ES2393498T3 - Moduladores macrocíclicos del receptor de ghrelina - Google Patents

Abstract

Un modulador de fórmula I: en el que Ri-1, T, X, Z1-2, **Fórmula** m, n y p son tal y como se definen más abajo:

Description

Moduladores macrocíclicos del receptor de ghrelina

Información relacionada con la solicitud [0001] La presente es una solicitud de continuación en parte en virtud del artículo 35

U.S.C. § 120 para la solicitud de patente provisional de los Estados Unidos con nº 10/872,142, presentada el 18 de junio de 2004, actualmente pendiente, que reivindica el beneficio de la prioridad en virtud del artículo 35 U.S.C. § 119(e) para la solicitud de patente provisional de los Estados Unidos con nº 60/479,223, presentada el 18 de junio de 2003. Esta solicitud de continuación en parte también reivindica el beneficio de prioridad en virtud del artículo 35 U.S.C. § 119(e) para la solicitud de patente provisional de los Estados Unidos con nº 60/621,642, presentada el 26 de octubre de 2004; la solicitud de patente provisional de los Estados Unidos con nº 60/622,055, presentada el 27 de octubre de 2004; y la solicitud de patente provisional de los Estados Unidos con nº 60/642,271, presentada el 7 de enero de 2005. La divulgación de las solicitudes mencionadas anteriormente se incorpora aquí mediante referencia en su totalidad.

Campo de la invención [0002] La presente invención hace referencia a unos innovadores compuestos macrocíclicos definidos en su configuración que se ligan al receptor de ghrelina (secretagogo de la hormona de crecimiento) y/o son moduladores funcionales del mismo incluyendo el GHS-R1a y subtipos, isoformas y/o variantes del mismo. La presente invención también hace referencia a los intermediarios de estos compuestos, a las composiciones farmacéuticas que los contienen y a los métodos para usarlos. Estos innovadores compuestos macrocíclicos son útiles como terapia para una variedad de indicaciones de enfermedades. En particular, estos compuestos son útiles para el tratamiento y la prevención de trastornos gastrointestinales incluyendo, pero sin limitarse a, el íleo postoperatorio, la gastroparesia, incluyendo la gastroparesia diabética, la disfunción intestinal opiácea, la seudoobstrucción crónica intestinal, el síndrome del intestino corto y trastornos gastrointestinales funcionales.

Descripción de los antecedentes [0003] El entendimiento mejorado de varias sendas reguladoras fisiológicas permitidas a través de los esfuerzos en la investigación genómica y proteómica ha comenzado a hacer impacto en el descubrimiento de nuevos agentes farmacéuticos. En particular, la identificación de receptores clave y sus ligandos endógenos ha creado nuevas oportunidades para la explotación de estos pares de receptores/ligandos como objetivos terapéuticos. Por ejemplo, la ghrelina es una hormona péptida de 28 aminoácidos recientemente caracterizada y aislada generalmente del estómago de ratas con el ortólogo identificado posteriormente en humanos (Kojima, M.; Hosoda, H. et al. Nature 1999, 402, 656-660.) La existencia de este péptido en una variedad de especies sugiere un papel conservado e importante en el funcionamiento normal de un cuerpo. Se ha demostrado que este péptido es el ligando endógeno de un receptor unido a la proteína G (GPCR) previamente huérfano, del tipo 1 del receptor secretagogo de la hormona de crecimiento (hGHS-R1a) (Howard, A.D.; Feighner, S.D.; et al. “A receptor in pituitary and hypothalamus that functions in growth hormone release.” Science 1996, 273, 974-977) que se encuentra predominantemente en el cerebro (núcleo arqueado y núcleo ventromedial del hipotálamo, hipocampo y sustancia negra) y la pituitaria (Patente nº

U.S. 6.242.199; nº de publicación internacional WO 97/21730 y WO 97/22004). También se ha detectado el receptor en otras áreas del sistema nervioso central (SNC) y en tejidos periféricos, por ejemplo glándulas adrenal y tiroidea, corazón, pulmón, riñón y músculos esqueléticos. Este receptor fue identificado y clonado antes del aislamiento y la caracterización del ligando péptido endógeno y es distinto a otros receptores involucrados en la regulación de la secreción de hormona de crecimiento (GH), en particular, el receptor de hormona liberadora de hormona de crecimiento (GHRH).

[0004] Una característica única de los péptidos de la rata y del ser humano es la presencia de la porción n-octanoica (Oct) en Ser3. Sin embargo, la forma desacil predomina en circulación, con aproximadamente un 90% de la hormona en esta forma. Este grupo deriva de una modificación post traslación y parece relevante para la bioactividad y posiblemente también para el transporte hacia el SNC (Banks, W.A.; Tschtöp, M.; Robinson, S.M.; Heiman, M.L. “Extent and direction of ghrelin transport across the blood-brain barrier is determined by its unique primary structure.” J. Pharmacol. Exp. Ther. 2002, 302, 822-827). En un ensayo de liberación de GH, la forma des-octanoica de la hormona era al menos cien veces menos potente que el péptido original, aunque se ha sugerido que la especie desacil puede ser responsable de alguno de los otros efectos biológicos asociados con la ghrelina. Esta forma desacil también ha sido postulada como responsable primaria de los efectos de proliferación cardiovascular y celular atribuidos a la ghrelina, mientras que la forma acilada participa en el mantenimiento del equilibrio de energía y de liberación de hormona de crecimiento (Baldanzi, G.; Filighenddu, N.; Cutrupi, S.; et al. “Ghrelin and des-acyl ghrelin inhibit cell death in cardiomyocytes and endothelial cells through ERK1/2 and PI-3 kinase/AKT.” J. Cell Biol. 2002, 159, 1029-1037). De manera similar, la des-Gln14-ghrelina y su derivado octanoico ha sido aislado en formas endógenas de la hormona surgiendo del empalme alternativo del gen ghrelina, pero ambos se hayan inactivos en la liberación de GH estimulante in vivo (Hosoda, H.; Kojima, M.; Matsuo, H.; Kangawa, K. “Purification and characterization of rat des Gln14-ghrelin, a second endogenous ligand for the growth hormone secretagogue receptor.” J. Biol. Chem. 2000, 275, 21995-2120). Se han observado otras formas menores de ghrelina producida mediante un procesamiento post-traslación en plasma, aunque no se les ha atribuido una actividad específica (Hosoda, H.; Kojima, M.; et al. “Structural divergence of human ghrelin. Identification of multiple ghrelin-derived molecules produced by post-translational processing.” J. Biol. Chem. 2003, 278, 64-70).

[0005] Incluso antes del aislamiento de este receptor y de su ligando péptido endógeno, se dedicó una cantidad significativa de investigación con el fin de encontrar agentes que pudieran estimular la secreción de GH. La regulación apropiada de la GH humana tiene importancia no sólo para un crecimiento corporal adecuado, sino también para una variedad de efectos fisiológicos críticos. Puesto que la GH y otros péptidos estimulantes de GH, como el GHRH y el factor de liberación de hormona de crecimiento (GRF), así como sus derivados y análogos, se administran vía inyección, con el fin de sacar un mayor provecho de estos efectos positivos, se centró la atención en el desarrollo de agentes terapéuticos activos oralmente que aumentarían la secreción de GH, llamados secretagogos de la GH (GHS). Además, se esperaba que el uso de estos agentes imitara estrechamente la liberación fisiológica pulsátil de la GH.

[0006] Comenzando con la identificación de los péptidos liberadores de hormona de crecimiento (GHRP) a finales de los años 70, (Bowers, C.Y. “Growth hormone-releasing peptides: physiology and clinical applications.” Curr. Opin. Endocrinol. Diabetes 2000, 7, 168-174; Camanni, F.; Ghigo, E.; Arvat, E. “Growth hormone-releasing peptides and their analogs.” Front. Neurosci. 1998, 19, 47-72; Locatelli, V.; Torsello, A. “Growth hormone secretagogues: focus on the growth hormone-releasing peptides.” Pharmacol. Res. 1997, 36, 415-423) se han estudiado una gran cantidad de agentes por su potencial para actuar como GHS. Además de su estimulación de la liberación de GH y sus concomitantes efectos positivos en este aspecto, se proyectaron los GHS para ser útiles en el tratamiento de una variedad de trastornos, incluyendo el síndrome de emaciación (caquexia) como se observa en pacientes de VIH y de anorexia inducida por cáncer, fragilidad óseomuscular en los ancianos, y enfermedades de deficiencia de la hormona de crecimiento. Muchos esfuerzos en los últimos 25 años han propiciado un número de GHS potentes y disponibles por vía oral (Smith, R.G.; Sun, Y.X.; Beatancourt, L.; Asnicar, M. “Growth hormone secretagogues: prospects and pitfalls.” Best Pract. Res. Clin. Endocrinol. Metab. 2004, 18, 333-347; Fehrentz, J.-A.; Martinez, J.; Boeglin, D.; Guerlavais, V.; Deghenghi, R. “Growth hormone secretagogues: Past, present and future.” IDrugs 2002, 5, 804-814; Svensson, J. Exp. Opin. Ther. Patents 2000, 10, 1071-1080; Nargund, R.P.; Patchett, A.A.; et al. “Peptidomimetic growth hormone secretagogues. Design considerations and therapeutic potential.” J. Med. Chem. 1998, 41, 3103-3127; Ghigo, E; Arvat, E.; Camanni, F. “Orally active growth hormone secretagogues: state of the art and clinical perspective.” Ann. Med 1998, 30, 159-168; Smith, R.G.; Van der Ploeg, L.H.T.; Howard, A.D.; Feighner, S.D.; et al. “Peptidomimetic regulation of growth hormone secretion.” Endocr. Rev. 1997, 18, 621645). Estos incluyen pequeños péptidos, como hexarelina (Zentaris) y ipamorelina (Novo Nordisk), y análogos a la adenosina, así como pequeñas moléculas como capromorelina (Pfizer), L-252,564 (Merck), MK-0677 (Merck), NN703 (Novo Nordisk), G-7203 (Genentech), S-37435 (Kaken) y SM-130868 (Sumitomo), diseñadas para ser activas oralmente en la estimulación de la hormona de crecimiento. Sin embargo, las pruebas clínicas con dichos agentes han producido unos resultados decepcionantes debido a, entre otras cosas, una falta de eficacia en un tratamiento prolongado, o efectos secundarios no deseados, incluyendo una inhibición irreversible de enzimas de citocromo P450 (Zdravkovic M.; Olse, A.K.; Christiansen, T.; et al. Eur. J. Clin. Pharmacol. 2003, 58, 683-688). Por tanto, persiste la necesidad de unos agentes farmacológicos que puedan captar con eficacia este receptor para fines terapéuticos.

[0007] A pesar de su participación en la modulación de GH, la ghrelina se sintetiza principalmente en la glándula oxíntica del estómago, aunque también se produce en menores cantidades en otros órganos, incluyendo el riñón, el páncreas y el hipotálamo (Kojima, M.; Hsoda, H.; Kangawa, K. “Purification and distribution of ghrelin: the natural endogenous ligand for the growth hormone secretagogue receptor.” Horm. Res. 2001, 56 (Supl. 1), 93-97; Ariyasu, H.; Takaya, K.; Tagami, T.; et al. “Stomach is a major source of circulating ghrelin, and feeding state determines plasma ghrelin-like immunoreactivity levels in humans.” J. Clin. Endocrinol. Metab. 2001, 86, 4753-4758). Además de su papel como estimulante en la liberación de GH, la hormona tiene otra variedad de funciones endocrinas y no endocrinas (Broglio, F.; Gottero, C.; Arvat, E.; Ghigo, E. “Endocrine and non-endocrine actions of ghrelin.” Horm. Res. 2003, 59, 109117) y se ha demostrado su interacción con un número de sistemas en su papel para mantener un equilibrio de energía apropiado (Horvath, T.L.; Diano, S.; Sotonyi, P.; Heiman, M.; Tschöp, M. “Ghrelin and the regulation of energy balance - a hypothalamic perspective.” Endocrinology 2001, 142, 4163-4169; Casanueva, F.F.; Dieguez, C. “Ghrelin: the link connecting growth with metabolism and energy homeostasis.” Rev. Endocrinol. Metab. Disord. 2002, 3, 325-338). En particular, la ghrelina péptida desempeña un papel como señal orexigénica en el control de la alimentación, en el que actúa para contrarrestar los efectos de la leptina. En efecto, fue el primer péptido intestinal que se probó que poseía dichas propiedades orexigénicas (Kojima, M.; Kangawa, K. Ghrelin, “An orexigenic signaling molecule from the gastrointestinal tract.” Curr. Opin. Pharmacology 2002, 2, 665-668). La hormona también está implicada en la regulación hipotalámica de la síntesis y secreción de un número de neuropéptidos involucrados en el comportamiento del apetito y de la alimentación. Los niveles de ghrelina son elevados en respuesta al ayuno o a una restricción de comida extendida (Nakazato, M.; Murakami, N.; Date, Y.; Kojima, M.; et al. “A role for ghrelin in the central regulation of feeding.” Nature 2001, 409, 194-198). Por ejemplo, los sujetos que sufren anorexia o bulimia exhiben unos elevados niveles de ghrelina. Se ha descubierto que los niveles en circulación de la hormona aumentan antes de las comidas y disminuyen después. Además, la pérdida de peso inducida por una dieta conlleva un aumento de los niveles de ghrelina, aunque los sujetos obesos que han sufrido cirugía de bypass gástrica no experimentan dicho aumento de la misma manera (Cummings, D.E.; Weigle, D.S.; Frayo, R.S.; et al. “Plasma ghrelin levels after diet-induced weight loss or gastric bypass surgery.” N. Engl. J. Med. 2002, 346, 1623-1630).

[0008] Esta relación íntima de la ghrelina con el control de la ingesta de comida y el apetito la ha convertido en un objetivo atractivo para la investigación sobre la obesidad. En efecto, muy pocas sustancias naturales han demostrado estar relacionadas con la modulación de la secreción de GH y de la ingesta de comida.

[0009] Un efecto adicional de la ghrelina que no ha sido explotado hasta la fecha con fines terapéuticos es la modulación de la motilidad gástrica y la secreción de ácido gástrico. La actividad procinética parece ser independiente de la acción secretoria de GH y es mediada probablemente por la vía muscarínica colinérgica vagal. Los niveles de dosis requeridos son equivalentes a los necesarios para las acciones de estimulación de la hormona GH y del apetito. Es digno de mención que, en contraste con su inactividad para otras acciones de la ghrelina, el péptido des-Gln demostró un fomento de la motilidad también (Trudel, L.; Bouin, M.; Tomasetto, C.; Eberling, P.; St-Pierre, S.; Bannon, P.; L'Heureux, M.C.; Poitras, P. “Two new peptides to improve post-operative gastric ileus in dog.” Peptides 2003, 24, 531-534; Trudel, L.; Tomasetto, C.; Rio, M.C.; Bouin, M.; Plourde, V.; Eberling, P.; Poitras, P. “Ghrelin/motilin-related peptide is a potent prokinetic to reverse gastric postoperative ileus in rats.” Am. J. Physiol. 2002, 282, G948-G952; Peeters, T.L. “Central and peripheral mechanisms by which ghrelin regulates gut motility.” J. Physiol. Pharmacol. 2003, 54(Sup. 4), 95-103).

[0010] La ghrelina también ha estado implicada en varios aspectos de la reproducción y el desarrollo neonatal (Arvat, E.; Gianotti, L.; Giordano, R.; et al. “Growth hormonereleasing hormone and growth hormone secretagogue-receptor ligands. Focus on reproductive system.” Endocrine 2001, 14, 35-43). También tienen importancia los efectos cardiovasculares de la ghrelina, puesto que el péptido es un poderoso vasodilatador. Como tal, los agonistas de la ghrelina poseen potencial para el tratamiento de la insuficiencia cardíaca crónica (Nagaya, N.; Kangawa, K. Ghrelin, “A novel growth hormone-relasing peptide, in the treatment of chronic heart failure.” Regul. Pept. 2003, 114, 71-77; Nagaya, N.; Kangawa, K. “Ghrelin improves left ventricular dysfunction and cardiac cachexia in heart failure.” Curr. Opin. Pharmacol. 2003, 3, 146151; Bedendi, I.; Alloatti, G.; Marcantoni, A.; Malan, D.; Catapano, F.; Ghé, C.; et al. “Cardiac effects of ghrelin and its endogenous derivatives des-octanoyl ghrelin and desGln14-ghrelin.” Eur. J. Pharmacol. 2003, 476, 87-95). La publicación internacional nº WO 2004/014412 describe el uso de agonistas de ghrelina para la protección contra la muerte celular en células miocárdicas y como un tratamiento cardioprotector contra trastornos que conducen a una insuficiencia cardíaca. Por último, se han obtenido pruebas que demuestran que la ghrelina puede tener implicaciones en la ansiedad y otros trastornos del SCN, así como la mejora de la memoria (Carlini, V.P., Monzon, M.E., Varas, M.M., Cragnolini, A.B., Schioth, H.B., Scimonelli, T.N., de Barioglio, S.R.:

“Ghrelin increases anxiety-like behavior and memory retention in rats.” Biochem.

Biophys. Res. Commun. 2002, 299, 739-743). [0011] La infinidad de efectos de la ghrelina en los humanos ha sugerido la existencia de subtipos para su receptor, aunque no se ha identificado ninguno aún (Torsello, A.; Locatelli, Y.; Melis, M.R.; Succu, S.; Spano, M.S.; Deghenghi, R.; Muller, E.E.; Argiolas, A.; Torsello, A.; Locatelli, V.; et al.: “Differential orexigenic effects of hexarelin and its analogs in the rat hypothalamus: indication for multiple growth hormone secretagogue receptor subtypes.” Neuroendocrinology, 2000, 72, 327-332). Sin embargo, se aisló e identificó una forma truncada e inactiva de GHS-R1a, denominada GHS-R1b, al mismo tiempo que se obtuvo la caracterización original. Existen pruebas crecientes de que unos subtipos de receptor adicionales podrían estar presentes en diferentes tejidos para explicar los diversos efectos manifestados por los péptidos endógenos y el GHS sintético. Por ejemplo, también se han encontrado sitios de unión de alta afinidad de ghrelina y desacil-ghrelina en las líneas celulares del cáncer de mama, en los cardiomiocitos y en el corazón de la cobaya que están involucradas en la mediación de los efectos inotrópicos cardíacos antiproliferativos, cardioprotectores y negativos de los péptidos. Del mismo modo, se han encontrado sitios de unión de GHS específicos además del GHS-R1a y del GHS-R1b en células de cáncer de próstata. Además, la ghrelina y la desacil-ghrelina ejercen diferentes efectos en la proliferación de las células en las líneas celulares del carcinoma de próstata (Cassoni, P.; Ghé, C.; Marrocco, T.; et al.: “Expression of ghrelin and biological activity of specific receptors for ghrelin and desacyl ghrelin in human prostate neoplasms and related cell lines”, Eur. J. Endocrinol. 2004, 150, 173-184). Estos diferentes subtipos de receptor pueden entonces estar implicados de manera independiente en la amplia selección de actividades biológicas manifestadas por los péptidos endógenos y el GHS sintético. De hecho, recientemente se ofreció como explicación al fomento de la acumulación de grasa provocada por la ghrelina la existencia de subtipos de receptores, a pesar de su potente estimulación de la hormona lipolítica, la hormona de crecimiento (Thompson, N. M.; Gill, D. A. S.; Davies, R; Loveridge, N.; Houston, P. A.; Robinson, I. C. A. F.; Wells, T.: “Ghrelin and desoctanoyl ghrelin promote adipogenesis directly in vivo by a mechanism independent of the type la growth hormone secretagogue receptor”, Endocrinology 2004,145, 234-242). Además, este trabajo sugirió que el ratio de producción de ghrelina y desacil-ghrelina podría ayudar a regular el equilibrio entre la adipogénesis y la lipólisis en respuesta a un estado nutricional.

[0012] La creación exitosa de análogos de la ghrelina péptida que separan los efectos moduladores de GH de los efectos sobre el aumento de peso y apetito proporciona pruebas firmes de la existencia y relevancia fisiológica de otros subtipos de receptores (Halem, H.A.; Taylor, J.E.; Dong, J.Z.; Shen, Y.; Datta, R.; Abizaid, A.; Diano, S.; Horvath, T.; Zizzari, P.; Bluet-Pajot, M.-T.; Epelbaum, J.; Culler, M.D.: “Novel analogs of ghrelin: physiological and clinical implications”, Eur. J. Endocrinol. 2004, 151, S71-S75).

El BIM-28163 funciona como antagonista en el receptor GHS-R1a e inhibe la activación del receptor mediante la ghrelina nativa. Sin embargo, esta misma molécula es una agonista completa en cuanto a la estimulación del aumento de peso y la ingesta de comida. Además, se ha propuesto la existencia de un subtipo de receptor todavía sin caracterizar basado en estudios de unión en varios tejidos que mostraron diferencias entre los GHS peptídicos y los no peptídicos (Ong, H.; Menicoll, N.; Escher, F.; Collu, R; Deghenghi, R; Locatelli, V.; Ghigo, E.; Muccioli, G.; Boghen, M.; Nilsson, M. Endocrinology 1998, 139, 432-435). Se han divulgado diferencias entre la expresión de GHS-R general y la del subtipo GHS-R1a en los testículos de las ratas (Barreiro, M.L.; Suominen, J.S.; Gaytan, F.; Pinilla, L.; Chopin, L.K; Casanueva, F.F.; Dieguez, C.; Aguilar, E.; Toppari, J.; Tena-Sempere, M.: “Developmental, stage-specific, and hormonally regulated expression of growth hormone secretagogue receptor messenger RNA in rat testis”, Biol. Reproduction, 2003, 68, 1631-1640). Se postula un subtipo de GHS-R sobre los nervios colinérgicos como explicación para las acciones diferenciales de la ghrelina y un GHS peptídico sobre la respuesta contráctil neural observada durante los estudios de unión en el receptor de motilina (Depoortere, I.; Thijs, T.; Thielemans, L.; Robberecht, P.; Peeters, T.L. “Interaction of the growth hormone-releasing peptides ghrelin and growth hormone-releasing peptide-6 with the motilin receptor in the rabbit gastric antrum”, J. Pharmacol. Eq. Ther. 2003, 305, 660-667).

[0013] La variedad de actividades asociadas con el receptor de la ghrelina también podrían deberse a diferentes agonistas que activan diversas rutas de señalización tal y como se ha demostrado para la ghrelina y la anedosina, las cuales interactúan como agonistas en el GHS-R1a (Carreira, M.C.; Camina, J.P.; Smith, R.G.; Casanueva, F.F. “Agonist-specific coupling of growth hormone secretagogue receptor type 1a to different intracellular signaling systems. Role of adenosine”, Neuroendocrinology 2004, 79, 1325).

[0014] Se ha demostrado que la actividad funcional de un GPCR requiere a menudo la formación de dímeros u otros complejos multiméricos con él mismo o con otras proteínas (Park, P.S.; Filipek, S.; Wells, J.W.; Palczewski, K. “Oligomerization of G protein-coupled receptors: past, present, and future”, Biochemistry, 2004, 43, 1564315656; Rios, C.D.; Jordan, B.A.; Gomes, I.; Devi, L.A. “G-protein-coupled receptor dimerization: modulation of receptor function”, Pharmacol. Ther. 2001, 92, 71-87; Devi,

L.A. “Heterodimerization of G-protein-coupled receptors: pharmacology, signaling and trafficking”, Trends Pharmacol. Sci. 2001, 22, 532-537). Asimismo, la actividad del receptor de la ghrelina podría estar al menos parcialmente regulada por dichos complejos. Por ejemplo, ciertos informes indican que la interacción del GHS-R1a con la GHRH (Cunha, S.R; Mayo, KE. “Ghrelin, and growth hormone (GH) secreatagogues potentiate GH-releasing hormone (GHRH)-induced cyclic adenosine 3',5'monophosphate production in cells expressing transfected GHRH and GH secretagogue receptors”, Endocrinology, 2002, 143, 4570-4582; Malagón, M.M.; Luque, R.M.; RuizGuerrero, E.; Rodriguez-Pacheco, F.; García-Navarro, S.; Casanueva, F.F.; Gracia-Navarro, F.; Castano, J.P. “Intracellular signaling mechanisms mediating ghrelinstimulated growth hormone release in somatotropes”, Endocrinology, 2003, 144, 53725380) o entre subtipos de receptores (Chan, C.B.; Cheng, C.H.K. “Identification and functional characterization of two alternatively spliced growth hormone secretagogue receptor transcripts from the pituitary of black seabream Acanthopagrus schlegeli”, Mol. Cell. Endocrinol. 2004, 214, 81-95) podría estar involucrada en la modulación de la función del receptor.

[0015] La inmensa mayoría de los enfoques presentados para explotar el receptor de la ghrelina con fines terapéuticos se han centrado en la modulación de las funciones metabólicas. Del mismo modo, la inmensa mayoría de la literatura sobre el GHS se centra en los trastornos que pueden ser tratados a través de sus acciones de promoción de la GH. Algunas de las formas de realización de la presente invención descritas en este documento se aprovechan, en concreto, de la activación selectiva del receptor de la ghrelina para proporcionar una vía para el tratamiento de enfermedades caracterizadas por la dismotilidad gastrointestinal. La mejora en la motilidad gastrointestinal observada con la ghrelina demuestra que los agonistas de la ghrelina pueden resultar útiles para corregir trastornos asociados con una motilidad reducida o limitada (Murray, C.D.R.; Kamm, M.A.; Bloom, S.R.; Emmanuel, A.V. “Ghrelin for the gastroenterologist: history and potential”, Gastroenterology, 2003, 125, 1492-1502; Fujino, K.; Inui, A.; Asakawa, A.; Kihara, N.; Fujimura, M.; Fujimiya, M. “Ghrelin induces fasting motor activity of the gastrointestinal tract in conscious fed rats”, J. Physiol. 2003, 550, 227-240; Edholm, T.; Levin, F.; Hellström, P.M.; Schmidt, P.T. “Ghrelin, stimulates motility in the small intestine of rats through intrinsic cholinergic neurons”, Regul. Pept. 2004,121, 25-30).

[0016] El íleo postoperatorio está incluido entre estos trastornos (POI, Luckey, A.; Livingston, E.; Taché, Y. “Mechanisms and treatment of postoperative ileus”, Arch. Surg. 2003, 138, 206-214; Baig, M.K.; Wexner, S.D. “Postoperative ileus: a review”, Dis. Colon Rectum 2004, 47, 516-526). El íleo postoperatorio (POI por sus siglas en inglés) se define como la deficiencia de la motilidad gastrointestinal que ocurre rutinariamente tras la cirugía abdominal, intestinal, ginecológica y pélvica. Tan sólo en los Estados Unidos, 4,3 millones de cirugías al año provocan POI, lo que representa un impacto económico de más de mil millones de dólares. El íleo postoperatorio está considerado como una respuesta perjudicial a la manipulación quirúrgica con una duración variable que generalmente persiste durante 72 horas. Se caracteriza por dolor, distensión o hinchazón abdominal, náuseas y vómitos, acumulación de gases y fluidos en el intestino y deposición de heces tardía. Los pacientes no son capaces de tolerar alimentos por vía oral ni evacuar el intestino hasta que vuelve la función intestinal. El íleo postoperatorio conlleva numerosas consecuencias no deseadas, incluyendo una mayor morbilidad del paciente, la costosa prolongación de la estancia hospitalaria y, asimismo, es una de las mayores causas de reingreso hospitalario. Además, los fármacos opiáceos que se prescriben como analgésicos después de la cirugía exacerban este trastorno debido a

su conocido efecto secundario de inhibición de la función intestinal. [0017] La manipulación quirúrgica del estómago o del intestino causa una desorganización de las vías de señalización entre el intestino y el cerebro, afectando a la actividad gastrointestinal y provocando el íleo postoperatorio. La ghrelina actúa localmente en el estómago para estimular y coordinar los disparos de neuronas aferentes vagales y así modular la motilidad intestinal. De este modo, la ghrelina acelera el vaciado gástrico en los humanos y es un potente agente que puede tratar, tal y como se ha demostrado, el íleo postoperatorio en modelos animales. Los agonistas de la ghrelina duplican los efectos de la ghrelina, por lo que se dirigen directamente a la causa subyacente del íleo postoperatorio para acelerar la normalización de la función intestinal y permitir un alta más rápida del hospital. La administración intravenosa es a menudo la forma preferida de tratamiento para el íleo postoperatorio debido a la deficiente motilidad gastrointestinal en estos pacientes que impide una terapia por vía oral. Actualmente, el Organismo para el Control de Alimentos y Medicamentos (FDA por sus siglas en inglés) de los Estados Unidos no ha aprobado ningún agente específico para el tratamiento del íleo postoperatorio.

[0018] Otro trastorno de motilidad grave es la gastroparesia, un problema concreto para los diabéticos tipo 1 y tipo 2 (Camilleri, M. “Advances in diabetic gastroparesis”, Rev. Gastroenterol. Disord. 2002, 2, 47-56; Tack et al. Gastroenterology 2004; 126: A485; Moreaux, B.; VandenBerg, J.; Thielmans, L.; Meulemans, A.; Coulie, B. “Activation of the GHS receptor accelerates gastric emptying in the dog”, Digestive Disease Week, 15-20 mayo 2004, New Orleans, LA, USA Abstract M1009; Tack et al. Gastroenterology 2004,

126: A74). La gastroparesia (“parálisis del estómago”) es un síndrome caracterizado por el vaciado gástrico tardío en ausencia de alguna obstrucción mecánica. Se caracteriza de manera variable por dolor abdominal, náuseas, vómitos, pérdida de peso, anorexia, sensación se saciedad prematura, malnutrición, deshidratación, reflujo gastroesofágico, calambres y distensión abdominal. Este trastorno crónico puede conllevar una hospitalización frecuente, una discapacidad mayor y una disminución de la calidad de vida. La gastroparesia sintomática grave es común en los individuos que sufren diabetes y afecta al 5-10% de diabéticos entre una población total de pacientes de 1 millón sólo en los Estados Unidos. La neuropatía es una complicación de la diabetes frecuente y debilitante. La neuropatía visceral resulta en una disfunción gastrointestinal, que involucra especialmente al estómago y conduce a una discapacidad en la motilidad gástrica. La ghrelina promueve el vaciado gástrico estimulando tanto el nervio vago como a través de una acción procinética directa en la mucosa gástrica. Además, un reciente estudio clínico indica que la administración intravenosa del péptido de ghrelina natural es una terapia aguda y efectiva en los pacientes con gastroparesia diabética. Por consiguiente, un agonista de la ghrelina resultaría muy efectivo para superar la barrera fundamental de la motilidad a la que se enfrentan los pacientes de gastroparesia y corregir este trastorno. Del mismo modo que con el íleo postoperatorio, no hay disponible ninguna terapia aceptada ni eficaz para la gastroparesia diabética y la mayoría de terapias actuales tienen como único fin el alivio sintomático. Además, muchas de las terapias en desarrollo poseen un mecanismo de acción similar a productos anteriores que han fracasado en esta indicación. Algunos procedimientos quirúrgicos pueden mejorar el proceso de la enfermedad, pero no ofrecen una posibilidad de cura.

[0019] La disfunción intestinal inducida por opiáceos (OBD, Kurz, A.; Sessler, D.J. “Opioid-Induced Bowel Dysfunction”, Drugs, 2003, 63, 649-671) es el término que se aplica a la confluencia de síntomas que implica la motilidad gastrointestinal reducida que resulta del tratamiento con analgésicos opiáceos. Aproximadamente el 40-50% de los pacientes que toman opiáceos para controlar el dolor experimentan una disfunción intestinal inducida por opiáceos (DIO). Se caracteriza por unas heces duras y secas, un esfuerzo deposicional, una evacuación incompleta, hinchazón, una distensión abdominal y un reflujo gástrico mayor. Además de la obvia angustia a corto plazo, este trastorno conlleva un deterioro físico y psicológico en los pacientes que se encuentran bajo un tratamiento a base de opiáceos a largo plazo. Asimismo, la disfunción puede ser tan grave como para convertirse en un efecto adverso que limite las dosis y que en realidad impide un control del dolor adecuado. Así como con el íleo postoperatorio, se puede esperar que un agonista de la ghrelina contrarreste la dismotilidad resultante del uso de opiáceos.

[0020] A través de los efectos de la estimulación de la motilidad gastrointestinal de la ghrelina y sus agonistas también se podría ayudar a dos síndromes menos conocidos. El síndrome del intestino corto es un trastorno que ocurre tras la extirpación de una parte sustancial del intestino delgado y se caracteriza por una malnutrición. Se observa que los pacientes han disminuido los niveles de ghrelina como resultado de la pérdida de las células neuroendocrinas que produce la ghrelina en el intestino. Es posible que el intestino delgado se retroalimente en la liberación de la hormona (Krsek, M.; Rosicka, M.; Haluzik, M.; et al. “Plasma ghrelin levels in patients with short bowel syndrome”, Endocr. Res. 2002, 28, 27-33). La seudoobstrucción intestinal es un síndrome definido por la presencia de una dilatación y dismotilidad intestinal crónica en ausencia de una obstrucción mecánica o inflamación. Se sabe que tanto causas genéticas como adquiridas ocasionan este trastorno que afecta a un gran número de individuos anualmente en todo el mundo (Hirano, I.; Pandolfino, J. “Chronic intestinal pseudoobstruction”, Dig. Dis. 2000, 18, 83-92).

[0021] Otros trastornos que podrían tratarse a través de la estimulación del receptor de la ghrelina son: emesis como la causada por la quimioterapia contra el cáncer, el estreñimiento como el asociado a la fase de hipomotilidad del síndrome del intestino irritable (SII), el vaciado gástrico tardío asociado a trastornos de emaciación, a la enfermedad de reflujo gastroesofágico (ERGE), úlceras gástricas (Sibilia, V.; Rindi, G.;

Pagani, F.; Rapetti, D.; Locatelli, V.; Torsello, A.; Campanini, N.; Degenghi, R.; Netti, C. “Ghrelin protects against ethanol-induced gastric ulcers in rats: studies on the mechanism of action”, Endocrinology, 2003, 144, 353-359) y la enfermedad de Crohn. [0022] Además, la dismotilidad gastrointestinal es un problema significativo en otros mamímeros también. Por ejemplo, la disfunción de la motilidad denominada íleo o cólico es la causa número uno de mortalidad entre los caballos. Asimismo, el íleo es una de las complicaciones más comunes de cirugía intestinal equina, en otras palabras, íleo postoperatorio. Este trastorno puede presentar también una etiología no quirúrgica. Algunos caballos pueden estar predispuestos al íleo basándose en la anatomía y funcionamiento de su tracto digestivo. Prácticamente cualquier caballo es susceptible de padecer cólicos con tan sólo unas menores diferencias basadas en edad, sexo y raza. Además, el íleo puede afectar a otros animales, por ejemplo los caninos (Roussel, A.J.,Jr.; Cohen, N.D.; Hooper, R.N.; Rakestraw, P.C. “Risk factors associated with development of postoperative ileus in horses”, J. Am Vet. Med. Assoc. 2001, 219, 72-78; Van Hoogmoed, L.M.; Nieto, J.E.; Snyder, J.R; Harmon, F.A. “Survey of prokinetic use in horses with gastrointestinal injury”, Vet. Surg. 2004,33,279-285).

[0023] Lo que es más importante aún, para la mayoría de los trastornos anteriormente mencionados no existe una terapia específica ni aprobada, y la mayoría de terapias simplemente tratan el alivio sintomático. Sin embargo, la modulación específica del receptor de la ghrelina proporcionará una oportunidad para dirigirse directamente al lugar de la alteración patofisiológica para tratar mejor el trastorno subyacente y mejorar el resultado clínico. Además, a diferencia de otros agentes que interactúan en el receptor de GHS-R1a, se cree que los compuestos de la presente invención no estimulan la secreción de GH concurrente. No se ha informado previamente sobre esta separación de los efectos gastrointestinales y de la GH para ningún modulador de este receptor. Sin embargo, tal y como se ha mencionado anteriormente, se ha informado sobre la existencia de análogos que separan el control de apetito y los efectos moduladores de la GH asociados con la ghrelina (Eur. J. Endocrinol. 2004, 151, S71-S75).

[0024] WO 01/00830 informa sobre los péptidos gastrointestinales cortos (SGIP por sus siglas en inglés) que secretan hormona de crecimiento y también promueven la motilidad gastrointestinal, pero no se demostró que fuera debido a la acción del receptor de la ghrelina. La Patente U.S. 6,548,501 revela unos compuestos específicos, pero del mismo modo que el GHS, es útil para la estimulación de la motilidad gastrointestinal. Además, se sabe que otros factores endógenos estimulan la secreción de GH, pero no promueven la motilidad gastrointestinal. Es más, muchas inhiben de hecho esta función fisiológica. Unos agonistas receptores específicos como los compuestos presentados en la presente invención tienen un mayor potencial para ser unos agentes terapéuticos selectivos y efectivos.

[0025] El trabajo sobre el desarrollo de un GHS potente y selectivo con un número de pequeñas moléculas derivadas ha continuado y ahora se conoce lo que se ha resumido previamente (Carpino, P. Exp. Opin. Ther. Patents, 2002, 12, 1599-1618.) En las siguientes patentes y números de Publicación Internacional se describen unos GHS específicos: WO 89/07110; WO 89/07111; WO 92/07578; WO 93/04081; WO 94/11012; WO 94/13696; WO 94/19367; WO 95/11029; WO 95/13069; WO 95/14666; WO 95/17422; WO 95/17423; WO 95/34311; WO 96/02530; WO 96/15148; WO 96/22996; WO 96/22997; WO 96/24580; WO 96/24587; WO 96/32943; WO 96/33189; WO 96/35713; WO 96/38471; WO 97/00894; WO 97/06803; WO 97/07117; WO 97/09060; WO 97/11697; WO 97/15191; WO 97/15573; WO 97/21730; WO 97/22004; WO 97/22367; WO 97/22620; WO 97/23508; WO 97/24369; WO 97/34604; WO 97/36873; WO 97/38709; WO 97/40023; WO 97/40071; WO 97/41878; WO 97/41879; WO 97/43278; WO 97/44042; WO 97/46252; WO 98/03473; WO 98/10653; WO 98/18815; WO 98/22124; WO 98/46569; WO 98/51687; WO 98/58947; WO 98/58948; WO 98/58949; WO 98/58950; WO 99/08697; WO 99/09991; WO 99/36431; WO 99/39730; WO 99/45029; WO 99/58501; WO 99/64456; WO 99/65486, WO 99/65488; WO 00/01726; WO 00/10975; WO 01/47558; WO 01/92292; WO 01/96300; WO 01/97831; Patente nº US 3.239.345; Patente nº US 4.036.979; Patente nº US 4.411.890; Patente nº US 5.492.916; Patente nº US 5.494.919; Patente nº US 5.559.128; Patente nº US 5.663.171; Patente nº US 5.721.250; Patente nº US 5.721.251; Patente nº US 5.723.616; Patente nº US 5.726.319; Patente nº US 5.767.124; Patente nº US 5.798.337; Patente nº US 5.830.433; Patente nº US 5.919.777; Patente nº US 6.034.216; Patente nº US 6.548.501; Patente nº US 6.559.150; Patente nº US 6.576.686; Patente nº US 6.686.359; y números de Solicitud Internacional 2002/0168343; 2003/100494; 2003/130284; 2003/186844.

[0026] A pesar de la existencia de tantos trabajos de investigación, rara vez se ha demostrado que los compuestos cíclicos actúen en el receptor. Cuando lo han conseguido, la actividad antagonista ha sido más frecuente. Por ejemplo, se demostró que el compuesto de 14 aminoácidos vapreotide, un agonista de SRIH-14 y mimético de somatostatina era un antagonista de la ghrelina (Deghenghi R, Papotti M, Ghigo E, et al. “Somatostatin octapeptides (lanreotide, octreotide, vapreotide, and their analogs) share the growth hormone-releasing peptide receptor in the human pituitary glan”, Endocrine, 2001, 14, 29-33). Se ha informado de las actividades de unión y antagonistas de los análogos de cortistatina, un neuropéptido cíclico conocido por unirse de manera no selectiva a los receptores de somatostatina, al receptor secretagogo de la hormona de crecimiento (Solicitud de Patente Internacional WO 03/004518), (Deghenghi R, Broglio F, Papotti M, et al. “Targeting the ghrelin receptor - Orally active GHS and cortistatin analogs”, Endocrine, 2003, 22, 13-18). En concreto, uno de estos análogos, el EP01492 (cortistatina-8) ha sido presentado en estudios preclínicos para el tratamiento de la obesidad como un antagonista de la ghrelina. Estos compuestos muestran un IC50 de 24-33 nM. Asimismo, estos compuestos cíclicos y sus derivados, además de su uso con agentes de unión de metales han sido descritos por su habilidad para ser útiles en su uso en radiodiagnóstico o radioterapia en el tratamiento de tumores y acromegalia.

[0027] Se han estudiado análogos cíclicos y lineales de la hormona de crecimiento 177191 como tratamientos para la obesidad (WO 99/12969), con un compuesto concreto, el AOD9604, que ha entrado en la clínica para esta indicación. Un compuesto que ya se ha estudiado y que es muy similar a las moléculas de la presente invención es el GHS, G7203 (EC50 = 0.43 nM), el análogo péptido cíclico del péptido liberador de hormona de crecimiento, GHRP-2 (Elias, K.A.; Ingle, G.S.; Burnier, J.P.; Hammonds, G.; McDowell, R.S.; Rawson, T.E.; Somers, T.C.; Stanley, M.S.; Cronin, M.J. “In vitro characterization of four novel classes of growth hormone-releasing peptide”, Endocrinol. 1995, 136, 56945699). Sin embargo, la simplificación de este derivado cíclico condujo a compuestos lineales y todavía potentes, mientras que para los compuestos de la presente invención, se ha demostrado que los análogos lineales están desprovistos de la actividad del receptor de la ghrelina.

[0028] Los compuestos macrocíclicos de la presente invención poseen actividad agonista. Tal y como se mencionó anteriormente, sin embargo, a diferencia de otros agonistas del receptor hGHS-R1a, los compuestos de la presente invención cuentan inesperadamente con un efecto estimulador insignificante sobre la liberación de la hormona de crecimiento. En consecuencia, los compuestos de la presente invención pueden mostrar una acción selectiva en el tracto gastrointestinal o para trastornos metabólicos sin efectos secundarios debido a la liberación de GH.

Resumen de la invención [0029] La presente invención provee unos novedosos componentes macrocíclicos definidos en cuanto a su configuración. Estos compuestos pueden funcionar como

moduladores, en concreto agonistas, del receptor de la ghrelina (secretagogo de la hormona de crecimiento) (GHS-R a). [0030] Según un primer aspecto de la presente invención, ésta está relacionada con una

cantidad eficaz de un modulador de la fórmula I tal y como se define en la reivindicación 1, o un isómero óptico, enantiómero, diastereómero, racemato o mezcla estereoquímica del mismo, para su uso en un método que estimule la motilidad gastrointestinal.

[0031] Según otro aspecto, la presente invención provee el uso de una cantidad eficaz de un modulador de la fórmula I tal y como se define en la reivindicación 1, o un isómero óptico, enantiómero, diastereómero, racemato o mezcla estereoquímica del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, para la elaboración de medicamentos que estimulen la motilidad gastrointestinal.

[0032] Según unas formas de realización de la presente invención concretas, el modulador es un agonista del receptor de la ghrelina o un agonista del receptor de GHS-R1.

[0033] Según otro aspecto de la invención, se provee una composición que comprende un modulador tal y como se define en la reivindicación 2, y un agente aglutinante de metal radiomarcado para su uso en un método de diagnóstico de tumores y/o acromegalia que comprende la administración de la composición y la detección del aglutinante de la composición en un objetivo biológico.

[0034] Según otro aspecto de la invención, se provee el uso de una composición que comprende un modulador tal y como se define en la reivindicación 2 y un agente aglutinante de metal radiomarcado en la elaboración de medicamentos para su uso en un método de diagnóstico de tumores y/o acromegalia que comprende la administración de la composición y la detección del agente de la composición en un objetivo biológico.

[0035] Según otro aspecto de la invención, se provee una cantidad terapéuticamente eficaz de composición que comprende un modulador tal y como se define en la reivindicación 2 para la elaboración de medicamentos para el tratamiento de tumores y/o acromegalia.

[0036] Según otro aspecto de la invención, se provee el uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende un modulador tal y como se define en la reivindicación 2 para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de tumores y/o acromegalia.

[0037] Según otro aspecto de la invención, se provee una cantidad terapéuticamente eficaz de un modulador de la fórmula I tal y como se define en la reivindicación 1, o un isómero óptico, enantiómero, diastereómero, racemato o mezcla estereoquímica del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de éste, para su uso en un método de tratamiento de un trastorno gastrointestinal en un caballo. En algunas formas de realización, el trastorno gastrointestinal resulta ser íleo o un cólico.

