ES2628634T3

ES2628634T3 - Moléculas liberadoras de monóxido de carbono-rutenio y usos de las mismas

Info

Publication number: ES2628634T3
Application number: ES12815454.9T
Authority: ES
Inventors: Ana PAMPLONA; Gonçalo J. L. BERNARDES; Maria M. Mota; Carlos C. ROMÃO
Original assignee: Alfama Inc
Current assignee: Alfama Inc
Priority date: 2011-07-21
Filing date: 2012-07-20
Publication date: 2017-08-03
Anticipated expiration: 2032-07-20
Also published as: JP2014520897A; WO2013013179A1; US20140219996A1; US9611286B2; US20150322105A1; US20160237105A9; US9062089B2; JP6134710B2; EP2734235A4; EP2734235B1; EP2734235A1

Abstract

Un compuesto de fórmula (I): o una sal, un isómero, un hidrato o un solvato del mismo o una combinación de los mismos; en la que: E es-S- o -Se-; R1 es hidrógeno o alquilo C1-6; cada uno de R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, hidrógeno, un grupo carbohidrato o un grupo protector de oxígeno; y X1 y X2 son cada uno, independientemente, halógeno.

Description

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DESCRIPCION

Moleculas liberadoras de monoxido de carbono-rutenio y usos de las mismas Antecedentes de la invencion

El paludismo sigue siendo un devastador problema de salud a nivel mundial, que da lugar a hasta un millon de muertes anuales (vease, por ejemplo, Sachs, Science (2002) 298:122-124; Mwangi et al., J Infect Dis (2005) 191:1932-1939; Snow et al., Nature (2005) 434:214-217; Organization Mundial de la Salud (WHO)). Informe sobre el paludismo en el mundo, 2008). Plasmodium falciparum es el causante de las formas mas graves de infection por paludismo, tal como paludismo cerebral (CM) y lesion pulmonar aguda (ALI) (vease, por ejemplo, Trampuz et al., Crit Care (2003) 7:315-323). La tasa de letalidad en el paludismo grave tratado con derivados de artemisinina o quinina sigue siendo inaceptablemente alta. El paludismo cerebral es uno de los slndromes mas mortales, con una mortalidad del 13-21 % incluso despues del tratamiento contra el paludismo (vease, por ejemplo, Idro et al., Lancet Neurol (2005) 4:827-840).

Por lo general, la terapia principal con derivados de quinina o de artemisinina es eficaz para controlar la parasitemia por P. /alciparum, pero la mortalidad por paludismo cerebral (CM) y otras formas de paludismo grave sigue siendo inaceptablemente alta. En un esfuerzo para reducir la mortalidad relacionada con el paludismo, se han sugerido y probado tratamientos auxiliares/adyuvantes complementarios al tratamiento contra el paludismo (vease, por ejemplo, John et al., Expert Rev Anti Infect Ther (2010) 8:997-1008). La hemo oxigenasa 1 (HO-1) es un gen protector clave contra el desarrollo de CM en ratones (vease, por ejemplo, Pamplona et al., Nat Med (2007) 13:703-710). La inhalation de monoxido de carbono (CO), uno de los productos finales de la actividad de la HO-1, impidio completamente el paludismo cerebral y la incidencia de danos pulmonares agudos asociados con el paludismo (M- AALI) en 6 ratones C57BL / (vease, por ejemplo, Pamplona citado anteriormente; Epiphanio et al., PLoS Pathog (2010) 6:e1000916). Las investigaciones realizadas en otros modelos experimentales han demostrado ademas que HO-1 / CO exhiben propiedades citoprotectoras y antiinflamatorias que son beneficiosas para la resolution de la inflamacion aguda (vease, por ejemplo, Hayashi et al., Circ Res (1999) 85:663-671; Lee et al., Nat Med (2002) 8:240246).

El monoxido de carbono es muy prometedor como agente terapeutico (vease, por ejemplo, Motterlini et al., Nat Rev Drug Discov (2010) 9:728-743). Sin embargo, la seguridad y la viabilidad de la aplicacion de gas monoxido de carbono en la cllnica sigue siendo cuestionable debido a su toxicidad y a la necesidad de instalaciones medicas altamente controladas. Por lo tanto, se ha propuesto a las moleculas liberadoras de CO-(CO-RM) como una alternativa valida. Entre las primeras CO-RM desarrolladas y que todavla se utilizan ampliamente en modelos experimentales se encuentran la CORM-2 liposoluble, [Ru(CO)3Cl2]2,y la CORM-3 hidrosoluble. [Ru(CO)3Cl2(H2NCH2CO)2]. Ni CORM-2 ni CORM-3 elevan los niveles de carboxihemoglobina (COHb) en la sangre despues de la administration in vivo (vease, por ejemplo, Clark et al., Circ Res (2003) 93:2-8). Se han notificado efectos protectores sustanciales similares a los observados para la inhalacion de CO usando CORM-2 y CORM-3 en varios modelos experimentales de enfermedad, tales como infeccion bacteriana, disfuncion vascular y lesion por reperfusion de isquemia y termica (vease, por ejemplo, Clark, citado anteriormente; Alcaraz et al., Curr Pharm Des (2008) 14:465-72); Kim et al., Annu Rev Pharmacol Toxicol 2006, 46:411-449). Ademas, CORM-2 carece de las propiedades deseables de tipo farmaco, tales como solubilidad en agua y estabilidad en su propio disolvente (vease, Motterlini et al., Circ Res (2002) 90:e17-e24). Por lo tanto, sigue habiendo la necesidad de desarrollar nuevas CORM como agentes terapeuticos.

En el documento US 7045140 se describen carbonilos de metales para la administracion de CO terapeutico, comprendiendo los carbonilos al menos un ligando modulador no CO para modular la liberation de Co y la solubilidad. En el documento US 2010/196516 se describen metodos para el tratamiento de la infeccion mediante la administracion de CO y diversos compuestos organometalicos que comprenden un ligando de CO para su uso en dichos tratamientos.

Sumario de la invencion

La presente solicitud proporciona compuestos de CORM rutenio de la invencion, composiciones farmaceuticas de los mismos y compuestos para su uso en metodos de tratamiento. Se ha descubierto que dichos compuestos son utiles en el tratamiento del paludismo, por ejemplo, como adyuvantes en combination con agentes antipaludicos. Tambien se ha descubierto que dichos compuestos inducen la expresion de HO-1 y, por lo tanto, tambien se consideran utiles en el tratamiento de diversas afecciones inflamatorias, tales como lesion pulmonar aguda y slndrome de dificultad respiratoria aguda, que opcionalmente se asocian con una infeccion de paludismo.

Por ejemplo, en un aspecto, se proporciona un compuesto de la formula (I):

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o una sal, un isomero, un hidrato o un solvato del mismo o una combinacion de los mismos; en la que:

E es-S- o -Se-;

R1 es hidrogeno o alquilo Ci_a;

cada uno de R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, hidrogeno, un grupo carbohidrato o un grupo protector de oxlgeno; y

X1 y X2 son cada uno, independientemente, halogeno.

En determinadas realizaciones, E is -S-. En determinadas realizaciones, E es -Se-. En determinadas realizaciones, R1 es hidrogeno. En determinadas realizaciones, R1 es -CH3. En determinadas realizaciones, cada uno de R2, R3, R4 y R5 es hidrogeno. En determinadas realizaciones, X1 y X2 son cada uno -Cl.

En determinadas realizaciones, el sustituyente:

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es un estereoisomero seleccionado de entre el grupo que consiste en:

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En determinadas realizaciones, el compuesto es un estereoisomero de formula (I-a):

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o una sal, un isomero, un hidrato o un solvato del mismo o una combinacion de los mismos. En determinadas realizaciones, el compuesto es un estereoisomero de formula (I-b):

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o una sal, un isomero, un hidrato o un solvato del mismo o una combinacion de los mismos. En determinadas realizaciones, el compuesto

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tambien se denomina en el presente documento Compuesto 1.

En otro aspecto, se proporciona una composition farmaceutica que comprende un compuesto de formula (I) o una sal, isomero, hidrato o solvato del mismo o combinacion de los mismos, y un excipiente farmaceuticamente aceptable. En determinadas realizaciones, el compuesto es el compuesto 1.

En otro aspecto mas, se proporciona un compuesto de formula (I) o una sal, isomero, hidrato o solvato del mismo o combinacion de los mismos, para su uso en un metodo de tratamiento de una infection de paludismo en un sujeto con necesidad del mismo, En determinadas realizaciones, el compuesto es el compuesto 1. En determinadas realizaciones, la infeccion de paludismo es paludismo grave debido a una infeccion por Plasmodium. En determinadas realizaciones, la infeccion por Plasmodium es una infeccion por Plasmodium falciparum, una infeccion por Plasmodium vivax, una infeccion por Plasmodium malariae, una infeccion por Plasmodium ovale o una infeccion por Plasmodium knowlesi. En determinadas realizaciones, la infeccion por paludismo es paludismo cerebral (CM). En determinadas realizaciones, la infeccion por paludismo es paludismo asociado al embarazo (PAM). En determinadas realizaciones, el sujeto tiene una infeccion de paludismo sospechada o confirmada. En determinadas realizaciones, el metodo previene la infeccion de paludismo en el sujeto, por ejemplo, en determinadas realizaciones, el metodo inhibe la infeccion del sujeto por parasitos del paludismo. En determinadas realizaciones, la infeccion de paludismo es un recrudecimiento (recalda) de la infeccion de paludismo.

En determinadas realizaciones, el metodo comprende ademas administrar uno o mas agentes. En determinadas realizaciones, el agente es un agente antiinflamatorio. En determinadas realizaciones, el agente es un agente antipaludico. En determinadas realizaciones, el compuesto de formula (I) o una sal, isomero, hidrato o solvato del mismo, es para su uso en combinacion con un agentes antipaludico. En determinadas realizaciones, el compuesto de formula (I) o una sal, isomero, hidrato o solvato del mismo, es util como adyuvante antipaludico, por ejemplo, el compuesto de Formula (I) es un agente que potencia el efecto terapeutico del agente antipaludico, cuando se usan en combinacion. En determinadas realizaciones, el agente es un activador de la piruvato deshidrogenasa. En determinadas realizaciones, el agente se selecciona entre el grupo que consiste en quinazolinas, inhibidores de la protelna cinasa, quininas, tetraciclinas, aminoquinolonas, biquanidas, alcaloides de cinchonas, sulfonamidas, artemisininas, clindamicina, dapsona, atovaquona, lumefantrina, piperaquina, pironaridina, atovaquona, mefloquina, pirimetamina, halofantrina, inhibidores del TNF, quelatos de hierro, dexametasona, inmunoglobulinas intravenosas, sulfato de curdlano, dicloroacetato y sales de los mismos; gas CO y combinaciones de los mismos. En determinadas realizaciones, el agente es artesunato. En determinadas realizaciones, el agente es el gas CO. En determinadas realizaciones, el agente es un inhibidor del TNF. En determinadas realizaciones, el agente es un quelato de hierro. En determinadas realizaciones, el agente es dicloroacetato. En determinadas realizaciones, el agente es un inhibidor de protelna cinasa (por ejemplo, genistelna).

En otro aspecto mas, se proporciona un compuesto de formula (I) o una sal, isomero, hidrato o solvato del mismo o combinacion de los mismos, para su uso en un metodo de tratamiento de la lesion pulmonar aguda en un sujeto con necesidad del mismo. En determinadas realizaciones, la lesion pulmonar aguda es lesion pulmonar aguda asociada con el paludismo. En determinadas realizaciones, el compuesto es el compuesto 1.

En todavla otro aspecto mas, se proporciona un compuesto de formula (I) o una sal, isomero, hidrato o solvato del mismo o combinacion de los mismos, para su uso en un metodo de tratamiento del slndrome de dificultad respiratoria aguda en un sujeto con necesidad del mismo. En determinadas realizaciones, el slndrome de dificultad respiratoria aguda se asocia con una infeccion por paludismo. En determinadas realizaciones, el compuesto es el compuesto 1.

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Los detalles de una o mas realizaciones de la invention se indican en el presente documento. Otras caracterlsticas, objetos y ventajas de la invencion se haran evidentes a partir de la siguiente description, las figuras, los ejemplos y las reivindicaciones.

Breve descripcion de los dibujos

Figuras 1a-1c. CORM-2 protege del ECM. Figura 1a: Estructura qulmica del dlmero de tricarbonildiclororuteniodlmero (II) (CORM-2) y tetraquis(dimetilsulfoxido)diclororutenio (II) (compuesto 2). Figuras 1b-1c: Efecto de CORM-2 sobre la supervivencia (Figura 1b)y la parasitemia (Figura 1c) de ratones C57BL/6 infectados por P. berghei ANKA GFP. Ratones infectados (control) tratados con DMSO, el compuesto 2 y CORM- 2 entre el dla 2 y el dla 3 despues de la infection (2x/dla). (□), Infectados (control) (n=10), (O) DMSO (n=10), (A) ALF466 (n=10) y (▲) CORM-2 (n=10). Las parasitemias se muestran como la media ± el error estandar de la media. El area sombreada indica el periodo de tiempo de administration del compuesto 2 y CORM-2. Los datos son representativos de 2 experimentos independientes.

Figuras 2a-2h. El compuesto 1 es una CORm hidrosoluble dirigida al hlgado y protege frente al ECM. Figura 2a: Slntesis esquematica de tricarbonilcloro (tiogalactopiranosido)rutenio(II) (compuesto 1). Figuras 2b-2c: La concentration de Ru y CO en organos de ratones no infectados (NI) despues del tratamiento i.v. con el compuesto 2, la forma inactiva y el compuesto 1. Los resultados se muestran como la concentracion media ± error estandar de la media (n= 3-5 animales por grupo). Efecto del Compuesto 1 sobre la supervivencia (Figura 2d) y la parasitemia (Figura 2d) de ratones C57BL/6 infectados por P. berghei ANKA GFP. Tratamiento con el compuesto 2 y el compuesto 1 entre el dla 2 y el dla 3 despues de la infeccion (2x/dla). (□), Control (n = 10), (A) Compuesto 2 (n=10) y (•) Compuesto 1 (n=10). Las parasitemias se muestran como la media ± el error estandar de la media. El area sombreada indica el periodo de tiempo de administracion del compuesto 2 y el compuesto 1. Los datos son representativos de 3 experimentos independientes. Figura 2f: Determination de COHb en sangre entera de ratones C57BL/6 no infectados (NI), infectados con P. berghei ANKA (control) y tratados con el compuesto 2, el compuesto 1 y CO (250 ppm, 24 h),el dla 3 despues de la infeccion. NI (n = 6); Control (n=4); Compuesto 2 (n = 4); Compuesto 1 (n=4) y CO (n = 4). Las barras de error representan el error estandar de la media. El compuesto 1 induce la expresion de HO-1 en el hlgado (Figura 2g) y el cerebro (Figura 2h) de ratones C57BL/6 infectados por P. berghei ANKA, respectivamente, el dla 3 despues de la infeccion, el ultimo dla de tratamiento con el compuesto 2 y el compuesto 1 se cuantifico el ARNm de HO-1 mediante qRT-PCR. NI (n=4-6);

1 + Compuesto 2 (n=4) e I + Compuesto 1 (n=3-5).

Figuras 3a-3i. El compuesto 1 reduce la acumulacion del parasito en el cerebro y la neuroinflamacion. Se determino la permeabilidad de la BHE (Figura 3a), el parasito r18S (Figura 3b), CD8p (Figura 3c), y se cuantifico la expresion del ARNm de IFN-y (Figura 3d) e ICAM-1 (Figura 3e) mediante qRT-PCR. NI (n = 4), I + Compuesto

2 (n=4) e I + Compuesto 1 (n=5). La cuantificacion de azul Evans se demostro como los pg media de azul Evans (EB) por g de tejido cerebral ± error estandar de la media. NI (n = 4); Compuesto 2 (n = 5) y Compuesto 1 (n = 5). Se sacrifico a los ratones no infectados (NI), infectados tratados con el compuesto 2 y tratados con el compuesto 1 cuando el grupo control, ratones tratados con el compuesto 2, mostraron signos de ECM y se extirparon los cerebros despues de perfusion intracardlaca. Figuras 3f-3i: Semicuantificacion de los hallazgos histologicos en las secciones de cerebro tenidas con hematoxilina y eosina, analizadas al mismo tiempo como en las Figuras 3a- 3e, usando un sistema de puntuacion enmascarado. Los graficos de puntos comparan el numero de animales a los que se les ha asignado puntuaciones de gravedad de 1 (menos grave) a 3 (mas grave) en ratones infectados, infectados y tratados con el compuesto 2 y tratados con el compuesto 1. Las imagenes son representativas de 38 ratones. La barra de escala corresponde a 100 pm.

Figuras 4a-4e. El compuesto 1 protege a los ratones de la ALI asociada con el paludismo (M-AALI). Figura 4a: Supervivencia (%) de ratones DBA/2 infectados por P. berghei ANKA que no reciben tratamiento o son tratados i.v. con el compuesto 2 y el compuesto 1 entre el dla 2 y el dla 3 despues de la infeccion (2x/dla). I (n=5); I + Compuesto 2 (n = 9); I+ Compuesto 1 (n = 7). Las parasitemias se muestran como la media ± el error estandar de la media. Figura 4b: Niveles de la protelna VEGf en el plasma de ratones DBA infectados con P. berghei ANKA con slntomas de ALI, ratones tratados con el compuesto 2 y el compuesto 1 en comparacion con ratones no infectados (NI). NI (n = 3), I (ALI) (n=3); I + Compuesto 2 (n=5) e I + Compuesto 1 (n=5). Los resultados se muestran como la concentracion media ± el error estandar de la media. Figuras 4c-4e: Semicuantificacion de los hallazgos histologicos en secciones de pulmon tenidas con hematoxilina y eosina, analizadas al mismo tiempo como en la Figura 4b, usando un sistema de puntuacion enmascarado. Los graficos de puntos muestran el numero de animales a los que se les ha asignado puntuaciones de gravedad de 1 (menos grave) a 3 (mas grave) en ratones infectados(ALI), infectados y tratados con el compuesto 2 (ALI) y tratados con el compuesto 1. Las imagenes son representativas de 4-6 ratones. La barra de escala corresponde a 100 pm.

Figuras 5a-5c. El compuesto 1 es un potencial o auxiliar /adyuvante para el ECM. Figura 5a: Supervivencia de ratones C57BL/6 infectados con P. berghei ANKA GFP, tratados con As (d5-d6) o AS (d5-d6) y el compuesto 1 (d5-d9) o AS (d5-d6) y el compuesto 1 (d8-d9). La supervivencia se controlo durante un periodo de 24 horas. Los datos son representativos de 2 experimentos independientes. El tratamiento con AS empezo cuando los ratones infectados (control) mostraron una puntuacion de 1 (pelaje erizado), estadio inicial del ECM. La supervivencia global se mejoro significativamente mediante el tratamiento con el compuesto 1 (P <0,01). Figura 5b: Se muestra la parasitemia de los ratones infectados con P. berghei ANKA (control), infectados y tratados con AS (d5-d6) (AS) (▲), infectados y tratados con AS (d5-d6) y el compuesto 1 (d5-d9) (AS+ Compuesto 1) (A), e infectados y tratados con AS (d5-d6) y el compuesto 1 (d8-d9) (AS^ Compuesto 1) (•). (□) Control (n=5), (▲) AS (n=11), (A)

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AS+ Compuesto 1 (d5- d9) (n=6), (•) AS^ Compuesto 1 (d8-d9) (n=9). Los datos representan la media ± el error estandar de la media. Figura 5c: A cada uno de los estadios clinicos del ECM (sintomas no detectables, pelaje erizado, pelaje erizado y deterioro motor, dificultad respiratoria y convulsiones y / o coma) se dio una puntuacion de (0, 1,2, 3 y 4). Los ratones se clasificaron graficamente basados en los sintomas presentados despues del dia 5 de infeccion.

Figuras 6a-6b. El compuesto 1 no inhibe el crecimiento in vitro de los parasitos de P. y /alciparum y P. berghei ANKA. La CI 50 del compuesto 1 en cultivos in vitro de parasitos del clon 3D7 de P. falciparum (Figura 6a) y de P. berghei ANKA (Figura 6b) en comparacion con el antipaludico cloroquina (CQ). Graficos representativos de 3-4 experimentos para cada conjunto de datos.

Figuras 7a-7b. El compuesto 1 redujo la alteracion de la barrera hematoencefalica (BHE) y la hemorragia cerebral del parenquima en ratones infectados por P. berghei ANKA. Craneo (Figura 7a) y cerebros (Figura 7b) tras la evaluation de la alteracion de la BHE mediante tincion con azul de Evans de ratones C57BL/6 no infectados (NI) frente a infectados con P. berghei ANKA (control) e infectados y tratados con el compuesto 2 (I + Compuesto 2) o tratados con el compuesto 1 (I+ Compuesto 1). Las imagenes son representativas de un total de 5 ratones por grupo.

Figura 8. Espectro IR (KBr) de RuCl2(CO)3(p-D-tiogalactopiranosido de metilo) (Compuesto 1).

Figura 9. Espectro de RMN de 1H de RuCl2(CO)3(p-D-tiogalactopiranosido de metilo) (Compuesto 1). en D2O. Figura 10. Equivalentes de CO transferido a desoxi-Mb por RuCh(CO) 3(p-D-tiogalactopiranosido de metilo) (Compuesto 1). Promedio de 2 experimentos realizados en PBS7.4 con: [desoxi-Mb]=61 uM y [Compuesto 1]= 51 uM; [desoxi-Mb]=68 uM y [Compuesto 1]= 50 uM.

Figuras 11a-11e. Figura 11a: Espectro ESI-MS de lisozima C nativa (2 mg/ml en H2O). Figura 11b: ESI-MS de lisozima (2,0 mg/ml) cuando se incubo con CORM-3 (10 eq.) en H2O durante 10 minutos a temperatura ambiente. Figura 11c: ESI-MS de lisozima (2,0 mg/ml) cuando se incubo con CORM-3 (10 eq.) en H2O durante 1 hora a temperatura ambiente. Figura 11d: ESI-MS de lisozima (2,0 mg/ml) cuando se incubo con Ru(CO)3Cl2(Gal-S-Me) (compuesto 1) (10 eq.) en H2O durante 10 minutos a temperatura ambiente. Figura 11e: ESI-MS de lisozima (2,0 mg/ml) cuando se incubo con Ru(CO)3Cl2(Gal-S-Me) (compuesto 1) (10 eq.) en H2O durante 1 Hora temperatura ambiente.

