KR102611653B1 - 폐렴구균 감염의 치료 및 예방을 위한 항-폐렴구균 과다면역 글로불린 - Google Patents

Abstract

본 발명은 폐렴 연쇄상구균에 의해 야기되는 감염의 치료를 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 폐렴구균 감염을 예방하거나 또는 치료하는 인간 과다면역 글로불린(human hyperimmune globulin) 및 이의 조성물을 제공한다. 본 발명은 고역가의 옵소닌 식작용 항-폐렴구균 항체를 함유하는 과다면역 글로불린을 생산하는 방법, 이를 함유하는 조성물, 및 폐렴구균 감염의 예방 및 치료를 위한 조성물을 이용하는 방법을 제공한다. 본 발명은 본 발명의 과다면역 글로불린 조성물(예, 고역가의 옵소닌 식작용 항-폐렴구균 항체를 함유함)을 면역저하 대상체(immunocompromised subject)로 투여하는 것을 통해, 면역저하 대상체에서 폐렴구균 감염[예, 상기도 감염(upper respiratory infection) (예, 기관지염(bronchitis), 이염(otitis), 부비동염(sinusitis) 등]을 예방 또는 치료하는 방법을 더 제공한다.

Description

폐렴구균 감염의 치료 및 예방을 위한 항-폐렴구균 과다면역 글로불린

본 발명은 폐렴 연쇄상구균(Streptococcus pneumonia)과 관련된 또는 이로 인해 야기된 감염의 치료를 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 폐렴구균 감염(pneumococcal infection)을 예방 또는 치료하기 위한 인간 과다면역 글로불린(human hyperimmune globulin) 및 이의 조성물을 제공한다. 본 발명은 고역가(high titer)의 옵소닌 항-폐렴구균 항체(opsonic anti-pneumococcal antibody)를 함유한 면역 글로불린을 생산하는 방법, 이를 함유하는 조성물, 및 폐렴구균 감염[예, 상기도 감염(upper respiratory tract infection) (예, 부비동염(sinusitis), 중이염(otitis media), 인두염(pharyngitis) 등 (예, 면역저하 대상체(immunocompromised subject)에서))]의 예방 및 치료를 위한 조성물을 이용하는 방법을 제공한다.

면역계에는 많은 구성 요소가 존재하며, 모든 구성요소들은 외부의 침입 병원체를 거부하는 데 협동한다. 대부분의 인간이 매우 다양한 감염성 유기체(infectious organism) - 바이러스, 박테리아 및 균류를 비롯한, 통상적으로 인간을 감염시키는 것 - 로부터 이들을 보호하는 역할을 하는 온전한 면역계를 갖지만, 많은 개체들은 손상되거나 또는 저하된 면역을 갖는다.

일차 면역 결핍증 (Primary immunodeficiency, PID)은 200가지가 넘는 유전적 질환(genetically inherited disorder)의 군으로, 감염에 대한 증가된 감수성의 임상적 결과를 수반하는 선천성 면역계 (innate immune system) 또는 적응성 면역계(adaptive immune system)의 개별적인 구성요소의 결핍을 특징으로 한다. 예를 들어, 항체를 제조하는 인체의 능력을 손상시키는 체액성 면역계(humoral immune system)의 결핍은 개인을 많은 감염에 감수성이도록 만든다. 일차 면역 결핍증으로 고려되기 위해서는, 면역 결핍증의 원인이 자연계에서 이차적인 것 (예, 다른 질병, 약물 치료, 또는 독소에 대한 환경적 노출에 의해 야기되는 것)이어서는 안된다. 대부분의 일차 면역 결핍증은 유전적 질환이며 소아에서 진단되지만, 덜 중증인 형태(less severe form)는 성인이 되기 전까지 인지되지 않을 수 있다. 약 500명 중 1명꼴로 일차 면역 결핍증을 지니고 태어난다.

면역 글로불린의 정맥내 주입(Intravenous infusion)은 면역 결핍 개체의 능력 - 감염에 대응하여 이들 스스로를 보호하는 - 을 복원하는 것으로 밝혀졌다. 면역 글로불린이 많은 공여자로부터 풀링되기 때문에, 많은 감염성 유기체 - 이에 대한 보호가 모색되어야 함 - 에 대한 항체 역가는 상당히 다양하고, 면역저하 개체에서의 감염인 경우에 면역적 요구(immune needs)를 충족시키는 데 충분할 수 있거나 또는 충분하지 않을 수도 있다.

대부분의 시판중인 면역 글로불린은 혈액 및 혈장제제 산업분야에 의해 판매용으로 수집, 가공, 및 유통되는 인간 혈장으로부터 유래된다. 최초로 정제된, 임상적으로 이용된 인간 면역 글로불린 G (immunoglobulin G, IgG) 제제는 1940년대에 생산된 면역 혈청 글로불린이었다 (Cohn, E. J. 외, "J. Am Chem. Soc., 68:459-475 (1946) 및 Oncely, J. L. 외, J. Am Chem Soc. 71:541-550 (1949)). 이 방법에 의해 생산된 감마 글로불린(gammaglobulin)은 고분해능 크기 배제 크로마토그래피(high resolution size exclusion chromatography)으로 분석되는 경우에, 높은 분자량을 갖는 분자 분포(molecular distribution)를 보인다.

표준 면역 글로불린(Standard immune globulin) (IVIG)은 인간 피부상에 상주하는(ubiquitous) 매우 통상적인 공생 유기체(commensal organism)인 표피 포도구균(S. epidermidis)에 대한 옵소닌 활성(opsonic activity)에 대해서 로트 간의 가변성(lot to lot variability)을 갖는 것으로 밝혀졌다 (L. A. Clark 및 C. S. F. Easmon, J. Clin. Pathol. 39:856 (1986)). 예를 들어, Clark과 Easmon의 연구에서, 검사된 IVIG 로트의 1/3이 보체(complement)와의 좋지 못한 옵소닌 활성(opsonic activity)을 가졌고, 14개 중 2개만 보체 없이 옵소닌으로 작용했다. 따라서, IVIG 로트가 방대한 혈장 공여자 풀(pool)로부터 제조되었다는 사실에도, 표피 포도구균에 대한 좋은 옵소닌 항체가 균일하게 존재하지 않았다.

일반적으로, IVIG는 면역저하 환자에서의 중증 하기도 감염(severe lower respiratory tract infection)의 예방에 성공적이었다. 그러나, IVIG를 받는 면역저하 환자가 허용가능한 수준의 전체 면역 글로불린, 및 폐렴 연쇄상구균에 의해 야기되는 심각한 박테리아 감염을 예방하기 위한 충분한 수준의 항-폐렴 연쇄상구균 항체를 갖는 것으로 나타났다는 사실에도 불구하고, 상당한 비율(percentage)의 상기도 감염(upper respiratory tract infection) 및 비-호흡기성 감염을 경험한 환자가 존재했는데, 이는 이들을 쇠약하게 하고, 이들의 삶의 질을 떨어뜨렸으며, 효과적이지 않은 항생제의 증가된 사용을 초래하고, 또한, 증가된 의학적 지출도 초래했다. (예, Favre 외, Allergy 2005 60:385-390을 참고).

본 발명은 폐렴 연쇄상구균에 의해 야기된 감염의 치료를 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 폐렴구균 감염을 예방하거나 또는 치료하기 위한 인간 면역 글로불린 및 이의 조성물을 제공한다. 본 발명은 옵소닌 활성(예, 다수의 폐렴 연쇄상구균 혈청형에 대한)을 갖는, 고역가의 항-폐렴구균 항체를 함유하는 면역 글로불린을 생산하는 방법, 이를 함유하는 조성물, 및 폐렴구균 감염의 예방 및 치료를 위한 조성물을 이용하는 방법을 제공한다. 본 발명은 면역저하 대상체에서 폐렴구균 감염[예, 상기도 감염 (예, 인두염, 중이염, 부비동염 등)]을 예방하거나 또는 치료하는 방법[예, 표준 IVIG의 정기적인 주입(regular infusion)에 의해 충분히 보호받지 못한 면역저하 대상체로의, 본 발명의 면역 글로불린 조성물(예, 고역가의 옵소닌 항-폐렴구균 항체를 함유함)의 투여를 통해]을 더 제공한다.

한 양태에서, 본 발명의 목적은 본 발명의 방법에 따른 혈장 공여자[예, 본원에 기술된 방법에 따라서 하나 이상의 폐렴구균 백신으로 백신 접종된 인간 혈장 공여자 (예, 건강한 인간 혈장 공여자)]로부터 제조된 신규한 면역 글로불린 조성물을 제공하는 것으로, 상기 조성물은 대조군 샘플에 비해서 상승된 역가의, 항-폐렴구균-특이적인, 옵소닌 활성을 갖는 항체를 함유한다.

본 발명은 사용된 대조군 샘플의 유형에 의해 한정되지 않는다. 예를 들어, 한 양태에서, 대조군 샘플은 백신접종 전의 건강한 인간 혈장 공여자(들)로부터 제조된 면역 글로불린이다 (예를 들어, 인간 혈장 공여자의 항-폐렴구균-특이적인, 옵소닌 항체 역가의 면역화 전의 수준은 면역화 후에, 항-폐렴구균-특이적인, 옵소닌 항체 역가의 증가를 측정하기 위한 기초선으로서 이용된다). 다른 양태에서, 대조군 샘플은 항-폐렴구균 백신으로 백신접종되지 않은 무작위 인간 혈장 공여자(예, 100, 300, 500, 1000 이상의 무작위 인간 혈장 공여자)로부터 수득된 혈장 샘플의 혼합물로부터 제조된 면역 글로불린이다 (예를 들어, 비-백신 접종된 인간 혈장 공여자의 항-폐렴구균-특이적, 옵소닌 항체 역가의 수준은 본 발명에 따라 백신 접종된 인간 혈장 공여자에 존재하는 항-폐렴구균-특이적, 옵소닌 항체 역가의 증가를 측정하기 위한 기초선으로서 이용된다). 통상의 기술자는 다른 대조군 샘플이 사용될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 본 발명은 항체가 나타내는 옵소닌 (예, 옵소닌 식작용) 역가의 측정에 이용되는 방법 또는 검정에 의해 한정되지 않는다. 실로, 다양한 검정이 이용될 수 있으며, 본원(예, 실시예 1)에서 기술되는 검정을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

한 양태에서, 본 발명의 목적은 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 함유하는 신규한 면역 글로불린 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 추가의 목적은 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 함유하는 신규한 정맥내(intravenous) 면역 글로불린 조성물(예, "항-폐렴구균 과다-면역 글로불린")과 이를 생산 및 활용하는 방법[예, 폐렴구균 감염을 (예, 면역저하 환자에서) 예방 및/또는 치료하는]을 제공하는 것이다. 이 맥락에서, 용어 "고역가(high titer)"는 옵소닌 항-폐렴구균 항체가 대조군 샘플에서 발견되는 역가의 2배 이상, 예를 들어, 3배, 5배, 7배, 10배, 15배, 20배 이상인 양으로 존재하는 것을 의미한다.

따라서, 본 발명의 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 함유하는 신규한 면역 글로불린 조성물(예, 항-폐렴구균 과다-면역 글로불린)은 다수의 폐렴 연쇄상구균 혈청형에 대해서 기능적으로 및 광범위하게 반응성이며(functionally and broadly reactive), 조성물에 존재하는 결합 항-폐렴구균 항체의 총량 (예, ELISA에 의해 측정됨)에 독립적으로, 폐렴 연쇄상구균의 식작용과 사멸[예, 시험관내 및/또는 생체 내 (예, 항체는 옵소닌 식작용성(opsonophagocytic)임)]을 강화한다는 점에서, 표준/통상적인 면역 글로불린 제제(예, 표준, 통상적인 IVIG)와 상이하고, 다른 IVIG 제제(예, 다른 과다-면역 IVIG 제제)와 상이하다.

이는 놀라운 것인데, 그 이유는 본원에서 생성 및 개시된 데이터가 백신 접종된 공여자들로부터 제조된 면역 글로불린 또는 혈장에 존재하는 전체 항-폐렴구균 IgG 항체 역가와 옵소닌 항-폐렴구균 항체의 역가 사이에 일관되거나 또는 예측 가능한 상관관계(correlation)가 존재하지 않았다는 것을 나타냈기 때문이다. 본원에 기술된 백신 접종된 공여자 혈장으로부터 수득된 혈장, 또는 이로부터 제조된 면역 글로불린에 존재하는, 결합 항-폐렴구균 IgG 항체 역가의 총량과 옵소닌 항-폐렴구균 항체 역가 사이의 큰 불일치(discordance)의 놀라운 확인으로 인해, 본 발명의 추가의 목적은 대조군 샘플에 비해서 유의하게 상승된 기능성, 옵소닌 항-폐렴구균 항체 역가[예, 결합 항-폐렴구균 항체 역가의 총량과 관계없는 (예, 백신 접종된 공여자 혈장으로부터 수확된 혈장 및/또는 면역 글로불린을 풀링함으로써, 또는 백신 접종된 공여자 혈장을 백신 접종되지 않은 공여자로부터 수득된 면역 글로불린 - 유의하게 상승된 역가의 옵소닌 항-폐렴구균 항체 공여자 혈장 및/또는 면역 글로불린과 풀링되는 경우에, 전체 옵소닌 역가를 비-보호 수준(non-protective level)으로 희석시키지 않는, 고역가의 옵소닌 항-폐렴구균 항체를 갖지 않을 수 있는 - 과 함께 풀링함으로써)]를 함유하는 혈장 및/또는 면역 글로불린 조성물(예, 항-폐렴구균 과다-면역 글로불린)을 제공하는 것이다. 본 발명이 포함하는 것은 유의하게 상승된 기능성, 및 광범위하게 반응성인 옵소닌 항-폐렴구균 항체 역가를 함유하는 혈청/혈장 및 이로부터 제조된 면역 글로불린(예, 과다면역 글로불린)이다. 한 양태에서, 본 발명은 상승된 항-폐렴구균-특이적, 옵소닌 항체 역가를 함유하는 혈장/혈청 및/또는 이로부터 제조된 면역 글로불린 을 제공하며, 상기 역가는 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F 중 약 55% 이상(예, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 이상)에 대해, 대조군 샘플[항-폐렴구균 백신으로 백신 접종되지 않은 무작위 인간 혈장 공여자(예, 100, 300, 500, 1000명 이상의 무작위 인간 혈장 공여자)로부터 수득된 혈장 샘플의 혼합물로부터 제조된 면역 글로불린]에 존재하는 동일한 혈청형에 대한 항-폐렴구균-특이적, 옵소닌 항체 역가에 비해서 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 7배, 10배 이상이다.

다른 양태에서, 본 발명은 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 및 23으로부터 선택된 폐렴 연쇄상구균 혈청형 중 70% 이상에 특이적인, 광범위하게 반응성인 옵소닌 항체의 역가를 함유하는 과다면역 글로불린 (예, IVIG) 조성물을 제공하며, 상기 역가는 대조군 샘플[예, 항-폐렴구균 백신으로 백신 접종되지 않은 무작위 인간 혈장 공여자(예, 100, 300, 500, 1000명 이상의 무작위 인간 혈장 공여자)로부터 수득된 혈장 샘플의 혼합물로부터 제조된 면역 글로불린]에 존재하는 동일한 폐렴 연쇄상구균 혈청형에 특이적인 옵소닌 항체 역가의 2배 이상(예, 3-25배 이상)이다. 다른 양태에서, 본 발명은 1:64 내지 1:8192의, 항-폐렴구균-특이적, 옵소닌 항체 역가 [예, 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F 중 적어도 50% 이상(예, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 이상)에 대한]를 함유하는 혈장/혈청 및/또는 이로부터 제조된 면역 글로불린을 제공한다.

또한, 본 발명의 목적은 통상적인 IVIG의 정기적인 주입에 충분히 반응하지 않는, 저하된 면역계의 환자에서, 생체내 면역을 강화하고/하거나 감염(예, 상기도 감염)을 예방적 및 치료학적으로 억제하는 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 함유하는 함유하는 신규한 면역 글로불린 조성물(예, 항-폐렴구균 과다면역 글로불린)을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 다른 이점은 정상 공여자의 표준 면역 글로불린 풀(standard immunoglobulin pool) (예, 시판중인, 표준/통상적인 IVIG의 생성에 이용됨)이 폐렴 연쇄상구균에 대해서 일관되고, 재현 가능하며, 완전한 보호 수준의 옵소닉 항체를 갖지 않는 반면에, 본 발명의 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 함유하는 과다면역 글로불린 조성물 (예, 항-폐렴구균 과다면역 글로불린)은 정맥내로 제공되는 경우에, 식세포(phagocyte)에 의한 폐렴 연쇄상구균의 식작용과 사멸을 촉진하는 특이적인, 기능성 (예, 그저 결합하는 것이 아님) 항체를 즉각적으로 제공한다. 본 발명은 본 발명의 과다면역 글로불린(예, IVIG) 조성물 내에 존재하는 기능성, 옵소닌 항체가 식작용 및/또는 사멸을 촉진하는, 폐렴 연쇄상구균의 혈청형 또는 혈청형의 수에 의해 한정되지 않는다. 실로, 본 발명의 추가의 목적은 본 발명의 조성물 [예, 과다면역 혈장 조성물 및/또는 과다면역 글로불린 (예, IVIG) 조성물]이 다음의 폐렴 연쇄상구균 혈청형 12종 중에서 적어도 7종, 12종 중에서 적어도 8종, 12종 중에서 적어도 9종, 12종 중에서 적어도 10종, 12종 중에서 적어도 11종, 또는 12종 중에서 12종 모두에 대해서 광범위하게 반응성인, 옵소닌 항체를 함유하는 것이다: 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F. 즉, 본 발명은 상승된 옵소닌 항-폐렴구균-특이적 항체 역가를 포함하는, 조성물 및 이를 수득하는 방법을 제공하며, 상기 항체 역가는 대조군 샘플에 존재하는 옵소닌 항-폐렴구균-특이적 항체 역가의 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 7배, 10배 이상이다 [예, 폐렴구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F로부터 선택된 혈청형 중 적어도 약 55% 이상(예, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 이상)에 대해서]. 한 양태에서, 본 발명은 폐렴 연쇄상구균 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 및 23으로부터 선택된 혈청형 중 70% 이상에 특이적인, 광범위하게 반응성인, 옵소닌 항체의 역가를 함유하는 면역 글로불린(예, 과다면역 글로불린 (예, IVIG)) 조성물을 제공하며, 상기 역가는 대조군 샘플[예, 항-폐렴구균 백신으로 백신 접종되지 않은 무작위 인간 혈장 공여자(예, 100, 300, 500, 1000명 이상의 무작위 인간 혈장 공여자)로부터 수득된 혈장 샘플의 혼합물로부터 제조된 면역 글로불린, 또는 백신접종 전의 건강한 인간 혈장 공여자(들)로부터 제조된 면역 글로불린(예, 인간 혈장 공여자의 혈청형-특이적인, 옵소닌 항체 역가의 면역화 전 수준은 면역화 후에 혈청형-특이적인, 옵소닌 항체 역가의 증가를 측정하기 위한 기초선으로서 이용된다)]에 존재하는 폐렴 연쇄상구균 혈청형에 특이적인 옵소닌 항체 역가의 2배 이상(예, 3-25배 이상)이다. 다른 양태에서, 본 발명은 고역가의 광범위하게 반응성인, 옵소닌 항체를 함유하는 면역 글로불린(예, 과다면역 글로불린(예, IVIG)) 조성물을 제공하며, 상기 옵소닌 항체는 면역 글로불린 조성물이 유래된, 한 명 이상의 혈장 공여자의 면역화에 사용된 백신 또는 복수의 백신에 존재하는 각 혈청형 중 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 95%, 98% 이상에 대한 것이다.

본 발명의 추가의 이점 및 목적은 폐렴 연쇄상구균에 특이적인, 광범위하게 반응성인, 옵소닌 항체를 함유하는 과다면역 글로불린 (예, IVIG) 조성물을 환자(예, 면역이 저하된 환자(예, PIDD 환자))에게 제공하여, 환자에서 폐렴구균 감염을 치료하거나 또는 예방하는 것이다 (예, 폐렴 연쇄상구균 성장을 억제하고/하거나 폐렴 연쇄상구균을 환자의 혈액으로부터 제거(clearing)함으로써). 본 발명의 다른 이점 및 목적은 폐렴 연쇄상구균에 특이적인, 광범위하게 반응성인, 옵소닌 항체를 함유하는 본 발명의 과다면역 글로불린(예, IVIG) 조성물을 환자[예, 면역이 저하된 환자 (예, PIDD 환자)]에게 제공하여, 환자에서 폐렴구균 감염을 치료하는 것이다 (예, 환자의 혈액으로부터 폐렴 연쇄상구균 제거(clearance)를 개선시키거나 또는 강화시킴으로써). 본 발명의 추가의 이점 및 목적은 폐렴 연쇄상구균에 특이적인 광범위하게 반응성인, 옵소닌 항체를 함유하는 본 발명의 과다면역 글로불린 (예, IVIG) 조성물을 환자(예, 면역 저하된 환자(예, PIDD 환자))에게 제공하여, 통상적인 IVIG 치료로는 예방할 수 없는, 환자에서 상기도 감염을 예방한다. 본 발명은 예방되고/되거나 치료되는 상기도 감염의 유형에 의해 한정되지 않으며, 이들 유형은 비부비동염(rhinosinusitis) [부비동염(sinusitis)], 중이염, 인두염(pharyngitis), 후두개염(epiglottitis), 후두기관염(laryngotracheitis), 및 후두기관 기관지염(laryngotracheobronchitis)을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 마찬가지로, 조성물 및 이를 이용하는(예, 투여하는) 방법은 기침, 재채기, 비루(nasal discharge), 코막힘(nasal congestion), 콧물(runny nose), 발열, 인후 긁힘(scratchy throat) 또는 인후통(sore throat), 및 비강 호흡(nasal breathing)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아닌 상기도 감염의 징후 또는 증상의 예방 및/또는 치료에서 이용된다.

한 양태에서, 본 발명은 조성물 및, 고역가의 옵소닌 항-폐렴구균 항체를 함유하는 풀링된 혈장 샘플[예, 복수의 공여자로부터 수득된 혈장 (예, 하나 이상의 폐렴구균 백신으로 백신 접종된 공여자)]을 포함하는 조성물을 수득하는 방법을 제공한다.

따라서, 본 발명의 목적은 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 함유하는 조성물[예, 혈액, 혈장, 및/또는 면역 글로불린 (예, 과다면역 글로불린)조성물]을 생성하는 방법을 제공한다. 한 양태에서, 한 명 또는 복수의 건강한 성인 인간 대상체 (예, 공지된 의학적 질환을 앓지 않는 인간 대상체)에 폐렴구균 면역원, 재조합 폐렴구균 단백질, 또는 이들의 배합물이 투여된다. 일부 양태에서, 폐렴 연쇄상구균 면역원은 폐렴 연쇄상구균 세포막의 당(예, 다당류)이다. 일부 양태에서, 폐렴 연쇄상구균 면역원은 하나 또는 복수의 폐렴 연쇄상구균 단백질(예, 재조합 또는 분리된 단백질)을 함유하는 폐렴 연쇄상구균 백신이다. 일부 양태에서, 폐렴 연쇄상구균 면역원은 컨쥬게이트 백신(conjugate vacine)[예, 담체 및/또는 보강제(예, 단백질 또는 다른 담체 분자)에 컨쥬게이트됨]이다. 일부 양태에서, 폐렴 연쇄상구균 면역원은 비-컨쥬게이트 백신(unconjugated vacine)이다. 일부 양태에서, 컨쥬게이트 백신 또는 비-컨쥬게이트 백신은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23종 이상의 상이한 면역원(예, 동일한 수의 상이한 폐렴 연쇄상구균의 혈청형으로부터)을 함유한다. 일부 양태에서, 폐렴 연쇄상구균의 하나 이상의 상이한 혈청형은 혈청형 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7A, 7B, 7C, 7D, 7E, 7F, 8, 9A-9V, 12, 14, 18C, 19A-19F, 23A-23F, 및 25를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 일부 양태에서, 폐렴 연쇄상구균의 하나 이상의 상이한 혈청형은 90종이 넘는 상이한, 공지된 폐렴 연쇄상구균 혈청형 중 임의의 혈청형으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 폐렴 연쇄상구균의 하나 이상의 상이한 혈청형이 새롭게 확인된다.