[0038] Según otro aspecto de la invención, se provee el uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un modulador de la fórmula I tal y como se define en la reivindicación 1, o un isómero óptico, enantiómero, diastereómero, racemato o mezcla estereoquímica del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de éste, para su uso en un método de tratamiento de un trastorno gastrointestinal en un caballo. En algunas formas de realización, el trastorno gastrointestinal resulta ser íleo o un cólico.

[0039] Según otro aspecto de la invención, se provee una cantidad terapéuticamente eficaz de un modulador de la fórmula I tal y como se define en la reivindicación 1, o un isómero óptico, enantiómero, diastereómero, racemato o mezcla estereoquímica del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de éste, para su uso en un método de tratamiento de un trastorno cardiovascular en el que la interacción del modulador y el receptor de GHS-R1a no ocasiona la liberación de una cantidad significativa de hormona de crecimiento.

[0040] Según otro aspecto de la invención, se provee el uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un modulador de la fórmula I tal y como se define en la reivindicación 1, o un isómero óptico, enantiómero, diastereómero, racemato o mezcla estereoquímica del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de éste, para su uso en un método de tratamiento de un trastorno cardiovascular en el que la interacción del modulador y del receptor de GHS-R1a no ocasiona la liberación de una cantidad significativa de hormona de crecimiento.

[0041] Según otro aspecto de la invención, se provee un modulador tal y como se define en la reivindicación 1 seleccionado de entre los componentes 1 a 3, 5 a 34, 37a a 43, 47, 52, 57, 59 a 62, 65 a 68, 88 a 90, 93 a 95, 97, 100 a 102, 105, 109, 111 a 113, 116 a 120, 122 a 124, 126, 127, 130 a 144, 147, 151 a 161b, 164, 168 a 171, 173 a 180, 184 a 195, 197 a 201, 203, 208a a 216, 218 a 223, 225 a 227, 229, 230, 299, 301, 303, 305 a 358b, 360 a 362, 364, 369 a 374, 379 a 385, 387 a 391, 393, 395 a 398, 400 a 402b, 435 a 441, 445 y 447 a 449, o un isómero óptico, enantiómero, diastereómero, racemato

o mezcla estereoquímica del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de éste. [0042] Según otro aspecto de la invención, se provee una sal farmacéuticamente

aceptable de un modulador, en el que el modulador posee una estructura tal y como se define en la reivindicación 2. [0043] Según otro aspecto de la invención, se provee una composición farmacéutica

que comprende una sal farmacéuticamente aceptable tal y como se define en la

reivindicación 58, y un vehículo, excipiente o diluyente. [0044] Según otro aspecto de la invención, se provee una composición farmacéutica que comprende un modulador de la fórmula I tal y como se define en la reivindicación 61, o un isómero óptico, enantiómero, diastereómero, racemato o mezcla estereoquímica del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de éste, y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

[0045] Según otro aspecto de la invención, se provee una composición farmacéutica para su administración parenteral, que comprende un modulador tal y como se define en la reivindicación 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

[0046] Según otro aspecto de la invención, se provee un estuche que comprende uno o más recipientes que contienen unidades posológicas de uso farmacéutico y que poseen una cantidad efectiva de uno o más moduladores tal y como se define en la reivindicación 2, o unas sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en el que el recipiente se envasa con instrucciones facultativas para su uso.

[0047] Las formas de realización de la presente invención están relacionadas con métodos para estimular la motilidad gastrointestinal, modular la actividad del receptor de GHS-R1a en un mamífero y/o tratar un trastorno gastrointestinal que comprende la administración a un sujeto que lo necesite de una cantidad efectiva de un modulador que modula un receptor de GHS-R1a de los mamíferos. En unas formas de realización concretas, la interacción del modulador y del receptor de GHS-R1a no ocasiona una cantidad significativa de liberación de la hormona de crecimiento.

[0048] Las formas de realización de la presente invención están relacionadas además con métodos para prevenir y/o tratar trastornos aquí descritos, en concreto, los trastornos gastrointestinales, incluyendo el íleo postoperatorio, la gastroparesia, como la diabética y la postquirúrgica, la disfunción intestinal inducida por opiáceos, la seudoobstrucción intestinal crónica, el síndrome del intestino corto, la emesis como la causada por la quimioterapia contra el cáncer, el estreñimiento como el asociado con la fase de hipomotilidad del síndrome del intestino irritable (SII), el vaciado gástrico tardío asociado con trastornos de emaciación, la enfermedad de reflujo gastroesofágico (ERGE), úlceras gástricas, enfermedad de Crohn, trastornos gastrointestinales caracterizados por dismotilidad y otras enfermedades y trastornos del tracto gastrointestinal.

[0049] Tanto los aspectos precedentes como otros se explican con mayor detalle en la descripción que se presenta más adelante.

Breve descripción de los dibujos [0050] − La Figura 1 muestra un esquema que presenta una estrategia sintética general con el fin de proporcionar macrociclos definidos conformacionalmente de la presente invención. − La Figura 2 muestra una estrategia de tioéster general con el fin de elaborar compuestos macrocíclicos de la presente invención.

− La Figura 3 muestra una estrategia de metátesis de cierre de anillo (RCM por sus siglas en inglés) para los componentes macrocíclicos de la presente invención.

− La Figura 4 (tablas de la A a la E) muestra las curvas de enlace competitivas para unir los compuestos ejemplares de la presente invención al receptor de hGHS-R1a.

− La Figura 5 (tablas de la A a la E) muestra las curvas de respuesta concentración para la activación del receptor hGHS-R1a mediante los compuestos ejemplares de la presente invención.

− La Figura 6 muestra unas gráficas que describen los parámetros farmacocinéticos para los compuestos ejemplares de la presente invención, en concreto tras la administración oral de 8 mg/kg del compuesto 298 (tabla A), tras la inyección subcutánea de 2 mg/kg del compuesto 298 con ciclodextrina (tabla B), tras la administración intravenosa de 2 mg/kg del compuesto 25 con ciclodextrina (tabla C) y tras la administración intravenosa de 2 mg/kg del compuesto 298 con ciclodextrina (tabla D).

− La Figura 7 (tablas A y B) muestra unas gráficas que representan los efectos sobre el vaciado gástrico de los compuestos ejemplares de la presente invención.

− La Figura 8 muestra una gráfica que presenta los efectos del íleo postoperatorio de un compuesto ejemplar de la presente invención.

− La Figura 9 (tablas de la A a la D) muestra unas gráficas que describen el efecto sobre la liberación de la hormona de crecimiento pulsátil de un compuesto ejemplar de la presente invención.

− La Figura 10 muestra una curva de enlace competitiva para la unión de un compuesto ejemplar de la presente invención al receptor hGHS-R1a.

− La Figura 11 muestra una curva de activación que demuestra el agonismo de un compuesto ejemplar de la presente invención.

− La Figura 12 muestra una gráfica que describe el agonismo y la falta de liberación de la hormona de crecimiento de un compuesto ejemplar de la presente invención.

− La Figura 13 muestra unas gráficas que describen la desensibilización del receptor asociada con el enlace de un compuesto ejemplar de la presente invención con el receptor hGHS-R1a.

− La Figura 14 (tablas A y B) muestra unas gráficas que presentan los efectos sobre el vaciado gástrico de un compuesto ejemplar de la presente invención.

− La Figura 15 muestra una gráfica que presenta los efectos sobre el íleo postoperatorio de un compuesto ejemplar de la presente invención.

− La Figura 16 muestra unas gráficas que describen la inversión del vaciado

gástrico retrasado por la morfina (tabla A) y el tránsito gastrointestinal retrasado

por la morfina (tabla B) de un compuesto ejemplar de la presente invención.

− La Figura 17 (tablas A y B) muestran unas gráficas que describen los efectos

sobre la gastroparesia de unos compuestos ejemplares de la presente invención.

Descripción detallada [0051] A continuación se describirán en mayor detalle los anteriores y otros aspectos de la presente invención en relación con otras formas de realización descritas aquí. Debería tenerse en consideración que la presente invención puede presentar diferentes formas de realización y no debería entenderse como que está limitado a las formas de realización aquí expuestas. Mejor dicho, se proveen estas formas de realización de

forma que esta descripción sea rigurosa y completa, y que exprese enteramente el alcance de la presente invención para aquellos doctos en la materia. [0052] La terminología empleada en la descripción de la presente invención posee como

finalidad describir tan sólo unas formas de realización concretas y no tiene el propósito de limitar la invención. Tal y como se emplean en la descripción de la invención y en las reivindicaciones adjuntas, se pretende que las formas singulares de un/una y de el/la incluyan también las formas en plural, a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Además, tal y como se usa aquí, el término “y/o” incluye cualquiera y todas las combinaciones de uno o más de los artículos enumerados asociados y puede abreviarse en “/”.

[0053] A menos que se defina de otra forma, todos los términos técnicos y científicos usados aquí tienen el mismo significado que el comúnmente conocido por aquellos con una experiencia corriente en la materia a la que pertenece esta invención.

[0054] Todas las publicaciones, las solicitudes de patentes de los Estados Unidos, patentes de los Estados Unidos y otras referencias aquí citadas se incorporan mediante referencia en su totalidad.

[0055] El término “alquilo” se refiere a los grupos de hidrocarburo saturados o parcialmente saturados de cadena recta o ramificada que contienen de 1 a 20 átomos de carbono, en algunos casos de 1 a 8 átomos de carbono. El término “alquilo inferior” se refiere a los grupos que contienen de 1 a 6 átomos de carbono. Algunos ejemplos de grupos alquílicos incluyen, pero no se limitan a, el metilo, etilo, isopropilo, ter-butil, 3hexenil y 2-butinil. Por “insaturado” se entiende la presencia de 1, 2 o 3 enlaces dobles o triples, o una combinación de ambos. Dichos grupos alquílicos también pueden sustituirse de manera opcional tal y como se describe más abajo.

[0056] Cuando se utiliza un subíndice en referencia a un alquilo u otro grupo de hidrocarburos aquí definido, dicho subíndice se refiere al número de átomos de carbono

que el grupo puede contener. Por ejemplo, el alquilo C2-C4 indica un grupo alquílico con 2, 3 o 4 átomos de carbono. [0057] El término “cicloalquilo” se refiere a los grupos de hidrocarburo cícilicos saturados

o parcialmente saturados que contienen de 3 a 15 átomos de carbono en el anillo, en algunos casos de 3 a 7, y a grupos alquílicos que contienen dichos grupos de hidrocarburo cíclico. Ejemplos de grupos de cicloalquilo incluyen, pero sin limitación a, ciclopropil, ciclopropilmetil, ciclopentil, 2-(ciclohexil)etil, cicloheptil y ciclohexenil. El cicloalquilo tal y como se describe aquí también incluye grupos con múltiples anillos de carbono, cada uno de los cuales puede estar saturado o parcialmente saturado, por ejemplo el decalinil, el [2.2.1]-bicicloheptanil o el adamantano. Todos estos grupos de cicloalquilo pueden ser también sustituidos de manera opcional tal y como se describe más abajo.

[0058] El término “aromático” se refiere a un grupo de hidrocarburos cíclicos insaturados que poseen un sistema conjugado de electrón pi que contiene electrones 4n+2 en los que n es un entero superior o igual a 1. Las moléculas aromáticas son normalmente estables y se describen como un anillo plano de átomos con estructuras de resonancia que consiste en alternar enlaces dobles o simples, por ejemplo el benceno o el naftaleno.

[0059] El término “arilo” se refiere a un grupo aromático en un sistema de anillos carbocíclicos simples o fundidos que poseen de entre 6 a 15 átomos del anillo, en algunos casos de 6 a 10, y a grupos de alquilo que contienen dichos grupos aromáticos. Ejemplos de grupos de arilo incluyen, pero sin limitación a, fenil, 1-naftilo, 2-naftilo y bencilo. El arilo tal y como se define aquí también incluye grupos con múltiples anillos de arilo que pueden estar fundidos, como es el caso del naftil y el antraceno, o no fundidos, como en el caso del bifenilo y el terfenilo. El arilo también se refiere a los anillos de carbono bicíclicos o tricíclicos, en los que uno de los anillos es aromático y los otros pueden ser saturados, parcialmente insaturados o aromáticos, por ejemplo, el indanil o el tetrahidronaftil (tetralinilo). Todos estos grupos de arilo pueden ser también sustituidos de manera opcional tal y como se describe más abajo.

[0060] El término “heterociclo” o “heterocíclico” se refiere a los grupos monocíclicos, bicíclicos o tricíclicos saturados o parcialmente insaturados que contienen de 3 a 15 átomos, en algunos casos de 3 a 7, con al menos un heteroátomo en al menos uno de los anillos, y estando dicho heteroátomo seleccionado de entre O, S o N. Cada anillo del grupo heterocíclico puede contener uno o dos átomos de O, uno o dos átomos de S, de uno a cuatro átomos de N, siempre que el número total de heteroátomos en cada anillo sea cuatro o menos y cada anillo contenga al menos un átomo de carbono. Los anillos fundidos que completan los grupos heterocíclicos bicíclicos o tricíclicos pueden contener sólo átomos de carbono y puede ser saturados o parcialmente insaturados. Los átomos de N y S pueden oxidarse opcionalmente y los átomos de N pueden ser cuaternizados. Heterocíclico también se refiere a los grupos de alquilo que contienen dichos grupos

heterocíclicos bicíclicos o tricíclicos. Ejemplos de anillos heterocíclicos incluyen, pero sin limitarse, 2- o 3-piperidina, 2- o 3-piperazinil, 2- o 3-morfolinil. Todos estos grupos heterocíclicos pueden ser también sustituidos opcionalmente tal y como se describe más abajo.

[0061] El término “heteroarilo” se refiere a un grupo aromático en un sistema de anillos simple o fusionados que contienen de entre 5 a 15 átomos de anillo, en algunos casos de 5 a 10, que posean al menos un heteroátomo en al menos uno de los anillos, siendo seleccionado dicho heteroátomo entre O, S o N. Cada anillo del grupo heteroarilo puede contener uno o dos átomos de O, uno o dos átomos de S, de uno a cuatro átomos de N, siempre y cuando el número total de heteroátomos en cada anillo sea cuatro o menos y cada anillo contenga al menos un átomo de carbono. Los anillos fusionados que completan los grupos bicíclicos o tricíclicos pueden contener sólo átomos de carbono y pueden ser saturados, parcialmente insaturados o aromáticos. En estructuras en las que el único par de electrones de un átomo de nitrógeno no está involucrado en la compleción del sistema aromático de electrón pi, los átomos de N pueden ser cuaternizados opcionalmente o oxidarse a N-óxido. Heteroarilo también se refiere a los grupos de alquilo que contienen dichos grupos cíclicos. Ejemplos de grupos de heteroarilo monocíclicos incluyen, pero sin limitación, pirrolilo, pirazolilo, pirazolinilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, isotiazolilo, furanilo, tienilo, oxadiazolilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo y triazinilo. Ejemplos de grupos de heteroarilo bicíclico incluyen, pero sin limitación, indolilo, benzotiazolilo, benzoxazolyl, benzotienilo, quinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, isoquinolinilo, benzimidazolilo, benzopiranilo, indolizinilo, benzofuranilo, isobenzofuranilo, cromonilo, coumarinilo, benzopiranilo, cinnolinilo, quinoxalinilo, indazolilo, purinilo, pinolopiridinilo, furopiridinilo, tienopiridinilo, dihidroisoindolilo y tetrahidroquinolinilo. Ejemplos de grupos de heteroarilo tricíclico incluyen, pero sin limitación, carbazolilo, benzindolilo, fenantrollinilo, acridinilo, fenantridinilo y xantenilo. Todos estos grupos de heteroarilo pueden ser también sustituidos opcionalmente tal y como se describe más abajo.

[0062] El término “hidroxi” se refiere al grupo -OH. [0063] El término “alcoxi” se refiere al grupo -ORa, en el que Ra es alquilo, cicloalquilo o

heterocíclico. Algunos ejemplos incluyen, pero sin limitación, metoxi, etoxi, tert-butoxi, ciclohexiloxi y tetrahidropiraniloxi. [0064] El término “ariloxi” se refiere al grupo -ORb en el que Rb es arilo o heteroarilo.

Algunos ejemplos incluyen, pero sin limitación, fenoxi, benziloxi y 2-naftiloxi. [0065] El término “acilo” se refiere al grupo -C(=O)-Rc en el que Rc es alquilo,

cicloalquilo, heterocíclico, arilo o heteroarilo. Algunos ejemplos incluyen, pero sin limitación, acetilo, benzoilo y furoilo. [0066] El término “amino acilo” indica un grupo de acilo que deriva de un aminoácido. [0067] El término “amino” se refiere a un grupo -NRdRe en el que Rd y Re se seleccionan

de manera independiente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, cicloalquilo,

heretocíclico, arilo y heteroarilo. Como alternativa, Rd y Re forman juntos un anillo heterocíclico de 3 a 8 miembros, sustituido de manera opcional con alquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocíclico no sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo no sustituido, hidroxi, alcoxi, ariloxi, acilo, amino, amido, carboxi, carboxialquilo, carboxiarilo, mercapto, sulfinilo, sulfonilo, sulfonamido, amidino, carbamoil, guanidino o ureido, y que contiene opcionalmente de uno a tres heteroátomos adicionales seleccionados entre O, S o N.

[0068] El término “amido” se refiere al grupo -C(=O)-NRfRg en el que Rf y Rg son seleccionados independientemente de entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, heretocíclico, arilo y heteroarilo. Como alternativa, Rf y Rg forman juntos un anillo heterocíclico de 3 a 8 miembros, sustituido de manera opcional con alquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocíclico no sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo no sustituido, hidroxi, alcoxi, ariloxi, acilo, amino, amido, carboxi, carboxialquilo, carboxiarilo, mercapto, sulfinilo, sulfonilo, sulfonamido, amidino, carbamoil, guanidino o ureido, y que contiene opcionalmente de uno a tres heteroátomos adicionales seleccionados entre O, S o N.

[0069] El término "amidino" se refiere al grupo -C(=NRh)NRiRj en el que Rh es seleccionado de entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, heretocíclico, arilo y heteroarilo; y Ri y Rj son seleccionados independientemente de entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, heretocíclico, arilo y heteroarilo. Como alternativa, Ri y Rj forman juntos un anillo heterocíclico de 3 a 8 miembros, sustituido de manera opcional con alquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocíclico no sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo no sustituido, hidroxi, alcoxi, ariloxi, acilo, amino, amido, carboxi, carboxialquilo, carboxiarilo, mercapto, sulfinilo, sulfonilo, sulfonamido, amidino, carbamoil, guanidino o ureido, y que contiene opcionalmente de uno a tres heteroátomos adicionales seleccionados entre O, S o N.

[0070] El término “carboxi” se refiere al grupo -CO2H.

[0071] El término “carboxialquilo” se refiere al grupo -CO2Rk, en el que Rk es alquilo, cicloalquilo o heterocíclico. [0072] El término “carboxiarilo” se refiere al grupo -CO2Rm, en el que Rm es arilo o

heteroarilo. [0073] El término “ciano” se refiere al grupo -CN. [0074] El término “formil” se refiere al grupo C(=O)H, también indicado como -CHO. [0075] El término “halo”, “halógeno” o “haluro” se refiere al fluoro, flúor o fluoruro, cloro,

cloruro, bromo, bromuro, y yodo, yoduro, respectivamente. [0076] El término “oxo” se refiere al grupo bivalente =O, que se sustituye en lugar de dos átomos de carbono en el mismo carbono para formar un grupo carbonilo.

[0077] El término “mercapto” se refiere al grupo -SRn en el que Rn es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, heterocíclico, arilo o heteroarilo. [0078] El término “nitro” se refiere al grupo NO2.

[0079] El término "trifluorometil" se refiere al grupo -CF3. [0080] El término “sulfinilo” se refiere al grupo -S(=O)Rp en el que Rp es alquilo, cicloalquilo, heterocíclico, arilo o heteroarilo.

[0081] El término “sulfonilo” se refiere al grupo -S(S)2-Rq1 en el que Rq1 es alquilo,

cicloalquilo, heterocíclico, arilo o heteroarilo. [0082] El término “aminosulfonilo” se refiere al grupo NRq2-S(O)2-Rq3 en el que Rq2 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, heterocíclico, arilo o heteroarilo; y Rq3 es alquilo, cicloalquilo, heterocíclico, arilo o heteroarilo.

[0083] El término “sulfonamido” se refiere al grupo -S(=O)2-NRrRs en el que Rr y Rs son seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, heterocíclico, arilo o heteroarilo. Alternativamente, Er y Rs forman juntos un anillo heterocíclico de 3 a 8 miembros, sustituidos de manera opcional por alquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocíclico no sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo no sustituido, hidroxi, alcoxi, ariloxi, acilo, amino, amido, carboxi, carboxialquilo, carboxiarilo, mercapto, sulfinilo, sulfonilo, sulfonamido, amidino, carbamoil, guanidino o ureido, y que contiene opcionalmente de uno a tres heteroátomos adicionales seleccionados entre O, S o N.

[0084] El término “carbamoil” se refiere al grupo de la fórmula -N(Rt)-C(=O)-ORu en el cual Rt se selecciona entre hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, heterocíclico, arilo o heteroarilo; y Ru es seleccionado entre alquilo, cicloalquilo, heterocíclico, arilo o heteroarilo.

[0085] El término “guanidino” se refiere al grupo de la fórmula -NCRv)-C(=NRw)-NRxRy en el que Rv, Rw, Rx y Ry son seleccionados de manera independiente entre hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, heterocíclico, arilo o heteroarilo. Alternativamente, Rx y Ry forman juntos un anillo heterocíclico de 3 a 8 miembros, sustituidos de manera opcional por alquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocíclico no sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo no sustituido, hidroxi, alcoxi, ariloxi, acilo, amino, amido, carboxi, carboxialquilo, carboxiarilo, mercapto, sulfinilo, sulfonilo, sulfonamido, amidino, carbamoil, guanidino o ureido, y que contiene opcionalmente de uno a tres heteroátomos adicionales seleccionados entre O, S o N.

[0086] El término “ureido” se refiere al grupo de la fórmula -N(R2z)-C(=O)-NRaaRbb en el que Rz, Raa y Rbb son seleccionados de manera independiente entre hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, heterocíclico, arilo o heteroarilo. Alternativamente, Raa y Rbb forman juntos un anillo heterocíclico de 3 a 8 miembros, sustituidos de manera opcional por alquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocíclico no sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo no sustituido, hidroxi, alcoxi, ariloxi, acilo, amino, amido, carboxi,

carboxialquilo, carboxiarilo, mercapto, sulfinilo, sulfonilo, sulfonamido, amidino, carbamoil, guanidino o ureido, y que contiene opcionalmente de uno a tres heteroátomos adicionales seleccionados entre O, S o N.

[0087] El término “sustituido de manera opcional” tiene la intención de indicar expresamente que el grupo especificado es insustituido o sustituido por uno o más de un sustituyente adecuado, a menos que se especifiquen expresamente los sustituyentes opcionales, en cuyo caso el término indica que el grupo es insustituido o sustituido por los sustituyentes especificados. Tal y como se define más arriba, diversos grupos pueden no ser sustituidos o ser sustituidos (es decir, son sustituidos de manera opcional) a menos que se indique lo contrario (p. ej. indicando que el grupo especificado no se sustituye).

[0088] El término “sustituido” cuando se emplea con los términos alquilo, cicloalquilo, heterocíclico, arilo y heteroarilo se refiere a un grupo alquilo, cicloalquilo, heterocíclico, arilo o heteroarilo que tiene uno o más de un átomo de hidrógeno del grupo reemplazado por sustituyentes seleccionados independientemente de alquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocíclico no sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo no sustituido, hidroxi, alcoxi, ariloxi, acilo, amino, amido, carboxi, carboxialquilo, carboxiarilo, halo, oxo, mercapto, sulfinilo, sulfonilo, sulfonamido, amidino, carbamoil, guanidino, ureido y grupos de las fórmulas -NRccC(=O)Rdd, NReeC(=NRff)Rgg, -OC(=O)NRhhRii, -OC(=O)Rjj, -OC(=O)ORkk, -NRmmSO2Rnn, o -NRppSO2NRqqRrr en los que Rcc, Rdd, Ree, Rff, Rgg, Rhh, Rii, Rjj, Rmm, Rpp, Rqq y Rrr son seleccionados de manera independiente entre alquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocíclico no sustituido, arilo no sustituido o heteroarilo no sustituido; y en el que Rkk y Rnn son seleccionados de manera independiente entre alquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocíclico no sustituido, arilo no sustituido o heteroarilo no sustituido. Alternativamente, Rgg y Rhh, Rjj y Rkk o Rpp y Rqq forman juntos un anillo heterocíclico de 3 a 8 miembros, sustituidos de manera opcional por alquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocíclico no sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo no sustituido, hidroxi, alcoxi, ariloxi, acilo, amino, amido, carboxi, carboxialquilo, carboxiarilo, mercapto, sulfinilo, sulfonilo, sulfonamido, amidino, carbamoil, guanidino o ureido, y que contiene opcionalmente de uno a tres heteroátomos adicionales seleccionados entre O, S o N. Además, el término “sustituido” para los grupos arilo y heteroarilo incluye como opción el reemplazo de uno de los átomos de hidrógeno del grupo por ciano, nitro o trifluorometil.

[0089] Se realiza una sustitución siempre que la valencia normal de cualquier átomo no se exceda y que la sustitución resulte en un compuesto estable. Generalmente, cuando una forma sustituida de un grupo está presente, dicho grupo sustituido no se sustituye más preferentemente o, si se sustituye, el sustituyente comprende sólo un número limitado de grupos sustituidos, en algunos casos 1, 2, 3 o 4 de tales sustituyentes.

[0090] Cuando aparece cualquier variable más de una vez en cualquier constituyente o en cualquier fórmula de las aquí expuestas, su definición en cada aparición es independiente de su definición en las otras apariciones. Además, las combinaciones de los sustituyentes y/o variables tan sólo son permisibles si tales combinaciones resultan

5 en compuestos estables. [0091] Un “compuesto estable” o “estructura estable” se refiere a un compuesto que es

lo suficientemente robusto como para sobrevivir al aislamiento a un grado útil de pureza y formulación en un agente terapéutico eficaz. [0092] El término “aminoácido” se refiere a los aminoácidos comunes naturales

10 (codificados genéticamente) o sintéticos y a sus derivados comunes, conocidos por aquellos doctos en la materia. Cuando se aplica a los aminoácidos, “estándar” o “proteinogénico” se refiere a los 20 aminoácidos codificados genéticamente en su configuración natural. De manera similar, cuando se aplica a los aminoácidos, “antinatural” o “inusual” se refiere a la amplia selección de aminoácidos no naturales,

15 poco comunes o sintéticos como los descritos por Hunt, S. en Chemistry and

Biochemistry of the Amino Acids, Barrett, G.C., Ed., Chapman and Hall: New York, 1985. [0093] El término “residuo” en referencia a un aminoácido o derivado de un aminoácido se refiere a un grupo de la fórmula:

20 en el que RAA es una cadena lateral de aminoácidos, y n = 0, 1 o 2 en este caso. [0094] El término “fragmento” con respecto a un dipéptido, tripéptido o un derivado

péptido de mayor orden indica un grupo que contiene dos, tres o más residuos de aminoácidos respectivamente. [0095] El término “cadena lateral de aminoácidos” se refiere a cualquier cadena lateral

25 de un aminoácido estándar o no natural, y se representa mediante RAA. Por ejemplo, la cadena lateral de la alanina es el metil, la cadena lateral de la valina es el isopropilo y la cadena lateral del triptófano es el 3-indolilmetil.

[0096] El término “agonista” se refiere a un compuesto que duplica al menos parte del efecto del ligando endógeno de una proteína, receptor, enzima o similar. 30 [0097] El término “antagonista” se refiere a un compuesto que inhibe al menos parte del

efecto del ligando endógeno de una proteína, receptor, enzima o similar. [0098] El término “secretagogo de la hormona de crecimiento” (GHS) se refiere a cualquier compuesto o agente administrado exógenamente que directa o indirectamente estimula o incrementa la liberación endógena de hormona de crecimiento, la hormona

35 liberadora de hormona de crecimiento o somatostatina en un animal, en concreto, un humano. Un GHS puede ser péptido o no péptido por naturaleza, en algunos casos, con un agente que puede administrarse oralmente. En algunos casos, el agente puede

producir una respuesta pulsátil. [0099] El término “modulador” se refiere a un compuesto que produce un efecto sobre un proceso o mecanismo biológico o químico. Por ejemplo, un modulador puede aumentar, facilitar, regular al alza, activar, inhibir, disminuir, bloquear, impedir, retrasar, insensibilizar, desactivar, regular a la baja, o por el estilo, un proceso o mecanismo biológico o químico. En consecuencia, un modulador puede ser “agonista” o “antagonista”. Algunos procesos o mecanismos biológicos ejemplares afectados por un modulador incluyen, pero sin limitación, la unión de los receptores y la liberación o secreción de hormonas. Algunos procesos o mecanismos químicos ejemplares afectados por un modulador incluyen, pero sin limitación, catálisis e hidrólisis.

[0100] El término “variante” cuando se aplica a un receptor se pretende que incluya los dímeros, trímeros, tetrámeros, pentámeros y otros complejos biológicos que contienen múltiples componentes. Estos componentes pueden ser los mismos o diferentes.

[0101] El término “péptido” se refiere a un compuesto químico que comprende dos o

más aminoácidos enlazados covalentemente. [0102] El término “péptido mimético” se refiere a un compuesto químico diseñado para imitar a un péptido, pero que contiene diferencias estructurales a través de la adición o sustitución de uno o más grupos funcionales del péptido con el fin de modular su actividad u otras propiedades, como la solubilidad, esthabilidad metabólica, biodisponibilidad oral, lipofilia, permehabilidad, etc. Esto puede incluir la sustitución de la unión péptida, modificaciones de cadenas laterales, truncamientos, adición de grupos funcionales, etc. Cuando la estructura química no deriva del péptido, sino que imita su actividad, se conoce a menudo como “péptido mimético no péptido”.

[0103] El término “unión péptida” se refiere a la funcionalidad amida [-C(=O)-NH-] con la que aminoácidos individuales se enlazan típicamente de manera covalente en un péptido.

[0104] El término “grupo protector” se refiere a cualquier compuesto químico que puede usarse para impedir que un grupo funcional potencialmente reactivo, como por ejemplo una amina, un hidroxil o un carboxil, en una molécula experimente una reacción química mientras que se produce un cambio químico en otro lado de la molécula. Aquellos doctos en la materia conocen un número de tales grupos protectores, y se pueden encontrar ejemplos en "Protective Groups in Organic Synthesis," Theodora W. Greene y Peter G. Wuts, editors, John Wiley & Sons, New York, 3rd edition, 1999 [ISBN 0471160199]. Ejemplos de grupos protectores de aminas incluyen, pero sin limitación, phthalimido, tricloroacetilo, benciloxicarbonilo, tert-butoxicarbonilo y adamantiloxicarbonilo. En algunas formas de realización, los grupos protectores de aminas son grupos protectores de carbamato amino que se definen como un grupo protector de aminas que cuando se enlaza con un grupo amino forma un carbamato. En otras formas de realización, los grupos protectores de carbamato animo son alliloxicarbonilo (Alloc), benziloxicarbonilo (Cbz), 9-fluorenilmetoxycarbonilo (Fmoc), tertbutoxicarbonilo (Boc) y a,a-dimetil-3,5-dimetoxibenziloxicarbonilo (Ddz). Para una discusión reciente sobre nuevos grupos protectores de nitrógeno véase: Theodoridis, G. Tetrahedron, 2000, 56, 2339-2358. Algunos ejemplos de grupos protectores de hidroxil incluyen, pero sin limitación, acetilo, tert-butildimetilsilil (TBDMS), tritilo (Trt), tert-butil y tetrahidropiranil (THP). Algunos ejemplos de grupos protectores de carboxil incluyen, pero sin limitación, metil éster, éster de tert-butilo, bencil éster, trimetilsililetil éster y 2,2,2-tricloroetil éster.

[0105] El término “química de fase sólida” se refiere al comportamiento de las reacciones químicas en las que un componente de la reacción está enlazado covalentemente con un material polimérico (un soporte sólido tal y como se define más abajo). Los métodos de reacción para llevar a cabo química en la fase sólida se conocen más ampliamente y se han establecido fuera de los campos tradicionales de la química de péptidos y oligonucleotídica.

[0106] Los términos “soporte sólido”, “fase sólida” o “resina” se refieren a una matriz polimérica mecánica y químicamente estable empleada para llevar a cabo una química de fase sólida. Esto se indica mediante “Resina”, "P-" o el siguiente símbolo:

Ejemplos de materiales polímeros apropiados incluyen, pero sin limitación, poliestireno, polietileno, polietilenglicol, polietilenglicol injertado o enlazado covalentemente al poliestireno (también llamado poliestireno PEG, TentaGel™, Rapp, W.; Zhang, L.; Bayer, E. In Innovations and Persepctives in Solid Phase Synthesis. Peptides, Polypeptides and Oligonucleotides; Epton, R., Ed.; SPCC Ltd.: Birmingham, UK; p 205), poliacrilato (CLEAR™), poliacrilamida, poliuretano, PEGA [polietilenglicol poli (N,Ndimetilacrilamida) copolímero, Meldal, M. Tetrahedron Lett. 1992, 33, 3077-3080], celulosa, etc. Estos materiales pueden contener opcionalmente agentes químicos adicionales para formar enlaces reticulados para estabilizar mecánicamente la estructura, por ejemplo poliestireno reticulado con divinilbenzeno (DVB, normalmente 0.1-5%, preferiblemente 0.5-2%). Este soporte sólido puede incluir como ejemplos no limitadores poliestireno aminometil, poliestireno hidroximetil, poliestireno benzhydrylamine (BHA), poliestireno metilbenzhydrylamine (MBHA), y otras cadenas principales que contienen grupos funcionales químicos libres, más comúnmente -NH2 o -OH, para una derivatización o reacción más. El término también pretende incluir “Ultraresinas” con una proporción alta (“carga”) de estos grupos funcionales como los preparados a partir de polietileneimines y moléculas reticuladas (Barth, M.; Rademann,

J. J. Comb. Chem. 2004, 6, 340-349). En la conclusión de la síntesis, las resinas son normalmente descartadas, aunque han mostrado ser capaces de ser reutilizadas como en Frechet, J.M.J.; Haque, K.E. Tetrahedron Lett. 1975,16, 3055.

[0107] En general, los materiales empleados como resinas son polímeros insolubles, pero ciertos polímeros poseen una solubilidad diferencial dependiendo del solvente y puede emplearse también para la química de fase sólida. Por ejemplo, el polietilenglicol puede utilizarse de esta manera puesto que es soluble en muchos solventes orgánicos en los que se pueden llevar a cabo las reacciones químicas, pero es insoluble en otros, como el éter dietil. Por consiguiente, las reacciones se pueden llevar a cabo homogéneamente en solución, luego el producto en el polímero se precipita mediante la adición de éter dietil y se procesa como un sólido. Esto se ha calificado como química “de fase líquida”.

[0108] El término “enlace” cuando se emplea en referencia a la química de fase sólida se refiere a un grupo químico que se enlaza covalentemente a un soporte sólido y está sujeto entre el soporte y el sustrato normalmente con el fin de permitir la liberación (clivaje) del sustrato del soporte sólido. Sin embargo, también se puede emplear para conferir estabilidad al enlace con el soporte sólido o meramente como un elemento separador. Muchos soportes sólidos están disponibles comercialmente con enlaces ya incluidos.

[0109] Las abreviaturas usadas para los aminoácidos y la designación de los péptidos siguen las normas de la Comisión de Nomenclatura Bioquímica IUPAC-IUB en J. Biol. Chem. 1972, 247, 977-983. Este documento ha sido actualizado: Biochem. J., 1984, 219, 345-373; Eur. J. Biochem., 1984, 138, 9-37; 1985, 152, 1; Internat. J. Pept. Prot. Res., 1984, 24, siguiendo p 84; J. Biol. Chem., 1985, 260, 14-42; Pure Appl. Chem., 1984, 56, 595-624; Amino Acids and Peptides, 1985, 16, 387-410; y en Biochemical Nomenclature and Related Documents, 2nd edition, Portland Press, 1992, pp 39-67. Se publicaron extensiones a las normas en la JCBN/NC-IUB Newsletter 1985, 1986, 1989; ver Biochemical Nomenclature and Related Documents, 2ª Edición, Portland Press, 1992, pp 68-69.

[0110] El término “cantidad efectiva” o “efectiva” pretende designar una dosis que causa un alivio de los síntomas de una enfermedad o trastorno tal y como se observa mediante pruebas y evaluaciones clínicas, observación del paciente y/o similares, y/o una dosis que causa un cambio detectable en la actividad biológica o química. Los cambios detectables pueden ser detectados y/o cuantificados por alguien docto en la materia por el mecanismo o proceso relevante. Tal y como se entiende por lo general en la materia, la dosis variará dependiendo de las vías de administración, síntomas y peso del paciente, pero también dependerá del compuesto que se está administrando.

[0111] La administración de dos o más compuestos “en combinación” significa que los dos compuestos se administran tan próximos en el tiempo que la presencia de uno altera los efectos biológicos del otro. Los dos compuestos pueden administrarse simultáneamente (al mismo tiempo) o secuencialmente. La administración simultánea puede ser llevada a cabo mezclando los compuestos antes de la administración, o administrando los compuestos en el mismo momento pero en diferentes lugares anatómicos o usando diferentes vías de administración. Las frases “administración concurrente”, “administración en combinación”, “administración simultánea” o “administrado simultáneamente” tal y como se emplean aquí, significan que los compuestos se administran en el mismo momento o siguiendo inmediatamente el uno al otro. En el último caso, los dos compuestos se administran en momentos lo suficientemente cercanos que los resultados observados son indistinguibles de aquellos obtenidos cuando los compuestos se administran a la misma vez.

5 [0112] El término “metabolito farmacéuticamente activo” pretende referirse a un producto activo farmacológicamente producido mediante el metabolismo en el cuerpo de un compuesto específico.

[0113] El término “solvato” pretende referirse a una forma de solvato farmacéuticamente aceptable de un compuesto específico que retiene la eficacia biológica de dicho

10 compuesto. Algunos ejemplos de solvatos incluyen, pero sin limitación, compuestos de la presente invención en combinación con agua, isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etilo, ácido acético o etanolamina.

1. Compuestos 15 [0114] Los compuestos macrocíclicos novedosos de la presente invención incluyen compuestos macrocíclicos que comprenden una estructura fundamental y que incluye un componente de enlace que experimenta ciclización para formar el compuesto macrocíclico. La estructura fundamental puede comprender aminoácidos (estándar y no naturales), hidroxiácidos, ácidos de hidrazina, ácidos de azaamino, grupos

20 especializados como los que juegan un papel en la introducción de sustitutos péptidos e isoestéres, y un componente de enlace tal y como se describe aquí. [0115] En algunas formas de realización de la presente invención, el compuesto puede

o un isómero óptico, enantiómero, diastereómero, racemato o una mezcla

estereoquímica del mismo. [0116] La presente invención incluye compuestos aislados. Un compuesto aislado se refiere a un compuesto que, en algunas formas de realización, comprende al menos el 10%, el 25%, el 50% o el 70% de los compuestos de la mezcla. En algunas formas de realización, el compuesto, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o la composición farmacéutica que contiene el compuesto exhibe un enlace estadísticamente significativo y/o una actividad antagonista cuando se examina en ensayos biológicos en el receptor humano de la ghrelina.

[0117] En el caso de los compuestos, sales o solvatos que sean sólidos, aquellos doctos en la materia entenderán que los compuestos, sales y solvatos inventivos pueden existir en diferentes formas de cristal o polimórficas, con la intención de que estén todos dentro del ámbito de la presente invención y fórmulas especificadas.

[0118] Los compuestos de la fórmula I aquí revelados tienen centros asimétricos. Los compuestos inventivos pueden existir como estereoisómeros simples, racematos y/o mezclas de enantiómeros y/o diastereómeros. Se pretende que todos ellos estén dentro del ámbito de la presente invención. En algunas formas de realización concretas, sin embargo, los compuestos inventivos se emplean en forma ópticamente pura. Los términos configuración "S" y “R" tal y como se usan aquí son tal y como los define IUPAC 1974 “Recommendations for Section E, Fundamentals of Stereochemistry” (Pure Appl. Chem. 1976, 45, 13-30).

[0119] A menos que se describa con el fin de conformar una orientación específica, la presente invención representa todas las formas estereoisoméricas. Los compuestos pueden prepararse en forma de estereoisómero simple o una mezcla de estereoisómeros. Las formas no racémicas pueden obtenerse mediante síntesis o resolución. Los compuestos pueden, por ejemplo, estar resueltos en los componentes enantiómeros mediante técnicas estándar, por ejemplo la formación de parejas diastereoméricas a través de la formación de sal. Los compuestos también pueden estar resueltos enlazándolos covalentemente con un grupo quiral. Los diastereómeros pueden entonces resolverse mediante separación cromatográfica y/o separación cristalográfica. En el caso de un grupo auxiliar quiral, puede ser entonces extraído. Como alternativa, los compuestos pueden resolverse a través del uso de cromatografía quiral. También se podrían emplear métodos de resolución encimáticos en ciertos casos.

[0120] Tal y como lo entienden generalmente los doctos en la materia, un compuesto “ópticamente puro” es aquel que contiene tan sólo un único enantiómero. Del modo en que se usa aquí, el término “ópticamente activo” significa un compuesto que comprende al menos un exceso suficiente de un enantiómero sobre el otro de forma que la mezcla rote luz polirazida plana. Los compuestos ópticamente activos tienen la habilidad de rotar el plano de luz polarizada. El exceso de un enantiómero sobre otro se expresa normalmente como exceso enantiomérico (e.e.). Al describir un compuesto ópticamente activo, se emplean los prefijos D y L o R y S para indicar la configuración absoluta de la molécula sobre su(s) centro(s) quiral(es). Los prefijos “d” y "1" o (+) y (-) se emplean para indicar la rotación óptica del compuesto (es decir, la dirección en la que un plano de luz polarizada es rotada por el compuesto ópticamente activo). El prefijo "I" o (-) indica que el compuesto es levorrotatorio (es decir, que rota el plano de luz polarizada hacia la izquierda o de forma inversa a las manecillas del reloj) mientras que el prefijo “d” o (+) significa que el compuesto es dextrorrotatorio (es decir, que rota el plano de luz polarizada hacia la derecha o en el sentido de las agujas del reloj). El signo de rotación óptica, (-) y (+), no está relacionado con la configuración absoluta de la molécula, R y S.

[0121] Un compuesto de la presente invención que posea las propiedades farmacológicas deseadas será ópticamente activo y puede estar compuesto de al menos el 90% (80% e.e.), al menos el 95% (90% e.e.), al menos el 97.5% (95% e.e.) o al menos el 99% (98% e.e.) de un único isómero.

[0122] Asimismo, muchos isómeros geométricos de enlace doble y similares también pueden estar presentes en los compuestos aquí descritos, y todos los isómeros estables se incluyen en la presente invención a menos que se indique lo contrario. También están incluidos en la invención los tautómeros y rotámeros de la fórmula I.

[0123] El uso de los siguientes símbolos a la derecha se refiere a la sustitución de uno o

con el sustituyente R definido. [0124] El uso del siguiente símbolo indica un enlace simple o un enlace doble opcional: . [0125] Los compuestos intermedios formados a través de los métodos sintéticos aquí

descritos para proporcionar los compuestos de la fórmula I pueden poseer utilidad como agente terapéutico para la variedad de indicaciones aquí descritas y/o un reagente para más métodos de síntesis y reacciones.

2. Métodos sintéticos [0126] Los compuestos de la fórmula I pueden sintetizarse empleando técnicas de síntesis de solución tradicional o métodos de química de fase sólida. En cualquiera de ellos, la construcción supone cuatro fases: primero, la síntesis de los elementos fundamentales que comprende los elementos de reconocimiento para el receptor de destino biológico, además de un grupo de enlace, principalmente para el control y la definición de conformación. Estos elementos fundamentales se colocan juntos, normalmente de forma secuencial, empleando en una segunda fase unas trasformaciones químicas estándar. Posteriormente se ciclizan los precursores del

ensamblaje en la tercera fase para proporcionar estructuras macrocíclicas. Finalmente, el proceso de post-ciclización de la cuarta fase que implica la eliminación de los grupos de protección y una purificación opcional proporciona los compuestos finales deseados. Se describen métodos sintéticos para este tipo general de estructura macrocíclica en las Solicitudes Internacionales WO 01/25257, WO 2004/111077, WO 2005/012331 y WO 2005/012332, incluyendo los procedimientos de purificación descritos en WO 2004/111077 y WO 2005/012331.

