JP6990522B2 - 免疫細胞の免疫刺激応答性を測定する方法、免疫細胞における免疫シナプスの形成能を判定する方法及び細胞分析装置 - Google Patents
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Description
図2を参照して、細胞分析装置1は、測定装置2と情報処理装置3を備える。測定装置2は、免疫細胞の表面抗原に結合し且つ光学シグナルを生じうる捕捉体と、免疫細胞との複合体を含む試料を、フローサイトメーターにより光学的に測定する。情報処理装置3は、測定装置2による測定結果を解析し、解析結果を表示部320に表示する。
実施形態1の解析処理のステップS53に代えて、CPU301は、ステップS52で抽出された測定データについて、X軸に細胞の総蛍光シグナル強度を割り当て、Y軸に蛍光シグナルを示すエリアを割り当てた2Dスキャッタグラムを作成し(図11d)、所定の範囲(R3)にある測定データ数を計数してもよい。範囲(R3)は、細胞の総蛍光シグナル強度(X軸)において細胞あたりの共刺激分子CD28の所定の発現量を反映する範囲でゲーティングし、かつ蛍光シグナルを示すエリア(Y軸)において共刺激分子CD28の局在を反映する所定の範囲でゲーティングする。範囲(R3)における測定データを計数することにより、免疫刺激に対して応答性の免疫細胞の数が計数される。この実施形態において、範囲(R3)にあるドットに対応する細胞は、免疫シナプスが形成されている傾向があり、その細胞はこの実施形態における免疫刺激に対して応答性を有すると判定される。
実施形態1の解析処理のステップS53に代えて、CPU301は、ステップS52で抽出された細胞の測定データについて、X軸に蛍光シグナルを示すエリアについての階級値を割り当て、Y軸に度数を割り当てたヒストグラムを作成して、表示部320に表示してもよい。CPU301は、さらにステップS54に代えて、このヒストグラムから、ステップS52で抽出された測定データの、蛍光シグナルを示すエリアの平均値、中央値、最頻値を算出してもよい。得られた平均値、中央値、最頻値を、例えば、健常者由来の生物試料から得られた、免疫細胞において蛍光シグナルを示すエリアの標準化された平均値、中央値、最頻値と比較することで、さらに解析されてよい。このさらなる解析において、例えばその試料の前記最頻値を示す階級値(蛍光シグナルを示すエリア)が、標準化された最頻値を示す階級値(蛍光シグナルを示すエリア)よりも小さい場合、これは共刺激分子CD28が局在していることを示唆し、結果的に、その試料は免疫刺激に対して応答性が高いと判定され得る。
以上の解析処理では、撮像された画像データに基づいた解析を例に示したが、撮像された画像データ以外の測定データからも免疫刺激応答性の免疫細胞を解析することができる。例えば、実施形態1における測定装置2(図4)において、光学ユニット203gと、カメラ203に代えて、ダイクロイックミラー203j、203kと、前方散乱受光部203lと蛍光受光部203mを用いる。光源203aから照射された波長λ1の光は、フローセル203cの内部を通過する試料に照射され、これにより、免疫細胞から波長λ1の前方散乱光が生じる。光源203bから照射された波長λ2の光は、フローセル203cの内部を通過する試料に照射され、これによりPEから波長λ3の蛍光が生じる。なお、実施形態4における試料は実施形態1で用いた複合体である。波長λ1の前方散乱光はダイクロイックミラー203jにより反射されて、前方散乱受光部203lにより受光される。波長λ3の蛍光はダイクロイックミラー203jを透過して、ダイクロイックミラー203kにより反射されて蛍光受光部203kにより受光される。前方散乱受光部203l及び蛍光受光部203mはフォトマルチプライヤである。この例において、図7aのステップS22で得られる光学シグナルは前方散乱光シグナル及び蛍光シグナルであり、図7bのステップS14では解析用パラメータとして「パルス幅(w)」、「パルス面積(A)」及び「パルスの高さ(H)」が得られる。図12を参照しつつ、これらの解析用パラメータについて説明する。
(1) クローンT細胞の調製
