JP5668049B2 - 髄膜炎菌ｈ因子結合タンパク質および肺炎球菌糖結合体の組み合わせ - Google Patents

Description

この出願は、米国仮出願第６１／１６３，００５号（２００９年３月２４日出願）および同第６１／２７０，４０７号（２００９年７月７日出願）からの優先権を主張する。これらの出願の完全な内容は、参考として本明細書に援用される。

本発明は、混合ワクチン、特に結合体化肺炎球菌莢膜糖と髄膜炎菌ｆＨＢＰ抗原との両方を含有するものの分野にある。

Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌）は、グラム陰性の球状細菌である。現在の髄膜炎菌ワクチンも、莢膜糖に基づく。これらは、１価血清群Ｃ結合体ワクチン（ＭＥＮＪＵＧＡＴＥ（商標）、ＭＥＮＩＮＧＩＴＥＣ（商標）、ＮＥＩＳＶＡＣ−Ｃ（商標））と、血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙについての４価結合体混合物（ＭＥＮＡＣＴＲＡ（商標））とを含む。血清群Ｂ（「ＭｅｎＢ」）に対する一般的な使用のために承認された有用なワクチンは、現在のところ存在しない。ＭｅｎＢワクチンを作製するための現在の研究努力は、外膜小胞（例えばＭＥＮＺＢ（商標）、ＨＥＸＡＭＥＮ（商標）、ＮＯＮＡＭＥＮ（商標））またはリポオリゴ糖および外膜タンパク質のような外膜からの精製された成分に焦点を当てている。

Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（肺炎球菌）は、グラム陽性球状細菌である。現在の肺炎球菌ワクチンは、莢膜糖に基づく。承認された小児ワクチンは、（ａ）血清型４、血清型６Ｂ、血清型９Ｖ、血清型１４、血清型１８Ｃ、血清型１９Ｆおよび血清型２３Ｆからの結合体化糖の７価混合物であるＰＲＥＶＮＡＲ（商標）、（ｂ）血清型１、血清型５および血清型７Ｆについてもカバーする１０価結合体混合物であるＳＹＮＦＬＯＲＩＸ（商標）、ならびに（ｃ）血清型３、血清型６Ａおよび血清型１９Ａについてもカバーする１３価結合体混合物であるＰＲＥＶＮＡＲ１３（商標）である。その他の９価、１０価、１１価および１３価結合体の組み合わせも公知である。ＰＲＥＶＮＡＲ（商標）と同じ７つの血清型は、髄膜炎菌の血清群Ｂ株からの外膜小胞複合体（「ＯＭＰＣ」）にも結合体化されている［１（非特許文献１）］。

参考文献２（非特許文献２）は、１３価肺炎球菌結合体ワクチン（「１３ｖＰｎＣ」、Ｗｙｅｔｈ）と９価ＭｅｎＢ外膜小胞ワクチン（ＮＯＮＡＭＥＮ（商標）、ＮＶＩ）とを組み合わせることにより形成された、肺炎球菌とＭｅｎＢの両方に対して免疫化するための組成物を開示している。同様の混合製品が、参考文献３（非特許文献３）において論じられている。

Ｋｉｌｐｉら、Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ（２００３）３７：１１５５〜６４ ｖａｎ ｄｅｎ Ｄｏｂｂｅｌｓｔｅｅｎら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００７）２５：２４９１〜６ Ｂｏｓら、Ｐｈａｒｍａｃｏｅｃｏｎｏｍｉｃｓ（２００６）２４：１４１〜５３

血清群Ｂ髄膜炎菌と肺炎球菌の両方に対して防御するためのさらなる、そして改良された混合ワクチンに対する必要性がまだ存在する。

発明の開示
３つの異なる操作された外膜小胞の組み合わせを用いる参考文献２に開示される組成物とは異なって、本発明の組成物中の髄膜炎菌血清群Ｂ抗原は、少数の精製された抗原に基づく。目的は、組成物中にＭｅｎＢ抗原の複合体または規定されない混合物（例えば参考文献１および２で用いられている外膜小胞）の存在を回避することである。特に、本発明の組成物は、精製された髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）抗原を含む。肺炎球菌結合体をｆＨＢＰに加えることにより、抗髄膜炎菌応答が増進され、ｆＨＢＰを肺炎球菌結合体に加えることにより、抗肺炎球菌応答が増進できることが見出された。

よって、本発明は、（ｉ）結合体化肺炎球菌莢膜糖と、（ｉｉ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）抗原とを含む免疫原性組成物を提供する。組成物は、好ましくは、髄膜炎菌外膜小胞（細菌の成長中に自発的に形成され、培養培地中に放出される、天然に存在する膜小胞、および例えば髄膜炎菌の洗浄剤処理または超音波処理により形成される人工外膜小胞を含む）を含まない。

好ましい組成物は、（ｉ）リン酸アルミニウムアジュバントと、（ｉｉ）少なくとも肺炎球菌血清型４、血清型６Ｂ、血清型９Ｖ、血清型１４、血清型１８Ｃ、血清型１９Ｆおよび血清型２３Ｆのそれぞれからの結合体化肺炎球菌莢膜糖であって、上記の糖のそれぞれが、ＣＲＭ１９７担体タンパク質と結合体化している糖と、（ｉｉｉ）少なくとも２つの異なる髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質抗原であって、それらのそれぞれが、リン酸アルミニウムに少なくとも部分的に吸着している抗原とを含む。結合体化肺炎球菌糖も、リン酸アルミニウムに吸着してよい。組成物は、塩化ナトリウムおよび／または緩衝剤を含んでよい。

本発明は、本発明の免疫原性組成物を調製するための方法も提供し、この方法は、（ｉ）少なくとも１つの結合体化肺炎球菌莢膜糖をリン酸アルミニウムアジュバントと混合して、結合体／アジュバント混合物を形成するステップと、（ｉｉ）該結合体／アジュバント混合物を少なくとも１つの髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質と混合するステップとを含む。

本発明は、本発明の免疫原性組成物を調製するための方法も提供し、この方法は、（ｉ）少なくとも１つの結合体化肺炎球菌莢膜糖を少なくとも１つの髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質と混合して、抗原混合物を形成するステップと、（ｉｉ）該抗原混合物をリン酸アルミニウムアジュバントと混合するステップとを含む。

本発明は、本発明の免疫原性組成物を調製するための方法も提供し、この方法は、（ｉ）少なくとも１つの髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質をリン酸アルミニウムアジュバントと混合して、タンパク質／アジュバント混合物を形成するステップと、（ｉｉ）該タンパク質／アジュバント混合物を少なくとも１つの結合体化肺炎球菌莢膜糖と混合するステップとを含む。

あまり好ましくない実施形態において、本発明は、本発明の免疫原性組成物を調製するための方法も提供し、この方法は、（ｉ）少なくとも１つの髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質をリン酸アルミニウムアジュバントと混合して、タンパク質／アジュバント混合物を形成するステップと、（ｉｉ）少なくとも１つの結合体化肺炎球菌莢膜糖をリン酸アルミニウムアジュバントと混合して、結合体／アジュバント混合物を形成するステップと、（ｉｉｉ）該タンパク質／アジュバント混合物と結合体／アジュバント混合物とを混合するステップとを含む。

好ましくは、本発明の方法は、水酸化アルミニウムアジュバントを、（ｉ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質、（ｉｉ）リン酸アルミニウムアジュバント、（ｉｉｉ）結合体化肺炎球菌莢膜糖、（ｉｖ）結合体／アジュバント混合物、（ｖ）抗原混合物または（ｖｉ）タンパク質／アジュバント混合物のいずれかと混合するステップを含まない。よって、水酸化アルミニウムは、免疫原性組成物の成分として加えられない。
したがって、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
（ｉ）結合体化肺炎球菌莢膜糖と、（ｉｉ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）抗原とを含むが、髄膜炎菌外膜小胞を含まない免疫原性組成物。
（項目２）
２以上の異なる肺炎球菌血清型からの莢膜糖を含む、項目１に記載の組成物。
（項目３）
莢膜糖が、以下の肺炎球菌血清型：１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆから選択される、項目２に記載の組成物。
（項目４）
血清型４、血清型６Ｂ、血清型９Ｖ、血清型１４、血清型１８Ｃ、血清型１９Ｆおよび血清型２３Ｆのそれぞれからの莢膜糖を含む、項目２または項目３に記載の組成物。
（項目５）
血清型１、血清型３、血清型４、血清型５、血清型６Ａ、血清型６Ｂ、血清型７Ｆ、血清型９Ｖ、血清型１４、血清型１８Ｃ、血清型１９、血清型１９Ｆおよび血清型２３Ｆのそれぞれからの莢膜糖を含む、項目２または項目３に記載の組成物。
（項目６）
それぞれの血清型の糖が、ＣＲＭ１９７、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイドおよびＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅタンパク質Ｄからなる群より選択される担体タンパク質と別々に結合体化し、異なる血清型についての上記担体タンパク質が、同じまたは異なっていてよい、項目２から５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目７）
（ａ）配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を有し、かつ／もしくは配列番号１からの少なくとも７隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；または（ｂ）配列番号２と少なくとも８５％の配列同一性を有し、かつ／もしくは配列番号２からの少なくとも７隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；または（ｃ）配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を有し、かつ／もしくは配列番号３からの少なくとも７隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含む単一ｆＨＢＰポリペプチドを含む、上記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目８）
（ａ）配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号１からの少なくとも７隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド；（ｂ）配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号３からの少なくとも７隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第２ポリペプチドの２つの異なるｆＨＢＰポリペプチドを含む、項目１から６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目９）
配列番号３と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号３からの少なくとも４０隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、上記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目１０）
（ａ）配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号１からの少なくとも７隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド；ならびに（ｂ）配列番号２と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号２からの少なくとも７隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第２ポリペプチドの２つの異なるｆＨＢＰポリペプチドを含む、項目１から６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１１）
リン酸アルミニウムアジュバントを含む、上記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目１２）
（ｉ）リン酸アルミニウムアジュバントと、（ｉｉ）肺炎球菌血清型４、血清型６Ｂ、血清型９Ｖ、血清型１４、血清型１８Ｃ、血清型１９Ｆおよび血清型２３Ｆのそれぞれからの結合体化肺炎球菌莢膜糖であって、上記糖のそれぞれがＣＲＭ１９７担体タンパク質と結合体化している糖と、（ｉｉｉ）少なくとも２つの異なる髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質抗原であって、それらのそれぞれが、リン酸アルミニウムアジュバントに少なくとも部分的に吸着している抗原とを含む、項目１１に記載の組成物。
（項目１３）
上記結合体化肺炎球菌糖の少なくとも１つが、リン酸アルミニウムアジュバントに吸着されている、項目１２に記載の組成物。
（項目１４）
塩化ナトリウムおよび／または緩衝剤を含む、項目１２または項目１３に記載の組成物。
（項目１５）
（ａ）配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号１からの少なくとも７隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第１ポリペプチドと、（ｂ）配列番号２と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号２からの少なくとも７隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第２ポリペプチドと、（ｃ）配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号３からの少なくとも７隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第３ポリペプチドとの３つの異なるｆＨＢＰポリペプチドを含む、項目１から６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１６）
上記組成物中のｆＨＢＰポリペプチドが、Ｎ末端システインにて脂質付加されている、上記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目１７）
上記組成物中のｆＨＢＰポリペプチド（複数可）の全量が、６００μｇ未満である、上記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目１８）
上記組成物中のｆＨＢＰポリペプチド（複数可）の全量が、２００μｇ未満である、上記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目１９）
上記組成物中のｆＨＢＰポリペプチド（複数可）の全量が、６０μｇ未満である、上記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目２０）
髄膜炎菌血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙの１、２、３または４つからの莢膜糖の１または複数の結合体（複数可）をさらに含む（例えば血清群Ｃ髄膜炎菌莢膜糖の結合体を含む）、上記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目２１）
ヒドロキシリン酸アルミニウムアジュバントを含む、上記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目２２）
水酸化アルミニウムを含まない、上記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目２３）
上記項目のいずれかに記載の組成物を哺乳類に投与するステップを含む、上記哺乳類における免疫応答を惹起するための方法。
（項目２４）
医薬品として用いるための、項目１から２２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２５）
免疫原性組成物を調製するための方法であって、上記方法は、（ｉ）少なくとも１つの結合体化肺炎球菌莢膜糖をリン酸アルミニウムアジュバントと混合して、結合体／アジュバント混合物を形成するステップと、（ｉｉ）上記結合体／アジュバント混合物を少なくとも１つの髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質と混合するステップとを含む、方法。
（項目２６）
免疫原性組成物を調製するための方法であって、上記方法は、（ｉ）少なくとも１つの結合体化肺炎球菌莢膜糖を少なくとも１つの髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質と混合して、抗原混合物を形成するステップと、（ｉｉ）上記抗原混合物をリン酸アルミニウムアジュバントと混合するステップとを含む、方法。
（項目２７）
免疫原性組成物を調製するための方法であって、上記方法は、（ｉ）少なくとも１つの髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質をリン酸アルミニウムアジュバントと混合して、タンパク質／アジュバント混合物を形成するステップと、（ｉｉ）上記タンパク質／アジュバント混合物を少なくとも１つの結合体化肺炎球菌莢膜糖と混合するステップとを含む、方法。
（項目２８）
免疫原性組成物を調製するための方法であって、上記方法は、（ｉ）少なくとも１つの髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質をリン酸アルミニウムアジュバントと混合して、タンパク質／アジュバント混合物を形成するステップと、（ｉｉ）少なくとも１つの結合体化肺炎球菌莢膜糖をリン酸アルミニウムアジュバントと混合して、結合体／アジュバント混合物を形成するステップと、（ｉｉｉ）上記タンパク質／アジュバント混合物および上記結合体／アジュバント混合物を混合するステップとを含む、方法。
（項目２９）
水酸化アルミニウムアジュバントを、（ｉ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質、（ｉｉ）リン酸アルミニウムアジュバント、（ｉｉｉ）結合体化肺炎球菌莢膜糖、（ｉｖ）結合体／アジュバント混合物、（ｖ）抗原混合物、または（ｖｉ）タンパク質／アジュバント混合物のいずれかと混合するステップを含まない、項目２５から２８のいずれか一項に記載の方法。

結合体化肺炎球菌莢膜糖（複数可）
本発明の組成物は、少なくとも１つの肺炎球菌莢膜糖を含む。莢膜糖は、担体タンパク質と結合体化している。

本発明は、１または複数の異なる肺炎球菌血清型からの莢膜糖を含むことができる。組成物が１より多い血清型からの糖抗原を含む場合、これらは、好ましくは、別々に調製され、別々に結合体化され、それから組み合わされる。肺炎球菌莢膜糖を精製するための方法は、当該技術において公知であり（例えば参考文献４を参照されたい）、２３の異なる血清型からの精製された糖に基づくワクチンが、長年、公知である。これらの方法の改良も、例えば血清型３について参考文献５に、血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆおよび１９Ａについて参考文献６に記載されている。

肺炎球菌莢膜糖（複数可）は、以下の血清型から典型的に選択される：１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆおよび／または３３Ｆ。よって、合計では、組成物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３またはそれより多い異なる血清型からの莢膜糖を含んでよい。少なくとも血清型６Ｂの糖を含む組成物が有用である。

