CN110437285B - 青蒿素钌金属配合物及其制备方法和医药用途 - Google Patents

青蒿素钌金属配合物及其制备方法和医药用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及药物领域的青蒿素钌金属配合物及其制备方法。具体而言，本发明涉及式(I)所示的青蒿素钌金属配合物及其制备方法。本发明的青蒿素钌金属配合物应用广泛，抗弓形虫活性显著，其具有生物利用度高、毒性低等特点，可应用于医药领域。式(I)中各符号具有与说明书中相同的含义。

Description

青蒿素钌金属配合物及其制备方法和医药用途
技术领域
本发明属于药物领域，涉及金属有机青蒿素钌金属配合物、其制备方法、以及其药用用途。
背景技术
弓形虫病为人兽共患传染病。全球感染率约33％，我国感染率约7.88％。免疫力正常的感染者表现为无症状或淋巴结肿大，而对于免疫力低下的感染者(孕妇或HIV患者)常引起高热、脑炎甚至死亡。孕畜感染后多引起流产、死胎或畸胎，除给经济带来巨大损失外，同时作为一种食源寄生虫病，可直接传播给人类而造成严重后果。目前仍以传统的磺胺嘧啶及乙胺嘧啶等抗生素药物为主进行治疗，但此类药物并不能完全消除弓形虫包囊且易引起过敏及血液学的不良反应。因此，开发一种高效、安全具有新机制的药物对世界及我国的弓形虫病的防治具有重要意义。
双氢青蒿素由于其结构上的特点，其应用广泛，毒性低，未形成明显耐药作用。除抗疟外，近年发现其抗弓形虫、抗癌(肺癌、肝癌、白血病等)药效明显，毒性低；但其缺点为生物利用度较低，抑瘤率不高。
Figure BDA0002131063780000011
[HIm][trans-RuCl4(DMSO)Im](NAMI-A，New Antitumor Metastasis Inhibitor，新肿瘤转移抑制剂)(Im代表咪唑)为欧洲近年发现的抗肿瘤转移化合物[1]。其对实验小鼠肺癌、乳腺癌有显著的抗转移作用(抗转移率约为80％)，而且毒性也较低或基本无明显毒性[2-4]。其缺点为抑瘤率较低，一般不超过30％。NAMI-A已在欧洲进入II期临床试验并完成部分实验[5，6]，有良好的研发前景。
与传统西药相比，目前在中药中发现具有抗虫及抗肿瘤活性且毒性低的新单体比较难，但利用中药有效成分及金属结构骨架可以进行优势互补制备药效好的新化合物。为研发新一代药效好、毒性低的新型药物，本申请公开一类含有青蒿素衍生物的金属钌配合物的结构、制备方法及其药用用途。
发明内容
本发明的目的是提供一类具有广泛用途(可用于抗弓形虫、抗疟、抗肿瘤及肿瘤转移等)的青蒿素钌金属配合物及其制备方法。本发明的青蒿素钌金属配合物，水溶性较好，可有效改善大部分青蒿素衍生物水溶性差的缺陷，且具有一定酯溶性，溶于水后在有效浓度范围内形成稳定的水溶液，生物利用度高。其具有抗弓形虫、抗疟、抗癌、毒性低等特点，具有开发成为临床用药的前景。
因此，本发明的目的为提供一种式(I)所示的青蒿素钌金属配合物，
Figure BDA0002131063780000021
其中，
Figure BDA0002131063780000022
M+为金属离子或LH+，所述金属离子优选Na+和K+；
所述连接子为具有配位能力的5至10元含氮杂芳环，其任选进一步被选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、卤素或酰基的一种或多种基团取代；
Ra、Rb和Rc相同或不同，且各自独立地选自亚烷基、亚烯基和亚炔基。
在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物，其为式trans-[RuCl4(DMSO)(L)]Na、式trans-[RuCl4(DMSO)(L)]Na·nDMSO、或式trans-[RuCl4(DMSO)(L)][LH]的配合物，其中n为1至3的整数。
在本发明另一个优选的实施方案中，根据本发明的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物，其中所述5至10元含氮杂芳环选自吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、三嗪、咪唑、吡唑、三氮唑、四氮唑、异喹啉、和氮杂吲哚，优选吡啶。
在本发明另一个优选的实施方案中，根据本发明的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物，其中所述连接子与青蒿素母核的12号碳原子通过酯键、C-N键、醚键、或酰胺键连接。
在本发明另一个优选的实施方案中，根据本发明的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物或其溶剂化物，其中Ra、Rb和Rc相同或不同，且各自独立地选自C1-C8亚烷基、C2-C8亚烯基或C2-C8亚炔基。
本发明进一步提供根据本发明的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物的制备方法，其包含以下步骤：
1)将双氢青蒿素或其衍生物与具有配位能力的5至10元含氮杂芳环或其衍生物在脱水剂和/或催化剂的作用下反应，得到青蒿素衍生物配体L；
2)将步骤1)制得的青蒿素衍生物配体L与钌金属配合物反应得到青蒿素钌金属配合物；
其中，所述双氢青蒿素的衍生物为双氢青蒿素的卤代物、双氢青蒿素的氨基化合物、或青蒿素醚的卤代物；
所述具有配位能力的5至10元含氮杂芳环的衍生物为含有羧基基团、氨基基团、羟基基团、酰氯基团或卤代基团的5至10元含氮杂芳环。
在本发明的一个优选的实施方案中，所述钌金属配合物为trans-[RuCl4(DMSO)2]Na或trans-[RuCl4(DMSO)2][(DMSO)H]。
在本发明的一个具体的实施方案中，根据本发明的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物的制备方法，其中，在步骤1)中，通过将双氢青蒿素与含有羧基基团或酰氯基团的具有配位能力的5至10元含氮杂芳环在脱水剂与催化剂的作用下反应，得到连接子与青蒿素母核的12号碳原子通过酯键连接的青蒿素衍生物配体L。
在本发明的另一个具体的实施方案中，根据本发明的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物的制备方法，其中，在步骤1)中，通过将双氢青蒿素或其卤代物与含有伯胺或仲胺基团的具有配位能力的5至10元含氮杂芳环，在酸性或碱性催化剂作用下反应，得到连接子与青蒿素母核的12号碳原子通过C-N键连接的青蒿素衍生物配体L，所述具有配位能力的5-10元含氮杂芳环优选吡啶、咪唑、三氮唑、四氮唑、氮杂吲哚、异喹啉。
在本发明的另一个具体的实施方案中，根据本发明的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物的制备方法，其中，在步骤1)中，通过将青蒿素醚的溴代物与具有配位能力的5至10元含氮杂芳环，或者将双氢青蒿素与含有卤代基团的具有配位能力的5至10元含氮杂芳环，在碱性催化剂作用下反应；或者通过将双氢青蒿素与含有羟基基团的具有配位能力的5至10元含氮杂芳环在酸性催化剂作用下反应；得到连接子与青蒿素母核的12号碳原子通过醚键连接的青蒿素衍生物配体L，所述具有配位能力的5至10元含氮杂芳环优选吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、三嗪、咪唑、吡唑、三氮唑、四氮唑、氮杂吲哚和异喹啉。
