JPH08208512A - 血栓形成阻害剤 - Google Patents
血栓形成阻害剤Info
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- JPH08208512A JPH08208512A JP7039083A JP3908395A JPH08208512A JP H08208512 A JPH08208512 A JP H08208512A JP 7039083 A JP7039083 A JP 7039083A JP 3908395 A JP3908395 A JP 3908395A JP H08208512 A JPH08208512 A JP H08208512A
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- plasmin
- fibrinogen
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 血栓形成を阻害できる薬剤を提供する。
【構成】 納豆菌の生産する線溶酵素を有効成分とする
血栓形成阻害剤、血栓再閉塞阻害剤またはフィブリノー
ゲン限定分解剤。 【効果】 本発明の酵素剤は経口投与により腸管から吸
収させることができ、血中のフィブリノーゲンを限定分
解してフィブリン網の形成を妨げ、血栓の形成や再閉塞
を阻害することができる。
血栓形成阻害剤、血栓再閉塞阻害剤またはフィブリノー
ゲン限定分解剤。 【効果】 本発明の酵素剤は経口投与により腸管から吸
収させることができ、血中のフィブリノーゲンを限定分
解してフィブリン網の形成を妨げ、血栓の形成や再閉塞
を阻害することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は納豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ Ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｎａｔｔｏ）の生産する線溶酵
素を有効成分とする血栓形成もしくは血栓再閉塞阻害剤
およびフィブリノーゲン限定分解剤に関する。
ｓ Ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｎａｔｔｏ）の生産する線溶酵
素を有効成分とする血栓形成もしくは血栓再閉塞阻害剤
およびフィブリノーゲン限定分解剤に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】血栓
症により引き起こされる疾病は、心筋梗塞、肺閉塞症な
ど生命にかかわるものが多く、常に死因の上位を占めて
いる。
症により引き起こされる疾病は、心筋梗塞、肺閉塞症な
ど生命にかかわるものが多く、常に死因の上位を占めて
いる。
【０００３】血栓の形成にはフィブリンが重要な役割を
演じるが、フィブリンはフィブリノーゲンからトロンビ
ンの作用によって生成する。そしてフィブリンは、プラ
スミノーゲンにプラスミノーゲンアクチベーターが作用
して生成するプラスミンによって分解することが知られ
ている。
演じるが、フィブリンはフィブリノーゲンからトロンビ
ンの作用によって生成する。そしてフィブリンは、プラ
スミノーゲンにプラスミノーゲンアクチベーターが作用
して生成するプラスミンによって分解することが知られ
ている。
【０００４】血栓症の治療には、ウロキナーゼ（以下Ｕ
Ｋと省略する）、ストレプトキナーゼ（以下ＳＫと省略
する）、組織型プラスミノーゲンアクティベータ（以下
ｔＰＡと省略する）等の血栓溶解剤が用いられている。
これらはいずれもプラスミノーゲンアクチベータとして
プラスミノーゲンに作用して後者をプラスミンに変換
し、その生成したプラスミンによってフィブリンを分解
して血栓を溶解するものである。しかしながら、これら
の薬剤によって血栓が完全に除去されることは殆どな
く、常に再閉塞する危険性がある。
Ｋと省略する）、ストレプトキナーゼ（以下ＳＫと省略
する）、組織型プラスミノーゲンアクティベータ（以下
ｔＰＡと省略する）等の血栓溶解剤が用いられている。
これらはいずれもプラスミノーゲンアクチベータとして
プラスミノーゲンに作用して後者をプラスミンに変換
し、その生成したプラスミンによってフィブリンを分解
して血栓を溶解するものである。しかしながら、これら
の薬剤によって血栓が完全に除去されることは殆どな
く、常に再閉塞する危険性がある。
【０００５】現在は、この再閉塞を阻害するためにシロ
スタゾール、ジヒドロエルゴトキシン・メシレート、テ
ィクロピディン・ハイドロクロライドなどの血小板凝集
阻害剤が臨床や研究で用いられている。
スタゾール、ジヒドロエルゴトキシン・メシレート、テ
ィクロピディン・ハイドロクロライドなどの血小板凝集
阻害剤が臨床や研究で用いられている。
【０００６】これらの再閉塞阻害剤は血小板の凝集もし
くは活性化を阻害し、それによって以下に続く血栓形成
の過程（活性化血小板形質膜上でカルシウムイオン存在
下、血液凝固因子ＶａおよびＸａによりプロトロンビン
を活性化し、生じたトロンビンによりフィブリン網が形
成する過程）を阻害しようとするものである。しかし、
毛細血管の様に細い血管はともかく、他の血管は血小板
が凝集して形成された白色血栓のみで閉塞することは希
で、ほとんどの場合、血栓は白色血栓およびフィブリン
がフィブリン網を形成する際に赤血球を取り込んで形成
した赤色血栓の混合血栓であって、血管壁付近は白色血
栓、血栓中央部は赤色血栓で占められている。この様
に、ほとんどの血栓は、フィブリン網の形成により完全
に閉塞するのである。したがって、血栓溶解剤で血栓が
完全に除去された場合はともかく、血管壁付近の白色血
栓が残った場合、この血栓を構成している血小板は活性
化していることから、この付近で生じたトロンビンによ
りフィブリン網が構成され、その結果血栓が再形成さ
れ、閉塞するに至る。
くは活性化を阻害し、それによって以下に続く血栓形成
の過程（活性化血小板形質膜上でカルシウムイオン存在
下、血液凝固因子ＶａおよびＸａによりプロトロンビン
