JPH11503168A - 非消化性オリゴ糖によるＣ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染の抑制 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 抗生物質関連下痢（偽膜性大腸炎としても周知）の主病因はＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅであることが認識されている。健康な個体の常在微生物叢は正常に存在するＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅを抑制すると考えられる。しかし、常在微生物叢が（例えば抗生物質治療の間に）崩壊すると、Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅは過剰増殖して下痢及び大腸炎を誘発しかねない。Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅを抗生物質で処置することが有効と判明しているが、再発が幾度も繰り返される。また、下痢に起因する脱水症は重大な問題である。微生物叢の正常化によってＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅの再発を抑制できることが示唆されている。非消化性オリゴ糖はＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染を抑制することが判明した。このような非消化性オリゴ糖を含有する経口再水和溶液剤は、体液及び電解質の補充も実現する。

Description

【発明の詳細な説明】 非消化性オリゴ糖によるＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ 感染の抑制 本発明は、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅに関連する疾患状態 の抑制に非消化性（ｉｎｄｉｇｅｓｔｉｂｌｅ）オリゴ糖を用いる方法、及び非 消化性オリゴ糖を含有する経口再水和溶液剤組成物に係わる。 急性下痢に首尾良く対処することは、今日でもなお一つの課題である。急性下 痢は体液と電解質との両方の損失を招く。長年にわたって、急性下痢に関連する 脱水症を予防及び治療する方法は経験的に開発されてきた。経口溶液剤を即時投 与すれば、脱水症の進行及び電解質不均衡を防止することができる。最近ようや く、臨床医は治療のより合理的な基盤となり得る下痢の病因論的及び病態生理学 的知識を獲得した。下痢にはしばしばＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉ ｌｅ（Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）が関与する。下痢の危険性は、個体が密集す るような生活または作業条件下、特に腸内病原体が糞便から口へと運ばれる恐れ が大きい場合に増大する。 Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅは院内感染の代表的な既知原 因である。Ｇｒｅｅｎｏｕｇｈ等， “Ｄｉａｒｒｈｅａ ｉｎ ｔｈｅ ｅｌ ｄｅｒｌｙ，” Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｇｅｒｉａｔｒｉｃ Ｍｅｄｉ ｃｉｎｅ ａｎｄ Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ ， Ｈａｚｚａｒｄ等編，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ， ｐｐ．１１６８−１１７６， １９９ ０； ＭｃＦａｒｌａｎｄ等， “Ａ Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ Ｐｌａｃｅｂｏ −Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｔｒｉａｌ ｏｆ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂ ｏｕｌａｒｄｉｉ ｉｎ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｓｔａｎｄａｒ ｄ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ｆｏｒ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃ ｉｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ，” Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａ ｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ２７１（２４）， ｐｐ．１９ １３−１９１８， １９９４参照。Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅに感染する最大の 危険性は普通、抗生物質療法と組み合わせられた（実際上通常は胃腸に関する） 外科的処置に伴う。前記のような処置を施される患者が取る食事はしばしば、正 常腸内細菌の確立または維持を導かない。加えて、Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅは 、下痢の発生が日常的である老人用長 期介護施設において地域流行性（ｅｎｄｅｍｉｃ）であり得る。Ｂｅｎｄｅｒ等 ， “Ｉｓ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ ｅｎｄｅｍｉｃ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ−ｃａｒｅ ｆａｃｉｌｉｔｉｅｓ？” Ｔｈｅ Ｌａｎ ｃｅｔ ２， ｐｐ．１１−１３， １９８６参照。 上記病原体への感染は経済的にも重大な結果をもたらし、なぜならＣ． ｄｉ ｆｆｉｃｉｌｅが誘発する疾患を得た患者は比較的長期間入院しなければならず 、その結果健康管理に余分なコストが掛かる。Ｋｏｆｓｋｙ等， “Ｃｌｏｓｔ ｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ─ａ ｃｏｍｍｏｎ ａｎｄ ｃｏｓｔｌｙ ｃｏｌｉｔｉｓ，” Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｏｌｏｎ ａｎｄ Ｒｅｃｔｕｍ ３４， ｐｐ．２４４−２４８， １９９１には、Ｃ． ｄｊ ｆｆｉｃｉｌｅ感染によって健康管理コストが１エピソード当たり＄２，０００ 〜５，０００増えることが指摘されている。そのうえ、１９９１年に老人医療施 策（Ｍｅｄｉｃａｒｅ）において、脱水症の初期診断で入院に掛かったコストは ４億４６００万ドルであった。Ｗａｒｒｅｎ等， “Ｔｈｅ Ｂｕｒｄｅｎ ａ ｎｄ Ｏｕｔｃｏｍｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｄｅｈｙ ｄｒａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ Ｕ．Ｓ． Ｅｌｄｅｒｌｙ，１９９１，” Ａｍ ｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ ８４（８ ）， ｐｐ．１２６５−１２６９， １９９４参照。更に、入院中に感染した患 者は感染を長期介護施設とその周囲へと広めることが判明している。Ｂｅｎｄｅ ｒ等， “Ｉｓ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｊｆｆｉｃｉｌｅ ｅｎｄｅｍｉ ｃ ｉｎｃｈｒｏｎｉｃ−ｃａｒｅ ｆａｃｉｌｉｔｉｅｓ？”Ｔｈｅ Ｌａｎ ｃｅｔ ２， ｐｐ．１１−１３， １９８６； Ｂｅｎｎｅｔ等， “Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅｄｉａｒｒｈｅａ： Ａ ｃｏｍｍｏｎ− ａｎｄ ｏｖｅ ｒｌｏｏｋｅｄ−ｎｕｒｓｉｎｇ ｈｏｍｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，” Ｇｅｒ ｉａｔｒｉｃｓ ４５， ｐｐ．７７−８７， １９９０； Ｋｏｆｓｋｙ等， “Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｊｆｆｉｃｉｌｅ─ａ ｃｏｍｍｏｎ ａｎｄ ｃｏｓｔｌｙ ｃｏｌｉｔｉｓ，” Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｏ ｌｏｎ ａｎｄ Ｒｅｃｔｕｍ ３４， ｐｐ．２４４−２４８， １９９１； Ｍｕｌｌｉｇａｎ等， “Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｈｏｓｐｉ ｔａｌ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｂｙ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ，”Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｉ ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ３， ｐｐ．