[0127] En algunas formas de realización de la presente invención, los compuestos macrocíclicos de la fórmula I se pueden sintetizar empleando química de fase sólida sobre una matriz de polímero soluble o insoluble tal y como se definió previamente. Para la química de fase sólida, se debe llevar a cabo una fase preliminar que incluye el acoplamiento del primer bloque funcional, también denominado “carga”, a la resina. La resina empleada para la presente invención tiene acoplado preferentemente un grupo de enlace, L. Estos enlazadores se unen con una funcionalidad química libre y apropiada, normalmente un alcohol o amina, aunque también son posibles otros, sobre la resina base mediante métodos de reacción estándar conocidos en la materia, como cualquiera del gran número de condiciones de reacción desarrolladas para la formación de enlaces de éster o amida. Algunos grupos de enlace de la presente invención se diseñan con el fin de permitir un clivaje simultáneo de la resina con la formación del macrocíclo en un proceso generalmente denominado “liberación-ciclización” (van Maarseveen, J.H. “Solid phase synthesis of heterocycles by cyclization/cleavage methodologies”, Comb. Chem. High Throughput Screen. 1998, 1, 185-214; lan W. James, “Linkers for solid phase organic synthesis”, Tetrahedron, 1999, 55, 4855-4946; Eggenweiler, H.-M. “Linkers for solid-phase synthesis of small molecules: coupling and cleavage techniques”, Drug Discovery Today, 1998, 3, 552-560; Backes, B.J.; Ellman, J.A. “Solid support linker strategies”, Curr. Opin. Chem. Biol. 1997, 1, 86-93). Es de particular utilidad en este aspecto para los compuestos de la presente invención el enlazador ácido 3-tiopropiónico (Hojo, H.; Aimoto, S. Bull. Chem. Soc. Jpn. 1991, 64, 111-117; Zhang, L.; Tam, J. J. Am. Chem. Soc. 1999, 121, 3311-3320).

[0128] Un proceso así proporciona material de mayor pureza puesto que sólo se liberan productos cíclicos del soporte sólido y no existe contaminación con el precursor lineal como sucedería en la fase de solución. Tras el ensamblaje secuencial de todos los bloques funcionales y los enlaces en el precursor lineal empleando una química de reacción conocida o estándar, el ataque intramolecular, mediado por la base sobre el carbonilo sujeto a este enlazador mediante una funcionalidad nucleofílica apropiada que forma parte del grupo de bloques funcionales, resulta en la formación de la amida o enlace éster que completa la estructura cíclica tal y como se muestra (Esquema 1). También se puede aplicar una metodología análoga adaptada a la fase de solución que sería preferible para aplicaciones a mayor escala.

[0129] Aunque esta descripción representa con precisión el camino para uno de los métodos de la presente invención, la estrategia tioéster, otro método de la presente invención, la de metátesis con cierre del anillo (RCM por sus siglas en inglés), procede a través de una ruta modificada en la que el componente de amarre se ensambla en realidad durante la fase de ciclización. Sin embargo, en la metodología de RCM el ensamblaje de los bloques funcionales también procede secuencialmente, seguido por la ciclización (y la liberación de la resina si se trata de la fase sólida). Es necesaria otra fase adicional de procesamiento de post-ciclización para eliminar productos secundarios de la reacción de RCM, pero el procesado posterior restante se realiza del mismo modo que para el tioéster o estrategias análogas de ciclización mediadas por la base.

[0130] Por otra parte, se entenderá que las fases que incluyen los métodos proporcionados aquí pueden llevarse a cabo de manera independiente o al menos se pueden combinar dos fases. Además, las fases que incluyen los métodos proporcionados aquí, cuando se llevan a acabo de manera independiente o combinada, se pueden realizar a la misma o a diferentes temperaturas sin apartarse de las enseñanzas de la presente invención.

[0131] Los novedosos compuestos macrocíclicos de la presente invención incluyen aquellos formados por un proceso nuevo entre los que se encuentra la ciclización de una estructura de bloques funcionales para formar un compuesto macrocíclico que comprende un componente de amarre aquí descrito. En consecuencia, la presente invención provee métodos de elaboración de los compuestos de la presente invención que comprende (a) un ensamblaje de estructuras de bloques funcionales, (b) la transformación química de las estructuras de bloques funcionales, (c) la ciclización de las estructuras de bloques funcionales incluyendo un componente de amarre, (d) la eliminación de grupos protectores de las estructuras de bloques funcionales, y (e) la purificación opcional del producto obtenido de la fase (d). En algunas formas de realización, el ensamblaje de las estructuras de bloques funcionales puede ser secuencial. En otras formas de realización, los métodos de síntesis se llevan a cabo empleando técnicas de síntesis de solución tradicionales o técnicas de química de fase sólida.

A. Aminoácidos

[0132] Los aminoácidos, los aminoácidos protegidos por Boc y Fmoc y los derivados de cadenas laterales, incluyendo los de N-metil y aminoácidos no naturales, se obtuvieron de unos proveedores comerciales [por ejemplo Advanced ChemTech (Louisville, KY, Estados Unidos), Bachem (Bubendorf, Suiza), ChemImpex (Wood Dale, IL, Estados Unidos), Novabiochem (filial de Merck KGaA. Darmstadt, Alemania), PepTech (Burlington, MA, Estados Unidos), Synthetech (Albany, OR, Estados Unidos)] o fueron sintetizados a través de metodologías estándar conocidas por aquellos doctos en la materia. Los aminoácidos, o bien fueron obtenidos comercialmente de Orpegen (Heidelberg, Alemania) o Advanced ChemTech (Louisville, KY, Estados Unidos), o bien fueron sintetizados por procedimientos estándar utilizando Ddz-OPh o Ddz-N3. (Birr, C.; Lochinger, W.; Stahnke, G.; Lang, P. “The a,a-dimethyl-3,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl (Ddz) residue, an N-protecting group labile toward weak acids and irradiation”, Justus Liebigs Ann. Chem. 1972, 763, 162-172). Los aminoácidos bts fueron sintetizados mediante procedimientos establecidos (Vedejs, E.; Lin, S.; Klapara, A.; Wang, J. "Heteroarene-2-sulfonyl Chlorides (BtsCl, ThsCl): Reagents for Nitrogen Protection and >99% Racemization-Free Phenylglycine Activation with SOCl2." J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 9796-9797. También WO 01/25257, WO 2004/111077). Los aminoácidos N-Alquilo, en concreto los aminoácidos N-metil, están disponibles comercialmente por parte de múltiples vendedores (Bachem, Novabiochem, Advanced ChemTech. ChemImpex). Además, se accedió a los derivados de los aminoácidos N-alquilo a través de métodos de la bibliografía (Hansen, D. W., Jr.; Pilipauskas, D. J. Org. Chem. 1985, 50, 945-950).

B. Enlaces [0133] Los enlaces se obtuvieron a partir de los métodos previamente descritos en las Publicaciones WO 01/25257, WO 2004/111077, WO 2005/012331 y nº de Solicitud

Internacional de los Estados Unidos 60/622,055. En los ejemplos posteriores se presentan procedimientos para la síntesis de los enlaces tal y como se describe aquí.

C. Técnicas de fase sólida [0134] Se han descrito unas técnicas de fase sólida específicas para la síntesis de los compuestos macrocíclicos de la presente invención en WO 01/25257, WO 2004/111077, WO 2005/012331 y WO 2005/012332. Las rutas de síntesis de la fase de solución, incluyendo los métodos susceptibles de una elaboración a gran escala, fueron descritos

en los números de serie de la Solicitud Internacional de los Estados Unidos 60/622,055 y 60/642,271. [0135] En ciertos casos, sin embargo, la habilidad de los grupos protectores impedía el

uso del medio básico estándar para la ciclización en la estrategia tióester discutida previamente. En estos casos, se empleó cualquiera de los dos métodos ácidos para proporcionar una macrociclización bajo condiciones ácidas. Un método utilizó HOAc, mientras que el otro método empleó HOAt (Esquema 2). Por ejemplo, se empleó la ciclización de ácido acético para el compuesto 219.

[0136] Tras ejecutar la desprotección del grupo Ddz o Boc sobre el enlace, se lavó la resina secuencialmente con DCM (2x), DCM-MeOH (1:1, 2x), DCM (2x), y DIPEA-DCM (3:7, 1x). Se secó la resina al vacío durante 10 min, y posteriormente se añadió inmediatamente a la solución de HOAc en DMF desgasificado (5% v/v). La mezcla de reacción se agitó a 50-70 °C durante toda la noche. Se filtró la resina, se lavó con THF, y la combinación de lo filtrado y lo lavado se evaporó a presión reducida (aspirador de agua, luego bomba de aceite) para permitir el macrociclo.

[0137] Para un macrociclo representativo con enlace T1, AA3 = Leu, AA2 = Leu, AA1 =

10 Phe, la aplicación del método HOAt que se muestra en el Esquema 2 proporcionó el péptidomimético cíclico en un 10% de rendimiento, mientras que el método de ácido acético fue más efectivo, y dio un rendimiento general del 24% del mismo macrociclo. Esta última metodología fue particularmente efectiva para los compuestos que contenían residuos His(Mts). Por ejemplo, con en enlace T8, AA3 = Phe, AA2 = Acp, AA1 =

15 His(Mts), se obtuvo el macrociclo en un rendimiento general del 20%, pero la mayoría del producto ya no poseía el grupo Mts sobre histidina (15:1 frente al todavía protegido). [0138] Se muestra la síntesis de los compuestos macrocíclicos representativos de la presente invención en los siguientes Ejemplos. La Tabla 1A presenta un resumen de la síntesis de los compuestos representativos de la presente invención. Los compuestos

20 44, 45, 46, 48, 49, 50, 51, 53, 54, 56, 58, 63, 64, 69, 70, 71, 73, 76, 78, 80, 81, 82, 83, 85, 86, 87, 91, 92, 96, 98, 99, 103, 104, 106, 107, 110, 114, 115, 121, 125, 128, 129, 163, 165, 166, 167, 172, 181, 182, 183, 196, 202, 204, 205, 206 y 207 no son compuestos según la invención. La metodología de reacción empleada para la construcción de la molécula macrocíclica se indica en la columna 2 y se refiere al

25 esquema concreto de la estrategia sintética, por ejemplo, el uso de la estrategia de tioéster como se muestra en la figura 2 o el enfoque RCM como se muestra en la figura

3. La columna 3 indica si existe algún sustitutivo en NBB1. Las columnas 4-6 y 8 indican los bloques funcionales individuales empleados para cada compuesto, aminoácidos, ácidos hidroxi o enlaces utilizando, o bien una nomenclatura estándar, o refiriéndose al

30 bloque funcional mediante designaciones presentadas en algún otro lugar de esta solicitud. La columna 7 indica el método usado para la sujeción del enlace, o bien una reacción Mitsunobu (descrita previamente en WO 01/25257) o bien una aminación reductora (descrita previamente en WO 2004/111077). La desprotección relevante y los protocolos de ensamblaje apropiados para la naturaleza del bloque funcional emplean

procedimientos estándar y los descritos en WO 2004/111077 para el ensamblaje de los precursores de cliclización. Los bloques funcionales se listan en el orden opuesto en el que se añaden con el fin de correlacionar el número del bloque funcional con la nomenclatura péptida estándar. Por lo tanto, se añade primero BB3, seguido de BB2, 5 luego BB1, finalmente el amarre (T por su sigla en inglés). En el caso del RCM, el amarre no se forma completamente hasta la fase de ciclización, pero la porción del amarre sujeto a BB1 todavía se añade en esta fase de la secuencia. Los últimos macrociclos se obtienen tras la aplicación de las secuencias de desprotección apropiadas. Si fuera necesario llevar a cabo alguna reacción en la post-ciclización, 10 aparece en la columna 9. Todos los macrocilos presentados en la Tabla 1A fueron purificados y cumplieron los criterios de aceptación internos. Los rendimientos (columna 10) están, o bien aislados, o bien calculados basados en el análisis CLND. Debe tenerse en cuenta que los compuestos 58 y 99 no se ciclizaron para proporcionar los análogos lineales de los compuestos 10 y 133 respectivamente. La falta de potencia de enlace 15 observada con estos análogos lineales ilustra la importancia de la característica

estructural macrocíclica para la actividad deseada.

Tabla 1A: Síntesis de los compuestos representativos de la presente invención

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

1

Estrategia deTioéster H Bts-Nle Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 10,1

2

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)Ala Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 13,8

3

Estrategia deTioéster H Bts-Val Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 10,3

4

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 4,6

5

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-NEtGly Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 8,6

6

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Ddz-Sar Ddz(D)Trp(Boc) Reacción deMitsunobu Ddz-T9 Ninguna 8,1

7

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Ddz-Sar Ddz(D)Tyr(But) Reacción deMitsunobu Ddz-T9 Ninguna 8,8

8

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 20,9

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

9

Estrategia deTioéster H Bts-Val Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 9,7

10

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 9,9

11

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 9,9

12

Estrategia deTioéster H Bts-(D)Val Boc-Nle Boc-Nle Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 2,9

13

Estrategia deTioéster H Bts-(D)Val Boc-Nva Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 5,8

14

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)Ala Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 27,5

15

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 19,5

16

Estrategia deTioéster H Bts-allo-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 23,9

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

17

Estrategia deTioéster H Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T9 Ninguna 24,8

18

Estrategia deTioéster H Bts-Acp Boy-acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 6,8

19

Estrategia deTioéster H Bts-Val Boc-(D)NMeAla Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 12,7

20

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Phe(2-Cl) Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 22,0

21

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 24,7

22

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-1Nal Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 10,3

23

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc(D)Phe(2-Cl) Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 32,6

24

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc(D)Phe(3-Cl) Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 22,4

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

25

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc(D)Phe(4-Cl) Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 21,0

26

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc(D)Phe(4-F) Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 15,5

27

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc(D)Tyr(OMe) Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 20,2

28

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Bip Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 31,6

29

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Dip Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 26,1

30

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)1Nal Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 31,9

31

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)2Nal Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 21,9

31

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)2Pal Reacción deAminaciónReductora Boc-T9 Ninguna 6,7

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

33

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)4- ThzAla Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 7,5

34

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)2-Thi Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 14,2

35

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T33a Ninguna 9,4

36

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T33b Ninguna 13,0

37

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA1+TB4 Ninguna 24,6

38

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA2+TB1 Hidrogenación 44,2

39

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-(D)NMcAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 21,4

40

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 18,6

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

41

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAbu Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 10,6

42

Estrategia deTioéster H Bts-Tle Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 1,7

43

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NEtAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 0,4

44

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T1 Ninguna 7,8

45

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Ddz-Acp Ddz-Glu(OBut) Reacción deMitsunobu Ddz-T8 Ninguna 11,6

46

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Val Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 13,6

47

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Leu Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 9,2

48

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Nva Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 17,5

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

49

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Sar Boc-(D)Ala AminaciónReductora Boc-T9 Ninguna 7,5

50

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Ddz-Sar Ddz(D)Glu(OBut) Reacción deMitsunobu Ddz-T9 Ninguna 10,1

51

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Sar Boc-Gly Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 6,6

52

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Sar Boc-(D)Nle Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 8,7

53

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Ddz-Sar Ddz(D)Om(Boc) Reacción deMitsunobu Ddz-T9 Ninguna 8,3

54

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Ddz-Sar Ddz(D)Ser(But) Reacción deMitsunobu Ddz-T9 Ninguna 6,2

55

Estrategia deTioéster H Bts(D)Nva Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 8,0

56

Estrategia deTioéster H Bts(D)Nva Boc-Sar Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 93

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

57

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Sar Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 8,9

58

Estrategia deTioéster, lineal Ac Bts-Nva Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 No ciclización 5,9

59

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Ala Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 8,0

60

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-(D)Ala Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 13,1

61

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Gly Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 8,4

a

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Leu Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 7,0

63

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-(D)Leu Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 11,7

64

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Phe Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 8,5

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

65

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-(D)Phe Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 8,6

66

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Aib Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 15,8

67

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Acp Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 11,7

68

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Ddz-Lys Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Ddz-T9 Ninguna 7,9

69

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Ddz-(D)Lys(Boc) Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Ddz-T9 Ninguna 11,2

70

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Ddz-Glu(OBut) Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Ddz-T9 Ninguna 10,0

71

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Ddz(D)Glu(OBut) Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Ddz-T9 Ninguna 9,9

72

Estrategia deTioéster H Bts-Ala Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 5,2

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

73

Estrategia deTioéster H Bts-Glu Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 6,8

74

Estrategia deTioéster H Bts-Lys Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 6,0

75

Estrategia deTioéster H Bts-Phe Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 9,5

76

Estrategia deTioéster H Bts-Ser Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 15,1

77

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T12 Ninguna 12,6

78

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T27 Ninguna 6,8

79

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 1,9

80

Estrategia deTioéster H Bts-Gly Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 1,3

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

81

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T1 Ninguna 5,3

82

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T3 Ninguna 3,9

83

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T16 Ninguna 1,8

84

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T4 Ninguna 2,6

85

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Ser Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T5 Ninguna 4,7

86

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Sar Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T14 Ninguna 0,4

87

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Ala Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 4,8

88

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Ddz-Acp Ddz-Tyr(But) Mitsumobu Reaction Ddz-T9 Ninguna 18,8

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

89

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Ddz-Acp Ddz-Trp(Boc) Reacción deMitsunobu Ddz-T9 Ninguna 16,5

90

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Hfe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 8,5

91

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Ddz-Acp Ddz-Lys(Boc) Reacción deMitsunobu Ddz-T9 Ninguna 6,8

92

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Ddz-Acp Ddz-Glu(OBut) Reacción deMitsunobu Ddz-T9 Ninguna 9,1

93

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Ala Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 9,2

94

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-(D)Ala Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 21,8

95

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Aib Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 193

96

Estrategia deTioéster H Bts(D)Leu Boc-Atp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 7,0

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

97

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Bco-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 9,2

98

Estrategia deTioéster H Bts(D)Leu Boc-Acp Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 15,3

99

Estrategia deTioéster, lineal Ac Bts-Leu Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 No ciclización 10,4

100

Estrategia deTioéster H Bts-Ala Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 10,4

101

Estrategia deTioéster H Bts-Nlo Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 19,0

102

Estrategia deTioéster H Bts-Phe Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 15,8

103

Estrategia deTioéster H Bts-Lys Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 12,9

104

Estrategia deTioéster H Bts-Glu Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 93

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

105

Estrategia deTioéster H Bts-Ser Boc-Acp Bac-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 11,9

106

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T3 Ninguna 6,3

107

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T5 Ninguna 4,2

108

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T12 Ninguna 18,3

109

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T11 Ninguna 10,1

110

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Gly Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 2,9

111

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acc Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 3,0

112

Estrategia deTioéster H Bts-Gly Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 3,2

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

113

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 16,9

114

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T16 Ninguna 2,9

115

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boe-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T6 Ninguna 0,5

116

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Ddz-Acp Ddz-Glu(Et) Reacción deMitsunobu Ddz-T8 Ninguna 11,8

117

Estrategia deTioéster H Bts-Abu Boc-(D)NMCAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 19,7

118

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 21,0

119

Estrategia deTioéster H Bts-Thr Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 12,2

120

Estrategia deTioéster H Bts-Thr(OMe) Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T9 Ninguna 17,5

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

121

Estrategia deTioéster H Bts-Acc Boc(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 5,8

123

Estrategia deTioéster H BtsPhe(2-Cl) Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 22,1

123

Estrategia deTioéster H BtsPhe(3-Cl) Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 13,6

124

Estrategia deTioéster H BtsPhe(4-Cl) Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 9,8

125

Estrategia deTioéster H BtsPhe(4-F) Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 15,8

126

Estrategia deTioéster H . Bts-Hfe Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 9,8

127

Estrategia deTioéster H Bts-Tyr(OMe) Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 14,5

128

Estrategia deTioéster H Bts-Bip Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 17,8

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

129

Estrategia deTioéster H Bts-Dip Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 11,0

130

Estrategia deTioéster H Bts-1Nal Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 18,8

131

Estrategia deTioéster H Bts-2Nal Boc-acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 15,0

131

Estrategia deTioéster H Bts-3Pal Boc-Acp Boc-Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T8 Ninguna 17,0

133

Estrategia deTioéster H Bts-4Pal Boc-Acp Boc-Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T8 Ninguna 9,5

134

Estrategia deTioéster H Bts-4-ThzAla Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 12,0

135

Estrategia deTioéster H Bts-2-Thi Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 4,0

136

Estrategia de H Bts-Abu Boc-Acp Boc-Phe Reacción de Boc-T8 Ninguna 13,3

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

Tioéster Mitsunobu

137

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 19,0

138

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 13,8

139

Estrategia deTioéster H Bts-Val Boc-hcLeu Boc-Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T8 Ninguna 18,4

140

Estrategia deTioéster H Bts-Val Boc-hc(4O)Leu Boc-Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T8 Ninguna 16,7

141

Estrategia deTioéster H Bts-Val Boc-(4O)Acp Boc-Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T8 Ninguna 15,7

142

Estrategia deTioéster H Bts-Val Boc-(3-4)InAcq Boc-Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T8 Ninguna 17,0

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

143

Estrategia deTioéster H Bts-Val Boc-hc(4S)Leu Boc-Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T8 Ninguna 16,1

144

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeVal Boc-(D)Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T9 Ninguna 5,7

145

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-NMeVal Boc-(D)Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T9 Ninguna 4,9

146

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-NMeNva Boc-(D)Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T9 Ninguna 23,3

147

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeLeu Boc-(D)Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T9 Ninguna 14,4

148

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-NMeLeu Boc-(D)Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T9 Ninguna 25,4

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

149

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc(D)NMeIle Boc-(D)Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T9 Ninguna 11,4

150

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-NMeIle Boc-(D)Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T9 Ninguna 7,0

151

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Ddz-(D)Ser(But) Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Ddz-T9 Ninguna 8,2

152

Estrategia deTioéster H Bts-Ile DdzNMeSer(But) Boc-(D)Phe Reacción Ddz-T9 Ninguna 22,1

153

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Phe(4-Cl) Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 13,5

154

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Phe(4-F) Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 14,4

155

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Hfe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 13,5

156

Estrategia de H Bts-Leu Boc-Acp Boc- Reacción de Boc-T8 Ninguna 132

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

Tioéster Tyr(OMe) Mitsunobu

157

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Bip Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 20,2

158

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Dip Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 11,3

159

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-2Nal Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 20,5

160

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-2Pal Reacción deAminaciónReductora Boc-T8 Ninguna 2,8

161

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-3Pal Reacción deAminaciónReductora Boc-T8 Ninguna 16,5

162

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-4Pal Reacción deAminaciónReductora Boc-T8 Ninguna 16,7

163

Estrategia de H Bts-Leu Boc-Acp Boc-4-ThzAla Reacción de Boc-T8 Ninguna 10,0

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

Tioéster Mitsunobu

164

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-2-Thi Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 12,5

165

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Abu Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 13,0

166

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Ile Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 11,1

167

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-allo-Ile Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 15,3

168

Estrategia deTioéster H Bts-Leu Boc-Acp Boc-Acp Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 4,2

169

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Hfe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 17,0

170

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)3Pal Reacción deAminaciónReductora Boc-T9 Ninguna 14,5

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

171

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc(D)NMeAla Boc-(D)4Pal Reacción deAminaciónReductora Boc-T9 Ninguna 16,4

172

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-Abu Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 12,0

173

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Nva Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 16,8

174

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Val Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 13,9

175

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Ile Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 15,1

176

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Leu Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 9,4

177

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T11 Ninguna 93

178

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Bac-T28 Ninguna 11,2

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

179

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T29 Ninguna 8,6

180

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T30 Ninguna 10,0

181

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA1+TB7 Ninguna 49,5

182

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA1+TB7 Hidrogenación 47,7

183

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA2+TB7 Ninguna 59,0

184

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA2+TB7 Hidrogenación 50,6

185

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA1+TB6 Ninguna 12,4

186

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA2+TB6 Ninguna 3,0

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

187

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA1+TB3 Ninguna 30,9

188

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA2+TB3 Ninguna 34,9

189

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA2+TB3 Hidrogenación 24,0

190

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA1+TB4 Hidrogenación 32,5

191

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA2+TB4 Ninguna 32,2

192

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA2-TB4 Hidrogenación 22,2

193

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA1+TB1 Ninguna 47,7

194

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA1+TB1 Hidrogenación 23,7

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

195

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA2+TB1 Ninguna 66,8

196

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Ddz-T32(Boc) Ninguna 13,0

197

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Ddz-T31(But) Ninguna 10,6

199

Estrategia deTioéster H Bts-Val Boc-Acc Boc-Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T8 Ninguna 16,0

200

Estrategia deTioéster H Bts-Val Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 14,7

201

Estrategia deTioéster Me Bts-Nva Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T9 Reacción deaminaciónreductora conformaldehido 32,4

202

Estrategia deTioéster Ac Bts-Nva Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe AminaciónReductora Boc-T9 Acetilación 14,2

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

203

Estrategia deTioéster Me Bts-Leu Boc-Acp Boc-Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T8 Reacción deaminaciónreductora conformaldehido 7,7

204

Estrategia deTioéster Ac Bts-Leu Boc-Acp Boc-Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T8 Acetilación 11,5

205

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Abu Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 19,9

206

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T34 Ninguna 26,2

207

Estrategia deTioéster H Bts-Val Boc-hc(4N)Leu Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna <1

208

Estrategia deTioéster H Bts-allo-Ile Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 16,7

209

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)allo-Ile Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 8,6

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

210

Estrategia deTioéster H Bts-2Pal Boc-Acp Boc-Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T8 Ninguna 1,1

211

Estrategia deTioéster H Bts-Val Boc-hc(4N)Leu Boc-Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T8 Ninguna <1

212

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-NMeAbu Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 1,2

213

Estrategia deTioéster H Bts-Ile Boc-(D)4- Thz Boc-(D)Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T9 Ninguna 1,0

214

Estrategia deRCM H Fmoc-Dc Fmoc(D)NMeAla Fmoc(D)Phe Reacción deMitsunobu TA1+TB3 Hidrogenación 14,9

215

Aislado de la síntesis del compuesto 151

216

Estrategia deTioéster H Bts-Val Boc-Acc Boc-Phe Reacción deAminación Boc-T9 Ninguna 11,6

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

Reductora

218

Estrategia deTioéster H Bts-hcLeu Boc-Acp Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T8 Ninguna 0,1

219

Acetic Acid Cyclization H Bts-His(Mts) Boc-Acp Boc-Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T8 Ninguna 19,0

220

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-Pro Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 15,0

221

Estrategia deTioéster H Bts-Nva Boc-(D)Pro Boc-(D)Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 14,9

222

ThioeaterStrategy H Bts-Leu Boo-Pro Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 11,7

223

Thoester Strategy H Bts-Leu Boc(D)Pro Boc-Phe Reacción deMitsunobu Boc-T9 Ninguna 20,4

224

Estrategia deRCM H Fmoc-Ile Fmoc(D)Hyp(But) Fmoc-(D)Phe Reacción deMitsunobu TA1+TB2 Hidrogenación 8,2

Compuesto

Método de ensamblaje del macrociclo HBB1-R BB1 BB2 BB3 Método desujeción del amarre Amarre ReacciónAdicional** Rendimientos(%)*

225

Estrategia deTioéster H Bts-Pro Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T9 Ninguna 10,0

226

Estrategia deTioéster H Bts-Pip Boc-(D)NMeAla Boo-(D)Phe Reacción deAminaciónReductora Boc-T9 Ninguna 13,5

*Rendimiento global: basado en la carga de resina teórica,empezando a partir de resina �500 mg

** Reacciones adicionales llevadas a cabo post-ciclización. excepto en las que se indica lo contrario, para alcanzar el producto deseado

[0139] La Tabla 1B presenta un resumen de la síntesis de los compuestos representativos de la presente invención, y la Tabla 1C presenta la síntesis de compuestos representativos adicionales. Los compuestos 403, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 415, 417, 430, 431, 432, 442, 443 y 444 no son compuestos según la invención. 5 Para la Tabla 1B, la metodología de reacción empleada para la construcción de la molécula macrocíclica se indica en la columna 2 y lo relaciona con el esquema particular de la estrategia sintética. Las columnas 3-6 indican los bloques funcionales individuales empleados para cada compuesto, aminoácidos o amarre utilizando, o bien una nomenclatura estándar, o bien refiriéndose a designaciones de los bloques funcionales 10 presentados en alguna parte de la presente solicitud. La columna 7 indica el método usado para la sujeción del amarre. Los bloques funcionales están listados en el orden contrario en el que son añadidos con el fin de correlacionar el número del bloque funcional con la nomenclatura péptida estándar. La columna 8 indica si se aplicó una química de reacción adicional, como para eliminar la protección auxiliar o para reducir

15 un enlace doble (tal y como se llevó a cabo con muchos productos intermedios de RCM). Todos los macrociclos de las Tablas 1B y 1C fueron purificados y cumplieron los criterios de aceptación. Los rendimientos (columas 9-10) están o bien aislados o bien calculados basados en el análisis CLND.

Tabla 1B: Síntesis de compuestos representativos de la presente invención

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg)* Rendimiento(%)*

298

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T33a Reacción deMitsunobu Ninguna 29,7 12

299

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-Cl) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 54,1 17

301

Estrategia detioéster Bts-Tyr(But) Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Ddz-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 36,5 10

303

Estrategia detioéster Bts-Val Boc-(40)Acp Boc-Phe Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 60 16

305

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)His(Mts) Boc-T9 AminaciónReductora Ninguna 110 31

306

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)MMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T11 Reacción deMitsunobu Ninguna 51 8

307

Estrategia deRCM Fmoc-Cpg Fmoc(D)NMeAla Fmo-(D)Phe(4-F) TA2+TB6 Reacción deMitsunobu Ninguna 13,6 10

308

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-Cl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 43,8 14

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg)* Rendimiento(%)*

309

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T9 Mltsunobu Reaction Ninguna 38,2 13

310

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(n)3-Thi Boc-T9 Mitsnunobu Reaction Ninguna 333 11

311

Estrategia detioéster Boc-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Tyr(3tBu) Boc-T9 Reacción deAminaciónReductora Ninguna 18,6 5.1

312

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(2-F) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 42,9 14

313

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(3-F) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 38,2 13

314

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(2,4diCl) Boc-79 Reacción deMitsunobu Ninguna 39,7 12

315

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(3,4diCl) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 35,3 11

316

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(3,4diF) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 40,7 13

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg)* Rendimiento(%)*

317

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(3,5diF) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 37,6 12

318

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc(D)Phe(pentaF) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 36,1 11

319

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-Br) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 37,5 11

320

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-I) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 43,4 12

321

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-CN) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 34,5 11

322

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-CF3) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 40,8 12

313

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(3,4diOMe) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 27,3 8

324

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeA)aBoc-(D)NMeAla Boc-(D)Trp Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 38,6 12

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg)* Rendimiento(%)*

325

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-F) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 33,7 10

326

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Br) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 37,5 10

327

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3,5diF) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 35,2 11

328

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-OMe) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 31,5 10

329

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-CN) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 26,9 8

330

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3,4diCl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 38,4 11

331

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3,4diF) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 37 11

332

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-CF3) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 30,6 9

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg)* Rendimiento(%)*

333

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-3-Thi Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 49,6 18

334

Estrategia detioéster Bts-Acp Boc-Aib Boc-Phe(3-Cl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 32 11

335

Estrategia detioéster Boc-Thr(OMe) Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T9 Reacción deAminaciónReductora Ninguna 62,2 18

336

Estrategia detioéster Bts-Ser(OMe) Boc-(D) Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 37,7 12

337

Estrategia detioéster Boc-Dap(Cbz) Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T9 Reacción deAminaciónReductora Hidrogenólisis 67,5 7

338

Estrategia detioéster Bts-Dab(Boc) Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe( 4-F) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 60 20

339

Estrategia detioéster BtsOm(Boc) Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 6,3 20

340

Estrategia de Boc-Met Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4 Boc-T9 Aminación Ninguna 14,4 4

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg)* Rendimiento(%)*

tioéster F) Reductora

341

Estrategia detioéster Bts-3-Thi Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 48 14

342

Estrategia detioéster BtsPhe(2-CN) Boc-Acp Boc-Phe(3-(Cl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 37,7 10

343

Estrategia detioéster BtsPhe(2-OMe) Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 91,3 25

344

Estrategia detioéster Bts-Ser(OMe) Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 22,1 7

345

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-(40)Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 48 13

346

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 52,1 16

347

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Ser(OBzl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 17,1 6

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg)* Rendimiento(%)*

348

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Ser(OBzl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 104,4 33

349

Estrategia detioéster Bts-Aib Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 23,6 7

350

Estrategia detioéster Bts-Aib Boc-Aib Boc-Phe(3-Cl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 44 15

351

Estrategia detioéster Bts-Acp Boc-(D)Ala Boc-Phe(3-Cl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 39,1 13

352

Estrategia detioéster Bts-Acp Boc-Ala Boc-Phe(3-Cl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 15,7 5

353

Estrategia deRCM Fmoc-Ile Fmoc(D)NMeAla Fmoc-(D)Phe(4-F) TA1+TB4 Reacción deMitsunobu Ninguna 47,8 25

354

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T65 Reacción deMitsunobu Ninguna 26,8 9

355

Estrategia detioéster Boc-(D)MMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T70 Reacción deMitsunobu Ninguna 36,8 12

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg)* Rendimiento(%)*

356

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-tnWMeAh Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T72 Reacción deMitsunobu Ninguna 10 3

357

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Ddz-T74(Boc) Reacción deMitsunobu Ninguna 41,8 11

358

Estrategia deRCM Fmoc-Ile Fmoc-Acp Fmoc-Phe(3-Cl) TA1+TB4 Reacción deMitsunobu Ninguna 26,1 26

359

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T58 Reacción deMitsunobu Ninguna 43,6 12

360

Estrategia deRCM Fmoc-Ile Fmoc-Acp Fmoc-Phe(3-Cl) TA2+TB6 Reacción deMitsunobu Ninguna 36,3 18

361

Estrategia deRCM Fmoc-Ile Fmoc-Acp Fmoc-Phe(3-Cl) TA2+TB4 Reacción deMitsunobu Ninguna 36,3 32

362

Estrategia deRCM Fmoc-Ile Fmoc-Acp Fmoc-Phe(3-Cl) TA2+TB1 Reacción deMitsunobu Hidrogenación 59,4 57

363

Estrategia deRCM Fmoc-Ile Fmoc-Acp Fmoc-Phe(3-Cl) TA2+TB7 Reacción deMitsunobu Hidrogenación 41,8 44

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg)* Rendimiento(%)*

364

Estrategia deRCM Fmoc-Ile Fmoc-Acp Fmoc-Phe(3-Cl) TA2+TB7 Reacción deMitsunobu Hidrogenación 49,1 51

365

Estrategia deRCM Fmoc-Ile Fmoc-Acp Fmoc-Phe(3-Cl) TA1+TB10 Reacción deMitsunobu Hidrogenación 31,2 35

366

Estrategia deRCM Fmoc-Ile Fmoc-Acp Fmoc-Phe(3-Cl) TA1+TB7 Reacción deMitsunobu Hidrogenación 33,3 37

367

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boo-(D)Phe(4-F) Boc-T33b Reacción deMitsunobu Ninguna 21,1 6

368

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T33a Reacción deMitsunobu Ninguna 21,8 10

369

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 21,1 4

370

Estrategia deRCM Fmoc-Ile Fmoc-Acp Fmoc-Phe(3-Cl) TA2+TB6 Reacción deMitsunobu Hidrogenación 8,9 NA

371

Estrategia deRCM Fmoc-Ile Fmoc-Acp Fmoc-Phe(3-Cl) TA2+TB4 Reacción deMitsunobu Hidrogenación 9,9 NA

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg)* Rendimiento(%)*

372

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T69 Reacción deMitsunobu Ninguna 30,9 10

373

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe( 4-F) Boc-T71 Reacción deMitsunobu Ninguna 34,9 11

374

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Ddz-T73(Boc) Reacción deMitsunobu Ninguna 42,7 12

375

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-f) Doc-T39 Reacción deMitsunobu Ninguna 22,3 7

376

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F Boc-T40 Reacción deMitsunobu Ninguna 7,5 2

377

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc(D)Phe(4-F) Boc-T10 Reacción deMitsunobu Ninguna 14,6 5

378

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)PhE(4-F) Boc-T58 Reacción deMitsunobu Ninguna 65,3 21

379

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T67 Reacción deMitsunobu Ninguna 363 12

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg)* Rendimiento(%)*

380

Estrategia detioéster Btd-Ile Boc-Acp Hoc-Phe(3-Cl) Boc-T66 Reacción deMitsunobu Ninguna 16,5 5

381

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T65 Reacción deMitsunobu Ninguna 22,5 7

382

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T70 Reacción deMitsunobu Ninguna 24,5 7

383

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T69 Reacción deMitsunobu Ninguna 25,1 7

384

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T71 Reacción deMitsunobu Ninguna 21,9 6

385

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-Tl1 Reacción deMitsunobu Ninguna 23,3 7

386

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T39 Reacción deMitsunobu Ninguna 12 4

387

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T68 Reacción deMitsunobu Ninguna 17,1 5

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg)* Rendimiento(%)*

388

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T67 Reacción deMitsunobu Ninguna 30 9

389

Estrategia detioéster Bts-Cp8 Boc-(D) NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T68 Reacción deMitsunobu Ninguna 16,1 5

390

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T18 Reacción deMitsunobu Ninguna 28,7 10

391

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc(D)NMeAla Boc(D)Phe(3,4,5triF) Boc-T9 Reacción deMitsunobu Ninguna 45,4 14

392

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T40 Reacción deMitsunobu Ninguna 43 1

393

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T45 Reacción deMitsunobu Ninguna 2,1 1

394

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T38 Reacción deMitsunobu Ninguna 3,7 1

395

Estrategia deRCM Fmoc-Ile Fmoc-(4N)Acp Fmoc-Phe(3-Cl) TA1+TB2 Reacción deMitsunobu Hidrogenación 0,2 0,2

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg)* Rendimiento(%)*

396

Estrategia detioéster Bts-Acp Boc-(D)NMeAla Boc-Phe(3-Cl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 2,3 1

397

Estrategia detioéster Bts-Acp NMeAla Boc-Phe(3-Cl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 1,4 0.4

398

Estrategia deRCM Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) TA2+TB6 Reacción deMitsunobu Hidrogenación 3,8 1

399

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T33b Reacción deMitsunobu Ninguna 5,7 4

400

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T66 Reacción deMitsunobu Ninguna 28,3 9

401

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 31,5 11

402

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T8 Reacción deMitsunobu Ninguna 29,1 9

403

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Boc-T33a Reacción deMitsunobu Ninguna 103 11

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg)* Rendimiento(%)*

405

Estrategia detioéster Bts-Nva Boc-(D)NMelAa Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T33a Reacción deMitsunobu Ninguna 38,8 12

406

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T75a Reacción deMitsunobu Ninguna 45 13

407

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T33a Reacción deMitsunobu Ninguna 138,5 16

408

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T75a Reacción deMitsunobu Ninguna 146,2 21

409

Estrategia detioéster Bts-Val Boc(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-F) Boc-T33a Reacción deMitsunobu Ninguna 125,7 19

410

Estrategia deRCM Bts-Nva Boc(D)NMeAla Boc-(D)Phe Boc-T75a Reacción deMitsunobu Ninguna 36 11

415

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-Cl) Boc-T33a Reacción deMitsunobu Ninguna 127,5 12

417

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-Cl) Boo-T69 Reacción deMitsunobu Ninguna 45,6 13

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg)* Rendimiento(%)*

430

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-Cl) Boc-T7&) Reacción deMitsunobu Ninguna 50,7 14

431

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc(D)NMeAla Boc-(D)Phe Boc-T33a Reacción deMitsunobu Ninguna 57,9 17

432

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc(D)NMeAla Boc-(D)Phe(4-Cl) Boc-T33a Reacción deMitsunobu Ninguna 141 13

* Rendimiento global: basado en la carga de resina teórica empezando desde resina 500 mg

** Reacciones adicionales llevadas a cabo post-ciclización para alcanzar el producto deseado

Tabla 1C: Síntesis de compuestos representativos de la presente invención

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg) Rendimiento (%)

435

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Boc-T75a ReaccióndeMitsunobu Ninguna 29,7 9

436

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMeAla Boc-(D)Phe Boc-T76 ReaccióndeMitsunobu Ninguna 37,8 11

437

Bts-Acp Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T8 ReaccióndeMitsunobu Ninguna 8,3 2

438

Estrategia detioéster Estrategiade tioéster Bts-Leu Boc-Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T33a ReaccióndeMitsunobu Ninguna 51,2 5

439

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-(3/4O)Acp Boc-Phe(3-Cl) Boc-T8 ReaccióndeMitsunobu Ninguna 5,9 2

440

Estrategia de RCM Bts-Ile Fmoc(D)NMeSer(O0Bz Fmoc(D)Phe(4-F) TA1+TB 2 Reacciónde Hidrogenación 2,7 2

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg) Rendimiento (%)

l) Mitsunobu

441

Estrategia detioéster Bts-Ile Ddz-Acp Ddz-Phe(4-CO2tBu) Ddz-T8 ReaccióndeMitsunobu Ninguna 9,8 3

442

Estrategia detioéster Bts-Ile Ddz-Acp Ddz-Ser(But) Ddz-T8 ReaccióndeMitsunobu Ninguna 17,1 6

443

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc-Ser(OMe) Boc-T8 ReaccióndeMitsunobu Ninguna 19 7

444

Estrategia detioéster Boc-Leu Boc-Acp Boc-His(Mts) Boc-T8 ReaccióndeAminaciónReductora Ninguna 21 7

445

Estrategia detioéster Bts-Ile Ddz-(D)NMeAla Ddz(D)Tyr(But) Boc-T9 ReaccióndeMitsunobu Ninguna 15,5 5

Compuesto

Método de ensamblaje macrocíclico BB1 BB2 BB3 Amarre Sujeción del amarre Reacción adicional** Cantidad(mg) Rendimiento (%)

446

Estrategia detioéster Bts-Cpg Boc-(D)NMcAla Boc(D)Phe(4-F) Boc-T45 ReaccióndeMitsunobu Ninguna 3,2 1

447

Estrategia de RCM Bts-Ile Fmoc-Acp FmocPhe(3-Cl) TA1+TB 9 ReaccióndeMitsunobu Hidrogenación 18,2 21

448

Estrategia de RCM Bts-Nva Fmoc-Sar Fmoc(DL)aMePh e TA1+TB 2 ReaccióndeMitsunobu Hidrogenación 4,8 2

449

Estrategia detioéster Bts-Ile Boc-Acp Boc177 ReaccióndeMitsunobu Ninguna 2,6 1

* Rendimiento global: basado en la carga de resina teórica empezando desde resina 500 mg

** Reacciones adicionales llevadas a cabo post-ciclización para alcanzar el producto deseado

Las tablas que aparecen inmediatamente después presentan los datos analíticos

obtenidos para los compuestos 1-197, 199-216, 218-230 (Tabla 2A), los compuestos

298, 299, 301, 303, 304-403, 405-410, 415, 417 y 430-432 (Tabla 2B) y los compuestos

435-449 (Tabla 2C), determinados por el análisis LC-MS de los productos purificados.

5 Los compuestos 44, 45, 46, 48, 49, 50, 51, 53, 54, 56, 58, 63, 64, 69, 70, 71, 73, 76, 78,

80, 81, 82, 83, 85, 86, 87, 91, 92, 96, 98, 99, 103, 104, 106, 107, 110, 114, 115, 121,

125, 128, 129, 163, 165, 166, 167, 172, 181, 182, 183, 196, 202, 204, 205, 206, 207,

224, 228, 403, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 415, 417, 430, 431, 432, 442, 443 y 444 no

son compuestos de la presente invención. Estos compuestos fueron examinados más a 10 fondo por su habilidad de interactuar en el receptor de la ghrelina humana utilizando los

métodos de prueba biológicos descritos más abajo.

