EA005823B1 - Способ лечения с использованием конъюгатов лиганд-иммуноген - Google Patents

Способ лечения с использованием конъюгатов лиганд-иммуноген Download PDF

Info

Publication number
EA005823B1
EA005823B1 EA200201042A EA200201042A EA005823B1 EA 005823 B1 EA005823 B1 EA 005823B1 EA 200201042 A EA200201042 A EA 200201042A EA 200201042 A EA200201042 A EA 200201042A EA 005823 B1 EA005823 B1 EA 005823B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
ligand
cells
immunogen
folate
host
Prior art date
Application number
EA200201042A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200201042A1 (ru
Inventor
Филип Стюарт Лоу
Йингдзуан Лу
Original Assignee
Пердью Рисерч Фаундейшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Пердью Рисерч Фаундейшн filed Critical Пердью Рисерч Фаундейшн
Publication of EA200201042A1 publication Critical patent/EA200201042A1/ru
Publication of EA005823B1 publication Critical patent/EA005823B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39541—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against normal tissues, cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds
    • A61K47/551—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds one of the codrug's components being a vitamin, e.g. niacinamide, vitamin B3, cobalamin, vitamin B12, folate, vitamin A or retinoic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K2039/55527—Interleukins
    • A61K2039/55533—IL-2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6081—Albumin; Keyhole limpet haemocyanin [KLH]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Предложены способ и фармацевтическая композиция для усиления опосредованной эндогенным иммунным ответом специфической элиминации популяции патогенных клеток у животного-хозяина, где указанные патогенные клетки преимущественно экспрессируют, исключительно экспрессируют или экспрессируют в повышенных количествах сайт связывания конкретного лиганда. Изобретение включает в себя введение этого лиганда, конъюгированного с иммуногеном, животному-хозяину, несущему указанную популяцию патогенных клеток. Антитела, предсуществующие или вводимые животному-хозяину для выработки пассивного иммунитета, направленные против иммуногена, связанного с конъюгатом лиганд-иммуноген, приводят к элиминации патогенных клеток под действием иммунного ответа хозяина. Вводят по меньшей мере один дополнительный терапевтический фактор, выбранный из группы, состоящей из агента, вызывающего гибель клеток, усилителя проникновения в опухоль, химиотерапевтического агента, противомикробного агента, цитотоксической иммунной клетки и соединения, стимулирующего эндогенный иммунный ответ, причем указанное соединение не связывается с конъюгатом лиганд-иммуноген.

