BR112021003660A2

BR112021003660A2 - compostos úteis como moduladores de autofagia mediada por chaperonas

Info

Publication number: BR112021003660A2
Application number: BR112021003660-1A
Authority: BR
Inventors: Ana Maria Cuervo; Evripidis Gavathiotis
Original assignee: Albert Einstein College Of Medicine
Priority date: 2018-08-30
Filing date: 2018-08-30
Publication date: 2021-05-18
Also published as: JP2022511269A; EP4212516A1; US11834424B2; US20210317095A1; KR20210052455A; CN112714761A; EP3844155A4; KR102628396B1; IL280902A; AU2018439206B2; WO2020046335A1; SA521421354B1; EP3844155A1; MX2021002260A; CA3109899A1; JP7262141B2; AU2018439206A1

Abstract

Compostos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos de Fórmula I são divulgados. Certos compostos e sais de Fórmula I são ativos como moduladores de CMA. A divulgação fornece composições farmacêuticas contendo um composto de Fórmula I.

Description

COMPOSTOS ÚTEIS COMO MODULADORES DE AUTOFAGIA MEDIADA POR CHAPERONAS DECLARAÇÃO DE INTERESSE DO GOVERNO

[0001] O National Institutes of Health financiou a matéria desta divulgação. O governo dos Estados Unidos tem certos direitos sobre este pedido.

CAMPO DA DIVULGAÇÃO

[0002] A presente divulgação se refere a 3-fenil-benzoxazinas e 3-fenil-quinoxazolinas como moduladores de CMA e composições farmacêuticas contendo esses compostos.

FUNDAMENTOS

[0003] A autofagia é um processo pelo qual proteínas desnecessárias ou disfuncionais presentes no citosol são degradadas no lúmen lisossomal. Na autofagia mediada por chaperonas (CMA), as proteínas são selecionadas individualmente e direcionadas do citosol para o lúmen lisossomal cruzando diretamente a membrana. A CMA desempenha um papel no controle de qualidade celular, facilitando a remoção de proteínas danificadas ou anormais e subunidades excedentes de complexos multiproteínas. A CMA, quando ativada, funciona: para quebrar proteínas para fornecer aminoácidos para combustível durante períodos prolongados de fome; para remover proteínas oxidadas durante o estresse oxidativo; e para remover proteínas danificadas após exposição a produtos químicos tóxicos. A CMA também tem funções regulatórias na célula, pois pode modular a atividade de outros processos celulares (ou seja, glicólise, lipogênese, lipólise, ciclo celular, reparo de DNA, etc.) por meio da degradação de proteínas-chave que participam de cada um desses processos.

[0004] A CMA é um processo de múltiplas etapas. A chaperona, proteína cognata de choque térmico 70 (Hsc70), reconhece e se liga a um motivo de pentapeptídeo (por exemplo, KFERQ) do substrato da proteína a ser degradado. Uma vez ligado a Hsc70, o substrato de proteína é direcionado para a superfície do lisossoma, onde interage com a cauda citosólica da forma monomérica do receptor de proteína de membrana associada ao lisossoma ligado à membrana tipo 2A (LAMP-2A). Após a ligação do complexo Hsc70-substrato de proteína ao receptor LAMP-2, isso desencadeia LAMP-2A para formar um complexo multimérico ("complexo de translocação") com as proteínas lisossomais associadas. É somente após a formação do complexo de translocação que o substrato da proteína pode atravessar a membrana do citosol para o lisossoma. Uma vez que o substrato é translocado para o lúmen lisossomal, o LAMP-2A se separa do complexo de translocação e o substrato da proteína sofre degradação.

[0005] As atividades de CMA tanto diminuída quanto aumentada têm sido associadas a doenças humanas. Em particular, os problemas no funcionamento do complexo de translocação contribuem para o desenvolvimento de patologias de doenças. Por exemplo, a redução da atividade de CMA está associada a: doenças neurodegenerativas, como tauopatias (demência frontotemporal, doença de Alzheimer), doença de Parkinson, doença de Huntington, doenças de príon, esclerose lateral amiotrófica, degeneração retinal e macular, amaurose congênita de leber, diabetes, fígado agudo insuficiência, NASH, hepatosteatose, fígado gorduroso alcoólico, insuficiência renal e doença renal crônica, enfisema, miosite de corpo de inclusão esporádica, lesão da medula espinhal, lesão cerebral traumática, distúrbios de armazenamento lisossomal, incluindo, mas não se limitando a cistinose, galactosialidose, mucopolisacaridose, uma doença cardiovascular ou imunosenescência. Alternativamente, a regulação positiva da atividade de CMA está ligada à sobrevivência e proliferação de células de câncer e também ocorre no lúpus, por exemplo. No entanto, moléculas pequenas conhecidas que modulam a CMA são inespecíficas e afetam a atividade de outros mecanismos de controle de qualidade celular. Portanto, há uma necessidade de compostos que modulem a atividade de CMA para o tratamento de doenças e condições associadas ao aumento ou diminuição da atividade de CMA.

SUMÁRIO

[0006] Os inventores descobriram uma classe de compostos e sais de Fórmula I que modulam a CMA. Alguns compostos ativam um receptor RAR. Alguns compostos inativam um receptor RAR.

[0007] Os receptores de ácido retinóico (RARs) são receptores de hormônios nucleares que atuam como fatores de transcrição, regulando a divisão celular, o crescimento celular e a morte celular. Existem três tipos de RARs identificados em mamíferos (RARa, RARB e RARy) codificados por diferentes genes. A expressão de RARB e RARy é dependente de tecido, enquanto RARa é expresso de forma ubíqua. Os ligantes naturais dos RARs são o ácido all-trans retinoico (ATRA) e o ácido 9-cis retinoico (RA 9-cis).

[0008] A sinalização de RARa inibe a transcrição de LAMP-2A e a expressão de outros genes de CMA. Quando o RARa é ativado após a ligação de agonistas de RARa (por exemplo, ATRA, 9- cis RA ou seus derivados), a transcrição de LAMP-2A diminui e há menos receptor de LAMP-2A presente para participar na CMA. Alternativamente, um antagonista que se liga a RARa bloquearia potencialmente a inibição da transcrição de LAMP-2A, resultando em mais receptor de LAMP-2A presente para participar na CMA. Ri R? Xw RR Rº nNÊ Rô Rº Rº R7

[0009] A divulgação inclui compostos e sais de Fórmula I Rê (D ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, em que XéOe ====== é uma ligação simples, ou X é N e ====== é uma ligação aromática; R!, R?, e Rº são independentemente escolhidos de hidrogênio, halogênio, hidroxila, C1-Cealquila, e Ci-Cçalcóxi; R? é halogênio; Ró, Ró, Rº, e Rº são independentemente escolhidos de hidrogênio, halogênio, hidroxila, C1-Cçalquila, e Ci-Cealcóxi; R? é -NR" COR"! ou -NR/ºSO3R!!, ou R é fenila, naftila e heteroarila mono- ou bicíclico, cada um dos quais é opcionalmente substituído por halogênio, hidroxila, ciano, -CHO, -COOH, amino e C1-Cçsalquila em que qualquer ligação simples carbono-carbono é opcionalmente substituída por uma ligação carbono-carbono dupla ou tripla, qualquer grupo metileno é opcionalmente substituído por O, S, ou NR”, e opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente escolhidos de halogênio, hidroxila, ciano, amino e oxo; e um substituinte escolhido de -NR'ºCOR"' e NR'SOR!'; R'º é independentemente escolhido em cada ocorrência de hidrogênio e C1-Cealquila; R'"' é independentemente escolhido em cada ocorrência de hidrogênio, Ci-Cealquila, Cr- Cohaloalquila, arila e heteroarila monocíclico, cada um dos quais arila e heteroarila monocíclico é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente escolhidos de halogênio, hidroxila, ciano, Ci-Cealquila, Ci-Cçalcóxi, Ci-Cohaloalquila, e C1- Cohaloalcóxi; e

R" é hidrogênio, C1-Cçalquila, ou (C3-Crcicloalquil)Co-Coalquila.