を活性化し、生じたトロンビンによりフィブリン網が形
成する過程）を阻害しようとするものである。しかし、
毛細血管の様に細い血管はともかく、他の血管は血小板
が凝集して形成された白色血栓のみで閉塞することは希
で、ほとんどの場合、血栓は白色血栓およびフィブリン
がフィブリン網を形成する際に赤血球を取り込んで形成
した赤色血栓の混合血栓であって、血管壁付近は白色血
栓、血栓中央部は赤色血栓で占められている。この様
に、ほとんどの血栓は、フィブリン網の形成により完全
に閉塞するのである。したがって、血栓溶解剤で血栓が
完全に除去された場合はともかく、血管壁付近の白色血
栓が残った場合、この血栓を構成している血小板は活性
化していることから、この付近で生じたトロンビンによ
りフィブリン網が構成され、その結果血栓が再形成さ
れ、閉塞するに至る。
【０００７】一方、納豆菌の生産する線溶酵素の精製
法、物理的化学的性質および酵素的性状、フィブリンの
分解および血栓の溶解 、ならびにアミノ酸配列は、特
開昭６１−１６２１８４号公報、特開平３−１６８０８
２号公報、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．
Ｃｏｍｍｕｎ．，１９７．１３４０−１３４７（１９９
３）および特開平６−１５３９７７号公報に発表されて
いる。また、それは平谷らにより経口用血栓溶解剤とし
ても提案されている（特開平１−１８０８３４号公報）
が、これらの発表はすでに形成された血栓の溶解に関す
るもので、血栓の形成や再閉塞の阻害作用については述
べていない。
法、物理的化学的性質および酵素的性状、フィブリンの
分解および血栓の溶解 、ならびにアミノ酸配列は、特
開昭６１−１６２１８４号公報、特開平３−１６８０８
２号公報、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．
Ｃｏｍｍｕｎ．，１９７．１３４０−１３４７（１９９
３）および特開平６−１５３９７７号公報に発表されて
いる。また、それは平谷らにより経口用血栓溶解剤とし
ても提案されている（特開平１−１８０８３４号公報）
が、これらの発表はすでに形成された血栓の溶解に関す
るもので、血栓の形成や再閉塞の阻害作用については述
べていない。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らはすでに形成
された血栓を溶解するのではなくて、血栓の形成や再閉
塞を未然に防止することができないかと考え、研究を重
ねた結果、納豆菌の生産する線溶酵素がその線溶活性と
は別に、意外にもフィブリノーゲンを限定分解して低分
子化する作用を有し、ひいてはフィブリンの生成阻害作
用ならびに、血漿凝固時間の延長作用すなわちフィブリ
ン網形成阻害作用を有することを発見した。これはこの
酵素が血栓形成や血栓の再閉塞を阻害する作用を有する
ことを示すものである。 本発明はこの新知見に基づく
もので、納豆菌の生産する線溶酵素を有効成分としてな
る血栓形成阻害剤、血栓再閉塞阻害剤およびフィブリノ
ーゲン限定分解剤に関する。
された血栓を溶解するのではなくて、血栓の形成や再閉
塞を未然に防止することができないかと考え、研究を重
ねた結果、納豆菌の生産する線溶酵素がその線溶活性と
は別に、意外にもフィブリノーゲンを限定分解して低分
子化する作用を有し、ひいてはフィブリンの生成阻害作
用ならびに、血漿凝固時間の延長作用すなわちフィブリ
ン網形成阻害作用を有することを発見した。これはこの
酵素が血栓形成や血栓の再閉塞を阻害する作用を有する
ことを示すものである。 本発明はこの新知見に基づく
もので、納豆菌の生産する線溶酵素を有効成分としてな
る血栓形成阻害剤、血栓再閉塞阻害剤およびフィブリノ
ーゲン限定分解剤に関する。
【０００９】納豆菌の生産する線溶酵素についてはその
抽出、精製法、性状、物性および用途が前記数種の文献
に発表され、多くの場合ナットウキナーゼと呼ばれてい
るので、本明細書においても以下この酵素をナットウキ
ナーゼと略称する。
抽出、精製法、性状、物性および用途が前記数種の文献
に発表され、多くの場合ナットウキナーゼと呼ばれてい
るので、本明細書においても以下この酵素をナットウキ
ナーゼと略称する。
【００１０】本発明に用いるナットウキナーゼは粗製物
でも精製物でもよい。ナットウキナーゼは納豆または納
豆菌の培養物に含まれ、中性もしくは弱塩基性の水また
は塩化ナトリウムや塩化カリウムなどを含む、リン酸緩
衝液（ｐＨ６〜８）、トリス緩衝液（ｐＨ７〜９）を用
いて抽出することができる。抽出液中のナットウキナー
ゼはメタノール、エタノールのような低級脂肪族アルコ
ールを６０〜８０ｖ／ｖ％となるように、または硫酸ア
ンモニウムを４０〜６０ｗ／ｖ％となるように、加えれ
ば沈澱させることができる。この沈澱中のナットウキナ
ーゼはブチルセファローズR 、アルキルセファローズR
（ファルマシア社）のような疏水性担体やモノーＱR 、
Ｑセファローズ・ファスト・フロウのような強塩性陽イ
オン交換体に吸着および溶出させるクロマトグラフィで
精製することができ、あるいは陰イオン交換体に不純物
を吸着、除去して精製できる。さらにセファクリルＳ−
２００R やセファデックスＱR （ファルマシア社）のよ
うな担体を用いるゲル濾過クロマトグラフィにより精製
することができる。これらのクロマトグラフィは前記の
発表された方法またはそれに準じた方法の１または２以
上を用いることができる。
でも精製物でもよい。ナットウキナーゼは納豆または納
豆菌の培養物に含まれ、中性もしくは弱塩基性の水また
は塩化ナトリウムや塩化カリウムなどを含む、リン酸緩
衝液（ｐＨ６〜８）、トリス緩衝液（ｐＨ７〜９）を用
いて抽出することができる。抽出液中のナットウキナー
ゼはメタノール、エタノールのような低級脂肪族アルコ
ールを６０〜８０ｖ／ｖ％となるように、または硫酸ア
ンモニウムを４０〜６０ｗ／ｖ％となるように、加えれ
ば沈澱させることができる。この沈澱中のナットウキナ
ーゼはブチルセファローズR 、アルキルセファローズR
（ファルマシア社）のような疏水性担体やモノーＱR 、
Ｑセファローズ・ファスト・フロウのような強塩性陽イ