Tabla 2A: Caracterización analítica de los compuestos representativos

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

1

C29H40N4O4 508,7 509

2

C29H40N4O4 508,7 509

3

C28H38N4O4 494,6 495

4

C29H40N4O4 508,7 509

5

C29H40N4O4 508,7 509

6

C30H39N5O4 533,7 534

7

C28H38N4O5 510,6 511

8

C32H42N4O4 546,7 547

9

C31H42N404 534,7 535

10

C28H38N4O4 494,6 495

11

C28H36N4O4 492,6 493

12

C28H45N4O4 501,7 502

13

C30H40N4O4 520,7 521

14

C29H38N4O4 506,6 507

15

C30H42N4O4 522,7 523

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

16

C30H42N4O4 522,7 523

17

C29H38N4O4 506,6 507

18

C32H40N4O4 544,7 545

19

C29H38N4O4 506,6 507

20

C32H41N404Cl 581,1 581

21

C32H41N404Cl 581,1 581

22

C36H44N4O4 596,8 597

23

C30H41N404Cl 557,1 557

24

C30H41N4O4Cl 557,1 557

25

C30H41N4O4Cl 557,1 557

26

C30H41N4O4F 540,7 541

27

C31H44N4O5 552,7 553

28

C36H46N4O4 598,8 599

29

C36H46N4O4 598,8 599

30

C34H44N4O4 572,7 573

31

C34H44N4O4 572,7 573

32

C29H41N5O4 523,7 524

33

C27H39N5O4S 529,7 530

34

C28H40N4O4S 528,7 529

35

C31H44N4O4 536,7 537

36

C31H44N4O4 536,7 537

37

C31H42N4O3 518,7 519

38

C31H44N4O3 520,7 521

39

C29H38N4O4 506,6 507

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

40

C30H40N4O4 520,7 521

41

C31H44N4O4 536,7 537

42

C30H42N4O4 522,7 523

43

C31H44N4O4 536,7 537

44

C25H38N4O4 458,6 459

45

C28H40N4O6 528,6 529

46

C28H42N4O4 498,7 499

47

C29H44N4O4 512,7 513

48

C28H42N4O4 498,7 499

49

C22H34N4O4 418,5 419

50

C24H36N4O6 476,6 477

51

C21H32N4O4 404,5 405

52

C25H40N4O4 460,6 461

53

C24H39N5O4 461,6 462

54

C22H34N4O5 434,5 435

55

C28H38N4O4 494,6 495

56

C28H38N4O4 494,6 495

57

C28H38N4O4 494,6 495

58

C30H43N5O5 553,7 554

59

C28H38N4O4 494,6 495

60

C28H38N4O4 494,6 495

61

C27H36N4O4 480,6 481

62

C31H44N4O4 536,7 537

63

C31H44N4O4 536,7 537

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

64

C34H42N4O4 570,7 571

65

C34H42N4O4 570,7 571

66

C29H40N4O4 508,7 509

67

C31H42N4O4 534,7 535

68

C31H45N5O4 551,7 552

69

C31H45N5O4 551,7 552

70

C30H40N4O6 552,7 553

71

C30H40N4O6 552,7 553

72

C26H34N4O4 466,6 467

73

C28H36N4O6 524,6 525

74

C29H41N5O4 523,7 524

75

C32H38N4O4 542,7 543

76

C26H34N4O5 482,6 483

77

C31H36N4O3S 544,7 545

78

C23H34N4O4 430,5 431

79

C29H41N4O4 509,7 510

80

C25H33N4O4 453,6 454

81

C21H33N4O4 405,5 406

82

C23H33N4O3 413,5 414

83

C23H35N4O3 415,5 416

84

C25H33N4O3 437,6 438

85

C26H35N4O3 451,6 452

86

C22H30N5O3S 444,6 445

87

C26H40N4O4 472,6 473

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

88

C32H44N4OS 564,7 565

89

C34H45N5O4 587,8 588

90

C33H46N4O4 562,7 563

91

C29H47N5O4 529,7 530

92

C28H42N4O6 530,7 531

93

C29H40N4O4 508,7 509

94

C29H40N4O4 508,7 509

95

C30H42N4O4 522,7 523

96

C32H44N4O4 548,7 549

97

C32H44N4O4 548,7 549

98

C32H44N4O4 548,7 549

99

C34H49N5O5 607,8 608

100

C29H38N4O4 506,6 507

101

C32H44N4O4 548,7 549

102

C35H42N4O4 582,7 583

103

C32H45N5O4 563,7 564

104

C31H40N4O6 564,7 565

105

C29H38N4O5 522,6 523

106

C27H38N403 466,6 467

107

C30H40N4O3 504,7 505

108

C35H42N4O3S 598,8 599

109

C31H43N5O4 549,7 550

110

C25H39N4O4 459,6 460

111

C30H40N4O4 520,7 521

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

112

C28H37N4O4 493,6 494

113

C32H45N4O4 549,7 550

114

C27H41N4O3 469,6 470

115

C30H41N4O3 505,7 506

116

C30H44N4O6 556,7 557

117

C28H38N4O4 494,6 495

118

C30H42N4O4 522,7 523

119

C28H38N4O5 510,6 511

120

C29H40N4O5 524,7 525

121

C28H36N4O4 492,6 493

122

C35H39N4O4Cl 615,2 615

123

C35H39N4O4Cl 615,2 615

124

C35H39N4O4Cl 615,2 615

125

C35H39N4O4F 598,7 599

126

C36H42N4O4 594,7 595

127

C36H42N4O5 610,7 611

128

C41H44N4O4 656,8 657

129

C41H44N404 656,8 657

130

C39H42N4O4 630,8 631

131

C39H42N4O4 630,8 631

132

C34H39N5O4 581,7 582

133

C34H39N5O4 581,7 582

134

C32H37N5O4S 587,7 588

135

C33H38N4O4S 586,7 587

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

136

C30H38N4O4 518,6 519

137

C31H40N4O4 532,7 533

138

C32H42N4O4 546,7 547

139

C32H42N4O4 546,7 547

140

C31H40N4O5 548,7 549

141

C30H38N4O5 534,6 535

142

C35H40N4O4 580,7 581

143

C31H40N4O4S 564,7 565

144

C32H46N4O4 550,7 551

145

C32H46N4O4 550,7 551

146

C32H46N4O4 550,7 551

147

C33H48N4O4 564,8 565

148

C33H48N4O4 564,8 565

149

C33H48N4O4 564,8 565

150

C33H48N4O4 564,8 565

151

C29H40N4O5 524,7 525

152

C30H42N4O5 538,7 539

153

C32H41N4O4Cl 581,1 581

154

C32H41N4O4F 564,7 565

155

C33H44N4O4 560,7 561

156

C33H44N4O5 576,7 577

157

C38H46N4O4 622,8 623

158

C38H46N4O4 622,8 623

159

C36H44N4O4 596,8 597

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

160

C31H41N5O4 547,7 548

161

C31H41N5O4 547,7 548

162

C31H41N5O4 547,7 548

163

C29H39N5O4S 553,7 554

164

C30H40N4O4S 552,7 553

165

C27H40N4O4 484,6 485

166

C29H44N4O4 512,7 513

167

C29H44N4O4 1,0 2

168

C29H42N4O4 510,7 511

169

C31H44N4O4 536,7 537

170

C29H41N5O4 523,7 524

171

C29H41N5O4 523,7 524

172

C25H40N4O4 460,6 461

173

C26H42N4O4 474,6 475

174

C26H42N4O4 474,6 475

175

C27H44N4O4 488,7 489

176

C27H44N4O4 488,7 489

177

C29H41N5O4 523,7 524

178

C29H40N4O4 508,7 509

179

C30H42N4O3 506,7 507

180

C31H44N4O3 520,7 521

181

C26H40N4O3 456,6 457

182

C26H42N4O3 458,6 459

183

C27H42N4O3 470,6 471

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

184

C27H44N4O3 472,7 473

185

C25H38N4O4 458,6 459

186

C26H40N4O4 472,6 473

187

C30H40N4O3 504,7 505

188

C31H42N4O3 518,7 519

189

C31H44N4O3 520,7 521

190

C31H44N4O3 520,7 521

191

C32H44N4O3 532,7 533

192

C32H46N4O3 534,7 535

193

C30H40N4O3 504,7 505

194

C30H42N4O3 506,7 507

195

C31H42N4O3 518,7 519

196

C31H44N6O4 564,7 565

197

C31H42N4O6 566,7 567

199

C29H36N4O4 504,6 505

200

C31H40N404 532,7 533

201

C30H42N4O4 522,7 523

202

C31H42N4O5 550,7 551

203

C33H44N4O4 560,7 561

204

C34H44N4O5 588,7 589

205

C25H40N4O4 460,6 461

206

C31H46N6O5 582,7 583

207

C31H43N5O4 549,7 550

208

C32H42N404 546,7 547

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

209

C27H44N4O4 488,7 489

210

C34H39N5O4 581,7 582

211

C31H41N5O4 547,7 548

212

C31H44N4O4 536,7 537

213

C30H40N4O4S 552,7 553

214

C30H42N4O3 506,7 507

215

C33H48N4O5 580,8 581

216

C29H38N4O4 506,6 507

218

C33H42N4O4 558,7 559

219

C32H38N6O4 570,7 571

220

C30H40N4O4 520,7 521

221

C30H40N4O4 520,7 521

222

C31H42N4O4 534,7 535

223

C31H42N4O4 534,7 535

224

C31H42N4O5 550,7 551

225

C29H38N4O4 506,6 507

226

C30H40N4O4 520,7 521

227

C30H40N4O4 520,7 521

228

C30H40N4O4 520,7 521

229

C31H42N4O4 534,7 535

230

C31H42N4O4 534,7 535

Notas

1. Las fórmulas y los pesos moleculares se calculan automáticamente a partir de la

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

estructura a través del software ActivityBase (IDBS, Guildford, Surrey, Reino Unido).

2. El M+H obtenido del análisis LC-MS usando métodos estándar.

3. Todos los análisis llevados a cabo sobre material tras su purificación preparatoria por los métodos descritos más abajo.

Tabla 2B: Caracterización analítica de los compuestos representativos de la presente invención

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

298

C30H39N4O4F 538,7 539

299

C29H37N4O4Cl 541,1 541

301

C35H39N4O5Cl 631,2 631

303

C30H38N4O5 534,6 535

305

C27H40N6O4 512,6 513

306

C28H36N5O4F 525,6 526

307

C25H35N4O4F 474,6 475

308

C29H35N4O4Cl 539,1 539

309

C29H37N4O4F 524,6 525

310

C27H36N4O4S 512,7 513

311

C33H46N4O5 578,7 579

312

C29H37N4O4F 524,6 525

313

C29H37N4O4F 524,6 525

314

C29H36N4O4Cl2 575,5 575

315

C29H36N4O4Cl2 575,5 575

316

C29H36N4O4F2 542,6 543

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

317

C29H36N4O4F2 542,6 543

318

C29H33N4o4F5 596,6 597

319

C29H37N4O4Br 585,5 585

320

C29H37N4O4I 632,5 633

321

C30H37N5O4 531,6 532

322

C30H37N4O4F3 574,6 575

323

C31H42N4O6 566,7 567

324

C31H39N5O4 545,7 546

325

C32H41N4O4F 564,7 565

326

C32H41N4O4Br 625,6 625

327

C32H40N4O4F2 582,7 583

328

C33H44N4O5 576,7 577

329

C33H41N5O4 571,7 572

330

C32H40N4O4Cl2 615,6 616

331

C32H40N4O4F2 582,7 583

332

C33H41N4O4F3 614,7 615

333

C30H40N4O4S 552,7 553

334

C30H37N4O4Cl 553,1 553

335

C29H39N4O5F 542,6 543

336

C28H37N4O5F 528,6 529

337

C27H36N5O4F 513,6 514

338

C28H38N5O4F 527,6 528

339

C29H40N5O4F 541,7 542

340

C29H39N4O4FS 558,7 559

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

341

C33H37N4O4SCl 621,2 621

342

C36H38N5O4Cl 640,2 640

343

C36H41N4O5Cl 645,2 645

344

C30H37N4O5Cl 569,1 569

345

C31H39N4O5Cl 583,1 583

346

C31H37N4O4Cl 565,1 565

347

C33H44N4O5 576,7 577

348

C31H42N4O5 550,7 551

349

C30H37N4O4Cl 553,1 553

350

C28H35N4O4Cl 527,1 527

351

C29H35N4O4Cl 539,1 539

352

C29H35N4O4Cl 539,1 539

353

C31H41N4O3F 536,7 537

354

C29H33N4O4F 520,6 521

355

C29H36N4O4F2 542,6 543

356

C30H36N4O4F4 592,6 593

357

C30H40N5O6FS 617,7 618

358

C33H43N4O3Cl 579,2 579

359

C34H47N4O4Cl 611,2 611

360

C28H41N4O4Cl 533,1 533

361

C34H4SN4O3Cl 593,2 593

362

C33H45N4O3Cl 581,2 581

363

C29H45N4O3Cl 533,1 533

364

C29H43N4O3Cl 531,1 531

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

365

C27H41N4O3Cl 505,1 505

366

C28H43N4O3Cl 519,1 519

367

C30H39N4O4F 538,7 539

368

C33H45N4O4Cl 597,2 597

369

C32H43N4O4Cl 583,2 583

370

C28H43N4O4Cl 535,1 535

371

C34H47N4O3Cl 595,2 595

372

C29H36N4O4F2 542,6 543

373

C29H36N4O4FCl 559,1 559

374

C30H40N5O6FS 617,7 618

375

C30H39N4O4F 538,7 539

376

C30H39N4O4F 538,7 539

377

C28H35N4O5F 526,6 527

378

C31H41N4O4F 552,7 553

379

C30H37N4O4F 536,6 537

380

C32H41N4O4Cl 581,1 581

381

C32H39N4O4Cl 579,1 579

382

C32H42N4O4FCl 601,2 601

383

C32H42N4O4FCl 601,2 601

384

C32H42N4O4Cl2 617,6 617

385

C31H42N5O4Cl 584,1 584

386

C33H45N4O4Cl 597,2 597

387

C33H43N4O4Cl 595,2 595

388

C33H43N4O4Cl 595,2 595

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

389

C30H37N4O4F 536,6 537

390

C26H40N5O3Cl 506,1 506

391

C29H35N4O4F3 560,6 561

392

C33H45N4O4Cl 597,2 597

393

C27H41N4O5Cl 537,1 537

394

C30H39N4O4F 538,7 539

395

C31H42N5O4Cl 584,1 584

396

C30H37N4O4Cl 553,1 553

397

C30H37N4O4Cl 553,1 553

398

C25H37N4O4F 476,6 477

399

C33H45N4O4Cl 597,2 597

400

C29H35N4O4F 522,6 523

401

C29H35N4O4F 522,6 523

402

C32H41N4O4Cl 581,1 581

403

C30H40N4O4 520,7 521

405

C30H41N4O4F 540,7 541

406

C30H38N4O4F2 556,6 557

407

C31H43N4O4F 554,7 555

408

C31H42N4O4F2 572,7 573

409

C30H41N4O4F 540,7 541

410

C30H42N4O4 522,7 523

415

C30H39N4O4Cl 555,1 555

417

C29H36N4O4FCl 559,1 559

430

C30H38N4O4FCl 573,1 573

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

431

C31H44N4O4 536,7 537

432

C31H43N4O4Cl 571,2 571

Notes

1. Las fórmulas y los pesos moleculares se calculan automáticamente a partir de la estructura a través del software ActivityBase (IDBS, Guildford, Surrey, Reino Unido).

2. El M+H obtenido del análisis LC-MS usando métodos estándar.

3. Todos los análisis llevados a cabo sobre material tras su purificación preparatoria por los métodos descritos más abajo.

Tabla 2C. Caracterización analítica de los compuestos representativos de la presente invención

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

435

C30H39N4O4F 538,7 539

436

C31H40N4O4 532,7 533

437

C32H39N4O4Cl 579,1 579

438

C33H45N4O4Cl 597,2 597

439

C32H39N4O5Cl 595,1 595

440

C37H47N4O5F 646,8 647

441

C33H42N4O6 590,7 591

442

C26H38N4O5 486,6 487

443

C27H40N4O5 500,6 501

444

C29H40N6O4 536,7 537

445

C30H42N4O5 538,7 539

Compuesto

Fórmula Molecular MW Calc (g/mol) MS [(M+H)+] encontrada

446

C24H35N4O5F 478,6 479

447

C26H39N4O3Cl 491,1 492

448

C29H40N4O4 508,7 509

449

C31H42N5O4Cl 584,1 584

Notes

1. Las fórmulas y los pesos moleculares se calculan automáticamente a partir de la estructura a través del software ActivityBase (IDBS, Guildford, Surrey, Reino Unido).

2. El M+H obtenido del análisis LC-MS usando métodos estándar.

3. Todos los análisis llevados a cabo sobre material tras su purificación preparatoria por los métodos descritos más abajo.

D. Determinación de pureza quiral [0140] Se emplearon métodos generales para la determinación HPLC de la pureza

estereoisomérica según las técnicas conocidas por aquellos doctos en la materia y se 5 optimizaron aún más para los compuestos de la presente invención.

Método quiral A: Grad35A-05 (columna: Chiralcel AS-RH, 0.46 cm x 15 cm):

1. Meseta isocrática de 40 min a 35% ACN, 65% de una solución de 50 mM de CH3COONH4 en H2O.

10 2. Gradiente 5 min a 70% ACN, 30% de una solución de 50 mM de CH3COONH4 en H2O.

3. Meseta isocrática de 10 min a 70% ACN, 30% de una solución de 50 mM de CH3COONH4 en H2O.

4. Gradiente 5 min a 35% ACN, 65% de una solución de 50 mM de CH3COONH4 en 15 H2O.

5.

Meseta isocrática de 10 min a 35% ACN, 65% de una solución de 50 mM de CH3COONH4 en H2O.

6.

Caudal: 0.5 mL/min

7.

Temperatura de columna: temperatura ambiente

20 8. Temperatura de muestra: temperatura ambiente

Método quiral B: Grad40A-05 (columna: Chiralcel OD-RH. 0.46 cm x 15 cm):

1.

Meseta isocrática de 40 min a 40% ACN, 60% de una solución de 50 mM de CH3COONH4 en H2O.

2.

Gradiente 5 min a 70% ACN, 30% de una solución de 50 mM de CH3COONH4 en H2O.

3.

Meseta isocrática de 10 min a 70% ACN, 30% de una solución de 50 mM de CH3COONH4 en H2O.

4.

Gradiente 5 min a 40% ACN, 60% de una solución de 50 mM de CH3COONH4 en H2O.

5.

Meseta isocrática de 10 min a 40% ACN, 60% de una solución de 50 mM de CH3COONH4 en H2O.

6.

Caudal: 0.5 mL/min

7.

Temperatura de la columna: temperatura ambiente

8.

Temperatura de la muestra: temperatura ambiente

Método quiral C: Grad 55A-05 (columna: Chiralcel OD-RH, 0.46 cm x 15 cm):

1.

40 min isocrático 55%/45% de ACN/ 50 mM CH3COONH4 en H2O

2.

5 min gradiente a 70%/30% de ACN/ 50 mM CH3COONH4 en H2

3.

10 min isocrático 70%/30% de ACN/ 50 mM CH3COONH4 en H2O

4.

5 min gradiente a 55%/44% de ACN/ 50 mM CH3COONH4 en H2O

5.

10 min isocrático 55%/45% de ACN/ 50 mM CH3COONH4 en H2O

6.

Caudal: 0.5 mL/min

7.

Temperatura de la columna: temperatura ambiente

8.

Temperatura de la muestra: temperatura ambiente

Método quiral D: Grad Iso100B 05 (columna: Chiralcel OD-RH, 0.46 cm x 15 cm):

1.

40 min isocrático 27%/73% de ACN/ 50 mM CH3COONH4 en H2O

2.

5 min gradiente a 70%/30% de ACN/ 50 mM CH3COONH4 en H2O

3.

10 min isocrático 70%/30% de ACN/ 50 mM CH3COONH4 en H2O

4.

5 min gradiente a 27%/73% de ACN/ 50 mM CH3COONH4 en H2O

5.

10 min isocrático 27%/73% de ACN/ 50 mM CH3COONH4 en H2O

6.

Caudal: 0.5 mL/min

7.

Temperatura de la columna: temperatura ambiente

8.

Temperatura de la muestra: temperatura ambiente

3. Métodos biológicos [0141] Los compuestos de la presente invención fueron evaluados por su habilidad para interactuar en el receptor de ghrelina humana utilizando un ensayo de unión competitiva del radioligando, un ensayo de fluorescencia o un ensayo funcional Aequorin tal y como

se describe más abajo. Tales métodos pueden llevarse a cabo de una forma de alta capacidad para permitir la evaluación simultánea de muchos compuestos. [0142] Se conocen métodos de ensayo específicos para los receptores de GHS

humanos (GHS-R1a), porcinos y de rata (Patente de los Estados Unidos nº 6,242,199, Solicitud Internacional nº WO 97/21730 y 97/22004), así como el receptor de GHS canino (Patente de los Estados Unidos nº 6,645,726), y su uso para la identificación general de agonistas y antagonistas de los mismos.

[0143] A continuación también se describen unos métodos apropiados para determinar la actividad funcional de los compuestos de la presente invención que interactúan en el receptor de ghrelina humana.

A. Ensayo de unión competitiva del radioligando (Receptor de ghrelina) [0144] El ensayo de unión competitiva en el receptor secretagogo de hormona de crecimiento (hGHS-R1a) humano se llevó a cabo de manera análoga a los ensayos descritos en la bibliografía (Bednarek MA et al. “Structure-function studies on the new growth hormone-releasing peptide ghrelin: minimal sequence of ghrelin necessary for activation of growth hormone secretagogue receptor 1a”, J. Med. Chem. 2000, 43, 4370

4376; Palucki, B.L. et al. “Spiro(indoline-3,4'-piperidine) growth hormone secretagogues as ghrelin mimetics”, Bioorg. Med. Chem. Lett. 2002, 11, 1955-1957).

Materiales [0145] Las membranas (GHS-R/HEK 293) se prepararon a partir de células HEK-293 transfectadas de manera estable con el receptor de ghrelina humano (hGHS-R1a). Estas membranas las proporcionó PerkinElmer BioSignal (#RBHGHSM, lot#1887) y fueron utilizadas en una cantidad de 0.71 μg/punto de ensayo.

1.

[125I]-Ghrelina (PerkinElmer, #NEX-388); concentración final: 0,0070-0,0085 nM

2.

Ghrelina (Bachem, #H-4864); concentración final: 1 μM

3.

Placas de cultivo multipantalla -GF/C (Millipore, #MAHFC1H60)

4.

Placa tituladora profunda de polipropileno (Beckman Coulter, #267006)

5.

TopSeal-A (PerkinElmer, #6005185)

6.

Sello inferior (Millipore, #MATAH0P00)

7.

MicroScint-0 (PerkinElmer, #6013611)

8.

Solución reguladora de unión: 25 mM Hepes (pH 7.4), 1 mM CaCl2, 5 mM MgCl2,

2.5 mM EDTA, 0.4% BSA Volúmenes de ensayo [0146] Los experimentos de competencia fueron llevados a cabo en un formato de ensayo de filtración de 300 μl.

1.

220 μL de membranas diluidas en la solución reguladora de unión.

2.

40 μL del compuesto diluido en la solución reguladora de unión.

3.

40 μL de radioligando ([125I]-Ghrelin) diluido en la solución reguladora de unión. Concentraciones de la prueba final (N =1) para los compuestos de la presente invención: 10, 1, 0,5, 0,2, 0,1, 0,05, 0,02, 0,01, 0,005, 0,002, 0,001 μM.

Tratamiento de los compuestos [0147] Los compuestos fueron proporcionados congelados en hielo seco en una concentración de existencias de 10 mM diluido en 100% DMSO y almacenados a -80°C hasta el día de la prueba. El día de la prueba se dejó que los compuestos se descongelaran a temperatura ambiente durante toda la noche y luego se diluyeran en la solución reguladora de unión según las concentraciones de prueba deseadas. Bajo estas condiciones, la concentración DMSO máxima final en el ensayo fue del 0,1%.

Protocolo del ensayo [0148] En placas de pocillo profundo, se combinaron 220 μL de membranas de células diluidas (concentración final: 0,71 μg/well) con 40 μL de cualquier solución reguladora de unión (unión total, N = 5), 1 μM de ghrelina (unión no específica, N = 3) o la concentración apropiada del compuesto de la prueba (N = 2 para cada concentración de la prueba). La reacción se inició con la adición de 40 μL de [125I]-ghrelina (concentración final de 0,0070 – 0,0085 nM) en cada pocillo. Las placas se sellaron con TopSeal-A, se agitaron ligeramente y se incubaron a temperatura ambiente durante 30 min. La reacción fue detenida filtrando las muestras a través de placas de cultivo multipantalla (puestas a remojo previamente en 0,5% polietilenimina) empleando un Tomtec Harvester, se lavó 9 veces con 500 μL de 50 mM Tris-HCl (pH 7.4, 4°C) frío, y luego las placas se secaron al aire en una campana de extracción durante 30 min. Se aplicó un sello inferior a las placas antes de añadir 25 μL de MicroScint-0 a cada pocillo. Luego se sellaron las placas con TopSeal-A y se contó durante 30 seg por pocillo en un contador de centelleo y luminiscencia de microplacas TopCount (PerkinElmer) usando un tiempo

de retardo de 60 seg. Los resultados se expresaron en forma de cuentas por minuto (cpm). [0149] GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, CA) analizó los datos usando

un análisis de regresión no lineal de pendiente. Los valores Ki se calcularon empleando un valor Kd de 0,01 nM para [125I]-ghrelina (determinada previamente durante la caracterización de la membrana). Los valores se calcularon usando la siguiente fórmula:

en la que el vínculo total y el no específico representa las cuentas por minuto obtenidas en ausencia o presencia de 1 μM ghrelina, respectivamente. [0150] La actividad de enlace en el receptor de ghrelina para los compuestos

5 representativos de la presente invención se muestra más abajo en las Tablas 3A a 3D. Las estructuras de los compuestos para las Tablas 3A, 3B y 3D se presentan con los diversos grupos tal y como se define para la estructura general de la fórmula I. Para las tablas 3B y 3D, en todas las entradas, m, n y p son 0; X, Z1 y Z2 es cada una NH. Para la Tabla 3B, R1 es H para todas las entradas. Los amarres (T) se ilustran con la vinculación

10 a X y Z2 tal y como se indica. Los compuestos mismos se muestran para la Tabla 3C. Los compuestos 44, 45, 46, 48, 49, 50, 51, 53, 54, 56, 58, 63, 64,69, 70, 71, 73, 76, 78, 80, 81, 82, 83, 85, 86, 87, 91, 92, 96, 98, 99, 103, 104, 106, 107, 110, 114, 115, 121, 125, 128, 129, 150b, 162b, 163, 165, 166, 167, 172, 181, 182a & b, 183, 196, 202, 204, 205, 206, 207, 224, 228, 442a & b, 443 y 444 no son compuestos de la invención. La

15 Figura 4 muestra las curvas de unión competitiva de los compuestos representativos 1, 2, 3, 4 y 25.

Tabla 3C: Actividad de unión en el receptor de ghrelina humano para los compuestos representativos de la invención

Compuesto

Estructura Ki (nM)

18

B

334

B

349

B

350

C

Compuesto

Estructura Ki (nM)

351

B

352

C

396

B

Compuesto

Estructura Ki (nM)

397

C

Tabla 3E: Actividad de unión en el receptor de ghrelina humano para los compuestos representativos de la invención

Compuesto

Ki

D

C

D

D

Compuesto

Ki

G

C

B

Compuesto

Ki

C

G

B

Compuesto

Ki

C

230 diastereómero

D

La actividad de unión determinada usando método estándar, expresado como sigue: A = 0.1-10 nM; B = 10-100 nM; C = 0.1-1.0 μM; D = 1-10 μM; E > 500 nM (la concentración más alta probada); F > 1 μM (la concentración más alta probada); G > 10 μM (o sin actividad a la concentración más alta probada)

B. Ensayo funcional de aequorina (Receptor de ghrelina) [0151] La actividad funcional de los compuestos de la invención que se unen al receptor GHS-R1a puede determinarse empleando el método descrito a continucación que 5 también se puede usar como pantalla primaria de la actividad del receptor de ghrelina de una forma de alto rendimiento (LePoul, E.; et al. “Adaptation of aequorin functional assay to high throughput screening”, J. Biomol. Screen. 2002, 7, 57-65; Bednarek, M.A.; et al. “Structure-function studies on the new growth hormone-releasing peptide ghrelin:

minimal sequence of ghrelin necessary for activation of growth hormone secretagogue 10 receptor 1a”, J. Med. Chem. 2000, 43, 4370-4376; Palucki, B.L.; et al. “Spiro(indoline3,4'-piperidine) growth hormone secretagogues as ghrelin mimetics”, Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001, 11, 1955-1957).

Materiales [0152] Las membranas se prepararon utilizando líneas celulares AequoScreen™ (EUROSCREEN, Bélgica) que expresan el receptor de ghrelina humano (línea celular ES-410-A; adhesión del receptor #60179). Esta línea celular se construye típicamente mediante la transfección del receptor de ghrelina humano a las células CHO-K1 coexpresando Ga16 y la aequorina mitocondrialmente definida (Ref#ES-WT-A5).

1.

Ghrelina (agonista de referencia; Bachem, #H-4864)

2.

Tampón de ensayo: DMEM (Medio modificado del águila de Dulbecco) que contiene 0,1% BSA (albúmina sérica bovina; pH 7.0).

3.

Coelenterazina (Molecular Probes, Leiden, Holanda). Concentraciones de prueba finales (N = 8) para los compuestos de la invención: 10, 1, 0,3, 0,1, 0,03, 0,01, 0,003, 0,001 μM.

Manejo de los compuestos [0153] Las soluciones matriz de los compuestos (10 mM en DMSO 100%) fueron proporcionadas congeladas en hielo seco y almacenadas a -20°C antes de su uso. A partir de las soluciones matriz se elaboraron las soluciones madre en una concentración de 500 μM por dilución 20 veces en DMSO 26%. A continuación, se prepararon placas de ensayo mediante la dilución apropiada en un medio DMEM que contiene 0,1% BSA. En estas condiciones, la máxima concentración final de DMSO en el ensayo fue < 0,6%.

Preparación de las células [0154] Se recogieron las células AequoScreen™ de placas de cultivo con disolución salina tamponada con fosfato (PBS) exenta de Ca2+ y Mg2+ suplementada con EDTA 5 mM, se aglomeraron durante 2 min a 1000X g, se resuspendieron en DMEM - Ham's F12 con 0,1% BSA a una densidad de 5 x 106 células/mL, y se incubaron durante la noche en presencia de 5 μM de coelenterazina. Tras la carga, las células se diluyeron con tampón de ensayo a una concentración de 5 x 105 células/mL.

Protocolo de ensayo [0155] Para la prueba de agonista, se mezclaron 50 μL de suspensión celular con 50 μL de compuesto de prueba o ghrelina (agonista de referencia) de la concentración apropiada en placas de 96 pocillos (muestras duplicadas). Se analizó la ghrelina (agonista de referencia) a diferentes concentraciones al mismo tiempo que los compuestos de la prueba con el fin de validar el experimento. Se registró la emisión de luz resultante de la activación del receptor usando el sistema 6000 de escrutinio de fármacos funcionales “FDSS 6000” (Hamamatsu Photonics K.K., Japón).

Análisis y expresión de resultados [0156] Los resultados se expresaron como Unidades de Luz Relativas (RLU por sus siglas en inglés). Las curvas de respuesta a la concentración se analizaron usando GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, CA) mediante análisis de regresión no-lineal (respuesta a la dosis sigmoidea) basado en la ecuación E=Emax/(1+EC50/C)n donde E es el valor de RLU medido a una concentración dada de agonista (C), Emax es la respuesta máxima, EC50 es la concentración que produce 50% de estimulación y n es el índice de pendiente. Para la prueba de agonista, los resultados para cada concentración del compuesto de prueba se expresaron como porcentaje de activación

con relación a la señal inducida por ghrelina a una concentración igual a la EC80 (es decir 3,7 nM). Se presentan los valores de EC50, de la pendiente y de %Emax. [0157] Los datos muestran que los compuestos representativos examinados actúan

como agonistas en el receptor de ghrelina y carecen de actividad antagonista en las concentraciones estudiadas. Además, se demostró que estos compuestos poseen una gran selectividad para el receptor de ghrelina contra su homólogo más cercano, el receptor de motilina, con el que posee 52% de homología de secuencia (Feighner, S.D.; Tan, C.P.; McKee, K.K.; Palyha, O.C.; Hreniuk, D.L.; Pong, S.-S.; Austin, C.P.; Figueroa, D.; MacNeil, D.; Cascieri, M.A.; Nargund, R.; Bakshi, R.; Abramovitz, M.; Stocco, R.; Kargman, S.; O'Neill, G.; van der Ploeg, L.H.T.; Evans, J.; Patchett, A.A.; Smith, R.G.; Howard, A.D. “Receptor for motilin identified in the human gastrointestinal system”, Science, 1999, 284, 2184-21880). Los propios péptidos endógenos tienen el 36% de residuos en común y la ghrelina se identificó incluso en un momento como péptido relacionado con la motilina (Tomasetto, C.; Karam, S.M.; Ribieras, S.; Masson, R.; Lefebvre, O.; Staub, A.; Alexander, G.; Chenard, M.P.; Rio, M.C. “Identification and characterization of a novel gastric peptide hormone: the motilin-related peptide”, Gastroenterology, 2000, 119, 395-405). La ghrelina no interactúa de forma apreciable en el receptor de motilina, aunque el GHRP-6 sí que lo hace (Depoortere, I.; Thijs, T.; Thielemans, L.; Robberecht, P.; Peeters, T.L. “Interaction of the growth hormonereleasing peptides ghrelin and growth hormone-releasing peptide-6 with the motilin receptor in the rabbit gastric antrum”, J. Pharmacol. Exp.Ther. 2003, 305, 660-667). Por otro lado, se ha demostrado que la propia motilina posee algunos efectos de liberación de GH (Samson, W.K.; Lumpkin, M.D.; Nilaver, G.; McCann, S.M. “Motilin: a novel growth hormone releasing agent”, Brain Res. Bull. 1984, 12, 57-62).

[0158] En la Tabla 4 se muestra el nivel de actividad y selectividad agonista para los compuestos representativos de la invención. En la Figura 5 se presentan los resultados de la concentración-respuesta para los compuestos ejemplares 1-5.

Tabla 4: Ensayo funcional en el receptor de ghrelina humano y resultados de selectividad

Compuestoa

Kl(nM)* EC50(nμ)** Selectividadb

1

B BB 142/1

2

C BB nd

3

C BB nd

4g

Bc AA 3012/1

5

C BB nd

6

C AA 71/1

7

C AA >100/1

8f

Bd AA 200/1

9g

Cc BB 117/1

10f

B AA 304/1

11r

B BB nd

15

A nd >1700/1

16

A nd >2000/1

17

A AA 2500/1

18

B AA 222/1

19

C nd >1700/1

20

A AA 1044/1

21

A AA 1078/1

23

A AA 30,000/1

24

A nd 3039/1

25

A AA 28,000/1

26

A AA >7700/1

27e

A AA >7100/1

Compuestoa

Kl(nM)* EC50(nμ)** Selectividadb

28

B AA nd

30

A AA 13,000/1

31

A AA 4900/1

34

B nd >1000/1

35

B AA nd

36

B BB nd

37a

B AA >800/1

37b

B BB nd

38

B BB nd

39f

A BB 3400/1

40

A AA >3300/1

42

A nd 4300/1

43

B nd 3700/1

47

C AA nd

97

B BB nd

111

B BB nd

113g

B BB nd

140

C BB nd

141

C AA nd

153

B AA nd

154

B AA nd

156

B AA nd

168

C CC nd

170

B BB nd

Compuestoa

Kl(nM)* EC50(nμ)** Selectividadb

176

B AA 105/1

177

B AA >100/1

178

C BB nd

184a

C BB 28/1

184b

C° BB nd

186

C BB nd

191

C BB nd

192

B BB nd

193

C BB nd

194a

C BB nd

194b

C BB nd

195

B AA nd

197

C CC 100/1

214

C BB nd

226

B CC nd

298

B AA 3100/1

299

A AA nd

306a

B AA 714/1

311

B nd 21/1

314

A AA >5500/1

318

A AA nd

322

A AA nd

334

B AA 346/1

345a

B AA >159/1

Compuestoa

Kl(nM)* EC50(nμ)** Selectividadb

346

B AA nd

351

B AA 450/1

354

B AA nd

358a

B AA nd

363

C nd 35/1

367

B AA nd

368a

A CC nd

372

A AA 2500/1

374

B AA 250/1

382

B BB 74/1

388

A AA 400/1

389a

B BB 450/1

394

A BB 1700/1

399a

A CC 300/1

445

B AA nd

a Todos los compuestos fueron analizados como sales TFA a menos que se indique lo contrario.

bContra el receptor de motilina humana nd = no determinado)

c Media de seis (6) experimentos

d Media de cuatro (4) experimentos

e Media de dos (2) experimentos

f Sal HCl

g Sal formiato

Compuestoa

Kl(nM)* EC50(nμ)** Selectividadb

*La actividad de enlace determinada usando un método estándar y expresada como A = 0,1-10 nM; B = 10-100 nM; C = 100 - 1000 nM

**Actividad funcional determinada usando un método estándar y expresada como AA = 1-100 nM; BB = 100 - 1000 nM; CC > 1000 nM;

nd = no determinada

C. Ensayo de cultivo celular para la liberación de hormona de crecimiento [0159] Se pueden emplear los ensayos de cultivo celular para determinar la liberación de hormona de crecimiento tal y como se describe en Cheng, et al. Endocrinology, 1989, 5 124, 2791-2798. En particular, se obtienen glándulas pituitarias anteriores de ratas Sprague-Dawley macho y se colocan en un medio de cultivo frío. Se seccionan estas pituitarias, por ejemplo en secciones de una octava parte y a continuación se digieren con tripsina. Las células se recogen tras la digestión, se combinan y se transfieren a placas de 24 pocillos (mínimo 200.000 células por pocillo). Después de que se haya 10 formado una monocapa de células, generalmente tras al menos 4 días en cultivo, se lavan estas células con el medio antes de su exposición a las muestras y controles de análisis. Se añadieron al medio diversas concentraciones de los compuestos de análisis y de ghrelina como control positivo. Las células se dejan durante 15 min a 37°C, a continuación se elimina el medio y se congelan las células. La cantidad de liberación de

15 GH se midió utilizando un radioinmunoensayo estándar tal y como es sabido por aquellos doctos en la materia.

D. Análisis farmacocinético de compuestos representativos de la invención [0160] Se puede establecer el comportamiento farmacocinético del compuesto de la 20 invención mediante métodos bien conocidos por aquellos doctos en la materia (Wilkinson, G. R. "Pharmacokinetics: The Dynamics of Drug Absorption, Distribution, and Elimination" en Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10ª Edición, Hardman, J.G.; Limbird, L.E., Eds., McGraw Hill, Columbus, OH, 2001, Capítulo 1). Se empleó el siguiente método para investigar los parámetros farmacocinéticos (vida

25 media de eliminación, aclaramiento plasmático total, etc) para la administración intravenosa, subcutánea y oral de los compuestos de la presente invención.

Recogida de plasma

[0161]

30 Ratas: macho, Sprague-Dawley (~250g) Ratas/Grupo de tratamiento: 6 (2 subgrupos de 3 ratas cada uno, sangre alterna)

Cada muestra de compuesto de análisis fue enviada en solución en una formulación (como con ciclodextrina) apropiada para la dosificación. Aquellos doctos en la materia apreciarán que se pueden realizar modificaciones apropiadas a este protocolo cuando

5 se requieran para analizar adecuadamente las propiedades del compuesto a analizar.

Dosis típica

[0162]

1. Intravenosa (i.v.): 2 mg/kg

10 2. Subcutánea (s.c): 2 mg/kg

3. Oral (p.o.): 8 mg/kg

Tabla 5: Pauta representativa de muestras de sangre intravenosa.

Tiempo (min.) relativo a la administración de dosis

Subgrupo ID

Pre-dosis 1 5 20 60 90 120 180 240 300

Subgrupo A

. . . . .

Subgrupo B

. . . . .

15 Tabla 6: Pauta representativa de muestras de sangre subcutánea y oral.

Tiempo (min.) relativo a la administración de dosis

Subgrupo ID

Pre-dosis 5 15 30 60 90 120 180 270 360

Subgrupo A

. . . . .

Subgrupo B

. . . . .

Recogida de plasma

[0163]

20 1. Mismo protocolo para todos los grupos de dosificación.

2. Para cada grupo, 2 subgrupos (A y B) de 3 ratas/subgrupo

[0164] En los intervalos temporales mencionados anteriormente, se recogieron 0,7 mL de sangre de cada animal. Es de esperar que este volumen de sangre produzca una 25 muestra de al menos 0,3 mL de plasma. Se empleó EDTA como anticoagulante para la

recogida de sangre completa. Las muestras de sangre completa se enfriaron y se

procesaron inmediatamente mediante centrifugación para obtener plasma. [0165] Las muestras de plasma se almacenaron congeladas (-70°C) hasta su análisis. Se llevó a cabo una detección analítica del compuesto parental en las muestras de

5 plasma mediante LC-MS tras un protocolo de preparación apropiado: extracción usando cartuchos de extracción de fase sólida (SPE por sus siglas en inglés) (Oasis MCX, Oasis HLB) o extracción líquido-líquido.

Método HPLC-MS 10 [0166]

Columna: Atlantis dC18 de Waters 2,1 x 30mm

Fases móviles:

A: 95% MeOH, 5% agua, 0,1% TFA

B: 95% agua, 5% MeOH, 0,1% TFA

15 Caudal: 0,5 mL/min Gradiente (lineal):

Tiempo(min)

A B

0

30% 70%

0.5

30% 70%

2.8

100% 0%

3.8

100% 0%

4.0

30% 70%

5.0

30% 70%

[0167] El análito se cuantificó en base a una curva estándar y se validó el método con estándares internos.

Tabla 7. Parámetros farmacocinéticos para los compuestos representativos de la invención

Compuesto

Modo de Administracióna Eliminación (t1/2, min) Aclaramiento (mL/min/kg) Biodisponibilidad (oral)b

25

i.v. 31 67 na

298

i.v. 75 17 na

Compuesto

Modo de Administracióna Eliminación (t1/2, min) Aclaramiento (mL/min/kg) Biodisponibilidad (oral)b

298

s.c. 66 15 na

298

p.o. 312 14 29%

a i.v. = intravenosa (10 puntos temporales sobre 150 min); s.c. = subcutánea (10 puntos temporales sobre 360 min), p.o. = oral (10 puntos temporales sobre 240 min) b na = no aplicable

[0168] Las Figuras 6A-6D proporcionan los resultados de los cursos de tiempo para estos estudios.

E. Vaciado gástrico [0169] Con el fin de examinar los efectos de los compuestos de la invención en un modelo para gastroparesia, se evaluaron los compuestos en busca de posibles efectos sobre el vaciado gástrico en las ratas en ayuno. Por ejemplo, los compuestos 25 y 298 a 10 100 μg/kg causaron una disminución significante (;30%) en el vaciado gástrico en relación con el grupo de control aglutinante. La relativa eficacia (39% de aumento) de los compuestos 25 y 298 a 100 μg/kg i.v. fue similar a los agentes de referencia que funcionan positivamente de manera simultánea GHRP-6 a 20 μg/kg i.v. (40% de aumento) y metoclopramida a 10 mg/kg i.v. (41% de aumento). En consecuencia, los 15 compuestos 25 y 298 a una dosis de 100 μg/kg demostraron actividad gastrocinética en ratas, con una eficiencia similar a GHRP-6 a 20 μg/kg y metoclopramida a 10 mg/kg. Además, el compuesto 25 también demostró vaciado gástrico 30 μg/kg. Esto es considerablemente más potente que otros compuestos que interactúan en este receptor que ha demostrado previamente aumentar la motilidad gastrointestinal, que no fueron

20 capaces de promover el vaciado gástrico a 100 μg/kg (Patente de los Estados Unidos nº 6,548,501).

Sustancias de análisis y patrón de dosificación [0170] El GHRP-6 y las muestras de análisis se disolvieron en un medio de 9%

25 HPBCD/0,9% NaCl. Inmediatamente después de la administración oral de metilcelulosa (2%) que contiene rojo de fenol (0.05%) (2 mL/rata), se administraron las sustancias de análisis o el medio (9% HPBCD/0.9% NaCl) de manera intravenosa (i.v.) a un volumen de dosificación de 5 mL/kg.

Animales [0171] LASCO (A Charles River Licensee Corporation, Taiwán) proporcionó ratas Wistar macho. El espacio asignado para 6 animales era de 45 x 23 x 15 cm. Los animales estaban alojados en jaulas APEC® y se mantenían en un entorno a una temperatura (22°C - 24°C) y con una humedad (60% - 80%) controladas con ciclos de 12 h de luz, 12 h de oscuridad durante al menos una semana en el laboratorio antes de ser usadas. Se disponía libremente de comida para ratas de laboratorio estándar (Lab Diet, Rodent Diet, PMI Nutrition International, Estados Unidos) y agua potable. Todos los aspectos de este trabajo incluyendo el alojamiento, la experimentación y el desechado de animales se llevaron a cabo según lo dispuesto en la Guía para el cuidado y el uso de animales de laboratorio (National Academy Press, Washington, D. C., 1996).

Productos químicos [0172] Glucosa (Sigma, Estados Unidos), Metoclopramida-HCl (Sigma, Estados Unidos), Metilcelulosa (Sigma, Estados Unidos), NaOH (hidróxido de sodio, Wako, Japón), salino carente de pirógenos (Astar, Taiwán), rojo de fenol sal sódica (Sigma, Estados Unidos) y ácido tricloroacético (Merck, Estados Unidos).

Equipación [0173] Tira de 8 pocillos (Costar, Estados Unidos), placa de 96 pocillos (Costar, Estados Unidos), caja de animales (ShinTeh, R. O. C.), separador centrífugo (Kokusan, H-107, Japón), jeringa de vidrio (1 mL, 2 mL, Mitsuba, Japón), aguja hipodérmica (25G x 1", TOP Corporation, Japón), microtubo (Treff, Suiza), pHmetro (Hanna, Estados Unidos), Pipetman (P100, Gilson, Francia), boquillas de pipeta (Costar, Estados Unidos), aguja oral para ratas (Natsume, Japón), Spectra Fluor plus (Austria), tijeras de acero inoxidable (Klappencker, Alemania) y forceps de acero inoxidable (Klappencker, Alemania).

