ES2607988T3

ES2607988T3 - Bifidobacterias probióticas felinas

Info

Publication number: ES2607988T3
Application number: ES06734378.0T
Authority: ES
Inventors: Thomas William-Maxwell Boileau; Barry Pius Kiely; Liam Diarmuid O'mahony; John Macsharry; Gregory Dean Sunvold
Original assignee: Alimentary Health Ltd; Iams Europe BV
Current assignee: PrecisionBiotics Group Ltd; Iams Europe BV
Priority date: 2005-05-31
Filing date: 2006-02-02
Publication date: 2017-04-05
Anticipated expiration: 2026-02-02
Also published as: WO2006130188A1; EP1885383B1; US8034601B2; US20090214499A1; JP4938006B2; US9404162B2; AR053805A1; EP1885383A1; JP2008541757A; BRPI0611492A2; PL1885383T3; BRPI0611492B1; CA2607949A1; US20060269534A1; AU2006253007A1; AU2006253007B2; CA2607949C

Abstract

Una cepa de bacterias ácido-lácticas del género Bifidobacterium que puede obtenerse mediante el aislamiento a partir de tracto gastrointestinal felino resecado y lavado que tiene actividad probiótica; en la que la cepa se selecciona entre el grupo que consiste en Bifidobacterium longum NCIMB 41290 (AHF5340) que tiene una secuencia polinucleotídica intergénica 16s-23s de acuerdo con la SEQ ID NO. 1, Bifidobacterium longum NCIMB 41291 (AHF1231) que tiene una secuencia polinucleotídica intergénica 16s-23s de acuerdo con la SEC. ID NO. 2 y mezclas de las mismas.

Description

imagen1

imagen2

imagen3

imagen4

imagen5

imagen6

15

25

35

45

55

animales de compañía. Los ejemplos no limitantes de tratamiento del tracto urinario incluyen el tratamiento o la prevención de infecciones del tracto urinario, el tratamiento o la prevención de enfermedades renales, incluyendo cálculos del tracto urinario, el tratamiento o la prevención de infecciones de la vejiga y similares. Sin quedar ligado por teoría alguna, se cree que las bacterias Bifidobacteria de la presente invención son útiles en la prevención de estas dolencias como resultado de su capacidad de degradar el ácido oxálico, como se demuestra in vitro. El ácido oxálico es un subproducto del metabolismo urinario que puede formar precipitados insolubles que dan como resultado infecciones renales, de la vejiga y otras infecciones del tracto urinario. Al degradar el ácido oxálico y por tanto evitar potencialmente su precipitación y acumulación en el tracto urinario, las bacterias de la presente invención pueden tratar y prevenir infecciones y otras dolencias del tracto urinario. La degradación del ácido oxálico puede medirse in vitro utilizando el kit de ensayo de ácido oxálico n.º del catálogo 755699 disponible en el mercado de Boehringer Mannheim/R-Biopharm.

La Bifidobacteria de la presente invención puede usarse en un procedimiento para mejorar o mantener la salud de los animales de compañía que comprende mejorar la digestión de la fibra. La mejora de la digestión de la fibra es deseable, ya que promueve el crecimiento de dichas bacterias probióticas, además de la microflora endógena beneficiosa, que ayuda en la supresión de algunas bacterias potencialmente patógenas. Además, se ha documentado en los seres humanos una disminución en la cantidad de metabolitos tóxicos y enzimas perjudiciales que son resultado de la fermentación colónica (Tomomatsu, H. "Health effects of oligosaccharides", (1994) Food Technol, 48, 61-65). La digestión de la fibra puede determinarse usando el procedimiento descrito en Vickers y col. (2001), "Comparison of fermentation of selected fructooligosaccharides and othe rfiber substrates by feline colonic microflora", Am. J. Vet. Res. 61 (4), 609-615, con la excepción de que en lugar de inocular usando muestras fecales diluidas cada experimento usó cultivos puros de las cepas bacterianas de interés.

