EA011857B1

EA011857B1 - Макроциклические карбоновые кислоты и ацилсульфонамиды в качестве ингибиторов репликации вируса гепатита с

Info

Publication number: EA011857B1
Application number: EA200600732A
Authority: EA
Inventors: Лоренс М. Блэтт; Стивен Марк Венгловски; Стивен Вейд Эндрьюс; Ютонг Джианг; Эйприл Лайн Кеннеди; Кевин Рональд Кондроски; Джон Энтони Джоси; Питер Джон Стенджел; Мачендер Р. Маддуру; Джордж Эндрю Догерти; Бенджамин Т. Вуддард
Original assignee: Интермьюн, Инк.; Эррей Биофарма Инк.
Priority date: 2003-10-14
Filing date: 2004-10-13
Publication date: 2009-06-30
Also published as: AR046422A1; HK1100164A1; AP2287A; IL215933A0; RS20110578A3; IS8395A; EP1680137A4; KR20070033315A; KR100853579B1; TWI375679B; RS20060259A; AR080189A2; WO2005037214A2; JP2013006870A; IL174704A0; EP1680137B1; BRPI0415373A; EA200600732A1; AP2006003579A0; TW200526685A

Abstract

В настоящем изобретении предложены соединения, описываемые общими структурными формулами I-IX, а также композиции, в том числе фармацевтические композиции, содержащие соединения согласно изобретению или фармацевтически приемлемые соли указанных соединений. В настоящем изобретении также предложены способы лечения, включая способы лечения вирусной инфекции гепатита С и способы лечения фиброза печени, которые в основном включают введение пациенту, который нуждается в лечении, эффективного количества соединения или композиции согласно изобретению.

Description

Настоящее изобретение относится к соединениям, способам их синтеза, композициям и способам лечения вирусной инфекции гепатита С. В частности, настоящее изобретение раскрывает новые пептидные аналоги, фармацевтические композиции, содержащие такие аналоги, и способы использования этих аналогов при лечении вирусной инфекции гепатита С.

ОПИСАНИЕ УРОВНЯ ТЕХНИКИ

Вирус гепатита С (ВГС) является самой распространенной в США хронической инфекцией, передаваемой через кровь. Хотя число новых заражений снизилось, количество хронических больных является значительным и по данным Центров по контролю и профилактики заболеваний в США насчитывается приблизительно 3,9 млн (1,8%) зараженных человек. Хроническое заболевание печени является десятым в списке лидирующих причин смертности среди взрослых в США и насчитывает приблизительно 25,000 смертей ежегодно (или приблизительно 1% от всех смертей). Исследования показывают, что 40% хронических заболеваний печени связаны с вирусом гепатита С, в результате получается приблизительно 800010000 смертей каждый год. Связанная с вирусом гепатита С конечная стадия заболевания печени является самой частой причиной пересадки печени среди взрослых.

Антивирусная терапия хронического гепатита С динамично развивалась за последнюю декаду со значительными улучшениями, наблюдаемыми в эффективности лечения. Тем не менее, даже при комбинированном лечении, используя интерферон-α, конъюгированный с ПЭГ, плюс рибавирин, у 40-50% пациентов лечение не удавалось, то есть пациенты демонстрировали либо отсутствие лечебного эффекта или рецидив заболевания. Обычно для таких пациентов отсутствовала эффективная альтернатива лечения. В частности, пациенты с запущенным фиброзом или циррозом печени, выявляемом при биопсии, имеют значительный риск развития осложнений запущенных заболеваний печени, включая асцит, желтуху, варикозное кровотечение, энцефалопатию и прогрессирующее нарушение работы печени; также заметно возрастает риск гепатоцеллюлярной карциномы.

Широкая распространенность хронической формы гепатита С вирусной инфекции несет серьезные последствия для общественного здравоохранения в виде ближайшего бремени хронических заболеваний печени в США. Данные, полученные от Национальной Исследовательской Службы по Здоровью и Питанию (ΝΗΑΝΕ8 III), указывают, что значительное увеличение числа заражений пришлось на конец 60-х начало 80 г., особенно среди людей в возрасте от 20 до 40 лет. Приблизительно подсчитано, что количество людей с затяжной формой ГС вирусной инфекции 20 лет и более может увеличиться в четыре раза за промежуток времени с 1990 по 2015 годы с 750000 до свыше 3 млн. Пропорциональное увеличение числа людей, зараженных в течение 30 или 40 лет, могло бы быть даже больше. Поскольку риск хронических заболеваний печени, связанных с ВГС, имеет отношение к продолжительности заражения, риск цирроза постепенно увеличивается для людей, зараженных более 20 лет, это приведет в результате к значительному увеличению заболеваний, связанных с циррозом, и смертности среди пациентов, зараженных между 1965-1985 г.

ВГС представляет собой вирус семейства флавивирусов с линейной молекулой РНК положительной полярности. Геном ВГС представлен однонитевой молекулой РНК протяженностью около 9500 нуклеотидов и содержит единственную открытую рамку считывания (ОКЕ), несущую информацию о единственном большом вирусспецифичном полипротеине размером около 3000 аминокислотных остатков. В зараженных клетках этот полипротеин расщепляется на многочисленные участки клеточными и вирусными протеазами с получением структурных и неструктурных (N8) протеинов вируса. В случае ВГС образование зрелых неструктурных протеинов (N82, N83, N84, Ν84Α, Ν84Β, Ν88Α и Ν85Β) осуществляется двумя вирусными протеазами. Первая вирусная протеза расщепляет связь Ν82-Ν83 полипротеина. Вторая вирусная протеза это сериновая протеаза, содержащая Ν-концевой участок N83 (далее именуемая как N83 протеаза). N83 протеаза является медиатором всех последующих расщеплений на участках ниже положения N83 в полипротеине (т.е. участках, расположенных между С-окончанием N83 и Сокончанием полипротеина). Ν83 протеаза проявляет активность как в цис-положении при расщеплении участка Ν83-Ν84, так и в транс-, для остальных Ν84Α-Ν84Β, Ν84Β-Ν85Α, и Ν85Α-Ν85Β участков. Считается, что белок Ν84Α, является многофункциональным полипротеином и способствует активности N83 протеазы и возможно участвует в мембранной локализации N83 и других вирусных репликазных компонентов. Очевидно, образование комплекса между N83 и Ν84Α необходимо для процессов, медиируемых N83, и улучшает протеолитическую эффективность на всех участках, распознаваемых N83. Протеаза N83 также проявляет нуклеозид трифосфатазную и РНК-хеликазную активность. Ν85Ε представляет собой РНК-зависимую РНК полимеразу, вовлеченную в репликацию РНК ВГС.

Литература

ΜΕΤΑνίΚ (1994) Нера!о1оду 20: 15-20; ΒπιιιΙ (2000) Нера!о1. 31:241-246; ΑΙρίηί (1997) 1. Нера!о1. 27:371-380; Нзгош е! а1. (1996) Нера!о1. 23:1189-1199; С/ща е! а1. (1989) Нера!о1. 10: 795-800; Огоккшапе1а1. (1998) 1. Оак!гоеп!его1. Нера!о1. 13:1058-1060; Коскеу апб Скипд (1994) 1. 1пуек1. Меб. 42: 660-670; 8ака1ба е! а1. (1998) 1. Нера!о1. 28:471-479; 8Ы е! а1. (1997) Ргос. №б. Αсаб. 8с1. υ8Α 94: 1066310668; Еагоп! е! а1. (1999) Ыуег 19 : 212-219; ЬойаЫасоЬ е! а1. (1997) 1. Нера!о1. 26: 894-903; Ь1огеп! е! а1. (1996) 1. Нера!о1. 24: 555-563; и. 8. Ра!еп! №. 5,082, 659; Европеская патентная заявка ЕР 294,160; Патент

- 1 011857

США № 4,806, 347; ВаЕзЕ е! а1. (1992) 1. 1п£ес1. И1зеазез 166: 1401-1403; Ка!ауата е! а1. (2001) 1. У1та1 НераЕЕз 8: 180-185; патент США № 5,082, 659; патент США № 5,190, 751; патент США № 4,806, 347; Аапб1 е! а1. (1992) Вг. 1. Наета!о1. 81:516-519; Европейская патентная заявка № 294,160; патент Канады № 1,321, 348; Европейская патентная заявка № 276,120; Аапб1 е! а1. (1992) 8ет. Опсо1. 19: 88-94; ВаЕзЕ е! а1. (1992) 1. Шесйоиз И1зеазез 166: 1401-1403; Уап Оцк е! а1. (1994) Ιη!. 1. Сапсег 56: 262-268; 8ипбтасЕег е! а1. (1987) Сиггеп! Еуе Кез. 6: 273-276; патенты США № 6,172,046; 6,245,740; 5,824,784; 5,372,808; 5,980,884; опубликованные международные патентные заявки АО 96/21468; АО 96/11953; АО 00/59929; АО 00/66623; А02003/064416; А02003/064455; А02003/064456; АО 97/06804; АО 98/17679; АО 98/22496; АО 97/43310; АО 98/46597; АО 98/46630; АО 99/07733; АО 99/07734, АО 00/09543; АО 00/09558; АО 99/38888; АО 99/64442; АО 99/50230; АО 95/33764; Тогге е! а1. (2001) 1. Меб. У1го1. 64: 455-459; Веккеттд е! а1. (2001) 1. Нера!о1. 34: 435-440; /ен/ет е! а1. (2001) Саз!гоеп!его1. 120:1438-1447; /ен/ет (1999) К. Нера!о1. 31: 61-64; Кеейе и Но11тдет (1997) Нера!о1. 26: 1018-1078; А111з (1990) С1т. РЕагтасокте!. 19: 390-399; Неа!Есо!е е! а1. (2000) Хеу Епд1. 1 Меб. 343: 1673- 1680; Низа и Низоха (2001) Вга!1з1. Йе! Е1з1у 102: 248-252; С1ие е! а1. (2000) С1т. РЕагтасо1. 68:556-567; ВаПоп е! а1. (2001) Вюсопр СЕет. 12: 195-202; и Хеитапп е! а1. (2001) 8с1епсе 282:103; /аНрзкх (1995) Αάν. Отд ОеНхегх Кехчеуз 8. 16,157-182; Мапп е! а1. (2001) йапсе! 358: 958-965; /ен/ет е! а1. (2000) Хеу Епд1. К Меб. 343: 1666-1672; Патенты США № 5,633,388; 5,866,684; 6,018,020; 5,869,253; 6,608,027; 5,985,265; 6,177,074; 5,985,263; 5,711,944; 5,382,657; и 5,908,121; ОзЕотп е! а1. (2002) 1. РЕагтасо1. Ехр. ТЕегар. 303: 540-548; 8Ееррагб е! а1. (2003) Ха!. 1ттипо1. 4: 63-68; СЕапд е! а1. (1999) Ха!. Вю!есЕпо1. 17: 793-797; Або1й (1995) Ми1йр1е 8с1егоз1з 1 8ирр1. 1: 844-847; СЕи е! а1., Те!. Йе!!. (1996), 7229-7232; Девятая Конференция по Антивирусным Исследованиям (Хт!Е Сопйегепсе оп АпПхчга1 КезеагсЕ), Урабандай, Фукишима, Япония (1996) (АпИхчга1 КезеагсЕ, (1996), 30: 1, А23 (реферат 19)); 8!еткиЕ1ет е! а1., ВюсЕет., 37: 8899-8905; 1пда11те11а е! а1., ВюсЕет., 37: 8906-8914.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем изобретении предложены соединения следующей общей формулы

Согласно одному из аспектов в настоящем изобретении предложены макроциклическая карбоновая кислота или ацилсульфонамид, отвечающие формулам I, VIII или IX

I

VIII

где:

(а) К¹ и К², каждый независимо, представляет собой Н, галоген, циано, гидрокси, С_1-6 алкил, С_1-6 ал- 2 011857 кокси, С1-6 алкил, возможно замещенный не более чем 3 атомами фтора, тиазолил, Ό(Ο)ΝΚ⁶Κ⁷, ΝΚ⁶Κ⁷, С(О)ОК⁸, Ν№(Ο)Κ⁸, ОСН^К⁶К⁷ или ОСНпК^9а; где К^9а представляет собой имидазолил или пиразолил; указанный тиазолил в определении К¹ и К² является необязательно замещенным С1-6 алкилом, (b) К⁴ представляет собой Н;

(c) К⁵ представляет собой ((ОМ/К, С(О)К⁸, С(О)ОК⁸ или (СО)СНК²^Н(СО)К²²;

(4) К⁶ и К⁷, каждый независимо, представляет собой Н, С_1-6 алкил, С_3-7циклоалкил или К⁶ И К⁷ вместе с азотом, к которому они присоединены, образуют пиперидинил, пиперазинил или морфолинил;

(е) К⁸ представляет собой С_1-6 алкил, С_3-7 циклоалкил, С_4-10 алкилциклоалкил, при этом все они могут быть замещены фенилом; или К⁸ представляет собой тетрагидрофурановое кольцо, присоединенное посредством атома углерода в положении С3 или С4 тетрагидрофуранового кольца; или К⁸ представляет собой тетрагидропирановое кольцо, присоединенное по положению С4 тетрагидропиранового кольца;

(ί) Υ представляет собой сульфонимидную группу формулы -С(О^Н8(О)₂К⁹, где К⁹ представляет собой С1-6 алкил, С3-7 циклоалкил, или К⁹ представляет собой фенил или нафтил, возможно замещенный не более чем тремя группами гало, циано, нитро, С1-6 алкила, С1-6 алкокси, или К⁹ представляет собой С1-6 алкил, возможно замещенный не более чем тремя атомами фтора, или К⁹ представляет собой 5-членное гетероароматическое кольцо, содержащее 1-3 гетероатома, выбранные из N и 8, возможно замещенное до двух раз галогеном; или Υ представляет собой карбоксильную группу;

(д) К¹⁰ и К¹¹, каждый независимо, представляет собой Н, С_1-6 алкил; или К¹⁰ и К¹¹ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил;

(й) р=0 или 1;

(ί) К¹² и К¹³, каждый независимо, представляет собой Н, СН^К⁶ К⁷, или К¹² и К¹³каждый представляет собой С1-6 алкил, возможно замещенный СНпОК⁸;

(ί) К²⁰ представляет собой Н;

(k) п=0-3;

(l) V представляет собой О или 8;

(т) представляет собой О или ΝΒ¹⁵, где К¹⁵ представляет собой Н;

(п) пунктирная линия означает возможную двойную связь;

(о) К²¹ представляет собой С1-6 алкил, С3-7 циклоалкил;

(р) К²² представляет собой С1-6 алкил и (с|) Ζ представляет собой присоединенный фенил, конденсированную С₆ арильную систему или конденсированную 5-9-членную гетероарильную циклическую систему, содержащую 1 или 2 гетероатома, выбранные из N и 8.

Согласно следующему аспекту в настоящем изобретении предложены макроциклическая карбоновая кислота или ацилсульфонамид, отвечающие формуле II

где:

(a) К¹ и К², каждый независимо, представляет собой Н, галоген, циано, гидрокси, С_1-3 алкил, С_1-3 алкокси;

(b) К⁵ представляет собой С(О^К⁶К⁷, С(О)К⁸, С(О)ОК⁸;

(c) К⁶ и К⁷, каждый независимо, представляет собой Н, С1-6 алкил, С3-7 циклоалкил;

(4) К⁸ представляет собой С_1-6 алкил, С_3-7 циклоалкил, С_4-10 алкилциклоалкил или 3тетрагидрофурил;

(е) Υ представляет собой сульфонимидную группу формулы -С(О^Н8(О)₂К⁹, где К⁹ представляет собой С1-3 алкил, С3-7 циклоалкил или фенил, который возможно замещен не более чем двумя группами гало, циано, нитро, С1-3 алкил, С1-3 алкокси, или Υ представляет собой карбоксильную группу;

(ί) К¹⁰ и К¹¹, каждый независимо, представляет собой Н, С1-6 алкил, или К¹⁰ и К¹¹ вместе с атомом

- 3 011857 углерода, к которому они присоединены, образуют циклобутил;

(д) представляет собой О или ΝΗ и (И) пунктирная линия означает возможную двойную связь.

Согласно еще одному аспекту в настоящем изобретении предложены макроциклическая карбоновая кислота или ацилсульфонамид, отвечающие общей формуле III

где:

(a) К¹ и К², каждый независимо, представляет собой Η, галоген, циано, гидрокси, С1_₃ алкил, С1_₃ алкокси;

(b) К⁴ представляет собой Η;

(c) К⁵ представляет собой СОУК К, С(О)К⁸, С(О)ОК⁸;

(б) К⁶ и К⁷, каждый независимо, представляет собой Η, С_1-6 алкил, С_3-7 циклоалкил, или К⁶ И К⁷ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют пиперидинил, пиперазинил или морфолинил;

(е) К представляет собой С_1-6 алкил, С_3-7циклоалкил, С_4-10 алкилциклоалкил или 3-тетрагидрофурил.

(ί) Υ представляет собой сульфонимидную группу формулы -С(О)NΗ8(О)₂К⁹, где К⁹ представляет собой С_1-3 алкил, С_3-7циклоалкил или фенил, возможно замещенный не более чем двумя группами гало, циано, нитро, гидрокси, С_1-3 алкила, С_3-7 циклоалкила, С_1-3 алкокси, или Υ представляет собой карбоксильную группу;

(д) выбирают из О, ΝΗ; и (И) пунктирная линия означает возможную двойную связь.

Согласно следующему аспекту в настоящем изобретении предложен макроциклический ацилсульфонамид, отвечающий общей формуле IV

где:

(a) К¹ и К², каждый независимо, представляет собой Η, галоген, циано, гидрокси, С_1-3 алкил, С_1-3 алкокси;

(b) К⁵ представляет собой С(О)ОК⁸, С(О)NΗК⁸;

(c) К⁸ представляет собой С_1-6 алкил, С_3-7 циклоалкил, 3-тетрагидрофурил.

(б) К⁹ представляет собой С_1-3 алкил, С_3-7 циклоалкил или фенил, который возможно замещен не более чем двумя группами гало, циано, С_1-3 алкила, С_1-3 алкокси;

(е) К¹⁰ и К¹¹, каждый независимо, представляет собой Η, С_1-6 алкил, или К¹⁰ и К¹¹ вместе с атомом углерода, к которому присоединены, образуют циклобутил;

(ί) представляет собой О или ΝΗ и

- 4 011857 (д) пунктирная линия означает возможную двойную связь.

Согласно другому аспекту в настоящем изобретении предложен макроциклический ацилсульфона-

где:

(b) К⁵ представляет собой С(О)ОК⁸ или Ό(Ο)ΝΗΚ⁸;

(c) К⁸ представляет собой С_1-6 алкил, С_3-7 циклоалкил или 3-тетрагидрофурил;

(б) К⁹ представляет собой С_1-3 алкил, С_3-4 циклоалкил или фенил, который возможно замещен не более чем двумя группами гало, циано, С1-3 алкила, С1-3 алкокси;

(е) представляет собой О или ΝΗ;

(ί) пунктирная линия означает возможную двойную связь.

Согласно следующему аспекту в настоящем изобретении предложен макроциклический ацилсульфонамид, отвечающий общей формуле VI

11

VI где:

(a) К¹ и К², каждый независимо, представляет собой Н, галоген, циано, гидрокси, С1-3 алкил, С1-3 алкокси;

(b) К⁵ представляет собой С(О)ОК⁸, (’(Ο)ΝΗΙ<⁸;

(c) К⁸ представляет собой С_1-6 алкил, С_3-7 циклоалкил, (б) К⁹ представляет собой С_1-3 алкил, С_3-7циклоалкил или фенил, который возможно замещен не более чем двумя группами гало, циано, С1-3 алкила, С1-3 алкокси;

(е) К¹⁰ и К¹¹, каждый независимо, представляет собой Н, С_1-6 алкил, или К¹⁰ и К¹¹ вместе с атомом углерода, к которому присоединены, образуют циклобутил и (ί) пунктирная линия означает возможную двойную связь.

Согласно еще одному аспекту в настоящем изобретении предложен макроциклический ацилсульфонамид, отвечающий общей формуле VII

- 5 011857

где:

(а) К¹ и К², каждый независимо, представляет собой Н, галоген, циано, гидрокси, С_1-3 алкил, С_1-3 ал кокси;

(b) К⁵ представляет собой С(О)ОК⁸, С(О)ЫНК⁸;

(c) К⁸ представляет собой С_1-6 алкил, С_3-7 циклоалкил;

(ά) К⁹ представляет собой С_1-3 алкил, С_3-7 циклоалкил или фенил, который возможно замещен не более чем двумя группами гало, циано, С_1-3 алкила, С_1-3 алкокси;

(е) пунктирная линия означает возможную двойную связь.

Согласно другому аспекту в настоящем изобретении предложено соединение формулы

Согласно другому аспекту в настоящем изобретении предложены фармацевтические композиции, содержащие N83 ингибитор, который представляет собой какое-либо соединение формулы Ι-ΙΧ, или его терапевтически приемлемую соль, или эфир в смеси с фармацевтически приемлемым носителем. Настоящее изобретение также включает любое фармацевтически приемлемое пролекарственное производное соединения формулы Ι-ΙΧ, где пролекарство способно обеспечить увеличение всасывания желудно кишечным трактом или печенью.

Согласно еще одному аспекту в настоящем изобретении предложен способ лечения пациента с вирусной инфекцией гепатита С, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы Ι-ΙΧ, или его терапевтически приемлемой соли, или эфира, или фармацевтической композиции, описанной выше.

Также предложен способ лечения пациента с вирусной инфекцией гепатита С, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы Ι-ΙΧ, или его терапевтически приемлемой соли? или эфира, или фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы Ι-ΙΧ, или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения в комбинации с одним или более дополнительным антивирусным агентом (агентами), в количестве, эффективном для улучшения продол жительного вирусного ответа у пациента.

Кроме того, в настоящем изобретении предложен способ лечения фиброза печени, включающий введение пациенту эффективного количества соединения формулы Ι-ΙΧ.

Также предложен способ усиления функции печени у пациента с вирусной инфекцией гепатита С, включающий введение пациенту эффективного количества соединения формулы Ι-ΙΧ.

Согласно одному из вариантов реализации изобретения предложенные способы лечения вирусной инфекции гепатита С, лечения фиброза печени и усиления функции печени дополнительно включают введение пациенту эффективного количества нуклеозидного аналога, при этом указанный нуклеозидный аналог может быть выбран из группы, включающей рибавирин, левовирин, вирамидин, Ь-нуклеозид и

- 6 011857 изаторибин. Согласно другому варианту реализации указанные способы дополнительно включают введение пациенту пирфенидона или его аналога, вводимого перорально, ежедневно в количестве примерно от 400 до 3600 мг.

Согласно еще одному варианту реализации изобретения предложенные способы лечения вирусной инфекции гепатита С, лечения фиброза печени и усиления функции печени дополнительно включают введение пациенту эффективного количества ингибитора Ν85Β РНК-зависимой РНК полимеразы. Согласно следующему варианту реализации предложенные способы дополнительно включают введение пациенту эффективного количества антагониста фактора некроза опухоли, выбранного из группы, включающей этанерсепт, инфликсимаб и адалимумаб.

Согласно другому варианту реализации предложенные способы лечения вирусной инфекции гепатита С, лечения фиброза печени и усиления функции печени дополнительно включают введение пациенту эффективного количества тимозина-α, при этом введение тимозина-α может осуществляться подкожно два раза в неделю в количестве примерно от 1,0 до 1,6 мг.

Согласно следующему варианту реализации предложенные способы лечения вирусной инфекции гепатита С, лечения фиброза печени и усиления функции печени дополнительно включают введение пациенту эффективного количества интерферона-гамма (ИФН-γ), при этом введение ИФН-γ может осуществляться подкожно в количестве примерно от 10 до 300 мкг.

Согласно еще одному варианту реализации предложенные способы лечения вирусной инфекции гепатита С, лечения фиброза печени и усиления функции печени дополнительно включают введение пациенту эффективного количества интерферона-альфа (ИФН-α), при этом указанный ИФН-α может представлять собой моноПЭГилированный (30 кДа, линейный) консенсусный ИФН-α, вводимый с интервалом от каждых 8 дней до каждых 14 дней. В частности, введение указанного моноПЭГилированного (30 кДа, линейного) консенсусного ИФН-α может осуществляться один раз каждые 7 дней. Согласно одному из вариантов реализации ИФН-α представляет собой ΙΝΕΕΒΟΕΝ консенсусный ИФН-α.

Согласно еще одному варианту реализации предложенные способы лечения вирусной инфекции гепатита С, лечения фиброза печени и усиления функции печени дополнительно включают введение эффективного количества агента, выбранного из группы, включающей 3'-азидотимидин, 2',3'дидеоксиинозин, 2',3'-дидеоксицитидин, 2,3-дидегидро-2',3'-дидеокситимидин, комбивир, абакавир, адефовир, дипоксил, цидофовир и ингибитор инозинмонофосфатдегидрогеназы.

В настоящем изобретении также предложено применение эффективного количества соединения формулы Ι-ΙΧ для получения фармацевтической композиции для лечения фиброза печени у пациента.

Согласно другому аспекту в настоящем изобретении предложено применение эффективного количества соединения формулы Ι-ΙΧ для получения фармацевтической композиции для усиления функции печени у пациента с вирусной инфекцией гепатита С.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

В контексте данного описания термин «печеночный фиброз», применяемый наряду с термином «фиброз печени», относится к росту рубцовой ткани в печени, который происходит при хронической форме вирусной инфекции гепатита.

Термины «индивид», «организм-носитель вируса», «субъект» и «пациент» являются взаимозаменяемыми и относятся к млекопитающим, включая, но, не ограничиваясь, приматами, включая обезьян и человека.

В контексте данного описания, термин «функция печени» относится к нормальной функции печени, включая, но, не ограничиваясь, синтетической функцией, включая, но, не ограничиваясь, синтезом протеинов, таких как сывороточные протеины (например, альбумин, факторы свертывания крови, щелочная фосфатаза, аминотрансферазы (например, аланиновая трансаминаза, аспартамовая трансаминаза), 5'нуклеозидаза, γ-глютаминилтранспептидаза и так далее), синтез билирубина, синтез холестерина и синтез желчных кислот; метаболическая функция печени, включая, но, не ограничиваясь, метаболизмом углеводов, метаболизмом аминокислот и аммиака, гормональным метаболизмом и липидным метаболизмом; детоксификация экзогенных лекарственных средств; гемодинамическая функция, включая внутренностную и портальную динамику кровообращения; и тому подобное.

Термин «продолжительный вирусный ответ» (8УР; также именуемый как «продолжительный ответ» или «длительный ответ») в данном контексте относится к ответу пациента на программу лечения вирусной инфекции гепатита С, исходя из титра ВГС в сыворотке. Как правило, «продолжительный вирусный ответ» относится к отсутствию (не обнаружению) РНК ВГС (например, меньше чем 500, меньше чем 200 или меньше чем 100 геномных копий на миллилитр сыворотки) в сыворотке пациента за период в течение по меньшей мере одного месяца, по меньшей мере двух месяцев, по меньшей мере трех месяцев, по меньшей мере четырех месяцев, по меньшей мере пяти месяцев, по меньшей мере шести месяцев вслед за прекращением лечения.

Термин пациенты, не поддающиеся лечению, как используется здесь, относится обычно к пациентам, зараженным ВГС, у которых отсутствует лечебный эффект после предварительной терапии ВГС (именуемые как «пациенты с отсутствием лечебного эффекта») или которые первоначально отвечали на

- 7 011857 проводимое лечение, но у которых лечебный эффект не сохраняется (именуемые как «пациенты с рецидивом заболевания»). Обычно предварительная терапия может включать монотерапию α-интерфероном или комбинированную терапию α-интерфероном и каким-нибудь антивирусным агентом, например рибавирином.

Как используется здесь, термины «лечение» и «терапия» и тому подобное относятся к получению желательного фармакологического и/или физиологического эффекта. Эффект может быть профилактическим, исходя из полностью или частично предотвращенного заболевания или его симптомов, и/или может быть терапевтическим, исходя из частичного или полного избавления от заболевания и/или неблагоприятного повреждения, присущего данному заболеванию. «Лечение», как используется здесь, охватывает любое лечение заболевания у млекопитающего, а именно у человека, и включает: (а) предотвращение заболевания у пациента, который может быть предрасположен к заболеванию, но при диагностике выявлено, что заболевание отсутствует; (Ь) подавление заболевания, т.е. остановка его развития; и (с) освобождение от заболевания, т. е. регрессия заболевания.

Термины «индивид», «организм-носитель вируса», «субъект» и «пациент» являются взаимозаменяемыми и относятся к млекопитающим, включая, но, не ограничиваясь мышами, обезьянами, человеком, млекопитающими животными фермерских и охотничьих хозяйств и домашними млекопитающими животными.

Термин «специфичный аналог пирфенидона» и все грамматические варианты относятся к и ограничиваются всеми и каждым аналогом пирфенидона, указанным в табл. 1.

Как используется здесь, «агонист рецептора интерферона I типа» относится к любому лиганду человеческого рецептора интерферона I типа природного происхождения или не природного происхождения, который связывает и вызывает сигнальную трансдукцию через рецептор. Агонисты рецепторов интерферона I типа включают интерфероны, охватывающие интерфероны природного происхождения, модифицированные интерфероны, синтетические интерфероны, гетерологические интерфероны, смешанные интерфероны; антитела, специфичные к интерфероновым рецепторам; непептидные химические агонисты и тому подобное.

Как используется здесь, термин «агонист рецептора интерферона II типа» относится к любому лиганду человеческого рецептора интерферона II типа природного происхождения или не природного происхождения, который связывает и вызывает сигнальную трансдукцию через рецептор. Агонисты рецепторов интерферона II типа включают природный человеческий интерферон-γ, представителей рекомбинантного интерферона-γ, представителей гликозилированного интерферона-γ, представителей интерферона-γ, конъюгированного с ПЭГ, модифицированных или измененных представителей интерферона-γ, интерферон-γ гибридные белки, агонисты антител, специфичных к рецепторам, непептидные агонисты и тому подобное.

Как используется здесь, термин «агонист рецептора интерферона III типа» относится к любому лиганду человеческого Ш-28 рецептора («Ρ-28Κ»>) природного происхождения или не природного происхождения, аминокислотная последовательность которого описана у 8йеррагб и др., выше, и который связывает и вызывает сигнальную трансдукцию через рецептор.

Как используется здесь, термин «агонисты рецепторов интерферона» относятся к любому из агонистов рецептора интерферона I типа, агонистов рецептора интерферона II типа или агонистов рецептора интерферона III типа.

Термин «дозированное введение», используемый здесь, относится к введению антивирусного агента пациенту, нуждающемуся в этом, где введение может включать одну или более доз антивирусного агента из устройства введения лекарственных средств. Таким образом, термин «дозированное введение», как используется здесь, включает, но не ограничивается, установкой продолжительной системы введения (например, насос или другое управляемое устройство для инъекции); однократную подкожную инъекцию вслед за установкой системы для продолжительного введения.

«Непрерывная доставка», как используется здесь (например, в следующем контексте «непрерывная доставка соединения к ткани»), означает продвижение лекарственного средства к месту доставки, например к ткани, некоторым способом, который обеспечит доставку желаемого количества вещества к ткани за выбранный промежуток времени, где приблизительно то же самое количество лекарственного средства получает пациент каждую минуту в течение выбранного промежутка времени.

«Контролируемое высвобождение», как используется здесь (например, в следующем контексте «контролируемое высвобождение лекарственного средства»), включает высвобождение соединения (например, агониста рецептора интерферона I типа или II типа, например интерферона-α) с выбранной или иным образом контролируемой скоростью, интервалом и/или количеством, на которое в значительной степени не влияют условия применения. «Контролируемое высвобождение», таким образом, охватывает, но не обязательно ограничивается в основном непрерывной доставкой и систематической доставкой (например, прерывистой доставкой за период времени, которая нарушается регулярными или нерегулярными временными интервалами).

«Систематическая» или «временная» доставка, как используется в контексте доставки лекарствен

- 8 011857 ных средств, означает доставку лекарственного средства систематически, особенно по регулярной схеме, за предварительно выбранный отрезок времени (например, иной, чем период, связанный с инъекцией ударной дозы вещества). «Систематическая» или «временная» доставка лекарственного средства включает доставку лекарственного средства при возрастающей, уменьшающейся, постоянной или пульсирующей скорости или диапазоне скоростей (например, количество лекарственного средства за единицу времени или объем лекарственной формы за единицу времени) и также включает доставку, которая является непрерывной или в значительной степени непрерывной или постоянной.

Термин «устройство для контролируемой доставки лекарственного средства» охватывает любое устройство, где высвобождение (например, скорость, время высвобождения) лекарственного средства или другой желательной субстанции, содержащейся в нем, контролируется с помощью или определяется самим устройством и не поддается влиянию окружающих условий использования или где высвобождение происходит при скорости, которая является воспроизводимой в окружающих условиях использования.

«Постоянный в значительной степени», как используется здесь в следующем контексте, «постоянное в значительной степени вливание» или «постоянная в значительной степени доставка» относится к доставке лекарства способом, который не прерывается в течение предварительно выбранного временного интервала, где количество лекарства, полученного пациентом в течение любого 8-часового интервала в предварительно выбранном периоде действия, никогда не упадет до нуля. Более того, «постоянная в значительной степени» доставка может также охватывать доставку лекарства при постоянной, предварительно выбранной скорости, или диапазоне скоростей (например, количество лекарства за единицу времени или объем лекарственной формы за единицу времени), которая не нарушается в течение предварительно выбранного периода доставки лекарства.

«Состояние, устойчивое в значительной степени», как используется здесь в контексте какого-либо биологического параметра, который может изменяться как функция от времени, означает, что этот биологический параметр имеет постоянное значение в течение промежутка времени, такого, что область под кривой, определяемая значениями биологического параметра как функции от времени в течение любого 8-часового интервала в периоде действия (ОПК8ч), не более чем на 20% больше или на 20% меньше или предпочтительно не более чем на 15% больше или на 15% меньше и более предпочтительно не более чем на 10% больше или на 10% меньше средней области под кривой биологического параметра за 8-часовой промежуток в течение периода действия (ОПК8ч средняя). ОПК8ч средняя определяется как частное (с|) от области под кривой биологического параметра за полное время действия (ОПК общая), разделенная на количество 8-часовых интервалов за период действия (число/Здня), то есть, с.| = (ОПК общая)/(число/Здня). Например, концентрация в сыворотке лекарственного средства сохраняется в устойчивом состоянии, в течение периода действия лекарства, когда область под кривой концентрации лекарственного средства в сыворотке в течение любого 8-часового интервала за время действия (ОПК8ч) не более чем на 20% больше или на 20% меньше средней области под кривой концентрации лекарственного средства в сыворотке за любой 8-часовой интервал во время действия (ОПК8ч средняя), то есть ОПК8ч не более чем на 20% больше или на 20% меньше ОПК8ч средней для концентрации лекарственного средства в сыворотке за время действия лекарства.

Перед тем, как настоящее изобретение будет более детально описано, отметим, что это изобретение не ограничивается конкретными описанными вариантами реализации изобретения, по существу, они конечно могут изменяться. Также понятно, что терминология, используемая здесь, только для целей описания конкретных вариантов реализации изобретения не подразумевает ограничений, поскольку объем притязаний настоящего изобретения может быть ограничен только прилагаемой формулой изобретения.

Там, где представлен диапазон значений, понятно, что каждое промежуточное значение до одного знака после запятой в единицах нижнего граничного значения, по меньшей мере, если не указано другое, между верхним и нижним граничным значением этого диапазона и любого другого заявляемого диапазона или промежуточное значение в этом заявленном диапазоне охватывается этим изобретением. Верхнее и нижнее граничные значения этих более маленьких диапазонов также могут независимо быть включены в эти более маленькие диапазоны и также охватываются настоящим изобретением, при условии исключения любого граничного значения в заявленном диапазоне. Там, где заявленный диапазон включает один или оба граничных значения, диапазоны, исключающие или один или оба граничных значения, также включены в объем притязаний настоящего изобретения.

По меньшей мере, если не указано иное, все технические или научные термины, используемые здесь, имеют то же самое значение, как обычно понимается специалистом в данной области техники, к которой изобретение принадлежит. Хотя любые методы и материалы, подобные или эквивалентные тем, что описаны здесь, могут также быть использованы в практической части или исследованиях настоящего изобретения, предпочтительные способы и материалы описываются здесь. Все публикации, использованные здесь, приводятся для ссылки с целью описания и раскрытия способов и/или материалов в связи с которыми публикации цитируются.

Должно быть отмечено, что как используется здесь и в прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают множественное число, по меньшей мере, если не указано иное. Таким

- 9 011857 образом, например отсылка к какому-нибудь «способу» включает множество таких способов и отсылка к «какой-либо дозе» включает отсылку к одной или более дозам и их эквивалентам, известным специалисту в области техники, и так далее.

Публикации, обсуждаемые здесь, являются публикациями, раскрытыми до даты подачи настоящей заявки. Ничего из представленного здесь не рассматривается в качестве допущения того, что настоящее изобретение не дает право датировать задним числом такую публикацию на основании более раннего изобретения. Также представленные даты публикации могут отличаться от фактической даты публика ции, которая может нуждаться в независимом подтверждении.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем изобретении предложены соединения формул Ι-ΙΧ, фармацевтические композиции и формы, содержащие любое соединение формулы Ι-ΙΧ или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения. Предложенные соединения подходят для лечения вирусной инфекции гепатита С и других заболеваний, как обсуждается ниже.

КОМПОЗИЦИИ

кокси, С1_б алкил, возможно замещенный не более чем 3-мя атомами фтора, тиазолил, С(О)ЫК⁶К⁷, ΝΚ⁶Κ⁷, С(О)ОК⁸, Ν№(Ο)Κ⁸, ОСΗηNΚ⁶Κ⁷ или ОСНпК^9а; где К^9а представляет собой имидазолил или пиразолил; указанный тиазолил в определении К¹ и К² является необязательно замещенным С_1-6 алкилом, (b) К⁴ представляет собой Н;

(c) К⁵ представляет собой С(ОЖ⁶К⁷, С(О)К⁸, С(О)ОК⁸ или (СО)СНК²^(СО)К²²;

(й) К⁶ и К⁷, каждый независимо, представляет собой Н, С_1-6 алкил, С_3-7 циклоалкил, или К⁶ и К⁷ вместе с азотом, к которому они присоединены, образуют пиперидинил, пиперазинил или морфолинил;

(е) К⁸ представляет собой С_1-6 алкил, С_3-7 циклоалкил, С_4-10 алкилциклоалкил, при этом все они могут быть замещены фенилом; или К⁸ представляет собой тетрагидрофурановое кольцо, присоединенное

- 10 011857 посредством атома углерода в положении С₃ или С₄ тетрагидрофуранового кольца; или К⁸ представляет собой тетрагидропирановое кольцо, присоединенное по положению С₄ тетрагидропиранового кольца;

(ί) Υ представляет собой сульфонимидную группу формулы -0(0)ΝΗ8(Θ)₂Κ⁹, где К⁹ представляет собой С1-6 алкил, С3-7 циклоалкил, или К⁹ представляет собой фенил или нафтил, возможно замещенный не более чем тремя группами гало, циано, нитро, С1-6 алкила, С_1-6 алкокси, или К⁹ представляет собой С_1-6алкил, возможно замещенный не более чем тремя атомами фтора, или К⁹ представляет собой 5-членное гетероароматическое кольцо, содержащее 1-3 гетероатома, выбранные из N и 8, возможно замещенное до двух раз галогеном; или Υ представляет собой карбоксильную группу;

(д) К¹⁰ и К¹¹, каждый независимо, представляет собой Н, С_1-6 алкил или К¹⁰ и К¹¹ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил;

(й) р=0 или 1;

(1) К¹² и К¹³, каждый независимо, представляет собой Н, ίΉ,.,ΝΕ⁶ К⁷ или К¹² и К¹³ каждый представляет собой С_1-6 алкил, возможно замещенный СН_п0К⁸;

(ί) К²⁰ представляет собой Н;

(k) п=0-3;

(l) V представляет собой О или 8;

(т) А представляет собой О или ΝΗ¹⁵, где К¹⁵ представляет собой Н;

(о) К²¹ представляет собой С1-6 алкил, С3-7циклоалкил;

(р) К²² представляет собой С1-6 алкил и (ς) Ζ представляет собой присоединенный фенил, конденсированную С₆ арильную систему или конденсированную 5-9-членную гетероарильную циклическую систему, содержащую 1 или 2 гетероатома, выбранные из N и 8.

В настоящем изобретении также предложены соединения общей формулы II

где:

(b) К⁵ представляет собой С(0)NК⁶К⁷, С(0)К⁸, С(0)0К⁸;

(c) К⁶ и К⁷, каждый независимо, представляет собой Н, С_1-6 алкил, С_3-7 циклоалкил, С_4-10 алкилциклоалкил или фенил;

(ф К⁸ представляет собой С_1-6 алкил, С_3-7циклоалкил, С_4-10 алкилциклоалкил или 3тетрагидрофурил.

(е) Υ представляет собой сульфонимидную группу формулы -С(0)NН8(0)₂К⁹, где К⁹ представляет собой С_1-3 алкил, С_3-7 циклоалкил или фенил, который необязательно замещен от одного до двух атомов галогенов, циано, нитро, гидрокси, С_1-3 алкилов, С_3-7 циклоалкилов, С_1-3 алкокси, или Υ представляет собой карбоксильную группу или ее фармацевтически приемлемую соль, сольват или пролекарство;

(ί) К¹⁰ и К¹¹, каждый независимо, представляет собой Н, С_1-3 алкил или К¹⁰ и К¹¹ вместе с атомом углерода, к которому присоединены, образуют циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил;

(д) А выбирают из О или N4 и (й) пунктирная линия означает необязательную двойную связь.

В настоящем изобретении предложены соединения общей формулы III

- 11 011857

К¹

0=( νν

11

III где:

(a) К¹ и К², каждый независимо, представляет собой Н, галоген, циано, гидрокси, С1_₃ алкил, С1_₃ алкокси;

(b) К⁴ представляет собой Н;

(c) К⁵ представляет собой С(О)МК_^бК⁷, С(О)К⁸, С(О)ОК⁸;

(й) К⁸ представляет собой С_1-б алкил, С_3-7циклоалкил, С_4-10 алкилциклоалкил или 3тетрагидрофурил;

(е) Υ представляет собой сульфонимидную группу формулы -С(О)ИН8(О)₂К⁹, где К⁹ представляет собой С_1-3 алкил, С_3-7 циклоалкил или фенил, который необязательно замещен от одного до двух атомов галогенов, циано, нитро, гидрокси, С_1-3 алкилов, С_3-7 циклоалкилов, С_1-3 алкокси, или Υ представляет собой карбоксильную группу или ее фармацевтически приемлемую соль, сольват или пролекарство;

(ί) выбирают из О или ΝΗ;

(д) пунктирная линия означает необязательную двойную связь.

В настоящем изобретении предложены соединения общей формулы IV

где:

(b) К⁵ представляет собой С(О)ОК⁸ или С(О)NНК⁸;

(c) К⁸ представляет собой С_1-б алкил, С_5-б циклоалкил или 3-тетрагидрофурил;

(й) К⁹ представляет собой С_1-3 алкил, С_3-4 циклоалкил или фенил, который необязательно замещен от одного до двух атомов галогенов, циано, гидрокси, С_1-3 алкилов, С_1-3 алкокси;

(е) К¹⁰ и К¹¹, каждый независимо, представляет собой Н, С_1-3 алкил или К¹⁰ и К¹¹ вместе с атомом углерода, к которому присоединены, образуют циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил;

(ί) выбирают из О или N4 и (д) пунктирная линия означает необязательную двойную связь.

В настоящем изобретении предложены соединения общей формулы V

- 12 011857

где:

(b) К⁵ представляет собой С(О)ОК⁸, С(Ο)NΗК⁸;

(c) К⁸ представляет собой С_1-6 алкил, С_5-6 циклоалкил или 3-тетрагидрофурил.

(б) К⁹ представляет собой С_1-3 алкил, С_3-5 циклоалкил, или фенил, который необязательно замещен от одного до двух атомов галогенов, циано, гидрокси, С_1-3 алкилов, С_1-3 алкокси;

(е) К¹⁰ и К¹¹ каждый независимо представляет собой Н, С_1-3 алкил или С_4-5 циклоалкил;

(ί) выбирают из О или ХН;

В настоящем изобретении предложены соединения общей формулы VI

где:

(a) К¹ и К², каждый независимо, представляет собой Н, хлор, фтор, циано, гидрокси, С_1-3 алкил, С_1-3алкокси;

(b) К⁵ представляет собой С(О)ОК⁸, С(Ο)NΗК⁸;

(c) К⁸ представляет собой С_1-6 алкил, С_5-6 циклоалкил;

(б) К⁹ представляет собой С_1-3 алкил, С_3-4 циклоалкил или фенил, который необязательно замещен от одного до двух атомов галогенов, циано, гидрокси, С_1-3 алкилов, С_1-3 алкокси;

(е) К¹⁰ и К¹¹, каждый независимо, представляет собой Н, С_1-3 алкил или К¹⁰ и К¹¹ вместе с атомом углерода, к которому присоединены, образуют циклопропил, циклобутил;

(ί) пунктирная линия означает необязательную двойную связь.

В настоящем изобретении предложены соединения общей формулы VII

- 13 011857

где:

(а) К¹ и К², каждый независимо, представляет собой Η, хлор, фтор, циано, гидрокси, С_1-3 алкил, С_1-3 алкокси;

(b) К⁵ представляет собой С(О)ОК⁸, С(О)МИК⁸;

(е) пунктирная линия означает необязательную двойную связь.

В настоящем изобретении предложены соединения общей формулы VIII

уу

ю 11

VIII где:

(a) К¹ и К², каждый независимо, представляет собой Η, галоген, циано, гидрокси, С1-3 алкил, С1-3 алкокси;

(b) К⁴ представляет собой Η;

(c) К⁵ представляет собой С(О)NК⁶К⁷, С(О)К⁸, С(О)ОК⁸;

(б) К⁸ представляет собой С_1-6 алкил, С_3-7циклоалкил, С_4-10 алкилциклоалкил или 3тетрагидрофурил;

(е) Υ представляет собой сульфонимидную группу формулы -С(О)МИ§(О)₂К⁹, где К⁹ представляет собой С_1-3 алкил, С_3-7 циклоалкил или фенил, который необязательно замещен от одного до двух атомов галогенов, циано, нитро, гидрокси, С_1-3 алкилов, С_3-7 циклоалкилов, С_1-3 алкокси, или Υ представляет собой карбоксильную группу или ее фармацевтически приемлемую соль, сольват или пролекарство;

(ί) К¹⁰ и К¹¹, каждый независимо, представляет собой Η, С_1-3 алкил или К¹⁰ и К¹¹ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил;

(д) К²⁰ представляет собой Η, С1-6 алкил, С3-7 циклоалкил, С4-10 алкилциклоалкил, С6 или С10 арил, гидрокси-С1-6 алкил, С1-6 алкил, необязательно замещенным до 5 атомов фтора, (ΟΗ^ΝΕ⁶^, (СИ2)_ПС(О)ОК¹⁴, где К¹⁴ представляет собой Η, С_1-6 алкил, С_3-7 циклоалкил, С_4-10 алкилциклоалкил, которые все необязательно замещены от одного до трех раз галогеном, циано, нитро, гидрокси, С_1-6 алкокси

- 14 011857 или фенилом, или К¹⁴ представляет собой С6 или Сю арил, который является необязательно замещенным от одного до трех атомов галогена, циано, нитро, гидрокси, С1-6 алкилов, С3-7 циклоалкилов, С4-10 алкилциклоалкилов, С2-6 алкенилов, С1-6 алкокси, гидрокси-С1-6 алкилов, С1-6 алкилов, необязательно замещенных до 5 атомами фтора, С1-6 алкокси, необязательно замещенных до 5 атомов фтора; указанный С6 или С10 арил в определении К¹² и К¹³ является необязательно замещенным от одного до трех атомами галогена, циано, нитро, гидрокси, С1-6 алкилов, С3-7 циклоалкилов, С4-10 алкилциклоалкилов, С2-6 алкенилов, С1-6 алкокси, гидрокси-С1-6 алкилов, С_1-6 алкилов, необязательно замещенных до 5 атомов фтора, С_1-6 алкокси, необязательно замещенных до 5 атомов фтора;

(И) V выбирают из О или ΝΗ;

В настоящем изобретении предложены соединения общей формулы IX

где:

(b) К⁴ представляет собой Н;

(c) К⁵ представляет собой С(О^К⁶К⁷, С(О)К⁸, С(О)ОК⁸;

(ά) К⁸ представляет собой С_1-6 алкил, С_3-7 циклоалкил, С_4-10 алкилциклоалкил или 3тетрагидрофурил;

(е) Υ представляет собой сульфонимидную группу формулы -С(О^Н8(О)₂К⁹ , где К⁹ представляет собой С_1-3 алкил, С_3-7циклоалкил, или фенил, который необязательно замещен от одного до двух атомов галогенов, циано, нитро, гидрокси, С_1-3 алкилов, С_3-7 циклоалкилов, С_1-3 алкокси, или Υ представляет собой карбоксильную группу или ее фармацевтически приемлемую соль, сольват или пролекарство;

(ί) К¹⁰ и К¹¹, каждый независимо, представляет собой Н, С_1-3 алкил, или К¹⁰ и К¹¹ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил;

(д) К²⁰ представляет собой Н, С1-6 алкил, С3-7 циклоалкил, С4-10 алкилциклоалкил, С6 или С10 арил, гидрокси-С1-6 алкил, С1-6 алкил, необязательно замещенным до 5 атомов фтора, (СН2)^К⁶К⁷, (СН2)_ПС(О)ОК¹⁴, где К¹⁴ представляет собой Н, С1-6 алкил, С3-7циклоалкил, С4-10 алкилциклоалкил, которые все необязательно замещены от одного до трех раз галогеном, циано, нитро, гидрокси, С1-6 алкокси или фенилом, или К¹⁴ представляет собой С6 или С₁₀ арил, который является необязательно замещенным от одного до трех атомов галогена, циано, нитро, гидрокси, С_1-6 алкилов, С_3-7 циклоалкилов, С_4-10 алкилциклоалкилов, С2-6 алкенилов, С1-6 алкокси, гидрокси-С1-6 алкилов, С1-6 алкилов, необязательно замещенных до 5 атомов фтора, С_1-6 алкокси, необязательно замещенных до 5 атомов фтора; указанный С₆ или С₁₀ арил в определении К¹² и К¹³ является необязательно замещенным от одного до трех атомов галогена, циано, нитро, гидрокси, С_1-6 алкилов, С_3-7 циклоалкилов, С_4-10 алкилциклоалкилов, С_2-6 алкенилов, С_1-6алкокси, гидрокси-С_1-6 алкилов, С_1-6 алкилов, необязательно замещенных до 5 атомов фтора, С_1-6 алкокси, необязательно замещенных до 5 атомов фтора;

(И) V выбирают из О или Ν^ (ί) пунктирная линия означает необязательную двойную связь;

(ί) где Ζ представляет собой конденсированный или присоединенный арил гетероарильной кольцевой системы.

В настоящем изобретении также предложены композиции, включая фармацевтические композиции, содержащие соединения общей формулы Ι-ΙΧ или их соли, эфиры или другие производные. Предложен

- 15 011857 ные фармацевтические композиции содержат соединение согласно настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый эксципиент. Из уровня техники известно множество различных фармацевтически приемлемых эксципиентов, поэтому нет необходимости приводить перечень подходящих эксципиентов в настоящем описании. Фармацевтически приемлемые эксципиенты описаны во множестве публикаций, включая, например, А. Сеппаго (2000) КетшдФп: Тйе 8с1епсе апб Ргасбсе οί Рйагтасу, 20111 еб1Ооп. ЫрршсоИ. ^1Шатк, & ХУбкшк; Рйагтасеибса1 Эокаде Еогтк апб Эгид ЭеНуегу 8ук1етк (1999) Н. С. Лпке1 е! а1. , ебк., 71Н еб., ЫрршсоИ. ^1Шатк, & ХУШсшк; апб НапбЬоок ок Р11агтасеиОса1 Ехар1еп18 (2000) А. Н. К1ЬЬе е! а1., ебк., 3б еб. Атег. Рйагтасеибса1 Аккос.

Фармацевтически приемлемые эксципиенты, такие как разбавители, адъюванты, носители или растворители, легко доступны для ознакомления и приобретения. Кроме того, фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как регуляторы рН, буферные агенты, регулирующие концентрацию агенты, стабилизаторы, увлажнители и тому подобное легко доступны для ознакомления и приобретения.

В большинстве вариантов реализации изобретения соединение согласно настоящему изобретению ингибирует энзиматическую активность протеазы N83 вируса гепатита С (ВГС). Ингибирует ли соединение N83 ВГС, может быть легко определено известными методами. Обычные методы охватывают определение, расщепляется ли полипротеин ВГС или другой полипептид, включающий участок распознавания N83, протеазой N83 в присутствии агента. В большинстве вариантов осуществления изобретения описываемое соединение ингибирует N83 энзиматическую активность, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 90% или более, по сравнению с энзиматической активностью N83 в отсутствие соединения.

Во многих вариантах реализации изобретения соединение согласно изобретению ингибирует энзимагическую активность N83 протеазы ВГС с 1С₅₀ меньше, чем 50 цМ (мкМ), например, соединение по изобретению ингибирует энзиматическую активность N83 протеазы ВГС с 1С₅₀ меньше чем 40 μΜ, меньше чем 25 μΜ, меньше чем 10 μΜ, меньше чем 1 μΜ, меньше чем 100 нМ, меньше чем 80 нМ, меньше чем 60 нМ, меньше чем 50 нМ, меньше чем 25 нМ, меньше чем 10 нМ или меньше чем 1 нМ или меньше.

Во многих вариантах реализации изобретения предложенное в настоящем изобретении соединение ингибирует репликацию ВГС. Например, соединение согласно изобретению ингибирует репликацию ВГС, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 90% или более по сравнению с репликацией ВГС в отсутствие соединения. Ингибирует ли соединение репликацию ВГС, может быть определено методами, известными в уровне техники, включая исследование на репликацию вируса ш убго.

ЛЕЧЕНИЕ ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ ГЕПАТИТА С

Способы и композиции, приведенные в настоящем описании, в общем случае подходят для лечения вирусной инфекции гепатита С.

Эффективность способа согласно изобретению при лечении вирусной инфекции гепатита С может быть определена по снижению вирусной нагрузки, снижению времени сероконверсии (вирус не обнаруживается в сыворотке пациента), увеличению скорости продолжительного вирусного ответа на лечение, снижению заболеваемости или смертности в клинических случаях или посредством другого индикатора ответа на заболевание.

Обычно эффективное количество соединения формулы Ι-ΙΧ и необязательно один или более дополнительных антивирусных агентов, представляет собой количество, которое является эффективным для снижения вирусной нагрузки или улучшает продолжительный вирусный ответ на терапию.

Эффективность способа согласно изобретению при лечении вирусной инфекции гепатита С может быть определена путем измерения вирусной нагрузки или измерения параметров, связанных с инфекцией гепатита С, включая, но не ограничиваясь такими параметрами, как фиброз печени, увеличение концентрации трансаминазы в сыворотке и некровоспалительной активности в печени. Индикаторы фиброза печени обсуждаются в деталях ниже.

Предложенный способ включает введение эффективного количества соединения формулы Ι-ΙΧ необязательно в комбинации с эффективным количеством одного или более дополнительных антивирусных агентов. В некоторых вариантах реализации изобретения эффективное количество соединения формулы Ι-ΙΧ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов представляет количество, эффективное для снижения титра вируса до необнаруживаемого уровня, например, приблизи

- 16 011857 тельно от 1000 до 5000, от 500 до 1000 или от 100 до 500 геномных копий/мл сыворотки. В некоторых вариантах реализации изобретения эффективное количество соединения формулы Ι-ΙΧ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов представляет количество, эффективное для снижения вирусной нагрузки до уровня ниже 100 геномных копий/мл сыворотки.

В некоторых вариантах реализации изобретения эффективное количество соединения формулы Ι-ΙΧ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов представляет количество, эффективное для достижения снижения 1.5-1од (логарифм), 2-1од, 2.5-1од, 3-1од, 3.5-1од, 4-1од, 4.5-1од, или 51од титра вируса в сыворотке пациента.

В некоторых вариантах реализации изобретения эффективное количество соединения формулы Ι-ΙΧ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов представляет количество, эффективное для улучшения «продолжительного вирусного ответа», например отсутствие (не обнаружение) РНК ВГС (например, меньше чем 500, меньше чем 200 или меньше чем 100 геномных копий на миллилитр сыворотки) в сыворотке пациента за период в течение по меньшей мере одного месяца, по меньшей мере двух месяцев, по меньшей мере трех месяцев, по меньшей мере четырех месяцев, по меньшей мере пяти месяцев, по меньшей мере шести месяцев вслед за прекращением лечения.

Эффективность способа согласно изобретению при лечении вирусной инфекции гепатита С может быть определена, как отмечено выше, путем измерения параметров, связанных с инфекцией гепатита С, таких как фиброз печени. Способы определения степени фиброза печени обсуждаются в деталях ниже. В некоторых вариантах реализации изобретения концентрация маркеров фиброза печени в сыворотке указывает на его степень.

В качестве одного, не ограничивающего объем притязаний, примера измеряют концентрацию аланин аминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке, используя стандартные исследования. Обычно, концентрация АЛТ меньше чем приблизительно 45 международных единиц (МЕ) считается нормальной. В некоторых вариантах реализации изобретения эффективное количество соединения формулы Ι-ΙΧ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов представляет количество, эффективное для снижения концентрации АЛТ ниже чем 45 МЕ/мл сыворотки.