血清型の有用な組み合わせは、例えば血清型４、血清型６Ｂ、血清型９Ｖ、血清型１４、血清型１８Ｃ、血清型１９Ｆおよび血清型２３Ｆのそれぞれからの莢膜糖を含む７価の組み合わせである。別の有用な組み合わせは、例えば血清型１、４、５、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆのそれぞれからの莢膜糖を含む９価の組み合わせである。別の有用な組み合わせは、例えば血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆのそれぞれからの莢膜糖を含む１０価の組み合わせである。１１価の組み合わせは、血清型３からの糖をさらに含み得る。１２価の組み合わせは、血清型６Ａおよび１９Ａ；６Ａおよび２２Ｆ；１９Ａおよび２２Ｆ；６Ａおよび１５Ｂ；１９Ａおよび１５Ｂ；または２２Ｆおよび１５Ｂを１０価の混合物に加え得る。１３価の組み合わせは、血清型１９Ａおよび２２Ｆ；８および１２Ｆ；８および１５Ｂ；８および１９Ａ；８および２２Ｆ；１２Ｆおよび１５Ｂ；１２Ｆおよび１９Ａ；１２Ｆおよび２２Ｆ；１５Ｂおよび１９Ａ；１５Ｂおよび２２Ｆ；６Ａおよび１９Ａなどを１１価の組み合わせに加え得る。

よって、有用な１３価の組み合わせは、例えば参考文献７〜１０に開示されるようにして調製された、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９（または１９Ａ）、１９Ｆおよび２３Ｆからの莢膜糖を含む。あるこのような組み合わせは、血清型６Ｂの糖を約８μｇ／ｍｌで、およびその他の１２の糖をそれぞれ約４μｇ／ｍｌの濃度で含む。別のこのような組み合わせは、血清型６Ａおよび６Ｂの糖をそれぞれ約８μｇ／ｍｌで、およびその他の１１の糖をそれぞれ約４μｇ／ｍｌで含む。

結合体のための適切な担体タンパク質は、ジフテリアもしくは破傷風毒素のような細菌毒素、またはそのトキソイドもしくは変異体を含む。これらは、結合体ワクチンにおいて通常用いられる。例えば、ＣＲＭ１９７ジフテリア毒素変異体が有用である［１１］。その他の適切な担体タンパク質は、合成ペプチド［１２、１３］、熱ショックタンパク質［１４、１５］、百日咳タンパク質［１６、１７］、サイトカイン［１８］、リンホカイン［１８］、ホルモン［１８］、成長因子［１８］、Ｎ１９［２０］のような種々の病原体由来抗原からの複数のヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質［１９］、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅからのタンパク質Ｄ［２１〜２３］、ニューモリシン［２４］またはその非毒性誘導体［２５］、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ［２６］、鉄取り込みタンパク質［２７］、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅからの毒素ＡまたはＢ［２８］、組換えＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａエキソタンパク質Ａ（ｒＥＰＡ）［２９］などを含む。参考文献１で用いられているＯＭＰＣは、髄膜炎菌外膜小胞であるので、肺炎球菌糖についての可能な担体からは本明細書において除外される。

肺炎球菌結合体ワクチンのために特に有用な担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイドおよびＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅタンパク質Ｄである。ＣＲＭ１９７は、ＰＲＥＶＮＡＲ（商標）において用いられている。１３価混合物は、１３の結合体のそれぞれについての担体タンパク質としてＣＲＭ１９７を用いてよく、ＣＲＭ１９７は、約５５〜６０μｇ／ｍｌで存在してよい。

組成物が１より多い肺炎球菌血清型からの結合体を含む場合、それぞれの別個の結合体について同じ担体タンパク質を用いることができるか、または異なる担体タンパク質を用いることができる。しかし、両方の場合において、異なる結合体の混合物は、通常、それぞれの血清型結合体を別々に調製し、それからそれらを混合して別個の結合体の混合物を形成することにより形成される。参考文献３０は、多価肺炎球菌結合体ワクチン中に異なる担体タンパク質を用いる場合の潜在的な利点について記載しているが、ＰＲＥＶＮＡＲ（商標）製品は、７つの異なる血清型のそれぞれについて同じ担体を用いて成功している。

担体タンパク質は、肺炎球菌糖に、直接またはリンカーを介して共有結合によって結合体化してよい。種々のリンカーが公知である。例えば、結合はカルボニルを介したものであってよく、これは、修飾糖の遊離のヒドロキシル基とＣＤＩとの反応［３１、３２］と、その後のタンパク質との反応によりカルバメート結合による連結（ｃａｒｂａｍａｔｅ ｌｉｎｋａｇｅ）を形成することにより形成され得る。カルボジイミド縮合を用いることができる［３３］。アジピン酸リンカーを用いることができ、これは、遊離の−ＮＨ_２基（例えばアミノ化により糖に導入される）とアジピン酸（例えばジイミド活性化を用いて）とのカップリングと、次いで得られた糖−アジピン酸中間体へのタンパク質のカップリングにより形成し得る［３４、３５］。その他のリンカーは、β−プロピオンアミド［３６］、ニトロフェニル−エチルアミン［３７］、ハロアシルハロゲン化物［３８］、グリコシド結合による連結（ｇｌｙｃｏｓｉｄｉｃ ｌｉｎｋａｇｅ）［３９］、６−アミノカプロン酸［４０］、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）［４１］、アジピン酸ジヒドラジドＡＤＨ［４２］、Ｃ_４〜Ｃ_１２部分［４３］などを含む。

還元的アミノ化による結合体化を用いることができる。糖は、過ヨウ素酸塩を用いてまず酸化してアルデヒド基を導入し、これが、次いで、担体タンパク質との直接的な共有結合による連結を、還元的アミノ化により例えばリジンのε−アミノ基に形成できる。糖が１分子あたりに複数のアルデヒド基を含む場合、この連結技術は、複数のアルデヒドが複数の担体アミンと反応した架橋生成物を導くことができる。この架橋による結合体化技術は、少なくとも肺炎球菌血清型４、血清型６Ｂ、血清型９Ｖ、血清型１４、血清型１８Ｃ、血清型１９Ｆおよび血清型２３Ｆのために特に有用である。

肺炎球菌糖は、肺炎球菌から調製される全長のインタクトな糖を含んでよく、かつ／または全長の糖のフラグメントを含んでよく、すなわち、糖は、細菌において見られる天然の莢膜糖よりも短くてよい。糖は、よって、解重合されてよく、この解重合は、糖の精製の間もしくは後であるが、結合体化の前に生じる。解重合は、糖の鎖長を低減する。解重合は、免疫原性のために最適な鎖長を提供し、かつ／または糖の物理的な管理のしやすさのために鎖長を低減するために用いることができる。１より多い肺炎球菌血清型を用いる場合、それぞれの血清型についてインタクトな糖を、それぞれの血清型についてフラグメントを、またはいくつかの血清型についてインタクトな糖と、その他の血清型についてフラグメントを用いることが可能である。

組成物が、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１９Ｆおよび２３Ｆのいずれかからの糖を含む場合、これらの糖は、好ましくはインタクトである。対照的に、組成物が、血清型１８Ｃからの糖を含む場合、この糖は、解重合されていることが好ましい。

血清型３の糖も解重合されてよい。例えば、血清型３の糖は、例えば酢酸を用いる、解重合のための酸加水分解［７］に供することができる。得られるフラグメントを、次いで、活性化のために酸化され（例えば過ヨウ素酸塩酸化、おそらく２価カチオンの存在下、例えばＭｇＣｌ_２を用いる）、担体（例えばＣＲＭ１９７）に還元条件下（例えばシアノ水素化ホウ素ナトリウムを用いて）で結合体化させてよく、次いで（所望により）、糖中の未反応のいかなるアルデヒドをもキャップできる（例えば水素化ホウ素ナトリウムを用いて）［７］。結合体化は、例えば活性化された糖と担体とを同時凍結乾燥させた後の凍結乾燥材料上で行ってよい。

血清型１の糖は、重炭酸塩／炭酸塩緩衝液を用いるような例えばアルカリｐＨ緩衝液処理［８］により達成して、少なくとも部分的に脱Ｏ−アセチル化してよい。このような（部分的）脱Ｏ−アセチル化糖は、活性化のために酸化され（例えば過ヨウ素酸塩酸化）、担体（例えばＣＲＭ１９７）に還元条件下（例えばシアノ水素化ホウ素ナトリウムを用いて）で結合体化させることができ、次いで（所望により）、糖中の未反応のいかなるアルデヒドをもキャップできる（例えば水素化ホウ素ナトリウムを用いて）［８］。結合体化は、例えば活性化された糖と担体とを同時凍結乾燥させた後の凍結乾燥材料上で行ってよい。

血清型１９Ａの糖は、活性化のために酸化され（例えば過ヨウ素酸塩酸化）、担体（例えばＣＲＭ１９７）にＤＭＳＯ中で還元条件下に結合体化させてよく、次いで（所望により）、糖中の未反応のいかなるアルデヒドをもキャップできる（例えば水素化ホウ素ナトリウムを用いて）［４４］。結合体化は、例えば活性化された糖と担体とを同時凍結乾燥させた後の凍結乾燥材料上で行ってよい。

１または複数の肺炎球菌莢膜糖結合体が、凍結乾燥された形態で存在してよい。

肺炎球菌結合体は、適切な糖と結合する抗莢膜抗体を理想的に惹起でき、例えば≧０．２０μｇ／ｍＬの抗糖抗体レベルを惹起できる［４５］。抗体は、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）および／またはオプソニン作用活性（ＯＰＡ）の測定により評価してよい。ＥＩＡ法は、詳細に確認されており、抗体濃度とワクチン効力との間に関連が存在する。

髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（複数可）
本発明の組成物は、少なくとも１つの髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）を含む。

ｆＨＢＰ抗原は、詳細に特徴決定されている。これは、タンパク質「７４１」［参考文献５６中の配列番号２５３５および２５３６］、「ＮＭＢ１８７０」、「ＧＮＡ１８７０」［参考文献４６〜４８］、「Ｐ２０８６」、「ＬＰ２０８６」または「ＯＲＦ２０８６」［４９〜５１］とも呼ばれている。これは、天然ではリポタンパク質であり、全ての髄膜炎菌血清群にわたって発現されている。ｆＨｂｐのＣ末端免疫優性ドメイン（「ｆＨｂｐＣ」）の構造は、ＮＭＲにより決定されている［５２］。タンパク質のこの部分は、８本鎖のβバレルを形成し、その鎖は、種々の長さのループで連結されている。バレルの前には、短いαヘリックスと可撓性Ｎ末端テイルがある。

ｆＨＢＰ抗原は、３つの別々のバリアントに当てはまり［５３］、ある所定のファミリーに対して産生された血清が、同じファミリー内で殺菌性であるが、その他の２つのファミリーの１つを発現する株に対しては活性でない、すなわちファミリー内交差防御が存在するが、ファミリー間交差防御は存在しないことが見出されている。本発明の組成物は、単一ｆＨＢＰバリアントを含むことができるが、２または３のバリアントからのｆＨＢＰを含むことが有利である。

組成物が単一ｆＨＢＰバリアントを含む場合、これは、以下のものの１つを含み得る：
（ａ）（ｉ）配列番号１と少なくともａ％の配列同一性を有し、かつ／または（ｉｉ）配列番号１からの少なくともｘ個隣接するアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第１アミノ酸配列を含む第１ポリペプチド；
（ｂ）（ｉ）配列番号２と少なくともｂ％の配列同一性を有し、かつ／または（ｉｉ）配列番号２からの少なくともｙ個隣接するアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第２アミノ酸配列を含む第２ポリペプチド；
（ｃ）（ｉ）配列番号３と少なくともｃ％の配列同一性を有し、かつ／または（ｉｉ）配列番号３からの少なくともｚ個隣接するアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第３アミノ酸配列を含む第３ポリペプチド。

組成物が２つの異なる髄膜炎菌ｆＨＢＰ抗原を含む場合、これは、（ｉ）上で規定される第１および第２ポリペプチド、（ｉｉ）上で規定される第１および第３ポリペプチド、または（ｉｉｉ）上で規定される第２および第３ポリペプチドの組み合わせを含み得る。第１および第３ポリペプチドの組み合わせが好ましい。

組成物が２つの異なる髄膜炎菌ｆＨＢＰ抗原を含む場合、これらは、いくらかの共通の配列を有し得るが、第１、第２および第３ポリペプチドは、異なるｆＨＢＰアミノ酸配列を有する。

第１アミノ酸配列を含むポリペプチドは、被験体に投与された場合に、配列番号６０の新生アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質（ＭＣ５８）と結合する抗体を含む抗体応答を惹起する。いくつかの実施形態において、これらの抗体のいくつかまたは全ては、配列番号６１の新生アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質にも配列番号６２の新生アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質にも結合しない。

第２アミノ酸配列を含むポリペプチドは、被験体に投与された場合に、配列番号６１の新生アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質（２９９６）と結合する抗体を含む抗体応答を惹起する。いくつかの実施形態において、これらの抗体のいくつかまたは全ては、配列番号６０の新生アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質にも配列番号６２の新生アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質にも結合しない。

第３アミノ酸配列を含むポリペプチドは、被験体に投与された場合に、配列番号６２の新生アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質（Ｍ１２３９）と結合する抗体を含む抗体応答を惹起する。いくつかの実施形態において、これらの抗体のいくつかまたは全ては、配列番号６０の新生アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質にも配列番号６１の新生アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質にも結合しない。

いくつかの実施形態において、配列番号１からの少なくともｘ個隣接するアミノ酸のフラグメントは、配列番号２中にも配列番号３中にも存在しない。同様に、配列番号２からの少なくともｙ個隣接するアミノ酸のフラグメントは、配列番号１中にも配列番号３中にも存在しない可能性がある。同様に、配列番号３からの少なくともｚ個隣接するアミノ酸のフラグメントも、配列番号１中または配列番号２中に存在しない可能性がある。いくつかの実施形態において、配列番号１〜３の１つからの上記のフラグメントを、その他の２つの配列番号に対して隣接配列として整列させた場合に、そのフラグメントとその他の２つの配列番号のそれぞれとの間の同一性は、７５％未満、例えば７０％未満、６５％未満、６０％未満などである。

ａの値は、少なくとも８０、例えば８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９８、９９またはそれより大きい値である。ｂの値は、少なくとも８０、例えば８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９８、９９またはそれより大きい値である。ｃの値は、少なくとも８０、例えば８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９８、９９またはそれより大きい値である。ａ、ｂおよびｃの値は同じまたは異なってよい。いくつかの実施形態において、ａ、ｂおよびｃは同一である。

ｘの値は、少なくとも７、例えば８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。ｙの値は、少なくとも７、例えば８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。ｚの値は、少なくとも７、例えば８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。ｘ、ｙおよびｚの値は同じまたは異なってよい。いくつかの実施形態において、ｘ、ｙおよびｚは同一である。

フラグメントは、好ましくはそれぞれの配列番号の配列からのエピトープを含む。その他の有用なフラグメントは、それぞれの配列番号のＣ末端から１もしくは複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１もしくは複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、その少なくとも１つのエピトープを保持している。

本発明で用いられるアミノ酸配列は、配列番号１、２または３と比較して、１または複数（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０など）の保存的アミノ酸置換、すなわち関連する側鎖を有する別のものであるアミノ酸の置換を含み得る。遺伝子によりコードされるアミノ酸は、一般的に４つのファミリーに分配される：（１）酸性、すなわちアスパラギン酸、グルタミン酸；（２）塩基性、すなわちリジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性、すなわちアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および（４）非荷電極性、すなわちグリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン。フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンは、時折、一緒に芳香族アミノ酸として分類される。一般的に、これらのファミリー内での単一アミノ酸の置換は、生物活性に対して大きな影響を有さない。ポリペプチドは、参照配列に対して１または複数（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０など）の単一アミノ酸欠失を有してよい。ポリペプチドは、参照配列に対して１または複数（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０など）の挿入（例えば１、２、３、４または５アミノ酸のそれぞれ）を有してもよい。

