JPS61162184A - 新規な線溶酵素およびその取得法 - Google Patents
新規な線溶酵素およびその取得法Info
- Publication number
- JPS61162184A JPS61162184A JP60002587A JP258785A JPS61162184A JP S61162184 A JPS61162184 A JP S61162184A JP 60002587 A JP60002587 A JP 60002587A JP 258785 A JP258785 A JP 258785A JP S61162184 A JPS61162184 A JP S61162184A
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- JP
- Japan
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- fibrinolytic
- fibrinolytic enzyme
- natto
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は納豆、納豆菌およびその培養液から抽出された
新規な線溶酵素に関する。また本発明は、線溶酵素を納
豆、納豆菌およびその培養液から得る方法に関する。
新規な線溶酵素に関する。また本発明は、線溶酵素を納
豆、納豆菌およびその培養液から得る方法に関する。
線溶酵素としてはヒト血漿中のプラスミン〔ロピンス・
サマリア著：メンッズインエンザイモロジイ（Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ） １９巻、１
８４頁（１９７０年）〕、ウロキナーゼ〔ダッカート著
：スプリングフエアラーグ刊、フィブリノリティックア
ンドアンティフィブリノリティックス（Ｆｉｂｒｉｎｏ
ｌｙｔｉｃｓ ａｎｄ Ａｎｔｉｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔ
ｉｃｓ ） ２０９頁（１９７８年）〕あるいはメラノ
ーマ細胞から得られるＴＰＡｔ−代表とする組織プラス
ミノーゲンアクケベーター〔レジケン・コレン著：ジャ
ーナルオプバイオロジカルケミストリイ（Ｊ、Ｂｉｏｌ
・Ｃｈｅｍ−） ２５６巻、７０３５頁（１９８１年）
〕が知られている。特にウロキナーゼは最近経口投与す
ることによってもその血中線溶先進効果が、長時間持続
的にみられることがわかり（須見ら著ニトロンポジスリ
サーチ（Ｔｈｒａｎｂ、Ｒｅｅ、） ２０ 巻７１１頁
（１９８０年）〕ただし、ここにあげた酵素は臨床的に
もその優れた血栓溶解効果が認められつつある。〔ロビ
ンスラ著：ニューヨークアカデミックプレス刊、ウロキ
ナーゼ：ベイシックアンドクリニカルアスベクツ（Ｕｒ
ｏｋｉｎａｓｅ：Ｂａ５ｉｃａｎｄ Ｃ１１ｎｉｃａｌ
Ａｓｐｅｃｔｓ ） ２６５頁（１９８２年）安部ら
著：臨床評価１１巻、７６６頁（１９８３年）〕、いず
れもヒト血漿あるいは尿由来でちゃ極めて高価であるこ
と、またＴＰＡなどはメラノーマ由来であるため、その
安全性は保障されていない。
サマリア著：メンッズインエンザイモロジイ（Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ） １９巻、１
８４頁（１９７０年）〕、ウロキナーゼ〔ダッカート著
：スプリングフエアラーグ刊、フィブリノリティックア
ンドアンティフィブリノリティックス（Ｆｉｂｒｉｎｏ
ｌｙｔｉｃｓ ａｎｄ Ａｎｔｉｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔ
ｉｃｓ ） ２０９頁（１９７８年）〕あるいはメラノ
ーマ細胞から得られるＴＰＡｔ−代表とする組織プラス
ミノーゲンアクケベーター〔レジケン・コレン著：ジャ
ーナルオプバイオロジカルケミストリイ（Ｊ、Ｂｉｏｌ
・Ｃｈｅｍ−） ２５６巻、７０３５頁（１９８１年）
〕が知られている。特にウロキナーゼは最近経口投与す
ることによってもその血中線溶先進効果が、長時間持続
的にみられることがわかり（須見ら著ニトロンポジスリ
サーチ（Ｔｈｒａｎｂ、Ｒｅｅ、） ２０ 巻７１１頁
