ES2540232T3

ES2540232T3 - Análogos de TOFA útiles en el tratamiento de trastornos o afecciones dermatológicas

Info

Publication number: ES2540232T3
Application number: ES13163877.7T
Authority: ES
Inventors: Timothy Scott Daynard; David W.C. Hunt; Geoffrey C. Winters
Original assignee: Dermira Canada Inc
Current assignee: Dermira Canada Inc
Priority date: 2009-07-08
Filing date: 2010-07-01
Publication date: 2015-07-09
Anticipated expiration: 2030-07-01
Also published as: BR112012000254A2; CN105017187B; NZ597375A; WO2011005660A1; EP2641906B1; EP2641906A1; CN105017187A; HK1166786A1; AU2010270797A1; RU2012104244A; MX2012000435A; CN102482249B; SG176983A1; US20120208807A1; US20160338988A1; HK1189886A1; AU2010270797B2; IL217421A0; ES2421723T3; DK2451796T3

Abstract

Un compuesto de fórmula (I): en la que: R1 es -O-R2, en donde R2 es haloalquilo o un arilo sustituido; o R1 es -O-R3-OR2, en donde R2 es heterociclilo opcionalmente sustituido y cada R3 es independientemente una cadena de alquileno opcionalmente sustituido; o R1 es R-O-R3-OC(O)-N(R5) R6, -O-R3-N(R5)R6, O-R3-N-(R4)C(O)OR5 -O-R3-C(O)OR5, -O-R3-C(O)N(R5)R6 o - N(R5)S(O)2-R4; en donde cada R3 es independientemente una cadena de alquileno opcionalmente sustituido; y R4 es alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido o heteroarilalquilo opcionalmente sustituido; cada R5 es independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o aralquilo opcionalmente sustituido; y cada R6 es alquilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido o -R3-C(O)OR4; o cualquiera de R5 y R6, junto con el nitrógeno al que están ambos unidos forman un N-heterociclilo opcionalmente sustituido o un N-heteroarilo opcionalmente sustituido; como un estereoisómero individual o como una mezcla de los mismos; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en terapia.

Description

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contempla diversos estereoisómeros y mezclas de los mismos e incluye “enantiómeros”, que se refiere a dos estereoisómeros cuyas moléculas son imágenes especulares no superponibles entre sí.

El protocolo de nomenclatura química y los diagramas de estructura usados en la presente memoria son una forma modificada del sistema de nomenclatura de la I.U.P.A.C. usando el programa de nomenclatura el software ChemDraw versión 10 (CambridgeSoft). Para nombres químicos complejos empelados en la presente memoria, un grupo sustituyente se nombra antes del grupo al que se une. Por ejemplo, 2-ciclopropiletilo comprende un esqueleto de etilo con sustituyente de ciclopropilo. En diagramas de estructura química, todos los enlaces se identifican, excepto algunos átomos de carbono, que se supone que se unen a suficientes átomos de hidrógeno para completar la valencia.

El uso de paréntesis en grupos sustituyentes se usa en la presente memoria para conservar el espacio. Por consiguiente, el uso de paréntesis en un grupo sustituyente indica que el grupo encerrado dentro de los paréntesis está unido directamente al átomo que precede al paréntesis. Por ejemplo, una de las elecciones para R1 es el grupo -O-R3-OC(O)-N(R5)R6. La fórmula para este grupo puede dibujarse del siguiente modo:

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Así, por ejemplo, un compuesto de fórmula (I) en la que R1 es 3-morfolinopropoxi; es decir, un compuesto de la siguiente fórmula:

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se llama en la presente memoria 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 3-morfolinopropilo.

Realizaciones de la invención

De los diversos aspectos de la invención expuestos anteriormente en la descripción resumida de la invención,

ciertas realizaciones se prefieren. De los compuestos de fórmula (I), como se exponen anteriormente en la descripción resumida de la invención, una realización es un compuesto de fórmula (I) en la que:

R1 es -O-R2; y R2 es independientemente alquilo o heterociclilalquilo.

De esta realización, una realización es un compuesto de fórmula (I) seleccionado de: 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de isopropilo; 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxylato de 4-metilpentilo; y 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo.

De los compuestos de fórmula (I), como se exponen anteriormente en la Descripción resumida de la invención, otra realización es un compuesto de fórmula (I) en la que: R1 es -O-R2; y R2 es haloalquilo o arilo sustituido. De esta realización, una realización es un compuesto de fórmula (I) seleccionado de: 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 2,2,2-trifluoroetilo; 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 2,2,2-tricloroetilo; 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 2-bromoetilo; y ácido 2-(5-(tetradeciloxi)furan-2-carboniloxi)benzoico.

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De los compuestos de fórmula (I), como se exponen anteriormente en la descripción resumida de la invención, otra realización es un compuesto de fórmula (I) en la que: R1 es -O-R3-OR2; R2 es heterociclilalquilo opcionalmente sustituido; y

R3 es una cadena de alquileno opcionalmente sustituido. De esta realización, una realización es un compuesto de fórmula (I) que es 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 3(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)propilo.

De los compuestos de fórmula (I), como se exponen anteriormente en la Descripción resumida de la invención, otra realización es un compuesto de fórmula (I) en la que:

R1 es -O-R3-OC(O)-N(R5)R6; cada R2 es independientemente alquilo, haloalquilo, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, heterociclilalquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido o heteroarilalquilo sustituido opcionalmente sustituido;

R3 es una cadena de alquileno opcionalmente sustituido; y

R5 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o aralquilo opcionalmente sustituido; y R6 es alquilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido o -R3-C(O)OR3; y

o cualquiera de R5 y R6, junto con el nitrógeno al que están ambos unidos, forman un N-heterociclilo opcionalmente sustituido o un N-heteroarilo opcionalmente sustituido. De esta realización, una realización es un compuesto de fórmula (I) seleccionado de: 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 1-(bencil(metil)carbamoiloxi)etilo; 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 1-((2-etoxi-2-oxoetil)(metil)carbamoiloxi)etilo; 1-(1-(5-(tetradeciloxi)furan-2-carboniloxi)etil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 4 (2S)-2-bencilo; 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 1-(4-fenilciclohexanocarboniloxi)etilo; 3-fenilpirrolidin-1-carboxilato de 1-(5-(tetradeciloxi)furan-2-carboniloxi)etilo; 3,4-dihidroisoquinolin-2(1H)-carboxilato de 1-(5-(tetradeciloxi)furan-2-carboniloxi)etilo; piperidin-1-carboxilato de 1-(5-(tetradeciloxi)furan-2-carboniloxi)etilo; morfolin-4-carboxilato de 1-(5-(tetradeciloxi)furan-2-carboniloxi)etilo; 4-(1-(5-(tetradeciloxi)furan-2-carboniloxi)etil)piperazin-1,4-dicarboxilato de 1-terc-butilo; y

5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 1-(diciclohexilcarbamoiloxi)etilo. De los compuestos de fórmula (I), como se exponen anteriormente en la descripción resumida de la invención, otra realización es un compuesto de fórmula (I) en la que:

R1 es -O-R3-N(R5)R6;

R3 es una cadena de alquileno opcionalmente sustituido; y

R5 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o aralquilo opcionalmente sustituido; y R6 es alquilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido o -R3-C(O)OR4; y

o cualquiera de R5 y R6, junto con el nitrógeno al que están ambos unidos, forman un N-heterociclilo opcionalmente sustituido o un N-heteroarilo opcionalmente sustituido.