在本发明的另一个具体的实施方案中，根据本发明的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物的制备方法，其中，在步骤1)中，通过将双氢青蒿素的氨基衍生物与含有羧基基团或酰氯基团的具有配位能力的5至10元含氮杂芳环，优选吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、三嗪、咪唑、吡唑、三氮唑、四氮唑、氮杂吲哚和异喹啉，在脱水剂和碱性催化剂条件下反应，得到连接子与青蒿素母核的12号碳原子通过酰胺键连接的青蒿素衍生物配体L。
在本发明的另一个具体的实施方案中，根据本发明的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物的制备方法，其中，在步骤1)中，通过将双氢青蒿素的羧酸衍生物与含有氨基基团的具有配位能力的5至10元含氮杂芳环，优选吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、三嗪、咪唑、吡唑、三氮唑、四氮唑、氮杂吲哚和异喹啉，在脱水剂和碱性催化剂条件下反应，得到连接子与青蒿素母核的羰基碳原子通过酰胺键连接的青蒿素衍生物配体L。
在本发明的一个具体的实施方案中，根据本发明的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物的制备方法，其中，步骤1)中双氢青蒿素或其衍生物与具有配位能力的5至10元含氮杂芳环或其衍生物的摩尔比为1∶1～1∶3。
在本发明的另一个具体的实施方案中，根据本发明的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物的制备方法，其中，在步骤2)中，钌金属配合物与青蒿素衍生物配体L的摩尔比为1∶1.1～1∶5.5。
本发明所使用的脱水剂可以为本领域酯化或缩合反应中常规使用的脱水剂和/或催化剂，可以举出碳二亚胺类，如二环己基碳二亚胺(DCC)、N，N-二异丙基碳二亚胺(DIC)、、(1，3-二(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基甲基)碳二亚胺)BDDC、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)，1-羟基苯并三唑(HOBT)、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(HOAT)、偶氮二碳酸二异丙酯(DIAD)、三苯基膦类、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)；4-二甲氨基吡啶(DMAP)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)、吗啉、(N-甲基吗啉)NMM等催化剂，优选DCC/DMAP。
本发明所使用的催化剂可以为本领域常规使用的酸性催化剂或碱性催化剂，所述酸性催化剂可以举出三氟化硼乙醚、四氯化锡、三氟乙酸酐、三氟乙酸、乙酸酐、三氯化铁、盐酸、对甲苯磺酸、硫酸和磷酸，所述碱性催化剂可以举出NaH、NaOH、KOH、K2CO3、三乙胺、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)、吗啉、(N-甲基吗啉)NMM和吡啶。
根据本发明所述的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物，当其中的连接子与青蒿素母核的12号碳原子通过酯键连接时，可以根据本领域公知的方法制备青蒿素衍生物配体L(参见李英；廖细斌。含氮杂环基的青蒿素衍生物及其制备方法，2001.5，CN1296009A)。其中，双氢青蒿素与带有羧基基团的杂环化合物在脱水剂与碱性催化剂的作用下，生成青蒿素酯衍生物。所用脱水剂与催化剂包括：二环己基碳二亚胺(DCC)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、1-羟基苯并三唑(HOBT)、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(HOAT)、偶氮二碳酸二异丙酯(DIAD)、三苯基膦类、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)、吗啉、(N-甲基吗啉)NMM等。双氢青蒿素与羧基杂环化合物的投料摩尔比为1∶1.1～1∶10，双氢青蒿素与DCC等脱水剂的摩尔比为1∶1～1∶10，碱性催化剂如DMAP的摩尔量为0.5～2倍。反应溶剂为二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、丙酮、苯、甲苯、苯胺、乙腈、N，N-二甲基甲酰胺、1，4-二氧六环、二甲基亚砜、甲醇、乙醇等有机溶剂。反应温度为低温(-5～5℃)投料，20～45℃反应。反应时间以薄层层析结果为主，多为1-10小时。或通过将羧基杂环化合物制备成酰氯而得到青蒿素酯衍生物。或通过双氢青蒿素与带有酰氯基团的杂环化合物在碱性催化剂和除水剂的作用下，生成青蒿素酯衍生物。所用碱性催化剂包括：有机碱，如吡啶、三乙胺、二乙胺、吗啉、NMM等；所用除水剂为分子筛等物理吸水介质。双氢青蒿素与酰氯杂环化合物的投料摩尔比为1∶1.01～1∶10或1.01∶1～10∶1；有机碱的摩尔量为0.5～10倍。反应溶剂为二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、丙酮、苯、甲苯、苯胺、乙腈、N，N-二甲基甲酰胺、1，4-二氧六环、二甲基亚砜、甲醇、乙醇等有机溶剂。反应温度为低温(-5～5℃)投料，20～45℃反应。反应时间以薄层层析结果为主，多为1～10小时。
根据本发明所述的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物，当其中的连接子与青蒿素母核的12号碳原子通过C-N键连接时，可根据本领域公知的方法制备青蒿素衍生物配体L(参见李英；杨永华；梁洁；山峰；吴光韶。含苯基和杂环基的青蒿素衍生物及其制备方法，1996.5，CN1122806A)。其中，双氢青蒿素或其卤代物与含有伯胺或仲胺的杂环化合物如咪唑、三氮唑、四氮唑、氮杂吲哚、氨基吡啶等，在酸性或碱性催化剂作用下，生成一类含杂环的青蒿素衍生物。所述酸性催化剂包括三氟化硼乙醚、四氯化锡、三氟乙酸酐、乙酸酐、对甲苯磺酸、硫酸和磷酸等。碱性催化剂主要包括NaH、NaOH、KOH和K2CO3、三乙胺和吡啶等，所用摩尔比0.1～5倍。反应溶剂为二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、丙酮、苯、甲苯、苯胺、乙腈、乙醚、N，N-二甲基甲酰胺、1，4-二氧六环、二甲基亚砜、甲醇、乙醇、三乙胺、吡啶等有机溶剂。每1g双氢青蒿素或其卤代物用溶剂量为50-500ml。反应温度为低温(-5～5℃)投料，20-45℃反应。反应时间多为0.5～10小时，以薄层层析结果为准。
根据本发明所述的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物，当其中的连接子与青蒿素母核的12号碳原子通过醚键连接时，可根据本领域公知的方法制备青蒿素衍生物配体L(参见李英；廖细斌。含氮杂环基的青蒿素衍生物及其制备方法，2001.5，CN1296009A)。其中，通过青蒿素醚的溴代物与含伯胺或仲胺的杂环配体如嘧啶、吡嗪、哒嗪、三嗪、咪唑、吡唑、三氮唑、四氮唑和氮杂吲哚或其氨基衍生物在碱性条件下反应得到青蒿素醚衍生物。其中碱性催化剂包括NaH、NaOH、KOH、K2CO3、三乙胺和吡啶等，所用摩尔比为0.1～5倍。或通过双氢青蒿素与含羟基的杂环化合物在酸性催化剂作用下反应得到青蒿素醚衍生物。其中酸性催化剂包括三氟化硼乙醚、三氟乙酸、对甲苯磺酸、三氯化铁、盐酸等。或通过双氢青蒿素与卤代杂环化合物(如3-氯甲基吡啶、4-氯甲基吡啶等)在碱性催化剂条件下反应得青蒿素醚衍生物配体L。其中碱性催化剂包括NaH、NaOH、KOH、K2CO3等，所用摩尔比0.1～5倍。