（１９８０年）〕ただし、ここにあげた酵素は臨床的に
もその優れた血栓溶解効果が認められつつある。〔ロビ
ンスラ著：ニューヨークアカデミックプレス刊、ウロキ
ナーゼ：ベイシックアンドクリニカルアスベクツ（Ｕｒ
ｏｋｉｎａｓｅ：Ｂａ５ｉｃａｎｄ Ｃ１１ｎｉｃａｌ
Ａｓｐｅｃｔｓ ） ２６５頁（１９８２年）安部ら
著：臨床評価１１巻、７６６頁（１９８３年）〕、いず
れもヒト血漿あるいは尿由来でちゃ極めて高価であるこ
と、またＴＰＡなどはメラノーマ由来であるため、その
安全性は保障されていない。
そこで本発明者は、まずなによジも経口投与で人体に全
く無害であり、しかも線溶活性の高い酵素検索のため、
鋭意努力を重ね、我国で庶民に数百年来摂取されている
納豆の中に強力な線溶活性のあることを発見し、そして
納豆、納豆菌およびその培養液よシ同活性を持つ新規な
酵素の分離に成功するに至った。
く無害であり、しかも線溶活性の高い酵素検索のため、
鋭意努力を重ね、我国で庶民に数百年来摂取されている
納豆の中に強力な線溶活性のあることを発見し、そして
納豆、納豆菌およびその培養液よシ同活性を持つ新規な
酵素の分離に成功するに至った。
この新規線溶酵素は納豆あるいは納豆菌に水性溶媒を加
えてホモゲナイズし、適当な時間、適当な温度に保持し
て抽出した抽出液、または納豆菌の培養液をそのまま、
または適当な時間、適当な温度に保持した後、濃縮、透
析または乾燥した後、極性有機溶媒、塩析、限外濾過、
吸着剤、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過、ア
フィニティクロマトグラフイー又は等電点電気泳動の組
み合せで処理することにより得ることができる。即ち、
この新規な線溶酵素は納豆、納豆菌由来であり、強い線
溶活性を有する。
えてホモゲナイズし、適当な時間、適当な温度に保持し
て抽出した抽出液、または納豆菌の培養液をそのまま、
または適当な時間、適当な温度に保持した後、濃縮、透
析または乾燥した後、極性有機溶媒、塩析、限外濾過、
吸着剤、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過、ア
フィニティクロマトグラフイー又は等電点電気泳動の組
み合せで処理することにより得ることができる。即ち、
この新規な線溶酵素は納豆、納豆菌由来であり、強い線
溶活性を有する。
以下この新規線溶酵素について詳述する。
１）分子量：約２０，０００
オブアルブミン（分子：！ｉ：４５．０００）キモトリ
プシノーゲンＡ （分子量： ２５．０００）およびチトクロームＣ（分子量：１２，
５００）を標準物質とし、５ＤＳ−ポリアクリルアミド
ゲル電気泳動法およびセファテックスＧ−１００による
ゲル濾過で測定した。
プシノーゲンＡ （分子量： ２５．０００）およびチトクロームＣ（分子量：１２，
５００）を標準物質とし、５ＤＳ−ポリアクリルアミド
ゲル電気泳動法およびセファテックスＧ−１００による
ゲル濾過で測定した。
２）等電点：約８．６
フアルマシア社のアンフオライト（ｐＨ３，５−１０゜
５）を用いてカラム法にょる等電点電気泳動〔アクタ・
ケミカル・スカンジナピカ（Ａｃｔａ （：：ｈｅｍ
５ｃａｎｄ−） ２０巻、８２０頁（１９６６年）〕で
測定した。
５）を用いてカラム法にょる等電点電気泳動〔アクタ・
ケミカル・スカンジナピカ（Ａｃｔａ （：：ｈｅｍ
５ｃａｎｄ−） ２０巻、８２０頁（１９６６年）〕で
測定した。
６）性状：白色無定形粉末
４）紫外部吸収スペクトル：吸収極大は２８０ｎｍ付近
に、吸収極小は２５０ｎｍ付近に存在する。
に、吸収極小は２５０ｎｍ付近に存在する。
５）安定ｐＨの範囲：ｐＨ６〜１１で安定ｐＨ安定性は
２０℃で１５分間放置した ８）後の線溶活性を測定し
た。
２０℃で１５分間放置した ８）後の線溶活性を測定し
た。
６）熱安定性：ＰＨ７，４で６０℃、１０分間保温して
も安定 ７）基質特異性：天然基質であるフィブリンに対する強
い分解活性と共に、プラスミンの合成基質であるＳ−２
２５１（カビ社）に対する分解活性を示した。、その他
５−２２３８、Ｓ−２２６６、Ｓ−２３０２（カビ社）
を分解したがＳ−２４４４あるいはＳ−２４８４（カビ
社〕に対する活性はほとんどなかった。なおここで調べ
た線溶活性測定にはマイルズ社の牛フィブリノーゲンを
用いた標準フィブリン平板法〔アチーブスオプバイオケ
ミストリイアンドバイオフィジクス（ＡｒｃｈＢＬｏｃ
ｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ、 ） ４０巻−３４６頁〔１
９５２年ン〕を用いた。また合成基質分解活性の測定は
カビ社データーシートに記載の方法に順じて行なった。
も安定 ７）基質特異性：天然基質であるフィブリンに対する強
い分解活性と共に、プラスミンの合成基質であるＳ−２
２５１（カビ社）に対する分解活性を示した。、その他
５−２２３８、Ｓ−２２６６、Ｓ−２３０２（カビ社）
を分解したがＳ−２４４４あるいはＳ−２４８４（カビ
社〕に対する活性はほとんどなかった。なおここで調べ
た線溶活性測定にはマイルズ社の牛フィブリノーゲンを
用いた標準フィブリン平板法〔アチーブスオプバイオケ
ミストリイアンドバイオフィジクス（ＡｒｃｈＢＬｏｃ
ｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ、 ） ４０巻−３４６頁〔１
９５２年ン〕を用いた。また合成基質分解活性の測定は
カビ社データーシートに記載の方法に順じて行なった。
阻害剤の影響：ディイソグロビルフルオロホスフエイト
（和光紬薬）で強く阻害される他、２．２．２−）ジク
ロロ−１−ヒドロキシエチル−〇、０．−ディメチルホ
スフェイト（和光紬薬）あるいは塩化第二水銀（和光紬
薬）、でもその線溶活性が阻害された。一方、同濃度の
イプシロンアミノカプロン酸（第一製薬）、大豆トリズ
シンインヒピター（シグマ社ン、牛膵臓トリプシンイン
ヒビター（シグマ社）あるいはアプロチニン（バイエル
社）による線溶活性の阻害効果はほとんど認められなか
つ念。
（和光紬薬）で強く阻害される他、２．２．２−）ジク
ロロ−１−ヒドロキシエチル−〇、０．−ディメチルホ
スフェイト（和光紬薬）あるいは塩化第二水銀（和光紬
薬）、でもその線溶活性が阻害された。一方、同濃度の
イプシロンアミノカプロン酸（第一製薬）、大豆トリズ
シンインヒピター（シグマ社ン、牛膵臓トリプシンイン
ヒビター（シグマ社）あるいはアプロチニン（バイエル
社）による線溶活性の阻害効果はほとんど認められなか
つ念。
本発明の新規な線溶酵素は前記したように、納豆、納豆
菌およびその培養液からはじめて得られた物質であり、
従来より認められているヒト血漿中のプラスミンあるい
はウロキナーゼよりも分子量が小さい。また基質特異性
も特徴的でフィブリンに対し非常に強い分解活性を持つ
。即ち本発明・の新規線溶酵素は本発明者がはじめて納
豆、納豆菌およびその培養液から得た物質であり、優れ
た線溶活性を持つことからマイクロカプセル化などして
直接静注することにより、一般に線溶酵素が用いられて
いる血栓症、寒栓症の治療への応用が期待される。また
ウロキナーゼで最近行なわれているように経口投与を行
なうことによって、特に長時間投与して害のないことか
ら血栓症などの治療のみならず、その予防薬としても期
待される。
菌およびその培養液からはじめて得られた物質であり、
従来より認められているヒト血漿中のプラスミンあるい
はウロキナーゼよりも分子量が小さい。また基質特異性
も特徴的でフィブリンに対し非常に強い分解活性を持つ
。即ち本発明・の新規線溶酵素は本発明者がはじめて納
豆、納豆菌およびその培養液から得た物質であり、優れ
た線溶活性を持つことからマイクロカプセル化などして
直接静注することにより、一般に線溶酵素が用いられて
いる血栓症、寒栓症の治療への応用が期待される。また
ウロキナーゼで最近行なわれているように経口投与を行
なうことによって、特に長時間投与して害のないことか
ら血栓症などの治療のみならず、その予防薬としても期
待される。
次に本発明の新規線溶酵素の製法、分離法、精爬法を実
施例にて詳細に説明する。
施例にて詳細に説明する。
〔実施例１〕
市販納豆（菅谷食品、東京） ６００１に対し生理的食
塩水５００−を加え、室温で１時間撹拌した後ガーゼで
濾過し、粗抽出液を得た。これを１，８５０ｘｒｌＯ分
間遠心分離し得られた上清を使用するまで一２０℃に保
存した。次にこの粗線溶酵素を０．２ Ｍ ＮａＣ１を
含む１０ｍＭリン酸、緩衝液（ｐＨ７，４）にて平衡化
したセファデックスＧ−１００カラムによりゲル濾過し
た。クロマト図を第１図に示す。線溶活性は２つのピー
クに分離し、遅れて溶出したピークが本発明の新規線溶
酵素である。この溶出位置は分子量約２０，０００であ
った。この分画を透析し、凍結乾燥することにより、精
製品４２ｑを得た。比活性は４．５Ｃｕ／＋１９蛋白で
あった。
塩水５００−を加え、室温で１時間撹拌した後ガーゼで
濾過し、粗抽出液を得た。これを１，８５０ｘｒｌＯ分
間遠心分離し得られた上清を使用するまで一２０℃に保
存した。次にこの粗線溶酵素を０．２ Ｍ ＮａＣ１を
含む１０ｍＭリン酸、緩衝液（ｐＨ７，４）にて平衡化
したセファデックスＧ−１００カラムによりゲル濾過し
た。クロマト図を第１図に示す。線溶活性は２つのピー
クに分離し、遅れて溶出したピークが本発明の新規線溶
酵素である。この溶出位置は分子量約２０，０００であ
った。この分画を透析し、凍結乾燥することにより、精
製品４２ｑを得た。比活性は４．５Ｃｕ／＋１９蛋白で
あった。
本例および他の例中の蛋白含量はフォーリン・ローリ−
（Ｆｏｌｉｎ −Ｌｏｗｒｙ ）法〔ザ・ジャーナル・
オプ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ。
（Ｆｏｌｉｎ −Ｌｏｗｒｙ ）法〔ザ・ジャーナル・
オプ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ。
Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ、） １９３巻、２６５頁（１９５
１年）〕で測定した。線溶活性はアーマ−社製の牛フィ
ブリノーゲンを用い、標準フィブリン平板法〔アチーブ
スオプバイオケミストリイアンドバイオフィジクス（Ａ
ｒｃｈ−Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、 ）４０巻
、３４６頁（１９５２年）〕で測定した。
１年）〕で測定した。線溶活性はアーマ−社製の牛フィ
ブリノーゲンを用い、標準フィブリン平板法〔アチーブ
スオプバイオケミストリイアンドバイオフィジクス（Ａ
ｒｃｈ−Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、 ）４０巻
、３４６頁（１９５２年）〕で測定した。
この時、ヒト血漿プラスミンを標準に用い、線溶活性を
カゼイン単位ＣＣＵ）で示した。
カゼイン単位ＣＣＵ）で示した。
〔実施例２〕
３００−害フラスコ５個に各々２００ｒｎｔの培養基〔
ヘンネベルク（Ｈｅｎｎｅｂｅｒｇ ）液ニゲルコース
６２、ペプトン２ｔ、酒精８−１肉エキス２２を含む〕
を入れ、殺菌した後あらかじめ普通寒天培地に予備培養
しておいた菌株である納豆醒（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｎａ
ｔｔｏ ） １０〜２０−を接種し、４３−４５℃で４
０時間振盪培養した。次に、培養液を集め、１，８５０
ｘＰ１０分間遠心し、この上清を使用するまで一２０℃
に保存した。培養液を合して攪拌しながら等量のアセト
ンを加え、ガーゼで濾過し得られた上清をエバポレータ
ーで濃縮し、実施例１と同条件のゲル濾過にかけた。活
性の主ピークに得られた蛋白量は約２８〜、線溶活性は
約ａＯｃＵ／１Ｎ！蛋白であった。
ヘンネベルク（Ｈｅｎｎｅｂｅｒｇ ）液ニゲルコース
６２、ペプトン２ｔ、酒精８−１肉エキス２２を含む〕
を入れ、殺菌した後あらかじめ普通寒天培地に予備培養
しておいた菌株である納豆醒（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｎａ
ｔｔｏ ） １０〜２０−を接種し、４３−４５℃で４
０時間振盪培養した。次に、培養液を集め、１，８５０
ｘＰ１０分間遠心し、この上清を使用するまで一２０℃
に保存した。培養液を合して攪拌しながら等量のアセト
ンを加え、ガーゼで濾過し得られた上清をエバポレータ
ーで濃縮し、実施例１と同条件のゲル濾過にかけた。活
性の主ピークに得られた蛋白量は約２８〜、線溶活性は
約ａＯｃＵ／１Ｎ！蛋白であった。
〔実施的６〕
納豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｎａｔｔｏ ） １ ｆに
対し２ＭＫＣｌ５０−を加え室温で２．５時間攪拌後、
水で４倍に希釈後ガーゼで濾過した。得られた抽出液に
４℃条件下で等量のエタノールを加え、５分間攪拌した
。１，８５０ｘｒの遠心分離で生じる沈澱を除き、さら
に上清を水で透析した。次に、限外濃縮後０．２ＭＮａ
Ｃ１を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ Ｈ７，４）にて
平衡化したセファデックスＧ−１５０カラムによりゲル
濾過した。遅れて得られる活性の主ピーク分画金集め、
凍結乾燥後、蛋白量は１０．２Ｍｇ、比活性は５．７
ＣＵ／ｍｙ蛋白であった。
対し２ＭＫＣｌ５０−を加え室温で２．５時間攪拌後、
水で４倍に希釈後ガーゼで濾過した。得られた抽出液に
４℃条件下で等量のエタノールを加え、５分間攪拌した
。１，８５０ｘｒの遠心分離で生じる沈澱を除き、さら
に上清を水で透析した。次に、限外濃縮後０．２ＭＮａ
Ｃ１を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ Ｈ７，４）にて
平衡化したセファデックスＧ−１５０カラムによりゲル
濾過した。遅れて得られる活性の主ピーク分画金集め、
凍結乾燥後、蛋白量は１０．２Ｍｇ、比活性は５．７
ＣＵ／ｍｙ蛋白であった。
〔実施例４〕
実施例２により得た培養上清１．５Ｌを限外濃縮して液
量を約５０ｆＩＩｔとし、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，４）で２４時間透析した後、同緩衝液にて平衡化し
た。Ｎアルファ・イプシロンアミノカプロイル−ＤＬ−
ホモアルギニンペキンルエステルーヤファロースに吸着
させた。この樹脂の調整およびカラム操作は須見らの方
法〔アクタ−へマトロジカ・ジャポニカ（ＡｃｔａＨｃ
ｆｍ Ｊａｐ−） ４１巻、７６６頁（１９７Ｂ年）〕
に従って行なった。吸着後２ＭＮａＣ１を含む同緩衝液
でよく洗浄し、次いで６Ｍ尿素および２ＭＮａＣ１を含
む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７、４）にて吸着分画を
溶出し、溶出分画を０．１５Ｍ重炭酸アンモニウムで透
析後、限外濃縮し、さらにセファデックスＧ−１００に
よるゲル濾過した。線溶酵素の溶出位置は分子量約２０
．０００であった。この分画を透析し、凍結乾燥するこ
とにより精製品約７．４岬を得た◎この精製品の比活性
は約４７．５ＣＵ／ｊｖ蛋白であった。
量を約５０ｆＩＩｔとし、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，４）で２４時間透析した後、同緩衝液にて平衡化し
た。Ｎアルファ・イプシロンアミノカプロイル−ＤＬ−
ホモアルギニンペキンルエステルーヤファロースに吸着
させた。この樹脂の調整およびカラム操作は須見らの方
法〔アクタ−へマトロジカ・ジャポニカ（ＡｃｔａＨｃ
ｆｍ Ｊａｐ−） ４１巻、７６６頁（１９７Ｂ年）〕
に従って行なった。吸着後２ＭＮａＣ１を含む同緩衝液
でよく洗浄し、次いで６Ｍ尿素および２ＭＮａＣ１を含
む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７、４）にて吸着分画を
溶出し、溶出分画を０．１５Ｍ重炭酸アンモニウムで透
析後、限外濃縮し、さらにセファデックスＧ−１００に
よるゲル濾過した。線溶酵素の溶出位置は分子量約２０
．０００であった。この分画を透析し、凍結乾燥するこ
とにより精製品約７．４岬を得た◎この精製品の比活性
は約４７．５ＣＵ／ｊｖ蛋白であった。
第１図は納豆抽出液のセファデックスＧ−１５０による
ゲル濾過したクロマト図を示す。
ゲル濾過したクロマト図を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）納豆、納豆菌およびその培養液から抽出され、下記
の特性を有することを特徴とする新規な線溶酵素 分子量：約２０，０００（ＳＤＳ−ポリアクリルアミド
ゲル電気泳動法およびセファ デックスＧ−１００によるゲル濾過で測 定した。） 等電点：約８．６ 性状：白色無定形粉末 紫外部吸収スペクトル：吸収極大は２８０ ｎｍ付近に、吸収極小は２５０ｎｍ付近 に存在する。 安定ｐＨの範囲：ｐＨ６〜１１で安定（ｐＨ安定性は２
０℃で１５分間放置した後の 線溶活性を測定することによつて決定し た。） 熱安定性：ｐＨ７．４で６０℃、１０分間保温しても安
定 基質特異性：天然基質であるフィブリンに 対する強い分解活性と共に、プラスミン の合成基質であるＳ−２２５１（カビ社 ）に対する分解活性を示した。その他Ｓ −２２３８、Ｓ−２２６６、Ｓ−２３０ ２（カビ社）を分解したが、Ｓ−２４４ ４あるいはＳ−２４８４（カビ社）に対 する活性はほとんどなかつた。 阻害剤の影響：ディイソプロピルフルオロ ホスフェイト（和光純薬）で強く阻害さ れる他、２，２，２−トリクロロ−１−ヒドロキシエチ
ル−０，０，−ディメチルホス フェイト（和光純薬）あるいは塩化第二 水銀（和光純薬）でもその線溶活性が阻 害された。一方、同濃度のイプシロンア ミノカプロン酸（第一製薬）、大豆トリ プシンインヒビター（シグマ社）、牛膵 臓トリプシンインヒビター（シグマ社） あるいはアプロチニン（バイエル社）に よる線溶活性の阻害効果はほとんど認め られなかつた。 ２）納豆、納豆菌を中性の水性媒体による抽出に付すこ
とを特徴とする新規な線溶酵素の取得法。 ３）納豆、納豆菌を慣用の増殖培地中で培養し、新規な
線溶酵素を含有する培養液を回収し得られた液より精製
する新規な線溶酵素の取得法。 ４）得られた抽出液および培養液をそのまま、または適
当な時間、適当な温度に保持した後、濃縮透析または乾
燥した後、極性有機溶媒、塩析限外濾過、吸着剤、イオ
ン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過、アフィニティク
ロマトグラフィー、又は等電点電気泳動の操作を２種類
以上組み合せて精製する特許精求範囲第２項、第３項記
載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60002587A JPS61162184A (ja) | 1985-01-10 | 1985-01-10 | 新規な線溶酵素およびその取得法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60002587A JPS61162184A (ja) | 1985-01-10 | 1985-01-10 | 新規な線溶酵素およびその取得法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61162184A true JPS61162184A (ja) | 1986-07-22 |
Family
ID=11533506
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60002587A Pending JPS61162184A (ja) | 1985-01-10 | 1985-01-10 | 新規な線溶酵素およびその取得法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61162184A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01180834A (ja) * | 1988-01-13 | 1989-07-18 | Nippon Chem Res Kk | 血栓溶解剤 |
| EP0624642A1 (en) * | 1993-05-12 | 1994-11-17 | Indian Council For Medical Research | Novel thrombolytic agent, process for preparing same and its use for the preparation of a thrombi dissolving medicament |
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