オン交換体に吸着および溶出させるクロマトグラフィで
精製することができ、あるいは陰イオン交換体に不純物
を吸着、除去して精製できる。さらにセファクリルＳ−
２００R やセファデックスＱR （ファルマシア社）のよ
うな担体を用いるゲル濾過クロマトグラフィにより精製
することができる。これらのクロマトグラフィは前記の
発表された方法またはそれに準じた方法の１または２以
上を用いることができる。
【００１１】かくして種々の純度のナットウキナーゼが
得られるが、有効成分の一定量を確実に投与するために
は、なるべく高純度のものを用いるのが好ましい。
得られるが、有効成分の一定量を確実に投与するために
は、なるべく高純度のものを用いるのが好ましい。
【００１２】本発明者らの研究により、経口投与された
ナットウキナーゼは腸より吸収され血中のフィブリノー
ゲンを限定分解することにより血液凝固系において抗凝
固作用を示すことがわかった（実施例参照）。
ナットウキナーゼは腸より吸収され血中のフィブリノー
ゲンを限定分解することにより血液凝固系において抗凝
固作用を示すことがわかった（実施例参照）。
【００１３】フィブリノーゲンが限定分解されることに
より低分子化されたフィブリノーゲン分解産物が血中に
生成するとそれがシグナルとなつて、フィブリノーゲン
が直ちに肝臓で合成される。したがって、ナットウキナ
ーゼの作用により一時的に血中のフィブリノーゲンが減
少することはあっても出血傾向になることはない。また
ナットウキナーゼは食用に供されている納豆に含有され
るもので経口投与による毒性はほとんど認められない。
より低分子化されたフィブリノーゲン分解産物が血中に
生成するとそれがシグナルとなつて、フィブリノーゲン
が直ちに肝臓で合成される。したがって、ナットウキナ
ーゼの作用により一時的に血中のフィブリノーゲンが減
少することはあっても出血傾向になることはない。また
ナットウキナーゼは食用に供されている納豆に含有され
るもので経口投与による毒性はほとんど認められない。
【００１４】本発明の酵素剤は経口投与に適しているが
胃酸によりナットウキナーゼが分解することを防ぐた
め、腸溶製剤の形で投与することが好ましい。腸溶製剤
は、酵素含有粉末、顆粒または溶液を腸溶カプセルに充
填し、あるいは顆粒や錠剤をエンテリックコーティング
することで調製しうる。本発明の酵素剤は、血中フィブ
リノーゲンを分解し、血栓の形成もしくは一旦溶解した
血栓の再閉塞を防ぐために精製物として成人一日あた
り、１〜３ｇを一回もしくは数回経口投与することがで
きる。
胃酸によりナットウキナーゼが分解することを防ぐた
め、腸溶製剤の形で投与することが好ましい。腸溶製剤
は、酵素含有粉末、顆粒または溶液を腸溶カプセルに充
填し、あるいは顆粒や錠剤をエンテリックコーティング
することで調製しうる。本発明の酵素剤は、血中フィブ
リノーゲンを分解し、血栓の形成もしくは一旦溶解した
血栓の再閉塞を防ぐために精製物として成人一日あた
り、１〜３ｇを一回もしくは数回経口投与することがで
きる。
【００１５】
【作用】本発明の酵素剤に含有されるナットウキナーゼ
は経口投与により腸管より吸収され、血中の血液凝固因
子であるフィブリノーゲンを限定分解することによりフ
ィブリン網の形成を抑制し抗血液凝固作用、抗血栓形成
作用を示す。
は経口投与により腸管より吸収され、血中の血液凝固因
子であるフィブリノーゲンを限定分解することによりフ
ィブリン網の形成を抑制し抗血液凝固作用、抗血栓形成
作用を示す。
【００１６】
【実施例】以下に参考例、実施例および実験例の形で本
発明をさらに説明するが、本発明はこれらによって限定
されるものではない。
発明をさらに説明するが、本発明はこれらによって限定
されるものではない。
【００１７】参考例１（抽出ナットウキナーゼ精製物の
製造） 精製操作の全過程を４℃で行う。納豆２０ｋｇを２ｍＭ
塩化カルシウム含有の０．９％塩化ナトリウム溶液２０
リットル中で攪拌することでナットウキナーゼを抽出す
る。抽出液を金網で濾過し、濾液を遠心分離機（ＴＯＭ
Ｙ ＲＳ−２０，ＴＯＭＹ，東京）で７，０００ｒｐｍ
４０分間遠心して上澄液を得、これに固体硫酸アンモ
ニウムを加えて２５％飽和液とし、混合物を一夜放置し
た。これを７，０００ｒｐｍ４０分間遠心して上澄液を
得、２ｍＭ塩化カルシウムと２５％飽和硫酸アンモニウ
ムを含む１０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）で平
衡化したブチル・トヨパール（１０×１５ｃｍ）のカラ
ムにアプライした後、２５−０％飽和硫酸アンモニウム
の直線濃度勾配により溶出した。合成基質Ｓｕｃ−Ａｌ
ａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＰＮＡに対する水解活性
の画分は固体硫酸アンモニウムを加えて２５％飽和硫酸
アンモニウム溶液とした。これを遠心して得られた上澄
液に固体硫酸アンモニウムを加えて６０％飽和硫酸アン
モニウム溶液とし、一夜放置した。次いで遠心して得た
沈澱を１ｍＭ塩化カルシウム含有の１ｍＭビス・トリス
酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）に溶解し、同じ緩衝液に対し
て一夜透析した。透析内液を１ｍＭビス・トリス酢酸緩
衝液（ｐＨ６．０）で平衡化したＣＭ−トヨパールのカ
ラム（２．８×３２ｃｍ）に添加し、０−０．２Ｍ塩化
ナトリウムの直線濃度勾配で溶出した。上記の水解活性
を有する画分を集め、６０％飽和となる様に硫酸アンモ
ニウムを添加することで本画分に含まれる活性分画を沈
澱させた。沈澱を０．１Ｍ炭酸水素アンモニウム（ｐＨ
８．０）に溶解し、同じ緩衝液で平衡化したセファデッ
クスＧ−５０（２．８×９０ｃｍ）のカラムを用いてゲ
ル濾過した。ここで得られた単一のピークを滅菌蒸留水
で一夜透析し、凍結乾燥した。
製造） 精製操作の全過程を４℃で行う。納豆２０ｋｇを２ｍＭ
塩化カルシウム含有の０．９％塩化ナトリウム溶液２０
リットル中で攪拌することでナットウキナーゼを抽出す
る。抽出液を金網で濾過し、濾液を遠心分離機（ＴＯＭ
