JPH0525055A - 血圧降下剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 ラクトバチルス属乳酸菌の菌体水抽出物より
分離された蛋白質画分を有効成分とする血圧降下剤。 【効果】 実質的に蛋白質のみからなり、製剤化が容易
で安定性が良い。蛋白質画分を分子量分画し、特定分子
量の蛋白質を有効成分として使用することもできるか
ら、抗原抗体反応など、生体に対する副作用を最小限度
に抑えたものを提供することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】この発明は、高血圧症患者の血圧
を低下させるのに有効な薬剤、すなわち血圧降下剤に関
するものである。

【０００２】

【従来の技術】高血圧症には原因がよくわかっていない
本態性高血圧症と、腎、副腎、神経系の疾患に伴う二次
性高血圧症とがあるが、近年は、前者が全体の９０％を
占めている。従来、本態性高血圧の予防と治療には血圧
降下剤がしばしば使われている。しかしながら、従来の
血圧降下剤は、いずれも何らかの副作用を示すという欠
点があった。すなわち、降圧利尿剤として知られている
ものは低カリウム血症や高酸血症を招き易い。また、抹
消血管拡張性降圧剤は赤血球減少、Ｂ−遮断剤は気管支
喘息、ａ−メチルドーパはＧＯＴやＧＰＴの上昇および
溶血性貧血など、それぞれ特有の副作用を示すから、こ
れらの血圧降下剤の服用には慎重を要し、服用量および
服用期間はおのずから制限される。

【０００３】そこで、副作用のない血圧降下剤の出現が
強く望まれており、有望な血圧降下剤として微生物由来
のものが注目されている。既に知られている微生物由来
の血圧降下剤としては、乳酸菌由来の高分子多糖類を有
効成分とするもの（特開昭５９−１９０９２９号）、ク
ロレラ藻体から分離された分子量１万以上の糖蛋白質か
らなるもの（特開昭６０−４５６０３号）、ストレプト
コッカス属細菌の生菌体または死菌体からなるもの（特
開昭６１−２２１１２４号）、乾燥ビール酵母を有効成
分とするもの（特開昭６３−２５５２３４号）、乳酸菌
の熱水抽出物からなるもの（特開昭６３−１３９１２９
号公報，特開平２−２４７１２７号公報）などがある。
最後に引用した乳酸菌の熱水抽出物は、糖、蛋白質、核
酸などからなるが、主たる有効成分は糖画分、特にペプ
チドグリカン画分であると考えられている。

【０００４】また、カゼインおよびその酵素分解物、魚
肉の酵素分解物等、ある種の蛋白質が血圧降下作用を示
すことも知られている。しかしながら、これら蛋白質系
のものは、いずれも数百ミリグラムないし数グラム／kg
-体重 という多量投与をしなければならないのが欠点で
ある。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、安全
性の高い微生物菌体もしくは動植物体に由来する血圧降
下性物質の中から、より降圧作用が強く少量で有効なも
のを見いだし、これを血圧降下剤として提供することに
ある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、ラクトバチル
ス属乳酸菌の菌体水抽出物から分離される蛋白質画分を
有効成分とする血圧降下剤を提供するものである。ここ
で、菌体水抽出物の蛋白質画分とは、菌体水抽出物に核
酸画分除去処理およびペプチドグリカン除去処理を施し
た残渣として得られる、主として蛋白質からなる画分で
あり、好ましくはそれから得られる精製蛋白質画分であ
る。

【０００７】

【作用】ラクトバチルス属乳酸菌の菌体水抽出物は蛋白
質、核酸、糖および灰分から主としてなるが、そこから
単離された蛋白質画分は、血圧降下作用を有することが
知られている蛋白質と比べるとはるかに強力な血圧降下
作用を示す。本発明の血圧降下剤の有効成分である蛋白
質は、ラクトバチルス属乳酸菌の菌体から次のようにし
て分離することができる。原料とするラクトバチルス属
乳酸菌は特に限定されるものではないが、好ましい具体
例を示すと、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス
・アシドフィルス、ラクトバチルス・ロイテリ、ラクト
バチルス・ブルガリクスなどがあり、中でもラクトバチ
ルス・カゼイ ＹＩＴ９０１８株は優れた原料である。
これを任意の培養条件で培養し、常法により集菌する。