Las cepas probióticas felinas de la presente invención pueden usarse para reducir el mal olor de las heces y la orina y simultáneamente en la caja de arena mediante la reducción de la producción de compuestos en las heces y la orina que causan el mal olor. Los ejemplos no limitantes de compuestos que causan mal olor incluyen amoníaco, indoles, fenoles, aminas, ácidos grasos de cadena ramificada y compuestos volátiles que contienen azufre. Sin desear quedar limitado por teoría alguna, se cree que la reducción de los niveles de estos compuestos en las heces

o la orina de un animal de compañía reduce el mal olor asociado a las heces o la orina. Además, para los animales de compañía que usan una caja de arena, existe una disminución simultánea del mal olor en la caja de arena.

El procedimiento de uso de las bacterias ácido-lácticas de la presente invención como se define en las reivindicaciones implica normalmente el consumo oral por el animal. El consumo oral puede tener lugar como parte de la ingestión alimentaria normal o como complemento a la misma. El consumo oral normalmente se produce al menos una vez al mes, preferentemente al menos una vez a la semana, más preferentemente al menos una vez por día. Las bacterias ácido-lácticas de la presente invención pueden administrarse al animal de compañía en una cantidad terapéuticamente eficaz para mantener o mejorar la salud del animal, preferentemente un animal de compañía. Como se usa en el presente documento, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" con referencia a las bacterias ácido-lácticas, significa la cantidad de bacterias suficiente para proporcionar el efecto deseado o el beneficio a un animal hospedador que necesita tratamiento, pero lo suficientemente baja para evitar efectos adversos tales como toxicidad, irritación o respuesta alérgica, coherente con una relación beneficio/riesgo razonable cuando se usa en la manera de la presente invención. La "cantidad terapéuticamente eficaz" específica variará con factores tales como la afección particular que se trata, el estado físico del usuario, la duración del tratamiento, la naturaleza de la terapia simultánea (si existe), la forma de dosificación específica que se usa, el vehículo empleado, la solubilidad de la forma de dosificación y el régimen de dosificación particular.

Preferentemente, las bacterias ácido-lácticas se proporcionan al animal de compañía a una dosis de desde 1,0E+04 a 1,0E+14 UFC por día, más preferentemente de 1,0E+06 a 1,0E+12 UFC por día. La composición preferentemente puede contener al menos un 0,001 % de 1,0E+04 a 1,0E+12 UFC/g de las bacterias ácido-lácticas del género Bifidobacteria que pueden obtenerse mediante el aislamiento a partir de tacto GI felino resecado y lavado. Las bacterias ácido-lácticas pueden administrarse al animal, ya sea en forma viable o como células inactivadas o destilados, aislados u otras fracciones de los productos de fermentación de las bacterias ácido-lácticas de la presente invención o cualquier mezcla de los mismos.

Preferentemente, las bacterias ácido-lácticas o una fracción purificada o aislada de las mismas, se usan para preparar una composición que tiene por objeto mantener o mejorar la salud de un animal. Como se ha indicado anteriormente, la composición puede ser parte de la ingesta dietética normal o un complemento. Cuando la composición comprende parte de la ingesta dietética normal, la composición puede estar en forma de un alimento para animales seco tal como galletas o croquetas, un alimento de grano procesado, un alimento para animales húmedo, yogures, salsas, masticables, golosinas y similares.

Dichas composiciones pueden comprender componentes adicionales. Otros componentes son beneficiosos para su inclusión en las composiciones utilizadas en el presente documento, pero son opcionales para los fines de la invención. Por ejemplo, las composiciones alimentarias están preferentemente equilibradas nutricionalmente. En una realización, las composiciones alimentarias pueden comprender, sobre la base de materia seca, de aproximadamente el 20 % a aproximadamente el 50 % de proteína en bruto, preferentemente de aproximadamente el 22 % a aproximadamente el 40 % de proteína en bruto, en peso de la composición alimentaria. El material

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

proteínico en bruto puede comprender cualquier material que tenga un contenido proteínico de al menos aproximadamente el 15 % en peso, cuyos ejemplos no limitantes incluyen proteínas vegetales tales como soja, semilla de algodón y cacahuete, proteínas animales tales como caseína, albúmina y tejido cárnico. Los ejemplos no limitantes de tejidos cárnicos útiles en la presente invención incluyen la carne fresca y las comidas secas o procesadas tales como la harina de pescado, la harina de aves de corral, la harina de carne, la harina de huesos y similares. Otros tipos de fuentes de proteínas en bruto adecuadas incluyen el gluten de trigo o el gluten de maíz y proteínas extraídas de fuentes microbianas tales como la levadura.