Терапевтически эффективное количество соединения формулы Ι-ΙΧ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов представляет количество, эффективное для снижения концентрации маркеров фиброза печени в сыворотке по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 90% или более по сравнению с концентрацией маркеров у пациента без проведения лечения или пациента, получавшего плацебо. Способы измерения маркеров в сыворотке включают иммунологические методы, например иммуноферментный твердофазный анализ (ЕБ18А), радиоиммуноанализ и тому подобное, используя антитела, специфичные для данного маркера в сыворотке.

Во многих вариантах реализации изобретения эффективное количество соединения формулы Ι-ΙΧ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов представляет синергическое количество. Как используется здесь «синергическая комбинация» или «синергическое количество» соединения формулы Ι-ΙΧ и дополнительного антивирусного агента представляет собой комбинированную дозу, которая является более эффективной в терапевтическом или профилактическом лечении вирусной инфекции ГС, чем постепенное улучшение в результате лечения, которое предполагается или ожидается только от дополнительной комбинации (ί) терапевтической или профилактической пользы соединения формулы Ι-ΙΧ, когда оно вводится в той же самой дозе в виде монотерапии и (ίί) терапевтической или профилактической пользы дополнительного антивирусного агента, когда он вводится в той же самой дозе в виде монотерапии.

В некоторых вариантах реализации изобретения выбранное количество соединения формулы Ι-ΙΧ и выбранное количество дополнительного антивирусного агента являются эффективным, когда используются в комбинированной терапии для лечения заболевания, но выбранное количество соединения формулы Ι-ΙΧ и/или выбранное количество дополнительного антивирусного агента является неэффективным, когда используется в монотерапии для лечения заболевания. Таким образом, изобретение охватывает (1) режимы, при которых выбранное количество дополнительного антивирусного агента улучшает терапевтическую пользу выбранного количества соединения формулы Ι-ΙΧ, когда они используются в комбинированной терапии для лечения заболевания, причем выбранное количество антивирусного агента не приносит терапевтическую пользу, когда оно используется в монотерапии для лечения заболевания; (2) режимы, при которых выбранное количество соединения формулы Ι-ΙΧ улучшает терапевтическую пользу выбранного количества дополнительного антивирусного агента, когда они используются в комбинированной терапии для лечения заболевания, причем выбранное количество соединения формулы Ι-ΙΧ не приносит терапевтическую пользу, когда оно используется в монотерапии для лечения заболевания; (3) режимы, при которых выбранное количество соединения формулы Ι-ΙΧ и выбранное количество дополнительного антивирусного агента обеспечивают терапевтическую пользу, когда они используются

- 17 011857 в комбинированной терапии для лечения заболевания, причем каждое из выбранных количеств соединения формулы ЫХ и дополнительного антивирусного агента соответственно не приносит терапевтическую пользу, когда они используется в монотерапии для лечения заболевания. Как используется здесь, «синергетически эффективное количество» соединения формулы ЫХ и дополнительного антивирусного агента и их грамматические эквиваленты следует считать включенными в любой режим, охваченный режимами (1)-(3), перечисленными выше.

ФИБРОЗ

Настоящее изобретение обеспечивает способы лечения фиброза печени (включая формы фиброза печени, являющиеся следствием или связанные с вирусной инфекцией гепатита С), которые обычно включают введение терапевтического количества соединения формулы ЫХ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов, а также режимы дозирования, как обсуждается ниже. Эффективное количество соединений формулы ЫХ с или без одного или более дополнительных антивирусных агентов, режимы дозирования также обсуждаются ниже.

Эффективность лечения соединением формулы ЫХ и необязательно одним или более дополнительным антивирусным агентом для снижения фиброза печени и функции печени определяется любым из числа хорошо известных способов определения фиброза печени и функции печени. Снижение фиброза печени определяется при анализе образца печеночной ткани, полученной при биопсии. Анализ биопсии печени включает оценку двух главных характеристик: некровоспалительный процесс, оцениваемый по «степени» для измерения серьезности заболевания и текущей активности заболевания, и поражение фиброзом и паренхимными или сосудистыми изменениями для оценки «стадии» как отражения длительного развития болезни. См., например, Вгип! (2000) Нера!о1. 31: 241-246; и МЕТАЫК (1994) Нера!о1оду 20: 15-20. На основании анализа биопсии печени устанавливаются индексы. Существуют различные стандартные системы градации, которые обеспечивают количественную оценку степени и серьезности фиброза. Они включают МЕТАЫК, Кпобе11, 8сйеиег, ЬибЫд и [<На1с системы градации.

Система градации МЕТ А VIК основывается на анализе различных признаков биопсии печени, включая фиброз (портальный фиброз, центродолевой фиброз и цирроз); некроз (частичный и лобулярный некроз, ацидофильная ретракция и баллонирующая дистрофия); воспаление (воспаление портальных трактов, портальное лимфоидное скопление и распространение портального воспаления); изменения желчных протоков; индекс Кноделля (Кпобе11) (стадия перипортального некроза, лобулярного некроза, портального воспаления, фиброза и полной степени активности заболевания). Определение каждой стадии в системе МЕТАЫК является следующим: стадия 0 - нет фиброза; стадия 1 - стеллатное разрастание портального тракта, но без образования септ; стадия 2 - удлинение портального тракта с небольшим образованием септ; стадия 3 - многочисленные септы без цирроза; и стадия 4 - цирроз.

Система градации Кноделля (Кпобе11), также называемая как Индекс Гистологической Активности (ИГ А), классифицирует степень активности заболевания, основываясь на стадиях по четырем категориям гистологических признаков: I) перипортальный и/или мостовидный некроз; II) интралобулярная дегенерация и фокальный некроз; III) портальное воспаление и IV) фиброз. В системе градации Кноделля (Кпобе11) стадии являются следующими: стадия 0 - нет фиброза; стадия 1 - слабовыраженный фиброз (распространение портального фиброза); стадия 2 - умеренный фиброз; стадия 3 - выраженный фиброз (мостовидный фиброз) и стадия 4 - цирроз. Чем выше стадия заболевания, тем более серьезно повреждена ткань печени. Кпобе11 (1981) Нера!о1. 1: 431.

В системе градации 8сйеиег стадии являются следующими: стадия 0 - нет фиброза; стадия 1 - удлиненные фиброзно-измененные портальные тракты; стадия 2 - перипортальные или портопортальные септы, но нетронутая архитектоника; стадия 3 - фиброз с нарушением архитектоники, но отсутствие очевидного цирроза; стадия 4 - вероятный или определенный цирроз. 8сйеиег (1991) 1. Нера!о1. 13: 372.

Система градации Исхака (кйак) описана в Ы1ак (1995) 1. Нера!о1. 22: 696-699. Стадия 0 - нет фиброза; стадия 1 - фиброз некоторых портальных трактов с короткими фиброзными септами или без них; стадия 2 - фиброз большинства портальных трактов с короткими фиброзными септами или без них; стадия 3 - фиброз большинства портальных трактов с редкими портопортальными септами (мостовидный фиброз); стадия 4 - фиброз портальных трактов с выраженными мостовидным фиброзом (портопортальные или портоцентральные септы); стадия 5 - выраженный мостовидный фиброз (портопортальные или портоцентральные септы) с единичными узлами (ранний цирроз); стадия 6 - цирроз, вероятный или определяемый цирроз.

Положительные эффекты лечения фиброза могут быть также измерены и оценены с использованием системы критериев Чайлда-Пью (СЫ1б-Ридй), которая включает многокомпонентную систему критериев, в основе которых лежит оценка нарушений концентрации в сыворотке билирубина, альбумина, протромбинового времени, наличие и серьезность асцита, наличие и серьезность энцефалопатии. На основании выявления и серьезности нарушения этих критериев, пациенты могут быть отнесены к одной из трех категорий по возрастанию серьезности заболевания: А, В или С.

В некоторых вариантах реализации изобретения терапевтически эффективное количество соединения формулы ЫХ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов представляет собой количество, которое осуществляет изменение одной единицы или более в стадии фиброза, осно

- 18 011857 вываясь на биопсии печени до и после лечения. В конкретных вариантах реализации изобретения, терапевтически эффективное количество соединения формулы Ι-ΙΧ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов снижает фиброз печени, по меньшей мере на одну единицу в системах градации ΜΕΤΑνίΚ, Кпобе11, 8сйеиег, ЬибЮд, или Ш1ак.

Вторичные или косвенные индексы функции печени также могут быть использованы для оценки эффективности лечения соединением формулы Ι-ΙΧ. Морфометрическая компьютеризированная полуавтоматическая оценка фиброза печени, основываемая на специфическом окрашивании коллагеном и/или сывороточными маркерами фиброза печени, также может быть измерена в качестве показателя эффективности описываемого способа лечения. Вторичные индексы функции печени включают, но не ограничиваются, уровнем трансаминазы в сыворотке, протромбиновым временем, билирубином, подсчетом тромбоцитов, портальным давлением, уровнем альбумина и оценкой критериев Чайлда-Пью (СЫ1бРидй).

Терапевтически эффективное количество соединения формулы Ι-ΙΧ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов представляет количество, эффективное для увеличения индекса функции печени по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 35%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 45%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 55%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 65%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 75%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 80% или более по сравнению с индексом функции печени у пациента без проведения лечения или пациента, получавшего плацебо. Специалист в данной области техники может легко измерить такие индексы функции печени, используя стандартные исследовательские методы, многие из которых являются коммерчески доступными и которые используются обычно в клинических условиях.

Сывороточные маркеры фиброза печени могут быть также измерены в качестве показателя эффективности описываемого способа лечения. Сывороточные маркеры включают, но не ограничиваются, гиалуронат, Ν-терминальный проколлаген ΙΙΙ пептид, 78 домен типа Ιν коллагена, С-терминальный проколлаген Ι пептид и ламинин. Дополнительные биохимические маркеры фиброза печени включают α-2макроглобулин, гаптоглобулин, гамма глобулин, аполипопротеин А и гамма глютамил транспептидаза.

Терапевтически эффективное количество соединения формулы Ι-ΙΧ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов представляет количество, эффективное для снижения концентрации маркеров фиброза печени в сыворотке, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 90% или более по сравнению с концентрацией маркеров у пациента без проведения лечения или пациента, получавшего плацебо. Специалист в данной области техники может легко измерить такие сывороточные маркеры фиброза печени, используя стандартные исследовательские методы, многие из которых являются коммерчески доступными и которые используются обычно в клинических условиях. Способы измерения маркеров в сыворотке включают иммунологические методы, например иммуноферментный твердофазный анализ (ΕΜ8Α), радиоиммуноанализ и тому подобное, используя антитела, специфичные для данного маркера в сыворотке.

Количественные тесты функциональных резервов печени также могут быть использованы для оценки эффективности лечения агонистами рецепторов интерферона и пирфенидона (или аналогов пирфенидона). Они включают: выведение индоцианина зеленого (ЮС), способность удаления галактозы (СЕС), аминопириновый дыхательный тест (ΑΒΤ), выведение антипирина, выведение моноэтилглицинксилидида (МЕС-Χ) и выведение кофеина.

В контексте данного описания, «осложнение, связанное с циррозом печени» относится к заболеваниям, которые представляют собой последствия декомпенсационных заболеваний печени, т. е. или происходят вслед за, или являются результатом развития фиброза печени и включают, но не ограничиваются, развитие асцитов, варикозного кровотечения, портальной гипертензии, желтухи, прогрессирующей печеночной недостаточности, энцефалопатии, гепатоцеллюлярной карциномы, отсутствия функционирования печени, требующее ее пересадки, и летальный исход, связанный с заболеваниями печени.

Терапевтически эффективное количество соединения формулы Ι-ΙΧ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов представляет количество, эффективное для снижения степени (например, вероятности, что у пациента будет развиваться заболевание) нарушений, связанных с циррозом печени, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 35%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 45%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 55%, по меньшей

- 19 011857 мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 65%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 80% или более по сравнению с пациентами без проведения лечения или пациентами, получавшими плацебо.

Эффективность лечения соединением формулы ЫХ и необязательно одним или более антивирусным агентом в отношении снижения степени нарушений, связанных с циррозом печени, может быть легко определена специалистами в области техники.

Снижение фиброза печени увеличивает функцию печени. Причем, изобретение обеспечивает методы увеличения функции печени, обычно включающие введение терапевтически эффективного количества соединения формулы ЫХ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов. Функции печени включают, но не ограничиваются, синтетической функцией, включая, но не ограничиваясь, синтез протеинов, таких как сывороточные протеины (например, альбумин, факторы свертывания крови, щелочная фосфатаза, аминотрансферазы (например, аланиновая трансаминаза, аспартамовая трансаминаза), 5'-нуклеозидаза, γ-глютаминилтранспептидаза и так далее), синтез билирубина, синтез холестерина и синтез желчных кислот; метаболическая функция печени, включает, но не ограничиваясь, метаболизм углеводов, метаболизм аминокислот и аммиака, гормональный метаболизм и липидный метаболизм; детоксификацию экзогенных лекарственных средств; гемодинамическую функцию, включая внутренностную и портальную динамику кровообращения; и тому подобное.

Улучшение функции печени может быть легко устанавлено специалистами в области техники, с помощью хорошо проверенных тестов по функциям печени. Причем синтез маркеров функции печени, таких как альбумин, щелочная фосфатаза, аланиновая трансаминаза, аспартамовая трансаминаза, билирубин и тому подобное, может быть определен измерением уровня маркеров в сыворотке, используя стандартные иммунологические и энзиматические исследования. Внутренностная циркуляция и портальная гемодинамика может быть измерена путем портального заклинивающего давления и/или сопротивления, используя стандартные методы.

Метаболические функции могут быть измерены определением уровня аммиака в сыворотке.

Также может быть определено, попадают ли значения концентрации сывороточных протеинов, обычно выделяемых печенью, в нормальный диапазон значений посредством стандартных иммунологических и энзиматических исследований. Специалисту в данной области известны нормальные диапазоны для таких сывороточных протеинов. Далее приводятся не ограничивающие объем притязаний примеры. Обычная концентрация аланиновой трансаминазы составляет около 45 МЕ на миллилитр сыворотки. Обычная концентрация аспартамовой трансаминазы составляет от 5 до 40 единиц на миллилитр сыворотки. Билирубин измеряется стандартными исследованиями. Нормальный уровень билирубина обычно меньше чем 1,2 мг/дл. Концентрация сывороточного альбумина измеряется, используя стандартные исследования. Обычный уровень сывороточного альбумина находится в диапазо не от 35 до 55 г/л. Длительность протромбинового времени измеряется, также используя стандартные исследования. Обычное протромбиновое время длится меньше 4 с по сравнению с контролем.

Терапевтически эффективное количество соединения формулы ЫХ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов представляет количество, эффективное для увеличения функции печени по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 80% или более. Например, терапевтически эффективное количество соединения формулы ЫХ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов представляет количество, эффективное для снижения повышенной концентрации сывороточных маркеров функции печени, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 80% или более, или снижения концентрации сывороточных маркеров функции печени до нормального диапазона. Терапевтически эффективное количество соединения формулы ЫХ и необязательно одного или более дополнительных антивирусных агентов представляет количество, эффективное для увеличения пониженной концентрации сывороточных маркеров функции печени, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 80% или более, или увеличения концентрации сывороточных маркеров функции печени до нормального диапазона.

Агонисты рецепторов интерферона I типа.

В любом из вышеописанных способов, в некоторых предпочтительных вариантах реализации изобретения вводятся агонисты рецепторов интерферона I типа. Агонисты рецепторов интерферона I типа включают какой-нибудь Интерферон (ИФН)-а; какой-нибудь ИФН-β; какой-нибудь ИФН-тау; какойнибудь !РХ-ш; агонисты антител, специфичные к рецепторам интерферона I типа, включая непептидные

- 20 011857 агонисты.

Интерферон-Альфа

Любой известный ИФН-α может быть использован в настоящем изобретении. Термин «интерферон-альфа» относится к семейству родственных полипептидов, которые ингибируют вирусную репликацию и клеточную пролиферацию и регулируют иммунный ответ. Термин «ИФН-α» включает ИФН-α природного происхождения, синтетические ИФН-α, производные ИФН-α (например, ИФН-α, конъюгированный с ПЭГ, гликозилированный ИФН-α и тому подобное); и аналоги природного происхождения или синтетические ИФН-α; в основном любой ИФН-α, который обладает антивирусными свойствами, как описывается для ИФН-α природного происхождения.

Подходящие альфа-интерфероны включают, но не ограничиваются, ИФН-α природного происхождения (включая, но не ограничиваясь, природного происхождения ИФН-«2а. ИФН-«2Ь); рекомбинантный интерферон-альфа-2Ь, такой как Ш1гои-А интерферон, доступный от 8сйегтд Согрогабои, Кеи1Шойй, N. 1.; рекомбинантный интерферон-альфа-2а, такой как КоГегоп интеферон, доступный от НоГГтаии-Ьа Косйе, №беу, N. 1.; рекомбинантный интерферон-альфа-2С, такой как ВегоГог альфа 2 интерферон, доступный от Воейпидег Шде1йе1т Рйагтасеибса1, Шс., Шбдейе1б, Сопи.; интерферон альфа-п1, очищенная смесь натуральных интерферонов, таких как 8ит£Гегоп, доступные от 8итйото, .Таран или также Ае11Гегоп интерферон альфа-и1 (ИНС), доступный от С1ахо-Ае11соте ЬТб., Ьоибои, Сгеа1 Вгйат; и интерферон-альфа-и3 смесь натуральных альфа интерферонов, выполненных ШТегГегои 8с1еисе5 и доступных от Ригбие Егебепск Со., №гха1к, Сопи., под торговой маркой А1Гегои.

Термин «интерферон-альфа» также охватывает консенсусные ИФН-α. Консенсусные ИФН-α (также называемые как «КИФН» и «ИФН-кон» и консенсусный интерферон) включают, но не ограничиваются аминокислотными последовательностями, обозначаемыми £Е№сои1 (ИФН-кон1), £Р№сои2 (ИФНкон2), и ΣΕΝ-соиЗ (ИФН-конЗ), которые раскрыты в патентах США № 4,695,623 и 4,897,471; и консенсусный интерферон по определению консенсусной последовательности интерферонов-альфа природного происхождения (например, Щег^еи®, ШТегМиие, Шс., ВпкЬаие, СайГ.). Ш№соп1 (ИФН-кон1) представляет собой консенсусный интерфероновый агент в продукте б·^^!'!® а1Гасои-1. Продукт консенсусного интерферона б·^^!·!® именуется здесь в дальнейшем с помощью его брэнда ДпГегдеи®) или общим наименованием (интерферон альфакон-1). Последовательность ДНК, кодирующая ИФН-кон, может быть синтезирована как описано в вышеупомянутых патентах или другими стандартными методами. Использование КИФН представляет особый интерес.

Также подходящими для использования в настоящем изобретении являются гибридные полипептиды, включающие ИФН-α и гетерологичный полипептид. Подходящие ИФН-α гибридные полипептиды включают, но не ограничиваются А1Ьшегои-а1рйа™ (Альбуиерон-альфа) (гибридный продукт человеческого альбумина и ИФН-α; Нитаи Се по те §аеисе8; смотреть, например, ОкЬоги е1 а1. (2002) 1. Рйагтасо1. Ехр. Тйегар. 303: 540-548). Также подходящими для применения в настоящем изобретении являются генно-смешанные формы ИФН-α. Смотреть, например, Ма§с1 е1 а1. (2003) Сигг. Оисо1. Кер. 5: 108-113. Интерферон-альфа, конъюгированный с ПЭГ.

Термин «ИФН-α» также охватывает производные ИФН-α, которые являются трансформированными (например, являются химически модифицированными) для изменения некоторых их свойств, таких как период полувыведения из сыворотки. Таким образом термин «ИФН-α» включает гликозилированный ИФН -α; ИФН -α, конъюгированный с полиэтиленгликолем («ИФН-α с ПЭГ», «ПЭГилированный ИФНα/ι) и тому подобное. ПЭГилированный ИФН-α и способы его получения обсуждаются в патентах США № 5,382,657; 5,981,709; и 5,951,974. ПЭГилированный ИФН-α охватывает конъюгаты с ПЭГ любой из вышеописанных молекул ИФН-α, включая, но не ограничиваясь, конъюгированный с ПЭГ интерферон альфа 2а (КоГегои, НоГГтап Ьа-Косйе, Шбеу, N. £), интерферон альфа 2Ь (Шбюи, 8сйепид-Р1оидй, Маб15оп, N. I.), интерферон альфа-2с (ВегоГог А1рйа, Воейпидег Шде1йе1т, Шде1йе1т, Сегтаиу); и консенсусный интерферон по определению консенсусной последовательности интерферонов-альфа природного происхождения (ШГегдеи®, ШТегМиие, Шс., ВгйЬаие, Са1££).

Любой из вышеупомянутых полипептидов ИФН-α может быть модифицирован одним или более фрагментами полиэтиленгликоля, то есть конъюгирован с ПЭГ. Молекула полиэтиленгликоля ПЭГилированного ИФН-α полипептида, конъюгируется к одной или более аминокислотной боковой цепи полипептида ИФН-α. В некоторых вариантах реализации изобретения ПЭГилированный ИФН-α содержит фрагменты ПЭГ только на одной аминокислоте. В других вариантах реализации изобретения, ПЭГилированный ИФН-α содержит фрагменты ПЭГ на двух или более аминокислотах, например, ИФН-α содержит фрагменты ПЭГ, присоединенные к двум, трем, четырем, пяти, шести, семи, восьми, девяти или десяти различным аминокислотным остаткам.

ИФН-α может быть соединен с ПЭГ напрямую (то есть без связующих групп) через амино-группу, сульфгидрильную группу, гидроксильную группу или карбоксильную группу.

В некоторых вариантах реализации изобретения, ПЭГилированный ИФН-α конъюгирован с ПЭГ на или около амино окончании ^-окончание) полипептида ИФН-α, например фрагмент ПЭГ конъюгирован

- 21 011857 с полипептидом ИФН-α на одном или более аминокислотных остатках от аминокислоты 1 через аминокислоту 4, или от аминокислоты 5 через аминокислоту 10.

В других вариантах реализации изобретения, ПЭГилированный ИФН-α конъюгирован с ПЭГ на одном или более аминокислотном остатке от приблизительно 10 к приблизительно 28.

В некоторых вариантах реализации изобретения, ПЭГилированный ИФН-α конъюгирован с ПЭГ на или около карбоксильном окончании (С-окончание) полипептида ИФН-α, например, на одной или более аминокислот 156-166 или из аминокислот 150 до 155.

В других вариантах реализации изобретения, ПЭГилированный ИФН-α конъюгирован с ПЭГ на одном или более аминокислотном остатке из аминокислот 100-114.

Конъюгация полиэтиленгликоля с аминокислотными остатками на или около рецепторсвязывающими и/или активными участками доменов протеина ИФН-α может нарушить функционирование этих доменов. В некоторых вариантах реализации изобретения аминокислоты, на которых конъюгации с ПЭГ избегают, включают аминокислотные остатки от аминокислот 30-40; и аминокислотные остатки от аминокислот 113-149.

В некоторых вариантах реализации изобретения ПЭГ присоединяется к ИФН-α через связывающую (линкерную) группу. Линкерная группа представляет собой любую биосовместимую связывающую группу, где «биосовместимость» указывает, что соединение или группа не является токсичной и может быть использована ίη ν Нго или ίη νίνο без нанесения вреда, причинения заболеваний, болезней, смерти. Подходящие биосовместимые группы включают, но не ограничиваются, эфирной группой, амидной группой, имидной группой, карбаматной группой, карбоксильной группой, гидроксильной группой, углеводами, сукцинимидной группой (включая, например, сукцинимидил сукцинат (88 А), сукцинимидил пропионат (8РА), сукцинимидил бутаноат (8ВА), сукцинимидил карбоксиметилат (8СМ), сукцинимидил сукцинамид (88А) или Ν-гидрокси сукцинимид (N48)), эпоксидными группами, оксикарбонилимидазольной группой (включая, например, карбонилдимидазол (СЭ!)). нитрофенильной группой (включая, например, нитрофенил карбонат (ΝΡί) или трихлорфенил карбонат (ТРС)), тризилатной группой, альдегидной группой, изоцианатной группой, винилсульфоновой группой, тирозиновой группой, цистиновой группой, гистидиновой группой или первичным амином.

Способы получения сукцинимидил пропионата (8РА) и сукцинимидил бутаноата (8ВА) - эфиров, активируемых ПЭГ, описаны в патенте США № 5672662 (Натк, е! а1.) и АО 97/03106.

Способы присоединения ПЭГ к ИФН-α полипептиду известны в уровне техники и любой известный способ может быть использован. См., например, Рагк и др., Апйсапсег Кек., 1:373-376 (1981); Ζηρίίρкку и Ьее, Ро1уе1йу1епе 01усо1 СйеткИу: Вю1ес11шса1 апй Вюше±са1 Аррйсайопк, 1. М. Натк, ей., Р1епит Ргекк, ΝΥ, Глава 21 (1992); патенты США № 5,985,265; 5,672,662 (Натк, е! а1.) и АО 97/03106.

ПЭГилированный ИФН-α и способы его получения, обсуждаются, например, в патентах США № 5382657; 5981709; 5985265 и 5951974. ПЭГилированный ИФН-α охватывает конъюгаты с ПЭГ любой из вышеописанных молекул ИФН-α, включая, но не ограничиваясь, конъюгированный с ПЭГ интерферон альфа 2а (КоГегоп, НоГГтап Ьа Косйе, Мику, N. 1.), где ПЭГилированный КоГегоп известен как Редакук (Нойтап Ьа Косйе); интерферон альфа 2Ь (Шйоп, 8сйегшд-Р1оидй, Майкоп, Ν.Γ), где ПЭГилированный Шйоп известен как РЕОЛпйоп (8сйегшд-Р1оидй); интерферон альфа-2с (ВегоГог А1рйа, Воейппдег ШдеШеш, ШдеШет, Оегтапу); и консенсусный интерферон по определению консенсусной последовательности интерферонов-альфа природного происхождения (ШГегдеп®, ЫегМипе, Шс., ВгкЬапе, Са11Г.), где ПЭГилированный Ийегдеп известен как РЕОЛпГегдеп.

Во многих вариантах реализации изобретения ПЭГ представляет собой молекулу монометоксиполиэтиленгликоля, которая взаимодействует с первичной аминовой группой полипептида ИФН-α. Способы модифицирования полипептидов монометоксиПЭГ путем восстановительного алкилирования известны из уровня техники. См., например, С11ато\у е! а1. (1994) Вюсоир Сйет. 5: 133-140. [00100] В одном, не ограничивающем объем притязаний, примере ПЭГ конъюгируется с ИФН-α через линкер - сукцинимидил пропионат 8РА. Эфиры 8РА и ПЭГ и способы их получения описаны в патенте США № 5672662. 8РА-связи обеспечивают соединение со свободными аминогруппами полипептида ИФН-α.

Например, молекула ПЭГ соединяется ковалентно через связь, которая включает амидную связь между пропионильной группой фрагмента ПЭГ и эпсилон аминогруппой выступающего на поверхности лизинового остатка в ИФН-α полипептиде. Такая связь может быть образована, например, конденсацией α-метокси, омега пропановой кислоты активированного эфира ПЭГ (тПЭГкра).В одном, не ограничивающем объем притязаний, примере конъюгат одного моноПЭГилированного КИФН, предпочтительный для использования здесь, имеет линейный ПЭГ фрагмент около 30 кД, присоединенный с помощью ковалентной связи к полипептиду КИФН, где ковалентная связь представляет собой амидную связь между пропионильной группой фрагмента ПЭГ и эпсилон-аминогруппой выступающего на поверхности лизинового остатка в полипептиде КИФН, где выступающий на поверхности лизиновый остаток выбран из 1ук³¹, 1ук⁵⁰, 1ук⁷¹, 1ук⁸⁴, 1ук¹²¹,1ук¹²², 1ук¹³⁴, 1ук¹³⁵ и 1ук¹⁶⁵, и амидная связь образуется при конденсации αметокси, омега-пропановой кислоты активированного эфира ПЭГ.

- 22 011857

Полиэтиленгликоль

Полиэтиленгликоль (ПЭГ), подходящий для конъюгации с каким-нибудь полипептидом ИФН-α, растворим в воде при комнатной температуре и имеет общую формулу В(О-СН₂-СН₂)_пО-В, где В представляет собой водород или защитную группу, такую как алкильную или алканоильную, и где η представялет собой целое число от 1 до 1000. Если В представляет защитную группу, то она обычно содержит от 1 до 8 атомов углерода.

Во многих вариантах реализации изобретения ПЭГ имеет по меньшей мере одну гидроксильную группу, например терминальную гидроксильную группу, где гидроксильная группа модифицируется с образованием функциональной группы для взаимодействия с аминогруппой, например эпсилонаминогруппой лизинового остатка, свободной аминогруппой на Ν-окончании полипептида или любой другой аминогруппой, такой как аминогруппа аспарагина, глютамина, аргинина или гистидина.

В других вариантах реализации изобретения ПЭГ трансформируют так, что он сам вступает в химическую реакцию с ИФН-α полипептидом, например свободная карбоксильная группа на карбоксильном окончании ИФН-α полипептида. Подходящие производные ПЭГ, которые способны вступать во взаимодействие со свободной карбоксильной группой на карбоксильном окончании полипептида ИФН-α включают, но не ограничиваются ПЭГ-аминами, и гидразиновыми производными ПЭГ (например, ПЭГΝΗ-ΝΗ₂).

В других вариантах реализации изобретения ПЭГ трансформируют так, что он включает терминальную тиокарбоксильную группу -СО8Н, которая селективно взаимодействует с аминогруппами с образованием амидных производных. Благодаря химической природе тиокислот селективность некоторых аминогрупп по сравнению с другими улучшается. Например, -8Н демонстрирует достаточную способность уходящей группы в реакции с Ν-концевой аминогруппой при соответствующих значениях рН, таких что ε-аминогруппы в лизиновых остатках протонируются и остаются ненуклеофильными. С другой стороны реакции при подходящих значениях рН могут заставлять некоторые из доступных лизиновых остатков взаимодействовать селективно.

В других вариантах реализации изобретения ПЭГ включает химически активный эфир, такой как Νгидрокси сукцинимидат на конце ПЭГ-цепи. Такой Ν-гидрокси сукцинимидат, содержащий ПЭГмолекулу, взаимодействует с селективной аминогруппой при конкретных значениях рН, таких как нейтральные 6,5-7,5. Например, Ν-концевые аминогруппы могут быть селективно модифицированы при нейтральных значениях рН. Однако если химическая активность реагентов была бы сверхвысокой, доступные ЧН₂ группы лизина могут также прореагировать.

ПЭГ может быть напрямую конъюгирован с ИФН-α полипептидом или через линкер. В некоторых вариантах реализации изобретения линкер добавляется к ИФН-α полипептиду, образуя модифицированный линкером ИФН-α полипептид. Такие линкеры обеспечивают различные функциональные группы, например химически активные группы, такие как сульфгидрильная, амино или карбоксильная группа для соединения реагента ПЭГ с модифицированным линкером ИФН-α полипептида.

В некоторых вариантах реализации изобретения ПЭГ, конъюгированный с полипептидом ИФН-α, является линейным. В других вариантах реализации изобретения ПЭГ, конъюгированный с полипептидом ИФН-α, является разветвленным. Разветвленные производные ПЭГ, такие как описаны в патентах США № 5643575, «звездчатые ПЭГи» и сильноразветвленные ПЭГи, такие как описаны в 811саг\га1сг Ро1утег§, 1пс. Каталог «Производные полиэтиленгликоля» 1997-1998. «Звездчатые ПЭГи» описаны в уровне техники, включая, например, патент США № 6046305.

ПЭГ имеет молекулярный вес от приблизительно 2 до приблизительно 100 кДа, где термин «приблизительно» применительно для ПЭГ указывает, что при получении полиэтиленгликоля некоторые молекулы имеют больший вес, некоторые меньший, чем заявляемый молекулярный вес. Например, ПЭГ, подходящий для конъюгации с ИФН-α, имеет молекулярный вес от приблизительно 2 до приблизительно 5 кДа, от приблизительно 5 до приблизительно 10 кДа, от приблизительно 10 до приблизительно 15 кДа, от приблизительно 15 до приблизительно 20 кДа, от приблизительно 20 до приблизительно 25 кДа, от приблизительно 25 до приблизительно 30 кДа, от приблизительно 30 до приблизительно 40 кДа, от приблизительно 40 до приблизительно 50 кДа, от приблизительно 50 до приблизительно 60 кДа, от приблизительно 60 до приблизительно 70 кДа, от приблизительно 70 до приблизительно 80 кДа, от приблизительно 80 до приблизительно 90 кДа, от приблизительно 90 до приблизительно 100 кДа.

Получение конъюгатов ПЭГ -ИФН-α.

Как обсуждается выше, фрагменты ПЭГ могут присоединены напрямую или через линкер к аминокислотным остаткам на или около Ν-окончания, внутри, или на, или около С-окончания ИФН-α полипептида. Конъюгация может быть осуществлена в растворе или твердой фазе.

Ν-терминальное соединение.

Методы присоединения ПЭГ фрагментов к аминокислотным остаткам на или около Ν-окончания полипептида ИФН-α известны в уровне техники. См., например, патент США № 5985265.

В некоторых вариантах реализации изобретения известные методы для селективного получения Νтерминально химически модифицированного ИФН-α используются. Например, может быть использован

- 23 011857 способ модификации протеинов путем восстановительного алкилирования, в котором используется различная химическая активность отличающихся типов первичных аминогрупп (лизин в сравнении с Νокончанием), доступных для трансформации конкретных протеинов. При соответствующих условиях реакции селективная трансформация протеина на Ν-окончании с карбонильной группой, содержащей полимер, улучшается. Реакция осуществляется при рН, которое позволяет соединению воспользоваться разницей рКа между ε-аминогруппами лизиновых остатков и α-аминогруппами Ν-терминального остатка протеина. Путем такой селективной трансформации присоединение фрагмента ПЭГ к ИФН-α контролируется: конъюгация с полимером имеет место преимущественно на Ν-окончание ИФН-α и значительная модификация других химически активных групп, таких как аминогруппы лизиновых боковых цепей, не происходит.

С-терминальное соединение

Процедуры Ν-терминального специфического соединения, такие как описаны в патенте США № 5985265, обеспечивают преимущественно моноПЭГилированные продукты. Однако процедуры очистки, направленные на удаление избытка реагентов и незначительные множественные ПЭГилированные продукты, удаляют Ν-терминально защищенные полипептиды. В условиях терапии такие процессы приведут к значительному увеличению производственных затрат. Например, исследование структуры тщательно охарактеризованной аминокислотной последовательности 1пГегдеп А1Гасоп-1 КИФН полипептида демонстрирует, что отсечение (ограничение) равно приблизительно 5% на карбоксильном окончании и, таким образом, существует только одна основная С-терминальная последовательность. Таким образом, в некоторых вариантах реализации изобретения, Ν-терминально ПЭГилированный ИФН-α не используется; вместо него используется ИФН-α полипептид, конъюгированный с ПЭГ по С-окончанию.

Таким образом, эффективный синтетический и также терапевтический подход для получения моно ПЭГилированных продуктов 1иГегдеи представлен следующим образом:

ПЭГ-реагент, который является селективным для С-окончания может быть подготовлен с или без спейсеров. Например, полиэтиленгликоль, модифицированный как метиловый эфир на одном конце и имеющий аминогруппу на другом конце, может быть использован в качестве исходного материала.

Подготовка или получение растворимого в воде карбодиимида в качестве конденсирующего агента может быть осуществлены. Соединение ИФН-α (например, 1иГетдеи А1Гасоп-1 КИФН или консенсусного интерферона) с растворенным в воде карбодиимидом в качестве конденсирующего агента обычно осуществляется в водной среде с подходящей буферной системой при оптимальном значении рН для получения амидной связи. ПЭГ с высоким молекулярным весом может быть присоединен к протеину ковалентно для увеличения молекулярного веса.

Выбранные реагенты будут зависеть от исследований оптимизации процесса. Примером подходящего реагента, не ограничивающим объем притязаний, является ΕΌΑί.' или 1-этил-3-(3диметиламинопропил)карбодиимид. Растворимость ΕΌΑΟ в воде дает возможность прямого добавления к реакции без необходимости предварительного растворения в органическом растворителе. Избыток реагента и изомочевина, образующаяся в качестве побочного продукта в результате реакции образования межмолекулярных связей, являются растворимыми в воде и могут легко быть удалены диализом или гель-фильтрацией. Концентрированный раствор ΕΌΑΟ в воде готовится для облегчения добавления небольшого молярного количества к реакционной смеси. Исходный раствор готовится и используется незамедлительно, принимая во внимание неустойчивость реагентов в воде. Большинство из синтетических протоколов в литературе предлагает оптимальную реакционную среду при рН диапазоне между 4,7 и 6,0. Однако реакция конденсации протекают без значительных потерь в выходе до значения рН 7,5. Вода может быть использована в качестве растворителя. Принимая во внимание предполагаемое использование 1иГетдеи, предпочтительно средой будет буферный раствор 2-(Кморфолино) этансульфоновой кислоты, предварительно титрованный до рН между 4,7 и 6,0. Однако 0,1М фосфат при рН 7-7,5 может быть также использован, принимая во внимание тот факт, что продукт находится в том же самом буфере. Соотношение ПЭГ амина к молекуле ИФН-α подбирается так, что С-терминальный(е) карбоксильный(е) остаток (остатки) селективно конъюгируются с ПЭГ с получением моноПЭГилированного производного (производных).

Даже при использовании ПЭГ амина, который был упомянут выше по названию или структуре, такие производные приведены только для примера, и другие группы, такие как гидразиновые производные ПЭГ -ΝΗ-ΝΗ₂, которые также будут конденсироваться с карбоксильной группой ИФН-α, могут быть использованы. В дополнении к водной фазе, реакции также могут быть проведены в твердой фазе. Полиэтиленгликоль может быть выбран из списка соединений с молекулярным весом в диапазоне от 30040000. Выбор различных полиэтиленликолей может также руководствоваться эффективностью связывания и биологическим характеристиками очищенных производных ίη νίίτο и ίη νίνο, т.е. временем циркуляции и антивирусной активности и т. д.

Дополнительно, подходящие спейсеры могут быть добавлены к С-окончанию протеина. Спейсеры могут содержать химически активные группы, такие как 8Η, ΝΗ₂ или СООН для связывания с соответствующим ПЭГ реагентом для получения производных ИФН-α с высоким молекулярным весом. Комбини

- 24 011857 рованная методика твердой/растворенной фазы может быть разработана для получения С-терминальных ПЭГилированных интерферонов. Например, С-окончание ИФН-α размещается на твердой фазе, используя спейсер Ο1у-Ο1у-Су8-NН₂ и затем моноПЭГилируется в растворе, используя активированный дитиопиридил-ПЭГ реагент соответствующего молекулярного веса. Поскольку связывание на С-окончании не зависит от защиты Ν-окончания, представленные процессы и продукты будут выгодными с точки зрения расходов (треть протеина не расходуется по сравнению с методами Ν-терминального ПЭГилирования) и способствует экономии при лечении вирусной инфекции.

Существуют, может быть, более химически активные карбоксильные группы аминокислотных остатков где-нибудь в другом месте в молекуле для взаимодействия с ПЭГ реагентом и проводящие к моноПЭГилированию на этом участке или к множественному ПЭГилированию при добавлении к СООН на С-окончании ИФН-α. Понятно, что эти реакции будут минимальными при стерической свободе на Сокончании молекулы и стерических препятствиях, налагаемых карбодиимидами и ПЭГ реагентами, как в разветвленных цепях молекулы. Таким образом, это является предпочтительным способом ПЭГ модификации для 1п£егдеп и таких подобных протеинов, природных или полученных рекомбинантным способом, которые могут иметь защиту Ν-окончания для изменения степени улучшения эффективности и поддержания более высокой биологической активности ίη νίνο.

Другой способ улучшения С-терминального ПЭГилирования является следующим. Селективность С-терминального ПЭГилирования улучшается стерически громоздкими реагентами, которые исключают реакции на карбоксильных остатках, которые скрыты в спиралях или внутри ИФН-α. Например, один такой реагент мог бы быть разветвленной цепью ПЭГ с молекулярным весом ~ 40кДа и этот агент мог бы быть синтезирован следующим образом: ОН₃С-(СН₂СН₂О)п-СН₂СН₂ЫН₂ + Глутаминовая кислота, то есть, НОСО-СН₂СН₂СН(ЫН₂)-СООН конденсируются с подходящим агентом, например, дициклогексил карбодиимидом или водорастворимым ЕЭС для получения разветвленной цепи ПЭГ агента ОН₃С(СН2СН2О)η-СН2СН2NНСОСН(NН2)СН2ОСН₃-(СН2ОСН2)η-СН2СН2NНСОСН2

О

II

НзС-О-(СН2СН2О)_л-СН2СН₂ЦН2+ но С-СН₂СН₂СН-СООН снш₂

ΕϋΑΟ I

Н₃С-О-(СН₂СН₂О)_п-СН2СН₂МН-СО снин₂ (СН₂)₂

Н₃С-О-(СН₂СН₂О)_п-СН₂СН₂№1-СО

ЕБАС - 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид

Этот реагент может быть использован в избытке для соединения аминогруппы и свободной и доступной карбоксильной группы с образованием пептидной связи.

Если желательно, ПЭГилированный ИФН-α отделяется от не ПЭГилированного ИФН-α, используя известные методы, включая, но не ограничиваясь ионообменной хроматографией, эксклюзионной хроматографией и их комбинацией. Например, где конъюгат ПЭГ и ИФН-α представляет собой моноПЭГилированный ИФН-α, продукты сначала отделяются ионообменной хроматографией с получением материала, имеющего зарядные характеристики моноПЭГилированного материала (другой мультиПЭГилированный материал, имеющий те же самые кажущие заряды, может присутствовать), и затем моноПЭГилированный материал оделяется, используя эксклюзионную хроматографию.

ИФН-β

Термин интерферон-бета («ИФН-β») включает ИФН-β полипептиды, которые являются полипептидами природного происхождения; неприродного происхождения и аналогами полипептидов ИФН-β природного и неприродного происхождения, которые сохраняют антивирусную активность родственных полипептидов ИФН-β природного и не природного происхождения.

Любой из множества бета-интерферонов может быть доставлен способом продолжительной доставки по настоящему изобретению. Подходящие бета-интерфероны включают, но не ограничиваются ИФНβ природного происхождения; ИФН-β 1а, например АтопехОх (Бюдеп, 1пс.), и КеЬ1£® (8егопо, 8А); ИФНβ 1Ь (Ве1азегоп®; Вег1ех) и подобные.

Формы ИФН-β могут включать Ν-защищенные виды, где Ν-терминальная аминокислота ацилиро

- 25 011857 вана ацильными группами, такими как формильная группа, ацетильная группа, малонильная группа и тому подобное. Также подходящим для использования является консенсусный ИФН-β.

ИФН-β полипептиды могут быть получены известными методами. ДНК последовательности, кодирующие ИФН-β, могут быть синтезированы, используя стандартные методы. Во многих вариантах осуществления изобретения, ИФН-β полипептиды являются продуктами экспрессии полученных ДНК последовательностей, трансформированных или трансфектированных в бактериальные клетки-хозяева, например Е. со11, или эукариотические клетки-хозяева (например дрожжи, клетки млекопитающих, такие как СИО клетки и тому подобное). В этих вариантах осуществления изобретения, ИФН-β представляет собой рекомбинантный ИФН-β. Когда клетка-хозяин представляет собой бактериальную клетку-хозяин, ИФН-β модифицируется включением Ν-терминального метионина.

Понятно, что ИФН-β, описанный здесь, может включать один или более модифицированных аминокислотных остатков, например путем гликозилирования, химических модификаций и тому подобное.

ИФН-тау

Термин интерферон-тау включает полипептиды ИФН-тау, которые являются полипептидами природного происхождения, неприродного происхождения и аналогами полипептидов ИФН-тау природного и неприродного происхождения, которые сохраняют антивирусную активность родственных полипептидов ИФН-тау природного и неприродного происхождения.

Подходящие тау интерфероны включают, но не ограничиваются ИФН-тау природного происхождения; ТаиГегоп® (Рердеп Согр.); и подобные. [00133] ИФН-тау может включать аминокислотную последовательность, как установлено в любой одной из СепБапк Каталоге № Р15696; Р56828; Р56832; Р56829; Р56831; 029429; 028595; 028594; 808072; 008071; 008070; 008053; Р56830; Р28169; Р28172; и Р28171. Последовательность любого известного ИФН-тау полипептида может быть изменена различными способами, известными в уровне техники для создания целевых изменений в последовательности. Разновидность полипептида будет обычно в значительной степени подобна последовательностям, представленным здесь, т.е. будет отличаться по меньшей мере на одну аминокислоту и может отличаться по меньшей мере на две, но не более чем на десять аминокислот. Изменения последовательности могут представлять собой замены, вставки, исключения. Консервативные аминокислотные заместители обычно включают заместители в следующих группах: (глицин, аланин); (валин, изолейцин, лейцин); (аспартамовая кислота, глутаминовая кислота); (аспарагин, глутамин); (серин, треонин); (лизин, аргинин); или (фенилаланин, тирозин).

Представляющие интерес модификации, которые могут или не могут изменять первичную аминокислотную последовательность, включают химическую трансформацию полипептидов, например ацетилирование или карбоксилирование; изменения в аминокислотной последовательности, которые вводят или исключают участки гликозилирования; изменения аминокислотной последовательности, которые делают протеин восприимчивей к ПЭГилированию, и тому подобное. Также включают модификации гликозилирования, например выполненные модификацией образцов гликозилирования полипептида во время его синтеза и обработки или дальнейшие стадии обработки, например воздействие на полипептид энзимов, которые затрагивают гликозилирование, такие как ферменты гликозилирования млекопитающих или энзимы дегликозилирования. Также включают последовательности, которые имеют фосфорилированные аминокислотные остатки, например фосфотирозин, фосфосерин или фосфотреонин.

Формы ИФН-тау могут включать Ν-защищенные виды, где Ν-терминальная аминокислота ацилирована ацильными группами, такими как формильная группа, ацетильная группа, малонильная группа и тому подобное. Также подходящим для использования является консенсусный ИФН-тау.

ИФН-тау полипептиды могут быть получены известными методами. ДНК последовательности, кодирующие ИФН-тау, могут быть синтезированы, используя стандартные методы. Во многих вариантах осуществления изобретения, ИФН-тау полипептиды являются продуктами экспрессии полученных ДНК последовательностей, трансформированных или трансфектированных в бактериальные клетки-хозяева, например Е. со11, или эукариотические клетки-хозяева (например дрожжи, клетки млекопитающих, такие как СЛО клетки и тому подобное). В этих вариантах осуществления изобретения, ИФН-тау представляет собой рекомбинантный ИФН-тау. Когда клетка-хозяин представляет собой бактериальную клеткухозяин, ИФН-тау модифицируется включением Ν-терминального метионина.

Понятно, что ИФН-тау, описанный здесь, может включать один или более модифицированных аминокислотных остатков, например, путем гликозилирования, химических модификаций и тому подобное.

ИФН-ω

Термин интерферон-омега («ИФН-ω») включает ИФН-ω полипептиды, которые являются полипептидами природного происхождения; неприродного происхождения и аналогами полипептидов ИФН-ω природного и неприродного происхождения, которые сохраняют антивирусную активность родственных полипептидов ИФН-ω природного и неприродного происхождения.

Любой известный омега интерферон может быть доставлен способом продолжительной доставки по настоящему изобретению. Подходящие ИФН-ω включают, но не ограничиваются ИФН-ω природного

- 26 011857 происхождения; рекомбинантный ИФН-ω, например Вютей 510 (ВюМейютек); и подобные.

ИФН-ω может включать аминокислотную последовательность, как установлено в любой одной из СепВапк Каталоге №ΝΡ_002168; или ААА70091. Последовательность любого известного ИФН-ω полипептида может быть изменена различными способами, известными в уровне техники для создания целевых изменений в последовательности. Разновидность полипептида будет обычно в значительной степени подобна последовательностям, представленным здесь, то есть будет отличаться по меньшей мере на одну аминокислоту и может отличаться по меньшей мере на две, но не более чем десять аминокислот. Изменения последовательности могут представлять собой замены, вставки, исключения. Консервативные аминокислотные заместители обычно включают заместители в следующих группах: (глицин, аланин); (валин, изолейцин, лейцин); (аспартамовая кислота, глутаминовая кислота); (аспарагин, глутамин); (серин, треонин); (лизин, аргинин) или (фенилаланин, тирозин).

Формы ИФН-ω могут включать Ν-защищенные виды, где Ν-терминальная аминокислота ацилирована ацильными группами, такими как формильная группа, ацетильная группа, малонильная группа и тому подобное. Также подходящим для использования является консенсусный ИФН-ω.

ИФН -ω полипептиды могут быть получены известными методами. ДНК последовательности, кодирующие ИФН-ω, могут быть синтезированы, используя стандартные методы. Во многих вариантах осуществления изобретения ИФН-ω полипептиды являются продуктами экспрессии полученных ДНК последовательностей, трансформированных или трансфектированных в бактериальные клетки-хозяева, например Е. со11, или эукариотические клетки-хозяева (например дрожжи, клетки млекопитающих, такие как СН0 клетки и тому подобное). В этих вариантах осуществления изобретения, ИФН-ω представляет собой рекомбинантный ИФН-ω. Когда клетка-хозяин представляет собой бактериальную клетку-хозяин, ИФН -ω модифицируется включением Ν-терминального метионина.

Понятно, что ИФН-ω, описанный здесь, может включать один или более модифицированных аминокислотных остатков, например, путем гликозилирования, химическими модификациями и тому подобное.

Агонисты рецепторов интерферона III типа.

В любом из вышеописанных способов, агонист рецепторов интерферона представляет собой в некоторых вариантах осуществления изобретения агонист рецепторов интерферона III типа (например, «интерфероновый агонист III типа»). Тип III интерфероновых агонистов включает какой-нибудь ГЕ-28Ь полипептид; и ГЕ-28а полипептид; и ГЕ-29 (интерлейкин-29) полипептид; рецептор антитела, специфичного для III типа интерфероновых рецепторов; и любой другой агонист III типа интерфероновых рецепторов, включая не полипептидные агонисты.

ΣΕ-28Α, [Б-28В и [П-29 (именуемые в дальнейшем как «интерфероны III типа» или «ИФН III») описаны в 8йеррагй еГ а1. (2003) №1Шге 4: 63-68. Каждый полипептид связывает гетеродимерный рецептор, состоящий из рецептора Π-Η) (интерлейкина) β цепи и рецептор ^-28;·!. 8йеррагй еГ а1. (2003), выше. Аминокислотные последовательности ΣΕ-28Α, Ш^В и Π-ΣΟ обнаружены в каталоге СепВапк под номерами ΝΡ_742150, ΝΡ742151 и ΝΡ_42152, соответственно.

Аминокислотная последовательность ИФН полипептида III типа может быть изменена различными способами, известными в уровне техники для создания целевых изменений в последовательности. Разновидность полипептида будет обычно в значительной степени подобна последовательностям, представленным здесь, то есть будет отличаться по меньшей мере на одну аминокислоту и может отличаться по меньшей мере на две, но не более чем на десять аминокислот. Изменения последовательности могут представлять собой замены, вставки, исключения. Сканирующие мутации, которые обычно вводят аланин или другие остатки, могут быть использованы для определения ключевых аминокислот. Специфические аминокислотные заместители, представляющие интерес, включают консервативные и не консервативные изменения. Консервативные аминокислотные заместители обычно включают заместители в следующих группах: (глицин, аланин); (валин, изолейцин, лейцин); (аспартамовая кислота, глутаминовая кислота); (аспарагин, глутамин); (серии, треонин); (лизин, аргинин); или (фенилаланин, тирозин).

Представляющие интерес модификации, которые могут или не могут изменять первичную аминокислотную последовательность, включают химическую трансформацию полипептидов, например ацетилирование или карбоксилирование; изменения в аминокислотной последовательности, которые вводят

- 27 011857 или исключают участки гликозилирования; изменения аминокислотной последовательности, которые делают протеин восприимчивей к ПЭГилированию и тому подобное. Также включают модификации гликозилирования, например выполненные модификацией образцов гликозилирования полипептида во время его синтеза и обработки или дальнейшие стадии обработки, например воздействие на полипептид энзимов, которые затрагивают гликозилирование, такие как ферменты гликозилирования млекопитающих или энзимы дегликозилирования. Также включают последовательности, которые имеют фосфорилированные аминокислотные остатки, например фосфотирозин, фосфосерин или фосфотреонин.

В изобретение включены полипептиды, которые были модифицированы, используя обычные химические техники для улучшения их резистентности к протеолитической деструкции, оптимизировать свойства растворимости или сделать их более подходящими в качестве терапевтических агентов. Например, основная цепь пептида может быть циклизована для улучшения стабильности (смотреть Рпсб1сг и др.(2000) 1. ΒίοΙ. СЬет. 275: 23783-23789). Могут быть использованы аналоги, которые включают остатки, отличные от Ь-аминокислот природного происхождения, например Э-аминокислот или синтетических аминокислот не природного происхождения. Протеин может быть конъюгирован с ПЭГ для улучшения стабильности. Полипептиды могут быть соединены с альбумином. Полипептиды могут быть приготовлены способом ίη νίίτο, используя обычные методы, известные в уровне техники, получены рекомбинантными методами или могут быть выделены из клеток принужденных или производящих протеин по своей природе. Конкретная последовательность и способ получения определяются благоприятной возможностью, экономическими выгодами, требуемой чистотой и тому подобное. Если желательно, различные группы могут быть введены в полипептид во время синтеза или экспрессии, что допустимо для связывания к другим молекулам или к поверхности. Причем цистеины могут быть использованы для получения тиоэфиров, гистидины для связывания металл-ионных комплексов, карбоксильные группы для формирования амидов или эфиров, аминогруппы для формирования амидов и тому подобное.

Агонисты рецепторов интерферона II типа

Агонисты рецепторов интерферона II типа включают любой природного происхождения или не природного происхождения лиганд человеческого рецептора интерферона II типа, который связывает и вызывает сигнальную трансдукцию через рецептор. Агонисты рецепторов интерферона II типа включают интерфероны, представляющие собой интерфероны природного происхождения, модифицированные интерфероны, синтетические интерфероны, интерфероны, конъюгированные с ПЭГ, гибридные протеины, включающие интерферон и какой-нибудь гетерологичный протеин, смешанные интерфероны; антитела, специфичные к рецепторам интерферона, непептидные химические агонисты, и тому подобное.

Специфический пример агонистов рецепторов интерферона II типа представляет собой ИФН-γ и его варианты. Поскольку представленное изобретение иллюстрирует использование ИФН-γ полипептида, легко понять, что любой агонист рецепторов интерферона II типа может быть использован в описанном методе.

Интерферон-гамма.

Последовательности нуклеиновых кислот, кодирующих ИФН-γ, могут быть доступны из общественных баз данных, например СепЬапк, журнальных публикаций и так далее. Поскольку различные полипептиды млекопитающих ИФН-γ представляют интерес для лечения заболеваний человека, обычно человеческий протеин будет использоваться. Последовательность, кодирующая ИФН-γ человека, может быть обнаружена в СепЬапк, номера по каталогу Х13274; У00543; и ΝΜ000619. Соответствующие геномные последовательности могут быть обнаружены в СепЬапк, номера по каталогу 100219; М37265; и У00536. См., например, Сгау е! а1. (1982) №1иге 295: 501 (СепЬапк Х13274); и К.шбег1спес1й и др. (1984) 1.В.С 259: 6790.

ИФН-','1Ь (Асйттипе®; человеческий интерферон) представляет собой одноцепочечный полипептид из 140 аминокислот. Его получают рекомбинантным способом в Е. со11 и снимают гликозильные группы. КгпбегкпесЫ и др. (1984) I. Βίο1. СЬет. 259: 6790-6797. Рекомбинантный ИФН-γ, как обсуждается в патенте США № 6,497,871, также подходит для использования здесь.

ИФН-γ для использования в способах по изобретению может быть любым из природных ИФН-γ, рекомбинантных ИФН-γ и их производных, обладающих активностью ИФН-γ, а именно активностью человеческого ИФН-γ. Человеческий ИФН-γ проявляет антивирусные и антипролиферативные свойства интерферонов, также различные другие иммуномодуляторные активности, как известно в уровне техники. Хотя ИФН-γ определяется последовательностями, как представлено выше, получение протеина и протеолитическая обработка может привести в результате к его технологическим вариантам. Необработанная последовательность, представленная Сгау и др., выше, состоит из 166 аминокислот (аа). Хотя рекомбинантный ИФН-γ, производимый в Е. сой первоначально содержал 146 аминокислот, (начинающийся с 20 аминокислоты) было последовательно обнаружено, что природный человеческий ИФН-γ расщепляется после остатка 23, с получением 143 аа протеина, или 144 аа, если терминальный метионин присутствует, как необходимо для экспрессии у бактерий. Во время очистки зрелый протеин может быть дополнительно расщеплен на С-окончании после остатка 162 (ссылаясь на последовательность Сгау и др.), с получением протеина из 139 аминокислот или 140 аминокислот, если исходный метионин присут

- 28 011857 ствует, например, если потребуется для бактериальной экспрессии. Ν-терминальный метионин представляет собой артефакт, кодированный мРНК трансляционным «стартовым» сигналом ЛИС, который в конкретном случае экспрессии Е.сой не обрабатывается. В других микробиологических системах или эукариотических системах экспрессии метионин может быть удален.

