KR20190112081A - 네이세리아 메닌기티디스 조성물 및 그의 방법 - Google Patents

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주디스 압살론
요하네스 프레데릭 비슬라
존 에르윈 팔리
리아 다이앤 플레처
섀넌 레아 해리스
토마스 리차드 존스
락슈미 칸드케
폴 리버레이터
존 랜스 페레즈
린 마리 펠란
개리 워렌 즐로트닉
데이비드 쿠퍼
호세 미구엘 아스트-아메자라
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Abstract

한 측면에서, 본 발명은 인자 H 결합 단백질 (fHBP) 및 네이세리아 메닌기티디스 비-혈청군 B 캡슐 폴리사카라이드를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 추가로, fHBP를 포함하는 조성물의 용도, 예컨대 예를 들어, 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 균주 및 비-혈청군 B 균주에 대한 면역 반응을 도출하기 위한 용도에 관한 것이다. 본원에 기재된 조성물 및 방법은 성인, 청소년, 유아, 및 영아를 포함한 인간에서의 투여에 관한 것이다.

Description

네이세리아 메닌기티디스 조성물 및 그의 방법
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2017년 1월 31일에 출원된 미국 특허 가출원 62/452,963, 2017년 5월 8일에 출원된 미국 가출원 62/503,295, 2018년 1월 5일에 출원된 미국 특허 가출원 62/613,945, 및 2018년 1월 29일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/623,233을 우선권 주장한다. 상기 출원은 모두 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
발명의 분야
본 발명은 네이세리아 메닌기티디스(Neisseria meningitidis) 조성물 및 그의 방법에 관한 것이다.
네이세리아 메닌기티디스는 패혈증, 수막염 및 사망을 유발할 수 있는 그람-음성 캡슐화된 박테리아이다. 엔. 메닌기티디스는 화학적으로 및 항원적으로 구별되는 폴리사카라이드 캡슐에 기초하여 적어도 12개의 혈청군 (혈청군 A, B, C, 29E, H, I, K, L, W-135 (대부분 현재 W로 지칭됨), X, Y 및 Z 포함)으로 분류될 수 있다. 혈청군 중 5종의 균주 (A, B, C, Y, 및 W135)가 대부분의 질환의 원인이 된다.
수막구균 수막염은 항생제의 이용가능성에도 불구하고 소아 및 젊은 성인을 수시간 내에 사망하게 할 수 있는 파괴적인 질환이다. 수막구균 혈청군 A, B, C, Y 및 W135 및/또는 X에 대한 개선된 면역원성 조성물에 대한 필요가 존재한다.
현재, 광범위한 MnB 및 수막구균 혈청군 A, C, Y 및 W 및/또는 X 분리주에 대한 효과적인 교차-보호 백신 또는 조성물이 아직 상업적으로 입수가능하지 않다. 예를 들어, 혈청군 B 질환에 대한 보호를 위한 허가된 다중-성분 조성물에 관하여 지금까지 공개된 결과는, 적어도 청소년에서, 비-혈청군 B 캡슐 폴리사카라이드를 발현하는 다중 수막구균 균주에 대한 직접적인 살박테리아 면역 반응을 입증하지 못했다. 따라서, 다양한 또는 이종 수막구균 균주 (예를 들어, 상이한 지리적 영역을 대표하는 것) 패널에 대한 현실-세계 백신 적용범위가 결정됨에 따라, 다양한 MnB 및 수막구균 혈청군 A, C, Y, 및 W 및/또는 X 분리주에 대한 효과적인 교차-보호 백신 또는 조성물이 필요하다.
본 발명의 추가의 목적은 수막구균 백신을, 특히 소아에게 투여하는 것에 대한 개선된 스케줄을 제공하는 것이다. 침습성 수막구균 질환 (IMD)의 발생률은 연령에 따라 다르지만, 종종 1개월 내지 1세 연령의 영아기 동안의 발생률이 가장 높고, 청소년기 동안 발생률이 두번째로 피크였다. 미국에서, 1998년에서 2007년 동안, 2세 미만의 연령의 영아에서의 수막구균 질환의 전체 비율은 100,000명당 3.9명이었다. 2세 내지 10세의 소아에서, 발생률은 100,000명당 0.68명이었고, 이러한 연령 군에서 사례의 41%는 2세 내지 3세의 소아에서 발생하였다. 호주의 국가 감시 데이터는 4세 이하의 소아에서의 질환의 피크 발생률을 보여주며, 청소년 및 젊은 성인에서 2차 피크가 존재하고; 모든 사례의 대략 85%는 혈청군 B 질환에 기인한다.
이들 및 다른 필요를 충족시키기 위해, 본 발명은 네이세리아 메닌기티디스 조성물 및 그의 방법에 관한 것이다.
본 발명자들은 놀랍게도 적어도 하나의 인자 H 결합 단백질 (fHBP) 및 적어도 하나의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드 접합체를 포함하는 조성물을 발견하였다. 조성물은 놀랍게도 안정하고, 다중-성분 조성물 중의 fHBP 변이체에 동종인 fHBP 변이체를 발현하는 균주에 대한 면역 반응, 및 다중-성분 조성물 중의 fHBP 변이체에 이종인 fHBP 변이체를 발현하는 균주에 대한 면역 반응을 도출하였다.
조성물은 서열식별번호(SEQ ID NO): 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드; 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드; 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드; 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드; 및 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드를 포함한다.
한 실시양태에서, 조성물은 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 아디프산 디히드라지드 (ADH) 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것인 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드 (MenAAH-TT 접합체); 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 ADH 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것인 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드 (MenCAH-TT 접합체); 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드 (MenW-TT 접합체); 및 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드 (MenY-TT 접합체)를 포함한다.
한 측면에서, 본 발명은 (a) 지질화된 MenB rLP2086 서브패밀리 A 폴리펩티드 및 지질화된 MenB rLP2086 서브패밀리 B 폴리펩티드를 포함하는 제1 조성물; 및 (b) 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드; 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드; 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드; 및 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드를 포함하는 제2 조성물을 포함하는 키트에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 제1 조성물은 액체 조성물이고, 제2 조성물은 동결건조된 조성물이다. 또 다른 실시양태에서, 키트는 하기 면역원성 조성물: 메낙트라(MENACTRA)(R), 멘베오(MENVEO)(R), 아다셀(ADACEL)(R), 하브릭스(HAVRIX)(R), 가르다실(GARDASIL)(R), 레페박스(REPEVAX), 또는 그의 임의의 조합 중 어느 하나를 추가로 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 키트는 이부프로펜, 파라세타몰 및 아목시실린 중 어느 하나를 포함한다.
한 측면에서, 본 발명은 (i) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 및 (ii) 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 액체 조성물; 및 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 아디프산 디히드라지드 (ADH) 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것인 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드 (MenAAH-TT 접합체); 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 ADH 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것인 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드 (MenCAH-TT 접합체); 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드 (MenW-TT 접합체); 및 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드 (MenY-TT 접합체)를 포함하는 동결건조된 조성물을 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 동결건조된 조성물은 액체 조성물에 의해 재구성된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 방법은 fHBP 단백질을 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 14, 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 16, 서열식별번호: 17, 서열식별번호: 18, 서열식별번호: 19, 서열식별번호: 20, 서열식별번호: 21, 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 23, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 27, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 30, 서열식별번호: 31, 서열식별번호: 32, 서열식별번호: 33, 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 41, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 50, 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 54, 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 57, 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 59, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 61, 및 서열식별번호: 62 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.9% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다. 방법은 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드; 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드; 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드; 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드; 및 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함한다.
한 측면에서, 본 발명은 임의의 연령의 환자에서 면역 반응을 도출하는 방법에 관한 것이다. 방법은 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서 조성물은 폴리소르베이트-80을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서 조성물은 알루미늄을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 히스티딘을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 염화나트륨을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 폴리소르베이트-80, 알루미늄, 히스티딘 및 염화나트륨을 추가로 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드; 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드; 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드; 및 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드를 추가로 포함한다.
도 1 - 실시예 6에 기재된 MenACWY-TT 조성물의 부재 및 존재 하의 MnB 2가 rLP2086 조성물에 대한 오버레이된 IEX-HPC 크로마토그램.
도 2 - 실시예 7에 기재된 바와 같이, MenACWY-TT 조성물의 존재가 MnB 2가 rLP2086 조성물 순도의 평가를 방해하지 않는다는 것을 보여주는 RP-HPLC 크로마토그램의 오버레이.
도 3 - 실시예 14에 기재된 바와 같이, 조합된 MenABCWY 조성물에서의 rLP2086 단백질 순도 및 피크 비를 보여주는 RP-HPLC 크로마토그램의 오버레이.
도 4a - MnB rLP2086 서브패밀리 A A05 단백질의 1차 아미노산 서열 및
도 4b - MnB rLP2086 서브패밀리 A A05 단백질의 1차 구조.
도 5a - MnB rLP2086 서브패밀리 B B01 단백질의 1차 아미노산 서열 및
도 5b - MnB rLP2086 서브패밀리 B B01 단백질의 1차 구조.
도 6a - 엔. 메닌기티디스 혈청군 A 균주 (fHBP 변이체 B16 (PMB3257, MenA))로부터의 인자 H 결합 단백질 (fHBP) B16 (서열식별번호: 26)에 대한 아미노산 서열;
도 6b - 엔. 메닌기티디스 혈청군 C 균주로부터의 fHBP A10 (서열식별번호: 27) (fHBP 변이체 A10 (PMB5208, MenC 및 PMB5523, MenW));
도 6c - 엔. 메닌기티디스 혈청군 W 균주로부터의 fHBP A19 (서열식별번호: 28) (fHBP 변이체 A19 (PMB5248, MenW));
도 6d - 엔. 메닌기티디스 혈청군 W 균주로부터의 fHBP A10 (서열식별번호: 27) (fHBP 변이체 A10 (PMB5523, MenW));
도 6e - 엔. 메닌기티디스 혈청군 Y 균주로부터의 fHBP B47 (서열식별번호: 29) (fHBP 변이체 B47 (PMB5187, MenY));
도 6f - 엔. 메닌기티디스 혈청군 X 균주로부터의 fHBP B49 (서열식별번호: 30) (fHBP 변이체 B49 (PMB5540, MenX)).
도 7 - 혈청 살박테리아 활성, 수막구균 질환에 대한 보호의 상관관계. 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정 (hSBA)에서 ≥ 1:4의 역가는 수막구균 질환에 대한 보호의 확립된 상관관계이다.
도 8 - MenA, C, W, Y 및 X 시험 균주 선택.
도 9 - 시험 혈청의 하위세트가 무작위로 선택된 임상 시험의 관련 군의 개략도.
도 10 - FHbp 반응성 mAb MN 994-11을 사용한 유동 세포측정 실험으로부터 결정된 FHbp 표면 발현 수준 (MFI)의 분포. 혈청군 내의 각각의 균주에 대한 FHbp 표면 발현을 흑색 점으로 표시하고, 각각의 혈청군 내의 선택된 시험 균주에 대한 FHbp 표면 발현 수준은 유색 별로 표시한다.
도 11 - MenA PMB3257 (B16)에 대한 hSBA 반응률 (hSBA 역가 ≥ 1:8을 갖는 대상체의 백분율). MenBFHbp의 경우 면역화전 (제0개월) 및 용량 1, 2, 및 3의 1개월 후에 수집된 혈청에 대한 반응률 및 95% 신뢰 구간이 제시된다. 수득된 기하 평균 역가 (GMT)는 각각 2, 3, 4 및 5였다. 양성 대조군에서의 대상체에 대한 반응률은 백신접종 전에 3%였고, MCV4를 제공받고 1개월 후에는 97%였다. 양성 대조군에 대한 GMT는 각각 2 및 95였다.
도 12 - MenC PMB5208 (A10)에 대한 hSBA 반응률 (hSBA 역가 ≥ 1:8을 갖는 대상체의 백분율). MenBFHbp의 경우 면역화전 (제0개월) 및 용량 1, 2, 및 3의 1개월 후에 수집된 혈청에 대한 반응률 및 95% 신뢰 구간이 제시된다. 수득된 GMT는 각각 4, 8, 12 및 29였다. 양성 대조군에서의 대상체에 대한 반응률은 백신접종 전에 20%였고, MCV4를 제공받고 1개월 후에는 90%였다. 양성 대조군에 대한 GMT는 각각 3 및 119였다.
도 13 - MenW PMB5248 (A19)에 대한 hSBA 반응률 (hSBA 역가 ≥ 1:8을 갖는 대상체의 백분율). MenBFHbp의 경우 면역화전 (제0개월) 및 용량 1, 2, 및 3의 1개월 후에 수집된 혈청에 대한 반응률 및 95% 신뢰 구간이 제시된다. 수득된 GMT는 각각 4, 18, 47 및 77이었다. 양성 대조군에서의 대상체에 대한 반응률은 백신접종 전 40%였고, MCV4를 제공받고 1개월 후에는 97%였다. 양성 대조군에 대한 GMT는 각각 5 및 88이었다.
도 14 - MenW PMB5523 (A10)에 대한 hSBA 반응률 (hSBA 역가 ≥ 1:8을 갖는 대상체의 백분율). MenBFHbp의 경우 면역화전 (제0개월) 및 용량 1, 2, 및 3의 1개월 후에 수집된 혈청에 대한 반응률 및 95% 신뢰 구간이 제시된다. 수득된 GMT는 각각 7, 15, 21, 및 42였다. 양성 대조군에서의 대상체에 대한 반응률은 백신접종 전 55%였고, MCV4를 제공받고 1개월 후에는 97%였다. 양성 대조군에 대한 GMT는 각각 8 및 60이었다.
도 15 - MenY PMB5187 (B47)에 대한 hSBA 반응률 (hSBA 역가 ≥ 1:8을 갖는 대상체의 백분율). MenBFHbp의 경우 면역화전 (제0개월) 및 용량 1, 2, 및 3의 1개월 후에 수집된 혈청에 대한 반응률 및 95% 신뢰 구간이 제시된다. 수득된 GMT는 각각 3, 7, 31 및 58이었다. 양성 대조군에서의 대상체에 대한 반응률은 백신접종 전 13%였고, MCV4를 제공받고 1개월 후에는 97%였다. 양성 대조군에 대한 GMT는 각각 3 및 79였다.
도 16 - MenX PMB5540 (B49)에 대한 hSBA 반응률 (hSBA 역가 ≥ 1:8을 갖는 대상체의 백분율). MenBFHbp의 경우 면역화전 (제0개월) 및 용량 1, 2, 및 3의 1개월 후에 수집된 혈청에 대한 반응률 및 95% 신뢰 구간이 제시된다. 수득된 GMT는 각각 2, 3, 7 및 20이었다. 양성 대조군에서의 대상체에 대한 반응률은 백신접종 전 0%였고, MCV4 백신을 제공받고 1개월 후에는 0%였다. 양성 대조군에 대한 GMT는 각각 2 및 2였다.
서열 식별자
서열식별번호: 1은 재조합 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A05 폴리펩티드 항원에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 2는 재조합 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B01 폴리펩티드 항원에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 3은 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 2의 위치 1-4의 아미노산 잔기를 제시한다.
서열식별번호: 4는 재조합 네이세리아 서브패밀리 A LP2086 폴리펩티드 (rLP2086) (A05) 폴리펩티드의 N-말단의 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 5는 네이세리아 서브패밀리 A LP2086 M98250771 폴리펩티드 (A05) 폴리펩티드의 N-말단의 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 6은 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B153에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 7은 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A04에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 8은 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A05에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 9는 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A12에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 10은 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A22에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 11은 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B02에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 12는 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B03에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 13은 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B09에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 14는 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B22에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 15는 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B24에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 16은 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B44에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 17은 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B16에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 18은 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A07에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 19는 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A19에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 20은 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A06에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 21은 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A15에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 22는 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A29에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 23은 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B15에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 24는 재조합 네이세리아 서브패밀리 B LP2086 폴리펩티드 (rLP2086) (B01) 폴리펩티드의 N-말단의 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 25는 네이세리아 서브패밀리 B LP2086 CDC-1573 폴리펩티드 (B01) 폴리펩티드의 N-말단의 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 26은 인자 H 결합 단백질 (fHBP) B16을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 A 균주에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 27은 fHBP A10을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 C 균주에 대한 아미노산 서열을 제시한다. 서열식별번호: 27은 또한 fHBP A10을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 W 균주에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 28은 fHBP A19를 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 W 균주에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 29는 fHBP B47을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 Y 균주에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 30은 fHBP B49를 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 31은 비-지질화된 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B16에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 32는 비-지질화된 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A07에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 33은 비-지질화된 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A19에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 34는 비-지질화된 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A06에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 35는 비-지질화된 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A15에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 36은 비-지질화된 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A29에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 37은 비-지질화된 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B15에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 38은 인자 H 결합 단백질 (fHBP) B16을 발현하는 비-지질화된 엔. 메닌기티디스 혈청군 A 균주에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 39는 fHBP A10을 발현하는 비-지질화된 엔. 메닌기티디스 혈청군 C 균주에 대한 아미노산 서열을 제시한다. 서열식별번호: 39는 또한 fHBP A10을 발현하는 비-지질화된 엔. 메닌기티디스 혈청군 W 균주에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 40은 fHBP A19를 발현하는 비-지질화된 엔. 메닌기티디스 혈청군 W 균주에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 41은 fHBP B47을 발현하는 비-지질화된 엔. 메닌기티디스 혈청군 Y 균주에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 42는 fHBP B49를 발현하는 비-지질화된 엔. 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 43은 비-지질화된 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B44에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 44는 비-지질화된 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B09에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 45는 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B09에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 46은 비-지질화된 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A05에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 47은 비-지질화된 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B01에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 48은 아미노산 위치 1에 N-말단 Cys를 포함하는 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B01에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 49는 아미노산 위치 1에 N-말단 Cys를 포함하는 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B15에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 50은 아미노산 위치 1에 N-말단 Cys를 포함하는 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B16에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 51은 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B22에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 52는 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A22에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 53은 비-지질화된 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A12에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 54는 비-지질화된 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A22에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 55는 아미노산 위치 1에 N-말단 Cys를 포함하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 B, 2086 변이체 A62에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 56은 비-지질화된 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A62에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 57은 아미노산 위치 1에 N-말단 Cys를 포함하는 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A29에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 58은 비-지질화된 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B22에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 59는 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A05에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 60은 비-지질화된 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A05에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 61은 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B24에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 62는 엔. 메닌기티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B24에 대한 아미노산 서열을 제시한다.
본 발명자들은 놀랍게도 적어도 하나의 인자 H 결합 단백질 (fHBP) 및 적어도 하나의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드 접합체를 포함하는 조성물을 발견하였다. 조성물은 놀랍게도 안정하고, 다중-성분 조성물 중의 fHBP 변이체에 동종인 fHBP 변이체를 발현하는 균주에 대한 면역 반응, 및 다중-성분 조성물 중의 fHBP 변이체에 이종인 fHBP 변이체를 발현하는 균주에 대한 면역 반응을 도출하였다. 본 발명자들은 추가로, 놀랍게도 fHBP 폴리펩티드가 소아, 예컨대 예를 들어, 12개월 이상의 인간에서 면역 반응을 효과적으로 도출한다는 것을 발견하였다. 또한, 본 발명자들은 놀랍게도 fHBP 폴리펩티드가 엔. 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 면역 반응을 효과적으로 도출한다는 것을 발견하였다.
본 발명자들은 놀랍게도 (a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; (b) 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드; (c) 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 아디프산 디히드라지드 (ADH) 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것인 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드 (MenAAH-TT 접합체); (d) 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 ADH 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것인 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드 (MenCAH-TT 접합체); (e) 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드 (MenW-TT 접합체); (f) 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드 (MenY-TT 접합체)를 포함하는 조성물을 발견하였다. 조성물은, 놀랍게도 액체 MnB 2가 rLP2086 조성물에 의해 용이하게 재구성되는 동결건조된 MenACWY-TT 조성물을 포함하며, 여기서 조성물은 단일 바이알 내에 있다. 본 발명자들은 동결건조된 MenACWY-TT 조성물 및 액체 MnB 2가 rLP2086 조성물이 상용성이고, 재구성 후에 실온에서 적어도 24시간 동안 안정하다는 것을 발견하였다.
또한, 본 발명자들은 MnB 2가 rLP2086 조성물이 엔. 메닌기티디스 혈청군 B에 대해서 뿐만 아니라, B 외의 다른 엔. 메닌기티디스 혈청군에 대해서도 살박테리아 항체를 도출한다는 것을 추가로 발견하였다. 예를 들어, MnB 2가 rLP2086 조성물은 적어도 엔. 메닌기티디스 혈청군 A, C, W, Y 및 X에 대한 살박테리아 항체를 도출하였다. MnB 2가 rLP2086 조성물이 엔. 메닌기티디스 혈청군 X에 대해 살박테리아 항체를 도출하였다는 놀라운 발견은 MnB 2가 rLP2086 조성물이 적어도 2종의 다양한 네이세리아 메닌기티디스 혈청군에 대해 인간에서 광범위하게 교차반응성인 살박테리아 면역 반응을 도출한다는 것을 나타낸다.
추가로, 본 발명자들은 놀랍게도, 연구 진입시 ≥24개월 내지 <4세 연령의 건강한 대상체에서 2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B (MnB) 시험 균주를 사용하여 수행한, 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정 (hSBA)에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 발견하였다. 본 발명자들은 또한 놀랍게도, 연구 진입시 ≥4세 내지 <10세 연령의 건강한 대상체에서 2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용하여 수행한, hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 발견하였다. 본 발명자들은 추가로 놀랍게도, 연구 진입시 ≥24개월 내지 <10세 연령의 건강한 대상체에서 (즉, 조합 연령층에서) 2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용하여 수행한, hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 발견하였다. 본 발명자들은 또한 놀랍게도, 연구 진입시 ≥24개월 내지 <4세 연령의 건강한 대상체에서, 연구 진입시 ≥ 4세 내지 <10세 연령의 건강한 대상체에서, 및 조합 연령층에서 2가 rLP2086에 의한 제2 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종의 6개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용하여 수행한, hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 발견하였다. 면역 반응은 연구 진입시 ≥24개월 내지 <4세 연령의 건강한 대상체에서, 연구 진입시 ≥ 4세 내지 <10세 연령의 건강한 대상체에서, 및 조합 연령층에서, 명시된 시점에, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용하여 수행한 hSBA에 의해 측정된 바와 같이, 추가의 종점까지 추가로 기재되었다.
또한, 본 발명자들은 놀랍게도, 연구 진입시 12 내지 <18개월 연령의 건강한 유아에서, 2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B (MnB) 균주를 사용하여 수행한, 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정 (hSBA)에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 발견하였다. 본 발명자들은 또한 놀랍게도, 연구 진입시 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서, 2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 균주를 사용하여 수행한, hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 발견하였다. 본 발명자들은 추가로 놀랍게도, 연구 진입시 12 내지 <24개월 연령의 건강한 유아 (즉, 둘 다의 조합 연령층)에서, 2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용하여 수행한, hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 발견하였다. 본 발명자들은 또한 놀랍게도, 연구 진입시 12 내지 <18개월 및 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서, 및 둘 다의 조합 연령층에서, 제2 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종 적어도 6개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용하여 수행한, hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 발견하였다. 예를 들어, hSBA는 연구 진입시 12 내지 <18개월 및 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서, 및 둘 다의 조합 연령층에서, 제3 백신접종의 12, 24, 36 및 48개월 후를 포함한 임의의 시점에 측정될 수 있다. 면역 반응은 연구 진입시 12 내지 <18개월 및 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서, 및 둘 다의 조합 연령층에서, 2가 rLP2086을 사용한 제2 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종의 적어도 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용하여 수행한 hSBA에 의해 측정된 바와 같이, 추가의 종점까지 추가로 기재되었다. 예를 들어, hSBA는 연구 진입시 12 내지 <18개월 및 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서, 및 둘 다의 조합 연령층에서, 2가 rLP2086을 사용한 제3 백신접종의 6, 12, 24, 36, 및 48개월 후를 포함한 임의의 시점에 측정될 수 있다. 면역 반응은 또한, 연구 진입시 12 내지 <18개월 및 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서, 및 둘 다의 조합 연령층에서, 제2 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종의 적어도 1개월 후에, LP2086 서브패밀리 A 및 B 단백질을 발현하는 2차 MnB 시험 균주에 대해 hSBA에 의해 측정된 바와 같이, 추가의 종점까지 기재되었다. 예를 들어, hSBA는 연구 진입시 12 내지 <18개월 및 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서, 및 둘 다의 조합 연령층에서, 제3 백신접종의 6, 12, 24, 36, 및 48개월 후를 포함한 임의의 시점에 측정될 수 있다.
따라서, 한 측면에서, 본 발명은 임의의 연령의 환자에서 면역 반응을 도출하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 인간은 적어도 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주 또는 12주 연령이다. 예를 들어, 바람직한 실시양태에서, 인간은 적어도 6주 연령이다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 수막구균 군 A, C, W-135, 및 Y 접합체 백신, 예컨대 니멘릭스(NIMENRIX)®는 6주 연령만큼 어린 유아에 적합하고, 6주 연령 이상의 임의의 인간에게 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간은 적어도 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 또는 12개월 연령이다. 예를 들어, 바람직한 실시양태에서, 인간은 적어도 12개월 연령이다. 한 실시양태에서, 인간은 12 내지 18개월 연령이다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 18개월 연령의 환자에서 면역 반응을 도출하는 방법에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 인간은 18 내지 24개월 연령이다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 24개월 연령의 환자에서 면역 반응을 도출하는 방법에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 인간은 24개월 내지 10세 연령이다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 10세 이상의 환자에서 면역 반응을 도출하는 방법에 관한 것이다. 추가의 측면에서, 본 발명은 10세 내지 25세 연령의 환자에서 면역 반응을 도출하는 방법에 관한 것이다. 방법은 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서 조성물은 폴리소르베이트-80을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서 조성물은 알루미늄을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 히스티딘을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 염화나트륨을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 폴리소르베이트-80, 알루미늄, 히스티딘 및 염화나트륨을 추가로 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드; 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드; 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드; 및 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드를 추가로 포함한다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 수막구균 군 A, C, W-135, 및 Y 접합체 백신, 예컨대 니멘릭스®는 6주 연령만큼 어린 유아에 적합하고, 6주 연령 이상의 임의의 인간에게 투여될 수 있다.
예시적인 조성물의 추가 설명이 하기 기재된다.
조성물 및 백신
본 발명자들은 fHBP를 포함하는 조성물이 적어도 12개월 연령의 인간에서 효과적인 면역 반응을 도출한다는 것을 추가로 발견하였다. 조성물은 또한 엔. 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 면역 반응을 도출한다. 또한, 본 발명자들은 놀랍게도 적어도 하나의 인자 H 결합 폴리펩티드 (fHBP) 및 적어도 하나의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드 접합체를 포함하는 조성물을 발견하였다. 조성물은 놀랍게도 안정하고, 다중-성분 조성물 중의 fHBP 변이체에 동종인 fHBP 변이체를 발현하는 균주에 대한 면역 반응, 및 다중-성분 조성물 중의 fHBP 변이체에 이종인 fHBP 변이체를 발현하는 균주에 대한 면역 반응을 도출하였다. 한 실시양태에서, 조성물은 임의의 fHBP, 예컨대 예를 들어, 하기 폴리펩티드: B24, B16, B44, A22, B03, B09, A12, A19, A05, A07, A06, A15, A29, B01, A62, B15, 및 그의 임의의 조합 중 어느 하나를 포함한다. 바람직하게는, 조성물은 A05 및 B01 폴리펩티드의 조합을 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 조성물은 B24 및 A05 폴리펩티드의 조합을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 A05, A12, B09, 및 B44 폴리펩티드의 조합을 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 지질화된 fHBP를 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 비-지질화된 fHBP를 포함하지 않는다.
또 다른 실시양태에서, 조성물은 비-지질화된 fHBP, 예컨대 국제 특허 공개 번호 WO2012/032489, 미국 특허 공개 번호 US20120093852, 국제 특허 공개 번호 WO2013/132452, 및 미국 특허 공개 번호US20160030543에 기재된 비-지질화된 fHBP 중 어느 하나를 포함하며, 이들은 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 한 실시양태에서, 조성물은 적어도 1종의 비-지질화된 fHBP 및 적어도 1종의 지질화된 fHBP를 포함한다.
일부 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 14, 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 16, 서열식별번호: 17, 서열식별번호: 18, 서열식별번호: 19, 서열식별번호: 20, 서열식별번호: 21, 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 23, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 27, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 30, 서열식별번호: 31, 서열식별번호: 32, 서열식별번호: 33, 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 41, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 50, 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 54, 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 57, 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 59, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 61, 및 서열식별번호: 62 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.9% 동일성을 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 발명자들은 추가로, 놀랍게도 액체 MnB 2가 rLP2086 조성물이 동결건조된 MenACWY-TT 조성물을 용이하게 재구성할 수 있고, 조합된 조성물이 상용성이고 안정하다는 것을 발견하였다.
한 측면에서, 본 발명은 네이세리아 메닌기티디스에 대한 조성물에 관한 것이다. 조성물은 (a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; (b) 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드; (c) 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 아디프산 디히드라지드 (ADH) 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것인 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드 (MenAAH-TT 접합체); (d) 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 ADH 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것인 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드 (MenCAH-TT 접합체); (e) 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드 (MenW-TT 접합체); (f) 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드 (MenY-TT 접합체)를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 MnB 2가 rLP2086 조성물 및 MenACWY-TT 조성물의 조합물을 포함하는 조성물에 관한 것이다. MnB 2가 rLP2086 조성물은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B의 다중 균주에 대해 효과적인 광범위한 보호 면역 반응을 유도하는 단일 엔. 메닌기티디스 폴리펩티드 성분을 포함하는 조성물을 지칭한다. 구체적으로, 한 실시양태에서, MnB 2가 rLP2086 조성물은 MnB rLP2086 서브패밀리 A 단백질 (서열식별번호: 1) 및 MnB rLP2086 서브패밀리 B 단백질 (서열식별번호: 2)을 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 융합 단백질을 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 조성물은 키메라 단백질을 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 조성물은 하이브리드 단백질을 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 조성물은 펩티드 단편을 추가로 포함하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 fHBP가 아닌 네이세리아 폴리펩티드를 추가로 포함하지 않는다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 조성물은 PorA 단백질을 포함하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 NadA 단백질을 포함하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 네이세리아 헤파린 결합 항원 (NHBA)을 추가로 포함하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 네이세리아 외부 막 소포 (OMV)를 추가로 포함하지 않는다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드 이외의 항원을 추가로 포함하지 않는다. 바람직한 실시양태에서, MnB 2가 rLP2086 조성물은 폴리소르베이트-80을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, MnB 2가 rLP2086 조성물은 히스티딘 완충제를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, MnB 2가 rLP2086 조성물은 염화나트륨을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, MnB 2가 rLP2086 조성물은 인산알루미늄을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, MnB 2가 rLP2086 조성물은 폴리소르베이트-80, 히스티딘 완충제, 염화나트륨, 및 인산알루미늄을 추가로 포함한다. 바람직하게는, MnB 2가 rLP2086 조성물은 액체 제제이고, 여기서 폴리펩티드는 0.5 mg/mL 인산알루미늄 (AlPO4)의 존재 하의 10 mM 히스티딘 완충제, pH 6.0, 150 mM 염화나트륨 (NaCl) 중의 120 mcg/mL/서브패밀리로서 제제화되며, 이는 추가로 0.5 mL 용량 중에 0.018 mg 폴리소르베이트-80을 포함한다.
MenACWY-TT 조성물은, 각각 독립적으로 TT에 각각 ~3, ~3, ~1.5 및 ~1.3의 비 (TT 대 폴리사카라이드)로 접합된, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A, C, W-135 및 Y의 정제된 캡슐 폴리사카라이드를 포함하는 조성물을 지칭한다. 구체적으로, 조성물은 (c) 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 아디프산 디히드라지드 (ADH) 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것인 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드 (MenAAH-TT 접합체); (d) 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 ADH 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것인 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드 (MenCAH-TT 접합체); (e) 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드 (MenW-TT 접합체); (f) 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드 (MenY-TT 접합체)를 포함한다. 바람직하게는, MenACWY-TT 조성물은 동결건조된 분말로서 제공된다.
MenAAH-TT, MenCAH-TT, MenW-TT, 및 MenY-TT 접합체는 하기 단계를 통해 제조된다: 폴리사카라이드 약물 물질 중간체의 제조, TT 약물 물질 중간체의 제조, 폴리사카라이드의 마이크로유동화, 폴리사카라이드의 유도체화 (MenAAH-TT 및 MenCAH-TT 공정의 경우에만), TT의 추가의 정제, 및 개별 폴리사카라이드의 TT에의 접합.
MenAAH-TT 접합체와 관련하여, MenA 폴리사카라이드는 먼저 분자 크기 및 점도를 감소시키기 위해 마이크로유동화된 다음, 1-시아노-4-디메틸아미노-피리디늄 테트라플루오로보레이트 (CDAP)에 의한 시아닐화를 통해 활성화된다. 활성화된 MenA는 아디프산 디히드라지드 (ADH)에 의해 유도체화되어 MenAAH를 형성한다. MenAAH 및 파상풍 톡소이드 (TT)는 카르보디이미드-매개 축합 (1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 (EDAC) 커플링 기술)을 통해 커플링되어, MenAAH-파상풍 톡소이드 접합체 (MenAAH-TT)를 형성한다.
MenCAH-TT 접합체와 관련하여, MenC 폴리사카라이드는 먼저 분자 크기 및 점도를 감소시키기 위해 마이크로유동화된 다음, CDAP에 의한 시아닐화를 통해 활성화된다. 활성화된 MenC는 아디프산 디히드라지드 (ADH)에 의해 유도체화되어 MenCAH를 형성한다. MenCAH 및 TT는 카르보디이미드-매개 축합 EDAC 커플링 기술을 통해 커플링되어, MenCAH-파상풍 톡소이드 (MenCAH-TT)를 형성한다.
MenW-TT 접합체와 관련하여, MenW 폴리사카라이드는 먼저 분자 크기 및 점도를 감소시키기 위해 마이크로유동화된 다음, CDAP에 의한 시아닐화를 통해 활성화된다. 활성화된 MenW는 TT에 직접 커플링되어 MenW-파상풍 톡소이드 (MenW-TT)를 형성한다.
MenY-TT 접합체와 관련하여, MenY 폴리사카라이드는 먼저 분자 크기 및 점도를 감소시키기 위해 마이크로유동화된 다음, CDAP에 의한 시안화를 통해 활성화된다. 활성화된 MenY는 TT에 직접 커플링되어 MenY-파상풍 톡소이드 (MenY-TT)를 형성한다.
또 다른 측면에서, 본 발명자들은 놀랍게도 최대 2종의 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 균주로부터 유래된 폴리펩티드 항원이 엔. 메닌기티디스 혈청군 B의 다중 균주에 대해 효과적인 광범위한 보호 면역 반응을 유도한다는 것을 발견하였다. 따라서, 한 실시양태에서, 조성물은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B fHBP 서브패밀리 A M98250771 균주 및/또는 엔. 메닌기티디스 혈청군 B fHBP 서브패밀리 B CDC1573 균주로부터 유래되지 않은 폴리펩티드는 추가로 포함하지 않는다.
한 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 1에 대해 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 추가로 포함하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 2에 대해 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 추가로 포함하지 않는다. 예를 들어 조성물은 서열식별번호: 1 및/또는 서열식별번호: 2의 전장에 대해 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 추가로 포함하지 않는다.
한 실시양태에서, 조성물은 폴리소르베이트-80, 알루미늄, 히스티딘 및 염화나트륨을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드 약 60μg, 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드 약 60μg, 각각의 폴리펩티드에 대해 2.8 몰비의 폴리소르베이트-80, 인산알루미늄으로서 0.5 mg 알루미늄/ml, 10 mM 히스티딘, 및 150 mM 염화나트륨을 포함하며, 여기서 조성물은 바람직하게는 약 0.5 ml의 총 부피를 갖는다.
또 다른 측면에서, 조성물은 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드 약 120 μg/ml, 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드 약 120 μg/ml, 각각의 폴리펩티드에 대해 2.8 몰비의 폴리소르베이트-80, 인산알루미늄으로서 0.5 mg 알루미늄/ml, 10 mM 히스티딘, 및 150 mM 염화나트륨을 포함한다.
추가의 측면에서, 조성물은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드 60 μg; b) 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드 60 μg; c) 18 μg 폴리소르베이트-80; d) 250 μg 알루미늄; e) 780 μg 히스티딘, 및; f) 4380 μg 염화나트륨을 포함한다.
예시적인 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 제1 지질화된 폴리펩티드 약 60 μg, 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 제2 지질화된 폴리펩티드 약 60 μg, 제1 지질화된 폴리펩티드에 대해, 및 제2 지질화된 폴리펩티드에 대해 2.8 몰비의 폴리소르베이트-80, 0.5 mg/ml 인산알루미늄, 10 mM 히스티딘, 및 150 mM 염화나트륨을 포함하며, 여기서 조성물은 약 0.5 ml의 총 부피를 갖는다. 예시적 실시양태에서, 조성물은 멸균 등장성 완충된 액체 현탁액이다. 예시적 실시양태에서, 조성물은 pH 6.0을 갖는다. 예시적 실시양태에서, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드는 알루미늄에 흡착된다.
한 실시양태에서, 조성물은 평균 TT/폴리사카라이드 비 3을 갖는 MenAAH-TT 접합체; 평균 TT/폴리사카라이드 비 3을 갖는 MenCAH-TT 접합체; 평균 TT/폴리사카라이드 비 1.5를 갖는 MenW-TT 접합체; 및 평균 TT/폴리사카라이드 비 1.3을 갖는 MenY-TT 접합체를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 5 mcg MenA 폴리사카라이드 및 ~ 15 mcg TT를 갖는 MenAAH-TT 접합체; 5 mcg MenC 폴리사카라이드 및 ~ 15 mcg TT를 갖는 MenCAH-TT 접합체; 5 mcg MenW 폴리사카라이드 및 ~ 7.5 mcg TT를 갖는 MenW-TT 접합체; 및 5 mcg MenY 폴리사카라이드 및 ~6.5 mcg TT를 갖는 MenY-TT 접합체를 포함한다. 조성물은 트리스-HCl, 수크로스, 및 염화나트륨을 추가로 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 조성물은 MenA 폴리사카라이드; MenC 폴리사카라이드; MenW 폴리사카라이드; 및 MenY 폴리사카라이드 및 TT 담체 단백질을 포함하는 MenAAH-TT 접합체; MenCAH-TT 접합체; MenW-TT 접합체; 및 MenY-TT 접합체를 포함한다. 조성물은 수크로스 및 트로메타놀을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 조성물은 10 μg/mL MenA 폴리사카라이드; 10 μg/mL MenC 폴리사카라이드; 10 μg/mL MenW 폴리사카라이드; 및 10 μg/mL MenY 폴리사카라이드; 88 μg/mL TT 담체 단백질; 164 mM 수크로스; 및 1.6 mM 트로메타놀을 포함한다.
한 실시양태에서, 조성물은 약 0.5 ml의 총 부피를 갖는다. 한 실시양태에서, 조성물의 제1 용량은 약 0.5 ml의 총 부피를 갖는다. "제1 용량"은 제0일에 투여되는 조성물의 용량을 지칭한다. "제2 용량" 또는 "제3 용량"은 제1 용량에 후속적으로 투여되는 조성물의 용량을 지칭하며, 이는 제1 용량과 동일한 양일 수 있거나 그렇지 않을 수 있다.
한 측면에서, 본 발명은 액체 MnB 2가 rLP2086 조성물로 재구성된, 동결건조된 MenACWY-TT 조성물로부터 생성된 액체 면역원성 조성물에 관한 것이다. 재구성은 액체 희석제를 첨가함으로써 건조 동결건조 조성물을 액체 형태로 복원시키는 것을 지칭한다. 하나의 바람직한 실시양태에서, 액체 MnB 2가 rLP2086 조성물은 동결건조된 MenACWY-TT 조성물과 병행 투여되지 않고, 공투여되지 않고, 동시에 투여되지 않으며, 여기서 동결건조된 MenACWY-TT 조성물은 액체 MnB 2가 rLP2086 조성물이 아닌 액체 조성물에 의해 재구성된다. 예를 들어, 하나의 바람직한 실시양태에서, 동결건조된 MenACWY-TT 조성물은 염화나트륨 및 물로 이루어진 수성 희석제에 의해 재구성되지 않고, 후속적으로 액체 MnB 2가 rLP2086 조성물과 병행 투여되지 않고, 공투여되지 않고, 동시에 투여되지 않는다.
오히려, 바람직한 실시양태에서, 동결건조된 MenACWY-TT 조성물은 인간에게 MnB 2가 rLP2086 조성물과 함께 1회, 즉 단일 투여로 투여된다. 생성된 단일 투여 (예를 들어, MenABCWY 조성물)는 제1 용기로부터의 MnB 2가 rLP2086 조성물을 제2 용기로부터의 동결건조된 MenACWY-TT 조성물과 혼합하는 것으로부터 이루어질 수 있다. 대안적으로, MenABCWY 조성물의 단일 투여는 MnB 2가 rLP2086 조성물 및 동결건조된 MenACWY-TT 조성물을 포함하는 하나의 (단일) 용기로부터 이루어질 수 있다. 백신 또는 면역원성 조성물을 위한 전달 장치는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 한 실시양태에서, MenABCWY 조성물은 이부프로펜, 파라세타몰 및 아목시실린 중 어느 하나와 병행 투여된다.
조성물은 인간에게 제1 용량을 투여한 후에 면역원성이다. 한 실시양태에서, 제1 용량은 총 부피로 약 0.5 ml이다.
조성물은 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정 (hSBA)에서 동일한 조건 하에 측정 시, 제1 용량을 제공하기 전 인간에서의 혈청 이뮤노글로불린의 살박테리아 역가보다 제1 용량을 제공한 후 인간에서 적어도 1-배를 초과하여 더 높은, 바람직하게는 적어도 2-배 더 높은 혈청 이뮤노글로불린의 살박테리아 역가를 유도한다.
살박테리아 역가 또는 살박테리아 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B에 대한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 살박테리아 역가 또는 살박테리아 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B fHBP 서브패밀리 A 균주 및 엔. 메닌기티디스 혈청군 B fHBP 서브패밀리 B 균주에 대한 것이다. 가장 바람직하게는, 살박테리아 역가 또는 살박테리아 면역 반응은 적어도 엔. 메닌기티디스 혈청군 B, fHBP 서브패밀리 B, B01 균주에 대한 것이다.
한 실시양태에서, 조성물은 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정에서 동일한 조건 하에 측정 시, 조성물의 용량을 제공하기 전 인간에서의 혈청 이뮤노글로불린의 살박테리아 역가보다 상기 용량을 제공한 후 인간에서 적어도 1-배를 초과하여 더 높은, 예컨대 예를 들어, 적어도 1.01-배, 1.1-배, 1.5-배, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배, 11-배, 12-배, 13-배, 14-배, 15-배, 또는 16-배 더 높은 혈청 이뮤노글로불린의 살박테리아 역가를 유도한다.
한 실시양태에서, 조성물은 면역원성 조성물이다. 한 실시양태에서, 조성물은 인간을 위한 면역원성 조성물이다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 백신이다. "백신"은 항원에 특이적인 면역 반응을 유도하는 적어도 하나의 에피토프를 함유하는, 항원을 포함하는 조성물을 지칭한다. 백신은 피하, 경구, 구비강내, 또는 비강내 투여 경로에 의해 대상체에게 직접 투여될 수 있다. 바람직하게는, 백신은 근육내로 투여된다. 한 실시양태에서, 조성물은 인간 백신이다. 한 실시양태에서, 조성물은 엔. 메닌기티디스에 대한 면역원성 조성물이다.
한 실시양태에서, 조성물은 액체 조성물이다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 액체 현탁액 조성물이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 조성물은 동결건조되지 않는다.
제1 폴리펩티드; MNB RLP2086 서브패밀리 A (A05) 단백질
한 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 제1 폴리펩티드를 포함한다. 폴리펩티드는 엔. 메닌기티디스 균주 M98250771로부터의 변형된 인자 H 결합 단백질 (fHBP)이다. fHBP의 설명은 WO2012032489 및 미국 특허 공개 US2012/0093852에 개시되어 있고, 이들은 각각 그 전문이 참조로 포함된다. 폴리펩티드는 폴리펩티드의 3개의 위치에서 공유 연결된 3개의 우세한 지방산 C16:0, C16:1, 및 C18:1에 의해 N-말단 지질화된다. 제1 폴리펩티드는 총 258개의 아미노산을 포함한다.
MnB rLP2086 A05 단백질의 대표적인 1차 구조를 도 4에 제시한다. 단백질의 1차 구조는 N-말단 시스테인 및 글리세릴 모이어티를 제외하고 (이는 완전 화학식을 사용하여 예시됨) 모든 아미노산에 대해 단일 문자 표기법을 사용하여 도 4에 예시된다. 이러한 구조는 N-말단 시스테인 잔기가 지질화된 단백질 서열의 1차 구조를 포함한다. 단백질 N-말단의 N-말단 시스테인 잔기의 아미노 기는 지방산 (R1)에 부착되어 아미드 연결을 형성하고, 시스테이닐 술프히드릴 기는 2개의 에스테르-결합된 지방산 (R2)을 함유하는 글리세롤 모이어티에 부착된다. R1의 구조는 헥사데칸산 (C16:0)인 것으로 추정되고, R2의 구조는 MnB rLP2086 이소형에 따라 달라진다.
제1 폴리펩티드는 엔. 메닌기티디스 균주 M98250771로부터의 상응하는 야생형 서열과 비교하여 폴리펩티드의 N-말단 영역에 도입된 2개의 변형을 포함한다. 제2 위치의 글리신은 클로닝 부위 도입의 결과로서 부가된다. 제2 변형은 4개의 아미노산의 결실을 포함한다. 따라서, 한 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 N-말단에 C-G-S-S 서열 (서열식별번호: 3)을 포함한다. 서열식별번호: 1, 처음 4개의 아미노산 잔기를 참조한다.