根据本发明所述的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物，当其中的连接子与青蒿素母核的12号碳原子通过酰胺键连接时，可根据本领域公知的方法制备青蒿素衍生物配体L(参见Design，Synthesis and Antitumor Activity of Novel Artemisinin DerivativesUsing Hybrid Approach，Chem.Pharm.Bull，2011，59(8)，984-990)。其中，氨基青蒿素衍生物与带有羧基的杂环化合物如吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、三嗪、咪唑、吡唑、三氮唑、四氮唑、氮杂吲哚和异喹啉或其衍生物在脱水剂与催化剂的作用下，生成青蒿素酰胺衍生物。所用脱水剂与催化剂包括：二环己基碳二亚胺(DCC)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、1-羟基苯并三唑(HOBT)、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(HOAT)、偶氮二碳酸二异丙酯(DIAD)、三苯基膦、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)、吗啉、(N-甲基吗啉)NMM等。羧基杂环化合物与青蒿素氨基衍生物的投料摩尔比为1∶1.1～1∶10，羧基杂环衍生物与DCC等脱水剂的摩尔比为1∶1～1∶10，碱性催化剂如DMAP等的摩尔量为0.5～2倍。反应溶剂为二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、丙酮、苯、甲苯等有机溶剂。反应温度为低温(-5～5℃)投料，20-40℃反应。反应时间以薄层层析结果为主，多为1-10小时。或通过将羧基杂环化合物制备成酰氯而得到青蒿素酰胺衍生物。
根据本发明所述的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物，当其中的连接子与青蒿素母核的羰基碳原子通过酰胺键连接时，可根据本领域公知的方法制备青蒿素羧酸衍生物(参见Synthesis and Cytotoxicity Studies of Artemisinin Derivatives ContainingLipophilic Alkyl Carbon Chains，Org.Lett.，2005，7(8)，pp 1561-1564)。其中，青蒿素羧酸衍生物与带有氨基的杂环化合物如吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、三嗪、咪唑、吡唑、三氮唑、四氮唑、氮杂吲哚和异喹啉或其衍生物在脱水剂与催化剂的作用下，生成青蒿素酰胺衍生物。所用脱水剂与催化剂包括：二环己基碳二亚胺(DCC)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、1-羟基苯并三唑(HOBT)、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(HOAT)、偶氮二碳酸二异丙酯(DIAD)、三苯基膦类、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)、吗啉、(N-甲基吗啉)NMM等。青蒿素羧酸衍生物与氨基杂环化合物的投料摩尔比为1∶1.1～1∶10，青蒿素羧酸衍生物与DCC等脱水剂的摩尔比为1∶1～1∶10，碱性催化剂如DMAP等的摩尔量为0.5～2倍。反应溶剂为二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、丙酮、苯、甲苯等有机溶剂。反应温度为低温(-5～5℃)投料，20-45℃反应。反应时间以薄层层析结果为主，多为1-24小时。
本发明进一步提供一种药物组合物，其含有根据本发明所述的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物和一种或多种药学上可接受的载体。
本发明进一步提供根据本发明所述的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物，或含有其药物组合物在制备预防和/或治疗弓形虫感染的药物中的用途。
本发明所述的药学上可接受的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。本领域技术人员能够理解，本发明的药物组合物可以根据具体的施用方式被配制成各种本领域熟知的制剂形式，例如口服剂型(粉剂、片剂、胶囊、软胶囊、口服溶液、糖浆、酏丸、散剂、囊剂、颗粒剂等)，或局部施用制剂(霜剂、乳膏、软膏、洗剂、凝胶、香脂、膏药、糊剂、喷雾剂、气雾剂等)，或注射制剂(溶液、粉针、悬浮剂、乳剂)。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。可以利用本领域任何已知方法制成，以使病人用药后能提供快速、持久或缓慢释放的活性成分。
本发明的活性成分青蒿素钌金属配合物可以单独使用，也可以与其它药学活性成分联合使用。
在本文中，术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基，更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、及其各种支链异构体等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
在本文中，术语“烯基”是指至少由两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上定义的烷基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
在本文中，术语“炔基”指至少两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的如上所定义的烷基，例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-，2-或3-丁炔基等。炔基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
在本文中，术语“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。非限制性实施例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。烷氧基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基，优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
在本文中，术语“酰基”是指至少由两个碳原子和至少一个羰基组成的如上定义的烷基，例如乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、甲酰丙酰基等。酰基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