В способах по изобретению любой из природных пептидов ИФН-γ, его вариантов и модификаций или комбинации одного или более пептидов может быть использована. ИФН-γ пептиды, представляющие интерес, включают фрагменты и могут быть различным образом транкированы на карбоксильном окончании по отношению к полной последовательности. Такие фрагменты продолжают проявлять характерные свойства человеческого гамма-интерферона, такие длинные, что аминокислоты от 24 до приблизительно 149 (нумерация остатков необработанного полипептида) присутствуют. Внешние последовательности могут быть заменены аминокислотной последовательностью вслед за аминокислотой 155 без потери активности. См., например, патент США № 5690 925. Природные ИФН-γ фрагменты включают молекулы, различным образом продлевающие от аминокислотных остатков 24-150; 24-151, 24-152; 24153, 24-155; и 24-157. Любой из этих вариантов и другие варианты, известные в уровне техники и обладающие ИФН-γ активностью, могут быть использованы в представленных способах.

Аминокислотная последовательность ИФН-γ полипептида может быть изменена различными способами, известными в уровне техники, для создания целевых изменений в последовательности. Разновидность полипептида будет обычно в значительной степени подобна последовательностям, представленным здесь, то есть будет отличаться по меньшей мере на одну аминокислоту и может отличаться по меньшей мере на две, но не более чем на десять аминокислот. Изменения последовательности могут представлять собой замены, вставки, исключения. Сканирующие мутации, которые обычно вводят аланин или другие остатки, могут быть использованы для определения ключевых аминокислот. Специфические аминокислотные заместители, представляющие интерес, включают консервативные и не консервативные изменения. Консервативные аминокислотные заместители обычно включают заместители в следующих группах: (глицин, аланин); (валин, изолейцин, лейцин); (аспартамовая кислота, глутаминовая кислота); (аспарагин, глутамин); (серин, треонин); (лизин, аргинин); или (фенилаланин, тирозин).

Представляющие интерес модификации, которые могут или не могут изменять первичную аминокислотную последовательность, включают химическую трансформацию полипептидов, например ацетилирование или карбоксилирование; изменения в аминокислотной последовательности, которые вводят или исключают участки гликозилирования; изменения аминокислотной последовательности, которые делают протеин восприимчивей к ПЭГилированию и тому подобное. В одном варианте осуществления изобретения изобретение рассматривает использование вариантов ИФН-γ с одним или более участков гликозилирования и/или ПЭГилирования неприродного происхождения, которые разработаны для обеспечения гликозил- и/или конъюгированных с ПЭГ трансформированных полипептидов со сниженным коэффициентом очистки сыворотки, такие как варианты ИФН-γ полипептидов, описанных в Международной патентной заявке νθ 01/36001. Также включают модификации гликозилирования, например, выполненные модификацией образцов гликозилирования полипептида во время его синтеза и обработки или дальнейшие стадии обработки, например воздействие на полипептид энзимов, которые затрагивают гликозилирование, такие как ферменты гликозилирования млекопитающих или энзимы дегликозилирования. Также включают последовательности, которые имеют фосфорилированные аминокислотные остатки, например фосфотирозин, фосфосерин или фосфотреонин.

В изобретение включены полипептиды, которые были модифицированы, используя обычные химические техники для улучшения их резистентности к протеолитической деструкции, оптимизацию свойств растворимости или выполнение их более подходящими в качестве терапевтических агентов. Например, основная цепь пептида может быть циклизована для улучшения стабильности (смотреть Епей1ег е1 а1. (2000) I. Бю1. СИет. 275: 23783-23789). Могут быть использованы аналоги, которые включают остатки, отличные от Ь-аминокислот природного происхождения, например Ό-аминокислот или синтетических аминокислот не природного происхождения. Протеин может быть конъюгирован с ПЭГ для улучшения стабильности. Полипептиды могут быть соединены с альбумином.

Полипептиды могут быть приготовлены способом ίη νίίτο, используя обычные методы, известные в уровне техники, получены рекомбинантными методами или могут быть выделены из клеток принужденных или производящих протеин по своей природе. Конкретная последовательность и способ получения определяются благоприятной возможностью, экономическими выгодами, требуемой чистотой и тому подобное. Если желательно различные группы могут быть введены в полипептид во время синтеза или экспрессии, что допустимо для связывания к другим молекулам или к поверхности. Причем цистеины могут быть использованы для получения тиоэфиров, гистидины для связывания металл ионных комплексов, карбоксильные группы для формирования амидов или эфиров, аминогруппы для формирования амидов и тому подобное.

Полипептиды могут быть также выделены и очищены в соответствии с обычными методами рекомбинантного синтеза. Лизат может быть приготовлен генной экспрессией и лизат очищают, используя ВЭЖХ, эксклюзионную хроматографию, электрофорез в геле, аффинную хроматографию или другие

- 29 011857 способы очистки. В большинстве своем композиции, которые используются, включают по меньшей мере около 20% по весу желаемого продукта, более обычно по меньшей мере 75% по весу, предпочтительно по меньшей мере 95% по весу и для терапевтических целей обычно по меньшей мере приблизительно 99.5% по весу, по отношению к загрязняющим веществам, относящимся к получению продукта и его очистки. Обычно проценты основываются на содержании общего протеина.

Пирфенидон и его аналоги

Пирфенидон (5-метил-1-фенил-2-(1Н)-пиридон) и специфические аналоги пирфенидона описываются для лечения фибротических состояний. «Фибротическое состояние» это то, что подлежит лечению введением соединения, обладающего антифибротической активностью.

Пирфенидон

Κι - карбоциклический (насыщенный и ненасыщенный), гетероциклический (насыщенный и ненасыщенный), алкилы (насыщенный и ненасыщенный). Примеры включают фенил, бензил, пиримидил, нафтил, индолил, пирролил, фурил, тиенил, имидазолил, циклогексил, пиперидил, пирролидил, морфолинил, циклогексенил, бутадиенил и тому подобное.

Κι может также включать заместители в карбоциклических и гетероциклических фрагментах с заместителями, такими как галоген, нитро, амино, гидроксил, алкокси, карбоксил, циано, тио, алкил, арил, гетроалкил, гетероарил и их комбинации, например 4-нитрофенил, 3-хлофенил, 2,5-динитрофенил, 4метоксифенил, 5-метилпирролил, 2,5-дихлорциклогексил, гуанидинилциклогексинил и тому подобное.

К₂ - алкил, карбоцикил, арил, гетероциклил. Примеры включают: метил, этил, пропил, изопропил, фенил, 4-нитрофенил, тиенил и тому подобное.

X - может быть любым количеством заместителей (от 1 до 3) в карбоциклическом или гетероциклическом кольце. Заместители могут быть одинаковые или различные. Заместители включают водород, алкил, гетероалкил, арил, гетероарил, галоген, нитро, карбоксил, гидроксил, циано, амино, тио, алкиламино, галоарил и тому подобное.

Заместители могут быть необязательно, в свою очередь, замещены от 1-3 заместителей из группы, состоящей из алкила, арила, нитро, алкокси, гидроксила и галогена. Примеры включают метил, 2,3диметилфенил, фенил, п-толил, 4-хлорфенил, 4-нитрофенил, 2,5-дихлорфенил, фурил, тиенил и тому подобное.

Специфические примеры включают соединения, перечисленные в таблице.

- 30 011857

ΙΑ НВ

5-метил-1 -(2 ’ -пиридил)-2-( 1 Н)пиридин	6-метил-1 -фенил-3-( 1 Н)пиридон
6-метил-1 -фенил-2-( 1 Н)пиридон	5 -метил-1 -п-толил-2-( 1 Н)пирид он
5-метил-3-фенил-1-(2’-тиенил)-2- (1Н)пиридон	5 -метил-1 -(2 ’ -нафтил)-3-( 1 Н)пиридон
5-метил-1 -(2 ’ -нафтил)-2-( 1 Н)пиридон	5 -метил-1 -фенил-3-( 1 Н)пиридон
5-метил-1 -п-толил-2-( 1 Н)пиридон	5 -метил-1 -(5 ’ -хино лил)-3 -(1 Н)пиридон
5-метил-1 -(Г -нафтил)-2-( 1 Н)пиридон	5-этил-1 -фенил-3-( 1 Н)пиридон
5-этил-1 -фенил-2-(1Н)пиридон	5-метил-1 -(4 ’ -метоксифенил)-3 (1Н)пиридон
5-метил-1 -(5 ’ -хино лил)-2-( 1 Н)пирид он	4-метил-1 -фенил-3 -(1 Н)пиридон
5 -метил-1 -(4 ’ -хино лил)-2-( 1 Н)пирид он	5 -метил-1 -(3 ’ -пиридил)-3 -(1 Н)пиридон
5-метил-1 -(4 ’ -пирид ил)-2-( 1 Н)пиридон	5 -метил-1 -(2 ’ -тиенил)-3 -(1 Н)пиридон
3 -метил-1 -фенил-2-( 1 Н)пиридон	5-метил-1-(2’-пиридил)-3-(1Н)пиридон
5-метил-1 -(4 ’ -метоксифени л)-2(1Н)пиридон	5-метил-1 -(2’ -хинолил )-3-( 1 Н)пиридон
1-фенил-2-(1Н) пиридон	1-фенил-2-(1Н) пиридон
1,3-дифенил-2-(1Н)пиридон	1 -(2 ’ -фурил)-5 -метил-3 -(1 Н)пиридон
1,3-дифенил-5-метил-2-(1Н)пиридон	1-(4’-хлорфенил)-5-метил-3-(1Н)пиридин
5-метил-1 -(3 ’ -трифторметилфенил)-2ί 1 Т-ТЧтгтт-гчтт тт/^тт уипрпДчэл
3-этил-1 -фенил-2-( 1 Н)пиридон
5-метил-1 -(3 ’ -пиридил )-2-( 1 Н)пиридон
5-метил-1 -(3-нитрофенил)-2(1Н)пиридон
3-(4’-хлорфенил)-5-метил-1-фенил-2- (1Н)пиридон
5-метил-1 -(2’ -тиенил)-2-(1 Н)пиридон
5 -метил-1 -(2 ’ -тиазолил)-2-( 1 Н)пирид он
3,6-диметил-1 -фенил-2-( 1 Н)пиридон
1-(4’-хлорфенил)-5-метил-2-(1Н)пиридон
1-(2’-имидазолил)-5-метил-2- (1Н)пиридон
1 -(4 ’ -нитрофенил)-2-( 1 Н)пиридон
1 -(2 ’ -фурил)-5-метил-2-( 1 Н)пиридон
1 -фенил-3-(4 ’-хлорфенил)-2-( 1 Н)пиридин

Патенты США № 3974281; 3839346; 4042699; 4052509; 5310562; 5518729; 5716632 и 6090822 описывают способы для синтеза и форм пирфенидона и специфичных аналогов пирфенидона в фармацевтических композициях, подходящих для использования в способах по изобретению.

Тимозин-α

Тимозин-α (ΖίΐιΙίΐχίιι™; доступный от 8с1С1опе РЕагтасеи!1са1з, Ыс., 8ап Ма!ео, СА) является синтетической формой тимозина альфа 1, гормона, обнаруженного в природе в кровообращении и производимого вилочковой железой. Тимозин-α увеличивает активность Т клеток и активность естественных клеток-киллеров.

/ас1ах111 в форме для подкожной инъекции представляет собой очищенную стерильную лиофилизированную форму химически синтезированного тимозина альфа 1, идентичного человеческому тимозину

- 31 011857 альфа 1. Тимозин альфа 1 представляет собой ацетилированный полипептид, имеющий следующую последовательность: Лс-8ег-Лзр-Л1а-Л1а-\'а1-Азр-Ткг-8ег-8ег-С1и-11е-Ткг-Ткг-1 .уз-Азр-1 ,ен-1 ,уз-С1и-1 ,уз-1 ,узС1и^а1^а1-С1и-С1и-А1а-С1и-Азп-ОН, и имеющий молекулярный все в 3,108 Да.

Лиофилизованная форма содержит 1,6 мг синтетического тимозина-α, 50 мг маннитола и фосфатный буфер для регулирования рН до 6.8.

Рибавирин

Рибавирин, 1-3-О-рибофуранозил-1Н-1,2,4-триазол-3-карбоксамид, представляет собой нуклеозидный аналог, доступный от IСN РйагтасеиЕса1з, 1пс., Соз1а Меза, Са11£., и описываемый в Каталоге Мегск, соединение № 8199, Одиннадцатое Издание. Его производство и лекарственные формы описаны в патенте США № 4211771. Изобретение также рассматривает использование производных рибавирина (смотреть, например, патент США № 6277830). Рибавирин может быть введен перорально в виде капсулы или таблетки. Конечно, другие типы введения рибавирина, насколько они являются доступными, рассматриваются, такие как назальный спрей, трансдермальное введение, суппозитории, лекарственная форма продолжительного действия и так далее. Любая форма введения будет работать так долго, пока сами лекарственные формы доставляются без разрушения активного ингредиента.

Рибавирин обычно вводится в количестве в диапазоне от 400 до приблизительно 1200 мг, от приблизительно 600 до 1000 мг или от 700 до 900 мг в день. В некоторых вариантах осуществления изобретения рибавирин вводится в течение всего курса ингибиторной терапии N83.

Левовирин

Левовирин представляет собой Ь-энантиомер рибавирина и проявляет свойства, улучшающие Тй1 иммунный ответ над Тй2 иммунным ответом. Левовирин производится IСN РйагтасеиЕса1з.

Левовирин имеет следующую структуру:

Вирамидин

Вирамидин представляет собой 3-карбоксамидиновое производное рибавирина и действует как пролекарство рибавирина. Он эффективно превращается в рибавирин с помощью аденозин деаминазы.

Вирамидин имеет следующую структуру:

Нуклеозидные аналоги.

Нуклеозидные аналоги, которые подходят для использования в комбинированной терапии по изобретению включают, но не ограничиваются, рибавирин, левовирин, вирамидин, изаторибин, какойнибудь Ь-рибофуранозильный нуклеозид, как описано в патенте США № 5559101 и описывается формулой I патента США № 5559101 (например, 1-3-Ь-рибофуранозилурацил, 1-3-Ь-рибофуранозил-5фторурацил, 1-3-Ь-рибофуранозилцитозин, 9-3-Ь-рибофуранозиладенин, 9-3-Ь-рибофуранозилгипоксантин, 9-3-Ь-рибофуранозилгуанин, 9-3-Ь-рибофуранозил-6-тиогуанин, 2-амино-а-Ь-рибофуран [1',2':4,5]оксазолин, О²,О²-ангидро-1 -α-Ь-рибофуранозилурацил, 1 -α-Ь-рибофуранозилурацил, 1 -(2,3,5три-О-бензоил-а-рибофуранозил)-4-тиоурацил, 1 -α-Ь-рибофуранозилцитозин, 1 -а-Ь-рибофуранозил-4тиоурацил, 1-а-Ь-рибофуранозил-5-фторурацил, 2-амино-3-Е-арабинофурано[1',2':4,5]оксазолин, О²,О²ангидро-3-Ь-арабинофуранозилурацил, 2'-деокси-3-Ь-уридин, 3'5'-ди-О-бензоил-2'деоки-4-тио-3-Ьуридин, 2'-деокси-3-Ь-цитидин, 2'-деокси-3-Ь-4-тиоуридин, 2'-деокси-3-Ь-тимидин, 2'-деокси-3-Ь-5фторуридин, 2',3'-дидеокси-3-Ь-уридин, 2'-деокси-3-Ь-5-фторуридин и 2'-деокси-3-Ь-инозин); соедине

- 32 011857 ние, как раскрыто в патенте США № 6423695 и охватывается формулой I патента США № 6423695; соединение, как раскрыто в патентной публикации США № 2002/0058635 и охватывается формулой 1 патентной публикации США № 2002/0058635; нуклеозидный аналог, как раскрыто в \УО 01/90121 А2 (Иешх); нуклеозидный аналог, как раскрыто в \УО 02/069903 А2 (Вюсгуй РЬагтасеийсак 1пс); нуклеозидный аналог, как раскрыто в \УО 02/057287 А2 или \УО 02/057425 А2 (оба Мегск/Шк); и тому подобное.

Антагонисты фактора некроза опухоли (ФНО).

В некоторых вариантах осуществления изобретения способ по изобретению включает введение эффективного количества ингибитора Ν83 и эффективного количества антагониста фактора некроза опухоли α (ФНО-α). Подходящие антагонисты для использования здесь, включают агенты, которые уменьшают синтез ФНО-α, агенты, которые блокируют или ингибируют связывание ФНО-α к ФНО-α рецепторам (ФНОР), и агенты, которые блокируют медиируемую ФНОР трансдукцию сигнала. По меньшей мере, если иное четко не указано, каждая отсылка на «ФНО-α антагонист» или «ФНО антагонист» будет означать ФНО-α антагонист, отличный от пирфенидона или его аналогов.

Как используется здесь, термины «полипептид рецептора ФНО» и «полипептид ФНОР» относятся к полипептидам, получаемых от ФНОР (от любого вида), которые способны связывать ФНО. Две различных клеточных поверхности ФНОР описаны: Тип II ФНОР (или р75 ФНОР или ФНОРП) и Тип I ФНОР (или р55 ФНОР или ФНОРЦ. Зрелый человеческий р75 ФНОР полной длины представляет собой гликопротеин, имеющий молекулярный вес приблизительно 75-80 кДа. Зрелый человеческий р75 ФНОР полной длины представляет собой гликопротеин, имеющий молекулярный вес приблизительно 55-60 кДа.

Типичные ФНОР полипептиды происходят от ФНОР Тип I и/или ФНОР Тип II. Растворимый ФНОР включает р75 ФНОР полипептид; слияния р75 ФНОР с гетерологичными сливающимися компонентами, например Ес участок иммуноглобулина.

Полипептиды ФНОР могут быть интактными ФНОР или подходящим фрагментом ФНОР. В патенте США № 5605690 представлены примеры полипептидов ФНОР, включая растворимые полипептиды ФНОР, подходящие для использования в настоящем изобретении. Во многих вариантах осуществления изобретения ФНОР полипептид включает внеклеточный домен ФНОР. В некоторых вариантах осуществления изобретения полипептид ФНОР представляет собой гибридный полипептид, включающий внеклеточный домен ФНОР, связанный с константным доменом молекулы иммуноглобулина. В других вариантах осуществления изобретения полипептид ФНОР представляет собой гибридный полипептид, включающий внеклеточный домен р75 ФНОР, связанный с константным доменом !цС1 молекулы. В некоторых вариантах осуществления изобретения, когда рассматривается введение человеку, какой-нибудь Щ используемый для гибридных протеинов является человеческим, например человеческий !дС1.

Моновалентная и мультивалентная формы полипептидов ФНОР могут быть использованы в настоящем изобретении. Мультивалентные формы полипептидов ФНОР обладают более чем одним ФНО связывающим сайтом. В некоторых вариантах осуществления изобретения, ФНОР является бивалентным или димерной формой ФНОР. Например, как описывается в патенте США № 5605690 и в МоЫег и др., 1993, 1. ^типо^ 151: 1548-1561, химерное антитело полипептид с ФНОР внеклеточными доменами для вариабельных доменов одной или обеих иммуноглобулиновых тяжелых или легких цепей обеспечит ФНОР полипептид для настоящего изобретения. Обычно, когда такой химерный ФНОР : антитело полипептид производится клетками, он образует бивалентные молекулы через дисульфидные мостики между доменами иммуноглобулина. Такой химерный ФНОР: антитело полипептид именуется как ФНОР: Ес.

В одном варианте осуществления изобретения, способ по изобретению охватывает введение эффективного количества растворимого ФНОР ΕΝΒΒΕΕ®. ΕΝΒΒΕΕ® представляет собой димерный гибридный протеин, состоящий из внеклеточной лиганд-связывающей части человеческого 75 кДа (р75) ФНОР, связанного с Ес частью человеческого ^СЕ Ес компонента ΕΝΒΒΕΕ® содержит СН2 домен, СН3 домен и шарнирную область, но не СН1 домен ЦСЕ ΕΝΒΒΕΕ® производится в млекопитающей клеточной системе экспрессии яичнике китайского хомячка (СНО). Он состоит из 934 аминокислот и имеет молекулярный вес приблизительно 150 кДа. 8тйй и др. (1990) 8с1епсе 248: 1019-1023; МоЫег и др. (1993) 1. Iттиηо1. 151: 1548-1561; патент США № 5395760 и патент США № 5605690.

Также подходящими для использования являются моноклональные антитела, которые связывают ФНО -α. Моноклональные антитела включают «гуманизированные» мышиные моноклональные антитела; химерные антитела; моноклональные антитела, которые являются по крайней мере приблизительно на 80%, по крайней мере на 90%, по крайней мере на 95% или 100% человеческими по аминокислотной последовательности и тому подобное. См., например, \¥О 90/10077; \УО 90/04036; и \УО 92/02190. Подходящие моноклональные антитела включают фрагменты антител, такие как Εν, Е(аЬ')2 и ЕаЬ; синтетические антитела; искусственные антитела; антитела фагового отображения; и тому подобное.

Примеры подходящих моноклональных антител включают [пП|хппаЬ (ΒΕΜΚ.ΆΟΕ®. СеШосог); и ЛйайтитаЬ (НЫМКА™, ЛЬЬоН). ΒΕΜΚ.ΆΟΕ® представляют собой химерное моноклональное антиФНО -α, которое включает приблизительно 25% мышиной аминокислотной последовательности и около 75% человеческой аминокислотной последовательности. ΒΕΜΚΆΌΕ® содержит вариабельные участки мышиного моноклонального анти-ФНО-α антитела, соединенного с константным участком человеческо

- 33 011857 го IдС1. ЕШой и др. (1993) ΑΓί6π!ίκ Кбеит. 36: 1681-1690; ЕШой и др. (1994) Ьапсе! 344: 1105-1110; Βаеή и др. (1999) Сак1гоеп!его1оду 116: 22-28. ΗυΜIΚΑ™ представляет собой человеческое !дС1 моноклональное антитело полной длины, которое было идентифицировано, используя технологию фагового отображения. Р1акс1к (2003) 1. Αт. Рбагт.Лккос. 43: 327-328.

Также в термин «ФНО антагонист» включают и, таким образом, являются подходящими для использования по описываемому здесь способу стресс-активируемые ингибиторы протеин киназы (8ΑΓΚ). 8ΑΓΚ ингибиторы известны в уровне техники и включают, но не ограничиваются 2-алкил имидазолами, описываемыми в патенте США 6548520; 1,4,5-замещенными имидазольными соединениями, которые описываются в патенте США № 6489325; 1,4,5-замещенными имидазольными соединениями, которые описываются в патенте США № 6569871; гетероарил аминофенилкетонами, которые описываются в опубликованной заявке на патент США № 2003/0073832; пиридилимидазольными соединениями, которые раскрываются в патенте США № 6288089; и гетероариламинобензофенонами, которые раскрываются в патенте США № 6432962. Также представляющие интерес соединения описываются в заявке на патент США № 2003/0149041 и патенте США № 6214854. Стресс-активированная протеин киназа является членом семейства митоген-активированных протеин киназ, которые активируются в ответ на раздражение стрессом. 8ΑРΚ включают, но не ограничиваются, р38 (Ьее и др. (1994) №11иге 372:739) и с-)ип Νтерминальную киназу (1ΝΚ).

Способы оценки активности антагонистов ФНО известны в уровне техники и приводятся для примера здесь. Например, активность антагониста ФНО может быть оценена с помощью исследования клеточного конкурентного связывания. В таком исследовании ФНО, меченый радиоактивным изотопом, смешивается с последовательно разбавляемыми антагонистами ФНО и клетками, проявляющими связывание клеточной мембраной ФНОР. Часть суспензии центрифугируется для отделения свободного и связанного ФНО и количество радиоактивности в свободных и связанных фракциях определяется. Активность антагониста ФНО оценивается ингибированием ФНО связывания к клеткам в присутствии антагониста ФНО.

В качестве другого примера антагонисты ФНО могут быть проанализированы на способность ингибировать активность ФНО ш ν 11го в биоисследовании, используя клетки, восприимчивые к цитотоксичной активности ФНО, в качестве клеток-мишеней. В таком исследовании клетки-мишени, выращиваемые с ФНО, обрабатываются различным количеством антагониста ФНО и затем исследуются на цитолиз. Активность антагонистов ФНО оценивается снижением ФНО-индуцируемого цитолиза клеток-мишеней в присутствии антагонистов ФНО.

Ингибиторы Ν85Β

В некоторых вариантах осуществления изобретения изобретение обеспечивает способ, включающий введение эффективного количество ингибитора N83 по изобретению и эффективного количества ингибитора неструктурных протеинов-5 ВГС (N85; РНК-зависимая РНК полимераза) пациенту, нуждающемуся в этом. Подходящие Ν85Β ингибиторы включают, но не ограничиваются, соединения, описанные в патенте США № 6479508 (Βοебπηде^-Шде1бе^т); соединение, как описано в любой из Международных патентных заявок РСТ/СА02/01127, РСТ/СА02/01128 и РСТ/СА02/01129, все поданные 18 июня 2002 г. Боебппдег Шде1бе1т; соединение, описанное в патенте США № 6440985 (^гоРбагта); соединение, описанное в \9О 01/47883, например, ПК-003 (1арап ТоЬассо); динуклеотидные аналоги, как описано в ΖΐΜΐΐβ и др. (2003) Αη!^т^с^οЬ. Αдеη!κ СбетоШег. 47: 2674-2681; бензотиадиазиновые соединения, как описано в Эбапак и др. (2002) 1. Бю1 Сбет. 277 (41):38322-7; ингибитор Ν85Β, как описано в \9О 02/100846 Α1 или XVО 02/100851 А2 (обе 8б1ге); ингибитор Ν85Β, как описано в XVО 01/85172 Α1 или XVО 02/098424 Α1 (обе С1ахо 8тббКбпе); Ν85Β ингибитор, как описано в XVО 00/06529 или XVО 02/06246 Α1 (обе Мегск); Ν85Β ингибитор, как описано в ^О 03/000254 (1арап ТоЬассо), Ν85Β ингибитор, как описано в ЕР 1 256,628 А2 (Αдοиюη); ТТК-002 (1арап ТоЬассо); ЛК-109 (1арап ТоЬассо) и тому подобное.

Во многих вариантах осуществления изобретения представляют интерес Ν85 ингибиторы, которые являются специфическими ингибиторами Ν85, например Ν85 ингибиторы, которые ингибируют Ν85 РНК-зависимую РНК полимеразу и у которых отсутствует значительный ингибиторный эффект к другой РНК зависимой РНК полимеразе и к ДНК зависимой РНК полимеразе.

Дополнительные антивирусные агенты

Дополнительные антивирусные терапевтические агенты, которые могут быть введены в комбинации с Ν83 ингибиторными соединениями по изобретению, включают, но не ограничиваются, ингибиторы инозин монофосфат дегидрогеназы (ГМРОН); рибозимы, которые являются комплементарными к вирусным нуклеотидным последовательностям; антисмысловые РНК ингибиторы и тому подобное.

^РЭН Ингибиторы

Ингибиторы ГМРОН, которые подходят для использования в комбинированной терапии по изобретению, включают, но не ограничиваются, νΧ-497 ((8)-Ы-3-[3-(3-метокси-4-оксазол-5-ил-фенил)уреидо] бензилкарбаминовую кислоту тетрагидрофуран-3-ил-эфир); Vе^ιеx Рбагтасеийсак; см., например, Магк1апб и др.(2000) Αώ^^^ Α^^κ Сбето!бег. 44: 859-866); рибавирин; левовирин (К1Ьарбагт; см., например ^а!коп (2002) Сигг Орт ИкекИд Огидк 3 (5): 680-3); вирамидин (К1Ьарбагт) и тому подобное.

- 34 011857

Рибозимы и антисмысловые соединения

Рибозимы и антисмысловые антивирусные агенты, которые подходят для использования в комбинированной терапии, включают, но не ограничиваются, 14803 (!8[§ Рбагтасеибса1з/Е1ап Согрогабоп;

см., например, Аббеге11 (2001) Сигг Орт !пуе811д Эгидз. 2 (11): 1523-9); Ηерΐаζуте™; и тому подобное.

В некоторых вариантах осуществления изобретения дополнительный антивирусный агент вводится в течение всего курса лечения Ν83 ингибиторными соединениями. В других вариантах осуществления изобретения дополнительный антивирусный агент вводится в течение периода времени, которое перекрывается со временем лечения Ν83 ингибиторными соединениями, например лечение дополнительным антивирусным агентом может начинаться до начала лечения Ν83 ингибиторными соединениями, заканчиваться раньше окончания лечения Ν83 ингибиторными соединениями; лечение дополнительным антивирусным агентом может начинаться после начала лечения Ν83 ингибиторными соединениями, заканчиваться после окончания лечения Ν83 ингибиторными соединениями; лечение дополнительным антивирусным агентом может начинаться после начала лечения Ν83 ингибиторными соединениями и заканчиваться раньше окончания лечения Ν83 ингибиторными соединениями или лечение дополнительным антивирусным агентом может начинаться до начала лечения Ν83 ингибиторными соединениями и заканчиваться после окончания лечения Ν83 ингибиторными соединениями.

Дозы, лекарственные формы и пути введения

В способе по изобретению активный агент (агенты) (например, соединения формулы I и необязательно один или более дополнительных антивирусных агентов) могут быть введены пациенту, используя любое соответствующее средство, способное давать желаемый терапевтический эффект. Причем агент может быть включен в различные лекарственные формы для терапевтического введения. Более конкретно, агенты по настоящему изобретению могут быть введены в состав фармацевтической композиции в комбинации с соответствующими фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями и могут быть введены в состав твердых, полутвердых, жидких или газообразных форм, таких как таблетки, капсулы, порошок, гранулы, мази, растворы, суппозитории, инъекции, ингаляторы и аэрозоли.

Лекарственные формы

Обсуждаемый выше активный агент (агенты) может быть введен в состав, используя хорошо известные реагенты и способы. Композиции представлены в комбинации с фармацевтически приемлемыми эксципиентами. Широкое разнообразие фармацевтически приемлемых экципиентов известно из уровня техники и не нуждается в детальном обсуждении здесь. Фармацевтически приемлемые экципиенты широко описаны во множестве публикаций, например А. Сепиаго (2000) «КепбпдЮп: Тбе 8с1епсе апб Ргасбсе о£ Рбагтасу», 20 издание, Ырртсоб, Аббатз, & Абк1пз; Рбагтасеибса1 Эозаде Богтз апб Эгид Эебуегу 8уз1етз (1999), Η. С. Апзе1 и др., ебз., 7 изд., Ырртсоб, Аббатз & Абктз; и ШпбЪоок о£ Рбагтасеибса1 Ехс1]йеп1з (2000), А. Η. К1ЪЪе и др., ебз., 3 изд. Атег. Рбагтасеибса1 Аззос.

Фармацевтически приемлемые эксципиенты, такие как наполнители, носители или разбавители, легко доступны для общественного применения. Более того, фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как рН-регулирующие и буферные агенты, регулирующие концентрацию агенты, стабилизаторы, увлажнители и тому подобное, легко доступны для общественного применения.

В некоторых вариантах осуществления изобретения агент вводится в состав водного буфера. Подходящие водные буферы включают, но не ограничиваются, ацетаты, сукцинаты, цитраты и фосфатные буферы, изменяющиеся по интенсивности от 5 до 100 мМ. В некоторых вариантах осуществления изобретения водный буфер включает реагенты, которые обеспечивают изотоничность раствора. Такие реагенты включают, но не ограничиваются, хлорид натрия и сахара, такие как маннитол, декстроза, сахароза и тому подобное. В некоторых вариантах осуществления изобретения водный буфер также включает неионные ПАВ, такие как полисорбат 20 или 80. Необязательно лекарственные формы могут также включать консерванты. Подходящие консерванты включают, но не ограничиваются, бензиловый спирт, фенол, хлорбутанол, бензаалкониум хлорид и тому подобное. Во многих случаях формы хранятся при температуре около 4°С. Формы могут быть также лиофилизованы, в таком случае они обычно включают криозащитные вещества, такие как сахароза, трегалоза, лактоза, мальтоза, маннитол и тому подобное. Лиофилизованные формы могут храниться в течение длительного периода времени, даже при комнатной температуре.

По существу, введение агентов может быть улучшено различными способами, включая пероральный, трансбукальный, ректальный, парентеральный, интраперитонеальный, интрадермальный, подкожный, внутримышечный, трансдермальный, внутритрахеальный и так далее способ введения. Во многих вариантах осуществления изобретения введение осуществляется болюсной инъекцией, например подкожной болюсной инъекцией, внутримышечной болюсной инъекцией и тому подобное.

Фармацевтические композиции по изобретению могут быть введены перорально, парентерально или через вживляемую емкость. Пероральное введение или введение через инъекцию предпочтительно.

Подкожное введение фармацевтической композиции осуществляется, используя стандартные методы и устройства, например иглу и шприц или систему портальной доставки подкожной инъекции и тому подобное, см., например, патенты США № 3547119; 4755173; 4531937; 4311137 и 6017328. Комбинация порта для подкожной инъекции и устройства для введения фармацевтической композиции по изобрете

- 35 011857 нию пациенту через указанный порт именуется здесь как «система портальной доставки подкожной инъекции». Во многих вариантах осуществления изобретения подкожное введение улучшается болюсной доставкой с помощью иголки и шприца.

В фармацевтически дозированных формах агенты могут быть введены в форме их фармацевтически приемлемой соли или они могут также быть использованы по одному или в соответствующей комбинации с другими фармацевтически активными соединениями. Следующие способы и экципиенты являются иллюстративными и не ограничивают объем притязаний.

Для пероральных форм агенты могут быть использованы индивидуально или в комбинации с соответствующими добавками для получения таблеток, порошков, гранул или капсул, например с обычными добавками, такими как лактоза, маннитол, кукурузный крахмал; со связующими веществами, такими как кристаллическая целлюлоза, производные целлюлозы, гуммиарабик, кукурузный крахмал или желатин; с дезинтеграторами (разрывателями), такими как кукурузный крахмал, картофельный крахмал или натрий карбоксиметилцеллюлоза; с лубрикантами, такими как тальк или стеарат магния; или если желательно с разбавителями, буферными агентами, увлажнителями, консервантами и ароматизаторами.

Агенты могут быть введены в состав для инъекции с помощью растворения, суспендирования или эмульсифицирования их в водном или неводном растворителе, таком как растительное или другие подобные масла, синтетические глицериды алифатических кислот, эфиры высших алифатических кислот или пропиленгликоля, и если желательно с обычными добавками, такими как солюбилизаторы, изотонические агенты, суспендирующие агенты, эмульсифицирующие агенты, стабилизаторы и консерванты.

Более того, агенты могут быть введены в суппозитории смешением основы, такой как эмульсифицирующая основа или водорастворимая основа. Соединения по изобретению могут быть введены ректально через суппозиторий. Суппозиторий может включать наполнители, такие как масло какао, парафин и полиэтиленгликоли, которые плавятся при температуре тела и остаются в твердом виде при комнатной температуре.

Единичные дозированные формы для перорального или ректального введения, такие как сиропы, эликсиры и суспензии могут быть предоставлены, где каждая дозированная единица, например чайная ложка, столовая ложка, таблетка или суппозиторий содержит определенное количество композиции, содержащей один или более ингибиторов. Подобным образом, единичные дозированные формы для инъекции или внутривенного введения могут включать ингибитор (ингибиторы) в композиции в виде раствора в стерильной воде, нормальном солевом растворе или другом фармацевтически приемлемом носителе.

Термин «единичная дозированная форма» как используется здесь, относится к физически изолированной единице, подходящей в качестве единичной дозы для человека или животного, каждая единица содержит определенное количество соединения по настоящему изобретению, рассчитанное в количестве, достаточном для получения желаемого эффекта в соединении с фармацевтически приемлемым разбавителем, носителем или наполнителем. Технические требования для новых единичных дозированных форм по изобретению зависят от конкретного применяемого соединения и эффекта, который может быть улучшен и фармакодинамики, связанной с каждым соединением у пациента.

Фармацевтически приемлемые экципиенты, такие как наполнители, носители или разбавители легко доступны для общественного применения. Более того, фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как рН-регулирующие и буферные агенты, регулирующие концентрацию агенты, стабилизаторы, увлажнители и тому подобное, легко доступны для общественного применения.

Другие антивирусные агенты

Как обсуждалось выше, способ по изобретению осуществлялся введением N83 ингибитора, такого как соединение формулы Ι, и необязательно одного или более дополнительного антивирусного агента (агентов).

В некоторых вариантах осуществления изобретения способ также включает введение одного или более агонистов рецепторов интерферона. Агонисты рецептора интерферона описаны выше.

В других вариантах осуществления изобретения способ включает введение пирфенидона или пирфенидоновых аналогов. Пирфенидон и его аналоги описывались выше.

Дополнительные антивирусные агенты, которые подходят для использования в комбинированной терапии, включают, но не ограничиваются, нуклеотидными и нуклеозидными аналогами. Примеры, не ограничивающие объем притязаний, включают азидотимидин (ΑΖΤ) (зидовудин), его аналоги и производные; 2',3'-дидеоксиинозин (ΌΌΙ) (диданозин) и его аналоги и производные; 2',3'-дидегидро-2',3'дидеокситимидин (Ό4Τ) (ставудин), его аналоги и производные; комбивир; абакавир; адефовир; дипоксил; цидофовир; рибавирин; его аналоги и тому подобное.

В некоторых вариантах осуществления изобретения способ включает введение рибавирина. Рибавирин, 1-3-О-рибофуранозил-1Н-1,2,4-триазол-3-карбоксамид, представляет собой нуклеозидный аналог, доступный от ΙΟΝ Рйагтасеийсак, Ιηο.. СоЛа Мека, Са11Г., и описываемый в Каталоге Мегск, соединение № 8199, Одиннадцатое Издание. Его производство и лекарственные формы описаны в патенте США № 4211771. Изобретение также рассматривает использование производных рибавирина (см., например, патент США № 6277830). Рибавирин может быть введен перорально в виде капсулы или таблетки. Ко

- 36 011857 нечно, другие типы введения рибавирина, насколько они являются доступными, рассматриваются; такие как назальный спрей, трансдермальное введение, суппозитории, лекарственная форма продолжительного действия и так далее. Любая форма введения будет работать так долго, пока сами лекарственные формы доставляются без разрушения активного ингредиента.

В некоторых вариантах осуществления изобретения дополнительный антивирусный агент вводится в течение всего курса лечения N83 ингибиторными соединениями. В других вариантах осуществления изобретения дополнительный антивирусный агент вводится в течение периода времени, которое перекрывается со временем лечения N83 ингибиторными соединениями, например лечение дополнительным антивирусным агентом может начинаться до начала лечения N83 ингибиторными соединениями и заканчиваться раньше окончания лечения N83 ингибиторными соединениями; лечение дополнительным антивирусным агентом может начинаться после начала лечения N83 ингибиторными соединениями и заканчиваться после окончания лечения N83 ингибиторными соединениями; лечение дополнительным антивирусным агентом может начинаться после начала лечения N83 ингибиторными соединениями и заканчиваться раньше окончания лечения N83 ингибиторными соединениями; или лечение дополнительным антивирусным агентом может начинаться до начала лечения N83 ингибиторными соединениями и заканчиваться после окончания лечения N83 ингибиторными соединениями.

Способы лечения

Монотерапии

Ингибитор N83 соединение по изобретению может быть использовано для лечения острой или хронической формы ВГС. Во многих вариантах осуществления изобретения соединение ингибитор N83 вводится в течение периода от приблизительно 1 дня до приблизительно 7 дней, или около 1 недели до приблизительно 2 недель, или около 2 недель до приблизительно 3 недель, или около 3 недель до приблизительно 4 недель или около 1 месяца до приблизительно 2 месяцев или около 2 месяцев до приблизительно 3 месяцев, около 4 месяцев до приблизительно 6 месяцев или около 6 месяцев до приблизительно 8 месяцев или около 8 месяцев до приблизительно 12 месяцев или, по крайней мере, в течение одного года и может быть введено в более длинный промежуток времени. Соединение ингибитор N83 может быть введено 5 раз в день, 4 раза в день, 3 раза в день, 2 раза в день, ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, 1 раз в неделю, через неделю, 3 раза в месяц или 1 раз в месяц. В других вариантах осуществления изобретения соединение ингибитор N83 вводится непрерывным вливанием.

Во многих вариантах осуществления изобретения соединение ингибитор N83 по изобретению вводится перорально.

В связи с вышеописанными способами введения для лечения вирусной инфекции ГС у пациента, соединение ингибитор N83 по изобретению может быть введено пациенту в дозировке от 0,01 мг до приблизительно 100 мг/кг веса пациента в день, разделенной от 1 до 5 доз в день. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение ингибитор N83 вводится в дозировке от приблизительно 0,5 до приблизительно 75 мг/кг веса тела человека в день, разделенной от 1 до 5 доз в день.

Количество активного ингредиента, которое может быть соединено с носителем для получения дозированной формы, может варьироваться в зависимости от пациента, которому назначают лечение и конкретного способа введения. Обычная фармацевтическая форма содержит приблизительно от 5 до приблизительно 95% активного ингредиента (весовое соотношение). В других вариантах осуществления изобретения фармацевтическая форма может содержать приблизительно от 20 до приблизительно 80% активного ингредиента.

Специалист в данной области легко определит, что концентрация дозы может изменяться как функция от специфического соединения ингибитора N83, серьезности симптомов, восприимчивости пациента к побочным эффектам. Предпочтительные дозировки для данного соединения ингибитора N83 легко определяются специалистом в данной области техники с помощью множества средств. Предпочтительными средствами являются те, которые определяют биологическую активность данного агониста рецептора интерферона.

Во многих вариантах осуществления изобретения множественные дозы соединения ингибитора N83 вводятся. Например, соединение ингибитор N83 вводится 1 раз в месяц, 2 раза в месяц, 3 раза в месяц, через неделю, 1 раз в неделю, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, 4 раза в неделю, 5 раз в неделю, 5 раз в неделю, через день, ежедневно, 2 раза в день, 3 раза в день, за период времени, изменяющийся в диапазоне от одного дня до одной недели или от 2 недель до приблизительно 4 недель, от 1 месяца до приблизительно 2 месяцев или от 2 месяцев до приблизительно 4 месяцев, от 4 месяцев до приблизительно 6 месяцев, или от 6 месяцев до приблизительно 8 месяцев, или от 8 месяцев до приблизительно 12 месяцев, или от одного года до двух лет, или от двух лет до четырех лет или более.

Комбинированная терапия с рибавирином.

В некоторых вариантах осуществления изобретения способы обеспечивают комбинированную терапию, включающую введение соединения ингибитора N83, как описано выше, и эффективного количества рибавирина. Рибавирин может быть введен в дозах приблизительно 400, приблизительно 800, около 1000 или около 1200 мг в день.

В одном варианте осуществления изобретение обеспечивает любой из вышеописанных способов,

- 37 011857 модифицированных для включения совместного введения пациенту терапевтически эффективного количества рибавирина в течение желательного курса лечения соединения ингибитора Ν83.

В другом варианте осуществления изобретение обеспечивает любой из вышеописанных способов, модифицированных для включения совместного введения пациенту от 800 до приблизительно 1200 мг рибавирина перорально в день в течение желательного курса лечения соединением ингибитором Ν83.

В другом варианте осуществления изобретение обеспечивает любой из вышеописанных способов, модифицированных для включения совместного введения пациенту (а) 1000 мг рибавирина, введенного перорально в день, если вес тела пациента меньше 75 кг, или (Ь) 1200 мг рибавирина перорально в день, если вес тела пациента больше или равен 75 кг, где ежедневная доза рибавирина необязательно делится на две дозы в течение желательного курса лечения соединением ингибитором Ν83.

Комбинированная терапия с левовирином

В некоторых вариантах осуществления изобретения способы раскрывают комбинированную терапию, включающую введение соединения ингибитора Ν83, как описано выше, и эффективного количества левовирина. Левовирин может быть введен в дозах приблизительно от 30 до 60 мг, от 60 до 125 мг, от 125 до 200 мг, от 200 до 300 мг, от 300 до 400 мг, от 400 до 1200 мг, от 600 до 1000 мг, от 700 до 900 мг в день или около 10 мг/кг веса тела в день. В некоторых вариантах осуществления изобретения левовирин может быть введен в дозах приблизительно 400, приблизительно 800, около 1000 или около 1200 мг в день в течение желательного курса лечения соединением ингибитором Ν83.

Комбинированная терапия с вирамидином

В некоторых вариантах осуществления изобретения способы раскрывают комбинированную терапию, включающую введение соединения ингибитора Ν83, как описано выше, и эффективного количества вирамидина. Вирамидин может быть введен в дозах приблизительно от 30 до 60 мг, от 60 до 125 мг, от 125 до 200 мг, от 200 до 300 мг, от 300 до 400 мг, от 400 до 1200 мг, от 600 до 1000 мг, от 700 до 900 мг в день или около 10 мг/кг веса тела в день. В некоторых вариантах осуществления изобретения вирамидин может быть введен в дозах приблизительно 800, около 1000 или около 1200 мг в день в течение желательного курса лечения соединением ингибитором Ν83.

Комбинированная терапия с тимозином-α

В некоторых вариантах осуществления изобретения способы обеспечивают комбинированную терапию, включающую введение соединения ингибитора Ν83, как описано выше, и эффективного количества тимозина-α. Тимозин-α (Ζηάηχίη™) обычно вводится подкожной инъекцией. Тимозин-α может быть введен 3 раза в день, 2 раза в день, ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, 1 раз в неделю, через неделю, 3 раза в месяц или 1 раз в месяц необязательно непрерывно или непрерывно в течение желательного курса лечения соединением ингибитором Ν83. Во многих вариантах осуществления изобретения тимозин-α вводится 2 раза в неделю в течение желательного курса лечения соединением ингибитором Ν83.

Эффективные дозировки тимозина-α изменяются в диапазоне от 0,5 до приблизительно 5 мг, например приблизительно от 0,5 до 1,0 мг, от 1,0 до 1,5 мг, от 1,5 до 2,0 мг, от 2,0 до 2,5 мг, от 2,5 до 3,0 мг, от 3,0 до 3,5 мг, от 3,5 до 4,0, от 4,0 до 4,5 мг или от 4,5 до приблизительно 5,0 мг. В конкретных вариантах осуществления изобретения тимозин-α вводится в дозировках, содержащих количество 1,0 или 1,6 мг.

Тимозин-α вводится в течение интервала времени, изменяющегося от 1 дня до 1 недели или от 2 недель до приблизительно 4 недель, от около 1 месяца до приблизительно 2 месяцев или от около 2 месяцев до приблизительно 4 месяцев, от около 4 месяцев до приблизительно 6 месяцев или от около 6 месяцев до приблизительно 8 месяцев, или от около 8 месяцев до приблизительно 12 месяцев, или от одного года до двух лет, или от двух лет до четырех лет или более. В одном варианте осуществления изобретения тимозин-α вводится в течение всего желательного курса лечения соединением ингибитором Ν83.

Комбинированные терапии с интерфероном (интерферонами)

Во многих вариантах осуществления изобретения способы обеспечивают комбинированную терапию, включающую введение соединения ингибитора Ν83, как описано выше, и эффективного количества агониста рецептора интерферона. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы I и агонисты рецепторов интерферона типа I или III вводятся совместно в способах лечения по изобретению. Агонисты рецепторов интерферона I типа, подходящие для использования здесь, включают любой интерферон-α (ИФН-α). В некоторых вариантах осуществления изобретения, интерферон-α представляет собой интерферон-α, конъюгированный с ПЭГ. В некоторых вариантах осуществления изобретения, интерферон-α представляет собой консенсусный интерферон, такой как [ΝΕΕΚ.6ΕΝ® интерферон альфакон-1. В еще некоторых других вариантах осуществления изобретения, интерферон-α представляет собой моноПЭГилированный (линейный 30 кДа) консенсусный интерферон.

Эффективные дозы ИФН-α изменяются от приблизительно 3 до 27 цг (мкг), от 4 до 10 ΜΕ, от приблизительно 90 до 180 цг или от около 18 до приблизительно 90 цг. Эффективные дозировки Шедеи® консенсусного ИФН-α включают приблизительно 3, приблизительно 6, приблизительно 9, приблизительно 12, приблизительно 15, приблизительно 18, приблизительно 21, приблизительно 24, приблизи

- 38 011857 тельно 27, приблизительно 30 цг лекарства на дозу. Эффективные дозировки ИФН-α2а и ИФН-α2Ь изменяется от 3 миллионных единиц (МЕ) до 10 МЕ на дозу. Эффективные дозировки ΡΕ6Α8Υ8® ИФН«2а. конъюгированного с ПЭГ, содержат лекарственное средство в количестве приблизительно от 90 до 270цг или приблизительно 180 цг на дозу. Эффективные дозировки ПЭГ-INΤКОN® ИФН-«2Ь, конъюгированного с ПЭГ, содержат количество приблизительно от 0,5 до 3,0 цг лекарства на кг веса тела на дозу. Эффективные дозировки ПЭГилированного консенсусного интерферона (ПЭГ-КИФН) содержат приблизительно от 18 до 90 цг, или от 27 до 60 цг, или приблизительно 45 цг КИФН аминокислоты на кг веса на дозу ПЭГ-КИФН. Эффективные дозировки моноПЭГилированного (30кДа, линейный) КИФН содержат количество приблизительно от 45 до приблизительно 270 цг, или приблизительно от б0 до 180 цг, или приблизительно от 90 до 120 цг, или от 90 до 120 цг лекарственного средства на дозу. ИФН-α может быть введен ежедневно, через день, 1 раз в неделю, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц, в основном непрерывно или непрерывно.

Во многих вариантах осуществления изобретения агонисты рецепторов интерферона типа I или типа III и/или типа II вводятся в течение периода от приблизительно 1 дня до приблизительно 7 дней, или около 1 недели до приблизительно 2 недель, или около 2 недель до приблизительно 3 недель, или около 3 недель до приблизительно 4 недель, или около 1 месяца до приблизительно 2 месяцев, или около 2 месяцев до приблизительно 3 месяцев, около 4 месяцев до приблизительно б месяцев, или около б месяцев до приблизительно 8 месяцев, или около 8 месяцев до приблизительно 12 месяцев, или по крайней мере в течение одного года и может быть введено в более длинный промежуток времени. Режимы дозирования могут включать введение 3 раза в день, 2 раза в день, ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, 1 раз в неделю, через неделю, 3 раза в месяц или 1 раз в месяц. В некоторых вариантах осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов в которых желательное количество ИФН-α вводится подкожно пациенту болюсным вливанием ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, 1 раз в неделю, через неделю, 3 раза в месяц или 1 раз в месяц или вводится пациенту подкожно в день необязательно непрерывной или непрерывной доставкой в течение желаемого лечения. В других вариантах осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, в которых желаемое количество ПЭГилированного ИФН-α (ПЭГ ИФН-α) вводится подкожно пациенту болюсным вливанием 1 раз в неделю, через неделю, 3 раза в месяц или 1 раз в месяц в течение желаемого лечения.

В других вариантах осуществления изобретения, соединение ингибитор Ν83 и агонист рецепторов интерферона тип II вводится совместно в способах лечения по изобретению. Агонист рецепторов интерферона тип II, подходящий для использования здесь, также включает интерферон-γ (ИФН-γ).

Эффективные дозировки ИФН-γ могут изменяться от приблизительно 0.5 до 500 цг/м², обычно от 1.5 до 200 цг/м², в зависимости от размера пациента. Эта активность основывается на 10^б международных единиц (Е) на 50 цг протеина. ИФН-γ может быть введен ежедневно, через день, три раза в неделю или в основном непрерывно или непрерывно.

В специфических вариантах осуществления изобретения, представляющих интерес, ИФН-γ вводится пациенту в единичной дозированной форме от приблизительно 25 до приблизительно 500 цг, от приблизительно 50 до 400 цг или от 100 до 300 цг. В конкретных вариантах осуществления изобретения, представляющих интерес, доза введения составляет 200 цг ИФН-γ. Во многих вариантах осуществления изобретения, представляющих интерес, ИФН-γ 1Ь вводится.

Там, где дозировка составляет 200 цг на дозу, количество ИФН-γ на вес тела (если вес тела составляет от 45 до 135 кг) находится в пределах от 4,4 цг ИФН-γ на кг веса тела до приблизительно 1,48 цг ИФН-γ на кг веса тела.

Поверхность тела рассматриваемых пациентов обычно изменяется от 1,33 до приблизительно 2,50 м², таким образом во многих вариантах осуществления изобретения, дозировка ИФН-γ меняется от 150 до приблизительно 20 цг/м². Например, дозировка ИФН-γ изменяется от приблизительно 20 до 30 цг/м², от 30 до 40 цг/м², от 40 до 50 цг/м², от 50 до 60 цг/м², от 60 до 70 цг/м², от 70 до 80 цг/м², от 80 до 90 цг/м², от 90 до 100 цг/м², от 100 до 110 цг/м², от 110 до 120 цг/м², от 120 до 130 цг/м², от 130 до 140 цг/м², от 140 до 150 цг/м². В некоторых вариантах осуществления изобретения дозировочная группа изменяется от 25 до приблизительно 100 цг/м². В других вариантах осуществления изобретения дозировочная группа изменяется от 25 до приблизительно 50 цг/м².

В некоторых вариантах осуществления изобретения агонист рецепторов интерферона тип I или тип III вводятся в первом режиме дозирования, за которым следует второй режим дозирования. Первый режим дозирования введения агонистов рецепторов интерферона типа I или типа III (также именуемый как «режим введения») обычно включает введение более высокой дозы агониста рецепторов интерферона тип II или типа III. Например, в случае ИтГегдеп® консенсусного ИФН-α (КИФН) первый режим дозирования включает введение КИФН приблизительно 9, 15, 18, 27 цг. Первый режим дозирования может включать одно дозированное событие или по крайней мере два или более дозированных события. Первый режим дозирования введения агонистов рецепторов интерферона типа I или типа III может быть

- 39 011857 осуществлен ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц, в основном непрерывно или непрерывно.

Первый режим дозирования введения агонистов рецепторов интерферона типа Ι или типа ΙΙΙ обычно включает введение в течение первого периода времени, где период времени может длиться 4 недели, по крайней мере 8 недель или по крайней мере приблизительно 12 недель.

Второй режим дозирования введения агонистов рецепторов интерферона типа ΙΙ или типа ΙΙΙ (также именуемый как «режим поддержания») обычно включает введение более низкой дозы агониста рецепторов интерферона типа ΙΙ или типа ΙΙΙ. Например, в случае КИФН, второй режим дозирования включает введение КИФН, по крайней мере приблизительно 3, 9, 15, 18 цг. Второй режим дозирования может включать одно дозированное событие или по крайней мере два или более дозированных события.

Второй режим дозирования введения агонистов рецепторов интерферона типа Ι или типа ΙΙΙ может быть осуществлен ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц, в основном непрерывно или непрерывно.

В некоторых вариантах осуществления изобретения, где осуществляется режим «введения/поддержания» агонистов рецепторов интерферона типа Ι или типа ΙΙΙ, «инициирующая» доза агонистов рецепторов интерферона типа II (например, ИФН-γ) включается. В этих вариантах осуществления изобретения ИФН-γ вводится в течение периода времени от 1 до 14 дней или приблизительно от 2 до 10 дней или от 3 до 7 дней перед началом лечения агонистами рецепторов интерферона типа Ι или типа ΙΙΙ. Этот период времени именуется как «инициирующая фаза».

В некоторых из этих вариантах осуществления изобретения лечение агонистами рецепторов интерферона типа ΙΙ продолжается в течение всего курса лечения агонистами рецепторов интерферона типа Ι или типа III. В других вариантах осуществления изобретения, лечение агонистами рецепторов интерферона типа ΙΙ прекращается перед концом лечения агонистами рецепторов интерферона типа Ι или типа

III. В этих вариантах осуществления изобретения общее время лечения агонистами рецепторов интерферона типа II (включая «инициирующую фазу») составляет приблизительно от 2 до 30 дней, от 8 до 20 дней, от 10 до 18 дней или от 12 до 16 дней. В еще других вариантах осуществления изобретения лечение агонистами рецепторов интерферона типа II прекращается, как только начинается лечение агонистами рецепторов интерферона типа I или типа III.

В других вариантах осуществления изобретения агонисты рецепторов интерферона типа I или типа III вводятся в индивидуальном режиме дозирования. Например, в случае КИФН, доза КИФН обычно изменяется от приблизительно 3 до 15 цг, от приблизительно 9 до 15 цг, 18 цг. Доза агонистов рецепторов интерферона типа I или типа III обычно вводится ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц, в основном непрерывно или непрерывно. Доза агонистов рецепторов интерферона типа I или типа III обычно вводится в течение некоторого периода времени, где период времени может быть, например, от по крайней мере приблизительно 24 до 48 недель или дольше.

В некоторых вариантах осуществления изобретения, где индивидуальный режим введения агонистов рецепторов интерферона типа I или типа III осуществляется, «инициирующая доза» агониста рецепторов интерферона типа II (например, ИФН-γ) обычно вводится. В этих вариантах осуществления изобретения ИФН-γ вводится в течение периода времени от 1 до 14 дней или приблизительно от 2 до 10 дней или от 3 до 7 дней перед началом лечения агонистами рецепторов интерферона типа I или типа III. Этот период времени именуется как «инициирующая фаза». В некоторых из этих вариантах осуществления изобретения лечение агонистами рецепторов интерферона типа II продолжается в течение всего курса лечения агонистами рецепторов интерферона типа I или типа III. В других вариантах осуществления изобретения лечение агонистами рецепторов интерферона типа II прекращается перед концом лечения агонистами рецепторов интерферона типа I или типа III. В этих вариантах осуществления изобретения общее время лечения агонистами рецепторов интерферона типа II (включая «инициирующую фазу») составляет приблизительно от 2 до 30 дней, от 8 до 20 дней, от 10 до 18 дней или от 12 до 16 дней. В еще других вариантах осуществления изобретения лечение агонистами рецепторов интерферона типа II прекращается, как только начинается лечение агонистами рецепторов интерферона типа I или типа III.