De esta realización, una realización es un compuesto de fórmula (I) seleccionado de: 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 2-(dimetilamino)etilo;

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Otra realización de este método es en la que la cantidad terapéuticamente eficaz se administra sistémicamente. Otra realización de este método es en la que la cantidad terapéuticamente eficaz se administra por vía oral. Del método de inhibición de la actividad de las glándulas sebáceas en un ser humano, en el que el método

comprende administrar al ser humano en necesidad del mismo una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable, como se expone anteriormente en la Descripción resumida de la invención, una realización de este método es en la que la cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de fórmula (I) que se reivindica aquí, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra tópicamente.

Otra realización de este método es en la que la composición farmacéutica se administra sistémicamente. Otra realización de este método es en la que la composición farmacéutica se administra por vía oral. Otra realización de este método es en la que la composición farmacéutica es una composición dermatológica y el

excipiente farmacéuticamente aceptable es un excipiente dermatológicamente aceptable. Otra realización de este método es en la que la composición farmacéutica es una composición sistémica. Otra realización de este método es en la que la composición farmacéutica es una composición oral. Del método de tratamiento de un ser humano que tiene un trastorno o afección caracterizado por inflamación, como

se expone anteriormente en la Descripción resumida de la invención, una realización de este método es en la que el

trastorno o afección es acné inflamatorio. Otra realización de este método es en la que la cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra tópicamente.

Otra realización de este método es en la que la cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o

una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra sistémicamente. Otra realización de este método es en la que la cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra por vía oral.

Otra realización de este método es en la que la composición farmacéutica es una composición dermatológica y el excipiente farmacéuticamente aceptable es un excipiente dermatológicamente aceptable. Otra realización de este método es en la que la composición farmacéutica es una composición sistémica.

Otra realización de este método es en la que la composición farmacéutica es una composición oral. Del método de reducir la proliferación de linfocitos T y secreción de citocinas en un ser humano que tiene un trastorno o afección caracterizado por inflamación, como se expone anteriormente en la Descripción resumida de la invención, una realización de este método es en la que el trastorno o afección es acné inflamatorio.

una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra tópicamente. Otra realización de este método es en la que la cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra sistémicamente.

una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra por vía oral. Otra realización de este método es en la que la composición farmacéutica es una composición dermatológica y el excipiente farmacéuticamente aceptable es un excipiente dermatológicamente aceptable.

Otra realización de este método es en la que la composición farmacéutica es una composición sistémica. Otra realización de este método es en la que la composición farmacéutica es una composición oral.

Utilidad de la invención

La elevada producción de sebo debida a hiperactividad de las glándulas sebáceas es uno de los varios factores generalmente creídos que son contribuyentes a la patogénesis del acné. En la formación de sebo hay diferenciación escalonada de sebocitos, un tipo de célula epitelial especializado, que se produce a partir de células progenitoras basales que conducen a células formadoras de lípido a medida que avanzan hacia la salida de las glándulas. Estas células alargadas se rompen finalmente (secreción de holocrinas) liberando su contenido rico en lípidos (sebo). La constitución global del sebo consiste en escualeno (12%), colesterol (2%), ésteres de cera (26%) y

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diglicéridos/triglicéridos/ácidos grasos libres (57%) (véase Zouboulis y col., “An oral 5-lipoxygenase inhibitor, directly reduces sebum production”. Dermatology. (2005) 210:36-38). Pueden aumentarse los niveles de ácidos grasos libres por degradación bacteriana de los di-y triglicéridos presentes dentro del sebo (véase, Thiboutot D. “Regulation of human sebaceous glands” J. Invest Dermatol. (2004) 123:1-12).

Los ácidos grasos libres también pueden promover los aspectos inflamatorios del acné activando células inmunitarias locales y su liberación de una variedad de factores pro-inflamatorios.

La síntesis de ácidos grasos empieza con la carboxilación de acetil CoA a malonil CoA. Esta reacción irreversible es la etapa comprometida en la síntesis de ácidos grasos. La síntesis de malonil CoA es catalizada por acetil CoA carboxilasa (ACC) (véase, Brownsey, R.W. y col., “Regulation of acetyl-CoA carboxylase”, Biochem Soc. Trans. (2006) 34: 223-227). La ACC existe como dos isoformas específicas para tejido, una proteína de 265 kDa de una sola cadena (ACC1) y una proteína de 280 kDa (ACC2) (véase, Waldrop, G.L. y col., “Targeting acetyl-CoA carboxylase for anti-obesity therap” Curr. Med. Chem. -Immun., Endoc. & Metab. Agents (2002) 3: 229-234).

En células de mamífero, la ACC1 está presente dentro del citosol mientras que la ACC2 se localiza en la mitocondria. Generalmente, la ACC1 es responsable de la síntesis de ácidos grasos de cadena larga mientras que la ACC2 mitocondrial actúa inhibiendo la oxidación de ácidos grasos. La expresión de las isoformas de ACC es específica para tejido y sensible a hormonas y estado nutricional. La ACC1 se expresa a altos niveles en tejidos lipogénicos, en particular en adiposo, hígado y glándula mamaria lactante. La ACC2 es un componente minoritario de la ACC hepática y es la isoforma predominante expresada, aunque a niveles relativamente bajos, en corazón y músculo esquelético. Se ha mostrado que la ACC activa está presente en glándulas sebáceas humanas, aunque el patrón de expresión de isoformas de ACC todavía no se ha descrito (véase, Smythe, C.D. y col., “The activity of HMG-CoA reductase and acetyl-CoA carboxylase in human apocrine sweat glands, sebaceous glands, and hair follicles is regulated by phosphorylation and by exogenous colesterol”, J. Invest. Dermatol. (1998) 111:139-148). Se ha mostrado que ACC y otras enzimas reguladoras de la síntesis de ácidos grasos y de colesterol están positivamente reguladas por andrógenos, un factor clave que contribuye a la elevada producción de sebo en la pubertad, además de la expresión de acné (véase, Rosignoli, C. y col., “Involvement of the SREBP pathway in the mode of action of androgens in sebaceous glands in vivo”, Exp. Dermatol. (2003) 12:480-489).

La ACC también cataliza la primera etapa comprometida y regulada en la síntesis de ácidos grasos en bacterias. Como la biogénesis de lípidos de membrana es esencial para el crecimiento bacteriano, la inhibición de la actividad de ACC puede disminuir potencialmente el crecimiento de bacterias normalmente presentes dentro de un comedón.

