CN110234658B - 脑膜炎奈瑟菌组合物及其使用方法 - Google Patents

脑膜炎奈瑟菌组合物及其使用方法 Download PDF

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Abstract

在一个方面，本发明涉及包含因子H结合蛋白(fHBP)和脑膜炎奈瑟菌(Neisseria Meningitidis)非血清群B荚膜多糖的组合物。本发明进一步关于包含fHBP的组合物于诸如例如引发针对脑膜炎奈瑟菌血清群B菌株和非血清群B菌株的免疫反应的用途。本发明描述的组合物和方法涉及施用于人类，其包括成人、青少年、幼儿和婴儿。

Description

脑膜炎奈瑟菌组合物及其使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年1月31日提交的美国临时专利申请号62/452,963、2017年5月8日提交的美国临时专利申请号62/503,295、2018年1月5日提交的美国临时专利申请号62/613,945及2018年1月29日提交的美国临时专利申请号62/623,233的权益。前述所有申请的全部内容以引用方式并入本文。
发明领域
本发明涉及脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)组合物及其使用方法。
发明背景
脑膜炎奈瑟菌为可引起败血症、脑膜炎和死亡的革兰氏阴性荚膜细菌。脑膜炎奈瑟菌基于化学上和抗原上不同的多糖荚膜可分类成至少12种血清群(包括血清群A、B、C、29E、H、I、K、L、W-135(现在大多被称为W)、X、Y和Z)。这些血清群菌株中有5种(A、B、C、Y和W135)为造成大多数疾病的原因。
尽管有可用的抗生素，脑膜炎球菌脑膜炎(Meningococcal Meningitis)为一种破坏性疾病，其可在数小时内杀死儿童和年轻人。对于针对脑膜炎奈瑟菌血清群A、B、C、Y和W135和/或X的改善的免疫原性组合物是有需要的。
目前尚无能有效的市售的对抗广范围的MnB和脑膜炎奈瑟菌血清群A、C、Y和W和/或X分离株的交叉保护性疫苗或组合物。例如，迄今为止已发表的关于用于防护血清群B疾病的经核准的多组分组合物的结果尚未显示出针对表达血清群B荚膜多糖的多种脑膜炎奈瑟菌菌株的直接杀菌免疫反应，至少在青少年中。因此，需要在测定现实世界疫苗针对一组不同或异源脑膜炎奈瑟菌菌株(例如代表不同的地理区域)的覆盖率时，能有效对抗各种MnB和脑膜炎奈瑟菌血清群A、C、Y和W和/或X分离株的交叉保护性疫苗或组合物。
本发明的进一步目的是提供改善的用于施用脑膜炎奈瑟菌疫苗，尤其是施用于儿童的计划表。虽然侵入性脑膜炎奈瑟菌病(IMD)的发病率随年龄而变化，但在1个月到1岁大之间的婴儿期的发病率通常最高，发病率的第二高峰是在青少年。在美国，在1998年至2007年之间，脑膜炎奈瑟菌病在2岁以下的婴儿的总发病率为每10万人中3.9人。在2至10岁的儿童中，发病率为每10万人中0.68人，其中有41％的病例发生在2至3岁的儿童中。来自澳大利亚的国家监测数据显示该疾病的发病率高峰在4岁或更小的儿童中，次高峰发生在青少年和年轻人中；全部病例中约85％归因于血清群B疾病。
发明概述
为满足这些和其他需求，本发明涉及脑膜炎奈瑟菌组合物及其使用方法。
本发明人意外发现一种组合物，该组合物包括至少一种因子H结合蛋白(fHBP)和至少一种脑膜炎奈瑟菌荚膜糖缀合物。该组合物出奇地稳定并引发针对表达与该多组分组合物中的变体fHBP同源的fHBP变体的菌株的免疫反应及针对表达与该多组分组合物中的变体fHBP异源的fHBP变体的菌株的免疫反应。
该组合物包括第一脂化多肽(其包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列)；第二脂化多肽(其包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列)；与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖；与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖；与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖；和与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖。
在一个实施方案中，该组合物包含脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖，该脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与己二酸二酰肼(ADH)接头缀合，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenAAH-TT缀合物)；脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖，该脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶/>化学过程与ADH接头缀合，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenCAH-TT缀合物)；脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖，该脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶/>化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合(MenW-TT缀合物)；及脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖，该脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶/>化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合(MenY-TT缀合物)。
在一个方面，本发明涉及试剂盒，该试剂盒包括(a)第一组合物，其包括脂化的MenB rLP2086亚族A多肽和脂化的MenB rLP2086亚族B多肽；(b)第二组合物，其包括与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖；与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖；与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖；和与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖。在一个实施方案中，该第一组合物为液体组合物且该第二组合物为冻干组合物。在另一实施方案中，该试剂盒未进一步包括任一下列免疫原性组合物：MENACTRA(R)、MENVEO(R)、ADACEL(R)、HAVRIX(R)、GARDASIL(R)、REPEVAX或其任何组合。在一个实施方案中，该试剂盒包括布洛芬(ibuprofen)、扑热息痛(paracetamol)和阿莫西林(amoxicillin)中任一者。
在一个方面，本发明涉及免疫原性组合物，该免疫原性组合物包括液体组合物和冻干组合物，该液体组合物包括(i)包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第一脂化多肽；和(ii)包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的第二脂化多肽；该冻干组合物包括：通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与己二酸二酰肼(ADH)接头缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenAAH-TT缀合物)；通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶/>化学过程与ADH接头缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenCAH-TT缀合物)；在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶/>化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖(MenW-TT缀合物)；和在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶/>化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖(MenY-TT缀合物)。在一个实施方案中，该冻干组合物以液体组合物重构。
在另一方面，本发明涉及诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的杀菌免疫反应的方法。在一些实施方案中，该方法包括对人施用包括fHBP蛋白的组合物。在一些实施方案中，该方法包括对人施用包含多肽的组合物，该多肽包含与下列群组中的任一序列所示的氨基酸序列具有至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.9％同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ IDNO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ IDNO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ IDNO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ IDNO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：43、SEQ IDNO：44、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ IDNO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ IDNO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：61和SEQID NO：62。在一些实施方案中，该方法包括对人施用包括第一脂化多肽和第二脂化多肽的组合物，该第一脂化多肽包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；该第二脂化多肽包括SEQ IDNO：2所示的氨基酸序列。
在另一方面，本发明涉及诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的杀菌免疫反应的方法。该方法包括对人施用包括下列的组合物：第一脂化多肽，其包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；第二脂化多肽该，其包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖；与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖；与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖；和与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖。
在一个方面，本发明涉及用于在任何年龄的患者中引发免疫反应的方法。该方法包括对人施用包括第一脂化多肽和第二脂化多肽的组合物，该第一脂化多肽包括SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列；该第二脂化多肽包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。在一个实施方案中，该组合物进一步包括聚山梨醇酯80。在一个实施方案中，该组合物进一步包括铝。在一个实施方案中，该组合物进一步包括组氨酸。在一个实施方案中，该组合物进一步包括氯化钠。在一个实施方案中，该组合物进一步包括聚山梨醇酯80、铝、组氨酸和氯化钠。再在另一实施方案中，该组合物进一步包括与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖；与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖；与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖；和与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖。
附图简要说明
图1为实施例6中描述的MnB二价rLP2086组合物在没有或有MenACWY-TT组合物的存在下的迭加IEX-HPC色谱图。
图2为迭加的RP-HPLC色谱图，其显示如实施例7中所描述的，存在MenACWY-TT组合物不会干扰MnB二价rLP2086组合物纯度的评估。
图3为迭加的RP-HPLC色谱图，其显示如实施例14中所描述的组合的MenABCWY组合物中的rLP2086蛋白质的纯度和峰值比。
图4A为MnB rLP2086亚族A A05蛋白的一级氨基酸序列，和
图4B为MnB rLP2086亚族A A05蛋白的一级结构
图5A为MnB rLP2086亚族B B01蛋白的一级氨基酸序列，和
图5B为MnB rLP2086亚族B B01蛋白的一级结构
图6A为来自脑膜炎奈瑟菌血清群A菌株(fHBP变体B16(PMB3257，MenA)的因子H结合蛋白(fHBP)B16(SEQ ID NO：26)的氨基酸序列；
图6B为来自脑膜炎奈瑟菌血清群C菌株(fHBP变体A10(PMB5208，MenC和PMB5523，MenW)的fHBP A10(SEQ ID NO：27)；
图6C为来自脑膜炎奈瑟菌血清群W菌株(fHBP变体A19(PMB5248，MenW)的fHBP A19(SEQ ID NO：28)；
图6D为来自脑膜炎奈瑟菌血清群W菌株(fHBP变体A10(PMB5523，MenW)的fHBP A10(SEQ ID NO：27)；
图6E为来自脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株(fHBP变体B47(PMB5187，MenY)的fHBP B47(SEQ ID NO：29)；
图6F为来自脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株(fHBP变体B49(PMB5540，MenX)的fHBP B49(SEQ ID NO：30)。
图7为血清杀菌活性，对脑膜炎奈瑟菌病的防护相关性。使用人补体的血清杀菌分析(hSBA)中效价≥1：4为已建立的对脑膜炎奈瑟菌病的防护相关性。
图8为MenA、C、W、Y和X测试菌株选择。
图9为自其中随机选择测试血清子集的临床试验相关群组的图示。
图10为从使用FHbp反应性mAb MN 994-11的流式细胞术实验测定的fHbp表面表达水平(MFI)的分布。血清群内各菌株的fHbp表面表达以黑点标注，而各血清群内该选定的测试菌株的fHbp表面表达水平以彩色星星标注。
图11为对MenA PMB3257(B16)的hSBA反应率(具有hSBA效价≥1：8的受试者的百分比)。图中显示在免疫接种前(第0个月)和给予第一、第二和第三剂量的MenBFHbp后1个月收集的血清的反应率和95％置信区间。所得到的几何平均效价(GMT)分别为2、3、4和5。阳性对照组中的受试者在疫苗接种前的反应率为3％，在接受MCV4后1个月的反应率为97％。阳性对照组的GMT分别为2和95。
图12为对MenC PMB5208(A10)的hSBA反应率(具有hSBA效价≥1：8的受试者的百分比)。图中显示在免疫接种前(第0个月)和给予第一、第二和第三剂量的MenBFHbp后1个月收集的血清的反应率和95％置信区间。所得的GMT分别为4、8、12和29。阳性对照组中的受试者在疫苗接种前的反应率为20％，在接受MCV4后1个月的反应率为90％。阳性对照组的GMT分别为3和119。
图13为对MenW PMB5248(A19)的hSBA反应率(具有hSBA效价≥1：8的受试者的百分比)。图中显示在免疫接种前(第0个月)和给予第一、第二和第三剂量的MenBFHbp后1个月收集的血清的反应率和95％置信区间。所得的GMT分别为4、18、47和77。阳性对照组中的受试者在疫苗接种前的反应率为40％，在接受MCV4后1个月的反应率为97％。阳性对照组的GMT分别为5和88。
图14为对MenW PMB5523(A10)的hSBA反应率(具有hSBA效价≥1：8的受试者的百分比)。图中显示在免疫接种前(第0个月)和给予第一、第二和第三剂量的MenBFHbp后1个月收集的血清的反应率和95％置信区间。所得的GMT分别为7、15、21和42。阳性对照组中的受试者在疫苗接种前的反应率为55％，在接受MCV4后1个月的反应率为97％。阳性对照组的GMT分别为8和60。
图15为对MenY PMB5187(B47)的hSBA反应率(具有hSBA效价≥1：8的受试者的百分比)。图中显示在免疫接种前(第0个月)和给予第一、第二和第三剂量的MenBFHbp后1个月收集的血清的反应率和95％置信区间。所得的GMT分别为3、7、31和58。阳性对照组中的受试者在疫苗接种前的反应率为13％，在接受MCV4后1个月的反应率为97％。阳性对照组的GMT分别为3和79。
图16为对MenX PMB5540(B49)的hSBA反应率(具有hSBA效价≥1：8的受试者的百分比)。图中显示在免疫接种前(第0个月)和给予第一、第二和第三剂量的MenBFHbp后1个月收集的血清的反应率和95％置信区间。所得的GMT分别为2、3、7和20。阳性对照组中的受试者在疫苗接种前的反应率为0％，在接受MCV4后1个月的反应率为0％。阳性对照组的GMT分别为2和2。
序列标识
SEQ ID NO：1列出重组脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A05多肽抗原的氨基酸序列。
SEQ ID NO：2列出重组脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B01多肽抗原的氨基酸序列。
SEQ ID NO：3列出SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的位置1至4处的氨基酸残基。
SEQ ID NO：4列出重组奈瑟菌亚族A LP2086多肽(rLP2086)(A05)多肽N端的氨基酸序列。
SEQ ID NO：5列出奈瑟菌亚族A LP2086 M98250771多肽(A05)多肽N端的氨基酸序列。
SEQ ID NO：6列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B153的氨基酸序列。
SEQ ID NO：7列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A04的氨基酸序列。
SEQ ID NO：8列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A05的氨基酸序列。
SEQ ID NO：9列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A12的氨基酸序列。
SEQ ID NO：10列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A22的氨基酸序列。
SEQ ID NO：11列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B02的氨基酸序列。
SEQ ID NO：12列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B03的氨基酸序列。
SEQ ID NO：13列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B09的氨基酸序列。
SEQ ID NO：14列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B22的氨基酸序列。
SEQ ID NO：15列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B24的氨基酸序列。
SEQ ID NO：16列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B44的氨基酸序列。
SEQ ID NO：17列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B16的氨基酸序列。
SEQ ID NO：18列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A07的氨基酸序列。
SEQ ID NO：19列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A19的氨基酸序列。
SEQ ID NO：20列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A06的氨基酸序列。
SEQ ID NO：21列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A15的氨基酸序列。
SEQ ID NO：22列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A29的氨基酸序列。
SEQ ID NO：23列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B15的氨基酸序列。
SEQ ID NO：24列出重组奈瑟菌亚族B LP2086多肽(rLP2086)(B01)多肽N端的氨基酸序列。
SEQ ID NO：25列出奈瑟菌亚族B LP2086 CDC-1573多肽(B01)多肽N端的氨基酸序列。
SEQ ID NO：26列出表达因子H结合蛋白(fHBP)B16的脑膜炎奈瑟菌血清群A菌株的氨基酸序列。
SEQ ID NO：27列出表达fHBP A10的脑膜炎奈瑟菌血清群C菌株的氨基酸序列。SEQID NO：27还列出表达fHBP A10的脑膜炎奈瑟菌血清群W菌株的氨基酸序列。
SEQ ID NO：28列出表达fHBP A19的脑膜炎奈瑟菌血清群W菌株的氨基酸序列。
SEQ ID NO：29列出表达fHBP B47的脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株的氨基酸序列。
SEQ ID NO：30列出表达fHBP B49的脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的氨基酸序列。
SEQ ID NO：31列出非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B16的氨基酸序列。
SEQ ID NO：32列出非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A07的氨基酸序列。
SEQ ID NO：33列出非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A19的氨基酸序列。
SEQ ID NO：34列出非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A06的氨基酸序列。
SEQ ID NO：35列出非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A15的氨基酸序列。
SEQ ID NO：36列出非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A29的氨基酸序列。
SEQ ID NO：37列出非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B15的氨基酸序列。
SEQ ID NO：38列出表达因子H结合蛋白(fHBP)B16的非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群A菌株的氨基酸序列。
SEQ ID NO：39列出表达fHBP A10的非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群C菌株的氨基酸序列。SEQ ID NO：39还列出表fHBP A10的非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群W菌株的氨基酸序列。
SEQ ID NO：40列出表达fHBP A19的非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群W菌株的氨基酸序列。
SEQ ID NO：41列出表达fHBP B47的非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株的氨基酸序列。
SEQ ID NO：42列出表达fHBP B49的非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的氨基酸序列。
SEQ ID NO：43列出非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B44的氨基酸序列。
SEQ ID NO：44列出非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B09的氨基酸序列。
SEQ ID NO：45列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B09的氨基酸序列。
SEQ ID NO：46列出非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A05的氨基酸序列。
SEQ ID NO：47列出非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B01的氨基酸序列。
SEQ ID NO：48列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B01的氨基酸序列，其包括在氨基酸位置1的N端Cys。
SEQ ID NO：49列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B15的氨基酸序列，其包括在氨基酸位置1的N端Cys。
SEQ ID NO：50列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B16的氨基酸序列，其包括在氨基酸位置1的N端Cys。
SEQ ID NO：51列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B22的氨基酸序列。
SEQ ID NO：52列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A22的氨基酸序列。
SEQ ID NO：53列出非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A12的氨基酸序列。
SEQ ID NO：54列出非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A22的氨基酸序列。
SEQ ID NO：55列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A62的氨基酸序列，其包括在氨基酸位置1的N端Cys。
SEQ ID NO：56列出非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A62的氨基酸序列。
SEQ ID NO：57列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A29的氨基酸序列，其包括在氨基酸位置1的N端Cys。
SEQ ID NO：58列出非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B22的氨基酸序列。
SEQ ID NO：59列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A05的氨基酸序列。
SEQ ID NO：60列出非脂化的脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体A05的氨基酸序列。
SEQ ID NO：61列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B24的氨基酸序列。
SEQ ID NO：62列出脑膜炎奈瑟菌血清群B 2086变体B24的氨基酸序列。
发明详述
本发明人意外发现包括至少一种因子H结合蛋白(fHBP)和至少一种脑膜炎奈瑟菌荚膜糖缀合物的组合物。该组合物出奇地稳定并引发针对表达与在该多组分组合物中的fHBP变体同源的fHBP变体的菌株的免疫反应和针对表达与在该多组分组合物中的fHBP变体异源的fHBP变体的菌株的免疫反应。本发明人进一步意外发现fHBP多肽有效地在儿童(例如12个月大及以上的人类)体内引发免疫反应。此外，本发明人意外发现fHBP多肽有效地引发针对脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的免疫反应。
本发明人意外发现包括下列的组合物：(a)包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第一脂化多肽；(b)包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的第二脂化多肽；(c)脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖，其通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与己二酸二酰肼(ADH)接头缀合，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenAAH-TT缀合物)；(d)脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖，其通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶/>化学过程与ADH接头缀合，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenCAH-TT缀合物)；(e)脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖，其在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶/>化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合(MenW-TT缀合物)；(f)脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖，其在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶/>化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合(MenY-TT缀合物)。该组合物包括冻干的MenACWY-TT组合物，该冻干的MenACWY-TT组合物意外可容易地以液体MnB二价rLP2086组合物重构，其中该组合物在单一小瓶中。本发明人发现该冻干的MenACWY-TT组或物与液体MnB二价rLP2086组合物相容且在重构后可在室温下稳定至少24小时。
此外，本发明人进一步发现MnB二价rLP2086组合物引发的杀菌抗体不仅针对脑膜炎奈瑟菌血清群B，还针对除血清群B外的脑膜炎奈瑟菌血清群。例如该MnB二价rLP2086组合物引发至少针对脑膜炎奈瑟菌血清群A、C、W、Y和X的杀菌抗体。该MnB二价rLP2086组合物能引发针对脑膜炎奈瑟菌血清群X的杀菌抗体的意外发现指明MnB二价rLP2086组合物在人体中引发广泛的交叉反应性杀菌免疫反应，该免疫反应可针对至少二种不同脑膜炎奈瑟菌血清群。
此外，本发明人意外地发现以4种主要脑膜炎奈瑟菌血清群B(MnB)测试菌株(2种菌株表达LP2086亚族A蛋白且2种菌株表达LP2086亚族B蛋白)进行使用人补体的血清杀菌分析(hSBA)测量时，以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月可在研究开始时年龄为≥24个月至<4岁的健康受试者中测量到免疫反应。本发明人还意外地发现以4种主要MnB测试菌株(2种菌株表达LP2086亚族A蛋白且2种菌株表达LP2086亚族B蛋白)进行hSBA来测量时，以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月可在研究开始时年龄为≥4岁至<10岁的健康受试者中测量到免疫反应。本发明人还意外地发现以4种主要MnB测试菌株(2种菌株表达LP2086亚族A蛋白且2种菌株表达LP2086亚族B蛋白)进行hSBA来测量时，以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月可在研究开始时年龄在≥24个月至<10岁(即，合并的年龄层)的健康受试者中测量到免疫反应。本发明人还意外地发现以4种主要MnB测试菌株(2种菌株表达LP2086亚族A蛋白且2种菌株表达LP2086亚族B蛋白)进行hSBA来测量时，以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后6个月可在研究开始时年龄为≥24个月至<4岁的健康受试者中、研究开始时年龄为≥4岁至<10岁的健康受试者中及合并的年龄层中测量到免疫反应。该免疫反应通过额外的试验指标(endpoint)来进一步描述，该额外的试验指标在指定的时间点，在研究开始时年龄为≥24个月至<4岁的健康受试者中、在研究开始时年龄为≥4岁至<10岁的健康受试者中及合并的年龄层中以4种主要MnB测试菌株(2种菌株表达LP2086亚族A蛋白且2种菌株表达LP2086亚族B蛋白)进行hSBA来测量。
此外，本发明人意外地发现以4种主要脑膜炎奈瑟菌血清群B(MnB)测试菌株(2种菌株表达LP2086亚族A蛋白且2种菌株表达LP2086亚族B蛋白)进行使用人补体的血清杀菌分析(hSBA)测量时，以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月可在研究开始时年龄在12个月至<18个月的健康幼儿中测量到免疫反应。本发明人还意外地发现以4种主要MnB测试菌株(2种菌株表达LP2086亚族A蛋白且2种菌株表达LP2086亚族B蛋白)进行hSBA来测量时，以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月可在研究开始时年龄在18个月至<24个月的健康幼儿中测量到免疫反应。本发明人还意外地发现以4种主要MnB测试菌株(2种菌株表达LP2086亚族A蛋白且2种菌株表达LP2086亚族B蛋白)进行hSBA来测量时，以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月可在研究开始时年龄在12个月至<24个月(即，两个年龄层合并)的健康幼儿中测量到免疫反应。本发明人还意外地发现以4种主要MnB测试菌株(2种菌株表达LP2086亚族A蛋白且2种菌株表达LP2086亚族B蛋白)进行hSBA来测量时，以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后至少6个月可在研究开始时年龄在12个月至<18个月和18个月至<24个月的健康幼儿中以及合并的两个年龄层中测量到免疫反应。例如，该hSBA可在第三次疫苗接种后的任何时间(包括12、24、36和48个月)，在研究开始时年龄在12个月至<18个月和18个月至<24个月的健康幼儿中以及合并的两个年龄层中测量。该免疫反应通过额外的试验指标来进一步描述，该额外的试验指标在以二价rLP2086第二次接种疫苗后1个月及以二价rLP2086第三次接种疫苗后至少1个月，在年龄在12个月至<18个月和18个月至<24个月的健康幼儿中以及合并的两个年龄层中以4种主要MnB测试菌株(2种菌株表达LP2086亚族A蛋白且2种菌株表达LP2086亚族B蛋白)进行hSBA来测量。例如，该hSBA可在以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后的任何时间(包括6、12、24、36和48个月)，在研究开始时年龄在12个月至<18个月和18个月至<24个月的健康幼儿中以及合并的两个年龄层中测量。该免疫反应还通过额外的试验指标来描述，该额外的试验指标经由使用表达LP2086亚族A和B蛋白的次代MnB测试菌株，在第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后至少1个月，在年龄在12个月至<18个月和18个月至<24个月的健康幼儿中以及合并的两个年龄层中通过hSBA对次要MnB测试菌株(表达LP2086亚族A和B蛋白)进行测量。例如，该hSBA可在第三次疫苗接种后的任何时间(包括6、12、24、36和48个月)，在研究开始时年龄在12个月至<18个月和18个月至<24个月的健康幼儿中以及在合并的两个年龄层中测量。
因此，在一个方面，本发明涉及用于在任何年龄的患者中引发免疫反应的方法。在一些实施方案中，该人的年龄为至少4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周龄。例如，在优选的实施方案中，该人为至少6周龄。如本领域所知，脑膜炎奈瑟菌A、C、W-135和Y群结合型疫苗(诸如)适合用于最小为6周龄的婴儿且可施用任何6周龄及以上的人类。在一些实施方案中，该人的年龄为至少6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月。例如，在优选的实施方案中，该人的年龄为至少12个月。在一个实施方案中，该人的年龄介于12至18个月之间。在另一方面，本发明涉及用于在年龄至少18个月的患者中引发免疫反应的方法。在一个实施方案中，该人的年龄介于18至24个月之间。再在另一方面，本发明涉及用于在年龄为至少24个月的患者中引发免疫反应的方法。在一个实施方案中，该人的年龄在24个月至10岁之间。在另一方面，本发明涉及用于在年龄为10岁及以上的患者中引发免疫反应的方法。在进一步的方面，本发明涉及用于在年龄在10岁至25岁之间的患者中引发免疫反应的方法。该方法包括对人施用包括第一脂化多肽(其包括SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列)和第二脂化多肽(其包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列)的组合物。在一个实施方案中，该组合物进一步包含聚山梨醇酯80。在一个实施方案中，该组合物进一步包括铝。在一个实施方案中，该组合物进一步包括组氨酸。在一个实施方案中，该组合物进一步包括氯化钠。在一个实施方案中，该组合物进一步包括聚山梨醇酯80、铝、组氨酸和氯化钠。再在另一实施方案中，该组合物进一步包括与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖；与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖；与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖；和与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖。如本领域所知，脑膜炎奈瑟菌A、C、W-135和Y结合型疫苗(诸如/>)适合用于最小为6周龄的婴儿，且可施用6周龄及以上的人类。
示例性组合物进一步描述的说明于下文中。
组合物和疫苗
本发明人进一步发现包括fHBP的组合物在年龄为至少12个月的人体内引发有效的免疫反应。该组合物还引发针对脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的免疫反应。此外，本发明人意外发现包括至少一种因子H结合多肽(fHBP)和至少一种脑膜炎奈瑟菌荚膜糖缀合物的组合物。该组合物出奇地稳定并引发针对表达与该多组分组合物中的fHBP变体同源的fHBP变体的菌株的免疫反应及针对表达与该多组分组合物中的fHBP变体异源的fHBP变体的菌株的免疫反应。在一个实施方案中，该组合物包括任何fHBP，例如任一下列多肽：B24、B16、B44、A22、B03、B09、A12、A19、A05、A07、A06、A15、A29、B01、A62、B15及其任何组合。优选地，该组合物包括A05和B01多肽的组合物合。在另一优选的实施方案中，该组合物包括B24和A05多肽的组合物。在另一优选的实施方案中，该组合物包括A05、A12、B09和B44多肽的组合物。在一个实施方案中，该组合物包括脂化的fHBP。在一个实施方案中，该组合物不包括非脂化的fHBP。
在另一实施方案中，该组合物包括非脂化的fHBP，诸如描述于下列文献中的任一非脂化的fHBP：国际专利申请公开号WO2012/032489、美国专利申请公开号US20120093852、国际专利申请公开号WO2013/132452和美国专利申请公开号US20160030543，各篇的全部内容以引用方式并入本文。在一个实施方案中，该组合物包括至少一种非脂化的fHBP和至少一种脂化的fHBP。
在一些实施方案中，该组合物包括与下列任一者所示的氨基酸序列具有至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.9％同一性的多肽：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ IDNO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ IDNO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ IDNO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ IDNO：40、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ IDNO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ IDNO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：57、SEQ IDNO：58、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：61和SEQ ID NO：62。
本发明人还意外地发现液体MnB二价rLP2086组合物可容易地重构冻干的MenACWY-TT组合物且该组合的组合物可兼容且稳定。
在一个方面，本发明涉及针对脑膜炎奈瑟菌的组合物。该组合物包括(a)包括SEQID NO：1所示的氨基酸序列的第一脂化多肽；(b)包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的第二脂化多肽；(c)通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与己二酸二酰肼(ADH)接头缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenAAH-TT缀合物)；(d)通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与ADH接头缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenCAH-TT缀合物)；(e)在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶/>化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖(MenW-TT缀合物)；(f)在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶/>化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖(MenY-TT缀合物)。
在另一方面，本发明涉及包括MnB二价rLP2086组合物和MenACWY-TT组合物的组合物的组合物。该MnB二价rLP2086组合物指包括单一脑膜炎奈瑟菌多肽组分的组合物，该脑膜炎奈瑟菌多肽组分诱导针对多种脑膜炎奈瑟菌血清群B菌株的有效的广泛保护性免疫反应。具体地说，在一个实施方案中，该MnB二价rLP2086组合物包括MnB rLP2086亚族A蛋白(SEQ ID NO：1)和MnB rLP2086亚族B蛋白(SEQ ID NO：2)。在一个实施方案中，该组合物不包括融合蛋白。在一个实施方案中，该组合物不包括嵌合蛋白。在一个实施方案中，该组合物不包括杂合蛋白。在一个实施方案中，该组合物不进一步包括肽片段。在另一实施方案中，该组合物不进一步包括非fHBP的奈瑟菌多肽。例如，在一个实施方案中，该组合物不包括PorA 蛋白。在另一实施方案中，该组合物不包括NadA蛋白。在另一实施方案中，该组合物不进一步包括奈瑟菌肝素结合抗原(NHBA)。在另一实施方案中，该组合物不进一步包括奈瑟菌外膜囊泡(OMV)。在优选的实施方案中，该组合物不进一步包括除第一多肽和第二多肽之外的抗原。在优选的实施方案中，该MnB二价rLP2086组合物进一步包括聚山梨醇酯80。在一个实施方案中，该MnB二价rLP2086组合物进一步包括组氨酸缓冲液。在一个实施方案中，该MnB二价rLP2086组合物进一步包括氯化钠。在一个实施方案中，该MnB二价rLP2086组合物进一步包括磷酸铝。在一个实施方案中，该MnB二价rLP2086组合物进一步包括聚山梨醇酯80、组氨酸缓冲液、氯化钠和磷酸铝。优选地，该MnB二价rLP2086组合物为液体制剂，其中该多肽在10mM组氨酸缓冲液，pH 6.0、150mM氯化钠(NaCl)加上0.5mg/mL磷酸铝(AlPO4)中被配制成120mcg/mL/亚族且在0.5mL剂量中进一步包括0.018mg聚山梨醇酯80。
该MenACWY-TT组合物指包括脑膜炎奈瑟菌血清群A、C、W-135和Y的纯化的荚膜多糖的组合物，该纯化的荚膜多糖各自独立地分别以～3、～3、～1.5和～1.3的比例(TT对多糖)与TT缀合。具体而言，该组合物包括(c)脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖，其通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与己二酸二酰肼(ADH)接头缀合，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenAAH-TT缀合物)；(d)脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖，其通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶/>化学过程与ADH接头缀合，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenCAH-TT缀合物)；(e)脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖，其在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶/>化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合(MenW-TT缀合物)；(f)脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖，其在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶/>化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合(MenY-TT缀合物)。优选地，该MenACWY-TT组合物以冻干粉末呈现。
MenAAH-TT、MenCAH-TT、MenW-TT和MenY-TT缀合物通过下列步骤制备：制造多糖药物中间体，制造TT药物中间体，将多糖微流体化，多糖的衍生反应(仅用于MenAAH-TT和MenCAH-TT过程)，TT的额外纯化及将个别多糖与TT缀合。
关于MenAAH-TT缀合物，首先将MenA多糖微流体化以降低分子大小和黏度，然后经由以四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶(CDAP)氰基化来活化它。以己二酸二酰肼(ADH)进行经活化的MenA的衍生反应以形成MenAAH。MenAAH和破伤风类毒素(TT)通过由碳二亚胺介导的缩合作用耦合(1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDAC)耦合技术)以形成MenAAH-破伤风类毒素缀合物(MenAAH-TT)。
关于MenCAH-TT缀合物，首先将MenC多糖微流体化以降低分子大小和黏度，然后经由以CDAP氰基化来活化它。以己二酸二酰肼(ADH)进行经活化的MenC的衍生反应以形成MenCAH。MenCAH和TT通过由碳二亚胺介导的缩合作用耦合(EDAC耦合技术)以形成MenCAH破伤风类毒素(MenCAH-TT)。
关于MenW-TT缀合物，首先将MenW多糖微流体化以降低分子大小和黏度，然后经由以CDAP氰基化来活化它。经活化的MenW与TT直接耦合以形成MenW-破伤风类毒素(MenW-TT)。
关于MenY-TT缀合物，首先将MenY多糖微流体化以降低分子大小和黏度，然后经由以CDAP氰基化来活化它。经活化的MenY与TT直接耦合以形成MenY-破伤风类毒素(MenY-TT)。
在另一方面，本发明人意外发现该源自至多二种脑膜炎奈瑟菌血清群B菌株的多肽抗原诱导针对多个脑膜炎奈瑟菌血清群B菌株的有效的广泛保护性免疫反应。因此，在一个实施方案中，该组合物不进一步包括非源自脑膜炎奈瑟菌血清群B fHBP亚族AM98250771菌株和/或脑膜炎奈瑟菌血清群B fHBP亚族B CDC1573菌株的多肽。
在一个实施方案中，该组合物不进一步包括与SEQ ID NO：1的序列同一性小于100％的多肽。在另一实施方案中，该组合物不进一步包括与SEQ ID NO：2的序列同一性小于100％的多肽。例如，该组合物不进一步包括与全长SEQ ID NO：1和/或SEQ ID NO：2的序列同一性小于100％的多肽。