[0010] São divulgadas composições farmacêuticas compreendendo um composto ou sal de Fórmula I juntamente com um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0011] A divulgação fornece composições farmacêuticas compreendendo um composto de Fórmula [, ou um sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula 1, juntamente com um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0012] A divulgação fornece ainda um método de ativação seletiva da autofagia mediada por chaperona em um sujeito em necessidade de administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula [, ou sal do mesmo, ao sujeito. A divulgação fornece o uso de um composto de Fórmula [, ou sal do mesmo, para a ativação de autofagia mediada por chaperona em um sujeito em necessidade do mesmo.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0013] FIGS. 1A a 1C: A FIG. 1A mostra o efeito de CA39 e CA39.1 (CA3901) em CMA; A FIG. 1B mostra o efeito de CA77 e CA77.1 (CAT701) em CMA

[0014] FIGS. 2A a 2B: A FIG. 2A mostra as concentrações de CA77.1 no plasma de camundongo ICR (CD-l) após administração iv e po de uma dose de 10 mg/kg; A FIG. 2B mostra as concentrações de CA77.1 no cérebro de camundongo ICR (CD-1) após administração iv e po de uma dose de 10 mg/kg.

[0015] FIGS. 3A a 3B: A FIG. 3A mostra a dependência da dose de ativação de CMA nas células 12h após a administração de CA39, CA77 ou CA77.1; A FIG. 3B mostra a dependência da dose de ativação CMA nas células 24 horas após a administração de CA39, CA77 ou CA77.1.

DESCRIÇÃO DETALHADA DESCRIÇÃO E TERMINOLOGIA QUÍMICA

[0016] Antes de apresentar a invenção em detalhes, pode ser útil fornecer definições de certos termos a serem usados nesta divulgação. Os compostos são descritos usando nomenclatura padrão. À menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos utilizados neste documento têm o mesmo significado conforme comumente entendido por um versado na técnica à qual esta invenção pertence. A menos que claramente contraindicado pelo contexto, cada nome de composto inclui a forma de ácido ou base livre do composto, bem como todos os sais farmaceuticamente aceitáveis do composto.

[0017] O termo "compostos de Fórmula I" abrange todos os compostos que satisfazem a Fórmula 1, incluindo quaisquer enantiômeros, racematos e estereoisômeros, bem como todos os sais farmaceuticamente aceitáveis de tais compostos. Um traço ("-") que não está entre duas letras ou símbolos é usado para indicar um ponto de ligação para um substituinte.

[0018] Também, os termos “um” e “uma” não denotam uma limitação de quantidade, mas em vez disso denotam a presença de pelo menos um dos itens referenciados. O termo “ou” significa “e/ou”. A frase de transição aberta "compreendendo" abrange a frase de transição intermediária "consistindo essencialmente em" e a frase fechada "consistindo em". As reivindicações que repetem uma dessas três frases de transição, ou com uma frase de transição alternativa, como "contendo" ou "incluindo", podem ser escritas com qualquer outra frase de transição, a menos que claramente impedido pelo contexto ou técnica. A repetição das faixas de valores se destina apenas a servir como um método abreviado de se referir individualmente a cada valor separado que cai dentro da faixa, salvo indicação ao contrário neste documento, e cada valor separado está incorporado no relatório descritivo como se fosse individualmente repetido neste documento. Os pontos finais de todas as faixas estão incluídos na faixa e podem ser combinados de forma independente. Todos os métodos descritos neste documento podem ser realizados em qualquer ordem apropriada a menos que indicado ao contrário neste documento ou de outra forma claramente contrariado pelo contexto. O uso de todo e qualquer exemplo ou linguagem exemplificativa (por exemplo, “tal como”) é destinado simplesmente a ilustrar melhor a invenção e não impor uma limitação do escopo da invenção, a menos que de outra maneira reivindicado. Nenhuma linguagem no relatório descritivo deve ser interpretada como indicação de nenhum elemento não reivindicado como essencial para a prática da invenção, como usado neste documento. À menos que definido de outra forma, os termos técnicos e científicos utilizados neste documento têm o mesmo significado comumente entendido por um versado na técnica à qual esta invenção pertence.

[0019] Um traço ("-") que não está entre duas letras ou símbolos é usado para indicar um ponto de ligação para um substituinte. Por exemplo, -(C=O)OH está ligado através de carbono do grupo ceto (C=O).

[0020] Uma ligação representada por uma combinação de uma linha sólida e tracejada, ou seja, =====, pode ser uma ligação simples ou dupla.

[0021] "Alquila" é um grupo de hidrocarboneto alifático saturado de cadeia ramificada ou linear, tendo o número especificado de átomos de carbono, geralmente de 1 a cerca de 8 átomos de carbono. O termo C1-Cs alquila, como utilizado neste documento, indica um grupo alquila tendo de 1,2,3,4,5 ou 6 átomos de carbono. Outras modalidades incluem grupos alquila tendo de 1 a 8 átomos de carbono, 1 a 4 átomos de carbono ou | ou 2 átomos de carbono, por exemplo, Ci-Caalquila e C1- Cialquila. Quando Co-Cn alquila é usado neste documento em conjunto com outro grupo, por exemplo, -Co-Cralquil(fenila), o grupo indicado, neste caso fenila, é diretamente ligado por uma única ligação covalente (Coalquila), ou ligado por uma cadeia alquila com o número especificado de átomos de carbono, neste caso 1, 2, 3 ou 4 átomos de carbono. Alquilas também podem ser anexados por meio de outros grupos, como heteroátomos, como em -O-Co-Caalquil(C3-Crcicloalquila). Exemplos de alquila incluem, mas não estão limitados a, metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, 3- metilbutila, t-butila, n-pentila e sec-pentila.

[0022] "Alcóxi" é um grupo alquila conforme definido anteriormente com o número indicado de átomos de carbono covalentemente ligados ao grupo que substitui por uma ponte de oxigênio (-O- ). Exemplos de alcóxi incluem, mas não estão limitados a, metóxi, etóxi, n-propóxi, i-propóxi, n- butóxi, 2-butóxi, t-butóxi, n-pentóxi, 2-pentóxi, 3-pentóxi, isopentóxi, neopentóxi, n-hexóxi, 2- hexóxi, 3-hexóxi e 3-metilpentóxi.

[0023] “Arila” indica grupos aromáticos contendo apenas carbono no anel ou anéis aromáticos. Os grupos arila típicos contêm 1 a 3 anéis separados, fundidos ou pendentes e de 6 a cerca de 18 átomos no anel, sem heteroátomos como membros do anel. Quando indicado, tais grupos arila podem ser ainda substituídos por átomos ou grupos de carbono ou não carbono. Os grupos arila incluem, por exemplo, fenila, naftila, incluindo 1-naftila, 2-naftila e bifenila.

[0024] "Cicloalquila" é um grupo de anel de hidrocarboneto saturado, tendo o número especificado de átomos de carbono. Grupos cicloalquila monocíclicos tipicamente têm de 3 a cerca de 7 (3, 4, 5, 6 ou 7) átomos no anel de carbono. Os substituintes de cicloalquila podem ser pendentes de um átomo de nitrogênio, enxofre, oxigênio ou carbono substituído, ou um átomo de carbono substituído que pode ter dois substituintes pode ter um grupo cicloalquila, que está ligado como um grupo espiro. Exemplos de grupos cicloalquila incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclo- hexila, bem como grupos de anel saturado em ponte ou enjaulado, como norbornano ou adamantina.

[0025] "Haloalquila" inclui grupos alquila de cadeia linear e ramificada com o número especificado de átomos de carbono, substituídos por 1 ou mais átomos de halogênio, até o número máximo permitido de átomos de halogênio. Exemplos de haloalquila incluem, mas não estão limitados a, trifluorometila, difluorometila, 2-fluoroetila e pentafluoroetila.

[0026] "Haloalcóxi" é um grupo haloalquila, conforme definido neste documento, ligado por meio de uma ponte de oxigênio (oxigênio de um radical de álcool).

[0027] “Halo” ou “halogênio” indica qualquer um de flúor, cloro, bromo e iodo.

[0028] "Heteroarila" é um anel aromático monocíclico estável tendo o número indicado de átomos de anel que contém de 1 a 4, ou em algumas modalidades de 1 a 2, heteroátomos escolhidos de N, O e S, com átomos de anel restantes sendo carbono, ou um sistema bicíclico estável contendo pelo menos um anel aromático de 5 a 7 membros que contém de 1 a 4, ou em algumas modalidades de 1 a 2, heteroátomos escolhidos de N, O e S, com os átomos restantes do anel sendo carbono. Os grupos heteroarila monocíclicos normalmente têm de 5 a 7 átomos no anel. Em certas modalidades, o grupo heteroarila é um grupo heteroarila de 5 ou 6 membros tendo 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos escolhidos de N, O e S, com não mais do que 2 átomos de O e 1 átomo de S.

