ITMI20010985A1

ITMI20010985A1 - Farmaci per il morbo di alzheimer

Info

Publication number: ITMI20010985A1
Application number: IT2001MI000985A
Authority: IT
Inventors: Soldato Piero Del
Original assignee: Nicox Sa
Priority date: 2001-05-15
Filing date: 2001-05-15
Publication date: 2002-11-15
Also published as: ITMI20010985A0; WO2002092072A2; AU2002312897A1; WO2002092072A3

Description

Descrizione dell'invenzione industriale

La presente invenzione riguarda l'uso di una particolare classe di nitroossiderivati di farmaci nella profilassi e terapia del morbo di Alzheimer.

Il morbo di Alzheimer è una malattia che colpisce soprattutto le persone anziane. Il progressivo invecchiamento della popolazione determina un notevole aumento dell'incidenza di questa malattia: attualmente nei paesi industrializzati i soggetti affetti dal morbo di Alzheimer sono circa 13,5 milioni.

I sintomi iniziali della demenza di Alzheimer includono un declino delle capacità cognitive. Le caratteristiche principali della malattia comprendono le seguenti:

depositi amiloidei (placche amiloidi) nel parenchima cerebrale e nella parete dei vasi, il componente principale di dette placche è la proteina B-amiloide (AB);

processo infiammatorio caratterizzato dall'attivazione delle cellule microgliali (microglia) e dalla presenza di astrociti reattivi nell'area peri-placca con produzione di mediatori prò-infiammatori , quali citochine, NO.

Recentemente è stato osservato che i farmaci antiinfiammatori non-steroidei (NSAIDs) possono essere utili nella profilassi e nella terapia della malattia (Stewart WF, Neurology 48, 626-632, 1997). Questi composti hanno una buona attività antiinfiammatoria a livello cerebrale, tuttavia hanno lo svantaggio di non avere una elevata inibizione della deposizione della placca amiloidea. Pertanto questi composti hanno una efficacia limitata nel prevenire o nel trattamento del morbo di Alzheimer.

Un altro approccio terapeutico per la prevenzione ed il trattamento del morbo di Alzheimer è costituito dalla somministrazione di vaccini a base di beta-amiloide (Schenk D. et Al. Nature 400 (6740) 173-7). Il meccanismo di funzionamento dei vaccini sembra dovuto alla reazione anticorpale contro la proteina beta-amiloide. L'attività dei vaccini nella prevenzione, riduzione e nel trattamento del deposito della placca amiloidea è più elevata rispetto ai farmaci antiinflaminatori. Tuttavia i vaccini presentano lo svantaggio di possedere una elevata immunotossicità legata a iperproduzione anticorpale (Schenk, vedi sopra).

Era sentita l'esigenza di avere a disposizione composti più efficaci nella prevenzione, riduzione e nel trattamento del deposito della placca amiloidea rispetto ai farmaci dell'arte nota.

Costituisce un oggetto della presente invenzione l'uso nella profilassi e trattamento del morbo di Alzheimer di composti o loro sali aventi la seguente formula generale:

(I)

m cui:

cO è un intero ed é 0 oppure 1, preferibilmente 1;

bO è un intero ed è 0 oppure 1, con la condizione che cO e bO non possono essere contemporaneamente uguali a zero.

A = R-T-L-, in cui

R é il radicale di un farmaco come sotto definito:

m cui:

G è uno dei seguenti gruppi: -CH=CH-

M è un atomo di carbonio o di azoto;

P è il seguente gruppo:

m cui:

l'atomo di carbonio della formula (V) si trova in posizione 5 dell'anello della formula (IV);

oppure un atomo di ossigeno;

sono interi e indipendentemente l'uno dall'altro sono 1 oppure quando l'anello in formula (IV) è aromatico e Q = -CH-; q2 = q3 = q4 = 1 quando l'anello di formula (IV) è saturo a 6 atomi in cui l'ete-roatomo è e si trova in posizione 6 dell'anello;

quando è il gruppo di formula

uguali o diversi, sono idrogeno, alchile 03-03 preferibilmente metile;

Rc è idrogeno, alchile C3-C3, oppure il seguente radicale :

in cui uguali o diversi, possono essere H, alogeno preferibilmente cloro, alchile C^-Cj preferibilmente metile, CF3;

Rg è idrogeno oppure OCH3 quando l'anello di fig. (IV) è a 6 atomi; oppure è un doppietto elettronico quando l'anello a 6 atomi è aromatico e M = azoto; oppure è un radicale p.clorobenzoile quando 3⁄4 = 0 ed M = azoto e l'anello di fig. (IV) è aromatico; oppure

Rc e Rg presi assieme sono tali da formare il seguente radicale:

Rd in formula (IV) è idrogeno, ossidrile, alchile Cx-C4 opzionalmente ramificato, fenile, oppure il seguente radicale:

Rdl = idrogeno quando q2 = 1;

Re = idrogeno, alogeno preferibilmente F, oppure benzoile; oppure

Rd e Re presi assieme sono tali da formare i seguenti radicali:

Rel = H quando q3 = 1 ;

RN = alchile preferibilmente etile quando q4 = 1; T-L = (CO)t oppure (X)t., dove oppure un alchile lineare o ramificato, avente da 1 a 5 atomi di carbonio, t e t' sono interi ed uguali a zero oppure 1, con la condizione che t = 1 quando t' = 0; t = 0 quando = 1 ;

in cui

TB e TBI sono uguali o diversi;

TB = (CO) quando la funzione reattiva nel farmaco precursore é -OH oppure -NH2; TB = X, come sopra definito, quando la funzione reattiva nel farmaco precursore é -COOH;

TBI = (C0)tx oppure (X)txx, in cui tx e txx hanno il valore di 0 oppure 1; con la condizione che tx = 1 quando txx = 0, tx = 0 quando txx = 1; X é come sopra definito; X2 é un pontante bivalente come sotto definito;

C é il radicale bivalente -Tc-Y- in cui

Tc = (CO) quando tx = 0, Tc = X quando txx = 0, essendo X come sopra definito;

Y ha uno dei seguenti significati:

in cui:

nix é un intero da 0 a 3 , preferibilmente 1;

nlIX é un intero da 1 a 3 preferibilmente 1;

uguali o diversi tra loro sono H oppure alchile lineare o ramificato preferibilmente

Y<3 >é un anello eterociclico contenente uno o due atomi di azoto, detto anello eterociclico essendo saturo, insaturo o aromatico, a 5 o 6 atomi;

oppure Y può essere:

Y0 , scelto tra i seguenti:

un gruppo alchilenossi lineare o ramificato quando possibile, avente preferibilmente da 2 a 6 atomi di carbonio, oppure un cicloalchilene avente da 5 a 7 atomi di carbonio, nell'anello cicloalchilenico uno o più atomi di carbonio possono essere sostituiti da eteroatomi, l'anello può avere catene laterali di tipo R' , essendo R' come sopra definito;

oppure uno dei seguenti gruppi:

in cui nf' è un intero da 1 a 6 preferibilmente da 1 a 3;

in cui e nf è un intero da 1 a 6; preferibilmente da 2 a 4;

oppure ed è scelto tra i seguenti:

in cui n3 é un intero da 0 a 3 ed n3' é un intero da 1 a 3;

in cui n3 ed n3' hanno il significato sopra indicato; con la condizione che quando in formula (I) il radicale R di formula (IV) del farmaco A è diverso da acido ferulico se il radicale bivalente Y di C è R'O allora bO = 1;

X2, radicale bivalente, é tale che il corrispondente precursore di B -TB-X2-TBI- in cui le valenze libere di TB e di TBI sono saturate ciascuna con OZ, con Z oppure con essendo:

preferibilmente alchile lineare o ramificato quando possibile,

uguali o diversi hanno i valori di Z come sopra definito, a seconda che oppure

X, in funzione dei valori di

soddisfa il seguente test (test 4): determinazione analitica eseguita aggiungendo aliquote di soluzioni metanoliche di concentrazione IO<"4 >M del precursore di B a una soluzione metanolica di DPPH ; dopo aver conservato la soluzione a temperatura ambiente e al riparo dalla luce per 30 minuti, si legge l'assorbanza della soluzione in esame e di una soluzione contenente solamente DPPH nella stessa quantità, alla lunghezza d'onda di 517 nm; poi si determina la percentuale di inibizione del precursore di B verso la produzione di radicali indotta da DPPH attraverso la formula:

in cui sono rispettivamente i valori di assorbanza della soluzione contenente il composto in esame e DPPH e quello della soluzione contenente solo DPPH.