有用な第１アミノ酸配列は、配列番号１と少なくとも８５％の同一性（例えば＞９５％または１００％）を有する。別の有用な第１アミノ酸配列は、配列番号６６と少なくとも９５％の同一性（例えば＞９８％または１００％）を有する。別の有用な第１アミノ酸配列は、配列番号６７と少なくとも９５％の同一性（例えば＞９８％または１００％）を有する。

有用な第３アミノ酸配列は、配列番号３と少なくとも８５％の同一性（例えば＞９５％または１００％）を有する。別の有用な第３アミノ酸配列は、配列番号６８と少なくとも９５％の同一性（例えば＞９８％または１００％）を有する。

配列番号６６および６８付近（またはそれらの近縁バリアント）に基づく第１および第３配列の混合物を含む組み合わせが、特に有用である。別の有用な組み合わせは、配列番号６７および６８（またはそれらの近縁バリアント）の混合物付近に基づく第１および第３配列の混合物を含む。よって、組成物は、配列番号６３のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号６５のアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含み得る。

いくつかの実施形態において、ｆＨＢＰポリペプチド（複数可）は、例えばＮ末端システインにて脂質付加される。別の実施形態において、しかし、ｆＨＢＰポリペプチド（複数可）は、脂質付加されない。脂質付加ｆＨＢＰについて、システインに付加される脂質は、通常、例えばトリパルミトイル−Ｓ−グリセリル−システイン（Ｐａｍ３Ｃｙｓ）、ジパルミトイル−Ｓ−グリセリルシステイン（Ｐａｍ２Ｃｙｓ）、Ｎ−アセチル（ジパルミトイル−Ｓ−グリセリルシステイン）などとしてのパルミトイル残基を含む。成熟脂質付加ｆＨＢＰ配列の例は、配列番号６３（配列番号６６を含む）、配列番号６４（配列番号６７を含む）および配列番号６５（配列番号６８を含む）である。

ｆＨＢＰの投与は、好ましくは、配列番号１、２または３のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起する。本発明で用いるために有利なｆＨＢＰ抗原は、被験体への投与の後に殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。

ｆＨＢＰポリペプチドの全量は、通常、１〜５００μｇ／用量、例えば６０〜２００μｇ／用量または１２０〜５００μｇ／ｍｌである。

さらなる抗原（複数可）
結合体化肺炎球菌莢膜糖（複数可）と髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（複数可）に加えて、本発明の組成物は、髄膜炎菌、肺炎球菌および／またはさらなる病原体（複数可）からのさらなる抗原を含み得る。

髄膜炎菌ポリペプチド抗原
髄膜炎菌ｆＨＢＰポリペプチド抗原（複数可）を含むことに加えて、組成物は、１または複数のさらなる髄膜炎菌ポリペプチド抗原（複数可）を含んでよい。よって、組成物は、２８７、ＮａｄＡ、ＮｓｐＡ、ＨｍｂＲ、ＮｈｈＡ、Ａｐｐおよび／またはＯｍｐ８５からなる群より選択されるポリペプチド抗原を含んでよい。これらの抗原は、精製ポリペプチド、例えば組換えポリペプチドとして有用に存在する。抗原は、好ましくは、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起する。本発明のいくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、１つだけの髄膜炎菌ＰｏｒＡ血清サブタイプを含むか、または好ましくは、髄膜炎菌ＰｏｒＡ外膜タンパク質を含まないかのいずれかである。

本発明の組成物は、２８７抗原を含んでよい。２８７抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８についての公開されたゲノム配列［５４］中に、遺伝子ＮＭＢ２１３２（ＧｅｎＢａｎｋ受理番号ＧＩ：７２２７３８８；本明細書において配列番号９）として含まれた。多くの株からの２８７抗原の配列が、それ以降公開されている。例えば、２８７の対立遺伝子型は、参考文献５５の図５および１５、参考文献５６の実施例１３および図２１（その中の配列番号３１７９〜３１８４）で見ることができる。２８７抗原の種々の免疫原性フラグメントも報告されている。本発明で用いるために好ましい２８７抗原は、（ａ）配列番号９と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号９の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号９からのエピトープを含む。本発明の最も有用な２８７抗原は、被験体に投与した後に、配列番号９のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起できる。本発明で用いるために有利な２８７抗原は、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。

本発明の組成物は、ＮａｄＡ抗原を含んでよい。ＮａｄＡ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８についての公開されたゲノム配列［５４］中に、遺伝子ＮＭＢ１９９４（ＧｅｎＢａｎｋ受理番号ＧＩ：７２２７２５６；本明細書において配列番号１０）として含まれた。多くの株からのＮａｄＡ抗原の配列がそれ以降公開され、ナイセリアの付着因子としてのタンパク質活性は、詳細に文書化されている。ＮａｄＡの種々の免疫原性フラグメントも報告されている。本発明で用いるために好ましいＮａｄＡ抗原は、（ａ）配列番号１０と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１０の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号１０からのエピトープを含む。本発明の最も有用なＮａｄＡ抗原は、被験体に投与した後に、配列番号１０のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起できる。本発明で用いるために有利なＮａｄＡ抗原は、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。配列番号６は、あるそのようなフラグメントである。

本発明の組成物は、ＮｓｐＡ抗原を含んでよい。ＮｓｐＡ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８についての公開されたゲノム配列［５４］中に、遺伝子ＮＭＢ０６６３（ＧｅｎＢａｎｋ受理番号ＧＩ：７２２５８８８；本明細書において配列番号１１）として含まれた。抗原は、参考文献５７および５８から、以前に公知であった。多くの株からのＮｓｐＡ抗原の配列が、それ以降公開されている。ＮｓｐＡの種々の免疫原性フラグメントも報告されている。本発明で用いるために好ましいＮｓｐＡ抗原は、（ａ）配列番号１１と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１１の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号１１からのエピトープを含む。本発明の最も有用なＮｓｐＡ抗原は、被験体に投与した後に、配列番号１１のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起できる。本発明で用いるために有利なＮｓｐＡ抗原は、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。

本発明の組成物は、髄膜炎菌ＨｍｂＲ抗原を含んでよい。全長ＨｍｂＲ配列は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８についての公開されたゲノム配列［５４］中に、遺伝子ＮＭＢ１６６８（本明細書において配列番号７）として含まれた。参考文献５９は、異なる株からのＨｍｂＲ配列（本明細書において配列番号８）を報告している。配列番号７と８は、１アミノ酸長異なり、９４．２％の同一性を有する。本発明は、全長ＨｍｂＲ配列を含むポリペプチドを用いることができるが、部分的なＨｍｂＲ配列を含むポリペプチドを頻繁に用いる。よって、いくつかの実施形態において、本発明に従って用いられるＨｍｂＲ配列は、配列番号７と少なくともｉ％（ここで、ｉの値は、５０、６０、７０、８０、９０、９５、９９またはそれより多い）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでよい。別の実施形態において、本発明に従って用いられるＨｍｂＲ配列は、配列番号７からの少なくともｊ連続アミノ酸のフラグメント（ここで、ｊの値は、７、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）のフラグメントを含んでよい。別の実施形態において、本発明に従って用いられるＨｍｂＲ配列は、（ｉ）配列番号７と少なくともｉ％の配列同一性を有し、かつ／または（ｉｉ）配列番号７からの少なくともｊ連続アミノ酸のフラグメントを含むアミノ酸配列を含んでよい。ｊアミノ酸の好ましいフラグメントは、配列番号７からのエピトープを含む。このようなエピトープは、通常、ＨｍｂＲの表面上にあるアミノ酸を含む。有用なエピトープは、ヘモグロビンとのＨｍｂＲの結合に関与するアミノ酸を有するものを含む。なぜなら、これらのエピトープと結合する抗体は、宿主のヘモグロビンと結合する細菌の能力を遮断できるからである。ＨｍｂＲの位相幾何学およびその重要な機能的残基は、参考文献６０において調べられた。本発明の最も有用なＨｍｂＲ抗原は、被験体に投与した後に、配列番号７のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起できる。本発明で用いるために有利なＨｍｂＲ抗原は、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。

本発明の組成物は、ＮｈｈＡ抗原を含んでよい。ＮｈｈＡ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８についての公開されたゲノム配列［５４］中に、遺伝子ＮＭＢ０９９２（ＧｅｎＢａｎｋ受理番号ＧＩ：７２２６２３２；本明細書において配列番号１２）として含まれた。多くの株からのＮｈｈＡ抗原の配列がそれ以降公開され、例えば参考文献５５および６１であり、ＮｈｈＡの種々の免疫原性フラグメントが報告されている。これは、Ｈｓｆとしても公知である。本発明で用いるために好ましいＮｈｈＡ抗原は、（ａ）配列番号１２と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１２の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号１２からのエピトープを含む。本発明の最も有用なＮｈｈＡ抗原は、被験体に投与した後に、配列番号１２のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起できる。本発明で用いるために有利なＮｈｈＡ抗原は、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。

本発明の組成物は、Ａｐｐ抗原を含んでよい。Ａｐｐ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８についての公開されたゲノム配列［５４］中に、遺伝子ＮＭＢ１９８５（ＧｅｎＢａｎｋ受理番号ＧＩ：７２２７２４６；本明細書において配列番号１３）として含まれた。多くの株からのＡｐｐ抗原の配列がそれ以降公開されている。Ａｐｐの種々の免疫原性フラグメントが報告されている。本発明で用いるために好ましいＡｐｐ抗原は、（ａ）配列番号１３と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１３の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号１３からのエピトープを含む。本発明の最も有用なＡｐｐ抗原は、被験体に投与した後に、配列番号１３のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起できる。本発明で用いるために有利なＡｐｐ抗原は、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。

本発明の組成物は、Ｏｍｐ８５抗原を含んでよい。Ｏｍｐ８５抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８についての公開されたゲノム配列［５４］中に、遺伝子ＮＭＢ０１８２（ＧｅｎＢａｎｋ受理番号ＧＩ：７２２５４０１；本明細書において配列番号１４）として含まれた。多くの株からのＯｍｐ８５抗原の配列がそれ以降公開されている。Ｏｍｐ８５についてのさらなる情報は、参考文献６２および６３で見出すことができる。Ｏｍｐ８５の種々の免疫原性フラグメントも報告されている。本発明で用いるために好ましいＯｍｐ８５抗原は、（ａ）配列番号１４と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１４の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号１４からのエピトープを含む。本発明の最も有用なＯｍｐ８５抗原は、被験体に投与した後に、配列番号１４のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起できる。本発明で用いるために有利なＯｍｐ８５抗原は、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。

髄膜炎菌リポオリゴ糖
髄膜炎菌ｆＨＢＰポリペプチド抗原（複数可）を含むことに加えて、組成物は、１または複数の髄膜炎菌リポオリゴ糖（ＬＯＳ）抗原（複数可）を含んでよい。髄膜炎菌ＬＯＳは、細菌の外膜の外側の単層で見出されるグルコサミンベースのリン脂質である。これは、リピドＡ部分とコアオリゴ糖領域とを含み、リピドＡ部分は、膜において疎水性アンカーとして作用する。オリゴ糖コア中の不均質性が、異なる髄膜炎菌株の間での構造的および抗原的多様性を生じ、これは、株を１２のイムノタイプ（Ｌ１〜Ｌ１２）に細分するために用いられている。本発明は、任意のイムノタイプ、例えばＬ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５、Ｌ６、Ｌ７および／またはＬ８からのＬＯＳを用いてよい。

Ｌ２およびＬ３のα鎖は、天然に、ラクトＮ−ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む。本発明がＬ２またはＬ３イムノタイプからのＬＯＳを用いる場合、このＬＮｎＴは存在しないことがある。この非存在は、α鎖内でＬＮｎＴ四糖を合成する能力が破壊されるように操作された変異体株を用いることにより、簡便に達成できる。関連する生合成付加を担う酵素のノックアウトによりこの目的が達成されることが公知である［６４、６５］。例えば、ＬｇｔＢ酵素のノックアウトは、ＬＮｎＴの末端ガラクトースの付加を妨げるとともに、α鎖の末端シアル酸の下流の付加も妨げる。ＬｇｔＡ酵素のノックアウトは、ＬＮｎＴのＮ−アセチル−グルコサミンの付加と、下流の付加とを妨げる。ＬｇｔＡノックアウトは、ＬｇｔＣノックアウトを伴い得る。同様に、ＬｇｔＥおよび／またはＧａｌＥ酵素のノックアウトは、内部ガラクトースの付加を妨げ、ＬｇｔＦのノックアウトは、Ｈｅｐ^Ｉ残基へのグルコースの付加を妨げる。これらのノックアウトのいずれも、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ７またはＬ９イムノタイプ株におけるＬＮｎＴ四糖の破壊のために、単独または組み合わせて用いることができる。有用な免疫原性を保持しながらＬＮｎＴエピトープが除去されたＬＯＳを提供するので、少なくともＬｇｔＢのノックアウトが好ましい。

ＬＮｎＴエピトープを破壊する変異に加えて、またはその代わりに、ｇａｌＥ遺伝子のノックアウトも、有用な改変ＬＯＳを提供し、リピドＡ脂肪トランスフェラーゼ（ｆａｔｔｙ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）遺伝子も同様にノックアウトされ得る［６６］。少なくとも１つの第一級Ｏ結合脂肪酸を、ＬＯＳから除去してよい［６７］。１ＬＯＳ分子あたりの第二級アシル鎖の数が低減されたＬＯＳを用いることもできる［６８］。ＬＯＳは、典型的に、少なくともＧｌｃＮＡｃ−Ｈｅｐ_２ホスホエタノールアミン−ＫＤＯ_２−リピドＡ構造を有する［６９］。ＬＯＳは、ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ三糖を含むが、ＬＮｎＴ四糖を欠くことがある。

ＬＯＳは、本発明の組成物中に種々の形態で含まれ得る。これは、精製された形態にてそれ自体で用いてよい。これは、担体タンパク質と結合体化してよい。ＬＯＳが結合体化されている場合、結合体化は、ＬＯＳ中のリピドＡ部分を介するか、または任意のその他の適切な部分、例えばそのＫＤＯ残基によるものであってよい。ＬＯＳのリピドＡ部分が存在しない場合、このような代替の連結が必要となる。ＬＯＳについての結合体化技術は、参考文献６７、６９、７０、７１などから公知である。これらの結合体に有用な担体タンパク質は、ジフテリアもしくは破傷風毒素またはそのトキソイドもしくは変異体のような上記で論じた例えば細菌毒素である。

ＬＯＳは、参考文献７２に記載されるような固定（すなわち相変動性（ｐｈａｓｅ ｖａｒｉａｂｌｅ）でない）ＬＯＳイムノタイプを有する株（例えば遺伝子操作された髄膜炎菌株）からであってよい。例えば、Ｌ２およびＬ３ ＬＯＳイムノタイプを固定してよい。このような株は、イムノタイプ間のスイッチング率が、元の野生型株に対して１／２未満（＞１／５０にさえ）に低減されてよい。参考文献７２は、ｌｇｔＡおよび／またはｌｇｔＧ遺伝子生成物の改変によりこの結果をどのようにして達成できるかについて開示している。