Figura 12. CORM-3 protege parcialmente frente al ECM. Figuras 12a-12b: Efecto de CORM-3 sobre la supervivencia (Figura 12a) y la parasitemia (Figura 12b) de ratones C57BL/6 infectados por P. berghei ANKA GFP. Ratones infectados (control), el compuesto 2 y CORM-3 entre el dia 2 y el dia 3 despues de la infeccion (2x/dia). (□), Infectados (control) (n=5), (A) ALF466 (n=5) y (A) CORM-3 (n=4). Las parasitemias se muestran como la media ± el error estandar de la media. Los datos son representativos de 1 experimento independiente.

Descripcion detallada de determinadas realizaciones de la invencion

La presente invencion se basa en el descubrimiento de que la adicion de un ligando de tioazucar al complejo CORM- 2, [Ru(CO)3Cl2]2, proporciona un nuevo complejo con propiedades mejoradas similares a farmacos, tal como estabilidad mejorada, solubilidad acuosa y / o la especificidad tisular. Un compuesto de ejemplo es el derivado de tiometil-beta-galactosa, denominado en el presente documento Compuesto 1, que se ha demostrado que tiene una estabilidad mejorada, solubilidad acuosa mejorada y especificidad mejorada para el higado en comparacion con CORM-2. El CO liberado por el Compuesto 1 puede inducir una protection similar como se ha visto con la terapia de gas CO, pero sin los efectos toxicos (niveles de COHb elevados) de inhalation de CO. Los inventores descubrieron que el compuesto 1 es una terapia eficaz en la proteccion frente a la muerte causada por la infeccion del paludismo, tal como paludismo cerebral (CM). De forma notable, la presente invencion demuestra que el compuesto 1 es un agente adyuvante eficaz cuando se utiliza en combination con otro agente antipaludico, por ejemplo, artesunato, despues de la aparicion de la infeccion de paludismo. Los inventores descubrieron ademas que el compuesto 1 induce la expresion de HO-1 y, por lo tanto, los inventores imaginan el compuesto 1 como una terapia eficaz en la mejora de las afecciones inflamatorias, por ejemplo, lesion pulmonar aguda y sindrome de dificultad respiratoria aguda, que opcionalmente pueden estar asociadas con infeccion del paludismo. Los inventores preven que ciertos bioisosteros del ligando de tioazucar, tales como selenoazucares, se puede encontrar, opcionalmente, que son utiles en la practica de uno o mas de los metodos de la invencion.

Por lo tanto, en un aspecto, la presente invencion proporciona compuestos de la invencion de formula (I):

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o sales, isomeros, hidratos o solvatos de los mismos o combinaciones de los mismos; en la que:

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E es-S- o -Se-;

R1 es hidrogeno o alquilo Ci-6;

Xi y X2 son cada uno, independientemente, halogeno.

La presente invencion tambien proporciona composiciones farmaceuticas que comprenden un compuesto de formula (I) o una sal, isomero, hidrato o solvato del mismo o combinacion de los mismos. La presente invencion proporciona ademas un compuesto de formula (I) o una sal, isomero, hidrato o solvato del mismo o combinacion de los mismos, o una composicion farmaceutica del mismo para su uso en metodos de uso y tratamiento.

Los terminos qulmicos especlficos se describen mas adelante en el presente documento. Principios generales de la qulmica organica, as! como restos funcionales especlficas y reactividad, se describen en Organic Chemistry, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito, 1999; Smith and March March's Advanced Organic Chemistry, 5a Edicion, John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, 2001; Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc., Nueva York, 1989; y Carruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 3a Edicion, Cambridge University Press, Cambridge, 1987. Los principios generales en qulmica organometalica se describen en S. W. Kirtley in Comprehensive Organometallic Chemistry I (G. Wilkinson, F. G.A. Stone, W. Abel Eds, Vol 3, 1080, Pergamon, Oxford 1982; M. J. Winter en Comprehensive Organometallic Chemistry II (W. Abel, F. G.A. Stone, G. Wilkinson Eds), Vol 5, 163, Pergamon, Oxford 1995; y M. Tamm, R. J. Baker, en Comprehensive Organometallic Chemistry III (R. H. Crabtree y D. M. P. Mingos Eds), Vol 5, 391, Elsevier, Oxford, 2007).

Los compuestos descritos en el presente documento pueden comprender uno o mas centros quirales asimetricos y, por tanto, pueden existir en diversas formas isomericas, por ejemplo, enantiomeros y / diastereomeros. Por ejemplo, los compuestos descritos en el presente documento pueden estar en la forma de un enantiomero individual, diastereomero o isomero geometrico, o pueden estar en forma de una mezcla de estereoisomeros, incluyendo mezclas racemicas y mezclas enriquecidas en uno o mas estereoisomeros. Los isomeros pueden aislarse a partir de mezclas mediante metodos conocidos por los expertos en la materia, incluyendo cromatografla quiral de llquidos de alta presion (HPLC) y la formation y cristalizacion de sales quirales; o isomeros preferidos se pueden preparar mediante slntesis asimetricas. Vease, por ejemplo, Jacques et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, Nueva York, 1981); Wilen et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); y Wilen, Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions pag. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. de Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972). La invencion abarca ademas compuestos descritos en el presente documento como isomeros individuales sustancialmente libres de otros isomeros y, COMO alternativa, como mezclas de varios isomeros.

Cuando se enumera un intervalo de valores, se pretende abarcar cada valor y subintervalo dentro del intervalo. Por ejemplo, con "alquilo C1-6" se pretende abarcar alquilo C1, C2, C3, C4, C5, C6, C1-6, C1-5, C1-4, C1-3, C1-2, C2-6, C2-5, C2-4, C2-3, C3-6, C3-5, C3-4, C4-6, C4-5 y C5-6.

"Alquilo" se refiere a un radical de un grupo hidrocarburo saturado ramificado o de cadena lineal que tiene de 1 a 10 atomos de carbono("alquilo C1-10"). En algunas realizaciones, un grupo alquilo tiene de 1 a 9 atomos de carbono ("alquilo C1-9"). En algunas realizaciones, un grupo alquilo tiene de 1 a 8 atomos de carbono ("alquilo C1-8"). En algunas realizaciones, un grupo alquilo tiene de 1 a 7 atomos de carbono ("alquilo C1-7"). En algunas realizaciones, un grupo alquilo tiene de 1 a 6 atomos de carbono ("alquilo C1-6"). En algunas realizaciones, un grupo alquilo tiene de 1 a 5 atomos de carbono ("alquilo C1-5"). En algunas realizaciones, un grupo alquilo tiene de 1 a 4 atomos de carbono ("alquilo C1-4"). En algunas realizaciones, un grupo alquilo tiene de 1 a 3 atomos de carbono ("alquilo C1- 3"). En algunas realizaciones, un grupo alquilo tiene de 1 a 2 atomos de carbono ("alquilo C1-2"). En algunas realizaciones, un grupo alquilo tiene 1 atomo de carbono ("alquilo C1"). En algunas realizaciones, un grupo alquilo tiene de 2 a 6 atomos de carbono ("alquilo C2-6"). Ejemplos de grupos alquilo C1-6 incluyen metilo (C1), etilo (C2), n-propilo (C3), isopropilo (C3), n-butilo (C4), terc-butilo (C4), sec-butilo (C4), iso-butilo (C4), n-pentilo (C5), 3- pentanIilo (C5), amilo (C5), neopentilo (C5), 3-metil-2-butanilo (C5), amilo terciario (C5) y n-hexilo (C6). Ejemplos adicionales de grupos alquilo incluyen n-heptilo (C7), n-octilo (C8), n-nonilo (C9), n-decilo (C10) y similares.

"Carbociclilo" se refiere a un radical de un grupo hidrocarburo no aromatico clclico que tiene de 3 a 4 atomos de carbono en el anillo("carbociclilo C3-4") y cero heteroatomos en el sistema de anillo no aromatico. Entre los grupos carbociclilo C3-4 de ejemplo se incluyen, sin limitaciones, ciclopropilo (C3), ciclopropenilo (C3), ciclobutilo (C4), y ciclobutenilo (C4). En algunas realizaciones, "carbociclilo" es un grupo carbociclilo monoclclico saturado que tiene de 3 a 4 atomos de carbono en el anillo("cicloalquilo C3-4").

"Alquenilo" se refiere a un radical de un grupo hidrocarburo ramificado o de cadena lineal que tiene de 2 a 10 atomos de carbono y uno o mas dobles enlaces carbono-carbono("alquenilo C2-10"). En algunas realizaciones, un grupo

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alquenilo tiene de 2 a 9 atomos de carbono ("alquenilo C2-9"). En algunas realizaciones, un grupo alquenilo tiene de 2 a 8 atomos de carbono ("alquenilo C2-8"). En algunas realizaciones, un grupo alquenilo tiene de 2 a 7 atomos de carbono ("alquenilo C2-7"). En algunas realizaciones, un grupo alquenilo tiene de 2 a 6 atomos de carbono ("alquenilo C2-6"). En algunas realizaciones, un grupo alquenilo tiene de 2 a 5 atomos de carbono ("alquenilo C2-5"). En algunas realizaciones, un grupo alquenilo tiene de 2 a 4 atomos de carbono ("alquenilo C2-4"). En algunas realizaciones, un grupo alquenilo tiene de 2 a 3 atomos de carbono ("alquenilo C2-3"). En algunas realizaciones, un grupo alquenilo tiene 2 atomos de carbono ("alquenilo C2"). El uno o mas dobles enlaces carbono-carbono pueden ser internos (tal como en 2-butenilo) o terminales (tal como en 1-butenilo). Entre los ejemplos de grupos alquenilo C2-4 se incluyen etenilo (C2), 1-propenilo (C3), 2-propenilo (C3), 1-butenilo (C4), 2-butenilo (C4), butadienilo (C4) y similares. Entre los ejemplos de grupos alquenilo C2-6 se incluyen los grupos alquenilo C2-4 mencionados anteriormente, as! como pentenilo (C5), pentadienilo (C5), hexenilo (C6), y similares. Entre los ejemplos adicionales de alquenilo incluyen heptenilo (C7), octenilo (C8), octatrienilo (C8) y similares.

"Alquinilo" se refiere a un radical de un grupo hidrocarburo ramificado o de cadena lineal que tiene de 2 a 10 atomos de carbono y uno o mas triples enlaces carbono-carbono("alquinilo C2-10"). En algunas realizaciones, un grupo alquinilo tiene de 2 a 9 atomos de carbono ("alquinilo C2-9"). En algunas realizaciones, un grupo alquinilo tiene de 2 a 8 atomos de carbono ("alquinilo C2-8"). En algunas realizaciones, un grupo alquinilo tiene de 2 a 7 atomos de carbono ("alquinilo C2-7"). En algunas realizaciones, un grupo alquinilo tiene de 2 a 6 atomos de carbono ("alquinilo C2-6"). En algunas realizaciones, un grupo alquinilo tiene de 2 a 5 atomos de carbono ("alquinilo C2-5"). En algunas realizaciones, un grupo alquinilo tiene de 2 a 4 atomos de carbono ("alquinilo C2-4"). En algunas realizaciones, un grupo alquinilo tiene de 2 a 3 atomos de carbono ("alquinilo C2-3"). En algunas realizaciones, un grupo alquinilo tiene 2 atomos de carbono ("alquinilo C2"). El uno o mas triples enlaces carbono-carbono pueden ser internos (tal como en 2-butinilo) o terminales (tal como en 1-butinilo). Entre los ejemplos de grupos alquinilo C2-4 se incluyen, sin limitation, etinilo (C2), 1 -propinilo (C3), 2-propinilo (C3), 1-butinilo (C4), 2-butinilo (C4) y similares. Entre los ejemplos de grupos alquenilo C2-6 se incluyen los grupos alquinilo C2-4 mencionados anteriormente, as! como pentinilo (C5), hexinilo (C6), y similares. Entre los ejemplos adicionales de alquinilo se incluyen heptinilo (C7), octinilo (C8) y similares.

"Heterociclilo" se refiere a un radical de un sistema de anillos no aromaticos de 5 a 10 miembros que tiene atomos de carbono en el anillo y de 1 a 4 heteroatomos en el anillo, en el que cada heteroatomo se selecciona independientemente de entre nitrogeno, oxlgeno y azufre("heterociclilo de 5-10 miembros"). En los grupos heterociclilo que contienen uno o mas atomos de nitrogeno, el punto de union puede ser un atomo de carbono o nitrogeno, segun lo permita la Valencia. Un grupo heterociclilo puede ser monoclclico o biclclico, y puede ser saturado o puede contener uno o mas dobles enlaces o triples enlaces carbono-carbono. Los sistemas de anillo biclclico heterociclilo pueden incluir uno o mas heteroatomos en uno o ambos anillos. Heterociclilo tambien incluye sistemas de anillo en el que el anillo heterociclilo, como se ha definido anteriormente, esta condensado con uno o mas grupos carbociclilo en los que el punto de union esta en el anillo carbociclilo o heterociclilo, o sistemas de anillo en los que el anillo heterociclilo, como se ha definido anteriormente, esta condensado con uno o mas grupos arilo o heteroarilo, en el que el punto de union esta en el anillo heterociclilo y, en estos casos, el numero de miembros en el anillo sigue designando el numero de miembros en el anillo en el sistema de anillo de heterociclilo.

En algunas realizaciones, un grupo heterociclilo es un sistema de anillos no aromaticos de 5-8 miembros que tienen atomos de carbono en el anillo y 1-4 heteroatomos en el anillo, en el que cada heteroatomo se selecciona independientemente de entre nitrogeno, oxlgeno y azufre("heterociclilo de 5-8 miembros"). En algunas realizaciones, un grupo heterociclilo es un sistema de anillos no aromaticos de 5-6 miembros que tienen atomos de carbono en el anillo y 1-4 heteroatomos en el anillo, en el que cada heteroatomo se selecciona independientemente de entre nitrogeno, oxlgeno y azufre("heterociclilo de 5-6 miembros"). En algunas realizaciones, el heterociclilo de 5-6 miembros tiene 1-3 heteroatomos en el anillo seleccionados de nitrogeno, oxlgeno y azufre. En algunas realizaciones, el heterociclilo de 5-6 miembros tiene 1-2 heteroatomos en el anillo seleccionados de nitrogeno, oxlgeno y azufre. En algunas realizaciones, el heterociclilo de 5-6 miembros tiene 1 heteroatomo seleccionado de nitrogeno, oxlgeno y azufre.

Entre los ejemplos de grupos heterociclilo de 5 miembros que contienen 1 heteroatomo se incluyen, sin limitacion, tetrahidrofuranilo, dihidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, dihidrotiofenilo, pirrolidinilo, dihidropirrolilo y pirrolil-2,5-diona. Entre los ejemplos de grupos heterociclilo de 5 miembros que contienen 2 heteroatomos se incluyen, sin limitacion, dioxolanilo, oxatiolanilo y ditiolanilo. Entre los ejemplos de grupos heterociclilo de 5 miembros que contienen 3 heteroatomos se incluyen, sin limitacion, triazolinilo, oxadiazolinilo y tiadiazolinilo. Entre los ejemplos de grupos heterociclilo de 6 miembros que contienen 1 heteroatomo se incluyen, sin limitacion, piperidinilo, tetrahidropiranilo, dihidropiridinilo y tianilo. Entre los ejemplos de grupos heterociclilo de 6 miembros que contienen 2 heteroatomos se incluyen, sin limitacion, piperazinilo, morfolinilo, ditianilo, dioxanilo, Entre los ejemplos de grupos heterociclilo de 6 miembros que contienen 2 heteroatomos se incluyen, sin limitacion, triazinanilo. Entre los ejemplos de grupos heterociclilo de 7 miembros que contienen 1 heteroatomo se incluyen, sin limitacion, azepanilo, oxepanilo y tiepanilo. Entre los ejemplos de grupos heterociclilo de 8 miembros que contienen 1 heteroatomo se incluyen, sin limitacion, azocanilo, oxecanilo y tiocanilo. Entre los grupos heterociclilo biclclico de ejemplo se incluyen, sin limitacion, indolinilo, isoindolinilo, dihidrobenzofuranilo, dihidrobenzotienilo, tetrahidrobenzotienilo, tetrahidrobenzofuranilo, tetrahidroindolilo, tetrahidroquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, decahidroquinolinilo, decahidroisoquinolinilo,

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octahidrocromenilo, octahidroisocromenilo, decahidronaftiridinilo, decahidro-1,8-naftiridinilo, octahidropirrolo[3,2- bjpirrol, indolinilo, ftalimidilo, naftalimidilo, cromanilo, cromenilo y similares.

"Arilo" se refiere a un radical de un sistema de anillo aromatico monoclclico o biclclico 4n+2 (por ejemplo, que tiene 6 o 10 n electrones compartidos en una disposicion clclica) que tiene 6-10 atomos de carbono de anillo y cero heteroatomos proporcionados en el aromatico sistema de anillo aromatico ("arilo C6-10"). En algunas realizaciones, un grupo arilo tiene 6 atomos de carbono ("arilo C6"; por ejemplo, fenilo). En algunas realizaciones, un grupo arilo tiene 10 atomos de carbono ("arilo C10"; por ejemplo, naftilo, tal como 1-naftilo y 2-naftilo). Arilo tambien incluye sistemas de anillo en los que el anillo arilo, como se ha definido anteriormente, esta condensado con uno o mas grupos carbociclilo o heterociclilo en los que el radical o punto de union esta en el anillo arilo, y, en tales casos, el numero de atomos de carbono sigue designando el numero de atomos de carbono en el sistema de anillo de arilo.

"Heteroarilo" se refiere a un radical de un sistema de anillo aromatico monoclclico o biclclico de 5-10 miembros 4n+2 (por ejemplo, que tiene 6 o 10 n electrones compartidos en una disposicion clclica) que tiene atomos de carbono en el anillo y 1-4 heteroatomos en el anillo proporcionados en el aromatico sistema de anillo aromatico, en el que cada heteroatomo se selecciona independientemente de entre nitrogeno, oxlgeno y azufre("heteroarilo de 5-10 miembros"). En los grupos heteroarilo que contienen uno o mas atomos de nitrogeno, el punto de union puede ser un atomo de carbono o nitrogeno, segun lo permita la Valencia. Los sistemas de anillo heteroarilo biclclico pueden incluir uno o mas heteroatomos en uno o ambos anillos. Heteroarilo incluye sistemas de anillo en los que el anillo heteroarilo, como se ha definido anteriormente, esta condensado con uno o mas grupos carbociclilo o heterociclilo en los que el punto de union esta en el anillo heteroarilo, y, en tales casos, el numero de miembros en el anillo sigue designando el numero de miembros en el anillo en el sistema de anillo de heteroarilo. Heteroarilo tambien incluye sistemas de anillo en los que el anillo heteroarilo, como se ha definido anteriormente, esta condensado con uno o mas grupos arilo en los que el punto de union esta en el anillo arilo o heteroarilo, y, en tales casos, el numero de miembros en el anillo sigue designando el numero de miembros en el anillo en el sistema de anillo policlclico condensado (arilo/heteroarilo). Los grupos heteroarilo biclclico en los que un anillo no contiene un heteroatomo (por ejemplo, indolilo, quinolinilo, carbazolilo y similares), el punto de union puede estar en cualquiera de los anillos, es decir, en el anillo portador de un heteroatomo (por ejemplo, 2-indolilo) o el anillo que no contiene un heteroatomo (por ejemplo, 5-indolilo).

En algunas realizaciones, un grupo heteroarilo es un sistema de anillo aromatico de 5-8 miembros que tienen atomos de carbono en el anillo y 1-4 heteroatomos en el anillo, proporcionados en el sistema del anillo aromatico, en el que cada heteroatomo se selecciona independientemente de entre nitrogeno, oxlgeno y azufre("heteroarilo de 5-8 miembros"). En algunas realizaciones, un grupo heteroarilo es un sistema de anillo aromatico de 5-6 miembros que tienen atomos de carbono en el anillo y 1-4 heteroatomos en el anillo, proporcionados en el sistema del anillo aromatico, en el que cada heteroatomo se selecciona independientemente de entre nitrogeno, oxlgeno y azufre("heteroarilo de 5-6 miembros"). En algunas realizaciones, el heteroarilo de 5-6 miembros tiene 1-3 heteroatomos en el anillo seleccionados de entre nitrogeno, oxlgeno y azufre. En algunas realizaciones, el heteroarilo de 5-6 miembros tiene 1-2 heteroatomos en el anillo seleccionados de entre nitrogeno, oxlgeno y azufre. En algunas realizaciones, el heteroarilo de 5-6 miembros tiene 1 heteroatomo en el anillo seleccionado de entre nitrogeno, oxlgeno y azufre.

Entre los ejemplos de grupos heteroarilo de 5 miembros que contienen 1 heteroatomo se incluyen, sin limitacion, pirrolilo, furanilo y tiofenilo. Entre los ejemplos de grupos heteroarilo de 5 miembros que contienen 2 heteroatomo se incluyen, sin limitacion, imidazolilo, pirazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo e isotiazolilo. Entre los ejemplos de grupos heteroarilo de 5 miembros que contienen 3 heteroatomo se incluyen, sin limitacion, triazolilo, oxadiazolilo y tiadiazolilo. Entre los ejemplos de grupos heteroarilo de 5 miembros que contienen 4 heteroatomo se incluyen, sin limitacion, tetrazolilo, Entre los ejemplos de grupos heteroarilo de 6 miembros que contienen 1 heteroatomo se incluyen, sin limitacion, piridinilo, Entre los ejemplos de grupos heteroarilo de 6 miembros que contienen 2 heteroatomos se incluyen, sin limitacion, piridazinilo, pirimidinilo y pirazinilo. Entre los ejemplos de grupos heteroarilo de 6 miembros que contienen 3 o 4 heteroatomos se incluyen, sin limitacion, triazinilo y tetrazinilo, respectivamente. Entre los ejemplos de grupos heteroarilo de 7 miembros que contienen 1 heteroatomo se incluyen, sin limitacion, azepinilo, oxepinilo y tiepinilo. Entre los grupos heteroarilo 5,6-biclclicos de ejemplo se incluyen, sin limitacion, indolilo, isoindolilo, indazolilo, benzotriazolilo, benzotiofenilo, isobenzotiofenilo, benzofuranilo, benzoisofuranilo, bencimidazolilo, benzoxazolilo, bencisoxazolilo, benzoxadiazolilo, benzotiazolilo, benzoisotiazolilo, benztiadiazolilo, indolizinilo y purinilo. Entre los grupos heteroarilo 6,6-biclclicos de ejemplo se incluyen, sin limitacion, naftiridinilo, pteridinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, cinolinilo, quinoxalinilo, ftalazinilo y quinazolinilo.