在一个实施方案中，该组合物进一步包括聚山梨醇酯80、铝、组氨酸和氯化钠。在一个实施方案中，该组合物包括约60μg的第一脂化多肽(其包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列)、约60μg的第二脂化多肽(其包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列)、聚山梨醇酯80对各多肽的摩尔比为2.8、呈磷酸铝形式的0.5mg铝/ml、10mM组氨酸和150mM氯化钠，其中该组合物的总体积优选为约0.5ml。
在另一方面，该组合物包括约120μg/ml的第一脂化多肽(其包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列)、约120μg/ml的第二脂化多肽(其包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列)、聚山梨醇酯80对各多肽的摩尔比为2.8、呈磷酸铝形式的0.5mg铝/ml、10mM组氨酸和150mM氯化钠。
在另一方面，该组合物包括a)60μg的第一脂化多肽(其包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列)；b)60μg的第二脂化多肽(其包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列)；c)18μg的聚山梨醇酯80；d)250μg的铝；e)780μg的组氨酸，和；f)4380μg的氯化钠。
在一示例性实施方案中，该组合物包括约60μg的第一脂化多肽(其由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成)、约60μg的第二脂化多肽(其由SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列组成)、聚山梨醇酯80对第一脂化多肽和第二脂化多肽的摩尔比为2.8、0.5mg/ml的磷酸铝、10mM的组氨酸和150mM的氯化钠，其中该组合物的总体积为约0.5ml。在一示例性实施方案中，该组合物为无菌等张的缓冲的液体悬浮液。在该示例性实施方案中，该组合物为pH6.0。在该示例性实施方案中，该第一多肽和第二多肽被吸附在铝上。
在一个实施方案中，该组合物包括其平均TT/多糖比为3的MenAAH-TT缀合物；其平均TT/多糖比为3的MenCAH-TT缀合物；其平均TT/多糖比为1.5的MenW-TT缀合物；和其平均TT/多糖比为1.3的MenY-TT缀合物。在优选的实施方案中，该组合物包括具有5mcg MenA多糖和～15mcg TT的MenAAH-TT缀合物；具有5mcg MenC多糖和～15mcg TT的MenCAH-TT缀合物；具有5mcg MenW多糖和～7.5mcg TT的MenW-TT缀合物；和具有5mcg MenY多糖和～6.5mcg TT的MenY-TT缀合物。该组合物可进一步包含Tris-HCl、蔗糖和氯化钠。
在另一实施方案中，该组合物包括MenAAH-TT缀合物；MenCAH-TT缀合物；MenW-TT缀合物；和MenY-TT缀合物，其包括MenA多糖；MenC多糖；MenW多糖；和MenY多糖和TT载体蛋白。该组合物可进一步包括蔗糖和托莫他尼(Trometanol)。例如，在一个实施方案中，该组合物包括10μg/mL MenA多糖；10μg/mL MenC多糖；10μg/mL MenW多糖；和10μg/mL MenY多糖；88μg/mL TT载体蛋白；164mM蔗糖；和1.6mM托莫他尼。
在一个实施方案中，该组合物的总体积为约0.5ml。在一个实施方案中，该组合物的第一剂量的总体积为约0.5ml。“第一剂量”指在第0天施用的组合物的剂量。“第二剂量”或“第三剂量”指接续在第一剂量之后施用的组合物的剂量，其量可能与第一剂量相同或可能不与第一剂量相同。
在一个方面，本发明涉及从冻干的MenACWY-TT组合物产生的液体免疫原性组合物，该冻干的MenACWY-TT组合物已经以液体MnB二价rLP2086组合物重构。重构指通过加入液体稀释剂将干燥的冻干组合物恢复成液体形式。在优选的实施方案中，该液体MnB二价rLP2086组合物不随该冻干的MenACWY-TT组合物施用、不与该冻干的MenACWY-TT组合物共同施用、不与该冻干的MenACWY-TT组合物同时施用，其中该冻干的MenACWY-TT组合物已经以非为该液体MnB二价rLP2086组合物的液体组合物重构。例如，在优选的实施方案中，该冻干的MenACWY-TT组合物并非以由氯化钠和水组成的水性稀释剂重构，且不随该液体MnB二价rLP2086组合物施用、不与该液体MnB二价rLP2086组合物共同施用、不与该液体MnB二价rLP2086组合物同时施用。
相反，在优选的实施方案中，该冻干的MenACWY-TT组合物与MnB二价rLP2086组合物在一次施用(即单次施用)中施用于人。所产生的单次施用(例如，该MenABCWY组合物)可能由来自第一容器的MnB二价rLP2086组合物与来自第二容器的冻干的MenACWY-TT组合物混合造成。或者，单次施用MenABCWY组合物可由包含该MnB二价rLP2086组合物和冻干的MenACWY-TT组合物的一个(单个)容器造成。用于疫苗或免疫原性组合物的递送装置为本领域中已知。在一个实施方案中，该MenABCWY组合物与下列的任一者伴随施用：布洛芬(ibuprofen)、扑热息痛(paracetamol)和阿莫西林(amoxicillin)。
对人施用第一剂量后，该组合物具有免疫原性。在一个实施方案中，该第一剂量的总体积为约0.5ml。
当在完全相同的条件下，在使用人类补体的血清杀菌分析中(hSBA)测量时，该在接受组合物的第一剂量后由该组合物诱导的血清免疫球蛋白的杀菌效价较该人接受第一剂量前的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至少1倍，优选为高至少2倍。
该杀菌效价或杀菌免疫反应针对脑膜炎奈瑟菌血清群B。在优选的实施方案中，该杀菌效价或杀菌免疫反应针对脑膜炎奈瑟菌血清群B fHBP亚族A菌株和针对脑膜炎奈瑟菌血清群B fHBP亚族B菌株。最优选地，该杀菌效价或杀菌免疫反应至少针对脑膜炎奈瑟菌血清群B，fHBP亚族B，B01菌株。
在一个实施方案中，当在完全相同的条件下，在使用人类补体的血清杀菌分析中测量时，该在接受组合物的剂量后由组合物诱导的血清免疫球蛋白的杀菌效价较该人接受该剂量前的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至少1倍，诸如例如至少1.01倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍或16倍。
在一个实施方案中，该组合物为免疫原性组合物。在一个实施方案中，该组合物为用于人类的免疫原性组合物。在另一实施方案中，该组合物为疫苗。“疫苗”指包括抗原的组合物，该抗原含有至少一个诱导特异于该抗原的免疫反应的表位。该疫苗可经由皮下、口、口鼻或鼻内施用途径直接施用入受试者。优选地，该疫苗经肌肉内途径施用。在一个实施方案中，该组合物为人类疫苗。在一个实施方案中，该组合物为针对脑膜炎奈瑟菌的免疫原性组合物。
在一个实施方案中，该组合物为液体组合物。在优选的实施方案中，该组合物为液体悬浮液组合物。在另一优选的实施方案中，该组合物未经冻干。
第一多肽；MNB RLP2086亚族A(A05)蛋白
在一个实施方案中，该组合物包括具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第一多肽。该多肽为来自脑膜炎奈瑟菌菌株M98250771的经修饰的因子H结合蛋白(fHBP)。fHBP的描述揭示于WO2012032489和美国专利公开US 2012/0093852(该二篇的全部内容各自以引用方式并入本文)中。该多肽的N端被三个主要脂肪酸C16：0、C16：1和C18：1脂化，该三个主要脂肪酸C16：0、C16：1和C18：1共价连接在该多肽的三个位置。第一多肽共包含258个氨基酸。
MnB rLP2086 A05蛋白的代表性一级结构呈现于图4中。该蛋白质的一级结构说明于图4中，除N端的半胱氨酸和甘油基部分外(用全化学式说明)，所有氨基酸使用单字母符号。该结构包括其中该N端半胱氨酸残基被脂化的蛋白质序列的一级结构。在该蛋白质N端的N端半胱氨酸残基的氨基团连接至形成酰胺键联的脂肪酸(R1)且该半胱氨酰巯基连接含有两个酯键合的脂肪酸(R2)的甘油部分。该R1的结构被推定为十六烷酸(C16：0)且该R2的结构根据MnB rLP2086同种型变化。
相较于该来自脑膜炎奈瑟菌菌株M98250771的对应的野生型序列，该第一多肽包括两个被引入该多肽的N端区的修饰。在第二位置中所添加的甘氨酸为引入克隆位点的结果。第二修饰包括删除四个氨基酸。因此，在一个实施方案中，第一多肽在N端包括C-G-S-S序列(SEQ ID NO：3)。参见SEQ ID NO：1，前四个氨基酸残基。
介于第一多肽序列和野生型奈瑟菌序列之间的N端差异如下所示。因此，在一个实施方案中，第一多肽至少包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的前2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13个或更多个氨基酸残基。优选地，第一多肽包括SEQ ID NO：1的至少前4个氨基酸残基，更优选为至少前6个氨基酸残基，且最优选为至少前8个氨基酸残基。
重组和奈瑟菌亚族A LP2086多肽的预测的N端序列的比较
rLP2086 M98250771 CGSS-----GGGGVAAD(SEQ ID NO:4)
奈瑟菌LP2086 M98250771 C-SSGS-GSGGGGVAAD(SEQ ID NO:5)
>A05(SEQ ID NO:1)
CGSSGGGGVAADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSISQNGTLTLSAQGAEKTFKVGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPSGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELASAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIREKVHEIGIAGKQ
在一个实施方案中，第一多肽包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。在一个实施方案中，第一多肽共具有258个氨基酸。在一个实施方案中，第一多肽不包括与SEQ ID NO：1的序列同一性小于100％的氨基酸序列。在另一实施方案中，第一多肽由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成。在另一实施方案中，第一多肽包括氨基酸序列KDN。参见，例如SEQ ID NO：1的氨基酸残基73至75。在另一实施方案中，第一多肽的多肽N端包括SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。在另一实施方案中，第一多肽的多肽N端包括SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。
在优选的实施方案中，使用本领域已知的标准技术可将第一多肽容易地表达在重组宿主细胞中。在另一优选的实施方案中，第一多肽包括SEQ ID NO：1的N和/或C结构域上的杀菌表位。在一个实施方案中，第一多肽包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的至少前4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个氨基酸残基。优选地，第一多肽包括SEQ ID NO：1的至少前2个氨基酸残基，更优选为至少前4个氨基酸残基，最优选为至少前8个氨基酸残基。
在另一实施方案中，第一多肽包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的至少后4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个氨基酸残基。
在一个实施方案中，该组合物包括约30μg/ml的第一多肽，该第一多肽包括SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列。在优选的实施方案中，该组合物包括约60μg的第一多肽，该第一多肽包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。在优选的实施方案中，该组合物包括约60μg的第一多肽，该第一多肽包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，其中该组合物的总体积优选为0.5ml。在另一实施方案中，该组合物包括约120μg/ml的第一多肽，该第一多肽包括SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列。
第二多肽；MNB RLP2086亚族B(B01)蛋白
在一个实施方案中，该组合物包括具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的第二多肽。该多肽为来自脑膜炎奈瑟菌菌株CDC1573的因子H结合蛋白(fHBP)。fHBP的描述揭示于WO2012032489和美国专利公开US 2012/0093852(其全部内容各自以引用方式并入本文)中。该多肽的N端被三个主要脂肪酸C16：0、C16：1和C18：1脂化，该三个主要脂肪酸C16：0、C16：1和C18：1共价连接在该多肽的三个位置。第二多肽共包括261个氨基酸。
MnB rLP2086 B01蛋白的代表性一级结构呈现于图5中。该蛋白质的一级结构说明于图5中，除N端半胱氨酸和甘油基部分外(使用全化学式说明)，所有氨基酸使用单字母符号。该结构包括其中该N端半胱氨酸残基被脂化的蛋白质序列的一级结构。在该蛋白质N端的N端半胱氨酸残基的氨基团连接形成酰胺键的脂肪酸(R1)且该半胱氨酰巯基连接含有两个酯键合的脂肪酸(R2)的甘油部分。该R1的结构被推定为十六烷酸(C16：0)且该R2的结构根据该rLP2086同种型变化。
相较于该来自脑膜炎奈瑟菌菌株CDC-1573的对应的野生型序列，第二多肽包括一个被引入该rLP2086亚族B蛋白的N端区的修饰。该第二位置中添的甘氨酸为引入克隆位点的结果。
与原始奈瑟菌序列的N端差异如下所示。
重组和奈瑟菌亚族B LP2086蛋白的预测的N端序列的比较
rLP2086 CDC-1573 CGSSGGGGSGGGGVTAD(SEQ ID NO:24)
奈瑟菌LP2086 CDC-1573 C-SSGGGGSGGGGVTAD(SEQ ID NO:25)
在一个实施方案中，第二多肽在N端包括C-G-S-S序列(SEQ ID NO：3)。参见SEQ IDNO：2之前四种氨基酸残基。
>B01(SEQ ID NO:2)
CGSSGGGGSGGGGVTADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSISQNGTLTLSAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTALQTEQEQDPEHSEKMVAKRRFRIGDIAGEHTSFDKLPKDVMATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKSPELNVDLAVAYIKPDEKHHAVISGSVLYNQDEKGSYSLGIFGEKAQEVAGSAEVETANGIHHIGLAAKQ
在一个实施方案中，第二多肽包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。在一个实施方案中，第二多肽共具有261个氨基酸。在一个实施方案中，第二多肽由SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列组成。在另一实施方案中，第二多肽不进一步包括与SEQ ID NO：2的序列同一性小于100％的多肽。在优选的实施方案中，第一多肽和第二多肽在各自多肽的N端包括C-G-S-S序列(SEQ ID NO：3)。
在优选的实施方案中，使用本领域已知的标准技术可将第二多肽容易地表达在重组宿主细胞中。在另一优选的实施方案中，第二多肽包括在SEQ ID NO：2的N和/或C结构域上的杀菌表位。在一个实施方案中，第二多肽包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的至少前2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个氨基酸残基。优选地，第二多肽包括SEQ ID NO：2的至少前2个氨基酸残基，更优选为至少前4个氨基酸残基，且最优选为至少前8个氨基酸残基。
在另一实施方案中，第二多肽包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的至少后4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个氨基酸残基。
在一个实施方案中，该组合物包括约30μg/ml的第二多肽，该第二多肽包括SEQ IDNO：2所示的氨基酸序列。在优选的实施方案中，该组合物包括约60μg的第二多肽，该第二多肽包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。在优选的实施方案中，该组合物包括约60μg的第二多肽，该第二多肽包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，其中该组合物的总体积优选为0.5ml。在另一实施方案中，该组合物包括约120μg/ml的第二多肽，该第二多肽包括SEQ IDNO：2所示的氨基酸序列。
糖类
本说明书的全文中术语“糖”可表明多糖或寡糖且包括此二者。多糖从细菌中分离出或从细菌中分离出并通过已知方法将缩小至一定程度，且任选地微流体化。多糖可缩小以降低多糖样品的黏度和/或改善缀合产物的可过滤性。寡糖具有小数目的重复单元(通常为5至30个重复单元)且通常为水解的多糖。
每个脑膜炎奈瑟菌荚膜糖可与独立选自由TT、DT、CRM197、TT的片段C和蛋白D组成的群组的载体蛋白缀合。虽然一个或多个脑膜炎奈瑟菌荚膜糖可与彼此不同的载体蛋白缀合，在一个实施方案中，它们均与相同的载体蛋白缀合。例如，它们可全部与选自由TT、DT、CRM197、TT的片段C和蛋白D组成的群组的相同载体蛋白缀合。在此背景下，CRM197和DT可被认为是相同的载体蛋白，因为它们仅有一个氨基酸不同。在优选的实施方案中，所有存在的脑膜炎奈瑟菌荚膜糖与TT缀合。
若组合物中的两种或更多种糖的蛋白质载体相同，则该糖可与该蛋白质载体的相同分子缀合(载体分子具有2种以上的不同糖与其缀合)[参见，例如WO 04/083251；例如单一载体蛋白可与MenA和MenC；MenA和MenW；MenA和MenY；MenC和MenW；MenC和MenY；Men W和MenY；MenA、MenC和MenW；MenA、MenC和MenY；MenA、MenW和MenY；MenC、MenW和MenY；MenA、MenC、MenW和MenY缀合。或者，该糖类可各自分别与蛋白质载体的不同分子缀合(各蛋白质载体分子仅具有一种类型的糖与其缀合)。
在一个实施方案中，至少2种不同的糖缀合物分别缀合至相同类型的载体蛋白，其中一种或多种糖经由蛋白质载体上的第一型化学基团与载体蛋白缀合且一种或多种糖经由蛋白质载体上的第二(不同)型化学基团与载体蛋白缀合。
在一个实施方案中，该2种缀合物涉及相同糖与相同载体连接，但通过不同的缀合化学。在替代的实施方案中，2种不同的糖与蛋白质载体上的不同基团缀合。
“分别与相同类型的载体蛋白缀合”意指该糖类个别与相同载体缀合(例如，MenA通过破伤风类毒素上的氨基与破伤风类毒素缀合，而MenC通过破伤风类毒素的不同分子上的羧酸基团与破伤风类毒素缀合)。
该荚膜糖可与独立地选自由下列组成的群组的相同载体蛋白缀合：TT、DT、CRM197、TT的片段C和蛋白D。可用于本发明的缀合物中的蛋白质载体的更完整列表呈现于下。在此背景下，CRM197和DT可被视为是相同的载体蛋白，因为它们仅有一个氨基酸不同。在一个实施方案中，所有存在的荚膜糖均与TT缀合。
该糖类可包括下列中的任一者：脑膜炎奈瑟菌血清群A荚膜糖(的MenA)、脑膜炎奈瑟菌血清群C荚膜糖(MenC)、脑膜炎奈瑟菌血清群Y荚膜糖(MenY)和脑膜炎奈瑟菌血清群W荚膜糖(MenW)或其任何组合。
存在于蛋白质载体上的第一和第二化学基团彼此不同且理想上为可容易地用于缀合目的的天然化学基团。该化学基团可独立选自由下列组成的群组：羧基、氨基、巯基、羟基、咪唑基、胍基和吲哚基。在一个实施方案中，该第一化学基团为羧基且该第二化学基团为氨基，或者反之亦然。下文中将更详细地解释这些基团。
在具体的实施方案中，该免疫原性组合物包含至少2种不同的脑膜炎奈瑟菌荚膜糖，其中一种或多种荚膜糖选自由MenA和MenC组成的第一组(该一种或多种荚膜糖经由蛋白质载体上的第一型化学基团(例如羧基)与载体蛋白缀合)，而一种或多种不同的糖选自由MenC、MenY和MenW组成的第二组糖(该一种或多种糖经由蛋白质载体上的第二型化学基团(例如氨基)与载体蛋白缀合)。
在进一步的实施方案中，本发明的免疫原性组合物包含经由第一类型化学基团(例如羧基)缀合的MenA和经由第二类型化学基团(例如氨基)缀合的MenC。
在另一实施方案中，该免疫原性组合物包含经由第一类型化学基团(例如羧基)缀合的MenC和经由第二类型化学基团(例如氨基)缀合的MenY。
在另一实施方案中，该免疫原性组合物包含经由第一类型化学基团(例如羧基)缀合的MenA和经由第二类型化学基团(例如氨基)缀合的MenC、MenY和MenW。
在另一实施方案中，该免疫原性组合物包含经由第一类型化学基团(例如羧基)缀合的MenA和MenC及经由第二类型化学基团(例如氨基)缀合的MenY和MenW。
包含在本发明的医药(免疫原性)组合物中的本发明的糖类与载体蛋白缀合，诸如破伤风类毒素(TT)、破伤风类毒素片段C、破伤风毒素的无毒性突变体[注意，所有这样的TT变体在本发明的目的方面均被认为是相同类型的载体蛋白]、白喉毒素(DT)、CRM197、白喉毒素的其他无毒性突变体[诸如CRM176、CRM197、CRM228、CRM45(Uchida et alJ.Biol.Chem.218；3838-3844,1973)；CRM 9、CRM 45、CRM102、CRM 103和CRM107及其他由Nicholls和Youle描述于Genetically Engineered Toxins,Ed:Frankel,Maecel DekkerInc,1992；US 4709017或US 4950740中揭示的缺失或Glu-148突变成Asp、Gln或Ser和/或Ala 158突变成Gly及其他突变；US 5917017或US 6455673中揭示的至少一个或多个残基Lys 516、Lys 526、Phe 530和/或Lys 534的突变和其他突变；或US 5843711中揭示的片段](注意，所有这样的DT变体在本发明的目的方面均被认为是相同类型的载体蛋白)、肺炎球菌溶血素(Kuo et al(1995)Infect Immun 63；2706-13)、OMPC(脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白-通常从脑膜炎奈瑟菌血清群B提取-EP0372501)、合成肽(EP0378881、EP0427347)、热休克蛋白(WO 93/17712、WO 94/03208)、百日咳蛋白(WO 98/58668、EP0471177)、细胞因子、淋巴因子、生长因子或激素(WO 91/01146)、包含多个来自各种源自病原体的抗原的人CD4+T细胞表位的人工蛋白质(Falugi et al(2001)Eur J Immunol 31；3816-3824)，诸如N19蛋白(Baraldoi et al(2004)Infect Immun 72；4884-7)、肺炎球菌表面蛋白PspA(WO 02/091998)、铁摄取蛋白(WO 01/72337)、艰难梭菌(C.difficile)的毒素A或B(WO 00/61761)或蛋白D(EP594610和WO 00/56360)。
在实施方案中，本发明的免疫原性组合物在其中所含有的至少两种、三种、四种或每种糖中使用相同类型的载体蛋白(各自独立地)。
在实施方案中，本发明的免疫原性组合物包含与选自由下列组成的群组的载体蛋白缀合的脑膜炎奈瑟菌糖：TT、DT、CRM197、TT的片段C和蛋白D。
本发明的免疫原性组合物任选地包含至少一种脑膜炎球菌糖(例如MenA；MenC；MenW；MenY；MenA和MenC；MenA和MenW；MenA和MenY；MenC和Men W；Men C和MenY；Men W和MenY；MenA、MenC和MenW；MenA、MenC和MenY；MenA、MenW和MenY；MenC、MenW和MenY或MenA、MenC、MenW和MenY)缀合物，其中Men糖对载体蛋白的比在1：5至5：1之间、在1：2至5：1之间、在1：0.5至1：2.5之间，或在1：1.25至1：2.5之间(w/w)。在一个优选的实施方案中，该组合物包括MenA、MenC、MenW和MenY，其各自分别以约3、约3、约1.5和约1.3的比例(类毒素对多糖)与破伤风类毒素缀合。
缀合物中糖对载体蛋白的比(w/w)可使用经灭菌的缀合物测定。蛋白质的量使用Lowry分析(例如Lowry et al(1951)J.Biol.Chem.193,265-275或Peterson et alAnalytical Biochemistry 100,201-220(1979))测定，而糖的量使用用于MenA的ICP-OES(电感耦合等离子体-光学发射光谱法(inductively coupled plasma-optical emissionspectroscopy))、用于MenC的DMAP及用于MenW和MenY的间苯二酚分析(Monsigny et al(1988)Anal.Biochem.175,525-530)测定。
在实施方案中，本发明的免疫原性组合物包含脑膜炎奈瑟菌糖缀合物，其中该脑膜炎奈瑟菌糖经由接头(例如双官能接头)与载体蛋白缀合。该接头任选地为异双官能或同双官能的，其具有例如一个反应性氨基和一个反应性羧酸基、两个反应性氨基或两个反应性羧酸基。该接头具有，例如4至20、4至12、5至10个碳原子。一种可能的接头为ADH。其他接头包括B-丙酰氨基(WO 00/10599)、硝苯基-乙胺(Gever et al(1979)Med.Microbiol.Immunol.165；171-288)、卤烷基卤化物(US4057685)、糖苷键(US4673574、US4808700)、己二胺和6-氨基己酸(US4459286)。
存在于本发明的免疫原性组合物中的糖缀合物可通过任何已知的耦合技术制备。该缀合方法可依赖以四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶(CDAP)活化糖以形成氰酸酯。该经活化的糖因此可直接或经由间隔子(接头)基团与载体蛋白上的氨基耦合。例如，该间隔子可为胱胺或半胱胺以产生硫醇化的多糖，该硫醇化的多糖可经由硫醚键与载体耦合，该硫醚键在与经马来酰亚胺活化的载体蛋白(例如使用GMBS)反应或与全乙酰化的载体蛋白(例如使用碘乙酰亚胺或N-琥珀酰亚胺溴乙酸酯溴乙酸酯)反应后获得。任选地，该氰酸酯(任选地通过CDAP化学制备)与己二胺或ADH耦合，且该氨基衍生的糖使用碳二亚胺(例如EDAC或EDC)化学，经由该蛋白质载体上的羧基与载体蛋白缀合。这样的缀合物描述于PCT公开的申请WO 93/15760(Uniformed Services University)和WO 95/08348及WO 96/29094中。
其他合适的技术使用卡比尼定(carbiinide)、酰肼、活性酯、降冰片烷(norborane)、对硝基苯甲酸、N-羟基琥珀酰亚胺、S-NHS、EDC、TSTU。WO 98/42721中描述了多种。缀合可能涉及羰基接头，该羰基接头可通过下述方法形成：将糖的游离羟基与CDI反应(Bethell et al J.Biol.Chem.1979,254；2572-4,Hearn et alJ.Chromatogr.1981.218；509-18)，然后再与蛋白质反应以形成氨基甲酸酯键。此可能涉及将异头端还原成一级羟基，任选地以CDI进行该一级羟基的一级羟基保护/去保护反应以形成CDI氨基甲酸酯中间体，并使CDI氨基甲酸酯中间体与蛋白质上的氨基耦合。
该缀合物还可通过如US 4365170(Jennings)和US 4673574(Anderson)中描述的直接还原胺化法制备。其他方法描述于EP-0-161-188、EP-208375和EP-0-477508中。
另一种方法涉及通过碳二亚胺缩合(Chu C.et al Infect.Immunity,1983 245256)(例如使用EDAC)将经溴化氰(或CDAP)活化的糖与蛋白质载体耦合，该经活化的糖经己二酸酰肼(ADH)衍生。
在实施方案中，糖上的羟基(任选地为活化的羟基，例如通过氰酸酯活化的羟基)直接或间接(通过接头)与蛋白质上的氨基或羧基连接。当存在接头时，糖上的羟基任选地与接头上的氨基连接，例如通过使用CDAP缀合。接头(例如ADH)中的其他氨基可例如通过使用碳二亚胺化学(例如通过使用EDAC)与蛋白质上的羧酸基缀合。在实施方案中，脑膜炎奈瑟菌荚膜糖(或一般糖)在接头与载体蛋白缀合前先与接头缀合。或者，该接头可先与载体缀合再与糖缀合。
通常可使用蛋白质载体上的下列类型的化学基团来用于缀合：
A)羧基(例如经由天冬氨酸或谷氨酸)。在一个实施方案中，该基团直接连接至糖上的氨基或通过碳二亚胺化学(例如通过EDAC)连接至接头上的氨基。
B)氨基(例如经由赖氨酸)。在一个实施方案中，该基团直接连接糖上的羧基或通过碳二亚胺化学(例如通过EDAC)连接至接头上的羧基。在另一实施方案中，该基团直接连接至糖上的以CDAP或CNBr活化的羟基或连接至接头上的这样的基团；连接至具有醛基的糖类或接头；接头具有琥珀酰亚胺酯基团的糖或接头。
C)巯基(例如经由半胱氨酸)。在一个实施方案中，该基团通过马来酰亚胺化学连接至溴或氯乙酰化糖或接头。在一个实施方案中，该基团经双重氮联苯胺活化/修饰。
D)羟基(例如经由酪氨酸)。在一个实施方案中，该基团经双重氮联苯胺活化/修饰。
E)咪唑基(例如经由组氨酸)。在一个实施方案中，该基团经双重氮联苯胺活化/修饰。
F)胍基(例如经由精氨酸)。
G)吲哚基(例如经由色氨酸)。
在糖上，通常可使用下列基团来用于耦合：OH、COOH或NH2。醛基可在本领域中已知的不同处理后产生，诸如：高碘酸盐、酸水解、过氧化氢等。
直接耦合方法：
糖-OH+CNBr或CDAP---->氰酸酯+NH2-Prot--->缀合物
糖-醛+NH2-Prot---->Schiff碱+NaCNBH3---->缀合物
糖-COOH+NH2-Prot+EDAC---->缀合物
糖-NH2+COOH-Prot+EDAC---->缀合物
经由间隔子(接头)方法间接耦合方法：
糖-OH+CNBr或CDAP-->氰酸酯+NH2---NH2--->糖----NH2+COOH-Prot+EDAC---->缀合物
糖-OH+CNBr或CDAP---->氰酸酯+NH2----SH---->糖----SH+SH-Prot(具有暴露的半胱氨酸的天然蛋白或通过例如SPDP修饰该蛋白质的氨基后获得)----->糖-S-S-Prot
糖-OH+CNBr或CDAP--->氰酸酯+NH2---SH------>糖----SH+马来酰亚胺-Prot(修饰氨基)---->缀合物
糖-COOH+EDAC+NH2----NH2--->糖------NH2+EDAC+COOH-Prot--->缀合物
糖-COOH+EDAC+NH2-----SH--->糖-----SH+SH-Prot(具有暴露的半胱氨酸的天然蛋白或以例如SPDP修饰该蛋白质的氨基后获得)---->糖-S-S-Prot
糖-COOH+EDAC+NH2---SH---->糖----SH+马来酰亚胺-Prot(修饰氨基)---->缀合物
糖-醛+NH2----NH2--->糖---NH2+EDAC+COOH-Prot--->缀合物
注：可使用任何合适的碳二亚胺代替上述的EDAC。
总之，通常用于与糖耦合的蛋白质载体化学基团的类型为氨基(例如在赖氨酸残基上)、COOH基团(例如在天冬氨酸和谷氨酸残基上)和SH基团(若可接近的话)(例如在半胱氨酸残基上)。
在实施方案中，至少一种脑膜炎奈瑟菌荚膜糖(或一般糖)直接与载体蛋白缀合；任选地，Men W和/或MenY和/或MenC糖直接与载体蛋白缀合。例如MenW；MenY；MenC；MenW和MenY；MenW和MenC；MenY和MenC；或MenW、MenY和MenC直接与载体蛋白连接。任选地，至少一种该脑膜炎奈瑟菌荚膜糖通过CDAP直接缀合。例如MenW；MenY；MenC；MenW和MenY；MenW和MenC；MenY和MenC；或MenW、MenY和MenC直接通过CDAP与载体蛋白连接(参见WO 95/08348和WO 96/29094)。在实施方案中，所有脑膜炎奈瑟菌荚膜糖均与破伤风类毒素缀合。
在实施方案中，Men W和/或Y糖对载体蛋白的比在1：0.5至1：2(w/w)之间和/或MenC糖对载体蛋白的比在1：0.5至1：4或1：0.5至1：1.5(w/w)之间，特别当这些糖任选地使用CDAP直接与蛋白质连接时。
在实施方案中，至少一种脑膜炎奈瑟菌荚膜糖(或一般糖类)经由接头(例如双官能接头)与载体蛋白缀合。该接头任选地为异双官能或同双官能的，其具有例如一个反应性氨基和一个反应性羧酸基、2个反应性氨基或2个反应性羧酸基。该接头具有，例如4至20、4至12、5至10个碳原子。一种可能的接头为ADH。
在实施方案中，MenA；MenC；或MenA和MenC经由接头(例如破伤风类毒素)与载体蛋白缀合。
在实施方案中，至少一种脑膜炎奈瑟菌糖使用CDAP和EDAC经由接头与载体蛋白缀合。例如，MenA；MenC；或MenA和MenC如上述使用CDAP和EDAC经由接头(例如那些在其端点具有两个肼基者，诸如ADH)与载体蛋白缀合。例如，CDAP用于将糖与接头缀合，而EDAC用于将接头与蛋白质缀合。在MenA；MenC；或MenA和MenC方面，经由接头的缀合任选地导致糖对载体蛋白的比介于1：0.5至1：6之间；1：1至1：5之间或1：2至1：4之间。
在实施方案中，当存在MenA荚膜糖时，该MenA荚膜糖至少部分被O-乙酰化从而使得至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或98％的重复单元在至少一个位置被O-乙酰化。O-乙酰化至少出现在例如至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或98％的重复单元的位置O-3处。
在实施方案中，当存在MenC荚膜糖时，该MenC荚膜糖至少部分被O-乙酰化从而使得至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或98％的(α2→9)-连接的NeuNAc重复单元在至少一个或两个位置处被O-乙酰化。O-乙酰化存在于例如至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或98％的重复单元的位置O-7和/或O-8。
在实施方案中，当存在MenW荚膜糖时，该MenW荚膜糖至少部分被O-乙酰化从而使得至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或98％的重复单元在至少一个或两个位置处被O-乙酰化。O-乙酰化出现在例如至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或98％的重复单元的位置O-7和/或O-9。
在实施方案中，当存在MenY荚膜糖时，该MenY荚膜糖至少部分被O-乙酰化从而使得至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或98％的重复单元在至少一个或两个位置处被O-乙酰化。O-乙酰化出现在例如至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或98％的重复单元的位置7和/或9。
O-乙酰化的百分比指含有O-乙酰化的重复单元的百分比。此可在缀合之前和/或缀合之后在糖中测量。
在本发明的免疫原性组合物的实施方案中，存在的糖或存在的各脑膜炎奈瑟菌荚膜糖与TT缀合。在进一步的实施方案中，各脑膜炎奈瑟菌荚膜糖分别与单独的载体蛋白缀合。在进一步的实施方案中，各脑膜炎奈瑟菌荚膜糖缀合物的糖类：载体比为1：5至5：1或1：1至1：4(w/w)。在进一步的实施方案中，至少一、二或三种脑膜炎奈瑟菌荚膜糖缀合物直接与载体蛋白缀合。在进一步的实施方案中，MenW和/或MenY、MenW和/或MenC、MenY和/或MenC或MenW和MenC及MenY直接与载体蛋白缀合。在进一步的实施方案中，至少一、二或三种脑膜炎奈瑟菌糖缀合物直接通过CDAP化学缀合。在进一步的实施方案中，MenW和/或Y糖对载体蛋白的比在1：0.5至1：2(w/w)之间。在进一步的实施方案中，MenC糖对载体蛋白的比例在1：0.5至1：2(w/w)之间。在进一步的实施方案中，至少一、二或三种脑膜炎奈瑟菌荚膜糖经由接头(其可为是双官能的，诸如具有两个反应性氨基(诸如ADH)或两个反应性羧基，或一端为一个反应性氨基，另一端为一个反应性羧基)与载体蛋白缀合。该接头可具有4至12个碳原子。在进一步的实施方案中，该经由接头缀合的脑膜炎奈瑟菌荚膜糖或各脑膜炎奈瑟菌荚膜糖通过CDAP化学与该接头缀合。在进一步的实施方案中，该载体蛋白使用碳二亚胺化学与该接头缀合，例如使用EDAC。在进一步的实施方案中，该脑膜炎奈瑟菌荚膜糖或各脑膜炎奈瑟菌荚膜糖在载体蛋白与接头缀合之前先与该接头缀合。在进一步的实施方案中，MenA经由接头与载体蛋白缀合(MenA糖对载体蛋白的比例可在1：2至1：5(w/w)之间)。在进一步的实施方案中，MenC经由接头与载体蛋白缀合(MenC糖对载体蛋白的比例可在1：2至1：5(w/w)之间)。
通过使用天然或略微缩小的多糖缀合物，可实现下列一项或多项优势：1)可通过0.2微米滤器过滤的具有高免疫原性的缀合物；2)免疫记忆可被增强(如实施例三中)；3)缀合物中多糖对蛋白质的比例改变，从而使缀合物中的多糖对蛋白质的比例(w/w)可能增加(此可导致载体抑制作用降低)；4)易于水解的免疫原性缀合物(诸如MenA缀合物)可通过使用较大的多糖进行缀合来稳定。使用较大的多糖可导致与缀合载体更多的交联并可减少游离糖从缀合物释出。现有技术中描述的结合型疫苗倾向在缀合之前将多糖解聚以改善缀合。保留较大尺寸的糖的脑膜炎奈瑟菌(或糖)缀合物疫苗可提供针对脑膜炎奈瑟菌病的良好免疫反应。
因此本发明的免疫原性组合物可包含一种或多种糖缀合物，其中各糖在缀合之前的平均大小高于50kDa、75kDa、100kDa、110kDa、120kDa或130kDa。在一个实施方案中，缀合后的缀合物应可容易地通过0.2微米过滤器过滤，从而在过滤后与过滤前样品相比较，可取得超过50、60、70、80、90或95％的产率。
尤其是，本发明的免疫原性组合物包含与载体蛋白缀合的来自血清群A、C、W和Y的至少一、二、三或四种的脑膜炎奈瑟菌荚膜糖，其中至少一、二、三、或四个、或各脑膜炎奈瑟菌荚膜糖的平均大小(重均分子量；Mw)高于50kDa、60kDa、75kDa、100kDa、110kDa、120kDa或130kDa。
在优选的实施方案中，该MenAAH-TT缀合物的平均Mw为至少250kDa、260kDa、270kDa、280kDa或290kDa，最优选为约300kDa，且至多为350kDa或330kDa。在优选的实施方案中，MenCAH-TT缀合物的平均Mw为至少150kDa、160kDa、170kDa、180kDa或190kDa，最优选为约200kDa，且至多为250kDa或230kDa。在优选的实施方案中，该MenW-TT缀合物的平均Mw为至少240kDa、250kDa、260kDa或270kDa，最优选为约280kDa，且至多为330kDa或310kDa。在优选的实施方案中，该MenY-TT缀合物的平均Mw为至少220kDa、230kDa、240kDa或250kDa，最优选为约270kDa且至多320kDa或300kDa。
包含与载体蛋白缀合的来自血清群A、C、W和Y的至少一、二、三或四种的脑膜炎奈瑟菌荚膜糖，其中至少一、二、三、或四个、或各脑膜炎奈瑟菌荚膜糖为天然糖或相对于该天然糖的重均分子量尺寸缩小高达×2、×3、×4、×5、×6、×7、×8、×9或×10倍。
在本发明的目的方面，“天然多糖”指未经历处理过程的糖，该过程的目的减小该糖的大小。在正常纯化程序中，多糖的尺寸可能会略微减小。这样的糖仍然为天然的。仅若该多糖已经经历尺寸缩小技术，多糖才不会被认为是天然的。
在本发明的目的方面，“尺寸缩小达到×2倍”意指该糖经受意图缩小该糖尺寸，但意图保留该天然多糖的一半以上的尺寸的过程。×3、×4等以相同的方式解释，即，该糖经受意图缩小该糖尺寸，但意图保留超过该天然多糖尺寸的三分的一以上，四分的一以上，等的过程。
在本发明的一个方面中，该免疫原性组合物包含与载体蛋白缀合的来自血清群A、C、W和Y的至少一、二、三或四种的脑膜炎奈瑟菌荚膜糖，其中至少一、二、三、或四个、或各脑膜炎奈瑟菌荚膜糖为天然多糖。
在本发明的一个方面中，该免疫原性组合物包含与载体蛋白缀合的来自血清群A、C、W和Y的至少一、二、三或四种的脑膜炎奈瑟菌荚膜糖，其中至少一、二、三、或四个、或各脑膜炎奈瑟菌荚膜糖的尺寸缩小高达×1.5、×2、×3、×4、×5、×6、×7、×8、×9或×10倍。
本发明的免疫原性组合物任选地包含下列的缀合物：脑膜炎奈瑟菌血清群C荚膜糖(MenC)、血清群A荚膜糖(MenA)、血清群W135荚膜糖(MenW)、血清群Y荚膜糖(MenY)、血清群C和Y荚膜糖(MenCY)、血清群C和A荚膜糖(MenAC)、血清群C和W荚膜糖(MenCW)、血清群A和Y荚膜糖(MenAY)、血清群A和W荚膜糖(MenAW)、血清群W和Y荚膜糖(Men WY)、血清群A、C和W荚膜糖(MenACW)、血清群A、C和Y荚膜糖(MenACY)；血清群A、W135和Y荚膜糖(MenAWY)、血清群C、W135和Y荚膜糖(MenCWY)；或血清群A、C、W135和Y荚膜糖(MenACWY)。此为本文中提及的“一、二、三或四种”或“至少一种”脑膜炎奈瑟菌血清群A、C、W和Y的定义。
在实施方案中，如通过MALLS所测定的，至少一、二、三、四种或各脑膜炎奈瑟菌糖的平均大小在50kDa至1500kDa之间、50kDa至500kDa之间、50kDa至300kDa之间、101kDa至1500kDa之间、101kDa至500kDa之间、101kDa至300kDa之间。
在实施方案中，当存在MenA糖时，其分子量为50至500kDa、50至100kDa、100至500kDa、55至90kDa、60至70kDa、或70至80kDa、或60至80kDa。
在实施方案中，当存在MenC糖时，其分子量为100至200kDa、50至100kDa、100至150kDa、101至130kDa、150至210kDa、或180至210kDa。
在实施方案中，当存在MenY糖时，其分子量为60至190kDa、70至180kDa、80至170kDa、90至160kDa、100至150kDa、或110至140kDa、50至100kDa、100至140kDa、140至170kDa或150至160kDa。
在实施方案中，当存在MenW糖时，其分子量为60至190kDa、70至180kDa、80至170kDa、90至160kDa、100至150kDa、110至140kDa、50至100kDa、或120至140kDa。
本文的糖的分子量或平均分子量是指在缀合之前测量的糖的重均分子量(Mw)且通过MALLS测量。
MALLS技术为本领域所熟知且通常如实施例2中的描述进行。为了通过MALLS分析脑膜炎奈瑟菌糖，可组合使用两个柱子(TSKG6000和5000PWxl)并将糖在水中洗脱。使用光散射检测器(例如配备488nm的10mW氩激光的Wyatt Dawn DSP)和光干涉折射计(inferometric refractometer)(例如配备P100cell和498nm红色滤光器的Wyatt OtilabDSP)来检测糖类。
在实施方案中，脑膜炎奈瑟菌糖为天然多糖或已在正常提取过程期间减小尺寸的天然多糖。
在实施方案中，脑膜炎奈瑟菌糖通过机械裂解(例如微流体化或超声处理)缩小尺寸。微流体化和超声处理具有缩小较大的天然多糖的尺寸至足以提供可过滤的缀合物(例如通过0.2微米过滤器)的益处。尺寸缩小不超过×20、×10、×8、×6、×5、×4、×3、×2、或×1.5倍。
在实施方案中，该免疫原性组合物包含由天然多糖及尺寸缩小不超过×20倍的糖的混合物制成的脑膜炎奈瑟菌缀合物。例如，来自MenC和/或MenA的糖为天然的。例如，来自MenY和/或MenW的糖类的尺寸缩小不超过×20、×10、×8、×6、×5、×4、×3或×2倍。例如免疫原性组合物含有从MenY和/或MenW和/或MenC和/或MenA制成的缀合物，该MenY和/或MenW和/或MenC和/或MenA的糖类的尺寸缩小不超过×10倍和/或经微流体化。例如，免疫原性组合物包含从天然MenA和/或MenC和/或MenW和/或MenY制成的缀合物。例如，免疫原性组合物包含从天然MenC制成的缀合物。例如，免疫原性组合物包含从天然MenC和MenA制成的缀合物，该MenC和MenA的糖类尺寸缩小不超过×10倍和/或经微流体化。例如，免疫原性组合物包含从天然MenC和MenY制成的缀合物，该MenC和MenY的糖类尺寸缩小不超过×10倍和/或经微流体化。
在实施方案中，该糖类的多分散数为1至1.5、1至1.3、1至1.2、1至1.1或1至1.05且在与载体蛋白缀合之后，该缀合物的多分散数为1.0至2.5、1.0至2.0、1.0至1.5、1.0至1.2、1.5至2.5、1.7至2.2或1.5至2.0。所有多分散数测量均通过MALLS进行。
糖类任选地从细菌分离出的多糖尺寸缩小高达1.5倍、2倍、4倍、6倍、8倍、10倍、12倍、14倍、16倍、18倍或20倍。
在一个实施方案中，各脑膜炎奈瑟菌糖为天然多糖，或尺寸缩小不超过×10倍。在进一步的实施方案中，各脑膜炎奈瑟菌荚膜糖为天然多糖。在进一步的实施方案中，至少一、二、三或四种脑膜炎奈瑟菌荚膜糖通过微流体化缩小尺寸。在进一步的实施方案中，各脑膜炎奈瑟菌荚膜糖的尺寸缩小不超过×10倍。在进一步的实施方案中，该脑膜炎奈瑟菌缀合物从天然多糖和尺寸缩小不超过×10倍的糖的混合物制成。在进一步的实施方案中，该来自血清群Y的荚膜糖的尺寸缩小不超过×10倍。在进一步的实施方案中，该来自血清群A和C的荚膜糖为天然多糖且来自血清群W135和Y的糖的尺寸缩小不超过×10倍。在进一步的实施方案中，各脑膜炎奈瑟菌荚膜糖的平均大小在50kDa至300kDa之间或50kDa至200kDa之间。在进一步的实施方案中，该免疫原性组合物包含平均大小超过50kDa、75kDa、100kDa或平均大小在50至100kDa或55至90kDa或60至80kDa之间的MenA荚膜糖。在进一步的实施方案中，该免疫原性组合物包含平均大小超过50kDa、75kDa、100kDa或平均大小在100至200kDa、100至150kDa、80至120kDa、90至110kDa、150至200kDa、120至240kDa、140至220kDa、160至200kDa或190至200kDa之间的MenC荚膜糖。在进一步的实施方案中，该免疫原性组合物包含平均大小超过50kDa、75kDa、100kDa或平均大小在60至190kDa、或70至180kDa、或80至170kDa、或90至160kDa、或100至150kDa、110至145kDa或120至140kDa之间的MenY荚膜糖。在进一步的实施方案中，该免疫原性组合物包含平均大小超过50kDa、75kDa、100kDa或平均大小在60至190kDa、或70至180kDa、或80至170kDa、或90至160kDa、或100至150kDa、140至180kDa、150至170kDa或110至140kDa之间的MenW荚膜糖。
在本发明的实施方案中，各该至少二、三、四种脑膜炎奈瑟菌糖种的每一种的糖剂量或各脑膜炎奈瑟菌糖的糖剂量任选地为相同或近似相同。
在实施方案中，本发明的免疫原性组合物经调整或缓冲或调节至介于pH7.0至8.0、pH7.2至7.6、或约为pH7.4、或确切为pH7.4。
本发明的免疫原性组合物或疫苗任选地在稳定剂、例如多元醇(诸如蔗糖或海药糖)的存在下冻干。
在上文中所讨论的脑膜炎奈瑟菌糖组合物方面，完全不使用任何铝盐佐剂或任何佐剂可能是有利的。
活性剂可以各种不同浓度存在于本发明的医药组合物或疫苗中。通常，该物质的最小浓度为实现其预期用途必要的量，而最大浓度为将保持在溶液中或均匀悬浮在初始混合物内的最大量。例如，治疗剂的最小量任选地为将提供单一治疗有效剂量的量。在生物活性物质方面，最低浓度为重构时对于生物活性所需的量，而最大浓度为无法维持均匀悬浮液的点。
在另一实施方案中，该组合物包括脑膜炎奈瑟菌血清群X荚膜多糖与载体分子的缀合物。血清群X荚膜多糖的结构由不含O-乙酰基的N-乙酰葡糖胺-4-磷酸残基组成，该N-乙酰葡糖胺-4-磷酸残基通过al-4磷酸二酯键保持在一起。载体分子可为白喉或破伤风类毒素、CRM197或蛋白D。如实施例中所示例的，在优选的实施方案中，该组合物不包括脑膜炎奈瑟菌血清群X荚膜多糖的缀合物。
稳定性
术语“稳定”和“稳定性”指抗原在一段期间内保持免疫原性的能力。稳定性可在随着时间推移的效力中测量。术语“稳定”和“稳定性”进一步指免疫原性组合物的物理、化学和构象稳定性。蛋白质组合物的不稳定性可由下列因素造成：蛋白质分子化学降解或聚集以形成更高阶的聚合物、异二聚体分解成单体、去糖基化、糖基化修饰或任何其他降低本发明所包括的蛋白质组合物的至少一种生物学活性的结构修饰。稳定性可通过本领域中熟知的方法评估，包括测量样品的光散射、光(吸光度或光密度)的明显衰减、尺寸(例如通过尺寸排阻色层分析法)、体外或体内生物学活性和/或差示扫描量热法(DSC)测量的性质。其他用于评估稳定性的方法为本领域所已知且也可根据本发明使用。
在一些实施方案中，与参考标准相比较，本发明的稳定制剂中的抗原可维持至少50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％效力至少1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月、30个月、36个月、42个月、48个月、54个月或60个月。在一些实施方案中，与参考标准相比较，本发明的稳定制剂中的抗原可维持至少50％效力至少1年、2年、3年、4年或5年。术语“稳定”和“稳定性”也指抗原在一段时间内维持表位或免疫反应性的能力。例如，与参考标准相比较，本发明的稳定制剂中的抗原可维持至少50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的其表位或免疫反应性至少1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月、30个月、36个月、42个月、48个月、54个月或60个月。在一些实施方案中，稳定性相对于环境条件测量。环境条件的非限制性实例包括光、温度、冷冻/解冻循环、搅动和pH值。本领域技术人员将能使用本文揭示的方法或本领域中已知的其他方法测定是否存在抗原性表位或免疫反应性。在一些实施方案中，抗原的稳定性从其配制日期开始测量。在一些实施方案中，抗原的稳定性从其储存条件改变的日期开始测量。储存条件的变化的非限制性实例包括从冷冻变成冷藏、从冷冻变成室温、从冷藏变成室温、从冷藏变成冷冻、从室温变成冷冻、从室温变成冷藏、从光亮变成黑暗或引入搅动。