Además, las composiciones alimentarias pueden comprender, sobre la base de materia seca, de aproximadamente el 5 % a aproximadamente el 35 % de grasa, preferentemente de aproximadamente el 10 % a aproximadamente el 30 % de grasa, en peso de la composición alimentaria. Más aún, las composiciones alimentarias que comprenden las bacterias ácido-lácticas de la presente invención también pueden comprender de aproximadamente el 4 % a aproximadamente el 25 % de la fibra dietética total. Las composiciones también pueden comprender una fuente de almidón múltiple como se describe en el documento WO99/51108.

Las composiciones de la presente invención pueden comprender adicionalmente una fuente de hidratos de carbono. Son fuentes ilustrativas los granos o cereales tales como arroz, maíz, milo, sorgo, cebada, alfalfa, trigo y similares. Además, las composiciones también pueden contener otros materiales tales como suero de leche desecado y otros subproductos lácteos.

Las composiciones que comprenden las bacterias de la presente invención como se definen en las reivindicaciones también pueden comprender un prebiótico. "Prebiótico" incluye sustancias o compuestos que son fermentados por la flora intestinal del animal de compañía y por tanto promueven el crecimiento o el desarrollo de bacterias ácidolácticas en el tracto gastrointestinal del animal de compañía, a expensas de las bacterias patógenas. El resultado de esta fermentación es una liberación de ácidos grasos, en particular ácidos grasos de cadena corta en el colon. Esto tiene el efecto de reducir el valor del pH en el colon. Los ejemplos no limitantes de prebióticos adecuados incluyen los oligosacáridos, tales como la inulina y sus productos de hidrólisis habitualmente conocidos como fructooligosacáridos, galactooligosacáridos, xilooligosacáridos u oligoderivados de almidón. Los prebióticos pueden proporcionarse en cualquier forma adecuada. Por ejemplo, el prebiótico puede proporcionarse en forma de material vegetal que contiene la fibra. Los materiales vegetales adecuados incluyen espárragos, alcachofas, cebollas, trigo o achicoria o residuos de estos materiales vegetales. Como alternativa, la fibra prebiótica puede proporcionarse como un extracto de inulina, por ejemplo los extractos de achicoria son adecuados. Pueden obtenerse extractos de inulina adecuados de Orafti SA de Tirlemont 3300, Bélgica, con la marca comercial "Raftiline". Por ejemplo, la inulina puede proporcionarse en forma de Raftiline (g) ST que es un polvo blanco fino que contiene de aproximadamente el 90 a aproximadamente el 94 % en peso de inulina, hasta aproximadamente el 4 % en peso de glucosa y fructosa y de aproximadamente el 4 al 9 % en peso de sacarosa. Como alternativa, la fibra puede estar en forma de un fructooligosacárido tal como se obtiene de Orafti SA de Tirlemont 3300, Bélgica, con la marca comercial "Raftilose". Por ejemplo, la inulina puede proporcionarse en forma de Raftilose (g) P95. De otro modo, los fructooligosacáridos pueden obtenerse hidrolizando inulina, mediante procedimientos enzimáticos o usando microorganismos.

Para los alimentos secos para animales de compañía un procedimiento adecuado es la cocción por extrusión, aunque pueden usarse el horneado y otros procedimientos adecuados. Cuando se cocina por extrusión, el alimento seco para animales de compañía se proporciona generalmente en forma de una croqueta. Si se usa un prebiótico, el prebiótico puede mezclarse con los otros ingredientes del alimento seco para animales de compañía antes del procesamiento. Un procedimiento adecuado se describe en la solicitud de patente europea N.º 0850569. Si se usa un microorganismo probiótico, el organismo mejor se aplica como revestimiento o se introduce en el alimento seco para animales de compañía. Un procedimiento adecuado se describe en la publicación de patente europea número EP 0 862 863.