제1 폴리펩티드 서열과 야생형 네이세리아 서열 사이의 N-말단 차이를 하기 제시한다. 따라서, 한 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열의 적어도 처음 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13개, 또는 그 초과의 아미노산 잔기를 포함한다. 바람직하게는 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 1의 적어도 처음 4개, 보다 바람직하게는 적어도 처음 6개, 및 가장 바람직하게는 적어도 처음 8개의 아미노산 잔기를 포함한다.
재조합 및 네이세리아 서브패밀리 A LP2086 폴리펩티드의 예측된 N-말단 서열의 비교
Figure pct00001
한 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서 제1 폴리펩티드는 총 258개의 아미노산을 갖는다. 한 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 1에 대해 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열은 포함하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 아미노산 서열 KDN을 포함한다. 예를 들어, 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 73-75를 참조한다. 또 다른 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 폴리펩티드의 N-말단에 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 폴리펩티드의 N-말단에 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 관련 기술분야에 공지된 표준 기술을 사용하여 재조합 숙주 세포에서 용이하게 발현된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 1의 N- 및/또는 C-도메인 상의 살박테리아 에피토프를 포함한다. 한 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열의 적어도 처음 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100개의 아미노산 잔기를 포함한다. 바람직하게는, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 1의 적어도 처음 2개, 보다 바람직하게는 적어도 처음 4개, 및 가장 바람직하게는, 적어도 처음 8개의 아미노산 잔기를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열의 적어도 마지막 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100개의 아미노산 잔기를 포함한다.
한 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 폴리펩티드를 약 30 μg/ml 포함한다. 하나의 바람직한 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 폴리펩티드를 약 60 μg 포함한다. 하나의 바람직한 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 폴리펩티드를 약 60 μg 포함하고, 여기서 조성물은 바람직하게는 0.5 ml의 총 부피를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 폴리펩티드를 약 120 μg/ml 포함한다.
제2 폴리펩티드; MnB rLP2086 서브패밀리 B (B01) 단백질
한 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 제2 폴리펩티드를 포함한다. 폴리펩티드는 엔. 메닌기티디스 균주 CDC1573으로부터의 인자 H 결합 단백질 (fHBP)이다. fHBP의 설명은 WO2012032489 및 US 특허 공개 US2012/0093852에 개시되어 있고, 이들은 각각 그 전문이 참조로 포함된다. 폴리펩티드는 폴리펩티드의 3개의 위치에서 공유 연결된 3개의 우세한 지방산 C16:0, C16:1, 및 C18:1에 의해 N-말단 지질화된다. 제2 폴리펩티드는 총 261개의 아미노산을 포함한다.
MnB rLP2086 B01 단백질의 대표적인 1차 구조를 도 5에 제시한다. 단백질의 1차 구조는 N-말단 시스테인 및 글리세릴 모이어티를 제외하고 (이는 완전 화학식을 사용하여 예시됨) 모든 아미노산에 대해 단일 문자 표기법을 사용하여 도 5에 예시된다. 이러한 구조는 N-말단 시스테인 잔기가 지질화된 단백질 서열의 1차 구조를 포함한다. 단백질 N-말단의 N-말단 시스테인 잔기의 아미노 기는 지방산 (R1)에 부착되어 아미드 연결을 형성하고, 시스테이닐 술프히드릴 기는 2개의-에스테르 결합된 지방산 (R2)을 함유하는 글리세롤 모이어티에 부착된다. R1의 구조는 헥사데칸산 (C16:0)인 것으로 추정되고, R2의 구조는 rLP2086 이소형에 따라 달라진다.
제2 폴리펩티드는 엔. 메닌기티디스 균주 CDC-1573으로부터의 상응하는 야생형 서열과 비교하여 rLP2086 서브패밀리 B 단백질에 대한 N-말단 영역에 도입된 1개의 변형을 포함한다. 제2 위치의 글리신은 클로닝 부위 도입의 결과이다.
원래의 네이세리아 서열과의 N-말단 차이를 하기 제시한다.
재조합 및 네이세리아 서브패밀리 B LP2086 단백질의 예측된 N-말단 서열의 비교
Figure pct00002
한 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 N-말단에 C-G-S-S 서열 (서열식별번호: 3)을 포함한다. 서열식별번호: 2의 처음 4개의 아미노산 잔기를 참조한다.
Figure pct00003
한 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서 제2 폴리펩티드는 총 261개의 아미노산을 갖는다. 한 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 2에 대해 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드는 추가로 포함하지 않는다. 바람직한 실시양태에서, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드는 각각의 폴리펩티드의 N-말단에서 C-G-S-S (서열식별번호: 3) 서열을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 관련 기술분야에 공지된 표준 기술을 사용하여 재조합 숙주 세포에서 용이하게 발현된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 2의 N- 및/또는 C-도메인 상의 살박테리아 에피토프를 포함한다. 한 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열의 적어도 처음 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100개의 아미노산 잔기를 포함한다. 바람직하게는, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 2의 적어도 처음 2개, 보다 바람직하게는 적어도 처음 4개, 및 가장 바람직하게는, 적어도 처음 8개의 아미노산 잔기를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열의 적어도 마지막 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100개의 아미노산 잔기를 포함한다.
한 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 폴리펩티드를 약 30 μg/ml 포함한다. 하나의 바람직한 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 폴리펩티드를 약 60 μg 포함한다. 하나의 바람직한 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 폴리펩티드를 약 60 μg 포함하고, 여기서 조성물은 바람직하게는 0.5 ml의 총 부피를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 폴리펩티드를 120 μg/ml 포함한다.
사카라이드
본 명세서 전반에 걸쳐 용어 "사카라이드"는 폴리사카라이드 또는 올리고사카라이드를 나타낼 수 있고, 둘 다를 포함한다. 폴리사카라이드는 박테리아로부터 단리되거나, 또는 박테리아로부터 단리되고 공지된 방법에 의해 및 임의로 마이크로유동화에 의해 어느 정도 크기 조절된다. 폴리사카라이드는 폴리사카라이드 샘플의 점도를 감소시키기 위해 및/또는 접합된 생성물에 대한 여과성을 개선시키기 위해 크기 조절될 수 있다. 올리고사카라이드는 적은 수의 반복 단위 (전형적으로 5-30개의 반복 단위)를 갖고, 전형적으로 가수분해된 폴리사카라이드이다.
각각의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드는 TT, DT, CRM197, TT의 단편 C 및 단백질 D로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 담체 단백질에 접합될 수 있다. 하나 이상의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드가 다른 것으로부터의 상이한 담체 단백질에 접합될 수 있지만, 한 실시양태에서 이들은 모두 동일한 담체 단백질에 접합된다. 예를 들어, 이들은 모두 TT, DT, CRM197, TT의 단편 C 및 단백질 D로 이루어진 군으로부터 선택된 동일한 담체 단백질에 접합될 수 있다. 이와 관련하여 CRM197 및 DT는 이들이 단지 1개의 아미노산만큼 상이하기 때문에 동일한 담체 단백질인 것으로 간주될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 존재하는 모든 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드는 TT에 접합된다.
단백질 담체가 조성물 중의 2개 이상의 사카라이드에 대해 동일한 경우, 사카라이드는 단백질 담체의 동일한 분자에 접합될 수 있다 (담체 분자가 그에 접합된 2개 초과의 상이한 사카라이드를 가짐) [예를 들어 WO04/083251 참조; 예를 들어 단일 담체 단백질은 MenA 및 MenC; MenA 및 MenW; MenA 및 MenY; MenC 및 MenW; MenC 및 MenY; Men W 및 MenY; MenA, MenC 및 MenW; MenA, MenC 및 MenY; MenA, MenW 및 MenY; MenC, MenW 및 MenY; MenA, MenC, MenW 및 MenY에 접합될 수 있음]. 대안적으로, 사카라이드는 각각 단백질 담체의 상이한 분자에 개별적으로 접합될 수 있다 (각각의 단백질 담체 분자가 그에 접합된 단지 하나의 유형의 사카라이드를 가짐).
한 실시양태에서, 적어도 2개의 상이한 사카라이드 접합체가 동일한 유형의 담체 단백질에 개별적으로 접합되고, 여기서 하나 이상의 사카라이드(들)는 단백질 담체 상의 제1 유형의 화학적 기를 통해 담체 단백질에 접합되고, 하나 이상의 사카라이드(들)는 단백질 담체 상의 제2 (상이한) 유형의 화학적 기를 통해 담체 단백질에 접합된다.
한 실시양태에서, 2개의 접합체는 동일한 담체에 연결되었지만 상이한 접합 화학에 의한 동일한 사카라이드를 수반한다. 대안적 실시양태에서, 2개의 상이한 사카라이드는 단백질 담체 상의 상이한 기에 접합된다.
"동일한 유형의 담체 단백질에 개별적으로 접합된"은 사카라이드가 동일한 담체에 별개로 접합된 것을 의미한다 (예를 들어, MenA는 파상풍 톡소이드 상의 아민 기를 통해 파상풍 톡소이드에 접합되고, MenC는 상이한 분자의 파상풍 톡소이드 상의 카르복실산 기를 통해 파상풍 톡소이드에 접합됨).
캡슐 사카라이드(들)는 TT, DT, CRM197, TT의 단편 C 및 단백질 D로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 동일한 담체 단백질에 접합될 수 있다. 본 발명의 접합체에 사용될 수 있는 단백질 담체의 보다 완전한 목록이 하기 제시된다. 이와 관련하여, CRM197 및 DT는 이들이 단지 1개의 아미노산만큼 상이하기 때문에 동일한 담체 단백질인 것으로 간주될 수 있다. 한 실시양태에서, 존재하는 모든 캡슐 사카라이드는 TT에 접합된다.
사카라이드는 하기: 엔. 메닌기티디스 혈청군 A 캡슐 사카라이드 (MenA), 엔. 메닌기티디스 혈청군 C 캡슐 사카라이드 (MenC), 엔. 메닌기티디스 혈청군 Y 캡슐 사카라이드 (MenY), 및 엔. 메닌기티디스 혈청군 W 캡슐 사카라이드 (MenW), 또는 그의 임의의 조합 중 어느 하나를 포함할 수 있다.
단백질 담체 상에 존재하는 제1 및 제2 화학적 기는 서로 상이하고, 이상적으로는 접합 목적을 위해 용이하게 사용될 수 있는 천연 화학적 기이다. 이들은 독립적으로 카르복실 기, 아미노 기, 술프히드릴 기, 히드록실 기, 이미다졸릴 기, 구아니딜 기 및 인돌릴 기로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 한 실시양태에서, 제1 화학적 기는 카르복실이고, 제2는 아미노이거나, 또는 그 반대이다. 이들 기는 하기에서 보다 상세하게 설명된다.
구체적 실시양태에서, 면역원성 조성물은 적어도 2개의 상이한 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드를 포함하고, 여기서 하나 이상은 단백질 담체 상의 제1 유형의 화학적 기 (예를 들어, 카르복실)를 통해 담체 단백질에 접합된 MenA 및 MenC로 이루어진 제1 군으로부터 선택되고, 하나 이상의 상이한 사카라이드는 단백질 담체 상의 제2 유형의 화학적 기 (예를 들어 아미노)를 통해 담체 단백질에 접합된 MenC, MenY 및 MenW로 이루어진 제2 군으로부터 선택된다.
추가 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 제1 유형의 화학적 기 (예를 들어 카르복실)를 통해 접합된 MenA, 및 제2 유형의 화학적 기 (예를 들어 아미노)를 통해 접합된 MenC를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 면역원성 조성물은 제1 유형의 화학적 기 (예를 들어 카르복실)를 통해 접합된 MenC, 및 제2 유형의 화학적 기 (예를 들어 아미노)를 통해 접합된 MenY를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 면역원성 조성물은 제1 유형의 화학적 기 (예를 들어 카르복실)를 통해 접합된 MenA, 및 제2 유형의 화학적 기 (예를 들어 아미노)를 통해 접합된 MenC, MenY 및 MenW를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 면역원성 조성물은 제1 유형의 화학적 기 (예를 들어 카르복실)를 통해 접합된 MenA 및 MenC, 및 제2 유형의 화학적 기 (예를 들어 아미노)를 통해 접합된 MenY 및 MenW를 포함한다.
본 발명의 제약 (면역원성) 조성물에 포함된 본 발명의 사카라이드는 담체 단백질 예컨대 파상풍 톡소이드 (TT), 파상풍 톡소이드 단편 C, 파상풍 독소의 비-독성 돌연변이체 [주: TT의 모든 이러한 변이체는 본 발명의 목적상 동일한 유형의 담체 단백질인 것으로 간주됨], 디프테리아 톡소이드 (DT), CRM197, 디프테리아 독소의 다른 비-독성 돌연변이체 [예컨대 CRM176, CRM 197, CRM228, CRM 45 (Uchida et al. J. Biol. Chem. 218; 3838-3844, 1973); CRM 9, CRM 45, CRM102, CRM 103 및 CRM107 및 문헌 [Nicholls and Youle in Genetically Engineered Toxins, Ed: Frankel, Maecel Dekker Inc, 1992]에 기재된 다른 돌연변이; Glu-148의 결실 또는 Asp, Gln 또는 Ser으로의 돌연변이 및/또는 Ala 158의 결실 또는 Gly로의 돌연변이 및 US 4709017 또는 US 4950740에 개시된 다른 돌연변이; 적어도 1개 이상의 잔기 Lys 516, Lys 526, Phe 530 및/또는 Lys 534의 돌연변이 및 US 5917017 또는 US 6455673에 개시된 다른 돌연변이; 또는 US 5843711에 개시된 단편] (주: 모든 이러한 DT의 변이체는 본 발명의 목적상 동일한 유형의 담체 단백질인 것으로 간주됨), 폐렴구균 뉴모리신 (Kuo et al. (1995) Infect Immun 63; 2706-13), OMPC (수막구균 외막 단백질 - 통상적으로 엔. 메닌기티디스 혈청군 B로부터 추출됨 - EP0372501), 합성 펩티드 (EP0378881, EP0427347), 열 쇼크 단백질 (WO 93/17712, WO 94/03208), 백일해 단백질 (WO 98/58668, EP0471177), 시토카인, 림포카인, 성장 인자 또는 호르몬 (WO 91/01146), 다양한 병원체 유래 항원으로부터의 다중 인간 CD4+ T 세포 에피토프를 포함하는 인공 단백질 (Falugi et al. (2001) Eur J Immunol 31; 3816-3824) 예컨대 N19 단백질 (Baraldoi et al. (2004) Infect Immun 72; 4884-7) 폐렴구균 표면 단백질 PspA (WO 02/091998), 철 흡수 단백질 (WO 01/72337), 씨. 디피실레의 독소 A 또는 B (WO 00/61761) 또는 단백질 D (EP594610 및 WO 00/56360)에 접합된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 그 안에 함유된 적어도 2, 3, 4개 또는 각각의 사카라이드에서 (독립적으로) 동일한 유형의 담체 단백질을 사용한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 TT, DT, CRM197, TT의 단편 C 및 단백질 D로 이루어진 군으로부터 선택된 담체 단백질에 접합된 엔. 메닌기티디스 사카라이드를 포함한다.
본 발명의 면역원성 조성물은 임의로 Men 사카라이드 대 담체 단백질의 1:5 내지 5:1, 1:2 내지 5:1, 1:0.5 내지 1:2.5 또는 1:1.25 내지 1:2.5(w/w)의 비를 갖는 적어도 하나의 수막구균 사카라이드 (예를 들어 MenA; MenC; MenW; MenY; MenA 및 MenC; MenA 및 MenW; MenA 및 MenY; MenC 및 Men W; Men C 및 MenY; Men W 및 MenY; MenA, MenC 및 MenW; MenA, MenC 및 MenY; MenA, MenW 및 MenY; MenC, MenW 및 MenY 또는 MenA, MenC, MenW 및 MenY) 접합체를 포함한다. 하나의 바람직한 실시양태에서, 조성물은 각각 약 3, 약 3, 약 1.5 및 약 1.3의 비 (톡소이드 대 폴리사카라이드)로 각각 파상풍 톡소이드에 접합된 MenA, MenC, MenW 및 MenY를 포함한다.
접합체의 사카라이드 대 담체 단백질의 비 (w/w)는 멸균된 접합체를 사용하여 결정될 수 있다. 단백질의 양은 로우리 검정 (예를 들어 [Lowry et al. (1951) J. Biol. Chem. 193, 265-275 또는 Peterson et al. Analytical Biochemistry 100, 201-220 (1979)])을 사용하여 결정되고, 사카라이드의 양은 MenA의 경우 ICP-OES (유도 커플링된 플라즈마-광학 방출 분광분석법), MenC의 경우 DMAP 검정 및 MenW 및 MenY의 경우 레조르시놀 검정을 사용하여 결정된다 (Monsigny et al. (1988) Anal. Biochem. 175, 525-530).
한 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 엔. 메닌기티디스 사카라이드 접합체(들)를 포함하며, 여기서 엔. 메닌기티디스 사카라이드(들)는 링커, 예를 들어 이관능성 링커를 통해 담체 단백질에 접합된다. 링커는 임의로, 예를 들어 반응성 아미노 기 및 반응성 카르복실산 기, 2개의 반응성 아미노 기 또는 2개의 반응성 카르복실산 기를 갖는, 이종이관능성 또는 동종이관능성이다. 링커는 예를 들어 4 내지 20, 4 내지 12, 5 내지 10개의 탄소 원자를 갖는다. 가능한 링커는 ADH이다. 다른 링커는 B-프로피온아미도 (WO00/10599), 니트로페닐-에틸아민 (Gever et al. (1979) Med. Microbiol. Immunol. 165; 171-288), 할로알킬 할라이드 (US4057685), 글리코시드 연결 (US4673574, US4808700), 헥산 디아민 및 6-아미노카프로산 (US4459286)을 포함한다.
본 발명의 면역원성 조성물에 존재하는 사카라이드 접합체는 임의의 공지된 커플링 기술에 의해 제조될 수 있다. 접합 방법은 시아네이트 에스테르를 형성하기 위한 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 (CDAP)를 사용한 사카라이드의 활성화에 의존할 수 있다. 따라서, 활성화된 사카라이드는 담체 단백질 상의 아미노기에 직접 또는 스페이서 (링커) 기를 통해 커플링될 수 있다. 예를 들어, 스페이서는 시스타민 또는 시스테아민일 수 있고 이는 티올화된 폴리사카라이드를 제공하며, 이는 말레이미드-활성화된 담체 단백질 (예를 들어 GMBS를 사용함) 또는 할로아세틸화된 담체 단백질 (예를 들어 아이오도아세트이미드 또는 N-숙신이미딜 브로모아세테이트브로모아세테이트를 사용함)과의 반응 후에 수득되는 티오에테르 연결을 통해 담체에 커플링될 수 있다. 임의로, 시아네이트 에스테르 (임의로 CDAP 화학에 의해 제조됨)는 헥산 디아민 또는 ADH와 커플링되고, 아미노-유도체화된 사카라이드는 단백질 담체 상의 카르복실기를 통해 카르보디이미드 (예를 들어 EDAC 또는 EDC) 화학을 사용하여 담체 단백질에 접합된다. 이러한 접합체는 PCT 공개 출원 WO93/15760 (Uniformed Services University) 및 WO95/08348 및 WO96/29094에 기재되어 있다.
다른 적합한 기술은 카르비이니드, 히드라지드, 활성 에스테르, 노르보란, p-니트로벤조산, N-히드록시숙신이미드, S-NHS, EDC, TSTU를 사용한다. 많은 것들이 WO98/42721에 기재되어 있다. 접합은 카르보닐 링커를 수반할 수 있고, 이는 사카라이드의 유리 히드록실 기와 CDI와의 반응 (Bethell et al. J. Biol. Chem. 1979, 254; 2572-4, Hearn et al. J. Chromatogr. 1981. 218; 509-18)에 이어서, 카르바메이트 연결을 형성하기 위한 단백질과의 반응에 의해 형성될 수 있다. 이는 아노머 말단의 1급 히드록실 기로의 환원, CDI 카르바메이트 중간체를 형성하기 위한 CDI와 1급 히드록실 기의 반응의 임의적인 보호/탈보호 및 CDI 카르바메이트 중간체와 단백질 상의 아미노 기의 커플링을 수반할 수 있다.
접합체는 또한 US 4365170 (Jennings) 및 US 4673574 (Anderson)에 기재된 바와 같은 직접 환원성 아미노화 방법에 의해 제조될 수 있다. 다른 방법은 EP-0-161-188, EP-208375 및 EP-0-477508에 기재되어 있다.
추가의 방법은, 예를 들어 EDAC를 사용한 카르보디이미드 축합에 의한, 아디프산 히드라지드 (ADH)에 의해 유도체화된 브로민화시아노겐 (또는 CDAP) 활성화된 사카라이드의 단백질 담체에의 커플링을 수반한다 (Chu C. et al. Infect. Immunity, 1983 245 256).
한 실시양태에서, 사카라이드 상의 히드록실 기 (임의로 활성화된 히드록실 기, 예를 들어 시아네이트 에스테르에 의해 활성화된 히드록실 기)는 단백질 상의 아미노 또는 카르복실 기에 직접적으로 또는 간접적으로 (링커를 통해) 연결된다. 링커가 존재하는 경우, 사카라이드 상의 히드록실 기는, 예를 들어 CDAP 접합을 사용하는 것에 의해, 링커 상의 아미노 기에 임의로 연결된다. 링커 (예를 들어, ADH) 내의 추가의 아미노 기는 단백질 상의 카르복실산 기에, 예를 들어 카르보디이미드 화학을 사용하는 것에 의해, 예를 들어 EDAC를 사용하는 것에 의해 접합될 수 있다. 한 실시양태에서, 링커가 담체 단백질에 접합되기 전에, 먼저 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드(들) (또는 일반적으로 사카라이드)가 링커에 접합된다. 대안적으로, 링커는 사카라이드에의 접합 전에 담체에 접합될 수 있다.
일반적으로 단백질 담체 상의 하기 유형의 화학적 기가 커플링/접합을 위해 사용될 수 있다:
A) 카르복실 (예를 들어, 아스파르트산 또는 글루탐산을 통함). 한 실시양태에서, 이러한 기는 사카라이드 상의 아미노 기에 직접, 또는 카르보디이미드 화학에 의해, 예를 들어 EDAC에 의해 링커 상의 아미노 기에 연결된다.
B) 아미노 기 (예를 들어 리신을 통함). 한 실시양태에서, 이러한 기는 사카라이드 상의 카르복실기에 직접, 또는 카르보디이미드 화학에 의해, 예를 들어 EDAC에 의해 링커 상의 카르복실 기에 연결된다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 기는 사카라이드 상의 CDAP 또는 CNBr에 의해 활성화된 히드록실 기에 직접, 또는 링커 상의 이러한 기에; 알데히드 기를 갖는 사카라이드 또는 링커에; 숙신이미드 에스테르 기를 갖는 사카라이드 또는 링커에 연결된다.
C) 술프히드릴 (예를 들어 시스테인을 통함). 한 실시양태에서, 이러한 기는 말레이미드 화학에 의해 브로모 또는 클로로 아세틸화된 사카라이드 또는 링커에 연결된다. 한 실시양태에서, 이러한 기는 비스 디아조벤지딘에 의해 활성화/변형된다.
D) 히드록실 기 (예를 들어, 티로신을 통함). 한 실시양태에서, 이러한 기는 비스 디아조벤지딘에 의해 활성화/변형된다.
E) 이미다졸릴 기 (예를 들어, 히스티딘을 통함). 한 실시양태에서, 이러한 기는 비스 디아조벤지딘에 의해 활성화/변형된다.
F) 구아니딜 기 (예를 들어, 아르기닌을 통함).
G) 인돌릴 기 (예를 들어, 트립토판을 통함).
사카라이드 상에서, 일반적으로 하기 기: OH, COOH 또는 NH2가 커플링에 사용될 수 있다. 알데히드 기는 관련 기술분야에 공지된 상이한 처리, 예컨대: 퍼아이오데이트, 산 가수분해, 과산화수소 등의 후에 생성될 수 있다.
직접 커플링 접근법:
Figure pct00004
스페이서 (링커) 접근법을 통한 간접 커플링:
Figure pct00005
Figure pct00006
주: 상기 EDAC 대신, 임의의 적합한 카르보디이미드를 사용할 수 있다.
요약하면, 사카라이드와의 커플링에 일반적으로 사용될 수 있는 단백질 담체 화학적 기의 유형은 아미노 기 (예를 들어 리신 잔기 상), COOH 기 (예를 들어 아스파르트산 및 글루탐산 잔기 상) 및 SH 기 (접근가능한 경우) (예를 들어 시스테인 잔기 상)이다.
한 실시양태에서, 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드 (또는 일반적으로 사카라이드) 중 적어도 하나는 담체 단백질에 직접 접합되고; 임의로 Men W 및/또는 MenY 및/또는 MenC 사카라이드(들)는 담체 단백질에 직접 접합된다. 예를 들어 MenW; MenY; MenC; MenW 및 MenY; MenW 및 MenC; MenY 및 MenC; 또는 MenW, MenY 및 MenC는 담체 단백질에 직접 연결된다. 임의로, 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드 중 적어도 하나는 CDAP에 의해 직접 접합된다. 예를 들어, MenW; MenY; MenC; MenW 및 MenY; MenW 및 MenC; MenY 및 MenC; 또는 MenW, MenY 및 MenC는 CDAP에 의해 담체 단백질에 직접 연결된다 (WO95/08348 및 WO96/29094 참조). 한 실시양태에서, 모든 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드는 파상풍 톡소이드에 접합된다.
한 실시양태에서, Men W 및/또는 Y 사카라이드 대 담체 단백질의 비는 1:0.5 내지 1:2 (w/w)이고/거나, MenC 사카라이드 대 담체 단백질의 비는 1:0.5 내지 1:4 또는 1:0.5 내지 1:1.5 (w/w)이고, 특히 여기서 이들 사카라이드는 임의로 CDAP를 사용하여 단백질에 직접 연결된다.
한 실시양태에서, 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드(들) (또는 일반적으로 사카라이드) 중 적어도 하나는 링커, 예를 들어 이관능성 링커를 통해 담체 단백질에 접합된다. 링커는 임의로, 예를 들어 반응성 아민 기 및 반응성 카르복실산 기, 2개의 반응성 아민 기 또는 2개의 반응성 카르복실산 기를 갖는, 이종이관능성 또는 동종이관능성이다. 링커는 예를 들어 4 내지 20, 4 내지 12, 5 내지 10개의 탄소 원자를 갖는다. 가능한 링커는 ADH이다.
한 실시양태에서, MenA; MenC; 또는 MenA 및 MenC는 링커를 통해 담체 단백질 (예를 들어 파상풍 톡소이드)에 접합된다.
한 실시양태에서, 적어도 하나의 엔. 메닌기티디스 사카라이드는 CDAP 및 EDAC를 사용하여 링커를 통해 담체 단백질에 접합된다. 예를 들어, MenA; MenC; 또는 MenA 및 MenC는 상기 기재된 바와 같이 CDAP 및 EDAC를 사용하여 링커 (예를 들어, 그의 말단에 2개의 히드라지노 기를 갖는 것, 예컨대 ADH)를 통해 단백질에 접합된다. 예를 들어, CDAP는 사카라이드를 링커에 접합시키는데 사용되고, EDAC는 링커를 단백질에 접합시키는데 사용된다. 임의로 링커를 통한 접합은, MenA; MenC; 또는 MenA 및 MenC의 경우 1:0.5 내지 1:6; 1:1 내지 1:5 또는 1:2 및 1:4의 사카라이드 대 담체 단백질의 비를 생성한다.
한 실시양태에서, MenA 캡슐 사카라이드는 존재하는 경우 반복 단위의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 98%가 적어도 1개의 위치에서 O-아세틸화되도록 적어도 부분적으로 O-아세틸화된다. O-아세틸화는 예를 들어 반복 단위의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 98%의 적어도 O-3 위치에 존재한다.
한 실시양태에서, MenC 캡슐 사카라이드는 존재하는 경우 (α2→9)-연결된 NeuNAc 반복 단위의 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 98%가 적어도 1개 또는 2개의 위치에서 O-아세틸화되도록 적어도 부분적으로 O-아세틸화된다. O-아세틸화는 예를 들어 반복 단위의 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 98%의 O-7 및/또는 O-8 위치에 존재한다.
한 실시양태에서, MenW 캡슐 사카라이드는 존재하는 경우 반복 단위의 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 98%가 적어도 1개 또는 2개의 위치에서 O-아세틸화되도록 적어도 부분적으로 O-아세틸화된다. O-아세틸화는 예를 들어 반복 단위의 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 98%의 O-7 및/또는 O-9 위치에 존재한다.
한 실시양태에서, MenY 캡슐 사카라이드는 존재하는 경우 반복 단위의 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 98%가 적어도 1개 또는 2개의 위치에서 O-아세틸화되도록 적어도 부분적으로 O-아세틸화된다. O-아세틸화는 반복 단위의 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 98%의 7 및/또는 9 위치에 존재한다.
O-아세틸화의 백분율은 O-아세틸화를 함유하는 반복 단위의 백분율을 지칭한다. 이는 접합 전 및/또는 접합 후에 사카라이드에서 측정될 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 면역원성 조성물, 존재하는 사카라이드, 또는 존재하는 각각의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드는 TT에 접합된다. 추가 실시양태에서, 각각의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드는 별개의 담체 단백질에 개별적으로 접합된다. 추가 실시양태에서, 각각의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드 접합체는 1:5-5:1 또는 1:1-1:4(w/w)의 사카라이드:담체 비를 갖는다. 추가 실시양태에서, 적어도 1, 2 또는 3개의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드 접합체(들)가 담체 단백질에 직접 접합된다. 추가 실시양태에서, MenW 및/또는 MenY, MenW 및/또는 MenC, MenY 및/또는 MenC, 또는 MenW 및 MenC 및 MenY는 담체 단백질에 직접 접합된다. 추가 실시양태에서, 적어도 1, 2 또는 3개의 엔. 메닌기티디스 사카라이드 접합체(들)는 CDAP 화학에 의해 직접 접합된다. 추가 실시양태에서, MenW 및/또는 Y 사카라이드 대 담체 단백질의 비는 1:0.5 내지 1:2 (w/w)이다. 추가 실시양태에서, MenC 사카라이드 대 담체 단백질의 비는 1:0.5 내지 1:2 (w/w)이다. 추가 실시양태에서, 적어도 1, 2 또는 3개의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드(들)는 링커 (이는 예컨대 2개의 반응성 아미노 기 (예컨대, ADH) 또는 2개의 반응성 카르복실 기, 또는 한쪽 말단에 반응성 아미노 기 및 다른쪽 말단에 반응성 카르복실 기를 갖는 이관능성일 수 있음)를 통해 담체 단백질에 접합된다. 링커는 4 내지 12개의 탄소 원자를 가질 수 있다. 추가 실시양태에서, 링커를 통해 접합된 각각의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드(들)는 CDAP 화학에 의해 링커에 접합된다. 추가 실시양태에서, 담체 단백질은 카르보디이미드 화학을 사용하여, 예를 들어 EDAC를 사용하여 링커에 접합된다. 추가 실시양태에서, 각각의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드는 담체 단백질이 링커에 접합되기 전에 링커에 접합된다. 추가 실시양태에서, MenA는 링커를 통해 담체 단백질에 접합된다 (MenA 사카라이드 대 담체 단백질의 비는 1:2 내지 1:5 (w/w)일 수 있음). 추가 실시양태에서, MenC는 링커를 통해 담체 단백질에 접합된다 (MenC 사카라이드 대 담체 단백질의 비는 1:2 내지 1:5 (w/w)일 수 있음).
천연 또는 약간 크기 조절된 폴리사카라이드 접합체를 사용함으로써, 하기 이점 중 하나 이상이 실현될 수 있다: 1) 높은 면역원성을 갖는 접합체가 0.2 마이크로미터 필터를 통해 여과될 수 있음; 2) 면역 기억이 증진될 수 있음 (실시예 3에서와 같음); 3) 접합체 내의 폴리사카라이드 대 단백질의 비 (w/w)가 증가될 수 있도록 접합체 내의 폴리사카라이드 대 단백질의 비의 변경 (이는 담체 억제 효과의 감소를 발생시킬 수 있음); 4) 가수분해 경향이 있는 면역원성 접합체 (예컨대, MenA 접합체)가 접합을 위한 보다 큰 폴리사카라이드의 사용에 의해 안정화될 수 있음. 보다 큰 폴리사카라이드의 사용은 접합체 담체와 보다 많은 가교를 생성할 수 있고, 접합체로부터 자유 사카라이드의 유리를 감소시킬 수 있다. 선행 기술에 기재된 접합체 백신은 접합을 개선시키기 위해 접합 전에 폴리사카라이드를 탈중합시키는 경향이 있다. 보다 큰 크기의 사카라이드를 보유하는 수막구균 (또는 사카라이드) 접합체 백신은 수막구균 질환에 대해 우수한 면역 반응을 제공할 수 있다.
따라서, 본 발명의 면역원성 조성물은 하나 이상의 사카라이드 접합체를 포함할 수 있고, 여기서 접합 전의 각각의 사카라이드의 평균 크기는 50kDa, 75kDa, 100kDa, 110kDa, 120kDa 또는 130kDa 초과이다. 한 실시양태에서 접합 후 접합체는 여과 전 샘플과 비교하여 여과 후 50, 60, 70, 80, 90 또는 95% 초과의 수율이 수득되도록 0.2 마이크로미터 필터를 통해 용이하게 여과될 수 있어야 한다.
특히, 본 발명의 면역원성 조성물은 담체 단백질에 접합된 혈청군 A, C, W 및 Y 중 적어도 1, 2, 3 또는 4종으로부터의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드를 포함하고, 여기서 적어도 1, 2, 3 또는 4종, 또는 각각의 엔. 메닌기티디스 사카라이드의 평균 크기 (중량-평균 분자량; Mw)는 50kDa, 60kDa, 75kDa, 100kDa, 110kDa, 120kDa 또는 130kDa 초과이다.
바람직한 실시양태에서, MenAAH-TT 접합체의 평균 Mw는 적어도 250 kDa, 260 kDa, 270 kDa, 280 kDa, 또는 290 kDa이고, 가장 바람직하게는 약 300 kDa, 및 최대 350 kDa 또는 330 kDa이다. 바람직한 실시양태에서, MenCAH-TT 접합체의 평균 Mw는 적어도 150 kDa, 160 kDa, 170 kDa, 180 kDa, 또는 190 kDa이고, 가장 바람직하게는 약 200 kDa이고, 최대 250 kDa 또는 230 kDa이다. 바람직한 실시양태에서, MenW-TT 접합체의 평균 Mw는 적어도 240, 250 kDa, 260 kDa, 또는 270 kDa이고, 가장 바람직하게는 약 280 kDa이고, 최대 330 kDa 또는 310 kDa이다. 바람직한 실시양태에서, MenY-TT 접합체의 평균 Mw는 적어도 220 kDa, 230 kDa, 240 kDa, 또는 250 kDa이고, 가장 바람직하게는 약 270 kDa이고, 최대 320 kDa 또는 300 kDa이다.
면역원성 조성물은 담체 단백질에 접합된 혈청군 A, C, W 및 Y 중 적어도 1, 2, 3 또는 4종으로부터의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드를 포함할 수 있고, 여기서 적어도 1, 2, 3 또는 4종, 또는 각각의 엔. 메닌기티디스 사카라이드는 천연 사카라이드이거나, 또는 천연 폴리사카라이드의 중량 평균 분자량에 비해 최대 x2, x3, x4, x5, x6, x7, x8, x9 또는 x10배로 크기 조절된다.
본 발명의 목적상, "천연 폴리사카라이드"는, 그 목적이 사카라이드의 크기를 감소시키는 것인 공정에 적용되지 않은 사카라이드를 지칭한다. 폴리사카라이드는 정상 정제 절차 동안 크기가 약간 감소될 수 있다. 이러한 사카라이드는 여전히 천연이다. 폴리사카라이드가 크기 조절 기술에 적용된 경우에만, 폴리사카라이드는 천연으로 간주되지 않을 것이다.
본 발명의 목적상, "최대 x2배로 크기 조절"은 사카라이드의 크기를 감소시키되 천연 폴리사카라이드의 크기의 절반을 초과하는 크기는 보유하도록 의도되는 공정에 사카라이드가 적용되는 것을 의미한다. x3, x4 등은 동일한 방식으로 해석되어야 하며, 즉 폴리사카라이드의 크기를 감소시키되 천연 폴리사카라이드의 크기의 3분의 1, 4분의 1 등을 초과하는 크기는 보유하도록 의도되는 공정에 사카라이드가 적용된다.
본 발명의 한 측면에서, 면역원성 조성물은 담체 단백질에 접합된 혈청군 A, C, W 및 Y 중 적어도 1, 2, 3 또는 4종으로부터의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드를 포함하고, 여기서 적어도 1, 2, 3 또는 4종, 또는 각각의 엔. 메닌기티디스 사카라이드는 천연 폴리사카라이드이다.
본 발명의 한 측면에서, 면역원성 조성물은 담체 단백질에 접합된 혈청군 A, C, W 및 Y 중 적어도 1, 2, 3 또는 4종으로부터의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드를 포함하고, 여기서 적어도 1, 2, 3 또는 4종, 또는 각각의 엔. 메닌기티디스 사카라이드는 최대 x1.5, x2, x3, x4, x5, x6, x7, x8, x9 또는 x10배로 크기 조절된다.
본 발명의 면역원성 조성물은 임의로: 엔. 메닌기티디스 혈청군 C 캡슐 사카라이드 (MenC), 혈청군 A 캡슐 사카라이드 (MenA), 혈청군 W135 캡슐 사카라이드 (MenW), 혈청군 Y 캡슐 사카라이드 (MenY), 혈청군 C 및 Y 캡슐 사카라이드 (MenCY), 혈청군 C 및 A 캡슐 사카라이드 (MenAC), 혈청군 C 및 W 캡슐 사카라이드 (MenCW), 혈청군 A 및 Y 캡슐 사카라이드 (MenAY), 혈청군 A 및 W 캡슐 사카라이드 (MenAW), 혈청군 W 및 Y 캡슐 사카라이드 (MenWY), 혈청군 A, C 및 W 캡슐 사카라이드 (MenACW), 혈청군 A, C 및 Y 캡슐 사카라이드 (MenACY); 혈청군 A, W135 및 Y 캡슐 사카라이드 (MenAWY), 혈청군 C, W135 및 Y 캡슐 사카라이드 (MenCWY); 또는 혈청군 A, C, W135 및 Y 캡슐 사카라이드 (MenACWY)의 접합체를 포함한다. 이는 본원에 언급된 혈청군 A, C, W 및 Y, 또는 각각의 엔. 메닌기티디스 사카라이드 중 "1, 2, 3 또는 4종", 또는 "중 적어도 1종"의 정의이다.
한 실시양태에서, 적어도 1, 2, 3, 4종 또는 각각의 엔. 메닌기티디스 사카라이드의 평균 크기는 MALLS에 의해 결정 시 50KDa 내지 1500kDa, 50kDa 내지 500kDa, 50 kDa 내지 300 KDa, 101kDa 내지 1500kDa, 101kDa 내지 500kDa, 101kDa 내지 300kDa이다.
한 실시양태에서, MenA 사카라이드는, 존재하는 경우, 50-500kDa, 50-100kDa, 100-500kDa, 55-90KDa, 60-70kDa 또는 70-80kDa 또는 60-80kDa의 분자량을 갖는다.
한 실시양태에서, MenC 사카라이드는, 존재하는 경우, 100-200kDa, 50-100kDa, 100-150kDa, 101-130kDa, 150-210kDa 또는 180-210kDa의 분자량을 갖는다.
한 실시양태에서, MenY 사카라이드는, 존재하는 경우, 60-190kDa, 70-180kDa, 80-170kDa, 90-160kDa, 100-150kDa 또는 110-140kDa, 50-100kDa, 100-140kDa, 140-170kDa 또는 150-160kDa의 분자량을 갖는다.
한 실시양태에서, MenW 사카라이드는, 존재하는 경우, 60-190kDa, 70-180kDa, 80-170kDa, 90-160kDa, 100-150kDa, 110-140kDa, 50-100kDa 또는 120-140kDa의 분자량을 갖는다.
본원에서 사카라이드의 분자량 또는 평균 분자량은 접합 전에 측정된 사카라이드의 중량-평균 분자량 (Mw)을 지칭하고, 이는 MALLS에 의해 측정된다.
MALLS 기술은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 이는 전형적으로 실시예 2에 기재된 바와 같이 수행된다. 수막구균 사카라이드의 MALLS 분석을 위해, 2개의 칼럼 (TSKG6000 및 5000PWxl)이 조합되어 사용될 수 있고, 사카라이드는 물에서 용리된다. 사카라이드는 광 산란 검출기 (예를 들어 10mW 아르곤 레이저가 장착된 와이어트 다운(Wyatt Dawn) DSP, 488nm) 및 간섭측정 굴절계 (예를 들어, P100 셀 및 적색 필터가 장착된 와이어트 오티랩(Wyatt Otilab) DSP, 498nm)를 사용하여 검출된다.
한 실시양태에서, 엔. 메닌기티디스 사카라이드는 천연 폴리사카라이드 또는 정상 추출 공정 동안 크기가 감소된 천연 폴리사카라이드이다.
한 실시양태에서, 엔. 메닌기티디스 사카라이드는 기계적 절단에 의해, 예를 들어 마이크로유동화 또는 초음파처리에 의해 크기 조절된다. 마이크로유동화 및 초음파처리는 보다 큰 천연 폴리사카라이드의 크기를 충분히 감소시켜 (예를 들어 0.2 마이크로미터 필터를 통과하는) 여과가능한 접합체를 제공하는 이점을 갖는다. 크기 조절은 x20, x10, x8, x6, x5, x4, x3, x2 또는 x1.5배 이하이다.
한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 천연 폴리사카라이드 및 x20배 이하로 크기 조절된 사카라이드의 혼합물로 제조된 엔. 메닌기티디스 접합체를 포함한다. 예를 들어 MenC 및/또는 MenA로부터의 사카라이드는 천연이다. 예를 들어, MenY 및/또는 MenW로부터의 사카라이드는 x20, x10, x8, x6, x5, x4, x3 또는 x2배 이하로 크기 조절된다. 예를 들어, 면역원성 조성물은 x10배 이하로 크기 조절되고/거나 마이크로유동화된 MenY 및/또는 MenW 및/또는 MenC 및/또는 MenA로 제조된 접합체를 함유한다. 예를 들어, 면역원성 조성물은 천연 MenA 및/또는 MenC 및/또는 MenW 및/또는 MenY로 제조된 접합체를 함유한다. 예를 들어, 면역원성 조성물은 천연 MenC로 제조된 접합체를 포함한다. 예를 들어, 면역원성 조성물은 x10배 이하로 크기 조절되고/거나 마이크로유동화된 천연 MenC 및 MenA로 제조된 접합체를 포함한다. 예를 들어, 면역원성 조성물은 x10배 이하로 크기 조절되고/거나 마이크로유동화된 천연 MenC 및 MenY로 제조된 접합체를 포함한다.
한 실시양태에서, 사카라이드의 다분산도는 1-1.5, 1-1.3, 1-1.2, 1-1.1 또는 1-1.05이고, 담체 단백질에의 접합 후, 접합체의 다분산도는 1.0-2.5, 1.0-2.0, 1.0-1.5, 1.0-1.2, 1.5-2.5, 1.7-2.2 또는 1.5-2.0이다. 모든 다분산도 측정은 MALLS에 의한다.
사카라이드는 박테리아로부터 단리된 폴리사카라이드의 크기로부터 임의로 최대 1.5, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 또는 20배로 크기 조절된다.
한 실시양태에서, 각각의 엔. 메닌기티디스 사카라이드는 천연 폴리사카라이드이거나, 또는 x10배 이하로 크기 조절된다. 추가 실시양태에서 각각의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드는 천연 폴리사카라이드이다. 추가 실시양태에서, 적어도 1, 2, 3 또는 4종의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드(들)가 마이크로유동화에 의해 크기 조절된다. 추가 실시양태에서, 각각의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드는 x10배 이하로 크기 조절된다. 추가 실시양태에서 엔. 메닌기티디스 접합체는 천연 폴리사카라이드 및 x10배 이하로 크기 조절된 사카라이드의 혼합물로 제조된다. 추가 실시양태에서, 혈청군 Y로부터의 캡슐 사카라이드는 x10배 이하로 크기 조절된다. 추가 실시양태에서, 혈청군 A 및 C로부터의 캡슐 사카라이드는 천연 폴리사카라이드이고, 혈청군 W135 및 Y로부터의 사카라이드는 x10배 이하로 크기 조절된다. 추가 실시양태에서, 각각의 엔. 메닌기티디스 캡슐 사카라이드의 평균 크기는 50 kDa 내지 300 KDa 또는 50kDa 내지 200kDa이다. 추가 실시양태에서, 면역원성 조성물은 50kDa, 75kDa, 100kDa 초과의 평균 크기 또는 50-100kDa 또는 55-90KDa 또는 60-80kDa의 평균 크기를 갖는 MenA 캡슐 사카라이드를 포함한다. 추가 실시양태에서, 면역원성 조성물은 50kDa, 75kDa, 100kDa 초과 또는 100-200kDa, 100-150kDa, 80-120kDa , 90-110kDa, 150-200kDa, 120-240kDa, 140-220kDa, 160-200kDa 또는 190-200kDa의 평균 크기를 갖는 MenC 캡슐 사카라이드를 포함한다. 추가 실시양태에서, 면역원성 조성물은 50kDa, 75kDa, 100kDa 초과 또는 60-190kDa 또는 70-180kDa 또는 80-170kDa 또는 90-160kDa 또는 100-150kDa , 110-145kDa 또는 120-140kDa의 평균 크기를 갖는 MenY 캡슐 사카라이드를 포함한다. 추가 실시양태에서, 면역원성 조성물은 50kDa, 75kDa, 100kDa 초과 또는 60-190kDa 또는 70-180kDa 또는 80-170kDa 또는 90-160kDa 또는 100-150kDa, 140-180kDa, 150-170kDa 또는 110-140kDa의 평균 크기를 갖는 MenW 캡슐 사카라이드를 포함한다.