"Parcialmente insaturado" se refiere a un grupo que incluye al menos un enlace doble o triple. La expresion "parcialmente insaturado" pretende abarcar anillos que tienen sitios multiples de insaturacion, pero no se pretende incluir grupos aromaticos (por ejemplo, restos arilo o heteroarilo), como se define en el presente documento. De forma analoga, "saturado" se refiere a un grupo que no contiene un enlace doble o triple, es decir, contiene todos los enlaces simples.

Los grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, carbociclilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, tal como se definen en el presente documento, estan opcionalmente sustituidos (por ejemplo, un grupo alquilo "sustituido" o "no sustituido",

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alquenilo "sustituido" o "no sustituido", alquinilo "sustituido" o "no sustituido", carbociclilo "sustituido" o "no sustituido", heterociclilo "sustituido" o "no sustituido", arilo "sustituido" o "no sustituido" o heteroarilo "sustituido" o "no sustituido"). En general, el termino "sustituido", vaya precedido o no del termino "opcionalmente", significa que al menos un hidrogeno presentes en un grupo (por ejemplo, un atomo de carbono o nitrogeno) esta sustituido con un sustituyente permisible, por ejemplo, un sustituyente que, tras la sustitucion, da como resultado un compuesto estable, por ejemplo, un compuesto que no se transforma espontaneamente, tal como mediante reorganization, ciclacion, elimination u otra reaction. Salvo que se indique lo contrario, un grupo "sustituido" tiene un sustituyente en una o mas posiciones sustituibles del grupo y. cuando mas de una position en cualquier estructura dada esta sustituida, el sustituyente es el mismo o diferente en cada posicion. Se contempla que el termino "sustituido" incluye la sustitucion con todos los sustituyentes permitidos de compuestos organicos, cualquiera de los sustituyentes descritos en el presente documento que se traduce en la formation de un compuesto estable. La presente invention contempla cualquiera y todas de tales combinaciones con el fin de llegar a un compuesto estable. Para los fines de la presente invencion, los heteroatomos, tales como nitrogeno, pueden tener sustituyentes de hidrogeno y / o cualquier sustituyente adecuado como se describe en el presente documento que satisfaga las valencias de los heteroatomos y de como resultado la formacion de un resto estable.

Entre los sustituyentes de atomos de carbono a modo de ejemplo se incluyen, pero sin limitaciones, halogeno, -CN,

NO2, -N3, -SO2H, -SO3H,-OH, -ORaa, -ON(Rbb)2, -N(Rbb)2, -N(Rbb)3+X-, -N(ORcc)Rbb, -SH, -SR CO2H, -CHO, -C(ORcc)2, -CO2Raa, -OC(=O)Raa,-OCO2Ra

NRbbCO2Raa

-SSR , -C(=O)R, - a, -C(=O)N(Rbb)2, -OC(=O)N(Rbb)2, -NRbbC(=O)Raa, - -NRbbC(=O)N(Rbb)2, -C(=NRbb)Raa, -C(=NRbb)ORaa, -OC(=NRbb)Raa, -OC(=NRbb)ORaa,-

C(=NRbb)N(Rbb)2,-OC(=NRbb)N(Rbb)2, -NRbbC(=NRbb)N(Rbb)2, -C(=O)NRbbSO2Raa, - NRbbSO2Raa, SO2N(Rbb)2, - SO2Raa, -SO2ORaa, -OSO2Raa, -S(=O)Raa, -OS(=O)Raa, - Si(Raa)3, -OSi(Raa)3-C(=S)N(Rbb)2, -C(=O)SRaa, -C(=S)SRaa, -SC(=S)SRaa, -SC(=O)SRaa, -OC(=O)SRaa, -SC(=O)ORaa, -SC(-O)Raa, -P(=O)2Raa, -OP(=O)2Raa, -P(=O)(Raa)2, - OP(=O)(Raa)2, -OP(=O)(ORcc)2, -P(=O)2N(Rbb)2, -OP(=O)2N(Rbb)2, -P(=O)(NRbb)2, - OP(=O)(NRbb)2, -

NRbbP(=O)(ORcc)2, -NRbbP(=O)(NRbb)2, -P(Rcc)2, -P(Rcc)3, -OP(Rcc)2,-OP(Rcc)3, -B(Raa)2, -B(ORcc)2, -BRaa(ORcc), - alquilo C1-10, perhaloalquilo-C1-10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, carbociclilo C3-10, heterociclilo de 3-14 miembros, arilo C6-14 y heteroarilo de 5-14 miembros, en el que cada alquilo, alquenilo, alquinilo, carbociclilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo estan sustituidos independientemente con 0, 1,2, 3, 4 o 5 grupos Rdd;

o dos hidrogenos geminales sobre un atomo de carbono estan sustituidos con el grupo =O, =S, =NN(Rbb)2, =NNRbbC(=O)Raa, =NNRbbC(=O)ORaa, =NNRbbS(=O)2Raa, =NRbb o =NORcc; cada uno de Raa, independientemente, se selecciona de entre alquilo C1-10, perhaloalquilo -C1.10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, carbociclilo C3-10, heterociclilo de 3-14 miembros, arilo C6-14 y heteroarilo de 5-14 miembros, o dos grupos Raa estan unidos para formar un anillo heterociclilo de 3-14 miembros o heteroarilo de 5-14 miembros, en el que cada alquilo, alquenilo, alquinilo, carbociclilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo estan sustituidos independientemente con 0, 1, 2, 3, 4 o 5 grupos Rdd;cada uno de Rbb, independientemente, se selecciona de hidrogeno, -OH, -ORaa, - N(Rcc)2, -CN, - C(=O)Raa, -C(=O)N(Rcc)2, -CO2Raa, -SO2Raa, -C(=NRcc)ORaa, - C(=NRcc)N(Rcc)2, -SO2N(Rcc)2, -SO2Rcc, -SO2ORcc, - SORaa, -C(=S)N(Rcc)2, -C(=O)SRcc, - C(=S)SRcc, -P(=O)2Raa, -P(=O)(Raa)2, -P(=O)2N(Rcc)2, -P(=O)(NRcc)2, alquilo C1- 10, perhaloalquilo C1-10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, carbociclilo C3-10, heterociclilo de 3-14 miembros, arilo C6-14 y heteroarilo de 5-14 miembros, o dos grupos Rbb estan unidos para formar un anillo heterociclilo de 3-14 miembros o heteroarilo de 5-14 miembros, en el que cada alquilo, alquenilo, alquinilo, carbociclilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo estan sustituidos independientemente con 0, 1,2, 3, 4 o 5 grupos Rdd;

cada uno de Rcc, independientemente, se selecciona de hidrogeno, alquilo C1-10, perhaloalquilo C1-10, alquenilo C2-10, alquinilo C2.10, carbociclilo C3-10, heterociclilo de 3-14 miembros, arilo C6.14 y heteroarilo de 5-14 miembros, o dos grupos Rcc estan unidos para formar un anillo heterociclilo de 3-14 miembros o heteroarilo de 5-14 miembros, en el que cada alquilo, alquenilo, alquinilo, carbociclilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo estan sustituidos independientemente con 0, 1, 2, 3, 4 o 5 grupos Rdd; cada uno de Rdd, independientemente, se selecciona de entre halogeno, -CN, -NO2, -N3, -SO2H, -SO3H, -OH, -ORee, -ON(Rff)2, -N(Rff)2, -N(Rff)a+X', -N(ORee)Rff, -SH, -SRee, - SSRee, -C(=O)Ree, -CO2H, -CO2Ree, -OC(=O)Ree, -OCO2Ree, -C(=O)N(Rff)2,-OC(=O)N(Rff)2, -NRffC(=O)Ree - NRffCO2Ree, -NRffC(=O)N(Rff)2, -C(=NRff)ORee, - OC(=NRff)Ree, -OC(=NRff)ORee, -C(=NRff)N(Rff)2, -OC(=NRff)N(Rff)2, - NRffC(=NRff)N(Rff)2,-NRffSO2Ree, -SO2N(Rff)2, -SO2Ree, -SO2ORee, -OSO2Ree, -S(=O)Ree, -Si(Ree)a, -OSi(Ree)3, - C(=S)N(Rff)2, -C(=O)SRee, -C(=S)SRee, -SC(=S)SRee, -P(=O)2Ree, - P(=O)(Ree)2, -OP(=O)(Ree)2, -OP(=O)(ORee)2, alquilo C1-6, perhaloalquilo C1-6, alquenilo C2.6, alquinilo C2.6, carbociclilo C3.10, heterociclilo de 3-10 miembros, arilo C6-10, heteroarilo de 5-10 miembros, en el que cada alquilo, alquenilo, alquinilo, carbociclilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo estan sustituidos independientemente con 0, 1,2, 3, 4 o 5 grupos Rgg o dos sustituyentes Rdd geminales se pueden unir para formar =O o =S;

cada uno de Ree, independientemente, se selecciona de entre alquilo C1-6, perhaloalquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2.6, carbociclilo C3-10, arilo C6.10, heterociclilo de 3-10 miembros y heteroarilo de 3-10 miembros, en el que cada alquilo, alquenilo, alquinilo, carbociclilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo estan sustituidos independientemente con 0, 1,2, 3, 4 o 5 grupos Rgg; cada uno de Rff, independientemente, se selecciona de hidrogeno, alquilo C1-6, perhaloalquilo C1-6, alquenilo C2.6, alquinilo C2.6, carbociclilo C3-10, heterociclilo de 3-10 miembros, arilo C6.10 y heteroarilo de 5-10 miembros, o dos grupos Rff estan unidos para formar un anillo heterociclilo de 3-14 miembros o heteroarilo de 5-14 miembros, en el que cada alquilo, alquenilo, alquinilo, carbociclilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo estan sustituidos independientemente con 0, 1, 2, 3, 4 o 5 grupos Rgg; cada uno de Rgg es, independientemente, halogeno, -CN, -NO2, -N3, -SO2H, -SO3H, - OH, -O alquilo C1-6, -ON(alquilo C1-6)2, -N(alquilo C1-6)2, -N(alquilo C1_6)a +X-, -NH(alquilo C^ +X-, -NH2(alquilo C^+X', -N^+X', -N(O alquilo C1-6)(alquilo C1.6), -N(OH)(alquilo C1.6), - NH(OH), -SH, -S alquilo C1-6, -SS(alquilo C1.6), -C(=O)(alquilo C1.6), -CO2H, -CO2(alquilo C1.6), -OC(=O)(alquilo C1.6),

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-OCO2(alquilo Ci-6), -C(=O)NH2, -C(=O)N(alquilo Ci-6)2,-OC(=O)NH(alquilo Ci-6), -NHC(=O)(alquilo Ci-6), -N(alquilo Ci-6)C(=O)(alquilo C1-6),-NHCO2(alquilo C1-6), -NHC(=O)N(alquilo C1-a)2, -NHC(=O)(alquilo C1-6), -NHC(=O)NH2, - C(=NH)O(alquilo Ci-6),-OC(=NH)(alquilo C^), -OC(=NH)O alquilo Ci-6, -C(=NH)N(alquilo Ci-6)2, -C(=NH)NH(alquilo Ci-6), -C(=NH)NH2, -OC(=NH)N(alquilo Ci-6)2,-OC(NH)NH(alquilo Ci-6), -OC(NH)NH2, -NHC(NH)N(alquilo Ci-6)2,- NHC(=NH)NH2,-NHSO2(alquilo Ci-6), -SO2N(alquilo Ci_a)2, -SO2NH(alquilo Ci-6), -SO2NH2,-SO2 alquilo Ci-6,-SO2O alquilo Ci-6, -OSO2 alquilo Ci-6, -SO alquilo Ci-6, -Si(alquilo Ci-6)3, -OSi(alquilo Ci-6)3-C(=S)N(alquilo Ci-6)2,

C(=S)NH(alquilo C^), C(=S)NH2, -C(=O)S(alquilo C^), -C(=S)S alquilo Ci-6, -SC(=S)S alquilo Ci-6, -P(=O)2(alquilo Ci-6), -P(=O)(alquilo Ci-6)2, -OP(=O)(alquilo Ci-6)2,-OP(=O)(O alquilo Ci-6)2, alquilo Ci-6, perhaloalquilo Ci-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, carbociclilo C3-10, arilo C6-10, heterociclilo de 3-10 miembros, heteroarilo de 5-10 miembros; o dos sustituyentes Rgg geminales pueden unirse para formar =O o =S; en el que X es un contraion.

Un "contraion" o "contraion anionico" es un grupo cargado negativamente asociado con un grupo amino cuaternario cationico con el fin de mantener la neutralidad electronica. Entre los contraiones de ejemplo se incluyen iones haluro (por ejemplo, F-, Cl-, Br-, I-), NO3", QO4", OH-, H2PC4", HSO4", iones sulfonato (por ejemplo, metanosulfonato,

trifluorometanosulfonato, p-toluenosulfonato, bencenosulfonato, sulfonato de 10-alcanfor, naftaleno-2-sulfonato, 5- sulfonato de acido naftaleno-1-sulfonico, 2-sulfonato de acido etan-1-sulfonico, y similares) e iones carboxilato (por ejemplo, acetato, etanoato, propanoato, benzoato, glicerato, lactato, tartrato, glicolato y similares).

"Halo" o "halogeno" se refiere a fluor (fluor, -F), cloro (cloro, -Cl), bromo (bromo, -Br) o yodo (yodo, -I).

Entre los sustituyentes de atomos de nitrogeno a modo de ejemplo se incluyen, pero sin limitaciones, -OH, -ORaa, - N(Rcc)2, -C(=O)Raa, -C(=O)N(Rcc)2, -CO2Raa, -SO2Raa, -C(=NRcc)Raa, -C(=NRcc)ORaa, - C(=NRcc)N(Rcc)2, -SO2N(Rcc)2, -SO2Rcc, -SO2ORcc, -SORaa, -C(=S)N(Rcc)2, -C(=O)SRcc, - C(=S)SRcc, alquilo C1-10 (por ejemplo, aralquilo, heteroaralquilo), alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, carbociclilo C3-10, heterociclilo de 3-14 miembros, arilo C6-14 y heteroarilo de 5-14 miembros, en el que cada alquilo, alquenilo, alquinilo, carbociclilo, heterociclilo, aralquilo, arilo y heteroarilo estan sustituidos independientemente con 0, 1, 2, 3, 4 o 5 grupos Rdd y en el que Raa, Rbb, Rcc y Rdd son como se definen en el presente documento. En determinadas realizaciones, el sustituyente atomo de nitrogeno es un grupo protector de nitrogeno. Los grupos protectores de nitrogeno son bien conocidos en la materia e incluyen los descritos con detalle en Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene y P. G. M. Wuts, 3a Edicion, John Wiley & Sons, 1999.

Entre los sustituyentes de atomos de oxlgeno a modo de ejemplo se incluyen, pero sin limitaciones, -Raa, - C(=O)SRaa, -C(=O)Raa, -CO2Raa, -C(=O)N(Rbb)2, -C(=NRbb)Raa, -C(=NRbb)ORaa,-C(=NRbb)N(Rbb)2, -S(=O)Raa, - SO2Raa, -Si(Raa)3, -P(Rcc)2, -P(Rcc)3, -P(=O)2Raa, - P(=O)(Raa)2, -P(=O)(ORcc)2, -P(-O)2N(Rbb)2 y -P(=O)(NRbb)2, en los que Raa, Rbb y Rcc son como se definen en el presente documento. En determinadas realizaciones, el sustituyente atomo de oxlgeno presente en un atomo de oxlgeno es un grupo protector de oxlgeno (tambien denominado grupo protector de hidroxilo). Los grupos protectores de oxlgeno son bien conocidos en la materia e incluyen los descritos con detalle en Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene y P. G. M. Wuts, 3a Edicion, John Wiley & Sons, 1999.

Entre los grupos protectores de oxlgeno a modo de ejemplo se incluyen, pero sin limitaciones, metilo, metoxilmetilo (MOM), metiltiometilo (MTM), f-butiltiometilo, (fenildimetilsilil)metoximetilo (SMOM), benciloximetilo (BOM), p- metoxibenciloximetilo (PMBM), (4-metoxifenoxi)metilo (p-AOM), guaiacolmetilo (GUM), f-butoximetilo, 4- penteniloximetilo (POM), siloximetilo, 2-metoxietoximetilo (MEM), 2,2,2-tricloroetoximetilo, bis(2-cloroetoxi)metilo, 2- (trimetilsilil)etoximetilo (SEMOR), tetrahidropiranilo (THP), 3-bromotetrahidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, 1- metoxiciclohexilo, 4-metoxitetrahidropiranilo (MTHP), 4-metoxitetrahidrotiopiranilo, S,S-dioxido de 4- metoxitetrahidrotiopiranilo, 1-[(2-cloro-4-metil)fenil]-4-metoxi piperidin-4-ilo (CTMP), 1,4-dioxan-2-ilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofuranilo, 2,3,3a,4,5,6,7,7a-octahidro-7,8,8-trimetil-4,7-metanobenzofuran-2-ilo, 1- etoxietilo, 1-(2-cloroetoxi)etilo, 1-metil-1-metoxietilo, 1-metil-1-benciloxietilo, 1 -metil-1 -benciloxi-2-fluoroetilo, 2,2,2- tricloroetilo, 2-trimetilsililetilo, 2-(fenilselenil)etilo, f-butilo, alilo, p-clorofenilo p-metoxifenilo, 2,4-dinitrofenilo, bencilo (Bn), p-metoxibencilo, 3,4-dimetoxibencilo, o-nitrobencilo, p-nitrobencilo, p-halobencilo, 2,6-diclorobencilo, p- cianobencilo, p-fenilbencilo, 2-picolilo, 4-picolilo, W-oxido de 3-metil-2-picolilo, difenilmetilo, p,p'-dinitrobencihidrilo, 5- dibenzosuberilo, trifenilmetilo, a-naftildifenilmetilo, p-metoxifenildifenilmetilo, di(p-metoxifenil)fenilmetilo, tri(p- metoxifenil)metilo, 4-(4'-bromofenaciloxifenil)difenilmetilo, 4,4',4"-tris(4,5-dicloroftalimidofenil)metilo, 4,4',4"- tris(levulinoiloxifenil)metilo, 4,4',4"-tris(benzoiloxifenil)metilo, 3-(imidazol-1- il)bis(4',4"-dimetoxifenill)metilo, 1, 1 -bis(4- metoxifenil)-1'-pirenilmetilo, 9-antrilo, 9-(9-fenil)xantenilo, 9-(9-fenil-10-oxo)antrilo, 1,3-benzodisulfuran-2-ilo, S,S- dioxido de benzisotiazolilo, trimetilsililo (TMS), trietilsililo (TES), triisopropilsililo (TIPS), dimetilisopropilsililo (IPDMS), dietilisopropilsililo (DEIPS), dimetilthexilsililo, f-butildimetilsililo (TBDMS), f-butildifenilsililo (TBDPS), tribencilsililo, tri- p-xililsililo, trifenilsililo, difenilmetilsililo (DPMS), f-butilmetoxifenilsililo (TBMPS), formiato, benzoilformiato, acetato (Ac), cloroacetato, dicloroacetato, tricloroacetato, trifluoroacetato, metoxiacetato, trifenilmetoxiacetato, fenoxiacetato, p-clorofenoxiacetato, 3-fenilpropionato, 4-oxopentanoato (levulinato), 4,4-(etilenditio)pentanoato (levulinoilditioacetal), pivaloato, adamantoato, crotonato, 4-metoxicrotonato, benzoato, p-fenilbenzoato, 2,4,6-trimetilbenzoato (mesitoato), alquilcarbonato de metilo, carbonato de 9-fluorenilmetilo (Fmoc), alquilcarbonato de etilo, alquilcarbonato de 2,2,2- tricloroetilo (Troc), carbonato de 2- (trimetilsilil)etilo (TMSEC), etilcarbonato de 2-(fenilsulfonilo) (Psec), etilcarbonato de 2-(trifenilfosfonio) (Peoc), alquilcarbonato de isobutilo, alquilcarbonato de vinilo alquilcarbonato de alilo, alquilcarbonato de p-nitrofenilo, alquilcarbonato de bencilo, alquilcarbonato de p-metoxibencilo, alquilcarbonato de

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3.4- dimetoxibencilo, alquilcarbonato de o-nitrobencilo, alquilcarbonato de p-nitrobencilo, alquilcarbonato de - bencilo, carbonato de 4-etoxi-1-naftilo, ditiocarbonato de metilo, 2- yodobenzoato, 4-azidobutirato, 4-nitro-4-metilpentanoato, o-(dibromometil)benzoato, 2-formilbencenosulfonato, 2-(metiltiometoxi)etilo, 4-(metiltiometoxi)butirato, 2- (metiltiometoximetil)benzoato, 2,6-dicloro-4- metilfenoxiacetato, 2,6-dicloro-4-(1,1,3,3-tetrametilbutil)fenoxiacetato,

2.4- bis(1,1-dimetilpropil)fenoxiacetato, clorodifenilacetato, isobutirato, monosuccinoato, (E)-2-metil-2-butenoato, o- (methoxiacil)benzoato, a- naftoato, nitrato, W,W,W',W'-tetrametilfosforodiamidato de alquilo, W-fenilcarbamato de alquilo, borato, dimetilfosfinotioilo, 2,4-dinitrofenilsulfenato de alquilo, sulfato, metanosulfonato (mesilato), benzylsulfonato y tosilato (Ts). En determinadas realizaciones, dos atomos de oxlgeno proximales estan protegidos como un acetal clclico, por ejemplo, 1,2- o 1,3-dioles pueden estar protegidos como grupo un isopropilidinilo, un cetal cicloalquilideno (por ejemplo, ciclopentilideno o ciclohexilideno), un bencilideno acetal (por ejemplo, p- metoxibencilidina), un carbonato, un silileno (por ejemplo, di-t-butilsilileno, 1,3-(1,1,1,3,3)-tetraisopropildisiloxanilida), un 1,3-dioxolanilo o un1,3-dioxanilo.

