JPH0853364A - 注射用血栓溶解剤 - Google Patents
注射用血栓溶解剤Info
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- JPH0853364A JPH0853364A JP6210518A JP21051894A JPH0853364A JP H0853364 A JPH0853364 A JP H0853364A JP 6210518 A JP6210518 A JP 6210518A JP 21051894 A JP21051894 A JP 21051894A JP H0853364 A JPH0853364 A JP H0853364A
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- thrombolytic
- nattokinase
- natto
- injection
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 血栓溶解作用に優れた新規な注射剤を提供す
る。 【構成】 有効成分として納豆菌の生産する線溶酵素を
含有してなる注射剤。 【効果】 本発明に用いる線溶酵素は血栓に対する親和
性が強いので、注射により血栓を強力かつ迅速に溶解す
るのみならず、フィブリノゲンを分解しにくく、毒性も
弱い。
る。 【構成】 有効成分として納豆菌の生産する線溶酵素を
含有してなる注射剤。 【効果】 本発明に用いる線溶酵素は血栓に対する親和
性が強いので、注射により血栓を強力かつ迅速に溶解す
るのみならず、フィブリノゲンを分解しにくく、毒性も
弱い。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は納豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ Ｎａｔｔｏ）の生産する線溶酵素を有効成分とする
注射用血栓溶解剤に関する。
ｓ Ｎａｔｔｏ）の生産する線溶酵素を有効成分とする
注射用血栓溶解剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】肺塞栓症、心筋梗塞、ならびに脳血管閉
塞症など血栓が原因となる疾病は社会的にも大きな問題
となっている。現在、実際に臨床で使用されている血栓
溶解剤としては、ストレプトキナーゼ（以下ＳＫと略称
する）、ウロキナーゼ（以下ＵＫと略称する）、ならび
に組織型プラスミノーゲン、アクティベーター（以下ｔ
ＰＡと略称する）が知られている。さらに最近、黄色ぶ
どう球菌より産出されるスタフィロキナーゼ（以下ＳＡ
Ｋと略称する）が血栓の構成成分である安定化フィブリ
ンに対して親和性が強く、フィブリン分解活性も強力で
ある〔Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏ
ｍｍｕｎ．１６２，８３０−８３７（１９８９），Ｔｈ
ｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．６６，４６８−４７３（１
９９１）〕ことから臨床に応用しようとされている。
塞症など血栓が原因となる疾病は社会的にも大きな問題
となっている。現在、実際に臨床で使用されている血栓
溶解剤としては、ストレプトキナーゼ（以下ＳＫと略称
する）、ウロキナーゼ（以下ＵＫと略称する）、ならび
に組織型プラスミノーゲン、アクティベーター（以下ｔ
ＰＡと略称する）が知られている。さらに最近、黄色ぶ
どう球菌より産出されるスタフィロキナーゼ（以下ＳＡ
Ｋと略称する）が血栓の構成成分である安定化フィブリ
ンに対して親和性が強く、フィブリン分解活性も強力で
ある〔Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏ
ｍｍｕｎ．１６２，８３０−８３７（１９８９），Ｔｈ
ｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．６６，４６８−４７３（１
９９１）〕ことから臨床に応用しようとされている。
【０００３】また、バチルス・スブチリスを包含するバ
チルス属菌の生産するスブチリシン族蛋白分解酵素を含
有する経口用血栓溶解剤が提案されているが、ヒト由来
でないため、静注すると抗原−抗体反応を起す危険性が
極めて大きいとして、専ら経口用として用いられている
（特開平１−１８０８３４号公報）。
チルス属菌の生産するスブチリシン族蛋白分解酵素を含
有する経口用血栓溶解剤が提案されているが、ヒト由来
でないため、静注すると抗原−抗体反応を起す危険性が
極めて大きいとして、専ら経口用として用いられている
（特開平１−１８０８３４号公報）。
【０００４】納豆菌の生産する線溶酵素はアミノ酸配列
その他の物性が明かにされたが、毒性は不明であり、血
栓溶解剤としては上記同様に経口用としてのみ利用され
ている（特開平３−１６８０８２号公報）。
その他の物性が明かにされたが、毒性は不明であり、血
栓溶解剤としては上記同様に経口用としてのみ利用され
ている（特開平３−１６８０８２号公報）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】現在、臨床で使用され
ている血栓溶解剤（ＳＫ、ＵＫ、およびｔＰＡ）ならび
にＳＡＫは、これらの酵素が直接血栓の構成成分である
安定化フィブリンを分解するのではなく、血液中または
血栓中のプラスミノーゲンを線溶酵素であるプラスミン
に変換させることで血栓を溶解するプラスミノーゲン・
アクティベーターである。そのため使用方法によって
は、血中のプラスミノーゲンが大幅に減少してしまい、
この様な状態が長時間続くと一度開通した血栓が再閉塞
する危険が生じる。また、ＳＫおよびＳＡＫは病原菌由
来の酵素であることから安全性に不安が残る。さらに、
ＵＫおよびｔＰＡは血中での半減期が数分以内と極めて
短い。加えて、これらの酵素ならびに、変換により生じ
たプラスミンは血中のインヒビターにより阻害され活性
を失うため大量を持続点滴することが必要であるが、大
量投与すれば、出血傾向を招く。
ている血栓溶解剤（ＳＫ、ＵＫ、およびｔＰＡ）ならび
にＳＡＫは、これらの酵素が直接血栓の構成成分である