在本文中，术语“含氮杂芳环”指包含1至4个杂原子、5至20个环原子的杂芳族体系，其中至少一个杂原子为氮，其余杂原子可以为氧或硫，优选5至10元含氮杂芳环。“5元含氮杂芳环”指包含1至4个杂原子、5个环原子的杂芳族体系，其非限制性实例包括吡咯、咪唑、吡唑、三氮唑、四氮唑、噁唑、噻唑、异噁唑、异噻唑等，优选吡咯、咪唑、吡唑、三氮唑、四氮唑。“6元含氮杂芳环”指包含1至4个杂原子、6个环原子的杂芳族体系，其非限制性实例包括吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、三嗪等。本发明所述的含氮杂芳环包括单环和多环的含氮杂芳环的情况，多环含氮杂芳环包含螺环、稠环和桥环的形式，多环含氮杂芳环的非限定性例子有联吡啶、异喹啉、氮杂吲哚等。本发明所述的含氮杂芳环可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“氰基”指-CN基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的含氮杂芳环”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括含氮杂芳环基团被烷基取代的情形和含氮杂芳环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
本发明青蒿素钌金属配合物的一般合成方法如下方案1和方案2所示。
Figure BDA0002131063780000091
方案1
Figure BDA0002131063780000092
方案2
首先将双氢青蒿素与连接子分子在脱水剂和/或催化剂的作用下反应，得到青蒿素衍生物配体L；然后将得到的青蒿素衍生物配体L与钌金属配合物在适合溶剂中反应得到本发明的青蒿素钌金属配合物。
以下，以举例的方式描述根据本发明的式(I)所示的青蒿素钌金属配合物的制备方法，其包括以下步骤：
1)制备化合物trans-[RuCl4(DMSO)2][(DMSO)2H]
根据文献Alessio，E.；Balducci，G.；Calligaris，M.；Costa，G.；Attia，W.M.；Mestroni，G.；Inorg.Chem.1991，30，609制备；
2)制备化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na
将步骤1)制得的trans-[RuCl4(DMSO)2][(DMSO)2H]溶解于乙醇溶液中，加入氯化钠溶液，搅拌至有大量橘黄色固体微晶粉末生成，过滤分别用乙醇和乙醚洗涤，硅胶干燥过夜；
3)制备化合物trans-[RuCl4(DMSO)L]Na·2DMSO
将步骤2)制得的化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na溶解于丙酮中，加入青蒿素衍生物配体L和DMSO，超声至反应结束且固体完全溶解；加入适量溶剂，放置得固体；用不溶解产物的有机溶剂过滤洗涤，硅胶干燥。
4)制备化合物trans-[RuCl4(DMSO)L]Na
将步骤2)制得的化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na溶解于丙酮中，加入青蒿素衍生物配体L，超声至反应结束且固体完全溶解；加入适量溶剂，放置得固体；用不溶解产物的有机溶剂过滤洗涤，硅胶干燥。
在步骤2)中，氯化钠溶液的加入量，按氯化钠的摩尔当量计，优选为trans-[RuCl4(DMSO)2][(DMSO)2H]摩尔数的1.1～3.0倍。
在步骤3)和4)中，trans-[RuCl4(DMSO)2]Na与加入的青蒿素衍生物配体L的摩尔比优选为1∶1.1～1∶5.5；超声或搅拌的时间优选0.5～4小时。
在步骤3)中，trans-[RuCl4(DMSO)2]Na与加入DMSO的摩尔比优选为1∶19～1∶42。
在一个优选的实施方案中，在步骤3)和步骤4)中，加入适量乙醚或其混合溶剂，放置处理或直接得固体结晶。
在另一个优选的实施方案中，在步骤3)和步骤4)中的不溶解产物的有机溶剂优选为乙醚、乙醚/氯仿、乙醚/二氯甲烷或乙醚/丙酮，且所述氯仿或丙酮占洗涤溶剂的比例优选大于70％。
本发明的青蒿素钌金属配合物，或药物组合物在制备预防和/或治疗肿瘤、肿瘤转移、恶性疟原虫、弓形虫感染的药物中的用途。
具体实施方式
以下将结合具体实施例进一步阐明本发明，但应理解其仅是举例说明的作用，并不以任何方式限制本发明的范围。
1HNMR的测定：Bruker Avance III 600核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)或重水(D2O)，内标为四甲基硅烷(TMS)，化学位移是以10-6(ppm)作为单位给出。
元素分析：Vario EL III型元素分析仪。
紫外光谱：Beckman Coulter DU800紫外分光光度计。
熔点测定仪：METTLER DSC System差式扫描量热仪。
红外光谱：SHIMADZU FTIR-8400s傅立叶变换红外光谱仪。溴化钾压片测定，测量范围(4000～400cm-1)。
超声仪：KQ-100型超声仪(昆山市超声仪器有限公司)
磁力加热搅拌器：IKA RCT basic
双氢青蒿素：纯度≥98％，购于武汉大华伟业医药化工有限公司和宜昌永诺药业有限公司
3，5-二羧基吡啶：纯度98％，购于原阿法埃莎(AlfaAesar)化学有限公司
本发明未注明来源的试剂为本领域常规试剂，可以通过本领域已知的方法来合成，或购自化学试剂公司；未详细注明的仪器均为本领域常规使用仪器。
实施例1青蒿素钌金属配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L1)]Na的合成
Figure BDA0002131063780000111
步骤1：青蒿素衍生物配体L1的合成
称取双氢青蒿素2.84g(10mmol)、DCC4.11g(20mmol)、烟酸2.45g(20mmol)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)1.23g(10mmol)，加入无水二氯甲烷200ml，0℃搅拌下，滴加三乙胺约10滴，反应半小时后逐渐升至室温，反应4小时。过滤，除去白色沉淀，将反应液依次用冰水、5％碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，收集有机层。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液反复低温(4℃)析晶，过滤除去白色固体。将滤液浓缩，残余物通过闪式硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝3∶2)，得到白色固体L1。收率：90％。熔点：173-175℃。
元素分析：理论值(C 64.77 H 6.99 N 3.60)；测定值(C 63.59 H7.01 N3.93)。
红外光谱：υmax/cm-1(KBr)：2949，2927，1740，1627，1590，1278，1133，1091，1034，1014，877，832，743。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：9.17(d，H)，8.88(dd，H)，8.40(tt，H)，7.62(t，H)，5.91(d，H)，5.68(s，H)，1.28(s，3H)，0.91(d，3H)，0.89(d，3H)。
步骤2：配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L1)]Na的合成