Para los alimentos húmedos, pueden usarse los procedimientos descritos en las patentes de los EE.UU. 4.781.939 y

5.132.137 para producir productos cárnicos simulados. También pueden utilizarse otros procedimientos para la producción de productos de tipo trocitos; por ejemplo la cocción en un horno de vapor. Como alternativa, pueden producirse productos de tipo barra mediante la emulsión de un material cárnico adecuado para producir una emulsión cárnica, la adición de un agente gelificante adecuado y el calentamiento de la emulsión cárnica antes del llenado de latas u otros recipientes. Las composiciones alimentarias húmedas típicas pueden comprender de aproximadamente el 5 % a aproximadamente el 15 % de proteína, de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 10 % de grasa y de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 7 % de fibra. Los ingredientes no limitantes que pueden utilizarse en las composiciones de alimentos húmedos incluyen pollo, pavo, ternera, pescado blanco, caldo de pollo, caldo de pavo, caldo de ternera, hígado de pollo, arroz de cervecería, sémola de maíz, harina de pescado, huevo, pulpa de remolacha, cloruro, harinas de linaza, cordero, subproductos de ternera, subproductos de pollo y mezclas de los mismos.

En otra realización, las composiciones complementarias tales como galletas, masticables y otras golosinas pueden comprender, sobre la base de materia seca, de aproximadamente el 20 % a aproximadamente el 60 % de proteína o de aproximadamente el 22 % a aproximadamente el 40 % de proteína, en peso de la composición complementaria. Como otro ejemplo, las composiciones complementarias pueden comprender, sobre la base de materia seca, de aproximadamente el 5 % a aproximadamente el 35 % de grasa o de aproximadamente el 10 % a aproximadamente

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

el 30 % de grasa, en peso de la composición complementaria. Se conocen habitualmente en la técnica alimentos y composiciones complementarias que tienen por objeto su uso por felinos o felinos.

Los alimentos para animales de compañía pueden contener otros agentes activos tales como ácidos grasos de cadena larga y cinc. Los ácidos grasos de cadena larga adecuados incluyen ácido alfa-linoleico, ácido gamma linolénico, ácido linoleico, ácido eicosapentanoico y ácido docosahexanoico. Los aceites de pescado son una fuente adecuada de ácidos eicosapentanoicos y ácido docosahexanoico.

El aceite de borraja, el aceite de semilla de grosella negra y el aceite de onagra son fuentes adecuadas de ácido gamma linolénico. Los aceites de cártamo, los aceites de girasol, los aceites de maíz y los aceites de soja son fuentes adecuadas de ácido linoleico. Estos aceites también pueden usarse en los sustratos de revestimiento mencionadas anteriormente. El cinc puede proporcionarse en diversas formas adecuadas, por ejemplo como sulfato de cinc u óxido de cinc. Además, muchos ingredientes utilizados habitualmente en alimentos para animales de compañía son fuentes de ácidos grasos y de cinc. Se ha observado que la combinación de achicoria, como fuente de prebióticos, con un aceite rico en ácido linoleico, tal como el aceite de soja, proporciona ventajas inesperadas, indicadoras de un efecto sinérgico.

Cuando la composición está en forma de una salsa, la composición comprende preferentemente al menos el 10 % de un caldo o una materia prima, cuyos ejemplos no limitantes incluyen materia prima vegetal, ternera, pollo o jamón. Las composiciones en salsa típicas pueden comprender de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 5 % de proteína en bruto, de aproximadamente el 2 % a aproximadamente el 5 % de grasa en bruto y de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 5 % de fibra.

Otros ejemplos no limitantes de complementos adecuados para su uso en el presente documento incluyen polvos, suspensiones en aceite, suspensiones a base de leche, quesos, composiciones a base de manteca de cacao y píldoras o cápsulas. Cuando la composición está en forma de una píldora, se requieren agentes aglutinantes adecuados para mantener la píldora en una forma sólida comprimida. Los ejemplos no limitantes de agentes aglutinantes adecuados incluyen las gomas naturales tales como la goma de xantano, pectinas, lecitinas, alginatos y otros conocidos por los expertos en la materia. Cuando la composición está en forma de una cápsula, la composición se encapsula preferentemente usando tecnologías conocidas por los expertos en la materia. Los ejemplos no limitantes de materiales de encapsulación adecuados incluyen el alcohol polivinílico (PVA), polivinilpirrolidona (PVP), alginatos y gelatina. Las composiciones a base de yogur pueden comprender de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 5 % de proteína, de aproximadamente el 10 % a aproximadamente el 20 % de hidratos de carbono, de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 5 % de fibra, de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 5 % de grasa y de aproximadamente el 50 % a aproximadamente el 90 % de un vehículo líquido tal como la leche.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos se proporcionan para ilustrar la invención y no tienen por objeto limitar el ámbito de la misma de ninguna manera.