Ensayo [0174] Las sustancias de análisis fueron administradas cada una de manera intravenosa a un grupo de 5 ratas macho Wistar en ayunas toda la noche y que pesaban 200 ± 20 g inmediatamente después de administrarles oralmente metilcelulosa (2%) con rojo fenol (0,05%) a 2 mL/animal. Los animales fueron sacrificados 15 minutos después. Se extrajo inmediatamente el estómago, se homogeneizó en 0,1 N NaOH (5 mL) y se centrifugó. Siguiendo la precipitación de proteínas mediante 20% de ácido tricloroacético (0,5 mL) y la realcalización del sobrenadante con 0,1 N NaOH, se determinó el rojo fenol total remanente en el estómago mediante un método colorimétrico a 560 nm. Se considera significativo un aumento del 30% o más (;30%) en el vaciado gástrico,

detectado como la disminución en la concentración de rojo fenol en el estómago en relación con el grupo de control del aglutinante.

[0175] La Figura 7 y los ejemplos que se muestran más abajo muestran los resultados para dos compuestos representativos de la invención.

F. Vaciado gástrico y tránsito intestinal en un modelo de íleo postoperatorio en

una rata [0176] Este modelo clínicamente relevante para íleo postoperatorio está adaptado del de Kalff (Kalff, J.C.; Schraut, W.H.; Simmons, RL.; Bauer, A.J. “Surgical manipulation of the gut elicits an intestinal muscularis inflammatory response resulting in postsurgical ileus”, Ann. Surg. 1998, 228, 652-663). También se pueden emplear otros modelos conocidos para estudiar el efecto de los compuestos de la invención (Trudel, L.; Bouin, M.; Tomasetto, C.; Eberling, P.; St-Pierre, S.; Bannon, P.; L'Heureux, M.C.; Poitras, P. “Two new peptides to improve post-operative gastric ileus in dog”, Peptides, 2003, 24, 531-534; (b) Trudel, L.; Tomasetto, C.; Rio, M.C.; Bouin, M.; Plourde, V.; Eberling, P.; Poitras, P. “Ghrelin/motilin-related peptide is a potent prokinetic to reverse gastric postoperative ileus in rats”, Am. J. Physiol. 2002, 282, G948-G952).

Animales [0177]

1.

Rata, Sprague-Dawley, macho, ~300 g.

2.

En ayunas toda la noche anterior al estudio.

Inducción de íleo postoperatorio (POI) [0178]

1.

Anestesia de isoflurano en condiciones estériles.

2.

Incisión por la línea media abdominal.

3.

Los intestinos y el intestino ciego se evisceraron y se mantuvieron húmedos con salino.

4.

Se manipularon los intestinos y el intestino ciego a lo largo de toda su extensión con aplicadores de algodón húmedo análogos a la sutura del intestino en el entorno clínico. Se calculó que este proceso durara 10 min.

5.

Se volvieron a colocar con cuidado los intestinos en el abdomen y se cosió la herida abdominal en condiciones estériles.

Dosificación [0179]

1.

Se permitió que la rata se recuperara de la anestesia de isoflurano.

2.

Los compuestos de análisis (o medio) se administraron de manera intravenosa a través de un catéter implantado previamente en la yugular.

3.

Inmediata alimentación forzada intragástrica de metilcelulosa (2%) marcada con radioactivo 99Tc, t=0.

Experimental [0180]

1.

A los t = 15 min, se le practicó la eutanasia al animal con CO2.

2.

Inmediatamente se ligaron el estómago y secciones de 10 cm a lo largo del intestino delgado, se cortaron y se colocaron en tubos para la medición de 99mTc en espectómetro gamma.

3.

Se midieron el vaciado gástrico y el tránsito del intestino delgado calculando la media geométrica.

[0181] Los resultados se describen en la gráfica de la Figura 8 e indican que el Compuesto 298 a 100 μg/kg (i.v. n = 5) mejora significativamente el íleo postoperatorio en comparación con el POI+ ratas tratadas mediante el aglutinante. En los ejemplos incluidos más abajo se presentan más resultados.

G. Respuesta de la hormona de crecimiento a los compuestos de análisis [0182] Los compuestos de la invención pueden ser probados del mismo modo en diferentes modelos de animales por su efecto sobre la liberación de GH. Por ejemplo, ratas (Bowers, C.Y.; Momany, F.; Reynolds, G.A.; Chang, D.; Hong, A.; Chang, K. Endocrinology, 1980, 106, 663-667), perros (Hickey, G.; Jacks, T.; Judith, F.; Taylor, J.; Schoen, W.R.; Krupa, D.; Cunningham, P.; Clark, J.; Smith, R.G. Endocrinology, 1994, 134, 695-701; Jacks, T.; Hickey, G.; Judith, F.; Taylor, J.; Chen, H.; Krupa, D.; Feeney, W.; Schoen, W.R; Ok, D.; Fisher, M.; Wyvratt, M.; Smith, R. J. Endocrinology, 1994, 143, 399-406; Hickey, G.J.; Jacks, T.M.; Schleim, K.D.; Frazier, E.; Chen, H.Y.; Krupa, D.; Feeney, W.; Nargund, R.P.; Patchett, A.A.; Smith, R.G. J. Endocrinol. 1997, 152, 183192), y cerdos (Chang, C.H.; Rickes, E.L.; Marsilio, F.; McGuire, L.; Cosgrove, S.; Taylor, J.; Chen, H.Y.; Feighner, S.; Clark, J.N.; Devita, R.; Schoen, W.R; Wyvratt, M.;

Fisher, M.; Smith, R.G.; Hickey, G. Endocrinology, 1995, 136, 1065-1071; (b) Peschke, B.; Hanse, B.S. Bioorg. Med. Chem. Lett. 1999, 9, 1295-1298) han sido utilizados satisfactoriamente para el estudio in vivo de los efectos del GHS y sería aplicable del mismo modo para la investigación del efecto de los agonistas de la ghrelina sobre los niveles de GH. La medición de los niveles de GH en plasma tras la administración apropiada de los compuestos de la invención se puede llevar a cabo usando radioinmunoensayo a través de métodos estándar conocidos por aquellos doctos en la materia (Deghenghi, R.; et al. Life Sciences 1994, 54, 1321-1328). Se puede estudiar la unión al tejido utilizando autorradiografía de todo el cuerpo tras administrarle a un animal una dosis de una sustancia de análisis que contiene una etiqueta radioactiva (Ahnfelt-Rorme, I.; Nowak, J.; Olsen, U.B. “Do growth hormone-releasing peptides act as ghrelin secretagogues?” Endocrine, 2001, 14, 133-135).

[0183] El siguiente método se emplea para determinar el patrón temporal y la magnitud de la respuesta de la hormona de crecimiento (GH) a los compuestos de análisis, administrados de manera sistémica o central. Los resultados para el compuesto 298 demostrando su falta de efecto sobre la liberación de GH se presentan gráficamente en la Figura 9. El compuesto 25 otorgó unos resultados similares. En los siguientes ejemplos se presentan mayores detalles.

Procedimientos de dosificación y muestreo para estudios in vivo de liberación de

GH [0184] Se compraron ratas Sprague Dawley macho adultas (225-300 g) a Charles River Canada (St. Constant, Canadá) y se alojaron individualmente en un ciclo de 12-h luz, 12-h oscuridad (luces encendidas, hora: 0600-1800) en una habitación con la temperatura (22 ± 1° C) y la humedad controladas. Se disponía libremente de comida de rata Purina (Ralston Purina Co., St. Louis, MO) y agua potable. Para estos estudios, se implantaron cánulas venosas intracerebroventriculares (icv) crónicas e intracardíacas bajo una anestesia por pentobarbital sódico (50 mg/kg, ip) usando conocidas técnicas. La colocación de la cánula icv se verificó tanto por una respuesta positiva a la toma de la inyección de carbacol icv (100 ng/10 μl) el día después de la cirugía como al colorante azul de metileno en el momento del sacrificio. Después de la cirugía, se colocaron las ratas en cámaras aisladas con comida y agua hasta que el peso corporal volviera a niveles anteriores a la operación (normalmente a los 5-7 d). Durante este tiempo, se trató con las ratas a diario para minimizar cualquier estrés asociado con el tratamiento el día del experimento. El día de la prueba se retiró la comida 1,5 h antes de empezar el muestreo y se devolvió al final. A las ratas que se movían libremente se les inyectó de forma intravenosa una muestra de prueba a varios niveles (3, 30, 300, 1000 μg/kg) o salino normal en dos momentos diferentes durante un periodo de muestreo de 6 horas. Se escogieron las horas 1100 y 1300 porque reflejan períodos punta y valle típicos de secreción de GH, tal y como se ha documentado previamente. El péptido de ghrelina humana (5 μg, Phoenix Pharmaceuticals, Inc., Belmont, CA) se usó como control positivo en los experimentos y se diluyó en suero fisiológico antes de su uso. Con el fin de evaluar las acciones centrales de los compuestos de prueba sobre la liberación de GH pulsátil, se administró icv una dosis 10 veces menor de la muestra de prueba en salino normal en los mismos puntos temporales, 1100 y 1300. Se extrajeron muestras de sangre (0,35 mL) cada 15 min a lo largo del período de muestreo de 6 horas (hora: 1000-1600) de todos los animales. Con el fin de documentar la rapidez de la respuesta de GH al compuesto de prueba, se obtuvo una muestra de sangre adicional 5 min después de cada inyección. Todas las muestras de sangre se centrifugaron inmediatamente, y se separó y guardó el plasma a -20° C para el posterior ensayo de GH. Para evitar perturbaciones hemodinámicas, se resuspendieron los hematíes en suero fisiológico y se devolvieron al animal tras la extracción de la siguiente muestra de sangre. Todos los estudios con animales se llevaron a cabo según los procedimientos aprobados por un comité de supervisión del bienestar animal.

Método de ensayo de GH [0185] Se midieron por duplicado las concentraciones de GH en plasma mediante el radioinmunoanálisis (RIA) de doble anticuerpo usando materiales suministrados por el Programa de Distribución de Hormonas NIDDK (Bethesda, MD). Los valores de GH en plasma medios para 5-6 ratas por grupo se presentan en términos de la preparación de referencia de la GH de la rata. La curva estándar era lineal dentro del ámbito de interés. La menor concentración de GH en plasma detectable en las condiciones usadas era aproximadamente de 1 ng/mL. Todas las muestras con valores por encima del ámbito de interés se volvieron a ensayar en disoluciones que oscila entre 1:2 y 1:10. Los coeficientes de variación intra e interensayo fueron aceptables para muestras duplicadas de plasma acumulado que contenían una concentración de Gh conocida.

4. Composiciones farmacéuticas [0186] Los compuestos macrocíclicos de la presente invención o las sales farmacológicamente aceptables de los mismos según la invención pueden ser formulados en composiciones farmacéuticas con varias formas de dosificación. Para preparar las composiciones farmacéuticas de la invención, uno o más compuestos, incluyendo isómeros ópticos, enantiómeros, diastereómeros, racematos o mezclas estereoquímicas de los mismos, o sales farmacéuticamente aceptables como

ingrediente activo se mezclan a fondo con vehículos y aditivos apropiados según las técnicas conocidas por aquellos doctos en la materia de formulaciones farmacéuticas. [0187] Una sal farmacéuticamente aceptable se refiere a una forma salina de los

compuestos de la presente invención con el fin de permitir su uso o formulación como productos farmacéuticos y que retienen la eficacia biológica de los ácidos y bases libres del compuesto especificado y que no es biológicamente o de otra manera indeseable. Ejemplos de tales sales se describen en Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, Wermuth, C.G. and Stahl, P.H. (eds.), Wiley-Verlag Helvetica Acta, Zürich, 2002 [ISBN 3-906390-26-8]. Ejemplos de dichas sales incluyen sales de metal alcalino y sales de adición de ácidos y bases libres. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, sin limitación, sulfatos, pirosulfatos, bisulfatos, sulfitos, bisulfitos, fosfatos, monohidrogenfosfatos, dihidrogenfosfatos, metafosfatos, pirofosfatos, cloruros, bromuros, yoduros, acetatos, propionatos, decanoatos, caprilatos, acrilatos, formatos, isobutiratos, caproatos, heptanoatos, propiolatos, oxalatos, malonatos, succinatos, suberatos, sebacatos, fumaratos, maleatos, butino-1,4-dioatos, hexino-1,6-dioatos, benzoatos, clorobenzoatos, metilbenzoatos, dinitrobenzoatos, hidroxibenzoatos, metoxibenzoatos, phtalatos, xilenesulfonatos, fenilacetatos, fenilpropionatos, fenilbutiratos, citratos, lactatos, y-hidroxibutiratos, glicollatos, tartratos, metanosulfonatos, etano sulfonatos, propanesulfonatos, toluenesulfonatos, nafthaleno-1sulfonatos, nafthaleno-2-sulfonatos y mandelatos.

[0188] Si un compuesto de la invención es una base, se podría preparar una sal deseada mediante cualquier método adecuado conocido por aquellos doctos en la materia, incluyendo el tratamiento de la base libre con un ácido inorgánico como por ejemplo, pero sin limitación, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, hidroiódico, ácido carbónico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares, o con un ácido orgánico, incluyendo, pero sin limitación, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido maleico, ácido succínico, ácido mandélico, ácido fumárico, ácido malónico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido esteárico, ácido ascórbico, ácido glicólico, ácido salicílico, ácido piranosidil, como el ácido glucurónico o ácido galacturónico, ácido alfa-hidroxi, como el ácido cítrico o ácido tartárico, aminoácido, como el ácido aspártico o el ácido glutámico, ácido aromático, como el ácido benzoico o ácido cinámico, ácido sulfónico, como el ácido p-toluenesulfónico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido 2hidroxietanosulfónico, ácido benzenosulfónico, ácido ciclohexilaminosulfónico o similares.

[0189] Si un compuesto de la invención es un ácido, se puede preparar una sal deseada mediante cualquier método adecuado conocido por aquellos doctos en la materia, incluyendo el tratamiento del ácido libre con una base inorgánica u orgánica, como una amina (primaria, secundaria o terciaria); un metal alcalino o hidroxido de metal alcalinotérreo o similares. Algunos ejemplos ilustrativos de sales adecuadas incluyen sales orgánicas derivadas de aminoácidos como la glicina, la lisina y la arginina; amoníaco; aminas primarias, secundarias o terciarias como la etilenodiamina, N,N'dibenciletilenodiamina, dietanolamina, colina y procaína, y aminas cíclicas, como la piperidina, la morfolina y la piperazina; así como sales inorgánicas derivadas de sodio, calcio, potasio, magnesio, manganeso, hierro, cobre, cinc, aluminio y litio.

[0190] Los vehículos y aditivos usados para dichas composiciones farmacéuticas pueden presentar una variedad de formas dependiendo del modo de administración anticipado. Así, algunas composiciones para la administración oral pueden ser, por ejemplo, preparaciones sólidas como pastillas, pastillas recubiertas de azúcar, cápsulas duras, cápsulas blandas, gránulos, polvos y similares, con vehículos y aditivos adecuados como almidones, azúcares, aglutinantes, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, agentes desintegradores y similares. Debido a su facilidad de uso y una mayor adhesión del paciente, las pastillas y las cápsulas representan la forma de dosificación oral con más ventajas para muchas síndromes médicos.

[0191] De manera similar, las composiciones para preparaciones líquidas incluyen soluciones, emulsiones, dispersiones, suspensiones, jarabes, elixires y otras por el estilo con vehículos y aditivos adecuados como el agua, alcoholes, aceites, glicoles, conservantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes, agentes de suspensión y otros por el estilo. Las preparaciones típicas para la administración parenteral comprenden el ingrediente activo con un vehículo como agua esterilizada o un aceite parenteralmente aceptable incluyendo glicol polietileno, pirrolidina de polivinilo, lecitina, aceite de maní o aceite de sésamo, también se pueden incluir otros aditivos para ayudar a la solubilidad o a la conservación. En el caso de una solución, puede ser liofilizado en polvo y luego reconstituirlo inmediatamente antes de su uso. Para las dispersiones y las suspensiones, se incluyen entre los vehículos y aditivos adecuados gomas acuosas, celulosas, silicatos o aceites.

[0192] Las composiciones farmacéuticas según las formas de realización de la presente invención incluyen aquellas adecuadas para su administración oral, rectal, tópica, por inhalación (p. ej. a través de un aerosol), bucal (p. ej. sublingual), vaginal, tópica (es decir, tanto superficies de piel como mucosas, incluyendo superficies de las vías aéreas), transdérmica y parenteral (p. ej. subcutánea, intramuscular, intradérmica, intraarticular, intrapleural, intraperitoneal, intratecal, intracerebral, intracraneal, intraarterial o intravenosa), aunque la vía más adecuada en cualquier caso dependerá de la naturaleza y gravedad de la enfermedad en tratamiento y de la naturaleza del agente activo concreto que se está empleando.

[0193] Las composiciones para inyección incluirán el ingrediente activo junto con vehículos adecuados incluyendo agua-alcohol-glicol de propileno, agua isotónica, agua esterilizada para inyección (USP), agua con alcohol emulPhor™, cremophor-EL™ u otros vehículos adecuados conocidos por aquellos doctos en la materia. Estos vehículos se pueden utilizar solos o en combinación con otros agentes de solubilización convencionales como el etanol, el glicol de propileno u otros agentes conocidos por aquellos doctos en la materia.

[0194] Cuando haya que aplicar los compuestos macrocíclicos de la presente invención en forma de soluciones o inyecciones, se pueden emplear los compuestos disolviendo o suspendiéndolos en cualquier diluyente convencional. Los diluyentes pueden incluir, por ejemplo, un salino fisiológico, una solución de Ringer, una solución de glucosa acuosa, una solución de dextrosa acuosa, un alcohol, un éster de ácido graso, glicerol, un glicol, un aceite derivado de una planta o fuentes animales, una parafina y otros por el estilo.

Estas preparaciones se pueden preparar según cualquier método convencional

conocido por aquellos doctos en la materia. [0195] Las composiciones para su administración nasal se pueden formular como aerosoles, gotas, polvos y geles. Las formulaciones de aerosol comprenden típicamente una solución o fina suspensión del ingrediente activo en un solvente acuoso o no acuoso fisiológicamente aceptable. Dichas formulaciones se presentan típicamente en cantidades únicas o multidosis de forma estéril en un recipiente sellado. El recipiente sellado puede ser un cartucho o recambio para su uso con un mecanismo de pulverización. Como alternativa, el recipiente sellado puede ser un dispositivo dispensador unitario como un inhalador nasal de un único uso, un pulverizador con bomba o un dispensador de aerosol provisto de válvula dosificadora dispuesta para repartir una cantidad terapéuticamente efectiva, y cuya eliminación está prevista una vez se ha usado por completo su contenido. Cuando la forma de dosificación comprende un dispensador de aerosol, contendrá un propulsor como por ejemplo gas comprimido, aire

o un propulsor orgánico que incluya un fluoroclorohidrocarburo o fluorohidrocarburo. [0196] Las composiciones adecuadas para su administración bucal o sublingual incluyen las grageas, las pastillas para chupar y las pastillas, en las que el ingrediente activo se

formula con un vehículo como el azúcar y la acacia, el tragacanto o la gelatina y la glicerina. [0197] Las composiciones para su administración rectal incluyen los supositorios que

contienen una base de supositorio convencional como manteca de cacao.

[0198] Las composiciones adecuadas para su administración transdérmica incluyen pomadas, geles y parches. [0199] Otras composiciones conocidas por aquellos doctos en la materia también

pueden aplicarse para su administración percutánea o subcutánea, como por ejemplo el

yeso. [0200] Además, al preparar tales composiciones farmacéuticas que comprenden el ingrediente o ingredientes activos en mezcla con los componentes necesarios para la formulación de las composiciones, se pueden incorporar otrs aditivos convencionales farmacológicamente aceptables, por ejemplo, excipientes, estabilizadores, antisépticos, agentes humectantes, agentes emulsionantes, lubricantes, agentes edulcorantes, agentes colorantes, agentes aromatizantes, agentes isotonizantes, agentes amortiguadores, antioxidantes y otros por el estilo. Como aditivos, se podrían mencionar, por ejemplo, el almidón, la sacarosa, la fructosa, la dextrosa, la lactosa, la glucosa, el manitol, el sorbitol, el carbonato de calcio precipitado, la celulosa cristalina, la carboximetilcelulosa, la dextrina, la gelatina, la acacia, tetraacetiletilendiamina (TAED), el estearato de magnesio, el talco, la hidroxipropilmetilcelulosa, el metabisulfito de sodio y otros por el estilo.

[0201] Según algunas formas de realización, se provee la composición en una forma posológica en dosis unitaria como la pastilla o la cápsula.

[0202] Según otras formas de realización, la presente invención provee un equipo que incluye uno o más envases que comprenden unidades de dosis farmacéuticas con una cantidad efectiva de uno o más compuestos de la presente invención.

[0203] La presente invención provee además profármacos que comprenden los compuestos aquí descritos. El término “profármcao” pretende referirse a un compuesto que se convierte en condiciones fisiológicas o mediante solvólisis o metabólicamente en un compuesto específico que es farmacéuticamente activo. El “profármaco” puede ser un compuesto de la presente invención que ha sido derivatizado químicamente de forma que: (i) retiene parte, toda o nada de la bioactividad de su compuesto parental farmacológico, y (ii) se metaboliza en un sujeto para producir el compuesto parental farmacológico. El profármaco de la presente invención también puede ser un “profármaco parcial” en tanto que el compuesto ha sido derivatizado químicamente de forma que: (i) retiene parte, toda o nada de la bioactividad de su compuesto parental farmacológico, y (ii) se metaboliza en un sujeto para producir un derivado biológicamente activo del compuesto. Se pueden emplear conocidas técnicas para derivatizar compuestos con el fin de proporcionar profármacos. Tales métodos pueden utilizar la formación de un ensamblaje hidrolizable con el compuesto.

[0204] Además, la presente invención provee que los compuestos de la misma puedan ser administrados en combinación con un agente terapéutico usado para prevenir y/o tratar trastornos metabólicos y/o endocrinos, trastornos gastrointestinales, trastornos cardiovasculares, obesidad y trastornos asociados a la misma, trastornos del sistema nervioso central, trastornos genéticos, trastornos hiperproliferativos y trastornos inflamatorios. Algunos agentes ejemplares incluyen los analgésicos (incluyendo analgésicos opioides), anestésicos, antimicóticos, antibióticos, antiinflamatorios (incluyendo agentes antiinflamatorios no esteroideos, antielmínticos, antieméticos, antihistamínicos, antihipertensivos, antipsicóticos, antiartríticos, antitusivos, antivirales, fármacos cardioactivos, catárticos, agentes quimioterapéuticos (como los agentes interactivos sobre el ADN, antimetabolitos, agentes interactivos sobre la tubulina, agentes hormonales y agentes como la asparaginasa o la hidroxiurea), corticoides (esteroides), antidepresivos, depresores, diuréticos, hipnóticos, minerales, suplementos nutricionales, parasimpaticomiméticos, hormonas (como la hormona liberadora de corticotropina, adrenocorticotropina, hormona liberadora de hormona de crecimiento, hormona de crecimiento, hormona liberadora de tirotropina y hormona estimulante del tiroides), sedantes, sulfonamidas, estimulantes, simpaticomiméticos, tranquilizantes, vasoconstrictores, vasodilatadores, vitaminas y derivados de xantina.

[0205] Los sujetos aptos para su tratamiento según la presente invención incluyen, pero sin limitación, sujetos aviarios y mamíferos, siendo preferiblemente mamíferos. Los mamíferos de la presente invención incluyen, pero sin limitación, caninos, felinos, bovinos, caprinos, equinos, ovinos, porcinos, roedores (p. ej. ratas y ratones), lagomorfos, primates, humanos, y otros por el estilo, y mamíferos en el útero. Cualquier sujeto mamífero que necesite ser tratado según la presente invención es apropiado. Se prefieren los sujetos humanos. Los sujetos humanos de ambos géneros y en cualquier etapa de desarrollo (es decir, neonatal, infancia, juventud, adolescencia, adultez) pueden ser tratados según la presente invención.

[0206] Algunas aves ilustrativas según la presente invención incluyen pollos, patos, pavos, gansos, codornices, faisanes, rátidas (p. ej. avestruz) y pájaros domesticados (p. ej. loros y canarios), y aves in-ovo.

[0207] La presente invención se ocupa principalmente del tratamiento de sujetos humanos, pero la invención también puede llevarse a cabo en sujetos animales, en particular sujetos mamíferos como los ratones, las ratas, los perros, los gatos, el ganado y los caballos con fines veterinarios, y con fines de selección de medicamentos y desarrollo de fármacos.

[0208] En el uso terapéutico para el tratamiento de enfermedades en mamíferos (es decir, humanos o animales) para los cuales es efectivo un modulador como un agonista del receptor de ghrelina, se podrían administrar los compuestos de la presente invención

o una composición farmacéutica apropiada de la misma en una cantidad efectiva. Puesto que la actividad de los compuestos y el grado del efecto terapéutico varía, la dosis real administrada estará determinada por factores reconocidos de manera general como la edad, enfermedad del paciente, vía de reparto y peso corporal del sujeto. La dosis puede oscilar entre 0,1 a alrededor de 100 mg/kg, administrada oralmente 1-4 veces al día. Además, los compuestos se pueden administrar mediante inyección a Aproximadamente 0,01 - 20 mg/kg por dosis, con una administración de 1-4 veces al día. El tratamiento podría continuar durante semanas, meses o más tiempo. La determinación de las dosis óptimas para una situación concreta está dentro de las capacidades de aquellos doctos en la materia.

5. Métodos de uso [0209] Los compuestos de la fórmula I de la presente invención se pueden usar para la prevención y el tratamiento de una gama de enfermedades incluyendo, pero sin limitación, trastornos metabólicos y/o endocrinos, trastornos gastrointestinales, trastornos cardiovasculares, trastornos del sistema nervioso central, trastornos genéticos, trastornos hiperproliferativos, trastornos inflamatorios y combinaciones de los mismos en los que el trastorno puede ser el resultado de múltiples enfermedades subyacentes. En algunas formas de realización concretas, la enfermedad o trastorno es el síndrome del colon irritable (IBS por sus siglas en inglés), dispepsia no ulcerosa, enfermedad de Crohn, trastornos de reflujo gastroesofágico, estreñimiento, colitis ulcerativa, pancreatitis, estenosis pilórica hipertrófica infantil, síndrome carcinoide, síndrome de mala absorción, colitis atrófica, gastritis, estasis gástrica, síndrome de

dumping gastrointestinal, síndrome de postgastroenterectomía o enfermedad celíaca. En otras formas de realización, la enfermedad o trastorno es una insuficiencia cardíaca congestiva, cardiopatía isquémica o cardiopatía crónica. Según otras formas de realización, la enfermedad o trastorno es osteoporosis y/o fragilidad, insuficiencia cardíaca congestiva, aceleración de la reparación de una fractura ósea, atenuación de la respuesta catabólica a las proteínas, caquexia, pérdida de proteínas, curación lenta o riesgo de curación lenta de heridas, recuperación lenta o riesgo de recuperación lenta de quemaduras, recuperación lenta o riesgo de recuperación lenta tras cirugía, deterioro

o riesgo de deterioro de la fuerza muscular, movilidad restringida o riesgo de movilidad restringida, alteración o riesgo de alteración del grosor de la piel, alteración o riesgo de alteración de la homeostasis metabólica o alteración o riesgo de alteración de la homeostasis renal. En otras formas de realización, la enfermedad o trastorno supone la facilitación del desarrollo neonatal, la estimulación de liberación de hormona de crecimiento en humanos, el mantenimiento de la fuerza y función muscular en los humanos, la inversión o prevención de la fragilidad en los humanos, la prevención de los efectos secundarios catabólicos de los glucocorticoides, el tratamiento de la osteoporosis, la estimulación y el incremento de la masa y la fuerza muscular, la estimulación del sistema inmune, la aceleración de la curación de las heridas, aceleración de la reparación de fracturas óseas, el tratamiento de fallo o insuficiencia renal resultante en un retraso del crecimiento, el tratamiento de la estatura corta, el tratamiento del retraso del crecimiento, la aceleración en la recuperación y la reducción de hospitalización de pacientes quemados, el tratamiento de retraso del crecimiento intrauterino, el tratamiento de displasia esquelética, el tratamiento del hipercortisolismo, el tratamiento del síndrome de Cushing, la inducción de liberación de hormona de crecimiento pulsátil, el reemplazo de la hormona de crecimiento en pacientes estresados, el tratamiento de osteocondrodisplasias, el tratamiento del síndrome de Noonan, el tratamiento de la esquizofrenia, el tratamiento de la depresión, el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, el tratamiento de la emesis, el tratamiento de la pérdida de memoria, el tratamiento de trastornos reproductivos, el tratamiento de la curación tardía de las heridas, el tratamiento de la privación psicosocial, el tratamiento de la dependencia del respirador; la atenuación de la respuesta catabólica a las proteínas, la reducción de la caquexia y la pérdida de proteínas, el tratamiento adyuvante para la inducción de la ovulación, la estimulación del desarrollo tímico, la prevención de la disminución de la función tímica, el tratamiento de pacientes inmunodeprimidos, la mejoría en la movilidad muscular, el mantenimiento del grosor de la piel, la homeostasis metabólica, la homeostasis renal, la estimulación de osteoblastos, la estimulación de la remodelación ósea, la estimulación del crecimiento del cartílago, la estimulación del sistema inmune en animales de compañía, el tratamiento de trastornos de envejecimiento en los animales de compañía, la estimulación del crecimiento en el ganado y/o la estimulación del crecimiento de lana en las ovejas.

[0210] Otras formas de realización de la invención están relacionadas con métodos para el tratamiento del íleo postoperatorio, caquexia (síndrome de emaciación) como la causada por un cáncer, el SIDA, una enfermedad cardíaca y una enfermedad renal, gastroparesis como la que resulta de la diabetes de tipo 1 o 2, otros trastornos gastrointestinales, deficiencia de la hormona de crecimiento, pérdida ósea y otros trastornos relacionados con la edad en un paciente humano o animal que sufre de los mismos, cuyo método comprende la administración a dicho paciente de una cantidad efectiva de al menos un miembro seleccionado de los compuestos aquí divulgados y que tienen la habilidad de modular el receptor de ghrelina. Otras enfermedades y trastornos tratados por los compuestos aquí descritos incluyen el síndrome del intestino corto, el síndrome de evacuación gastrointestinal rápida, síndrome de postgastroenterectomía, enfermedad celíaca y trastornos hiperproliferativos como los tumores, cánceres y trastornos neoplásicos, así como trastornos hiperprolifetativos premalignos y no neoplásicos o no malignos. En concreto, los tumores, cánceres y tejidos neoplásicos que pueden tratarse mediante la presente invención incluyen, pero sin limitación, trastornos malignos como el cáncer de mama, osteosarcomas, angiosarcomas, fibrosarcomas y otros sarcomas, leucemias, linfomas, tumores de seno, cáncer de ovarios, de uretra, de próstata y otros cánceres genitourinarios, de colon, esófago y de estómago y otros cánceres gastrointestinales, cáncer de pulmón, mielomas, cáncer pancreático, cáncer de hígado, cáncer de riñón, cáncer endocrino, cáncer de piel o tumores cerebrales o del sistema nervioso central o periférico, malignos

o benignos, incluyendo los gliomas y los neuroblastomas. [0211] Según algunas formas de realización concretas, los compuestos macrocíclicos de la presente invención se pueden usar para tratar el íleo postoperatorio. Según otras formas de realización, los compuestos de la presente invención se pueden usar para tratar la gastroparesia. Lo que es aún más, según otras formas de realización, los compuestos de la presente invención se pueden usar para tratar la gastroparesia diabética. Según otra forma de realización, los compuestos de la presente invención se pueden usar para tratar la disfunción intestinal inducida por opiáceos. Según otras

formas de realización, los compuestos de la presente invención se pueden usar para tratar la pseudoobstrucción intestinal crónica. [0212] Tal y como se emplea aquí, “tratamiento” no significa necesariamente la cura o la

completa eliminación del trastorno o síntomas asociados con el mismo. [0213] Los compuestos de la presente invención se pueden emplear además para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una gama de enfermedades que incluyen, pero sin limitación, trastornos metabólicos y/o endocrinos, trastornos

gastrointestinales, trastornos cardiovasculares, trastornos genéticos, trastornos hiperproliferativos y trastornos inflamatorios. [0214] A continuación se describirán otras formas de realización en relación con los

siguientes ejemplos. Debe tenerse en consideración que estos ejemplos tienen el propósito de ilustrar formas de realización de la presente invención, y no limitan el alcance de la invención.

Ejemplo 1 Síntesis de amarres

A. Procedimiento estándar para la síntesis del amarre T9

[0216] Fase T9-1: A una solución de 2-yodofenol (T9-0, 200 g, 0,91 mol, 1.0 eq) en DMF (DriSolv®, 560 mL) se añade 60% de híbrido de sodio en aceite mineral (3,64 g, 0,091 mol, 0.1 eq) por partes (se ve evolucionar el hidrógeno). Se calienta la reacción durante 1h a 100ºC en nitrógeno, posteriormente se añade carbonato de etileno y se calienta la

10 mezcla de reacción toda la noche a 100ºC. Se monitoriza la reacción mediante cromatografía de capa fina (TLC por sus siglas en inglés) (condiciones: 25/75 EtOAc/hex; Rf: 0,15, detección: UV, CMA). Se deja enfriar la mezcla de reacción, luego se evapora el solvente a presión reducida. El aceite residual se diluye en Et2O (1,5 L), luego se lava secuencialmente con 1 N hidroxido de sodio (3x) y salmuera (2x), se seca

15 con MgSO4, se filtra y luego se evapora el filtrado a presión reducida. El producto bruto se destila al vacío (200 μm Hg) a 110-115°C para proporcionar T9-1. [0217] Fase T9-2: Se desgasificó una solución de T9-1 (45,1 g, 0,171 mol, 1.0 eq) y Ddz-propargilamina (sintetizada mediante procedimientos de protección estándar, 59,3 g, 0,214 mol, 1.25 eq) en acetonitrilo (DriSolv®, 257 mL) pasando argón a través de la

20 solución durante 10-15 min. A esto se añadió Et3N (85,5 mL, agitado toda la noche con CaH2, luego destilado) y se purgó de nuevo la mezcla borboteando argón, esta vez durante 5 min. Se añade yoduro de cobre (I) cristalizado (1,14 g, 0,006 mol, 0.035 eq) y trans-dicloro-bis(trifenilfosfina) paladio (II) (Strem Chemicals, 3,6 g, 0,0051 mol, 0.03 eq) y se agita la mezcla de reacción durante 4 h en argón a temperatura ambiente. Tras 5

25 10 min, la mezcla de reacción se volvió negra. Se monitorizó la reacción mediante TLC (condiciones: 55/45 EtOAc/hex). Una vez completada, se eliminó el solvente a presión reducida a sequedad y luego se diluyó el aceite residual con 1 L de un DCM al 15% DCM en una solución de Et2O. La fase orgánica se lava con tampón de citrato pH 4-5 (3x), bicarbonato sódico acuoso saturado (2x), y salmuera (1x), luego se seca con MgSO4, se filtra y se evapora el filtrado a presión reducida. Entonces el producto bruto obtenido se purifica mediante relleno en seco empezando con 30% EtOAc/Hex (4-8 L) incrementando después un 5% EtOAc hasta el 55% de EtOAc/Hex para proporcionar T9-2 en forma de jarabe marrón (rendimiento: 65,8 g, 93,2%).

[0218] Fase T9-3: A una solución de Ddz-amino-alcohol T9-2 (65,8 g, 0,159 mol, 1.0 eq) en etanol 95% bajo nitrógeno se añadió óxido de platino (IV) (3,6 g, 0,016 mol, 0.1 eq) y posteriormente el gas de hidrógeno burbujeó en la solución durante 2 h. La mezcla se agitó durante toda la noche, manteniendo una atmósfera de hidrógeno usando un globo. Se monitorizó la reacción mediante resonancia magnética nuclear RMN 1H hasta su compleción. Una vez completa la reacción, se burbujeó nitrógeno durante 10 min para eliminar el exceso de hidrógeno. El solvente se evapora a presión reducida, luego se diluye con EtOAc, se filtra a través de una almohadilla de gel de sílice y se lava el sílice con EtOAc hasta que no se eluye más material tal y como verifica el TLC (55/45 EtOAc/hex). Los filtrados combinados se concentraron a presión reducida. El residuo se diluye en DCM (500 mL) y se añadieron 4 eq de resina de intercambio y se removió la suspensión durante toda la noche. Para esta última fase se utilizó cualquiera de estas tres resinas: se prefiere la resina MP-TMT (Argonaut Technologies, Foster City, CA, 0,73 mmol/g) pero otras, por ejemplo la PS-TRIS (4.1 mmol/g) y la Si-Triamine (Silicycle, Quebec City, QC, 1,21mmol/g) también se pueden emplear de manera efectiva. La resina se filtró y se lavó con DCM, se evaporó el solvente a presión reducida, luego se secó en vacío (bomba de aceite) para proporcionar el producto. El rendimiento de Ddz-T9 desde T9-0 en una escala de 65 g fue de 60,9 g (91%)

1H NMR (CDCl3): 0 7,19-7,01, (m, 2H), 6,92-9,83 (m, 2H), 6,53 (bs, 2H), 6,34 (t, 1H), 5,17 (bt, 1H), 4,08 (m, 2H), 3,98 (m, 2H), 3,79 (s, 6H), 3,01 (bq, 2H), 2,66 (t, 3H), 1,26 (bs, 8H);

13C NMR (CDCl3): 0 160,9, 156,8, 155,6, 149,6, 130,4, 127,5, 121,2, 111,7, 103,2, 98,4, 80,0, 69,7, 61,6, 55,5, 40,3, 30,5, 29,3, 27,4 ppm.

También se puede sintetizar el amarre T9 a partir de otra molécula de anclaje mediante reducción como en la fase T9-3 o con otros catalistas de hidrogenación apropiados conocidos por aquellos doctos en la materia.

B. Procedimiento estándar para la síntesis del amarre T33a y T33b [0219]

[0220] La construcción del (R)-isómero de este amarre (T33a) fue llevada a cabo a partir de 2-yodofenol (33-0) y lactato de (S)-metil (33-A). La Reacción de Mitsunobu de 33-0 y 33-A continuó con la inversión de la configuración en un rendimiento excelente para proporcionar 33-1. La reducción del éster al alcohol correspondiente (33-2) también

10 ocurrió a alto rendimiento y le siguió la reacción de Sonogashira con Ddzpropargilamina. El alquino en el producto de ensamblaje resultante, 33-3, se redujo mediante hidrogenación catalítica. Las pruebas diagnósticas con resina de intercambio proporcionaron el producto deseado, Ddz-T33a. [0221] La síntesis del (S)-enantiómero (Ddz-T33b) se llevó a cabo de manera idéntica

15 con un rendimiento comparable empezando por el lactato (R)-metil (33-B)

C. Procedimiento estándar para la síntesis del precursor de amarre RCM-TA1 [0222]

[0223] Fase A1-1. A una solución de diol A1-0 (50 g, 567 mmol, 1.0 eq) en CH2Cl2 (1,5

5 L) se le añadieron Et3N (34,5 mL, 341 mmol, 0.6 eq) y DMAP (1,73 g, 14,2 mmol, 0,025 eq). Se añadió TBDMSC1 (42,8 g, 284 mmol, 0.5 eq) en CH2Cl2 (100 mL) a esta mezcla a temperatura ambiente a lo largo de 4 h con una bomba de jeringa. La reacción se monitorizó mediante TLC [EtOAc/hexanos (30:70); detección: KMnO4; Rf = 0,39], lo que reveló el material de partida, el compuesto monoprotegido y el compuesto diprotegido.

10 La mezcla se agitó durante la noche, se lavó con H2O, NH4Cl (aq) saturado y salmuera, y posteriormente se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/hexanos, 30:70) para proporcionar el alcohol A1-1 monoprotegido deseado (rendimiento: 31%).

[0224] Fase A1-2. A una solución de alcohol A1-1 (26,5 g, 131 mmol, 1.0 eq) en THF

15 (130 mL) a 0°C se le añadió PPh3 (44,7 g, 170 mmol, 1.3 eq). Se añadió lentamente una solución recién preparada y titulada de 1,3 M de HN3 (149 mL, 157 mmol, 1.5 eq) a esta mezcla, luego se añadió también lentamente DIAD (32 mL, 163 mmol, 1.25 eq). Esto resultó en una reacción exotérmica. La mezcla resultante se agitó a 0°C durante 1 h con una monitorización de la reacción mediante TLC [EtOAc/hexanos (30:70); detección:

20 KMnO4; Rf = 0,77]. Se obtuvo el compuesto A1-2, pero no se aisló y se usó directamente para la siguiente fase de la solución. [0225] Fase A1-3. Se añadió PPh3 (51 g, 196 mmol, 1.5 eq) en porción a la solución de A1-2 y la mezcla resultante se agitó a 0°C durante 2 h, se dejó que se calentara a temperatura ambiente y se mantuvo allí durante 3 h. luego se añadió H2O (24 mL, 1331

25 mmol, 10 eq). Se calentó esta mezcla a 60°C toda la noche. Se monitorizó la reacción mediante TLC [EtOAc/hexanos (1:9); detección: KMnO4; Rf = base]. Tras enfriarse, se añadió una solución de 2 N HCl (327 mL, 655 mmol, 5.0 eq) y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 2 h para obtener el A1-3 en solución, la cual se utilizó directamente en la siguiente fase. TLC [DCM/MeOH/30% NH4OH (7:3:1);

30 detección: KMnO4; Rf= 0,32]. [0226] Fase A1-4. Para la siguiente transformación, se evaporó THF a presión reducida de la mezcla de reacción anteriormente mencionada y se extrajo la fase acuosa

remanente con Et2O (5 x 150 mL) y CHCl3 (3 x 150 mL). Las fases orgánicas se monitorizaron mediante TLC y si se observaba cualquier A1-3, se extraía entonces la fase orgánica con 2 N HC1. La fase acuosa se neutralizó cautelosamente a pH 8 con 10 N NaOH. Se añadió CH3CN (400 mL) a esta solución acuosa y también se añadió lentamente Fmoc-OSu (41,9 g, 124 mmol, 0.95 eq) en CH3CN (400 mL) en 50 min. Se agitó la solución a temperatura ambiente toda la noche. El progreso de reacción se monitorizó mediante TLC [EtOAc/hexanos (1:1); detección: ninhidrina; Rf = 0,27]. Se extrajo la fase acuosa con Et2O, y posteriormente la fase orgánica combinada se secó sobre MgSO4 y se concentró a presión reducida. El residuo sólido obtenido se mezcló con H2O (120 mL), se agitó 30 min, se filtró (con el fin de eliminar el subproducto de succinimida) y se secó durante toda la noche en vacío (bomba de aceite). Se purificó el sólido mediante cromatografía flash [gradiente: EtOAc/hexanos (50:50) a EtOAc/hexanos (70:30), con el cambio de eluyente una vez eliminado el Fmoc-OSu tal y como indicaba la TLC] con el fin de proporcionar el compuesto TA1 en forma de sólido blanco (rendimiento: 71%).

1H NMR (CDCl3, ppm): 7,8 (d, 2H), 7,6 (d, 2H), 7,4 (t, 2H), 7,3 (t, 2H), 5,9-5,7 (1H, m), 5,6-5,5 (1H, m), 5,0 (1H, broad), 4,4 (2H, d), 4,2 (2H, d), 3,9 (2H, amplio), 2,1 (1H, amplio).

13C NMR (CDCl3, ppm): 156,8, 144,1, 141,5, 131,9, 128,3, 127,9, 127,3, 125,2, 120,2, 67,0, 58,0, 47,4, 38,0.

D. Procedimiento estándar para la síntesis del precursor de amarre RCM-TA2 [0227]

Se accedió a este material mediante la aplicación de la reacción de metátesis cruzada que se ha demostrado que construye la estructura de carbono. El nitrilo resultante se redujo a la amina, que estaba protegida in situ con Fmoc u otro grupo protector apropiado anterior a la sujeción a la resina, la cual se llevó a cabo usando procedimientos químicos de fase sólida conocidos por aquellos doctos en la materia. Este procedimiento estándar también sería aplicable a homólogos de TA2.