在一个实施方案中，术语“稳定”和“稳定性”包括抗原与铝结合的能力。例如，与参考标准相比较，本发明的稳定制剂包含至少50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的蛋白质与制剂中的铝(例如磷酸铝)结合至少1小时、6小时、12小时、18小时、24小时、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月、30个月、36个月、42个月、48个月、54个月或60个月。参见，例如实施例13。在优选的实施方案中，至少90％，更优选为至少95％，且最优选为至少99％的总亚族A rLP2086多肽(例如，包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的多肽)与组合物中的铝结合。在优选的实施方案中，至少90％，更优选为至少95％，且最优选为至少99％的总亚族B rLP2086多肽(例如，包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的多肽)与组合物中的铝结合。
铝结合作用的测定.将包含铝和至少一种蛋白质抗原的组合物离心从而使铝沉淀成小丸。将吸附铝的蛋白质离心为本领域所已知。参见，例如Egan et al.,Vaccine,Vol.27(24):3175-3180(2009)。还将与铝结合的蛋白沉淀成小丸，而非与铝结合的蛋白质则保留在上清液中。上清液和小丸中的总蛋白质通过Lowry分析测定。经结合的蛋白的百分比经由将上清液中的总蛋白除以加入该组合物中的总蛋白再乘以100％来计算。类似地，未经结合的蛋白质的百分比经由将上清液中的总蛋白除以加入该组合物中的总蛋白再乘以100％来计算。在同时包含亚族A和亚族B抗原的组合物方面，上清液中的个别亚族A和B蛋白浓度通过离子交换色层分析法测定。亚族A和B蛋白的分离和洗脱使用强阴离子柱和高盐浓度洗脱液进行。亚族A和B蛋白二者的检测和定量使用荧光检测器进行，该荧光检测器的设定为激发＝280nm且发射＝310nm。亚族A和亚族B蛋白在不同的滞留时间洗脱出并使用针对rLP2086蛋白质参考物产生的标准曲线定量。未经结合的蛋白质的百分比通过将上清液中的总蛋白除以加入该组合物中的总蛋白再乘以100％来计算。经结合的蛋白质的百分比通过从100％减去未经结合的蛋白质的百分比来计算。
聚山梨醇酯80
聚山梨醇酯80(PS-80)为非离子性表面活性剂。基于效力分析的使用体外单克隆抗体的加速稳定性研究证明在具有较高摩尔比的PS-80对MnB rLP2086蛋白的最终制剂中的亚族B蛋白不稳定。以各种不同比例的PS-80进行的进一步实验已证明用于保持效力的PS-80对MnB rLP2086蛋白的最优选摩尔比为约2.8±1.4。
该组合物中的PS-80的浓度取决于PS-80对多肽的摩尔比。在一个实施方案中，该组合物包括的PS-80对第一多肽和PS-80对第二多肽的摩尔比为2.8±1.4。在一个实施方案中，该组合物包括的PS-80对第一多肽和PS-80对第二多肽的摩尔比为2.8±1.1。在一个实施方案中，该组合物包括的PS-80对多肽的摩尔比至少为1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2或3.3。在一个实施方案中，该组合物包括的PS-80对多肽的摩尔比至多为4.0、3.9、3.8、3.7、3.6、3.5、3.4、3.3、3.2、3.1、3.0或2.9。本发明描述的任何最小值可与任何最大值组合以定义一个范围。优选地，该组合物包括的PS-80对多肽的摩尔比为2.8。
PS-80对多肽的摩尔比从测得的PS-80浓度和测得的总多肽浓度进行计算来测定，其中两个数值均以摩尔表示。例如PS-80对蛋白质的摩尔比的测定通过计算在最终药品物质中测得的PS-80浓度(例如通过逆相高压液相色层分析法(RP-HPLC))对该测得的总蛋白质浓度(例如通过离子交换高压液相色层分析法(IEX-HPLC))的摩尔比来进行，其中两个数值均以摩尔表示。
使用RP-HPLC来定量疫苗制剂中的聚山梨醇酯80的浓度。清洁剂的浓度通过皂化脂肪酸部分来测定；聚山梨酸酯80通过在40℃下的碱性水解来转化成游离油酸。该样品使用C18柱通过RP-HPLC分离并使用UV检测器，在波长200nm下定量。
第一和第二多肽通过阴离子交换HPLC解析。rLP2086(fHBP)亚族A和B蛋白在不同的滞留时间洗脱出并使用针对各自rLP2086蛋白质参考物质产生的标准曲线定量。
术语“摩尔比”和包括fHBP和PS-80的免疫原性组合物的描述进一步揭示于WO2012025873和美国专利公开US 2013/0171194中，其全部内容各自以引用方式并入本文。
如本文所使用的术语“摩尔比”指组合物中的二种不同元素的摩尔数的比例。在一些实施方案中，该摩尔比为清洁剂的摩尔数对多肽的摩尔数的比例。在一些实施方案中，该摩尔比为PS-80的摩尔数对蛋白质的摩尔数的比例。在一个实施方案中，基于蛋白质和聚山梨醇酯80浓度，该摩尔比可使用下列等式计算：
在一个实施方案中，该组合物包括的PS-80对MnB rLP2086蛋白的摩尔比在1.4至4.2之间以保持效力。在一个实施方案中，该组合物包括至少为1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7或2.8的PS-80对MnB rLP2086蛋白的摩尔比。在一个实施方案中，该组合物包含至多4.2、4.1、4.0、3.9、3.8、3.7、3.7、3.6、3.5、3.4、3.3、3.2、3.1、3.0、2.9或2.8。任何最小值均可与本文描述的任何最大值组合以定义一个范围。
在一个实施方案中，该组合物包含约0.0015、0.0017、0.0019、0.0021、0.0023、0.0025、0.0027、0.0029、0.0031、0.0033、0.0035、0.0037、0.0039、0.0041、0.0043、0.0045、0.0047、0.0049、0.0051mg/ml的PS-80。优选地，该组合物包含约0.0035mg/ml的PS-80。
在另一实施方案中，该组合物包含至少10μg、11μg、12μg、13μg、14μg、15μg、16μg、17μg、18μg、19μg、20μg、21μg、22μg、23μg、24μg或25μg的PS-80。在另一实施方案中，该组合物包含至多30μg、29μg、28μg、27μg、26μg、25μg、24μg、23μg、22μg、21μg、20μg、19μg或18μg的PS-80。任何最小值均可与本文描述的任何最大值组合以定义一个范围。在优选的实施方案中，该组合物包含至少10μg及至多20μg的PS-80。在最优选的实施方案中，该组合物包含约18μg的PS-80。
在另一实施方案中，该组合物包括范围在0.0005％至1％的PS-80浓度。例如，该组合物中的PS-80浓度可为至少0.0005％、0.005％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.10％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％或1.1％的PS-80。在一个实施方案中，该组合物中的PS-80浓度可为至多2.0％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1.4％、1.3％、1.2％、1.1％、1.0％、0.9％、0.8％或0.7％的PS-80。在优选的实施方案中，该组合物包括约0.07％的PS-80。任何最小值均可与本文描述的任何最大值组合以定义一个范围。
本发明人意外发现与第一组合物中的聚山梨醇酯80对MnB rLP2086多肽的摩尔比相比较，虽然包含第一组合物和第二组合物的组合的组合物可具有不同的聚山梨醇酯80对MnB rLP2086多肽摩尔比，用于该组合组合物的额外的表面活性剂对于维持该组合组合物中的MnB rLP2086多肽的溶解度和稳定性不是必需的。因此，在一个实施方案中，该试剂盒不包含多于0.02mg的聚山梨醇酯80。
铝
该组合物包括呈磷酸铝形式的铝。添加的AlPO4作为稳定剂以提供增强的可制造性和稳定性。用于制造磷酸铝的方法描述于美国专利公开US 2009/0016946(其全部内容以引用方式并入本文)中。在一个实施方案中，该组合物不进一步包括除了铝之外的多价阳离子。在一个实施方案中，该组合物不进一步包括Al(OH)3或Al(SO4)3。
在一个实施方案中，该组合物包括至少50μg、60μg、70μg、80μg、90μg、100μg、110μg、120μg、130μg、140μg、150μg、160μg、170μg、180μg、190μg、200μg、210μg、220μg、230μg、240μg或250μg的铝。在一个实施方案中，该组合物包括至多500μg、490μg、480μg、470μg、460μg、450μg、440μg、430μg、420μg、410μg、400μg、390μg、380μg、370μg、360μg、350μg、340μg、330μg、320μg、310μg、300μg、290μg、280μg、270μg、260μg或250μg的铝。任何最小值均可与本文描述的任何最大值组合以定义一个范围。在最优选的实施方案中，该组合物包含250μg的铝。
在一个实施方案中，该组合物包括至少0.005mg/ml、0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml、0.06mg/ml、0.07mg/ml、0.08mg/ml、0.09mg/ml、0.10mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml或0.5mg/ml的磷酸铝。在一个实施方案中、该组合物包括至多2.0mg/ml、1.9mg/ml、1.8mg/ml、1.7mg/ml、1.6mg/ml、1.5mg/ml、1.4mg/ml、1.3mg/ml、1.2mg/ml、1.1mg/ml、1.0mg/ml、0.9mg/ml、0.8mg/ml或0.7mg/ml的PS-80。在优选的实施方案中，该组合物包括约0.07mg/ml的PS-80。任何最小值均可与本文描述的任何最大值组合以定义一个范围。在优选的实施方案中，该组合物包括0.5mg/ml的磷酸铝。在最优选的实施方案中，该组合物包括为磷酸铝(AlPO4)形式的0.5mg铝/ml。该浓度维持该亚族A和B蛋白与铝结合(至少90％结合或更优选)。
本发明人意外发现，当与第一组合物中与铝结合的MnB rLP2086多肽的百分比相比较，虽然组合物中第一组合物和第二组合物组合可改变与铝结合的MnB rLP2086多肽的百分比，令人惊讶地，第一和第二组合物组合可保持至少90％的总MnBrLP2086多肽与铝结合。因此，在一个实施方案中，该组合组合物中与铝结合的总MnB rLP2086多肽的百分比为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。优选地，该组合组合物中与铝结合的总MnBrLP2086多肽的百分比为至少90％，更优选为至少95％，最优选为至少100％。
在另一实施方案中，与重构该冻干组合物之前在液体组合物中的与铝结合的多肽的浓度相比较，该免疫原性组合物中与铝结合的多肽的浓度在24小时后并未降低。在另一实施方案中，与该冻干组合物中的MenAAH-TT缀合物的浓度相比较，该免疫原性组合物中的MenAAH-TT缀合物的浓度在24小时后并未降低。在一个实施方案中，与重构之前在液体组合物中的相应浓度相比较，该浓度在24小时后降低至多1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％。
在另一实施方案中，与该冻干组合物中的MenCAH-TT缀合物的浓度相比较，该免疫原性组合物中的MenCAH-TT缀合物的浓度在24小时后并未降低。在另一实施方案中，与该冻干组合物中的MenW-TT缀合物的浓度相比较，该免疫原性组合物中的MenW-TT缀合物的浓度在24小时后并未降低。在另一实施方案中，与该冻干组合物中的MenY-TT缀合物的浓度相比较，该免疫原性组合物中的MenY-TT缀合物的浓度在24小时后并未降低。在一个实施方案中，与重构之前在该液体组合物中的相应浓度相比较，该浓度在24小时后降低至多1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％。
赋形剂
在一个实施方案中，该组合物包括组氨酸。在一个实施方案中，该组合物包括至少650μg、660μg、670μg、680μg、690μg、700μg、710μg、720μg、730μg、740μg、750μg、760μg、770μg、780μg、790μg、800μg、810μg、820μg、830μg、840μg或850μg的组氨酸。在一个实施方案中，该组合物包括至多1560μg、1500μg、1400μg、1300μg、1200μg、1100μg、1000μg、950μg、900μg、890μg、880μg、870μg、860μg、850μg、840μg、830μg、820μg、810μg、800μg、790μg或780μg的组氨酸。任何最小值均可与本文描述的任何最大值组合以定义一个范围。优选地，该组合物包括780μg的组氨酸。
在一个实施方案中，该组合物包括tris、磷酸盐或琥珀酸盐缓衡剂。在优选的实施方案中，该组合物不包括tris缓冲剂。在优选的实施方案中，于组合物不包括磷酸盐缓冲剂。在优选的实施方案中，该组合物不包括琥珀酸盐缓冲剂。在优选的实施方案中，该组合物包括组氨酸缓冲剂。
在一个实施方案中，该组合物包括氯化钠。MenABCWY组合物中的氯化钠浓度可在160.5-161.1mM之间变化。
在一个实施方案中，该组合物的pH值在5.5至7.5之间。在优选的实施方案中，该组合物的pH值在5.8至7.0之间，最优选为pH 5.8至pH 6.0之间。在一个实施方案中，该组合物的pH值至多为6.1。在一个实施方案中，该组合物的pH值为5.8。
试剂盒
本发明进一步的方面为用于施用组合物的剂量的试剂盒以在哺乳动物中引发针对脑膜炎奈瑟菌的杀菌抗体。
在一个方面，该试剂盒包括第一组合物，该第一组合物包括如上述的第一多肽和如上述的第二多肽。在优选的实施方案中，该第一多肽包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。在另一优选的实施方案中，该第二多肽包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。该试剂盒进一步包括第二组合物，该第二组合物包括MenAAH-TT缀合物、MenCAH-TT缀合物、MenW-TT缀合物和MenY-TT缀合物。在一个实施方案中，该试剂盒包括至少两个容器，其中第一容器包括该第一组合物，第二容器包括该第二组合物。
在一个实施方案中，该试剂盒包含液体第一组合物和冻干的第二组合物。优选地，该试剂盒包括液体MnB二价rLP2086组合物和冻干的MenACWY-TT组合物。
本发明人意外发现，虽然包括第一组合物和第二组合物的组合的组合物改变第一组合物中MnB rLP2086多肽相对于聚山梨醇酯80的摩尔比，但令人惊讶地，用于该组合组合物的额外的表面活性剂对保持该组合组合物中的MnB rLP2086多肽的溶解度和稳定性而言并非必要的。因此，在一个实施方案中，该试剂盒不包含多于0.02mg的聚山梨醇酯80。
在本发明的一个实施方案中，该试剂盒并未进一步包含任一下列市售的免疫原性组合物：MENACTRA(R)、MENVEO(R)、ADACEL(R)、HAVRIX(R)、GARDASIL(R)、REPEVAX或其任何组合。例如，优选地，该试剂盒并未进一步包括脑膜炎奈瑟菌A、C、Y和W-135多糖缀合物(MCV4)组合物，其中该载体蛋白为白喉类毒素。在一个实施方案中，该试剂盒并未进一步包括脑膜炎奈瑟菌A、C、Y和W-135多糖缀合物(MCV4)组合物，其中该载体蛋白为CRM197。在一个实施方案中，该试剂盒并未进一步包含NIMENRIX疫苗，其中NIMENRIX包含由氯化钠和水组成的稀释剂。
杀菌活性
MnB的发病率约为10万分之一，意指需要极多数的受试者(40万至6百万以上)来支持统计学上有意义的效力评估。因此，采用使用人补体(其为保护和疫苗效力的替代物)的血清杀菌分析(hSBA)来评估临床试验中的免疫原性。
辉瑞已建立包含2000年至2006年引起IMD的分离株的广泛MnB菌株集合(N＝至少1263)。MnB分离株从美国疾病控制和预防中心(CDC)及欧洲国家健康和参考实验室系统性收集。
在一个实施方案中，通过对人施用该组合物所诱导的免疫反应利用人补体，采用血清杀菌分析(hSBA)针对四种脑膜炎奈瑟菌血清群B(MnB)菌株测定。用于hSBA的MnB菌株选自菌株库。该菌株库代表系统性收集的临床相关脑膜炎奈瑟菌的菌株集合。
对所有测试菌株(尤其是表达具有与第一多肽和第二多肽异源的序列的脂蛋白2086变体的菌株)的高比例的hSBA反应表明该组合物为广泛保护性疫苗，其足以提供针对表达至少来自血清群B，包括额外的血清群(诸如血清群X)的rLP2086(FHBP)的脑膜炎奈瑟菌菌株的高度血清保护作用。
亚族A菌株
在一个实施方案中，该hSBA菌株为表达LP2086(fHBP)亚族A蛋白的脑膜炎奈瑟菌菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株为表达脂蛋白2086变体的LP2086(fHBP)亚族A菌株，其与表达A05的脑膜炎奈瑟菌菌株异源。例如，在一个实施方案中，该hSBA菌株为表达脂蛋白2086变体的LP2086(fHBP)亚族A菌株，其与菌株M98250771异源。
在一个实施方案中，该hSBA菌株为表达fHBP A10的脑膜炎奈瑟菌菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株为表达LP2086(fHBP)A22的脑膜炎奈瑟菌菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株为表达LP2086(fHBP)A56的脑膜炎奈瑟菌菌株。在进一步的实施方案中，该hSBA菌株为LP2086(fHBP)A22和LP2086(fHBP)A56菌株。在另一实施方案中，该hSBA菌株为表达LP2086 A04的脑膜炎奈瑟菌菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株为表达LP2086 A05的脑膜炎奈瑟菌菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株为表达LP2086 A12的脑膜炎奈瑟菌菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株为LP2086 A22的脑膜炎奈瑟菌菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株为LP2086 A12的脑膜炎奈瑟菌菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株为LP2086A04的脑膜炎奈瑟菌菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株为LP2086 A19的脑膜炎奈瑟菌菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株为LP2086 A07的脑膜炎奈瑟菌菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株包括任一下列菌株：表达A22、A12、A19、A05和A07的菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株包括任一下列菌株：表达A06、A15和A29的菌株。
在一个实施方案中，该免疫反应对与表达A05的脑膜炎奈瑟菌菌株异源的脑膜炎奈瑟菌血清群B fHPB亚族A菌株具有杀菌性。在一个实施方案中，该免疫反应针对脑膜炎奈瑟菌血清群B A22菌株。在一个实施方案中，该免疫反应针对脑膜炎奈瑟菌血清群B A56菌株。在一个实施方案中，该免疫反应针对脑膜炎奈瑟菌血清群B A06菌株。在一个实施方案中，该免疫反应针对脑膜炎奈瑟菌血清群B A15菌株。在一个实施方案中，该免疫反应针对脑膜炎奈瑟菌血清群B A29菌株。在一个实施方案中，该免疫反应针对脑膜炎奈瑟菌血清群B A62菌株。在一个实施方案中，该免疫反应对与脑膜炎奈瑟菌菌株M98250771异源的脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族A菌株具有杀菌性。
在一个实施方案中，该免疫反应对表达因子H结合蛋白的脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族A菌株具有杀菌性，该因子H结合蛋白包括与第一多肽具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在另一实施方案中，该免疫反应对表达因子H结合蛋白的脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族A菌株具有杀菌性，该因子H结合蛋白包括与脑膜炎奈瑟菌菌株M98250771表达的因子H结合蛋白具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在优选的实施方案中，该免疫反应对表达因子H结合蛋白的脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族A菌株具有杀菌性，该因子H结合蛋白包括与脑膜炎奈瑟菌菌株M98250771表达的因子H结合蛋白具有至少80％，更优选为至少84％同一性的氨基酸序列。
在另一实施方案中，该免疫反应对表达因子H结合蛋白的脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族A菌株具有杀菌性，该因子H结合蛋白包括与第一多肽具有至多81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在另一实施方案中，该免疫反应对表达因子H结合蛋白的脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族A菌株具有杀菌性，该因子H结合蛋白包括与脑膜炎奈瑟菌菌株M98250771表达的因子H结合蛋白具有至多81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在优选的实施方案中，该免疫反应对表达因子H结合蛋白的脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族A菌株具有杀菌性，该因子H结合蛋白包括与脑膜炎奈瑟菌菌株M98250771表达的因子H结合蛋白具有至多85％，更优选为至多99％同一性的氨基酸序列。任何最小值均可与本文描述的任何最大值组合以定义一个范围。
在一个实施方案中，由该组合物引发的免疫反应不仅对脑膜炎奈瑟菌血清群BfHPB亚族A菌株具有杀菌性，还对表达fHBP亚族A多肽的脑膜炎奈瑟菌菌株具有杀菌性，其中该血清群并非血清群B。例如，在优选的实施方案中，由该组合物引发的免疫反应对脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族A菌株具有杀菌性且对表达与fHBP A05异源的fHBP亚族A多肽的脑膜炎奈瑟菌血清群C菌株具有杀菌性。例如，在一个实施方案中，该免疫反应针对表达fHBPA10的脑膜炎奈瑟菌血清群C菌株。在另一实施方案中，该免疫反应针对表达fHBP A19的脑膜炎奈瑟菌血清群W菌株。在一个实施方案中，该免疫反应对表达fHBP亚族A多肽的脑膜炎奈瑟菌菌株具有杀菌性，其中该菌株与脑膜炎奈瑟菌菌株M98250771异源。
亚族B菌株
在一个实施方案中，该hSBA菌株为LP2086(fHBP)亚族B菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株为表达脂蛋白2086变体的LP2086(fHBP)亚族B菌株，其与表达B01的脑膜炎奈瑟菌菌株异源。例如，在一个实施方案中，该hSBA菌株为表达脂蛋白2086变体的LP2086(fHBP)亚族B菌株，其与菌株CDC1127异源。在优选的实施方案中，该hSBA菌株为表达脂蛋白2086变体的LP2086(fHBP)亚族B菌株，其与菌株CDC1573异源。
在一个实施方案中，该免疫反应对脑膜炎奈瑟菌血清群B fHPB亚族B菌株具有杀菌性，该脑膜炎奈瑟菌血清群B fHPB亚族B菌株与表达B01的脑膜炎奈瑟菌菌株异源。在一个实施方案中，该免疫反应针对脑膜炎奈瑟菌血清群B B24菌株。在一个实施方案中，该免疫反应针对脑膜炎奈瑟菌血清群B B44菌株。在一个实施方案中，该免疫反应针对脑膜炎奈瑟菌血清群B B16菌株。在一个实施方案中，该免疫反应针对脑膜炎奈瑟菌血清群B B03菌株。在一个实施方案中，该免疫反应针对脑膜炎奈瑟菌血清群B B09菌株。在一个实施方案中，该免疫反应针对脑膜炎奈瑟菌血清群B B15菌株。在一个实施方案中，该免疫反应针对脑膜炎奈瑟菌血清群B B153菌株。在一个实施方案中，该免疫反应对与脑膜炎奈瑟菌血清群CDC1573异源的脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族B菌株具有杀菌性。
在一个实施方案中，该免疫反应对表达因子H结合蛋白的脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族B菌株具有杀菌性，该因子H结合蛋白包括与第二多肽具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在另一实施方案中，该免疫反应对表达因子H结合蛋白的脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族B菌株具有杀菌性，该因子H结合蛋白包括与脑膜炎奈瑟菌菌株CDC1573表达的因子H结合蛋白具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在优选的实施方案中，该免疫反应对表达因子H结合蛋白的脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族B菌株具有杀菌性，该因子H结合蛋白包括与脑膜炎奈瑟菌菌株CDC1573表达的因子H结合蛋白具有至少80％，更优选为至少87％同一性的氨基酸序列。在另一优选的实施方案中，该免疫反应对表达因子H结合蛋白的脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族B菌株具有杀菌性，该因子H结合蛋白包括与脑膜炎奈瑟菌菌株CDC1573表达的因子H结合蛋白具有至少100％同一性的氨基酸序列。
在另一实施方案中，该免疫反应对表达因子H结合蛋白的脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族B菌株具有杀菌性，该因子H结合蛋白包括与第二多肽具有至多81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在另一实施方案中，该免疫反应对表达因子H结合蛋白的脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族B菌株具有杀菌性，该因子H结合蛋白包括与脑膜炎奈瑟菌菌株CDC1573表达的因子H结合蛋白具有至多81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在优选的实施方案中，该免疫反应对表达因子H结合蛋白的脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族B菌株具有杀菌性，该因子H结合蛋白包括与脑膜炎奈瑟菌菌株CDC1573表达的因子H结合蛋白具有至多88％，更优选为至多99％同一性的氨基酸序列。任何最小值均可与本文描述的任何最大值组合以定义一个范围。
在一个实施方案中，该hSBA菌株为LP2086(fHBP)B24菌株。在另一实施方案中，该hSBA菌株为LP2086(fHBP)B44菌株。在进一步的实施方案中，该hSBA菌株包括LP2086(fHBP)B24和LP2086(fHBP)B44菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株包括LP2086(fHBP)A22、LP2086(fHBP)A56、LP2086(fHBP)B24和LP2086(fHBP)B44菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株包括B15。在一个实施方案中，该hSBA菌株包括B153。在另一实施方案中，该hSBA菌株为LP2086 B16菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株为LP2086 B03菌株。在一个实施方案中，该hSBA菌株为LP2086 B09菌株。在进一步的实施方案中，该hSBA菌株包括B24、B16、B44、B03和B09或其任何组合。在另一实施方案中，该hSBA菌株包括B24、B16、B44、A22、B03、B09、A12、A19、A05和A07或其任何组合。在另一实施方案中，该hSBA菌株包括A06、A07、A12、A15、A19、A29、B03、B09、B15和B16或其任何组合。
在一个实施方案中，该方法诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群B fHPB亚族A菌株和针对脑膜炎奈瑟菌血清群B fHPB亚族B菌株的免疫反应。优选地，该免疫反应对脑膜炎奈瑟菌血清群B fHPB亚族A菌株和脑膜炎奈瑟菌血清群B fHPB亚族B菌株具有杀菌性。
在一个实施方案中，该由组合物引发的免疫反应不仅对脑膜炎奈瑟菌血清群BfHPB亚族B菌株具有杀菌性，还对表达fHBP亚族B多肽的脑膜炎奈瑟菌菌株具有杀菌性，其中该血清群并非血清群B。例如，在优选的实施方案中，该由组合物引发的免疫反应对脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族B菌株具有杀菌性且对表达与fHBP B01异源的fHBP亚族B多肽的脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株具有杀菌性。例如，在一个实施方案中，该免疫反应针对表达fHBPB16的脑膜炎奈瑟菌血清群A菌株。在另一实施方案中，该免疫反应针对表达fHBP B47的脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株。在另一实施方案中，该免疫反应针对表达fHBP B49的脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株。在一个实施方案中，该免疫反应对表达fHBP亚族B多肽的脑膜炎奈瑟菌菌株具有杀菌性，其中该菌株与脑膜炎奈瑟菌血清群B菌株CDC1573异源。
效价
在一个实施方案中，与施用组合物剂量之前人体内的杀菌效价相比较，当在相同条件下，在hSBA中测量时该组合物诱导人体内的杀菌效价增加。在一个实施方案中，与施用该组合物的第一剂量之前人体内的杀菌效价相比较，当在相同条件下，在hSBA中测量时该杀菌效价较施用该组合物的第一剂量之前人体内的杀菌效价增加。在一个实施方案中，与施用该组合物的第二剂量之前人体内的杀菌效价相比较，当在相同条件下，在hSBA中测量时可观察到该杀菌效价较施用该组合物的第二剂量之前增加。在另一实施方案中，与施用该组合物的第三剂量之前人体内的杀菌效价相比较，当在相同条件下，在hSBA中测量时可观察到该杀菌效价较施用该组合物的第三剂量之前增加。
在一个实施方案中，在施用组合物的剂量后，该组合物在人体中诱导杀菌效价，其中当在相同条件下在hSBA中测量时，该杀菌效价较施用该剂量之前人体内的杀菌效价高至少1倍。例如，当在相同条件下在hSBA中测量时，接受该组合物的剂量后人体内的杀菌效价可较施用该剂量之前人体内的杀菌效价高至少1.01倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍或16倍。
在一个实施方案中，“反应者”指人类，其中在施用组合物剂量后，该组合物在人体内诱导杀菌效价，其中该杀菌效价较施用该剂量之前人体内的杀菌效价高至少1倍。在优选的实施方案中，当与施用该剂量之前人体内的杀菌效价相比较，该反应者的hSBA效价达到增加至少≥4倍。这样的反应者可被称为具有保护效价。在一些实施方案中，保护效价为大于1：4的效价。
在一个实施方案中，该hSBA效价为产生可测量效果的血清样品的最高稀释度的倒数。例如，在一个实施方案中，该hSBA效价为与T30CFU值(即，在含有除测试血清外的所有分析组分的分析孔中孵育后的存活细菌数；100％细菌存活率)相比较，导致MnB细菌减少至少50％(50％细菌存活)的测试血清的最高2倍稀释度的倒数。
在一个实施方案中，当在相同条件下在hSBA中测量时，在接受组合物的第一剂量后，该组合物在人体内诱导的杀菌效价较接受该第一剂量之前的杀菌效价高至少2倍(例如高于无第一剂量存在时人体内的杀菌效价)。在一个实施方案中，当在相同条件下在使用人补体的人血清杀菌分析(hSBA)中测量时，在接受组合物的第一剂量后，该组合物在人体内诱导的杀菌效价较接受该第一剂量之前的杀菌效价高至少4倍。在一个实施方案中，当在相同条件下在使用人补体的人血清杀菌分析(hSBA)中测量时，该在接受组合物的第一剂量后，该组合物在人体内诱导的杀菌效价较接受该第一剂量之前的杀菌效价高至少8倍。
在优选的实施方案中，该人血清补体源自对指定的hSBA测试菌株具有低固有杀菌活性的人。低固有杀菌活性指，例如针对指定的hSBA测试菌株的杀菌效价至少低于1：4稀释度。在一个实施方案中，该人补体源自对指定的hSBA测试菌株的hSBA效价至少低于1：4稀释度(诸如1：2稀释度)的人，其中未对该人施用该组合物。
在施用组合物(诸如二价rLP2086组合物)之前，人类可能显现出低于1：4的hSBA效价，或者在施用该组合物之前，人类可能显现出≥1：4的hSBA效价。因此，在优选的实施方案和实施例中，将至少一个剂量的组合物施用于人可导致人体内的hSBA效价较施用组合物之前的效价高至少4倍。在一些实施方案中，将至少一个剂量的组合物施用于人可导致hSBA效价至少高于1：4，例如hSBA效价≥1：8、hSBA效价≥1：16、hSBA效价≥1：32。本文描述的各自实施例包括评估具有hSBA效价≥1：8和/或≥1：16的人受试者的比例，其中将该二价rLP2086组合物施用于人。在一些实施方案中，与施用组合物之前相比较，施用组合物后人体内的效价增加4倍显示出该保护作用与该组合物有关。在一些实施方案中，这样的高于1：4的hSBA效价的优选评估显示出在人体内被诱导出的保护作用(即，杀菌免疫反应)与组合物有关。
在一个实施方案中，在施用该组合物的第一剂量后，该人具有等于或大于hSBA的定量下限(LLOQ)的hSBA效价。在另一实施方案中，在施用该组合物的第二剂量后，该人具有等于或大于hSBA的LLOQ的hSBA效价。在另一实施方案中，在施用该组合物的第三剂量后，该人具有等于或大于hSBA的LLOQ的hSBA效价。
方法和施用
在一个方面，本发明涉及诱导针对人的脑膜炎奈瑟菌的免疫反应的方法。在另一方面，本发明涉及为人接种疫苗的方法。在一个实施方案中，该方法包括对人施用至少一个剂量的上述组合物。在优选的实施方案中，该方法包括对人施用最多一个剂量的上述组合物。在另一实施方案中，该方法包括对人施用至少一个第一剂量和第二剂量的上述组合物。
在一个实施方案中，该第二剂量在第一剂量后至少20、30、50、60、100、120、160、170或180天及第一剂量后至多250、210、200或190天施用。任何最小值均可与本文描述的任何最大值组合以定义一个范围。
在另一实施方案中，该第二剂量在第一剂量后约30天施用。在另一实施方案中，该第二剂量在第一剂量后约60天施用，诸如例如在第0、2个月的免疫接种计划表中施用。在另一实施方案中，该第二剂量在第一剂量后约180天施用，诸如例如在第0、6个月免疫接种计划表中施用。再在另一实施方案中，该第二剂量在第一剂量后约120天施用，例如在第2、6个月免疫接种计划表中施用。
在一个实施方案中，该方法包括对人施用两个剂量的该组合物且至多两个剂量。在一个实施方案中，该两个剂量在第一剂量后约6个月内施用。在一个实施方案中，该方法不包括对人进一步施用加强剂。如本文所使用的“加强剂”指对人额外施用该组合物。对人施用至多两个该组合物的剂量可能是有利的。这样的优势包括，例如促进人遵从完整的施用计划表及促进该计划表的成本效益。
在一个实施方案中，该第一剂量和第二剂量在约25、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200天的期间内施用且在第一剂量后至多400、390、380、370、365、350、340、330、320、310、300、290、280、270、260、250、240、230、220、210或200天施用于人。任何最小值均可与本文描述的任何最大值组合以定义一个范围。优选地，第一剂量和第二剂量将间隔至少4周施用，例如间隔≥8周、间隔≥2个月、间隔≥3个月、间隔≥6个月等。
在一个实施方案中，该第一剂量和第二剂量在约30天的期间内施用于人。在另一实施方案中，该第一剂量和第二剂量在约60天的期间内施用于人。在另一实施方案中，该第一剂量和第二剂量在约180天的期间内施用于人。
方便的是，第一剂量可与另一疫苗在基本上相同的时间施用(例如，在同一医疗咨询或访视健康护理专业人员的期间或在脑膜炎奈瑟菌疫苗第一剂量的24小时内)，例如与B型肝炎病毒疫苗、白喉疫苗、破伤风疫苗、百日咳疫苗(细胞型，或优选地，无细胞型)、B型流感嗜血杆菌疫苗、肺炎链球菌疫苗和/或脊髓灰质炎疫苗(优选为经灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗)在基本上相同的时间施用。这些任选地共同施用的疫苗各自可为单价疫苗或可为组合疫苗的一部分(例如为DTP疫苗的一部分)。
方便的是，第二剂量可与另一疫苗在基本上相同的时间施用(例如，在同一医疗咨询或访视健康护理专业人员的期间或在脑膜炎奈瑟菌疫苗第二剂量的24小时内)，例如与B型肝炎病毒疫苗、白喉疫苗、破伤风疫苗、百日咳疫苗(细胞型，或优选地，无细胞型)、B型流感嗜血杆菌疫苗、肺炎链球菌疫苗、脊髓灰质炎疫苗(优选为经灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗)、流感疫苗、水痘疫苗、麻疹疫苗、腮腺炎疫苗和/或风疹疫苗在基本上相同的时间施用。这些任选地共同施用的疫苗各自可为单价疫苗或可为组合疫苗的一部分(例如为MMR疫苗的一部分)。
方便的是，第三剂量可与另一疫苗在基本上相同的时间施用(例如，在同一医疗咨询或访视健康护理专业人员的期间或在脑膜炎奈瑟菌疫苗第三剂量的24小时内)，例如与B型肝炎病毒疫苗、白喉疫苗、破伤风疫苗、百日咳疫苗(细胞型，或优选地，无细胞型)、B型流感嗜血杆菌疫苗、肺炎链球菌疫苗、脊髓灰质炎疫苗(优选为经灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗)、流感疫苗、水痘疫苗、麻疹疫苗、腮腺炎疫苗和/或风疹疫苗在基本上相同的时间施用。这些任选地共同施用的疫苗各自可为单价疫苗或可为组合疫苗的一部分(例如为MMR疫苗的一部分)。
三剂量
在一个实施方案中，相较于二剂量计划表，该组合物的三剂量计划表在较高比例的人体内诱导杀菌效价，该杀菌效价针对多种表达与第一和/或第二多肽异源的LP2086(fHBP)的菌株。
在一个实施方案中，该方法包括对人施用三个剂量的该组合物。在另一实施方案中，该方法包括施用至多三个剂量的该组合物。在一个实施方案中，该三个剂量在第一剂量后约6个月的期间内施用。在一个实施方案中，该方法包括在第三剂量后对人施用加强剂量。在另一实施方案中，该方法不包括在第三剂量后对人施用加强剂量。在另一实施方案中，该方法不进一步包括对人施用该组合物的第四剂量或加强剂量。在进一步的实施方案中，在约6个月的期间内对人施用至多三个剂量。
在示例性实施方案中，该第二剂量在第一剂量后约30天施用，第三剂量在第二剂量后约150天施用，诸如例如在第0、1、6个月免疫接种计划表中。在另一示例性实施方案中，该第二剂量在第一剂量后约60天施用，该第三剂量在第二剂量后约120天施用，诸如例如在第0、2、6个月免疫接种计划表中。
在一个实施方案中，该第一剂量、第二剂量和第三剂量在约150、160、170或180天的期间内，且至多为240、210、200或190天的期间内施用于人。任何最小值均可与本文描述的任何最大值组合以定义一个范围。优选地，第一剂量、第二剂量和第三剂量在约180天或6个月的期间内施用于人。例如，第二剂量可在第一剂量后约60天施用于人，且第三剂量可在第二剂量后约120天施用于人。因此，示例性的施用计划表包括在约第0、2和6个月对人施用剂量。
如上述，可对人施用多个该免疫原性组合物的剂量且可改变介于各剂量之间的天数。例如，该方法的优点之一包括，例如提供人类遵循施用计划表的灵活性。
在一个实施方案中，该方法包括对人施用至多三个剂量的同一免疫原性组合物。例如，在优选的实施方案中，该方法不包括对人施用第一组合物的第一剂量、对人施用第二组合物的第二剂量及对人施用第三组合物的第三剂量，其中第一、第二和第三组合物非为同一组合物。在另一实施方案中，该方法包括对人施用最多四个剂量的同一免疫原性组合物。
实施例
下列实施例举例说明本发明的实施方案。除非本文另外指出，否则下列实施例中提及的为120μg二价rLP2086剂量水平的MnB二价rLP2086组合物(此为组合物的优选实施方案)包括：每0.5mL剂量中包含60μg的第一脂化多肽(其包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列)、每0.5mL剂量中包含60μg的第二脂化多肽(其包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列)、聚山梨醇酯80对第一多肽的摩尔比为2.8、聚山梨醇酯80对第二多肽的摩尔比为2.8、每ml组合物包括0.5mg Al3+、10mM组氨酸和150mM氯化钠。
更具体地说，在120μg二价rLP2086的剂量水平下，所调查的二价重组rLP2086疫苗包括(a)60μg的第一脂化多肽(其包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列)；(b)60μg的第二脂化多肽(其包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列)；(c)18μg的聚山梨醇酯80；(d)250μg的铝；(e)780μg的组氨酸，和(f)4380μg的氯化钠。每一剂量为0.5mL。
除非本文另外指明，否则下列实施例中提及的MenACWY-TT组合物(其为四价脑膜炎奈瑟菌多糖缀合组合物的优选示例性实施方案)包括各自与作为载体蛋白的破伤风类毒素耦合的脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖A、C、W-135和Y。脑膜炎奈瑟菌血清群A和C多糖与己二酸二酰肼(AH)间隔子缀合，并间接与破伤风类毒素缀合，而W-135和Y多糖直接与破伤风类毒素缀合。该组合物不含任何防腐剂或佐剂。
更具体地说，下列实施例中描述的冻干的MenACWY-TT组合物的每一剂量(0.5mL)包含与破伤风类毒素载体蛋白缀合的5μg的脑膜炎奈瑟菌血清群A多糖；与破伤风类毒素载体蛋白缀合的5μg的脑膜炎奈瑟菌血清群C多糖；与破伤风类毒素载体蛋白缀合的5μg的脑膜炎奈瑟菌血清群W-135多糖；与破伤风类毒素载体蛋白缀合的5μg的脑膜炎奈瑟菌血清群Y多糖；28mg的蔗糖；97μg的氨丁三醇。
实施例1：MenABCWY组合物
为了抽取0.5mL剂量的MenABCWY疫苗以用于肌肉内注射，以0.67mL的MnB二价rLP2086药物产品(描述于下列实施例3中)将该冻干的MenACWY-TT药物产品(描述于下列实施例2中)的小瓶重构以制备该最终MenABCWY组合物。下列表1中提供用于制备MenABCWY疫苗的所有组分及其功能。
表1.MenABCWY疫苗的组成
a在MenABCWY疫苗中的氯化钠浓度可根据临床和市售NIMENRIX药物产品(DP)批次的组成在160.5-161.1mM之间变化。
实施例2：MnB二价rLP2086药物产品的描述和组成
MnB二价rLP2086药物产品为无菌液体制剂，其由120μg/mL/亚族的rLP2086亚族A和B蛋白组成，该rLP2086亚族A和B蛋白配制在10mM组氨酸缓冲液、150mM氯化钠(NaCl)pH6.0，加0.5mg/ml铝(为铝磷酸(AlPO4)形式)中。在药物中添加聚山梨醇酯80(PS-80)以获得目标的PS-80对蛋白质摩尔比。因此，在药物产品调制期间不添加PS-80，但以相同比例存在于最终的药物产品中。将该药物产品填入1mL注射器中。不含防腐剂的单一疫苗剂量为0.5mL。
表2.MnB二价rLP2086药物产品的组成
成分 量/剂量
MnB rLP2086亚族A(SEQ ID NO:1) 120μg/mL
MnB rLP2086亚族B(SEQ ID NO:2) 120μg/mL
氯化钠 150mM
L-组氨酸 10mM
磷酸铝 0.50mg磷酸铝/mL
注射用水 适量以达到1mL
a聚山梨醇酯80(PS-80)为药物的一部分。PS-80在药物产品中作为表面活性剂起作用。
b等于每剂量0.25mg铝
聚山梨醇酯80浓度的影响
聚山梨醇酯80(PS-80)为非离子性表面活性剂。其通过防止可能由温度、过滤器、管道、容器、密合接触和加工混合导致的聚集和吸附来稳定和助溶该制剂中的MnB rLP2086亚族A和B蛋白。使用基于体外单克隆抗体的效力分析的稳定性研究证明在最终制剂中PS-80对MnB rLP2086蛋白的摩尔比较高时亚族B蛋白不稳定。改变PS-80对蛋白质的摩尔比进行的实验已证明PS-80对MnB rLP2086蛋白的最优选摩尔比约介于1.4至4.2之间以保持效力。
实施例3：MenACWY-TT组合物的描述和组成
MenACWY-TT药物产品由纯化的脑膜炎奈瑟菌血清群A、C、W和Y多糖组成，其分别以～3、～3、～1.5和～1.3的破伤风类毒素(TT)对多糖比各自与破伤风类毒素(TT)缀合。
MenACWY-TT药物产品呈冻干粉末形式，提供于3mL玻璃小瓶中，该玻璃小瓶具有适合用于冻干的溴化丁基橡胶瓶盖和铝制药盖。表3中提供用于制造MenACWY-TT药物产品的所有组分及彼等的功能。
表3.MenACWY-TT药物产品的组成
a冻干饼中也含有从存在于各个纯化TT缀合物块中的盐产生的氯化钠。氯化钠浓度基于该临床和市售批次的组成在10.5-11.1mM之间变化。
实施例4：MenABCWY组合物的制备方法
最终的MenABCWY组合物在诊所中经由以0.67mL的MnB二价rLP2086将该冻干的MenACWY-TT药物产品小瓶重构来制备。所产生的MenABCWY组合物(疫苗液体药物产品)含有120mcg/mL/亚族的rLP2086亚族A和B蛋白，浓度为10mcg/mL/型的纯化的脑膜炎奈瑟菌类型A、C、W和Y多糖，该脑膜炎奈瑟菌类型A、C、W和Y多糖分别以～3、～3、～1.5、～3的比例与破伤风类毒素缀合，该组合物配制在含有下列的10mM组氨酸和1.6mM tris缓冲液、pH值6.05中以用于肌肉内注射：160.5至161.1mM氯化钠、0.5mg/ml铝(为铝磷酸(AlPO4)形式)、0.035mg/ml的聚山梨醇酯80和56mg/ml的蔗糖。
MenABCWY疫苗经由将二种药物产品MenACWY-TT和MnB二价rLP2086混合来制备。缓冲的组分和赋形剂根据各组分的个别发展来选择且显示出提供用于延长的保存期限所需的稳定性。
进行剂量验证研究以证明当MenACWY-TT药物产品和MnB二价rLP2086药物产品被混合在一起时以用于施用MenABCWY疫苗时二者是兼容的且所有药物产品和给药溶液均与施用组分相容，且该给药溶液在施用组分中可稳定一段足够的时间以制备剂量和操作施用。该在重构小瓶和定量注射器中的经由以0.67mL MnB二价rLP2086药物产品重构MenACWY-TT药物产品所制备的MenABCWY疫苗在环境温度和光照条件下，在保持时间内的稳定性被确认。
使用诸如下列的稳定性指示方法测试代表MenABCWY疫苗的给药溶液的样品：用于抗原结合和纯度的RP-HPLC、Bioplex活性分析、ELISA和具有预定的验收标准的ICP-MS。此研究的结果显示MenABCWY疫苗在室温和光照条件下24小时具可接受的稳定性。这些数据显示并描述于下列实施例5至15中。
实施例5：MenABCWY疫苗的评估
进行研究以评估当以MnB二价rLP2086组合物将经冻干的MenACWY-TT组合物重构时是否具有可接受的物理兼容性和短期稳定性。将冻干的MenACWY-TT组合物和液体MnB二价rLP2086组合物组合并在未经控制的室温环境中储存长达24小时以接近现实生活条件。结果证明该经冻干的MenACWY-TT组合物可使用液体MnB二价rLP2086组合物通过轻轻手动混合来重构且该组合的pH和渗透压在注射剂的典型范围内。该缀合物和蛋白质在未经控制的室温环境中长达24小时后其所有关键属性与对照组相似。
通过评估该组合的药物产品的pH、外观、重构的容易性和渗透压来评估物理兼容性。该抗原的稳定性通过ELISA，通过评估该rLP2086亚族A和亚族B蛋白的浓度、纯度和体外相对抗原性(IVRA)及该缀合的脑膜炎奈瑟菌A、C、Y和W-135多糖的浓度来评估。
实施例5至实施例15证明该经冻干的MenACWY-TT组合物和液体MnB二价rLP2086组合物的组合物(即，MenABCWY组合物)可兼容且在室温下稳定至少24小时。
用于测定MenABCWY组合物中的Mening A、C、Y和W-135多糖浓度的ELISA-开发Mening A、C、Y和W-135 ELISA&筛选用于检测的pAb
选择六种用于筛选的抗体以用于ELISA分析中。使用Men A、C、Y或W-135多糖TT缀合物免疫接种每组10只的四组兔子中的每一只，在开发出抗体后接着将兔子放血。使用与载体蛋白CRM197缀合的Men A、C、Y或W-135多糖个别筛选每只兔子的结合和特异性。筛选兔子血清的阳性结合信号，该阳性结合信号相当于较背景吸光度高出三倍的吸光度读数。此外，筛选非特异性结合低(此为高于空白组吸光度读数的任何无抗原、次级或检测血清组合的吸光度读数)及交叉反应性低(此为高于背景吸光度的任何异源血清群吸光度读数)的兔子血清。集中该符合筛选标准的兔子。使用CRM缀合物建立标准曲线范围并通过重构该冻干的MenACWY-TT组合物确认。
建立定量该组合的药物产品(MenABCWY组合物)中的A、C、Y和W缀合物的可行性。确定在该分析中未检测到单独的MnB二价rLP2086组合物。此外，当在MenABCWY组合物样品中的磷酸铝溶解时可完全回收缀合物。因此，确定该MnB二价rLP2086组合物不会干扰通过ELISA定量MenACWY-TT缀合物。
实施例6：评估用于在MenACWY-TT组合物的存在下评估MnB二价rLP2086组合物的方法的适用性
评估通过IEX-HPLC测定在MenACWY-TT组合物的存在下的MnB二价rLP2086组合物亚族A和B蛋白强度的适用性。评估在存在MenACWY-TT组合物和不存在MenACWY-TT组合物的情况下MnB二价rLP2086组合物的总蛋白质和结合蛋白质结果。该迭加的色谱显示于图1中。
表4
实施例7：在MenACWY-TT组合物的存在下评估MnB二价rLP2086组合物纯度和峰比率
评估在MenACWY-TT组合物的存在下使用RP-HPLC测定MnB二价rLP2086组合物的纯度的适合性。比较存在MenACWY-TT组合物和不存在MenACWY-TT组合物时MnB二价rLP2086组合物的纯度结果。迭加的色谱显示于图2中。杂质峰的积分的实例以插图形式显示于图2中。评估结果显示存在MenACWY-TT组合物时不会干扰使用RP-HPLC方法评估MnB二价rLP2086组合物纯度。