5×106のCD4陽性細胞(Stemcell Technologies: ST-70026)およびCD8陽性細胞(フナコシ: 0508-100, コスモバイオ: PB08C-1)を、1μg/mLのLEAF(商標) Purified anti-human CD3 Antibody(Biolegend: 317315)、10 ng/mLのRecombinant human IL-2(rhIL-2)(R&D systems: 202-IL-500)、0.2μg/ mL のPhytohemagglutinin-L(PHA)(SIGMA: L4144-5MG)と2%ヒト血清(SIGMA: H4522-100ML)を添加したYssel’s培地(Gemini Bio-Products:400102)に播種し、1×106の末梢血単核球細胞および1×104 のJY細胞と14日間、共培養した。14日後、T細胞を限界希釈法にて0.3、1.0及び3.0 cells/ wellとなるように96 ウェルプレートに播種し、1×104の末梢血単核球細胞とコロニーが形成されるまで培養した。コロニーが形成されたウェルからT細胞を回収し、クローンT細胞を得た。以下、得られたT細胞を「調製クローンT細胞」とも呼ぶ。
24ウェルプレートに、抗CD3抗体(BioLegend #300414 Clone:UCHT1)の溶液(0.01 mg/ml)を1ウェルあたり300μl添加して、抗CD3抗体をウェル表面に固相化した。以下、得られたプレートを「抗CD3抗体固相化プレート」とも呼ぶ。
抗CD3抗体固相化プレートに、調製クローンT細胞を1ウェルあたり約5×105 cellsとなるように加えた。そして、抗CD28抗体(BioLegend #302914 Clone:CD28.2)を終濃度0.01 mg/mlとなるようにウェル中の細胞に加えた。そのプレートを遠心分離した後(200 G、30秒)、37℃で30分間インキュベートした。調製クローンT細胞を、ピペッティングによりウェル表面から回収した。回収したT細胞を、1%パラホルムアルデヒド(PFA)を含む固定液を用いて固定化した。固定化したT細胞を、PE標識抗マウスIgG抗体(BioLegend #405307)を用いて免疫染色した。染色したT細胞(5×105 cells/20μl)を、Imaging FCM(ImageStreamX MarkII Imaging Flow Cytometer:Amnis)を用いて測定した。
Imaging FCMを用いて測定して得られた、上記の免疫刺激なしのT細胞を含むサンプルの測定データ(図15a及びb)と、上記の免疫刺激ありのT細胞を含むサンプルの測定データ(図15c及びd)の多重パラメータ解析を行った。
(1) サイトカイン産生細胞の測定
実施例1と同様にして、プレートの各ウェルに抗CD3抗体を固相化して、抗CD3抗体固相化プレートを作製した。また、実施例1と同様にして、ヒト末梢血からクローンT細胞を調製した。抗CD3抗体固相化プレートに、クローンT細胞を1ウェルあたり約5×105 cellsとなるように加えた。そして、抗CD28抗体(BioLegend #302914 Clone:CD28.2)を終濃度0.01 mg/mlとなるようにウェル中の細胞に加え、37℃で4時間インキュベートした。その後、各ウェルにブレフェルジンAを終濃度10μg/mlとなるように加え、2時間インキュベートした。その後、プレートを氷上に静置し、各ウェル中の細胞を回収した。回収したT細胞を、1%PFAを含む固定液で固定し、次いで、0.5%サポニン及び1%BSAを含むPBS溶液で膜透過処理を行った。処理後の細胞を、Alexa Fluor(登録商標)488標識抗IFN-γ抗体(BioLegend # 502517 Clone:4S.B3)を用いて免疫染色した。染色したT細胞をフローサイトメーター(BD biosciences:Accuri(商標))で測定した。測定データを常法により解析して、測定したT細胞におけるIFN-γ陽性細胞の割合を取得した。
上記(1)で使用したT細胞と同一のウェルから播種したT細胞を用い、CD28を指標として、免疫シナプスを形成した細胞を測定した。測定データを解析して、測定したT細胞における免疫シナプスを形成した細胞の割合を取得した。なお、測定及びデータ解析は、実施例1と同様にして行った。
縦軸をIFN-γ陽性細胞の割合(%)とし、横軸を免疫シナプス形成細胞の割合(%)として、データをプロットした。得られたグラフを図16に示す。図16から分かるように、免疫刺激を受けたクローンT細胞において、免疫シナプスの形成とINF-γ産生との間に相関が認められた(R2=0.8371)。よって、接触面が解消された免疫細胞における免疫シナプスを検出することにより、サイトカイン産生に基づく従来法と同様に、免疫刺激により活性化された免疫細胞を検出できることが示された。
(1) 免疫細胞の刺激及び測定