В дополнительных вариантах осуществления изобретения соединение ингибитор N83, агонисты рецепторов интерферона типа I или типа III, агонист рецепторов интерферона типа II вводятся совместно в течение желательного периода лечения в соответствии со способами по изобретению. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение ингибитор N83, интерферон-α и какой-нибудь интерферон-γ вводятся совместно в течение желательного периода лечения в соответствии со способами по изобретению.

В некоторых вариантах осуществления изобретение раскрывает способы, используя количество агонистов рецепторов интерферона типа I или типа III, агонистов рецепторов интерферона типа II и соединения ингибитора N83, эффективное для лечения вирусной инфекции ГС у пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретение раскрывает способы, используя эффективное количество ИФН-α, ИФН-γ и соединения ингибитора N83 для лечения вирусной инфекции ГС у пациента. В одном варианте осуществления изобретение раскрывает способ, используя эффективное количество консенсусного

- 40 011857

ИФН -α, ИФН-γ и соединения ингибитора Ν83 для лечения вирусной инфекции ГС у пациента.

Обычно эффективное количество консенсусного интерферона (КИФН) и ИФН-γ, подходящих для использования в способах по изобретению, обеспечивается с помощью соотношения 1 цг КИФН: 10 цг ИФН-γ, где оба КИФН и ИФН-γ являются не конъюгированными с ПЭГ и негликозилированными видами.

В одном варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества INΕΕК^ΕN® консенсусного ИФН-α и ИФН-γ при лечении вирусной инфекции ГС у пациента, включающий введение пациенту системы доз ΕΝΤΕΕ-ΟΕΝ®, содержащей в количестве от 1 до 30 цг лекарства на дозу INΕΕК6ΕN®, подкожно ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц, в основном непрерывно или непрерывно в комбинации с системой доз ИФН-γ, содержащей количество от приблизительно 10 до 300 цг лекарства на дозу ИФН-γ, подкожно ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов модифицированных для использования эффективного количества INΡΕК^ΕN® консенсусного ИФН-α и ИФН-γ при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз ΣΝΕΕΗ6ΕΝ®, содержащей в количестве от 1 до 9 цг лекарства на дозу INΕΕК6ΕN®, подкожно ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц или за день в основном непрерывно или непрерывно в комбинации с системой доз ИФН-γ, содержащей количество от приблизительно 10 до 100 цг лекарства на дозу ИФН-γ, подкожно ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества INΕΕК^ΕN® консенсусного ИФН-α и ИФН-γ при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз ΣΝΕΕΗ6ΕΝ®, содержащей 1 цг лекарства на дозу INΕΕК6ΕN®, подкожно ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц или за день в основном непрерывно или непрерывно в комбинации с системой доз ИФН-γ, содержащей количество от приблизительно 10 до 50 цг лекарства на дозу ИФН-γ, подкожно ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества INΕΕК^ΕN® консенсусного ИФН-α и ИФН-γ при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз ΣΝΕΕΗ6ΕΝ®, содержащей в количестве приблизительно 9 цг лекарства на дозу INΕΕК6ΕN®, подкожно ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц или за день в основном непрерывно или непрерывно в комбинации с системой доз ИФН-γ, содержащей количество от приблизительно 90 до 100 цг лекарства на дозу ИФН-γ, подкожно ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В другом варианте осуществления, изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества INΕΕК^ΕN® консенсусного ИФН-α и ИФН-γ при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз ΣΝΕΕΗ6ΕΝ®, содержащей в количестве приблизительно 30 цг лекарства на дозу INΕΕК6ΕN®, подкожно ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц или за день в основном непрерывно или непрерывно в комбинации с системой доз ИФН-γ, содержащей количество от приблизительно 200 до 300 цг лекарства на дозу ИФН-γ, подкожно ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества консенсусного ИФН-α, конъюгированного с ПЭГ и ИФН-γ при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз консенсусного ИФН-α, конъюгированного с ПЭГ (ПЭГ -КИФН), содержащего в количестве от 4 до 60 цг КИФН аминокислотного веса на дозу ПЭГ-КИФН, подкожно каждую неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц или за день в основном непрерывно или непрерывно в комбинации с общей еженедельной дозой ИФН-γ, содержащей количество от приблизительно 30 до 1000 цг лекарства за неделю поделенного на дозы, вводимого подкожно ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного пе

- 41 011857 риода лечения соединением ингибитором N83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества консенсусного ИФН-α, конъюгированного с ПЭГ и ИФН-γ при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз консенсусного ИФН-α, конъюгированного с ПЭГ (ПЭГ -КИФН), содержащего в количестве от 18 до 24 цг КИФН аминокислотного веса на дозу ПЭГ-КИФН, подкожно каждую неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц или за день в основном непрерывно или непрерывно в комбинации с общей еженедельной дозой ИФН-γ, содержащей количество от приблизительно 100 до 300 цг лекарства за неделю, поделенного на дозы, вводимого подкожно ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

Обычно эффективное количество ИФН-а2а, или 2Ь, или 2с и ИФН-γ, подходящих для использования в способах по изобретению, обеспечивается с помощью соотношения доз 1 миллионная единица (МЕ) ИФН-α 2а, или 2Ь, или 2с : 30 цг ИФН-γ, которые не являются ПЭГилированными или гликозилированными видами.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества ИФН-а2а, или 2Ь, или 2с и ИФН-γ при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз ИФН-а2а, или 2Ь, или 2с, содержащей в количестве приблизительно от 1 до 20 МЕ лекарства на дозу ИФН-а2а, или 2Ь, или 2с, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или за день, в основном непрерывно или непрерывно в комбинации с системой доз ИФН-γ, содержащей количество от приблизительно 30 до 600цг лекарства на дозу ИФН-γ, подкожно ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц, в основном непрерывно или непрерывно, в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества ИФН-а2а, или 2Ь, или 2с и ИФН-γ при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз ИФН-а2а, или 2Ь, или 2с, содержащей в количестве приблизительно 3 МЕ лекарства на дозу ИФН-а2а, или 2Ь, или 2с, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или за день в основном непрерывно или непрерывно в комбинации с системой доз ИФН-γ, содержащей количество приблизительно 100 цг лекарства на дозу ИФН-γ, подкожно ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества ИФН-а2а, или 2Ь, или 2с и ИФН-γ при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз ИФН-а2а, или 2Ь, или 2с, содержащей в количестве приблизительно 10 МЕ лекарства на дозу ИФН-а2а, или 2Ь, или 2с, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или за день в основном непрерывно или непрерывно в комбинации с системой доз ИФН-у, содержащей количество приблизительно 300 цг лекарства на дозу ИФН-γ, подкожно ежедневно, через день, 3 раза в неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества РЕСА8У8® ИФН-а2а, конъюгированного с ПЭГ и ИФН-γ при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз РЕСА8У8®, содержащей в количестве приблизительно от 90 до 360цг лекарства на дозу РЕСА8У8®, подкожно раз в неделю, через неделю, 3 раза в месяц или ежемесячно в комбинации с общей еженедельной дозой ИФН-γ, содержащей количество от приблизительно 30 до 1000 цг лекарства за неделю, поделенного на дозы, вводимого подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, вводимого в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества РЕСА8У8® ИФН-а2а, конъюгированного с ПЭГ и ИФН-γ, при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз РЕСА8У8®, содержащей в количестве приблизительно 180 цг лекарства на дозу РЕСА8У8®, подкожно раз в неделю, через неделю, 3 раза в месяц или ежемесячно в комбинации с общей еженедельной дозой ИФН-γ, содержащей количество от приблизительно 100 до 300 цг лекарства за неделю, поделенного на дозы, вводимого подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, вводимого в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

- 42 011857

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества РЕС ΙΝΤΚΟΝ® ИФН-а2Ь, конъюгированного с ПЭГ и ИФН-γ, при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз РЕС ΙΝΤΚΟΝ®, содержащей в количестве приблизительно от 0,75 до 3,0цг лекарства на кг веса тела на дозу РЕС ΙΝΤΚΟΝ®, подкожно раз в неделю, через неделю, 3 раза в месяц или ежемесячно в комбинации с общей еженедельной дозой ИФН-γ, содержащей количество от приблизительно 30 до 1000 цг лекарства за неделю, поделенного на дозы, вводимого подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, вводимого в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества РЕС ΙΝΤΚΟΝ® ИФН-а2Ь, конъюгированного с ПЭГ и ИФН-γ, при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз РЕС ΙΝΤΚΟΝ®, содержащей в количестве приблизительно 1,5 цг лекарства на кг веса тела на дозу РЕС ΙΝΤΚΟΝ®, подкожно раз в неделю, через неделю, 3 раза в месяц или ежемесячно в комбинации с общей еженедельной дозой ИФН-γ, содержащей количество от приблизительно 100 до 300цг лекарства за неделю, поделенного на дозы, вводимого подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, вводимого в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора Ν83; и какой-нибудь режим 9 цг INΕЕΚСЕN® консенсусного ИФН-α, вводимого подкожно ежедневно или 2 раза в неделю и рибивирин, вводимый перорально ежедневно, где длительность терапии составляет 48 недель. В этом варианте рибавирин вводится в количестве 1000 мг для пациентов, весящих меньше 75 кг, и 1200 мг для пациентов, весящих 75 кг и более.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора Ν83; и какой-нибудь режим 9 цг INΕЕΚСЕN® консенсусного ИФН-α, вводимого подкожно ежедневно или 2 раза в неделю; 50 цг Асйттипе® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно два раза в неделю; и рибивирин, вводимый перорально ежедневно, где длительность терапии составляет 48 недель. В этом варианте рибавирин вводится в количестве 1000 мг для пациентов, весящих меньше 75 кг, и 1200 мг для пациентов, весящих 75 кг и более.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора Ν83; и какой-нибудь режим 9цг INΕЕΚСЕN® консенсусного ИФН-α, вводимого подкожно ежедневно или 2 раза в неделю; 100 цг Асйттипе® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно два раза в неделю; и рибивирин, вводимый перорально ежедневно, где длительность терапии составляет 48 недель. В этом варианте рибавирин вводится в количестве 1000 мг для пациентов, весящих меньше 75 кг, и 1200 мг для пациентов, весящих 75 кг и более.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора Ν83; и какой-нибудь режим 9 цг INΕЕΚСЕN® консенсусного ИФН-α, вводимого подкожно ежедневно или 2 раза в неделю; и 50 цг Асйттипе® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно два раза в неделю; где длительность терапии составляет 48 недель.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора Ν83; и какой-нибудь режим 9 цг INΕЕΚСЕN® консенсусного ИФН-α, вводимого подкожно ежедневно или два раза в неделю; и 100 цг АсОттипе® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно два раза в неделю; где длительность терапии составляет 48 недель.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора Ν83; и какой-нибудь режим 9 цг INΕЕΚСЕN® консенсусного ИФН-α, вводимого подкожно ежедневно или два раза в неделю; 25 цг АсОттипе® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно два раза в неделю; и рибивирин, вводимый перорально ежедневно, где длительность терапии составляет 48 недель. В этом варианте рибавирин вводится в количестве 1000 мг для пациентов, весящих меньше 75 кг, и 1200 мг для пациентов, весящих 75 кг и более.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора Ν83; и какой-нибудь режим 9 цг INΕЕΚСЕN® консенсусного ИФН-α, вводимого подкожно ежедневно или два раза в неделю; 200 цг АсОттипе® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно два раза в неделю; и рибивирин, вводимый перорально ежедневно, где длительность терапии составляет 48

- 43 011857 недель. В этом варианте рибавирин вводится в количестве 1000 мг для пациентов, весящих меньше 75 кг, и 1200 мг для пациентов, весящих 75 кг и более.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 9 цг INΕЕЯСЕN® консенсусного ИФН-α, вводимого подкожно ежедневно или два раза в неделю; и 25 цг Асбттиие® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно два раза в неделю; где длительность терапии составляет 48 недель.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 9 цг INΕЕЯСЕN® консенсусного ИФН-α, вводимого подкожно ежедневно или 2 раза в неделю; и 200 цг Асбттиие® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно два раза в неделю; где длительность терапии составляет 48 недель.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 100 цг моноПЭГилированного (30 кДа, линейного) консенсусного ИФН -α, вводимого подкожно каждые 10 дней или 1 раз в неделю; и рибивирин, вводимый перорально ежедневно, где длительность терапии составляет 48 недель. В этом варианте рибавирин вводится в количестве 1000 мг для пациентов, весящих меньше 75 кг, и 1200 мг для пациентов, весящих 75 кг и более.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 100 цг моноПЭГилированного (30 кДа, линейного) консенсусного ИФН -α, вводимого подкожно каждые 10 дней или 1 раз в неделю; и 50 цг Асбттиие® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно 2 раза в неделю; и рибивирин, вводимый перорально ежедневно, где длительность терапии составляет 48 недель. В этом варианте рибавирин вводится в количестве 1000 мг для пациентов, весящих меньше 75 кг, и 1200 мг для пациентов, весящих 75 кг и более.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 100 цг моноПЭГилированного (30 кДа, линейного) консенсусного ИФН -α, вводимого подкожно каждые 10 дней или 1 раз в неделю; и 100 цг Асбттиие® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно два раза в неделю; и рибивирин, вводимый перорально ежедневно, где длительность терапии составляет 48 недель. В этом варианте рибавирин вводится в количестве 1000 мг для пациентов, весящих меньше 75 кг, и 1200 мг для пациентов, весящих 75 кг и более.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 100 цг моноПЭГилированного (30 кДа, линейного) консенсусного ИФН -α, вводимого подкожно каждые десять дней или один раз в неделю; и 50 цг Асбттиие® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно два раза в неделю; где длительность терапии составляет 48 недель.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 100 цг моноПЭГилированного (30 кДа, линейного) консенсусного ИФН -α, вводимого подкожно каждые 10 дней или 1 раз в неделю; и 100 цг Асбттиие® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно два раза в неделю; где длительность терапии составляет 48 недель.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 150 цг моноПЭГилированного (30 кДа, линейного) консенсусного ИФН -α, вводимого подкожно каждые 10 дней или 1 раз в неделю; и рибивирин, вводимый перорально ежедневно, где длительность терапии составляет 48 недель. В этом варианте рибавирин вводится в количестве 1000 мг для пациентов, весящих меньше 75 кг, и 1200 мг для пациентов, весящих 75 кг и более.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 150 цг моноПЭГилированного (30 кДа, линейного) консенсусного ИФН -α, вводимого подкожно каждые 10 дней или 1 раз в неделю; и 50 цг Асбттиие® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно два раза в неделю; и рибивирин, вводимый перорально ежедневно, где длительность терапии составляет 48 недель. В этом варианте рибавирин вводится в количестве 1000 мг для пациентов, весящих меньше 75 кг, и 1200 мг для пациентов, весящих 75 кг и более.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 150 цг моноПЭГилированного (30 кДа, линейного) консенсусного ИФН -α, вводимого подкожно каждые 10 дней или 1 раз в неделю; и 100цг Асбттиие® человеческого

- 44 011857

ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно 2 раза в неделю; и рибивирин, вводимый перорально ежедневно, где длительность терапии составляет 48 недель. В этом варианте рибавирин вводится в количестве 1000 мг для пациентов, весящих меньше 75, кг и 1200 мг для пациентов, весящих 75 кг и более.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 150 цг моноПЭГилированного (30 кДа, линейного) консенсусного ИФН -α, вводимого подкожно каждые 10 дней или 1 раз в неделю; и 50 цг АсЕттипе® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно два раза в неделю; где длительность терапии составляет 48 недель.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 150 цг моноПЭГилированного (30 кДа, линейного) консенсусного ИФН -α, вводимого подкожно каждые 10 дней или 1 раз в неделю; и 100 цг АсЕттипе® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно 2 раза в неделю; где длительность терапии составляет 48 недель.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 200 цг моноПЭГилированного (30 кДа, линейного) консенсусного ИФН -α, вводимого подкожно каждые 10 дней или 1 раз в неделю; и рибивирин, вводимый перорально ежедневно, где длительность терапии составляет 48 недель. В этом варианте рибавирин вводится в количестве 1000 мг для пациентов, весящих меньше 75 кг, и 1200 мг для пациентов, весящих 75 кг и более.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 200 цг моноПЭГилированного (30 кДа, линейного) консенсусного ИФН -α, вводимого подкожно каждые 10 дней или 1 раз в неделю; и 50 цг АсЕттипе® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно 2 раза в неделю; и рибивирин, вводимый перорально ежедневно, где длительность терапии составляет 48 недель. В этом варианте рибавирин вводится в количестве 1000 мг для пациентов, весящих меньше 75 кг, и 1200 мг для пациентов, весящих 75 кг и более.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 200 цг моноПЭГилированного (30 кДа, линейного) консенсусного ИФН -α, вводимого подкожно каждые 10 дней или 1 раз в неделю; и 100 цг АсЕттипе® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно 2 раза в неделю; и рибивирин, вводимый перорально ежедневно, где длительность терапии составляет 48 недель. В этом варианте рибавирин вводится в количестве 1000 мг для пациентов, весящих меньше 75 кг, и 1200 мг для пациентов, весящих 75 кг и более.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 200 цг моноПЭГилированного (30 кДа, линейного) консенсусного ИФН -α, вводимого подкожно каждые 10 дней или 1 раз в неделю; и 50 цг АсЕттипе® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно 2 раза в неделю; где длительность терапии составляет 48 недель.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает введение пациенту с вирусной инфекцией ГС эффективного количества ингибитора N83; и какой-нибудь режим 200 цг моноПЭГилированного (30 кДа, линейного) консенсусного ИФН -α, вводимого подкожно каждые 10 дней или 10 раз в неделю; и 100 цг АсЕттипе® человеческого ИФН-γ 1Ь, вводимый подкожно 2 раза в неделю; где длительность терапии составляет 48 недель.

Любой из вышеописанных способов включает введение ингибитора N83, агониста рецептора интерферона тип I (например, какой-нибудь ИФН-α) и агониста рецептора интерферона тип II (например, какой-нибудь ИФН-γ) и может быть усилен введением эффективного количества антагониста ФНО-α (например, какой-нибудь антагонист ФНО-α, отличный от пирфенидона и его аналогов). Для примера, не ограничивающего объем притязаний, антагонисты ФНО-α, которые подходят для использования в таких комбинированных терапиях, включают ЕНЕРЕЕ®, КЕМГСАПЕ® и НИМ^А™.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает способ использования эффективного количества ЕХВКЕЕ®; эффективного количества ИФН-α; эффективного количества ИФН-γ и эффективного количества ингибитора N83 для лечения вирусной инфекции ГС у пациента, включающий введение пациенту системы доз ЕNВКЕ^®. содержащей количество приблизительно от 0,1 до 23 мг на дозу, приблизительно от 0,1 до 1 цг, приблизительно от 1 до 10 цг, приблизительно от 10 до 100 цг, приблизительно от 100 до 1 мг, приблизительно от 1 до 5 мг, приблизительно от 5 до 10 мг, приблизительно от 10 до 15 мг, приблизительно от 15 до 20 мг или приблизительно от 20 до 23 мг ЕNВКЕ^®. подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, 1 раз в неделю, каждую неделю, 3 раза в месяц 1 раз месяц или каждый месяц или за день в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает способ использования эффек- 45 011857 тивного количества КЕМТСАОЕ®; эффективного количества ИФН-α; эффективного количества ИФН-γ; и эффективного количества ингибитора Ν83 для лечения вирусной инфекции ГС у пациента, включающий введение пациенту системы доз КЕМТСАОЕ®, содержащей количество приблизительно от 0,1 до 4.5 мг/кг, приблизительно от 0,1 до 0,5 мг/кг, приблизительно от 0,5 до 1.0 мг/кг, приблизительно от 1,0 до 1,5 мг/кг, приблизительно от 1,5 мг/кг до 2,0 мг/кг, приблизительно от 2,0 мг/кг до 2,5 мг/кг, приблизительно от 2,5 до 3,0 мг/кг, приблизительно от 3,0 до 3.5 мг/кг, приблизительно от 3,5 до 4,0 мг/кг, приблизительно от 4,0 до 4,5 мг/кг на дозу КЕМШАПЕ®, внутривенно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, 1 раз в неделю, каждую неделю, 3 раза в месяц 1 раз месяц или каждый месяц или за день в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает способ использования эффективного количества ΗυМIКА™; эффективного количества ИФН-α; эффективного количества ИФН-γ и эффективного количества ингибитора Ν83 для лечения вирусной инфекции ГС у пациента, включающий введение пациенту системы доз ΗυМIКА™, содержащей количество приблизительно от 0,1 до 35 мг на дозу, приблизительно от 0,1 до 1 цг, приблизительно от 1 до 10 цг, приблизительно от 10 до 100 цг, приблизительно от 100 цг до 1 мг, приблизительно от 1 до 5 мг, приблизительно от 5 до 10 мг, приблизительно от 10 до 15 мг, приблизительно от 15 до 20 мг или приблизительно от 20 до 25 мг, приблизительно от 25 до 30 мг, приблизительно от 30 до 35 мг на дозу ΗυМIКА™, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 2 раза в неделю, 1 раз в неделю, каждую неделю, 3 раза в месяц, 1 раз месяц или каждый месяц или за день в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения.

Комбинированные терапии с пирфенидоном

Во многих вариантах осуществления изобретения способы раскрывают комбинированную терапию, включающую введение соединения ингибитора Ν83 как описано выше и эффективного количества пирфенидона или его аналога. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение ингибитор Ν83, один или более агонистов рецептора интерферона и пирфенидон или его аналоги вводятся совместно в способах лечения по изобретению. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение ингибитор Ν83, какой-нибудь агонист рецептора интерферона тип I и пирфенидон (или какой-нибудь его аналог) вводятся совместно. В других вариантах осуществления изобретения соединение ингибитор Ν83, какой-нибудь агонист рецептора интерферона типа I, какой-нибудь агонист рецептора интерферона типа II и пирфенидон (или его аналоги) вводятся совместно. Агонисты рецептора интерферона тип I, подходящие для использования здесь, включают ИФН-α, такой как интерферон альфа-2а, интерферон альфа2Ъ, интерферон альфакон-1, и ИФН-α, конъюгированные с ПЭГ, такие как ПЭГинтерферон альфа-2а, ПЭГинтерферон альфа-2Ъ, и консенсусные интерфероны, конъюгированные с ПЭГ, такие как моноПЭГилированный (30 кДа, линейный) консенсусный интерферон. Агонисты рецептора интерферона тип II, подходящие для использования здесь, включают интерферон-γ.

Пирфенидон или какой-нибудь его аналог может быть введен 1 раз в месяц, 2 раза в месяц, 1 раз в неделю, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, 4 раза в неделю, 5 раз в неделю, 6 раз в неделю или поделен на ежедневные дозы, которые принимают от одного до пяти раз в день за период времени, изменяющийся приблизительно от 1 дня до 1 недели или от 2 недель до приблизительно 4 недель, от около 1 месяца до приблизительно 2 месяцев или от около 2 месяцев до приблизительно 4 месяцев, от около 4 месяцев до приблизительно 6 месяцев, или от около 6 месяцев до приблизительно 8 месяцев, или от около 8 месяцев до приблизительно 12 месяцев, или от 1 года до 2 лет или от 2 лет до 4 лет или более.

Эффективные дозировки пирфенидона или специфичных аналогов пирфенидона включают зависимую от веса пациента дозу, изменяющуюся приблизительно от 5 до 125 мг/кг/день, или фиксированная доза от 400 до 3600 мг в день, или приблизительно 1800 мг в день, или приблизительно от 1200 до 1600 мг в день, вводимые перорально, разделенные от одного до пяти приемов в день. Другие дозы и формы пирфенидона и специфичных аналогов пирфенидона, подходящих для использования при лечении фибротических заболеваний, описываются в патентах США № 5310 562; 5518729; 5716632; и 6090822.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, который включает совместное введение пациенту терапевтически эффективного количества пирфенидона или его аналогов в течение желательного курса лечения соединением ингибитором Ν83.

Комбинированные терапии с антагонистами ФНО-α

Во многих вариантах осуществления изобретения способы раскрывают комбинированную терапию, включающую введение соединения ингибитора Ν83, как описано выше, и эффективного количества антагонистов ФНО-α, в комбинированной терапии для лечения вирусной инфекции ГС.

Эффективные дозы антагонистов ФНО-α изменяются от 0,1 цг до 40 мг на дозу, например приблизительно от 0,1 до 0,5 цг на дозу, приблизительно от 0,5 до 1,0 цг на дозу, приблизительно от 1,0 до 5,0 цг на дозу, приблизительно от 5,0 до 10 цг на дозу, приблизительно от 10 до 20 цг на дозу, приблизительно от 20 до 30 цг на дозу, приблизительно от 30 до 40 цг на дозу, приблизительно от 40 до 50 цг на дозу, приблизительно от 50 до 60 цг на дозу, приблизительно от 60 до 70 цг на дозу, приблизительно от 70 до 80 цг на дозу, приблизительно от 80 до 90 цг на дозу, приблизительно от 90 до 100 цг на дозу, при

- 46 011857 близительно от 100 до 150 цг на дозу, приблизительно от 150 до 200 цг на дозу, приблизительно от 200 до 250 цг на дозу, приблизительно от 250 до 300 цг на дозу, приблизительно от 300 до 400 цг на дозу, приблизительно от 400 до 500 цг на дозу, приблизительно от 500 до 600 цг на дозу, приблизительно от 600 до 700 цг на дозу, приблизительно от 700 до 800 цг на дозу, приблизительно от 800 до 900 цг на дозу, приблизительно от 900 до 1000 цг на дозу, приблизительно от 1 до 10 мг на дозу, приблизительно от 10 до 15 мг на дозу, приблизительно от 15 до 20 мг на дозу, приблизительно от 20 до 25 мг на дозу, приблизительно от 25 до 30 мг на дозу, приблизительно от 30 до 35 мг на дозу, приблизительно от 35 до 40 мг на дозу.

В некоторых вариантах осуществления изобретения эффективные дозировки антагонистов ФНО-α выражаются как мг/кг веса тела. В этих вариантах осуществления эффективных дозировки антагонистов ФНО-α изменяются от приблизительно 0,1 до 10 мг/кг веса тела, например от приблизительно от 0,1 до 0,5 мг/кг веса тела, приблизительно от 0,5 до 1,0 мг/кг веса тела, приблизительно от 1,0 до 2.5 мг/кг веса тела, приблизительно от 2,5 до 5,0 мг/кг веса тела, приблизительно от 5,0 до 7,5 мг/кг веса тела, приблизительно от 7,5 до 10 мг/кг веса тела.

Во многих вариантах осуществления изобретения антагонист ФНО-α вводится в течение периода от 1 дня до 1 недели или от 2 до приблизительно 3 недель, от 3 до приблизительно 4 недель, от около 1 до приблизительно 2 месяцев, от около 2 до приблизительно 3 месяцев или от около 3 до приблизительно 4 месяцев, от около 4 до приблизительно 6 месяцев, или от около 6 до приблизительно 8 месяцев, или от около 8 до приблизительно 12 месяцев, или по крайней мере 1 года и может быть введено за больший интервал времени. Антагонист ФНО-α может быть введен 3 раза в день, 2 раза в день, ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, 1 раз в неделю, каждую неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц, в основном непрерывно или непрерывно.

Во многих вариантах осуществления изобретения множественные дозы антагонистов ФНО-α вводятся. Например, антагонист ФНО-α вводится 1 раз в месяц, 2 раза в месяц, 3 раза в месяц, каждую неделю, 1 раз в неделю, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, 4 раза в неделю, 5 раз в неделю, 6 раз в неделю, через день, ежедневно, 2 раза в день, 3 раза в день, в основном непрерывно или непрерывно за период времени, изменяющийся приблизительно от 1 дня до 1 недели, или от 2 недель до приблизительно 4 недель, от около 1 до приблизительно 2 месяцев или от около 2 до приблизительно 4 месяцев, от около 4 до приблизительно 6 месяцев, или от около 6 до приблизительно 8 месяцев, или от около 8 до приблизительно 12 месяцев, или от 1 года до 2 лет или от 2 лет до 4 лет или более.

Антагонист ФНО-α и соединение ингибитор N83® обычно вводятся в отдельных лекарственных формах. Антагонист ФНО-α и соединение ингибитор N83® могут быть введены в основном одновременно или через приблизительно 30 мин, 1, 2, 4, 8, 16, 24, 36, 72 часа, 4 дня, 7 дней или приблизительно 2 недели.

В одном варианте осуществления изобретения изобретение раскрывает способ, используя эффективное количество антагониста ФНО-α эффективное количество соединения ингибитора N83, лечения вирусной инфекции ГС у пациента, включающий введение пациенту системы дозантагониста ФНО-α, содержащей приблизительно от 0,1 цг до 40 мг на дозу антагониста ФНО-α, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю; или в день в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает способ использования эффективного количества ЕНВИЕЕ® и эффективного количества ингибитора N83 для лечения вирусной инфекции ГС у пациента, включающий введение пациенту системы доз ЕНВЕЕЕ®. содержащей количество приблизительно от 0,1 цг до 23 мг на дозу, приблизительно от 0,1 до 1 цг, приблизительно от 1 до 10 цг, приблизительно от 10 до 100 цг, приблизительно от 100 цг до 1 мг, приблизительно от 1 до 5 мг, приблизительно от 5 до 10 мг, приблизительно от 10 до 15 мг, приблизительно от 15 до 20 мг или приблизительно от 20 до 23 мг ЕНВ^ЕЕ®, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, 1 раз в неделю, каждую неделю, 3 раза в месяц, 1 раз месяц, или каждый месяц, или в день в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение раскрывает способ использования эффективного количества К.ЕМК'.'АЭЕ® и эффективного количества ингибитора N83 для лечения вирусной инфекции ГС у пациента, включающий введение пациенту системы доз КЕМГСАОЕ®, содержащей количество приблизительно от 0,1 до 4,5 мг/кг, приблизительно от 0,1 до 0,5 мг/кг, приблизительно от 0,5 до 1,0 мг/кг, приблизительно от 1,0 до 1,5 мг/кг, приблизительно от 1,5 до 2,0 мг/кг, приблизительно от 2,0 до 2,5 мг/кг, приблизительно от 2,5 до 3,0 мг/кг, приблизительно от 3,0 до 3,5 мг/кг, приблизительно от 3,5 до 4,0 мг/кг, приблизительно от 4,0 до 4,5 мг/кг на дозу КЕМЮАОЕ®, внутривенно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, 1 раз в неделю, каждую неделю, 3 раза в месяц, 1 раз месяц или каждый месяц; или в день в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает способ использования эффек- 47 011857 тивного количества НЕМКА™ и эффективного количества ингибитора Ν83 для лечения вирусной инфекции ГС у пациента, включающий введение пациенту системы доз ΗυМIΒА™, содержащей количество приблизительно от 0,1 цг до 35 мг на дозу, приблизительно от 0,1 до 1 цг, приблизительно от 1 до 10 цг, приблизительно от 10 до 100 цг, приблизительно от 100 цг до 1 мг, приблизительно от 1 до 5 мг, приблизительно от 5 до 10 мг, приблизительно от 10 до 15 мг, приблизительно от 15 до 20 мг или приблизительно от 20 до 25 мг, приблизительно от 25 до 30 мг, приблизительно от 30 до 35 мг на дозу НЕМКА™, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, 1 раз в неделю, каждую неделю, 3 раза в месяц, 1 раз месяц, или каждый месяц, или за день в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

Комбинированные терапии с тимозином-α

Во многих вариантах осуществления изобретения способы раскрывают комбинированные терапии, включающие введение эффективного количества соединения ингибитора Ν83, как описано выше, и эффективного количества тимозина-α в комбинированной терапии для лечения вирусной инфекции ГС.

Эффективные дозировки тимозина-α изменяются приблизительно от 0,5 до 5 мг, например приблизительно от 0,5 до 1,0 мг, приблизительно от 1,0 до 1,5 мг, приблизительно от 1,5 до 2,0 мг, приблизительно от 2,0 до 2,5 мг или приблизительно от 2,5 до 3,0 мг, приблизительно от 3,0 до 3,5 мг, приблизительно от 3,5 до 4,0 мг, приблизительно от 4,0 до 4,5 мг, приблизительно от 4,5 до 5 мг. В конкретных вариантах осуществления изобретения, тимозин-α вводится в дозах, содержащих 1,0 или 1,6 вещества.

Во одном варианте осуществления, изобретение раскрывает способ, использующий эффективное количество ΖА^АXIN™ тимозина-α и эффективное количество соединения ингибитора Ν83 для лечения вирусной инфекции ГС у пациента, включающий введение пациенту системы доз ΖА^АXIN™, содержащего количество приблизительно от 1,0 до 1,6 мг на дозу, подкожно 2 раза в неделю в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

Комбинированные терапии с антагонистами ФНО-α и интерфероном

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение раскрывает способ лечения вирусной инфекции ГС у пациента с вирусной инекцией ГС, способ включает введение эффективного количества ингибитора Ν83, эффективное количество антагонистов ФНО-α и эффективное количество одного или более интерферонов.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества ИФН-γ и эффективного количества антагониста ФНО-α при лечении вирусной инфекции ГС у пациента, который включает введение пациенту системы доз ИФН-γ, содержащей количество приблизительно от 10 до 300 цг лекарственного средства на дозу ИФН-γ, вводимого подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, каждую неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц; или в день в основном непрерывно или непрерывно, в комбинации с системой доз антагониста ФНО-α, содержащей количество приблизительно от 0,1 цг до 40 мг антагониста ФНО-α на дозу, вводимого подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю или 3 раза в неделю или в день в основном непрерывно или непрерывно; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества ИФН-γ и эффективного количества антагониста ФНО-α при лечении вирусной инфекции ГС у пациента, который включает введение пациенту системы доз ИФН-γ, содержащей количество приблизительно от 10 до 100 цг лекарственного средства на дозу ИФН-γ, вводимого подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, каждую неделю, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц или в день в основном непрерывно или непрерывно, в комбинации с системой доз антагониста ФНО-α, содержащей количество приблизительно от 0,1 цг до 40 мг антагониста ФНО-α на дозу, вводимого подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, или 3 раза в неделю, или в день в основном непрерывно или непрерывно; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества ИФН-γ и эффективного количества антагониста ФНО-α при лечении вирусной инфекции ГС у пациента, который включает введение пациенту общей недельной дозы ИФН-γ, содержащей количество приблизительно от 30 до 1000 цг лекарственного средства в неделю, поделенного на дозы, вводимого подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или вводимого в основном непрерывно или непрерывно, в комбинации с системой доз антагониста ФНО-α, содержащей количество приблизительно от 0,1 цг до 40 мг антагониста ФНО-α на дозу, вводимого подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, или 2 раза в неделю, или в день в основном непрерывно или непрерывно; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества ИФН-γ и эффективного ко- 48 011857 личества антагониста ФНО-α при лечении вирусной инфекции ГС у пациента, который включает введение пациенту общей недельной дозы ИФН-γ, содержащей количество приблизительно от 100 до 300 цг лекарственного средства в неделю, поделенного на дозы, вводимого подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или вводимого в основном непрерывно или непрерывно, в комбинации с системой доз антагониста ФНО-α, содержащей количество приблизительно от 0,1 цг до 40 мг антагониста ФНО-α на дозу, вводимого подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, или 3 раза в неделю, или в день в основном непрерывно или непрерывно; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В одном варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества INΡЕКСЕN® консенсусного ИФН-α и антагониста ФНО-α при лечении вирусной инфекции ГС у пациента, который включает введение пациенту системы доз INΡЕКСЕN®, содержащей в количестве приблизительно от 1 до 30 цг лекарства на дозу INΕЕКСЕN®, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, еженедельно, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц или в день в основном непрерывно или непрерывно в комбинации с системой доз антагониста ФНО-α, содержащей в количестве приблизительно от 0,1 цг до 40 мг антагониста ФНО-α на дозу, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или в день, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В одном варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества INΡЕКСЕN® консенсусного ИФН-α и антагониста ФНО-α при лечении вирусной инфекции ГС у пациента, который включает введение пациенту системы доз INΡЕКСЕN®, содержащей в количестве приблизительно от 1 до 9 цг лекарства на дозу INΕЕКСЕN®, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю, еженедельно, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц или в день, в основном непрерывно или непрерывно в комбинации с системой доз антагониста ФНО-α, содержащей в количестве приблизительно от 0,1 цг до 40 мг антагониста ФНО-α на дозу, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или в день, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества ПЭГилированного консенсусного ИФН-α и антагониста ФНО-α при лечении вирусной инфекции у пациента, который включает введение пациенту системы доз ПЭГилированного консенсусного ИФН-α (ПЭГ КИФН), содержащей в количестве приблизительно от 4 до 60 цг КИФН аминокислотного веса на дозу ПЭГ-КИФН, подкожно еженедельно, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц; в комбинации с системой доз антагониста ФНО-α, содержащей в количестве приблизительно от 0,1 цг до 40 мг антагониста ФНО-α на дозу, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или в день, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества ПЭГилированного консенсусного ИФН-α и антагониста ФНО-α при лечении вирусной инфекции у пациента, который включает введение пациенту системы доз ПЭГилированного консенсусного ИФН-α (ПЭГ КИФН), содержащей в количестве приблизительно от 18 до 24 цг КИФН аминокислотного веса на дозу ПЭГ-КИФН, подкожно еженедельно, через неделю, 3 раза в месяц, 1 раз в месяц; в комбинации с системой доз антагониста ФНО-α, содержащей в количестве приблизительно от 0,1 цг до 40 мг антагониста ФНО-α на дозу, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или в день, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества ИФН^2а, или 2Ь, или 2с и эффективного количества антагониста ФНО-α при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз ИФН^2а, или 2Ь, или 2с, содержащей в количестве приблизительно от 1 до 20 МЕ лекарства на дозу ИФН^2а, или 2Ь, или 2с, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или в день, в основном непрерывно или непрерывно; в комбинации с системой доз антагониста ФНО-α, содержащей в количестве приблизительно от 0,1 цг до 40 мг антагониста ФНО-α на дозу, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или в день, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества ИФН^2а, или 2Ь, или 2с и эффективного количества антагониста ФНО-α при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз ИФН^2а, или 2Ь, или 2с, содержащей в количестве приблизительно от 3 МЕ

- 49 011857 лекарства на дозу ИФН-а2а, или 2Ь, или 2с, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или в день, в основном непрерывно или непрерывно; в комбинации с системой доз антагониста ФНО-α, содержащей в количестве приблизительно от 0,1 цг до 40 мг антагониста ФНО-α на дозу, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или в день, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества ИФН-а2а, или 2Ь, или 2с и эффективного количества антагониста ФНО-α при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз ИФН-а2а, или 2Ь, или 2с, содержащей в количестве приблизительно от 10 МЕ лекарства на дозу ИФН-а2а, или 2Ь, или 2с подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или в день, в основном непрерывно или непрерывно; в комбинации с системой доз антагониста ФНО-α, содержащей в количестве приблизительно от 0,1 цг до 40 мг антагониста ФНО-α на дозу, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или в день, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества ΡΕΟΆ8Υ8® ИФН-а2а, конъюгированного с ПЭГ, и эффективного количества антагониста ФНО-α при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз ΡΕΟΆ8Υ8®, содержащей в количестве приблизительно от 90 до 360 цг лекарства на дозу ΡΕ6Ά8Υ8® подкожно раз в неделю, через неделю, 3 раза в месяц или ежемесячно в комбинации с системой доз антагониста ФНО-α, содержащей в количестве приблизительно от 0,1 цг до 40 мг антагониста ФНО-α на дозу, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или в день, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества ΡΕΟΆ8Υ8® ИФН-«2а. конъюгированного с ПЭГ, и эффективного количества антагониста ФНО-α при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз ΡΕΟΆ8Υ8®, содержащей в количестве приблизительно 180 цг лекарства на дозу ΡΕ6Ά8Υ8® подкожно раз в неделю, через неделю, 3 раза в месяц или ежемесячно в комбинации с системой доз антагониста ФНО-α, содержащей в количестве приблизительно от 0,1 цг до 40 мг антагониста ФНО-α на дозу, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или в день, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества ΡΕΟ INΤКОN® ИФН^2Ь, конъюгированного с ПЭГ, и эффективного количества антагониста ФНО-α при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз ΡΕΟ INΤКОN®, содержащей в количестве приблизительно от 0,75 до 3,0 цг лекарства на кг веса тела на дозу ΡΕΟ INΤКОN® подкожно раз в неделю, через неделю, три раза в месяц или ежемесячно в комбинации с системой доз антагониста ФНО-α, содержащей в количестве приблизительно от 0,1 цг до 40 мг антагониста ФНО-α на дозу, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или в день, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В другом варианте осуществления изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов, модифицированных для использования эффективного количества ΡΕΟ INΤКОN® ИФН^2Ь, конъюгированного с ПЭГ, и эффективного количества антагониста ФНО-α при лечении вирусной инфекции у пациента, включающий введение пациенту системы доз ΡΕΟ INΤКОN®, содержащей в количестве приблизительно 1,5 цг лекарства на кг веса тела на дозу ΡΕΟ INΤКОN® подкожно раз в неделю, через неделю, 3 раза в месяц или ежемесячно в комбинации с системой доз антагониста ФНО-α, содержащей в количестве приблизительно от 0,1 цг до 40 мг антагониста ФНО-α на дозу, подкожно ежедневно, через день, 2 раза в неделю, 3 раза в неделю или в день, в основном непрерывно или непрерывно в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

Комбинированные терапии с другими антивирусными агентами

Другие агенты, такие как ингибиторы N83 геликазы ВГС, также являются привлекательными лекарственными средствами для комбинированной терапии и рассматриваются для использования в комбинированных терапиях, описываемых здесь. Рибозимы, такие как Нер1ахуте™ и фосфоротиоаты олигонуклеотидов, которые являются комплементарными к протеиновым последовательностям ВГС и которые ингибируют экспрессию вирусных капсидных протеинов, также являются подходящими для использования к комбинированных терапиях, описываемых здесь.

В некоторых вариантах осуществления изобретения дополнительные антивирусные агенты вводятся во время полного курса лечения соединением ингибитором N83 по изобретению, и начало и конец периодов лечения совпадают. В других вариантах осуществления изобретения дополнительный антиви- 50 011857 русный агент вводится в течение периода времени, которое перекрывается со временем лечения Ν83 ингибиторными соединениями, например лечение дополнительным антивирусным агентом может начинаться до начала лечения Ν83 ингибиторными соединениями, заканчиваться раньше окончания лечения Ν83 ингибиторными соединениями; лечение дополнительным антивирусным агентом может начинаться после начала лечения Ν83 ингибиторными соединениями, заканчиваться после окончания лечения Ν83 ингибиторными соединениями; лечение дополнительным антивирусным агентом может начинаться после начала лечения Ν83 ингибиторными соединениями, заканчиваться раньше окончания лечения Ν83 ингибиторными соединениями; или лечение дополнительным антивирусным агентом может начинаться до начала лечения Ν83 ингибиторными соединениями, заканчиваться после окончания лечения Ν83 ингибиторными соединениями.

Соединение ингибитор Ν83 может быть введено вместе с (т.е. одновременно в отдельных лекарственных формах; одновременно в одной и то же лекарственной форме; одновременно в отдельных формах и приблизительно через 48, через 36, через 24, через 16, через 12, через 8, через 4, через 2, через 1 ч, через 30, через 15 мин или менее) одним или более дополнительным антииврусным агентом.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом ИФН-α, может быть модифицирован заменой режима ИФН-α на режим моноПЭГилированного (30кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, включающий введение системы доз моноПЭГилированного (30кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю, один раз в каждые восемь дней или один раз в каждые десять дней в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом ИФН-α, может быть модифицирован заменой режима ИФН-α на режим моноПЭГилированного (30кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, включающий введение системы доз моноПЭГилированного (30кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 150 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом ИФН-α, может быть модифицирован заменой режима ИФН-α на режим моноПЭГилированного (30кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, включающий введение системы доз моноПЭГилированного (30кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 200 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом ИФН-α, может быть модифицирован заменой режима ИФН-α на режим ΓΝΕΕΚ6ΕΝ® интерферон альфакон-1, включающий введение системы доз ΓΝΕΈΚΟΕΝ® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 9 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в день или 3 раза в неделю в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом ИФН-α, может быть модифицирован заменой режима ИФН-α на режим ΓΝΕΕΚ6ΕΝ® интерферон альфакон-1, включающий введение системы доз INΡΕΚ6ΕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 15 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в день или 3 раза в неделю в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом ИФН-α, может быть модифицирован заменой режима ИФН-α на режим ΓΝΕΕΚ6ΕΝ® интерферон альфакон-1, включающий введение системы доз INΡΕΚ6ΕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 25 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в день или 3 раза в неделю в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом ИФН-γ, может быть модифицирован заменой режима ИФН-γ на режим ИФН-γ, включающий введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 50 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом ИФН-γ, может быть модифицирован заменой режима ИФН-γ на режим ИФН-γ, включающий введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий:

- 51 011857 (а) введение системы доз моноПЭГилированного (30кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 50 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой режима антагониста ФНО на режим антагониста ФНО, включающий введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (а) этанерсепт в количестве 25 мг лекарства на дозу подкожно 2 раза в неделю; (Ь) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела на дозу внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (с) адалимумаб в количестве 40 мг лекарства на дозу подкожно один раз внеделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий: (а) введение системы доз моноПЭГилированного (30кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий: (а) введение системы доз моноПЭГилированного (30кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 150 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 50 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий: (а) введение системы доз моноПЭГилированного (30кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 150 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий: (а) введение системы доз моноПЭГилированного (30кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 200 цг лекарственного средства на дозу, подкожно один раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 50 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий: (а) введение системы доз моноПЭГилированного (30кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 200 цг лекарственного средства на дозу, подкожно один раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий: (а) введение системы доз INΕΕΚСΕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 9 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 25 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

- 52 011857

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий: (а) введение системы доз INΡЕΚСЕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 9 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 50 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий: (а) введение системы доз INΡЕΚСЕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 9 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 100цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий: (а) введение системы доз INΡЕΚСЕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 9 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз ежедневно; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 25 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий: (а) введение системы доз INΡЕΚСЕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 9 цг лекарственного средства на дозу, подкожно один раз ежедневно; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 50 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий: (а) введение системы доз INΡЕΚСЕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 9 цг лекарственного средства на дозу, подкожно один раз ежедневно; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий: (а) введение системы доз INΡЕΚСЕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 15 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 25 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий: (а) введение системы доз INΡЕΚСЕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 15 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 50 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий: (а) введение системы доз INΡЕΚСЕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 15 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

- 53 011857 (а) введение системы доз INΡΕК6ΕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 15 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз ежедневно; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 25 цг лекарственного средства на дозу, подкожно три раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий: (а) введение системы доз INΕΕК6ΕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 15 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз ежедневно; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 50 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся комбинацией ИФН-α и ИФН-γ, может быть модифицирован заменой комбинированного режима ИФН-α и ИФН-γ по изобретению на ИФН-α и ИФН-γ комбинированный режим, включающий: (а) введение системы доз INΡΕК6ΕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 15 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз ежедневно; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз моноПЭГилированного (30 кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; и (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз моноПЭГилированного (30 кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 50 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю и (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно два раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз моноПЭГилированного (30 кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 150 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 50 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз моноПЭГилированного (30 кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 150 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю и (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2

- 54 011857 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Х83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз моноПЭГилированного (30 кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 200 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 50 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Х83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз моноПЭГилированного (30 кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 200 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Х83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз ГХРЕКСЕХ® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 9 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 25 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; и (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Х83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз ГХРЕКСЕХ® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 9 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 50 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Х83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз ГХРЕКСЕХ® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 9 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно три раза в неделю; (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно два раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Х83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антаго- 55 011857 ниста ФНО, включающий: (а) введение системы доз INΕΕК6ΕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 9 цг лекарственного средства на дозу, подкожно один раз ежедневно; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 25 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз INΕΕК6ΕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 9 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз ежедневно; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 50 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз INΕΕК6ΕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 9 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз ежедневно; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз INΕΕК6ΕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 15 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 25 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз INΕΕК6ΕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 15 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 50 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз INΕΕК6ΕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 15 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован

- 56 011857 заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз INΕЕΚСЕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 15 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в день; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 25 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз INΕЕΚСЕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 15 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в день; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 50 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-α и ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз INΕЕΚСЕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 15 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в день; (Ь) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и антагониста ФНО на режим ИФН-α и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз моноПЭГилированного (30кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней; (Ь) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и антагониста ФНО на режим ИФН-α и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз моноПЭГилированного (30 кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 150 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней; (Ь) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю; (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и антагониста ФНО на режим ИФН-α и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз моноПЭГилированного (30кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, содержащего в количестве 200 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю, 1 раз в каждые восемь дней или 1 раз в каждые десять дней; (Ь) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю, (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой

- 57 011857 описанного режима ИФН-α и антагониста ФНО на режим ИФН-α и антагониста ФНО, включающий (а) введение системы доз INΕЕКСЕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 9 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в день или 3 раза в неделю; (Ъ) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю, (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-α и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-α и антагониста ФНО на режим ИФН-α и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз INΡЕКСЕN® интерферона альфакона-1, содержащего в количестве 15 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в день или 3 раза в неделю; (Ъ) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 25 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; и (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно два раза в неделю, (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 50 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; и (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю, (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом комбинации ИФН-γ и антагониста ФНО, может быть модифицирован заменой описанного режима ИФН-γ и антагониста ФНО на режим ИФН-γ и антагониста ФНО, включающий: (а) введение системы доз ИФН-γ, содержащей в количестве 100 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 3 раза в неделю; и (с) введение системы доз антагониста ФНО, выбранной из группы: (ί) этанерсепт в количестве 25 мг подкожно 2 раза в неделю, (ίί) инфликсимаб в количестве 3 мг лекарства на килограмм веса тела внутривенно на неделях 0,2 и 6 и затем каждую 8 неделю или (ίίί) адалимумаб в количестве 40 мг подкожно 1 раз в неделю или 1 раз в 2 недели; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, который включает режим моноПЭГилированного (30 кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, может быть модифицирован заменой описанного режима моноПЭГилированного (30кДа, линейный) консенсусного ИФН-α на режим ПЭГинтерферона альфа-2а, включающего введение системы доз ПЭГинтерферона альфа-2а, содержащего в количестве 180 цг лекарственного средства на дозу, подкожно 1 раз в неделю; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, который включает режим моноПЭГилированного (30 кДа, линейный) консенсусного ИФН-α, может быть модифицирован заменой описанного режима моноПЭГилированного (30 кДа, линейный) консенсусного ИФН-α на режим ПЭГинтерферона альфа-2Ъ, включающего введение системы доз ПЭГинтерферона альфа-2Ъ, содержащего в количестве от 1,0 до 1,5 цг лекарственного средства на килограмм тела на дозу, подкожно 1 раз в неделю; в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, может быть модифицирован дополнительным введенияем дозы рибивирина, содержащей в количестве 400, 800, 1000 или 1200 мг лекарства, перорально в день, необязательно в 2 или более приема в день, в течение желательного периода лечения соединением ингибитором Ν83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов,

- 58 011857 может быть модифицирован дополнительным введением дозы рибивирина, содержащей (ί) в количестве 1000 мг лекарства, перорально в день для пациентов с весом тела менее 75 кг или (ίί) в количестве 1200 мг лекарства, перорально в день для пациентов с весом тела больше или равном 75 кг, необязательно в 2 или более приема в день, в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, может быть модифицирован заменой описываемого режима ингибитора N83 на режим ингибитора N83, включающий введение системы доз от 0,01 до 0.1 мг лекарства на килограмм веса перорально ежедневно, необязательно в 2 или более приема в день, в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, может быть модифицирован заменой описываемого режима ингибитора N83 на режим ингибитора N83, включающий введение системы доз от 0,1 до 1 мг лекарства на килограмм веса перорально ежедневно, необязательно в 2 или более приема в день, в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, может быть модифицирован заменой описываемого режима ингибитора N83 на режим ингибитора N83, включающий введение системы доз от 1 до 10 мг лекарства на килограмм веса перорально ежедневно, необязательно в 2 или более приема в день, в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, может быть модифицирован заменой описываемого режима ингибитора N83 на режим ингибитора N83, включающий введение системы доз от 10 до 100 мг лекарства на килограмм веса перорально ежедневно, необязательно в два или более приема в день, в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом ингибитором N856, может быть модифицирован заменой описываемого режима ингибитора N858 на режим ингибитора N858, включающий введение системы доз от 0,01 до 0.1 мг лекарства на килограмм веса перорально ежедневно, необязательно в 2 или более приема в день, в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом ингибитором N853, может быть модифицирован заменой описываемого режима ингибитора №5В на режим ингибитора №5В, включающий введение системы доз от 0,1 до 1 мг лекарства на килограмм веса перорально ежедневно, необязательно в 2 или более приема в день, в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом ингибитором №5В, может быть модифицирован заменой описываемого режима ингибитора №5В на режим ингибитора №5В, включающий введение системы доз от 1 до 10 мг лекарства на килограмм веса перорально ежедневно, необязательно в 2 или более приема в день, в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

В качестве примера, не ограничивающего объем притязаний, любой из вышеописанных способов, отличающийся режимом ингибитором №5В, может быть модифицирован заменой описываемого режима ингибитора №5В на режим ингибитора №5В, включающий введение системы доз от 10 до 100 мг лекарства на килограмм веса перорально ежедневно, необязательно в 2 или более приема в день, в течение желательного периода лечения соединением ингибитором N83.

Идентифицирование пациента

В некоторых вариантах осуществления изобретения специфический режим лекарственной терапии, используемый при лечении пациентов с вирусной инфекцией ГС, выбирается в соответствии с некоторыми параметрами заболевания, которые проявляются у пациента, такие как первоначальная вирусная нагрузка, генотип вирусной инфекции ГС у пациента, гистология печени и/или стадия фиброза печени у пациента.

Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции гепатита С, при которой описываемый способ модифицируется для лечения пациента с неблагоприятным исходом лечения в течение 48 недель.

В других вариантах осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для лечения пациента с отсутствием лечебного эффекта, где пациент проходит 48-недельный курс терапии.

В других вариантах осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для лечения пациента с рецидивом заболевания, где пациент проходит 48-недельный курс терапии.

В других вариантах осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для

- 59 011857 лечения пациента, зараженного ВГС генотипом 1, где пациент проходит 48-недельный курс терапии.

В других вариантах осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для лечения пациента, зараженного ВГС генотипом 4, где пациент проходит 48-недельный курс терапии.

В других вариантах осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для лечения пациента, зараженного ВГС генотипом 1, где пациент имеет высокую вирусную нагрузку (ВВН), где «ВВН» относится к вирусной нагрузке ВГС больше, чем 2 χ 10⁶ ВГС геномных копий на мл сыворотки и где пациент проходит 48-недельный курс терапии.

В одном варианте осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для включения стадий (1) идентификации пациента, имеющего прогрессирующую или тяжелую стадию фиброза печени, оцениваемую по системе Кноделля (Кпобе11) с индексом 3 или 4, и затем (2) проведения для пациента лекарственной терапии по описываемому способу в течение периода времени приблизительно от 24 до 60 недель, или от 30 недель до 1 года, или от 36 до 50 недель, или от 40 до 48 недель, или по крайней мере 24 недели, или по крайней мере 30 недель, или по крайней мере 36 недель, или по крайней мере 40 недель, или по крайней мере 48 недель, или по крайней мере 60 недель.

В другом варианте осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для включения стадий (1) идентификации пациента, имеющего прогрессирующую или тяжелую стадию фиброза печени, оцениваемую по системе Кноделля (Кпобе11) с индексом 3 или 4, и затем (2) проведения для пациента лекарственной терапии по описываемому способу в течение периода времени приблизительно от 40 до 50 недель или приблизительно 48 недель.

В другом варианте осуществления изобретения, изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для включения стадий (1) идентификации пациента, имеющего вирусную инфекцию ГС генотип 1, и первоначальную вирусную нагрузку более чем 2 млн вирусных геномных копий на мл сыворотки пациента, и затем (2) проведения для пациента лекарственной терапии по описываемому способу в течение периода времени приблизительно от 24 до 60 недель, или от 30 недель до одного года, или от 36 до 50 недель, или от 40 до 48 недель, или по крайней мере 24 недели, или по крайней мере 30 недель, или по крайней мере 36 недель, или по крайней мере 40 недель, или по крайней мере 48 недель или по крайней мере 60 недель.

В другом варианте осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для включения стадий (1) идентификации пациента, имеющего вирусную инфекцию ГС генотип 1 и первоначальную вирусную нагрузку более чем 2 млн вирусных геномных копий на мл сыворотки пациента и затем (2) проведения для пациента лекарственной терапии по описываемому способу в течение периода времени приблизительно от 40 до 50 недель или приблизительно 48 недель.

