser evitadas com o tratamento convencional com IVIG. A invenção não está limitada pelo tipo de infecção do trato respiratório superior prevenida e/ou tratada e pode incluir, mas não está limitada a, rinossinusite (sinusite), otite média, faringite, epiglotite, laringotraqueíte e laringotraqueobronquite. Do mesmo modo, as composições e os métodos de utilização (por exemplo, a administração) são os mesmos que se encontram na prevenção e/ou no tratamento de sinais ou sintomas da infecção do trato respiratório superior incluindo, mas não limitado a, tosse, espirros, secreção nasal, congestão nasal, corrimento nasal, febre, irritação ou dor de garganta e respiração nasal.

[00018] Numa modalidade, a invenção proporciona composições e métodos para obter uma composição compreendendo amostras de plasma reunido (por exemplo, plasma de uma pluralidade de doadores (por exemplo, doadores que foram vacinados com uma ou mais vacinas pneumocócicas) que contêm títulos elevados de anticorpos opsônicos antipneumocócicos.

[00019] Assim, é um objetivo da invenção proporcionar métodos para gerar composições (por exemplo, composições de sangue, plasma e/ou imunoglobulina (por exemplo, globulina hiperimune) contendo um título elevado de anticorpos opsônicos antipneumocócicos. Numa modalidade, uma ou uma pluralidade de sujeitos humanos adultos saudáveis (por exemplo, sujeitos humanos sem condições médicas conhecidas) são administrados um imunógeno pneumocócico, uma proteína pneumocócica recombinante ou uma combinação destes. Em algumas modalidades de imunógeno de S. pneumonia é um açúcar de membrana celular de S. pneumonia (por exemplo, um polissacarídeo). Em algumas modalidades, o imunógeno de S. pneumonia é uma vacina de S. pneumonia contendo uma ou uma pluralidade de proteínas de S. pneumonia (por exemplo, proteínas recombinantes ou isoladas). Em algumas modalidades, um imunógeno de S. pneumonia é uma vacina conjugada (por exemplo, conjugada com um carreador e/ou adjuvante (por exemplo, uma proteína ou outra molécula carreadora)). Em algumas modalidades, um imunógeno de S. pneumonia é uma vacina não conjugada. Em algumas modalidades, a vacina conjugada ou a vacina não conjugada contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 21,22, 23 ou mais imunógenos diferentes (por exemplo, de um número igual de diferentes sorotipos de S. pneumonia). Em algumas modalidades, um ou mais sorotipos diferentes de S. pneumonia incluem, mas não estão limitados a, sorotipos 1,2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7A, 7B, 7C, 7D, 7E, 7F, 8, 9A-9V, 12, 14, 18C, 19A-19F, 23A-23F e 25. Em algumas modalidades, um ou mais sorotipos diferentes de S. pneumonia são selecionados de qualquer um dos mais dos 90 sorotipos diferentes conhecidos de S. pneumonia. Em algumas modalidades, um ou mais sorotipos diferentes de S. pneumonia é recentemente identificado.

[00020] Numa outra modalidade, uma ou uma pluralidade de sujeitos humanos saudáveis (por exemplo, sujeitos humanos sem condições médicas conhecidas) são administrados um imunógeno pneumocócico, uma proteína pneumocócica recombinante ou uma combinação destes, presente em uma vacina pneumocócica comercial. A invenção não está limitada pelo tipo de vacina pneumocócica comercial. De fato, qualquer vacina pneumocócica conhecida na técnica pode ser utilizada incluindo, mas não se limitando à vacina conjugada pneumocócica (PCV13 ou PREVNAR13, Wyeth Pharmaceuticals, Collegeville, PA), SYNFLORIX e/ou vacina pneumocócica de polissacarídeo (PPSV23 ou PNEUMOVAX23, Merck Sharp). & Dohme Corp., North Wales, PA). Numa modalidade, uma ou uma pluralidade de sujeitos humanos saudáveis recebe uma vacinação primária ou de iniciação com uma primeira vacina antipneumocócica e uma vacinação de reforço subsequente com a primeira vacina antipneumocócica ou com uma segunda vacina antipneumocócica diferente. Por exemplo, numa modalidade, um ou uma pluralidade de humanos saudáveis recebem uma vacinação/imunização primária ou de iniciação ou com uma primeira vacina antipneumocócica (por exemplo, PREVNAR), e depois receber uma vacinação/imunização de reforço (por exemplo, às 2 semanas, 4 semanas, 6 semanas, 8 semanas, 10 semanas, 12 semanas ou mais após a vacinação/imunização primária) com uma segunda vacina antipneumocócica (por exemplo, PNEUMOVAX23). Em um momento posterior à vacinação sequencial (por exemplo, às 2 semanas, 4 semanas, 6, semanas, 8 semanas, 10 semanas, 12 semanas ou mais, após a vacinação sequencial), o soro/plasma é colhido a partir dos doadores de planas humano vacinado e saudável. O plasma dos dadores vacinados pode ser reunido (entre si e/ou com plasma de doadores não vacinados) seguido de isolamento e/ou purificação da imunoglobulina do mesmo (por exemplo, para gerar uma globulina hiperimune antipneumocócica da invenção). Métodos de colheita de plasma, bem como extração de imunoglobulina são bem conhecidos pelos versados na técnica.

[00021] Numa modalidade, a invenção proporciona um método para a preparação de uma globulina hiperimune com um título elevado de anticorpo opsonofagocítico para Streptococcus pneumonia (por exemplo, um título que é pelo menos 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 7 vezes, 10 vezes ou mais, pelo menos cerca de 55% ou mais (por exemplo,60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ou mais) de sorotipos de S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F) em comparação com os títulos de anticorpos opsonofagocíticos específicos antipneumocócicos para os mesmos sorotipos presentes numa amostra de controle; ou, um título específico para 70% ou mais dos sorotipos de S. pneumonia selecionados dos sorotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F e 23, ou seja, 2 vezes ou mais (por exemplo, 3-25 vezes ou mais) que o título de anticorpos opsonofagocíticos específicos para os mesmos sorotipos S. pneumonia presentes em uma amostra de controle; ou, um título entre 1:64 e 1: 8192 (por exemplo, pelo menos 1:256 (por exemplo, pelo menos 50% ou mais (por exemplo, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ou mais)) de sorotipos S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F) conforme determinado por um ensaio de morte opsonofagocítica aqui descrito) compreendendo as etapas de imunizar doadores de plasma humano adulto saudáveis entre as idades de 18-60 com imunização primária com uma vacina de S. pneumonia multivalente, seguida de imunização com uma vacina de S. pneumonia multivalente de reforço que é a mesma ou pode ser diferente da vacina primária; colher plasma dos doadores de plasma subsequente à imunização de reforço; reunir plasma dos doadores vacinados, a fim de obter uma reunião de plasma contendo um título elevado de título de anticorpo opsonofagocítico para S. pneumonia; e preparar uma imunoglobulina a partir do plasma reunido. Numa outra modalidade, o método compreende tornar a imunoglobulina obtida injetável por via intravenosa. A imunoglobulina pode ser fornecida em solução e/ou o pH e a força iônica da solução podem ser ajustados de modo a torná-lo intravenosamente injetável.
A invenção não está limitada pelo número de indivíduos vacinados de acordo com os métodos aqui descritos. Por exemplo, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400 ou mais doadores de plasma humanos adultos saudáveis podem ser vacinados e o plasma é colhido dos doadores. Numa modalidade, o plasma reunido é feito de reunião de plasma de 1000 ou mais doadores de plasma humano adultos saudáveis vacinados diferentes. Numa modalidade, o plasma reunido contém um título de anticorpo opsonofagocítico que é pelo menos 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 7 vezes, 10 vezes, ou mais, para pelo menos cerca de 55% ou mais (por exemplo,60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ou mais) de sorotipos de S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F) em comparação com os títulos opsonofagocíticos específicos de anticorpos antipneumocócicos para os mesmos sorotipos presentes em uma amostra de controle (por exemplo, imunoglobulina preparada a partir de plasma reunido a partir de 1000 ou mais doadores aleatórios de plasma humano não vacinados). Numa outra modalidade, o plasma reunido contém um título de anticorpo opsonofagocítico específico para 70% ou mais dos sorotipos de S. pneumonia selecionados dos sorotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F e 23, ou seja, 2 vezes ou mais (por exemplo, 3-25 vezes ou mais) que o título de anticorpos opsonofagocíticos específicos para os mesmos sorotipos S. pneumonia presentes em uma amostra de controle (por exemplo, imunoglobulina preparada a partir de plasma reunido a partir de 1000 ou mais doadores aleatórios de plasma humano não vacinados). Ainda numa outra modalidade, o plasma reunido contém um título de anticorpo opsonofagocítico entre 1:64 e 1:8192 (por exemplo, para pelo menos 50% ou mais (por exemplo, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ou mais) de sorotipos de S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F) conforme determinado por um ensaio de morte opsonofagocítica aqui descrito ou conhecido na técnica.

[00022] A invenção também proporciona uma imunoglobulina (por exemplo, uma globulina hiperimune) preparada de acordo com o método descrito acima. A imunoglobulina (por exemplo, globulina hiperimune) assim preparada pode ser utilizada em vários métodos. Por exemplo, a imunoglobulina pode ser utilizada em um método de tratamento de infecção por S. pneumonia num sujeito (por exemplo, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz da imunoglobulina). A imunoglobulina também pode ser utilizada num método de proporcionar imunoterapia a um sujeito (por exemplo, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz da imunoglobulina).

[00023] A invenção também fornece, em uma modalidade, um método de preparar uma globulina hiperimune tendo atividade bactericida opsonofagocítica aumentada contra pelo menos sete sorotipos de Streptococcus pneumonia para a prevenção ou tratamento de infeção por S. pneumonia compreendendo as etapas de imunizar doadores de plasma humano adulto saudável com uma imunização primária com uma vacina conjugada de S. pneumonia multivalente seguida de imunização de reforço com uma vacina de S. pneumonia de polissacarídeo multivalente que é diferente do que a primeira vacina; colher e reunir plasma dos doadores de plasma imunizados; e preparando a imunoglobulina do plasma reunido, no qual a imunoglobulina contém um título de anticorpo opsonofagocítico específico para cada um dos pelo menos sete sorotipos de S. pneumonia que é duplo ou superior (por exemplo, 3-25 vezes ou mais) que o título de anticorpo opsonofagocítico específico para cada um dos pelo menos sete sorotipos de S. pneumonia presentes em uma amostra de controle (por exemplo, imunoglobulina preparada a partir de plasma reunido a partir de 1000 ou mais doadores aleatórios de plasma humano não vacinados). A invenção também proporciona uma globulina hiperimune preparada de acordo com o método descrito acima. A globulina hiperimune pode ser usada em vários métodos. Por exemplo, a globulina hiperimune pode ser usada em um método de tratamento de infecção por S. pneumonia num sujeito compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz da globulina hiperimune. A globulina hiperimune pode também ser utilizada num método de proporcionar imunoterapia a um sujeito compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz da globulina hiperimune.

[00024] Em algumas modalidades, a invenção proporciona um método de preparação de composições (por exemplo, composições de sangue, plasma e/ou imunoglobulina (por exemplo, globulina hiperimune) contendo um título elevado de anticorpos opsônicos, antipneumocócicos envolvendo rastrear o plasma (por exemplo, reuniões de plasma ou imunoglobulina, preparações de imunoglobulina ou imunoglobulina) para anticorpos de ligação antipneumocócicos totais utilizando um ensaio de ligação ao antígeno in vitro (por exemplo, utilizando uma ELISA) juntamente com um ensaio de morte opsonofagocítica (por exemplo, um ensaio de morte opsonofagocítica aqui descrito ou conhecido na técnica). Em algumas modalidades, a invenção proporciona um método de preparação de composições (por exemplo, composições de sangue, plasma e/ou imunoglobulina) contendo um título elevado de anticorpos opsônicos e antipneumocócicos envolvendo rastrear o plasma (por exemplo, reuniões de plasma ou imunoglobulina, imunoglobulina ou preparações de imunoglobulina) para o título total de anticorpo opsônico antipneumocócico usando um ensaio bactericida opsonofagocítico (por exemplo, um ensaio descrito no Exemplo 1). Numa outra modalidade, a invenção proporciona um método de preparação de composições (por exemplo, composições de sangue, plasma e/ou imunoglobulina) contendo um título elevado de anticorpos opsônicos, antipneumocócicos envolvendo rastrear o plasma (por exemplo, reuniões de plasma ou imunoglobulina, imunoglobulina ou preparações de imunoglobulina) para anticorpos de ligação antipneumocócicos totais utilizando um ensaio de ligação ao antígeno in vitro (por exemplo, utilizando um ELISA), seguido de varredura do plasma (por exemplo, reuniões de plasma ou imunoglobulina, imunoglobulina ou preparações de imunoglobulina) para título de anticorpo opsônico antipneumocócico total utilizando um ensaio bactericida opsonofagocítico (por exemplo, um ensaio descrito no Exemplo 1). Numa outra modalidade, a eficácia protetora pode ser documentada in vivo por análise da atividade protetora das composições (por exemplo, composições de sangue, plasma e/ou imunoglobulina) contendo um título elevado de anticorpos opsônicos e antipneumocócicos utilizando um modelo animal de infecção por S. pneumonia (por exemplo, para determinar a morbidade, mortalidade e/ou a depuração bacteriana). A invenção não está limitada pelo método ou ensaio utilizado para medir o título opsônico do anticorpo presente. Na verdade, uma variedade de ensaios pode ser usada incluindo, mas não limitada a, aqueles aqui descritos (por exemplo, no Exemplo 1).

[00025] A invenção proporciona um modo, numa modalidade, de gerar uma composição compreendendo a obtenção de amostras de plasma de doadores (por exemplo,50, 100, 300, 500, 1000 ou mais doadores (por exemplo, doadores de plasma humano adulto saudável)) vacinados com uma ou mais vacinas antipneumocócicas e reunindo as amostras de plasma (por exemplo, uns com os outros e/ou com plasma de doadores não vacinados) para gerar uma composição de plasma reunido. Numa modalidade adicional, a imunoglobulina é preparada a partir das amostras de plasma reunido (por exemplo, a imunoglobulina é fracionada, purificada e/ou isolada a partir de plasma através de qualquer método conhecido na técnica incluindo os aqui descritos). Numa outra modalidade, a imunoglobulina da invenção é tornada injetável por via intravenosa (por exemplo, proporcionando a imunoglobulina em solução, ajustando o pH, ajustando a força iônica, etc.). Como descrito acima, em uma modalidade, uma composição de plasma reunido da invenção contém um título de anticorpo opsonofagocítico que é pelo menos 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 7 vezes, 10 vezes, ou mais, para pelo menos cerca de 55% ou mais (por exemplo,60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ou mais) de sorotipos de S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F) em comparação com os títulos específicos de anticorpos antipneumocócicos, opsônicos para os mesmos sorotipos presentes em uma amostra de controle (por exemplo, imunoglobulina preparada a partir de plasma reunido a partir de 1000 ou mais doadores aleatórios de plasma humano não vacinados). Numa outra modalidade, a composição de plasma reunido contém um título de anticorpo opsonofagocítico específico para 70% ou mais dos sorotipos de S. pneumonia selecionados dos sorotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F e 23, ou seja, 2 vezes ou mais (por exemplo, 3-25 vezes ou mais) que o título de anticorpos opsônicos específicos para os mesmos sorotipos de S. pneumonia presentes em uma amostra de controle (por exemplo, imunoglobulina preparada a partir de plasma reunido a partir de 1000 ou mais doadores aleatórios de plasma humano não vacinados). Ainda numa outra modalidade, a composição de plasma reunido contém um título de anticorpo opsonofagocítico entre 1:64 e 1:8192 (por exemplo, para pelo menos 50% ou mais (por exemplo,60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ou mais) de sorotipos de S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F) conforme determinado por um ensaio de morte opsonofagocítica aqui descrito.

[00026] Numa modalidade, as amostras de plasma (por exemplo, de doadores vacinados e/ou não vacinados) são rastreadas para confirmar a ausência de agentes patogênicos transmitidos pelo sangue (por exemplo, antes ou depois da reunião). Em algumas modalidades, amostras de plasma e/ou anticorpo são obtidas de sujeitos doadores na forma de material biológico doado ou comprado (por exemplo, sangue ou plasma). Em algumas modalidades, amostras de plasma e/ou anticorpo (por exemplo, sangue, plasma, anticorpos isolados, etc.) são obtidos a partir de uma fonte comercial. Em algumas modalidades, uma amostra de plasma e/ou de anticorpo, doação de sangue ou doação de plasma é rastreada para patógenos, e limpa ou descartada se patógenos específicos estiverem presentes. Em algumas modalidades, o rastreio ocorre antes de reunir uma amostra de doador com outras amostras de doador. Em outras modalidades, o rastreio ocorre após a reunião das amostras. Anticorpos, sangue e/ou plasma podem ser obtidos de qualquer sujeito adequado. Em algumas modalidades, os anticorpos, sangue e/ou plasma são obtidos de um sujeito que tem recentemente (por exemplo, dentro de 1 ano, dentro de 6 meses, dentro de 2 meses, dentro de 1 mês, dentro de 2 semanas, dentro de 1 semana, dentro de 3 dias, dentro de 2 dias, no prazo de 1 dia) foram vacinados contra ou foram expostos a uma ou mais vacinas pneumocócicas.

[00027] Em algumas modalidades, as amostras de sangue, plasma e/ou imunoglobulina identificadas (por exemplo, de acordo com os métodos aqui descritos) como contendo um título elevado de anticorpos opsônicos, antipneumocócicos são combinados (por exemplo, reunidos) para produzir uma composição da invenção (por exemplo, globulina hiperimune) compreendendo um título elevado de anticorpos opsônicos e antipneumocócicos.

[00028] Qualquer método adequado para obter plasma, amostras de anticorpos, composições de plasma reunido e/ou imunoglobulina a partir da mesma estão dentro do âmbito da presente invenção. Além disso, qualquer método adequado para produzir, fabricar, purificar, fracionar, enriquecer, etc., amostras de anticorpos e/ou conjuntos de plasma está dentro dos limites da presente invenção. Técnicas e procedimentos exemplificativos para coletar amostras de anticorpos e produzir reuniões de plasma são fornecidos, por exemplo, em: Patente US 4.174.388; Patente US 4.346.073; Patente US 4.482.483; Patente US 4.587.121; Patente US 4.617.379; Patente US 4.659.563; Patente US 4.665.159; Patente US 4.717.564; Patente US 4.717.766; Patente US 4.801.450; Patente US 4.863.730; Patente US 5.505.945; Patente US 5.582.827; Patente US 6.692.739; Patente US 6.962.700; Patente US 6.984.492; Patente US 7.045.131; Patente US 7.488.486; Patente US 7.597.891; Patente US 6.372.216; Pedido de Patente US 2003/0118591; Pedido de Patente US 2003/0133929 Pedido de Patente US 2005/0053605; Pedido de Patente US 2005/0287146; Pedido de Patente US 2006/0110407; Pedido de Patente US 2006/0198848; Pedido de Patente US 2006/0222651; Pedido de Patente US 2007/0037170; Pedido de Patente US 2007/0249550; Pedido de Patente US 2009/0232798; Pedido de Patente US 2009/0269359; Pedido de Patente US 2010/0040601; Pedido de Patente US 2011/0059085; e Pedido de Patente US 2012/0121578; aqui incorporados por referência na sua totalidade. As modalidades da presente invenção podem utilizar qualquer combinação adequada de técnicas, métodos ou composições a partir das referências mencionadas acima.

