SE510753C2 - Användning av en stam av Lactobacillus för tillverkning av ett läkemedel för reduktion av fibrinogenhalten i blod - Google Patents

Description

510 753 2 satsen att fibrinogen patofysiologiskt är relaterat till kardiovaskulära händelser och kan betraktas som en väsentlig kardiovaskulär riskfaktor.

Det finns flera determinanter för fibrinogenhalten vid hälsa och sjukdom, varav några ej kan påverkas såsom ålder, kön och arv. Andra som kan förändras är livsstildeterminanter såsom rökning, stillasittande, diet och stress.

En ökad kolesterolhalt, liksom ett förhöjt blodtryck utgör andra viktiga riskfaktorer för hjärtsjukdomar. Serum- kolesterolhalter avser allmänt en kombination av HDL, lipo- proteiner med hög densitet, och LDL, lipoproteiner med låg densitet. Ökade halter av LDL kolesterol kan vara förknippade med patogenes av arteroskleros under det att högre halter av HDL kolesterol synes minska risken för hjärtsjukdom.

Känd teknik Det finns en stor mängd antilipidemiska medel som förutom en förlängd reduktion av FFA halterna i plasma också reducerar koncentrationen av blodfibrinogen samtidigt som den fibrinolytiska aktiviteten ökas, synbarligen genom en minskning av hepatisk syntes av fibrinogen och antifibrinolysiner, se Pickart, L., Pharmacology 23(5), 271-80, 1981. Som exempel på dessa medel som är biokemiskt och strukturellt olika, kan nämnas allylpropyldisulfid, den aktiva principen från vitlök och lök, acetylsalicylsyra och klofibrat, en fettsyraanalog. De flesta av dessa medel har störande eller allvarliga biverkningar och mer effektiva medel bör eftersträvas.

Det finns motsägelsefulla data vad gäller den potentiellt hypokolesterolemiska effekten av fermenterade mjölkprodukter hos människa, och huruvida ett intag av dessa produkter har någon betydelse för att förhindra koronara hjärtsjukdomar. Gilliland, S.E., et al., Applied and Environ- mental Microbiology, 49(2): 377-381, 1985, har funnit att vissa stammar av Lactobacillus acidophilus, men ej andra, verkar direkt på kolesterol i mag-tarmkanalen och således kan vara fördelaktiga för att reducera serumkolesterolhalterna och därigenom minska risken för koronara hjärtsjukdomar. Man 510 755 3 rapporterar även att vissa av dessa stammar har förmåga att dekonjugera gallsalter. I denna undersökning användes grisar som en djurmodell.

Det finns idag ingen känd substans som sänker fibrino- genhalten hos riskpatienter på ett säkert och selektivt sätt.

Beskrivning av uppfinningen Det har nu överraskande visat sig att oralt administrerade levande Lactobacillus bakterier åstadkommer en minskning av serumfibrinogenhalten. Uppfinningen avser följ- aktligen användning av en stam av Lactobacillus för tillverkning av ett läkemedel som reducerar fibrinogenhalten i blod hos dägg- djur inklusive människa.

Eventuellt medför även den administrerade stammen av Lactobacillus en minskning av serumkolesterolhalten. Upp- finningen avser därför även användning av en stam av Lactobacillus för tillverkning av ett läkemedel för reduktion av fibrinogenhalten liksom kolesterolhalten i blod.

Uppfinningen avser även användning av en stam av Lactobacillus i kombination med en antihyperlipoproteinemiskt aktiv substans för tillverkning av ett läkemedel för reduktion av fibrinogenhalten, liksom kolesterolhalten, i blod. Härigenom kommer det att bli möjligt att använda en lägre dos av det lipoproteinreducerande läkemedlet, vars administration ofta är förenad med allvarliga biverkningar.

Enligt en annan aspekt avser uppfinningen användning av en stam av Lactobacillus för tillverkning av ett läkemedel för profylax och/eller behandling av cirkulatoriska sjukdomar, såsom arteroskleros, hjärt-kärlsjukdomar, koronar hjärtsjukdom, mykardiell infarkt, ischemiska hjärtsjukdomar, stroke.

En föredragen stam av Lactobacillus bör kunna överleva passagen genom magsäcken till mag-tarmkanalen och kunna kolonisera i tarmen. Två faktorer synes vara avgörande för att laktobacillerna kan utöva en ekologisk effekt. För det första är det kapaciteten att kolonisera tarmen, dvs. att överleva i högt antal under en tidsperiod efter den sista administrationen av 510 753 4 levande bakterier. Det andra är förmågan att binda direkt till tarmepitelceller. Detta kan vara en av de faktorer som gynnar kolonisering, men är ej en förutsättning för kolonisering, Förmågan att vidhäfta till epitelet garanterar ej att stammen kan kolonisera.