実施例1と同様にして、プレートの各ウェルに抗CD3抗体を固相化して、抗CD3抗体固相化プレートを作製した。また、実施例1と同様にして、ヒト末梢血からクローンT細胞を調製した。抗CD3抗体固相化プレートに、調製クローンT細胞を1ウェルあたり約5×105 cellsとなるように加えた。そして、抗CD28抗体(BioLegend #302914 Clone:CD28.2)及びPE標識抗CD40L抗体(BD biosciences # 340477 Clone: 89-76)をそれぞれ終濃度が0.01 mg/ml及び0.01mg/mlとなるようにウェル中の細胞に加えた。そのプレートを遠心分離した後(200 G、60秒)、37℃で30分間インキュベートした。ウェル中の上清みを除去した後、調製クローンT細胞をピペッティングにより分散させ、ウェル表面から回収した。回収したT細胞を、1%PFAを含む固定液を用いて固定化した。固定化したT細胞を、APC標識抗CD3抗体(BioLegend # 300411 Clone: UCHT1)を用いて免疫染色した。なお、このT細胞は、PE標識抗CD40L抗体で免疫刺激されたので、抗CD40L抗体でも免疫染色された状態にある。染色したT細胞(5×105 cells/20μl)を、Imaging FCM(ImageStreamX MarkII Imaging Flow Cytometer:Amnis)を用いて測定した。
Imaging FCMを用いて測定して得られた、上記の免疫刺激なしのT細胞を含むサンプルの測定データ(図18a及びb)と、上記の免疫刺激ありのT細胞を含むサンプルの測定データ(図18c及びd)の多重パラメータ解析を行った。実施例2における計測処理及び解析処理の一例を、図20に示した。簡単には、Imaging FCMを用いて測定した透過光画像、蛍光画像(CD3及びCD40L)に基づいて画像解析し、細胞のサイズ(ピクセル数)、細胞のアスペクト比、細胞における蛍光シグナルを示すエリア(ピクセル数)及び該エリア内の総蛍光シグナル強度(細胞の総蛍光シグナル強度)を計測した。最初に、X軸に細胞サイズを割り当て、Y軸に細胞のアスペクト比を割り当てた2Dスキャッタグラム(図20a参照)を作成し、所定の範囲(Cells)にあるドットに対応する細胞の測定データを抽出した。次いで、範囲(Cells)内の測定データについて、細胞の総蛍光シグナル強度が所定の範囲(Tcells)にあるドットに対応する測定データをさらに抽出した(図20b参照)。範囲(Tcells)内の測定データについて、IS_CD3及びIS_CD40Lと表示された領域内(図18c及びd、図19c及びd参照)にあるドットの数をそれぞれ計数した。また、図18c及びd、図19c及びdのスキャッタグラム上にあるドットの数(範囲(Tcells)内にあるドットの数)を計数した。そして、範囲(Tcells)内のドットの数に対する範囲(IS_CD3又はIS_CD40L)内のドットの数の割合を、下記の式(2)より算出した。結果を以下の表2及び表3に示した。なおISはImmune Synapseの略語である。
(1) 他家細胞及びクローンT細胞
他家細胞として、所定のドナー由来のiPS細胞(他家iPS細胞)から作製した網膜色素上皮細胞(RPE細胞)を用いた。RPE細胞は、株式会社ヘリオスより提供された。24ウェルプレートにRPE細胞を1ウェルあたり約5×105 cellsとなるように播種し、37℃、5%CO2にて7日間インキュベートした。これにより、ウェル底面にRPE細胞を接着させたプレートを得た。クローンT細胞は、以下の方法で調整した。5×106のCD4陽性細胞(Stemcell Technologies: ST-70026)およびCD8陽性細胞(フナコシ: 0508-100, コスモバイオ: PB08C-1)を、1μg/mLのLEAF(商標) Purified anti-human CD3 Antibody(Biolegend: 317315)、10 ng/mLのRecombinant human IL-2(rhIL-2)(R&D systems: 202-IL-500)、0.2 μg/ mL のPhytohemagglutinin-L (PHA)(SIGMA: L4144-5MG)と2% ヒト血清(SIGMA: H4522-100ML)を添加したYssel’s培地(Gemini Bio-Products:400102)に播種し、1.2×105のRPE細胞と14日間、共培養した。
14日後、T細胞を限界希釈法にて0.3, 1.0および3.0 cells/ wellとなるように96 ウェルプレートに播種し、1×104のRPE細胞とコロニーが形成されるまで培養した。コロニーが形成されたウェルからT細胞を回収し、クローンT細胞を得た。
RPE細胞を播種したプレートに、調製クローンT細胞を1ウェルあたり約5×105 cellsとなるように加えた。そのプレートを遠心分離した後(200 G、120秒)、37℃で30分間インキュベートした。ウェル中の上清みを除去した後、調製クローンT細胞をピペッティングにより分散させ、ウェル表面から回収した。回収したT細胞を、1%PFAを含む固定液を用いて固定化した。固定化したT細胞を、APC標識抗CD3抗体(BioLegend # 300411 Clone: UCHT1)、抗CD28抗体(BioLegend #302914 Clone:CD28.2)、PE標識抗CD40L抗体(BD biosciences # 340477 Clone: 89-76)又はPE標識抗OX40抗体(BioLegend #350003 Clone: Ber-ACT35)を用いて免疫染色した。抗CD28抗体で免疫染色したT細胞は、さらにPE標識抗マウスIgG抗体(BioLegend #405307)を用いて免疫染色した。染色したT細胞(5×105 cells/20μl)を、Imaging FCM(ImageStreamX MarkII Imaging Flow Cytometer:Amnis)を用いて測定した。
Imaging FCMを用いて測定して得られた、上記の免疫刺激なしのT細胞を含むサンプルの測定データ(図18a及びb)と、上記の免疫刺激ありのT細胞を含むサンプルの測定データ(図18c及びd)の多重パラメータ解析を行った。計測処理及び解析処理は、実施例2と同様である。簡単には、Imaging FCMを用いて測定した透過光画像、蛍光画像(CD3、CD28、CD40L又はOX40)に基づいて画像解析し、細胞のサイズ(ピクセル数)、細胞のアスペクト比、細胞における蛍光シグナルを示すエリア(ピクセル数)及び該エリア内の総蛍光シグナル強度(細胞の総蛍光シグナル強度)を計測した。最初に、X軸に細胞サイズを割り当て、Y軸に細胞のアスペクト比を割り当てた2Dスキャッタグラムを作成し、所定の範囲(Cells)にあるドットに対応する細胞の測定データを抽出した。次いで、範囲(Cells)内の測定データについて、細胞の総蛍光シグナル強度が所定の範囲(Tcells)にあるドットに対応する測定データをさらに抽出した。範囲(Tcells)内の測定データについて、IS_CD3、IS_CD28、IS_CD40L及びIS_OX40と表示された領域内(図22b及びd、図23b及びd、図24b及びd、図25b及びd参照)にあるドットの数をそれぞれ計数した。また、各スキャッタグラム上にあるドットの数(範囲(Tcells)内にあるドットの数)を計数した。そして、範囲(Tcells)内のドットの数に対する範囲(IS_CD3、IS_CD28、IS_CD40L及びIS_OX40)内のドットの数の割合を、下記の式(3)より算出した。結果を以下の表4~7に示した。
Claims (24)
- (i)測定対象の免疫細胞と免疫刺激因子とを接触させる工程と、
(ii)前記測定対象の免疫細胞に、前記測定対象の免疫細胞とは異なる物質との接触により接触面を形成させ、前記接触を物理的及び/又は化学的に解消する工程と、
(iii)前記測定対象の免疫細胞と、前記接触をしていた面における表面抗原に結合し且つ光学シグナルを生じうる捕捉体とを接触させる工程と、
(iv)前記捕捉体から生じた光学シグナルを検出する工程と、
(v)検出した光学シグナルに基づいて、前記測定対象の免疫細胞が免疫刺激応答性を有するか否かを判定する工程と
を含み、
前記測定対象の免疫細胞とは異なる物質が、非生物材料の固相及び/又は前記測定対象の免疫細胞とは異なる細胞であり、
前記測定対象の免疫細胞が、T細胞及び/又はNK細胞である、
免疫細胞の免疫刺激応答性を測定する方法。 - 工程(i)の免疫刺激因子が、工程(iii)の前記接触をしていた面における表面抗原に結合し且つ光学シグナルを生じうる捕捉体として共用され、
工程(i)と工程(iii)とが同時に実施される、請求項1に記載の方法。 - 工程(i)の免疫刺激因子が、工程(ii)の前記測定対象の免疫細胞とは異なる物質上に存在する、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記接触を、攪拌、超音波処理又は化学的処理により解消させる、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記測定対象の免疫細胞を、細胞の大きさ、凝集度及び/又は比重に基づいて、細胞を含む試料から分取する工程をさらに含む、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記表面抗原が、TCRα/β、CD3、CD40L、OX40、CD28、CTLA4、PD-1及びICOSの少なくとも1つを含む、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記表面抗原が共刺激分子である、請求項1~6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記捕捉体が、光学シグナルを生じうる物質と、前記接触面における表面抗原に直接的または間接的に結合する物質とを含む、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記接触面における表面抗原に直接的又は間接的に結合する物質が、抗体、抗体フラグメント、一本鎖抗体又はアプタマーである、請求項8に記載の方法。
- 前記免疫刺激因子が、免疫刺激抗体、免疫刺激ペプチド、主要組織適合性分子(MHC分子)、及びMHC分子と抗原ペプチドの複合体の少なくとも1つを含む、請求項1~9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記測定対象の免疫細胞とは異なる物質が、他家細胞、抗原提示細胞、癌細胞、容器、マルチウェルプレート、スライド又はビーズである、請求項1~10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記測定対象の免疫細胞がT細胞である、請求項1~11のいずれか一項に記載の方法。
- 工程(v)において、前記光学シグナルに基づいて、前記接触をしていた面における、捕捉体が結合した表面抗原の分布を反映する値を計測し、計測した値を閾値と比較することにより、前記測定対象の免疫細胞が免疫刺激応答性を有するか否かを判定する、請求項1~12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記捕捉体が蛍光物質を含み、
工程(iv)において、前記捕捉体から生じた蛍光シグナルを検出し、
工程(v)において、前記検出した蛍光シグナルに基づいて蛍光画像を取得し、前記蛍光画像において表面抗原の分布を反映する蛍光シグナルを示すエリアを計測して、前記エリアを閾値と比較することにより、前記測定対象の免疫細胞が免疫刺激応答性を有するか否かを判定する、請求項13に記載の方法。 - 工程(v)において、前記エリアが閾値よりも小さい場合に、前記測定対象の免疫細胞は免疫刺激応答性を有すると判定する、請求項14に記載の方法。
- 前記測定対象の免疫細胞とは異なる物質が、他家細胞、抗原提示細胞、癌細胞、又はビーズである場合、前記測定対象の免疫細胞と、前記測定対象の免疫細胞とは異なる物質と、前記捕捉体との複合体に対して、フローサイトメーター又はイメージングサイトメーターを用いて前記工程(iv)を実行するか、あるいは
前記測定対象の免疫細胞とは異なる物質が、容器、マルチウェルプレート又はスライドである場合、前記測定対象の免疫細胞とは異なる物質と前記測定対象の免疫細胞との接触を解消させ、前記測定対象の免疫細胞とは異なる物質から離れた、前記測定対象の免疫細胞と前記捕捉体との複合体に対して、フローサイトメーター又はイメージングサイトメーターを用いて前記工程(iv)を実行する、
請求項1~15のいずれか一項に記載の方法。 - (i)測定対象の免疫細胞と免疫刺激因子とを接触させる工程と、
(ii)前記測定対象の免疫細胞に、前記測定対象の免疫細胞とは異なる物質との接触により接触面を形成させ、前記接触を物理的及び/又は化学的に解消する工程と、
(iii)前記測定対象の免疫細胞上の前記接触をしていた面に形成された免疫シナプス、又は前記接触をしていた面において前記測定対象の免疫細胞に結合した免疫刺激因子を、光学シグナルを生じうる捕捉体により標識する工程と、
(iv)前記捕捉体から生じた光学シグナルを検出する工程と、
(v)検出した光学シグナルに基づいて、前記測定対象の免疫細胞が免疫刺激応答性を有するか否かを自動的に判定する工程と
を含み、
前記測定対象の免疫細胞とは異なる物質が、非生物材料の固相及び/又は前記測定対象の免疫細胞とは異なる細胞であり、
前記測定対象の免疫細胞が、T細胞及び/又はNK細胞である、
免疫細胞の免疫刺激応答性を測定する方法。 - (i)測定対象の免疫細胞と免疫刺激因子とを接触させる工程と、
(ii)前記測定対象の免疫細胞に、前記測定対象の免疫細胞とは異なる物質との接触により接触面を形成させ、前記接触を物理的及び/又は化学的に解消する工程と、
(iii)前記測定対象の免疫細胞上の前記接触をしていた面に形成された免疫シナプス、又は前記接触をしていた面において前記測定対象の免疫細胞に結合した免疫刺激因子を、光学シグナルを生じうる捕捉体により標識する工程と、
(iv)前記捕捉体から生じた光学シグナルを検出する工程と、
(v)検出した光学シグナルに基づいて、前記測定対象の免疫細胞における免疫シナプスの局在を判定する工程と
を含み、
前記測定対象の免疫細胞とは異なる物質が、非生物材料の固相及び/又は前記測定対象の免疫細胞とは異なる細胞であり、
前記測定対象の免疫細胞が、T細胞及び/又はNK細胞である、
免疫細胞における免疫シナプスの形成能を判定する方法。 - 免疫刺激因子による免疫刺激を受けた測定対象の免疫細胞と、光学シグナルを生じうる捕捉体との複合体であって、前記免疫細胞が、前記免疫細胞とは異なる物質との接触により接触面が形成された後、前記接触が物理的及び/又は化学的に解消された細胞であり、前記捕捉体が、前記免疫細胞と前記免疫細胞とは異なる物質とが接触していた面に形成された免疫シナプス、又は前記接触をしていた面において前記免疫細胞に結合した前記免疫刺激因子に結合されている前記複合体を導入する導入部と、
前記導入部から供給された前記複合体を撮像する撮像部と、
前記撮像部により撮像された画像に基づいて、前記測定対象の免疫細胞が免疫刺激応答性を有するか否かを判定する解析部と
を含み、
前記測定対象の免疫細胞とは異なる物質が、非生物材料の固相及び/又は前記測定対象の免疫細胞とは異なる細胞であり、
前記測定対象の免疫細胞が、T細胞及び/又はNK細胞である、細胞分析装置。 - 前記解析部が、前記画像に基づいて、前記接触をしていた面における免疫シナプスを構成する分子の分布を反映する値を取得し、取得した値を閾値と比較することにより、前記測定対象の免疫細胞が免疫刺激応答性を有するか否かを判定する、請求項19に記載の装置。
- 前記捕捉体が蛍光物質を含み、
前記画像が蛍光画像を含み、
前記免疫シナプスを構成する分子の分布を反映する値が、前記蛍光画像に基づいた前記分子の分布を反映する蛍光シグナルを示すエリアを含み、
前記エリアが前記閾値よりも小さい場合に、前記測定対象の免疫細胞は免疫刺激応答性を有すると判定する、請求項19又は20に記載の装置。 - 前記画像が透過光画像を含み、
前記解析部が、前記透過光画像に基づいて前記測定対象の免疫細胞の大きさを反映した値を取得し、前記測定対象の免疫細胞の大きさを反映した値と前記免疫シナプスを構成する分子の分布を反映する値とに基づいて、前記測定対象の免疫細胞が免疫刺激応答性を有するか否かを判定する、請求項20又は21に記載の装置。 - 免疫刺激因子による免疫刺激を受けた測定対象の免疫細胞と、光学シグナルを生じうる捕捉体との複合体であって、前記免疫細胞が、前記免疫細胞とは異なる物質との接触により接触面が形成された後、前記接触が物理的及び/又は化学的に解消された細胞であり、前記捕捉体が、前記免疫細胞と前記免疫細胞とは異なる物質とが接触していた面に形成された免疫シナプス、又は前記接触をしていた面において前記免疫細胞に結合した前記免疫刺激因子に結合されている前記複合体を導入する導入部と、
前記導入部から供給された前記複合体に光を照射し、生じた前記複合体からの光学シグナルを検出する検出部と、
検出した光学シグナルに基づいて、前記測定対象の免疫細胞が免疫刺激応答性を有するか否かを判定する解析部と
を含み、
前記測定対象の免疫細胞とは異なる物質が、非生物材料の固相及び/又は前記測定対象の免疫細胞とは異なる細胞であり、
前記測定対象の免疫細胞が、T細胞及び/又はNK細胞である、細胞分析装置。 - 前記捕捉体が蛍光物質を含み、
前記検出部は、前記複合体から生じた蛍光シグナルを検出し、
前記解析部が、前記蛍光シグナルに基づいて、前記免疫シナプスを構成する分子の分布を反映する値を取得し、取得した値を閾値と比較することにより、前記測定対象の免疫細胞が免疫刺激応答性を有するか否かを判定し、
前記分子の分布を反映する値が、前記複合体からの蛍光シグナルのパルス幅、その蛍光パルスの高さ及びパルス面積の少なくとも一つを含む、請求項23に記載の装置。
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