E. Procedimiento estándar para la síntesis del precursor de amarre RCM-TB1 [0228]

[0229] Fase B1-1. Se añadió dihidropirano (B1-A, 22 mL, 241 mmol) a un alcohol 2bromobenzil (B1-0, 30 g, 160 mmol) en DCM (DriSolv®, 530 mL) como una solución Aproximadamente de 0,3 M,. Se añadió Piridinio p-toluenesulfonato (PPTS, 4,0 g, 16 10 mmol) y se agitó la mezcla de reacción enérgicamente a temperatura ambiente durante toda la noche. Luego se añadió una solución saturada de Na2CO3 (aq, 200 mL) y se agitó la mezcla durante 30 min. Se separó la capa de DCM, se lavó sucesivamente con Na2CO3 saturado (aq, 2 x 100 mL) y salmuera (2 x 50 mL), y se secó sobre MgSO4 anhidro. El solvente se evaporó a presión reducida y se purificó el residuo crudo

15 mediante una columna de relleno de gel de sílice (EtOAc/hexanos (1:9); antes de cargar el material crudo, se neutralizó el sílice enjuagándolo con 1% Et3N en DCM]. Esto proporcionó el B1-1 en forma de aceite incoloro (42 g, 97%). TLC [EtOAc/hexanos (1:9); Rf= 0,56]

[0230] Fase B1-2. Se añadieron virutas de magnesio (2.21 g, 90 mmol) a una solución

20 de Aproximadamente 0,8 M de B1-1 (del cual se evaporaron varias porciones de tolueno para eliminar los rastros de agua, 22,14 g, 81,8 mmol) en THF anhidro (destilado de quetil de benzofenona de sodio, 100 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno. La reacción fue iniciada añadiendo virutas de yodo (50 mg, 0,002 equiv). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2 h, en cuyo tiempo la mayor parte de virutas de Mg

25 desaparecieron. Se dejó enfriar la reacción a temperatura ambiente. En un matraz de fondo redondo secado al fuego, se diluyó bromuro de alilo (6.92 mL, 81.8 mmol) recién destilado con THF anhidro (50 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno y enfriado a 0 °C usando un baño de hielo y agua. A esto se transfirió gradualmente la solución Grignard ahora fría en un periodo de 20-30 min usando una cánula para asegurarse de que las

30 virutas de magnesio no reaccionadas permanecieran en el matraz fuente. Se lavaron los contenidos del matraz con la preparación Grignard (2 × 5 mL THF seco) y se transfirió la solución de lavado a través de la cánula también a la solución de bromuro de alilo. La mezcla resultante se agitó durante toda la noche bajo N2 dejando mientras tanto que se calentara gradualmente a temperatura ambiente. La reacción se apagó añadiendo una solución de NH4Cl saturado (aq), luego se diluyó con 100 mL Et2O y se separaron las capas. Se extrajo la fase acuosa con Et2O (3 x 100 mL) y se secaron las capas

5 orgánicas combinadas sobre MgSO4, y luego se concentraron a presión reducida para proporcionar B1-2 (18,54 g, 98%). TLC [EtOAc/hexanos (1:9), Rf = 0,53]. Este material se utilizó en la siguiente fase sin una purificación adicional.

[0231] Fase B1-3. Alcohol 2-(2-Propenil)benzil (TB1). Se disolvió el éter THP crudo B1-2 (18,54 g, 80 mmol) en MeOH (160 mL) y se añadió monohidrato del ácido p10 toluenesulfonico (PTSA, 1,52 g, 8 mmol). Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante toda la noche, luego se concentró a presión reducida y se diluyó el residuo con Et2O (100 mL). La capa orgánica se lavó secuencialmente con una solución de NaHCO3 5% (aq) (3 x 50 mL) y salmuera (1 × 50 mL), y luego se secó sobre MgSO4. El solvente se evaporó a presión reducida y se purificó el residuo mediante

15 cromatografía flash (EtOAc/hexanos, 1:9), para obtener TB1 en forma de aceite de color amarillo pálido (9,2 g, 78%). TLC [EtOAc/hexanos (1:9), detección: UV, PMA; Rf= 0,24].

F. Procedimiento estándar para la síntesis del precursor de amarre RCM-TB2 [0232]

[0233] Fase B2-1. A una suspensión de MePPh3Br (85,7 g, 240 mmol, 2.2 eq) en THF (500 mL) se le añadió t-BuOK en porciones (26,9 g, 240 mmol, 2.2 eq) y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 2 h tiempo durante el cual se volvió amarilla. Se enfrió la mezcla resultante a -78°C, se añadió 2-hidroxibenzaldehido (B2-0, 25 11,6 mL, 109 mmol, 1.0 eq) en 10 min, luego se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. El progreso de la reacción se monitorizó mediante TLC [EtOAc/hexanos (20:80); detección: UV, CMA; Rf = 0,25]. Se añadió una solución de NH4Cl saturado (aq) y la fase acuosa resultante se extrajo Et2O (3x). La fase orgánica combinada se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo

30 se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/hexanos, 30:70) para proporcionar B2-1 en forma de aceite amarillo. Se confirmó la identidad y la pureza mediante 1H NMR (rendimiento: 100%).

[0234] Fase B2-2. A una solución de alcohol B2-1 (2,0 g, 16,7 mmol, 1.0 eq) en DMF a 0°C se le añadió carbonato de cesio (1,1 g, 3,34 mmol, 0.2 eq) y se agitó la mezcla a 35 0°C durante 15 min. Se calentó la reacción a 100°C y se añadió carbonato de etileno. La mezcla resultante se agitó a 100°C durante toda la noche. Se monitorizó la reacción mediante TLC [EtOAc/hexanos (30:70); detección: UV, CMA; Rf = 0.21]. La solución se

enfrió a temperatura ambiente y se añadió H2O. Se extrajo la fase acuosa resultante con Et2O (3x). La fase orgánica se extrajo con salmuera (3x), se secó con MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se obtuvo un jarabe amarillo (TB2) (rendimiento: 96%), que tenía la pureza suficiente (valorado por NMR) para su uso sin una purificación

5 adicional. Nótese que este producto resultó ser inestable en la presencia de ácido.

1H NMR (CDCl3, ppm): 7,50 (1H, dd, Ph), 7,22 (1H, td, Ph), 7,05 (dd, 1H, PhCH=CH2), 6,98 (1H, t, Ph), 7,90 (1H, d, Ph), 5,75 (1H, dd, PhCH=CHH), 5,30 (1H. dd, PhCH=CHH), 4,15-4,10 (2H, m, PhOCH2CH2OH), 4,05-3,95 (2H, m,

10 PhOCH2CH2OH), 2,05 (1H, s, OH).

G. Procedimiento estándar para la síntesis del precursor de amarre RCM-TB3 [0235]

[0236] A una solución de alcohol 2'-bromofenetil (B3-0, 2,0 mL, 14,9 mmol, 1.0 eq) en tolueno (50 mL) se le añadieron tetakris (trifenilfosfino)paladio(0) [Pd(PPh3)4, 347 mg, 0,30 mmol, 0.02 eq) y viniltributiltin (6,5 mL, 22,4 mmol, 1.5 eq). La mezcla resultante se agitó a reflujo durante 24 h bajo N2. Monitorizar el progreso de la reacción mediante TLC 20 fue difícil puesto que el material de partida y el producto poseían el mismo Rf [EtOAc/hexanos (30:70)]. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió una solución de KF saturado (aq) en cuyo momento se formó un precipitado. El sólido se eliminó opcionalmente mediante filtración y se extrajo la fase acuosa con DCM (4x). La fase orgánica combinada se extrajo con salmuera, se secó sobre MgSO4 y se

25 concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc/hexanos, 30:70) para proporcionar el TB3 en forma de aceite incoloro. Se confirmaron la identidad y la pureza mediante 1H NMR (rendimiento: 100%).

1H NMR (CDCl3, ppm): 7,57-7,45 (1H, m, Ph), 7,30-7,15 (3H, m, Ph), 7,05 (dd,

30 1H, PhCH=CH2), 5,65 (1H, dd, PhCH=CHH), 5,32 (1H. dd, PhCH=CHH), 4,85 (2H, t, PhCH2CH2OH), 2,98 (2H, t, PhCH2CH2OH), 1,50 (1H, s, OH).

H. Procedimiento estándar para la síntesis del precursor de amarre RCM-TB4 [0237]

[0238] Fase B4-1. Se disolvió 1,2-Dihidronafthaleno (B4-0, 5,0 g, 38,4 mmol, 1.0 eq) en

5 200 mL de DCM:MeOH (1: 1) y se enfrió la solución hasta -78°C. Se burbujeó ozono (O3) a través de la solución hasta que se desarrolló un color azul. Se monitorizó la reacción mediante TLC [EtOAc/hexanos (30:70); detección: UV, CMA; Rf = 0,25]. El exceso de O3 se eliminó entonces burbujeando N2 a través de la solución hasta que se disipó el color azul. Se añadió lentamente borohidruro sódico (2,9 g, 76,8 mmol, 2.0 eq)

10 a la mezcla, luego se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se monitorizó la reacción mediante TLC [EtOAc/hexanos (30:70); detección: UV, CMA; Rf = 0,06]. Se añadió lentamente una solución de NH4Cl saturado (aq), luego se extrajo la fase acuosa con DCM (3x). La fase orgánica combinada se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se obtuvo B4-1 en forma de aceite amarillo (rendimiento:

15 100%). Se confirmó la identidad y la pureza del compuesto mediante un análisis NMR y tenía la suficiente pureza como para usarlo sin mayor manipulación. [0239] Fase B4-2. A una solución de diol B4-1 (6,38 g, 38,4 mmol, 1.0 eq) en benzeno (200 mL) se le añadió MnO2 (85%, 16,7 g, 192 mmol, 5.0 eq) y se agitó la mezcla resultante durante 1 h a temperatura ambiente. Se monitorizó la reacción mediante TLC

20 [EtOAc/hexanos (50:50); detección: UV, CMA; Rf = 0,24] y se añadió más MnO2 (5 eq) cada hora hasta que se completó la reacción, típicamente esto requirió de 2 a 3 de dichas adiciones. El MnO2 se filtró a través de una almohadilla de Celita, la cual se lavó con EtOAc. El filtrado y lo lavado combinado se evaporó a presión reducida para proporcionar B4-2. Se tomó un A 1H NMR para comprobar la pureza del compuesto

25 resultante, que contenía típicamente pequeñas cantidades de impurezas. Sin embargo, era lo suficientemente puro como para usarlo en la siguiente fase, la cual se llevó a cabo preferentemente el mismo día que esta fase puesto que el producto aldehido (B4-2) tenía una esthabilidad limitada.

[0240] Fase B4-3. A una suspensión de MePPh3Br (30,2 g, 84,5 mmol, 2.2 eq) en THF

30 (200 mL) se le añadió t-BuOK en porciones (9,5 g, 84,5 mmol, 2.2 eq) y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 2 h tiempo en el cual la solución se tornó amarilla. La mezcla de reacción se enfrió hasta los -78°C, se añadió B4-2 [6,3 g, 38,4 mmol, 1.0 eq (basado en el rendimiento teórico)] a lo largo de 10 min, luego se agitó la mezcla durante toda la noche a temperatura ambiente. La reacción se

35 monitorizó mediante TLC (EtOAc/hexanos (50:50); detección: UV, CMA; Rf = 0,33]. Se añadió una solución de NH4Cl saturado (aq) y se extrajo la fase acuosa resultante con EtOAc (3x). La fase orgánica combinada se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía flash (EtOAc/hexanos, 40:60) para proporcionar TB4 en forma de aceite amarillo. Se empleó NMR para

5 confirmar la identidad y la pureza del producto (rendimiento: 73%, 2 fases).

1H NMR (CDCl3 ppm): 7,55-7,45 (1H, m, Ph), 7,25-7,10 (3H, m, Ph), 7,05 (dd, 1H, PhCH=CH2), 5,65 (1H, dd, PhCH=CHH), 5,30 (1H. dd, PhCH=CHH), 3,70 (2H, t, PhCH2CH2CH2OH), 2,80 (2H, t, PhCH2CH2CH2OH), 1,90-1,80 (2H, m,

10 PhCH2CH2CH2OH), 1,45 (1H, s, OH).

I. Procedimiento estándar para la síntesis del amarre T45 [0241]

[0242] La versión protegida de este amarre se obtuvo mediante transformaciones estándar que implican la monoprotección de trietilenoglicol (45-0) seguido de una conversión del alcohol restante a un mesilato, desplazamiento con azida y reducción catalítica en presencia de dicarbonato di-t-butil.

J. Procedimiento estándar para la síntesis del amarre T65 [0243]

25 [0244] Véase la preparación de T9-2 puesto que este amarre es realmente un intermediario en la síntesis del amarre T9.

1H NMR (CDCl3): 0 7,38-7,35 (bd, 1H), 7,30-7,19 (m, 1H), 6,92 (dd, 2H), 4,88 (bs, 1H), 4,16-4,11 (bt, 4H), 3,98-3,95 (t, 2H), 1,46 (s, 9H). 13CNMR (CDCl3): 0 156,7, 30 155,8, 133,6, 130,0, 121,3, 114,8, 113,1, 112,9, 90,2, 70,8, 61,4, 28,6

K. Procedimiento estándar para la síntesis del amarre T66 [0245]

5 [0246] A una solución de alquino (Boc-T65, 13,1 g, 45,1 mmol, 1.0 eq) en EtOH/AcOEt

(5:1) bajo N2 se le añade quinoleína (106 μl, 0,9 mmol, 0.02 eq) y el catalizador Lindlar

(1.3 g, 10% wt), luego se burbujea hidrógeno en la mezcla. La reacción se monitoriza (cada 30-40 min) mediante 1H NMR hasta que la reacción está completa. Luego, la reacción se filtra a través de una almohadilla de Celita y se enjuaga con AcOEt hasta

10 que no hay más material eluyendo. El solvente se elimina a presión reducida. El producto crudo se purifica mediante cromatografía flash con AcOEt/Hex 15% a AcOEt/Hex 40% para proporcionar Boc-T66 en forma de aceite. (Rendimiento: 7,8 g, 59%) TLC (45/55 AcOEt/Hex): Rf: 0,15; detección: UV, KMnO4.

15 1H NMR (CDCl3): 0 7,27-7,21 (td, 1H), 7,15-7,10 (dd, 1H), 7,00.6,85, (m, 2H), 6,62-6,58 (bd, 1H), 5,77-5,70 (dt, 1H), 4,13-4,03 (m, 2H), 3,97-3,95 (m, 2H), 3,93,88 (bd, 2H), 1,46, (s, 9H)

L. Procedimiento estándar para la síntesis del amarre T67 20 [0247]

[0248] A una solución de Et2Zn (1 M en hexanos, 153 mL, 153,6 mmol, 3.0 eq) en CH2Cl2 (150 mL) a -20°C se le añadió CH2I2 (12,4 mL, 153,6 mmol, 3.0 eq) 25 (ADVERTENCIA: Se puede desarrollar presión) y se agitó la mezcla a -20°C durante 15 min. Luego se añadió Boc-T8 (15,0 g, 51,2 mmol, 1.0 eq) en CH2Cl2 (100 mL) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante toda la noche. La reacción fue monitorizada mediante TLC [(60% AcOEt: 40% hexano); detección: UV y CMA; Rf = 0,39]. La solución fue tratada con NH4Cl acuoso (saturado) y se extrajo la fase acuosa con CH2Cl2. Se

30 secó la fase orgánica sobre MgSO4 y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash (60% AcOEt: 40% hexano) para proporcionar Boc-T67 en forma de aceite amarillo (rendimiento: 57%).

1NMR (CDCl3, ppm): 7,18 (1H, t), 7,03 (1H, d), 6,88 (2H, t), 4,23-4,04 (4H, m),

3,73-3,70 (2H, m), 1,48 (1H, broad), 1,28 (9H, s), 1,12-1,06 (1H, m), 1,0-0,93

(1H, m), 0,76 (2H, dt).

M. Procedimiento estándar para la síntesis del amarre T68 [0249]

[0250] A una solución de Et2Zn (1 M en hexanos, 49,2 mL, 49,2 mmol, 3.0 eq) en CH2Cl2

10 (30 mL) a -20°C se le añadió CH2I2 (3,9 mL, 49,2 mmol, 3.0 eq) y se agitó la mezcla a 20°C durante 15 min. Luego se añadió lentamente el alqueno (Boc-T66, 4,8 g, 16,4 mmol, 1.0 eq) en CH2Cl2 (50 mL) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2

h. La solución fue tratada con NH4Cl acuoso (saturado) y se extrajo la fase acuosa con CH2Cl2 (1x) y luego se lavó con salmuera (1x). La fase orgánica se secó sobre MgSO4,

15 se filtró y se eliminó el solvente a presión reducida. El producto crudo se purifica mediante cromatografía flash (gradiente: 40%, luego 50% y finalmente 60% AcOEt en hexanos) para proporcionar Boc-T68 en forma de aceite amarillo (rendimiento: 90,7%). TLC (60% AcOEt: 40% hexanos): Rf: 0,4; detección: UV, ninhidrina.

20 1H NMR (CDCl3): 8 7,32-7,20 (td, 2H), 7,10-6,85, (m, 2H), 4,25-4,13 (m, 2H), 4,10-3,99 (m, 2H), 3,41-3,36 (dd, 1H), 2,15-2,02 (m, 1H), 1,38 (s, 9H), 1,04-0,96 (dq, 1H), 0,78-0,73 (q, 1H)

13C NMR (CDCl3): 0 158,0, 130,7, 130,4, 127,9, 127,5, 127,1, 121,2, 121,0, 25 111,6, 111,2, 79,5, 69,8, 61,5, 28,7, 17,8, 16,8, 7,2

N. Procedimiento estándar para la síntesis del amarre T69 [0251]

TLC (25/75 AcOEt/Hex): Rf: 0,03; detección: UV, ninhidrina

1H NMR (CDCl3): 0 7,06-7,00 (bt, 1H), 6,61-6,52 (m, 4H), 6,35 (m, 1H), 5,12 (bt, 1H), 4,03 (m, 2H), 3,95 (m, 2H), 3,77 (s, 6H), 3,11-3,04 (bq, 2H), 2,60 (bt, 2H), 1,75 (m, 8H)

13C NMR (CDCl3): 0 163,9, 160,9, 160,6, 157,6, 157,5, 155,6, 149,5, 130,8, 130,6, 125,9, 107,26, 106,9, 103,2, 98,4, 80,8, 77,5, 69,9, 61,3, 60,9, 60,6, 55,4, 40,3, 30,4, 29,3, 26,9,

LC-MS (Grad_A4) tR: 8,37 min

O. Procedimiento estándar para la síntesis del amarre T70 [0252]

5 TLC (25/75 AcOEt/Hex): Rf: 0,03; detección: UV, ninhidrina

1H NMR (CDCl3): 0 6,84-6,75 (m, 3H), 6,52 (bs, 2H), 6,34 (m, 1H), 5,17 (bt, 1H), 4,01 (m, 2H), 3,93 (m, 2H), 3,77 (s, 6H), 3,10 (bq, 2H), 2,63 (bt, 2H), 1,74 (m, 8H)

10 13C NMR (CDCl3): 0 160,9, 158,9, 155,8, 155,6, 152,9, 152,9, 149,5, 132,4, 132,3, 117,1, 116,8, 112,7,112,6, 103,2, 98,4, 80,8, 70,4, 61,6, 55,5, 40,2, 30,3, 29,3, 27,4.

LC-MS (Grad_A4) tR: 8,29 min

P. Procedimiento estándar para la síntesis del amarre T71 [0253]

TLC (25/75 AcOEt/Hex): Rf: 0,03; detección: UV, ninhidrina

1H NMR (CDCl3): 0 7,12-7,08 (bd, 2H), 6,76-6,73 (d, 1H), 6,52 (m, 2H), 6,33 (bs, 1H), 5,15 (bt, 1H), 4,02 (m, 2H), 3,95 (m, 2H), 3,79 (s, 6H), 3,09 (bq, 2H), 2,61 10 (bt, 2H), 1,74(m,8H)

13C NMR (CDCl3): 0 160,8, 155,6, 155,4, 149,5, 132,4, 130,1, 127,0, 126,0, 112,8, 103,2, 98,4, 80,8, 70,0, 61,4, 55,5, 40,3, 30,2, 29,3, 24,5, 27,4

15 LC-MS (Grad_A4) tR: 9,60 min

Q. Procedimiento estándar para la síntesis del amarre T72 [0254]

TLC (1/1, Hex/AcOEt): Rf: 0,16

1H NMR (ppm): 1,49 (Boc), 1,8 (CH2), 2,7 (CH2), 3,1 (CH2), 4,0 (CH2), 4,1 (CH2), 4,9 (NH), 6,9 (CH aromático), 7,35 (CH aromático), 7,4 (CH aromático)

13C NMR (ppm): 29, 30, 40, 61, 70, 110, 124, 128, 132, 160

R. Procedimiento estándar para la síntesis del amarre T73 [0255]

TLC (60/40 AcOEt/Hex): Rf: 0,11; detección: UV, ninhidrina

1H NMR (CDCl3): 0 7,06-6,99, (m, 2H), 6,84-6,81 (m, 1H), 6,5 (m, 2H), 6,32 (m, 1H), 5,11 (bt, 1H), 4,07(m, 2H), 3,90(bt, 2H), 3,79 (s, 6H), 3,39 (s, 3H), 3,09 (bt,

10 2H), 2,64 (bt, 2H), 1,85-1,74 (m, 8H), 1,46 (bs, 9H)

13C NMR (CDCl3): 0 160,8, 157,1, 155,6, 151,9, 149,5, 131,3, 131,0, 128,43,

128,37, 111,6, 103,2, 98,4, 84,8, 80,8, 69,9, 61,4, 60,6, 55,5, 41,8, 40,2, 30,0,

29,3, 28,1, 27,3 ppm.

LC-MS (Grad_A4) tR: 8,26 min.

S. Procedimiento estándar para la síntesis del amarre T74 [0256]

TLC (50/50 AcOEt/Hex): Rf: 0,09; Detección: UV, CMA

1H NMR (DMSO-d6): 0 7,14 (bd, 1H), 6,76-6,71 (m, 2H), 6,53 (m, 2H), 6,33 (bs, 1H), 5,15 (bt, 1H), 4,08 (m, 2H), 3,95 (m, 2H), 3,79 (s, 6H), 3,41 (s, 3H), 3,01 (bq,

10 2H), 2,64 (bt, 2H), 1,75 (m, 8H), 1,47 (s, 9H)

13C NMR (DMSO-d6): 0 156,1, 152,3, 150,8, 147,0, 144,7, 129,8, 126,9, 125,6,

116,8, 108,4, 98,5, 93,6, 80,3, 76,1, 65,1, 56,7, 50,7, 37,1, 35,6, 25,3, 24,5, 23,4,

22,6

LC-MS (Grad_A4) tR: 8,21 min

T. Procedimiento estándar para la síntesis de los amarres T75a y T75b [0257]

5 [0258] La síntesis del derivado fluorado, amarre T75, se llevó a cabo de forma análoga al del amarre T33 empezando desde 33-A [(S)-metil lactato] y el fenol adecuadamente sustituido 75-0 para proporcionar 4,1 g de Ddz-T75a en forma de sólido amarillo pálido. A pesar de que las dos primeras fases, la Reacción de Mitsunobu y la reducción DIBAL, fueron de alto rendimiento, 91% y 98% respectivamente, el aislamiento del producto final

10 resultó difícil tras la reacción de acoplamiento de Sonogashira e hidrogenación, reduciendo el rendimiento global al 17%. De nuevo, el (R)-enantiómero correspondiente, Ddz-T75b, es accesible sustituyendo el lactato (R)-metil (33-B) en el procedimiento superior.

U. Procedimiento estándar para la síntesis del amarre T76 [0259]

[0260] Fase T76-1. 3-Bromo-2-hidroxi-benzaldehído. De forma análoga a la hallada en la bibliografía (Hofslokken et al. Acta. Chemica Scand. 1999, 53, 258), una suspensión agitada de 2-bromofenol (76-0, 3,5 g, 20 mmol) y paraformaldehido (8,1 g, 270 mmol) en 100 mL de acetonitrilo seco a temperatura ambiente se trató con MgCl2

10 (2,85 g, 30 mmol) y trietilamina (TEA, 10,45 ml, 75 mmol). La mezcla se agitó enérgicamente a reflujo toda la noche. Tras este periodo de tiempo, se enfrió la mezcla a temperatura ambiente, luego se añadieron 30 mL de HCl 5% y se extrajo el producto con Et2O para proporcionar 4,0 g (95%) de 76-1.

15 TLC (hexanos/diclorometano, 3:1): Rf= 0,3; detección: CMA y UV

[0261] Fase 76-2. 2-Bromo-6-vinil-fenol. A una solución agitada de CH3PPh3Br (72 g, 0,033 mol) a temperatura ambiente se añadió, a lo largo de 50 min, una solución de tBuOK (4,1g, 0,03 mol) en THF (50 mL). La mezcla se enfrió a -78°C y se añadió gota a

20 gota 76-1 (3 g, 0,015 mol) a lo largo de 15 min. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara a temperatura ambiente y se agitó durante 24 h. Tras este tiempo, se eliminó el solvente en vacío y se purificó el residuo mediante cromatografía flash usando hexanos/diclorometano (3:1) como eluyente para proporcionar 76-2 en forma de aceite incoloro (2.2 g, 75%).

TLC (hexanos/diclorometano, 3:1): Rf= 0,5; detección: CMA y UV

[0262] Fase 76-3. El tosilato 76-A se sintetizó usando el método de la bibliografía (Buono et al. Eur. J. Org. Chem. 1999, 1671) y luego se empleó para 76-3 (Manhas,

M.S. J. Am. Chem. Soc. 1975, 97, 461-463. Nakano, J. Heterocycles 1983, 20, 19751978). A una solución de 76-2 (2,5 g, 12 mmol), Ph3P (4,6 g, 18 mmol) y 76-A (4,3 g, 18 mmol) en 150 mL de THF se le añadió lentamente dietilazodicarboxilato (DEAD, 3,5 mL, 18 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 6 h hasta que la reacción se completó tal y como indicaba el análisis de TLC (hexanos/acetato de etilo, 8:2; Rf = 0,6; detección: CMA y UV). El solvente se eliminó bajo alto vacío y se purificó el residuo mediante cromatografía flash para obtener 76-3 en forma de líquido de color marrón pálido (4,6 g, 88%).

[0263] Fase 76-4. Se trató el 76-3 (3,4 g, 8 mmol) con un catalizador Grubbs de segunda generación (0,02 mol%) en 50 mL de DCM (Grubbs, R. J. Org. Chem. 1998, 63, 864-866. Gross, J. Tet. Lett. 2003, 44, 8563-8565. Hoveyda, A. J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 2343-2351). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. El solvente fue retirado entonces bajo alto vacío y se purificó el residuo mediante cromatografía en columna flash para obtener 76-4 en forma de líquido marrón pálido (2,15 g, 70%). TLC (hexanos/acetato de etilo, 8:2; Rf = 0,4; detección: CMA y UV).

[0264] Fase 76-5. A una solución de 76-4 (1,43 g, 0,023 mol) en DMF seco (50 mL) se añadió acetato de cesio (2,09 g, 0,0109 mol) bajo una atmósfera de argón. La solución se agitó a 50°C toda la noche. Transcurrido este tiempo, se eliminó el solvente bajo alto vacío y se purificó el residuo mediante cromatografía flash para obtener 76-5 en forma de líquido marrón pálido (0,7 g, 70%). TLC (hexanos/acetato de etilo, 8:2; Rf= 0,6; detección: CMA y UV).

[0265] Fase 76-6 (8-Bromo-2H-chromen-2-yl)-metanol A una solución de 76-5 (5,5 g, 0,023 mol) en MeOH seco (150 mL) se le añadió sodio metálico en una cantidad catalizadora bajo una atmósfera de argón. Luego se agitó la solución a temperatura ambiente durante 60 min. Transcurrido este tiempo, se añadió resina Amberlite IRA-120 (H+) para neutralizar (pH = 7) el exceso de metóxido sódico y se agitó enérgicamente la mezcla durante 10 min. Se eliminó la resina mediante filtración y el filtrado se evaporó en vacío. Se recuperó el compuesto puro 76-6 en forma de aceite incoloro (4.5 g, 98%).

TLC (hexanos/acetato de etilo, 7:3): Rf = 0,3; detección: CMA y UV

[0266] Fase 76-7. Se disolvieron el 76-6 (4,5 g, 18 mmol) y la amina Ddz-propargil (76-B, 15,16 g, 55,8 mmol) en dioxano (150 mL) y diisopropilamina (27 mL). La mezcla de reacción fue desgasificada borboteando argón a través de la solución. Se añadió PdCh(PhCN)2 (430 mg, 1,11 mmol, 0.06 eq), CuI (220 mg, 1,11 mmol, 0.06 eq) y tributilfosfina (10% en hexano, 4,4 mL, 2,23 mmol) y se calentó la mezcla hasta los 70 °C y se agitó toda la noche. El solvente se eliminó bajo alto vacío y se purificó el residuo mediante cromatografía en columna flash para obtener 76-7 en forma de líquido marrón pálido (3,2 g, 80%).

TLC (hexanos/acetato de etilo, 1:1): Rf= 0,3; detección: CMA and UV,

[0267] Fase 76-8. El acetileno 76-7 (4,5 g, 0,2 mol) se disolvió en EtOH (150 mL), posteriormente se purgó con nitrógeno durante 10 min. Se añadió PtO2 (10 mol%, 450 mg), y la mezcla se purgó con un globo lleno de gas hidrógeno. Luego se cargó la mezcla en una bomba Parr, se aclaró con hidrógeno (sencillamente se llena con hidrógeno a 60 psi, luego se libera y se rellena, este ciclo de llenar-liberar-rellenar se repite tres veces), y reaccionó con hidrógeno a 60 psi a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de Celite (úsese metanol para lavar la almohadilla) y se concentró el filtrado para proporcionar una muestra prácticamente pura (limpia mediante 1H NMR), pero coloreada de Ddz-T76 en rendimiento cuantitativo. Se consiguió una mayor purificación exponiendo este material a cromatografía flash. TLC (hexanos/acetato de etilo, 1:1; Rf = 0,3; detección: CMA y UV). Puesto que el producto Ddz-T76 tiene el mismo Rf que el material de partida (76-7), 1H NMR es la mejor forma para distinguirlos.

1H NMR (CDCl3): 0 1,73 (s, 6H), 1,75-1,95 (m, 4H), 2,60 (m, 2H), 2,70-2,90 (m, 2H), 3,10 (m, 2H), 3,72 (s, 6H), 3,75 (m, 2H), 4,12 (m, 1H), 5,20 (m, 1H), 6,35 (s, 1H), 6,50 (s, 2H), 6,80 (m, 1H), 6,90 (m, 2H).

13C NMR (CDCl3): 0 23,93 (CH2), 24,97 (CH2), 27,07 (CH2), 29,35 (CH3), 30,45 (CH2), 40,23 (CH2), 55,47 (CH3), 65,76 (CH2), 80,72 (CH), 98,44 (CH), 103,22 (CH), 120,29 (CH), 121,90 (Cq), 127,76 (CH), 128,14 (CH), 129,42 (Cq), 149,56 (Cq), 152,55 (Cq), 155,56 (Cq), 160,84 (Cq).

LC-MS (Grad_A4): tR: 9,46 min; Masa detectada: 443

V. Procedimiento estándar para la síntesis del amarre T77 [0268]

5 [0269] Fase T77-1. 3-Bromo-piridina-2-ol. Una suspensión agitada de 2 piridona (77-0, 19 g, 200 mmol) en 200 mL de 1 M de KBr acuoso a temperatura ambiente se trató a lo largo de 15 min con bromina (32 g, 200 mmol; ADVERTENCIA: ¡Grandes cantidades de Br2 deben manejarse con cuidado!) en 200 mL de 1 M de KBr acuoso, luego se agitó enérgicamente a temperatura ambiente toda la noche. Tras 24 h, esta solución depositó

10 cristales que fueron filtrados y luego recristalizados a partir de acetonitrilo para proporcionar 27,2 g (78%) de 3-bromo-piridina-2-ol. (77-1) [J. Am. Chem. Soc. 1982, 104, 4142-4146; Bioorg. Med. Chem. Lett. 2002, 12, 197-200; J Med Chem. 1979, 22, 1284-1290].

15 Peso molecular calculado para C5H4BrNO: 173; (M+H)+ detectado: 174

[0270] Fase T77-2. A una solución de 3-bromo-piridina-2-ol (77-1, 5 g, 0,028 mol), Ph3P (11 g, 0,04 mol) y 2-(tert-butildimetilsilaniloxi)-etanol (77-A, 7 g, 0,04 mol) en 50 mL de THF se añadió lentamente dietilazodicarboxilato (8,1 g, 0,04 mol) a temperatura 20 ambiente. El progreso de la reacción se monitorizó fácilmente mediante TLC [hexanos/acetato de etilo (4:1); Rf = 0,5; detección: CMA]. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 24 h, punto en el cual se completó la reacción mediante análisis TLC. El solvente se eliminó bajo alto vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía flash para obtener 77-2 en forma de líquido marrón pálido (6,3 g, 68%).

25 [Tetrahedron Lett. 1994, 35, 2819-2822; Tetrahedron Lett. 1995, 36, 8917-8920; Synlett, 1995, 845-846. Heetrocycles 1990, 31, 819-824].

Peso molecular calculado para C13H22BrNO2Si 331; (M+H)+ detectado: 332

30 [0271] Fase T77-3. El alcohol protegido 77-2 (3 g, 9,1 mmol) se disolvió en diisopropilamina (50 mL) y se desgasificó la mezcla de reacción borboteando argón a través de la solución. Se añadió PdCl2(PPh3)2 (410 mg, 0,61 mmol, 0.06 eq), CuI (74 mg, 0,4 mmol, 0.04 eq) y trifenilfosfina (310 mg, 1,12 mmol), luego se calentó la mezcla hasta los 70 °C y se agitó toda la noche. Se eliminó el solvente bajo alto vacío y se purificó el residuo mediante cromatografía flash para obtener 77-3 en forma de líquido marrón pálido (3.36 g, 70%) [Org. Lett. 2003, 5, 2441-2444; J. Chem. Soc. Perkin. Trans I 1999, 1505-1510; J. Org: Chem.. 1993, 58, 2232-2243; J Org. Chem. 1999, 58, 95-99; Org. Lett. 2000, 2, 2291-2293; Org. Lett. 2002, 4, 2409-2412].

TLC (hexanos/acetato de etilo, 1:3): Rf; = 0,3; detección: CMA

Peso molecular calculado para C28H40N2O6Si: 528; (M+H)+ detectado: 529

[0272] Fase T77-4. Se disolvió el acetileno 77-3 (3 g, 5,67 mmol) en EtOH (30 mL) y se purgó con nitrógeno durante 10 min. Se añadió PtO2 (10 mol%, 300 mg) y se purgó la mezcla con un globo lleno de gas de hidrógeno. Luego se cargó la mezcla en una bomba Parr, se aclaró con hidrógeno (se llena con hidrógeno a 80 psi, luego se libera y se rellena, este ciclo de llenar-liberar-rellenar se repite tres veces), y se mantuvo con hidrógeno a 80 psi a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de Celite (úsese metanol para lavar el residuo sobre el Celite) y el filtrado junto con las soluciones de lavado se concentraron a baja presión para proporcionar una muestra prácticamente pura (1H NMR limpio), pero con color de 77-4 en un rendimiento cuantitativo. Se consiguió una mayor purificación exponiendo este material a cromatografía flash. El producto 77-4 posee el mismo Rf que el material de partida (77-3), por lo que 1H NMR es la mejor forma para distinguirlos.

TLC [(hexanos/acetato de etilo, 1:3); Rf; = 0,3 detección: CMA]

Peso molecular calculado para C28R44N2O6Si: 532, (M+H)+ detectado: 533

[0273] Fase T77-5. Se disolvió 77-4 (3 g, 5,6 mmol) en THF anhidro (200 mL). Se añadió a la solución clara TBAF (6,7 mmol, 7 mL) y se agitó la mezcla durante 2 h a temperatura ambiente. La solución se vertió entonces en agua helada. Se extrajo la solución acuosa con diclorometano (3 x 200 mL). La capa orgánica se lavó secuencialmente con tampón de citrato saturado (1 x 200 mL), agua (200 mL) y salmuera (200 mL). El extracto orgánico lavado se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se evaporó hasta la sequedad a baja presión para proporcionar un residuo oleoso. Este jarabe se purificó mediante cromatografía flash (hexanos/AcOEt, 1:2) para proporcionar Ddz-T77 en forma de jarabe (2,10 g, rendimiento 90%). TLC (hexanos/AcOEt, 1:2): Rf= 0,3; detección: ninhidrina

1H NMR (CDCl3): 0 1,73 (s, 6H), 1,75 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 3,15 (m, 2H), 3,75 (s, 6H), 3,90 (m, 2H), 4,50 (m, 2H), 5,01 (sb, 1H), 6,30 (s, 1H), 6,50 (s, 2H), 6,80 (m, 1H), 7,40 (m, 1H), 8,01 (m, 1H).

13C NMR (CDCl3): 0 27,23 (CH2), 29,24 (CH3), 29,71 (CH2), 40,17 (CH2), 55,44 (CH3), 62,76 (CH2), 69,11 (CH2), 80,76 (Cq), 98,24 (CH), 103,24 (CH), 117,54 (CH), 124,68 (Cq), 138,82 (CH), 144,17 (CH), 149,45 (Cq), 155,50 (Cq), 160,84 (Cq), 162,03 (Cq).

Peso molecular calculado para C22H30N2O6:418; (M+H)+ detectado: 419

Ejemplo 2 Síntesis de compuestos macrocíclicos representativos [0274] Lo que sigue son ejemplos representativos para los compuestos macrocíclicos de

la invención. Para métodos de fase sólida, todos los rendimientos están registrados empezando desde 300-325 mg de resina de PS-aminometil (carga 2,0 mmol/g) a menos que se indique lo contrario. La sujeción del primer bloque funcional, BB3, varía de 100% a 55% para los residuos más difíciles, típicamente estructuras congestionadas estéricamente como Ile o Val. Los ensamblajes restantes para BB2 y BB1 proceden en un rendimiento medio de 80-90%. La unión del amarre empleando la Reacción de Mitsunobu produce un rendimiento que oscila entre el 50-90% del precursor lineal deseado. La macrociclización misma produce un rendimiento medio que oscila entre el 20-50%. Ocurre una mínima pérdida de rendimiento en el procesamiento postciclización.

[0275] Todos los valores de tiempo de retención presentados aquí se basan en la porción UV de los datos HPLC. En el procedimiento HPLC, se procuraron también datos ELSD y CLND (no se listan) para evaluar mejor la pureza de los productos finales, y para la cuantificación (CLND). Todos los compuestos se analizaron empleando las mismas condiciones HPLC. Los detalles para el procedimiento HPLC usado fueron los siguientes: Columna: XTerra MS C18 4.6 x 50 mm, 3,5 μm de Waters, HPLC: Alliance 2695 de Waters; MS: Platform LC de Micromass/Waters; CLND: 8060 de Antek; PDA: 996 de Waters; Gradient_B4: (i) 0 a 50% MeOH : 0,1% TFA acuoso en 6 min, (ii) 3 min a 50% MeOH: 0,1% TFA acuoso; (iii) 50 a 90% MeOH : 0,1% TFA acuoso en 5 min; (iv) 3 min a 90% MeOH : 0,1% TFA acuoso. Se lista el tiempo de retención (tR) para el compuesto.

[0276] Se realizaron modificaciones a los métodos estándar para los compuestos 58, 99, 201, 203 y 215.

Compuesto 1 [0277] Rendimiento: se obtuvieron 33,4 mg de macrociclo puro (cuantificación CLND).

1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 0 8,53, 8,41, 8,34 (dobletes J = 8,7 Hz para todos, 1H); 8,13-8,06, 7,82-7,75 (multipletes, 1H); 7,30-7,05 (m, 8H); 6,90-6,77 (m, 2H);

4,58-4,46, 4,40-4,29, 4,27-4,16 (multipletes, 1H); 4,09-3,99, 3,97-3,82 (multipletes, 2H); 3,77-3,44 (m, 2H); 3,37-3,19 (m, 4H); 3,15, 3,08 (2s, 2H); 2,982,86 (m, 5H); 2,52 (s, 3H); 1,94-1,75, 1,60-1,30 (multipletes, 2H); 1,22 (br s, 4H); 0,86-0,75 (m, 3H).

HRMS calculado para C29H40N4O4; 508.3049; detectado 508,3040 ± 0,0015.

HPLC tR = 8,94 min.

Compuesto 3 [0278] Rendimiento: se obtuvieron 3320 mg de macrociclo puro (cuantificación CLND).

1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 0 8,54 (d, J = 9,4 Hz), 8,43-8,36 (m), y 8,12 (br t, J = 5,65 Hz) (1H); 7,90 (d, J = 6,6 Hz), 7,79-7,72 (m) (1H); 7,30-7,05 (m, 6H); 6,90-6,76 (m, 3H); 4,60-4,50 (m), 4,43 (d, J = 18,3 Hz), 4,26-4,16 (m) (1H); 4,134,02 (m, 1H); 4,01-3,84 (m, 2H); 3,74-3,41 (m, 2H); 3,17, 3,09 (2s, 3H); 2,99-2,86 (m, 5H); 2,43-2,18 (m, 1H); 1,97-1,75 (m, 3H); 1,72-1,39 (m, 1H); 0,96 (d, 5,76 Hz, 3H); 0,93-0,77 (m, 2H); 0.68 (d, 5,76 Hz, 3H).

HRMS calculado para C28H38N4O4; 494.2893; detectado 494,2888 ± 0,0015.

HPLC tR = 8,11 min.

Compuesto 4 [0279] Rendimiento: se obtuvieron 15,3 mg de macrociclo puro (cuantificación CLND).

1H NMR (300 MHz, CD3CN): 0 7,48-7,19 (m, 6H); 7,13-6,98 (m, 3H); 4,71-4,51 (m, 3H); 4,48-4,32 (m, 1H); 4,26-4,01 (m, 1H); 3,79-3,57 (m, 2H); 3,48-3,20 (m, 3H); 3,19-3,06 (m, 5H); 3,01-2,89 (m, 2H); 2,80-2,62 (m, 2H); 2,09-1,96 (m, 3H); 1,94-1,70 (m, 1H); 1,57-1,36 (m, 4H); 1,32-1,26 (m, 1H); 1,08-0,97 (m, 3H).

HRMS calculado para C29H40N4O4; 508,3049; detectado 508,3045 ± 0,0015

HPLC tR= 8,37 min

Compuesto 6 [0280] Rendimiento: se obtuvieron 28,2 mg de macrociclo (cuantificación CLND).

1H NMR (300 MHz, DMSO-D6): 0 10,80 (s, 1H); 8,46 (d, J = 9,65 Hz), 8,36-8,28 (m), 8,14-8,07 (m), y 8,02 (d, J = 9,65 Hz) (1H); 7,73-7,65 (m), 7,59 (d, 8,2 Hz), y 7,51 (d, J = 8,2 Hz) (1H); 7,3 (d, J = 8,2 Hz, 1H); 7,16-6,91 (m, 5H); 6,89-6,76 (m, 2H); 4,62-4,49 (m) y 4,42-4,24 (m) (1H); 4,15-3,81 (m, 2H); 3,77-3,43 (m, 2H); 3,41-3,19 (m, 6H); 3,22-2,85 (m, 6H); 2,52 (s, 3H); 1,89-1,69 (m, 1H); 1,59-1,02 (m, 4H); 0,88-0,74 (m, 3H).

HRMS calculado para C30H39N5O4; 533,3002; detectado 533,2990 ± 0,0016.

HPLC tR = 8,22 min.

Compuesto 8 [0281] Rendimiento: se obtuvieron 74,9 mg de macrociclo puro (cuantificación CLND). A partir de 600-650 mg de resina de partida.

1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 0 9,47 (br s), 9,07 (s) (1H) y 8,32 (br s) (2H); 7,94 (d, 6,6 Hz, 1H); 7,60-7,42 (m, 2H); 7,38 (d, 9,0 Hz, 1H); 7,28-7,04 (m, 7H); 6,93 (t, 8,1 Hz, 1H); 6,60 (d, J= 14,4 Hz) y 6,39-6,27 (m) (1H); 4,51-4,38 (m, 1H); 4,294,08 (m, 2H); 3,87-3,63 (m, 2H); 3,40-3,13 (m, 2H); 2,94 (t, J = 14,1 Hz, 1H); 2,53-2,50 (m, 1H); 2,32-2,17 (m, 1H); 1,86-1,06 (m, 10H); 0,95-0,79 (m, 6H).

HRMS calculado para C32H42N4O4; 546,3206; detectado 546,3198 ± 0,0016.

HPLC tR = 9,02 min.

Compuesto 9 [0282] Rendimiento: se obtuvieron 33,7 mg de macrociclo puro (cuantificación CLND).

1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 0 8,48 (s, 1H); 7,92 (d, J = 5,3 Hz, 1H); 7,81 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 7,26-7,08 (m, 7H); 6,88-6,75 (m, 2H); 4,30 (br t, J = 10,1 Hz, 1H); 4,0 (t, J = 8,6 Hz, 1H); 3,87 (br d, J = 8,6 Hz, 1H); 3,70-3,58 (m, 1H); 3,4-3,25 (m, 1H); 3,04-2,85 (m, 3H); 2,73 (d, 7,67 Hz, 1H); 2,53 (s, 3H); 2,35-2,09 (m, 2H); 1,92-1,44 (m, 8H); 1,42-1,18 (m, 2H); 0,85, 0,81 (2 dobletes, J = 6,76 Hz, 6H).