본 발명의 한 실시양태에서, 각각의 적어도 2, 3, 4종의 또는 각각의 엔. 메닌기티디스 사카라이드 접합체의 사카라이드 용량은 임의로 동일하거나, 또는 대략 동일하다.
한 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 pH 7.0 내지 8.0, pH 7.2 내지 7.6 또는 대략 또는 정확히 pH 7.4로 조정되거나, 완충되거나, 또는 조정된다.
본 발명의 면역원성 조성물 또는 백신은 안정화제, 예를 들어 폴리올, 예컨대 수크로스 또는 트레할로스의 존재 하에 임의로 동결건조된다.
상기 논의된 엔. 메닌기티디스 사카라이드 조합물의 경우, 임의의 알루미늄 염 아주반트 또는 임의의 아주반트를 전혀 사용하지 않는 것이 유리할 수 있다.
활성제는 본 발명의 제약 조성물 또는 백신에서 다양한 농도로 존재할 수 있다. 전형적으로, 물질의 최소 농도는 그의 의도된 용도를 달성하는데 필요한 양인 한편, 최대 농도는 용액으로 유지되거나 또는 초기 혼합물 내에 균질하게 현탁될 최대량이다. 예를 들어, 치료제의 최소량은 임의로, 단일 치료 유효 투여량을 제공할 양이다. 생물활성 물질의 경우, 최소 농도는 재구성시 생물활성에 필요한 양이고, 최대 농도는 균질 현탁액이 유지될 수 없는 지점이다.
또 다른 실시양태에서, 조성물은 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X 캡슐 폴리사카라이드 및 담체 분자의 접합체를 포함한다. 군 X 캡슐 폴리사카라이드의 구조는 O-아세틸 기 없이 al-4 포스포디에스테르 결합에 의해 함께 유지되는 N-아세틸글루코사민-4-포스페이트 잔기로 이루어진다. 담체 분자는 디프테리아 또는 파상풍 톡소이드, CRM197 또는 단백질 D일 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 실시예에 예시된 바와 같이, 조성물은 엔. 메닌기티디스 혈청군 X 캡슐 폴리사카라이드의 접합체를 포함하지 않는다.
안정성
용어 "안정한" 및 "안정성"은 소정의 기간에 걸쳐 면역원성을 유지하는 항원의 능력을 지칭한다. 안정성은 시간의 경과에 따라 효력면에서 측정될 수 있다. 용어 "안정한" 및 "안정성"은 면역원성 조성물의 물리적, 화학적, 및 입체형태적 안정성을 추가로 지칭한다. 단백질 조성물의 불안정성은 보다 고차의 중합체를 형성하기 위한 단백질 분자의 화학적 분해 또는 응집에 의해, 이종이량체의 단량체로의 해리, 탈글리코실화, 글리코실화의 변형, 또는 본 발명에 포함된 단백질 조성물의 적어도 하나의 생물학적 활성을 감소시키는 임의의 다른 구조적 변형에 의해 유발될 수 있다. 안정성은 샘플의 광 산란, 겉보기 광 감쇠 (흡광도 또는 광학 밀도), 크기 (예를 들어, 크기 배제 크로마토그래피에 의함), 시험관내 또는 생체내 생물학적 활성 및/또는 시차 주사 열량측정 (DSC)에 의한 특성의 측정을 포함한, 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의하여 평가될 수 있다. 다른 안정성 평가 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 이는 또한 본 발명에 따라 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 안정한 제제 내의 항원은 참조 표준물과 비교하여 적어도 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 9개월, 12개월, 18개월, 24개월, 30개월, 36개월, 42개월, 48개월, 54개월, 또는 60개월 동안 적어도 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 효력을 유지할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 안정한 제제 내의 항원은 참조 표준물과 비교하여 적어도 1년, 2년, 3년, 4년 또는 5년 동안 적어도 50% 효력을 유지할 수 있다. 용어 "안정한" 및 "안정성"은 또한 소정의 기간에 걸쳐 에피토프 또는 면역반응성을 유지하는 항원의 능력을 지칭한다. 예를 들어, 본 발명의 안정한 제제 내의 항원은 참조 표준물과 비교하여 적어도 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 9개월, 12개월, 18개월, 24개월, 30개월, 36개월, 42개월, 48개월, 54개월, 또는 60개월 동안 그의 에피토프 또는 면역반응성의 적어도 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%를 유지할 수 있다. 일부 실시양태에서, 안정성은 환경 조건과 관련하여 측정된다. 환경 조건의 비제한적 예는 광, 온도, 냉동/해동 주기, 교반 및 pH를 포함한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 개시된 방법 또는 관련 기술분야에 공지된 다른 방법을 사용하여 항원 에피토프 또는 면역반응성의 존재를 결정할 수 있을 것이다. 일부 실시양태에서, 항원의 안정성은 그의 제제화일로부터 측정된다. 일부 실시양태에서, 항원의 안정성은 그의 저장 조건의 변화일로부터 측정된다. 저장 조건의 변화의 비제한적 예는 동결 온도에서 냉장 온도로의 변화, 동결 온도에서 실온으로의 변화, 냉장 온도에서 실온으로의 변화, 냉장 온도에서 동결 온도로의 변화, 실온에서 동결 온도로의 변화, 실온에서 냉장 온도로의 변화, 명에서 암으로의 변화, 또는 교반의 도입을 포함한다.
한 실시양태에서, 용어 "안정한" 및 "안정성"은 알루미늄에 결합되는 항원의 능력을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 안정한 제제는 참조 표준물과 비교하여 적어도 1시간, 6시간, 12시간, 18시간, 24시간, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 9개월, 12개월, 18개월, 24개월, 30개월, 36개월, 42개월, 48개월, 54개월, 또는 60개월 동안 제제 중의 알루미늄 (예를 들어, 인산알루미늄)에 결합된 단백질의 적어도 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%를 포함한다. 예를 들어, 실시예 13을 참조한다. 바람직한 실시양태에서, 총 서브패밀리 A rLP2086 폴리펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드)의 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 및 가장 바람직하게는 적어도 99%가 조성물 중의 알루미늄에 결합된다. 바람직한 실시양태에서, 총 서브패밀리 B rLP2086 폴리펩티드 (예를 들어 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드)의 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 및 가장 바람직하게는 적어도 99%가 조성물 중의 알루미늄에 결합된다.
알루미늄 결합의 결정. 알루미늄 및 적어도 1종의 단백질 항원을 포함하는 조성물을 알루미늄이 펠릿화되도록 원심분리하였다. 알루미늄 흡수된 단백질의 원심분리는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Egan et al., Vaccine, Vol. 27(24): 3175-3180 (2009)]을 참조한다. 알루미늄-결합된 단백질이 또한 펠릿화되었고, 한편 비-알루미늄-결합된 단백질은 상청액에 잔류하였다. 상청액 및 펠릿 내의 총 단백질을 로우리 검정에 의해 결정하였다. 상청액 중 총 단백질을 조성물에 첨가된 총 단백질로 나누고, 이에 100%를 곱하여 결합된 단백질의 백분율을 계산하였다. 유사하게, 상청액 중 총 단백질을 조성물에 첨가된 총 단백질로 나누고, 이에 100%를 곱하여 미결합된 단백질의 백분율을 계산하였다. 서브패밀리 A 및 서브패밀리 B 항원 둘 다를 포함하는 조성물의 경우, 상청액 중 개별 서브패밀리 A 및 B 단백질 농도를 이온-교환 크로마토그래피에 의해 결정하였다. 강음이온 칼럼 및 높은 염 농도 용리액을 사용하여 서브패밀리 A 및 B 단백질의 분리 및 용리를 수행하였다. 여기 = 280 nm 및 방출 = 310 nm로 설정된 형광 검출기를 사용하여 서브패밀리 A 및 B 단백질 둘 다를 검출하고 정량화하였다. 서브패밀리 A 및 서브패밀리 B 단백질은 별개의 체류 시간에 용리되고, rLP2086 단백질 참조 물질에 대해 생성된 표준 곡선을 사용하여 이를 정량화하였다. 상청액 중 총 단백질을 조성물에 첨가된 총 단백질로 나누고, 이에 100%를 곱하여 미결합된 단백질의 백분율을 계산하였다. 미결합된 단백질의 백분율을 100%에서 차감하여 결합된 단백질 백분율을 계산하였다.
폴리소르베이트-80
폴리소르베이트 80 (PS-80)은 비-이온성 계면활성제이다. 시험관내 모노클로날 항체 기반 효력 검정을 사용한 가속 안정성 연구는 최종 제제 중의 PS-80 대 MnB rLP2086 단백질의 보다 높은 몰비에서의 서브패밀리 B 단백질의 불안정성을 입증하였다. PS-80의 다양한 비를 사용한 추가의 실험은, 효력을 보유하기 위한 PS-80 대 MnB rLP2086 단백질의 최적의 몰비가 대략 2.8 ± 1.4임을 입증하였다.
조성물 중 PS-80의 농도는 PS-80 대 폴리펩티드의 몰비에 의존한다. 한 실시양태에서, 조성물은 2.8±1.4 몰비의 PS-80 대 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드를 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 2.8±1.1 몰비의 PS-80 대 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드를 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 적어도 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 또는 3.3 몰비의 PS-80 대 폴리펩티드를 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 최대 4.0, 3.9, 3.8, 3.7, 3.6, 3.5, 3.4, 3.3, 3.2, 3.1, 3.0, 또는 2.9 몰비의 PS-80 대 폴리펩티드를 포함한다. 범위를 규정하기 위해 임의의 최소 값은 본원에 기재된 임의의 최대 값과 조합될 수 있다. 바람직하게는, 조성물은 2.8 몰비의 PS-80 대 폴리펩티드를 포함한다.
PS-80 대 폴리펩티드 몰비는 PS-80의 측정된 농도 및 측정된 총 폴리펩티드 농도로부터의 계산에 의해 결정되고, 여기서 둘 다의 값은 몰로 표현된다. 예를 들어, PS-80 대 단백질 몰비는 최종 약물 물질 중의 PS-80의 측정된 농도 (예를 들어, 역상 고압 액체 크로마토그래피 (RP-HPLC)에 의함) 대 측정된 총 단백질 농도 (예를 들어, 이온 교환-고압 액체 크로마토그래피 (IEX-HPLC)에 의함)의 계산에 의해 결정되고, 여기서 둘 다의 값은 몰로 표현된다.
RP-HPLC를 사용하여 백신 제제 중 폴리소르베이트 80의 농도를 정량화한다. 세제의 농도는 지방산 모이어티의 비누화에 의해 결정되고; 폴리소르베이트 80은 40℃에서의 알칼리 가수분해에 의해 유리 올레산으로 전환된다. 샘플은 C18 칼럼을 사용하여 RP-HPLC에 의해 분리되고, 200 nm 파장에서 UV 검출기를 사용하여 정량화된다.
제1 및 제2 폴리펩티드는 음이온-교환 HPLC에 의해 분해된다. rLP2086(fHBP) 서브패밀리 A 및 B 단백질은 별개의 체류 시간에 용리되고, 각각의 rLP2086 단백질 참조 물질에 대해 생성된 표준 곡선을 사용하여 정량화된다.
용어 "몰비" 및 fHBP 및 PS-80을 포함하는 면역원성 조성물의 기재는 WO2012025873 및 미국 특허 공개 US 2013/0171194에 추가로 개시되어 있으며, 이들은 각각 그 전문이 참조로 포함된다.
본원에 사용된 용어 "몰비"는 조성물 중의 2종의 상이한 요소의 몰수의 비를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 몰비는 세제의 몰 대 폴리펩티드 몰의 비이다. 일부 실시양태에서, 몰비는 PS-80의 몰 대 단백질의 몰의 비이다. 한 실시양태에서, 단백질 및 폴리소르베이트 80 농도에 기초하여, 몰비는 하기 방정식을 사용하여 계산될 수 있다:
Figure pct00007
한 실시양태에서, 조성물은 효력을 유지하기 위해 1.4 내지 4.2의 PS-80 대 MnB rLP2086 단백질의 몰비를 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 적어도 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 또는 2.8을 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 최대 4.2, 4.1, 4.0, 3.9, 3.8, 3.7, 3.7, 3.6, 3.5, 3.4, 3.3, 3.2, 3.1, 3.0, 2.9, 또는 2.8을 포함한다. 범위를 규정하기 위해 임의의 최소 값은 본원에 기재된 임의의 최대 값과 조합될 수 있다.
한 실시양태에서, 조성물은 약 0.0015, 0.0017, 0.0019, 0.0021, 0.0023, 0.0025, 0.0027, 0.0029, 0.0031, 0.0033, 0.0035, 0.0037, 0.0039, 0.0041, 0.0043, 0.0045, 0.0047, 0.0049, 0.0051 mg/mL의 PS-80을 포함한다. 바람직하게는, 조성물은 약 0.0035 mg/mL의 PS-80을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 조성물은 적어도 10 μg, 11 μg, 12 μg, 13 μg, 14 μg, 15 μg, 16 μg, 17 μg, 18 μg, 19 μg, 20 μg, 21 μg, 22 μg, 23 μg, 24 μg, 또는 25 μg의 PS-80을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 최대 30 μg, 29 μg, 28 μg, 27 μg, 26 μg, 25 μg, 24 μg, 23 μg, 22 μg, 21 μg, 20 μg, 19 μg, 또는 18 μg의 PS-80을 포함한다. 범위를 규정하기 위해 임의의 최소 값은 본원에 기재된 임의의 최대 값과 조합될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 적어도 10 μg 및 최대 20 μg의 PS-80을 포함한다. 가장 바람직한 실시양태에서, 조성물은 약 18 μg의 PS-80을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 조성물은 0.0005% 내지 1% 범위의 PS-80 농도를 포함한다. 예를 들어, 조성물 중의 PS-80 농도는 적어도 0.0005%, 0.005%, 0.01%, 0.02%, 0.03%, 0.04%, 0.05%, 0.06%, 0.07%, 0.08%, 0.09%, 0.10%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5%, 0.6%, 0.7%, 0.8%, 0.9%, 1%, 또는 1.1% PS-80일 수 있다. 한 실시양태에서, 조성물 중의 PS-80 농도는 최대 2.0%, 1.9%, 1.8%, 1.7%, 1.6%, 1.5%, 1.4%, 1.3%, 1.2%, 1.1%, 1.0%, 0.9%, 0.8%, 또는 0.7% PS-80일 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 약 0.07% PS-80을 포함한다. 범위를 규정하기 위해 임의의 최소 값은 본원에 기재된 임의의 최대 값과 조합될 수 있다.
본 발명자들은 놀랍게도 제1 조성물 및 제2 조성물의 조합물을 포함하는 조성물이, 제1 조성물 중의 MnB rLP2086 폴리펩티드에 대한 폴리소르베이트-80의 몰비와 비교하여, MnB rLP2086 폴리펩티드에 대한 폴리소르베이트-80의 상이한 몰비를 가질 수 있는 한편, 조합된 조성물에 대한 추가의 계면활성제는 놀랍게도 조합된 조성물 중의 MnB rLP2086 폴리펩티드의 용해도 및 안정성을 유지시키는데 필요하지 않다는 것을 발견하였다. 따라서, 한 실시양태에서, 키트는 0.02 mg 초과의 폴리소르베이트-80을 포함하지 않는다.
알루미늄
조성물은 알루미늄을 인산알루미늄으로서 포함한다. AlPO4는 안정화제로서 첨가되어 증진된 제조성 및 안정성을 제공한다. 인산알루미늄의 제조 방법은 미국 특허 공개 US 2009/0016946에 기재되어 있고, 이는 그 전문이 참조로 포함된다. 한 실시양태에서, 조성물은 알루미늄 외에 다가 양이온을 추가로 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 조성물은 Al(OH)3 또는 Al(SO4)3을 추가로 포함하지 않는다.
한 실시양태에서, 조성물은 적어도 50 μg, 60 μg, 70 μg, 80 μg, 90 μg, 100 μg, 110 μg, 120 μg, 130 μg, 140 μg, 150 μg, 160 μg, 170 μg, 180 μg, 190 μg, 200 μg, 210 μg, 220 μg, 230 μg, 240 μg, 또는 250 μg의 알루미늄을 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 최대 500 μg, 490 μg, 480 μg, 470 μg, 460 μg, 450 μg, 440 μg, 430 μg, 420 μg, 410 μg, 400 μg, 390 μg, 380 μg, 370 μg, 360 μg, 350 μg, 340 μg, 330 μg, 320 μg, 310 μg, 300 μg, 290 μg, 280 μg, 270 μg, 260 μg, 또는 250 μg의 알루미늄을 포함한다. 범위를 규정하기 위해 임의의 최소 값은 본원에 기재된 임의의 최대 값과 조합될 수 있다. 가장 바람직한 실시양태에서, 조성물은 250 μg의 알루미늄을 포함한다.
한 실시양태에서, 조성물은 적어도 0.005 mg/ml, 0.01 mg/ml, 0.02 mg/ml, 0.03 mg/ml, 0.04 mg/ml, 0.05 mg/ml, 0.06 mg/ml, 0.07 mg/ml, 0.08 mg/ml, 0.09 mg/ml, 0.10 mg/ml, 0.2 mg/ml, 0.3 mg/ml, 0.4 mg/ml, 또는 0.5 mg/ml의 인산알루미늄을 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 최대 2.0 mg/ml, 1.9 mg/ml, 1.8 mg/ml, 1.7 mg/ml, 1.6 mg/ml, 1.5 mg/ml, 1.4 mg/ml, 1.3 mg/ml, 1.2 mg/ml, 1.1 mg/ml, 1.0 mg/ml, 0.9 mg/ml, 0.8 mg/ml, 또는 0.7 mg/ml의 PS-80을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 약 0.07 mg/ml의 PS-80을 포함한다. 범위를 규정하기 위해 임의의 최소 값은 본원에 기재된 임의의 최대 값과 조합될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 0.5 mg/ml의 인산알루미늄을 포함한다. 가장 바람직한 실시양태에서, 조성물은 인산알루미늄 (AlPO4)으로서 0.5 mg 알루미늄/ml를 포함한다. 이 농도는 서브패밀리 A 및 B 단백질의 알루미늄에 대한 결합 (적어도 90% 결합 이상)을 유지시킨다.
본 발명자들은 놀랍게도 제1 조성물 및 제2 조성물의 조합물을 포함하는 조성물이, 제1 조성물 중의 알루미늄에 결합된 MnB rLP2086 폴리펩티드의 백분율과 비교하였을 때, 알루미늄에 결합된 MnB rLP2086 폴리펩티드의 백분율을 변화시킬 수 있는 한편, 제1 및 제2 조성물의 조합물은 놀랍게도 알루미늄에 대한 총 MnB rLP2086 폴리펩티드의 적어도 90%의 결합을 유지시킨다는 것을 발견하였다. 따라서, 한 실시양태에서, 조합된 조성물 중의 알루미늄에 대한 총 MnB rLP2086 폴리펩티드의 백분율은 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%이다. 바람직하게는, 조합된 조성물 중의 알루미늄에 대한 총 MnB rLP2086 폴리펩티드의 백분율은 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 및 가장 바람직하게는 적어도 100%이다.
또 다른 실시양태에서, 면역원성 조성물 중의 알루미늄에 결합된 폴리펩티드의 농도는 동결건조된 조성물의 재구성 전 액체 조성물 중의 알루미늄에 결합된 폴리펩티드의 농도와 비교하여 24시간 후에 감소되지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 면역원성 조성물 중의 MenAAH-TT 접합체의 농도는 동결건조된 조성물 중의 MenAAH-TT 접합체의 농도와 비교하여 24시간 후에 감소되지 않는다. 한 실시양태에서, 농도는 재구성 전의 액체 조성물 중의 각각의 농도와 비교하여 24시간 후 최대 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 또는 20%만큼 감소된다.
또 다른 실시양태에서, 면역원성 조성물 중의 MenCAH-TT 접합체의 농도는 동결건조된 조성물 중의 MenCAH-TT 접합체의 농도와 비교하여 24시간 후에 감소되지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 면역원성 조성물 중의 MenW-TT 접합체의 농도는 동결건조된 조성물 중의 MenW-TT 접합체의 농도와 비교하여 24시간 후에 감소되지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 면역원성 조성물 중의 MenY-TT 접합체의 농도는 동결건조된 조성물 중의 MenY-TT 접합체의 농도와 비교하여 24시간 후에 감소되지 않는다. 한 실시양태에서, 농도는 재구성 전 동결건조된 조성물 중의 각각의 농도와 비교하여 24시간 후 최대 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 또는 20%만큼 감소된다.
부형제
한 실시양태에서, 조성물은 히스티딘을 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 적어도 650 μg, 660 μg, 670 μg, 680 μg, 690 μg, 700 μg, 710 μg, 720 μg, 730 μg, 740 μg, 750 μg, 760 μg, 770 μg, 780 μg, 790 μg, 800 μg, 810 μg, 820 μg, 830 μg, 840 μg, 또는 850 μg의 히스티딘을 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 최대 1560 μg, 1500 μg, 1400 μg, 1300 μg, 1200 μg, 1100 μg, 1000 μg, 950 μg, 900 μg, 890 μg, 880 μg, 870 μg, 860 μg, 850 μg, 840 μg, 830 μg, 820 μg, 810 μg, 800 μg, 790 μg, 또는 780 μg의 히스티딘을 포함한다. 범위를 규정하기 위해 임의의 최소 값은 본원에 기재된 임의의 최대 값과 조합될 수 있다. 바람직하게는, 조성물은 780 μg의 히스티딘을 포함한다.
한 실시양태에서, 조성물은 트리스, 포스페이트 또는 숙시네이트 완충제를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 트리스 완충제를 포함하지 않는다. 바람직한 경우에, 조성물은 포스페이트 완충제를 포함하지 않는다. 하나의 바람직한 실시양태에서, 조성물은 숙시네이트 완충제를 포함하지 않는다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 조성물은 히스티딘 완충제를 포함한다.
한 실시양태에서, 조성물은 염화나트륨을 포함한다. MenABCWY 조성물 중의 염화나트륨 농도는 160.5-161.1 mM 사이에서 달라질 수 있다.
한 실시양태에서, 조성물의 pH는 5.5 내지 7.5이다. 바람직한 실시양태에서, 조성물의 pH는 5.8 내지 7.0, 가장 바람직하게는 pH 5.8 내지 pH 6.0이다. 한 실시양태에서, 조성물의 pH는 최대 6.1이다. 한 실시양태에서, 조성물의 pH는 5.8이다.
키트
본 발명의 추가 측면은 포유동물에서 네이세리아 메닌기티디스에 대한 살박테리아 항체를 도출하기 위한 조성물의 용량을 투여하기 위한 키트이다.
한 측면에서, 키트는 상기 기재된 바와 같은 제1 폴리펩티드 및 상기 기재된 바와 같은 제2 폴리펩티드를 포함하는 제1 조성물을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 키트는 추가로, MenAAH-TT 접합체, MenCAH-TT 접합체, MenW-TT 접합체, 및 MenY-TT 접합체를 포함하는 제2 조성물을 포함한다. 한 실시양태에서, 키트는 적어도 2개의 용기를 포함하며, 여기서 제1 용기는 제1 조성물을 포함하고, 제2 용기는 제2 조성물을 포함한다.
한 실시양태에서, 키트는 액체 제1 조성물 및 동결건조된 제2 조성물을 포함한다. 바람직하게는, 키트는 액체 MnB 2가 rLP2086 조성물 및 동결건조된 MenACWY-TT 조성물을 포함한다.
본 발명자들은 놀랍게도 제1 조성물 및 제2 조성물의 조합물을 포함하는 조성물이 제1 조성물 중의 MnB rLP2086 폴리펩티드에 대한 폴리소르베이트-80의 몰비를 변화시키는 한편, 조합된 조성물에 대한 추가의 계면활성제는 놀랍게도 조합된 조성물 중의 MnB rLP2086 폴리펩티드의 용해도 및 안정성을 유지시키는데 필요하지 않다는 것을 발견하였다. 따라서, 한 실시양태에서, 키트는 0.02 mg 초과의 폴리소르베이트-80을 포함하지 않는다.
본 발명의 한 실시양태에서, 키트는 하기 상업적 면역원성 조성물: 메낙트라(R), 멘베오(R), 아다셀(R), 하브릭스(R), 가르다실(R), 레페박스, 또는 그의 임의의 조합 중 어느 하나를 추가로 포함하지 않는다. 예를 들어, 키트는 바람직하게는 담체 단백질이 디프테리아 톡소이드인 수막구균 A, C, Y 및 W-135 폴리사카라이드 접합체 (MCV4) 조성물을 추가로 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 키트는 담체 단백질이 CRM197인 수막구균 A, C, Y 및 W-135 폴리사카라이드 접합체 (MCV4) 조성물을 추가로 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 키트는 염화나트륨 및 물로 이루어진 희석제를 포함하는 니멘릭스 백신을 추가로 포함하지 않는다.
살박테리아 활성
MnB의 질환 발생률은 대략 1/100,000이고, 이는 효능의 통계적으로 유의한 평가를 지지하기 위해서는 극히 많은 수의 대상체 (400,000 내지 6백만명 초과)가 요구될 것임을 의미한다. 따라서, 보호 및 백신 효능의 대용물인 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정 (hSBA)이 임상 시험에서 면역원성을 평가하는데 사용된다.
화이자(Pfizer)는 2000년부터 2006년까지 IMD-유발 분리주를 포함한 광범위한 MnB 균주 수집물 (N=적어도 1263)을 구축하였다. MnB 분리주는 미국 질병 관리 예방센터 (CDC) 및 유럽 국가로부터의 건강 및 표준 실험실로부터 체계적으로 수집되었다.
한 실시양태에서, 인간에게 조성물을 투여함으로써 유도되는 면역 반응은 4종의 엔. 메닌기티디스 혈청군 B (MnB) 균주에 대한 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정 (hSBA)을 사용하여 결정된다. hSBA에 사용되는 MnB 균주는 균주 풀로부터 선택되었다. 균주 풀은 체계적으로 수집된 임상적으로 관련된 엔. 메닌기티디스 균주의 수집물을 나타낸다.
모든 시험 균주, 특히 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드 둘 다에 대해 이종인 서열을 갖는 지단백질 2086 변이체를 발현하는 균주에 대한 hSBA 반응의 높은 비율은, 조성물이 추가의 혈청군, 예컨대 혈청군 X를 포함한 적어도 혈청군 B로부터의 rLP2086 (FHBP)을 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주에 대한 높은 혈청보호를 부여하는데 충분한 광범위한 보호 백신이라는 것을 시사한다.
서브패밀리 A 균주
한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) 서브패밀리 A 단백질을 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 A05를 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주에 대해 이종인 지단백질 2086 변이체를 발현하는 LP2086 (fHBP) 서브패밀리 A 균주이다. 예를 들어, 한 실시양태에서, hSBA 균주는 균주 M98250771에 대해 이종인 지단백질 2086 변이체를 발현하는 LP2086 (fHBP) 서브패밀리 A 균주이다.
한 실시양태에서, hSBA 균주는 fHBP A10을 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) A22를 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) A56을 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주이다. 추가 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) A22 및 LP2086 (fHBP) A56 균주이다. 또 다른 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 A04를 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 A05를 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 A12를 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 A22를 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 A12를 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 A04를 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 A19를 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 A07을 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주이다. 추가 실시양태에서, hSBA 균주는 A22-, A12-, A19-, A05-, 및 A07-발현 균주 중 어느 하나를 포함한다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 A06-, A15-, 및 A29-발현 균주 중 어느 하나를 포함한다.
한 실시양태에서, 면역 반응은 A05를 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주에 대해 이종인 엔. 메닌기티디스 혈청군 B fHPB 서브패밀리 A 균주에 대해 살박테리아성이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B A22 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B A56 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B A06 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B A15 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B A29 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B A62 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 균주 M98250771에 대해 이종인 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살박테리아성이다.
한 실시양태에서, 면역 반응은 제1 폴리펩티드에 대해 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살박테리아성이다. 또 다른 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 균주 M98250771에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살박테리아성이다. 바람직한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 균주 M98250771에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 적어도 80%, 보다 바람직하게는 적어도 84% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살박테리아성이다.
또 다른 실시양태에서, 면역 반응은 제1 폴리펩티드에 대해 최대 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살박테리아성이다. 또 다른 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 균주 M98250771에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 최대 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살박테리아성이다. 바람직한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 균주 M98250771에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 최대 85%, 보다 바람직하게는 최대 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살박테리아성이다. 범위를 규정하기 위해 임의의 최소 값은 본원에 기재된 임의의 최대 값과 조합될 수 있다.
한 실시양태에서, 조성물에 의해 도출되는 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B fHPB 서브패밀리 A 균주 뿐만 아니라, 혈청군이 혈청군 B가 아닌 fHBP 서브패밀리 A 폴리펩티드를 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주에 대해서도 살박테리아성이다. 예를 들어, 하나의 바람직한 실시양태에서, 조성물에 의해 도출되는 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해, 및 fHBP A05에 대해 이종인 fHBP 서브패밀리 A 폴리펩티드를 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 C 균주에 대해 살박테리아성이다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 면역 반응은 fHBP A10을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 C 균주에 대한 것이다. 또 다른 실시양태에서, 면역 반응은 fHBP A19를 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 W 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 균주 M98250771에 대해 이종인 fHBP 서브패밀리 A 폴리펩티드를 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주에 대해 살박테리아성이다.
서브패밀리 B 균주
한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) 서브패밀리 B 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 B01을 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주에 대해 이종인 지단백질 2086 변이체를 발현하는 LP2086 (fHBP) 서브패밀리 B 균주이다. 예를 들어, 한 실시양태에서, hSBA 균주는 균주 CDC1127에 대해 이종인 지단백질 2086 변이체를 발현하는 LP2086 (fHBP) 서브패밀리 B 균주이다. 바람직한 실시양태에서, hSBA 균주는 균주 CDC1573에 대해 이종인 지단백질 2086 변이체를 발현하는 LP2086 (fHBP) 서브패밀리 B 균주이다.
한 실시양태에서, 면역 반응은 B01을 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주에 대해 이종인 엔. 메닌기티디스 혈청군 B fHPB 서브패밀리 B 균주에 대해 살박테리아성이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B B24 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B B44 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B B16 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B B03 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B B09 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B B15 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B B153 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 균주 CDC1573에 대해 이종인 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살박테리아성이다.
한 실시양태에서, 면역 반응은 제2 폴리펩티드에 대해 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살박테리아성이다. 또 다른 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 균주 CDC1573에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살박테리아성이다. 바람직한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 균주 CDC1573에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 적어도 80% 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 87% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살박테리아성이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 균주 CDC1573에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살박테리아성이다.
또 다른 실시양태에서, 면역 반응은 제2 폴리펩티드에 대해 최대 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살박테리아성이다. 또 다른 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 균주 CDC1573에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 최대 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살박테리아성이다. 바람직한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 균주 CDC1573에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 최대 88% 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살박테리아성이다. 범위를 규정하기 위해 임의의 최소 값은 본원에 기재된 임의의 최대 값과 조합될 수 있다.
한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) B24 균주이다. 또 다른 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) B44 균주이다. 추가 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) B24 및 LP2086 (fHBP) B44 균주를 포함한다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) A22, LP2086 (fHBP) A56, LP2086 (fHBP) B24, 및 LP2086 (fHBP) B44 균주를 포함한다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 B15를 포함한다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 B153을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 B16 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 B03 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 B09 균주이다. 추가 실시양태에서, hSBA 균주는 B24, B16, B44, B03, 및 B09, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, hSBA 균주는 B24, B16, B44, A22, B03, B09, A12, A19, A05, 및 A07, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, hSBA 균주는 A06, A07, A12, A15, A19, A29, B03, B09, B15, 및 B16, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다.
한 실시양태에서, 방법은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B fHPB 서브패밀리 A 균주에 대한 면역 반응 및 엔. 메닌기티디스 혈청군 B fHPB 서브패밀리 B 균주에 대한 면역 반응을 유도한다. 바람직하게는, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B fHPB 서브패밀리 A 균주에 대해, 및 엔. 메닌기티디스 혈청군 B fHPB 서브패밀리 B 균주에 대해 살박테리아성이다.
한 실시양태에서, 조성물에 의해 도출되는 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B fHPB 서브패밀리 B 균주 뿐만 아니라, 혈청군이 혈청군 B가 아닌 fHBP 서브패밀리 B 폴리펩티드를 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주에 대해서도 살박테리아성이다. 예를 들어, 하나의 바람직한 실시양태에서, 조성물에 의해 도출되는 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해, 및 fHBP B01에 대해 이종인 fHBP 서브패밀리 B 폴리펩티드를 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 Y 균주에 대해 살박테리아성이다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 면역 반응은 fHBP B16을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 A 균주에 대한 것이다. 또 다른 실시양태에서, 면역 반응은 fHBP B47을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 Y 균주에 대한 것이다. 또 다른 실시양태에서, 면역 반응은 fHBP B49를 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 엔. 메닌기티디스 혈청군 B 균주 CDC1573에 대해 이종인 fHBP 서브패밀리 B 폴리펩티드를 발현하는 엔. 메닌기티디스 균주에 대해 살박테리아성이다.
역가
한 실시양태에서, 조성물은 hSBA에서 동일한 조건 하에 측정 시, 조성물의 용량의 투여 전의 인간에서의 살박테리아 역가와 비교하여, 인간에서 살박테리아 역가의 증가를 유도한다. 한 실시양태에서, 살박테리아 역가의 증가는 hSBA에서 동일한 조건 하에 측정 시, 조성물의 제1 용량의 투여 전의 인간에서의 살박테리아 역가와 비교하여, 조성물의 제1 용량의 투여 후의 인간에서의 살박테리아 역가와 비교된다. 한 실시양태에서, 역가의 증가는 hSBA에서 동일한 조건 하에 측정 시, 조성물의 제2 용량의 투여 전의 인간에서의 살박테리아 역가와 비교하여, 조성물의 제2 용량 후에 관찰된다. 또 다른 실시양태에서, 살박테리아 역가의 증가는 hSBA에서 동일한 조건 하에 측정 시, 조성물의 제3 용량의 투여 전의 인간에서의 살박테리아 역가와 비교하여, 조성물의 제3 용량 후에 관찰된다.
한 실시양태에서, 조성물은 용량의 투여 후 인간에서 살박테리아 역가를 유도하며, 여기서 살박테리아 역가는 hSBA에서 동일한 조건 하에 측정 시, 용량의 투여 전의 인간에서의 살박테리아 역가보다 적어도 1-배를 초과하여 더 높다. 예를 들어, 살박테리아 역가는 hSBA에서 동일한 조건 하에 측정 시, 용량의 투여 전의 인간에서의 살박테리아 역가와 비교하여, 조성물의 용량을 제공한 후 인간에서 적어도 1.01-배, 1.1-배, 1.5-배, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배, 11-배, 12-배, 13-배, 14-배, 15-배, 또는 16-배 더 높을 수 있다.
한 실시양태에서, "반응자"는 조성물이 용량의 투여 후 인간에서 살박테리아 역가를 유도하는 인간을 지칭하고, 여기서 살박테리아 역가는 용량의 투여 전의 인간에서의 살박테리아 역가보다 적어도 1-배를 초과하여 더 높다. 바람직한 실시양태에서, 반응자는 용량의 투여 전의 인간에서의 살박테리아 역가와 비교하여 hSBA 역가에서 적어도 ≥ 4-배 상승을 달성한다. 이러한 반응자는 보호 역가를 갖는 것으로 언급될 수 있다. 일부 실시양태에서, 보호 역가는 1:4를 초과하는 역가이다.
한 실시양태에서, hSBA 역가는 측정가능한 효과를 생성하는 혈청 샘플의 최고 희석의 역수이다. 예를 들어, 한 실시양태에서, hSBA 역가는 T30 CFU 값 (즉 시험 혈청을 제외한 모든 검정 성분을 함유하는 검정 웰에서 인큐베이션한 후 생존한 박테리아의 수; 100% 박테리아 생존)과 비교하여 MnB 박테리아의 적어도 50% 감소 (50% 박테리아 생존)를 발생시키는 시험 혈청의 최고 2-배 희석의 역수이다.
한 실시양태에서, 조성물은 hSBA에서 동일한 조건 하에 측정 시, 제1 용량의 제공 전의 인간에서의 살박테리아 역가보다 적어도 2-배 더 높은 (예를 들어, 제1 용량의 부재 하의 인간에서의 살박테리아 역가보다 더 높은) 제1 용량의 제공 후의 인간에서의 살박테리아 역가를 유도한다. 한 실시양태에서, 조성물은 인간 보체를 사용한 인간 혈청 살박테리아 검정 (hSBA)에서 동일한 조건 하에 측정 시, 제1 용량의 제공 전의 인간에서의 살박테리아 역가보다 적어도 4-배 더 높은 인간에서의 살박테리아 역가를 유도한다. 한 실시양태에서, 조성물은 인간 보체를 사용한 인간 혈청 살박테리아 검정 (hSBA)에서 동일한 조건 하에 측정 시, 제1 용량의 제공 전의 인간에서의 살박테리아 역가보다 적어도 8-배 더 높은 인간에서의 살박테리아 역가를 유도한다.
바람직한 실시양태에서, 인간 혈청 보체는 주어진 hSBA 시험 균주에 대해 낮은 내인성 살박테리아 활성을 갖는 인간으로부터 유래된다. 낮은 내인성 살박테리아 활성은, 예를 들어, 주어진 hSBA 시험 균주에 대해 적어도 1:4 희석 미만의 살박테리아 역가를 지칭한다. 한 실시양태에서, 인간 보체는 주어진 hSBA 시험 균주에 대해 적어도 1:4 희석 미만, 예컨대 1:2 희석의 hSBA 역가를 갖는 인간으로부터 유래되고, 여기서 조성물은 인간에게 투여되지 않는다.
인간은 조성물, 예컨대 2가 rLP2086 조성물의 투여 전에 1:4 미만의 hSBA 역가를 나타낼 수 있거나, 또는 인간은 조성물의 투여 전에 ≥ 1:4의 hSBA 역가를 나타낼 수 있다. 따라서, 바람직한 실시양태 및 실시예에서, 인간에게의 조성물의 적어도 1회 용량의 투여는 투여 전의 인간에서의 역가보다 적어도 4-배 더 큰 hSBA 역가를 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 인간에게의 조성물의 적어도 1회 용량의 투여는 적어도 1:4를 초과하는 hSBA 역가, 예컨대 예를 들어, ≥ 1:8의 hSBA 역가, ≥ 1:16의 hSBA 역가, 및 ≥ 1:32의 hSBA 역가를 발생시킨다. 본원에 기재된 각각의 실시예는 ≥ 1:8 및/또는 ≥ 1:16의 hSBA 역가를 갖는 인간 대상체의 비율의 평가를 포함하고, 여기서는 2가 rLP2086 조성물이 인간에게 투여되었다. 일부 실시양태에서, 조성물의 투여 전과 비교하여 조성물의 투여 후의 인간에서의 역가의 4-배 상승은 보호가 조성물과 연관된다는 것을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 1:4를 초과하는 hSBA 역가의 이러한 바람직한 평가는 보호, 즉 인간에서 유도된 살박테리아 면역 반응이 조성물과 연관된다는 것을 나타낸다.
한 실시양태에서, 인간은 조성물의 제1 용량의 투여 후 hSBA의 정량 하한치 (LLOQ) 이상의 hSBA 역가를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 인간은 조성물의 제2 용량의 투여 후 hSBA의 LLOQ 이상의 hSBA 역가를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 인간은 조성물의 제3 용량의 투여 후 hSBA의 LLOQ 이상의 hSBA 역가를 갖는다.
방법 및 투여
한 측면에서, 본 발명은 인간에서 엔. 메닌기티디스에 대한 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 인간에게 백신접종하는 방법에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 방법은 인간에게 상기 기재된 조성물의 적어도 1회의 용량을 투여하는 것을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 방법은 인간에게 상기 기재된 조성물의 최대 1회의 용량을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 인간에게 상기 기재된 조성물의 적어도 제1 용량 및 제2 용량을 투여하는 것을 포함한다.
한 실시양태에서, 제2 용량은 제1 용량의 적어도 20, 30, 50, 60, 100, 120, 160, 170, 또는 180일 후, 및 제1 용량의 최대 250, 210, 200, 또는 190일 후에 투여된다. 범위를 규정하기 위해 임의의 최소 값은 본원에 기재된 임의의 최대 값과 조합될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 제2 용량은 제1 용량의 약 30일 후에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 제2 용량은 제1 용량의 약 60일 후에, 예컨대 예를 들어 0, 2개월 면역화 스케줄로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 제2 용량은 제1 용량의 약 180일 후에, 예컨대 예를 들어, 0, 6개월 면역화 스케줄로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 제2 용량은 제1 용량의 약 120일 후에, 예컨대 예를 들어, 2, 6개월 면역화 스케줄로 투여된다.
한 실시양태에서, 방법은 인간에게 2회 용량의 조성물 및 최대 2회 용량을 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 2회 용량은 제1 용량 후 약 6개월의 기간 내에 투여된다. 한 실시양태에서, 방법은 인간에게의 추가의 부스터 투여를 포함하지 않는다. 본원에 사용된 "부스터"는 인간에게의 조성물의 추가 투여를 지칭한다. 인간에게 최대 2회 용량의 조성물을 투여하는 것이 유리할 수 있다. 이러한 이점은, 예를 들어, 인간이 완전한 투여 스케줄을 준수하는 것을 용이하게 하는 것 및 스케줄의 비용-유효성을 용이하게 하는 것을 포함한다.
한 실시양태에서, 제1 용량 및 제2 용량은 인간에게 약 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 또는 200일의 기간에 걸쳐, 및 제1 용량의 최대 400, 390, 380, 370, 365, 350, 340, 330, 320, 310, 300, 290, 280, 270, 260, 250, 240, 230, 220, 210, 또는 200일 후에 투여된다. 범위를 규정하기 위해 임의의 최소 값은 본원에 기재된 임의의 최대 값과 조합될 수 있다. 바람직하게는, 제1 및 제2 용량은 적어도 4주 간격, 예를 들어 ≥ 8주 간격, ≥ 2개월 간격, ≥ 3개월 간격, ≥ 6개월 간격 등으로 투여될 것이다.
한 실시양태에서, 제1 용량 및 제2 용량은 약 30일의 기간에 걸쳐 인간에게 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 제1 용량 및 제2 용량은 약 60일의 기간에 걸쳐 인간에게 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 제1 용량 및 제2 용량은 약 180일의 기간에 걸쳐 인간에게 투여된다.
편리하게는, 제1 용량은 또 다른 백신과 실질적으로 동일한 시간에 (예를 들어 건강관리 전문가에게의 동일한 의학 상담 또는 방문 동안 또는 수막구균 백신의 제1 용량의 24시간 내에), 예를 들어 B형 간염 바이러스 백신, 디프테리아 백신, 파상풍 백신, 백일해 백신 (세포성 또는 바람직하게는 무세포성), 헤모필루스 인플루엔자에(Haemophilus influenzae) 유형 b 백신, 스트렙토코쿠스 뉴모니아에(Streptococcus pneumoniae) 백신, 및/또는 소아마비 백신 (바람직하게는 불활성화된 폴리오바이러스 백신으로)과 실질적으로 동일한 시간에 투여될 수 있다. 이들 임의로 공투여되는 백신은 각각 1가 백신일 수 있거나 또는 (예를 들어 DTP 백신의 일부로서) 조합 백신의 일부일 수 있다.
편리하게는, 제2 용량은 또 다른 백신과 실질적으로 동일한 시간에 (예를 들어 건강관리 전문가에게의 동일한 의학 상담 또는 방문 동안 또는 수막구균 백신의 제2 용량의 24시간 내에), 예를 들어 B형 간염 바이러스 백신, 디프테리아 백신, 파상풍 백신, 백일해 백신 (세포성 또는 무세포성), 헤모필루스 인플루엔자에 유형 b 백신, 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 백신, 소아마비 백신 (바람직하게는 불활성화된 폴리오바이러스 백신으로), 인플루엔자 백신, 수두 백신, 홍역 백신, 볼거리 백신, 및/또는 풍진 백신과 실질적으로 동일한 시간에 투여될 수 있다. 이들 임의로 공투여되는 백신은 각각 1가 백신일 수 있거나 또는 (예를 들어 MMR 백신의 일부로서) 조합 백신의 일부일 수 있다.
편리하게는, 제3 용량은 또 다른 백신과 실질적으로 동일한 시간에 (예를 들어 건강관리 전문가에게의 동일한 의학 상담 또는 방문 동안 또는 수막구균 백신의 제3 용량의 24시간 내에), 예를 들어 B형 간염 바이러스 백신, 디프테리아 백신, 파상풍 백신, 백일해 백신 (세포성 또는 무세포성), 헤모필루스 인플루엔자에 유형 b 백신, 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 백신, 소아마비 백신 (바람직하게는 불활성화된 폴리오바이러스 백신으로), 인플루엔자 백신, 수두 백신, 홍역 백신, 볼거리 백신, 및/또는 풍진 백신과 실질적으로 동일한 시간에 투여될 수 있다. 이들 임의로 공투여되는 백신은 각각 1가 백신일 수 있거나 또는 (예를 들어 MMR 백신의 일부로서) 조합 백신의 일부일 수 있다.
3회의 용량
한 실시양태에서, 조성물의 3회-용량 스케줄은 2회-용량 스케줄보다 더 큰 백분율의 인간에서 제1 및/또는 제2 폴리펩티드에 대해 이종인 LP2086 (fHBP)을 발현하는 다수의 균주에 대해 살박테리아 역가를 유도한다.
한 실시양태에서, 방법은 인간에게 조성물의 3회 용량을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 인간에게 조성물의 최대 3회 용량을 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 3회 용량은 제1 용량 후 약 6개월의 기간 내에 투여된다. 한 실시양태에서, 방법은 제3 용량 후 인간에게 부스터 용량을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 제3 용량 후 인간에게 부스터 용량을 투여하는 것을 포함하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 인간에게 조성물의 제4 또는 부스터 용량을 투여하는 것을 추가로 포함하지 않는다. 추가 실시양태에서, 약 6개월의 기간 내에 최대 3회 용량이 인간에게 투여된다.