ＬＯＳは、例えばＬ３について、そのヘプトースＩＩ残基に付加されたＧｌｃＮａｃ残基上でＯ−アセチル化されてよい［７３］。

免疫原性組成物は、１より多い型のＬＯＳ、例えば髄膜炎菌イムノタイプＬ２およびＬ３からのＬＯＳを含むことができる。例えば、参考文献７４に開示されるＬＯＳの組み合わせを用いてよい。

ＬＯＳ抗原は、好ましくは、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。

しかし、本発明の好ましい組成物は、髄膜炎菌リポオリゴ糖を含まない。

髄膜炎菌莢膜糖抗原（複数可）
髄膜炎菌ｆＨＢＰポリペプチド抗原（複数可）を含むことに加えて、組成物は、１または複数の髄膜炎菌莢膜糖結合体を含んでよい。本発明の組成物は、髄膜炎菌血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙの１、２、３または４つ、例えばＡ＋Ｃ、Ａ＋Ｗ１３５、Ａ＋Ｙ、Ｃ＋Ｗ１３５、Ｃ＋Ｙ、Ｗ１３５＋Ｙ、Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５、Ａ＋Ｃ＋Ｙ、Ａ＋Ｗ１３５＋Ｙ、Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙなどからの莢膜糖の１または複数の結合体を含んでよい。血清群Ｃの糖または血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙの４つ全てからの糖を含む組成物が理想的である。

血清群Ａ髄膜炎菌の莢膜糖は、Ｃ３位およびＣ４位に部分的Ｏ−アセチル化を有する（α１→６）結合Ｎ−アセチル−Ｄ−マンノースアミン−１−ホスフェートのホモポリマーである。Ｃ３位でのアセチル化は、７０〜９５％であり得る。糖を精製するために用いる条件は、脱Ｏ−アセチル化をもたらし得る（例えば塩基性条件下で）が、このＣ３位にてＯＡｃを保持することが有用である。いくつかの実施形態において、血清群Ａの糖中のマンノースアミン残基の少なくとも５０％（例えば少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれより多い）が、Ｃ３位にてＯ−アセチル化される。アセチル基は、加水分解を防ぐために、ブロック基で置き換えることができ［７５］、このような改変糖は、本発明の意味において、まだ血清群Ａの糖である。

血清群Ｃの莢膜糖は、（α２→９）結合シアル酸（Ｎ−アセチルノイラミン酸または「ＮｅｕＮＡｃ」）のホモポリマーである。糖の構造は、→９）−ＮｅｕｐＮＡｃ７／８ＯＡｃ−（α２→と記載される。ほとんどの血清群Ｃ株は、シアル酸残基のＣ７および／またはＣ８にてＯ−アセチル基を有するが、臨床単離株の約１５％は、これらのＯ−アセチル基を欠く［７６、７７］。ＯＡｃ基の存在または非存在は、ユニークエピトープを生じ、糖と結合する抗体の特異性は、Ｏ−アセチル化された株（ＯＡｃ＋）および脱Ｏ−アセチル化された株（ＯＡｃ−）に対するその殺菌活性に影響し得る［７８〜８０］。本発明で用いられる血清群Ｃの糖は、ＯＡｃ＋またはＯＡｃ−株のいずれかから調製してよい。許諾されたＭｅｎＣ結合体ワクチンは、ＯＡｃ−（ＮＥＩＳＶＡＣ−Ｃ（商標））およびＯＡｃ＋（ＭＥＮＪＵＧＡＴＥ（商標）およびＭＥＮＩＮＧＩＴＥＣ（商標））糖の両方を含む。いくつかの実施形態において、血清群Ｃの結合体の生成のための株は、例えば、血清型１６、血清サブタイプＰ１．７ａ，１などのＯＡｃ＋株である。よって、Ｃ：１６：Ｐ１．７ａ，１ ＯＡｃ＋株を用いてよい。Ｃ１１株のような血清サブタイプＰ１．１中のＯＡｃ＋株も有用である。

血清群Ｗ１３５の糖は、シアル酸−ガラクトース二糖単位のポリマーである。血清群Ｃの糖と同様に、これは、変動性のＯ−アセチル化を有するが、シアル酸７位および９位においてである［８１］。この構造は、→４）−Ｄ−Ｎｅｕｐ５Ａｃ（７／９ＯＡｃ）−α−（２→６）−Ｄ−Ｇａｌ−α−（１→と記載される。

血清群Ｙの糖は、二糖反復単位がガラクトースの代わりにグルコースを含む以外は、血清群Ｗ１３５の糖と同様である。血清群Ｗ１３５と同様に、これは、シアル酸７位および９位において変動性のＯ−アセチル化を有する［８１］。血清群Ｙの構造は、→４）−Ｄ−Ｎｅｕｐ５Ａｃ（７／９ＯＡｃ）−α−（２→６）−Ｄ−Ｇｌｃ−α−（１→と記載される。

本発明に従って用いられる糖は、上記のようにＯ−アセチル化されてよい（例えば、天然の莢膜糖で見られるのと同じＯ−アセチル化パターンで）か、またはこれらは、糖の環の１または複数の位置にて部分的もしくは完全に脱Ｏ−アセチル化されてよいか、またはこれらは、天然の莢膜糖に比べて過剰にＯ−アセチル化されてよい。

結合体中の糖部分は、髄膜炎菌から調製される全長の糖を含んでよく、かつ／または全長の糖のフラグメントを含んでよく、すなわち、糖は、細菌で見られる天然の莢膜糖より短くてよい。糖は、よって、解重合されてよく、この解重合は、糖の精製の間もしくは後であるが、結合体化の前に生じる。解重合は、糖の鎖長を低減する。ある解重合法は、過酸化水素の使用を伴う。過酸化水素を糖に加え（例えば１％の最終Ｈ_２Ｏ_２濃度まで）、混合物を、次いで、所望の鎖長の減少が達成されるまでインキュベートする（例えば約５５℃にて）。別の解重合法は、酸加水分解を伴う。その他の解重合法は、当該技術において公知である。本発明に従って用いるための結合体を調製するために用いる糖は、これらの解重合法のいずれによっても得ることができる。解重合は、免疫原性のために最適な鎖長を提供し、かつ／または糖の物理的な管理のしやすさのために鎖長を低減するために用いることができる。いくつかの実施形態において、糖は、以下の範囲の平均重合度（Ｄｐ）を有する：Ａ＝１０〜２０；Ｃ＝１２〜２２；Ｗ１３５＝１５〜２５；Ｙ＝１５〜２５。Ｄｐよりもむしろ分子量の点において、有用な範囲は、全ての血清群について＜１００ｋＤａ；５ｋＤａ〜７５ｋＤａ；７ｋＤａ〜５０ｋＤａ；８ｋＤａ〜３５ｋＤａ；１２ｋＤａ〜２５ｋＤａ；１５ｋＤａ〜２２ｋＤａである。

いくつかの実施形態において、髄膜炎菌血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙのそれぞれからの糖についての平均分子量は、特にＭＡＬＬＳにより決定して、５０ｋＤａより高く、例えば≧７５ｋＤａ、≧１００ｋＤａ、≧１１０ｋＤａ、≧１２０ｋＤａ、≧１３０ｋＤａなどであってよく［８２］、１５００ｋＤａまででさえあってよい。例えば、ＭｅｎＡの糖は、５０〜５００ｋＤａ、例えば６０〜８０ｋＤａの範囲であってよく、ＭｅｎＣの糖は、１００〜２１０ｋＤａの範囲であってよく、ＭｅｎＷ１３５の糖は、６０〜１９０ｋＤａ、例えば１２０〜１４０ｋＤａの範囲であってよく、かつ／またはＭｅｎＹの糖は、６０〜１９０ｋＤａ、例えば１５０〜１６０ｋＤａの範囲であってよい。

組成物中の１血清群あたりの髄膜炎菌の糖の質量は、通常、１μｇ〜２０μｇ、例えば１血清群あたり２〜１０μｇ、または約４μｇもしくは約５μｇもしくは約１０μｇである。１より多い血清群からの結合体が含まれる場合、これらは、実質的に等しい質量で存在してよく、例えば、各血清群の糖の質量が、互いの＋１０％以内である。等しい比率の代替として、２倍の質量の血清群Ａの糖を用いてよい。つまり、ワクチンは、ＭｅｎＡの糖を１０μｇと、ＭｅｎＣ、Ｗ１３５およびＹの糖をそれぞれ５μｇで含んでよい。

有用な担体タンパク質および結合化学は、上で論じている。有用な担体は、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドおよびＣＲＭ１９７を含む。

１：５（すなわち過剰のタンパク質）〜５：１（すなわち過剰の糖）の糖：タンパク質比率（ｗ／ｗ）、例えば１：２〜５：１の比率および１：１．２５〜１：２．５の比率の結合体を用いてよい。参考文献８３に記載されるように、混合物中の異なる髄膜炎菌血清群結合体は、異なる糖：タンパク質の比率を有することができ、例えば、あるものは１：２〜１：５の比率を有し、別のものは５：１〜１：１．９９の比率を有してよい。

参考文献８４に記載されるように、混合物は、直接の糖／タンパク質結合を有するある結合体と、リンカーを介する結合を有する別の結合体とを含むことができる。この取り合わせは、異なる髄膜炎菌血清群からの糖結合体を用いる場合に特に当てはまり、例えばＭｅｎＡおよびＭｅｎＣの糖はリンカーを介して結合体化してよく、ＭｅｎＷ１３５およびＭｅｎＹの糖は、担体タンパク質と直接結合体化してよい。

肺炎球菌ポリペプチド抗原（複数可）
結合体化肺炎球菌莢膜糖（複数可）を含むことに加えて、組成物は、１または複数の肺炎球菌ポリペプチド抗原（複数可）を含んでよい。よって、組成物は、（１）ｓｐｒ００５７抗原、（２）ｓｐｒ０２８６抗原、（３）ｓｐｒ０５６５抗原、（４）ｓｐｒ１０９８抗原、（５）ｓｐｒ１３４５抗原、（６）ｓｐｒ１４１６抗原、（７）ｓｐｒ１４１８抗原、（８）ｓｐｒ０８６７抗原、（９）ｓｐｒ１４３１抗原、（１０）ニューモリシン、（１１）ｓｐｒ２０２１抗原、（１２）ｓｐｒ００９６抗原、（１３）ｓｐｒ１４３３抗原および／または（１４）ｓｐｒ１７０７抗原の１または複数を含んでよい。

組成物は、（１）ＰｓｐＡポリペプチド、（２）ＰｓａＡポリペプチド、（３）ＰｓｐＣポリペプチド、（４）ＬｙｔＡポリペプチド、（５）ＰｈｔＡポリペプチド、（６）ＰｈｔＡポリペプチド、（７）ＰｈｔＡポリペプチドおよび／または（８）ＰｈｔＤポリペプチドの１または複数を含んでよい。

組成物は、ＲｒｇＡ、ＲｒｇＢおよび／またはＲｒｇＣのような肺炎球菌ピリ繊毛のサブユニットを含んでよい。

肺炎球菌ポリペプチド抗原は、好ましくは、被験体に投与した後に、防御抗体を惹起できる。

元の「ｓｐｒ００５７」配列は、参考文献８５中に「ベータ−Ｎ−アセチル−ヘキソサミニダーゼ前駆体」（ＧＩ：１５９０２１０１を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ００５７のアミノ酸配列を、配列番号１８として本明細書中に示す。本発明で用いるために好ましいｓｐｒ００５７ポリペプチドは、（ａ）配列番号１８と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１８の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ００５７タンパク質は、配列番号１８のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号１８からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号１８のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号１８の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ある適切なフラグメントは、配列番号３２であり、これは、天然のリーダーペプチド配列とソルターゼ（ｓｏｒｔａｓｅ）認識配列とを欠いている。

元の「ｓｐｒ０２８６配列」は、参考文献８５中に「ヒアルロン酸リアーゼ前駆体」（ＧＩ：１５９０２３３０を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ０２８６のアミノ酸配列を、配列番号１９として本明細書中に示す。本発明で用いるために好ましいｓｐｒ０２８６ポリペプチドは、（ａ）配列番号１９と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１９の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ０２８６タンパク質は、配列番号１９のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号１９からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号１９のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号１９の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ある適切なフラグメントは、配列番号３３であり、これは、天然のリーダーペプチド配列とソルターゼ認識配列とを欠いている。その他の適切なフラグメントは、配列番号３４および３５である。

元の「ｓｐｒ０５６５」配列は、参考文献８５中に「ベータ−ガラクトシダーゼ前駆体」（ＧＩ：１５９０２６０９を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ０５６５のアミノ酸配列を、配列番号２０として本明細書中に示す。本発明で用いるために好ましいｓｐｒ０５６５ポリペプチドは、（ａ）配列番号２０と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２０の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ０５６５タンパク質は、配列番号２０のバリアントを含む（例えば配列番号６６；以下を参照されたい）。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２０からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２０のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２０の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ある適切なフラグメントは、配列番号３６であり、これは、天然のリーダーペプチド配列とソルターゼ認識配列とを欠いている。その他の適切なフラグメントは、配列番号３７および３８である。

ｓｐｒ０５６５のバリアント形態は、本明細書中の配列番号３９である。免疫化のためのこのバリアント形態の使用は、参考文献８６に報告されている（その中の配列番号１７８）。有用なｓｐｒ０５６５ポリペプチドは、（ａ）配列番号３９と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号３９の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含み得る。これらのポリペプチドは、配列番号３９のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号３９からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号３９のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号３９の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。配列番号３９の免疫原性フラグメントは、参考文献８６の表１に同定されている。

ｓｐｒ０５６５は天然において長いポリペプチド（＞２０００ａａ）であるので、フラグメントを発現させることがより簡便であり得る。よって、本発明で用いるためのｓｐｒ０５６５の適切な形態は、１５００アミノ酸未満の長さ（例えば＜１４００、＜１３００、＜１２００、＜１１００など）であり得る。ｓｐｒ０５６５のこのような短い形態は、「ｓｐｒ０５６５Ａ」（配列番号３７）および「ｓｐｒ０５６５Ｂ」（配列番号３８）を含む。

元の「ｓｐｒ１０９８」配列は、参考文献８５中に「ソルターゼ」（ＧＩ：１５９０３１４１を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ１０９８のアミノ酸配列を、配列番号２１として本明細書中に示す。本発明で用いるために好ましいｓｐｒ１０９８ポリペプチドは、（ａ）配列番号２１と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２１の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１０９８タンパク質は、配列番号２１のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２１からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２１のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２１の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ある適切なフラグメントは、配列番号４０であり、これは、天然のリーダーペプチド配列を欠いている。

元の「ｓｐｒ１３４５」配列は、参考文献８５中に「仮想タンパク質」（ＧＩ：１５９０３３８８を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ１３４５のアミノ酸配列を、配列番号２２として本明細書中に示す。本発明で用いるために好ましいｓｐｒ１３４５ポリペプチドは、（ａ）配列番号２２と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２２の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１３４５タンパク質は、配列番号２２のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２２からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２２のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２２の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ある適切なフラグメントは、配列番号４１であり、これは、天然のリーダーペプチド配列とソルターゼ認識配列とを欠いている。

元の「ｓｐｒ１４１６」配列は、参考文献８５中に「仮想タンパク質」（ＧＩ：１５９０３４５９を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ１４１６のアミノ酸配列を、配列番号２３として本明細書中に示す。本発明で用いるために好ましいｓｐｒ１４１６ポリペプチドは、（ａ）配列番号２３と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２３の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１４１６タンパク質は、配列番号２３のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２３からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２３のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２３の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。