[0029] O termo "substituído", como usado neste documento, significa que qualquer um ou mais hidrogênios no átomo ou grupo designado é substituído por uma seleção do grupo indicado, desde que a valência normal do átomo designado não seja excedida. Quando o substituinte é oxo (isto é, =O), então, 2 hidrogênios no átomo são substituídos. Quando um grupo oxo substitui porções aromáticas, o anel parcialmente insaturado correspondente substitui o anel aromático. Por exemplo, um grupo piridila substituído por oxo é uma piridona. Combinações de substituintes e/ou variáveis são permitidas apenas se tais combinações resultarem em compostos estáveis ou intermediários sintéticos úteis. Um composto estável ou estrutura estável pretende implicar um composto que é suficientemente robusto para sobreviver ao isolamento de uma mistura de reação e formulação subsequente em um agente terapêutico eficaz. A menos que especificado de outra forma, os substituintes são nomeados na estrutura do núcleo. Por exemplo, deve ser entendido que quando o aminoalquila estiver listado como um possível substituinte, o ponto de ligação deste substituinte à estrutura do núcleo estará na porção alquila.

[0030] Em certas modalidades, os grupos que podem ser "substituídos" ou "opcionalmente substituídos" incluem, mas não estão limitados a: arila monocíclico, por exemplo, fenila; heteroarilao monocíclico, por exemplo, pirrolila, pirazolila, tienila, furanila, imidazolila, tiazolila, triazolila, piridila, pirmidinila; heteroarila bicíclico, por exemplo, benzimidazolila, imidazopiridizinila, indolila,

indazolila, quinolinila, isoquinolinila; e Ci-Cçsalquila em que qualquer ligação simples carbono- carbono é opcionalmente substituída por uma ligação carbono-carbono dupla ou tripla, qualquer grupo metileno é opcionalmente substituído por O, S ou NR.

[0031] Os grupos adequados que podem estar presentes em uma posição "substituída" ou "opcionalmente substituída" incluem, mas não estão limitados a: halogênio; ciano; CHO; COOH; hidroxila; oxo; amino; grupos alquila de | a cerca de 6 átomos de carbono; grupos alcóxi tendo uma ou mais ligações de oxigênio e de | a cerca de 8, ou de 1 a cerca de 6 átomos de carbono; grupos haloalquila com um ou mais halogênios e de 1 a cerca de 8, de 1 a cerca de 6, ou de 1 a cerca de 2 átomos de carbono; e grupos haloalcóxi tendo uma ou mais ligações de oxigênio e um ou mais halogênios e de 1 a cerca de 8, de 1 a cerca de 6, ou de 1 a cerca de 2 átomos de carbono.

[0032] “Composições farmacêuticas” são composições que compreendem pelo menos um agente ativo, como um composto ou sal de Fórmula [, e pelo menos uma outra substância, como um carreador. As composições farmacêuticas contêm opcionalmente um ou mais agentes ativos adicionais. Quando especificado, as composições farmacêuticas atendem aos padrões de GMP (boas práticas de fabricação) do FDA dos EUA para fármacos humanos ou não humanos.

[0033] "Sais farmaceuticamente aceitáveis" incluem derivados dos compostos divulgados nos quais o composto original é modificado pela produção de sais de adição inorgânicos e orgânicos, não tóxicos, ácidos ou básicos dos mesmos. Os sais dos presentes compostos podem ser sintetizados de um composto original que contém uma fração básica ou ácida por métodos químicos convencionais. Geralmente, tais sais podem ser preparados pela reação de formas de ácido livre destes compostos com uma quantidade estequiométrica da base apropriada (tal como hidróxido, carbonato, bicarbonato de Na, Ca, Mg ou K, ou semelhantes), ou por reação de formas de base livre destes compostos com uma quantidade estequiométrica do ácido apropriado. Essas reações são tipicamente realizadas em água ou em um solvente orgânico, ou em uma mistura dos dois. No geral, meios não aquosos como éter, acetato de etila, etanol, isopropanol ou acetonitrila são preferidos, onde praticável. Os sais dos presentes compostos incluem ainda solvatos dos compostos e dos sais dos compostos.

[0034] Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, entre outros, sais de ácido mineral ou orgânico de resíduos básicos, como aminas; álcalis ou sais orgânicos de resíduos ácidos, como ácidos carboxílicos; e semelhantes. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais não tóxicos convencionais e os sais de amônio quaternário do composto original formado, por exemplo,

de ácidos inorgânicos ou orgânicos não tóxicos. Por exemplo, os sais de ácido não tóxicos convencionais incluem os derivados de ácidos inorgânicos, tais como clorídrico, bromídrico, sulfúrico, sulfâmico, fosfórico, nítrico e semelhantes; e os sais preparados de ácidos orgânicos, tais como acético, propiônico, succeínico, glicólico, esteárico, lático, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, pamoico, maleico, hidroximaleico, fenilacético, glutâmico, benzoico, salicílico, mesílico, esílico, sulfanílico, 2-acetoxibenzoico, fumárico, toluenossulfônico, metanossulfônico, etano dissulfônico, oxálico, isetiônico, HOOC-(CH2>))-COOH onde n é 0 a 4 e semelhantes.

[0035] O termo "carreador" aplicado a composições/combinações farmacêuticas da presente divulgação se refere a um diluente, excipiente ou veículo com o qual um composto ativo é fornecido. Para ser farmaceuticamente aceitável, um carreador deve ser seguro, não tóxico e nem biologicamente nem de outra forma indesejável.

DESCRIÇÃO QUÍMICA

[0036] A divulgação fornece compostos e sais de Fórmula I. O termo "Fórmula I" inclui os sais farmaceuticamente aceitáveis de Fórmula 1, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Em certas situações, os compostos de Fórmula I podem conter um ou mais elementos assimétricos, tais como centros estereogênicos, eixos estereogênicos e semelhantes, por exemplo, átomos de carbono assimétricos, de modo que os compostos possam existir em diferentes formas estereoisoméricas. Estes compostos podem ser, por exemplo, racematos ou formas opticamente ativas. Para compostos com dois ou mais elementos assimétricos, esses compostos podem ser, adicionalmente, misturas de diastereômeros. Para compostos com centros assimétricos, deve ser entendido que todos os isômeros ópticos e misturas dos mesmos estão incluídos. Além disso, os compostos com ligações duplas carbono-carbono podem ocorrer nas formas Z e E, com todas as formas isoméricas dos compostos estando incluídas na presente divulgação. Nessas situações, enantiômeros únicos, ou seja, formas opticamente ativas, podem ser obtidos por síntese assimétrica, síntese de precursores opticamente puros, ou por resolução de racematos. A resolução dos racematos também pode ser realizada, por exemplo, por métodos convencionais, tal como cristalização na presença de um agente de resolução ou cromatografia, usando, por exemplo, uma coluna de HPLC quiral.

[0037] Quando um composto existe em várias formas tautoméricas, a invenção não é limitada a nenhum dos tautômeros específicos, mas inclui todas as formas tautoméricas.

[0038] A presente divulgação inclui todos os isótopos de átomos que ocorrem nos presentes compostos. Isótopos incluem os átomos tendo o mesmo número atômico, mas diferentes números de massa. A título de exemplo geral, e sem limitação, os isótopos de hidrogênio incluem trítio e deutério e isótopos de carbono incluem "'C, BC, e !*C.

[0039] A divulgação inclui compostos e sais de Fórmula I em que as variáveis, por exemplo, X, R', R2, Rô, R$, Ré, Ró, R7, R$, Rº, R!º, R!!, R!? carregam qualquer uma das definições estabelecidas a seguir. Qualquer uma das definições de variáveis estabelecidas a seguir pode ser combinada com qualquer outra das definições de variáveis, desde que resulte um composto estável.

R R& XX R Rº Ná R R Rº R7 Rº Fórmula I

[0040] CA77 e CA39 são fornecidos como exemplos comparativos e não estão dentro do escopo da Fórmula [. Cc! O. CAR |

O CA7T7 Cc! O. "O CA39 O A Variável Xe =====

[0041] Xé O e ====== é uma ligação simples.

[0042] X é Ne ====== é uma ligação aromática. As Variáveis R' a RU

[0043] (1) R', Rô, e Rº são todos hidrogênio.

[0044] (2) Ró, Ró, R$ e Rº são todos hidrogênio.

[0045] (3) R', Rà, Rº R5, R$, R$, e Rº são hidrogênio.

[0046] (4) R? é cloro.