[00029] A imunoglobulina isolada da invenção pode ser da fração ou isotipo de IgG, mas a imunoglobulina isolada não está restrita a qualquer fração ou isotipo particular e pode ser IgG, IgM, IgA, IgD, IgE ou qualquer combinação destes. Também é preferível que a imunoglobulina isolada seja imunoglobulina humana pura ou antigênica.

[00030] Numa modalidade, uma composição compreendendo um título elevado de anticorpos opsônicos, antipneumocócicos da invenção é uma solução estéril com um pH de cerca de 6,0-7,8 (por exemplo, 5,0-6,0, 6,0, 6,1,6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1,7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6. 7,7, 7,8 ou superior). Numa outra modalidade, uma composição compreendendo elevado título de anticorpos opsônicos, antipneumocócicos da invenção é preparada de acordo com os padrões da US FDA para preparação de imunoglobulinas (ver, por exemplo, 37 CFR §§640. 100; 640,101; 640,102; 640,103; 640. 104, 1 de abril de 2013). Numa modalidade, uma composição compreendendo elevado título de anticorpos opsônicos, antipneumocócicos da invenção (por exemplo, globulina hiperimune aqui descrita, em particular, nos Exemplos) possui pelo menos o nível mínimo de títulos de anticorpo para Corynebacterium diphtheria, vírus do sarampo, e vírus da poliomielite recomendado pela FDA (por exemplo, ver 37 CFR § 640.104) para o tratamento de pacientes com doença de imunodeficiência.

[00031] Numa modalidade, a composição de plasma reunido não tem níveis detecteis (por exemplo, detectada utilizando qualquer modo conhecido na técnica (por exemplo, recomendado pela US Food and Drug Administration)) de vírus da imunodeficiência humana (HIV) 1 (HIV-1), HIV-2, Treponema pallidum, Plasmodium falciparum, Plasmodium malariae, Ovale Plasmodium, Plasmodium vivax, Plasmodium knowlesi, vírus da hepatite B (HBV), vírus da hepatite C (HCV), príons, vírus do Nilo Ocidental, parvovírus, Typanosoma cruzi, coronavírus SARS e/ou vírus vaccinia. Numa modalidade, cada amostra de plasma individual utilizada num processo ou composição da invenção é recolhida somente em estabelecimentos de sangue aprovados pela FDA e é testado por testes sorológicos (por exemplo, testes sorológicos aprovados pela FDA) para vírus da imunodeficiência humana (HIV) 1 (HIV-1), HIV-2, Treponema pallidum, Plasmodium falciparum, Plasmodium malariae, Ovale Plasmodium, Plasmodium vivax, Plasmodium knowlesi, vírus da hepatite B (HBV), vírus da hepatite C (HCV), príons, vírus do Nilo Ocidental, parvovírus, Typanosoma cruzi, coronavírus SARS e/ou vírus vaccinia. Numa outra modalidade, uma amostra de plasma individual e/ou uma composição de plasma reunido da invenção é testada quanto à presença de HIV-1, HIV-2, HBV, HCV ou outro agente infeccioso (por exemplo, agente patogênico) utilizando Teste de Ácido Nucleico (NAT) e utilizado num processo ou composição da invenção apenas quando a ausência dos agentes patogênicos é confirmada.

[00032] A invenção não está limitada pelo tipo de sujeito (por exemplo, mamífero, primata não humano, humano, etc.) administrado ou tratado com uma composição da invenção (por exemplo, amostras de plasma reunido e/ou composição imunoterapêutica compreendendo o mesmo). Por exemplo, a invenção não está limitada pelo tipo de paciente que recebe composições (por exemplo, composições de sangue, plasma e/ou imunoglobulina (por exemplo, globulina hiperimune) contendo um título elevado de anticorpos opsônicos e antipneumocócicos. É um objetivo da invenção proporcionar e/ou administrar uma composição da invenção a pacientes imunocomprometidos aqui descritos.

[00033] Numa modalidade, o plasma reunido compreende amostras de plasma obtidas de 1.000-3.000 ou mais (por exemplo, mais de 1.000, 1.250, 1.500, 1.750, 2.000, 2.500, 3.000, 3.500, 4.000 ou mais) seres humanos. Numa modalidade, a composição compreendendo amostras de plasma reunido compreende ainda um carreador farmaceuticamente aceitável (por exemplo, carreadores de ocorrência natural e/ou não natural). Numa modalidade, a composição de plasma reunido é utilizada para preparar imunoglobulina (por exemplo, para administração intravenosa a um sujeito). Numa modalidade, a composição de plasma reunido e/ou a imunoglobulina proporciona um benefício terapêutico a um sujeito administrado com a composição que não é possível através da administração de uma mistura de amostras de plasma obtidas de 1000 ou mais sujeitos humanos aleatórios e/ou imunoglobulina preparada a partir do mesmo (por exemplo, evita ou trata a infecção respiratória superior em um sujeito não prevenido ou tratado com IVIG convencional). A invenção não está limitada pelo tipo de benefício terapêutico fornecido. De fato, uma variedade de benefícios terapêuticos pode ser alcançada incluindo aqueles aqui descritos.

[00034] Numa modalidade, o plasma reunido e/ou a imunoglobulina preparada a partir do mesmo da invenção reduz a incidência de infecção (por exemplo, infecção do trato respiratório superior) num sujeito administrado com a composição. Numa outra modalidade, um plasma reunido e/ou imunoglobulina preparada a partir do mesmo da invenção reduz o número de dias em que um sujeito administrado com o plasma reunido e/ou a imunoglobulina da invenção é requerido para ser administrado com antibióticos (por exemplo, para tratar a infecção (por exemplo, infecção do trato respiratório superior)). Ainda numa outra modalidade, um plasma reunido e/ou uma imunoglobulina preparada a partir do mesmo da invenção aumenta o nível de circulação de anticorpos opsônicos antipneumocócicos em um sujeito (por exemplo, aumenta o nível de título de anticorpo opsônico específico para S. pneumonia (por exemplo, proporcionando assim níveis protetores de anticorpos específicos antipneumocócicos entre as datas programadas de administração do plasma reunido e/ou da imunoglobulina preparada a partir do mesmo da invenção (por exemplo, que não são mantidas num sujeito administrado IVIG convencional)).

[00035] Objetivos adicionais, características e vantagens da invenção atual serão evidentes a partir da seguinte descrição detalhada. Deve-se compreender, entretanto, que a descrição detalhada e os exemplos específicos, ao indicar as modalidades preferidas da invenção atual, estão apresentados por a ilustração somente, desde que as várias mudanças e modificações dentro do princípio e do escopo da invenção atual se tornarão aparentes àquelas pessoas versadas na técnica desta descrição detalhada.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[00036] A FIG. 1 mostra os títulos de ligação de anticorpos IgG específicos do sorotipo pneumocócico em soros de doadores vacinados individuais desenhados nos seguintes pontos de tempo: imediatamente antes da vacinação primária com PREVNAR (Pre), imediatamente antes da vacinação secundária com PNEUMOVAX23 na semana 4 (Semana 4), na semana 8, na semana 10, na semana 12 e na semana 16. Os títulos médios de ligação ao anticorpo IgG específico do sorotipo pneumocócico são apresentados para a Pre e para as semanas 4, 8, 10 e 12, e para a Pre e a semana 12 reunidas. O aumento da dobra em títulos de ligação ao anticorpo IgG específico do sorotipo pneumocócico entre a Pre e a semana 12 também são mostrados.

[00037] A FIG 2 mostra a morte opsônica específica do sorotipo pneumocócico (OPK) em soros de doadores vacinados individuais desenhados nos seguintes pontos de tempo: imediatamente antes da vacinação primária com PREVNAR (Pre), imediatamente antes da vacinação secundária com PNEUMOVAX23 na semana 4 (Semana 4), na semana 8, na semana 10, na semana 12 e na semana 16, específico para vários sorotipos pneumocócicos. Os títulos médios opsônicos específicos do sorotipo pneumocócico são apresentados para a Pre e para as semanas 4, 8, 10 e 12, e para a Pre e a semana 12 reunidas. O aumento da dobra em títulos de OPK específicos do sorotipo pneumocócico entre a Pre e a semana 12 também são mostrados.

[00038] A FIG. 3 mostra o título de ligação ao anticorpo IgG específico do sorotipo pneumocócico em soros doadores reunidos de 40 sujeitos que foram sorteados nos seguintes pontos de tempo: imediatamente antes da vacinação primária com PREVNAR (Pre), na semana 8, na semana 10, na semana 12 e na semana 16, e no mês 5.

[00039] A FIG. 4 mostra concentrações de ligação de anticorpos IgG específicos para o sorotipo pneumocócico em soros de doadores reunidos são desenhadas nos seguintes pontos de tempo: imediatamente antes da vacinação primária com PREVNAR (Pre), na semana 8, na semana 10, na semana 12 e na semana 16, e no mês 5. (* = linha de base).

[00040] A FIG. 5 mostra os títulos de morte opsônica específica do sorotipo pneumocócico (OPK) em soros de doadores reunidos de 40 sujeitos que foram extraídos nos seguintes pontos de tempo: imediatamente antes da vacinação primária com PREVNAR (Pre), na semana 8, na semana 10, na semana 12 e na semana 16, e no mês 5.

[00041] A FIG. 6 mostra as concentrações de ligação de anticorpos IgG específicos do sorotipo pneumocócico em imunoglobulina (IG) purificada de soros de doadores reunidos de 40 indivíduos que foram extraídos nos pontos de tempo indicados.

[00042] A FIG. 7 mostra os títulos de OPK específicos do sorotipo pneumocócico em IgG purificada a partir de soros de doadores reunidos de 40 indivíduos que foram retirados nos pontos de tempo indicados.

[00043] A FIG. 8 mostra uma comparação do título específico de sorotipo de OPK de anticorpos funcionais/opsônicos presentes em soros humanos reunidos de doadores vacinados versus título específico de sorotipo de OPK de anticorpos funcionais/opsônicos presentes em IVIGs convencionais diferentes, comercialmente disponíveis. Cada coluna representa apenas um sorotipo de S. pneumonia único. Cada linha representa uma amostra exclusiva. As amostras A-I representam diferentes lotes de IVIG convencional, comercialmente disponível. "Média de IVIG" é o título médio padrão de sorotipo de OPK de anticorpos funcionais/opsônicos presentes em uma amostra reunida contendo quantidades iguais de cada IVIG convencional comercialmente disponível. A "Vacinação de Pre do soro do doador” representa o título específico do sorotipo de OPK dos anticorpos funcionais/opsônicos presentes na Vacinação de Pre do soro do doador humano reunido descrito no Exemplo 1. "Soro de doador vacinado” representa o título específico de sorotipo de OPK de anticorpos funcionais/opsônicos presentes em soros de doador humano reunidos às doze semanas após a vacinação descrita no Exemplo 1. "Aumento de título de dobra em IVIG comercial" representa o aumento de dobra em título específico de sorotipo de OPK de anticorpos funcionais/opsônicos presentes no soro de doador humano reunido às doze semanas após a vacinação descrita no Exemplo 1 em relação ao título médio padrão de sorotipo de OPK de anticorpos funcionais/opsônicos presentes em uma amostra reunida contendo quantidades iguais de cada IVIG convencional, comercialmente disponível.

[00044] As FIGS. 9A-9L descrevem título de anticorpo opsônico específico de sorotipo de S. pneumonia presente em nove diferentes lotes comerciais de IVIG (amostras A-I) em comparação com o título de anticorpo opsônico específico de sorotipo de S. pneumonia presente na globulina hiperimune da invenção contendo um alto título de anticorpos opsônicos, antipneumocócicos para cada sorotipo.

[00045] A FIG. 10 mostra a percentagem de indivíduos com doença de imunodeficiência primária que se encontram abaixo dos níveis protetores (1,2 mg/ml) de anticorpos de ligação de anti-S Pneumonia anticorpos de ligação no nível baixo após infusão de IVIG convencional.

DEFINIÇÕES

[00046] Tal como aqui utilizado, o termo "sujeito" refere-se a qualquer humano ou animal (por exemplo, primatas não humanos, roedores, felinos, caninos, bovinos, porcinos, equinos, etc.).

[00047] Tal como aqui utilizado, o termo "amostra” é usado em seu sentido mais amplo e abrange materiais obtidos de qualquer fonte, e pode ser usado, por exemplo, para se referir a materiais obtidos de uma fonte biológica, por exemplo, obtido de animais (incluindo humanos), e abrange ainda quaisquer fluidos, sólidos e tecidos. Em modalidades particulares desta invenção, as amostras biológicas incluem sangue e produtos sanguíneos tais como plasma, soro e semelhantes. No entanto, estes exemplos não devem ser interpretados como limitando os tipos de amostras que acham uso com a presente invenção.

[00048] Tal como aqui utilizado, o termo "anticorpo" refere-se a uma molécula de imunoglobulina que é tipicamente composta por dois pares idênticos de cadeias polipeptídicas, cada par tendo uma cadeia "leve" (L) e uma cadeia "pesada" (H). Cadeias leves humanas são classificadas como cadeias leves capa e lambda. Cadeias pesadas são classificadas como mu, delta, gama, alfa ou épsilon e definem o isotipo do anticorpo como IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, respectivamente. Dentro das cadeias leves e pesadas, as regiões variáveis e constantes são unidas por uma "J" da região de cerca de 12 ou mais aminoácidos, com a cadeia pesada incluindo também uma região "D" de cerca de 3 ou mais aminoácidos. Cada cadeia pesada é compreendida por uma região variável de cadeia pesada (abreviada aqui como HCVR ou VH) e uma região constante de cadeia pesada. A região constante da cadeia pesada é composta por três domínios, CH1, CH2 e CH3. Cada cadeia leve é constituída por uma região variável de cadeia leve (abreviada aqui como LCVR ou VL) e uma região constante de cadeia leve. A região constante de cadeia leve é composta de um domínio, CL. As regiões constantes dos anticorpos podem mediar a ligação da imunoglobulina a tecidos hospedeiros ou fatores, incluindo várias células do sistema imunitário (por exemplo, células efetoras) e o primeiro componente (C1q) do sistema do complemento clássico. As regiões VH e VL podem ser ainda subdivididas em regiões de hipervariabilidade, designadas regiões determinantes de complementaridade (CDRs), intercaladas com regiões que são mais conservadas, denominadas regiões estruturais (FRs). Cada Vh e Vl é composta por três CDRs e quatro FRs, arranjadas da extremidade amino-terminal até a extremidade carboxi-terminal na seguinte ordem:FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. As regiões variáveis de cada par de cadeia pesada/leve (Vh e Vl), respectivamente, formam o sítio de ligação ao anticorpo. O termo "anticorpo" engloba um anticorpo que é parte de um multímero de anticorpos (uma forma multimérica de anticorpos), tais como dímeros, trímeros ou multímeros de ordem superior de anticorpos monoméricos. Abrange também um anticorpo que é ligado ou anexado a, ou associado fisicamente ou funcionalmente com uma porção de não anticorpo. Adicionalmente, o termo "anticorpo" não está limitado por nenhum método específico de produção do anticorpo. Por exemplo, inclui, inter alia, anticorpos recombinantes, anticorpos sintéticos, anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos biespecíficos e anticorpos multiespecíficos.

[00049] Tal como aqui utilizado, o termo "derivado de anticorpo" ou "derivado" de um anticorpo refere-se a uma molécula que é capaz de se ligar ao mesmo antígeno que o anticorpo do qual é derivado liga-se a e compreende uma sequência de aminoácidos que é a mesma ou semelhante ao anticorpo ligado a uma entidade molecular adicional. A sequência de aminoácidos do anticorpo que está contido no derivado de anticorpo pode ser o anticorpo de comprimento completo, ou pode ser qualquer porção ou porções de um anticorpo de comprimento completo. A entidade molecular adicional pode ser uma molécula química ou biológica. Exemplos de entidades moleculares adicionais incluem grupos químicos, aminoácidos, peptídeos, proteínas (como enzimas, anticorpos) e compostos químicos. A entidade molecular adicional pode ter qualquer utilidade, como para uso como agente de detecção, marcação, marcador, agente farmacêutico ou terapêutico. A sequência de aminoácidos de um anticorpo pode ser anexada ou ligada à entidade adicional por acoplamento químico, fusão genética, associação não covalente ou de outra forma. O termo "derivado de anticorpo" engloba também anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados e moléculas que derivam de modificações das sequências de aminoácidos de um anticorpo, tais como substituições, adições e inserções de aminoácidos de conservação.

[00050] Tal como aqui utilizado, os termos "antígeno" e "imunógeno" são utilizados indistintamente para se referir a qualquer substância que seja capaz de induzir uma resposta imune adaptativa. Um antígeno pode ser células inteiras (por exemplo, células bacterianas), vírus, fungos ou uma porção antigênica ou componente deste. Exemplos de antígenos incluem, mas não estão limitados a, patógenos microbianos, bactérias, vírus, proteínas, glicoproteínas, lipoproteínas, peptídeos, glicopeptídeos, lipopeptídeos, toxoides, carboidratos, antígenos específicos de tumores e porções antigênicas ou componentes destes.

[00051] Tal como aqui utilizado, o termo "fragmento de ligação ao antígeno” de um anticorpo refere-se a uma ou mais porções de um anticorpo de comprimento total que retém a capacidade de se ligar ao mesmo antígeno ao qual o anticorpo se liga.

[00052] Tal como aqui utilizado, os termos "imunoglobulina", "globulina imune", "molécula de imunoglobulina" e "IG" abrangem (1) anticorpos, (2) fragmentos de ligação ao antígeno de um anticorpo e (3) derivados de um anticorpo, cada um como aqui definido. Tal como aqui descrito, a imunoglobulina pode ser preparada a partir de (por exemplo, fracionadas de, isoladas de, purificadas de, concentradas de, etc.) composições de plasma reunido (por exemplo, para administração a um sujeito). Como usado aqui, o termo "imunoglobulina intravenosa (IVIG)” refere-se à imunoglobulina convencional preparada a partir do plasma de grandes números (por exemplo,250, 500, 1000 ou mais) de doadores humanos aleatórios (por exemplo, HIZENTRA, Imunoglobulina Subcutânea, CSL Behring), enquanto os termos "imunoglobulina antipneumocócica” ou "IVIG antipneumocócica” ou "globulina hiperimune antipneumocócica” (por exemplo, como descrito aqui e nos Exemplos), referem-se à imunoglobulina preparada a partir de doadores de plasma (por exemplo, doadores de plasma humano) de acordo com os métodos da invenção (por exemplo, grandes números (por exemplo, 250, 500, 1000 ou mais) de doadores de plasma humano (por exemplo, doadores de plasma humano saudáveis) que foram vacinados com uma ou mais vacinas antipneumocócicas de acordo com os métodos descritos aqui), que contêm um elevado nível específico antipneumocócico, título de anticorpo opsônico quando comparado a uma amostra de controle.

[00053] Os termos "anticorpo opsonofagocítico" e "anticorpo opsônico” são aqui utilizados de forma intercambiável para se referir a anticorpos que funcionam ativamente para causar bactérias ou outras matérias estranhas (por exemplo, células ou produtos celulares) para se tornarem suscetíveis à ação de fagócitos (por exemplo, bactéria de revestimento de anticorpos opsônicos em giro, fazendo com que as células bacterianas se tornem suscetíveis à fagocitose devido à interação entre os anticorpos opsônicos que revestem as células bacterianas e os receptores presentes na superfície dos fagócitos). Por exemplo, um anticorpo opsônico antipneumocócico é um anticorpo que se liga e reveste a superfície de S. pneumonia e faz com que a bactéria se torne suscetível à fagocitose/morte por fagócitos.

[00054] Os termos "título de anticorpo opsonofagocítico" e "título de anticorpo opsônico" são aqui utilizados de forma intercambiável para se referir ao título de anticorpos opsonofagocíticos funcionalmente ativos (por exemplo, que se correlacionam com proteção contra infecção e/ou doença). Por exemplo, um título de anticorpo opsônico antipneumocócico (por exemplo, medido por um ensaio OPK aqui descrito) é o título de anticorpos opsonofagocíticos específicos para S. pneumonia numa amostra (por exemplo, que é independente e distinta da quantidade total de anticorpo capaz de se ligar à S. pneumonia presente na amostra (por exemplo, medido por um ensaio ELISA).

[00055] Tal como aqui utilizado, o termo “globulina hiperimune” refere-se à imunoglobulina preparada a partir do plasma de doadores com altos títulos de anticorpos (por exemplo, anticorpo opsônico) contra um organismo específico (por exemplo, S. pneumonia). Por exemplo, tal como aqui utilizado, uma "globulina hiperimune antipneumocócica" é uma imunoglobulina contendo um título de anticorpo opsônico antipneumocócico elevado, independentemente de (isto é, independente e distinto) do título total ou quantidade de anticorpo capaz de se ligar à S. pneumonia.

[00056] Tal como aqui utilizado, um título elevado de anticorpo específico antipneumocócico opsônico é um que seja pelo menos 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 7 vezes, 10 vezes, ou mais, pelo menos durante cerca de 55% ou mais (por exemplo, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ou mais) de sorotipos de S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F) em comparação com os títulos de anticorpos específicos antipneumocócicos opsônicos para os mesmos sorotipos presentes numa amostra de controle; ou um que seja específico para 70% ou mais dos sorotipos de S. pneumonia selecionados dos sorotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F e 23 e que é 2 vezes ou mais (por exemplo,3-25 vezes ou mais) que o título de anticorpos opsônicos específicos para o mesmo sorotipo de S. pneumonia presente em uma amostra de controle; ou um que esteja entre 1:64 e 1:8192 (por exemplo, pelo menos 50% ou mais (por exemplo,60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ou mais) de sorotipos de S. pneumonia 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F) conforme determinado por um ensaio de morte opsonofagocítica aqui descrito; ou um que seja pelo menos 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes ou mais do que o título de anticorpo específico antipneumocócico opsônico presente em uma amostra de controle, por exemplo, para pelo menos 55% ou mais dos sorotipos pneumocócicos selecionados dos sorotipos 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F (ou seja, pelo menos 2, 3, 4, 5 vezes ou mais de aumento maior nos títulos específicos de anticorpos específicos antipneumocócicos opsônicos para 7/12, 8/12, 9/12, 10/12, 11/12 ou 12/12 dos sorotipos pneumocócicos em comparação com uma amostra de controle). A invenção não é limitada pelo tipo de amostra de controle utilizada. Por exemplo, numa modalidade, uma amostra de controle é imunoglobulina preparada a partir da Vacinação de Pre de doador(es) de plasma humano saudável (por exemplo, de modo que os níveis de Pre-imunização de títulos de anticorpos opsônicos específicos de antipneumocócicos dos doadores de plasma humano são utilizados como linha de base para medir o aumento dos títulos antipneumocócicos específicos, os anticorpos opsônicos após a imunização). Numa outra modalidade, uma amostra de controle é imunoglobulina preparada a partir de uma mistura de amostras de plasma obtidas de 1000 ou mais doadores aleatórios de plasma humano que não foram vacinados com uma vacina antipneumocócica (por exemplo, de modo que os níveis de títulos de anticorpos específicos antipneumocócicos opsônicos dos doadores de plasma humano não vacinados são utilizados como base para medir o aumento dos títulos de anticorpos antipneumocócicos opsônicos presentes em doadores de plasma humanos vacinados de acordo com os métodos da invenção). Os versados na técnica apreciarão que outras amostras de controle podem ser utilizadas. Um título de anticorpo antipneumocócico opsônico elevado pode também ser um título que é usado para medir a morte bacteriana e/ou um que é usado como um substituto preciso para prever a eficácia de uma preparação de imunoglobulina para proteger contra S. pneumonia infecções.

[00057] Tal como aqui utilizado, a frase "farmaceuticamente aceitável" refere-se a entidades e composições moleculares que são fisiologicamente toleráveis e não produzem tipicamente uma reação alérgica ou semelhante indesejável inaceitável quando administrada a um humano.

[00058] PNEUMOVAX (Merck Sharp & Dohme Corp., North Wales, PA) refere-se à vacina pneumocócica polissacarídica composta de preparações purificadas de polissacarídeo capsular pneumocócico. O PPSV23 contém o antígeno polissacarídico dos seguintes 23 tipos de bactérias pneumocócicas:1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19F, 19A, 20, 22F, 23F, e 33F. Contém 25 μg de cada antígeno por dose e contém 0,25% de fenol como conservante.

[00059] PREVNAR-13 (Wyeth Pharmaceuticals, Collegeville, PA) refere-se a uma vacina pneumocócica conjugada que inclui polissacarídeo capsular purificado de 13 sorotipos de Streptococcus pneumonia (1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 19A, 19F, 18C e 23F) conjugado com uma variante não tóxica da toxina da difteria conhecida como CRM197. Uma dose de 0,5 mililitro (mL) de PCV13 contém aproximadamente 2,2 microgramas μg) de polissacarídeo de cada um dos 12 sorotipos e aproximadamente 4,4 μg de polissacarídeo do sorotipo 6B; a concentração total de CRM197 é de aproximadamente 34 μg. A vacina contém 0,02% de polissorbato 80 (P80), 0,125 miligramas (mg) de alumínio como adjuvante de fosfato de alumínio (AlPO4) e 5 mL de tampão de succinato. A vacina não contém conservante de timerosal.

[00060] Tal como aqui utilizado, o termo "amostra de anticorpo” refere-se a uma composição contendo anticorpo (por exemplo, fluido (por exemplo, plasma, sangue, anticorpos purificados, frações de sangue ou plasma, componentes de sangue ou plasma, etc.)) retirados ou fornecidos por um doador (por exemplo, fonte natural) ou obtido de um produto sintético, recombinante, outra fonte in vitro, ou de uma fonte comercial. A amostra de anticorpos pode exibir um título elevado de um anticorpo particular ou conjunto de anticorpos com base nas exposições patogênicas/antigênicas (por exemplo, exposição natural ou através da vacinação) do doador ou os anticorpos engenheirados para serem produzidos no contexto sintético, recombinante ou in vitro. Aqui, uma amostra de anticorpo com título elevado de anticorpo X é referida como uma "amostra de anticorpo de X elevado”. Por exemplo, uma amostra de anticorpo com título elevado de anticorpos contra S. pneumonia é referido como uma amostra de anticorpo de "S. pneumonia elevada”.

[00061] Tal como aqui utilizado, o termo "anticorpo isolado" ou "molécula de ligação isolada" refere-se a um anticorpo ou molécula de ligação que é identificada e separada de pelo menos um contaminante com o qual está normalmente associado na sua fonte. Exemplos de um anticorpo isolado incluem: um anticorpo que:(1) não está associado a um ou mais componentes naturalmente associados que o acompanham em seu estado natural; (2) está substancialmente livre de outras proteínas da sua fonte de origem; ou (3) é expresso de forma recombinante, in vitro, ou isento de células, ou é produzido sinteticamente e é removido do ambiente em que foi produzido.

[00062] Tal como aqui utilizado, os termos "plasma reunido", "amostras de plasma reunido" e "composição de plasma reunido" referem-se a uma mistura de duas ou mais amostras de plasma e/ou uma composição preparada a partir da mesma (por exemplo, imunoglobulina). O título elevado de um determinado anticorpo ou conjunto de anticorpos no plasma reunido reflete os títulos elevados das amostras de anticorpos que compõem o plasma reunido. Por exemplo, as amostras de plasma podem ser obtidas a partir de indivíduos que foram vacinados (por exemplo, com uma vacina pneumocócica) e, portanto, têm um título elevado de anticorpo (por exemplo, título elevado de anticorpo de ligação total e/ou um título elevado de anticorpo opsônico) para um patógeno (S. pneumonia) em comparação com o(s) nível(s) de anticorpos encontrados na população como um todo. Após a reunião das amostras de plasma, é produzida uma composição de plasma reunido (por exemplo, que tem um título elevado de anticorpos específicos para o patógeno particular). Aqui, uma reunião de plasma com título elevado de anticorpo X (por exemplo, em que "X" é um patógeno microbiano) é referido como "reunião de anticorpos de X elevado". Por exemplo, um plasma reunido com título elevado de anticorpos de ligação S. pneumonia é referido como " uma reunião de anticorpo de S. pneumonia elevada. " Composições de plasma reunido podem ser usadas para preparar imunoglobulina (por exemplo, que é subsequentemente administrada a um indivíduo) através de métodos conhecidos na técnica (por exemplo, fracionamento, purificação, isolamento, etc.). A invenção proporciona que tanto as composições de plasma reunidas como a imunoglobulina preparada a partir da mesma podem ser administradas a um indivíduo para proporcionar benefícios profiláticos e/ou terapêuticos ao sujeito. Por conseguinte, o termo composição de plasma reunido pode referir-se à imunoglobulina preparada a partir de amostras de plasma reunido/plasma reunido.

[00063] Tal como aqui utilizado, o termo "reunião de anticorpo com ponta" refere-se a um plasma reunido com ponta ou combinado com anticorpos ou outras imunoglobulinas produzidas sinteticamente, de forma recombinante ou através de outros meios in vitro.

[00064] Tal como aqui utilizado, o termo "purificado" ou "purificar" significa o resultado de qualquer processo que remova algum de um contaminante do componente de interesse, tal como uma proteína (por exemplo, anticorpo) ou ácido nucleico. A percentagem de um componente purificado é assim aumentada na amostra.

[00065] Tal como aqui utilizado, o termo "agentes imunoterapêuticos" refere-se a uma substância química ou biológica que pode melhorar uma resposta imune (por exemplo, específica ou geral) de um mamífero. Tal como aqui utilizado, o termo "doador" refere-se a um indivíduo que fornece uma amostra biológica (por exemplo, sangue, plasma, etc.). Uma amostra de doador/doador pode ser rastreada quanto à presença ou ausência de patógenos específicos (por exemplo, usando as diretrizes da US Food and Drug Administration (FDA) para avaliar os padrões de segurança para produtos derivados do sangue (por exemplo, emitido pelo Comitê Consultivo de Produtos Sanguíneos da FDA). Por exemplo, uma amostra de doador/doador pode ser rastreada de acordo com as diretrizes da FDA para verificar a ausência de um ou mais agentes patogênicos transmitidos pelo sangue (por exemplo, vírus da imunodeficiência humana (HIV) 1 (HIV-1), HIV-2; Treponema pallidum (sífilis); Plasmodium falciparum, P. malariae, P. ovale, P. vivax ou P. knowlesi (malária); vírus da hepatite B (HBV), vírus HCV da hepatite C); príons (doença de Creutzfeldt Jakob); Vírus do Nilo Ocidental; parvovírus; Typanosoma cruzi; coronavírus SARS (SARS); vírus da vacina ou outro agente patogênico rastreado rotineiramente ou que é recomendável que seja preparado por um órgão regulador como a FDA).

[00066] Tal como aqui utilizado, uma "quantidade imunoestimulatória" refere-se à quantidade de uma vacina (por exemplo, vacina antipneumocócica) que é capaz de estimular uma resposta imune. Uma resposta imune inclui o conjunto de efeitos biológicos que conduzem à produção de imunoglobulinas ou anticorpos do corpo, em resposta a uma entidade estrangeira. Consequentemente, a resposta imune refere-se à ativação de células B, in vivo ou em cultura, através da estimulação de moléculas receptoras de Ig de superfície de células B. A medição da resposta imune está dentro da habilidade comum daqueles que são desta técnica e inclui a determinação dos níveis de anticorpos usando métodos descritos na série. Tijssen, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology:Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, (Burdon & van Knippenberg eds., 3a ed., 1985) Elsevier, Nova Iorque; e Antibodies: A Laboratory Manual, (Harlow & Lane eds.,1988), Cold Spring Harbor Laboratory Press; assim como procedimentos como imunoeletroforese contracorrente (GIEP), radioimunoensaio, radioimunoprecipitação, ensaios imunoabsorventes ligados a enzima (ELISA), ensaios de transferência de pontos e ensaios em sanduíche, ver Patente US 4.376.110 e 4.486.530, todas elas incorporadas por referência. A medição da resposta imune também inclui a detecção ou determinação de eventos de ativação de células B que podem preceder a produção de anticorpos ou sinalizar um aumento na produção de anticorpos. Tais medições incluem ensaios de proliferação de células B, ensaios de fosforilação, ensaios de concentração intracitoplásmica de cálcio livre e outros métodos para determinar a ativação de células B conhecidas na técnica. Ensaios representativos são fornecidos em Mongini et al., J. Immunol. 159:3782-91 (1997); Frade, et al., BBRC 188:833-842 (1992); Tsokos et al., J. Immunol. 144:1640-1645 (1990); Delcayre et al., BBRC 159: 12131220 (1989); e Nemerow et al. J. Immunol. 135:3068-73 (1985), cada um dos quais é incorporado por referência. Em modalidades preferidas, a prática da invenção inclui promover, aumentar ou estimular uma resposta imune. Essas ações referem-se ao estabelecimento de uma resposta imune que não existia anteriormente; para otimizar ou aumentar a resposta imune desejada; para estabelecer ou aumentar uma resposta secundária caracterizada pelo aumento da troca de isotipo, da resposta da memória ou de ambos; proporcionar um efeito imunoprotetor estatisticamente aumentado contra um patógeno; para gerar uma resposta imune humoral equivalente ou maior, ou outra medida de ativação de células B, a partir de uma dose reduzida ou limitativa de antígeno; gerar uma resposta imune humoral aumentada ou outra medida de ativação de células B, em resposta a uma dose equivalente de antígeno; ou para baixar o limiar de afinidade para a ativação de células B in vivo ou in vitro. De preferência, uma quantidade imunoestimulatória refere-se à quantidade de vacina que é capaz de estimular uma resposta imune num sujeito (por exemplo, um doador), e da qual o plasma, soro ou outro componente sanguíneo do sujeito é recolhido para utilização nas composições e métodos da invenção (por exemplo, para o tratamento terapêutico e/ou profilático da infecção pneumocócica num indivíduo tratado com composições e métodos aqui descritos)).

[00067] Os termos "tampão" ou "agentes tampão” referem-se a materiais que, quando adicionados a uma solução, fazem com que a solução resista mudanças no pH.

[00068] Os termos “agente redutor” e “doador de elétrons” referem-se a um material que doa elétrons a um segundo material para reduzir o estado de oxidação de um ou mais dos átomos do segundo material.

[00069] O termo “sal monovalente” refere-se a qualquer sal no qual o metal (por exemplo, Na, K ou Li) tem uma carga líquida 1+ em solução (isto é, mais um próton do que um elétron).

[00070] O termo “sal divalente” refere-se a qualquer sal em que um metal (por exemplo, Mg, Ca ou Sr) tem uma carga líquida 2+ em solução.

[00071] Os termos "quelante" ou "agente quelante" referem-se a quaisquer materiais com mais de um átomo com um par de elétrons soltos que estão disponíveis para se ligar a um íon metálico.

[00072] O termo "solução" refere-se a uma mistura aquosa ou não aquosa.

[00073] Tal como aqui utilizado, o termo "adjuvante" refere-se a qualquer substância que possa estimular uma resposta imune. Alguns adjuvantes podem causar a ativação de uma célula do sistema imune (por exemplo, um adjuvante pode causar uma célula imune a produzir e secretar uma citocina). Exemplos de adjuvantes que podem causar a ativação de uma célula do sistema imune incluem, mas não estão limitados a saponinas purificadas a partir da casca da árvore Q. saponaria, como QS21 (um glicolipídeo que elui no 21° pico com fracionamento de HPLC; Aquila Biopharmaceuticals, Inc.,Worcester, Mass.); poli (di(carboxilatofenoxi)fosfazeno (polímero PCPP; Virus Research Institute, EUA); derivados de lipopolissacarídeos, tais como monofosforil-lipídeo A (MPL; Ribi ImmunoChem Research, Inc.,Hamilton, Mont.), muramil dipeptídeo (MDP; Ribi) e treonil-muramil dipeptídeo (t-MDP; Ribi); OM-174 (um dissacarídeo de glucosamina relacionado com o lipídeo A; OM Pharma SA, Meyrin, Suíça); toxina da cólera (CT) e fator de alongamento de Leishmania (uma proteína de Leishmania purificada; Corixa Corporation, Seattle, Wash.). Os adjuvantes tradicionais são bem conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, sais de fosfato ou hidróxido de alumínio ("alúmen"). Em algumas modalidades, as composições da presente invenção são administradas com um ou mais adjuvantes (por exemplo, para desviar a resposta imune para uma resposta do tipo Th1 e/ou Th2). Em algumas modalidades, um adjuvante descrito em US2005158329; US2009010964; US2004047882; ou US6262029 (cada um dos quais aqui incorporado por referência na sua totalidade) é utilizado.

[00074] Tal como aqui utilizado, o termo "uma quantidade eficaz para induzir uma resposta imune" (por exemplo, de uma vacina pneumocócica), refere-se ao nível de dosagem requerido (por exemplo, quando administrado a um sujeito) para estimular, gerar e/ou provocar uma resposta imune no sujeito. Uma quantidade eficaz pode ser administrada numa ou mais administrações (por exemplo, através da mesma via ou de uma via diferente), aplicações ou dosagens e não se destina a ser limitada a uma formulação particular ou a uma via de administração.

[00075] Tal como aqui utilizado, o termo "sob condições tais que o referido sujeito gere uma resposta imune" refere-se a qualquer indução, geração e/ou estimulação qualitativa ou quantitativa de uma resposta imune (por exemplo, inata ou adquirida).

[00076] Tal como aqui utilizado, o termo "resposta imune” refere-se a uma resposta pelo sistema imune de um sujeito. Por exemplo, as respostas imunes incluem, mas não estão limitadas a, uma alteração detectável (por exemplo, aumento) na ativação do receptor do tipo Toll (TLR), expressão e/ou secreção de linfocina (por exemplo, citocina (por exemplo, citocinas tipo Th1 ou Th2) ou quimiocina, ativação de macrófagos, ativação de células dendríticas, ativação de células T (por exemplo, células T CD4+ ou CD8+), ativação de células NK e/ou ativação de células B (por exemplo, geração e/ou secreção de anticorpos). Exemplos adicionais de respostas imunes incluem ligar um imunógeno (por exemplo, antígeno (por exemplo, polipeptídeo imunogênico)) a uma molécula de MHC e induzir uma resposta de linfócitos T citotóxicos ("CTL"), induzindo uma resposta de células B (por exemplo, produção de anticorpos), e/ou resposta de linfócitos T auxiliares e/ou uma resposta de hipersensibilidade de tipo retardada (DTH) contra o antígeno do qual o polipeptídeo imunogênico é derivado, expansão (por exemplo, crescimento de uma população de células) de células do sistema imune, células T, células B (por exemplo, de qualquer estágio de desenvolvimento (por exemplo, células plasmáticas) e aumento do processamento e apresentação do antígeno pelas células que apresentam antígeno. Uma resposta imune pode ser a imunógenos que o sistema imune do sujeito reconhece como estranho (por exemplo, não autoantígenos de micro-organismos (por exemplo, agentes patogênicos) ou autoantígenos reconhecidos como estrangeiros). Assim, deve ser entendido que, tal como aqui utilizado, "resposta imune" refere-se a qualquer tipo de resposta imune, incluindo, mas não limitado a, respostas imunes inatas (por exemplo, ativação de cascata de sinalização do receptor Toll), respostas imunes mediadas por células (por exemplo, respostas mediadas por células T (por exemplo, células T específicas de antígeno) e células não específicas do sistema imune) e respostas imunes humorais (por exemplo, respostas mediadas por células B (por exemplo, via geração e secreção de anticorpos nos fluidos de plasma, linfa e/ou tecido). O termo "resposta imune" deve abranger todos os aspectos da capacidade do sistema imune de um sujeito para responder a antígenos e/ou imunógenos (por exemplo, tanto a resposta inicial a um imunógeno (por exemplo, um patógeno) quanto respostas adquiridas (por exemplo, memória) que são resultado de uma resposta imune adaptativa).

[00077] Tal como aqui utilizado, o termo "carreador farmaceuticamente aceitável" refere-se a qualquer dos carreadores farmacêuticos padrão incluindo, mas não limitado a, solução salina tamponada com fosfato, água, e vários tipos de agentes umectantes (por exemplo, lauril sulfato de sódio), qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, lauril sulfato de sódio, agentes isotônicos e retardantes de absorção, agentes de desintoxicação (por exemplo, amido de batata ou glicolato de amido e sódio), polietil glicol, outros carreadores naturais e não naturais, e semelhantes. As composições também podem incluir estabilizadores e conservantes. Exemplos de carreadores, estabilizantes e adjuvantes foram descritos e são conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15a Ed., Mack Publ. Co., (Easton, Pa., (1975), incorporado aqui por referência.)

[00078] Tal como aqui utilizado, o termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a qualquer sal (por exemplo, obtido por reação com um ácido ou uma base) de uma composição da presente invenção que é fisiologicamente tolerada no alvo. Os "sais" das composições da presente invenção podem ser derivados de ácidos e bases inorgânicos ou orgânicos. Exemplos de ácidos incluem, mas não estão limitados a ácidos clorídricos, bromídricos, sulfúricos, nítrico, perclórico, fumárico, maleico, fosfórico, glicólico, láctico, salicílico, succínico, tolueno-p-sulfônico, tartárico, acético, cítrico, metanossulfônico, etanossulfônico, fórmico, benzoico, malônico, sulfônico, naftaleno-2-sulfônico, benzenossulfônico e semelhantes. Outros ácidos, tais como oxálico, embora não sejam eles próprios farmaceuticamente aceitáveis, podem ser utilizados na preparação de sais úteis como intermediários na obtenção das composições da invenção e dos seus sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos de bases incluem, mas não estão limitados a, hidróxidos de metal alcalino (por exemplo, sódio), hidróxidos de metais alcalino-terrosos (por exemplo, magnésio), amônia e compostos de fórmula NW4+em que W é C1-4 alquil e semelhantes.

[00079] Exemplos de sais incluem, mas não estão limitados a:acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, benzenossulfonato, bissulfato, butirato, citrato, canforato, canforssulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, fumarato, fluco-heptanoato, glicerofosfato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, cloreto, brometo, iodeto, 2- hidroxietanossulfonato, lactato, maleato, metanossulfonato, 2-naftalenossulfonato, nicotinato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartarato, tiocianato, tosilato, undecanoato e semelhantes. Outros exemplos de sais incluem ânions dos compostos da presente invenção misturados com um cátion apropriado, tal como Na+, NH4+e NW4+ (em que W é um grupo C1-4 alquil) e semelhantes. Para uso terapêutico, os sais dos compostos da presente invenção são considerados como sendo farmaceuticamente aceitáveis. No entanto, sais de ácidos e bases que não são farmaceuticamente aceitáveis podem também encontrar utilização, por exemplo, na preparação ou purificação de um composto farmaceuticamente aceitável.

[00080] Para uso terapêutico, os sais das composições da presente invenção são considerados como sendo farmaceuticamente aceitáveis. No entanto, sais de ácidos e bases que não são farmaceuticamente aceitáveis podem também encontrar utilização, por exemplo, na preparação ou purificação de uma composição farmaceuticamente aceitável.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[00081] Streptococcus pneumonia é uma das principais causas de mortalidade e morbidade em todo o mundo. Seu principal fator de virulência é o polissacarídeo capsular. A velhice e a imunodeficiência de anticorpos (por exemplo, resultantes de uma imunodeficiência primária aqui descrita) são os principais fatores de risco para a infecção pneumocócica. A Organização Mundial da Saúde (OMS) estima que 1,6 milhões de pessoas morrem de doenças pneumocócicas a cada ano. Embora a maioria dos mais de 90 sorotipos capsulares conhecidos possam causar doenças graves, um número limitado causa a maioria dos casos de doença pneumocócica invasiva (IPD). A imunidade para a S. pneumonia é mediada por fagocitose da bactéria na presença de complemento e sorotipo específico, anticorpo opsônico. A avaliação das respostas sorológicas a diferentes vacinas pneumocócicas em grandes ensaios clínicos forneceu correlatos de proteção necessária para liberar novas vacinas. Para prever a proteção contra a doença da IPD, a WHO recomenda um limite de referência de 0,2 a 0,35 μg/mL para vacinas pneumocócicas conjugadas (todos os sorotipos); para vacinas polissacarídicas, a orientação atual é de 1,3 μg/mL. Um marcador substituto mais preciso que é indicativo de proteção e que foi aceito pela FDA como correlacionado com a eficácia clínica é o título de anticorpo opsônico e este foi encontrado para ser suficientemente preciso que substituiu a necessidade de ensaios de vacina. Por exemplo, os títulos opsônicos em um indivíduo vacinado de 1:8 geralmente são considerados correlatos de proteção contra os vários sorotipos de S. pneumonia. Se uma vacina induz um título opsônico de 1:8 contra um sorotipo particular, essa vacina pode ser considerada clinicamente eficaz mesmo na ausência de um ensaio clínico que demonstre um número reduzido de infecções em indivíduos vacinados em comparação com indivíduos não vacinados.

[00082] As imunodeficiências primárias (PIDs) são um grupo de mais de 200 distúrbios geneticamente hereditários caracterizados por deficiências em componentes individuais do sistema imune inato ou adaptativo com um resultado clínico de uma suscetibilidade aumentada à infecção. A deficiência imunológica mais frequente é a deficiência de anticorpos. As principais características clínicas de pacientes com deficiência de anticorpos (também conhecida como hipogamaglobinemia) são infecções recorrentes do trato respiratório com a Streptococcus pneumonia sendo a bactéria isolada mais frequente (ver, por exemplo, Fried e Bonilla, Clin Microbiol Rev. 2009; 22:396-414; Busse et al., J Allergy Clin Immunol. 2002; 109:1001-1004).

[00083] Nas últimas décadas, a administração a longo prazo de imunoglobulina intravenosa polivalente humana (IVIG, também referida aqui como "IVIG convencional”) tem sido a principal terapia para reduzir a gravidade e a frequência de infecções em pacientes imunodeficientes (por exemplo, deficiência de anticorpos) (ver, por exemplo, Salehzadeh et al., J Microbiol Immunol Infect 2010, 43(1):11-17; Favre et al., Allergy 2005 60:385-390). A infusão de IVIG resulta rapidamente em um pico de concentração de imunoglobulina G (IgG), seguido por uma diminuição de IgG ao longo do tempo. O nível de IgG imediatamente antes da próxima infusão (ou seja, o nível mínimo) é monitorado para avaliar a adequação de um regime de infusão particular. Em geral, os pacientes com PID tratados com IVIG recebem infusões a cada três ou quatro semanas. Embora a infusão de IVIG a cada três ou quatro semanas tenha sido geralmente bem-sucedida para prevenir infecções graves do trato respiratório inferior em pacientes com PID, existe uma porcentagem significativa de pacientes com PID que continuam a sofrer infecções do trato respiratório superior, com morbidade e doença associadas, ao serem tratados. Isso ocorre apesar do fato de que a maioria dos pacientes imunocomprometidos recebendo IVIG parece ter níveis aceitáveis de imunoglobulina total, bem como níveis aceitáveis de S. pneumonia IgG no nível baixo (ver, por exemplo, Favre et al., Allergy 2005 60:385390). Além disso, os antibióticos foram usados, mas geralmente são ineficazes.

[00084] Assim, a administração de IVIG humano reunido exógeno tem sido uma importante terapia em medicina clínica para pacientes com imunodeficiência (por exemplo, deficiências de anticorpos) e parece ter impedido a ocorrência de infecções graves do trato respiratório inferior. No entanto, e em forte contraste, a terapia convencional com IVIG não conseguiu prevenir ou tratar a ocorrência significativa de infecções do trato respiratório inferior menos ameaçadoras à vida (por exemplo, S. pneumonia) que ocorrem em pacientes com PID (ver, por exemplo, Favre et al., Allergy 2005 60:385-390; Simao-Gurge et al., Allergo Immnopathol 2017, 45:55-62). Isto é, enquanto as concentrações totais de IgG obtidas por infusões regulares de IVIG convencional previnem infecções graves do trato respiratório inferior em pacientes com PID, continua a haver morbidade substancial e significativa das infecções respiratórias superiores menos clínicas graves em pacientes com PID causados por S. pneumonia que, por sua vez, resultam em complicações significativas para a saúde, uma diminuição da qualidade de vida e um uso indiscriminado de antibióticos de amplo espectro nos pacientes na tentativa de controle de infecções.

[00085] Divulgadas aqui estão composições e métodos para o tratamento da infecção causada por Streptococcus pneumonia. Em particular, a invenção fornece globulina hiperimune humana e composições da mesma para prevenir ou tratar infecção pneumocócica. A invenção fornece métodos para produzir globulina hiperimune contendo altos títulos de anticorpos antipneumocócicos opsônicos, composições contendo a mesma e métodos para usar as composições para a prevenção e o tratamento de infecção pneumocócica. A invenção fornece ainda métodos para prevenir ou tratar infecção pneumocócica (por exemplo, infecções respiratórias superiores (por exemplo, bronquite, otite, sinusite, etc.)) em sujeitos imunocomprometidos através da administração de composições de globulina hiperimune da invenção (por exemplo, contendo um alto título de anticorpos antipneumocócicos opsônicos) para sujeitos imunocomprometidos.

[00086] Conforme descrito em detalhes neste documento (por exemplo, nos Exemplos), a invenção proporciona uma nova composição de globulina hiperimune que contém um título elevado de anticorpos opsônicos antipneumocócicos que é surpreendentemente e significativamente diferente das preparações convencionais de imunoglobulina bem como outras preparações de IVIG (por exemplo, outras preparações hiperimunes de IVIG). Em particular, como descrito nos Exemplos 2-4, descobriu-se surpreendentemente que a globulina hiperimune preparada de acordo com os métodos da invenção tem um título elevado de anticorpos antipneumocócicos opsônicos que são funcionalmente e amplamente reativos contra uma multidão de sorotipos de S. pneumonia e melhorar a fagocitose e a morte de S. pneumonia in vitro (por exemplo, os anticorpos são opsonofagocíticos), independentemente da quantidade total de anticorpos antipneumocócicos de ligação (por exemplo, medidos por ELISA) que estão presentes na composição. Ou seja, experiências conduzidas durante o desenvolvimento de modalidades da invenção inesperadamente identificaram que o anticorpo de ligação total a IgG ao polissacarídeo capsular de S pneumonia não se correlacionou com e não foi preditivo da quantidade de anticorpo opsônico funcional presente na imunoglobulina preparada a partir dos soros de um hospedeiro vacinado (Ver, por exemplo, Exemplos 2-4). Assim, baixos níveis de anticorpo de ligação podem estar associados a altos níveis de anticorpos opsônicos protetores e vice-versa. Assim, a medição dos níveis totais de anticorpos apenas nas preparações de imunoglobulina não prevê ou correlaciona-se com a eficácia protetora dessa preparação. Assim, numa modalidade, a invenção proporciona a identificação e caracterização de composições de plasma e/ou imunoglobulina contendo um título de anticorpo funcional opsônico desejado em vez de um em que apenas a quantidade total de IgG é conhecida (por exemplo, devido à identificação da falta de correlação entre o título total de anticorpos IgG antipneumocócicos e o título de anticorpos opsônicos antipneumocócicos presentes no plasma ou imunoglobulina preparada a partir dos mesmos de doadores vacinados).

[00087] Além disso, uma variabilidade pronunciada nos títulos opsônicos específicos do sorotipo foi descoberta em vários lotes comerciais de IVIG convencional (Ver, por exemplo, FIG. 9A-9L, amostras A-I em cada um representando IVIG comercial) e que um título elevado para um sorotipo não previu ou correlacionou com um título elevado a nenhum dos outros sorotipos. Isso indicou que a resposta individual elevada em qualquer IVIG convencional individual não refletia uma resposta imune geral a S Pneumonia mas resposta(s) esporádica(s) melhorada(s) a sorotipos muito específicos (ver, por exemplo, Malgorzata et al., Clin Diagn Lab Immunol 2004, 11 (6):1158-1164). Em contraste marcado, os títulos de anticorpos opsônicos observados na imunoglobulina preparada a partir de doadores imunizados de acordo com a invenção foram notados como melhorados para todos os sorotipos sem exceção (ver, por exemplo, Exemplo 5, FIG. 8 e ver FIG. 9A-9L, amostra HIG -"globulina hiperimune” da invenção). Dependendo do sorotipo, houve um aumento de 3 a 256 vezes no título de anticorpo antipneumocócico opsônico na imunoglobulina de doadores imunizados em comparação com vários lotes comerciais de imunoglobulina (ver, por exemplo, Exemplo 5 e FIG. 8, amostras IVIG comerciais/convencionais A-I versus soros de doadores hiperimunes). Assim, em algumas modalidades, composições e métodos da invenção para gerar composições (por exemplo, composições de sangue, plasma e/ou imunoglobulina) contendo um título elevado de anticorpo antipneumocócico opsônico fornecem uma composição heterogênea compreendendo títulos de anticorpos antipneumocócicos opsônicos específicos para uma grande variedade de sorotipos pneumocócicos (por exemplo,9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou mais sorotipos) e/ou (por exemplo, 3-256 vezes mais) títulos de anticorpos opsônicos significativamente elevados em comparação com imunoglobulina comercial convencional.

[00088] Assim, devido à identificação da discordância entre o título total de anticorpo IgG de ligação antipneumocócica e o título de anticorpos opsônicos antipneumocócicos presentes no plasma ou imunoglobulina preparada a partir do mesmo a partir do plasma de doador vacinado aqui divulgado, é um outro objeto da invenção proporcionar uma composição de plasma e/ou imunoglobulina (por exemplo, globulina hiperimune antipneumocócica) contendo um título de anticorpo opsônico antipneumocócico elevado desejado (por exemplo, de pelo menos 1:64 a cerca de 1: 8192 (por exemplo, independentemente do título total de anticorpos de ligação antipneumocócicos (por exemplo, reunindo plasma e/ou imunoglobulina colhida a partir de plasma de doador vacinado e/ou imunoglobulina identificada como possuindo um título elevado de anticorpos opsônicos antipneumocócicos entre si e/ou, com plasma de doador vacinado e/ou imunoglobulina que pode não ter um título elevado de anticorpos antipneumocócicos opsônicos, mas que, quando reunidos com o plasma de doador de anticorpo antipneumocócico opsônico de título elevado e/ou a imunoglobulina não dilui o título opsônico total a um nível indesejável em comparação com a amostra de controle))).

[00089] A presente divulgação também descreve a descoberta de que as reuniões padrão/convencionais de imunoglobulina de doadores normais (por exemplo, usados para gerar IVIG padrão/convencional comercialmente disponível) não possuem níveis elevados confiáveis e consistentes de anticorpos opsônicos para sorotipos múltiplos de S. pneumonia, enquanto que uma composição de imunoglobulina (por exemplo, globulina hiperimune antipneumocócica) que contém um título altamente reativo e alto de anticorpos opsônicos, antipneumocócicos da invenção contra uma grande variedade de sorotipos quando administrada por via intravenosa fornece anticorpos específicos e funcionais que promovem fagocitose e morte de uma multidão de sorotipos de S. pneumonia por fagócitos. A invenção não é limitada pelo sorotipo ou número de sorotipos de S. pneumonia para o qual os anticorpos opsônicos funcionais, presentes dentro de uma composição de globulina hiperimune (por exemplo, IVIG) da invenção promove a opsonofagocitose e/ou a morte. De fato, a invenção fornece uma composição (por exemplo, uma composição de plasma hiperimune e/ou globulina hiperimune (por exemplo, IVIG)) da invenção contém anticorpos opsônicos amplamente reativos para pelo menos 9 de 12, 10 de 12, 11 de 12 ou todos 12 de 12 dos seguintes sorotipos de S. pneumonia: 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F (Ver, por exemplo, Exemplos 2-5). Ou seja, a invenção proporciona composições e métodos de obtenção do mesmo que compreendem um título de anticorpo opsônico antipneumocócico elevado, que é pelo menos duas vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 7 vezes, 10 vezes ou mais maior que o título de anticorpo opsônico antipneumocócico presente em uma amostra de controle (por exemplo, para pelo menos 75% dos sorotipos pneumocócicos selecionados dos sorotipos 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19 F e 23F). Em outra modalidade, a invenção proporciona uma composição de globulina hiperimune (por exemplo, IVIG) que contém um título elevado de anticorpos opsônicos amplamente reativos para pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, 95%, 98% ou mais de cada sorotipo presente em uma vacina ou uma pluralidade de vacinas utilizadas para imunizar um ou mais doadores de plasma dos quais a imunoglobulina é derivada.

[00090] É uma vantagem adicional e objetivo da invenção fornecer uma composição de globulina hiperimune (por exemplo, IVIG) contendo anticorpos opsônicos amplamente reativos, específicos para S. pneumonia para um paciente (por exemplo, um paciente imunocomprometido (por exemplo, um paciente com PIDD)) para tratar (por exemplo, terapêutica e/ou profilaticamente) a infecção pneumocócica no paciente (por exemplo, inibindo o crescimento de S. pneumonia e/ou a depuração de S. pneumonia do sangue do paciente). A invenção também fornece uma composição de globulina hiperimune (por exemplo, IVIG) contendo anticorpos opsônicos amplamente reativos, específicos para S. pneumonia para um paciente (por exemplo, um paciente imunocomprometido (por exemplo, um paciente com PIDD)) para tratar a infecção pneumocócica no paciente (por exemplo, melhorando ou aumentando a depuração de S. pneumonia do sangue do paciente). A invenção também fornece uma composição de globulina hiperimune (por exemplo, IVIG) contendo anticorpos opsônicos amplamente reativos, específicos para S. pneumonia para um paciente (por exemplo, um paciente imunocomprometido (por exemplo, um paciente com PIDD)) para prevenir infecções do trato respiratório superior no paciente que não podem ser evitadas com o tratamento convencional com IVIG. A invenção não está limitada pelo tipo de infecção do trato respiratório superior prevenida e/ou tratada e pode incluir, mas não está limitada a, rinossinusite (sinusite), otite média, faringite, epiglotite, laringotraqueíte e laringotraqueobronquite. Do mesmo modo, as composições e os métodos de utilização (por exemplo, a administração) são os mesmos que se encontram na prevenção e/ou no tratamento de sinais ou sintomas da infecção do trato respiratório superior incluindo, mas não limitado a, tosse, espirros, secreção nasal, congestão nasal, corrimento nasal, febre, irritação ou dor de garganta e respiração nasal.

[00091] A invenção não está limitada pelo tipo de infecção estreptocócica tratada (por exemplo, profilática e/ou terapeuticamente). De fato, qualquer infecção estreptocócica causada pelo grupo estreptococo de bactérias pode ser tratada. Existem mais de 90 cepas diferentes de bactérias de Streptococcus pneumonia (S. pneumonia) (conhecidas como sorotipos), algumas das quais causam infecção mais grave do que outras. Os sintomas de uma infecção pneumocócica podem variar, dependendo do tipo de infecção. Os sintomas comuns incluem: temperatura elevada (febre) de 38°C, dores e/ou dor de cabeça. As infecções pneumocócicas geralmente se enquadram em uma de duas categorias: infecções pneumocócicas não invasivas -estas ocorrem fora dos principais órgãos ou do sangue e tendem a ser menos graves; e infecções pneumocócicas invasivas - estas ocorrem dentro de um órgão principal ou do sangue e tendem a ser mais graves. As composições da invenção e os métodos de utilização do mesmo acham uso no tratamento (por exemplo, terapêutica e/ou profilaticamente) tanto de infecções pneumocócicas não invasivas como invasivas.