Il criterio di accettazione dei composti precursori di B secondo questo test é il seguente: il test 4 é soddisfatto dai composti precursori di B se la percentuale di inibizione come sopra definita é maggiore o uguale del 50%.

Quando nella formula è il gruppo di formula (Vg) in cui è metile e Rb è idrogeno,

e in formula ( l'anello di

formula (IV) comprendente M e Q è un anello aromatico a 6 atomi di carbonio e gli altri sostituenti sono come qui di seguito definiti:

quando è isobutile, il farmaco precursore di R così definito è ibuprofene;

quando è fenile ed il farmaco precursore di R così definito è flurbiprofene;

quando formano assieme il radicale di formula (IX), il farmaco precursore di R così definito è naproxene ;

quando è il radicale di formula (Vili), il farmaco precursore di R così definito è loxoprofene;

quando = benzoile, il farmaco precursore di R così definito è ketoprofene;

quando formano assieme il radicale di formula (X), il farmaco precursore di R così definito è carprofene;

quando nella formula

e in formula

l'anello di formula (IV) comprendente M e Q è un anello aromatico a 6 atomi di carbonio e gli altri sostituenti sono come qui di seguito definiti:

quando Rc è il radicale di formula

e si trova in posizione meta rispetto al gruppo

-NH- , il farmaco precursore di R così definito è l'acido flufenamico ;

quando Rc è il radicale di formula (VI) in cui

CI e si trovano nelle due posizioni orto rispetto al gruppo

e si trova in posizione para rispetto al gruppo

-NH- , il farmaco precursore di R così definito è l'acido meclofenamico ;

quando Rc è il radicale di formula (VI) in cui

e si trova in posizione meta rispetto al gruppo -NH-,

in posizione orto rispetto al gruppo -NH- e rispetto

all'atomo di cloro, il farmaco precursore di R così definito è l'acido tolfenamico;

quando nella formula

e nella formula

il doppietto elettronico libero sull'atomo di azoto, l'anello di formula (IV) comprendente M e Q è un anello piridinico, Rc è il radicale di formula e si trova in posizione meta rispetto al gruppo -NH-, il farmaco precursore di R così definito è l'acido nifiumico;

quando nella f

formula (Vg) in cui

e nella formula

l'anello della formula (IV) comprendente M e Q è un anello aromatico a 6 atomi di carbonio; Rc è il radicale di formula (VI) in cui e si trovano nelle due posizioni orto

rispetto al gruppo il farmaco precursore di R così definito è il diclofenac;

quando nella formula è il gruppo di

anello saturo a 6 atomi; Rg e Rc assieme formano il radicale di formula (VII), il farmaco precursore del radicale R così definito è etodolac;

quando nella formula è il gruppo di formula (Vg) in cui e in formula , l'anello in formula (IV) comprendente M corrisponde a quello del pirrolo; Rg = p.clorobenzoile; Rc = CH3; Rd con Re di formula (V) assieme formano il radicale di formula (IX), il farmaco precursore del radicale R così definito è indometacina;

quando nella formula

e in formula

l'anello di formula (IV) comprendente M e Q è un anello aromatico a 6 atomi di carbonio; il composto precursore del radicale R così definito è l'acido ferulico di formula (IVA)

Il composto precursore di B che soddisfa il test 4 é scelto preferibilmente nelle seguenti classi di composti:

amminoacidi, scelti tra i seguenti: L-carnosina, anserina, selenocisteina, selenometionina, penicilamina, N-acetilpenicilamina, cisteina, N-acetilcistena, glutatione o suoi esteri, preferibilmente estere etilico o isopropilico;

idrossiacidi, scelti tra i seguenti: acido gallico, acido ferulico, acido gentisico, acido citrico, acido caffeico, diidrocaffeico, acido p-cumarico, acido vanillico;

polialcooli aromatici ed eterociclici, scelti tra i seguenti: acido nordiidroguaiaretico, quercetina, catechina, kaempferolo, sulfuretina, acido ascorbico, acido isoascorbico, idrochinone, gossypol, acido reductico, metossiidrochinone , idrossiidrochinone, propil gallato, saccarosio, 3,5-di-tertbutil-4-idrossibenziltio glicollato, alcool p-cumarico, 4-idrossi-feniletilalcool, alcool coniferilico, allopurinolo;

composti contenenti almeno una funzione acida libera, scelti tra i seguenti: acido 3,3<1 >-tiodipropionico, acido fumarico, acido diidrossimaleico, acido edetico.

I composti precursori di B dei gruppi sopra indicati vengono preparati secondo i metodi noti in letteratura e descritti, ad esempio, nel "The Merck Index", 12a Ed. (1996), qui integralmente incorporato per riferimento.

Il test 4 é un saggio colorimetrico che consente di stabilire se i precursori di B sono in grado di inibire la produzione di radicali da parte di DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) (M.S. Nenseter et Al., Atheroscler. Thromb. 15, 1338-1344, 1995). Vengono preparate soluzioni 100 μΜ in metanolo delle sostanze in esame, ed una aliquota di esse viene aggiunta a una soluzione 0,1 M metanolica di DPPH. Dopo aver conservato le soluzioni a temperatura ambiente e al riparo dalla luce per 30 minuti si misura 1'assorbanza alla lunghezza d'onda di 517 nm. Si determina la diminuzione di assorbanza rispetto a quella della soluzione che contiene la stessa concentrazione di DPPH. La capacità del composto in esame di inibire la produzione di radicali viene espressa attraverso la seguente formula:

in cui As e Ac sono rispettivamente i valori di assorbanza della soluzione contenente il composto in esame assieme a DPPH e della soluzione contenente solo DPPH.

Il precursore di B soddisfa il test 4 se la capacità di inibire la produzione di radicali, come sopra definita, é uguale o maggiore del 50% alla concentrazione indicata (IO<'4 >M).

Preferibilmente Y<3 >é scelto tra i seguenti:

Preferibilmente Υ<3 >é un anello aromatico a 6 atomi, contenente un atomo di azoto, detto anello aromatico avente le due valenze libere in posizione 2 e 6.<■>

Il preferito di Y<3 >é Y12 (piridile) sostituito in posizione 2 e 6. I legami possono trovarsi anche in posizione non simmetrica. Ad esempio Y12 (piridile) può essere sostituito anche in posizione 2 e 3; Yl (pirazolo) può essere 3,5-disostituito.

I precursori di Y come definiti dalla formula (III), in cui la valenza libera dell'ossigeno é saturata con H e la valenza libera del carbonio terminale é saturata o con un gruppo carbossilico oppure ossidrilico, sono prodotti repe-ribili in commercio o possono essere ottenuti con metodi noti nell'arte.