추가의 양태에서, 한 명 또는 복수의 건강한 인간 대상체(예, 공지된 의학적 질환을 앓지 않는 인간 대상체)에 시판용 폐렴구균 백신에 존재하는 폐렴구균 면역원, 재조합 폐렴구균 단백질, 또는 이들의 배합물이 투여된다. 본 발명은 시판용 폐렴구균 백신의 유형에 의해 한정되지 않는다. 실로, 폐렴구균 컨쥬게이트 백신 [PCV 13 또는 프리베나 13(PREVNAR 13), 펜실베니아주, 칼리지빌 소재의 Wyeth Pharmaceuticals], 신플로릭스(SYNFLORIX), 및/또는 폐렴구균 다당류 백신(polysaccharide vaccine) (PPSV23 또는 뉴모박스 23(PNEUMOVAX23), 펜실베니아주, 노스 웨일스 소재의 Merck Sharp & Dohme Corp.)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아닌 당해 분야에 공지된 임의의 폐렴구균 백신이 이용될 수 있다. 한 양태에서, 한 명 또는 복수의 건강한 인간 대상체는 제1 항-폐렴구균 백신을 이용한 제1 백신접종 또는 프라임 백신접종(prime vaccination)을 받고, 제1 항-폐렴구균 백신 또는 제2의, 상이한 항-폐렴구균 백신으로 후속적인 부스트 백신접종(boost vaccination)을 받는다. 예를 들어, 한 양태에서, 한 명 또는 복수의 건강한 인간 대상체는 제1 항-폐렴구균 백신 [예, 프리베나(PREVNAR)]를 이용한 제1 또는 프라임 백신접종/면역화를 받은 다음에, 제2 항-폐렴구균 백신(예, 뉴모박스 23)을 이용한 부스트 백신접종/면역화를 (예, 프라임 백신접종/면역화 후 2주차, 4주차, 6주차, 8주차, 10주차, 12주차 이후에서)받는다. 순차적인 백신접종 후의 시점(예, 순차적인 백신접종 후 2주차, 4주차, 6주차, 8주차, 10주차, 12주차 이후)에서, 혈청/혈장은 백신 접종된, 건강한 인간 혈장 공여자로부터 수확된다. 백신 접종된 공여자로부터 수득된 혈장은 (서로 간에 및/또는 비-백신 접종된 공여자로부터 수득된 혈장과)풀링된 후에, 이로부터 면역 글로불린의 분리 및/또는 정제가 수행될 수 있다(예, 본 발명의 항-폐렴구균 과다-면역 글로불린을 생성하기 위함). 혈장을 수확하는 방법 및 면역 글로불린의 추출은 통상의 기술자에게 주지되어 있다.

한 양태에서, 본 발명은 폐렴 연쇄상구균에 대한 고역가의 옵소닌 식작용 항체[예, 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F 중 적어도 약 55% 이상(예, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 이상)에 대해서, 대조군 샘플에 존재하는 동일한 혈청형에 대한 항-폐렴구균-특이적, 옵소닌 식작용 항체 역가에 비해, 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 7배, 10배 이상인 역가; 또는 폐렴 연쇄상구균 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 및 23으로부터 선택된 혈청형 중 70% 이상에 특이적인, 대조군 샘플에 존재하는 동일한 폐렴 연쇄상구균 혈청형에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가의 2배 이상(예, 3-25배 이상)인, 역가; 또는 본원에서 기술되는 옵소닌 식작용 사멸 검정(opsonophagocytic killing assay)에 의해 측정되는 1:64 내지 1:8192의 역가 (예, 적어도 1:256 (예, 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F 중 적어도 50% 이상(예, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 이상)에 대해))]를 갖는, 과다면역 글로불린을 제조하는 방법을 제공한다. 상기 제조하는 방법은 다음의 단계를 포함한다: 18-60세의 건강한 성인 인간 혈장 공여자를 다가 폐렴 연쇄상구균 백신(multivalent S. pneumonia vaccine)을 이용한 일차 면역화(primary immunization)로 면역화시킨 후에, 일차 백신과 동일하거나 또는 상이할 수 있는 부스트 다가 폐렴 연쇄상구균 백신을 이용한 면역화로 면역화시키는 단계; 부스트 면역화 후에, 혈장 공여자로부터 혈장을 수확하는 단계; 백신 접종된 공여자로부터 혈장을 풀링(pooling)하여, 폐렴 연쇄상구균에 대한 고역가의 옵소닌 식작용 항체 역가를 함유하는 풀링된 혈장을 수득하는 단계; 및 풀링된 혈장으로부터 면역 글로불린을 제조하는 단계. 추가의 양태에서, 상기 방법은 수득된 면역 글로불린을 정맥내로 주입가능하게 만드는 단계를 포함한다. 면역 글로불린은 용액으로 제공될 수 있고/있거나, 상기 용액의 pH 및 이온 강도가 조정되어 이를 정맥내로 주입 가능하게(intravenously injectable) 만들 수 있다. 본 발명은 본원에 기술된 방법에 따라 백신 접종된 개체의 수에 의해 한정되지 않는다. 예를 들어 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400명 이상의 건강한 성인 인간 혈장 공여자가 백신 접종될 수 있고, 이들 공여자들로부터 혈장이 수확될 수 있다. 한 양태에서, 풀링된 혈장은 1000명 이상의 상이한, 백신 접종된 건강한 성인 인간 혈장 공여자로부터 혈장을 풀링하는 것으로부터 제조된다. 한 양태에서, 풀링된 혈장은 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F 중 적어도 약 55% 이상(예, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 이상)에 대해서, 대조군 샘플(예, 1000명 이상의 무작위 비-백신 접종된 인간 혈장 공여자로부터 풀링된 혈장으로부터 제조된 면역 글로불린)에 존재하는 동일한 혈청형에 대한 옵소닌 식작용 항-폐렴구균-특이적 항체 역가에 비해, 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 7배, 10배 이상인 옵소닌 식작용 항체 역가를 함유한다. 다른 양태에서, 풀링된 혈장은 폐렴 연쇄상구균 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 및 23으로부터 선택된 혈청형 중 70% 이상에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가를 함유하며, 상기 역가는 대조군 샘플(예, 1000명 이상의 무작위 비-백신 접종된 인간 혈장 공여자로부터 풀링된 혈장으로부터 제조된 면역 글로불린)에 존재하는 동일한 폐렴 연쇄상구균 혈청형에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가의 2배 이상(예, 3-25배 이상)이다. 또 다른 양태에서, 풀링된 혈장은 1:64 내지 1:8192 [예, 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F 중 적어도 50% 이상(예, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 이상)에 대해]의 옵소닌 식작용 항체 역가를 함유하는데, 이는 본원에 기술되거나 또는 당해 분야에 공지된 옵소닌 식작용 사멸 검정(opsonophagocytic killing assay)에 의해 측정된다.

또한, 본 발명은 상기 기술된 방법에 따라 제조된 면역 글로불린 (예, 과다면역 글로불린)을 제공한다. 이렇게 제조된 면역 글로불린 (예, 과다면역 글로불린)은 다양한 방법에서 이용될 수 있다. 예를 들어, 면역 글로불린은 대상체에서 폐렴 연쇄상구균 감염을 치료하는 방법(예, 대상체에게 면역 글로불린의 치료학적 유효량을 투여하는 단계를 포함함)에서 이용될 수 있다. 또한, 면역 글로불린은 면역요법을 대상체에게 제공하는 방법(예, 대상체에게 면역 글로불린의 치료학적 유효량을 투여하는 단계를 포함함)에서 이용될 수 있다.

또한, 본 발명은 한 양태에서, 폐렴 연쇄상구균 감염의 예방 또는 치료를 위한, 폐렴 연쇄상구균의 적어도 7종의 혈청형에 대한 강화된 옵소닌 식작용 살균 활성(opsonophagocytic bactericidal activity)을 갖는 과다면역 글로불린을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 건강한 성인 인간 혈장 공여자를 다가 폐렴 연쇄상구균 컨쥬게이트 백신(multivalent S. pneumonia conjugate vaccine)을 이용한 일차 면역화로 면역화시킨 후에, 프라임 백신(prime vaccine)과 상이한 다가 다당류 폐렴 연쇄상구균 백신(multivalent polysaccharide S. pneumonia vaccine)을 이용한 부스트 면역화로 면역화시키는 단계; 면역화된 혈장 공여자로부터 혈장을 수확 및 풀링하는 단계; 및 풀링된 혈장으로부터 면역 글로불린을 제조하는 단계;를 포함하며, 면역 글로불린은 폐렴 연쇄상구균의 적어도 7종의 혈청형 각각에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가를 함유하고, 상기 옵소닌 식작용 항체 역가는 대조군 샘플 (예, 1000명 이상의 무작위 비-백신 접종된 인간 혈장 공여자로부터 풀링된 혈장으로부터 제조된 면역 글로불린)에 존재하는 폐렴 연쇄상구균의 적어도 7종의 혈청형 각각에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가의 2배 이상(예, 3-25배 이상)이다. 또한, 본 발명은 상기 기술된 방법에 따라 제조된 과다면역 글로불린을 제공한다. 이렇게 제조된 과다면역 글로불린은 다양한 방법에서 이용될 수 있다. 예를 들어, 과다면역 글로불린은 대상체에서 폐렴 연쇄상구균 감염을 치료하는 방법에서 이용될 수 있으며, 상기 방법은 대상체에게 과다면역 글로불린의 치료학적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 또한, 과다면역 글로불린은 면역 요법을 대상체에 제공하는 방법에 이용될 수 있으며, 상기 방법은 과다면역 글로불린의 치료학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.

일부 양태에서, 본 발명은 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 함유하는 조성물[예, 혈액, 혈장, 및/또는 면역 글로불린(예, 과다면역 글로불린) 조성물]을 제조하는 방법을 제공하며, 옵소닌 식작용 사멸 검정(예, 본원에 기술되거나 또는 당해 분야에 공지된 옵소닌 식작용 사멸 검정)과 함께, 시험관내 항원-결합 검정을 이용하여(예, ELISA를 이용하는), 혈장(예, 혈장 또는 면역 글로불린의 풀; 면역 글로불린 또는 면역 글로불린 제제)을 전체 항-폐렴구균 결합 항체에 대해서 스크리닝하는 것(screening)을 수반한다. 일부 양태에서, 본 발명은 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 함유하는 조성물(예, 혈액, 혈장, 및/또는 면역 글로불린 조성물)을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 옵소닌 식작용 살균 검정(예, 실시예 1에 기술된 검정)을 이용하여, 혈장(예, 혈장 또는 면역 글로불린의 풀; 면역 글로불린 또는 면역 글로불린 제제)을 전체 항-폐렴구균 옵소닌 항체 역가에 대해서 스크리닝하는 것(screening)을 수반한다. 다른 양태에서, 본 발명은 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 함유하는 조성물(예, 혈액, 혈장, 및/또는 면역 글로불린 조성물)을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 시험관내 항원-결합 검정을 이용하여(예, ELISA를 이용하여) 전체 항-폐렴구균 결합 항체에 대해서 혈장(예, 혈장 또는 면역 글로불린의 풀; 면역 글로불린 또는 면역 글로불린 제제)을 스크리닝한 다음에, 옵소닌 식작용 살균 검정 (예, 실시예 1에 기술된 검정)을 이용하여, 혈장(예, 혈장 또는 면역 글로불린의 풀; 면역 글로불린 또는 면역 글로불린 제제)을 전체 항-폐렴구균 옵소닌 항체 역가에 대해서 스크리닝하는 것을 수반한다. 추가의 양태에서, 보호 효능(protective efficacy)이 폐렴 연쇄상구균 감염의 동물 모델[예, 이환율(morbidity), 사망률(mortality), 및/또는 박테리아 제거(bacterial clearance)의 측정을 위함]을 이용하여, 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 함유하는 조성물(예, 혈액, 혈장, 및/또는 면역 글로불린 조성물)의 보호 활성(protective activity)을 분석함으로써 생체내에서 실증될 수 있다. 본 발명은 존재하는 항체의 옵소닌 식작용 역가를 측정하는 데 이용되는 방법 또는 검정에 의해 한정되지 않는다. 실로, 다양한 검정이 이용될 수 있으며, 본원(예, 실시예 1)에 기술되는 것을 포함한, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명은 한 양태에서, 조성물을 생성하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 하나 이상의 항-폐렴구균 백신으로 백신 접종된 공여자[예, 50, 100, 300, 500, 1000명 이상의 공여자 (예, 건강한 성인 인간 혈장 공여자)]로부터 혈장 샘플을 수득하는 단계 및 상기 혈장 샘플을 (예, 서로 간에 및/또는 비-백신 접종된 공여자로부터의 혈장과) 풀링하여 풀링된 혈장 조성물을 생성하는 단계를 포함한다. 추가의 양태에서, 면역 글로불린은 풀링된 혈장 샘플로부터 제조된다 (예, 면역 글로불린은 본원에 기술된 방법을 비롯한, 당해 분야에 공지된 임의의 방법을 통해 혈장으로부터 분획화되고, 정제되고/되거나, 분리된다). 추가의 양태에서, 본 발명의 면역 글로불린은 정맥내로 주입 가능하게 만들어진다(예, 면역 글로불린을 용액으로 제공하는 것, pH를 조정하는 것, 이온 강도를 조정하는 것 등을 통해서). 본원에서 기술되는, 한 양태에서, 본 발명의 풀링된 혈장 조성물은 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F 중 적어도 약 55% 이상(예, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 이상)에 대해, 대조군 샘플(예, 1000명 이상의 무작위 비-백신 접종된 인간 혈장 공여자로부터 풀링된 혈장으로부터 제조된 면역 글로불린)에 존재하는 동일한 혈청형에 대한 항-폐렴구균-특이적, 옵소닌 항체 역가에 비해, 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 7배, 10배 이상인, 옵소닌 식작용 항체 역가를 함유한다. 다른 양태에서, 풀링된 혈장 조성물은 폐렴 연쇄상구균 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 및 23으로부터 선택된 혈청형 중 70% 이상에 특이적인 옵소닌 식작용 항체의 역가를 함유하며, 상기 역가는 대조군 샘플(예, 1000명 이상의 무작위 비-백신 접종된 인간 혈장 공여자로부터 풀링된 혈장으로부터 제조된 면역 글로불린)에 존재하는 동일한 폐렴 연쇄상구균 혈청형에 특이적인 옵소닌 항체 역가의 2배 이상(예, 3-25배 이상)이다. 또 다른 양태에서, 풀링된 혈장 조성물은 1:64 내지 1:8192[예, 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F 중 적어도 50% 이상 (예, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 이상)]인 옵소닌 식작용 항체 역가를 함유하며, 이는 본원에서 기술되는 옵소닌 식작용 사멸 검정에 의해 측정된다.

한 양태에서, 혈장 샘플 (예, 백신 접종되고/되거나 백신 접종되지 않은 공여자로부터 수득됨)이 스크리닝되어, 혈액-전염 병원체(blood-borne pathogen)의 부재를 확인한다(예, 풀링 전 또는 후에). 일부 양태에서, 혈장 및/또는 항체 샘플은 공여된 형태 또는 구매된 생물학적 물질의 형태로(예, 혈액 또는 혈장), 공여자 대상체로부터 수득된다. 일부 양태에서, 혈장 및/또는 항체 샘플(예, 혈액, 혈장, 분리된 항체 등)은 상업적 공급원(commercial source)으로부터 수득된다. 일부 양태에서, 혈장 및/또는 항체 샘플, 혈액 공여물, 또는 혈장 공여물이 병원체에 대해서 스크리닝 되고, 특정 병원체가 존재하는 경우에, 제거되거나 또는 폐기된다. 일부 양태에서, 스크리닝은 한 공여자 샘플과 다른 공여자 샘플의 풀링 이전에 일어난다. 다른 양태에서, 스크리닝은 샘플의 풀링 후에 일어난다. 항체, 혈액, 및/또는 혈장은 임의의 적합한 대상체로부터 수득될 수 있다. 일부 양태에서, 항체, 혈액, 및/또는 혈장은 하나 이상의 폐렴구균 백신에 대해 최근에(예, 1년 이내, 6개월 이내, 2개월 이내, 1개월 이내, 2주 이내, 1주 이내, 3일 이내, 2일 이내, 1일 이내) 백신 접종되었거나, 또는 이에 대해 노출되었던 대상체로부터 수득된다.

일부 양태에서, 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 함유하는 것으로 확인된(예, 본원에 기술된 방법에 따라서) 혈액, 혈장 및/또는 면역 글로불린 샘플은 배합(예, 풀링)되어, 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 포함하는 본 발명의 조성물(예, 과다면역 글로불린)을 생산한다.

혈장, 항체 샘플, 풀링된 혈장 조성물 및/또는 면역 글로불린을 이로부터 수득하는 임의의 적합한 방법이 본 발명의 범위에 속한다. 더욱이, 항체 샘플 및/또는 혈장 풀을 생산하는, 제조하는, 정제하는, 분획화하는, 농후화하는 등의 임의의 적합한 방법이 본 발명의 범위 내에 있다. 항체 샘플을 수집하고 혈장 풀을 생산하는 예시적인 기법 및 절차가 다음의 특허 문헌에서 제공되며, 이들의 전체 기재내용이 본원에 참고로 포함된다: 예를 들어, US 특허 제4,174,388호; US 특허 제4,346,073호; US 특허 제4,482,483호; US 특허 제4,587,121호; US 특허 제4,617,379호; US 특허 제4,659,563호; US 특허 제4,665,159호; US 특허 제4,717,564호; US 특허 제4,717,766호; US 특허 제4,801,450호; US 특허 제4,863,730호; US 특허 제5,505,945호; US 특허 제5,582,827호; US 특허 제6,692,739호; US 특허 제6,962,700호; US 특허 제6,984,492호; US 특허 제7,045,131호; US 특허 제7,488,486호; US 특허 제7,597,891호; US 특허 제6,372,216호; US 특허 출원 제2003/0118591호; US 특허 출원 제2003/0133929호; US 특허 출원 제2005/0053605호; US 특허 출원 제2005/0287146호; US 특허 출원 제2006/0110407호; US 특허 출원 제2006/0198848호; US 특허 출원 제2006/0222651호; US 특허 출원 제2007/0037170호; US 특허 출원 제2007/0249550호; US 특허 출원 제2009/0232798호; US 특허 출원 제2009/0269359호; US 특허 출원 제2010/0040601호; US 특허 출원 제2011/0059085호; 및 US 특허 출원 제2012/0121578호. 본 발명의 양태는 상기 열거된 참고문헌으로부터 기법, 방법, 또는 조성물의 임의의 적합한 조합을 사용할 수 있다.

본 발명의 분리된 면역 글로불린은 IgG 분획 또는 이소타입(isotype)일 수 있으나, 분리된 면역 글로불린이 임의의 특정한 분획 또는 이소타입에 제한되는 것은 아니며, IgG, IgM, IgA, IgD, IgE, 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. 또한, 분리된 면역 글로불린이 순수한(purely) 또는 항원성(antigenically) 인간 면역 글로불린인 것이 바람직하다.

한 양태에서, 본 발명의 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 포함하는 조성물은 약 6.0-7.8 (예, 5.0-6.0, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8 이상)의 pH를 갖는 살균 용액이다. 다른 양태에서, 본 발명의 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 포함하는 조성물은 면역 글로불린 제제에 대한 미국 FDA 기준에 따라서 제조된다 (예, 37 CFR §§640.100; 640.101; 640.102; 640.103; 640.104, April 1, 2013을 참고). 한 양태에서, 본 발명의 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체(예, 본원에서, 특히 실시예에서 기술된 과다면역 글로불린)를 포함하는 조성물은 FDA가 권장하는(예, 37 CFR § 640.104를 참고), 면역 결핍성 질병을 앓는 환자를 치료하기 위한 코리네박테리움 디프테리아(Corynebacterium diphtheria), 홍역 바이러스(measles virus), 및 폴리오 바이러스(polio virus)에 대한 적어도 최소 수준의 항체 역가를 지닌다.

한 양태에서, 풀링된 혈장 조성물은 검출 가능한 수준[예, 당해 분야에 공지된 임의의 방법(예, 미국 식품 의약국이 권장하는)을 이용하여 검출되는]의 인간 면역 결핍증 바이러스 1(human immunodeficiency virus 1, HIV 1), HIV-2, 매독균(Treponema pallidum), 열대열 원충(Plasmodium falciparum), 사일열 원충(Plasmodium malariae), 난형 말라리아 원충(Plasmodium ovale), 삼일열 원충(Plasmodium vivax), 원숭이열 말라리아(Plasmodium knowlesi), B형 간염 바이러스 (hepatitis B virus, HBV), C형 간염 바이러스 (hepatitis C virus, HCV), 프리온(prion), 웨스트 나일 바이러스(West Nile virus), 파보 바이러스(parvovirus), 타이파노소마 크루지(Typanosoma cruzi), SARS 코로나 바이러스(SARS coronavirus), 및/또는 천연두 바이러스(vaccinia virus)가 존재하지 않는다. 한 양태에서, 본 발명의 방법 또는 조성물에서 이용된 각각의 개별적인 혈장 샘플은 FDA 인가된 혈액원(blood establishment)에서만 수집되고, 인간 면역 결핍증 바이러스 (HIV) 1 (HIV-1), HIV-2, 매독균(Treponema pallidum), 열대열 원충(Plasmodium falciparum), 사일열 원충(Plasmodium malariae), 난형 말라리아 원충(Plasmodium ovale), 삼일열 원충(Plasmodium vivax), 원숭이열 말라리아(Plasmodium knowlesi), B형 간염 바이러스 (HBV), C형 간염 바이러스 (HCV), 프리온(prion), 웨스트 나일 바이러스(West Nile virus), 파보 바이러스(parvovirus), 타이파노소마 크루지(Typanosoma cruzi), SARS 코로나 바이러스(SARS coronavirus), 및/또는 천연두 바이러스(vaccinia virus)에 대한 혈청학적 검사(serological test) (예, FDA 인가된 혈청학적 검사)로 검사된다. 다른 양태에서, 본 발명의 개별적인 혈장 샘플 및/또는 풀링된 혈장 조성물은 핵산 검사(Nucleic Acid Testing, NAT)를 이용하여 HIV-1, HIV-2, HBV, HCV, 또는 다른 감염원(infectious agent) (예, 병원체)의 존재에 대해서 검사되고, 병원체의 부재가 확인되는 경우에만 본 발명의 방법 또는 조성물에 이용되었다.

본 발명은 본 발명의 조성물(예, 풀링된 혈장 샘플 및/또는 이를 포함하는 면역요법 조성물)로 투여되거나 또는 치료되는 대상체의 유형(예, 포유동물, 비-인간 영장류, 인간 등)에 의해 한정되지 않는다. 예를 들어, 본 발명은 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 함유하는 조성물[예, 혈액, 혈장, 및/또는 면역 글로불린 (예, 과다면역 글로불린) 조성물]을 받는 환자의 유형에 의해 한정되지 않는다. 본 발명의 목적은 본원에 기술된 면역 저하된 환자에게 본 발명의 조성물을 제공하고/하거나 투여하는 것이다.

한 양태에서, 풀링된 혈장은 1000-3000명 이상(예, 1000, 1250, 1500, 1750, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000명 이상)의 인간 대상체로부터 수득된 혈장 샘플을 포함한다. 한 양태에서, 풀링된 혈장 샘플을 포함하는 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체(예, 자연적으로 및/또는 비-자연적으로 존재하는 담체)를 더 포함한다. 한 양태에서, 풀링된 혈장 조성물은 면역 글로불린의 제조에 사용된다(예, 대상체로의 정맥내 투여용). 한 양태에서, 풀링된 혈장 조성물 및/또는 면역 글로불린은 조성물이 투여된 대상체에게 치료학적 이점을 제공하는데, 이는 1000명 이상의 무작위 인간 대상체로부터 수득된 혈장 샘플의 혼합물 및/또는 이들로부터 제조된 면역 글로불린의 투여를 통해서는 달성 가능하지 않다 (예, 통상적인 IVIG로는 예방되지 않거나 또는 치료되지 않는 대상체에서 상기도 감염을 예방하거나 또는 치료한다). 본 발명은 제공되는 치료학적 이점의 유형에 의해 한정되지 않는다. 실로, 본원에서 기술된 것을 비롯한, 다양한 치료학적 이점이 획득될 수 있다.

한 양태에서, 본 발명의 풀링된 혈장 및/또는 이로부터 제조된 면역 글로불린은 조성물이 투여된 대상체에서 감염(예, 상기도 감염)의 발생률(incidence)을 감소시킨다. 다른 양태에서, 본 발명의 풀링된 혈장 및/또는 이로부터 제조된 면역 글로불린은 본 발명의 풀링된 혈장 및/또는 면역 글로불린이 투여된 대상체에게 항생제가 투여되도록 요구되는[예, 감염 (예, 상기도 감염)을 치료하기 위해] 일(day) 수를 감소시킨다. 또 다른 양태에서, 본 발명의 풀링된 혈장 및/또는 이로부터 제조된 면역 글로불린은 대상체에서 순환하는 옵소닌 항-폐렴구균 항체의 최저 수준(trough level)을 증가시킨다 [예, 폐렴 연쇄상구균에 특이적인 옵소닌 항체 역가의 수준을 증가시킨다(예, 이로써, 본 발명의 풀링된 혈장 및/또는 이로부터 제조된 면역 글로불린의 예정된 투여 일자 사이에서, 항-폐렴구균 특이적 항체의 보호 수준(예, 통상적인 IVIG가 투여된 대상체에서는 유지되지 않음)을 제공한다)].

본 발명의 추가 목적, 구성 및 이점은 아래의 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다. 그러나, 본 발명의 사상 및 범위 내에서의 다양한 변화 및 변형이 이 상세한 설명으로부터 통상의 기술자에게 명백해질 것이기 때문에, 상세한 설명 및 특정한 예시가 본 발명의 바람직한 양태를 나타내면서도 단지 설명의 수단으로서 제공된다는 것이 이해될 것이다.