[0047] (5) Rº é fenila, naftila, pirrolila, pirazolil tienila, furanila, imidazolila, tiazolila, triazolila, piridila, pirmidinila, benzimidazolila, imidazopiridizinila, indolila, indazolila, quinolinila ou isoquinolinila, cada um dos quais é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes opcionalmente escolhidos independentemente de halogênio, hidroxila, ciano, -CHO, -COOH, amino e Ci-Cralquila em que qualquer ligação simples carbono-carbono é opcionalmente substituída por uma ligação carbono-carbono dupla ou tripla, qualquer grupo metileno é opcionalmente substituído por O, S, ou NR!?, e opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente escolhidos de halogênio, hidroxila, ciano, amino e oxo; e um substituinte escolhido de -NR"ºCOR!' eNR!ºSOR!!.

[0048] (6) Rº é fenila, opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente escolhidos de halogênio, hidroxila, Ci-Caalquila, C1-Caalcóxi, trifluorometila e trifluorometóxi; e um substituinte escolhido de -NR!ºCOR!! e NR!SOR!!,

[0049] (7) Rº é fenila, opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente escolhidos de hidroxila e Ci-Coalcóxi.

[0050] (8) Rº é fenila, opcionalmente substituído com halogênio, -NRYCOR!!, ou NR!ºSO2R!!,

[0051] (9) R? é 4-fluorofenila.

[0052] (10) R? é -NR!ºCOR!' ou -NR!ºSOsR!!,

[0053] (11) Rº é -NR!COR'!.

[0054] (12) R? é -NR/ºSO3R!!.

[0055] (13) R'º é independentemente escolhido em cada ocorrência de hidrogênio e Cr- Cealquila.

[0056] (14) R'º é hidrogênio ou metila.

[0057] (15) R"º é hidrogênio.

[0058] (16) R!! é independentemente escolhido em cada ocorrência de hidrogênio, Cr- Cçalquila, Ci-Cohaloalquila, C3-Crcicloalquila, arila e heteroarila monocíclico, cada um dos quais arila e heteroarila monocíclico é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente escolhidos de halogênio, hidroxila, ciano, Ci-Cealquila, Ci-Cçalcóxi, Cr-

Cohaloalquila e Ci-Cohaloalcóxi.

[0059] (17) R"' é independentemente escolhido em cada ocorrência de hidrogênio, Cr- Cçalquila, Ci-Cohaloalquila, C3-Cicicloalquila, fenila e piridila, cada um dos quais fenila e piridila é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente escolhidos de halogênio, hidroxila, ciano, Ci-Cçalquila, Ci-Cealcóxi, Ci-Cohaloalquila, e Ci-Cahaloalcóxi.

[0060] (18) R!' é escolhido de Cr-Cçealquila, Ci-Cohaloalquila, cada um dos fenila opcionalmente substituídos por um ou mais halogênios.

[0061] (19) RU é -Cr-Cçealquila ou -CF3.

[0062] (20) RU! é -CH3, CF3, -CH(CH;3)2, -(CH2)2CH;, ou 4-fluorofenila.

[0063] (21) R"? é hidrogênio, C1-Cralquila, ou C3-Crcicloalquila.

[0064] Em certas modalidades, R? é escolhido de um dos seguintes grupos:

O NO: Fadas O 5 A ' ' AN ros PL Is Ar A As Ares FA HO e ” E x S OH Qt DEMO, UU se LS o Ss No E, ; F, OH, x OH * AM KRA REZA FAN -. | no so) cooH, RN SS SNcooH, “NÓ, O, ;

EZ x "SCA GQ Ss, S OH, ONÓVEON, Nº CNO?) + COOoH COOH E É | = FA AN N E R Li O OL, e Ay NX, Ô 2 Nº NH ; OH, N A H, H É o o " A N OS “oO “O”

Z DE ; ou :

[0065] A divulgação inclui o seguinte composto e seus sais farmaceuticamente aceitáveis:

cl N

CX “o x CAT7.1 N

[0066] A divulgação inclui o seguinte composto e seus sais farmaceuticamente aceitáveis: Cc! N

NS TX, “OQ CA3S.1 O

[0067] Certos compostos desta divulgação têm vantagens sobre os compostos comparativos CA77 e CA39, incluindo propriedades farmacêuticas melhoradas, como biodisponibilidade.

[0068] Outro aspecto da modalidade anterior (Fórmula 1) é um composto ou sal da Tabela 1. TABELA 1. Benzoxazinas e Quinazolinas Comp. , Estrutura química Nº Cc! O. 4'-(7-cloro-2H- 1 TX > benzol[b][1,4]oxazin-3-il)- (CA-3- N [1, 1'-bifenil]-3,4-diol 55) O OH

OH 2 Cl O. 4'-(7-cloro-2H- (CA-3- TX D benzol[bI[1 4Joxazin-3-il)- 67) N O [1, 1'-bifenil]-4-o0] : OH 3 [e O. 7-cloro-3-(2'-metóxi-[1,1"- (CA-3- TX DP bifenil|-4-il)-2H-benzo 69) N O OCH; [b][1 A4Joxazina 4 Cl O. 7-cloro-3-(2'-hidróxi-[1,1"- (CA-3- TX D bifenil|-4-il)-2H-benzo 70) N O OH [b][1 4Joxazina

TABELA 1. Benzoxazinas e Quinazolinas Comp. , Estrutura química Nº foi] Ne 2-([1,1'-bifenil]-4-i1)-6- (CA39.1) TX 2 cloroquinoxalina “O 6 Cl Ns N-(4-(6-cloroquinoxalin-2- (CA77.1) TX > iDfenil)acetamida

N O NO

H 7 Cc! Ne N-(4-(6-cloroquinoxalin-2- (CA77.11) TX õ iDfenil)-2,2,2- N x trifluoroacetamida N “CF 8 Cl Ns N-(4-(6-cloroquinoxalin-2- (CA77.12) TX D i)feni)isobutiramida

N O A

H 9 Cc! Nx N-(4-(6-cloroquinoxalin-2- (CA77.13) TX iNfenil)butiramida 2

OU N

H Cl Ns N-(4-(6-cloroquinoxalin-2- (CA7T7.14) TX > iNfenil)-1,1,1- N Oo trifluorometanossulfonamid 2 a NCFg 11 Cl Ns N-(4-(6-cloroquinoxalin-2- (CA7T7.15) TX D iDfenil)-4- N O.o fluorobenzenossulfonamid É a

N “O F

TABELA 1. Benzoxazinas e Quinazolinas Comp. Estrutura química Nº 12 Cl Ns N-(4-(6-cloroquinoxalin-2- (CA7T7.16) TX > iNfenil)-4-fluorobenzamida N o “Oo

H

F 13 Cc! Ns 6-cloro-2-(4'-fluoro-[1,1"- (CA39.12) TX > bifenil]|-4-il)quinoxalina “O OQ, 14 cl Ns 6-cloro-2-(2'-fluoro-[1,1"- (CA39.13) TX 2 bifenil]|-4-il)quinoxalina

N O F [6 Ns N-(4'-(6-cloroquinoxalin-2- (CA39.14) TX > iN)-[1,1'-bifenil]-4-il) / -2,2,2- N O trifluoroacetamida o Nº “CF;

H 16 CI Na N-(4'-(6-cloroquinoxalin-2- (CA39.15) TX 5 iD)-[1,1'-bifenil]-4-il) N O isobutiramida > a

H 117 Cl Ns N-(4'-(6-cloroquinoxalin-2- (CA39.16) TX D iD-[1,1'-bifenil]-4-il) N O butiramida

AU N H

TABELA 1. Benzoxazinas e Quinazolinas Comp. 1 Estrutura química Nº 18 cl Ns N-(4'-(6-cloroquinoxalin-2- (CA39.17) TT > iN)-[1, 1'-bifenil]-4-i1)-4- N O fluorobenzamida

Q “o

H

F 19 Cc Ns N-(4'-(6-cloroquinoxalin-2- (CA39.18) TX > iN)-[1, 1-bifenil]-4-11)-4- N O fluorobenzenossulfonamid O 2,0 a “O 4

F CI! Ns N-(4'-(6-cloroquinoxalin-2- (CA39.19) TX iN)-[1,1'-bifenil]-4-11)-1,1,1- 2 Í : N O trifluorometanossulfonamid a Os Nº CF H 3

PREPARAÇÕES FARMACÊUTICAS

[0069] Os compostos divulgados neste documento podem ser administrados como o produto químico puro, mas são preferencialmente administrados como uma composição farmacêutica. Consequentemente, a divulgação fornece composições farmacêuticas compreendendo um composto ou sal farmaceuticamente aceitável de um modulador de CMA, tal como um composto de Fórmula [, juntamente com pelo menos um carreador farmaceuticamente aceitável. Em certas modalidades, a composição farmacêutica está em uma forma de dosagem que contém de cerca de 0,1 mg a cerca de

2.000 mg, de cerca de 10 mg a cerca de 1.000 mg, de cerca de 100 mg a cerca de 800 mg, ou de cerca de 200 mg a cerca de 600 mg de um composto de Fórmula I e opcionalmente de cerca de 0,1 mg a cerca de 2.000 mg, de cerca de 10 mg a cerca de 1.000 mg, de cerca de 100 mg a cerca de 800 mg, ou de cerca de 200 mg a cerca de 600 mg de um agente ativo adicional em uma forma de dosagem unitária.