Description

Область изобретения
Данное изобретение связано со способом и фармацевтической композицией для применения при лечении болезненных состояний, характеризующихся наличием патогенных клеточных популяций. Более конкретно, нацеленные на клетку комплексы лиганд-иммуноген вводятся заболевшему хозяину, предпочтительно в комбинации со стимулятором иммунной системы или другим терапевтическим фактором, для усиления и/или ориентации иммунных ответов хозяина на патогенные клетки.
Основа и краткое содержание изобретения
Иммунная система млекопитающих обеспечивает средство узнавания и элиминации опухолевых клеток, иных патогенных клеток и инвазирующих чужеродных патогенов. Хотя в норме иммунная система обеспечивает сильную систему защиты, все еще существует множество примеров, когда раковые клетки, иные патогенные клетки или инфекционные агенты обходят иммунный ответ хозяина и пролиферируют или персистируют с сопутствующим патогенным эффектом у хозяина. Химиотерапевтические агенты и радиационная терапия были предприняты для элиминации реплицирующихся неоплазм. Однако большинство, если не все, из доступных в настоящее время химиотерапевтических агентов и режимов радиационной терапии вызывает побочные эффекты, поскольку их действие связано с разрушением не только раковых клеток, но и с их воздействием также и на нормальные клетки хозяина, такие как клетки гематопоэтической системы. Более того, химиотерапевтические агенты имеют ограниченную эффективность воздействия в случаях, когда у хозяина развивается лекарственная толерантность.
Чужеродные патогены могут также пролиферировать в организме хозяина в обход компетентного иммунного ответа или же тогда, когда иммунная система хозяина подорвана в результате лекарственной терапии или других проблем со здоровьем. Несмотря на то что было развито множество терапевтически активных соединений, многие патогены являются резистентными или же приобретают резистентность к указанным терапевтическим средствам. Способность раковых клеток и инфекционных организмов развивать резистентность к терапевтическим агентам, а также неблагоприятные побочные эффекты доступных в настоящее время противораковых лекарственных средств диктуют необходимость создания новых терапевтических средств, специфических в отношении патогенных клеточных популяций и имеющих пониженную токсичность в целом для организма хозяина.
Исследователями разработаны терапевтические протоколы по разрушению раковых клеток путем специфического нацеливания цитотоксических соединений на такие клетки. В таких протоколах используются токсины, конъюгированные с лигандами, которые связываются с уникальными рецепторами раковых клеток или же с такими рецепторами, экспрессия которых на поверхности раковых клеток повышена с тем, чтобы минимизировать доставку токсина к нормальным клеткам. С использованием такого подхода удалось разработать определенные иммунотоксины, состоящие из антител, направленных на специфические рецепторы, находящиеся на патогенных клетках, при этом указанные антитела связаны с токсинами, такими как рицин, экзотоксином Ркеийотопак, дифтерийным токсином и фактором некроза опухоли. Указанные иммунотоксины нацелены на опухолевые клетки, несущие специфические рецепторы, узнаваемые антителом (Окпек, 8., 1ттипо1. Тойау, 10, рр. 291-295,1989; Ме1Ьу, Е.Ь., Сапсег Век., 53 (8), рр. 1755-1760, 1993; Вейет, Μ.Ό., публикация РСТ под номером XVО 91/07418, опубликованная 30 мая 1991 г.).
Другим подходом для селективного нацеливания на популяции раковых клеток или чужеродных патогенов в организме хозяина является усиление иммунного ответа хозяина против патогенных клеток, что дает возможность избежать необходимости введения соединений, которые могут также проявлять независимую токсичность в отношении организма хозяина. Одной из опубликованных стратегий такого рода иммунотерапии является стратегия связывания антител, например, полученных с помощью генной инженерии мультимерных антител, с поверхностью опухолевых клеток с тем, чтобы расположить константную область антител на поверхности клеток и, таким образом, индуцировать гибель опухолевых клеток в результате различных процессов, опосредованных иммунной системой (Эе Уйа, У.Т., Вю1ощс Тйетару о! Сапсег, 2й ей. РЫ1айе1рЫа, Ырртсой, 1995; 8оий11ои, 1. Р., и.8. Ра!еп1 5,672,486). Однако такой подход оказался осложненным трудностями, связанными с определением опухолеспецифических антигенов. Другим подходом, связанным с усилением иммунокомпетентности системы хозяина, является нацеливание антитела против рецептора Т-клеток или антитела против Рс-рецептора на поверхность опухолевых клеток для промоции прямого связывания иммунных клеток с опухолями (Кгапх. Ό.Μ., и.8. Ра1еп1 5,547,668). Был описан также подход на основе использования вакцин и в таком подходе упор был сделан на вакцину, содержащую антигены, слитые с цитокинами, где цитокин модифицировал иммуногенность вакцинного антигена, и, таким образом, происходила стимуляция иммунного ответа в отношении патогенного агента (РШа1, 8., публикация РСТ под номером νθ 91/11146, опубликованная 7 февраля 1991 г.). Такой способ основан на непрямой модуляции вызываемого иммунного ответа. Другим подходом для уничтожения нежелательных клеточных популяций являлось использование 1Ь-2 или РаЬфрагментов антитимоцитарного глобулина, связанного с антигенами, для элиминации нежелательных Тклеток; однако, если учесть опубликованные экспериментальные данные, этот способ давал возможность элиминировать только 50% клеточной популяции-мишени, а также приводил к неспецифической элиминации клеток ш у1уо (т.е. 50% лимфоцитов периферической крови, которые не являлись Т-клетками, ока
- 1 005823 зывались также уничтоженными (Рои1ейу, Р., публикация РСТ под номером АО 97/37690, опубликованная 16 октября 1997 г.). Таким образом, остается актуальной потребность в терапии, направленной на лечение болезненных состояний, характеризующихся наличием патогенных клеточных популяций в пораженном организме хозяина.
Настоящее изобретение направлено на способ элиминации патогенных клеточных популяций в организме хозяина путем усиления распознавания иммунной системой хозяина таких клеточных популяций и усиления ответа на такие клеточные популяции. Антигенность клеточных патогенов эффективно увеличивалась с целью усиления элиминации популяции патогенных клеток, опосредованной эндогенным иммунным ответом. В этом способе удается избежать или же минимизировать использование цитотоксических или противомикробных терапевтических агентов. Этот способ включает в себя введение конъюгата лиганд-иммуноген, где указанный лиганд специфически связывается с популяцией патогенных клеток ίη νίνο, которая исключительно экспрессирует, преимущественно экспрессирует или же экспрессирует в повышенных количествах лиганд-связывающий фрагмент, а конъюгированный с лигандом иммуноген вызывает продукцию антител или более предпочтительно распознается эндогенными или совместно вводимыми экзогенными антителами в организме животного-хозяина. Опосредованная иммунной системой элиминация патогенных клеток вызвана связыванием конъюгированного с лигандом иммуногена с рецептором, переносчиком или другим представленным на поверхности протеином, экспрессируемым исключительно, экспрессируемым в повышенных количествах или преимущественно экспрессируемым патогенной клеткой. Представленный на поверхности протеин, исключительно экспрессируемый, экспрессируемый в повышенных количествах или преимущественно экспрессируемый патогенной клеткой, является рецептором, не представленным или представленным в малых количествах на непатогенных клетках, что обеспечивает средство для специфической элиминации патогенных клеток. По меньшей мере один дополнительный терапевтический фактор, например стимулятор иммунной системы, агент, вызывающий гибель клеток, усилитель проникновения в опухоль, химиотерапевтический агент, цитотоксическая иммунная клетка или противомикробный агент могут быть совместно введены животному-хозяину для усиления терапевтической эффективности.
В одном из аспектов настоящий способ включает в себя стадии введения лигандов, способных к высокоаффинному специфическому связыванию ίη νίνο с протеинами клеточной поверхности, исключительно экспрессируемыми, преимущественно экспрессируемыми или экспрессируемыми в повышенных количествах на популяции патогенных клеток-мишеней, при этом указанные лиганды конъюгированы с иммуногеном, против которого врожденный или приобретенный иммунитет уже существует или может быть вызван в организме животного-хозяина, и необязательно совместное введение по меньшей мере одного терапевтического фактора, который является активатором эндогенного иммунного ответа или цитотоксическим соединением. В одном из предпочтительных аспектов настоящий способ включает в себя введение животному-хозяину композиции, содержащей конъюгат лиганд-иммуноген, где лиганд представляет собой лиганд, связывающий рецептор фолиевой кислоты или другого фолата. Лиганд является конъюгированным, например, путем ковалентного связывания с иммуногеном, способным вызывать антительный ответ в организме животного-хозяина, или более предпочтительно с иммуногеном, способным связываться с предсуществующими эндогенными антителами (вследствие врожденного или приобретенного иммунитета), или совместно вводимыми антителами (т.е. путем пассивной иммунизации) в организме животного-хозяина. По меньшей мере один дополнительный терапевтический фактор, не способный специфически связываться с комплексом лиганд-иммуноген, но способный стимулировать или усиливать эндогенный иммунный ответ, агент, вызывающий гибель клеток, усилитель проникновения в опухоль, такой как воспалительный или провоспалительный агент, химиотерапевтический агент, цитотоксическая иммунная клетка или противомикробный агент могут быть введены животному-хозяину в сочетании с введением конъюгатов лиганд-иммуноген.
В соответствии с другим аспектом данного изобретения обеспечивается способ усиления эндогенной опосредованной иммунным ответом специфической элиминации популяции патогенных клеток в организме животного-хозяина, несущего указанную популяцию, где члены указанной клеточной популяции имеют избыточное количество сайтов связывания лиганда. Этот способ включает в себя стадию введения указанному хозяину композиции конъюгата лиганд-иммуноген, включающей в себя комплекс лиганда и иммуногена, где указанный иммуноген отличается тем, что он распознается эндогенным или экзогенным антителом у хозяина или напрямую распознается иммунной клеткой хозяина, и по меньшей мере одной дополнительной композиции, включающей в себя терапевтический фактор, причем указанный фактор выбран из группы, состоящей из агента, вызывающего гибель клеток, усилителя проникновения в опухоль, химиотерапевтического агента, цитотоксической иммунной клетки и соединения, способного стимулировать эндогенный иммунный ответ, где указанное соединение не связывается с конъюгатом лиганд-иммуноген.
В соответствии с альтернативным аспектом данного изобретения обеспечивается способ усиления эндогенной опосредованной иммунным ответом специфической элиминации популяции патогенных клеток в организме животного-хозяина, несущего указанную популяцию, где указанная клеточная популяция экспрессирует сайт связывания лиганда. Этот способ включает в себя стадии введения хозяину ком
- 2 005823 позиции, включающей в себя комплекс указанного лиганда и иммуногена, введения хозяину антител, направленных на иммуноген, и введения указанному хозяину по меньшей мере одного дополнительного терапевтического фактора, причем указанный фактор выбран из группы, состоящей из агента, вызывающего гибель клеток, усилителя проникновения в опухоль, химиотерапевтического агента, противомикробного агента, цитотоксической иммунной клетки и стимулятора эндогенного иммунного ответа, который не связывается с комплексом лиганд-иммуноген.
В одном из предпочтительных аспектов данного изобретения обеспечивается способ усиления эндогенной опосредованной иммунным ответом специфической элиминации популяции патогенных клеток в организме животного-хозяина, несущего указанную популяцию, где указанная клеточная популяция преимущественно экспрессирует, исключительно экспрессирует или экспрессирует в повышенных количествах рецептор фолиевой кислоты. Этот способ включает в себя стадию введения указанному хозяину композиции, включающей в себя ковалентно связанный конъюгат иммуногена, где иммуноген отличается тем, что он распознается эндогенным или экзогенным антителом у хозяина или напрямую распознается иммунной клеткой хозяина, и лиганд, содержащий фолиевую кислоту или аналог фолиевой кислоты, имеющий глутамильную группу, где ковалентная связь с иммуногеном осуществляется только через γкарбоксигруппу глутамильной группы. В другом аспекте хозяину вводится по меньшей мере одна дополнительная композиция, содержащая терапевтический фактор, где указанный фактор выбран из группы, состоящей из агента, вызывающего гибель клеток, усилителя проникновения в опухоль, химиотерапевтического агента, противомикробного агента, цитотоксической иммунной клетки и соединения, способного стимулировать эндогенный иммунный ответ, где указанное соединение не связывается с конъюгатом лиганд-иммуноген.
Еще в одном аспекте данного изобретения обеспечивается способ усиления эндогенной опосредованной иммунным ответом специфической элиминации популяции патогенных клеток в организме животного-хозяина, несущего указанную популяцию, где указанная клеточная популяция преимущественно экспрессирует, исключительно экспрессирует или экспрессирует в повышенных количествах рецептор фолиевой кислоты. Этот способ включает в себя стадию введения указанному хозяину композиции, включающей в себя ковалентно связанный конъюгат иммуногена, где иммуноген отличается тем, что он распознается эндогенным или экзогенным антителом у хозяина или напрямую распознается иммунной клеткой хозяина, и лиганд, содержащий фолиевую кислоту или аналог фолиевой кислоты, имеющий глутамильную группу, где ковалентная связь с иммуногеном осуществляется только через αкарбоксигруппу глутамильной группы. В другом аспекте хозяину вводится по меньшей мере одна дополнительная композиция, содержащая терапевтический фактор, где указанный фактор выбран из группы, состоящей из агента, вызывающего гибель клеток, усилителя проникновения в опухоль, химиотерапевтического агента, противомикробного агента, цитотоксической иммунной клетки и соединения, способного стимулировать эндогенный иммунный ответ, где указанное соединение не связывается с конъюгатом лиганд-иммуноген.
Еще в одном аспекте данного изобретения популяция патогенных клеток-мишеней представляет собой популяцию раковых клеток. В другом аспекте популяция патогенных клеток-мишеней представляет собой популяцию инфицированных вирусом эндогенных клеток. В другом аспекте популяция клетокмишеней представляет собой популяцию экзогенных организмов, таких как бактерии, микоплазма, дрожжи или грибы. Конъюгат лиганд-иммуноген связывается с поверхностью опухолевых клеток или патогенных организмов и метит клетки, принадлежащие популяции клеток-мишеней, иммуногеном, таким образом производя запуск иммунно-опосредованного ответа, направленного на популяцию меченых клеток. Антитела, вводимые хозяину при пассивной иммунизации, или антитела, существующие в системе хозяина из предсуществующего врожденного или приобретенного иммунитета, связываются с иммуногеном и запускают эндогенные иммунные ответы. Связывание антитела со связанным с клеткой конъюгатом лиганд-иммуноген приводит к комплемент-опосредованной цитотоксичности, антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности, опсонизации антитела и фагоцитозу, к индуцированной антителом кластеризации рецептора, сигнализирующей о гибели клетки или о переходе ее в покоящееся состояние, или к любому другому гуморальному или клеточному иммунному ответу, стимулированному связыванием антитела со связанными с клеткой конъюгатами лиганд-иммуноген. В случаях, когда антиген может быть напрямую распознан иммунными клетками без предварительной опсонизации антитела, может происходить непосредственное уничтожение патогенных клеток.
Элиминация чужеродных патогенов или инфицированных или неопластических эндогенных клеток может быть дополнительно усилена путем введения терапевтического фактора, способного стимулировать эндогенный иммунный ответ, агента, вызывающего гибель клеток, усилителя проникновения в опухоль, химиотерапевтического агента, цитотоксической иммунной клетки или противомикробного агента. В одном из аспектов цитотоксическая иммуная клетка представляет собой популяцию цитотоксических иммунных клеток, которая выделена, размножена ех νίνο, а затем инъецирована обратно животномухозяину. В другом аспекте изобретения используется иммуностимулятор, причем иммуностимулятором может служить интерлейкин, такой как 1Ь-2, 1Ь-12 или 1Ь-15, или интерферон (ΙΕΝ), такой как ΙΕΝ-α,
- 3 005823
ΙΡΝ-β или ΙΡΝ-γ, или СМ-С8Е. В другом аспекте иммуностимулятором может быть композиция цитокинов, содержащая комбинации цитокинов, таких как 1Ь-2, 1Ь-12 или 1Б-15 в комбинации с ΙΡΝ-α, ΙΡΝ-β, или ΙΡΝ-γ, и СМ-С8Р, или любую их эффективную комбинацию, или же любую другую комбинацию цитокинов.
Еще в одном из аспектов данного изобретения обеспечивается фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективные количества конъюгата лиганд-иммуноген, способного специфически связываться с популяцией патогенных клеток в организме животного-хозяина, для промоции специфической элиминации указанных клеток в результате приобретенного или врожденного иммунного ответа, совместного введения антител или непосредственно под действием иммунной клетки у хозяина, терапевтический фактор, выбранный из группы, состоящей из агента, вызывающего гибель клеток, усилителя проникновения в опухоль, химиотерапевтического агента, противомикробного агента, цитотоксической иммунной клетки и соединения, способного стимулировать эндогенный иммунный ответ, где указанное соединение не связывается с конъюгатом лиганд-иммуноген, и фармацевтически приемлемый носитель. В одном из аспектов фармацевтическая композиция представлена в виде дозировки для парентерального введения с пролонгированным высвобождением. В другом аспекте терапевтический фактор представляет собой иммуностимулятор, содержащий соединение, выбранное из группы, состоящей из интерлейкинов, таких как 1Б-2. 1Б-12, 1Б-15, интерферонов, таких как ΙΡΝ-α, ΙΡΝ-β, или ΙΡΝ-γ, и СМ-С8Р или их комбинации.