В другом варианте осуществления изобретения, изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для включения стадий (1) идентификации пациента, имеющего вирусную инфекцию ГС генотип 1 и первоначальную вирусную нагрузку более чем 2 млн вирусных геномных копий на мл сыворотки пациента или раннюю стадию фиброза печени, оцениваемый по системе Кноделля (Кпобе11), с индексом 0,1 или 2, и затем (2) проведения для пациента лекарственной терапии по описываемому способу в течение периода времени приблизительно от 24 до 60 недель, или от 30 недель до одного года, или от 36 до 50 недель, или от 40 до 48 недель, или по крайней мере 24 недели, или по крайней мере 30 недель, или по крайней мере 36 недель, или по крайней мере 40 недель, или по крайней мере 48 недель или по крайней мере 60 недель.

В другом варианте осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для включения стадий (1) идентификации пациента, имеющего вирусную инфекцию ГС генотип 1 и первоначальную вирусную нагрузку более чем 2 млн вирусных геномных копий на мл сыворотки пациента или раннюю стадию фиброза печени, оцениваемый по системе Кноделля (Кпобе11), с индексом 0,1 или 2, и затем (2) проведения для пациента лекарственной терапии по описываемому способу в течение периода времени приблизительно от 40 до 50 недель или приблизительно 48 недель.

В другом варианте осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для включения стадий (1) идентификации пациента, имеющего вирусную инфекцию ГС генотип 1 и первоначальную вирусную нагрузку более чем 2 млн вирусных геномных копий на мл сыворотки пациента и затем (2) проведения для пациента лекарственной терапии по описываемому способу в течение периода времени приблизительно от 20 до 50 недель, или от 24 до 48 недель, или от 30 до 40 недель, или приблизительно до 20 недель, или до 24 недель, или до 30 недель, или до 36 недель, или до 48 недель.

- 60 011857

В другом варианте осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для включения стадий (1) идентификации пациента, имеющего вирусную инфекцию ГС генотип 1 и первоначальную вирусную нагрузку более чем 2 млн вирусных геномных копий на мл сыворотки пациента, и затем (2) проведения для пациента лекарственной терапии по описываемому способу в течение периода времени приблизительно от 20 до 24 недель.

В другом варианте осуществления изобретения, изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для включения стадий (1) идентификации пациента, имеющего вирусную инфекцию ГС генотип 1 и первоначальную вирусную нагрузку более чем 2 млн вирусных геномных копий на мл сыворотки пациента, и затем (2) проведения для пациента лекарственной терапии по описываемому способу в течение периода времени приблизительно от 24 до 48 недель.

В другом варианте осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для включения стадий (1) идентификации пациента, имеющего вирусную инфекцию ГС генотип 2 или 3, и затем (2) проведения для пациента лекарственной терапии по описываемому способу в течение периода времени приблизительно от 24 до 60 недель, или от 30 недель до одного года, или от 36 до 50 недель, или от 40 до 48 недель, или по крайней мере 24 недели, или по крайней мере 30 недель, или по крайней мере 36 недель, или по крайней мере 40 недель, или по крайней мере 48 недель или по крайней мере 60 недель.

В другом варианте осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для включения стадий (1) идентификации пациента, имеющего вирусную инфекцию ГС генотип 2 или 3 и затем (2) проведения для пациента лекарственной терапии по описываемому способу в течение периода времени приблизительно от 20 до 50 недель, или от 24 до 48 недель, или от 30 до 40 недель, или приблизительно до 20 недель, или до 24 недель, или до 30 недель, или до 36 недель, или до 48 недель.

В другом варианте осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для включения стадий (1) идентификации пациента, имеющего вирусную инфекцию ГС генотип 2 или 3, и затем (2) проведения для пациента лекарственной терапии по описываемому способу в течение периода времени приблизительно от 20 до 24 недель.

В другом варианте осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для включения стадий (1) идентификации пациента, имеющего вирусную инфекцию ГС генотип 2 или 3, и затем (2) проведения для пациента лекарственной терапии по описываемому способу в течение периода времени по крайней мере 24 недели.

В другом варианте осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для включения стадий (1) идентификации пациента, имеющего вирусную инфекцию ГС генотип 1 или 4, и затем (2) проведения для пациента лекарственной терапии по описываемому способу в течение периода времени приблизительно от 24 до 60 недель, или от 30 недель до одного года, или от 36 до 50 недель, или от 40 до 48 недель, или по крайней мере 24 недели, или по крайней мере 30 недель, или по крайней мере 36 недель, или по крайней мере 40 недель, или по крайней мере 48 недель, или по крайней мере 60 недель.

В другом варианте осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для включения стадий (1) идентификации пациента, имеющего вирусную инфекцию ГС, отличающую любым из генотипов ВГС 5,6,7,8 и 9, и затем (2) проведения для пациента лекарственной терапии по описываемому способу в течение периода времени приблизительно от 20 до 50 недель.

В другом варианте осуществления изобретения изобретение раскрывает любой из вышеописанных способов для лечения вирусной инфекции ГС, при котором описываемый способ модифицируется для включения стадий (1) идентификации пациента, имеющего вирусную инфекцию ГС, отличающую любым из генотипов ВГС 5,6,7,8 и 9, и затем (2) проведения для пациента лекарственной терапии по описываемому способу в течение периода времени по крайней мере приблизительно 24 недели и до 48 недель.

Объекты, подходящие для лечения

Любой из вышеописанных режимов лечения может быть осуществлен на пациентах, которым поставлен диагноз вирусной инфекции ГС. Любой из вышеописанных режимов может быть применен к пациентам, у которых предыдущее лечение вирусной инфекции ГС не имело лечебного эффекта («пациенты, у которых лечение не удавалось», включая пациентов с отсутствием лечебного эффекта и пациентов с рецидивом заболевания).

Пациенты, которым в клинических условиях был поставлен диагноз вирусной инфекции ГС, представляют особый интерес во многих вариантах осуществления изобретения. Пациенты, которым в кли

- 61 011857 нических условиях был поставлен диагноз гепатита С, рассматриваются как имеющие РНК ВГС в крови и/или имеющие анти-ВГС антитела в сыворотке. Такие пациенты включают анти-ВГС БЫЗАпозитивные пациенты и пациенты с позитивным рекомбинантным иммуноблотным исследованием (ΒΣΒΑ). Такие пациенты могут также иметь, но необязательно, повышенный уровень в сыворотке АЛТ.

Пациенты, которым в клинических условиях поставлен диагноз вирусной инфекции ГС, включают не подвергнутых какому-либо воздействию пациентов (например, пациенты, у которых предварительно не проводилось лечение вирусной инфекции ГС, а именно те, кому предварительно не проводили терапию, основанную на ИФН-α и/или рибавирине) и пациентов, у которых предварительное лечение вирусной инфекции ГС не имело эффекта («пациенты, у которых лечение не удалось»). Пациенты, у которых лечение не удалось, включают пациентов с отсутствием лечебного эффекта (т.е. пациентов у которых, титр ВГС незначительно или недостаточно снижался при предварительном лечении ВГС, например предварительной монотерапией ИФН-α и комбинированной терапией ИФН-α и рибавирином или предварительной комбинированной терапией ИФН-α, конъюгированного с ПЭГ, и рибавирина); и пациенты с рецидивом заболевания (т.е. пациенты, у которых было проведено предварительное лечение ВГС, например пациенты, у которых предварительно была проведена монотерапия ИФН-α, предварительная комбинированная терапия ИФН-α и рибавирином или предварительная комбинированная терапия ИФНα, конъюгированным с ПЭГ, и рибавирином и титр ВГС сначала снизился, а затем возрос).

В конкретных вариантах осуществления изобретения, представляющих интерес, пациенты, имеют титр ВГС по крайней мере 10⁵, по крайней мере приблизительно 5х10⁵, по крайней мере приблизительно 10⁶ или по крайней мере приблизительно 2 х 10⁶, геномных копий ВГС на миллилитр сыворотки. Пациент может быть заражен любым генотипом ВГС (генотип 1, включая, 1а и 1Ь, 2,3, 4,6, и так далее и подтипы (например, 2а, 2Ь, 3а и так далее)), особенно сложными для лечения генотипами, такими как ВГС генотип 1 и конкретные подтипы ВГС и квази виды.

Также представляют интерес ВГС-позитивные пациенты (как описано выше), у которых обнаружен тяжелый фиброз или ранний цирроз (недекомпенсированный, Чайлд-Пью класс А или меньше) или более запущенный цирроз (декомпенсированный, Чайлд-Пью класс В или С) вследствие хронической формы вирусной инфекции ГС и у кого в крови присутствует вирус, несмотря на предварительное антивирусное проведение ИФН-α, основанных терапий, или кто не может переносить ИФН-α, основанные терапии, или кто имеет противопоказания к таким терапиям. В конкретных вариантах осуществления изобретения, представляющих интерес, ВГС-позитивные пациенты со стадией фиброза печени 3 или 4 по системе градации МΕΤАVIΒ являются подходящими для лечения способами по настоящему изобретению. В других вариантах осуществления изобретения пациенты, подходящие для лечения способами по настоящему изобретению, являются пациентами с декомпенсированным циррозом с клиническими проявлениями, включая пациентов с сильно запущенным циррозом печени, включая ожидающих пересадку печени. В еще других вариантах осуществления изобретения пациенты, подходящие для лечения способами по настоящему изобретению включают пациентов с более мягкими степенями фиброза, включая пациентов с ранним фиброзом (стадия 1 и 2 по системе градации МΕΤАVIΒ, Ьибшд, и Зсйеиег или стадии 1,2 или 3 по системе Бйак).

Получение ингибиторов Ν83.

Соединения формулы I могут быть синтезированы в соответствии со способами, описанными ниже.

Методика

Получение соединений общей формулы I

Два способа были использованы для получения соединений с общей формулой I. В обоих способах промужуточные соединения 1 и 4 были получены в соответствии с процедурами, описанными в международной заявке РСТ/СА00/00353 (номер публикации 00/59929). Промежуточное соединение 4 было также приобретено Β8Ρ Атшо Ас-ίάδ.

Пример 1-1. Синтез соединения № 101 (Соединение ΑΒ00220042) способом А:

Соединение №101 (Соединение ΑΒ00220042)

- 62 011857

Способ А

1. Первая стрелочка О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурониум гексафторфосфат ГАТУ (НАТи)

N,N-диизопропилэтиламин ДИЭА^ГЕА) Диметилформамид ДМФА (ЭМТ)

2. Вторая стрелочка Карбодимид КДИ (СБТ) Дихлорметан ДХМ (ЭСМ)

3. Третья стрелочка

1) 4н НС1 (диоксан)

2) О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурониум гексафторфосфат (НАТИ) N,N-диизопропилэтиламин (□[ЕА)

Диметилформамид ДМФА (ЭМЕ)

4. Четвертая стрелочка

Дихлорэтан (ОСЕ)

Катализатор Нолана

5. Пятая стрелочка

Под стрелочкой Тетрагидрофуран (ТНЕ)

Метанол (МеОН)

Стадия 1. Синтез 28-(1-этоксикарбонил-2-винилциклопропилкарбамоил)-4К-гидроксипирролидин1-карбоновой кислоты трет-бутилового эфира (3)

В колбу с этил-(1К, 28) (18,2К)-1-амино-2-винилциклопропилкарбоксилатом (1, 1,0 г, 5,2 ммоль), транс-Ы-(трет-бутоксикарбонил)-4-гидрокси-Е-пролином (2, 1,3 г, 1,1 эквивалент) и О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурониум гексафторфосфатом (НАТИ) (2,7 г, 1,1 эквивалент) было добавлено 30 мл ДМФА для получения раствора. Затем раствор был охлажден до 0°С на ледяной бане, за которым последовало медленное добавление раствора N,N-диизопропилэтиламин (ОША) (4,4 мл, 4 эквивалента) в ДМФА (15 мл) при перемешивании. Реакционная смесь была оставлена для нагревания до комнатной температуры и перемешивалась всю ночь.

Поселе 16 ч реакция была завершена, как продемонстрировала жидкостная хроматография высокого давления (ЖХВД). Смесь была разбавлена этилацетатом ЕЮАс (100 мл), промыта водой (3 х 40 мл),

- 63 011857 насыщенным раствором №НСО₃ (2 х 40 мл) и солевым раствором (2 х 40 мл), затем высушена над №₂8О₄ и сконцентрирована с получением масла темно-красного цвета. Смесь была очищена на силикагеле (элюент: ацетон/гексан 3:7), с получением чистого вещества 3 в виде желто-коричневого порошка (770 мг, 32 %).

Стадия 2. Синтез 3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 1-трет бутоксикарбонил-5(1К-этоксикарбонил-28-винилциклопропилкарбамоил)пирролидин-3К-ил эфира (5) и 3,4-дигидро-1Низохинолин-2-карбоновой кислоты 1-трет-бутоксикарбонил-5-(18-этоксикарбонил-2К-винилциклопропилкарбамоил)пирролидин-3К-ил эфира (6)

5(1 К, 23) 6(13,2«)

Надпись под стрелочкой: дихлорметан, комнатная температура

Дипептид 3 (300 мг, 0.81 ммоль) был растворен в дихлорметане (ОСМ) (8 мл), за которым последовало добавление карбодиимида (СЮ1) (163 мг, 1,2 эквивалента) в одной порции. Реакция перемешивалась всю ночь при комнатной температуре. После 15 ч реакция была завершена, как продемонстрировал анализ тонкослойной хроматографии (ТСХ) (ОСМ/МеОН 9: 1). 1,2,3,4-тетрагироизохинолин (0,32 мл, 3 эквивалента) был добавлен к реакционной смеси по каплям, и реакция перемешивалась при комнатной температуре всю ночь.

После 22 ч ТСХ показала завершение реакции. Реакционная смесь была разбавлена дихлорметаном мл), промыта 1н водной НС1 (15 мл), солевым раствором (15 мл), высушена над На₂8О₄ и сконцентрирована. Продукт был очищен на силикагеле (элюент: ОСМ/Е!₂О/ацетон 30:10:1). Верхнее пятно (ТСХ) (5) было белым порошком (169 мг, 40%), и нижнее пятно (6) было белым твердым осадком (156 мг, 38%). М8 (масс-спектр) т/е 550 (М^+На).

Стадия 3. Синтез 3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 1-(28-трет-бутоксикарбониламино-нон-8-еноил)-5-(1К-этоксикарбонил-28-винилциклопропилкарбамоил)пирролидин-3К-ил эфира (7)

Надпись:

1) 4н НС1 (диоксан)

2) О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурониум гексафторфосфат (НЛТИ) Ν,Ν-диизопропилэтиламин (ΌΙΕΑ)

Диметилформамид ДМФА (1)\1Г)

Верхний изомер 5 (118 мг, 0.22 ммоль) был растворен в 4н НС1 (диоксан, 8 мл) и оставлен при комнатной температуре в течение 90 мин для снятия ВОС (третбутилоксикарбонильных) защитных групп. Раствор был сконцентрирован, затем экстрагирован ацетонитрилом, затем снова дважды сконцентрирован. К светло-коричневому осадку было добавлено соединение 4 (66,8 мг, 1,1 эквивалент) и НЛТИ (93,5 мг, 1,1 эквивалент), за которым следовало добавление 2 мл ДМФА в атомосфере азота. Реакция была охлаждена на ледяной бане в течение 15 мин, после которых 0.5 мл раствора в ДМФА ΌΙΕΑ (0,13 мл, 4 эквивалента) было добавлено к реакционной смеси по капле при перемешивании. Ледяная баня была оставлена для медленного повышения температуры до комнатной и реакционная смесь перемешивается в течение ночи.

После 24 ч реакционная смесь стала темно-коричневого цвета. Проба по ТСХ показала завершение реакции. Реакционная смесь была разбавлена этилацетатом (ЕЮАс) (30 мл) и промыта водой (3 х 15 мл), насыщенным раствором №НСО₃ (2 х 15 мл), солевым раствором (15 мл), высушена (На₂8О₄), и сконцентрирована с получением 7 в виде оранжевого маслянистого осадка (156 мг). Соединение было использо- 64 011857 вано в следующей стадии без дальнейшей очистки. М8 т/е 703 (М\а).

Стадия 4. Синтез (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоциклической кислоты этилового эфира (8)

мол% дихлорэтан (ОСЕ)

Продукт 7 (135 мг, 0,2 ммоль) был растворен в 20 мл дихлорэтана Ог18оКе для получения раствора, за которым последовало добавление катализатора Нолана (5 мг, 0,3 эквивалента) при комнатной температуре в атмосфере азота. Раствор стал багряным. Реакционная смесь была поставлена на масляную баню (50°С) и перемешивалась всю ночь.

После 10 ч реакционная смесь стала темно-коричневой. Хроматограмма (^СΜ/ΕίОΑс 1:1) показала появление нового пятна с меньшим значением К£. Реакционная смесь была сконцентрирована и очищена на силикагеле (элюент: ^СΜ/ΕίОΑс, градиент от 5:1 до 2:1) с получением продукта 8 в виде желтокоричневого порошка (75 мг, 58 %). М8 т/е 653.1 (М⁺+1).

Стадия 5. Синтез (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновой кислоты (Соединение № 101)

Соединение № 101

Под стрелочкой

Тетрагидрофуран (ТНЕ) Метанол (МеОН)

Макроциклический эфир 8 (60 мг, 0,092 ммоль) был растворен в 0,9 мл смешанного растворителя (ТГФ/МеОН/Н₂О 2:1:1), за которым следует добавление ЫОН-Н₂О (23 мг, 6 эквивалентов). Смесь перемешивается при комнатной температуре всю ночь. После 18 ч ТС.\ (ОСМ/МеОН 9:1) показало появление нового чистого пятна с меньшим К£. Рекционная смесь была сконцентрирована почти досуха и экстрагирована с разделением на два слоя 1н водной НС1 (15 мл) и дихлорметаном ОСМ (20 мл). Водный слой был еще раз экстрагирован ОСМ (2 х 10 мл). Органические слои были объединены, высушены над Nа₂8О₄ и сконцентрированы с получением соединения № 101 в виде светло-коричневого порошка (50 мг, 87%).

¹Н ЯМР (СОзОО, 400 МГц) δ 1.20-1.67 (м, 21Н), 1.70-1.83 (м, 1Н), 1.88-2.10 (м, 1Н), 2.12-2.58 (м, 4Н), 2.82 (м, 2Н), 3.60-3.80 (м, 2Н), 3.86 (м, 1Н), 4.20 (м, 1Н), 4.35 (м, 1Н), 4.54 (с, 7Н), 4.58 (м, 3Н), 5.295.41 (м, 2Н), 5.57 (м, 1Н), 7.0-7.24 (м, 4Н). М8 т/е 625.1 (М⁺+1).

Пример 1-1а.

р

Соединение .^100220122

- 65 011857 (18,48,6К,145,18К)-14-третбутоксикарбониламино-18-(3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение

АК00220122) было получено в соответствии с процедурами, описанными в примере 1-1, заменяя соединение 5 на 6 в Стадии 3. М8 т/е 625 (М⁺+1).

Пример 1-2. Синтез Соединения № 101 (Соединение АК00220042) по способу В.

Способ В

1. Первая стрелочка

О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурониум гексафторфосфат ГАТУ (НАТи) ^^диизопропилэтиламин ДИЭЛ(1)И:Л)

Диметилформамид ДМФА (ОМЕ)

2. Вторая стрелочка

1) 4н НС1 (диоксан)

2) О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурониум гексафторфосфат (НАТи) ^^диизопропилэтиламин (□И/А)

Диметилформамид ДМФА (ОМЕ)

3. Третья стрелочка

Дихлорэтан (ОСЕ)

Катализатор Нолана или катализатор Ховейда

4. Четвертая стрелочка

Карбодимид (СО!) Дихлорметан (ОСМ)

5. Пятая стрелочка

Под стрелочкой

Тетрагидрофуран (ТНЕ)

Метанол (МеОН)

Соединение № 101 было получено в соответствии с вышеописанной процедурой. Синтез макроциклического промежуточного соединения 10, описанный здесь, подобен синтезу, описанному в международной заявке РСТ/СА00/00353 (Номер публикации \СО 00/59929).

Стадия 1. Синтез 28-(этоксикарбонил-2-винилциклопропилкарбамоил)-4К-гидроксипирролидин-1карбоновой кислоты трет-бутилового эфира (3)

О-(7-азабензотриазол-1-ил)- 1,1,3,3-тетраметилурониум гексафторфосфат (НАТи) ^^диизопропилэтиламин (ОП У\) Диметилформамид ДМФА (ОМЕ)

В колбу с этил-(1К,28)(18,2К)-1-амино-2-винилциклопропилкарбоксилатом (1, 1,0 г, 5,2 ммоль),

- 66 011857 транс-№(трет-бутоксикарбонил)-4-гидрокси-Ь-пролином (2, 1,3 г, 1,1 эквивалента) и О-(7азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурониум гексафторфосфатом (НАТО) (2,7 г, 1,1 эквивалента) было добавлено 30 мл ДМФА для получения раствора. Затем раствор был охлажден до 0°С на ледяной бане, за чем последовало медленное добавление раствора Н^диизопропилэтиламина (ОША) (4,4 мл, 4 эквивалента) в ДМФА (15 мл) при перемешивании. Реакционная смесь была оставлена для нагревания до комнатной температуры и перемешивалась всю ночь.

После 16 ч реакция была завершена, как продемонстрировала жидкостная хроматография высокого давления (ЖХВД). Смесь была разбавлена этилацетатом ΕΐОАс (100 мл), промыта водой (3 х 40 мл), насыщенным раствором NаΗСОз (2 х 40 мл) и солевым раствором (2 х 40 мл), затем высушена над NаΗСО₄и сконцентрирована с получением масла темно-красного цвета. Смесь была очищена на силикагеле (элюент: ацетон/гексан 3:7), с получением чистого вещества 3 в виде желто-коричневого порошка (770 мг, 32%).

Стадия 2. Синтез 1К-{[1-(28-трет-бутоксикарбониламино-нон-8-еноил)-4К-гидроксипирролидин28-карбонил]амино}-28-винилциклопропанкарбоновой кислоты этилового эфира (9)

Соединение 3 (2,85 г, 7,7 ммоль) было растворено в 10 мл 4н НС1 (диоксан) и было оставлено при комнатной температуре в течение 90 мин для снятия ВОС защитных групп. Раствор был сконцентрирован, затем экстрагирован ацетонитрилом, затем снова дважды сконцентрирован. К светло-коричневому осадку было добавлено 4 (2.2 г, 8.1 ммоль) и НАТО (3.2 г, 8.5 ммоль), за которым следовало добавление 80 мл ДМФА в атомосфере азота. Реакция была охлаждена на ледяной бане в течение 15 мин, после которых 5 мл раствора в ДМФА ОША (5.4 мл, 30.9 ммоль) было добавлено к реакционной смеси по капле при перемешивании. Ледяная баня была оставлена для медленного повышения температуры до комнатной и реакционная смесь перемешивается в течение ночи.

После 18 ч ТСХ показала завершение реакции. Реакционная смесь была разбавлена ΕΐОАс (300 мл) и промыта водой (3х150 мл), насыщенным раствором №НСО₃ (2 х 150 мл), солевым раствором (150 мл), высушена (№₂8О₄) и растворитель был удален. Продукт был очищен на силикагеле флэшхроматографией на Вю!аде 40М (элюент = от 3 до 5% МеОН в ЭСМ) с получением 9 в виде коричневого твердого осадка (3.5 г, 87%).

Стадия 3. Синтез (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-гидрокси-2,15-диоксо-3,16диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновой кислоты этилового эфира (10)

Соединение 9 (2,6 г, 5,0 ммоль) было растворено в 500 мл дихлорэтана ϋηδοίνβ в 1 л круглодонной колбе с получением раствора. Раствор был дегазирован пробулькиванием азота в течение 1 ч. Затем катализатор Ховейда (0,25 эквивалента) был добавлен при комнатной температуре в атмосфере азота. Реакционная смесь была помещена на предварительно нагретую масляную баню (50°С) и перемешивалась всю ночь. После 16 ч реакционная смесь стала темно-коричневого цвета. ТСХ (ОСМ/БЮАс 1:1) продемонстрировала полное превращение и появление нового пятна с меньшим значением К£. Реакционная смесь была сконцентрирована и очищена на силикагеле. (Вю!аде 40 М, элюент = ОСМ/БЮАс градиент от 1:1 до 1:2), с получением продукта 10 в виде желто-коричневого порошка (0.64 г, 52 %).

¹Н ЯМР (СЭС1₃, 400 МГц) δ 1.21 (т, 1= 7.0 Гц, 3Н), 1.43 (с, 9Н), 1.20-1.50 (м, 6Н), 1.53-1.68 (м, 2Н), 1.83-1.96 (м, 2Н), 1.98-2.28 (м, 4Н), 2.60 (м, 1Н), 3.13 (уш.с, 1Н), 3.68 (м, 1Н), 3.94 (м, 1Н), 4.01-4.19 (м, 2Н), 4.48 (м, 1Н), 4.56 (уш.с, 1Н), 4.79 (м, 1Н), 5.26 (т, I = 9.4 Гц, 1Н), 5.36 (д, 1= 7.8 Гц, 1Н), 5.53 (м, 1Н), 7.19 (уш.с, 1Н). М8 т/е 494.0 (М+1).

Стадия 4. Синтез (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(3,4-дигидро-1Низохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновой кислоты этилового эфира (11)

- 67 011857

Макроциклическое промежуточное соединение 10 (110 мг, 0,22 ммоль) было растворено в дихлорметане (БСМ) (2,2 мл), за которым последовало добавление карбодиимида (СБТ) (45 мг, 0,27 ммоль) в одной порции. Реакционная смесь перемешивалась при комнатной температуре всю ночь. После 15 ч, реакция была завершена, как показала ТСХ (БСМ/МеОН 9:1). 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин (0,14 мл, 1.1 ммоль) был добавлен к реакционной смеси по каплям, и реакционная смесь перемешивалась при комнатной температуре всю ночь. После 22 ч ТСХ показала завершение реакции. Реакционная смесь была раз бавлена дихлорметаном (6 мл) и промыта 1н водной НС1 (2x2 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (2 мл), солевым раствором (2 мл), высушена (\а₂8О.|), и сконцентрирована. Продукт был очищен на силикагеле (Вю1аде 408, элюент: от 2 до 4% МеОН в дихлорметане), с получением 11 в виде бледножелтого порошка (131 мг, 90%).

Стадия 5. Соединение было гидролизовано тем же самым способом, как описано в стадии 5 примера 1-1 с получением Соединения № 101.

Следующие соединения были также получены в соответствии со способом В, описанным выше, с заменой 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на другие различные вторичные амины. Большинство аминов были приобретены коммерческим путем или являются известными в литературе соединениями и были получены, используя процедуры, описанные в: 1) 81оккег, О Е. Те1гайейгоп Бей. 1996, 37 (31), 5453-5456. 2) СЪап, Ν ^. Вюогдашс & Мей1ста1 СЪеш181гу 2000, 8, 2085-2094. 3) VессЫеШ, V. и др., 3. Мей. СЪет. 1991, 34, 2624-2633. Синтез исходных соединений для получения аминов, которые не были напрямую синтезированы в соответствии с процедурами, описанными в литературе, или специфических исходных соединений, которые не описывались в литературе ранее, приводится в каждом примере, исходя из наших лучших знаний.

Пример 1-3.

Соединение АК00226824 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино- 18-(6,7-диметокси-3,4-дигидро-1Н-изохинолин2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение АК00226824) было синтезировано в соответствии со Способом В, только 6,7-диметокси-1,2,3,4тетрагидроизохинолин был использован в стадии 4. М8 т/е 585. 2 (М⁺+1-100).

Пример 1-4:

Соединение АК00226825 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-2,15-диоксо-18-(1,3,4,9-тетрагидро-Ь-карболин2-карбонилокси)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение

АК00226825) было синтезировано в соответствии со способом В, только 2,3,4,9-тетрагидро-1Н-Ькарболин был использован в стадии 4. М8 т/е 564.2 (М⁺+1-100).

- 68 011857

Пример 1-5.

Соединение АК00291871 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-( 1,3-дигидроизоиндол-2-карбонилокси)-2,15диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение АК00291871) было синтезировано в соответствии со способом В, только 2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован в Стадии 4.

¹Н ЯМР (СБС1з, 500 МГц) δ 1.21-1.44 (м, 8Н), 1.32 (с, 9Н), 1.54-1.62 (м, 2Н), 1.78-1.88 (м, 2Н), 2.042.13 (м, 1Н), 2.16-2.23 (м, 1Н), 2.24-2.36 (м, 2Н), 2.66-2.74 (м, 1Н), 3.87-3.90 (м, 1Н), 4.15 (д, > 11.0 Гц, 1Н), 4.37-4.43 (м, 1Н), 4.61-4.77 (м, 5Н), 5.18 (т, 1=10.3 Гц, 1Н), 5.24-5.31 (м, 1Н), 5.40-5.45 (м, 1Н), 5.585.66 (м, 1Н), 7.11-7.30 (м, 4Н). М8 т/е 611.0 (М⁺+1).

Пример 1-6.

р

Соединение АК00291875 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(2,3-дигидроиндол-1-карбонилокси)-2,15диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение АК00291875) было синтезировано в соответствии со способом В, только 2,3-дигидро-1Н-индол был использован в Стадии 4. М8 т/е 610.9 (М⁺+1).

Пример 1-7.

Соединение АК00294382 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-2,15-диоксо-18-(8-трифторметил-3,4-дигидро1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение АК00294382) было синтезировано в соответствии со способом В, только 8-трифторметил1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован в Стадии 4. М8 т/е 693.0 (М⁺)

Пример 1-8.

Р

Соединение АК00294383 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-2,15-диоксо-18-(6-трифторметил-3,4-дигидро- 69 011857

1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение АК00294383) было синтезировано в соответствии со способом В, только 6-трифторметил1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован в Стадии 4.

¹Н ЯМР (500 МГц, СЭС1э): δ 7.46-7.38 (м, 2Н), 7.26-7.18 (м, 1Н), 6.98 (с, 1Н), 5.62 (к, 1Н), 5.42 (с, 1Н), 5.21-5.15 (м, 2Н), 4.78-4.60 (м, 3Н), 4.40 (с, 1Н), 4.16-4.00 (м, 1Н), 3.92-3.81 (м, 1Н), 3.80-3.60 (м, 2Н), 3.00-2.85 (м, 2Н), 2.72-2.64 (уш.с, 1Н), 2.40-1.18 (м, 20Н). Μ8: т/е 693.0 (Μ⁺).

Пример 1-9.

Соединение АК00294384 (18,4^,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(5-фтор-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение АК00294384) было синтезировано в соответствии со способом В, только 5-фторметил-1,2,3,4тетрагидроизохинолин был использован в Стадии 4.

¹Н ЯМР (500 МГц, СЭС1₃): δ 7.19-7.11 (м, 1Н), 7.05 (м, 1Н), 6.91 (т, 2Н), 5.62 (к, 1Н), 5.40 (с, 1Н), 5.24 (д, 1Н), 5.20 (т, 1Н), 4.78 (с, 1Н), 4.64-4.56 (м, 2Н), 4.42 (с, 1Н), 4.12-4.02 (м, 1Н), 3.92-3.81 (м, 1Н), 3.78-3.61 (м, 2Н), 2.84-2.80 (м, 2Н), 2.74-2.64 (м, 1Н), 2.36-2.18 (м, 2Н), 1.91-1.81 (м, 2Н), 1.64-1.54 (м, 2Н), 1.48-1.10 (м, 15Н). Μ8: т/е 643.0 (Μ⁺).

Пример 1-10.

Соединение АК00301745 (18,4^,68,148,18К)-18-(5-амино-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-14-трет-бутилоксикарбониламино-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение АК00301745) было синтезировано в соответствии со способом В, только 5-амино-1,2,3,4тетрагидроизохинолин был использован в Стадии 4. Μ8: т/е 640.1 (Μ ).

Пример 1-11.

р

Соединение АК00301749 (18,4^,68,148,18К)-18-(7-амино-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-14-трет-бутоксикарбониламино-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение АК00301749) было синтезировано в соответствии со способом В, только 7-амино-1,2,3,4тетрагидроизохинолин был использован в Стадии 4. Μ8: т/е 640.1 (Μ⁺), 641.1 (М⁺+1)

- 70 011857

Пример 1-12.

Соединение АК00304000 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-2,15-диоксо-18-(2-фениламино-6,7-дигидро-4Нтиазоло[5,4-с]пиридин-5-карбонилокси)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение АК00304000) было синтезировано в соответствии со способом В, только фенил(4,5,6,7-тетрагидро-тиазоло[5,4-с]пиридин-2-ил)амин был использован в стадии 4. М8 т/е 721.2 (М-1).

Пример 1-13.

Соединение АК00304062 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(7-хлор-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение АК00304062) было синтезировано в соответствии со способом В, только 7-хлор-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован в стадии 4. М8 т/е 659.0 (М⁺ ), 661.0 (М⁺+2)

Пример 1-14.

Соединение АК00304063 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(6-фтор-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение АК00304063) было синтезировано в соответствии со способом В, только 6-фтор-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован на Стадии 4. М8 т/е 643.0 (М⁺), 644.0 (М⁺+1)

Пример 1-15.

Соединение АК00304065 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(4,4-спироциклобутил-3,4-дигидро-1Н-изо- 71 011857 хинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АН003 04065) было синтезировано в соответствии со способом В, только 4,4спироциклобутил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован в Стадии 4.

¹Н ЯМР (400 МГц, 06-ацетон) δ 7.99 (д, 1Н), 7.57-7.66 (м, 1Н), 7.27 (т, 1Н), 7.09-7.22 (м, 2Н), 5.99 (уш.с, 1Н), 5.56 (дд, 1Н), 5.42 (уш.с, 1Н), 5.19-5.30 (м, 1Н), 4.52-4.70 (м, 1Н), 4.27-4.42 (м, 1Н), 4.17-4.27 (м, 1Н), 3.91 (дд, 1Н), 3.63-3.82 (м, 2Н), 2.22-2.51 (м, 6Н), 1.93-2.20 (м, 3Н), 1.79-1.91 (м, 1Н), 1.52-1.66 (м, 1Н), 1.16-1.50 (м, 19Н). М8 т/ζ 665.1 (М⁺+1).

Пример 1-15а.

Получение 4,4-спироциклобутил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолина

А: Тетрагидрофуран ТГФ (ΤΙ II)

В: Триэтаноламин ТЭА ^ЕА), тетрагидрофуран ТГФ (таГ)

С: 2-Амино-1-фенилпропан-1-ол (РРА)

1): Тетрагидрофуран ТГФ (ΤΙII)

A. К раствору 1-фенил-1-циклопропан карбонитрилу (2,00 г, 12,7 ммоль) в 100 мл ТГФ был добавлен 1,0 М раствор ЫА1Н₄ (19,1 мл, 19,1 ммоль) по каплям при комнатной температуре. Реакционная смесь перемешивалась при комнатной температуре в течение 15 ч, затем была медленно нейтрализована при 0°С 10 мл Н₂О и затем 10 мл 1.0н NаΟН и перемешивалась при комнатной температуре в течение 15 ч. Раствор был отфильтрован, и ТГФ был удален на роторном испарителе. Водный раствор был экстрагирован ЕЮАс и органический экстракт был промыт Н₂О и солевым раствором, высушен над №₂8Ο₄ и сконцентрирован с получением 0,70 г (34%) чистого масла, которое было использовано в следующей стадии без дальнейшей очистки.

B. К раствору С-(1-фенилциклобутил)метиламина (0,70 г, 4,34 ммоль) и триэтаноламина ΤЕΑ (0,67 мл, 4,78 ммоль) в 40 мл ТГФ при 0°С был добавлен по каплям метил хлоформиат. Реакционная смесь была перемешена при комнатной температуре в течение 15 ч. На следующий день вода и ЕЮАс были добавлены, и органический слой был отделен и промыт 1н НС1 и солевым раствором, высушен над Ν₂8Ο₄, сконцентрирован до масла и использовался напрямую в следующей стадии без дальнейшей очистки.

C. Смесь (1-фенилциклобутилметил)карбаминовой кислоты метилового эфира (0,95 г, 4,34 ммоль) и 2-амино-1-фенилпропан-1-ола (РРА) (20 мл) была поставлена на песчаную баню, предварительно нагретую до 150°С. 30 мин спустя реакционная смесь была охлаждена до комнатной температуры. После охлаждения вода была добавлена по каплям и раствор был экстрагирован дважды дихлорметаном ОСМ. Органические экстракты были промыты солевым раствором, высушены над №₂8Ο₄, сконцентрированы до чистого масла, которое использовалось напрямую в следующей стадии без дальнейшей очистки.

Ώ. К раствору 3,4-дигидро-2Н-изохинолин-1-она (0,406 г, 2,17 ммоль) в 20 мл ТГФ при 0°С был добавлен 1.0 М раствор ЫА1Н₄ (3,26 мл, 3,26 ммоль) по каплям. Реакционная смесь нагрелась до комнатной температуры и перемешивалась в течение 15 ч, затем была медленно нейтрализована при 0°С 5 мл Н₂О и затем 5 мл 1,0 н NаΟН и перемешивалась при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Раствор был отфильтрован и ТГФ был удален на роторном испарителе. Водный раствор был экстрагирован ЕЮАс, органический экстракт был промыт Н₂О и солевым раствором и высушен над №₂8Ο₄ и сконцентрирован с получением 0,21 г (56%) чистого масла, которое было использовано в следующей стадии без дальнейшей очистки.

Пример 1-16:

О=<

Соединение А1<00304066

- 72 011857 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(4,4-диметил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение АК00304066) было синтезировано в соответствии со способом В, только 4,4-диметил-1,2,3,4тетрагидроизохинолин был использован в стадии 4.

¹Н ЯМР (400 МГц, б₆-ацетон) δ 7.98 (д, 1Н), 7.39 (уш.с, 1Н), 7.09-7.24 (м, 3Н), 5.99 (уш.с, 1Н), 5.57 (дд, 1Н), 5.37-5.46 (уш.с, 1Н), 5.24 (дд, 1Н), 4.55-4.69 (м, 1Н), 4.26-4.36 (м, 1Н), 4.16-4.26 (м, 1н), 3.90 (дд, 1Н), 3.40-3.49 (м, 1Н), 2.28-2.50 (м, 4Н), 1.98-2.09 (2Н), 1.79-1.92 (м, 1Н), 1.52-1.65 (м, 3н), 1.16-1.51 (м, 22Н). М8 т/ζ 653.0 (М⁺+1).

Пример 1-16а.

4,4-диметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был получен следуя экспериментам по стадиям от А до Ό в примере 1-15а, 2-метил-2-фенилпропионитрил (получен в соответствии с Сагоп, 8.; Vаζ^иеζ, Е.; ^о]с1к, I. М. I. Ат. СЬет. 8ос. 2000,122, 712-713) был превращен в названное соединение.

Пример 1-17

Соединение АК00304067 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(4-метил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение АК00304067) было синтезировано в соответствии со способом В, только 4-метил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован в Стадии 4.

¹Н ЯМР (400 МГц, б₆-ацетон) δ 7.93-8.03 (м, 1Н), 7.04-7.28 (м, 4Н), 6.02 (уш.с, 1Н), 5.56 (дд, 1Н), 5.40 (м, 1Н), 5.23 (дд, 1Н), 4.66-4.85 (м, 1Н), 4.54-4.64 (м, 1Н), 4.34-4.54 (м, 1Н), 4.17-4.34 (м, 1Н), 3.91 (дд, 1Н), 3.57-3.78 (м, 1Н), 3.42-3.57 (м, 1Н), 2.26-2.52 (м, 4Н), 1.96-2.09 (м, 2.0), 1.77-1.92 (м, 1.0), 1.501.64 (м, 3.0), 1.13-1.50 (м, 17Н). М8 т/ζ 639.0 (М⁺+1)

Пример 1-17а.

4-Метил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был получен из 2-фенилпропиламина в соответствии с Огипе^а1б, О. Ь.; 8а11, Ό. I.; Мопп, I. А. I. Меб. СЬет. 1988, 31, 433-444.

Пример 1-18.

О

Соединение АК00304103 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(2-трет-бутиламино-6,7-дигидро-4Н-тиазоло [5,4-с]пиридин-5-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение АК00304103) было синтезировано в соответствии со способом В, только третбутил-(4,5,6,7-тетрагидротиазоло[5,4-с]пиридин-2-ил)амин был использован в Стадии 4. М8 т/е 731.2 (М⁺+1).

- 73 011857

Пример 1-19.

О

Соединение АК00304154 (18.4К.68.148.18К)-18-(2-амино-6.7-дигидро-4Н-тиазоло[5.4-с]пиридин-5-карбонилокси)-14-третбутоксикарбониламино-2.15-диоксо-3.16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение АК00304154) было синтезировано в соответствии со способом В, только 4,5,6,7тетрагидротиазоло [5,4-с]пиридин-2-иламин был использован в Стадии 4. М8 т/е 675.1 (М +1).

Пример 1-20.

Соединение АК00304158 (18.4К.68.148.18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(2-метил-6.7-дигидро-4Н-тиазоло[5.4-с]пиридин-5-карбонилокси)-2.15-диоксо-3.16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение АК00304158) было синтезировано в соответствии со Способом В, только 2-метил-4.5.6.7тетрагидротиазоло[5,4-с]пиридин был использован в Стадии 4. М8 т/е 546.2 (М⁺+1-100).

Пример 1-21.

Соединение АК00304183 (18.4К.68.148.18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(7.8-дигидро-5Н-пиридо[4.3-б]пиримидин-6карбонилокси)-2.15-диоксо-3.16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00304183) было синтезировано в соответствии со Способом В, только 5.6.7.8-тетрагидропиридо [4,3-б]пиримидин был использован в Стадии 4. М8 т/е 625.2 (М-1).

Пример 1-22.

р

Соединение АК00312023 (18,4^68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(3 ^-дигидро-Ш-изохинолин^-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадекан-4-карбоновая кислота (Соединение

- 74 011857

АК00312023) было синтезировано в соответствии со способом В, только продукт циклизации 10 в Стадии 3 был в дальнейшем восстановлен ^/КИ^^ перед следующей стадией соединения (АО 0059929, стр. 76-77). М8 т/е 625.3 (М-1).

Пример 1-23.

Соединение АК00314578 (18,4К,68,148,18К)-18-(6-амино-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)- 14-трет-бутоксикарбониламино-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00314878) был синтезирован в соответствии со способом В, только 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6иламин был использован в Стадии 4. М8 (РО8 Е8^ т/ζ 540.2 [исходный, (М⁺+1)-100 (Вос группа)].

Пример 1-24

Соединение АК00314685 (18,4К,68,148,18К)-18-(2-ацетиламино-6,7-дигидро-4Н-тиазоло[5,4-с]пиридин-5-карбонилокси)-14трет-бутоксикарбониламино-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00314685) было синтезировано в соответствии со способом В, только Ν-(4,5,6,7тетрагидротиазоло[5,4-с]пиридин-2-ил)ацетамид был использован в Стадии 4. М8 т/е 589.2 (М⁺+1-100).

Пример 1-25.

р

Соединение АК00315997 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино- 18-(5-диметиламино-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00315997) было синтезировано в соответствии со способом В, только диметил-(1,2,3,4тетрагидроизохинолин-5-ил)амин (пример 1-25а) был использован в Стадии 4. М8 т/е 668.0 (М⁺).

Пример 1-25 а.

Синтез диметил-(1,2,3,4-тетрагидро-изохинолин-5-ил)-амина описан в следующей схеме:

- 75 011857

1) (третБутилоксикарбонил)₂О-Вос₂О

3) Трифторуксусная кислота ТФК (ΤΓΑ), дихлорметан (ЭСМ)

К раствору 5-аминотетрагидроизохинолина (3,68 г, 24,8 ммоль) в 1,4-диоксане (100 мл) было добавлен 3 н \а011 (8,27 мл, 24,8 ммоль). После охлаждения до 0°С, (Вос)₂0 (5,42 г, 24,8 ммоль) в 1,4диоксане (10 мл) было добавлено по каплям и перемешивалось всю ночь при комнатной температуре. Реакционная смесь была вылита в воду и экстрагирована этилацетатом Εΐ0Αс (2х). Объединенные органические слои были промыты насыщенным водным раствором NаНС0з, водой, солевым раствором, затем высушены и сконцентрированы. Осадок был очищен на силикагеле колоночной хроматографией с получением 5.44 г (88%) желаемого Вос-защищенного продукта в виде белого осадка.

К раствору продукта по предыдущей стадии, описанной выше (0.2 г, 0.81 ммоль) в ТГФ (5 мл) был добавлен №Н при 0°С. По истечению 15 мин СНзI был добавлен, и перемешивание продолжалось всю ночь при комнатной температуре. После завершения реакционная смесь была охлаждена ледяной водой, экстрагирована Εΐ0Αс (25 мл), высушена (№₂8 0₄) и сконцентрирована. Вос группы были удалены 60% трифторуксусной кислотой-дихлорметаном ЭСМ (2 мл) при 0°С с получением 110 мг (77,5%) конечного продукта в виде светло-зеленого твердого осадка. М8: 177,1 (МН⁺).

Пример 1-26.

О

Соединение АК00315998 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино- 18-(5-хлор-1,3 -дигидроизоиндол-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[ 14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение

АК00315998) было синтезировано в соответствии со Способом В, только 5-хлор-2,3-дигидро-1Низоиндол был использован в Стадии 4.

¹Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃): δ 7.24-7.02 (м, 3Н), 6.82 (с, 1Н), 5.68-5.51 (м, 1Н), 5.36 (с, 1Н), 5.11-4.96 (м, 2Н), 4.67-4.44 (м, 5Н), 4.29-4.20 (м, 1Н), 4.20-4.11 (м, 1Н), 3.82-3.74 (м, 1Н), 2.69-2.55 (м, 1Н), 2.312.15 (м, 1Н), 2.14-2.06 (м, 1Н), 2.03 (с, 1Н), 2.01-1.86 (м, 1Н), 1.86-1.24 (м, НН), 1.22 (с, 9Н). М8: т/е 644.9 (М⁺), 646.9 (м⁺+2)

Пример 1-27.

Соединение АК00315999 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино- 18-(5,6-дихлор-1,3 -дигидроизоиндол-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00315999) было синтезировано в соответствии со способом В, только 5,6-дихлор-2,3-дигидро-1Низоиндол использовался в Стадии 4.

¹Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃): δ 7.29 (с, 1Н), 7.22 (с, 1Н), 7.06 (с, 1Н), 5.57-5.50 (м, 1Н), 5.33 (с, 1Н), 5.23-5.09 (м, 2Н), 4.73-4.65 (м, 1Н), 4.64-4.48 (м, 5Н), 4.33-4.29 (м, 1Н), 4.11-4.02 (м, 1Н), 3.82-3.74 (м,

1Н), 2.73-2.61 (м, 1Н), 2.29-2.08 (м, 3Н), 2.01 (с, 1н), 1.83-1.65 (м, 2н), 1.63-1.46 (м, 2н), 1.40-1.12 (м,

15Н). М8: т/е 678.9 (М⁺), 681 (М⁺+2)

Пример 1-28:

- 76 011857

Соединение ΑΒ00320122 (18,4Β,68,148,18Β)-14-трет-бутоксикарбониламино- 18-(4Β-метил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение ΑΒ00320122) было синтезировано в соответствии со способом В, только 4Β-метил-1,2,3,4тетрагидроизохинолин был использован в Стадии 4.

¹Н ЯМР (400 МГц, СВзОВ) δ 7.02-7.24 (м, 3Н), 5.59 (дд, 1Н), 5.30-5.44 (м, 2Н), 4.66-4.81 (м, 1Н), 4.14-4.64 (м, 3Н), 3.83-3.92 (м, 1Н), 3.58-3.81 (м, 1Н), 3.44-3.56 (м, 1Н), 2.86-3.86 (м, 1Н), 2.23-2.58 (м, 4Н), 1.87-2.13 (м, 2Н), 1.70-1.87 (м, 1Н), 1.50-1.70 (м, 3Н), 1.07-1.51 (м, 19Н), 0.80-0.96 (м, 2Н). М8 т/ζ 639.0 (М⁺+1).

Пример 1-29.

Соединение ΑΒ00320123 (18,4Β,68,148,18Β)-14-трет-бутоксикарбониламино- 18-(48-метил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение ΑΒ00320123) было синтезировано в соответствии со способом В, только 48-метил-1,2,3,4тетрагидроизохинолин был использован в Стадии 4.

¹Н ЯМР (400 МГц, СВ₃ОВ) δ 7.01-7.23 (м, 3Н), 5.58 (дд, 1Н), 5.32-5.45 (м, 2Н), 4.66-4.82 (м, 1Н), 4.12-4.64 (м, 3Н), 3.86-3.94 (м, 1Н), 3.52-3.74 (м, 1Н), 3.43-3.56 (м, 1Н), 2.88-3.85 (м, 1Н), 2.24-2.60 (м, 4Н), 1.87-2.15 (м, 2Н), 1.71-1.87 (м, 1Н), 1.52-1.70 (м, 3Н), 1.07-1.52 (м, 19Н), 0.80-0.96 (м, 2Н). М8 т/ζ 639.0 (М⁺+1)

Пример 1-30.

Соединение ΑΒ00320576 (18,4Β,68,148,18Β)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-[4-(2-метоксифенил)пиперидин-1-карбонилокси]-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение ΑΒ00320576) было синтезировано в соответствии со способом В, только 4-(2-метоксифенил)пиперидин был использован в Стадии 4. М8 т/е 583.3 (М⁺+1-100).

Пример 1-31.

- 77 011857

Соединение АК00320577 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино- 18-(6-метокси-1,3,4,9-тетрагидро-Ь-карболин-2карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00320577) было синтезировано в соответствии со способом В, только 6-метокси-2,3,4,9тетрагидро-1Н-Ь-карболин был использован в Стадии 4 М8 т/е 594.2 (М⁺+1-100).

Пример 1-32.

Соединение АК00301383 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-2,15-диоксо-18-(1-пиперидин-1-илметил-3,4дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбонилокси)-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00301383) было синтезировано в соответствии со Способом В, только 1пиперидин-1-илметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован в Стадии 4.

²Н ЯМР (500 МГц, СОэОо) δ 7.33-7.24 (м, 4Н), 7.20 (уш.с, 1Н), 6.61 (уш.с, 1Н), 5.75-5.52 (м, 2Н), 5.50-5.33 (м, 2Н), 4.63-4.43 (м, 2Н), 4.42-4.07 (м, 4Н), 3.96 (уш.с, 1 Н), 3.67-3.11 (м, 5Н), 3.06-2.88 (м, 2н), 2.86-2.74 (м, 2Н), 2.56-2.35 (м, 3Н), 2.23 (к, 1Н), 2.04-1.90 (м, 2Н), 1.89-1.52 (м, 10Н), 1.51-1.32 (м, 12Н); М8 (РО8 АРСК) т/ζ 722.3 (М⁺+1).

Пример 1-33.

Соединение АК00333842 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино- 18-(6-метокси-1-метоксиметил-3,4-дигидро-1 Низохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00333842) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 1-2, только 6-метокси-1-метоксиметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолиниум хлорид был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4. М8 (АРСЬ): т/ζ 697.2 (М-1).

Пример 1-34.

- 78 011857

Соединение АК00365349 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино- 18-(5-фтор-1-метоксиметил-3,4-дигидро-1Низохинолин-2-карбонилокси)-2,15 - диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00365349) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 1-2, только 5-фтор-1-метоксиметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолиниум хлорид был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4. М8 (АРС1-): т/ζ 685.3 (М-1).

Пример 1-35.

Соединение АК00333224 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино- 18-(1-диметиламинометил-3,4-дигидро-1Низохинолин-2-карбонилокси)-2,15 -диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00333224) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 1-2, только диметил-(1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-1-метил)амин (синтезированный в соответствии с примером 1-35а) был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4. М8 (АРС1+): т/ζ 582. 3 (МН⁺-Вос).

Пример 1-35а.

Диметил-(1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-1-илметил)амин был синтезирован как описано в примере 3-76а, только в Стадии 1, фенетиламин был использован для замены 2-(3-метоксифенил)этиламина, и в первой части Стадии 3 диметиламин был использован для замены метоксида натрия в качестве нуклеофила. Сырой продукт был использован в реакции присоединения без дальнейшей очистки.

Пример 1-36.

Соединение АК00333225 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино- 18-(1-морфолин-4-илметил-3,4-дигидро-1Н

- 79 011857 изохинолин-2-карбонилокси)-2,15 -диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00333225) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 1-2, только 1-морфолин-4-илметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин (синтезированный в соответствии с примером 1-36а) был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4. М8 (АРСЕ): т/ζ 722.3 (М-1).

Пример 1-36а.

1-Морфолин-4-илметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был синтезирован как описано в примере 376а, только в Стадии 1, фенетиламин был использован для замены 2-(3-метоксифенил )этиламина, и в первой части Стадии 3 диметиламин был использован для замены метоксида натрия в качестве нуклеофила. Сырой продукт был использован в реакции присоединения без дальнейшей очистки.

Пример 1-37.

Соединение АК00333248 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино- 18-(6-метокси-1-пиперидин-1-илметил-3,4дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15 -диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-4карбоновая кислота (Соединение АК00333248) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 1-2, только 6-метокси-1-пиперидин-1-илметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин (синтезированный в соответствии с примером 1-37а) был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4. М8 (АРСй): т/ζ 750.4 (М-1).

Пример 1-37а.

6-Метокси-1-пиперидин-1-илметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был синтезирован, как описано в примере 3-76а, только в первой части Стадии 3 пиперидин был использован для замены метоксида натрия в качестве нуклеофила. Сырой продукт был использован в реакции присоединения без дальнейшей очистки.

Пример 1-38.

Соединение АК00333276 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(6-метокси-1-морфолин-4-илметил-3,4дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15 -диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-4- 80 011857 карбоновая кислота (Соединение ΑΚ00333276) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 1-2, только 6-метокси-1-морфолин-4-илметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин (синтезированный в соответствии с примером 1-38а) был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4. М8 (ΑΓΟΙ-): т/ζ 750.3 (М-1).

Пример 1-38а.

6-Метокси-1-морфолин-4-илметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был синтезирован, как описано в примере 3-76а, только в первой части Стадии 3, морфолин был использован для замены метоксида натрия в качестве нуклеофила. Сырой продукт был использован в реакции присоединения без дальнейшей очистки.

Пример 1-39.

Соединение .-^100.33.3277 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(1-диметиламинометил-6-метокси-3,4дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-4карбоновая кислота (Соединение .-^100.333277) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 1-2, только (6-метокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-1-илметил)диметиламин (синтезированный в соответствии с примером 1-39а) был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4. М8 (ДРСН): т/ζ 712.3 (МН⁺).

Пример 1-39а.

(6-Метокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-1-илметил)диметиламин был синтезирован, как описано в примере 3-76а, только в первой части Стадии 3 диметиламин был использован для замены метоксида натрия в качестве нуклеофила. Сырой продукт был использован в реакции присоединения без дальнейшей очистки.

Пример 1-40.

N

0^0

Соединение .-^100.365.369 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-(4-фтор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоноваяк кислота (Соединение .-^100.365369) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 1-2, только 4

- 81 011857 фтор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4.

¹Η ЯМР (500 МГц, ЭМ8О (ДМСО)) δ 12.21 (уш.с, 1Η), 8.66 (уш.с, 1Η), 7.35 (к, 1Η), 7.19 (д, 1Η), 7.11 (к, 2Η), 7.03 (уш.с, 1Η), 5.51 (к, 1Η), 5.33-5.21 (м, 2Η), 4.66 (с, 4Η), 4.22 (к, 1Η), 4.24 (т, 1Η), 3.99-3.89 (м, 1Η), 3.73-3.64 (м, 1Η), 2.65-2.55 (м, 1Η), 2.28- 2.08 (м, 3Η), 1.77-1.61 (м, 2Η), 1.54-1.42 (м, 1Η), 1.42-1.03 (м, 16Η); М8 (АРСГ): т/ζ 627.3 (М-1).

Пример 1-41.

сАо

Соединение АК00371946 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-[5-(2-морфолин-4-ил-метокси)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбонилокси]-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00371946) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 1-2, только 5-(2-морфолин-4-ил-этокси)-2,3-дигидро-1Н-изоиндол (получен в соответствии с процедурами, описанными в 1. Меб. Сбет. 2002, Vо1. 45, Νο. 26, 5771, способ получения Ό, и в Вюогд. Меб. Сбет. Иен. 11 (2001) 685-688. Для Ν-Вос защищенных аминов исходное соединение ¹Η ЯМР (500 МГЦ, СЭС1₃) δ 7.13 (дд, 1Η), 6.85-6.74 (м, 2Η), 4.61 (т, 4Η), 4.10 (т, 2Η), 3.73 (т, 4Η), 2.81 (т, 2Η), 2.61-2.54 (м, 4Η), 1.51 (с, 9Η); М8 (АРСТ+): т/ζ 349.1 (М+1)) был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4. М8 (АРСЬ): т/ζ 640.3 [(М+1)-Вос].

Пример 1-42.

О^О

Соединение АК00371947 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-[5-(2-диметиламиноэтокси)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбонилокси]-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00371947) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 12, только [2-(2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-илокси)этил]диметиламин (полученные в соответствии с процедурами, описанными в б. Меб. Сбет. 2002, νο1. 45, Νο. 26, 5771, способ получения Ό, и в Вюогд. Меб. Сбет. 1,еИ. 11 (2001) 685-688. Для Ν-Вос защищенных аминов исходное соединение: ¹Η ЯМР (500 МГц, СОС1₃) δ 7.14 (дд, 1Η), 6.88-6.76 (м, 2Η), 4.61 (т, 4Η), 4.04 (т, 2Η), 2.72 (т, 2Η), 2.34 (с, 6Η), 1.50 (с, 9Η); М8 (АРСТ+): т/ζ 307.1 (М+1)) был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин в Стадии 4. М8 (АРСТ+): т/ζ 698.2 (М+1).