１７３−１７５， １９７９参照。Ｔｈｏ ｍａｓ等，“Ｐｏｓｔａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｗｉ ｔｈ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ ｉｎ ｎｕｒｓｉｎｇ ｈｏｍｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ，” Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒ ｉｃａｎ Ｇｅｒｉａｔｒｉｃｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ ３８，ｐｐ．４１５−４２ ０， １９９０には、「……抗生物質投与後（ｐｏｓｔａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ） Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染は在宅看護患者において死の標識（ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｄｅａｔｈ）として用いられ、この標識は抗生物質治療単独の場合の危 険性と区別し得る」ことが指摘されている。 Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅは、胞子を形成する偏性嫌気性桿菌である。この細 菌は健康な成人の約３〜５％の正常腸内細菌叢の構成要素であるが、成人入院患 者の１５〜２０％以下、及び５０％もの高率の無症候乳児の糞便中に見出され得 る。Ｆｅｋｅｔｙ， “Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｄｉａ ｒｒｈｅａ，” Ｄｉａｒ ｒｈｅａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ， Ｆｉｅｌｄ編， ｐｐ．２９３−３１７， １９９１参照。 結腸内で確立された場合、病原性のＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ株は下痢及び大 腸炎の原因となる毒素を産生する。Ｂａｎｎｏ等， “Ｔｗｏ ｔｏｘｉｎｓ （Ｄ−１ ａｎｄ Ｄ−２） ｏｆ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉ ｌｅ ｃａｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｃｏｌ ｉｔｉｓ： Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｏｍｅ ｃｈａｒａｃｔｅ ｒｉｚａｔｉｏｎ，” Ｂｌｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ ｌ ２， ｐｐ．６２５−６３５， １９８１； Ｔａｙｌｏｒ等， “Ｃｏｍ ｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｔｏｘｉｎｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｃｌ ｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ，” Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３４， ｐｐ．１０３６−１０４３， １９８１参照。Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅは、毒素Ａ及び毒素Ｂとして知られている２種の大型タン パク質外毒素を産生する。毒素Ａは、齧歯類の腸内に注入すると体液分泌、粘膜 傷害及び脳内炎症を惹起する。Ｔｒｉａｄａｆｉｌｏｐｏｕｌｏｓ等， “Ｄｉ ｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉ ｆｆｉｃｉｌｅ ｔｏｘｉｎｓ Ａａｎｄ Ｂ ｏｎ ｒａｂｂｉｔ ｉｌｅｕ ｍ，” Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ９３， ｐｐ．２７３−２７９， １９８７参照。毒素Ｂは、組織培養における細胞毒としては毒素Ａよりも強力 であるが、動物に対する脳毒素ではない。Ｋｅｌｌｙ等， “Ｃｌｏｓｔｒｉｄ ｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ，” Ｔｈｅ Ｎｅｗｅｎｇｌａ ｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３３０（４）， ｐｐ．２５ ７−２６２， １９９４参照。下痢の結果としての脱水症はしばしばＣ．ｄｉｆ ｆｉｃｉｌｅ感染に起因する。 毒素Ａ（日本の文献からは毒素Ｄ−２として公知）は腸毒素であり、Ｃ． ｄ ｉｆｆｉｃｉｌｅ関連疾患の一次媒介物質と看做される。毒素Ａの分子量（ＭＷ ）は約３０８，０００である。毒素Ｂ（日本の文献からは毒素Ｄ−１として公知 ）は細胞毒であり、その分子量は約２７０，０００である。毒素Ａが胃腸管内で 組織傷害を惹起し、この傷害が毒素Ｂにより増悪して下痢及び大腸炎に至ると考 えられる。 Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染は、非合併性下痢、非特異性大腸炎、または最 も重篤な場合偽膜性大腸炎（ＰＭＣ）として臨床的に発現する。脱水症、中毒性 巨大結腸症または腸穿孔といった合併症が原因で患者が死亡する場合も有る。Ｍ ｃＦａｒｌａｎｄ等， “Ｎｏｓｏｃｏｍｉａｌ Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ ｏ ｆ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，” Ｔｈｅ Ｎｅｗｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３ ２０， ｐｐ．２０４−２１０， １９８９； Ｂｒｏｗｎ等， “Ｒｉｓｋ Ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ Ｔｏ ｘｉｎ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｄｉａｒｒｈｅａ，” Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ １１（６）， ｐｐ．２８３−２９０， １９９０参照。Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ大腸炎は あらゆる年代に発生するが、老人の、及び衰弱した患者において最も頻発する。 乳児では、その糞便中に上記細菌が普通に見出されるにしても上記大腸炎はまれ であり、通常抗生物質を用いた後にのみ発生する。Ｆｅｋｅｔｙ， “Ａｎｔｉ ｂｉｏｔｉｃ−Ａｓｓｏｃｉａ ｔｅｄ Ｄｉａｒｒｈｅａ，” Ｄｉａｒｒｈｅａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ， Ｆ ｉｅｌｄ編， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ発行， ｐｐ．２９３−３１７， １９９１参 照。Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染は、偽膜性大腸炎の全症例、及び大腸炎を伴 わない抗生物質関連下痢の症例の２０％までの原因となっている。Ｋｅｌｌｙ等 ， “Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ，” Ｔ ｈｅ Ｎｅｗｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３３ ０（４）， ｐｐ．２５７−２６２， １９９４； ＭｃＦａｒｌａｎｄ等， “Ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃ ｉｌｅ ｃａｒｒｉａｇｅ ａｎｄ Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ−ａｓｓｏｃｉ ａｔｅｄ ｄｉａｒｒｈｅａ ｉｎ ａ ｃｏｈｏｒｔ ｏｆ ｈｏｓｐｉｔａ ｌ ｐａｔｉｅｎｔｓ，” Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄ ｉｓｅａｓｅｓ １６２， ｐｐ．６７８−６８４， １９９０参照。 Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅは、該細菌の病院環境内伝播の容易さ及び抗生物質 の使用の広範さゆえに院内病原体として存続しやすい。はるかに珍しい感染の治 療のために任 意の経路で投与された抗生物質でもＰＭＣを惹起する恐れが有る。疾患の治療に 最も普通に用いられるものを含め、ヒトの感染の治療に用いられる抗微生物薬は 実際上いずれもＰＭＣを誘発することが知られている。Ｆｅｋｅｔｙ，“Ａｎｔ ｉｂｉｏｔｉｃ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｄｉａｒｒｈｅａ，” Ｄｉａｒｒｈ ｅａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ，Ｆｉｅｌｄ編， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ発行， ｐｐ． ２９３−３１７， １９９１参照。ＰＭＣは抗生物質の使用を中断した直後の期 間内（ほぼ常に６週間以内）に発症し得、前記期間内には正常腸内細菌叢はまだ 正常レベルに達せず、正常細菌叢のこのような不在によって、Ｃ． ｄｉｆｆｉ ｃｉｌｅが健康に有害な集団レベルにまで増殖することが可能となる。Ｆｅｋｅ ｔｙ， “Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｄｉａｒｒｈｅａ， ” Ｄｉａｒｒｈｅａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ， Ｆｉｅｌｄ編， Ｅｌｓｅｖｉ ｅｒ発行， ｐｐ．２９３−３１７， １９９１参照。Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌ ｅ関連疾患の標準的な治療法は、抗生物質のバンコマイシンまたはメトロニダゾ ールを投与することである。新規な抗生物質治療で、臨床試験で有効と判明され たものは無い。Ｆｅｋｅｔｙ等， “Ｄ ｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕ ｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ ｃｏｌｉｔｉｓ，” Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ２６９， ｐ ｐ．７１−７５， １９９３； Ｋｅｌｌｙ等，“Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄ ｉｆｆｉｃｉｌｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ，” Ｔｈｅ Ｎｅｗｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏ ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３３０（４）， ｐｐ．２５７−２６２ ， １９９４参照。標準的な抗生物質療法はＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ関連疾患 （ＣＤＤ）患者の８０％に有効であるが、残り２０％の患者は抗生物質投与中断 後の許容期の間に再度下痢または大腸炎のエピソードを経験する。Ｆｅｋｅｔｙ 等， “Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ａｓｓｏｃｉａｔ ｅｄ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ ｗｉｔ ｈ Ｏｒａｌ Ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ： Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ Ｔｗｏ Ｄｏｓａｇｅ Ｒｅｇｉｍｅｎｓ，” Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ８６， ｐｐ．１５−１９， １９８９； Ｗａｌｔ ｅｒｓ等， ”Ｒｅｌａｐｓｅ ｏｆ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｃｏｌｉｔｉｓ： ｅｎｄｏｇ ｅｎｏｕｓ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ ｏｆ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆ ｆｉｃｉｌｅｄｕｒｉｎｇ ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ ｔｈｅｒａｐｙ，” Ｇｕ ｔ ２４， ｐｐ．２０６−２１２， １９８３； Ｂａｒｔｌｅｔｔ等， “ Ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ Ｒｅｌａｐｓｅ Ａｆｔｅｒ Ｏｒａｌ Ｖａｎｃ ｏｍｙｃｉｎ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ａｓｓｏｃｉａ ｔｅｄ Ｐｓｅｕｄｏｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ ｃｏｌｉｔｉｓ，” Ｇａｓｔｒ ｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ７８， ｐｐ．４３１−４３４， １９８０参照。一 旦再発した患者は疾患エピソードを数年にわたって繰り返し経験する場合が有る 。Ｆｅｋｅｔｙ等， “Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏ ｆ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ ｃｏｌｉｔｉｓ，” Ｊｏ ｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉ ａｔｉｏｎ ２６９，ｐｐ．７１−７５， １９９３； Ｋｉｍｍｅｙ等， “ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｒｔｈｅｒ Ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉ ｆｆｉｃｉｌｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ ｗｉｔｈ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂ ｏｕｌａｒｄｉｉ，” Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ Ｓｃ ｉｅｎｃｅｓ３５（７）， ｐｐ．８９７−９０１， １９９０参照。Ｊｏｈｎ ｓｏｎ等は“Ｔｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ Ｃｌｏｓｔ ｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ ｃａｒｒｉｅｒｓ （ｆｅｃａｌ ｅｘｃ ｒｅｔｏｒｓ） ｗｉｔｈ ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ ｏｒｍｅｔｒｏｎｉｄａｚ ｏｌｅ，” Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １１ ７， ｐｐ．２９７−３０２， １９９０に、無作為化プラシーボ対照試験にお いてＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ下痢の院内発生を制御する手段としてのバンコマ イシン及びメトロニダゾールの、無症候のＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ糞便排出者 を皆無とする効力の比較を行なったと述べている。Ｊｏｈｎｓｏｎ等は、メトロ ニダゾールが有効でないこと、及びバンコマイシンは一時的には有効であっても 、処置から２ヵ月後のＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ保菌率が甚だしく高くなること に関連性を有することを発見した。Ｊｏｈｎｓｏｎ等はその結論において、Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅを排出す る無症候患者に抗生物質治療を施すことを推奨しなかった。 しかし、ＣＤＤにおいて抗生物質が原因として作用するのであれば、抗生物質 の代替物を探求することはＣＤＤという衰弱性状態の新規な治療法を開発するた めのより有効な手段となるかもしれない。ＣＤＤが病院にとって甚だしい負担と なること、及びこの疾患の誘発に抗生物質が関与することから、代替の予防及び 治療方法を開発することの重要性は大きい。発明の概要 即ち、本発明はその一態様において、哺乳動物のＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄ ｉｆｆｉｃｉｌｅ感染を抑制する方法を提供し、この方法は哺乳動物に治療有効 量の非消化性オリゴ糖を経小腸投与することを含む。好ましくは、オリゴ糖は１ −ケトース、ニストース（ｎｙｓｔｏｓｅ）もしくは１^F−β−フルクトフラノ ースといったフルクトオリゴ糖（ｆｒｕｃｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ）であるか、またはキシロビオース、キシロトリオースもしくはキシロテトロー スといったキシロオリゴ糖（ｘｙｌｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）である 。 第二の態様において、本発明はＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素Ａを抑制する方法を提供し、この方法は哺乳動物 に治療有効量の上記のような非消化性オリゴ糖を経小腸投与することを含む。 急性下痢に対処する重要な一方法に、体液及び電解質の補充が有る。体液療法 は、脱水症の重篤度に応じて経口投与または静脈内投与によって行ない得る。経 口再水和溶液剤は静脈内投与療法ほどコストが掛からない。体液療法が済んだら 、他の治療に取り掛かることもできる。 別の態様において本発明は、ナトリウム、カリウム、塩化物、重炭酸塩源、及 び先に挙げたような非消化性オリゴ糖を含有する経口再水和溶液剤を提供する。 本発明は、更に別の態様において、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉ ｌｅ感染に起因する下痢に関連する脱水症を治療する方法も提供し、この方法は ナトリウム、カリウム、塩化物、重炭酸塩源及び治療有効量の非消化性オリゴ糖 を含有する経口再水和溶液剤を経小腸投与することを含む。図面の簡単な説明 図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃは本発明の実施に有用なフルクトオリゴ糖の化学構造を 示す説明図である。 図２Ａ、２Ｂ及び２Ｃは本発明の実施に有用なキシロオリゴ糖の化学構造を示 す説明図である。 図３及び４は実験１の結果を示すグラフである。 図５及び６は実験２の結果を示すグラフである。 図７及び８は実験３の結果を示すグラフである。発明の詳細な説明 本明細書中及び請求の範囲各項中に用いた「非消化性オリゴ糖」という語は、 ヒトの上部消化管内での内因性消化に対して耐性である小型の炭水化物部分（重 合度２０未満、及び／または分子量３，６００未満）を意味する。本発明の好ま しい具体例に用い得る非消化性オリゴ糖はフルクトオリゴ糖及びキシロオリゴ糖 である。本発明の最も好ましい具体例に用い得る非消化性オリゴ糖は、１−ケト ース、ニストース及び１^F−β−フルクトフラノシルニストースフルクトオリゴ 糖の中から選択されたフルクトオリゴ糖、並びにキシロビオース、キシロトリオ ース及びキシロテトロースキシロオリゴ糖の中から選択されたキシロオリゴ糖で ある。 本明細書中に用いた「抑制」という語は、Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅの数を減 少させることと、Ｃ． ｄｉｆｆｉ ｃｉｌｅの数の増加を防止することとの両方を意味すると理解される。 フルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）は、（２→１）−β−グルコシド結合によって連 結されたフルクトース残基の鎖から成る炭水化物ポリマーであり、スクロースの ように（１→２）−α−結合によって連結された鎖の非還元末端にＤ−グルコシ ル残基を普通ただ１個有する。 ＦＯＳは、バナナ、トマト、タマネギ、コムギ、オオムギ、ハニー（ｈｏｎｅ ｙ）、アスパラガス及びアーティチョークを含めた多くの種類の植物に天然に存 在する。ＦＯＳは、真菌Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒから得られる酵素 などのトランスフルクトシル化酵素を用いてスクロースから合成することもでき る。Ｈｉｄａｋａ等，“Ｆｒｕｃｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ： Ｅ ｎｚｙｍａｔｉｃ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｂｉｏｆｕｎｃｔｉｏｎ ｓ，” Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ ｙ １０（４）， ｐｐ．５０９−５２２， １９９１参照。スクロースを上記 酵素で処理すると、２個、３個または４個のフルクトース残基を有するフルクト オリゴ糖の混合物が得 られる。得られるフルクトオリゴ糖は１−ケトース（ＧＦ₂）、ニストース（Ｇ Ｆ₃）及び１^F−β−フルクトフラノシルニストース（ＧＦ₄）とそれぞれ呼称さ れ、これらの化学構造は図１に示してある。ＦＯＳを工業生産する方法は、Ａｄ ａｃｈｉ等の米国特許第４，６８１，７７１号に開示されている。 ＦＯＳはラットまたはヒトの消化酵素によっては小腸内で加水分解されず、即 ち無傷のままで大腸に到達する。大腸では多くの腸内微生物がＦＯＳを利用する 。ＦＯＳは、きわめて有益な生物であると考えられるビフィズス菌類（ｂｉｆｉ ｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）によって最も盛んに利用され得る（Ｈｉｄａｋａ等）。 ＦＯＳは、ウェルシュ菌、Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅまたは大腸菌といった幾つ かの望ましくない腐敗菌によってはｉｎ ｖｉｔｒｏで利用され得ない。 小腸で消化されない炭水化物は、大腸内に見出される微生物により発酵されて 短鎖脂肪酸となり得る。短鎖脂肪酸は結腸細胞（ｃｏｌｏｎｏｃｙｔｅｓ）、及 び肝臓など他の器官のエネルギー源として用いられる。ＦＯＳは、おそらくＬＤ Ｌコレステロールレベルを低下させることによっ して総血中コレステロールを減少させ、また蠕動の促進によって便秘を軽減する ことも判明している（Ｈｉｄａｋａ等）。 キシロオリゴ糖（ＸＯＳ）は、トウモロコシ、サトウキビ及び綿実由来のキシ ランを酵素で加水分解することによって製造される。キシランをＴｒｉｃｈｏｄ ｅｒｍａ属由来酵素のキシラナーゼで加水分解するとＸＯＳが生成する。キシロ オリゴ糖は主として、β−１−４結合で連結された２個、３個及び４個のキシロ ース単位から成り、キシロビオース、キシロトリオース及びキシロテトロースと それぞれ呼称されるこれらのキシロオリゴ糖の化学構造は図２に示してある。主 要なＸＯＳであるキシロビオースは筍に比較的豊富に存在する。Ｉｍａｉｚｕｍ ｉ等， “Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｘｙｌｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｏｎ ｂｌｏｏｄ ｇｌｕｃｏｓｅ， ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｌ ｉｐｉｄｓ ａｎｄ ｃｅｃｕｍ ｓｈｏｒｔ−ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃ ｉｄｓｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒａｔｓ，” Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａ ｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５５（１）， ｐｐ．１９ ９−２０５， １９ ９１の、Ｆｕｊｉｋａｗａ及びＯｋａｚａｋｉ， Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓ（日本語版）１， ｐ．６３，１９８９からの引用参照。 ＸＯＳはＦＯＳ同様、ｉｎ ｖｉｔｒｏでビフィズス菌により選択的に利用さ れることが判明している。Ｏｋａｚａｋｉ等， “Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｘｙｌ ｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｂｉ ｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ，” Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ Ｍｉｃｒｏｆ ｌｏｒａ ９（２）， ｐｐ．７７−８６， １９９０参照。加えて、臨床的研 究から、ＸＯＳをヒトの食事に補充するとそれによって糞便から回収されるビフ ィズス菌のレベルが上昇することも判明している（Ｏｋａｚａｋｉ等）。更に、 ぶどう球菌、大腸菌、ウェルシュ菌及びＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅのような潜在 的病原菌はＸＯＳをエネルギー源として利用し得ないことがｉｎ ｖｊｔｒｏ研 究によって証明されている（Ｏｋａｚａｋｉ等）。 発酵性炭水化物の有益な作用の多くは結腸内での嫌気発酵の間に産生される酢 酸、プロピオン酸及び酪酸などの短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）によって媒介されるこ とが次第に明 らかになりつつある。短鎖脂肪酸は腸機能において重要な役割を果たす。１００ ｍｍｏｌのＳＣＦＡの吸収は３６０ｍｌの水の吸収と関連付けられる。Ｃａｓｐ ａｒｅｙ等，“Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｒ ｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎ ａｌ ｔｒａｃｔ，” Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｖｉｅｗ １，ｐｐ．１０７−１７７， １９８１参照。従って、結腸においてＳＣＦＡが 存在しなくなったり減少したりすると下痢が起こりかねない。Ｒａｍａｋｒｉｓ ｈｎａ等， “Ｃｏｌｏｎｉｃ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｄｉａｒｒｈｅａ： ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｌｕｍｉｎａｌ ｓｈｏｒｔ ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ，” Ｇｕｔ ３４， ｐ．１２１５， １９９３によれば、急性下痢患者における短鎖脂肪酸の糞便中排出量は罹患初日 には少なかったが、その後５日にわたり患者の状態が改善されるにつれて増加し た。更に、Ｒａｍａｋｒｉｓｈｎａ等， “Ｃｏｌｏｎｉｃ ｄｙｓｆｕｎｃｔ ｉｏｎ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｄｉａｒｒｈｅａ： ｔｈｅｒｏｌｅ ｏｆ ｌｕ ｍｉｎａｌ ｓｈｏｒｔ ｃｈａｉ ｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ，” Ｇｕｔ ３４， ｐ．１２１５， １９９３ ではｉｎ ｖｉｖｏ直腸透析技術を用いて、内腔ＳＣＦＡが急性下痢患者の直腸 における正味の（ｎｅｔ）水及びナトリウム再吸収を回復し得ることが証明され た。健康な被検者におけるｉｎ ｖｉｖｏ灌流試験からは、経小腸栄養に応答し て上行結腸において塩及び水が分泌されることが明らかとなった。Ｂｏｗｌｉｎ ｇ等，“Ｃｏｌｏｎｉｃ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎ ｒｅｓｐ ｏｎｓｅ ｔｏ ｅｎｔｅｒａｌ ｆｅｅｄｉｎｇ ｉｎ ｍａｎ，” Ｇｕｔ ３４（ｓｕｐｐｌ．１）， Ａ５４， １９９３； Ｂｏｗｌｉｎｇ等，“Ｔ ｈｅ ｃｏｌｏｎｉｃ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｅｎｔ ｅｒａｌ ｆｅｅｄｉｎｇ：ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｈｉｇｈ ｓｔｒｅｎ ｇｔｈｄｉｅｔ，” Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ１２（ｓｕｐｐｌ ． ２）， ｐ．２３，１９９３参照。Ｂｏｗｌｉｎｇ等， “Ｒｅｖｅｒｓａ ｌ ｂｙ ｓｈｏｒｔ−ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｏｆ ｃｏｌｏ ｎｉｃ ｆｌｕｉｄ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｅｎｔｅｒ ａｌ ｆｅｅｄｉｎｇ，” Ｌ ａｎｃｅｔ ３４２， ｐ．１２６６， １９９３では、短鎖脂肪酸が経小腸栄 養によって誘導される結腸体液分泌に及ぼす作用が調べられた。研究者たちは、 ＳＣＦＡを健康な被検者の盲腸内へ直接注入すると経小腸栄養の間に上行結腸に おいてみられる体液分泌が逆転することを発見し、この発見が経小腸栄養に関連 する下痢への対処に関係し得ることを理論化した。 ＸＯＳ及びＦＯＳのような非消化性オリゴ糖は、非消化性であること、及び有 益な腸内細菌によって選択的に利用されることによってビフィズス菌をより多く 存在させ、その結果短鎖脂肪酸が産生され、短鎖脂肪酸は大腸内のｐＨ値を低下 させて、望ましくない微生物と該微生物が産生する物質（例えば毒素）とを抑制 し得る。このような活性はヒトと動物とのいずれの健康にも有益である。 本発明の組成物： Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ関連下痢、また該下痢に関連する脱水症も、栄養組 成物中に存在させた非消化性オリゴ糖の経小腸投与により毒素Ａのレベルを抑制 して治療し得る。本発明の範囲内には確かに他の栄養組成物も含まれるが、上記 栄養組成物は理想的には、下痢に関連する脱水症 の軽減を補助する経口再水和溶液剤である。世界保健機関経口再水和溶液剤（Ｗ ＨＯ−ＯＲＳ）は、特に下痢に関連する脱水症を治療するべく開発されたモデル ＯＲＳである。この溶液剤は、水または他の通常の家庭飲料とは異なり、再水和 を促進する特別の組成を有する。ＯＲＳの理想的なナトリウム含量は決まってい ない。ＷＨＯ−ＯＲＳは９０ｍＥｑ／ｌのナトリウムを含有するが、より少量の ナトリウムを含有する他のＯＲＳも有効であることが証明されている。二つの典 型的な市販経口再水和溶液剤を以下に説明する。 広く用いられている市販の成人用経口再水和溶液剤に、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂ ｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｃｏｌｕｍｂｕｓ， Ｏｈｉｏ， Ｕ．Ｓ．Ａ．のＲｏ ｓｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｄｉｖｉｓｉｏｎによって頒布されているＥｑｕａＬ ｙｔｅ^TMが有る。 ＥｑｕａＬｙｔｅ^TM １０００ｍｌ当たりの成分分量及び熱量は次のとおりで ある。 広く用いられている市販の乳児及び小児用経口再水和溶液剤に、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｃｏｌｕｍｂｕｓ， Ｏｈｉｏ， Ｕ．Ｓ．Ａ ．のＲｏｓｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｄｉｖｉｓｉｏｎによって頒布されて 本発明は、上述のような経口再水和溶液剤に１種以上の非消化性オリゴ糖を添 加することを含む。本発明は特に、 経口再水和溶液剤に約３〜３０ｇ／ｌ（好ましくは約３〜１８ｇ／ｌ）のフルク トオリゴ糖を添加することによって実施し得る。即ち、本発明の組成物は、例え ばナトリウム、カリウム、塩化物、重炭酸塩源及び治療有効量の非消化性オリゴ 糖を含有する経口再水和溶液剤である。非消化性オリゴ糖はフルクトオリゴ糖（ 例えば１−ケトース、ニストース及び１^F−β−フルクトフラノシルニストース ）またはキシロオリゴ糖（キシロビオース、キシロトリオース及びキシロテトロ ースなど）の中から選択され得る。 食事補充物質としてのフルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）がＣ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ 大腸炎のシリアンハムスターモデルの死亡率に及ぼす影響を調べる二つの実験を 行なった。 実験１及び２で用いる動物モデル Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ大腸炎のモデルとしてシリアンハムスターを用いる ことは広く知られている。Ｌｕｓｔ等， “Ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ−Ｉｎｄｕ ｃｅｄ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ ｉｎ Ｈａｍｓｔｅｒｓ，”Ｔｈｅ Ｊ ｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ １３７， ｐ ｐ．４６４−４７５， １９７８には、ハムスターにおいて抗生物質によって誘発された全腸炎はヒトの 症候群研究用の優れたモデルであると述べられている。Ｐｒｉｃｅ等， “Ｍｏ ｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ− ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈａｍｓ ｔｅｒ： ａ ｍｏｄｅｌｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｐｓｅｕｄｏｍｅｍｂｒａｎｏ ｕｓｃｏｌｉｔｉｓ ａｎｄ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｄｉａｒｒｈｅａ，” Ｇｕｔ ２０，ｐｐ．４６７−４７５， １９７９には 、実験で発生させた抗生物質関連偽膜性大胆炎（ＰＭＣ）の形態学的研究が記載 されている。この論文の著者たちは、ハムスターモデルは形態学的には幾つかの 点で相違するものの細菌学的及び中毒学的にはヒトと同等であると指摘している 。彼らが得た結論は、ハムスターはＰＭＣ及び抗生物質関連腸疾患の発生病理を 総体的に研究する上での優れたモデルであるというものであった。実際、Ｗｉｌ ｓｏｎ等， “Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉ ｆｆｉｃｉｌｅ ｂｙ Ｎｏｒｍａｌ Ｈａｍｓｔｅｒ Ｃｅｃａｌ Ｆｌｏｒ ａ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｃｅｃｉｔｉｓ，” Ｉ ｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３４， ｐｐ．６２６−６２８ ， １９８１では、ハムスターモデルを用いた抗生物質関連大腸炎の研究によっ てヒトの抗生物質関連大腸炎の主病因としてのＣ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ毒素が発 見され、経口用バンコマイシンでの有効な治療が行なわれるようになったことが 指摘されている。Ｗｉｌｓｏｎ等， “Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ Ｄｙｎａｍｉｃ ｓ ｏｆ Ｉｎｇｅｓｔｅｄ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｔｒａｃｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｙｒｉａｎ Ｈａｍｓｔｅｒ，” Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆ ｅｃｔｌｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ １５１， ｐｐ．３５５−３６１， １９ ８５では、抗生物質関連大腸炎の最も良く研究された動物モデルはシリアンハム スターモデルであることが指摘されている。 実験１及び２で用いる物質及び方法 動物： 雌のゴールデンシリアンハムスター（６〜８週齢； ８０〜１２０ｇ）をＨａ ｒｌａｎ Ｓｒａｇｕｅ Ｄａｗｌ ｅｙ， Ｉｎｃ．， Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ， ＩＮから購入した。動物を 無作為に複数の処理グループに分け、２２±２℃においてグループケースに収容 した。動物は病原体を保有しないものを入手し、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）及びＡｍ ｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｃｃｒｅｄｉｔａ ｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ（ＡＡＡＬＡ Ｃ）規準に則って収容した。動物には標準的な実験動物用食事（ｌａｂ ｃｈｏ ｗ ｄｉｅｔ）（Ｐ ｓ， Ｉｎｃ．， Ｓｙｒａｃｕｓｅ， ＮＹ）を与えた。 抗生物質： ハムスターを、第０日から第６日まで毎日シプロフロキサシン（ｃｉｐｒｏｆ ｌｏｘａｃｉｎ）（Ｍｉｌｅｓ，Ｉｎｃ．， Ｗｅｓｔ Ｈａｖｅｎ， ＣＴ； １日当たり体重１ｋｇにつき２５０ｍｇ）を胃管内強制投与（ｇａｖａｇｅ） することにより薬剤処理した。この薬剤処理によって、自然のＣ． ｄｉｆｆｉ ｃｉｌｅ感染（過剰増殖）を可能にする胃腸管の「抗生物質滅菌」が達成される 。 上記「自然」感染は実験セットの下では不確実となりかねず、そこで動物間で同 程度の感染が実現するように実験１及び２に、第３日及び第７日にハムスターへ のＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ接種（攻撃）を行なう付加的な処理を加えた。 接種材料： 多量の毒素Ａ及びＢを産生することが判明しているＣ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅの ヒト単離物（菌株ＶＰＩ １０４６３）を実験１及び２に用いた。Ｗｉｌｓｏｎ 等， “Ｇｎｏｔｏｂｉｏｔｉｃ ｍｏｄｅｌｓ ｆｏｒ ｓｔｕｄｙｏｆ ｍ ｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｃｏｉｌｏｇｙ ｏｆ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆ ｆｉｃｉｌｅ ａｎｄ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ，” Ｔｈｅ Ｊｏ ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ１５３（３）， ｐｐ．５４７−５５１， １９８６；Ｓｕｌｌｉｖａｎ等， “Ｐｒｕｉｆｉｃ ａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｘｉｎｓ Ａ ａｎｄ Ｂ ｏｆ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ，” Ｉ ｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３５（３）， ｐｐ．１０３２ −１０ ４０， １９８２参照。Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ ＶＰＩ １０４６３を嫌気 条件下に回転プラットフォーム上でＢＨＩ（脳心臓注入液； Ｄｉｆｃｏ Ｌａ ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｄｅｔｒｏｉｔ， ＭＩ）ブイヨン中で増殖させた。 一晩培養物（ＯＮＣ）は約１０⁹ＣＦＵ／ｍｌの濃度を有する。第３日及び第７ 日にハムスターに、それぞれに該当する量のＯＮＣを胃管内強制投与によって接 種した。 実験手順 実験１： 第一の実験では、４１匹の雌のゴールデンシリアンハムスターを無作為に六つ の処理グループに分けた。処理は、２レベル（飲用水１ｌ中に０ｇ及び３０ｇ） のＦＯＳ及び３レベル（０ｍｌ、０．５ｍｌ及び２．０ｍｌ）のＣ．ｄｉｆｆｉ ｃｉｌｅ（約１０⁹ＣＦＵ／ｍｌ）接種を用いて２×３＝６種類実施した。第０ 日から第６日までハムスターをシプロフロキサシン（１日当たり体重１ｋｇにつ き２５０ｍｇ）で経口処理し、第３日及び第７日にハムスターにそれぞれ適量の Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ一晩培養物を接種した。 実験２： 第二の実験では、６３匹のハムスターを無作為に八つの処理グループに分けた 。処理は、２レベル（飲用水１ｌ中に０ｇ及び３０ｇ）のＦＯＳ、２レベル（０ ｍｌ及び２．０ｍｌ）のＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ接種材料、及び２レベル（１ 日当たり体重１ｋｇにつき０ｍｇ及び５０ｍｇ）のバンコマイシン（Ｅｌｉ Ｌ ｉｌｌｙ， Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ， ＴＮ）薬剤処理を用いて２×２×２ ＝８種類実施した。ＦＯＳレベル、シプロフロキサシン用量及び接種プロトコル は実験１と同じにした。バンコマイシンで処理したハムスターには、１日当たり 体重１ｋｇにつき５０ｍｇの該抗生物質を第７日から第１３日まで投与した。 実験１及び２のデータの収集及び統計的解析 死亡時、生存時間（日数）を記録した（シプロフロキサシンでの薬剤処理初日 から測定）。動物を第２４日まで観察し、この日実験を終了した。生存時間をＫ ａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ曲線として集計した（Ｐｏｃｏｃｋ， Ｃｌｉｎｉｃａ ｌ Ｔｒｉａｌｓ： Ａ ＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｌｔｄ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎｅｗ Ｙｏｒ ｋ， ＵＳＡ， １９８３）。実験を終了しても死亡しない動物の生存時間は第２４日 に削除した。ＦＯＳを与えなかった対照グループの差をｌｏｇ順位統計（ｌｏｇ ｒａｎｋｓｔａｔｉｓｔｉｃ）によって検定し、一般Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定で 補足した。ＦＯＳを与えた動物を対照（ＦＯＳを与えなかった動物）と比較する 大域解析に加え、幾つかのサブグループに関しては処理効果の、例えばＣ． ｄ ｉｆｆｉｃｉｌｅ攻撃レベルによる周辺検定も行なった。検定の結果を両側検定 結果として、０．０５を下回るＰレベルにおいて判定された統計的有意性と共に 報告する。一般に、二つの統計的検定の結果は類似した。Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定 （Ｒｏｓｎｅｒ， Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ ｏｆ Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉ ｃｓ ， ＰＷＳ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， Ｂｏｓｔｏｎ， Ｍａｓｓａｃｈｕ ｓｅｔｔｓ， Ｕ．Ｓ．Ａ．， １９８６）は早い時点に行なった処理同士の差 を検定するものであり、一方ｌｏｇ順位検定（Ｎｅｔｅｒ及びＷａｓｓｅｒｍａ ｎ， Ａｐｐｌｉｅｄ Ｌｉｎｅａｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｍｏｄｅｌｓ ， Ｒｉｃｈａｒｄ Ｄ． Ｉｒｗｉｎ， Ｉｎｃ．，Ｈｏｍｅｗｏｏｄ， Ｉ ｌｌｉｎｏｉｓ， ＵＳＡ， １ ９７４）は遅い時点に行なった処理同士の差を検定するものである。 結果とその検討 実験１： 処理グループの中央値生存時間（ＭＳＴ）を表１に示す。全体として、ＦＯＳ （飲用水１ｌ中に３０ｇ）を食事に補充するとＭＳＴが増大する傾向が認められ た（Ｐ＝０．０９； ｌｏｇ順位統計）（表２）。Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定を用い た場合は、ＦＯＳの全体的な影響は著しく有意であった（Ｐは０．０１未満）。 接種を行なわなかった（自然感染させた）ハムスターだけで比較するなら、ＦＯ ＳはＭＳＴを改善しなかった（Ｐは０．２０より大）。先に述べたように、自然 感染に頼っていては感染が不確実となりかねないので、実験１及び２では接種動 物も用いた。Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ（０．５ｍｌ及び２．０ｍｌ）を接種した ハムスター同士で比較すると、ＦＯＳはＭＳＴに著しく有意の影響を及ぼした（ Ｐは０．１未満）。しかも、接種レベルを（０．５ｍｌと２．０ｍｌとに）区別 したことによって、補充物質ＦＯＳを与えたハムスターに関してより大きいＭＳ Ｔが得られた（Ｐは０．０１未満）。０．５ ｍｌ及び２．０ｍｌのＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅを接種したハムスターに関する 生存曲線を図３及び図４にそれぞれ示す。これらの図から、補充物質ＦＯＳを与 えたハムスターの生存時間が改善されることが知見される。全体として、ＦＯＳ は中央値生存時間（ＭＳＴ）を増大させる傾向を有した（Ｐは０．１０未満）。 加えて、ＦＯＳを消費したハムスターでは０．５ｍｌまたは２．０ｍｌのＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅを接種した場合にもＭＳＴが増大した（Ｐは０．０１未満） 。 実験２： 処理グループの中央値生存時間を表３に示す。先の実験同様、ＦＯＳの影響は 全体としてハムスターのＭＳＴを増 大させるものであった（Ｐは０．０５未満）。この実験では、バンコマイシン処 理と接種レベルとの間に相互作用が存在すると考えられた（表４）。ＦＯＳを与 え、かつＣ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅを接種したがバンコマイシンで処理しなかった ハムスターのＭＳＴは改善される傾向を有した（Ｐは０．１０未満）。しかし、 バンコマイシンで処理した接種ハムスターには、ＦＯＳは影響を及ぼさなかった （Ｐは０．２０より大）。他方、接種を行なわなかったハムスターのＭＳＴはＦ ＯＳ補充によって、バンコマイシン処理を行なおうと行なうまいと増大した（Ｐ はそれぞれ０．０５未満及び０．０１未満； 生存曲線を図５及び図６にそれぞ れ示す）。ここでも、生存曲線はＦＯＳの付加的な利点を示している。全体とし て、ＦＯＳを与えたハムスターのＭＳＴは増大した（Ｐは０．０５未満）。これ らのデータは、ＦＯＳの食事補充によってＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉ ｃｉｌｅ大腸炎のハムスターモデルの中央値生存時間が増大することを示唆して いる。 実験１及び２の結果は全体として、Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ大腸炎のハムス ターモデルの改善された生存時間が示すように治療有効量の非消化性オリゴ糖（ ＦＯＳ）の経小腸投与によって哺乳動物のＣ． ｄｉｆｆｉｄｉｌｅ感 染を抑制できることを示している。このことは、（幾つかの処理グループにおけ る）生存率の上昇、及び一致した中央値生存時間の増大に現われている。驚くべ きことに、ＦＯＳ補充による生存時間の改善は食事が含有する繊維の影響を上回 った。 実験３ 実験３はマウス（ｍｕｒｉｎｅ）モデルにおいて高発酵性炭水化物の付与がＣ ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染に及ぼす影響を確認することを目的として行ない、 この実験の操作には、病原体（Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）攻撃の前に抗生物質 を投与することを含めた。上記モデルでは、抗生物質のセフォキシチンで腸内微 生物叢（ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ）を崩壊させてからＣ． ｄｉｆｆｉｃ ｉｌｅ（ＶＰＩ １０４６３）での攻撃を行なった。 物質及び方法 動物： ６４匹の雄のＢＡＬＢ／ｃマウス（平均体重１９．３±１．６ｇ）をステンレ ス鋼製ケージに個別に収容した。環境条件を、光のサイクルが１２時間となり、 かつ温度が一定の２４℃となるように制御した。 食事： 水と、残留物の少ない粉末状栄養平衡食（Ｅｎｓｕｒｅ^TM）とを任意に提供し た。対照マウス（Ｃ）には繊維性補充物質を与えなかった。残りのグループには ３種の発酵性炭水化物源を提供した。アラビアゴム（ＧＡ； 粉末）及びフルク トオリゴ糖（ＦＯＳ； 粉末）は食事のＥｎｓｕｒｅ^TMと混合した（食事粉末１ ｇ当たり繊維４４ｍｇ）。キシロオリゴ糖（ＸＯＳ； シロップ）は飲用水と混 合した（３０ｇ／ｌ）。 細菌株及び条件： この実験では既知の毒素産生Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ株を 用いた。Ｗｉｌｓｏｎ等， “Ｇｎｏｔｏｂｉｏｔｉｃ ｍｏｄｅｌｓ ｆｏｒ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｃｌｏｓｔ ｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ ａｎｄ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌ ｉ，” Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓ ｅｓ １５３（３）， ｐｐ．５４７−５５１， １９８６； Ｓｕｌｌｉｖａ ｎ等， “Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉ ｏｎ ｏｆ ｔｏｘｉｎｓ Ａ ａｎｄ Ｂ ｏｆ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃ ｉｌｅ，” Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３５（３）， ｐｐ．１０３２−１０４０， １９８２参照。生物を強化クロストリジウム培地 （ＲＣＭ； Ｄｉｆｃｏ， Ｄｅｔｒｏｉｔ，Ｍｉｃｈｉｇａｎ， Ｕ．Ｓ．Ａ ．）中で維持し、かつ増殖させ、接種材料としては標準的な細胞懸濁液を用いた 。稀釈剤及び培地は総て通常の嫌気的技術を用いて製造した。Ｍａｃｋｉｅ等， “Ｅｎｕｍｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ ｏｆ ｔｈｅ ｅｑｕｉｎｅ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅ ｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ，” Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅ ｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ５４， ｐｐ．２１５５−２１６０， １９８８； Ｍｅｙｅｒ等， “Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｖａｌｕ ａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｒａｌｕｍｉｎａｌ ｉｎｓａｃｃｕｌｕｓ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，” Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅ ｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ５１， ｐｐ．６２２− ６２９， １９８６参照。 実験手順 ６４匹のマウス総てに３日間Ｅｎｓｕｒｅ^TM粉末を消費させた。第４日に、総 てのマウスに体重１ｇ当たり１００μｇのセフォキシチンを経口胃投与した。セ フォキシチン（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ， Ｍｉｓｓｏｕｒｉ， Ｕ．Ｓ．Ａ．）を水に溶解させ、適正用量をガバージュ 針（２２ｇａ； １ｉｎ．）を用いて胃内に送達した。翌日、マウスを無作為に 対照か、または異なる発酵性炭水化物で処理するグループに割り当て、各マウス にそれぞれの食事を５日間与えた。この時点で食事１種当たり８匹のマウスに、 ２．８×１０⁸コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍｌの濃度のＣ． ｄｉｆｆｉｃ ｉｌｅ懸濁液２００μｌを先に述べたように接種した。各食事につき残り８匹の マウスにはＲＣＭを接種した。接種の６日後、マウスをＣＯ₂で窒息させて殺し た。全動物プロトコルを１５日で完了した。 データの収集及び統計的解析 糞便試料を、実験全体を通して５回採取した（第２日、第５日、第８日、第１ ２日及び第１５日）。判りやすいように前記試料採取日をＣ． ｄｉｆｆｉｃｉ ｌｅ接種日 （第０日）を基準に表わすと、第−７日、第−４日、第−１日、第３日及び第６ 日となる。各動物から１００ｍｇの糞便を採取し、これを直ちに９．９ｍｌの嫌 気性稀釈液中に懸濁させた。Ｂｒｙａｎｔ等， “Ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏ ｄｓ ａｎｄ ｓｏｍｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｏｆ ｓｏｍｅ ｏ ｆ ｔｈｅ ｍｏｒｅ ｎｕｍｅｒｏｕｓ ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ ｂａｃｔｅｒ ｉａｉｎ ｔｈｅ ｂｏｖｉｎｅ ｒｕｍｅｎ，” Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄ ａｉｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６， ｐｐ．２０５−２１７， １９５３参照。 糞便試料を、シクロセリン−セフォキシチン−フルクトース選択寒天上のＣ．ｄ ｉｆｆｉｃｉｌｅの数（Ｇｅｏｒｇｅ等， “Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｄ ｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ，” Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｃｌ ｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ９，ｐｐ．２１４−２１９， １９ ７９）と、酵素結合免疫吸着剤アッセイを用いて調べる毒素Ａ力価（Ｔｏｘ−Ａ −Ｔｅｓｔ； ＴＥＣＨＬＡＢ， Ｂｌａｃｋｓｂｕｒｇ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ， Ｕ．Ｓ．Ａ．）との二つの応答規準 を用いて評価した。 処理は分割プロット内に無作為化完備ブロック計画（ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｂｌｏｃｋ ｄｅｓｉｇｎ）によって配分した。Ｇｉｌｌ等 ， “Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ ｏｆ ａｎｉｍａｌｓ，”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎ ｃｅ ３３， ｐｐ．３３１−３３６， １９７１参照。データに対して、ＳＡ Ｓの一般線形モデル（ＧＬＭ）操作（ＳＡＳ Ｔｎｓｔｉｔｕｔｅ， “ＳＡＳ Ｕｓｅｒ’ｓ Ｇｕｉｄｅ： Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，” ＳＡＳ Ｉｎｓｔ ｉｔｕｔｅ，Ｉｎｃ．， Ｃａｒｙ， Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ，１９８ ８）に従い分散分析を施した。処理効果を統計量Ｆ（Ｆ−ｓｔａｔｉｓｔｉｃ） を用いて検定し、有意性レベルとしては０．０５のＰ値を選択した。 結果とその検討 糞便中のＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅの数（表５）は、食事と試料採取日との相 互作用の影響を受けた（Ｐ＜０．０１）。実験初期（第−７日）には、検出可能 な数のＣ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅは存在しなかった（糞便１ｇ当たり１ ０⁴ＣＦＵ未満）。興味深いことに、セフォキシチン投与（第−６日）から病原 体接種の３日後までに、接種を行なわなかったマウスを含めた総てのマウスが或 る程度Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅに感染した。対照食事を与えたマウスの場合、Ｃ ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅは実験の間中増加し続けた。Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ 接種の６日後までに、対照マウスは最高数（糞便１ｇ当たり１２７．５×１０⁵ ＣＦＵ）のＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅを有するようになり、その際ＦＯＳを与え たマウスのＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅの数は最少（０）であった。 実験期間中、糞便試料について毒素Ａアッセイを行なった。出現率（検出可能 な毒素Ａを有するマウスのパーセンテージ）及び毒素Ａ力価を示す（表６）。Ｃ ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ接種前は、いずれのマウスの糞便中にも毒素Ａは検出さ れなかった。接種の３日後までに、実質的に総てのマウスにおいてＣ． ｄｉｆ ｆｉｃｉｌｅ及び毒素Ａが検出され、その際力価はＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅを 接種したマウスにおいて最大（１０⁴）であった。接種の６日後、Ｃ食事及びＧ Ａ食事を消費したマウスにおける毒素Ａ出現率は５０％を越えたが、ＦＯＳ及び ＸＯＳを消費した マウスにおける毒素Ａ出現率は５０％未満であった。Ｃ食事またはＧＡ食事を消 費し、かつＣ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅを接種されたマウスのみが重篤な下痢を発 症し（Ｃ食事の場合３７％、ＧＡ食事の場合７５％）、または死亡した（Ｃ食事 の場合１２．５％、ＧＡ食事の場合５０％）。 実験３の結論 マウスはヒトが発現する病変（ＰＭＣ）と同じ病変は発現しないが、それでも なおマウスモデルは重要なｉｎ ｖｉｖｏデータを提供し得る。栄養処置と関連 付けての微生物の相互作用の研究は、Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅの定着及び感染 の原因の理解に寄与し得る。そのうえ、得られる情報によって、胃腸内微生物の 生態をより良く理解することができる。この実験においてオリゴ糖はＣ． ｄｉ ｆｆｉｃｉｌｅの増殖を抑制し、腸上皮組織を保護すると考えられた。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＪＰ，Ｍ Ｘ，ＮＯ，ＮＺ (72)発明者 ミユールブルーク，ジヨナサン・アラン アメリカ合衆国、イリノイ・60030、グレ イズレイク、フエアフアクス・レイン・ 481 (72)発明者 ウイーラー，キース・ブライアン アメリカ合衆国、オハイオ・43017、ダブ リン、ドニゴール・クリフス・ドライブ・ 4805 (72)発明者 キヤンベル，シエリア・マーテインソン アメリカ合衆国、オハイオ・43085、ワー シントン、ロングフエロウ・アベニユー・ 275 (72)発明者 ウオルトン，ジヨウジフ・エドワード アメリカ合衆国、オハイオ・43081、ウエ スタービル、エグゼクテイブ・コート・86

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 哺乳動物のＣｌｏｓｔｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染を抑制し、ま たは哺乳動物においてＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ毒素Ａのレ ベルを抑制する方法であって、治療有効量の非消化性オリゴ糖を経小腸投与する ことを含む方法。 ２． 非消化性オリゴ糖がフルクトオリゴ糖であることを特徴とする請求項１に 記載の方法。 ３． 非消化性オリゴ糖が１−ケトース、ニストース及び１^F−β−フルクトフ ラノシルニストースの中から選択されたフルタトオリゴ糖であることを特徴とす る請求項２に記載の方法。 ４． 非消化性オリゴ糖がキシロオリゴ糖であることを特徴とする請求項１に記 載の方法。 ５． 非消化性オリゴ糖がキシロビオース、キシロトリオース及びキシロテトロ ースの中から選択されたキシロオリゴ糖であることを特徴とする請求項４に記載 の方法。 ６． 非消化性オリゴ糖を経口再水和溶液剤栄養組成物によって経小腸投与する ことを特徴とする請求項１に記載の方法。 ７． 経口再水和溶液剤が治療有効量の非消化性オリゴ糖に加えてナトリウム、 カリウム、塩化物、及び重炭酸塩源も含有することを特徴とする請求項６に記載 の方法。 ８． 非消化性オリゴ糖が１−ケトース、ニストース及び１^F−β−フルクトフ ラノシルニストースの中から選択されたフルクトオリゴ糖であることを特徴とす る請求項７に記載の方法。 ９． 非消化性オリゴ糖がキシロビオース、キシロトリオース及びキシロテトロ ースの中から選択されたキシロオリゴ糖であることを特徴とする請求項７に記載 の方法。 １０． Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅに感染したヒトにおいて 下痢に関連する脱水症を、ナトリウム、カリウム、塩化物、重炭酸塩源及び治療 有効量の非消化性オリゴ糖を含有する経口再水和溶液剤の経小脱投与によって治 療する方法。 １１． 非消化性オリゴ糖が１−ケトース、ニストース及び１^F−β−フルクト フラノシルニストースの中から選択されたフルクトオリゴ糖であることを特徴と する請求項１０に記載の方法。 １２． 非消化性オリゴ糖がキシロビオース、キシロトリ オース及びキシロテトロースの中から選択されたキシロオリゴ糖であることを特 徴とする請求項１２に記載の方法。 １３． ナトリウム、カリウム、塩化物、重炭酸塩源及び非消化性オリゴ糖を含 有する経口再水和溶液剤。 １４． 非消化性オリゴ糖が１−ケトース、ニストース及び１^F−β−フルタト フラノシルニストースの中から選択されたフルクトオリゴ糖であることを特徴と する請求項１３に記載の溶液剤。 １５． 非消化性オリゴ糖がキシロビオース、キシロトリオース及びキシロテト ロースの中から選択されたキシロオリゴ糖であることを特徴とする請求項１３に 記載の溶液剤。 １６． 非消化性オリゴ糖が溶液剤１ｌ当たり３〜３０ｇの濃度で存在すること を特徴とする請求項１３に記載の溶液剤。