Подробное описание изобретения
Разработаны способы терапевтического лечения животного-хозяина, больного раком, или животного-хозяина, инфицированного патогенными организмами. Результатом применения указанных способов является усиление опосредованной иммунным ответом элиминации патогенных клеточных популяций путем изменения/мечения антигенности патогенных клеток, что приводит к их распознаванию и элиминации иммунной системой хозяина. В указанном способе используется конъюгат лиганд-иммуноген, способный к высокоаффинному связыванию с раковыми клетками или другими патогенными агентами. Высокоаффинное связывание может быть присущим лиганду и оно может быть также модифицировано (усилено) с помощью химически модифицированного лиганда или за счет особой химической связи между лигандом и иммуногеном, которая присутствует в конъюгате. В указанном способе может применяться также комбинированная терапия путем использования конъюгата лиганд-иммуноген и дополнительного терапевтического фактора, способного стимулировать эндогенный иммунный ответ, агента, вызывающего гибель клеток, химиотерапевтического агента, усилителя проникновения в опухоль, цитотоксической иммунной клетки или противомикробного агента для усиления опосредованной иммунным ответом элиминации патогенных клеточных популяций.
Способ согласно изобретению используется для усиления опосредованной эндогенным иммунным ответом элиминации популяции патогенных клеток у животного-хозяина, являющегося носителем популяции патогенных клеток. Данное изобретение применимо к популяциям патогенных клеток, которые вызывают различные патологии, такие как рак и инфекционные заболевания. Таким образом, популяция патогенных клеток может быть популяцией раковых клеток, т. е. туморогенных, включая доброкачественные опухоли и злокачественные опухоли, или же она может быть нетуморогенной популяцией клеток. Популяция раковых клеток может возникнуть спонтанно или в результате таких процессов как мутации, возникающие в линии зародышевых клеток животного-хозяина, или соматические мутации, или же они могут быть химически индуцированными, индуцированными вирусами или излучением. Изобретение может быть использовано для лечения таких раковых заболеваний, как карциномы, саркомы, лимфомы, болезнь Ходжкина, меланомы, мезотелиомы, лимфома Беркитта, назофарингеальные карциномы, лейкемии и миеломы. Популяция раковых клеток может включать в себя, не ограничиваясь ими, оральный рак, рак щитовидной железы, эндокринный рак, рак кожи, рак желудка, рак пищевода, рак гортани, рак поджелудочной железы, рак кишечника, рак мочевого пузыря, рак мозга, рак яичника, рак шейки матки, рак матки, рак молочной железы, рак яичка, рак предстательной железы, рак прямой кишки, рак почки, рак печени и рак легкого.
Популяция патогенных клеток может также представлять собой экзогенный патоген или клеточную популяцию, несущую экзогенный патоген, например вирус. Настоящее изобретение применимо к таким экзогенным патогенам, как бактерии, грибы, вирусы, микоплазма и паразиты. Инфекционные агенты, которые подлежат лечению в соответствии с настоящим изобретением, представляют собой любые известные инфекционные организмы, которые являются причиной патогенеза у животного, включая такие организмы, как бактерии, которые являются грамотрицательными или грамположительными кокками или бациллами, ДНК- и РНК-вирусами, включая, но не ограничиваясь ими, ДНК-вирусы, такие как вирусы папилломы, парвовирусы, аденовирусы, герпес-вирусы и вирусы коровьей оспы, и РНК-вирусы, такие как аренавирусы, коронавирусы, риновирусы, респираторные синтициальные вирусы, вирусы гриппа, пикорнавирусы, парамиксовирусы, реовирусы, ретровирусы и рабдовирусы. Особый интерес представляют собой бактерии, которые резистентны к антибиотикам, такие как антибиотикрезистентные виды 81гер1ососси5 и виды 81арйу1ососси5, или бактерии, которые чувствительны к антибиотикам, но вызыва
- 4 005823 ют рекуррентные инфекции, которые лечат антибиотиками, и в результате могут возникнуть резистентные организмы. Такие организмы могут быть подвергнуты лечению под действием конъюгатов лигандиммуноген согласно изобретению в комбинации с более низкими дозами антибиотиков, чем те дозы, которые обычно вводятся больному, чтобы избежать развития подобных резистентных к действию антибиотиков бактериальных штаммов. Настоящее изобретение применимо также к любой грибковой инфекции, видам микоплазмы, паразитам или другим инфекционным организмам, которые вызывают заболевание у животных. Примерами грибковых инфекций, которые могут быть подвергнуты лечению с помощью способов согласно настоящему изобретению, включают в себя грибы, которые растут наподобие плесени или подобные дрожжам, включая, например, грибки, которые вызывают такие заболевания, как дерматомикоз, гистоплазмоз, бластомикоз, аспергиллоз, криптококкоз, споротрихоз, кокцидиоидомикоз, паракокцидиоидомикоз и кандидии. Настоящее изобретение может быть использовано для лечения паразитарных инфекций, включая, но не ограничиваясь ими, инфекции, вызываемые соматическими гельминтами, шистосомой, тканевыми аскаридами, амебами и Р1а8тобшт, видами Тгурапокота, ЬеЦйташа и Тохор1а§та. Паразитами, представляющими особый интерес, являются те, которые экспрессируют фолатные рецепторы и связывают фолат; однако, литература изобилует ссылками на лиганды, обладающие высокой аффинностью к инфекционным организмам. Например, пенициллины и цефалоспорины, известные своей антибиотической активностью и специфическим связыванием с предшественниками бактериальной клеточной стенки, могут сходным образом быть использованы в качестве лигандов для получения конъюгатов лиганд-иммуноген для применения в соответствии с настоящим изобретением. Конъюгаты лиганд-иммуноген согласно изобретению могут быть направлены также на клеточную популяцию, несущую эндогенные патогены, где патоген-специфические антигены преимущественно экспрессированы на поверхности клеток, несущих указанные патогены, и действовать в качестве рецепторов для лиганда с лиганд-специфическим связыванием с антигеном.
Способ согласно изобретению может быть использован как в клинической медицине для лечения человека, так и в ветеринарии.
Таким образом, животные-хозяева, являющиеся носителями популяции патогенных организмов и леченые конъюгатами лиганд-иммуноген, могут быть человеком или, в случае применений в ветеринарной практике, могут быть лабораторными, сельскохозяйственными, домашними или дикими животными. Данное изобретение может быть применимо к животным-хозяевам, включая в их число, но ими не ограничиваясь, человека, лабораторных животных, таких как грызуны (например, мыши, крысы, хомяки и т.д.), кролики, обезьяны, шимпанзе, домашние животные, такие как собаки, кошки и кролики, сельскохозяйственные животные, такие как коровы, лошади, свиньи, овцы, козы, и дикие животные в неволе, такие как медведи, панды, львы, тигры, леопарды, слоны, зебры, жирафы, гориллы, дельфины и китообразные.
Конъюгаты лиганд-иммуноген предпочтительно вводятся животному-хозяину парентерально, например интрадермально, подкожно, внутримышечно или внутривенно. Альтернативно, конъюгат может быть введен животному-хозяину другими используемыми в медицине способами и в любой эффективной дозе и соответствующей терапевтической лекарственной форме, включая лекарственные формы с пролонгированным высвобождением, которые также могут быть использованы. Способ согласно изобретению может применяться в комбинации с хирургическим удалением опухоли, с радиационной терапией, химиотерапией или в сочетании с биологическими методами терапии, такими как другие способы иммунотерапии, включая в их число, но ими не ограничиваясь, терапию моноклональными антителами, лечение с помощью иммуномодулирующих агентов, адоптивный перенос иммунных эффекторных клеток, лечение с помощью гематопоэтических факторов роста, цитокинов, а также вакцинации.
В соответствии с настоящим изобретением, конъюгаты лиганд-иммуноген могут быть выбраны из широкого разнообразия лигандов и иммуногенов. Лиганды должны быть способны к специфической элиминации популяции патогенных клеток в организме животного-хозяина за счет преимущественной экспрессии рецептора этого лиганда на поверхности патогенных клеток, доступного для связывания лиганда. Приемлемые лиганды включают в себя фолиевую кислоту, аналоги фолиевой кислоты и другие молекулы, связывающиеся с рецептором фолата, другие витамины, пептидные лиганды, идентифицируемые на основе скрининга библиотек, опухолеспецифические пептиды, опухолеспецифические аптамеры, опухолеспецифические углеводы, опухолеспецифические моноклональные или поликлональные антитела, ЕаЬ- или 5сЕу (т.е. одноцепочечная вариабельная область) фрагменты или антитела, такие, например, как ЕаЬ-фрагменты антитела, направленного на ЕрпА2 или другие белки, специфически экспрессируемые или доступные исключительно на поверхности метастатических раковых клеток, малые органические молекулы, полученные из комбинаторных библиотек, факторы роста, такие как ЕСЕ, ЕСЕ, инсулин и инсулиноподобные факторы роста, и гомологичные полипептиды, соматостатин и его аналоги, трансферрин, липопротеиновые комплексы, желчные соли, селектины, стероидные гормоны, пептиды, содержащие Агд-С1у-А§р, ретиноиды, различные галектины, лиганды δ-опиоидных рецепторов, лиганды рецепторов холецистокинина А, лиганды, специфические в отношении рецепторов ангиотензина АТ1 или АТ2, лиганды γ-рецептора, активируемого пролифератором пероксисом, β-лактамные антибиотики, малые органические молекулы, включая противомикробные лекарственные средства, и другие молекулы,
- 5 005823 которые специфически связываются с рецептором, преимущественно экспрессируемым на поверхности опухолевых клеток или инфекционных организмов, или фрагменты любых из указанных молекул. Представляющими интерес в случае лигандов, которые связываются с инфекционными организмами, являются любые молекулы, такие как антибиотики или другие лекарственные средства, которые известны своей способностью предпочтительного связывания с микроорганизмом. Данное изобретение приложимо также к лигандам, которые являются молекулами, такими как противомикробные лекарственные средства, сконструированные таким образом, чтобы они могли встроиться в связывающий карман отдельного рецептора, на основе кристаллографической структуры этого рецептора, или другого белка клеточной поверхности, и где такие рецепторы преимущественно экспрессированы на поверхности опухолей, бактерий, вирусов, микоплазм, грибков, паразитов или других патогенов. В предпочтительном варианте данного изобретения также подразумевается, что могут быть использованы лиганды, связывающиеся с любыми опухолевыми антигенами или другими молекулами, преимущественно экспрессируемыми на поверхности опухолевых клеток.
Сайт связывания лиганда может включать в себя рецепторы для любой молекулы, способной специфически связываться с рецептором, где рецептор или другой протеин преимущественно экспрессирован на популяции патогенных клеток, включая, например, рецепторы к факторам роста, витаминам, пептидам, включая опиоидные пептиды, гормонам, антителам, углеводам и малым органическим молекулам. Связывающий сайт может быть также сайтом связывания для любой молекулы, такой как антибиотик или другое лекарственное средство, где указанный сайт отличается тем, что он преимущественно представлен на микроорганизмах. Например, обсуждаемыми сайтами связывания могут быть сайты связывания β-лактамных антибиотиков, таких как пенициллин, в клеточной стенке бактерий, или сайты связывания противовирусного агента, исключительно представленные на поверхности вируса. Данное изобретение также приложимо к сайтам связывания лигандов, таких как противомикробные лекарственные средства, сконструированные таким образом, чтобы встроиться в связывающий сайт рецептора, на основе кристаллографической структуры этого рецептора, и где такой рецептор преимущественно экспрессирован на поверхности патогенных клеток или организмов. Подразумевается также, что в способе согласно изобретению опухолеспецифические антигены могут функционировать в качестве связывающих сайтов для лигандов. Примером опухолеспецифического антигена, который может функционировать в качестве связывающего сайта для конъюгатов лиганд-иммуноген, является внеклеточный эпитоп белков-членов эфринового семейства белков, таких как Ер11Л2. Экспрессия ЕрНА2 в нормальных клетках ограничена межклеточными контактами, но на опухолевых метастатических клетках Ер11Л2 распределен по всей клеточной поверхности. Таким образом, Ер11А2 на метастатических клетках должен быть доступен для связывания, например, с ТаЬ-фрагментом антитела, конъюгированного с иммуногеном, в то время как этот протеин не должен быть доступен для связывания с ТаЬ-фрагментом на поверхности нормальных клеток, и результатом этого является то, что конъюгат лиганд-иммуноген является специфическим для метастатических раковых клеток. Кроме того, в данном изобретении подразумевается применение комбинаций конъюгатов лиганд-иммуноген с тем, чтобы максимизировать нацеливание на патогенные клетки, чтобы добиться их элиминации в результате врожденного или приобретенного иммунного ответа или под действием совместно вводимых антител.
Приемлемыми иммуногенами для применения в настоящем изобретении являются иммуногены, которые способны вызвать продукцию антител у животного-хозяина или которые прежде вызывали у животного-хозяина продукцию антител, в результате чего возник предсуществующий иммунитет, или которые составляют часть системы врожденного иммунитета. Альтернативно, антитела, направленные против иммуногена, могут быть введены животному-хозяину для установления пассивного иммунитета. Подходящие для применения в данном изобретении иммуногены включают в себя антигены или антигенные пептиды, против которых был развит предсуществующий иммунитет в результате проводимых в норме плановых вакцинаций или прежнего естественного контакта с такими агентами, как антигены полиовируса, столбняка, тифа, краснухи, кори, эпидемического паротита, коклюша, туберкулеза и гриппа, и α-галактозильные группы. В таких случаях конъюгаты лиганд-иммуноген будут использованы для того, чтобы направить ранее приобретенный гуморальный или клеточный иммунитет на популяцию патогенных клеток в организме животного-хозяина на элиминацию чужеродных клеток или патогенных организмов. Остальные подходящие иммуногены включают в себя антигенные пептиды, в ответ на которые у животного-хозяина развился новый иммунитет в результате иммунизации против неприродного антигена или гаптена (например, флуоресцеина изотиоцианата или динитрофенила), и антигены, против которых существует врожденный иммунитет (например, суперантигены и дипептид мурамила).
Лиганды и иммуногены согласно изобретению могут быть конъюгированы с помощью любого известного в данной области метода формирования комплекса. Это может включать в себя ковалентное, ионное или водородное связывание лиганда с иммуногеном либо напрямую, либо непрямым образом через связывающую группу, такую как двухвалентный линкер. Обычно конъюгат образуется в результате ковалентного связывания лиганда с иммуногеном через образование амидных, сложноэфирных или иминосвязей между кислотой, альдегидом, гидроксигруппой, аминогруппой или группой гидразона на
- 6 005823 соответствующих компонентах комплекса. В предпочтительном воплощении данного изобретения лигандом является фолиевая кислота, аналог фолиевой кислоты или любая другая связывающаяся с фолатным рецептором молекула, а фолатный лиганд конъюгирован с иммуногеном посредством процедуры, в которой используется трифторуксусный ангидрид для получения γ-эфиров фолиевой кислоты через птероилазидное промежуточное соединение. В результате этой предпочтительной процедуры происходит синтез фолатного лиганда, конъюгированного с иммуногеном только посредством γ-карбоксигруппы фолатных групп глутаминовой кислоты, где γ-конъюгат связывается с фолатным рецептором с высокой аффинностью, дающей возможность образования смесей α-конъюгата и γ-конъюгата. Альтернативно, чистые α-конъюгаты могут быть получены из промежуточных соединений, в которых γ-карбоксигруппа селективно блокирована, α-конъюгат сформирован, а γ-карбоксигруппа впоследствии деблокирована с помощью известных в данной области методов органического синтеза и процессов. Также успешно могут быть использованы и другие витамины в качестве лигандов для получения конъюгатов в соответствии с данным изобретением. Например, конъюгаты лиганд-иммуноген могут быть образованы с биотином и рибофлавином, так же как и с фолатом (см. патенты США под номерами 5,108,921, 5,416,016, и 5,635,382, включенные в данное описание в виде ссылки).
Конъюгаты лиганд-иммуноген согласно изобретению усиливают опосредованную эндогенным иммунным ответом элиминацию популяции патогенных клеток. Эндогенный иммунный ответ может включать в себя гуморальный ответ, клеточно-опосредованный иммунный ответ и любой другой иммунный ответ, эндогенный для организма животного-хозяина, включая опосредованный комплементом лизис клеток, антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ЛЭСС). опсонизацию антител, ведущую к фагоцитозу, кластеризацию рецепторов при связывании антител, ведущую в результате к сигналу апоптоза, антипролиферации или дифференцировки, и прямое распознавание иммунной клеткой доставленного антигена/гаптена. Также подразумевается, что в эндогенном иммунном ответе будет использована секреция цитокинов, которая регулирует такие процессы, как размножение и миграция иммунных клеток. Эндогенный иммунный ответ может включать в себя участие таких типов иммунных клеток, как В-клетки, Т-клетки, включая хелперные и цитотоксические Т-клетки, макрофаги, природные киллеры, нейтрофилы, ЬАК-клетки и им подобные.