In formula (I) i precursori di B preferiti per la sintesi dei nitrossiderivati utilizzabili nella presente invenzione sono i seguenti: acido ferulico, N-acetilcisteina, cisteina, acido caffeico, acido idrocaffeico e gentisico; i farmaci precursori preferiti di R sono i seguenti: ibuprofene, flurbiprof ene, naproxene, acido ferulico di formula (IVA).

I composti di formula (I) preferiti per l'uso secondo la seguente invenzione sono i seguenti:

Altri composti preferiti dell'invenzione sono quelli in cui in formula (I) il farmaco precursore di R ha formula (IVA), b0= O e cO = l e C è Y0 oppure Yte oppure YP, in particolare si possono citare i seguenti composti:

acido trans 3-(4-idrossi-3-metossifenil)-2-propenoico-, 4-(nitroossi)butil estere (XXI)

acido trans 3-(4-idrossi-3-metossifenil)-2-propenoico-, 3-(nitrossimetil)fenil estere (XXII)

acido trans 3-(4-idrossi-3-metossifenil)-2-propenoico-, 6-(nitroossimetil )-2-piridinilmetilestere cloridrato (XXIII)

Altri composti preferiti dell'invenzione sono quelli in cui in formula (I) il farmaco precursore di R ha formula (IVA), b0= l e cO = l e C è Y0 oppure YAr, in particolare si possono citare i seguenti composti:

(S)-N-acetilcisteina-4- (nitroossi)butilestere, trans-3-(4-idrossi-3-metossifenil )-2-propenoato (XXIV)

Il composto preferito è il seguente:

acido trans-3-(4-idrossi-3-metossifenil)-2-propenoico, 2-metossi-4-[(1E)-3-[4-(nitroossi )butossi]-3-oxo-lprope-nil]fenilestere (XXV)

I nitroossiderivati del composto di formula (IVA) risultano nuovi.

Questi composti si possono preparare utilizzando ad esempio i seguenti schemi di sintesi.

Le reazioni vengono effettuate con metodi ben noti nell'arte, che consentono di ottenere i legami tra farmaco precursore, il composto precursore di B e il radicale bivalente C come sopra definiti.

la. Se il farmaco ha formula generale il gruppo funzionale del composto precursore di B che si lega alla funzione carbossilica del farmaco ha formula XZ, essendo X come sopra definito e le reazioni che si effettuano dipendono dalla natura del secondo gruppo reattivo presente nel composto precursore di B.

la.l Se il secondo gruppo reattivo presente nel composto precursore di B é un gruppo carbossilico, lo schema generale della sintesi prevede la formazione iniziale dell'alogenuro dell'acido R-COHal (Hai = CI, Br) e la successiva reazione con il gruppo HX del composto precursore di B:

essendo come sopra definiti.

Se nei due composti in reazione sono presenti altri gruppi funzionali essi devono venire protetti prima della reazione secondo i metodi noti nell'arte; ad esempio come descritto nel volume di Th.

W. Greene :"Protective groups in organic synthesis", Harward University Press, 1980.

L'acilalogenuro RCOHal viene preparato secondo i metodi noti nell'arte, ad esempio mediante tionil o ossalil cloruro, alogenuri di P<111 >o P<v >in solventi inerti nelle condizioni di reazione, come ad esempio toluene, cloroformio, DMF, ecc.

In particolare, se il gruppo HX del composto precursore di B é NH2, oppure OH o SH, il farmaco precursore di formula R-COOH viene prima convertito nel corrispondente acil alogenuro RCOHal, come sopra indicato, e poi fatto reagire con il gruppo HX del composto precursore di B in presenza di una base organica, come trietilammina , piridina, ecc. impiegando un solvente inerte nelle condizioni di reazione come toluene, tetraidrofurano , ecc. a una temperatura compresa tra 0°C e 25°C.

In alternativa alla sintesi precedente, il farmaco precursore di formula R-COOH può essere trattato con un agente attivante il carbossile scelto tra Ν,Ν'-carboni1-diimidazolo (CDI), N-idrossibenzotriazolo e dicicloesilcarbodiimide in solvente come ad esempio DMF, THF, cloroformio ecc. a una temperatura compresa tra -5°C e 50°C e il composto ottenuto fatto reagire in situ con la funzione reattiva del composto precursore di B per ottenere il composto di formula (IA.1).

la.2 Se il composto precursore di B contiene due gruppi fun-zionali XZ, uguali o diversi tra loro, essendo X come sopra definito e Z = H, il farmaco precursore avente formula R-COOH viene prima trattato con un agente attivante il carbossile, come sopra descritto in la.l, e poi con il composto precursore di B, dopo aver protetto uno dei due gruppi reattivi HX, ad esempio con un gruppo acetilico oppure ter-butilossicarbonile , ripristinando la funzione iniziale alla fine della sintesi. Lo schema é il seguente:

in cui sono come sopra definiti e G é un gruppo protettivo della funzione HX.

2. Sintesi del nitrossiderivato .

2a.l Se il composto che si ottiene alla fine del precedente passaggio la. ha formula (IA.l), si può convertire l'acido nel corrispondente sale sodico e seguire poi metodi noti nell'arte per prepare il composto finale, ad esempio secondo uno degli schemi di sintesi seguenti:

in cui sono come sopra definiti,

scelto tra é come sopra defin

dicale Y privo dell'atomo di ossigeno,

il composto di formula (lA.lb) viene

sottoposto ad alogenazione, ad es. con

PPh3 + I2, e poi fatto reagire con AgN03 in solvente organico come acetonitrile, tetraidrofurano. Se R3 é Cl, Br, Iodio, il composto di formula (lA.lb) viene fatto reagire direttamente con AgN03 come sopra indicato.

in cui R5 = OH oppure NHR1C, essendo Rlc, R3 e gli altri simboli come sopra definiti.

Le reazioni sopra illustrate sono ben note nell'arte. Si vedano ad esempio le domande di brevetto a nome della Richiedente WO 94/12463, WO 95/09831 e WO 95/30641.

Se X1A é un alchile lineare C4, si fa reagire il corrispondente acido con trifenilfosfina in presenza di un agente alogenante come CBr4 oppure Nbromosuccinimmide in tetraidrofurano ottenendo il composto (lA.lc) in cui R3 = Br.

2a.2 Se il composto ottenuto alla fine del passaggio precedente la. ha formula (IA.2), il nitrossiderivato corrispondente viene ottenuto trattando un acido alogeno-carbossilico di formula Hai-X1A-COOH, essendo X1A come sopra definito, dapprima con un agente attivante il carbossile come descritto in 1A.1, e poi con il composto di formula (IA.2), ottenendo un alogeno derivato, che viene isolato e poi sciolto in solvente organico, (rif. paragrafo 2a.l), e trattato con nitrato d'argento. Lo schema di reazione complessivo é il seguente:

in cui sono come sopra definiti.

In alternativa, si può usare l'alogenuro

in cui Hai é preferibilmente bromo, che viene fatto reagire con il composto di formula (IA.2).

lb. Se il precursore del farmaco ha la funzione reattiva HX, in cui X é come sopra definito, invece di un gruppo carbossilico, i due gruppi funzionali presenti sul composto precursore di B possono essere i seguenti:

lb.l Un gruppo carbossilico, che reagisce con la funzione HX del precursore del farmaco, ed un gruppo HX, essendo quest'ultimo gruppo reattivo del composto precursore di B uguale o diverso dal gruppo funzionale del precursore del farmaco. La formula del composto precursore di B é del tipo sono come sopra definiti.