예시적인 실시양태에서, 제2 용량은 제1 용량의 약 30일 후에 투여되고, 제3 용량은 제2 용량의 약 150일 후, 예컨대 예를 들어, 0, 1, 6개월 면역화 스케줄로 투여된다. 또 다른 예시적인 실시양태에서, 제2 용량은 제1 용량의 약 60일 후에 투여되고, 제3 용량은 제2 용량의 약 120일 후, 예컨대 예를 들어, 0, 2, 6개월 면역화 스케줄로 투여된다.
한 실시양태에서, 제1 용량, 제2 용량, 및 제3 용량은 약 150, 160, 170, 또는 180일, 및 최대 240, 210, 200, 또는 190일의 기간에 걸쳐 인간에게 투여된다. 범위를 규정하기 위해 임의의 최소 값은 본원에 기재된 임의의 최대 값과 조합될 수 있다. 바람직하게는, 제1 용량, 제2 용량, 및 제3 용량은 약 180일 또는 6개월의 기간에 걸쳐 인간에게 투여된다. 예를 들어, 제2 용량은 제1 용량의 약 60일 후 인간에게 투여될 수 있고, 제3 용량은 제2 용량의 약 120일 후 인간에게 투여될 수 있다. 따라서, 예시적인 투여 스케줄은 약 제0개월, 제2개월, 및 제6개월에 인간에게 용량을 투여하는 것을 포함한다.
상기 기재된 바와 같이, 면역원성 조성물의 다중 용량이 인간에게 투여될 수 있고, 각각의 용량 사이의 일수는 달라질 수 있다. 방법의 이점은, 예를 들어, 인간이 투여 스케줄을 준수하는 것에 대한 유연성을 포함한다.
한 실시양태에서, 방법은 동일한 면역원성 조성물의 최대 3회 용량을 인간에게 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, 바람직한 실시양태에서, 방법은 제1 조성물의 제1 용량을 인간에게 투여하는 것, 제2 조성물의 제2 용량을 인간에게 투여하는 것, 및 제3 조성물의 제3 용량을 인간에게 투여하는 것을 포함하지 않으며, 여기서 제1, 제2 및 제3 조성물은 동일하지 않다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 동일한 면역원성 조성물의 최대 4회 용량을 인간에게 투여하는 것을 포함한다.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 실시양태를 예시한다. 본원에서 달리 나타내지 않는 한, 하기 실시예에서 120-μg 2가 rLP2086 용량 수준으로의 MnB 2가 rLP2086 조성물이 언급되며, 이는 하기를 포함하는 조성물의 바람직한 예시적인 실시양태이다: 0.5 mL 용량당 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드 60 μg, 0.5 mL 용량당 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드 60 μg, 제1 폴리펩티드에 대해 2.8 몰비의 폴리소르베이트-80, 제2 폴리펩티드에 대해 2.8 몰비의 폴리소르베이트-80, 0.5 mg Al3+/조성물 ml, 10 mM 히스티딘, 및 150 mM 염화나트륨.
보다 구체적으로, 120-μg 2가 rLP2086 용량 수준으로의 임상시험용 2가 재조합 rLP2086 백신은 (a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드 60 μg; (b) 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드 60 μg; (c) 18 μg 폴리소르베이트-80; (d) 250 μg 알루미늄; (e) 780 μg 히스티딘; 및 (f) 4380 μg 염화나트륨을 포함한다. 각각의 용량은 0.5 mL이다.
본원에서 달리 나타내지 않는 한, 하기 실시예에서 MenACWY-TT 조성물이 언급되며, 이는 각각이 담체 단백질로서 파상풍 톡소이드에 커플링된 네이세리아 메닌기티디스 캡슐 폴리사카라이드 A, C, W-135 및 Y를 포함하는 4가 수막구균 폴리사카라이드 접합된 조성물의 바람직한 예시적인 실시양태이다. 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A 및 C 폴리사카라이드는 아디프산 디히드라지드 (AH) 스페이서와 접합되고, 파상풍 톡소이드에 간접적으로 접합되는 반면에, W-135 및 Y 폴리사카라이드는 파상풍 톡소이드에 직접 접합된다. 조성물은 어떠한 보존제 또는 아주반트도 함유하지 않는다.
보다 구체적으로, 하기 실시예에 기재된 동결건조된 MenACWY-TT 조성물은 용량 (0.5 mL)당 파상풍 톡소이드 담체 단백질에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A 폴리사카라이드 5 마이크로그램; 파상풍 톡소이드 담체 단백질에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C 폴리사카라이드 5 마이크로그램; 파상풍 톡소이드 담체 단백질에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W-135 폴리사카라이드 5 마이크로그램; 파상풍 톡소이드 담체 단백질에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 폴리사카라이드 5 마이크로그램; 28 mg 수크로스; 97 μg 트로메타몰을 포함한다.
실시예 1: MenABCWY 조성물
동결건조된 MenACWY-TT 약물 생성물 (하기 실시예 2에 기재됨) 바이알을 0.67 mL의 MnB 2가 rLP2086 약물 생성물 (하기 실시예 3에 기재됨)로 재구성함으로써 최종 MenABCWY 조성물을 제조하여, 근육내 주사를 위한 0.5 mL 용량의 MenABCWY 백신을 취출하였다. MenABCWY 백신의 제조에 사용된 모든 성분 및 그의 기능을 하기 표 1에 제공한다.
표 1. MenABCWY 백신의 조성
Figure pct00008
aMenABCWY 백신 중의 염화나트륨 농도는 임상용 및 상업용 니멘릭스 약물 제품 (DP) 로트의 조성에 기초하여 160.5-161.1 mM 사이에서 달라질 수 있다.
실시예 2: MnB 2가 rLP2086 약물 생성물의 설명 및 조성
MnB 2가 rLP2086 약물 생성물은 인산알루미늄 (AlPO4)으로서 0.5 mg/mL 알루미늄의 존재 하의 10 mM 히스티딘 완충제, 150 mM 염화나트륨 (NaCl), pH 6.0 중에 120 μg/mL/서브패밀리로 제제화된 rLP2086 서브패밀리 A 및 B 단백질로 구성된 멸균 액체 제제이다. 폴리소르베이트 80 (PS-80)을 약물 물질에 첨가하여 목표 PS-80 대 단백질 몰비를 수득한다. 따라서, PS-80은 약물 생성물 제제화 동안 첨가되지 않지만, 최종 약물 생성물에 동일한 비로 존재한다. 약물 생성물을 1 mL 주사기에 충전한다. 단일 용량의 백신은 보존제 없이 0.5 mL이다.
표 2. MnB 2가 rLP2086 약물 생성물의 조성
Figure pct00009
a폴리소르베이트 80 (PS-80)은 약물 물질의 일부이다. PS-80은 약물 생성물에서 계면활성제로서 기능한다.
b용량당 0.25 mg 알루미늄과 등가
폴리소르베이트 80 농도의 효과
폴리소르베이트 80 (PS-80)은 비-이온성 계면활성제이다. 이는 온도, 필터, 튜빙, 용기/마개 접촉 및 공정 혼합에 의해 유발될 수 있는 응집 및 흡착을 방지함으로써 제제 내의 MnB rLP2086 서브패밀리 A 및 B 단백질을 안정화시키고 가용화시키는데 사용된다. 시험관내 모노클로날 항체 기반 효력 검정을 사용한 안정성 연구는 최종 제제 중의 PS-80 대 MnB rLP2086 단백질의 보다 높은 몰비에서 서브패밀리 B 단백질의 불안정성을 입증하였다. 다양한 몰비의 PS-80 대 단백질을 사용한 실험은 효력을 유지하기 위한 PS-80 대 MnB rLP2086 단백질의 최적 몰비가 대략 1.4 내지 4.2라는 것을 입증하였다.
실시예 3: MenACWY-TT 조성물의 설명 및 조성
MenACWY-TT 약물 생성물은 폴리사카라이드에 대해 각각 ~3, ~3, ~1.5 및 ~1.3의 비로 각각 파상풍 톡소이드 (TT)에 접합된, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A, C, W 및 Y의 정제된 폴리사카라이드로 구성된다.
MenACWY-TT 약물 생성물은 동결건조 및 알루미늄 플립-오프 캡에 적합한 브로모부틸 고무 마개를 갖는 3 mL 유리 바이알에 공급된 동결건조 분말로서 제공된다. MenACWY-TT 약물 생성물의 제조에 사용된 모든 성분 및 그의 기능을 표 3에 제공한다.
표 3. MenACWY-TT 약물 생성물의 조성
Figure pct00010
a동결건조된 케이크는 또한 각각의 벌크 정제된 TT 접합체에 존재하는 염으로부터 생성된 염화나트륨을 함유한다. 염화나트륨 농도는 임상용 및 상업용 로트의 조성에 기초하여 10.5-11.1 mM 사이에서 달라진다.
실시예 4: MenABCWY 조성물의 제조
동결건조된 MenACWY-TT 약물 생성물 바이알을 0.67 mL의 MnB 2가 rLP2086으로 재구성함으로써 최종 MenABCWY 조성물을 클리닉에서 제조하였다. 생성된 MenABCWY 조성물 (백신 액체 약물 생성물)은 근육내 주사를 위한 pH 6.05의 160.5-161.1 mM 염화나트륨, 인산알루미늄 (AlPO4)으로서 0.5 mg/mL 알루미늄, 0.035 mg/mL 폴리소르베이트 80 및 56 mg/mL 수크로스를 함유하는 1.6 mM 트리스 완충제 및 10 mM 히스티딘 중의 120 mcg/mL/서브패밀리의 rLP2086 서브패밀리 A 및 B 단백질, 각각 ~ 3, ~ 3, ~ 1.5, 및 ~ 3의 비로 파상풍 톡소이드에 접합된 10 mcg/mL/유형의 농도의 네이세리아 메닌기티디스 유형 A, C, W 및 Y의 정제된 폴리사카라이드를 함유한다.
2종의 약물 생성물, MenACWY-TT 및 MnB 2가 rLP2086을 혼합하여 MenABCWY 백신을 제조하였다. 완충 성분 및 부형제를 각각의 성분의 개별 개발에 기초하여 선택하였고, 이는 연장된 보관 수명을 위해 필요한 안정성 프로파일을 제공하는 것으로 나타났다.
투여량 검증 연구를 수행하여 MenACWY-TT 약물 생성물 및 MnB 2가 rLP2086 약물 생성물이 MenABCWY 백신의 투여를 위해 함께 혼합할 경우 상용성이고, 모든 약물 생성물 및 투여 용액이 투여 성분과 상용성이고, 투여 용액이 용량 제조 및 투여 작업을 수행하기에 충분한 시간 동안 투여 성분 중에서 안정하다는 것을 입증하였다. 주위 온도 및 광 조건에서 유지 시간에 걸쳐 MenACWY-TT 약물 생성물을 0.67 mL의 MnB 2가 rLP2086 약물 생성물로 재구성하는 것에 의해 제조된 MenABCWY 백신의 안정성을 재구성된 바이알 및 투여 시린지에서 확인하였다.
MenABCWY 백신의 투여 용액을 대표하는 샘플을 안정성 표시 방법, 예컨대 항원 결합 및 순도에 대한 RP-HPLC, 바이오플렉스 활성 검정, ELISA, 및 ICP-MS를 사용하여 미리 규정된 수용 기준 하에 시험하였다. 본 연구의 결과는 실온 및 광 조건에서 24시간 동안의 MenABCWY 백신의 허용되는 안정성을 보여준다. 이들 데이터를 하기 실시예 5-15에 제시하고 기재한다.
실시예 5: MenABCWY 백신의 평가
동결건조된 MenACWY-TT 조성물을 MnB 2가 rLP2086 조성물로 재구성할 경우 허용되는 물리적 상용성 및 단기 안정성이 존재하는지 여부를 평가하기 위해 연구를 수행하였다. 동결건조된 MenACWY-TT 조성물 및 액체 MnB 2가 rLP2086 조성물을 조합하고, 실제 생활 조건을 근사화하기 위해 비제어 실온 환경에서 최대 24시간 동안 저장하였다. 동결건조된 MenACWY-TT 조성물은 액체 MnB 2가 rLP2086 조성물에 의해 온화한 수동 혼합 하에 재구성될 수 있고, 조합된 pH 및 오스몰랄농도는 주사가능한 전형적인 범위 내에 있는 것으로 입증되었다. 접합체 및 단백질에 대한 모든 주요 속성은 대조군의 것과, 비제어 실온 환경에서 최대 24시간 동안 유사하였다.
조합된 약물 생성물의 pH, 외관, 재구성의 용이성, 및 오스몰랄농도를 검토함으로써 물리적 상용성을 평가하였다. 항원의 안정성은 rLP2086 서브패밀리 A 및 서브패밀리 B 단백질의 농도, 순도 및 시험관내 상대 항원성 (IVRA) 뿐만 아니라 접합된 수막구균 A, C, Y, 및 W-135 폴리사카라이드의 농도를 ELISA에 의해 검토함으로써 평가하였다.
실시예 5 내지 실시예 15는 동결건조된 MenACWY-TT 조성물 및 액체 MnB 2가 rLP2086 조성물의 조합물, 즉 MenABCWY 조성물이 상용성이고 실온에서 적어도 24시간 동안 안정한 것으로 확인되었다는 것을 입증한다.
MenABCWY 조성물 중의 메닝 A, C, Y, 및 W-135 폴리사카라이드 농도를 결정하기 위한 ELISA- 메닝 A, C, Y 및 W-135 ELISA의 개발 & 검출을 위한 pAb의 스크리닝
ELISA 검정에 사용하기 위한 스크리닝을 위해 6개의 항체를 선택하였다. 각각의 10마리의 토끼의 4개의 군을 Men A, C, Y 또는 W-135 폴리사카라이드 TT 접합체로 면역화하고, 후속해서 항체 발생 후 토끼에서 방혈시켰다. 각각의 토끼를 담체 단백질 CRM197에 접합된 Men A, C, Y 또는 W-135 폴리사카라이드를 사용하여 결합 및 특이성에 대해 개별적으로 스크리닝하였다. 토끼 혈청을 양성 결합 신호에 대해 스크리닝하였고, 이는 배경 흡광도를 3-배 넘게 초과하는 흡광도 판독과 등가였다. 추가적으로, 블랭크에 대한 흡광도 판독을 초과하는 2차 또는 검출인 항원이 없는 혈청 조합물에 대한 임의의 흡광도 판독인 낮은 비-특이적 결합, 뿐만 아니라 배경 흡광도를 초과하는 이종 혈청형에 대한 임의의 흡광도 판독인 낮은 교차-반응성에 대해 토끼 혈청을 스크리닝하였다. 스크리닝 기준을 충족시키는 토끼를 풀링하였다. CRM 접합체를 사용하여 표준 곡선 범위를 확립하였고, 재구성된 동결건조된 MenACWY-TT 조성물을 사용하여 확인하였다. CRM 접합체를 사용하여 표준 곡선 범위를 확립하였고, 재구성된 동결건조된 MenACWY-TT 조성물을 사용하여 확인하였다.
조합된 약물 생성물 (MenABCWY 조성물) 중의 A, C, Y 및 W 접합체의 정량화의 실행가능성을 확립하였다. MnB 2가 rLP2086 조성물 단독은 검정에서 검출되지 않았음이 결정되었다. 추가적으로, MenABCWY 조성물 샘플 중의 인산알루미늄이 가용화되었을 때, 접합체의 완전한 회복이 수득되었다. 따라서, MnB 2가 rLP2086 조성물은 ELISA에 의한 MenACWY-TT 접합체의 정량화를 방해하지 않는 것으로 결정되었다.
실시예 6: MenACWY-TT 조성물의 존재 하에 MnB 2가 rLP2086 조성물을 검토하기 위한 방법의 적합성 평가
IEX-HPLC를 MenACWY-TT 조성물의 존재 하에서 MnB 2가 rLP2086 조성물 서브패밀리 A 및 B 단백질의 농도를 결정하는 것에 대한 그의 적합성에 대해 평가하였다. MenACWY-TT 조성물의 존재 하에서 및 MenACWY-TT 조성물의 부재 하에서, MnB 2가 rLP2086 조성물에 대한 총 단백질 및 결합된 단백질 결과를 검토하였다. 오버레이된 크로마토그램을 도 1에 제시한다.
표 4
Figure pct00011
실시예 7: MenACWY-TT 조성물의 존재 하에서의 MnB 2가 rLP2086 조성물 순도 및 피크 비의 평가
RP-HPLC를 MenACWY-TT 조성물의 존재 하에서 MnB 2가 rLP2086 조성물의 순도를 결정하는 것에 대한 그의 적합성에 대해 평가하였다. MenACWY-TT 조성물의 존재 하에서의 및 MenACWY-TT 조성물의 부재 하에서의 MnB 2가 rLP2086 조성물의 순도 결과를 비교하였다. 오버레이된 크로마토그램을 도 2에 제시한다. 불순물 피크의 통합의 예를 도 2에 삽입물로서 제시한다. 평가 결과는, MenACWY-TT 조성물의 존재가 RP-HPLC 방법을 사용한 MnB 2가 rLP2086 조성물 순도의 평가를 방해하지 않는다는 것을 보여준다.
실시예 8: MenACWY-TT 조성물의 존재 하에서의 MnB 2가 rLP2086 조성물 IVRA의 평가
IVRA 방법을 MenACWY-TT 조성물의 존재 하에서 MnB 2가 rLP2086 조성물 서브패밀리 A (서열식별번호: 1) 및 서브패밀리 B (서열식별번호: 2) 단백질의 시험관내 상대 항원성을 결정하는 것에 대한 그의 적합성에 대해 평가하였다.
MenACWY-TT 조성물의 존재 및 부재 하에서의 MnB 2가 rLP2086 조성물 서브패밀리 A 및 서브패밀리 B 단백질에 대한 IVRA 결과를 비교하였다. 실현가능성 평가 결과는 결과가 검정 가변성 내에서 대등하고, MenACWY-TT 조성물의 존재가 시험관내 상대 항원성의 결정을 방해하지 않는다는 것을 보여준다.
실시예 9: MenACWY-TT 조성물 바이알의 MnB 2가 rLP2086 조성물에 의한 재구성
MnB 2가 rLP2086 조성물 약물 생성물로 재구성된 MenACWY-TT 조성물 바이알을 사용하여 MenACWY-TT 조성물 및 MnB 2가 rLP2086 조성물 약물 생성물을 수행하였다. 방법에 따라, 염수 또는 MenACWY-TT 조성물 매트릭스 위약으로 재구성된 MenACWY-TT 조성물 바이알을 대조군으로서 사용하였다.
표 5
Figure pct00012
MenACWY-TT 조성물에 대한 염수 재구성 부피의 결정
니멘릭스® 상업용 제품 패키지는 동결건조된 MenACWY-TT 조성물을 함유하는 바이알 및 재구성에 사용되는 0.9% 염수를 함유하는 주사기 둘 다를 함유한다. MnB 2가 rLP2086 조성물에 의한 재구성 시 상업용 백신 중 최종 니멘릭스® 농도를 재현하기 위해, 시판 제품으로부터의 시린지를 사용하여 분배되는 염수의 양을 결정해야 했다. 이어서, 이러한 동일한 부피의 MnB 2가 rLP2086 조성물을 모든 재구성 연구에 사용할 것이다.
MnB 2가 rLP2086 조성물에 의한 MenACWY-TT 조성물 바이알의 재구성
MnB 2가 rLP2086 조성물을 10 mL 유리 바이알에 풀링하였다. 대략 800 μL의 용액을 1 mL 주사기 내로 취출하였다. 시린지의 조정된 내용물을 MenACWY-TT 조성물을 함유하는 바이알 내로 주입하였다. 바이알을 와류시켜 내용물을 용해시켰다.
MenABCWY 조성물에 대한 pH 및 외관을 이중 샘플에 대해 결정하였다. 염수로 재구성된 MenACWY-TT 조성물 및 MnB 2가 rLP2086 조성물로 재구성된 MenACWY-TT 조성물에 대해 오스몰랄농도를 삼중으로 측정하였다.
실시예 10: DP 매트릭스에서 메닝 A, C, Y, 및 W-135 폴리사카라이드 안정성을 평가하기 위한 SEC-MALLS.
조합된 약물 생성물 (MenABCWY 조성물) 중 접합된 수막구균 A, C, Y, 및 W-135 폴리사카라이드의 임의의 불안정성이 예상될 수 있는지 평가하기 위한 대용물로서 메닝 A, C, Y 및 W-135 폴리사카라이드를 사용하였다.
메닝 A, C, Y 및 W-135 폴리사카라이드의 처리
시약 제조 ("완전 MenABCWY 조성물 완충제 매트릭스")
2.24 g의 수크로스 및 7.8 mg의 트리스 (트로메타민)를 MnB rLP2086 단백질 (각각 히스티딘 20mM pH 6.0, NaCl 300mM, PS 80 0.07mg/ml, AlPO4 1mg/ml (8mM), rLP2086 서브패밀리 A (서열식별번호: 1) 및 서브패밀리 B (서열식별번호: 2) 단백질 240 μg/mL)이 존재하는 20 ml의 2X MnB 2가 rLP2086 조성물 완충제 매트릭스에 첨가하였다.
샘플 제조
각각의 메닝 폴리사카라이드를 완전 MenABCWY 조성물 완충제 매트릭스로 1:1 희석하고, 5℃, 25℃ 및 37℃에서 0, 6 및 24시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 샘플 현탁액을 14,000 r.p.m에서 1분 동안 회전시켰다. 상청액을 SEC-MALLS에 의해 분석하였다.
실시예 11: MenABCWY 조성물의 안정성 - 조합된 MnB 2가 rLP2086 및 MenACWY-TT 조성물의 pH, 외관 및 오스몰랄농도의 평가
조합된 MnB 2가 rLP2086 조성물 및 MenACWY-TT 조성물, 즉 MenABCWY 조성물의 pH 및 외관을 재구성 직후 및 24시간 후에 다시 평가하였다.
모든 결과는 예상된 바와 같았다 (표 6).
표 6. MenABCWY 조성물의 외관 및 pH
Figure pct00013
MnB 2가 rLP2086 조성물에 의해 재구성된 MenACWY-TT 조성물의 평균 오스몰랄농도는 염수로 재구성된 MenACWY-TT 조성물의 평균 오스몰랄농도의 3% 이내였다.
표 7
Figure pct00014
실시예 12: 조합된 약물 생성물 중의 메닝 A, C, Y 및 W-135 폴리사카라이드 접합체 농도
MenABCWY 조성물 중의 메닝 A, C, Y 및 W-135-TT 접합체의 농도를 초기에 및 24시간 후에 다시 평가하였다. 4종의 접합체의 농도는 24시간의 기간에 걸쳐 안정하였다 (표 8).
표 8. ELISA에 의한 MenABCWY 조성물 중의 MnA, C, Y 및 W 접합체의 단기 안정성 결과
Figure pct00015
실시예 13: MenABCWY 조성물 중의 MnB 2가 rLP2086 단백질의 안정성의 평가
조합된 약물 생성물 중의 총 및 결합된 rLP2086 서브패밀리 A (서열식별번호: 1) 및 서브패밀리 B (서열식별번호: 2) 단백질 농도
MenABCWY 조성물 샘플을 IEX-HPLC에 의해 분석하여 단백질 농도를 결정하였다. 표 9에 제시된 바와 같이, 총 단백질, (알루미늄에) 결합된 단백질, 및 MnB 2가 rLP2086 서브패밀리 A (서열식별번호: 1) 및 서브패밀리 B (서열식별번호: 2) 단백질 둘 다의 결합 % (알루미늄에 결합됨)는 24시간 내에 변화하지 않았고, 이는 rLP2086 서브패밀리 A 및 서브패밀리 B 단백질이 24시간의 기간에 걸쳐 안정하였음을 나타낸다.
표 9. 총 및 결합된 단백질 안정성
Figure pct00016
실시예 14: 조합된 MenABCWY 조성물 중의 rLP2086 단백질 순도 및 피크 비
MenABCWY 조성물 샘플을 RP-HPLC에 의해 분석하여 rLP2086 단백질에 대한 순도 및 피크 비를 결정하였다. 도 3을 참조한다. 11.9분의 피크는 순도 계산으로부터 제외된다.
조합된 약물 생성물 중의 rLP2086 서브패밀리 A 및 서브패밀리 B 단백질 IVRA
MenABCWY 조성물 샘플의 IVRA를 혼합 후 최대 24시간 동안 평가하였다. MenABCWY 조성물 중의 rLP2086 서브패밀리 A (서열식별번호: 1) 및 서브패밀리 B (서열식별번호: 2) 단백질의 상대 항원성은 24시간의 기간에 걸쳐 안정한 것으로 결정되었다.
실시예 15: SEC-MALS에 의한 완전 MenABCWY 조성물 완충제 매트릭스 중의 메닝 A, C, Y 및 W-135 폴리사카라이드 안정성
다양한 온도에서의 6 및 24시간 인큐베이션 후 SEC-MALLS에 의한 완전 MenABCWY 조성물 완충제 매트릭스 중의 메닝 A PS의 안정성
메닝 A, C, W 및 Y 폴리사카라이드를 완전 MenABCWY 조성물 완충제 매트릭스와 혼합하고, 5℃, 25℃ 및 37℃에서 최대 24시간 동안 인큐베이션한 후 SEC-MALS에 의해 안정성을 평가하였다. 모든 4종의 폴리사카라이드 5℃ 및 25℃에서 최대 24시간 동안 안정한 것으로 보였다. 일부 분해가 메닝 A 및 Y에 대해 37℃에서 관찰되었다. 메닝 Y 폴리사카라이드의 경우 처음을 제외한 모든 시험된 조건 하에서 높은 Mw 응집체의 형성으로 인해 분해의 정도를 결정할 수 없었다.
표 10
Figure pct00017
실시예 16: MenACWXY에 대한 MnB 2가 rLP2086 조성물-유도된 hSBA 활성 교차 보호의 평가
트루멘바(TRUMENBA) MnB 2가 rLP2086 조성물은, 각각의 서브패밀리로부터 1개씩, 2개의 지질화된 인자 H 결합 단백질 (fHBP)을 함유하고, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B에 대한 보호를 제공한다. fHBP는 혈청군 A, C, W, Y 및 X에서 가변 수준으로 발현되는 것으로 밝혀졌고, 이는 MnB 2가 rLP2086 조성물이 이들 혈청군에 대한 보호를 제공할 수 있음을 시사한다. 본 발명자들은 연구 B1971015로부터의 혈청을 사용하여, 트루멘바 MnB 2가 rLP2086 조성물이 혈청군 A, C, W, Y, 및 X에 대한 보호를 제공할 수 있다는 개념의 증거를 조사하였다. 균주를 세계적으로 수집하였다 (최근 UK에서 발생한 MnW 균주 및 아프리카에서 새로이 출현한 MnX 포함). hSBA를 개발하기 위해 후보 균주를 선택하는 과정, 및 MnB 2가 rLP2086 조성물로 면역화한 대상체의 하위세트 및 비교로서 4가 수막구균 캡슐 폴리사카라이드 접합체 백신 (MCV4)으로 면역화한 하위세트로부터의 면역 반응을 기재한다.
면역원성 결정에 사용된 혈청
대상체의 2개의 군이 메낙트라(MENACTRA) (수막구균 A, C, Y 및 W-135 폴리사카라이드 접합체 백신 [MCV4]) 및 아다셀(ADACEL) (파상풍 톡소이드, 환원 디프테리아 톡소이드, 무세포 백일해 백신 [Tdap]) 또는 2가 rLP2086 (트루멘바 [수막구균 혈청군 B 백신], 미국에서 승인됨)을 제공받은 연구 B1971015, 2상, 무작위, 활성-대조, 관찰자-맹검 연구로부터의 혈청의 하위세트를 사용하여 하기 기재된 바와 같이 선택된 MnACWYX 균주를 사용한 hSBA에서 면역원성을 평가하였다.
기준선 혈청양성률
연구 B1971015로부터의 청소년으로부터 수득한 비-면역 또는 백신접종전 혈청을 사용하여 마이크로콜로니-기반 hSBA에서 기준선 혈청양성률을 추정하였다. 이러한 목적을 위해, 혈청양성은 hSBA 역가 ≥ 예상되는 검정 LLOQ인 1:8로서 정의하였다. 검정 개발을 위해 고려할 것으로, 균주는 낮은 기준선 혈청양성 (즉, 기준선 혈청 < ~40%를 사용하여 hSBA 역가 ≥ 1:8의 비율)을 입증하여야 한다.
면역원성 결정에 사용된 혈청
대상체의 2개의 군이 메낙트라 (수막구균 A, C, Y 및 W-135 폴리사카라이드 접합체 백신 [MCV4]) 및 아다셀 (파상풍 톡소이드, 환원 디프테리아 톡소이드, 무세포 백일해 백신 [Tdap]) 또는 2가 rLP2086 (트루멘바 [수막구균 혈청군 B 백신], 미국에서 승인됨)을 제공받은 연구 B1971015, 2상, 무작위, 활성-대조, 관찰자-맹검 연구로부터의 혈청의 하위세트를 사용하여 하기 기재된 바와 같이 선택된 MnACWYX 균주를 사용한 hSBA에서 면역원성을 평가하였다.
결과 및 논의
혈청군 A
혈청군 A SBA 균주 풀에 남아프리카로부터의 17종의 균주, 미국으로부터의 4종의 균주 및 네덜란드로부터의 1종의 균주가 존재하였다. 이러한 수집물에서 혈청군 A 균주의 73 퍼센트는 B16을 발현하였고, 23%는 B22를 발현하였다. 혈청군 A 균주의 이러한 수집물에서 보편적인 클론 복합체는 ST-1 및 ST-5였다. 1100 MFI 초과의 fHBP 발현 수준을 갖는 B16을 발현하는 2종의 균주 및 B22를 발현하는 1종의 균주를 추가의 시험을 위해 선택하였다. C의 36 로트를 C의 T30/T0 비 스크리닝에 사용하였다. PMB1546은 균주를 비-특이적으로 사멸시키지 않는 적절한 인간 혈청 보체 공급원이 C의 통과율에 따라 확인될 수 없었기 때문에 배제시켰다 (표 11). PMB3143은 청소년 면역전 혈청에 대한 높은 기준선 혈청양성률, 52%로 인해 배제시켰다. PMB3257은 선택 기준을 충족시켰다: 적절한 보체 공급원이 확인되었고, 청소년 면역전 혈청에 의한 낮은 기준선 혈청양성률 예를 들어 0%, 및 hSBA가 기술적으로 실현가능하였다.
표 11. 혈청군 A 시험 균주 후보
Figure pct00018
a. 측정 검정에서 결정된 바와 같은 평균 형광 강도
b. 균주가 한정된 콜로니를 형성하고, hSBA에서 지표 혈청에 의해 사멸됨
c. 청소년, 백신접종전 혈청
d. 면역전 비율이 높음
e. 행하지 않음
선택된 혈청군 A 균주는 볼드체로 표시된다.
혈청군 C
혈청군 C SBA 균주 풀에는 미국으로부터의 49종의 균주 및 네덜란드로부터의 10종의 균주가 존재하였다. fHBP 서열은 혈청군 C에서 보다 불균질하였다. 균주 풀은 적어도 17%, 즉 19%의 MenC 균주가 fHBP A10 발현 균주이고 10%는 A15 발현 균주를 함유한다. 혈청군 C 균주의 이러한 수집물에서 보편적인 클론 복합체는 ST11/ET-37 복합체 및 ST-103이었다. 1100 MFI 초과의 fHBP 발현 수준을 갖는 A10을 발현하는 1종의 균주 및 A15를 발현하는 3종의 균주를 추가의 시험을 위해 선택하였다. C의 36 로트를 C의 T30/T0 비 스크리닝에 사용하였다. fHBP에 대해 A15를 발현하는 PMB5196 및 PMB5180은 균주를 비-특이적으로 사멸시키지 않는 적절한 인간 혈청 보체 공급원이 C의 통과율에 따라 확인될 수 없었기 때문에 배제시켰다 (표 12). PMB5043의 경우, C의 통과 초기 스크리닝 시험이 T30/T0 비로 인해 SBA 검정에서 실패하였다. PMB5208은 선택 기준을 충족시켰다: 적절한 보체 공급원이 확인되었고, 청소년 면역전 혈청에 의한 낮은 기준선 혈청양성률 17%가 확인되었고, hSBA가 기술적으로 실현가능하였다.
표 12. 혈청군 C 시험 균주 후보
Figure pct00019
a. 측정 검정에서 결정된 바와 같은 평균 형광 강도
b. 균주가 한정된 콜로니를 형성하고, hSBA에서 지표 혈청에 의해 사멸됨
c. 적절한 보체 공급원이 이용가능하지 않고, SBA에서 T30/T0 비를 실패함
d. 청소년, 백신접종전 혈청
e. 행하지 않음
선택된 혈청군 C 균주는 볼드체로 표시된다.
혈청군 W
혈청군 W SBA 균주 풀에는 미국으로부터의 14종의 균주, 네덜란드로부터의 9종의 균주 및 영국으로부터의 6종의 최근 발생 균주가 존재하였다. fHBP 서열은 혈청군 W 균주의 이러한 수집물에서 보다 균질하였다. 이러한 풀에서 균주의 45 퍼센트는 fHBP A19 변이체를 발현하였고, 45%는 fHBP A10을 발현하였다. 혈청군 W 풀에서 fHBP A19 변이체에 대한 보편적인 클론 복합체는 ST-22이고, fHBP A10 변이체 균주에 대한 보편적인 클론 복합체는 ST-11/ET-37 복합체이다. 미국으로부터의, A19를 발현하는 1종의 균주 및 A10을 발현하는 1종의 균주를 선택하였다. 1100 MFI 초과의 fHBP 발현 수준을 갖는 A10을 발현하는 2종의 영국 발생 균주를 추가의 시험을 위해 선택하였다. C의 36 로트를 C의 T30/T0 비 스크리닝에 사용하였다. 4종의 균주 모두 이러한 초기 C 스크리닝 시험을 통과하였다. 면역전 비율에 기초하여, PMB5524 및 PMB5163은 청소년 면역전 혈청에 의한 혈청양성률이 각각 74% 및 48%였기 때문에 배제시켰다. PMB5248 및 PMB5523은 선택 기준을 충족시켰다: 적절한 보체 공급원이 확인되었고, 청소년 면역전 혈청에 의한 낮은 기준선 혈청양성률 예를 들어 각각 26% 및 28%, 및 hSBA가 기술적으로 실현가능하였다 (표 13).
표 13. 혈청군 W 시험 균주 후보
Figure pct00020
a. 측정 검정에서 결정된 바와 같은 평균 형광 강도
b. 균주가 한정된 콜로니를 형성하고, hSBA에서 지표 혈청에 의해 사멸됨
c. 청소년, 백신접종전 혈청
d. 면역전 비율이 높음
선택된 혈청군 W 균주는 볼드체로 표시된다.
혈청군 X
혈청군 X SBA 균주 풀에는 아프리카로부터의 8종의 균주 및 네덜란드로부터의 1종의 균주가 존재하였다. 아프리카로부터의 5종의 균주는 fHBP B49 변이체를 발현하였고, 3종의 균주는 새로운 fHBP 유형을 가졌고, 네덜란드로부터의 1종의 균주는 fHBP B09를 발현하였다. 모든 9종의 균주의 경우 fHBP 발현이 1100 MFI를 초과하였다. 3종의 아프리카 발생 균주 및 네덜란드로부터의 1종의 균주를 추가의 시험을 위해 선택하였다. C의 36 로트를 C의 T30/T0 비 스크리닝에 사용하였다. 4종의 균주가 모두 C의 초기 스크리닝 시험을 통과하였다. 면역전 비율에 기초하여, PMB5467은 청소년 면역전 혈청에 의한 혈청양성률이 68%였기 때문에 배제시켰다. PMB5537, PMB5540 및 PMB5539는 선택 기준을 충족시켰다: 적절한 보체 공급원이 확인되었고, 청소년 면역전 혈청에 의한 낮은 기준선 혈청양성률 예를 들어 0, 및 hSBA가 기술적으로 실현가능하였다 (표 14). PMB5540을 평가를 위해 선택하였다.
표 14. 혈청군 X 시험 균주 후보
Figure pct00021
a. 측정 검정에서 결정된 바와 같은 평균 형광 강도
b. 균주가 한정된 콜로니를 형성하고, hSBA에서 지표 혈청에 의해 사멸됨
c. 적절한 보체 공급원이 이용가능하지 않고, SBA에서 T30/T0 비를 실패함
c. 청소년, 백신접종전 혈청
d. 면역전 비율이 높음
선택된 혈청군 X 균주는 볼드체로 표시된다.
혈청군 Y
혈청군 Y SBA 균주 풀에는 미국으로부터의 87종의 균주 및 네덜란드로부터의 30종의 균주가 존재하였다. fHBP 서열은 혈청군 Y 균주의 이러한 수집물에서 보다 균질하였다. 풀에서 혈청군 Y 균주의 66 퍼센트가 fHBP A15를 발현하였다. 이러한 혈청군 Y 수집물에서 fHBP A15 변이체 발현 균주의 경우 통상적인 클론 복합체는 ST-23/클러스터 A3이었다. 이러한 수집물에서 혈청군 Y 균주의 오직 15%만이 1100 MFI 초과의 fHBP 발현 수준을 가졌다. 1100 MFI 초과의 fHBP 발현 수준을 갖는 A15 변이체 군으로부터의 3개의 균주를 추가의 시험을 위해 선택하였다. C의 36 로트를 C의 T30/T0 비 스크리닝에 사용하였다. PMB5122, PMB5053 및 PMB5050은 균주를 비-특이적으로 사멸시키지 않는 적절한 인간 혈청 보체 공급원이 C의 통과율에 따라 확인될 수 없었기 때문에 배제시켰다 (표 15). fHBP B47을 갖는 PMB5187을 C의 T30/T0 스크리닝을 위해 선택하였고, 균주를 비-특이적으로 사멸시키지 않는 C의 공급원을 확인할 수 있었다 (표 15). PMB5187이 혈청군 Y에 대한 보편적인 fHBP 변이체는 발현하지 않았지만, 이러한 균주는 다른 선택 기준을 충족시켰다: 적절한 보체 공급원이 확인되었고, 청소년 면역전 혈청에 의한 낮은 기준선 혈청양성률 예를 들어 4%, 및 hSBA가 기술적으로 실행가능하였다.
표 15. 혈청군 Y 시험 균주 후보:
Figure pct00022
a. 측정 검정에서 결정된 바와 같은 평균 형광 강도
b. 균주가 한정된 콜로니를 형성하고, hSBA에서 지표 혈청에 의해 사멸됨
c. 청소년, 백신접종전 혈청
d. 행하지 않음
선택된 혈청군 Y 균주는 볼드체로 표시된다.
각각의 혈청군에 대한 fHBP의 보편적인 변이체, 1100 MFI 초과의 fHBP 발현, 및 검정 실행가능성 (예를 들어, 인간 보체 및 기준선 혈청양성의 확인)에 기초하여 MnACYWX 균주를 hSBA 개발을 위해 선택하였다. 6종의 선택된 MnACYWX 균주의 특징, 뿐만 아니라 각각의 변이체 군에 대한 중간 fHBP 발현을 표 16에 요약한다.
표 16. MnACYWX 시험 균주 특징
Figure pct00023
면역원성 분석
2상 병용 연구 B1971015에 등록된 10 내지 <13세 연령의 건강한 청소년의 하위세트에서 도출된 면역 반응을 평가하기 위해 MnACYWX 시험 균주를 hSBA에 사용하였다. 트루멘바-도출된 hSBA 반응을 메낙트라-도출된 (수막구균 A, C, Y 및 W-135 폴리사카라이드 접합체 백신 [MCV4]) hSBA 반응과 선택된 6종의 균주에 대해 비교하였다 (표 17).
MenA를 제외하고 MenCWYX 균주에 대해 보호의 허용되는 상관관계 (즉, hSBA 역가 ≥ 1:4)보다 더 엄격한 기준인 hSBA 역가 ≥ 1:8에 기초한 실질적인 살박테리아 항체 반응이 높은 비율의 백신접종된 개체에서 관찰되었고, MenA는 MCV4로 면역화된 대상체로부터의 97%와 비교하여 트루멘바로 면역화된 대상체로부터 28%였다. 트루멘바 반응은 2종의 혈청군 W 균주의 경우 용량 2의 1개월 후에 피크에 도달하였고 (PMB5248 100%, PMB5523, 97%), 혈청군 C, Y, X 균주의 경우에는 용량 3의 1개월 후에 반응률이 83%-100%였다. MCV4 반응은 용량 1의 1개월 후에 피크에 도달하였고, MenX의 경우에는 어떠한 반응도 없었다. 트루멘바 도출된 항체는 MCV4에 의해서는 커버되지 않는 MenX에 대한 보호의 잠재력을 입증하였다. MnC, W 또는 Y 균주에 대한 3회 용량 후의 트루멘바 반응률 (즉 % ≥ 1:8)은 1회 용량 후 MCV4 반응률과 대등하였다. MnACYWX hSBA 시험 균주로부터 수득된 면역원성 데이터는 B 이외의 혈청군에 대한 보호의 개념의 증거를 제공한다.
표 17: MnACWYX 균주의 경우 SBA 역가 ≥ 1:8의 백분율
Figure pct00024
결론 각각의 혈청군에 대한 fHBP의 보편적인 변이체, MnB에 대한 fHBP-발현 역치 초과의 fHBP 발현 및 검정 실행가능성 (예를 들어, 인간 보체 및 기준선 혈청양성의 확인)에 기초하여 MnACYWX 균주를 hSBA 개발을 위해 선택하였다. MnACYWX 균주를 사용하여 hSBA에서 트루멘바로 면역화된 대상체로부터의 혈청을 사용한 것은, 트루멘바 도출된 항체가 B 이외의 혈청군에 대한 보호를 제공할 수 있다는 개념의 증거를 제공하였다. 3회 용량 후 2가 rLP2086-도출된 반응 (예를 들어, 역가 ≥ 1:8을 갖는 대상체의 백분율)은 1회 용량 후 MCV4-도출된 반응과 혈청군 C, W 및 Y로부터의 균주의 경우에 대등하였지만, 혈청군 A 균주의 경우에는 더 낮았다. 또한, 높은 비율의 대상체에서의 2가 rLP2086-도출된 hSBA 역가 ≥ 1:8은 MCV4에 의해서는 제공되지 않는 MenX에 대한 보호를 나타낸다.
실시예 17: 트루멘바는 비-혈청군 B 수막구균에 대한 살박테리아 항체를 도출한다
서론. 네이세리아 메닌기티디스 (Men)는 영아, 청소년, 및 젊은 성인에서의 박테리아성 수막염 및 균혈증의 주요 원인이다. 5종의 주요 질환-유발 수막구균 혈청군, A, B, C, Y, 및 W가 존재하며, 제6 혈청군, X가 아프리카에서 출현하였다. 전세계의 다양한 지역에서 수막구균 혈청군 A, C, Y, 및 W에 의해 유발되는 질환으로부터 보호하기 위해 4가 수막구균 접합체 백신 (MCV4)이 사용된다. 혈청군 B 질환에 대한 보호를 제공하기 위해 의도되는, 최근 승인된 백신 트루멘바® (MenB-FHbp, 2가 rLP2086, 화이자 인크(Pfizer Inc), 펜실베니아주 칼리지빌)는 2개의 인자 H 결합 단백질 (FHbp) 계통발생학적 서브패밀리 각각으로부터 1개씩, 2개의 재조합 지단백질로 이루어진다. FHbp를 코딩하는 유전자는 혈청군 분류와 독립적으로 거의 모든 침습성 Men 균주에서 발견된다. 전임상 연구는 MenB-FHbp의 다른 질환-유발 혈청군에 대한 보호 잠재력을 입증하였다. 예비 연구에서, 단일 FHbp 변이체 항원을 포함하는 Men B 백신 벡스세로(BEXSERO)® (MenB-4C; 노파르티스 인크(Novartis Inc), 매사추세츠주 캠브리지)는 MenX 및 MenW 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도할 수 있었다. 본 연구의 목적은 MenB-FHbp에 의해 청소년에서 도출된 항체가 MenA, C, W, Y, 및 X 균주에 대해 살박테리아성이어서 (도 7) 그에 의해 혈청군에 걸친 수막구균 질환에 대한 보호 잠재력이 제공되는지 여부를 조사하기 위해, 탐색적 검정을 사용하여 이러한 관찰을 확장시키는 것이었다.
실험 개관. 후보 균주 (도 8)로부터 하기 균주를 선택하였다:
Figure pct00025
인간 보체 사멸에 대해서만 감수성이지 않음
Figure pct00026
MenB 균주에 의해 발현된 FHbp에 대해 지시된 살박테리아 항체를 갖는 것으로 밝혀진 혈청을 사용한 hSBA에서 사멸됨
Figure pct00027
백신접종전 혈청에 의해 낮은 기준선 역가를 가짐 (25개의 백신접종전 혈청; 도 9 참조)
선택된 균주 (표 18, 도 10)에 대해: 탐색적 hSBA 검정을 개발하였다. hSBA에서 시험된 혈청에 대해서는 도 9를 참조한다. 반응률=확립된 보호 상관관계 (≥ 1:4)보다 더 큰, hSBA 역가 ≥1:8을 갖는 대상체의 백분율 (도 11-16).
표 18. 선택된 MenA, MenC, MenY, MenW, 및 MenX 시험 균주의 특징
Figure pct00028
도 9를 참조하여, 군 A 제0개월로부터의 25개의 혈청을 사용하여 면역-전을 연구하였다. 제0개월 및 제1개월에 채취한 군 A 및 제0개월, 제1개월, 제3개월 및 제7개월에 채취한 군 B로부터의 30명의 대상체로부터의 혈청을 hSBA 시험에 사용하였다. 반응률의 종점은 역가 > 1:8을 갖는 혈청의 백분율이다.
도 10 - FHbp 반응성 mAb MN 994-11을 사용한 유동 세포측정 실험으로부터 결정된 FHbp 표면 발현 수준 (MFI)의 분포. 혈청군 내의 각각의 균주에 대한 FHbp 표면 발현을 흑색 점으로 표시하고, 각각의 혈청군 내의 선택된 시험 균주에 대한 FHbp 표면 발현 수준은 유색 별로 표시한다.