Ejemplo 1: Aislamiento de bacterias ácido-lácticas a partir de tractos GI felinos

Se obtuvieron muestras intestinales felinas de gatos sanos presentados a los veterinarios locales para la eutanasia iniciada y aprobada por el dueño. Todos los animales estaban sanos y libres de enfermedades. Se diseccionaron el colon, el colon medio, el ciego y el íleon de cada gato con el fin de exponer la mucosa.

Los sobrenadantes se retiraron después de la agitación del tejido de la mucosa (agitado con formación de vórtice durante 1 minuto) y después de la homogeneización mecánica del tejido. Cada sobrenadante se sembró en placas con agar de Mann Rogosa Sharpe (MRS). Éstas se incubaron anaeróbicamente, usando el sistema Anerocult GasPak, durante 48 horas a 37 ºC. Las colonias aisladas de las placas se volvieron a sembrar en estrías en MRS y se volvieron a cultivar anaeróbicamente en las mismas condiciones. Las colonias aisladas se volvieron a sembrar en estrías otras 4 veces con el fin de purificar una sola cepa. Se evaluó la morfología y el aspecto microscópico de las colonias. Los aislados adecuados se ensayaron para determinar la reacción de Gram y la actividad de la catalasa. La identificación de los bacilos grampositivos, catalasa negativos se realizó mediante el ensayo de API (API 50CHL, BioMérieux). Las células recogidas se lavaron dos veces con tampón de fosfato 0,05 M (pH 6,5) y cisteína-HCl (500 mg/l), seguido de ultrasonidos. La centrifugación retiró los desechos celulares. Los sobrenadantes se incubaron con NaF (6 mg/ml) y yodoacetato de Na (10 mg/ml) durante 30 minutos a 37 ºC. La reacción se detuvo mediante incubación con HCl de hidroxilamina (pH 6,5) durante 10 minutos a temperatura ambiente. Se controló el desarrollo de color después de la adición de HCl (4 M), FeCl3•6H2O (al 5 % (p/v) en HCl 0,1 M) y fructosa-6-fosfato (sal de Na). La formación de fosfato de acetilo a partir de fructosa-6-fosfato se evidencia por el color rojizo formado por el quelato férrico de su hidroxamato.

Ejemplo 2: Detección de actividad antimicrobiana

Cada una de las cepas bacterianas acido-lácticas aisladas se incubó anaeróbicamente en caldo MRS. Se aplicaron puntualmente 2 µl de cada cultivo en placas de agar MRS y se incubaron anaeróbicamente durante la noche. Se

10

15

20

25

30

35

cultivaron previamente Salmonella typhimurium y E. Coli enteropatogénica (ExPEC) durante la noche y se inocularon 100 µl en agar fundido (al 1 % v/v). Este cultivo indicador se vertió sobre la superficie de las placas de MRS inoculadas. Después de la incubación durante la noche, se midieron las zonas de inhibición alrededor de la colonia probiótica. Todos los experimentos se realizaron por duplicado en tres ocasiones separadas. Además, la incorporación del tampón betaglicerofosfato al 2 % en el agar permitió la evaluación de la contribución de la producción de ácido a la inhibición de patógenos observada in vitro.

Los datos presentados en la Tabla 2 demuestran claramente que las cepas de bacterias ácido-lácticas de la presente invención que pueden obtenerse mediante el aislamiento a partir del tracto GI felino resecado y lavado tienen una actividad antimicrobiana significativa in vitro, indicativa de actividad probiótica potencial.

Tabla 2

AHF534D: 1231

S. typhimurium: 5,5 3,67

ExPEC: 6,17 6

Ejemplo 3: Mediciones in vitro de supervivencia y colonización

Tolerancia al pH

Se recogieron células bacterianas de cultivos de una noche, se lavaron dos veces en tampón fosfato (pH 6,5) y se volvieron a suspender en caldo MRS/TPY ajustado con HCl 1 M a pH 2,5. Las células se incubaron anaeróbicamente a 37 ºC y su supervivencia se midió a intervalos de 0, 30, 60, 120, 240 y 360 minutos usando el procedimiento de recuento de placas conocido por los expertos en la materia. La Tabla 3 resume estos datos por cepa.