Ｙ ＲＳ−２０，ＴＯＭＹ，東京）で７，０００ｒｐｍ
４０分間遠心して上澄液を得、これに固体硫酸アンモ
ニウムを加えて２５％飽和液とし、混合物を一夜放置し
た。これを７，０００ｒｐｍ４０分間遠心して上澄液を
得、２ｍＭ塩化カルシウムと２５％飽和硫酸アンモニウ
ムを含む１０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）で平
衡化したブチル・トヨパール（１０×１５ｃｍ）のカラ
ムにアプライした後、２５−０％飽和硫酸アンモニウム
の直線濃度勾配により溶出した。合成基質Ｓｕｃ−Ａｌ
ａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＰＮＡに対する水解活性
の画分は固体硫酸アンモニウムを加えて２５％飽和硫酸
アンモニウム溶液とした。これを遠心して得られた上澄
液に固体硫酸アンモニウムを加えて６０％飽和硫酸アン
モニウム溶液とし、一夜放置した。次いで遠心して得た
沈澱を１ｍＭ塩化カルシウム含有の１ｍＭビス・トリス
酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）に溶解し、同じ緩衝液に対し
て一夜透析した。透析内液を１ｍＭビス・トリス酢酸緩
衝液（ｐＨ６．０）で平衡化したＣＭ−トヨパールのカ
ラム（２．８×３２ｃｍ）に添加し、０−０．２Ｍ塩化
ナトリウムの直線濃度勾配で溶出した。上記の水解活性
を有する画分を集め、６０％飽和となる様に硫酸アンモ
ニウムを添加することで本画分に含まれる活性分画を沈
澱させた。沈澱を０．１Ｍ炭酸水素アンモニウム（ｐＨ
８．０）に溶解し、同じ緩衝液で平衡化したセファデッ
クスＧ−５０（２．８×９０ｃｍ）のカラムを用いてゲ
ル濾過した。ここで得られた単一のピークを滅菌蒸留水
で一夜透析し、凍結乾燥した。
【００１８】参考例２（培養ナットウキナーゼ精製物の
製造） ２％フラクトース、１．５％イソペプトン（Ｄｉｆｃｏ
Ｌａｂ．）、０．２％酵母エキス、０．１％リン酸二
水素カリウム、０．３％リン酸水素二カリウム、０．０
５％硫酸マグネシウム・５水和物、０．０２％塩化カル
シウム・２水和物、ｐＨ７．０の組成に終濃度２％のマ
ルトースを加えた培地１００ｍｌを５００ｍｌ容三角フ
ラスコに入れ、納豆菌であるバチルス・ズブチリスＢ−
４０７株（微工研条寄４０４３号）を接種して、０℃で
１８時間種母培養した。種母培養液５０ｍｌ（２％）を
０．１％カラリンを含む同じ組成の培地２．５リットル
の入った５リットル容発酵槽に加え、回転数８００ｒｐ
ｍ、３０℃で毎分２．５リットルの空気を送りながら、
７０時間通気攪拌培養した。その培養上清に終濃度１．
５Ｍとなるように硫安を加え、あらかじめ１．５Ｍ硫
安、１０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．２で平衡化して
おいたブチル・セファロース４ファーストフロー（ファ
ルマシア）に吸着させた。同緩衝液で洗浄した後、０．
５Ｍ硫安、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２でナ
ットウキナーゼを段階溶出させ、合成基質Ｓｕｃ−Ａｌ
ａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡに対する水解活性
の画分を採取した。セファデックスＧ−２５（ファルマ
シア）により、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２
に緩衝液を交換したのち、Ｓ−セファロース ファース
トフロー（ファルマシア）に吸着させ、同緩衝液で洗浄
後、０．１Ｍ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウ
ム、ｐＨ７．２で段階溶出させ、同様に活性画分を採取
した。最後に、０．１２Ｍ塩化ナトリウム、１０ｍＭリ
ン酸ナトリウム、ｐＨ７．５で平衡化したセファクリル
Ｓ−２００ＨＲ（ファルマシアにてゲル濾過を行い単一
のピークを示す活性画分として精製ナットウキナーゼを
得た。
製造） ２％フラクトース、１．５％イソペプトン（Ｄｉｆｃｏ
Ｌａｂ．）、０．２％酵母エキス、０．１％リン酸二
水素カリウム、０．３％リン酸水素二カリウム、０．０
５％硫酸マグネシウム・５水和物、０．０２％塩化カル
シウム・２水和物、ｐＨ７．０の組成に終濃度２％のマ
ルトースを加えた培地１００ｍｌを５００ｍｌ容三角フ
ラスコに入れ、納豆菌であるバチルス・ズブチリスＢ−
４０７株（微工研条寄４０４３号）を接種して、０℃で
１８時間種母培養した。種母培養液５０ｍｌ（２％）を
０．１％カラリンを含む同じ組成の培地２．５リットル
の入った５リットル容発酵槽に加え、回転数８００ｒｐ
ｍ、３０℃で毎分２．５リットルの空気を送りながら、
７０時間通気攪拌培養した。その培養上清に終濃度１．
５Ｍとなるように硫安を加え、あらかじめ１．５Ｍ硫
安、１０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．２で平衡化して
おいたブチル・セファロース４ファーストフロー（ファ
ルマシア）に吸着させた。同緩衝液で洗浄した後、０．
５Ｍ硫安、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２でナ
ットウキナーゼを段階溶出させ、合成基質Ｓｕｃ−Ａｌ
ａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡに対する水解活性
の画分を採取した。セファデックスＧ−２５（ファルマ
シア）により、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２
に緩衝液を交換したのち、Ｓ−セファロース ファース
トフロー（ファルマシア）に吸着させ、同緩衝液で洗浄
後、０．１Ｍ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウ
ム、ｐＨ７．２で段階溶出させ、同様に活性画分を採取
した。最後に、０．１２Ｍ塩化ナトリウム、１０ｍＭリ