La funzione H-X- del composto precursore di B viene protetta secondo i metodi noti nell'arte e il carbossile viene fatto reagire, come sopra indicato, secondo il seguente schema:

Alla fine della reazione si ripristina la funzione HX del composto precursore di B.

lb.2 Se il composto precursore di B contiene due gruppi carbossilici, viene trattato con una quantità equimolare di un agente attivante il carbossile nelle condizioni in precedenza descritte in la.l, e poi fatto reagire con la funzione reattiva HX della molecola del precursore del farmaco. Eventuali altre funzioni reattive di tipo HX presenti nei due composti devono essere protette come in precedenza indicato. Si ottiene alla fine un composto di formula R

2b. Sintesi del nitrossiderivato .

2b.1 Per ottenere il nitrossiderivato finale partendo dal composto di formula ottenuto alla fine della sintesi descritta in lb.l, si fa reagire il composto (1B.1) con un alogenoacido di fonnula Hal-X1A-COOH che sia stato trattato come descritto in precedenza nel paragrafo la.l, oppure con il corrispondente cloruro dell <1 >alogenoacido. Il composto risultante viene sciolto in solvente organico, ad esempio acetonitrile o tetraidrofurano, e si fa reagire con nitrato di argento.

2b.2 Per ottenere il nitrossiderivato finale partendo dal composto di formula ottenuto alla fine della sintesi descritta in lb.2, si trasforma l'acido nel corrispondente sale sodico, si fa reagire con un composto in precedenza definito nella schema di reazione A. del paragrafo 2a.l, ottenendo secondo il medesimo procedimento ivi indicato il nitrossiderivato finale. In alternativa, se X1A é un alchile lineare C4, si fa reagire l'acido (1B.2) con trif enilfosf ina in presenza di un agente alogenante come CBr4 o N-bromosuccinimmide in tetraidrof urano e il composto risultante sciolto in solvente organico ad esempio acetonitrile, tetraidrof urano, viene fatto reagire con argento nitrato.

2b.3 In alternativa al procedimento di sintesi secondo lb.l e 2b.l, é possibile far reagire in un primo passaggio la funzione HX- del composto precursore di B HX-X2-COOH con il cloruro acilico di un alogenoacido di formula Hai-X1A-C0C1, in cui Hai é preferibilmente Br, e successivamente la funzione carbossilica del composto così ottenuto, con il precursore del farmaco R-HX. Nel terzo ed ultimo passaggio il gruppo -Hai viene sostituito con -0N02 secondo il procedimento descritto in 2b.l. Lo schema di reazione é il seguente:

definiti .

Nel precedente schema la nitrazione può essere in alternativa effettuata sul composto acido di formula (2B.3).

Quando i composti di formula (I) utilizzabili nella presente invenzione hanno uno o più centri chirali, essi possono essere in forma racemica o come miscele di diastereoisomeri, come singoli enantiomeri o singoli diastereoisomeri; se presentano asimmetria geometrica si possono utilizzare i composti nella forma cis o trans.

Quando nella molecola dei composti di formula (I) è presente un gruppo funzionale salificabile, ad esempio un azoto amminico o eterociclico, è possibile utilizzare i sali corrispondenti dei suindicati composti, ottenibili per reazione in solvente organico come ad esempio acetonitrile, tetraidrofurano , con una quantità equimolecolare del corrispondente acido, organico od inorganico.

Esempi di acidi organici utilizzabili sono i seguenti: acido ossalico, tartarico, maleico, succinico, citrico.

Esempi di acidi inorganici utilizzabili sono i seguenti: acido nitrico, cloridrico, solforico, fosforico. Preferiti sono acido nitrico e cloridrico.

E' stato trovato che i nitroossiderivati utilizzati nella presente invenzione sono in grado di prevenire la deposizione della placca amiloidea, con efficacia alquanto superiore ai prodotti dell'arte nota. Non è noto tuttora il loro meccanismo di azione in quanto è stato trovato che non esercitano alcun effetto inibitorio sul processo infiammatorio a carico della microglia. I risultati dell'invenzione sono ancora più sorprendenti se si considera che i composti utilizzati nella presente invenzione sono in grado di rilasciare sistemicamente ossido nitrico, che nella patologia di Alzheimer è riconosciuto come uno dei mediatori proinfiammatori che vengono rilasciati in seguito all'attivazione delle cellule microgliali. Non era prevedibile che l'impiego di questi composti nella profilassi e terapia del morbo di Alzheimer risultasse efficace.

I composti utilizzati nella presente invenzione inoltre presentano ottima tollerabilità, anche dopo trattamento a lungo termine. Data l'elevata efficacia e tollerabilità, si possono usare anche in condizioni di patologia molto avanzata .

I suddetti composti sono formulati nelle corrispondenti composizioni farmaceutiche per uso parenterale, orale secondo le tecniche ben note nel ramo, unitamente agli usuali eccipienti; si veda ad esempio il volume "Remington's Pharmaceutical Sciences 15a Ed.".

La quantità su base molare del principio attivo in queste formulazioni é uguale o inferiore alla massima posologia indicata per i farmaci precursori. Si possono usare anche dosi superiori data la loro ottima tollerabilità. Le dosi giornaliere dei farmaci precursori si possono trovare nelle pubblicazioni del ramo, come ad esempio nel "Physician's Desk reference".

Opzionalmente, l'uso secondo la presente invenzione può essere realizzato utilizzando i composti di formula (I) in combinazione con uno o più vaccini a base di beta-amiIoide.

II vaccino a base di beta-amiloide viene preparato con metodi noti, ad esempio come descritto nel lavoro di Schenk et al. (1999) "Immunization with amyloid-beta attenuates Alzheimer-disease-like pathology in thè PDAPP mouse" Nature 400(6740):173-7) . In questo caso è possibile ridurre la quantità di vaccino somministrata con conseguente riduzione degli effetti collaterali di natura immunologica del vaccino come indicato sopra.

I seguenti esempi illustrano l'invenzione e non sono limitativi del suo scopo.

ESEMPIO 1

-acetilcisteina-4-(nitroossi)butilestere, lfa-metil-2-naftalenacetato di formula (XV)

)-N-acetil-S-(6-metossi-a-metil-2-naftalen a-

A una soluzione di acido 6-metossi-a-metil-2-naftalenacetico (10 g, 43,4 mmoli) in cloroformio (100 mi) e N,N-dimetilformamide (6 mi) si aggiunge 1,1'-carbonildiimidazolo (CDI) (7,04 g, 43,4 mmoli). Dopo 15 minuti la soluzione ottenuta viene trattata con (S)-N-acetilcisteina (7,08 g, 43,4 mmoli) e si lascia a temperatura ambiente per 12 ore. La miscela di reazione si lava con HC15%, poi con acqua ed infine con salamoia. La fase organica viene anidrificata con sodio solfato e poi evaporata a pressione ridotta. Il residuo ottenuto viene purificato per cromatografia su gel di silice eluendo con acetato di etile. Si ottengono 11,66 g del prodotto atteso nella forma di un solido bianco p.f. 122-126°C.

bj_ Sintesi_ di_ (S)-N-acetil-cisteina_ 4-(bromobutil) estere-S-(6-metossi-<x-metil-2-naftalenacetato

A una soluzione del composto sintentizzato nel passaggio precedente (11,3 g, 30,1 mmoli) in tetraidrofurano (200 mi) si aggiungono trifenilfosfina (23,7 g, 90,3 mmoli) e tetrabromuro

(HF 2407/061 )

di carbonio (28,85 g, 90,3 mmoli). La miscela di reazione viene lasciata sotto agitazione per 24 ore a temperatura ambien-te. Si allontana il solvente per evaporazione a pressione ridotta. Si purifica il grezzo ottenuto per cromatografia su gel di silice eluendo con n-esano/etile acetato 7/3. Si ottengono 4 g dell'estere nella forma di un solido bianco con p.f. 67-71°C.

c) Sintesi di (S)- N-acetilcisteina-4-(nitroossi)butilestere. -(S)-6-metossi- alfa-metil-2-naftalenacetato

A una soluzione dell'estere ottenuto alla fine del prece-dente passaggio (1 g, 1,96 mmoli) in acetonitrile (20 mi) si aggiunge argento nitrato (0,66 g, 3,92 mmoli). La miscela di reazione viene scaldata per 7 ore al riflusso al riparo dalla luce. Si allontana per filtrazione il sale formatosi e si evapora la soluzione a pressione ridotta. Il residuo ottenuto viene purificato per cromatografia su gel di silice eluendo con n-esano/etile acetato 7/3. Si ottengono 0,47 g del prodotto finale nella forma di un solido bianco con p.f. 56-59°C.

