DE60005241T2 - Verfahren zur Herstellung von Phosphatidylserinen - Google Patents
Verfahren zur Herstellung von Phosphatidylserinen Download PDFInfo
- Publication number
- DE60005241T2 DE60005241T2 DE60005241T DE60005241T DE60005241T2 DE 60005241 T2 DE60005241 T2 DE 60005241T2 DE 60005241 T DE60005241 T DE 60005241T DE 60005241 T DE60005241 T DE 60005241T DE 60005241 T2 DE60005241 T2 DE 60005241T2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- serine
- phosphatides
- phospholipase
- reaction
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 150000008106 phosphatidylserines Chemical class 0.000 title claims abstract description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 37
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 102000011420 Phospholipase D Human genes 0.000 claims abstract description 21
- 108090000553 Phospholipase D Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims abstract description 18
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 13
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 37
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 34
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 21
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 17
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 17
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 17
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 7
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 claims description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 5
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 5
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 5
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 4
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 3
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 claims description 3
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 2
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000005210 alkyl ammonium group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 239000008348 synthetic phosphatidyl choline Substances 0.000 claims description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims 2
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 claims 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 1
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 20
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 17
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 17
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 14
- 229960002713 calcium chloride Drugs 0.000 description 14
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 14
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 12
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 9
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M sodium docusate Chemical compound [Na+].CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 4
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 125000001095 phosphatidyl group Chemical group 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 1,2-di-O-myristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 0.000 description 2
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 2
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 2
- JCABVIFDXFFRMT-DIPNUNPCSA-N [(2r)-1-[ethoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCC)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC JCABVIFDXFFRMT-DIPNUNPCSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 229960003724 dimyristoylphosphatidylcholine Drugs 0.000 description 2
- 239000008344 egg yolk phospholipid Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- 208000018152 Cerebral disease Diseases 0.000 description 1
- -1 DMPC are used Chemical class 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 235000007882 dietary composition Nutrition 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 150000002190 fatty acyls Chemical group 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003842 industrial chemical process Methods 0.000 description 1
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 229940042880 natural phospholipid Drugs 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 230000006439 vascular pathology Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
- Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung von Phosphatidylserinen.
- Insbesondere bezieht sich die Erfindung auf ein Verfahren zur Herstellung von Phosphatidylserinen, ausgehend von natürlichen oder synthetischen Phospholipiden, indem diese mit Serin in einem wässrigen Medium umgesetzt werden.
- Phosphatidylserine haben vielfältige Bedeutung, insbesondere bei der Herstellung von pharmazeutischen Zusammensetzungen, die zur Behandlung von zerebralverwickelten Erkrankungen unterschiedlicher Natur, wie senilem Verfall oder vaskulären Pathologien, bei der Herstellung von besonderen Liposomformulierungen, und, noch kürzlicher, der Vermarktung von diätischen Zusammensetzungen, die natürliche Lecithine, insbesondere Soja, enthalten, die mit Phospatidyl-(L)-Serin angereichert sind, nachfolgend als PS bezeichnet, und welche ebenfalls mehrfach ungesättigte Fettsäureacylreste enthalten.
- Indem zunehmend industrielle Mengen von PS niederer Kosten gebraucht werden, unternahm die Anmelderin eine umfassende Studie, um Bedingungen für die Herstellung dieses Produkts zu finden, welches die Erfordernisse der Praktikabilität auf industriellem Maßstab erfüllt.
- Die
US 5,700,668 im Namen der Anmelderin offenbart ein Verfahren zur Herstellung von PS, welches im Gegensatz zu denen des Stands der Technik (siehe insbesondere P. Comfurius et al., Biochim. Biophys. Acta 488, 36 (1977); Yamane et al., Biochim. Biophys. Acta 1003, 277 (1989);JP-A-63 036,791 JP-A-02 079, 990 - Das in diesem Patent offenbarte Verfahren umfasst die Umsetzung von natürlichen oder synthetischen Phosphatiden mit Serin in einem Zweiphasensystem, welches aus einer Lösung des Ausgangsphosphatids in einem organischen Lösungsmittel, typischerweise Toluol, sowie aus einer wässrigen Lösung, die Serin und Phospholipase D enthält, besteht. Unter Aufrechterhaltung eines gründlichen Rührens dieses Systems werden Phosphatide in PS umgewandelt, welches aus der organischen Phase mittels Präzipitation mit Aceton zurückgewonnen werden kann.