[0070] Os compostos divulgados neste documento podem ser administrados por via oral,

tópica, parenteral, por inalação ou pulverização, sublingual, transdérmica, via administração bucal, retal, como uma solução oftálmica ou por outros meios, em formulações de unidade de dosagem contendo carreadores convencionais farmaceuticamente aceitáveis. A composição farmacêutica pode ser formulada como qualquer forma farmaceuticamente útil, por exemplo, como um aerossol, um creme, um gel, uma pílula, uma cápsula, um comprimido, um xarope, um adesivo transdérmico ou uma solução oftálmica. Algumas formas de dosagem, tais como comprimidos e cápsulas, são subdivididas em doses unitárias de tamanho adequado contendo quantidades apropriadas dos componentes ativos, por exemplo, uma quantidade eficaz para atingir o propósito desejado.

[0071] Os carreadores incluem excipientes e diluentes e devem ser de pureza suficientemente elevada e toxicidade suficientemente baixa para torná-los adequados para administração ao paciente a ser tratado. O carreador pode ser inerte ou pode possuir benefícios farmacêuticos próprios. À quantidade de carreador empregado em conjunto com o composto é suficiente para fornecer uma quantidade prática de material para administração por dose unitária do composto.

[0072] As classes de carreadores incluem, mas não estão limitadas a, ligantes, agentes tamponantes, agentes corantes, diluentes, desintegrantes, emulsificantes, aromatizantes, deslizantes, lubrificantes, conservantes, estabilizadores, surfactantes, agentes de compressão e agentes umectantes. Alguns carreadores podem estar listados em mais de uma classe, por exemplo, óleo vegetal pode ser usado como um lubrificante em algumas formulações e um diluente em outras. Os carreadores farmaceuticamente aceitáveis exemplificativos incluem açúcares, amidos, celuloses, tragacanto em pó, malte, gelatina; talco e óleos vegetais. Agentes ativos opcionais podem ser incluídos em uma composição farmacêutica, que não interfere substancialmente com a atividade do composto da presente divulgação.

[0073] As composições/combinações farmacêuticas podem ser formuladas para administração oral. Estas composições contêm entre 0,1 e 99% em peso (% em peso) de um composto de Fórmula I e normalmente pelo menos cerca de 5% em peso de um composto de Fórmula 1. Algumas modalidades contêm de cerca de 25% em peso a cerca de 50% em peso % ou de cerca de 5% em peso a cerca de 75% em peso do composto de Fórmula.

MÉTODOS DE TRATAMENTO

[0074] A divulgação também fornece métodos de ativação seletiva da autofagia mediada por chaperona (CMA) em um sujeito em necessidade dos mesmos, compreendendo a administração ao sujeito de um composto de Fórmula I em uma quantidade eficaz para ativar a CMA no sujeito.

[0075] O sujeito pode ter, por exemplo, uma doença neurodegenerativa, como tauopatias, (demência frontotemporal, doença de Alzheimer), doença de Parkinson, doença de Huntington, doenças de príon, esclerose lateral amiotrófica, degeneração retinal, amaurose congênita leber, diabetes, insuficiência hepática aguda, esteato-hepatite não alcoólica (NASH), hepatosteatose, fígado gorduroso alcoólico, insuficiência renal e doença renal crônica, enfisema, miosite esporádica de corpos de inclusão, lesão da medula espinhal, lesão cerebral traumática, distúrbio de armazenamento lisossomal, doença cardiovascular e imunosenescência. Os distúrbios de armazenamento lisossomal incluem, mas não estão limitados a, cistinose, galactosialidose e mucolipidose. O sujeito também pode ter uma doença ou condição na qual a CMA é regulada positivamente, como câncer ou lúpus. O sujeito pode ter CMA reduzido em comparação com um sujeito normal antes de administrar o composto. Preferencialmente, o composto não afeta a macroautofagia ou outras vias autofágicas. Na macrofagia, proteínas e organelas são sequestradas em vesículas de membrana dupla e entregues aos lisossomos para degradação. Na CMA, os substratos de proteína são identificados seletivamente e direcionados ao lisossoma por meio de interações com uma chaperona citosólica.

[0076] A divulgação também fornece um método de proteção de células de estresse oxidativo, proteotoxicidade e/ou lipotoxicidade em um sujeito em necessidade do mesmo compreendendo a administração ao sujeito de qualquer um dos compostos divulgados neste documento, ou uma combinação de um composto de Fórmula 1, em uma quantidade eficaz para proteger as células do estresse oxidativo, proteotoxicidade e/ou lipotoxicidade. O sujeito pode ter, por exemplo, uma ou mais das condições crônicas que foram associadas ao aumento do estresse oxidativo e oxidação e um fundo de propensão à proteotoxicidade. As células a serem protegidas podem compreender, por exemplo, células cardíacas, células renais e hepáticas, neurônios e glia, miócitos, fibroblastos e/ou células do sistema imunológico. O composto pode, por exemplo, ativar seletivamente a autofagia mediada por chaperona (CMA). Em uma modalidade, o composto não afeta a macroautofagia.

[0077] Em uma modalidade, o sujeito é um mamífero. Em certas modalidades, o sujeito é um humano, por exemplo, um paciente humano em tratamento médico. O sujeito também pode ser um mamífero não humano de companhia, como um animal de companhia, por exemplo, gatos e cães, ou um animal de criação.

[0078] Para aplicações de diagnóstico ou pesquisa, uma grande variedade de mamíferos serão sujeitos adequados, incluindo roedores (por exemplo, camundongos, ratos, hamsters), coelhos, primatas e suínos, como porcos consanguíneos e semelhantes. Além disso, para aplicações in vitro, tais como aplicações de diagnóstico e pesquisa in vitro, fluidos corporais (por exemplo, sangue, plasma, soro, fluido intersticial celular, saliva, fezes e urina) e amostras de células e tecidos dos sujeitos anteriores serão adequados para uso.

[0079] Uma quantidade eficaz de uma composição farmacêutica pode ser uma quantidade suficiente para inibir a progressão de uma doença ou distúrbio, causar uma regressão de uma doença ou distúrbio, reduzir os sintomas de uma doença ou distúrbio ou alterar significativamente um nível de um marcador de uma doença ou distúrbio. Por exemplo, os níveis de transportador de dopamina (DAT) e transportador de monoamina vesicular 2 (VMAT2) são ambos reduzidos no cérebro de portadores de Parkinson na fase prodrômica e no diagnóstico e também podem ser usados para monitorar a progressão da doença por imagens cerebrais. Assim, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula 1 inclui um efeito de quantidade para retardar a diminuição nos níveis de DAT ou VMAT?2 do cérebro, conforme observado por imagens do cérebro. O acúmulo de proteína Tau em cérebros de pacientes com demência fronto-temporal foi observado por imagens PET, portanto, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I inclui uma quantidade suficiente para diminuir os depósitos cerebrais de tau ou diminuir a taxa de deposição de tau no cérebro. Os marcadores para o tratamento eficaz de NASH, hepatosteatose e fígado gorduroso alcoólico incluem teor de lipídeo reduzido e fibrose na biópsia hepática. Os marcadores para o tratamento eficaz do câncer incluem tamanho reduzido do tumor, por exemplo, conforme observado por MRI, número ou tamanho da reduzido metástase. Os marcadores para o tratamento eficaz do enfisema incluem parâmetros volumétricos e de velocidade aprimorados na espirometria. Os marcadores para o tratamento eficaz da imunossenescência incluem recuperar a ativação das células T in vitro. Os marcadores para o tratamento eficaz da disfunção renal incluem a normalização dos níveis de creatina no plasma e a razão da creatina no plasma para a urina.