도 1 - 본 명세서에서 도 1이라 함은 도 1a, 도 1b 및 도 1c를 포함하여 전체로서 도 1을 의미함; 이하, 본 명세서 전반에 걸쳐 도 1은 앞서 정의한 바와 같음 - 은 다음의 시점에서 채취된, 개별적인 백신 접종된 공여자 혈청 중 폐렴구균 혈청형 특이적 IgG 항체 결합 역가를 나타낸다: 일차 프리베나 백신접종 직전 (Pre), 이차 뉴모박스 23 백신접종 직전 4주차, 8주차, 10주차, 12주차, 및 16주차. 평균 폐렴구균 혈청형 특이적 IgG 항체 결합 역가는 pre 및 4, 8, 10, 및 12주차와, pre 풀링 및 12주차 풀링에 대해서 나타냈다. 또한, pre 내지 12주차 사이의 폐렴구균 혈청형 특이적 IgG 항체 결합 역가의 배수 증가(fold increase)가 제시된다.
도 2 - 본 명세서에서 도 2라 함은 도 2a, 도 2b 및 도 2c를 포함하여 전체로서 도 2를 의미함; 이하, 본 명세서 전반에 걸쳐 도 2는 앞서 정의한 바와 같음 - 는 다음의 시점에서 채취된, 개별적인 백신 접종된 공여자 혈청 중 폐렴구균 혈청형 특이적 옵소닌 사멸 (opsonic killing, OPK) 역가를 나타낸다: 다양한 폐렴구균 혈청형에 특정한, 일차 프리베나 백신 접종 직전(Pre), 이차 뉴모박스 23 백신접종 직전 4주차, 8주차, 10주차, 12주차, 및 16주차. 평균 폐렴구균 혈청형 특이적 옵소닌 역가는 pre 및 4, 8, 10, 및 12주차와, pre 풀링 및 12주차 풀링에 대해서 나타냈다. 또한, pre 내지 12주차 사이의 폐렴구균 혈청형 특이적 OPK 역가의 배수 증가가 제시된다.
도 3은 다음의 시점에서 채취되었던, 40명의 대상체로부터 풀링된, 풀링된 공여자 혈청에서의 폐렴구균 혈청형 특이적 IgG 항체 결합 역가를 나타낸다: 일차 프리베나 백신접종 직전 (Pre), 8주차, 10주차, 12주차, 및 16주차와 5개월 차.
도 4는 다음의 시점에서 채취된, 풀링된 공여자 혈청 중 폐렴구균 혈청형 특이적 IgG 항체 결합 농도의 배수 증가를 나타낸다: 일차 프리베나 백신접종 직전 (Pre), 8주차, 10주차, 12주차, 및 16주차와 5개월 차 (* = 기초선).
도 5는 다음의 시점에서 채취된, 40명의 대상체로부터 풀링된, 풀링된 공여자 혈청 중 폐렴구균 혈청형 특이적 옵소닌 사멸(OPK) 역가를 나타낸다: 일차 프리베나 백신접종 직전 (Pre), 8주차, 10주차, 12주차, 및 16주차와 5개월 차.
도 6은 명시된 시점에서 채취됐던, 40명의 개체로부터 풀링된, 풀링된 공여자 혈청으로부터 수득된 정제된 면역 글로불린 (IG) 중 폐렴구균 혈청형 특이적 IgG 항체 결합 농도를 나타낸다.
도 7은 명시된 시점에서 채취됐던, 40명의 개체로부터 풀링된, 풀링된 공여자 혈청으로부터 수득된, 정제된 IgG 중 폐렴구균 혈청형 특이적 OPK 역가를 나타낸다.
도 8은 백신 접종된 공여자로부터 수득된, 풀링된 인간 혈청에 존재하는 기능성/옵소닌 항체의 OPK 혈청형 특이적 역가 대 (versus) 다수의 상이한 통상의, 시판중인 IVIG에 존재하는 기능성/옵소닌 항체의 OPK 혈청형 특이적 역가의 비교를 나타낸다. 각 열은 단일의, 고유한 폐렴 연쇄상구균 혈청형을 나타낸다. 각 행은 고유한 샘플을 나타낸다. 샘플 A-I는 통상의, 시판중인 IVIG의 상이한 로트(lot)를 나타낸다. "IVIG 평균"은 동일한 양의 각각의 통상의, 시판중인 IVIG를 함유하는, 풀링된 샘플에 존재하는 기능성/옵소닌 항체의 평균 OPK 혈청형 특이적 역가이다. "백신 접종 전 공여자 혈청"은 실시예 1에서 기술되는 백신 접종 전의 풀링된 인간 공여자 혈청에 존재하는 기능성/옵소닌 항체의 OPK 혈청형 특이적 역가를 나타낸다. "백신 접종된 공여자 혈청"은 실시예 1에서 기술되는 백신 접종 후 12주차에서, 풀링된 인간 공여자 혈청에 존재하는 기능성/옵소닌 항체의 OPK 혈청형 특이적 역가를 나타낸다. "시판용 IVIG에 대한 배수 역가 증가"는 실시예 1에서 기술되는 백신 접종 후 12주차에서, 풀링된 인간 공여자 혈청에 존재하는 기능성/옵소닌 항체의 OPK 혈청형 특이적 역가의 배수 증가 대(versus) 동일한 양의, 각각의 통상의 시판중인 IVIG를 함유하는, 풀링된 샘플에 존재하는 기능성/옵소닌 항체의 평균 OPK 혈청형 특이적 역가를 나타낸다.
도 9a-9l은 각 형철형에 대한 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 함유하는 본 발명의 과다면역 글로불린에 존재하는 폐렴 연쇄상구균 혈청형 특이적 옵소닌 항체 역가와 비교된, IVIG의 9개의 상이한 시판용 로트 (샘플 A-I)에 존재하는 폐렴 연쇄상구균 혈청형 특이적 옵소닌 항체 역가를 도시한다.
도 10은 통상적인 IVIG의 주입 후에, 최저(at trough)의 항-폐렴 연쇄상구균 결합 항체의 보호 수준 (1.2 mg/ml) 이하인, 일차 면역결핍증을 앓는 대상체의 백분율(percentage)을 나타낸다.

정의

본원에서 이용되는, 용어 "대상체(subject)"는 임의의 인간 또는 동물 [예, 비-인간 영장류, 설치류(rodent), 고양이과(feline), 개과(canine), 보바인(bovine), 포사인(porcine), 이콰인(equine) 등]을 의미한다.

본원에서 이용되는, 용어 "샘플 (sample)"은 이의 가장 넓은 의미로 이용되며, 임의의 공급원으로부터 수득된 물질을 망라하고, 예를 들어, 생물학적 공급원으로부터 수득된 물질, 예를 들어, 동물(인간을 비롯한)로부터 수득된 물질을 의미하는 데 이용될 수 있으며, 임의의 유체, 고체, 및 조직을 더 망라한다. 본 발명의 특정 양태에서, 생물학적 샘플은 혈액 및 혈장, 혈청 등과 같은 혈액 제제를 포함한다. 그러나, 이러한 예시가 본 발명과 함께 이용되는 샘플의 유형을 한정하는 것으로 해석되는 것은 아니다.

본원에서 이용되는, 용어 "항체"는 통상적으로 두 개의 동일한 폴리펩티드 사슬의 쌍으로 이루어진 면역 글로불린 분자를 의미하며, 각 쌍은 하나의 "경쇄(L)"와 하나의 "중쇄(H)"를 갖는다. 인간 경쇄는 카파 경쇄(kappa light chain)와 람다 경쇄(lambda light chain)로 분류된다. 중쇄는 뮤(mu), 델타(delta), 감마(gamma), 알파(alpha), 또는 입실론(epsilon)으로 분류되고, 항체의 이소타입(isotype)을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE로 정의한다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변영역 및 불변영역이 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 연결되고(joining), 또한 중쇄는 약 3개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. 각 중쇄는 중쇄 가변영역(본원에서 HCVR 또는 V_H로 축약됨) 및 중쇄 불변영역으로 이루어진다. 중쇄 불변영역은 세 개의 도메인인, C_H1, C_H2 및 C_H3으로 이루어진다. 각 경쇄는 경쇄 가변영역 (본원에서 LCVR 또는 V_L로 축약됨) 및 경쇄 불변영역으로 이루어진다. 경쇄 불변영역은 하나의 도메인인, CL로 이루어진다. 항체의 불변영역은 면역 글로불린이 숙주 조직, 또는 면역계의 다양한 세포(예, 이펙터 세포) 및 고전적인 보체계(classical complement system)의 제1 구성요소 (C1q)를 비롯한 인자에 결합하는 것을 매개할 수 있다. V_H와 V_L 영역은 상보성 결정 영역(complementarity determining region, CDR)이라고 하는 초가변 영역 (regions of hypervariability)과 프레임 워크 영역(framework region, FR)이라고 하는 더욱 보존된 영역으로 더 세분화될 수 있는데, 상보성 결정 영역은 프레임 워크 영역들 사이에 배치되어 있다(interspersing). V_H와 V_L 각각은 3개의 CDR과 4개의 FR로 이루어져 있고, 이들은 다음의 순서로 아미노-말단으로부터 카르복시-말단으로 배열되어 있다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 각 중쇄/경쇄쌍의 가변영역(V_H 및 V_L)은 각각 항체 결합 부위(antibody binding site)를 형성한다. 용어 "항체"는 단량체 항체의 이량체, 삼량체, 또는 더 높은 차수의 다량체를 비롯한, 항체 다량체(antibody multimer) (항체의 다량체 형태)의 일부인 항체를 망라한다. 또한, 이는 비-항원 모이어티(non-antibody moiety)에 연결되거나, 부착되거나, 또는 이외에 물리적으로 또는 기능적으로 관련된 항체를 망라한다. 또한, 용어 "항체"는 항체를 생산하는 임의의 특정한 방법에 의해 한정되지 않는다. 예를 들어, 이는 그 중에서도, 재조합 항체, 합성 항체, 단일클론 항체, 다클론 항체, 이중-특이적 항체 (bi-specific antibody), 및 다중-특이적 항체(multi-specific antibody)를 포함한다.

본원에서 이용되는, 용어 "항체 유도체(antibody derivative)" 또는 항체의 "유도체"는 동일한 항원(항체가 - 유도체가 이로부터 유도됨 - 추가의 분자 실체(molecular entity)에 연결된 항체와 동일하거나 또는 유사한 아미노산 서열에 결합하거나, 또는 이를 포함하는)에 결합할 수 있는 분자를 의미한다. 항체 유도체에 함유된 항체의 아미노산 서열은 전체-길이의 항체일 수 있거나, 또는 전체 길이의 항체의 임의의 부분 또는 부분들일 수 있다. 추가의 분자 실체는 화학적 분자 또는 생물학적 분자일 수 있다. 추가의 분자 실체의 예시는 화학기(chemical group), 아미노산, 펩티드, 단백질(효소, 항체를 비롯한), 및 화학적 화합물을 포함한다. 추가의 분자 실체는 검출제(detection agent), 표지, 마커, 약제학적 또는 치료학적 제제로서 이용하기 위한 것을 비롯한 임의의 유용성을 가질 수 있다. 항체의 아미노산 서열은 화학적 커플링, 유전적 융합, 비-공유결합성 회합(noncovalent association) 또는 공유결합성 회합 등에 의해 추가의 실체에 부착될 수 있거나 또는 이에 연결될 수 있다. 또한, 용어 "항체 유도체"는 키메라 항체(chimeric antibody), 인간화된 항체, 및 보존 아미노산(conservation amino acid) 치환, 첨가, 및 결실을 비롯한 항체의 아미노산의 변형으로부터 유도된 분자를 망라한다.

본원에서 이용되는, 용어 "항원" 및 "면역원(immunogen)"은 적응성 면역 반응(adaptive immune response)을 유도하는 것이 가능한 임의의 물질을 의미하는 데 상호교환적으로 이용된다. 항원은 전세포(whole cell) (예, 박테리아 세포), 바이러스, 균(fungus), 또는 이들의 항원성 부분 또는 성분일 수 있다. 항원의 예시는 미생물 병원체(microbial pathogen), 박테리아, 바이러스, 단백질, 당단백질, 지질단백질, 펩티드, 당펩티드, 지질펩티드, 독소(toxoid), 탄수화물, 종양-특이적 항원, 및 이들의 항원성 부분 또는 성분을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본원에서 이용되는, 용어 항체의 "항원-결합 단편(antigen-binding fragment)"은 항체가 결합하는, 동일한 항원에 결합하는 능력을 보유하는 전체 길이의 항체의 하나 이상의 부분을 의미한다.

본원에서 이용되는, 용어 "면역 글로불린 (immunoglobulin 또는 immune globulin)", "면역 글로불린 분자(immunoglobulin molecule)" 및 "IG"는 (1) 항체, (2) 항체의 항원-결합 단편 및 (3) 항체의 유도체를 망라하며, 이들 각각은 본원에 정의되어 있다. 본원에서 기술되는, 면역 글로불린은 풀링된 혈장 조성물(예, 대상체 투여용)로부터 제조(예, 분획화, 분리, 정제, 녹축 등)될 수 있다. 본원에서 이용된, 용어 "정맥내 면역 글로불린(intravenous immunoglobulin, IVIG)"은 많은 수의 (예, 250, 500, 1000명 이상의) 무작위 인간 공여자의 혈장으로부터 제조된 통상의 면역 글로불린[예, 히젠트라(HIZENTRA), 면역 글로불린 피하제(Immune Globulin Subcutaneous), CSL 베링 사 (CSL Behring)]을 의미하는 반면, 용어 "항-폐렴구균 면역 글로불린" 또는 "항-폐렴구균 IVIG" 또는 "항-폐렴구균 과다-면역 글로불린" (예, 본원과 실시예에서 기술됨)은 본 발명의 방법에 따라서 혈장 공여자(예, 인간 혈장 공여자)로부터 [예, 본원에서 기술된 방법에 따른 하나 이상의 항-폐렴구균 백신으로 백신 접종된 많은 수의 (예, 250, 500, 1000명 이상의) 인간 혈장 공여자 (예, 건강한 인간 혈장 공여자)] 제조된, 대조군 샘플에 비해서 상승된 항-폐렴구균 특이적, 옵소닌 항체 역가를 함유하는 면역 글로불린을 의미한다.

용어 "옵소닌 식작용 항체" 및 "옵소닌 항체"는 본원에서 상호 교환적으로 이용되어, 박테리아 또는 외부 물질[예, 세포 또는 세포 제제(cell product)]이 식세포(예, 옵소닌 항체가 박테리아를 코팅하여, 결과적으로 박테리아 세포를 코팅하는 옵소닌 항체와 식세포의 표면에 존재하는 수용체 사이의 상호작용으로 인해, 박테리아 세포가 식작용에 감수성이 되도록 야기함)의 작용에 감수성이 되도록 활발히 야기하는 기능을 하는 항체를 의미한다. 예를 들어, 옵소닌 항-폐렴구균 항체는 폐렴 연쇄상구균의 표면에 결합 및 이를 코팅하여, 박테리아가 식세포에 의한 식작용/사멸에 감수성이 되도록 야기하는 항체이다.

용어 "옵소닌 식작용 항체 역가" 및 "옵소닌 항체 역가"는 본원에서 상호 교환적으로 이용되어, 기능적으로 활성인 옵소닌 식작용 항체(예, 감염 및/또는 질병에 대한 보호와 상관관계가 있는)의 역가를 나타낸다. 예를 들어, 옵소닌 항-폐렴구균 항체 역가 (예, 본원에서 기술되는 OPK 검정에 의해 측정됨)는 샘플 중 폐렴 연쇄상구균에 특이적인 옵소닌 식작용 항체의 역가이다 [예, 샘플에 존재하는 폐렴 연쇄상구균에 결합할 수 있는 항체의 총량 (예, ELISA 검정에 의해 측정됨)과 독립적이고 별개임].

본원에서 이용되는, 용어 "과다면역 글로불린"은 특정한 유기체 (예, 폐렴 연쇄상구균)에 대한 고역가의 항체(예, 옵소닌 항체)를 갖는 공여자의 혈장으로부터 제조된 면역 글로불린을 의미한다. 예를 들어, 본원에서 이용되는, "항-폐렴구균 과다면역 글로불린"은 폐렴 연쇄상구균이 결합할 수 있는 항체의 전체 역가 또는 총량과 관계없는(예, 독립적인 및 이와 별개인) 상승된 옵소닌 항-폐렴구균 항체 역가를 함유하는 면역 글로불린이다.

본원에서 기술되는, 상승된 옵소닌 항-폐렴구균-특이적 항체 역가는 폐렴 연쇄상구균 혈청형 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F 중 적어도 약 55% 이상(예, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 이상)에 대해서 대조군 샘플에 존재하는 동일한 혈청형에 대한 옵소닌 항-폐렴구균 특이적 항체 역가에 비해, 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 7배, 10배 이상인 것; 또는 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 및 23으로부터 선택된 폐렴 연쇄상구균 혈청형 중 70% 이상에 특이적이고, 대조군 샘플에 존재하는 동일한 폐렴 연쇄상구균 혈청형에 특이적인 옵소닌 항체 역가의 2배 이상(예, 3-25배 이상)인 것; 또는 본원에서 기술되는 옵소닌 식작용 사멸 검정에 의해 측정되는 1:64 내지 1:8192 [예, 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F 중 적어도 50% 이상(예, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 이상)에 대한]인 것; 또는, 예를 들어, 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F로부터 선택된 폐렴구균 혈청형 중 적어도 55% 이상에 대한, 대조군 샘플에 존재하는 옵소닌 항-폐렴구균-특이적 항체 역가의 적어도 2배, 3배, 4배, 5배 이상인 것 (즉, 대조군 샘플에 비해, 폐렴구균 혈청형의 7/12, 8/12, 9/12, 10/12, 11/12, 또는 12/12에 특이적인, 옵소닌 항-폐렴구균-특이적 항체 역가의, 적어도 2배, 3배, 4배, 5배 이상의 증가)이다. 본 발명은 사용된 대조군 샘플의 유형에 의해 한정되지 않는다. 예를 들어, 한 양태에서, 대조군 샘플은 백신접종 전의 건강한 인간 혈장 공여자(들)[예, 인간 혈장 공여자의 옵소닌 항-폐렴구균-특이적 항체 역가의 면역화 전의 수준은 면역화 후의 옵소닌 항-폐렴구균-특이적 항체 역가의 증가를 측정하기 위한 기초선으로 이용됨]로부터 제조된 면역 글로불린이다. 다른 양태에서, 대조군 샘플은 항-폐렴구균 백신으로 백신 접종되지 않은 1000명 이상의 무작위 인간 혈장 공여자(예, 비-백신 접종된 인간 혈장 공여자의 옵소닌 항-폐렴구균-특이적 항체 역가의 수준은 본 발명의 방법에 따라 백신 접종된 인간 혈장 공여자에 존재하는 옵소닌 항-폐렴구균-특이적 항체 역가의 증가를 측정하기 위한 기초선으로 이용됨)로부터 수득된 혈장 샘플의 혼합물로부터 제조된 면역 글로불린이다. 통상의 기술자는 다른 대조군 샘플이 이용될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 또한, 상승된 옵소닌 항-폐렴구균-특이적 항체 역가는 박테리아 사멸을 측정하는 데 이용되는 역가 및/또는 폐렴 연쇄상구균 감염에 대응하여 보호하기 위한 면역 글로불린 제제의 효능을 예측하기 위한 정확한 대리변수(surrogate)로 이용되는 역가일 수 있다.

본원에서 이용되는, 구절 "약제학적으로 허용가능한-"은 인간에게 투여되는 경우에, 생리학적으로 용인가능하고(physiologically tolerable), 통상적으로 허용 불가능한 알러지성 반응(unacceptable allergic reaction) 또는 유사한 유해반응(untoward reaction)을 생성하지 않는, 분자 실체 및 조성물을 의미한다.

뉴모박스 (펜실베니아주, 노스 웨일스 소재의 Merck Sharp & Dohme Corp.)는 폐렴구균 협막 다당류(pneumococcal capsular polysaccharide)의 정제된 제제로 이루어진 폐렴구균 다당류 백신을 의미한다. PPSV23은 다음의 23종의 폐렴구균 박테리아로부터 수득된 다당류 항원을 함유한다: 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19F, 19A, 20, 22F, 23F, 및 33F. 이는 용량(dose) 당 각 항원 25 μg을 함유하고, 0.25% 페놀을 보존제로서 함유한다.

프리베나-13 (펜실베니아주, 칼리지빌 소재의 Wyeth Pharmaceuticals)은 CRM197로 공지된 디프테리아 독소의 비독성 변이체(nontoxic variant)에 컨쥬게이트된 폐렴 연쇄상구균 (1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 19A, 19F, 18C, 및 23F) 중 13종의 혈청형의 정제된 협막 다당류를 포함하는 폐렴구균 컨쥬게이트 백신을 의미한다. 0.5-밀리리터 (mL)의 PCV13 용량(dose)은 12종의 혈청형 각각으로부터 수득된 다당류 약 2.2 마이크로그램(μg)과 혈청형 6B로부터 수득된 다당류 약 4.4 μg을 함유하고; CRM197의 전체 농도는 약 34 μg이다. 상기 백신은 0.02%의 폴리소르베이트 80 (polysorbate 80, P80), 알루미늄 포스페이트(aluminum phosphate, AlPO4) 보강제로서 0.125 밀리그램(mg)의 알루미늄, 및 5 mL의 숙시네이트 완충액을 함유한다. 백신은 티메로살 보존제(thimerosal preservative)를 함유하지 않는다.

본원에서 이용되는, 용어 "항체 샘플"은 공여자로부터 채취되거나 또는 공여자에 의해 제공되거나(예, 자연적인 공급원), 또는 합성, 재조합, 다른 시험관내 공급원, 또는 시판용 공급원으로부터 수득된 항체-함유 조성물[예, 유체(예, 혈장, 혈액, 정제된 항체, 혈액 또는 혈장 분획물, 혈액 또는 혈장 성분 등)]을 의미한다. 항체 샘플은 특정한 항체 또는 항체의 세트의 상승된 역가를 공여자의 병원체/항원 노출(예, 자연적인 노출 또는 백신접종을 통해) 또는 합성, 재조합, 또는 시 험관내 환경에서 생산되도록 조작된 항체에 기초하여 나타낼 수 있다. 본원에서 항체 X의 상승된 역가를 갖는 항체 샘플은 "X-상승 항체 샘플"이라고 한다. 예를 들어, 폐렴 연쇄상구균에 대한 항체의 상승된 역가를 갖는 항체 샘플은 "폐렴 연쇄상구균-상승 항체 샘플"이라고 한다.

본원에서 이용된, 용어 "분리된 항체" 또는 "분리된 결합 분자"는 적어도 하나의 오염물(contaminant) - 이것은 적어도 하나의 오염물과 함께 이의 공급원에 보통 회합되어 있음 - 로부터 확인 및 분리된 항체 또는 결합 분자를 의미한다. 분리된 항체의 예시는 다음을 포함한다: (1) 항체의 자연적인 상태에서, 항체를 동반하는 하나 이상의 자연적으로 회합된 성분과 회합되지 않은 항체; (2) 항체의 본래의 공급원으로부터 수득된 다른 단백질이 실질적으로 없는 항체; 또는 (3) 재조합적으로, 시험관내에서, 또는 세포 없이 발현되는 항체, 또는 합성적으로 생산되고, 생산됐던 환경으로부터 제거된 항체.

본원에서 이용된, 용어 "풀링된 혈장", "풀링된 혈장 샘플" 및 "풀링된 혈장 조성물"은 둘 이상의 혈장 샘플 및/또는 이로부터 제조된 조성물(예, 면역 글로불린)의 혼합물을 의미한다. 풀링된 혈장 중 특정 항체 또는 항체 세트의 상승된 역가는 풀링된 혈장을 구성하는 항체 샘플의 상승된 역가를 반영한다. 예를 들어, 혈장 샘플은 백신 접종되어(예, 폐렴구균 백신으로), 개체군 전체에서 발견되는 항체 수준(들)에 비해, 병원체(폐렴 연쇄상구균)에 대한 고역가의 항체(예, 고역가의 전체 결합 항체 및/또는 고 옵소닌 항체 역가)를 갖는 대상체로부터 수득될 수 있다. 혈장 샘플을 풀링할 때, 풀링된 혈장 조성물(예, 특정 병원체에 특이적인 항체의 상승된 역가를 갖는)이 생산된다. 본원에서, 항체 X(예, 여기서 "X"는 미생물 병원체임)의 상승된 역가를 갖는 풀링된 혈장은 "X-상승 항체 풀"이라고 한다. 예를 들어, 폐렴 연쇄상구균에 대한 결합 항체의 상승된 역가를 갖는 풀링된 혈장은 "폐렴 연쇄상구균-상승 항체 풀"이라고 한다. 풀링된 혈장 조성물은 당해 분야에 공지된 방법(예, 분획화, 정제, 분리 등)을 통한 면역 글로불린(예, 대상체에게 후속적으로 투여되는)의 제조에 이용될 수 있다. 본 발명은 풀링된 혈장 조성물 및 이로부터 제조된 면역 글로불린 모두가 대상체에게 투여되어, 예방적 및/또는 치료학적 이점을 대상체에게 제공할 수 있다는 것을 제공한다. 따라서, 용어 풀링된 혈장 조성물은 풀링된 혈장/풀링된 혈장 샘플로부터 제조된 면역 글로불린을 의미할 수 있다.

본원에서 이용되는, 용어 "스파이킹된 항체 풀 (spiked antibody pool)"은 합성적으로, 재조합적으로, 또는 다른 시험관내 수단을 통해 생산된 항체 또는 다른 면역 글로불린으로로 스파이킹되거나 또는 배합된 풀링된 혈장을 의미한다.

본원에서 이용되는, 용어 "정제된-" 또는 "정제하기 위한-"은 관심 있는 성분으로부터 단백질 (예, 항체) 또는 핵산을 비롯한 오염물의 일부를 제거하는 임의의 과정의 결과를 의미한다. 이로써, 정제된 성분의 백분율은 샘플에서 증가된다.