Tabla 3

Supervivencia de las cepas en un entorno de pH bajo (pH 2,5). Los datos son el log de los recuentos de UFC.

TIEMPO (min)

CEPA: 0 30 60 120 180 360

AHF5340: 8,34 8,22 8,29 8,19 8,26 8,12

AHF1231: 9,10 9,06 9,07 9,04 8,97 8,91

Resistencia a la bilis

Las cepas bacterianas se sembraron en estrías sobre agar MRS complementado con bilis porcina (Sigma) al 0,5 %, al 1 % y al 5 % (p/v). Las placas se incubaron a 37 ºC bajo condiciones anaeróbicas y el crecimiento se registró después de 48 horas. El crecimiento se comparó con placas de control por un observador experimentado y el crecimiento de las colonias se describió como:

Negativo (0) -sin crecimiento;

+ (1) -Crecimiento translúcido turbio (<33 % de las placas de control con 0 % de bilis); ++ (2) -Crecimiento definido, pero no tan bueno como el de los controles (> 33 % pero <66 %); +++ (3) -Crecimiento equivalente al de los controles (> 66 %).

Una vez que el crecimiento de las colonias en presencia de sales biliares se comparó con los controles, a los descriptores de crecimiento se les proporcionaron valores numéricos de 0, 1, 2 o 3 (-; +; ++, +++ respectivamente) y después se expresaron como porcentaje, donde 3 representa el 100 %.

La Tabla 4 demuestra que la Bifidobacterium de la presente invención muestra claramente una resistencia a las sales biliares, siendo capaz de crecer y formar colonias a un nivel de al menos el 66 % en la mayoría de los casos cuando se expone a sales biliares porcinas al 0,3 %.

Tabla 4

Supervivencia de las cepas en diversas concentraciones de bilis porcina

PORCENTAJE DE BILIS (%)

CEPA: 0 0,3 0,5 1 2 5 7,5 10

AHF5340: +++ +++ +++ ++ +++ ++ ++ ++

AHF1231: +++ ++ + - - - - -

Además, con el fin de evaluar cualquier diferencia en la capacidad de las cepas de colonizar el tracto GI de los gatos, las cepas bacterianas se sembraron en estrías sobre agar MRS complementado con bilis felina al 0,5 %, 1 %

11

imagen7

Después de la secuenciación, las secuencias obtenidas para las cuatro cepas depositadas se compararon con la base de datos de secuencias en línea "BLAST", disponible en http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/ para determinar la homología con secuencias 16s-23s bacterianas depositadas. Las coincidencias más aproximadas para Bifidobacterium longum NCIMB 41290 (AHF5340) y Bifidobacterium longum NCIMB 41291 (AHF1231) fue la cepa Bifidobacterium longum NCC2705, que tenía una puntuación de porcentaje de homología del 95 % y del 94 %, respectivamente.

Ejemplo 5: Composiciones de ejemplo

Los Ejemplos 1 a 4 son ejemplos de composiciones de croquetas secas que comprenden la Bifidobacteria probiótica de la presente invención.

Ingrediente: Porcentaje basado en el peso

Ej. 1: Ej. 2 Ej. 3 Ej.4

Granos de cereales: hasta 100 hasta 100 hasta 100 hasta 100

Harina de subproductos de aves de corral: 43,5 40 45 35

Grasa de aves de corral: 1,28 1,02 1,16 1,35

Producto de huevo: 2,4 2,1 2,5 2,2

Harina de hígado de pollo: 1,0 1,0 1,0 1,0

Levadura de cerveza seca: 1,0 1,0 1,0 1,0

Fosfato monosódico: 1,0 1,0 1,0 1,0

Carbonato de calcio: 0,8 0,8 0,8 0,8

Cloruro de potasio: 0,6 0,6 0,6 0,6

Vitaminas: 0,4 0,4 0,4 0,4

Cloruro de colina: 0,3 0,3 0,3 0,3

Minerales: 0,3 0,3 0,3 0,3

DL-metionina: 0,1 0,1 0,1 0,1

Cloruro de sodio: 0,03 0,03 0,03 0,03

Probiótico (1 × 1010 ufc/g de NCIMB 41290 en aceite de girasol): 1 0,5 - 0,6

Probiótico (1 × 1010 ufc/g de NCIMB 41291 en aceite de girasol): - 0,5 1 0,4

Los Ejemplos 5 a 7 son ejemplos de composiciones de alimentos húmedos para animales de compañía que comprenden el probiótico Bifidobacteria longum de la presente invención.