- Ein ähnliches Verfahren, obgleich Phosphatidylserin in großem Maßstab in guten Ausbeuten bereitgestellt werden, weicht vom gegenwärtigen Trend zu industriellen chemischen Verfahren ab, die einen reduzierten Gebrauch von organischen Lösungsmittels beinhalten und Nebenprodukte minimieren. Dieses Verfahren beinhaltet in der Tat den Gebrauch (und die Wiedergewinnung) von beträchtlichen Mengen organischer Lösungsmittel sowie deren Wiedergewinnung sowohl während der Reaktion als auch während der Isolierung des Endprodukts.
- Comfurius et al., Journal of Lipid Research, Bd. 31, 1990, 1719–1721, offenbaren Umsetzungen in niedrigem Maßstab, bei denen die Menge an oberflächenaktivem Mittel, die zur Ermöglichung der Vervollständigung der Umsetzung verwendet werden muß, 1% (w/v) beträgt,. wenn die Substratkonzentration 10 mg/mL beträgt, und 2% wenn die Substratkonzentration 25 mg/mL beträgt; diese Werte entsprechen einem oberflächenaktiven Mittel : Substrat-Verhältnis von mindestens 8%.
- Die vorliegende Erfindung zielt ab auf die Bereitstellung eines Verfahrens für die Herstellung von Phosphatidylserin auf einem industriellen Maßstab, welches die oben unter Bezugnahme auf den Stand der Technik erwähnten Nachteile beseitigt.
- Dieses Problem wurde gelöst gemäß der Erfindung durch ein Verfahren zur Herstellung von Phosphatidylserin der Formel (I)worin R1 und R2 unabhängig voneinander gesättigte, einfach ungesättigte oder vielfach ungesättigte C10–C30 Acylreste sind, X = OH oder OM, wobei M = Alkali- oder Erdalkalimetall, Ammonium, Alkylammonium (einschließlich des inneren Salzes), umfassend die Umsetzung von Phosphatiden der allgemeinen Formel (II)
worin Rlund R2 und X die oben definierten Bedeutungen aufweisen und R3 = CH2-CH2-NH2 oder CH2-CH2-N+(CH3)3, mit racemischem oder enantiomerreinem Serin, vorzugsweise mit (L)-Serin, in Gegenwart einer Phospholipase D (PLD), dadurch gekennzeichnet, daß die Umsetzung in einer wässrigen Dispersion, vorzugsweise in Gegenwart von Calciumsalzen, durchgeführt wird. Serin wird gewöhnlicherweise zu einer gepufferten wässrigen Dispersion von Phosphatiden zugegeben.
- Das im Verfahren verwendete Ausgangsmaterial kann entweder ein synthetisches Phosphatidylcholin (PC) wie DiMyristolPhosphatidylCholin (DMPC) oder ein natürliches Phosphatidylcholin oder eine Mischung von Phospholipiden wie Soja- oder Eilecithin, oder eines der kommerziell erhältlichen Phospholipidmischungen, die durch Partialreinigung von Soja- oder Eilecithin erhalten wurden, sein.
- Was die Kosten des Verfahrens angeht, ist es besonders passend, Ausgangsmaterialien zu verwenden, die aus Lecithin stammen, angesichts von sowohl ihrer niedrigeren Kosten als auch der Tatsache, daß Phosphatidylethanolamin (PE), welches in diesen Mischungen eine wichtige Komponente darstellt, unter diesen Reaktionsbedingungen in PS umgewandelt wird.
- Das Ausgangsmaterial sollte in einem wässrigen Medium gründlich dispergiert werden vor der Zugabe der anderen Reagenzien, um die Reaktivität zu steigern.
- Die Dispersion wird durchgeführt, indem das Phospholipid-Ausgangsmaterial für 1–10 Stunden bei 20–50°C unter Rühren gehalten wird mit 3–10 Volumina an Wasser oder Salzlösungen.
- Die Verwendung von oberflächenaktiven Mitteln in diesem Schritt steigert die Dispersion des Substrats und deshalb die Reaktionsgeschwindigkeit.
- Ionische oder nicht-ionische oberflächenaktive Mittel können geeigneterweise verwendet werden, besser geeignet ist das oberflächenaktive Mittel bis(2-Ethylhexyl)sulfosuccinat-Natriumsalz (AOT) oder Tween 80(R) in Mengen von 0,01 bis 0,4 g pro Gramm Substrat.
- Die Wirkung dieser oberflächenaktiven Mittel ist besonders günstig, wenn Phosphatidylcholine wie DMPC verwendet werden, die eine schwache Tendenz aufweisen, in wässrigem Medium zu dispergieren.