본원에서 이용되는, 용어 "면역요법 제제(immunotherapeutic agent)"는 포유동물의 면역 반응(예, 특이적이거나 또는 일반적인)을 강화할 수 있는 화학적 또는 생물학적 물질을 의미한다. 본원에서 이용되는, 용어 "공여자"는 생물학적 샘플(예, 혈액, 혈장 등)을 제공하는 대상체를 의미한다. 공여자/공여자 샘플은 특정한 병원체의 존재 또는 부재에 대해서 스크리닝될 수 있다 [예, 혈액 제제에 대한 안전기준을 평가하기 위한 미국 식품 의약국 (Food and Drug Administration, FDA) 가이트 라인(FDA 혈액 제제 자문 위원회에 의해 발행됨)을 이용함]. 예를 들어, 공여자/공여자 샘플은 FDA 가이드라인에 따라서 스크리닝되어, 하나 이상의 혈액 전염 병원체[예, 인간 면역 결핍증 바이러스 (human immunodeficiency virus, HIV) 1 (HIV-1), HIV-2; 매독균(매독(syphilis)); 열대열 원충(Plasmodium falciparum), 사일열 원충(P. malariae), 난형 말라리아 원충(P. ovale), 삼일열 원충(P. vivax) 또는 원숭이열 말라리아(P. knowlesi) (말라리아); B형 간염 바이러스 (hepatitis B virus, HBV), C형 간염 바이러스 (hepatitis C virus, HCV); 프리온(크로이츠펠트 야콥병); 웨스트 나일 바이러스(West Nile virus); 파보 바이러스(parvovirus); 타이파노소마 크루지(Typanosoma cruzi); SARS 코로나 바이러스(SARS); 천연두 바이러스(vaccinia virus)] 또는 통상적으로 스크리닝되거나 또는 FDA와 같은 규제기관(regulatory body)에 의해 스크리닝되도록 권고되는 다른 병원체의 부재를 확인할 수 있다.

본원에서 이용되는, "면역 자극량 (immunostimulatory amount)"은 면역 반응을 자극하는 것이 가능한 백신(예, 항-폐렴구균 백신)의 양을 의미한다. 면역 반응은 외부의 실체(foreign entity)에 반응하여, 면역 글로불린, 또는 항체의 신체의 생성을 초래하는 생물학적 효과의 세트를 포함한다. 따라서, 면역 반응은 B 세포 표면 Ig 수용체 분자의 자극을 통한, 생체내 또는 배양물에서의 B 세포의 활성을 의미한다. 면역 반응의 측정은 당해 분야의 통상의 기술 내에 있고, 다음의 총서(series)에 기술된 방법: P. Tijssen, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology: Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, (Burdon & van Knippenberg eds., 3rd ed.,1985) Elsevier, New York;과 Antibodies: A Laboratory Manual, (Harlow & Lane eds., 1988), Cold Spring Harbor Laboratory Press; 및 역류 면역-전기영동(countercurrent immuno-electrophoresis, GIEP), 방사 면역측정법(radioimmunoassay), 방사-면역 침전(radio-immunoprecipitation), 효소-결합 면역-흡착 검정(enzyme-linked immuno-sorbent assay, ELISA), 도트 블롯 검정(dot blot assay), 및 샌드위치 검정(sandwich assay)을 비롯한 절차를 이용한 항체 수준의 측정을 포함하는데, 전체 기재내용이 참고로 본원에 포함되는, 미국 특허 제4,376,110호 및 제4,486,530호를 참고한다. 또한, 면역 반응의 측정은 항체 생산에 대해 선행할 수 있거나, 또는 항체 생산의 증가를 신호전달할 수 있는 B 세포 활성화 작용의 검출 또는 측정을 포함한다. 이러한 측정은 B 세포 증식 검정(B cell proliferation assays), 인산화 검정(phosphorylation assay), 세포질내 유리 칼슘 농도(intracytoplasmic free calcium concentration)의 검정, 및 당해 분야에 공지된 B 세포 활성화를 측정하는 다른 방법을 포함한다. 대표적인 검정은 Mongini 외, J. Immunol. 159:3782-91 (1997); Frade 외, BBRC 188:833-842 (1992); Tsokos 외, J. Immunol. 144:1640-1645 (1990); Delcayre 외, BBRC 159:1213-1220 (1989); 및 Nemerow 외, J. Immunol. 135:3068-73 (1985)에서 제공되며, 이들의 전체 기재내용이 참고로 본원에 포함된다. 바람직한 양태에서, 본 발명의 실시는 면역 반응을 촉진하는 것, 강화하는 것, 또는 자극하는 것을 포함한다. 이들 작용은 이전에 존재하지 않았던 면역 반응을 규명하는 것; 목적하는 면역 반응을 최적화하거나 또는 증가시키는 것; 증가된 이소타입 전환(isotype switching), 증가된 기억 반응, 또는 이들 모두의 증가를 특징으로 하는 이차 면역 반응을 규명 또는 증가시키는 것; 병원체에 대해서 통계학적으로 증가된 면역보호 효과(statistically increased immunoprotective effect)를 제공하는 것; 등가 또는 증대된 체액성 면역반응, 또는 B 세포 활성화의 다른 척도(measure)를 감소되거나 또는 한정된 항원의 용량(dose)으로부터 생성하는 것; 항원의 등가 용량(equivalent dose)에 응하여, 증가된 체액성 면역 반응 또는 B 세포 활성화의 다른 척도를 생성하는 것; 또는 생체내 또는 시험관내 B 세포 활성화에 대한 친화도 역치(affinity threshold)를 낮추는 것;을 의미한다. 바람직하게는, 면역 자극량은 대상체(예, 공여자)에서 면역 반응을 자극하는 것이 가능하고, 본 발명의 조성물 및 방법에서 이용하기 위한(예, 본원에 기술된 조성물 및 방법으로 치료되는 대상체에서 폐렴구균 감염의 치료학적 및/또는 예방적 치료를 위함) 대상체 혈장, 혈청 또는 다른 혈액 성분이 수확되는 백신의 양을 의미한다.

용어 "완충액" 또는 "완충 제제"는 용액에 첨가되는 경우에, 용액이 pH의 변화에 저항하도록 야기하는 물질을 의미한다.

용어 "환원제" 및 "전자 공여체"는 전자를 제2의 물질에 공여하여, 하나 이상의 제2 물질의 원자의 산화 상태를 환원시키는 물질을 의미한다.

용어 "일가 염(monovalent salt)"은 금속 (예, Na, K, 또는 Li)이 용액에서 순전하 1+ (즉, 전자보다 양자가 1개 더 많음)를 갖는 임의의 염을 의미한다.

용어 "이가 염(divalent salt)"은 금속 (예, Mg, Ca, 또는 Sr)이 용액에서 순전하 2+를 갖는 임의의 염을 의미한다.

용어 "킬레이터(chelator)" 또는 "킬레이트제(chelating agent)"는 금속 이온에 결합하는 것이 가능한, 고립 전자쌍(lone pair of electrons)을 갖는 원자를 1개보다 많이 갖는, 많은 임의의 물질을 의미한다.

용어 "용액"은 수성 또는 비-수성 혼합물을 의미한다.

본원에서 이용되는, 용어 "보강제"는 면역 반응을 자극할 수 있는 임의의 물질을 의미한다. 일부 보강제는 면역계의 세포의 활성을 야기할 수 있다(예, 보강제는 면역세포가 사이토카인을 생성 및 분비하도록 야기할 수 있다). 면역계의 세포의 활성을 야기할 수 있는 보강제의 예시는 다음을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다: QS21 (HPLC 분획화로, 21번째 피크에서 용출되는 당지질; 매사추세츠주, 우스터 소재의 Aquila Biopharmaceuticals, Inc.)을 비롯한, 키라야 사포닌 나무(Q. saponaria tree)의 수피(bark)로부터 정제된 사포닌(saponin); 폴리(디(카르복실라토페녹시)포스파젠 (poly(di(carboxylatophenoxy)phosphazene) (PCPP 폴리머; 미국 소재의 Virus Research Institute); 모노포스포릴 지질 A (MPL; 몬타나주, 해밀턴 소재의 Ribi ImmunoChem Research, Inc.), 무라밀 디펩티드(muramyl dipeptide) (MDP; Ribi) 및 트레오닐-무라밀 디펩티드(threonyl-muramyl dipeptide) (t-MDP; Ribi)를 비롯한 지질 다당류의 유도체; OM-174 (지질 A에 관련된 글루코사민 이당류; 스위스, 메헝(Meyrin) 소재의 OM Pharma SA); 콜레라 독소 (cholera toxin, CT), 및 리슈만 연장 인자(Leishmania elongation factor) (정제된 리슈만 단백질; 워싱턴주, 시애틀 소재의 Corixa Corporation). 전형적인 보강제는 당해 분야에 공지되어 있고, 예를 들어, 알루미늄 포스페이트 또는 하이드록사이드 염 ("알룸 (alum)")을 포함한다. 일부 양태에서, 본 발명의 조성물은 하나 이상의 보강제와 함께 투여된다(예, 면역 반응을 Th1 및/또는 Th2 유형 반응으로 편중(skewing)시키기 위해). 일부 양태에서, US 제2005158329호; US 제2009010964호; US 제2004047882호; 또는 US 제6262029호(이들 문헌 각각은 이의 전체 기재내용이 참고로 본원에 포함됨)에 기술된 보강제가 사용된다.

본원에서 이용되는, 용어 (예, 폐렴구균 백신의) "면역 반응의 유도에 효과적인 양"은 (예, 대상체에 투여되는 경우에) 대상체에서 면역 반응의 자극, 생성 및/또는 유도(elicit)에 요구되는 투여량 수준(dosage level)을 의미한다. 유효량은 일회 이상의 투여(예, 동일하거나 또는 상이한 경로를 통해), 도포(application), 또는 투여(dosage)에서 투여될 수 있고, 특정한 제형 또는 투여 경로로 한정되도록 의도되지 않는다.

본원에서 이용되는, 용어 "상기 대상체가 면역 반응을 생성하도록 하는 조건하에서"는 면역반응(예, 선천성 또는 후천성)의 임의의 정성적이거나 정량적인 유도, 생성, 및/또는 자극을 의미한다.

본원에서 이용되는, 용어 "면역 반응"은 대상체의 면역계에 의한 반응을 의미한다. 예를 들어, 면역 반응은 다음의 검출 가능한 변화 (예, 증가)를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다: 톨-유사 수용체(Toll-like receptor, TLR) 활성화, 림포카인(lymphokine) [예, 사이토카인 (예, Th1 또는 Th2형 사이토카인) 또는 케모카인] 발현 및/또는 분비, 대식세포 활성화, 수지상세포 활성화, T 세포 활성화 (예, CD4+ 또는 CD8+ T 세포), NK 세포 활성화, 및/또는 B 세포 활성화 (예, 항체 생성 및/또는 분비). 면역 반응의 추가의 예시는 MHC 분자로의 면역원[예, 항원(예, 면역원성 폴리펩티드)]의 결합 및 세포독성 T 림프구 (cytotoxic T lymphocyte, "CTL") 반응의 유도, B 세포 반응 (예, 항체 생산), 및/또는 T-헬퍼 림프구 반응, 및/또는 면역원성 폴리펩티드가 유도된 항원에 대한 지연형 과민증 (delayed type hypersensitivity, DTH) 반응, 면역계의 세포[예, T 세포, B 세포(예, 임의의 발달 단계의(예, 혈장 세포))]의 확장(expansion) (예, 세포 개체군의 성장), 및 항원 제시 세포에 의한 증가된 항원의 가공 및 제시의 유도를 포함한다. 면역 반응은 대상체의 면역계가 외부의 것으로 인식하는 면역원[예, 미생물(예, 병원체)로부터 수득된 비-자가 항원, 또는 외부의 것으로 인식되는 자가-항원]에 대한 것일 수 있다. 따라서, 본원에서 이용되는 "면역 반응"은 선천성 면역반응(예, 톨 수용체 신호전달 연쇄반응의 활성화), 세포-매개성 면역 반응 [예, T 세포에 의해 매개되는 반응 (예, 항원-특이적 T 세포) 및 면역계의 비-특이적 세포에 의해 매개되는 반응] 및 체액성 면역 반응 [예, B 세포에 의해 매개되는 반응 (예, 혈장, 림프, 및/또는 조직액으로 항체의 생성 및 분비를 통해]을 포함하나, 이에 한정되지 않는 임의의 유형의 면역 반응을 의미한다는 것이 이해될 것이다. 용어 "면역 반응"은 항원 및/또는 면역원에 반응하는 대상체의 면역계의 능력의 모든 측면[예, 면역원(예, 병원체)에 대한 초기 반응 및 적응성 면역 반응의 결과인 후천성 (예, 기억) 반응 모두]을 망라하는 것을 의미한다.

본원에서 이용되는, 용어 "약제학적으로 허용가능한 담체"는 임의의 표준 약제학적 담체(standard pharmaceutical carrier)를 의미하며, 포스페이트 완충 생리 식염수, 물, 및 다양한 유형의 습윤제 (예, 소듐 라우릴 설페이트), 임의의 및 모든 용매, 분산 매질(dispersion media), 코팅제, 소듐 라우릴 설페이트, 등장화제 및 흡수 지연제, 붕해제(예, 감자 전분 또는 소듐 전분 글리콜레이트), 폴리에틸 글리콜, 다른 자연적 및 비-자연적으로 존재하는 담체 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 조성물은 안정화제 및 보존제를 포함할 수 있다. 담체, 안정화제 및 보강제의 예시는 기술되어 있고, 당해 분야에 공지되어 있다 [예, 참고로 본원에 포함된, Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ. Co., Easton, Pa. (1975)를 참고].

본원에서 이용되는, 용어 "약제학적으로 허용가능한 염"은 본 발명의 조성물의 임의의 염(예, 산 또는 염기와의 반응에 의해 수득된)을 의미하며, 이는 표적 대상체에서 생리학적으로 용인 가능하다(physiologically tolerated). 본 발명의 조성물의 "염"은 무기산 또는 유기산 및 염기로부터 유도될 수 있다. 산의 예시는 염화수소산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 과염소산(perchloric acid), 푸마르산, 말레산, 인산, 글리콜산, 젖산, 살리실산, 숙신산, 톨루엔-p-술폰산, 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 포름산, 벤조산, 말론산, 술폰산, 나프탈렌-2-술폰산, 벤젠 술폰산 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 옥살산과 같은 다른 산은 이들 자체로는 약제학적으로 허용가능한 것이 아니나, 본 발명의 조성물 및 이들의 약제학적으로 허용가능한 산 부가 염의 수득에 있어서, 중간체로서 유용한 염의 제조에 이용될 수 있다. 염기의 예시는 알칼리 금속 (예, 소듐) 하이드록사이드, 알칼리 토금속(예, 마그네슘) 하이드록사이드, 암모니아, 및 화학식 NW₄ ⁺(이 화학식에서, W는 C_1-4 알킬 등임)의 화합물 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

염의 예시는 다음을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다: 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠술포네이트, 바이설페이트(bisulfate), 부티레이트(butyrate), 시트레이트, 캄포레이트(camphorate), 캄포술포네이트(camphorsulfonate), 사이클로펜탄프로피오네이트(cyclopentanepropionate), 디글루코네이트(digluconate), 도데실설페이트(dodecylsulfate), 에탄술포네이트(ethanesulfonate), 푸마레이트(fumarate), 플루코헵타노에이트(flucoheptanoate), 글리세로포스페이트(glycerophosphate), 헤미설페이트(hemisulfate), 헵타노에이트(heptanoate), 헥사노에이트(hexanoate),클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드(iodide), 2-하이드록시에탄술포네이트, 락테이트, 말레에이트(maleate), 메탄술포네이트(methanesulfonate), 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 옥살레이트, 팔모에이트, 펙티네이트(pectinate), 퍼설페이트(persulfate), 페닐프로피오네이트(phenylpropionate), 피크레이트(picrate), 피발레이트(pivalate), 프로피오네이트, 숙시네이트, 타르트레이트(tartrate), 티오시아네이트(thiocyanate), 토실레이트(tosylate), 운데카노에이트(undecanoate) 등. 염의 다른 예시는 Na⁺, NH₄ ⁺, 및 NW₄ ⁺ (이 화학식에서, W는 C_1-4 알킬기임) 등을 비롯한 적합한 양이온과 화합된 (compounded) 본 발명의 화합물의 음이온을 포함한다. 치료학적 용도의 경우, 본 발명의 화합물의 염은 약제학적으로 허용가능한 것으로 고려된다. 그러나, 약제학적으로 허용가능하지 않은 산 및 염기의 염이 예를 들어, 약제학적으로 허용가능한 화합물의 제조 또는 정제에서 또한 이용될 수 있다.

치료학적 용도의 경우, 본 발명의 조성물의 염은 약제학적으로 허용가능한 것으로 고려된다. 그러나, 약제학적으로 허용가능하지 않은 산 및 염기의 염이 예를 들어, 약제학적으로 허용가능한 조성물의 제조 또는 정제에서 또한 이용될 수 있다.

발명의 상세한 설명

폐렴 연쇄상구균(Streptococcus pneumonia) 은 전세계적인 사망률 및 이환율의 주요 원인이다. 이의 주요한 독성 인자(virulence factor)는 협막 다당류이다. 노년기와 항체 면역 결핍증(antibody immunodeficiency)(예, 본원에서 기술된 일차 면역 결핍증으로부터 기인됨)은 폐렴구균 감염에 대한 일차 위험 인자(primary risk factor)이다. 세계 보건기구 (World Health Organization, WHO)는 매년 160만명의 사람이 폐렴구균 질병으로 사망하는 것으로 추정하고 있다. 90종이 넘는 알려진 협막 혈청형(capsular serotype)의 대부분이 심각한 질병을 야기할 수 있으나, 한정된 수가 침습성 폐렴구균 질병(invasive pneumococcal disease, IPD)의 주요 원인을 야기한다. 폐렴 연쇄상구균에 대한 면역은 보체(complement) 및 혈청형 특이적, 옵소닌 항체가 존재하는 경우에 박테리아의 식작용에 의해 매개된다. 규모가 큰 임상시험에서 상이한 폐렴구균 백신에 대한 혈청학적 반응의 평가는 새로운 백신의 발매에 요구되는 보호의 상관관계를 제공해왔다. IPD 질병에 대한 보호의 예측에 대해서, WHO는 폐렴구균 컨쥬게이트 백신(모든 혈청형)에 대한 0.2 내지 0.35μg/mL의 참조 역치(reference threshold)를 권고하고 있고; 다당류 백신에 대해서, 현재의 가이드라인은 1.3 μg/mL이다. 보호를 나타내고, FDA에 의해 임상적 효능과의 상관관계로서 인가된 더욱 정확한 대리 마커(surrogate marker)는 옵소닌 항체 역가이고, 이는 충분히 정확한 것으로 밝혀져서, 백신 임상에 대한 필요성을 대체했다. 예를 들어, 1:8의 백신 접종된 개체 중 옵소닌 역가는 폐렴 연쇄상구균의 다양한 혈청형에 대한 보호의 상관관계인 것으로 일반적으로 간주된다. 백신이 특정한 혈청형에 대한 1:8의 옵소닌 역가를 유도하는 경우에, 이 백신은 임상적으로 유효한 (clinically efficacious)것으로서 간주될 수 있으며, 심지어 백신 접종되지 않은 개체에 비해서 백신 접종된 개체에서의 감소된 감염의 수를 입증하는 임상시험이 부재하는 경우에서도 그러하다.

일차 면역 결핍증 (Primary immunodeficiency, PID)은 200가지가 넘는 유전적 질환의 군으로, 감염에 대한 증가된 감수성의 임상적 결과를 수반하는 선천성 또는 적응성 면역계의 개별적인 구성요소의 결핍을 특징으로 한다. 가장 빈번한 면역 결핍증은 항체 결핍증이다. 항체 결핍증[일명 저 감마글로불린 혈증(hypogammaglobinaemia)이라고 함]을 앓는 환자의 주요 임상적 특징은 가장 빈번한 분리된 박테리아인 폐렴 연쇄상구균으로 인한 기도의 재발성 감염이다 (예, Fried 및 Bonilla, Clin Microbiol Rev. 2009;22:396-414; Busse 외, J Allergy ClinImmunol. 2002;109:1001-1004를 참고).

지난 수십 년간, 인간 다가 정맥내 면역 글로불린 (intravenous immunoglobulin, IVIG; 또한, 본원에서 "통상적인 IVIG"라고 함)의 장기간의 투여는 면역 결핍(예, 항체 결핍) 환자에서 감염의 중증도 및 빈도를 감소시키는 중심 요법(mainstay therapy)이었다 (예, Salehzadeh 외, J Microbiol Immunol Infect 2010, 43(1):11-17; Favre 외, Allergy 2005 60:385-390을 참고). IVIG의 주입은 면역 글로불린 G (immunoglobulin G, IgG)의 농도 피크(concentration peak)를 빠르게 야기한 후에, 시간에 따른 IgG 감소를 야기한다. IgG 수준은 다음 주입 직전에 (즉, 최저 농도(trough level)) 모니터링되어, 특정한 주입 요법의 적합성(adequacy)을 평가한다. 일반적으로, IVIG로 치료된 PID 환자는 3-4주 마다 주입을 받는다. 3-4주 마다의 IVIG 주입은 PID 환자에서 심각한 하기도 감염의 예방에 일반적으로 성공적이었으나, 치료되는 동안에 이환율 및 병(sickness)과 관련된, 상기도 감염을 지속해서 겪는 PID 환자의 유의한 백분율이 존재한다. 이는 IVIG를 받는 면역 저하된 환자의 대부분이 최저의(at trough), 허용가능한 수준의 전체 면역 글로불린 및 허용가능한 수준의 항-폐렴 연쇄상구균 IgG를 갖는 것으로 나타난다는 사실에도 불구하고 존재하는 것이다(예, Favre 외, Allergy 2005 60:385-390을 참고). 또한, 항생제가 사용되었으나, 대개 비효과적이었다.

따라서, 외인성의 풀링된 인간 IVIG의 투여는 면역 결핍증(예, 항체 결핍증)을 앓는 환자를 위한 임상적 약제에서 중요한 요법이고, 심각한 하기도 감염의 발생을 예방하는 것으로 나타난다. 그러나, 극명히 대조적으로, 통상적인 IVIG 요법은 PID 환자에서 발생하는 생명을 덜 위협하는 상기도 감염(예, 폐렴 연쇄상구균에 의해 야기됨)의 현저한 발생을 예방 또는 치료하는 데 실패해왔다 (예, Favre 외, Allergy 2005 60:385-390; Simao-Gurge 외, Allergo Immnopathol 2017, 45: 55-62를 참고). 즉, 통상적인 IVIG의 정기적인 주입에 의해 달성되는 전체 IgG 농도가 PID 환자에서 심각한 하기도 감염을 예방하나, 폐렴 연쇄상구균에 의해 야기되는 PID 환자에서 임상적으로 덜 심각한 상기도 감염으로부터의 상당하고 현저한 이환율을 유지하는데, 이는 결국 현저한 건강 합병증 (significant health complication), 삶의 질의 감소, 및 감염을 제어하려는 시도로서 환자에서 광역 항생제(broad spectrum antibiotic)의 무차별적인 이용을 야기한다.

본원에서 기술된 것은 폐렴 연쇄상구균에 의해 야기된 감염의 치료를 위한 조성물 및 방법이다. 특히, 본 발명은 폐렴구균 감염을 예방하거나 또는 치료하기 위한 인간 과다면역 글로불린 및 이의 조성물을 제공한다. 본 발명은 고역가의 옵소닌 항-폐렴구균 항체를 함유하는 과다면역 글로불린을 생산하는 방법, 이를 함유하는 조성물, 및 폐렴구균 감염의 예방 및 치료를 위한 조성물을 이용하는 방법을 제공한다. 본 발명은 면역저하 대상체에서 본 발명의 과다면역 글로불린 조성물(예, 고역가의 항-폐렴구균 항체를 함유함)을 면역저하 대상체에 투여하는 것을 통한 폐렴구균 감염 [예, 상기도 감염 (예, 기관지염(bronchitis), 이염(otitis), 부비동염(sinusitis) 등)]을 예방 또는 치료하는 방법을 더 제공한다.

본원(예, 실시예)에서 상술되는, 본 발명은 신규한 과다면역 글로불린 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 통상적인 면역 글로불린 제제 및 다른 IVIG 제제(예, 다른 과다면역 IVIG 제제)보다 놀랍고도 현저히 상이한, 고역가의 옵소닌 항-폐렴구균 항체를 함유한다. 특히, 본 발명의 방법에 따라 제조된 과다면역 글로불린이 다수의 폐렴 연쇄상구균 혈청형에 대해서 기능적으로 및 광범위하게 반응성이고 - 조성물에 존재하는 결합 항-폐렴구균 항체의 총량(예, ELISA에 의해 측정됨)과 독립적임 - 시험관내에서 폐렴 연쇄상구균의 식작용과 사멸(예, 항체는 옵소닌 식작용성)을 강화하는, 상승된 역가의 옵소닌 항-폐렴구균 항체를 갖는다는 것이 놀랍게도 발견되었는데, 이는 실시예 2-4에서 기술된다. 즉, 본 발명의 양태의 전개동안에 수행된 실험은 폐렴 연쇄상구균의 협막 다당류에 대한 전체 IgG 결합 항체가 백신 접종된 숙주의 혈청으로부터 제조된 면역 글로불린에 존재하는 기능성, 옵소닌 항체의 양과 상관관계에 있지 않으며, 이를 예측하지 않는다는 것이 예상외로 확인되었다(예, 실시예 2-4를 참고). 따라서, 낮은 수준의 결합 항체(binding antibody)는 높은 수준의 방어적 옵소닌 항체(protective opsonic antibody)와 관련 있을 수 있고, 이의 역일 수도 있다. 따라서, 면역 글로불린 제제만의 전체 항체 수준의 측정은 이 제제의 보호 효능(protective efficacy)을 예측하지 않거나 또는 이와 상관관계가 없다. 따라서, 한 양태에서, 본 발명은 IgG의 총량만 알려주는 역가보다, 목적하는 기능성, 옵소닌 항체 역가를 함유하는 혈장 및/또는 면역 글로불린 조성물의 확인 및 특성화를 제공한다 (예, 백신 접종된 공여자로부터의 혈장 또는 이로부터 제조된 면역 글로불린에 존재하는 전체 항-폐렴구균 IgG 항체 역가와 옵소닌 항-폐렴구균 항체의 역가 사이의 상관관계가 없음을 확인하는 것으로 인함).