- 82 011857

Пример 1-43.

(18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-[5-(2-изопропиламиноэтокси)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбонилокси]-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00371948) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 1-2, только [2-(2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-илокси)этил]изопропиламин (полученные в соответствии с процедурами, описанными в I. Меб. Сйет. 2002, Уо1. 45, Ж. 26, 5771, способ получения Ό, и в Вюогд. Меб. Сйет. Ьей. 11 (2001) 685-688. Для ЖВос защищенных аминов исходное соединение: ¹Н ЯМР (500

МГц, СЭСЬ) δ 7.13 (дд, 1Н), 6.86-6.75 (м, 2Н), 4.62 (т, 4Н), 4.06 (т, 2Н), 2.99 (т, 2Н), 2.88 (септуплет, 1Н),

1.62 (уш.с, 1Н), 1.51 (с, 9Н), 1.10 (д, 6Н); М8 (АРСН): т/ζ 321.2 (М+1)) был использован для замены

1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4. М8 (АРСЬ): т/ζ 710.3 (М-1).

2. Получение соединений общей структурной формулы III

1) 4н НС1 (диоксан)

3) под стрелочкой ТГФ (ТНР)

Соединения с общей структурной формулой III были получены в соответствии с общей схемой, приведенной выше. Соединения структурной формулы Ы сначала подвергались снятию Вос защитной группы, за которым следовала нуклеофильная атака аминогруппы на электрофил, с образованием карбамата, амида или мочевины.

Пример 2-1.

Соединение АК00247310

Стадия 1. Получение (18,4К,68,148,18К)-14-амино-18-(3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонил- 83 011857 окси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновой кислоты этилового эфира.

№Вос защищенное исходное соединение (102 мг, 0,16 ммоль) было растворено в 6 мл 4н НС1 (диоксан) и оставлено при комнатной температуре в течение 90 мин. Жидкостная хроматография высокого давления продемонстрировала полное снятие Вос защитных групп. Реакционная смесь была сконцентрирована, экстрагирована ацетонитрилом и вновь дважды сконцентрирована. Полученный порошок светлокоричневого цвета был использован в следующей стадии.

Стадия 2. Получение (18,4К,68,148,18К)-14-циклопентилоксикарбониламино-18-(3,4-дигидро-1Низохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновой кислоты этилового эфира.

Тетрагидрофуран ТГФ (ТНЕ)

Триэтаноламин (ТЕА)

К раствору циклопентинола (42 мг, 0,48 ммоль) в ТГФ (16 мл) по каплям был добавлен толуольный раствор фосгена (0,42 мл, 1,9М, 0,80 ммоль). Смесь перемешивалась при комнатной температуре в течение 2 ч с образованием циклопентил хлороформиатного реагента. Реакционная смесь была сконцентрирована до половины своего объема. Затем была разбавлена ОСМ до первоначального объема и вновь концентрирована до половины объема, для того, чтобы полностью удалить избыток фосгена. Раствор полученного циклопентил хлорформиата был затем разбавлен ТГФ (16мл), охлажден до 0°С и добавлен к твердому осадку (0,16 ммоль) из Стадии 1 при 0°С. ТЕА (0,11 мл, 0,81ммоль) была затем добавлена к реакционной смеси, и смесь перемешивалась при 0°С в течение 2 ч. Как показала ЖХВД, реакция блыа завершена. Реакционная смесь была сконцентрирована, экстрагирована Е!ОАс (15 мл) и затем промыта водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и солевым раствором (10 мл каждый), высушена над Nа₂8О₄ и сконцентрирована вновь. Полученное вязкое масло желтого цвета было очищено флэшхроматографией на В1о!аде 408 (элюент = гексан/Е1ОАс 1:1) с получением желаемого продукта в виде белого хрустящего порошка (65,2 мг, 63%). М8 (МН⁺ 665,2)

Стадия 3. Получение (18,4К,68,148,18К)-14-циклопентилоксикарбониламино-18-(3,4-дигидро-1Низохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновой кислоты (Соединение АК00247310).

Затем следуют те же самые процедуры гидролиза, как описано в Стадии 5 примера 1-1.

Следующие соединения также были получены, используя процедуры, описанные выше в примере 2-1, заменяя циклопентил хлорформиат на другие электрофилы и/или Р2-тетрагидроизохинолин на другие исходные амины, как проиллюстрировано в Стадии 4 Способа В примера 1-2.

Пример 2-2.

- 84 011857

Соединение АК00294376 (18,4К,68,148,18К)-18-(3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбонилокси)- 14-метоксикарбониламино2,15 -диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение

АК00294376) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 2-1, только метил хлорформиат был использован на Стадии 2.

Пример 2-3.

Соединение АК00304074 (18,4К,68,148,18К)-14-циклопентилоксикарбониламино-18-(5-фтор-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2карбонилокси)-2.15-диоксо-3.16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00304074) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-1, только 5-фтор-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован в Стадии 4 примера 1-2. М8 т/е 583.2 (М⁺+1).

Пример 2-4.

(18,4К,68,148,18К)-14-циклопентилоксикарбониламино-2,15-диоксо-18-(8-трифторметил-3,4дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00304075) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-1, только 8-трифторметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован в Стадии 4 примера 1-2. М8 т/е 705.1 (М⁺+1).

Пример 2-5.

- 85 011857

(18,4Β,68,148,18Β)-14-циклопентилкарбониламино-18-(1,3-дигидроизоиндол-2-карбонилокси)-2,15диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение ΑΒ00304076) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-1, только 2,3дигидро-1Н-изоиндол был использован в Стадии 4 примера 1-2. М8 т/е 623.2 (М⁺+1).

Пример 2-6.

(18,4Β,68,148,18Β)-18-(3,4-дигидро-1Η-изохинолин-2-карбонилокси)-14-(2-фторэтоксикарбониламино)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение

ΑΒ00304125) было синтезировано в ссответствии с процедурами, описанными в примере 2-1, только 2фторэтанол был использован для образования хлорформиатного реагента на Стадии 2 вместо циклопентанола. М8 т/е 615.1 (М⁺+1).

Пример 2-7.

Соединение ΑΒ00304126 (18,4Β,68,148,18Β)-18-(3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-14-(тетрагидрофуран-38-илоксикарбониламино)-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение ΑΒ00304126) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 2-1, только тетрагидрофуран-38-ол был использован для образования хлорформиатного реагента в Стадии 2 вместо циклопентанола. М8 т/е 639.2 (М⁺+1).

Пример 2-8.

- 86 011857

Соединение АК00304127 (18,4К,68,148,18К)-18-(3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-14-(тетрагидрофуран-3К-илоксикарбониламино)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00304127) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 2-1, только тетрагидрофуран-3К-ол был использован для образования хлорформиатного реагента в Стадии 2 вместо циклопентанола. М8 т/е 639.2 (М⁺+1).

Пример 2-9.

Соединение АК00320002 (18,4К,68,148,18К)-18-(3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-14-(тетрагидропиран-4-илоксикарбониламино)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00320002) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 2-1, только тетрагидропиран-4-ол был использован для образования хлорформиатного реагента в Стадии 2 вместо циклопентанола. М8 т/е 653.2 (М⁺+1).

Пример 2-10.

Соединение АК00320074 (18,4К,68,148,18К)-18-(1,3-дигидроизоиндол-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-14-(тетрагидрофуран3К-илоксикарбониламино)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00320074) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-1, только 2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован на Стадии 4 примера 1-2, и тетрагидрофуран-3К-ол был использован для образования хлорформиатного реагента в Стадии 2 вместо циклопентанола. М8 т/е 625. 2 (М⁺+1).

Пример 2-11.

- 87 011857

^оЧР

Соединение АК00320075 (18,4К,68,148,18К)-18-(1,3-дигидроизоиндол-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-14-(тетрагидрофуран38-илоксикарбониламино)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00320074) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-1, только 2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован на Стадии 4 примера 1-2, и тетрагидрофуран-38-ол был использован для образования хлорформиатного реагента в Стадии 2 вместо циклопентанола. Μ8 т/е 625.2 (Μ⁺+1).

Пример 2-12.

(18,4К,68,148,18К)-18-(1,3-Дигидроизоиндол-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-14-(тетрагидрофуран38-илоксикарбониламино)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00320076) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-1, только 2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован на Стадии 4 в примере 1-2, и 2-фторэтанол был использован для образования хлорформиатного агента на Стадии 2 в примере 2-1 вместо циклопентанола. Μ8 т/е 601. 1 (М⁺+1).

Пример 2-13.

Соединение АК00320077 (18,4К,68,148,18К)-18-(1,3-дигидроизоиндол-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-14-(тетрагидропиран-4илоксикарбониламино)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00320076) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-1, только 2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован на Стадии 4 в примере 1-2, и тетрагидропиран-4-ол был использован для образования хлорформиатного агента на Стадии 2 в примере 2-1 вместо циклопентанола. Μ8 т/е 601.1 (Μ⁺+1).

Пример 2-14.

- 88 011857

Соединение АК00320445 (18,4К,68,148,18К)-18-(5,6-дихлор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-14-(тетрагидрофуран-3К-илоксикарбониламино)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00320445) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-1, только 5,6-дихлор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован на Стадии 4 в примере 1-2, и тетрагидрофуран-3К-ол был использован для образования хлорформиатного агента на Стадии 2 в примере 2-1 вместо циклопентанола. М8: т/е 693.0 (М⁺), 695.1 (М⁺+2).

Пример 2-15.

(18,4К,68,148,18К)-18-(5,6-дихлор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-14-(тетрагидрофуран-3К-илоксикарбониламино)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00320445) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-1, только 5-хлор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован на Стадии 4 в примере 1-2, и тетрагидрофуран-3К-ол был использован для образования хлорформиатного агента на Стадии 2 в примере

2-1 вместо циклопентанола.

¹Н ЯМР (500 МГц, СП₃ОЭ): δ 7.38 (с, 1Н), 7.32-7.28 (м, 2Н), 7.22 (д, 1Н), 7.10 (уш.с, 1Н), 5.56-5.50 (к, 1Н), 5.42-5.38 (т, 1н), 5.35 (уш.с, 1Н), 4.80-4.48 (м, 6Н), 4.44 (м, 1Н), 4.16 (д, 1Н), 3.84 (дд, 1Н), 3.783.69 (м, 1Н), 3.68-3.60 (м, 1Н), 3.50 (т, 1Н), 2.55-2.36 (м, 3Н), 2.21-2.12 (м, 1Н), 1.98-1.85 (м, 1Н), 1.72-1.62 (м, 2Н), 1.61-1.51 (м, 2Н), 1.50-1.20 (м, 9Н). М8: т/е 659.1 (М⁺), 661.1 (М⁺+2).

Пример 2-16.

АК00248689

Синтез (18,4К,68,148,18К)-14-(циклопентанкарбониламино)-18-(3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновой кислоты (Соединение АК248689).

Циклопентил карбоновая кислота была сначала добавлена к Ρ8-ΤΓΡ (4-гидрокси-2,3,5,6тетрафторбензамидометил полистирол) смоле (приобретенной у Агдопаи! ТесЪпо1од1ез) с образованием активного эфира. Активированный эфир на смоле (26 мг, 1,16 ммоль/г, 0,03 ммоль) оставлен набухать в 0,5 мл хлороформа сначала, за которым последовало добавление М-Ρ карбонатной смолы (крупнопористая смола-триэтиламмониум метилполистирол карбонат) (приобретенной у Агдопаи! ТесИпо1од1е8, 300 мг, 2,5 ммоль/г, 0,75 ммоль). К смеси этих смол был добавлен 0.5 М раствор в хлороформе макроцикли

- 89 011857 ческого соединения (15 мг, 0,02 ммоль), и реакционная смесь перемешивалась всю ночь при комнатной температуре. Как показала ЖХВД, реакция была завершена через 16 ч. Реакционная смесь была отфильтрована и затем сконцентрирована с получением чистого ^ацилированного продукта, который затем был гидролизован, следуя процедурам гидролиза, как описано в Стадии 5 примера 1-1, с получением желаемого продукта АК248689 в виде белого твердого вещества. (12.5 тд, 88 %). М8 (АРС1+): т/ζ 621.3 (МН⁺).

Пример 2-17.

О

Соединение АК00248687 (18,4К,68,148,18К)-18-(3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)- 14-(2,2-диметилпропиониламино)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение

АК00248687) было синтезировано в соответствии с процедурами, как описано в примере 2-16, только трет-бутил карбоновая кислота была сначала добавлена к Р8-ТЕР смоле. М8 (АРС1+): т/ζ 609.3 (МН+).

Пример 2-18.

Соединение АК00248688 (18,4К,68,148,18К)-18-(3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-14-(изобутириламино)-2,15диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00248688) было синтезировано в соответствии с процедурами, как описано в примере 2-16, только изопропил карбоновая кислота была сначала добавлена к Р8-ТЕР смоле. М8 (АРС1+): т/ζ 595.3 (МН⁺).

Пример 2-19.

Соединение АК00298989

Синтез (18,4К,68,148,18К)-14-(2-трет-бутоксикарбониламино-3-метил-бутириламино)-18-(3,4дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4карбоновой кислоты (Соединение АК298989)

- 90 011857

Дихлорметан, комнатная температура (ЭСМ, гГ)

14-Амино-18-(3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15 -диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,б]нонадек-7-ен-4-карбоновой кислоты этиловый эфир (120 мг, 217 мкмоль) и Ν-α-Вос-Ь-валин Ν-гидроксисукцинамидный эфир (96 мг, 300 мкмоль) были перемешаны вместе в 1,1 мл дихлометана в течение 14 ч. Растворитель был удален под вакуумом и этилацетат был добавлен. Фазы были разделены и водный слой был промыт дважды 500 мкл этилацетата. Объединенные органические фазы были высушены над Мд80₄ и растворители были удалены под вакуумом для получения желаемого соединения в виде белого твердого вещества. (132 мг, 81%). М8 т/ζ 752.2 (МН⁺).

Пример 2-20.

(18,4К,68,148,18К)-18-(3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)- 14-{3-метил-2-[(пиразин-2карбонил)амино] бутириламино}-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00301338) было синтезировано в соответствии с теми же процедурами, как описано в примере 2-19, только 3-метил-2-[(пиразин-2-карбонил)амино]бутановой кислоты 2,5-диоксопирролидин-1-иловый эфир был использован для замены Ν-α-Вос-Ь-валин Ν-гидроксисукцинамидного эфира. М8 т/е 730.3 (М^+1).

Пример 2-21.

Соединение АК00304072 (18,4К,68,148,18К)-18-(3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)- 14-{2-[(6-диметиламинопиридин-3-карбонил)амино]-3-метилбутириламино}-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен4-карбоновая кислота (Соединение АК00304072) было синтезировано в соответствии с процедурами, как описано в примере 2-19, только 2-[(6-диметиламинопиридин-3-карбонил)амино]-3-метилбутановой кислоты 2,5-диоксопирролидин-1-иловый эфир был использован для замены Ν-α-Τ-Вос-Ь-валин Νгидроксисукцинамидного эфира.

¹Н ЯМР (СО₃0О, 500 МГц): δ 8.69 (с, 1Н), 8.46 (с, 1Н), 8.37-8.39 (м, 1Н), 8.14-8.21 (м, 2Н), 7.07-7.18 (м, 5Н), 5.63 (к, 1Н), 5.36-5.42 (м, 2Н), 4.49-4.56 (м, 3 Н), 4.42-4.45 (м, 1 Н), 4.31-4.32 (м, 1Н), 3.92-3.95 (м, 1Н), 3.65-3.72 (м, 2Н), 2.85-2.91 (м, 2Н), 2.33-2.55 (м, 4Н), 1.93-2.03 (м, 3Н), 1.61-1.68 (м, 3Н), 1.27-1.52

- 91 011857 (м, 12Н), 0.86-0.96 (м, 8 Н). М8 т/е 770.4 (М-1).

Пример 2-22.

Соединение А1\00304073 (18,4Κ,68,148,18Κ)-18-(3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбонилокси)- 14-{3-метил-2-[(пиридин-3карбонил)амино]бутириламино}-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АЯ00304073) было синтезировано в соответствии с процедурами, как описано в примере 2-19, только 3-метил-2-[(пиридин-3-карбонил)амино]бутановой кислоты 2,5-диоксопирролидин1-иловый эфир был использован для замены Ν-α-Бос-Ь-валин Ν-гидроксисукцинамидного эфира. М8 т/е 729.2 (М⁺+1).

Пример 2-23.

Соединение А1\00298990 (18,4Κ,68,148,18Κ)-14-(2-амино-3 -метилбутириламино)-18-(3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (соединение 298990) было получено в соответствии с теми же самыми процедурами, как изложено в Стадии 1 примера 2-1. М8 т/е 624.2 (М⁺+1).

Пример 2-24.

Соединение А1\00294378

Синтез (18,4Κ,68,148,18Κ)-14-(3-циклопентилуреидо)-18-(3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение А12294378)

- 92 011857

N.N-диизопропилэтиламин (1)11/А), дихлорметан (1Х’М1)

Г идрохлорид 14-амино-2,15-диоксо-18-(8-трифторметил-3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбонилокси)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновой кислоты этилового эфира (49 мг, 74 мкмоль), диизопропилэтиламин (29 мг, 222 мкмоль) и циклопентил изоцианат (25 мг, 222 мкмоль) были растворены в 375 мкл дихлорметана и перемешивались при 19°С в течение 1 ч. Реакционная масса была перенесена на С18 испарительную колонку и элюирована водой/ацетонитрилом (10 до 100%), содержащим 0,1% трифторуксусную кислоту для получения названного продукта в виде твердого белого вещества (42 мг, 77%). М8 т/ζ 732.2 (МН⁺).

Пример 2-25.

р

Соединение АК00294377 (18,4К,68,148,18К)-14-(3 -трет-бутилуреидо)-18-(3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00294377) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-24, только третбутил изоцианат был использован вместо циклопентил изоцианата в прцедуре примера 2-24. М8 т/е 624.1 (М⁺+1).

Пример 2-26.

Соединение АК00304077 (18,4К,68,148,18К)-14-(3 -циклопентилуреидо)- 18-(5-фтор-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00304077) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-24, только 5-фтор-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2. М8 т/е 654.2 (М⁺+1).

Пример 2-27.

- 93 011857

Соединение АК00304078 (18,4К,68,148,18К)-14-(3-циклопентилуреидо)-2,15-диоксо-18-(8-трифторметил-3,4-дигидро-1Низохинолин-2-карбонилокси)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00304078) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 224, только 8-трифторметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2. М8 т/е 704. 1 (М⁺+1).

Пример 2-28.

(18,4К,68,148,18К)-14-(3 -циклопентилуреидо)-18-(1,3 -дигидроизоиндол-2-карбонилокси)-2,15диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00304079) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-24, только 2,3дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4 примера 12. М8 т/е 622.2 (М⁺+1).

Пример 2-29.

Соединение АК00320078 (18,4К,68,148,18К)-14-(3-трет-бутилуреидо)-18-(1,3-дигидроизоиндол-2-карбонилокси)-2,15диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00320078) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-24, только 2, 3дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4 примера 12 и трет-бутилизоцианат был использован для замены циклопентилизоцианта в процедурах примера 224. М8 т/е 610.1 (М⁺+1).

Пример 2-30.

- 94 011857

Соединение АК00320221 (18,4К,68,148,18К)-18-(3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-14-[3-(тетрагидрофуран-3-ил)уреидо]-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00320221) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-24, только 3-изоцианатотетрагидрофуран был использован для замены циклопентилизоцианата в процедуре примера 2-24. М8 т/е 638.2 (М⁺+1).

Пример 2-31.

Соединение АК00320449 (18,4К,68,148,18К)-14-(3-трет-бутилуреидо)-18-(5-хлор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбонилокси)2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение

АК00320449) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-24, только 5-хлор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4 примера 1-2 и трет-бутил изоцианат был использован для замены циклопентилизоцианта в процедурах примера 2-24.

¹Н ЯМР (500 МГц, СП₃ОЭ): δ 7.34 (с, 1Н), 7.28-7.25 (м, 2Н), 7.24 (с, 1Н), 7.20 (с, 1Н), 5.51 (м, 2Н), 5.40 (с, 1Н), 4.73-4.60 (м, 3Н), 4.53 (т, 1Н), 4.38 (д, 1Н), 4.28 (д, 1Н), 3.98 (дд, 1Н), 2.43 (м, 2Н), 2.38-2.30 (м, 1Н), 2.12-2.00 (м, 2Н), 1.81-1.70 (м, 1Н), 1.64-1.56 (м, 3Н), 1.48-1.20 (м, 8н), 1.18 (с, 9Н). М8: т/е 644.0 (М⁺), 645.9 (М⁺+2). Пример 2-32.

(18,4К,68,148,18К)-14-(3-трет-бутилуреидо)-18-(5,6-дихлор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбонилокси)2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение

АК00320450) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-24, только 5,6-дихлор-2,3-дигидро-1 Н-изоиндол был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4 примера 1-2 и трет-бутилизоцианат был использован для замены циклопентилизоцианта в процедурах примера 2-24.

¹Н ЯМР (500 \1ΙΙζ, СП₃ОЭ): δ 7.50 (с, 1Н), 7.38 (с, 1Н), 5.56 (к, 1Н), 5.42-5.38 (м, 2Н), 4.72-4.61 (м, 4Н), 4.55 (т, 1Н), 4.34 (дд, 1Н), 4.28 (д, 1Н), 3.92 (дд, 1н), 2.45-2.32 (м, 2н), 2.32-2.18 (м, 1Н), 2.08-2.00 (м,

- 95 011857

1Н), 1.75-1.68 (м, 1Н), 1.63-1.54 (м, 3Н), 1.50-1.22 (м, 8Н), 1.18 (с, 9Н). М8: т/е 678.0 (М⁺), 680.0 (М⁺+2). Пример 2-33.

Соединение АК00365381 (18,4К.68,148,18К)-14-циклопентилоксикарбониламино- 18-(5-фтор-1-метоксиметил-3,4-дигидро-1 Низохинолин-2-карбонилокси)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,б]нонадек-7-ен-4-карбоновая кислота (Соединение АК00365381) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 2-1, только 5-фтор-1-метоксиметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолиниум хлорид был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4 примера 1-2. М8 (АРС!-): т/ζ 697.4 (М-1).

3. Получение соединений с общей структурной формулой IV

Карбодиимид (СЭ1)

Диметилформамид ДМФА (ЭМГ)

Соединения с общей структурной формулой IV были получены в соответствии со схемой, приведенной выше (1. Кйап е1 а1., Вюогд. & Меб. Сйет. Ьей. , 1997, 7 (23), 3017-3022. 2. Международная заявка РСТ/и802/39926, МО 03/053349).

Пример 3-1.

Соединение АК00261408

Синтез (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфонаминокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек7-ен-18-илового эфира (АК00261408)

- 96 011857

Карбодиимид (СОЦ

Диметилформамид ДМФА (ОМЕ)

7,11-диазабицикло [5.4.0]ундек-11-ен

Макроциклическая кислота соединение №101 (7 мг, 0.011 ммоль) было растворено в 0,1 мл ДМФА, за которым последовало добавление карбодимида СО! (1,8 мг, 0.011 ммоль). Смесь перемешивалась при 40°С на масляной бане в течение 1 ч. Затем циклопропилсульфонамид (2,0 мг, 0,017 ммоль) был добавлен к реакционной смеси, за которым последовало добавление 7,11-диазабицикло[5.4.0]ундек-11-ена ΏΒϋ (1,7 мг, 0,011 ммоль). Реакционная смесь перемешивалась при 40°С всю ночь. После 14 ч с помощью сочетания жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии было продемонстрировано завершение реакции. Реакционная смесь была охлаждена до комнатной температуры, разделена между 2 мл ЭА и 2 мл 5% НС1 (водный). Органический слой был промыт водой, бикарбонатом натрия (2 мл), затем высушен (№₂8О₄). Полученный продукт был очищен на Вю1аде 12М (элюент = ОСМ:МеОН 20:1), с получением АК00261408 (4,2 мг, 52%).

¹Н ЯМР (СЭС1₃, 500 МГц): δ 0.80-2.10 (м, 25Н), 2.20-2.27 (м, 1Н), 2.37-2.59 (м, 3Н), 2.84 (м, 1Н), 3.60-3.70 (м, 1Н), 3.82-3.90 (м, 1Н), 4.20-4.30 (м, 2Н), 4.45-4.70 (м, 5Н), 4.95-5.05 (м, 2Н), 5.30-5.48 (м, 2Н), 5.74 (м, 1Н), 6.74 (м, 1Н), 7.0-7.23 (м, 4Н). М8 т/е 728.0 (М⁺Н).

Пример 3-2.

Соединение АК00261407 (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-2,15-диоксо-4-(пропан-2-сульфониламинокарбонил)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен18-ил эфир (Соединение АК00261407) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-1, только изопропил сульфонамид был использован для замены циклопропил сульфонамида на стадии присоединения. М8 т/е 728.4 (М-1).

Пример 3-3.

Соединение АК00254906 (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-метансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение АК00254906) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-1, только метил сульфонамид был использован для замены циклопропил сульфонамида на стадии присоединения ¹Н ЯМР (СЭС1₃, 500 МГц): δ 1.20-1.52 (м, 16Н), 1.54-1.98 (м, 5Н), 2.20-2.30 (м, 1Н), 2.38-2.46 (м,

- 97 011857

1Н), 2.47-2.59 (м, 3Н), 2.84 (м, 1Н), 3.18 (с, 3Н), 3.56-3.70 (м, 1Н), 3.82-3.90 (м, 1Н), 4.22-4.33 (м, 2Н), 4.47-4.69 (м, 4Н), 4.90-5.10 (м, 2Н), 5.47 (уш.с, 1Н), 5.74 (м, 1Н), 6.74 (м, 1Н), 7.03-7.23 (м, 4Н). М8 т/е 701.9 (М⁺), 602.2 (родственный, МН^ШоС группа).

Пример 3-4.

(18,4Β,68,148,18Β)-3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 4-(бутан-1-сульфониламинокарбонил)-14-трет-бутоксикарбониламино-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7ен-18-иловый эфир (Соединение ΑΒ00261409) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-1, только н-бутил сульфонамид был использован для замены циклопропил сульфонамида на стадии присоединения ¹Н ЯМР (СПС1₃, 500 МГц): δ 0.80-1.03 (м, 7Н), 1.20-2.10 (м, 22Н), 2.20-2.60 (м, 4Н), 2.84 (м, 1Н), 3.20 (м, 1Н), 3.44 (м, 1Н), 3.65 (м, 1Н), 3.80-3.95 (м, 1Н), 4.20-4.34 (м, 2Н), 4.50-4.65 (м, 4н), 4.95-5.05 (м, 1Н), 5.30-5.39 (м, 1Н), 5.44-5.49 (м, 1Н), 5.74 (м, 1Н), 6.74 (м, 1Н), 7.0-7.23 (м, 4Н). М8 т/е 743.3 (М⁺, АРСГ).

Пример 3-5.

Соединение АΒ00282131 (18,4Β,68,148,18Β)-3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-циклопентилоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек7-ен-18-иловый эфир (Соединение АΒ00282131) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 2-1 и 3-1. М8 т/е 738.4 (М-1).

Пример 3-6.

Соединение АΒ00294381 (18,4Β,68,148,18Β)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение АΒ00294381) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-5 и 3-1.

¹Н ЯМР (СПС1₃, 500 МГц): δ 0.89-2.08 (м, 25Н), 2.21-2.28 (м, 1Н), 2.41-2.49 (м, 1Н), 2.51-2.61 (м, 2Н), 2.91 (м, 1Н), 3.83 (м, 1Н), 4.21 (м, 1Н), 4.40 (д, 1= 11.7 Гц, 1Н), 4. 53-4.80 (м, 5Н), 4.95-5.04 (м, 2Н), 5.47 (уш.с, 1Н), 5.72 (м, 1Н), 6.77 (м, 1Н), 7.16 (м, 1Н), 7.23-7.31 (м, 3Н). М8 т/е 712.3 (аРСГ, М-Н).

Пример 3-7.

- 98 011857

Соединение АК00298996 (18,4К,68,148,18К)-5-фтор-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00298996) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 3-1, только 5-фтор-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4 примера 1-2.

¹Н ЯМР (400 МГц, СОСЬ): δ 10.05 (с, 1Н), 8.12 (с, 1Н), 7.04 (с, 1Н), 6.84-6.73 (м, 2Н), 6.70 (с, 1Н), 5.65 (к, 1Н), 5.40 (с, 1Н), 4.59 (м, 2Н), 4.54-4.40 (м, 3Н), 4.30- 4.10 (м, 2Н), 3.82-3.74 (м, 1Н), 3.72-3.51 (м, 2Н), 2.92-2.68 (м, 3Н), 2.55-2.30 (м, 3Н), 2.21-2.15 (м, 1Н), 2.00-1.60 (м, 3Н), 1.40-0.75 (м, 18Н). М8: т/е 746.0 (М⁺).

Пример 3-8.

Соединение АК00298997 (18,4К,68,148,18К)-8-трифторметил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-третбутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00298997) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 3-1, только 8-трифторметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4 примера 1-2.

¹Н ЯМР (500 МГц, СЭзОЭ): δ 7.55 (дд, 1Н), 7.42 (дд, 1Н), 7.35 (т, 1Н), 5.71-5.61 (м, 1Н), 5.40 (м, 1Н), 4.60 (с, 1Н), 4.52 (м, 1Н), 4.42 (м, 1Н), 4.15 (м, 1Н), 3.91 (м, 1Н), 3.78-3.62 (м, 2Н), 3.00-2.82 (м, 3Н), 2.582.52 (м, 3н), 2.51-2.32 (м, 2Н), 1.86-1.56 (м, 3Н), 1.41 (м, 2Н), 1.32-1.21 (м, 5Н), 1.04-0.98 (м, 14Н). М8: т/е 795.9 (М⁺).

Пример 3-9.

Соединение АК00301746 (18,4К,68,148,18К)-7-хлор-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00301746) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 3-1, только 7-хлор-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина в Стадии 4 примера 1-2.

¹Н ЯМР (400 МГц, СЭС1₃): δ 10.10 (с, 1Н), 7.08 (д, 1Н), 7.02-6.96 (м, 2Н), 6.60 (д, 1Н), 5.64 (к, 1Н), 5.40 (с, 1Н), 4.92-4.41 (м, 2Н), 4.55-4.40 (м, 3Н), 4.28-4.12 (м, 2Н), 3.82-3.75 (м, 1Н), 3.65-3.46 (м, 3Н), 2.88-2.80 (м, 1Н), 2.78-2.56 (м, 2Н), 2.52-2.42 (м, 1Н), 2.38-2.30 (м, 1Н), 2.21-2.12 (к, 1Н), 1.82-1.74 (м, 2н), 1.45-1.12 (м, 16Н), 1.10-0.98 (м, 2Н), 0.90-0.75 (м, 2Н). М8 т/е 761.9(М⁺).

Пример 3-10.

- 99 011857

Соединение АК00301747 (18,4К,68,148,18К)-6-трифторметил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00301747) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 3-1, только 6-трифторметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 в примере 1-2.

' Н ЯМР (500 МГц, СПэОО): δ 7.44 (м, 2Н), 7.38-7.30 (м, 1Н), 7. 28-7.24 (м, 1Н), 5.65 (к, 1Н), 5.40 (м, 1Н), 5.08 (м, 1Н), 4.56 (уш.с, 2Н), 4.60-4.50 (м, 1Н), 4.48 (м, 1Н), 4.15 (д, 1Н), 3.88 (д, 1Н), 3.75-3.67 (м, 2Н), 2.93-2.82 (м, 3Н), 2.66-2.54 (м, 1Н), 2.52-2.44 (м, 1Н), 2.42-2.40 (м, 2Н), 1.91-1.76 (м, 2Н), 1.74-1.70 (дд, 1Н), 1.64-1.58 (м, 1Н), 1.54-1.36 (м, 4Н), 1.34-1.25 (м, 12Н), 1.50-1.20 (м, 2Н), 1.00-0.70 (м, 1Н), 0.520.34 (м, 1Н). М8: т/е 795.9 (М⁴).

Пример 3-11.

Соединение АК00301751 (18,4К,68,148,18К)-6-фтор-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00301751) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 3-1, только 6-фтор-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 в примере 1-2.

'Н ЯМР (500 МГц, СЭзОЭ): δ 7.21-7.02 (м, 1Н), 6.92 (м, 2Н), 6.92 (м, 2Н), 5.68 (к, 1Н), 5.40 (м, 1Н), 5.08 (т, 1Н), 4.58 (м, 2Н), 4.45 (м, 1Н), 4.12 (д, 1Н), 3.88 (д, 1Н), 3.78-3.60 (м, 3Н), 2.86-2.72 (м, 3Н), 2.712.61 (м, 1Н), 2.52-2.42 (м, 1Н), 2.41-2.34 (м, 1Н), 1.88-1.76 (м, 2Н), 1.74-1.70 (м, 1Н), 1.64-1.58 (м, 1Н), 1.56-1.38 (м, 2Н), 1.37-1.24 (м, 14Н), 1.13-1.04 (м, 2Н), 1.02-0.89 (м, 1Н), 0. 88-0.82 (м, 1Н). М8: т/е 746.0

(18,4К,68,148,18К)-5-фтор-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-(3-циклопентилуреидо)-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7ен-18-иловый эфир (Соединение АК00304080) было синтезировано в соответствии процедурами, опи

- 100 011857 санными в примерах 1-2, 2-24 и 3-1, только 5-фтор-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2.

Пример 3-13.

Соединение АК00304081 (18,4К,68,148,18К)-8-трифторметил-3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-(3-циклопентилуреидо)-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00304081) был синтезирован в соответствии процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-24 и 3-1, только 8-трифторметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2. М8 т/е 807.2 (М⁺+1).

Пример 3-14.

Соединение АК00304082 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-(3-циклопентилуреидо)-4циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение АК00304082) был синтезирован в соответствии процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-24 и 3-1, только 2,3-дигидроизоиндол был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2. М8 т/е 725.2 (М⁺+1).

Пример 3-15.

Соединение АК00304161 (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 4-циклопропансульфониламинокарбонил-14-(2-фторэтоксикарбониламино)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7ен-18-иловый эфир (Соединение АК00304161) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-1 и 3-1, только 2-фторэтанол был использован для образования хлорформиатного реагента на Стадии 2 в примере 2-1 вместо циклопентанола. М8 т/е 718.1 (М⁺+1).

Пример 3-16.

- 101 011857

Соединение АК00304162 (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-14-(тетрагидрофуран-38-илоксикарбониламино)-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00304162) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-1 и 3-1, только тетрагидрофуран-38-ол был использован для образования хлорформиатного реагента на Стадии 2 в примере 2-1 вместо циклопентанола. Μ8 т/е 742.1 (Μ⁺+1).

Пример 3-17.

Соединение АК00304163 (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-14-(тетрагидро-фуран-3К-илоксикарбониламино)-3,16-диазатрицикло [14.3. 0.0^4,6] нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00304163) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-1 и 3-1, только тетрагидрофуран-3К-ол был использован для образования хлорформиатного реагента на Стадии 2 в примере 2-1 вместо циклопентанола.

¹Н ЯМР (б⁶-Бензол, 500 МГц): δ 10.53 (с, 1Н), 6.78-6.96 (м, 4Н), 5.83-5.90 (м, 1Н), 5.66 (к, 1Н), 5.185.21 (м, 1Н), 5.13 (уш.с, 1Н), 5.04 (уш.с, 1Н), 4.41-4.87 (м, 3Н), 3.85-4.05 (м, 4Н), 3.67-3.74 (м, 1Н), 3.463.53 (м, 3Н), 3.23-3.34 (м, 1Н), 2.80-2.85 (м, 1Н), 2.34-2.59 (м, 4Н), 1.84-1.99 (м, 4Н), 0.98-1.60 (м, 14Н), 0.42-0.47 (м, 1Н), 0.27-0.32 (м, 1Н). Μ8 т/е 741.2 (Μ-1).

Пример 3-18.

Соединение АК00311814 (18,4К,68,148,18К)-2-фениламино-6,7-дигидро-4Н-тиазоло[5,4-с]пиридин-5-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00311814) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 3-1, только фенил-(4,5,6,7-тетрагидротиазоло[5,4-с]пиридин-2-ил)амин был спользован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 в пимере 1-2. Μ8 т/е 826.2 (М⁺+1).

Пример 3-19.

- 102 011857

Соединение ΑΚ00311815 (18,4К,68,148,18К)-1 -пиперидин-1-илметил-3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбоновая кислота 14трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло 14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение ΑΚ00311815) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в пимерах 1-2 и 3-1, только 1-пиперидин-1-илметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2.

¹Н ЯМР (500 МГц, СО₃ОО) δ 8.94 (д, 1Н), 7.59 (с, 1Н), 7.31-7.23 (м, 3Н), 7.22-7.15 (м, 2Н), 5.74-5.64 (м, 2Н), 5.47 (уш.с, 1Н), 5.06 (т, 1Н), 4.54 (дт, 1Н), 4.40-4.17 (м, 4Н), 4.11-4.04 (м, 1Н), 3.96-3.88 (м, 1Н), 3.75-3.40 (м, 5Н), 3.14-2.32 (м, 7Н), 2.05 (дд, 1Н), 1.99-1.68 (м, 5Н), 1.65-0.95 (м, 24Н); М8 (РО8 Е8^ т/ζ 825.4 (М⁺).

Пример 3-20.

Соединение .ΑΙΟ0312024 (18,4К,68,148,18К)-4,4-спироциклобутил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло 14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение .Α100312024) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 3-1, только 4,4-спироциклобутил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован вместо 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 в примере 1-2.

¹Н ЯМР (400 МГц, СО₃ОО) δ 7.54-7.60 (м, 1Н), 7.26 (дд, 1Н), 6.97-7.21 (м, 1Н), 5.66 (дд, 1Н), 5.375.48 (м, 1Н), 5.11 (дд, 1Н), 4.58 (с, 2Н), 4.39 (т, 3Н), 4.11-4.26 (м, 1Н), 3.77-3.96 (м, 1Н), 3.87 (!, 3Н), 3.603.70 (м, 1Н), 2.83-2.93 (м, 1Н), 2.23-2.68 (м, 6Н), 1.70-2.23 (м, 7Н), 1.18-1.69 (м, 18Н), 0.81-1.12 (м, 3Н). М8 т/ζ 767.9 (М⁺+1)

Пример 3-21.

Соединение .ΑΙΟ0312025 (18,4К,68,148,18К)-4,4-дметил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение .-\100312025) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 3-1, только 4,4-диметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2.

- 103 011857 ¹Н ЯМР (400 МГц, СЭзОЭ) δ 7.31-7.40 (м, 1Н), 6.97-7.23 (м, 3Н), 5.67 (дд, 1Н), 5.34-5.49 (м, 1Н), 5.09 (дд, 1Н), 4.64 (с, 1Н), 4.50-4.61 (м, 1Н), 4.33-4.44 (м, 3Н), 4.11-4.24 (м, 1.0), 3.82-3.95 (м, 3Н), 3.363.55 (м, 2Н), 2.84-2.94 (м, 1Н), 2.25-2.69 (м, 4Н), 1.68-2.24 (м, 4Н), 1.15-1.68 (м, 23Н), 0.81-1.15 (м, 3Н). М8 т/ζ 756.0 (М⁺+1).

Пример 3-22.

О=/

Соединение АК00312026 (18,4К,68,148,18К)-4-метил-3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00312026) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 3-1, только 4-метил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2.

¹Н ЯМР (400 МГц, СП₃ОП) δ 7.76 (с, 1Н), 6.98-7.24 (м, 3Н), 5.67 (дд, 1Н), 5.2-5.51 (м, 1Н), 5.04-5.15 (дд, 1Н), 4.28-4.63 (м, 5Н), 4.10-4.24 (м, 1Н), 3.81-3.96 (м, 3Н), 3.37-3.78 (м, 2Н), 2.83-3.06 (м, 2Н), 2.542.71 (м, 1Н), 2.25-2.54 (м, 3Н), 1.69-1.94 (м, 3Н), 1.16-1.69 (м, 20Н), 0.81-1.15 (3н). М8 т/ζ 742.0 (М⁺+1).

Пример 3-23.

Соединение АК00314635 (18,4К,68,148,18К)-4,4-спироциклобутил-3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 4циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-14-(тетрагидрофуран-3-илоксикарбониламино)-3,16диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00314635) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-1 и 3-1, только 4,4-спироциклобутил-1,2,3,4тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2, и тетрагидрофуран-3К-ол был использован для замены циклопентанола на Стадии 2 в примере 2-1 с образованием хлорформиатных реагентов.

¹Н ЯМР (500 МГц, СП₂С1₂) δ 10.24-10.29 (с, 1Н), 7.49-7.55 (м, 1Н), 7.24 (дд, 1Н), 7.14 (дд, 1Н), 7.04 (дд, 1Н), 6.81 (д, 1Н), 5.71 (дд, 1Н), 4.95 (дд, 1н), 4.90 (уш.с, 1Н), 4.48-4.59 (м, 3н), 4.17-4.30 (м, 2Н), 3.513.74 (м, 3Н), 3.51-3.72 (6н), 2.80-2.86 (м, 1Н), 2.36-2.54 (м, 3Н), 2.10-2.33 (м, 4Н), 1.80-2.10 (м, 6Н), 1.241.80 (м, 7Н), 0.65-1.24 (м, 10Н). М8 т/ζ 741.2 (М⁺+1)

Пример 3-24.

Соединение АК00314654

- 104 011857 (18,4Κ,68,148,18Κ)-4,4-диметил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-14-(тетрагидрофуран-38-илоксикарбониламино)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АΚ00314654) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-1 и 3-1, только 4,4-диметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2 и тетрагидрофуран-38-ол был использован для замены циклопентанола на Стадии 2 в примере 2-1 с образованием хлорформиатных реагентов.

¹Н ЯМР (500 МГц, СЭ₂С1₂) δ 8.51-8.64 (уш.с, 1Н), 7.26-7.36 (м, 1Н), 7.09-7.19 (м, 2Н), 6.98-7.08 (м, 1Н), 5.70 (дд, 1Н), 4.95 (дд, 1Н), 4.83 (д, 1Н), 4.44-4.72 (м, 3Н), 4.17-4.30 (м, 2Н), 3.25-3.91 (м, 9Н), 2.802.86 (м, 1Н), 2.35-2.55 (м, 4Н), 2.13-2.34 (м, 4Н), 1.91-2.07 (м, 2Н), 1.80-1.90 (м, 2Н), 1.66-1.80 (м, 2Н), 1.51-1.63 (м, 2Н), 1.30-1.51 (м, 2Н), 0.96-1.15 (м, 3Н), 0.65-0.95 (м, 9Н). М8 т/ζ 770. 1 (М⁺+1)

Пример 3-25.

Соединение ΑΚ00314656 (18,4Κ,68,148,18Κ)-4-метил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-(3-трет-бутилуреидо)-4-циклопропансульфонидаминокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7ен-18-иловый эфир (Соединение ΑΚ00314656) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-24 и 3-1, только 4-метил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2 и трет-бутил изоцианат был использован для замены циклопентил изоцианата в примере 2-24.

¹Н ЯМР (500 МГц, СЭ₂С1₂) δ 7.60-7.72 (м, 1Н), 7.06-7.48 (м, 4Н), 5.73 (дд, 1Н), 5.39-5.48 (м, 1Н), 5.18-5.27 (уш.с Ш), 4.98 (дд, 1Н), 4.79-4.90 (уш.с, 1Н), 4.30-4.72 (м, 4Н), 3.40-3.77 (м, 5Н), 2.97 (д, 1Н), 2.83-2.90 (м, 1Н), 2.37-2.58 (м, 3Н), 2.17-2.30 (дт, 1Н), 2.22-2.35 (дт, 1Н), 1.97-2.07 (м, 1Н), 1.82-1.95 (м, 2Н), 1.68-1.79 (м, 1Н), 1.55-1.66 (м, 2Н), 1.05-1.55 (м, 15Н), 0.83-0.98 (м, 3Н). М8 т/ζ 741.2 (М⁺+1)

Пример 3-26.

Соединение ΑΚ00314719 (18,4Κ,68,148,18Κ)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7ен-18-иловый эфир (Соединение ΑΚ00314719) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-22 и 3-1. М8 т/е 630.2 (М⁺+1-100).

Пример 3-27.

Соединение АВД0320001

- 105 011857 (18,4^68,148,18К)-3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-(3-трет-бутилуреидо)-4циклопропансульфонидаминокарбонил-2.15-диоксо-3.16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение АК00320001) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-24 и 3-1, только трет-бутилизоцианат был использован для замены циклопентилизоцианат в примере 2-24. М8 т/е 725.7 (М-1).

Пример 3-28.

Соединение АК00320073 (18.4К.68.148.18К)-1.3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 4-циклопропансульфонидаминокарбонил-14-(2-фторэтоксикарбониламино)-2.15-диоксо-3.16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение АК00320073) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-1 и 3-1, только 2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 1,2,3,4тетрагидроизохинолина на Стадии 4 в примере 1-2, и 2-фторэтанол был использован дя замены циклопентанола на Стадии 2 в примере 2-1 с образованием хлорформиатного реагента. М8 т/е 704.0 (М⁺+1).

Пример 3-29.

Соединение АК00320079. (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 4-циклопропансульфониламинокарбонил-14-(тетрагидрофуран-3К-илоксикарбониламино)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320079) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-1 и 3-1, только 2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидро-изохинолина на Стадии 4 примера 1-2, и тетрагидрофуран-3К-ол был использован для замены циклопентанола на Стадии 2 примера 2-1 с образованием хлорформиатного реагента. М8 т/е 728.1 (М⁺+1).

Пример 3-30.

Соединение АК00320080 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 4-циклопропансульфонидаминокарбонил-14-(тетрагидрофуран-38-илоксикарбониламино)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6] нона

- 106 011857 дек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320080) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-1 и 3-1, только 2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 1,2,3,4тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2, и тетрагидрофуран-38-ол был использован для замены циклопентанола на Стадии 2 примера 2-1 с образованием хлорформиатного реагента. М8 т/е 728.1 (М⁺+1).

Пример 3-31.

Соединение АК00320081 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 4-циклопропансульфонидаминокарбонил-2,15-диоксо-14-(тетрагидропиран-4-илоксикарбониламино)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320081) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-1 и 3-1, только 2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 1,2,3,4тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2, и тетрагидро-пиран-4-ол был использован для замены циклопентанола на Стадии 2 примера 2-1 с образованием хлорформиатного реагента. М8 т/е 742.1 (М⁺+1).

Пример 3-32.

Соединение АК00320082 (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 4-циклопропансульфонидаминокарбонил-2,15-диоксо-14-(тетрагидропиран-4-илоксикарбониламино)-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320082) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-1 и 3-1, только тетрагидропиран-4-ол был использован для замены циклопентанола на Стадии 2 примера 2-1 с образованием хлорформиатного реагента. М8 т/е 756.1 (М⁺+1).

Пример 3-33.

Соединение АК00320119 (18,4К,68,148,18К)-5-хлор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320119) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 3-1, только 5-хлор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 1,2,3,4тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2.

- 107 011857 ¹Н ЯМР (500 МГц, СП₃ОЭ): δ 7.36 (с, 1Н), 7.30 (с, 1Н), 7.28 (с, 1Н), 7.22 (с, 1Н), 7.12-7.20 (м, 1Н), 6.64 (уш.с, 1н), 5.72-5.64 (м, 1Н), 5.41 (с, 1Н), 5.14-5.04 (м, 1Н), 4.80-4.62 (м, 2Н), 4.61-4.56 (т, 1Н), 4.544.48 (м, 1Н), 4.10 (д, 1Н), 3.85 (д, 1Н), 2.90 (м, 1Н), 2.65 (уш.с, 1Н), 2.54-2.48 (м, 1Н), 2.46-2.32 (м, 2Н), 1.91-1.72 (м, 2Н), 1.64-1.56 (м, 2Н), 1.56-1.21 (м, 8н), 1.18 (с, 9Н), 1.12-1.05 (м, 1Н) 1.00 (м, 1Н), 0.94-0.82 (м, 2Н). М8 т/е 747.9 (М⁺).

Пример 3-34.

''Ν

Соединение АК00320120 (18,4К,68,148,18К)-5-диметиламино-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-третбутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320120) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 3-1, только диметил-(1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-5-ил)-амин (пример 1-25а) был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2.

¹Н ЯМР (400 МГц, СЭС1₃): δ 10.08 (с, 1Н), 7.13-7.05 (м, 1Н), 6.88-6.81 (д, 1Н), 6.77 (д, 1Н), 6.68 (д, 1Н), 6.61-6.53 (с, 1Н), 5.71-5.60 (к, 1Н), 5.40 (с, 1Н), 5.00-4.88 (м, 2Н), 4.55-4.38 (м, 3Н), 4.24-4.16 (м, 2Н), 3.88-3.77 (д, 1Н), 3.64-3.41 (м, 3Н), 2.91-2.69 (м, 3Н), 2.61 (с, 6Н), 2.53-2.41 (м, 2Н), 2.40-2.39 (м, 1Н), 2.22-

2.11 (м, 1н), 1.89-1.72 (м, 1Н), 1.61-1.22 (м, 10Н), 1.18 (с, 9Н), 1.09-0.97 (м, 2н), 0.91-0.76 (м, 2н). М8: 771.1 (М⁺), 772.1 (М⁺+1), 773.1 (М⁺+2).

Пример 3-35.

р

Соединение АК00320121 (18,4К,68,148,18К)-5,6-дихлор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320121) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 3-1, только 5,6-дихлор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2.

¹Н ЯМР (500 МГц, СП₃ОЭ): δ 7.52 (с, 1Н), 7.38 (с, 1Н), 6.61 (уш.с, 1Н), 5.72-5.65 (к, 1Н), 5.40 (с, 1Н), 5.08 (т, 1Н), 4.78-4.62 (м, 3Н), 4.63-4.57 (т, 1Н), 4.50 (д, 1Н), 4.20 (д, 1Н), 3.65 (д, 1Н), 2.90 (м, 1Н), 2.55 (м, 1Н), 2.52-2.45 (м, 1Н), 2.46-2.31 (м, 2Н), 1.91-1.75 (м, 3Н), 1.67-1.60 (м, 1Н), 1.58-1.25 (м, 8Н), 1.18 (с, 9Н), 1.12-1.05 (м, 2Н), 1.04-0.81 (м, 2Н). М8: т/е 781.9 (м⁺).

Пример 3-36.

Соединение АК00320220

- 108 011857 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-(3-трет-бутилуреидо)-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16- диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320220) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-24 и 3-1, только 2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2 и т-бутил изоцианат был использован для замены циклопентилизоцианата в примере 2-24. М8 т/е 713.1 (М⁺+1).

Пример 3-37.

Соединение АК00320222 (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-14-[3-(тетрагидрофуран-3-ил)уреидо]-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320222) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-24 и 3-1, только 3-изоцианатотетрагидрофуран был использован для замены циклопентил изоцианата в примере 2-24. М8 т/е 740.8 (М⁺+1).

Пример 3-38.

Р

Соединение АК00320403 (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-(3-циклопентилуреидо)4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение АК00320403) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-24 и 3-1. М8 т/е 739.2 (М⁺+1).

Пример 3-39.

р

Соединение АК00320446 (18,4К,68,148,18К)-5-хлор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-(3-трет-бутилуреидо)-4циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение АК00320446) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-24 и 3-1, только 5-хлор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 1,2,3,4тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2 и трет-бутил изоцианат был использован для замены циклопентил изоцианата в примере 2-24.

¹Н ЯМР (500 МГц, СРзОР): δ 7.35 (с, 1Н), 7.28 (с, 1Н), 7.26 (с, 1Н), 7.02 (с, 1Н), 7.18 (с, 1Н), 5.65

- 109 011857

5.72 (к, 1Н), 5.45 (с, 1Н), 5.06 (т, 1Н), 4.74-4.60 (м, 4Н), 4.56 (т, 1Н), 4.46 (м, 1Н), 4.22 (д, 1Н), 3.87-3.91 (дд, 1Н), 2.86-2.94 (м, 1Н), 2.65-2.54 (м, 1Н), 2.52-2.45 (м, 1н), 2.42-2.34 (м, 2Н), 1.92-1.83 (м, 1Н), 1.781.70 (м, 2Н), 1.62-1.56 (м, 1Н), 1.54-3.92 (м, 4Н), 1.39-1.23 (м, 7Н), 1.12 (с, 9Н), 1.02-0.98 (м, 1Н), 0.94-0.86 (м, 1Н). М8: т/е 747.1 (М⁺), 749.1 (М⁺+2).

Пример 3-40.

Соединение АК00320447 (18,4К,68,148,18К)-5,6-дихлор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-(3-трет-бутилуреидо)-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен18-иловый эфир (Соединение АК00320447) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-24 и 3-1, только 5,6-дихлор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2 и т-бутил изоцианат был использован для замены циклопентил изоцианата в примере 2-24 М8: т/е 781.1 (М+). 783.1 (М++2)

Пример 3-41.

Соединение АК00320506 (18,4К,68,148,18К)-1 -пиперидин-1-илметил-3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14циклопентилоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320506) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-1 и 3-1, только 1-пиперидин-1-илметил-1,2,3,4тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера

(18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 4-бензолсульфониламинокарбонил-14-трет-бутоксикарбониламино-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение АК00320547) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 3-1, только бензолсульфонамид был использован для замены циклопропилсульфонамида в примере 3-1. М8 т/е 762.3 (М-1).

Пример 3-43.

- 110 011857

Соединение АК00320548 (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-(4метоксибензолсульфониламинокарбонил)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6] нонадек7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320548) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 3-1, только 4-метоксибензолсульфонамид был использован для замены циклопропилсульфонамида в примере 3-1. М8 т/е 792.3 (М-1).

Пример 3-44.

Соединение АК00320549 (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-2,15 -диоксо-4-(толуол-4-сульфониламинокарбонил)-3,16-диазатрицикло[ 14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен18-иловый эфир (Соединение АК00320549) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2 и 3-1, только 4-метил-бензолсульфонамид был использован для замены циклопропилсульфонамида на стадии присоединения в примере 3-1. М8 т/е 776.3 (М^+1).

Пример 3-45.

Соединение АК00320556 (18,4К,68,148,18К)-1 -пиперидин-1К-илметил-3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты

14-циклопентилоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,б]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320556) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-1 и 3-1, только 1-пиперидин-1К-илметил-1,2,3,4тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2.

¹Н ЯМР (500 МГц, С1СОО) δ 8.99 (уш.с, 1Н), 7.34-7.13 (м, 6Н), 5.75-5.65 (м, 2Н), 5.44 (уш.с, 1Н), 5.06 (т, 1Н), 4.60 (т, 1Н), 4.51 (д, 1Н), 4.44-4.16 (м, 2Н), 4.12-3.97 (м, 2Н), 3.86 (д, 1Н), 3.75-3.38 (м, 2Н), 3.07 (т, 2Н), 2.96-2.86 (м, 1Н), 2.78 (д, 1Н), 2.66 (уш.с, 1Н), 2.56-2.26 (м, 3Н), 2.06 (д, 1Н), 1.99-1.66 (м, 10Н), 1.65-1.21 (м, 18Н), 1.15-0.95 (м, 3Н); М8 (РО8 Е8Г) т/ζ 837.4 (М⁺).

Пример 3-46.

- 111 011857

Соединение АК00320557 (18,4К,68,148,18К)-1 -пиперидин-18-илметил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты

14-циклопентилоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320557) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-1 и 3-1, только 1-пиперидин-18-илметил-1,2,3,4тетрагидроизохинолин был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2.

¹Н ЯМР (500 МГц, СП₃0П) δ 7.32-7.14 (м, 6Н), 6.87 (уш.с, 1Н), 5.72-5.60 (м, 2Н), 5.47-5.39 (м, 1Н),

5.11 (уш.с, 1Н), 4.58 (т, 1Н) 4.53-3.86 (м, 8Н), 3.67-3.40 (м, 2Н), 3.08-2.85 (м, 1Н), 2.78 (д, 1Н), 2.65-2.24 (м, 4Н), 2.10-1.22 (м, 27Н), 1.19 (дт, 1Н), 1.10-1.02 (м, 2Н), 1.01-0.93 (м, 1Н), 0.89 (к, 1Н); М8 (Ρ08 Ε8Σ) т/ζ 837.4 (М⁺).

Пример 3-47.

Соединение АК00320574 (18,4К,68,148,18К)-5-хлор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-(3-циклопентилуреидо)4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение АК00320574) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-24 и 3-1, только 5-хлор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 1,2,3,4тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2. М8: т/е 759.1 (М⁺), 761.1 (М⁺+2).

Пример 3-48.

Соединение АК00320575 (18,4К,68,148,18К)-5,6-дихлор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-(3-циклопентилуреидо)-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320575) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-24 и 3-1, только 5,6-дихлор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина на Стадии 4 примера 1-2. М8: т/е 793.1(М⁺)/

Пример 3-49.

- 112 011857

Соединение АК00320578 (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-14-(2,2,2-трифторэтоксикарбониламино)-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320578) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-24 и 3-1, только 2,2,2-трифторэтанол был использован для замены циклопентанола на Стадии 2 примера 2-1 для образования хлорформиатного реагента. М8 т/е 754.0 (М⁺+1).

Пример 3-50.

оА

Соединение АК00320579 (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 4-циклопропансульфониламинокарбонил-14-(2,2-дифторэтоксикарбониламино)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320578) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-24 и 3-1, только 2,2-дифторэтанол был использован для замены циклопентанола на Стадии 2 примера 2-1 для образования хлорформиатного реагента. М8 т/е 736.0 (М⁺+1).