ン酸ナトリウム、ｐＨ７．５で平衡化したセファクリル
Ｓ−２００ＨＲ（ファルマシアにてゲル濾過を行い単一
のピークを示す活性画分として精製ナットウキナーゼを
得た。
【００１９】実験例１（抗ナットウキナーゼ抗体の作
製） ナットウキナーゼに対するポリクローナル抗体を以下の
様にして得た。ナットウキナーゼ（１ｍｇ／ｍｌ）２０
０μｌとＣｏｍｐｌｅｔｅ ａｄｊｕｖａｎｔ（ＤＩＦ
ＣＯ）２００μｌを混合し乳状とした。これをウサギの
四肢の付け根に皮下投与した。３週間後、ナットウキナ
ーゼ（１ｍｇ／ｍｌ）２００μｌとＩｎｃｏｍｐｌｅｔ
ｅ ａｄｊｕｖａｎｔ（ＤＩＦＣＯ）２００μｌを混合
し乳状としたものを同様に追加免疫した（追加免疫は１
週間間隔で２回行った）。追加免疫終了後、７日目に、
全採血し抗血清を得た。本抗血清は５６℃で３０分間非
動化した後、４０％硫安飽和で得た沈澱画分を２０ｍＭ
リン酸緩衝液で溶解し同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−
セルロース（ファルマシア）のカラムにかけて分画し
た。ここで得られる素通り画分（２８０ｎｍで０．５以
上の吸光度を示す画分）をＩｇＧ画分として得た。
製） ナットウキナーゼに対するポリクローナル抗体を以下の
様にして得た。ナットウキナーゼ（１ｍｇ／ｍｌ）２０
０μｌとＣｏｍｐｌｅｔｅ ａｄｊｕｖａｎｔ（ＤＩＦ
ＣＯ）２００μｌを混合し乳状とした。これをウサギの
四肢の付け根に皮下投与した。３週間後、ナットウキナ
ーゼ（１ｍｇ／ｍｌ）２００μｌとＩｎｃｏｍｐｌｅｔ
ｅ ａｄｊｕｖａｎｔ（ＤＩＦＣＯ）２００μｌを混合
し乳状としたものを同様に追加免疫した（追加免疫は１
週間間隔で２回行った）。追加免疫終了後、７日目に、
全採血し抗血清を得た。本抗血清は５６℃で３０分間非
動化した後、４０％硫安飽和で得た沈澱画分を２０ｍＭ
リン酸緩衝液で溶解し同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−
セルロース（ファルマシア）のカラムにかけて分画し
た。ここで得られる素通り画分（２８０ｎｍで０．５以
上の吸光度を示す画分）をＩｇＧ画分として得た。
【００２０】実験例２（抗ラットフィブリノーゲン抗体
の作製） ラットフィブリノーゲンに対するポリクローナル抗体を
以下の様にして得た。ラットフィブリノーゲン（Ｓｉｇ
ｍａ）２００μｌ（１ｍｇ／ｍｌ）とＣｏｍｐｌｅｔｅ
ａｄｊｕｖａｎｔ ２００μｌを混合し乳状とした。
これをウサギの四肢の付け根に皮下投与した。３週間
後、ラットフィブリノーゲン（１ｍｇ／ｍｌ）２００μ
ｌとＩｎｃｏｍｐｌｅｔｅ ａｄｊｕｖａｎｔ ２００
μｌを混合し乳状としたものを同様に追加免疫した（追
加免疫は１週間間隔で２回行った）。追加免疫終了後７
日目に、全採血し抗血清を得た。本抗血清は５６℃で３
０分間非動化した後、４０％硫安飽和で得た沈澱画分を
２０ｍＭリン酸緩衝液で溶解し同緩衝液で平衡化したＤ
ＥＡＥ−セルロースにかけて分画した。ここで得られる
素通り画分（２８０ｎｍで０．５以上の吸光度を示す画
分）をＩｇＧ画分として得た。
の作製） ラットフィブリノーゲンに対するポリクローナル抗体を
以下の様にして得た。ラットフィブリノーゲン（Ｓｉｇ
ｍａ）２００μｌ（１ｍｇ／ｍｌ）とＣｏｍｐｌｅｔｅ
ａｄｊｕｖａｎｔ ２００μｌを混合し乳状とした。
これをウサギの四肢の付け根に皮下投与した。３週間
後、ラットフィブリノーゲン（１ｍｇ／ｍｌ）２００μ
ｌとＩｎｃｏｍｐｌｅｔｅ ａｄｊｕｖａｎｔ ２００
μｌを混合し乳状としたものを同様に追加免疫した（追
加免疫は１週間間隔で２回行った）。追加免疫終了後７
日目に、全採血し抗血清を得た。本抗血清は５６℃で３
０分間非動化した後、４０％硫安飽和で得た沈澱画分を
２０ｍＭリン酸緩衝液で溶解し同緩衝液で平衡化したＤ
ＥＡＥ−セルロースにかけて分画した。ここで得られる
素通り画分（２８０ｎｍで０．５以上の吸光度を示す画
分）をＩｇＧ画分として得た。
【００２１】実施例１ ヒトフィブリノーゲン（１ｍｇ／ｍｌ）を参考例１にお
いて得られた抽出ナットウキナーゼ精製物（５μｇ／ｍ
ｌ）を０．１５Ｍ塩化ナトリウムを含む５０ｍＭトリス
塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解し、３７℃で０，１，
３，２０分間反応させた後、０．２ｍＭフェニルメチル
スルフォニルフルオリドで反応を停止させた。この様に
して得た試料をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳
動に供した後、ザルトブロットII−Ｓ（ザルトリウス）
を用いてＰＶＤＦ膜（第一化学薬品）にゲル上のタンパ
クを転写した。このＰＶＤＦ膜を０．９％の塩化ナトリ
ウムを含む５０ｍＭトリス塩酸緩衝液ｐＨ７．４（以下
ＴＢＳと省略する）で洗浄した後、ブロッキング溶液
（１％スキム・ミルクを含むＴＢＳ）と３０分間反応さ
せた後、ブロッキング溶液で１，０００倍に希釈した抗
ヒトフィブリノーゲン分解産物フラグメントＤ抗体（Ｓ
ｅｒｂｉｏ）と６０分間反応した。これを０．０５％
Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＴＢＳ（以下Ｔｗｅｅｎ−ＴＢ
Ｓと省略する）で洗浄した後、Ｔｗｅｅｎ−ＴＢＳで
３，０００倍に希釈した抗マウスＩｇＧ（ＢｉｏＭａｒ
ｋｅｒ）と３０分間反応し、ＴＢＳで洗浄した。この
後、ＰＶＤＦ膜を０．０１５％過酸化水素存在下、４−
クロロナフトール（０．６ｍｇ／ｍｌ）と２０分間反応
した。対照にはプラスミンを用いた（反応は１０ｍＭ
ε−アミノカプロン酸で停止した）。この結果、ナット
ウキナーゼによるフィブリノーゲンの分解過程は、プラ
スミンのそれと類似していた（図１）。このことより、
ナットウキナーゼはフィブリノーゲンを限定分解するこ
とがわかった。
いて得られた抽出ナットウキナーゼ精製物（５μｇ／ｍ
ｌ）を０．１５Ｍ塩化ナトリウムを含む５０ｍＭトリス
塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解し、３７℃で０，１，