[0080] Uma quantidade eficaz de um composto ou composição farmacêutica descrita neste documento também fornecerá uma concentração suficiente de um composto de Fórmula I quando administrado a um sujeito. Uma concentração suficiente é uma concentração do composto de Fórmula I no corpo do paciente necessária para prevenir ou combater um distúrbio ou doença mediado por CMA ou outro distúrbio ou doença para o qual um composto de Fórmula I é eficaz. Essa quantidade pode ser determinada experimentalmente, por exemplo, testando a concentração do composto no sangue ou, teoricamente, calculando a biodisponibilidade.

[0081] Os métodos de tratamento incluem o fornecimento de certas quantidades de dosagem de um composto de Fórmula I a um sujeito ou paciente. Os níveis de dosagem de cada composto de cerca de 0,1 mg a cerca de 140 mg por quilograma de peso corporal por dia são úteis no tratamento das condições indicadas anteriormente (cerca de 0,5 mg a cerca de 7 g por paciente por dia). À quantidade de composto que pode ser combinada com os materiais transportadores para produzir uma forma de dosagem única variará dependendo do paciente tratado e do modo particular de administração. As formas de dosagem unitária conterão, em geral, entre cerca de 1 mg e cerca de 500 mg de cada composto ativo. Em certas modalidades, 25 mg a 500 mg ou 25 mg a 200 mg de um composto de Fórmula I são fornecidos diariamente a um paciente. A frequência da dosagem também pode variar dependendo do composto usado e da doença particular tratada. No entanto, para o tratamento da maioria das doenças e distúrbios, um regime de dosagem de 4 vezes ao dia ou menos pode ser usado e, em certas modalidades, um regime de dosagem de 1 ou 2 vezes ao dia é usado.

[0082] Será entendido, no entanto, que o nível de dose específica para qualquer paciente particular dependerá de uma variedade de fatores, incluindo a atividade do composto empregado específico, a idade, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, tempo de administração, via de administração e taxa de excreção, combinação de fármacos e a gravidade da doença particular em terapia.

[0083] Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de um distúrbio de armazenamento lisossomal em um paciente identificado como em necessidade de tal tratamento, o método compreendendo fornecer ao paciente uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula 1. Os compostos de Fórmula I fornecidos neste documento podem ser administrados sozinhos como o único agente ativo, ou em combinação com um ou mais outros agentes ativos.

EXEMPLOS

[0084] Os Exemplos 1 a 3 fornecem métodos sintéticos detalhados para compostos representativos. Os compostos restantes desta divulgação podem ser feitos por esses métodos usando mudanças nos materiais de partida e nas condições de reação que serão rapidamente evidentes para os versados na técnica de síntese de química orgânica.

Exemplo 1. Síntese de N-(4-(6-cloroquinoxalin-2-il)fenil)acetamida (CA77.1)

“OR PA(PPhaL a Na “Cc KO; Tr o No dioxano A 110º HH (CATTI)

[0085] Em um frasco de fundo redondo de 50 mL seco e lavado com argônio, 2,6- dicloroquinoxalina (250 mg, 1,25 mmol), ácido (4-acetamidofenil) borônico (293 mg, 1,64 mmol, 1,30 equiv) e carbonato de potássio (1,0 M; 1,25 mL, 1,25 mmol, 1,00 equiv) foram dissolvidos em dioxano (8,40 mL). A mistura foi desgaseificada (borbulhamento de argônio durante 20 min). Tetraquis de paládio (73 mg, 63 umol, 5,0% em mol), foi então adicionado. O frasco foi purgado com mais argônio e um condensador de refluxo foi colocado no topo. A mistura foi aquecida sob atmosfera de argônio a 100 ºC durante a noite. A análise por TLC indicou conversão completa. A mistura foi filtrada; o sólido resultante foi purificado usando combiFlash (MeOH em gradiente de DCM 0 a 10%). O produto foi recristalizado usando uma mistura de diclorometano e metanol.

[0086] TLC: Ry; = 0,16 (2% de MeOH em CH2Cl2). "H-NMR (600 MHz, dmso-ds): 10,20 (s, 1H), 9,58 (s, 1H), 8,32—8,31 (m, 2H), 8,18 (d, J=2,4 Hz, 1H), 8,13 (d, J=8,9 Hz, 1H), 7,89 (dd, J = 8,9, 2,4 Hz, 1H), 7,82 (d, J=8,8 Hz, 2H), 2,11 (s, 3H). BC-NMR (151 MHz, CDCI3): 5 168,6, 150,9, 144,5, 141,6, 141,0, 140,1, 133,5, 131,0, 130,8, 129,9, 128,1, 127,5, 119,0, 24,1. HRMS (para CIsHiICIN;O, M+H): caleulado: 298,0742, encontrado: 298,0743.

Exemplo 2. Síntese de 3 - ([1,1'-bifenil]|-4-i1)-7-cloro-2H-benzo[b][1,4]oxazina (CA39) o fe o. E . O 00 Po, NH O CH;CN . O o (CA39)

[0087] A 2-amino-5-clorofenol (1g, 6,96 mmol) em acetonitrila (40 mL) foi adicionado K2CO; (1,92 g, 13,92 mmol). 1-([1,1'-bifenil]-4-i1)-2-bromoetan-l-ona (2,15 g, 8,36 mmol) em acetonitrila (20 mL) foi adicionado gota a gota à temperatura ambiente a esta mistura. A mistura de reação foi então agitada em temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi então evaporado e o resíduo foi dissolvido em diclorometano (20 mL). A camada orgânica foi lavada com água,

salmoura e seca sobre NarSOas concentrado. O composto desejado foi isolado através de cromatografia em gel de sílica (hexanos/acetato de etila:15/1). A recristalização com isopropanol deu um pó amarelo claro (A-1, CA39, 1,2 g, 53,9%).

[0088] 'H-NMR (300M, CDCI3) ô ppm: 8,03 (d, J= 0.03 Hz, 2H), 7,75 (d, ] = 0,02 Hz, 2H), 7,68 (d, J = 0,02 Hz, 2H), 7,48-7,53 (m, 2H), 7,37-7,45 (m, 2H), 7,01-7,05 (dd, J = 0,01 Hz, 0,03 Hz, 1H), 6,96 (d, 1 =0,01 Hz, 1H), 5,13 (s, 2H). VC-NMR (151 MHz, DMSO-d6) ô ppm: 158,11, 146,84, 144,08, 140,00, 133,90, 133,30, 132,48, 128,95 x 2, 128,51, 128,05, 127,44 x 2, 127,15 x 2, 126,94 x 2, 62,83. IHRMS: calculado para Cxo0Hi4CINO (M + H) 320,0837, encontrado: 320,0839. Exemplo 3. Síntese de 2-([1,1'-bifenil]|-4-i1)-6-cloroquinoxalina (CA39.1) fo O Ns “O O CA39.1

[0089] Um vaso lavado com nitrogênio foi preenchido com 2,6-dicloroquinoxalina (200 mg, 1 mmol), ácido (4-acetamidofenil) borônico (1257,4 mg, 1,3 mmol) e K2CO;3 (276 mg, 2 mmol, 2N em água). O vaso foi lavado com nitrogênio pela segunda vez e tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) (115,6 mg, 0,1 mmol) foi adicionado. Em seguida, solvente dioxano (10 mL) foi adicionado e a reação foi desgaseificada e protegida com nitrogênio, e agitada a 110ºC durante a noite. Em seguida, o solvente foi evaporado e o resíduo foi carregado em sílica gel para purificação (hexanos/acetona: 5/1 a 2/1). Em seguida, o produto em bruto obtido foi recristalizado com etanol quente para dar um pó amarelo claro (CA39.1, 181,3 mg, 57%).

[0090] 'H-NMR (300M, CDCI;) 5 ppm: 9,41 (s, 1H), 8,33 (d, J] = 0,03 Hz, 2H), 8,15 (d, J = 0,03 Hz, 2H), 7,85 (d, J= 0,03 Hz, 2H), 7,75-7,78 (dd, Ji= 0,03 Hz, J= 0,01 Hz, 2H), 7,72 (d J] = 0,02 Hz, 2H), 7,50-7,55 (m, 2H), 7,46 (d, ] = 0,03 Hz, 1H). PC-NMR (75 MHz, CDCI;) 5 ppm: 151,60, 144,14, 143,31, 141,91, 141,00, 140,21, 135,30, 135,25, 131,44, 130,91, 129,03 x 2, 128,18, 127,99 x 2, 127,98 x 2, 127,24 x 2. HRMS: calculado para CooH13CIN2> (M+H) 317,0840, encontrado: 317,0839. Exemplo 4. Medição da atividade de CMA in vitro

[0091] O ensaio repórter de CMA fotoativável foi construído pela inserção de uma sequência de 21 aminoácidos de Ribonuclease A carregando o motivo de direcionamento de CMA no local de multiclonagem de N-terminal da proteína fotoativável mCherryl ou a proteína fotoativável Dendra

2.