"Sal" o "sal farmaceuticamente aceptable" se refiere a las sales que son, dentro del alcance del buen juicio medico, adecuadas para su uso en contacto con los tejidos de los seres humanos y animales sin toxicidad excesiva, irritacion, respuesta alergica y similares y en consonancia con una proporcion beneficio/riesgo razonable. Las sales farmaceuticamente aceptables se conocen bien en la tecnica. Por ejemplo, vease Berge et al., describe sales farmaceuticamente aceptables con detalle en J. Pharmaceutical Sciences (1977) 66:1-19 y P. Heinrich Stahl and Camille G. Wermuth, Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. International Union of Pure and Applied Chemistry, Wiley-VCH 2002. Las sales farmaceuticamente aceptables incluyen las sales de adicion de acido farmaceuticamente aceptables (es decir, una sal formada a partir del compuesto tras la adicion de un acido) y sales de adicion de bases farmaceuticamente aceptables (es decir, una sal formada a partir el compuesto despues de la adicion de una base). Las sales de adicion de acidos farmaceuticamente aceptables incluyen, pero sin limitaciones, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, nitrato, sulfato, bisulfato, fosfato, fosfato de acido, isonicotinato, acetato, lactato, salicilato, citrato, tartrato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucaronato, sacarato, formiato, benzoato, glutamato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato y pamoato. Las sales de adicion de bases farmaceuticamente aceptables incluyen, pero sin limitaciones, aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio, cinc y de amina cuaternaria.

Un “isomero” incluye cualquiera y todos los isomeros geometricos y estereoisomeros. Por ejemplo, "isomeros" incluye los isomeros cis y trans, isomeros E y Z, enantiomeros R y S, diastereomeros, (D)-isomeros, (L)-isomeros, isomeros fac y mer, mezclas racemicas de los mismos y otras mezclas de los mismos, que se encuentran dentro del alcance de la invencion.

Un "hidrato" se refiere a un compuesto de la presente divulgacion asociado no covalentemente con una o mas moleculas de agua. De forma analoga, Un "solvato" se refiere a un compuesto de la presente divulgacion asociado no covalentemente con una o mas moleculas de disolvente organico.

Un "grupo carbohidrato" o un "hidrato de carbono" se refiere a un monosacarido o un polisacarido (por ejemplo, un disacarido o un oligosacarido). Entre los ejemplos de monosacaridos se incluyen, pero sin limitaciones, alosa, altrosa, glucosa, manosa, gulosa, idosa, galactosa, talosa, ribosa, arabinosa, xilosa y lixosa. Los disacaridos son dos monosacaridos unidos. Entre los ejemplos de disacaridos se incluyen, pero sin limitaciones, sacarosa, maltosa, celobiosa y lactosa. Normalmente, un oligosacarido incluye entre tres y diez unidades de monosacaridos (por ejemplo, rafinosa, estaquiosa). El grupo carbohidrato puede ser un azucar natural o un azucar modificado. Entre los azucares modificados de ejemplo se incluyen, pero sin limitaciones, 2'-desoxirribosa en la que se ha eliminado un grupo hidroxilo, 2'-fluororribosa en la que un grupo hidroxilo se sustituye con un atomo de fluor o N- acetilglucosamina, o una forma de la glucosa que contiene nitrogeno(por ejemplo, 2'-fluororribosa, desoxirribosa y hexosa). Los hidratos de carbono pueden existir en muchas formas diferentes, por ejemplo, conformeros, formas clclicas, formas aclclicas, estereoisomeros, tautomeros, anomeros e isomeros.

Realizaciones del compuesto de formula (I)

Tal como se ha descrito generalmente anteriormente, la presente invencion proporciona compuestos de formula (I):

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E es-S- o -Se-;

R1 es hidrogeno o alquilo Ci-6;

cada uno de R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, hidrogeno, un grupo carbohidrato o un grupo protector de

oxlgeno; y

Xi y X2 son cada uno, independientemente, halogeno.

En determinadas realizaciones, E is -S-. En determinadas realizaciones, E es -Se-.

En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C1-5. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C1-4. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C1-3. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C1-2. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C2-6. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C2-5. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C2-4. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C2-3. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C3- 6. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C3-5. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C3-4. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C4-6. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C4-5. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C1. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C2. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C3. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C4. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C5. En determinadas realizaciones, R1 es alquilo C6. En determinadas realizaciones, R1 se selecciona entre el grupo que consiste en -CH3, -CH2CH3, -(CH2)2CH3, -(CH2)3CH3, -(CH2)4CH3, -(CH2)5CH3, -CH(CH3)2, -C(CH3)3,- CH(CH3)CH2CH3, -CH2CH(CH3)CH3, -CH(CH3)(CH2)2CH3, -CH2CH(CH3)CH2CH3,-(CH2)2CH(CH3)2, -

CH(CH3)(CH2)3CH3,-CH2CH(CH3)(CH2)2CH3 y -(CH2)3CH(CH3)2. En determinadas realizaciones, R1 es -CH3 o - CH2CH3 En determinadas realizaciones, R1 es -CH3.

Tal como se ha descrito generalmente anteriormente, cada uno de R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, hidrogeno, un grupo carbohidrato o un grupo protector de oxlgeno.

En determinadas realizaciones, al menos uno de R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, hidrogeno. En determinadas realizaciones, al menos dos de R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, hidrogeno. En determinadas realizaciones, al menos tres de R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, hidrogeno. En determinadas realizaciones, cada uno de R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, hidrogeno.

En determinadas realizaciones, al menos uno de R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, un grupo carbohidrato. En determinadas realizaciones, al menos dos de R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, un grupo carbohidrato. En

determinadas realizaciones, al menos tres de R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, un grupo carbohidrato. En

determinadas realizaciones, cada uno de R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, un grupo carbohidrato. Ejemplos

de grupos carbohidrato se han descrito anteriormente y en el presente documento. Por ejemplo, en determinadas

realizaciones, el grupo carbohidrato es un monosacarido, por ejemplo, glucosa o galactosa. En determinadas realizaciones, el hidrato de carbono es un disacarido, por ejemplo, sacarosa. En determinadas realizaciones, el hidrato de carbono es un oligosacarido.

En determinadas realizaciones, al menos uno de R' oxlgeno

2 R3, R4 y R5 es, independientemente, un grupo protector de En determinadas realizaciones, al menos dos de R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, un grupo protector de oxlgeno. En determinadas realizaciones, al menos tres de R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, un grupo protector de oxlgeno. En determinadas realizaciones, cada uno de R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, un grupo protector de oxlgeno. Ejemplos de grupos carbohidrato se han descrito anteriormente y en el presente documento. Por ejemplo, en determinadas realizaciones, el grupo protector de oxlgeno se selecciona de entre el grupo que consiste en -Raa, -C(=O)SRaa, -C(=O)Raa, -CO2Raa, -C(=O)N(Rbb)2, -C(=NRbb)Raa,-C(=NRbb)ORaa, - C(=NRbb)N(Rbb)2, -S(=O)Raa, -SO2Raa, -Si(Raa)3-P(Rcc)2, -P(Rcc)3,-P(=O)2Raa, -P(=O)(Raa)2, -P(=O)(ORcc)2, - P(=O)2N(Rbb)2 y -P(=O)(NRbb)2, en los que Raa, Rbb y Rcc son como se definen en el presente documento. En determinadas realizaciones, el grupo protector de oxlgeno es -C(=O)Raa, en el que Raa es alquilo C1-10. En determinadas realizaciones, el grupo protector de oxlgeno es -C(=O)CH3.

Tal como se ha descrito generalmente anteriormente, X1 y X2 son cada uno, independientemente, halogeno: En determinadas realizaciones, X1 y X2 se seleccionan, cada uno independientemente, de entre el grupo que consiste en bromo, yodo o cloro. En determinadas realizaciones, X1 y X2 se seleccionan, cada uno independientemente, de entre el grupo que consiste en bromo o cloro. En determinadas realizaciones, al menos uno de X1 y X2 es yodo. En determinadas realizaciones, al menos uno de X1 y X2 es bromo. En determinadas realizaciones, al menos uno de X1 y X2 es cloro. En determinadas realizaciones, X1 y X2 son cada uno yodo. En determinadas realizaciones, X1 y X2 son cada uno bromo. En determinadas realizaciones, X1 y X2 son cada uno cloro.

En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar:

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or3 or2.

p- altrosa

p- alosa

a- alosa

p-glucosa

oc-glucosa

a-altrosa

p-gulosa

p- manosa

a- manosa

a- yodosa

B- yodosa

a- gulosa

es un estereoisomero seleccionado de entre el grupo que consiste en:

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en la que R2, R3, R4 y R5 son como se definen en el presente documento.

Alfa y beta designan la estereoqmmica en el carbono anomerico C1 del sustituyente azucar. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es alfa en el carbono anomerico. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es beta en el carbono anomerico.

En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar se selecciona de entre el grupo que consiste en a-glucosa, p- glucosa, a-manosa, p-manosa, a-galactosa y p-galactosa. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar se selecciona de entre el grupo que consiste en a glucosa y p-glucosa. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar se selecciona de entre el grupo que consiste en a manosa y p-manosa. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar se selecciona de entre el grupo que consiste en a-galactosa y p-galactosa. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es a-glucosa. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es p- glucosa. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es a-manosa. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es p-manosa. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es a-galactosa. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es p-galactosa.

En determinadas realizaciones, el complejo de rutenio:

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es un estereoisomero de formula:

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en la que Xi y X2 son como se define en el presente documento.

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En determinadas realizaciones, el complejo de rutenio es un estereoisomero de formula (i). En determinadas realizaciones, el complejo de rutenio es un estereoisomero de formula (ii). En determinadas realizaciones, el complejo de rutenio es un estereoisomero de formula (iii).

En determinadas realizaciones de formula (I), en el que el complejo de rutenio es un estereoisomero de formula (i), el compuesto es de formula (I-a):

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o una sal, isomero, hidrato o solvato del mismo o combinacion de los mismos, en la que E, R1, R2, R3, R4, R5, Xi y X2 son como se definen en el presente documento. En determinadas realizaciones, E is -S-. En determinadas realizaciones, E es -Se-. En determinadas realizaciones, R1 es hidrogeno. En determinadas realizaciones, R1 es - CH3. En determinadas realizaciones, cada uno de R2, R3, R4 y R5 es hidrogeno. En determinadas realizaciones, X1 y X2 son cada uno cloro (-Cl). En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es a-galactosa o p-galactosa. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es a-galactosa. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es p-galactosa.

En determinadas realizaciones de formula (I), en la que el sustituyente azucar es a-galactosa o p-galactosa, el compuesto es de formula (I-b):

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o una sal, isomero, hidrato o solvato del mismo o combinacion de los mismos, en la que E, R1, R2, R3, R4, R5, X1 y X2 son como se definen en el presente documento. En determinadas realizaciones, E is -S-. En determinadas realizaciones, E es -Se-. En determinadas realizaciones, R1 es hidrogeno. En determinadas realizaciones, R1 es - CH3. En determinadas realizaciones, cada uno de R2, R3, R4 y R5 es hidrogeno. En determinadas realizaciones, X1 y X2 son cada uno cloro (-Cl). En determinadas realizaciones, el complejo de rutenio es un estereoisomero de formula (i). En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es a-galactosa. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es p-galactosa.

En determinadas realizaciones de formula (I-b), en el que el complejo de rutenio es un estereoisomero de formula (i), el compuesto es de formula (I-c):

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o una sal, hidrato o solvato del mismo o combinacion de los mismos, en la que E, R1, R2, R3, R4, R5, X1 y X2 son como se definen en el presente documento. En determinadas realizaciones, E is -S-. En determinadas realizaciones, E es -Se-. En determinadas realizaciones, R1 es hidrogeno. En determinadas realizaciones, R1 es -CH3. En determinadas realizaciones, cada uno de R2, R3, R4 y R5 es hidrogeno. En determinadas realizaciones, X1 y X2 son cada uno cloro (-Cl). En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es a-galactosa. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es p-galactosa.

En determinadas realizaciones de formula (I-c), en el que X1 y X2 son cada uno cloro (-Cl), el compuesto es de formula (I-d):

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o una sal, hidrato o solvato del mismo o combinacion de los mismos, en la que E, R1, R2, R3, R4 y R5, son como se definen en el presente documento. En determinadas realizaciones, E is -S-. En determinadas realizaciones, E es - Se-. En determinadas realizaciones, R1 es hidrogeno. En determinadas realizaciones, R1 es -CH3. En determinadas realizaciones, cada uno de R2, R3, R4 y R5 es hidrogeno. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es a- galactosa. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es p-galactosa.

En determinadas realizaciones de formula (I-d), en la que R1 es -CH3, el compuesto es de formula (I-e):

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o una sal, hidrato o solvato del mismo o combinacion de los mismos, en la que E, R2, R3, R4 y R5, son como se definen en el presente documento. En determinadas realizaciones, E is -S-. En determinadas realizaciones, E es - Se-. En determinadas realizaciones, cada uno de R2, R3, R4 y R5 es hidrogeno. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es a-galactosa. En determinadas realizaciones, el sustituyente azucar es p-galactosa.

En determinadas realizaciones de formula (I-e), en la que el sustituyente azucar es p-galactosa, el compuesto es de formula (I-f):

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o una sal, hidrato o solvato del mismo o combinacion de los mismos, en la que E, R2, R3, R4 y R5, son como se definen en el presente documento. En determinadas realizaciones, E is -S-. En determinadas realizaciones, E es - Se-. En determinadas realizaciones, cada uno de R2, R3, R4 y R5 es hidrogeno.

En determinadas realizaciones de formula (I-f), en la que E es -S- y cada uno de R2, R3, R4 y R5 es hidrogeno, el compuesto es:

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o un hidrato o solvato del mismo o combinacion de los mismos.

Composiciones farmaceuticas y administration

La presente invencion proporciona composiciones farmaceuticas que comprenden un compuesto de la presente invencion, por ejemplo, un compuesto de formula (I) o una sal, isomero, hidrato o solvato del mismo o combinacion de los mismos, como se describe en el presente documento y un vehlculo farmaceuticamente aceptable. En determinadas realizaciones, el compuesto de la presente invencion se proporciona en una cantidad eficaz en la

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composition farmaceutica. En determinadas realizaciones, la cantidad eficaz es una cantidad terapeuticamente eficaz. En determinadas realizaciones, la cantidad eficaz es una cantidad profilacticamente eficaz.

Entre los excipientes farmaceuticamente aceptables se incluyen a cualquiera y a todos los disolventes, diluyentes, u otros vehlculos llquidos, dispersiones, auxiliares de la suspension, agentes tensioactivos, agentes isotonicos, agentes espesantes o emulsionantes, conservantes, aglutinantes solidos, lubricantes y similares, segun sea adecuado para la forma farmaceutica concreta deseada. Consideraciones generales sobre la formulation y/o fabrication de agentes de composiciones farmaceuticas se pueden encontrar, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, Decimosexta edition, E. W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980) y en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21a edition (Lippincott Williams & Wilkins, 2005).

Las composiciones farmaceuticas descritas en el presente documento se pueden preparar mediante cualquier metodo conocido en la tecnica de farmacologla. En general, dichos metodos de preparation incluyen las etapas de asociar el compuesto de la presente invention (el "principio activo") con un vehlculo y/o uno o mas ingredientes auxiliares adicionales, y a continuation, si es necesario y/o deseable, la conformation y/o el envasado del producto en una forma farmaceutica monodosis y multidosis.

Las composiciones farmaceuticas se pueden preparar, envasar y/o vender a granel, como dosis unitaria sencilla y/o como una pluralidad de dosis unitarias sencillas. Como se usa en el presente documento, una "dosis unitaria" es una cantidad pequena de la composition farmaceutica que comprende una cantidad predeterminada del principio activo. La cantidad de principio activo es generalmente igual a la dosis del principio activo, que se administrarla a un sujeto y/o una fraction conveniente de dicha dosificacion tal como, por ejemplo, una mitad o un tercio de dicha dosis.

Las cantidades relativas del principio activo, el excipiente farmaceuticamente aceptables y/o cualesquiera ingredientes adicionales en una composicion farmaceutica de la invencion variaran dependiendo de la identidad, tamano, y/o estado del sujeto tratado, y adicionalmente dependiente de la via por la que se va a administrar la composition. A modo de ejemplo, la composition puede comprender entre un 0,1% y 100 % (p/p) de principio activo.

Los excipientes farmaceuticamente aceptables usados en la fabricacion de las composiciones farmaceuticas proporcionadas incluyen diluyentes inertes, agentes de dispersion y/o granulation, tensioactivos y/o emulsionantes, agentes disgregantes, agentes aglutinantes, conservantes, agentes tamponadores, agentes y/o aceites lubricantes. Los excipientes tales como manteca de cacao y ceras de supositorio, agentes colorantes, agentes de recubrimiento, edulcorantes, aromatizantes, y agentes perfumantes, pueden estar presentes en la composition,

Entre los diluyentes de ejemplo se incluyen carbonato de calcio, carbonato de sodio, fosfato de calcio, fosfato dicalcico, sulfato de calcio, hidrogeno fosfato de calcio, lactosa fosfato de sodio, sacarosa, celulosa, celulosa microcristalina, caollna, manitol, sorbitol, inositol, cloruro sodico, almidon seco, almidon de malz, azucar en polvo y mezclas de los mismos.

Los agentes de granulation y/o dispersantes de ejemplo se incluyen almidon de patata, almidon de malz, almidon de tapioca, glicolato de almidon sodio, arcillas, acido alglnico, goma guar, pulpa de cltricos, agar, bentonita, celulosa y productos de madera, esponja natural, resinas de intercambio cationico, carbonato de calcio, silicatos, carbonato de sodio, poli(vinilpirrolidona) reticulada (crospovidona), carboximetilalmidon sodio (glicolato de almidon sodico), carboximetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio reticulada (croscarmelosa), metilcelulosa, almidon pregelatinizado (almidon 1500), almidon microcristalino, almidon insoluble en agua, carboximetilcelulosa de calcio, silicato de aluminio y magnesio (Veegum), lauril sulfato sodico, compuestos de amonio cuaternario y mezclas de los mismos.

Entre los agentes tensioactivos y/o emulsionantes de ejemplo se incluyen, agar, acido alglnico, alginato de sodio, tragacanto, condrux, colesterol, xantana, pectina, gelatina, yema de huevo, caselna, lanolina, colesterol, cera, y lecitina), arcillas coloidales (por ejemplo, bentonita [silicato de aluminio] y Veegum [silicato de aluminio y magnesio]), derivados de aminoacidos, de cadena larga, alcoholes de alto peso molecular (por ejemplo, alcohol cetllico, alcohol olellico, monoestearato de triacetina, diestearato de etilenglicol, monoestearato de glicerilo y monoestearato de propilenglicol, alcohol polivinllico), carbomeros (por ejemplo, carboxipolimetileno, poli(acido acrllico), pollmero de acido acrllico y pollmero de carboxivinilo), carragenano, derivados de celulosa (por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, celulosa en polvo, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa metilcelulosa), esteres de acidos grasos de sorbitano (por ejemplo monolaurato de polioxietileno de sorbitano [Tween 20], polioxietileno de sorbitano [Tween 60], monooleato de polioxietileno de sorbitano [Tween 80], monopalmitato de sorbitano [Span 40], monoestearato de sorbitano [Span 60], triestearato de sorbitano [Span 65], monooleato de glicerilo, monooleato de sorbitano [Span 80 ]), esteres de polioxietileno (por ejemplo, monoestearato de polioxietileno [Myrj 45], aceite de ricino polioxietilenado, aceite de ricino polioxietilenado, estearato polioxietilenado, y Solutol), esteres de acido graso de sacarosa, esteres de acidos grasos de polietilenglicol (por ejemplo, Cremophor), eteres polioxietilenados, (por ejemplo, lauril eter de polioxietileno [Brij 30]), poli(vinilpirrolidina), monolaurato de dietilenglicol, oleato de trietanolamina, oleato de sodio, oleato de potasio, oleato de etilo, acido oleico, laurato de etilo, lauril sulfato sodico, Pluronic F 68, Poloxamero 188, bromuro de cetrimonio, cloruro de cetilpiridinio, cloruro de benzalconio, docusato sodico y/o mezclas de los mismos.

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Entre los agentes de union de ejemplo se incluyen almidon (por ejemplo, almidon de malz y pasta de almidon), gelatina, azucares (por ejemplo, sacarosa, glucosa, dextrosa, dextrina, melazas, lactosa, lactitol, manitol, etc.), gomas naturales y sinteticas (por ejemplo, acacia, alginato de sodio, extracto de musgo de Irlanda, goma panwar, goma ghatti, mucllago de cascara de isapol, carboximetilcelulosa, metilcelulosa, etilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, celulosa microcristalina, acetato de celulosa, poli(vinilpirrolidina), silicato de aluminio y magnesio (Veegum), y arabolaractano de alerce), alginatos, oxido de polietileno, polietilenglicol, sales de calcio inorganicas, acido sillcico, polimetacrilatos, ceras, agua, alcohol y/o mezclas de las mismas.

Entre los conservantes de ejemplo se pueden incluir antioxidantes, agentes quelantes, agentes antimicrobianos, conservantes antifungicos, conservantes de alcohol, conservantes acidos, y otros conservantes.

Entre los ejemplos de antioxidantes se incluyen alfa-tocoferol, acido ascorbico, palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, monotioglicerol, metabisulfito de potasio, acido propionico, galato de propilo, ascorbato sodico, bisulfito de sodio, metabisulfito de sodio, y sulfito de sodio.

Entre los agentes quelantes de ejemplo se incluyen acido etilendiaminotetraacetico (EDTA) y sales e hidratos de los mismos (por ejemplo, edetato de sodio, edetato disodico, edetato trisodico, edetato disodico y calcico, edetato dipotasico y similares), acido cltrico y sales e hidratos de los mismos (por ejemplo, acido cltrico monohidrato), acido fumarico y sales e hidratos de los mismos, acido malico y sales e hidratos de los mismos, acido fosforico y sales e hidratos de los mismos, y acido tartarico y sales e hidratos de los mismos. Entre los conservantes antimicrobianos de ejemplo se incluyen cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, alcohol bencllico, bronopol, cetrimida, cloruro de cetilpiridinio, clorhexidina, clorobutanol, clorocresol, cloroxilenol, cresol, alcohol etllico, glicerina, hexetidina, imidurea, fenol, fenoxietanol, feniletil alcohol, nitrato de fenilmercurio, propilenglicol, y timerosal.

Entre los ejemplos de conservantes antifungicos se incluyen butil parabeno, metilparabeno, etilparabeno, propilparabeno, acido benzoico, acido hidroxibenzoico, benzoato de potasio, sorbato de potasio, benzoato de sodio, propionato de sodio, y acido sorbico.

Entre los ejemplos de conservantes de alcohol se incluyen etanol, polietilenglicol, fenol, compuestos fenolicos, bisfenol, clorobutanol, hidroxibenzoato, y alcohol feniletllico.