安定化フィブリンを分解するのではなく、血液中または
血栓中のプラスミノーゲンを線溶酵素であるプラスミン
に変換させることで血栓を溶解するプラスミノーゲン・
アクティベーターである。そのため使用方法によって
は、血中のプラスミノーゲンが大幅に減少してしまい、
この様な状態が長時間続くと一度開通した血栓が再閉塞
する危険が生じる。また、ＳＫおよびＳＡＫは病原菌由
来の酵素であることから安全性に不安が残る。さらに、
ＵＫおよびｔＰＡは血中での半減期が数分以内と極めて
短い。加えて、これらの酵素ならびに、変換により生じ
たプラスミンは血中のインヒビターにより阻害され活性
を失うため大量を持続点滴することが必要であるが、大
量投与すれば、出血傾向を招く。
【０００６】ＳＫ、ＵＫ、ｔＰＡ、およびＳＡＫは上記
のような種々の問題点を有している。またスブチリシン
族蛋白分解酵素や納豆菌の生産する線溶酵素は経口投与
されているが、蛋白質は経口的にはそのまま吸収され難
いと考えられるので、これらの酵素を経口投与したとき
どのような機序で血中において線溶活性が発現に至るの
か不明である。したがって、経口以外に投与法が知られ
ていないが、患者の容態によっては経口投与が不適の場
合もある。
のような種々の問題点を有している。またスブチリシン
族蛋白分解酵素や納豆菌の生産する線溶酵素は経口投与
されているが、蛋白質は経口的にはそのまま吸収され難
いと考えられるので、これらの酵素を経口投与したとき
どのような機序で血中において線溶活性が発現に至るの
か不明である。したがって、経口以外に投与法が知られ
ていないが、患者の容態によっては経口投与が不適の場
合もある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】上記の問題点を打開する
ため、本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、本発明を確
立するに至った。
ため、本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、本発明を確
立するに至った。
【０００８】本発明は、有効成分として納豆菌の生産す
る線溶酵素を含有してなる注射用血栓溶解剤である。納
豆菌の生産する線溶酵素（以下、ナットウキナーゼと略
称する）の精製法、理化学的および酵素的性状ならびに
アミノ酸配列は、前記のように、中西らにより特開平３
−１６８０８２号公報に、ならびに本発明者らによりＢ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．１９７，１３４０−１３４７（１９９３）および特
開平６−１５３９７７号公報に発表されている。その精
製は納豆または納豆菌の培養物の水性抽出液をたとえ
ば、疎水性クロマトグラフィ、イオンクロマトグラフ
ィ、ゲル濾過クロマトグラフィ等のクロマトグラフィに
付し、線溶活性を示す分画を採取することによって行わ
れる。
る線溶酵素を含有してなる注射用血栓溶解剤である。納
豆菌の生産する線溶酵素（以下、ナットウキナーゼと略
称する）の精製法、理化学的および酵素的性状ならびに
アミノ酸配列は、前記のように、中西らにより特開平３
−１６８０８２号公報に、ならびに本発明者らによりＢ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．１９７，１３４０−１３４７（１９９３）および特
開平６−１５３９７７号公報に発表されている。その精
製は納豆または納豆菌の培養物の水性抽出液をたとえ
ば、疎水性クロマトグラフィ、イオンクロマトグラフ
ィ、ゲル濾過クロマトグラフィ等のクロマトグラフィに
付し、線溶活性を示す分画を採取することによって行わ
れる。
【０００９】注射用として用いた場合に、納豆菌やその
培地に由来するナットウキナーゼ以外の夾 物の影響を
防ぐためには、ゲル濾過クロマトグラフィで線溶活性を
有する単一ピークを得るまでナットウキナーゼを精製す
るのが望ましい。前記のようにナットウキナーゼは毒性
も明かでなく、経口的にしか投与されていなかったが、
本発明者らの研究により、毒性は極めて少く、静脈注射
により生体に害を及ぼさずに血栓溶解作用を示すことが
判った（実験例参照）。ナットウキナーゼは安定化フィ
ブリン（血栓）に対して親和性が強く、そのため血中に
注入されたナットウキナーゼは安定化フィブリンに直接
作用して分解することができる。したがって、その血栓
分解作用は急速かつ確実であり、フィブリノゲンに対す
る作用は弱いことから血中のフィブリノゲンが激減する
ことはない。
培地に由来するナットウキナーゼ以外の夾 物の影響を
防ぐためには、ゲル濾過クロマトグラフィで線溶活性を
有する単一ピークを得るまでナットウキナーゼを精製す
るのが望ましい。前記のようにナットウキナーゼは毒性
も明かでなく、経口的にしか投与されていなかったが、
本発明者らの研究により、毒性は極めて少く、静脈注射
により生体に害を及ぼさずに血栓溶解作用を示すことが
判った（実験例参照）。ナットウキナーゼは安定化フィ
ブリン（血栓）に対して親和性が強く、そのため血中に
注入されたナットウキナーゼは安定化フィブリンに直接
作用して分解することができる。したがって、その血栓
分解作用は急速かつ確実であり、フィブリノゲンに対す
る作用は弱いことから血中のフィブリノゲンが激減する
ことはない。
【００１０】本発明の注射剤は、ナットウキナーゼの水
性溶液の形で調製されるが、生理食塩水などを用いて等
張溶液とするのが望ましく、所望により他の血栓溶解剤
を配合してもよい。また、本発明の目的を阻害しない限
り、ビタミン類、アミノ酸類などを配合してもよい。
性溶液の形で調製されるが、生理食塩水などを用いて等
張溶液とするのが望ましく、所望により他の血栓溶解剤
を配合してもよい。また、本発明の目的を阻害しない限
り、ビタミン類、アミノ酸類などを配合してもよい。
【００１１】本発明の血栓溶解剤は、精製ナットウキナ
ーゼとして成人１日あたり１００〜２００ｍｇを１回も
しくは数回に分けて、静脈内、筋肉内または皮下に注射
して投与することができる。
ーゼとして成人１日あたり１００〜２００ｍｇを１回も
しくは数回に分けて、静脈内、筋肉内または皮下に注射
して投与することができる。
【００１２】
【作用】本発明の血栓溶解剤に含有されるナットウキナ
ーゼは注射により血液中に入って血栓に直接作用してそ
れを分解する。
ーゼは注射により血液中に入って血栓に直接作用してそ
れを分解する。
【００１３】
【実施例】以下に参考例、実施例および実験例の形で本
発明をさらに説明するが、本発明はこれらによって限定
されるものではない。 参考例１（抽出ナットウキナーゼ精製物の製造） 精製操作の全階程を４℃で行う。納豆２０ｋｇを２ｍＭ
ＣａＣｌ2 含有の０．９％食塩溶液２０Ｌ中で攪拌する
ことでナットウキナーゼを抽出する。抽出液を金網で濾
過し、濾液を遠心分離機（ＴＯＭＹ ＲＳ−２０，ＴＯ
ＭＹ，東京）で７，０００ｒｐｍ４０分間遠心して上澄
液を得、それに固体硫酸アンモニウムを加えて２５％飽
和液とし、混合物を一夜放置した。これを７，０００ｒ
ｐｍ４０分間遠心して上澄液を得、２ｍＭＣａＣｌ2 と
２５％飽和硫酸アンモニウムを含む１０ｍＭトリス−Ｈ
Ｃｌ（ｐＨ８．０）緩衝液で平衡化したブチル−トヨパ
ール（１０×１５ｃｍ）のカラムに添加したのち、同緩
衝液に溶解した２５−０％飽和硫酸アンモニウムの直線
濃度勾配により溶出した。活性分画は固体硫酸アンモニ
ウムを加えて２５％飽和硫酸アンモニウム溶液とした。
混合物を遠心して粒子を除き、上澄液に固体硫酸アンモ
ニウムを加えて６０％飽和硫酸アンモニウム溶液とし、
一夜放置した。次いで遠心して得た沈澱を１ｍＭＣａＣ
ｌ2 含有の１ｍＭビス・トリス一酢酸（ｐＨ８．０）緩
衝液に溶解し、同じ緩衝液に対して一夜透析した。透析
内液を１ｍＭビス・トリス一酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）
で平衡化したＣＭ−トヨパールのカラム（２．８×３２
ｃｍ）に添加し、次いで同じ緩衝液に溶解した０−０．
２ＭＮａＣｌの直線濃度勾配液で溶出した。線溶活性含
有分画はプールし、６０％飽和となる様に硫酸アンモニ
ウムを添加することで活性含有分画を沈澱させた。沈澱
を０．１Ｍ炭酸水素アンモニウム（ｐＨ８．０）に溶解
し、同じ緩衝液で平衡化したセファデックスＧ−５０
（２．８×９０ｃｍ）のカラムを用いてゲル濾過クロマ
トグラフィに付した。線溶活性を含有する単一の対称的
な蛋白質のピークが溶出され、これを水で一夜透析し、
凍結乾燥した。
発明をさらに説明するが、本発明はこれらによって限定
されるものではない。 参考例１（抽出ナットウキナーゼ精製物の製造） 精製操作の全階程を４℃で行う。納豆２０ｋｇを２ｍＭ
ＣａＣｌ2 含有の０．９％食塩溶液２０Ｌ中で攪拌する
ことでナットウキナーゼを抽出する。抽出液を金網で濾
過し、濾液を遠心分離機（ＴＯＭＹ ＲＳ−２０，ＴＯ
ＭＹ，東京）で７，０００ｒｐｍ４０分間遠心して上澄
液を得、それに固体硫酸アンモニウムを加えて２５％飽
和液とし、混合物を一夜放置した。これを７，０００ｒ
ｐｍ４０分間遠心して上澄液を得、２ｍＭＣａＣｌ2 と
２５％飽和硫酸アンモニウムを含む１０ｍＭトリス−Ｈ
Ｃｌ（ｐＨ８．０）緩衝液で平衡化したブチル−トヨパ
ール（１０×１５ｃｍ）のカラムに添加したのち、同緩
衝液に溶解した２５−０％飽和硫酸アンモニウムの直線
濃度勾配により溶出した。活性分画は固体硫酸アンモニ
ウムを加えて２５％飽和硫酸アンモニウム溶液とした。
混合物を遠心して粒子を除き、上澄液に固体硫酸アンモ
ニウムを加えて６０％飽和硫酸アンモニウム溶液とし、
一夜放置した。次いで遠心して得た沈澱を１ｍＭＣａＣ
ｌ2 含有の１ｍＭビス・トリス一酢酸（ｐＨ８．０）緩
衝液に溶解し、同じ緩衝液に対して一夜透析した。透析
内液を１ｍＭビス・トリス一酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）
で平衡化したＣＭ−トヨパールのカラム（２．８×３２
ｃｍ）に添加し、次いで同じ緩衝液に溶解した０−０．
２ＭＮａＣｌの直線濃度勾配液で溶出した。線溶活性含
有分画はプールし、６０％飽和となる様に硫酸アンモニ
ウムを添加することで活性含有分画を沈澱させた。沈澱
を０．１Ｍ炭酸水素アンモニウム（ｐＨ８．０）に溶解
し、同じ緩衝液で平衡化したセファデックスＧ−５０
（２．８×９０ｃｍ）のカラムを用いてゲル濾過クロマ
トグラフィに付した。線溶活性を含有する単一の対称的
な蛋白質のピークが溶出され、これを水で一夜透析し、
凍結乾燥した。
【００１４】 参考例２（培養ナットウキナーゼ精製物の製造） ２％フラクトース、１．５％ソイペプトン（Ｄｉｆｃｏ
Ｌａｂ．）、０．２％酵母エキス０．１％ＫＨ2 ＰＯ
4 ，０．３％Ｋ2 ＨＰＯ4 ，０．０５％ＭｇＳＯ4 ・５
Ｈ2 Ｏ，０．０２％ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ｐＨ７．０
の組成に修濃度２％のマルトースを加えた培地１００ｍ
ｌを５００ｍｌ容三角フラスコに入れ、納豆菌であるバ
チルス・ズブチリスＢ−４０７株（微工研条寄４０４３
号）を接種して、０℃で１８時間種母培養した。該種母
培養液５０ｍｌ（２％）を０．１％カラリンを含む同じ
組成の培地２．５リットルの入った５リットル容発酵槽
に加え、回転数８００ｒｐｍ、３０℃で毎分２．５リッ
トルの空気を送りながら、７０時間通気攪拌培養した。
その培養上清に終濃度１．５Ｍとなるように硫安を加
え、あらかじめ１．５Ｍ硫安、１０ｍＭリン酸ナトリウ
ムｐＨ７．２で平衡化しておいたブチル−セファロース
４ファーストフロー（ファルマシア）に吸着させた。同
緩衝液で洗浄した後、０．５Ｍ硫安、１０ｍＭリン酸ナ
トリウム、ｐＨ７．２でナットウキナーゼを段階溶出さ
せ、合成基質Ｓｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｉｏ−Ｐｈｅ
−ｐＮａに対する水解活性の分画を採取した。セファデ
ックスＧ２５（ファルマシア）により、１０ｍＭリン酸
ナトリウム、ｐＨ７．２に緩衝液を交換したのち、Ｓ−
セファロースファーストフロー（ファルマシア）に吸着
させ、同緩衝液で洗浄後、０．１Ｍ塩化ナトリウム、１
０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２で段階溶出させ、
同様に活性分画を採取した。最後に、０．１２Ｍ塩化ナ
トリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５で平
衡化したセファクリルＳ−２００ＨＲ（ファルマシア）
にてゲル濾過を行ない単一のピークを示す活性分画とし
て精製ナットウキナーゼを得た。
Ｌａｂ．）、０．２％酵母エキス０．１％ＫＨ2 ＰＯ
4 ，０．３％Ｋ2 ＨＰＯ4 ，０．０５％ＭｇＳＯ4 ・５
Ｈ2 Ｏ，０．０２％ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ｐＨ７．０
の組成に修濃度２％のマルトースを加えた培地１００ｍ
ｌを５００ｍｌ容三角フラスコに入れ、納豆菌であるバ
チルス・ズブチリスＢ−４０７株（微工研条寄４０４３
号）を接種して、０℃で１８時間種母培養した。該種母
培養液５０ｍｌ（２％）を０．１％カラリンを含む同じ
組成の培地２．５リットルの入った５リットル容発酵槽
に加え、回転数８００ｒｐｍ、３０℃で毎分２．５リッ
トルの空気を送りながら、７０時間通気攪拌培養した。
その培養上清に終濃度１．５Ｍとなるように硫安を加
え、あらかじめ１．５Ｍ硫安、１０ｍＭリン酸ナトリウ
ムｐＨ７．２で平衡化しておいたブチル−セファロース
４ファーストフロー（ファルマシア）に吸着させた。同
緩衝液で洗浄した後、０．５Ｍ硫安、１０ｍＭリン酸ナ
トリウム、ｐＨ７．２でナットウキナーゼを段階溶出さ
せ、合成基質Ｓｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｉｏ−Ｐｈｅ
−ｐＮａに対する水解活性の分画を採取した。セファデ
ックスＧ２５（ファルマシア）により、１０ｍＭリン酸
ナトリウム、ｐＨ７．２に緩衝液を交換したのち、Ｓ−
セファロースファーストフロー（ファルマシア）に吸着
させ、同緩衝液で洗浄後、０．１Ｍ塩化ナトリウム、１
０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２で段階溶出させ、
同様に活性分画を採取した。最後に、０．１２Ｍ塩化ナ
トリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５で平
衡化したセファクリルＳ−２００ＨＲ（ファルマシア）
にてゲル濾過を行ない単一のピークを示す活性分画とし
て精製ナットウキナーゼを得た。
【００１５】実施例１ 参考例１において得られた抽出ナットウキナーゼ精製物
および参考例２において得られた発酵ナットウキナーゼ
精製物のフィブリン分解活性を、Ａｓｔｒｕｐらの方法
〔Ａｒｃｈｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．４
０，３４６−３５１（１９５２）〕により作製したフィ
ブリン平板（プラスミノーゲンを含まない）によりプラ
スミンのそれと比較した。表１がその結果である。
および参考例２において得られた発酵ナットウキナーゼ
精製物のフィブリン分解活性を、Ａｓｔｒｕｐらの方法
〔Ａｒｃｈｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．４
０，３４６−３５１（１９５２）〕により作製したフィ
ブリン平板（プラスミノーゲンを含まない）によりプラ
スミンのそれと比較した。表１がその結果である。
【００１６】
【表１】
【００１７】抽出ナットウキナーゼは３ｐｍｏｌで１０
５．０±２．０ｍｍ2 、５ｐｍｏｌで１３５．２±２．
６ｍｍ2 、醗酵ナットウキナーゼは３ｐｍｏｌで１１
０．０±３．０ｍｍ2 、５ｐｍｏｌで１４０．５±２．
５ｍｍ2 のフィブリン溶解窓を示したのに対して、プラ
スミンは３０ｐｍｏｌで１２７．１±１．９ｍｍ2 、５
０ｐｍｏｌで１４３．０±５．９ｍｍ2 であった。この
結果より、抽出および醗酵ナットウキナーゼのフィブリ
ン分解活性はプラスミンのそれと比較して、約９〜１０
倍程度強いことがわかった。
５．０±２．０ｍｍ2 、５ｐｍｏｌで１３５．２±２．
６ｍｍ2 、醗酵ナットウキナーゼは３ｐｍｏｌで１１
０．０±３．０ｍｍ2 、５ｐｍｏｌで１４０．５±２．
５ｍｍ2 のフィブリン溶解窓を示したのに対して、プラ
スミンは３０ｐｍｏｌで１２７．１±１．９ｍｍ2 、５
０ｐｍｏｌで１４３．０±５．９ｍｍ2 であった。この
結果より、抽出および醗酵ナットウキナーゼのフィブリ
ン分解活性はプラスミンのそれと比較して、約９〜１０
倍程度強いことがわかった。
【００１８】実施例２ 参考例１の方法により精製したナットウキナーゼ（２０
μｇ＝０．７２ｎｍｏｌ）を用いて任意の量（３，５，
７，１０ｍｇ）の安定化フィブリンを０．１５Ｍ塩化ナ
トリウムを含む５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．
４）１ｍｌ中、懸濁状態で消化し、遠心した後、上清を
非還元状態でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供した後、０．５％ク
マジ−ブリリアントブルーを用いて、ナットウキナーゼ
消化により生成してきた安定化フィブリンの分解産物
（１７５ｋＤａおよび１１０ｋＤａ）を染色した。反応
速度定数は、上記の方法で検出した分解産物（１７５ｋ
Ｄａおよび１１０ｋＤａ）の量をウシ血清アルブミンを
標準タンパクとして、デンシトメーター（Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ ＬＫＢ ２２２２ ＵｌｔｒｏＳｃａｎ Ｘ
Ｌ）により測定することで求めた反応初速度を用いて、
Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋ ｐｌｏｔにより求め
た。対照として、プラスミン（６７μｇ＝０．７２ｎｍ
ｏｌ）を用いて同様に反応速度定数を測定した。表２が
その結果である。
μｇ＝０．７２ｎｍｏｌ）を用いて任意の量（３，５，
７，１０ｍｇ）の安定化フィブリンを０．１５Ｍ塩化ナ
トリウムを含む５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．
４）１ｍｌ中、懸濁状態で消化し、遠心した後、上清を
非還元状態でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供した後、０．５％ク
マジ−ブリリアントブルーを用いて、ナットウキナーゼ
消化により生成してきた安定化フィブリンの分解産物
（１７５ｋＤａおよび１１０ｋＤａ）を染色した。反応
速度定数は、上記の方法で検出した分解産物（１７５ｋ
Ｄａおよび１１０ｋＤａ）の量をウシ血清アルブミンを
標準タンパクとして、デンシトメーター（Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ ＬＫＢ ２２２２ ＵｌｔｒｏＳｃａｎ Ｘ
Ｌ）により測定することで求めた反応初速度を用いて、
Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋ ｐｌｏｔにより求め
た。対照として、プラスミン（６７μｇ＝０．７２ｎｍ
ｏｌ）を用いて同様に反応速度定数を測定した。表２が
その結果である。
【００１９】
【表２】 安定化フィブリンにおけるナットウキナーゼ およびプラスミンの反応速度定数 ─────────────────────────────────── ｋｃａｔ Ｋｍ ｋｃａｔ／Ｋｍ （ｓｅｃ-1） （×１０-5Ｍ） （ｓｅｃ-1Ｍ-1） ─────────────────────────────────── ナットウキナーゼ ６．４３×１０-3 ２．０３ ３．１７×１０2 プラスミン １．３５×１０-2 ２５．０ ０．５４×１０2 ───────────────────────────────────
【００２０】ナットウキナーゼの場合見かけのＫｍ値が
２．０３×１０-5（Ｍ）であるのに対して、プラスミン
では見かけのＫｍ値は２５．０×１０-5（Ｍ）であっ
た。さらにｋｃａｔ／Ｋｍはナットウキナーゼが３．１
７×１０2 （ｓｅｃ-1Ｍ-1）であるのに対して、プラス
ミンは０．５４×１０2 （ｓｅｃ-1Ｍ-1）であった。以
上の結果より、ナットウキナーゼの安定化フィブリンに
対する親和性がプラスミンと比較して約１２倍高いこ
と、さらに、安定化フィブリン分解速度は約６倍速いこ
とがわかった。
２．０３×１０-5（Ｍ）であるのに対して、プラスミン
では見かけのＫｍ値は２５．０×１０-5（Ｍ）であっ
た。さらにｋｃａｔ／Ｋｍはナットウキナーゼが３．１
７×１０2 （ｓｅｃ-1Ｍ-1）であるのに対して、プラス
ミンは０．５４×１０2 （ｓｅｃ-1Ｍ-1）であった。以
上の結果より、ナットウキナーゼの安定化フィブリンに
対する親和性がプラスミンと比較して約１２倍高いこ
と、さらに、安定化フィブリン分解速度は約６倍速いこ
とがわかった。
【００２１】実施例３ 参考例１により精製したナットウキナーゼ（抽出ナット
ウキナーゼ）および参考例２により精製したナットウキ
ナーゼ（醗酵ナットウキナーゼ）（３．３ｍｇ／ｋｇ＝
０．１２μｍｏｌ／ｋｇ）を酢酸（４７％）の刺激によ
り右総頸動脈に閉塞血栓を作製した血栓症モデルラット
５匹に、大腿静脈より定速で２０分かけて注入し、血栓
形成部位（右総頸動脈）の血流の回復を連続的に測定し
た。血流は電磁血流計（Ｍｏｄｅｌ １４０１，スカラ
ー社製）のプローブ（直径０．７ｍｍ）を右頸動脈（血
栓形成部位よりも上部）に装着して測定した。なお、血
栓により血流が停止したときを閉塞血栓形成期とし、閉
塞血栓形成後、５分間血流が停止した状態であることを
確認した後、ナットウキナーゼを注入した。対照とし
て、生理食塩水、および線溶酵素であるプラスミン（１
１ｍｇ／ｋｇ＝０．１２μｍｏｌ／ｋｇ）を用いた。測
定終了後、直ちに血栓形成部位の組織切片を作製し血栓
の状態を観察した。この結果、抽出および醗酵ナットウ
キナーゼ投与群は共に、投与開始後６０分で血流が約６
０％まで回復したのに対して、プラスミン投与群は投与
開始後６０分で２０％しか回復しなかった。また生理食
塩水投与群では、全く回復は認められなかった（図
１）。さらに、各投与群の血栓形成部位の組織切片を作
製し、検鏡した結果、抽出および醗酵ナットウキナーゼ
投与群は血栓を顕著に溶解していたのに対して、プラス
ミン投与群では若干の溶解が認められただけであった。
また生理食塩水投与群では血栓の溶解は認められなかっ
た（図２）。これらの結果より、ナットウキナーゼは生
体内で強力な血栓溶解作用を示すことがわかった。
ウキナーゼ）および参考例２により精製したナットウキ
ナーゼ（醗酵ナットウキナーゼ）（３．３ｍｇ／ｋｇ＝
０．１２μｍｏｌ／ｋｇ）を酢酸（４７％）の刺激によ
り右総頸動脈に閉塞血栓を作製した血栓症モデルラット
５匹に、大腿静脈より定速で２０分かけて注入し、血栓
形成部位（右総頸動脈）の血流の回復を連続的に測定し
た。血流は電磁血流計（Ｍｏｄｅｌ １４０１，スカラ
ー社製）のプローブ（直径０．７ｍｍ）を右頸動脈（血
栓形成部位よりも上部）に装着して測定した。なお、血
栓により血流が停止したときを閉塞血栓形成期とし、閉
塞血栓形成後、５分間血流が停止した状態であることを
確認した後、ナットウキナーゼを注入した。対照とし
て、生理食塩水、および線溶酵素であるプラスミン（１
１ｍｇ／ｋｇ＝０．１２μｍｏｌ／ｋｇ）を用いた。測
定終了後、直ちに血栓形成部位の組織切片を作製し血栓
の状態を観察した。この結果、抽出および醗酵ナットウ
キナーゼ投与群は共に、投与開始後６０分で血流が約６
０％まで回復したのに対して、プラスミン投与群は投与
開始後６０分で２０％しか回復しなかった。また生理食
塩水投与群では、全く回復は認められなかった（図
１）。さらに、各投与群の血栓形成部位の組織切片を作
製し、検鏡した結果、抽出および醗酵ナットウキナーゼ
投与群は血栓を顕著に溶解していたのに対して、プラス
ミン投与群では若干の溶解が認められただけであった。
また生理食塩水投与群では血栓の溶解は認められなかっ
た（図２）。これらの結果より、ナットウキナーゼは生
体内で強力な血栓溶解作用を示すことがわかった。
【００２２】実験例１（毒性試験） 参考例１において得られた抽出ナットウキナーゼ精製物
および参考例２で得られた発酵ナットウキナーゼ精製物
をそれぞれ３２０ｍｇ宛腸溶カプセルに充填し、雄性の
ピーグル犬（体重８ｋｇ）に対し７経口投与した（各３
例宛実施）。投与後、一般症状、体重および摂餌量を定
期的に２週間観察した。その結果、全ての所見に何ら異
状は認められなかった。
および参考例２で得られた発酵ナットウキナーゼ精製物
をそれぞれ３２０ｍｇ宛腸溶カプセルに充填し、雄性の
ピーグル犬（体重８ｋｇ）に対し７経口投与した（各３
例宛実施）。投与後、一般症状、体重および摂餌量を定
期的に２週間観察した。その結果、全ての所見に何ら異
状は認められなかった。
【００２３】
【発明の効果】本発明によれば、血栓に対して選択性の
高い強力な注射用血栓溶解剤が提供される。
高い強力な注射用血栓溶解剤が提供される。
【図１】実施例３の実験結果を示す。横軸は閉塞血栓作
製時を０分として、投与開始からの経過時間を表示し、
縦軸には酢酸刺激による血栓形成前の血流（１００％）
に対する各時間の血流を相対的に表し、値は平均値±標
準誤差（例数は５例）で表示している。
製時を０分として、投与開始からの経過時間を表示し、
縦軸には酢酸刺激による血栓形成前の血流（１００％）
に対する各時間の血流を相対的に表し、値は平均値±標
準誤差（例数は５例）で表示している。
【図２】本図も実施例３の実験結果を示し、各投与群の
血栓の断面を示す顕微鏡写真（×１２５）で、各写真中
央の白班は血栓の溶解を示している。
血栓の断面を示す顕微鏡写真（×１２５）で、各写真中
央の白班は血栓の溶解を示している。
【手続補正書】
【提出日】平成６年９月１４日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項２
【補正方法】変更
【補正内容】
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は納豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ Ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｎａｔｔｏ）の生産する線溶酵
素を有効成分とする注射用血栓溶解剤に関する。
ｓ Ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｎａｔｔｏ）の生産する線溶酵
素を有効成分とする注射用血栓溶解剤に関する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００３】また、バチルス・スブチリスを包含するバ
チルス属菌の生産するスブチリシン族蛋白分解酵素を含
有する経口用血栓溶解剤が提案されているが、ヒト由来
でないため、静注すると抗原−抗体反応を起す可能性が
あるとして、専ら経口用として用いられている（特開平
１−１８０８３４号公報）。
チルス属菌の生産するスブチリシン族蛋白分解酵素を含
有する経口用血栓溶解剤が提案されているが、ヒト由来
でないため、静注すると抗原−抗体反応を起す可能性が
あるとして、専ら経口用として用いられている（特開平
１−１８０８３４号公報）。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００６】ＳＫ、ＵＫ、ｔＰＡ、およびＳＡＫは上記
のような種々の問題点を有している。またスブチリシン
族蛋白分解酵素や納豆菌の生産する線溶酵素は経口投与
されているが、蛋白質は経口的にはそのまま吸収され難
いと考えられるので、これらの酵素を経口投与したとき
どのような機序で血中において線溶活性が発現に至るの
か不明である。さらに、経口以外に投与法が知られてい
ないが、患者の容態によっては経口投与が不適の場合も
ある。
のような種々の問題点を有している。またスブチリシン
族蛋白分解酵素や納豆菌の生産する線溶酵素は経口投与
されているが、蛋白質は経口的にはそのまま吸収され難
いと考えられるので、これらの酵素を経口投与したとき
どのような機序で血中において線溶活性が発現に至るの
か不明である。さらに、経口以外に投与法が知られてい
ないが、患者の容態によっては経口投与が不適の場合も
ある。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００８】本発明は、有効成分として納豆菌の生産す
る線溶酵素を含有してなる注射用血栓溶解剤である。納
豆菌の生産する線溶酵素（以下、ナットウキナーゼと略
称する）の精製法、理化学的および酵素的性状ならびに
アミノ酸配列は、前記のように、中西らにより特開平３
−１６８０８２号公報に、ならびに本発明者らによりＢ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ・Ｃｏｍｍｕ
ｎ．１９７，１３４０−１３４７（１９９３）および特
開平６−１５３９７７号公報に発表されている。その精
製は納豆または納豆菌の培養物の水性抽出液をたとえ
ば、疎水性クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラ
フィ、ゲル濾過クロマトグラフィ等のクロマトグラフィ
に付し、線溶活性を示す分画を採取することによって行
われる。
る線溶酵素を含有してなる注射用血栓溶解剤である。納
豆菌の生産する線溶酵素（以下、ナットウキナーゼと略
称する）の精製法、理化学的および酵素的性状ならびに
アミノ酸配列は、前記のように、中西らにより特開平３
−１６８０８２号公報に、ならびに本発明者らによりＢ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ・Ｃｏｍｍｕ
ｎ．１９７，１３４０−１３４７（１９９３）および特
開平６−１５３９７７号公報に発表されている。その精
製は納豆または納豆菌の培養物の水性抽出液をたとえ
ば、疎水性クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラ
フィ、ゲル濾過クロマトグラフィ等のクロマトグラフィ
に付し、線溶活性を示す分画を採取することによって行
われる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００９】注射用として用いた場合に、納豆菌やその
培地に由来するナットウキナーゼ以外の夾雑物の影響を
防ぐためには、ゲル濾過クロマトグラフィで線溶活性を
有する単一ピークを得るまでナットウキナーゼを精製す
るのが望ましい。前記のようにナットウキナーゼは毒性
も明らかでなく、経口的にしか投与されていなかった
が、本発明者らの研究により、毒性は極めて少く、静脈
注射により生体に害を及ぼさずに血栓溶解作用を示すこ
とが判った（実験例参照）。ナットウキナーゼは安定化
フィブリン（血栓）に対して親和性が強く、そのため血
中に注入されたナットウキナーゼは安定化フィブリンに
直接作用して分解することができる。したがって、その
血栓分解作用は急速かつ確実であり、またフィブリノゲ
ンに対する作用は弱いので血中のフィブリノゲンが激減
することはない。
培地に由来するナットウキナーゼ以外の夾雑物の影響を
防ぐためには、ゲル濾過クロマトグラフィで線溶活性を
有する単一ピークを得るまでナットウキナーゼを精製す
るのが望ましい。前記のようにナットウキナーゼは毒性
も明らかでなく、経口的にしか投与されていなかった
が、本発明者らの研究により、毒性は極めて少く、静脈
注射により生体に害を及ぼさずに血栓溶解作用を示すこ
とが判った（実験例参照）。ナットウキナーゼは安定化
フィブリン（血栓）に対して親和性が強く、そのため血
中に注入されたナットウキナーゼは安定化フィブリンに
直接作用して分解することができる。したがって、その
血栓分解作用は急速かつ確実であり、またフィブリノゲ
ンに対する作用は弱いので血中のフィブリノゲンが激減
することはない。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１４】 参考例２（醗酵ナットウキナーゼ精製物の製造） ２％フラクトース、１．５％ソイペプトン（Ｄｉｆｃｏ
Ｌａｂ．）、０．２％酵母エキス０．１％ＫＨ２ＰＯ
４，０．３％Ｋ２ＨＰＯ４，０．０５％ＭｇＳＯ４・５
Ｈ２Ｏ，０．０２％ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ ｐＨ７．０
の組成に終濃度２％のマルトースを加えた培地１００ｍ
ｌを５００ｍｌ容三角フラスコに入れ、納豆菌であるバ
チルス・ズブチリスＢ−４０７株（微工研条寄４０４３
号）を接種して、０℃で１８時間種母培養した。該種母
培養液５０ｍｌ（２％）を０．１％カラリンを含む同じ
組成の培地２．５リットルの入った５リットル容発酵槽
に加え、回転数８００ｒｐｍ、３０℃で毎分２．５リッ
トルの空気を送りながら、７０時間通気攪拌培養した。
その培養上清に終濃度１．５Ｍとなるように硫安を加
え、あらかじめ１．５Ｍ硫安、１０ｍＭリン酸ナトリウ
ムｐＨ７．２で平衡化しておいたブチル−セファロース
４ファーストフロー（ファルマシア）に吸着させた。同
緩衝液で洗浄した後、０．５Ｍ硫安、１０ｍＭリン酸ナ
トリウム、ｐＨ７．２でナットウキナーゼを段階溶出さ
せ、合成基質Ｓｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ
−ｐＮＡに対する水解活性の分画を採取した。セファデ
ックスＧ２５（ファルマシア）により、１０ｍＭリン酸
ナトリウム、ｐＨ７．２に緩衝液を交換したのち、Ｓ−
セファロースファーストフロー（ファルマシア）に吸着
させ、同緩衝液で洗浄後、０．１Ｍ塩化ナトリウム、１
０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２で段階溶出させ、
同様に活性分画を採取した。最後に、０．１２Ｍ塩化ナ
トリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５で平
衡化したセファクリルＳ−２００ＨＲ（ファルマシア）
にてゲル濾過を行ない単一のピークを示す活性分画とし
て精製ナットウキナーゼを得た。
Ｌａｂ．）、０．２％酵母エキス０．１％ＫＨ２ＰＯ
４，０．３％Ｋ２ＨＰＯ４，０．０５％ＭｇＳＯ４・５
Ｈ２Ｏ，０．０２％ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ ｐＨ７．０
の組成に終濃度２％のマルトースを加えた培地１００ｍ
ｌを５００ｍｌ容三角フラスコに入れ、納豆菌であるバ
チルス・ズブチリスＢ−４０７株（微工研条寄４０４３
号）を接種して、０℃で１８時間種母培養した。該種母
培養液５０ｍｌ（２％）を０．１％カラリンを含む同じ
組成の培地２．５リットルの入った５リットル容発酵槽
に加え、回転数８００ｒｐｍ、３０℃で毎分２．５リッ
トルの空気を送りながら、７０時間通気攪拌培養した。
その培養上清に終濃度１．５Ｍとなるように硫安を加
え、あらかじめ１．５Ｍ硫安、１０ｍＭリン酸ナトリウ
ムｐＨ７．２で平衡化しておいたブチル−セファロース
４ファーストフロー（ファルマシア）に吸着させた。同
緩衝液で洗浄した後、０．５Ｍ硫安、１０ｍＭリン酸ナ
トリウム、ｐＨ７．２でナットウキナーゼを段階溶出さ
せ、合成基質Ｓｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ
−ｐＮＡに対する水解活性の分画を採取した。セファデ
ックスＧ２５（ファルマシア）により、１０ｍＭリン酸
ナトリウム、ｐＨ７．２に緩衝液を交換したのち、Ｓ−
セファロースファーストフロー（ファルマシア）に吸着
させ、同緩衝液で洗浄後、０．１Ｍ塩化ナトリウム、１
０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２で段階溶出させ、
同様に活性分画を採取した。最後に、０．１２Ｍ塩化ナ
トリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５で平
衡化したセファクリルＳ−２００ＨＲ（ファルマシア）
にてゲル濾過を行ない単一のピークを示す活性分画とし
て精製ナットウキナーゼを得た。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１５】実施例１ 参考例１において得られた抽出ナットウキナーゼ精製物
および参考例２において得られた醗酵ナットウキナーゼ
精製物のフィブリン分解活性を、Ａｓｔｒｕｐらの方法
〔Ａｒｃｈｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．４
０，３４６−３５１（１９５２）〕により作製したフィ
ブリン平板（プラスミノーゲンを含まない）によりプラ
スミンのそれと比較した。表１がその結果である。
および参考例２において得られた醗酵ナットウキナーゼ
精製物のフィブリン分解活性を、Ａｓｔｒｕｐらの方法
〔Ａｒｃｈｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．４
０，３４６−３５１（１９５２）〕により作製したフィ
ブリン平板（プラスミノーゲンを含まない）によりプラ
スミンのそれと比較した。表１がその結果である。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２２】実験例１（毒性試験） 参考例１において得られた抽出ナットウキナーゼ精製物
および参考例２で得られた醗酵ナットウキナーゼ精製物
をそれぞれ３２０ｍｇ宛腸溶カプセルに充填し、雄性の
ピーグル犬（体重８ｋｇ）に対して経口投与した（各３
例宛実施）。投与後、一般症状、体重および摂餌量を定
期的に２週間観察した。その結果、全ての所見に何ら異
状は認められなかった。
および参考例２で得られた醗酵ナットウキナーゼ精製物
をそれぞれ３２０ｍｇ宛腸溶カプセルに充填し、雄性の
ピーグル犬（体重８ｋｇ）に対して経口投与した（各３
例宛実施）。投与後、一般症状、体重および摂餌量を定
期的に２週間観察した。その結果、全ての所見に何ら異
状は認められなかった。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２
【補正方法】変更
【補正内容】
【図２】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｎ 9/54 Ｃ１２Ｒ 1:07） (72)発明者 三沢 悟 埼玉県戸田市新曽南３丁目17番35号 ジャ パンエナジー株式会社内 (72)発明者 竹内 尚人 埼玉県戸田市新曽南３丁目17番35号 ジャ パンエナジー株式会社内
Claims (3)
- 【請求項１】 有効成分として納豆菌の生産する線溶酵
素を含有する注射用血栓溶解剤。 - 【請求項２】 線溶酵素が納豆もしくは納豆菌培養物の
水性抽出物を精製して得られる線溶活性分画である請求
項１記載の注射用血栓溶剤。 - 【請求項３】 線溶活性分画がゲル濾過クロマトグラフ
ィで単一のピークを示す請求項１記載の注射用血栓溶解
剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6210518A JPH0853364A (ja) | 1994-08-10 | 1994-08-10 | 注射用血栓溶解剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6210518A JPH0853364A (ja) | 1994-08-10 | 1994-08-10 | 注射用血栓溶解剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0853364A true JPH0853364A (ja) | 1996-02-27 |
Family
ID=16590703
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6210518A Pending JPH0853364A (ja) | 1994-08-10 | 1994-08-10 | 注射用血栓溶解剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0853364A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001299277A (ja) * | 2000-04-21 | 2001-10-30 | Nippon Seibutsu Kagaku Kenkyusho:Kk | 納豆菌培養エキス |
| WO2003013565A1 (fr) * | 2001-08-08 | 2003-02-20 | Toyo Hakko Co., Ltd. | Materiaux fonctionnels, agonistes sod, hypotensifs et thrombolytiques, leur procede de production et souches microbiennes a utiliser |
| CN1108817C (zh) * | 1999-12-27 | 2003-05-21 | 华东师范大学 | 溶栓剂 |
| KR100478214B1 (ko) * | 2002-08-01 | 2005-03-21 | 에이치 엘 지노믹스(주) | 바실러스 속 ｈｌｎ-21 균주 유래의 혈전용해효소 및 이를 분리·정제하는 방법 |
| WO2006025276A1 (ja) * | 2004-08-31 | 2006-03-09 | Kumamoto University | ナットウキナーゼを含む眼科疾患の治療・予防剤 |
| CN105018452A (zh) * | 2015-08-12 | 2015-11-04 | 武汉真福医药股份有限公司 | 溶栓酶qk基因及含有该基因的重组表达载体、重组菌及应用 |
| JP2020147512A (ja) * | 2019-03-12 | 2020-09-17 | オルガノフードテック株式会社 | 血栓溶解剤、血栓溶解作用促進剤、血栓溶解作用促進方法 |
-
1994
- 1994-08-10 JP JP6210518A patent/JPH0853364A/ja active Pending
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JPWO2006025276A1 (ja) * | 2004-08-31 | 2008-05-08 | 国立大学法人 熊本大学 | ナットウキナーゼを含む眼科疾患の治療・予防剤 |
| CN105018452A (zh) * | 2015-08-12 | 2015-11-04 | 武汉真福医药股份有限公司 | 溶栓酶qk基因及含有该基因的重组表达载体、重组菌及应用 |
| JP2020147512A (ja) * | 2019-03-12 | 2020-09-17 | オルガノフードテック株式会社 | 血栓溶解剤、血栓溶解作用促進剤、血栓溶解作用促進方法 |
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