Se ha encontrado que los tioésteres de acil-CoA de ácidos grasos de cadena larga (16-20 carbonos) son potentes inhibidores de productos finales fisiológicos de ACC de mamífero.

TOFA (ácido 5-(tetradeciloxi)-2-furancarboxílico) es un compuesto hipolipidémico conocido que tiene la siguiente estructura:

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TOFA y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se describen y reivindican en la patente US 4.110.351(cuya descripción íntegra se incorpora aquí por referencia). Se ha mostrado que TOFA reduce los niveles de triglicéridos en plasma en tanto ratas como monos (véase, por ejemplo, Parker, R.A. y col., J. Med. Chem. (1977), vol. 20, pág. 781-791) e inhibe la síntesis de ácidos grasos hepáticos (véase, por ejemplo, Ribereau-Gayon, G., FEBS Lett. (1976), vol. 62, nº 309-312; Panek, E. y col., Lipids (1977), vol. 12, pág. 814-818; Kariya, T. y col., Biochem. Biophys. Res. Commun. (1978), vol. 80, pág. 1022-1024; y Harris, R.A. y col., Hormones and Energy Metabolism (Klachko,

D.M. y col., eds.), vol. III, pág. 17-42.

TOFA, cuando se convierte intracelularmente en su tioéster de acil-CoA, inhibe la actividad de ACC con un mecanismo similar a acil-CoA grasas de cadena larga, los inhibidores de productos finales fisiológicos de ACC (véase, McCune, S.A. y col., J. Biol. Chem. (1979), vol. 254, nº 20., pág. 10095-10101). Como mimético de ácidos grasos, TOFA puede ejercer múltiples efectos en trastornos de las glándulas sebáceas reduciendo la producción de sebo y afectando posiblemente el crecimiento de bacterias patógenas en el sitio de tratamiento.

Se conocen métodos de uso de TOFA para inhibir la hiperactividad de las glándulas sebáceas y en el tratamiento de acné e inflamación. Véase, por ejemplo, la solicitud de patente publicada PCT nº WO 2008/058034.

Análogos de TOFA, tales como los compuestos de la invención, se desvelan en la presente memoria como inhibidores eficaces de la actividad de las glándulas sebáceas y, por tanto, son útiles en el tratamiento de un mamífero, preferentemente un ser humano, que tiene un trastorno o afección dermatológica caracterizado por hiperactividad de las glándulas sebáceas, tal como acné. Los análogos de TOFA desvelados en la presente memoria también pueden ser útiles en el tratamiento de un mamífero que tiene un trastorno o afección caracterizado por inflamación que reduce la proliferación de linfocitos T y secreción de citocinas.

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Los compuestos de la presente invención también pueden prepararse como se ha explicado resumidamente en el Esquema de reacción 2 en el que cada R2, R3, R5 y R6 son como se han descrito anteriormente en la Descripción resumida de la invención. TOFA puede hacerse reaccionar con un agente alquilante (tanto comprado comercialmente como preparado usando técnicas muy conocidas en la técnica) que tienen un grupo saliente adecuado (haluro, triflato, tosilato, mesilato y similares) en presencia de una base adecuada (que incluye, pero no se limita a, carbonato de potasio, carbonato de cesio, hidróxido de tetrabutilamonio, trietilamina, etc.). Las reacciones pueden llevarse a cabo en un disolvente adecuado tal como N,N-dimetilformamida y se realizan normalmente a una temperatura entre ambiente y 70 ºC. El producto de la reacción puede aislarse y purificarse empleando técnicas convencionales tales como extracción con disolvente, cromatografía, cristalización, destilación y similares.

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Los compuestos de la presente invención también pueden prepararse como se muestra anteriormente en el Esquema de reacción 3. TOFA puede hacerse reaccionar con un ligador que contiene dos grupos salientes adecuados (haluro, triflato, tosilato, mesilato y similares). La reacción inicial se realiza como en el Esquema de reacción 2 anterior. El producto de esta reacción se hace reaccionar entonces con un nucleófilo adecuado que incluye, pero no se limita a, aminas (mostradas anteriormente), alcoholes o fenoles en un disolvente adecuado tal como DMF o THF. La reacción se realiza generalmente a temperatura ambiente durante 12 h en presencia de una base adecuada que puede ser hidróxido de tetrabutilamonio, exceso del nucleófilo de amina, trietilamina o similares. El producto de la reacción puede aislarse y purificarse empleando técnicas convencionales tales como extracción con disolvente, cromatografía, cristalización, destilación y similares.

En algunos casos, el producto final de los esquemas de reacción mostrados anteriormente puede modificarse adicionalmente, por ejemplo por manipulación de sustituyentes. Estas manipulaciones pueden incluir, pero no se limitan a, oxidación, reducción, alquilación, acilación e hidrólisis, según se necesite para preparar los compuestos de la invención. Tales manipulaciones están dentro del conocimiento de un experto en el campo de la química orgánica. Estas manipulaciones también pueden incluir la eliminación de un grupo protector tal como un grupo Boc, un grupo tetrahidropirano o similares mediante métodos explicados resumidamente en T. W. Greene y P. G. M. Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis”, segunda edición, John Wiley and Sons, Nueva York, 1991.

Todos los compuestos de la invención como se han preparado anteriormente y más adelante que existen en forma de base o ácido libre pueden convertirse en su sal farmacéuticamente aceptable mediante tratamiento con la base o ácido inorgánico u orgánico apropiado mediante métodos conocidos para un experto en la materia. Sales de los compuestos preparados en la presente memoria pueden convertirse en su base o ácido libre por técnicas convencionales conocidas para un experto en la materia.

Los siguientes ejemplos sintéticos, que se refieren a la preparación de los compuestos de fórmula (I), se proporcionan como una guía para ayudar en la práctica de la invención, y no están previstos como una limitación del alcance de la invención. Se analizaron muestras de espectrómetro de masas en el espectrómetro de masas MicroMass operado en modo de EM simple con ionización por electropulverización. Las muestras se introdujeron en el espectrómetro de masas usando cromatografía. Los espectros de RMN 1H se registraron a 400 MHz usando un instrumento Bruker o a 300 MHz usando un instrumento Varian. El análisis elemental se realizó por Canadian Microanalytical Ltd., Delta, BC, Canadá.