Entre los ejemplos de conservantes acidos se incluyen vitamina A, vitamina C, vitamina E, beta-caroteno, acido cltrico, acido acetico, acido deshidroacetico, acido ascorbico, acido sorbico, y acido fltico.

Entre otros conservantes se incluyen, acetato de tocoferol, mesilato de deteroxima, cetrimida, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), etilendiamina, lauril sulfato de sodio (SLS), lauril eter sulfato de sodio (SLS), bisulfito de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de potasio, metabisulfito de potasio, Glydant Plus, Phenonip, metilparabeno, Germall 115, Germaben II, Neolone, Kathon y Euxyl. En determinadas realizaciones, el conservante es un antioxidante. En otras realizaciones, el conservante es un agente quelante.

Entre los ejemplos de agentes tamponadores, se incluyen soluciones de tampon citrato, soluciones de tampon acetato, soluciones de tampon fosfato, cloruro de amonio, carbonato de calcio, cloruro de calcio, citrato de calcio, glubionato de calcio, gluceptato de calcio, gluconato de calcio, acido D-gluconico,, glicerofosfato de calcio, lactato de calcio, acido propanoico, levulinato de calcio, acido pentanoico, fosfato de calcio dibasico, acido fosforico, fosfato de calcio tribasico, hidroxidofosfato de calcio, acetato de potasio, cloruro de potasio, gluconato de potasio, mezclas potasicas, fosfato de potasio dibasico, fosfato de potasio monobasico, mezclas de fosfato de potasio, acetato de sodio, bicarbonato de sodio, cloruro sodico, citrato de sodio, lactato sodico, fosfato de sodio dibasico, fosfato de sodio monobasico, mezclas de fosfato de sodio, trometamina, hidroxido de magnesio, hidroxido de aluminio, acido alglnico, agua apirogena, solucion salina isotonica, solucion de Ringer, alcohol etllico y mezclas de los mismos.

Entre los ejemplos de agentes lubricantes se incluyen estearato de magnesio, estearato de calcio, acido estearico, sllice, talco, malta, behenato de glicerilo, aceites vegetales hidrogenados, polietilenglicol, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro sodico, leucina, lauril sulfato de magnesio, lauril sulfato de sodio, y sus mezclas.

Entre los ejemplos de aceites naturales se incluyen aceites de almendras, de almendras de albaricoque, aguacate, babasu, bergamota, semillas de grosella negra, borraja, enebro de miera, camomila, canola, alcaravea, carnauba, ricino, canela, manteca de cacao, coco, hlgado de bacalao, cafe, malz, semillas de algodon, emu, eucalipto, onagra, pescado, semillas de lino, geraniol, calabaza, pepitas de uva, avellanas, hisopo, miristato de isopropilo, jojoba, nuez de kukui, lavandina, lavanda, limon, litsea cubeba, nuez de macadamia, malva, semillas de mango, semillas de hierba de la pradera, vison, nuez moscada, de oliva, naranja, de reloj anaranjado, palma, nuez de palma, nuez de melocoton, cacahuete, semillas de amapola, semillas de calabaza, colza, salvado de arroz, romero, cartamo, madera de sandalo, camelia sasquana, aceite especiado, espino cerval, sesamo, manteca de karite, silicona, soja, girasol, arbol del te, cardo, camelia, vetiver, avellana y aceites de germen de trigo. Entre los ejemplos de aceites sinteticos se incluyen, pero sin limitaciones, estearato de butilo, triglicerido caprllico, triglicerido caprico, ciclometicona, sebacato de dietilo, dimeticona 360, miristato de isopropilo, aceite mineral, octildodecanol, alcohol olellico, aceite de silicona, y mezclas de los mismos.

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Las formas farmaceuticas llquidas para administracion oral y parenteral incluyen emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmaceuticamente aceptables. Ademas de los principios activos, la forma farmaceutica llquida puede comprender diluyentes inertes usados habitualmente en la tecnica, tales como, por ejemplo, agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes tales como alcohol etllico, alcohol isopropllico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencllico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3- butilenglicol, dimetilformamida, aceites (por ejemplo, de semilla de algodon, de cacahuete, malz, de germen, de oliva, de ricino y de sesamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurfurllico, polietilenglicoles y esteres de acidos grasos de sorbitan y mezclas de los mismos. Ademas de diluyentes inertes, las composiciones orales pueden incluir adyuvantes tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y agentes suspensores, edulcorantes, aromatizantes y perfumantes. En determinadas realizaciones para la administracion parenteral, los conjugados de la invention se mezclan con agentes solubilizantes, tales como Cremophor, alcoholes, aceites, aceites modificados, glicoles, polisorbatos, ciclodextrinas, pollmeros y mezclas de los mismos.

Las preparaciones inyectables, por ejemplo, suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables esteriles pueden formularse de acuerdo con la tecnica conocida usando agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes de suspension. La preparation inyectable esteril tambien puede ser una solution, suspension o emulsion inyectable esteril en un diluyente o disolvente no toxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solucion en 1,3- butanodiol. Entre los vehlculos y disolventes aceptables que se pueden emplear se encuentran agua, solucion de Ringer, U.S.P. y solucion de cloruro sodico isotonica. Ademas, normalmente se usan aceites fijos esteriles como disolvente o medio de suspension. Para este fin, puede emplearse cualquier aceite suave no volatil, incluyendo mono o digliceridos sinteticos. Ademas, se usan acidos grasos tales como acido oleico en la preparacion de los inyectables.

Las formulaciones inyectables pueden esterilizarse, por ejemplo, mediante filtration a traves de un filtro de retention de bacterias, o incorporando agentes esterilizantes en forma de composiciones solidas esteriles que pueden disolverse o dispersarse en agua esteril u otro medio inyectable esteril antes de su uso.

Para prolongar el efecto de un farmaco, es a menudo deseable ralentizar la absorcion del farmaco mediante inyeccion subcutanea o intramuscular. Esto puede lograrse mediante el uso de una suspension llquida de material cristalino o amorfo con poca solubilidad en agua. La velocidad de absorcion del farmaco depende por tanto de su velocidad de disolucion que, a su vez, puede depender del tamano del cristal y de la forma cristalina. Como alternativa, la absorcion retardada de una forma de farmaco administrada parenteralmente se logra disolviendo o suspendiendo el farmaco en un vehlculo oleoso.

Las composiciones para administracion rectal o vaginal son, normalmente, supositorios que pueden prepararse mezclando los conjugados de la presente invencion con excipientes o vehlculos adecuados no irritantes, tales como manteca de cacao, polietilenglicol o una cera para supositorio que son solidos a temperatura ambiente pero llquidos a temperatura corporal y por lo tanto se derretiran en el recto o en la cavidad vaginal y liberaran el principio activo.

Las formas farmaceuticas solidas para administracion oral incluyen capsulas, comprimidos, plldoras, polvos y granulos. En dichas formas farmaceuticas solidas, el principio activo se mezcla con al menos un excipiente o vehlculo inerte farmaceuticamente aceptable, tal como citrato de sodio o fosfato dicalcico y/o a) cargas o extensores, tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y acido sillcico, b) aglutinantes, tales como por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidinona, sacarosa y goma arabiga, c) humectantes, tales como glicerol, d) agentes disgregantes, tales como agar, carbonato de calcio, almidon de patata o tapioca, acido alglnico, ciertos silicatos y carbonato sodico, e) agentes retardantes de la solucion, tales como parafina, f) aceleradores de la absorcion, tales como compuestos de amonio cuaternario, g) agentes humectantes, tales como por ejemplo, alcohol cetllico y monoestearato de glicerol, h) absorbentes tales como caolln y arcilla bentonita e i) lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles solidos, lauril sulfato de sodio, y sus mezclas. En el caso de capsulas, comprimidos y plldoras, la forma farmaceutica puede comprender agentes tamponadores.

Pueden emplearse composiciones solidas de tipo similar como cargas en capsulas de gelatina blandas y duras usando excipientes tales como lactosa o azucar de la leche, as! como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares. Las formas farmaceuticas solidas de comprimidos, grageas, capsulas, plldoras y granulos pueden prepararse con recubrimientos y envolturas, tales como recubrimientos entericos y otros recubrimientos bien conocidos en la tecnica de formulation farmaceutica. Pueden comprender opcionalmente agentes opacificantes y tambien puede ser de una composition tal que liberen a el(los) ingrediente(s) activo(s) unicamente, o bien, preferentemente, en una parte determinada del tracto intestinal, opcionalmente, de manera retardada. Los ejemplos de composiciones de inclusion que pueden usarse incluyen sustancias polimericas y ceras. Tambien pueden emplearse composiciones solidas de un tipo similar como cargas en capsulas de gelatina blandas y duras usando excipientes tales como lactosa o azucar de la leche, as! como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares.

Los principios activos pueden estar en forma microencapsulada con uno o mas excipientes, tal como se ha indicado anteriormente. Las formas farmaceuticas solidas de comprimidos, grageas, capsulas, plldoras y granulos pueden prepararse con recubrimientos y envolturas, tales como recubrimientos entericos, recubrimientos de control de la liberation y otros recubrimientos bien conocidos en la tecnica de la formulacion farmaceutica. En dichas formas

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farmaceuticas solidas, el principio activo puede mezclarse con al menos un diluyente inerte, tal como sacarosa, lactosa o almidon. Dichas formas farmaceuticas pueden comprender, como es habitual, sustancias adicionales distintas de los diluyentes inertes, por ejemplo, lubricantes de compresion y otros adyuvantes para la compresion, tales como estearato de magnesio y celulosa microcristalina. En el caso de capsulas, comprimidos y plldoras, las formas farmaceuticas pueden comprender agentes tamponadores. Pueden comprender opcionalmente agentes opacificantes y tambien puede ser de una composicion tal que liberen a el(los) ingrediente(s) activo(s) unicamente, o bien, preferentemente, en una parte determinada del tracto intestinal, opcionalmente, de manera retardada. Los ejemplos de composiciones de inclusion que pueden usarse incluyen sustancias polimericas y ceras.

Las formas farmaceuticas para administracion topica y/o transdermica de un compuesto de la presente invencion pueden incluir pomadas, pastas, cremas, lociones, geles, polvos, soluciones, pulverizaciones, inhaladores y/o parches. En general, el principio activo se mezcla en condiciones esteriles con un vehlculo farmaceuticamente aceptable y cualesquiera conservantes y/o tampones necesarios, segun se requiera. Ademas, la presente invencion contempla el uso de parches transdermicos, que frecuentemente tienen la ventaja anadida de proporcionar un suministro controlado de un principio activo al organismo. Dichas formas farmaceuticas se pueden preparar, por ejemplo, disolviendo y/o dispensando el principio activo en el medio correcto. De forma alternativa o adicional, la velocidad se puede controlar tanto proporcionando una membrana de control de la velocidad y/o dispersando el principio activo en una matriz polimerica y/o gel.

Los dispositivos adecuados para administrar las composiciones farmaceuticas descritas en el presente documento por via intradermica incluyen los dispositivos de aguja corta tales como los que se describen en las patentes de Estados Unidos 4.886.499; 5.190.521; 5.328.483; 5.527.288; 4.270.537; 5.015.235; 5.141.496; y 5.417.662. Las composiciones intradermicas se pueden administrar mediante dispositivos que limiten la longitud de penetracion eficaz de una aguja dentro de la piel, tales como los que se describen en la publicacion PCT WO 99/34850 y sus equivalentes funcionales. Son adecuados los dispositivos de inyeccion de chorro que administran vacunas llquidas a la dermis mediante un inyector de chorro llquido y/o mediante una aguja que perfora el estrato corneo y produce un chorro que alcanza la dermis. Los dispositivos de inyeccion de chorro se describen, por ejemplo, en las patentes de Estados Unidos 5.480.381; 5.599.302; 5.334.144; 5.993.412; 5.649.912; 5.569.189; 5.704.911; 5.383.851; 5.893.397; 5.466.220; 5.339.163; 5.312.335; 5.503.627; 5.064.413; 5.520.639; 4.596.556; 4.790.824; 4.941.880; 4.940.460; y en la Publicaciones PCT WO 97/37705 y WO 97/13537. Son adecuados los dispositivos de administracion ballstica de polvo/partlculas que usan gas comprimido para acelerar la vacuna en forma de polvo a traves a traves de las capas exteriores de la piel hasta alcanzar la dermis. De forma alternativa o adicional, se pueden usar jeringas convencionales segun el metodo clasico de Mantoux de administracion intradermica.

Las formulaciones adecuadas para administracion topica incluyen, pero sin limitaciones, preparaciones llquidas y/o semillquidas tales como linimentos, lociones, emulsiones de aceite en agua y/o de agua en aceite tales como cremas, pomadas y/o pastas, y/o soluciones y/o suspensiones. Las formulaciones que se pueden administrar por via topica, por ejemplo, comprenden de aproximadamente 1% a aproximadamente 10% (p/p) de principio activo, aunque la concentracion del principio activo puede ser tan alta como el llmite de solubilidad del principio activo en el disolvente. Las formulaciones para administracion topica pueden comprender ademas uno o mas de los ingredientes adicionales descritos en el presente documento.

Una composicion farmaceutica de la invencion se puede preparar, envasar, y/o comercializar en una formulacion adecuada para administracion pulmonar a traves de la cavidad bucal. Dicha formulacion puede comprender partlculas secas que comprenden el principio activo y que tienen un diametro comprendido en el intervalo de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 7 nanometros o de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 nanometros. Dichas composiciones estan convenientemente en forma de polvos secos para su administracion usando un dispositivo que comprende un deposito de polvo seco al que se puede dirigir una corriente de propulsor para dispersar el polvo y/o usar una recipiente dispensador de disolvente/polvo autopropulsado tal como un dispositivo que comprende el principio activo disuelto y/o suspendido en un propulsor de bajo punto de ebullicion en un recipiente precintado. Dichos polvos comprenden partlculas en las que al menos el 98% de las partlculas en peso tienen un diametro superior a 0,5 nanometros y al menos el 95 % de las partlculas en numero tienen un diametro inferior a 7 nanometros. Como alternativa, al menos el 95 % de las partlculas en peso tienen un diametro superior a 1 nanometro y al menos el 90 % de las partlculas en numero tienen un diametro inferior a 6 nanometros. Las composiciones de polvo seco pueden incluir un diluyente en forma de polvo fino como azucar, y se proporciona convenientemente en una forma farmaceutica unitaria.

Los propulsores de bajo punto de ebullicion por lo general incluyen propulsores llquidos que tienen un punto de ebullicion inferior a 65 °F (18,3 °C) a presion atmosferica. Por lo general, el propulsor puede constituir del 50 al 99,9 % (p/p) de la composicion, y el principio activo puede constituir del 0,1 al 20 % (p/p) de la composicion. El propulsor puede comprender ademas ingredientes adicionales tales como un tensioactivo no ionico llquido y/o un tensioactivo anionico solido y/o un diluyente solido (que puede tener un tamano de las partlculas del mismo orden de magnitud que las partlculas que comprenden el principio activo).

Las composiciones farmaceuticas de la invencion formulada para administracion pulmonar pueden proporcionar el principio activo en forma de gotlculas de una solucion y/o suspension. Dichas formulaciones pueden prepararse,

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envasarse y/o comercializarse en forma de soluciones y/o suspensiones alcoholicas acuosas y/o diluidas, opcionalmente esteriles, que comprenden el principio activo, y se pueden administrar convenientemente usando cualquier dispositivo de nebulizacion y/o atomizacion. Dichas formulaciones pueden comprender ademas uno o mas ingredientes adicionales incluyendo, aunque no de forma limitativa, un agente aromatizante tal como sacarina de sodio, un aceite volatil, un agente tamponador, un agente tensioactivo, y/o un conservante tal como hidroxibenzoato de metilo. Las gotlculas proporcionadas por esta via de administracion pueden tener un diametro promedio comprendido en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 200 nanometros.

Las formulaciones descritas en el presente documento que son utiles para administracion pulmonar son utiles para administracion intranasal de una composition farmaceutica de la invention. Otra formulation adecuada para su administracion intranasal es un polvo grueso que comprende el principio activo y que tiene un diametro promedio de aproximadamente 0,2 a 500 micrometros. Dicha formulacion se administra mediante inhalation rapida a traves de las fosas nasales desde un envase con el polvo sujetado cerca de la nariz.

Las formulaciones para administracion nasal pueden, por ejemplo, comprender desde aproximadamente tan solo un 0,1 % (p/p) y tanto como un 100 % (p/p) del principio activo, y pueden comprender uno o mas de los ingredientes adicionales descritos en el presente documento. Una composicion farmaceutica de la invencion se puede preparar, envasar y/o comercializar en una formulacion para administracion bucal. Dichas formulaciones pueden estar, por ejemplo, en forma de comprimidos y/o gominolas fabricadas usando metodos convencionales, y pueden contener, por ejemplo, de 0,1 al 20 % (p/p) de principio activo, siendo el resto una composicion que se puede disolver y/o disgregar por via oral y, opcionalmente, uno o mas de los ingredientes adicionales descritos en el presente documento. Como alternativa, las formulaciones para administracion bucal pueden comprender un polvo y/o una solution y/o suspension aerosolizada y/o atomizada que comprende el principio activo. Dichas formulaciones en polvo, aerosolizadas, y/o en aerosol, cuando se dispersan, pueden tener un tamano promedio de partlculas y/o gotlculas en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 200 nanometros y pueden comprender ademas uno o mas de los ingredientes adicionales descritos en el presente documento.

Una composicion farmaceutica de la invencion se puede preparar, envasar y/o comercializar en una formulacion para administracion oftalmica. Dichas formulaciones pueden estar, por ejemplo, estar en forma de colirios incluyendo, por ejemplo, una solucion y/o suspension al 0,1/1,0 % (p/p) del principio activo en un vehlculo llquido acuoso u oleoso. Dichas gotlculas pueden tambien comprender agentes tamponantes, sales, y/o uno o mas de los ingredientes adicionales descritos en el presente documento. Otras formulaciones que se pueden administrar por via oftalmica que son utiles incluyen aquellas que comprenden el principio activo en forma microcristalina y/o como preparation liposomica. Las gotas oticas y/o los colirios se consideran comprendidos dentro del alcance de la presente invencion.

Aunque las descripciones de las composiciones farmaceuticas proporcionan en el presente documento estan principalmente dirigidas a composiciones farmaceuticas que son adecuadas para su administracion a seres humanos, el experto en la materia entendera que dichas composiciones son generalmente adecuadas para su administracion a todo tipo de animales. La modification de composiciones farmaceuticas adecuadas para su administracion a seres humanos para volver las composiciones adecuadas para su administracion a diferentes animales es bien conocido, y el farmaceutico veterinario normalmente experto puede disenar y/o llevar a cabo tales modificaciones con una pequena experimentation ordinaria.

Los compuestos proporcionados en el presente documento se formulan normalmente en forma de dosis unitaria por facilidad de administracion y uniformidad de la dosis. Se entendera, sin embargo, que el uso diario total de las composiciones de la presente invencion se decidira por el medico a cargo del tratamiento dentro del alcance del buen juicio medico. El nivel especlfico de dosificacion terapeuticamente eficaz para cualquier sujeto u organismo concreto dependera de varios factores incluyendo la enfermedad, trastorno o afeccion que se este tratando y la gravedad del trastorno; la actividad del principio activo especlfico utilizado; la composicion especlfica empleada; la edad, el peso corporal, el estado de salud general, el sexo y la alimentation del sujeto; el tiempo de administracion, la via de administracion y la tasa de excretion del principio activo especlfico utilizado; la duration del tratamiento; los farmacos usados en combination o a la vez con el principio activo especlfico usado; y factores similares bien conocidos en la practica medica.

Los compuestos y composiciones proporcionados en el presente documento pueden administrarse por cualquier via, incluyendo enteral (por ejemplo, oral), parenteral, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intramedular, intratecal, subcutanea, intraventricular, transdermica, intradermica, rectal, intravaginal, intraperitoneal, topica (como mediante polvos, pomadas, cremas, y/o gotas), mucosal, nasal, bucal, sublingual; mediante instilacion traqueal, instilacion bronquial, y/o inhalacion; y/o como una pulverization, pulverization nasal, y/o aerosol. Por lo general, la via de administracion mas adecuada dependera de diversos factores, entre los que se incluyen la naturaleza del agente, el regimen terapeutico y/o la afeccion del sujeto. La administracion oral es el modo de administracion preferente. Sin embargo, en determinadas realizaciones, el sujeto puede no estar en estado de tolerar la administracion oral y, por tanto, la administracion inravenosa, intramuscular y/o rectal administration tambien son modos de administracion alternativos preferentes.

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La cantidad exacta de un compuesto requerido para lograr una cantidad eficaz variara de un sujeto a otro, dependiendo, por ejemplo, de la especie, la edad y el estado general de un sujeto, la gravedad de los efectos secundarios o el trastorno, la identidad del compuesto o compuestos concretos, el modo de administracion y similares. La dosificacion deseada puede administrarse tres veces al dla, dos veces al dla, una vez al dla, en dlas alternos, cada tres dlas, cada semana, cada dos semanas, cada tres semanas, o cada cuatro semanas. En determinadas realizaciones, la dosificacion adecuada se puede administrar usando administraciones multiples (por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce o mas administraciones).

En determinadas realizaciones, una cantidad eficaz de un compuesto para la administracion una o mas veces al dla a un ser humano adulto de 70 kg puede comprender de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 3000 mg, de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 2000 mg, de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 1000 mg, de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 100 mg, de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 100 mg o de aproximadamente 20 mg a aproximadamente 100 mg, de un compuesto por forma farmaceutica unitaria.

En determinadas realizaciones, los compuestos de la invencion se pueden administrar a niveles de dosificacion suficientes para administrar de aproximadamente 1 mg / kg a aproximadamente 100 mg / kg, de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg, preferentemente de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg, preferentemente de aproximadamente 0,5 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg, de aproximadamente 10 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg, de aproximadamente 20 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg y, mas preferentemente, de aproximadamente 25 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg, de peso corporal del sujeto por dla, una o mas veces al dla, para obtener el efecto terapeutico deseado.

Se apreciara que los intervalos de dosis como se describe en el presente documento proporcionan una gula para la administracion de composiciones farmaceuticas proporcionadas a un adulto. La cantidad a administrar a, por ejemplo, un nino o un adolescente la puede determinar un medico o una persona experta en la materia y puede ser menor o la misma que se administra a un adulto.