实施例8：在MenACWY-TT组合物的存在下评估MnB二价rLP2086组合物IVRA
评估在MenACWY-TT的存在下使用IVRA方法测定MnB二价rLP2086组合物亚族A(SEQID NO：1)和亚族B(SEQ ID NO：2)蛋白的体外相对抗原性的适合性。
比较存在和不存在MenACWY-TT组合物时MnB二价rLP2086组合物亚族A和亚族B蛋白的IVRA结果。可行性评估结果显示在分析变异性内，二种结果相当且存在MenACWY-TT组合物时不会干扰体外相对抗原性的测定。
实施例9：以MnB二价rLP2086组合物重构MenACWY-TT组合物小瓶
使用MenACWY-TT组合物小瓶和MnB二价rLP2086组合物进行以MnB二价rLP2086组合物药物产品重构MenACWY-TT组合物。根据该方法，使用以生理盐水或MenACWY-TT组合物基质安慰剂重构的MenACWY-TT组合物小瓶作为对照组。
表5
测定用于MenACWY-TT组合物的生理盐水重构体积
商品包装同时包含一个含有经冻干的MenACWY-TT组合物的小瓶和一个含有用于重构的0.9％生性生理盐水的注射器。为了在使用MnB二价rLP2086组合物重构时重现该疫苗商品中的最终/>浓度，必须测定使用该来自商品的注射器所分配的生理盐水量。然后使用该相同体积的MnB二价rLP2086组合物进行所有重构研究。
使用MnB二价rLP2086组合物重构该MenACWY-TT组合物小瓶
将MnB二价rLP2086组合物汇集在10mL玻璃小瓶中。将大约800μL的溶液抽入1mL注射器中。将经调整的注射器内容物注入含有MenACWY-TT组合物的小瓶中。旋转该小瓶以溶解内容物。
在MenABCWY组合物的一式二份的样品上测定pH值和外观。在使用生理盐水重构的MenACWY-TT组合物和使用MnB二价rLP2086组合物重构的MenACWY-TT组合物上以一式三份测量渗透压。
实施例10：通过SEC-MALLS评估在DP基质中的Mening A、C、Y和W-135多糖的稳定性。
使用Mening A、C、Y和W-135多糖作为替代物以评估在该组合的药物产品(MenABCWY组合物)中的缀合的脑膜炎奈瑟菌A、C、Y和W-135多糖是否可预期有任何不稳定性。
Mening A、C、Y和W-135多糖的处理
试剂制备(“全MenABCWY组合物缓冲基质”)
将2.24g的蔗糖和7.8mg的Tris(氨丁三醇(tromethamine))加入20ml具有MnBrLP2086蛋白(组氨酸20mM pH6.0、NaCl 300mM、PS 80 0.07mg/ml、AlPO4 1mg/ml(8mM)、各为240μg/mL的rLP2086亚族A蛋白(SEQ ID NO：1)和亚族B(SEQ ID NO：2)蛋白)的2X MnB二价rLP2086组合物缓冲基质中。
样品制备
使用全MenABCWY组合物缓冲基质将各Mening多糖1：1稀释，并在5℃、25℃和37℃下孵育0、6和24小时。孵育后，将样品悬浮液在14,000rpm离心1分钟。通过SEC-MALLS分析上清液。
实施例11：MenABCWY组合物的稳定性-评估该组合的MnB二价rLP2086和MenACWY-TT组合物的pH、外观和渗透压
在重构后立即评估该组合MnB二价rLP2086组合物和MenACWY-TT组合物(即MenABCWY组合物)的pH和外观并在24小时后再次评估。
所有结果均与预期的一样(表6)。
表6.MenABCWY组合物的外观和pH
样品# 样品 时间点,小时 外观 pH
1 MenABCWY组合物,Rep1 0 均匀的白色悬浮液 5.8
2 MenABCWY组合物,Rep2 0 均匀的白色悬浮液 5.8
3 MenABCWY组合物,Rep 1 24 均匀的白色悬浮液 5.8
4 MenABCWY组合物,Rep 2 24 均匀的白色悬浮液 5.8
5 MenACWY-TT组合物w/生理盐水 0 透明，无色 6.3
6 MenACWY-TT组合物w/生理盐水 24 透明，无色 6.4
·
使用MnB二价rLP2086组合物重构的MenACWY-TT组合物的平均渗透压在使用生理盐水重构的MenACWY-TT组合物的平均渗透压的3％以内。
表7
实施例12：组合的药物产品中的Mening A、C、Y和W-135多糖缀合物浓度
在开始时评估MenABCWY组合物中的Mening A、C、Y和W-135-TT缀合物的浓度并在24小时后再次评估。该4个缀合物的浓度在24小时的期间内保持稳定(表8)。
表8.通过ELISA评估MenABCWY组合物中的MnA、C、Y和W缀合物的短期稳定性结果
实施例13：评估MenABCWY组合物中的MnB二价rLP2086蛋白的稳定性
组合的药物产品中的总rLP2086亚族A(SEQ ID NO：1)蛋白和结合蛋白及总亚族B(SEQ ID NO：2)蛋白和结合蛋白的浓度
通过IEX-HPLC分析MenABCWY组合物样品以测定蛋白质浓度。如表9中所示，MnB二价rLP2086亚族A(SEQ ID NO：1)和亚族B(SEQ ID NO：2)蛋白(与铝结合)二者的总蛋白、结合蛋白(与铝结合)及％结合蛋白(与铝结合)在24小时内没有改变，表明rLP2086亚族A和亚族B蛋白在24小时的期间内保持稳定。
表9.总蛋白和结合蛋白稳定性
实施例14：组合的MenABCWY组合物中的rLP2086蛋白纯度和峰比率
通过RP-HPLC分析MenABCWY组合物样品以测定rLP2086蛋白质的纯度和峰比率。参见图3。11.9分钟处的峰值从纯度计算中排除。
组合的药物产品中的rLP2086亚族A和亚族B蛋白IVRA
混合后评估MenABCWY组合物样品的IVRA长达24小时。结果确定该MenABCWY组合物中的rLP2086亚族A(SEQ ID NO：1)和亚族B(SEQ ID NO：2)蛋白的相对抗原性在24小时的期间内保持稳定。
实施例15：通过SEC-MALS评估Mening A、C、Y和W-135多糖在全MenABCWY组合物缓冲基质中的稳定性
在各种温度下孵育6和24小时后通过SEC-MALLS评估全MenABCWY组合物缓冲基质中的Mening A PS的稳定性
将Mening A、C、W和Y多糖与全MenABCWY组合物缓冲基质混合，并在5℃、25℃和37℃下孵育长达24小时后通过SEC-MALS评估稳定性。所有四种多糖在5℃和25℃下长达24小时似乎均可保持稳定。Mening A和Y在37℃下可观察到有些降解。由于Mening Y多糖除开始之外在所有测试条件下均形成高Mw聚集物，因而无法测定Mening Y多糖的降解度。
表10
实施例16：评估由MNB二价RLP2086组合物诱导的针对MENACWXY的HSBA活性抗交叉保护作用
TRUMENBA MnB二价rLP2086组合物含有二种脂化的因子H结合蛋白(fHBP)，该脂化的因子H结合蛋白(fHBP)各自来自一个亚族并提供针对脑膜炎奈瑟菌血清群B的保护作用。fHBP已被发现以不同表达水平表达在血清群A、C、W、Y和X中，表明MnB二价rLP2086组合物可为这些血清群提供保护。我们使用来自研究B1971015的血清以调查TRUMENBA MnB二价rLP2086组合物可提供针对血清群A、C、W、Y和X的保护的概念的证据。在全球收集菌株(包括从英国最近的爆发收集的MnW菌株和新近在非洲冒出的MnX)。描述选择用于研发hSBA的候选菌株的方法和来自以MnB二价rLP2086组合物免疫接种的受试者子集的免疫反应，及作为比较的来自以四价脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖结合型疫苗(MCV4)免疫接种的子集的免疫反应。
用于测定免疫原性的血清
使用来自研究B1971015(2期、随机分配、活性对照、观察者盲法研究，其中两组受试者或是接受MENACTRA(脑膜炎奈瑟菌A、C、Y和W-135多糖结合型疫苗[MCV4])和ADACEL(破伤风类毒素、降低的白喉类毒素、无细胞百日咳疫苗[Tdap])或是接受二价rLP2086(TRUMENBA[脑膜炎奈瑟菌血清群B疫苗]，由美国核准)的血清子集在hSBA中使用依下述选择的MnACWYX菌株来评估免疫原性。
基线血清阳性率
使用来自研究B1971015的从青少年获得的非免疫或免疫接种前血清来估计基于小菌落的hSBA中的基线血清阳性率。为此，将血清阳性定义为hSBA效价≥1：8，此为预期的分析LLOQ。为了分析研发的考虑，该菌株必须显示出为低基线血清阳性(即，使用基线血清的hSBA效价≥1：8的比率<～40％)。
用于测定免疫原性的血清
使用来自研究B1971015(2期、随机分配、活性对照、观察者盲法研究，其中两组受试者或是接受MENACTRA(脑膜炎奈瑟菌A、C、Y和W-135多糖结合型疫苗[MCV4])和ADACEL(破伤风类毒素、降低的白喉类毒素、无细胞百日咳疫苗[Tdap])或是接受二价rLP2086(TRUMENBA[脑膜炎奈瑟菌血清群B疫苗]，由美国核准)的血清子集在hSBA中使用依下述选择的MnACWYX菌株来评估免疫原性。
结果及讨论
血清群A
血清群A SBA菌株汇集库中有17个来自南非的菌株、4个来自美国的菌株及1个来自荷兰的菌株。该集合中的血清群A菌株有73％表达B16并有23％表达B22。此血清群A菌株的集合中的流行的克隆复合物为ST-1和ST-5。选择其fHBP表达水平高于1100MFI的两个表达B16的菌株和一个表达B22的菌株以用于进一步测试。使用36个批次的C’以用于C’T30/T0比筛选。由于无法根据C’合格率鉴定出不会非特异性杀死菌株PMB1546的适当的人血清补体来源，所以将PMB1546排除(表11)。由于使用青少年免疫前血清时PMB3143的基线血清阳性率高(52％)因而将PMB3143排除。PMB3257符合选择标准：鉴定出适当的补体来源，使用青少年免疫前血清时基线血清阳性率低(例如0％)且hSBA在技术上可行。
表11.血清群A候选测试菌株
a.如在MEASURE分析中测定的平均荧光强度
b.菌株形成确定的菌落，并在hSBA中被指示剂血清杀死
c.青少年，免疫接种前的血清
d.免疫前比率高
e.未完成
选定的血清群A菌株以粗体显示。
血清群C
血清群C SBA菌株汇集库中有49个来自美国的菌株和10个来自荷兰的菌株。血清群C中的fHBP序列更加不均一。该菌株汇集库中含有至少17％、即19％的MenC菌株为fHBPA10表达菌株和10％A15表达菌株。该血清群C菌株的集合中的流行的克隆复合物为ST11/ET-37复合物和ST-103。选择四个fHBP表达水平高于1100MFI的菌株(其中一个菌株表达A10和三个菌株表达A15)以用于进一步测试。使用36个批次的C’以用于C’T30/T0比筛选。由于无法根据C’合格率鉴定出不会非特异性杀死表达fHBP A15的PMB5180和PMB5196菌株的适当的人血清补体来源，所以将表达fHBP A15的PMB5180和PMB5196排除(表12)。在PMB5043方面，C’通过初始筛选，但在SBA分析中由于T30/T0比率的原因而失败。PMB5208符合选择标准：鉴定出适当的补体来源，青少年免疫前血清的基线血清阳性率低(确认为17％)且hSBA在技术上可行。
表12.血清群C候选测试菌株
a.如在MEASURE分析中测定的平均荧光强度
b.菌株形成确定的菌落，并在hSBA中被指示剂血清杀死
c.没有合适的可用补体来源，在SBA中T30/T0比率失败
d.青少年，免疫接种前的血清
e.未进行
选定的血清群C菌株以粗体显示。
血清群W
血清群W SBA菌株汇集库中有14个来自美国的菌株、9个来自荷兰的菌株和6个来自英国的最近爆发流行的菌株。此血清群W菌株的集合中的fHBP序列较均匀。此汇集库中的菌株有45％表达fHBP A19变体且有45％表达fHBP A10。此血清群W汇集库中的fHBP A19变异株的流行的克隆复合物为ST-22，而fHBP A10变异株的流行的克隆复合物为ST-11/ET-37复合物。选择两个来自美国的菌株，一个表达A19且一个表达A10。选择两个fHBP表达水平高于1100MFI的表达A10的英国暴发菌株以用于进一步测试。使用36个批次的C’以用于C’T30/T0比筛选。四个菌株均通过此最初的C’筛选测试。根据免疫前的比率将PMB5524和PMB5163排除，因为青少年免疫前血清的血清阳性率分别为74％和48％。PMB5248和PMB5523符合选择标准：鉴定出适当的补体来源，青少年免疫前血清的基线血清阳性率低，分别为26％和28％且hSBA在技术上可行(表13)。
表13.血清群W候选测试菌株
a.如在MEASURE分析中测定的平均荧光强度
b.菌株形成确定的菌落，并在hSBA中被指示剂血清杀死
c.青少年，免疫接种前的血清
d.免疫前比率高
选定的血清群W菌株以粗体显示。
血清群X
血清群X SBA菌株汇集库中有8个来自非洲的菌株和1个来自荷兰的菌株。五个来自非洲的菌株表达fHBP B49变体，三个菌株具有新fHBP类型且一个来自荷兰的菌株表达fHBP B09。所有9个菌株的fHBP表达均超过1100MFI。选择三个非洲爆发流行的菌株和一个来自荷兰的菌株进行进一步测试。使用36个批次的C’以用于C’T30/T0比筛选。四株菌株均通过C’初始筛选试验。根据免疫前比率将PMB5467排除，因为青少年免疫前血清中血清阳性率为68％。PMB5537、PMB5540和PMB5539符合选择标准：鉴定出适当的补体来源、青少年免疫前血清中基线血清阳性率低(例如0)且hSBA在技术上可行(表14)。选择PMB5540进行评估。
表14.血清群X候选测试菌株
a.如在MEASURE分析中测定的平均荧光强度
b.菌株形成确定的菌落，并在hSBA中被指示剂血清杀死
c.没有合适的可用补体来源，在SBA中T30/T0比率失败
d.青少年，免疫接种前的血清
d.免疫前比率高
选定的血清群X菌株以粗体显示。
血清群Y
血清群Y SBA菌株汇集库中有87个来自美国的菌株和30个来自荷兰的菌株。此血清群Y菌株的集合中的fHBP序列较均匀。此汇集库中的血清群Y菌株有66％表达fHBP A15。此血清群Y菌株的集合中表达fHBP A15变体的菌株的常见克隆复合物为ST-23/簇A3。此集合中的血清群Y菌株仅15％的fHBP表达水平超过1100MFI。选择三个其fHBP表达水平高于1100MFI的来自A15变体组的菌株以用于进一步测试。使用36个批次的C’以用于C'T30/T0比筛选。由于无法根据C’合格率鉴定出不会非特异性杀死PMB5122、PMB5053和PMB5050的适当的人血清补体来源，所以将PMB5122、PMB5053和PMB5050排除(表15)。选择具有fHBP B47的PMB5187用于C’T30/T0筛选，并可鉴定不会非特异性杀死该菌株的C’来源(表15)。尽管PMB5187不表达血清群Y的流行的fHBP变体，但该菌株符合其他选择标准：鉴定出适当的补体来源、青少年免疫前血清的基线血清阳性率低(例如4％)且hSBA在技术上可行。
表15.血清群Y候选测试菌株：
a.如在MEASURE分析中测定的平均荧光强度
b.菌株形成确定的菌落，并在hSBA中被指示剂血清杀死
c.青少年，免疫接种前的血清
d.未进行
选定的血清群Y菌株以粗体显示。
基于各自血清群的流行的fHBP变体、fHBP表达超过1100MFI和分析可行性(例如人补体的鉴定和基线血清阳性)选择用于发展hSBA的MnACYWX菌株。表16中总结六种选定的MnACYWX菌株的特征及每种变体组的中位数fHBP表达。
表16.MnACYWX测试菌株特征
免疫原性分析
在hSBA中使用MnACYWX测试菌株以评估在2期伴随研究B1971015中登记的10岁至<13岁的健康青少年亚群中引发的免疫反应。将针对该6个选定的菌株的由TRUMENBA引发的hSBA反应与由MENACTRA(脑膜炎奈瑟菌A、C、Y和W-135多糖结合型疫苗[MCV4])引发的hSBA反应进行比较(表17)。
在高比例的经接种疫苗的受试者中可观察到基于hSBA效价≥1：8的实质性杀菌抗体反应，hSBA效价≥1：8为较针对MenCWYX菌株(除MenA以外)的公认的保护相关性(即，hSBA效价≥1：4)更严格的标准，相较于以MCV4免疫接种的受试者为97％，以TRUMENBA免疫接种的受试者为28％。针对2个血清群W菌株的TRUMENBA反应在第二剂量后1个月达到高峰(PMB5248为100％，PMB5523为97％)，而针对血清群C、Y、X菌株的反应在第三剂量后1个月达到高峰(反应率为83％-100％)。MCV4反应在第一剂量后1个月达到高峰，但对MenX没有反应。TRUMENBA引发的抗体显示出对MenX的防护潜力，此为MCV4未涵盖者。TRUMENBA在3个剂量后，针对MnC、W或Y菌株的反应率(即，％≥1：8)与MCV4在1个剂量后的反应率相当。从MnACYWX hSBA测试菌株获得的免疫原性数据提供针对除血清群B之外的血清群的防护概念的证据。
表17:针对MnACWYX菌株的SBA效价≥1:8的百分比
结论 基于各自血清群的fHBP流行变体、fHBP-表达高于MnB的fHBP表达阈值和分析可行性(例如人补体的鉴定和基线血清阳性)来选择用于发展hSBA的MnACYWX菌株。在使用MnACYWX菌株的hSBA中使用来自以Trumenba免疫接种的受试者的血清可证明由Trumenba引发的抗体可提供针对除B以外的血清群的防护作用的概念。由二价rLP2086引发的反应在第三剂量后(例如效价≥1：8的受试者的百分比)对来自血清群C、W和Y的菌株的反应与由MCV4在第一剂量后引发的反应相当，但对血清群A菌株的反应较低。此外，二价rLP2086在高比例的受试者中引发表示针对MenX的防护作用的hSBA效价≥1：8，MCV4未提供的防护作用。
实施例17：Trumenba引发针对非血清群B脑膜炎奈瑟菌的杀菌性抗体
引言.脑膜炎奈瑟菌(Men)为婴儿、青少年和年轻人的细菌性脑膜炎和败血症的主要原因。主要的致病性脑膜炎奈瑟菌血清群有5种：A、B、C、Y和W，在非洲出现第六种血清群X。在世界各地使用四价脑膜炎奈瑟菌结合型疫苗(MCV4)来防护由脑膜炎奈瑟菌血清群A、C、Y和W引起的疾病。最近批准的意图提供针对血清群B疾病的防护作用的疫苗TRUMENBA(MenB-FHbp，二价rLP2086，辉瑞公司，Collegeville，PA)由2种重组脂蛋白组成，每一重组脂蛋白各自来自2种因子H结合蛋白(FHbp)系统发生(phylogenetic)亚族。编码FHbp的基因可在几乎所有侵袭性Men菌株中找到，与血清群分类无关。临床前研究已证明MenB-FHbp防护其他致病血清群的潜力。在主要研究中，包括单一FHbp变体抗原的Men B疫苗(MenB-4C；Novartis Inc，Cambridge，MA)能够引发针对MenX和MenW菌株的杀菌免疫反应。本研究的目的使用探索性分析来扩展这些观察结果，以研究由MenB-FHbp在青少年中引发的抗体对MenA、C、W、Y和X菌株是否具杀菌效果(第7图)，从而提供针对各血清群间的脑膜炎奈瑟菌疾病的防护潜力。
实验概述.从候选菌株(图8)中选择如下述的菌株
·对单独的人补体杀伤不敏感
·在使用显示出具有针对由MenB菌株表达的fHbp的杀菌性抗体的血清的hSBA中被杀死
·接种疫苗前的血清的基线效价低(25个接种疫苗前血清；参见图9)
在选定的菌株方面(表18，图10)：开发探索性hSBA分析。参见图9的在hSBA中测试的血清。反应率＝hSBA效价≥1：8(高于已建立的防护相关性(≥1：4))的受试者的百分比(图11至16)。
表18.选定的MenA、MenC、MenY、MenW和MenX测试菌株的特征
参考图9，使用25个来自A组第0个月的血清研究免疫前。使用来自30名受试者的血清用于hSBA测试，该30名受试者的血清在第0和第1个月从A组抽取及在第0、1、3和7个月从B组抽取。反应率的试验指标为效价>1：8的血清的百分比。
图10-从使用FHbp反应性mAb MN 994-11的流式细胞术实验测定的fHbp表面表达水平(MFI)的分布。血清群内各菌株的fHbp表面表达以黑点标注，而各血清群内的选定的测试菌株的FHbp表面表达水平以彩色星星标注。
图11-MenA PMB3257(B16)的hSBA反应率(hSBA效价≥1：8的受试者的百分比)。图中显示在免疫前(第0个月)和给予第一、第二和第三剂量的MenBFHbp后1个月收集的血清的反应率和95％置信区间。获得的几何平均效价(GMT)分别为2、3、4和5。在接种疫苗前阳性对照组中的受试者的反应率为3％，在接受MCV4后1个月的反应率为97％。阳性对照组的GMT分别为2和95。
图12-MenC PMB5208(A10)的hSBA反应率(hSBA效价≥1：8的受试者的百分比)。图中显示在免疫前(第0个月)和给予第一、第二和第三剂量的MenBFHbp后1个月收集的血清的反应率和95％置信区间。所获得的GMT分别为4、8、12和29。在接种疫苗前阳性对照组中的受试者的反应率为20％，在接受MCV4后1个月的反应率为90％。阳性对照组的GMT分别为3和119。
图13-MenW PMB5248(A19)的hSBA反应率(hSBA效价≥1：8的受试者的百分比)。图中显示在免疫接种前(第0个月)和给予第一、第二和第三剂量的MenBFHbp后1个月收集的血清的反应率和95％置信区间。所获得的GMT分别为4、18、47和77。在接种疫苗前阳性对照组中的受试者的反应率为40％，在接受MCV4后1个月的反应率为97％。阳性对照组的GMT分别为5和88。
图14-MenW PMB5523(A10)的hSBA反应率(hSBA效价≥1：8的受试者的百分比)。图中显示在免疫前(第0个月)和给予第一、第二和第三剂量的MenBFHbp后1个月收集的血清的反应率和95％置信区间。所获得的GMT分别为7、15、21和42。在接种疫苗前阳性对照组中的受试者的反应率为55％，在接受MCV4后1个月的反应率为97％。阳性对照组的GMT分别为8和60。
图15-MenY PMB5187(B47)的hSBA反应率(hSBA效价≥1：8的受试者的百分比)。图中显示在免疫前(第0个月)和给予第一、第二和第三剂量的MenBFHbp后1个月收集的血清的反应率和95％置信区间。所获得的GMT分别为3、7、31和58。在接种疫苗前阳性对照组中的受试者的反应率为13％，在接受MCV4后1个月的反应率为97％。阳性对照组的GMT分别为3和79。
图16-MenX PMB5540(B49)的hSBA反应率(hSBA效价≥1：8的受试者的百分比)。图中显示在免疫前(第0个月)和给予第一、第二和第三剂量的MenBFHbp后1个月收集的血清的反应率和95％置信区间。所获得的GMT分别为2、3、7和20。在接种疫苗前阳性对照组中的受试者的反应率为0％，在接受MCV4后1个月的反应率为0％。阳性对照组的GMT分别为2和2。
总结.在MenW菌株，PMB5248方面，由MenB-FHbp引发的反应率在给予第二剂量后1个月(第3个月)达到高峰(100％)，在MenC、MenY和MenX菌株，及第二个MenW菌株方面，由MenB-FHbp引发的反应率在给予第三剂量后1个月(第7个月)达到高峰(反应率的范围在83％至100％)。
通过hSBA测量的针对MenA测试菌株的反应率实质上较低，在3个MenB-FHbp剂量后达到峰值28％。
公认的针对脑膜炎奈瑟菌病的防护相关性为hSBA效价≥1：4。MenB-FHbp引出至少1：8的hSBA效价的能力证明MenB-FHbp可防护由除了血清群B以外的脑膜炎奈瑟菌血清群(包括MenX)所引起的疾病的概念，这样的疾病不在MCV4的防护范围内。
实施例18：在年龄在≥24个月至<10岁的健康受试者中进行2期、随机化、对照、观察者盲法研究以描述脑膜炎奈瑟菌血清群B二价重组脂蛋白2086疫苗(二价rLP2086，即现在疫苗)的免疫原性、安全性和耐受性(B1971017-syn)。
研究设计：此为2期、随机化、对照、观察者盲法、多中心研究，其设计用来评估当将120μg剂量水平的二价rLP2086施用年龄在≥24个月至<10岁的健康受试者以作为第0、2和6个月计划表的一部分时，该二价rLP2086的免疫原性、安全性和耐受性(表19)。计划将约400名受试者以3：1的比例随机分配至两个组别的其中一者。第1组在第0个月(第1次访视)接受二价rLP2086，随后在第2和第6个月接种疫苗。第2组在第0个月(第1次访视)和第6个月接受经核准的小儿A型肝炎病毒(HAV)疫苗并在第2个月接受生理盐水注射以保持研究盲法。在每次接种疫苗后1个月和第三次接种疫苗后6个月进行随访访视以收集安全性数据和/或获得血液样品。受试者参与研究长达13个月。
表19.研究设计
HAV＝甲型肝炎病毒
施用的疫苗：在第0、2和6个月经由肌肉内注射将二价rLP2086施用在第1组中的受试者手臂的上三角肌中。在第0、2和6个月分别将HAV疫苗/生理盐水/HAV疫苗组施用在第2组中的受试者手臂的上三角肌中。
免疫原性评估：为促进免疫原性分析，就在第1次疫苗接种前不久、在第2次疫苗接种后1个月及第3次疫苗接种后1和6个月从受试者收集约5至10mL血液(取决于年龄)。为了评估对二价rLP2086的免疫反应，在经验证的hSBA中以4种来自辉瑞的MnB血清杀菌分析(SBA)菌株汇集库的主要MnB测试菌株分析功能性抗体，该4种主要MnB测试菌株使用无偏倚算法并基于调节输入调整流行病学流行率从辉瑞的MnB血清杀菌分析(SBA)菌株汇集库中选出。hSBA测量人血清中能起始补体依赖性破坏该靶的脑膜炎球菌菌株的抗体。在hSBA中使用四(4)种主要MnB测试菌株，PMB80(A22)、PMB2001(A56)、PMB2948(B24)和PMB2707(B44)(其各自表达与该疫苗组分抗原异源的因子H结合蛋白(fHBP)变体)来测定本研究中的免疫原性试验指标。这些分析中使用在第一次研究疫苗接种之前、第二次研究疫苗接种后1个月及第三次研究疫苗接种后1和6个月从所有受试者取得的血清。
在主要分析方面，在每个采血时间点对一半的受试者(在两个组中)测试二种主要测试菌株(PMB80[A22]和PMB2948[B24])并在每个采血时间点对剩余的另一半受试者测试另外二种主要测试菌株(PMB2001[A56]和PMB2707[B44])。
主要免疫原性试验指标为：以二价rLP2086在年龄为≥24个月至<4岁(在研究开始时)的受试者中进行第三次疫苗接种后1个月，针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥定量下限(LLOQ)的比例；及以二价rLP2086在年龄为≥4岁至<10岁(在研究开始时)的受试者中进行第三次疫苗接种后1个月，针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥LLOQ的比例。
次要免疫原性试验指标为：
·在研究开始时年龄为≥24个月至<10岁的健康受试者中：
·以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月，针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
·在研究开始时年龄为≥24个月至<4岁的健康受试者、年龄为≥4岁至<10岁的健康受试者、及在合并的年龄层中：
·以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后1和6个月，针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
·在基线、以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后1个月和6个月，针对该4种主要测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥1：4、≥1：8、≥1：16、≥1：32、≥1：64和≥1：128的受试者的比例。
·在基线、以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后1个月和6个月，针对该4种主要测试菌株的每一种菌株的hSBA GMT。
总结了该可评估的免疫原性群体和mITT群体二者的次要免疫原性试验指标。
使用下列探索性试验指标来描述在研究开始时年龄为≥24个月至<4岁的健康受试者、年龄为≥4岁至<10岁的健康受试者、及在合并的年龄层中的健康受试者的反应：
·在每个适用的血液采样时间点，其hSBA效价达到≥1：4、≥1：8、≥1：16、≥1：32、≥1：64和≥1：128的受试者的比例。
·在每个适用的血液采样时间点，针对该4种主要菌株的每一种菌株的hSBA GMT。
·从基线开始到以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月，针对该4种主要测试菌株的每一种菌株的hSBA效价增加至少4倍的受试者的比例：
·对具有基线hSBA效价低于检测限制(LOD)或hSBA效价<1：4的受试者而言，4倍反应被定义为hSBA效价达到≥1：16或LLOQ(视何者效价较高而定)。
·对具有基线hSBA效价≥LOD(即，hSBA效价达到≥1：4)及<LLOQ的受试者而言，4倍反应被定义为hSBA效价≥4倍LLOQ。
·对具有基线hSBA效价≥LLOQ的受试者而言，4倍反应被定义为hSBA效价≥4倍基线效价。
结果
受试者：本研究中将共400名年龄为≥24个月至<10岁的受试者随机分组。在随机分配的受试者中，第1组中有294名受试者(二价rLP2086)，第2组中有106名受试者(HAV/生理盐水)。共有200名受试者被随机分配在年龄为≥24个月至<4岁及年龄为≥4岁至<10岁的各年龄层中。
在400名随机分配的受试者中，390名(97.5％)受试者完成研究的疫苗接种阶段(直到最后一次研究疫苗接种后1个月)。共有387名(96.8％)受试者完成6个月的随访电话联系。只有完成疫苗接种期和6个月随访电话联系的受试者被认为已经完成这项研究。总体而言，共有375名(93.8％)受试者完成所有研究程序且各年龄层完成的情况类似。
可评估的免疫原性群体共包括371名(92.8％)受试者，且有29名(7.3％)受试者被排除在可评估的免疫原性群体之外。所有400名被随机分配的受试者均包括在mITT群中。
免疫原性结果：本研究的主要目标为通过hSBA，针对4种主要MnB测试菌株(2种表达LP2086亚族A蛋白，2种表达LP2086亚族B蛋白)进行测量来描述受试者对二价rLP2086的免疫反应，该测量在第三次疫苗接种后1个月，在年龄为≥24个月至<4岁和≥4岁至<10岁的健康受试者中进行。对合并的年龄层(≥24个月至<10岁)的免疫反应的描述为次要目标。主要目标的试验指标为在第三次疫苗接种后1个月，各年龄层中针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例。
在施用第三剂量的二价rLP2086后一个月可在年龄为≥24个月至<10岁的儿童中观察到强大的免疫反应，此可通过针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ(在A56、B24和B44方面为1：8；在A22方面为1：16)的受试者的比例确认，在3个剂量后，年龄为≥24个月至<4岁的受试者对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的比例为80.0％至100.0％，年龄为≥4岁至<10岁的受试者针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的比例为78.3％至100.0％。在第三次疫苗接种后1个月，合并的年龄层中针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例为79.1％至100.0％。这些发现可通过与跨越二种年龄层的基线相比较，在接受三个剂量的二价rLP2086后针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的实质性GMT(范围在19.1至191)及hSBA效价达到≥1：4(81.5％至100％)或≥1：16(75.4％至100％)的受试者的比例进一步得到支持。另外，在合并的年龄层中，第三次疫苗接种后1个月针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例在76.9％至93.5％的范围内。
该研究的次要目标为描述在施用第二剂量的二价rLP2086后一个月的免疫反应，此通过评估2个年龄层及合并的年龄层的≥LLOQ反应、确定的hSBA效价和hSBA GMT来完成。在合并的年龄层方面，达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例在48.5％至100.0％的范围内，较年轻和年长的年龄层之间未观察到有意义的差异。这些发现进一步通过合并的年龄层在接受两个剂量的二价rLP2086后与基线相比较，针对该4种主要的MnB测试菌株的每一种菌株的GMT增加(范围在11.1至96.6)或hSBA效价达到≥1：4(57.7％至100％)或≥1：16(43.1％至100％)的受试者的比例得到支持。两个年龄层之间的GMT类似。另外，在合并的年龄层中，在第二次疫苗接种后1个月，针对该4种主要的MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例在42.3％至91.0％的范围内。
还在施用第三剂量的二价rLP2086后6个月评估免疫持久性，该合并的年龄层中hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例从第三次疫苗接种后1个月的79.1％至100％下降到第三次疫苗接种后6个月变成10.4％至82.4％。除了在A22方面，较年长的儿童中达到效价≥LLOQ的受试者比例高于较年幼的儿童(46％，95％CI 33.4，59.1对19％，95％CI 10.2，30.9)外，2个年龄层之间未观察到差异。然而，在A22方面，较年长的年龄层中，接种疫苗前的基线效价≥LLOQ的比率较高(13.6％对4.4％)。在合并的年龄层中也观察到类似的趋势，在第三次接种疫苗后6个月具有保护性hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例在13.3％至84.0％，GMT为5.1至31.3。
总之，在0、2和6个月计划表中以3个剂量给予的二价rLP2086在年龄为≥24个月至<10岁的幼儿和儿童中引发强大的免疫反应，通过hSBA测量时，有高比例的受试者在第三剂量后取得保护性抗体效价。年龄为≥24个月至<4岁的幼儿和年龄为≥4岁至<10岁的儿童之间未观察到临床上有意义的差异。在第三剂量后6个月抗体反应下降，但仍高于接种疫苗前基线的比率。
结论：总之，在0、2和6个月计划表中以3剂量系列施用年龄为≥24个月至<10岁的幼儿和儿童的二价rLP2086在第二和第三剂量后在大部分的受试者中引发强大的免疫反应，通过hSBA测量时在第三剂量后取得保护性抗体效价。hSBA效价在3剂量系列后6个月降低。如本研究中施用的疫苗对年龄为≥24个月至<10岁的幼儿和儿童而言安全且耐受性良好，具有可接受的安全性变化曲线。
实施例19：在年龄为≥24个月至<10岁的健康受试者中进行2期、随机化、对照、观察者盲法研究以描述脑膜炎奈瑟菌血清群B二价重组脂蛋白2086疫苗(二价rLP2086，即现在的疫苗)的免疫原性、安全性和耐受性(B1971017-CSR)
二价rLP2086的初始制剂(其不包含聚山梨醇酯80)已在成人、青少年、儿童和幼儿的一期研究中评估，该二价rLP2086的初始制剂在这些群体中被证实具有令人满意的安全性、耐受性和免疫原性变化曲线。该初始制剂已显示出在高达200μg的剂量具有可接受的安全性略图且如通过hSBA测量时为免疫原性的。剂量水平为20μg、60μg和200μg的初始制剂已在年龄为18至36个月的幼儿中进行研究(计划编号6108A1-502-AU)。在6108A1-502-AU研究中，各剂量组的局部反应频率一般高于A型肝炎病毒(HAV)疫苗/安慰剂组，但在大多数情况下，该反应为轻度或中度严重。发烧的发生率趋向随着剂量水平增加而增加。在任何剂量后报告任何发烧的受试者比例在该20μg组中为36.4％、在60μg组中为39.1％且在200μg组中为54.5％。各疫苗组中的其他全身性事件的频率大致上与HAV/安慰剂组的频率相当。大多数受试者在第三次疫苗接种后具有针对MnB菌株的hSBA反应。
与该初始制剂相比较，药物制造过程和药物制剂已经过改进(包括加入聚山梨醇酯80)，该改进的设计是增加制造的可扩充性并确保该疫苗的最终制剂的长期稳定性。参与以二价rLP2086的最终制剂进行的研究的成人和青少年的安全性数据与最初制剂的安全性相一致。所有年龄组中的局部反应和全身性事件通常为轻度或中度严重。严重事件相对罕见。此外，在免疫持久性研究6108A1-1002-AU、6108A1-2001及B1971033中，在二价rLP2086的第三剂量后的6个月至48个月的后续不良事件(AE)数据并无安全性问题。严重不良事件(SAE)很少发生且大多数被认为与该研究疫苗无关。由于不良事件而从研究中退出的人数很少。
以该疫苗的最终制剂进行两(2)个2期研究(B1971017和B1971035)以探讨该疫苗在儿童(12个月至<10岁)中的免疫原性和安全性。研究B1971035持续进行并经过设计以评估2种不同剂量水平(60μg和120μg)在12个月至<24个月的健康幼儿中的安全性、耐受性和免疫原性。该研究(B1971017)对年龄为≥24个月至<10岁的健康受试者施用120μg剂量水平的二价rLP2086(最终制剂)作为第0、2和6个月计划表的一部分以评估免疫原性、安全性和耐受性。计划将约400名受试者以3：1的比例随机分配在2组的其中一组。第1组在第0个月(第1次访视)接受二价rLP2086，随后在第2和第6个月接种疫苗。第2组在第0个月(第1次访视)和第6个月接受HAV疫苗，并在第2个月接受生理盐水注射。根据年龄层随机分配以确保在≥24个月至<4岁和≥4岁至<10岁的年龄层中包括相等的受试者数。
该研究(B1971017)为2期、随机化、对照、观察者盲法、多中心研究，其中计划将约400名受试者以3：1的比例随机分配在2组的其中一组。第1组在第0个月(第1次访视)接受二价rLP2086，随后在第2和第6个月接种疫苗。第2组在第0个月(第1次访视)和第6个月接受经核准的儿科HAV疫苗，并且在第2个月时注射生理盐水以维持研究盲法。根据年龄层随机分配以确保在≥24个月至<4岁和≥4岁至<10岁的年龄层中包括相等的受试者数。该研究计划登记约200名年龄为≥24个月至<4岁的受试者和约200名年龄为≥4岁至<10岁的受试者。
该研究对年龄为≥24个月至<10岁的健康受试者施用120μg剂量水平的二价rLP2086作为第0、2和6个月计划表的一部分以评估免疫原性、安全性和耐受性。在每次疫苗接种后1个月和第三次疫苗接种后6个月进行随访访视，以收集安全性数据和/或获得血液样品。受试者参与该研究达13个月。二价rLP2086(含有各为60μg的纯化的亚族A和亚族BrLP2086蛋白，其吸附至在无菌的缓冲等张悬浮液中的铝)提供在用于注射的0.5mL剂量中。
得到许可的儿科HAV疫苗提供在用于注射的0.5mL剂量中。
在第一组方面，59.31％的年龄为≥24个月至<4岁的受试者和57.05％的年龄为≥4岁至<10岁的受试者接受伴随治疗。在第二组方面，58.18％的年龄为≥24个月至<4岁的受试者和52.94％的年龄为≥4岁至<10岁的受试者接受伴随治疗。研究期间最常见的伴随治疗为布洛芬、扑热息痛和阿莫西林。
二价rLP2086血清杀菌分析-主要测试菌株
为了评估对二价rLP2086的免疫反应，在经验证的hSBA中以4种主要MnB测试菌株来分析功能性抗体，该4种主要MnB测试菌株使用无偏倚算法并基于调节输入调整流行病学流行率从辉瑞的MnB血清杀菌分析(SBA)菌株汇集库中选出。hSBA测量人血清中能起始补体依赖性破坏该靶的脑膜炎奈瑟菌菌株的抗体。在hSBA中使用四(4)种主要MnB测试菌株，PMB80(A22)、PMB2001(A56)、PMB2948(B24)和PMB2707(B44)(其各自表达与该疫苗组分抗原异源的fHBP变体)来测定本研究中的免疫原性试验指标。这些分析中使用在第一次研究疫苗接种之前、第二次研究疫苗接种后1个月及第三次研究疫苗接种后1和6个月从所有受试者取得的血清。
在主要分析方面，在每个采血时间点对一半的受试者(在两个组中)测试二种主要测试菌株(PMB80[A22]和PMB2948[B24])并在每个采血时间点对剩余的另一半受试者测试另外二种主要测试菌株(PMB2001[A56]和PMB2707[B44])。
免疫原性分析
免疫原性分析并无假设测试。使用评估方法来评估主要、次要和探索性目标。
在第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后6个月计算每个年龄层和合并的年龄层的各组中对各试验菌株的hSBA效价达到≥定量下限(LLOQ)的受试者的比例及双边95％准确置信区间(CI)。
主要免疫原性试验指标
主要免疫原性试验指标为：
·以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月，针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥LLOQ的年龄为≥24个月至<4岁(在研究开始时)的受试者的比例。
·以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月，针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥LLOQ的年龄为≥4岁至<10岁(在研究开始时)的受试者的比例。
次要免疫原性试验指标
次要免疫原性试验指标为：
·在研究开始时年龄为≥24个月至<10岁的健康受试者中：
·以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月，针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
·在研究开始时年龄为≥24个月至<4岁的健康受试者、年龄为≥4岁至<10岁的健康受试者、及在合并的年龄层中：
·以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后1和6个月，针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
·在基线、以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后1个月和6个月，针对该4种主要测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥1：4、≥1：8、≥1：16、≥1：32、≥1：64和≥1：128的受试者的比例。
·在基线、以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后1个月和6个月，对该4种主要测试菌株的每一种菌株的hSBA GMT。
探索性免疫原性试验指标
在探索性试验指标方面，不对所有4种主要MnB测试菌株进行测试。相反，使用菌株PMB2001(A56)和PMB2707(B44)，但不使用PMB80(A22)或PMB2948(B24)在50％受试者中进行测试。使用菌株PMB80(A22)或PMB2948(B24)，但不使用PMB2001(A56)或PMB2707(B44)在剩余的50％受试者中进行测试。下文中具体指明的所有探索性试验指标可能已应用于来自所有接受二价rLP2086的受试者的hSBA结果且可能已在指定的时间点对适当的菌株进行测试。
使用下列探索性试验指标来描述在研究开始时年龄为≥24个月至<4岁的健康受试者、年龄为≥4岁至<10岁的健康受试者、及在合并的年龄层中的健康受试者的反应：
·在每个适用的血液采样时间点，其hSBA效价达到≥1：4、≥1：8、≥1：16、≥1：32、≥1：64和≥1：128的受试者的比例。
·在每个适用的血液采样时间点的针对该4种主要菌株的每一种菌株的hSBAGMT。
·从基线开始到以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月，对该4种主要测试菌株的每一种菌株的hSBA效价增加至少4倍的受试者的比例：
·对具有基线hSBA效价低于检测限制(LOD)或其hSBA效价<1：4的受试者而言，4倍反应被定义为hSBA效价达到≥1：16或LLOQ(视何者效价较高而定)。
·对具有基线hSBA效价≥LOD(即，hSBA效价达到≥1：4)及<LLOQ的受试者而言，4倍反应被定义为hSBA效价≥4倍LLOQ。
·对具有基线hSBA效价≥LLOQ的受试者而言，4倍反应被定义为hSBA效价≥4倍基线效价。
分析方法
免疫原性的主要分析包括估计在各年龄层及合并的年龄层的每一组中在第三次疫苗接种后1个月针对各试验菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例，连同双边95％准确置信区间CI。
所有二元试验指标(包括主要试验指标)均以使用精确方法的双边95％CI总结。hSBA的GMT结果也以95％CI总结。
PMB80(A22)的LLOQ为1：16，PMB2001(A56)的LLOQ为1：8，PMB2707(B44)的LLOQ为1：8且PMB2948(B24)的LLOQ为1：8。
在GMT的计算方面，低于LLOQ的hSBA结果设为主要分析的0.5×LLOQ。
主要试验指标分析
主要目标的主要分析基于可评估的免疫原性群体。以双边95％精确CI计算在第三次疫苗接种后1个月，各组中对各测试菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例。为了满足这2个主要目标，呈现的这些数据为2个年龄层的数据：≥24个月至<4岁及≥4岁至<10岁。
所有二元试验指标(包括主要试验指标)均以使用精确方法的双边95％CI总结。hSBA的GMT结果也以95％CI总结。
为了支持对该主要分析的解释，进行基于mITT群体的同一分析。
次要和探索性试验指标分析
下列分析满足次级和探索性免疫原性目标：
·在可评估的免疫原性和mITT群体的个别两个年龄层及合并的年龄层中分析在第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后6个月，对该4种主要菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例。
·在可评估的免疫原性和mITT群体的个别两个年龄层及合并的年龄层中分析在第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后1个月和6个月，对该4种主要菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥1：4、≥1：8、≥1：16、≥1：32、≥1：64和≥1：128的受试者的比例。
·在可评估的免疫原性和mITT群体的个别两个年龄层及合并的年龄层中分析在第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后1个月和6个月，对该4种主要菌株的每一种菌株的基线hSBA GMT。
总结了在可评估的免疫原性和mITT群体的个别两个年龄层及合并的年龄层中各适用的时间点的探索性终点。
反向累积分布曲线
通过图表评估该可评估的免疫原性群体在每个采样时间点对该4种主要菌株的每一种菌株的经验性反向累积分布曲线(RCDC)。
免疫原性评估
分析的群体
该可评估的免疫原性群体为用于免疫原性分析的主要分析群体。该mITT群体作为免疫原性分析的支持性免疫原性群体。
可评估的免疫原性群体中总共包括371名(92.8％)受试者并有29名(7.3％)受试者被排除在该可评估的免疫原性群体外。受试者被排除在该可评估的免疫原性群体外的原因可能超过1个。共21名(5.3％)受试者因为缺乏在第一个疫苗剂量之前或第三次疫苗接种后的基线抽血而被排除在该可评估的免疫原性群体外，15名(3.8％)受试者在任一次访视中均无有效和确定的分析结果，11名(2.8％)受试者不合格或在疫苗接种之前或第三次疫苗接种访视后1个月失去资格，11名(2.8％)受试者在所有疫苗接种访视中因被随机分配而未接受任何疫苗接种并有4名(1.0％)受试者被医疗监测员鉴定为具有重大方案偏差。总体而言，在被排除在该可评估的免疫原性群体外的受试者的百分比方面，该2个研究组和2个年龄层彼此相当。
全部400名被随机分配的受试者均包括在该mITT群中。
免疫原性结果
下列章节提供主要免疫原性试验指标、次要免疫原性试验指标和探索性免疫原性试验指标的分析结果。
主要和次要试验指标
达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例
主要免疫原性试验指标为年龄为以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月，年龄为≥24个月至<4岁(在研究开始时)及≥4岁至<10岁(在研究开始时)的健康受试者中针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例。次要试验指标为以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月，在个别年龄层及合并的年龄层中针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
表20中呈现该可评估的免疫原性群体的各个年龄层中，针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
在第1组中，年龄为≥24个月至<4岁及年龄为≥4岁至<10岁的群体的基线hSBA效价≥LLOQ的受试者比例在PMB80(A22)方面分别为4.4％和13.6％；在PMB2001(A56)方面分别为1.5％和15.4％；在PMB2948(B24)方面分别为3.0％和7.5％；且在PMB2707(B44)方面两个年龄层均为0.0％。
总体而言，在合并的年龄层中，第1组中具有基线hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例在PMB80(A22)方面为9.0％，在PMB2001(A56)方面为8.3％，在PMB2948(B24)方面为5.2％，且在PMB2707(B44)方面为0.0％。
在第二次疫苗接种后1个月，第1组中具有hSBA效价≥LLOQ的年龄为≥24个月至<4岁及年龄为≥4岁至<10岁的受试者的比例在PMB80(A22)方面分别为59.4％和78.8％；在PMB2001(A56)方面两个年龄层均为100.0％；在PMB2948(B24)方面分别为49.2％和65.1％；且在PMB2707(B44)方面分别为57.1％和40.3％。
总体而言，在合并的年龄层中，在第二次疫苗接种后1个月，第1组中具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例在PMB80(A22)方面为69.2％，在PMB2001(A56)方面为100.0％，在PMB2948(B24)方面为57.0％且在PMB2707(B44)方面为48.5％。
在第三次疫苗接种后1个月，第1组中具有hSBA效价≥LLOQ的年龄为≥24个月至<4岁及年龄为≥4岁至<10岁的受试者的比例在PMB80(A22)方面分别为83.8％和91.0％；在PMB2001(A56)方面两个年龄层均为100.0％；在PMB2948(B24)方面分别为85.7％和92.1％；且在PMB2707(B44)方面分别为80.0％和78.3％。
总体而言，在合并的年龄层中，在第三次疫苗接种后1个月，第1组中具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例在PMB80(A22)方面为87.4％，在PMB2001(A56)方面为100.0％，在PMB2948(B24)方面为88.9％，且在PMB2707(B44)方面为79.1％。