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Ejemplo 1 sintético Síntesis de 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 2,2,2-trifluoroetilo

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A una suspensión a temperatura ambiente con agitación de ácido 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxílico (1,3 g, 4,0 mmoles) en CH2Cl2 (40 ml) se añadió N,N'-diciclohexilcarbodiimida (0,990 g, 4,8 mmoles), N,N-dimetilaminopiridina (0,488 g, 4,0 mmoles) y 2,2,2-trifluoroetanol (0,875 ml, 12,0 mmoles). El matraz se tapó y la agitación continuó durante 16 h en cuyo momento la CCF (10% de EtOAc en hexanos Rf = 0,05 (SM) y 0,25 (Prod)) indicó el consumo completo del material de partida. La suspensión resultante se diluyó con CH2Cl2 (40 ml), se filtró y se concentró. Este material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con 5-20% de EtOAc en hexanos. El sólido resultante se purificó adicionalmente por recristalización en 30 ml de 2-propanol caliente con la adición de una cantidad mínima de agua para dar 1,13 g (70%) del compuesto del título como agujas blancas. EM (m/z, ES-): 406,0 (M-1, 100%); AE hallado para C23H36F3NO2: C: 62,20, H: 8,18; calcd: C: 62,05, H: 8,18; RMN 1H (400 MHz, DMSOd6) : 7,4 (d, 1H), 5,7 (d, 1H), 4,9 (q, 2H), 4,2 (t, 2H), 1,50-1,57 (m, 2H), 1,10-1,20 (m, 22H), 0,85 (t, 3H).

Ejemplo 2 sintético

Síntesis de 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 2,2,2-tricloroetilo

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El compuesto del título se preparó como se describe en el Ejemplo 1 a partir de 0,228 g (0,7 mmoles) de ácido 5(tetradeciloxi)furan-2-carboxílico y 0,196 ml (2,04 mmoles) de 2,2,2-tricloroetanol. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 7,4 (d, 1H), 5,74 (d, 1H), 5,03 (s, 2H), 4,19 (t, 2H), 1,7 (p, 2H), 1,2-1,5 (m, 22H), 0,85 (t, 3H).

Ejemplo 3 sintético

Síntesis de 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de isopropilo

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El compuesto del título se preparó como se describe en el Ejemplo 1 a partir de 0,228 g (0,7 mmoles) de ácido 5(tetradeciloxi)furan-2-carboxílico y 0,161 ml (2,1 mmoles) de 2-propanol. EM (m/z, ES+): 366,30 (M+, 100%); RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 7,2 (d, 1H), 5,6 (d, 1H), 5,0 (p, 1H), 4,1 (t, 2H), 1,7 (p, 2H), 1,3-1,4 (m, 2H), 1,23 (d, 6H), 1,2 (s, 20H), 0,85 (t, 3H).

Ejemplo 4 sintético

Síntesis de 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de metilo

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El compuesto del título se preparó como se describe en el Ejemplo 1 a partir de 0,228 g (0,7 mmoles) de ácido 5(tetradeciloxi)furan-2-carboxílico y 0,083 ml (2,1 mmoles) de metanol. EM (m/z, ES+): 339,34 (M+1, 100%). Ejemplo 5 sintético Síntesis de 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 2-bromoetilo

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El compuesto del título se preparó como se describe en el Ejemplo 1 a partir de 0,228 g (0,7 mmoles) de ácido 5(tetradeciloxi)furan-2-carboxílico y 0,150 ml (2,1 mmoles) de 2-bromoetanol. EM (m/z, ES+): 446,30 (79BrM+1, 100%), 448,30 (81BrM+1, 80%); RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 7,30 (d, 1H), 5,67 (d, 1H), 4,49 (t, 2H), 4,16 (t, 2H),

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entonces con salmuera (5 ml), agua (5 ml) y EtOAc (70 ml). La fase orgánica se lavó sucesivamente con agua (30 ml) y salmuera (30 ml) y luego se secó y se concentró. El material resultante en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con EtOAc en hexanos, 5-20%, para dar 0,120 g (43%) del compuesto del título como un aceite ligeramente marrón. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,15-7,40 (m, 6H), 7,05 (p, 1H), 5,30 (d, 1H), 4,40-4,60 (m, 2H), 4,10 (t, 2H), 2,85 (d, 3H) 1,7-1,9 (m, 2H), 1,79 (p, 2H), 1,55-1,62 (m, 3H), 1,18-1,50 (m, 22H), 0,89 (t, 3H).

Ejemplo 9 sintético

Síntesis de 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 1-((2-etoxi-2-oxoetil)(metil)carbamoiloxi)etilo

imagen23

El compuesto del título se preparó como en el Ejemplo 8, Etapas 1 y 2, a partir de 0,20 ml (1,8 mmoles) de

10 cloroformiato de 1-cloroetilo, 0,267 g (1,8 mmoles) de clorhidrato de éster etílico de sarcosina y 4 ml de disolución saturada de NaHCO3. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,18 (t, 1H), 6,98 (dq, 1H), 5,3 (d, 1H), 4,03-4,23 (m, 5H), 3,8-3,9 (m, 1H), 2,98 (s, 3H), 1,75 (p, 2H), 1,52-1,6 (m, 3H), 1,2-1,5 (m, 27H), 0,85 (t, 3H).

Ejemplo 10 sintético

Síntesis de 1-(1-(5-(tetradeciloxi)furan-2-carboniloxi)etil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S)-2-bencilo

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El compuesto del título se preparó como en el Ejemplo 8, Etapas 1 y 2, a partir de 0,20 ml (1,8 mmoles) de cloroformiato de 1-cloroetilo, 0,435 g (1,8 mmoles) de clorhidrato de L-bencilprolina y 4 ml de disolución saturada de NaHCO3. El compuesto se aisló como una mezcla de dos diaestereómeros. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,25-7,4 (m, 5H), 6,9-7,2 (m, 2H), 5,0-5,3 (m, 2H), 4,35-4,45 (m, 1H), 4,0-4,18 (m, 2H), 3,4-3,65 (m, 2H), 2,1-2,3 (m, 1H), 1,8

20 2,0 (m, 2H), 1,65-1,8 (m, 2H), 1,45-1,6 (m, 3H), 1,2-1,5 (m, 24H), 0,9 (t, 3H).

Ejemplo 11 sintético

Síntesis de 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 1-(4-fenilciclohexanocarboniloxi)etilo

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25 cloroformiato de 1-cloroetilo, 0,303 g (1,8 mmoles) de 1-fenilpiperazina y 4 ml de disolución saturada de NaHCO3. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,25-7,35 (m, 2H), 7,20 (d, 1H, J = 4 Hz), 7,04 (q, 1H, J = 5 Hz), 6,85-6,95 (m, 3H), 5,30 (d, 1H, J = 4 Hz), 4,15 (t ap, 2H, J = 3,5 Hz), 3,63 (t a, 4H), 3,18 (s a, 4H), 1,8 (p, 2H, J = 8 Hz), 1,60 (d, 3H, J = 6 Hz), 1,20-1,5 (m, 22H), 0,87 (t, 3H, J = 7 Hz).

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Ejemplo 12 sintético Síntesis de 3-fenilpirrolidin-1-carboxilato de 1-(5-(tetradeciloxi)furan-2-carboniloxi)etilo

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5 cloroformiato de 1-cloroetilo, 0,167 g (1,8 mmoles) de 3-fenilpirrolidina y 4 ml de disolución saturada de NaHCO3. El compuesto se aisló como una mezcla de cuatro diaestereómeros. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,18-7,3 (m, 5H), 7,2 (q, 1H), 6,93 (d, 1H), 5,3 (d, 1H), 4,12 (t, 2H), 3,1-4,0 (m, 5H), 2,2-2,35 (m, 1H), 1,95-2,05 (m, 1H), 1,75 (t, 2H), 1,51,65 (m, 3H), 1,2-1,5 (m, 22H), 0,9 (t, 3H).