도 11 - MenA PMB3257 (B16)에 대한 hSBA 반응률 (hSBA 역가 ≥ 1:8을 갖는 대상체의 백분율). MenBFHbp의 경우 면역화전 (제0개월) 및 용량 1, 2, 및 3의 1개월 후에 수집된 혈청에 대한 반응률 및 95% 신뢰 구간이 제시된다. 수득된 기하 평균 역가 (GMT)는 각각 2, 3, 4 및 5였다. 양성 대조군에서의 대상체에 대한 반응률은 백신접종 전에 3%였고, MCV4를 제공받고 1개월 후에는 97%였다. 양성 대조군에 대한 GMT는 각각 2 및 95였다.
도 12 - MenC PMB5208 (A10)에 대한 hSBA 반응률 (hSBA 역가 ≥ 1:8을 갖는 대상체의 백분율). MenBFHbp의 경우 면역화전 (제0개월) 및 용량 1, 2, 및 3의 1개월 후에 수집된 혈청에 대한 반응률 및 95% 신뢰 구간이 제시된다. 수득된 GMT는 각각 4, 8, 12 및 29였다. 양성 대조군에서의 대상체에 대한 반응률은 백신접종 전에 20%였고, MCV4를 제공받고 1개월 후에는 90%였다. 양성 대조군에 대한 GMT는 각각 3 및 119였다.
도 13 - MenW PMB5248 (A19)에 대한 hSBA 반응률 (hSBA 역가 ≥ 1:8을 갖는 대상체의 백분율). MenBFHbp의 경우 면역화전 (제0개월) 및 용량 1, 2, 및 3의 1개월 후에 수집된 혈청에 대한 반응률 및 95% 신뢰 구간이 제시된다. 수득된 GMT는 각각 4, 18, 47 및 77이었다. 양성 대조군에서의 대상체에 대한 반응률은 백신접종 전 40%였고, MCV4를 제공받고 1개월 후에는 97%였다. 양성 대조군에 대한 GMT는 각각 5 및 88이었다.
도 14 - MenW PMB5523 (A10)에 대한 hSBA 반응률 (hSBA 역가 ≥ 1:8을 갖는 대상체의 백분율). MenBFHbp의 경우 면역화전 (제0개월) 및 용량 1, 2, 및 3의 1개월 후에 수집된 혈청에 대한 반응률 및 95% 신뢰 구간이 제시된다. 수득된 GMT는 각각 7, 15, 21, 및 42였다. 양성 대조군에서의 대상체에 대한 반응률은 백신접종 전 55%였고, MCV4를 제공받고 1개월 후에는 97%였다. 양성 대조군에 대한 GMT는 각각 8 및 60이었다.
도 15 - MenY PMB5187 (B47)에 대한 hSBA 반응률 (hSBA 역가 ≥ 1:8을 갖는 대상체의 백분율). MenBFHbp의 경우 면역화전 (제0개월) 및 용량 1, 2, 및 3의 1개월 후에 수집된 혈청에 대한 반응률 및 95% 신뢰 구간이 제시된다. 수득된 GMT는 각각 3, 7, 31 및 58이었다. 양성 대조군에서의 대상체에 대한 반응률은 백신접종 전 13%였고, MCV4를 제공받고 1개월 후에는 97%였다. 양성 대조군에 대한 GMT는 각각 3 및 79였다.
도 16 - MenX PMB5540 (B49)에 대한 hSBA 반응률 (hSBA 역가 ≥ 1:8을 갖는 대상체의 백분율). MenBFHbp의 경우 면역화전 (제0개월) 및 용량 1, 2, 및 3의 1개월 후에 수집된 혈청에 대한 반응률 및 95% 신뢰 구간이 제시된다. 수득된 GMT는 각각 2, 3, 7 및 20이었다. 양성 대조군에서의 대상체에 대한 반응률은 백신접종 전 0%였고, MCV4 백신을 제공받고 1개월 후에는 0%였다. 양성 대조군에 대한 GMT는 각각 2 및 2였다.
요약. MenB-FHbp에 의해 도출된 반응률은 MenW 균주, PMB5248의 경우에 용량 2의 1개월 후 (제3개월)에 피크였고 (100%), MenC, MenY, 및 MenX 균주의 경우, 뿐만 아니라 제2 MenW 균주의 경우에는 용량 3의 1개월 후 (제7개월)에 피크였다 (83%-100% 범위의 반응률).
MenA 시험 균주의 경우 hSBA에 의해 측정된 반응률은 실질적으로 더 낮았고, MenB-FHbp의 3회 용량 후에 28%에서 피크를 보였다.
수막구균 질환에 대한 보호의 인식된 상관관계는 hSBA 역가 ≥ 1:4였다. 적어도 1:8의 hSBA 역가를 도출하는 MenB-FHbp의 능력은 MenB-FHbp가 MCV4에 의해서는 커버되지 않는 MenX를 포함한 B 이외의 수막구균 혈청군에 의해 유발되는 질환에 대해 보호할 수 있다는 개념의 증거를 제공한다.
실시예 18: ≥24개월 내지 <10세 연령의 건강한 대상체에서의 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B 2가 재조합 지단백질 2086 백신 (2가 rLP2086, 즉 현재 트루멘바® 백신)의 면역원성, 안전성, 및 내약성을 설명하기 위한 2상, 무작위화, 대조, 관찰자-맹검 연구 (B1971017-syn)
연구 설계: 이는 제0개월, 제2개월, 및 제6개월 스케줄의 부문로서 ≥24개월 내지 <10세 연령의 건강한 대상체에게 투여된 120-μg 용량 수준의 2가 rLP2086의 면역원성, 안전성, 및 내약성을 평가하기 위해 설계된 2상, 무작위화, 대조, 관찰자-맹검, 다기관 연구이다 (표 19). 대략 400명의 대상체를 2개의 군 중 1개에 3:1 비로 무작위로 배정하는 것으로 계획하였다. 군 1에게 제0개월 (방문 1)에 2가 rLP2086을 제공한 다음, 제2개월 및 제6개월에 후속 백신접종하였다. 군 2에는 제0개월 (방문 1) 및 제6개월에 허가된 소아 A형 간염 바이러스 (HAV) 백신을 제공하였고, 연구 맹검을 유지하기 위해 제2개월에 염수를 주사하였다. 추적 방문을 각각의 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종의 6개월 후에 수행하여 안전성 데이터를 수집하고/거나 혈액 샘플을 수득하였다. 대상체는 최대 13개월 동안 본 연구에 참여하였다.
표 19. 연구 설계
Figure pct00029
HAV=A형 간염 바이러스
투여된 백신: 군 1의 대상체에게 2가 rLP2086을 제0개월, 제2개월, 및 제6개월에 팔의 상부 삼각근 내로 근육내 주사에 의해 투여하였다. 군 2의 대상체에게는 HAV 백신/염수/HAV 백신을 제0개월, 제2개월, 및 제6개월에 팔의 상부 삼각근 내로 투여하였다.
면역원성 평가: 면역원성 분석을 용이하게 하기 위해, 대상체에서 백신접종 1 직전, 백신접종 2의 1개월 후, 및 백신접종 3의 1 및 6개월 후에 대략 5 내지 10 mL (연령에 따라 좌우됨)의 혈액을 수집하였다.
2가 rLP2086에 대한 면역 반응의 평가를 위해, 비편향 알고리즘을 사용하여 선택된 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용한 검증된 hSBA에서 기능적 항체를 분석하고, 화이자의 MnB 혈청 살박테리아 검정 (SBA) 균주 풀로부터의 조절 입력치에 기초하여 역학적 유병률에 대해 조정하였다. hSBA는 표적 수막구균 균주의 보체-의존성 파괴를 개시하는 인간 혈청 내의 항체를 측정한다. 각각 백신 성분 항원에 대해 이종인 인자 H 결합 단백질 (fHBP) 변이체를 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주, PMB80 (A22), PMB2001 (A56), PMB2948 (B24), 및 PMB2707 (B44)을 본 연구에서 면역원성 종점의 결정을 위해 hSBA에 사용하였다. 제1 연구 백신접종 전, 제2 연구 백신접종의 1개월 후, 및 제3 연구 백신접종 1 및 6개월 후에 모든 대상체로부터 수득한 혈청을 이들 검정에서 사용하였다.
1차 분석의 경우, 2종의 1차 시험 균주 (PMB80 [A22] 및 PMB2948 [B24])를 (둘 다의 군에서의) 대상체의 절반에 대해 각각의 혈액 샘플링 시점에 시험하였고, 다른 2종의 1차 시험 균주 (PMB2001 [A56] 및 PMB2707 [B44])는 대상체의 나머지 절반에 대해 각각의 혈액 샘플링 시점에 시험하였다.
1차 면역원성 종점은 하기와 같았다: 2가 rLP2086을 사용한 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ 정량 하한치 (LLOQ)를 갖는 ≥24개월 내지 <4세 (연구 진입시) 연령의 대상체의 비율; 및 2가 rLP2086을 사용한 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 ≥4세 내지 <10세 (연구 진입시) 연령의 대상체의 비율.
2차 면역원성 종점은 하기와 같았다:
Figure pct00030
연구 진입시 ≥24개월 내지 <10세 연령의 건강한 대상체에서:
Figure pct00031
2가 rLP2086을 사용한 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율.
Figure pct00032
연구 진입시 ≥24개월 내지 <4세 연령의 건강한 대상체에서, 연구 진입시 ≥4세 내지 <10세 연령의 건강한 대상체에서, 및 조합된 연령층에서:
Figure pct00033
2가 rLP2086을 사용한 제2 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종 1 및 6개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율.
Figure pct00034
기준선, 2가 rLP2086을 사용한 제2 백신접종의 1개월 후, 및 제3 백신접종 1 및 6개월 후 4종의 1차 시험 균주 각각에 대해 ≥1:4, ≥1:8, ≥1:16, ≥1:32, ≥1:64, 및 ≥1:128의 hSBA 역가를 달성한 대상체의 비율.
Figure pct00035
기준선, 2가 rLP2086을 사용한 제2 백신접종의 1개월 후, 및 제3 백신접종 1 및 6개월 후 4종의 1차 시험 균주 각각에 대한 hSBA GMT.
2차 면역원성 종점을 둘 다의 평가가능한 면역원성 집단 및 mITT 집단에 대해 요약하였다.
하기 탐색적 종점을 사용하여 연구 진입시 ≥24개월 내지 <4세 연령의 건강한 대상체, 연구 진입시 ≥4세 내지 <10세 연령의 건강한 대상체, 및 조합된 연령층에서의 반응을 기재하였다:
Figure pct00036
각각의 적용가능한 혈액 샘플링 시점에 hSBA 역가 ≥1:4, ≥1:8, ≥1:16, ≥1:32, ≥1:64, 및 ≥1:128을 갖는 대상체의 비율.
Figure pct00037
각각의 적용가능한 혈액 샘플링 시점에 4종의 1차 균주 각각에 대한 hSBA GMT.
Figure pct00038
4종의 1차 시험 균주 각각에 대해 기준선으로부터 2가 rLP2086을 사용한 제3 백신접종의 1개월 후까지 hSBA 역가에서 적어도 4-배 증가를 달성한 대상체의 비율:
Figure pct00039
기준선 hSBA 역가가 검출 한계 (LOD) 미만이거나 또는 hSBA 역가가 <1:4인 대상체의 경우, 4-배 반응은 ≥1:16 또는 LLOQ (어느 것이든 역가가 더 높은 것)의 hSBA 역가로서 정의되었다.
Figure pct00040
기준선 hSBA 역가가 ≥ LOD (즉, hSBA 역가 ≥1:4) 및 < LLOQ인 대상체의 경우, 4-배 반응은 LLOQ의 ≥4배의 hSBA 역가로서 정의되었다.
Figure pct00041
기준선 hSBA 역가가 ≥ LLOQ인 대상체의 경우, 4-배 반응은 기준선 역가의 ≥4배의 hSBA 역가로서 정의되었다.
결과
대상체: ≥24개월 내지 <10세 연령의 총 400명의 대상체를 본 연구에서 무작위화하였다. 무작위화된 대상체 중에서, 294명의 대상체는 군 1 (2가 rLP2086)이고, 106명의 대상체는 군 2 (HAV/염수)였다. ≥24-개월 내지 <4-세 및 ≥4-세 내지 <10-세 연령층 각각에 무작위화된 200명의 대상체가 존재하였다.
400명의 무작위화된 대상체 중에서, 390명 (97.5%)의 대상체가 연구의 백신접종기 (마지막 연구 백신접종 후 1개월까지)를 완료하였다. 총 387명 (96.8%)의 대상체가 6-개월 추적 전화 접촉을 완료하였다. 백신접종기 및 6-개월 추적 전화 접촉을 완료한 대상체만 연구를 완료한 것으로 간주하였다. 전체적으로, 총 375명 (93.8%)의 대상체가 모든 연구 절차를 완료하였고, 완료는 각각의 연령층에서 유사하였다.
총 371명 (92.8%)의 대상체가 평가가능한 면역원성 집단에 포함되었고, 29명 (7.3%)의 대상체는 평가가능한 면역원성 집단으로부터 배제되었다. 모든 400명의 무작위화된 대상체가 mITT 집단에 포함되었다.
면역원성 결과: 본 연구의 1차 목적은 ≥24개월 내지 <4세 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 건강한 대상체에서 제3 백신접종의 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주에 대해 hSBA에 의해 측정된 바와 같은, 2가 rLP2086에 대한 대상체 면역 반응을 설명하기 위한 것이었다. 조합 연령층 (≥24개월 내지 <10세)에 대한 면역 반응의 설명이 2차 목적이었다. 1차 목적의 경우에 종점은 제3 백신접종의 1개월 후에 4종의 1차 MnB 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥　LLOQ를 달성한 각각의 연령층에서의 대상체의 비율이었다.
4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 3회 용량 후 ≥24개월 내지 <4세 연령의 대상체의 경우 80.0% 내지 100.0% 및 ≥4세 내지 <10세 대상체의 경우 78.3% 내지 100.0% 범위의 hSBA 역가 ≥　LLOQ (A56, B24 및 B44의 경우 1:8; A22의 경우 1:16)를 달성한 대상체의 비율에 의해 확인되는 바와 같이, 2가 rLP2086의 제3 용량의 1개월 후 ≥24개월 내지 <10세 연령의 소아에 대해 강건한 면역 반응이 관찰되었다. 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 조합 연령층에서의 대상체의 비율은 79.1% 내지 100.0%의 범위였다. 이들 발견은 실질적인 GMT (19.1 내지 191 범위) 및 둘 다의 연령층에 걸쳐 기준선과 비교하여 2가 rLP2086의 3회 용량 후의 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 hSBA 역가 ≥1:4 (81.5% 내지 100%) 또는 ≥ 1:16 (75.4% 내지 100%)을 달성한 대상체의 비율에 의해 추가로 지지된다. 추가적으로, 기준선으로부터 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 제3 백신접종의 1개월 후까지 hSBA 배수 상승 ≥4를 달성한 조합 연령층에서의 대상체의 비율은 76.9% 내지 93.5% 범위였다.
연구의 2차 목적은 2개의 연령층 및 조합 연령층에 대해 ≥ LLOQ 반응, 규정된 hSBA 역가 및 hSBA GMT에 의해 평가된 바와 같은 2가 rLP2086의 제2 용량의 1개월 후의 면역 반응을 설명하는 것이었다. 조합 연령층의 경우, hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 48.5% 내지 100.0% 범위였고, 연하의 연령층과 연상의 연령층 사이에서 의미있는 차이는 관찰되지 않았다. 이들 발견은 추가로 조합 연령층에 의해, 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 기준선과 비교하여 2가 rLP2086의 2회 용량 후 GMT의 증가 (11.1 내지 96.6 범위), 및 hSBA 역가 ≥1:4 (57.7% 내지 100%) 또는 ≥ 1:16 (43.1% 내지 100%)을 달성한 대상체의 비율의 증가에 의해 지지된다. GMT는 2종의 연령층 사이에서 유사하였다. 추가적으로, 기준선으로부터 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 제2 백신접종의 1개월 후까지 hSBA 배수 상승 ≥4를 달성한 조합 연령층에서의 대상체의 비율은 42.3% 내지 91.0% 범위였다.
또한 2가 rLP2086의 제3 용량의 6개월 후에 면역지속성을 평가하였고, 조합 연령층의 경우 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율은 백신접종 3의 1개월 후 79.1% 내지 100%에서 제3 백신접종의 6개월 후에 10.4% 내지 82.4%로 저하되었다. 연상의 소아가 연하의 소아보다 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율이 더 높은 A22를 제외하고, 2종의 연령층 사이에 어떠한 차이도 관찰되지 않았다 (46%, 95% CI 33.4, 59.1 vs 19%, 95% CI　10.2, 30.9). 그러나, 역가 ≥ LLOQ의 기준선 백신접종전 비는 A22의 경우 연상의 나이층에서 더 컸다 (13.6% vs 4.4%). 또한 조합 연령층에 대해 유사한 경향이 관찰되었고, 제3 백신접종의 6개월 후에 보호 hSBA 역가 ≥1:4를 갖는 대상체의 비율은 13.3% 내지 84.0% 범위였고 GMT는 5.1 내지 31.3 범위였다.
요약하면, 0-, 2-, 및 6-개월 스케줄의 3회 용량으로서 제공된 2가 rLP2086은 ≥24개월 내지 <10세 연령의 유아 및 소아 사이에서, 제3 용량 후 높은 비율의 대상체에서 hSBA에 의해 측정된 바와 같은 보호 항체 역가가 달성되어, 강건한 면역 반응을 도출하였다. ≥24개월 내지 <4세 연령의 유아 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 소아 사이에서는 어떠한 임상적으로 의미있는 차이도 관찰되지 않았다. 항체 반응은 제3 용량의 6개월 후에 감소하지만, 백신접종전 기준선 비보다 더 높게 유지된다.
결론(들): 결론적으로, ≥24개월 내지 <10세 연령의 유아 및 소아에게 0-, 2- 및 6-개월 스케줄의 3-용량 시리즈로 투여된 2가 rLP2086은 제2 및 제3 용량 후 대부분의 대상체에 의한 강건한 면역 반응을 도출하였고, 제3 용량 후 hSBA에 의해 측정된 바와 같이 보호 항체 역가가 달성되었다. hSBA 역가는 3-용량 시리즈의 6개월 후에 감소하였다. 본 연구에서 투여된 바와 같은 백신은 ≥24개월 내지 <10세 연령의 유아 및 소아에 대해 허용되는 안전성 프로파일로 안전하고 잘 허용되었다.
실시예 19: ≥24개월 내지 <10세 연령의 건강한 대상체에서의 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B 2가 재조합 지단백질 2086 백신 (2가 rLP2086, 즉 현재 트루멘바® 백신)의 면역원성, 안전성, 및 내약성을 설명하기 위한 2상, 무작위화, 대조, 관찰자-맹검 연구 (B1971017-CSR)
2가 rLP2086의 초기 제제 (폴리소르베이트-80을 포함하지 않음)가 1상 연구에서 성인, 청소년, 소아 및 유아에서 평가되었고, 이들 집단에서 만족스러운 안전성, 내약성 및 면역원성 프로파일이 입증되었다. 초기 제제는 200 μg의 용량까지 허용되는 안전성 프로파일을 갖고, hSBA에 의해 측정된 바와 같이 면역원성인 것으로 밝혀졌다. 18 내지 36개월 연령의 유아에서, 초기 제제는 20　μg, 60 μg, 및 200 μg의 용량 수준에서 연구되었다 (연구 6108A1-502-AU). 6108A1-502-AU 연구에서, 각각의 용량 군에서의 국소 반응의 빈도는 A형 간염 바이러스 (HAV) 백신/위약군에서의 것보다 일반적으로 더 높았지만, 대부분의 경우에 반응은 경도 또는 중간 정도의 중증도였다. 열 발생률은 용량 수준이 증가함에 따라 증가하는 경향이 있었다. 임의의 용량 후 임의의 열이 보고된 대상체의 비율은 20-μg 군에서 36.4%, 60-μg 군에서 39.1%, 및 200-μg 군에서 54.5%였다. 각각의 백신 군에서의 다른 전신 사건의 빈도는 일반적으로 HAV/위약에 대한 것과 대등하였다. 대부분의 대상체는 제3 백신접종 후 MnB 균주에 대한 hSBA 반응을 가졌다.
초기 제제와 비교하여, 약물 물질 제조 방법 및 약물 생성물 제제는 제조를 위한 확장성을 증가시키고 백신의 최종 제제의 장기간 안정성을 보장하기 위해 설계된 증진과정 (폴리소르베이트-80의 첨가 포함)을 거친다. 2가 rLP2086의 최종 제제를 사용한 연구에 참여한 성인 및 청소년으로부터의 안전성 데이터는 초기 제제의 안전성과 일치한다. 국부 반응 및 전신 사건은 모든 연령 군에서 일반적으로 경도 또는 중간 정도의 중증도였다. 중증 사건은 상대적으로 드물었다. 또한, 2가 rLP2086의 제3 용량 후 6개월 내지 48개월 범위의 면역지속성 연구 6108A1-1002-AU, 6108A1-2001, 및 B1971033으로부터의 추적 유해 사건 (AE) 데이터는 어떠한 안전성 우려도 일으키지 않았다. 심각한 유해 사건 (SAE)은 드물었고, 대부분 연구 백신과 관련이 없는 것으로 간주되었다. AE로 인한 연구 철회는 거의 없었다.
2종의 2상 연구 (B1971017 및 B1971035)를 수행하여 소아 (12개월 내지 <10세)에서 백신의 최종 제제에 의한 백신의 면역원성 및 안전성을 연구하였다. 연구 B1971035는 진행중이고, 12개월 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서 2종의 상이한 용량 수준 (60-μg 및 120-μg)의 안전성, 내약성, 및 면역원성을 평가하도록 설계되었다. 본 연구 (B1971017)는 제0개월, 제2개월 및 제6개월 스케줄의 일부로서 ≥24개월 내지 <10세 연령의 건강한 대상체에게 투여된 120-μg 용량 수준 (최종 제제)의 2가 rLP2086의 면역원성, 안전성, 및 허용성을 평가하였다. 대략 400명의 대상체를 2개의 군 중 1개로 3:1 비로 무작위화하도록 계획하였다. 군 1에게 제0개월 (방문 1)에 2가 rLP2086을 제공한 다음, 제2개월 및 제6개월에 후속 백신접종하였다. 군 2에는 제0개월 (방문 1) 및 제6개월에 HAV 백신을 제공하였고, 제2개월에 염수를 주사하였다. 무작위화는 동등한 수의 대상체가 ≥24-개월 내지 <4-세 및 ≥4-세 내지 <10-세 연령층에 포함되는 것을 보장하도록 계층화하였다.
이것 (B1971017)은 대략 400명의 대상체가 2개의 군 중 1개에 3:1 비로 무작위로 배정되도록 계획된 2상, 무작위화, 대조, 관찰자-맹검 다기관 연구였다. 군 1에게 제0개월 (방문 1)에 2가 rLP2086을 제공한 다음, 제2개월 및 제6개월에 후속 백신접종하였다. 군 2에는 제0개월 (방문 1) 및 제6개월에 허가된 소아 HAV 백신을 제공하였고, 연구 맹검을 유지하기 위해 제2개월에 염수를 주사하였다. 무작위화는 동등한 수의 대상체가 ≥24-개월 내지 <4-세 연령층 및 ≥4-세 내지 <10-세 연령층에 포함되는 것을 보장하도록 연령에 따라 계층화하였다. 연구는 ≥24개월 내지 <4세 연령의 대략 200명의 대상체 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 대략 200명의 대상체가 등록되도록 계획되었다.
본 연구는 제0개월, 제2개월 및 제6개월 스케줄의 일부로서 ≥24개월 내지 <10세 연령의 건강한 대상체에게 투여된 120-μg 용량 수준의 2가 rLP2086의 면역원성, 안전성, 및 허용성을 평가하였다. 추적 방문을 각각의 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종의 6개월 후에 수행하여 안전성 데이터를 수집하고/거나 혈액 샘플을 수득하였다. 대상체는 최대 13개월 동안 연구에 참여하였다.
2가 rLP2086 (멸균 완충된 등장성 현탁액 중의 알루미늄에 흡착된, 각각의 정제된 서브패밀리 A 및 서브패밀리 B rLP2086 단백질 60 μg을 함유함)은 주사용으로 0.5-mL 용량으로 제공되었다.
허가된 소아 HAV 백신은 주사용으로 0.5-mL 용량으로 제공되었다.
군 1의 경우, ≥24개월 내지 <4세 연령의 대상체의 59.31% 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 대상체의 57.05%가 병용 치료를 받았다. 군 2의 경우, ≥24개월 내지 <4세 연령의 대상체의 58.18% 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 대상체의 52.94%가 병용 치료를 받았다. 연구 동안 받는 가장 통상적인 병용 치료는 이부프로펜, 파라세타몰, 및 아목시실린이었다.
2가 rLP2086 혈청 살박테리아 검정 - 1차 시험 균주
2가 rLP2086에 대한 면역 반응의 평가를 위해, 비편향 알고리즘을 사용하여 선택된 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용한 검증된 hSBA에서 기능적 항체를 분석하고, 화이자의 MnB 혈청 살박테리아 검정 (SBA) 균주 풀로부터의 조절 입력치에 기초하여 역학적 유병률에 대해 조정하였다. hSBA는 표적 수막구균 균주의 보체-의존성 파괴를 개시하는 인간 혈청 내의 항체를 측정한다. 각각 백신 성분 항원에 대해 이종인 fHBP 변이체를 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주, PMB80 (A22), PMB2001 (A56), PMB2948 (B24), 및 PMB2707 (B44)을 본 연구에서 면역원성 종점의 결정을 위해 hSBA에 사용하였다. 제1 연구 백신접종 전, 제2 연구 백신접종의 1개월 후, 및 제3 연구 백신접종 1 및 6개월 후에 모든 대상체로부터 수득한 혈청을 이들 검정에서 사용하였다.
1차 분석의 경우, 2종의 1차 시험 균주 (PMB80 [A22] 및 PMB2948 [B24])를 (둘 다의 군에서의) 대상체의 절반에 대해 각각의 혈액 샘플링 시점에 시험하였고, 다른 2종의 1차 시험 균주 (PMB2001 [A56] 및 PMB2707 [B44])는 대상체의 나머지 절반에 대해 각각의 혈액 샘플링 시점에 시험하였다.
면역원성 분석
면역원성 분석에 대한 가설 검정은 없었다. 추정 접근법을 사용하여 1차, 2차 및 탐색적 목적을 평가하였다.
제2 및 제3 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종의 6개월 후에 hSBA 역가 ≥ 정량 하한치 (LLOQ)를 달성한 각각의 군에서의 대상체의 비율을 각각의 연령층 및 조합 연령층에 대해 양측 95% 정확한 신뢰 구간 (CI)과 함께 각각의 시험 균주에 대해 연산하였다.
1차 면역원성 종점
1차 면역원성 종점은 하기와 같았다:
Figure pct00042
2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는, ≥24개월 내지 <4세 (연구 진입시) 연령의 대상체의 비율.
Figure pct00043
2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는, ≥4세 내지 <10세 (연구 진입시) 연령의 대상체의 비율.
2차 면역원성 종점
2차 면역원성 종점은 하기와 같았다:
Figure pct00044
연구 진입시 ≥24개월 내지 <10세 연령의 건강한 대상체에서:
Figure pct00045
2가 rLP2086을 사용한 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율.
Figure pct00046
연구 진입시 ≥24개월 내지 <4세 연령의 건강한 대상체에서, 연구 진입시 ≥4세 내지 <10세 연령의 건강한 대상체에서, 및 조합된 연령층에서:
Figure pct00047
2가 rLP2086을 사용한 제2 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종 1 및 6개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율.
Figure pct00048
기준선, 2가 rLP2086을 사용한 제2 백신접종의 1개월 후, 및 제3 백신접종 1 및 6개월 후 4종의 1차 시험 균주 각각에 대해 ≥1:4, ≥1:8, ≥1:16, ≥1:32, ≥1:64, 및 ≥1:128의 hSBA 역가를 달성한 대상체의 비율.
Figure pct00049
기준선, 2가 rLP2086을 사용한 제2 백신접종의 1개월 후, 및 제3 백신접종 1 및 6개월 후 4종의 1차 시험 균주 각각에 대한 hSBA GMT.
탐색적 면역원성 종점
탐색적 종점의 경우, 모든 4종의 1차 MnB 시험 균주에 대해 시험을 수행하지 않았다. 대신, 50%의 대상체를 균주 PMB2001 (A56) 및 PMB2707 (B44)을 사용하여 시험하였지만, PMB80 (A22) 또는 PMB2948 (B24)은 사용하지 않았다. 나머지 50%의 대상체는 균주 PMB80 (A22) 또는 PMB2948 (B24)을 사용하여 시험하였지만, PMB2001 (A56) 또는 PMB2707 (B44)은 사용하지 않았다. 하기 명시된 모든 탐색적 종점은 2가 rLP2086을 제공받은 모든 대상체로부터의 hSBA 결과에 적용될 수 있고, 표시된 시점(들)에서 적절한 균주에 대해 시험될 수 있다.
하기 탐색적 종점을 사용하여 연구 진입시 ≥24개월 내지 <4세 연령의 건강한 대상체, 연구 진입시 ≥4세 내지 <10세 연령의 건강한 대상체, 및 조합된 연령층에서의 반응을 기재하였다:
Figure pct00050
각각의 적용가능한 혈액 샘플링 시점에 hSBA 역가 ≥1:4, ≥1:8, ≥1:16, ≥1:32, ≥1:64, 및 ≥1:128을 갖는 대상체의 비율.
Figure pct00051
각각의 적용가능한 혈액 샘플링 시점에 4종의 1차 균주 각각에 대한 hSBA GMT.
Figure pct00052
4종의 1차 시험 균주 각각에 대해 기준선으로부터 2가 rLP2086을 사용한 제3 백신접종의 1개월 후까지 hSBA 역가에서 적어도 4-배 증가를 달성한 대상체의 비율:
Figure pct00053
기준선 hSBA 역가가 검출 한계 (LOD) 미만이거나 또는 hSBA 역가가 <1:4인 대상체의 경우, 4-배 반응은 ≥1:16 또는 LLOQ (어느 것이든 역가가 더 높은 것)의 hSBA 역가로서 정의되었다.
Figure pct00054
기준선 hSBA 역가가 ≥ LOD (즉, hSBA 역가 ≥1:4) 및 < LLOQ인 대상체의 경우, 4-배 반응은 LLOQ의 ≥4배의 hSBA 역가로서 정의되었다.
Figure pct00055
기준선 hSBA 역가가 ≥ LLOQ인 대상체의 경우, 4-배 반응은 기준선 역가의 ≥4배의 hSBA 역가로서 정의되었다.
분석 방법
면역원성에 대한 1차 분석은 각각의 연령층 및 조합 연령층에 대한, 양측 95% 정확한 신뢰 구간 (CI)과 함께 각각의 시험 균주에 대한 제3 백신접종의 1개월 후 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 각각의 군에서의 대상체의 비율에 대한 추정치를 포함하였다.
모든 2원 종점 (1차 종점 포함)을 정확한 방법을 사용하여 양측 95% CI와 함께 요약하였다. hSBA 결과에 대한 GMT를 또한 95% CI와 함께 요약하였다.
LLOQ는 PMB80 (A22)의 경우 1:16, PMB2001 (A56)의 경우 1:8, PMB2707 (B44)의 경우 1:8, 및 PMB2948 (B24)의 경우 1:8이었다.
GMT의 계산을 위해, LLOQ 미만의 hSBA 결과를 1차 분석의 경우 0.5 x LLOQ로 설정하였다.
1차 종점 분석
1차 목적의 경우 1차 분석은 평가가능한 면역원성 집단을 기초로 하였다. 제3 백신접종의 1개월 후 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 각각의 군에서의 대상체의 비율을 각각의 시험 균주에 대해 양측 95% 정확한 CI와 함께 연산하였다. 2종의 1차 목적을 다루기 위해, 이들 데이터는 2종의 연령층: ≥24개월 내지 <4세 및 ≥4세 내지 <10세에 대해 제공된다.
모든 2원 종점 (1차 종점 포함)을 정확한 방법을 사용하여 양측 95% CI와 함께 요약하였다. hSBA 결과에 대한 GMT를 또한 95% CI와 함께 요약하였다.
1차 분석의 해석을 지지하기 위해, mITT 집단에 기초하여 동일한 분석을 수행하였다.
2차 및 탐색적 종점 분석
하기 분석은 2차 및 탐색적 면역원성 목적을 다루었다:
Figure pct00056
제2 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종의 6개월 후에 4종의 1차 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율을 개별적으로 및 조합된 2종의 연령층에서, 평가가능한 면역원성 및 mITT 집단에서 분석하였다.
Figure pct00057
기준선, 제2 백신접종의 1개월 후, 및 제3 백신접종의 1개월 및 6개월 후에 4종의 1차 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥1:4, ≥1:8, ≥1:16, ≥1:32, ≥1:64, 및 ≥1:128을 달성한 대상체의 비율을 개별적으로 및 조합된 2종의 연령층에서, 평가가능한 면역원성 및 mITT 집단에서 분석하였다.
Figure pct00058
기준선, 제2 백신접종의 1개월 후, 및 제3 백신접종의 1개월 및 6개월 후에 4종의 1차 시험 균주 각각에 대한 hSBA GMT를 개별적으로 및 조합된 2종의 연령층에서, 평가가능한 면역원성 및 mITT 집단에서 분석하였다.
탐색적 종점을 개별적으로 및 조합된 2종의 연령층에서, 평가가능한 면역원성 집단 및 mITT 집단 둘 다에대해 각각의 적용가능한 시점에 대해 요약하였다.
역 누적 분포 곡선
평가가능한 면역원성 집단에 대해, 4종의 1차 균주 각각에 대해, 및 각각의 샘플링 시점에서 실험적 역 누적 분포 곡선 (RCDC)을 그래프로 평가하였다.
면역원성 평가
분석된 집단
평가가능한 면역원성 집단은 면역원성 분석을 위한 1차 분석 집단이었다. mITT 집단을 면역원성 분석을 위한 지지 면역원성 집단으로서 사용하였다.
총 371명 (92.8%)의 대상체가 평가가능한 면역원성 집단에 포함되었고, 29명 (7.3%)의 대상체는 평가가능한 면역원성 집단으로부터 배제되었다. 대상체는 1개 초과의 이유로 면역원성 집단으로부터 배제될 수 있다. 총 21명 (5.3%)의 대상체는 백신의 제1 용량 전 또는 백신접종 3 후에 기준선 혈액이 채취되지 않았기 때문에 평가가능한 면역원성 집단으로부터 배제되었고, 15명 (3.8%)의 대상체는 임의의 방문에서 유효하고 확실한 검정 결과를 갖지 않았고, 11명 (2.8%)의 대상체는 적격이 아니었거나 또는 백신접종 3 방문 전 또는 그의 1-개월 후에 연구에 부적격하게 되었고, 11명 (2.8%)의 대상체는 모든 백신접종 방문 시 무작위화됨에 따라 백신을 제공받지 않았고, 4명 (1.0%)의 대상체는 의료 모니터에 의해 확인된 바와 같은 중요한 프로토콜 편차를 가졌다. 전체적으로, 2종의 연구군 및 2종의 연령층은 평가가능한 면역원성 집단으로부터 배제된 대상체의 백분율과 관련하여 대등하였다.
모든 400명의 무작위화된 대상체가 mITT 집단에 포함되었다.
면역원성 결과
1차 면역원성 종점, 2차 면역원성 종점, 및 탐색적 면역원성 종점에 대한 분석 결과를 하기 섹션에 제공한다.
1차 및 2차 종점
hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율
1차 면역원성 종점은 2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥　LLOQ를 갖는, ≥24개월 내지 <4세 (연구 진입시) 연령, 및 ≥4세 내지 <10세 (연구 진입시) 연령의 대상체의 비율이었다. 2가 rLP2086에 의한 제2 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥　LLOQ를 갖는 개별 및 조합 연령층에서의 대상체의 비율과 함께, 2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥　LLOQ를 갖는 조합 연령층 (연구 진입시)에서의 모든 대상체의 비율은 2차 종점이었다.
4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 각각의 연령층에서의 대상체의 비율을 평가가능한 면역원성 집단에 대해 표 20에 제시한다.
기준선에서 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 군 1의 ≥24개월 내지 <4세 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 각각 4.4% 및 13.6%였고; PMB2001 (A56)의 경우 각각 1.5% 및 15.4%였고; PMB2948 (B24)의 경우 각각 3.0% 및 7.5%였고; PMB2707 (B44)의 경우 둘 다의 연령층에 대해 0.0%였다.
전체적으로, 기준선에서 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 조합 연령층에서의 대상체의 비율은 군 1에서 PMB80 (A22)의 경우 9.0%였고, PMB2001 (A56)의 경우 8.3%였고, PMB2948 (B24)의 경우 5.2%였고, PMB2707 (B44)의 경우 0.0%였다.
제2 백신접종의 1개월 후 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 군 1의 ≥24개월 내지 <4세 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 각각 59.4% 및 78.8%였고; PMB2001 (A56)의 경우 둘 다의 연령층에 대해 100.0%였고; PMB2948 (B24)의 경우 각각 49.2% 및 65.1%였고; PMB2707 (B44)의 경우 각각 57.1% 및 40.3%였다.
전체적으로, 제2 백신접종의 1개월 후 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 조합 연령층에서의 대상체의 비율은 군 1에서 PMB80 (A22)의 경우 69.2%였고, PMB2001 (A56)의 경우 100.0%였고, PMB2948 (B24)의 경우 57.0%였고, PMB2707 (B44)의 경우 48.5%였다.
제3 백신접종의 1개월 후 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 군 1의 ≥24개월 내지 <4세 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 각각 83.8% 및 91.0%였고; PMB2001 (A56)의 경우 둘 다의 연령층에 대해 100.0%였고; PMB2948 (B24)의 경우 각각 85.7% 및 92.1%였고; PMB2707 (B44)의 경우 각각 80.0% 및 78.3%였다.
전체적으로, 제3 백신접종 후 1개월 후 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 조합 연령층에서의 대상체의 비율은 군 1에서 PMB80 (A22)의 경우 87.4%였고, PMB2001 (A56)의 경우 100.0%였고, PMB2948 (B24)의 경우 88.9%였고, PMB2707 (B44)의 경우 79.1%였다.
일반적으로, hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 군 2 대상체의 비율은 기준선과 비교하여 시간의 경과에 따라 변하지 않았다. 임의의 시점에서 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 조합 연령층에서의 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 4.4% 내지 8.5%; PMB2001 (A56)의 경우 14.9% 내지 20.9%; PMB2948 (B24)의 경우 0.0% 내지 8.9%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 각각의 시점에 0.0%였다.
mITT 집단에 대한 결과는 평가가능한 면역원성 집단의 결과와 유사하였다.
4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율의 하위군 분석을 평가가능한 면역원성 집단에 대해 성별, 인종 및 국가별로 제시한다. 수행된 하위군 분석에서 관찰된 임상적으로 중요한 차이는 존재하지 않았다.
면역지속성: 제3 백신접종의 6개월 후 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율
2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 6개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥　LLOQ를 갖는, ≥24개월 내지 <4세, ≥4세 내지 <10세 연령, 및 조합 연령층 (≥24개월 내지 <10세)에서의 대상체의 비율이 2차 면역원성 종점이었다. 각각의 연령층에서 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율을 평가가능한 면역원성 집단에 대해 표 20에 제시한다.
일반적으로, 제3 백신접종의 6개월 후에 군 1 대상체 사이에서 둘 다의 연령층에서 관찰된 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥　LLOQ를 갖는 대상체의 비율이 저하되었다.
≥24개월 내지 <4세 연령의 대상체의 경우, 제3 백신접종의 1개월 후에서 제3 백신접종의 6개월 후까지, hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 각각 83.8%에서 19.0%; PMB2001 (A56)의 경우 각각 100.0%에서 80.3%; PMB2948 (B24)의 경우 각각 85.7%에서 9.2%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 각각 80.0%에서 12.1%로 감소하였다.
≥4세 내지 <10세 연령의 대상체의 경우, 제3 백신접종의 1개월 후에서 제3 백신접종의 6개월 후까지, hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 각각 91.0%에서 46.0%; PMB2001 (A56)의 경우 각각 100.0%에서 84.3%; PMB2948 (B24)의 경우 각각 92.1%에서 21.9%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 각각 78.3%에서 8.7%로 감소하였다.
전체적으로 조합 연령층의 경우, 제3 백신접종의 1개월 후에서 제3 백신접종의 6개월 후까지, hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 87.4%에서 32.5%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0%에서 82.4%; PMB2948 (B24)의 경우 88.9%에서 15.5%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 79.1%에서 10.4%로 감소하였다.
일반적으로, hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 군 2 대상체의 비율은 기준선과 비교하여 시간의 경과에 따라 변하지 않았다.
표 20. 1차 균주에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체 - 평가가능한 면역원성 집단
Figure pct00059
Figure pct00060
약어: hSBA = 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정; LLOQ = 정량 하한치.
주: A22의 경우 LLOQ = 1:16; A56, B24 및 B44의 경우 1:8.
a. N = 주어진 균주에 대해 유효하고 확실한 hSBA 역가를 갖는 대상체의 수.
b. n = 주어진 시점에 주어진 균주에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ가 관찰된 대상체의 수.
c. 클로퍼 및 피어슨 방법을 사용한, 대상체의 관찰된 비율에 기초한 정확한 양측 CI.
프로그램 ID: 연구 B1971017/CP IMM_LLOQ.SAS.　　보고 데이터세트 생성 날짜: 01JUN2017.　　실행시간 ID:　　16JUN2017 11:22.　　파일 ID: T_2_2_IMM_LLOQ_EVL.HTM.
hSBA GMT. 기준선, 2가 rLP2086을 사용한 제2 백신접종의 1개월 후, 및 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 시험 균주 각각에 대한 hSBA GMT가 2차 종점이었다. 표 21은 평가가능한 면역원성 집단에 대한 4종의 1차 MnB 균주에 대한 hSBA GMT를 제공한다.
≥24개월 내지 <4세 연령 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 군 1 대상체의 경우, 기준선에서의 hSBA GMT는 PMB80 (A22)의 경우 각각 8.3 및 9.1; PMB2001 (A56)의 경우 각각 4.1 및 5.8; PMB2948 (B24)의 경우 4.3 및 4.6; 및 PMB2707 (B44)의 경우 둘 다의 연령층에서 4.0이었다.
≥24개월 내지 <10세 연령의 군 1 대상체의 경우, 기준선에서의 hSBA GMT는 PMB80 (A22)의 경우 8.7, PMB2001 (A56)의 경우 4.9, PMB2948 (B24)의 경우 4.5, 및 PMB2707 (B44)의 경우 4.0이었다.
≥24개월 내지 <4세 연령 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 군 1 대상체의 경우, 백신접종 2의 1개월 후의 hSBA GMT는 PMB80 (A22)의 경우 각각 17.4 및 23.1; PMB2001 (A56)의 경우 각각 103.8 및 90.0; PMB2948 (B24)의 경우 각각 9.1 및 13.7; 및 PMB2707 (B44)의 경우 각각 17.1 및 8.2이었다.
≥24개월 내지 <10세 연령의 군 1 대상체의 경우, 백신접종 2의 1개월 후의 hSBA GMT는 PMB80 (A22)의 경우 20.1, PMB2001 (A56)의 경우 96.6; PMB2948 (B24)의 경우 11.1, 및 PMB2707 (B44)의 경우 11.7이었다.
≥24개월 내지 <4세 연령 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 군 1 대상체의 경우, 백신접종 3의 1개월 후의 hSBA GMT는 PMB80 (A22)의 경우 각각 33.7 및 38.2; PMB2001 (A56)의 경우 각각 175.6 및 191.0; PMB2948 (B24)의 경우 각각 19.1 및 26.8; 및 PMB2707 (B44)의 경우 각각 43.6 및 36.5이었다.
≥24개월 내지 <10세 연령의 군 1 대상체의 경우, 백신접종 3의 1개월 후의 hSBA GMT는 PMB80 (A22)의 경우 35.8, PMB2001 (A56)의 경우 183.3; PMB2948 (B24)의 경우 22.6, 및 PMB2707 (B44)의 경우 39.8이었다.
일반적으로, 군 2의 대상체에 대한 hSBA GMT는 기준선과 비교하여 시간의 경과에 따라 변하지 않았다. 조합 연령층의 경우, 임의의 시점에서 hSBA GMT는 PMB80 (A22)의 경우 8.6 내지 8.9; PMB2001 (A56)의 경우 5.6 내지 6.0; PMB2948 (B24)의 경우 4.0 내지 4.8; 및 PMB2707 (B44)의 경우 각각의 시점에 4.0 범위였다.
표 21. 1차 균주에 대한 hSBA GMT - 평가가능한 면역원성 집단
Figure pct00061
Figure pct00062
약어: GMT = 기하 평균 역가; hSBA = 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정; LLOQ = 정량 하한치; NE = 추정가능하지 않음.
주: LLOQ = A22의 경우 1:16; A56, B24 및 B44의 경우 1:8. LLOQ 미만의 역가는 분석을 위해 0.5 x LLOQ로 설정되었다.
a. N = 주어진 균주에 대해 유효하고 확실한 hSBA 역가를 갖는 대상체의 수.
b. 주어진 시점에 유효하고 확실한 hSBA 역가를 갖는 모든 대상체를 사용하여 GMT를 계산하였다.
c. CI는 hSBA 역가의 평균 로그에 대한 스튜던트 t 분포에 기초한 신뢰 수준의 역 변환이다.
4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 hSBA GMT의 하위군 분석을 성별, 인종, 및 국가별로 평가가능한 면역원성 집단에 대해, 및 mITT 집단에 대해 제시한다. 수행된 하위군 분석에서 관찰된 임상적으로 중요한 차이는 존재하지 않았다.
면역지속성: hSBA GMT
2가 rLP2086을 사용한 제3 백신접종의 6개월 후 4종의 1차 시험 균주 각각에 대한 hSBA GMT가 2차 종점이었다. 표 21은 평가가능한 면역원성 집단에 대한 4종의 1차 MnB 균주에 대한 hSBA GMT를 제공한다.
전체적으로, 군 1 대상체의 경우 둘 다의 연령층에서 제3 백신접종의 1개월 후에서 제3 백신접종의 6개월 후까지 4종의 1차 시험 균주 각각에 대한 hSBA GMT에서 감소가 관찰되었다.
≥24개월 내지 <4세 연령의 군 1 대상체의 경우, 제3 백신접종의 1개월 후에서 제3 백신접종의 6개월 후까지, hSBA GMT는 PMB80 (A22)의 경우 33.7에서 10.9, PMB2001 (A56)의 경우 175.6에서 27.0, PMB2948 (B24)의 경우 19.1에서 5.1, 및 PMB2707 (B44)의 경우 43.6에서 5.2로 감소하였다.
≥4세 내지 <10세 연령의 군 1 대상체의 경우, 제3 백신접종의 1개월 후에서 제3 백신접종의 6개월 후까지, hSBA GMT는 PMB80 (A22)의 경우 38.2에서 14.2, PMB2001 (A56)의 경우 191.0에서 35.7, PMB2948 (B24)의 경우 26.8에서 6.2, 및 PMB2707 (B44)의 경우 36.5에서 5.0으로 감소하였다.
≥24개월 내지 <10세 연령의 군 1 대상체의 경우, 제3 백신접종의 1개월 후에서 제3 백신접종의 6개월 후까지, hSBA GMT는 PMB80 (A22)의 경우 35.8에서 12.4, PMB2001 (A56)의 경우 183.3에서 31.3, PMB2948 (B24)의 경우 22.6에서 5.6, 및 PMB2707 (B44)의 경우 39.8에서 5.1로 감소하였다.
일반적으로, 군 2의 대상체에 대한 hSBA GMT는 기준선과 비교하여 시간의 경과에 따라 변하지 않았다.
규정된 hSBA 역가
기준선, 2가 rLP2086에 의한 제2 백신접종의 1개월 후, 및 제3 백신접종의 1개월 후, 4종의 1차 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥1:4, ≥1:8, ≥1:16, ≥1:32, ≥1:64, 및 ≥1:128을 달성한 ≥24개월 내지 <4세, ≥4세 내지 <10세 연령, 및 조합 연령층에서의 대상체의 비율이 2차 면역원성 종점이었다.
4종의 1차 MnB 균주에 대해 규정된 hSBA 역가를 달성한 대상체의 비율을 평가가능한 면역원성 집단에 대해 평가하였다.
hSBA 역가 ≥ 1:4 및 ≥ 1:16을 달성한 대상체를 하기 기재한다. ≥ 1:4의 hSBA 역가는 IMD에 대한 보호의 상관관계로서 널리 인식되지만; ≥ 1:16의 보다 보존적인 hSBA 역가는 백신접종 전 혈청음성인 대상체에 대해 4-배 백신 효과를 나타내는 수준으로 간주된다.
기준선에서 hSBA 역가 ≥1:4를 갖는 군 1의 ≥24개월 내지 <4세 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 각각 5.9% 및 19.7%였고; PMB2001 (A56)의 경우 각각 3.0% 및 18.5%였고; PMB2948 (B24)의 경우 각각 4.5% 및 9.0%였고; PMB2707 (B44)의 경우 각각 0.0% 및 1.4%였다. 기준선에서 hSBA 역가 ≥1:16을 갖는 군 1의 ≥24개월 내지 　<4세 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 대상체는 PMB80 (A22)의 경우 각각 4.4% 및 13.6%였고; PMB2001 (A56)의 경우 각각 1.5% 및 15.4%였고; PMB2948 (B24)의 경우 각각 3.0% 및 6.0%였고; PMB2707 (B44)의 경우 둘 다의 연령층에 대해 0.0%였다.
기준선에서 hSBA 역가 ≥1:4 및 ≥1:16을 갖는 조합된 연령층에서의 군 1 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 각각 12.7% 및 9.0%였고; PMB2001 (A56)의 경우 각각 10.6% 및 8.3%였고; PMB2948 (B24)의 경우 각각 6.7% 및 4.5%였고; PMB2707 (B44)의 경우 각각 0.7% 및 0.0%였다.
제2 백신접종의 1개월 후 hSBA 역가 ≥1:4를 갖는 군 1의 ≥24개월 내지 <4세 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 각각 65.6% 및 83.3%였고; PMB2001 (A56)의 경우 둘 다의 연령층에 대해 100.0%였고; PMB2948 (B24)의 경우 각각 53.8% 및 68.3%였고; PMB2707 (B44)의 경우 각각 49.3% 및 66.7%였다. 제2 백신접종의 1개월 후 hSBA 역가 ≥1:16을 갖는 군 1의 ≥24개월 내지 　<4세 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 대상체는 PMB80 (A22)의 경우 각각 59.4% 및 78.8%였고; PMB2001 (A56)의 경우 각각 98.5% 및 100.0%였고; PMB2948 (B24)의 경우 각각 43.1% 및 58.7%였고; PMB2707 (B44)의 경우 각각 31.3% 및 55.6%였다.
제2 백신접종의 1개월 후 hSBA 역가 ≥1:4 및 ≥1:16을 갖는 조합 연령층에서의 군 1 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 각각 74.6% 및 69.2%였고; PMB2001 (A56)의 경우 각각 100.0% 및 99.2%였고; PMB2948 (B24)의 경우 각각 60.9% 및 50.8%였고; PMB2707 (B44)의 경우 각각 57.7% 및 43.1%였다.
제3 백신접종의 1개월 후 hSBA 역가 ≥1:4를 갖는 군 1의 ≥24개월 내지 <4세 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 각각 86.8% 및 98.5%였고; PMB2001 (A56)의 경우 각각의 연령층에 대해 100.0%였고; PMB2948 (B24)의 경우 각각 90.5% 및 95.2%였고; PMB2707 (B44)의 경우 각각 81.5% 및 82.6%였다. 제3 백신접종의 1개월 후 hSBA 역가 ≥1:16을 갖는 군 1의 ≥24개월 내지 <4세 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 대상체는 PMB80 (A22)의 경우 각각 83.8% 및 91.0%였고; PMB2001 (A56)의 경우 각각의 연령층에 대해 100.0%였고; PMB2948 (B24)의 경우 각각 81.0% 및 88.9%였고; PMB2707 (B44)의 경우 각각 81.5% 내지 82.6% 및 80.0% 및 75.4%였다.
제3 백신접종의 1개월 후 hSBA 역가 ≥1:4 및 ≥1:16을 갖는 조합 연령층에서의 군 1 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 각각 92.6% 및 87.4%였고; PMB2001 (A56)의 경우 각각 100.0% 및 100.0%였고; PMB2948 (B24)의 경우 각각 92.9% 및 84.9%였고; PMB2707 (B44)의 경우 각각 82.1% 및 77.6%였다.
일반적으로, 규정된 hSBA 역가를 달성한 군 2 대상체의 비율은 기준선과 비교하여 시간에 따라 변화하지 않았다.
mITT 집단에 대한 결과는 평가가능한 면역원성 집단의 결과와 유사하였다.
면역지속성: 규정된 hSBA 역가
2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 6개월 후 4종의 1차 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥1:4, ≥1:8, ≥1:16, ≥1:32, ≥1:64, 및 ≥1:128을 달성한, ≥24개월 내지 <4세, ≥4세 내지 <10세 연령, 및 조합 연령층에서의 대상체의 비율이 2차 면역원성 종점이었다. 4종의 1차 MnB 균주에 대해 규정된 hSBA 역가를 달성한 대상체의 비율을 평가가능한 면역원성 집단에 대해 평가하였다.
전체적으로, 제3 백신접종의 1개월 후에서 제3 백신접종의 6개월 후까지 규정된 hSBA 역가를 달성한 둘 다의 연령층의 군 1 대상체의 비율에서 감소가 관찰되었다.
≥24개월 내지 <4세 연령 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 군 1 대상체의 경우, 제3 백신접종의 1개월 후에서 제3 백신접종의 6개월 후까지, hSBA 역가 ≥1:4를 갖는 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 각각 86.8%에서 25.4% 및 98.5%에서 55.6%; PMB2001 (A56)의 경우 각각 100.0%에서 82.0% 및 100.0%에서 85.7%; PMB2948 (B24)의 경우 각각 90.5%에서 13.8% 및 95.2%에서 26.6%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 각각 81.5%에서 13.6% 및 82.6%에서 13.0%로 감소하였다.
조합 연령층의 군 1 대상체의 경우, 제3 백신접종의 1개월 후에서 제3 백신접종의 6개월 후까지, hSBA 역가 ≥1:4를 갖는 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 92.6%에서 40.5%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0%에서 84.0%; PMB2948 (B24)의 경우 92.9%에서 20.2%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 82.1%에서 13.3%로 감소하였다.
≥24개월 내지 <4세 연령 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 군 1 대상체의 경우, 제3 백신접종의 1개월 후에서 제3 백신접종의 6개월 후까지, hSBA 역가 ≥1:16을 갖는 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 각각 83.8%에서 19.0% 및 91.0%에서 46.0%; PMB2001 (A56)의 경우 각각 100.0%에서 77.0% 및 100.0%에서 82.9%; PMB2948 (B24)의 경우 각각 81.0%에서 9.2% 및 88.9%에서 20.3%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 각각 80.0%에서 9.1% 및 75.4%에서 7.2%로 감소하였다.
조합 연령층의 군 1 대상체의 경우, 제3 백신접종의 1개월 후에서 제3 백신접종의 6개월 후까지, hSBA 역가 ≥1:16을 갖는 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 87.4%에서 32.5%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0%에서 80.2%; PMB2948 (B24)의 경우 84.9%에서 14.7%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 77.6%에서 8.1%로 감소하였다.
일반적으로, 규정된 hSBA 역가를 달성한 군 2 대상체의 비율은 기준선과 비교하여 시간에 따라 변화하지 않았다.
탐색적 면역원성 종점
일부 탐색적 면역원성 종점의 분석은 대상체의 절반에 대한 균주 PMB2001 (A56) 및 PMB2707 (B44)에 대한 hSBA 결과, 및 나머지 절반에 대한 균주 PMB80 (A22) 및 PMB2948 (B24)에 대한 hSBA 결과에 기초하였다. 분석된 탐색적 종점은 기준선으로부터 ≥4-배 증가를 갖는 hSBA 역가였다.
기준선으로부터의 hSBA 역가 4-배 증가
표 22는 4종의 1차 시험 균주에 대해 기준선으로부터 ≥4-배 상승된 hSBA 역가를 갖는 대상체의 비율을 제시한다.
기준선으로부터 백신접종 2의 1개월 후까지 hSBA 역가에서 ≥4-배 상승을 달성한 ≥24개월 내지 <4세 연령 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 군 1 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 각각 56.3% 및 63.6%였고; PMB2001 (A56)의 경우 각각 100.0% 및 82.1%였고; PMB2948 (B24)의 경우 각각 43.1% 및 54.0%였고; PMB2707 (B44)의 경우 각각 54.0% 및 31.3%였다.
기준선으로부터 백신접종 2의 1개월 후까지 hSBA 역가에서 ≥4-배 상승을 달성한 조합 연령층의 군 1 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 60.0%였고, PMB2001 (A56)의 경우 91.0%였고, PMB2948 (B24)의 경우 48.4%였고, PMB2707 (B44)의 경우 42.3%였다.
기준선으로부터 백신접종 3의 1개월 후까지 hSBA 역가에서 ≥4-배 상승을 달성한 ≥24개월 내지 <4세 연령 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 군 1 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 각각 79.4% 및 77.6%였고; PMB2001 (A56)의 경우 각각 98.5% 및 88.7%였고; PMB2948 (B24)의 경우 각각 77.8% 및 82.5%였고; PMB2707 (B44)의 경우 각각 78.5% 및 75.4%였다.
기준선으로부터 백신접종 3의 1개월 후까지 hSBA 역가에서 ≥4-배 상승을 달성한 조합 연령층의 군 1 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 78.5%였고, PMB2001 (A56)의 경우 93.5%였고, PMB2948 (B24)의 경우 80.2%였고, PMB2707 (B44)의 경우 76.9%였다.
기준선으로부터 백신접종 3의 6개월 후까지 hSBA 역가에서 ≥4-배 상승을 달성한 ≥24개월 내지 <4세 연령 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 군 1 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 각각 19.0% 및 36.5%였고; PMB2001 (A56)의 경우 각각 75.4% 및 64.3%였고; PMB2948 (B24)의 경우 각각 6.2% 및 17.2%였고; PMB2707 (B44)의 경우 각각 7.6% 및 7.2%였다.
기준선으로부터 백신접종 3의 6개월 후까지 hSBA 역가에서 ≥4-배 상승을 달성한 조합 연령층의 군 1 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 27.8%였고, PMB2001 (A56)의 경우 69.5%였고, PMB2948 (B24)의 경우 11.6%였고, PMB2707 (B44)의 경우 7.4%였다.
mITT 집단에 대해 유사한 결과가 관찰되었다.
표 22. 1차 균주에 대해 hSBA 역가 ≥4-배 상승을 갖는 대상체 - 평가가능한 면역원성 집단
Figure pct00063
Figure pct00064
약어: hSBA = 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정; LLOQ = 정량 하한치; LOD = 검출 한계.
주: A22의 경우 LLOQ = 1:16; A56, B24 및 B44의 경우 1:8.
주: 4-배 증가는 하기와 같이 정의된다: (1) LOD 미만의 기준선 hSBA 역가 (hSBA 역가 <1:4)를 갖는 대상체의 경우, 반응은 hSBA 역가 ≥ 1:16 또는 LLOQ (어느 역가이든 더 높은 것)로서 정의된다. (2) 기준선 hSBA 역가 ≥ LOD 및 <LLOQ를 갖는 대상체의 경우, 반응은 hSBA 역가 ≥ LLOQ의 4배로서 정의된다. (3) 기준선 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 경우, 반응은 hSBA 역가 ≥ 기준선 역가의 4배로서 정의된다.
a. hSBA 역가 배수 상승이 기준선으로부터 ≥ 4인 경우, N = 명시된 시점 및 기준선 둘 다에서 주어진 균주에 대해 유효하고 확실한 hSBA 역가를 갖는 대상체의 수.
b. hSBA 역가 배수 상승이 기준선으로부터 ≥ 4인 경우, n = 주어진 균주에 대해 기준선으로부터 ≥ 4의 hSBA 역가 배수 상승을 달성한 대상체의 수.
c. 클로퍼 및 피어슨 방법을 사용한, 대상체의 관찰된 비율에 기초한 정확한 양측 CI.
d. 기준선은 백신접종 1 전에 채취된 혈액으로서 정의된다.
추가의 면역원성 분석
1차 MnB 시험 균주에 대한 누락된 hSBA 데이터의 평가
단지 유효하고 확실한 hSBA 결과만을 모든 면역원성 분석에 포함시켰다.
hSBA 결과는 하기 이유로 면역원성 분석으로부터 배제되었다 (또는 누락된 것으로 간주되었다):
Figure pct00065
대상체가 연구를 철회함.
Figure pct00066
대상체가 시험을 위한 혈액 샘플을 갖지 않았지만, 연구를 철회하지는 않음.
Figure pct00067
혈액의 양이 검정을 수행하는데 불충분함. 이는 검정 결과에 대해 "충분하지 않은 양"으로 입력됨.
Figure pct00068
샘플을 시험하였지만, 수치 역가가 신뢰가능하게 결정될 수 없음. 이는 검정 결과에 대해 "불확실"로 입력됨.
역 누적 분포 곡선
조합 연령층에 대해, 4종의 1차 균주 각각에 대한 및 각각의 샘플링 시점에서의 hSBA 반응 (≥ LLOQ)을 나타내는 대상체의 비율의 RCDC를 평가하였다. 또한 ≥24개월 내지 <4세 연령의 대상체에 대해, 4종의 1차 균주 각각에 대한 및 각각의 샘플링 시점에서의 RCDC를 평가하였다. ≥4세 내지 <10세 연령의 대상체에 대해, 4종의 1차 균주 각각에 대한 및 각각의 샘플링 시점에서의 RCDC를 평가하였다.
RCDC는 둘 다의 연령층의 대부분의 대상체가 2가 rLP2086의 제2 및 제3 용량의 1개월 후 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 측정가능한 hSBA 반응을 나타내었음을 보여주었다.
면역원성 결론
본 연구의 1차 목적은 ≥24개월 내지 <4세 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 건강한 대상체에서 제3 백신접종의 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주에 대해 hSBA에 의해 측정된 바와 같은, 2가 rLP2086에 대한 대상체 면역 반응을 설명하기 위한 것이었다. 조합 연령층 (≥24개월 내지 <10세)에 대한 면역 반응의 설명이 2차 목적이었다. 1차 목적의 경우에 종점은 제3 백신접종의 1개월 후에 4종의 1차 MnB 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥　LLOQ를 달성한 각각의 연령층에서의 대상체의 비율이었다.
4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 3회 용량 후 ≥24개월 내지 <4세 연령의 대상체의 경우 80.0% 내지 100.0% 및 ≥4세 내지 <10세 대상체의 경우 78.3% 내지 100.0% 범위의 hSBA 역가 ≥　LLOQ (A56, B24 및 B44의 경우 1:8; A22의 경우 1:16)를 달성한 대상체의 비율에 의해 확인되는 바와 같이, 2가 rLP2086의 제3 용량의 1개월 후 ≥24개월 내지 <10세 연령의 소아에 대해 강건한 면역 반응이 관찰되었다. 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 조합 연령층에서의 대상체의 비율은 79.1% 내지 100.0%의 범위였다. 이들 발견은 실질적인 GMT (19.1 내지 191 범위) 및 둘 다의 연령층에 걸쳐 기준선과 비교하여 2가 rLP2086의 3회 용량 후의 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 hSBA 역가 ≥1:4 (81.5% 내지 100%) 또는 ≥ 1:16 (75.4% 내지 100%)을 달성한 대상체의 비율에 의해 추가로 지지된다. 추가적으로, 기준선으로부터 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 제3 백신접종의 1개월 후까지 hSBA 배수 상승 ≥4를 달성한 조합 연령층에서의 대상체의 비율은 76.9% 내지 93.5% 범위였다.
연구의 2차 목적은 2개의 연령층 및 조합 연령층에 대해 ≥ LLOQ 반응, 규정된 hSBA 역가 및 hSBA GMT에 의해 평가된 바와 같은 2가 rLP2086의 제2 용량의 1개월 후의 면역 반응을 설명하는 것이었다. 조합 연령층의 경우, hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 48.5% 내지 100.0% 범위였고, 연하의 연령층과 연상의 연령층 사이에서 의미있는 차이는 관찰되지 않았다. 이들 발견은 추가로 조합 연령층에 의해, 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 기준선과 비교하여 2가 rLP2086의 2회 용량 후 GMT의 증가 (11.1 내지 96.6 범위), 및 hSBA 역가 ≥1:4 (57.7% 내지 100%) 또는 ≥ 1:16 (43.1% 내지 100%)을 달성한 대상체의 비율의 증가에 의해 지지된다. GMT는 2종의 연령층 사이에서 유사하였다. 추가적으로, 기준선으로부터 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 제2 백신접종의 1개월 후까지 hSBA 배수 상승 ≥4를 달성한 조합 연령층에서의 대상체의 비율은 42.3% 내지 91.0% 범위였다.
또한 2가 rLP2086의 제3 용량의 6개월 후에 면역지속성을 평가하였고, 조합 연령층의 경우 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율은 백신접종 3의 1개월 후 79.1% 내지 100%에서 제3 백신접종의 6개월 후에 10.4% 내지 82.4%로 저하되었다. 연상의 소아가 연하의 소아보다 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율이 더 높은 A22를 제외하고, 2종의 연령층 사이에 어떠한 차이도 관찰되지 않았다 (46%, 95% CI 33.4, 59.1 vs 19%, 95% CI　10.2, 30.9). 그러나, 역가 ≥ LLOQ의 기준선 백신접종전 비는 A22의 경우 연상의 나이층에서 더 컸다 (13.6% vs 4.4%). 또한 조합 연령층에 대해 유사한 경향이 관찰되었고, 제3 백신접종의 6개월 후에 보호 hSBA 역가 ≥1:4를 갖는 대상체의 비율은 13.3% 내지 84.0% 범위였고 GMT는 5.1 내지 31.3 범위였다.
요약하면, 0-, 2-, 및 6-개월 스케줄의 3회 용량으로서 제공된 2가 rLP2086은 ≥24개월 내지 <10세 연령의 유아 및 소아 사이에서, 제3 용량 후 높은 비율의 대상체에서 hSBA에 의해 측정된 바와 같은 보호 항체 역가가 달성되어, 강건한 면역 반응을 도출하였다. ≥24개월 내지 <4세 연령의 유아 및 ≥4세 내지 <10세 연령의 소아 사이에서는 어떠한 임상적으로 의미있는 차이도 관찰되지 않았다. 항체 반응은 제3 용량의 6개월 후에 감소하지만, 백신접종전 기준선 비보다 더 높게 유지된다.
논의 및 전체적 결론
면역원성 논의
≥24개월 내지 <10세 연령의 유아 및 소아에 대해 주어진 2가 rLP2086의 3-용량 요법 (0-, 2- 및 6-개월 스케줄)의 이러한 2상 연구로부터의 면역원성 결과는 청소년 및 젊은 성인에서의 이전 연구와 일치한다.
2가 rLP2086 백신접종에 대한 면역원성 반응을, 보호의 허용되는 상관관계 (hSBA 역가 ≥1:4)보다 더 엄격한 기준을 사용하여 각각 백신 성분 항원에 대해 이종인 fHBP 변이체를 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용하여 검증된 hSBA에서 측정하였다. 백신접종　3의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주에 대한 hSBA 역가 ≥ LLOQ에 기초하여, 본 연구에 참여한 유아 및 소아는 연구 B1971009에 참여한 청소년 (10세 내지 <19세)과 비교하여 유사한 면역 반응을 가졌고, 제3 백신접종 (0-, 2-, 6-개월 스케줄) 후 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 본 연구에서 79.1% 내지 100% 및 연구　B1971009에서 87.1% 내지 99.5% 범위였다. 연구 B1971009가, 특히 A22 (각각 33.2% vs 9%) 및 A56 (각각 27.5% vs 8.3%) 시험 균주의 경우, 본 연구의 유아 및 소아와 비교하여 백신접종전 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 청소년 대상체의 비율이 훨씬 더 높다는 사실에도 불구하고, 이들 2종의 연구 사이에서 백신접종 3의 1개월 후 4종의 1차 시험 균주에 대해 hSBA 역가 ≥　LLOQ를 갖는 대상체의 비율에서 의미있는 차이는 뚜렷하지 않았다. 2가 rLP2086은 ≥24개월 내지 <10세 연령 집단에서 고도로 면역원성인 것으로 보이고, 보호의 hSBA 상관관계에 기초하여 청소년에 대해 예상되는 것과 유사하게 MnB 감염에 대한 보호를 제공할 가능성이 있다.
2차 목적과 관련하여, 2가 rLP2086의 제2 용량의 1개월 후 조합 연령층 (≥24개월 내지 <10세)에 대한 본 연구에서의 면역 반응은 4종의 1차 MnB 시험 균주에 대해 비교적 강건하였고, hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 48.5% 내지 100% 범위였다. 균주 A56을 제외하고, 이들 반응은 2개월 간격을 두고 주어진 2회의 용량의 2가 rLP2086을 제공받은 연구 B1971009에 참여한 청소년 (10세 내지 <19세) 사이에서 관찰된, 64% 내지 99.1% 범위의 면역 반응보다 낮았다. 백신접종 3의 6개월 후에 hSBA 역가를 측정함으로써 본 연구에서 유아 및 소아에 대해 면역지속성을 평가하였다. hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 백신접종 3의 1개월 후 79.1% 내지 100%의 범위에서 백신접종 3의 6개월 후 10.4% 내지 82.4%의 범위로 저하되었다. GMT 및 규정된 hSBA 역가를 갖는 대상체의 비율도 또한 백신접종 3의 6개월 후에 저하되었다. 본 연구에서 백신접종 3의 6개월 후 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율 (10.4% 내지 82.4%)은 연구 6108A1-2001에 참여한 청소년 (11세 내지 <19세)보다 낮았지만 (36.7% 내지 89.4%), 이는 여전히 기준선에서 hSBA 역가 ≥　LLOQ를 갖는 ≥24개월 내지 <10세 연령의 대상체의 비율 (0% 내지 9%)보다 더 높았다. 수막구균 콜로니화 속도는 초기 성인기까지 연령에 따라 증가한다는 것이 잘 확립되어 있다. ≥24개월 내지 <10세 연령 및 그보다 연상의 연령군의 대상체 사이의 차이는 부분적으로 기준선 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율에 기인할 수 있고, 이는 연구 B1971009에서는 27.5% (A56) 및 33.2% (A22)만큼 높았고, 연구　6108A1-2001에서는 서브패밀리 A 균주의 경우 7.4% 내지 13.4%였다. 추가적으로, 최근 연구는 질환-연관 혈청군 B 균주의 보유가 보호 hSBA 역가를 갖는 대상체 (백신접종 전)에서 더 높았고, 백신접종이 그러한 질환-연관 균주의 후속 보유에 영향을 미치지 않았음을 보여주었다. 이는 보유가 기준선 hSBA 역가에 영향을 미칠 수 있고, 백신접종 후의 지속성 또는 재콜로니화가, 본 발명자들이 콜로니화될 가능성이 낮고 기준선에서 보다 낮은 백분율의 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 가질 것으로 추측한 본 연구에서의 유아 및 소아와 비교하여, 백신접종의 6개월 후 청소년들 사이에서 관찰된 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 보다 큰 비율에 기여할 수 있음을 시사한다. 영아 및 소아에서의 1가 접합체 수막구균 혈청군 C 백신을 사용한 면역지속성 연구는 유사하게 보호 면역이 신속하게 약해지는 것을 보여준다. 그러나, 1차 용량의 완료의 4년 후 단지 46.9%의, 혈청군 C에 대해 hSBA 역가 > 1:8의 백분율을 갖는 소아 코호트에서도, 후속 부스터 용량은 부스터의 1개월 후 및 1년 후 대상체의 100%에서 > 1:8의 역가를 제공하였다. 이는 부스터 용량 전에 심지어 혈청음성으로 간주된 것도 부스터 백신접종 후 최대 1년 동안 지속되는 강한 면역기억 반응을 갖는다는 것을 나타낸다. 따라서, 부스터후 반응 및 지속성 연구는, 청소년 및 초기 성인기까지 IMD에 대한 보호를 제공하는데 있어서 부스터 용량의 유용성에 대한 추가의 이해를 제공하기 위해, 유아 및 소아로서 2가 rLP2086의 그의 1차 시리즈를 제공받은 개체들 사이에서 필요하다.
요약하면, 0-, 2-, 및 6-개월 스케줄로 투여된 2가 rLP2086은 ≥24개월 내지 <10세 연령의 유아 및 소아 사이에서 고도로 면역원성이며, 제3 용량 후 높은 비율의 대상체에서 hSBA에 의해 측정된 바와 같이 보호 면역 반응을 달성한다. 본 연구에서 측정된 바와 같은 면역 반응은 제2 및 제3 용량의 1개월 후에 청소년 사이의 선행 연구에서 관찰된 것과 유사한 것으로 보인다. 3-용량 요법은 ≥24개월 내지 <10세 연령의 유아 및 소아에서 높은 비율의 보호 면역을 제공하는 것으로 보인다.
전체적 결론
결론적으로, ≥24개월 내지 <10세 연령의 유아 및 소아에게 0-, 2- 및 6-개월 스케줄의 3-용량 시리즈로 투여된 2가 rLP2086은 제2 및 제3 용량 후 대부분의 대상체에 의한 강건한 면역 반응을 도출하였고, 제3 용량 후 hSBA에 의해 측정된 바와 같이 보호 항체 역가가 달성되었다. hSBA 역가는 3-용량 시리즈의 6개월 후에 감소하였다. 본 연구에서 투여된 바와 같은 백신은 ≥24개월 내지 <10세 연령의 유아 및 소아에 대해 허용되는 안전성 프로파일로 안전하고 잘 허용되었다.
실시예 20: 12 내지 <18개월 또는 18　내지 <24개월 연령의 건강한 유아에게 투여한 경우의 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B 2가 재조합 지단백질 2086 백신 (2가 rLP2086)의 면역원성, 안전성, 및 내약성을 설명하기 위해 수행된 2상, 무작위화, 대조, 관찰자-맹검 연구 (B1971035-syn)
목적
1차 면역원성 목적:
Figure pct00069
연구 진입시 12 내지 <18개월 연령의 건강한 유아에서, 2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B (MnB) 균주를 사용하여 수행한, 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정 (hSBA)에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 설명하기 위함.
Figure pct00070
연구 진입시 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서, 2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 균주를 사용하여 수행한, hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 설명하기 위함.
1차 안전성 목적:
Figure pct00071
연구 진입시 12 내지 <18개월 및 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서, 및 둘 다의 조합 연령층에서 국부 반응, 전신 사건, 유해 사건 (AE), 심각한 유해 사건 (SAE), 새로이 진단된 만성 의학적 상태 (NDCMC), 의학적으로 수반되는 사건 (MAE), 및 즉각적 AE에 의해 측정된 바와 같은, 대조군 (A형 간염 바이러스 [HAV] 백신)과 비교하여 2가 rLP2086 의 안전성 프로파일을 평가하기 위함.
2차 면역원성 목적:
Figure pct00072
연구 진입시 12 내지 <24개월 연령의 건강한 유아 (즉, 둘 다의 조합 연령층)에서 2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용하여 수행한, hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 설명하기 위함.
Figure pct00073
연구 진입시 12 내지 <18개월 및 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서, 및 둘 다의 조합 연령층에서 제2 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종의 6, 12, 24, 36, 및 48개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용하여 수행한, hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 설명하기 위함.
탐색적 면역원성 목적:
Figure pct00074
연구 진입시 12 내지 <18개월 및 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서, 및 둘 다의 조합 연령층에서 2가 rLP2086에 의한 제2 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종의 1, 6, 12, 24, 36, 및 48개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용하여 수행한, hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 추가로 설명하기 위함.
Figure pct00075
연구 진입시 12 내지 <18개월 및 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서, 및 둘 다의 조합 연령층에서 제2 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종의 1, 6, 12, 24, 36, 및 48개월 후에 측정한, LP2086 서브패밀리 A 및 B 단백질을 발현하는 2차 MnB 시험 균주에 대해 hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 추가로 설명하기 위함.
방법
연구 설계:
본 연구는 연령, 12 내지 <18개월 또는 18 내지 <24개월 연령별로 계층화된 대략 396명의 건강한 유아가 2가 rLP2086 (2가지 용량 수준 중 하나 [60 μg 또는 120 μg]) 또는 주사용으로 허가된 소아 HAV 백신 (0.5 mL)/멸균 염수 용액 (0.5-mL 0.85% 염화나트륨)을 제공받도록 2:1 비로 무작위로 배정된 2상, 무작위화, 활성-대조, 관찰자-맹검, 스폰서-맹검해제, 다기관 연구였다.
연구는 2단계로 수행하였다. 단계 1은 2개의 기: 감시대상체-등록기 및 확장-등록기에 걸쳐 백신 면역원성, 안전성 및 내약성을 평가하였다. 단계 2는 2가 rLP2086에 대한 면역 반응의 지속기간을 평가하였다.
면역원성의 경우, 탐색적 목적을 지지하는 2차 MnB 시험 균주 데이터를 제외하고, 백신접종 3 (방문 7)의 1개월 후까지의 모든 데이터가 제시된다.
최종 보고는 단계 2의 완료까지의 모든 면역원성 데이터 및 방문 8 후 연구 종료시 (방문 13, 백신접종 3의 48개월 후)까지의 기간 동안의 안전성 데이터를 포함한다.
단계 1 감시대상체-등록기는 총 4개의 감시대상체 코호트: 2가 rLP2086의 각각의 용량 수준 (60 μg 또는 120 μg)에 대한 2개의 연령층을 포함하도록 계획되었다. 연하의-연령의 감시대상체 코호트는 12 내지 <15개월 연령의 대상체로 구성되었고, 연상의-연령의 감시대상체 코호트는 18 내지 <24개월 연령의 대상체로 구성되었다. 4개의 감시대상체 코호트 각각에 대략 33명의 대상체가 등록되도록 계획하였다. 감시대상체-등록기는 사전-명시된 지점에서의 IRC에 의한 리뷰 및 정지 규칙 적용이 교차된다. 120-μg 용량 수준의 감시대상체 코호트는 60-μg 용량 수준이 IRC에 의해 동일한 연령의 감시대상체 코호트에서 안전하고 허용되는 것으로 평가될 때까지 진행되지 않았다. 연하의-연령의 120-μg 용량 수준 감시대상체 코호트는 이러한 용량 수준이 IRC에 의해 연상의-연령의 120-μg 용량 수준 감시대상체 코호트에서 안전하고 허용되는 것으로 평가될 때까지 진행되지 않았다.
단계 1 확장-등록기 전에, IRC는 감시 대상체로부터 수득된 모든 백신접종 1-후, 7-일 e-다이어리 및 SAE 데이터를 검토하였다. 검토에 기초하여, IRC는 단계 1 확장-등록기에서 둘 다의 연령층에 대해 연구할 120-μg 2가 rLP2086 용량 수준을 선택하였다. 연하의-연령의 확장-등록 코호트 (추가의 132명의 대상체 등록)는 12 내지 <18개월 연령의 대상체로 확장되었고, 연령별로 2개의 하위세트: 12개월 내지 <15개월 및 15개월 내지 <18개월로 계층화되었다. 연상의-연령의 확장된 등록 코호트 (추가의 132명의 대상체 등록)에는 확장-등록기 동안 18 내지 <24개월 연령의 대상체가 등록되었다. 단계 1만을 완료한 대상체의 경우 총 연구 기간은 대략 18개월일 것이다. 단계 1의 경우 방문 스케줄이 표 23에 제시된다.
단계 2는 2가 rLP2086에 무작위로 배정된 대상체만을 포함한다 (용량 수준과 관계없음). 단계 2를 완료한 대상체의 경우 총 연구 기간은 대략 4.5년 (54개월)일 것이다. 단계 2의 경우 방문 스케줄이 표 24에 제시된다.
2가 rLP2086을 제0개월, 제2개월, 및 제6개월 (방문 1, 4, 및 6)에 투여하였다. 소아 HAV 백신을 제0개월 및 제6개월 (방문 1 및 6)에 투여하고, 연구 맹검을 유지하기 위해 염수를 제2개월 (방문 4)에 투여하였다.
표 23. 단계 1 방문 스케줄
Figure pct00076
약어: CRF = 사례 보고 형태; e-다이어리 = 전자 다이어리.
a. 방문 9 및 10은 이러한 1차 분석 임상 연구 보고에 포함되지 않는다.
b. 백신접종 3 대비.
c. 주사는 맹검해제된 투여자에 의해 수행되고; 급성 반응은 맹검 관찰자에 의해 평가된다. 백신접종 위치는 소스, CRF, 및 e-다이어리에 기록된다.
d. 혈액은 백신접종 전에, 및 오직 적격성이 확인된 후에만 수집하였다.
e. 방문 8에 채취한 혈액으로부터의 면역원성 결과는 이러한 1차 분석 임상 연구 보고에 포함되지 않는다.
소스: 단계 2에 대한 활동의 프로토콜 스케줄.
표 24. 단계 2 방문 스케줄
Figure pct00077
소스: 단계 2에 대한 활동의 프로토콜 스케줄.
투여된 백신: 2가 rLP2086 (60 μg 또는 120 μg)을 연구 과정에 걸쳐 3회 투여하였다: 방문 1 (제0개월)에 제1 백신접종, 방문 4 (제2개월)에 제2 백신접종, 및 방문 6 (제6개월)에 제3 백신접종. 2가 rLP2086을 삼각근 또는 전외측 넓적다리 근육 내로 근육내 주사로서 투여하였다. HAV 백신을 연구 과정에 걸쳐 2회 투여하였다: 방문 1 (제0개월)에 제1 백신접종 및 방문 6 (제6개월)에 제3 백신접종. 제2 백신접종 (제2개월) 시점에는 염수를 투여하였다. HAV 백신/염수를 삼각근 또는 전외측 넓적다리 근육 내로 근육내 주사로서 투여하였다. 연구 스태프 중 오직 제3자인 맹검해제된 의학적으로 검증된 구성원만이 임상시험용 제품을 투여하였다. 삼각근 내의 근육 질량이 근육내 주사를 위해 충분하지 않은 경우, 넓적다리가 바람직한 주사 부위였다.
면역원성 평가: 면역원성 분석을 용이하게 하기 위해, 대상체에서 단계 1 동안 하기 시점에 대략 5 mL의 혈액을 수집하였다: 백신접종 1 (방문 1) 전, 백신접종 2 (방문 5)의 1개월 후, 백신접종 3 (방문 7)의 1개월 후, 백신접종 3 (방문 8)의 6개월 후, 백신접종 3 (방문 9)의 12개월 후. 18-개월 기간에 걸쳐 총 25 mL를 수집하였다. 혈액 채취 전에 국부/국소 마취제를 사용할 수 있었다.
면역 반응의 지속기간을 결정하기 위해, 단계 2 대상체에서 하기 시점에 대략 5 mL의 혈액을 수집할 것이다: 백신접종 3의 2년 후, 백신접종 3의 3년 후, 및 백신접종 3의 4년 후. 대략 2.5년에 걸쳐 총 15 mL이 수집될 것이다.
2가 rLP2086에 대한 면역 반응의 평가를 위해, 수막구균 혈청군 B 균주를 사용하여 hSBA에서 기능성 항체를 분석하였다. hSBA는 표적 수막구균 균주의 보체-의존성 사멸을 발생시키는 인간 혈청 내의 항체를 측정한다. 각각 백신 성분 항원에 대해 이종인 인자 H 결합 단백질 (fHBP) 변이체를 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주, PMB80 (A22), PMB2001 (A56), PMB2948 (B24), 및 PMB2707 (B44)을 본 연구에서 면역원성 종점의 결정을 위해 hSBA에 사용하였다.
혈청 부피 제한으로 인해, 1차 균주 중 2종 (PMB80 [A22] 및 PMB2948 [B24])을 (둘 다의 연령층의) 대상체의 절반에 대해 각각의 혈액 샘플링 시점에 시험하였고, 다른 2종의 1차 균주 (PMB2001 [A56] 및 PMB2707 [B44])는 대상체의 나머지 절반에 대해 각각의 혈액 샘플링 시점에 시험하였다.
일단 모든 대상체가 등록을 완료하면 (방문 1), 연구의 수행에 수반되지 않는 통계 팀인 독립적 통계 센터 (ISC)가 2종의 대상체 목록 (무작위로 선택됨, PMB80 [A22]/PMB2948 [B24]에 대해 시험될 대상체의 50% 및 PMB2001 [A56]/PMB2707 [B44]에 대해 시험될 대상체의 나머지 50%)을 스폰서의 샘플 관리 팀에게 제공하였다. 둘 다의 목록은 연구 설계에서와 동일한 무작위화 비 (2:1) 및 연령층 분포를 따랐다. 동일한 균주 쌍 (PMB80 [A22]/PMB2948 [B24] 또는 PMB2001 [A56]/PMB2707 [B44])을 모든 방문에 걸쳐 동일한 대상체에 대해 시험하였다.
일단 1차 분석에 대한 시험이 완료되었고, 충분한 부피의 혈청이 이용가능한 경우, 2가 rLP2086에 대한 면역 반응을 평가하기 위한 추가의 시험을 하기와 같이 고려할 수 있었다: 2가 rLP2086을 제공받았고, 그의 혈청 샘플이 원래 PMB2001 (A56) 및 PMB2707 (B44)에 대해 시험되었던 대상체의 50%로부터의 혈청 샘플에서 PMB80 (A22) 및 PMB2948 (B24)을 시험할 수 있었다. 반대로, 2가 rLP2086을 제공받았고 원래 PMB80 (A22) 및 PMB2948 (B24)에 대해 시험되었던 대상체의 50%로부터의 혈청 샘플에서 PMB2001 (A56) 및 PMB2707 (B44)을 시험할 수 있었다. 2차 균주에 대한 시험을 수행할 수 있었다.
통계적 방법:
1차 면역원성 종점은 하기와 같았다:
Figure pct00078
연구 진입시 12 내지 <18개월 연령의 건강한 유아에서 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 제3 백신접종의 1개월 후에 hSBA 역가 ≥ 정량 하한치 (LLOQ)를 달성한 대상체의 비율.
Figure pct00079
연구 진입시 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 제3 백신접종의 1개월 후에 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율.
전체 연구에 대한 모든 2차 면역원성 종점은 본원에 기재되어 있지만, 본 실시예는 단지 방문 1 내지 7에 적용가능한 면역원성 종점에 대한 결과를 제시한다. 후속 종점을 분석할 것이다.
연구 진입시 12개월 내지 <24개월 연령 (즉, 둘 다의 조합 연령층)의 건강한 대상체에서의 결과에 하기 종점을 적용하였다:
Figure pct00080
2가 rLP2086을 사용한 제3 백신접종의 1개월 후 및 2가 rLP2016을 사용한 제3 백신접종의 6, 12, 24, 36, 및 48개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율.
연구 진입시 12 내지 <18개월의 연령 및 18 내지 <24개월의 연령의 건강한 대상체에서, 및 둘 다의 조합 연령층에서의 결과에 하기 종점을 적용하였다:
Figure pct00081
2가 rLP2086을 사용한 제2 백신접종의 1개월 후에 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체 비율.
Figure pct00082
각각의 적용가능한 혈액 샘플링 방문에서 4종의 1차 MnB 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ, ≥1:4, ≥1:8, ≥1:16, ≥1:32, ≥1:64, 및 ≥1:128을 갖는 대상체의 비율.
Figure pct00083
각각의 적용가능한 혈액 샘플링 방문에서 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 hSBA 기하 평균 역가 (GMT).
2가 rLP2086을 제공받고 적절한 시점에 적절한 균주에 대해 시험된, 연구 진입시 12 내지 <18개월의 연령 또는 18 내지 <24개월의 연령의 모든 건강한 대상체로부터의, 및 둘 다의 조합 연령층에서의 hSBA 결과에 하기 명시된 모든 탐색적 종점을 적용하였다:
Figure pct00084
각각의 적용가능한 혈액 샘플링 시점에 hSBA 역가 ≥ LLOQ, ≥1:4, ≥1:8, ≥1:16, ≥1:32, ≥1:64, 및 ≥1:128을 갖는 대상체의 비율.
Figure pct00085
각각의 적용가능한 혈액 샘플링 방문에서의 4종의 1차 MnB 균주 각각에 대한 hSBA GMT.
Figure pct00086
4종의 1차 시험 균주 각각에 대해 기준선으로부터 2가 rLP2086을 사용한 제3 백신접종의 1개월 후까지 hSBA 역가에서 적어도 4-배 증가를 달성한 대상체의 비율:
Figure pct00087
기준선 hSBA 역가가 검출 한계 (LOD) 미만이거나 또는 hSBA 역가가 <1:4인 대상체의 경우, 4-배 반응은 ≥1:16의 hSBA 역가로서 정의되었다.
Figure pct00088
기준선 hSBA 역가가 ≥ LOD (즉, hSBA 역가 ≥1:4) 및 < LLOQ인 대상체의 경우, 4-배 반응은 LLOQ의 ≥4배의 hSBA 역가로서 정의되었다.
Figure pct00089
기준선 hSBA 역가가 ≥ LLOQ인 대상체의 경우, 4-배 반응은 기준선 역가의 ≥4배의 hSBA 역가로서 정의되었다.
모든 4종의 1차 균주에 대해 각각의 대상체를 시험하고/거나 2차 균주에 대해 대상체를 시험하는데 이용가능한 충분한 혈청이 존재하는 경우 하기 종점이 계획되었다.
Figure pct00090
2가 rLP2086을 사용한 제3 백신접종의 1개월 후 조합된 모든 4종의 1차 시험 균주 (PMB80 [A22], PMB2948 [B24], PMB2001 [A56], 및 PMB2707 [B44]) 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율. 이는 모든 4종의 1차 균주에 대해 시험된 대상체에 대해서만 적용되었다.
Figure pct00091
하기와 같은 2차 MnB 균주에 대해 hSBA를 시험하기 위한 추가의 탐색적 검정:
Figure pct00092
제2 및 제3 백신접종의 1개월 후 및/또는 그 후 각각의 혈액 샘플링 시점에 시험된 각각의 2차 MnB 균주에 대한 hSBA GMT.
Figure pct00093
제2 및 제3 백신접종의 1개월 후 및/또는 그 후 각각의 혈액 샘플링 시점에 각각의 2차 MnB 균주에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율.
1차 종점 분석
1차 목적을 위한 1차 분석은 각각 연구 진입시 12 내지 <18개월, 및 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 제3 백신접종의 1개월 후에 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율이었다. 평가가능한 면역원성 집단을 이러한 요약에 사용하였고, 백분율 및 신뢰 구간 (CI) 둘 다를 표시하였다.
2차 종점 분석
mITT 집단에 대해 수행된 모든 분석은 2차 분석으로 간주하였다.
2차 분석은 또한 평가가능한 면역원성 집단 및 mITT 집단 둘 다에 대한, 제3 백신접종의 1개월 후에 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 퍼센트를 포함하였다.
본 실시예의 경우, 제2 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 백분율을 평가가능한 면역원성 집단 및 mITT 집단 둘 다를 사용하여 분석하였다. 최종 분석의 경우, 제3 백신접종의 6, 12, 24, 36, 및 48개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 백분율을 평가가능한 면역원성 집단 및 mITT 집단 둘 다를 사용하여 분석할 것이다.
각각의 적용가능한 혈액 샘플링 방문에서 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128을 갖는 대상체의 백분율을 평가가능한 면역원성 집단 및 mITT 집단 둘 다를 사용하여 분석하였다.
각각의 적용가능한 혈액 샘플링 방문에서 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 GMT를 평가가능한 면역원성 집단 및 mITT 집단에 대해 요약하였다.
탐색적 종점 분석
기준선으로부터 2가 rLP2086을 사용한 제2 및 제3 백신접종의 1개월 후까지 hSBA 역가에서 적어도 4-배 증가를 달성한 대상체의 비율을 평가가능한 면역원성 집단 및 mITT 집단에 대해 요약하였다.
하위군 분석
일부 면역원성 및 안전성 종점은 성별별로, 국가별로, 및 연령층 내에서 설명적으로 요약하였다.
결과
대상체 배치 및 인구통계학:
12 내지 <24개월 연령의 총 396명의 대상체가 본 연구에서 무작위화되었다. 무작위화된 대상체 중에서, 총 44명의 대상체에게 60 μg의 2가 rLP2086을 제공하고, 220명의 대상체에게 120 μg의 2가 rLP2086을 제공하고, 132명의 대상체에게 HAV 백신/염수를 제공하였다. 198명의 대상체가 각각의 연령층 (12 내지 <18개월 및 18 내지 <24개월)에서 무작위화되었다.
396명의 무작위화된 대상체 중에서, 385명 (97.2%)의 대상체가 연구의 백신접종기 (제1 연구 백신접종 [방문 1]으로부터 백신접종 3의 1개월 후 [방문 7]까지)를 완료하였다. 총 386명 (97.5%)의 대상체가 추적기 (방문 7로부터 백신접종 3의 6개월 후 [방문 8]까지)를 완료하였다. 전체적으로, 총 381명 (96.2%)의 대상체가 6-개월 추적 방문 (방문 8)까지 모든 연구 방문을 완료하였고, 완료 상태는 각각의 연령층에서 유사하였다 (각각 12 내지 <18개월 및 18 내지 <24개월 연령층에서 189명 [95.5%]의 대상체 및 192명 [97.0%]의 대상체).
전체적으로, 대상체의 52.8%는 여성이었고, 대부분의 대상체는 백인 (94.4%) 및 비-히스패닉/비-라티노 (99.5%)였다. 제1 백신접종시 평균 연령 (SD)은 17.3 (3.61)개월이었다 (12 내지 23개월의 범위). 인구통계학적 특징은 백신 군 사이에서 일반적으로 유사하였다.
ITT 및 mITT 집단의 특징은 안전성 집단의 특징과 유사하였다.
면역원성 결과:
본 연구의 1차 목적은 12 내지 <18개월의 연령 및 18 내지 <24개월의 연령의 건강한 대상체에서 제3 백신접종의 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주에 대해 hSBA에 의해 측정된 바와 같은, 2가 rLP2086에 대한 면역 반응을 설명하기 위한 것이었다. 조합 연령층 (12 내지 <24개월)에 대한 면역 반응의 설명이 2차 목적이었다. 1차 목적의 경우에 1차 종점은 제3 백신접종의 1개월 후에 4종의 1차 MnB 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥　LLOQ를 달성한 각각의 연령층에서의 대상체의 비율이었다.
4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥　LLOQ (A56, B24 및 B44의 경우 1:8; A22의 경우 1:16)를 달성한 대상체의 비율에 의해 확인되는 바와 같이, 2가 rLP2086의 제3 용량의 1개월 후 12 내지 <18개월의 연령의 유아 및 18 내지 <24개월의 연령의 유아, 뿐만 아니라 조합 연령층 (12 내지 <24개월)에 대해 둘 다의 용량 수준에서 강건한 면역 반응이 관찰되었다. 60-μg 군의 경우, hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 3회 용량 후 연하의 유아 (12 내지 <18개월)의 경우 88.9% 내지 100.0%, 및 연상의 유아 (18 내지 <24개월)의 경우 81.8% 내지 100.0%의 범위였다. 120-μg 군의 경우, hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 3회 용량 후 12 내지 <18개월의 연령의 유아의 경우 71.1% 내지 100.0%, 및 18 내지 <24개월의 연령의 유아의 경우 72.0% 내지 100.0%의 범위였다. 조합 연령층의 경우, 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 60-μg 군의 경우 85.0% 내지 100.0% 및 120-μg 군의 경우 71.6% 내지 100.0% 범위였다. 이들 발견은 GMT (기준선에서 4.0 내지 8.5로부터 백신접종 3의 1개월 후 15.1 내지 171.4의 범위)의 증가, 및 둘 다의 연령층 및 용량 수준에 걸친 기준선과 비교하여 2가 rLP2086의 3회 용량 후의 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 hSBA 역가 ≥1:4 (71.1% 내지 100.0%) 또는 ≥1:16 (63.6% 내지 100.0%)을 달성한 대상체의 비율의 증가에 의해 추가로 지지된다. 추가적으로, 기준선으로부터 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 제3 백신접종의 1개월 후까지 hSBA 배수 상승 ≥4를 달성한 조합 연령층에서의 대상체의 비율은 둘 다의 용량 수준에 대해 67.4% 내지 100.0% 범위였다. 결론적으로, 0-, 2-, 6-개월 스케줄로 투여된 2가 rLP2086의 60 μg 또는 120 μg의 3회 용량은 12 내지 <24개월의 연령 (개별 및 조합 연령층 둘 다)의 유아에서 강건한 면역 반응을 유도하였다.
연구의 2차 목적은 2개의 연령층 및 조합 연령층에 대해 ≥ LLOQ 반응, 규정된 hSBA 역가, 및 hSBA GMT에 의해 평가된 바와 같은 2가 rLP2086의 제2 용량의 1개월 후의 면역 반응을 설명하는 것이었다. 조합 연령층의 경우, 2가 rLP2086의 제2 용량 (제1 용량의 2개월 후에 투여됨) 후 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 60-μg 군의 대상체의 경우 57.9% 내지 94.7% 및 120-μg 군의 대상체의 경우 33.7% 내지 100.0% 범위였다. 연하의 연령층과 연상의 연령층 사이에 어떠한 임상적으로 의미있는 차이 없이 2개의 개별 연령층에 대해 유사한 결과가 수득되었다. 이들 발견은 조합 연령층에 대한 기준선을 초과한 GMT에서의 증가 (7.2 내지 110.6 범위) 및 둘 다의 용량 수준에 걸쳐 기준선과 비교하여 2가 rLP2086의 2회 용량 후의 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 hSBA 역가 ≥1:4 (36.0% 내지 100.0%) 또는 ≥ 1:16 (32.6% 내지 100%)을 달성한 대상체의 비율에서의 증가에 의해 추가로 지지된다. 2개의 개별 연령층에 대해 유사한 결과가 수득되었다. 추가적으로, 기준선으로부터 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 제2 백신접종의 1개월 후까지 hSBA 배수 상승 ≥4를 달성한 조합 연령층에서의 대상체의 비율은 30.2% 내지 98.9% 범위였다. 결론적으로, 2개월 간격을 두고 투여된 2가 rLP2086의 60 μg 또는 120 μg의 2회 용량은 12 내지 <24개월의 연령 (개별 및 조합 연령층 둘 다)의 유아에서 강건한 면역 반응을 유도하였다.
요약하면, 60-μg 및 120-μg 용량 수준 둘 다에서, 0-, 2-, 및 6-개월 스케줄의 3회 용량으로서 제공된 2가 rLP2086은 12 내지 <24개월 연령의 유아 사이에서, 제3 용량 후 높은 비율의 대상체에서 hSBA에 의해 측정된 바와 같은 보호 항체 역가가 달성되어, 강건한 면역 반응을 도출하였다.
결론:
결론적으로, 60-μg 및 120-μg 용량 수준의 2가 rLP2086은, 12 내지 <24개월의 연령의 유아에게 0-, 2- 및 6-개월 스케줄로 투여한 경우, hSBA에 의해 측정된 바와 같이 제3 용량 후 보호 항체 역가를 도출하였다. 본 연구에서 투여된 바와 같은 백신은 12 내지 <24개월 연령의 유아에 대해 허용되는 안전성 프로파일로 안전하고 잘 허용되었다.
실시예 21: 12 내지 <18개월 또는 18　내지 <24개월 연령의 건강한 유아에게 투여한 경우의 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B 2가 재조합 지단백질 2086 백신 (2가 rLP2086)의 면역원성, 안전성, 및 내약성을 설명하기 위해 수행된 2상, 무작위화, 대조, 관찰자-맹검 연구 (B1971035-CSR)
이러한 2상 연구는 2단계로 수행하였다. 단계 1은 12 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서 마지막 연구 백신접종의 12개월 후 (방문 10)까지 2가 rLP2086의 안전성, 내약성, 및 면역원성을 평가하도록 설계 및 수행되었다. 단계 1은 4개의 감시대상체 코호트를 갖는 감시대상체-등록기 및 확장-등록기로 구성되었다. 감시대상체 코호트에서, 2가 rLP2086을 2개의 연령층 (12 내지 <15개월 및 18 내지 <24개월)에 2개의 용량 수준 (60 μg 및 120 μg)으로 투여하였다. 확장-등록기에 대한 용량 수준의 선택은 2개의 용량 수준의 안전성 프로파일의 내부 검토 위원회 (IRC) 검토에 기초하였다. 단계 2는 최종 연구 백신접종 후 4년까지 면역 반응의 지속기간을 평가하도록 계획되었다.
1차 면역원성 목적
Figure pct00094
연구 진입시 12 내지 <18개월 연령의 건강한 유아에서, 2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 균주를 사용하여 수행한, hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 설명하기 위함.
Figure pct00095
연구 진입시 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서, 2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 균주를 사용하여 수행한, hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 설명하기 위함.
2차 면역원성 목적
Figure pct00096
연구 진입시 12 내지 <24개월 연령의 건강한 유아 (즉, 둘 다의 조합 연령층)에서 2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용하여 수행한, hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 설명하기 위함.
Figure pct00097
연구 진입시 12 내지 <18개월 및 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서, 및 둘 다의 조합 연령층에서 제2 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종의 6, 12, 24, 36, 및 48개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용하여 수행한, hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 설명하기 위함.
탐색적 면역원성 목적
Figure pct00098
연구 진입시 12 내지 <18개월 및 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서, 및 둘 다의 조합 연령층에서 2가 rLP2086에 의한 제2 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종의 1, 6, 12, 24, 36, 및 48개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용하여 수행한, hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 추가로 설명하기 위함.
Figure pct00099
연구 진입시 12 내지 <18개월 및 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서, 및 둘 다의 조합 연령층에서 제2 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종의 1, 6, 12, 24, 36, 및 48개월 후에 측정한, LP2086 서브패밀리 A 및 B 단백질을 발현하는 2차 MnB 시험 균주에 대해 hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 추가로 설명하기 위함.
임상시험 계획
전체적 연구 설계 및 계획
본 연구는 연령, 12 내지 <18개월 또는 18 내지 <24개월 연령별로 계층화된 대략 396명의 건강한 유아가 2가 rLP2086 (2가지 용량 수준 중 하나 [60 μg 또는 120 μg]) 또는 주사용으로 허가된 소아 HAV 백신 (0.5 mL)/멸균 염수 용액 (0.5-mL 0.85% 염화나트륨)을 제공받도록 2:1 비로 무작위로 배정된 2상, 무작위화, 활성-대조, 관찰자-맹검, 스폰서-맹검해제, 다기관 연구이다.
연구는 2단계로 수행하였다. 단계 1은 2개의 기: 감시대상체-등록기 및 확장-등록기에 걸쳐 백신 면역원성, 안전성 및 내약성을 평가하였다. 단계 2는 2가 rLP2086에 대한 면역 반응의 지속기간을 평가하였다.
단계 1 감시대상체-등록기는 총 4개의 감시대상체 코호트: 2가 rLP2086의 각각의 용량 수준 (60 μg 또는 120 μg)에 대한 2개의 연령층을 포함하도록 계획되었다. 연하의-연령의 감시대상체 코호트는 12 내지 <15개월 연령의 대상체로 구성되었고, 연상의-연령의 감시대상체 코호트는 18 내지 <24개월 연령의 대상체로 구성되었다. 4개의 감시대상체 코호트 각각에 대략 33명의 대상체가 등록되도록 계획하였다. 감시대상체-등록기는 사전-명시된 지점에서의 IRC에 의한 리뷰 및 정지 규칙 적용이 교차된다. 120-μg 용량 수준의 감시대상체 코호트는 60-μg 용량 수준이 IRC에 의해 동일한 연령의 감시대상체 코호트에서 안전하고 허용되는 것으로 평가될 때까지 진행되지 않았다. 연하의-연령의 120-μg 용량 수준 감시대상체 코호트는 이러한 용량 수준이 IRC에 의해 연상의-연령의 120-μg 용량 수준 감시대상체 코호트에서 안전하고 허용되는 것으로 평가될 때까지 진행되지 않았다.
단계 1 확장-등록기 전에, IRC는 감시 대상체로부터 수득된 모든 백신접종 1-후, 7-일 e-다이어리 및 SAE 데이터를 검토하였다. 검토에 기초하여, IRC는 단계 1 확장-등록기에서 둘 다의 연령층에 대해 연구할 120-μg 2가 rLP2086 용량 수준을 선택하였다. 연하의-연령의 확장-등록 코호트 (추가의 132명의 대상체 등록)는 12 내지 <18개월 연령의 대상체로 확장되었고, 연령별로 2개의 하위세트: 12개월 내지 <15개월 및 15개월 내지 <18개월로 계층화되었다. 연상의-연령의 확장된 등록 코호트 (추가의 132명의 대상체 등록)에는 확장-등록기 동안 18 내지 <24개월 연령의 대상체가 등록되었다. 단계 1만을 완료한 대상체의 경우 총 연구 기간은 대략 18개월일 것이다.
단계 2는 2가 rLP2086에 무작위로 배정된 대상체만을 포함한다 (용량 수준과 관계없음). 단계 2를 완료한 대상체의 경우 총 연구 기간은 대략 4.5년 (54개월)일 것이다.
2가 rLP2086을 제0개월, 제2개월, 및 제6개월 (방문 1, 4, 및 6)에 투여하였다. 소아 HAV 백신을 제0개월 및 제6개월 (방문 1 및 6)에 투여하고, 연구 맹검을 유지하기 위해 염수를 제2개월 (방문 4)에 투여하였다.
대조군의 선택을 포함한 연구 설계의 논의
이러한 2-단계 연구는 12 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서 2개의 용량 수준 (60 μg 및 120 μg)에서 2가 rLP2086의 안전성, 내약성, 및 면역원성을 평가하였다.
HAV 백신 (제0개월 및 제6개월)을 본 연구의 대조군으로서 선택하였다. 이러한 연령 군에 대한 다른 권장 백신과 비교하여, HAV 백신은 보다 우수한 내약성 프로파일을 갖는다. 또한, HAV 백신은 향후 여행 동안 또는 다른 노출 동안 A형 간염 바이러스 감염에 대해 증가된 위험에 있을 수 있는 대상체에게 이익을 부여한다. HAV 백신에 대해 일반적으로 권장되는 요법은 제0개월 및 제6개월에의 2회 용량이다. 본 연구에서는 연구 맹검을 유지하기 위해 제2개월에 염수를 제공하였다.
투여된 백신
2가 rLP2086 (60 μg 또는 120 μg)을 연구 과정에 걸쳐 3회 투여하였다: 방문 1 (제0개월)에 제1 백신접종, 방문 4 (제2개월)에 제2 백신접종, 및 방문 6 (제6개월)에 제3 백신접종. 2가 rLP2086을 삼각근 또는 전외측 넓적다리 근육 내로 근육내 주사로서 투여하였다. HAV 백신을 연구 과정에 걸쳐 2회 투여하였다: 방문 1 (제0개월)에 제1 백신접종 및 방문 6 (제6개월)에 제3 백신접종. 제2 백신접종 (제2개월) 시점에는 염수를 투여하였다. HAV 백신/염수를 삼각근 또는 전외측 넓적다리 근육 내로 근육내 주사로서 투여하였다. 연구 스태프 중 오직 제3자인 맹검해제된 의학적으로 검증된 구성원만이 임상시험용 제품을 투여하였다. 삼각근 내의 근육 질량이 근육내 주사를 위해 충분하지 않은 경우, 넓적다리가 바람직한 주사 부위였다. 투여 부위 (예를 들어, 좌측/우측 팔/넓적다리)는 소스 노트 및 CRF에 기록되었다.
임상시험용 제품(들)의 정체
2가 rLP2086 (멸균 완충된 등장성 현탁액 중의 알루미늄에 흡착된, 각각의 정제된 서브패밀리 A 및 서브패밀리 B rLP2086 단백질 30 μg [60-μg 용량 수준] 또는 60 μg [120-μg 용량 수준]을 함유함)은 주사용으로 0.5-mL 용량으로 제공되었다.
허가된 소아 HAV 백신은 주사용으로 0.5-mL 용량으로 제공되었다.
위약은 0.5-mL 용량으로 공급된 주사용 멸균 염수 (0.85% 염화나트륨)였다.
임상시험용 제품 (2가 rLP2086, HAV 백신, 및 염수)을 스폰서가 각각의 연구 장소에 제공하였다. 연구 백신을 현행 가이드라인 및 적용가능한 지역 및 법적 규제 요건에 따라 임상시험용 제품으로서 패킹하고 라벨링하였다. 각각의 임상시험용 제품을 고유 키트 번호로 라벨링하였다.
백신접종 요법의 선택
2가 rLP2086 (60 μg 또는 120 μg)을 제0개월, 제2개월, 및 제6개월에 투여하였다. 대조군 대상체에게 제0개월 및 제6개월에 HAV 백신을 제공하였고, 연구 맹검을 유지하기 위해 제2개월에 염수를 주사하였다.
2가 rLP2086 혈청 살박테리아 검정 - 1차 시험 균주
2가 rLP2086에 대한 면역 반응의 평가를 위해, 수막구균 혈청군 B 균주를 사용하여 hSBA에서 기능성 항체를 분석하였다. hSBA는 표적 수막구균 균주의 보체-의존성 사멸을 매개하는 인간 혈청 내의 항체를 측정한다. 각각 백신 성분 항원에 대해 이종인 인자 H 결합 단백질 (fHBP) 변이체를 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주, PMB80 (A22), PMB2001 (A56), PMB2948 (B24), 및 PMB2707 (B44)을 본 연구에서 면역원성 종점의 결정을 위해 hSBA에 사용하였다.
혈청 부피 제한으로 인해, 1차 균주 중 2종 (PMB80 [A22] 및 PMB2948 [B24])을 (둘 다의 연령층의) 대상체의 절반에 대해 각각의 혈액 샘플링 시점에 시험하였고, 다른 2종의 1차 균주 (PMB2001 [A56] 및 PMB2707 [B44])는 대상체의 나머지 절반에 대해 각각의 혈액 샘플링 시점에 시험하였다.
일단 모든 대상체가 등록을 완료하면 (방문 1), 연구의 수행에 수반되지 않는 통계 팀인 독립적 통계 센터 (ISC)가 2종의 대상체 목록 (무작위로 선택됨, PMB80 [A22]/PMB2948 [B24]에 대해 시험될 대상체의 50% 및 PMB2001 [A56]/PMB2707 [B44]에 대해 시험될 대상체의 나머지 50%)을 스폰서의 샘플 관리 팀에게 제공하였다. 둘 다의 목록은 연구 설계에서와 동일한 무작위화 비 (2:1) 및 연령층 분포를 따랐다. 동일한 균주 쌍 (PMB80 [A22]/PMB2948 [B24] 또는 PMB2001　[A56]/PMB2707 [B44])을 모든 방문에 걸쳐 동일한 대상체에 대해 시험하였다.
추가의 검정
일단 1차 분석에 대한 시험이 완료되었고, 충분한 부피의 혈청이 이용가능한 경우, 2가 rLP2086에 대한 면역 반응을 평가하기 위한 추가의 시험을 하기와 같이 고려할 수 있었다: 2가 rLP2086을 제공받았고, 그의 혈청 샘플이 원래 PMB2001 (A56) 및 PMB2707 (B44)에 대해 시험되었던 대상체의 50%로부터의 혈청 샘플에서 PMB80 (A22) 및 PMB2948 (B24)을 시험할 수 있었다. 반대로, 2가 rLP2086을 제공받았고 원래 PMB80 (A22) 및 PMB2948 (B24)에 대해 시험되었던 대상체의 50%로부터의 혈청 샘플에서 PMB2001 (A56) 및 PMB2707 (B44)을 시험할 수 있었다. 2차 균주에 대한 시험을 수행할 수 있었다.
면역원성 분석
관심대상 비교 및 종점 - 1차 면역원성 종점
1차 면역원성 종점은 하기와 같았다:
Figure pct00100
연구 진입시 12 내지 <18개월 연령의 건강한 유아에서 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 제3 백신접종의 1개월 후에 hSBA 역가 ≥ 정량 하한치 (LLOQ)를 달성한 대상체의 비율.
Figure pct00101
연구 진입시 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 제3 백신접종의 1개월 후에 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율.
관심대상 비교 및 종점 - 2차 면역원성 종점
전체 연구에 대한 모든 2차 면역원성 종점은 본원에 기재되어 있지만, 본 실시예는 단지 방문 1에서 7 (백신접종 1에서 백신접종 3의 3개월 후)에 적용가능한 면역원성 종점에 대한 결과를 제시할 것이다.
연구 진입시 12개월 내지 <24개월의 연령 (즉, 둘 다의 조합 연령층)의 건강한 대상체에서의 결과에 하기 종점을 적용하였다:
Figure pct00102
2가 rLP2086을 사용한 제3 백신접종의 1개월 후 및 2가 rLP2016을 사용한 제3 백신접종의 6, 12, 24, 36, 및 48개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율.
연구 진입시 12 내지 <18개월의 연령 및 18 내지 <24개월의 연령의 건강한 대상체에서, 및 둘 다의 조합 연령층에서의 결과에 하기 종점을 적용하였다:
Figure pct00103
2가 rLP2086을 사용한 제2 백신접종의 1개월 후에 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체 비율.
Figure pct00104
각각의 적용가능한 혈액 샘플링 방문에서 4종의 1차 MnB 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ, ≥1:4, ≥1:8, ≥1:16, ≥1:32, ≥1:64, 및 ≥1:128을 갖는 대상체의 비율.
Figure pct00105
각각의 적용가능한 혈액 샘플링 방문에서 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 hSBA 기하 평균 역가 (GMT).
탐색적 면역원성 종점
2가 rLP2086을 제공받고 적절한 시점에 적절한 균주에 대해 시험된, 연구 진입시 12 내지 <18개월의 연령 또는 18 내지 <24개월의 연령의 모든 건강한 대상체로부터의, 및 둘 다의 조합 연령층에서의 hSBA 결과에 하기 명시된 모든 탐색적 종점을 적용하였다:
Figure pct00106
각각의 적용가능한 혈액 샘플링 시점에 hSBA 역가 ≥ LLOQ, ≥1:4, ≥1:8, ≥1:16, ≥1:32, ≥1:64, 및 ≥1:128을 갖는 대상체의 비율.
Figure pct00107
각각의 적용가능한 혈액 샘플링 방문에서의 4종의 1차 MnB 균주 각각에 대한 hSBA GMT.
Figure pct00108
4종의 1차 시험 균주 각각에 대해 기준선으로부터 2가 rLP2086을 사용한 제3 백신접종의 1개월 후까지 hSBA 역가에서 적어도 4-배 증가를 달성한 대상체의 비율:
Figure pct00109
기준선 hSBA 역가가 검출 한계 (LOD) 미만이거나 또는 hSBA 역가가 <1:4인 대상체의 경우, 4-배 반응은 ≥1:16의 hSBA 역가로서 정의되었다.
Figure pct00110
기준선 hSBA 역가가 ≥ LOD (즉, hSBA 역가 ≥1:4) 및 < LLOQ인 대상체의 경우, 4-배 반응은 LLOQ의 ≥4배의 hSBA 역가로서 정의되었다.
Figure pct00111
기준선 hSBA 역가가 ≥ LLOQ인 대상체의 경우, 4-배 반응은 기준선 역가의 ≥4배의 hSBA 역가로서 정의되었다.
모든 4종의 1차 균주에 대해 각각의 대상체를 시험하고/거나 2차 균주에 대해 대상체를 시험하는데 이용가능한 충분한 혈청이 존재하는 경우 하기 종점이 고려되었다.
Figure pct00112
2가 rLP2086을 사용한 제3 백신접종의 1개월 후 조합된 모든 4종의 1차 시험 균주 (PMB80 [A22], PMB2948 [B24], PMB2001 [A56], 및 PMB2707 [B44]) 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율. 이는 모든 4종의 1차 균주에 대해 시험된 대상체에 대해서만 적용되었다.
Figure pct00113
하기와 같은 2차 MnB 균주에 대해 hSBA를 시험하기 위한 추가의 탐색적 검정:
Figure pct00114
제2 및 제3 백신접종의 1개월 후 및/또는 그 후 각각의 혈액 샘플링 시점에 시험된 각각의 2차 MnB 균주에 대한 hSBA GMT.
Figure pct00115
제2 및 제3 백신접종의 1개월 후 및/또는 그 후 각각의 혈액 샘플링 시점에 각각의 2차 MnB 균주에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율.
분석 집단
변형된 치료 의도 집단
제안된 분석과 관련하여 적어도 1개의 유효하고 확실한 검정 결과를 갖는 모든 무작위화된 대상체를 변형된 치료 의도 (mITT) 집단에 포함시켰다. 이러한 분석 세트는 면역원성 분석을 위한 것이었다. mITT 집단의 분석에서 무작위화된 임상시험용 제품에 따라 대상체를 분석하였다.
분석 방법
대조군 및 동일한 연령층 내의 상이한 코호트로부터의 각각의 용량-수준군을 분석을 위해 풀링하였다. 모든 면역원성 분석을 각각의 연령층에 대해 개별적으로, 뿐만 아니라 전체 집단에 대해 요약하였다.
이는 가설-검정 연구가 아니었고; 따라서, 추정 접근법을 사용하여 본 연구에서 1차, 2차 및 탐색적 목적을 평가하였다.
LLOQ는 PMB80 (A22)의 경우 1:16, PMB2001 (A56)의 경우 1:8, PMB2707 (B44)의 경우 1:8, 및 PMB2948 (B24)의 경우 1:8이었다.
GMT의 계산을 위해, LLOQ 미만의 hSBA 결과를 1차 분석의 경우 0.5 x LLOQ로 설정하였다.
1차 종점 분석
1차 목적을 위한 1차 분석은 각각 연구 진입시 12 내지 <18개월, 및 18 내지 <24개월 연령의 건강한 유아에서 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 제3 백신접종의 1개월 후에 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 비율이었다. 평가가능한 면역원성 집단을 이러한 요약에 사용하였고, 백분율 및 신뢰 구간 (CI) 둘 다를 표시하였다.
2차 종점 분석
mITT 집단에 대해 수행된 모든 분석은 2차 분석으로 간주하였다.
2차 종점에 대한 분석은 또한 평가가능한 면역원성 집단 및 mITT 집단 둘 다에 대한, 제3 백신접종의 1개월 후에 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 퍼센트를 포함하였다.
본 실시예의 경우, 백신접종 2의 1개월 후 및 백신접종 3의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 백분율을 평가가능한 면역원성 집단 및 mITT 집단 둘 다를 사용하여 분석하고, 이러한 보고에 제시하였다. 후속 시점 (제3 백신접종의 6, 12, 24, 36, 및 48개월 후) 동안 동일한 분석이 계획된다.
백신접종 2의 1개월 후 및 백신접종 3의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128을 갖는 대상체의 백분율을 평가가능한 면역원성 집단 및 mITT 집단 둘 다를 사용하여 분석하고, 이러한 보고에 제시하였다. 후속 시점 (백신접종 3의 6, 12, 24, 36, 및 48개월 후) 동안 동일한 분석이 계획된다.
제2 백신접종의 1개월 후 및 제3 백신접종의 1개월 후 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 GMT를 평가가능한 면역원성 집단 및 mITT 집단에 대해 요약하고, 이러한 보고에 제시하였다. 후속 시점 (백신접종 3의 6, 12, 24, 36, 및 48개월 후) 동안 동일한 분석이 계획된다.
탐색적 종점 분석
기준선으로부터 2가 rLP2086을 사용한 제2 및 제3 백신접종의 1개월 후까지 hSBA 역가에서 적어도 4-배 증가를 달성한 대상체의 비율을 평가가능한 면역원성 집단 및 mITT 집단에 대해 요약하였다.
역 누적 분포 곡선
평가가능한 면역원성 집단에 대해, 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해, 및 백신접종 2의 1개월 후 및 백신접종 3의 1개월 후에 실험적 역 누적 분포 곡선 (RCDC)을 또한 평가하였다.
면역원성 평가
분석된 집단
평가가능한 면역원성 집단은 면역원성 분석을 위한 1차 분석 집단이었다. mITT 집단을 면역원성 분석을 위한 지지 면역원성 집단으로서 사용하였다.
총 348명 (87.9%)의 대상체가 평가가능한 면역원성 집단에 포함되었고, 48명 (12.1%)의 대상체는 평가가능한 면역원성 집단으로부터 배제되었다. 대상체는 1개 초과의 이유로 면역원성 집단으로부터 배제될 수 있다. 총 31명 (7.8%)의 대상체는 백신접종전 또는 백신접종후 혈액 채취가 스케줄링되지 않았기 때문에 평가가능한 면역원성 집단으로부터 배제되었고 (샘플이 채취되지 않은 대상체 및 샘플이 프로토콜-명시된 윈도우에서 벗어나서 채취된 대상체 포함), 13명 (3.3%)의 대상체는 적격이 아니었거나 또는 백신접종 3 방문 전 또는 그의 1-개월 후에 연구에 부적격하게 되었고, 11명 (2.8%)의 대상체는 모든 백신접종 방문 시 무작위화됨에 따라 백신을 제공받지 않았고, 16명 (4.0%)의 대상체는 금지된 백신 또는 치료를 받았다. 총 12 내지 <18개월의 연령의 대상체의 84.3%, 및 18 내지 <24개월의 연령의 대상체의 91.4%가 평가가능한 면역원성 집단에 포함되었다.
면역원성 결과
백신접종 3의 1개월 후 (방문 7)까지 모든 면역원성 데이터를 포함하는 1차 분석 결과를 하기 섹션에 제공한다. 면역원성 종점의 분석은 대상체의 절반에 대한 균주 PMB2001 (A56) 및 PMB2707 (B44)에 대한 hSBA 결과, 및 나머지 절반에 대한 균주 PMB80 (A22) 및 PMB2948 (B24)에 대한 hSBA 결과에 기초하였다.
1차 및 2차 종점
hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율
1차 면역원성 종점은 2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥　LLOQ를 달성한, 12 내지 <18개월의 연령 (연구 진입시), 및 18 내지 <24개월의 연령 (연구 진입시)의 대상체의 비율이었다. 2가 rLP2086에 의한 제2 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥　LLOQ를 달성한 개별 및 조합 연령층에서의 대상체의 비율과 함께, 2가 rLP2086에 의한 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥　LLOQ를 달성한 조합 연령층에서의 모든 대상체의 비율은 2차 종점이었다.
4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 각각의 연령층에서의 대상체의 비율을 평가가능한 면역원성 집단에 대해 표에 제시한다.
조합 연령층의 경우, 기준선에서 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 0.0% 및 3.1%; PMB2001 (A56)의 경우 0.0% 및 1.1%; PMB2948 (B24)의 경우 4.8% 및 2.1%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 0.0% 및 1.1%였다.
백신접종 2의 1개월 후, 12 내지 <18개월 연령층에서 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 90.0% 및 64.4%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 70.0% 및 23.8%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 77.8% 및 72.3%였다. 18 내지 <24개월 연령층의 경우, hSBA 역가 ≥　LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 66.7% 및 84.0%; PMB2001 (A56)의 경우 90.0% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 44.4% 및 43.2%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 60.0% 및 63.8%였다. 전체적으로, 조합 연령층의 경우, 백신접종 2의 1개월 후에 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 78.9% 및 74.7%; PMB2001 (A56)의 경우 94.7% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 57.9% 및 33.7%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 68.4% 및 68.1%였다.
백신접종 3의 1개월 후에, 12 내지 <18개월 연령층에서 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 88.9% 및 91.1%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 88.9% 및 71.1%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 88.9% 및 87.2%였다. 18 내지 <24개월 연령층에서, hSBA 역가 ≥　LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 90.9% 및 88.2%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 100.0%; PMB2948의 경우 81.8% 및 72.0% (B24); 및 PMB2707 (B44)의 경우 90.0% 및 85.1%였다. 전체적으로, 조합 연령층의 경우, 백신접종 3의 1개월 후에 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 90.0% 및 89.6%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 85.0% 및 71.6%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 89.5% 및 86.2%였다.
일반적으로, hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 HAV/염수군의 대상체의 비율은 기준선과 비교하여 시간의 경과에 따라 변하지 않았다 (표 25).
mITT 집단에 대한 결과는 평가가능한 면역원성 집단의 결과와 유사하였다.
4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율의 하위군 분석을 평가가능한 면역원성 집단에 대해 성별 및 국가별로 평가하였다. 수행된 하위군 분석에서 관찰된 임상적으로 중요한 차이는 존재하지 않았다.
표 25. 1차 균주에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체 - 평가가능한 면역원성 집단
Figure pct00116
Figure pct00117
약어: hSBA = 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정; LLOQ = 정량 하한치.
주: A22의 경우 LLOQ = 1:16; A56, B24 및 B44의 경우 1:8.
a. N = 주어진 균주에 대해 유효하고 확실한 hSBA 역가를 갖는 대상체의 수.
b. n = 주어진 시점에 주어진 균주에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ가 관찰된 대상체의 수.
c. 클로퍼 및 피어슨 방법을 사용한, 대상체의 관찰된 비율에 기초한 정확한 양측 CI.
hSBA GMT
12 내지 <18개월의 연령, 18 내지 <24개월의 연령의 대상체, 및 조합 연령층에 대한 기준선, 2가 rLP2086을 사용한 제2 백신접종의 1개월 후, 및 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 hSBA GMT가 2차 종점이었다. 표 26은 평가가능한 면역원성 집단에 대한 4종의 1차 MnB 균주에 대한 hSBA GMT를 제공한다.
조합 연령층의 경우, 기준선에서의 hSBA GMT는 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 8.0 및 8.4; PMB2001 (A56)의 경우 4.0 및 4.1; PMB2948 (B24)의 경우 4.4 및 4.1; 및 PMB2707 (B44)의 경우 4.0 및 4.0이었다.
백신접종 2의 1개월 후, 12 내지 <18개월 연령층에 대한 hSBA GMT는 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 42.2 및 24.6; PMB2001 (A56)의 경우 101.6 및 117.2; PMB2948 (B24)의 경우 10.6 및 6.0; 및 PMB2707 (B44)의 경우 23.5 및 22.1이었다. 18 내지 <24개월 연령층의 경우, hSBA GMT는 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 23.5 및 36.8; PMB2001 (A56)의 경우 68.6 및 104.6; PMB2948 (B24)의 경우 6.9 및 8.5; 및 PMB2707 (B44)의 경우 21.1 및 17.0이었다. 전체적으로, 백신접종 2의 1개월 후, 조합 연령층에 대한 hSBA GMT는 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 32.0 및 30.4; PMB2001 (A56)의 경우 82.6 및 110.6; PMB2948 (B24)의 경우 8.6 및 7.2; 및 PMB2707 (B44)의 경우 22.2 및 19.4였다.
백신접종 3의 1개월 후, 12 내지 <18개월 연령층에 대한 hSBA GMT는 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 80.6 및 63.0; PMB2001 (A56)의 경우 109.7 및 190.6; PMB2948 (B24)의 경우 20.2 및 15.8; 및 PMB2707 (B44)의 경우 29.6 및 46.3이었다. 18 내지 <24개월 연령층의 경우, hSBA GMT는 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 82.3 및 71.4; PMB2001 (A56)의 경우 181.0 및 154.4; PMB2948 (B24)의 경우 17.0 및 14.5; 및 PMB2707 (B44)의 경우 34.3 및 44.9였다. 전체적으로, 백신접종 3의 1개월 후, 조합 연령층에 대한 hSBA GMT는 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 81.6 및 67.3; PMB2001 (A56)의 경우 142.8 및 171.4; PMB2948 (B24)의 경우 18.4 및 15.1; PMB2707 (B44)의 경우 32.0 및 45.6이었다.
일반적으로, HAV/염수군의 대상체에 대한 hSBA GMT는 기준선과 비교하여 시간의 경과에 따라 변하지 않았다.
표 26. 1차 균주에 대한 hSBA GMT - 평가가능한 면역원성 집단
Figure pct00118
Figure pct00119
약어: GMT = 기하 평균 역가; hSBA = 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정; LLOQ = 정량 하한치; NE = 추정가능하지 않음.
주: LLOQ = A22의 경우 1:16; A56, B24 및 B44의 경우 1:8. LLOQ 미만의 역가는 분석을 위해 0.5 x LLOQ로 설정되었다.
a. N = 주어진 균주에 대해 유효하고 확실한 hSBA 역가를 갖는 대상체의 수.
b. 주어진 시점에 유효하고 확실한 hSBA 역가를 갖는 모든 대상체를 사용하여 GMT를 계산하였다.
c. CI는 hSBA 역가의 평균 로그에 대한 스튜던트 t 분포에 기초한 신뢰 수준의 역 변환이다.
mITT 집단에 대한 결과는 평가가능한 면역원성 집단의 결과와 유사하였다.
4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA GMT의 하위군 분석을 평가가능한 면역원성 집단에 대해 성별 및 국가별로 평가하였다. 수행된 하위군 분석에서 관찰된 임상적으로 중요한 차이는 존재하지 않았다.
규정된 hSBA 역가
기준선, 2가 rLP2086에 의한 제2 백신접종의 1개월 후, 및 제3 백신접종의 1개월 후, 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥1:4, ≥1:8, ≥1:16, ≥1:32, ≥1:64, 및 ≥1:128을 달성한 12 내지 <18개월의 연령, 18 내지 <24개월의 연령, 및 조합 연령층에서의 대상체의 비율이 2차 면역원성 종점이었다.
4종의 1차 MnB 균주에 대해 규정된 hSBA 역가를 달성한 대상체의 비율을 평가가능한 면역원성 집단에 대해 표 27에 제시한다.
hSBA 역가 ≥ 1:4 및 ≥ 1:16을 달성한 2가 rLP2086을 제공받은 대상체에 대한 결과를 하기 기재한다. ≥ 1:4의 hSBA 역가는 IMD에 대한 보호의 상관관계로서 널리 인식되지만; ≥ 1:16의 보다 보존적인 hSBA 역가는 백신접종 전 혈청음성인 대상체에 대해 4-배 백신 효과를 나타내는 수준으로 간주된다.
일반적으로, 규정된 hSBA 역가를 달성한 HAV/염수군의 대상체 비율은 기준선과 비교하여 시간의 경과에 따라 변하지 않았다.
mITT 집단에 대한 결과는 평가가능한 면역원성 집단의 결과와 유사하였다.
hSBA 역가 ≥1:4
백신접종 2의 1개월 후, hSBA 역가 ≥ 1:4를 달성한 12 내지 <18개월 연령의 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 90.0% 및 64.4%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 70.0% 및 28.6%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 77.8% 및 72.3%였다. hSBA 역가 ≥ 1:4를 달성한 18 내지 <24개월 연령의 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 66.7% 및 86.0%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 44.4% 및 43.2%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 70.0% 및 63.8%였다. 전체적으로 조합 연령층의 경우, 백신접종 2의 1개월 후 hSBA 역가 ≥ 1:4를 달성한 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 78.9% 및 75.8%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 57.9% 및 36.0%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 73.7% 및 68.1%였다.
백신접종 3의 1개월 후, hSBA 역가 ≥ 1:4를 달성한 12 내지 <18개월 연령의 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 88.9% 및 91.1%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 88.9% 및 71.1%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 88.9% 및 87.2%였다. hSBA 역가 ≥ 1:4를 달성한 18 내지 <24개월 연령의 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 90.9% 및 88.2%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 81.8% 및 72.0%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 90.0% 및 87.2%였다. 전체적으로 조합 연령층의 경우, 백신접종 3의 1개월 후 hSBA 역가 ≥ 1:4를 달성한 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 90.0% 및 89.6%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 85.0% 및 71.6%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 89.5% 및 87.2%였다.
hSBA 역가 ≥1:16
백신접종 2의 1개월 후, hSBA 역가 ≥ 1:16을 달성한 12 내지 <18개월 연령의 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 90.0% 및 64.4%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 60.0% 및 21.4%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 77.8% 및 72.3%였다. hSBA 역가 ≥ 1:16을 달성한 18 내지 <24개월 연령의 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 66.7% 및 86.0%; PMB2001 (A56)의 경우 90.0% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 33.3% 및 43.2%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 60.0% 및 61.7%였다. 전체적으로 조합 연령층의 경우, 백신접종 2의 1개월 후 hSBA 역가 ≥ 1:16을 달성한 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 78.9% 및 74.7%; PMB2001 (A56)의 경우 94.7% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 47.4% 및 32.6%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 68.4% 및 67.0%였다.
백신접종 3의 1개월 후, hSBA 역가 ≥ 1:16을 달성한 12 내지 <18개월 연령의 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 88.9% 및 91.1%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 97.9%; PMB2948 (B24)의 경우 88.9% 및 66.7%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 77.8% 및 87.2%였다. hSBA 역가 ≥ 1:16을 달성한 18 내지 <24개월 연령의 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 90.9% 및 88.2%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 63.6% 및 68.0%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 90.0% 및 85.1%였다. 전체적으로 조합 연령층의 경우, 백신접종 3의 1개월 후 hSBA 역가 ≥ 1:16을 달성한 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 90.0% 및 89.6%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 98.9%; PMB2948 (B24)의 경우 75.0% 및 67.4%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 84.2% 및 86.2%였다.
표 27. 1차 균주에 대해 규정된 hSBA 역가를 달성한 대상체 - 평가가능한 면역원성 집단
Figure pct00120
Figure pct00121
Figure pct00122
Figure pct00123
Figure pct00124
Figure pct00125
약어: hSBA = 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정.
a. N = 주어진 균주에 대해 유효하고 확실한 hSBA 역가를 갖는 대상체의 수.
b. n= 주어진 시점에 주어진 균주에 대해 hSBA 역가 ≥ 규정된 역가가 관찰된 대상체의 수.
c. 클로퍼 및 피어슨 방법을 사용한, 대상체의 관찰된 비율에 기초한 정확한 양측 CI.
탐색적 면역원성 종점
기준선으로부터의 hSBA 역가 ≥4-배 증가
표 28은 4종의 1차 MnB 시험 균주에 대해 기준선으로부터 ≥4-배 상승된 hSBA 역가를 갖는 대상체의 비율을 제시한다.
백신접종 2의 1개월 후, 기준선으로부터 hSBA 역가에서 ≥4-배 상승을 달성한 12 내지 <18개월 연령의 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 80.0% 및 62.2%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 97.9%; PMB2948 (B24)의 경우 60.0% 및 19.0%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 77.8% 및 70.2%였다. 18 내지 <24개월 연령층의 경우, 기준선으로부터 hSBA 역가에서 ≥4-배 상승을 달성한 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 66.7% 및 80.0%; PMB2001 (A56)의 경우 90.0% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 33.3% 및 40.9%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 60.0% 및 61.7%였다. 전체적으로, 조합 연령층의 경우, 백신접종 2의 1개월 후, 기준선으로부터 hSBA 역가에서 ≥4-배 상승을 달성한 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 73.7% 및 71.6%; PMB2001 (A56)의 경우 94.7% 및 98.9%; PMB2948 (B24)의 경우 47.4% 및 30.2%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 68.4% 및 66.0%였다.
백신접종 3의 1개월 후, 기준선으로부터 hSBA 역가에서 ≥4-배 상승을 달성한 12 내지 <18개월 연령의 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 77.8% 및 86.7%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 95.7%; PMB2948 (B24)의 경우 88.9% 및 66.7%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 77.8% 및 85.1%였다. 18 내지 <24개월 연령층의 경우, 기준선으로부터 hSBA 역가에서 ≥4-배 상승을 달성한 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 90.9% 및 88.2%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 100.0%; PMB2948 (B24)의 경우 63.6% 및 68.0%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 90.0% 및 85.1%였다. 전체적으로, 조합 연령층의 경우, 백신접종 3의 1개월 후, 기준선으로부터 hSBA 역가에서 ≥4-배 상승을 달성한 대상체의 비율은 각각 60-μg 및 120-μg 군에 대해 PMB80 (A22)의 경우 85.0% 및 87.5%; PMB2001 (A56)의 경우 100.0% 및 97.9%; PMB2948 (B24)의 경우 75.0% 및 67.4%; 및 PMB2707 (B44)의 경우 각각 84.2% 및 85.1%였다.
백신접종 3의 1개월 후 hSBA 역가에서 ≥4-배 상승을 달성한 HAV/염수군 (조합 연령층)의 대상체의 비율은 PMB80 (A22)의 경우 5.0%, PMB2001 (A56)의 경우 1.9%, PMB2948 (B24)의 경우 3.3%, 및 PMB2707 (B44)의 경우 0.0%였다.
표 28. 1차 균주에 대한 hSBA 역가에서 ≥4-배 상승을 달성한 대상체 - 평가가능한 면역원성 집단
Figure pct00126
Figure pct00127
약어: hSBA = 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정; LLOQ = 정량 하한치; LOD = 검출 한계;
주: A22의 경우 LLOQ = 1:16; A56, B24 및 B44의 경우 1:8.
주: 4-배 증가는 하기와 같이 정의된다: (1) LOD 미만의 기준선 hSBA 역가 (hSBA 역가 <1:4)를 갖는 대상체의 경우, 반응은 hSBA 역가 ≥ 1:16 또는 LLOQ (어느 역가이든 더 높은 것)로서 정의된다.
(2) 기준선 hSBA 역가 ≥ LOD 및 <LLOQ를 갖는 대상체의 경우, 반응은 hSBA 역가 ≥ LLOQ의 4배로서 정의된다.