一般而言，与基线相比较，第2组中具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例并未随时间变化。在合并的年龄层中，在任何时间点具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例在PMB80(A22)方面为4.4％至8.5％；在PMB2001(A56)方面为14.9％至20.9％；在PMB2948(B24)方面为0.0％至8.9％；且在PMB2707(B44)方面每个时间点均为0.0％。
mITT群体的结果类似于该可评估的免疫原性群体的结果。
该可评估的免疫原性群体中针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥LLOQ的受试者比例的亚群分析按性别、种族和国家呈现。在进行分析的亚群分析中未观察到临床上重要的差异。
免疫持久性：第三次疫苗接种后6个月达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例
以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后6个月，在年龄为≥24个月至<4岁、年龄为≥4岁至<10岁及合并的年龄层(≥24个月至<10岁)中对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例为次要免疫原性试验指标。表20中呈现该可评估的免疫原性群体的每个年龄层中对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
一般而言，在第三次疫苗接种后6个月，该两个年龄层中第一组受试者中观察到的该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例均有减少。
在年龄为≥24个月至<4岁的受试者方面，从第三次疫苗接种后1个月至第三次疫苗接种后6个月，对PMB80(A22)具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例分别从83.8％降至19.0％；对PMB2001(A56)具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例分别从100.0％降至80.3％；对PMB2948(B24)具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例分别从85.7％降至9.2％；对PMB2707(B44)具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例分别从80.0％降至12.1％。
在年龄为≥4岁至<10岁的受试者方面，从第三次疫苗接种后1个月至第三次疫苗接种后6个月，对PMB80(A22)具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例分别从91.0％降至46.0％；对PMB2001(A56)具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例分别从100.0％降至84.3％；对PMB2948(B24)具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例分别从92.1％降至21.9％；对PMB2707(B44)具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例分别从78.3％降至8.7％。
总体而言，在合并的年龄层方面，从第三次疫苗接种后1个月至第三次疫苗接种后6个月，对PMB80(A22)具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例从87.4％降至32.5％；对PMB2001(A56)具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例从100.0％降至82.4％；对PMB2948(B24)具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例从88.9％降至15.5％；对PMB2707(B44)具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例从79.1％降至10.4％。
一般而言，与基线相比较，具有hSBA效价≥LLOQ的第2组受试者的比例并未随时间变化。
表20.对主要菌株具有hSBA效价≥LLOQ的受试者-免疫原性可评估群体
表20.对主要菌株具有hSBA效价≥LLOQ的受试者-免疫原性可评估群体
缩写:hSBA＝使用人补体的血清杀菌分析；LLOQ＝定量下限。
注:在A22方面LLOQ＝1:16；在A56、B24和B44方面LLOQ＝1:8。
a.N＝对指定菌株具有有效和确定的hSBA效价的受试者数。
表20.对主要菌株具有hSBA效价≥LLOQ的受试者-免疫原性可评估群体
b.n＝在指定时间点对指定菌株具有观察的hSBA效价≥LLOQ的受试者数。
c.基于观察的受试者比例的精确双边CI，使用Clopper和Pearson方法。
计划ID:研究B1971017/CP IMM_LLOQ.SAS.报告数据集创建日期：2017年6月1日。运行时间ID:16JUN2017 11:22.文件ID:T_2_2_IMM_LLOQ_EVL.HTM。
hSBA GMT.在基线、以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月和第三次疫苗接种后1个月对该4种主要测试菌株的每一种菌株的hSBA GMT为次要试验指标。表21提供该可评估的免疫原性群体针对该4种主要MnB测试菌株的hSBA GMT。
在年龄为≥24个月至<4岁和年龄为≥4岁至<10岁的第1组受试者方面，针对PMB80(A22)的基线hSBA GMT分别为8.3和9.1；针对PMB2001(A56)的基线hSBA GMT分别为4.1和5.8；针对PMB2948(B24)的基线hSBA GMT分别为4.3和4.6；针对PMB2707(B44)的基线hSBAGMT均为4.0。
在年龄为≥24个月至<10岁的第1组受试者方面，针对PMB80(A22)的基线hSBA GMT为8.7；针对PMB2001(A56)的基线hSBA GMT为4.9；针对PMB2948(B24)的基线hSBA GMT为4.5；针对PMB2707(B44)的基线hSBA GMT为4.0。
在年龄为≥24个月至<4岁和年龄为≥4岁至<10岁的第1组受试者方面，在第2次疫苗接种后1个月针对PMB80(A22)的hSBA GMT分别为17.4和23.1；针对PMB2001(A56)的hSBAGMT分别为103.8和90.0；针对PMB2948(B24)的hSBA GMT分别为9.1和13.7；针对PMB2707(B44)的hSBA GMT分别为17.1和8.2。
在年龄为≥24个月至<10岁的第1组受试者方面，在第2次疫苗接种后1个月针对PMB80(A22)的hSBA GMT为20.1；针对PMB2001(A56)的hSBA GMT为96.6；针对PMB2948(B24)的hSBA GMT为11.1；针对PMB2707(B44)的hSBA GMT为11.7。
在年龄为≥24个月至<4岁和年龄为≥4岁至<10岁的第1组受试者方面，在第3次疫苗接种后1个月针对PMB80(A22)的hSBA GMT分别为33.7和38.2；针对PMB2001(A56)的hSBAGMT分别为175.6和191.0；针对PMB2948(B24)的hSBA GMT分别为19.1和26.8；针对PMB2707(B44)的hSBA GMT分别为43.6和36.5。
在年龄在≥24个月至<10岁的第1组受试者方面，在第3次疫苗接种后1个月，针对PMB80(A22)的hSBA GMT为35.8；针对PMB2001(A56)的hSBA GMT为183.3；针对PMB2948(B24)的hSBA GMT为22.6；针对PMB2707(B44)的hSBA GMT为39.8。
一般而言，与基线相比较，第2组中的受试者的hSBA GMT并未随时间变化。在合并的年龄层方面，在任何时间点针对PMB80(A22)的hSBA GMT在8.6至8.9的范围内；针对PMB2001(A56)的hSBA GMT在5.6至6.0的范围内；针对PMB2948(B24)的hSBA GMT在4.0至4.8的范围内；针对PMB2707(B44)方面均为4.0。
表21.主要菌株的hSBA GMT–免疫原性可评估群体
表21.主要菌株的hSBA GMT–免疫原性可评估群体
缩写:GMT＝几何平均效价；hSBA＝使用人补体的血清杀菌分析；LLOQ＝定量下限；NE＝无法估算。
注:在A22方面LLOQ＝1:16；在A56、B24和B44方面LLOQ＝1:8。低于LLOQ的效价设为0.5×LLOQ用于分析。
a.N＝对指定菌株具有有效和确定的hSBA效价的受试者数。
表21.主要菌株的hSBA GMT–免疫原性可评估群体
b.使用在指定时间点具有有效和确定的hSBA效价的所有受试者计算GMT。
c.CI是基于Student t分布的hSBA效价平均对数的置信水平的逆转换。
该可评估的免疫原性群体和mITT群体中针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA GMT的亚群分析按性别、种族和国家呈现。在进行分析的亚群分析中未观察到临床上重要的差异。
免疫持久性：hSBA GMT
次要试验指标为以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后6个月针对该4种主要测试菌株的每一种菌株的hSBA GMT。表21提供该可评估的免疫原性群体的针对该4种主要MnB测试菌株的hSBA GMT。
总体而言，第三次疫苗接种后1个月至第三次疫苗接种后6个月可在两个年龄层的第1组受试者中观察到对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA GMT下降。
在年龄为≥24个月至<4岁的第1组受试者方面，第三次疫苗接种后1个月至第三次疫苗接种后6个月针对PMB80(A22)的hSBA GMT从33.7降至10.9，针对PMB2001(A56)的hSBAGMT从175.6降至27.0，针对PMB2948(B24)的hSBA GMT从19.1降至5.1，针对PMB2707(B44)的hSBA GMT从43.6降至5.2。
在年龄为≥4岁至<10岁的第1组受试者方面，第三次疫苗接种后1个月至第三次疫苗接种后6个月，针对PMB80(A22)的hSBA GMT从38.2降至14.2，针对PMB2001(A56)的hSBAGMT从191.0降至35.7，针对PMB2948(B24)的hSBA GMT从26.8降至6.2，针对PMB2707(B44)的hSBA GMT从36.5降至5.0。
在年龄在≥24个月至<10岁的第1组受试者方面，第三次疫苗接种后1个月至第三次疫苗接种后6个月，针对PMB80(A22)的hSBA GMT从35.8降至12.4，针对PMB2001(A56)的hSBA GMT从183.3降至31.3，针对PMB2948(B24)的hSBA GMT从22.6降至5.6，针对PMB2707(B44)的hSBA GMT从39.8降至5.1。
一般而言，与基线相比较，第2组中的受试者的hSBA GMT未随时间变化。
确定的hSBA效价
年龄为≥24个月至<4岁、≥4岁至<10岁及合并的年龄层中的受试者在基线、以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后1个月达到对4种主要测试菌株的hSBA效价达到≥1：4、≥1：8、≥1：16、≥1：32、≥1：64和≥1：128的受试者比例为次要免疫原性试验指标。
评估该可评估的免疫原性群体中针对该4种主要MnB菌株的hSBA效价达到确定的hSBA效价的受试者比例。
下文中描述达到hSBA效价≥1：4和≥1：16的受试者。hSBA效价≥1：4被广泛承认为与防护IMD相关；然而，更保守的hSBA效价≥1：16已被视为表示在接种疫苗前为血清阴性的受试者的4倍疫苗效果的水平。
在年龄为≥24个月至<4岁及≥4岁至<10岁的第1组受试者中，在基线时具有针对PMB80(A22)的hSBA效价≥1：4的受试者比例分别为5.9％和19.7％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价≥1：4的受试者比例分别为3.0％和18.5％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价≥1：4的受试者比例分别为4.5％和9.0％；针对PMB2707(B44)的hSBA效价≥1：4的受试者比例分别为0.0％和1.4％。在年龄为≥24个月至<4岁及≥4岁至<10岁的第1组受试者中，在基线时具有针对PMB80(A22)的hSBA效价≥1：16的受试者比例分别为4.4％和13.6％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价≥1：16的受试者比例分别为1.5％和15.4％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价≥1：16的受试者比例分别为3.0％和6.0％；针对PMB2707(B44)的hSBA效价≥1：16的受试者比例均为0.0％。
在合并的年龄层的第1组受试者中，在基线时具有针对PMB80(A22)的hSBA效价≥1：4和≥1：16的受试者的比例分别为12.7％和9.0％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价≥1：4和≥1：16的受试者的比例分别为10.6％和8.3％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价≥1：4和≥1：16的受试者的比例分别为6.7％和4.5％；针对PMB2707(B44)的hSBA效价≥1：4和≥1：16的受试者的比例分别为0.7％和0.0％。
在年龄为≥24个月至<4岁及≥4岁至<10岁的第1组受试者中，在第二次疫苗接种后1个月具有针对PMB80(A22)的hSBA效价≥1：4的受试者的比例分别为65.6％和83.3％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价≥1：4均为100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价≥1：4的受试者的比例分别为53.8％和68.3％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价≥1：4的受试者的比例分别为49.3％和66.7％。在年龄为≥24个月至<4岁及≥4岁至<10岁的第1组受试者中，在第二次疫苗接种后1个月具有针对PMB80(A22)的hSBA效价≥1：16的受试者的比例分别为59.4％和78.8％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价≥1：16的受试者的比例分别为98.5％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价≥1：16的受试者的比例分别为43.1％和58.7％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价≥1：16的受试者的比例分别为31.3％和55.6％。
在合并的年龄层的第1组受试者中，在第二次疫苗接种后1个月具有针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：4和≥1：16的受试者的比例分别为74.6％和69.2％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：4和≥1：16的受试者的比例分别为100.0％和99.2％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：4和≥1：16的受试者的比例分别为60.9％和50.8％；针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：4和≥1：16的受试者的比例分别为57.7％和43.1％。
在年龄为≥24个月至<4岁及≥4岁至<10岁的第1组受试者中，在第三次疫苗接种后1个月具有针对PMB80(A22)的hSBA效价≥1：4的受试者的比例分别86.8％和98.5％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例在两个年龄层均为100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为90.5％和95.2％；针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为81.5％和82.6％。在年龄为≥24个月至<4岁及≥4岁至<10岁的第1组受试者中，在第三次疫苗接种后1个月具有针对PMB80(A22)的hSBA效价≥1：16的受试者的比例分别83.8和91.0％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例在两个年龄层均为100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为81.0％和88.9％；针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为81.5％至82.6％和80.0至75.4％。
在合并的年龄层的第1组受试者中，在第二次疫苗接种后1个月具有针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：4和≥1：16的受试者的比例分别为92.6％和87.4％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：4和≥1：16的受试者的比例分别为100.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：4和≥1：16的受试者的比例分别为92.9％和84.9％；及针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：4和≥1：16的受试者的比例分别为82.1％和77.6％。
一般而言，与基线相比较，第2组中达到确定的hSBA效价的受试者的比例并未随时间改变。
mITT群体的结果与可评估的免疫原性群体的结果相似。
免疫持久性：确定的hSBA效价
以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后6个月，年龄为≥24个月至<4岁、≥4岁至<10岁及合并的年龄层中对该4种主要测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥1：4、≥1：8、≥1：16、≥1：32、≥1：64和≥1：128的受试者的比例为次要免疫原性试验指标。评定该可评估的免疫原性群体中达到对该4种主要MnB测试菌株的确定的hSBA效价的受试者的比例。
总体而言，从第三次疫苗接种后1个月至第三次疫苗接种后6个月在两个年龄层中所观察到的达到确定的hSBA效价的第1组受试者的比例下降。
在年龄为≥24个月至<4岁和年龄为≥4岁至<10岁的第1组受试者中，在第三次疫苗接种后1个月至第三次疫苗接种后6个月，具有针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别从86.8％下降至25.4％和从98.5％下降至55.6％；具有针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别从100.0％下降至82.0％和从100.0％下降至85.7％；具有针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别从90.5％下降至13.8％和从95.2％下降至26.6％；且具有针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别从81.5％下降至13.6％和从82.6％下降至13.0％。
在合并的年龄层的第1组受试者中，在第三次疫苗接种后1个月至第三次疫苗接种后6个月，具有针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例从92.6％下降至40.5％；具有针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例从100.0％下降至84.0％；具有针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例从92.9％下降至20.2％；且具有针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例82.1％下降至13.3％。
在年龄为≥24个月至<4岁和年龄为≥4岁至<10岁的第1组受试者中，在第三次疫苗接种后1个月至第三次疫苗接种后6个月，具有针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别从83.8％下降至19.0％和从91.0％下降至46.0％；具有针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别从100.0％下降至77.0％和从100.0％下降至82.9％；具有针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别从81.0％下降至9.2％和从88.9％下降至20.3％；且具有针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别从80.0％下降至9.1％和从75.4％下降至7.2％。
在合并的年龄层的第1组受试者中，在第三次疫苗接种后1个月至第三次疫苗接种后6个月，具有针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例从87.4％下降至32.5％；具有针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例从100.0％下降至80.2％；具有针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例从84.9％下降至14.7％；且具有针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例从77.6％下降至8.1％。
一般而言，与基线相比较，第2组中达到确定的hSBA效价的受试者的比例并未随时间改变。
探索性免疫原性试验指标
一些探索性免疫原性试验指标的分析基于半数受试者针对菌株PMB2001(A56)和PMB2707(B44)的hSBA结果及剩余的半数受试者针对菌株PMB80(A22)和PMB2948(B24)的hSBA结果。分析的探索性试验指标为从基线开始hSBA效价增加≥4倍。
从基线开始hSBA效价增加4倍
表22呈现具有针对该4种主要测试菌株的hSBA效价从基线开始增加≥4倍的受试者的比例。
在年龄为≥24个月至<4岁及≥4岁至<10岁的第1组受试者中，从基线开始到第二次疫苗接种后1个月具有针对PMB80(A22)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例分别为56.3％和63.6％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例分别为100.0％和82.1％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例分别为43.1％和54.0％；针对PMB2707(B44)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例分别为54.0％和31.3％。
在合并的年龄层的第1组受试者中，从基线开始到第二次疫苗接种后1个月具有针对PMB80(A22)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例为60.0％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例为91.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例为48.4％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例为42.3％。
年龄为≥24个月至<4岁及≥4岁至<10岁的第1组受试者中，从基线开始到第三次疫苗接种后1个月具有针对PMB80(A22)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例分别为79.4％和77.6％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例分别为98.5％和88.7％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例分别为77.8％和82.5％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例分别为78.5％和75.4％。
在合并的年龄层的第1组受试者中，从基线开始到第三次疫苗接种后1个月具有针对PMB80(A22)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例为78.5％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例为93.5％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例为80.2％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例为76.9％。
在年龄为≥24个月至<4岁及≥4岁至<10岁的第1组受试者中，从基线开始到第三次疫苗接种后6个月具有针对PMB80(A22)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例分别为19.0％和36.5％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例分别为75.4％和64.3％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例分别为6.2％和17.2％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例分别为7.6％和7.2％。
在合并的年龄层的第1组受试者中，从基线开始到第三次疫苗接种后6个月具有针对PMB80(A22)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例为27.8％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例为69.5％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例为11.6％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价增加≥4倍的受试者比例为7.4％。
mITT群体可观察到类似的结果。
表22.针对主要菌株具有hSBA效价增加≥4倍的受试者–免疫原性可评估群体
表22.针对主要菌株具有hSBA效价增加≥4倍的受试者–免疫原性可评估群体
缩写:hSBA＝使用人补体的血清杀菌分析；LLOQ＝定量下限；LOD＝检测限。
注:在A22方面LLOQ＝1:16；在A56、B24和B44方面LLOQ＝1:8。
注:增加4倍定义如下：(1)对于基线hSBA效价低于LOD(hSBA效价<1:4)的受试者，反应定义为hSBA效价≥1:16或LLOQ(视何者效价较高而定)。(2)对于基线hSBA效价≥LOD和<LLOQ的受试者，反应定义为hSBA效价≥4倍LLQQ。(3)对于基线hSBA效价≥LLOQ的受试者，反应定义为hSBA效价≥基线效价的4倍。
a.对于hSBA效价从基线开始增加≥4倍，N＝对指定菌株具有有效和确定的hSBA效价的受试者数。
b.对于hSBA效价从基线开始增加≥4倍，n＝达到对指定菌株的hSBA效价从基线开始增加≥4倍的受试者数。
c.基于观察的受试者比例的精确双边CI，使用Clopper和Pearson方法。
d.基线定义为第1次疫苗接种前的抽血。
额外的免疫原性分析
主要MnB试验菌株的缺失hSBA数据的评估
在所有免疫原性分析中仅包括有效和确定的hSBA结果。
hSBA的结果由于下列原因而被排除在免疫原性分析之外(或认为缺失)：
·该受试者退出研究。
·该受试者无用于检测的血液样本，但未从该研究中退出。
·血液量不足以进行该分析。此在分析结果中输入为“量不足”。
·样本接受测试，但不能可靠地测定数值效价。此在分析结果中输入为“不确定”。
反向累积分布曲线
评估在组合的年龄层中对该4种主要菌株的每一种菌株及在每个采样时间点显现出hSBA反应(≥LLOQ)的受试者比例的RCDC。还评估年龄为≥24个月至<4岁的受试者对该4种主要菌株的每一种菌株及在每个采样时间点的RCDC。评估年龄为≥4岁至<10岁的受试者对该4种主要菌株的每一种菌株及在每个采样时间点的RCDC。
RCDC显示出在两个年龄层中的大多数受试者在接受第二和第三剂量的二价rLP2086后1个月对该主要MnB测试菌株的每一种菌株显现出可测量的hSBA反应。
免疫原性结论
本研究的主要目标为通过在第三次疫苗接种后1个月测量年龄为≥24个月至<4岁和年龄为≥4岁至<10岁的健康受试者针对4种主要MnB测试菌株(2种表达rLP2086亚族A蛋白且2种表达LP2086亚族B蛋白)的hSBA来描述受试者对二价rLP2086的免疫反应。对合并的年龄层(≥24个月至<10岁)的免疫反应的描述为次要目标。主要目标的试验指针为在第三次疫苗接种后1个月各年龄层中对该4种主要MnB菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例。
在第三剂量的二价rLP2086后1个月可在年龄为≥24个月至<10岁的儿童中观察到强大的免疫反应，此通过在三个剂量后年龄为≥24个月至<4岁的受试者对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ(在A56、B24和B44方面为1：8；且在A22方面为1：16)的受试者比例(范围在80.0％至100.0％)及年龄为≥4岁至<10岁的受试者对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者比例(范围在78.3％至100.0％)获得确认。在合并的年龄层中，在第三次疫苗接种后1个月，对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例在79.1％至100.0％的范围内。这些发现可进一步由实质性GMT(范围在19.1至191)及在接受三个剂量的二价rLP2086后，与基线相比较，跨两个年龄层的受试者中针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥1：4(81.5％至100％)或1：16(75.4％至100％)的受试者比例得到支持。另外，在合并的年龄层中，在第三次疫苗接种后1个月针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例在76.9％至93.5％的范围内。
该研究的次要目标通过评估2个年龄层及合并的年龄层的≥LLOQ反应、确定的hSBA效价和hSBA GMT来描述在第二剂量的二价rLP2086后一个月的免疫反应。在合并的年龄层方面，达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例在48.5％至100.0％，在较年轻和较年长的年龄层之间并未观察到有意义的差异。这些发现进一步由合并的年龄层在接受两个剂量的二价rLP2086后与基线相比较，对该4种主要的MnB测试菌株的每一种菌株的GMT增加(范围在11.1至96.6)及达到hSBA效价达到≥1：4(57.7％至100％)或≥1：16(43.1％至100％)的受试者的比例得到支持。两个年龄层之间的GMT类似。另外，在第二次疫苗接种后1个月，在合并的年龄层中对该4种主要的MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者比例在42.3％至91.0％的范围内。
还在第三剂量的二价rLP2086后6个月评估免疫持久性，该合并的年龄层中具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例从第三次疫苗接种后1个月的79.1％至100％下降到第三次疫苗接种后6个月为10.4％至82.4％。除了A22之外，2个年龄层之间未观察到差异，在A22方面，较年长的儿童中效价≥LLOQ的受试者的比例高于较年幼的儿童(46％，95％CI 33.4，59.1对19％，95％CI 10.2，30.9)。然而，在A22方面，较长的年龄层中接种疫苗前基线效价≥LLOQ的比率较高(13.6％对4.4％)。在合并的年龄层中也观察到类似趋势，在第三次疫苗接种后6个月具有保护性hSBA效价达到≥1：4的受试者比例的范围在13.3％至84.0％，而GMT的范围在5.1至31.3。
总之，在0、2和6个月计划表中以3个剂量给予的二价rLP2086在年龄为≥24个月至<10岁的幼儿和儿童中引发强大的免疫反应，通过hSBA测量时，在第三剂量后有高比例的受试者取得保护性抗体效价。年龄为≥24个月至<4岁的幼儿和年龄为≥4岁至<10岁的儿童之间未观察到临床上有意义的差异。抗体反应在第三剂量后6个月下降，但保持高于疫苗接种前的基线比率。
讨论和总体结论
免疫原性讨论
来自该给予年龄为≥24个月至<10岁的幼儿和儿童的3剂量二价rLP2086方案(第0、2和6个月计划表)的第2期研究结果与先前在青少年和年轻人身上进行的研究相一致。对二价rLP2086疫苗接种的免疫原性反应利用4种主要的MnB测试菌株(各自表达与该疫苗组分抗原异源的fHBP变体)在经验证的hSBA中，采用较公认的保护相关性(即，hSBA效价≥1：4)更严格的标准测量。基于在第三次疫苗接种后1个月对该4种主要MnB测试菌株的hSBA效价≥LLOQ，与参与研究B1971009的青少年(10岁至<19岁)相比较，参与本研究的幼儿和儿童具有类似的免疫反应，在第三次疫苗接种(第0、2和6个月计划表)后本研究中达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例为79.1％至100％，而研究B1971009中达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例为87.1％至99.5％。在这2个研究之间，在第三次疫苗接种后1个月对该4种主要测试菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例并没有明显的有意义的差异，尽管事实上与本研究中的幼儿和儿童相比较，在研究B1971009中，在疫苗接种前hSBA效价达到≥LLOQ的青少年受试者的比例高出许多，尤其是针对A22(分别为33.2％对9％)和A56(分别为27.5％对8.3％)测试菌株时。二价rLP2086显示出在≥24个月至<10岁的群体中具有高度免疫原性且可能提供针对MnB感染的防护作用，类似于基于hSBA保护相关性的对青少年的预期保护。
关于次要目标，本研究中在第二剂量的二价rLP2086后1个月在合并的年龄层(≥24个月至<10岁)中对该4种主要MnB测试菌株的免疫反应相当强，达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例在48.5％至100％的范围内。除了菌株A56外，这些反应较在参与研究B1971009的青少年(10岁至<19岁)中所观察到的免疫反应低，研究B1971009相隔2个月接受2个剂量的二价rLP2086，范围在64％至99.1％内。本研究中通过在第三次疫苗接种后6个月测量hSBA效价来评估幼儿和儿童的免疫持久性。达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例从第三次疫苗接种后1个月的79.1％至100％下降到第三次疫苗接种后6个月为10.4％至82.4％。在第三次疫苗接种后6个月，GMT和具有确定的hSBA效价的受试者的比例也下降。虽然本研究中在第三次疫苗接种后6个月达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例(10.4％至82.4％)低于参与研究6108A1-2001的青少年(11岁至<19岁)的比例(36.7％至89.4％)，该比例仍然较年龄为≥24个月至<10岁的受试者在基线时具有hSBA效价≥LLOQ的比例(0％至9％)高。脑膜炎奈瑟菌定殖率直到成年早期你随着年龄增加而增加已是被充分确定的。年龄为≥24个月至<10岁的受试者与较年长组的受试者之间的差异可能部分归因于具有基线效价≥LLOQ的受试者的比例，在研究B1971009中该比例高达27.5％(A56)和33.2％(A22)，在研究6108A1-2001中针对亚族A菌株的基线效价≥LLOQ的受试者的比例为7.4％至13.4％。此外，最近的研究显示具有防护性hSBA效价(接种疫苗前)的受试者中携带较多疾病相关的血清群B菌株且疫苗接种并不影响这些疾病相关菌株的后续携带量。这表明，携带量可能会影响基线hSBA效价且接种疫苗后的持久性或再定殖可能促成在接种疫苗后6个月在青少年中观察到具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例较本研究中的幼儿和儿童的比例来得高，我们推测幼儿和儿童较不可能被定殖且在基线时具有hSBA效价≥LLOQ的比例较低。在婴儿和儿童中使用单价缀合脑膜炎奈瑟菌血清群C疫苗进行免疫持久性研究同样显示出保护性免疫迅速减弱。然而，即使在完成初次剂量4年后针对血清群C的hSBA效价>1：8的百分比仅为46.9％的儿童组中，后续的加强剂量可在加强剂后的1个月和1年在100％受试者中提供效价>1：8。这表明即使是那些在加强剂量之前被认为是血清阴性的患者也在加强疫苗接种后具有持续长达一年的强烈的回忆性反应。因此，在那些在幼儿和儿童时接受他们初步的二价rLP2086列的个人中，加强剂后的反应和持久性研究保证更深入了解加强剂量于青少年到成年早期提供针对IMD的防护的用途。
总之，在第0、2和6个月计划表中施用的二价rLP2086在年龄为≥24个月至<10岁的幼儿和儿童中为高度免疫原性，通过hSBA测量时有高比例的受试者在第三剂量后取得保护性免疫反应。如本研究中所测量的免疫反应似乎与先前研究中在第二和第三剂量后1个月在青少年中所观察到者类似。该3剂量方案似乎在年龄为≥24个月至<10岁的幼儿和儿童中提供高比例的保护性免疫。
总体结论
总之，在第0、2和6个月计划表中在3剂量系列中施用年龄为≥24个月至<10岁的幼儿和儿童的二价rLP2086在第二和第三个剂量后在大部分的受试者中引发强大的免疫反应，通过hSBA测量时，在第三个剂量后取得保护性抗体效价。hSBA效价在3剂量系列后6个月降低。如本研究中施用的疫苗对年龄为≥24个月至<10岁的幼儿和儿童而言是安全且耐受性良好，具有可接受的安全性变化曲线。
实施例20：进行2期、随机分配、对照、观察者盲法研究以描述当将脑膜炎奈瑟菌血清群B的二价重组脂蛋白2086疫苗(二价rLP2086)施用年龄为12至<18个月或18至<24个月的健康幼儿时的免疫原性、安全性和耐受性(B1971035-syn)。
目标
主要免疫原性目标：
·通过使用人补体的血清杀菌分析法(hSBA)的测量结果来描述在研究开始时年龄为12至<18个月的健康幼儿中的免疫反应，该血清杀菌分析法在以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月，使用4种主要脑膜炎奈瑟菌血清群B(MnB)菌株(2种表达LP2086亚族A蛋白且2种表达LP2086亚族B蛋白)进行。
·通过hSBA的测量结果来描述在研究开始时年龄为18至<24个月的健康幼儿中二免疫反应，该hSBA在以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月，使用4种主要MnB菌株(2种表达LP2086亚族A蛋白，2种表达LP2086亚族B蛋白)进行。
主要安全目标：
·通过局部反应、全身性事件、不良事件(AE)、严重不良事件(SAE)、新近诊断的慢性医疗病况(NDCMC)、医疗照护事件(MAE)和立即AE的测量结果评估与对照组(A型肝炎病毒[HAV]疫苗)相比较，二价rLP2086在研究开始时年龄为12至<18个月和18至<24个月及两个年龄层合并的健康幼儿中的安全性变化曲线。
次要免疫原性目标：
·通过hSBA的测量结果来描述在研究开始时年龄为12至<24个月(即，两个年龄层合并)的健康幼儿中的免疫反应，该hSBA在以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月，使用4种主要MnB测试菌株(2种表达LP2086亚族A蛋白，2种表达LP2086亚族B蛋白)进行。
·通过hSBA的测量结果来描述在研究开始时年龄为12至<18个月和18至<24个月及两个年龄层合并的健康幼儿中的免疫反应，该hSBA在第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后6、12、24、36和48个月使用4种主要MnB测试菌株(2种表达LP2086亚族A蛋白，2种表达LP2086亚族B蛋白)进行。
探索性免疫原性目标：
·通过hSBA的测量结果进一步描述在研究开始时年龄为12至<18个月和18至<24个月及两个年龄层合并的健康幼儿中的免疫反应，该hSBA使用4种主要MnB测试菌株(2种表达LP2086亚族A蛋白，2种表达LP2086亚族B蛋白)，在以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后1、6、12、24、36和48个月进行测量。
·通过hSBA的测量结果进一步描述在研究开始时年龄为12至<18个月和18至<24个月及两个年龄层合并的健康幼儿中的免疫反应，该hSBA在第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后1、6、12、24、36和48个月针对表达LP2086亚族A和B蛋白的次要MnB测试菌株进行。
方法
研究设计：
该研究为2期、随机分配、活性对照、观察者盲法、申办者非盲法、多中心的研究，其中约将396名的健康幼儿按12至<18个月或18至<24个月的年龄，以2：1的比例随机分配以接受二价rLP2086(2种剂量水平其中一者[60μg或120μg])或得到许可的儿科HAV疫苗(0.5mL)/注射用无菌生理盐水溶液(0.5mL的0.85％氯化钠)。
该研究分两个阶段进行。第一阶段横跨二期(前哨注册期和扩大注册期)评估疫苗的免疫原性、安全性和耐受性。第二阶段评估对二价rLP2086的免疫反应的持续时间。
在免疫原性方面，呈现从第三次疫苗接种后到1个月(访视7)的所有数据，除了支持探索性目标的次要MnB试验菌株数据以外。最终报告包括直到第二阶段结束的所有免疫原性数据和第8次访视后直至研究结束期间的安全性数据(第13次访视，第三次疫苗接种后48个月)。
第一阶段的前哨注册期计划总共包括4个前哨群组：每个二价rLP2086剂量水平(60μg或120μg)包含2个年龄层。较年幼的前哨群组由年龄为12至<15个月的受试者组成，而较年长的前哨群组由年龄为18至<24个月的受试者组成。该4个前哨群组的各小组计划登记约33名受试者。前哨注册期在预先指定的点与IRC审查错开并适用终止规则。直到由IRC评估60μg的剂量水平在相同年龄的前哨群组中为安全且可耐受的才评估该前哨群组的120μg剂量水平。直到由IRC评估120μg剂量水平在年长的前哨群组中为安全且可耐受的才在较年幼的前哨群组中进行120μg剂量水平的评估。
在第一阶段扩大注册期之前，IRC审查所有从前哨受试者取得的第一次疫苗接种后，7天电子日记和SAE数据。基于该审查，IRC选择120μg剂量水平的二价rLP2086在两个年龄层的第一阶段扩大注册期中进行研究。较年幼的扩大注册群组(登记另外的132名受试者)扩展至年龄为12至<18个月的受试者并根据年龄分成2个子集：12至<15个月和15至<18个月。在扩大注册期间，较年长的扩大注册群组(另外登记132名受试者)登记年龄为18至<24个月的受试者。仅完成第一阶段的受试者的总研究期间将约为18个月。表23中呈现第一阶段的访视计划表。
第二阶段仅包括那些被随机分配接受二价rLP2086(不考虑剂量水平)的受试者。完成第二阶段的受试者的总研究期间将为约4.5年(54个月)。第二阶段的访视计划表呈现于表24中。
二价rLP2086在第0、2和6个月(访视1、4和6)施用。儿科HAV疫苗在第0和6个月(访视1和6)施用并在第2个月(访视4)施用生理盐水以维持研究盲法。
表24.第二阶段访视计划表
来源:第二阶段方案活动的计划表。
·
施用的疫苗：在该研究过程中施用3次二价rLP2086(60μg或120μg)：在访视1(第0个月)第一次接种疫苗、在访视4(第2个月)第二次接种疫苗且在访视6(第6个月)第三次接种疫苗。以肌肉内注射液的形式将二价rLP2086施用在三角肌或前外侧大腿肌肉。在该研究过程中施用二次HAV疫苗：在访视1(第0个月)第一次接种疫苗和在访视6(第6个月)第三次接种疫苗。在第二次接种疫苗(第2个月)的时间点施用生理盐水。HAV疫苗/生理盐水以肌肉内注射液的形式施用在三角肌或前外侧大腿肌肉。仅由一名第三方非盲法的医学合格研究人员施用该研究产品。若三角肌中的肌肉量不适合进行肌肉注射，则大腿为优选的注射部位。
免疫原性评估：为了协助免疫原性分析，受试者在第一阶段期间的下列时间点收集约5mL的血液：第1次接种疫苗(访视1)之前、第2次接种疫苗后1个月(访视5)、第3次接种疫苗后1个月(访视7)、第3次接种疫苗后6个月(访视8)、第3次接种疫苗后12个月(访视9)。在18个月的期间内共收集25mL。在抽血前可使用局部(local)/局部(topical)麻醉剂。
为了测定免疫反应的持续时间，在下列时间点自第二阶段受试者收集约5mL血液：第3次接种疫苗后2年、第3次接种疫苗后3年和第3次接种疫苗后4年。在约2.5年的期间内共收集15mL。
为了评估对二价rLP2086的免疫反应，在hSBA中使用脑膜炎奈瑟菌血清群B菌株分析功能性抗体。hSBA测量人血清中导致补体依赖性灭杀靶的脑膜炎球菌菌株的抗体。在hSBA中使用四(4)种主要MnB测试菌株PMB80(A22)、PMB2001(A56)、PMB2948(B24)和PMB2707(B44)以测定本研究中的免疫原性试验指标，该四(4)种主要MnB测试菌株PMB80(A22)、PMB2001(A56)、PMB2948(B24)和PMB2707(B44)各自表达与疫苗组分抗原异源的因子H结合蛋白(fHBP)变体。
由于血清体积限制，在每个血液采样时间点对一半受试者(两个年龄层中的受试者)测试该主要菌株的其中二种菌株(PMB80[A22]和PMB2948[B24])，并在每个采血时间点对其余一半受试者测试另外二种主要菌株(PMB2001[A56]和PMB2707[B44])。
一旦所有受试者完成注册(访视1)，独立的统计中心(ISC)(未参与进行该研究的统计团队)提供2份受试者列表(随机选择的，50％的受试者将接受PMB80[A22]/PMB2948[B24]测试，而剩余的50％受试者将接受PMB2001[A56]/PMB2707[B44]测试)给申办者的样品管理团队。二份列表均遵循与研究设计中相同的随机分配比例(2：1)和年龄层分布。在相同受试者的所有访视中测试相同的菌株对(PMB80[A22]和PMB2948[B24]或PMB2001[A56]/PMB2707[B44])。
一旦完成主要分析的测试且若有足够量的血清可用，则可考虑依下述进行额外测试以评估针对二价rLP2086的免疫反应：PMB80(A22)和PMB2948(B24)的测试可在来自接受二价rLP208且其血清样品最初接受PMB2001(A56)和PMB2707(B44)测试的50％受试者的血清样品中进行。相反，PMB2001(A56)和PMB2707(B44)的测试可在来自接受二价rLP2086且其血清样品最初接受PMB80(A22)和PMB2948(B24)测试的50％受试者的血清样品中进行。可进行次要菌株的测试。
统计方法：
主要免疫原性试验指标为：
·在第三次疫苗接种后1个月，年龄为12至<18个月(在研究开始时)的健康幼儿中针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥定量下限(LLOQ)的受试者的比例。
·在第三次疫苗接种后1个月，年龄为18至<24个月(在研究开始时)的健康幼儿针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
此处描述整个研究的所有次要免疫原性试验指标，但本实施例提供仅适用于访视1至访视7的免疫原性试验指标的结果。将分析后续的试验指标。
下列试验指标适用于在研究开始时年龄为12个月至<24个月(即，两个年龄层合并)的健康受试者的结果：
·以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月及以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后6、12、24、36和48个月对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
下列试验指标适用于在研究开始时年龄为12至<18个月和18至<24个月及两个年龄层合并的健康受试者的结果：
·以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月，针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
·在每一适用的血液采样访视时具有针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价≥LLOQ、≥1：4、≥1：8、≥1：16、≥1：32、≥1：64和≥1：128的受试者的比例。
·在每一适用的血液采样访视时，对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA几何平均效价(GMT)。
所有下列具体指定的探索性试验指标适用于来自研究开始时年龄为12至<18个月和18至<24个月及两个年龄层合并的健康受试者的hSBA结果，该健康受试者接受二价rLP2086并在适当的时间点针对适当的菌株进行测试：
·在每一适用的血液采样时间点，具有hSBA效价≥LLOQ、≥1：4、≥1：8、≥1：16、≥1：32、≥1：64和≥1：128的受试者的比例。
·在每一适用的血液采样访视时，针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA GMT。
·针对该4种主要测试菌株的每一种菌株的hSBA效价从基线开始到以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月增加至少4倍的受试者的比例：
·对具有基线hSBA效价低于检测限制(LOD)或hSBA效价<1：4的受试者而言，4倍反应被定义为hSBA效价达到≥1：16。
·对具有基线hSBA效价≥LOD(即，hSBA效价达到≥1：4)及<LLOQ的受试者而言，4倍反应被定义为hSBA效价≥4倍LLOQ。
·对具有基线hSBA效价≥LLOQ的受试者而言，4倍反应被定义为hSBA效价≥4倍基线效价。
若有足够的血清可用于测试每个受试者对所有4种主要菌株的反应和/或测试受试者对次要菌株的反应，则计划下列试验指标。
·以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月，具有对组合的所有4种主要测试菌株(PMB80[A22]、PMB2948[B24]、PMB2001[A56]及PMB2707[B44])的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例。这只适用于已测试所有4种主要菌株的受试者。
·测试针对次要MnB菌株的hSBA的其他探索性分析如下：
·在第二次和第三次疫苗接种后1个月和/或其后的每一血液采样时间点针对每一测试的次要MnB菌株的hSBA GMT。
·在第二次和第三次疫苗接种后1个月和/或其后的每一血液采样时间点针对每一次要MnB菌株具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
主要试验指标的分析
用于主要目标的主要分析为在研究开始时年龄为12至<18个月和18至<24个月的健康幼儿在第3次疫苗接种后1个月对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株分别具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。该总述使用可评估的免疫原性群体并显示百分比和置信区间(CI)。
次要试验指标的分析
所有在mITT群体进行的分析均视为次要分析。
次要分析还包括该可评估的免疫原性群体和mITT群体二者在第三次接种疫苗后1个月对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
对于该实施例，同时使用可评估的免疫原性群体和mITT群体分析在第二次接种疫苗后1个月和第三次接种疫苗后1个月对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。在最终分析方面，同时使用可评估的免疫原性群体和mITT群体分析在第三次疫苗接种后6、12、24、36和48个月对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
在每一适用的血液采样访视时，同时使用可评估的免疫原性群体和mITT群体分析对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株具有hSBA效价≥LLOQ、≥1：4、≥1：8、≥1：16、≥1：32、≥1：64和≥1：128的受试者的比例。
在每一适用的血液采样访视时总结了该可评估的免疫原性群体和mITT群体对该主要MnB测试菌株的每一种菌株的GMT。
探索性试验指标的分析
总结了该可评估的免疫原性群体和mITT群体从以二价rLP2086进行第二次和第三次接种后1个月达到hSBA效价从基线开始增加至少4倍的受试者的比例。
亚群分析
按性别、国家和年龄层描述性地总结一些免疫原性和安全性试验指标。
结果
受试者配置和人口统计学：
将共396名年龄为12至<24个月的受试者随机分配在这项研究中。在随机分配的受试者中，共有44名受试者接受60μg的二价rLP2086，220名受试者接受120μg的二价rLP2086和132名受试者接受HAV疫苗/生理盐水。共有198名受试者被随机分配在各年龄层(12至<18个月和18至<24个月)中。
在396名随机分配的受试者中，385名(97.2％)受试者完成该研究的疫苗接种阶段(从第一次研究疫苗接种[访视1]至第三次疫苗接种后1个月[访视7])。共有386名(97.5％)受试者完成随访阶段(从访视7至第三次疫苗接种后6个月[访视8])。总体而言，共有381名(96.2％)受试者完成长达6个月随访访视(访视8)的所有访视且每个年龄层的完成状态类似(在12至<18个月和18至<24个月的年龄层中分别有189名[95.5％]受试者和192名[97.0％]受试者)。
总体而言，52.8％受试者为女性，大多数受试者为白人(94.4％)和非西班牙裔/非拉丁裔(99.5％)。第一次疫苗接种的平均年龄(SD)为17.3(3.61)个月(在12至23个月的范围内)。疫苗组之间的人口统计学特征大致类似。
ITT和mITT群体的特征类似于该安全性群体的特征。
免疫原性结果：
该研究的主要目标为描述受试者对二价rLP2086的免疫反应，该免疫反应通过hSBA测量年龄为12至<18个月和18至<24个月的健康受试者在第三次疫苗接种后1个月针对该4种主要MnB测试菌株(2种表达LP2086亚族A蛋白且2种表达LP2086亚族B蛋白)的反应。该次要目标为对合并的年龄层(12至<24个月)的免疫反应的描述。该主要目标的主要试验指针为各年龄层在第三次疫苗接种后1个月对该4种主要MnB菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例。
在第三剂量的二价rLP2086后一个月可在年龄为12至<18个月的幼儿和18至<24个月的幼儿及合并的年龄层(12至<24个月)中观察到在两个剂量水平下的强大的免疫反应，此可由对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株达成hSBA效价≥LLOQ(A56、B24和B44为1：8；A22为1：16)的受试者的比例确认。在60μg组方面，在较年幼的幼儿(12至<18个月)方面，在3个剂量后达成hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例为88.9％至100.0％，在较年长的幼儿(18至<24个月)方面该比例为81.8％至100.0％。在120μg组方面，在12至<18个月的幼儿方面，在3个剂量后达成hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例为71.1％至100.0％，在18至<24个月的幼儿方面该比例为72.0％至100.0％。在合并的年龄层中，在第三次疫苗接种后1个月，针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例在60μg组方面为85.0％至100.0％，在120μg组方面为71.6％至100.0％。这些发现可进一步通过与跨越两个年龄层和剂量水平的基线相比较，在接受三个剂量的二价rLP2086后针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的GMT增加(从基线范围的4.0至8.5到第三次接种疫苗后1个月的15.1至171.4)及hSBA效价达到≥1：4(71.1％至100.0％)或1：16(63.6％至100.0％)的受试者的比例得到支持。另外，在合并的年龄层中，在二种剂量水平下，在第三次疫苗接种后1个月，针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例在67.4％至100.0％的范围内。总之，在第0、2和6个月计划表中的3个剂量的60μg或120μg二价rLP2086在年龄为12至<24个月(单独及合并的年龄层)的幼儿中诱导强大的免疫反应。
该研究的次要目标通过评估2个年龄层及合并的年龄层的≥LLOQ反应、确定的hSBA效价和hSBA GMT来描述在第二剂量的二价rLP2086后一个月的免疫反应。在合并的年龄层方面，在第二剂量的二价rLP2086(施用第一剂量后2个月施用)后达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例在60μg组中为57.9％至94.7％，在120μg组中为33.7％至100.0％。两个个别年龄层的结果类似且较年幼和较年长的年龄层间没有临床上有意义的差异。这些发现进一步通过与合并的年龄层的跨二种剂量水平的基线相比较，接受两个剂量的二价rLP2086后对该4种主要的MnB测试菌株的每一种菌株的GMT较基线增加(范围在7.2至110.6)且hSBA效价达到≥1：4(36.0％至100.0％)或≥1：16(32.6％至100％)的受试者的比例增加得到支持。两个个别年龄层获得类似的结果。另外，在合并的年龄层中，在第二次疫苗接种后1个月，对该4种主要的MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者比例在30.2％至98.9％的范围内。总之，相隔2个月施用的2个60μg或120μg二价rLP2086在年龄为12至<24个月(个别及合并的年龄层)的幼儿中引发免疫反应。总之，在两个60μg和120μg剂量水平下，在第0、2和6个月计划表中以3个剂量施用的二价rLP2086在年龄为12至<24个月的幼儿中引发强大的免疫反应，在第三剂量后，通过hSBA测得在高比例的受试者中取得保护性抗体效价。
结论：
总之，当在第0、2和6个月计划表中将60μg或120μg剂量水平的二价rLP2086施用年龄为12至<24个月的幼儿时，通过hSBA测得在第三剂量后引发保护性抗体效价。如本研究中施用的疫苗对年龄为12至<24个月的幼儿而言为安全且耐受性良好，具有可接受的安全性变化曲线。
实施例21：进行2期、随机化、对照、观察者盲法研究以描述对年龄为12至<18个月或18至<24个月的健康幼儿施用的脑膜炎奈瑟菌血清群B二价重组脂蛋白2086疫苗(二价rLP2086)的免疫原性、安全性和耐受性(B1971035-CSR)
分两个阶段进行此2期研究。第一阶段的设计和进行用来评估在最后一次接种疫苗后12个月(访视10)，二价rLP2086在年龄为12至<24个月的健康幼儿中的安全性、耐受性和免疫原性。第一阶段由具有四个前哨群组的前哨注册期和一个扩大注册期组成。在前哨群组中，以两种剂量水平(60μg和120μg)对两个年龄层(12至<15个月及18至<24个月)施用二价rLP2086。扩大注册期的剂量水平的选择基于内部审查委员会(IRC)对该二种剂量水平的安全性变化曲线的审查。计划的第二阶段用于在最后一次研究疫苗接种后评估该免疫反应的持续时间长达4年。
主要免疫原性目标
·通过hSBA的测量来描述在研究开始时年龄为12至<18个月的健康幼儿中的免疫反应，该hSBA在以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月，使用4种主要MnB菌株(2种表达LP2086亚族A蛋白，2种表达LP2086亚族B蛋白)进行。
·通过hSBA的测量来描述在研究开始时年龄为18至<24个月的健康幼儿中的免疫反应，该hSBA在以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月，使用4种主要MnB菌株(2种表达LP2086亚族A蛋白，2种表达LP2086亚族B蛋白)进行。
次要免疫原性目标：
·通过hSBA的测量来描述在研究开始时年龄为12至<24个月(即，两个年龄层合并)的健康幼儿中的免疫反应，该hSBA在以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月，使用4种主要MnB测试菌株(2种表达LP2086亚族A蛋白，2种表达LP2086亚族B蛋白)进行。
·通过hSBA的测量来描述在研究开始时年龄为12至<18个月和18至<24个月及两个年龄层合并的健康幼儿中的免疫反应，该hSBA在第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后6、12、24、36和48个月使用4种主要MnB测试菌株(2种表达LP2086亚族A蛋白，2种表达LP2086亚族B蛋白)进行。
探索性免疫原性目标：
·通过hSBA的测量来进一步描述在研究开始时年龄为12至<18个月和18至<24个月及两个年龄层合并的健康幼儿中的免疫反应，该hSBA在以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后1、6、12、24、36和48个月，使用4种主要MnB测试菌株(2种表达LP2086亚族A蛋白，2种表达LP2086亚族B蛋白)进行。
·通过hSBA的测量来进一步描述在研究开始时年龄为12至<18个月和18至<24个月及两个年龄层合并的健康幼儿对表达LP2086亚族A和B蛋白的次要MnB测试菌株的免疫反应，该hSBA在第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后1、6、12、24、36和48个月进行。
调查计划
总体研究设计和计划
该研究为2期、随机分配、活性对照、观察者盲法、申办者非盲法、多中心的研究，其中约将396名的健康幼儿按12至<18个月或18至<24个月的年龄，以2：1的比例随机分配以接受二价rLP2086(2种剂量水平其中之一[60μg或120μg])或经核准的儿科HAV疫苗(0.5mL)/注射用无菌生理盐水溶液(0.5mL的0.85％氯化钠)。
该研究分2个阶段进行。第一阶段横跨二期(前哨注册期和扩大注册期)评估疫苗的免疫原性、安全性和耐受性。第二阶段评估对二价rLP2086的免疫反应的持续时间。
第一阶段的前哨注册期计划共包括4个前哨群组：每个二价rLP2086剂量水平(60μg或120μg)包含2个年龄层。较年幼的前哨群组由年龄为12至<15个月的受试者组成，而较年长的前哨群组由年龄为18至<24个月的受试者组成。该4个前哨群组的各小组计划登记约33名受试者。前哨注册期在预先指定的点与IRC审查错开并适用终止规则。直到由IRC评估60μg剂量水平在相同年龄的前哨群组中为安全且可耐受的才评估该前哨群组的120μg剂量水平。直到由IRC评估120μg剂量水平在年长的前哨群组中为安全且可耐受的才在较年幼的前哨群组中进行120μg剂量水平的评估。
在第一阶段扩大注册期之前，IRC审查所有从前哨受试者取得的第一次疫苗接种后，7天电子日记和SAE数据。基于该审查，IRC选择120μg剂量水平的二价rLP2086在两个年龄层的第一阶段扩大注册期中进行研究。较年幼的扩大注册群组(登记另外的132名受试者)扩展至年龄为12至<18个月的受试者并根据年龄分成2个子集：12至<15个月和15至<18个月。在扩大注册期间，较年长的扩大注册群组(另外登记132名受试者)登记年龄为18至<24个月的受试者。仅完成第一阶段的受试者的总研究期间将约为18个月。
第二阶段仅包括那些被随机分配接受二价rLP2086(不考虑剂量水平)的受试者。完成第二阶段的受试者的总研究期间将为约4.5年(54个月)。
二价rLP2086在第0、2和6个月(访视1、4和6)施用。儿科HAV疫苗在第0和6个月(访视1和6)施用并在第2个月(访视4)施用生理盐水以维持研究盲法。
研究设计的讨论，包括对照组的选择
此二阶段研究评估2种剂量水平(60μg和120μg)的二价rLP2086在年龄为12至<24个月的健康幼儿中的安全性、耐受性和免疫原性。
本研究中选择HAV疫苗(在第0个月和6个月)作为对照组。相较于被推荐用于此年龄组的其他疫苗，HAV疫苗具有优选的耐受性变化曲线。此外，HAV疫苗可为那些在未来旅行期间或其他暴露期间可能处于增加A型肝炎病毒感染的风险中的受试者提供益处。一般推荐的HAV疫苗方案在第0个月和第6个月施用2个剂量。本研究中在第2个月给予生理盐水以维持研究盲法。
施用的疫苗
在研究过程中施用3次二价rLP2086(60μg或120μg)：在访视1(第0个月)第一次接种疫苗、在访视4(第2个月)第二次接种疫苗并在访视6(第6个月)第三次接种疫苗。以肌肉内注射液的形式将二价rLP2086施用在三角肌或前外侧大腿肌肉。在研究过程中施用二次HAV疫苗：在访视1(第0个月)第一次接种疫苗并在访视6(第6个月)第三次接种疫苗。在第二次接种疫苗(第2个月)的时间点施用生理盐水。HAV疫苗/生理盐水以肌肉内注射液的形式施用在三角肌或前外侧大腿肌肉。仅由一名第三方非盲法的医学合格的研究人员施用该研究产品。若三角肌中的肌肉量不适合用于肌肉注射，则大腿为优选的注射部位。将施用位点(例如左/右臂/大腿)注明在来源备注和CRF上。
试验用药品的特性
二价rLP2086(在没有菌缓冲的等张悬浮液中，含有吸附在铝上的各为30μg[60μg剂量水平]或60μg[120μg剂量水平]的纯化的亚族A和亚族B rLP2086蛋白质)提供在注射用的0.5mL剂量中。得到许可的儿科HAV疫苗提供在注射用的0.5mL剂量中。
该安慰剂为以0.5mL剂量提供的注射用的无菌生理盐水(0.85％氯化钠)。
该试验用药品(二价rLP2086、HAV疫苗和生理盐水)由申办者提供给各研究地点。研究疫苗根据现行指导方针及适用的当地和法律法规要求包装并标记为试验用药品。各试验用药品均以独特的试剂盒编号标示。
疫苗接种方案的选择
在第0、2和6个月的计划表施用二价rLP2086(60μg或120μg)。对照组受试者在第0个月和第6个月接受HAV疫苗并在第2个月时注射生理盐水以维持研究盲法。
二价rLP2086血清杀菌分析-主要测试菌株
为了评估对二价rLP2086的免疫反应，在hSBA中使用脑膜炎奈瑟菌血清群B菌株分析功能性抗体。hSBA测量人血清中介导补体依赖性灭杀靶的脑膜炎奈瑟菌菌株的抗体。在hSBA中使用四(4)种主要MnB测试菌株PMB80(A22)、PMB2001(A56)、PMB2948(B24)和PMB2707(B44)以用于测定本研究中的免疫原性试验指标，该四(4)种主要MnB测试菌株PMB80(A22)、PMB2001(A56)、PMB2948(B24)和PMB2707(B44)各自表达与疫苗组分抗原异源的因子H结合蛋白(fHBP)变体。
由于血清体积限制，在每个血液采样时间点对一半受试者(两个年龄层中的受试者)测试该主要菌株的其中二种菌株(PMB80[A22]和PMB2948[B24])，并在每个采血时间点对其余一半受试者测试另外二种主要菌株(PMB2001[A56]和PMB2707[B44])。
一旦所有受试者完成注册(访视1)，独立的统计中心(ISC)(未参与进行该研究的统计团队)提供2份受试者列表(随机选择的，50％的受试者将接受PMB80[A22]/PMB2948[B24]测试，而剩余的50％受试者将接受PMB2001[A56]/PMB2707[B44]测试)给申办者的样品管理团队。二份列表均遵循与研究设计中相同的随机分配比例(2：1)和年龄层分布。在相同受试者的所有访视中测试相同的菌株对(PMB80[A22]和PMB2948[B24]或PMB2001[A56]/PMB2707[B44])。
额外分析
一旦完成主要分析的测试且若有足够量的血清可用，则可考虑依下述进行额外测试以评估针对二价rLP2086的免疫反应：PMB80(A22)和PMB2948(B24)的测试可在来自接受二价rLP2086且其血清样品最初接受PMB2001(A56)和PMB2707(B44)测试的50％受试者的血清样品中进行。相反，PMB2001(A56)和PMB2707(B44)的测试可在来自接受二价rLP2086且其血清样品最初接受PMB80(A22)和PMB2948(B24)测试的50％受试者的血清样品中进行。可进行次要菌株的测试。
免疫原性分析
关注目标和试验指标的比较-主要免疫原性试验指标
主要免疫原性试验指标为：
·在研究开始时年龄为12至<18个月的健康幼儿在第三次疫苗接种后1个月对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥定量下限(LLOQ)的受试者的比例。
·在研究开始时年龄为18至<24个月的健康幼儿在第三次疫苗接种后1个月对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥定量下限(LLOQ)的受试者的比例。
关注目标和试验指标的比较-次要免疫原性试验指标
此处描述整个研究的所有次要免疫原性试验指标，但本实施例将仅呈现适用于访视1至7(第一次疫苗接种至第三次疫苗接种后3个月)的免疫原性试验指标的结果。
下列试验指标适用于在研究开始时年龄为12个月至<24个月(即，两个年龄层合并)的健康受试者的结果：
·以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月至以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后6、12、24、36和48个月对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
下列试验指标适用于在研究开始时年龄为12个月至<18个月和年龄为18个月至<24个月及两个年龄层合并的健康受试者的结果
·以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
·在每一适用的采血访视时对该4种主要MnB菌株的每一种菌株具有hSBA效价≥LLOQ≥1：4、≥1：8、≥1：16、≥1：32、≥1：64和≥1：128的受试者的比例。
·在每一适用的采血访视时对该4种主要MnB菌株的每一种菌株的hSBA几何平均效价(GMT)。
探索性免疫原性试验指标
下文中具体指明的所有探索性试验指标适用于来自所有在研究开始时年龄为12至<18个月和18至<24个月及两个年龄层合并的健康幼儿中的hSBA结果，该健康受试者接受二价rLP2086并在适当的时间点对适当的菌株进行测试：
·在每一适用的采血时间点具有hSBA效价≥LLOQ≥1：4、≥1：8、≥1：16、≥1：32、≥1：64和≥1：128的受试者的比例。
·在每一适用的采血访视对该4种主要MnB菌株的每一种菌株的hSBA GMT。
·在以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月，对该4种主要测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到从基线开始增加至少4倍的受试者的比例：
·对具有基线hSBA效价低于检测限制(LOD)或hSBA效价<1：4的受试者而言，4倍反应被定义为hSBA效价≥1：16。
·对具有基线hSBA效价≥LOD(即，hSBA效价达到≥1：4)及<LLOQ的受试者而言，4倍反应被定义为hSBA效价≥4倍LLOQ。
·对具有基线hSBA效价≥LLOQ的受试者而言，4倍反应被定义为hSBA效价≥基线效价的4倍。
若有足够的血清可用于测试每个受试者对所有4种主要菌株的反应和/或测试受试者对次要菌株的反应，则考虑下列试验指标。
·以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月，具有对组合的所有4种主要测试菌株(PMB80[A22]、PMB2948[B24]、PMB2001[A56]及PMB2707[B44])的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例。这只适用于已测试所有4种主要菌株的受试者。
·测试针对次要MnB菌株的hSBA的其他探索性分析如下：
·在第二次和第三次疫苗接种后1个月和/或其后的每一血液采样时间点针对每一测试的次要MnB菌株的hSBA GMT。
·在第二次和第三次疫苗接种后1个月和/或其后的每一血液采样时间点针对每一次要MnB菌株具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
分析群体
改良式意图治疗群体
所有具有至少1个与所提出的分析相关的有效且确定的分析结果的经随机分配的受试者均包括在改良式意图治疗(mITT)群体中。此分析设定用于免疫原性分析。根据受试者在mITT分析中被随机分配的试验产品来分析受试者。
分析方法
汇集对照组和来自同一年龄层的不同群组的各个剂量水平组以用于分析。分别总结各年龄层及整个群体的所有免疫原性分析。
这并非假设试验研究；因此，本研究中使用估计法来评估主要、次要和探索性目标。
PMB80(A22)的LLOQ为1：16，PMB2001(A56)的LLOQ为1：8，PMB2707(B44)的LLOQ为1：8，PMB2948(B24)的LLOQ为1：8。
为了计算GMT，在主要分析方面，低于LLOQ的hSBA结果设为0.5×LLOQ。
主要试验指标的分析
在主要目标方面的主要分析为在研究开始时年龄分别为12至<18个月和18至<24个月的健康幼儿在第三次接种疫苗后1个月对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。该总结使用可评估的免疫原性群体并同时显示百分比和置信区间(CI)。
次要试验指标的分析
所有在mITT群体进行的分析都被认为是次要分析。
对次要试验指标的分析还包括可评估的免疫原性群体及mITT群体在第三次接种疫苗后1个月对该4种主要的MnB测试菌株的每一种菌株具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例。
在该实施例中，在第二次接种疫苗后1个月及第三次接种疫苗后1个月对该4种主要的MnB测试菌株的每一种菌株具有hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例使用可评估的免疫原性群体及mITT群体分析并呈现在本报告中。随后的时间点(第三次接种疫苗后6、12、24、36和48个月)计划使用相同分析。
在第二次接种疫苗后1个月及第三次接种疫苗后1个月对该4种主要的MnB测试菌株的每一种菌株具有hSBA效价≥LLOQ、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64和1：128的受试者的比例使用可评估的免疫原性群体及mITT群体分析并呈现在本报告中。随后的时间点(第三次接种疫苗后6、12、24、36和48个月)计划使用相同分析。
总结了该可评估的免疫原性群体及mITT群体在第二次接种疫苗后1个月及第三次接种疫苗后1个月对该主要MnB测试菌株的每一种菌株的GMT。随后的时间点(第三次接种疫苗后6、12、24、36和48个月)计划使用相同分析。
探索性试验指标的分析
总结了该可评估的免疫原性群体和mITT群体在以二价rLP2086进行第二次和第三次疫苗接种后1个月达到hSBA效价从基线开始增加至少4倍的受试者的比例。
反向累积分布曲线
还评定该可评估的免疫原性群体在第二次接种疫苗后1个月及第三次接种疫苗后1个月对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的经验反向累积分布曲线(RCDC)。
免疫原性评估
分析的群体
该可评估的免疫原性群体为用于免疫原性分析的主要分析群体。使用mITT群体作为用于免疫原性分析的支持性免疫原性群体。
该可评估的免疫原性群体中总共包括348名(87.9％)受试者，并有48名(12.1％)受试者被排除在该可评估的免疫原性群体外。受试者被排除在该可评估的免疫原性群体外的原因可能超过1个。共31名(7.8％)受试者被排除在该可评估的免疫原性群体之外，因为他们没有排定疫苗接种前或疫苗接种后的抽血计划(包括没有采集样品的受试者和在方案指定的窗口采集样品的受试者)，有13名(3.3％)受试者不合格或在第三次疫苗接种访视之前或第三次疫苗接种访视后1个月失去资格，11名(2.8％)受试者在所有疫苗接种访视中被随机分配而未接受任何疫苗接种并有16名(4.0％)受试者接受禁用的疫苗或治疗。共有84.3％的年龄为12至<18个月的受试者和91.4％的年龄为18至<24个月的受试者被包括在该可评估的免疫原性群体中。
免疫原性结果
下列章节中提供包括直到第三次疫苗接种后1个月(访视7)的所有免疫原性数据的主要分析结果。免疫原性试验指标的分析基于一半受试者对菌株PMB2001(A56)和PMB2707(B44)的hSBA结果，及剩余的一半受试者对菌株PMB80(A22)和PMB2948(B24)的hSBA结果。
主要和次要试验指标
达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例
该主要免疫原性试验指标为年龄为12至<18个月(在研究开始时)和年龄为18至<24个月(在研究开始时)的受试者在以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例。次要试验指标为合并的年龄层中以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的所有受试者的比例，连同个别的年龄层及合并的年龄层中以二价rLP2086进行第三次疫苗接种后1个月对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例。
每个年龄层中对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例呈现于用于该可评估的免疫原性群体的表中。
在合并的年龄层方面，在60μg组和120μg组中在基线时针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为0.0％和3.1％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为0.0％和1.1％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为4.8％和2.1％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为0.0％和1.1％。
在第二次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中年龄层为12至<18个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为90.0％和64.4％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为100.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为70.0％和23.8％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为77.8％和72.3％。在60μg和120μg组中年龄层为18至<24个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为66.7％和84.0％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为90.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为44.4％和43.2％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为60.0％和63.8％。总体而言，在第二次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中的合并的年龄层中针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为78.9％和74.7％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为94.7％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为57.9％和33.7％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为68.4％和68.1％。
在第三次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中年龄层为12至<18个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为88.9％和91.1％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为100.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为88.9％和71.1％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为88.9％和87.2％。在60μg和120μg组中年龄层为18至<24个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为90.9％和88.2％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为100.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为81.8％和72.0％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为90.0％和85.1％。总体而言，在第三次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中的合并的年龄层中针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为90.0％和89.6％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为100.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为85.0％和71.6％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例分别为89.5％和86.2％。
一般而言，与基线相比较，HAV/生理盐水组中达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例并未随时间变化(表25)。
mITT群体的结果与该可评估的免疫原性群体的结果相似。
按性别和国家评定该可评估的免疫原性群体中对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者比例的亚群分析。在进行的亚群分析中未观察到临床上重要的差异。
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hSBA GMT
次要试验指标为年龄为12至<18个月、18至<24个月及合并的年龄层的受试者在基线、以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月和第三次疫苗接种后1个月对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA GMT。表26提供该可评估的免疫原性群体对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA GMT。
在合并的年龄层方面，在60μg和120μg组中针对PMB80(A22)的基线hSBA GMT分别为8.0和8.4；针对PMB2001(A56)的基线hSBA GMT分别为4.0和4.1；针对PMB2948(B24)的基线hSBA GMT分别为4.4和4.1；且针对PMB2707(B44)的基线hSBA GMT分别为4.0和4.0。
在第二次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中年龄层为12至<18个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA GMT分别为42.2和24.6；针对PMB2001(A56)的hSBA GMT分别为101.6和117.2；针对PMB2948(B24)的hSBA GMT分别为10.6和6.0；且针对PMB2707(B44)的hSBA GMT分别为23.5和22.1。在60μg和120μg组中年龄层为18至<24个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA GMT分别为23.5和36.8；针对PMB2001(A56)的hSBA GMT分别为68.6和104.6；针对PMB2948(B24)的hSBA GMT分别为6.9和8.5；且针对PMB2707(B44)的hSBA GMT分别为21.1和17.0。总体而言，在第二次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中的合并的年龄层的受试者针对PMB80(A22)的hSBA GMT分别为32.0和30.4；针对PMB2001(A56)的hSBA GMT分别为82.6和110.6；针对PMB2948(B24)的hSBA GMT分别为8.6和7.2；且针对PMB2707(B44)的hSBA GMT分别为22.2和19.4。
在第三次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中年龄层为12至<18个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA GMT分别为80.6和63.0；针对PMB2001(A56)的hSBA GMT分别为109.7和190.6；针对PMB2948(B24)的hSBA GMT分别为20.2和15.8；且针对PMB2707(B44)的hSBA GMT分别为29.6和46.3。在60μg和120μg组中，年龄层为18至<24个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA GMT分别为82.3和71.4；针对PMB2001(A56)的hSBA GMT分别为181.0和154.4；针对PMB2948(B24)的hSBA GMT分别为17.0和14.5；且针对PMB2707(B44)的hSBA GMT分别为34.3和44.9。总体而言，在第三次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中的合并的年龄层的受试者针对PMB80(A22)的hSBA GMT分别为81.6和67.3；针对PMB2001(A56)的hSBAGMT分别为142.8和171.4；针对PMB2948(B24)的hSBA GMT分别为18.4和15.1；且针对PMB2707(B44)的hSBA GMT分别为32.0和45.6。
一般而言，与基线相比较，HAV/生理盐水组中的受试者的hSBA GMT并未随时间变化。
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mITT群体的结果与该可评估的免疫原性群体的结果相似。
按性别和国家评估该可评估的免疫原性群体中对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA GMT的亚群分析。在进行的亚群分析中未观察到临床上重要的差异。
确定的hSBA效价
次要免疫原性试验指标为年龄为12至<18个月和18至<24个月及合并的年龄层的受试者在基线、以二价rLP2086进行第二次疫苗接种后1个月及第三次疫苗接种后1个月针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥1：4、≥1：8、≥1：16、≥1：32、≥1：64和≥1：128的受试者的比例。
该可评估的免疫原性群体中对该4种主要MnB测试菌株达到确定的hSBA效价的受试者的比例呈现于表27中。
接受二价rLP2086且达到hSBA效价达到≥1：4和≥1：16的受试者的结果描述于下。hSBA效价≥1：4被广泛承认为与防护IMD相关；然而，更保守的hSBA效价≥1：16已被视为表示在接种疫苗前为血清阴性的受试者的4倍疫苗效果的水平。
一般而言，与基线相比较，HAV/生理盐水组中达到确定的hSBA效价的受试者比例不随时间变化。
mITT群体的结果与该可评估的免疫原性群体的结果相似。
hSBA效价≥1：4
在第二次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中年龄为12至<18个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为90.0％和64.4％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为100.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为70.0％和28.6％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为77.8％和72.3％。在60μg和120μg组中年龄为18至<24个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为66.7％和86.0％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为100.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为44.4％和43.2％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为70.0％和63.8％。总体而言，在第二次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中的合并的年龄层中针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为78.9％和75.8％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为100.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为57.9％和36.0％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为73.7％和68.1％。
第三次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中年龄为12至<18个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为88.9％和91.1％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为100.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为88.9％和71.1％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为88.9％和87.2％。在60μg和120μg组中年龄为18至<24个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为90.9％和88.2％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为100.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为81.8％和72.0％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为90.0％和87.2％。总体而言，在第三次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中的合并的年龄层中针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为90.0％和89.6％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为100.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为85.0％和71.6％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：4的受试者的比例分别为89.5％和87.2％。
hSBA效价≥1：16
第二次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中年龄为12至<18个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为90.0％和64.4％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为100.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为60.0％和21.4％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为77.8％和72.3％。在60μg和120μg组中年龄为18至<24个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为66.7％和86.0％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为90.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为33.3％和43.2％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为60.0％和61.7％。总体而言，在第二次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中的合并的年龄层中针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为78.9％和74.7％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为94.7％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为47.4％和32.6％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为68.4％和67.0％。
第三次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中年龄为12至<18个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为88.9％和91.1％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为100.0％和97.9％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为88.9％和66.7％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为77.8％和87.2％。在60μg和120μg组中年龄为18至<24个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为90.9％和88.2％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为100.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为63.6％和68.0％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为90.0％和85.1％。总体而言，在第三次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中的合并的年龄层中针对PMB80(A22)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为90.0％和89.6％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为100.0％和98.9％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为75.0％和67.4％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到≥1：16的受试者的比例分别为84.2％和86.2％。
表27.对主要菌株达到确定的hSBA效价的受试者–免疫原性可评估群体
表27.对主要菌株达到确定的hSBA效价的受试者–免疫原性可评估群体
表27.对主要菌株达到确定的hSBA效价的受试者–免疫原性可评估群体
表27.对主要菌株达到确定的hSBA效价的受试者–免疫原性可评估群体
表27.对主要菌株达到确定的hSBA效价的受试者–免疫原性可评估群体
表27.对主要菌株达到确定的hSBA效价的受试者–免疫原性可评估群体
表27.对主要菌株达到确定的hSBA效价的受试者–免疫原性可评估群体
缩写:hSBA＝使用人补体的血清杀菌分析。
a.N＝对指定菌株具有有效和确定的hSBA效价的受试者数。
b.n＝在指定时间点对指定菌株具有观察的hSBA效价≥确定效价的受试者数。
c.基于观察的受试者比例的精确双边CI，使用Clopper和Pearson方法。
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探索性免疫原性试验指标
hSBA效价从基线开始增加≥4倍
表28呈现对该4种主要MnB测试菌株的hSBA效价从基线开始增加≥4倍的受试者的比例。
在第二次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中年龄为12至<18个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为80.0％和62.2％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为100.0％和97.9％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为60.0％和19.0％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为77.8％和70.2％。在60μg和120μg组中年龄层为18至<24个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为66.7％和80.0％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为90.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为33.3％和40.9％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为60.0％和61.7％。总体而言，在第二次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中的合并的年龄层中针对PMB80(A22)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为73.7％和71.6％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为94.7％和98.9％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为47.4％和30.2％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为68.4％和66.0％。