Tambien se apreciara que un compuesto o composicion, tal como se describe en el presente documento, se pueden administrar en combinacion con uno o mas agentes terapeuticamente activos adicionales. Los agentes terapeuticamente activos incluyen, pero no se limitan a las mismas, moleculas organicas pequenas (es decir, que tienen un peso molecular por debajo de 800 g / mol), tal como compuestos farmacologicos (por ejemplo, compuestos homologados por la U.S. Food and Drug Administration como se proporciona en el U.S. Code of Federal Regulations (C.F.R.).) peptidos, protelnas, hidratos de carbono, monosacaridos, oligosacaridos, polisacaridos, nucleoprotelnas, mucoprotelnas lipoprotelnas; polipeptidos o protelnas sinteticos, moleculas organicas pequenas unidas a protelnas, glucoprotelnas, esteroides, acidos nucleicos, ADN, ARN, nucleotidos, nucleosidos, oligonucleotidos, oligonucleotidos antisentido, llpidos, hormonas, vitaminas, vacunas, gases y celulas. Ejemplos especlficos de agentes terapeuticamente activos se describen adicionalmente en el presente documento. Los compuestos o composiciones se pueden administrar en combinacion con agentes terapeuticamente activos adicionales que mejoran su biodisponibilidad, reducen y/o modifican su metabolismo, inhiben su excrecion, y/o modifican su distribucion dentro del organismo. Se apreciara que los tratamientos utilizados pueden conseguir un efecto deseado para el mismo trastorno y/o pueden alcanzar diferentes efectos. En general, cada agente concreto se administrara a una dosis y/o con un calendario de tiempo determinado para dicho agente. Se apreciara ademas que los agentes adicionales utilizados en esta combinacion se pueden administrar conjuntamente en una sola composicion farmaceutica o administrarse por separado en composiciones farmaceuticas diferentes. La combinacion particular a utilizar en un regimen tendra en cuenta la compatibilidad del compuesto de la invencion con el agente adicional y/o el efecto terapeutico que se desea conseguir. En general, se espera que los agentes adicionales utilizados en combinacion se utilicen a niveles que no superan los niveles los que se utilizan individualmente. En algunas realizaciones, los niveles utilizados en combinacion seran menores que los utilizados individualmente.

La invencion tambien abarca kits (por ejemplo, envases farmaceuticos). Los kits proporcionados pueden comprender una composicion farmaceutica o compuesto de la invencion y un recipiente (por ejemplo, un vial, ampolla, frasco, jeringa, y / o envase dispensador, u otro recipiente adecuado). En algunas realizaciones, los kits proporcionados pueden incluir, ademas, opcionalmente, un segundo recipiente que comprende un excipiente farmaceutico para la dilucion o suspension de una composicion farmaceutica o compuesto de la invencion. En algunas realizaciones, la composicion farmaceutica o compuesto de la invencion proporcionado en el recipiente y el segundo recipiente se combinan para formar una forma farmaceutica unitaria.

Usos

La presente invencion tambien proporciona compuestos de la presente invencion, por ejemplo, compuestos de formula (I) o sales, isomeros, hidratos o solvatos de los mismos o combinaciones de los mismos, como se describe en el presente documento para su uso en metodos de uso y tratamiento.

Un "sujeto" para el que se contempla la administracion es un sujeto humano, por ejemplo, un ser humano varon o mujer de cualquier grupo de edad, por ejemplo, un sujeto pediatrico (por ejemplo, un lactante, un nino, un adolescente) o sujeto adulto (por ejemplo, un adulto joven, un adulto de mediana edad o un adulto mayor.

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"Tratar", "que trata" y "tratamiento" contemplan una accion que se produce mientras un sujeto padece una afeccion que reduce la gravedad de la afeccion o los sintomas asociados con la afeccion, o retarda o retrasa la progresion de la afeccion o los sintomas asociados con la afeccion("tratamiento terapeutico") y tambien contempla una accion que se produce antes de que un sujeto comience a sufrir la afeccion y que inhibe o reduce la gravedad de la afeccion o los sintomas asociados con la afeccion("tratamiento profilactico"). Por ejemplo, "tratar una infeccion de paludismo" implica la administration de un compuesto de la presente invention a un sujeto que tiene infeccion de paludismo o un sujeto que presenta uno o mas sintomas de la infeccion de paludismo (por ejemplo, aparicion ciclica de frio repentino, seguido de rigor y luego fiebre y sudoracion, dolor articular, vomitos, anemia, hemoglobinuria, dano en la retina, y / o convulsiones)("tratar terapeuticamente una infeccion de paludismo"), y tambien implica el cuidado preventivo, tal como la administracion de un compuesto de la presente invencion a un sujeto en riesgo de infeccion de paludismo ("tratar profilacticamente una infeccion de paludismo").

Una "cantidad eficaz" de un compuesto se refiere a una cantidad suficiente para provocar la respuesta biologica deseada, es decir, tratar la afeccion (por ejemplo, una infeccion de paludismo, una afeccion inflamatoria). Como apreciaran los expertos en la materia, la cantidad eficaz de un compuesto de la invencion puede variar dependiendo de factores tales como el criterio de valoracion biologico deseado, la farmacocinetica del compuesto, la afeccion que se este tratando, el modo de administracion y la edad y salud del sujeto. Una cantidad eficaz abarca el tratamiento terapeutico y profilactico.

Una "cantidad terapeuticamente eficaz" de un compuesto es una cantidad suficiente para proporcionar un beneficio terapeutico en el tratamiento de una afeccion o para retrasar o minimizar uno o mas sintomas asociados con la afeccion. Una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto significa una cantidad de un compuesto de la presente invencion, solo o junto con otros tratamientos, que proporciona un beneficio terapeutico en el tratamiento de la afeccion. La expresion "cantidad terapeuticamente eficaz" puede abarcar una cantidad que mejora la terapia global, reduce o evita los sintomas o causas de la afeccion o aumenta la eficacia terapeutica de otro agente terapeuticamente activo.

Una "cantidad profilacticamente eficaz" de un compuesto es una cantidad suficiente para prevenir una afeccion o uno o mas sintomas asociados con la afeccion o prevenir su recurrencia. Una cantidad profilacticamente eficaz de un compuesto significa una cantidad de un compuesto de la presente invencion, solo o junto con otros agentes. que proporciona un beneficio terapeutico en la prevention de la afeccion. La expresion "cantidad profilacticamente eficaz" puede abarcar una cantidad que mejora la profilaxis global o mejora la eficacia profilactica de otro agente profilactico.

En determinadas realizaciones, la presente invencion proporciona un compuesto de formula (I) o una sal, isomero, hidrato o solvato del mismo o combination de los mismos, para su uso en el tratamiento de la infeccion de paludismo.

En determinadas realizaciones, la cantidad eficaz es una cantidad terapeuticamente eficaz. Por ejemplo, en determinadas realizaciones, el metodo mejora la supervivencia por una infeccion de paludismo en el sujeto. En determinadas realizaciones, el sujeto tiene una infeccion de paludismo sospechada o confirmada.

En determinadas realizaciones, la cantidad eficaz es una cantidad profilacticamente eficaz. Por ejemplo, en determinadas realizaciones, el metodo previene o reduce la probabilidad de infeccion de paludismo en el sujeto, por ejemplo, en determinadas realizaciones, el metodo comprende administrar un compuesto de Formula (I) a un sujeto en necesidad del mismo en una cantidad suficiente para prevenir o reducir la probabilidad de una infeccion por parasitos del paludismo. En determinadas realizaciones, el sujeto esta en riesgo de infeccion de paludismo (por ejemplo, ha sido expuesto a otro sujeto que tiene una infeccion de paludismo sospechada o confirmada).

En determinadas realizaciones, la infeccion de paludismo es paludismo grave debido a una infeccion por Plasmodium. En determinadas realizaciones, la infeccion por Plasmodium es una infeccion por Plasmodium falciparum, una infeccion por Plasmodium vivax, una infeccion por Plasmodium malariae, una infeccion por Plasmodium ovale o una infeccion por Plasmodium knowlesi. En determinadas realizaciones, la infeccion por Plasmodium es una infeccion por Plasmodium falciparum. En determinadas realizaciones, la infeccion por Plasmodium es una infeccion por Plasmodium vivax. En determinadas realizaciones, la infeccion por Plasmodium es una infeccion por Plasmodium malariae. En determinadas realizaciones, la infeccion por Plasmodium es una infeccion por Plasmodium ovale. En determinadas realizaciones, la infeccion por Plasmodium es una infeccion por Plasmodium knowlesi.

En determinadas realizaciones, la infeccion por paludismo es paludismo cerebral (CM). En determinadas realizaciones, la infeccion por paludismo es paludismo asociado al embarazo (PAM). En determinadas realizaciones, la infeccion de paludismo es un recrudecimiento (recaida) de la infeccion de paludismo.

Tambien se ha descubierto que los compuestos de la presente invencion inducen la expresion de HO-1 y, por lo tanto, los compuestos de la presente invencion tambien se consideran utiles en el tratamiento de una afeccion inflamatoria, tal como ALI y ARDS, que no necesariamente estan asociados con la infeccion de paludismo. Sin

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embargo, en determinadas realizaciones, el sujeto sufre una infeccion de paludismo tambien sufre una afeccion inflamatoria, por ejemplo, lesion pulmonar aguda (ALI) o sindrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA). En determinadas realizaciones, ta afeccion inflamatoria es una complicacion de la infeccion de paludismo. Se considera que SDRA es la forma mas grave de la ALI en el paludismo. El ALI y el SDRA se han descrito como complicaciones que surgen en sujetos que sufren infeccion de paludismo y podrian estar asociados con el paludismo cerebral; vease, por ejemplo, Mohan et al., J Vector Borne Dis. (2008) 45:179-93; Taylor et al., Treat Respir Med (2006) 5: 419-28.

En determinadas realizaciones, la presente invencion proporciona un compuesto de formula (I) o una sal, isomero, hidrato o solvato del mismo o combinacion de los mismos, para su uso en el tratamiento e la lesion pulmonar aguda.

En determinadas realizaciones, la lesion pulmonar aguda es lesion pulmonar aguda asociada con el paludismo (M- AALI).

En determinadas realizaciones, la cantidad eficaz es una cantidad terapeuticamente eficaz. Por ejemplo, en determinadas realizaciones, el metodo mejora la supervivencia frente a la lesion pulmonar aguda asociada con el paludismo en el sujeto. En determinadas realizaciones, el sujeto tiene una infeccion de paludismo sospechada o confirmada.

En determinadas realizaciones, la cantidad eficaz es una cantidad profilacticamente eficaz. Por ejemplo, en determinadas realizaciones, el metodo previene o reduce la probabilidad de lesion pulmonar aguda asociada con el paludismo en el sujeto.

En determinadas realizaciones, la presente invencion proporciona un compuesto de formula (I) o una sal, isomero, hidrato o solvato del mismo o combinacion de los mismos, para su uso en el tratamiento del sindrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS).

En determinadas realizaciones, el sindrome de dificultad respiratoria aguda es un sindrome de dificultad respiratoria aguda asociado con el paludismo (M-AARDS).

En determinadas realizaciones, la cantidad eficaz es una cantidad terapeuticamente eficaz. Por ejemplo, en determinadas realizaciones, el metodo mejora la supervivencia frente al sindrome de dificultad respiratoria aguda asociado con el paludismo en el sujeto. En determinadas realizaciones, el sujeto tiene una infeccion de paludismo sospechada o confirmada.

En determinadas realizaciones, la cantidad eficaz es una cantidad profilacticamente eficaz. Por ejemplo, en determinadas realizaciones, el metodo previene o reduce la probabilidad de sindrome de dificultad respiratoria aguda asociada con el paludismo en el sujeto.

En cualquiera de los metodos descritos anteriormente, uno o mas agentes terapeuticos adicionales (tambien denominado el "agente") pueden administrarse simultaneamente, antes de, o posteriormente a, el compuesto de formula (I), como se describe en el presente documento. El agente se puede anadir al mismo tiempo que el compuesto de Formula (I) (administration simultanea), antes o despues de la administration del compuesto de Formula (I) (administracion secuencial), o cualquier combinacion de los mismos. Por ejemplo, en determinadas realizaciones, el agente se administra en primer lugar, seguido de la administracion simultanea del agente y el compuesto de Formula (I). En determinadas realizaciones, el compuesto de formula (I) se administra en primer lugar, seguido de la administracion simultanea del agente y el compuesto de Formula (I). En cualquiera de las realizaciones anteriores, el agente o el compuesto de Formula (I) se puede administrar solo despues de la administracion simultanea.

En determinadas realizaciones, l compuesto de Formula (I) se utiliza como un agente adyuvante en combinacion con uno o mas agentes terapeuticos adicionales (tambien denominado el "agente primario"). Como se usa en el presente documento, un "agente adyuvante" o "adyuvante" es un agente utilizado en combinacion con el agente primario, y que potencia los efectos terapeuticos (por ejemplo, de forma aditiva o sinergica) del agente primario. La terapia adyuvante incluye la administracion del adyuvante antes de la administracion del agente primario("terapia neoadyuvante"), durante la administracion del agente primario("concomitante" o "terapia adyuvante sistemica concurrente") o despues de la administracion del agente primario.

En determinadas realizaciones, el agente terapeutico adicional es un agente antipaludico. Los agentes antipaludicos de ejemplo incluyen, pero sin limitaciones, quinazolinas (por ejemplo, 2,4-diamino-6(3,4-diclorobencilamina quinazolina (PAM 1392), 2,4-diamino-6-[93,4-dichlorobenzyl0-nitrosoamino]-quinazoline (CI-679)), inhibidores de la proteina cinasa (por ejemplo, radicicol, estaurosproina, genisteina, 2,5-dihidroxicinnamato de metilo, tirfostina B44 y B46, lavendustina A y RO3), quininas (por ejemplo, quinina, quinacrina, quinidina), tetraciclinas (por ejemplo, doxiciclina, tetraciclina), aminoquinolonas (por ejemplo, amodiaquina, cloroquina, hidroxicloroquina, primaquina), biquanidas (por ejemplo, proguanil, clorproquanil), alcaloides de cinchona (por ejemplo, cinchoma, cinchonidina), sulfonamidas (por ejemplo, sulfonamida, sulfadoxina, sulfametoxipridazina), artemisininas (por ejemplo, artemisinina,

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artemeter, dihidroartemesinina, artesunato, arteter), clindamicina, dapsona, atovaquona, lumefantrina, piperaquina, pironaridina, atovaquona, mefloquina, pirimetamina, halofantrina y sales de los mismos. En determinadas realizaciones, el agente antipaludico es un compuesto de artemisinina (por ejemplo, artemisinina, artemeter, dihidroartemesinina, artesunato, arteter) En determinadas realizaciones, el agente antipaludico es artemisinina,, artemeter, dihidroartemesinina, artesunato o arteter. En determinadas realizaciones, el agente antipaludico es artemisinina. En determinadas realizaciones, el agente antipaludico es artemisinina.

En determinadas realizaciones, el agente terapeutico adicional es un agente antiinflamatorio. Entre los ejemplos de agentes antiinflamatorios se incluyen, pero sin limitaciones, inhibidores del TNF (por ejemplo, anticuerpos monoclonales tales como infliximab, adalimumab, certolizumab pegol y golimumab; una protelna de fusion del receptor de circulacion, tales como etanercept; derivados de xantina tales como pentoxifilina; bupropion); quelantes de hierro (por ejemplo, desferoxamina); dexametasona; inmunoglobulinas intravenosas; sulfato de curdlano; sales de los mismos; y gas CO. En determinadas realizaciones, el agente antiinflamatorio es gas CO.

En determinadas realizaciones, el agente terapeutico adicional es un activador de la piruvato deshidrogenasa, por ejemplo, dicloroacetato (DCA). Se ha demostrado que el DCA reduce la hiperlactatemia y la acidosis (por ejemplo, aumento de la acidez de la sangre) del paludismo grave (vease, por ejemplo, Krishna et al, Br. J. Clin. Pharmacol. (1996) 41:29-34).

Ejemplos

Con el fin de que la invencion descrita en el presente documento se pueda entender mejor, se exponen los ejemplos siguientes. Debe entenderse que estos ejemplos son para fines ilustrativos unicamente y no deben interpretarse como limitantes de la presente invencion de ningun modo.

Ejemplo 1. CORM-2 protege contra el desarrollo de ECM.

Se ha mostrado previamente que la administracion de CO mediante inhalacion protege a los ratones C57BL / 6 infectados con P. berghei ANKA infectados frente al desarrollo de ECM (vease, por ejemplo, Pamplona et al. Nat Med (2007) 13:703-710). Los inventores se preguntaron si CO-RMS podrla imitar la proteccion conferida por la inhalacion de CO en la infeccion por P. berghei ANKA. Con este fin, una CORM de rutenio conocida, Ru(CO)3Cl2, tambien se denomina en el presente documento CORM-2, se analizo con diferentes reglmenes terapeuticos y dosis en ratones C57BL/6 infectados por P. berghei ANKA(datos no mostrados). Como control negativo, se uso un analogo de CORM-2 con depletion de CO, [Ru(DMSO)4Cl2] (tambien denominado en el presente documento "Compuesto 2"), en el que todos los ligandos de CO de Ru(II) estan sustituidos por ligandos de DMSO (Fig. 1a). El tratamiento dos veces al dla con CORM-2 entre los dlas 2 y 3 despues de la infeccion previno

la muerte o los slntomas del ECM en todos los ratones C57BL / 6 infectados (P <0,001 frente a tratados con DMSO o con el compuesto 2). Estos ratones desarrollaron hiperparasitemia y anemia (> 30 % de globulos rojos infectados) y se sacrificaron 3 semanas despues de la infeccion (Fig. 1b,c). Por el contrario, los ratones en los grupos tratados con el compuesto 2(ratones "tratados de forma simulada") y de control tratados con DMSO murieron entre los dlas 6 y 7 despues de la infeccion con slntomas de ECM, tales como hemiparaplejia o paraplejia, desviacion de la cabeza, tendencia a darse la vuelta con la estimulacion, ataxia y convulsiones (Fig. 1b). Un retraso estadlsticamente significativo en la parasitemia tambien se observo despues del dla 5 de la infeccion en los ratones tratados con CORM-2 (P <0,01) (Fig. 1c).

Los inventores tambien evaluaron el efecto terapeutico de CORM-3, [Ru(CO)3Cl2(H2NCH2CO)2], un compuesto soluble en agua mediante el modelo de ECM. Se observo que la administracion de CORM-3 a una concentracion equimolar a CORM-2, dentro del mismo calendario de tratamiento que CORM-2, protegio a los ratones del ECM en el 50 % (Fig 12a). Como el tratamiento con CORM-2, se produjo un retraso estadlsticamente significativo en la parasitemia en los ratones tratados con CORM-3 entre el dla 6 y el dla 8 de la infeccion, en comparacion con los controles (es decir, ratones infectados tratados con el compuesto 2 (P<0,001) y control infectados (P<0,05)) (Fig. 12b). Los ratones tratados con CORM-3 protegidos murieron 3 semanas despues de la infeccion debido al desarrollo de hiperparasitemia y anemia (>50 % de globulos rojos infectados) (Fig. 12b). Aunque CORM-3 pudo conferir un 50 % de proteccion contra ECM, no fue tan eficaz como CORM-2.

Ejemplo 2. Una nueva molecula liberadora de CO (compuesto 1) protege a los ratones del ECM sin formacion de COHb

Se sintetizo una nueva CO-RM hidrosoluble, tricarbonildicloro(metiltiogalactopiranosido) Ru(II) [Ru(CO)3Ch(Gal-S- Me)] (Compuesto 1), mediante la reaction de CORM-2 con metiltiogalactopiranosido (Gal-S-Me) (Fig. 2a). Este complejo de tricarbonilo Ru cuenta con un ligando derivado de galactosa (Gal) coordinado con el centro de Ru a traves de un enlace tioeter. La presencia del ligando de galactosa puede conferir un cierto grado de especificidad hepatica.

El tricarbonildicloro(metiltiogalactopiranosido) Ru(II) (Ru(CO)3Cl2(Gal-S-Me)], tambien denominado en el presente

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documento Compuesto 1, se prepare haciendo reaccionar CORM-2 con metiltiogalactopiranosido (Gal-S- Me) como se describe en el presente documento (vease la figura 2a y la seccion Materiales y Metodos). La biodistribucion del Compuesto 1 en los tejidos se evaluo mediante la cuantificacion de los niveles de Ru y CO en el huesped mediante el metodo de Vreman et al., Anal Biochem. (2005) 341:280-9). Los tejidos de hlgado, rinon, bazo, pulmon y cerebro de ratones no infectados (NI) se analizaron una hora despues de la administracion del compuesto 1 y la molecula control, compuesto 2 (Fig. 2b). En los ratones tratados con el compuesto 1, se pudo detectar Ru en todos los organos analizados con una afinidad marcada por el hlgado (Fig. 2b). De hecho, la concentracion de Ru en el hlgado de ratones tratados con el compuesto 1 fue de aproximadamente 7,0 ± 0,3 veces mayor que la medida en los ratones tratados con el compuesto 2 (P <0,05) (Fig. 2b). El cerebro fue el organo en el que los niveles de Ru fueron menores (401,8 ± 17,3 veces menos que en el hlgado), lo que indica un bajo potencial de neurotoxicidad (Fig. 2b). La cantidad de Ru retenido en el hlgado despues de la ultima inyeccion del compuesto 1 represento aproximadamente un 13,7 ± 0,6 % de la Ru administrada en todas las dosis. Los niveles de Ru en los ratones tratados con el compuesto 1 fueron mas altos que los de los ratones tratados con el compuesto 2 para todos los organos analizados (P <0,05) (Fig. 2b), lo que implica una tasa de excrecion menor del compuesto 1 o de sus metabolitos que contienen Ru. Los niveles medidos de CO para los ratones tratados con el compuesto 2 y tratados con el compuesto 1 fueron significativamente diferentes en todos los organos (P <0,05) (Fig. 2c). El compuesto 1 mostro niveles mas altos de CO en el hlgado y el bazo, de los que el bazo muestra el nivel mas alto. El bazo es un organo que desempena un papel crucial en la eritrofagocitosis, proceso importante para la renovacion de los globulos rojos y el reciclaje de hierro. Los eritrocitos son hidrolizados por los macrofagos esplenicos, en los que se produce la degradacion de hemoglobina, se libera el hemo y se cataboliza por la hemo oxigenasa-1 en biliverdina, monoxido de carbono y hierro ferroso (Fe2+). La produccion endogena de CO debido a la mayor actividad de la HO-1 podrla explicar los niveles mas altos de CO vistos en el bazo de los ratones tratados con el compuesto 1. Se ha planteado la hipotesis de que el compuesto 1 estimula/aumenta la eritrofagocitosis.

Se uso e ensayo con lisozima de clara de huevo de gallina (HEWL) para evaluar la reactividad del compuesto 1 en presencia de protelnas (vease, por ejemplo, Santos-Silva, T. et al. J Am Chem Soc (2011) 133, 1192-1195). En este articulo se describen las interacciones de CORM-3 con las protelnas plasmaticas. CORM-3 reacciona rapidamente con las protelnas, perdiendo ion cloruro, glicinato y un ligando de CO. e preve que el compuesto 1 podrla reaccionar con protelnas del suero de una manera similar a lo que se ha visto anteriormente para CORM-3 y forma aductos de CO del que se puede liberar CO y ejercer sus efectos protectores. De hecho, el compuesto 1 en presencia de HEWL forma aductos de protelna-RuM(CO)2, pero reacciona mas lentamente que CORM-3 (vease la seccion Materiales y Metodos, descrita en el presente documento, y la Fig. 11a-11e), y, por lo tanto, puede significar que la liberacion de CO es mas lenta y mas eficiente. Se observo que CORM-3 reacciona mas rapido y tiene una eficacia mucho mas debil que el compuesto 1 en este tratamiento del ECM.

A continuacion se evaluo la capacidad de donacion de CO del compuesto 1 mediante un ensayo de carbonilacion de desoxi-mioglobina (Mb) (vease, por ejemplo, Clark et al., Am J Pathol (1992) 140:325-336). Se observo que el compuesto 1 transfiere aproximadamente 1 equivalente de CO a Mb despues de 15 minutos de incubacion con desoxi-Mb, como se ve por Ru tricarbonilo CORM-3 (vease la seccion Materiales y Metodos descrita en el presente documento). En conjunto, estos datos demuestran que el Compuesto 1 es capaz de transferir CO al hemo de Mb, reacciona con las protelnas para formar aductos de protelna-RuM(CO)2 y, preferentemente, distribuye al hlgado.

El potencial efecto protector del compuesto 1 se evaluo despues en ECM. Los ratones C57BL/6 infectados por P. berghei ANKA fueron tratados diariamente con el compuesto 1 entre los dlas 2 y 3 despues de la infeccion. El tratamiento con el compuesto 1 protegio al 100 % de los ratones C57BL / 6 infectados con berghei ANKA frente al desarrollo de ECM, en contraste con los ratones control infectados y tratados con el compuesto 2 que murieron con slntomas de ECM entre los dlas 6 y 8 despues de la infeccion (P <0,0001)) (Fig. 2d). Tambien se observo una detencion pequena pero significativa de la parasitemia en los ratones tratados con el compuesto 1 entre los dlas 5 y 7 despues de la infeccion (P <0,01) (Fig. 2e).

Los datos llevaron a los inventores a preguntarse si el compuesto 1 podrla tener un efecto antiparasitario directo sobre los parasitos P. berghei ANKA y P. falciparum Con este fin, el efecto del compuesto 1 y la cloroquina (CQ) contra el paludismo se controlo en la replicacion in vitro del aislado 3D7 de P. /alciparum y P. berghei ANKA durante 48 horas y 24 horas, respectivamente. El compuesto 1 mostro valores de CI50 notablemente altos en comparacion con CQ, aproximadamente 5600 y 350 veces mayor en los parasitos P. falciparum 3D7 y P. berghei ANKA respectivamente (vease la Fig. 6a-6b). La CI50 para el Compuesto 2 no se determino debido a la ausencia de efecto inhibidor en el intervalo de concentraciones analizadas.

En conjunto, los resultados anteriores muestran que la administracion terapeutica del compuesto 1, aunque no tiene un efecto antiparasitario, tiene un impacto significativo en el resultado global de la infeccion, como se indica por 100 % de supervivencia de los ratones infectados tratados con el compuesto 1 (Fig. 2d). La inhalacion de CO a una dosis necesaria para obtener efectos protectores similares para ECM (250 ppm durante 24 horas, comenzando el dla 2 despues de la infeccion) indujo la formacion de COHb 30,3 + 2 % (P <0,05), que es un valor inaceptable para los seres humanos. De forma notable, el compuesto 1 protegio completamente a los ratones contra ECM sin causar aumento mensurable en los niveles de COHb en la sangre. Los niveles de COHb en los ratones tratados con el compuesto 1 fueron similares a los observados para los ratones no infectados (NI), infectados control, tratados con

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el compuesto 2 y tratados con DMSO (Fig. 2f). Los niveles de CO-Hb cuando se utiliza CO-RM-3 son similares a los del compuesto 1. En conjunto, estos datos demuestran que el compuesto 1 protege completamente a los ratones del inicio de ECM inicio sin afectar al transporte de oxlgeno por la hemoglobina, superando de este modo el principal efecto adverso de la terapia con gas CO.

Ejemplo 3. El compuesto 1 induce la expresion de HO-1

Se ha demostrado que la induccion de HO-1 reduce la incidencia de CM en ratones C57BL / 6 infectados por P. berghei ANKA (vease, por ejemplo, Pamplona et al., Nat Med (2007) 13:703-710). El compuesto 1 se distribuye preferentemente en el hlgado, que se considera un mediador de la inmunidad innata sistemica y local y se ha implicado en la regulacion de genes que contribuyen al control de la inflamacion, tales como HO-1 (vease, por ejemplo, Nemeth et al., Semin Immunopathol (2009) 31:333-343). No se encontraron signos de rutenio en el cerebro. Los inventores se preguntaron si el compuesto 1 podia modular la expresion de HO-1 y, por lo tanto,contribuir a la proteccion observada contra el ECM. La expresion del ARNm de HO-1 estaba significativamente regulada por aumento en el hlgado de ratones C57BL / 6 infectados por P. berghei ANKA tratados con el compuesto 1, 11,1 ± 2,3 y 5,7 ± 1,2 veces, en comparacion, respectivamente, con ratones no infectados e infectados tratados con el compuesto 2 (P<0,05) (Fig. 2g). Ademas, tLa expresion del ARNm de HO-1 en el cerebro de ratones infectados tratados con el compuesto 1 el dla 3 despues de la infeccion no fue significativamente diferente de la de los ratones no infectados e infectados tratados con el compuesto 2 (Fig. 2h). Estos resultados muestran que el tratamiento con el Compuesto 1 indujo la regulacion por aumento de la expresion de HO-1 en el hlgado de ratones infectados, lo que contribuye al control de la respuesta inflamatoria sistemica del huesped frente a la infeccion de P. berghei ANKA.

Ejemplo 4. El compuesto 1 previene la alteracion de la BHE y la neuroinflamacion

La alteracion de la barrera hematoencefalica (BHE) es una caracteristica del ECM y se ha notificado en el CM humano (vease, por ejemplo, Thumwood et al., Parasitology (1988) 96:579-589; Medana et al., Int J Parasitol (2006) 36:555-568). Los ratones C57BL/6 infectados por P. berghei ANKA no tratados y los tratados con el compuesto 2 mostraron alteracion de la BHE medida mediante la acumulacion de azul Evans en el parenquima cerebral, es decir 4,3 ± 0,65 y 6,7 ± 1,5 veces de incremento, respectivamente, en comparacion con ratones NI (P<0,01), mientras que los ratones tratados con el compuesto 1 no mostraron ningun signo de alteracion de la BHE, dado que los niveles de acumulacion de azul de Evans fueron similares a los de los ratones NI (Fig. 3a y Fig. 7a-7b). Se sabe que la inhibicion de la alteracion de la BHE contribuye a la supresion del desarrollo de ECM (vease, por ejemplo, Favre et al., Microbes Infect (1999) 1:961-8). Ademas, en varios informes se ha demostrado inequivocamente que el desarrollo de ECM en ratones infectados con P. berghei ANKA depende de la presencia de celulas T,, principalmente celulas T CD8+ (vease, por ejemplo, Berendt et al., Parasitol Today (1994) 10:412-414; Belnoue et al., J Immunol (2002) 169:6369-6375; Yanez et al., J Immunol (1996) 157:1620-1624). Mas recientemente, se ha demostrado que la acumulacion de celulas T CD8+ en el cerebro no es suficiente para el desarrollo de ECM en ratones C57BL / 6, pero la presencia concomitante de globulos rojos parasitados (pRBC) es necesaria para la aparicion de patologia (vease, por ejemplo, Baptista et al., Infect Immun (2010) 78:4033-9). Tanto la acumulacion de pRBC como la expresion de ARNm de CD8-cadena -p en el cerebro fueron significativamente inferiores en ratones tratados con el compuesto 1 en comparacion con los ratones tratados con el compuesto 2, que mostraron claros signos de CM (P <0,01) ((Fig. 3b. c) Durante el ECM, las citocinas proinflamatorias, como iFN-y y moleculas de adhesion, tales como ICAM-1, estan reguladas por aumento y desempenan un papel decisivo en la patogenia del ECM (Favre, citado anteriormente; de Kossodo et al., J Immunol (1993) 151:4811-4820; Rudin et al., Eur J Immunol (1997) 27:810-815). De manera importante, el tratamiento con el compuesto 1 redujo la expresion de ARNm de IFN- y en comparacion con los ratones infectados tratados con el compuesto 2 (P <0,01) (Fig. 3d) y la disminucion de la expresion de ICAM-1 2,02 ± 0,06 veces, P<0,01 ratones tratados con el compuesto 1 y tratados con el compuesto 2), cuando se evaluaron el dia 6 despues de la infeccion (Fig. 3e).

El tratamiento con el compuesto 1 tratamiento tambien previno las caracteristicas neuropatologicas asociadas con el ECM (vease, por ejemplo, Pamplona et al., Nat Med (2007) 13:703-710); Neill et al., Parasitology (1992) 105: 165175). Los cerebros de ratones infectados con P. berghei ANKA y tratados con el compuesto 2 mostraron signos de congestion microvascular con pRBC y leucocitos y focos hemorragicos. Por el contrario, los ratones infectados tratados con el compuesto 1 mostraron menos hemorragias y los vasos tenian una acumulacion menor de pRBC y leucocitos (Fig. 3f-i). En su conjunto, estos resultados muestran que el tratamiento con el compuesto 1 previene la permeabilidad de la BHE, disminuye la congestion, las hemorragias y la neuroinflamacion en el cerebro de los ratones infectados.

Ejemplo 5. El compuesto 1 protege a los ratones frente al desarrollo de ALI asociada con el paludismo

La patogenia del paludismo por P. /alciparum grave es compleja y da como resultados un amplio espectro de manifestaciones de la enfermedad, tales como CM y ALI. A continuation, los inventores evaluaron el efecto protector del compuesto 1 en un modelo de lesion pulmonar aguda asociada con el paludismo (M-AALI) (vease, por ejemplo, Epiphanio et al. PLoS Pathog (2010) 6:1-10). El modelo de M-AALI, basado en la infeccion de ratones DBA-2 con P. berghei ANKA se caracteriza por disnea, obstruction de las vias respiratorias, hipoxemia, exudado pulmonar y niveles de VEGF elevados en plasma, seguido de muerte entre los dias 7 y 12 despues de la infeccion. Ninguno de

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los ratones DBA/2 infectados por P. berghei ANKA, tratados dos veces al dla con el compuesto 1 entre los dlas 2 y 4 despues de la infeccion, desarrollo M-AALI. En los grupos control de ratones infectados no tratados y tratados con el compuesto 2, el 83 % y el 67 % de los ratones, respectivamente, murieron con slntomas de M-AaLI, tales como disnea, insuficiencia respiratoria (como primeros slntomas), y exudado pulmonar y niveles altos de VEGF en el plasma analizado post-mortem (Fig. 4a). Ademas, los niveles de VEGF fueron significativamente inferiores en los ratones infectados tratados con el Compuesto 1 (P <0,001; Fig. 4b). El examen histologico del tejido pulmonar de los ratones infectados, infectados tratados con el compuesto 2 y tratados con el compuesto 1 mostro grandes diferencias en la congestion vascular con pRBC (Fig. 4c-e). En resumen, los datos muestran que el tratamiento con el compuesto 1 mejora significativamente el resultado infeccion en el modelo de M-AALI.

Ejemplo 6. Compuesto 1, un potencial tratamiento auxiliar /adyuvante para el ECM

Los datos anteriores muestran que el tratamiento con el Compuesto 1 protege a los ratones infectados con P. berghei frente a la muerte causada por ECM y M-AALI cuando se administra antes de que se observen slntomas de la enfermedad. Sin embargo, para que sea util en los seres humanos, el compuesto 1 debe mostrar actividad terapeutica despues de la aparicion de la enfermedad, ya sea solo o en combinacion con otros farmacos antipaludicos. Por lo tanto, los inventores decidieron analizar el compuesto 1 como tratamiento auxiliar y adyuvante durante la fase aguda del ECM. El artesunato (AS) es el tratamiento primario en el paludismo grave y generalmente es eficaz en el control de la parasitemia por P. /alciparum y se ha utilizado previamente para tratar ratones infectados por P. berghei ANKA (vease, por ejemplo, Vivas et al., Acta Trop (2008) 105:222-228; Bienvenu et al., Acta Trop (2008) 106:104-8; Sinclair et al., Base de datos Cochrane Syst Rev 3, CD005967). Por lo tanto, los inventores evaluaron la combinacion del compuesto 1 y AS en la eliminacion del parasito y la recuperacion cllnica del ECM. Se analizaron dos combinaciones de AS y compuesto 1: (i) Terapia auxiliar: se administraron AS y el compuesto 1 de forma concomitante durante 2 dlas despues de la aparicion de CM, seguido de un tratamiento de 3 dlas con el compuesto 1 solo, o (ii) terapia adyuvante: se administro AS los primeros 2 dlas despues de la aparicion de CM, seguido por la administracion del compuesto 1 durante 3 dlas mas.

El tratamiento con AS empezo cuando los ratones infectados (control) mostraron el estadio inicial del ECM (puntuacion de 1). Todos los ratones infectados no tratados hablan muerto por ECM el dla 6 despues de la infeccion (Fig. 5a). El efecto del tratamiento antipaludico con AS solo se demostro por la disminucion de la parasitemia de 6,8 + 0,3 % a 0,59 + 0,06 % (los dlas 5 y 9 despues de la infeccion, respectivamente). El tratamiento con AS solo retraso, pero en la mayorla de casos no previno la muerte por CM Fig. 5b). Nueve de 11 (82 %) ratones tratados con AS murieron con eCm entre los dlas 12 y 13 despues de la infeccion (Fig. 5a). Los ratones tratados simultaneamente con AS y el compuesto 1 en el marco del protocolo auxiliar mostraron un aumento significativo de la supervivencia (83 %) cuando se comparo con el grupo tratado con AS (18 %) (P <0,01) (Fig. 5a). El grupo infectado tratado con la combinacion de AS y compuesto 1 segun el protocolo adyuvante mostro una mejora de la supervivencia del 67 % del ECM (P <0,01 frente a ratones tratados con AS-) (Fig. 5a). Como no se administraron agentes antipaludicos despues de dla 7, los ratones que no tenlan ECM desarrollaron hiperparasitemia y anemia (> 30 % de parasitemia) y fueron sacrificados en un plazo de 3 semanas despues de la infeccion (Fig. 5a). Durante la administracion de AS, entre los dlas 5 y 6, el Compuesto 1 no interfirio con la accion antipaludica del AS in vivo (Fig. 5b). Estos resultados muestran claramente que un medicamento antipaludico y el compuesto 1 usados en combinacion despues de la aparicion de ECM puede mejorar significativamente la supervivencia.

Discusion

Los inventores han descubierto una nueva CORM hidrosoluble , tricarbonildicloro (tiogalactopiranosido) Ru (compuesto 1) (II), capaz de transferir CO a las protelnas hemo y que protege a los ratones de la muerte causada por el paludismo grave. Los inventores han observado que la CORM-2 liposoluble podia proteger completamente a los ratones frente a la muerte causada por ECM, mientras que el analogo a CORM-3 hidrosoluble era menos activo y solo podia proteger al 50 % de los ratones frente al ECM (vease la Figura 12)). La inhalacion CO suprime la patogenia del CM y M-AALI en ratones (vease, por ejemplo, Pamplona, citado anteriormente; Epiphanio citado anteriormente) pero produjo niveles inaceptables de carboxihemoglobina (COHb). La COHb se usa rutinariamente para evaluar la toxicidad del CO en seres humanos (vease, por ejemplo, Motterlini et al., Nat Rev Drug Discov (2910) 9:728-743). Los datos muestran que el compuesto 1, a concentraciones terapeuticas, no inducia la formacion de niveles mensurables de COHb, al tiempo que preservaba los efectos protectores observados con CO inhalado.

Este trabajo tambien proporciona indicios de que el tratamiento con el compuesto 1 en el modelo de ECM induce la expresion de HO-1. Previamente se ha demostrado que la induccion de HO-1 protege a los ratones del desarrollo de ECM (vease, por ejemplo, Pamplona, citado anteriormente). Ademas, en un modelo de inflamacion intestinal cronica se ha demostrado que el CO podria mejorar la colitis murina cronica a traves de una via dependiente de HO-1 (vease, por ejemplo, Hegazi et al., J Exp Med (2005) 202:1703-1713). Los datos sugieren fuertemente que HO-1 media en un componente significativo de la accion antiinflamatoria del compuesto 1 en el ECM, que se caracteriza no solo por respuestas inflamatorias exacerbadas mediadas por el parasito, sino tambien para pRBC, secuestro de RBC no parasitados en la microvasculatura del cerebro y, mas recientemente, por coagulopatia y disfuncion de la microcirculacion (vease, por ejemplo, van der Heyde et al., Trends Parasitol (2006) 22:503-508).

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A pesar de la introduccion de nuevos agentes antipaludicos, tales como derivados de la artemisinina (por ejemplo, artesunato), estos farmacos requieren al menos 12-18 horas para matar parasitos (vease, por ejemplo, Mishra et al., Nat Rev Neurol (2009) 5:189-198). Las muertes por paludismo grave pueden ocurrir dentro en las primeras 24 horas despues del ingreso hospitalario (vease, por ejemplo, Idro et al., Lancet Neurol (2005) 4:827-840). Por lo tanto, la administracion de terapias auxiliares en las primeras 24 horas es crucial para reducir la mortalidad. Los ninos que sobreviven al episodio agudo de CM a menudo tienen deficits cognitivos (~ 25 %) y neurologicos (1,1- 4,4 %) a largo plazo (vease, por ejemplo, Trampuz et al., Crit Care (2003) 7:315-323; Idro citado anteriormente). El uso de terapias auxiliares que reducirlan la lesion neurologica puede resultar esencial para reducir esta carga. Se ha evaluado una serie de tratamientos auxiliares, tales como agentes anti-TNF-a, quelantes de hierro (tal como desferoxamina) y dicloroacetato (estimula la piruvato deshidrogenasa y as! reduce lactato) en ensayos cllnicos aleatorizados (revisado en John et al., Expert Rev Anti Infect Ther (2010) 8:997-1008).

De forma notable, los presentes datos demuestran que el compuesto 1 es un adyuvante eficaz cuando esta en combinacion con un agente antipaludico artemisinina (por ejemplo, artesunata (AS)) para el tratamiento de la infeccion por paludismo, por ejemplo, ECM. Ademas, el tratamiento con el compuesto 1 protegio a los ratones de la M-AALI, y disminuyo significativamente los niveles de VEGF en la circulacion. Por lo tanto, el compuesto 1 puede ser un agente adyuvante eficaz en el tratamiento de la M-AALI as! como de afecciones inflamatorias, tales como ALI, ya que los unicos tratamientos que se ha demostrado que mejoran la supervivencia y reducen la mortalidad para pacientes con ALI han sido estrategias de atencion de soporte (vease, por ejemplo, Jain et al., Mayo Clin Proc (2006) 81:205-212).

En resumen, la nueva CORM, el compuesto 1, muestra una solubilidad en agua mejorada, puede transferir CO a las protelnas hemo y se tribuye in vivo con una afinidad moderada por el hlgado. La bioactividad y las caracterlsticas terapeuticas clave del compuesto 1 se muestran en dos modelos distintos de paludismo grave. De manera importante, los datos muestran el uso de este compuesto como terapia adyuvante prometedora durante la fase aguda del paludismo cerebral. El compuesto 1 protege completamente a los ratones contra el CM experimental (ECM) y la lesion pulmonar aguda (ALI). El compuesto 1 permite la liberacion especlfica de CO in vivo sin afectar al transporte de oxlgeno por la hemoglobina, la principal limitacion en la terapia de inhalacion de CO. El efecto protector depende del CO e induce la expresion de hemo oxigenasa-1, lo que contribuye a la proteccion observada. De manera importante, cuando esta en combinacion con el farmaco antipaludico artesunato, el compuesto 1 es un adyuvante eficaz para el ECM que confiere proteccion despues de la aparicion de la enfermedad grave.

El presente estudio aclara aun mas los efectos antiinflamatorios y citoprotectores de un nuevo Ru tricarbonilo CORM en modelos de ECM y M-AALI. Los datos destacan el potencial terapeutico del compuesto 1 en la orientacion farmacologica de la expresion de HO-1 que desempena papeles citoprotectores, inmunomoduladores y antiinflamatorios cruciales. El trabajo demuestra claramente que el CO liberado por el Compuesto 1 puede inducir una proteccion similar como se ha visto con la terapia de gas CO, pero sin los efectos toxicos (niveles de COHb elevados) de inhalacion de CO. En conjunto, este trabajo representa una importante prueba de principio precllnica de CORM como una nueva clase de farmacos para el tratamiento de las formas graves de la infeccion de paludismo y establecer una nueva CO-RM con muchas caracterlsticas de tipo farmaco importantes relevantes para otras aplicaciones terapeuticas.

Materiales y metodos

Reactivos

Para los estudios in vivo, el dlmero de tricarbonildiclororutenip(II) (CORM-2) y artesunato (AS) se adquirieron en Sigma-Aldrich. CORM-3/ac-Ru(CO)3Cl(NH2CH2COO) tambien denominada fac-Ru(CO)3Cl(glicinato), se sintetizo como se ha descrito anteriormente (vease, por ejemplo, Clark et al., Am J Pathol (1992) 140:325-36), El compuesto 2 (Tetrakis(dimetilsulfoxido)diclororutenio(II)) se adquirio en Strem Chemicals, Inc. El p-D-tiogalactopiranosido se adquirio en Carbosynth. La lisozima C de clara de huevo de gallina (codigo PDB 3b61; codigo UniProtKB/Swiss-Prot P00698) (masa isotopica promedio calculada = 14305,1) se utilizo como un modelo para la interaccion con Ru(CO)3Cl2(Gal-S-Me) y CORM-3.

Ratones

Los ratones C57BL/6 y DBA-2 salvajes se adquirieron en Charles River Laboratories Internation Inc. (Barcelona, Espana) y se estabularon en las instalaciones apirogenas del Instituto de Medicina Molecular. Todos los protocolos se aprobaron y realizaron de acuerdo con las regulaciones para el Cuidado de Animales de la Direccion General de Veterinaria (Portugal).

Parasitos, infeccion y evaluacion de la enfermedad

Se utilizaron globulos rojos infectados con P. berghei ANKA transgenico con protelna verde fluorescente (GFP) y P. berghei ANKA para infectar ratones (vease, por ejemplo, Franke-Fayard et al. Mol Biochem Parasitol (2004) 137:2333). Los parasitos criopreservados se pasaron una vez a traves de ratones C57BL / 6 o DBA-2 antes de usarse para

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infectar animales de experimentation. Se infectaron ratones C57BL/6 o DBA-2 de 6 a 8 semanas de edad (de sexos equivalentes en cada experimento) mediante inyeccion intraperitoneal (i.p.) de 106 globulos rojos infectados. Los ratones infectados se controlaron diariamente para detectar slntomas cllnicos de paludismo cerebral experimental (ECM), incluyendo hemiplejia o paraplejia, desviacion de la cabeza, tendencia a darse la vuelta con la estimulacion, ataxia y convulsiones, o aLi, incluyendo disnea. Se sacrifico a los ratones que mostraban signos graves de ECM el dla 5, 6 o 7 despues de la infection (p.i.) y ALI entre los dlas 7 y 9. La parasitemia se evaluo mediante citometrla de flujo para los ratones infectados con P. berghei ANKA, con expresion de GFP usando sangre de la cola, como se ha descrito anteriormente (vease, por ejemplo, Pamplona et al., Nat Med (2007) 13:703-710). La parasitemia media se expresa como el porcentaje de globulos rojos infectados. Para los ratones infectados con P. berghei sin GFP se evaluo La parasitemia diariamente mediante recuento microscopico de frotis sangulneos finos tenidos con Giemsa. La parasitemia media se expresa como el porcentaje de globulos rojos infectados. La supervivencia se expresa como el porcentaje.

Evaluation cifnica del paludismo cerebral experimental

Con el fin de evaluar la presentation cllnica de paludismo cerebral experimental se utilizo una clasificacion en estadios cllnicos de 0 a 4 (vease, por ejemplo, Bienvenu et al., Acta Trop (2008) 106:104-8; Franklin et al., Proc Natl Acad Sci U S A (2011) 108:3689-94). En resumen, el estadio 0 indica ausencia de slntomas cllnicos detectables, estadio 1, pelaje erizado; estadio 2, pelaje erizado y desequilibrio; estadio 3, paralisis de las extremidades y dificultad respiratoria, y estadio 4, convulsiones, coma o muerte. Los ratones fueron clasificados cllnicamente antes y despues del tratamiento para evaluar la recuperation cllnica.

Tratamientos in vivo

CORM-2 (Sigma-Aldrich) y el compuesto 2 se solubilizaron usando 10 % de dimetilsulfoxido (DMSO; Sigma- Aldrich) en PBS. CORM-3 y el compuesto 1 se solubilizaron en PBS (1x). La solution de CORM-2 (20 mg / kg de peso corporal) se administro por via intravenosa (i.v.) de acuerdo con los calendarios elegidos. El compuesto 2, CORM-3 y el compuesto 1 se administraron i.v. a concentraciones equimolares en relation con CORM-2 (36,7 mg / kg). Como vehlculo de control se utilizo una solution de 10 % de DMSO en PBS administrado i.v. Las concentraciones de CORM-2 utilizadas en el presente estudio se basaron en informes anteriores (vease, por ejemplo, Chen et al. Am. J. Pathol. (2009) 175:422-429; Sun et al., World. J. Gastroenterol. (2008) 14:547-553). El artesunato se presenta como un polvo de acido artesunico. La solution de artesunato (AS) se preparo disolviendo 60 mg de acido artesunico anhidro en 1 ml de bicarbonato de sodio (5 %) para formar artesunato de sodio y, despues, se diluyo en 5 ml de NaCl (0,9 %). Una solution AS (i.p.) se administro a 40 mg / kg / dla, como se ha descrito anteriormente (vease, por ejemplo, Bienvenu, Acta Trop (2008) 106:104-108). El tratamiento con AS se inicio cuando los ratones infectados no tratados presento el estadio cllnico 1 para el paludismo cerebral experimental.

Quantification e COHb en sangre periferica

Se extrajo sangre de la cola de los ratones a los tubos capilares (VWR) con heparina (100 ui./ml en PBS 1X; LEO Pharma Inc.), se transfirio a cubetas AVOXimeter 4000 (ITC) donde los niveles de carboxihemoglobina(COHb), oxihemoglobina (O2Hb) y metahemoglobina (MetHb) se midieron en un ACO-oxlmetro portatil VOXimeter 4000 (ITC). Los resultados se muestran como el porcentaje medio de la especie de hemoglobina total en la circulation.

Determination de CO en tejidos

El CO cuantifico en diferentes tejidos como se ha descrito previamente (vease, por ejemplo, Vreman et al., Anal Biochem (2005) 341:280-289). En resumen, el CO se libero en forma de gas en un vial cerrado mediante la adicion de 25 pl de agua y 5 pl de acido sulfosalicllico (SSA, 30 % [peso / vol]) a 30 pl de la muestra diluida despues de homogeneizar. Los viales se incubaron en hielo durante al menos 10 minutos antes de su analisis. El gas en el espacio superior de los viales se analizo cuantitativamente con un cromatografo de gases (GC) equipado con detector de fotometrla de compuesto reductor (detector RCP) (Peak Laboratories, Mountain View, CA), que permite cuantificar CO en el gas a concentraciones tan bajas como 1-2 partes por mil millones (ppb). La cantidad de CO se calculo utilizando una curva de calibration preparada a partir de patrones de CO. En resumen, se extrajo sangre de la cola de los ratones a los tubos capilares (VWR) con heparina (100 ui./ml en PBS 1X; LEO Pharma Inc.), se transfirio a cubetas AVOXimeter 4000 (ITC) donde los niveles de carboxihemoglobina(COHb), oxihemoglobina (O2Hb) y metahemoglobina (MetHb) se midieron en un ACO-oxlmetro portatil VOXimeter 4000 (ITC). Los resultados se muestran como el porcentaje medio de la especie de hemoglobina total en la circulacion.

Quantification de Ru en tejidos

Las muestras de tejido se pesaron y se secaron a 80 °C durante la noche, seguido de 2 o mas horas a 120 °C. Los tejidos secos se digirieron a continuation mediante la adicion de 2 ml de solution de hidroxido de tetraetilamonio (20 % en peso en agua) (Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, EE.UU.)) durante 24 horas. Despues de la digestion completa del tejido, se anadio 1 ml de agua. El contenido de Ru se analizo mediante un espectrometro de emision atomica de plasma acoplado inductivamente (ICP-AES) (modelo Ultima - Horiba Jobin Yvon, Longjumeau, Francia) usando un

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metodo estandar de Ru externo.

Histologia

Para la evaluacion de las caracterlsticas histologicas, se anestesio profundamente a los ratones hasta que dejaron de respirar cuando los ratones de control infectados presentaron signos de ECM o ALI. Se extrajeron los hlgados pulmones y cerebros y se fijaron en formalina al 10 % tamponada durante 24-72 horas. Se cortaron secciones de cuatro micrometros de los tejidos embebidos en parafina y se tineron con hematoxilina y eosina de acuerdo con procedimientos estandar. Los analisis histologicos se realizaron en un microscopio Leica DM 2500 (Leica Microsystems).

Determinacion de los niveles de la protefna VEGF

El VEGF de raton en muestras de plasma se determino utilizando un kit de ELISA comercial (R & D Systems) siguiendo las instrucciones del fabricante. La clasificacion por grupos se realizo solo al final de cada experimento despues de determinar la causa de la muerte.

PCR cuantitativa con transcripcion inversa en tiempo real (qRT-PCR)

Se sacrifico a los ratones cuando los ratones de control infectados presentaron signos de ECM y se les perfundio intracardialmente con PBS para eliminar los RBC circulantes y los leucocitos de los organos. Se aislo el ARN de cerebros, hlgados y pulmones utilizando el reactivo Trizol (Invitrogen, Life technologies), de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. La slntesis de la primera hebra de ADNc a partir de los moldes de ARN se llevo a cabo usando el kit Transcriptor First Strand cDNA Synthesis (Roche). Las reacciones de RT-PCR se realizaron en presencia de verde SYBeR (SYBER Green PCR master mix, Applied Biosystems) en un ABI PRISM 7500Fast (Applied Biosystem). Los oligonucleotidos utilizados para la amplificacion especlfica de genes incluyen:

SEQ ID NO 1

hprt 5'-GTTGGATACAGGCCAGACTTTGTTG-3' (directo);

SEQ ID NO 2

5'-GATTCAACCTTGCGCTCATCTTAGGC-3' (inverso);

SEQ ID NO 3 SEQ ID NO 4

ho-1 5'-TCTCAGGGGGTCAGGTC-3' (directo); 5'-GGAGCGGTGTCTGGGATG3'(inverso);

SEQ ID NO 5: SEQ ID NO 6: SEQ ID NO 7: SEQ ID NO 8: SEQ ID NO 9: SEQ ID NO 10 SEQ ID NO 11 SEQ ID NO 12

Pb 18S 5'-AAGCATTAAATAAAGCGAATACATCCTTAC-3' (directo) 5'-GGAGATTGGTTTTGACGTTTATGTG-3' (inverso);

CD8£ 5'TGCTCGAGATGTGATGAAGG-3'(directo); y 5'-TCCCCTGTTGACTGGTCATT-3' (inverso); ifn-$5-CACACTG CATCTTGGCTTT G-3'(directo); 5'-TCTGGCTCTGCAGGATTTTC-3'(inverso); icam-1 5'-CGAAGGTGGTTCTTCTGAGC-3' (directo); y 5'-GTCTGCTGAGACCCCTCTTG-3' (inverso).

Los cambios relativos en la expresion genica entre los grupos experimental y de control se calcularon por el metodo Pfaffl usando hprt como gen de control interno.

Analisis estadfstico

Para las muestras en las que n > 5, los analisis estadlsticos se realizaron utilizando la prueba t de Student y para n <5, los analisis estadlsticos se realizaron usando la prueba U de Mann-Whitney. Las curvas de supervivencia se compararon mediante la prueba del orden logarltmico y la prueba de Gehan-Breslow-Wilcoxon. Un valor de P < 0,05 se considero significativo.

Cuantificacion de la liberacion de CO usando un ensayo de Mb

El ensayo de Mb se realizo como se describe en lark et al., Circ. Res. (2003) 93:2-8). Se preparo una solucion madre de mioglobina (Mb) a partir de musculo esqueletico equino disolviendo la protelna en PBS7.4. De esta solucion se tomaron allcuotas a una cubeta (concentracion final entre aproximadamente 60 pM) y se anadio Na2S2O4 en PBS, pH 7,4 (solucion de 10 mg/ml; 0,1 % de concentracion final) para convertir met-Mb en desoxi-Mb. Las reacciones se realizaron mezclando en la misma cubeta y por este orden, la solucion madre de Mb, la solucion de Na2S2O4, una cantidad calculada de una solucion del compuesto 1 y la adicion de PBS para obtener el volumen final deseado. Antes de anadir la solucion del compuesto 1 un espectro de control siempre se adquirio para ver si la protelna se habla reducido correctamente con ditionito de sodio. Dos controles se realizaron por duplicado, El control negativo (0 % DE CO-Mb), una solucion DE desoxi-Mb y el control positivo (100 % DE CO-Mb), obtenido mediante el burbujeo de gas CO puro en la solucion de desoxi-Mb durante 10- 15 minutos. El espectro experimental se ajusto como una suma ponderada de los espectros de desoxi-Mb y de CO-Mb. Se uso la funcion Solver en MS Excel para calcular el

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porcentaje de CO-Mb mediante deconvolucion de los espectros usando patrones positivos y negativos como controles. El espectro de absorbancia se convirtio en un porcentaje de CO-Mb y la cantidad de CO liberado se calculo como equivalentes molares de CO sobre la base de la concentracion inicial del compuesto 1 (vease la Figura 10).

Espectrometrfa de masas de las protefnas

Se realizo cromatografla de llquidos-espectrometrla de masas (LC-MS) en un Micromass Quattro API instrument (ESI-TOF-MS) acoplado a Waters Alliance 2795 HPLC usando un MassPREP On-Line Desalting Cartridge. Se usaron agua:acetonitrilo, 95:5 (disolvente A) y acetonitrilo (disolvente B), conteniendo el disolvente A 0,1 % de acido formico, como la fase movil a un caudal de 0,3 ml min-1. El gradiente se programo de la siguiente manera: 95 % de A (0,5 min isocratico) a 80 % de B despues de 1,5 min, despues isocratico durante 1 minuto. Despues de 4 minutos a 95 % de A y, a continuacion, isocratico durante 6 minutos. La fuente de electropulverizacion de LCT se hizo funcionar con un voltaje capilar de 3,0 kV y un voltaje de cono de 20 V. Se utilizo nitrogeno como nebulizador y gas de desolvatacion a un flujo total de 600 l h -1. Las protelnas normalmente eluyen entre 2 y 4 minutos usando este metodo. os espectros se calibra utilizando una curva de calibracion construida a partir de un mlnimo de 17 picos emparejados de la serie de iones se multiplican cargada de la mioglobina equina, que tambien se obtuvo a un voltaje de cono de 20 V. Los espectros de masas totales se reconstruyeron a partir de la serie de iones utilizando el algoritmo MaxEnt preinstalado en el software MassLynx (v. 4.0 de Waters) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Estudios de union de lisozima

La lisozima C de clara de huevo de gallina (codigo PDB 3b61; UniProtKB/Swiss-Prot codigo P00698). La secuencia de aminoacidos de la lisozima de clara de huevo empleada se describe en Canfield et al., J. Biol. Chem. (1963) 238:2698-2707 (1963). La determination cuantitativa de la union lisozima-ligando en las fases de solution y de gas por espectrometrla de masas - ionization por electropulverizacion sigue Veros et al., Rapid Commun. Mass Spectrom. (2007) 21:3505-3510). Todas las manipulaciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente. La lisozima liofilizada (2 mg, 0,14 pmol) se disolvio en 1 ml de agua en un tubo de plastico de 1,5 ml. La muestra se dividio en allcuotas de 150 pl (0,3 mg, 0,02 mol) y se almaceno a 4 °C. Una allcuota de 50 pl se analizo mediante LC-MS (masa isotopica promedio calculada de la lisozima de clara de huevo = 14305,1).

Santos-Silva et al., han descrito anteriormente reactividad de CORM-3 hacia las protelnas y la formation de un complejo de dicarbonil Ru (Il)-lisozima (vease, por ejemplo, Santos-Silva et al., J. Am. Chem. Soc. (2011) 133:11921195). Una solucion de CORM-3 o el compuesto 1 (10 equivalentes, 0,2 pmol) en agua (50 pl) (en esta concentracion el pH de la solucion que contiene CORM-3 es 3,0 y el compuesto 1 4,0) se anadio por micropipeta a la solucion de lisozima (150 pl) y la mezcla de reaction se agito con vortex periodicamente durante 1 minuto. El tubo se dejo agitar durante 1 hora. Se recogieron allcuotas de 50 pl y se analizaron mediante LC-MS durante el tiempo de reaccion (10 minutos y 1 hora). Se detectaron dos especies de protelnas, uno correspondiente a la masa de la lisozima nativa (14305 = masa calculada) y otra correspondiente a la adicion de una unidad de RuCO)2+ (m / z 157,9) a la masa de lisozima (14463 = masa calculada). Despues de 1 hora, las moleculas pequenas se eliminaron de la mezcla de reaccion mediante la carga de la muestra en una columna de desalado PD10 (GE Healthcare) equilibrada previamente con 10 volumenes de columna de agua desionizada y eluyendo con 3,50 ml de agua desionizada. La muestra recogida (ahora diluida a 0,57 mg / ml) se analizo mediante LC-MS en diez minutos y 1 hora a temperatura ambiente, vease, por ejemplo, ESI-MS de lisozima cuando se incuba con CORM-3 en 10 minutos (Figura 11b) y 1 hora (Figura 11c) y ESI-MS de lisozima cuando se incuba con el compuesto 1 a los 10 minutos (Figura 11d) y 1 hora (Figura 11 e).

Preparacion de tricarbonildicloro (tiogalactopiranosido)rutenio(II) (compuesto 1)

El dlmero de diclorotricarbonilrutenio (II) dlmero (0,52 g, 1,02 mmol) se disolvio en metanol anhidro (30 ml) y se transfirio mediante una canula a una solucion de p-D-tiogalactopiranosido (0,42 g, 2,04 mmol) en metanol anhidro (30 ml). Se formo una solucion transparente de color amarillo ligeramente claro y se agito durante 24 horas a temperatura ambiente en atmosfera de nitrogeno.

La solucion se concentro y se anadio eter dietllico. El precipitado blanco se filtro, se lavo con eter dietllico (3 x 30 ml), y se seco. El residuo se disolvio parcialmente en eter dietllico y se congelo en nitrogeno llquido. El solido se trituro y se agito. Se formo un polvo blanco y se filtro y se seco para dar tricarbonilcloro(tiogalactopiranosido) rutenio (II) (348 mg, 73 %); El producto se almaceno en nitrogeno; vmax (disco de KBr cm-1) 2139 (s, CEO) 2060 (s, CEO) cm- 1 5h (400 MHz, D2O) 2,23 (3H, s, CH3), 3,58-75 (6H, m), 4,38 (1H, d, J=9,2 Hz, H-1); Encontrado: C, 25,81 %, H, 2,94 %, S, 6,80 %. C10H14Cl2OsRuS Requiere: C, 25,76 %, H, 3,03 %, S, 6,88 %.

Otras realizaciones

Lo anterior ha sido una description de determinadas realizaciones no limitantes de la invention Los expertos en la materia apreciaran que se pueden realizar varios cambios y modificaciones a esta descripcion sin apartarse del

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esplritu o alcance de la presente invencion, como se define en las siguientes reivindicaciones.

LISTADO DE SECUENCIAS <110> Alfama, Inc.

< 120 > Moleculas liberadoras de monoxido de carbono rutenio carbono rutenio y usos de las mismas

<130>JXC/FP6957682

<140> EP 12815454.9 <141 > 20/07/2012

<150> PCT/US2012/047661 <151 > 20/07/2012

<150> US 61/510.136 <151 > 21/07/2011

<160> 12

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1 <211>2 <212> ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223>Oligonucleotido sintetico <400> 1

gttggataca ggccagactt tgttg 25

<210>2 <211 > 26 <212> ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223>Oligonucleotido sintetico <400> 2

gattcaacct tgcgctcatc ttaggc 26

<210>3 <211> 17 <212> ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223>Oligonucleotido sintetico <400>3

tctcaggggg tcaggtc 17

<210>4 <211> 18 <212> ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223>Oligonucleotido sintetico <400> 4

ggagcggtgt ctgggatg 18

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<210>5 <211 > 30 <212> ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223>Oligonucle6tido sintetico <400> 5

aagcattaaa taaagcgaat acatccttac

<210>6 <211 > 25 <212> ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223>Oligonucle6tido sintetico <400> 6

ggagattggt tttgacgttt atgtg 25

<210>7 <211 > 20 <212> ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223>-Oligonucle6tido sintetico <400> 7

tgctcgagat gtgatgaagg 20

<210>8 <211 > 20 <212> ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223>Oligonucle6tido sintetico <400>8

tcccctgttg actggtcatt 20

<210>9 <211 > 20 <212> ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223>Oligonucle6tido sintetico <400> 9

cacactgcat cttggctttg 20

<210> 10 <211 > 20 <212> ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223>Oligonucle6tido sintetico <400> 10

tctggctctg caggattttc 20

<210> 11 <211 > 20 <212> ADN

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223>Oligonucleotido sintetico <400> 11

10 cgaaggtggt tcttctgagc 20

<210> 12 <211 > 20 <212> ADN

15 <213> Secuencia artificial

<220>

<223>Oligonucleotido sintetico

20 <400> 12

gtctgctgag acccctcttg 20

Claims

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REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de formula (I):

imagen1

o una sal, un isomero, un hidrato o un solvato del mismo o una combinacion de los mismos; en la que:

E es-S- o -Se-;

R1 es hidrogeno o alquilo Ci_a;

cada uno de R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, hidrogeno, un grupo carbohidrato o un grupo protector de oxlgeno; y

X1 y X2 son cada uno, independientemente, halogeno.
2. El compuesto de la reivindicacion 1, en el que E es -S-.
3. El compuesto de las reivindicaciones 1-2, en el que R es -CH3.
4. El compuesto de las reivindicaciones 1-3, en el que cada uno de R2, R3, R4 y R5 es hidrogeno.
5. El compuesto de las reivindicaciones 1-4, en el que X1 y X2 son cada uno -Cl.
6. El compuesto de la reivindicacion 1, en el que el sustituyente:

imagen2

es un estereoisomero seleccionado de entre el grupo que consiste en:

imagen3

imagen4

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imagen5
8. El compuesto de la reivindicacion 1, en donde el compuesto es un estereoisomero de formula (I-a):

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imagen6

o una sal, un isomero, un hidrato o un solvato del mismo o una combinacion de los mismos.
9. El compuesto de la reivindicacion 1, en donde el compuesto es un estereoisomero de formula (I-b): 15

imagen7

o una sal, un isomero, un hidrato o un solvato del mismo o una combinacion de los mismos. 5 10. El compuesto de la reivindicacion 1, en donde el compuesto es:

imagen8
11. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, o 10 una sal, un isomero, un hidrato o un solvato del mismo o una combinacion de los mismos, y un excipiente

farmaceuticamente aceptable.
12. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, o una sal, un isomero, un hidrato o un solvato del mismo o una combinacion de los mismos, para su uso en el tratamiento de la infeccion de paludismo.

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13. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, o una sal, un isomero, un hidrato o un solvato del mismo o una combinacion de los mismos, para su uso en el tratamiento de la lesion pulmonar aguda.
14. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, para su uso en el tratamiento del slndrome de 20 dificultad respiratoria aguda.