또한, 혈청형 특이적 옵소닌 역가의 확연한 가변성(pronounced variability)이 통상적인 IVIG의 다양한 시판용 로트에서 발견되었고(예, 도 9a-9l, 각각 시판용 IVIG를 나타내는 샘플 A-I를 참고), 한 혈청형에 대한 고조된 역가(heightened titer)가 임의의 다른 혈청형의 고조된 역가를 예측하지 않았거나 또는 이와 상관관계가 아니었다. 이는 임의의 개별적인, 통상적인 IVIG에서의 개별적인 고조된 반응이 폐렴 연쇄상구균에 대한 일반적인 강화된 면역 반응을 반영하지 않았고, 오히려 매우 특이적인 혈청형에 대한 산발적인 강화된 반응(들) [sporadic enhanced response(s)]을 반영했다는 것을 나타낸다 (예, Malgorzata 외, Clin Diagn Lab Immunol 2004, 11(6):1158-1164). 뚜렷하게 대조적으로, 본 발명에 따른 면역화된 공여자로부터 제조된 면역 글로불린내에서 관측된 옵소닌 항체 역가는 예외 없이 모든 혈청형에 대해서 강화되는 것으로 알려졌다 (예, 실시예 5, 도 8을 참고, 및 도 9a-9l, 본 발명의 "과다면역 글로불린"인, 샘플 HIG를 참고). 혈청형에 따라, 면역 글로불린의 다양한 상이한 시판용 로트에 비해서, 면역화된 공여자로부터 수득된 면역 글로불린 중 옵소닌 항-폐렴구균 항체 역가의 3-256배의 증가가 존재했다(예, 실시예 5 및 도 8, 시판용/통상적인 IVIG 샘플 A-I 대(versus) 과다면역 공여자 혈청을 참고). 따라서, 일부 양태에서, 상승된 옵소닌 항-폐렴구균 항체 역가를 함유하는 조성물(예, 혈액, 혈장, 및/또는 면역 글로불린 조성물)을 생성하는 본 발명의 방법 및 조성물은 다수의 폐렴구균 형철형(예, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15종 이상의 혈청형)에 특이적인 옵소닌 항-폐렴구균 항체 역가 및/또는 통상적인, 시판중인 면역 글로불린에 비해서 현저히 상승된 (예, 3-256배 이상) 옵소닌 항체 역가를 포함하는 이질적인 조성물(heterogeneous composition)을 제공한다.

따라서, 본원에 개시된 백신 접종된 공여자로부터 수득된 혈장 또는 이로부터 제조된 면역 글로불린에 존재하는 전체 항-폐렴구균 결합 IgG 항체 역가와 옵소닌 항-폐렴구균 항체 역가 사이의 불일치(discordance)의 확인으로 인해, 본 발명의 추가 목적은 목적하는 상승된 기능성, 옵소닌 항-폐렴구균 항체 역가[예, 적어도 1:64 내지 약 1:8192의(예, 전체 항-폐렴구균 결합 항체 역가와 관계없음(예, 고역가의 옵소닌 항-폐렴구균 항체를 지니는 것으로 확인된, 백신 접종된 공여자 혈장 및/또는 면역 글로불린으로부터 수확된 혈장 및/또는 면역 글로불린을 서로, 및/또는, 고역가의 옵소닌 항-폐렴구균 항체를 갖지 않을 수 있으나 고역가의 옵소닌 항-폐렴구균 항체 공여자 혈장 및/또는 면역 글로불린과 풀링되는 경우에 대조군 샘플에 비해서, 전체 옵소닌 역가를 바람직하지 않은 수준으로 희석시키지 않는, 백신 접종된 공여자 혈장 및/또는 면역 글로불린과 풀링함으로써))]를 함유하는 혈장 및/또는 면역 글로불린 조성물(예, 항-폐렴구균 과다면역 글로불린)을 제공하는 것이다.

또한, 본 개시는 정상 공여자의 표준/통상적인 면역 글로불린 풀(예, 시판중인 표준/통상적인 IVIG의 생성에 이용되는)이 폐렴 연쇄상구균의 다중 혈청형에 대한 신뢰할 수 있고 일관된 높은 수준의 옵소닌 항체를 갖지 않는 반면에, 다수의 폐렴 연쇄상구균 혈청형에 대한 본 발명의 광범위하게 반응성인, 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 함유하는 면역 글로불린 조성물(예, 항-폐렴구균 과다면역 글로불린)은 정맥내로 주어지는 경우에, 식세포에 의한 다수의 폐렴 연쇄상구균 혈청형의 식작용 및 사멸을 촉진하는 특이적인, 기능성 항체를 제공하는 즉시 제공한다는 발견을 기술한다. 본 발명은 본 발명의 과다면역 글로불린 (예, IVIG) 조성물내에 존재하는 기능성, 옵소닌 항체가 옵소닌 식작용 및/또는 사멸을 촉진하는, 폐렴 연쇄상구균의 혈청형 또는 혈청형의 수에 의해 한정되지 않는다. 실로, 본 발명은 다음의 폐렴 연쇄상구균의 혈청형 12종 중 적어도 9종, 12종 중 10종, 12종 중 11종 또는 12종 중 12종 모두에 대해서 광범위하게 반응성인, 옵소닌 항체를 함유하는 본 발명의 조성물[예, 과다면역 혈장 조성물 및/또는 과다면역 글로불린(예, IVIG) 조성물]을 제공한다: 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F (예, 실시예 2-5를 참고). 즉, 본 발명은 대조군 샘플에 존재하는 옵소닌 항-폐렴구균-특이적 항체 역가의 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 7배, 10배 이상인 상승된 옵소닌 항-폐렴구균-특이적 항체 역가(예, 폐렴구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F로부터 선택된 혈청형 중 적어도 75%에 대한)를 포함하는, 조성물 및 이를 수득하는 방법을 제공한다. 다른 양태에서, 본 발명은 한 명 이상의 혈장 공여자 - 이 공여자로부터 면역 글로불린이 유도됨 - 를 면역화시키는 데 사용된 백신 또는 복수의 백신에 존재하는 각 혈청형 중 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 95%, 98% 이상에 대한 고역가의 광범위하게 반응성인, 옵소닌 항체를 함유하는 과다면역 글로불린(예, IVIG) 조성물을 제공한다.

본 발명의 추가 이점 및 목적은 폐렴 연쇄상구균에 특이적인 광범위하게 반응성인, 옵소닌 항체를 함유하는 과다면역 글로불린 (예, IVIG) 조성물을 환자[예, 면역 저하된 환자 (예, PIDD환자)]에게 제공하여, 환자에서 (예, 폐렴 연쇄상구균 성장을 억제하고/하거나 환자의 혈액으로부터 폐렴 연쇄상구균을 제거함으로써) 폐렴구균 감염을 (치료학적으로 및/또는 예방적으로) 치료하는 것이다. 또한, 본 발명은 폐렴 연쇄상구균에 특이적인 광범위하게 반응성인, 옵소닌 항체를 함유하는 과다면역 글로불린 (예, IVIG) 조성물을 환자[예, 면역 저하된 환자 (예, PIDD환자)]에게 제공하여, 환자에서 폐렴구균 감염을 (예, 환자의 혈액으로부터 폐렴 연쇄상구균 제거를 개선하거나 또는 강화함으로써) 치료한다. 또한, 본 발명은 폐렴 연쇄상구균에 특이적인 광범위하게 반응성인, 옵소닌 항체를 함유하는 과다면역 글로불린(예, IVIG) 조성물을 환자[예, 면역 저하된 환자 (예, PIDD 환자)]에게 제공하여, 통상적인 IVIG 치료로는 예방할 수 없는 환자에서 상기도 감염을 예방한다. 본 발명은 예방되고/되거나 치료되는 상기도 감염의 유형에 의해 한정되지 않으며, 비부비동염 (부비동염), 중이염, 인두염, 후두개염, 후두기관염, 및 후두기관 기관지염을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 마찬가지로, 조성물 및 이를 이용하는 (예, 투여하는) 방법은 상기도 감염의 징후 또는 증상의 예방 및/또는 치료에서 이용되며, 기침, 재채기, 비루, 코막힘, 콧물, 발열, 인후 긁힘 또는 인후통, 및 비강 호흡을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명은 (예, 예방적으로 및/또는 치료학적으로) 치료되는 연쇄상구균 감염(streptococcal infection)의 유형에 의해 한정되지 않는다. 실로, 박테리아의 연쇄상구균 군에 의해 야기되는 임의의 연쇄상구균 감염이 치료될 수 있다. 폐렴 연쇄상구균 [Streptococcus pneumonia (S. pneumonia)] 박테리아의 90종이 넘는 상이한 균주(혈청형으로 공지됨)가 존재하는데, 이들 중 일부는 다른 박테리아보다 더욱 심각한 감염을 야기한다. 폐렴구균 감염의 증상은 감염의 유형에 따라 달라질 수 있다. 통상적인 증상은 다음을 포함한다: 38℃ (100.4F)의 고온(발열), 동통(ache) 및 통증(pain), 및/또는 두통. 폐렴구균 감염은 대개 다음의 두 카테고리 중 하나에 속한다: 주요 장기 또는 혈액의 밖에서 발생하고, 덜 심각해지는 경향이 있는, 비-침습성 폐렴구균 감염(non-invasive pneumococcal infection); 및 주요 장기 또는 혈액의 내부에서 발생하고, 더 심각해지는 경향이 있는 침습성 폐렴구균 감염(invasive pneumococcal infection). 본 발명의 조성물 및 이를 이용하는 방법은 비-침습성 및 칩습성 폐렴구균 감염의 치료(예, 치료학적 및/또는 예방적)에 이용된다.

한 양태에서, 본 발명은 고역가의 옵소닌 항-폐렴구균 항체를 함유하는 풀링된 혈장 샘플[예, 복수의 공여자(예, 하나 이상의 폐렴구균 백신으로 백신 접종된 공여자)로부터 수득된 혈장]을 포함하는 조성물을 획득하는 방법 및 조성물을 제공한다. 따라서, 본 발명의 목적은 고역가의 옵소닌, 항-폐렴구균 항체를 함유하는 조성물(예, 혈액, 혈장, 및/또는 면역 글로불린 조성물)을 생성하는 방법을 제공하는 것이다. 한 양태에서, 한 명 또는 복수의 건강한 성인 인간 대상체 (예, 공지된 의학적 질환을 앓지 않는 인간 대상체)에 폐렴구균 면역원, 재조합 폐렴구균 단백질, 또는 이들의 배합물이 투여된다. 일부 양태에서, 폐렴 연쇄상구균 면역원은 폐렴 연쇄상구균 세포막 당 (예, 다당류)이다. 일부 양태에서, 폐렴 연쇄상구균 면역원은 컨쥬게이트 백신[예, 담체 및/또는 보강제(예, 단백질 또는 다른 담체 분자)에 컨쥬게이트됨]이다. 일부 양태에서, 폐렴 연쇄상구균 면역원은 컨쥬게이트 되지 않은 백신이다. 일부 양태에서, 컨쥬게이트 백신 또는 컨쥬게이트 되지 않은 백신은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 ,17, 18, 19, 20, 21, 22, 23종 이상의 상이한 면역원(예, 폐렴 연쇄상구균의 동일한 수의 상이한 혈청형으로부터)을 함유한다. 일부 양태에서, 폐렴 연쇄상구균의 하나 이상의 상이한 혈청형은 혈청형 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7A, 7B, 7C, 7D, 7E, 7F, 8, 9A-9V, 12, 14, 18C, 19A-19F, 23A-23F, 및 25를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 일부 양태에서, 폐렴 연쇄상구균의 하나 이상의 상이한 혈청형은 90종이 넘는 상이한, 확인된 폐렴 연쇄상구균 혈청형 중 임의의 혈청형으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 폐렴 연쇄상구균의 하나 이상의 상이한 혈청형이 새롭게 확인되었다.

한 명 또는 복수의 인간 대상체 (예, 공지된 의학적 질환을 앓지 않는 인간 대상체)에 시판용 폐렴구균 백신에 존재하는 폐렴구균 면역원, 재조합 폐렴구균 단백질, 또는 이들의 배합물이 투여될 수 있다. 본 발명은 시판용 폐렴구균 백신의 유형에 의해 한정되지 않는다. 실로, 당해 분야에 공지된 임의의 폐렴구균 백신이 사용될 수 있으며, 폐렴구균 컨쥬게이트 백신[PCV 13 또는 프리베나 13(PREVNAR 13), 펜실베니아주, 칼리지빌 소재의 Wyeth Pharmaceuticals], 신플로릭스(SYNFLORIX), 및/또는 폐렴구균 다당류 백신(polysaccharide vaccine) (PPSV23 또는 PNEUMOVAX23, 펜실베니아주, 노스 웨일스 소재의 Merck Sharp & Dohme Corp.)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 한 양태에서, 한 명 또는 복수의 건강한 인간 대상체는 제1의 항-폐렴구균 백신을 이용한 제1 또는 프라임 백신 접종을 받은 후에, 제1의 항-폐렴구균 백신 또는 제2의, 상이한 항-폐렴구균 백신을 이용한 후속적인 부스트 백신 접종을 받는다. 예를 들어, 한 양태에서, 한 명 또는 복수의 건강한 인간 대상체는 제1의 항-폐렴구균 백신(예, 프리베나)을 이용한 제1 또는 프라임 백신접종/면역화를 받은 다음에, 제2의 항-폐렴구균 백신 (예, 뉴모박스23)을 이용한 부스트 백신접종/면역화를 (예, 프라임 백신접종/면역화 후 2주차, 4주차, 6주차, 8주차, 10주차, 12주차 이후에서) 받는다. 순차적인 백신접종 후의 시점(예, 순차적인 백신접종 후 2주차, 4주차, 6주차, 8주차, 10주차, 12주차 이후)에서, 혈청/혈장은 백신 접종된, 건강한 인간 혈장 공여자로부터 수확된다. 백신 접종된 공여자로부터의 혈장은 (서로 및/또는 비-백신 접종된 공여자로부터 수득된 혈장과) 풀링된 후에, 이로부터 수득된 면역 글로불린이 수확될 수 있다. 혈장 및 면역 글로불린을 수확하는 방법은 통상의 기술자에 의해 주지된다.

한 양태에서, 본 발명은 폐렴 연쇄상구균에 대한 고역가의 옵소닌 식작용 항체[예, 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F 중 적어도 약 55% 이상(예, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 이상)에 대한, 대조군 샘플에 존재하는 동일한 혈청형에 대한 옵소닌 식작용 항-폐렴구균-특이적 항체 역가에 비해서, 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 7배, 10배 이상의 역가; 또는 폐렴 연쇄상구균 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 및 23으로부터 선택된 혈청형 중 70% 이상에 특이적인, 대조군 샘플에 존재하는 동일한 폐렴 연쇄상구균 혈청형에 특이적인, 옵소닌 식작용 항체 역가의 2배 이상(예, 3-25배 이상)인 역가; 또는 본원에 기술된 옵소닌 식작용 사멸 검정에 의해 측정된, 1:64 내지 1:8192 사이의 역가(예, 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F 중 적어도 50% 이상(예, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 이상)에 대한)]를 갖는 과다면역 글로불린을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 18-60세의 건강한 성인 인간 혈장 공여자를 프라임 다가 폐렴 연쇄상구균 백신(prime multivalent S. pneumonia vaccine)으로 면역화시킨 후에, 프라임 백신과 상이한 부스트 다가 폐렴 연쇄상구균 백신을 이용하여 면역화시키는 단계; 부스트 면역화 후에, 혈장 공여자로부터 혈장을 수확하는 단계; 백신 접종된 공여자로부터 혈장을 풀링(pooling)하여, 폐렴 연쇄상구균에 대한 고역가의 옵소닌 식작용 항체 역가를 함유하는 풀링된 혈장을 수득하는 단계; 및 풀링된 혈장으로부터 면역 글로불린을 제조하는 단계. 추가의 양태에서, 상기 방법은 수득된 면역 글로불린을 정맥내로 투여 가능하게 만드는 단계를 포함한다. 면역 글로불린은 용액으로 제공될 수 있고/있거나, 상기 용액의 pH 및 이온 강도는 조정되어 이를 정맥내 투여 가능하게 만들 수 있다. 본 발명은 본원에 기술된 방법에 따라 백신 접종된 개체의 수에 의해 한정되지 않는다. 예를 들어, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400명 이상의 건강한 성인 인간 혈장 공여자는 백신 접종될 수 있고, 혈장이 이들 공여자들로부터 수확될 수 있다. 한 양태에서, 풀링된 혈장은 1000명 이상의 상이한 건강한 백신 접종된 성인 인간 혈장 공여자로부터의 풀링 혈장으로부터 제조된다. 한 양태에서, 풀링된 혈장은 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F 중 적어도 약 55% 이상(예, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 이상)에 대한, 대조군 샘플(예, 1000명 이상의 무작위 비-백신 접종된 인간 혈장 공여자로부터 풀링된 혈장, 또는 혈장으로부터 제조된 면역 글로불린)에 존재하는 동일한 혈청형에 대한 옵소닌 식작용 항-폐렴구균-특이적 항체 역가에 비해, 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 7배, 10배 이상인 옵소닌 식작용 항체 역가를 함유한다. 다른 양태에서, 풀링된 혈장은 폐렴 연쇄상구균 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 및 23으로부터 선택된, 혈청형 중 70% 이상에 특이적인, 대조군 샘플(예, 1000명 이상의 무작위 비-백신 접종된 인간 혈장 공여자로부터 풀링된, 혈장 또는 혈장으로부터 제조된 면역 글로불린)에 존재하는 동일한 폐렴 연쇄상구균 혈청형에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가의 2배 이상(예, 3-25배 이상)인 옵소닌 식작용 항체 역가를 함유한다. 또 다른 양태에서, 풀링된 혈장은 1:64 내지 1:8192 [예, 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F 중 적어도 50% 이상(예, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 이상)에 대한]의 옵소닌 식작용 항체 역가를 함유하는데, 이는 본원에 기술된 옵소닌 식작용 사멸 검정에 의해 측정된다. 또한, 본 발명은 상기 기술된 방법에 따라 제조된 과다면역 글로불린을 제공한다. 이렇게 제조된 과다면역 글로불린은 다양한 방법에서 이용될 수 있다. 예를 들어, 과다면역 글로불린은 대상체에서 폐렴 연쇄상구균 감염을 치료하는 방법(예, 과다면역 글로불린의 치료학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함함)에서 이용될 수 있다. 또한, 과다면역 글로불린은 면역요법을 대상체에게 제공하는 방법(예, 대상체에게 과다면역 글로불린의 치료학적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는)에서도 이용될 수 있다.

또한, 본 발명은 한 양태에서, 폐렴 연쇄상구균 감염의 예방 또는 치료를 위한 폐렴 연쇄상구균(예, 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 및 23F)의 적어도 7종의 혈청형에 대한 강화된 옵소닌 살균 활성(opsonophagocytic bactericidal activity)을 갖는 면역 글로불린을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 건강한 성인 인간 혈장 공여자를 다가 폐렴 연쇄상구균 컨쥬게이트 백신을 이용한 일차 면역화로 면역화시킨 후에, 프라임 백신과 상이한 다가 다당류 폐렴 연쇄상구균 백신을 이용한 부스트 면역화로 면역화시키는 단계; 면역화된 혈장 공여자로부터 혈장을 수확 및 풀링하는 단계; 및 풀링된 혈장으로부터 면역 글로불린을 제조하는 단계;를 포함하고, 면역 글로불린은 폐렴 연쇄상구균의 적어도 7종의 혈청형 각각에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가 - 대조군 샘플(예, 1000명 이상의 무작위 비-백신 접종된 인간 혈장 공여자로부터 풀링된 혈장으로부터 제조된 면역 글로불린)에 존재하는 폐렴 연쇄상구균의 적어도 7종의 혈청형 각각에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가의 2배 이상인 - 를 함유한다. 또한, 본 발명은 상기 기술된 방법에 따라 제조된 면역 글로불린을 제공한다. 이렇게 제조된 면역 글로불린은 다양한 방법에서 이용될 수 있다. 예를 들어, 면역 글로불린은 대상체에서 폐렴 연쇄상구균 감염을 치료하는 방법에서 이용될 수 있으며, 이 방법은 면역 글로불린의 치료학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 또한, 면역 글로불린은 면역 요법을 대상체에게 제공하는 방법에서 이용될 수 있으며, 이 방법은 대상체에게 면역 글로불린의 치료학적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 양태의 전개 동안에 수행되는 실험은 IVIG로 치료된 현저한 수의 환자가 보호적인 것으로 간주되는 농도 이하인, 최저의(trough) 항-폐렴 연쇄상구균 항체 농도를 가졌다는 것을 발견했다. 예를 들어, 도 10에서 제시되는, 통상적인 IVIG로 치료된 일차 면역 결핍증을 앓는 환자의 현저한 백분율은 최저의(at though) 보호 수준(1.2㎍/ml 이하) 이하인, 전체 항-폐렴 연쇄상구균 결합 항체의 혈청형-특이적 수준을 가졌다는 것이 측정되었다.

혈청으로부터 분획화 및/또는 분리되고, 정맥내 주입용으로 이용되는 모든 면역 글로불린이 임의의 측정 가능한 IgA를 거의 함유하지 않는데, 이는 점막 표면에서 보호하는 면역 글로불린의 불능(inability)(예, 이로써, 통상적인 IVIG를 받는 면역 결핍 환자에서 증가된 상기도 감염을 초래함)을 설명할 수 있다. 따라서, 메커니즘은 본 발명을 실시하는 데 필요하지 않고, 본 발명은 임의의 특정한 작용의 메커니즘에 한정될 필요가 없으나, 일부 양태에서, 고농도의, 광범위하게 반응성인, 옵소닌 항-폐렴 연쇄상구균 항체를 함유하는 본 발명의 과다면역 글로불린 조성물 (예, 본 발명의 과다면역 글로불린 조성물로 제공됨)은 점막(mucosal membrane) 전체에 걸쳐, 더 높은 농도의 기능성인, 광범위하게 반응성인, 옵소닌 항-폐렴구균 IgG의 구배 확산(gradient diffusion)을 허용함으로써, 점막 보호 및 상기도 감염의 감소된 발생률[예, 고농도의 광범위하게 반응성인, 옵소닌 항-폐렴 연쇄상구균 항체를 갖지 않으므로, 구배가 훨씬 적거나, 또는 구배가 없는 확산이 통상적인 IVIG로 치료된 면역 저하 환자에서 상기도 감염의 높은 발생률을 야기하는, 통상적인 IVIG에 비해서]을 제공한다.

따라서, 본 발명은 본원에 기술된 방법 중 임의의 방법에 따라 제조된 과다면역 글로불린을 제공하며, 이는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 ,17, 18, 19, 20, 21, 22, 23종 이상의 폐렴 연쇄상구균의 상이한 혈청형 (혈청형 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7A, 7B, 7C, 7D, 7E, 7F, 8, 9A-9V, 12, 14, 18C, 19A-19F, 23A-23F, 및 25를 포함하나, 이에 한정되지 않음)에 특이적인 상승된 역가의 옵소닌 항체를 함유한다. 메커니즘을 이해하는 것은 본 발명을 실시하는 데 필요하지 않고, 본 발명은 작용 - 건강한 성인 인간 혈장 공여자의 백신 접종에 사용된, 하나 이상의 백신에 존재하는 모든 혈청형에 대해 광범위하게 반응성인, 옵소닌 IgG의 목적하는 수준 (예, 치료학적 및/또는 예방적 보호 수준)을 제공하는 (예, 임의의 혈청형 내지 혈청형 변이 및/또는 풀링하는 동안의 희석 정도에도 불구하고) 백신 접종된 공여자 혈청의 풀링 - 의 임의의 특정한 메커니즘에 한정되지 않는다. 따라서, 일부 양태에서, 혈청형 특이적 옵소닌 IgG 농도의 임의의 개체별 차이(individual difference)는 혈청을 풀링함으로써 이들 항체의 보호 수준을 절충하지 않고 정규화될 수 있다(normalizing). 혈청으로부터 면역 글로불린의 정제는 임의의 폐렴구균 혈청형 특이적 옵소닌 IgG의 임의의 결손(deficit)을 야기하지 않고, 또한 이의 기능성 활성의 결손을 야기하지도 않는다.

정제된 면역 글로불린의 제조. 한 양태에서, 고역가의 폐렴구균 특이적, 옵소닌 항체를 갖는 정제된 면역 글로불린이 제조된다. 이러한 맥락에서 용어 "고역가(high titer)"는 양이 2배 이상[예, 1000개의 무작위 샘플의 정규 모집단(normal population)에서 발견되는 역가보다 최대 10-20배 이상 더 높음]인 항체의 존재를 의미한다.

혈액 제제는 다음에 의해 제조될 수 있다: (i) 백신 접종되었고(예, 본 발명의 과정을 통해), 고역가의 폐렴구균 특이적, 옵소닌 항체를 갖는 공여자로부터 수득된 면역 글로불린의 선택 및 정제, 또는 (ii) 본 발명의 방법에 따라 백신 접종된 다수의 개체(예, 100, 200, 200-500, 500-1000, 또는 1000명 이상의 대상체)로부터 수득된 공여자 면역 글로불린의 배합.

혈장반출(plasmapheresis)이 백신 접종된 공여자로부터의 혈청/혈장의 수확에 이용될 수 있다. 용어 "혈장반출"은 혈액이 동물로부터 제거되어, 이의 세포 및 혈장 성분으로 분리된 다음에, 세포는 동물로 반환되고, 혈장만 유지되는 기법을 말한다. 큰 부피 혈장 반출(large volume plasmapheresis)은 제거된 혈장이 적합한 유체에 의해 대체되는 것을 필요로 하고, 이것이 수행되는 경우에, 기법은 흔히 혈장 교환(plasma exchange)으로 알려져 있다. 혈장에서 발견되는 임의의 성분은 혈장 교환에 의해 제거될 수 있다. 이 방식으로 추출된 상업적 판매용의 혈장은 본 발명의 바람직한 양태에서 이용 가능하다.

일부 양태에서, 소량의 혈액을 반복적으로 채취함으로써, 예를 들어, 인간으로부터 한 달에 한번 혈액을 채취함으로써, 일관된 공여자 군을 확인 및 유지하는 것이 바람직하다. 채취의 빈도는 안전하게 채취될 수 있는 양에 영향을 미칠 수 있다. 일반적으로, 시간이 경과되는 동안에 공여자의 건강에 손상을 야기하지 않고, 혈액의 최대량을 채취하는 것이 바람직하다. 이는 높은 빈도로 소량을 채취하는 것, 또는 감소된 빈도에서 가능한 최대량을 채취하는 것을 지시할 수 있다. 공여자의 혈액 부피는 질병 통제 센터(Center for Disease Control)로부터 입수 가능한 표준식(standard formula)에 의해 측정될 수 있다. 혈액 및 혈장 채집의 방법은 일반적으로 표준규격이고, 통상의 기술자에게 주지되어 있다. 목적하는 결과를 달성하는 임의의 방법이 이용될 수 있다.

혈장 분리후에, 면역 글로불린 (항체)은 다른 세포 제제로부터 정제될 수 있다. 이는 Cohn 분획화(Cohn fractionation), 이온 교환(ion exchange), 친화도 정제(affinity purification) 등과 같은 면역글로불린 정제의 기술 분야의 통상의 기술자에게 공지된, 다양한 단백질 분리 철자에 의해 달성될 수 있다. 항체를 제조 및 특성화하는 수단은 당해 분야에 주지되어 있다. 예를 들어, 혈청 샘플을 단백질 A 또는 단백질 G 세파로오스 컬럼(sepharose column)에 통과시켜, IgG에 결합시킬 수 있다(이소타입에 따라). 그런 다음에, 결합된 항체는 예를 들어, pH 5.0 시트레이트 완충액으로 용출될 수 있다. Ab들을 함유하는 용출 분획은 등장성 완충액(isotonic buffer)에 대해 투석된다(dialyzing). 대안적으로는, 용출물을 또한 항-면역 글로불린-세파로오스 컬럼에 통과시킨다. 그런 다음에, Ab는 3.5 M 마그네슘 클로라이드로 용출될 수 있다. 그런 다음에, 이런 방식으로 정제된 Ab는 예를 들어, 이소타입-특이적 ELISA 및 표적 세포의 면역 형광 염색 검정(immunofluorescence staining assay)에 의해 결합 활성에 대해서 테스트될 수 있거나, 또는 옵소닌 (옵소닌 식작용) 활성 (예, 본원에 기술된 하나 이상의 옵소닌 사멸 검정을 이용하여)에 대해서 테스트될 수 있다.

한 양태에서, 혈장 샘플이 수확 및 혼합[예, 본원에 기술된 방법에 따라 면역화된 복수의 대상체(예, 100, 200, 200-500, 500-1000, 1000명 이상의 대상체)로부터]되는 경우에, 혼합된 혈장 또는 이로부터 수득된(예, 분리 및/또는 분획화된) 면역 글로불린은 홍역(measles), 디프테리아 및/또는 폴리오에 대한 혈청 방어적 항체 역가(seroprotective antibody titer)를 함유한다[예, 배합된(blended) 혈장 조성물 또는 이로부터 수득된 면역 글로불린이 투여된 대상체에게 홍역, 디프테리아 및 폴리오에 특이적인 항체의 혈청 수준을 제공하여, 이로 인한 감염을 예방하거나, 또는 이로부터 보호하는, 홍역, 디프테리아 및/또는 폴리오에 대한 항체 역가를 함유한다]. 다른 양태에서, 혈장 샘플이 복수의 백신 접종된 대상체로부터 혼합되는 경우에, 혼합된 혈장 또는 이로부터 수득된(예, 분획화된) 면역 글로불린은 홍역, 디프테리아, 폴리오, 및/또는 파상풍(tetanus)에 대한 혈청 방어적 항체 역가를 함유한다[예, 혼합된 혈장 조성물 또는 이로부터 수득된 면역 글로불린이 투여된 대상체에게 홍역, 디프테리아, 폴리오, 및/또는 파상풍에 특이적인 항체의 혈청 수준을 제공하여, 이로 인한 감염을 예방하거나, 또는 이로부터 보호하는, 홍역, 디프테리아, 폴리오, 및/또는 파상풍에 대한 항체 역가(예, 미국 식품 의약국에 의해 권고되는 항체 역가 수준(예, 면역 결핍 대상체에서, 면역 결핍증의 치료 및/또는 감염의 치료 또는 예방을 위한)을 충족시키는)를 함유한다]. 한 양태에서, 혼합된/풀링된 혈장은 1000-3000명 이상(예, 1000, 1250, 1500, 1750, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000명 이상의 인간 대상체)으로부터 수득된 혈장 샘플을 포함한다. 한 양태에서, 풀링된 혈장은 면역 글로불린(예, 대상체로의 정맥내 투여를 위한)의 제조에 사용된다. 한 양태에서, 풀링된 혈장 및/또는 면역 글로불린은 풀링된 혈장 및/또는 면역 글로불린이 투여된 대상체에게 치료학적 이점을 제공하는데, 이는 1000명 이상의 무작위 인간 대상체로부터 수득된 혈장 샘플의 혼합물 (또는 이로부터 제조된 면역 글로불린)의 투여를 통해 달성할 수 없다. 본 발명은 제공되는 치료학적 이점의 유형에 의해 한정되지 않는다. 실로, 본원에 기술된 것[예, 폐렴구균 감염의 치료(예, 상기도 감염)]을 비롯한, 다양한 치료학적 이점이 획득될 수 있다. 한 양태에서, 풀링된 혈장 및/또는 면역 글로불린은 1000명 이상의 무작위 인간 대상체로부터 수득된 혈장 샘플의 혼합물 또는 이로부터 제조된 면역 글로불린에 비해서, 강화된 항-폐렴구균 옵소닌 식작용 특성을 지닌다. 예를 들어, 한 양태에서, 풀링된 혈장은 10종 이상의 상이한 폐렴구균 혈청형(예, 10, 10-20, 20-30종 이상의 혈청형)에 대한 강화된 항-폐렴구균 옵소닌 식작용 특성을 지닌다. 추가 양태에서, 강화된 항-폐렴구균 옵소닌 식작용 특성은 조성물이 투여된 대상체에서 감염을 감소시키고/시키거나 예방하는데, 이는 1000명 이상의 무작위 (예, 비-백신 접종된) 인간 대상체로부터 수득된 혈장 샘플의 혼합물이 투여된 대상체보다 - 이 대상체에서는 달성 불가능한 - 더 긴 기간 동안 가능하다. 한 양태에서, 풀링된 혈장 및/또는 이로부터 제조된 면역 글로불린은 조성물이 투여된 대상체에서 감염의 발생률을 감소시킨다. 다른 양태에서, 풀링된 혈장 및/또는 이로부터 제조된 면역 글로불린은 풀링된 혈장 및/또는 면역 글로불린이 투여되는 대상체에 항생제가 투여(예, 감염의 치료를 위해)되어야 하는 일(day) 수를 감소시킨다. 또 다른 양태에서, 풀링된 혈장 및/또는 이로부터 제조된 면역 글로불린은 대상체에서 순환하는 항-폐렴구균 옵소닌 식작용 항체의 최저 수준을 증가시킨다[예, 한 종 이상의 폐렴구균 혈청형에 특이적인 항-옵소닌 식작용 항체 역가의 수준을 증가시킨다(예, 이로써, 풀링된 혈장 및/또는 이로부터 제조된 면역 글로불린의 예정된 투여 일자들 사이에서, 항-폐렴구균 옵소닌 식작용 항체의 보호 수준 - 1000명 이상의 무작위 인간 대상체로부터 수득된 혈장 샘플의 혼합물 또는 이로부터 제조된 면역 글로불린이 투여된 대상체에서 유지되지 않는 - 을 제공하는)]. 한 양태에서, 풀링된 혈장 샘플을 포함하는 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체[예, 당해 분야에 공지된 임의의 자연적으로 또는 비-자연적으로 존재하는 담체(들)]를 추가로 포함한다. 한 양태에서, 본 발명에 따른 풀링된 혈장으로부터 제조된 면역 글로불린이 투여된 대상체는, 면역 글로불린의 투여 후 적어도 1일 내지 14일의 시점(예, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일 이후)에서, 적어도 2배, 3배, 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배 이상인, 항-폐렴구균 옵소닌 식작용 항체 역가의 평균 배수 증가(mean fold increase)를 보인다. 본 발명은 대상체에게 투여된 면역 글로불린의 양에 의해 한정되지 않는다. 한 양태에서, 대상체에 일회, 또는 2일 이상(예, 2, 3, 4일 이상의 연속일) 동안 매일, 100-5000 mg/kg의 면역 글로불린이 투여된다. 다른 양태에서, 이러한 용량(dose)은 간헐적으로(intermittently) - 예를 들어, 매주마다, 격주마다, 삼주마다, 사주마다 등 - 투여된다. 한 양태에서, 대상체는 1일차에 750-1500 mg/kg의 면역 글로불린이 투여되고, 2일차에 750-1500 mg/kg의 면역 글로불린이 투여된다. 한 양태에서, 대상체는 1일차에 1500 mg/kg의 면역 글로불린이 투여되고, 2일차에 750 mg/kg의 면역 글로불린이 투여된다. 다른 양태에서, 대상체는 일일차에 750 mg/kg의 면역 글로불린이 투여되고, 2일차에 750 mg/kg의 면역 글로불린이 투여된다. 한 양태에서, 대상체는 1일차에 면역 글로불린이 투여되고, 2일차에 면역 글로불린이 투여되거나 투여되지 않은 다음에, 21일마다 면역 글로불린이 재-투여된다. 한 양태에서, 대상체는 1일차에 면역 글로불린이 투여되고, 2일차에 면역 글로불린이 투여되거나 투여되지 않은 다음에, 28일마다 면역 글로불린이 재-투여된다. 한 양태에서, 풀링된 혈장 및/또는 이로부터 제조된 면역 글로불린은 조성물이 투여된 대상체에서 폐렴구균 감염의 발생률을 감소시킨다. 또 다른 양태에서, 대상체에서, 풀링된 혈장 및/또는 이로부터 제조된 면역 글로불린 순환하는 항-폐렴구균 옵소닌 식작용 항체의 최저 수준을 증가시키고, 순환하는 항-홍역, 항-디프테리아, 항-폴리오, 및/또는 항-파상풍 특이적 항체의 최저 수준을 증가시킨다 [예, 홍역, 디프테리아, 폴리오, 및/또는 파상풍 및 폐렴구균 혈청형에 특이적인 항-폐렴구균 옵소닌 식작용 항체 역가의 수준을 증가시킨다(예, 이로써, 1000명 이상의 무작위 인간 대상체(예, 비-백신 접종된 대상체)로부터 수득된 혈장 샘플의 혼합물 또는 이로부터 제조된 면역 글로불린이 투여된 대상체에서 유지되지 않는, 항-폐렴구균 옵소닌 식작용 항체 및 항-홍역, 항-디프테리아, 항-폴리오, 및/또는 항-파상풍 특이적 항체의 보호 수준을 풀링된 혈장 및/또는 이로부터 제조된 면역 글로불린의 예정된 투여 일자들 사이에서 제공한다)].

일부 양태에서, 혈장 및/또는 항체 샘플은 공여되고/되거나 구매된 체액 샘플, 예를 들어, 개별적인 혈액 또는 혈액 성분 샘플(예, 혈장)을 포함한다. 이들 샘플은 정제될 수 있고/있거나 병원체 또는 다른 불순물의 존재에 대해서 (예, 풀링 전 또는 후에) 스크리닝될 수 있다. 다중 공여자 항체 샘플(예, 공여자 혈장 샘플 또는 다른 항체-함유 샘플)은 함께 풀링되어, 풀링된 혈장 샘플을 생성할 수 있다. 일부 양태에서, 풀링된 항체 샘플은 정제, 스크리닝, 및/또는 농축된다. 한 양태에서, 샘플(예, 1000개 이상의 샘플)의 풀링은 가능한 한 적은 수의 샘플(예, 본원에 기술된 조성물 및 방법에 의해 생성됨)을 이용하는 방식으로 수행되나, 목적하는, 표준화된, 및 상승된 수준의 항-폐렴구균 옵소닌 식작용 항체를 여전히 유지한다.

본 발명의 어떤 양태는 면역원성 물질(예, 백신)이 투여된 대상체로부터 수득된 혈장을 사용하여, 대상체내에서 상승된 수준의 항-폐렴구균 옵소닌 식작용 항체를 생성하는데, 이는 본원에서 기술된다. 본 발명은 대상체(예, 공여자)로의 투여에 이용되어, 특정한 항체의 발현을 유도하는 백신 및/또는 항원 (예, 폐렴 연쇄상구균 항원)의 유형에 의해 한정되지 않는다. 일부 양태에서, 항원은 폐렴 연쇄상구균 항원 또는 이의 단편 또는 구성성분이다. 일부 양태에서, 항원은 (예, 담체 또는 단백질에 컨쥬게이트되거나 또는 컨쥬게이트되지 않은) 다당류 또는 복수의 다당류이다. 일부 양태에서, 항원 (예, 폐렴 연쇄상구균 항원)은 특정한 항체(예, 폐렴 연쇄상구균의 다중의, 상이한 혈청형에 특이적인 항체)를 유도할 수 있는 성분을 포함하는 백신이다. 일부 양태에서, 백신은 시판중인 백신이다. 본 발명은 백신에 의해 한정되지 않는다. 실로, 다양한 백신 (예, 폐렴 연쇄상구균 백신)이 사용될 수 있으며, 프리베나, 신플로릭스, 뉴모박스, 및 당해 분야에 공지된 다른 백신을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 마찬가지로, 본 발명은 투여/면역화의 유형 또는 경로에 의해 한정되지 않는다. 실로, 임의의 경로/유형의 면역화가 사용될 수 있고, 미국 특허공보 US 제2008026002호, US 제2007009542호; US 제2002094338호; US 제2005070876호; US 제2002010428호; US 제2009047353호; US 제2008066739호; 및 US 제2002038111호 (각각의 전체 기재내용이 참고로 본원에 포함됨)에 기술된 방법을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 유사한 방식으로, 본 발명은 백신 제형(예, 폐렴 연쇄상구균 백신)에 의해 한정되지 않는다. 실로, 임의의 제형이 사용될 수 있으며, US 제2002107265호(이의 전체 기재내용이 본원에 참고로 포함됨)에 기술된 것을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 일부 양태에서, 백신은 추가의 항원이 추가된 다가 백신이다 (예, 전체 기재내용이 참고로 본원에 포함된, US 제2007161088호; US 제2006121059호를 참고). 일부 양태에서, 항원은 백신(예, 컨쥬게이트 백신)의 사용 전에 정제된다(예, 전체 기재내용이 참고로 본원에 포함되는, US 제2008286838호를 참고). 폐렴구균 컨쥬게이트 백신을 제조하는 방법에 유용한 미생물의 배양방법은 US 제2010290996호에 기술되어 있으며, 이의 전체 기재내용이 참고로 본원에 포함되어 있다. 대안적으로는, 일부 양태에서, 담체 단백질에 컨쥬게이티드 되지 않은 항원 (예, 폐렴 연쇄상구균 항원)이 사용된다(예, 전체 기재내용이 참고로 본원에 포함된, US 제2009136547호를 참고). 일부 양태에서, 면역 조절제(immunomodulator)가 사용된다 (예, US 제2004156857호; US 제5985264호; 및 국제특허공보 WO 제11041691호를 참고, 각각의 문헌은 이의 전체 기재내용이 참고로 본원에 포함됨). 일부 양태에서, 치료학적 항체는 국제특허공보 WO 제05070458호; US 제2009191217호; 및 국제특허공보 WO 제10094720호 - 이들 문헌 각각은 이의 전체 기재내용이 참고로 본원에 포함됨 - 에 기술된 방법에 따라서, 항원(예, 폐렴 연쇄상구균 항원) 및/또는 백신이 투여된 공여자에서 생산된다. 일부 양태에서, 항원 [예, 백신(예, 컨쥬게이트 또는 비-컨쥬게이티드 백신)]이 전염성 질병 유기체(infectious disease organism)에 대해서 유용한 항체(예, 혈청 및/또는 혈장에 존재하는)의 생성에 이용된다 (예를 들어, US 제2003099672호; 국제특허공보 WO 제0062802호에 기술됨, 각 문헌은 이의 전체 기재내용이 참고로 본원에 포함됨).

일부 양태에서, 다당류 백신이 이용된다 [예, 다중 폐렴 연쇄상구균 혈청형을 함유하는(예, 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 2, 3, 4, 5, 6b, 7F, 8,9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19F, 19A, 20, 22F, 23F 및 33F 중 1, 2, 3, 4종 이상 또는 23종 모두로부터의 정제된 다당류를 함유)]. 메커니즘을 이해하는 것은 본 발명의 실시에 필요하지 않고, 본 발명은 작용의 임의의 특정한 메커니즘에 한정되는 것이 아니나, 일부 양태에서, T 세포의 보조 없이 B-세포 (예, 혈장 세포)를 자극하여, 특정한 (예, 폐렴 연쇄상구균-특이적) 면역 글로불린을 생성 및 분비하도록 하는 항원(예, 폐렴 연쇄상구균 항원) 또는 백신이 본 발명에서 이용된다.

일부 양태에서, 담체 및/또는 보강제(예, 디프테리아 독소 CRM197)에 공유결합된 협막 다당류(예, 복수의 폐렴 연쇄상구균 혈청형으로부터)를 함유하는 컨쥬게이트 백신이 사용된다. 메커니즘을 이해하는 것은 본 발명의 실시에 필요하지 않고, 본 발명은 작용의 임의의 특정한 메커니즘에 한정되지 않으나, 일부 양태에서, 특정한 2형 헬퍼 T 세포(specific type 2 helper T cell)와의 상호작용 및/또는 기억 B 세포의 생성(예, 폐렴 연쇄상구균-특이적 기억 B 세포)을 통해, B-세포(예, 혈장 세포)를 자극하여, 특정한 (예, 폐렴 연쇄상구균-특이적) 면역 글로불린 (예, 폐렴 연쇄상구균-특이적 IgM 및/또는 IgG)을 생성 및 분비하도록 하는 임의의 항원 (예, 폐렴 연쇄상구균 항원) 또는 백신이 본 발명에서 이용된다.

따라서, 일부 양태에서, 본 발명은 공여자에서 높은 수준의 옵소닌 식작용 항-폐렴구균 항체를 자극하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항원 조성물(예, 폐렴 연쇄상구균 항원 조성물)의 면역학적 유효량을 포함하는 치료학적으로 허용가능한 조성물을 동물, 예를 들어, 인간에게 투여하는 단계를 포함한다. 조성물은 부분적이거나 또는 상당히 정제된 항원[예, 폐렴 연쇄상구균 항원 (예, 자연적 공급원 또는 재조합 공급원으로부터 수득된 다당류, 단백질 및/또는 펩티드 에피토프; 이는 자연적으로 수득되거나, 또는 화학적으로 합성될 수 있음; 또는 대안적으로는, 이러한 에피토프를 암호화하는 DNA 분절(segment)을 발현하는 재조합 숙주 세포로부터 시험관내에서 생산될 수 있음)]을 포함할 수 있다.

면역화의 효능을 측정하는 방법(예, 폐렴 연쇄상구균-특이적 항체 역가의 수준을 측정하는 것)은 당해 분야에 공지되어 있고, 임의의 공지된 방법이 면역화의 효능을 평가하는 데 이용될 수 있다[예, 옵소닌 식작용 항-폐렴구균 항체를 유도하는 효능(예, 본원에 기술되거나 또는 당해 분야에 공지된 옵소닌 식작용 사멸 검정)]. 일부 양태에서, 백신(예, 폐렴구균 컨쥬게이트 백신)의 효능을 평가하는 검출 방법이 예를 들어, 각각의 전체 기재내용이 참고로 본원에 포함되는, US 제2005260694호; US 제4308026호; US 제4185084호; 또는 US 제2005208608호에서 기술된 대로 이용된다.

일부 양태에서, 특정한 항체 역가(예, 상승된 옵소닌 식작용 항-폐렴구균 항체 역가)를 갖는 샘플 및/또는 풀을 확인하는 키트 및 방법이 제공된다. 한 양태에서, 적합한 양의 검출 시약(예, 당해 분야에 공지된, 항체에 특이적인 항체, 항원, 또는 다른 시약)이 고체 지지체(solid support) 상에 고정되고(immobilizing), 검출 가능한 제제로 표지된다. 항체는 공지된 방법에 의해서 다양한 고체 기판(solid substrate)에 고정될 수 있다. 적합한 고체 지지 기판(solid support substrate)은 스틱(stick), 비드(bead), 컵(cup), 플랫 팩(flat pack), 또는 다른 고체 지지체에 의해 지지되거나, 또는 이에 부착된, 막 또는 코팅을 갖는 물질을 포함한다. 다른 고체 기판은 세포 배양 플레이트, ELISA 플레이트, 튜브, 및 폴리머 막(polymeric membrane)을 포함한다. 항체는 형광색소(fluorochrome), 방사선 표지(radioactive label), 비오틴; 또는 겨자무과산화 효소(Horseradish Peroxidase), 알칼라인 포스파타제(alkaline phosphatase), 및 2-갈락토시다제(2-galactosidase)를 비롯한 다른 효소;와 같은 검출 가능한 제제로 표지될 수 있다. 검출 시약이 효소인 경우에, 검출 시약을 검출하는 수단은 키트와 함께 공급될 수 있다. 검출 가능한 제제를 검출하기 위한 적합한 수단은 검출 가능한 제제로서 효소, 및 이 효소와 접촉하면 색상을 변화시키는 효소 기질을 이용한다. 또한, 키트는 검정의 결과물을 평가하는 수단, 예를 들어, 컬러 차트(color chart), 또는 수치 참조 차트(numerical reference chart)를 포함할 수 있다. 샘플 및 풀을 특성화하는 일부 적합한 방법은 참고로 본원에 포함되는 참고문헌에서 제공된다. 본 발명은 샘플 및 풀을 상승된 역가를 갖는 것으로 특성화하는 데 이용되는 방법에 의해 한정되지 않는다. 또한, 혈장, 면역 글로불린, 및/또는 이들의 풀에서 항-폐렴구균 옵소닌 식작용 항체의 수준을 측정하는 검정이 이용될 수 있다(예, 실시예에 기술됨).

어떤 양태에서, 조성물이 - 조성물 중 항체가 하나 이상의 오염물로부터 정제되고/되거나 분리된 - 제공된다(예, 항체 샘플, 풀링된 혈장 샘플, 면역 글로불린 등). 인간 면역 글로불린은 F. J. Cohn에 의해 1940년대에 처음 대규모로 분리되었다. 일부 양태에서, Cohn에 의해 제공된 기법(Cohn 외, J. Am. Chem. Soc. 1946; 68:459-475; 이의 전체 기재내용이 참고로 본원에 포함됨) 또는 변형된 Cohn-기법이 본원에서 면역 글로불린의 제조에 이용된다. 일부 양태에서, 다양한 정제 및 분리 방법이 이용되어, 실질적으로 변형되지 않은, 변하지 않은, 비-변성되고/되거나 본래의, 고순도의 면역 글로불린 분자를 생산한다. 예시적인 기법은 예를 들어, US 특허 제4,482,483호에 제공되며, 이의 전체 기재내용이 참고로 본원에 포함된다. 일부 양태에서, 조성물 (예, 항체 풀)은 >50%의 면역 글로불린(예, >60%, >70%, >80%, >90%, >95%, >99%)을 포함한다. 다양한 방법이 이러한 조성물의 생산에 이용될 수 있으며, 예를 들어, 표준 단백질 정제 및 분리 기법과 생물학적 유체(예, 혈장)의 분획화를 포함한다. 면역 치료제(immunotherapeutics)에 이용하기 위한 항체의 분획화에 대한 설명은 예를 들어, US 특허 제4,346,073호 및 본원에서 제공되는 다른 참고문헌에서 발견되며, 이러한 문헌 각각은 이들의 전체 기재내용이 참고로 본원에 포함된다. 어떤 양태에서, 면역 글로불린은 분별 침전법(fractional precipitation method), 이온-교환 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피, 한외 여과(ultrafiltration), 친화도 크로마토그래피, 또는 이들의 임의의 적합한 조합에 의해 정제된다 (예, 전체 기재내용이 참고로 본원에 포함된, US 특허 제7,597,891호; US 특허 제4,256,631호; US 특허 제4,305,870호; Lullau외, J. Biol. Chem. 1996; 271:16300-16309; Corthesy, Biochem. Soc. Trans. 1997; 25:471-475; 및 Crottet 외, Biochem. J. 1999; 341:299-306을 참고).