元の「ｓｐｒ１４１８」配列は、参考文献８５中に「仮想タンパク質」（ＧＩ：１５９０３４６１を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ１４１８のアミノ酸配列を、配列番号２４として本明細書中に示す。本発明で用いるために好ましいｓｐｒ１４１８ポリペプチドは、（ａ）配列番号２４と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２４の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１４１８タンパク質は、配列番号２４のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２４からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２４のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２４の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。

元の「ｓｐｒ０８６７」配列は、参考文献８５中に「エンド−ベータ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ」（ＧＩ：１５９０２９１１を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ０８６７のアミノ酸配列を、配列番号２５として本明細書中に示す。本発明で用いるために好ましいｓｐｒ０８６７ポリペプチドは、（ａ）配列番号２５と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２５の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ０８６７タンパク質は、配列番号２５のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２５からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２５のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２５の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ある適切なフラグメントは、配列番号４２であり、これは、天然のリーダーペプチド配列を欠いている。

元の「ｓｐｒ１４３１」配列は、参考文献８５中に「１，４−ベータ−Ｎ−アセチルムラミダーゼ」（ＧＩ：１５９０３４７４を参照されたい）としてアノテートされた。これは、「ＬｙｔＣ」として公知であり、免疫化のためのその使用は、参考文献１００に報告されている。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ１４３１のアミノ酸配列を、配列番号２６として本明細書中に示す。本発明で用いるために好ましいｓｐｒ１４３１ポリペプチドは、（ａ）配列番号２６と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２６の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１４３１タンパク質は、配列番号２６のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２６からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２６のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２６の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ある適切なフラグメントは、配列番号４３であり、これは、天然のリーダーペプチド配列を欠いている。

Ｒ６株で見出される全長ニューモリシンのアミノ酸配列を、配列番号２７として本明細書中に示す。本発明で用いるために好ましいニューモリシンポリペプチドは、（ａ）配列番号２７と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２７の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのニューモリシンタンパク質は、配列番号２７のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２７からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２７のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２７の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ワクチン接種で用いるためのニューモリシンの変異体形態は、当該技術において公知であり［２５、８７〜９２］、これらの変異体形態は、本発明で用いてよい。解毒化は、例えば３４アミノ酸、４５アミノ酸、７アミノ酸［９４］などを欠失するＣ末端切断（例えば参考文献９３を参照されたい）により達成できる。さらなる変異は、配列番号２７に従って番号付けすると、Ｐｒｏ３２５→Ｌｅｕ（例えば配列番号４４）および／またはＴｒｐ４３３→Ｐｈｅ（配列番号４５）を含む。これらの変異は、Ｃ末端切断と組み合わせて、例えばＰｒｏ３２５→Ｌｅｕ変異を７ｍｅｒ切断と組み合わせる（例えば配列番号４６）ことができる。

元の「ｓｐｒ２０２１」配列は、参考文献８５中に「一般ストレスタンパク質ＧＳＰ−７８１」（ＧＩ：１５９０４０６２を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ２０２１のアミノ酸配列を、配列番号２８として本明細書中に示す。本発明で用いるために好ましいｓｐｒ２０２１ポリペプチドは、（ａ）配列番号２８と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２８の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ２０２１タンパク質は、配列番号２８のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２８からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２８のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２８の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ある適切なフラグメントは、配列番号４７であり、これは、天然のリーダーペプチド配列を欠いている。参考文献８６は、ｓｐｒ２０２１を、ＧｂｐＢに対する相同性を有する分泌４５ｋＤａタンパク質としてアノテートし、免疫原としてのその使用を開示している（その中の配列番号２４３；ＳＰ２２１６）。ｓｐｒ２０２１の免疫原性フラグメントは、参考文献８６の表１（第７３頁）に同定されている。ｓｐｒ２０２１の別の有用なフラグメントは、参考文献９５の配列番号１として開示される（本明細書の配列番号２８のアミノ酸２８〜２７８）。

元の「ｓｐｒ００９６」配列は、参考文献８５中に「仮想タンパク質」（ＧＩ：１５９０２１４０を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ００９６のアミノ酸配列を、配列番号２９として本明細書中に示す。本発明で用いるために好ましいｓｐｒ００９６ポリペプチドは、（ａ）配列番号２９と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２９の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ００９６タンパク質は、配列番号２９のバリアントを含む（例えば配列番号４０；以下を参照されたい）。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２９からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２９のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２９の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。

配列番号２９に対するそのＣ末端付近に挿入物を有するｓｐｒ００９６のバリアント形態は、本明細書中の配列番号４８である。免疫化のためのこのバリアントの使用は、参考文献８６に報告されており（その中の配列番号１５０）、ここでは、ＬｙｓＭドメインタンパク質としてアノテートされている。よって、本発明で用いるためのｓｐｒ００９６は、（ａ）配列番号４８と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号４８の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのポリペプチドは、配列番号４８のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号４８からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号４８のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号４８の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。配列番号４８の免疫原性フラグメントは、参考文献８６の表１に同定されている。

ｓｐｒ００９６ポリペプチドは、二量体、例えばホモ二量体の形態で用いてよい。

元の「ｓｐｒ１４３３」配列は、参考文献８５中に「仮想タンパク質」（ＧＩ：１５９０３４７６を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ１４３３のアミノ酸配列を、配列番号３０として本明細書中に示す。本発明で用いるために好ましいｓｐｒ１４３３ポリペプチドは、（ａ）配列番号３０と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号３０の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１４３３タンパク質は、配列番号３０のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号３０からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号３０のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号３０の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。

元の「ｓｐｒ１７０７」配列は、参考文献８５中に「ＡＢＣトランスポーター基質結合タンパク質−オリゴペプチド輸送」（ＧＩ：１５９０３７４９を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ１７０７のアミノ酸配列を、配列番号３１として本明細書中に示す。本発明で用いるために好ましいｓｐｒ１７０７ポリペプチドは、（ａ）配列番号３１と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号３１の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１７０７タンパク質は、配列番号３１のバリアントを含む（例えば配列番号１００；以下を参照されたい）。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号３１からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号３１のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号３１の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。

配列番号３１とは４アミノ酸異なるｓｐｒ１７０７のバリアント形態は、本明細書中の配列番号４９である。免疫化のための配列番号４９の使用は、参考文献８６に報告されている（その中の配列番号２２０）。よって、本発明で用いるためのｓｐｒ１７０７ポリペプチドは、（ａ）配列番号４９と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号４９の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含み得る。これらのポリペプチドは、配列番号４９のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号４９からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号４９のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号４９の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。配列番号４９の免疫原性フラグメントは、参考文献８６の表１に同定されている。

ＰｓｐＡは、肺炎球菌表面タンパク質Ａである。参照の目的のために、全長ＰｓｐＡのアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５０である。Ｒ６ゲノムにおいて、ＰｓｐＡはｓｐｒ０１２１である［８５］。本発明で用いるために好ましいＰｓｐＡポリペプチドは、（ａ）配列番号５０と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５０の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰｓｐＡタンパク質は、配列番号５０のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５０からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５０のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５０の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。免疫化のためのＰｓｐＡの使用は、なかでも参考文献９６に報告されている。これは、ＰｓｐＣと組み合わせて有利に投与できる。

ＰｓａＡは、肺炎球菌表面付着因子である。参照の目的のために、全長ＰｓａＡのアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５１である。本発明で用いるために好ましいＰｓａＡポリペプチドは、（ａ）配列番号５１と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５１の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰｓａＡタンパク質は、配列番号５１のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５１からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５１のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５１の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ＰｓａＡの有用なフラグメントは、参考文献９５に配列番号３として開示されている（本明細書中の配列番号５１のアミノ酸２１〜５１９に相当）。免疫化のためのＰｓａＡの使用は、参考文献９７に報告されている。これは、ＰｓｐＡおよび／またはＰｓｐＣと組み合わせて使用できる。

ＰｓｐＣは、肺炎球菌表面タンパク質Ｃ［９８］であり、コリン結合タンパク質Ａ（ＣｂｐＡ）としても公知である。免疫化のためのその使用は、参考文献９９および１００に報告されている。Ｒ６株において、これはｓｐｒ１９９５であり、参照のために、全長ｓｐｒ１９９５のアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５２である。本発明で用いるために好ましいＰｓｐＣポリペプチドは、ａ）配列番号５２と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５２の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１９９５タンパク質は、配列番号５２のバリアントを含む（例えば配列番号２７；以下を参照されたい）。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５２からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５２のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５２の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。

ＰｓｐＣのバリアントは、「Ｈｉｃ」として公知である。これは、参考文献１０１の図１に示すＰｓｐＣと類似しており、ここでは、これはＨ因子（ｆＨ）と結合すると報告されている。参照の目的のために、全長Ｈｉｃのアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５３である。Ｈｉｃタンパク質は、本発明において、ＰｓｐＣポリペプチドに加えてまたはその代わりに用いてよい。本発明で用いるために好ましいＨｉｃポリペプチドは、（ａ）配列番号５３と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５３の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのＨｉｃタンパク質は、配列番号５３のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５３からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５３のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５３の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。

ＰｓｐＣおよび／またはＨｉｃは、ＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡと組み合わせて有利に用いることができる。

ＬｙｔＡは、Ｎ−アセチルムラモイル−Ｌ−アラニンアミダーゼ（自己溶解素）である。参照の目的のために、全長ＬｙｔＡのアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５４である。Ｒ６ゲノムにおいて、ＬｙｔＡは、ｓｐｒ１７５４である［８５］。本発明で用いるために好ましいＬｙｔＡポリペプチドは、（ａ）配列番号５４と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５４の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのＬｙｔＡタンパク質は、配列番号５４のバリアント（例えばＧＩ：１８５６８３５４）を含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５４からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５４のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５４の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。特に異種乱雑（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）Ｔヘルパーエピトープと融合したＬｙｔＡコリン結合ドメインを含む形態での、免疫化のためのＬｙｔＡの使用は、参考文献１０２に報告されている。

ＰｈｔＡは、肺炎球菌ヒスチジン三連タンパク質（ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ ｔｒｉａｄ ｐｒｏｔｅｉｎ）Ａである。参照の目的のために、全長ＰｈｔＡ前駆体のアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５５である。Ｒ６ゲノムにおいて、ＰｈｔＡはｓｐｒ１０６１である［８５］。本発明で用いるために好ましいＰｈｔＡポリペプチドは、（ａ）配列番号５５と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５５の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰｈｔＡタンパク質は、配列番号５５のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５５からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５５のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５５の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。免疫化のためのＰｈｔＡの使用は、参考文献１０３および１０４に報告されている。

ＰｈｔＢは、肺炎球菌ヒスチジン三連タンパク質Ｂである。参照の目的のために、全長ＰｈｔＢ前駆体のアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５６である。残基５７８のＸａａは、リジンであり得る。本発明で用いるために好ましいＰｈｔＢポリペプチドは、（ａ）配列番号５６と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５６の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰｈｔＢタンパク質は、配列番号５６のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５６からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５６のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５６の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。免疫化のためのＰｈｔＢの使用は、参考文献１０３、１０４および１０５に報告されている。

ＰｈｔＤは、肺炎球菌ヒスチジン三連タンパク質Ｄである。参照の目的のために、全長ＰｈｔＤ前駆体のアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５７である。Ｒ６ゲノムにおいて、ＰｈｔＤはｓｐｒ０９０７である［８５］。本発明で用いるために好ましいＰｈｔＤポリペプチドは、（ａ）配列番号５７と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５７の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰｈｔＤタンパク質は、配列番号５７のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５７からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５７のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５７の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。免疫化のためのＰｈｔＤの使用は、参考文献１０３、１０４および１０６に報告されている。

ＰｈｔＥは、肺炎球菌ヒスチジン三連タンパク質Ｅである。参照の目的のために、全長ＰｈｔＥ前駆体のアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５８である。Ｒ６ゲノムにおいて、ＰｈｔＥはｓｐｒ０９０８である［８５］。本発明で用いるために好ましいＰｈｔＥポリペプチドは、（ａ）配列番号５８と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５８の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰｈｔＥタンパク質は、配列番号５８のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５８からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５８のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５８の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。免疫化のためのＰｈｔＥの使用は、参考文献１０３および１０４に報告されている。

その他の病原体（複数可）からのさらなる抗原
結合体化肺炎球菌莢膜糖（複数可）および髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（複数可）に加えて、本発明の組成物は、さらなる病原体（複数可）からの抗原（複数可）を含むことができる。

例えば、組成物は、以下のさらなる抗原（複数可）の１または複数を含んでよい：
−表面抗原ＨＢｓＡｇのようなＢ型肝炎ウイルスからの抗原。
−所望によりペルタクチンおよび／または凝集原２および３とも組み合わせた、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓからの百日咳ホロ毒素（ＰＴ）および繊維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）のようなＢ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓからの抗原。
−ジフテリアトキソイドのようなジフテリア抗原。
−破傷風トキソイドのような破傷風抗原。
−Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ（Ｈｉｂ）からの、典型的には結合体化された糖抗原。
−不活化ポリオウイルス抗原（複数可）。

ジフテリア抗原が組成物に含まれる場合、破傷風抗原と百日咳抗原も含むことが好ましい。同様に、破傷風抗原が含まれる場合、ジフテリア抗原と百日咳抗原も含むことが好ましい。同様に、百日咳抗原が含まれる場合、ジフテリア抗原と破傷風抗原も含むことが好ましい。ＤＴＰの組み合わせが、よって、好ましい。

ハイブリッドポリペプチド
髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質は、個別の分離したポリペプチドとして組成物中に存在してよいか、またはこれは、参考文献１０７中に髄膜炎菌抗原について開示されるように、少なくとも２（例えば２、３、４、５またはそれより多い）の抗原が単一ポリペプチド鎖として発現される「ハイブリッド」ポリペプチドの部分として存在してよい。このハイブリッドポリペプチドアプローチは、いずれの追加の髄膜炎菌ポリペプチド（複数可）および／または肺炎球菌ポリペプチドについても用いることができる。

ハイブリッドポリペプチドは、２つの主な利点を提供する。第１に、それ自体では不安定または発現が乏しいことがあるポリペプチドが、この問題を克服する適切なハイブリッドパートナーを加えることにより援助され得る。第２に、商業的な製造が単純化される。なぜなら、ともに抗原的に有用な２つのポリペプチドを生成するために、１回の発現および精製を使用することしか必要とされないからである。

ハイブリッドポリペプチドは、上に開示されるように２以上の髄膜炎菌および／または肺炎球菌のポリペプチド配列を含んでよい。２、３、４、５、６、７、８、９または１０の抗原からのアミノ酸配列からなるハイブリッドが有用である。特に、２または３の抗原のような２、３、４または５の抗原からのアミノ酸配列からなるハイブリッドが好ましい。

ハイブリッドポリペプチドは、式ＮＨ_２−Ａ−｛−Ｘ−Ｌ−｝_ｎ−Ｂ−ＣＯＯＨ（式中、Ｘは、上で論じたように、二者択一の髄膜炎菌または肺炎球菌抗原のアミノ酸配列であり、Ｌは、任意選択のリンカーアミノ酸配列であり、Ａは、任意選択のＮ末端アミノ酸配列であり、Ｂは、任意選択のＣ末端アミノ酸配列であり、ｎは、２以上の整数である（例えば２、３、４、５、６など））で表すことができる。通常、ｎは、２または３である。