Exempel på användbara arter av Lactobacillus är L. plantarum och L. rhamnosus. Olika stammar av dessa laktobaciller beskrives i den internationella patentansökningen WO 93/01823, som avser ett förfarande för isolering av stammar av Lactobacillus med förmåga att kunna etableras på human tarm- slemhinna in vivo och också att stanna kvar därefter oral administration under minst 10 dagar. Denna ansökan avser speciellt två nya stammar av Lactobacillus som har deponerats enligt Budapestkonventionen vid DSM - Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH -, Braunschweig, Tyskland, den 2 juli 1991, nämligen L. plantarum 299, DSM nummer 6595, och L. casei ssp. rhamnosus 271, DSM nummer 6594, liksom varianter därav. En föredragen stam är Lactobacillus plantarum 299V, som har deponerats vid DSM den 16 mars 1995 under nummer DSM 9843.

Denna stam liksom andra stammar av L. plantarum beskrives i den internationella patentansökningen WO 96/29083.

Stammen av Lactobacillus kan administreras i varje livsmedel eller farmaceutisk komposition som kan bevara stammens viabilitet i tjocktarmen. Kompositionen enligt uppfinningen kan administreras på varje lämpligt sätt, företrädesvis oralt eller rektalt, exempelvis i form av lavemang. Den kan också administreras enteralt genom en kateter införd i tarmen via magsäcken eller direkt in i tarmarna.

En bärare för stammen av Lactobacillus i den farmaceutiska kompositionen är t.ex. ett fysiologiskt godtagbart substrat som fermenteras av ifrågavarande bakterie, speciellt baserat på stärkelse eller mjölk. Ett lämpligt substrat kan innehålla flytande eller fasta fibrer som ej resorberas i mag- tarmkanalen. Som ett exempel på lämpliga, stärkelsehaltiga substrat kan nämnas cerealier, såsom havre och vete, majs, rotfrukter såsom potatis och vissa frukter såsom gröna bananer. 510 753 5 Ett föredraget substrat för den farmaceutiska kompositionen enligt uppfinningen, som också ger kompositionen ett utmärkt näringsvärde är en näringslösning baserad på havremjöl, exempelvis såsom beskrivits i WO 89/08405. Den fermenterade produkten kan också blandas med ett livsmedel, lämpligen baserat på frukt eller bär, såsom nypon, blåbär, jordgubbar, men också med inerta fasta eller flytande substanser, såsom salin eller vatten.

Behandlingen bör ske en eller flera gånger per dag under en kontinuerlig period. För att ge ett påvisbart resultat bör stammen av Lactobacillus administreras i en daglig dos som ej understiger cirka 10” bakterier.

Biologiskt försök Syftet med denna undersökning var att undersöka effekten av en livsmedelsprodukt (ProViva®) som innehåller Lactobacillus plantarum 299V på halten av serumlipid, speciellt LDL kolesterol, och fibrinogen hos individer med måttligt höjda kolesterolkoncentrationer.

Material Qçh metoder Livsmedelsprodukten ProViva® var en nypondryck som innehåller havre (O,75 g havremjöl, dvs. 0,07 g havrefibrer/100 ml). Produkten innehåller ca 5 x 107 cfu/ml Lactobacillus plantarum 299 v och ca 0,035 g DL-mjölksyra/100 ml. Vid tillverkningen av denna produkt gjordes den fermenterade havren och nypondrycken separat och blandades därefter samman i för- hållandet 5 % (vol/vol) fermenterat havre (som innehåller 18,5 % (vol/vol) havremjöl) och 95 % (vol/vol) nypondryck. Ren nypondryck, bestående av nyponpulver, sackaros, förtjocknings- medel, citronsyra, askorbinsyra och vatten, användes som placebo. De två produkterna tillverkades båda av Skånemejerier (Lunnarp, Sverige).

Undersökningen utfördes på 30 män med en ålder av 42,6 1 2,8 år, som tidigare screenats med avseende på gastro- intestinala symptom, medicinering, tobaksrökning, matvanor och alkoholkonsumtion. Individer med kardiovaskulär sjukdom, 510 753 6 diabetes mellitus och arteriell hypertension uteslöts fràn undersökningen. Kroppsvikt, längd, arteriellt blodtryck och puls antecknades och blod uppsamlades för biokemiska försök. En dubbel-blind studie med placebo utarbetades och deltagarna uppdelades slumpvis i två lika grupper som gavs ProViva® respektive placebo. Egenskaper hos individerna i undersökningen anges i Tabell 1 nedan.

Varje individ konsumerade 200 ml ProViva® eller placebo varje morgon i sex veckor och bevarade samma livsstil som tidigare. Vid slutet av denna period undersöktes deltagarna och blod uppsamlades ånyo.

Halten kolesterol och triglycerid i serum bestämdes under användning av enzymsatser (CHOD-PAP, GPO-PAP). HDL- kolesterol mättes efter utfällning av lipoproteiner innehållande apoB med fosfotungstensyra i närvaro av Mg”. LDL-kolesterol bestämdes efter fällning av LDL med polyvinylsulfat.

Laboratorieförfaranden baserades på testsatser från Boehringer- Mannheim. Glukos mättes med hjälp av glukosoxidas och testsatser från Analco (PAP) och plasmafibrinogen bestämningar skedde enligt metoden enligt Clauss på basis av trombintiden (test- satser från bioMérieux). label; 1 Egenskaper hos individer i de två grupperna Parameter ProViva® Placebo Antal 15 15 Ålder (år) 43,2 i 2,0 42,3 i 3,0 BMI (kg/m5 26,6 i 3,7 25,9 i 2,6 Systoliskt tryck (mm Hg) 133 i 12 125 i 15 Diastoliskt tryck (mm Hg) 88 i 7 83 r 9 510 753 7 I3bgll_2 Biokemiska parametrar hos individerna efter konsumtion av ProViva® eller placebo Parameter ProViva® Placebo mg/dl Före Efter 6 v Före Efter 6v Triglycerider 122 i 61 121 i 52 127 i 42 112 i 32 Kolesterol 233 i 36 216 i 33* 216 i 31 208 i 40 LDL-kolesterol 156 i 36 141 i 34* 140 t 32 134 i 41 HDL-kolesterol 47 i 10 46 i 10 48 i 10 46 i 8 Glukos 110 i 11 112 i 11 104 1 10 109 i 16 Fibrinogen 319 i 82 276 i 58** 320 i 85 307 i 60 * P < 0,01 ** p < 0,001 Bâânliâl Det var ingen signifikant skillnad mellan grupperna vad gäller ålder, body mass index (BMI), systoliskt eller diastoliskt blodtryck (Tabell 1). Resultaten av det biokemiska försöket presenteras i Tabell 2. De ursprungliga koncentra- tionerna av totalt kolesterol, LDL-kolesterol och fibrinogen var màttligt förhöjda i bàda grupperna, medan triglycerid- och HDL- kolesterolvärdena förblev inom normala gränser. Vid detta tillfälle fanns inga statiskt signifikanta skillnader mellan grupperna.

Resultaten uttryckes i mg/dl. Genomsnittliga värden av standardavvikelser beräknades för de biokemiska parametrarna och underkastades en icke parad Students t-test mellan grupperna eller det parade testet inom varje grupp. Signifikansgraden togs som p < 0,05. Efter 6 veckors försök sjönk fibrinogenhalten i ProViva® gruppen från 319 i 82 till 276 i 58 mg/dl (p < 0,001), vilket representerar en reduktion av 13,5 % i förhållande till det ursprungliga värdet. På liknande sätt reducerades halterna av totalt kolesterol och LDL-kolesterol med 7,3 % (233 1 33 till 216 i 31) respektive 9,6 % (156 i 36 till 141 i 34). Halterna av triglycerid, glukos och HDL-kolesterol förblev oförändrade i denna grupp.

I placebo-gruppen kunde nâgra statiskt signifikanta 510 753 8 skillnader mellan ursprungsvärdena och slutvärdena ej iakttagas.

Denna undersökning bekräftar tidigare iakttagelser att livsmedelsprodukter som innehåller vissa stammar av Lactobacillus reducerar halten kolesterol i blod. Det visade sig dock för första gången att en stam av Lactobacillus effektivt kan reducera fibrinogenhalten. Sammanfattningsvis kan därför en komplettering av kosten med Lactobacillus vara fördelaktig för patienter med måttligt höjda kolesterolkoncentrationer för att minska risken för kardiovaskulära sjukdomar.

Det har tidigare bekräftats att fibrinogen utgör en oberoende riskfaktor för ischemisk hjärtsjukdom och att halten därav i blod regleras av genetiska faktorer liksom miljö- faktorer. Upptäckten att ProViva minskar både fibrinogenhalten och kolesterolhalten gör den till en lovande livsmedelsprodukt för att tidigt förhindra ischemisk hjärtsjukdom.

Claims (6)

510 753 PATENTKRAV

1. Användning av en stam av Lactobacillus för tillverkning av ett läkemedel för reduktion av fibrinogenhalten i blod hos däggdjur inklusive människa.

2. Användning av en stam av Lactobacillus i kombination med en antihyperlipoproteinemiskt aktiv substans för till- verkning av ett läkemedel för,reduktion av fibrinogenhalten, liksom kolesterolhalten i blod.

3. Användning enligt krav 1 eller 2, varvid stammen av Lactobacillus även reducerar kolesterolhalten i blod.

4. Användning enligt något av kraven 1-3, för tillverkning av ett läkemedel för profylax och/eller behandling av cirkula- toriska sjukdomar, såsom arteroskleros, hjärt-kärlsjukdomar, koronara hjärtsjukdomar, myokardiell infarkt, ischemisk hjärtsjukdom, stroke.

5. Användning enligt något av kraven 1-4, varvid stammen av Lactobacillus tillhör arten Lactobacillus plantarum eller Lactobacillus rhamnosus.

6. Användning enligt något av kraven 1-5 av Lactobacillus plantarum 299V, deponeringsnummer DSM 9843.