Ejemplo 13 sintético

10 Síntesis de 3,4-dihidroisoquinolin-2(1H)-carboxilato de 1-(5-(tetradeciloxi)furan-2-carboniloxi)etilo

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El compuesto del título se preparó como en el Ejemplo 8, Etapas 1 y 2, a partir de 0,20 ml (1,8 mmoles) de cloroformiato de 1-cloroetilo, 0,305 g (1,8 mmoles) de clorhidrato de 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina y 4 ml de disolución saturada de NaHCO3. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,0-7,2 (m, 6H), 5,3 (d, 1H), 4,6 (d, 2H), 4,1 (t, 2H),

15 3,6-3,75 (m, 2H), 2,8-2,87 (m, 2H), 1,75 (p, 2H), 1,5-1,62 (m, 3H), 1,2-1,5 (m, 22H), 0,9 (t, 3H).

Ejemplo 14 sintético

Síntesis de piperidin-1-carboxilato de 1-(5-(tetradeciloxi)furan-2-carboniloxi)etilo

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20 cloroformiato de 1-cloroetilo, 0,178 ml (1,8 mmoles) de piperidina y 4 ml de disolución saturada de NaHCO3. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,18 (d, 1H), 6,98 (q, 1H), 5,3 (d, 1H), 4,08-4,18 (m, 2H), 3,38-3,42 (m, 4H), 1,5-1,8 (m, 33H), 0,89 (t, 3H).

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Ejemplo 15 sintético Síntesis de morfolin-4-carboxilato de 1-(5-(tetradeciloxi)furan-2-carboniloxi)etilo

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El compuesto del título se preparó como en el Ejemplo 8, Etapas 1 y 2, a partir de 0,20 ml (1,8 mmoles) de cloroformiato de 1-cloroetilo, 0,157 ml (1,8 mmoles) de morfolina y 4 ml de disolución saturada de NaHCO3. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,18 (d, 1H), 7,05 (q, 1H), 5,32 (d, 1H), 4,1 (t, 2H), 3,6-3,6 (m, 4H), 3,45-3,55 (m, 4H), 1,75 (p, 2H), 1,5-1,65 (m, 3H), 1,2-1,5 (m, 22H), 0,85 (t, 3H).

Ejemplo 16 sintético

Síntesis de 4-(1-(5-(tetradeciloxi)furan-2-carboniloxi)etil)piperazin-1,4-dicarboxilato de 1-terc-butilo

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El compuesto del título se preparó como en el Ejemplo 8, Etapas 1 y 2, a partir de 0,20 ml (1,8 mmoles) de cloroformiato de 1-cloroetilo, 0,335 mg (1,8 mmoles) de 1-piperazincarboxilato de terc-butilo y 4 ml de disolución saturada de NaHCO3. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,2 (d, 1H), 6,97 (q, 1H), 5,3 (d, 1H), 4,1 (t, 2H), 3,4 (s a, 8H), 1,75 (p, 2H), 1,5-1,6 (m, 3H) 1,5 (s, 9H), 1,2-1,5 (m, 22H), 0,9 (t, 3H).

15 Ejemplo 17 sintético

Síntesis de 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 1-(diciclohexilcarbamoiloxi)etilo

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El compuesto del título se preparó como en el Ejemplo 8, Etapas 1 y 2, a partir de 0,20 ml (1,8 mmoles) de cloroformiato de 1-cloroetilo, 0,220 mg (1,8 mmoles) de diciclohexilamina y 3 ml de disolución saturada de NaHCO3. 20 RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,1 (d, 1H), 7,0 (q, 1H), 5,3 (d, 1H), 4,05-4,15 (m, 2H), 3,6 (s a, 1H), 3,2 (s a, 1H), 1,651,8 (m, 10H), 1,55-1,65 (m, 11H), 1,2-1,5 (m, 24H), 1,0-1,2 (m, 2H), 0,8 (t, 3H).

Ejemplo 18 sintético

Síntesis de 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 2-(dimetilamino)etilo

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25 A una disolución de 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 2-bromoetilo (0,186 g, 0,43 mmoles) (preparada en el Ejemplo 5) en THF a 0 ºC se añadió dimetilamina (1 ml de una disolución 2 M en THF, 2,15 mmoles) con agitación. La disolución se dejó calentar hasta temperatura ambiente y la agitación continuó durante 12 h, momento en el que la reacción se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con acetato de etilo en hexanos (5-35%) para dar 0,121 g (71 %) del compuesto del título como un sólido incoloro

30 ceroso. EM (m/z, ES+): 396,29 (M+1, 100%); RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 7,2 (d, 1H), 5,6 (d, 1H), 4,23 (t, 2H), 4,13 (t, 2H), 2,53 (t, 2H), 2,18 (s, 6H), 1,7 (p, 2H), 1,2-1,5 (m, 22H), 0,85 (t, 3H).

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Ejemplo 21 sintético Síntesis de 4-(2-(5-tetradeciloxi)furan-2-carboniloxi)acetil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo

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El compuesto del título se preparó como en el Ejemplo 20, Etapas 1 y 2, a partir de 0,373 g (2,0 mmoles) de 1

5 piperazincarboxilato de terc-butilo y 0,160 ml (2 mmoles) de cloruro de cloroacetilo, excepto que la mezcla de reacción en la Etapa 1 se diluyó en EtOAc en vez de hexanos. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,22 (d, 1H), 5,3 (d, 1H), 4,85 (s, 2H), 4,15 (t, 2H), 3,55-3,65 (m, 2H), 3,4-3,52 (m, 6H), 1,75 (p, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,2-1,5 (m, 22H), 0,8 (t, 3H).

Ejemplo 22 sintético

10 Síntesis de 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 2-(diciclohexilamino)-2-oxoetilo

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El compuesto del título se preparó como en el Ejemplo 20, Etapas 1 y 2, a partir de 0,244 ml (2,0 mmoles) de diciclohexilamina y 0,160 ml (2 mmoles) de cloruro de cloroacetilo, excepto que la mezcla de reacción en la Etapa 1 se diluyó en EtOAc en vez de hexanos. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,2 (d, 1H), 5,3 (d, 1H), 4,8 (s, 2H), 4,1-4,18

15 (m, 2H), 3,22 (t, 2H), 2,9-3,05 (m, 2H), 2,3-2,5 (m, 2H), 1,1-1,9 (m, 40H), 0,83 (t, 3H).