いくつかの実施形態において、少なくとも１つの−Ｘ−部分は、ｆＨＢＰである。その他の実施形態において、少なくとも２つの−Ｘ−部分は、ｆＨＢＰ、例えば異なるｆＨＢＰバリアントである。その他の実施形態において、ｆＨＢＰは、個別のポリペプチドとして存在してよく、ハイブリッドポリペプチド中の少なくとも１つの−Ｘ−部分は、非ｆＨＢＰ髄膜炎菌ポリペプチドであり、かつ／または肺炎球菌ポリペプチドである。

−Ｘ−部分が、その野生型形のリーダーペプチド配列を有する場合、これは、ハイブリッドタンパク質に含めてよいか、またはハイブリッドタンパク質から省いてよい。いくつかの実施形態において、リーダーペプチドは、ハイブリッドタンパク質のＮ末端にある−Ｘ−部分のもの以外は削除され、すなわち、Ｘ_１のリーダーペプチドが保持されるが、Ｘ_２・・・Ｘ_ｎのリーダーペプチドは省かれる。このことは、全てのリーダーペプチドを削除し、Ｘ_１のリーダーペプチドを−Ａ−部分として用いることと等しい。

｛−Ｘ−Ｌ−｝のｎの場合のそれぞれについて、リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は、存在してよいかまたは存在しなくてよい。例えば、ｎ＝２である場合、ハイブリッドは、ＮＨ_２−Ｘ_１−Ｌ_１−Ｘ_２−Ｌ_２−ＣＯＯＨ、ＮＨ_２−Ｘ_１−Ｘ_２−ＣＯＯＨ、ＮＨ_２−Ｘ_１−Ｌ_１−Ｘ_２−ＣＯＯＨ、ＮＨ_２−Ｘ_１−Ｘ_２−Ｌ_２−ＣＯＯＨなどであってよい。リンカーアミノ酸配列（複数可）−Ｌ−は、典型的には短い（例えば２０以下のアミノ酸、すなわち２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１）。例としては、クローニングを容易にする短いペプチド配列、ポリグリシンリンカー（すなわちＧｌｙ_ｎ（ｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）を含む）およびヒスチジンタグ（すなわちＨｉｓ_ｎ（ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い））が含まれる。その他の適切なリンカーアミノ酸配列は、当業者に明らかである。有用なリンカーは、ＧＳＧＧＧＧ（配列番号１５）またはＧＳＧＳＧＧＧＧ（配列番号１６）であり、Ｇｌｙ−ＳｅｒジペプチドがＢａｍＨＩ制限部位から形成されるので、クローニングおよび操作の助けとなり、（Ｇｌｙ）_４テトラペプチドが、典型的なポリグリシンリンカーである。特に最後のＬ_ｎとして用いるためのその他の適切なリンカーは、Ｌｅｕ−Ｇｌｕジペプチドまたは配列番号５９である。

−Ａ−は、任意選択のＮ末端アミノ酸配列である。これは、典型的には短い（例えば４０以下のアミノ酸、すなわち４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１）。例としては、タンパク質輸送を指示するリーダー配列、またはクローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えばヒスチジンタグ、すなわちＨｉｓ_ｎ（ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い））が含まれる。その他の適切なＮ末端アミノ酸配列は、当業者に明らかである。Ｘ_１がそれ自体のＮ末端メチオニンを欠失している場合、−Ａ−は、Ｎ末端メチオニン、例えばＭｅｔ−Ａｌａ−Ｓｅｒを提供するオリゴペプチド（例えば、１、２、３、４、５、６、７または８アミノ酸を有する）、または単一Ｍｅｔ残基であることが好ましい。

−Ｂ−は、任意選択のＣ末端アミノ酸配列である。これは、典型的には短い（例えば４０以下のアミノ酸、すなわち３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１）。例としては、タンパク質輸送を指示する配列、クローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えばヒスチジンタグ、すなわちＨｉｓ_ｎ（ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）を含む、例えば配列番号１７）、またはタンパク質安定性を増進する配列が含まれる。その他の適切なＣ末端アミノ酸配列は、当業者に明らかである。

ｆＨＢＰ抗原を含む髄膜炎菌ポリペプチド抗原の特に有用な組み合わせは、参考文献１０７および１０８に開示され、本発明の組成物は、よって、結合体化肺炎球菌莢膜糖と、ｆＨＢＰと、（１）「ＮａｄＡ」タンパク質；（２）「９３６」タンパク質；（３）「９５３」タンパク質；および（４）「２８７」タンパク質の１、２、３または４つとを含んでよい。例えば、組成物は、結合体化肺炎球菌莢膜糖と、（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を有する第１ポリペプチド；（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を有する第２ポリペプチド；および（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を有する第３ポリペプチドとを含んでよい。

アジュバント（複数可）
本発明の組成物は、免疫学的アジュバントを含んでよい。よって、例えば、これらは、アルミニウム塩アジュバントまたは水中油型エマルジョン（例えば水中スクアレンエマルジョン）を含んでよい。その他のアジュバントも用いてよい。

適切なアルミニウム塩は、水酸化物（例えばオキシ水酸化物）、リン酸塩（例えばヒドロキシリン酸塩、オルトリン酸塩）（例えば、参考文献１０９の第８および９章を参照されたい）またはそれらの混合物を含む。塩は、任意の適切な形態を取り得る（例えばゲル、結晶、非晶質など）。患者に投与するための組成物中のＡｌ^＋＋＋の濃度は、好ましくは、５ｍｇ／ｍｌ未満、例えば≦４ｍｇ／ｍｌ、≦３ｍｇ／ｍｌ、≦２ｍｇ／ｍｌ、≦１ｍｇ／ｍｌなどである。好ましい範囲は、０．３〜１ｍｇ／ｍｌである。最大で０．８５ｍｇ／用量が好ましい。

本発明で用いるための好ましいアルミニウム塩アジュバントは、リン酸アルミニウムである。このアジュバントは、ｆＨＢＰと、ＰＲＥＶＮＡＲ（商標）およびＳＹＮＦＬＯＲＩＸ（商標）肺炎球菌結合体ワクチンとの両方に適合する。「リン酸アルミニウム」として公知のアジュバントは、典型的には、少量の硫酸塩も頻繁に含有しているヒドロキシリン酸アルミニウムである（すなわち、アルミニウムヒドロキシホスフェートサルフェート（ａｌｕｍｉｎｉｕｍ ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｕｌｆａｔｅ））。これらは、沈殿により得ることができ、沈殿中の反応条件および濃度は、塩中のヒドロキシルのホスフェートによる置換の程度に影響する。ヒドロキシリン酸塩は、通常、ＰＯ_４／Ａｌモル比が０．３〜１．２である。ヒドロキシリン酸塩は、ヒドロキシル基の存在により厳密なＡｌＰＯ_４から区別できる。例えば、３１６４ｃｍ^−１（例えば２００℃に加熱時）でのＩＲスペクトルのバンドは、構造上のヒドロキシルの存在を示す。

リン酸アルミニウムアジュバントのＰ／Ａｌモル比は、通常、０．３〜１．２、好ましくは０．８〜１．２または０．８５〜１．０、より好ましくは約０．９である。少なくとも０．５のＰ／Ａｌモル比が、より良好な熟成特性を有するアジュバントを提供できる。

リン酸アルミニウムアジュバントは、通常、非晶質である（すなわち、Ｘ線に対して非晶質）。これは、通常、粒子状である（例えば、透過型電子顕微鏡写真により観察されるような板状の形態）。板の典型的な直径は、１０〜１００ｎｍであり、これらは、０．５〜２０μｍのサイズ（例えば約１〜１０μｍ）の凝集体を形成する。ｐＨ７．４にてＡｌ^＋＋＋１ｍｇあたり０．７〜１．５ｍｇタンパク質の吸着能力が、リン酸アルミニウムアジュバントについて報告されている。

典型的なアジュバントは、０．８４〜０．９２のＰ／Ａｌモル比を有する非晶質リン酸アルミニウムであり、このアジュバントは、０．６ｍｇ Ａｌ^３＋／ｍｌで含まれることができる。

患者に投与するための組成物中のＡｌ^＋＋＋の濃度は、好ましくは５ｍｇ／ｍｌ未満、例えば≦４ｍｇ／ｍｌ、≦３ｍｇ／ｍｌ、≦２ｍｇ／ｍｌ、≦１ｍｇ／ｍｌなどである。好ましい範囲は、０．２〜１ｍｇ／ｍｌである。０．８５ｍｇ／用量の最大Ａｌ^＋＋＋濃度が好ましい。

リン酸アルミニウムのゼロ電荷点（ＰＺＣ）は、ヒドロキシルのホスフェートによる置換の程度と反比例し、この置換の程度は、沈殿により塩を調製するために用いる反応条件および反応物の濃度に依存して変動できる。ＰＺＣは、溶液中の遊離ホスフェートイオンの濃度を変化させること（より多いホスフェート＝より酸性側のＰＺＣ）、またはヒスチジン緩衝剤のような緩衝剤を加えること（ＰＺＣをより塩基性にする）によっても変更される。本発明に従って用いられるリン酸アルミニウムは、通常、４．０〜７．０、より好ましくは５．０〜６．５、例えば約５．７のＰＺＣを有する。

「水酸化アルミニウム」として公知のアジュバントは、典型的にはオキシ水酸化アルミニウム塩であり、これは、通常、少なくとも部分的に結晶である。式ＡｌＯ（ＯＨ）で表すことができるオキシ水酸化アルミニウムは、その他のアルミニウム化合物から、赤外（ＩＲ）分光法により、特に１０７０ｃｍ^−１での吸収帯および３０９０〜３１００ｃｍ^−１での強いショルダーの存在により区別できる［参考文献１０９の第９章］。水酸化アルミニウムアジュバントは、通常、約１１．４のＰＺＣを有する。

本発明のある実施形態において、アジュバント成分は、水酸化アルミニウムとリン酸アルミニウムの両方の混合物を含む。この場合、水酸化物よりも多くのリン酸アルミニウムが存在し、例えば、少なくとも２：１、例えば≧５：１、≧６：１、≧７：１、≧８：１、≧９：１などの重量比であってよい。最も好ましくは、しかし、アジュバント成分は、水酸化アルミニウムを含まない。よって、組成物は、ヒドロキシリン酸アルミニウムを含んでよいが、オキシ水酸化アルミニウムは含まないことがある。

本発明の好ましい組成物において、ｆＨＢＰは、リン酸アルミニウムアジュバントに吸着される。組成物中の全ｆＨＢＰの少なくとも５０％、例えば＞５０％、＞６０％、＞７０％、＞８０％、＞９０％、＞９５％または実質的に１００％が吸着されてよい。吸着されたｆＨＢＰの割合は、処方の間に塩濃度および／またはｐＨを変更することにより制御でき、例えば、通常、より高いＮａＣｌ濃度は、ｆＨＢＰの吸着を減少させることができる。ｆＨＢＰの安定的な吸着を容易にするために、３つの有用な技術を用いてよい。（ｉ）吸着は、アジュバントのＰＺＣと等しいかまたはそれ未満のｐＨで生じ得る；（ｉｉ）ｆＨＢＰとアジュバントとを、ｆＨＢＰのｐＩとアジュバントのＰＺＣとがともに５．０〜７．０の範囲内になるように選択する；そして（ｉｉｉ）ｆＨＢＰがアジュバントのＰＺＣより高い等電点を有する場合、緩衝剤を加えてｐＨをＰＺＣの１．２ｐＨ単位以内にする。

本発明の組成物を調製するために用いられるアルミニウム塩（複数可）の懸濁物は、緩衝剤（例えばリン酸塩またはヒスチジンまたはＴｒｉｓ緩衝剤）を含んでよいが、常に必要なわけではない。懸濁物は、好ましくは滅菌され、発熱物質を含まない。懸濁物は、１．０〜２０ｍＭ、好ましくは５〜１５ｍＭ、より好ましくは約１０ｍＭの濃度で存在する遊離の水性ホスフェートイオンを含んでよい。懸濁物は、塩化ナトリウムも含んでよい。

アルミニウム塩（複数可）の代替として、種々の水中油型アジュバントが公知である。これらは、典型的には、少なくとも１種の油と少なくとも１種の界面活性剤とを含み、油（複数可）および界面活性剤（複数可）は、生分解性（代謝可能）であり、生体適合性である。エマルジョン中の油滴は、通常、直径５μｍ未満であり、サブミクロンの直径さえ有してよく、これらの小さいサイズは、マイクロフルイダイザーを用いて安定なエマルジョンを得ることにより達成される。２２０ｎｍ未満のサイズの液滴は、フィルタ滅菌に供することができるので好ましい。

本発明は、動物（例えば魚類）または植物の供給源からのもののような油を用いることができる。植物油の供給源は、堅果、種子および穀粒を含む。ピーナツ油、大豆油、ココナツ油およびオリーブ油が、最も一般的に入手可能な堅果油の例である。例えばホホバ豆から得られるホホバ油を用いることができる。種子油は、紅花油、綿実油、ひまわり種子油、ごま種子油などを含む。穀粒の群において、コーン油が最も容易に入手可能であるが、小麦、オート麦、ライ麦、米、テフ、ライ小麦などのようなその他の穀類の穀粒の油も用いてよい。グリセロールおよび１，２−プロパンジオールの６〜１０炭素脂肪酸エステルは、種子油中に天然に存在しないが、堅果油および種子油から出発する適切な材料の加水分解、分離およびエステル化により調製し得る。哺乳動物の乳からの脂肪および油は代謝可能であり、よって、本発明の実施において用いてよい。動物の供給源から純粋な油を得るために必要な分離、精製、けん化およびその他の手段の手順は、当該技術において周知である。ほとんどの魚類は、容易に回収し得る代謝可能な油を含有する。例えば、タラ肝油、サメ肝油および鯨ろうのような鯨油は、本明細書において用い得る魚油のいくつかの例である。いくつかの分岐鎖油が、５炭素イソプレンユニットで生化学的に合成され、通常、テルペノイドとよばれる。サメ肝油は、スクアレン、２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサエンとして公知の分岐不飽和テルペノイドを含有し、これは、本明細書において特に好ましい。スクアレンの飽和類似体であるスクワランも好ましい油である。スクアレンおよびスクワランを含む魚油は、商業的な供給源から容易に入手可能であるか、または当該技術において公知の方法により得ることができる。その他の好ましい油は、トコフェロールである。油の混合物を用いることができる。

組成物がトコフェロールを含む場合、α、β、γ、δ、εまたはξトコフェロールのいずれを用いることもできるが、α−トコフェロールが好ましい。トコフェロールは、いくつかの形態、例えば異なる塩および／または異性体を取ることができる。塩は、コハク酸塩、酢酸塩、ニコチン酸塩などのような有機塩を含む。Ｄ−α−トコフェロールおよびＤＬ−α−トコフェロールの両方を用いることができる。好ましいα−トコフェロールは、ＤＬ−α−トコフェロールであり、このトコフェロールの好ましい塩は、コハク酸塩である。