称取化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na 1.500g(3.50mmol)，溶解于25ml丙酮中。称取步骤1中制备的青蒿素衍生物配体L1 1.76g(4.52mmol)，溶解于5ml二氯甲烷中，将得到的溶液加入至步骤1制得的trans-[RuCl4(DMSO)2]Na的丙酮溶液中，并于室温超声反应4小时。向反应液中加入乙醚，有半固体生成，4℃放置，减压除去溶液，得到半固体。用二氯甲烷将半固体溶解，加入乙醚，4℃放置，将得到的固体过滤，并用乙醚洗涤，硅胶干燥。得2.56g橘黄色固体粉末状配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L1)]Na。收率：95％。熔点：145.50℃。
元素分析：理论值(C37.66 H4.54 N1.91)；测定值(C37.42 H4.79 N1.91)。
紫外光谱：UV(25℃，H2O)：291nm，398nm，465nm。
红外光谱：υmax/cm-1(KBr)：2926，2874，1737，1627，1609，1434，1378，1281，1133，1093，1017，877，839，824，750，428。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：6.93，5.29，4.91，2.17，1.96，1.51，1.21，0.85，0.67(bs)，-1.34(bs)，-12.74(bs)。
实施例2青蒿素钌金属配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L1)]Na·2DMSO的合成
Figure BDA0002131063780000121
称取化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na 1.00g(2.33mmol)，溶解于30ml丙酮和2ml二甲基亚砜溶液中。称取青蒿素衍生物配体L1 1.37g(3.5mmol)，溶解于5ml二氯甲烷中，将得到的溶液加入上述trans-[RuCl4(DMSO)2]Na的丙酮和二甲基亚砜溶液中，并于室温搅拌下超声反应4小时。向反应液中加入乙醚，有半固体生成，4℃放置，去除溶液，得到半固体。用二氯甲烷将半固体溶解，加入乙醚，4℃放置，将得到的固体过滤，乙醚洗涤，硅胶干燥。得1.75g橘黄色固体粉末状配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L1)]Na·2DMSO。收率：97％。熔点：150.81℃。
元素分析：理论值(C36.45 H5.10 N1.57)；测定值(C36.24 H5.17 N1.67)。
紫外光谱：UV(25℃，H2O)：291nm，398nm，465nm。
红外光谱：υmax/cm-1(KBr)：2925，2876，1744，1607，1435，1279，1132，1092，1034，877，838，825，748，432。
1H-NMR(D2O)δ：5.02，2.60，1.52，1.30，0.95，-2.65(bs)。
实施例3青蒿素钌金属配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L2)]Na的合成
Figure BDA0002131063780000131
步骤1：青蒿素衍生物配体L2的合成
称取双氢青蒿素0.71g(2.49mmol)、DCC1.04g(5mmol)、异烟酸0.62g(5mmol)和DMAP 0.31g(2.54mmol)，加入无水二氯甲烷60ml，0℃搅拌下，滴加三乙胺约3-5滴，反应半小时后逐渐升至室温，反应4小时。过滤，除去白色沉淀，将反应液依次用冰水、饱和食盐水洗涤，干燥。反复低温(4℃)析晶，过滤除去白色固体。将滤液浓缩，残余物通过闪式硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝3∶2)，得到油状物L2。收率：85-90％。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：8.86(d，H)，8.85(d，H)，7.93(d，H)，7.92(d，H)，5.91(d，H)，5.69(s，H)，2.23-2.18(m，H)，1.58-1.82(m，H)，1.28(s，3H)，0.91(d，3H)，0.89(d，3H)。
步骤2：配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L2)]Na的合成
称取化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na 0.06g(0.14mmol)，溶解于5ml丙酮中。称取步骤1中制得的青蒿素衍生物配体L2 0.10g(0.26mmol)，溶解于2ml二氯甲烷中，将得到的溶液加入至上述trans-[RuCl4(DMSO)2]Na的丙酮溶液中，并于室温超声反应4小时。向反应液中加入乙醚，4℃放置，将得到的固体过滤、乙醚洗涤、硅胶干燥。得到0.0903g桔黄色固体状的配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L2)]Na。收率：87％。熔点：146℃。
元素分析：理论值(C37.66 H4.54 N1.91)；测定值(C36.97 H5.13 N1.89)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：4.97(s)，4.51(s)，1.90，1.74，1.51，1.29，1.09，0.89(s)，0.65(d)，-0.17(s)，-1.02(bs)，-12.74(bs)。
实施例4青蒿素钌金属配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L2]Na·2DMSO的合成
Figure BDA0002131063780000141
称取化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na 0.90g(2.13mmol)，超声溶解于30ml丙酮和3ml二甲基亚砜中。称取青蒿素衍生物配体L2 1.43g(3.7mmol)，溶解于5ml二氯甲烷中，将得到的溶液加入上述trans-[RuCl4(DMSO)2]Na溶液中，室温超声反应4小时。向反应液中加入乙醚，有半固体生成，4℃放置，除去溶液，得到半固体。将半固体用二氯甲烷溶解，加入乙醚，4℃放置。将得到的固体过滤、乙醚洗涤、硅胶干燥。得1.80g橘黄色固体粉末状配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L2]Na·2DMSO。收率：87％。熔点：146-149℃。
元素分析：理论值(C36.45 H5.10 N1.57)；测定值(C35.92 H5.11 N1.74)。
紫外光谱：UV(25℃，H2O)：290nm，463nm，395nm。
红外光谱：υmax/cm-1(KBr)：2925，1740，1631，1420，1280，1094，1018，878，769，432。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：4.97(s)，4.51(s)，1.90，1.74，1.51，1.29，1.09，0.89(s)，0.65(d)，-0.17(s)，-1.11(bs)，-13.08(bs)。
实施例5青蒿素钌金属配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L3)]Na·2DMSO的合成
Figure BDA0002131063780000151
步骤1：吡啶-3，5-二羰基二氯化物的制备
称取3，5-二羧基吡啶0.45g(2.69mmol)，加入5-8ml重蒸二氯亚砜，搅拌下回流2-3小时，反应完全后，将溶液减压浓缩，得到浅黄色固体产物。