第三次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中年龄为12至<18个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为77.8％和86.7％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为100.0％和95.7％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为88.9％和66.7％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为77.8％和85.1％。在60μg和120μg组中年龄为18至<24个月的受试者针对PMB80(A22)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为90.9％和88.2％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为100.0％和100.0％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为63.6％和68.0％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为90.0％和85.1％。总体而言，在第三次疫苗接种后1个月，在60μg和120μg组中的合并的年龄层中针对PMB80(A22)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为85.0％和87.5％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为100.0％和97.9％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为75.0％和67.4％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例分别为84.2％和85.1％。
在第三次疫苗接种后1个月，HAV/生理盐水组(合并的年龄层)中针对PMB80(A22)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例为5.0％；针对PMB2001(A56)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例为1.9％；针对PMB2948(B24)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例为3.3％；且针对PMB2707(B44)的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者的比例为0.0％。
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mITT群体观察到类似的结果。
按性别和国家评估该可评估的免疫原性群体中对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到增加≥4倍的受试者比例的亚群分析。在进行的亚群分析中未观察到临床上重要的差异。
主要MnB试验菌株的反向累积分布曲线
评估该合并的年龄层中的受试者在各采样时间点对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株(PMB80[A22]、PMB2001[A56]、PMB2948[B24]和PMB2707[B44])显示出hSBA反应(≥LLOQ)的受试者比例的RCDC。RCDC显示出相对于HAV/生理盐水组，二价rLP2086组在第二次疫苗接种和第三次疫苗接种后的免疫反应较高。该二价rLP2086组的免疫反应随着每一次的疫苗接种而增加。
免疫原性结论
本研究的主要目标为通过hSBA，针对4种主要MnB测试菌株(2种表达LP2086亚族A蛋白，2种表达LP2086亚族B蛋白)进行测量来描述受试者的免疫反应，该测量在第三次疫苗接种后1个月，在年龄为12至<18个月和年龄为18至<24个月的健康受试者中进行。对合并的年龄层(12至<24个月)的免疫反应的描述为次要目标。主要目标的主要试验指针为在第三次疫苗接种后1个月，各年龄层中针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例。
在施用第三剂量的二价rLP2086后一个月可在年龄为12至<18个月的幼儿和年龄为18至<24个月的幼儿及合并的年龄层(12至<24个月)中观察到强大的免疫反应，此可通过针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ(在A56、B24和B44方面为1：8；在A22方面为1：16)的受试者的比例确认。对60μg组，在3个剂量后，较年小幼儿(12至<18个月大)和较年长幼儿(18至<24个月大)的达成hSBA效价≥LLOQ的受试者比例分别为自88.9％至100.0％和自81.8％至100.0％。对120μg组，在3个剂量后，年龄为12至<18个月大的幼儿和年龄为18至<24个月大的幼儿达成hSBA效价≥LLOQ的受试者比例分别为自71.1％至100.0％和自72.0％至100.0％。在第三次疫苗接种后1个月，合并的年龄层中针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者比例为自85.0％至100.0％(60μg组)和自71.6％至100.0％(120μg组)。这些发现可通过与跨越二种年龄层和剂量水平的基线相比较，在接受三个剂量的二价rLP2086后针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的GMT增加(从基线的4.0至8.5至第三次疫苗接种后1个月的15.1至171.4)及hSBA效价达到≥1：4的受试者比例(71.1％至100％)或≥1：16的受试者比例(63.6％至100％)进一步得到支持。另外，在合并的年龄层中，在两种剂量下，第三次疫苗接种后1个月针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者比例自67.4％至100.0％。总之，在第0、2和6个月计划表中施用的3个剂量的二价rLP2086(无论是60μg或120μg)可在年龄为12至<24个月的幼儿(个别及合并的年龄层)中引发强大的免疫反应。
该研究的次要目标在施用第二剂量的二价rLP2086后一个月通过评估2个年龄层及合并的年龄层的≥LLOQ反应、确定的hSBA效价和hHSBA GMT来描述免疫反应。在合并的年龄层方面，在第二剂量的二价rLP2086后一个月(施用第一剂量后2个月)，在60μg组中达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例为57.9％至94.7％，在120μg组中达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例为33.7％至100.0％。两个个别年龄层所得到的结果类似，在较年轻和年长的年龄层之间未观察到有意义的差异。这些发现可通过与跨越两种年龄层和剂量水平的基线相比较，在接受两个剂量的二价rLP2086后针对该4种主要MnB测试菌株的每一种菌株的GMT增加(7.2至110.6)且hSBA效价达到≥1：4(36.0％至100％)或≥1：16(32.6％至100％)的受试者的比例得到支持。两种个别年龄层得到的结果类似。另外，在第二次疫苗接种后1个月，在合并的年龄层中对该4种主要的MnB测试菌株的每一种菌株的hSBA效价达到从基线开始增加≥4倍的受试者比例在30.2％至98.9％的范围内。结论，通过相隔两个月施用的两个60μg或120μg剂量的二价rLP2086在年龄为12至<24个月的幼儿(个别及合并的年龄层)中引出强大的免疫反应。
总之，在60μg和120μg两种剂量水平下，在第0、2和6个月计划表中以3个剂量施用的二价rLP2086在年龄为12至<24个月的幼儿(个别及合并的年龄层)中引出强大的免疫反应，通过hSBA测量时，有高比例的受试者在第三剂量后取得保护性抗体效价。
讨论和整体结论
免疫原性讨论.来自该给予年龄为12至<24个月的幼儿的二价rLP2086(在两种剂量水平)的3剂量方案(第0、2和6个月计划表)的第2期研究的免疫原性结果与先前在青少年和年轻人身上进行的120μg剂量水平的研究相一致。
对二价rLP2086疫苗接种的免疫原性反应在经验证的hSBA中，采用较公认的保护相关性(即，hSBA效价≥1：4)更严格的标准，使用4种主要的MnB测试菌株(各自表达与该疫苗组分抗原异源的fHBP变体)测量。基于在第三次疫苗接种后1个月，对该4种主要MnB测试菌株的hSBA效价≥LLOQ，参与本研究的幼儿(任一种剂量水平)与参与研究B1971009的青少年(10岁至<19岁)和参与研究B1971017的幼儿和儿童(≥24个月至<10岁)相较下具有类似的免疫反应，在120μg组(年龄12至<24个月)方面，本研究中在第三次疫苗接种(第0、2和6个月计划表)后达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例为71.6％至100.0％，而研究B1971009中为87.1％至99.5％，研究B1971017中为79.1％至100.0％。在第三次疫苗接种后1个月对该4种主要MnB测试菌株的hSBA效价达到≥LLOQ的受试者的比例在这3个研究之间并没有临床上有意义的差异，尽管研究B1971009中具有疫苗接种前hSBA效价≥LLOQ的青少年受试者的比例较本研究中的幼儿的比例高出许多。二价rLP2086显示出在年龄为12至<24个月的群体中为高度免疫原性且基于hSBA保护相关性似乎能提供类似于预期对青少年的针对MnB感染的防护。对个别年龄层及合并的两个年龄层施用3个剂量后，60μg剂量水平的反应与120μg剂量水平的反应并无有意义的差别。
关于次要目标(本研究中合并的年龄层(12至<24个月)在第二剂量的二价rLP2086(任一剂量水平)后1个月对的免疫反应)，相较于参与研究B1971009的青少年(10岁至<19岁)(其接受相隔2个月施用的2个剂量的二价rLP2086)达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例为64.2％至99.1％及参与研究B1971017的幼儿和儿童(≥24个月至<10岁)达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例为48.5％至100.0％，本研究中达到hSBA效价≥LLOQ的受试者的比例为33.7％至100.0％。对于两个年龄层及合并的年龄层，施用两个60μg二价rLP2086剂量后的免疫反应与施用两个120μg二价rLP2086剂量后的免疫反应并无有意义的差别。应注意的是，当比较60μg和120μg剂量水平之间的反应率时，60μg组中较小的样品尺寸较难做确定性结论。
总之，在第0、2和6个月计划表中施用的60μg和120μg两种剂量水平的二价rLP2086在年龄为12至<24个月的幼儿中为高度免疫原性，通过hSBA测量时，有高比例的受试者在第三剂量后取得保护性抗体效价。在施用第三剂量后一个月，在本研究中测量的免疫反应似乎与先前在青少年和儿童中进行的研究中所观察到者类似。该3剂量方案似乎在年龄为12至<24个月的幼儿中提供高比例的保护性免疫。
总体结论.总之，当在第0、2和6个月计划表中施用年龄为12至<24个月的幼儿时，通过hSBA可测得60μg和120μg剂量水平的二价rLP2086在第三剂量后可引发保护性抗体效价。如本研究中施用的疫苗对年龄为12至<24个月的幼儿是安全且良好耐受，具有可接受的安全性变化曲线。
实施例22：在CBA/J小鼠中评估Mn五价和疫苗的脑膜炎奈瑟菌血清群B免疫原性
在CBA/J小鼠中评估以二价MnB fHBP疫苗、Trumenba或与四价ACWY多糖结合型疫苗一起配制的二价MnB fHBP疫苗(Mn五价ABCWY)进行疫苗接种后对脑膜炎奈瑟菌血清群BfHBP的免疫反应。以三种不同疫苗免疫接种各组CBA/J小鼠：五价(ABCYW)、(MnB)和/>(ACYW)(表29)。
表29—研究设计：各疫苗的剂量水平
剂量水平,μg/0.25mL剂量
在每一治疗臂方面，使用各自疫苗的2倍稀释剂量水平(表29)经由皮下途径在颈部的颈背部免疫接种CBA/J小鼠(25只/组)。在时间0使用疫苗起动小鼠的免疫反应并在第2周给予加强剂。在第3周PD2收集血清以利用二种不同的血清杀菌分析法进行测试，该二种不同的血清杀菌分析法利用人补体(hSBA)进行。一种hSBA利用表达fHBP亚族A的菌株(M98250771)，另一种hSBA利用表达fHBP亚族B的菌株(CDC1127)。
hSBA测量针对脑膜炎奈瑟菌血清群B菌株的抗体依赖性，补体介导的杀菌活性。简单地说，将经适当稀释的测试血清在96孔微量滴定分析盘中与新制备的脑膜炎奈瑟菌B菌株(亚族A或B)的细菌培养物和人补体混合。将分析盘置于回转式振荡器(orbital shaker)上并在加湿培养箱(37℃/5％CO2)中混合30分钟。随后，将来自各个孔的分析反应物的等分试样转移至96孔过滤盘以计算存活细菌数。
对疫苗接种的反应率以各给药组(n＝25)中在hSBA中反应的小鼠的百分比计算出。当以预定的稀释水平测试时，杀死≥50％的T30对照脑膜炎奈瑟菌的小鼠血清样品被视为反应者。该T30对照孔含有细菌和补体但无测试血清并在30分钟分析孵育结束时进行计数。
表30和表31显示由或Mn五价疫苗诱导的对脑膜炎奈瑟菌血清群B菌株亚族A和亚族B的剂量依赖性反应率，该二者彼此相当。如所预期的，NIMENRIXTM不会诱导对Mn B菌株的功能性免疫反应。
表30—亚族A的hSBA反应(％反应者)
a参见表29中的对应剂量水平
表31—亚族B的hSBA反应(％反应者)
a参见表29中的对应剂量水平
下列各项描述本发明的另外的实施方案：
C1.一种组合物，其包含多肽和脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖缀合物；脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖缀合物；脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖缀合物；和脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖缀合物。
C2.如第C1项的组合物，其中该MenA荚膜糖与载体蛋白缀合；该MenC荚膜糖与载体蛋白缀合；该MenW荚膜糖与载体蛋白缀合；且该MenY荚膜糖与载体蛋白缀合。
C3.如第C1项的组合物，其中该组合物进一步包括脑膜炎奈瑟菌血清群X(MenX)荚膜糖缀合物。
C4.如第C1项的组合物，其中该多肽为因子H结合蛋白(fHBP)。
C5.如第C1项的组合物，其中该多肽包含与下列群组中任一者所示的氨基酸序列具有至少70％同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ IDNO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：26、SEQ IDNO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ IDNO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ IDNO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ IDNO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ IDNO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：56、SEQ IDNO：57、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：61和SEQ ID NO：62。
C6.一种组合物，其包含：
a.第一脂化多肽，其包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；
b.第二脂化多肽，其包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；和
c.与载体蛋白缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖。
C7.一种组合物，其包含：
a.第一脂化多肽，其包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；
b.第二脂化多肽，其包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；和
c.与载体蛋白缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖。
C8.一种组合物，其包含：
a.第一脂化多肽，其包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；
b.第二脂化多肽，其包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；和
c.与载体蛋白缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群W-135(MenW)荚膜糖。
C9.一种组合物，其包含：
a.第一脂化多肽，其包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；
b.第二脂化多肽，其包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；和
c.与载体蛋白缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖。
C10.一种组合物，其包含：
a.第一脂化多肽，其包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；
b.第二脂化多肽，其包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；
c.与载体蛋白缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖；
d.与载体蛋白缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖；
e.与载体蛋白缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖；和
f.与载体蛋白缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖。
C11.一种组合物，其包含：
a.第一脂化多肽，其包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；
b.第二脂化多肽，其包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；和
c.与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖；
d.与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖；
e.与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖；和
f.与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖。
C12.如第C1项的组合物，其中该MenA荚膜糖通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与己二酸二酰肼(ADH)接头缀合且其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenAAH-TT缀合物)。
C13.如第C1项的组合物，其中该MenC荚膜糖通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与ADH接头缀合，且其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenCAH-TT缀合物)。
C14.如第C1项的组合物，其中该MenW荚膜糖在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合(MenW-TT缀合物)。
C15.如第C1项的组合物，其中该MenY荚膜糖在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合(MenY-TT缀合物)。
C16.如第C1项的组合物，其进一步包含Tris-HCl。
C17.如第C1项的组合物，其进一步包含氯化钠。
C18.如第C1项的组合物，其进一步包含蔗糖。
C19.如第C1项的组合物，其进一步包含组氨酸。
C20.如第C1项的组合物，其进一步包含聚山梨醇酯80。
C21.如第C1项的组合物，其进一步包含铝。
C22.如第C1项的组合物，其进一步包含磷酸铝。
C23.如第C1项的组合物，其中该组合物包含约120μg/ml的第一多肽；约120μg/ml的第二多肽；约0.5mg/ml的呈磷酸铝形式的铝；约0.02mg的聚山梨醇酯80；约10mM的组氨酸；和约150mM的氯化钠。
C24.如第C1项的组合物，其中该组合物每剂量包含约60μg的第一多肽；约60μg的第二多肽；与约7.5μg破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的约5μg的MenA荚膜糖；与约7.5μgTT缀合的约5μg的MenC荚膜糖；与约3.75μg TT缀合的约5μg的MenW荚膜糖；与约3.25μg TT缀合的约5μg的MenY荚膜糖；约97μg的Tris-HCl，pH 6.8±0.3；4.69至4.71mg的氯化钠；约28mg的蔗糖；约0.78mg的L-组氨酸；约0.02mg的聚山梨醇酯80；约0.25mg的铝；且进一步包含0.5mL水。
C25.如第C1项的组合物，其中该组合物适合用于年龄为12至<18个月或18至<24个月的患者。
C26.如第C1项的组合物，其中该组合物适合用于年龄为18至<24个月的患者。
C27.如第C1项的组合物，其中该组合物适合用于年龄为≥24个月至<10岁的患者。
C28.如第C20项的组合物，其中该组合物包含至少0.010mg的聚山梨醇酯80和至多0.018mg的聚山梨醇酯80。
C29.如第C20项的组合物，其中该组合物包含至少0.01mg的聚山梨醇酯80和至多0.02mg的聚山梨醇酯80。
C30.如第C1项的组合物，其中该组合物未进一步包含与SEQ ID NO：1的序列同一性小于100％的多肽。
C31.如第C1项的组合物，其中该第一多肽共具有258个氨基酸。
C32.如第C1项的组合物，其中该组合物未进一步包含与SEQ ID NO：2的序列同一性小于100％的多肽。
C33.如第C1项的组合物，其中该第二多肽共具有261个氨基酸。
C34.如第C1项的组合物，其中该组合物包含至多二种脂化多肽。
C35.如第C1项的组合物，其中该组合物不包含杂合蛋白。
C36.如第C1项的组合物，其中该组合物不包含嵌合蛋白。
C37.如第C1项的组合物，其中该组合物不包含融合蛋白。
C38.如第C1项的组合物，其中该组合物未经冻干。
C39.如第C1项的组合物，其中该组合物不包含甲醛。
C40.如第C1项的组合物，其中该组合物不包含白喉类毒素或CRM。
C41.如第C1项的组合物，其中该组合物在没有己二酸二酰肼(ADH)接头存在的情况下不包含MenA荚膜糖。
C42.如第C1项的组合物，其中该组合物在没有己二酸二酰肼(ADH)接头存在的情况下不包含MenC荚膜糖。
C43.如第C1项的组合物，其中该组合物为液体组合物。
C44.如第C1项的组合物，其中该组合物未进一步包含任一下列免疫原性组合物：MENACTRA(R)、MENVEO(R)、ADACEL(R)、HAVRIX(R)、GARDASIL(R)、REPEVAX或其任何组合。
C45.如第C1项的组合物，其中该组合物未进一步包含脑膜炎奈瑟菌A、C、Y和W-135多糖缀合物(MCV4)组合物，其中该载体蛋白为白喉类毒素。
C46.如第C1项的组合物，其中该组合物未进一步包含脑膜炎奈瑟菌A、C、Y和W-135多糖缀合物(MCV4)组合物，其中该载体蛋白为CRM197。
C47.如第C1项的组合物，其中该组合物未进一步包含NIMENRIX疫苗。
C48.如第C1项的组合物，其中该组合物未进一步包含NIMENRIX疫苗，其中NIMENRIX包含由氯化钠和水组成的稀释剂。
C49.一种试剂盒，其包含(a)第一组合物，其包含脂化的MenB rLP2086亚族A多肽和脂化的MenB rLP2086亚族B多肽；和(b)第二组合物，其包含与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖；与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖；与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖；和与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖。
C50.如第C49项的试剂盒，其中该第一组合物为液体组合物且该第二组合物为冻干组合物。
C51.如第C49项的试剂盒，其中该冻干组合物不包含聚山梨醇酯80。
C52.如第C49项的试剂盒，其中该试剂盒未进一步包含任一下列免疫原性组合物：MENACTRA(R)、MENVEO(R)、ADACEL(R)、HAVRIX(R)、GARDASIL(R)、REPEVAX或其任何组合。
C53.如第C49项的试剂盒，其中该试剂盒未进一步包含脑膜炎奈瑟菌A、C、Y和W-135多糖缀合物(MCV4)组合物，其中该载体蛋白为白喉类毒素。
C54.如第C49项的试剂盒，其中该试剂盒未进一步包含脑膜炎奈瑟菌A、C、Y和W-135多糖缀合物(MCV4)组合物，其中该载体蛋白为CRM197。
C55.如第C49项的试剂盒，其中该试剂盒未进一步包含NIMENRIX疫苗。
C56.如第C49项的试剂盒，其中该试剂盒未进一步包含NIMENRIX(R)疫苗，其中NIMENRIX(R)包含由氯化钠和水组成的稀释剂。
C57.一种试剂盒，其包含：
a.一种液体组合物，其包含
i.第一脂化多肽，其包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；和
ii.第二脂化多肽，其包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；和
b.一种冻干组合物，其包含
i.脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖，其通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与己二酸二酰肼(ADH)接头缀合，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenAAH-TT缀合物)；
ii.脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖，其通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与ADH接头缀合，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenCAH-TT缀合物)；
iii.脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖，其在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合(MenW-TT缀合物)；和
iv.脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖，其在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合(MenY-TT缀合物)。
C58.如第C57项的试剂盒，其中该液体组合物进一步包含氯化钠。
C59.如第C57项的试剂盒，其中该液体组合物进一步包含L-组氨酸。
C60.如第C57项的试剂盒，其中该液体组合物进一步包含聚山梨醇酯80。
C61.如第C57项的试剂盒，其中该液体组合物进一步包含磷酸铝。
C62.如第C57项的试剂盒，其中该液体组合物未进一步包含Tris-HCl。
C63.如第C57项的试剂盒，其中该液体组合物未进一步包含蔗糖。
C64.如第C57项的试剂盒，其中该冻干组合物进一步包含氯化钠。
C65.如第C57项的试剂盒，其中该冻干组合物不包含聚山梨醇酯80。
C66.如第C60项的试剂盒，其中该液体组合物包含至少0.010mg的聚山梨醇酯80和至多0.018mg的聚山梨醇酯80。
C67.如第C60项的试剂盒，其中该液体组合物包含至少0.010mg的聚山梨醇酯80和至多0.02mg的聚山梨醇酯80。
C68.一种免疫原性组合物，其包含：
a.一种液体组合物，其包含(i)第一脂化多肽，其包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；和(ii)第二脂化多肽，其包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；及
b.一种冻干组合物，其包含
i.脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖，其通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与己二酸二酰肼(ADH)接头缀合，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenAAH-TT缀合物)；
ii.脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖，其通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与ADH接头缀合，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenCAH-TT缀合物)；
iii.脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖，其在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合(MenW-TT缀合物)；和
iv.脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖，其在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合(MenY-TT缀合物)。
C69.如第C68项的免疫原性组合物，其中该冻干组合物以该液体组合物重构。
C70.如第C68项的免疫原性组合物，其中该液体组合物进一步包含组氨酸。
C71.如第C68项的免疫原性组合物，其中该液体组合物进一步包含聚山梨醇酯80。
C72.如第C68项的免疫原性组合物，其中该液体组合物进一步包含磷酸铝。
C73.如第C68项的免疫原性组合物，其中该液体组合物进一步包含氯化钠。
C74.如第C68项的免疫原性组合物，其中该组合物适合用于年龄为12至<18个月或18至<24个月的患者。
C75.如第C68项的免疫原性组合物，其中该组合物适合用于年龄为18至<24个月的患者。
C76.如第C68项的免疫原性组合物，其中该组合物适合用于年龄为≥24个月至<10岁的患者。
C77.一种免疫原性组合物，其包含：
a.一种液体组合物，其包含(i).第一脂化多肽，其包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；和(ii).第二脂化多肽，其包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；和
b.一种冻干组合物，其包含
i.脑膜炎奈瑟菌血清群A(MenA)荚膜糖，其通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与己二酸二酰肼(ADH)接头缀合，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenAAH-TT缀合物)；
ii.脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖，其通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与ADH接头缀合，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenCAH-TT缀合物)；
iii.脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖，其在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合(MenW-TT缀合物)；和
iv.脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖，其在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学过程与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合(MenY-TT缀合物)；
其中该冻干组合物与该液体组合物的重构以生成该免疫原性组合物。
C78.如第C77项的免疫原性组合物，其中该液体组合物进一步包含铝。
C79.如第C77项的免疫原性组合物，其中该液体组合物进一步包含磷酸铝。
C80.如第C77项的免疫原性组合物，其中该冻干组合物进一步包含氯化钠。
C81.如第C77项的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物包含至少0.010mg的聚山梨醇酯80和至多0.018mg的聚山梨醇酯80。
C82.如第C77项的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物包含至少0.01mg的聚山梨醇酯80和至多0.02mg的聚山梨醇酯80。
C83.如第C77项的免疫原性组合物，其中该冻干组合物不含有铝。
C84.如第C78项的免疫原性组合物，其中该第一多肽和第二多肽与铝结合。
C85.如第C78项的免疫原性组合物，其中于免疫原性组合物中该第一多肽和第二多肽与铝结合。
C86.如第C78项的免疫原性组合物，其中与重构该冻干组合物之前该液体组合物中与铝结合的多肽的浓度相比较，该免疫原性组合物中与铝结合的多肽的浓度在24小时后未降低。
C87.如第C77项的免疫原性组合物，其中与该冻干组合物中的MenAAH-TT缀合物的浓度相比较，该免疫原性组合物中的MenAAH-TT缀合物的浓度在24小时后未降低。
C88.如第C77项的免疫原性组合物，其中与该冻干组合物中的MenCAH-TT缀合物的浓度相比较，该免疫原性组合物中的MenCAH-TT缀合物的浓度在24小时后未降低。
C89.如第C77项的免疫原性组合物，其中与该冻干组合物中的MenW-TT缀合物的浓度相比较，该免疫原性组合物中的MenW-TT缀合物的浓度在24小时后未降低。
C90.如第C77项的免疫原性组合物，其中与该冻干组合物中的MenY-TT缀合物的浓度相比较，该免疫原性组合物中的MenY-TT缀合物的浓度在24小时后未降低。
C91.如第C86项的免疫原性组合物，其中与重构之前液体组合物中的对应浓度相比较，该浓度在24小时后降低至多1％。
C92.如第C86项的免疫原性组合物，其中该与重构之前液体组合物中的相应浓度相比，该浓度在24小时后降低至多5％。
C93.如第C86项的免疫原性组合物，其中与重构之前该液体组合物中的对应浓度相比较，该浓度在24小时后降低至多10％。
C94.如第C87至C90项的免疫原性组合物，其中与重构之前该冻干组合物中的对应浓度相比较，该浓度在24小时后降低至多1％。
C95.如第C87至C90项的免疫原性组合物，其中与重构之前该冻干组合物中的对应浓度相比较，该浓度在24小时后降低至多5％。
C96.如第C87至C90项的免疫原性组合物，其中与重构之前该冻干组合物中的对应浓度相比较，该浓度在24小时后降低至多10％。
C97.如第C68项或C77项的免疫原性组合物，其中当以氯化钠重构时，该重构的免疫原性组合物的pH值小于该冻干组合物的pH值。
C98.一种组合物，其包含a)第一脂化多肽，其包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，和b)第二脂化多肽，其包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。
C99.如第C98项的组合物，其中该组合物进一步包含聚山梨醇酯80、铝、组氨酸和氯化钠。
C100.如第C98项的组合物，其中该组合物包含60μg的第一脂化多肽和60μg的第二脂化多肽。
C101.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族A菌株和针对脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族B菌株的杀菌免疫反应的方法，其包含对该人施用有效量的如第C1项的组合物。
C102.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族A菌株和针对脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族B菌株的杀菌免疫反应的方法，其包含对该人施用有效量的如第C68项的组合物。
C103.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族A菌株和针对脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族B菌株的杀菌免疫反应的方法，其包含对该人施用有效量的如第C77项的组合物。
C104.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W和/或脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株的杀菌免疫反应的方法，其包含对该人施用有效量的如第C1项的组合物。
C105.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W和/或脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株的杀菌免疫反应的方法，其包含对该人施用有效量的如第C68项的组合物。
C106.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W和/或脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株的杀菌免疫反应的方法，其包含对该人施用有效量的如第C77项的组合物。
C107.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W和/或脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株的杀菌免疫反应的方法，其包含对该人施用有效量的如第C1项的组合物。
C108.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W和/或脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株的杀菌免疫反应的方法，其包含对该人施用有效量的如第C68项的组合物。
C109.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W和/或脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株的杀菌免疫反应的方法，其包含对该人施用有效量的如第C77项的组合物。
C110.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W、脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株和脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的杀菌免疫反应的方法，其包含对该人施用有效量的如第C1项的组合物。
C111.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W、脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株和脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的杀菌免疫反应的方法，其包含对该人施用有效量的如第C68项的组合物。
C112.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W、脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株和脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的杀菌免疫反应的方法，其包含对该人施用有效量的如第C77项的组合物。
C113.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W、脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株和脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的杀菌免疫反应的方法，其包含对该人施用有效量的如第C98项的组合物。
C114.一种在人体中诱导针对表达因子H结合蛋白A10的脑膜炎奈瑟菌血清群C菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用包含第一脂化多肽和第二脂化多肽的组合物，该第一脂化多肽包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；该第二脂化多肽包含SEQ IDNO：2所示的氨基酸序列。
C115.一种在人体中诱导针对表达因子H结合蛋白A10的脑膜炎奈瑟菌血清群W菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用包含含有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的多肽的组合物。
C116.一种在人体中诱导针对表达因子H结合蛋白A19的脑膜炎奈瑟菌血清群W菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用包含含有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的多肽的组合物。
C117.一种在人体中诱导针对表达因子H结合蛋白B16的脑膜炎奈瑟菌血清群A菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用包含含有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的多肽的组合物。
C118.一种在人体中诱导针对表达因子H结合蛋白B47的脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用包含含有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的多肽的组合物。
C119.一种在人体中诱导针对表达因子H结合蛋白A10的脑膜炎奈瑟菌血清群C菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用包含第一脂化多肽和第二脂化多肽的组合物，该第一脂化多肽包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；该第二脂化多肽包含SEQ IDNO：2所示的氨基酸序列。
C120.一种在人体中诱导针对表达因子H结合蛋白A10的脑膜炎奈瑟菌血清群W菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用包含第一脂化多肽和第二脂化多肽的组合物，该第一脂化多肽包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；该第二脂化多肽包含SEQ IDNO：2所示的氨基酸序列。
C121.一种在人体中诱导针对表达因子H结合蛋白A19的脑膜炎奈瑟菌血清群W菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用包含第一脂化多肽和第二脂化多肽的组合物，该第一脂化多肽包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；该第二脂化多肽包含SEQ IDNO：2所示的氨基酸序列。
C122.一种在人体中诱导针对表达因子H结合蛋白B16的脑膜炎奈瑟菌血清群A菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用包含第一脂化多肽和第二脂化多肽的组合物，该第一脂化多肽包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；该第二脂化多肽包含SEQ IDNO：2所示的氨基酸序列。
C123.一种在人体中诱导针对表达因子H结合蛋白B47的脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用包含第一脂化多肽和第二脂化多肽的组合物，该第一脂化多肽包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；该第二脂化多肽包含SEQ IDNO：2所示的氨基酸序列。
C124.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用有效量的与选自由下列所组成的群组的氨基酸序列具有至少70％同一性的多肽：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQID NO：41、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQID NO：59、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：61和SEQ ID NO：62。
C125.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用有效量的如第C1项的组合物。
C126.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用有效量的如第C68项的组合物。
C127.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用有效量的如第C77项的组合物。
C128.一种在人体中诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用有效量的如第C98项的组合物。
C129.一种在人体中诱导针对表达因子H结合蛋白B49的脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用如第C98项的组合物。
C130.一种在人体中诱导针对表达因子H结合蛋白B49的脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的杀菌免疫反应的方法，该方法包括对该人施用包含第一脂化多肽和第二脂化多肽的组合物，该第一脂化多肽包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；该第二脂化多肽包含SEQ IDNO：2所示的氨基酸序列。
C131.如第C101至C130项中任一项的方法，其中该人类在接受第一剂量后，当在血清杀菌分析中使用人补体在相同条件下测量时，该组合物在人体中诱导较接受该第一剂量前的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至少2倍的血清免疫球蛋白的杀菌效价。
C132.如第C101至C130项中任一项的方法，其中该人类在接受第一剂量后，当在血清杀菌分析中使用人补体在相同条件下测量时，该组合物在人体中诱导较接受该第一剂量前的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至少4倍的血清免疫球蛋白的杀菌效价。
C133.如第C101至C132项中任一项的方法，其中该人类在接受第一剂量后，当在血清杀菌分析中使用人补体在相同条件下测量时，该组合物在人体中诱导较接受该第一剂量前的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至少8倍的血清免疫球蛋白的杀菌效价。
C134.如第C101至C132项中任一项的方法，其中该患者的年龄为12至<18个月或18至<24个月。
C135.如第C101至C132项中任一项的方法，其中该患者的年龄为18至<24个月。
C136.如第C101至C132项中任一项的方法，其中该患者的年龄为≥24个月至<10岁。
C137.一种引发患者的免疫反应的方法，该方法包括：(a)当该患者的年龄在12至18个月之间时，对患者施用免疫原性组合物；其中该免疫原性组合物包含第一脂化多肽和第二脂化多肽，该第一脂化多肽包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；该第二脂化多肽包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。
C138.一种引发患者的免疫反应的方法，该方法包括：(a)当该患者的年龄为18至24个月之间时，对患者施用免疫原性组合物；其中该免疫原性组合物包含第一脂化多肽和第二脂化多肽，该第一脂化多肽包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；该第二脂化多肽包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。
C139.一种引发患者的免疫反应的方法，该方法包括：(a)当该患者的年龄为24个月至10岁之间时，对患者施用免疫原性组合物；其中该免疫原性组合物包含第一脂化多肽和第二脂化多肽，该第一脂化多肽包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；该第二脂化多肽包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。
C140.如第C137至C139项中任一项的方法，其中该组合物进一步包含聚山梨醇酯80、铝、组氨酸和氯化钠。
序列表
<110> Pfizer Inc.