13C NMR (75 MHz, DMSO-d6): 0 176,15; 173,20; 171,27; 157,18; 140,08; 130,72; 130,52; 129,71; 128,64; 127,87; 126,62; 120,88; 111,44; 68,29; 67,10; 66,99; 55,24; 48,42; 41,11; 41,03; 39,36; 36,93; 35,77; 34,65; 32,38; 30,55; 29,96; 23,83; 22,65; 19,87.

HRMS calculado para C31H42O4; 534,3206; detectado 534,2139 ± 0,0016.

HPLC tR = 9,29 min.

Compuesto 10 [0283] Rendimiento: se obtuvieron 19,2 mg de macrociclo puro (cuantificación CLND).

1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 0 8,53, 8,41, 8,38 (dobletes, J = 8,8, 8,5, 8,5 Hz, 1H); 8,16-8,05, 7,87-7,71 (multipletes, 1H); 7,31-7,04 (m, 7H); 6,91-6,75 (m, 2H); 4,60-4,45, 4,39-4,30, 4,28-4,16 (m, 1H), 4,10-4,00, 3,97-3,83 (m, 2H); 3,73-3,46 (m, 2H); 3,22-3,20 (m 1H), 3,16, 3,09 (2 s, 3H), 2,45-2,39 (m, 1H); 2,99-2,86 (m, 1H); 2,85-2,58 (m, 5H); 2,48-2,22 (m, 1H); 2,07 (s, 1H), 1,95-1,78 (m, 1H), 1,751,42 (m, 1H), 1,42-1,17 (m, 4H), 0,88-0,77 (m, 3H).

HRMS calculado para C28H38N4O4; 494,2893; detactado 494,2888 ± 0,0015

HPLC tR= 8,27 min.

Compuesto 221 [0284] Rendimiento: se obtuvieron 50,3 mg de macrociclo (cuantificación CLND).

1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 0 7,86 (d, J = 6,7 Hz) y 7,65-7,58 (m) (1H); 7,287,06 (m, 7H); 6,88 (d, 8,06 Hz, 1H); 6,81 (t, J = 6,7 Hz, 1H); 4,07-3.91 (m, 3H); 3,77-3,65 (m, 1H); 3,56-3,38 (m, 2H); 3,35-3,25 (m, 3H); 3,25-3,07 (m, 2H); 3,042,63 (m, 3H); 2,52 (s, 3H); 2,01-1,71 (m, 4H); 1,66-1,49 (m, 2H); 1,47-1,17 (m, 4H); 0,90-0,78 (m, 3H).

13C NMR (75 MHz, DMSO-d6): 0 172,15; 170,81; 170,74; 157,29; 139,62; 130,76; 130,56; 129,56; 128,82; 61,73; 59,29; 56,37; 47,90; 41,11; 41,03; 39,36; 35,81; 35,43; 30,23; 30,03; 29,63; 25,12; 19,15; 14,66.

HRMS calculado para C30H40N4O4; 520,3049; encontrado 520,3041 ± 0,0016.

HPLC tR = 8,30 min.

Ejemplo 3

Estrategias sintéticas alternativas

[0285] Ciertas estrategias sintéticas alternativas que se prestan a la síntesis a mayor

escala de los compuestos de la presente invención se tratan más adelante.

A. Método LS1 para la síntesis representativa a gran escala de los compuestos de la invención [0286] Fase LS1-A: Síntesis de LS1-8 [0287]

[0288] Se añadió al alcohol Cbz-T33a (2,4 g, 7,0 mmol, 1.0 eq) en CH2Cl2 (50 mL) NBS

5 (1,5 g, 8,4 mmol, 1.2 eq) y PPh3 (2,2 g, 8,4 mmol, 1.2 eq). La mezcla se agitó a temperatura ambiente toda la noche y se añadió una solución de NH4Cl acuosa. Se extrajo la fase acuosa con CH2Cl2 (2x) y las fases orgánicas combinadas se extrajeron con una solución de NH4Cl acuosa saturada para eliminar el subproducto de succinimida. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró a presión reducida.

10 Se purificó el residuo mediante cromatografía flash (AcOEt 20%, hexanos 80%) para proporcionar bromuro LS1-8a en forma de aceite amarillo (2,6 g, 91%).

TLC (30% AcOEt, 70% hexanos); Rf = 0,56; detección: UV y CMA

15 1H NMR (CDCl3): 0 7,37-7,26 (5H, m, Ph), 7,19-7,13 (2H, m, Ph), 6,90 (1H, t, Ph), 6,83 (1H, d, Ph), 5,10 (2H, s, NHC(O)OCH2Ph), 4,96 (1H, broad, NHCbz), 4,59 (1H, sextuplete, PhOCH(CH3)CH2Br), 3,58-3,47 (2H, m, CH2Br), 3,19 (2H, q, CH2NHCbz), 2,67 (2H, t, PhCH2CH2), 1,78 (2H, quint, PhCH2CH2), 1,44 (3H, d, CHCH3).

LC/MS (Grad_A4): tR = 11,15 min

Fase LS1-B1: Síntesis de LS1-10

[0289]

[0290] La sal clorhidrato de H-Nva-OMe se disolvió en una solución acuosa de Na2CO3 (1 M) y se saturó con NaCl para asegurar la extracción de todas las aminas libres. La solución acuosa se extrajo con AcOEt (3x). Las fases orgánicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a 30 presión reducida. La amina libre, H-Nva-OMe, se recuperó en un rendimiento del 90%. Es importante llevar a cabo la alquilación con la amina libre (H-Nva-OMe) para eliminar

la formación de cloruro (OTs a Cl) como reacción secundaria. Se añadió en un matraz de fondo redondo seco bromuro LS1-8a (740 mg, 1,83 mmol, 1,0 eq) y H-Nva-OMe (479 mg, 3,60 mmol, 2,0 eq). Se añadió DMF (3,7 mL) desgasificado (agitándolo en vacío durante 30 min), Na2CO3 anhidro (232 mg, 2,19 mmol, 1,2 eq) y KI (61 mg, 0,37 mmol, 0,2 eq) y se agitó la mezcla a 110°C toda la noche. Se añadió agua y se extrajo la fase acuosa con Et2O (3x). Se extrajeron las fases orgánicas combinadas con agua (2x), luego salmuera (1x). La fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash (30% AcOEt: 70% hexanos) para proporcionar amina secundaria LS1-10 en forma de aceite amarillo (709 mg, 85%).

TLC (30% AcOEt, 70% hexanos); Rf= 0,32; detección: UV y CMA

1H NMR (CDCl3): 0 7,35-7,29 (5H, m, Ph), 7,17-7,12 (2H, m, Ph), 6,91-6,84 (2H, m, Ph), 5,51 (1H, amplio, CH2NHCHRR'), 5,09 (2H, s, OCH2Ph), 4,67-4,51 (1H, m, PhOCH(CH3)R), 3,65 (3H, s, C(O)OCH3), 3,24-3,10 (3H, m, NHCH(Pr)CO2Me y CH2NHCbz), 2,87-2,41 (4H, m, PhCH2CH2 y NHCH2CH(Me)OPh), 1,86-1,76 (2H, m, PhCH2CH2), 1,70-1,63 (2H, m, CH3CH2CH2), 1,36-1,28 (2H, m, CH3CH2CH2), 1,23 (3H, d, CHCH3), 0,90 (3H, t, CH3CH2CH2).

13C NMR (CDCl3): 0 176,44, 156,88, 155,58, 137,14, 131,16, 130,57, 128,68, 128,34, 128,21, 127,33, 120,79, 112,62, 73,16, 66,62, 61,30, 54,21, 51,95, 40,86, 36,02, 30,60, 27,88, 19,20, 17,80, 14,07.

LC/MS (Grad_A4): tR = 6,76 min

Fase LS1-B2: Síntesis alternativa de LS1-10 [0291] A una solución de alcohol Cbz-T33a (8,5 g, 24,7 mmol, 1,0 eq) en CH2Cl2 (125 mL) se añadió Et3N (10,4 mL, 74,1 mmol, 3,0 eq), TsCl (5,2 g, 27,2 mmol, 1,1 eq) y DMAP (302 mg, 2,47 mmol, 0,1 eq). La mezcla se agitó toda la noche a temperatura ambiente y luego se añadió una solución acuosa de NH4Cl saturado. Se extrajo la fase acuosa con CH2Cl2 (2x) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatrografía flash (30% AcOEt, 70% hexanos) para proporcionar tosilato LS1-8b en forma de aceite (9.4 g, 90%). TLC (50% AcOEt, 50% hexanos); Rf = 0,47; detección: UV y CMA

1H NMR (CDCl3): 0 7,74 (2H, d, Ph), 7,36-7,26 (7H, m, Ph), 7,14-7,08 (2H, m, Ph), 6,88 (1H, t, Ph), 6,74 (1H, d, Ph), 5,10 (2H, s, NHC(O)OCH2Ph), 4,97 (1H, amplio, NHCbz), 4,61-4,55 (1H, m, PhOCH(CH3)CH2OTs), 4,19-4,05 (2H, m, CH2OTs), 3,15 (2H, q, CH2NHCbz), 2,56 (2H, td, PhCH2CH2), 2,42 (3H, s, PhCH3) 1,74 (2H, quint, PhCH2CH2), 1,27 (3H, d, CHCH3)

13C NMR (CDCl3): 0 156,67, 155,05, 145,20, 137,04, 133,02, 131,16, 130,65, 5 130,11, 128,72, 128,28, 128,23, 128,10, 127,39, 121,50, 112,87, 71,99, 71,42, 66,68, 40,79, 30,32, 27,57, 21,87, 16,74.

LC-MS (Grad_A4): tR = 11,02 min

10 La aplicación del procedimiento en la Fase LS1-B1, sustituyendo el tosilato LSl-8b como agente alquilante proporcionó el 73% de rendimiento de LS1-10 con 2 eq de H-Nva-OMe.

Fase LS1-C1: Síntesis de LS1-7 15 [0292]

[0293] A una solución de amina LS1-10 (697 mg, 1,53 mmol, 1.0 eq) en THF/H2O (1:1, 15 mL) a 0°C se añadió Na2CO3 (244 mg, 1,68 mmol, 1.5 eq) y (Boc)2O (366 mg, 1,68 mmol, 1.1 eq), luego se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 36-48 h. El THF

20 se evaporó a presión reducida y se extrajo la fase acuosa con Et2O (3x). Las fases orgánicas combinadas se extrajeron con salmuera y se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El compuesto Boc se obtuvo en forma de aceite amarillo y se usó sin más purificación para la siguiente reacción.

[0294] TLC (30% AcOEt, 70% hexano): Rf= 0,49; detección: UV y CMA 25 [0295] A una solución de compuesto Boc crudo en THF/H2O (1:1, 15 mL) se añadió LiOH (309 mg, 7,35 mmol, 5.0 eq) y se agitó la mezcla toda la noche a temperatura ambiente. El THF se evaporó a presión reducida y la fase básica acuosa restante se acidificó con 1 M HC1 a pH 3 (papel de pH). Se extrajo la fase acuosa con AcOEt y las fases orgánicas combinadas con agua y salmuera. La fase orgánica se secó sobre 30 MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se obtuvo ácido carboxílico LS1-7 en forma de aceite amarillo (687 mg, 83%, 2 fases). TLC (50% AcOEt, 50% hexano); Rf = 0,32; detección: UV y CMA

13NMR (CDCl3): 0 176,11, 156,81, 155,51, 155,18, 136,93, 131,13, 130,37, 128,72, 128,31, 127,44, 121,20, 113,70, 81,36, 73,40, 66,79, 61,99, 40,80, 32,83, 31,56, 30,33, 28,48, 27,48, 20,10, 17,53, 14,11.

LC/MS (Grad_A4): tR =12,50 min

Fase LS1-C2: Vía sintética divergente (sin protección de amina) [0296]

10 [0297] El H-Nva-OtBu·HCl se disolvió en una solución acuosa de Na2CO3 (1 M) y se saturó con NaCl para asegurar la extracción de todas las aminas libres. Esta solución acuosa se extrajo con AcOEt (3x). Las fases orgánicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se recuperó cerca del 90% de la amina libre, H-Nva-OtBu. Es importante llevar a cabo la

15 alquilación con la amina libre (H-Nva-OtBu) para eliminar la formación de producto secundario de cloruro (OTs -> Cl). [0298] Se añadió en un matraz de fondo redondo seco tosilato LS1-8b (1,0 g, 2,01 mmol, 1,0 eq) y H-Nva-OtBu (752 mg, 4.02 mmol, 2.0 eq). Se añadió DMF (4 mL) desgasificado (agitándolo en vacío durante 30 min) y Na2CO3 anhidro (256 mg, 2,41

20 mmol, 1,2 eq, nótese que otras bases fueron menos efectivas) y se agitó la mezcla a 110°C toda la noche. Se añadió agua y se extrajo la fase acuosa con Et2O (3x). Las fases orgánicas combinadas se extrajeron con agua (2x) y salmuera (1x). La fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatogarfía flash (30% AcOEt: 70% hexanos) para proporcionar la

25 amina libre, LS1-12, en forma de aceite amarillo (683 mg, 75%). Esta amina secundaria cruda (1,0 eq) se disolvió en 4 M HCl/dioxano (10 eq) y se agitó la mezcla toda la noche a temperatura ambiente. El solvente se evaporó a presión reducida y se añadió Et2O al residuo. Se formó un precipitado blanco tras la adición de hexanos a la mezcla. El precipitado se filtró y se enjuagó con hexanos fríos para proporcionar el aminoácido

30 deseado, LS1-13, en forma de un sólido blanco.

TLC (50% AcOEt, 50% hexano); Rf = 0,71; detección: UV y CMA A pesar de la presencia de la amina libre, se ha usado LS1-13 en la parte restante del esquema sintético para acceder con éxito al macrociclo deseado.

Fase LS1-D: Síntesis del dipéptido LS1-6 [0299]

[0300] La sal tosilato de H-(D)Phe-OBn se disolvió en una solución acuosa de 1 M Na2CO3 y se extrajo dicha solución con AcOEt (3x). Las fases orgánicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a 10 presión reducida. La amina libre H-(D)Phe-OBn se recuperó al 90% de rendimiento. Se añadió Boc-(D)NMeAla-OH (2,5 g, 12,35 mmol, 1,05 eq), 6-Cl HOBt (2,0 g, 11,76 mmol, 1,0 eq) y DIPEA (10,2 mL, 58,8 mmol, 5,0 eq) a una solución de H-(D)Phe-OBn (3,0 g, 11,76 mmol, 1,0 eq) en THF/CH2Cl2 1/1 (60 mL). La mezcla se enfrió hasta los 0°C y se añadió EDCI (2,48 g, 12,94 mmol, 1,1 eq). La mezcla se agitó durante 1 h a 0°C y a 15 temperatura ambiente toda la noche. El solvente se evaporó a presión reducida y el residuo se disolvió en AcOEt. La fase orgánica se lavó secuencialmente con una solución acuosa de 1 M de tampón de citrato (pH 3,5, 2x), una solución acuosa de NaHCO3 saturado (2x) y salmuera (1x). La fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se obtuvo el dipéptido en forma de aceite amarillo y 20 se usó tal y como se obtuvo para la siguiente fase (5,3 g, 100%). Se disolvió el dipéptido en una solución de HCl/dioxano (4 M, 30 mL, 10 eq), luego se añadieron 50 mL de dioxano para facilitar la agitación y se agitó la mezcla durante 1 h a temperatura ambiente; se obtuvo una solución heterogénea. La mezcla se concentró a presión reducida y se secó más en una bomba de vacío mecánica. Se obtuvo la sal clorhidrato

25 LS1-6 en forma de sólido amarillo pálido (4,4 g, 100%).

1H NMR (DMSO-d6): 0 9,40-8,70 (3H, d y 2 amplios, C(O)NH y CH3NH2+Cl-), 7,39-7,17 (10H, m, Ph), 5,11 (2H, s, C(O)OCH2Ph), 4,69-4,61 (1H, m, CHCH3), 3,69 (1H, dd, CHCH2Ph), 3,31 (3H, s, CH3NH2+Cl-), 3,17-3,11 y 2,97-2,90

30 (CHCH2Ph), 1,28 (3H, d, CHCH3)

13C NMR (DMSO-d6): 0 171,33, 169,18, 137,63, 136,31, 129,92, 129,11, 128,95, 128,83, 128,63, 127,30, 67,00, 56,57, 54,38, 36,98, 31,11, 16,47.

35 LC/MS (Grad_A4): tR = 6,17 min

Fase LS1-E: Síntesis del aminoácido LS1-5 [0301]

[0302] Se añadió sal clorhidrato LS1-6 (958 mg, 2,55 mmol, 1,0 eq), DIPEA (2,2 mL,

5 12,8 mmol, 5,0 eq) y HATU (1,07 g, 2,81 mmol, 1,1 eq) a una solución de ácido LS1-7 (1,45 g, 2,67 mmol, 1,05 eq) en TBF/CH2Cl2 1/1 (13 mL) a 0°C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente toda la noche. El solvente se evaporó y el residuo se disolvió en AcOEt. La fase orgánica se lavó secuencialmente con una solución acuosa de 1 M de tampón de citrato (pH = 3,5, 2x), una solución acuosa de NaHCO3 saturado (2x), y luego

10 con salmuera (1x). La fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash (gradiente: 20% AcOEt, 80% hexanos a 30% AcOEt, 70% hexanos) para proporcionar el tripéptido completamente protegido y deseado en forma de espuma pegajosa amarilla pálida (1,6 g, 73%).

TLC (50% AcOEt, 50% hexanos): Rf= 0,78; detección: UV y CMA

LC/MS (Grad_A4): tR =15,15 min

20 [0303] Se añadió un 10% de Pd/C (20% por peso, 315 mg) a una solución del tripéptido alquilado y protegido (1,5 g, 1,75 mmol, 1,0 eq) en AcOEt (23 mL) y posteriormente se borboteó hidrógeno a través de la solución. La mezcla se agitó toda la noche bajo una atmósfera de hidrógeno. Se borboteó nitrógeno a través de la reacción y posteriormente se filtró la mezcla en una almohadilla de Celite y se aclaró con AcOEt. El filtrado

25 combinado se evaporó a presión reducida para proporcionar LS1-5 en forma de sólido blanco (1,1 g, cuantitativo).

TLC (50% AcOEt, 50% hexanos): Rf= 0,52; detección: UV y CMA

30 LCMS (Grad_A4): tR = 8,23 min

Fase LS1-F: Macrociclización y desprotección final [0304]

[0305] Se añadió DIPEA (68 μL, 0,39 mmol, 5,0 eq) y DEPBT (28 mg, 0,094 mmol, 1,2

5 eq) a una solución de precursor de ciclización LS1-5 (50 mg, 0,08 mmol, 1.0 eq) en THF (3,2 mL, para una concentración de 25 mM) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente toda la noche. El solvente se evaporó a presión reducida y se purificó el residuo mediante cromatografía flash (1% MeOH, 99% CH2Cl2) para proporcionar el macrociclo Boc-protegido LS1-11 en forma de sólido blanco (40 mg, 0,064 mmol, 80%). En una

10 escala de 1 g de precursor LS1-5 en una concentración de reacción de 25 mM, el rendimiento fue del 73%.

TLC (5:95 MeOH:DCM): Rf=0,43; detección: UV y CMA 1H NMR (DMSO-d6 60°C): 8 7,62.(1H, d, NH), 7,47 (1H, amplio, NH), 7,27-7,08 15 (7H, m, Ph), 6,85-6,79 (2H, m, Ph), 4,78 (1H, amplio), 4,51-4,38 (1H, m), 4,114,02 (2H, m), 3,62-3,56 (1H, m), 3,32-3,04 (5H, m), 2,92 (3H, s, N-CH3), 2,72

2,46 (2H, m), 1,90-1,59 (4H, m), 1,46 (9H, s, C(CH3)3), 1,28-1,06 (8H, m), 0,65 (3H, t, CH2CH3). 13C NMR (DMSO-d6): 0 172,03, 171,07, 155,83, 155,60, 139,69, 131,82, 130,82,

20 129,69, 128,73, 127,73, 126,75, 121,06, 113,40, 80,66, 74,75, 57,22, 56,66, 50,49, 35,88, 33,72, 32,71, 30,41, 28,68, 19,35, 18,44,14,95, 14,19. LC-MS (Grad_A4): tR = 12,82 min

El macrociclo LS1-11 (565 mg, 0,91mmol, 1.0 eq) se disolvió en una solución de 4 M

25 HCl/dioxano (4,6 mL, 20 eq) y la mezcla se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. La mezcla se concentró a presión reducida y se colocó en vacío (bomba de aceite) para proporcionar el macrociclo final del Compuesto 410 en forma de sólido blanco (508 mg, 100%).

El HPLC quiral no indicó ninguna racemización cuando se comparó con su (L)-antípoda

30 en la posición AA3. 1H NMR (DMSO-d6, 60°C): 0 9,38 (1H, amplio), 8,28 (1H, d), 8,13 (1H, amplio), 7,81 (1H, t), 7,28-7,13 (7H, m, Ph), 6,93-6,87 (2H, m, Ph), 4,84-4,77 (1H, m), 4,54-4,40 (3H, m), 3,35-3,07 (6H, m), 2,94 (3H, s, N-CH3), 2,90-2,81 y 2,64-2,47 (2H, m), 1,85-1,64 (4H, m), 1,38-1,21 (5H, m), 1,10 (3H, d, CH3), 0,88 (3H, t,

CH2CH3). 13C NMR (CDCl3): 0 171,92, 171,46, 170,44, 155,11, 139,07, 131,68, 130,47, 129,87, 128,67, 127,54, 126,90, 121,50, 112,94, 69,83, 67,03, 58,14, 56,33,

5 55,61, 55,29, 53,88, 50,48, 37,29, 32,29, 31,08, 29,70, 28,58, 18,15, 17,89, 15,20, 14,55. LC-MS (Grad_A4): tR = 6,23 min LC quiral (Grad35A-05): tR = 26,49 min LC quiral (Grad40A-05): tR = 26,54 min

B. Método LS2 para la síntesis representativa a gran escala de los compuestos de

la invención [0306]

Fase LS2-A: Síntesis del dipéptido LS2-21 [0307]

20 [0308] Se trató una suspensión agitada de H-(D)Phe-OtBu.HCl (5 g, 0,02 mol, 1 eq) y Z(D)NMeAla-OH (4,98 g, 0,021 mol, 1,05 eq) en 130 mL de THF-DCM anhidro (1:1) a temperatura ambiente con DIPEA (17,50 mL, 0,1 mol, 5eq) y 6-Cl-HOBt (3,40 g, 0,02 mol, 1eq). La mezcla se agitó enérgicamente a temperatura ambiente durante varios minutos, se enfrió en un baño de hielo y posteriormente se añadió EDCI (4,20 g, 0,022

25 mol, 1.1 eq) y se agitó la mezcla durante 1h. Transcurrido este periodo de tiempo, se quitó el baño de hielo y se agitó la mezcla a temperatura ambiente toda la noche. Se eliminó el solvente a presión reducida y se disolvió el residuo en 100 mL de AcOEt y se lavó con una solución de tampón de citrato (1 N, 2 x 100 mL), una solución de NaHCO3 saturado (2 x 100 mL) y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó hasta la sequedad a presión reducida para proporcionar 9,25 g (100%) de un aceite incoloro, LS2-24.

TLC (hexanos/acetato de etilo, 1:1): Rf= 0,3; detección: CMA y UV

1H NMR (CDCl3): 0 1,25 (m, 2H), 1,40 (s, 9H), 2,66 (s. 3H), 2,85 (dd, 1H), 3,15 (dd, 1H), 4,70 (q, 2H), 5,15 (s, 2H), 6,50 (sb, 1H), 7,15 (m, 2H), 7,20 (m, 3H), 7,35 (m, 5H).

13C NMR (CDCl3): 0 28,18, 38,23, 53,61, 53,61, 67,87, 127,12, 128,40, 128,19, 128,40, 128,61, 128,8, 129,53, 170,01.

LC/MS (Grad_A4); tR = 9,73 min; masa encontrada: 440

[0309] El dipéptido LS2-24 (6,9 g, 0,015 mol) se disolvió en AcOEt (100 mL), posteriormente se purgó con nitrógeno durante 10 min. Se añadió el 10% de Pd-C (690 mg) y se purgó la mezcla con un globo lleno de gas hidrógeno. La mezcla fue entonces hidrogenada a presión atmosférica usando un globo de H2. Transcurridas 12 h, se filtró la mezcla de reacción a través de una almohadilla corta de Celite, y se lavó la torta de filtración con AcOEt. El filtrado combinado y las soluciones de lavado se concentraron a presión reducida para producir el compuesto prácticamente puro (NMR limpio), incoloro y sólido LS2-21 (4,30 g, 90%) que fue usado directamente en la siguiente fase sin una mayor purificación.

TLC (100% AcOEt): Rf= 0,1; detección: CMA y UV.

1H NMR (CDCl3): 0 1,20 (d J=7,03 Hz, 3H) (s, 9H), 2,40 (s, /H), 3,01-3,20 (m, 3H), 4,80 (q, 1H), 7,20 (m, 5H), 7,60 (m, 1H).

13C NMR (CDCl3): 0 19,64, 28,18, 35,12, 38,46, 53,06, 60,42, 82,29, 127,05, 128,50, 129,71, 136,61, 170,85, 174,28.

LC-MS (Grad_A4): tR = 5,86 min; Masa encontrada: 306

Fase LS2-B: Síntesis del tripéptido LS2-22 [0310]

5 [0311] Se trató una suspensión de dipéptido LS2-21 (2 g, 6,50 mmol, 1 eq) y Bts-Nva-OH (LS2-28, 2,15 g, 6,85 mmol, 1,05 eq) en 32 mL DCM anhidro a 0°C con DIPEA (4,50 mL, 0,026 mol, 4eq) y HATU (2,72 g, 7,18 mmol, 1,1 eq). La mezcla se agitó enérgicamente a 0°C durante 1 h. Transcurrido este tiempo, se quitó el baño de hielo y se agitó la reacción a temperatura ambiente toda la noche. El solvente se eliminó en

10 vacío y el residuo se disolvió en 30 mL de AcOEt. La fase orgánica se lavó secuencialmente con 1 N de solución tampón de citrato (2 x 30 mL), solución de NaHCO3 saturado (2 x 30 mL) y salmuera (1 x 30 mL). La capa orgánica se secó entonces sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se evaporó a sequedad a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash [acetato de etilo/hexanos

15 (1/1)] para proporcionar LS2-22 en forma de sólido incoloro (3,13 g, 80%).

TLC (hexanos/acetato de etilo, 3:2): Rf= 0,3; detección: CMA y UV

1H NMR (CDCl3): 0 0,95 (m, 3H), 1,20 (d, 2H), 1,40(s, 9H), 1,42-1,70 (m, 4H),

20 2,60 (m, 2H), 2,90 (s, 3H), 4,40 (m, 1H), 4,80 (m, 1H), 4,92 (m, 1H), 6,10 (m,1H), 6,30 (M, 1H), 6,40 (m, 1H), 6,90 (m, 2H), 7,20 (m, 3H), 7,40-7,60 (m, 2H), 7,90 (m,1H), 8,10 (m, 1H).

13C NMR (CDCl3): 0 23,42, 26,32, 33,12, 48,63, 49,10, 49,85, 77,56, 117,63,

25 120,67, 122,35, 122,93, 123,11, 123,80, 124,13, 124,68, 124,75, 131,45, 147,67, 165,16,165,68, 167,66.

LC-MS (Grad_A4): tR =11,48 min; Masa encontrada: 602

Fase LS2-C: Síntesis de LS2- 23 [0312]

[0313] Se trató una suspensión agitada de tripéptido LS2-22 (0,4 g, 0,66 mmol) y amarre de bromuro LS2-9 (0,5 g, 1,32 mmol, sintetizado como en la fase LS1-A para el derivado Cbz correspondiente) en 1,33 mL de DMF anhidro a temperatura ambiente con KI (0,12 g, 0,66 mmol) y K2CO3 (0,185 g, 1,32 mmol). La mezcla se agitó enérgicamente 10 a 80°C durante 24 horas. Transcurrido este tiempo, la mezcla se enfrió hasta alcanzar la temperatura ambiente, posteriormente se añadieron 20 ml de agua y se extrajo el producto con Et2O (3 x 30 mL). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (2 x 30 mL), se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía flash [hexanos/acetato de etilo (1:2)] para proporcionar

15 LS2-25 en forma de sólido blanco (70%).

TLC (hexanos/acetato de etilo, 2:1): Rf= 0,4; detección: CMA y UV

1H NMR (DMSO-d6): 0,5 (m, 1H), 0,70 (m, 1H), 1,01-1,40 (m, )1,60 (m, 3H), 1,80

20 (m, 1H), 2,55 (m,), 2,95 (m, 4H), 3,1 (m, 2), 3,30 (m, 2H), 3,60 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,80 (m,), 6,80 (m, 3H), 7,05 (m, 6H), 7,60 (2H), 7,95 (m, 1H), 8,20 (m, 1H), 8,25 (m, 1H), 8,90 (s, 2H).

13C NMR (CDCl3): 0 13,84, 15,36, 17,40, 17,70, 19,40, 22,17, 27,52, 28,14,

25 28,67, 30,29, 31,27, 33,27; 38,01, 40,35, 51,02, 53,08, 54,35, 56,72, 70,25, 73,13, 81,10, 113,49, 120,94, 122,28, 125,44, 127,01, 127,19, 127,19, 127,68, 127,68, 127,79, 128,64, 129,57,130,06, 136,2, 137,10, 165,10,170,10, 171,10.

LC-MS (Grad_A4): tR =15,10 min; Masa encontrada: 892

[0314] Se trataron 100 mg de tripéptido alquilado LS2-25 (100 mg, 0,11 mmol) con 2 mL de TFA 50%, trietilsilano 3% (TES) en DCM, posteriormente se agitó la mezcla durante 1 h a temperatura ambiente. Transcurrido este tiempo, se eliminaron todos los solventes a presión reducida. El compuesto crudo LS2-23 se secó empleando una bomba de vacío durante 1 h y se usó directamente en la siguiente fase sin mayor purificación.

LC/MS (Grad_A4): tR = 8,55 min; Masa encontrada: 737

Fase LS2-D: Síntesis de LS2-26 (Macrolactamización) [0315]

[0316] Se añadió DEPBT (41 mg, 0,14 mmol) a una suspensión agitada de tripéptido

10 alquilado 23 (0,12 mmol) y DIPEA (0,100 mL, 0,56 mmol) en 11,22 mL de THF anhidro a temperatura ambiente. La mezcla se agitó enérgicamente a temperatura ambiente toda la noche. Posteriormente, se concentró la reacción a sequedad a presión reducida y se disolvió el residuo en 10 mL de AcOEt. La solución orgánica se lavó secuencialmente con solución tampón de (1 N, 2 x 30 mL), NaHCO3 saturado (2 x 30 mL) y salmuera (1 x

15 30 mL). La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se evaporó a sequedad a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash empleando [acetato de etilo/ hexanos (3:1)] para proporcionar LS2-26 (Bts-410) en forma de sólido blanco (80 mg, 98%).

20 TLC (acetato de etilo/ hexanos, 3:1): Rf= 0,3; detección: CMA y UV

1H NMR (CDCl3): 0 0,64 (m, 3H), 0,87 (m, 1H), 1,02 (m, 2H), 1,20 (m, 6H), 1,40 (m, 3H), 1,60 (m, 4 H), 1,80 (m, 1H0, 2,01 (m, 1H), 2,40 (m, 1H), 2,80 (m, 1H), 3,15 (s, 3H), 3,20 (m, 2H), 3,45 (m, 1H), 3,60-3,80 (m, 2H), 4,40-4,60 (dd, 2H),

25 4,70 (m, 2H), 5,01 (m, 1H), 5,90 (m, 1H), 6,80 (m, 2H), 6,90 (m, 1H), 7,15-7,25 (m, 7H), 7,60 (m, 2H), 8,01 (m, 1H), 8,10 (m, 1H).

13C NMR (CDCl3): 0 13,28, 13,55, 18,75, 18,98, 28,89, 29,92, 29,92, 33,19, 36,81, 36,98, 39,55, 51,94, 53,83, 55,25, 59,51, 74,64, 111,66, 120,64, 122,51,

30 125,15, 127,10, 127,37, 127,84, 128,07, 128,86, 129,47, 130,51, 136,55, 137,30, 152,58, 155,86, 165,33, 169,75, 170,09, 171,66.

LC/MS (Grad_A4): tR =13,17 min; Masa encontrada: 719 LC quiral (columna ODRH, Grad 55A-05): tR = 42,059.

Fase LS2-E: Síntesis del compuesto 410 [0317]

[0318] Se añadieron 23 mg de K2CO3 y 10 μl de ácido mercaptopropinóico a temperatura ambiente a una suspensión agitada de macrociclo LS2-26 (40 mg, 0,003 mmol) en 0,110 mL de DMF, posteriormente se dejó la reacción durante toda la noche.

10 La reacción se concentró a sequedad a presión reducida y se disolvió el residuo crudo en 10 mL de AcOEt. La solución orgánica se lavó con una solución saturada de NaHCO3 (2 x 30 mL), y salmuera (1 x 30 mL). La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se evaporó a sequedad a presión reducida. Así, se aisló el compuesto 410 al 90% de rendimiento.

15 TLC (100% AcOEt): Rf= 0,2; detección: CMA y UV

1H NMR (DMSO-d6): 0 0,79 (m, 3H), 1,20 (m, 9H), 1,30 (M, 1H), 1,60 (m, 1H), 1,90 (m, 1H), 2,10 (sb, 1H), 2,35 (ddd, J=4,98, 4,95, 4,69 Hz, 1H), 2,56 (sb, 1H), 2,63 (m, 1H), 2,80 (ddd, J=4,99, 4,69, 4,40 Hz, 1H), 3,01-3,15 (m, 5H), 3,25 (dd,

20 J=4,69, 4,11 Hz, 1H), 3.,30 (s, 2H), 3,55 (sb, 1H), 3,95 (q, J=7,33, 7,04 Hz, 1H), 4,50 (sb, 1H), 6,80 (m, 1H), 6,90 (m,1H), 7,10-7,30 (m, 7H), 7,70 (m, 2H).

13C NMR (DMSO-d6): 0 14,60, 14,84, 18,46, 18,85, 29,80, 29,96, 34,03, 35,84, 36,31, 40,68, 54,79, 55,67, 57,77, 58,11, 73,42, 112,26, 120,58, 126,84, 127,81,

25 128,80, 129,73, 131,10, 140,10, 158,10, 172,10, 172,40, 176,10.

LC/MS (Grad_A4): tR = 6,19 min; Masa encontrada: 522

Ejemplo 4 Síntesis y resultados biológicos para el compuesto representativo 298

A. Síntesis de la solución del compuesto 298

[0320] Fase LS3-1. Síntesis de la sal de clorhidrato del éster metílico de la ciclopropilglicina. Se añadió lentamente cloruro de acetilo (185 mL, 2,6 mol, 15 eq) recién destilado (a partir de PCl5) a una suspensión de H-Cpg-OH (LS3-A, 20,0 g, 174 mmol, 1,0 eq) en MeOH anhidro (350 mL) a 0°C a lo largo de 45 min. Se dejó que la

10 mezcla se calentara hasta alcanzar la temperatura ambiente y se agitó durante 16-18 h. Se monitorizó la reacción mediante TLC [MeOH/NR4OH/AcOEt (10:2:88); detección: ninhidrina; Rf = 0,50]. Posteriormente se concentró la mezcla en vacío, se formó un azeotropo con tolueno (3x) y se secó bajo alto vacío durante 16-18 h para proporcionar LS3-1 en forma de sólido amarillo pálido (30,0 g, > 100% rendimiento crudo).

1H NMR (CD3OD): 0 4,88 (3H, s, NH3+), 3,85 (3H, s, CH3O), 3,36-3,33 (1H, d, NH3+CHCH3O), 1,19-1,10 (1H, m, CH(CH2)2), 0,83-0,53 (4H, m, CH(CH2)2).

[0321] Fase LS3-2. Síntesis del amarre de bromuro. Se añadió NBS (12,8 g, 72,0 mmol, 1,15 eq, cantidades mayores de NBS produjeron un producto secundario desbromado) y PPh3 (18,9 g, 72,0 mmol, 1,15 eq) a alcohol en bruto Cbz-T33a (21,5 g, 62,6 mmol, 1.0 eq) en CH2Cl2 anhidro (250 mL). El matraz de fondo redondo se protegió de la luz con papel de aluminio y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1618 h con una monitorización mediante TLC [AcOEt/Hexanos (3:7); detección: UV y CMA; Rf = 0,42]. Se añadió una solución acuosa de NH4Cl saturado (200 mL) y se extrajo la fase acuosa con CH2Cl2 (2 x 150 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa de NH4Cl saturado (2 x 200 mL), se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash (AcOEt:hexanos, gradiente, 5:95 a 15:85) para proporcionar bromuro LS3-2 en forma de un aceite ligeramente amarillo (22,2 g, 88.4%).

1H NMR (CDCl3): 0 7,37-7,26 (5H, m, Ph), 7,19-7,13 (2H, m, Ph), 6,92-6,88 (1H, t, Ph), 6,84-6,81 (1H, d, Ph), 5,10 (2H, s, NHC(O)OCH2Ph), 4,96 (1H, amplio, NHCbz), 4,62-4,56 (1H, sextuplete, PhOCH(CH3)CH2Br), 3,58-3,45 (2H, m, CH2Br), 3,22-3,16 (2H, q, CH2NHCbz), 2,69-2,64 (2H, t, PhCH2CH2), 1,83-1,78 (2H, quint, PhCH2CH2),1,45 (3H, d, CHCH3).

13C NMR (CDCl3): 0 156,66, 155,08, 136,99, 131,28, 130,77, 128,75, 128,32, 128,28, 127,49, 121,56, 113,03, 73,12, 66,76, 40,69, 36,12, 30,45, 27,48, 19,00.

LC/MS (Grad_A4): tR =11,04 min

[0322] Fase LS3-3. Se disolvió la sal clorhidrato LS3-1 en una solución acuosa de Na2CO3 (1 M, 275 mL, 0,272 mol, 1,5 eq). Se saturó la fase acuosa básica con NaCl y se extrajo con AcOEt/CH2Cl2 (2:1) (5 x 100 mL). TLC [MeOH/NH4OH/AcOEt (10:2:88); detección: ninhidrina; Rf = 0,50]. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a bajo vacío a temperatura ambiente para proporcionar el aminoéster libre LS3-3 en forma de aceite amarillo (19,1 g, 85%, 2 fases). LS3-3 es volátil y no debe dejarse en una bomba de vacío mecánica durante largos períodos de tiempo. Con el fin de minimizar la formación de dicetopiperazina, la Fase LS3-4 no debe darse inmediantamente después del aislamiento de LS3-3.

1H NMR (CDCl3): 0 3,70 (3H, s, CH3O), 2,88-2,85 (1H, d, NH2CHCH3O), 1,54 (1H, s, NH2), 1,04-0,97 (1H, m, CH(CH2)2), 0,56-0,27 (4H, m, CH(CH2)2).

[0323] Fase LS3-4. Se añadieron en un matraz de fondo redondo seco bromuro LS3-2 (47,2 g, 117 mmol, 1.0 eq) y LS3-3 (19,1 g, 148 mmol, 1.2 eq) recién preparado. Se añadió DMF anhidro desgasificado (117 mL), Na2CO3 anhidro (14,8 g, 140 mmol, 1.2 eq) y KI (19,4 g, 117 mmol, 1.0 eq) y se agitó la mezcla a 100°C bajo una atmósfera de nitrógeno durante 16-18 h. El progreso de la reacción se monitorizó mediante LC-MS y/o TLC. La mezcla se enfrió hasta alcanzar la temperatura ambiente, se añadió agua (200 mL) y la fase acuosa se extrajo con MTBE (3 x 100 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron secuencialmente con agua (2 x 100 mL) y salmuera (1 x 100 mL), se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash [hexanos/AcOEt/DCM, gradiente (85:10:5) a (50:45:5)] para proporcionar LS3-4 en forma de aceite naranja (43,1 g, 81%).

TLC [hexanos/AcOEt (1:1)]: Rf= 0,35; detección: UV y CMA

1H NMR (CDCl3): 0 7,31-7,22 (5H, m, Ph), 7,07-7,03 (2H, m, Ph), 6,80-6,74 (2H, m, Ph), 5,48 (1H, amplio, CH2NHCHRR'), 5,00 (2H, s, OCH2Ph), 4,49-4,43 (1H, m, PhOCH(CH3)R), 3,56 (3H, s, C(O)OCH3), 3,18-3,11 (3H, m, NHCH(Pr)CO2Me y CH2NHCbz), 2,75-2,50 (4H, m, PhCH2CH2 y NHCH2CH(Me)OPh), 1,76-1,68 (2H, m, PhCH2CH2), 1,19-1,14 (3H, d, PhOCH(CH3)R), 0,88-0,80 (1H, m, CH(CH2)2), 0,46-0,13 (4H, m, CH(CH2)2).

LC/MS (Grad_A4): tR =6,63 min

[0324] Fase LS3-5. Se añadió Na2CO3 (15,1 g, 113,7 mmol, 1.5 eq) y (Boc)2O (24,8 g, 142,1 mmol, 1.2 eq) a una solución de amina secundaria LS3-4 (43,0 g, 94,7 mmol, 1.0 eq) en THF/H2O (1:1.475 mL) a 0°C. Se dejó que la mezcla se calentara hasta alcanzar la temperatura ambiente y se agitó durante 24 h. La reacción se monitorizó mediante LC/MS y/o TLC. El THF se evaporó en vacío y la fase acuosa residual se extrajo con MTBE (3 x 100 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (1 x 100 mL), se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó en vacío para proporcionar el LS3-5 crudo en forma de aceite naranja (59,1 g, > 100% rendimiento crudo).

TLC [hexanos/AcOEt (1:1)]: Rf = 0,57; detección: UV y CMA

LC/MS (Grad_A4): 12,98 min.

[0325] Fase LS3-6. Se añadió monohidrato de LiOH (19,9 g, 474 mmol, 5.0 eq.) a una solución de LS3-5 (52,5 g, 94,7 mmol, 1.0 eq.) en THF/H2O (1:1, 475 mL) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 16-18 h a temperatura ambiente. La reacción fue monitorizada mediante LC/MS (Grad_A4): tR = 12,21 min. TLC [Hexanos/AcOEt (1:1); detección: UV y CMA; Rf = base]. La mezcla de reacción se acidificó con tampón de citrato (1M, 3,5 pH) y el THF se evaporó entonces en vacío. La fase acuosa residual se extrajo con AcOEt (3 x 150 mL), posteriormente las fases orgánicas combinadas de lavaron con salmuera (1 x 100 mL), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar el ácido carboxílico LS3-6 en forma de sólido pegajoso blanco (47,3 g, 93% para 2 fases).

LC/MS (Grad_A4): tR =12,16 min

[0326] Fase LS3-7. Se añadió p-TSA (69,4 g, 0,37 mol, 1.2 eq) y alcohol bencílico (157 mL, 1,52 mol, 5.0 eq) a una suspensión de H-(D)Phe(4F)-OH (LS3-B, 55,6 g, 0,30 mol,

1.0 eq) en benceno (1.2 L). La mezcla se agitó a reflujo durante 16-18 h en un aparato de Dean-Stark tiempo durante el cual se obtuvo una solución homogenea. La mezcla se enfrió hasta alcanzar la temperatura ambiente y se formó un precipitado blanco. El precipitado se diluyó con Et2O (500 mL), se filtró y se trituró con Et2O (3 x 500 mL). El sólido se secó al vació para proporcionar LS3-7 en forma de sólido blanco (126 g, 93,1 %). La sustitución de tolueno por benceno resultó en un tiempo de reacción reducido de 2-3 h.

1H NMR (DMSO-d6): 8 8,40 (3H, bs, NH3Cl), 7,47-7,36 (2H, d, Ph), 7,37-7,06 (11H, m, Ph), 5,15 (2H, s, OCH2Ph), 4,37 (1H, bt, CHCH2Ph), 3,09-3,05 (2H, m, CHCH2Ph), 2,27 (3H, s, CH3Ph).

13C NMR (DMSO-d6): 0 169,52 163,83, 160,62, 140,01, 138,56, 135,48, 132,16, 132,04, 131,33, 131,28, 129,09, 129,05, 128,84, 128,72, 127,09, 126,20, 116,18, 115,89, 67,83, 53,88, 35,83, 21,47.

LC/MS (Grad_A4): tR = 6,12 min

Punto de fusión (sin corregir): 165-167°C.

[0327] Fase LS3-8. La sal de tosilato LS3-7 (122 g) se incorporó en una solución acuosa de Na2CO3 (1 M, 500 mL). La solución acuosa básica resultante se extrajo con AcOEt (4 x 500 mL) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (1 x 250 mL), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar el aminoéster LS3-8 en forma de sólido blanco (74,4 g, 99%).