Analisi elementare:

ESEMPIO 2

A una soluzione di acido a-metil[4-(2-metilpropil)benzene] acetico (10 g, 48,48 mmoli) in cloroformio (100 mi) e N,N-dimetilformamide (6 mi) si aggiunge 1,1'-carbonildiimidazolo (7,86 g, 48,48 mmoli). Dopo 1 ora la soluzione ottenuta viene trattata con (S)-N-acetilcisteina (7,91 g, 48,47 mmoli) e si lascia a temperatura ambiente per 24 ore. La miscela di reazione si lava con HC1 5%, poi con acqua ed infine con salamoia. La fase organica viene anidrificata con sodio solfato e poi evaporata a pressione ridotta. Il residuo ottenuto viene purificato per cromatografia su gel di silice eluendo con acetato di etile. Si ottengono 13,3 g del prodotto atteso nella forma di un olio.

A una soluzione del composto sintetizzato nel passaggio precedente (12,8 g, 36,4 mmoli) in tetraidrofurano (100 mi) si

aggiungono trif enilfosfina (28,65 g, 109,23 mmoli) e tetrabromuro di carbonio (36,23 g, 109,23 mmoli). La miscela di reazione viene lasciata sotto agitazione per 48 ore a temperatura ambiente. Si allontana il solvente per evaporazione a pressione ridotta. Si purifica il grezzo ottenuto per cromatografia su gel di silice eluendo con cicloesano/etile acetato 1/1. Si ottengono 5,79 g dell'estere nella forma di un olio.

A una soluzione dell'estere ottenuto alla fine del precedente passaggio (5,5 g, 11,3 mmoli) in acetonitrile (100 mi) si aggiunge argento nitrato (2,69 g, 15,8 mmoli). La miscela di reazione viene scaldata per 24 ore al riflusso al riparo dalla luce. Si allontana per filtrazione il sale formatosi e si evapora la soluzione a pressione ridotta. Il residuo otte-nuto viene purificato per cromatografia su gel di silice eluendo con cicloesano/etile acetato 7/3. Si ottengono 1,18 g del prodotto atteso nella forma di un olio.

Analisi elementare:

ESEMPIO 3

Sintesi di_ ( S ) - N-acetilcisteina- 4 - (nitroossi )butilestere , 1-( 4 -cloro benzoli ) -metossi - 2 -metil - IH- indol - 3 -acetato di formula (XVII )

A una soluzione di acido 1-(4-clorobenzoil)-5-metossi-2-metil-IH-indol-3-acetico (10 g, 28,00 mmoli) in cloroformio (100 mi) e Ν,Ν-dimetilformamide (2 mi) si aggiunge l,l'-carbonildiimidazolo (4,53 g, 28,00 mmoli). Dopo 1 ora la soluzione ottenuta viene trattata con (S)-N-acetilcisteina (4,56 g, 28,00 mmoli) e si lascia a temperatura ambiente per 24 ore. La miscela di reazione si lava con HC15%, poi con acqua ed infine con salamoia. La fase organica viene anidrificata con sodio solfato e poi evaporata a pressione ridotta. Il residuo ottenuto viene purificato per cromatografia su gel di silice eluendo con acetato di etile. Si ottengono 7,79 g del prodotto atteso nella forma di un solido giallo p.f. 129°C.

A una soluzione del composto ottenuto nel passaggio precedente (3,09 g, 6,14 mmoli) in N,N dimetilformamide (50 mi) si aggiunge sodio etilato (0,42 g, 6,14 mmoli) e, dopo 30 minuti, 1,4-dibromobutano (2,18 mi, 18,00 mmoli) sciolto in 25 mi di N, N dimetilformamide. La miscela di reazione viene lasciata sotto agitazione per 20 ore a temperatura ambiente, quindi si diluisce con etere etilico e si lava con acqua. Dopo aver anidrificato la fase organica con solfato di sodio si allontana il solvente per evaporazione a pressione ridotta. Si purifica il grezzo ottenuto per cromatografia su gel di silice eluendo con cicloesano/etile acetato 1/1 Si ottengono 1,7 g dell'estere nella forma di un solido di color giallo con p.f.

130-134°C.

A una soluzione dell'estere ottenuto alla fine del precedente passaggio (1,6 g, 2,5 mmoli) in acetonitrile (30 mi) si aggiunge argento nitrato (0,6 g, 3,51 mmoli). La miscela di reazione viene scaldata per 8 ore al riflusso al riparo dalla luce. Si allontana per filtrazione il sale formatosi e si evapora la soluzione a pressione ridotta. Il residuo ottenuto viene purificato per cromatografia su gel di silice eluendo con cicloesano/etile acetato 4/6. Si ottengono 1,2 g del pro

dotto finale nella forma di un olio.

Analisi elementare:

ESEMPIO 4

Il composto viene sintetizzato secondo il procedimento descritto nell'esempio 1. La sostanza si presenta come un olio. Resa: 26%.

Analisi elementare:

ESEMPIO 5

Sintesi di acido alfa-metil -4-(2-metilpropil )benzeneacetico , 2-metossi-4- [(1E)-3-[4-(nitroossi )butossi ]-3-oxo-1 -propenil ]fenilestere di formula (XIII)

A una soluzione di acido a-metil-[4- (2-metilpropil )benzene] acetico (5,03 g, 24,4 mmoli) in tetraidrofurano (100 mi) e Ν,Ν-dimetilf ormamide (5 mi) si aggiunge 1,1-carboniIdi imidazolo (4,25 g, 24,8 mmoli). Dopo 1 ora la soluzione ottenuta si tratta con acido ferulico (4,90 g, 25 mmoli), si aggiunge sodio etilato (89 mg) e si lascia a temperatura ambiente sotto agitazione per 12 ore. La miscela di reazione si lava con HC1 5%, poi con acqua ed infine con salamoia. La fase organica si anidrifica con sodio solfato e si evapora pressione ridotta.

Il residuo ottenuto viene purificato per cromatografia su gel di silice, eluendo con etile acetato/n-esano 7/3. Si ottengono 5,1 g del prodotto atteso come solido bianco con p.f.

131 -137°C.

( , )

A una soluzione del composto sintetizzato nel passaggio precedente (5,33 g, 14 mmoli) in N,N-dimetilformamide (130 mi) si aggiunge, sotto agitazione, sodio etilato (1,2 g, 16 mmoli). Dopo 1 ora alla miscela ottenuta si aggiunge 1,4-dibromobutano (10 g, 46 mmoli) e si lascia reagire a temperatura ambiente per 12 ore. La miscela di reazione si lava con HC1 5%, poi con acqua ed infine con salamoia, la fase organica si anidrifica con sodio solfato e si evapora a pressione ridotta. Il residuo ottenuto si purifica per cromatografia su gel di silice eluendo con n-esano/etile acetato 8/2. Si ottengono 4,46 g del prodotto atteso.