Гуморальный иммунный ответ может быть ответом, индуцированным такими процессами, как нормальная плановая вакцинация или активная иммунизация природным антигеном, или неприродным антигеном, или гаптеном (например, флуоресцеинизотиоцианатом), неприродным антигеном, индуцирующим новый иммунитет. Активная иммунизация включает в себя множество инъекций неприродного антигена или гаптена, вводимых по схеме, помимо нормальной плановой вакцинации, для индукции нового иммунитета. Гуморальный ответ может также быть результатом врожденного иммунитета, когда животное-хозяин обладает предсуществующим природным иммунитетом, таким как иммунитет к αгалактозильным группам. Альтернативно, пассивный иммунитет может быть установлен путем введения животному-хозяину антител, таких как природные антитела, полученные из сыворотки, или моноклональные антитела, которые могут быть, а могут и не быть, антителами, полученными генно-инженерным путем, включая гуманизированные антитела. Использование конкретного количества антительного реагента для развития пассивного иммунитета и использование конъюгатов лиганд-иммуноген, где пассивно вводимые антитела направлены на иммуноген, должно обеспечить преимущество стандартного набора реагентов для использования в тех случаях, когда предсуществующий титр антител пациента к другим потенциальным антигенам терапевтически бесполезен. Пассивно вводимые антитела могут быть вводимыми совместно с конъюгатом лиганд-иммуноген, а совместное введение определяется как введение антител до, одновременно или после введения конъюгата лиганд-иммуноген.
Подразумевается, что предсуществующие антитела, индуцированные антитела или пассивно вводимые антитела будут направлены на опухолевые клетки или инфекционные организмы в результате преимущественного связывания конъюгатов лиганд-иммуноген с этими инвазирующими клетками или организмами, и что патогенные клетки будут уничтожаться в результате комплемент-опосредованного лизиса, АЭСС, антителозависимого фагоцитоза или антительной кластеризации рецепторов. Цитотоксический процесс может также включать в себя и другие типы иммунных ответов, таких как клеточноопосредованный иммунитет, а также вторичные иммунные ответы, которые возникают, когда привлеченные антигенпредставляющие клетки фагоцитируют нежелательные клетки и представляют природные опухолевые антигены или антигены чужеродных патогенов иммунной системе для элиминации клеток или организмов, несущих эти антигены.
По меньшей мере одна дополнительная композиция, включающая в себя терапевтический фактор, может быть введена хозяину в качестве адъюванта или в комбинации с описанной выше методологией, чтобы усилить опосредованную иммунным ответом элиминацию популяции патогенных клеток, или же может быть введен более чем один дополнительный терапевтический фактор. Терапевтический фактор может быть отобран из соединения, способного стимулировать эндогенный иммунный ответ, химиотерапевтического агента, противомикробного агента или другого терапевтического фактора, способного дополнять эффективность вводимого комплекса лиганд-иммуноген. Способ согласно изобретению мо
- 7 005823 жет быть предпринят путем введения хозяину, помимо описанных выше конъюгатов, соединений или композиций, способных стимулировать эндогенный иммунный ответ, включая, но не ограничиваясь ими, цитокины или факторы роста иммунных клеток, такие как интерлейкины 1-18, фактор стволовых клеток, основный ЕСЕ, ЕСЕ, О-С8Е, ОМ-С8Е,- ЕБК-2-лиганд, ШБЭА, ΜΙΡ-1α, ТСЕ-α, ТСЕ-β, М-С8Е, ΙΕΝ-α, ΙΕΝ-β, ШЖу, растворимый СЭ23, Ь1Е и их комбинации.
Терапевтически эффективные комбинации указанных цитокинов могут быть использованы также. В предпочтительном воплощении данного изобретения, например, терапевтически эффективные количества 1Ь-2, например, в количествах, варьирующих приблизительно от 5000 МЕ/дозу/день до 500000 МЕ/дозу/день в режиме многократного суточного приема, и [ЕЖа, например, в количествах, варьирующих приблизительно от 7500 МЕ/дозу/день до 150000 МЕ/дозу/день в режиме многократного суточного приема, используются вместе со связанным с фолатом флуоресцеинизотиоцианатом для элиминации патогенных клеток в организме животного-хозяина, несущего такую популяцию клеток. В другом предпочтигельном воплощении 1Б-12 и ΙΕΝ-α используются в терапевтически эффективных количествах, а еще в одном предпочтительном воплощении ΙΜ-15 и ΙΕΝ-α используются в терапевтически эффективных количествах. В альтернативном предпочтительном воплощении ΙΕ-2, ΙΡΝ-α или №N-7 и СМ-С8Е используются в комбинации. Предпочтительно, если используемый терапевтический фактор(ы), такой как ΙΕ-2, ΙΕ-12, ΙΜ-15, ΙΡΝ-α, ΨΝ-γ. и СМ-С8Е, включая их комбинации, активирует(ют) природные клеткикиллеры и/или Т-клетки. Альтернативно, терапевтический фактор или комбинации терапевтических факторов, включая интерлейкин в комбинации с интерфероном и СМ-С8Е, могут активировать другие иммунные эффекторные клетки, такие как макрофаги, В-клетки, нейтрофилы, БАК-клетки и им подобные. В изобретении также предполагается применение любой другой эффективной комбинации цитокинов, включая комбинации других интерлейкинов и интерферонов и колониестимулирующих факторов.
Химиотерапевтические агенты, которые сами по себе являются цитотоксическими и могут действовать в качестве агентов, усиливающих проникновение в опухоль, подходящие для применения в способе согласно изобретению, включают в себя аденокортикоиды, алкилирующие агенты, антиандрогены, антиэстрогены, андрогены, эстрогены, антиметаболиты, такие как цитозинарабинозид, пуриновые аналоги, пиримидиновые аналоги, и метотрексат, бусульфан, карбоплатин, хлорамбуцил, цисплатина и другие соединения платины, тамоксифен, таксол, циклофосфамид, растительные алкалоиды, преднизон, гидроксимочевина, тенипозид, антибиотики, такие как митомицин С и блеомицин, азотистый иприт, нитрозомочевина, винкристин, винбластин, воспалительные и провоспалительные агенты, и любой другой из известных в данной области химиотерапевтических агентов. Другие терапевтические агенты, которые могут быть введены в качестве адъювантов при введении конъюгатов согласно изобретению, включают в себя пенициллины, цефалоспорины, ванкомицин, эритромицин, клиндамицин, рифампин, хлорамфеникол, аминогликозиды, гентамицин, амфотерицин В, ацикловир, трифлуридин, ганцикловир, зидовудин, амантадин, рибавирин и любое другое из известных в данной области противомикробных соединений.
Элиминация популяции патогенных клеток влечет за собой снижение или элиминацию массы опухоли или патогенных организмов, в чем и выражается терапевтический эффект. В случае опухоли, элиминация может быть элиминацией клеток первичной опухоли или клеток, которые метастазировали, или клеток на стадии диссоциации от первичной опухоли. Профилактическое лечение с целью предотвращения возврата опухоли после ее устранения в результате любого лечения, включая хирургическое удаление опухоли, лучевую терапию, химиотерапию или биологическую терапию, также подразумевается в настоящем изобретении. Под профилактическим лечением может подразумеваться первоначальное лечение конъюгатами лиганд-иммуноген, такое как лечение в режиме многократных суточных доз, и/или оно может подразумевать дополнительное лечение или серию курсов лечения с интервалом в несколько дней или месяцев после первоначального лечения (лечений).
Настоящее изобретение направлено также и на фармацевтические композиции, содержащие количество конъюгата лиганд-иммуноген, которое эффективно для мечения популяции патогенных клеток у животного-хозяина с целью специфической элиминации под действием эндогенного иммунного ответа или совместно вводимых антител. Композиция, кроме того, содержит количество дополнительного фактора, эффективного для усиления элиминации патогенных клеток, выбранных из группы, состоящей из агента, вызывающего гибель клеток, усилителя проникновения в опухоль, химиотерапевтического агента, противомикробного агента, цитотоксической иммунной клетки и соединения, способного стимулировать эндогенный иммунный ответ, где указанное соединение не связывается с конъюгатом лигандиммуноген. Фармацевтическая композиция содержит терапевтически эффективные количества конъюгата лиганд-иммуноген и терапевтический фактор, и этот фактор может содержать цитокин, такой как ГБ-2, ГБ-12 или ΙΜ-15, или комбинацию цитокинов, включая ΙΕ-2, ΙΕ-12 или ΙΜ-15, и интерфероны, такие как ЕЕ№а или IΕN-γ, и комбинации интерферонов, интерлейкинов и колоннестимулирующих факторов, таких как ОМ-С8Е.
Используемая суточная доза конъюгата лиганд-иммуноген может существенно варьировать, в зависимости от состояния животного-хозяина, статуса заболевания, подлежащего лечению, молекулярной массы конъюгата, пути его введения и тканевого распределения, и возможности совместного применения
- 8 005823 других терапевтических приемов лечения, таких как радиационная терапия. Эффективное количество, вводимое больному, берется с учетом площади поверхности тела, массы больного и оценки физического состояния больного. Эффективная доза может колебаться приблизительно от 1 нг/кг до 1 мг/кг, более предпочтительно приблизительно от 1 до 500 мкг/кг и наиболее предпочтительно приблизительно от 1 до 100 мкг/кг.
Может быть использован любой эффективный режим введения конъюгата лиганд-иммуноген и терапевтического фактора для переориентировки предсуществующих антител на опухолевые клетки или инфекционные организмы, или для индукции гуморального иммунного ответа на иммуноген. Например, конъюгат лиганд-иммуноген и терапевтический фактор могут быть введены в виде единичной дозы или могут быть разделены на части и вводиться в режиме многократного суточного введения. Кроме того, в качестве альтернативы суточному введению может быть применен колеблющийся (изменяющийся) режим, например, от одного до трех дней в неделю, и для целей, определяющих данное изобретение, такой переменный (пульсирующий) или колеблющийся суточный режим считается эквивалентным ежедневному введению и входящим в объем защиты настоящего изобретения. В предпочтительном воплощении данного изобретения животному-хозяину многократно вводят инъекции конъюгата лиганд-иммуноген и терапевтического фактора для элиминации популяции патогенных клеток. В одном из воплощений животному-хозяину инъекции конъюгата лиганд-иммуноген вводят многократно (предпочтительно приблизительно от 2 вплоть до 50 раз), например, с интервалами от 12 до 72 ч или с интервалами от 48 до 72 ч. Дополнительные инъекции конъюгата лиганд-иммуноген могут быть введены больному с интервалом, насчитывающим дни или месяцы с момента первоначальной инъекции (инъекций), и эти дополнительные инъекции препятствуют повторному проявлению заболевания. Альтернативно, первоначальная инъекция (инъекции) конъюгата лиганд-иммуноген может предотвращать повторное проявление заболевания.
Терапевтический фактор может быть введен животному-хозяину до, после или одновременно с конъюгатом лиганд-иммуноген и терапевтический фактор может быть введен в виде составляющей той же самой композиции, содержащей конъюгат, или в составе иной композиции, нежели композиция конъюгата лиганд-иммуноген.
Любая такого рода терапевтическая композиция, содержащая терапевтический фактор в терапевтически эффективной дозе, может быть использована при воплощении данного изобретения. Кроме того, могут быть использованы конъюгаты лиганд-иммуноген более чем одного вида. Например, животноехозяин может быть преиммунизировано флуоресцеинизотиоцианатом и динитрофенилом, а затем флуоресцеинизотиоцианатом и динитрофенилом, связанными с одним и тем же или различными лигандами, согласно прописи совместного дозирования. В случае химиотерапевтического и противомикробного агентов, терапевтический фактор может быть введен в субоптимальной дозе вместе с конъюгатом лиганд-иммуноген в комбинационной терапии, чтобы избежать развития у животного-хозяина резистентности к химиотерапевтическому или противомикробному агентам.
Конъюгат лиганд-иммуноген и терапевтический фактор предпочтительно вводят в виде парентеральной инъекции, и такие инъекции могут представлять собой внутрибрюшинные инъекции, подкожные инъекции, внутримышечные инъекции, внутривенные инъекции или внутритрахеальные инъекции. Доставка конъюгата лиганд-иммуноген и терапевтического фактора может также осуществляться с помощью медленного насоса. Примеры парентеральных лекарственных форм включают в себя водные растворы активного агента в изотоническом солевом растворе, 5% глюкозе или же других хорошо известных фармацевтически приемлемых жидких носителях, таких как жидкие спирты, гликоли, сложные эфиры и амиды. Парентеральная лекарственная форма согласно изобретению может быть представлена в виде восстанавливаемого лиофилизата, содержащего дозу конъюгата лиганд-иммуноген и терапевтического фактора. В одном из предпочтительных воплощений данного изобретения может быть введена любая из многочисленных лекарственных форм пролонгированного высвобождения, известных в данной области, например биодеградируемые углеводные матриксы, описанные в патентах США под номерами 4,713,249; 5,266,333 и 5,417,982, описания которых включены в настоящее описание в виде ссылки.
Пример 1. Влияние конъюгатов флотат-флуоресцеин-изотиоцианат на выживаемость мышей с имплантатами опухоли легкого.
Шести-восьминедельных самок мышей Ва1Ь/с (весом приблизительно 20-22 г) иммунизировали подкожно путем многократного обкалывания бычьим сывороточным альбумином (В 8А), меченным флуоресцеинизотиоцианатом (Р1ТС), с использованием коммерчески доступного адъюванта (например, адъюванта Фрейнда или Мах™-Со1б). После установления того факта, что титры анти-Р1ТС-антитела достаточно высоки у всех мышей (что доказывается результатами анализа ЕЫ8А образцов сыворотки мышей), каждому животному путем внутрибрюшинных инъекций вводили 5 х 105 клеток М109, сингенной линии клеток рака легкого, которая экспрессирует высокие уровни фолатного рецептора. Затем раковым клеткам, веденным в отдельные локусы, предоставляли возможность достичь слияния друг с другом и последующего роста. На 4 и 7 дни после имплантации раковых клеток всех животных внутрибрюшинно инъецировали либо забуференным физиологическим раствором (РВ8), либо соответствующим количеством Е1ТС, конъюгированного с фолиевой кислотой посредством связанного с гамма
- 9 005823 карбоксилом этилендиаминового мостика. Концентрации инъецированного конъюгата фолат-МТС составляли 0 (контроль РВ8), 4,5, 45, 450 и 4500 нмоль/кг, причем каждую из указанных концентраций конъюгата фолат-МТС вводили путем инъекции 8 мышам в группе, а общее количество инъецированных мышей составило 40 животных. Затем всем мышам вводили серию пятидневных инъекций (дни с 8-го по 12-й) из 5000 МЕ рекомбинантного человеческого 1Ь-2 в порядке стимуляции иммунной системы. Эффективность такой иммунотерапии затем оценивали путем мониторинга выживаемости как функции от времени у мышей, обработанных конъюгатом фолат-МТС, по сравнению с контрольными животными. Как показано на фиг. 1, средняя выживаемость мышей, обработанных конъюгатом фолат-МТС, носила дозозависимый характер, при этом средняя выживаемость мышей в контрольной группе составила 23 дня после имплантации опухоли, а выживаемость мышей, обработанных конъюгатом фолат-МТС, существенно возрастала по мере увеличения вводимой дозы конъюгата. Уже доза 45 нмоль/кг конъюгата фолат-МТС оказалась способной вызывать долговременное выживание мышей, при этом эффективность возрастала пропорционально увеличению доз конъюгата. Несмотря на то что было показано, что конъюгат фолат-МТС концентрируется в опухолях, некоторое количество конъюгата фолат-МТС обнаруживалось также в ткани почек (однако в количествах, не сравнимых с уровнями, наблюдаемыми в нормальных тканях). Не было обнаружено какого-либо токсического эффекта в отношении почечной ткани или ткани других нормальных органов при аутопсии, проводимой квалифицированными патологоанатомамиветеринарами.
Пример 2. Получение сравнительных изображений нормальных и опухолевых тканей с помощью конъюгатов фолат-флуоресцеинизотиоцианат.
Использованные методики подобны тем, которые описаны в примере 1, за исключением того, что животных инъецировали опухолевыми клетками 241К-ЕВР, а умерщвляли мышей вскоре после того, как инъецировали комплексом фолат-МТС, и из тканей делали тонкие срезы, которые затем изучали методом МТС-иммунофлуоресценции с помощью конфокальной флуоресцентной микроскопии с целью определения локализации комплекса фолат-МТС в определенных тканях, включая почки, печень и мышечные ткани. На фиг. 2 показаны микрографические фазово-контрастные изображения срезов различных тканей в качестве контролей вместе с флуоресцентными микрографическими изображениями. Комплексы фолат-МТС обнаруживались в основном локализованными в опухолевой ткани и в клетках проксимальных почечных канальцев, которые исключительно изобилуют рецепторами фолиевой кислоты.
Пример 3. Получение изображений опухолевой ткани с помощью фолата, конъюгированного с флуоресцеинизотиоцианатом, или с помощью меченного фикоэритрином антимышиного козьего 1дС.
Использованные методики подобны тем, которые описаны в примере 2, за исключением того, что были использованы клетки М109, а ткани изучали методами МТС-флуоресценции (зеленые изображения) и фикоэритрин (РЕ)-флуоресценции (красные изображения). В случае РЕ-флуоресценции флуоресцентная метка была связана с козьими антимышиными 1дС-антителами для использования при определении связывания эндогенных мышиных анти-МТС-антител с конъюгатами фолат-МТС, которые аккумулируются на опухолевых клетках. Сравнивали опухолевые ткани, обработанные и не обработанные конъюгатами фолат-МТС, при этом оба типа образцов изучали методом фазово-контрастнной микроскопии, как описано в примере 2. С помощью МТС-флуоресценции выявили локализацию конъюгатов фолат-МТС на опухолевых тканях (фиг. 3). Методом РЕ-флуоресценции показали, что эндогенные мышиные анти-МТС-антитела связываются с конъюгатами фолат-МТС, локализованными на опухолевых клетках. Другие исследования (не показаны) продемонстрировали отсутствие такого 1дС-связывания с нормальными тканями, включая почечную ткань. Отсутствие связывания антител с конъюгатами фолатМТС, локализованными в почечных тканях, следует из того факта, что если рецептор фолата находится на апикальной мембране клеток проксимальных канальцев почек, антитела не имеют доступа к этой области почек. Фазово-контрастные изображения (переданные изображения) показывают морфологию обработанных и необработанных опухолевых тканей, выявляя гибель клеток в образцах обработанных опухолевых тканей.
Пример 4. Влияние конъюгатов фолат-флуоресцеинизотиоцианат на рост солидных опухолей.
Использованные методики подобны тем, которые описаны в примере 1, за исключением того, что каждого животного подкожно инъецировали в область плеча клетками М109 в количестве 1 х 106 (день 0) после первой иммунизации флуоресцеинизотиоцианатом (МТС). Иммунизацию комплексом фолат-МТС после имплантации опухолевых клеток производили в количестве 1500 нмоль/кг комплекса фолат-МТС, вводимого в составе 6 внутрибрюшинных доз с интервалом в 48 ч (дни 7, 9, 11, 13, 15 и 17). Полученные в результате солидные опухоли плеча измеряли и определяли процент увеличения размера опухолей. Кривые роста опухолей, представленные на фиг. 4, показывают, что рост солидных опухолей был в значительной степени ингибирован, когда животных обрабатывали комплексом фолат-МТС в комбинации с Ш-2.
Пример 5. Эффект обработки комбинациями цитокинов.
Использованные методики подобны тем, которые описаны в примере 1, за исключением того, что животных в течение 5 дней (дни с 8-го по 12-й) обрабатывали инъекциями, содержавшими 5000 МЕ ре
- 10 005823 комбинантного человеческого 1Ь-2 вместе либо с ΙΕΝ-α (5 инъекций в день, по 2,5 х 104 Ед./день), либо с 1Б-12 (5 инъекций в день, по 0,5 мкг/день), либо с ΤΝΕ-α (3 инъекции в дни 8, 10 и 12 по 2 мкг/день), затем инъецированием 2 доз по 1500 нмоль/кг комплекса фолат-Е1ТС или аминофлуоресцеина в дни 4-й и 7-й после имплантации опухолевых клеток. Более того, в попытках сократить время, необходимое для получения данных по продолжительности срока выживаемости, опухолевые клетки имплантировали внутрибрюшинно вблизи от печени. Следовательно, продолжительность жизни мышей-опухоленосителей в целом была сокращена по сравнению с таковой, показанной в примере 1. Результаты, приведенные на фиг. 5, показывают, что 1Ь-2 сам по себе был более эффективным в промоции продолжительности срока выживаемости животных, чем комбинированная обработка 1Ь-2 и 1Ь-12 или 1Ь-2 и ΤΝΕ-α. И наоборот, комбинированная обработка 1Ь-2 и ΙΕΝ-α оказалась более эффективной в промоции продолжительности срока выживаемости животных, чем обработка одним только 1Ь-2. Аминофлуоресцеин инъецировали вместе с различными комбинациями цитокина в качестве контроля, поскольку это соединение не связано с фолатом и, следовательно, не будет осуществлять переориентировку антифлуоресцеиновых антител на опухолевые клетки.
Пример 6. Влияние многократных инъекций конъюгатов фолат-флуоресцеинизотиоцианат.
Использованные методики подобны тем, которые описаны в примере 1, за исключением того, что животных внутрибрюшинно инъецировали с интервалом в 48 ч (дни 7, 9, 11, 13, 15 и 17 после имплантации опухолевых клеток) 1500 нмоль/кг комплекса фолат-Е1ТС. Результаты показывают (фиг. 6), что многократные инъекции комплексом фолат-Е1ТС способствуют увеличению продолжительности срока выживаемости животных, обработанных комплексом фолат-Е1ТС и 1Ь-2, по сравнению со случаем, когда 2 инъекции комплекса фолат-Е1ТС назначали в дни 4-й и 7-й после имплантации опухолевых клеток.
Пример 7. Синергический эффект конъюгатов фолат-флуоресцеинизотиоцианат и 1Ь-2.
Использованные методики подобны тем, которые описаны в примере 1, за исключением того, что животных инъецировали 1500 нмоль/кг комплекса фолат-Е1ТС, а некоторых животных обрабатывали либо комплексом фолат-Е1ТС, либо отдельно 1Ь-2. Кроме того, опухолевые клетки имплантировали внутрибрюшинно, как описано в примере 5. Этот эксперимент (см. фиг. 7) был предпринят для определения того, является ли действие комплекса фолат-Е1ТС и 1Ь-2 синергическим в промоции продолжительности срока выживаемости мышей-опухоленосителей. Средние времена выживаемости в контрольной группе (п = 8) и в группах (п = 8), обработанных 1Ь-2, комплексом фолат-Е1ТС или комплексом фолат-Е1ТС + 1Ь-2, составляли 18, 19, 22 и 42 дня соответственно. Результаты, приведенные на фиг. 7, показывают, что способность комплекса фолат-Е1ТС и 1Ь-2 вызывать промоцию продолжительности срока выживаемости мышей-опухоленосителей строго синергична, при этом 1Ь-2 как таковой в низких дозах, в отсутствие комплекса фолат-Е1ТС, обладает отрицательным эффектом на выживаемость мышей, тогда как комплекс фолат-Е1ТС влияет на этот показатель лишь незначительно.
Пример 8. Вовлечение ΝΚ-клеток в синергический эффект конъюгатов фолат-флуоресцеинизотиоцианат и 1Ь-2.
Использованные методики подобны тем, которые описаны в примере 7, за исключением того, что группу животных обрабатывали поликлональными кроличьими антителами (АЬ) против ΝΚ-клеток мыши (антиасиало-ΟΜΙ; \Уако Риге СЬеш1са1 1пби51пс5. Б1б.. КтсЬшопб, Уа.) в комбинации с комплексом фолат-Е1ТС и 1Ь-2. Каждую мышь инъецировали 0,2 мл разведенного 1:10 маточного раствора антитела в 1, 4, 9 и 14 дни после имплантации опухоли с тем, чтобы достичь истощения ΝΚ-клеток. Средние времена выживаемости в контрольной группе животных и в группах животных, обработанных комплексом фолат-Е1ТС + 1Ь-2 или комплексом фолат-Е1ТС + 1Ь-2 + α-ΝΚ-АЬ, составляли 18, 42 и 18,5 дней соответственно. Результаты, приведенные на фиг. 8, свидетельствуют о том, что ΝΚ-клетки опосредуют синергическое увеличение продолжительности срока выживаемости мышей-опухоленосителей, вызванное комбинированной обработкой комплексом фолат-Е1ТС и 1Ь-2.
Пример 9. Развитие клеточного иммунитета против опухолевых клеток Μ109.
Использованные методики подобны тем, которые описаны в примере 1, за исключением того, что опухолевые клетки были имплантированы животным внутрибрюшинно, как описано в примере 5, и животные были инъецированы РВ8 (контроль) или были инъецированы совместно комплексом фолат-Е1ТС (1500 нмоль/кг), 1Ь-2 (250000 МЕ/дозу) и ШЫ-α (25000 Ед./дозу) на 7, 8, 9, 11 и 14 дни после имплантации опухолевых клеток. Кроме того, животных сенсибилизировали путем инъецирования им 5 х 105 клеток Μ109 на 62 день после первоначальной имплантации опухолевых клеток, путем инъецирования 1,5 х 106 клеток М109 на 96 день после первоначальной имплантации опухолевых клеток, или путем инъецирования 2,5 х 105 клеток линии 1 (мыши Ва1Ь/с, спонтанная карцинома легких) на 127 день после первоначальной имплантации опухолевых клеток.
Как показано на фиг. 9, средняя продолжительность срока выживаемости у контрольных мышей, которым инъецировали 5 х 105 клеток М109, составила 18,5 дней. Средняя продолжительность срока выживаемости контрольных мышей, которым инъецировали 1,5 х 106 клеток М109, составила 18 дней. Средняя продолжительность срока выживаемости контрольных мышей, которым инъецировали 2,5 х 105 клеток линии 1, составила 23,5 дней. Средняя продолжительность срока выживаемости контрольных
- 11 005823 мышей, которым инъецировали 5 х 105 клеток М109 и которых обрабатывали комплексом фолат-НТС в комбинации с 1Ь-2 и ΙΕΝ-α, и которых также сенсибилизировали путем введения 5 х 105 клеток М109 на 62-й день, сенсибилизировали клетками М109 в количестве 1,5 х 106 на 96-й день и сенсибилизировали клетками линии 1 в количестве 2,5 х 105 на 127-й день, составила свыше 192 дней.
Результаты, приведенные на фиг. 9, свидетельствуют о развитии долговременного, специфического в отношении определенного типа клеток клеточного иммунитета у животных, обработанных комплексом фолат-Р1ТС в сочетании с 1Ь-2 и ΙΡΝ-α. Этот долговременный иммунитет защищал животных, которым были имплантированы клетки М109 и которые получали нацеленную на фолат иммунотерапию, от повторного проявления заболевания при сенсибилизации этих животных последующим инъецированием клетками М109. Срок выживаемости таких животных после последней сенсибилизации клетками линии 1, возможно, из-за присутствия фолатных рецепторов на поверхности клеток линии 1 в меньшем количестве, чем на клетках М109, и при наличии опухолевых антигенов, распределенных между клетками М109 и клетками линии 1, приводящее к развитию М109-специфического клеточного иммунного ответа, дающего возможность осуществлять перекличку с клетками линии 1.
Пример 10. Эффект дозы 1Ь-2 на срок выживаемости мышей, обработанных конъюгатами фолатфлуоресцеинизотиоцианат.
Использованные методики подобны тем, которые описаны в примере 1, за исключением того, что опухолевые клетки были имплантированы животным внутрибрюшинно, как описано в примере 5, и животные были инъецированы РВ8 (контроль) или были инъецированы совместно комплексом фолат-НТС (1500 нмоль/кг) и Ш-2 в дозах 5 х 103 МЕ (1х), 0,5 х 105 МЕ (10х), 2,5 х 105 МЕ (50х) или 5 х 105 МЕ (100х) на 7, 8, 9, 11 и 14 дни после имплантации опухолевых клеток. Кроме того, животных иммунизировали НТС-меченным гемоцианином моллюска (КЕН) вместо НТС-меченного В8А. Как показано на фиг. 10, средняя продолжительность срока выживаемости мышей, которым имплантировали клетки М109 и которые были обработаны комплексом фолат-НТС, возрастала с увеличением дозы 1Ь-2 выше дозы 1Ь-2 в 5 х 103 МЕ. И наоборот, никаких существенных изменений не было отмечено между средней продолжительностью срока выживаемости контрольных мышей (мыши, которым инъецировали клетки М109 и которых обрабатывали РВ8) и мышей, обработанных только лишь 1Ь-2.
Пример 11. Повышение под действием ΙΕΝ-α срока выживаемости мышей, обработанных конъюгатами фолат-флуоресцеинизотиоцианат и 1Ь-2.
Использованные методики были подобны тем, которые описаны в примере 1, за исключением того, что опухолевые клетки были имплантированы животным внутрибрюшинно, как описано в примере 5, и животные были инъецированы РВ8 (контроль) или были инъецированы совместно комплексом фолатНТС (1500 нмоль/кг) и 1Ь-2 (5000 МЕ/дозу) или комплексом фолат-НТС (1500 нмоль/кг), 1Ь-2 (5000 МЕ/дозу) и ΙΕΝ-α (25000 Ед./дозу) на 7, 8, 9, 11 и 14 дни после имплантации опухолевых клеток. Дополнительную группу мышей инъецировали совместно комплексом фолат-НТС, 1Ь-2 и ΙΕΝ-α, но при этом эти животные не были преиммунизированы Е1ТС-В8А. На фиг. 11 показано, что средний срок выживаемости контрольных мышей, обработанных РВ8, составлял 18,5 дней, средний срок выживаемости мышей, обработанных совместно комплексом фолат-НТС и 1Ь-2, составлял 20,5 дней, средний срок выживаемости мышей, обработанных совместно комплексом фолат-НТС, 1Ь-2 и ΙΕΝ-α, составил более 60 дней, а средний срок выживаемости мышей, обработанных совместно комплексом фолат-НТС, ΙΕ-2 и ΙΕΝ-α, но не преиммунизированных, составил 24,3 дня. Средний срок выживаемости мышей, инъецированных комплексом фолат-НТС и ΙΕ-2, незначительного отличался от такового в группе контрольных мышей, поскольку этих мышей инъецировали ΙΕ-2 в количестве 5000 МЕ/дозу, а как описано в примере 10, для увеличения среднего срока выживаемости мышей, обработанных комплексом фолат-НТС на 7, 8, 9, 11 и 14 дни, необходимы дозы ΙΕ-2, превышающие 5000 МЕ. Результаты, приведенные на фиг. 11, показывают, что ΙΕΝ-α способствует дополнительному увеличению среднего срока выживаемости, достигаемого в результате обработки мышей, которым были имплантированы опухолевые клетки, комплексом фолат-НТС и Ш-2.
Пример 12. Влияние истощения СЭ8+-Т-клеток на нацеленную на фолат иммунотерапию.
Использованные методики были подобны тем, которые описаны в примере 1, за исключением того, что опухолевые клетки были имплантированы животным внутрибрюшинно, как описано в примере 5, и животные были инъецированы РВ8 (контроль) или были инъецированы совместно комплексом фолатЕГГС (1500 нмоль/кг), Ш-2 (5000 МЕ/дозу) и ΙΕΝ-α (25000 Ед./дозу) на 7, 8, 9, 11 и 14 дни после имплантации опухолевых клеток. Дополнительные группы мышей были инъецированы совместно аминофлуоресцеином (1500 нмоль/кг), Ш-2 и ΙΕΝ-α или комплексом фолат-НТС, Ш-2, ΙΕΝ-α и антителом против СЭ8+-Т-клеток (в виде асцитов и вводились на 2, 3, 7, 11 и 15 дни). Как показано на фиг. 12, антитело против СЭ8+-Т-клеток ингибирует увеличение среднего срока выживаемости мышей, обработанных комплексом фолат-НТС, Ш-2 и ΙΕΝ-α, что указывает на то, что СЭ8+-Т-клетки играют роль в активации клеточного иммунного ответа, вызванного нацеленной на фолат иммунотерапией. Аминофлуоресцеин инъецировали вмесите с комбинацией цитокинов Ш-2, ΙΕΝ-α в качестве контроля, поскольку это соединение не связано с фолатом и не будет способствовать нацеливанию антифлуоресцеиновых антител на
- 12 005823 опухолевые клетки. На фиг. 12 показано, что аминофлуоресцеин вместе с 1Ь-2 и ΙΕΝ-α является значительно менее эффективным, нежели комплекс фолат-ИТС, 1Ь-2 и ΙΕΝ-α, в увеличении среднего срока выживаемости мышей, которым имплантированы клетки М109.
Пример 13. Дополнительное влияние СМ-С8Е на нацеленную на фолат иммунотерапию, усиленную Ш-2 и ΙΕΝ-α.
Использованные методики были подобны тем, которые описаны в примере 1, за исключением того, что опухолевые клетки были имплантированы животным внутрибрюшинно, как описано в примере 5. Кроме того, как указано на фиг. 13, животных инъецировали многочисленными цитокинами, включая 1Ь2 (5000 МЕ/дозу), ΙΕΝ-α (25000 Ед./дозу) и 6М-С8Е (3000 Ед./дозу). Цитокины были инъецированы совместно в режиме серийных 5-дневных инъекций в дни от 8-го до 12-го после имплантации клеток М109, которые сопровождались инъекциями 2 доз в 1500 нмоль/кг комплекса фолат-Е1ТС в дни 4-й и 7-й. Результаты, представленные на фиг. 13, показывают, что средний срок выживаемости мышей, которых обрабатывали РВ8, составлял 19 дней, средний срок выживаемости мышей, которых инъецировали 1Ь-2, ΙΕΝ-α и СМ-С8Е без конъюгата фолат-Е1ТС, составлял 22 дня, средний срок выживаемости мышей, которых инъецировали конъюгатом фолат-Е1ТС, 1Ь-2 и ΙΕΝ-α, составлял 38 дней, и средний срок выживаемости мышей, которых инъецировали конъюгатом фолат-ЕЕТС, ΙΕ-2, ШИ-а и СМ-С8Е, составлял более чем 57,5 дней. Результаты показывают, что СМ-С8Е дополнительно усиливает нацеленное на фолат уничтожение опухолевых клеток у мышей, обработанных также ГБ-2 и ШИ-а. Средний срок выживаемости мышей, которых инъецировали РВ8, ΙΕ-2, ^Ν-α и СМ-С8Е, незначительно отличался от такового у контрольных мышей, что указывает на особую важность того, чтобы нацеливание опухолеспецифического иммунного ответа производилось с помощью конъюгата фолат-ЕИС.
Пример 14. Влияние дозы ШИ-а на выживаемость мышей, обработанных конъюгатами фолатфлуоресцеинизотиоцианат.
Использованные методики были подобны тем, которые описаны в примере 1, за исключением того, что опухолевые клетки были имплантированы животным внутрибрюшинно, как описано в примере 5, и животных обрабатывали РВ8 (контроль) или инъецировали совместно комплексом фолат-ЕИС (1500 нмоль/кг) и ШИ-α в дозах 1,5 х 105 МЕ/дозу (6х), 7,5 х 104 МЕ/дозу (3х), 2,5 х 104 МЕ/дозу (1х) и 7,5 х 103 МЕ/дозу (0,3х). Кроме того, животных иммунизировали ЕИС-меченным гемоцианином моллюска (КЬН) вместо ЕИС-меченного В8Л, и животные были инъецированы конъюгатом фолат-ЕЕГС и IΕN-α на 7, 8, 9, 11 и 14 дни после имплантации опухолевых клеток. Как показано на фиг. 14, средний срок выживаемости мышей, которым были имплантированы клетки М109 и которых обрабатывали конъюгатом фолатЕИС, возрастал с увеличением дозы ШИ-α, превышающей 0,8 х 104 МЕ/дозу.
Пример 15. Влияние динитрофенила в качестве иммуногена на нацеленную на фолат иммунотерапию.
Использованные методики были подобны тем, которые описаны в примере 1, за исключением того, что опухолевые клетки были имплантированы животным внутрибрюшинно, как описано в примере 5, и животных обрабатывали РВ8 (контроль) или инъецировали совместно динитрофенилом (ИИР) (1500 нмоль/кг), Ш-2 (5000 МЕ/дозу/день) и ШИ-а (2,5 х 104 Ед./день) или комплексом фолат-динитрофенил (ϋ№) (1500 нмоль/кг), Ш-2 (5000 МЕ/дозу/день) и ШИ-а (2,5 х 104 Ед./день) на 7, 8, 9, 11 и 14 после имплантации опухоли. Дополнительно животных иммунизировали ИИР-меченным гемоцианином моллюска (КЬН). Как показано на фиг. 15, средний срок выживаемости мышей, обработанных комплексом фолат-динитрофенил, ΙΕ-2 и ШИ-щ был выше такового у контрольных мышей (обработанных РВ8) или мышей, обработанных ΌΝΓ, ΙΕ-2 и ШИ-а. Таким образом, динитрофенил также является эффективным иммуногеном для применения в нацеленной на фолат иммунотерапии.
Пример 16. Синергический эффект конъюгатов фолат-флуоресцеинизотиоцианат и ΙΒΝ-α.
Использованные методики были подобны тем, которые описаны в примере 1, за исключением того, что опухолевые клетки были имплантированы животным внутрибрюшинно, как описано в примере 5, и животных обрабатывали РВ8 (контроль), только ШИ-а (7,5 х 104 Ед./день), только комплексом фолатЕИС (1500 нмоль/кг) или же они были инъецированы совместно комплексом фолат-ЕИС (1500 нмоль/кг) и ШИ-а (7,5 х 104 Ед./день) на 7, 8, 9, 11 и 14 дни после имплантации опухоли. Дополнительно животных (по 5 мышей на группу) иммунизировали ЕИС-меченным гемоцианином моллюска (КЬН) вместо ЕИС-меченного В8Л. Как показано на фиг. 16, средние сроки выживаемости животных в группах, обработанных РВ8 (контроль), ШИ-α, комплексом фолат-ЕИС или же комплексом фолат-ЕИС + ЕЕК-а, составляли, соответственно, 17, 17, 23 и 33 дня. Эти результаты показывают, что ^Ν-α, наподобие ΙΕ-2, действует синергично с комплексом фолат-ЕИС в промоции продолжительности выживаемости мышей-опухоленосителей.
Пример 17. Влияние динитрофенила в качестве иммуногена и цитокинов в высоких концентрациях на продолжительность срока выживаемости мышей.
Использованные методики были подобны тем, которые описаны в примере 1, за исключением того, что опухолевые клетки были имплантированы животным внутрибрюшинно, как описано в примере 5, и
- 13 005823 животных обрабатывали РВ8 (контроль), или же они были инъецированы совместно РВ8, 1Ь-2 (2,5 х 105 Ед./день) и ΙΡΝ-α (7,5 х 104 Ед./день), или же комплексом фолат-динитрофенил (ΌΝΡ) (1500 нмоль/кг), 1Ь-2 (2,5 х 105 Ед./день) и ΙΡΝ-α (7,5 х 104 Ед./день) на 7, 8, 9, 11 и 14-й дни после имплантации опухоли. Дополнительно животных иммунизировали ΌΝΡ-меченным гемоцианином моллюска (КЬН). Как показано на фиг. 17, средние сроки выживаемости животных, обработанных комплексом фолатдинитрофенил, 1Ь-2 и ΙΡΝ-α, были выше таковых у контрольных мышей (обработанных РВ8) или мышей, обработанных РВ8, Ш-2 и ΙΡΝ-α. Мыши, обработанные комплексом фолат-ΌΝΡ, Ш-2 и ΙΡΝ-α в концентрациях 2,5 х 105 Ед./день и 7,5 х 104 Ед./день, соответственно, были вылечены полностью.

Claims (9)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ усиления опосредованной эндогенным иммунным ответом специфической элиминации популяции патогенных клеток у животного-хозяина, несущего указанную популяцию, где члены указанной клеточной популяции имеют доступные для лиганда сайты связывания, причем указанный способ включает в себя стадию введения указанному хозяину композиции конъюгата лиганд-иммуноген, включающей в себя комплекс лиганда и иммуногена, где указанный иммуноген характеризуется тем, что он распознается эндогенным или экзогенным антителом у хозяина, или характеризуется тем, что он напрямую распознается иммунной клеткой у хозяина; и соединения, способного стимулировать эндогенный иммунный ответ, причем указанное соединение не связывается с конъюгатом лиганд-иммуноген.
  2. 2. Способ по п.1, где лиганд выбран из группы, состоящей из фолиевой кислоты и других лигандов, связывающихся с фолатным рецептором.
  3. 3. Способ по п.1, где иммуноген представляет собой органическую молекулу, выбранную из флуоресцеина или динитрофенила.
  4. 4. Способ по п.1, где конъюгат лиганд-иммуноген имеет следующую формулу:
  5. 5. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективные количества конъюгата лиганд-иммуноген, способного специфически связываться с популяцией патогенных клеток у животного-хозяина, для специфической элиминации указанных клеток под действием приобретенного или врожденного иммунного ответа, под действием совместно вводимых антител или напрямую под действием иммунных клеток у хозяина, соединения, способного стимулировать эндогенный иммунный ответ, где указанное соединение не связывается с конъюгатом лиганд-иммуноген, и фармацевтически приемлемый носитель.
  6. 6. Фармацевтическая композиция, включающая в себя количество конъюгата лиганд-иммуноген, эффективное для мечения популяции патогенных клеток у животного-хозяина, для специфической элиминации в результате эндогенного иммунного ответа или с помощью совместно вводимых антител, где конъюгатом лиганд-иммуноген является флуоресцеинизотиоцианат или динитрофенил, конъюгированный с фолиевой кислотой посредством связанного с гамма-карбоксилом этилендиаминового мостика (фолат-ΡΙΤΟ), и фармацевтически приемлемый носитель.
  7. 7. Применение конъюгата фолат-ΡΙΤΟ в производстве лекарственного средства для мечения популяции патогенных клеток у животного-хозяина для специфической элиминации в результате эндогенного иммунного ответа или с помощью совместно вводимых антител.
  8. 8. Применение по п.7, где фолат-ΡΙΤΟ имеет следующую формулу:
  9. 9. Конъюгат фолат-ΡΙΤΟ формулы
    - 14 005823
    Влияние нацеленной на фолат иммунотерапии на выживаемость мышей с имплантатами опухоли легкого
EA200201042A 2000-03-31 2001-03-30 Способ лечения с использованием конъюгатов лиганд-иммуноген EA005823B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US19394400P 2000-03-31 2000-03-31
US25584600P 2000-12-15 2000-12-15
PCT/US2001/010254 WO2001074382A1 (en) 2000-03-31 2001-03-30 Method of treatment using ligand-immunogen conjugates

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200201042A1 EA200201042A1 (ru) 2003-04-24
EA005823B1 true EA005823B1 (ru) 2005-06-30

Family

ID=26889531

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200201042A EA005823B1 (ru) 2000-03-31 2001-03-30 Способ лечения с использованием конъюгатов лиганд-иммуноген

Country Status (20)

Country Link
US (2) US7033594B2 (ru)
EP (1) EP1267918A4 (ru)
JP (2) JP5059271B2 (ru)
KR (1) KR100863632B1 (ru)
CN (2) CN1441676B (ru)
AU (2) AU5697001A (ru)
BR (1) BR0109704A (ru)
CA (1) CA2405299C (ru)
CZ (1) CZ304942B6 (ru)
DZ (1) DZ3332A1 (ru)
EA (1) EA005823B1 (ru)
HR (1) HRP20020787B1 (ru)
HU (1) HUP0300421A2 (ru)
IL (2) IL151927A0 (ru)
MX (1) MXPA02009454A (ru)
NO (1) NO332160B1 (ru)
NZ (1) NZ521898A (ru)
PL (1) PL211872B1 (ru)
SK (1) SK288201B6 (ru)
WO (1) WO2001074382A1 (ru)

Families Citing this family (75)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6927203B1 (en) 1999-08-17 2005-08-09 Purdue Research Foundation Treatment of metastatic disease
US7192698B1 (en) 1999-08-17 2007-03-20 Purdue Research Foundation EphA2 as a diagnostic target for metastatic cancer
CA2328356A1 (en) * 1999-12-22 2001-06-22 Itty Atcravi Recreational vehicles
US7645743B2 (en) * 1999-12-22 2010-01-12 Altermune, Llc Chemically programmable immunity
AU5697001A (en) 2000-03-31 2001-10-15 Purdue Research Foundation Method of treatment using ligand-immunogen conjugates
US7101976B1 (en) 2000-09-12 2006-09-05 Purdue Research Foundation EphA2 monoclonal antibodies and methods of making and using same
ATE427948T1 (de) * 2001-04-24 2009-04-15 Purdue Research Foundation Folat-mimetika und deren folatrezeptorbindende konjugate
PL367102A1 (en) 2001-05-02 2005-02-21 Purdue Research Foundation Treatment and diagnosis of macrophage mediated disease
ATE451935T1 (de) * 2001-09-28 2010-01-15 Purdue Research Foundation Behandlungsverfahren mit liganden- immunogenkonjugaten
WO2003034995A2 (en) * 2001-10-22 2003-05-01 The Scripps Research Institute Integrin targeting compounds
US8043602B2 (en) * 2002-02-07 2011-10-25 Endocyte, Inc. Folate targeted enhanced tumor and folate receptor positive tissue optical imaging technology
US8043603B2 (en) 2002-02-07 2011-10-25 Endocyte, Inc. Folate targeted enhanced tumor and folate receptor positive tissue optical imaging technology
AR039429A1 (es) * 2002-04-19 2005-02-16 Endocyte Inc Metodo para aumentar la eliminacion especifica mediada por la respuesta inmune endogena de la poblacion de celulas patogenicas en un animal huesped inmunizado previamente, composicion y combinacion que comprenden un auxiliar th1 y un conjugado hapten-portador de utilidad en el mismo.
ATE530577T1 (de) * 2002-05-10 2011-11-15 Purdue Research Foundation Epha2 agonistische monoklonale antikörper und deren anwendungsverfahren
ES2373715T3 (es) * 2002-05-10 2012-02-08 Medimmune, Llc Anticuerpos monoclonales frente a epha2 y procedimientos de uso de los mismos.
US20050152899A1 (en) * 2002-05-10 2005-07-14 Kinch Michael S. EphA2 agonistic monoclonal antibodies and methods of use thereof
CA2484640C (en) * 2002-05-15 2012-01-17 Endocyte, Inc. Vitamin-mitomycin conjugates
WO2004069159A2 (en) * 2003-01-27 2004-08-19 Endocyte, Inc. Vitamin receptor binding drug delivery conjugates
EP2230249A3 (en) 2003-02-06 2010-12-22 ChronTech Pharma AB Antigen/antibody or ligand/receptor glycosylated specificity exchangers
AU2004229543A1 (en) * 2003-04-11 2004-10-28 Medimmune, Llc EphA2 and non-neoplastic hyperproliferative cell disorders
EP1622646B1 (en) * 2003-05-06 2012-08-08 Purdue Research Foundation Treatment of lupus targeting the macrophages or the folate receptor
ES2317010T3 (es) * 2003-05-30 2009-04-16 Purdue Research Foundation Metodo de diagnostico de la arterosclerosis.
US7601511B2 (en) * 2003-11-12 2009-10-13 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Biotin-facilitated transport in gram negative bacteria
US7785875B2 (en) 2004-07-03 2010-08-31 Mogam Biotechnology Research Institute Polynucleotide encoding HCV epitopes which can bind to various HLA supertypes, immunogenic composition comprising same and method of inducing an HCV-specific immune response using same
KR100790646B1 (ko) * 2004-07-03 2008-01-02 재단법인 목암생명공학연구소 세포매개 면역반응을 효과적으로 유도하는 ｈｃｖ수퍼타입 에피토프, 그를 코딩하는 올리고뉴클레오타이드및 그의 용도
WO2006012527A1 (en) 2004-07-23 2006-02-02 Endocyte, Inc. Bivalent linkers and conjugates thereof
RU2007128036A (ru) * 2004-12-23 2009-01-27 Пердью Рисерч Фаундейшн (Us) Способ получения изображения позитронно-эмиссионной томографией
JP5289935B2 (ja) * 2005-03-16 2013-09-11 エンドサイト，インコーポレイテッド プテロイン酸およびその結合体の合成と精製
CN101203759A (zh) 2005-03-30 2008-06-18 普渡研究基金会 使用细胞叶酸维生素受体定量法而用于癌症预后的方法
WO2007006041A2 (en) 2005-07-05 2007-01-11 Purdue Research Foundation Imaging and therapeutic method using monocytes
US20080280937A1 (en) * 2005-08-19 2008-11-13 Christopher Paul Leamon Ligand Conjugates of Vinca Alkaloids, Analogs, and Derivatives
ES2468240T3 (es) * 2005-08-19 2014-06-16 Endocyte, Inc. Conjugados de ligando de múltiples fármacos
US8795633B2 (en) 2005-09-23 2014-08-05 Purdue Research Foundation Multiphoton in vivo flow cytometry method and device
US8357671B2 (en) 2005-11-10 2013-01-22 James Paulson High affinity Siglec ligands
WO2007092299A2 (en) 2006-02-03 2007-08-16 Purdue Research Foundation Targeted conjugates and radiation
WO2007139815A2 (en) * 2006-05-23 2007-12-06 Purdue Research Foundation Imaging and therapeutic method using progenitor cells
US8486412B2 (en) 2006-06-01 2013-07-16 Mayo Foundation For Medical Education And Research Immunity to folate receptors
EP2087337A4 (en) 2006-11-03 2010-09-08 Purdue Research Foundation METHOD AND DEVICE FOR EX-VIVO FLOW CYTOMETRY
AU2008213702B2 (en) 2007-02-07 2014-04-24 Purdue Research Foundation Positron emission tomography imaging method
WO2008101231A2 (en) 2007-02-16 2008-08-21 Endocyte, Inc. Methods and compositions for treating and diagnosing kidney disease
CN101678124A (zh) * 2007-03-14 2010-03-24 恩多塞特公司 结合配体连接的微管溶素递药缀合物
EP2164525A2 (en) * 2007-05-25 2010-03-24 Purdue Research Foundation Method of imaging localized infections
EP3569251A1 (en) 2007-06-25 2019-11-20 Endocyte, Inc. Conjugates containing hydrophilic spacer linkers
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
EP3656403B1 (en) 2007-08-17 2022-05-11 Purdue Research Foundation Preparation process of psma binding ligand-linker conjugates
CA2698146C (en) 2007-08-30 2016-12-20 Daiichi Sankyo Company, Limited Anti-epha2 antibody
CA2703491C (en) 2007-10-25 2017-06-13 Endocyte, Inc. Tubulysins and processes for preparing
JP5554713B2 (ja) * 2007-11-15 2014-07-23 エンドサイト，インク． 接合体を投与する方法
HUE025618T2 (en) * 2008-05-13 2016-04-28 Univ Yale Kimer small molecules to select antibodies against cancer cells
US8852630B2 (en) 2008-05-13 2014-10-07 Yale University Chimeric small molecules for the recruitment of antibodies to cancer cells
CA2760774A1 (en) * 2009-05-05 2010-11-11 Altermune Technologies, Llc Chemically programmable immunity
KR101580713B1 (ko) 2010-02-24 2015-12-29 이뮤노젠 아이엔씨 엽산염 수용체 1 항체와 면역접합체 및 이들의 용도
US9951324B2 (en) 2010-02-25 2018-04-24 Purdue Research Foundation PSMA binding ligand-linker conjugates and methods for using
MX2012013100A (es) 2010-05-18 2013-01-22 Cerulean Pharma Inc Composiciones y metodos para el tratamiento de enfermedades autoinmunes y otras enfermedades.
UA125636C2 (uk) 2011-04-01 2022-05-11 Іммуноджен, Інк. Способи ідентифікації раку, який може реагувати на анти-folr1 антитіло або анти-folr1 імунокон'югат
US10080805B2 (en) 2012-02-24 2018-09-25 Purdue Research Foundation Cholecystokinin B receptor targeting for imaging and therapy
EP2822386B1 (en) 2012-02-29 2021-05-05 Purdue Research Foundation Folate receptor alpha binding ligands
US20140080175A1 (en) 2012-03-29 2014-03-20 Endocyte, Inc. Processes for preparing tubulysin derivatives and conjugates thereof
KR20200079565A (ko) 2012-08-31 2020-07-03 이뮤노젠 아이엔씨 엽산 수용체 1의 검출을 위한 진단성 검정 및 키트
AU2013331440A1 (en) 2012-10-16 2015-04-30 Endocyte, Inc. Drug delivery conjugates containing unnatural amino acids and methods for using
JP6892218B2 (ja) 2012-11-15 2021-06-23 エンドサイト・インコーポレイテッドＥｎｄｏｃｙｔｅ， Ｉｎｃ． 薬物送達結合体およびｐｓｍａ発現細胞によって引き起こされる疾患の治療方法
AU2013383382B2 (en) 2013-03-15 2017-02-23 Purdue Research Foundation Synthesis and composition of amino acid linking groups conjugated to compounds used for the targeted imaging of tumors
WO2015031815A2 (en) 2013-08-30 2015-03-05 Immunogen, Inc. Antibodies and assays for detection of folate receptor 1
GEP20237496B (en) 2013-10-18 2023-04-10 Deutsches Krebsforsch Labeled inhibitors of prostate specific membrane antigen (psma), their use as imaging agents and pharmaceutical agents for the treatment of prostate cancer
GB201411150D0 (en) * 2014-06-23 2014-08-06 Altermune Technologies Llc Novel aptamers and therapeutic uses thereof
KR20170051462A (ko) * 2014-08-28 2017-05-11 아카데미슈 지켄후이스 라이덴 Ｃｄ９４／ｎｋｇ２ａ 및／또는 ｃｄ９４／ｎｋｇ２ｂ 항체, 백신 조합물
US10188759B2 (en) 2015-01-07 2019-01-29 Endocyte, Inc. Conjugates for imaging
IL257531B2 (en) 2015-09-17 2023-04-01 Immunogen Inc Medicinal compositions containing anti-folr1 immunoconjugates
US20180067121A1 (en) * 2016-09-06 2018-03-08 Nanoco Technologies Ltd. Exosome-conjugated quantum dot nanoparticles and methods of detecting exosomes and cancer using same
US11129906B1 (en) 2016-12-07 2021-09-28 David Gordon Bermudes Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria
US11649288B2 (en) 2017-02-07 2023-05-16 Seattle Children's Hospital Phospholipid ether (PLE) CAR T cell tumor targeting (CTCT) agents
WO2018160622A1 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Endocyte, Inc. Compositions and methods for car t cell therapy
JP6990522B2 (ja) * 2017-04-11 2022-02-03 シスメックス株式会社 免疫細胞の免疫刺激応答性を測定する方法、免疫細胞における免疫シナプスの形成能を判定する方法及び細胞分析装置
CN108051581A (zh) * 2017-12-18 2018-05-18 河北中医学院 非共价键连接法半抗原---载体免疫原的制备
CN112292138A (zh) 2018-01-22 2021-01-29 西雅图儿童医院（Dba西雅图儿童研究所） Car t细胞的使用方法

Family Cites Families (88)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2816110A (en) * 1956-11-23 1957-12-10 Merck & Co Inc Methods for the production of substituted pteridines
US4314988A (en) 1979-10-31 1982-02-09 Baker Instruments Corp. Folic acid derivatives and process for preparation
US4713249A (en) * 1981-11-12 1987-12-15 Schroeder Ulf Crystallized carbohydrate matrix for biologically active substances, a process of preparing said matrix, and the use thereof
US4659655A (en) * 1981-11-25 1987-04-21 Bio-Response, Inc. Method for isolating product-producing cells
US5140104A (en) * 1982-03-09 1992-08-18 Cytogen Corporation Amine derivatives of folic acid analogs
ES8407097A1 (es) 1982-05-12 1984-08-16 Harvard College Un procedimiento para obtener una proteina hibrida.
NL8401226A (nl) 1984-04-16 1985-11-18 Univ Utrecht Farmaceutisch produkt met anti-tumorwerking; gebruik van een farmaceutisch produkt of van farmaceutische samenstellingen in een anti-tumortherapie.
ATE74622T1 (de) 1984-10-31 1992-04-15 Massachusetts Inst Technology Verfahren zum sensibilisieren einer zielzelle zum lysen durch cytotoxische t-lymphkoerperchen.
US5266333A (en) * 1985-03-06 1993-11-30 American Cyanamid Company Water dispersible and water soluble carbohydrate polymer compositions for parenteral administration of growth hormone
US4681760A (en) 1985-04-17 1987-07-21 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method of conferring immunotolerance to a specific antigen
CA1282069C (en) * 1985-09-12 1991-03-26 Damon L. Meyer Antibody complexes of hapten-modified diagnostic or therapeutic agents
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
NZ217821A (en) 1985-10-10 1989-07-27 Biotech Australia Pty Ltd Oral delivery system; complex of active agent and vitamin b12 or analogue thereof
US5117022A (en) * 1985-10-18 1992-05-26 The Board Of Regents, The University Of Texas System Hydrophobic cis-platinum complexes efficiently incorporated into liposomes
JPS6479125A (en) 1986-08-13 1989-03-24 Takeda Chemical Industries Ltd Antitumor agent
GB8626413D0 (en) 1986-11-05 1986-12-03 Gilliland L K Antibodies
US5888512A (en) 1987-01-30 1999-03-30 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Lymphocyte activity regulation by HLA peptides
US4971792A (en) 1987-03-27 1990-11-20 The Wistar Institute Monoclonal antibodies against glycolipid antigens
US5583112A (en) 1987-05-29 1996-12-10 Cambridge Biotech Corporation Saponin-antigen conjugates and the use thereof
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
US4946945A (en) 1987-06-23 1990-08-07 Allergy Immuno Technologies, Inc. Immunotherapy agents for treatment of IgE mediated allergies
DE3880766D1 (de) 1987-09-02 1993-06-09 Ciba Geigy Ag Konjugate von interferon alpha mit immunglobulinen.
DK8189A (da) 1988-01-12 1989-07-13 Bunge Australia Antigen-antistof-konjugater, deres fremstilling og anvendelse
GB8803365D0 (en) 1988-02-13 1988-03-16 Ciba Geigy Ag Antiviral combination
EP0334300A1 (en) 1988-03-21 1989-09-27 Neorx Corporation The use of monoclonal antibodies and conjugates thereof as signals to direct sensitized effector cells to tumor sites
DE3825615A1 (de) 1988-07-28 1990-02-01 Behringwerke Ag Antigenkonstrukte von "major histocompatibility complex" klasse i antigenen mit spezifischen traegermolekuelen, ihre herstellung und verwendung
KR900005995A (ko) 1988-10-31 1990-05-07 우메모또 요시마사 변형 인터류킨-2 및 그의 제조방법
DE68926380T2 (de) 1988-11-14 1996-09-12 Kanegafuchi Chemical Ind Sphärische Vinylchloridharzgranulate und Verfahren zu ihrer Herstellung
JPH02169521A (ja) 1988-12-22 1990-06-29 Ajinomoto Co Inc 自己免疫疾患治療剤
CA2047244C (en) 1989-02-24 2002-09-17 Zanetti Maurizio Genetically engineered immunoglobulins
US5075287A (en) 1989-03-03 1991-12-24 Nisshin Oil Mills, Inc. Muramyl peptide derivatives and immunoregulating compositions containing them
GB8907310D0 (en) 1989-03-31 1989-05-17 Medical Res Council Heteroconjugates
US5688488A (en) * 1989-04-03 1997-11-18 Purdue Research Foundation Composition and method for tumor imaging
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
US5217881A (en) 1989-04-25 1993-06-08 Immunex Corporation Hyperglycosylated cytokine conjugates
JPH04501808A (ja) 1989-07-06 1992-04-02 セラジェン・インコーポレーテッド ハイブリッド分子
JPH04506662A (ja) 1989-07-14 1992-11-19 アメリカン・サイアナミド・カンパニー 接合体ワクチンのためのサイトカイニンおよびホルモンのキヤリヤー
JP2807831B2 (ja) 1989-07-18 1998-10-08 国際試薬株式会社 免疫学的測定法
JPH0686375B2 (ja) 1989-09-25 1994-11-02 大塚製薬株式会社 リポソーム製剤
JPH03206886A (ja) 1989-11-13 1991-09-10 Green Cross Corp:The ヒト腫瘍細胞抗原に対し特異性を持つマウス―ヒトキメラａ１０抗体
ES2171392T3 (es) 1990-08-29 2002-09-16 Ct Hospitalier Regional De Nan Poliligandos de proteina unidos a un nucleo de proteina estable.
JP3105629B2 (ja) 1991-04-23 2000-11-06 サングスタット メディカル コーポレイション 特異的結合ペアのメンバーの細胞活性調節接合体
IT1244983B (it) 1991-04-29 1994-09-13 Raggio Italgene Spa Procedimento per rivelare sequenze di acidi nucleici e kit per la sua utilizzazione.
JP3173814B2 (ja) 1991-05-30 2001-06-04 株式会社タムラ製作所 フラックス塗布方法
US6335434B1 (en) * 1998-06-16 2002-01-01 Isis Pharmaceuticals, Inc., Nucleosidic and non-nucleosidic folate conjugates
US5159079A (en) * 1991-12-20 1992-10-27 Eli Lilly And Company 2-piperidones as intermediates for 5-deaza-10-oxo- and 5-deaza-10-thio-5,6,7,8-tetrahydrofolic acids
US5650398A (en) 1992-07-02 1997-07-22 Cambridge Biotech Corporation Drug delivery enhancement via modified saponins
US5273965A (en) 1992-07-02 1993-12-28 Cambridge Biotech Corporation Methods for enhancing drug delivery with modified saponins
DK0609606T3 (ru) 1992-10-01 1997-03-17 Wellcome Found
DE4238416A1 (de) 1992-11-13 1994-05-19 Max Planck Gesellschaft Bestimmung von Peptidmotiven auf MHC-Molekülen
US5747024A (en) 1993-03-08 1998-05-05 Immunex Corporation Vaccine adjuvant comprising interleukin-15
US5932208A (en) 1993-03-19 1999-08-03 Vacsyn S.A. Compositions and methods for the use of such compositions in human therapeutics, characterized by the association of a muramyl peptide with a cytokine
US5482698A (en) 1993-04-22 1996-01-09 Immunomedics, Inc. Detection and therapy of lesions with biotin/avidin polymer conjugates
DE69433519T2 (de) 1993-07-14 2004-11-11 The Regents Of The University Of California, Oakland Sich selbst zusammensetzendes polynukleotid-abgabesystem, das dendrimer-polykationen enthält
US5834441A (en) 1993-09-13 1998-11-10 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Adeno-associated viral (AAV) liposomes and methods related thereto
CN1044781C (zh) * 1994-02-05 1999-08-25 丹东市生物制品免疫技术应用研究中心 复方免疫抗生素
US5417982A (en) * 1994-02-17 1995-05-23 Modi; Pankaj Controlled release of drugs or hormones in biodegradable polymer microspheres
JP2660661B2 (ja) 1994-05-11 1997-10-08 株式会社バイオセンサー研究所 遺伝子の定量方法
JPH09503003A (ja) 1994-06-16 1997-03-25 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティ クラスｉｉのアルファ鎖断片による免疫調節
US5547668A (en) 1995-05-05 1996-08-20 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Conjugates of folate anti-effector cell antibodies
US5753625A (en) 1995-05-12 1998-05-19 Sangstat Medical Corporation Treatment for inhibiting the progression of autoimmune disease
US5602171A (en) * 1995-06-07 1997-02-11 Sugen Inc. Methods of inhibiting phosphatase activity and treatment of disorders associated therewith using naphthopyrones and derivatives thereof
WO1997024140A1 (en) 1996-01-02 1997-07-10 The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University Interaction of hla proteins with members of the hsp70 family of proteins
US6509313B1 (en) * 1996-02-28 2003-01-21 Cornell Research Foundation, Inc. Stimulation of immune response with low doses of cytokines
EP0833666B1 (en) 1996-04-10 2003-12-10 Sangstat Medical Corporation Cytomodulating conjugates of members of specific binding pairs
US6231859B1 (en) 1996-12-02 2001-05-15 Aquila Biopharmaceuticals, Inc. Saponin adjuvant compositions
US6080725A (en) 1997-05-20 2000-06-27 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Immunostimulating and vaccine compositions employing saponin analog adjuvants and uses thereof
NZ500779A (en) 1997-05-20 2001-06-29 Galenica Pharmaceuticals Inc Triterpene saponin analogs having adjuvant and immunostimulatory activity
US5891432A (en) * 1997-07-29 1999-04-06 The Immune Response Corporation Membrane-bound cytokine compositions comprising GM=CSF and methods of modulating an immune response using same
WO1999020626A1 (en) * 1997-10-17 1999-04-29 Purdue Research Foundation Folic acid derivatives
DE19746173A1 (de) * 1997-10-18 1999-04-22 Boehringer Ingelheim Int Tumorvakzine
US6262029B1 (en) 1998-08-14 2001-07-17 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Chemically modified saponins and the use thereof as adjuvants
AU771330B2 (en) * 1998-08-19 2004-03-18 Baxter Healthcare Sa Immunogenic beta-propionamido-linked polysaccharide protein conjugate useful as a vaccine produced using an N-acryloylated polysaccharide
WO2001032207A1 (en) * 1998-10-30 2001-05-10 United States Army Medical Research And Materiel Command Methods for conferring active/passive immunotherapy
AUPQ071299A0 (en) 1999-06-02 1999-06-24 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Vitamin directed dual targeting therapy
CA2380888A1 (en) 1999-08-17 2001-02-22 Purdue Research Foundation Treatment of metastatic disease
DE60045075D1 (de) 1999-08-17 2010-11-18 Purdue Research Foundation Anti-epha2 antikörper als krebsdiagnostikum
AU7123500A (en) 1999-09-08 2001-07-09 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Polysialic acid-klh conjugate vaccine
EE200200158A (et) 1999-09-25 2003-06-16 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatoorsed nukleiinhapped
MXPA02003059A (es) 1999-09-27 2002-09-30 Univ Iowa Res Found Metodos relacionados con interferon inducido por acido nucleico inmunoestabilizador.
US20020039583A1 (en) 1999-09-30 2002-04-04 Subjeck John R. Stress protein compositions and methods for prevention and treatment of cancer and infectious disease
JP2003527352A (ja) 2000-01-13 2003-09-16 アンティジェニクス インコーポレーテッド Ｃｐｇおよびサポニンの自然免疫刺激化合物、ならびにそれらの方法
AU5697001A (en) 2000-03-31 2001-10-15 Purdue Research Foundation Method of treatment using ligand-immunogen conjugates
ATE451935T1 (de) 2001-09-28 2010-01-15 Purdue Research Foundation Behandlungsverfahren mit liganden- immunogenkonjugaten
AR039429A1 (es) 2002-04-19 2005-02-16 Endocyte Inc Metodo para aumentar la eliminacion especifica mediada por la respuesta inmune endogena de la poblacion de celulas patogenicas en un animal huesped inmunizado previamente, composicion y combinacion que comprenden un auxiliar th1 y un conjugado hapten-portador de utilidad en el mismo.
WO2004069159A2 (en) 2003-01-27 2004-08-19 Endocyte, Inc. Vitamin receptor binding drug delivery conjugates
US20050222068A1 (en) 2003-10-23 2005-10-06 Mourich Dan V Method and antisense composition for selective inhibition of HIV infection in hematopoietic cells
WO2007092299A2 (en) 2006-02-03 2007-08-16 Purdue Research Foundation Targeted conjugates and radiation

Also Published As

Publication number Publication date
CN1441676B (zh) 2012-08-22
JP2003528924A (ja) 2003-09-30
HRP20020787B1 (en) 2012-06-30
MXPA02009454A (es) 2003-04-10
US20010031252A1 (en) 2001-10-18
US20060067946A1 (en) 2006-03-30
US8105608B2 (en) 2012-01-31
HRP20020787A2 (en) 2004-02-29
EA200201042A1 (ru) 2003-04-24
NZ521898A (en) 2004-11-26
IL151927A0 (en) 2003-04-10
SK13962002A3 (sk) 2004-02-03
IL213240A0 (en) 2011-07-31
EP1267918A1 (en) 2003-01-02
JP2012092097A (ja) 2012-05-17
NO332160B1 (no) 2012-07-09
WO2001074382A9 (en) 2002-10-10
CN1441676A (zh) 2003-09-10
CA2405299C (en) 2014-07-22
HUP0300421A2 (hu) 2003-06-28
KR20020087431A (ko) 2002-11-22
JP5632813B2 (ja) 2014-11-26
DZ3332A1 (fr) 2001-10-11
AU5697001A (en) 2001-10-15
PL357943A1 (en) 2004-08-09
JP5059271B2 (ja) 2012-10-24
KR100863632B1 (ko) 2008-10-15
CN102805868A (zh) 2012-12-05
SK288201B6 (sk) 2014-06-03
AU2001256970C1 (en) 2008-07-03
WO2001074382A1 (en) 2001-10-11
PL211872B1 (pl) 2012-07-31
US7033594B2 (en) 2006-04-25
AU2001256970B2 (en) 2007-06-14
CA2405299A1 (en) 2001-10-11
CZ304942B6 (cs) 2015-02-04
IL213240A (en) 2015-04-30
BR0109704A (pt) 2003-04-29
EP1267918A4 (en) 2007-06-27
NO20024577L (no) 2002-11-05
NO20024577D0 (no) 2002-09-24
CZ20023240A3 (cs) 2003-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA005823B1 (ru) Способ лечения с использованием конъюгатов лиганд-иммуноген
AU2001256970A1 (en) Method of treatment using ligand-immunogen conjugates
EP1434603B1 (en) Method of treatment using ligand-immunogen conjugates
AU2003224989B2 (en) Adjuvant enhanced immunotherapy
JP5554713B2 (ja) 接合体を投与する方法
US8168164B2 (en) Targeted conjugates and radiation
ZA200207768B (en) Method of treatment using ligand-immunogen conjugates.
KR20050016350A (ko) 어쥬번트 보강된 면역요법
AU2002353785A1 (en) Method of Treatment Using Ligand-Immunogen Conjugates

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU