ES2907222T3

ES2907222T3 - Método para preparar hiper-inmunoglobulina anti-neumocócica

Info

Publication number: ES2907222T3
Application number: ES18161907T
Authority: ES
Inventors: James Mond; Adam S Grossman
Original assignee: ADMA Biologics Inc
Current assignee: ADMA Biologics Inc
Priority date: 2017-03-15
Filing date: 2018-03-15
Publication date: 2022-04-22
Anticipated expiration: 2038-03-15
Also published as: KR102611653B1; US20190241646A1; KR20190129932A; EP4032903A1; SG11201908573QA; AU2018201803B2; BR102018005192A2; IL293466A; US11897943B2; DK3375789T3; CA2998067A1; EP3375789A1; WO2018170297A1; BR102018005192A8; MX2022010156A; IL309034A; PT3375789T; IL258116A; EP3375789B1; AU2018201803A1

Abstract

Un método para preparar una inmunoglobulina que tenga un título de anticuerpos opsonofagocíticos de al menos 1:256 para el 50% o más de los serotipos de Streptococcus pneumoniae seleccionados de los serotipos 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F que comprende las etapas de: (a) recolección no quirúrgica de plasma de donantes de plasma humano adultos sanos entre las edades de 18 a años (i) inmunizados con una inmunización primaria con una vacuna conjugada multivalente contra S. pneumoniae, definida además por lo siguiente: - dicha vacuna incluye polisacárido capsular purificado de 13 serotipos de Streptococcus pneumoniae, más específicamente, 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 19A, 19F, 18C y 23F, conjugado a una variante no tóxica de la toxina de difteria conocida como CRM197; - una dosis de 0,5 ml de dicha vacuna conjugada contiene aproximadamente 2,2 microgramos (μg) de polisacárido de cada uno de los 12 serotipos 1, 3, 4, 5, 6A, 7F, 9V, 14, 19A, 19F, 18C y 23F, y aproximadamente 4,4 μg de polisacárido de serotipo 6B; - la concentración total de dicha toxina de difteria es de aproximadamente 34 μg; - la vacuna contiene polisorbato 80 al 0,02%, 0,125 mg de aluminio como adyuvante de fosfato de aluminio (AlPO4) y 5 ml de tampón succinato; (ii) seguido por una inmunización de refuerzo con una vacuna polisacárida multivalente contra S. pneumoniae, definida además por lo siguiente: - dicha vacuna polisacárida contiene antígeno polisacárido capsular de los siguientes 23 tipos de bacterias neumocócicas: 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C,19F, 19A, 20, 22F, 23F y 33F; y - contiene 25 μg de cada antígeno por dosis y contiene un 0,25% de fenol como conservante; (b) agrupar el plasma con el fin de obtener un plasma agrupado que contiene un título de anticuerpos opsonofagocíticos de al menos 1:256 para el 50% o más de serotipos de Streptococcus pneumoniae seleccionados de los serotipos 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F, en donde cada uno de los títulos de anticuerpos opsonofagocíticos es tres veces o superior al título de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para cada serotipo de S. pneumoniae presente en una muestra de control, en donde la muestra de control es inmunoglobulina preparada a partir de plasma agrupado a partir de donantes aleatorios de plasma humano no inmunizados; y (c) preparar una inmunoglobulina a partir del plasma agrupado de acuerdo con la etapa (b).

Description

DESCRIPCIÓN

Método para preparar hiper-inmunoglobulina anti-neumocócica

Campo

La presente invención se refiere a composiciones y métodos para el tratamiento de la infección causada por o asociada con Streptococcus pneumoniae. En particular, la invención se define en las reivindicaciones y proporciona métodos para producir inmunoglobulina que contiene altos títulos de anticuerpos opsónicos antineumocócicos.

Antecedentes

Hay muchos componentes del sistema inmune, todos los cuales cooperan para rechazar patógenos invasores extraños. Si bien la mayoría de las personas tienen sistemas inmunes intactos que sirven para protegerlas de la amplia variedad de organismos infecciosos que comúnmente infectan a las personas, incluidos virus, bacterias y hongos, muchas personas tienen una inmunidad deteriorada o comprometida.

Las inmunodeficiencias primarias (IDPs) son un grupo de más de 200 trastornos heredados genéticamente caracterizadas por deficiencias en componentes individuales del sistema inmune innato o adaptativo con un resultado clínico de una mayor susceptibilidad a la infección. Por ejemplo, un defecto en el sistema inmune humoral que afecta a la capacidad del cuerpo para producir anticuerpos hace a la persona susceptible a muchas infecciones. Para ser considerada una inmunodeficiencia primaria, la causa de la inmunodeficiencia no debe ser de naturaleza secundaria (p. ej., causada por otra enfermedad, tratamiento farmacológico o exposición ambiental a toxinas). La mayoría de las inmunodeficiencias primarias son trastornos genéticos y se diagnostican en niños, aunque las formas menos graves pueden no reconocerse hasta la edad adulta. Aproximadamente 1 de cada 500 personas nace con una inmunodeficiencia primaria.

Se ha demostrado que la infusión intravenosa de inmunoglobulina reconstituye la capacidad de los individuos inmunodeficientes para defenderse contra la infección. Dado que la inmunoglobulina se recolecta de muchos donantes, los títulos de anticuerpos frente a muchos organismos infecciosos para los que se debe buscar protección varían mucho y pueden no ser suficientes para satisfacer las necesidades inmunes en caso de infección en un individuo inmunocomprometido.

La mayoría de las inmunoglobulinas comercialmente disponibles se derivan de plasma humano recolectado, procesado y distribuido para la venta por la industria de productos de sangre y plasma. La primera preparación purificada de inmunoglobulina G (IgG) humana usada clínicamente fue la inmunoglobulina sérica que se produjo en la década de 1940 (Cohn, E. J., y cols. J. Am Chem Soc., 68: 459-475 (1946)) y Oncely, J. L., y cols., J Am Chem Soc.

71: 541-550 (1949). La gammaglobulina producida mediante este método muestra una distribución molecular que tiene un alto peso molecular, cuando se analiza por medio de cromatografía de exclusión por tamaño de alta resolución.

Se ha demostrado que la inmunoglobulina estándar (IGIV) tiene mucha variabilidad para la actividad opsónica frente a un organismo comensal muy común que está omnipresente en la piel humana, S. epidermidis (L. A. Clark y C. S. F. Easmon, J. Clin. Pathol. 39: 856 (1986)). Por ejemplo, en el estudio de Clark y Easmon, un tercio de los lotes de IGIV probados tenían una actividad opsónica deficiente con complemento, y solamente dos de catorce eran opsónicos sin complemento. Por lo tanto, a pesar del hecho de que los lotes de IGIV se hicieron a partir de grandes grupos de donantes de plasma, no estaba presente de manera uniforme un buen anticuerpo opsónico frente S. epidermidis.

La IGIV generalmente ha tenido éxito en la prevención de infecciones graves del tracto respiratorio inferior en pacientes inmunocomprometidos. Sin embargo, a pesar del hecho de que los pacientes inmunocomprometidos que reciben IGIV parecen tener niveles aceptables de inmunoglobulina total, así como niveles suficientes de anticuerpos anti S. pneumoniae para prevenir infecciones bacterianas graves causadas por S. pneumoniae, existe un porcentaje significativo de pacientes que experimentan infecciones del tracto respiratorio superior e infecciones no respiratorias que son debilitantes, disminuyen su calidad de vida, da lugar a un mayor uso de antibióticos que no son eficaces y también dan lugar a un aumento de los gastos médicos (Véase, p. ej., Favre y cols., Allergy 200560: 385-390).

Las vacunas multivalentes de S. pneumoniae PREVNAR® y PNEUMOVAX® como se usan en la reivindicación 1 del conjunto de reivindicaciones adjuntas son vacunas conocidas del estado de la técnica, véase p. ej., Balmer y cois., “Anti-pneumococcal antibody titre measurement: what useful information does it yield?”, JOURNAL OF CLINICAL PATHOLOGY, vol. 60, n° 4, 5.7.2006, páginas 345-350 y el documento US 2014/322263 A1. Siber y cois., “Preparation of Human Hyperimmune Globulin to Haemophilus influenza b, Streptococcus pneumoniae and Neisseria meningitidis”, INFECTION AND IMMUNITY, vol. 45, n° 1, 1.7.1984, páginas 248-254 describe un método para preparar una preparación de inmunoglobulina humana a partir de donantes adultos sanos de plasma humano con el fin de preparar una inmunoglobulina para el tratamiento de las infecciones por S. pneumoniae y los donantes habían sido vacunados con PNEUMOVAX®. Se conoce la inmunización pasiva de animales con un antisuero generado mediante la inmunización con PNEUMOVAX® por Sanders y cois., “Passive immunization with Pneumovax® 23 and pneumolysin in combination with vancomycin for pneumococcal endophthalmitis”, BMC OPHTHALMOLOGY, BIOMe D CENTRAL, vol. 13, n° 1, 11.3.2013, página 8. Se conocen también las técnicas y procedimientos para recoger muestras de anticuerpos y producir pooles de plasma en el documento WO 2007/017859 A1. Más específicamente, el documento WO 2007/017859 A1, que se ha sido citado como el estado de la técnica más cercano a las reivindicaciones del método adjunto, está dirigido a la inmunoglobulina de vaccinia de alto título (HT-VIG) para la inmunización pasiva, en donde dicha HT-VIG se combina a partir de los componentes sanguíneos de individuos que tienen un alto título de IgG de los anticuerpos específicos medido por ELISA, es decir, dicha HT-VIG tiene un título de IgG que es diferente del título de anticuerpos opsonofagocíticos tal como se define en la reivindicación 1 del método del conjunto de reivindicaciones adjuntas.

Resumen de la invención

La invención se establece en las reivindicaciones adjuntas. Las realizaciones de la descripción que no entran dentro del alcance de dichas reivindicaciones se proporcionan únicamente con fines ilustrativos y no forman parte de la presente invención.

La invención se define en las reivindicaciones y proporciona métodos para producir inmunoglobulina que contiene altos títulos de anticuerpos antineumocócicos con actividad opsónica (frente a una multitud de serotipos de S. pneumoniae según se define en las reivindicaciones).

Se describen además, pero no forman parte de la invención, métodos para prevenir o tratar la infección neumocócica (p. ej., infecciones de las vías respiratorias superiores (p. ej., faringitis, otitis media, sinusitis, etc.) en sujetos inmunocomprometidos (p. ej., a través de la administraciones de composiciones de inmunoglobulina como se describe en la presente memoria (p. ej., que contiene un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos) a sujetos inmunocomprometidos que no han sido adecuadamente protegidos por infusiones regulares de IGIV estándar).

Se describe, pero no forma parte de la invención, una nueva composición de inmunoglobulina preparada a partir de donantes de plasma de acuerdo con los métodos de la invención tal como se definen en las reivindicaciones (donantes de plasma humano, en particular, donante de plasma humano sanos como se define en la reivindicación 1) que han sido vacunados con vacunas de acuerdo con los métodos de las reivindicaciones) que contiene un título elevado de anticuerpos antineumocócicos específicos con actividad opsónica cuando se compara con una muestra de control como se define en la reivindicación 1.

El tipo de muestra de control utilizada se define en la reivindicación 1. Una muestra de control puede ser una inmunoglobulina preparada a partir de una mezcla de muestras de plasma obtenidas de donantes de plasma humano aleatorios (p. ej., 100, 300, 500, 1.000 o más donantes de plasma humano aleatorios) que no han sido vacunados con una vacuna antineumocócica (p. ej., de modo que los niveles de títulos de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos de los donantes de plasma humano no vacunados se usan como línea de base para medir el aumento en los títulos de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos presente en el plasma humano de donantes vacunados de acuerdo con los métodos de la invención tal como se definen en las reivindicaciones). No hay limitación por el método o ensayo usado para medir el título opsónico (p. ej., opsonofagocítico) del anticuerpo presente. De hecho, se pueden usar una variedad de ensayos, que incluyen, pero no se limitan a, los descritos en la presente memoria (p, ej., en el Ejemplo 1).

Se describe, pero no forma parte de la invención, una nueva composición de inmunoglobulina que contiene un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos. Se describe de forma adicional, pero no forma parte de la invención, excepto por el método de preparación de acuerdo con las reivindicaciones, una nueva composición de inmunoglobulina intravenosa que contiene un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos (p. ej., “hiper-inmunoglobulina antineumocócica”) y métodos de producción y utilización de esta (p. ej., para prevenir y/o tratar la infección neumocócica (p. ej., en pacientes inmunocomprometidos)). El término “alto título” en este contexto significa la presencia de anticuerpos antineumocócicos opsónicos en una cantidad que es 2 veces o mayor, p. ej., 3, 5, 7, 10, 15, 20 o más veces mayor que el encontrado en una muestra de control.

Por consiguiente, una nueva composición de inmunoglobulina (p. ej., hiper-inmunoglobulina antineumocócica) que contiene un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos que se puede obtener por los métodos tal como se definen en las reivindicaciones, es diferente de las preparaciones de inmunoglobulina estándar/convencionales (p. ej., IGIV estándar convencional) y es diferente de otras preparaciones de IGIV (p. ej., otras preparaciones de IGIV hiperinmune) en que tiene un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos humanos que son funcional y ampliamente reactivos frente a multitud de serotipos de S. pneumoniae y mejora la fagocitosis y muerte de S. pneumoniae (p. ej., in vitro y/o in vivo (p. ej., los anticuerpos son opsonofagocíticos)), independientemente de la cantidad total de anticuerpos antineumocócicos de unión (p. ej., medidos por ELISA) que están presentes en la composición.

Esto es sorprendente ya que los datos generados y descritos en la presente memoria indicaron que no había una correlación consistente o predecible entre el título de anticuerpos IgG antineumocócicos total y el título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos presentes en plasma o en la inmunoglobulina preparada a partir de donantes vacunados. Debido a la sorprendente identificación de la gran discordancia entre la cantidad total de título de anticuerpos IgG antineumocócicos de unión y el título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos presentes en el plasma, o en la inmunoglobulina preparada a partir de este, a partir del plasma de donante vacunado descrito en la presente memoria, es un objeto adicional de la presente descripción en relación con los métodos de la invención tal según se definen en las reivindicaciones, proporcionar una composición de plasma y/o composición de inmunoglobulina (p. ej., hiperinmunoglobulina antineumocócica) que contenga títulos de anticuerpos antineumocócicos opsónicos funcionales significativamente elevados (p. ej., independientemente de la cantidad total del título de anticuerpos antineumocócicos de unión (p. ej., agrupando plasma y/o inmunoglobulina extraída a partir de plasma de donantes vacunado, o agrupando plasma de donantes vacunado junto con la inmunoglobulina obtenida de donantes no vacunados que pueden no tener un título alto de anticuerpos antineumocócicos opsónicos que, cuando se agrupan con los anticuerpos antineumocócicos opsónicos de título significativamente elevado de plasma y/o inmunoglobulina de donante, no diluyen el título opsónico total a un nivel no protector)) en comparación con una muestra de control. Se incluyen sueros/plasmas así como inmunoglobulina (p. ej., hiper-inmunoglobulina) preparada a partir de estos que contienen títulos de anticuerpos antineumocócicos opsónicos funcionales y ampliamente reactivos significativamente elevados. Se describen, pero no forman parte de la invención, plasmas/sueros y/o inmunoglobulina preparados a partir de estos, que contienen un título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos elevado que es al menos 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 7 veces, 10 veces o más para al menos aproximadamente el 55% o más (p. ej., 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o más) de serotipos de S. pneumoniae 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F) en comparación con los títulos de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos para los mismos serotipos presentes en una muestra de control (inmunoglobulina preparada a partir de una mezcla de muestras de plasma obtenidos a partir de donantes de plasma humano aleatorios (p. ej., 100, 300, 500, 1.000 o más donantes de plasma humano aleatorios) que no han sido vacunados con una vacuna antineumocócica.

Se describe, pero no forma parte de la invención, una composición de globulina hiper-inmune (p. ej., IGIV) que contiene un título de anticuerpos opsónicos ampliamente reactivos, específicos para el 70% o más de los serotipos de S. pneumoniae seleccionados de los serotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23, que es 2 veces o más (p. ej., de 3-25 veces o más) que el título de anticuerpos opsónicos específicos para los mismos serotipos de S. pneumoniae presentes en una muestra de control (p. ej., inmunoglobulina preparada a partir de una mezcla de muestras de plasma obtenidas de donantes de plasma humano aleatorios (p. ej., 100, 300, 500, 1.000 o más donantes de plasma humano aleatorios) que no han sido vacunados con una vacuna antineumocócica. Se describen, pero no forman parte de la invención, plasma/sueros y/o inmunoglobulina preparados a partir de estos que contienen un título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos entre 1:64 y 1:8192 (p. ej., para al menos el 50% o más (p. ej., 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o más) de serotipos de S. pneumoniae 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19f y 23F).

Se describe, pero no forma parte de la invención, una nueva composición de inmunoglobulina (p. ej., hiperinmunoglobulina antineumocócica) que contiene un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos que mejora la inmunidad in vivo y/o que inhibe preventiva y terapéuticamente la infección (p. ej., infección del tracto respiratorio superior), en pacientes con sistemas inmunes comprometidos que no responden de forma adecuada a infusiones regulares de IGIV convencional.

También es otra ventaja que mientras los poooles de inmunoglobulina estándar de donantes normales (p. ej., usados para generar IGIV estándar/convencional comercialmente disponible) no tienen niveles consistentes, reproducibles y totalmente protectores de anticuerpos opsónicos para S. pneumoniae, una composición de hiper-inmunoglobulina (p. ej., hiper-inmunoglobulina antineumocócica) que contiene un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos que se puede obtener por los métodos reivindicados cuando se administra por vía intravenosa, proporciona inmediatamente anticuerpos específicos funcionales (p. ej., no simplemente de unión) que promueven la fagocitosis y la muerte de S. pneumoniae por los fagocitos. El serotipo o número de serotipos de S. pneumoniae para los que los anticuerpos opsónicos funcionales presentes dentro de una composición de hiper-inmunoglobulina (p. ej., IGIV) promueve la fagocitosis y/o la muerte es preferiblemente como se define en las reivindicaciones del método adjuntas. Preferiblemente una composición (p. ej., una composición de plasma hiper-inmune y/o una composición de hiperinmunoglobulina (p. ej., IGIV) contiene anticuerpos opsónicos ampliamente reactivos para al menos 7 de 12, 8 de 12, 9 de 12, 10 de 12, 11 de 12 o todos los 12 de los siguiente serotipos de S. pneumoniae: 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F.

Se describen, pero no forman parte de la invención, excepto por el método reivindicado, composiciones y métodos de obtención de los mismos que comprenden un título elevado de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos que es al menos 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 7 veces, 10 veces o más que el título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos presentes en una muestra de control (p. ej., para al menos aproximadamente el 55% o más (p. ej., 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o más)) de los serotipos neumocócicos seleccionados de los serotipos 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A 19F y 23F). Se describe, pero no forma parte de la invención, una composición de inmunoglobulina (p. ej., una hiper-inmunoglobulina) (p. ej., IGIV) que contiene un título de anticuerpos opsónicos ampliamente reactivos específicos para más del 70% o más de los serotipos de S. pneumoniae seleccionados de los serotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23, que es 2 veces o más (p. ej., de 3-25 veces o más) que el título de anticuerpos opsónicos específicos para los serotipos de S. pneumoniae presentes en una muestra de control (p. ej., inmunoglobulina preparada a partir de una mezcla de muestras de plasma obtenidas de donantes de plasma humano aleatorios (p. ej., 100, 300, 500, 1.000 o más donantes de plasma humano aleatorios) que no han sido vacunados con una vacuna antineumocócica, o, inmunoglobulina preparada a partir de donante(s) de plasma humano aleatorio(s) antes de la vacunación (p. ej., de modo que los niveles previos a la inmunización de títulos de anticuerpos opsónicos específicos de serotipo de los donantes de plasma humano se usan como línea de base para medir el aumento de los títulos de anticuerpos opsónicos específicos de serotipo después de la inmunización)). Se describe, pero no forma parte de la invención, una composición de inmunoglobulina (p. ej., una hiper-inmunoglobulina (p. ej., IGIV)) que contiene un alto título de anticuerpos opsónicos ampliamente reactivos para al menos el 50%, al menos el 55%, al menos el 60%, al menos el 65%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, 95%, 98% o más de cada serotipo presente en una vacuna o una pluralidad de vacunas utilizadas para inmunizar uno o más donantes de plasma a partir de los que se deriva la composición de inmunoglobulina.

Sería preferido proporcionar una composición de hiper-inmunoglobulina (p. ej., IGIV) que contenga anticuerpos opsónicos ampliamente reactivos específicos de S. pneumoniae a un paciente (p. ej., un paciente inmunocomprometido (p. ej., un paciente con IDP)) con el fin de tratar o prevenir la infección neumocócica en el paciente (p. ej., inhibiendo el crecimiento de S. pneumoniae y/o el aclaramiento de S. pneumoniae de la sangre del paciente). Además, sería preferible proporcionar una composición de hiper-inmunoglobulina (p. ej., IGIV) que contenga anticuerpos opsónicos ampliamente reactivos específicos de S. pneumoniae a un paciente (p. ej., un paciente inmunocomprometido (p. ej., un paciente con IDP)) con el fin de tratar la infección neumocócica en el paciente (p. ej., mejorando o aumentando el aclaramiento de S. pneumoniae de la sangre del paciente). Además, sería preferible proporcionar una composición de hiper-inmunoglobulina (p. ej., IGIV) que contenga anticuerpos opsónicos ampliamente reactivos específicos de S. pneumoniae a un paciente (p. ej., un paciente inmunocomprometido (p. ej., un paciente con IDP)) con el fin de prevenir infecciones del tracto respiratorio superior en el paciente que no se pueden prevenir con el tratamiento con IGIV convencional. No hay limitación por el tipo de infección del tracto respiratorio superior prevenida y/o tratada y puede incluir, pero no se limita a, rinosinusistis (sinusitis), otitis media, faringitis, epiglotitis, laringotraqueítis y laringotraqueobronquitis. De forma similar, las composiciones y métodos de uso (p. ej., administración) de los mismos pueden ser útiles para prevenir y/o tratar los signos o síntomas de la infección del tracto respiratorio superior que incluye, pero no se limita a, tos, estornudos, secreción nasal, congestión nasal, moqueo nasal, fiebre, picor o dolor de garganta y respiración nasal.

Se describen, pero no forman parte de la invención, excepto por el método reivindicado, composiciones y métodos para obtener una composición que comprende muestras de plasma agrupadas (p. ej., plasma a partir de una pluralidad de donantes (p. ej., donantes que han sido vacunados con una o más vacunas neumocócicas)) que contienen altos títulos de anticuerpos antineumocócicos opsónicos.

Por lo tanto, si bien la invención se define exclusivamente en las reivindicaciones del método adjuntas, también sería preferible proporcionar métodos para generar composiciones (p. ej., sangre, plasma y/o composiciones de inmunoglobulina (p. ej., hiper-inmunoglobulina)) que contengan un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos. A uno o a una pluralidad de sujetos humanos adultos sanos (p. ej., sujetos humanos sin afecciones médicas conocidas) se les puede administrar un inmunógeno neumocócico, una proteína neumocócica recombinante, o una combinación de estos. El inmunógeno de S. pneumoniae puede ser un azúcar de membrana celular de S. pneumoniae (p. ej., un polisacárido). El inmunógeno de S. pneumoniae puede ser una vacuna de S. pneumoniae que contenga una o una pluralidad de proteínas de S. pneumoniae (p. ej., proteínas recombinantes o aisladas). Un inmunógeno de S. pneumoniae puede ser una vacuna conjugada (p. ej., conjugada a un transportador y/o adyuvante (p. ej., una proteína u otra molécula transportadora)). Un inmunógeno de S. pneumoniae puede ser una vacuna no conjugada. La vacuna conjugada o la vacuna no conjugada puede contener 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23 o más inmunógenos diferentes (p. ej., de un número igual de serotipos diferentes de S. pneumoniae). Uno o más serotipos diferentes de S. pneumoniae pueden incluir, pero no se limitan a, los serotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7A, 7B, 7C, 7D, 7E, 7F, 8, 9A-9V, 12, 14, 18C, 19A-19F, 23A-23F y 25. Uno o más serotipos diferentes de S. pneumoniae se pueden seleccionar de cualquiera de los más de 90 serotipos diferentes conocidos de S. pneumoniae. Recientemente se pueden identificar uno o más serotipos diferentes de S. pneumoniae.

Se describen, pero no forman parte de la invención, métodos no cubiertos por la invención considerando el Art 53(c) EPC donde a uno o una pluralidad de sujetos humanos sanos (p. ej., sujetos humanos sin afecciones médicas conocidas) se les administra un inmunógeno neumocócico, proteína neumocócica recombinante o una combinación de estos presentes en una vacuna antineumocócica comercial. El método reivindicado se refiere a las vacunas que se utilizarán de acuerdo con la invención.

Uno o una pluralidad de sujetos humanos sanos pueden recibir una vacunación primera o inicial con una primera vacuna antineumocócica y una vacunación de refuerzo posterior con la primera vacuna antineumocócica o con una segunda vacuna antineumocócica diferente. Por ejemplo, uno o una pluralidad de sujetos humanos sanos reciben una vacunación/inmunización primera o inicial con una primera vacuna antineumocócica (p. ej., PREVNAR), y luego reciben una vacunación/inmunización de refuerzo (p. ej., a las 2 semanas, 4 semanas, 6 semanas, 8 semanas, 10 semanas, 12 semanas o más después de la vacunación/inmunización inicial) con una segunda vacuna antineumocócica (p. ej., PNEUMOVAX23). En un punto de tiempo posterior a la vacunación secuencial (p. ej., a las 2 semanas, 4 semanas, 6 semanas, 8 semanas, 10 semanas, 12 semanas o más después de la vacunación secuencial), se extraen los sueros/plasmas de los donantes de plasma humano sanos vacunados. El plasma de los donante vacunados se puede agrupar (entre sí y/o con plasma de donantes no vacunados) seguido del aislamiento y/o purificación de la inmunoglobulina a partir de este (p. ej., con el fin de generar una hiper-inmunoglobulina antineumocócica). Son bien conocidos los métodos de recolección de plasma así como de extracción de la inmunoglobulina por los expertos en la técnica.

Mientras que la invención se define exclusivamente en las reivindicaciones del método adjuntas, dichos métodos reivindicados también están relacionados con un método para preparar una hiper-inmunoglobulina que tenga un alto título de anticuerpos opsonofagocítico contra Streptococcus pneumoniae (p. ej., un título que es al menos 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 7 veces, 10 veces o más para al menos aproximadamente el 55% o más (p. ej., 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o más) de los serotipos de S. pneumoniae 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19a , 19F y 23F) en comparación con los títulos de anticuerpos opsonofagocíticos antineumocócicos específicos para los mismos serotipos presentes en una muestra de control; o, un título específico para el 70% o más de los serotipos de S. pneumoniae seleccionados de los serotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23, que es dos veces o mayor (p. ej., de 3-25 veces o más) que el título de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para los mismos serotipos de S. pneumoniae presentes en una muestra de control; o, un título entre 1:64 y 1:8192 (p. ej., al menos 1:256 (p. ej., para al menos el 50% o más (p. ej., 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o más)) de los serotipos de S. pneumoniae 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F) según lo determinado mediante un ensayo de muerte opsonofagocítica descrito en la presente memoria) que comprende las etapas de inmunización de donantes de plasma humano adultos sanos entre las edades de 18-60 con una inmunización primaria con una vacuna multivalente de S. pneumoniae seguida de inmunización con un refuerzo de vacuna multivalente de S. pneumoniae que es la misma o puede ser diferente de la vacuna primaria; recolección del plasma de los donantes de plasma después de la inmunización de recuerdo; agrupación del plasma que contiene un alto título de anticuerpos opsonofagocíticos contra S. pneumoniae; y preparación de una inmunoglobulina a partir del plasma agrupado. Dicho método puede comprender además hacer que la inmunoglobulina obtenida sea inyectable por vía intravenosa. Se puede proporcionar la inmunoglobulina en solución y/o se puede ajustar el pH y la fuerza iónica para que sea inyectable por vía intravenosa. No hay limitación del número de individuos vacunados de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria. Por ejemplo, se pueden vacunar 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1.000, 1.100, 1.200, 1.300, 1.400 o más donantes de plasma humano adultos sanos y de plasma extraído de los donantes. El plasma agrupado se puede preparar a partir del plasma agrupado de 1.000 o más donantes de plasma humano adultos sanos vacunados diferentes. El plasma agrupado puede contener un título de anticuerpos opsonofagocíticos que es al menos 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 7 veces, 10 veces o más para al menos aproximadamente el 55% o más (p. ej., 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o más) de los serotipos de S. pneumoniae 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F) en comparación con los títulos de anticuerpos antineumocócicos opsonofagocíticos específicos para los mismos serotipos presentes en una muestra de control (p. ej., inmunoglobulina preparada a partir de plasma agrupado de 1.000 o más donantes aleatorios de plasma humano no vacunados). El plasma agrupado puede contener un título de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para el 70% o más de los serotipos de S. pneumoniae seleccionados de los serotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23, que es 2 veces o mayor (p. ej., de 3-25 veces o más) que el título de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para los mismos serotipos de S. pneumoniae presentes en una muestra de control (p. ej., inmunoglobulina preparada a partir de plasma agrupado de 1.000 o más donantes aleatorios de plasma humano no vacunados). El plasma agrupado puede contener un título de anticuerpos opsonofagocíticos entre 1:64 y 1:8192 (p. ej., para al menos el 50% o más (p. ej., 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o más) de los serotipos de S. pneumoniae 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F) según lo determinado mediante un ensayo de muerte opsonofagocítica descrito en la presente memoria o conocido en la técnica.

Se describe, pero no forma parte de la invención, una inmunoglobulina (p. ej., una hiper-inmunoglobulina) preparada de acuerdo con el método descrito anteriormente. La inmunoglobulina (p. ej., una hiper-inmunoglobulina) así preparada se puede usar en varios métodos. Por ejemplo, la inmunoglobulina se puede usar en un método para tratar la infección por S. pneumoniae en un sujeto (p. ej., que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de la inmunoglobulina). La inmunoglobulina también se puede usar en un método para proporcionar inmunoterapia a un sujeto (p. ej., que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de la inmunoglobulina).

Si bien la invención se define exclusivamente en las reivindicaciones del método adjuntas, dichos métodos reivindicados también están relacionados con un método de preparación de una hiper-inmunoglobulina que tiene una actividad bactericida opsonofagocítica mejorada frente al menos siete serotipos de Streptococcus pneumoniae para la prevención o el tratamiento de la infección por S. pneumoniae que comprende las etapas de inmunizar a los donantes de plasma humano adultos sanos con una inmunización primaria con una vacuna multivalente conjugada contra S. pneumoniae seguida de una inmunización de refuerzo con una vacuna polisacárida multivalente contra S. pneumoniae que es diferente de la vacuna inicial; recolectar y agrupar el plasma a partir de los donantes de plasma inmunizados; y preparar una inmunoglobulina a partir del plasma agrupado, en donde la inmunoglobulina contiene un título de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para cada uno de los al menos siete serotipos de S. pneumoniae que es dos veces o más (p. ej., de 3-25 veces o más) que el título de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para cada uno de los al menos siete serotipos de S. pneumoniae presentes en una muestra de control (p. ej., inmunoglobulina preparada a partir de plasma agrupado de 1.000 o más donantes aleatorios de plasma humano no vacunados). Se puede proporcionar una hiper-inmunoglobulina preparada de acuerdo con el método anteriormente descrito. La hiper-inmunoglobulina así preparada se puede usar en varios métodos. Por ejemplo, la hiperinmunoglobulina se puede usar en un método para tratar la infección por S. pneumoniae en un sujeto que comprende la administración al sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de la hiper-inmunoglobulina. La hiperinmunoglobulina también se puede usar en un método para proporcionar inmunoterapia a un sujeto que comprende la administración al sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de la hiper-inmunoglobulina. Dichos métodos de tratamiento no están comprendidos en la invención reivindicada en vista del Artículo 53(c) EPC.

Si bien la invención se define exclusivamente en las reivindicaciones del método adjuntas, dichos métodos reivindicados también están relacionados con un método de preparación de composiciones (p. ej., composiciones de sangre, plasma y/o inmunoglobulina (p. ej., hiper-inmunoglobulina)) que contienen un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos que implican un cribado de plasma (p. ej., pooles de plasma o inmunoglobulina; inmunoglobulina o preparaciones de inmunoglobulina) para anticuerpos antineumocócicos de unión totales usando un ensayo de unión a antígeno in vitro (p. ej., usando un ELISA) junto con un ensayo de muerte opsonofagocítica (p. ej., un ensayo de muerte opsonofagocítica descrito en la presente memoria o conocido en la técnica). En la presente memoria se describe un método de preparación de composiciones (p. ej., composiciones de sangre, plasma y/o inmunoglobulina) que contienen un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos que implican un cribado de plasma (p. ej., pooles de plasma o inmunoglobulina; inmunoglobulina o preparaciones de inmunoglobulina) para el título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos totales mediante un ensayo bactericida opsonofagocítico (p. ej., un ensayo descrito en el Ejemplo 1). Se describe en la presente memoria un método de preparación de composiciones (p. ej., composiciones de sangre, plasma y/o inmunoglobulina) que contienen un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos que implican un cribado de plasma (p. ej., pooles de plasma o inmunoglobulina; inmunoglobulina o preparaciones de inmunoglobulina) para anticuerpos antineumocócicos de unión totales usando un ensayo de unión a antígeno in vitro (p. ej., usando un ELISA) seguido de un cribado del plasma (p. ej., pooles de plasma o inmunoglobulina; inmunoglobulina o preparaciones de inmunoglobulina) para el título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos totales mediante un ensayo bactericida opsonofagocítico (p. ej., un ensayo descrito en el Ejemplo 1). Se puede documentar la eficacia protectora in vivo mediante el análisis de la actividad protectora de las composiciones (p. ej., composiciones de sangre, plasma y/o inmunoglobulina) que contienen un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos usando un modelo animal de infección por S. pneumoniae (p. ej., para determinar morbilidad, mortalidad y/o aclaramiento bacteriano). No hay limitación por el método o ensayo usado para medir el título de anticuerpos opsonofagocíticos presente. De hecho, se pueden usar una variedad de ensayos, que incluyen, pero no se limitan a, los descritos en la presente memoria (p. ej., en el Ejemplo 1).

Si bien la invención se define exclusivamente en las reivindicaciones del método adjuntas, dichos métodos reivindicados también están relacionados con un método de generación de una composición que comprende la obtención de muestras de plasma de donantes (p. ej., 50, 100, 300, 500, 1.000 o más donantes (p. ej., donantes de plasma humano adultos sanos)) vacunados con una o más vacunas antineumocócicas y el agrupamiento de las muestras de plasma (p. ej., entre sí y/o junto con plasma de donantes no vacunados) para generar una composición de plasma agrupado. La inmunoglobulina se puede preparar a partir de las muestras de plasma agrupado (p. ej., la inmunoglobulina se fracciona, purifica, y se aísla a partir del plasma a través de cualquier método conocido en la técnica, incluidos los descritos en la presente memoria). La inmunoglobulina se puede hacer inyectable por vía intravenosa (p. ej., proporcionando la inmunoglobulina en solución, ajustando el pH, ajustando la fuerza iónica, etc.). Como se describe en la presente memoria, una composición de plasma agrupado puede contener un título de anticuerpos opsonofagocíticos que es al menos 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 7 veces, 10 veces o más para al menos aproximadamente el 55% o más (p. ej., 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o más) de los serotipos de S. pneumoniae 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F) en comparación con los títulos de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos para los mismos serotipos presentes en una muestra de control (p. ej., inmunoglobulina preparada a partir de plasma agrupado de 1.000 o más donantes aleatorios de plasma humano no vacunados). La composición de plasma agrupado puede contener un título de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para el 70% o más de los serotipos de S. pneumoniae seleccionados de los serotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23, que es dos veces o más (p. ej., de 3-25 veces o más) que el título de anticuerpos opsónicos específicos para los mismos serotipos de S. pneumoniae presentes en una muestra de control (p. ej., inmunoglobulina preparada a partir de plasma agrupado a partir de 1.000 o más donantes aleatorios de plasma humano no vacunados). La composición de plasma agrupado puede contener un título de anticuerpos opsonofagocíticos entre 1:64 y 1:8192 (p. ej., para al menos el 50% o más (p. ej., 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o más) de los serotipos de S. pneumoniae 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F) según lo determinado mediante un ensayo de muerte opsonofagocítica descrito en la presente memoria.

Se describen, pero no forman parte de la invención, muestras de plasma (p. ej., de donantes vacunados y/o no vacunados) que se examinan con el fin de confirmar la ausencia de patógenos transmitidos por la sangre (p. ej., antes 0 después de la agrupación). Las muestras de plasma y/o anticuerpo se pueden obtener a partir de sujetos donantes en forma de material biológico donado o comprado (p. ej., sangre o plasma). Las muestras de plasma y/o anticuerpos (p. ej., sangre, plasma, anticuerpos aislados, etc.) se pueden obtener de una fuente comercial. Una muestra de plasma y/o anticuerpos, donación de sangre o donación de plasma se puede examinar para detectar patógenos, y ser o bien limpiada o descartada si hay patógenos particulares presentes. El cribado se puede hacer antes de agrupar una muestra de donante con otras muestras de donantes. El cribado puede ser después de la agrupación de muestras. Se pueden obtener anticuerpos, sangre y/o plasma de cualquier sujeto adecuado. Se pueden obtener anticuerpos, sangre y/o plasma de un sujeto que recientemente (p. ej., dentro de 1 año, dentro de 6 meses, dentro de 2 meses, dentro de 1 mes, dentro de 2 semanas, dentro de 1 semana, dentro de 3 días, dentro de 2 días, dentro de 1 día) se ha vacunado o se ha expuesto a una o más vacunas antineumocócicas.

Las muestras de sangre, plasma y/o inmunoglobulina identificadas (p. ej., de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria) que contienen un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos se pueden combinar (p.

ej., agrupar) para producir una composición de la invención (p. ej., hiper-inmunoglobulina) que comprende un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos.

Se podrá usar cualquier método adecuado para la obtención de plasma, muestras de anticuerpos, composiciones de plasma agrupado y/o inmunoglobulina a partir de estos. Además se puede usar cualquier método adecuado para producir, fabricar, purificar, fraccionar, enriquecer, etc. muestras de anticuerpos y/o pooles de plasma. Las técnicas y procedimientos ejemplares para la recolección de muestras de anticuerpos y la producción de pooles de plasma se proporcionan, por ejemplo, en la patente de EE.UU. N° 4.174.388; la patente de EE.UU. N° 4.346.073; la patente de EE.UU. N° 4.482.483; la patente de EE.UU. N° 4.587.121; la patente de EE.UU. N° 4.617.379; la patente de EE.UU. N° 4.659.563; la patente de EE.UU. N° 4.665.159; la patente de EE.UU. N° 4.717.564; la patente de EE.UU. N° 4.717.766; la patente de EE.UU. N° 4.801.450; la patente de EE.UU. N° 4.863.730; la patente de EE.UU. N° 5.505.945; la patente de EE.UU. N° 5.582.827; la patente de EE.UU. N° 6.692.739; la patente de EE.UU. N° 6.962.700; la patente de EE.UU. N° 6.984.492; la patente de EE.UU. N° 7.045.131; la patente de EE.UU. N° 7.488.486; la patente de EE.UU. N° 7.597.891; la patente de EE.UU. N° 6.372.216; la solicitud de patente de EE.UU. N° 2003/0118591; la solicitud de patente de EE.UU. N° 2003/0133929; la solicitud de patente de Ee .UU. N° 2005/0053605; la solicitud de patente de EE.UU. N° 2005/0287146; la solicitud de patente de EE.UU. N° 2006/0110407; la solicitud de patente de EE.UU. N° 2006/0198848 la solicitud de patente de EE.UU. N2 2006/0222651 la solicitud de patente de EE.UU. N2 2007/0037170 la solicitud de patente de EE.UU. N2 2007/0249550 la solicitud de patente de EE.UU. N2 2009/0232798 la solicitud de patente de EE.UU. N° 2009/0232798 la solicitud de patente de EE.UU. N2 2009/0269359 la solicitud de patente de EE.UU. N° 2010/0040601 la solicitud de patente de EE.UU. N2 2011/0059085 y la solicitud de patente de EE.UU. N° 2012/0121578. Se puede utilizar cualquier combinación adecuada de técnicas, métodos o composiciones de las referencias enumeradas anteriormente.

La inmunoglobulina aislada descrita en la presente memoria, pero que no forma parte de la invención, puede ser de la fracción o isotipo IgG, aunque la inmunoglobulina aislada no se restringe a ninguna fracción o isotipo en particular y puede ser IgG, IgM, IgA, IgD, IgE o cualquier combinación de estas. También es preferible que la inmunoglobulina aislada sea pura o antigénicamente inmunoglobulina humana.

Una composición que comprende un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos descritos en la presente memoria, pero que no forma parte de la invención, puede ser una solución estéril con un pH de aproximadamente 6,0 7,8 (p. ej., 5,0-6,0; 6,0; 6,1; 6,2; 6,3; 6,4; 6,5; 6,6; 6,7; 6,8; 6,9; 7,0; 7,1; 7,2; 7,3; 7,4; 7,5; 7,6; 7,7; 7,8 o superior). Una composición que comprende un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos descrita en la presente memoria, pero que no forma parte de la invención, se puede preparar de acuerdo con los estándares de la FDA de EE.UU. para la preparación de inmunoglobulina (véase p. ej., 37 CFR §§640.100; 640.101; 640.102; 640.103; 640.104; 1 Abril, 2013). Una composición que comprende un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos descrita en la presente memoria (p. ej., hiper-inmunoglobulina descrita en la presente memoria, en particular, en los ejemplos, pero que no forma parte de la invención) puede poseer al menos nivel mínimo de títulos de anticuerpos contra Corynebacterium diphtheria, virus del sarampión y virus de la poliomielitis recomendados por la FDA (p. ej., véase 37 CFR §§640.104) para el tratamiento de pacientes con enfermedad de inmunodeficiencia.

La composición de plasma agrupado puede carecer de niveles detectables (p. ej., detectados usando cualquier método conocido en la técnica (p. ej., recomendado por la Administración de Alimentos y Medicamentos de EE.UU.)) del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) 1 (VIH-1), VIH-2, Treponema pallidum, Plasmodium falciparum, Plasmodium malariae, Plasmodium ovale, Plasmodium vivax, Plasmodium knowlesi, virus de la Hepatitis B (VHB), virus de la Hepatitis C (VHC), priones, virus del Nilo Occidental, parvovirus, Trypanosoma cruzi, coronavirus SARS y/o virus vaccinia. Cada muestra de plasma individual usada en un proceso o composición descrito en la presente memoria se puede recolectar solo en un establecimiento de sangre aprobado por la FDA y se puede analizar mediante pruebas serológicas (p. ej., pruebas serológicas aprobadas por la FDA) para detectar el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) 1 (VIH-1), VIH-2, Treponema pallidum, Plasmodium falciparum, Plasmodium malariae, Plasmodium ovale, Plasmodium vivax, Plasmodium knowlesi, virus de la Hepatitis B (VHB), virus de la Hepatitis C (VHC), priones, virus del Nilo Occidental, parvovirus, Trypanosoma cruzi, coronavirus SARS y/o virus vaccinia. Una muestra de plasma individual y/o una composición de plasma agrupado descritas en la presente memoria se pueden analizar para detectar la presencia de VIH-1, VIH-2, VHB, VHC u otro agente infeccioso (p. ej., patógeno) usando Pruebas de Ácido Nucleico (NAT) y usarse en un proceso o composición descrito en la presente memoria solo cuando se confirme la ausencia de los patógenos.

No hay limitación por el tipo de sujeto (p. ej., mamífero, primate no humano, ser humano, etc.) administrado o tratado con una composición descrita en la presente memoria (p. ej., muestras de plasma agrupado y/o composición inmunoterapéutica que comprende esta). Por ejemplo, no hay limitación por el tipo de paciente que recibe una composición (p. ej., composiciones de sangre, plasma y/o inmunoglobulina (p. ej., hiper-inmunoglobulina)) que contiene un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos. Se prefiere proporcionar y/o administrar una composición descrita en la presente memoria a los pacientes inmunocomprometidos descritos en la presente memoria.

El plasma agrupado puede comprender muestras de plasma obtenidas de 1.000-3.000 o más (p. ej., más de 1.000, 1.250, 1.500, 1.750, 2.000, 2.500, 3.000, 3.500, 4.000 o más) sujetos humanos. La composición que comprende muestras de plasma agrupado puede comprender además un transportador farmacéuticamente aceptable (p. ej., transportadores naturales y/o no naturales). La composición de plasma agrupado se puede utilizar para preparar inmunoglobulina (p. ej., para la administración intravenosa a un sujeto). La composición de plasma agrupado y/o inmunoglobulina pueden proporcionar un beneficio terapéutico a un sujeto al que se le administra la composición que no se puede lograr mediante la administración de una mezcla de muestras de plasma obtenidas de 1.000 o más sujetos humanos aleatorios y/o inmunoglobulina preparada a partir de estas (p. ej., previene o trata la infección de las vías respiratorias superiores en un sujeto no prevenido o tratado con IGIV convencional). No hay limitación por el tipo de beneficio terapéutico proporcionado. De hecho, se pueden obtener una variedad de beneficios terapéuticos, incluidos los descritos en la presente memoria.

El plasma agrupado y/o la inmunoglobulina preparados como se describe en la presente memoria pueden reducir la incidencia de infección (p. ej., infección del tracto respiratorio superior) en un sujeto al que se le administró la composición. Un plasma agrupado y/o inmunoglobulina preparado como se describe en la presente memoria puede reducir el número de días que un sujeto al que se ha administrado el plasma agrupado y/o la inmunoglobulina como se describe en la presente memoria, requiere para que se le administren antibióticos (p. ej., para tratar la infección (p. ej., infección del tracto respiratorio superior)). Un plasma agrupado y/o inmunoglobulina preparado como se describe en la presente memoria puede aumentar el nivel de anticuerpos antineumocócicos opsónicos circulantes en un sujeto (p. ej., aumenta el nivel del título de anticuerpos opsónicos específicos para S. pneumoniae (p. ej., proporcionando así niveles protectores de anticuerpos antineumocócicos específicos entre las fechas programadas de administración del plasma agrupado y/o inmunoglobulina preparada a partir de este de la invención (p. ej., que no se mantienen en un sujeto al que se le ha administrado IGIV convencional))).

Breve descripción de las figuras

La FIG. 1 muestra los títulos de anticuerpos IgG de unión específicos del serotipo neumocócico en sueros de donantes individuales vacunados extraídos en los siguientes puntos de tiempo: inmediatamente antes de la vacunación primaria con PREVNAR (Pre), inmediatamente antes de la vacunación secundaria con PNEUMOVAX23 en la semana 4 (Semana 4), en la semana 8, en la semana 10, en la semana 12 y en la semana 16. Se muestran los títulos promedio de anticuerpos IgG de unión específicos del serotipo neumocócico para Pre y las semanas 4, 8, 10 y 12, y para el agrupado Pre y en la semana 12. También se muestran las veces de aumento en los títulos de anticuerpos IgG de unión específicos del serotipo neumocócico entre Pre y la semana 12.

La FIG. 2 muestra el título de muerte opsónica (OPK) específica del serotipo neumocócico en sueros de donantes vacunados individuales extraídos en los siguientes puntos de tiempo: inmediatamente antes de la vacunación primaria con PREVNAR (Pre), inmediatamente antes de la vacunación secundaria con PNEUMOVAX23 en la semana 4 (Semana 4), en la semana 8, en la semana 10, en la semana 12 y en la semana 16, específica para varios serotipos neumocócicos. Los títulos opsónicos específicos del serotipo neumocócico promedio se muestran para Pre y las semanas 4, 8, 10 y 12, y para el agrupado Pre y en la semana 12. También se muestra las veces de aumento en los títulos de OPK específicos del serotipo neumocócico entre Pre y la semana 12.

La FIG. 3 muestra el título de anticuerpos IgG de unión específicos del serotipo neumocócico en suero agrupado de donantes de 40 sujetos que se extrajeron en los siguientes puntos de tiempo: inmediatamente antes de la vacunación primaria con PREVNAR (Pre), en la semana 8, en la semana 10, en la semana 12 y en la semana 16, y en el mes 5.

La FIG. 4 muestra las veces de aumento en las concentraciones de anticuerpos IgG de unión específicos del serotipo neumocócico en suero agrupado de donantes extraído en los siguientes puntos de tiempo: inmediatamente antes de la vacunación primaria con PREVNAR (Pre), en la semana 8, en la semana 10, en la semana 12 y en la semana 16, y en el mes 5. (* = línea de base).

La FIG. 5 muestra los títulos de muerte opsónica (OPK) específica del serotipo neumocócico en suero agrupado de donantes de 40 sujetos que se extrajeron en los siguientes puntos de tiempo: inmediatamente antes de la vacunación primaria con PREVNAR (Pre), en la semana 8, en la semana 10, en la semana 12 y en la semana 16, y en el mes 5.

La FIG. 6 muestra las concentraciones de anticuerpos IgG de unión específicos del serotipo neumocócico en inmunoglobulina purificada (IgG) a partir de un suero agrupado de donantes de 40 individuos que se extrajeron en los puntos de tiempo indicados.

La FIG. 7 muestra los títulos de OPK específica del serotipo neumocócico en IgG purificada a partir de suero agrupado de donantes de 40 individuos que se extrajeron en los puntos de tiempo indicados.

La FIG. 8 muestra una comparación del título OPK específico del serotipo de los anticuerpos funcionales/opsónicos presentes en suero humano agrupado de donantes vacunados frente al título OPK específico del serotipo de los anticuerpos funcionales/opsónicos presentes en múltiples IGIV convencionales diferentes comercialmente disponibles. Cada columna representa un solo y único serotipo de S. pneumoniae. Cada fila representa una muestra única. Las muestras A-I representan diferentes lotes de IGIV convencional comercialmente disponible. “IGIV promedio” es el título OPK promedio específico del serotipo de los anticuerpos funcionales/opsónicos presentes en una muestra agrupada que contienen cantidades iguales de cada IGIV convencional comercialmente disponible. “Sueros de donantes antes de la vacunación” representa el título OPK específico del serotipo de los anticuerpos funcionales/opsónicos presentes en suero humano agrupado de donantes antes de la vacunación descrito en el Ejemplo 1. “Sueros de donantes vacunados” representa el título OPK específico del serotipo de los anticuerpos funcionales/opsónicos presentes en suero humano agrupado de donantes a las doce semanas después de la vacunación descrito en el Ejemplo 1. “Veces de aumento del título sobre la IGIV comercial” representa las veces de aumento en el título OPK específico del serotipo de los anticuerpos funcionales/opsónicos presentes en suero humano agrupado de donantes a las doce semanas después de la vacunación descrito en el Ejemplo 1 frente al título OPK promedio específico del serotipo de los anticuerpos funcionales/opsónicos presentes en una muestra agrupada que contiene cantidades iguales de cada IGIV convencional comercialmente disponible.

Las FIGS. 9A-9L representan el título de anticuerpos opsónicos específicos del serotipo de S. pneumoniae presente en nueve lotes comerciales diferentes de IGIV (muestras A-I) en comparación con el título de anticuerpos opsónicos específico del isotipo de S. pneumoniae presente en la hiper-inmunoglobulina de la invención que contiene un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos para cada serotipo.

La FIG. 10 muestra el porcentaje de sujetos con enfermedad por inmunodeficiencia primaria que caen por debajo de los niveles protectores (1,2 mg/ml) de anticuerpos de unión anti-S. pneumoniae en el nivel mínimo después de la infusión de IGIV convencional.

Definiciones

Tal como se usa en la presente memoria, el término “sujeto” se refiere a cualquier ser humano o animal (p. ej., primate no humano, roedor, felino, canino, bovino, porcino, equino, etc.).

Tal como se usa en la presente memoria, el término “muestra” se usa en su sentido más amplio y abarca materiales obtenidos de cualquier fuente y se puede usar, por ejemplo, para referirse a materiales obtenidos a partir de una fuente biológica, por ejemplo, obtenidos de animales (incluidos los seres humanos) y abarca además cualquier fluido, sólido y tejidos. Las muestras biológicas pueden incluir sangre y productos sanguíneos como plasma, suero y similares.

Tal como se usa en la presente memoria, el término “anticuerpo” se refiere a una molécula de inmunoglobulina que generalmente se compone de dos pares idénticos de cadenas polipeptídicas, cada par tiene una cadena “ligera” (L) y una cadena “pesada” (H). Las cadenas ligeras humanas se clasifican como cadenas kappa y lambda. Las cadenas pesadas se clasifican como mu, delta, gamma, alfa o épsilon, y definen el isotipo del anticuerpo como IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, respectivamente. Dentro de las cadenas ligeras y pesadas, las regiones variables y las constantes están unidas por una región “J” de aproximadamente 12 o más aminoácidos, y la cadena pesada también incluye una región “D” de aproximadamente 3 o más aminoácidos. Cada cadena pesada se compone de una región variable de cadena pesada (abreviada en la presente memoria como HCVR o V^h) y una región constante de cadena pesada. La región constante de cadena pesada se compone de tres dominios, C^h1, C^h2y C^h3. Cada cadena ligera se compone de una región variable de cadena ligera (abreviada en la presente memoria como LCVR o V^l) y una región constante de cadena ligera. La región constante de cadena ligera se compone de un dominio, CL. Las regiones constantes de los anticuerpos pueden mediar la unión de la inmunoglobulina a los tejidos o factores del huésped, incluyendo varias células del sistema inmune (p. ej., células efectoras) y el primer componente del complemento (C1q) del sistema clásico del complemento. Las regiones V^hy V^lse pueden dividir adicionalmente en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones determinantes de la complementariedad (CDR), intercaladas con regiones que están más conservadas, denominadas regiones marco (FR). Cada V^hy V^lestá compuesta de tres CDRs y cuatro FRs, dispuestos desde el extremo amino terminal al carboxilo terminal en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Las regiones variables de cada par de cadena pesada/ligera (V^hy V^l), respectivamente, forman el sitio de unión del anticuerpo. El término “anticuerpo” abarca un anticuerpo que forma parte de un anticuerpo multimérico (una forma multimérica de anticuerpos), como dímeros, trímeros, o multímeros de orden superior de anticuerpos monoméricos. También abarca un anticuerpo que está ligado o unido a, o de otra manera física o funcionalmente asociado con, una fracción de no anticuerpo. Además, el término “anticuerpo” no está limitado por ningún método particular de producción del anticuerpo. Por ejemplo, incluye, entre otras cosas, anticuerpos recombinantes, anticuerpos sintéticos, anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, anticuerpos biespecíficos y anticuerpos multiespecíficos.

Tal como se usa en la presente memoria, el término “derivado de anticuerpo” o “derivado” de un anticuerpo se refiere a una molécula que es capaz de unirse al mismo antígeno al que se une el anticuerpo del que se deriva y que comprende una secuencia de aminoácidos que es igual o similar al anticuerpo unido a una entidad molecular adicional. La secuencia de aminoácidos del anticuerpo que está contenida en el derivado de anticuerpo puede ser el anticuerpo de longitud completa o puede ser cualquier porción o porciones de un anticuerpo de longitud completa. La entidad molecular adicional puede ser una molécula química o biológica. Ejemplos de entidades moleculares adicionales incluyen grupos químicos, aminoácidos, péptidos, proteínas (como enzimas, anticuerpos) y compuestos químicos. La entidad molecular adicional puede tener cualquier utilidad, como para su uso como agente de detección, etiqueta, marcador, agente farmacéutico o terapéutico. La secuencia de aminoácidos de un anticuerpo se puede ligar o unir a la entidad adicional mediante acoplamiento químico, fusión génica, asociación no covalente o de otro tipo. El término “derivado de anticuerpo” también abarca anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados y moléculas que se derivan de modificaciones de las secuencias de aminoácidos de un anticuerpo, como conservación de aminoácidos, sustituciones, adiciones e inserciones.

Tal como se usa en la presente memoria, los términos “antígeno” e “inmunógeno” se usan indistintamente para referirse a cualquier sustancia que sea capaz de inducir una respuesta inmune adaptativa. Un antígeno puede ser una célula entera (p. ej., célula bacteriana), un virus, un hongo o una porción antigénica o un componente de este. Los ejemplos de antígenos incluyen, pero no se limitan a, patógenos microbianos, bacterias, virus, proteínas, glicoproteínas, lipoproteínas, péptidos, glicopéptidos, lipopéptidos, toxoides, carbohidratos, antígenos específicos de tumor, y porciones antigénicas o componentes de estos.

Tal como se usa en la presente memoria, el término “fragmento de unión al antígeno” de un anticuerpo se refiere a una o más porciones de un anticuerpo de longitud completa que conservan la capacidad de unirse al mismo antígeno al que se une el anticuerpo.

Tal como se usa en la presente memoria, los términos “inmunoglobulina”, “inmuno globulina”, “molécula de inmunoglobulina” e “IG” abarca (1) anticuerpos, (2) fragmentos de unión a antígeno de un anticuerpo y (3) derivados de un anticuerpo, cada uno como se define en la presente memoria. Tal como se describe en la presente memoria, la inmunoglobulina se puede preparar a partir de composiciones de plasma agrupado (p. ej., forma fraccionada, forma aislada, forma purificada, forma concentrada, etc.) (p.ej., para administración a un sujeto). Tal como se usa en la presente memoria, el término “inmunoglobulina intravenosa (IGIV)” se refiere a inmunoglobulina convencional preparada a partir de plasma de grandes cantidades (p. ej., 250, 500, 1.000 o más) de donantes humanos aleatorios (p. ej., HIZENTRA, Inmunoglobulina Subcutánea, CLS Behring), mientras que los términos “inmunoglobulina antineumocócica” o “IGIV antineumocócica” o “hiper-inmunoglobulina antineumocócica” (p. ej., tal como se describe en la presente memoria y en los Ejemplos), se refieren a inmunoglobulina preparada a partir de plasma de donantes (p. ej., donantes de plasma humano) de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria (p. ej., un gran número (p. ej., 250, 500, 1.000 o más) de donantes de plasma humano (p. ej., donantes de plasma humano sanos) que han sido vacunados con una o más vacunas antineumocócicas de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria), que contiene un título elevado de anticuerpos antineumocócicos opsónicos cuando se compara con una muestra de control.

Los términos “anticuerpo opsonofagocítico” y “anticuerpo opsónico” se usan indistintamente en la presente memoria para referirse a anticuerpos que funcionan para provocar de forma activa que las bacterias u otras materias extrañas (p. ej., células o productos celulares) se vuelvan susceptibles a la acción de los fagocitos (p. ej., los anticuerpos opsónicos recubren las bacterias causando a su vez que las células bacterianas se vuelvan susceptibles a la fagocitosis debido a la interacción entre los anticuerpos opsónicos que recubren las células bacterianas y los receptores presentes en la superficie de los fagocitos). Por ejemplo, un anticuerpo antineumocócico opsónico es un anticuerpo que se une y recubre la superficie de S. pneumoniae y hace que la bacteria se vuelva susceptible a la fagocitosis/muerte por los fagocitos.

Los términos “título de anticuerpos opsonofagocíticos” y “título de anticuerpos opsónicos” se usan indistintamente en la presente memoria para referirse al título de anticuerpos opsonofagocíticos funcionalmente activos (p. ej., que se correlacionan con la protección frente a infecciones y/o enfermedad). Por ejemplo, un título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos (p. ej., medido por un ensayo OPK descrito en la presente memoria) es el título de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para S. pneumoniae en una muestra (p. ej., que es independiente y distinto de la cantidad total de anticuerpos capaces de unirse a S. pneumoniae presente en la muestra (p. ej., medido por ensayo de ELISA).

Tal como se usa en la presente memoria, el término “hiper-inmunoglobulina” se refiere a inmunoglobulina preparada a partir de plasma de donantes con altos títulos de anticuerpo (p. ej., anticuerpo opsónico) contra un organismo específico (p. ej., S. pneumoniae). Por ejemplo, tal como se usa en la presente memoria, una “hiper-inmunoglobulina antineumocócica” es una inmunoglobulina que contiene un elevado título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos independientemente de (p. ej., que es independiente y distinto de) el título o cantidad total de anticuerpos capaz de unirse a S. pneumoniae.

Tal como se describe en la presente memoria, un título elevado de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos es aquel que es al menos 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 7 veces, 10 veces o más para al menos el 55% o más (p. ej., (60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o más) de serotipos de S. pneumoniae 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F) en comparación con los títulos de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos para los mismos serotipos presentes en una muestra de control; o aquel que es específico para el 70% o más de los serotipos de S. pneumoniae seleccionados de los serotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23, y que es dos veces o más (p. ej., de 3-25 veces o más) que el título de anticuerpos opsónicos específicos para los mismos serotipos de S. pneumoniae presentes en una muestra de control; o aquel que está entre 1:64 y 1:8192 (p. ej., para al menos el 50% o más (p. ej., 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o más) de los serotipos de S. pneumoniae 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F) según lo determinado mediante un ensayo de muerte opsonofagocítica descrito en la presente memoria; o aquel que es al menos 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces o más que el título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos presente en una muestra de control, p. ej., para al menos el 55% o más de los serotipos neumocócicos seleccionados de los serotipos 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F (es decir, que es al menos 2, 3, 4, 5 veces o más de aumento en los títulos de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos para 7/12, 8/12, 9/12, 10/12, 11/12 o 12/12 de los serotipos neumocócicos en comparación con una muestra de control). El tipo de muestra de control utilizada se define en las reivindicaciones. Una muestra de control puede ser inmunoglobulina preparada a partir de una mezcla de muestras de plasma obtenidas a partir de 1.000 o más donantes de plasma humano aleatorios que no han sido vacunados con una vacuna antineumocócica (p. ej., de modo que los niveles de títulos de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos de los donantes de plasma humano no vacunados se usan como línea de base para medir el aumento en los títulos de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos en plasma humano de donantes vacunados de acuerdo con los métodos de la invención tal como se define en las reivindicaciones). Un título elevado de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos también puede ser un título que se usa para medir la muerte bacteriana y/o aquel que se use como un sustituto preciso para predecir la eficacia de una preparación de inmunoglobulina para proteger frente a las infecciones por S. pneumoniae.

Tal como se usa en la presente memoria, la frase “farmacéuticamente aceptable” se refiere a entidades y composiciones moleculares que son fisiológicamente tolerables y que generalmente no producen una reacción alérgica inaceptable o similar cuando se administran a un ser humano.

PNEUMOVAX (Merck Sharp & Dohme Corp., North Wales, PA) se refiere a la vacuna antineumocócica polisacárida compuesta de preparaciones purificadas de polisacárido capsular neumocócico. PPSV23 contiene antígeno polisacárido de los siguientes 23 tipos de bacterias neumocócicas: 1,2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19F, 19A, 20, 22F, 23F y 33F. Contiene 25 mg de cada antígeno por dosis y contiene fenol al 0,25% como un conservante.

PREVNAR-13 (Wyeth Pharmaceuticals, Collegeville, PA) se refiere a una vacuna conjugada neumocócica que incluye polisacárido capsular purificado de 13 serotipos de Streptococcus pneumoniae (1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 19A, 19F, 18C y 23F) conjugada a una variante no tóxica de la toxina de la difteria conocida como CRM197. Una dosis de PCV13 de 0,5 mililitros (ml) contiene aproximadamente 2,2 microgramos (mg) de polisacárido de cada uno de los 12 serotipos y aproximadamente 4,4 mg de polisacárido del serotipo 6B; la concentración total de CRM197 es de aproximadamente 34 mg. La vacuna contiene polisorbato 80 (P80) al 0,02%, 0,125 miligramos (mg) de adyuvante de aluminio como fosfato de aluminio (AlPO4) y 5 ml de tampón succinato. La vacuna no contiene timerosal como conservante.

Tal como se usa en la presente memoria, el término “muestra de anticuerpos” se refiere a una composición que contiene anticuerpos (p. ej., líquido (p. ej., plasma, sangre, anticuerpos purificados, fracciones de sangre o plasma, componentes de sangre o plasma, etc.)) tomada de o proporcionada por un donante (p. ej., fuente natural) u obtenida de una fuente sintética, recombinante, otra fuente in vitro, o de una fuente comercial. La muestra de anticuerpos puede exhibir un título elevado de un anticuerpo particular o un conjunto de anticuerpos en función de las exposiciones patógenas/antigénicas (p. ej., exposición natural o a través de la vacunación) del donante o los anticuerpos diseñados para ser producidos en el contexto sintético, recombinantes o in vitro. En la presente memoria, una muestra de anticuerpos con un título elevado de anticuerpos X se conoce como una “muestra de anticuerpos X elevados”. Por ejemplo, una muestra de anticuerpos con un título elevado de anticuerpos frente a S. pneumoniae se conoce como una “muestra de anticuerpos de S. pneumoniae elevados”.

Tal como se usa en la presente memoria, el término “anticuerpo aislado” o “molécula de unión aislada” se refiere a un anticuerpo o molécula de unión que se identifica y se separa de al menos un contaminante con el que normalmente se asocia en su fuente. Ejemplos de un anticuerpo aislado incluyen: un anticuerpo que: (1) no está asociado con uno o más componentes asociados de forma natural que lo acompañan en su estado natural; (2) está sustancialmente libre de otras proteínas de su fuente de origen; o (3) se expresa de forma recombinante, in vitro o libre de células, o se produce sintéticamente y se elimina el entorno en el que se produjo.

Tal como se usa en la presente memoria, los términos “plasma agrupado”, “muestras de plasma agrupado” y “composición de plasma agrupado” se refieren a una mezcla de dos o más muestras de plasma y/o una composición preparada a partir de estas (p. ej., inmunoglobulina). El título elevado de un anticuerpo particular o un conjunto de anticuerpos en el plasma agrupado refleja los títulos elevados de las muestras de anticuerpos que componen el plasma agrupado. Por ejemplo, se pueden obtener muestras de plasma de sujetos que han sido vacunados (p. ej., con una vacuna antineumocócica) y, por lo tanto, tienen un alto título de anticuerpos (p. ej., un alto título de anticuerpos totales de unión y/o un alto título de anticuerpos opsónicos) frente a un patógeno (S. pneumoniae) en comparación con el(los) nivel(es) de anticuerpos encontrados en la población en su conjunto. Al agrupar las muestras de plasma se produce una composición de plasma agrupado (p. ej., que tiene un título elevado de anticuerpos específicos para el patógeno en particular). En la presente memoria, un plasma agrupado con un título elevado de anticuerpos X (p. ej., en donde “X” es un patógeno microbiano) se conoce como “pool de anticuerpos X elevados”. Por ejemplo, un plasma agrupado con título elevado de anticuerpos de unión frente a S. pneumoniae se conoce como “pool de anticuerpos de S. pneumoniae elevados”. Las composiciones de plasma agrupado se pueden usar para preparar inmunoglobulina (p. ej., que posteriormente se administra a un sujeto) a través de métodos conocidos en la técnica (p. ej., fraccionamiento, purificación, aislamiento, etc.). Tanto las composiciones de plasma agrupado como la inmunoglobulina preparada a partir este se pueden administrar a un sujeto para proporcionar beneficios profilácticos y/o terapéuticos al sujeto. Por consiguiente, el término composición de plasma agrupado se puede referir a la inmunoglobulina preparada a partir del plasma agrupado/muestras de plasma agrupado.

Tal como se usa en la presente memoria, “pool de anticuerpos con añadido” se refiere a un plasma agrupado con añadido o combinado con anticuerpos u otra inmunoglobulina producida de forma sintética, recombinante o a través de otros medios in vitro.

Tal como se usa en la presente memoria, el término “purificado” o “purificar” significa el resultado de cualquier proceso que elimina parte de un contaminante del componente de interés, como una proteína (p. ej., anticuerpo) o ácido nucleico. El porcentaje de un componente purificado se incrementa así en la muestra.

Tal como se usa en la presente memoria, el término “agentes inmunoterapéuticos” se refiere a una sustancia química o biológica que puede mejorar la respuesta inmune (p. ej., específica o general) de un mamífero. Como se usa en la presente memoria, el término “donante” se refiere a un sujeto que proporciona una muestra biológica (p. ej., sangre, plasma, etc.). Una muestra de donante/donante se puede examinar para detectar la presencia o ausencia de patógenos específicos (p. ej., usando las pautas de la Administración de Alimentos y Medicamentos de los EE.UU. (FDA) para evaluar los estándares de seguridad para los productos sanguíneos (p. ej., expedidos por el Comité Asesor de Productos Sanguíneos de la FDA)). Por ejemplo, una muestra de donante/donante se puede examinar de acuerdo con las directrices de la FDA para verificar la ausencia de uno o más patógenos transmitidos por la sangre (p. ej., virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) 1 (VIH-1), VIH-2; Treponema pallidum (sífilis); Plamodium falciparum, P. malariae, P. ovale, P. vivax o P. knowlesi (malaria); virus de la hepatitis B (VHB), virus de la hepatitis C (VHC); priones (enfermedad de Creutzfeldt Jakob); virus del Nilo Occidental; parvovirus; Trypanosoma cruzi; coronavirus (SARS); virus vaccinia u otros patógenos examinados rutinariamente o que se recomienda que sea examinado por un organismo regulador como la FDA).

Tal como se usa en la presente memoria, una “cantidad inmunoestimuladora” se refiere la cantidad de una vacuna (p. ej., vacuna antineumocócica) que es capaz de estimular una respuesta inmune. Una respuesta inmune incluye el conjunto de efectos que dan lugar a la producción por el cuerpo de inmunoglobulinas o anticuerpos en respuesta a una entidad extraña. Por consiguiente, la respuesta inmune se refiere a la activación de las células B, in vivo o en cultivo, a través de la estimulación de las moléculas receptoras de Ig de la superficie de las células B. La medición de la respuesta inmune está dentro de la técnica ordinaria de aquellos expertos en la técnica e incluye la determinación de los niveles de anticuerpos usando métodos descritos en las series por P. Tijssen, Laboratory techniques in Biochemistry and Molecular Biology: Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, (Burdon & van Knippenberg eds., 3a ed., 1985) Elsevier, Nueva York; y Antibodies: A Laboratory Manual, (Harlow & Lane eds., 1988), Cold Spring Harbor Laboratory Press; así como procedimientos como electroforesis a contracorriente (GIEP), radioinmunoensayo, radioinmunoprecipitación, ensayos de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), ensayos de dot blot y ensayos sándwich, véanse las patentes de e E.UU. Nos. 4.376.110 y 4.486.530. La medición de la respuesta inmune también incluye la detección o determinación de eventos de activación de células B que pueden preceder a la producción de anticuerpos o indicar un aumento en la producción de anticuerpos. Tales mediciones incluyen, ensayos de proliferación de células B, ensayos de fosforilación, ensayos de concentración de calcio libre intracitoplasmático y otros métodos para determinar la activación de células B conocidos en la técnica. Los ensayos representativos se proporcionan en Mongini y cols., J. Immunol. 159: 3782-91(1997); Frade y cols., BBRC 188: 833-842 (1992); Tsokos y cols., J. Immunol. 144: 1640-1645 (1990); Delcayre y cols., BBRC 159: 1213-1220 (1989); y Nemerow y cols., J. Immunol. 135: 3068-73 (1985). La práctica puede incluir promover, mejorar o estimular una respuesta inmune. Estas acciones se refieren a establecer una respuesta inmune que antes no existía; para optimizar o aumentar una respuesta inmune deseada; para establecer o aumentar una respuesta secundaria caracterizada por un aumento del intercambio de isotipo, la respuesta de memoria o ambas; proporcionar un efecto inmunoprotector estadísticamente mayor contra un patógeno; generar una respuesta inmune humoral equivalente o mayor, u otra medida de activación de células B, a partir de una dosis reducida o limitante de antígeno; a generar un aumento de la respuesta inmune humoral, u otra medida de activación de células B en respuesta a una dosis equivalente de antígeno; o a la reducción del umbral de afinidad para la activación de células B in vivo o in vitro. Preferiblemente, una cantidad inmunoestimuladora se refiere a la cantidad de vacuna que es capaz de estimular una respuesta inmune en un sujeto (p. ej., un donante) y a partir de la cual se extrae el plasma, suero u otro componente sanguíneo del sujeto para su uso en las composiciones y métodos descritos en la presente memoria (p. ej., para el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de la infección neumocócica en un sujeto tratado con las composiciones y métodos descritos en la presente memoria)).

Los términos “tampón” o “agentes tamponadores” se refieren a materiales que, cuando se añaden a una solución, hacen que la solución resista los cambios en el pH.

Los términos “agente reductor” y “donante de electrones” se refieren a un material que dona electrones a un segundo material para reducir el estado de oxidación de uno o más de los átomos del segundo material.

El término “sal monovalente” se refiere a cualquier sal en la que el metal (p. ej., Na, K, o Li) tiene una carga neta de 1+ en solución (es decir, un protón más que electrones).

El término “sal divalente” se refiere a cualquier sal en la que el metal (p. ej., Mg, Ca, o Sr) tiene una carga neta de 2+ en solución.

Los términos “quelante” o “agente quelante” se refiere a cualquier material que tenga más de un átomo con un par de electrones solitario que están disponibles para unirse a un ion metálico.

El término “solución” se refiere a una mezcla acuosa o no acuosa.

Tal como se usa en la presente memoria, el término “adyuvante” se refiere a cualquier sustancia que pueda estimular una respuesta inmune. Algunos adyuvantes pueden causar la activación de una célula del sistema inmune (p. ej., un adyuvante puede hacer que una célula inmune produzca y secrete una citoquina). Ejemplos de adyuvantes que pueden causar la activación de una célula del sistema inmune incluyen, pero no se limitan a, saponinas purificadas de la corteza del árbol Q. saponaria, como QS21 (un glicolípido que eluye en el pico 21° con fraccionamiento en HPLC; Aquila Biopharmaceuticals, Inc., Worcester, Mass.); poli(di(carboxilatofenoxi)fosfaceno (polímero PCPP, Virus Research Institute, EE.UU.); derivados de lipopolisacáridos como monofosforil lípido A (MPL; Ribi ImmunoChem Research, Inc., Hamilton, Mont.), muramil dipéptido (MDP; Ribi) y treonil-muramil dipéptido (t-MDP; Ribi); OM-174 (un disacárido de glucosamina relacionado con el lípido A; OM Pharma SA, Meyrin, Suiza); toxina del cólera (TC) y factor de elongación de Leishmania (una proteína purificada de Leishmania; Corixa Corporation; Seattle, Wash.). Los adyuvantes tradicionales son bien conocidos en la técnica e incluyen, por ejemplo, fosfato de aluminio o sales de hidróxido (“alumbre”). Las composiciones descritas en la presente memoria se pueden administrar con uno o más adyuvantes (p. ej., para sesgar la respuesta inmune hacia una respuesta de tipo Th1 y/o Th2). Se pueden utilizar los adyuvantes descritos en las patentes de EE.UU. US2005158329; US2009010964; US2004047882; o US6262029.

Tal como se usa en la presente memoria, el término “una cantidad eficaz para inducir una respuesta inmune” (p. ej., de una vacuna neumocócica), se refiere al nivel de dosis requerido (p. ej., cuando se administra a un sujeto) para estimular, generar y/o desencadenar una respuesta inmune en el sujeto. Una cantidad eficaz se puede administrar en una o más administraciones (p. ej., a través de esta o diferente vía), aplicaciones o dosis y no está destinada a limitarse a una formulación o vía de administración en particular.

Tal como se usa en la presente memoria, el término “en condiciones tales que dicho sujeto genere una respuesta inmune” se refiere a cualquier inducción, generación y/o estimulación cualitativa o cuantitativa de una respuesta inmune (p. ej., innata o adquirida).

Tal como se usa en la presente memoria, el término “respuesta inmune” se refiere a una respuesta del sistema inmune de un sujeto. Por ejemplo, las respuestas inmunes incluyen, pero no se limitan a, una alteración detectable (p. ej., aumento) en la activación del receptor de tipo Toll (TLR), la expresión y/o secreción de linfoquinas (p. ej., citoquinas (p. ej., citoquinas de tipo Th1 o Th2) o quimioquinas), la activación de macrófagos, la activación de células dendríticas, la activación de célula T (p. ej., células T CD4+ o CD8+), la activación de células NK y/o la activación de células B (p. ej., generación y/o secreción de anticuerpos). Ejemplos adicionales de respuestas inmunes incluyen la unión de un inmunógeno (p. ej., antígeno (p. ej., polipéptido inmunogénico)) a una molécula MHC e inducir una respuesta de linfocitos T citotóxicos (“CTL”), inducir una respuesta de células B (p. ej., producción de anticuerpos y/o respuesta de linfocitos T auxiliares, y/o una respuesta de hipersensibilidad de tipo retardado (DTH) frente al antígeno del que se deriva el polipéptido inmunogénico, expansión (p. ej., crecimiento de una población de células) de células del sistema inmune (p. ej., células T, células B, (p. ej., de cualquier etapa de desarrollo (p. ej., células plasmáticas)), y aumento del procesamiento y la presentación del antígeno por las células presentadoras de antígeno. Puede ser una respuesta inmune a inmunógenos que el sistema inmune del sujeto reconoce como extraños (p. ej., antígenos no propios de microorganismos (p. ej., patógenos), o auto-antígenos reconocidos como extraños). Por lo tanto, se debe entender, tal como se usa en la presente memoria, que “respuesta inmune” se refiere a cualquier tipo de respuesta inmune, que incluye, pero no se limita a, respuestas inmunes innatas (p. ej., la activación de la cascada de señalización del receptor Toll), respuestas inmunes mediadas por células (p. ej., respuestas mediadas por células T (p. ej., células T específicas de antígeno) y células no específicas del sistema inmune) y respuestas humorales (p. ej., respuestas mediadas por células B (p. ej., a través de la generación y secreción de anticuerpos en el plasma, linfa y/o fluidos tisulares). El término “respuesta inmune” está destinado a abarcar todos los aspectos de la capacidad del sistema inmune del sujeto para responder a antígenos y/o inmunógenos (p. ej., tanto la respuesta inicial a un inmunógeno (p. ej., patógeno) como las respuestas adquiridas (p. ej., memoria) que son el resultado de una respuesta inmune adaptativa).

Tal como se usa en la presente memoria, el término “transportador farmacéuticamente aceptable” se refiere a cualquiera de los transportadores farmacéuticos estándar, que incluyen, pero no se limitan a, solución salina de fosfato tamponada, agua, y varios tipos de agentes humectantes (p. ej., lauril sulfato de sodio), todos y cada uno de los disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, lauril sulfato de sodio, agentes isotónicos y retardadores de la absorción, desintegrantes (p. ej., almidón de patata o glicolato sódico de almidón), polietilénglicol, otros transportadores naturales y no naturales, y similares. Las composiciones también pueden incluir estabilizadores y conservantes. Se han descrito ejemplos de transportadores, estabilizadores y adyuvantes que se conocen en la técnica (Véase p. ej., Martin, Remington’s Pharmaceutical Sciences, 15a Ed., Mack Publ. Co., Easton, Pa. (1975)).

Tal como se usa en la presente memoria, el término “sal farmacéuticamente aceptable” se refiere a cualquier sal (p. ej., obtenida mediante reacción con un ácido o con una base) de una composición descrita en la presente memoria que se tolera fisiológicamente en el sujeto diana. Las “sales” de las composiciones descritas en la presente memoria se pueden derivar de ácidos y bases inorgánica u orgánicas. Ejemplos de ácidos incluyen, pero no se limitan a, ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico, perclórico, fumárico, maleico, fosfórico, glicólico, láctico, salicílico, succínico, tolueno-p-sulfónico, tartárico, acético, cítrico, metanosulfónico, etanosulfónico, fórmico, benzoico, malónico, sulfónico, naftalen-2-sulfónico, bencenosulfónico, y similares. Otros ácidos, como el oxálico, aunque no son en sí mismos farmacéuticamente aceptables, se pueden emplear en la preparación de sales útiles como intermediarios para obtener las composiciones descritas en la presente memoria y sus sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables.

Ejemplos de bases incluyen, pero no se limitan a, hidróxidos de metales alcalinos (p. ej., sodio), hidróxidos de metales alcalinotérreos (p. ej., magnesio), amoniaco y compuestos de fórmula NW⁴+, en donde W es alquilo C^1-4, y similares.

Ejemplos de sales incluyen, pero no se limitan a: acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, citrato, canforato, canforsulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, flucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, cloruro, bromuro, yoduro, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato, undecanoato, y similares. Otros ejemplos de sales incluyen aniones de los compuestos descritos en la presente memoria compuestos por un catión adecuado como Na+, NH⁴+ y NW⁴+ (en donde W es un grupo alquilo C^1-4), y similares. Para uso terapéutico, se contemplan las sales de los compuestos descritos en la presente memoria como farmacéuticamente aceptables. Sin embargo, las sales de ácidos y bases que no son farmacéuticamente aceptables también pueden encontrar uso, por ejemplo, en la preparación o purificación de un compuesto farmacéuticamente aceptable.

Para uso terapéutico, se contemplan las sales de las composiciones descritas en la presente memoria como farmacéuticamente aceptables. Sin embargo, las sales de ácidos y bases que no son farmacéuticamente aceptables también pueden encontrar uso, por ejemplo, en la preparación o purificación de un composición farmacéuticamente aceptable.

Descripción detallada de la invención

El Streptococcus pneumoniae es una de las principales causas de mortalidad y morbilidad en todo el mundo. Su principal factor de virulencia es el polisacárido capsular. La edad avanzada y la inmunodeficiencia de anticuerpos (p. ej., como resultado de una inmunodeficiencia primaria descrita en la presente memoria) son los principales factores de riesgo para la infección neumocócica. La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que 1,6 millones de personas mueren de enfermedades neumocócicas cada año. Aunque la mayoría de los más de 90 serotipos capsulares conocidos pueden causar enfermedades graves, un número limitado causa la mayoría de los casos de enfermedad neumocócica invasiva (IPD). La inmunidad a S. pneumoniae está mediada por la fagocitosis de las baterías en presencia del complemento y el anticuerpo opsónico específico de serotipo. La evaluación de las respuestas serológicas a diferentes vacunas antineumocócicas en grandes ensayos clínicos ha proporcionado las correlaciones de protección requerida para lanzar nuevas vacunas. Para predecir la protección frente a la enfermedad IPD, la OMS recomienda un umbral de referencia de 0,2 a 0,35 mg/ml para las vacunas antineumocócicas conjugadas (todos los serotipos); para las vacunas con polisacáridos, la directriz actual es de 1,3 mg/ml. Un marcador sustituto más preciso que es indicativo de protección y que ha sido aceptado por la FDA como que correlaciona con la eficacia clínica es el título de anticuerpos opsónicos y se ha encontrado que este es lo suficientemente preciso como para reemplazar la necesidad de ensayos de vacunas. Por ejemplo, títulos opsónicos en un individuo vacunado de 1:8 generalmente se consideran correlatos de protección contra los diversos serotipos de S. Pneumoniae. Si una vacuna induce un título opsónico de 1:8 contra un serotipo particular, esa vacuna se puede considerar clínicamente eficaz incluso en ausencia de un ensayo clínico que demuestre un número reducido de infecciones en individuos vacunados en comparación con individuos no vacunados.

Las inmunodeficiencias primarias (IDPs) son un grupo de más de 200 trastornos heredados genéticamente caracterizados por deficiencias en componentes individuales del sistema inmune innato o adaptativo, con un resultado clínico de una mayor susceptibilidad a la infección. La inmunodeficiencia más frecuente es la deficiencia de anticuerpos. Las principales características clínicas de los pacientes con deficiencia de anticuerpos (también conocida como hipogammaglobulinemia) son infecciones recurrentes del tracto respiratorio, siendo Streptococcus pneumoniae la bacteria aislada más frecuente (Véanse, p. ej., Fried y Bonilla, Clin Microbiol Rev. 2009; 22: 396-414; Busse y cols., J Allergy Clin Immmunol. 2002; 109: 1001 -1004).

Durante las últimas décadas, la administración a largo plazo de inmunoglobulina intravenosa polivalente humana (IGIV, también conocida en la presente memoria como “IGIV convencional”) ha sido la terapia principal para reducir la gravedad y la frecuencia de las infecciones en pacientes inmunodeficientes (p. ej., deficientes de anticuerpos) (Véanse, p. ej., Salehzadeh y cols., J Microbiol Immunol Infect 2010, 43(1): 11-17; Favre y cols., Allergy 200560: 385-390). La infusión de IGIV da como resultado rápidamente un pico de concentración de inmunoglobulina G (IgG), seguido de una disminución de IgG con el tiempo. Se controla el nivel de IgG justo antes de la siguiente infusión (es decir, el nivel mínimo) para evaluar la idoneidad de un régimen de infusión particular. En general, los pacientes IDP tratados con IGIV reciben infusiones cada tres o cuatro semanas. Si bien la infusión de IGIV cada tres o cuatro semanas ha tenido éxito generalmente para prevenir infecciones graves del tracto respiratorio inferior en pacientes con IDP, existe un porcentaje significativo de pacientes con IDP que continúan experimentando infecciones del tracto respiratorio superior, con morbilidad y enfermedad asociadas, mientras reciben el tratamiento. Esto es a pesar del hecho de que la mayoría de los pacientes inmunocomprometidos que reciben IGIV parecen tener niveles aceptables de inmunoglobulina total, así como niveles aceptables de IgG anti-S. pneumoniae en el nivel mínimo (Véase, p. ej., Favre y cols., Allergy 200560: 385-390). Además, se han usado antibióticos, pero a menudo son ineficaces.

Por lo tanto, la administración de IGIV agrupada humana exógena ha sido una terapia importante en medicina clínica para pacientes con inmunodeficiencia (p. ej., deficiencias de anticuerpos) y parece haber prevenido la aparición de infecciones graves del tracto respiratorio inferior. Sin embargo, y en marcado contraste, la terapia con IGIV convencional no ha logrado prevenir o tratar la aparición significativa de las infecciones del tracto respiratorio superior potencialmente menos mortales (p. ej., causadas por S. pneumoniae) que ocurren en pacientes con IDP (Véanse, p. ej., Favre y cols., Allergy 2005 60: 385-390; Simao-Gurge y cols., Allergo Immunopathol 2017, 45: 55-62), Es decir, mientras que las concentraciones totales de IgG logradas por las infusiones regulares de IGIV convencional previenen infecciones graves del tracto respiratorio inferior en pacientes con IDP, sigue habiendo una morbilidad sustancial y significativa de las infecciones de las vías respiratorias superiores clínicamente menos graves en pacientes con IDP causadas por S. pneumoniae que a su vez da como resultado complicaciones de salud significativas, una disminución de la calidad de vida y un uso indiscriminado de antibióticos de amplio espectro en los pacientes en un intento de controlar las infecciones.

Se describen en la presente memoria, pero no forman parte de la invención, composiciones y métodos para el tratamiento de la infección causada por Streptococcus pneumoniae. Además, se describen, pero no forman parte de la invención, la hiper-inmunoglobulina humana y sus composiciones para prevenir o tratar la infección neumocócica. La invención se define en las reivindicaciones y se refiere a los métodos de producción de hiper-inmunoglobulina que contiene altos títulos de anticuerpos antineumocócicos opsónicos.

Además, se describen, pero no forman parte de la invención, métodos para prevenir o tratar la infección neumocócica (p. ej., infecciones de las vías respiratorias superiores (p. ej., bronquitis, otitis, sinusitis, etc.)) en sujetos inmunocomprometidos mediante la administración de composiciones de hiper-inmunoglobulina de la invención (p. ej., que contienen un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos) a sujetos inmunocomprometidos.

Como se describe en detalle en la presente memoria (p. ej., en los Ejemplos), pero no forma parte de la invención, una nueva composición de hiper-inmunoglobulina que contiene un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos que es sorprendente y significativamente diferente de las preparaciones convencionales de inmunoglobulina, así como de otras preparaciones de IGIV (p. ej., otras preparaciones de IGIV hiperinmune). En particular, como se describe en los Ejemplos 2-4, se descubrió de manera sorprendente que la hiper-inmunoglobulina preparada de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria tenía un título elevado de anticuerpos antineumocócicos opsónicos que son funcional y ampliamente reactivos contra una multitud de serotipos de S. Pneumoniae y mejoran la fagocitosis y la muerte de S. pneumoniae in vitro (p. ej., los anticuerpos son opsonofagocíticos), independientemente de la cantidad total de anticuerpos antineumocócicos de unión (p. ej., medidos por ELISA) que están presentes en la composición. Es decir, los experimentos llevados a cabo identificaron de forma inesperada que el anticuerpo IgG total de unión al polisacárido capsular de S. pneumoniae no se correlacionaba y no era predictivo de la cantidad de anticuerpo opsónico funcional presente en la inmunoglobulina preparada a partir de los sueros de un huésped vacunado (Véanse, p. ej., Ejemplos 2-4). Por lo tanto, los niveles bajos de anticuerpos de unión pueden estar asociados con altos niveles de anticuerpos opsónicos protectores, y viceversa. Por lo tanto, la medición de los niveles totales de anticuerpos solo en preparaciones de inmunoglobulina no predice ni se correlaciona con la eficacia protectora de esa preparación. Por lo tanto, se puede proporcionar la identificación y caracterización de composiciones de plasma y/o de inmunoglobulina que contengan un título de anticuerpos opsónicos funcionales deseado en lugar de uno en el que solo se conozca la cantidad total de IgG (p. ej., debido a la identificación de la falta de correlación entre el título de anticuerpos IgG antineumocócicos totales y el título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos presentes en el plasma o en la inmunoglobulina preparada a partir de donantes vacunados).

Además, se descubrió una pronunciada variabilidad en los títulos opsónicos específicos de serotipo en varios lotes comerciales de IGIV convencionales (Véanse, p.ej., FIG. 9A-9L, muestras A-I en cada uno que representa la IGIV comercial) y que un título elevado a un serotipo no predecía ni se correlacionaba con un título elevado con ninguno de los otros serotipos. Esto indicó que la respuesta individual aumentada en cualquier IGIV convencional individual no reflejaba una respuesta inmune general mejorada frente a S. pneumoniae, sino más bien respuestas mejoradas esporádicas a serotipos muy específicos (Véase, p. ej., Malgorzata y cols., Clin Diag Lab Immunol 2004, 11(6): 1158 1164). En marcado contraste, los títulos de anticuerpos opsónicos observados dentro de la inmunoglobulina preparada a partir de donantes inmunizados de acuerdo con la invención se mostraron mejorados para todos los serotipos sin excepción (Véanse, p.ej., Ejemplo 5, FIG. 8 y véanse FIG. 9A-9L, muestra HIG - “hiper-inmunoglobulina” de la invención). Dependiendo del serotipo, hubo entre 3 y 256 veces de aumento en el título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos en la inmunoglobulina a partir de donantes inmunizados en comparación con varios lotes comerciales diferentes de inmunoglobulina (Véanse, p. ej., Ejemplo 5 y FIG. 8, muestras de IGIV comercial/convencional A-I frente a sueros hiper-inmunes de donantes). Por lo tanto, las composiciones y los métodos descritos en la presente memoria para generar composiciones (p. ej., composiciones de sangre, plasma y/o inmunoglobulina) que contengan un título elevado de anticuerpos antineumocócicos opsónicos pueden proporcionar una composición heterogénea que comprende títulos de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos para una multitud de serotipos neumocócicos (p. ej., 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o más serotipos) y/o títulos significativamente elevados de anticuerpos opsónicos (p. ej., de 3-256 veces más) en comparación con la inmunoglobulina comercial convencional.

Por lo tanto, debido a la identificación de la discordancia entre el título total de anticuerpos IgG antineumocócicos de unión y el título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos presentes en el plasma o la inmunoglobulina preparada a partir de este de donantes vacunados descrito en la presente memoria, es un objetivo adicional proporcionar una composición de plasma y/o inmunoglobulina (p. ej., hiper-inmunoglobulina antineumocócica) que contenga un título elevado de anticuerpos antineumocócicos opsónicos funcionales (p. ej., de al menos 1:64 a aproximadamente 1:8192 (p. ej., independientemente del título total de anticuerpos antineumocócicos de unión (p. ej., agrupando plasma y/o inmunoglobulina recolectada de plasma y/o inmunoglobulina de donantes vacunados identificados como poseedores de un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos entre sí, y/o con plasma y/o inmunoglobulina de donantes vacunados que pueden no tener un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos, pero que cuando se agrupan con el plasma de anticuerpos antineumocócicos opsónicos y/o inmunoglobulina de alto título no diluyen el título opsónico total a un nivel no deseable en comparación con la muestra de control))).

La presente descripción también describe el descubrimiento de que los pooles de inmunoglobulina estándar/convencionales de donantes normales (p. ej., usados para generar IGIV estándar/convencional comercialmente disponible) no tienen niveles altos fiables y consistentes de anticuerpos opsónicos para múltiples serotipos de S. pneumoniae, mientras que una composición de inmunoglobulina (p. ej., hiper-inmunoglobulina antineumocócica) que contiene un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos ampliamente reactivos descrita en la presente memoria frente a multitud de serotipos cuando se administra por vía intravenosa proporciona de forma inmediata anticuerpos específicos y funcionales que promueven la fagocitosis y la muerte de una multitud de serotipos de S. pneumoniae por los fagocitos. No hay limitación por el serotipo o el número de serotipos de S. pneumoniae para los cuales los anticuerpos opsónicos funcionales presentes dentro de una composición de hiperinmunoglobulina (p. ej., IGIV) descrita en la presente memoria promueven la opsonofagocitosis y/o la muerte. Una composición (p. ej., una composición de plasma hiper-inmune y/o una composición de hiper-inmunoglobulina (p. ej., IGIV)) puede contener anticuerpos opsónicos ampliamente reactivos para al menos 9 de 12, 10 de 12, 11 de 12 o todos los 12 de 12 de los siguientes serotipos de S. pneumoniae: 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F (Véase, p. ej., Ejemplos 2-5). Es decir, si bien la invención se define exclusivamente en las reivindicaciones del método adjuntas, dichos métodos reivindicados también están relacionados con métodos de obtención de los mismos que comprenden un título elevado de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos que es al menos 3 veces, 4 veces, 5 veces, 7 veces, 10 veces o más que el título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos presentes en una muestra de control (p. ej., para al menos el 75% de los serotipos antineumocócicos seleccionados de los serotipos 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F). Se describe además, pero no forma parte de la invención, una composición de hiper-inmunoglobulina (p. ej., IGIV) que contiene un alto título de anticuerpos opsónicos ampliamente reactivos para al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, 95%, 98% o más de cada serotipo presente en una vacuna o una pluralidad de vacunas utilizadas para inmunizar uno o más donantes de plasma a partir del cual se deriva la inmunoglobulina.

Se describe además, pero no forma parte de la invención, una composición de hiper-inmunoglobulina (p. ej., IGIV) que contiene anticuerpos opsónicos ampliamente reactivos específicos para S. pneumoniae a un paciente (p. ej., un paciente inmunocomprometido (p. ej., un paciente con IDP)) con el fin de tratar (p. ej., terapéutica y/o profilácticamente) la infección neumocócica en el paciente (p. ej., inhibiendo el crecimiento de S. pneumoniae y/o el aclaramiento de S. pneumoniae de la sangre del paciente). Se describe además, pero no forma parte de la invención, una composición de hiper-inmunoglobulina (p. ej., IGIV) que contiene anticuerpos opsónicos ampliamente reactivos específicos para S. pneumoniae a un paciente (p. ej., un paciente inmunocomprometido (p. ej., un paciente con IDP)) con el fin de tratar la infección neumocócica en el paciente (p. ej., mejorando o aumentando el aclaramiento de S. pneumoniae de la sangre del paciente). Se describe además, pero no forma parte de la invención, una composición de hiperinmunoglobulina (p. ej., IGIV) que contiene anticuerpos opsónicos ampliamente reactivos específicos para S. pneumoniae a un paciente (p. ej., un paciente inmunocomprometido (p. ej., un paciente con IDP)) con el fin de tratar las infecciones del tracto respiratorio superior en el paciente que no se pueden prevenir con el tratamiento con IGIV convencional. No hay limitación por el tipo de infección del tracto respiratorio superior prevenida y/o tratada y puede incluir, pero no se limita a, rinosinusitis (sinusitis), otitis media, faringitis, epiglotitis, laringotraqueitis y laringotraqueobronquitis. De forma similar, las composiciones y métodos de uso (p. ej., administración) de los mismos encuentran uso en la prevención y/o el tratamiento de signos o síntomas de infección del tracto respiratorio superior que incluyen, pero no se limitan a, tos, estornudos, secreción nasal, congestión nasal, moqueo, fiebre, picor o dolor de garganta y respiración nasal.

No hay limitación por el tipo de infección estreptocócica tratada (p. ej., profiláctica y/o terapéuticamente). De hecho, se puede tratar cualquier infección estreptocócica causada por el grupo estreptococcus de bacterias. Hay más de 90 cepas diferentes de bacterias de Streptococcus pneumoniae (S. pneumoniae), algunas de las cuales causan infecciones más graves que otras. Los síntomas de una infección neumocócica pueden variar, dependiendo del tipo de infección. Los síntomas comunes incluyen: una alta temperatura (fiebre) de 38 °C (100,4 °F), dolores y molestias y/o dolor de cabeza. Las infecciones neumocócicas generalmente se dividen en una o dos categorías: infecciones neumocócicas no invasivas (ocurren fuera de los órganos principales o de la sangre y tienden a ser menos graves) e infecciones neumocócicas invasivas (ocurren dentro de un órgano principal o en la sangre y tienden a ser más graves. Las composiciones descritas en la presente memoria y los métodos de uso de estas encuentran uso en el tratamiento (p. ej., terapéutica y/o profilácticamente) tanto de infecciones neumocócicas no invasivas como invasivas.

Se describen además, pero no forman parte de la invención, excepto por el método mencionado en las reivindicaciones, composiciones y métodos para obtener una composición que comprende muestras de plasma agrupado (p. ej., plasma de una pluralidad de donantes (p. ej., donantes que se han vacunado con una o más vacunas neumocócicas)) que contiene altos títulos de anticuerpos antineumocócicos opsónicos basados en un objetivo de proporcionar métodos de generación de composiciones (p. ej., composiciones de sangre, plasma y/o inmunoglobulina) que contengan un alto título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos. Por ejemplo, a uno o una pluralidad de sujetos humanos adultos sanos (p. ej., sujetos humanos sin afecciones médicas conocidas) se les administra un inmunógeno neumocócico, una proteína neumocócica recombinante o una combinación de estos. Un inmunógeno de S. pneumoniae puede ser un azúcar de membrana celular de S. pneumoniae (p. ej., un polisacárido). Un inmunógeno de S. pneumoniae puede ser una vacuna conjugada (p. ej., conjugada a un transportador y/o adyuvante (p. ej., una proteína u otra molécula transportadora)). Un inmunógeno de S. pneumoniae puede ser una vacuna no conjugada. La vacuna conjugada o la vacuna no conjugada puede contener 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23 o más inmunógenos diferentes (p. ej., de un número igual de serotipos diferentes de S. pneumoniae). Uno o más serotipos diferentes de S. pneumoniae pueden incluir, pero no se limitan a, los serotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7A, 7B, 7C, 7D, 7E, 7F, 8, 9A-9V, 12, 14, 18C, 19A-19F, 23A-23F y 25. Uno o más serotipos diferentes de S. pneumoniae se pueden seleccionar de cualquiera de los 90 serotipos diferentes de S. pneumoniae identificados. Uno o más serotipos diferentes de S. pneumoniae pueden estar recién identificados.

A uno o a una pluralidad de sujetos humanos sanos (p. ej., sujetos humanos sin afecciones médicas conocidas) se les puede administrar un inmunógeno neumoócico, proteína neumocócica recombinante o una combinación de estos presentes en una vacuna antineumocócica comercial. Las vacunas para usar de acuerdo con la invención se mencionan en el método reivindicado.

Uno o una pluralidad de sujetos humanos sanos pueden recibir una vacunación primera o principal con una primera vacuna antineumocócica, y una vacunación de refuerzo posterior con la primera vacuna antineumocócica o con una segunda vacuna antineumocócica diferente. Por ejemplo, uno o una pluralidad de sujetos humanos sanos reciben una vacunación/inmunización primera o principal con una primera vacuna antineumocócica (p. ej., PREVNAR), y luego reciben una vacunación/inmunización de refuerzo (p. ej., a las 2 semanas, 4 semanas, 6 semanas, 8 semanas, 10 semanas, 12 semanas o más después de la vacunación/inmunización principal) con una segunda vacuna antineumocócica (p. ej., PNEUMOVAX23). En un punto de tiempo posterior a la vacunación secuencial (p. ej., a las 2 semanas, 4 semanas, 6 semanas, 8 semanas, 10 semanas, 12 semanas o más después de la vacunación secuencial), se extraen los sueros/plasmas de los donantes de plasma humano sanos y vacunados. El plasma de los donantes vacunados se puede agrupar (entre sí y/o con plasma de donantes no vacunados) seguido de la recolección de la inmunoglobulina de estos. Los métodos de recolección de plasma, así como de la inmunoglobulina, son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica.

Se describe además, pero no forma parte de la invención, excepto por el método mencionado en las reivindicaciones, un método para preparar una hiper-inmunoglobulina que tiene un alto título de anticuerpos opsonofagocíticos contra Streptococcus pneumoniae (p. ej., un título que sea al menos 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 7 veces, 10 veces o más para al menos aproximadamente el 55% o más (p. ej., 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o más) de los serotipos de S. pneumoniae 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F) en comparación con los títulos de anticuerpos antineumocócicos opsonofagocíticos específicos para los mismos serotipos presentes en una muestra de control; o, un título específico para el 70% o más de los serotipos de S. pneumoniae seleccionados de los serotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23, que es 2 veces mayor o más (p. ej., de 3-25 veces o más) que el título de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para los mismos serotipos de S. pneumoniae presentes en una muestra de control; o, un título entre 1:64 y 1:8192 (p. ej., para al menos el 50% o más (p. ej., 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o más) de los serotipos de S. pneumoniae 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F) según lo determinado mediante un ensayo de muerte opsonofagocítica descrito en la presente memoria) que comprende las etapas de inmunizar donantes de plasma humano adultos sanos entre las edades de 18-60 años con una vacuna multivalente contra S. pneumoniae principal seguido de inmunización con un refuerzo de vacuna multivalente contra S. pneumoniae que es diferente de la vacuna principal; recolectar el plasma de los donantes de plasma después de la inmunización de refuerzo; agrupar el plasma de los donantes vacunados con el fin de obtener un plasma agrupado que contenga un alto título de título de anticuerpos opsonofagocíticos para S. pneumoniae; y preparar una inmunoglobulina a partir del plasma agrupado. El método puede comprender hacer que la inmunoglobulina obtenida sea inyectable por vía intravenosa. La inmunoglobulina se puede proporcionar en solución y/o se puede ajustar el pH y la fuerza iónica de la solución para que sea inyectable por vía intravenosa. No hay limitación del número de individuos vacunados de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria. Por ejemplo, se pueden vacunar 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1.000, 1.100, 1.200, 1.300, 1.400 o más donantes de plasma humano adultos sanos y extraer el plasma de los donantes. El plasma agrupado puede estar hecho de plasma agrupado de 1.000 o más donantes de plasma humano adultos sanos vacunados. El plasma agrupado puede contener un título de anticuerpos opsonofagocíticos que es al menos 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 7 veces, 10 veces o más para al menos el 55% o más (p. ej., 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o más) de los serotipos de S. pneumoniae 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F) en comparación con los títulos de anticuerpos antineumocócicos opsonofagocíticos específicos para los mismos serotipos presentes en una muestra de control (p. ej., plasma o inmunoglobulina preparada a partir de plasma, agrupado de 1.000 o más donantes aleatorios de plasma humano no vacunados). El plasma agrupado puede contener un título de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para el 70% o más de los serotipos de S. pneumoniae seleccionados de los serotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23, que es 2 veces o más (p. ej., de 3-25 veces o más) que el título de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para los mismos serotipos de S. pneumoniae presentes en una muestra de control (p. ej., plasma o inmunoglobulina preparada a partir de plasma, agrupado de 1.000 o más donantes aleatorios de plasma humano no vacunados). El plasma agrupado puede contener un título de anticuerpos opsonofagocíticos entre 1:64 y 1:8192 (p. ej., para al menos el 50% o más (p. ej., 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o más) de los serotipos de S. pneumoniae 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F) según lo determinado mediante un ensayo de muerte opsonofagocítica descrito en la presente memoria. Se describe, pero no forma parte de la invención, un hiper-inmunoglobulina preparada de acuerdo con el método descrito anteriormente. La hiper-inmunoglobulina así preparada se puede usar en varios métodos. Por ejemplo, la hiper-inmunoglobulina se puede usar en un método de tratamiento de la infección por S. pneumoniae en un sujeto (p. ej., que comprende la administración al sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de la hiper-inmunoglobulina). La hiperinmunoglobulina también se puede usar en un método para proporcionar inmunoterapia a un sujeto (p. ej., que comprende la administración al sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de la hiper-inmunoglobulina).

Se describe además, pero no forma parte de la invención, excepto por el método mencionado en las reivindicaciones, un método de preparación de inmunoglobulina que tenga una actividad bactericida opsonofagocítica mejorada frente al menos siete serotipos de Streptococcus pneumoniae (p. ej., serotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23F) para la prevención o tratamiento de la infección por S. pneumoniae que comprende las etapas de inmunizar donantes de plasma humano adultos sanos con una inmunización primaria con una vacuna multivalente conjugada contra S. pneumoniae seguido de inmunización de refuerzo con una vacuna multivalente polisacárida contra S. pneumoniae que es diferente de la vacuna principal; recolectar y agrupar el plasma de los donantes de plasma inmunizados; y preparar una inmunoglobulina a partir del plasma agrupado, en donde la inmunoglobulina contenga un título de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para cada uno de los al menos siete serotipos de S. pneumoniae que es dos veces o más que el título de anticuerpos opsonofagocíticos para cada uno de los al menos siete serotipos de S. pneumoniae presentes en una muestra de control (p. ej., inmunoglobulina preparada a partir de plasma agrupado de 1.000 o más donantes aleatorios de plasma humano no vacunados). La inmunoglobulina así preparada se puede usar en varios métodos. Por ejemplo, la inmunoglobulina se puede usar en un método de tratamiento de la infección por S. pneumoniae en un sujeto que comprende la administración al sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de la inmunoglobulina. La inmunoglobulina también se puede usar en un método para proporcionar inmunoterapia a un sujeto que comprende la administración al sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de la inmunoglobulina.

Los experimentos realizados durante el desarrollo descubrieron que un número significativo de pacientes tratados con IGIV tenían en el nivel mínimo concentraciones de anticuerpos anti-S. pneumoniae que cayeron por debajo de lo que se consideran protectoras. Por ejemplo, como se muestra en la FIG. 10, se determinó que un porcentaje significativo de pacientes con enfermedad de inmunodeficiencia primaria tratados con IGIV convencional tenían niveles específicos de serotipo de anticuerpos anti-S. pneumoniae de unión que cayeron por debajo de un nivel protector (por debajo de 1,2 mg/ml) en el nivel mínimo.

Toda la inmunoglobulina fraccionada y/o aislada a partir de los sueros y usada para infusión intravenosa contiene poca o ninguna IgA medible que pueda explicar la incapacidad de la inmunoglobulina para proteger las superficies de las mucosas (p. ej., lo que da lugar a un aumento de la infección del tracto respiratorio superior en pacientes inmunodeficientes que reciben IGIV convencional). Por lo tanto, una composición de hiper-inmunoglobulina descrita en la presente memoria que contiene una alta concentración de anticuerpos anti-S. pneumoniae opsónicos ampliamente reactivos (p. ej., proporcionados en una composición de hiper-inmunoglobulina descrita en la presente memoria) puede permitir la difusión por gradiente de concentraciones más altas de IgG antineumocócica opsónica funcional ampliamente reactiva a través de las membranas de mucosas, lo que brinda protección de la mucosa y reduce la incidencia de infección de las vías respiratorias superiores (p. ej., en comparación con IGIV convencional que no tiene una alta concentración de anticuerpos anti-S. pneumoniae opsónicos ampliamente reactivos y, por lo tanto, mucha menos o ninguna difusión de gradiente, lo que da lugar a una alta incidencia de infección del tracto respiratorio superior en pacientes inmunocomprometidos tratados con IGIV convencional)).

Por lo tanto, la hiper-inmunoglobulina preparada de acuerdo con cualquiera de los métodos descritos en la presente memoria puede contener un título elevado de anticuerpos opsónicos específicos para 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 o más diferentes serotipos de S. pneumoniae que incluyen, pero no se limitan a, los serotipos 1,2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7A, 7B, 7C, 7D, 7E, 7F, 8, 9A-9V, 12, 14, 18C, 19A-19F, 23A-23F y 25. La agrupación de sueros de donantes vacunados proporciona los niveles deseados (p. ej., niveles terapéuticos y/o profilácticamente protectores) de IgGs opsónicas ampliamente reactivas contra todos los serotipos presentes en una o más vacunas utilizadas para vacunar donantes de plasma humano adultos sanos (p. ej., a pesar de cualquier variación serotipo a serotipo y/o grado de dilución durante la agrupación). Por consiguiente, cualquier diferencia individual en la concentración de la IgG opsónica específica de serotipo se puede normalizar sin comprometer los niveles protectores de estos anticuerpos a través de la agrupación de sueros. La purificación de la inmunoglobulina a partir del suero no dio como resultado ningún déficit en ningún serotipo neumocócico de la IgG opsónica específica ni en sus actividades funcionales.

Preparación de Inmunoglobulina Purificada. Se puede preparar inmunoglobulina purificada que tenga un alto título de anticuerpos opsónicos específicos para neumococo. El término “alto título” en este contexto significa la presencia de un anticuerpo en una cantidad que es 2 veces mayor (p. ej., hasta 10-20 o más veces mayor que la encontrada en una población normal de 1.000 muestras aleatorias).

El producto sanguíneo se puede preparar mediante (i) selección y purificación de la inmunoglobulina de un donante que ha sido vacunado (p. ej., a través de un proceso de la invención) y tiene altos títulos de anticuerpos opsónicos específicos para neumococo, o (ii) la combinación de inmunoglobulina de donante de una multitud de individuos (p. ej., 100, 200, 200-500, 500-1.000 o 1.000 o más sujetos) que han sido vacunados de acuerdo con un método de la invención.

Puede ser preferible identificar y mantener un grupo consistente de donantes a través de la extracción repetida de pequeñas cantidades de sangre, por ejemplo, una extracción de sangre una vez al mes para los seres humanos. La frecuencia de la extracción puede influir en la cantidad máxima de sangre a lo largo del tiempo sin causar detrimento a la salud del donante. Esto puede dictar la extracción de pequeñas cantidades con gran frecuencia, o la máxima cantidad posible con una frecuencia reducida. El volumen de sangre del donante se puede estimar mediante fórmulas estándar disponibles en el Centro de Control de Enfermedades. Los métodos de recolección de sangre y plasma son generalmente estándar y bien conocidos por aquellos expertos en la técnica. Se puede usar cualquier método que logre los resultados deseados.

Después del aislamiento del plasma, la inmunoglobulina (anticuerpos) se puede purificar separada de otros productos celulares. Esto se puede lograr a través de una variedad de procedimientos de aislamiento de proteínas, conocidos por aquellos expertos en la técnica de la purificación de inmunoglobulinas, como el fraccionamiento de Cohn, el intercambio iónico, la purificación por afinidad, etc. Los medios para preparar y caracterizar anticuerpos son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, las muestras de suero se pueden pasar a través de columnas de proteína A o proteína G sepharosa para unir la IgG (dependiendo del isotipo). Los anticuerpos unidos se pueden eluir entonces con, p. ej., un tampón citrato pH 5,0. Las fracciones eluidas que contienen los Abs se dializan frente a tampón isotónico. De modo alternativo, el eluido también se pasa a través una columna de anti-inmunoglobulina sepharosa. El anticuerpo se puede eluir entonces con cloruro de magnesio 3,5 M. Los anticuerpos purificados de esta forma se pueden probar por su actividad de unión, por ejemplo, un ELISA específico de isotipo y ensayo de tinción de inmunofluorescencia de las células diana, o por su actividad opsónica (opsonofagocítica) (p. ej., usando uno o más de los ensayos de muerte opsónica descritos en la presente memoria).

Cuando se extraen y mezclan muestras de plasma (p. ej., de una pluralidad de sujetos (p. ej., 100, 200, 200-500, 500 1.000, 1.000 o más sujetos) inmunizados de acuerdo con los métodos descritos en la presente memoria), el plasma mezclado o la inmunoglobulina obtenida (p. ej., aislada y/o fraccionada) del mismo contiene títulos de anticuerpos seroprotectores contra el sarampión, difteria y/o polio (p. ej., contienen títulos de anticuerpos contra el sarampión, difteria y/o polio que proporcionan a un sujeto administrado la composición de plasma mezclada o la inmunoglobulina obtenida a partir de los mismos niveles séricos de anticuerpos específicos para el sarampión, difteria y polio para prevenir o proteger de la infección con los mismos). Cuando las muestras de plasma se mezclan de una pluralidad de sujetos vacunados, el plasma mezclado o la inmunoglobulina obtenida (p. ej., fraccionada) del mismo puede contener títulos de anticuerpos seroprotectores contra el sarampión, la difteria, la poliomielitis y/o el tétanos (p. ej., contienen títulos de anticuerpos contra el sarampión, la difteria, la poliomielitis y/o el tétanos que proporcionan a un sujeto al que se le administró la composición de plasma mezclado o la inmunoglobulina obtenida a partir de los mismos, niveles séricos de anticuerpos específicos para para el sarampión, difteria, polio y/o tétanos para prevenir o proteger de la infección con los mismos (p. ej., cumple con los niveles de título de anticuerpos recomendados por la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos (p. ej., para el tratamiento de la enfermedad de inmunodeficiencia y/o el tratamiento o prevención de la infección en un sujeto inmunodeficiente)). El plasma mezclado/agrupado puede comprender muestras de plasma obtenidas de 1.000-3.000 o más (p. ej., más de 1.000, 1.250, 1.500, 1.750, 2.000, 2.500, 3.000, 3.500, 4.000 o más sujetos humanos). El plasma agrupado se puede utilizar para preparar inmunoglobulina (p. ej., para administración intravenosa a un sujeto). El plasma agrupado y/o la inmunoglobulina puede proporcionar un beneficio terapéutico a un sujeto al que se le administró el plasma agrupado y/o la inmunoglobulina que no se puede lograr a través de la administración de una mezcla de muestras de plasma (o inmunoglobulina preparada de las mismas) obtenidas de 1.000 o más sujetos humanos aleatorios. No hay limitación por el tipo de beneficio terapéutico proporcionado. De hecho, se pueden obtener una variedad de beneficios terapéuticos, que incluyen los descritos en la presente memoria, (p. ej., el tratamiento de la infección neumocócica (p. ej., infecciones del tracto respiratorio superior)). El plasma agrupado y/o la inmunoglobulina pueden poseer propiedades opsonofagocíticas antineumocócicas mejoradas en comparación con una mezcla de muestras de plasma obtenida de 1.000 o más sujetos humanos aleatorios o inmunoglobulina preparada a partir de las mismas. Por ejemplo, el plasma agrupado posee propiedades opsonofagocíticas antineumocócicas mejoradas contra diez o más serotipos neumocócicos diferentes (p. ej., 10, 10-20, 20-30 o más serotipos). Las propiedades opsonofagocíticas antineumocócicas mejoradas pueden reducir y/o prevenir la infección en un sujeto al que se le administró la composición durante un periodo de tiempo que es más largo que, y no alcanzable en un sujeto al que se le administró una mezcla de muestras de plasma obtenidas de 1.000 o más sujetos humanos aleatorios (p. ej., no vacunados). El plasma agrupado y/o la inmunoglobulina preparada a partir del mismo pueden reducir la incidencia de infección en un sujeto al que se le administró la composición. Un plasma agrupado y/o inmunoglobulina preparada a partir del mismo puede reducir el número de días que requiere un sujeto al que se le administró el plasma y/o inmunoglobulina para recibir antibióticos (p. ej., para tratar la infección). Un plasma agrupado y/o inmunoglobulina preparada a partir del mismo puede aumentar el nivel mínimo de anticuerpos antineumocócicos opsonofagocíticos circulantes en un sujeto (p. ej., puede aumentar el nivel del título de anticuerpos anti-opsonofagocíticos específico para diez o más serotipos neumocócicos (p. ej., proporcionando así niveles protectores de anticuerpos antineumocócicos opsonofagocíticos entre las fechas programadas de administración del plasma agrupado y/o inmunoglobulina preparada a partir del mismo que no se mantienen en un sujeto al que se le administró una mezcla de muestras de plasma obtenida de 1.000 o más sujetos humanos aleatorios o inmunoglobulina preparada a partir del mismo)). La composición que comprende muestras de plasma agrupadas puede comprender además un transportador farmacéuticamente aceptable (p. ej., cualquier transportador o transportadores naturales o no naturales conocidos en la técnica). Un sujeto al que se le administró inmunoglobulina preparada a partir de plasma agrupado como se describe en la presente memoria puede mostrar un aumento medio en el título de anticuerpos antineumocócicos opsonofagocíticos que es al menos 2 veces, 3 veces, 4 veces, al menos 5 veces, al menos 6 veces, al menos 7 veces, al menos 8 veces, al menos 9 veces o más en un punto de tiempo de al menos 1 a 14 días después de la administración (p. ej., 14 días, 15 días, 16 días, 17 días, 18 días, 19 días o más) de la inmunoglobulina. No hay limitación por la cantidad de inmunoglobulina administrada a un sujeto. A un sujeto se le puede administrar entre 100-5.000 mg/kg de inmunoglobulina una vez, o diariamente durante dos o más días (p. ej., 2, 3, 4 o más días consecutivos). Tales dosis se pueden administrar de forma intermitente, p. ej., cada semana, cada dos semanas, cada tres semanas, cada cuatro semanas, etc. A un sujeto se le puede administrar entre 750-1.500 mg/kg de inmunoglobulina el primer día y entre 750-1.500 mg/kg de inmunoglobulina el día 2. A un sujeto se le pueden administrar 1.500 mg/kg de inmunoglobulina el primer día y 750 mg/kg de inmunoglobulina el día 2. A un sujeto se le pueden administrar 750 mg/kg de inmunoglobulina el primer día y 750 mg/kg de inmunoglobulina el día 2. A un sujeto se le puede administrar inmunoglobulina el primer día, opcionalmente se le administra inmunoglobulina el día 2 y luego se le vuelve a administrar inmunoglobulina cada 21 días. A un sujeto se le puede administrar inmunoglobulina el primer día, opcionalmente se le administra inmunoglobulina el día 2 y luego se le vuelve a administrar inmunoglobulina cada 28 días. El plasma agrupado y/o la inmunoglobulina preparada a partir del mismo puede reducir la incidencia de infección neumocócica en un sujeto al que se le administró la composición. Un plasma agrupado y/o la inmunoglobulina preparada a partir del mismo puede aumentar el nivel mínimo de anticuerpos antineumocócicos opsonofagocíticos circulantes y aumenta el nivel mínimo de anticuerpos anti-sarampión, anti-difteria, anti-polio y/o anti-tétanos específicos en un sujeto (p. ej., aumenta el nivel de títulos de anticuerpos antineumocócicos opsonofagocíticos específicos para serotipos neumocócicos y sarampión, difteria, poliomielitis y/o tétanos (p. ej., proporcionando así niveles protectores de anticuerpos antineumocócicos opsonofagocíticos y anticuerpos anti-sarampión, anti-diftéricos, anti-poliomielíticos y/o anti-tetánicos específicos entre las fechas programadas de administración del plasma agrupado y/o inmunoglobulina preparada a partir del mismo que no se mantienen en un sujeto al que se le administra una mezcla de muestras de plasma obtenidas de 1.000 o más sujetos humanos aleatorios (p. ej., sujetos no vacunados) o inmunoglobulina preparada a partir del mismo)).

Las muestras de plasma y/o anticuerpos pueden comprender muestras de fluidos corporales donadas y/o compradas, por ejemplo muestras individuales de sangre o componentes sanguíneos (p. ej., plasma). Estas muestras se pueden purificar y/o examinar para detectar la presencia de patógenos u otras impurezas (p. ej., antes o después de la agrupación). Las muestras de anticuerpos de donantes múltiples (p. ej., muestras de plasma de donantes u otras muestras que contienen anticuerpos) se pueden agrupar para crear una muestra de plasma agrupado. Las muestras de anticuerpo agrupado se pueden purificar, examinar y/o concentrar. La agrupación de muestras (p. ej., más de 1.000 o más muestras) puede producirse de una manera que use el menor número posible de muestras (p. ej., generadas por las composiciones y métodos descritos en la presente memoria) pero que aún mantenga el nivel deseado, estandarizado y elevado de anticuerpos antineumocócicos opsonofagocíticos.

Como se describe en la presente memoria, se puede utilizar plasma de sujetos a los que se les han administrado sustancias inmunogénicas (p. ej., vacunas) con el fin de generar niveles elevados de anticuerpos antineumocócicos opsonofagocíticos dentro del sujeto. Las vacunas que se utilizan se describen en las reivindicaciones.

Se puede utilizar cualquier vía/tipo de inmunización, que incluyen, pero no se limitan a, los métodos descritos en las Patentes de los EE.UU. con Nos de publicación US2008026002; US2007009542; US2002094338; US2005070876; US2002010428; US2009047353; US2008066739 y US2002038111). De la misma manera, no hay limitación por la formulación de la vacuna utilizada (p. ej., de una vacuna contra S. pneumoniae). De hecho, se puede utilizar cualquier formulación, que incluye, pero no se limita a, las descritas en el documento US2002107265. La vacuna puede ser una vacuna multivalente a la que se añaden antígenos adicionales (Véanse, p. ej., los documentos US2007161088; US2006121059). Los antígenos se pueden purificar antes de su uso en una vacuna (p. ej., una vacuna conjugada) (Véase, p. ej., el documento US2008286838). Los métodos de cultivo de microorganismos útiles en un proceso de fabricación de vacunas antineumocócicas conjugadas se describen en el documento US2010290996. De manera alternativa, se utilizan antígenos (p. ej., antígenos de S. pneumoniae) que no están conjugados con una proteína transportadora (Véase, p. ej., el documento US 2009136547). Se pueden utilizar inmunomoduladores (Véanse, p. ej., los documentos US2004156857; US5985264 y WO11041691). Se pueden producir anticuerpos terapéuticos en un donante al que se le administre un antígeno (p. ej., un antígeno de S. pneumoniae) y/o una vacuna de acuerdo con los métodos descritos en los documentos WO05070458; US2009191217 y WO10094720. Los antígenos (p. ej., vacunas (p. ej., vacunas conjugadas o no conjugadas)) se pueden utilizar para generar anticuerpos (p. ej., presentes en suero y/o plasma) que son útiles contra microorganismos de enfermedades infecciosas (p. ej., como se describe en, por ejemplo, los documentos US2003099672; WO0062802).

Se puede usar una vacuna de polisacáridos (p. ej., que contenga múltiples serotipos de S. pneumoniae (p. ej., que contenga polisacáridos purificados de 1,2, 3, 4 o más o todos los 23 de los siguientes serotipos de S. pneumoniae: 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19F, 19A, 20, 22F, 23F y 33F). Un antígeno (p. ej., un antígeno de S. pneumoniae) o una vacuna que estimula a las células B (p. ej., células plasmáticas) pueden encontrar uso para generar y secretar inmunoglobulina específica (p. ej., específica de S. pneumoniae) sin la asistencia de las células T.

Se puede utilizar una vacuna conjugada que contenga polisacáridos capsulares (p. ej., de una pluralidad de serotipos de S. pneumoniae) que esté unida covalentemente a un transportador y/o adyuvante (p. ej., el toxoide de difteria CRM197). Cualquier antígeno (p. ej., antígeno de S. pneumoniae) o vacuna que estimule a las células B (p. ej., células plasmáticas) pueden encontrar uso para generar y secretar inmunoglobulina específica (p. ej., específica de S. pneumoniae) (p. ej., IgM y/o IgG específica de S. pneumoniae) a través de la interacción con células T auxiliares específicas de tipo 2) y/o producción de células B memoria (p. ej., células B memoria específicas de S. pneumoniae).

Se describen, pero no forman parte de la invención, métodos para estimular altos niveles de anticuerpos antineumocócicos opsonofagocíticos en un donante, lo que incluye administrar a un animal, por ejemplo, un ser humano, una composición farmacéuticamente aceptable que comprende una cantidad inmunológicamente eficaz de una composición de antígenos (p. ej., una composición de antígenos de S. pneumoniae). La composición puede incluir antígenos parcial o significativamente purificados (p. ej., antígenos de S. pneumoniae (p. ej., epítopos polisacáridos, proteínas y/o péptidos obtenidos de fuentes naturales o recombinantes que se pueden obtener o bien de forma natural o sintetizarse químicamente, o de manera alternativa, productos in vitro a partir de células huésped recombinantes que expresan segmentos de ADN que codifican dichos epítopos)).

Se conocen en la técnica métodos para determinar la eficacia de la inmunización (p. ej. determinar el nivel de los títulos de anticuerpos específicos de S. pneumoniae) y se puede utilizar cualquier método conocido para evaluar la eficacia de la inmunización (p. ej., la eficacia de inducir anticuerpos antineumocócicos opsonofagocíticos (p. ej., un ensayo de muerte opsonofagocítica descrito en la presente memoria)). Se pueden usar los métodos de detección para la evaluación de la eficacia de una vacuna (p. ej., una vacuna antineumocócica conjugada) como se describe, por ejemplo, en los documentos US2005260694; US4308026; US4185084 o US2005208608.

Se describen, pero no forman parte de la invención, kits y métodos que identifican muestras y/o pooles con títulos de anticuerpos específicos (p. ej., títulos de anticuerpos antineumocócicos opsonofagocíticos que están elevados). Se puede inmovilizar una cantidad adecuada de reactivo de detección (p. ej., anticuerpo específico para anticuerpos, un antígeno u otro reactivo conocido en la técnica) en un soporte sólido y marcarse con un agente detectable. Los anticuerpos se pueden inmovilizar a una variedad de sustratos sólidos por métodos conocidos. Los sustratos de soporte sólido adecuados incluyen materiales que tienen una membrana o recubrimiento soportado por barras, perlas, pocillos, paquetes planos u otros soportes sólidos. Otros sustratos sólidos incluyen placas de cultivo celular, placas de ELISA, tubos y membranas poliméricas. Los anticuerpos se pueden marcar con un agente detectable como un fluorocromo, una sonda radioactiva, biotina u otra enzima, como peroxidasa de rábano picante, fosfatasa alcalina y 2-galactosidasa. Si el reactivo de detección es una enzima, se puede suministrar un medio para detectar el reactivo de detección con el kit. Un método adecuado para detectar un agente detectable emplea una enzima como agente detectable y un sustrato enzimático que cambia de color al ponerse en contacto con la enzima. El kit también puede contener un medio para evaluar el producto del ensayo, por ejemplo, una tabla de colores o una tabla de referencia numérica. Se proporcionan algunos métodos adecuados para caracterizar muestras y pooles con un título elevado en la presente memoria en las referencias citadas. No hay limitación por el método usado para caracterizar las muestras y pooles que tienen títulos elevados. También se pueden usar ensayos para determinar el nivel de anticuerpos antineumocócicos opsonofagocíticos en plasma, inmunoglobulina y/o pooles de los mismos (p. ej., como se describe en los Ejemplos).

Se describen, pero no forman parte de la invención, composiciones (p. ej., muestras de anticuerpos, muestras de plasma agrupado, inmunoglobulinas, etc.) en las que se han purificado y/o aislado los anticuerpos de uno o más contaminantes. Las inmunoglobulinas humanas se aislaron por primera vez a gran escala durante la década de 1.940 por F. J. Cohn. Las técnicas proporcionadas por Cohn (Cohn y cols., J. Am. Chem. Soc. 1946; 68: 459-475) o las técnicas de Cohn modificadas se pueden utilizar en la preparación de inmunoglobulinas en la presente memoria. Se pueden utilizar varios métodos de purificación y aislamiento para producir moléculas de inmunoglobulina sustancialmente sin modificar, alterar o desnaturalizar y/o nativas de alta pureza. Se proporcionan técnicas ejemplares, por ejemplo, en la Patente de EE.UU. N°. 4.482.483. Las composiciones (p. ej., pooles de anticuerpos) pueden comprender >50% de inmunoglobulina (p. ej., >60%, >70%, >80%, >90%, >95%, >99%). Se pueden utilizar varios métodos para producir tales composiciones, que incluyen, por ejemplo, técnicas estándar de purificación y aislamiento de proteínas, así como el fraccionamiento de fluidos biológicos (p. ej., plasma). Las descripciones del fraccionamiento de anticuerpos para su uso en inmunoterapia se encuentran, por ejemplo, en la Patente de EE.UU. N°. 4.346.073 y otras referencias proporcionadas en la presente memoria. Las inmunoglobulinas se pueden purificar mediante un método de precipitación fraccionada, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de exclusión por tamaño, ultrafiltración, cromatografía de afinidad o cualquier combinación adecuada de estas (Véanse, p. ej., los documentos de Patente de EE.UU. N°. 7.597.891; Patente de EE.UU. N°. 4.256.631; Patente de EE.UU. N°. 4.305.870; Lullau y cols., J. Biol. Chem. 1996; 271: 16300-16309; Corthesy, Biochem. Soc. Trans. 1997; 25: 471-475; y Crottet y cols., Biochem. J. 1999; 341: 299-306).

Se describe, pero no forma parte de la invención, una composición (p. ej., plasma agrupado y/o inmunoglobulina preparada a partir del mismo) que se puede administrar por cualquier medio adecuado, que incluye, administración parenteral, subcutánea, intraperitoneal, intrapulmonar, y, si se desea para tratamiento local, intralesional. Las infusiones parenterales incluyen administración intramuscular, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal o subcutánea. Además, las composiciones se pueden administrar por infusión de pulso, particularmente con dosis crecientes. La dosificación puede ser por cualquier vía adecuada, p. ej., mediante inyecciones, como inyecciones intravenosas o subcutáneas, dependiendo en parte de si la administración es aguda o crónica.

Una composición se puede formular, dosificar y/o administrar de una manera consistente con la buena práctica médica. Los factores que considerar en este contexto incluyen el trastorno particular que se está tratando, la condición clínica del paciente individual, la causa del trastorno, el sitio de distribución del agente, el método de administración, la programación de la administración y otros factores conocidos por los médicos. Las composiciones no necesitan ser, aunque opcionalmente, formuladas con uno o más agentes usados actualmente para prevenir o tratar el trastorno en cuestión. La cantidad eficaz de tales otros agentes depende de la cantidad de anticuerpos presentes en la formulación, el tipo de trastorno o tratamiento y otros factores discutidos anteriormente. Estos se usan generalmente en las mismas dosis y con las vías de administración descritas en la presente memoria, o aproximadamente del 1 al 99% de las dosis descritas en la presente memoria, o en cualquier dosis y por cualquier vía que se determine empírica/clínicamente que sea apropiada.

Para la prevención o el tratamiento de la enfermedad, la dosis adecuada de una composición (cuando se usa sola o en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales) puede depender de una serie de factores que incluyen el tipo de enfermedad a tratar, el tipo de anticuerpo, el tamaño del paciente, el área de superficie corporal, la edad, el compuesto particular a administrar, sexo, tiempo y vía de administración, salud general, interacción con otros fármacos que se administran simultáneamente, la gravedad y curso de la enfermedad, si el anticuerpo se administra con fines preventivos o terapéuticos, terapia previa y la historia clínica del paciente.

El médico individual puede determinar una dosis exacta en vista del paciente a tratar. La dosis y la administración se ajustan para proporcionar niveles suficientes de la fracción activa (p. ej., pool de plasma) o para mantener el efecto deseado. Otros factores que se pueden tener en cuenta incluyen la gravedad del estado de la enfermedad, edad, peso y sexo del paciente, dieta, tiempo y frecuencia de administración, combinación(es) de fármacos, sensibilidades de reacción y tolerancia/respuesta al tratamiento. Las composiciones farmacéuticas de acción prolongada se pueden administrar cada 3 o 4 días, cada semana, o una vez cada dos semanas, cuatro semanas, seis semanas, ocho semanas o más, dependiendo de la vida media y la tasa de aclaramiento de la formulación en particular.

Se puede administrar una composición al paciente a una sola vez o durante una serie de tratamientos. Dependiendo del tipo y de la gravedad de la enfermedad, aproximadamente de 1 mg/kg a 5.000 mg/kg (p. ej., 0,5 mg/kg-1.500 mg/kg) de una composición puede ser una dosis candidata inicial para su administración al paciente, ya sea, por ejemplo, por una o más administraciones separadas o por infusión continua. Como se describe en la presente memoria, se pueden administrar simultáneamente fármacos o agentes adicionales (p. ej., antimicrobianos (p. ej., antibióticos, antivirales, antifúngicos, etc.), otras composiciones de inmunoglobulina (p. ej., IGIV convencional), antiinflamatorios y/o compuestos curativos, etc.) simultáneamente con una composición de plasma agrupado como se describe en la presente memoria. Una dosis diaria ejemplar de dicho agente puede variar de aproximadamente 1 mg/kg a 100 mg/kg o más. Para administraciones repetidas durante varios días o más, dependiendo de la afección, generalmente se puede mantener el tratamiento hasta que ocurra una supresión deseada de los síntomas de la enfermedad. Una dosis ejemplar de una composición estaría en el intervalo de aproximadamente 0,05 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg. Por lo tanto, se puede administrar a un paciente una o más dosis de aproximadamente 0,5 mg/kg, 2,0 mg/kg, 4,0 mg/kg o 10 mg/kg (o cualquier combinación de estas). Dichas dosis se pueden administrar de forma intermitente, p. ej., cada semana o cada dos o tres semanas. Un profesional médico es capaz de controlar fácilmente la administración terapéutica de una composición y, a su vez, puede determinar si se deben administrar dosis más altas o más bajas de la composición.

Las composiciones se pueden administrar (p. ej., por vía intravenosa, oral, intramuscular, subcutánea, etc.) a un paciente en un transportador farmacéuticamente aceptable, como la solución salina fisiológica. Tales métodos son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica.

Por consiguiente, una composición se puede administrar a un paciente solo, o en combinación con otros medicamentos o en composiciones farmacéuticas donde se mezcla con excipientes u otros transportadores farmacéuticamente aceptables. El transportador farmacéuticamente aceptable puede ser farmacéuticamente inerte. Dependiendo de la afección que se esté tratando, las composiciones farmacéuticas se pueden formular y administrar sistémica o localmente. Las técnicas de formulación y administración se pueden encontrar en la última edición de “Remington’s Pharmaceutical Sciences” (Mack Publishing Co, Easton Pa.). Las vías adecuadas pueden incluir, por ejemplo, la administración oral o transmucosal; así como la distribución parenteral, que incluye administración intramuscular, subcutánea, intramedular, intratecal, intraventricular, intravenosa, intraperitoneal o intranasal.

Para la inyección, una composición se puede formular en soluciones acuosas, preferiblemente en tampones fisiológicamente compatibles como la solución de Hanks, la solución de Ringer o la solución salina fisiológicamente tamponada. Para la administración tisular o celular, se usan en la formulación penetrantes apropiados para la barrera en particular a penetrar. Tales penetrantes son generalmente conocidos en la técnica.

Las composiciones (p. ej., composiciones farmacéuticas) se pueden formular usando transportadores farmacéuticamente aceptables bien conocidos en la técnica en dosis adecuadas para la administración oral. Tales transportadores permiten que las composiciones farmacéuticas se formulen como tabletas, píldoras, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, composición fluida, suspensiones y similares, para la ingestión oral o nasal por parte de un paciente a tratar.

Las composiciones farmacéuticas adecuadas para su uso como se describe en la presente memoria incluyen composiciones en las que los ingredientes activos están contenidos en una cantidad eficaz para lograr el propósito previsto. Por ejemplo, una cantidad eficaz de una composición puede ser esa cantidad que da como resultado la inhibición del crecimiento y/o muerte de bacterias en un sujeto. La determinación de las cantidades eficaces está dentro de la capacidad de los expertos en la técnica, especialmente a la luz de la descripción proporcionada en la presente memoria.

Además de los ingredientes activos, las composiciones farmacéuticas pueden contener transportadores aceptables adecuados que comprenden excipientes y auxiliares que facilitan el procesamiento de las composiciones en preparaciones que se pueden usar farmacéuticamente.

Las composiciones farmacéuticas se pueden fabricar de una manera que se conoce en sí misma (p. ej., mediante procesos convencionales de mezcla, disolución, granulación, fabricación de grageas, levigación, emulsión, encapsulación, atrapamiento o liofilización).

Las formulaciones farmacéuticas para administración parenteral incluyen soluciones acuosas de las composiciones en forma soluble en agua. Además, las suspensiones de las composiciones se pueden preparar como suspensiones de inyección oleosas apropiadas. Los disolventes o vehículos lipofílicos adecuados incluyen aceites grasos como el aceite de sésamo o ésteres de ácidos grasos sintéticos, como oleato de etilo o triglicéridos, o liposomas. Las suspensiones de inyección acuosas pueden contener sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión, como carboximetilcelulosa de sodio, sorbitol o dextrano. Opcionalmente, la suspensión también puede contener estabilizadores o agentes adecuados que aumenten la solubilidad de las composiciones para permitir la preparación de soluciones altamente concentradas.

Las composiciones formuladas en un transportador farmacéutico aceptable se pueden preparar, colocar en un recipiente apropiado y etiquetarse para el tratamiento de una afección indicada. Las condiciones indicadas en la etiqueta pueden incluir tratamiento o prevención de una infección viral o bacteriana.

La composición farmacéutica se puede proporcionar como una sal y se puede formar con muchos ácidos, que incluyen, pero no se limitan a, clorhídrico, sulfúrico, acético, láctico, tartárico, málico, succínico, etc. Las sales tienden a ser más solubles en disolventes acuosos u otros disolventes protónicos que son las formas de base libre correspondientes. En otros casos, la preparación preferida puede ser un polvo liofilizado en histidina 1 mM-50 mM, sacarosa al 0,1%-2%, manitol al 2% a un intervalo de pH de 4,5 a 5,5 que se combina con tampón antes de su uso.

Las composiciones descritas en la presente memoria (p. ej., hiper-inmunoglobulina antineumocócica) se pueden combinar con agentes adicionales (p. ej., anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, moléculas similares a anticuerpos, anticuerpos monoclonales, antimicrobianos, otras composiciones de inmunoglobulinas (p. ej., IGIV convencional) u otras proteínas o moléculas pequeñas) para mejorar el efecto inmunoterapéutico y/o antinflamatorio. Dichos agentes adicionales se pueden producir de forma recombinante, sintético, in vitro, etc. No hay limitación por los tipos de agentes adicionales con los que se administra conjuntamente y/o combina una hiper-inmunoglobulina antineumocócica. Los anticuerpos recombinantes o sintéticos (p. ej., monoclonales humanizados) o fragmentos de anticuerpos (p. ej., dirigidos a un patógeno o antígeno específico) se pueden administrar conjuntamente y/o añadir. Además, los anticuerpos (p. ej., monoclonales, policlonales, etc.) específicos para bacterias y virus se pueden administrar conjuntamente y/o añadir en las composiciones. Varios agentes terapéuticos (p. ej., agentes antiinflamatorios, quimioterapéuticos), estabilizantes, tampones, etc. se pueden administrar conjuntamente y/o añadir a la hiperinmunoglobulina antineumocócica, por ejemplo, para mejorar aún más la eficacia, la estabilidad, la administrabilidad, la duración de la acción, el intervalo de usos, etc. Una hiper-inmunoglobulina antineumocócica se puede administrar conjuntamente con una IGIV convencional (p. ej., a un paciente con enfermedad de inmunodeficiencia primaria (p. ej., para tratar (p. ej., profiláctica y/o terapéuticamente) la infección (p. ej., causada por S. pneumoniae, Corynebacterium diphtheriae, virus del sarampión y virus de la polio)).

Las composiciones pueden contener opcionalmente transportadores tales como agentes conservantes, humectantes, emulsionantes y dispensadores. La prevención de la acción de los microorganismos se puede garantizar mediante diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico y similares. También puede ser deseable incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, cloruro de sodio y similares. La absorción prolongada de las inmunoglobulinas puede ser provocada por el uso de agentes que retrasan la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.

La hiper-inmunoglobulina antineumocócica se puede administrar a un sujeto para proporcionar beneficios terapéuticos, preventivos, profilácticos y/u otros.

Las enfermedades y afecciones para las cuales se puede usar la administración de la hiper-inmunoglobulina antineumocócica de manera terapéutica o profiláctica incluyen, pero no se limitan a: inmunodeficiencia variable común, deficiencia de IgA, infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), infecciones bacterianas y virales como la infección del tracto respiratorio con influenza, infección del tracto respiratorio con el virus respiratorio sincitial, infección del tracto respiratorio con rinovirus, infección del tracto respiratorio con adenovirus; infecciones por protozoos como giardiasis, infecciones por levaduras; leucemia linfocítica crónica; mieloma múltiple; macroglobulinemia; bronquitis crónica; bronquiectasis; asma; inmunosupresión asociada con trasplante de médula ósea; inmunosupresión asociada con la administración de ciclofosfamida; inmunosupresión asociada con la administración de azatiaprina; inmunosupresión asociada con la administración de metotrexato; inmunosupresión asociada con la administración de clorambucilo; inmunosupresión asociada con la administración de mostaza nitrogenada; inmunosupresión asociada con la administración de 6-mercaptopurina; inmunosupresión asociada con la administración de tioguanina; inmunodeficiencia combinada severa; deficiencia de adenosina desaminasa; deficiencias del Complejo Mayor de Histocompatibilidad I (síndrome de leucocito desnudo) y de clase II; deficiencia de purina nucleósido desaminasa; Síndrome de DiGeorge; hipogammaglobulinemia transitoria de la infancia; agammaglobulinemia ligada al X; agammaglobulinemia ligada al X con deficiencia de hormona del crecimiento; deficiencia de transcobalamina II; inmunodeficiencia con timoma; inmunodeficiencia con defecto hereditario de respuesta al virus de Epstein Barr; deficiencia de inmunoglobulina con aumento de IgM; deficiencia de cadena P; ataxia telangiectasia; inmunodeficiencia con albinismo parcial; secuelas de deficiencia selectiva de IgA como las debidas a la artritis reumatoide; artritis reumatoide juvenil; lupus eritematoso sistémico; tiroiditis; anemia perniciosa; dermatomiositis; anemia hemolítica de Coomb positivo; enfermedad de Addison idiopática; vasculitis cerebral y púrpura trombocitopénica idiopática.

Las composiciones y métodos descritos en la presente memoria pueden proporcionar beneficios antiinflamatorios cuando se administran a un sujeto. Se ha demostrado que las inmunoglobulinas agrupadas proporcionan una acción antiinflamatoria cuando se administran de manera pasiva (Véanse, p. ej., Nimmerjahn y Ravetch, Annu. Rev. Immunol.

2008. 26: 513-33; Ramakrishna y cols., Plos Pathogens 2011. 7: 6: e1002071). La hiper-inmunoglobulina antineumocócica puede ejercer un mayor efecto antiinflamatorio (p. ej., mejora del 10%, mejora del 20%, mejora del 50%, mejora de 2 veces, mejora de 3 veces, mejora de 5 veces, mejora de 10 veces, o más) en comparación con el efecto antiinflamatorio de una mezcla de muestras de plasma obtenida de sujetos humanos aleatorios (p. ej., 1.000 o más sujetos humanos aleatorios). La hiper-inmunoglobulina antineumocócica puede exhibir un efecto antiinflamatorio significativamente mayor en comparación con una IGIV convencional ya que la composición de plasma agrupado de la invención comprende plasma de al menos 1.000 donantes (p. ej., en comparación con una hiper-inmunoglobulina convencional preparada a partir de un número limitado de donantes (p. ej., cuanto mayor sea el número de diferentes muestras de plasma agrupadas, más beneficioso será el efecto antiinflamatorio (p. ej., cuanto mayor sea el beneficio histopatológico (p. ej., reducción de la muerte celular epitelial)) observado.

Se describen en la presente memoria, pero no forman parte de la invención, composiciones administradas solas, o las composiciones están preferiblemente presentes en una formulación farmacéutica que comprende al menos un ingrediente/agente activo, como se define anteriormente, junto con un soporte sólido o, alternativamente, junto con uno o más transportadores farmacéuticamente aceptables y opcionalmente otros agentes terapéuticos. Cada transportador debe ser “aceptable” en el sentido de que sea compatible con los demás ingredientes de la formulación y no perjudicial para el sujeto.

La hiper-inmunoglobulina antineumocócica proporcionada en la presente memoria puede comprender además uno o más agentes biológicamente activos. No hay limitación por el tipo de agente/material biológicamente activo. De hecho, se puede usar una variedad de agentes/materiales biológicamente activos, que incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos, material anti-toxina, agente antiinflamatorio, agente anticancerígeno, agente antimicrobiano, agente terapéutico, antihistamínico, citoquinas, quimioquinas, vitaminas, minerales o similares. El agente biológicamente activo puede ser un agente anti-toxina. El agente anti-toxina puede ser un anticuerpo monoespecífico, biespecífico o multiespecífico con especificidad hacia una toxina viral, bacteriana o fúngica. La toxina bacteriana o fúngica se puede seleccionar de la neurotoxina botulínica, toxina tetánica, toxina de E. coli, toxina de Clostridium difficile, toxina de Vibrio RTX, toxinas estafilocócicas, toxina cianobacteriana y micotoxinas. La composición inmunoterapéutica puede comprender además una alícuota de uno o varios anticuerpos monoclonales con una o múltiples especificidades (p. ej., a la composición inmunogénica se le puede haber añadido uno o más anticuerpos o material biológicamente activo (p. ej., un anticuerpo monoclonal de cualquier especificidad, un agente anti-toxina, etc.)). No hay limitación por el tipo de uno o más anticuerpos que se añaden (p. ej., añadido(s) a) la composición inmunogénica. De hecho, se pueden usar uno o más anticuerpos (p. ej., específicos para un patógeno o producto patogénico), que incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos estándar, anticuerpos biespecíficos, anticuerpos multiespecíficos, o similares conocidos en la técnica (p. ej., específico para uno o una multiplicidad de antígenos).

No hay limitación por el tipo de sujeto tratado. De hecho, una variedad de sujetos se pueden tratar de esta manera, que incluyen, pero no se limitan a, un sujeto en riesgo de desarrollar una infección (p. ej., infección del tracto respiratorio superior o de otro tipo (p. ej., reduciendo así el riesgo de desarrollar infección en un sujeto que tiene un riesgo elevado de infección)). Un sujeto tratado con una composición descrita es la presente memoria puede tener o estar diagnosticado con una enfermedad de inmunodeficiencia primaria (IDP). El sujeto puede ser un paciente con enfermedad renal en etapa terminal (ESRD); paciente con cáncer con terapia inmunosupresora, paciente con SIDA, paciente diabético, neonato, paciente trasplantado, paciente en terapia de inmunosupresión, paciente con IDP y otras inmunodeficiencias, paciente con mal funcionamiento del sistema inmune, paciente con enfermedad autoinmune, una persona mayor en un centro de atención prolongada, paciente con enfermedad autoinmune con terapia inmunosupresora, paciente trasplantado, paciente con procedimiento quirúrgico invasivo, paciente quemado u otro paciente en un entorno de cuidados intensivos.

Parte Experimental

Se proporcionan los siguientes ejemplos.

Ejemplo 1

Generación de donantes de plasma hiperinmune, suero hiperinmune e inmunoglobulina preparada a partir de este

Los experimentos se llevaron a cabo en un esfuerzo por generar donantes de plasma hiperinmune que tuvieran plasma/suero hiperinmune para una amplia variedad de serotipos neumocócicos. A continuación se proporciona un ejemplo no limitante de estos experimentos.

Se seleccionaron sujetos humanos sanos (hombres y mujeres) entre las edades de 18-45 años para la inmunización. En particular, se requirió que cada sujeto estuviera libre de cualquier afección médica conocida para participar en el estudio y participar como un donante de plasma humano vacunado.

A cada participante del estudio se le administró el siguiente régimen de vacunación: vacunación primaria/dosis de PREVNAR (PCV13) (inyección intramuscular de 0,5 ml de acuerdo con las instrucciones del fabricante) en el día 0, seguida de una vacunación secundaria de PNEUMOVAX23 (inyección intramuscular de 0,5 ml de acuerdo con las instrucciones del fabricante) a las 4 semanas. Se extrajo la sangre (10 ml) de cada participante en los siguientes puntos de tiempo: inmediatamente antes de la vacunación primaria con PREVNAR, inmediatamente después de la segunda vacunación con PNEUMOVAX23 a ls 4 semanas, a las 8 semanas, a las 10 semanas, a las 12 semanas y en la semana 16. Se prepararon las muestras de suero a partir de cada muestra de sangre, se alicuotaron y se almacenaron a -70 °C ± 10 °C. Se realizaron varios estudios (p. ej., descritos a continuación) con las muestras de suero.

Cuantificación de anticuerpos anti-neumocócicos de polisacárido (PS) específicos de serotipo (Pruebas de IgG). La IgG neumocócica específica de serotipo (ST) se cuantificó adoptando métodos previamente descritos (Véase, p. ej., Lai y cols., 2005 J Immunol Meth 296: 135-147). Brevemente, se conjugaron perlas de luminex espectralmente distintas con el polisacárido capsular (PS) neumocócico (Pnc) específico de ST obtenido de ATCC. Las muestras de suero de prueba se mezclaron con las perlas conjugadas con PS y se cuantificó la IgG específica de ST con el suero humano de referencia, 89SF. La concentración específica de serotipo en las muestras de suero se expresó en mg/ml.

Ensayo de muerte opsonofagocítica (OPK). Se probaron las concentraciones de anticuerpo funcionales (título) en las muestras de suero adoptando métodos previamente descritos (Véase, p. ej., Romero-Steiner y cols., 1997 Clin Diagn Lab Immunol. Jul; 4(4): 415-22). Brevemente, las células HL-60 (leucocitos promielocíticos humanos) diferenciadas en linaje polimorfonuclear (PMN) se usaron como células efectoras. Se usaron cepas vivas específicas de serotipo de S. pneumoniae como la diana y se usó complemento de cría de conejo (PELFREEZE, Inc, Rogers, AR) como fuente de complemento para la muerte opsonofagocítica. Los reactivos almacenados a 4 °C ± 2 °C se pusieron a temperatura ambiente antes de realizar el ensayo. Se añadieron 10 ml de HBSS (+) con Gelatina, en lo sucesivo conocido como tampón de ensayo, a cada pocillo de una placa de 96 pocillos, excepto para la fila A. Se añadieron 20 ml de sueros control de calidad sin diluir de los pocillos A1 a A3. Se añadieron 20 ml de material de muestra diluido a los pocillos A4 - A12. Los sueros QC y las muestras desconocidas se diluyeron en serie 1:2. Los pocillos de control del complemento y los pocillos de control de células tienen 10 ml de tampón de ensayo en este punto.

Se diluyó una solución bacteriana de S. pneumoniae de trabajo a una concentración de 8,0 x 105 colonias por 20 ml. Se añadieron 20 ml de la suspensión bacteriana a cada pocillo de la placa, incluyendo los pocillos de control. La placa se incubó durante 30 minutos a temperatura ambiente en un agitador de placas ajustado a 200 rpm. Se añadieron 10 ml de complemento de cría de conejo congelado a cada pocillo excepto al control de células. El control de células recibió 10 ml de tampón de ensayo en su lugar. La placa se incubó durante 15 minutos a temperatura ambiente en un agitador de placas ajustado a 200 rpm. Se añadieron 40 ml de HL60 diferenciadas a PMNs a cada pocillo en la placa. Se determinó la concentración de células de tal modo que se añadieron 100.000 células por pocillo. La placa se incubó durante 30 minutos a temperatura ambiente en un agitador de placas ajustado a 200 rpm.

Usando una pipeta multicanal, se añadieron simultáneamente 5 ml de cada pocillo de modo consecutivo a una placa de Petri de 150x15 mm que contenía Agar Chocolate. La placa estaba en ángulo para permitir que el volumen de la muestra corriera por la placa de agar en líneas paralelas. Las placas se incubaron durante toda la noche a 37 °C y 5% de CO². El día siguiente, se fotografiaron las placas y se contaron las unidades formadoras de colonias (UFCs). La muerte bacteriana se calculó como el porcentaje de muerte dentro de un pocillo (UFC por pocillo/UFC del control de complemento promedio * 100). El recíproco de la dilución que tiene >50% de muerte de la bacteria diana en comparación con el control del complemento se expresa como el título OPK. Dado que la primera dilución fue de 1:8, las muestras de suero sin ningún título se informaron como 1:4 para fines de cálculo informático.

Ejemplo 2

Identificación y caracterización de la respuesta de anticuerpos totales y funcionales específicos de serotipo neumocócico en individuos inmunizados

Se extrajo la muestra de suero individual en diferentes puntos temporales (inmediatamente antes de la vacunación primaria con PREVNAR, inmediatamente antes de la vacunación secundaria con PNEUMOVAX23 en la semana 4, en la semana 8, en la semana 10, en la semana 12 y en la semana 16) de los participantes del estudio. Los sueros se analizaron para determinar la concentración de IgG específica (ST) de serotipo neumocócico (Pnc) (Véase la prueba de IgG en el Ejemplo 1, arriba). Además de las muestras de suero individuales, se generó la muestra de suero agrupado agrupando una cantidad igual de sueros de cada participante antes y después de la semana 12, y también se caracterizaron las muestras de suero agrupado para evaluar el efecto de la agrupación en el resultado de la prueba de IgG. Además, se analizaron tanto las muestras de suero individuales como la del agrupado para detectar la respuesta de anticuerpos funcionales utilizando el ensayo de muerte opsonofagocítica (OPK) descrito en el Ejemplo 1.

Concentraciones/título de IgG específica de serotipo neumocócico. Se analizaron muestras de suero de cada individuo (n = 10) inmunizados con dosis inicial - recuerdo, con PREVNAR - PNEUMOVAX23 para IgG específica de ST Pnc. Los títulos de IgG específica de ST Pnc se muestran en la FIG. 1. Se registraron las variaciones entre donantes y de -ST para la respuesta IgG en las muestras de suero. Si bien se observó que 9/10 donantes montaban una respuesta de IgG robusta a los STs Pns, existen diferencias en las respuestas específicas de ST. Entre los donantes, 7/10 tuvieron concentraciones máximas de IgG a las 4 semanas después de la vacunación con PNEUMOVAX23 (respuesta de recuerdo con PNEUMOVAX23, ocho semanas después de la vacunación inicial) seguida de una caída gradual que se mantuvo varias veces por encima de la línea de base incluso en la semana 12. A pesar de estas variaciones, todos los donantes demostraron concentraciones de IgG específica ST Pnc por encima del nivel protector (>0,2 mg/ml) de inmunidad (Véase, p.ej., Balmer y cols., Clin Exp Immunol. 2003 Sep; 133(3): 364-9). La concentración de IgG en los sueros agrupados indicó un aumento de 2,2 - 30 veces de aumento en las concentraciones de IgG al final del periodo de estudio (semana 12) a partir del inicio (pre). Entre estos, se registró un aumento máximo en la respuesta de IgG para el serotipo ST 1 seguido de los serotipos ST 23F y ST 4. El serotipo ST 19A exhibió el menor aumento de veces de aumento en la concentración de IgG (2,2 veces) seguido del ST 3 (2,6 veces) y ST 14 (3,2 veces).

Título de anticuerpos funcionales/opsónicos (OPK). La FIG. 2 muestra los datos relativos al título OPK en los sueros de donantes específicos de varios STs Pnc. Los títulos OPK de línea de base van a la par con la concentración de IgG. Las veces de aumento en el título de anticuerpos funcionales osciló de 4-256 veces (Véase. FIG. 2). De manera sorprendente, se descubrió que la cantidad total de IgG (p. ej., mostrada en la FIG. 1) no se correlacionaba con la cantidad de anticuerpos opsónicos funcionales totales. Por ejemplo, el serotipo ST 14 tenía solo un aumento modesto en el título total de IgG (3,2 veces, Véase FIG. 1). Sin embargo, tuvo el mayor aumento en la respuesta funcional (título de anticuerpos opsónicos) de 256 veces sobre el valor de línea de base.

Ejemplo 3

Cuantificación de anticuerpos totales y funcionales de serotipo neumocócico en sueros humanos agrupados

Se extrajeron las muestras de suero de donantes de plasma humano vacunados (n = 34) a intervalos de un mes a partir de 1 mes antes de la vacunación hasta 5 meses después de la vacunación. A estos 6 puntos de tiempo, se agruparon las muestras de suero y se analizaron para la concentración de IgG específica ST Pnc (prueba de IgG) y de anticuerpos funcionales usando el OPK descrito en el Ejemplo 1 anterior. Se determinaron las concentraciones de anticuerpos (IgG y OPK específicos de serotipo) y las veces de aumento sobre la línea de base previa a la vacunación.

Las muestras de suero de individuos vacunados (inmunizados con dosis inicial - recuerdo con PREVNAR-PNEUMOVAX23) se agruparon en cada intervalo de 1 mes desde 1 mes antes de la vacunación hasta el mes 5 después de la vacunación, y se analizó el suero agrupado de cada punto de tiempo para IgG específica ST Pnc. El título de IgG específico ST Pnc en el suero de donante agrupado extraído a cada punto de tiempo se muestra en la FIG. 3. La concentración de IgG promedio en el suero agrupado después de la inmunización osciló entre 4,4 - 37,59 mg/ml. La reducción en las concentraciones globales de IgG en comparación con el punto final de la semana 12 posiblemente se debió a una caída gradual en los niveles de IgG después de la adición observada en la semana 4 después de la vacunación lo que dio como resultado una reducción de la concentración de IgG con el tiempo. Sin embargo, las veces de aumento en la concentración de IgG sobre la línea de base (Véase FIG. 4) indicó un patrón similar al mostrado en la FIG. 1 con la mayor respuesta a ST 1, ST 23F y ST 4.

OPK. Los títulos OPK en los sueros de donantes agrupado específicos para varios ST Pncs se muestran en la FIG. 5. El título OPK promedio posterior a la inmunización para ST 1 fue excepcionalmente alto (36.044), mientras que todos los demás STs tenían un título mínimo de un logaritmo más bajo. A pesar de que se registraron títulos OPK altos en las muestras de suero individuales analizadas en la semana 12 (Véase FIG. 2), los títulos no fueron un logaritmo más altos que los otros serotipos.

Ejemplo 4

Identificación y caracterización de anticuerpos totales y funcionales de serotipo neumocócico en IgG humana purificada

Las muestras de suero extraídas en diferentes puntos de tiempo de los participantes del estudio (n = 34) se agruparon en cada uno de los puntos de tiempo individuales (pre, semana 4, 8, 10, 12, 16 y mes 5) y se purificó la IgG a partir de las muestras agrupadas usando columnas de inmunoabsorción de proteína A estándar. La IgG purificada se analizó para la concentración de IgG específica de ST Pnc (prueba de IgG) y de anticuerpos funcionales usando OPK como se describe en el Ejemplo 1. Se caracterizaron las concentraciones de anticuerpos (IgG específica de serotipo) y el título de anticuerpos funcionales (OPK). Adicionalmente, se llevó a cabo la caracterización de los resultados con el fin de comprender la relación entre las técnicas in vitro y ex vivo a partir del análisis de regresión de los resultados individuales.

Concentraciones de IgG específicas de serotipo neumocócico. Las muestras de suero de individuos vacunados con el régimen de inmunización de dosis inicial - recuerdo con PREVNAR-PNEUMOVAX23 se agruparon en cada intervalo de 1 mes desde 1 mes antes de la vacunación hasta 5 meses después de la vacunación y el suero agrupado de cada punto de tiempo, y la IgG purificada. Los sueros agrupados se analizaron para IgG específica de ST Pnc. La IgG específica de ST Pnc de los sueros agrupados se muestra en la FIG. 6. La concentración de IgG promedio en los sueros agrupados post inmunes osciló entre 3,2 -23,3 mg/ml lo que daba como resultado una reducción de la concentración de IgG a lo largo del tiempo. Sin embargo, las veces de aumento en la concentración de IgG sobre la línea de base (Véase FIG. 4) indicó un patrón similar al mostrado en la FIG. 1 con la mayor respuesta a ST 1, ST 23F y ST 4.

OPK: El título OPK en los sueros de donantes agrupados específicos para varios ST Pncs se presenta en la FIG. 7. El título OPK promedio posterior a la inmunización osciló entre 213 y 5.826,7 con el título más alto para ST 7F (5.826,7), seguido de ST 23F (4.778,7) y ST 5 (4.096).

Ejemplo 5

Comparación del título OPK de serotipo presente en sueros humanos agrupados de donantes vacunados frente al título OPK de serotipo presente en la IVIG convencional, comercialmente disponible

Ensayo OPK. Se usó el ensayo OPK descrito en el Ejemplo 1 anterior. Brevemente, los reactivos almacenados a 4 ± 2 °C se llevaron a temperatura ambiente antes de realizar el ensayo. Se añadieron 10 ml de HBSS (+) con gelatina, en lo sucesivo conocido como tampón de ensayo, a cada pocillo de una placa de 96 pocillos, excepto para la fila A. Se añadieron 20 ml de sueros de control de calidad sin diluir a los pocillos A1 a A3. Se añadieron 20 ml de material de muestra diluido a los pocillos A4 - A12. Los sueros QC y las muestras desconocidas se diluyeron en serie 1:2. Los pocillos de control de complemento y los pocillos de control de células tienen 10 ml de tampón de ensayo en este punto.

Se diluyó una suspensión bacteriana de S. pneumoniae de trabajo a una concentración de 8,0 x105 colonias por 20 ml. Se añadieron 20 ml de la suspensión bacteriana a cada pocillo de la placa, incluidos los pocillos de control. La placa se incubó durante 30 minutos a temperatura ambiente en un agitador de placas ajustado a 200 rpm. Se añadieron 10 ml de complemento de cría de conejo congelado a cada pocillo excepto al control de células. El control de células recibió 10 ml de tampón de ensayo en su lugar. La placa se incubó durante 15 minutos a temperatura ambiente en un agitador de placas ajustado a 200 rpm. Se añadieron 40 ml de HL60 diferenciadas a PMNs a cada pocillo en la placa. Se determinó la concentración de células de tal modo que se añadieron 100.000 células por pocillo. La placa se incubó durante 30 minutos a temperatura ambiente en un agitador de placas ajustado a 200 rpm.

Usando una pipeta multicanal, se añadieron simultáneamente 5 ml de cada pocillo de modo consecutivo a una placa de petri de 150x15 mm que contenía Agar Chocolate. La placa estaba en ángulo para permitir que el volumen de la muestra corriera por la placa de agar en líneas paralelas. Las placas se incubaron durante toda la noche a 37 °C y 5% de CO². El día siguiente, se fotografiaron las placas y se contaron las unidades formadoras de colonias (UFCs). La muerte bacteriana se calculó como el porcentaje de muerte dentro del pocillo (UFC por pocillo/UFC del control de complemento promedio * 100).

La FIG. 8 muestra una comparación del título OPK específico de serotipo de anticuerpos funcionales/opsónicos presentes en sueros humanos agrupados de donantes vacunados frente al título OPK específico de serotipo de anticuerpos funcionales/opsónicos presentes en nueve IGIV aleatorias diferentes convencionales comercialmente disponibles. Cada columna representa un solo y único serotipo de S. pneumoniae. Cada fila representa una muestra única. Las muestras A-I representan IGIV convencional comercialmente disponible.

Como se muestra en la FIG. 8, se descubrió una pronunciada variabilidad en los títulos opsónicos específicos de serotipo en los lotes comerciales de IGIV. Se descubrió además que un título elevado a un serotipo no predecía ni se correlacionaba con un título elevado a ninguno de los otros serotipos, lo que sugiere que la respuesta individual aumentada no reflejaba una respuesta inmune mejorada general a S. pneumoniae sino más bien respuestas mejoradas esporádicas a serotipos muy específicos. En marcado contraste, se notó que los títulos de anticuerpos opsónicos observados usando la inmunoglobulina de donantes inmunizados estaban aumentados en todos los serotipos sin excepción. Además, hubo un aumento de 3-256 veces en el título de anticuerpos antineumocócicos opsónicos en la inmunoglobulina a partir de donantes inmunizados en comparación con los lotes comerciales de inmunoglobulina. Por lo tanto, las composiciones y métodos descritos en la presente memoria para generar composiciones (p. ej., composiciones de sangre, plasma y/o inmunoglobulina) que contienen un título elevado de anticuerpos antineumocócicos opsónicos específicos proporciona una composición homogénea que comprende títulos de anticuerpos antineumocócicos para todos los múltiples serotipos neumocócicos (p. ej., 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o más serotipos) y/o títulos de anticuerpos opsónicos significativamente elevados en comparación con la inmunoglobulina convencional comercial (p. ej., es decir, 2x, 3x, 4x, 5x, 6x, 7x, 8x, 9x, 10x o más el título de anticuerpos opsónicos).

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un método para preparar una inmunoglobulina que tenga un título de anticuerpos opsonofagocíticos de al menos 1:256 para el 50% o más de los serotipos de Streptococcus pneumoniae seleccionados de los serotipos 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F que comprende las etapas de:

(a) recolección no quirúrgica de plasma de donantes de plasma humano adultos sanos entre las edades de 18 a 60 años

(i) inmunizados con una inmunización primaria con una vacuna conjugada multivalente contra S. pneumoniae, definida además por lo siguiente:

- dicha vacuna incluye polisacárido capsular purificado de 13 serotipos de Streptococcus pneumoniae, más específicamente, 1,3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 19A, 19F, 18C y 23F, conjugado a una variante no tóxica de la toxina de difteria conocida como CRM197;

- una dosis de 0,5 ml de dicha vacuna conjugada contiene aproximadamente 2,2 microgramos (mg) de polisacárido de cada uno de los 12 serotipos 1, 3, 4, 5, 6A, 7F, 9V, 14, 19A, 19F, 18C y 23F, y aproximadamente 4,4 mg de polisacárido de serotipo 6B;

- la concentración total de dicha toxina de difteria es de aproximadamente 34 mg;

- la vacuna contiene polisorbato 80 al 0,02%, 0,125 mg de aluminio como adyuvante de fosfato de aluminio (AlPO4) y 5 ml de tampón succinato;

(ii) seguido por una inmunización de refuerzo con una vacuna polisacárida multivalente contra S. pneumoniae, definida además por lo siguiente:

- dicha vacuna polisacárida contiene antígeno polisacárido capsular de los siguientes 23 tipos de bacterias neumocócicas; 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C,19F, 19A, 20, 22F, 23F y 33F; y

- contiene 25 mg de cada antígeno por dosis y contiene un 0,25% de fenol como conservante;

(b) agrupar el plasma con el fin de obtener un plasma agrupado que contiene un título de anticuerpos opsonofagocíticos de al menos 1:256 para el 50% o más de serotipos de Streptococcus pneumoniae seleccionados de los serotipos 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F, en donde cada uno de los títulos de anticuerpos opsonofagocíticos es tres veces o superior al título de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para cada serotipo de S. pneumoniae presente en una muestra de control, en donde la muestra de control es inmunoglobulina preparada a partir de plasma agrupado a partir de donantes aleatorios de plasma humano no inmunizados; y

(c) preparar una inmunoglobulina a partir del plasma agrupado de acuerdo con la etapa (b).

2. El método de la reivindicación 1, que comprende además la etapa (d) que hace que la inmunoglobulina obtenida de acuerdo con la etapa (c) sea inyectable por vía intravenosa.

3. El método de la reivindicación 2, en donde la inmunoglobulina se proporciona en solución y se ajustan el pH y la fuerza iónica para que sea inyectable por vía intravenosa.

4. El método de la reivindicación 1, en donde el plasma agrupado de la etapa (b) contiene títulos elevados de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para el 50% o más de los serotipos de S. pneumoniae seleccionados de los serotipos 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F que son cinco veces o más altos que el título de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para cada serotipo de S. pneumoniae presente en la muestra de control.

5. El método de la reivindicación 1, en donde el plasma agrupado de la etapa (b) contiene títulos elevados de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para el 50% o más de los serotipos de S. pneumoniae seleccionados de los serotipos 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F que son diez veces o más altos que el título de anticuerpos opsonofagocíticos específicos para cada serotipo de S. pneumoniae presente en la muestra de control.