A una soluzione del composto sintetizzato nel passaggio precedente (4 g, 7,72 mmoli) in acetonitrile (70 mi) si aggiunge argento nitrato (2,58 g, 15 mmoli). La miscela di reazione viene scaldata al riflusso per 2 ore al riparo dalla luce. Al termine si allontana per filtrazione il sale formatosi e si evapora la soluzione a pressione ridotta. Il residuo che si recupera viene purificato per cromatografia su gel di silice, eluendo con n-esano/etile acetato 8/2. Si ottengono

2,4 g del composto atteso come olio.

Analisi elementare:

ESEMPIO 6

Il composto viene sintetizzato secondo il procedimento descritto nell'esempio 5. La resa globale del processo é 32%. La sostanza si presenta come un solido amorfo.

Analisi elementare:

ESEMPIO 7

Valutazione dell'effetto di ibuprofen e del nitrossi derivato del flurbiprofen (NO-flurbiprof en) sulla riduzione dei deposi-ti amiloidici (Proteina Αβ) nella corteccia cerebrale frontale e sull'attivazione della microglia misurata nella corteccia cerebrale frontale

In questo esperimento si sono utilizzati topi transgeni-ci (APPM-PS1M) portatori dei geni umani e mutati per la pro-teina precursore della proteina β-amoloide (APP, da cui si forma per proteolisi la proteina Αβ delle placche amiloidi) e per la proteina presenilina- 1 (PS1). Le mutazioni in queste proteine causano la demenza di Alzheimer in alcune famiglie in cui la malattia presenta un carattere autosomico dominan-te. I topi portatori del doppio-transgene APP mutata PS-1 mutata (APPM/PS1M) rappresentano un ottimo modello per lo studio della demenza di Alzheimer in quanto sviluppano plac-che amiloidi e neuroinfiammazione simili a quelli riscontrati nella patologia umana (Holcomb L. et Al. Nat. Med. 4:97 (1998) ).

Tre gruppi composti ciascuno di 12 topi transgenici (APPM/PS1M) aventi all'inizio dell'esperimento 7 mesi di età, ricevevano con la dieta giornaliera ibuprofen e, rispettiva-mente, NO-flurbiprofen (rif. Es. 6).

La dose prò die somministrata di ciascun composto era di 60 mg/kg per 5 mesi. Il terzo gruppo era il gruppo controllo e riceveva solo la dieta giornaliera. Al termine del quinto mese gli animali venivano sacrificati mediante iniezione intra-peritoneale di pentobarbital (100 mg/kg). I cervelli sono stati rimossi e i due emisferi sono stati separati. Gli emisferi sono stati dapprima trattati per 24 ore con una soluzione di paraformaldeide (4% volume), poi per un periodo di 8 ore ciascuno, con soluzioni a concentrazioni crescenti di tampone fosfato di Soreson, rispettivamente di 10%, 20% e 30%. Gli emisferi sono stati quindi congelati e sezionati lungo un piano orizzontale e le sezioni sono state conservate a 4°C in DPBS (Dulbecco phosphate buffer saline) con sodio azide.

L'entità dei depositi amiloidi è stata valutata su una parte delle sezioni ottenute mediante colorazione con Rosso Congo (Sheehan DC, Hrapchak BB, eds. Theory and Practice of Histotechnology , 2<nd >ed. Mosby, St. Louis (MO), 1980, pp.

177-178; Thompson SW, ed. Selected Histochemical and Histopathological Methods. Charles C. Thomas, Springfield (IL), 1966, pp.402-405), e su una seconda parte delle sezioni di cervello mediante trattamento con anticorpo policlonale specifico verso il peptide Αβ per identificare mediante metodo immunochimico i depositi Αβ.

Un'altra parte delle sezioni ottenute dalla corteccia frontale é stata analizzata mediante analisi immunoistochimica utilizzando anticorpi diretti contro indicatori di attivazione microgliale: anti-MHC-II, diretto contro il complesso di istocompatibilità di tipo II, anti-CRIII che riconosce il recettore 3 del complemento. L'espressione di questi indicatori risulta aumentata nella microglia attivata. La presenza di microglia è stata quantificata mediante analisi videodensitometrica e le cellule microgliali positive per MHC-II sono state contate manualmente in diversi campi di ogni sezione di cervello ed i risultati sono stati espressi come nu-mero medio di cellule MHC-II positive per sezione di tessuto.

I risultati sono riportati nelle Tabelle 1 e 2.

I risultati riportati in Tabella 1 mostrano che N0-flurbiprofen induce una riduzione notevole del deposito delle placche amiloidiche (depositi AS) negli animali trattati rispetto a ibuprofen.

L'attività di ibuprofen risulta notevolmente inferiore a quella dei composti secondo la presente invenzione.

I risultati riportati in Tabella 2 sono espressi come rapporto tra la media del numero di cellule microgliali atti-vate (MCH-II positive) contate nelle sezioni cerebrali dei tre gruppi di animali e la media del numero di cellule microgliali attivate contate nelle sezioni cerebrali del gruppo di controllo. Detti risultati mostrano che nel gruppo di topi trattati con NO-flurbiprofen il numero delle cellule micro-gliali è circa 25 volte superiore a quello dei controlli e che nel gruppo trattato con ibuprofen il numero delle cellule attivate è circa 6 volte superiore a quello dei controlli. ESEMPIO 8

Valutazione dei danni gastrici indotti da flurbiprofen e ibuprofen rispetto ai corrispondenti nitroossi-derivati secondo la presente invenzione

La tollerabilità gastrica di questi farmaci è stata valutata nei topi (gruppi di 10 topi ciascuno) trattati a breve o lungo termine rispettivamente con NO-flurbiprofen come sopra definito, una dose equimolare di flurbiprofen, oppure con ibuprofen o con una dose equimolecolare di NO-ibuprofen.

Le dosi somministrate ed i risultati ottenuti sono riportati in Tabella 3 e mostrano che la somministrazione di flurbiprofen provoca danni gastrici, mentre NO-flurbiprofen non danneggia la mucosa gastrica ed è più tollerato.

ESEMPIO 9

Confronto dell'efficacia di NO-flurbiprofen e del nitroossibutil derivato dell'aspirina (NO-ASA) e il nitroossi butil derivato del flurbiprofen (NO-C4-flurbiprofen) nell'inibire la neurodegenerazione cerebrale in ratti trattati con LPS Il nitroossibutil derivato dell'aspirina (NO-ASA) e il nitroossi butil derivato del flurbiprofen (NO-C4- flurbipro-fen) sono stati sintetizzati secondo il metodo riportato nella domanda di brevetto WO 95/30641 a nome della Richiedente.

72 ratti F-344 maschi di 3 mesi sono stati suddivisi in 4 gruppi, che venivano infusi cronicamente con LPS (lipopolisaccaride) per 30 giorni e ricevevano una volta al giorno, per lo stesso periodo di tempo, mediante iniezione sottocutanea rispettivamente NO-ASA (90 mg/kg equivalenti a 302 pnroli/Kg), NO-f lurbiprofen (14 pmoli/kg), NO-C4-flurbiprofen (15 mg/Kg equivalenti a 41,5 pinoli /kg) o solo lo stesso volume di solvente (controlli). Il solvente era costituito da una miscela dimetilolf ossido/etanolo/olio di ricino 20/5/75 in volume.

Al termine i ratti venivano sacrificati mediante iniezione letale con pentobarbital .