界面活性剤は、それらの「ＨＬＢ」（親水性／親油性比）により分類できる。本発明の好ましい界面活性剤は、少なくとも１０、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも１６のＨＬＢを有する。本発明は、それらに限定されないが、ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（一般的にＴｗｅｅｎとよばれる）、特にポリソルベート２０およびポリソルベート８０；線状ＥＯ／ＰＯブロックコポリマーのようなＤＯＷＦＡＸ（商標）の商標の下で販売されるエチレンオキシド（ＥＯ）、プロピレンオキシド（ＰＯ）および／またはブチレンオキシド（ＢＯ）のコポリマー；反復エトキシ（オキシ−１，２−エタンジイル）基の数が変動し得るオクトキシノール、特にオクトキシノール−９（ＴｒｉｔｏｎＸ−１００またはｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）が興味深い；（オクチルフェノキシ）ポリエトキシエタノール（ＩＧＥＰＡＬ ＣＡ−６３０／ＮＰ−４０）；ホスファチジルコリン（レシチン）のようなリン脂質；トリエチレングリコールモノラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ３０）のようなラウリル、セチル、ステアリルおよびオレイルアルコールに由来するポリオキシエチレン脂肪酸エーテル（Ｂｒｉｊ界面活性剤として公知である）；ならびにソルビタントリオレエート（Ｓｐａｎ８５）およびソルビタンモノラウレートのようなソルビタンエステル（一般的にＳＰＡＮとして公知である）を含む界面活性剤を用いることができる。エマルジョンに含めるために好ましい界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、Ｓｐａｎ８５（ソルビタントリオレエート）、レシチンおよびＴｒｉｔｏｎＸ−１００である。

界面活性剤の混合物、例えばＴｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ８５混合物を用いることができる。ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ８０）のようなポリオキシエチレンソルビタンエステルと、ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール（ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）のようなオクトキシノールとの組み合わせも適切である。別の有用な組み合わせは、ラウレス−９とポリオキシエチレンソルビタンエステルおよび／またはオクトキシノールとを含む。

界面活性剤の好ましい量（重量％）は、ポリオキシエチレンソルビタンエステル（例えばＴｗｅｅｎ８０）０．０１〜１％、特に約０．１％；オクチル−またはノニルフェノキシポリオキシエタノール（例えばＴｒｉｔｏｎＸ−１００またはＴｒｉｔｏｎシリーズのその他の洗浄剤）０．００１〜０．１％、特に０．００５〜０．０２％；ポリオキシエチレンエーテル（例えばラウレス９）０．１〜２０％、好ましくは０．１〜１０％、特に０．１〜１％または約０．５％である。

本発明で有用な具体的な水中油型エマルジョンアジュバントは、それらに限定されないが、以下のものを含む：
・スクアレンとＴｗｅｅｎ８０とＳｐａｎ８５とのサブミクロンのエマルジョン。エマルジョンの容量での組成は、約５％スクアレン、約０．５％ポリソルベート８０および約０．５％Ｓｐａｎ８５であり得る。重量の点において、これらの比率は、４．３％スクアレン、０．５％ポリソルベート８０および０．４８％Ｓｐａｎ８５になる。このアジュバントは、参考文献１０９の第１０章および参考文献１１３の第１２章により詳細に記載されるように、「ＭＦ５９」［１１０〜１１２］として公知である。ＭＦ５９エマルジョンは、シトレートイオン、例えば１０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液を含んでよい。
・スクアレンとトコフェロールとポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）とのエマルジョン。エマルジョンは、リン酸緩衝生理食塩水を含んでよい。これは、Ｓｐａｎ８５（例えば１％で）および／またはレシチンも含んでよい。これらのエマルジョンは、２〜１０％スクアレン、２〜１０％トコフェロールおよび０．３〜３％Ｔｗｅｅｎ８０を有してよく、スクアレン：トコフェロールの重量比は、より安定なエマルジョンが得られるので、好ましくは≦１である。スクアレンとＴｗｅｅｎ８０とは、約５：２の容量比または約１１：５の重量比で存在してよい。あるこのようなエマルジョンは、Ｔｗｅｅｎ８０をＰＢＳ中に溶解して２％溶液を得て、次いで９０ｍｌのこの溶液を、（５ｇのＤＬ−α−トコフェロールおよび５ｍｌスクアレン）の混合物と混合し、次いで混合物を微小流動化する（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｓｅ）ことにより作製できる。得られるエマルジョンは、１００〜２５０ｎｍ、好ましくは約１８０ｎｍの平均直径のサブミクロンの油滴を有し得る。エマルジョンは、３−脱−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（３ｄ−ＭＰＬ）も含んでよい。この型の別の有用なエマルジョンは、１ヒト用量あたりに０．５〜１０ｍｇスクアレン、０．５〜１１ｍｇトコフェロールおよび０．１〜４ｍｇポリソルベート８０を含んでよい［１１４］。
・スクアレンとトコフェロールとＴｒｉｔｏｎ洗浄剤（例えばＴｒｉｔｏｎＸ−１００）とのエマルジョン。エマルジョンは、３ｄ−ＭＰＬも含んでよい。エマルジョンは、リン酸緩衝液を含有してよい。
・ポリソルベート（例えばポリソルベート８０）とＴｒｉｔｏｎ洗浄剤（例えばＴｒｉｔｏｎＸ−１００）とトコフェロール（例えばα−トコフェロールスクシネート）とを含むエマルジョン。エマルジョンは、これらの３成分を、約７５：１１：１０の質量比で含んでよく（例えば７５０μｇ／ｍｌポリソルベート８０、１１０μｇ／ｍｌＴｒｉｔｏｎＸ−１００および１００μｇ／ｍｌα−トコフェロールスクシネート）、これらの濃度は、抗原からのこれらの成分のいずれの寄与も含むべきである。エマルジョンは、スクアレンも含んでよい。エマルジョンは、３ｄ−ＭＰＬも含んでよい。水相は、リン酸緩衝液を含有してよい。
・スクワランとポリソルベート８０とポロキサマー４０１（「Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）Ｌ１２１」）とのエマルジョン。エマルジョンは、リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４中で処方できる。このエマルジョンは、ムラミルジペプチドについての有用な送達媒体であり、スレオニル−ＭＤＰとともに「ＳＡＦ−１」アジュバント中で用いられている［１１５］（０．０５〜１％Ｔｈｒ−ＭＤＰ、５％スクワラン、２．５％ＰｌｕｒｏｎｉｃＬ１２１および０．２％ポリソルベート８０）。これは、「ＡＦ」アジュバントでのようにＴｈｒ−ＭＤＰなしで用いることもできる［１１６］（５％スクワラン、１．２５％ＰｌｕｒｏｎｉｃＬ１２１および０．２％ポリソルベート８０）。微小流動化が好ましい。
・スクアレンと水性溶媒とポリオキシエチレンアルキルエーテル親水性非イオン界面活性剤（例えばポリオキシエチレン（１２）セトステアリルエーテル）と疎水性非イオン界面活性剤（例えばソルビタンモノオレエートまたは「Ｓｐａｎ８０」のようなソルビタンエステルまたはマンニドエステル）とを含むエマルジョン。エマルジョンは、好ましくは、熱可逆性であり、かつ／または少なくとも９０％の油滴（容量による）が２００ｎｍ未満のサイズである［１１７］。エマルジョンは、アルジトール、凍結保護剤（例えばドデシルマルトシドおよび／またはスクロースのような糖）、および／またはアルキルポリグリコシドの１または複数も含んでよい。このようなエマルジョンは、凍結乾燥してよい。
・０．５〜５０％の油と、０．１〜１０％のリン脂質と、０．０５〜５％の非イオン界面活性剤とを含むエマルジョン。参考文献１１８に記載されるように、好ましいリン脂質成分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリンおよびカルジオリピンである。サブミクロンの液滴サイズが有利である。
・代謝不可能油（例えば軽鉱油（ｌｉｇｈｔ ｍｉｎｅｒａｌ ｏｉｌ））と少なくとも１種の界面活性剤（例えばレシチン、Ｔｗｅｅｎ８０またはＳｐａｎ８０）とのサブミクロンの水中油型エマルジョン。ＱｕｉｌＡサポニン、コレステロール、サポニン親油性物質結合体（例えば脂肪族アミンをデスアシルサポニンに、グルクロン酸のカルボキシル基を介して付加することにより生成される、参考文献１１９に記載されるＧＰＩ−０１００）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ｄｉｍｅｔｈｙｉｄｉｏｃｔａｄｅｃｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ）ブロミドおよび／またはＮ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）プロパンジアミンのような添加物を含んでよい。
・鉱油と、非イオン親油性エトキシ化脂肪アルコールと、非イオン親水性界面活性剤（例えばエトキシ化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー）とを含むエマルジョン［１２０］。
・鉱油と、非イオン親水性エトキシ化脂肪アルコールと、非イオン親油性界面活性剤（例えばエトキシ化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー）とを含むエマルジョン［１２０］。
・サポニン（例えばＱｕｉｌＡまたはＱＳ２１）とステロール（例えばコレステロール）とが、らせん状ミセルとして会合しているエマルジョン［１２１］。

水中油型エマルジョンは、それら自体でアジュバントとして、またはさらなる免疫賦活性化合物、例えば免疫賦活性オリゴヌクレオチド、３ｄ−ＭＰＬなどのための担体として用いることができる。

医薬組成物
本発明は、患者に投与するための医薬組成物に関する。これらは、典型的には、薬学的に許容される担体を含む。薬学的に許容される担体の詳細な考察は、参考文献１２２で入手可能である。

有効投薬容量は、日常的に確立できるが、組成物の典型的なヒト用量は、例えば筋肉内注射について約０．５ｍｌの容量である。これは、ＰＲＥＶＮＡＲ（商標）製品、ＲＩＶＭ ＯＭＶベースのワクチンおよびＭｅＮＺＢ（商標）についての投薬容量である。これらの投薬容量は、筋肉内注射について典型的であるが、同様の用量をその他の送達経路のために用いてよく、例えば噴霧化（ａｔｏｍｉｓａｔｉｏｎ）用の鼻内ＯＭＶベースのワクチンは、１スプレーあたり約１００μｌまたは約１３０μｌの容量を有して４回のスプレーで投与して、約０．５ｍｌの合計用量を与えてよい。

本発明の組成物のｐＨは、通常、６〜８、より好ましくは６．５〜７．５（例えば約７）である。組成物は、緩衝剤、例えばＴｒｉｓ緩衝剤、クエン酸塩緩衝剤、リン酸塩緩衝剤、コハク酸ナトリウム緩衝剤またはヒスチジン緩衝剤を含んでよい。

組成物は、滅菌され、かつ／または発熱物質を含まなくてもよい。本発明の組成物は、ヒトに関して等張であってよい。

患者に投与するための本発明の組成物は、免疫原性であり、より好ましくはワクチン組成物である。本発明によるワクチンは、予防的（すなわち感染を防止する）または治療的（すなわち感染を処置する）のいずれかであってよいが、典型的には予防的である。ワクチンとして用いられる免疫原性組成物は、免疫学的有効量の抗原（複数可）と、必要に応じて任意のその他の成分とを含む。「免疫学的有効量」により、単回用量または連続するものの一部のいずれかとしてその量を個体に投与することが、処置または予防のために有効であることを意味する。この量は、処置される個体の健康および体調、年齢、処置される個体の分類群（例えば非ヒト霊長類、霊長類など）、抗体を合成する個体の免疫系の能力、望まれる防御の程度、ワクチンの処方、医療状態についての処置医の評価およびその他の関連する因子に依存して変動する。この量は、日常的な試験により決定できる比較的広い範囲にあると予測される。本発明の組成物の抗原含量は、通常、１用量あたりのタンパク質の量で表される。

髄膜炎菌および肺炎球菌は、身体の種々の領域に影響し、よって、本発明の組成物は、種々の液体の形態で調製してよい。例えば、組成物は、溶液または懸濁液のいずれかとしての注射用剤として調製してよい。組成物は、例えば吸入器により、微細な噴霧（ｓｐｒａｙ）を用いての肺投与のために調製してよい。組成物は、例えばスプレー剤またはドロップ剤として鼻、耳または眼投与のために調製してよい。筋肉内投与のための注射用剤が典型的である。

本発明の組成物は、多回用量フォーマットで包装される場合は特に、抗菌剤を含んでよい。チオメルサールおよび２−フェノキシエタノールのような抗菌剤が、ワクチン中で通常見られるが、水銀を含まない防腐剤を用いるか、または防腐剤を全く用いないことが好ましい。

本発明の組成物は、洗浄剤、例えばＴｗｅｅｎ８０のようなＴｗｅｅｎ（ポリソルベート）を含んでよい。洗浄剤は、通常、低いレベル、例えば＜０．０１％で存在する。

本発明の組成物は、張度を得るためにナトリウム塩（例えば塩化ナトリウム）を含んでよい。１０±２ｍｇ／ｍｌ ＮａＣｌの濃度、例えば約９ｍｇ／ｍｌが典型的である。

処置方法
本発明は、本発明の組成物を哺乳類に投与するステップを含む、哺乳類における免疫応答を惹起するための方法も提供する。免疫応答は、好ましくは、髄膜炎菌と肺炎球菌との両方に対して防御的であり（少なくとも、組成物中にある髄膜炎菌血清群と肺炎球菌血清型とについて）、好ましくは抗体を含む。方法は、既に初回刺激（ｐｒｉｍｅ）された患者における追加免疫応答を惹起し得る。

哺乳類は、好ましくはヒトである。ワクチンが予防用である場合、ヒトは、好ましくは、小児（例えば、よちよち歩きの幼児または幼児）または１０代の若者であり、ワクチンが治療用である場合、ヒトは好ましくは成人である。小児用を意図するワクチンは、例えば安全性、投薬量、免疫原性などを評価するために、成人に投与してもよい。

本発明は、医薬品として用いるための本発明の組成物も提供する。医薬品は、好ましくは、上記のように、哺乳類における免疫応答を惹起するために用いられ（すなわちこれは免疫原性組成物である）、より好ましくはワクチンである。

本発明は、哺乳類における上記のような免疫応答を惹起するための医薬品の製造における、（ｉ）少なくとも１つの結合体化肺炎球菌莢膜糖と、（ｉｉ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）抗原との使用も提供する。

これらの使用および方法は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓおよび／またはＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを原因とする疾患、例えば細菌性（またはより具体的には髄膜炎菌および／もしくは肺炎球菌性）髄膜炎もしくは敗血症の予防および／または処置のためであることが好ましい。

治療処置の効力を確認するある方法は、本発明の組成物の投与後の髄膜炎菌および／または肺炎球菌への感染を監視することを含む。予防的処置の効力を確認するある方法は、組成物の投与後の抗原に対する免疫応答を監視することを含む。本発明の組成物の免疫原性は、それらを試験被験体（例えば１２〜１６ヶ月齢の小児、または動物モデル［１２３］）に投与し、次いで、髄膜炎菌についての血清殺菌性抗体（ＳＢＡ）およびＥＬＩＳＡ力価（ＧＭＴ）を含む標準的なパラメータを決定することにより決定できる。これらの免疫応答は、通常、組成物の投与の４週間後付近に決定され、組成物の投与前に決定された値と比較される。少なくとも４倍または８倍のＳＢＡの増加が好ましい。組成物の１回より多い用量を投与する場合、１回より多い投与後測定を行ってよい。

本発明の組成物は、通常、患者に直接投与される。直接送達は、非経口注射（例えば皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内または組織の間隙の空間へ）または任意のその他の適切な経路により達成してよい。本発明は、全身および／または粘膜免疫を惹起するために用いてよい。大腿または上腕への筋肉内投与が好ましい。注射は、針を介して（例えば皮下針）であってよいが、無針注射を代わりに用いてよい。典型的な筋肉内用量は、０．５ｍｌである。