(3) 기준선 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 대상체의 경우, 반응은 hSBA 역가 ≥ 기준선 역가의 4배로서 정의된다.
a. hSBA 역가 배수 상승이 기준선으로부터 ≥ 4인 경우, N = 명시된 시점 및 기준선 둘 다에서 주어진 균주에 대해 유효하고 확실한 hSBA 역가를 갖는 대상체의 수.
b. hSBA 역가 배수 상승이 기준선으로부터 ≥ 4인 경우, n = 주어진 균주에 대해 기준선으로부터 ≥ 4의 hSBA 역가 배수 상승을 달성한 대상체의 수.
c. 클로퍼 및 피어슨 방법을 사용한, 대상체의 관찰된 비율에 기초한 정확한 양측 CI.
mITT 집단에 대해 유사한 결과가 관찰되었다.
4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가에서 ≥4-배 상승을 달성한 대상체의 비율의 하위군 분석을 평가가능한 면역원성 집단에 대해 성별 및 국가별로 평가하였다. 수행된 하위군 분석에서 관찰된 임상적으로 중요한 차이는 존재하지 않았다.
1차 MnB 시험 균주에 대한 역 누적 분포 곡선
조합 연령층에 대해, 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 및 각각의 샘플링 시점에서의 hSBA 반응 (≥ LLOQ)을 나타내는 대상체의 비율의 RCDC를 PMB80 [A22], PMB2001 [A56], PMB2948 [B24], 및 PMB2707 [B44]에 대해 평가하였다. RCDC는 면역 반응이 HAV/염수군에 비해 2가 rLP2086 군에서, 백신접종 2 및 백신접종 3 후에 더 높다는 것을 보여주었다. 2가 rLP2086 군에 대한 면역 반응은 각각의 백신접종에 따라 증가하였다.
면역원성 결론
본 연구의 1차 목적은 12 내지 <18개월의 연령 및 18 내지 <24개월의 연령의 건강한 대상체에서 제3 백신접종의 1개월 후에 측정한, 2종은 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하고 2종은 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주에 대해 hSBA에 의해 측정된 바와 같은, 2가 rLP2086에 대한 면역 반응을 설명하기 위한 것이었다. 조합 연령층 (12 내지 <24개월)에 대한 면역 반응의 설명이 2차 목적이었다. 1차 목적의 경우에 1차 종점은 제3 백신접종의 1개월 후에 4종의 1차 MnB 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥　LLOQ를 달성한 각각의 연령층에서의 대상체의 비율이었다.
4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥　LLOQ (A56, B24 및 B44의 경우 1:8; A22의 경우 1:16)를 달성한 대상체의 비율에 의해 확인되는 바와 같이, 2가 rLP2086의 제3 용량의 1개월 후 12 내지 <18개월의 연령의 유아 및 18 내지 <24개월의 연령의 유아, 뿐만 아니라 조합 연령층 (12 내지 <24개월)에 대해 둘 다의 용량 수준에서 강건한 면역 반응이 관찰되었다. 60-μg 군의 경우, hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 3회 용량 후 연하의 유아 (12 내지 <18개월)의 경우 88.9% 내지 100.0%, 및 연상의 유아 (18 내지 <24개월)의 경우 81.8% 내지 100.0%의 범위였다. 120-μg 군의 경우, hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 3회 용량 후 12 내지 <18개월의 연령의 유아의 경우 71.1% 내지 100.0%, 및 18 내지 <24개월의 연령의 유아의 경우 72.0% 내지 100.0%의 범위였다. 조합 연령층의 경우, 제3 백신접종의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대해 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 60-μg 군의 경우 85.0% 내지 100.0% 및 120-μg 군의 경우 71.6% 내지 100.0% 범위였다. 이들 발견은 GMT (기준선에서 4.0 내지 8.5로부터 백신접종 3의 1개월 후 15.1 내지 171.4의 범위)의 증가, 및 둘 다의 연령층 및 용량 수준에 걸친 기준선과 비교하여 2가 rLP2086의 3회 용량 후의 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 hSBA 역가 ≥1:4 (71.1% 내지 100.0%) 또는 ≥1:16 (63.6% 내지 100.0%)을 달성한 대상체의 비율의 증가에 의해 추가로 지지된다. 추가적으로, 기준선으로부터 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 제3 백신접종의 1개월 후까지 hSBA 배수 상승 ≥4를 달성한 조합 연령층에서의 대상체의 비율은 둘 다의 용량 수준에 대해 67.4% 내지 100.0% 범위였다. 결론적으로, 0-, 2-, 6-개월 스케줄로 투여된 2가 rLP2086의 60 μg 또는 120 μg의 3회 용량은 12 내지 <24개월의 연령 (개별 및 조합 연령층 둘 다)의 유아에서 강건한 면역 반응을 유도하였다.
연구의 2차 목적은 2개의 연령층 및 조합 연령층에 대해 ≥ LLOQ 반응, 규정된 hSBA 역가, 및 hSBA GMT에 의해 평가된 바와 같은 2가 rLP2086의 제2 용량의 1개월 후의 면역 반응을 설명하는 것이었다. 조합 연령층의 경우, 2가 rLP2086의 제2 용량 (제1 용량의 2개월 후에 투여됨) 후 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 60-μg 군의 대상체의 경우 57.9% 내지 94.7% 및 120-μg 군의 대상체의 경우 33.7% 내지 100.0% 범위였다. 연하의 연령층과 연상의 연령층 사이에 어떠한 임상적으로 의미있는 차이 없이 2개의 개별 연령층에 대해 유사한 결과가 수득되었다. 이들 발견은 조합 연령층에 대한 기준선을 초과한 GMT에서의 증가 (7.2 내지 110.6 범위) 및 둘 다의 용량 수준에 걸쳐 기준선과 비교하여 2가 rLP2086의 2회 용량 후의 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 hSBA 역가 ≥1:4 (36.0% 내지 100.0%) 또는 ≥ 1:16 (32.6% 내지 100%)을 달성한 대상체의 비율에서의 증가에 의해 추가로 지지된다. 2개의 개별 연령층에 대해 유사한 결과가 수득되었다. 추가적으로, 기준선으로부터 4종의 1차 MnB 시험 균주 각각에 대한 제2 백신접종의 1개월 후까지 hSBA 배수 상승 ≥4를 달성한 조합 연령층에서의 대상체의 비율은 30.2% 내지 98.9% 범위였다. 결론적으로, 2개월 간격을 두고 투여된 2가 rLP2086의 60 μg 또는 120 μg의 2회 용량은 12 내지 <24개월의 연령 (개별 및 조합 연령층 둘 다)의 유아에서 강건한 면역 반응을 유도하였다.
요약하면, 60-μg 및 120-μg 용량 수준 둘 다에서, 0-, 2-, 및 6-개월 스케줄의 3회 용량으로서 제공된 2가 rLP2086은 12 내지 <24개월 연령의 유아 사이에서, 제3 용량 후 높은 비율의 대상체에서 hSBA에 의해 측정된 바와 같은 보호 항체 역가가 달성되어, 강건한 면역 반응을 도출하였다.
논의 및 전체적 결론
면역원성 논의. 12 내지 <24개월 연령의 유아에 대해 주어진 2가 rLP2086의 (2개의 용량 수준으로의) 3-용량 요법 (0-, 2- 및 6-개월 스케줄)의 이러한 2상 연구로부터의 면역원성 결과는 청소년 및 젊은 성인에서의 120-μg 용량 수준에서의 이전 연구와 일치한다.
2가 rLP2086 백신접종에 대한 면역원성 반응을, 보호의 허용되는 상관관계 (hSBA 역가 ≥1:4)보다 더 엄격한 기준을 사용하여 각각 백신 성분 항원에 대해 이종인 fHBP 변이체를 발현하는 4종의 1차 MnB 시험 균주를 사용하여 검증된 hSBA에서 측정하였다. 백신접종　3의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주에 대한 hSBA 역가 ≥ LLOQ에 기초하여, 본 연구에 참여한 유아는 (어느 하나의 용량 수준에서) 연구 B1971009에 참여한 청소년 (10세 내지 <19세) 및 연구 B1971017에 참여한 유아 및 소아 (≥24개월 내지 <10세)와 비교하여 유사한 면역 반응을 가졌고, 제3 백신접종 (0-, 2-, 6-개월 스케줄) 후 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은 본 연구에서 120-μg 군의 경우 71.6% 내지 100.0% (12 내지 <24개월 연령), 연구　B1971009에서 87.1% 내지 99.5%, 및 연구 B1971017에서 79.1% 내지 100.0% 범위였다. 연구 B1971009가 본 연구의 유아와 비교하여 백신접종전 hSBA 역가 ≥ LLOQ를 갖는 청소년 대상체의 비율이 훨씬 더 높다는 사실에도 불구하고, 이들 3종의 연구 사이에서 백신접종 3의 1개월 후 4종의 1차 MnB 시험 균주에 대해 hSBA 역가 ≥　LLOQ를 달성한 대상체의 비율에서 임상적으로 의미있는 차이는 뚜렷하지 않았다. 2가 rLP2086은 12 내지 <24개월 연령 집단에서 고도로 면역원성인 것으로 보이고, 보호의 hSBA 상관관계에 기초하여 청소년에 대해 예상되는 것과 유사하게 MnB 감염에 대한 보호를 제공할 가능성이 있다. 개별 연령층에 대한 3회 용량 및 둘 다의 조합 연령층에 대한 3회의 용량 후에, 60-μg 용량 수준에 대한 반응은 120-μg 용량 수준에 대한 반응과 의미있게 상이하지 않았다.
2차 목적, 2가 rLP2086 (어느 하나의 용량 수준)의 제2 용량의 1개월 후 조합 연령층 (12 내지 <24개월)에 대한 본 연구에서의 면역 반응과 관련하여, hSBA 역가 ≥ LLOQ를 달성한 대상체의 비율은, 2개월 간격을 두고 주어진 2가 rLP2086의 2회 용량을 제공받은 연구　B1971009에 참여한 청소년 (10세 내지 <19세)의 64.2% 내지 99.1%의 범위 및 연구 B1971017에 참여한 유아 및 소아 (≥24개월 내지 <10세)의 48.5% 내지 100.0%의 범위와 비교하여, 33.7% 내지 100.0% 범위였다. 둘 다의 연령층 및 조합 연령층의 경우, 60 μg 2가 rLP2086의 2회 용량 후의 면역 반응은 120 μg 2가 rLP2086의 2회 용량 후의 반응보다 유의하게 상이하지 않았다. 60-μg 군의 보다 작은 샘플 크기는 60-μg 및 120-μg 용량 수준 사이의 반응률을 비교할 때 확정적으로 결론내리는 것을 어렵게 한다는 것에 주목한다.
요약하면, 60-μg 및 120-μg 용량 수준 둘 다에서, 0-, 2-, 및 6-개월 스케줄로 투여된 2가 rLP2086은 12 내지 <24개월 연령의 유아 사이에서, 제3 용량 후 높은 비율의 대상체에서 hSBA에 의해 측정된 바와 같은 보호 면역 반응을 달성하여, 고도로 면역원성이다. 본 연구에서 측정된 바와 같은 면역 반응은 제3 용량의 1개월 후에 청소년 및 소아 사이의 선행 연구에서 관찰된 것과 유사한 것으로 보인다. 3-용량 요법은 12 내지 <24개월 연령의 유아에서 높은 비율의 보호 면역을 제공하는 것으로 보인다.
전체적 결론. 결론적으로, 60-μg 및 120-μg 용량 수준의 2가 rLP2086은, 12 내지 <24개월의 연령의 유아에게 0-, 2- 및 6-개월 스케줄로 투여한 경우, hSBA에 의해 측정된 바와 같이 제3 용량 후 보호 항체 역가를 도출한다. 본 연구에서 투여된 바와 같은 백신은 12 내지 <24개월 연령의 유아에 대해 허용되는 안전성 프로파일로 안전하고 잘 허용되었다.
실시예 22: CBA/J 마우스에서의 Mn 5가 및 트루멘바® 백신의 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B 면역원성의 평가
CBA/J 마우스에서 2가 Mn B fHBP 백신, 트루멘바, 또는 4가 ACWY 폴리사카라이드 접합체 백신과 함께 제제화된 2가 Mn B fHBP 백신 (Mn 5가 ABCWY)을 사용한 백신접종 후의 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B fHBP에 대한 면역 반응을 평가하였다. CBA/J 마우스의 군을 3종의 상이한 백신: 5가 (ABCYW), 트루멘바® (MnB) 및 니멘릭스® (ACYW)로 면역화시켰다 (표 29).
표 29 - 연구 설계: 각각의 백신에 대한 용량 수준
Figure pct00128
각각의 부문에 대해, 각각의 백신의 2-배 희석 용량 수준을 사용하여 CBA/J 마우스 (25마리/군)를 목의 뒷덜미에서 피하로 면역화하였다 (표 29). 마우스를 시간 0에 백신으로 프라이밍하고, 제2주에 부스팅하였다. 인간 보체를 사용한 2종의 상이한 혈청 살박테리아 검정 (hSBA)을 사용하여 시험하기 위해 제3주에 혈청을 PD2 수집하였다. 하나의 hSBA는 fHBP 서브패밀리 A 발현 균주 (M98250771)를 사용하였고, 다른 하나는 fHBP 서브패밀리 B 발현 균주 (CDC1127)를 사용하였다.
hSBA는 엔 메닌기티디스 혈청군 B 균주에 대한 항체-의존성 보체 매개된 살박테리아 활성을 측정한다. 간략하게, 적절히 희석된 시험 혈청을 96-웰 마이크로타이터 검정 플레이트에서 엔 메닌기티디스 B 균주 (서브패밀리 A 또는 B)의 새로이 제조된 박테리아 배양물 및 인간 보체와 함께 혼합하였다. 검정 플레이트를 오비탈 진탕기 상에 놓고, 가습 인큐베이터 (37℃/5% CO2) 내에서 30분 동안 혼합하였다. 후속해서, 각각의 웰로부터의 검정 반응의 분취물을 96-웰 필터 플레이트로 옮겨 생존 박테리아를 열거하였다.
백신접종에 대한 반응률을 hSBA에서 반응한 각각의 투여군 (n=25)의 마우스의 백분율로서 계산하였다. 미리 결정된 희석 수준에서 시험한 경우, T30 대조군 수막구균 박테리아의 ≥ 50%를 사멸시킨 마우스 혈청 샘플을 반응자로 간주하였다. T30 대조군 웰은 박테리아 및 보체를 함유하지만 시험 혈청은 함유하지 않았고, 30분 검정 인큐베이션의 종료 시에 계수하였다.
표 30 및 표 31은 엔 메닌기티디스 혈청형 B 균주의 서브패밀리 A 및 서브패밀리 B 둘 다에 대한 트루멘바® 또는 Mn 5가에 의해 유도된 대등한 용량-의존성 반응률을 보여준다. 예상된 바와 같이, 니멘릭스™는 Mn B 균주에 대해 기능적 면역 반응을 유도하지 않았다.
표 30 - 서브패밀리 A hSBA 반응 (% 반응자)
Figure pct00129
a표 29에서 상응하는 용량 수준 참조
표 31 - 서브패밀리 B hSBA 반응 (% 반응자)
Figure pct00130
a표 29에서 상응하는 용량 수준 참조
하기 항목은 본 발명의 추가의 실시양태를 기재한다:
C1. 폴리펩티드 및 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드 접합체; 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드 접합체; 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드 접합체; 및 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드 접합체를 포함하는 조성물.
C2. 항목 C1에 있어서, MenA 캡슐 사카라이드가 담체 단백질에 접합되고; MenC 캡슐 사카라이드가 담체 단백질에 접합되고; MenW 캡슐 사카라이드가 담체 단백질에 접합되고; MenY 캡슐 사카라이드가 담체 단백질에 접합된 것인 조성물.
C3. 항목 C1에 있어서, 추가로 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X (MenX) 캡슐 사카라이드 접합체를 포함하는 조성물.
C4. 항목 C1에 있어서, 폴리펩티드가 인자 H 결합 단백질 (fHBP)인 조성물.
C5. 항목 C1에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 14, 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 16, 서열식별번호: 17, 서열식별번호: 18, 서열식별번호: 19, 서열식별번호: 20, 서열식별번호: 21, 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 23, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 27, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 30, 서열식별번호: 31, 서열식별번호: 32, 서열식별번호: 33, 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 41, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 50, 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 54, 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 57, 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 59, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 61, 및 서열식별번호: 62 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것인 조성물.
C6.
a. 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드;
b. 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드; 및
c. 담체 단백질에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드
를 포함하는 조성물.
C7.
a. 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드;
b. 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드; 및
c. 담체 단백질에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드
를 포함하는 조성물.
C8.
a. 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드;
b. 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드; 및
c. 담체 단백질에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W-135 (MenW) 캡슐 사카라이드
를 포함하는 조성물.
C9.
a. 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드;
b. 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드; 및
c. 담체 단백질에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드
를 포함하는 조성물.
C10.
a. 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드;
b. 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드;
c. 담체 단백질에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드;
d. 담체 단백질에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드;
e. 담체 단백질에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드; 및
f. 담체 단백질에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드
를 포함하는 조성물.
C11.
a. 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드;
b. 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드;
c. 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드;
d. 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드;
e. 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드; 및
f. 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드
를 포함하는 조성물.
C12. 항목 C1에 있어서, MenA 캡슐 사카라이드가 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 아디프산 디히드라지드 (ADH) 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것 (MenAAH-TT 접합체)인 조성물.
C13. 항목 C1에 있어서, MenC 캡슐 사카라이드가 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 ADH 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것 (MenCAH-TT 접합체)인 조성물.
C14. 항목 C1에 있어서, MenW 캡슐 사카라이드가 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 것 (MenW-TT 접합체)인 조성물.
C15. 항목 C1에 있어서, MenY 캡슐 사카라이드가 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 것 (MenY-TT 접합체)인 조성물.
C16. 항목 C1에 있어서, 추가로 트리스-HCl을 포함하는 조성물.
C17. 항목 C1에 있어서, 추가로 염화나트륨을 포함하는 조성물.
C18. 항목 C1에 있어서, 추가로 수크로스를 포함하는 조성물.
C19. 항목 C1에 있어서, 추가로 히스티딘을 포함하는 조성물.
C20. 항목 C1에 있어서, 추가로 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물.
C21. 항목 C1에 있어서, 추가로 알루미늄을 포함하는 조성물.
C22. 항목 C1에 있어서, 추가로 인산알루미늄을 포함하는 조성물.
C23. 항목 C1에 있어서, 제1 폴리펩티드 약 120 μg/ml; 제2 폴리펩티드 약 120 μg/ml; 인산알루미늄으로서 알루미늄 약 0.5 mg/ml; 약 0.02 mg 폴리소르베이트-80; 약 10 mM 히스티딘; 및 약 150 mM 염화나트륨을 포함하는 조성물.
C24. 항목 C1에 있어서, 제1 폴리펩티드 약 60 μg; 제2 폴리펩티드 약 60 μg; 약 7.5 μg TT에 접합된 약 5 μg의 MenA 캡슐 사카라이드; 약 7.5 μg TT에 접합된 약 5 μg의 MenC 캡슐 사카라이드; 약 3.75 μg TT에 접합된 약 5 μg의 MenW 캡슐 사카라이드; 약 3.25 μg TT에 접합된 약 5 μg의 MenY 캡슐 사카라이드; 약 97 μg 트리스-HCl, pH 6.8 ± 0.3; 염화나트륨 4.69-4.71 mg; 수크로스 약 28 mg; L-히스티딘 약 0.78 mg; 약 0.02 mg 폴리소르베이트-80; 약 0.25 mg 알루미늄을 포함하고; 추가로 용량당 0.5 mL 물을 포함하는 조성물.
C25. 항목 C1에 있어서, 12 내지 <18개월 또는 18 내지 <24개월 연령의 환자에서 사용하기에 적합한 조성물.
C26. 항목 C1에 있어서, 18 내지 <24개월 연령의 환자에서 사용하기에 적합한 조성물.
C27. 항목 C1에 있어서, ≥24개월 내지 <10세 연령의 환자에서 사용하기에 적합한 조성물.
C28. 항목 C20에 있어서, 적어도 0.010 mg 폴리소르베이트-80 및 최대 0.018 mg 폴리소르베이트-80을 포함하는 조성물.
C29. 항목 C20에 있어서, 적어도 0.01 mg 폴리소르베이트-80 및 최대 0.02 mg 폴리소르베이트-80을 포함하는 조성물.
C30. 항목 C1에 있어서, 서열식별번호: 1에 대해 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드는 추가로 포함하지 않는 조성물.
C31. 항목 C1에 있어서, 제1 폴리펩티드가 총 258개의 아미노산을 갖는 것인 조성물.
C32. 항목 C1에 있어서, 서열식별번호: 2에 대해 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드는 추가로 포함하지 않는 조성물.
C33. 항목 C1에 있어서, 제2 폴리펩티드가 총 261개의 아미노산을 갖는 것인 조성물.
C34. 항목 C1에 있어서, 최대 2개의 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 조성물.
C35. 항목 C1에 있어서, 하이브리드 단백질을 포함하지 않는 조성물.
C36. 항목 C1에 있어서, 키메라 단백질을 포함하지 않는 조성물.
C37. 항목 C1에 있어서, 융합 단백질을 포함하지 않는 조성물.
C38. 항목 C1에 있어서, 동결건조되지 않은 조성물.
C39. 항목 C1에 있어서, 포름알데히드를 포함하지 않는 조성물.
C40. 항목 C1에 있어서, 디프테리아 톡소이드 또는 CRM을 포함하지 않는 조성물.
C41. 항목 C1에 있어서, 아디프산 디히드라지드 (ADH) 링커의 부재 하에 MenA 캡슐 사카라이드를 포함하지 않는 조성물.
C42. 항목 C1에 있어서, 아디프산 디히드라지드 (ADH) 링커의 부재 하에 MenC 캡슐 사카라이드를 포함하지 않는 조성물.
C43. 항목 C1에 있어서, 액체 조성물인 조성물.
C44. 항목 C1에 있어서, 하기 면역원성 조성물: 메낙트라(R), 멘베오(R), 아다셀(R), 하브릭스(R), 가르다실(R), 레페박스, 또는 그의 임의의 조합 중 어느 하나를 추가로 포함하지 않는 조성물.
C45. 항목 C1에 있어서, 담체 단백질이 디프테리아 톡소이드인 수막구균 A, C, Y 및 W-135 폴리사카라이드 접합체 (MCV4) 조성물을 추가로 포함하지 않는 조성물.
C46. 항목 C1에 있어서, 담체 단백질이 CRM197인 수막구균 A, C, Y 및 W-135 폴리사카라이드 접합체 (MCV4) 조성물을 추가로 포함하지 않는 조성물.
C47. 항목 C1에 있어서, 니멘릭스 백신을 추가로 포함하지 않는 조성물.
C48. 항목 C1에 있어서, 염화나트륨 및 물로 이루어진 희석제를 포함하는 니멘릭스 백신을 추가로 포함하지 않는 조성물.
C49. (a) 지질화된 MenB rLP2086 서브패밀리 A 폴리펩티드 및 지질화된 MenB rLP2086 서브패밀리 B 폴리펩티드를 포함하는 제1 조성물; 및 (b) 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드; 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드; 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드; 및 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드를 포함하는 제2 조성물을 포함하는 키트.
C50. 항목 C49에 있어서, 제1 조성물이 액체 조성물이고, 제2 조성물이 동결건조된 조성물인 키트.
C51. 항목 C49에 있어서, 동결건조된 조성물이 폴리소르베이트 80을 포함하지 않는 것인 키트.
C52. 항목 C49에 있어서, 하기 면역원성 조성물: 메낙트라(R), 멘베오(R), 아다셀(R), 하브릭스(R), 가르다실(R), 레페박스, 또는 그의 임의의 조합 중 어느 하나를 추가로 포함하지 않는 키트.
C53. 항목 C49에 있어서, 담체 단백질이 디프테리아 톡소이드인 수막구균 A, C, Y 및 W-135 폴리사카라이드 접합체 (MCV4) 조성물을 추가로 포함하지 않는 키트.
C54. 항목 C49에 있어서, 담체 단백질이 CRM197인 수막구균 A, C, Y 및 W-135 폴리사카라이드 접합체 (MCV4) 조성물을 추가로 포함하지 않는 키트.
C55. 항목 C49에 있어서, 니멘릭스 백신을 추가로 포함하지 않는 키트.
C56. 항목 C49에 있어서, 염화나트륨 및 물로 이루어진 희석제를 포함하는 니멘릭스(R) 백신을 추가로 포함하지 않는 키트.
C57.
a.
i. 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 및
ii. 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드
를 포함하는 액체 조성물; 및
b.
i. 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 아디프산 디히드라지드 (ADH) 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것인 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드 (MenAAH-TT 접합체);
ii. 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 ADH 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것인 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드 (MenCAH-TT 접합체);
iii. 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드 (MenW-TT 접합체); 및
iv. 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드 (MenY-TT 접합체)
를 포함하는 동결건조된 조성물
를 포함하는 키트.
C58. 항목 C57에 있어서, 액체 조성물이 추가로 염화나트륨을 포함하는 것인 키트.
C59. 항목 C57에 있어서, 액체 조성물이 추가로 L-히스티딘을 포함하는 것인 키트.
C60. 항목 C57에 있어서, 액체 조성물이 추가로 폴리소르베이트 80을 포함하는 것인 키트.
C61. 항목 C57에 있어서, 액체 조성물이 추가로 인산알루미늄을 포함하는 것인 키트.
C62. 항목 C57에 있어서, 액체 조성물이 추가로 트리스-HCl을 포함하지 않는 것인 키트.
C63. 항목 C57에 있어서, 액체 조성물이 추가로 수크로스를 포함하지 않는 것인 키트.
C64. 항목 C57에 있어서, 동결건조된 조성물이 추가로 염화나트륨을 포함하는 것인 키트.
C65. 항목 C57에 있어서, 동결건조된 조성물이 폴리소르베이트-80을 포함하지 않는 것인 키트.
C66. 항목 C60에 있어서, 액체 조성물이 적어도 0.010 mg 폴리소르베이트-80 및 최대 0.018 mg 폴리소르베이트-80을 포함하는 것인 키트.
C67. 항목 C60에 있어서, 액체 조성물이 적어도 0.010 mg 폴리소르베이트-80 및 최대 0.02 mg 폴리소르베이트-80을 포함하는 것인 키트.
C68.
a. (i) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 및 (ii) 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 액체 조성물; 및
b.
i. 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 아디프산 디히드라지드 (ADH) 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것인 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드 (MenAAH-TT 접합체);
ii. 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 ADH 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것인 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드 (MenCAH-TT 접합체);
iii. 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드 (MenW-TT 접합체); 및
iv. 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드 (MenY-TT 접합체)
를 포함하는 포함하는 동결건조된 조성물
을 포함하는 면역원성 조성물.
C69. 항목 C68에 있어서, 동결건조된 조성물이 액체 조성물로 재구성되는 것인 면역원성 조성물.
C70. 항목 C68에 있어서, 액체 조성물이 추가로 히스티딘을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
C71. 항목 C68에 있어서, 액체 조성물이 추가로 폴리소르베이트-80을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
C72. 항목 C68에 있어서, 액체 조성물이 추가로 인산알루미늄을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
C73. 항목 C68에 있어서, 액체 조성물이 추가로 염화나트륨을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
C74. 항목 C68에 있어서, 12 내지 <18개월 또는 18 내지 <24개월 연령의 환자에서 사용하기에 적합한 면역원성 조성물.
C75. 항목 C68에 있어서, 18 내지 <24개월 연령의 환자에서 사용하기에 적합한 면역원성 조성물.
C76. 항목 C68에 있어서, ≥24개월 내지 <10세 연령의 환자에서 사용하기에 적합한 면역원성 조성물.
C77.
a. (i) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 및 (ii) 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 액체 조성물; 및
b.
i. 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 아디프산 디히드라지드 (ADH) 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것인 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드 (MenAAH-TT 접합체);
ii. 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 ADH 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합된 것인 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드 (MenCAH-TT 접합체);
iii. 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드 (MenW-TT 접합체); 및
iv. 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드 (MenY-TT 접합체)
를 포함하는 동결건조된 조성물
을 포함하는 면역원성 조성물이며, 여기서 동결건조된 조성물은 액체 조성물에 의해 재구성되어 면역원성 조성물을 생성하는 것인 면역원성 조성물.
C78. 항목 C77에 있어서, 액체 조성물이 추가로 알루미늄을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
C79. 항목 C77에 있어서, 액체 조성물이 추가로 인산알루미늄을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
C80. 항목 C77에 있어서, 동결건조된 조성물이 추가로 염화나트륨을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
C81. 항목 C77에 있어서, 적어도 0.010 mg 폴리소르베이트-80 및 최대 0.018 mg 폴리소르베이트-80을 포함하는 면역원성 조성물.
C82. 항목 C77에 있어서, 적어도 0.01 mg 폴리소르베이트-80 및 최대 0.02 mg 폴리소르베이트-80을 포함하는 면역원성 조성물.
C83. 항목 C77에 있어서, 동결건조된 조성물이 알루미늄을 함유하지 않는 것인 면역원성 조성물.
C84. 항목 C78에 있어서, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드가 알루미늄에 결합된 것인 면역원성 조성물.
C85. 항목 C78에 있어서, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드가 면역원성 조성물 중의 알루미늄에 결합된 것인 면역원성 조성물.
C86. 항목 C78에 있어서, 면역원성 조성물 중의 알루미늄에 결합된 폴리펩티드의 농도가 동결건조된 조성물의 재구성 전 액체 조성물 중의 알루미늄에 결합된 폴리펩티드의 농도와 비교하여 24시간 후에 감소되지 않는 것인 면역원성 조성물.
C87. 항목 C77에 있어서, 면역원성 조성물 중의 MenAAH-TT 접합체의 농도가 동결건조된 조성물 중의 MenAAH-TT 접합체의 농도와 비교하여 24시간 후에 감소되지 않는 것인 면역원성 조성물.
C88. 항목 C77에 있어서, 면역원성 조성물 중의 MenCAH-TT 접합체의 농도가 동결건조된 조성물 중의 MenCAH-TT 접합체의 농도와 비교하여 24시간 후에 감소되지 않는 것인 면역원성 조성물.
C89. 항목 C77에 있어서, 면역원성 조성물 중의 MenW-TT 접합체의 농도가 동결건조된 조성물 중의 MenW-TT 접합체의 농도와 비교하여 24시간 후에 감소되지 않는 것인 면역원성 조성물.
C90. 항목 C77에 있어서, 면역원성 조성물 중의 MenY-TT 접합체의 농도가 동결건조된 조성물 중의 MenY-TT 접합체의 농도와 비교하여 24시간 후에 감소되지 않는 것인 면역원성 조성물.
C91. 항목 C86에 있어서, 농도가 재구성 전 액체 조성물 중의 각각의 농도와 비교하여 24시간 후 최대 1%만큼 감소된 것인 면역원성 조성물.
C92. 항목 C86에 있어서, 농도가 재구성 전 액체 조성물 중의 각각의 농도와 비교하여 24시간 후 최대 5%만큼 감소된 것인 면역원성 조성물.
C93. 항목 C86에 있어서, 농도가 재구성 전 액체 조성물 중의 각각의 농도와 비교하여 24시간 후 최대 10%만큼 감소된 것인 면역원성 조성물.
C94. 항목 C87-C90 중 어느 한 항목에 있어서, 농도가 재구성 전 동결건조된 조성물 중의 각각의 농도와 비교하여 24시간 후 최대 1%만큼 감소된 것인 면역원성 조성물.
C95. 항목 C87-C90 중 어느 한 항목에 있어서, 농도가 재구성 전 동결건조된 조성물 중의 각각의 농도와 비교하여 24시간 후 최대 5%만큼 감소된 것인 면역원성 조성물.
C96. 항목 C87-C90 중 어느 한 항목에 있어서, 농도가 재구성 전 동결건조된 조성물 중의 각각의 농도와 비교하여 24시간 후 최대 10%만큼 감소된 것인 면역원성 조성물.
C97. 항목 C68 또는 항목 C77에 있어서, 재구성된 면역원성 조성물의 pH가, 염화나트륨에 의해 재구성될 경우, 동결건조된 조성물의 pH 미만인 면역원성 조성물.
C98. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드, 및 b) 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 조성물.
C99. 항목 C98에 있어서, 추가로 폴리소르베이트-80, 알루미늄, 히스티딘, 및 염화나트륨을 포함하는 조성물.
C100. 항목 C98에 있어서, 제1 지질화된 폴리펩티드 60 μg 및 제2 지질화된 폴리펩티드 60 μg을 포함하는 조성물.
C101. 항목 C1에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주 및 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C102. 항목 C68에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주 및 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C103. 항목 C77에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주 및 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C104. 항목 C1에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W, 및/또는 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C105. 항목 C68에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W, 및/또는 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C106. 항목 C77에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W, 및/또는 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C107. 항목 C1에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W, 및/또는 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C108. 항목 C68에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W, 및/또는 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C109. 항목 C77에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W, 및/또는 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C110. 항목 C1에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 균주, 및 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C111. 항목 C68에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 균주, 및 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C112. 항목 C77에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 균주, 및 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C113. 항목 C98에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 균주, 및 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C114. 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 인자 H 결합 단백질 A10을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 C 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C115. 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 인자 H 결합 단백질 A10을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 W 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C116. 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 인자 H 결합 단백질 A19를 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 W 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C117. 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 인자 H 결합 단백질 B16을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 A 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C118. 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 인자 H 결합 단백질 B47을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 Y 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C119. 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 인자 H 결합 단백질 A10을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 C 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C120. 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 인자 H 결합 단백질 A10을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 W 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C121. 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 인자 H 결합 단백질 A19를 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 W 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C122. 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 인자 H 결합 단백질 B16을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 A 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C123. 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 인자 H 결합 단백질 B47을 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 Y 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C124. 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 14, 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 16, 서열식별번호: 17, 서열식별번호: 18, 서열식별번호: 19, 서열식별번호: 20, 서열식별번호: 21, 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 23, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 27, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 30, 서열식별번호: 31, 서열식별번호: 32, 서열식별번호: 33, 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 41, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 50, 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 54, 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 57, 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 59, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 61, 및 서열식별번호: 62로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 동일성을 갖는 폴리펩티드의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C125. 항목 C1에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C126. 항목 C68에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C127. 항목 C77에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C128. 항목 C98에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C129. 항목 C98에 따른 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 인자 H 결합 단백질 B49를 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C130. 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 인자 H 결합 단백질 B49를 발현하는 엔. 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 살박테리아 면역 반응을 유도하는 방법.
C131. 항목 C101-C130 중 어느 한 항목에 있어서, 조성물이 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정에서 동일한 조건 하에 측정 시, 제1 용량을 제공하기 전 인간에서의 혈청 이뮤노글로불린의 살박테리아 역가보다 제1 용량을 제공한 후 인간에서 적어도 2-배 더 높은 혈청 이뮤노글로불린의 살박테리아 역가를 유도하는 것인 방법.
C132. 항목 C101-C130 중 어느 한 항목에 있어서, 조성물이 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정에서 동일한 조건 하에 측정 시, 제1 용량을 제공하기 전 인간에서의 혈청 이뮤노글로불린의 살박테리아 역가보다 제1 용량을 제공한 후 인간에서 적어도 4-배 더 높은 혈청 이뮤노글로불린의 살박테리아 역가를 유도하는 것인 방법.
C133. 항목 C101-C132 중 어느 한 항목에 있어서, 조성물이 인간 보체를 사용한 혈청 살박테리아 검정에서 동일한 조건 하에 측정 시, 제1 용량을 제공하기 전 인간에서의 혈청 이뮤노글로불린의 살박테리아 역가보다 제1 용량을 제공한 후 인간에서 적어도 8-배 더 높은 혈청 이뮤노글로불린의 살박테리아 역가를 유도하는 것인 방법.
C134. 항목 C101-C132 중 어느 한 항목에 있어서, 환자가 12 내지 <18개월 또는 18 내지 <24개월 연령인 방법.
C135. 항목 C101-C132 중 어느 한 항목에 있어서, 환자가 18 내지 <24개월 연령인 방법.
C136. 항목 C101-C132 중 어느 한 항목에 있어서, 환자가 ≥24개월 내지 <10세 연령인 방법.
C137. (a) 환자가 12 내지 18개월 연령일 때 환자에게 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 면역 반응을 도출하는 방법이며; 여기서 면역원성 조성물은 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 것인 방법.
C138. (a) 환자가 18 내지 24개월 연령일 때 환자에게 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 면역 반응을 도출하는 방법이며; 여기서 면역원성 조성물은 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 것인 방법.
C139. (a) 환자가 24개월 내지 10세 연령일 때 환자에게 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 면역 반응을 도출하는 방법이며; 여기서 면역원성 조성물은 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제1 지질화된 폴리펩티드; 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 제2 지질화된 폴리펩티드를 포함하는 것인 방법.
C140. 항목 C137-C139 중 어느 한 항목에 있어서, 조성물이 추가로 폴리소르베이트-80, 알루미늄, 히스티딘, 및 염화나트륨을 포함하는 것인 방법.
SEQUENCE LISTING <110> Pfizer Inc. <120> NEISSERIA MENINGITIDIS COMPOSITIONS AND METHODS THEREOF <130> PC72351 <160> 62 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 258 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic amino acid sequence <400> 1 Cys Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Thr Gly 1 5 10 15 Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu 20 25 30 Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly Thr Leu Thr 35 40 45 Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly Asp Lys Asp 50 55 60 Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile Ser Arg Phe 65 70 75 80 Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala 85 90 95 Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala 100 105 110 Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile 115 120 125 Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala 130 135 140 Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe 145 150 155 160 Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala 165 170 175 Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln 180 185 190 Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His 195 200 205 Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr 210 215 220 Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser 225 230 235 240 Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly 245 250 255 Lys Gln <210> 2 <211> 261 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic amino acid sequence <400> 2 Cys Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Thr Ala 1 5 10 15 Asp Ile Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His 20 25 30 Lys Asp Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln 35 40 45 Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly 50 55 60 Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser 65 70 75 80 Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile 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amino acid sequence <400> 4 Cys Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp 1 5 10 <210> 5 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic amino acid sequence <400> 5 Cys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp 1 5 10 15 <210> 6 <211> 255 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic amino acid sequence <400> 6 Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu 1 5 10 15 Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln 20 25 30 Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu 35 40 45 Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn 50 55 60 Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg 65 70 75 80 Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe 85 90 95 Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu 100 105 110 Gln Val Gln Asp Ser Glu Asp Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln 115 120 125 Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr 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Ala Ser Asp Ile Lys Pro Asp Lys Lys Arg His Ala Val Ile 195 200 205 Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu 210 215 220 Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val 225 230 235 240 Glu Thr Ala Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln 245 250 255 <210> 51 <211> 255 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic amino acid sequence <400> 51 Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Val Leu 1 5 10 15 Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln 20 25 30 Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu 35 40 45 Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn 50 55 60 Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg 65 70 75 80 Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe 85 90 95 Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu 100 105 110 Gln Val Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln 115 120 125 Phe 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sequence <400> 53 Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile 1 5 10 15 Gly Ala Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp 20 25 30 Lys Ser Leu Gln Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu 35 40 45 Lys Leu Lys Leu Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly 50 55 60 Asp Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe 65 70 75 80 Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala 85 90 95 Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asn His Ser Ala Val Val Ala 100 105 110 Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile 115 120 125 Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala 130 135 140 Phe Asn Gln Leu Pro Asp Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe 145 150 155 160 Ser Ser Asp Asp Pro Asn Gly Arg Leu His Tyr Ser Ile Asp Phe Thr 165 170 175 Lys Lys Gln Gly Tyr Gly Arg Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln 180 185 190 Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His 195 200 205 Ala 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Gly Ala Gly Leu Ala 1 5 10 15 Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln Ser 20 25 30 Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala 35 40 45 Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr 50 55 60 Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln 65 70 75 80 Ile Glu Val Asp Gly Lys Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln 85 90 95 Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu Gln 100 105 110 Val Gln Asp Ser Glu Asp Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln Phe 115 120 125 Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro 130 135 140 Lys Gly Gly Ser Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp 145 150 155 160 Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly 165 170 175 His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu 180 185 190 Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu 195 200 205 Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala 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Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln 85 90 95 Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu Gln 100 105 110 Val Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln Phe 115 120 125 Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro 130 135 140 Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp 145 150 155 160 Ala Ser Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly 165 170 175 His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu 180 185 190 Ala Ala Ser Asp Ile Lys Pro Asp Lys Lys Arg His Ala Val Ile Ser 195 200 205 Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly 210 215 220 Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Glu 225 230 235 240 Thr Ala Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln 245 250 <210> 59 <211> 258 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic amino acid sequence <400> 59 Cys Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Thr Gly 1 5 10 15 Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu 20 25 30 Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly Thr Leu Thr 35 40 45 Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly Asp Lys Asp 50 55 60 Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile Ser Arg Phe 65 70 75 80 Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala 85 90 95 Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala 100 105 110 Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile 115 120 125 Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala 130 135 140 Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe 145 150 155 160 Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala 165 170 175 Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln 180 185 190 Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His 195 200 205 Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr 210 215 220 Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg 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Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala 165 170 175 Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn 180 185 190 Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala 195 200 205 Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr Tyr 210 215 220 His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala 225 230 235 240 Thr Val Lys Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys 245 250 255 Gln <210> 61 <211> 254 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic amino acid sequence <400> 61 Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala 1 5 10 15 Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln Ser 20 25 30 Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala 35 40 45 Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr 50 55 60 Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln 65 70 75 80 Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln 85 90 95 Val 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25 30 Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala Ala Gln 35 40 45 Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr Gly Lys 50 55 60 Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu 65 70 75 80 Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln Val Tyr 85 90 95 Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Phe Gln Thr Glu Gln Ile Gln 100 105 110 Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln Phe Arg Ile 115 120 125 Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro Glu Gly 130 135 140 Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly 145 150 155 160 Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly Asn Gly 165 170 175 Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu Ala Ala 180 185 190 Ala Asp Ile Lys Pro Asp Gly Lys Arg His Ala Val Ile Ser Gly Ser 195 200 205 Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe 210 215 220 Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Lys Thr Val 225 230 235 240 Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln 245 250

Claims (25)

  1. 인자 H 결합 단백질 (fHBP) 및 담체 단백질에 접합된 네이세리아 메닌기티디스(Neisseria meningitidis) 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드; 담체 단백질에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드; 담체 단백질에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드; 및 담체 단백질에 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드를 포함하는 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 제1 fHBP 폴리펩티드 및 제2 fHBP 폴리펩티드를 포함하는 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 추가로 인산알루미늄을 포함하는 조성물.
  4. 제2항에 있어서, 제1 폴리펩티드의 적어도 90%가 조성물 중의 알루미늄에 결합된 것인 조성물.
  5. 제2항에 있어서, 제2 폴리펩티드의 적어도 90%가 조성물 중의 알루미늄에 결합된 것인 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 추가로 폴리소르베이트-80을 포함하는 조성물.
  7. 제2항에 있어서, 제1 폴리펩티드 약 120 μg/ml; 제2 폴리펩티드 약 120 μg/ml; 인산알루미늄으로서 알루미늄 약 0.5 mg/ml; 약 0.02 mg 폴리소르베이트-80; 약 10 mM 히스티딘; 및 약 150 mM 염화나트륨을 포함하는 조성물.
  8. 제2항에 있어서, 제1 폴리펩티드 약 60 μg; 제2 폴리펩티드 약 60 μg; 약 7.5 μg TT에 접합된 약 5 μg의 MenA 캡슐 사카라이드; 약 7.5 μg TT에 접합된 약 5 μg의 MenC 캡슐 사카라이드; 약 3.75 μg TT에 접합된 약 5 μg의 MenW 캡슐 사카라이드; 약 3.25 μg TT에 접합된 약 5 μg의 MenY 캡슐 사카라이드; 약 97 μg 트리스-HCl, pH 6.8 ± 0.3; 염화나트륨 4.69-4.71 mg; 수크로스 약 28 mg; L-히스티딘 약 0.78 mg; 약 0.02 mg 폴리소르베이트-80; 약 0.25 mg 알루미늄을 포함하고; 추가로 용량당 0.5 mL 물을 포함하는 조성물.
  9. 제2항에 있어서, 제1 폴리펩티드가 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 것인 조성물.
  10. 제2항에 있어서, 제2 폴리펩티드가 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 것인 조성물.
  11. 제1항에 있어서, 하이브리드 단백질을 포함하지 않는 조성물.
  12. 제1항에 있어서, 융합 단백질을 포함하지 않는 조성물.
  13. 제1항에 있어서, 동결건조되지 않은 조성물.
  14. 제1항에 있어서, 포름알데히드를 포함하지 않는 조성물.
  15. 제1항에 있어서, 디프테리아 톡소이드 또는 CRM을 포함하지 않는 조성물.
  16. 제1항에 있어서, 아디프산 디히드라지드 (ADH) 링커의 부재 하에 MenA 캡슐 사카라이드를 포함하지 않는 조성물.
  17. 제2항에 있어서, 제1 폴리펩티드가 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 제2 폴리펩티드가 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A (MenA) 캡슐 사카라이드가 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 아디프산 디히드라지드 (ADH) 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합되고 (MenAAH-TT 접합체); 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C (MenC) 캡슐 사카라이드가 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 ADH 링커에 접합되고, 여기서 링커는 카르보디이미드 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 접합되고 (MenCAH-TT 접합체); 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 (MenW) 캡슐 사카라이드가 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합되고 (MenW-TT 접합체); 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y (MenY) 캡슐 사카라이드가 링커의 부재 하에 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트 화학에 의해 파상풍 톡소이드 담체 단백질 (TT)에 직접 접합된 것 (MenY-TT 접합체)인 조성물.
  18. 제17항에 있어서, 추가로 트리스-HCl; 염화나트륨; 수크로스; L-히스티딘; 폴리소르베이트 80; 및 인산알루미늄을 포함하는 조성물.
  19. 제1항에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주 및 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대한 면역 반응을 유도하는 방법.
  20. 제1항에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W, 및/또는 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 균주에 대한 면역 반응을 유도하는 방법.
  21. 제1항에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W, 및/또는 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 균주에 대한 면역 반응을 유도하는 방법.
  22. 제1항에 따른 조성물의 유효량을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 B, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W, 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 균주, 및/또는 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X 균주에 대한 면역 반응을 유도하는 방법.
  23. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 12 내지 <18개월 또는 18 내지 <24개월 연령인 방법.
  24. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 18 내지 <24개월 연령인 방법.
  25. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 ≥24개월 내지 <10세 연령인 방법.
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