步骤2：青蒿素衍生物配体L3的合成
称取双氢青蒿素1.09g(3.83mmol)和DMAP0.051g(0.42mmol)，溶解于40ml二氯甲烷中。将上述步骤1中制得的吡啶-3，5-二羰基二氯化物0.59g(2.87mmol)溶解于5ml二氯甲烷中，并于0℃搅拌下，缓慢滴加到上述双氢青蒿素溶液中，随后加入约0.77ml三乙胺。于0℃反应1小时后，将反应液温度升至室温，然后继续反应约5-6小时。反应完全后，将反应液浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到白色固体产物L31g。收率：75％。
步骤3：配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L3)]Na·2DMSO的合成
称取化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na 0.052g(0.123mmol)，超声溶解于6ml丙酮和0.5ml二甲基亚砜中。称取步骤2中制得的青蒿素衍生物配体L3 0.13g(0.19mmol)，溶解于2ml丙酮和1ml二氯甲烷中，将得到的溶液加入至上述trans-[RuCl4(DMSO)2]Na溶液中，室温超声反应2小时。加入乙醚，4℃放置。将得到的固体过滤、乙醚洗涤、硅胶干燥。得0.0974g桔黄色固体粉末状产物trans-[RuCl4(DMSO)(L3)]Na·2DMSO。收率：67％。
元素分析：理论值(C 42.53 H 5.52 N1.18)；测定值(C 42.27 H 5.441 N 1.20)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：1.95，1.80，1.72，1.54，1.30，1.08，1.01，0.61，0.53，-13.33(bs)。
实施例6青蒿素钌金属配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L4)]Na的合成
Figure BDA0002131063780000161
步骤1：青蒿素衍生物配体L4的合成
称取双氢青蒿素1.42g(5mmol)和DCC2.06g(10mmol)，溶解于200ml二氯甲烷中。称取5-溴烟酸2.02g(10mmol)和DMAP 0.60g(5mmol)，溶解于20ml二氯甲烷中。于0℃搅拌下，将上述得到的5-溴烟酸二氯甲烷溶液缓慢加入至上述得到的双氢青蒿素二氯甲烷溶液中，反应半小时后逐渐升至室温，继续反应5小时。将反应液过滤，滤液依次用冰水、饱和食盐水洗涤，收集有机层，干燥，减压浓缩至10-15ml。低温(4℃)反复析晶，过滤除去白色固体。将滤液减压浓缩，残余物通过闪式硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝12：7)，得到白色固体产物L4 1.005g。收率：43％。分子量：468.34。
元素分析：理论值(C53.86 H5.60 N2.99)；测定值(C54.14 H5.516 N3.04)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：9.14(s，H)，9.03(s，H)，8.55(s，H)，5.91(d，H)，5.68(s，H)，2.20(t，H)，2.03(d，H)，1.28(s，3H)，0.91(d，3H)，0.89(d，3H)。
步骤2：配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L4)]Na的合成
称取化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na 0.0513g(0.12mmol)，溶解于5ml丙酮中。称取步骤1中制得的L4 0.1217g(0.26mmol)，溶解于2ml二氯甲烷中，将两溶液混合，室温超声反应2小时。向反应液中加入乙醚，4℃放置。过滤、乙醚洗涤、硅胶干燥。将滤液减压浓缩至少量，重复以上析出固体的程序。将得到的固体合并，共得0.0773g黄色固体产物trans-[RuCl4(DMSO)(L4)]Na。收率：78％。熔点：131.74℃。
元素分析：理论值(C34.01 H3.97 N1.72)；测定值(C33.88 H4.24 N1.45)。
红外光谱：υmax/cm-1(KBr)：3091，2925，2873，1738，1626，1435，1379，1270，1095，1017，877，846，764，430。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：2.16，2.05，1.51(s)，1.29(d)，1.21(s)，0.85(d)，0.77，0.64(bs)，-12.96(bs)。
实施例7青蒿素钌金属配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L4)]Na·2DMSO的合成
Figure BDA0002131063780000171
称取化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na 0.0513g(0.117mmol)，超声溶解于5ml丙酮和0.5ml二甲基亚砜中。称取青蒿素衍生物配体L4 0.0826g(0.176mmol)，溶解于2ml二氯甲烷中，将得到的溶液加入上述trans-[RuCl4(DMSO)2]Na溶液中，并于室温超声反应2小时。向反应液中加入乙醚，4℃放置。过滤、乙醚洗涤、硅胶干燥。将滤液浓缩至少量，重复以上析出固体的程序。将得到的固体合并，共得0.0819g桔黄色固体产物trans-[RuCl4(DMSO)(L4)]Na·2DMSO。收率：70％。熔点：136.90℃。
元素分析：理论值(C33.48 H4.58 N1.45)；测定值(C33.44 H4.29 N1.28)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：2.50(被溶剂峰覆盖)，2.18，2.05，1.51(s)，1.29(d)，1.21(s)，0.91(d)，0.89(d)，0.85(d)，0.78(d)，0.65(bs)，-12.91(bs)。
实施例8青蒿素钌金属配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L5)]Na的合成
Figure BDA0002131063780000181
步骤1：青蒿素衍生物配体L5的合成
称取双氢青蒿素0.71g(2.50mmol)和DCC1.05g(5.09mmol)，溶解于50ml二氯甲烷中。称取5-甲基烟酸0.75g(5.47mmol)和DMAP0.31g(2.54mmol)，溶解于10ml二氯甲烷中。于0℃搅拌下，将上述5-甲基烟酸二氯甲烷溶液缓慢加入至上述得到的双氢青蒿素二氯甲烷溶液中，反应半小时后逐渐升至室温，并继续反应9小时。反应液过滤，将滤液反复低温(4℃)析晶，过滤除去固体。将滤液减压浓缩，残余物通过闪式硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝150∶115)，得到白色固体产物L5 0.873g。收率：86％。分子量：403.47。
元素分析：理论值(C65.49 H7.24 N3.47)；测定值(C65.73 H7.12 N4.20)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：9.14(s，H)，9.03(s，H)，8.55(s，H)，5.91(d，H)，5.68(s，H)，2.18-2.23(m，H)，2-2.03(m，H)，1.81-1.86(m，H)，1.28(s，3H)，0.91(d，3H)，0.88(d，3H)。