<120> 脑膜炎奈瑟菌组合物及其使用方法
<130> PC72351
<160> 62
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 258
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 1
Cys Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Thr Gly
1 5 10 15
Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu
20 25 30
Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly Thr Leu Thr
35 40 45
Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly Asp Lys Asp
50 55 60
Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile Ser Arg Phe
65 70 75 80
Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala
85 90 95
Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala
100 105 110
Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile
115 120 125
Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala
130 135 140
Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe
145 150 155 160
Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala
165 170 175
Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln
180 185 190
Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His
195 200 205
Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr
210 215 220
Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser
225 230 235 240
Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly
245 250 255
Lys Gln
<210> 2
<211> 261
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 2
Cys Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Thr Ala
1 5 10 15
Asp Ile Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His
20 25 30
Lys Asp Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln
35 40 45
Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly
50 55 60
Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser
65 70 75 80
Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr
85 90 95
Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu
100 105 110
Thr Ala Leu Gln Thr Glu Gln Glu Gln Asp Pro Glu His Ser Glu Lys
115 120 125
Met Val Ala Lys Arg Arg Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His
130 135 140
Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro Lys Asp Val Met Ala Thr Tyr Arg Gly
145 150 155 160
Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile
165 170 175
Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser
180 185 190
Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu Ala Val Ala Tyr Ile Lys Pro Asp Glu
195 200 205
Lys His His Ala Val Ile Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Asp Glu
210 215 220
Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe Gly Glu Lys Ala Gln Glu Val
225 230 235 240
Ala Gly Ser Ala Glu Val Glu Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly
245 250 255
Leu Ala Ala Lys Gln
260
<210> 3
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 3
Cys Gly Ser Ser
1
<210> 4
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 4
Cys Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp
1 5 10
<210> 5
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 5
Cys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp
1 5 10 15
<210> 6
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 6
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu
100 105 110
Gln Val Gln Asp Ser Glu Asp Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln
115 120 125
Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu
130 135 140
Pro Lys Gly Gly Ser Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp
145 150 155 160
Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln
165 170 175
Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp
180 185 190
Leu Ala Ala Ala Tyr Ile Lys Pro Asp Glu Lys His His Ala Val Ile
195 200 205
Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Asp Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu
210 215 220
Gly Ile Phe Gly Gly Lys Ala Glu Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val
225 230 235 240
Lys Thr Val Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250 255
<210> 7
<211> 259
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌（B群）
<400> 7
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Thr
1 5 10 15
Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly
20 25 30
Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Pro Gln Asn Gly Thr Leu
35 40 45
Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Ala Gly Asp Lys
50 55 60
Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile Ser Arg
65 70 75 80
Phe Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu
85 90 95
Ala Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val
100 105 110
Ala Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu
115 120 125
Ile Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr
130 135 140
Ala Phe Asn Gln Leu Pro Gly Asp Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala
145 150 155 160
Phe Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe
165 170 175
Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu
180 185 190
Gln Asn Val Glu Leu Ala Ala Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser
195 200 205
His Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly
210 215 220
Thr Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly
225 230 235 240
Ser Ala Thr Val Lys Ile Gly Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala
245 250 255
Gly Lys Gln
<210> 8
<211> 261
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌（B群）
<400> 8
Cys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile
1 5 10 15
Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp
20 25 30
Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly
35 40 45
Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly
50 55 60
Asp Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Phe Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile
85 90 95
Thr Leu Ala Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala
100 105 110
Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp
115 120 125
Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu
130 135 140
His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly
145 150 155 160
Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile
165 170 175
Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr
180 185 190
Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu
195 200 205
Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu
210 215 220
Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile
225 230 235 240
Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly
245 250 255
Ile Ala Gly Lys Gln
260
<210> 9
<211> 254
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌（B群）
<400> 9
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Ile Tyr Lys Gln Asn His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu
100 105 110
Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser
115 120 125
Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu
130 135 140
Pro Asp Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp
145 150 155 160
Pro Asn Gly Arg Leu His Tyr Ser Ile Asp Phe Thr Lys Lys Gln Gly
165 170 175
Tyr Gly Arg Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu
180 185 190
Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu
195 200 205
Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala
210 215 220
Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys
225 230 235 240
Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln
245 250
<210> 10
<211> 254
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌（B群）
<400> 10
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu
100 105 110
Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser
115 120 125
Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu
130 135 140
Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp
145 150 155 160
Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly
165 170 175
His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu
180 185 190
Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu
195 200 205
Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala
210 215 220
Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys
225 230 235 240
Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln
245 250
<210> 11
<211> 263
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌（B群）
<400> 11
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp
1 5 10 15
Ile Gly Ala Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys
20 25 30
Asp Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn
35 40 45
Gly Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Arg Thr Phe Lys Ala
50 55 60
Gly Asp Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys
65 70 75 80
Ile Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu
85 90 95
Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser
100 105 110
Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu Gln Val Gln Asp Ser Glu His Ser
115 120 125
Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln Phe Arg Ile Gly Asp Ile Val Gly
130 135 140
Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro Lys Asp Val Met Ala Thr Tyr
145 150 155 160
Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr
165 170 175
Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu
180 185 190
Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro
195 200 205
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210 215 220
Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln
225 230 235 240
Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Glu Thr Ala Asn Gly Ile Arg His
245 250 255
Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
260
<210> 12
<211> 255
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌（B群）
<400> 12
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu
100 105 110
Gln Glu Gln Asp Pro Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Arg
115 120 125
Phe Lys Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu
130 135 140
Pro Lys Asp Val Met Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp
145 150 155 160
Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln
165 170 175
Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Glu
180 185 190
Leu Ala Thr Ala Tyr Ile Lys Pro Asp Glu Lys His His Ala Val Ile
195 200 205
Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Asp Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu
210 215 220
Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val
225 230 235 240
Glu Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250 255
<210> 13
<211> 255
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌（B群）
<400> 13
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Lys Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu
100 105 110
Gln Val Gln Asp Ser Glu Asp Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln
115 120 125
Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu
130 135 140
Pro Lys Gly Gly Ser Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp
145 150 155 160
Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln
165 170 175
Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Glu
180 185 190
Leu Ala Thr Ala Tyr Ile Lys Pro Asp Glu Lys Arg His Ala Val Ile
195 200 205
Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Asp Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu
210 215 220
Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val
225 230 235 240
Glu Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250 255
<210> 14
<211> 255
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌（B群）
<400> 14
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Val Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu
100 105 110
Gln Val Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln
115 120 125
Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu
130 135 140
Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp
145 150 155 160
Asp Ala Ser Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln
165 170 175
Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp
180 185 190
Leu Ala Ala Ser Asp Ile Lys Pro Asp Lys Lys Arg His Ala Val Ile
195 200 205
Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu
210 215 220
Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val
225 230 235 240
Glu Thr Ala Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250 255
<210> 15
<211> 255
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌（B群）
<400> 15
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Phe Gln Thr Glu
100 105 110
Gln Ile Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln
115 120 125
Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu
130 135 140
Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp
145 150 155 160
Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln
165 170 175
Gly Asn Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp
180 185 190
Leu Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro Asp Gly Lys Arg His Ala Val Ile
195 200 205
Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu
210 215 220
Gly Ile Phe Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val
225 230 235 240
Lys Thr Val Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250 255
<210> 16
<211> 263
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌（B群）
<400> 16
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp
1 5 10 15
Ile Gly Ala Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys
20 25 30
Asp Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn
35 40 45
Gly Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Arg Thr Phe Lys Ala
50 55 60
Gly Asp Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys
65 70 75 80
Ile Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu
85 90 95
Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser
100 105 110
Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu Gln Val Gln Asp Ser Glu His Ser
115 120 125
Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln Phe Arg Ile Gly Asp Ile Val Gly
130 135 140
Glu His Thr Ser Phe Gly Lys Leu Pro Lys Asp Val Met Ala Thr Tyr
145 150 155 160
Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr
165 170 175
Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu
180 185 190
Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro
195 200 205
Asp Glu Lys His His Ala Val Ile Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln
210 215 220
Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln
225 230 235 240
Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Glu Thr Ala Asn Gly Ile Arg His
245 250 255
Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
260
<210> 17
<211> 255
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌（B群）
<400> 17
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu
100 105 110
Gln Val Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln
115 120 125
Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu
130 135 140
Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp
145 150 155 160
Asp Ala Ser Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln
165 170 175
Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp
180 185 190
Leu Ala Ala Ser Asp Ile Lys Pro Asp Lys Lys Arg His Ala Val Ile
195 200 205
Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu
210 215 220
Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val
225 230 235 240
Glu Thr Ala Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250 255
<210> 18
<211> 254
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌（B群）
<400> 18
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu
100 105 110
Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser
115 120 125
Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu
130 135 140
Pro Gly Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp
145 150 155 160
Pro Asn Gly Arg Leu His Tyr Ser Ile Asp Phe Thr Lys Lys Gln Gly
165 170 175
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195 200 205
Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala
210 215 220
Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys
225 230 235 240
Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln
245 250
<210> 19
<400> 19
000
<210> 20
<211> 257
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌（B群）
<400> 20
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Lys
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly Thr Leu Thr Leu
35 40 45
Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly Asp Lys Asp Asn
50 55 60
Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile Ser Arg Phe Asp
65 70 75 80
Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala Ser
85 90 95
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100 105 110
Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn
115 120 125
Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe
130 135 140
Asn Gln Leu Pro Gly Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser
145 150 155 160
Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala
165 170 175
Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn
180 185 190
Val Glu Leu Ala Ala Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala
195 200 205
Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr Tyr
210 215 220
His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala
225 230 235 240
Thr Val Lys Ile Gly Glu Lys Val His Glu Ile Ser Ile Ala Gly Lys
245 250 255
Gln
<210> 21
<211> 254
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌（B群）
<400> 21
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Thr Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Ile Tyr Lys Gln Asn His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu
100 105 110
Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser
115 120 125
Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu
130 135 140
Pro Asp Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp
145 150 155 160
Pro Asn Gly Arg Leu His Tyr Ser Ile Asp Phe Thr Lys Lys Gln Gly
165 170 175
Tyr Gly Arg Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu
180 185 190
Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu
195 200 205
Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala
210 215 220
Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys
225 230 235 240
Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln
245 250
<210> 22
<211> 262
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌（B群）
<400> 22
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp
1 5 10 15
Ile Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys
20 25 30
Asp Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Pro Gln Asn
35 40 45
Gly Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Ala
50 55 60
Gly Asp Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys
65 70 75 80
Ile Ser Arg Phe Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr
85 90 95
Ile Thr Leu Ala Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asn His Ser
100 105 110
Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile
115 120 125
Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly
130 135 140
Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro Gly Asp Lys Ala Glu Tyr His
145 150 155 160
Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Pro Asn Gly Arg Leu His Tyr Thr
165 170 175
Ile Asp Phe Thr Asn Lys Gln Gly Tyr Gly Arg Ile Glu His Leu Lys
180 185 190
Thr Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp
195 200 205
Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu
210 215 220
Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu
225 230 235 240
Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile Gly Glu Lys Val His Glu Ile
245 250 255
Gly Ile Ala Gly Lys Gln
260
<210> 23
<211> 255
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌（B群）
<400> 23
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Ile Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu
100 105 110
Gln Val Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln
115 120 125
Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu
130 135 140
Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Ser Ser Asp
145 150 155 160
Asp Ala Gly Gly Lys Leu Ile Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln
165 170 175
Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp
180 185 190
Leu Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro Asp Glu Lys His His Ala Val Ile
195 200 205
Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu
210 215 220
Gly Ile Phe Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val
225 230 235 240
Lys Thr Val Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250 255
<210> 24
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 24
Cys Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Thr Ala
1 5 10 15
Asp
<210> 25
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 25
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Thr Ala Asp
1 5 10 15
<210> 26
<211> 255
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌
<400> 26
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu
100 105 110
Gln Val Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln
115 120 125
Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu
130 135 140
Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp
145 150 155 160
Asp Ala Ser Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln
165 170 175
Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp
180 185 190
Leu Ala Ala Ser Asp Ile Lys Pro Asp Lys Lys Arg His Ala Val Ile
195 200 205
Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu
210 215 220
Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val
225 230 235 240
Glu Thr Ala Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250 255
<210> 27
<211> 254
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌
<400> 27
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu
100 105 110
Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser
115 120 125
Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu
130 135 140
Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp
145 150 155 160
Pro Asn Gly Arg Leu His Tyr Ser Ile Asp Phe Thr Lys Lys Gln Gly
165 170 175
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180 185 190
Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu
195 200 205
Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala
210 215 220
Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys
225 230 235 240
Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln
245 250
<210> 28
<211> 254
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌
<400> 28
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu
100 105 110
Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser
115 120 125
Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu
130 135 140
Pro Asp Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp
145 150 155 160
Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly
165 170 175
His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu
180 185 190
Ala Ala Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu
195 200 205
Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala
210 215 220
Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys
225 230 235 240
Ile Gly Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln
245 250
<210> 29
<211> 260
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌
<400> 29
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp
1 5 10 15
Ile Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys
20 25 30
Asp Lys Gly Leu Gln Ser Leu Met Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn
35 40 45
Glu Lys Leu Lys Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn
50 55 60
Gly Asp Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile Ser Arg
65 70 75 80
Phe Asp Phe Ile His Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu
85 90 95
Glu Ser Gly Glu Phe Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr
100 105 110
Ala Leu Gln Thr Glu Gln Val Gln Asp Ser Glu His Ser Glu Lys Met
115 120 125
Val Ala Lys Arg Arg Phe Lys Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr
130 135 140
Ser Phe Asp Lys Leu Pro Lys Asp Val Met Ala Thr Tyr Arg Gly Thr
145 150 155 160
Ala Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp
165 170 175
Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro
180 185 190
Glu Leu Asn Val Glu Leu Ala Ala Ala Tyr Ile Lys Pro Asp Glu Lys
195 200 205
Arg His Ala Val Ile Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Asp Glu Lys
210 215 220
Gly Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala
225 230 235 240
Gly Ser Ala Glu Val Glu Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly Leu
245 250 255
Ala Ala Lys Gln
260
<210> 30
<211> 255
<212> PRT
<213> 脑膜炎奈瑟菌
<400> 30
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu
100 105 110
Gln Glu Gln Asp Pro Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Arg
115 120 125
Phe Lys Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu
130 135 140
Pro Lys Asp Val Met Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp
145 150 155 160
Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln
165 170 175
Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp
180 185 190
Leu Ala Val Ala Tyr Ile Lys Pro Asp Glu Lys His His Ala Val Ile
195 200 205
Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Asp Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu
210 215 220
Gly Ile Phe Gly Glu Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val
225 230 235 240
Lys Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250 255
<210> 31
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 31
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala
1 5 10 15
Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln Ser
20 25 30
Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala
35 40 45
Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr
50 55 60
Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln
65 70 75 80
Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln
85 90 95
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100 105 110
Val Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln Phe
115 120 125
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130 135 140
Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp
145 150 155 160
Ala Ser Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly
165 170 175
His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu
180 185 190
Ala Ala Ser Asp Ile Lys Pro Asp Lys Lys Arg His Ala Val Ile Ser
195 200 205
Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly
210 215 220
Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Glu
225 230 235 240
Thr Ala Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250
<210> 32
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 32
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala
1 5 10 15
Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln Ser
20 25 30
Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala
35 40 45
Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr
50 55 60
Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln
65 70 75 80
Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln
85 90 95
Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys
100 105 110
Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe
115 120 125
Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro
130 135 140
Gly Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Pro
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile
225 230 235 240
Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln
245 250
<210> 33
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 33
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala
1 5 10 15
Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln Ser
20 25 30
Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala
35 40 45
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50 55 60
Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln
65 70 75 80
Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln
85 90 95
Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys
100 105 110
Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe
115 120 125
Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro
130 135 140
Asp Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Ala
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Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His
165 170 175
Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala
180 185 190
Ala Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly
195 200 205
Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu
210 215 220
Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile
225 230 235 240
Gly Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln
245 250
<210> 34
<211> 256
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 34
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala
1 5 10 15
Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Lys Ser
20 25 30
Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser
35 40 45
Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly Asp Lys Asp Asn Ser
50 55 60
Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile Ser Arg Phe Asp Phe
65 70 75 80
Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala Ser Gly
85 90 95
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130 135 140
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Glu Leu Ala Ala Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val
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Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His
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Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr
225 230 235 240
Val Lys Ile Gly Glu Lys Val His Glu Ile Ser Ile Ala Gly Lys Gln
245 250 255
<210> 35
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 35
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala
1 5 10 15
Asp Ala Leu Thr Thr Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln Ser
20 25 30
Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala
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Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro
130 135 140
Asp Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Pro
145 150 155 160
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165 170 175
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210 215 220
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225 230 235 240
Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln
245 250
<210> 36
<211> 261
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 36
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile
1 5 10 15
Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp
20 25 30
Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Pro Gln Asn Gly
35 40 45
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
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195 200 205
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210 215 220
Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile
225 230 235 240
Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile Gly Glu Lys Val His Glu Ile Gly
245 250 255
Ile Ala Gly Lys Gln
260
<210> 37
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 37
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala
1 5 10 15
Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln Ser
20 25 30
Leu Ile Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro Asp Glu Lys His His Ala Val Ile Ser
195 200 205
Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly
210 215 220
Ile Phe Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Lys
225 230 235 240
Thr Val Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250
<210> 38
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 38
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala
1 5 10 15
Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln Ser
20 25 30
Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala
35 40 45
Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Val Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln Phe
115 120 125
Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro
130 135 140
Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp
145 150 155 160
Ala Ser Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly
165 170 175
His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu
180 185 190
Ala Ala Ser Asp Ile Lys Pro Asp Lys Lys Arg His Ala Val Ile Ser
195 200 205
Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly
210 215 220
Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Glu
225 230 235 240
Thr Ala Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250
<210> 39
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 39
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala
1 5 10 15
Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln Ser
20 25 30
Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala
35 40 45
Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr
50 55 60
Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln
65 70 75 80
Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln
85 90 95
Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys
100 105 110
Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe
115 120 125
Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro
130 135 140
Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Pro
145 150 155 160
Asn Gly Arg Leu His Tyr Ser Ile Asp Phe Thr Lys Lys Gln Gly Tyr
165 170 175
Gly Arg Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala
180 185 190
Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly
195 200 205
Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu
210 215 220
Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile
225 230 235 240
Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln
245 250
<210> 40
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 40
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala
1 5 10 15
Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln Ser
20 25 30
Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala
35 40 45
Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr
50 55 60
Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln
65 70 75 80
Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln
85 90 95
Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys
100 105 110
Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe
115 120 125
Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro
130 135 140
Asp Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Ala
145 150 155 160
Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His
165 170 175
Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala
180 185 190
Ala Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly
195 200 205
Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu
210 215 220
Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile
225 230 235 240
Gly Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln
245 250
<210> 41
<211> 259
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 41
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1 5 10 15
Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp
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Lys Gly Leu Gln Ser Leu Met Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu
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Lys Leu Lys Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Phe Asp Lys Leu Pro Lys Asp Val Met Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala
145 150 155 160
Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe
165 170 175
Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu
180 185 190
Leu Asn Val Glu Leu Ala Ala Ala Tyr Ile Lys Pro Asp Glu Lys Arg
195 200 205
His Ala Val Ile Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Asp Glu Lys Gly
210 215 220
Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly
225 230 235 240
Ser Ala Glu Val Glu Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly Leu Ala
245 250 255
Ala Lys Gln
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<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 42
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala
1 5 10 15
Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln Ser
20 25 30
Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala
35 40 45
Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr
50 55 60
Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln
65 70 75 80
Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln
85 90 95
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100 105 110
Glu Gln Asp Pro Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Arg Phe
115 120 125
Lys Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro
130 135 140
Lys Asp Val Met Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp
145 150 155 160
Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly
165 170 175
His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu
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Ala Val Ala Tyr Ile Lys Pro Asp Glu Lys His His Ala Val Ile Ser
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Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Asp Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly
210 215 220
Ile Phe Gly Glu Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Lys
225 230 235 240
Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 43
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile
1 5 10 15
Gly Ala Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp
20 25 30
Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly
35 40 45
Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Arg Thr Phe Lys Ala Gly
50 55 60
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130 135 140
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210 215 220
Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu
225 230 235 240
Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Glu Thr Ala Asn Gly Ile Arg His Ile
245 250 255
Gly Leu Ala Ala Lys Gln
260
<210> 44
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 44
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala
1 5 10 15
Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln Ser
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Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro
130 135 140
Lys Gly Gly Ser Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp
145 150 155 160
Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly
165 170 175
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210 215 220
Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Glu
225 230 235 240
Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250
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<211> 259
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 45
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile
1 5 10 15
Gly Ala Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp
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Lys Gly Leu Gln Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu
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Lys Leu Lys Leu Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly
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65 70 75 80
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100 105 110
Leu Gln Thr Glu Gln Val Gln Asp Ser Glu Asp Ser Gly Lys Met Val
115 120 125
Ala Lys Arg Gln Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser
130 135 140
Phe Asp Lys Leu Pro Lys Gly Gly Ser Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala
145 150 155 160
Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe
165 170 175
Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu
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Leu Asn Val Glu Leu Ala Thr Ala Tyr Ile Lys Pro Asp Glu Lys Arg
195 200 205
His Ala Val Ile Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Asp Glu Lys Gly
210 215 220
Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly
225 230 235 240
Ser Ala Glu Val Glu Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly Leu Ala
245 250 255
Ala Lys Gln
<210> 46
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 46
Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly
1 5 10 15
Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys
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Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly Thr
35 40 45
Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly Asp
50 55 60
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Arg Phe Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr
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100 105 110
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Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His
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Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys
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Ala Phe Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp
165 170 175
Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro
180 185 190
Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys
195 200 205
Ser His Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys
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Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala
225 230 235 240
Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile
245 250 255
Ala Gly Lys Gln
260
<210> 47
<211> 259
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 47
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Thr Ala Asp Ile
1 5 10 15
Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp
20 25 30
Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly
35 40 45
Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly
50 55 60
Asp Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe
65 70 75 80
Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu
85 90 95
Ser Gly Glu Phe Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala
100 105 110
Leu Gln Thr Glu Gln Glu Gln Asp Pro Glu His Ser Glu Lys Met Val
115 120 125
Ala Lys Arg Arg Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser
130 135 140
Phe Asp Lys Leu Pro Lys Asp Val Met Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala
145 150 155 160
Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe
165 170 175
Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu
180 185 190
Leu Asn Val Asp Leu Ala Val Ala Tyr Ile Lys Pro Asp Glu Lys His
195 200 205
His Ala Val Ile Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Asp Glu Lys Gly
210 215 220
Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe Gly Glu Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly
225 230 235 240
Ser Ala Glu Val Glu Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly Leu Ala
245 250 255
Ala Lys Gln
<210> 48
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 48
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Thr Ala Asp
1 5 10 15
Ile Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys
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Asp Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn
35 40 45
Gly Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn
50 55 60
Gly Asp Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg
65 70 75 80
Phe Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu
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Glu Ser Gly Glu Phe Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr
100 105 110
Ala Leu Gln Thr Glu Gln Glu Gln Asp Pro Glu His Ser Glu Lys Met
115 120 125
Val Ala Lys Arg Arg Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr
130 135 140
Ser Phe Asp Lys Leu Pro Lys Asp Val Met Ala Thr Tyr Arg Gly Thr
145 150 155 160
Ala Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp
165 170 175
Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro
180 185 190
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Gly Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe Gly Glu Lys Ala Gln Glu Val Ala
225 230 235 240
Gly Ser Ala Glu Val Glu Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly Leu
245 250 255
Ala Ala Lys Gln
260
<210> 49
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 49
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
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Ser Leu Ile Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
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Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu
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Gly Ile Phe Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val
225 230 235 240
Lys Thr Val Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
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<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 50
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
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50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
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100 105 110
Gln Val Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln
115 120 125
Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu
130 135 140
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145 150 155 160
Asp Ala Ser Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln
165 170 175
Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp
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Leu Ala Ala Ser Asp Ile Lys Pro Asp Lys Lys Arg His Ala Val Ile
195 200 205
Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu
210 215 220
Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val
225 230 235 240
Glu Thr Ala Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250 255
<210> 51
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 51
Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Val Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
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85 90 95
Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu
100 105 110
Gln Val Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln
115 120 125
Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu
130 135 140
Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp
145 150 155 160
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165 170 175
Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp
180 185 190
Leu Ala Ala Ser Asp Ile Lys Pro Asp Lys Lys Arg His Ala Val Ile
195 200 205
Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu
210 215 220
Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val
225 230 235 240
Glu Thr Ala Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250 255
<210> 52
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 52
Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu
100 105 110
Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser
115 120 125
Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu
130 135 140
Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp
145 150 155 160
Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly
165 170 175
His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu
180 185 190
Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu
195 200 205
Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala
210 215 220
Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys
225 230 235 240
Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln
245 250
<210> 53
<211> 258
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 53
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile
1 5 10 15
Gly Ala Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp
20 25 30
Lys Ser Leu Gln Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu
35 40 45
Lys Leu Lys Leu Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly
50 55 60
Asp Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe
65 70 75 80
Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala
85 90 95
Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asn His Ser Ala Val Val Ala
100 105 110
Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile
115 120 125
Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala
130 135 140
Phe Asn Gln Leu Pro Asp Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe
145 150 155 160
Ser Ser Asp Asp Pro Asn Gly Arg Leu His Tyr Ser Ile Asp Phe Thr
165 170 175
Lys Lys Gln Gly Tyr Gly Arg Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln
180 185 190
Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His
195 200 205
Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr
210 215 220
Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser
225 230 235 240
Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly
245 250 255
Lys Gln
<210> 54
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 54
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala
1 5 10 15
Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln Ser
20 25 30
Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala
35 40 45
Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr
50 55 60
Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln
65 70 75 80
Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln
85 90 95
Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys
100 105 110
Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe
115 120 125
Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro
130 135 140
Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Ala
145 150 155 160
Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His
165 170 175
Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala
180 185 190
Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly
195 200 205
Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu
210 215 220
Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile
225 230 235 240
Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln
245 250
<210> 55
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 55
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu
35 40 45
Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn
50 55 60
Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg
65 70 75 80
Gln Ile Glu Val Asp Gly Lys Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe
85 90 95
Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu
100 105 110
Gln Val Gln Asp Ser Glu Asp Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln
115 120 125
Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu
130 135 140
Pro Lys Gly Gly Ser Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp
145 150 155 160
Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln
165 170 175
Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu
180 185 190
Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile
195 200 205
Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu
210 215 220
Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val
225 230 235 240
Lys Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln
245 250 255
<210> 56
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 56
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala
1 5 10 15
Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln Ser
20 25 30
Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala
35 40 45
Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr
50 55 60
Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln
65 70 75 80
Ile Glu Val Asp Gly Lys Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln
85 90 95
Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu Gln
100 105 110
Val Gln Asp Ser Glu Asp Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln Phe
115 120 125
Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro
130 135 140
Lys Gly Gly Ser Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp
145 150 155 160
Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly
165 170 175
His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu
180 185 190
Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu
195 200 205
Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala
210 215 220
Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys
225 230 235 240
Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln
245 250
<210> 57
<211> 262
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 57
Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp
1 5 10 15
Ile Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys
20 25 30
Asp Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Pro Gln Asn
35 40 45
Gly Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Ala
50 55 60
Gly Asp Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys
65 70 75 80
Ile Ser Arg Phe Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr
85 90 95
Ile Thr Leu Ala Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asn His Ser
100 105 110
Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile
115 120 125
Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly
130 135 140
Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro Gly Asp Lys Ala Glu Tyr His
145 150 155 160
Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Pro Asn Gly Arg Leu His Tyr Thr
165 170 175
Ile Asp Phe Thr Asn Lys Gln Gly Tyr Gly Arg Ile Glu His Leu Lys
180 185 190
Thr Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp
195 200 205
Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu
210 215 220
Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu
225 230 235 240
Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile Gly Glu Lys Val His Glu Ile
245 250 255
Gly Ile Ala Gly Lys Gln
260
<210> 58
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 58
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Val Leu Ala
1 5 10 15
Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln Ser
20 25 30
Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala
35 40 45
Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr
50 55 60
Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln
65 70 75 80
Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln
85 90 95
Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu Gln
100 105 110
Val Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln Phe
115 120 125
Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro
130 135 140
Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp
145 150 155 160
Ala Ser Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly
165 170 175
His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu
180 185 190
Ala Ala Ser Asp Ile Lys Pro Asp Lys Lys Arg His Ala Val Ile Ser
195 200 205
Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly
210 215 220
Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Glu
225 230 235 240
Thr Ala Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250
<210> 59
<211> 258
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 59
Cys Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Thr Gly
1 5 10 15
Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu
20 25 30
Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly Thr Leu Thr
35 40 45
Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly Asp Lys Asp
50 55 60
Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile Ser Arg Phe
65 70 75 80
Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala
85 90 95
Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala
100 105 110
Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile
115 120 125
Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala
130 135 140
Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe
145 150 155 160
Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala
165 170 175
Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln
180 185 190
Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His
195 200 205
Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr
210 215 220
Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser
225 230 235 240
Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly
245 250 255
Lys Gln
<210> 60
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 60
Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Thr Gly Leu
1 5 10 15
Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Lys
20 25 30
Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly Thr Leu Thr Leu
35 40 45
Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly Asp Lys Asp Asn
50 55 60
Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile Ser Arg Phe Asp
65 70 75 80
Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala Ser
85 90 95
Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu
100 105 110
Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn
115 120 125
Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe
130 135 140
Asn Gln Leu Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser
145 150 155 160
Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala
165 170 175
Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn
180 185 190
Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala
195 200 205
Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr Tyr
210 215 220
His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala
225 230 235 240
Thr Val Lys Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys
245 250 255
Gln
<210> 61
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 61
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala
1 5 10 15
Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln Ser
20 25 30
Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala
35 40 45
Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr
50 55 60
Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln
65 70 75 80
Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln
85 90 95
Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Phe Gln Thr Glu Gln
100 105 110
Ile Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln Phe
115 120 125
Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro
130 135 140
Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp
145 150 155 160
Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly
165 170 175
Asn Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu
180 185 190
Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro Asp Gly Lys Arg His Ala Val Ile Ser
195 200 205
Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly
210 215 220
Ile Phe Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Lys
225 230 235 240
Thr Val Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250
<210> 62
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成氨基酸序列
<400> 62
Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala Asp Ala
1 5 10 15
Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln Ser Leu Thr
20 25 30
Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala Ala Gln
35 40 45
Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr Gly Lys
50 55 60
Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu
65 70 75 80
Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln Val Tyr
85 90 95
Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Phe Gln Thr Glu Gln Ile Gln
100 105 110
Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln Phe Arg Ile
115 120 125
Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro Glu Gly
130 135 140
Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly
145 150 155 160
Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly Asn Gly
165 170 175
Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu Ala Ala
180 185 190
Ala Asp Ile Lys Pro Asp Gly Lys Arg His Ala Val Ile Ser Gly Ser
195 200 205
Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe
210 215 220
Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Lys Thr Val
225 230 235 240
Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 250

Claims (13)

1.一种免疫原性组合物，该免疫原性组合物通过将冻干组合物以液体组合物重构而产生，其中液体组合物含有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第一脂化因子H结合蛋白(fHBP)、SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的第二脂化fHBP和铝；并且其中冻干组合物包含：
(i)通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学与己二酸二酰肼(ADH)接头缀合的脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)血清群A(MenA)荚膜糖，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenAAH-TT缀合物)；
(ii)通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学与ADH接头缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群C(MenC)荚膜糖，其中该接头通过碳二亚胺化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)缀合(MenCAH-TT缀合物)；
(iii)在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群W135(MenW)荚膜糖(MenW-TT缀合物)；和
(iv)在不存在接头的情况下通过四氟硼酸1-氰基-4-二甲氨基吡啶化学与破伤风类毒素载体蛋白(TT)直接缀合的脑膜炎奈瑟菌血清群Y(MenY)荚膜糖(MenY-TT缀合物)。
2.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中铝包括磷酸铝。
3.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中该第一fHBP和第二fHBP至少90％的量与铝结合，持续至少24小时。
4.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物进一步包含聚山梨醇酯80。
5.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物进一步包含Tris-HCl；氯化钠；蔗糖；L-组氨酸；聚山梨醇酯80；和磷酸铝。
6.根据权利要求5所述的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物包含120μg/ml的第一fHBP；120μg/ml的第二fHBP；0.5mg/ml呈磷酸铝形式的铝；0.02mg的聚山梨醇酯80；10mM的L-组氨酸；及150mM的氯化钠。
7.根据权利要求5所述的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物每剂量包含60μg的第一fHBP；60μg的第二fHBP；与15μg TT缀合的5μg的MenA荚膜糖；与15μg TT缀合的5μg的MenC荚膜糖；与7.5μg TT缀合的5μg的MenW荚膜糖；与6.5μg TT缀合的5μg的MenY荚膜糖；97μg的Tris-HCl，pH 6.8±0.3；4.69至4.71mg的氯化钠；28mg的蔗糖；0.78mg的L-组氨酸；0.02mg的聚山梨醇酯80；0.25mg的铝；及进一步0.5mL水。
8.权利要求1至7中任一项所述的免疫原性组合物在制备疫苗中的用途，所述疫苗在人体内诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族A菌株和脑膜炎奈瑟菌血清群B亚族B菌株的免疫反应。
9.权利要求1至7中任一项所述的免疫原性组合物在制备疫苗中的用途，所述疫苗在人体内诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W和/或脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株的免疫反应。
10.权利要求1至7中任一项所述的免疫原性组合物在制备疫苗中的用途，所述疫苗在人体内诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W和/或脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株的免疫反应。
11.权利要求1至7中任一项所述的免疫原性组合物在制备疫苗中的用途，所述疫苗在人体内诱导针对脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W、脑膜炎奈瑟菌血清群Y菌株和/或脑膜炎奈瑟菌血清群X菌株的免疫反应。
12.根据权利要求8至11中任一项所述的用途，其中该人的年龄为至少10岁。
13.根据权利要求8至11中任一项所述的用途，其中该人的年龄为10岁至25岁。
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