投薬処置は、単回用量計画または多回用量計画であり得る。多回用量は、一次免疫化計画および／または追加免疫化計画で用い得る。一次用量計画の後に、追加用量計画を行い得る。初回刺激用量間（例えば４〜１６週間）、および初回刺激と追加刺激との間の適切なタイミングは、日常的に決定できる。多回用量（例えば２回用量たは３回用量）は、肺炎球菌と髄膜炎菌との両方に対する免疫を確立するために典型的である。

本発明のいくつかの実施形態において、肺炎球菌および髄膜炎菌の抗原は、別々であるが共投与（ｃｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）してよく、すなわち２つの抗原を、同時、別々または逐次的に投与してよい。典型的には、しかし、２つの抗原を、同時の組み合わせた投与のために混合する。

全般
本発明の実施は、そうでないと記載しない限り、当該技術の技量内の化学、生化学、分子生物学、免疫学および薬理学の従来の方法を用いる。このような技術は、文献に詳細に説明されている。例えば参考文献１２４〜１３０などを参照されたい。

用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「からなる」を包含し、例えばＸを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物は、Ｘのみからなり得るか、または何か追加のもの、例えばＸ＋Ｙを含み得る。

数値ｘに関する「約」との用語は、任意選択であり、例えばｘ±１０％を意味する。

本発明が「エピトープ」に関する場合、このエピトープは、Ｂ細胞エピトープおよび／またはＴ細胞エピトープであってよいが、通常、Ｂ細胞エピトープである。このようなエピトープは、経験的に同定できる（例えばＰＥＰＳＣＡＮ［１３１、１３２］または類似の方法を用いて）か、またはこれは予想できる（例えばＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ抗原インデックス（ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｉｎｄｅｘ）［１３３］、行列に基づくアプローチ［１３４］、ＭＡＰＩＴＯＰＥ［１３５］、ＴＥＰＩＴＯＰＥ［１３６、１３７］、ニューラルネットワーク（neural network）［１３８］、ＯｐｔｉＭｅｒ＆ＥｐｉＭｅｒ［１３９、１４０］、ＡＤＥＰＴ［１４１］、Ｔｓｉｔｅｓ［１４２］、親水性［１４３］、抗原インデックス［１４４］または参考文献１４５〜１４９に開示される方法などを用いて）。エピトープは、抗体またはＴ細胞受容体の抗原結合部位により認識され、それと結合する抗原の部分であり、これらは、「抗原決定基」とよぶこともできる。

本発明が、「精製された」抗原を用いる場合、この抗原は、それが天然に存在する環境から分離されている。例えば、抗原は、存在する任意のその他の精製された抗原に由来するもの以外のその他の髄膜炎菌成分を実質的に有さない。精製された抗原の混合物は、２つの抗原が天然に混合されて存在していても、それぞれの抗原を別々に精製し、次いでそれらを再び組み合わせることにより典型的に調製される。

２つのアミノ酸配列間のパーセンテージ配列同一性についての言及は、整列させたときに、アミノ酸のそのパーセンテージが、２つの配列の比較において同じであることを意味する。このアラインメントおよびパーセント相同性または配列同一性は、当該技術において公知のソフトウェアプログラム、例えば参考文献１５０の７．７．１８節に記載されるものを用いて決定できる。好ましいアラインメントは、１２のギャップ開始ペナルティおよび２のギャップ伸長ペナルティでのアフィンギャップ検索、６２のＢＬＯＳＵＭマトリクスを用いるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムにより決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、参考文献１５１に開示されている。

「実質的に」との語句は、「完全に」を除外せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まないことがある。必要であれば、「実質的に」との語句を、本発明の定義から省くことができる。

図１は、６Ｂフィンランド肺炎球菌に対するオプソニン作用活性アッセイの結果を示す。このグラフは、血清希釈に対するＯＰＡ死滅％を示す。記号は、陽性対照抗６Ｂ血清からのデータを示す中実菱形（◆）、および予備免疫化血清を用いたデータを示す中実三角形（▲）以外は、マウス群１〜７について以下に説明されている。いくつかの線は、Ｘ軸に沿っている（すなわち０％活性）ので、見えない。

血清群Ｂ髄膜炎菌と肺炎球菌との両方に対して防御するためのワクチンを得るために、髄膜炎菌ｆＨＢＰ抗原（ＭＣ５８株；５０μｇ／ｍｌ）を、７価肺炎球菌莢膜糖結合体混合物（４μｇ／ｍｌでの血清型４、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆ；８μｇ／ｍｌでの６Ｂ）と組み合わせた。組成物を、７群のＣＤ１マウス（１群あたり８匹のマウス）に、２回用量計画（第０日および第２１日）で腹腔内投与した。リン酸アルミニウムアジュバントを用いた。組成物はいずれも、髄膜炎菌外膜小胞を含まなかった。

５つの異なる組成物（Ａ〜Ｅ）をマウスに投与した：

７群のマウス（１〜７）を用い、これらに以下のように組成物Ａ〜Ｅを与えた：

血液を、免疫応答の評価のために第１６日および第３５日に採取した。肺炎球菌免疫原性を、オプソニン作用アッセイによりおよび糖に対する抗体力価により評価した。髄膜炎菌免疫原性は、２つの異なる株（ＭＣ５８およびＨ４４／７６）に対する血清殺菌性アッセイにより評価した。

髄膜炎菌ＳＢＡ力価は、以下のとおりであった：

力価は、群３〜６の全てで許容可能であったが、３５日後での最高力価が、両方の株について群５で見られた。これらのデータは、肺炎球菌結合体をｆＨＢＰに加えることにより、抗ｆＨＢＰ応答が増進できたことを示す。

ＯＰＡ活性を、肺炎球菌の６Ｂフィンランド株に対して、仔ウサギ補体を用いる参考文献１５２のＵＡＢ−ＭＯＰＡ法を用いて評価した。結果を、図１に示す。最良の応答は、群６（□）、次いで群２（△）である。群２と群６との違いは、群６についての免疫化組成物が、髄膜炎菌ｆＨＢＰを肺炎球菌結合体に加えて含んでいたことであった。よって、これらのデータは、ｆＨＢＰを肺炎球菌結合体に加えることにより、抗肺炎球菌応答を、少なくとも血清型６Ｂに対して増進できることを示す。

血清を、ＴＩＧＲ４株に対しても評価した。ＯＰＡ応答は、群２および群６において同様であった。血清を、７価結合体によりカバーされない肺炎球菌血清型３５Ｂに対しても試験した。予測されたように、血清は、ＯＰＡアッセイにおいて非常に効果的というわけではなかった。

ＯＰＡアッセイの結果は、５０％の細菌の死滅をもたらす血清希釈の逆数であるＯＰＡ力価として表すことができる。５０％の死滅閾値が２つの希釈の間にある場合、力価は、ある範囲として表される。この尺度により、血清型６Ｂ株および血清型４株に対する力価は、免疫化の２１日後に以下のとおりであった：

全体として、よって、これらのデータは、結合体化肺炎球菌莢膜糖が、髄膜炎菌ｆＨＢＰの免疫原性を増進でき、その逆もそうであることを示す。

別々の実験において、マウスを、（ｉ）血清群Ｂ髄膜炎菌のＭＣ５８株から調製した外膜小胞１０μｇ、（ｉｉ）７価肺炎球菌莢膜糖結合体混合物０．４μｇ、および（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）との混合物で免疫化した。全ての組成物は、水酸化アルミニウムアジュバントを含んでいた。小胞および血清型１４の糖に対するＩｇＧ力価（ＧＭＴ）を、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイにより測定した。第３４日（第１日および第２１日における免疫化の後）に、力価は、３つの群において、相対的単位（ＲＬＵ／ｍｌ）で測定して、以下のとおりであった：

これらのデータは不完全で、十分に決定的ではないが、群（ｉｉ）と比較して群（ｉｉｉ）における抗ＯＭＶ応答の減少は、肺炎球菌の糖とｆＨＢＰとの間の有利な相互作用が、全ての髄膜炎菌抗原について普遍的ではないことを示唆する。

本発明は、例としてのみ記載され、本発明の範囲および精神内に留まったまま改変を行うことができることが理解される。

参考文献

Claims (31)

1. （ｉ）結合体化肺炎球菌莢膜糖と；
   （ｉｉ）２つの異なるＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）ポリペプチドとを含むが、髄膜炎菌外膜小胞を含まない免疫原性組成物であって、ここで、前記２つの異なるｆＨＢＰポリペプチドは、
   （ａ）配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド；および、配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２ポリペプチド、または
   （ｂ）配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド；および、配列番号２と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２ポリペプチド
   のいずれかである、組成物。
2. （ｉ）結合体化肺炎球菌莢膜糖と；
   （ｉｉ）Ｎ末端システインにて脂質付加されている髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）抗原とを含むが、髄膜炎菌外膜小胞を含まない免疫原性組成物。
3. （ｉ）血清型１８Ｃ由来の解重合した糖を含む結合体化肺炎球菌莢膜糖と；
   （ｉｉ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）抗原とを含むが、髄膜炎菌外膜小胞を含まない免疫原性組成物。
4. 前記ｆＨＢＰ抗原が、
   （ａ）配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド；および、配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２ポリペプチド、または
   （ｂ）配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド；および、配列番号２と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２ポリペプチド
   のいずれかである、請求項２または請求項３に記載の組成物。
5. ２以上の異なる肺炎球菌血清型からの莢膜糖を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
6. 莢膜糖が、以下の肺炎球菌血清型：１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆから選択される、請求項５に記載の組成物。
7. 血清型４、血清型６Ｂ、血清型９Ｖ、血清型１４、血清型１８Ｃ、血清型１９Ｆおよび血清型２３Ｆのそれぞれからの莢膜糖を含む、請求項５または請求項６に記載の組成物。
8. 血清型１、血清型３、血清型４、血清型５、血清型６Ａ、血清型６Ｂ、血清型７Ｆ、血清型９Ｖ、血清型１４、血清型１８Ｃ、血清型１９、血清型１９Ｆおよび血清型２３Ｆのそれぞれからの莢膜糖を含む、請求項５または請求項６に記載の組成物。
9. それぞれの血清型の糖が、ＣＲＭ１９７、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイドおよびＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅタンパク質Ｄからなる群より選択される担体タンパク質と別々に結合体化し、異なる血清型についての前記担体タンパク質が、同じまたは異なっていてよい、請求項５から８のいずれか一項に記載の組成物。
10. 配列番号６３のアミノ酸配列を含むポリペプチドおよび配列番号６５のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物。
11. 配列番号３と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の組成物。
12. リン酸アルミニウムアジュバントを含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の組成物。
13. （ｉ）リン酸アルミニウムアジュバントと、（ｉｉ）肺炎球菌血清型４、血清型６Ｂ、血清型９Ｖ、血清型１４、血清型１８Ｃ、血清型１９Ｆおよび血清型２３Ｆのそれぞれからの結合体化肺炎球菌莢膜糖であって、前記糖のそれぞれがＣＲＭ１９７担体タンパク質と結合体化している糖と、（ｉｉｉ）少なくとも２つの異なる髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質抗原であって、それらのそれぞれが、リン酸アルミニウムアジュバントに少なくとも部分的に吸着している抗原とを含む、請求項１２に記載の組成物。
14. 前記結合体化肺炎球菌莢膜糖の少なくとも１つが、リン酸アルミニウムアジュバントに吸着されている、請求項１３に記載の組成物。
15. 塩化ナトリウムおよび／または緩衝剤を含む、請求項１３または請求項１４に記載の組成物。
16. ヒスチジン緩衝剤を含む、請求項１５に記載の組成物。
17. （ａ）配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１ポリペプチドと、（ｂ）配列番号２と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２ポリペプチドと、（ｃ）配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第３ポリペプチドとの３つの異なるｆＨＢＰポリペプチドを含む、請求項１に記載の組成物。
18. 前記組成物中のｆＨＢＰポリペプチドが、Ｎ末端システインにて脂質付加されている、請求項１から１７のいずれか一項に記載の組成物。
19. 前記組成物中のｆＨＢＰポリペプチド（複数可）の全量が、６００μｇ未満である、請求項１から１８のいずれか一項に記載の組成物。
20. 前記組成物中のｆＨＢＰポリペプチド（複数可）の全量が、２００μｇ未満である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の組成物。
21. 前記組成物中のｆＨＢＰポリペプチド（複数可）の全量が、６０μｇ未満である、請求項１から２０のいずれか一項に記載の組成物。
22. 髄膜炎菌血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙの１、２、３または４つからの莢膜糖の１または複数の結合体（複数可）をさらに含む（例えば血清群Ｃ髄膜炎菌莢膜糖の結合体を含む）、請求項１から２１のいずれか一項に記載の組成物。
23. ヒドロキシリン酸アルミニウムアジュバントを含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の組成物。
24. 水酸化アルミニウムを含まない、請求項１から２３のいずれか一項に記載の組成物。
25. ポリソルベート８０を含む、請求項１から２４のいずれか一項に記載の組成物。
26. 前記組成物中のＡｌ^＋＋＋の濃度が、０．３ｍｇ／ｍｌ〜１ｍｇ／ｍｌである、請求項１から２５のいずれか一項に記載の組成物。
27. 哺乳類における免疫応答を惹起するための、請求項１から２６のいずれか一項に記載の組成物。
28. 医薬品として用いるための、請求項１から２６のいずれか一項に記載の組成物。
29. 免疫原性組成物を調製するための方法であって、前記方法は、
    （ｉ）少なくとも１つの結合体化肺炎球菌莢膜糖をリン酸アルミニウムアジュバントと混合して、結合体／アジュバント混合物を形成するステップと、（ｉｉ）前記結合体／アジュバント混合物を少なくとも１つの髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質と混合するステップとを含むか、あるいは
    （ｉ）少なくとも１つの結合体化肺炎球菌莢膜糖を少なくとも１つの髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質と混合して、抗原混合物を形成するステップと、（ｉｉ）前記抗原混合物をリン酸アルミニウムアジュバントと混合するステップとを含むか、あるいは
    （ｉ）少なくとも１つの髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質をリン酸アルミニウムアジュバントと混合して、タンパク質／アジュバント混合物を形成するステップと、（ｉｉ）前記タンパク質／アジュバント混合物を少なくとも１つの結合体化肺炎球菌莢膜糖と混合するステップとを含むか、あるいは
    （ｉ）少なくとも１つの髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質をリン酸アルミニウムアジュバントと混合して、タンパク質／アジュバント混合物を形成するステップと、（ｉｉ）少なくとも１つの結合体化肺炎球菌莢膜糖をリン酸アルミニウムアジュバントと混合して、結合体／アジュバント混合物を形成するステップと、（ｉｉｉ）前記タンパク質／アジュバント混合物および前記結合体／アジュバント混合物を混合するステップとを含む、方法。
30. 水酸化アルミニウムアジュバントを、（ｉ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質、（ｉｉ）リン酸アルミニウムアジュバント、（ｉｉｉ）結合体化肺炎球菌莢膜糖、（ｉｖ）結合体／アジュバント混合物、（ｖ）抗原混合物、または（ｖｉ）タンパク質／アジュバント混合物のいずれかと混合するステップを含まない、請求項２９に記載の方法。
31. 前記２つの異なるｆＨＢＰポリペプチドが、
    （ａ）配列番号１と少なくとも８６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド；および、配列番号３と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２ポリペプチド、または
    （ｂ）配列番号１と少なくとも８６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド；および、配列番号２と少なくとも８８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２ポリペプチド
    のいずれかである、請求項１に記載の組成物。