Procedure di Fissazione dei tessuti cerebrali

Il cervello di ogni ratto é stato perfuso in situ dappri-ma con una soluzione salina fredda contenente 1 U/ml di eparina, successivamente con paraformaldeide 4% in tampone fosfato 0,1 M (pH 7,4). I cervelli sono stati sezionati, fissati ulteriormente per 1 h nello stesso fissativo e incubati per una notte in una soluzione crioprotettiva contenente 20% in peso di sucrosio. I tessuti congelati sono stati gradualmente riscaldati a -20°C e sezioni seriali frontali sono state tagliate mediante un criostato. Le sezioni sono state raccolte in tampone fosfato e utilizzate immediatamente o conservate per una notte.

Le sezioni sono state lavate ed incubate in tampone fosfato (PBS ) ed incubate per una notte a temperatura ambiente con anticorpi primari diretti contro epitomi specifici. La microglia attivata é stata visualizzata utilizzando 1'anticorpo OX-6 diretto contro il complesso di istocompatibilità di classe II (MHC-II). Le sezioni sono state incubate per 1 h con 1'anticorpo secondario biotinilato (anti-IgG di topo, ottenuto nel cavallo) e poi con avidina coniugata con perossidasi (1 h). In seguito, le sezioni sono state trattate per 1-5 min con 0,05% di una soluzione di 3,3'-diamminobenzidina tetraidrocloridrato, che è il substrato della perossidasi. La reazione di colorazione é stata terminata mediante lavaggi con PBS.

Le sezioni sono state quindi analizzate mediante microscopia. Il numero di cellule microgliali positive per OX-6 nel giro dentato e nelle aree CAI-4 dell'ippocampo sono state contate in sezioni di cervello identiche provenienti da ogni ratto.

I risultati, espressi come percentuale di inibizione del processo neurodegenerativo rispetto ai controlli sono riportati in Tabella IV e dimostrano che il nitroossiderivato del flurbiprofen (NO-flurbiprofen) secondo l'invenzione è più efficace nell'inibire il processo neurodegenartivo indotto da LPS sia rispetto a NO-ASA che rispetto a NO-C4-flurbiprofen. In particolare NO-flurbiprofen ha la stessa efficacia in questo test a 1/3 della dose utilizzata per NO-C4-flurbiprofen. L'attività di NO-ASA è invece molto inferiore rispetto a quella dei due precedenti composti.

Tabella 1

<1 >Colorazione con congo red;

<2 >Dosaggio Αβ I con metodo immunocitochimico

Tabella 2

Analisi immuno-istochimica dell'attivazione delle cellule microgliali in seguito al trattamento con ibuprofen e NO-flurbiprofene , rispettivamente.

I controlli non hanno ricevuto alcun trattamento farmacologico. I risultati sono espressi come rapporto tra il numero medio di cellule microgliali in ciascun gruppo di ratti rispetto a quello dei controlli (RATT)

Tabella 3

Tabella 4

Confronto dell'efficacia di NO-flurbiprofen, del nitroossibutil derivato dell'aspirina (NO-ASA) e il nitroossi butil derivato del flurbiprofen (NO-C4-flurbiprofen) nell'inibire la neurodegenerazione cerebrale in ratti trattati con LPS.

Claims

RIVENDICAZIONI 1. Uso per la preparazione di farmaci nella profilassi e trattamento del morbo di Alzheimer di composti, o loro sali, aventi la seguente formula generale:

m cui: c0 è un intero ed é 0 oppure 1, preferibilmente 1; bO è un intero ed è 0 oppure 1, con la condizione che cO e bO non possono essere contemporaneamente uguali a zero. in cui R é il radicale di un farmaco come sotto definito:

m cui: G è uno dei segue

M è un atomo di carbonio o di azoto; P è il seguente gruppo:

m cui l'atomo di carbonio della formula (V) si trova in posizione 5 dell'anello della formula (IV);

oppure un atomo di ossigeno; sono interi e indipendente-mente l'uno dall'altro sono 1 oppure 0; q2 = q3 = q4 = 0 quando l'anello in formula (IV) è aromatico e quando l'anello di formula (IV) è saturo a 6 atomi in cui l'eteroatomo è Q = 0, e si trova in posi-zione 6 dell'anello; quando di formula (Vg) Ra ed Rb, uguali o diversi, sono idrogeno, alchile C-L-CJ preferibilmente metile; Rc in formula (IV)è idrogeno, alchile CJ-CJ, op-pure il seguente radicale:

in cui , uguali o diversi, possono essere H, alogeno preferibilmente cloro, alchile CJ-CJ preferibilmente metile, CF3; Rg è idrogeno oppure -OCH3, quando l'anello di fig. (IV) è a 6 atomi; oppure è un doppietto elettronico quando l'anello a 6 atomi è aromatico e M = azoto; oppure è un radicale p.clorobenzoile quando q3 = 0 ed M = azoto e l'anello di fig. (IV) è aromatico; oppu-re Rc e Rg presi assieme sono tali da formare il seguente radicale:

Rd in formula (IV) è idrogeno, ossidrile, alchile C1-C4 opzionalmente ramificato, fenile, oppure il seguente radicale:

Rdl = idrogeno quando q2 = 1 ; Re (formula V) = idrogeno, alogeno preferibilmente F, oppure benzoile; oppure Rd e Re presi assieme sono tali da formare i seguenti radicali:

Rel (formula V) = H quando q3 = 1; RN (formula IV) = alchile C1-C3 preferibilmente etile quando q4 = 1; T-L = (CO)t oppure (X)t., dove X = 0, S, NR1C, Rlc é H oppure un alchile lineare o ramificato, avente da 1 a 5 atomi di carbonio, t e t<1 >sono interi ed uguali a zero oppure 1, con la condizione che t 1 quando t 0; t = 0 quando

in cui no uguali o diversi; quando la funzione reattiva nel farmaco precursore é -OH oppure -NH2; TB = X, come sopra definito, quando la funzione reattiva nel farmaco precursore é -COOH; TBI= (CO)tx oppure (X)txx, in cui tx e txx hanno il valore di 0 oppure 1; con la condizione che tx = 1 quando quando come sopra definito; X2 é un pontante bivalente come sotto definito; C é il radicale bivalente -Tc-Y- in cui Tc = (CO) quando quando essendo X come sopra definito; Y ha uno dei seguenti significati:

m cui: nix é un intero da 0 a 3 , preferibilmente 1; nlIX é un intero da 1 a 3 preferibilmente 1; uguali o diversi tra loro sono H oppure alchile lineare o ramificato C1-C4; preferibilmente sono H. Y<3 >é un anello eterociclico contenente uno o due atomi di azoto, detto anello eterociclico essendo saturo, insaturo o aromatico, a 5 o 6 atomi; oppure Y può essere: Y0, scelto tra i seguenti: un gruppo alchilenossi R

lineare o ramificato quando possibile, avente preferibilmente da 2 a 6 atomi di carbonio, oppure un cicloalchilene avente da 5 a 7 atomi di carbonio, nel-l'anello cicloalchilenico uno o più atomi di carbo-nio possono essere sostituiti da eteroatomi, 1'anello può avere catene laterali di tipo R', essendo R' come sopra definito; oppure uno dei seguenti gruppi:

in cui nf' è un intero da 1 a 6 preferibilmente da 1 a 3;

ribilmente da 2 a 4; oppure Y è Υ3⁄4 ed è scelto tra i seguenti:

in cui n3 é un intero da 0 a 3 ed n3<1 >é un intero da 1 a 3;

in cui n3 ed n3' hanno il significato sopra indica- to; con la condizione che quando in formula (I) il radicale R di formula (IV) del farmaco A è diverso da acido ferulico se il radicale bivalente Y di C è R'O allora bO = 1; X2, radicale bivalente, é tale che il corrispondente precursore di in cui le valenze libere di TB e di TBI sono saturate ciascuna con OZ, con Z oppure con essendo: preferibilmente C^-C8 alchile lineare o ramificato quando possibile, uguali o diversi hanno i valori di Z come so-pra definito, a seconda che = CO oppure X, in funzione dei valori di t, t', tx e txx; soddisfa il seguente test (test 4): determinazione ana-litica eseguita aggiungendo aliquote di soluzioni metanoliche di concentrazione IO<"4 >M del precursore di B a una soluzione metanolica di DPPH (2 ,2-diphenyl -1-picryl hydrazyl); dopo aver conservato la soluzione a temperatura ambiente e al riparo dalla luce per 30 minuti, si legge l'assorbanza della soluzione in esame e di una soluzione contenente solamente DPPH nella stessa quantità, alla lunghezza d'onda di 517 nm; poi si determina la per-centuale di inibizione del precursore di B verso la pro-duzione di radicali indotta da DPPH attraverso la for-mula:

in cui As e Ac sono rispettivamente i valori di assorbanza della soluzione contenente il composto in esame e DPPH e quello della soluzione contenente solo DPPH. Il criterio di accettazione dei composti precursori di B secondo questo test é il seguente: il test 4 é soddisfatto dai composti precursori di B se la percentuale di inibizione come sopra definita é maggiore o uguale del 50%.
2. Uso secondo la rivendicazione 1, in cui: quando nella formula è il gruppo di formula (Vg) in cui Ra è metile e Rb è idrogeno,

e in formula

l'anello di formula (IV) comprendente M e Q è un anello aromatico a 6 atomi di carbonio e gli altri sostituenti sono come qui di seguito definiti: quando è isobutile, il farmaco precursore di R così definito è ibuprofene; quando è fenile ed il farmaco precursore di R così definito è flurbiprofene; quando formano assieme il radicale di formula (IX), il farmaco precursore di R così definito è naproxene; quando è il radicale di formula (Vili), il farmaco precursore di R così definito è loxoprofene; quando = benzoile, il farmaco precursore di R così definito è ketoprofene; quando formano assieme il radicale di formula (X), il farmaco precursore di R così definito è carprofene; quando nella formula

e in formula

l'anello di formula (IV) comprendente M e Q è un anello aromatico a 6 atomi di carbonio e gli altri sostituenti sono come qui di seguito definiti: quando Rc è il radicale di formula (VI) in cui RM = e si trova in posizione meta rispetto al gruppo -NH-, il farmaco precursore di R così definito è l'acido flufenamico; quando Rc è il radicale di formula (VI) in cui RM = RP = CI e si trovano nelle due posizioni orto rispetto al gruppo - e si trova in posizione para rispetto al gruppo -NH-, il farmaco precursore di R così definito è l'acido meclofenamico; quando Rc è il radicale di formula (VI) in cui RM = e si trova in posizione meta rispetto al gruppo - in posizione orto rispetto al gruppo - e rispetto all'atomo di cloro, il farmaco precursore di R così definito è l'acido tolfenamico; quando nella formula

e nella formula

è il doppietto elettronico libero sull'atomo di azoto, l'anello di formula (IV) comprendente M e Q è un anello piridinico, Rc è il radicale di formula (VI) in cui 3 e si trova in posizione meta rispetto al gruppo -NH-, il farmaco precursore di R così definito è l'acido nifiumico; quando nella formula è il gruppo di formula (Vg) in cui

e nella formula (

0; l'anello della formula (IV) comprendente M e Q è un anello aromatico a 6 atomi di carbonio; Rc è il radicale di formula (VI) in cui e si trovano nelle due posizioni orto rispetto al gruppo -NH-, RQ = H; il farmaco precursore di R così definito è il diclofenac; quando nella formula è il gruppo di formula (

= etile, e nella formula

l'anello della formula (IV) compren-dente M e Q è un anello saturo a 6 atomi; Rg e Rc assieme formano il radicale di formula (VII), il farmaco precur-sore del radicale R così definito è etodolac; quando nella formula è il gruppo di formula (Vg) in cui

formula l'anello in formula (IV) comprendente M corrisponde a quello del pirrolo; Rg = p.clorobenzoile; di formula (V) assieme formano il radicale di formula (IX), il farmaco precurso-re del radicale R così definito è indometacina.
3. Uso secondo la rivendicazione 1, in cui quando nella formula e in formula l'anello di formula (IV) comprendente M e Q è un anello aromatico a 6 atomi di carbonio; il farmaco precursore del radicale R così definito è l'acido ferulico di formula (IVA)
4. Uso secondo le rivendicazioni 1-3 in cui il composto precursore di B che soddisfa il test 4 é scelto nelle se-guenti classi di composti: amminoacidi, scelti tra i seguenti: L-carnosina, anserina, selenocisteina, selenometionina, penicilamina, N-acetilpenicilamina, cisteina, N-acetilcistena, glutatione o suoi esteri, preferibilmente estere etilico o isopropilico; idrossiacidi, scelti tra i seguenti: acido gallico, acido ferulico, acido gentisico, acido citrico, acido caffeico, diidrocaffeico, acido p-cumarico, acido vanillico; polialcooli aromatici ed eterociclici, scelti tra i seguenti: acido nordiidroguaiaretico, quercetina, catechina, kaempferolo, sulfuretina, acido ascorbico, acido isoascorbico, idrochinone, gossypol, acido reductico, metossiidrochinone, idrossiidrochinone, propil gallato, saccarosio, 3,5-di-tertbutil-4-idrossibenziltio glicollato, alcool p-cumarico, 4-idrossi-feniletilalcool, alcool coniferilico, allo<¬> composti contenenti almeno una funzione acida libera, scelti tra i seguenti: acido 3,3'-tiodipropionico, acido fumarico, acido diidrossimaleico, acido edetico.
5. Uso secondo le rivendicazioni 1-4 in cui Y<3 >nella formula (III) é scelto tra i seguenti:
6. Uso secondo la rivendicazione 5, in cui Y<3 >é un anello aromatico a 6 atomi, contenente un atomo di azoto e avente le due valenze libere rispettivamente in posizione 2 e 6.
7. Uso secondo la rivendicazione 6 in cui Y<3 >é Y12 (piridile) sostituito in posizione 2 e 6, o avente i due legami anche in posizione non simmetrica.
8. Uso secondo le rivendicazioni 1-7 in cui i precursori di B di formula (I) per la sintesi dei nitrossiderivati utilizzabili nella presente invenzione sono i seguenti: acido ferulico, N-acetilcisteina, cisteina, acido caffeico, acido idrocaffeico e gentisico; e i farmaci precursori di R sono i seguenti: ibuprofene, flurbiprofene, naproxene, acido ferulico.
9. Uso secondo le rivendicazioni 1-8 in cui i composti di formula (I) sono i seguenti:
10. Uso secondo le rivendicazioni 1-9 in cui se i composti di formula (I) hanno uno o più centri chirali, essi sono utilizzati in forma racemica o come miscele di diastereoisomeri, come singoli enantiomeri o singoli diastereoisomeri; se presentano asimmetria geometrica sono utilizzati i composti nella forma cis o trans.
11. Uso secondo le rivendicazioni 1-10 in cui i composti di formula (I) vengono utilizzati in combinazione con uno o più vaccini a base di beta-amiloide.
12. Miscele di composti come definite nella rivendicazione 11.
13. Composti secondo la rivendicazione 9 scelti fra: