JP4198728B2 - 動物用免疫活性調整剤、及びその調整剤を含有する動物用飼料 - Google Patents
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Description
しかしながら、上記文献に開示された技術は、単一種類の微生物を用いたものであり、いくつかの微生物を組み合わせたときの効果を評価したものについては、十分な研究開発が行われていなかった。
また、上記発明に係る動物用免疫活性調整剤を含有する動物用飼料を提供することができる。
上記4種類の微生物の特徴を説明すると次のようである。
GTL−001は、ラクトバチルス・パラカセイ(Lactobacillus paracasei ssp paracasei)であった。GTL−001の特徴として、下表1に示すものが認められた。
本実施形態の動物用免疫活性調整剤(以下には単に、「調整剤」という)は、適当な栄養を含む培地中で、GTL−001、GTL−002、GTY−001、及びGTY−002を混合培養することにより得ることができる。そのような培地としては、例えば酵母抽出物、麦芽抽出物、ポリペプトン、ブドウ糖などを含有したものを用いることができる。適量の酵母抽出物、麦芽抽出物、ポリペプトン、ブドウ糖を混ぜ、適当量の水(精製水、井戸水、または水道水)を混合し、殺菌処理することにより、培地を作成することができる。
<実施例1> 培地の製造
調整剤の製造工程は、培地の製造(図1を参照)と、培養液の製造(図2を参照)とに大別される。まず、図1を参照しつつ、培地の製造について説明する。
まず、酵母抽出物(BactoTM Yeast extract (Becton, Dickinson and Company))27g、麦芽抽出物(BactoTM Malt extract (Becton, Dickinson and Company))27g、ペプトン(BactoTM pepton (Becton, Dickinson and Company))45g、D(+)−グルコース(和光純薬工業株式会社)90g、及び米ぬか抽出物(RICEO-EX(TSUNO RICE FINE CHEMICALS CO., LTD.))90gと水を混合し、9リットルに調整した。水には、水道水を用いたが、この他にも井戸水、殺菌水などを用いることもできる。
次に、この混合液を121℃にて20分間、加熱殺菌した後、冷却することにより培地を得た。以後、この培地を「GT培地」という。
次に、図2を参照しつつ、培養液の製造方法について説明する。
実施例1で調製したGT培地に、前述のGTL−001、GTL−002、GTY−001、及びGTY−002の4種類の微生物を添加して混合した。
37℃で24時間或いは48時間の通気培養(一次培養)を行った後、4℃で2週間或いは4週間の低温培養(二次培養)を行った。
二次培養の後に、121℃、20分間の加熱殺菌を行った。この培養液を4℃で冷蔵保存した。
GT培地及び実施例2で得た培養液について、ICR系マウスの脾細胞を用いた活性化試験を行った。
ICR系マウスから定法に従って脾細胞を抽出した。この脾細胞をGT培地、及び培養液に添加し、450nmの吸光度を測定することにより免疫活性を測定した。
培養液としては、24時間の一次培養と4週間の二次培養を行ったもの(以下、この培養液を用いた試験群を「A群」という)、48時間の一次培養と2週間の二次培養を行ったもの(以下、この培養液を用いた試験群を「B群」という)、及び48時間の一次培養と4週間の二次培養を行ったもの(以下、この培養液を用いた試験群を「C群」という)の3種類を用いた。
試薬には、タカラバイオ株式会社のPremix WST-1 Cell Proliferation Assay System を用いた。また、計測装置として、BIO−RAD社製のMICROPLATE READER Model 550 を用いた。
表1及び図3には、試験結果を示した。データは、いずれの群についてもN=3とし、それらのデータについて平均値及び標準偏差を求めた。なお、有意差は、コントロールとの比較において、危険率5%(p<0.05)で計算した(表2においても同様である)。
実施例3のICR系マウス脾細胞に代えて、C57BL/6系マウス脾細胞を用い、実施例3と同様の試験を行なった。但し、培養液は、A群及びC群の2群とした。コントロール及び比較対照については、実施例3と同じものを用いた。
また、本実施例の培養液を用いた場合には、A群及びC群のいずれについても、コントロールに比べて免疫応答の上昇が認められた。但し、培養液の効果は、conAに比べると高かったものの、LPSの効果には僅かに至らなかった。こうして、培養液の免疫活性効果は、ICR系マウスに対する効果には及ばないものの、C57BL/6系マウスに対しても認められることがわかった。
動物種イヌに、培養液から調整した免疫調整剤を体重あたり10-4g/日、8週間連続給餌した。その結果、免疫機能が良好となることが分かった。
<実施例6>
上記実施例5の追試を行うと共に、イヌ以外の動物種における効果確認を行った。
表7及び表8に示す4匹のイヌまたはネコを用いた免疫調整剤の効果確認試験を行った。表7には、各動物の基礎的なデータを、表8には、免疫調整剤を投与前の病状を示した。
特に、No.1のイヌにおける結果を図5に示した。免疫調整剤を投与前(図5(A)では、腹部全体に掻痒による発赤・角化過剰・脱毛が広範囲に見られ、脂漏性皮膚炎と診断した。投与後1〜3週間は、顕著な変化は見られなかった(図5(B))。しかし、投与後4週後に掻痒・発赤の軽減が見られ、新たな発毛が見られた(図5(C))。更に、投与後8週間では、さらに掻痒・発赤の軽減が見られ腹部皮膚の軟化が見られ、角化過剰も改善された(図5(D))。新たな発毛により、腹部全体が体毛に覆われていた。なお、一般血液性状・体重においても、特に記述するべき変化はなかった。
こうして、本実施例の培養液から調整した免疫調整剤(或いは、動物用飼料)は、イヌ及びネコなどの動物においても免疫調整機能を示すことが明らかとなった。
Claims (2)
- Lactobacillus paracasei ssp paracasei:GTL−001(受託番号NITE P−135)、Lactobacillus paracasei ssp paracasei:GTL−002(受託番号NITE P−136)、Saccharomyces cerevisiae:GTY−001(受託番号NITE P−137)、及びPichia membranifasciens:GTY−002(受託番号NITE P−138)を混合培養して得られたことを特徴とする動物用免疫促進剤。
- 請求項1に記載の動物用免疫促進剤を含有することを特徴とする動物用飼料。
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