３，２０分間反応させた後、０．２ｍＭフェニルメチル
スルフォニルフルオリドで反応を停止させた。この様に
して得た試料をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳
動に供した後、ザルトブロットII−Ｓ（ザルトリウス）
を用いてＰＶＤＦ膜（第一化学薬品）にゲル上のタンパ
クを転写した。このＰＶＤＦ膜を０．９％の塩化ナトリ
ウムを含む５０ｍＭトリス塩酸緩衝液ｐＨ７．４（以下
ＴＢＳと省略する）で洗浄した後、ブロッキング溶液
（１％スキム・ミルクを含むＴＢＳ）と３０分間反応さ
せた後、ブロッキング溶液で１，０００倍に希釈した抗
ヒトフィブリノーゲン分解産物フラグメントＤ抗体（Ｓ
ｅｒｂｉｏ）と６０分間反応した。これを０．０５％
Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＴＢＳ（以下Ｔｗｅｅｎ−ＴＢ
Ｓと省略する）で洗浄した後、Ｔｗｅｅｎ−ＴＢＳで
３，０００倍に希釈した抗マウスＩｇＧ（ＢｉｏＭａｒ
ｋｅｒ）と３０分間反応し、ＴＢＳで洗浄した。この
後、ＰＶＤＦ膜を０．０１５％過酸化水素存在下、４−
クロロナフトール（０．６ｍｇ／ｍｌ）と２０分間反応
した。対照にはプラスミンを用いた（反応は１０ｍＭ
ε−アミノカプロン酸で停止した）。この結果、ナット
ウキナーゼによるフィブリノーゲンの分解過程は、プラ
スミンのそれと類似していた（図１）。このことより、
ナットウキナーゼはフィブリノーゲンを限定分解するこ
とがわかった。
【００２２】実施例２ 参考例１において得られた抽出ナットウキナーゼ精製物
および参考例２において得られた発酵ナットウキナーゼ
精製物の溶液（生理食塩水に溶解）１ｍｌを十二指腸よ
り腸管腔内に投与した（各６例）。投与量はそれぞれ８
０ｍｇ／ｋｇとした。ナットウキナーゼ投与前および投
与後、０．５，１，３，５時間で大腿静脈から採血（４
００μｌ）した。この様にして得た血液４００μｌに対
して３．８％クエン酸ナトリウム１００μｌを加えて遠
心することで得たクエン酸血漿を試料として下記
（イ）、（ロ）、（ハ）の試験をした。
および参考例２において得られた発酵ナットウキナーゼ
精製物の溶液（生理食塩水に溶解）１ｍｌを十二指腸よ
り腸管腔内に投与した（各６例）。投与量はそれぞれ８
０ｍｇ／ｋｇとした。ナットウキナーゼ投与前および投
与後、０．５，１，３，５時間で大腿静脈から採血（４
００μｌ）した。この様にして得た血液４００μｌに対
して３．８％クエン酸ナトリウム１００μｌを加えて遠
心することで得たクエン酸血漿を試料として下記
（イ）、（ロ）、（ハ）の試験をした。
【００２３】（イ） ナットウキナーゼの腸管吸収の有
無を、上記の様にして得た血漿を用いて、実験１で得た
抗ナットウキナーゼ抗体を利用したウエスタン・ブロッ
ト法により分析することで検討した。以下の操作は全て
室温で行った。非還元条件下、ＳＤＳ化した血漿（最終
希釈倍率は７倍）をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動に供した後、ザルトブロットII−Ｓを用いてＰＶ
ＤＦ膜にゲル上のタンパクを転写した。このＰＶＤＦ膜
をＴＢＳで洗浄した後、ブロッキング溶液と３０分間反
応させた後、ブロッキング溶液で希釈した抗ナットウキ
ナーゼ抗体（×１，０００）と６０分間反応した。これ
をＴｗｅｅｎ−ＴＢＳで洗浄した後、Ｔｗｅｅｎ−ＴＢ
Ｓで３，０００倍に希釈した抗ウサギＩｇＧ（ＢｉｏＭ
ａｒｋｅｒ）と１５分間反応し、ＴＢＳで洗浄した。こ
の後、ＰＶＤＦ膜をＥＣＬ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ
ｔｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔｓと１分間反応した。この結
果、ナットウキナーゼ投与後、３および５時間後に採血
することで得た血漿中にナットウキナーゼが検出された
（図２）。このことより、ナットウキナーゼが腸より吸
収されることがわかった。
無を、上記の様にして得た血漿を用いて、実験１で得た
抗ナットウキナーゼ抗体を利用したウエスタン・ブロッ
ト法により分析することで検討した。以下の操作は全て
室温で行った。非還元条件下、ＳＤＳ化した血漿（最終
希釈倍率は７倍）をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動に供した後、ザルトブロットII−Ｓを用いてＰＶ
ＤＦ膜にゲル上のタンパクを転写した。このＰＶＤＦ膜
をＴＢＳで洗浄した後、ブロッキング溶液と３０分間反
応させた後、ブロッキング溶液で希釈した抗ナットウキ
ナーゼ抗体（×１，０００）と６０分間反応した。これ
をＴｗｅｅｎ−ＴＢＳで洗浄した後、Ｔｗｅｅｎ−ＴＢ
Ｓで３，０００倍に希釈した抗ウサギＩｇＧ（ＢｉｏＭ
ａｒｋｅｒ）と１５分間反応し、ＴＢＳで洗浄した。こ
の後、ＰＶＤＦ膜をＥＣＬ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ
ｔｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔｓと１分間反応した。この結
果、ナットウキナーゼ投与後、３および５時間後に採血
することで得た血漿中にナットウキナーゼが検出された
（図２）。このことより、ナットウキナーゼが腸より吸
収されることがわかった。
【００２４】（ロ） ナットウキナーゼ投与による血漿
フィブリノーゲンの変化を実験２で得た抗ラットフィブ
リノーゲン抗体を利用したウエスタン・ブロット法によ
り分析することで検討した。以下の操作は全て室温で行
った。非還元条件下、ＳＤＳ化した血漿（最終希釈倍率
は７倍）をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動に
供した後、ザルトブロットII−Ｓを用いてＰＶＤＦ膜に
ゲル上のタンパクを転写した。このＰＶＤＦ膜をＴＢＳ
で洗浄した後、ブロッキング溶液と３０分間反応させた
後、ブロッキング溶液で希釈した抗ラットフィブリノー
ゲン抗体（×１，０００）と６０分間反応した。これを