Ejemplo 23 sintético

Síntesis de 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 2-(4-ciclohexilpiperazin-1-il)-2-oxoetilo

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El compuesto del título se preparó como en el Ejemplo 20, Etapas 1 y 2, a partir de 0,337 g (2,0 mmoles) de 1

20 ciclohexilpiperazina y 0,160 ml (2 mmoles) de cloruro de cloroacetilo, excepto que la mezcla de reacción en la Etapa 1 se diluyó en EtOAc en vez de hexanos. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,22 (d, 1H), 5,3 (d, 1H), 4,9 (s, 2H), 4,1 (t, 2H), 3,6 (t, 2H), 3,4 (t, 2H), 2,57 (p, 4H), 2,2-2,35 (m, 1H), 1,5-1,8 (m, 6H), 1,2-1,5 (m, 28H), 0,83 (t, 3H).

Ejemplo 24 sintético

Síntesis de 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 2-oxo-2-(4-fenilpiperazin-1-il)etilo

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El compuesto del título se preparó como en el Ejemplo 20, Etapas 1 y 2, a partir de 0,324 g (2,0 mmoles) de 1fenilpiperazina y 0,160 ml (2 mmoles) de cloruro de cloroacetilo, excepto que la mezcla de reacción en la Etapa 1 se diluyó en EtOAc en vez de hexanos. El compuesto del título se purificó adicionalmente por recristalización en isopropanol y agua. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,23-7,35 (m, 4H), 6,9 (d, 2H), 5,34 (d, 1H), 4,95 (s, 2H), 4,13 (t,

30 2H), 3,78-3,82 (m, 2H), 3,69-3,63 (m, 2H), 3,15-3,25 (m, 4H), 1,75 (p, 2H), 1,2-1,5 (m, 22H), 0,86 (t, 3H).

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Ejemplo 25 sintético Síntesis de 5-tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 2-((2-etoxi-2-oxoetil)(metil)amino)-2-oxoetilo

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El compuesto del título se preparó como en el Ejemplo 20, Etapas 1 y 2, a partir de 0,307 g (2,0 mmoles) de

5 clorhidrato de éster etílico de sarcosina y 0,160 ml (2 mmoles) de cloruro de cloroacetilo, excepto que la mezcla de reacción en la Etapa 1 se diluyó en EtOAc en vez de hexanos. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,23 (d, 1H), 5,32 (d, 1H), 4,95 y 4,8 (2s de rotámeros, 2H), 4,05-4,25 (m, 6H), 3,1 y 3,0 (2s de rotámeros, 3H), 1,75 (p, 2H), 1,2-1,5 (m, 25H), 0,9 (t, 3H).

Ejemplo 26 sintético

10 Síntesis de 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 2-oxo-2-(piperidin-1-il)etilo

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El compuesto del título se preparó como en el Ejemplo 20, Etapas 1 y 2, a partir de 0,198 ml (2,0 mmoles) de piperidina y 0,160 ml (2 mmoles) de cloruro de cloroacetilo, excepto que la mezcla de reacción en la Etapa 1 se diluyó en EtOAc en vez de hexanos. El material en bruto aislado en la Etapa 2 se purificó por recristalización en

15 isopropanol. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,22 (d, 1H), 5,35 (d, 1H), 4,87 (s, 2H), 4,15 (t, 2H), 3,55-3,6 (m, 2H), 3,33,4 (m, 2H), 1,75 (p, 2H), 1,5-1,7 (m, 6H), 1,2-1,5 (m, 22H), 0,9 (t, 3H).

Ejemplo 27 sintético

Síntesis de 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 2-morfolino-2-oxoetilo

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20 El compuesto del título se preparó como en el Ejemplo 20, Etapas 1 y 2, a partir de 0,157 ml (2,0 mmoles) de morfolina y 0,160 ml (2 mmoles) de cloruro de cloroacetilo, excepto que la mezcla de reacción en la Etapa 1 se diluyó en EtOAc en vez de hexanos. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 7,23 (d, 1H), 5,35 (d, 1H), 4,86 (s, 2H), 4,15 (t, 2H), 3,68-3,75 (m, 4H), 3,6-3,65 (m, 2H), 3,4-3,45 (m, 2H), 1,75 (p, 2H), 1,2-1,5 (m, 22H), 0,9 (t, 3H).

Ejemplo 28 sintético

25 Síntesis de 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxilato de 2-(3,4-dihidroisoquinolin-2(1H)-il)-2-oxoetilo

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El compuesto del título se preparó como en el Ejemplo 20, Etapas 1 y 2, a partir de 0,339 g (2,0 mmoles) de clorhidrato de 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina y 0,160 ml (2 mmoles) de cloruro de cloroacetilo, excepto que la mezcla de reacción en la Etapa 1 se diluyó en una mezcla 1:1 de hexanos:EtOAc en vez de hexanos. RMN 1H (300 MHz,

30 CDCl3) : 7,05-7,25 (m, 5H), 5,32 (d, 1H), 4,95 (2s de rotámeros, 2H), 4,65 y 4,7 (2s de rotámeros, 2H), 4,15 (t, 2H), 3,83 y 3,63 (2t de rotámeros, 2H), 2,92 y 2,85 (2t de rotámeros, 2H), 1,78 (p, 2H), 1,2-1,5 (m, 22H), 0,9 (t, 3H).

Ejemplo 29 sintético

Síntesis de 1-(2-(5-(tetradeciloxi)furan-2-carboniloxi)acetil)pirrolidin-2-carboxilato de (S)-bencilo

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Ejemplo 33 sintético Síntesis de ácido 2-(5-(tetradeciloxi)furan-2-carboniloxi)benzoico

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A una suspensión enfriada (0 ºC) y con agitación de ácido 5-(tetradeciloxi)furan-2-carboxílico (0,324 g, 1 mmoles) en 10 ml de CH2Cl2 se añadió cloruro de oxalilo (0,135 ml, 1,5 mmoles) y 2 gotas de N,N-dimetilformamida. Se observó efervescencia inmediata. La disolución se dejó calentar hasta temperatura ambiente con agitación continuada hasta tal momento en el que cesó el desprendimiento de gas y se habían disuelto todos los sólidos suspensos. La disolución se enfrió entonces una vez más a 0 ºC y se añadieron ácido salicílico (0,180 g, 1,3 mmoles) y Et3N (3 ml) a la reacción rápidamente agitada. Después de agitar durante 2 h, la reacción se diluyó con EtOAc (100 ml) y la fase orgánica se lavó con HCl 1 M (2 x 100 ml) y salmuera (100 ml) y luego se secó y se concentró para dar un residuo sólido blanco. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con 5-40% de EtOAc en hexanos con 1% de AcOH. El material resultante se purificó adicionalmente por recristalización en CH2Cl2 y hexanos para dar 0,225 g (57%) del compuesto del título como un material cristalino blanco. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 8,08 (dd, 1H), 7,62 (dt, 1H), 7,32-7,38 (m, 2H), 7,24 (dd, 1H), 5,39 (d, 1H), 4,18 (t, 2H), 1,80 (p, 2H), 1,2-1,5 (m, 22H), 0,88 (t, 3H).