1H NMR (CDCl3): 0 7,38-7,28 (5H, m, OCH2Ph), 7,10-7,06 (2H, m, Ph(4F)), 6,966,90 (2H, m, Ph(4F)), 5,13 (2H, d, OCH2Ph), 3,76-3,71 (1H, t, CHCH2Ph), (2H, dq, CHCH2Ph), 1,53 (2H, s, NH2)

[0328] Fase LS3-9. Se añadió Boc-(D)NMeAla-OH (LS3-C, 57,1 g, 0,28 mol, 1.03 eq), 6-Cl-HOBt (46,2 g, 0,27 mol, 1.0 eq) y DIPEA (238 mL, 1,37 mol, 5.0 eq) a una solución de LS3-8 (74,4 g, 0,27 mol, 1.0 eq) en THF/CH2Cl2 anhidro (1:1, 1120 mL). La mezcla se enfrió hasta los 0°C y se añadió EDCI (57,6 g, 0,3 mol, 1.1 eq). La mezcla se agitó durante 1 h a 4°C, se dejó calentar hasta alcanzar la temperatura ambiente y se agitó durante 18 h. El solvente se evaporó al vacío y el residuo se disolvió en AcOEt (1000 mL). La fase orgánica se lavó secuencialmente con una solución acuosa de tampón de citrato (1 M, 3,5 pH, 2 x 500 mL), H2O (1 x 500 mL), una solución acuosa de NaHCO3 saturado (PRECAUCIÓN: se ha desarrollado CO2, 2 x 500 mL) y salmuera (1 x 500 mL). La fase orgánica se secó sobre MgSO4 (180 g), se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar el dipéptido crudo LS3-9 en forma de aceite amarillo (127 g, > 100% rendimiento crudo).

[0329] Fase LS3-10. El aceite LS3-9 se disolvió en 150 mL de dioxano, posteriormente se añadió una solución de 4 M HCl en dioxano (1360 mL, 20 eq) y se agitó la mezcla durante 1 h a temperatura ambiente. La reacción fue monitorizada mediante TLC [AcOBt/Hexanos (3:2)]; Rf = base; detección: UV y ninhidrina]. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo resultante se coevaporó con Et2O (2 x 500 mL), luego se secó en vacío. El LS3-10 crudo se obtuvo en forma de sólido ligeramente amarillo (96 g, 89,7 %). Esto se disolvió en EtOH 95% (200 mL) caliente, luego se añadió MTBE (900 mL). La mezcla se enfrió hasta alcanzar la temperatura ambiente, luego se metió en un congelador (-20°C) durante 18 h. Los cristales resultantes se recogieron mediante filtración y se lavaron con MTBE (2 x 200 mL), luego se secaron al vacío para proporcionar el hidrocloruro dipéptido cristalino LS3-10 (62 g, 64,5 % recuperación).

1H NMR (DMSO-d6): 0 9,31-9,28 (1H, d, C(O)NH), 7,38-7,26 (7H, m, Ph), 7,097,04 (2H, m, Ph), 5,10 (2H, s, C(O)OCH2Ph), 4,65-4,57 (1H, m, CHCH3), 3,763,69 (1H, d, CHCH2Ph), 3,15-3,08 y 2,99-2,91 (CHCH2Ph), 2,221 (3H, s, CH3NH2+Cl-), 1,31-1,28 (3H, d, CHCH3).

13C NMR (DMSO-d6): 0 171,33, 169,18, 137,63, 136,31, 129,92, 129,11, 128,95, 128,83, 128,63, 127,30, 67,00, 56,57, 54,38, 36,98, 31,11, 16,47.

LC/MS (Grad_A4): tR = 6,26 min

LC Quiral (Iso100B_05): tR = 29,6 min. 97% UV

Punto de fusión (sin corrección): 140-142 °C

[0330] Fase LS3-11. Se añadió DIPEA (92 mL, 526 mmol, 6.0 eq) y HATU (34,9 g, 91,9 mmol, 1.05 eq) a una solución de ácido carboxílico LS3-6 (47,3 g, 87,6 mmol, 1.0 eq) y sal de clorhidrato dipéptida LS3-10 (36,2 g, 91,9 mmol, 1.05 eq) en THF/CH2Cl2 anhidro

(1:1) (438 mL) a 0°C. Se dejó que la mezcla se calentara hasta alcanzar la temperatura ambiente y se agitó durante 16-18 h. La reacción fue monitorizada mediante TLC [AcOEt/Hex (1:1); Rf = 0,48; detección: UV y CMA]. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se disolvió en AcOEt (250 mL). La fase orgánica se lavó secuencialmente con una solución acuosa de tampón de citrato (1 M, 3,5 pH, 3 x 150 mL), H2O (1 x 150 mL), una solución acuosa de NaHCO3 saturado (2 x 150 mL) y salmuera (1 x 150 mL). La fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash [AcOEt:hexanos, gradiente (10:90) a (50:50)] para proporcionar LS3-11 en forma de sólido pegajoso blanco (70.0 g, 90%).

LC/MS (Grad_A4): tR =15,06 min

[0331] Fase LS3-12. Se añadió una solución de tripéptido alquilado LS3-11 (69,0 g, 78,4 mmol, 1.0 eq) en AcOEt (375 mL) a una suspensión de Pd/C 10% (13,8 g, 20% por peso) en AcOEt (150 mL), luego se borboteó hidrógeno a través de la solución durante 16-18 h. La reacción se monitorizó mediante TLC [AcOEt/hexanos (1:1); Rf = 0,22; detección: UV y CMA]. La mezcla se purgó mediante el borboteo de nitrógeno, se filtró a través de una almohadilla de Celite y se aclaró con AcOEt (3x). El filtrado y las soluciones de lavado combinadas se evaporaron a presión reducida para proporcionar LS3-12 en forma de sólido blanco (51,4 g, 100%).

LC/MS (Grad_A4): tR = 8,05 min

[0332] Fase LS3-13. Se añadió una solución de 3,0 M HCl en dioxano/H2O (75:25, 525 mL, 1,57 mol, 20 eq) a LS3-12 (51,4 g, 78,4 mmol, 1.0 eq) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h. El solvente se evaporó en vacío, luego el residuo se mezcló a temperatura de ebullición constante con tolueno (3x) y se secó en vacio para proporcionar LS3-13 crudo en forma de sólido color hueso (58,0 g, >100% rendimiento).

LC/MS (Grad_A4): tR = 5,38 min.

[0333] Fase LS3-14. Se añadió DIPEA (68,0 mL, 392 mmol, 7.0 eq) y DEPBT (25,8 g, 86,2 mmol, 1.1 eq) a una solución de precursor macrocíclico LS3-13 (78,4 mmol basado en LS3-12, 1.0 eq) en THF anhidro (1,57 L , 50 mM). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16-18 h. La reacción fue monitorizada mediante TLC [MeOH/AcOEt (1:9); Rf= 0,38; detección: UV y CMA]. Al final de la reacción, había cantidades significativas de sales de DIPEA en suspensión en la solución. Antes de la evaporación, se filtraron estas sales y se lavaron con THF para evitar unas sacudidas excesivas de la solución durante la evaporación. El solvente se evaporó en vacío y el residuo se incorporó a una solución acuosa de Na2CO3 (1 M, 500 mL) y AcOEt (250 mL). La fase acuosa básica separada se extrajo con AcOEt (2 x 250 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 250 mL), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida. El material crudo obtenido de esta forma se purificó mediante cromatografía flash [AcOEt:MeOH, gradiente (100:0) a (90:10)] para proporcionar el compuesto macrociclo 298 en forma de sólido amarillo pálido (35,0 g, 83%, 2 fases).

LC/MS (Grad_A4): tR = 6,19 min

[0334] Fase LS3-15. Se añadieron lentamente 1,25 M de HCl en EtOH (41,2 mL, 51,5 mmol, 1.5 eq) al compuesto crudo 298 (18,5 g, 34,4 mmol, 1.0 eq) en EtOH anhidro (100 mL). La mezcla se agitó durante 5 min, se enfrió hasta los 0°C y se filtró mientras estaba fría. El precipitado blanco se lavó con EtOH anhidro frío (3 x 75 mL) y se secó en vacío para proporcionar el clorhidrato del compuesto 298 en forma de sólido blanco amorfo (15,3 g, 88% recuperación, corregido).

[0335] Purificación del compuesto 298. El clorhidrato del compuesto 298 amorfo (14,2 g, 24,7 mmol) se disolvió en una mezcla caliente de EtOH/H2O (9:1, 215 mL). La solución se enfrió hasta alcanzar la temperatura ambiente y luego se colocó en un congelador (-20°C) durante 16-18 h. Se recogieron los cristales mediante filtración y se lavaron con EtOH anhidro frío (3 x 75 mL) para proporcionar el clorihidrato del compuesto 298 en forma de sólido blanco cristalino (12,4 g, 86% recuperación). Se incorporó el clorhidrato del compuesto 298 cristalino (11,4 g, 19,9 mmol) en 1 M de Na2CO3/AcOEt (1:1, 200 mL) y se agitó hasta completar la disolución del sólido. La fase acuosa básica separada se extrajo con AcOEt (2 x 50 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (1 x 50 mL), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se evaporaron en vacío. El residuo óleo se disolvió en una cantidad mínima de AcOEt, luego se añadieron hexanos hasta que se formó el precipitado blanco. La mezcla se evaporó y secó en vacío para proporcionar el compuesto 298 en forma de sólido blanco amorfo (11,1 g, 100% recuperación).

LC/MS (Grad_A4): 6,18 min; Pureza (UV/ELSD/CLND): 100/100/100.

[0336] Esta secuencia de reacción se ha repetido en rendimientos comparables empezando desde 1 kg de Cbz-T33a, 518 g de LS3-A y 1 kg de LS3-B para rendir más de 400 g del producto macrocíclico deseado del compuesto 298 y/o la forma de sal HCI correspondiente. Se pueden aplicar procedimientos similares para otros compuestos de

10 la invención. [0337] Como alternativa, el éster t-butil de Cpg (LS3-14), producido en condiciones estándar, se puede utilizar tal y como se describió en la Fase LS3-4 para proporcionar Cpg alquilado LS3-15 por una reacción con Cbz-T33a. Esto, sin protección de la amina secundaria sobre LS3-16 producida por una desprotección ácida estándar del éster t

15 butil de LS3-15, luego pasa por un proceso de acoplamiento quimioselectivo con el dipéptido LS3-10 para preparar LS3-17. Una hidrogenólisis simultánea sencilla de los grupos protectores Cbz y benzilo conduce a un LS3-13 intermedio en un enfoque más eficaz que evita dos fases.

[0338] Fase LS3-17. Se añadió DIPEA (5,3 mL, 30,6 mmol, 7.0 eq), y HATU (1,7 g, 4,59 mmol, 1.05 eq) a la sal clorhidrato del ácido carboxílico LS3-16 (2,1 g, 4,41 mmol, 1.0 eq) y LS3-10 (1,7 g, 4,59 mmol, 1.05 eq) en THF/CH2Cl2 anhidro (1:1, 22 mL) a 0°C. Se 25 dejó que la mezcla se calentara hasta alcanzar la temperatura ambiente y se agitó durante 16-18 h. La reacción fue monitorizada mediante LC-MS. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se disolvió en AcOEt (150 mL). La fase orgánica se lavó secuencialmente con una solución acuosa de tampón de citrato (1 M, pH 3.5, 3 x 25 mL), H2O (1 x 25 mL), una solución acuosa de NaHCO3 saturado (2 x 25 mL) y salmuera 30 (1 x 25 mL). La fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío

para proporcionar LS3-17as en forma de sólido blanco (3,5 g, > 100% rendimiento bruto).

LC/MS (Grad_A4): tR =12,09 min.

[0339] Fase LS3-18. Se añadió una solución de tripéptido alquilado LS3-17 (3,0 g, 3,82 mmol, 1.0 eq) en AcOEt (15 mL) a una suspensión de Pd/C 10% (596 mg, 20% por peso) en EtOH 95% (10 mL) y se borboteó hidrógeno en la solución durante 2 h. La mezcla se agitó entonces bajo una atmósfera de hidrógeno durante 16-18 h. La reacción fue monitorizada mediante TLC [AcOEt 100%; Rf = Base; detección: UV y CMA]. La mezcla se purgó mediante borboteo de nitrógeno, se filtró a través de una almohadilla de Celite y se aclaró con EtOH 95% (3 x 20 mL). El filtrado combinado y las soluciones de aclarado se evaporaron a presión reducida para proporcionar LS3-13 en forma de sólido blanco (2,0 g, 94%).

LC/MS (Grad_A4): tR = 5,40 min.

B. Resultados biológicos 1. Objetivo del ensayo de unión del radioligando en el receptor de ghrelina (clon

humano, hGHS-R1a) [0340] 1. Demostrar que el compuesto 298 interactúa de manera directa y con un alto grado de afinidad con el hGHS-R1a.

Aspectos clave del método [0341]

1.

La unión llevada a cabo en las membranas preparadas de HEK293 expresando el receptor de ghrelina humano clonado y transfectado (hGHS-R1a).

2.

[125I]La ghrelina se usó como radioligando para el desplazamiento (Kd = 0,01 nM, concentración de ensayo = 0,007 nM).

3.

La ghrelina (sin etiqueta, 1 μM) se usó para determinar la unión no específica.

4.

El compuesto 298 se probó con duplicado de muestras sobre una curva de concentración de 11 puntos.

Resultados [0342] La unión del compuesto 298 con el hGHS-R1a se ha efectuado en múltiples ocasiones. Una curva de inhibición de unión representativa tal y como se muestra en la Figura 10 demuestra que el compuesto 298 se une de manera competitiva, reversible y con alta afinidad al hGHS-R1a

2. Objetivos de los ensayos funcionales y de base celular sobre el receptor de

ghrelina (clon humano, hGHS-R1a) [0343]

1.

Demostrar que el compuesto 298 es un agonista completo en el hGHS-R1a.

2.

Medir la potencia de la actividad del agonista del compuesto 298 en el hGHS-R1a.

Aspectos clave del método [0344]

1.

El ensayo llevado a cabo en las células CHO-K1 expresando el receptor de ghrelina humano clonado y transfectado (hGHS-R1a) y Ga16.

2.

Las células suspendidas incubadas toda la noche con coelenterazina.

3.

La estimulación del hGHS-R1a activa Ga16, causando la liberación de Ca2+ intercelular, el cual conduce finalmente a la oxidación de la coelenterazina y a la emisión de una señal luminiscente cuantitativa.

4.

La ghrelina se empleó como control positivo.

5.

El compuesto 298 se probó con duplicado de muestras sobre una curva de concentración de 8 puntos.

Resultados [0345] El compuesto 298 activa el hGHS-R1a con un EC50 = 25 nM tal y como muestra la Figura 11. El compuesto 298 es un agonista completo basado en su eficacia máxima y similar al péptido de ghrelina (control positivo).

3. Efecto (i.v.) del compuesto 298 (i.v.) en la liberación de hormona de crecimiento

(GH) en ratas conscientes y que se mueven libremente. [0346] Se conoce que la ghrelina (y sus análogos) estimulan potentemente la liberación de GH desde la pituitaria en diversas especies incluyendo la rata que siguen una dosis intravenosa.

Objetivos [0347]

1.

Determinar si el compuesto 298 estimula la liberación de GH en las ratas.

2.

Determinar si el compuesto 298 modula la liberación de GH inducida por la ghrelina en las ratas.

Método [0348]

1.

Modelo adaptado de Tannenbaum et al. (2003), Endocrinology 144:967-974.

2.

Ratas implantadas con cánulas intravenosas (i.v.) crónicas.

3.

Se permitía a las ratas moverse libremente incluso durante la administración de fármacos o la extracción de sangre con el fin de minimizar los cambios inducidos por el estrés en la liberación de GH.

4.

La administración del compuesto 298 en niveles pico y valle de GH para medir: a) El efecto estimulador, si lo hubiere, en la liberación de GH; b) Si cualquier efecto estimulador se mantiene con una administración

repetida.

5.

Se toman muestras de sangre en intervalos definidos de 15 minutos a lo largo del día de la prueba y se mide la hormona de crecimiento (GH) directamente mediante radioinmunoanálisis.

6.

Compuesto puesto a prueba a 3, 30, 300, 1000 μg/kg (i.v., N = 5-6/ratas por grupo).

7.

Ghrelina (control positivo) puesta a prueba a 5 μg (i.v.).

Resultados [0349] El compuesto 298 en dosis de hasta 1000 μg/kg no causa ninguna diferencia significativa en la liberación pulsátil en comparación con controles del vehículo (Figura 12 para 300 μg/kg). La ghrelina en una dosis de 5 μg causa un aumento significativo en la liberación de GH cuando se administra en niveles pico y valle (control positivo). La administración del compuesto 298 10 min. antes que la ghrelina ni inhibe ni aumenta la liberación de GH inducida por la ghrelina (Figura 12B). Como indicador secundario de la liberación de GH, también se examinaron los efectos del compuesto 298 en los niveles de IGF-1 en la administración de 1000 μg/kg. No se observaron cambios en los niveles de IGF-1 tras el tratamiento con el compuesto 298.

4. Efecto del compuesto 298 en la desensibilazión del receptor hGHS-R1a [0350] Los receptores acoplados a la proteína G pueden sufrir una desensibilización del receptor por la estimulación agonista, en el cual el grado de la desensibilización del receptor es parcialmente característico del agonista. Es deseable una desensibilazión menor porque esto está correlacionado con un desarrollo menor de la tolerancia con un

uso crónico de fármacos. Este factor, entre otros, ha estado implicado en los pobres resultados clínicos del GHS.

Objetivo [0351]

1. Determinar en qué medida el compuesto 298 causa desensibilización del receptor de ghrelina (clon humano, hGHS-R1a).

Método [0352]

1.

Estudios mediante FLIPR (Lector de placas de imágenes fluorométrico, Molecular Devices).

2.

Ensayo desarrollado en células HEK293 que expresan el hGHS-R1a.

3.

La potencia agonista del compuesto 298 se calculó empleando muestras por duplicado sobre una curva de concentración de 12 puntos; EC50 establecido para el compuesto 298.

4.

En un experimento separado, unas células que expresan el hGHS-R1a se exponen a una gama de concentraciones del compuesto 298 (1, 10, 100, 1000 nM) durante 3 minutos. Se lava el compuesto 298 y luego las células son tratadas con una concentración de ghrelina (EC100) que suscita una estimulación máxima en los receptores no desensibilizados.

5.

Se calcula un valor de DC50. El valor de DCso se define como la concentración de pretratamiento del compuesto 298 que desensibiliza la respuesta de la ghrelina (EC100) al 50%.

Resultados [0353] El compuesto 298 es un agonista completo (EC50 = 5 nM; Figura 13A). Unas concentraciones de pretratamiento en aumento del compuesto 298 desensibilizan la respuesta máxima a la ghrelina EC100 (DC50 = 32 nM; Figura 13B). El valor DC50 es >6 veces menos potente que el valor EC50, por lo que el compuesto 298 estimula el

receptor de manera más potente que desensibiliza el receptor. El compuesto 298 desensibiliza el receptor de forma 10 veces menos potente que otros agonistas de ghrelina (es decir, el péptido de ghrelina y la capromorelina del GHS [Pfizer]; Figura

13C). [0354] El compuesto 298 posee un perfil de desensibilización favorable puesto que (1) estimula el receptor de manera 6 veces más potente que lo desensibiliza y (2) obtiene una desensibilización a una potencia 10 veces inferior que el ligando endógeno (es decir, la ghrelina) y agonistas de ghrelina de molécula pequeña alternativos. En consecuencia, el compuesto 298 puede obtener una tolerancia menor que unos agonistas de ghrelina alternativos con una dosificación crónica.

5. Objetivos del efecto del compuesto 298 sobre el vaciado gástrico de una

comida sólida en ratas sin tratamiento [0355]

1. Verificar datos del compuesto 298 como agente procinético con efectos potentes en el vaciado gástrico, un modelo para la gastroparesia.

Métodos [0356]

1.

Se administró una comida de metilcelulosa (2%) mediante sonda intragástrica a unas ratas en ayunas desde la noche anterior (macho, Wistar, 200g, N=5/grupo). La comida se marcó con rojo de fenol (0,05%).

2.

Los artículos de prueba (es decir, el vehículo, el compuesto 298, la metoclopramida, etc.) fueron administrados mediante inyección intravenosa inmediatamente después de la comida.

3.

Los animales se sacrificaron 15 minutos después; se extrajo inmediatamente el estómago y se homogeneizó en 0,1 N de NaOH y se centrifugó.

4.

El rojo de fenol total restante en el estómago se cuantificó mediante un método colorimétrico en 560 nm.

5.

Un incremento >30% en el vaciado gástrico, detectado a partir de la concentración de rojo de fenol en comparación con el grupo de control, se considera significativo.

Resultados [0357] Tanto la Metoclopramida (producto comercializado para la gastroparesia), la ghrelina y los GHRP-6 (agonistas péptidos de referencia en el hGHS-R1a) mostraron un vaciado gástrico significativo (Figura 14A). El compuesto 298 causó un vaciado gástrico significativo de manera proporcional a la dosis con una potencia más de 100 veces superior a la metoclopramida (Figura 14B). El compuesto 298 estimuló potentemente el vaciado gástrico de una comida sólida en ratas vírgenes de tratamiento con una potencia 100 veces superior a la metoclopramida, un fármaco usado actualmente con actividad procinética.

6. Objetivo del efecto del compuesto 298 en el tratamiento del íleo postoperatorio

en ratas [0358] Calcular la utilidad del compuesto 298 en un modelo de rata con íleo postoperatorio (POI).

Métodos [0359]

1.

Modelo adaptado de Kälff et al. (1998), Ann Surg 228:652-63.

2.

Se les implantó a las ratas (macho, Sprague-Dawley, 250-300g) catéteres en la vena yugular para acomodar la dosificación de los artículos de prueba.

3.

Las ratas permanecieron en ayunas toda la noche, se les anestesió con isofluorano y se les sometió a cirugía abdominal.

4.

Tras una incisión abdominal, se procedió a la evisceración del intestino delgado, intestino ciego e intestino grueso durante un período de 15 min y se mantuvieron húmedos con salino.

5.

Se recorrió el intestino con los dedos, una manipulación de los intestinos clínicamente relevante que se caracteriza por pellizcar primero la parte superior del intestino delgado y continuar la manipulación hacia el intestino grueso.

6.

Se deja que las ratas se recuperen durante 15 min a partir de la desaparición de cualquier efecto de la anestesia con isofluorano.

7.

Se les administra a las ratas el vehículo o el compuesto 298 (30, 100, o 300 μg/kg, i.v., N=6/gp) seguido de la sonda intragástrica con la comida de metilcelulosa 99mTc (2%).

8.

Tras 15 min, se practicó la eutanasia a las ratas y se aislaron el estómago y segmentos de 10 cm consecutivos de intestino. Se midió la radioactividad (99mTc) en cada tejido aislado como medio para medir el tránsito de la comida.

Resultados [0360] En la Figura 15, la distribución de las barras indica la distribución de la comida en el estómago (`ST') y en los segmentos de 10 cm consecutivos del intestino delgado a los 15 min después de la sonda oral. La cirugía abdominal unida al recorrido de los intestinos causaron un íleo significativo en las ratas que se determina en comparación con los grupos vírgenes de tratamiento (es decir, que no han sido operados) y de tratamiento de POI. El compuesto 298 incrementó significativamente el vaciado gástrico y el tránsito intestinal en concentraciones de ensayo de 100 a 300 μg/kg (i.v.). Los datos correspondientes a la dosis de 100 μg/kg se presentan en la Figura 15. A 100 μg/kg (i.v.), el compuesto 298 promovió significativamente el tránsito gastrointestinal en un 2,7x medido por el centro geométrico de la comida en comparación con el grupo de tratamiento de POI+vehículo. El compuesto 298 mejoró significativamente el vaciado gástrico y el tránsito intestinal en las ratas con íleo postoperatorio. El compuesto 298 puede tratar de manera efectiva un íleo postquirúrgico existente; de este modo, no se requiere el uso profiláctico previo a la cirugía como sucede con los antagonistas opiáceos en el desarrollo clínico.

7. El efecto de los compuestos de la invención sobre el vaciado gástrico y el

tránsito gastrointestinal en un modelo de vaciado gástrico tardío por opiáceos [0361] Los analgésicos opioides, como la morfina, son conocidos por retrasar el tránsito gastrointestinal, lo que supone un importante efecto secundario para esta clase de fármacos. El término clínico para este síndrome es la disfunción intestinal inducida por opiáceos (DIO). Además, los pacientes que se están recuperando de una cirugía abdominal sufren un íleo postoperatorio que se ve exacerbado por una terapia de opioides simultánea para el dolor postquirúrgico.

Objetivo [0362]

1. Determinar si los compuestos de la invención pueden ser útiles terapéuticamente en el tratamiento de la disfunción intestinal inducida por opiáceos.

Métodos [0363]

1.

Se les implantan a las ratas (macho, Sprague-Dawley, 250-300 g) catéteres en la vena yugular para acomodar la dosificación de los artículos de prueba.

2.

Se administra morfina (3 mg/kg s.c.) a las ratas que han estado en ayunas toda la noche.

3.

Tras 30 min, se les administra a las ratas el vehículo o el compuesto 298 (300 o 1000 μg/kg, i.v., n = 4-to-6/gp) seguido de una sonda intragástrica con la comida de metilcelulosa 99mTc (2%).

4.

Tras 15 min, se practica la eutanasia a las ratas y se aíslan el estómago y segmentos de 10 cm consecutivos del intestino. Se mide la radiocatividad (99mTc) en cada tejido aislado como medio para medir el tránsito de la comida.

Resultados [0364] La morfina (3 mg/kg, s.c.) retrasó significativamente el vaciado gástrico y el tránsito intestinal en las ratas (Figura 16A). El tránsito gastrointestinal tardío por opiáceos se revirtió eficazmente de manera proporcional a la dosis mediante el tratamiento con el compuesto 298 (i.v.) (Figura 16B).

8. Esthabilidad metabólica en el plasma humano [0365] Los fármacos son susceptibles a la degradación enzimática en plasma mediante

la acción de diversas proteinasas y estearasas. De ese modo, la estabilidad del plasma se lleva a cabo a menudo como un examen metabólico en las fases tempranas de la identificación del fármaco. El objetivo de este estudio es medir la estabilidad metabólica de los compuestos de la presente invención en el plasma humano.

Método experimental 5 [0366] La estabilidad del compuesto 298 en el plasma humano a 37°C se ha medido a las 2 y 24 h. Se han estudiado dos formas del compuesto 298: la amina libre y la sal clorhidrato. Además, se ha establecido la estabilidad del compuesto 298 en plasma a solas y en plasma tamponado con una solución salina tamponada con fosfato (PBS por sus siglas en inglés) en la que la ratio de plasma frente al tampón de fosfato (7.0 pH) es 10 de 20:1. Se llevaron a cabo ensayos y se analizaron en muestras por triplicado. El compuesto 298 se extrajo de la matriz de plasma empleando una técnica de extracción en fase sólida (SPE por sus siglas en inglés) (cartucho de Oasis MCX). El análisis de las muestras se realiza empleando cromatografía líquida-espectometría de masa (LC-MS por sus siglas en inglés) en modo APCI+ (Ionización química a presión atmosférica). El 15 nivel del compuesto 298 en muestras de plasma se compara con el nivel del compuesto 298 en una muestra adicionada almacenada a -60°C del mismo grupo de plasma. Los resultados se presentan en forma de porcentaje de recuperación del compuesto 298.

Tabla 8. Porcentaje de recuperación del compuesto 298 después de la incubación 20 en plasma humano (37°C).

Triplicados

Amina libre Amina PBS libre + Sal clorhidrato Sal clorhidrato + PBS

2 horas (%) 24 horas (%) 2 horas (%) 24 horas (%) 2 horas (%) 24 horas (%) 2 horas (%) 24 horas (%)

Ensayo #1

101,0 105,5 98,3 97,9 100,2 96,6 102,9 97,8

Ensayo #2

100,3 95,6 100,4 100,8 99,1 104,3 97,4 101,9

Ensayo #3

101,3 100.9 98,3 101,9 101,6 102,3 99,4 98,5

Media

100,9 100,7 99,0 100,2 100,3 101,1 99,9 99,4

Desviación estándar

0,5 4,9 1,2 2,1 1,3 4,0 2,7 2,2

RSD

0,5 4,9 1,3 2,1 1,3 4,0 2,7 2,2

[0367] Tal y como se muestra en la Tabla 8, el compuesto 298 es estable en el plasma humano a 37°C durante al menos 24 horas independientemente de la forma del

compuesto (es decir, amina libre o sal) o si las muestras de plasma están tamponadas o no con PBS.

9. Perfil de interacción del compuesto 298 en nueve subtipos de enzimas del

citocromo humanas P450 [0368] El compuesto 298 (0,0457 a 100 μM) posee una actividad de inhibición mínima en todas las enzimas del citocromo P450 ensayadas, excepto la enzima cyp3A4, y cuenta con una actividad de inhibición moderada en la cyp3A4. No estaba previsto que la actividad de inhibición observada para el compuesto 298 en la cyp3A4 fuera fisiológicamente relevante basada en las dosis bajas del compuesto 298 requeridas para la actividad terapéutica. Además, no existían indicios de que el compuesto 298 experimentaría una interacción entre fármacos con analgésicos opioides que pueden ser coadministrados a los pacientes de POI.

10. Perfil del compuesto 298 en la inhibición de canal de hERG [0369] El compuesto 298 (1, 10 μM no tuvo un efecto significativo en la función del canal

de hERG en comparación con los controles del vehículo (0,1% DMSO). E-4031 (control positivo) inhibió completamente las corrientes del canal de hERG a 500 nM.

Ejemplo 5 Modelo animal de gastroparesia [0370] Las comidas hipercalóricas son conocidas por dificultar el vaciado gástrico. Esta

observación ha sido explotada recientemente por Megens, A.A.; et al. (sin publicar) para desarrollar un modelo en ratas para el vaciado gástrico tardío tal y como se experimenta en la gastroparesia.

Materiales [0371]

1.

Ratas Wistar, macho, 200-250 g

2.

Comida de prueba de chocolate: 2 mL Clinutren ISO® (1.0 kcal/mL, Nestle SA, Vevey Switzerland)

Método [0372] Se proporciona la comida de prueba a los sujetos mediante sonda por vía oral en el momento = 0. Después de 60 min, los sujetos se sacrifican, se extirpan los estómagos y se pesan los contenidos. Los animales sin tratamiento experimentaron un retraso significativo en el vaciado gástrico como denota el mayor contenido estomacal residual.

[0373] Los compuestos de prueba se administraron de manera intravenosa en forma de soluciones acuosas, o soluciones en salino normal, en el momento = 0 a tres niveles de dosis (0,08 mg/kg; 0,30-0,31 mg/kg, 1,25 mg/kg). Cuando fue preciso, por ejemplo en los compuestos 21, 299 y 415, se añadió ciclodextrina (CD) 10% para solubilizar el

5 material. Los compuestos de prueba examinados utilizando inyección subcutánea se administran en el momento = -30 min. Se ensayaron de cuatro a cinco (4-5) ratas por grupo, excepto en el caso del control de ciclodextrina en el cual el grupo comprendía diez (10) ratas.

[0374] Los resultados se presentan en forma de porcentaje en relación con el peso del

10 estómago para la inyección única del solvente como control tal y como se muestra en las Figuras 17A y 17B e ilustra la capacidad de vaciado gástrico de los compuestos de la presente invención. Estos resultados son aplicables para la utilidad de estos compuestos en la prevención y/o tratamiento de la gastroparesia y/o íleo postoperatorio. [0375] Lo anterior es ilustrativo de la presente invención y no se ha construido como

15 limitante de la misma. La invención está definida por las siguientes reivindicaciones.

Claims (64)

1. Reivindicaciones

   1. Un modulador de fórmula I:

   en el que Ri-1, T, X, Z1-2, m, n y p son tal y como se definen más abajo:

   o en el que X1 Z1 y Z2 representando NH, m, n y p equivaliendo cada uno 0, R1 es tal y como se define más abajo o si no representa H, los R2-7 son como se definen más abajo y T está representado por el amarre (Tether) tal y como se define más abajo:

   o en el que el modulador de la fórmula I tiene por fórmula:

   o un isómero óptico, enantiómero, diastereómero, racemato o mezcla estereoquímica del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, destinado a ser utilizado en una cantidad eficaz en un método terapéutico de estimulación de la motilidad gastrointestinal.

2. 2. El modulador destinado a ser utilizado según la reivindicación 1, en el que el modulador posee alguna de las siguientes estructuras:

   o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

3. 4.

   El modulador destinado a ser utilizado según la reivindicación 2 o 3, en el que el modulador tiene la forma de una sal clorhidrato.

4. 5.

   El modulador destinado a ser utilizado según las reivindicaciones 1 a 4, en el que el modulador se administra por vía oral.

5. 6.

   El modulador destinado a ser utilizado según las reivindicaciones 1 a 4, en el que el modulador se administra por vía parenteral.

6. 7.

   El modulador destinado a ser utilizado según la reivindicación 6, en el que el modulador se administra por vía intracraneal.

7. 8.

   El modulador destinado a ser utilizado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para el tratamiento de un trastorno gastrointestinal, en el que la interacción del modulador y del receptor GHS-RIa mamífero no resulta en la liberación de una cantidad significativa de hormona de crecimiento.

8. 9.

   El modulador destinado a ser utilizado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que el modulador es un agonista del receptor de la ghrelina.

9. 10.

   El modulador destinado a ser utilizado según la reivindicación 8, en el que el receptor GHS-R1a de mamífero es un receptor GHS-RIa humano.

10. 11.

    El modulador destinado a ser utilizado según la reivindicación 8, en el que el modulador actúa sobre un subtipo, una isoforma y/o una variante del receptor GHS-RIa de mamífero.

11. 12.

    El modulador destinado a ser utilizado según la reivindicación 8, en el que la interacción del modulador y del receptor GHS-RIa de mamífero no resulta en una secreción terapéuticamente útil de hormona de crecimiento.

12. 13.

    El modulador destinado a ser utilizado según la reivindicación 8, en el que el modulador es un agonista del receptor GHS-RIa de mamífero.

13. 14.

    El modulador destinado a ser utilizado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el uso consiste en prevenir y/o tratar el íleo postoperatorio, la gastroparesia, la caquexia, la estasis gástrica, la disfunción intestinal inducida por opiáceos, la pseudo-obstrucción intestinal crónica, el síndrome del intestino corto, la emesis, el síndrome de colon irritable con constipación predominante, el vaciado gástrico tardío, el síndrome de reflujo gastroesofágico, las úlceras gástricas o la enfermedad de Crohn.

14. 15.

    El modulador destinado a ser utilizado según la reivindicación 14, en el que el trastorno gastrointestinal es un íleo postoperatorio o gastroparesia.

    5 16. El modulador destinado a ser utilizado según la reivindicación 14, en el que el trastorno gastrointestinal es un íleo postoperatorio.

15. 17.

    El modulador destinado a ser utilizado según la reivindicación 14 o 15, en el que la gastroparesia es una gastroparesia diabética.

16. 18.

    El modulador destinado a ser utilizado según la reivindicación 14, en el que la caquexia está causada por un cáncer, el SIDA, una enfermedad cardíaca o una enfermedad renal.

    15 19. El uso de una cantidad efectiva de un modulador de fórmula I tal y como se define en la reivindicación 1, o de un isómero óptico enantiómero, diastereómero, racemato o mezcla estereoquímica del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento destinado a la estimulación de la motilidad gastrointestinal.
17. 20. La utilización según la reivindicación 19, en la que el modulador posee una de las estructuras definidas en la reivindicación 2, o isómero óptico enantiómero, diastereómero, racemato o mezcla estereoquímica del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
18. 21. La utilización según la reivindicación 20, en la que el modulador tiene la estructura:

    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

19. 22.

    La utilización según la reivindicación 20 o 21, en la que el modulador está en forma de una sal clorhidrato.

20. 23.

    La utilización según cualquiera de las reivindicaciones 19 a 22, en la que el modulador se administra vía oral.

21. 24.

    La utilización según cualquiera de las reivindicaciones 19 a 22, en la que el modulador se administra vía parenteral.

22. 25.

    La utilización según la reivindicación 24, en la que el modulador se administra vía intracraneal.

23. 26.

    La utilización según cualquiera de las reivindicaciones 19 a 23, en la que el medicamento está destinado al tratamiento del trastorno gastrointestinal, en el que la interacción del modulador y del receptor GHS-R1a de mamífero no resulta en la liberación de una cantidad significativa de hormona de crecimiento.

24. 27.

    La utilización según cualquiera de las reivindicaciones 19 a 26, en la que el modulador es un agonista del receptor de la ghrelina.

25. 28.

    La utilización según la reivindicación 26, en la que el receptor OHS-R1a de mamífero es un receptor GHS-R1a humano.

26. 29.

    La utilización según la reivindicación 26, en la que el modulador actúa sobre un subtipo, una isoforma y/o una variante del receptor OHS-R1a de mamífero.

27. 30.

    La utilización según la reivindicación 26, en la que la interacción del modulador y del receptor GHS-R1a de mamífero no resulta en una secreción terapéuticamente útil de hormona de crecimiento.

28. 31.

    La utilización según la reivindicación 26, en la que el modulador es un agonista del receptor GHS-R1a de mamífero.

29. 32.

    La utilización según cualquiera de las reivindicaciones 19 a 25, en la que el medicamento está destinado a prevenir y/o tratar el íleo postoperatorio, la gastroparesia, la caquexia, la estasis gástrica, la disfunción intestinal inducida por opiáceos, la pseudo-obstrucción intestinal crónica, el síndrome del intestino corto, la emesis, el síndrome de colon irritable con constipación predominante, el vaciado gástrico tardío, el síndrome de reflujo gastroesofágico, las úlceras gástricas o la enfermedad de Crohn.

30. 33.

    La utilización según la reivindicación 32, en la que el trastorno gastrointestinal es un íleo postoperatorio o gastroparesia.

31. 34.

    La utilización según la reivindicación 32, en la que el trastorno gastrointestinal es un íleo postoperatorio

32. 35.

    La utilización según la reivindicación 32 o la reivindicación 33, en la que la gastroparesia es una gastroparesia diabética.

33. 36.

    La utilización según la reivindicación 32, en la que la caquexia está causada por un cáncer, el SIDA, una enfermedad cardíaca o una enfermedad renal.

34. 37.

    Una composición que comprende un modulador tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 y un agente ligante metálico radiomarcado, para su uso en un método de diagnóstico de tumores y/o acromegalia que comprende la administración de la composición y la detección del enlace de la composición con un objetivo biológico.

35. 38.

    La utilización de una composición que comprende un modulador tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 y un agente ligante metálico radiomarcado, en la fabricación de un medicamento destinado a ser utilizado en un método de diagnóstico de tumores y/o acromegalia que comprende la administración de la composición y la detección del enlace de la composición con un objetivo biológico.

36. 39.

    Una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende un modulador tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 para el tratamiento de tumores y/o acromegalia.

37. 40.

    La utilización de una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende un modulador tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de tumores y/o acromegalia.

38. 41.

    Una cantidad terapéuticamente eficaz de un modulador de fórmula I tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o de un isómero óptico enantiómero, diastereómero, racemato o mezcla estereoquímica del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un método de tratamiento de un caballo por un trastorno gastrointestinal.

39. 42.

    El modulador destinado a ser utilizado según la reivindicación 20, en el que el trastorno gastrointestinal es un íleo o un cólico.

40. 43.

    Una cantidad terapéuticamente eficaz de un modulador de fórmula I tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o de un isómero óptico enantiómero, diastereómero, racemato o mezcla estereoquímica del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de un caballo por un trastorno gastrointestinal.

41. 44.

    La utilización según la reivindicación 43, en el que el trastorno gastrointestinal es un íleo o un cólico.

42. 45.

    Una cantidad terapéuticamente eficaz de un modulador de fórmula I tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o de un isómero óptico enantiómero, diastereómero, racemato o mezcla estereoquímica del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un método de tratamiento de un trastorno cardiovascular en el que la interacción del modulador y del receptor GHS-R1a no resulta en la liberación de una cantidad significativa de hormona de crecimiento.

43. 46.

    El modulador destinado a ser utilizado según la reivindicación 45, en el que el trastorno cardiovascular es una insuficiencia cardíaca congestiva, una cardiopatía isquémica o una cardiopatía crónica.

44. 47.

    El modulador destinado a ser utilizado según la reivindicación 45, en el que el modulador se administra por vía oral.

45. 48.

    El modulador destinado a ser utilizado según la reivindicación 45, en el que el modulador se administra por vía parenteral.

46. 49.

    El modulador destinado a ser utilizado según la reivindicación 45, en el que el modulador se coadministra con un agente adicional útil para el tratamiento de trastornos cardiovasculares.

47. 50.

    La utilización de una cantidad terapéuticamente eficaz de un modulador de fórmula I tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o de un

    isómero óptico enantiómero, diastereómero, racemato o mezcla estereoquímica del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno cardiovascular en el que la interacción del modulador y del receptor GHS-R1a no resulta en la liberación de una cantidad significativa de hormona de crecimiento.

48. 51.

    La utilización según la reivindicación 50, en el que el trastorno cardiovascular es una insuficiencia cardíaca congestiva, una cardiopatía isquémica o una cardiopatía crónica.

49. 52.

    La utilización según la reivindicación 50, en el que el modulador se administra por vía oral.

50. 53.

    La utilización según la reivindicación 50, en el que el modulador se administra por vía parenteral.

51. 54.

    La utilización según la reivindicación 50, en el que el modulador se coadministra con un agente adicional útil para el tratamiento de trastornos cardiovasculares.

52. 55.

    Un modulador tal y como se define en la reivindicación 1 seleccionado entre los compuestos 1 a 3, 5 a 34, 37a a 43, 47, 52, 59 a 62, 65 a 68, 88 a 90, 93 a 95, 97, 100 a 102, 105, 109, 111 a 113, 116 a 120, 122 a 124, 126, 127, 134 a 144, 141, 151 a 161b, 164, 168 a 171, 173 a 180, 184 a 195, 197 a 201, 203, 208a a 216, 218 a 223, 225 a 227, 229, 230, 299, 301, 303, 305 a 358b, 360 a 362, 364, 369 a 374, 379 a 385, 387 a 391, 393, 395 a 398, 400 a 402b, 435 a 441, 445 y 447 a 449, o un isómero óptico enantiómero, diastereómero, racemato o mezcla estereoquímica del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

53. 56.

    Una sal farmacéuticamente aceptable de un modulador, en el que el modulador posee la estructura tal y como se define en la reivindicación 2.

54. 57.

    La sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 56, que es una sal clorhidrato.

55. 58.

    La sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 56, en la que el modulador posee la estructura:

56. 59.

    La sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 58, que es una sal clorhidrato.

57. 60.

    Una composición farmacéutica que comprende una sal farmacéuticamente aceptable tal y como se define en la reivindicación 58 o la reivindicación 59, y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

    10 61. Una composición farmacéutica que comprende: Un modulador de fórmula I, tal y como se define en la reivindicación 2 o la reivindicación 4, que posee cualquiera de las siguientes estructuras:

    o un isómero óptico enantiómero, diastereómero, racemato o mezcla estereoquímica del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

    10 62. La composición farmacéutica de la reivindicación 61 que comprende además un secretagogo de hormona de crecimiento.
58. 63. La composición farmacéutica de la reivindicación 62, en el que el secretagogo de hormona de crecimiento es la hexarelina, GHRP-1, GHRP-2, GHRP-6, la

    15 ipamorelina, MK-0677, NN703, la capromorelina, G7039, G7134, G1203, G7502, SM-130686, RC-1291, L-692429, L-692587, L-739943, L-163255, L-163540, L163833, L-166446, CP-424391, EP-51389, LY-444711, NNC-26-0235, NNC-260323, NNC-26-0610, NNC-26-0722, NNC-26-1089, NNC-26-1136, NNC-26-1137, NNC-26-1187, NNC-26-1291, el factor liberador de la hormona de crecimiento, IGF-I o IGF-II.
59. 64. Una composición farmacéutica para administración parenteral, que comprende

    5 un modulador tal y como se define en la reivindicación 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.
60. 65. La composición farmacéutica de la reivindicación 64, en la que el modulador es 10 una sal clorhidrato.

61. 66.

    La composición farmacéutica de la reivindicación 64, en la que el modulador posee la estructura:

62. 67.

    La composición farmacéutica de la reivindicación 66, en la que el modulador es una sal clorhidrato.

    20 68. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 64 a 67, que es para inyección.
63. 69. Un estuche que comprende uno o varios recipientes que contienen unidades posológicas de uso farmacéutico que comprenden una cantidad eficaz de uno o

    25 de varios moduladores tal y como se define en la reivindicación 2, o de sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en el que el recipiente está envasado con instrucciones facultativas para su utilización.
64. 70. El estuche de la reivindicación 39, en el que el estuche comprende además un 30 secretagogo de hormona de crecimiento.