步骤2：配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L5)]Na的合成
称取化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na 0.05g(0.12mmol)，溶解于5ml丙酮中。称取步骤1中得到的L5 0.0718g(0.178mmol)，将其加入上述trans-[RuCl4(DMSO)2]Na的溶液中，室温超声反应2小时。向反应液中加入乙醚，4℃放置。将得到的固体过滤、乙醚洗涤、硅胶干燥。得到0.067g桔黄色固体产物trans-[RuCl4(DMSO)(L5)]Na。收率：75％。熔点：148.26℃。
元素分析：理论值(C38.56 H4.72 N1.87)；测定值(C38.34 H4.83 N1.80)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：5.28(s)，2.09-2.20(m)，2.05，1.95(d)，1.50，1.29(d)，1.20(s)，0.88-0.91(m)，0.85(d)，0.79(d)，0.64(bs)，0.27(bs)，-12.93(bs)。
实施例9青蒿素钌金属配合物trans-[RuCl4(DMSO)(L5)]Na·2DMSO的合成
Figure BDA0002131063780000191
称取化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na 0.052g(0.122mmol)，超声溶解于5ml丙酮和0.5ml二甲基亚砜中。称取上述得到的配体L5 0.0711g(0.176mmol)，溶解于2ml二氯甲烷中，将两溶液混合，室温超声反应2小时。向反应液中加入乙醚，4℃放置。将得到的固体过滤、乙醚洗涤、硅胶干燥。得到0.0893g桔黄色固体产物trans-[RuCl4(DMSO)(L5)]Na·2DMSO。收率：81％。熔点：152.85℃。
元素分析：理论值(C37.21 H5.24 N1.55)；测定值(C36.94 H5.23 N1.50)。
红外光谱：υmax/cm-1(KBr)：2925，2875，1736，1627，1620，1448，1378，1298，1215，1132，1095，1018，878，857，828，763，431。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：5.28(s)，4.89(s)，2.50(被溶剂峰覆盖)，2.13-2.18(m)，1.95(d)，1.76，1.52，1.32，1.20(s)，1.14，0.91(d)，0.85(d)，0.79(d)，0.63(bs)，0.28(bs)，-12.74(bs)。
实施例10效果测试
1.方法
表1 药物原液的配制
Figure BDA0002131063780000192
Figure BDA0002131063780000201
LAM1：trans-RuCl4(dmso)(NIC-Q)Na 733.45；
LAM2-D：trans-RuCl4(dmso)(3，5-COOQ2PY)Na 1043.79，3，5-COOQ2PY＝L3；
LAM3：trans-RuCl4(dmso)(5-CH3-NIC-Q)Na 747.49；
LAM4-D：trans-RuCl4(dmso)(5-Br-NIC-Q)Na 812.34.
双氢青蒿素284.43
1.1细胞毒性实验
本实验使用MTT法，每种药物设试验组(加入药物组)，试验对照组(不加入药物组)和空白对照组(不加vero细胞组)，取对数期生长的vero细胞，用吸管吹打成单个细胞悬液，加入100μl/孔细胞悬液于96孔培养板中，37℃，5％CO2条件下培养24h之后，吸弃上清，在不同的孔中分别加入终浓度为250，125，62.5，31.25，15.625μg/ml的LAM1，LAM2-D，LAM4-D各100μl；终浓度为125，62.5，31.25，15.625，7.8125μg/ml的LAM3100μl；终浓度为80，40，20，10，5，2.5，1.25，0.625，0.3125μg/ml的双氢青蒿素100μl；终浓度为500，250，125，62.5，31.25μg/ml的阿奇霉素100μl以及终浓度为4，2，1，0.5，0.25mg/ml的磺胺嘧啶钠100μl，其中LAM1，LAM2-D，LAM3，LAM4-D，双氢青蒿素的对照组为0.5％的丙酮，阿奇霉素的对照组为0.5％DMSO，磺胺嘧啶钠(SDZ)的对照组为完全培养基。各组设4个平行孔，37℃，5％CO2培养20h之后，每孔加入5mg/mlMTT工作液20μl，继续培养4h后，取出培养板，小心吸弃上清液，每孔加入200μl二甲基亚砜，振荡混匀0.5h后，用酶标仪在波长490nm处测出各孔的OD值，计算重复孔的平均值。细胞增值率(％)＝(OD值试验组-OD值空白对照组)/(OD值试验对照组-OD值空白对照组)×100％，细胞增值率(％)大于90％的最大稀释浓度为药物安全浓度，在药物安全浓度内进行体外抗虫实验。
1.2体外抗弓形虫增值实验
将vero细胞分传于24孔板中，每孔加含5×104个vero细胞的培养基悬液400μl，37℃，5％CO2培养24h之后，每孔加含弓形虫速殖子4×105个的DMEM完全培养基100μl，继续培养4h，显微镜下观察弓形虫已开始进入细胞，吸弃上清，每孔加入梯度稀释的药物500μl，每组3个重复，同时设立不加药物的对照组。在最佳观察时间内判定各组药物抑制弓形虫增殖的效果，用显微镜观察每孔10个视野，计算感染细胞假包囊数并取平均值。弓形虫相对增殖率＝试验孔平均虫体数/对照孔平均虫体数×100％。绘制药物浓度-弓形虫相对增殖率关系曲线，以药物终浓度的对数值为横坐标，以B/B0(各药物浓度抑制时的弓形虫相对增殖率值为B，不加药物时弓形虫相对增殖率为B0)为纵坐标，绘制标准曲线，并推导出回归方程，进行相关的回归分析。根据标准曲线计算50％抑制率时对应的药物的浓度，即IC50。
2.结果
2.1细胞毒性实验
由表2可知0.5％及低于0.5％体积分数的丙酮与0.5％及低于0.5％体积分数的二甲基亚砜(DMSO)对Vero细胞的毒性影响不大，故可作为几种水溶性较差的抗弓形虫药物的促溶剂，并且考虑到药物原液配制的终浓度大小，故选用0.5％丙酮及0.5％DMSO来稀释配置好的不同药物原液。
表2 丙酮，二甲基亚砜(DMSO)对vero细胞的毒性
Figure BDA0002131063780000211
表3.LAM1，LAM2-D，LAM3，LAM4-D，阿奇霉素，磺胺嘧啶钠(SDZ)对vero细胞的毒性
Figure BDA0002131063780000212
表4 双氢青蒿素对vero细胞的毒性
Figure BDA0002131063780000213
2.2药效试验
表5 LAM1，LAM2-D，LAM3，LAM4-D，阿奇霉素，磺胺嘧啶钠(SDZ)的体外抗弓形虫速殖子抑制效果
Figure BDA0002131063780000214
结论
新化合物对弓形虫有明显的抑制作用，且青蒿素双核化合物好于双氢及临床常用抗菌素(阿奇霉素和磺胺嘧啶)。化合物体外抗弓形虫效果从大到小依次为(以药物摩尔浓度计算)：LAM2-D＞LAM4-D＞LAM3≈LAM1＞双氢青蒿素＞＞阿奇霉素＞磺胺嘧啶钠。均具有开发前景。
参考文献
1.Mestroni，G.，E.Alessio，and G.Sava，United States Patent.Patent No.US6,221,905 B1.2001.