【０００８】次に、集められた菌体について常温の水も
しくは熱水を用いる抽出処理を行なって、水抽出物を得
る。熱水抽出法による場合は、菌体を約５０〜１００℃
の熱水中に約１０〜８０mg/mlの濃度で懸濁させて約１
０〜６０分間保持することにより可溶性成分を溶出さ
せ、その後、菌体を分離する。pＨは特に調整する必要
はないが、通常、約６〜８が適当である。なお、水抽出
に先立って、自己消化または細胞壁溶解酵素を利用する
軽い前処理を施してもよい。たとえば、菌体を自己消化
させたのち１００℃で５〜３０分間加熱抽出する方法、
リゾチーム等のN-アセチルグルコサミニダーゼを作用さ
せて細胞壁の基底膜構造を切断してから抽出処理を行う
方法、などが可能である。

【０００９】得られた菌体水抽出物に、核酸除去処理お
よびペプチドグリカン除去処理を施す。核酸は、ヌクレ
アーゼＰ１（ヤマサ醤油株式会社）等の核酸分解酵素で
処理すると低分子化するので、透析によって除去するこ
とができる。その後、陰イオン交換樹脂カラムに流して
蛋白質を吸着させ、カラムを水でよく洗浄してペプチド
グリカン等の非吸着成分を除いてから吸着された蛋白質
を溶出させれば、核酸やペプチドグリカンを含まない蛋
白質画分を得ることができる。上述のようにして精製さ
れた蛋白質画分は、さらにイオン交換、ゲル濾過、逆相
クロマトグラフィー等によってさらに精製すると、蛋白
質としての純度の高いものになり、あるいは特定の分子
量を有するものになる。ラクトバチルス属乳酸菌の菌体
水抽出物から分離される蛋白質画分に含まれる蛋白質
は、その分子量のいかんにかかわらず血圧降下作用を示
すことが確認されており、したがって、上記精製蛋白質
はいずれも本発明の血圧降下剤構成成分として使用する
ことができる。

【００１０】本発明の血圧降下剤を構成する上記蛋白質
画分は水に易溶であるから、本発明の血圧降下剤は容易
に任意の剤形のものとすることができる。また、投与方
法も、経口投与、腹腔内投与、静脈内投与などのいずれ
もが可能であるが、降圧効果が最も確実なのは経口投与
である。経口投与のための錠剤、顆粒剤、散剤、カプセ
ル剤、液体製剤などにする場合は、製剤化にあたり一般
に使用されている結合剤、包含剤、賦形剤、潤滑剤、崩
壊剤、湿潤剤、その他任意の補助成分を、必要に応じて
用いることができる。投与量は１回当たり５〜１０mg/k
gで十分であるが、毒性はほとんど無いので、それ以上
の大量投与も可能である。本血圧降下剤の投与により、
通常２〜３時間後から１０〜３０mmHgの血圧降下が期待
できる。効果は１２〜２４時間以上持続する。連日投与
すればさらに効果的であって、より少ない投与量で顕著
な降圧作用を発揮する。

【００１１】

【実施例】

実施例１ コーンスティープリカー培地（４％グルコース、１４％
コーンスティープリカー、０.１％リン酸一カリウム、
０.１％リン酸二カリウム）４００リットルにラクトバ
チルス・カゼイ ＹＩＴ‐９０１８ (微工研条寄第６６
５号) を接種し、水酸化ナトリウムでpＨを６に制御し
ながら３５℃で２０時間培養した。その後、遠心分離し
て、洗浄菌体１.３kg（乾物換算重量）を得た。この菌
体を５５℃、pＨ７で２時間自己消化させてから１００
℃で１０分間加熱抽出し、抽出液を凍結乾燥して、２３
４ｇの水抽出物を得た。

【００１２】得られた水抽出物５０ｇをpＨ５.５の50mM
酢酸緩衝液５００mlに溶解し、ヌクレアーゼＰ１（ヤマ
サ醤油株式会社）４０００ユニットを添加して５５℃で
５時間反応させた。反応終了後、pＨを９.０に調整し、
遠心分離して上清を得、これを一晩蒸留水中で透析した
のち、pＨ８.５の１０mMギ酸アンモニウム緩衝液で平衡
化した陰イオン交換樹脂Ｑセファロースファーストフロ
ーカラム（２０００ml）に通塔し、蛋白質を吸着させ
た。さらに同じ緩衝液で洗浄し、非吸着性の多糖−グリ
コペプチド複合体等のペプチドグリカン層成分を除去し
た。次いで、吸着された蛋白質をpＨ８.５の1Mギ酸アン
モニウム緩衝液で溶出させ、蒸留水に対して透析したの
ち凍結乾燥して、７.５ｇの蛋白質画分Ａ（蛋白質とし
ての純度９５％）を得た。