Ｔｗｅｅｎ−ＴＢＳで洗浄した後、Ｔｗｅｅｎ−ＴＢＳ
で３，０００倍に希釈した抗ウサギＩｇＧと３０分間反
応し、ＴＢＳで洗浄した。この後、ＰＶＤＦ膜をＥＣＬ
Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔ
ｓと１分間反応した。この結果、ナットウキナーゼ投与
後、３および５時間後に採血することで得た血漿中のフ
ィブリノーゲンは全て分子量約２７０ｋＤａにまで低分
子化しており、さらにその一部はフラグメントＤ（分子
量１０５ｋＤａ）にまで分解されていた（図３）。この
ことは、腸より吸収されたナットウキナーゼが血漿フィ
ブリノーゲンを分解したことを示唆している。
フィブリノーゲンの変化を実験２で得た抗ラットフィブ
リノーゲン抗体を利用したウエスタン・ブロット法によ
り分析することで検討した。以下の操作は全て室温で行
った。非還元条件下、ＳＤＳ化した血漿（最終希釈倍率
は７倍）をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動に
供した後、ザルトブロットII−Ｓを用いてＰＶＤＦ膜に
ゲル上のタンパクを転写した。このＰＶＤＦ膜をＴＢＳ
で洗浄した後、ブロッキング溶液と３０分間反応させた
後、ブロッキング溶液で希釈した抗ラットフィブリノー
ゲン抗体（×１，０００）と６０分間反応した。これを
Ｔｗｅｅｎ−ＴＢＳで洗浄した後、Ｔｗｅｅｎ−ＴＢＳ
で３，０００倍に希釈した抗ウサギＩｇＧと３０分間反
応し、ＴＢＳで洗浄した。この後、ＰＶＤＦ膜をＥＣＬ
Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔ
ｓと１分間反応した。この結果、ナットウキナーゼ投与
後、３および５時間後に採血することで得た血漿中のフ
ィブリノーゲンは全て分子量約２７０ｋＤａにまで低分
子化しており、さらにその一部はフラグメントＤ（分子
量１０５ｋＤａ）にまで分解されていた（図３）。この
ことは、腸より吸収されたナットウキナーゼが血漿フィ
ブリノーゲンを分解したことを示唆している。
【００２５】（ハ） 上記の様にして得た血漿の凝固時
間を血漿カルシウム再加凝固時間測定法により測定し
た。クエン酸血漿１００μｌに５０ｍＭ塩化カルシウム
１００μｌを添加し凝固するまでの時間を計測した。こ
の結果、ナットウキナーゼ投与後、０．５、１時間で採
血することにより得た血漿の凝固時間は、投与前に採血
することで得た血漿（０時間後）のそれと差はなかっ
た。しかし、ナットウキナーゼ投与後３，５時間で採血
することで得た血漿の凝固時間は投与前に得た血漿のそ
れと比較して明らかに延長した（表１）。このことよ
り、ナットウキナーゼを腸管腔内に投与することで血漿
凝固時間が延長することは明らかとなった。
間を血漿カルシウム再加凝固時間測定法により測定し
た。クエン酸血漿１００μｌに５０ｍＭ塩化カルシウム
１００μｌを添加し凝固するまでの時間を計測した。こ
の結果、ナットウキナーゼ投与後、０．５、１時間で採
血することにより得た血漿の凝固時間は、投与前に採血
することで得た血漿（０時間後）のそれと差はなかっ
た。しかし、ナットウキナーゼ投与後３，５時間で採血
することで得た血漿の凝固時間は投与前に得た血漿のそ
れと比較して明らかに延長した（表１）。このことよ
り、ナットウキナーゼを腸管腔内に投与することで血漿
凝固時間が延長することは明らかとなった。
【００２６】 表１ ナットウキナーゼ投与によるクエン酸血漿凝固時間への影響（例数＝６） ──────────────────────────────────── ０ 0.5 １ ３ ５時間後 ──────────────────────────────────── 血漿凝固 時間 2.1±0.5 2.3±0.6 2.5±0.6 6.3±2.0 10＜ （分） ────────────────────────────────────
【００２７】以上（イ）、（ロ）、（ハ）結果は、参考
例２において得られた発酵ナットウキナーゼ精製物のも
のであるが、参考例１において得られた抽出ナットウキ
ナーゼ精製物でも同様の結果が得られた。
例２において得られた発酵ナットウキナーゼ精製物のも
のであるが、参考例１において得られた抽出ナットウキ
ナーゼ精製物でも同様の結果が得られた。
【００２８】以上の実施例より、腸より吸収されたナッ
トウキナーゼが血漿フィブリノーゲンを限定分解するこ
とで血漿凝固時間を延長させることがわかった。
トウキナーゼが血漿フィブリノーゲンを限定分解するこ
とで血漿凝固時間を延長させることがわかった。
【００２９】
【発明の効果】本発明によれば、フィブリノーゲンを限
定分解し、血栓形成の最終段階（フィブリン網の形成）
を阻害する血栓形成もしくは再閉塞阻害剤またはフィブ
リノーゲン分解剤が提供される。
定分解し、血栓形成の最終段階（フィブリン網の形成）
を阻害する血栓形成もしくは再閉塞阻害剤またはフィブ
リノーゲン分解剤が提供される。
【００３０】
【図１】 写真 実施例１におけるフィブリノーゲンとナットウキナーゼ
またはプラスミンの反応による分解生成物の電気泳動パ
ターンを示し、上部の数字１〜４はプラスミン、５〜８
はナットウキナーゼによる限定分解であることを示す。
反応時間はそれぞれ１と５が０分、２と６が１分、３と
７が３分、４と８が２０分間である。
またはプラスミンの反応による分解生成物の電気泳動パ
ターンを示し、上部の数字１〜４はプラスミン、５〜８
はナットウキナーゼによる限定分解であることを示す。
反応時間はそれぞれ１と５が０分、２と６が１分、３と
７が３分、４と８が２０分間である。
【図２】 写真 実施例２（イ）においてナットウキナーゼを腸管内に投
与後採血した血漿中にナットウキナーゼが検出されるこ
とを示すゲル電気泳動パターンで、横軸はナットウキナ
ーゼ投与後採血までに経過した時間（ただし、０時間は
投与前に採血）を示す。
与後採血した血漿中にナットウキナーゼが検出されるこ
とを示すゲル電気泳動パターンで、横軸はナットウキナ
ーゼ投与後採血までに経過した時間（ただし、０時間は
投与前に採血）を示す。
【図３】 写真 実施例２（ロ）において、上記の血漿中のフィブリノー