[00092] Numa modalidade, a invenção proporciona composições e métodos para obter uma composição compreendendo amostras de plasma reunido (por exemplo, plasma de uma pluralidade de doadores (por exemplo, doadores que foram vacinados com uma ou mais vacinas pneumocócicas) que contêm títulos elevados de anticorpos opsônicos antipneumocócicos. Assim, é um objetivo da invenção proporcionar métodos para gerar composições (por exemplo, composições de sangue, plasma e/ou imunoglobulina) contendo um título elevado de anticorpos opsônicos antipneumocócicos. Numa modalidade, uma ou uma pluralidade de sujeitos humanos adultos saudáveis (por exemplo, sujeitos humanos sem condições médicas conhecidas) são administrados um imunógeno pneumocócico, uma proteína pneumocócica recombinante ou uma combinação destes. Em algumas modalidades de imunógeno de S. pneumonia é um açúcar de membrana celular de S. pneumonia (por exemplo, um polissacarídeo). Em algumas modalidades, um imunógeno de S. pneumonia é uma vacina conjugada (por exemplo, conjugada com um carreador e/ou adjuvante (por exemplo, uma proteína ou outra molécula carreadora). Em algumas modalidades, um imunógeno de S. pneumonia é uma vacina não conjugada. Em algumas modalidades, a vacina conjugada ou a vacina não conjugada contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 21, 22, 23 ou mais imunógenos diferentes (por exemplo, de um número igual de diferentes sorotipos de S. pneumonia). Em algumas modalidades, um ou mais sorotipos diferentes de S. pneumonia incluem, mas não estão limitados a, sorotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7A, 7B, 7C, 7D, 7E, 7F, 8, 9A-9V, 12, 14, 18C, 19A-19F, 23A-23F e 25. Em algumas modalidades, um ou mais sorotipos diferentes de S. pneumonia são selecionados de qualquer um dos mais dos 90 sorotipos diferentes de S. pneumonia identificados. Em algumas modalidades, um ou mais sorotipos diferentes de S. pneumonia são recentemente identificados.

[00093] Uma ou uma pluralidade de indivíduos humanos saudáveis (por exemplo, indivíduos humanos sem condições médicas conhecidas) podem ser administrados com um imunógeno pneumocócico, uma proteína pneumocócica recombinante ou uma combinação destes, presente em uma vacina pneumocócica comercial. A invenção não está limitada pelo tipo de vacina pneumocócica comercial. De fato, qualquer vacina pneumocócica conhecida na técnica pode ser utilizada incluindo, mas não se limitando à vacina conjugada pneumocócica (PCV13 ou PREVNAR13, Wyeth Pharmaceuticals, Collegeville, PA), SYNFLORIX e/ou vacina pneumocócica de polissacarídeo (PPSV23 ou PNEUMOVAX23, Merck Sharp). & Dohme Corp., North Wales, PA). Numa modalidade, uma ou uma pluralidade de sujeitos humanos saudáveis recebe uma vacinação primária ou de iniciação com uma primeira vacina antipneumocócica e uma vacinação de reforço subsequente com a primeira vacina antipneumocócica ou com uma segunda vacina antipneumocócica diferente. Por exemplo, numa modalidade, um ou uma pluralidade de humanos saudáveis recebem uma vacinação/imunização primária ou de iniciação ou com uma primeira vacina antipneumocócica (por exemplo, PREVNAR), e depois receber uma vacinação/imunização de reforço (por exemplo, às 2 semanas, 4 semanas, 6 semanas, 8 semanas, 10 semanas, 12 semanas ou mais após a vacinação/imunização primária) com uma segunda vacina antipneumocócica (por exemplo, PNEUMOVAX23). Em um momento posterior à vacinação sequencial (por exemplo, às 2 semanas, 4 semanas, 6, semanas, 8 semanas, 10 semanas, 12 semanas ou mais, após a vacinação sequencial), o soro/plasma é colhido a partir dos doadores de planas humano vacinado e saudável. O plasma dos doadores vacinados pode ser reunido (entre si e/ou com plasma de doadores não vacinados) seguido pela colheita da imunoglobulina do mesmo. Métodos de colheita de plasma, bem como imunoglobulina são bem conhecidos pelos versados na técnica.

[00094] Numa modalidade, a invenção proporciona um método para a preparação de uma globulina hiperimune com um título elevado de anticorpo opsonofagocítico para Streptococcus pneumonia (por exemplo, um título que é pelo menos 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 7 vezes, 10 vezes ou mais, pelo menos cerca de 55% ou mais (por exemplo,60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ou mais) de sorotipos de S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F) em comparação com os títulos de anticorpos específicos antipneumocócicos opsonofagocíticos para os mesmos sorotipos presentes numa amostra de controle; ou, um título específico para 70% ou mais dos sorotipos de S. pneumonia selecionados dos sorotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F e 23, ou seja, 2 vezes ou mais (por exemplo,3-25 vezes ou mais) que o título de anticorpos opsonofagocíticos específicos para os mesmos sorotipos S. pneumonia presentes em uma amostra de controle; ou, um título entre 1:64 e 1: 8192 (por exemplo, pelo menos 50% ou mais (por exemplo,60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ou mais)) de sorotipos S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F) conforme determinado por um ensaio de morte opsonofagocítica aqui descrito) compreendendo as etapas de imunizar doadores de plasma humano adulto saudáveis entre as idades de 18-60 com uma vacina de S. pneumonia multivalente, seguida de imunização com uma vacina de S. pneumonia multivalente de reforço que é diferente da vacina primária; colher plasma dos doadores de plasma subsequente à imunização de reforço; reunir plasma dos doadores vacinados, a fim de obter uma reunião de plasma contendo um título elevado de título de anticorpo opsonofagocítico para S. pneumonia; e preparar uma imunoglobulina a partir do plasma reunido. Numa outra modalidade, o método compreende tornar a imunoglobulina obtida injetável por via intravenosa. A imunoglobulina pode ser fornecida em solução e/ou o pH e a força iônica da solução podem ser ajustados de modo a torná-lo intravenosamente injetável. A invenção não está limitada pelo número de indivíduos vacinados de acordo com os métodos aqui descritos. Por exemplo, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400 ou mais doadores de plasma humanos adultos saudáveis podem ser vacinados e o plasma é colhido dos doadores. Numa modalidade, o plasma reunido é feito de reunião de plasma de 1000 ou mais doadores de plasma humano adultos saudáveis vacinados diferentes. Numa modalidade, o plasma reunido contém um título de anticorpo opsonofagocítico que é pelo menos 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 7 vezes, 10 vezes, ou mais, para pelo menos cerca de 55% ou mais (por exemplo,60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ou mais) de sorotipos de S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F) em comparação com os títulos opsonofagocíticos específicos de anticorpos antipneumocócicos para os mesmos sorotipos presentes em uma amostra de controle (por exemplo, plasma, imunoglobulina preparada a partir de plasma reunido a partir de 1000 ou mais doadores aleatórios de plasma humano não vacinados). Numa outra modalidade, o plasma reunido contém um título de anticorpo opsonofagocítico específico para 70% ou mais dos sorotipos de S. pneumonia selecionados dos sorotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F e 23, ou seja, 2 vezes ou mais (por exemplo, 3-25 vezes ou mais) que o título de anticorpos opsonofagocíticos específicos para os mesmos sorotipos S. pneumonia presentes em uma amostra de controle (por exemplo, plasma, imunoglobulina preparada a partir de plasma reunido a partir de 1000 ou mais doadores aleatórios de plasma humano não vacinados). Ainda numa outra modalidade, o plasma reunido contém um título de anticorpo opsonofagocítico entre 1:64 e 1:8192 (por exemplo, para pelo menos 50% ou mais (por exemplo, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ou mais) de sorotipos de S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F) conforme determinado por um ensaio de morte opsonofagocítica aqui descrito. A invenção também proporciona uma globulina hiperimune preparada de acordo com o método descrito acima. A globulina hiperimune pode ser usada em vários métodos. Por exemplo, a globulina hiperimune pode ser usada em um método de tratamento de infecção por S. pneumonia em um sujeito (por exemplo, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz da globulina hiperimune). A globulina hiperimune pode também ser utilizada num método de proporcionar imunoterapia a um sujeito (por exemplo, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz da globulina hiperimune).

[00095] A invenção também proporciona, numa modalidade, um método de preparação de imunoglobulina tendo uma atividade bactericida opsonofagocítica melhorada contra pelo menos sete sorotipos de Streptococcus pneumonia (por exemplo, sorotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F e 23F) para a prevenção ou tratamento de infecção por S. pneumonia compreendendo as etapas de imunização de doadores saudáveis de plasma humano adulto com uma imunização primária com vacina conjugada de S. pneumonia multivalente seguida por imunização de reforço com uma vacina de S. pneumonia de polissacarídeo multivalente que é diferente da vacina primária; colher e reunir o plasma dos doadores de plasma imunizados; e preparar a imunoglobulina a partir do plasma reunido, em que a imunoglobulina contém um título de anticorpo opsonofagocítico específico para cada um dos pelo menos sete sorotipos de S. pneumonia que é duas vezes maior que o título de anticorpo opsonofagocítico específico para cada um dos pelo menos sete sorotipos de S. pneumonia presentes numa amostra de controle (por exemplo, imunoglobulina preparada a partir de plasma reunido a partir de 1000 ou mais doadores de plasma humano não vacinados aleatórios). A invenção também proporciona uma imunoglobulina preparada de acordo com o método descrito acima. A imunoglobulina pode ser usada em vários métodos. Por exemplo, a imunoglobulina pode ser usada em um método de tratamento de infecção por S. pneumonia num sujeito compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz da imunoglobulina. A imunoglobulina também pode ser utilizada num método de proporcionar imunoterapia a um indivíduo compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz da imunoglobulina.

[00096] Experiências conduzidas durante o desenvolvimento de modalidades da invenção descobriram que um número significativo de pacientes a serem tratados com IVIG tinha concentrações de anticorpos de S. pneumonia de nível baixo que caíram abaixo do que é considerado como protetor. Por exemplo, como mostrado na FIG. 10, determinou-se que uma porcentagem significativa de pacientes com imunodeficiência primária em tratamento com IVIG convencional apresentava níveis específicos de sorotipos de anticorpos de ligação de anti-S. pneumonia que caíram abaixo de um nível de proteção (abaixo de 1,2 μg/ml) no nível baixo.

[00097] Toda imunoglobulina fracionada e/ou isolada de soro e utilizada para infusão intravenosa contém pouca ou alguma IgA mensurável que pode explicar a incapacidade da imunoglobulina para proteger nas superfícies da mucosa (por exemplo, levando ao aumento da infecção do trato respiratório superior em pacientes imunodeficientes que recebem IVIG convencional). Assim, enquanto não é necessário um mecanismo para praticar a presente invenção, e enquanto a presente invenção não está limitada a qualquer mecanismo específico de ação, em algumas modalidades, uma composição de globulina hiperimune da invenção que contém uma alta concentração de anticorpo anti -S. pneumonia opsônicos, amplamente reativos (por exemplo, fornecido em uma composição de globulina hiperimune nos casos da invenção) permite a difusão de gradiente de concentrações mais elevadas de IgG antipneumocócico opsônico, amplamente reativo e funcional através das membranas mucosas, proporcionando, assim, proteção da mucosa e redução da incidência de infecção respiratória superior (por exemplo, em relação ao IVIG convencional que não tem uma alta concentração de anticorpos anti-S. pneumonia opsônicos, amplamente reativos e, portanto, muito menos ou nenhuma difusão gradiente, resultando em alta incidência de infecção do trato respiratório superior em pacientes imunocomprometidos tratados com IVIG convencional)).

[00098] Assim, a invenção proporciona globulina hiperimune preparada de acordo com qualquer um dos métodos aqui descritos que contém um título elevado de anticorpos opsônicos específicos para 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ou mais sorotipos diferentes de S. pneumonia incluindo, mas não se limitando a, sorotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7A, 7B, 7C, 7D, 7E, 7F, 8, 9A-9V, 12, 14, 18C, 19A-19F, 23A-23F e 25. Embora a compreensão de um mecanismo não seja necessária para praticar a presente invenção e enquanto a presente invenção não se limita a nenhum mecanismo particular de ação, a reunião de soro de doador vacinado proporciona níveis desejados (por exemplo, níveis de proteção terapêutica e/ou profilaticamente) de IgGs opsônicos, amplamente reativos contra todos os sorotipos presentes em uma ou mais vacinas utilizadas para vacinar de doadores saudáveis de plasma humano adulto (por exemplo, apesar de qualquer sorotipo para variação de sorotipo e/ou grau de diluição enquanto ocorre reunião). Por conseguinte, em algumas modalidades, qualquer diferença individual na concentração de IgG opsônica específica do sorotipo pode ser normalizada sem comprometer os níveis protetores destes anticorpos por associação dos soros. A purificação da imunoglobulina do soro não resultou em nenhum déficit em qualquer IgG opsônica específica de sorotipo pneumocócico ou suas atividades funcionais.

[00099] Preparação de imunoglobulina purificada. Numa modalidade, prepara-se uma imunoglobulina purificada que tem um título elevado de anticorpos opsônicos específicos para pneumocócicos. O termo "título elevado” neste contexto significa a presença de um anticorpo numa quantidade que é 2 vezes ou maior (por exemplo, até 10-20 ou mais vezes superior à encontrada em uma população normal de 1000 amostras aleatórias).

[000100] O produto sanguíneo pode ser preparado por (i) seleção e purificação da imunoglobulina de um doador que foi vacinado (por exemplo, através de um processo da invenção) e tem altos títulos de anticorpos opsônicos específicos pneumocócicos, ou (ii) a combinação de imunoglobulina de doador de uma multidão de indivíduos (por exemplo,100, 200, 200-500, 500-1000, ou 1000 ou mais sujeitos) que foram vacinados de acordo com um método da invenção.

[000101] A plasmaférese pode ser utilizada para colher soro/plasma de um doador vacinado. O termo plasmaférese descreve uma técnica na qual o sangue é removido de um animal, separado em seus componentes celular e plasmático, as células são então retornadas para o animal e o plasma retido. A plasmaférese de grande volume exige que o plasma removido seja substituído por um fluido adequado e, quando isso for feito, a técnica é frequentemente conhecida como troca de plasma. Quaisquer componentes encontrados no plasma podem ser removidos por troca de plasma. O plasma extraído desta maneira para venda comercial está disponível para uso em uma modalidade preferida desta invenção.

[000102] Em algumas modalidades, é preferido identificar e manter um grupo de doadores consistente por retirada repetida de pequenas quantidades de sangue, por exemplo, retirada de sangue, uma vez por mês, de seres humanos. A frequência da retirada pode influenciar a quantidade que pode ser retirada com segurança. Em geral, é desejável retirar a quantidade máxima de sangue ao longo do tempo sem prejudicar a saúde do doador. Isso pode ditar a retirada de pequenas quantidades com grande frequência, ou a quantidade máxima possível em uma frequência reduzida. O volume de sangue do doador pode ser estimado por fórmulas padrão disponíveis no Center for Disease Control. Os métodos de coleta de sangue e plasma são geralmente padrão e bem conhecidos dos versados na técnica. Qualquer método pode ser usado para alcançar os resultados desejados.

[000103] Após o isolamento do plasma, a imunoglobulina (anticorpos) pode ser purificada de outros produtos celulares. Isto pode ser obtido através de uma variedade de procedimentos de isolamento de proteínas, conhecidos dos versados na técnica da purificação de imunoglobulinas, tais como fracionamento de Cohn, permuta iônica, purificação por afinidade, etc. Meios para preparar e caracterizar anticorpos são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, as amostras de soro podem ser passadas sobre colunas de proteína A ou de proteína G sepharose para se ligarem a IgG (dependendo do isótipo). Os anticorpos ligados podem então ser eluídos com, por exemplo, um tampão de citrato de pH 5,0. As frações de eluato contendo o Abs, são dialisadas contra um tampão isotônico. Alternativamente, o eluato é também passado por uma coluna anti-imunoglobulina-sepharose. O Ab pode então eluir com cloreto de magnésio 3,5 M. O Abs purificado deste modo pode então ser testado quanto à atividade de ligação por, por exemplo, um ELISA específico para isotipos e ensaio de coloração de imunofluorescência das células alvo, ou para atividade opsônica (opsonofagocítica) (por exemplo, utilizando um ou mais dos ensaios de morte opsônicos descritos aqui).

[000104] Em uma modalidade, quando as amostras de plasma são colhidas e misturadas (por exemplo, de uma pluralidade de (por exemplo,100, 200, 200-500, 5001000, 1000 ou mais sujeitos) imunizados de acordo com os modos aqui descritos), o plasma misturado ou a imunoglobulina obtida (por exemplo, isolados e/ou fracionados) destes contém os títulos de anticorpos soroprotetores para sarampo, difteria e/ou poliomielite (por exemplo, contém títulos de anticorpos contra sarampo, difteria e/ou poliomielite que forneçam ao indivíduo administrado com a composição plasmática combinada ou imunoglobulina obtida dos mesmos níveis séricos de anticorpos específicos para sarampo, difteria e poliomielite para prevenir ou proteger de, infecção com o mesmo). Em outra modalidade, quando as amostras de plasma são misturadas a partir de uma pluralidade de sujeitos vacinados, o plasma misturado ou imunoglobulina obtida (por exemplo, fracionado) deste contém títulos de anticorpos soroprotetores para sarampo, difteria, poliomielite e/ou tétano (por exemplo, contém títulos de anticorpos contra sarampo, difteria, poliomielite e/ou tétano que proporcionam a um sujeito administrado com a composição de plasma misturado ou imunoglobulina obtida dos mesmos níveis de soro de anticorpos específicos para sarampo, difteria, poliomielite e/ou tétano para prevenir ou proteger da infecção com os mesmos (por exemplo, atende aos níveis de anticorpos recomendados pela US Food and Drug Administration (por exemplo, para o tratamento da doença de imunodeficiência e/ou tratamento ou prevenção de infecção em um sujeito imunodeficiente))). Numa modalidade, o plasma misturado/reunido compreende amostras de plasma obtidas de 1000-3000 ou mais (por exemplo, mais de 1000, 1250, 1500, 1750, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000 ou mais) seres humanos. Numa modalidade, o plasma reunido é utilizada para preparar imunoglobulina (por exemplo, para administração intravenosa a um sujeito). Numa modalidade, o plasma reunido e/ou a imunoglobulina proporciona um benefício terapêutico a um sujeito administrado com o plasma reunido e/ou a imunoglobulina que não é possível através da administração de uma mistura de amostras de plasma (ou imunoglobulina preparada a partir do mesmo) obtidas a partir de 1000 ou mais sujeitos humanos aleatórios. A invenção não está limitada pelo tipo de benefício terapêutico fornecido. De fato, uma variedade de benefícios terapêuticos pode ser alcançada incluindo aqueles aqui descritos (por exemplo, tratamento de infecção pneumocócica (por exemplo, infecções do trato respiratório superior)). Numa modalidade, o plasma reunido e/ou imunoglobulina possui propriedades opsonofagocíticas antipneumocócicas reforçadas em comparação com uma mistura de amostras de plasma obtidas de 1000 ou mais indivíduos humanos aleatórios ou imunoglobulina preparada a partir do mesmo. Por exemplo, numa modalidade, o plasma reunido possui propriedades opsonofagocíticas antipneumocócicas aumentadas contra dez ou mais sorotipos pneumocócicos diferentes (por exemplo, 10, 10-20, 20-30, ou mais sorotipos). Numa outra modalidade, as propriedades opsonofagociíticas antipneumocócicas melhoradas reduzem e/ou previnem a infecção num indivíduo que administra a composição durante um período de tempo que é mais longo do que, e não é possível, num indivíduo que recebeu uma mistura de amostras de plasma obtidas a partir de 1000 ou mais (por exemplo, não vacinados) sujeitos humanos. Numa modalidade, o plasma reunido e/ou a imunoglobulina preparada a partir do mesmo reduz a incidência de infecção em um indivíduo administrado com a composição. Numa outra modalidade, um plasma reunido e/ou imunoglobulina preparada a partir do mesmo reduz o número de dias em que um sujeito administrado com o plasma reunido e/ou imunoglobulina é necessário para administrar antibióticos (por exemplo, para tratar a infecção). Ainda numa outra modalidade, um plasma reunido e/ou uma imunoglobulina preparada a partir do mesmo aumenta o nível mínimo de anticorpos opsonofagocíticos antipneumocócicos circulantes num sujeito (por exemplo, aumenta o nível de título de anticorpo antiopsonofagocítico específico para dez ou mais sorotipos pneumocócicos (por exemplo, proporcionando assim níveis protetores de anticorpos opsonofagocíticos antipneumocócicos entre datas programadas de administração do plasma reunido e/ou da imunoglobulina preparada a partir dos mesmos que não são mantidas num sujeito administrado com uma mistura de amostras de plasma obtidas a partir de 1000 ou mais sujeitos humanos aleatórios ou imunoglobulina preparada a partir do mesmo)). Numa modalidade, a composição compreendendo amostras de plasma reunidas compreende ainda um carreador farmaceuticamente aceitável (por exemplo, qualquer carreador(es) de ocorrência natural ou não natural (ais) conhecido(s) na técnica). Numa modalidade, um sujeito administrado com a imunoglobulina preparada a partir do plasma reunido de acordo com a invenção apresenta um aumento de dobra médio no título de anticorpo opsonofagocítico antipneumocócico que pelo menos 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, pelo menos 5 vezes, pelo menos 6 vezes, pelo menos 7 vezes, pelo menos 8 vezes, pelo menos 9 vezes ou mais em um ponto de tempo de pelo menos 1 a 14 dias após a administração (por exemplo,14 dias, 15 dias, 16 dias, 17 dias, 18 dias, 19 dias ou mais) da imunoglobulina. A invenção não é limitada pela quantidade de imunoglobulina administrada a um sujeito. Numa modalidade, um sujeito é administrado entre 1005000 mg/kg da imunoglobulina uma vez ou diariamente durante dois ou mais dias (por exemplo,2, 3, 4 ou mais dias consecutivos). Numa outra modalidade, estas doses são administradas intermitentemente, por exemplo, todas as semanas, de duas em duas semanas, de três em três semanas, de quatro em quatro semanas, etc. Numa modalidade, um sujeito é administrado entre 750-1500 mg/kg de imunoglobulina no dia um e entre 750-1500 mg/kg de imunoglobulina no dia 2. Numa modalidade, um sujeito é administrado 1500 mg/kg de imunoglobulina no dia um e 750 mg/kg de imunoglobulina no dia 2. Numa outra modalidade, um sujeito é administrado 750 mg/kg de imunoglobulina no dia um e 750 mg/kg de imunoglobulina no dia 2. Em uma das modalidades, um sujeito recebe imunoglobulina no primeiro dia, imunoglobulina administrada opcionalmente no dia 2, e então é re-administrado imunoglobulina a cada 21 dias. Numa modalidade, a um sujeito é administrada imunoglobulina no dia um, imunoglobulina administrada opcionalmente no dia 2 e, em seguida, re-administrada imunoglobulina a cada 28 dias. Numa modalidade, o plasma reunido e/ou a imunoglobulina preparada a partir do mesmo reduz a incidência de infecção em um indivíduo pneumocócica administrado com a composição. Ainda noutra modalidade, um plasma reunido e/ou imunoglobulina preparado a partir dos mesmos aumenta o nível mínimo de anticorpos opsonofagocíticos antipneumocócicos circulantes e aumenta o nível mínimo de anticorpos antissarampo, antidifteria, antipoliomielite e/ou antitétano específicos em um sujeito (por exemplo, aumenta o nível de títulos de anticorpos opsonofagocíticos antipneumocócicos específicos para sorotipos pneumocócicos e sarampo, difteria, poliomielite e/ou tétano (por exemplo, fornecendo níveis protetores de anticorpos opsonofagocíticos antipneumocócicos e antissarampo, antidifteria, antipoliomielite e/ou antitétano específicos entre datas programadas de administração do plasma reunido e/ou imunoglobulina preparados a partir dos mesmos que não são mantidos num sujeito administrado com uma mistura de amostras de plasma obtidas a partir de 1000 ou mais sujeitos humanos aleatórios (por exemplo, sujeitos não vacinados) ou imunoglobulina preparada a partir dos mesmos)).

[000105] Em algumas modalidades, as amostras de plasma e/ou anticorpo compreendem amostras de fluidos corporais doadas e/ou compradas, por exemplo, amostras de sangue ou componentes sanguíneos individuais (por exemplo, plasma). Estas amostras podem ser purificadas e/ou rastreadas quanto à presença de patógenos ou outras impurezas (por exemplo, antes ou depois da reunião). Amostras de múltiplos doadores de anticorpos (por exemplo, amostras de plasma de doadores ou outras amostras contendo anticorpos) podem ser agrupadas para criar uma amostra de plasma reunido. Em algumas modalidades, as amostras de anticorpo reunido são purificadas, rastreadas e/ou concentradas. Numa modalidade, a reunião de amostras (por exemplo,1000 ou mais amostras) ocorre de uma maneira que utiliza o menor número possível de amostras (por exemplo, geradas pelas composições e métodos aqui descritos), mas que ainda mantém um nível desejado, padronizado e elevado de anticorpos opsonofagocíticos antipneumocócicos.

[000106] Tal como aqui descrito, certas modalidades da invenção utilizam plasma de sujeitos aos quais foram administradas substâncias imunogênicas (por exemplo, vacinas) de modo a gerar níveis elevados de anticorpos opsonofagocíticos antipneumocócicos no sujeito. A invenção não é limitada pelo tipo de vacina e/ou antígeno (por exemplo, antígeno S. pneumonia) utilizado para administração a um sujeito (por exemplo, doador) para induzir a expressão de anticorpos específicos. Em algumas modalidades, o antígeno é um antígeno de S. pneumonia ou fragmento ou componente deste. Em algumas modalidades, o antígeno é um polissacarídeo (por exemplo, não conjugado ou conjugado com um carreador ou proteína) ou uma pluralidade do mesmo. Em algumas modalidades, o antígeno (por exemplo, antígeno de S. pneumonia) é uma vacina que compreende componentes capazes de induzir anticorpos específicos (por exemplo, anticorpos específicos de múltiplos sorotipos de S. pneumonia). Em algumas modalidades, uma vacina é uma vacina comercialmente disponível. A invenção não é limitada pela vacina. De fato, uma variedade de vacinas (por exemplo, vacinas de S. pneumonia) pode ser utilizada incluindo, mas não se limitando a PREVNAR, SYNFLORIX, PNEUMOVAX, bem como outras conhecidas na técnica. Similarmente, a invenção não é limitada pelo tipo ou via de administração/imunização. De fato, qualquer via/tipo de imunização pode ser utilizado incluindo, mas não limitado aos métodos descritos nas Publicações de Patente US2008026002, US2007009542; US2002094338; US2005070876; US2002010428; US2009047353; US2008066739; e US2002038111), cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade. De maneira semelhante, a invenção não é limitada pela formulação da vacina (por exemplo, de uma vacina de S. pneumonia). De fato, qualquer formulação pode ser utilizada incluindo, mas não limitada àquelas descritas em US2002107265, aqui incorporada por referência na sua totalidade. Em algumas modalidades, a vacina é uma vacina multivalente na qual são adicionados antígenos adicionais (ver, por exemplo, US2007161088; US2006121059, cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade.). Em algumas modalidades, os antígenos são purificados antes da utilização numa vacina (por exemplo, uma vacina conjugada) (ver, por exemplo, US2008286838 aqui incorporada por referência na sua totalidade). Os métodos de cultura de micro-organismos úteis num processo de fabricação de vacinas pneumocócicas conjugadas estão descritos em US2010290996, aqui incorporada por referência na sua totalidade. Alternativamente, em algumas modalidades, antígenos (por exemplo, antígenos S. pneumonia) que não são conjugados com uma proteína carreadora (ver, por exemplo, US2009136547, aqui incorporada por referência na sua totalidade). Em algumas modalidades, os imunomoduladores são utilizados (ver, por exemplo, US2004156857; US5985264; e WO11041691, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade). Em algumas modalidades, os anticorpos terapêuticos são produzidos num doador administrado com um antígeno (por exemplo, um antígeno S. pneumonia) e/ou vacina de acordo com os modos descritos em WO05070458; US2009191217; e WO10094720, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Em algumas modalidades, antígenos (por exemplo, vacinas (por exemplo, vacinas conjugadas ou não conjugadas)) são utilizados para gerar anticorpos (por exemplo, presentes no soro e/ou plasma) que são úteis contra organismos de doenças infecciosas (por exemplo, como descrito em, por exemplo, US2003099672; WO0062802, cada uma das quais aqui incorporada por referência na sua totalidade).

[000107] Em algumas modalidades, é utilizada uma vacina de polissacarídeos (por exemplo, contendo múltiplos sorotipos de S. pneumonia (por exemplo, contendo polissacarídeos purificados de 1, 2, 3, 4 ou mais ou todos os 23 dos seguintes sorotipos de S. pneumonia:1, 2, 3, 4, 5, 6b, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19F, 19A, 20, 22F, 23F, e 33F. Embora não seja necessário um entendimento de um mecanismo para praticar a presente invenção, e embora a presente invenção não esteja limitada a qualquer mecanismo de ação particular, em algumas modalidades, um antígeno (por exemplo, antígeno de S. pneumonia) ou vacina que estimula as células B (por exemplo, células plasmáticas) a gerar e secretar imunoglobulina específica (por exemplo, específica de S. pneumonia) sem o auxílio de células T, encontra uso na invenção.

[000108] Em algumas modalidades, é utilizada uma vacina conjugada que contém polissacarídeos capsulares (por exemplo, de uma pluralidade de sorotipos de S. pneumonia) que é covalentemente ligado a um carreador e/ou adjuvante (por exemplo, o toxoide diftérico CRM197). Embora não seja necessário um entendimento de um mecanismo para praticar a presente invenção, e enquanto a presente invenção não está limitada a qualquer mecanismo de ação particular, em algumas modalidades, qualquer antígeno (por exemplo, antígeno de S. pneumonia) ou vacina que estimula as células B (por exemplo, células plasmáticas) a gerar e secretar imunoglobulina específica (por exemplo, S pneumonia) (por exemplo, IgM e/ou IgG específica de S. pneumonia) através da interação com células T auxiliares tipo 2 específicas) e/ou produção de células B de memória (por exemplo, células B de memória específicas de S. pneumonia) encontra uso na invenção.

[000109] Assim, em algumas modalidades, a invenção proporciona métodos de estimulação de níveis elevados de anticorpos antipneumocócicos opsonofagocíticos em um doador, que inclui a administração a um animal, por exemplo um humano, uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo uma quantidade imunologicamente eficaz de uma composição de antígeno (por exemplo, uma composição de antígeno de S. pneumonia). A composição pode incluir antígenos parcialmente ou significativamente purificados (por exemplo, antígenos de S. pneumonia (por exemplo, epítopos de polissacarídeos, proteína e/ou peptídeo, obtidos a partir de fontes naturais ou recombinantes, que podem ser obtidos naturalmente ou sintetizados quimicamente ou, alternativamente, produzidos in vitro a partir de células hospedeiras recombinantes que expressam segmentos de DNA que codificam tais epítopos)).

[000110] Métodos para determinar a eficácia da imunização (por exemplo, determinar o nível de títulos de anticorpo específico de S. pneumonia) são conhecidos na técnica, e qualquer método conhecido pode ser utilizado para avaliar a eficácia da imunização (por exemplo, a eficácia da indução de anticorpos antipneumocócicos opsonofagocíticos (por exemplo, um ensaio de morte opsonofagocítica aqui descrito ou conhecido na técnica)). Em algumas modalidades, são utilizados métodos de detecção para a avaliação da eficácia de uma vacina (por exemplo, uma vacina conjugada pneumocócica) como descrito, por exemplo, em US2005260694; US4308026; US4185084; ou US2005208608, cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade.

[000111] Em algumas modalidades, são fornecidos kits e métodos que identificam amostras e/ou reuniões com títulos de anticorpos específicos (por exemplo, títulos de anticorpos antipneumocócicos opsonofagocíticos que são elevados). Numa modalidade, uma quantidade adequada de um reagente de detecção (por exemplo, anticorpo específico para anticorpos, um antígeno ou outro reagente conhecido na técnica) é imobilizada num suporte sólido e marcada com um agente detectável. Anticorpos podem ser imobilizados para uma variedade de substratos sólidos por métodos conhecidos. Os substratos de suporte sólidos adequados incluem materiais tendo uma membrana ou revestimento suportado por ou preso a varetas, grânulos, copos, embalagens lisas ou outro suporte sólido. Outros substratos sólidos incluem placas de cultura celular, placas de ELISA, tubos e membranas poliméricas. Os anticorpos podem ser marcados com um agente detectável, tal como um fluorocromo, um marcador radioativo, biotina ou outra enzima, tal como peroxidase de rábano, fosfatase alcalina e 2-galactosidase. Se o reagente de detecção for uma enzima, um meio para detectar o reagente de detecção pode ser fornecido com o kit. Um meio adequado para detectar um agente detectável emprega uma enzima como um agente detectável e um substrato enzimático que muda de cor quando em contato com a enzima. O kit também pode conter um meio para avaliar o produto do ensaio, por exemplo, um gráfico de cores ou um gráfico de referência numérica. Alguns métodos adequados para caracterizar amostras e reuniões são fornecidos nas referências aqui incorporadas por referência. A presente invenção não é limitada pelo método usado para caracterizar amostras e reuniões como tendo título elevado. Ensaios para determinar o nível de anticorpos opsonofagocíticos antipneumocócicos no plasma, imunoglobulina e/ou reuniões destes podem ser utilizados (por exemplo, como descrito nos Exemplos).

[000112] Em certas modalidades, são fornecidas composições (por exemplo, amostras de anticorpos, amostras de plasma agrupadas, globulinas imunes, etc.) nas quais os anticorpos foram purificados e/ou isolados de um ou mais contam inantes. As imunoglobulinas humanas foram isoladas pela primeira vez em grande escala durante a década de 1940 por F. J. Cohn. Em algumas modalidades, as técnicas fornecidas por Cohn (Cohn et al., J. Am. Chem. Soc. 1946; 68:459-475; aqui incorporada por referência na sua totalidade) ou técnicas de Cohn modificadas são utilizadas na preparação de imunoglobulinas aqui. Em algumas modalidades, utilizam-se vários métodos de purificação e isolamento para produzir moléculas de imunoglobulina substancialmente não modificadas, inalteradas, não desnaturadas e/ou nativas de alta pureza. Técnicas exemplificativas, são fornecidas, por exemplo, na Patente US 4.482.483, aqui incorporada por referência na sua totalidade. Em algumas modalidades, as composições (por exemplo, reuniões de anticorpo) compreendem > 50% de imunoglobulina (por exemplo,>60%, >70%, >80%, >90%, >95%, >99%). Vários métodos podem ser utilizados para produzir tais composições, incluindo, por exemplo, técnicas convencionais de purificação e isolamento de proteínas, bem como fracionamento de fluidos biológicos (por exemplo, plasma). Descrições de fracionamento de anticorpos para uso em imunoterápicos são encontradas, por exemplo, na Patente US 4.346.073 e outras referências aqui fornecidas, cada uma das quais é incorporada por referência na sua totalidade. Em certas modalidades, as imunoglobulinas são purificados por um método de precipitação fracionária, cromatografia de permuta iônica, cromatografia por exclusão de tamanho, ultrafiltração, cromatografia de afinidade ou quaisquer combinações adequadas destes (ver, por exemplo, Patente US 7.597.891; Patente US 4.256.631; Patente US 4.305.870; Lullau et al. J. Biol. Chem. 1996; 271:16300-16309; Corthesy, Biochem. Soc. Trans. 1997; 25:471-475; e Crottet et al., Biochem. J. 1999; 341:299-306; aqui incorporada por referência na sua totalidade).

[000113] Uma composição da invenção (por exemplo, plasma reunido e/ou imunoglobulina preparada a partir do mesmo) pode ser administrada por qualquer meio adequado, incluindo administração parenteral, subcutânea, intraperitoneal, intrapulmonar e, se desejado, para tratamento local, administração intralesional. Infusões parenterais incluem administração intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal ou subcutânea. Além disso, as composições da invenção podem ser administradas por infusão de pulso, particularmente com doses decrescentes. A dosagem pode ser por qualquer rota apropriada, por exemplo, injeções, como injeções intravenosas ou subcutâneas, dependendo em parte da administração ser aguda ou crônica.

[000114] Uma composição da invenção pode ser formulada, doseada e/ou administrada de uma forma consistente com a boa prática médica. Fatores para a consideração neste contexto incluem distúrbio particular sendo tratado, o quadro clínico do paciente individual, a causa do distúrbio, o local de distribuição do agente, o método de administração, a programação da administração, e outros fatores conhecidos de médicos praticantes. As composições da invenção não precisam ser, mas são opcionalmente formuladas com um ou mais agentes correntemente utilizados para prevenir ou tratar o distúrbio em questão. A quantidade eficaz de tais outros agentes depende da quantidade de anticorpos ou imunoconjugado da presente na formulação, o tipo de distúrbio ou tratamento, e outros fatores discutidos acima. Essas são geralmente usadas nas mesmas dosagens e com vias de administração conforme descrito neste documento, ou de cerca de 1 a 99% das dosagens descritas neste documento, ou em qualquer dosagem e por qualquer via que seja empiricamente/clinicamente determinada como apropriada.

[000115] Para a prevenção ou tratamento da doença, a dosagem apropriada de uma composição da invenção (quando utilizada sozinha ou em combinação com um ou mais outros agentes terapêuticos adicionais) pode depender de vários fatores incluindo o tipo de doença a ser tratada, o tipo de anticorpo, tamanho do paciente, área de superfície corporal, idade, o composto específico a ser administrado, sexo, tempo e via de administração, estado geral de saúde, interação com outras drogas administradas concomitantemente, gravidade e curso da doença, se o anticorpo é administrado para fins preventivos ou terapêuticos, terapia prévia e histórico clínico do paciente.

[000116] Uma dosagem exata pode ser determinada pelo médico individual tendo em conta o paciente a ser tratado. A dosagem e a administração são ajustadas para fornecer níveis suficientes da porção ativa (por exemplo, reunião de plasma) ou para manter o efeito desejado. Fatores adicionais que podem ser levados em consideração incluem a gravidade do estado da doença; idade, peso e sexo do paciente; dieta, tempo e frequência de administração, combinação(ões) de drogas, sensibilidades à reação e tolerância/resposta à terapia. Composições farmacêuticas de ação prolongada podem ser administradas a cada 3 a 4 dias, toda semana ou uma vez a cada duas semanas, quatro semanas, seis semanas, oito semanas ou mais, dependendo da meia vida e da taxa de depuração da formulação específica.

[000117] Uma composição da invenção pode ser administrada ao paciente de uma só vez ou ao longo de uma série de tratamentos. Dependendo do tipo e gravidade da doença, cerca de 1 gg/kg a 5000 mg/kg (por exemplo,0,5 mg/kg-1500 mg/kg) de uma composição da invenção pode ser uma dosagem candidata inicial para administração ao paciente, seja, por exemplo, por uma ou mais administrações separadas, ou por infusão contínua. Tal como aqui descrito, drogas ou agentes adicionais (por exemplo, antimicrobianos (por exemplo, antibióticos, antivirais, antifúngicos, etc.), outras composições de imunoglobulinas (por exemplo, IVIG convencional), compostos anti-inflamatórios e/ou cicatrizantes, etc.) podem ser administrados concorrentemente com uma composição de plasma reunido da invenção. Uma dosagem diária exemplificativa de tal agente pode variar de cerca de 1 μg/kg a 100 mg/kg ou mais. Por administrações repetidas ao longo de vários dias ou mais, dependendo da condição, o tratamento geralmente pode ser sustentado até que ocorra uma desejada supressão dos sintomas de doença. Uma dosagem exemplificativa de uma composição da invenção estaria na faixa de cerca de 0,05 mg/kg a cerca de 10 mg/kg. Assim, uma ou mais doses de cerca de 0,5 mg/kg, 2,0 mg/kg, 4,0 mg/kg, ou 10 mg/kg (ou qualquer combinação das mesmas) podem ser administradas a um paciente. Essas doses podem ser administradas de forma intermitente, por exemplo, todas as semanas ou a cada duas ou três semanas. Um médico é prontamente capaz de monitorar a administração terapêutica de uma composição da invenção e pode, por sua vez, determinar se doses maiores ou menores da composição devem ser administradas.

[000118] As composições da invenção podem ser administradas (por exemplo, intravenosamente, oralmente, intramuscularmente, subcutaneamente, etc.) a um paciente num carreador farmaceuticamente aceitável, tal como solução salina fisiológica. Esses métodos são bem conhecidos para aqueles versados na técnica.

[000119] Consequentemente, em algumas modalidades da presente invenção, uma composição da invenção pode ser administrada a um paciente sozinho, ou em combinação com outras drogas ou em composições farmacêuticas onde é misturado com excipiente(s) ou outros carreadores farmaceuticamente aceitáveis. Numa modalidade da presente invenção, o carreador farmaceuticamente aceitável é farmaceuticamente inerte. Dependendo da condição a ser tratada, as composições farmacêuticas podem ser formuladas e administradas sistemicamente ou localmente. Técnicas para formulação e administração podem ser encontradas na última edição de "Remington's Pharmaceutical Sciences” (Mack Publishing Co., Easton Pa.). Rotas adequadas podem, por exemplo, incluir administração oral ou transmucosal; bem como administração parentérica, incluindo administração intramuscular, subcutânea, intramedular, intratecal, intraventricular, intravenosa, intraperitoneal ou intranasal.

[000120] Para injeção, uma composição da invenção pode ser formulada em soluções aquosas, preferivelmente em tampões fisiologicamente compatíveis, tais como solução de Hanks, solução de Ringer ou solução salina fisiologicamente tamponada. Para administração de tecido ou células, são utilizados penetrantes apropriados à barreira particular a ser permeada na formulação. Esses penetrantes são geralmente conhecidos na técnica.

[000121] Em outras modalidades, as composições da presente invenção (por exemplo, composições farmacêuticas) podem ser formuladas utilizando transportadores farmaceuticamente aceitáveis bem conhecidos na técnica em dosagens adequadas para administração oral. Tais carreadores permitem que as composições farmacêuticas sejam formuladas como comprimidos, pílulas, cápsulas, líquidos, géis, xaropes, lamas, suspensões e semelhantes, para ingestão oral ou nasal por um paciente a ser tratado.

[000122] As composições farmacêuticas adequadas para utilização na presente invenção incluem composições em que os ingredientes ativos estão contidos numa quantidade eficaz para atingir o objetivo pretendido. Por exemplo, uma quantidade eficaz de uma composição da invenção pode ser aquela quantidade que resulta na inibição de crescimento e/ou morte de bactérias num sujeito. A determinação da quantidade eficaz está bem dentro da capacidade dos versados na técnica, especialmente à luz da divulgação aqui proporcionada.

[000123] Além dos ingredientes ativos, as composições farmacêuticas podem conter carreadores farmaceuticamente aceitáveis adequados, compreendendo excipientes e auxiliares que facilitam o processamento das composições da invenção em preparações que podem ser utilizadas farmaceuticamente.

[000124] As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser fabricadas de uma maneira que ela própria é conhecida (por exemplo, por meio de processos convencionais de mistura, dissolução, granulação, fabricação de drágeas, levigação, emulsão, encapsulação, aprisionamento ou liofilização).

[000125] As formulações farmacêuticas para a administração parenteral incluem soluções aquosas das composições ativas na forma solúvel em água. Adicionalmente, as suspensões das composições podem ser preparadas como suspensões de injeção oleosa apropriadas. Os solventes ou veículos lipofílicos adequados incluem óleos graxos, tais como o óleo de gergelim, ou ésteres de ácido graxo sintéticos, tais como etil oleato ou triglicerídeos, ou lipossomas. As suspensões de injeção aquosas podem conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão, como carboximetilcelulose de sódio, sorbitol, ou dextrano. Opcionalmente, a suspensão também pode conter estabilizantes ou agentes adequados que aumentam a solubilidade das composições para permitir a preparação de soluções altamente concentradas.

[000126] Composições da invenção formuladas num carreador farmaceuticamente aceitável podem ser preparadas, colocadas num recipiente apropriado e marcadas para o tratamento de uma condição indicada. As condições indicadas no rótulo podem incluir tratamento ou prevenção de uma infecção viral ou bacteriana.

[000127] A composição farmacêutica pode ser provida como um sal e pode ser formada com muitos ácidos, incluindo, mas não se limitando a, clorídrico, sulfúrico, acético, lático, tartárico, málico, succínico, etc. Sais tendem a ser mais solúveis em solventes aquosos ou outros protônicos do que são as suas formas de base livre correspondentes. Noutros casos, a preparação preferida pode ser um pó liofilizado em histidina 1 mM-50 mM, sacarose a 0,1% -2%, manitol a 2% -% a uma faixa de pH de 4,5 a 5,5 que é combinada com tampão antes da utilização.

[000128] As composições da presente invenção (por exemplo, globulina hiperimune antipneumocócica) podem ser combinadas com agentes adicionais (por exemplo, anticorpos, fragmentos de anticorpos, moléculas semelhantes a anticorpos, anticorpos monoclonais, antimicrobianos, outras composições de imunoglobulinas (por exemplo, IVIG convencional) ou outras proteínas ou moléculas pequenas) para aumentar o efeito imunoterapêutico e/ou anti-inflamatório. Tais agentes adicionais podem ser produzidos recombinantemente, sinteticamente, in vitro, etc. A presente invenção não é limitada pelos tipos de agentes adicionais que uma globulina hiperimune antipneumocócica é coadministrada e/ou combinada com. Em algumas modalidades, anticorpos recombinantes ou sintéticos (por exemplo, monoclonais humanizados) ou fragmentos de anticorpos (por exemplo, dirigidos para um patógeno ou antígeno específico) são coadministrados e/ou adicionados. Além disso, os anticorpos (por exemplo, monoclonal, policlonal, etc.) para bactérias e vírus especificados podem ser coadministrados e/ou adicionados às composições. Em algumas modalidades, vários agentes terapêuticos (por exemplo, agentes anti-inflamatórios, quimioterapêuticos), estabilizantes, tampões, etc. são coadministrados e/ou adicionados à globulina hiperimune antipneumocócica, por exemplo, para aumentar ainda mais a eficácia, estabilidade, administrabilidade, duração de ação, faixa de usos, etc. Em uma modalidade, uma globulina hiperimune antipneumocócica é coadministrada com uma IVIG convencional (por exemplo, para um paciente com doença de imunodeficiência primária (por exemplo, para tratar infecção (por exemplo, profilaticamente e/ou terapeuticamente) (por exemplo, causada por S. pneumonia, Corynebacterium difteria, vírus do sarampo e/ou vírus da polio)).

[000129] As composições podem opcionalmente conter carreadores, tais como agentes conservantes, umectantes, emulsionantes e dispensadores. Prevenção da ação de micro-organismos pode ser assegurada por vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico e similares. Também pode ser desejável incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, cloreto de sódio e similares. A absorção prolongada das imunoglobulinas pode ser provocada pelo uso de agentes, atrasando a absorção, por exemplo, gelatina e monoestearato de alumínio.

[000130] Em algumas modalidades, a globulina hiperimune antipneumocócica da invenção é administrada a um sujeito para proporcionar benefícios terapêuticos, preventivos, profiláticos e/ou outros.

[000131] Doenças e condições para as quais a administração da globulina hiperimune antipneumocócica da invenção deve ser utilizada de forma terapêutica ou profilática, incluindo, mas não se limitando a imunodeficiência comum variável, deficiência de IgA, infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), infecções bacterianas e virais, como infecção do trato respiratório por influenza, infecção do trato respiratório pelo vírus sincicial respiratório, infecção do trato respiratório por rinovírus, infecção do trato respiratório por adenovírus: infecções por protozoários, como giardíase, infecções fúngicas; Leucemia linfocítica crônica; mieloma múltiplo; macroglobulinemia; bronquite crônica; bronquiectasia; asma; supressão imune associada ao transplante de medula óssea; supressão imune associada à administração de ciclofosfamida; supressão imune associada à administração de azatioprina; supressão imune associada à administração de metotrexato; supressão imune associada à administração de clorambucil; supressão imune associada à administração de mostarda de nitrogênio; supressão imune associada à administração de 6-mercaptopurina; supressão imune associada à administração de tioguanina; imunodeficiência combinada severa; deficiência de adenosina desaminasa; maior histocompatibilidade classe I (síndrome do leucócito nu) e deficiências de classe II; deficiência de purina nucleosídeo fosforilase; Síndrome de DiGeorge; hipogamaglobulinemia transitória da infância; agamaglobulinemia ligada ao X; agamaglobulinemia ligada ao X com deficiência de hormônio do crescimento; deficiência de transcobalamina II; imunodeficiência com timoma; imunodeficiência com resposta defeituosa hereditária ao vírus Epstein Barr; deficiência de imunoglobulina com IgM aumentada; deficiência da cadeia P; ataxia telangiectasia; imunodeficiência com albinismo parcial; sequelas de deficiência seletiva de IgA, tais como as devidas à artrite reumatoide; artrite reumatoide juvenil; lúpus eritematoso sistêmico; tireoidite; anemia perniciosa; dermatomiosite; anemia hemolítica positiva de Coomb; doença de Addison idiopática; vasculite cerebral e púrpura trombocitopênica idiopática.

[000132] Em algumas modalidades, as composições e métodos da presente invenção fornecem benefícios anti-inflamatórios quando administrados a um sujeito. Demonstrou-se que as imunoglobulinas reunidas proporcionam uma ação anti-inflamatória quando administradas passivamente (ver, por exemplo, Nimmerjahn e Ravetch, Annu. Rev. Immunol. 2008. 26:513-33.; Ramakrishna et al. Plos Pathogens. 2011. 7:6:e1002071; aqui incorporado por referência na sua totalidade). Em algumas modalidades, a globulina hiperimune antipneumocócica da invenção exerce um efeito anti-inflamatório melhorado (por exemplo, aumento de 10%, aumento de 20%, aumento de 50%, aumento de 2 vezes aumento de 3 vezes, aumento de 5 vezes, aumento de 10 vezes ou maior) comparado ao efeito anti-inflamatório de uma mistura de amostras de plasma obtidas de sujeitos humanos aleatórios (por exemplo, 1000 ou mais indivíduos humanos aleatórios). Embora não seja necessário compreender um mecanismo para a prática da presente invenção e enquanto a presente invenção não está limitada a qualquer mecanismo particular, numa modalidade, a globulina hiperimune antipneumocócica da invenção exibe um efeito anti-inflamatório significativamente melhorado em comparação com um IVIG convencional porque a composição de plasma reunido da invenção compreende plasma de pelo menos 1000 doadores (por exemplo, em comparação com uma globulina hiperimune convencional preparada a partir de um número limitado de doadores (por exemplo, numa modalidade, quanto maior for o número de diferentes amostras de plasma reunido, mais benéfico o efeito anti-inflamatório (por exemplo, quanto maior o benefício histopatológico (por exemplo, redução da morte celular epitelial)) observado)).

[000133] Em algumas modalidades da presente invenção, as composições da invenção são administradas sozinhas, enquanto noutras modalidades, as composições estão preferencialmente presentes numa formulação farmacêutica compreendendo pelo menos um ingrediente/agente ativo, como definido acima, em conjunto com um suporte sólido ou alternativamente, em conjunto com um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis e opcionalmente outros agentes terapêuticos. Cada carreador deve ser "aceitável" no sentido de que é compatível com os outros ingredientes da formulação e não prejudicial para o sujeito.

[000134] Numa modalidade, a globulina hiperimune antipneumocócica fornecida aqui compreende ainda um ou mais agentes biologicamente ativos. A invenção não está limitada ao tipo de agente/material biologicamente ativo. De fato, pode ser utilizada uma variedade de agentes/materiais biologicamente ativos incluindo, mas não limitados a anticorpos, material antitoxina, agente anti-inflamatório, agente anticancerígeno, agente antimicrobiano, agente terapêutico, anti-histamínico, citocina, quimiocina, vitamina mineral ou similares. Numa modalidade, o agente biologicamente ativo é um agente antitoxina. Numa modalidade, o agente antitoxina é um anticorpo monoespecífico, biespecífico ou multiespecífico com especificidade para uma toxina viral, bacteriana ou fúngica. Numa outra modalidade, a toxina bacteriana ou fúngica é selecionada de neurotoxina de Botulinum, toxina do tétano, toxina de E. coli, toxina de Clostridium difficile, toxina de Vibrio RTX, toxinas estafilocócicas, toxina de cianobactérias e micotoxinas. Em outra modalidade, a composição imunoterapêutica compreende ainda uma alíquota de um anticorpo monoclonal único ou múltiplo com especificidades únicas ou múltiplas (por exemplo, a composição imunogênica pode ser misturada com um ou mais anticorpos ou material biologicamente ativo (por exemplo, um anticorpo monoclonal de qualquer especificidade, um agente antitoxina, etc.)). A invenção não é limitada pelo tipo de um ou mais anticorpos que são adicionados (por exemplo, adicionados) à composição imunogênica. Na verdade, podem ser utilizados qualquer um ou mais anticorpos (por exemplo, específicos para um agente patogênico ou produto patogênico), incluindo, mas não se limitando a anticorpos padrão, anticorpos biespecíficos, anticorpos multiespecíficos ou semelhantes conhecidos na técnica (por exemplo, específico para um ou uma multiplicidade de antígenos).

[000135] A invenção não é limitada pelo tipo de sujeito tratado com as composições e métodos da invenção. De fato, uma variedade de sujeitos pode ser tratada, incluindo, mas não se limitando a, um sujeito em risco de desenvolver uma infecção (por exemplo, trato respiratório superior ou outro tipo de infecção (por exemplo, reduzindo o risco de desenvolver infecção em um sujeito tendo um risco elevado de infecção)). Numa modalidade, um sujeito tratado com uma composição da invenção foi ou é diagnosticado como tendo uma doença de imunodeficiência primária (PIDD). Noutra modalidade, o sujeito é um paciente com doença renal terminal (ESRD); paciente com câncer em terapia imunossupressora, paciente de AIDS, paciente diabético, recém-nascido, paciente transplantado, paciente em terapia de imunossupressão, paciente com PIDD e outras imunodeficiências, paciente com sistema imune defeituoso, paciente com doença autoimune, pessoa idosa em instituição de cuidados prolongados com doença autoimune em terapia imunossupressora, paciente transplantado, paciente com procedimento cirúrgico invasivo, paciente queimado ou outro paciente em ambiente de tratamento agudo.

EXPERIMENTAL

[000136] Os seguintes exemplos são fornecidos para demonstrar e ilustrar adicionalmente certas modalidades e aspectos preferidos da presente invenção e não devem ser interpretados como limitativos do seu alcance.

Exemplo 1 Geração de doadores de plasma hiperimune, soro hiperimune e imunoglobulina preparada a partir dos mesmos

[000137] As experiências foram conduzidas durante o desenvolvimento de modalidades da invenção num esforço para gerar doadores de plasma hiperimunes que possuem plasma/soro hiperimune para uma grande variedade de sorotipos pneumocócicos. Um exemplo não limitativo dessas experiências é fornecido abaixo.

[000138] Foram selecionados sujeitos saudáveis (homens e mulheres) entre 18 e 45 anos para imunização. Em particular, foi requerido que cada sujeito não tivesse qualquer condição médica conhecida para participar no estudo e para funcionar como doador de plasma humano vacinado.

[000139] Cada participante do estudo recebeu o seguinte esquema de vacinação: vacinação/dose primária de PREVNAR (PCV13) (0,5 ml de injeção intramuscular de acordo com as instruções do fabricante) no dia 0 seguida de uma vacinação secundária de PNEUMOVAX23 (0,5 ml de injeção intramuscular de acordo com as instruções do fabricante) às 4 semanas. O sangue foi coletado (10 mL) de cada participante nos seguintes momentos: imediatamente antes da vacinação primária com PREVNAR, imediatamente antes da vacinação secundária com PNEUMOVAX23 na semana 4, na semana 8, na semana 10, na semana 12 e na semana 16. Amostras de soro foram preparadas a partir de cada amostra de sangue, divididas em alíquotas e armazenadas a -70°C ± 10°C. Vários estudos (por exemplo, descritos abaixo) foram realizados com as amostras de soro.

[000140] Quantificação de anticorpos polissacarídicos antipneumocócicos (PS) específicos para sorotipo (Teste IgG). A IgG específica para o sorotipo pneumocócico (ST) foi quantificada adotando-se métodos previamente descritos (ver, por exemplo, Lai et al.,2005 J Immunolo Meth 296:135-147). Resumidamente, os grânulos de luminex espectralmente distintos foram conjugados com polissacarídeo capsular específico (PS) pneumocócico (Pnc) ST obtido a partir de ATCC. As amostras de soro de teste foram comisturadas com os grânulos conjugados de PS e a IgG específica de ST foi quantificada com o soro de referência humano, 89SF. A concentração específica do sorotipo nas amostras de soro foi expressa em μg/mL.

[000141] Ensaio de morte Opsonofagocítica (OPK). As concentrações funcionais de anticorpos (título) nas amostras de soro foram testadas adotando métodos previamente descritos (ver, por exemplo, Romero-Steiner et a/.,1997 Clin Diagn Lab Immunol. Jul;4(4):415-22.). Resumidamente, células HL-60 (leucócitos promielocíticos humanos) diferenciadas em linhagens polimorfonucleares (PMN) foram usadas como células efetoras. Cepas vivas específicas de sorotipo de S. pneumonia foram utilizadas como complemento alvo e complemento de coelho bebê (PELFREEZE, Inc, Rogers, AR) como fonte de complemento para a morte opsonofagocítica. Reagentes armazenados a 4 ± 2°C foram trazidos à temperatura ambiente antes de realizar o ensaio. 10L de HBSS (+) com Gelatina, doravante conhecido como tampão de ensaio, foi adicionado a cada poço de uma placa de 96 poços, exceto para a linha A. Foram adicionados 20 μL de soros de controle de qualidade não diluídos aos poços A1 a A3. Adicionou-se 20 μL de material de amostra diluída aos poços A4-A12. Os soros QC e amostras desconhecidos foram diluídos em série 1:2. Os poços de controle do complemento e os poços de controle celular possuem 10 μL de tampão de ensaio neste ponto.

[000142] Uma suspensão bacteriana de trabalho de S. pneumonia foi diluída para uma concentração de 8,0 x 105 colônias por 20μL. Adicionram-se 20 μL da suspensão bacteriana a cada poço da placa, incluindo poços de controle. A placa foi incubada durante 30 minutos à temperatura ambiente num agitador de placas ajustado para 200 rpm. Foram adicionados 10 μl de complemento de coelho de bebê congelado a todos os poços, exceto o controle celular. O controle celular recebeu 10 μL de tampão de ensaio em seu lugar. A placa foi incubada durante 15 minutos à temperatura ambiente num agitador de placas ajustado para 200 rpm. Foram adicionados 40 μL de PMNs HL60 diferenciados a cada poço da placa. A concentração de células foi determinada de modo que 100. 000 células foram adicionadas por poço. A placa foi incubada durante 30 minutos à temperatura ambiente num agitador de placas ajustado para 200 rpm.

[000143] Usando uma pipeta multicanal, 5 μL de cada poço em linha foram simultaneamente adicionados a uma placa de petri de 150x15mm contendo Agar de Chocolate. O prato foi inclinado para permitir que o volume da amostra escorresse pela placa de ágar em linhas paralelas. Os pratos foram incubados durante a noite a 37°C e 5% de CO2. No dia seguinte, as placas foram fotografadas e as unidades formadoras de colônias (CFU) contaram. A morte bacteriana foi calculada como a porcentagem de morte dentro de um poço (CFU por poço/controle médio do complemento CFU*100). O recíproco de diluição que tem > 50% de morte da bactéria alvo em comparação com o controle do complemento foi relatado como o título de OPK. Uma vez que a primeira diluição foi de 1:8, as amostras de soro sem títulos foram relatadas 1:4 para fins computacionais.

Exemplo 2 Identificação e caracterização da resposta de anticorpos totais e funcionais específicos do sorotipo pneumocócico em indivíduos imunizados

[000144] A amostra de soro individual foi desenhada em diferentes pontos de tempo (imediatamente antes da vacinação primária de PREVNAR, imediatamente antes da vacinação secundária de PNEUMOVAX23 na semana 4, na semana 8, na semana 10, na semana 12 e na semana 16) dos participantes do estudo. O soro foi analisado quanto à concentração de IgG específica de sorotipo (ST) pneumocócico (Pnc) (ver teste de IgG no Exemplo 1 acima). Além das amostras de soro individuais, o soro reunido foi gerado reunindo uma quantidade igual de soros de cada participante antes e depois da semana 12 e as amostras de soro reunidas foram também caracterizadas para avaliar o efeito da agregação no resultado do teste de IgG. Adicionalmente, as amostras de soro individuais e combinadas foram testadas quanto à resposta funcional de anticorpos utilizando o ensaio de morte opsonofagocítica (OPK) descrito no Exemplo 1.

[000145] Concentrações/título de IgG específicos do sorotipo pneumocócico. As amostras de soro de cada indivíduo (n = 10) imunizado primário ou de reforço com PREVNAR-PNEUMOVAX23 foram analisadas para IgG específica para Pnc ST. Os títulos de IgG específicos de Pnc ST são mostrados na FIG. 1. As variações de inter-doadores e de -ST foram registradas para a resposta de IgG nas amostras de soro. Enquanto 9/10 de doadores foram observados para montar uma resposta robusta de IgG aos Pnc STs, existem diferenças nas respostas específicas de ST. Entre os doadores, 7/10 apresentaram concentrações máximas de IgG às 4 semanas após a vacinação com PNEUMOVAX23 (resposta ao reforço de PNEUMOVAX23, oito semanas após a vacinação primária) seguido por uma queda gradual que permaneceu várias vezes acima da linha de base, mesmo na semana 12. Apesar dessas variações, todos os doadores demonstraram concentrações de IgG específicas para Pnc ST acima do nível de proteção (> 0,2 μg/mL) de imunidade (Ver, por exemplo, Balmer et al., Clin Exp Immunol. Setembro de 2003; 133 (3):364-9). A concentração de IgG nos soros agrupados indicou aumento de 2,2 a 30 vezes nas concentrações de IgG no final do período de estudo (semana 12) a partir da linha de base (Pre). Entre estes, o aumento máximo na resposta de IgG foi registrado para o sorotipo ST 1 seguido pelos sorotipos ST23F e ST 4. O sorotipo ST19A exibiu o aumento mínimo de vezes na concentração de IgG (2,2 vezes) seguido por ST3 (2,6 vezes) e ST14 (3,2 vezes).

[000146] Título de anticorpo funcional/opsônico (OPK). A FIG 2 mostra dados referentes ao título de OPK nos soros doadores específicos para vários Pnc STs. Os títulos de OPK de linha de base são marcados ao longo da concentração de IgG. O aumento da dobra no título de anticorpo funcional variou de 4-256 vezes (Ver a FIG. 2). Surpreendentemente, descobriu-se que a quantidade total de IgG (por exemplo, mostrada na FIG. 1) não foi correlacionada com a quantidade de anticorpo opsônico funcional total. Por exemplo, o sorotipo ST14 teve apenas um modesto aumento no título total de IgG (3,2 vezes, ver FIG. 1). No entanto, teve o maior aumento na resposta funcional (título de anticorpo opsônico) de 256 vezes em relação ao valor basal.

Exemplo 3 Quantificação dos anticorpos totais e funcionais do sorotipo Pneumocócico em soros humanos reunidos

[000147] As amostras de soro de plasma humano vacinado (n = 34) foram retiradas em intervalos de um mês entre 1 mês de Vacinação de Pre - até o mês 5 após a vacinação. Nestes 6 pontos de tempo, as amostras de soro foram reunidas e analisadas quanto à concentração de IgG específica de Pnc ST (teste de IgG) e anticorpos funcionais usando OPK descrito no Exemplo 1 acima. Determinaram-se as concentrações de anticorpos (IgG e OPK específicos para o sorotipo) e o aumento de dobra acima da linha de base Vacinação de Pre.

[000148] Amostras de soro de indivíduos vacinados (imunizados primários ou de reforço com PREVNAR-PNEUMOVAX23) foram reunidas em intervalos de 1 mês entre 1 mês Vacinação de Pre - até o 5° mês após a vacinação e o soro reunido de cada período foi analisado para IgG específica para Pnc ST. O título de IgG específico para Pnc ST no soro de doador reunido, retirado em cada ponto de tempo, é mostrado na FIG. 3. A concentração média de IgG nos soros pós-imunes reunidos variou de 4,4 - 37,59 μg/mL. A redução das concentrações globais de IgG em comparação com o ponto final da semana 12 foi possivelmente devido a uma queda gradual nos níveis de IgG após o pico observado na semana 4 após a vacinação, resultando na redução da concentração de IgG ao longo do tempo. No entanto, o aumento de dobra na concentração de IgG sobre a linha de base (ver FIG. 4) indicou um padrão semelhante ao mostrado na FIG. 1 com a resposta mais alta a ST1, ST23F e ST4.

[000149] OPK. Os títulos de OPK nos soros de doadores reunidos específicos para vários Pnc STs são mostrados na FIG. 5. O título de OPK de pós-imunização médio para ST1 foi excepcionalmente alto (36044), enquanto todas as outras STs tinham um mínimo de um título inferior de registro. Apesar de terem sido registrados altos títulos de OPK nas amostras individuais de soro testadas na semana 12 (Ver FIG. 2) os títulos não foram o registro mais alto do que os outros sorotipos.

Exemplo 4 Identificação e caracterização de anticorpos de sorotipo pneumocócico total e funcional em IgG humana purificada:

[000150] As amostras de soro desenhadas em diferentes pontos de tempo dos participantes do estudo (n = 34) foram reunidas em cada um dos pontos de tempo individuais (pre, semana 4, 8, 10, 12, 16 e mês 5) e a IgG foi purificada a partir das amostras reunidas usando colunas de imunoabsorvente de proteína A padrão. A IgG purificada foi analisada quanto à concentração de IgG específica de Pnc ST (teste de IgG) e anticorpos funcionais usando OPK como descrito no Exemplo 1. As concentrações de anticorpos (IgG específica para o sorotipo) e títulos funcionais de anticorpos (OPK) foram caracterizadas. Adicionalmente, a caracterização dos resultados foi realizada com o intuito de compreender a relação entre as técnicas in vitro e ex vivo baseadas na análise de regressão dos resultados individuais.

[000151] Concentrações de IgG específicos do sorotipo pneumocócico. As amostras de soro de indivíduos vacinados com o regime de imunização primário-reforço com PREVNAR-PNEUMOVAX23 foram reunidas em intervalos de um mês de 1 mês Vacinação de Pre até 5 meses após e o soro reunido de cada ponto de tempo e a IgG purificada. Os soros reunidos foram analisados para IgG específica de Pnc ST. A IgG específica de Pnc ST dos soros reunidos é mostrada na FIG. 6. A concentração média de IgG no soro reunido pós-imune variou de 3,2 a 23,3 μg/mL, resultando em redução da concentração de IgG ao longo do tempo. No entanto, o aumento de dobra na concentração de IgG sobre a linha de base (ver FIG. 4) indicou um padrão semelhante como mostrado na FIG. 1 com a resposta mais alta para ST1, ST23F e ST4.

[000152] OPK:O título de OPK no soro de doador reunido específico para vários Pnc STs é apresentado na FIG. 7. O título médio de OPK pós-imunização variou de 213-5826,7 com maior título para ST7F (5826,7) seguido de ST23F (4778,7) e ST5 (4096).

Exemplo 5 Comparação do título do sorotipo de OPK presente em soros humanos reunidos de doadores vacinados versus o título de sorotipo de OPK presente em IVIG imunogênicas convencionais e comercialmente disponíveis

[000153] Ensaio de OPK. O ensaio de OPK descrito no Exemplo 1 acima foi utilizado. Resumidamente, e agentes armazenados a 4 ± 2°C foram trazidos à temperatura ambiente antes de realizar o ensaio. 10μL de HBSS (+) com Gelatina, doravante conhecido como tampão de ensaio, foi adicionado a cada poço de uma placa de 96 poços, exceto para a linha A. Foram adicionados 20 μL de soros de controle de qualidade não diluídos aos poços A1 a A3. Adicionou-se 20 μL de material de amostra diluída aos poços A4-A12. Os soros QC e amostras desconhecidos foram diluídos em série 1:2. Os poços de controle do complemento e os poços de controle celular possuem 10 μL de tampão de ensaio neste ponto.

[000154] Uma suspensão bacteriana de trabalho de S. pneumonia foi diluída para uma concentração de 8,0 x 105 colônias por 20μL. Adicionou-se 20 μL da suspensão bacteriana a cada poço da placa, incluindo poços de controle. A placa foi incubada durante 30 minutos à temperatura ambiente num agitador de placas ajustado para 200 rpm. Foram adicionados 10 μl de complemento de coelho de bebê congelado a todos os poços, exceto o controle celular. O controle celular recebeu 10 μL de tampão de ensaio em seu lugar. A placa foi incubada durante 15 minutos à temperatura ambiente num agitador de placas ajustado para 200 rpm. Foram adicionados 40 μL de PMNs HL60 diferenciados a cada poço da placa. A concentração de células foi determinada de modo que 100. 000 células foram adicionadas por poço. A placa foi incubada durante 30 minutos à temperatura ambiente num agitador de placas ajustado para 200 rpm.

[000155] Usando uma pipeta multicanal, 5 μL de cada poço em linha foram simultaneamente adicionados a uma placa de petri de 150x15mm contendo Agar de Chocolate. O prato foi inclinado para permitir que o volume da amostra escorresse pela placa de ágar em linhas paralelas. Os pratos foram incubados durante a noite a 37°C e 5% de CO2. No dia seguinte, as placas foram fotografadas e as unidades formadoras de colônias (CFU) contaram. A morte bacteriana foi calculada como a porcentagem de morte dentro de um poço (CFU por poço/controle médio do complemento CFU*100).

[000156] A FIG. 8 mostra uma comparação do título específico de sorotipo de OPK de anticorpos funcionais/opsônicos presentes em soros humanos reunidos de doadores vacinados versus título específico de sorotipo de OPK de anticorpos funcionais/opsônicos presentes em nove IVIGs convencionais, aleatórias e diferentes comercialmente disponíveis. Cada coluna representa apenas um sorotipo de S. pneumonia único. Cada linha representa uma amostra exclusiva. As amostras A-I representam IVIG convencional, comercialmente disponível.

[000157] Como mostrado na FIG. 8, uma variação pronunciada nos títulos opsônicos específicos de sorotipo foi descoberta nos lotes comerciais de IVIG. Verificou-se ainda que um título aumentado para um sorotipo não previu ou correlacionou-se com um título aumentado para qualquer outro sorotipo sugerindo que a resposta aumentada individual não refletia uma resposta imune geral melhorada para S pneumonia, mas sim uma resposta(s) esporádica(s) reforçada para sorotipos muito específicos. Em contraste acentuado, os títulos de anticorpos opsônicos observados usando a imunoglobulina de doadores imunizados foram observados como aumentados para todos os sorotipos sem exceção. Além disso, houve um aumento de 3-256 vezes no título opsônico de anticorpos antipneumocócicos na imunoglobulina de doadores imunizados em comparação com lotes comerciais de imunoglobulina. Assim, em algumas modalidades, composições e métodos da invenção para gerar composições (por exemplo, composições de sangue, plasma e/ou imunoglobulina) contendo um título elevado de anticorpo antipneumocócico opsônico fornecem uma composição homogênea compreendendo títulos de anticorpos antipneumocócicos opsônicos específicos para todos os múltiplos sorotipos pneumocócicos (por exemplo,9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou mais sorotipos) e/ou títulos de anticorpos opsônicos significativamente elevados em comparação com imunoglobulina comercial convencional (por exemplo, 2x, 3x, 4x, 5x, 6x, 7x, 8x, 9x, 10x ou mais de título de anticorpo opsônico maior).

Claims

Método para preparar uma globulina imune que tem uma titulação de anticorpo opsonofagocítico de pelo menos 1:256 para 50% ou mais de sorotipos de Streptococcus pneumonia selecionados dentre os sorotipos 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F caracterizado por compreender as etapas de:
- (a) imunizar doadores de plasma humanos saudáveis entre 18 a 60 anos de idade com uma imunização primária com uma vacina de S. pneumonia multivalente seguida por uma imunização de reforço com uma vacina de S. pneumonia multivalente que é diferente da vacina primária;
- (b) colher o plasma dos doadores de plasma após a imunização de reforço;
- (c) agrupar o plasma dos doadores vacinados a fim de obter um plasma agrupado que contém uma titulação de anticorpo opsonofagocítico de pelo menos 1:256 para 50% ou mais de sorotipos de Streptococcus pneumonia selecionados a partir de sorotipos 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F; e
- (d) preparar uma globulina imune a partir do plasma agrupado de acordo com a etapa (c).
Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender a etapa (e) de tornar a globulina imune obtida de acordo com a etapa (d) injetável por via intravenosa.
Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por a globulina imune ser fornecida em solução e o pH e a força iônica da solução serem ajustados de modo a tornar a mesma injetável por via intravenosa.
Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o plasma agrupado ser produzido a partir de agrupamento de plasma de 1.000 ou mais doadores de plasma humanos imunizados diferentes.
Globulina imune caracterizada por ser preparada de acordo com o método, conforme definido na reivindicação 1.
Método para tratar infecção por S. pneumonia em um sujeito caracterizado por compreender administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma globulina imune preparada de acordo com o método, conforme definido na reivindicação 1.
Método para fornecer imunoterapia a um sujeito caracterizado por compreender administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma globulina imune preparada de acordo com o método, conforme definido na reivindicação 1.
Método para preparar globulina imune que tem atividade bactericida opsonofagocítica intensificada contra pelo menos sete sorotipos de Streptococcus pneumonia para a prevenção ou tratamento de infecção por S. pneumonia caracterizado por compreender as etapas de:
- (a) imunizar doadores de plasma humanos adultos saudáveis com uma imunização primária com uma vacina conjugada de S. pneumonia seguida por imunização de reforço com uma vacina de S. pneumonia de polissacarídeo multivalente;
- (b) colher e agrupar o plasma dos doadores de plasma imunizados; e
- (c) preparar globulina imune a partir do plasma agrupado,
em que a globulina imune contém uma titulação de anticorpo opsonofagocítico específica para cada um dos pelo menos sete sorotipos de S. pneumonia que é três vezes ou mais alta do que a titulação de anticorpo opsonofagocítico específico para cada um dos pelo menos sete sorotipos de S. pneumonia presentes em globulina imune preparada a partir do plasma agrupado de 1.000 ou mais doadores de plasma humanos não vacinados aleatórios.
Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado por a titulação de anticorpo opsonofagocítico específica para cada um dos pelo menos sete sorotipos de S. pneumonia ser cinco vezes ou mais alta do que a titulação de anticorpo opsonofagocítico específico para cada um dos pelo menos sete sorotipos de S. pneumonia presentes em globulina imune preparada a partir do plasma agrupado de 1.000 ou mais doadores de plasma humanos não vacinados aleatórios.
Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado por a titulação de anticorpo opsonofagocítico específica para cada um dos pelo menos sete sorotipos de S. pneumonia ser dez vezes ou mais alta do que a titulação de anticorpo opsonofagocítico específico para cada um dos pelo menos sete sorotipos de S. pneumonia presentes em globulina imune preparada a partir do plasma agrupado de 1.000 ou mais doadores de plasma humanos não vacinados aleatórios.
Globulina imune caracterizada por ser preparada de acordo com o método, conforme definido na reivindicação 8.
Composição de plasma agrupado caracterizada por ter uma titulação de anticorpo opsonofagocítico específica para pelo menos 55% de sorotipos de S. pneumonia 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F que é pelo menos 3 vezes mais alta do que a titulação de anticorpo opsonofagocítico presente na globulina imune preparada a partir de uma mistura de amostras de plasma obtidas de 500 ou mais doadores de plasma humanos aleatórios que não tenham sido vacinados com uma vacina antipneumocócica.
Composição de plasma agrupado, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada por a titulação de anticorpo opsonofagocítico específica para pelo menos 55% de sorotipos de S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F ser pelo menos 5 vezes mais alta do que a titulação de anticorpo opsonofagocítico presente na globulina imune preparada a partir de uma mistura de amostras de plasma obtidas de 500 ou mais doadores de plasma humanos aleatórios que não tenham sido vacinados com uma vacina antipneumocócica.
Composição de plasma agrupado, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada por a titulação de anticorpo opsonofagocítico específica para pelo menos 55% de sorotipos de S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F ser pelo menos 10 vezes mais alta do que a titulação de anticorpo opsonofagocítico presente na globulina imune preparada a partir de uma mistura de amostras de plasma obtidas de 500 ou mais doadores de plasma humanos aleatórios que não tenham sido vacinados com uma vacina antipneumocócica.
Globulina imune caracterizada por ter uma titulação de anticorpo opsonofagocítico de pelo menos 1:256 para 50% ou mais de sorotipos de Streptococcus pneumonia selecionados dentre os sorotipos 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F.
Globulina imune, de acordo com a reivindicação 15, caracterizada por a titulação de anticorpo opsonofagocítico ser pelo menos 1:512 para 50% ou mais de sorotipos de Streptococcus pneumonia selecionados dentre os sorotipos 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F.
Globulina imune, de acordo com a reivindicação 15, caracterizada por a titulação de anticorpo opsonofagocítico ser pelo menos 1:1024 para 50% ou mais de sorotipos de Streptococcus pneumonia selecionados dentre os sorotipos 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F e 23F.