Prueba de los compuestos de la invención

El estudio de la función de sebocitos humanos se ha restringido relativamente debido a la falta de líneas celulares adecuadas. Recientemente, sebocitos SZ95 se prepararon usando células de las glándulas sebáceas faciales humanas transfectadas con un plásmido que contiene la región codificante para el antígeno T grande del virus 40 simio (véase, Zouboulis, C.C. y col., J. Invest. Dermatol. (1999), vol. 113, pág. 1011-1020). Células SZ95 expresan varias moléculas normalmente asociadas a sebocitos humanos. Estudios funcionales mostraron la síntesis de los lípidos sebáceos escualeno y ésteres de cera, además de triglicéridos y ácidos grasos libres (véase, Zouboulis CC, Seltmann H, Neitzel H, Orfanos CE. Establishment and characterization of an immortalized human sebaceous gland cell line (SZ95). J. Invest Dermatol. (1999) 113:1011-1020).

Así, células SZ95 pueden recapitular muchos aspectos del crecimiento y diferenciación de sebocitos (véase, Wrobel,

A. y col., “Differentiation and apoptosis in human immortalized sebocytes”, J. Invest Dermatol. (2003) 120:175-181).

El tratamiento con ácido araquidónico (AA) aumentó reproduciblemente los elevados niveles de lípidos de sebocitos SZ95 aproximadamente 5 veces usando un formato de placa de microtitulación de 96 pocillos. Las células SZ95 pueden usarse para identificar compuestos con potencial inhibidor del sebo, tales como Accutane® e inhibidores de la síntesis del colesterol (estatinas), ambos de los cuales demostraron la capacidad para reducir la producción de lípidos por estas células (véase, Tsukada, M. y col., “13-cis retinoic acid exerts its specific activity on human sebocytes through selective intracellular isomerization to all-trans retinoic acid and binding to retinoid acid receptors”,

J. Invest. Dermatol. (2000) 115:321-327).

La administración de compuestos de la invención también puede inhibir varios parámetros relacionados con la activación de linfocitos T que incluye proliferación y secreción de citocinas inmunoreguladoras/reguladoras de inflamación. Por consiguiente, los análogos de TOFA serían agentes útiles en el tratamiento de trastornos o afecciones dermatológicas caracterizados por inflamación, reduciendo la proliferación de linfocitos T y la secreción de citocinas, por ejemplo, en el tratamiento de acné inflamatorio.

La prueba in vivo para evaluar el posible tratamiento para el acné puede realizarse usando los siguientes ensayos en hámster debido a que las glándulas sebáceas de las orejas de hámster tiene un gran parecido con aquellas de seres humanos en términos de estructura, bioquímica y fisiología.

Prueba de actividad anti-glándulas sebáceas in vivo

Se usó el modelo de glándulas sebáceas de las orejas de hámster dorado sirio (Oryctolagus cuniculus) para evaluar el efecto de la administración repetida de TOFA y análogos de TOFA. Se emplearon animales macho ya que tienen glándulas sebáceas mayores que las hembras a consecuencia de sus mayores niveles endógenos de hormonas andrógenas. Para definir los efectos del compuesto, secciones transversales preparadas de orejas de hámster se trataron con la tinción específica para lípidos neutros Oil Red O. Los resultados de la tinción se compararon con la oreja sin tratar del mismo animal con el fin de explicar cualquier cambio en el estado fisiológico global del animal, además de posibles efectos sistémicos que surgen de la administración del fármaco local.

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Tratamiento y monitorización de animales

Normalmente, los compuestos se prepararon y se aplicaron en 40% de dimetilacetamida (DMA)/30% de acetona/30% de etanol (vehículo). Los animales tuvieron normalmente 10-12 semanas de edad y 100-150 g de peso corporal al inicio del experimento. Los grupos de tratamiento consistieron en 5-8 animales. Hámsteres no anestesiados se administraron con el material de prueba sobre la superficie ventral de la oreja derecha usando una pipeta a un volumen de 20 µl por oreja. Los materiales se masajearon suavemente en el sitio de tratamiento con un dedo con guante durante aproximadamente 15 s. Los hámsteres recibieron tratamiento una vez al día durante 15-28 días consecutivos. La aplicación de los artículos de prueba se produjo en el plazo del mismo periodo de 4 horas en cada día de administración. La oreja izquierda permaneció sin tratar y sirvió de sitio de control interno. Los animales se evaluaron diariamente para el aspecto general y posibles signos clínicos relacionados con el tratamiento tales como edema, eritema, cambio de color u otros cambios en las orejas. Los hámsteres también se evaluaron para salud general por aspecto del pelaje, comportamiento y nivel de actividad.

Preparación de muestras para histología

Los animales se sacrificaron por asfixia con CO2 aproximadamente 16-20 h tras la aplicación final (21ª). Las muestras de tejido para el análisis de glándulas sebáceas se tomaron posteriormente por personal de histología. Las orejas derecha (tratada) e izquierda (sin tratar) se extirparon cuidadosamente de los hámsteres sacrificados. Se marcó una biopsia en sacabocados de 3,5 mm de la oreja tratada con un colorante marcador sobre la superficie ventral. Una biopsia en sacabocados de la oreja sin tratar se marcó con un colorante marcador de tejido separado sobre la superficie ventral. Los tejidos se incorporaron en un molde etiquetado lleno de medio de incorporación criogénica “Neg 50” y se congelaron sobre nitrógeno líquido. Estos bloques se envolvieron secuencialmente en Parafilm®, luego lámina de aluminio para el almacenamiento a -70ºC hasta que se requiriera.

Análisis de las glándulas sebáceas

Para evaluar el estado de las glándulas sebáceas, secciones transversales de las orejas se cortaron inicialmente a un espesor de aproximadamente 8 µm sobre portaobjetos de vidrio y se fijaron inmediatamente con 10% de formalina tamponada. Las secciones se tiñeron con el colorante Oil Red O específico para lípidos mediante métodos convencionales, se cubrieron con medio de montaje acrílico Faramount (DakoCytomation, Ca), se cubrieron con cubreobjetos y luego se dejó que se fijaran. Las secciones de tejido reñidas con Oil Red O se visualizaron con una cámara digital Spot RT montada sobre un microscopio Olympus BX60. Las secciones de tejido teñidas con Oil Red O se visualizaron con una cámara digital Spot RT montada sobre un microscopio Olympus BX60. Se tomó una imagen de la sección usando el microscopio con objetivo de 4x. La imagen se guardó usando el número de identificación del animal único, número de portaobjetos y aumento. Las áreas relativas de las glándulas sebáceas (áreas de tinción rojas) se determinaron usando el software Imagen-Pro (Media Cybernetics Inc., Silver Spring, MD). El área de análisis de las imágenes fue la dermis que incluyó la región desde la intersección epidérmica-dérmica hasta la línea central del tejido delimitado por la línea de cartílago central. Los datos se expresaron como porcentaje del área de la sección transversal de tejido que era de color rojo, representativo de estructuras que contienen lípidos, en comparación con el área total analizada.

Los siguientes ejemplos biológicos pueden usarse por un experto en la materia para determinar la eficacia de los compuestos de la invención en el tratamiento de un ser humano que tiene un trastorno o afección dermatológica caracterizado por hiperactividad de las glándulas sebáceas en inhibir la actividad de las glándulas sebáceas en un ser humano o en reducir la proliferación de linfocitos T y secreción de citocinas.

Ejemplo 1 biológico

Inhibición de la síntesis de lípidos en sebocitos SZ95

La línea celular de sebocitos humana inmortalizada, SZ95, se mantuvo en cultivo como se describe en Zouboulis,

C.C. y col., J. Invest. Dermatol. (1999), vol. 113, pág. 1011-1020. La síntesis de lípidos se estimuló tratando células SZ95 con ácido araquidónico (AA). Para la medición de la producción de lípidos y los estudios de la inhibición de lípidos, los compuestos de prueba se disolvieron en sulfóxido de dimetilo (DMSO) y se añadieron a la concentración deseada en placas de microtitulación de 96 pocillos. Las células se cultivaron entonces durante hasta 72 horas antes de que las placas se lavaran 3 veces con PBS y se añadió un volumen final de 200 µl de PBS / pocillo. Para teñir lípidos neutros de células, 5 µl de disolución de rojo Nilo (0,2 mg/ml disuelta en DMSO) se añadieron a cada pocillo y se incubaron durante un mínimo de 60 minutos. Entonces se cuantificó la fluorescencia en placas usando un lector de placas fluorométrico (longitud de onda de excitación: 490 nm; longitud de onda de emisión: 590 nm). La inhibición de los niveles de lípidos por el compuesto de prueba se expresó como el % de reducción de la fluorescencia de células estimuladas con AA en presencia del compuesto de prueba con respecto a los valores obtenidos para las células de control sin estimular. La viabilidad celular se midió utilizando la conversión de un reactivo de tetrazolio (MTS) con un producto de formazano coloreado para células vivas. Para estos ensayos, el compuesto de prueba se disolvió en sulfóxido de dimetilo (DMSO) y se añadió a la concentración deseada a células sembradas en placas de 96 pocillos. Las células se cultivaron durante 48 horas en presencia del compuesto de prueba antes de que las placas se lavaran 3 veces con PBS. Se añadió un volumen final de 100 µl de medio de cultivo por pocillo. Se

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Ejemplo 1 de formulación Formulación en gel alcohólica dermatológica El producto de la siguiente formulación es un gel transparente semi-sólido.

Componente: Porcentaje en peso/peso

Compuesto de fórmula (I): 1,0

Éter monoetílico de dietilenglicol, NF: 32,0

Tocofersolano, NF: 1,0

Hidroxipropilcelulosa, NF (Klucel® GF): 4,0

Edetato de disodio: 0,05

Alcohol, deshidratado, NF: 61,95

La formulación anterior puede prepararse del siguiente modo. Se combinan el alcohol y el éter monoetílico de

5 dietilenglicol. Se disuelven tocofersolano, edetato de disodio y el compuesto de fórmula (I) con mezcla. Se añade la hidroxipropilcelulosa y se dispersa rápidamente y uniformemente con mezcla a alta velocidad. El producto se saca de la mezcla después de la dispersión uniforme.

Ejemplo 2 de formulación

Formulación en gel acuosa dermatológica

10 El producto de la siguiente formulación es un gel suave transparente semi-sólido.

Componente: Porcentaje en peso/peso

Compuesto de fórmula (I): 1,0

Éter monoetílico de dietilenglicol, NF: 30,0

Glicerina, USP: 5,0

Tocofersolano, NF: 1,0

Metilparabeno, NF: 0,1

Propilparabeno, NF: 0,02

Edetato de disodio: 0,05

Acrilatos/polímero reticulado de acrilato de alquilo C10-C30, NF: 2,0

Polisorbato 80, NF: 0,1

Trolamina, NF: a pH 6,75

Agua, USP: hasta 100,0

La formulación anterior puede prepararse del siguiente modo. Se mezclan los líquidos, éter monoetílico de dietilenglicol, glicerina y agua. Se añaden polisorbato 80 y tocofersolano y se mezclan hasta que se disuelven. Se añade el compuesto de fórmula (I) y se mezcla hasta que se disuelve. Se añaden edetato de disodio, metilparabeno y propilparabeno y se mezclan hasta que se disuelven. Los acrilatos/polímero reticulado de acrilato de alquilo C1015 C30 se dispersan rápidamente con mezcla a alta velocidad hasta que se obtiene una mezcla uniforme. Se añade trolamina con mezcla constante para obtener un gel viscoso a un pH de aproximadamente 6,75 (cuando se diluye

1:9 con agua).

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Ejemplo 3 de formulación Formulación en gel hidroalcohólica dermatológica El producto de la siguiente formulación es un gel suave transparente semi-sólido.

Componente: Porcentaje en peso/peso

Compuesto de fórmula (I): 1,0

Éter monoetílico de dietilenglicol, NF: 30,0

Alcohol, NF: 25,0

Glicerina, USP: 5,0

Tocofersolano, NF: 1,0

Metilparabeno, NF: 0,1

Propilparabeno, NF: 0,02

Edetato de disodio: 0,05

Hidroxipropilcelulosa, NF (Klucel® EF): 2,0

Acrilatos/polímero reticulado de acrilato de alquilo C10-C30, NF: 1,0

Polisorbato 80, NF: 0,05

Trolamina, NF: a pH 6,75

Agua, USP: hasta 100,0

La formulación anterior puede prepararse del siguiente modo. Se mezclan los líquidos, éter monoetílico de

5 dietilenglicol, alcohol de glicerina y agua. Se añaden polisorbato 80 y tocofersolano y se mezclan hasta que se disuelven. Se añade el compuesto de fórmula (I) y se mezcla hasta que se disuelve. Se añaden edetato de disodio, metilparabeno y propilparabeno y se mezclan hasta que se disuelven. Se dispersan rápidamente los acrilatos/polímero reticulado de acrilato de alquilo C10-C30 e hidroxipropilcelulosa con mezcla a alta velocidad hasta que se obtiene una mezcla uniforme. Se añade trolamina con mezcla constante para obtener un gel viscoso a un pH

10 de aproximadamente 6,75 (cuando se diluye 1:9 con agua).

Ejemplo 4 de formulación

Formulación en crema dermatológica

Un compuesto de fórmula (I) también puede formularse como una crema, un ejemplo de la cual es del siguiente modo:

Componente: Porcentaje en peso/peso

Compuesto de fórmula (I): 1,0

Éter monoetílico de dietilenglicol, NF: 20,0

Vaselina filante: 5,0

Miristato de isopropilo: 5,0

Alcohol cetoestearílico: 5,0

Fosfato de trilauriléter 4: 1,0

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