Пример 3-51.

Соединение АК00320580 (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 4-циклопропансульфониламинокарбонил-14-(2-фтор-1-фторметилэтоксикарбониламино)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320580) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-24 и 3-1, только 1,3-дифторпропан-2-ол был использован для замены циклопентанола на Стадии 2 примера 2-1 для образования хлорформиатного реагента. М8 т/е 750.1 (М⁺+1).

Пример 3-52.

- 113 011857

Соединение АК00320581 (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 4-циклопропансульфониламинокарбонил-14-(2,2,2-трифтор-1-метилэтоксикарбониламино)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320581) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-1 и 3-1, только 1,1,1-трифторпропан-2-ол был использован для замены циклопентанола на Стадии 2 примера 2-1 для образования хлорформиатного реагента. М8 т/е 768.1 (М⁺+1).

Пример 3-53.

оА

Соединение АК00320582 (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-14-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтоксикарбониламино)-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00320582) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-1 и 3-1, только 1,1,1-трифтор-2-метилпропан-2-ол был использован для замены циклопентанола на Стадии 2 примера 2-1 для образования хлорформиатного реагента М8 т/е 782.1 (М⁺+1).

Пример 3-54.

Соединение АК00324375 (18,4К,68,148,18К)-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-циклопентилоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00324375) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1-2, 2-1 и 3-1. М8 т/е 740.5 (М⁺+1).

Пример 3-55.

- 114 011857

Соединение АК00334191 (18,4К,68,148,18К)-4-фтор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7ен-18-иловый эфир (Соединение АК00334191) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 1-2, 4-фтор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован вместо 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина.

¹Н ЯМР (500 МГц, й₆-ацетон) δ 10.70 (уш.с, 1Н), 8.34 (д, 1Н), 7.39-7.33 (м, 1Н), 7.20 (д, 1Н), 7.107.02 (м, 2Н), 6.13 (д, 1Н), 5.70 (к, 1Н), 5.44 (уш.с, 1Н), 4.99 (т, 1Н), 4.78-4.59 (м, 5Н), 4.18-4.08 (м, 1Н), 3.88-3.81 (м, 1Н), 2.86-2.78 (м, 3Н), 2.71-2.60 (м, 1 Н), 2.52-2.35 (м, 3 Н), 1.92-1.81 (м, 2Н), 1.75 (т, 1н), 1.61-1.14 (м, 17Н), 1.04-0.95 (м, 2Н); АРП М8 т/ζ 730.4 (М-1).

Пример 3-55 а.

4-Фтор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол, используемый в примере 3-55, был приготовлен в следующие две стадии.

Стадия 1

Лучшие результаты получаются, когда исходное вещество растворяют в 0,5 М соотношении в формамиде и нагревают до 125°С в течение от 1 до 5 ч в зависимости от объема. Исходное вещество не растворимо в формамиде до тех пор, пока температура не превысит > 60°С. После завершения реакции, как наблюдалось с помощью сочетания жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии (хромато-массспектрометрии) (арсшед), нагревание убирают и 3-кратный объем воды по отношению к реакционному объему добавляют в реакцию. Затем, реакционная масса остывает до комнатной температуры и перемешивается до тех пор, пока бледно-желтый осадок не образуется. Желтый твердый продукт был отфильтрован и промыт водой перед высушиванием в течение ночи, продукт получается с выходом между 7077%.

Стадия 2

Тетрагидрофуран (ТНЕ)

Под стрелочкой - кипение, 18 ч

К исходному соединению в круглодонной колбе было добавлено 4 эквивалента 1 М ВН₃-ТГФ по каплям, используя дополнительную воронку с образованием золотистого раствора, который при нагревании и перемешивании становится медным. Реакционная масса была нагрета при кипении растворителя в течение 18 ч.

Затем реакционная масса была охлаждена до комнатной температуры и затем до 0°С на ледяной бане. 4 эквивалента МеОН были по каплям добавлены и ледяную баню убрали, поэтому охлажденная реакционная масса нагрелась до комнатной температуры. Реакционная масса стала темного цвета во время этой процедуры нагревания. Затем 6н НС1 была по каплям добавлена при комнатной температуре, пока рН бумага не показала кислую реакцию смеси, и реакция кипела (63°С) в течение 1 ч. Реакционная масса была охлаждена до комнатной температуры. В этой точке реакционная масса была сконцентрирована и промыта эфиром Е1₂О (2х) и дихлорметаном (2х). Водный слой был доведен до рН 11 гранулами \аО11. Больше воды было добавлено и водный слой экстрагирован эфиром (4х). Объединенные экстракты были высушены над №₂8О₄ и сконцентрированы с получением желто-коричневого масляного продукта, который был использован напрямую. Возвратная масса всегда немного выше теоретической, но материал

- 115 011857 использовался в сыром виде для получения выхода > 80% на следующей стадии. Пример 3-56.

Соединение ΑΒ00333833 (18,4Β,68,148,18Β)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение ΑΒ00333833) был синтезирован в соответствии с примерами 1-2 и 3-1, только в аналогичных примеру 1-2 стадиях, 2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован в Стадии 4, продукт 10 реакции обмена из Стадии 3 примера 1-2 был затем восстановлен I ΓΒΙι-ΑΗ); перед следующей стадией соединения в соответствии с процедурами, описанными в литературе (^О 0059929, стр. 76-77).

¹Н ЯМР (400 МГц, СП38ОСП3) δ 11.11 (с, 1Н), 8.89 (с, 1Н), 7.16-7.29 (м, 4Н), 6.95 (д, 1Н), 5.25 (уш.с, 1Н), 4.50-4.60 (уш.с, 4Н), 4.40 (дц, 1Н), 4.23 (д, 1Н), 3.93 (м, 1Н), 3.68 (д, 1Н), 2.92 (м, 1Н), 2.32 (дц, 1Н),

2.11 (м, 1Н), 1.40-1.68 (м, 2Н), 0.92-1.40 (м, 19Н). М8 т/ζ 717.0(М⁺1).

Пример 3-57.

Соединение ΑΒ00334286 (18,4Β,68,148,18Β)-5-амино-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7ен-18-иловый эфир (Соединение ΑΒ00334286) было синтезировано в соответствии с процедурами, показанными на следующей схеме.

- 116 011857

1) 8!ер 1 Стадия 1

Триизопропилсилил Хлорид (ПР8С1)

Под стрелочкой 3-диметиламинопропан-1-ол (ЭМАР),

Имидазол

2) 8!ер 2 Стадия 2

3) 8!ер 3 Стадия 3

Карбодиимид (СИ^ Дихлорэтан (ИСЕ)

7,11-диазабицикло[5.4.0]ундек-11-ен (ОВЕ)

4) 8!ер 4 Стадия 4

Тетра-н-бутиламмониум фторид (ТВАЕ)

5) 8!ер 5 Стадия 5

Карбодиимид (СИ^

Дихлорэтан (ИСЕ), г! комнатная температура

Стадия 1. Синтез (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-2,15-диоксо-18-триизопропилсиланилокси-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновой кислоты этилового эфира.

К раствору свободного гидроксимакроциклического промежуточного соединения (соединение 10 примера 1-2, 5,0 г, 10,1 ммоль) в дихлорметане Оп8о1уе (30 мл) был добавлен имидазол (827 мг, 1,2 эквивалента) и триизопропилсилил хлорид ТIР8С1 (2,15 г, 1,1 эквивалента). Реакционная смесь перемешивалась при комнатной температуре в течение 18 ч. ТСХ (5% МеОН-ОСМ) показала, что значительное количество исходного соединения еще остается. К этой реакционной смеси было добавлено больше имидазола (410 мг), триизопропилсилил хлорид ТВР8С1 (1 г) и 3-диметиламинопропан-1-ол ОМАР (121 мг). После перемешивания в течение ночи в реакционной смеси осталось незначительное количество исходного соединения. Реакционная смесь была промыта водой (2 х 25 мл). Объединенные водные слои были вновь промыты дихлорметаном (25 мл). Объединенные органические слои были высушены и сконцентрированы с получением светло-желтого масла. Сырой продукт был использован на следующей стадии без предварительной очистки.

Стадия 2. Синтез (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-2,15-диоксо-18-триизопропилсиланилокси-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновой кислоты.

Эфир из Стадии 1 был растворен в смеси ТГФ (20 мл) и МеОН (20 мл). К этой смеси затем был добавлен Е1ОН-Н₂О (2,1 г, 50 ммоль) в воде (10 мл) и реакционная смесь перемешивалась в течение 12 ч при комнатной температуре. Хромато-масс-спектрометрия продемонстрировала полное завершение реакции. Реакционная смесь была сконцентрирована почти досуха. Затем твердый осадок был растворен в 50 мл воды, подкислен 2н НС1 и экстрагирован этилацетатом Е!ОАс (2 х 50 мл). Объединенные орагинческие слои были высушены над безводным №₂8О₄ и сконцентрированы. Сырой материал был использован в следующей стадии без дальнейшей очистки.

Стадия 3. Синтез (18,4К,68,148,18К)-(4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-18триизопропилсиланилокси-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-14-ил)-карбаминовой кислоты

- 117 011857 трет-бутиловый эфир.

Кислота из Стадии 2 была сначала растворена в 25 мл Бп8оке1, 2-дихлорэтана. К этому раствору было добавлен карбодиимид С^I (2,2 г, 13,8 ммоль) одной порцией и реакционная смесь перемешивалась при 50°С в течение 3 ч. Затем циклопропил сульфонамид (3,3 г, 27,5 ммоль) было добавлено к реакционной смеси, за которым последовало добавление 7,11-диазабицикло[5.4.0]ундек-11-ен ΌΒυ (4.2 г, 27.5 ммоль), и реакция перемешивалась при 50°С в течение 4 ч. ЖХВД показала полное завершение реакции. Для обработки, реакционная смесь была промыта водой (2 х 50 мл), и органический слой был высушен (безводный Ыа₂8О₄) и сконцентрирован. Сырой материал был использован в следующей стадии без дальнейшей очистки.

Стадия 4. Синтез (18,4К,68,148,18К)-(4-циклопропансульфониламинокарбонил-18-гидрокси-2,15диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-14-ил)-карбаминовой кислоты трет-бутилового эфи ра.

Сырой продукт из стадии 3 был сначала растворен в ТГФ (40 мл). К раствору был затем добавлен тетра-н-бутиламмониум фторид ΤΒΑЕ (3,6 г, 13,7 ммоль, 1,5 эквивалента) и перемешивался при комнатной температуре в течение 2 ч. ΤСX показало завершение реакции. Реакционная смесь затем была сконцентрирована досуха, вновь растворена в ΕΐОЛс и промыта водой. Органический слой был высушен (безводный Ыа₂8О₄) и сконцентрирован. Для очистки, сырой продукт был растворен в дихлорметане (50 мл) и промыт раствором 3н №О11. Водный слой был нейтрализован 2н НС1 и экстрагирован дихлорметаном ОСМ (2 х 25 мл). Объединенные органические слои были высушены (Ыа₂8О₄) и сконцентрированы с получением белого осадка (2,4 г, 46%). М8 т/ζ (ΑΒ^*) 469,1 (МН⁺-Вос).

Стадия 5. Синтез (18,4К,68,148,18К)-5-амино-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-третбутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-илового эфира (Соединение Α^0334286). К раствору в дихлорэтане продукта из Стадии 4 (19 мг, 33 мкмоль) был добавлен карбодиимид (7 мг, 1,3 эквивалента), и реакционная смесь была перемешена при комнатной температуре всю ночь. ЖХВД показала полное завершение реакции. 2,3-Дигидро-1Н-изоиндол-5-иламин (18 мг, 4 эквивалента) было затем добавлен. После 4 ч реакции при комнатной температуре ЖХВД показала полное завершение реакции. Реакционная смесь была перенесена прямо на силикагель и элюирована от 1 до 5% метанол/БСМ. Чистый продукт был выделен в виде белого твердого вещества. М8 т/ζ (ΑΒα*): 629.2 (МН⁺-Вос).

Пример 3-58.

Соединение Α^0334385.

Синтез (18,4К,68,148,18К)-4-амино-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-илового эфира (Соединение Α^0334385) было синтезировано подобным образом как описано в примере 3-57, заменяя 2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-иламин на Стадии 5 на 2,3-дигидро-1Низоиндол-4-иламин. Также конечный продукт был очищен обратно фазной колоночной хроматографией (элюент = 5 до 100% ацетонитрила в воде), получая конечный продукт в виде бежевого твердого вещества. М8 т/ζ (ДРСЬ): 728.2 (М*).

Пример 3-59.

(__

Соединение Α^0340479

Синтез (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет

- 118 011857 бутоксикарбониламино-2,15-диоксо-4-трифторметансульфониламинокарбонил-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-илового эфира (Соединение АК00340479) был синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только трифторметансульфонамид был использован для замены циклопропансульфонамида.

¹Н ЯМР (400 МГц, Й6-ацетон): δ 7.98 (уш.с, 1 Н), 7.23-7.35 (м, 4Н), 6.13 (уш.д, 1Н), 5.70 (к, 1Н), 5.44 (уш.с, 1Н), 4.98-5.02 (м, 1Н), 4.61-4.72 (м, 5Н), 4.49 (д, 1Н), 4.16-4.18 (м, 1Н), 3.87-3.90 (м, 1Н), 2.57-2.59 (м, 2Н), 2.38-2.51 (м, 2Н), 1.82-1.92 (м, 2Н), 1.72-1.79 (м, 2Н), 1.21-1.59 (м, 8Н), 1.21 (с, 9н). Μ8 т/ζ (АРСЕ): 741.1 (Μ⁺).

Пример 3-60.

Соединение АК00365387 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4(4-карбоксибензолсульфониламинокарбонил)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен18-иловый эфир (Соединение АК00365387) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 4-сульфамоил-бензойная кислота была использована для замены циклопропансульфонамида. Μ8 т/ζ (АРСЕ): 792.3 (Μ-1).

Пример 3-61.

Соединение АК00365388 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4(5-карбокси-2-хлорбензолсульфониламинокарбонил)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00365388) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 4-хлор-3-сульфамоилбензойная кислота была использована для замены циклопропансульфонамида. Μ8 т/ζ (АРСЕ): 826.2 (М-2).

Пример 3-62.

Соединение АК00365425 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4(3-карбокси-4-метоксибензолсульфониламинокарбонил)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00365425) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 2-метокси-5-сульфамоилбензойная кислота была использована для замены циклопропансульфонамида. Μ8 т/ζ (АРСЕ): 822.3 (Μ-1).

Пример 3-63.

- 119 011857

Соединение АК00365426 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4(5-карбокси-4-хлор-2-фторбензолсульфониламинокарбонил)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00365426) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 2-хлор-4-фтор-5-сульфамоилбензойная кислота была использована для замены циклопропансульфонамида. М8 т/ζ (АРС1-): 844.2 (М-2).

Пример 3-64.

Соединение АК00365572 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4(4-диметиламинобензолсульфониламинокарбонил)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00365572) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 4-диметиламинобензойная кислота была использована для замены циклопропансульфонамида. М8 т/ζ (АРС1-): 791.3 (М-1).

Пример 3-65

Соединение АК00333801 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино2,15 - диоксо-4-(пропан-2-сульфониламинокарбонил)-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение АК00333801) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только пропан-2-сульфоновая кислота была использована для замены циклопропансульфонамида. М8 т/ζ (АРС1-): 714.4 (М-1).

Пример 3-66.

О

- 120 011857

Соединение АК00333802 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4бензолсульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00333802) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только бензолсульфонамид был использован для замены циклопропансульфонамида. М8 т/ζ (АРСР): 748.3 (М-1).

Пример 3-67.

О

Соединение АК00333803 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4метансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00333803) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только метансульфонамид был использован для замены циклопропансульфонамида. М8 т/ζ (АРСР): 686.4 (М-1).

Пример 3-68.

Соединение АК00334188 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4(5-хлор-тиофен-2-сульфониламинокарбонил)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен18-иловый эфир (Соединение АК00334188) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 5-хлор-тиофен-2-сульфоновая кислота была использована для замены циклопропансульфонамида. М8 т/ζ (АРСГ): 788.3 (М-2).

Пример 3-69.

Соединение АК00334247 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4(5-ацетиламино-[1,3,4]тиадиазол-2-сульфониламинокарбонил)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00334247) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только N-(5-сульфамоил-[1,3,4]тиадиазол-2-ил)ацетамид был использован для замены циклопропансульфонамида.

¹Н ЯМР (400 МГц, 06-ацетон): δ 7.24-7.31 (м, 4Н), 5.96 (уш.д, 1Н), 5.42 (уш.с, 1Н), 5.28 (м, 1Н), 5.15 (м, 1Н), 4.68 (м, 6Н), 4.49 (м, 1Н), 4.14 (м, 2Н), 2.60 (м, 1Н), 2.25-2.36 (м, 5Н), 1.70-2.19 (м, 8Н), 1.19-1.48 (м, 4 Н), 1.30 (с, 9 Н). М8 т/ζ (АРСР): 813.3 (М-1).

- 121 011857

Пример 3-70.

Соединение АК00334248 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4(4-цианобензолсульфониламинокарбонил)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение АК00334248) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 4-цианобензолсульфонамид был использован для замены циклопропансульфонамида.

Ή ЯМР (400 МГц, 06-ацетон): δ 11.32 (уш.с, 1Н), 8.36 (уш.с, 1Н), 8.04-8.15 (м, 4Н), 7.22-7.35 (м, 4Н), 6.12 (уш.д, 1Н), 5.47 (уш.с, 1Н), 5.28 (к, 1Н), 4.60-4.72 (м, 5Н), 4.48-4.54 (м, 2Н), 4.14-4.17 (м, 1Н), 3.863.90 (м, 1Н), 2.37-2.52 (м, 4Н), 1.72-1.85 (м, 2Н), 1.59-1.62 (м, 1Н), 1.20-1.55 (м, 8Н), 1.20 (с, 9Н). М8 т/ζ (АРС1-): 773.3 (М-1).

Пример 3-71.

Соединение АК00334249 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4(4-нитробензолсульфониламинокарбонил)-2,15 -диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение АК00334249) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 4-нитробензолсульфонамид был использован для замены циклопропансульфонамида.

Ή ЯМР (400 МГц, 06-ацетон): δ 11.39 (уш.с, 1Н), 8.46 (д, 2Н), 8.35 (уш.с, 1Н), 8.23 (д, 2Н), 7.23-7.36 (м, 4Н), 6.11 (уш.д, 1Н), 5.47 (уш.с, 1Н), 5.23 (к, 1Н), 4.59-4.72 (м, 5Н), 4.49-4.54 (м, 2н), 4.15 (м, 1Н), 3.86-3.90 (м, 1Н), 2.40-2.53 (м, 4Н), 1.72-1.85 (м, 2Н), 1.59-1.62 (м, 1Н), 1.20-1.56 (м, 8Н), 1.20 (с, 9Н).М8 т/ζ (АРС1-): 793.3 (М-1).

Пример 3-72.

Соединение АК00334250 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4(4-хлорбензолсульфониламинокарбонил)-2,15 -диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение АК00334250) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 4-хлор-бензолсульфонамид был использован для замены циклопропансульфона мида.

Ή ЯМР (400 МГц, а₆-ацетон): δ 11.16 (уш.с, 1Н), 8.34 (уш.с, 1Н), 7.96 (д, 2Н), 7.65 (д, 2 Н), 7.22-7.36 (м, 4 Н), 6.13 (уш.д, 1Н), 5.46 (уш.с 1Н), 5.27 (к, 1Н), 4.59-4.71 (м, 5Н), 4.48-4. 54 (м, 2Н), 4.14-4.18 (м, 1Н), 3.87-3.89 (м, 1Н), 2.35-2. 52 (м, 4н), 1.75-1.85 (м, 2 Н), 1. 58-1.61 (м, 1Н), 1.20-1.53 (м, 8Н), 1.20 (с, 9н). М8 т/ζ (АРС1-): 782.3 (М-2).

Пример 3-73

- 122 011857

О

Соединение АК00334341 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4(4-метоксибензолсульфониламинокарбонил)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение АК00334341) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 4-метоксибензолсульфонамид был использован для замены циклопропансульфонамида.

¹Н ЯМР (400 МГц, б6-ацетон): δ 8.26 (уш.с, 1Н), 7.84 (д, 2Н), 7.19-7.32 (м, 4Н), 7.05 (д, 2Н), 6.08 (уш.д, 1Н), 5.43 (уш.с, 1Н), 5.25 (к, 1Н), 4.55-4.67 (м, 5Н), 4.48 (к, 2Н), 4.10-4.14 (м, 1Н), 3.87 (с, 3Н), 3.823.87 (м, 1Н), 2.29-2.47 (м, 4Н), 1.74-1.84 (м, 2Н), 1.51-1.55 (м, 1Н), 1.37-1.47 (м, 4Н), 1.20-1.32 (м, 5Н), 1.17 (с, 9Н). М8 т/ζ (АРС1-): 779.1 (М-1).

Пример 3-74.

Соединение АК00364266 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4(5-карбокси-1-метил-1Н-пиррол-2-сульфониламинокарбонил)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00364266) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 1-метил-5-сульфамоил-1Н-пиррол-2-карбоновая кислота была использована для замены циклопропансульфонамида.

¹Н ЯМР (400 МГц, б6-ацетон): δ 10.84 (уш.с, 1Н), 8.27 (уш.с, 1Н), 7.59 (д, 1Н), 7.24-7.35 (м, 4Н), 7.18 (д, 1Н), 6.10 (уш.д, 1Н), 5.50 (уш. д, 1Н), 5.46 (м, 1Н), 5.36 (к, 1Н), 4.59-4.71 (м, 6Н), 4.48 (д, 1Н), 4.13-4.17 (м, 1Н), 4.00 (с, 3Н), 3.85-3.89 (м, 1Н), 2.35-2.59 (м, 4Н), 1.71-1.90 (м, 2Н), 1.62-1.65 (м, 1Н), 1.20-1.51 (м, 8Н), 1.20 (с, 9Н). М8 т/ζ (АРС1): 795.4 (М-1).

Пример 3-75.

Соединение АК00365427 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4(тиофен-2-сульфониламинокарбонил )-2,15 - диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00365427) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только тиофен-2-сульфоновая кислота была использована для замены циклопропансульфонамида. М8 т/ζ (АРС1-): 754.4 (М-1).

Пример 3-76.

- 123 011857

Соединение А1<00334339 (18,4Κ,68,148,18Κ)-6-метокси-1 -метоксиметил-3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение А1<00334339) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными тетрагидроизохинолин (для синтеза см. изоиндола. М8 т/ζ (АРС-): 800.5 (М-1).

Пример 3-76а.

в примере 3-6, только 6-метокси-1-метоксиметил-1,2,3,4пример 3-76а) был использован вместо 2,3-дигидро-1Н-

I

Синтез 6-метокси-1-метоксиметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолиниум хлорида изображен на следующей схеме:

/О

νη₂

н ^Νγ-₀| о ^Р2°5- Хуциев

140 °с

51ер 2

1. ТЕА, МаОМе, №Ι, МеОН

2. №ВН₄, МеОН

ЫерЗ

1) 81ер 1 Стадия 1

Триэтаноламин ^ЕА) Дихлорметан (БСМ)

2) 81ер 2 Стадия 2 Ксилол (Ху1епе§)

3) 81ер 3 Стадия 3 Триэтаноламин ^ЕА) Стадия 1. Синтез 2-хлор-№[2-(3-метоксифенил)этил]ацетамида.

Амин 2-(3-метоксифенил)этиламин был взят в виде 0,6 М раствора в дихлорметане, за которым последовало добавление триэтаноламина (2 эквивалента). Смесь была охлаждена на бане изопропанол/сухой лед. Когда температура реакционной смеси достигла -60°С, раствор хлорацетилхлорида в дихлорметане (2,6 М) был добавлен по каплям так, чтобы сохранить температуру ниже -60°С. После полного добавления реакционная смесь перемешивалась при -60°С в течение 1 ч. Затем реакционная смесь была нагрета до -20°С и отфильтрована через СГ фильтровальную бумагу для удаления некоторых из ΤЕΑНС1 солей. Фильтрат был нагрет до комнатной температуры и перенесен в разделительную воронку, где он был промыт 1 н НС1 (2х) и солевым раствором. Органический слой был высушен над Мд8Ο₄ и сконцентрирован с получением темно-красного твердого осадка. Этот сырой продукт был напрямую использован в следующей стадии без дальнейшей очистки.

Стадия 2. Синтез 1-хлорметил-6-метокси-3,4-дигидроизохинолиниум хлорида.

Два эквивалента Р₂О₅ (12,9 г) было прокипячено в ксилоле (180 мл) с образованием 0.25 М раствора. Сырой продукт из Стадии 1 был также прокипячен в ксилоле (45 мл) с образованием 0,5 М раствора, и затем был по каплям добавлен через капельную воронку к раствору Р₂О₅. Смесь была перемешена и

- 124 011857 нагрета при кипении в течение 1 ч. Затем реакционная смесь была охлаждена до комнатной температуры и ксилол был декантирован на этом этапе. Затем колба была помещена на ледяную баню и перемешивалась до тех пор, пока при осторожном добавлении льда, воды, этилацетата и 4М NаОН рН не стало >12. Реакционная смесь была выдержана при температуре <25°С до тех пор, пока рН = 12 не было достигнуто. Реакционная смесь была экстрагирована этилацетатом (3х). Объединенные органические экстракты были высушены над Мд8О₄ и сконцентрированы с образованием темного раствора. Он был охлажден на ледяной бане до тех пор, пока 400 мл холодного Е1₂О было добавлено, за которым последовало добавление 100 мл холодной НС1/Е1₂О. Образовался осадок, который был отфильтрован и промыт Е1₂О. Твердый осадок был незамедлительно перенесен под высокий вакуум в течение 2 ч с получением целевого продукта в виде окрашенного твердого вещества. Этот сырой продукт был напрямую использован на следующей стадии без дальнейшей очистки.

Стадия 3. Синтез 6-метокси-1-метоксиметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолиниум хлорида.

Сырой продукт со Стадии 2 был добавлен к одной части ТЕА (5 эквивалентов) и NаI (0,1 эквиалент) в МеОН при 0°С. Затем 2,2 эквивалента NаОΜе было добавлено, и гомогенная реакционная масса стала мутной. Реакционная масса была перемешана при 0°С в течение 1 ч. Хромато-масс-спектрометрия продемонстрировала, что имин находится в полностью свободной форме.

Реакционная масса затем была охлаждена до 0°С на ледяной бане и №ВН₄ (1,5 эквивалента) был осторожно добавлен. Затем реакция была вновь нагрета до комнатной температуры и перемешивалась в течение 2 ч. После полного завершения реакции, как показала хромато-масс-спектрометрия, раствор был сконцентрирован, обработан 1н NаОН и экстрагирован ЕЮАс. Органический слой был высушен над Мд8О₄ и сконцентрирован. Полученный остаток был растворен в МеОН и охлажден на ледяной бане. НС1 газ пробулькивался через раствор в течение 10 мин. Реакционная смесь была сконцентрирована и вновь растворена в МеОН. После повторного концентрирования реакционная смесь была помещена под высокий вакуум на всю ночь. Сырой материал был растерт в порошок с ЕЮАс (3х) с образованием продукта в виде коричневого твердого вещества при помещении его на всю ночь под глубокий вакуум. Этот сырой продукт был напрямую использован в следующей стадии без дальнейшей очистки. М8 т/ζ (РО8Е8Ц: 208.1 (МН⁺).

Пример 3-77.

Соединение АК00365193 (18,4К,68,148,18К)-5-фтор-1 -метоксиметил-3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00365193) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-76, только 5-фтор-1-метоксиметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолиниум хлорид (для синтеза см. пример 3-77а) был использован для замены 6-метокси-1метоксиметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолиниум хлорида.

¹Н ЯМР (500 МГц, СП₃ОП) δ 8.99-8.91 (м, 1Н), 7.23-7.15 (м, 1Н), 7.13-6.99 (м, 2Н), 6.99-6.90 (м, 1Н),

5.68 (к, 1Н), 5.41 (уш.с, 1Н), 5.35-5.21 (м, 1Н), 5.06 (т, 1Н), 4.60-4.31 (м, 3Н), 4.30-4.05 (м, 3Н), 3.96-3.81 (м, 1Н), 3.80-3.56 (м, 3Н), 3.35 (д, 3Н), 2.98-2.30 (м, 9Н), 1.91-1.68 (м, 4Н), 1.64-0.95 (м, 16Н); М8 (АРСЕ) т/ζ 788.3 (М-1).

Пример 3-77а.

О'

Синтез 5-фтор-1-метоксиметил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолиниум хлорида был осуществлен как проиллюстрировано в примере 3-76а, только на Стадии 1 2-(2-фторфенил)этиламин был использован вместо 2-(3-метоксифенил)этиламина.

- 125 011857

Пример 3-78.

Соединение АК00365438 (18,4К,68,148,18К)-4-фтор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-(4-карбоксибензолсульфониламинокарбонил )-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00365438) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-55, только 4-сульфамоилбензойная кислота была использована для замены циклопропансульфонамид.

¹Н-ЯМР (500 МГц, СЭзОЭ) δ 8.92 (д, 1Н), 8.25-8.19 (м, 1Н), 8.15 (д, 2Н), 8.04 (д, 2Н), 7.36-7.27 (м, 1Н), 7.14 (д, 1Н), 7.05-6.95 (м, 2Н), 5.42 (уш.с, 1Н), 5.26 (к, 1Н), 4.82-4.50 (м, 8Н), 4.10-4.00 (м, 1Н), 3.85 (д, 1Н), 3.75-3.69 (м, 1Н), 2.60-2.39 (м, 4Н), 2.26 (п, 2Н), 1.89-1.84 (м, 1Н), 1.81-1. 05 (м, 15Н); М8 (АРСП): т/ζ 810.2 (М-1).

Пример 3-79.

Соединение АК00340303

Синтез (18,4К,68,148,18К)-4-фтор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-{2-циклогексил2-[(пиразин-2-карбонил)амино]ацетиламино}-4-циклопропансульфониламинокарбонил)-2,15-диоксо3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфира (Соединение АК00340303).

1) 50% трифторуксуная кислота (дихлорметан), комнатная температура, 1 ч

2) Ацетон (АСК)

О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурониум гексафторфосфат (НАТи)

Ν,Ν-диизопропилэтиламин (ИЖА)

От 0°С до комнатной температуры

Исходный материал (АК00334191, пример 3-55, 10 мг, 13,7 цл) был растворен в 1 мл 50% трифторуксусной кислоты (дихлорметан) и перемешивался при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционная смесь была сконцентрирована досуха, экстрагирована ацетонитрилом и вновь сконцентрирована. Повторите вышеуказанный процесс еще один раз для того, чтобы удалить избыток трифторуксусной кислоты. Полученный твердый осадок затем был растворен в дихлорэтане (137 цл), охлажден до 0°С на ледяной бане, за которым последовало добавление аминокислоты, циклогексил-[(пиразин-2-карбонил) амино] уксусной кислоты (1,05 эквивалента), НАТи (10 мг) и ОГЕА (4 капли). Смесь была медленно нагрета до комнатной температуры и перемешивалась в течение всей ночи. В завершение, реакционная

- 126 011857 смесь была перенесена прямо на колонку С-18 и очищена обратно-фазной колоночной хроматографией, с получением целевых соединений в виде белого осадка. М8 (АРС1): т/ζ 876.1 (М-1).

Пример 3-80.

Соединение АК00340122 (18,4К,68,148,18К)-4-фтор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-(2-ацетиламино-2-циклогексилацетиламино)-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00340122) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-79, только ацетиламиноциклогексил-уксусная кислота была использована для замены циклогексил-[(пиразин-2-карбонил)амино] уксусной кислоты. М8 (АРС1-): т/ζ 811.3(М-1).

Пример 3-81.

Соединение АК00340156

Синтез (18,4К,68,148, 18К)-4-фтор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-[2-(4-метоксифенил)ацетиламино]-4-циклопропансульфониламинокарбонил)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфира (Соединение АК00340156).

1) 50% трифторуксуная кислота/дихлорметан, 1 ч

2) Ν,Ν-диизопропилэтиламин (О1ЕА)

Дихлорэтан (ЭСЕ)

Исходное соединение (АК00334191, пример 3-55, 10 мг, 13.7 пмоль) было растворено в 1 мл 50% трифторуксусной кислоты (дихлорметан) и перемешивалось при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционная смесь была сконцентрирована досуха, экстрагирована ацетонитрилом и вновь сконцентрирована. Повторите вышеуказанный процесс еще один раз для того, чтобы удалить избыток трифторуксусной кислоты. Полученный твердый осадок затем был растворен в дихлорэтане (137 цл), за которым последовало добавление хлорида аминокислоты, (4-метоксифенил)уксуной кислоты (2 капли), Ν,Νдиизопроиплэтиламина ЭГЕА (4 капли). Смесь перемешивалась в течение всей ночи.

В завершение, реакционная смесь была перенесена прямо на колонку С-18 и очищена обратнофазной колоночной хроматографией. Соединение затем было очищено обычной хроматографией на силикагеле (элюент = 40 % Е!ОАс/гексан с 1% муравьиной кислотой) с получением целевого соединения в виде белого осадка.

- 127 011857 ¹Н ЯМР (500 МГц, СО₃О1)) δ 7.33 (п, 1Н), 7.15 (д, 1Н), 7.05-6.92 (м, 3Н), 6.65 (дд, 2Н), 5.68 (к, 1Н), 5.40 (уш.с, 1Н), 5.09 (т, 1Н), 4.78-4.46 (м, 7Н), 4.43-4.24 (м, 2Н), 3.89-3.80 (м, 1Н), 3.68 (д, 3Н), 3.21 (д, 1Н), 2.69-2.57 (м, 1Н), 2.52-2.30 (м, 5Н), 2.06-0.80 (м, 15Н); М8 (АРСГ): т/ζ 778.3 (М-1).

Пример 3-82.

0^0

Соединение ΑΒ00340178 (18,4Β,68,148,18Β)-4-фтор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 4-циклопропансульфониламинокарбонил-14-[2-(3-метоксифенил)ацетиламино]-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение ΑΒ00340178) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-81, только (3-метоксифенил)ацетил хлорид был использован для замены (4метоксифенил)ацетил хлорида.

¹Н ЯМР (500 МГц, СОЮО) δ 7.32 (п, 1Н), 7.14 (д, 1Н), 7.05-6.92 (м, 3Н), 6.76-6.58 (м, 2Н), 5.68 (к, 1Н), 5.41 (уш.с, 1Н), 5.09 (т, 1Н), 4.76-4.46 (м, 7Н), 4.43-4.26 (м, 2Н), 3.91-3.82 (м, 1Н), 3.69 (д, 3Н), 2.942.85 (м, 1Н), 2.70-2.57 (м, 1Н), 2.52-2.30 (м, 5Н), 2.06-0.80 (м, 15Н); М8 (АРСГ) т/ζ 778.3 (М-1).

Пример 3-83.

Соединение ΑΒ00340188 (18,4Β,68,148,18Β)-4-фтор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты -4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15 -диоксо-14-фенилаетиламино-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение ΑΒ00340188) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-81, только фенилацетил хлорид был использован для замены (4-метоксифенил) хлорид. М8 (АРСГ) т/ζ 748.4 (М-1).

Пример 3-84.

Соединение ΑΒ00334314 (18,4Β,68,148,18Β)-5-метокси-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино 4-циклопропансульфониламинокарбонил)-2,15 -диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек7-ен-18-иловый эфир (Соединение ΑΒ00334314) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 5-метокси-2,3-дигидро-1Н-изоиндол (полученный способом, как описано: ЮС, Том 53, №22, 1988, стр. 5381- 5383) был использован для замены 2,3-дигидро-1Н-изоиндола. М8

- 128 011857 т/ζ (АРСП): 742.3 (М-1). Пример 3-85.

Соединение АК00334399 (18,4К,68,148,18К)-4,7-дифтор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-третбутоксикарбониламино 4-циклопропансульфониламинокарбонил)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00334399) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 4,7-дифтор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол (получено способом, как описано в ЮС, том 53, № 22, 1988, стр. 5381-5383) был использован вместо 2,3-дигидро-1Н изоиндола.

¹Н ЯМР (500 МГц, СПэ0П) δ 8.97 (с, 1Н), 6.99-6.85 (м, 2Н), 5.69 (к, 1Н), 5.42 (уш.с, 1Н), 5.07 (т, 1Н), 4.83-4.57 (м, 6Н), 4.51 (д, 1Н), 4.13-4.02 (м, 1Н), 3.85 (т, 1Н), 2.94-2.86 (м, 1Н), 2.73-2.59 (м, 1Н), 2.55-2.28 (м, 4Н), 1.89-1.70 (м, 3Н), 1.65-1.22 (м, 10Н), 1.18-0.96 (м, 10Н), М8 т/ζ (АРСП): 746.1 (М-1).

Пример 3-86.

Соединение АК00338066 (18,4К,68,148,18К)-4-фтор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-(3-трет-бутилуреидо)-4циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18иловый эфир (Соединение АК00338066) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-36, только 4-фтор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 2,3-дигидро-1Н изоиндола.

¹Н ЯМР (500 МГц, СВ30П) δ 7.38-7.28 (м, 1Н), 7.13 (д, 1Н), 7.01 (п, 1Н), 5.69 (к, 1Н), 5.45 (уш.с, 1Н), 5.07 (т, 1Н), 4.83-4.66 (м, 4Н), 4.59 (к, 1 Н), 4.49 (д, 1Н), 4.37-4.17 (м, 2Н), 3.94-3.84 (м, 1Н), 3.72 (т, 1Н), 2.95-2.87 (м, 1Н), 2.68-2.29 (м, 5Н), 2.09-1.22 (м, НН), 1.12-0.95 (м, 12Н); М8 (АРСП): т/ζ 729.3 (М1).

Пример 3-87.

Соединение АК00338070 (18,4К,68,148,18К)-4-фтор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-(3,3-диметил бутириламино)-4-циклопропансульфониламинокарбонил)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7

- 129 011857 ен-18-иловый эфир (Соединение АК00338070) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примерах 3-81, только 3,3-диметил-бутирил хлорид был использован для замены (4-метоксифенил)ацетил хлорид. М8 ^ΡΟ-) т/ζ 728.3 (М-1).

Пример 3-88.

Соединение АК00338071 (18,4К,68,148,18К)-4-фтор-1,3 -дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-(4,4,4-трифторбутириламино)-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7ен-18-иловый эфир (Соединение АК00338071) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-81, только 4,4,4-трифторбутирил хлорид был использован для замены (4-метоксифенил)ацетил хлорида. М8 ^ΡΟ-) т/ζ 754.3 (М-1).

Пример 3-89.

ΗΝ

Соединение АК00341649 (18,4К,68,148,18К)-5-изопропиламино-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-третбутоксикарбониламино 4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0. 0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00341649) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только (2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-ил)изопропиламин (полученный способом, как описано в Огд. Ьейегз, 2003, Том 5, № 6, 793-796) был использован вместо 2,3-дигидро-1Низоиндол.

¹Н ЯМР (500 МГц, СП₃ОП) δ 8.94 (уш.д, 1Н), 7.52 (с, 1Н), 7.48 (д, 1Н), 7.41-7.32 (м, 2Н), 7.32-7.24 (м, 2Н), 5.69 (к, 1Н), 5.41 (уш.с, 1Н), 5.07 (т, 1Н), 4.82-4.66 (м, 3Н), 4.60 (т, 1Н), 4.52 (т, 1Н), 4.08 (д, 1Н), 3.85 (д, 1Н), 3.80-3.68 (м, 1Н), 2.94-2.87 (м, 1Н), 2.71-2.59 (м, 1Н), 2.55-2.45 (м, 1н), 2.45-2.30 (м, 3н), 1.88-1.69 (м, 3Н), 1.61 (т, 1Н), 1.58-0.94 (м, 25Н); М8 ^ΡΟ-): т/ζ 770.1 (М-1).

Пример 3-90.

НО

- 130 011857

Соединение АК00364936 (18,4К,68,148,18К)-5-гидрокси-1,3-дигидро-изоиндол-2-карбоновой кислоты 14-третбутоксикарбониламино 4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло

14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00364936) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в пимере 3-6, только 2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-ол (получен способом как описано в: ЮС, Том 53, № 22, 1988, стр. 5381-5383) был использован для замены 2,3-дигидро-1Низоиндола. М8 т/ζ (АРС1-): 728.2 (М-1).

Пример 3-91.

Ν—/

Соединение АК00365083 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2,5-дикарбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино 4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7ен-18-иловый эфир 5-метиловый эфир (Соединение АК00365083) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в пимере 3-57, только 2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-карбоновой кислоты метиловый эфир (получают, как показано в примере 3-91а) был использован вместо 2,3-дигидро-1Низоиндол-5-иламина на Стадии 5. М8 т/ζ (АРС1+) : 672.2 (МН⁺-Вос).

Пример 3-91 а.

Μθ©2θ

ΝΗ

2,3-Дигидро-1Н-изоиндол-5-карбоновой кислоты метиловый эфир был синтезирован в соответствии со следующей схемой:

-χ

ΝΒοο

Рб(ОАс)₂, рррр, теа _МеОгС

СО, ΜβΟΗΌΜδΟ (1:1)

ТЕА:ОСМ (1:1) МеО₂С

1) 5-(3-гидрокси-2-метил-5-(фосфонооксиметил)пиридин-4-ил)пирролидин-2,4-дикарбоновая кислота 1)РРР

Триэтанол амин (ТЕА)

Диметилсульфоксид ДМСО (ЭМ8О)

2) Трифторуксусная кислота: дихлорметан (1:1)

Смесь 5-бром-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты трет-бутилового эфира (200 мг, 0.67 ммоль), Рй(ОАс)₂ (30 мг, 0.2 эквивалента), 5-(3-гидрокси-2-метил-5-(фосфонооксиметил)пиридин-4ил)пирролидин-2,4-дикарбоновой кислоты 1)РРР (55 мг, 0,2 эквивалента), триэтаноламина ТЕА (0,93 мл, 10 эквивалента) и МеОН: ДМСО (1:1,4 мл) была перемешан в течение 16 ч в атмосфере СО (баллон) при 80°С. Хроматомасс-спектрометрия и ТСХ (20% ЕЮАс-Гексан) продемонстрировали завершение реакции. Реакционная смесь была сконцентрирована с удалением МеОН и разбавлена ЕЮАс (10 мл) и промыта водой (2 х 25 мл). Органический слой был высушен (Ха₂8О₄), сконцентрирован и очищен на колонке с силикагелем гель-хроматографией (элюент = 20% ЕЮАс-Гексан), с получением чистого 1,3дигидроизоиндола-2,5-дикарбоновой кислоты 2-трет-бутиловый эфира 5-метилового эфира (150 мг, 81%). М8 (АРС1+): т/ζ 178.1 (МН⁺-Вос).

Продукт, указанный выше, был освобожден от защитных групп, обработкой 50% ТФК-ДХМ в течение 1 ч при температуре от 0°С до комнатной температуры. Реакционная смесь был сконцентрирована досуха, вновь растворена в дихлорметане и нейтрализована насыщенным раствором \аНСО₃. Органический слой был отделен, высушен и сконцентрирован с получением свободного основания, которое было напрямую использовано в следующей стадии соединения без дальнейшей очистки.

Пример 3-92.

- 131 011857

Соединение АК00333831 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-циклопентилоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7ен-18-иловый эфир (Соединение АК00333831) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-5, только 2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован вместо 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина.

¹Н ЯМР (400 МГц, СП₃ОЭ): δ 7.36-7.22 (м, 3Н), 7.21-7.16 (м, 1Н), 5.74-5.60 (м, 1Н), 5.40 (с, 1Н), 5.20-5.03 (м, 1Н), 4.80-4.54 (м, 6Н), 4.38-4.28 (м, 1Н), 4.18 (м, 1Н), 3.90-3.80 (м, 1Н), 2.96-2.85 (м, 1Н), 2.70-2.31 (м, 4Н), 1.92-0.98 (м, 24 Н). М8 т/ζ (АРСЕ): 724.4 (М-1).

Пример 3-93.

Соединение АК00340494 (18,4К,68,148,18К)-5-морфолин-4-ил-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино 4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00340494) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 5-морфолин-4-ил-2,3-дигидро-1Н-изоиндол (полученный способом, как описано в 1. Огд. Сйет. 2000, 65, 1144-1157) был использован вместо 2,3-дигидро-1Н изоиндола.

¹Н ЯМР (400 МГц, ЭМ8О-б⁶): δ 7.80-7.22 (м, 1Н), 7.22-7.15 (м, 1Н), 7.00-6.81 (м, 2Н), 5.45 (м, 1Н), 5.26 (м, 1Н), 4.62- 4.50 (м, 4Н), 4.42 (м, 1Н), 4.28-4.10 (м, 2Н), 3.98 (м, 1Н), 3.76 (м, 4Н), 3.12 (м, 4Н), 2.712.60 (м, 1Н), 2.40-1.45 (м, 3Н), 1.40-1.21 (м, 10Н), 0.98-0.61 (м, 4Н). М8 т/ζ (АРСИ+): 699.2 (МН⁺-Вос).

Пример 3-94.

о

Соединение АК00365082 (18,4К,68,148,18К)-5-циано-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино 4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7ен-18-иловый эфир (Соединение АК00365082) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-карбонитрил (полученный способом как описано в 1. Огд. Сйет. 1998, 63, 8224-8228) был использован для замены 2,3-дигидро-1Н-изоиндола. М8 т/ζ

- 132 011857 (АРСН): 639.1 (МН⁺-Вос).

Пример 3-95.

Соединение АК00365252 (18,4К,68,148,18К)-5-этилкарбамоил-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино 4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00365252) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в следующей схеме:

1) Ь1ОН-Н₂О, ТГФ-МеОН

2) 1-Гидрокси-7-азабензотриазол НОА1

О-(7-азабензотриазол-1 -ил)- 1,1,3,3-тетраметилурониум гексафторфосфат (НАТи)

Ν,Ν-диизопропилэтиламин (1)П:Л)

Диметилформамид ДМФА БМЕ

Соединение АК00365083 (70 мг, 91 пмоль), синтез которого был описан ранее в этом документе, был растворен в смеси ТГФ:МеОН (2:1,3 мл), за которым последовало добавление 1 мл водного раствора Ь1ОН-Н₂О. Реакционная смесь была перемешана в стечение 1 ч при комнатной температуре. Хроматомасс-спектрометрия показала полный гидролиз, реакционная смесь была оставлена в течение 30 мин перед ее концентрацией, нейтрализована 0.1н НС1 и экстрагирована 5 мл ЕЮАс. Органический слой был высушен (№₂8О₄), сконцентрирован и очищен колоночной хроматографией на силикагеле (элюент = 57% МеОН-дихлорметан) с получением продукта гидролиза в виде белого осадка. М8 (АРСН): т/ζ 658.1 (МН⁺-Вос).

Продукт из стадии, описанный выше (23 мг, 30 мкмоль), был растворен в безводном ДМФА (2 мл), за которым последовало добавление этиламина (3 эквивалента), 1-гидрокси-7-азабензотриазола НОАТ (3 эквивалента), О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурониум гексафторфосфата НАТи (3 эквивалента) и в конце Ν,Ν-диизопропилэтиламина 1ХЕА (6 эквивалентов) было добавлено по каплям. Реакционная смесь была перемешана при комнатной температуре в течение ночи. Хромато-массспектрометрия показала полное завершение реакции. Реакционная смесь была разбавлена ЕЮАс (5 мл) и промыта водой (2 х 10 мл). Органический слой был высушен, сконцентрирован и сырой продукт очищен препаративной ТСХ. М8 (АРСН): 685.2 (МН⁺-Вос).

Пример 3-96.

- 133 011857

Соединение АК00334218 (18,4К,68,148,18К)-5-хлор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-циклопентилоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15 -диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00334218) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-5, только 5-хлор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован вместо 1,2,3,4 тетрагидроизохинолина.

¹Н ЯМР (400 МГц, С1)₃С\) δ 7.55 (уш.с, 1Н), 7.19-7.33 (м, 3Н), 5.63-5.73 (м, 2Н), 5.27-5.34 (м, 1Н),

4.98 (т, 1Н), 4.52-4.72 (м, 5Н), 4.48 (т, 1Н), 4.34-4.44 (м, 1Н), 4.06-4.15 (м, 1Н), 2.77-2.90 (м, 2Н), 2.54 (уш.с, 1Н), 2.24-2.44 (м, 3Н), 1.64-1.75 (м, 2Н), 1.13-1.57 (м, 18Н), 0.91-1.09 (м, 4Н). Μ8 т/ζ 759.9 (М+1).

Пример 3-97.

Соединение АК00334220 (18,4К,68,148,18К)-5-хлор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-(тетрагидрофуран-3илоксикарбониламино)-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00334220) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-16, только 5-хлор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован вместо 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина.

¹Н ЯМР (400 МГц, С1)₃С\) δ 7.57 (уш.с, 1Н), 7.20-7.34 (м, 3Н), 5.87-5.93 (м, 1Н), 5.65 (к, 1Н), 5.31 (уш.с, 1Н), 5.23-5.29 (м, 1Н), 4.98 (т, 1Н), 4.44-4.71 (м, 5Н), 4.29-4.39 (м, 1Н), 4.07-4.18 (м, 1Н), 3.70-3.87 (м, 4Н), 3.61-3.70 (м, 1Н), 3.44-3.55 (м, 2Н), 3.30-3.42 (м, 1Н), 2.76-2.89 (м, 2Н), 2.54 (уш.с, 1н), 2.36-2.46 (м, 1Н), 2.24-2.36 (м, 2Н), 1.69-1.76 (м, 1н), 1.59-1.69 (м, 1Н), 1.13-1.56 (м, 8Н), 0.90-1.10 (м, 4Н). Μ8 т/ζ 762.0 (М+1)

Пример 3-98.

Соединение АК00334222 (18,4К,68,148,18К)-5-хлор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-(2-фторэтоксикарбониламино)-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00334222) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-28, только 5-хлор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован вместо 2,3дигидро-1 Н-изоиндола.

- 134 011857

Ή ЯМР (400 МГц, СО₃С\) δ 7.53 (уш.с, 1Н), 7.20-7.33 (м, 3Н), 5.93 (д, 1Н), 5.67 (к, 1Н), 5.32 (уш.с, 1Н), 4.93-5.05 (м, 1Н), 4.52-4.72 (м, 5Н), 4.47 (т, 1Н), 4.39 (т, 1Н), 4.25-4.36 (м, 2Н), 4.12-4.25 (м, 2Н), 3.653.96 (м, 2Н), 2.76-2.89 (м, 2Н), 2.54 (уш.с, 1Н), 2.22-2.44 (м, 3Н), 1.67-1.76 (м, 1Н), 1.13-1.60 (м, 10Н), 0.91-1.13 (м, 4Н). М8 т/ζ 737. 9 (М+1).

Пример 3-99.

Соединение АК00334225 (18,4К,68,148,18К)-5-хлор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-(3,3-диметилбутириламино)-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00334225) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-81, только 3,3-диметилбутирил хлорид был использован вместо (4-метоксифенил)-ацетил хлорида и 5-хлор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован вместо 4-фтор-2,3-дигидро1 Н-изоиндола.

Ή ЯМР (400 МГц, СО₃С\) δ 7.60 (уш.с, 1Н), 7.15-7.33 (м, 3Н), 6.54-6.65 (м, 1Н), 5.63-5.73 (м, 1Н), 5.33 (уш.с, 1Н), 4.93-5.02 (м, 1н), 4.53-4.65 (м, 3Н), 4.39-4.48 (м, 2Н), 4.28-4.38 (м, 1Н), 3.74-3.83 (м, 2Н), 2.77-2.89 (м, 1Н), 2.54 (уш.с, 1Н), 2.23-2.44 (м, 3Н), 1.68-1.91 (м, 4Н), 1.12-1.54 (м, 11Н), 0.91-1.11 (м, 4н), 0.76-0.90 (м, 9Н). М8 т/ζ 746.2 (М+1).

Пример 3-100.

Соединение АК00334226 (18,4К,68,148,18К)-5-хлор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-(2-циклопентилацетиламино)-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7ен-18-иловый эфир (Соединение АК00334226) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-81, только циклопентилацетил хлорид был использован вместо (4-метоксифенил)ацетил хлорида и 5-хлор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован вместо 4-фтор-2,3-дигидро-1Низоиндола.

Ή ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ 10.85 (уш.с, 1Н), 6.95-7.30 (м, 3Н), 5.87-6.02 (м, 1Н), 5.63-5.79 (м, 1Н), 5.43-5.52 (м, 1Н), 4.93-5.08 (м, 1Н), 4.52-4.85 (м, 5Н), 4.31-4.52 (м, 1Н), 3.79-3.95 (м, 1Н), 3.60-3.75 (м, 2Н), 3.14 (к, 1Н), 2.90 (уш.с, 1Н), 2.37-2.63 (м, 3Н), 2.14-2.29 (м, 1Н), 1.73-2.12 (м, 6Н), 1.16-1.74 (м, 13Н), 0.96-1.16 (м, 4Н), 0.68-0.96 (м, 9Н). М8 т/ζ 758.2 (М+1).

Пример 3-101.

- 135 011857

Соединение АК00340173 (18,4К,68,148,18К)-5-хлор-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-(5-хлортиофен-2-сульфониламинокарбонил)-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00340173) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 5-хлор-тиофен-2-сульфоновой кислоты амид был использован вместо циклопропансульфонамида и 5-хлор-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован для замены 2,3дигидро-1 Н-изоиндола.

Ή ЯМР (400 МГц, СО_;С\) δ 8.07 (д, 1Н), 7.50 (д, 1Н), 7.16-7.32 (м, 3Н), 6.98 (д, 1Н), 5.86 (уш.с, 1Н), 5.27-5.39 (м, 2Н), 4.81-4.92 (м, 1Н), 4.58-4.64 (м, 2Н), 4.51-4.58 (м, 2Н), 4.44 (т, 1Н), 4.33 (д, 1Н), 4.10-4.20 (м, 1Н), 3.73-3.81 (м, 1Н), 2.47 (уш.с, 1Н), 2.16-2.41 (м, 3Н), 1.63-1.77 (м, 2Н), 1.47-1.57 (м, 2н), 1.07-1.47 (м, 17Н). М8 т/ζ 724.1 (М+1-Вос).

Пример 3-102.

Соединение АК00340526 (18,4К,68,148,18К)-5-бром-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение АК00340526) было синтезировано в соответствии с прцедурами, описанными в примере 3-6, только 5-бром-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был использован вместо 2,3дигидро-1Н-изоиндола.

'Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ 10.31 (уш.с, 1Н), 7.36-7.44 (м, 1Н), 6.99-7.32 (м, 3Н), 5.70 (к, 1Н), 5.425.49 (м, 1Н), 5.06-5.13 (м, 1Н), 4.99 (т, 1Н), 4.52-4.78 (м, 5Н), 4.32-4.44 (м, 1Н), 4.16-4.27 (м, 1Н), 3.78-3.89 (м, 1Н), 3.33-3.42 (м, 1Н), 2.85-2.94 (м, 1Н), 2.40-2.64 (м, 3Н), 2.20-2.32 (м, 1Н), 1.68-1.97 (м, 4Н), 1.171.67 (м, 16Н), 1.01-1.17 (м, 3Н), 0.80-0.98 (м, 2Н). М8 т/ζ 694.0 (М+1-Вос).

Пример 3-103.

Соединение АК00333462 (18,4К,68,148,18К)-4К-метил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-третбутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфира (Соединение АК00333462) было синтезировано в соответствии

- 136 011857 с процедурами, описанными в примере 3-1, только 4К-метил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин (получен в соответствии с процедурами, описанными в примере 1-17а, только энантиомерно чистый исходный материал был использован вместо рацемата) был использован вместо 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина. М8 т/ζ 642.2 (М+1-Вос).

Пример 3-104.

Соединение Α^0333463 (18,4К,68,148,18К)-48-метил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 14-третбутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение Α^0333463) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-1, только 48-метил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин (получен в соответствии с процедурами, описанными в примере 1-17а, только энантиомерно чистый исходный материал был использован вместо рацемата) был использован вместо 1,2,3,4-тетрагидроизохинолина. М8 т/ζ

642.2 (М+1-Вос).

Пример 3-105.

Соединение Α^0345032 (18,4К,68,148,18К)-5-[2-(морфолин-4-карбонилокси)этокси]-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение Α^0345032) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только морфолин-4-карбоновой кислоты 2-(2,3дигидро-1Н-изоиндол-5-илокси)этиловый эфир (полученный в соответствии с процедурами, описанными в I. Меб. Сбет. 2002, том 45, № 26, 5771, способ получения Э, и в Б|оогц. Меб. Сбет. Ьей. 11 (2001) 685688) был использован вместо 2,3-дигидро-1Н-изоиндола. М8 (ΑРСI-): т/ζ 885.4 (М-1).

Пример 3-106.

- 137 011857

Соединение АК00345075 (18,4К,68,148,18К)-5-(3-Морфолин-4-ил-пропокси)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфира (Соединение АК00345075) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 5-(3-морфолин-4-ил-пропокси)-2,3-дигидро-1Низоиндол (получен в соответствии с процедурами, описанными в 1. Мед. СНет. 2002, том 45, № 26, 5771, способ получения Ώ, и в Вюогд. Мед. СНет. Ъе1Г.11 (2001) 685-688) был использован вместо 2,3-дигидро1Н-изоиндола. М8 (АРСЬ): т/ζ 855.6 (М-1).

Пример 3-107.

Соединение АК00345090 (18,4К,68,148,18К)-5-(2-морфолин-4-ил-этокси)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфира (Соединение АК00345090) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 5-(2-морфолин-4-ил-этокси)-2,3-дигидро-1Н-изоиндол (получен в соответствии с процедурами, описанными в I. Мед. СНет. 2002, том 45, № 26, 5771, способ получения Ώ, и в Вюогд. Мед. СНет. Ьей. 11 (2001) 685-688) был использован вместо 2,3-дигидро-1Низоиндола. М8 (АРСЬ): т/ζ 841.5 (М-1).

Пример 3-108.

- 138 011857

Соединение ΑΚ00345094 (18,4Κ,68,148,18Κ)-5-(2-изопропиламиноэтокси)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (Соединение ΑΚ00345094) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только [2-(2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-илокси)этил]изопропиламин (получен в соответствии с процедурами, описанными в I. Меб. СЬет. 2002, том 45, № 26, 5771, способ получения О, ив Вюогд. Меб. СЬет. Ьей. 11 (2001) 685-688) был использован вместо 2,3дигидро-1Н-изоиндола. М8 (АРСЬ): т/ζ 813.5 (М-1).

Пример 3-109.

\

Ν—

СТЮ

Соединение ΑΚ00345095 (18,4Κ,68,148,18Κ)-5-(2-диметиламиноэтокси)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-третбутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15 -диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (соединение ΑΚ00345095) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только [2-(2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-илокси)этил]диметиламин (получен в соответствии с процедурами, описанными в I. Меб. СЬет. 2002, том 45, № 26, 5771, способ получения О, и в Вюогд. Меб. СЬет. ке11.11 (2001) 685-688) был использован вместо 2,3-дигидро1Н-изоиндола. М8 (АРСТ-): т/ζ 799.5 (М-1).

Пример 3-110.

- 139 011857 (18,4К,68,148,18К)-5-(2-имидазол-1 -ил-этокси)- 1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (соединение АК00345096) было синтезировано в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 5-(2-имидазол-1-ил-этокси)-2,3-дигидро-1Н-изоиндол (получен в соответствии с процедурами, описанными в 1. Меб. СИет. 2002, том 45, № 26, 5771, способ получения Ό, и в Вюогд. Меб. СИет. 1,еИ. 11 (2001) 685-688) был использован вместо 2,3-дигидро-1Низоиндола. М8 (АРСЕ): т/ζ 822.5 (М-1).

Пример 3-111.

Соединение АК00364924 (18,4К,68,148,18К)-5-(2-пиразол-1 -ил-этокси)- 1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-третбутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфир (соединение АК00364924) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-6, только 5-(2-пиразол-1-ил-этокси)-2,3-дигидро-1Н-изоиндол (получен в соответствии с процедурами, описанными в б. Меб. СИет. 2002, том 45, № 26, 5771, способ получения Ό, и в Вюогд. Меб. СИет. 1,еИ. 11 (2001) 685-688) был использован вместо 2,3-дигидро-1Низоиндола. М8 (АРСЕ): т/ζ 742.1 [(М-100)+18].

Пример 3-112.

С

Ν—'

Соединение АК00340495 (18,4К,68,148,18К)-5-(4-метнлпнперазнн-Енл)- 1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфира (соединение АК00340495) был синтезирован способом, как описано в примере 3-57, заменяя 2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-иламин в стадии 5 на 5-(4-метилпнперазнн-1-нл)-2,3-днгндро-1Н-нзонндол (получен в соответствии со способом, описанным в б. Огд. СИет. 2000, 65, 1144-1157).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ЭМ8О-6⁶): 7.72-7.40 (м, 1Н), 7.22-7.05 (м, 1Н), 6.95-6.70 (м, 2Н), 5.55-5.45 (м, 1Н), 5.35-5.22 (м, 2Н), 4.62-4.50 (м, 4Н), 4.40 (м, 1Н), 4.30-4.08 (м, 2Н), 4.0-3.89 (м, 1н), 3.10 (м, 3Н), 2.65 (м, 1Н), 2.42 (м, 3Н), 2.33-2.20 (м, 6Н), 1.85-1.50 (м, 5Н), 1.42-1.0 (м, 14Н), 0.82-0.55 (м, 4Н). М8 (АРСН):

712.3 (МН⁺-Вос).

Пример 3-113.

- 140 011857

Соединение АК00365084 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2,5-дикарбоновой кислоты 2-( 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7ен-18-иловый) эфир (соединение АК00365084) был синтезирован в соответствии с процедурами, описанным в примере 3-91, только продукт АК00365083 из этого примера затем был гидролизован ЬЮН в смеси ТГФ-МеОН-Н₂О с получением АК00365084. М8: 658 (М-Вос).

Пример 3-114.

Соединение АК00364989 (18,4К,68,148,18К)-5-(2-метилтиазол-4-ил)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-третбутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15 -диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфира (соединение АК00364989) был синтезирован способом, как описано в примере 3-57, заменяя 2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-иламин в стадии 5 на 5-(2-метилтиазол-4ил)-2,3-дигидро-1 Н-изоиндол.

¹Н ЯМР (400 МГц, СП₃СОСП₃) δ 10.69 (уш.с, 1Н) 8.32 (уш.с, 1Н), 7.94 (д, 1Н), 7.88 (д, 1Н), 7.70 (д, 1Н), 7.34 (дд, 1Н), 6.08-6.16 (м, 1Н), 5.69 (к, 1Н), 5.45 (уш.с, 1Н), 5.00 (т, 1Н), 4.58-4.81 (м, 5Н), 4.44-4.53 (м, 1Н), 4.12-4.21 (м, 1Н), 3.83-3.91 (м, 1н), 2.86-2.97 (м, 1Н), 2.57-2.71 (м, 1Н), 2.33-2.54 (м, 3Н), 1.811.96 (м, 2Н), 1.75 (дд, 1Н), 1.17-1.63 (м, 20Н), 1.06-1.17 (м, 1Н), 0.94-1.06 (м, 2Н). М8 т/ζ 711.2 (М+1100).

Пример 3-114а.

5-(2-Метилтиазол-4-ил)-2,3-дигидро-1Н-изоиндол был получен в соответствии с экспериментами стадий А-Е примера 3-115а, только используя тиоацетамид в стадии Ε.

Пример 3-115.

- 141 011857

Соединение АК00365019 (18,4К,68,148,18К)-5-(2-изопропиламинотиазол-4-ил)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты 14-трет-бутоксикарбониламино-4-циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-иловый эфира (соединение АК00365019) был синтезирован способом как описано в примере 3-57, заменяя 2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-иламин в стадии 5 на [4-(2,3-дигидро1 Н-изоиндол-5-ил)тиазол-2-ил]изопропиламин.

¹Н ЯМР (400 МГц, СПзСОСПз) δ 10.69 (уш.с, 1Н), 8.27-8.36 (м, 1Н), 7.28-7.50 (м, 2Н) 7.01-7.20 (м, 1Н), 6.08-6.15 (м, 1Н), 5.70 (к, 1Н), 4.45 (уш.с, 1Н) 4.94-5.05 (м, 1Н), 4.68-4.76 (м, 4Н), 4.59-4.64 (м, 1н) 4.45-4.53 (м, 1Н), 4.10-4.20 (м, 1н), 3.81-3.90 (м, 1Н) 3.65-3.76 (м, 1Н), 2.86-2.98 (м, 1Н), 2.63 (уш.с, 1Н), 2.32-2.54 (м, 3Н), 1.80-1.94 (м, 2Н), 1.70-1.79 (м, 1Н), 1.05-1.65 (м, 19Н), 0.95-1.05 (м, 2Н). М8 т/ζ 754.2 (М+1-100).

Пример 3-115а.

Синтез [4-(2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-ил)тиазол-2-ил]изопропиламина проиллюстрирован в следующей схеме:

1) Стадия А оставляем

2) Стадия В Тетрагидрофуран ТГФ (ТНР)

- 142 011857

3) Стадия С Тетрагидрофуран ТГФ (ТНГ)

4) Стадия I) 1) (Диметил-триметилсилиламиносилил)метил литий, триметилсилил хлорид (ТМ8С1)

5) Стадия Ε оставляем

6) Стадия Г НС1-диоксан

A. К раствору 1 мл этил винилового эфира в 4 мл ТГФ при -78°С, был по каплям добавлен третВиЬ1 (0,79 мл, 1,34 ммоль). Раствор был нагрет до комнатной температуры и перемешивался в течение 30 мин. 0.5 М раствор ΖηΓΡ в ТГФ (3,02 мл, 1,51 ммоль) был добавлен по каплям и реакционная смесь была перемешана при комнатной температуре в течение 30 мин. Эта смесь была использована без дальнейшей очистки.

B. К раствору арил бромида (0,200 г, 0.67 ммоль) и Ρά(ΡΡΓ₃)₄ (39 мг, 0,33 ммоль), растворенных в ТГФ, в атмосфере Ν2 был введено сырое производное винил цинка из Стадии А. Реакционная смесь был нагрета при 50°С в течение 36 ч, затем отфильтрована через слой А1₂0₃ с помощью Εί0Αс и сконцентрирована с получением масла, которое затем использовалось без дальнейшей очистки.

C. Сырое масло со стадии В было растворено в ТГФ (2 мл) и 1н НС1 (2 мл) и перемешивалось в течение 1 ч. Реакционная смесь была экстрагирована Εί0Αс и отделена и органический слой был промыт насыщенным раствором \а11С0₃ и солевым раствором, высушен над Να₂80₄ и сконцентрирован с получением оранжевого масла. Это масло было очищено путем хроматографии 5:1 гексан:этилацетат с получением белого твердого осадка. (95 мг, 54%).

I). К раствору 1,0 М (диметилтриметилсилиламиносилил)метил литий Ι,ίΙ 1\П)8 (4,0 мл, 4,0 ммоль) в атмосфере Ν₂ при -78°С был добавлен триметилсилил хлорид ТМ8С1 (3,38 мл, 26,6 ммоль) по каплям. К этому раствору был добавлен кетон со стадии С в 3 мл ТГФ. Реакционная смесь была перемешана при -78°С в течение 30 мин и нагрета до 0°С. ФТТБ (изображен на схеме) (1.10 г, 2.93 ммоль) был добавлен и реакционная смесь была перемешана в течение 30 мин при 0°С, сконцентрирована до твердого вещества и экстрагирована этилацетатом и водой. Органический слой был промыт водой и солевым раствором, высушен над Να₂80₄ и сконцентрирован и масло было очищено 5:1 ГексанШЮАс с получением желтого осадка (0.64г, 71%).

Ε. Суспензия бромкетона (75 мг, 0,22 ммоль), №₂С0₃ (37 мг, 0,44 ммоль) и 1-изопропил тиомочевины (26 мг, 22 ммоль) в Ε10Η была нагрета при кипении в течение 30 мин. Реакционная смесь была экстрагирована Εί0Αс и отделена, и органический слой был промыт насыщенным раствором \а11С0₃ и солевым раствором, высушен над Να₂80₄ и сконцентрирован с образованием желтого масла. Масло было очищено хроматографически 3:1 Гексан:2-метокси-2-метилпропан с получением чистого масла. (77 мг, 97%).

Г. Вос-защищенный амин со Стадии Ε перемешивался в 4н НС1/диоксане (2.0 мл) в течение 1 ч и был сконцентрирован до белого осадка. Этот осадок был экстрагирован 0,1н НС1 и промыт дихлорметаном. Водный слой был подщелачен 1,0 н \а0Н и экстрагирован дихлорметаном, высушен, сконцентрирован и использован без дальнейшей очистки.

4. Получение макроциклических аминопролиновых промежуточных соединений.

Пример 4-1.

Синтез (18,4К,68,148,18К)- 18-амино-14-трет-бутоксикарбониламино-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновой кислоты этилового эфира.

1) Стадия А: Триэтанол амин (ΤΕΑ), дихлорметан (ОСМ), под стрелочкой 70% (2 стадии)

2) Стадия В: 0-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурониум гексафторфосфат (НАТи) Ν,Ν-диизопропилэтиламин (ОША)

Диметилформамид (ОМГ)

- 143 011857

Под стрелочкой затем БЮН 50% (2 стадии)

3) Стадия С: О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурониум гексафторфосфат (ΗΑΤϋ) Ν,Ν-диизопропилэтиламин (ОША)

Дихлорметан 1)СА-1

4) Стадия Ό: 1. 5% катализатор Ховейда 1 поколения

Дихлорметан, 40°С

2. Тетра-н-бутиламмоинум фторид (ΤΒΑΓ)

Тетрагидрофуран (ΤΗΒ), 50°С

А. К раствору гидрохлорида (28,48)-4-амино-1-[бензилоксикарбонил]пирролидин-2-метилкарбоксилата (2.00 г, 2.34 ммоль) в хлористом метилене (25 мл) был добавлен 2-(триметил силил)этил пнитрофенил карбонат (1,98 г, 6,99 ммоль) и триэтил амин (1.81 мл, 13.34 ммоль). Реакционная смесь была перемешана в течение 3 дней, нанесена на силикагель и элюирована 40% ИЮАс/гексан с получением бесцветного масла. Масло было растворено в метаноле (20 мл) и перемешано с 10% палладием на угле в атмосфере водорода из баллона. После перемешивания в течение 4 ч реакционная смесь была отфильтрована и сконцентрирована. Полученный твердый осадок был растворен в 1н водной НС1 (75 мл) и экстрагирован хлористым метиленом (75 мл). Водный слой стал основным с помощью добавления гидроксида натрия и вновь экстрагирован хлористым метиленом (100 мл). Оба органических экстракта были объединены, сконцентрированы и полученный осадок был очищен на силикагеле элюированием 10% метанол/хлористый метилен с получением коричневого твердого осадка (1.29 г, 70%). Хромато-масс спектр =289 (Н⁺).

Β. Раствор 4(Β)-(2-триметилсилилэтил карбониламино)пирролидин-2(8)-карбоновой кислоты метилового эфира (1.29 г, 4.50 ммоль), 2(8)-трет-бутоксикарбониламино-нон-8-енольной кислоты (1.22 г, 4.51 ммоль), ΗΑΤϋ (2.06 г, 5.41 ммоль) и диизопропилэтиламина (1.18 мл, 6.76 ммоль) в диметилформамиде (10 мл) перемешивался всю ночь. Реакционная смесь была разбавлена этилацетатом (150 мл), промыта 1н водной НС1 (2 х 100 мл), высушена над сульфатом магния и сконцентрирована. Путем хроматографии на силикагеле было получено масло, которое было перемешано с гидрооксидом лития (0,28 г, 6,76 ммоль) в метаноле (5 мл) в течение 2 ч. Реакционная смесь была разбавлена хлористым метиленом, промыта 1Н водной НС1, высушена над сульфатом магния и сконцентрирована с получением 1,2 г (49%>) продукта.

С. К 1(Β)-трет-бутоксикарбониламино-2(8)-винил-циклопропанкарбоновой кислоты этиловому эфиру (0,70 г, 2,75 ммоль) был добавлен 4н НС1/диоксановый раствор (2,87 мл, 11,46 ммоль). После перемешивания в течение 2 ч реакционная смесь была сконцентрирована с получением твердого осадка. К этому твердому осадку была добавлена 1-(2(О-трет-бутоксикарбо11и.лами11о-11о11-8-енои.л )-4(Β)-(2триметилсилилэтилкарбониламино)пирролидин-2(8)-карбоновая кислота (1,21 г, 2,29 ммоль), НАВЛ (1,05 г, 2,75 ммоль), диизопропилэтиламин (1,60 мл, 9,17 ммоль) и хлористый метилен (10 мл) и реакционная смесь была перемешана в течение 18 ч при комнатной температуре. Реакционная смесь была перенесена на силикагель и элюирована раствором 50% этилацетат/гексан с получением продукта в виде бесцветного масла (1.27 г, 83%). 665 (Н+)

Ό. Раствор 1-{[1-(2(8)-трет-бутоксикарбониламино-нон-8-еноил)-4(Β)-(2-триметилсилилэтил карбониламино)пирролидин-2(8)-карбонил]амино}-2(8)-винилциклопропан-1-(Β)-карбоновой кислоты этилового эфира (1.27 г, 1.91 ммоль) в хлористом метилене (195 мл) был дегазирован в течение 1 ч пробулькиванием Ν₂ через раствор. Дихлор(о-изопропоксифенилметилен)(трихлоргексил фосфин) рутениум (II) (0,057 г, 0,096 ммоль) был добавлен к реакционной смеси и смесь перемешивалась при 40°С в течение 16 ч. Реакционная смесь была сконцентрирована, нанесена на силикагель и элюирована 50% этилацетатом/гексаном. Полученное масло было обработано тетра-н-бутиламмониум фторидом ΤΒΑΒ (1,0 М в ТГФ, 2,87 мл) и нагрето до 50°С в течение 4 ч. Рекционная смесь была нанесена на силикагель и элюирована 20% метанол/хлористым метиленом с получением желто-коричневого твердого вещества (0,65 г, 69%).

¹Н ЯМР (СОС1₃, 400 МГц): δ 1.06-1.66 (м, 17Н), 1.85-1.95 (м, 2Н), 2.0-2.1 (м, 1Н), 2.1-2.2 (м, 1Н), 2.2-

2.3 (м, 1Н), 2.65-2.75 (м, 1Н), 3.40 (м, 1Н), 3.73-3.83 (м, 2Н), 4.08-4.19 (м, 2Н), 4.56 (м, 1Н), 4.78 (д, 1=5.5 Гц, 1Н), 5.20 (т, 1=8.1 Гц, 1Н), 5.34 (д, 1=8.1 Гц, 1Н), 5.47 (дт, 1=4.5, 10.8 Гц, 1Н), 7.08 (с, 1н). 493 (н+).

5. Получение соединений с общей структурной формулой V.

Ν,Ν-диизопропилэтиламин (ОША), 3-диметиламинопропан-1-ол (ОМАР), дихлорметан (1)СА-1) Пример 5-1.

- 144 011857

Соединение АК00287262

Синтез (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-[(3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2карбонил)амино]-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновой кислоты (Соединение АК00287262)

Ν,Ν-диизопропилэтиламин (О1ЕА), 3-диметиламинопропан-1-ол (ОМАР), дихлорметан (1)СМ)

Раствор 3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонил хлорида (0.030 г, 0.152 ммоль), (18,4К,68,148, 18К)-18-амино-14-трет-бутоксикарбониламино-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен4-карбоновой кислоты этилового эфира (0,025 г, 0,050 ммоль), Ν,Ν-диизопропилэтиламин (БРЕА) (0.027 мл, 0,153 ммоль) и каталитическое количество 3-диметиламинопропан-1-ола ОМАР было перемешано вместе в хлористом метилене (0,3 мл) в течение 18 ч. Реакционная смесь была перенесена на силикагель и продукт был элюирован 40% ацетон/гексаном и выделен в виде белого твердого вещества. Вещество было растворено в метаноле и обработано гидрооксидом лития (0,011 г, 0,254 ммоль) и 1 каплей воды. После перемешивания в течение 5 ч реакция была разбавлена хлористым метиленом (30 мл), промыта 1н водной НС1 (30 мл), солевым раствором (30 мл), высушена над сульфатом магния и сконцентрирована с получением названного соединения в виде белого твердого вещества. Хромато-масс спектр =624 (МН+).

Следующее соединение было также получено, используя процедуры, описанные в примере 5-1, заменяя 1,3-дигидроизоиндол-2-карбонил хлорид на 3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонил хлорид. Хромато-масс спектр =610 (Н+)

Пример 5-2.

Соединение АК00298980 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-[(1,3-дигидроизоиндол-2-карбонил)амино]2,15 - диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек-7 -ен-4-карбоновой кислоты (Соединение

АК00298980) был получен в соответствии с процедурами, описанными в примере 5-1, заменяя 3,4дигидро-1Н-изохинолин-2 карбонил хлорид на 1,3-дигидроизоиндол-2-карбонил хлорид. М8 т/е 608.2 (М-1).

Пример 5-3.

Соединение АК00304160 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-[(3,4-дигидро-2Н-изохинолин-1-карбонил)

- 145 011857 амино]-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновой кислоты (Соединение АК00304160) был получен в соответствии с процедурами, описанными в примере 5-1, заменяя 3,4дигидро-1Н-изохинолин-2-карбонил хлорид на 3,4-дигидро-2Н-хинолин-1-карбонил хлорид. М8 т/е

524,3 (М+1-100).

6. Получение соединений с общей структурной формулой VI

1.тиокарбонил димидазол, затем К₂КН Пример 6-1.

Соединение АК00304010 (18,4К,68,148,18К)-14-трет-бутоксикарбониламино-18-[(3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карботиоил) амино]-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-4-карбоновой кислоты (Соединение АК00304010) был получен, используя ту же самую процедуру, как описано на стадии 4 примера 1-2, только карбонил диимидазол был заменен на тиокарбонил диимидазол. Хромато-масс спектр=640 (Н+). М8 т/е 640,1 (М⁺+1).

7. Получение соединений с общей структурной формулой VII

1. карбодиимид СОД диметилформамид ОМЕ Пример 7-1.

Соединение АК00287266

Синтез (18,4К,68,148,18К)- { 4-циклопропансульфониламинокарбонил-18-[(3,4-дигидро-1 Н-изохинолин-2-карбонил)амино] -2,15 - диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-14-ил } карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир (Соединение АК00287266) было получено в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-1, начиная с кислоты, получаемой по процедурам, описанным в примере 5-2. М8 т/е 727,0 (М+1).

Пример 7-2.

- 146 011857

Соединение АК00304008 (18,4К,68,148,18К)-{4-циклопропансульфониламинокарбонил-18-[(1,3-дигидроизоиндол-2-карбонил)амино]-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-14-ил (карбаминовой кислоты третбутиловый эфир (Соединение АК003 04008) был получен в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-1, начиная с кислоты, получаемой по процедурам, описанным в примере 5-2. М8 т/е 613,2 (М+1-100).

Пример 7-3.

Соединение АК00304014 (18,4К,68,148,18К)-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты [ 14-(3 -циклопентилуреидо)-4циклопропансульфониламинокарбонил-2,15-диоксо-3,16-диазатрицикло[14.3.0.0^4,6]нонадек-7-ен-18-ил] амид (Соединение АК00304014) был получен в соответствии с процедурами, описанными в примере 224, начиная с сульфонамида, полученного в соответствии с процедурами, описанными в примере 7-4. М8 т/е 724,2 (М⁺+1).

Пример 7-4.

Соединение АК00304012 (18,4К,68,148,18К)-{4-циклопропансульфониламинокарбонил-18-[3,4-дигидроизохинолин-2-карботиоил)амино]-2,15 - диоксо-3,16-диазатрицикло [14.3.0.0^4,6] нонадек-7-ен-14-ил (-карбаминовой кислоты трет-бутиловый эфир (Соединение АК00304012) был получен в соответствии с процедурами, описанными в примере 3-1, начиная с кислоты, полученной по процедурам, описанным в примере 6-1. М8 т/е 743.0 (М⁺+1).

Пример 8.

Ν83-Ν84Ά протеазный анализ

Образование комплекса Ν83 с Х84А-2

Рекомбинатный Ν83 полной длины, полученный при помощи Е. сой или Бакуловируса, был разбавлен до 3.33 мкМ буфером для анализа, и материал был перенесен в пробирку еррепйог£ и помещен на водяную баню в 4°С холодильник. Соответствующее количество N84А-2, разбавленного до 8,3 мМ буфером для анализа, было добавлено к эквивалентному объему Ν83 на стадии 2.1. 1 (коэффициент пересчета - 3, 8мг/272 цл буфера для анализа). Материал был перенесен в пробирку еррепйог£ и помещен на водяную баню в 4°С холодильник.

После доведения системы до 4°С равные объемы растворов Ν83 и N84А-2 были объединены в пробирке еррепйог£, мягко перемешаны ручным устройством для пипетирования, и смесь была выдержана в течение 15 мин на водяной бане при 4°С. Конечные концентрации в смеси были 1,67 мкМ Ν83, 4.15 мМ N84А-2 (2485-кратный молярный избыток N84А-2).

После 15 мин при 4°С пробирку еррепйог£ с N83/N84А-2 достали из холодильника и поместили при комнатной температуре на водяную баню в течение 10 мин. Материал N83/N84А-2 был разделен без остатка на соответствующие объемы и хранился при -80°С (Е. сой Ν83 действует при 2нМ в анализе, аликвота 25 мкл. Бакуловирусная Ν83 действует при 3нМ в исследовании, аликвота 30 мкл).

Исследование ингибирования Ν83.

- 147 011857

Стадия 2.2.5. Образцы соединений были растворены до содержания 10 мМ в ДМСО, затем разбавлены до 2,5 мМ (1:4) в ДМСО. Обычно, соединения добавляли к аналитическому планшету при концентрации 2,5 мМ, получающейся при разбавлении первоначальной концентрации до 50 микроМ по аналитической кривой ингибирования. Соединения были последовательно разбавлены в буфере для анализа с целью получения тестовых растворов низкой концентрации.

Стадия 2.2.6. Е. со11 Ы83/М84А-2 был разбавлен до 4нМ N83 (1: 417.5 1,67 мкМ исходного - 18 мкл 1,67 мкМ исходного + 7497 мкл буфера для анализа).

Бакуловирусный №3/№4А-2 был разбавлен до 6нМ N83 (1: 278.3 1,67 мкМ исходного - 24 мкл 1,67 мкМ исходного + 6655 мкл буфера для анализа).

Стадия 2.2.7. Используя ручное многоканальное устройство для пипетирования и избегая образования пузырьков в планшете, 50 мкл буфера для анализа было добавлено в лунки А01-Н01 черного Сок1аг 96-луночного полипропиленового планшета для хранения.

Стадия 2.2.8. Используя многоканальное ручное устройство для пипетирования и избегая образования пузырьков в планшете, 50 мкл разбавленного №3/Ы84А-2 из стадии 2.2.6, было добавлено в лунки А02-Н12 планшета стадии 2.2.7.

Стадия 2.2.9. Используя многоканальное ручное устройство для пипетирования и избегая образования пузырьков в планшете, 25 мкл из лунок в планшете для разбавления соединений стадии 2.2.5 было перенесено в соответствующие лунки аналитического планшета стадии 2.2.8. Наконечники многоканального устройства для пипетирования менялись для каждого ряда переносимых соединений.

Стадия 2.2.10. Используя многоканальное ручное устройство для пипетирования и избегая образования пузырьков в планшете, содержимое лунок аналитического планшета Стадии 2.2.9 было перемешано отсасыванием и распределением 35 мкл из 75 мкл в каждой лунке пять раз. Наконечники многоканального устройства для пипетирования менялись для каждого ряда переносимых соединений.

Стадия 2.2.11. Планшет был покрыт полистирольной планшетной крышечкой и планшет стадии 2.2.10, содержащий N83 протеазу и образцы соединений, был предварительно выдержан 10 мин при комнатной температуре.

В то время пока планшет из стадии 2.2.11 был предварительно выдержан, КЕТ81 субстрат был разбавлен в 15 мл пропиленовой пробирке для центрифугирования. КЕТ81 субстрат был разбавлен до 8 мкМ (1: 80,75 646 мкМ исходного-65 мкл 646 мкМ исходного + 5184 мкл буфера для анализа).

После того, как планшет в стадии 2.2.11 был предварительно выдержан, используя ручное устройство, 25 мкл субстрата было добавлено ко всем лункам в планшете. Содержимое всех лунок было быстро перемешано, как на стадии 2.2.10, но смешиванием 65 мкл из 100 мкл в лунках.

Планшеты были считаны кинетическим образом на Мо1еси1аг ОеОсек 8рес1гаМах 0ет1ш Х8 считывателе планшетов. Установки считывателя: время считывания: 30 мин, интервал: 36 с, воспроизведение: 51, излучение λ: 335 нм, эмиссия λ: 495 нм, граничное значение: 475 нм, автомикс: отключено, калибровка: один раз, ФЭУ: высокий, излучение/лунку: 6, Умакс ρΐκ: 21 или 28/51 в зависимости от длины линейности реакции.

Юо были определены, используя эмпирическое уравнение кривой с четырьмя параметрами, и пересчитывая Κί'κ, используя следующие Кт'к: Полной длины Е. со11 N83-2.03 мкМ Полной длины ВУ N831.74 мкМ, где Κΐ = IС5₀/(1+ [8]/Кт))

Количественная оценка твердофазным иммуноферментным анализом (ЕЫ8А) селектируемых маркеров протеинов, Неомицин фосфотрансферазы II (№ТП) в ВГС суб-геномном репликоне, 084.3.

ВГС суб-геномный репликон (077^83-3/ поступление № А1242652), стабильно сохраняющийся в человеческих НиН-7 клетках гепатомы, был создан ЕоЬтаии и др. 8с1епсе 285:110-113 (1999). Содержащие репликон клеточные культуры, обозначаемые как 084.3, были получены от Ог.СНгМорН 8еедег из Института исследования раковых заболеваний, Еох Скаке Сапсег Сеп1ег, Филадельфия, Пенсильвания.

084.3 клетки поддерживались при 37°С, 5% СО₂, в ЭМЕМ (01Ьсо 11965-092) с Ь-глютамином 200 мМ (100Х) (01Ьсо25030-081), второстепенными аминокислотами (№АА) (Вю\\'1Ш1акег 13-114Е), термоинактивированной (Ш) эмбриональной бычьей сывороткой (ЕВ8) (Нус1опе 8Н3007.03) и 750 иг/мл генетицина (0418) (01Ьсо 10131-035). Клетки были подразделены 1:3 или 4 каждые 2-3 дня.

За 24 ч до исследования, клетки 084.3 были собраны, подсчитаны и высеяны в 96-луночные планшеты (Сок1аг 3585) при плотности 7500 клеток/лунку во всех стандартных стабилизирующих средах (выше) и выдержаны в условиях, указанных выше. Для начала исследования питательная среда была удалена, клетки были один раз промыты физиологическим раствором с фосфатным буфером РВ8 (01Ьсо 10010-023) и 90 мл исследовательской среды (ЭМЕМ, Ь-глютамин, ХЕАА, 10% ШЕВ8, без 0418) было добавлено. Ингибиторы были выполнены в виде 10Х исходного раствора в Исследовательской Среде, (3кратное разбавление от 10 цМ до 56 пМ конечной концентрации, конечная концентрация ЭМ8О 1 %), 10 цл было добавлено к лункам дубликатам, планшеты были встряхнуты для смешивания и выдержаны как выше в течение 72 ч.

№ТП ЕМ8А набор был получен от А0^IА, Шс. (ЕЫ8А тестовая система соединений для Неомицин Фосфотрансферазы II, Р8Р 73000/4800).

- 148 011857

Инструкции производителя были выполнены, но с некоторыми изменениями. 10Х РΕΒ-1 лизирующий буфер был модифицирован включением 500 пМ фенилметилсульфонилфторид (РМ8Е) (81§та Р7626, 50мМ исходного раствора в изопропаноле). После 72 ч выдерживания клетки были промыты один раз физиологическим раствором с фосфатно-солевым буфером РΒ8, и 150 цл РΕΒ-1 с РМ8Е было добавлено на лунку. Содержимое планшетов было перемешано в течение 15 мин, при комнатной температуре, затем заморожено при -70°С. Планшеты были разморожены, лизаты были основательно смешаны, и 100 цл было внесено на №ТП Ε^I8Л планшет. Стандартная кривая была построена. Лизат из ДМСОобработанных контрольных клеток был собран, последовательно разбавлен РΕΒ-1 с РМ8Е, и применен к дублирующим лункам планшета Ε^I8Л, в диапазоне первоначального количества лизата 150 цл-2.5 цл. Дополнительно, 100 цл только буфера было внесено в дубликате в качестве бланка. Планшеты были герметично закрыты и мягко перемешивались при комнатной температуре в течение 2 ч. После выдерживания, планшеты были промыты 5Х 300 ил с РΒ8-Τ (0,5% Тмееп-20, РΒ8-Τ были предоставлены в наборе Ε^I8Л). Для определения, 1Х разбавление растворителем, конъюгированным с энзимом, МК8-2 (5Х) было выполнено в РΒ8-Τ, к которому 1:100 разбавление энзим конъюгатах А и В были добавлены, в соответствии с инструкциями. Планшеты были повторно герметично закрыты, выдержаны с перемешиванием, покрыты и оставлены при комнатной температуре в течение 2 ч. Промывание было повторено и 100 цл субстрата ΤΜΒ комнатной температуры было добавлено. После приблизительно 30 минутного выдерживания (комнатная температура, перемешивание, исследование), реакция была остановлена 50 цл 3М серной кислоты. Планшеты были считаны при 450 нм на Мо1еси1аг Оехчсев Уегзатах считывателе планшетов.

Ингибиторный эффект выражался в процентах от ЭМ8О-обработанного контрольного сигнала и кривая ингибирования была рассчитана, используя уравнение с 4 параметрами: γ=Α+((ΒΑχΗ^/χ^))), где С представляет собой половину максимальной активности или ЕС₅₀.

ПРИМЕРЫ АКТИВНОСТИ

Где

А обозначает ГС₅₀ или ЕС₅₀, как указано, меньше чем 50 мкМ В обозначает ГС₅₀ или ЕС₅₀, как указано, меньше чем 10 мкМ С обозначает ГС₅₀ или ЕС₅₀, как указано, меньше чем 1 мкМ и □ обозначает IС5₀ или ЕС₅₀, как указано, менее 0.1 мкМ ______________

Соединение	Ν83/Ν84Α-2 1С50	Репликон ЕС50	Соединение	Ν83/Ν84Α- 2 1С50	Реплик ЕС50
ΑΚΌ0220042	С	Β	ΑΚΌ0301383	В	Нет свед.
ΑΒΌ0220122	А	Нет свед.	ΑΒΌ0301745	С	В
АК.00226824	В	Нет свед.	ΑΚΌ0301746	ϋ	ϋ
ΑΒΌ0226825	В	Нет свед.	АК.00301747	ϋ	ϋ
АК00247310	с	Нет свед.	АК00301749	С	В
АК00248687	с	Нет свед.	АК00301751	ϋ	ϋ
АК00248688	в	Нет свед.	АК00304000	с	В
АК00248689	с	Нет свед.	АК.00304008	ϋ	ϋ
АК00254906	ϋ	С	АК00304010	с	в
АК.00261407	ϋ	С	ΑΚΌ0304012	ϋ	С
АК00261408	ϋ	ϋ	АК.00304014	ϋ	ϋ
АК.00261409	ϋ	В	АК00304062	в	Нет свед.
АК00282131	ϋ	ϋ	АК00304063	с	В
АК00287262	Β	Нет свед.	АК00220122	с	В
АК.00287266	ϋ	С	АК.00304066	с	в
АК00291871	ϋ	С	АК.00304067	с	в
АК00291875	С	В	АК.00304072	с	в
АК.00294376	Β	Нет свед.	АК00304073	с	в
АК.00294377	С	В	АК00304074	с	в
АК00294378	С	В	АК00304075	с	в
АК00294381	ϋ	ϋ	АК.00304076	ϋ	с
АК.00294382	С	Нет свед.	АК00304077	ϋ	в
АК.00294383	Β	Нет свед.	АК00304078	ϋ	с
ΑΚΌ0294384	С	В	ΑΚΌ0304079	Ό	с
ΑΚΌ0294980	Β	Нет свед.	ΑΒΌ0304080	Ό	ϋ

- 149 011857

АК00298989	В	Нет свед.	АК00304081	ϋ	С
АК00298990	В	Нет свед.	АК00304082	ϋ	ϋ
АК00298996	Ό	ϋ	АК00304103	В	Β
АК00298997	Ό	ϋ	АК00304125	С	Β
АК00301338	Ό	В	АК00304126	с	Β
АК00304183	А	Нет свед.	АК00304127	с	Β
АКООЗ 11814	ϋ	В	АК00304154	в	Нет свед.
АК00311815	ϋ	С	АК00304158	А	Нет свед.
АКООЗ 12023	С	Нет свед.	АК00304160	А	Нет свед.
АКООЗ 12024	ϋ	ϋ	АК00304161	ϋ	ϋ
АКООЗ 12025	ϋ	ϋ	АК00304162	ϋ	ϋ
АКООЗ 12026	ϋ	Ώ	АК00304163	ϋ	ϋ
АКООЗ 14578	С	Нет свед.	АК00320123	С	В
АКООЗ 1463 5	ϋ	ϋ	АК00320220	ϋ	ϋ
АКООЗ 14654	ϋ	ϋ	АК00320221	С	Нет свед.
АКООЗ 14656	ϋ	ϋ	АК00320222	ϋ	В
АКООЗ 14685	Α	Нет свед.	АК00320403	ϋ	С
АКООЗ 14719	ϋ	ϋ	АК00320445	В	Нет свед.
АКООЗ 15997	С	В	АК00320446	ϋ	ϋ
АКООЗ 15998	С	В	АК00320447	ϋ	С
АКООЗ 15999	С	В	АК00320448	С	В
АК00320001	1)	ϋ	АК00320449	ϋ	В
АК00320002	С	в	АК00320450	С	В
АК00320073	ϋ	ϋ	АК00320506	ϋ	ϋ
АК00320074	ϋ	в	АК00320547	ϋ	ϋ
АК00320075	С	в	АК00320548	ϋ	ϋ
АК00320076	С	в	АК00320549	ϋ	ϋ

- 150 011857

АК00320077	С	Β	ΑΚΌ0320556	ϋ	ϋ
АК.00320078	ϋ	Β	ΑΚ.00320557	ϋ	ϋ
АК00320079	ϋ	ϋ	ΑΚ.00320574	ϋ	ϋ
ΑΚ00320080	ϋ	С	ΑΚ00320575	ϋ	С
АК00320081	ϋ	ϋ	ΑΚ00320576	Β	Нет свед.
АК.00320082	ϋ	Э	ΑΚ00320577	С	В
АК.00320119	Ό	Ό	ΑΚ.00320578	ϋ	ϋ
АК.00320120	Ό	Ό	ΑΚ00320579	ϋ	ϋ
АК00320121	Ό	ϋ	ΑΚΌ0320580	ϋ	ϋ
АК.00320122	С	Β	ΑΚ00320581	ϋ	ϋ
АК00324375	С	С	ΑΚΌ0320582	ϋ	ϋ
АК00334286	Ό	ϋ	ΑΚ00320774	ϋ	С
АК00334385	ϋ	ϋ	ΑΚΌ0333833	ϋ	ϋ
АК00365387	ϋ	ϋ	ΑΚ00334191	ϋ	ϋ
АК003 65425	ϋ	Нет свед.	ΑΚΌ0340479	ϋ	ϋ
АК00365572	ϋ	ϋ	ΑΚΌ0365388	ϋ	Нет свед.
АК00333802	ϋ	ϋ	ΑΚ00365426	ϋ	В
АК00334188	Ο	С	ΑΚ00333801	Ο	О
АК00334248	ϋ	С	ΑΚΌ0333803	ϋ	С
АК.00334250	ϋ	ϋ	ΑΚΌ0334247	ϋ	с
АК.003 64266	ϋ	С	ΑΚΌ0334249	ϋ	с
АК.00334339	ϋ	ϋ	ΑΚΌ0334341	ϋ	ϋ
АК00365438	ϋ	Э	ΑΚ.00365427	ϋ	ϋ
ΑΒ.00365349	С	С	ΑΚΌ0365193	ϋ	ϋ
ΑΒΌ0340303	ϋ	С	ΑΚΌ0333842	С	в
АК00340156	ϋ	С	ΑΚΌ0365381	С	с
ΑΒΌ0340188	ϋ	С	ΑΚ00340122	ϋ	с
АК00334399	ϋ	ϋ	ΑΚ00340178	ϋ	ϋ
АК00338070	ϋ	ϋ	ΑΚ00334314	ϋ	ϋ
АК00341649	ϋ	ϋ	ΑΚ00338066	ϋ	ϋ
АК00333224	В	Нет свед.	ΑΚ00338071	ϋ	ϋ
ΑΚΌ0333248	В	Нет свед.	ΑΚ00364936	ϋ	с
АЯ00333277	В	Нет свед.	ΑΚΌ0333225	Β	Нет свед.
АК00365083	ϋ	ϋ	ΑΚΌ0333276	Β	Нет свед.
ΑΚΌ0340494	ϋ	Ό	ΑΚ00365369	ϋ	С
АК00365252	ϋ	С	ΑΚ.00333831	ϋ	ϋ
АК00334220	ϋ	С	ΑΚΌ0365082	ϋ	С
АК00334225	ϋ	С	ΑΚ00334218	ϋ	ϋ
АК00340173	ϋ	в	ΑΚ00334222	ϋ	ϋ
АК00333462	ϋ	ϋ	ΑΚ00334226	ϋ	ϋ
АК00333463	ϋ	ϋ	ΑΚ.00340526	ϋ	ϋ
АК00345032	ϋ	ϋ	ΑΚ00345075	ϋ	С
АК.00345090	ϋ	ϋ	ΑΚ.00345094	Ρ	ϋ
АК00345095	ϋ	ϋ	ΑΚ.00345096	ϋ	Ρ
АК.00364924	ϋ	ϋ	ΑΚ00371946	ϋ	Нет свед.
АК.00371947	С	Нет свед.	ΑΚ00371948	ϋ	Нет свед.
АК.00340495	ϋ	Ρ	ΑΚΌ0365084	ϋ	В
АК00364989	ϋ	ϋ	ΑΚ00365019	ϋ	ϋ

Анализ специфичности

При оценке соединений с помощью анализа специфичности было обнаружено, что соединения формулы I являются селективными, они не демонстрировали значительного ингибирования в Катепсине В, Химотрипсине, Тромбине или Лейкоцитной Эластазе.

Пример 9. Фармакокинетический анализ соединений.

- 151 011857

Способы

Первоначально соединения были синтезированы и проверены на активность (1С₅₀) в флюорогенном Ν83/4 протеазном анализе и на клетках системы репликона ВГС, как описано в примере 8 выше.

Плазма-кинетический анализ у КаРиз зр. после IV введения был использован совместно с исследованиями стабильности ΐη νίίΓο человеческих микросом печени (НИМ) и гепатоцитов для направления дизайна метаболически стабильных соединений из соединений с активностью <20 нМ. Эти образцы затем были оптимизированы по физическим свойствам, подобным лекарственным средствам, и введены перорально Кайнз зр. для оценки концентрации в печени, сердце и плазме.

Соединения были проверены на выведение из печени за время вслед за введением индивидуальной пероральной дозы 3 мг/кг крысе. Для любого соединения, обнаруживаемого в печени 8 ч спустя после введения, причем в концентрации по крайней мере в 100 раз больше, чем концентрация, эффективная для ингибирования 50% от максимального ингибирования в анализе репликона (репликон ЕС₅₀), была проведена дополнительная токсикологическая оценка у крыс, используя дозы свыше 30 мг/кг перорально по шкале ВГО в течение семи дней.

Результаты

Соединения АК294381, АК261408, АК333833 и АК334191 имели значения ЕС₅₀ приблизительно 2 нМ и проявляли стабильность ΐη νίίΓο в инкубационном анализе гепатоцитов крысы, собаки и человека, данные которого свидетельствует о низких - умеренных скоростях выведения из печени. Дополнительно, эти соединения проявили высокую степень селективности против серии других протеиновых протеаз и не показали значительного ингибирования изоформ Цитохрома Р450 или каналов активности НЕКО даже при самых высоких концентрациях тестируемых соединений. (10 мкМ).

Для соединений АК294381, АК261408, АК333833 и АК334191 индивидуальная пероральная доза 30 мг/кг у Кайиз зр. спустя 24 ч после введения давала концентрации в печени, которые были по крайней мере в 20 раз больше, чем соответствующие значения репликон ЕС₅₀.

Соединение АК334191 давало концентрации в сердце и плазме на два порядка ниже, чем наблюдаемые в печени, и коррелировало кинетически с концентрациями в печени у тех же самых животных. При клинически более разумной пероральной дозе (3 мг/кг) соединение АК334191 спустя 8 ч после введения давало концентрацию в печени, которая была более чем в 100 раз больше, чем значения репликон ЕС₅₀ соединения. После экспозиции соединения АК334191 при дозе 30 мг/кг перорально по шкале ВГО в течение 7 дней у обрабатываемых животных не были отмечены изменения в весе, аномалии в клинической химии, смертность.

Заключение

Активные, метаболически стабильные, перорально доступные маленькие молекулы ингибиторы Ν83 протеазы ВГС были разработаны. При умеренной пероральной дозировке (3 мг/кг) эти соединения имеют очень высокий уровень в печени (в 100 раз больше, чем их соответствующие значения репликон ЕС50) спустя 8 ч после введения дозы. Экспозиция в плазме и сердце на два порядка ниже, чем наблюдаемые в печени, и такие низкие концентрации уменьшают любой потенциальный системный токсикологический эффект.

Соединение АК334191 не проявляло токсичность у Кайиз зр. при дозах 30 мг/кг по шкале ВГО в течение 7 дней, обеспечивая по крайней мере 10-кратный коэффициент надежности больше предположительной эффективной дозы (3 мг/кг), что дает концентрацию в печени, превышающую в 100 раз значение репликона ЕС50 соединения.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Макроциклическая карбоновая кислота или ацилсульфонамид, имеющие формулу I, VIII или IX где

- 152 011857 (a) К¹ и К², каждый независимо, представляют собой Н, галоген, циано, гидрокси, С1_6алкил, С1. 6алкокси, С1_6алкил, возможно замещенный не более чем тремя атомами фтора, тиазолил, С(О^К⁶К⁷, ΝΚ⁶Κ⁷, С(О)ОК⁸, ΝΗ€.’(Ό)Κ⁸, Ο€.ΉηΝΚΚ⁷ или ОСНпК^9а; где К^9а представляет собой имидазолил или пиразолил; указанный тиазолил в определении К¹ и К² является необязательно замещенным С1_6алкилом, (b) К⁴ представляет собой Н;

(c) К⁵ представляет собой С(О)Ж⁶К⁷, С(О)К⁸, С(О)ОК⁸ или (СО)СНК²¹№(СО)К²²;

(б) К⁶ и К⁷, каждый независимо, представляют собой Н, С1_₆алкил, С₃_₇циклоалкил или К⁶ и К⁷ вместе с азотом, к которому они присоединены, образуют пиперидинил, пиперазинил или морфолинил;

(е) К⁸ представляет собой С1_6алкил, С3_7циклоалкил, С4.10алкилциклоалкил, при этом все они могут быть замещены фенилом; или К⁸ представляет собой тетрагидрофурановое кольцо, присоединенное посредством атома углерода в положении С3 или С₄ тетрагидрофуранового кольца; или К⁸ представляет собой тетрагидропирановое кольцо, присоединенное по положению С₄ тетрагидропиранового кольца;

(ί) Υ представляет собой сульфонимидную группу формулы -С(О^Н8(О)₂К⁹, где К⁹ представляет собой С1_6алкил, С3_7циклоалкил, или К⁹ представляет собой фенил или нафтил, возможно замещенный не более чем тремя группами гало, циано, нитро, С1_6алкила, С1_₆алкокси, или К⁹ представляет собой С₁. ₆алкил, возможно замещенный не более чем тремя атомами фтора, или К⁹ представляет собой 5-членное гетероароматическое кольцо, содержащее 1-3 гетероатома, выбранные из Ν и 8, возможно замещенное до двух раз галогеном; или Υ представляет собой карбоксильную группу;

(д) К¹⁰ и К¹¹, каждый независимо, представляют собой Н, С1_₆алкнл или К¹⁰ и К¹¹ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил;

(И) р=0 или 1;

(ί) К¹² и К¹³, каждый независимо, представляют собой Н, (СН2)пХК⁶К⁷ или К¹² и К¹³, каждый, представляют собой С1_6алкил, возможно замещенный (СН₂)_пОК⁸;

(ί) К²⁰ представляет собой Н;

(k) п=0-3;

(l) V представляет собой О или 8;

(т) представляет собой О или ΝΕ¹'⁵, где К¹⁵ представляет собой Н;

(п) пунктирная линия означает возможную двойную связь;

(о) К²¹ представляет собой С1_₆алкил, С_3-7циклоалкил;

(р) К²² представляет собой С1_₆алкил и (ц) Ζ представляет собой присоединенный фенил, конденсированную С₆ арильную систему или конденсированную 5-9-членную гетероарильную циклическую систему, содержащую 1 или 2 гетероатома, выбранные из Ν и 8.
2. Макроциклическая карбоновая кислота или ацилсульфонамид, имеющие формулу II ⁰⁼<

νν ю 11

П где (a) К¹ и К², каждый независимо, представляют собой Н, галоген, циано, гидрокси, С1_₃алкил, С₁3алкокси;

(b) К⁵ представляет собой С(О^К⁶К⁷, С(О)К⁸, С(О)ОК⁸;

(c) К⁶ и К⁷, каждый независимо, представляют собой Н, С1_₆алкил, С₃_₇циклоалкил;

(б) К⁸ представляет собой С1_₆алкил, С₃_₇циклоалкил, С₄.1₀алкилциклоалкил или 3-тетрагидрофурил;

(е) Υ представляет собой сульфонимидную группу формулы -С(О^Н8(О)₂К⁹, где К⁹ представляет собой С1_₃алкил, С₃_₇циклоалкил или фенил, который возможно замещен не более чем двумя группами гало, циано, нитро, С1_₃алкила, С1_₃алкокси, или Υ представляет собой карбоксильную группу;

(ί) К¹⁰ и К¹¹, каждый независимо, представляют собой Н, С1_₆алкил или К¹⁰ и К¹¹ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют циклобутил;

- 153 011857 (д) представляет собой О или ΝΗ;

(Ь) пунктирная линия означает возможную двойную связь.
3. Макроциклическая карбоновая кислота или ацилсульфонамид по п.1, имеющие общую формулу III где (a) К¹ и К², каждый независимо, представляют собой Н, галоген, циано, гидрокси, С1_₃алкил, С₁. 3алкокси;

(b) К⁵ представляет собой С(О^К⁶К⁷, С(О)К⁸, С(О)ОК⁸;

(c) К⁶ и К⁷, каждый независимо, представляют собой Н, С_1-6алкил, С_3-7циклоалкил или К⁶ и К⁷ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют пиперидинил, пиперазинил или морфоли нил;

(б) К⁸ представляет собой С1_₆алкил, С₃_₇циклоалкил, С₄.1₀алкилциклоалкил или 3-тетрагидрофурил;

(е) Υ представляет собой сульфонимидную группу формулы -С(О^Н8(О)₂К⁹, где К⁹ представляет собой С1_₃алкил, С_3-7циклоалкил или фенил, возможно замещенный не более чем двумя группами гало, циано, нитро, гидрокси, С1_₃алкнла, С_3-7циклоалкила, С1_₃алкокси, или Υ представляет собой карбоксиль ную группу;

(ί) выбирают из О, ΝΗ;

(д) пунктирная линия означает возможную двойную связь.
4. Макроциклический ацилсульфонамид, имеющий общую формулу IV где (a) К¹ и К², каждый независимо, представляют собой Н, галоген, циано, гидрокси, С1_₃алкил, С₁3алкокси;

(b) К⁵ представляет собой С(О)ОК⁸, С(О^НК⁸;

(c) К⁸ представляет собой С1_₆алкил, С₃_₇циклоалкил, 3-тетрагидрофурил;

(б) К⁹ представляет собой С1.₃алкнл, С₃_₇циклоалкил или фенил, который возможно замещен не более чем двумя группами гало, циано, С₁.₃алкила, С1_₃алкокси;

- 154 011857 (е) К¹⁰ и К¹¹, каждый независимо, представляют собой Н, С_1-6алкил или К¹⁰углерода, к которому присоединены, образуют циклобутил;

(ί) V представляет собой О или NН;

(д) пунктирная линия означает возможную двойную связь.
5. Макроциклический ацилсульфонамид, имеющий общую формулу V и К¹¹ вместе с атомом где (а) К¹ и К², каждый независимо, представляют собой Н, галоген, циано, гидрокси, С_1-3алкил, С₁

3алкокси;

(b) К⁵ представляет собой С(О)ОК⁸ или С(О^НК⁸;

(c) К⁸ представляет собой С_1-6алкил, С_3-7циклоалкил или 3-тетрагидрофурил;

(й) К⁹ представляет собой С_1-3алкил, С_3-4циклоалкил или фенил, который возможно замещен не более чем двумя группами гало, циано, С_1-3алкила, С_1-3алкокси;

(е) V представляет собой О или NН;

(ί) пунктирная линия означает возможную двойную связь.
6. Макроциклический ацилсульфонамид, имеющий общую формулу VI

10 11

VI где (a) К¹ и К², каждый независимо, представляют собой Н, галоген, циано, гидрокси, С_1-3алкил, С₁3алкокси;

(b) К⁵ представляет собой С(О)ОК⁸, С(О^НК⁸;

(c) К⁸ представляет собой С_1-6алкил, С_3-7циклоалкил;

(й) К⁹ представляет собой С_1-3алкил, С_3-7циклоалкил или фенил, который возможно замещен не более чем двумя группами гало, циано, С_1-3алкила, С_1-3алкокси;

(е) К¹⁰ и К¹¹, каждый независимо, представляют собой Н, С_1-6алкил или К¹⁰ и К¹¹ вместе с атомом углерода, к которому присоединены, образуют циклобутил;

(ί) пунктирная линия означает возможную двойную связь.
7. Макроциклический ацилсульфонамид, имеющий общую формулу VII

- 155 011857 где (a) К¹ и К², каждый независимо, представляют собой Н, галоген, циано, гидрокси, С₁.₃алкил, С₁₃алкокси;

(b) К⁵ представляет собой С(О)ОК⁸, С(О)\НК⁸;

(c) К⁸ представляет собой С₁.₆алкил, С₃_7циклоалкил;

(б) К⁹ представляет собой С₁.₃алкил, С₃.7циклоалкил или фенил, который возможно замещен не более чем двумя группами гало, циано, С₁.₃алкила, С₁.₃алкокси;

(е) пунктирная линия означает возможную двойную связь.
8. Соединение по п.1, имеющее формулу
9. Фармацевтическая композиция для лечения заболеваний печени, включающая:

(a) эффективное количество соединения по любому из пп.1-8 или фармацевтически приемлемой соли указанного соединения и (b) фармацевтически приемлемый носитель.
10. Способ лечения вирусной инфекции гепатита С у индивидуума, включающий введение пациенту эффективного количества соединения по любому из пп.1-8.
11. Способ по п.10, в котором достигается продолжительный вирусный ответ.
12. Способ лечения фиброза печени у индивидуума, включающий введение пациенту эффективного количества соединения по любому из пп.1-8.
13. Способ усиления функции печени у пациента с вирусной инфекцией гепатита С, включающий введение индивидууму эффективного количества соединения по любому из пп.1-8.
14. Способ по пп.10, 12 или 13, отличающийся тем, что он дополнительно включает введение пациенту эффективного количества нуклеозидного аналога.
15. Способ по п.14, отличающийся тем, что нуклеозидный аналог выбран из группы, включающей рибавирин, левовирин, вирамидин, Ь-нуклеозид и изаторибин.
16. Способ по пп.10, 12 или 13, отличающийся тем, что он дополнительно включает введение индивидууму пирфенидона или его аналога, вводимого перорально, ежедневно в количестве приблизительно от 400 до 3600 мг.
17. Способ по пп.10, 12 или 13, отличающийся тем, что он дополнительно включает введение индивидууму эффективного количества ингибитора ХБ5В РНК-зависимой РНК-полимеразы.
18. Способ по пп.10, 12 или 13, отличающийся тем, что он дополнительно включает введение индивидууму эффективного количества антагониста фактора некроза опухоли, выбранного из группы, состоящей из этанерсепта, инфликсимаба и адалимумаба.
19. Способ по пп.10, 12 или 13, отличающийся тем, что он дополнительно включает введение индивидууму эффективного количества тимозина-α.

- 156 011857
20. Способ по п.19, отличающийся тем, что тимозин-α вводят подкожно два раза в неделю в количестве приблизительно от 1,0 до 1,6 мг.
21. Способ по пп.10, 12 или 13, отличающийся тем, что способ дополнительно включает введение индивидууму эффективного количества интерферона-гамма (ИФН-γ).
22. Способ по п.21, отличающийся тем, что ИФН-γ вводят подкожно в количестве приблизительно от 10 до 300 мкг.
23. Способ по пп.10, 12 или 13, отличающийся тем, что он дополнительно включает введение индивидууму эффективного количества интерферона-альфа (ИФН-α).
24. Способ по п.23, отличающийся тем, что ИФН-α представляет собой моноПЭГилированный (30 кДа, линейный) консенсусный ИФН-α, вводимый с интервалом от каждые 8 дней до каждые 14 дней.
25. Способ по п.23, отличающийся тем, что ИФН-α представляет собой моноПЭГилированный (30 кДа, линейный) консенсусный ИФН-α, вводимый один раз каждые 7 дней.
26. Способ по п.23, отличающийся тем, что ИФН-α представляет собой ΙΝΕΈΚΟΗΝ консенсусный ИФН-α.
27. Способ по пп.10, 12 или 13, отличающийся тем, что он дополнительно включает введение эффективного количества агента, выбранного из 3'-азидотимидина, 2',3'-дидеоксиинозина, 2',3'- дидеоксицитидина, 2,3-дидегидро-2',3'-дидеокситимидина, комбивира, абакавира, адефовира, дипоксила, цидофовира и ингибитора инозинмонофосфатдегидрогеназы.
28. Применение эффективного количества соединения по любому из пп.1-8 в производстве фармацевтической композиции для лечения фиброза печени у пациента.
29. Применение эффективного количества соединения по любому из пп.1-8 в производстве фармацевтической композиции для усиления функции печени у пациента с вирусной инфекцией гепатита С.