ゲンは全て低分子化していることを示すゲル電気泳動パ
ターンで、横軸はナットウキナーゼ投与後採血までに経
過した時間（ただし、０時間は投与前に採血）を示す。
ゲンは全て低分子化していることを示すゲル電気泳動パ
ターンで、横軸はナットウキナーゼ投与後採血までに経
過した時間（ただし、０時間は投与前に採血）を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:07） (72)発明者 三沢 悟 埼玉県戸田市新曽南三丁目17番35号 株式 会社ジャパンエナジー内 (72)発明者 竹内 尚人 埼玉県戸田市新曽南三丁目17番35号 株式 会社ジャパンエナジー内
Claims (5)
- 【請求項１】 納豆菌の生産する線溶酵素を有効成分と
してなる血栓形成阻害剤。 - 【請求項２】 納豆菌の生産する線溶酵素を有効成分と
してなる血栓再閉塞阻害剤。 - 【請求項３】 経口用である請求項１または２記載の阻
害剤。 - 【請求項４】 納豆菌の生産する線溶酵素を有効成分と
してなるフィブリノーゲン限定分解剤。 - 【請求項５】 納豆菌の生産する線溶酵素を有効成分と
してなる経口用血中フィブリノーゲン限定分解剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7039083A JPH08208512A (ja) | 1995-02-03 | 1995-02-03 | 血栓形成阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7039083A JPH08208512A (ja) | 1995-02-03 | 1995-02-03 | 血栓形成阻害剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08208512A true JPH08208512A (ja) | 1996-08-13 |
Family
ID=12543208
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7039083A Pending JPH08208512A (ja) | 1995-02-03 | 1995-02-03 | 血栓形成阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08208512A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999007827A1 (en) * | 1997-08-05 | 1999-02-18 | Probi Ab | Use of lactobacillus for reduction of the fibrinogen level in blood |
| JP2001299277A (ja) * | 2000-04-21 | 2001-10-30 | Nippon Seibutsu Kagaku Kenkyusho:Kk | 納豆菌培養エキス |
| CN1100142C (zh) * | 2000-05-22 | 2003-01-29 | 北京孚曼生物技术有限公司 | 纳豆激酶的生产方法及其用途 |
| WO2003013565A1 (fr) * | 2001-08-08 | 2003-02-20 | Toyo Hakko Co., Ltd. | Materiaux fonctionnels, agonistes sod, hypotensifs et thrombolytiques, leur procede de production et souches microbiennes a utiliser |
| KR100511637B1 (ko) * | 2002-04-24 | 2005-08-31 | 주식회사 바이오알앤즈 | 바실러스 속 ｂｒｄ-54 균주(ｋｃｔｃ 10183ｂｐ) 및 이 균주로부터 생산된 혈전용해능을 갖는 효소단백질 |
| US7972835B2 (en) | 2004-11-16 | 2011-07-05 | Daiwa Pharmaceutical Co., Ltd. | Blood-viscosity reducing agent |
| CN105238720A (zh) * | 2015-10-28 | 2016-01-13 | 华中农业大学 | 一种产纤溶酶枯草芽孢杆菌及发酵方法和应用 |
| JP2017119683A (ja) * | 2015-12-24 | 2017-07-06 | 株式会社日本生物科学研究所 | 血液凝固阻害剤 |
-
1995
- 1995-02-03 JP JP7039083A patent/JPH08208512A/ja active Pending
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999007827A1 (en) * | 1997-08-05 | 1999-02-18 | Probi Ab | Use of lactobacillus for reduction of the fibrinogen level in blood |
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| KR100790771B1 (ko) * | 2000-04-21 | 2008-01-03 | 가부시키가이샤닛폰세이부쓰카가쿠겐큐쇼 | 비타민 ｋ2의 회수 방법 |
| CN1100142C (zh) * | 2000-05-22 | 2003-01-29 | 北京孚曼生物技术有限公司 | 纳豆激酶的生产方法及其用途 |
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| JP2017119683A (ja) * | 2015-12-24 | 2017-07-06 | 株式会社日本生物科学研究所 | 血液凝固阻害剤 |
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