Ingrediente: Porcentaje basado en el peso

Ej. 5: Ej. 6 Ej. 7

Agua: hasta 38 hasta 47 hasta 50

Hígado aves de corral: hasta 25 hasta 20 hasta 15

Productos de aves de corral: 25 20 20

Arroz de cervecería: 5 7 10

Producto de huevo: 3 2,5 1,5

Grasa de ave: 2,9 3,0 3,2

Materia prima de pollo: 0,6 0,7 0,9

Taurina: 0,1 0,1 0,1

Vitaminas: 0,05 0,1 0,1

Minerales: 0,05 0,1 0,1

Probiótico (1 × 1010 ufc/g de NCIMB 41290): 4 5 6

Los Ejemplos 8 a 10 son ejemplos de composiciones de complementadas con yogur que comprenden el probiótico 15 Bifidobacteria longum de la presente invención.

Ingrediente: Porcentaje basado en el peso

Ej. 8: Ej. 9 Ej. 10

Leche: 38 42 48

Azúcar: 12 12 10

Almidón modificado: 1,0 0,8 0,8

Prebiótico: 0,25 0,3 0,5

Probiótico (1 × 1010 ufc/g de NCIMB 41291): 4 5 6

La mención de cualquier documento citado en la Descripción Detallada de la invención no debe interpretarse como una admisión de que es técnica anterior con respecto a la presente invención.

Original (para PRESENTACIÓN)

0-1: Formulario PCT/RO/134 (SAFE) Indicaciones relativas al microorganismo o microorganismos u otro material biológico depositados (Regla PCT 13bis)

0-1-1: Preparado usando PCT-SAFE [Modo fácil] Versión 3.51.001.176 MT/FOP 20060101/0.20.4rc.2.7

0-2: Solicitud Internacional N.º

0-3: Referencia del expediente del solicitante o del agente P-171&+/CB

1: Las indicaciones que se hacen a continuación se refieren al microorganismo o microorganismos u otro material biológicodepositados referidos en la descripción en:

1-1 1-2: página línea 2 24

1-3: Identificación del depósito

1-3-1 1-3-2: Nombre de la institución depositaria Dirección de la institución depositaria NCIMB NCIMB Ltd. Ferguson Building, Craibstone Estate, Bucksburn, Aberdeen AB21 9YA, Reino Unido

1-3-3 1-3-4: Fecha de depósito Número de registro 7 diciembre de 2005 (07.12.2005) NCIMB 41290

1-4: Indicaciones adicionales Bifidobacterium longum (AHF5340)

1-5: Estados designados para los que se hacen las indicaciones Todas las designaciones

1-6: Suministro de indicaciones por separado Recepción del depósito y prueba de viabilidad de la institución depositaria para proporcionarse a la entrada en la fase nacional segúnsea necesario.

Estas indicaciones se presentarán a la Oficina Internacional más tarde

2: Las indicaciones que se hacen a continuación se refieren al microorganismo o microorganismos u otro material biológicodepositados referidos en la descripción en:

2-1 2-2: Página línea 2 25

2-3: Identificación del depósito

2-3-1 2-3-2: Nombre de la institución depositaria Dirección de la institución depositaria NCIMB NCIMB Ltd. Ferguson Building, CraibstoneEstate, Bucksburn, Aberdeen AB21 9YA, Reino Unido

2-3-3 2-3-4: Fecha de depósito Número de registro 20 octubre de 2005 (20.10.2005) NCIMB 41291

2-4: Indicaciones adicionales Bifidobacterium longum (AHF1231)

2-5: Estados designados para los que se hacen las indicaciones todas las designaciones

Claims

imagen1