본 발명의 조성물 (예, 풀링된 혈장 및/또는 이로부터 제조된 면역 글로불린)이 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있으며, 비경구적 투여(parenteral administration), 피하(subcutaneous administration), 복강내(intraperitoneal administration), 폐내 (intrapulmonary administration), 및 국소적 치료에 바람직한 경우에, 병소내 투여(intralesional administration)를 포함한다. 비경구적 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 또는 피하 투여를 포함한다. 또한, 본 발명의 조성물은 펄스 주입(pulse infusion)에 의해, 특히 감소하는 용량(declining dose)으로 투여될 수 있다. 투약(dosing)은 임의의 적합한 경로, 예를 들어, 정맥내 또는 피하 주입을 비롯한 주입에 의할 수 있으며, 이는 부분적으로, 투여가 급성(acute)인지 또는 만성(chronic)인지에 대한 여부에 의해 좌우된다.

본 발명의 조성물은 모범 의료행위 지침(good medical practice)과 일치하는 방식으로 제형화, 투약, 및/또는 투여될 수 있다. 이러한 문맥에서의 고려를 위한 요인은 치료된 특정한 질환, 개별적인 환자의 임상적 질환, 질환의 원인, 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 일정, 및 개원의(medical practitioner)에게 공지된 다른 요인을 포함한다. 본 발명의 조성물은 문제의 질환을 예방하거나 또는 치료하는 데 현재 이용되는 하나 이상의 제제로 제형화될 필요는 없지만, 선택적으로 제형화된다. 이러한 다른 제제의 유효량은 제형에 존재하는 항체의 양, 질환 또는 치료의 유형, 및 상기에서 언급된 다른 요인에 의해 좌우된다. 이들은 일반적으로 본원에 기술된 동일한 투여량(dosage) 및 투여 경로, 또는 본원에 기술된 투여량(dosage)의 약 1 내지 99%, 또는 임의의 투여량(dosage) 및 임의의 경로에 의해 이용되는데, 이는 적절한 것으로 경험적(empirically)/임상적으로 결정된다.

질병의 예방 또는 치료를 위해, 본 발명의 조성물의 적절한 투여량(dosage) (단독으로 또는 하나 이상의 다른 추가의 치료제와 병용하여 이용되는 경우)은 치료될 질병의 유형, 항체의 유형, 환자의 크기, 체표면적(body surface area), 나이, 투여될 특정한 화합물, 성별, 투여의 시간 및 경로, 일반 건강(general health), 동시에 투여되고 있는 다른 약물과의 상호 작용, 질병의 중증도 및 과정, 항체가 예방적인 목적으로 투여되는지 또는 치료학적 목적으로 투여되는지에 대한 여부, 이전의 요법, 및 환자의 병력을 포함하는 많은 수의 요인에 의해 좌우될 수 있다.

정확한 투여량(dosage)은 치료될 환자를 고려하여, 개별적인 의사에 의해 결정될 수 있다. 투여량(dosage) 및 투여는 조정되어, 충분한 수준의 활성 모이어티(active moiety) (예, 혈장 풀)를 제공하거나, 또는 목적하는 효과를 유지한다. 고려될 수 있는 추가의 요인은 질병 상태의 중증도; 환자의 나이, 몸무게, 및 성별; 식단, 투여의 시간 및 빈도, 약물 배합(들), 반응 민감성, 및 치료에 대한 내성/반응을 포함한다. 지속성 약제학적 조성물(Long acting pharmaceutical composition)은 3일 내지 4일마다, 매주마다, 또는 2주, 4주, 6주, 8주이상 마다 일회 투여될 수도 있으며, 이는 특정한 제형의 반감기 및 제거 속도(clearance rate)에 의해 좌우된다.

본 발명의 조성물은 환자에게 일회 또는 일련의 치료 동안에 투여될 수 있다. 질병의 유형 및 중등도에 따라서, 본 발명의 조성물 약 1 ㎍/kg 내지 5000 mg/kg (예, 0.5 mg/kg-1500 mg/kg)은, 예를 들어, 일회 이상의 별도의 투여에 의해서든, 또는 연속적인 주입에 의해서든, 환자에게 투여하기 위한 초기의 후보 투여량(initial candidate dosage)일 수 있다. 본원에 기술되는, 추가의 약물 또는 제제[예, 항균제(antimicrobial) (예, 항생제, 항바이러스제, 항진균제 등), 다른 면역 글로불린 조성물(예, 통상적인 IVIG), 항-염증성 및/또는 치유 화합물(healing compound) 등]는 본 발명의 풀링된 혈장 조성물과 동시에 투여될 수 있다. 이러한 제제의 예시적인 일일 투여량(dosage)은 약 1 ㎍/kg 내지 100 mg/kg 이상에 이를 수 있다. 수 일 이상 동안의 반복된 투여의 경우, 질환에 따라서, 질병 증상의 목적하는 억제가 나타날 때까지 치료가 일반적으로 지속될 수 있다. 본 발명의 조성물의 한 예시적인 투여량(dosage)은 약 0.05 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 범위내에 있을 것이다. 따라서, 약 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg 또는 10 mg/kg (또는 이들의 임의의 조합) 중 하나 이상의 용량(dose)이 환자에게 투여될 수 있다. 이러한 용량(dose)은 간헐적으로, 예를 들어, 매주마다 또는 2주 또는 3주마다 투여될 수 있다. 개업의는 본 발명의 조성물의 치료학적 투여를 모니터링하는 것이 용이하게 가능하여, 더 높은 용량(dose)의 조성물이 투여될 것인지, 또는 더 낮은 용량(dose)의 조성물이 투여될 것인지를 결정할 수 있다.

생리 식염수(physiological saline)를 비롯한, 약제학적으로 허용가능한 담체 중 본 발명의 조성물이 환자에게 (예, 정맥내, 경구, 근육내, 피하 등으로) 투여될 수 있다. 이러한 방법은 통상의 기술자에게 주지되어 있다.

따라서, 본 발명의 일부 양태에서 본 발명의 조성물이 환자에게 단독으로, 다른 약물과 배합하여, 또는 부형제(들) 또는 다른 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합된 약제학적 조성물로 투여될 수 있다. 본 발명의 한 양태에서, 약제학적으로 허용가능한 담체는 약제학적으로 비활성(pharmaceutically inert)이다. 치료되는 질환에 따라서, 약제학적 조성물은 제형화될 수 있고, 전신적으로 또는 국소적으로 투여될 수 있다. 제형 및 투여하는 기법은 최신판의 "Remington's Pharmaceutical Sciences" (Mack Publishing Co, Easton Pa.)에서 찾을 수 있다. 적합한 경로는, 예를 들어, 경구 또는 점막흡수(transmucosal) 투여; 및 근육내, 피하, 척수내(intramedullary), 경막내(intrathecal), 심실내(intraventricular), 정맥내, 복강내, 또는 비강내 투여를 비롯한 비경구적 전달;을 포함할 수 있다.

주입의 경우, 본 발명의 조성물이 수성 용액, 바람직하게는 행크액(Hanks' solution), 링거액(Ringer's solution) 또는 생리학적 완충 식염수(physiologically buffered saline)를 비롯한, 생리학적으로 적합한 완충액 중으로 제형화될 수 있다. 조직 또는 세포 투여의 경우, 투과될 특정한 장벽에 적절한 침투제(penetrant)가 제형화에 이용된다. 이러한 침투제는 당해 분야에 일반적으로 공지되어 있다.

다른 양태에서, 본 발명의 조성물(예, 약제학적 조성물)은 경구 투여에 적합한 투여(dosage)의 당해 분야에 주지된 약제학적으로 허용가능한 담체를 이용하여 제형화될 수 있다. 이러한 담체는 약제학적 조성물이 치료될 환자에 의한 경구 섭취(oral ingestion) 또는 비강 섭취(nasal ingestion)용 정제, 환제, 캡슐제, 용액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁제 등으로 제형화되는 것을 가능하게 한다.

본 발명에서 이용하기에 적합한 약제학적 조성물은 활성 성분이 유효량으로 함유되어 의도된 목적을 달성하는 조성물을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 조성물의 유효량은 대상체에서 박테리아의 성장 및/또는 사멸의 저해를 야기하는 양(amount)일 수 있다. 유효량의 결정은 통상의 기술자의 역량내에 충분히 내재되어 있으며, 특히, 본원에 제공된 개시를 고려하는 경우에 그러하다.

활성 성분에 더하여, 약제학적 조성물은 본 발명의 조성물을 약제학적으로 이용될 수 있는 제제로 가공하는 것을 용이하게 하는, 부형제 및 보조제(auxiliary)를 포함하는 적합한 약제학적으로 허용가능한 담체를 함유할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 공지된 방식으로 제조될 수 있다[예, 통상의 혼합, 용해, 과립화, 당제-제조(dragee-making), 연화(levigating), 유화, 캡슐화, 포집(entrapping) 또는 동결건조 공정에 의해].

비경구 투여용의 약제학적 제형은 수용성 형태인 조성물의 수성 용액을 포함한다. 또한, 조성물의 현탁제는 적절한 유질 주입 현탁제(oily injection suspension)로서 제조될 수 있다. 적합한 친유성 용매(lipophilic solvent) 또는 비히클은 참기름을 비롯한 지방유, 또는 에틸 올레이트(ethyl oleate) 또는 트리글리세리드를 비롯한 합성 지방산 에스테르, 또는 리포솜을 포함한다. 수성 주입 현탁제는 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스(sodium carboxymethyl cellulose), 솔비톨, 또는 덱스트란(dextran)을 비롯한, 현탁제의 점성(viscosity)을 증가시키는 물질을 함유할 수 있다. 선택적으로, 현탁제는 적합한 안정화제 또는 조성물의 용해도를 증가시켜 고도로 농축된 용액의 제조를 감안하는 제제를 또한 함유할 수 있다.

약제학적으로 허용가능한 담체에 제형화된 본 발명의 조성물은 제조되어, 적절한 용기에 넣을 수 있고, 명시된 질환의 치료에 대해 라벨을 붙일 수 있다. 라벨에 나타낸 질환은 바이러스 또는 박테리아 감염의 치료 또는 예방을 포함할 수 있다.

약제학적 조성물은 염으로서 제공될 수 있고, 다음과 같은 많은 산으로 제형화될 수 있다: 염산, 황산, 아세트란, 젖산, 타르타르산, 말산, 숙신산 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아님. 염은 수성 용매 또는 대응하는 유리 염기 형태인 다른 양성자성 용매(protonic solvent)에서 더욱 가용성인 경향이 있다. 다른 경우에서, 바람직한 제제는 사용전에 완충액과 배합된, pH 범위가 4.5 내지 5.5인, 1 mM-50 mM 히스티딘, 0.1%-2% 수크로오스, 2%-% 만니톨 중 동결건조된 파우더일 수 있다.

본 발명의 조성물 (예, 항-폐렴구균 과다면역 글로불린)은 추가의 제제[예, 항체, 항체 단편, 항체-유사 분자, 단일클론 항체, 항균제, 다른 면역 글로불린 조성물(예, 통상적인 IVIG), 또는 다른 단밸질 또는 소분자]와 배합되어, 면역 요법 및/또는 항-염증성 효과를 강화할 수 있다. 이러한 추가의 제제는 재조합적으로, 합성적으로, 시험관내에서 등으로 생산될 수 있다. 본 발명은 항-폐렴구균 과다면역 글로불린이 공동-투여되고/되거나 배합되는 추가의 제제의 유형에 의해 한정되지 않는다. 일부 양태에서, 재조합 또는 합성 항체(예, 인간화된 단일클론) 또는 항체 단편(예, 특정한 병원체 또는 항원에 관한)이 공동-투여되고/되거나 추가된다. 또한, 명시된 박테리아 및 바이러스에 대한 항체 (예, 단일클론, 다클론 등)는 공동-투여될 수 있고/있거나 조성물에 추가될 수 있다. 일부 양태에서, 다양한 치료제 (예, 항-염증제, 화학요법제), 안정화제, 완충액 등이 공동-투여되고/거나 항-폐렴구균 과다면역 글로불린에 추가되어, 예를 들어, 효능, 안정성, 투여력(administerability), 작용의 지속, 용도의 범위 등을 더 강화시킨다. 한 양태에서, 항-폐렴구균 과다면역 글로불린은 통상적인 IVIG와 함께 공동-투여된다 [예, 일차 면역 결핍증을 앓는 환자에게 (예, 감염(예, 폐렴 연쇄상구균, 코리네박테리움 디프테리아( Corynebacterium diphtheria), 홍역 바이러스, 및/또는 폴리오 바이러스에 의해 야기되는)을 (예, 예방적 및/또는 치료학적으로) 치료하기 위해)].

조성물은 보존제, 습윤제, 유화제, 및 조제제(dispensing agent)를 비롯한 담체를 함유하거나 또는 함유하지 않는다. 미생물의 작용의 예방은 다양한 항생제 및 진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르빈산(sorbic acid) 등에 의해 보장될 수 있다. 또한, 등장화제, 예를 들어, 당(sugar), 소듐 클로라이드 등을 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 면역 글로불린의 장기적인 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트(aluminum monostearate) 및 젤라틴의 사용에 의해 야기될 수 있다.

일부 양태에서, 본 발명의 항-폐렴구균 과다면역 글로불린은 대상체에게 투여되어, 치료학적 이점, 방지적 이점(preventative benefit), 예방적 이점(prophylactic benefit), 및/또는 다른 이점을 제공한다.

본 발명의 항-폐렴구균 과다면역 글로불린의 투여가 치료학적이거나 또는 예방적으로 이용되는, 질병 및 질환은 다음을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다: 공통 가변성 면역결핍증(common variable immunodeficiency), IgA 결핍증, 인간 면역 결핍증 바이러스 (HIV) 감염, 인플루엔자 기도 감염, 호흡기 세포융합 바이러스(respiratory syncytial virus) 기도 감염, 라이노바이러스(rhinovirus) 기도 감염, 아데노바이러스 기도 감염을 비롯한 세균성 및 바이러스성 감염; 지아디아시스(giadiasis)를 비롯한 원충 감염(protozoan infection); 효모 감염; 만성 림프구 백혈병(chronic lymphocytic leukemia); 다발성 골수증(multiple myeloma); 마크로글로불린혈증(macroglobulinemia); 만성 기관지염(chronic bronchitis); 기관지 확장증(broncliectasis); 천식; 골수이식(bone marrow transplantation) 관련 면역 억제(immune suppression); 사이클로포스파미드 투여(cyclophosphamide administration) 관련 면역 억제; 아자티아프린 투여(azathiaprine administration) 관련 면역 억제; 메토트렉세이트 투여(methotrexate administration) 관련 면역 억제; 클로람부실 투여(chlorambucil administration) 관련 면역 억제; 질소 겨자 투여(nitrogen mustard administration) 관련 면역 억제; 6-머캅토푸린 투여(6-mercaptopurine administration) 관련 면역 억제; 티오구아닌 투여(thioguanine administration) 관련 면역 억제; 중증 합병 면역 결핍증(severe combined immunodeficiency); 아데노신 탈아미노효소 결핍증(adenosine deaminase deficiency); 주조직 적합성 클래스 I (major histocompatibility class I) 결핍증 [베어 백혈구 증후군(Bare leukocyte syndrome)] 및 주조직 적합성 클래스 II 결핍증; 푸린 뉴클레오시드 인산화효소 결핍증(purine nucleoside phosphorylase deficiency); 디조지 증후군(DiGeorge Syndrome); 영아기(infancy)의 일과성 저감마글로불린혈증(transient hypogammaglobulinemia); X-연관 무감마글로불린증(X-linked agammaglobulinemia); 성장 호르몬 결핍증(growth hormone deficiency)으로 인한 X-연관 무감마글로불린혈증(X-linked agammaglobulinemia); 트랜스코발라민 II 결핍증(transcobalamin II deficiency); 흉선종(thymoma)으로 인한 면역 결핍증; 엡스타인 바 바이러스(Epstein Barr virus)에 대한 유전성 결손 반응(hereditary defective response)으로 인한 면역 결핍증; 증가된 IgM으로 인한 면역글로불린 결핍증(immunoglobulin deficiency); P 사슬 결핍증 (P chain deficiency); 모세혈관 확장성 운동실조증(ataxia telangiectasia); 국한성 백색증(partial albinism)으로 인한 면역 결핍증; 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis)으로 인한 후유증(sequelae)과 같은, 선택적 IgA 결핍증(selective IgA deficiency)의 후유증(sequelae); 소아 류머티스 관절염(juvenile rheumatoid arthritis); 전신 홍반 루푸스(systemic lupus erythematosus); 갑상선염(thyroiditis); 악성빈혈(pernicious anemia); 피부근육염(dermatomyositis); 쿰스 양성 용혈성 빈혈(Coomb's positive hemolytic anemia); 특발성 애디슨병(idiopathic Addison's disease); 뇌혈관염(cerebral vasculitis) 및 특발성 혈소판감소성 자반병(idiopathic thrombocytopenic purpura).

일부 양태에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 대상체에게 투여되는 경우에 항-염증적 이점(anti-inflammatory benefit)을 제공한다. 풀링된 면역 글로불린은 수동적으로 투여되는(passively administered) 경우에 항-염증성 작용을 제공하는 것으로 밝혀졌다(예, Nimmerjahn 및 Ravetch, Annu. Rev. Immunol. 2008. 26:513-33.; Ramakrishna 외. Plos Pathogens. 2011. 7:6:e1002071을 참고. 이들의 전체 기재내용은 참고로 본원에 포함됨). 일부 양태에서, 본 발명의 항-폐렴구균 과다면역 글로불린은 무작위 인간 대상체(예, 1000명 이상의 무작위 인간 대상체)로부터 수득된 혈장 샘플 혼합물의 항-염증성 효과에 비해서, 강화된 항-염증성 효과 [예, 10% 증강(enhancement), 20% 증강, 50% 증강, 2배 증강, 3배 증강, 5배 증강, 10배 증강 이상]를 발휘한다. 메커니즘을 이해하는 것이 본 발명의 실시에 필수적이지 않고, 본 발명이 임의의 특정한 메커니즘에 한정되는 것은 아니나, 한 양태에서, 본 발명의 항-폐렴구균 과다면역 글로불린은 통상적인 IVIG에 비해서 현저히 강화된 항-염증성 효과를 보이는데, 이는 본 발명의 풀링된 혈장 조성물이 적어도 1000명의 공여자로부터 수득된 혈장을 포함하기 때문이다[예, 한정된 수의 공여자로부터 제조된 통상적인 과다면역 글로불린에 비해 (예, 한 양태에서, 상이한, 풀링된 혈장 샘플의 수가 더 많을수록, 더 이로운 항-염증성 효과(예, 더 큰 병리조직학적(histopathological) 이점(예, 상피세포 사멸의 감소))가 관찰된다)].

본 발명의 일부 양태에서, 본 발명의 조성물은 단독으로 투여되는 반면에, 다른 양태에서, 조성물은 고체 지지체와 함께, 또는 대안적으로는 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께, 및 선택적으로는 다른 치료제와 함께 적어도 하나의 활성성분/활성제 - 상기에 정의됨 - 를 포함하는, 약제학적 제형에 바람직하게 존재한다. 각 담체는 제형의 다른 성분과 적합하고, 대상체에게 해롭지 않다는 점에서 "허용가능한-"것이어야 한다.

한 양태에서, 본원에 제공되는 항-폐렴구균 과다면역 글로불린은 하나 이상의 생물학적 활성제를 더 포함한다. 본 발명은 생물학적 활성제/물질의 유형에 한정되지 않는다. 실로, 다양한 생물학적 활성제/물질이 이용될 수 있으며, 다음을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다: 항체, 항-독소 물질(anti-toxin material), 항-염증제, 항-암제, 항균제, 치료제, 항-히스타민제(anti-histamine), 사이토카인, 케모카인, 비타민, 미네랄 등. 한 양태에서, 생물학적 활성제는 항-독소제(anti-toxin agent)이다. 한 양태에서, 항-독소제는 바이러스 독소, 박테리아 독소 또는 진균 독소(fungal toxin)에 대한 특이성을 갖는, 단일-특이적 항체(mono-specific antibody), 이중-특이적 항체 (bi-specific antibody), 또는 다중-특이적 항체(multi-specific antibody)이다. 추가의 양태에서, 박테리아 또는 진균 독소는 보툴리눔 신경독소( Botulinum neurotoxin), 파상풍 독소(Tetanus toxin), 대장균 독소(E. coli toxin), 클로스트리듐 디피실리균 독소(Clostridium difficile toxin), 비브리오 RTX 독소 (Vibrio RTX toxin), 포도상구균 독소(Staphylococcal toxin), 남세균 독소(Cyanobacteria toxin), 및 곰팡이 독소(mycotoxin)로부터 선택된다. 다른 양태에서, 면역요법 조성물은 단일 또는 다중 특이성을 갖는 단일 또는 다중의 단일클론 항체의 분취물을 더 포함한다 [예, 면역원성 조성물은 하나 이상의 항체 또는 생물학적 활성 물질(예, 임의의 특이성의 단일클론 항체, 항-독소제 등)로 스파이킹(spiking)될 수 있다]. 본 발명은 면역원성 조성물에 추가된(예, 스파이킹된) 하나 이상의 항체의 유형에 의해 한정되지 않는다. 실로, 임의의 하나 이상의 항체(예, 병원체 또는 병원체 산물에 특이적인)가 이용될 수 있는데, 당해 분야에 공지된, 표준 항체, 이중-특이적 항체, 다중-특이적 항체 등(예, 하나 또는 다수의 항원에 특이적임)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명은 본 발명의 조성물 및 방법으로 치료된 대상체의 유형에 의해 한정되지 않는다. 실로, 다양한 대상체가 이렇게 치료될 수 있으며, 감염을 발달시킬 위험에 처한 대상체를 포함하나 [예, 상기도 감염 또는 다른 유형의 감염(예, 이로써, 감염의 상승된 위험을 갖는 대상체에서 감염을 발달시킬 위험을 감소시킴)] 이에 한정되는 것은 아니다. 한 양태에서, 본 발명의 조성물로 치료되는 대상체는 일차 면역 결핍증 (PIDD)을 앓거나, 또는 이를 앓는 것으로 진단된다. 다른 양태에서, 대상체는 말기 신장병(end stage renal disease, ESRD) 환자; 면역억제성 요법(immunosuppressive therapy)중인 암환자, AIDS 환자, 당뇨병 환자(diabetic patient), 신생아(neonate), 이식 환자(transplant patient), 면역억제 요법(immunosuppression therapy)중인 환자, PIDD 및 다른 면역 결핍증을 앓는 환자, 기능부전 면역계(malfunctioning immune system)를 갖는 환자, 자가면역 질병 환자, 장기 요양 시설(extended care facility)에 있는 노인, 면역억제성 요법중인 자가면역 질병을 앓는 환자, 이식 환자, 침습성 외과적 처치(invasive surgical procedure)를 받은 환자, 화상 환자, 또는 급성 의료기관(acute care setting)에 있는 다른 환자이다.

[실험]

다음 실시예들이 제공되어 본 발명의 어떤 바람직한 양태 및 측면을 입증하며, 이를 추가로 설명하나, 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.

[ 실시예 1]

과다면역 혈장 공여자의 발생, 이로부터 제조된 과다면역 혈청 및 면역 글로불린

광범위한 폐렴구균 혈청형에 대한 과다면역 혈장/혈청을 지니는 과다면역 혈장 공여자를 발생시키려는 노력의 일환으로, 본 발명의 양태를 전개하는 동안, 실험을 수행하였다. 이들 실험의 비-제한적인 예시가 아래에 제공된다.

18-45세의 건강한 인간 (남성 및 여성) 대상체를 면역화를 위해 선별했다. 특히, 각 대상체는 연구에 참가하고, 백신 접종된 인간 혈장 공여자로서 역할하기 위해, 임의의 공지된 의학적 질환이 없어야 했다.

각 연구 참가자는 다음의 백신접종 요법으로 투여되었다: 0일차에서, 프리베나 (PCV13)의 일차 백신접종/용량(dose) (제조사의 지시에 따라, 0.5 mL를 근육내로 주입), 이후 4주차에서 뉴모박스23의 이차 백신접종 (제조사의 지시에 따라 0.5 mL를 근육내로 주입). 다음의 시점에서 각 참가자로부터 혈액을 채취하였다(10 mL): 일차 프리베나 백신접종 직전, 4주차에서 이차 뉴모박스23 백신접종 직전, 8주차, 10주차, 12주차 및 16주차. 혈청 샘플을 각 혈액 샘플로부터 제조하여, 분취했고, -70^oC ± 10^oC에서 보관하였다. 이 혈청 샘플을 이용하여 다양한 연구 (예, 아래에 기술됨)를 수행하였다.

혈청형 특이적 항-폐렴구균 다당류(polysaccharide, PS) 항체의 정량 ( IgG 테스트). 폐렴구균 혈청형 (serotype, ST) 특이적 IgG를 이전에 기술된 방법을 채택하여 정량했다(예, Lai 외, 2005 J Immunolo Meth 296: 135-147을 참고). 간단히 말해서, 스펙트럼이 분명한 루미넥스 비드(spectrally distinct luminex bead)를 ATCC로부터 수득된 폐렴구균 (pneumococcal, Pnc) ST 특이적 협막 다당류 (PS)에 컨쥬게이트시켰다(conjugating). 테스트 혈청 샘플을 PS 컨쥬게이트 비드와 공동-혼합하였고, ST 특이적 IgG를 인간 참조 혈청(human reference serum)인, 89SF로 정량했다. 혈청 샘플 중 혈청형 특이적 농도를 ㎍/mL로 표현했다.

옵소닌 식작용 사멸 검정(Opsonophagocytic Killing Assay, OPK). 혈청 샘플 중 기능성 항체 농도 (역가)를 이전에 기술된 방법을 채택하여 테스트했다 (예, Romero-Steiner외, 1997 Clin Diagn Lab Immunol. Jul;4(4):415-22를 참고). 간단히 말해서, 다형핵 (polymorphonuclear, PMN) 계대(lineage)로 분화된 HL-60 세포[인간 전골수 백혈구(human promyelocytic leukocyte)]를 이펙터 세포로 이용했다. 살아 있는 폐렴 연쇄상구균 혈청형 특이적 균주를 표적으로 이용했고, 새끼 토끼 보체(baby rabbit complement) (아칸소주, 로저스 소재의 PELFREEZE, Inc)를 옵소닌 식작용 사멸을 위한 보체 공급원으로 이용했다. 4±2°C에 보관된 시약을 검정을 수행하기 전에 실온에 두었다. 젤라틴과 HBSS (+) 10㎕ - 이하, 검정 완충액(assay buffer)으로 공지 - 를 A행을 제외한, 96웰 플레이트의 각 웰에 추가했다. 20㎕의 희석되지 않은 품질 대조 혈청(quality control serum)을 A1 내지 A3 웰에 추가했다. 20㎕의 희석된 샘플 물질을 A4 - A12 웰에 추가했다. QC 혈청과 알려지지 않은 샘플을 1:2로 연속 희석했다. 보체 대조군 웰 및 세포 대조군 웰은 이 시점에서 10㎕의 검정 완충액을 갖는다.

실시 폐렴 연쇄상구균 박테리아 현탁액을 20㎕ 당 8.0 x 105 콜로니의 농도로 희석시켰다. 20㎕의 박테리아 현탁액을 대조군 웰을 비롯해, 플레이트의 각 웰에 추가했다. 플레이트를 30분 동안 실온에서 200rpm으로 설정된 플레이트 교반기(plate shaker)상에서 배양시켰다. 10㎕의 동결된 새끼 토끼 보체를 세포 대조군을 제외한 모든 웰에 추가했다. 세포 대조군 자리에 10㎕의 검정 완충액을 추가했다. 플레이트를 15분 동안 실온에서 200rpm으로 설정된 플레이트 교반기상에서 배양시켰다. 40㎕의 분화된 HL60 PMN을 플레이트의 모든 웰에 추가했다. 웰 당 100,000개의 세포가 추가되도록, 세포의 농도를 측정했다. 플레이트를 30분 동안 실온에서 200rpm으로 설정된 플레이트 교반기상에서 배양시켰다.

다채널 피펫(multichannel pipet)을 이용하여, 행의 각 웰로부터의 5㎕를 초콜릿 한천(Chocolate Agar)을 함유하는 150x15mm 페트리 접시에 동시에 추가했다. 이 접시를 기울여서 샘플 부피가 한천 플레이트에서 평행하는 행으로 흐르게 했다(running down). 접시를 37°C에서, 5% CO₂에서 밤새 배양시켰다. 다음날, 플레이트를 촬영했고, 콜로니 형성 유닛(colony forming unit, CFU)을 계수했다. 박테리아 사멸은 웰에서의 백분율 사멸(percent kill) (웰 당 CFU/평균 보체 대조군 CFU * 100)로 계산되었다. 보체 대조군에 비해서, 표적 박테리움의 >50% 사멸을 갖는 희석의 역수(reciprocal of dilution)가 OPK 역가로서 보고되었다. 첫번째 희석이 1:8이었기 때문에, 역가가 존재하지 않는 혈청 샘플은 계산을 목적으로 1:4로 보고되었다.

[ 실시예 2]

면역화된 개체에서의 폐렴구균 혈청형 특이적 전체 및 기능성 항체 반응의 확인 및 특성화

개별적인 혈청 샘플을 상이한 시점(일차 프리베나 백신접종 직전, 이차 뉴모박스 23 백신접종 직전 4주차, 8주차, 10주차, 12주차 및 16주차)에서 연구 참가자로부터 채취했다. 혈청을 폐렴구균 (Pnc) 혈청형 (ST) 특이적 IgG 농도에 대해서 분석했다 (상기 실시예 1에서의 IgG 테스트를 참고). 개별적인 혈청 샘플에 더하여, 풀링된 혈청을 12주 전후에서, 각 참가자로부터 수득된 동일한 양의 혈청을 풀링함으로써 생성했고, 또한, 풀링된 혈청 샘플을 특성화하여 풀링의 효과를 IgG 테스트 결과로 평가했다. 추가적으로, 개별적인 혈청 샘플과 풀링된 혈청 샘플 모두를 실시예 1에서 기술된 옵소닌 식작용 사멸 검정(OPK)을 이용하여 기능성 항체 반응에 대해서 테스트했다.

폐렴구균 혈청형 특이적 IgG 농도/ 역가. 프리베나-뉴모박스 23으로 프라임-부스트 면역화된 각 개체(n=10)로부터의 혈청 샘플을 Pnc ST 특이적 IgG에 대해서 검정했다. Pnc ST 특이적 IgG 역가는 도 1에서 제시된다. 공여자간 및 ST간 편차(variation)가 혈청 샘플에서의 IgG 반응에 대해서 기록되었다. 9명/10명의 공여자가 Pnc ST에 대한 강인한(robust) IgG 반응을 시작(mounting)하는 것으로 보였으나, ST 특이적 반응의 차이가 존재한다. 공여자 중에서, 7명/10명은 뉴모박스23 백신접종 후 4주차(프라임 백신접종 8주 후, 뉴모박스23 부스트 반응)에서 피크 IgG 농도를 가졌는데, 이후에 심지어 12주차에서도 기초선의 수 배를 초과하여 유지되는 점진적인 하락을 보였다. 이러한 편차에도 불구하고, 모든 공여자들은 면역의 보호 수준 (>0.2 ㎍/mL)을 초과하는 Pnc ST 특이적 IgG 농도를 입증했다 (예, Balmer 외, Clin Exp Immunol. 2003 Sep;133(3):364-9를 참고). 풀링된 혈청 중 IgG 농도는 기초선(pre)으로부터 연구 기간의 말(12주)에서 IgG 농도의 2.2 - 30배의 증가를 나타냈다. 이들 중에서, IgG 반응의 최대 증가는 혈청형 ST 1에 대해서 기록되었고, 이어서 혈청형 ST23F 및 ST 4 순이었다. 혈청형 ST19A는 IgG 농도의 최소의 배수 증가(2.2 배)를 보였고, 이어서 ST 3 (2.6 배) 및 ST14 (3.2 배) 순이었다.

기능성/ 옵소닌 항체 역가 ( OPK). 도 2는 다양한 Pnc ST에 특이적인 공여자 혈청 중 OPK 역가에 상관된 데이터를 나타낸다. 기초선 OPK 역가는 IgG 농도를 따른다(taging along). 기능성 항체 역가의 배수 증가는 4-256배에 이르렀다(도 2를 참고). 놀랍게도, IgG의 총량(예, 도 1에서 제시됨)이 기능성, 옵소닌 항체의 총량과 상관관계에 있지 않았다는 것이 발견되었다. 예를 들어, 혈청형 ST14는 전체 IgG 역가의 보통의(modest) 증가(3.2배, 도 1을 참고)만 가졌다. 그러나, 이는 기초선에 대해 256배인 기능성 반응(옵소닌 항체 역가)의 가장 큰 증가를 가졌다.

[ 실시예 3]

풀링된 인간 혈청 중 전체 및 기능성 폐렴구균 혈청형 항체의 정량

백신 접종된 인간 혈장 공여자 (n=34) 혈청 샘플을 백신접종 1개월 전 내지 백신접종 5개월 후 사이에서, 1개월 간격으로 채취하였다. 이들 6번의 시점에서 혈청 샘플을 풀링했고, Pnc ST 특이적 IgG 농도(IgG 테스트), 및 기능성 항체에 대해서 상기 실시예 1에 기술된 OPK를 이용하여 분석했다. 백신접종 전의 기초선에 대한 항체 농도(혈청형 특이적 IgG 및 OPK) 및 배수 증가를 측정했다.

백신 접종된(프리베나-뉴모박스23으로 프라임 - 부스트 면역화됨) 개체로부터 수득된 혈청 샘플을 백신접종 1개월 전 내지 백신접종 5개월 후 사이에서, 각각 1개월 간격으로 풀링했고, 각 시점에서의 풀링된 혈청을 Pnc ST 특이적 IgG에 대해서 분석했다. 각 시점에서 채취된 풀링된 공여자 혈청 중 Pnc ST 특이적 IgG 역가는 도 3에서 제시된다. 면역 후 풀링된 혈청 중 평균 IgG 농도는 4.4 - 37.59 ㎍/mL에 이르렀다. 12주차 종료점(end point)에 비교된 전체 IgG 농도의 감소는 부스트 백신접종 후 4주차에서 급등(spike)이 관찰된 후에 시간에 따라 IgG 농도의 감소를 야기하는 IgG 수준의 점진적 하락으로 인한 것일 수도 있다. 그럼에도 불구하고, 기초선에 대한 IgG 농도의 배수 증가(도 4를 참고)는 ST1, ST23F, 및 ST4에 대한 더 높은 반응을 수반하는 도 1에서 제시된 패턴과 비슷한 패턴을 나타냈다.

OPK. 다양한 Pnc ST에 특이적인 풀링된 공여자 혈청 중 OPK 역가가 도 5에 제시된다. 면역화 후 평균 OPK 역가(Average post immunization OPK titer)가 ST1에 대해서 예외적으로 높은(36044) 반면에, 다른 ST 모두는 최소 열배는 낮은 역가(a log lower titer)를 가졌다. 12주차에서 테스트된 개별적인 혈청 샘플에서 높은 OPK 역가가 기록되었으나(도 2를 참고), 역가가 다른 혈청형의 역가보다 열배 높은(a log higher)것은 아니었다.

[ 실시예 4]

정제된 인간 IgG에서의 전체 및 기능성 폐렴구균 혈청형 항체의 확인 및 특성화

상이한 시점에서 연구 참가자(n=34)로부터 채취된 혈청 샘플을 각각의 개별적인 시점(pre, 4, 8, 10, 12, 16, 및 5개월차)에서 풀링했고, IgG를 풀링된 샘플로부터 표준 단백질 A 면역흡착 컬럼(standard protein A immunosorbent column)을 이용하여 정제했다. 정제된 IgG를 Pnc ST 특이적 IgG 농도에 대해서 (IgG 테스트) 및 기능성 항체에 대해서 실시예 1에서 기술된 OPK를 이용하여 분석했다. 항체 농도(혈청형 특이적 IgG) 및 기능성 항체 역가 (OPK)를 특성화했다. 추가적으로, 결과의 특성화를 수행해서, 개별적인 결과의 회귀 분석에 기초하여 시험관내 및 탈체 (ex vivo ) 기법 사이의 관계를 이해했다.

폐렴구균 혈청형 특이적 IgG 농도. 프리베나-뉴모박스23을 이용한 프라임 - 부스트 면역화 요법으로 백신 접종된 개체로부터 수득된 혈청 샘플을 백신접종 1개월전 내지 백신접종 후 5개월까지, 1개월 간격으로 풀링했고, 각 시점에서 풀링된 혈청 및 IgG를 정제했다. 풀링된 혈청은 Pnc ST 특이적 IgG에 대해서 분석했다. 풀링된 혈청 중 Pnc ST 특이적 IgG는 도 6에서 제시된다. 면역화 후 풀링된 혈청 중 평균 IgG 농도는 3.2 - 23.3 ㎍/mL에 이르렀는데, 이는 시간에 따른 IgG 농도의 감소를 야기했다. 그럼에도 불구하고, 기초선에 대한 IgG 농도의 배수 증가(도 4를 참고)는 ST1, ST23F 및 ST4에 대한 더 높은 반응을 수반하는, 도 1에서 제시된 패턴과 유사한 패턴을 나타냈다.

OPK : 다양한 Pnc ST에 특이적인 풀링된 공여자 혈청 중 OPK 역가가 도 7에서 제시된다. 면역화 후 평균 OPK 역가는 213 - 5826.7에 이르렀는데, ST7F (5826.7)에 대한 역가가 가장 높았고, ST23F (4778.7)와 ST5 (4096)가 그 다음으로 높았다.

[ 실시예 5]

백신 접종된 공여자로부터 풀링된 인간 혈청에 존재하는 OPK 혈청형 역가 대(versus) 통상의, 시판중인 IVIG에 존재하는 OPK 혈청형 역가의 비교

OPK 검정. 상기 실시예 1에서 기술된 OPK 검정을 이용했다. 간단히 말해서, 4±2°C에 보관된 시약을 검정을 수행하기 전에 실온에 두었다. 젤라틴과 HBSS (+) 10㎕ - 이하, 검정 완충액으로 공지 - 를 A행을 제외한, 96웰 플레이트의 각 웰에 추가했다. 20㎕의 희석되지 않은 품질 대조 혈청(quality control serum)을 A1 내지 A3 웰에 추가했다. 20㎕의 희석된 샘플 물질을 A4 - A12 웰에 추가했다. QC 혈청과 알려지지 않은 샘플을 1:2로 연속 희석했다. 보체 대조군 웰 및 세포 대조군 웰은 이 시점에서 10㎕의 검정 완충액을 갖는다.

실시 폐렴 연쇄상구균 박테리아 현탁액을 20㎕ 당 8.0 x 105 콜로니의 농도로 희석시켰다. 20㎕의 박테리아 현탁액을 대조군 웰을 비롯해, 플레이트의 각 웰에 추가했다. 플레이트를 30분 동안 실온에서 200rpm으로 설정된 플레이트 교반기(plate shaker)상에서 배양시켰다. 10㎕의 동결된 새끼 토끼 보체를 세포 대조군을 제외한 모든 웰에 추가했다. 세포 대조군 자리에 10㎕의 검정 완충액을 추가했다. 플레이트를 15분 동안 실온에서 200rpm으로 설정된 플레이트 교반기상에서 배양시켰다. 40㎕의 분화된 HL60 PMN을 플레이트의 모든 웰에 추가했다. 웰 당 100,000개의 세포가 추가되도록, 세포의 농도를 측정했다. 플레이트를 30분 동안 실온에서 200rpm으로 설정된 플레이트 교반기상에서 배양시켰다.

다채널 피펫(multichannel pipet)을 이용하여, 행의 각 웰로부터 수득된 5㎕를 초콜릿 한천(Chocolate Agar)을 함유하는 150x15mm 페트리 접시에 동시에 추가했다. 이 접시를 기울여서 샘플 부피가 한천 플레이트에, 평행하는 행으로 흐르게 했다. 접시를 37°C에서, 5% CO₂에서 밤새 배양시켰다. 다음날, 플레이트를 촬영했고, 콜로니 형성 유닛(colony forming unit, CFU)을 계수했다. 박테리아 사멸은 웰에서의 백분율 사멸(percent kill)로 계산되었다 (웰 당 CFU/평균 보체 대조군 CFU * 100).

도 8은 백신 접종된 공여자로부터 수득된 풀링된 인간 혈청에 존재하는 기능성/옵소닌 항체의 OPK 혈청형 특이적 역가 대(versus) 9종의 무작위 및 상이한, 통상의, 시판중인 IVIG에 존재하는 기능성/옵소닌 항체의 OPK 혈청형 특이적 역가의 비교를 나타낸다. 각 열은 단일의, 고유한 폐렴 연쇄상구균 혈청형을 나타낸다. 각 행은 고유한 샘플을 나타낸다. 샘플 A-I는 통상의, 시판중인 IVIG를 나타낸다.

도 8에서 제시되는, 혈청형 특이적 옵소닌 역가의 확연한 가변성(variability)이 IVIG의 시판용 로트에서 발견되었다. 한 혈청형에 대한 고조된 역가는 임의의 다른 혈청형에 대한 고조된 역가를 예측하지 않았거나, 또는 이와 상관관계에 있지 않았다는 것이 추가로 발견되었는데, 이는 개별적인 고조된 반응이 폐렴 연쇄상구균에 대한 일반적인 강화된 면역 반응을 반영하지 않았고, 오히려 매우 특이적인 혈청형에 대한 산발적인 강화된 반응(들) [sporadic enhanced response(s)]을 반영했다는 것을 시사한다. 뚜렷하게 대조적으로, 면역화된 공여자로부터 수득된 면역 글로불린을 이용하여 관측된 옵소닌 항체 역가는 예외 없이 모든 혈청형에 대해서 강화되는 것으로 나타났다. 추가적으로, 면역 글로불린의 시판용 로트에 비해서, 면역화된 공여자로부터 수득된 면역 글로불린 중 옵소닌 항-폐렴구균 항체 역가의 3-256배의 증가가 존재했다. 따라서, 일부 양태에서, 상승된 옵소닌 항-폐렴구균 항체 역가를 함유하는 조성물(예, 혈액, 혈장, 및/또는 면역 글로불린 조성물)을 생성하는 본 발명의 방법 및 조성물은 모든 다중 폐렴구균 형철형(예, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15종 이상의 혈청형)에 특이적인 옵소닌 항-폐렴구균 항체 역가 및/또는 통상의, 시판중인 면역 글로불린에 비해서 현저히 상승된 옵소닌 항체 역가(예, 즉, 2x, 3x, 4x, 5x, 6x, 7x, 8x, 9x, 10x 이상의 옵소닌 항체 역가)를 포함하는 이질적인 조성물을 제공한다.

Claims (17)

1. 폐렴 연쇄상구균 혈청형(Streptococcus pneumonia serotype) 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F로부터 선택된, 50% 이상의 혈청형에 대해 옵소닌 식작용 항체 역가들(opsonophagocytic antibody titers)를 갖는 면역 글로불린의 제조방법으로서, 상기 방법은 하기 단계를 포함하는 것인, 면역 글로불린의 제조방법:
   (a) 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F로부터 선택된, 50% 이상의 혈청형에 대해 적어도 1:256의 옵소닌 식작용 항체 역가를 함유하는 풀링된 혈장을 수득하기 위해 백신 접종된 공여자들로부터 수확된 혈장을 풀링(pooling)하는 단계로서,
   상기 백신 접종된 공여자들은 다가 폐렴 연쇄상구균 컨쥬게이트 백신(multivalent S. pneumonia conjugated vaccine)을 이용한 일차 면역화(primary immunization)로 면역화된 후에, 일차 백신과 상이한 다가 폐렴 연쇄상구균 다당류 백신(polysaccharide vaccine)을 이용한 부스터 면역화(booster immunization)로 면역화된 18-60세의 건강한 성인 인간 혈장 공여자들이며, 상기 풀링은 상기 부스터 면역화 후 5개월 이내에 수행되고;
   이때, 상기 다가 폐렴 연쇄상구균 컨쥬게이트 백신은 디프테리아 독소의 비독성 변이체인 CRM197에 컨쥬게이트된 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 19A, 19F, 18C, 및 23F의 정제된 협막 다당류를 포함하고;
   상기 다가 폐렴 연쇄상구균 다당류 백신은 하기 23종의 폐렴구균 박테리아: 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19F, 19A, 20, 22F, 23F, 및 33F로부터 수득된 다당류 항원을 함유하고;
   상기 옵소닌 식작용 항체 역가 각각은 대조군 샘플에 존재하는 각 폐렴 연쇄상구균 혈청형에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가의 3배 이상이되, 상기 대조군 샘플은 비-백신 접종된 500명 이상의 무작위 인간 혈장 공여자로부터 풀링된 혈장으로부터 제조된 면역 글로불린인 것인, 단계; 및
   (b) 상기 단계 (a)에 따라 풀링된 혈장으로부터 면역 글로불린을 제조하는 단계.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 방법은 (c) 상기 단계 (b)에 따라 수득된 면역 글로불린을 정맥내로 주입 가능하게(intravenously injectable) 만드는 단계(rendering)를 더 포함하는 것인, 면역 글로불린의 제조방법.
   
3. 제2항에 있어서,
   상기 면역 글로불린은 용액으로 제공되고, 상기 용액의 pH 및 이온 강도가 조정되어 이를 정맥내로 주입 가능하게 만드는 것인, 면역 글로불린의 제조방법.
   
4. 삭제
5. 제1항에 기재된 방법에 따라 제조된 면역 글로불린.
   
6. 제1항에 기재된 방법에 따라 제조된 면역 글로불린의 치료학적 유효랑을 포함하는, 대상체에서 폐렴 연쇄상구균 감염을 치료하기 위한 약제학적 조성물.
   
7. 제1항에 기재된 방법에 따라 제조된 면역 글로불린의 치료학적 유효량을 포함하는, 대상체에서 폐렴 연쇄상구균 감염을 치료하기 위한 약제학적 조성물로서, 상기 약제학적 조성물은 면역요법을 제공하기 위해 사용되는 것인, 약제학적 조성물.
   
8. 폐렴 연쇄상구균 감염의 예방 또는 치료를 위한, 폐렴 연쇄상구균의 적어도 7종의 혈청형에 대해 강화된 옵소닌 식작용 살균 활성(opsonophagocytic bactericidal activity)을 갖는 면역 글로불린의 제조방법으로서, 상기 방법은,
   (a) 면역화된 혈장 공여자로부터 수확된 혈장을 풀링하는 단계; 및
   (b) 상기 풀링된 혈장으로부터 면역 글로불린을 제조하는 단계를 포함하고,
   이때, 상기 면역화된 혈장 공여자는 다가 폐렴 연쇄상구균 컨쥬게이트 백신을 이용한 일차 면역화로 면역화된 후에, 다가 다당류 폐렴 연쇄상구균 백신으로 부스트 면역화된 건강한 성인 인간 혈장 공여자이며, 상기 풀링은 상기 부스트 면역화 후 5개월 이내에 수행되고;
   상기 다가 폐렴 연쇄상구균 컨쥬게이트 백신은 디프테리아 독소의 비독성 변이체인 CRM197에 컨쥬게이트된 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 19A, 19F, 18C, 및 23F의 정제된 협막 다당류를 포함하고;
   상기 다가 폐렴 연쇄상구균 다당류 백신은 하기 23종의 폐렴구균 박테리아: 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19F, 19A, 20, 22F, 23F, 및 33F로부터 수득된 다당류 항원을 함유하며,
   상기 면역 글로불린은 상기 폐렴 연쇄상구균의 적어도 7종의 혈청형 각각에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가를 함유하고, 상기 옵소닌 식작용 항체 역가는, 1000명 이상의 무작위 비-백신 접종된 인간 혈장 공여자(random non-vaccinated human plasma donor)로부터 풀링된 혈장으로부터 제조된 면역 글로불린에 존재하는 상기 폐렴 연쇄상구균의 적어도 7종의 혈청형 각각에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가의 3배 이상이며,
   상기 폐렴 연쇄상구균의 적어도 7종의 혈청형은 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F로부터 선택되는 것인, 면역 글로불린의 제조방법.
   
9. 제8항에 있어서,
   상기 폐렴 연쇄상구균의 적어도 7종의 혈청형 각각에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가는 1000명 이상의 무작위 비-백신 접종된 인간 혈장 공여자로부터 풀링된 혈장으로부터 제조된 면역 글로불린에 존재하는 상기 폐렴 연쇄상구균의 적어도 7종의 혈청형 각각에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가의 5배 이상인 것인, 면역 글로불린의 제조방법.
   
10. 제8항에 있어서,
    상기 폐렴 연쇄상구균의 적어도 7종의 혈청형 각각에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가는 1000명 이상의 무작위 비-백신 접종된 인간 혈장 공여자로부터 풀링된 혈장으로부터 제조된 면역 글로불린에 존재하는 상기 폐렴 연쇄상구균의 적어도 7종의 혈청형 각각에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가의 10배 이상인 것인, 면역 글로불린의 제조방법.
    
11. 제8항에 기재된 방법에 따라 제조된 면역 글로불린.
    
12. 제1항에 있어서, 단계 (a)의 풀링된 혈장은, 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F로부터 선택된 50% 이상의 혈청형에 대한 옵소닌 식작용 항체 역가들을 함유하며, 상기 옵소닌 식작용 항체 역가들은 대조군 샘플에 존재하는 각 폐렴 연쇄상구균 혈청형에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가의 5배 이상인 것인, 면역 글로불린의 제조방법.
    
13. 제1항에 있어서, 단계 (a)의 풀링된 혈장은, 폐렴 연쇄상구균 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 및 23F로부터 선택된 50% 이상의 혈청형에 대한 옵소닌 항체 역가들을 함유하며, 상기 옵소닌 항체 역가들은 대조군 샘플에 존재하는 각 폐렴 연쇄상구균 혈청형에 특이적인 옵소닌 식작용 항체 역가의 10배 이상인 것인, 면역 글로불린의 제조방법.
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