【００１３】上記蛋白質画分Ａを自然発症高血圧ラット
（SHR，雄，１群５匹）に１０mg/kg体重 となるよう
に、ゾンデにて経口投与した。対照群には、水道水０.
５ml/100gを同様にして経口投与した。上記投与から３
時間後、６時間後、１２時間後、および２４時間後に、
各群ラットについて尾動脈の収縮期血圧を測定した結果
を図１に示す。

【００１４】実施例２ 実施例１と同様にして乳酸菌菌体水抽出物から分離され
た蛋白質画分７.５ｇをpＨ８.５の10mMギ酸アンモニウ
ム緩衝液２０００mlに溶解し、同緩衝液で平衡化した陰
イオン交換樹脂Ｑセファロースファーストフローカラム
（１０００ml）に通塔し、蛋白質を吸着させた。次い
で、吸着された蛋白質をpＨ７.０の同緩衝液、pＨ５.５
の同緩衝液、およびpＨ５.５の１Mギ酸アンモニウム緩
衝液で順次溶出させて三つの画分に分画したのち蒸留水
に対して透析し、蛋白質画分Ａ１，Ａ２，Ａ３を得た。
次に、上記蛋白質画分Ａ１を10mMギ酸アンモニウム緩衝
液（pＨ５.５）２０００mlに溶解し、同緩衝液で平衡化
した陰イオン交換樹脂Ｑセファロースファーストフロー
カラム（５００ml）に通塔し、蛋白質を吸着させた。次
いで、吸着された蛋白質を２００mM、４００mM、および
１Mのギ酸アンモニウム緩衝液で順次溶出させて三つの
画分に分画したのち蒸留水に対して透析し、蛋白質画分
Ａ１１，Ａ１２，Ａ１３を得た。

【００１５】次に、上記蛋白質画分Ａ１２を10mM酢酸緩
衝液（pＨ５.５）で平衡化したＱセファロースファース
トフローに吸着させ、吸着された蛋白質を２００mM〜４
００mMのギ酸アンモニウム緩衝液で順次溶出させて五つ
の画分に分画したのち蒸留水に対して透析し、蛋白質画
分Ａ１２１，Ａ１２２，Ａ１２３，Ａ１２４，Ａ１２５
を得た。次に、上記蛋白質画分Ａ１２２を逆相ＨＰＬＣ
分取用カラム（Cosmosil 5C-18P）を用いて、０.０５％
ＴＦＡをベースに流し、６０分で５０％アセトニトリル
となるように５ml／分の流速でリニアグラジエント溶出
を行ない、透析して、三つの蛋白質画分Ａ１２２１，Ａ
１２２２，Ａ１２２３に分けた。

【００１６】次に、上記蛋白質画分Ａ１２２１を逆相Ｈ
ＰＬＣ分取用カラム（Cosmosil 5C-18P）を用いて、０.
０５％ＴＦＡをベースに流し、６０分で５０％アセトニ
トリルとなるように５ml／分の流速でリニアグラジエン
ト溶出を行なった。溶出のピークを分取し、透析して、
精製蛋白質ＡＰを得た。この精製蛋白質は、蛋白質とし
ての純度は９５％以上（キャピラリー電気泳動装置によ
る）、分子量（ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動に
よる）は約５０００であった。上記各蛋白質画分につい
て、実施例１の場合と同様にして血圧降下作用を調べ
た。その結果、すべての蛋白質画分について、危険率５
％で有意な血圧降下を生じさせることを確認した。

【００１７】

【発明の効果】本発明の血圧降下剤の有効成分はヨーグ
ルト等を製造するのに普通に使われている乳酸菌の菌体
成分であり且つ蛋白質であるから、安全性が高く、長期
投与による副作用の心配もない。しかも、従来の蛋白質
系血圧降下剤と比べるとはるかに少ない投与量で有効で
あるから、服用も容易である。本発明の血圧降下剤は、
従来の乳酸菌菌体熱水抽出物系血圧降下剤と比べても多
くの利点を有する。すなわち実質的に蛋白質のみからな
ることにより製剤化が容易であり、安定性のよい製剤を
提供することができる。また、必要に応じて蛋白質画分
を分子量分画し、特定分子量の蛋白質を有効成分として
使用することができるから、抗原抗体反応など、生体に
対する副作用を最小限度に抑えたものを提供することが
できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 実施例１による蛋白質画分Ａの血圧降下作用
を示すグラフ。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 渡辺 常一 東京都港区東新橋１−１−19株式会社ヤク ルト本社内 (72)発明者 横倉 輝男 東京都港区東新橋１−１−19株式会社ヤク ルト本社内

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 【請求項１】 ラクトバチルス属乳酸菌の菌体水抽出物
   より分離された蛋白質画分を有効成分とする血圧降下
   剤。