[0092] Os fibroblastos NIH 3T3 foram transduzidos de forma estável com um repórter de CMA fotoconversível, KFERQ-Dendra. foram fotoativados por exposição a um LED 3,5 MA (corrente constante) (Norlux, 405 nm) por 10 minutos e nos tempos desejados fixados em 3% de formaldeído. As células de teste foram expostas às concentrações indicadas dos compostos durante 12 horas (FIG. 3A) ou 24 horas (FIG. 3B). As células foram fotografadas usando microscopia de alto conteúdo (Operetta, Perkin Elmer) ou capturando imagens com um microscópio de fluorescência Axiovert 200 (Zeiss) com apótomo e equipado com um conjunto de filtros de lente objetiva de óleo de 63 x 1,4 NA e vermelho (ex. 570/30 nm, em. 615/30 nm), ciano (ex. 365/50 nm e em. 530/45 nm) e verde (ex. 475/40 nm e em. 535/45 nm) (Chroma). As imagens foram adquiridas com câmera CCD de alta resolução após corte óptico do apótomo. Atividade de CMA medida como o número médio de punctas fluorescentes (lisossomas ativos de CMA) por célula. Os valores são expressos em relação aos valores em células não tratadas às quais foi atribuído um valor arbitrário de 1 e são médias de >

2.500 células contadas por condição. O S.D. em todos os casos foi <0,01% do valor médio. A Tabela 2 fornece uma comparação dos compostos CA39.1 e seu exemplo comparativo CA39 e CA77.01 e seu exemplo comparativo CA77.

O MD DE Exemplo 5. Comparação Farmacocinética para CA77 e CA77.1

[0093] Todo trabalho com animais foi aprovado e realizado de acordo com as diretrizes estabelecidas pelo Comitê Institucional de Uso e Cuidado de Animais da Albert Einstein College of Medicine.

[0094] Camundongos machos ICR (CD-1) jejuaram pelo menos três horas e a água estava disponível ad libitum antes do estudo. Os animais foram alojados em ambiente controlado, condições alvo: temperatura 18 a 29 ºC, umidade relativa 30 a 70%. A temperatura e a umidade relativa foram monitoradas diariamente. Um sistema de iluminação eletrônico controlado por tempo foi usado para fornecer um ciclo de 12h de luz/12h de escuridão. 3 ratos para cada ponto de tempo indicado. Camundongos ICR (CD-1) foram administrados com CA77 a 1 mg/kg iv e 30 mg/kg po ou CA77.1 a 1 mg/kg iv (FGI. 2A) e 10 mg/kg po (FIG. 2B). Três (3) camundongos foram incluídos em cada grupo de dosagem e de tempo. Os camundongos foram sacrificados e o plasma e os cérebros foram obtidos em 0,083, 0,25, 0,50, 1,0, 2,0, 4,0, 8,0 e 24,0 horas após a administração e a concentração do fármaco foi determinada usando LC-MS/MS. Os cérebros foram removidos, homogeneizados com um homogeneizador de tecido em 5% p/v de BSA frio em salina tamponada com fosfato (PBS). Alíquotas de 100 microlitros de amostras de cérebro foram dispensadas em tubos de cultura de vidro e misturadas com acetato de etila (800 ul), agitadas em vórtex e centrifugadas. A camada orgânica foi transferida para um tubo de cultura fresco, seca sob nitrogênio e reconstituída em fase móvel para quantificação. Os parâmetros farmacocinéticos foram determinados por métodos padrão usando o software Phoenix WinNonlin 6.3.

[0095] As tabelas 3A e 3B fornecem as concentrações de CA77 em plasma de camundongo ICR (CD-1) (3A) e cérebro de camundongo (3B) após administração iv de 1 mg/kg de CA77. À Tabela 3C fornece a razão cérebro/plasma de CA77 após a administração iv de 1 mg/kg de CA77. Os parâmetros farmacocinéticos no plasma e cérebro para CA77 são fornecidos na Tabela 4. As células sombreadas indicam dados não incluídos nas estatísticas devido ao valor aberrante. BLQ = Abaixo do Limite de Quantificação.

TABELA 3A fame fã Jo Jara | 52,9 0,083 47,1 - - ee ne |)

TABELA 3A 0,50 17,9 3,73 20,8 15,4 3,54 23,0 -

BLQ 4,00 0,565 - - TABELA 3B e Jema fue Je Jem | 0,083 3357,8 - es Ee 0,50 2648 397 15,0 Es os 1,00 2456 322 131 E ds | [100 7 o as [20

TABELA 3B ago Conc. (ng/g) | Média SD CV (%) 800 | 275 ————j256 66,2 24,0 3,00 1,12 37,5 TABELA 3C 00683 a na 0,50 151 35,2 23,3 178 1,00 159 27,8 17,5 2,00 183 717 39,2

TABELA 4 Parâmetros farmacocinéticos de QX77 após administração po e iv em camundongos ICR (CD-1) Lo [rm Tso Jon [AUComo — [AUCNE o | (h) | (h) (ng/ml) | (h*ng/ml) (h*ng/mL) TABELA 4 (Cont.) Parâmetros farmacocinéticos de QX77 após administração po e iv em camundongos ICR (CD-1) [JE es es er PA (mL/min/Kkg) (h) (mML/Kkg)

[0096] As tabelas 5A e 5B fornecem as concentrações de CA77.1 em plasma de camundongo ICR (CD-1) (5A) e cérebro de camundongo (5B) após administração iv de 1 mg/kg de CA77.1. À Tabela 5C fornece a razão cérebro/plasma de CA77.1 após a administração iv de 1 mg/kg de CA77.1. Os parâmetros farmacocinéticos do plasma e do cérebro para CA77.1 são fornecidos na Tabela 6. * - as células contêm dados não apresentados nas estatísticas. TABELA 5A 0,083 190 21 EE 214

TABELA 5A

FE 30,8 2,00 46 20 44 nm TABELA 5B FT fe Je es | 0,083 1057 103 10 970 0,25 789 88 1 0,50 812 234 29 669 99 15

TABELA 5B Fo TI 182 4,00 19 6 30 8,00 4 21 e | 24,0 o o Eee ee Jo ee | 5,81 0,083 5,64 1,03 18,2 4,53 0,25 6,19 0,73 11,8 1,00 7,52 1,91 25,35 8,97 2,00 6,22 3,22 51,8 4,00 1,52 38,1 8,00 2,23 0,40 18,0

[0097] A estabilidade do microssoma foi determinada em microssomas de fígado de humanos, ratos e camundongos. O composto na concentração final de 3 uM juntamente com 0,5 mg/mL de proteína de microssoma e NADPH 1 mM foi incubado por 0, 5, 15, 30 e 60 min. Como controle negativo, o composto de teste foi incubado com microssomas na ausência de NADPH. As amostras foram resfriadas rapidamente com metanol e centrifugadas durante 25 min a 2500 rpm para precipitar as proteínas. Os sobrenadantes foram analisados (N = 3) por LC-MS./MS. A razão da área do pico In (área do pico do composto/área do pico do padrão interno) foi traçada contra o tempo e o gradiente da linha determinou a constante da taxa de eliminação [k = (-1) (inclinação)]. A meia-vida (tin em minutos), o volume de incubação (V em uL/mg de proteína) e a depuração intrínseca in vitro (CLin em uL/min/mg de proteína) foram calculados de acordo com as seguintes equações: Meia-vida (ti2)(min) = 0,693/k (1) V (uL/mg) = volume de incubação (uL)/proteína na incubação (mg) O)

Depuração intrínseca (CLin)(uL/min/mg de proteína) = V * 0,693/tin 6)

[0098] As tabelas 7 fornecem uma comparação da estabilidade de CA77 e CA77.1 em microssomas humanos. A Tabela 8 fornece uma comparação da estabilidade de CA39 e CA39.1 em microssomas humanos. Testosterona, diclofenaco e propafenona são fornecidos como controles. R? é o coeficiente de correlação da regressão linear para a determinação da constante cinética. Tin é a meia-vida e CLint (mio) é a depuração intrínseca. CLintifigadoy = CLintmioy * mg proteína microssomal/g de peso do fígado * g de peso do fígado/kg de peso corporal. O peso do fígado/kg de peso corporal é de 20 g/kg para humanos.

TABELA 7 - Estabilidade metabólica de CA77 e CA77.1 em microssomas humanos Amostra R? Ti2(min) CLintímic) CLint(figado) Restante (uL/min/kg) (mL/min/kg) | (T = 60 min) CAT7.1 0,9301 10,8% CAT7 0,9493 40,8 36,7 25,9% 0,9904 16,7% 0,9875 | 104,9 104,9 0,9692 |1591 1591 143,2 TABELA 8 - Estabilidade metabólica de CA39 e CA3S9.1 em microssomas humanos Amostra Ti(min) CLintímio) CLint(figado) Restante L/min/kg mL/min/kg T =60 min CA39.1 0,1321 96,0% CA39 0,9363 36,6 32,9 30,1% 0,9983 102,8 92,5 4,6% 0,9973 0,9464 |66 [2112 190,1

Claims

Reivindicações

1. Composto da Fórmula I

R R& Xw Ro Rº nó R R Rº R

ROO ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que XéOe ====== é uma ligação simples, ou X é N e ====== é uma ligação aromática; R!', Rô, e R são independentemente escolhidos de hidrogênio, halogênio, hidroxila, Ci-Cealquila, e Cr-Cçalcóxi; R? é halogênio; R5ó, Ró, R$, e Rº são independentemente escolhidos de hidrogênio, halogênio, hidroxila, Ci-Cçalquila, e Ci-Cçalcóxi; Rº é -NRºCOR!! ou -NR/ºSOR!!, ou R é fenila, naftila e heteroarila mono ou bicíclico, cada um dos quais é opcionalmente substituído por halogênio, hidroxila, ciano, -CHO, -COOH, amino e C1-Cçsalquila em que qualquer ligação simples carbono-carbono é opcionalmente substituída por uma ligação carbono-carbono dupla ou tripla, qualquer grupo metileno é opcionalmente substituído por O, S, ou NR, e opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente escolhidos de halogênio, hidroxila, ciano, amino e oxo; e um substituinte escolhido de -NR!ºCOR!! e NRUSOR!!, R!º é independentemente escolhido em cada ocorrência de hidrogênio e C1i-Cealquila; R!! é independentemente escolhido em cada ocorrência de hidrogênio, Ci-Cealquila, Cr- Cohaloalquila, arila e heteroarila monocíclico, cada um dos quais arila e heteroarila monocíclico é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente escolhidos de halogênio, hidroxila, ciano, C1-Cçalquila, C1-Cçalcóxi, Ci-Cohaloalquila, e C1- Cohaloalcóxi; e R" é hidrogênio, C1-Cçalquila, ou (C3-Crcicloalquil)Co-Coalquila.

2. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que X é O e === é uma ligação simples.

3. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que X é Ne ====== é uma ligação aromática.

4. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações | a 3, caracterizado pelo fato de que R!, Rô, e Rº são todos hidrogênio.

5. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que R? é cloro.

6. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que R5, Ré, Rº e Rº são todos hidrogênio.

7. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que R? é -NR!ºCOR!! ou -NR!ºSOsR!!, ou R' é fenila, naftila, pirrolila, pirazolila, tienila, furanila, imidazolila, tiazolila, triazolila, piridila, pirmidinila, benzimidazolila, imidazopiridizinila, indolila, indazolila, quinolinila ou isoquinolinila, cada um dos quais é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente escolhidos de halogênio, hidroxila, ciano, -CHO, - COOH, amino e Ci-Crsalquila em que qualquer ligação simples carbono-carbono é opcionalmente substituída por uma ligação carbono-carbono dupla ou tripla, qualquer grupo metileno é opcionalmente substituído por O, S, ou NR"?, e opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente escolhidos de halogênio, hidroxila, ciano, amino e 0x0; € um substituinte escolhido de -NR"ºCOR"' e NRUSOJR!!.

R'º é independentemente escolhido em cada ocorrência de hidrogênio e C1-Cealquila; e R!' é escolhido independentemente em cada ocorrência de hidrogênio, Cr-Cçealquila, Ci- Cohaloalquila, C3-Crcicloalquila, arila e heteroarila monocíclico, cada um dos quais arila e heteroarila monocíclico é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente escolhidos de halogênio, hidroxila, ciano, Ci-Cealquila, Ci-Cçalcóxi, Ci- Cohaloalquila, e Ci-Cohaloalcóxi; e

R" é hidrogênio, C1-Cçalquila, ou C3-Crcicloalquila.

8. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que R'"' é independentemente escolhido em cada ocorrência de hidrogênio, Ci-Cçralquila, Cr- Cohaloalquila, C3-Cricicloalquila, fenila e piridila, cada um dos fenila e piridila é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente escolhidos de halogênio, hidroxila, ciano, Ci-Cçalquila, Ci-Cealcóxi, Ci-Cohaloalquila, e Ci-Cohaloalcóxi.

9. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que Rº -NR"COR"'! ou NR"SO3R!!; R'º é hidrogênio ou metila; e R'' é Ci-Cçalquila ou CF3.

10. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que R é fenila, opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente escolhidos de halogênio, hidroxila, Ci-Caalquila, C1- Caalcóxi, trifluorometila e trifluormetóxi; e um substituinte escolhido de -NR!ºCOR!! e NRUSOSR!!,

11. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que XéOe ====== é uma ligação simples; R', Rê, Rº R5, R$, R$, e Rº são hidrogênio; Rº é cloro; e R é fenila, opcionalmente substituído por um ou mais substituintes independentemente escolhidos de hidroxila e Ci-Coalcóxi.

12. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Xé Ne ====== é uma ligação aromática; R', R?à, Rº Ró, R$, R$, e Rº são hidrogênio; R? é cloro; R é fenila, opcionalmente substituído com halogênio, -NR!ºCOR!!, ou NR!ºSOR!!; R!º é hidrogênio; e

R'' é escolhido de Cr-Cealquila, Ci-Cohaloalquila, e fenila cada um dos fenila opcionalmente substituídos por um ou mais halogênios.

13. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que XéNe ====== é uma ligação aromática; R', R?à, Rº Ró, R$, R$, e Rº são hidrogênio; R? é cloro; R? é -NR! COR! ou NRSOR!!; R!º é hidrogênio; e R!! é escolhido de C1-Cçealquila, Ci-Cohaloalquila, e fenila cada um dos fenila opcionalmente substituídos por um ou mais halogênios.

14. Composto ou sal do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é cl N Ss

TV N o

NO

À

15. Composto ou sal do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é cl N TX, “O

16. Composto ou sal do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é da Tabela 1.

17. Composição farmacêutica compreendendo um composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizada pelo fato de que é juntamente com um carreador farmaceuticamente aceitável.

18. Método de ativação seletiva da autofagia mediada por chaperona em um sujeito em necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade eficaz de um composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 16 ao sujeito.

19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o sujeito tem doença de Parkinson, doença de Huntington, doença de Alzheimer, demência frontotemporal, doenças priônicas, esclerose lateral amiotrófica, degeneração retinal, amaurose congênita leber, diabetes, insuficiência hepática aguda, NASH, hepatosteatose, gordura alcoólica fígado, insuficiência renal e doença renal crônica, enfisema, miosite esporádica de corpos de inclusão, lesão da medula espinhal, lesão cerebral traumática, um distúrbio de armazenamento lisossomal, uma doença cardiovascular ou imunossenescência.

20. Uso de um composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações | a 16, caracterizado pelo fato de que é para ativar seletivamente a autofagia mediada por chaperona em um sujeito em necessidade do mesmo.

21. Uso de um composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento da doença de Parkinson, doença de Huntington, doença de Alzheimer, demência frontotemporal, doenças de príon, esclerose lateral amiotrófica, degeneração retinal, amaurose congênita de Leber, diabetes, insuficiência hepática aguda, NASH, hepatosteatose, fígado gorduroso alcoólico, insuficiência renal e doença renal crônica, enfisema, miosite esporádica de corpos de inclusão, lesão da medula espinhal, lesão cerebral traumática, um distúrbio de armazenamento lisossomal, uma doença cardiovascular ou imunosenescência.