2.Capozzi，I.，et al.，Modification of cell cycle and viability of TLX5lymphoma in vitro by sulfoxide-ruthenium compounds and cisplatin detected byflow cytometry.Chem Biol Interact，1998.113(1)：p.51-64.
3.Bergamo，A.，et al.，In vitro cell cycle arrest，in vivo action onsolid metastasizing tumors，and host toxicity of the antimetastatic drug NAMI-A and cisplatin.J Pharmacol Exp Ther，1999.289(1)：p.559-64.
4.Zorzet，S.，et al.，Lack of In vitro cytotoxicity，associated toincreased G(2)-M cell fraction and inhibition of matrigel invasion，maypredict In vivo-selective antimetastasis activity of ruthenium complexes.JPharmacol Exp Ther，2000.295(3)：p.927-33.
5.Casini，A.，et al.，Ruthenium anticancer drugs and proteins：a study ofthe interactions of the ruthenium(III)complex imidazolium trans-[tetrachloro(dimethyl sulfoxide)(imidazole)ruthenate(III)]with hen egg white lysozyme andhorse heart cytochrome c.J Biol Inorg Chem，2007.12(8)：p.1107-17.
6.Leijen，S.，et al.，Phase I/II study with ruthenium compound NAMI-Aand gemcitabine in patients with non-small cell lung cancer after first linetherapy.Invest New Drugs，2015.33(1)：p.201-14.
7.中华人民共和国卫生药政管理局主编，中药新药研究指南，P104-106。

Claims (10)

1.一种式（I）所示的青蒿素钌金属配合物，
Figure DEST_PATH_IMAGE002
其中，
Figure DEST_PATH_IMAGE004
M+为金属离子，所述金属离子为Na+和K+；
所述连接子为具有配位能力的5至10元含氮杂芳环，其任选进一步被选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、卤素或酰基的一种或多种基团取代；
所述5至10元含氮杂芳环选自吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、三嗪、咪唑、吡唑、三氮唑、四氮唑、异喹啉、和氮杂吲哚。
2.根据权利要求1所述的式（I）所示的青蒿素钌金属配合物，其为式trans-[RuCl4(DMSO)(L)]Na、或式trans-[RuCl4(DMSO)(L)]Na·nDMSO的配合物，其中n为1至3的整数。
3.根据权利要求1或2所述的式（I）所示的青蒿素钌金属配合物，其中所述5至10元含氮杂芳环为吡啶。
4.根据权利要求1或2所述式（I）所示的青蒿素钌金属配合物，其中所述连接子与青蒿素母核的12号碳原子通过酯键、C-N键、醚键、或酰胺键连接。
5.根据权利要求1至4任一项所述的式（I）所示的青蒿素钌金属配合物的制备方法，其包含以下步骤：
1）将双氢青蒿素或其衍生物与具有配位能力的5至10元含氮杂芳环或其衍生物在脱水剂和/或催化剂的作用下反应，得到青蒿素衍生物配体L；
2）将步骤1）制得的青蒿素衍生物配体L与钌金属配合物反应得到青蒿素钌金属配合物；
其中，所述双氢青蒿素的衍生物为青蒿素的卤代物、青蒿素的氨基化合物、青蒿素羧酸化合物或青蒿素醚的卤代物；
所述具有配位能力的5至10元含氮杂芳环的衍生物为含有羧基基团、氨基基团、酰氯基团或卤代基团的5至10元含氮杂芳环。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述钌金属配合物为trans-[RuCl4(DMSO)2]Na或trans-[RuCl4(DMSO)2][(DMSO)H]。
7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其中，在步骤1）中，通过将双氢青蒿素与含有羧基基团或酰氯基团的具有配位能力的5至10元含氮杂芳环在脱水剂与碱性催化剂的作用下反应，得到连接子与青蒿素母核的12号碳原子通过酯键连接的青蒿素衍生物配体L。
8.根据权利要求5或6所述的制备方法，其中，在步骤1）中，通过将双氢青蒿素或其卤代物与含有氨基基团的具有配位能力的5至10元含氮杂芳环，在酸性或碱性催化剂作用下反应，得到连接子与青蒿素母核的12号碳原子通过C-N键连接的青蒿素衍生物配体L；其中，所述含有氨基基团的具有配位能力的5至10元含氮杂芳环为含有伯胺或仲胺基团的具有配位能力的5至10元含氮杂芳环。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其中，所述具有配位能力的5至10元含氮杂芳环选自吡啶、咪唑、三氮唑、四氮唑、氮杂吲哚、异喹啉。
10.根据权利要求1-4任一项的青蒿素钌金属配合物，或添加药学上可接受的药物载体得到的药物组合物在制备预防和/或治疗肿瘤、肿瘤转移、恶性疟原虫、弓形虫感染的药物中的用途。
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