- Ein weiteres Merkmal dieser Erfindung besteht darin, daß es möglich ist, die Alkohollösungsmittel und insbesondere Ethanol leichter zu entfernen, welche die Präparationen von natürlichen Phospholipiden (zum Beispiel Phosphatidylcholin-angereicherte Fraktionen, die aus Sojalecithin erhalten wurden) häufig kontaminieren, und die in der anschließenden Umsetzung zur Bildung von PS stören, weil sie in Gegenwart der Phospholipase D reagieren, um die entsprechenden Phosphatidylderivate zu ergeben (wie Phosphatidylethanol, wenn Ethanol in der Mischung vorliegt).
- Diese Entfernung kann bequem durch Dispergieren des Ausgangs-Phospholipids in einer wässrigen Salzlösung, Dekantieren der Suspension und Entfernen der flüssigen Phase, die Ethanol darin aufgelöst enthält, durchgeführt werden.
- Als wässrige Salzlösung kann irgendeine Salzlösung, die eine ausreichend hohe Dichte zur leichten Trennung des Ausgangsmaterials aufweist, vorzugsweise eine Lösung von Calciumchlorid oder von Natriumacetat/Essigsäure-Puffer oder beidem, verwendet werden.
- Der wässrigen Dispersion des Ausgangsmaterials wird eine wässrige Lösung zugegeben, die Serin, Calciumchlorid, einen Puffer zum Steuern des pH sowie Phospholipase D enthält.
- Die Menge des Serins reicht geeigneterweise von 4 bis 20 Molen Serin pro Mol Phospholipid, welches in PS zu verwandeln ist. Serin kann in der D-, der L- oder der racemischen Form vorliegen, um auf jeden Fall die entsprechenden Phosphatidylderivate zu erhalten.
- Calciumchlorid ist die Quelle des Calciumions, welches die Phospholipase D-katalysierten Reaktionen begünstigt; ferner indiziert die Gegenwart von Calciumionen die Trennung von Phosphatidylserin in einer leicht filtrierbaren Form nach Abschluß der Reaktion.
- Die Konzentration des Calciumchlorids reicht vorzugsweise von 0,05 bis 0,5 M.
- Der pH der wässrigen Lösung hängt vom Ursprung des verwendeten Enzyms ab und wird vorzugsweise von einschließlich pH = 4 bis pH = 9 reichen. Im Fall von Enzymen, die ihre Wirksamkeit in im wesentlichen saurem Medium ausüben, wird die wässrige Lösung vorzugsweise mit 0,02 M bis 0,2 M Acetat-Puffer gepuffert.
- Als Enzym zum Durchführen der Umsetzung sollte geeigneterweise ein Enzym verwendet werden, welches eine höhere Transphosphatidylier-Wirksamkeit aufweist als die Hydrolisier-Wirksamkeit; vorteilhafterweise kann ein Enzym von fermentativer Herkunft, noch besser das Enzym verwendet werden, welches durch Fermentation des Mikroorganismus erhalten wurde, der bei ATCC unter der Nummer 55717 hinterlegt wurde.
- Das Enzym kann entweder in Rohform, nämlich der Fermentationsmischung nach dem Abfiltern des Mikroorganismus, oder weiter bevorzugt nach Reinigung mittels Ultrafiltration durch eine Membran mit einer geeigneten Ausschlußgrenze zum Entfernen von Verunreinigungen niedrigen Molekulargewichts verwendet werden. Die enzymreiche Lösung aus der Ultrafiltration kann so wie sie ist verwendet werden, oder sie kann gefriergetrocknet werden, um das Enzym in fester Form zu erhalten; die Enzymmenge reicht vorzugsweise von 10 bis 100 Einheiten pro Gramm Phosphatid (die Enzymaktivität wird bestimmt nach dem in Biotechn. Techn. 7, 795 (1993) beschriebenen Test).
- Die Umsetzung wird vorzugsweise bei 25–60°C, weiter bevorzugt von 40–50°C, durchgeführt.
- PS wird mittels Filtration der Reaktionsmischung, Waschen des Feststoffs mit Wasser zum Entfernen von Serin und der vorliegenden Salze wiedergewonnen.
- Ein besonders vorteilhafter Gegenstand des Verfahrens gemäß der Erfindung besteht darin, daß das Reaktionsprodukt (PS) von der Reaktionsmischung in einer solchen Form abgetrennt wird, daß die Wiedergewinnung durch einfache Filtration ohne Notwendigkeit für Präzipitationen durch Zugabe von Lösungsmitteln bewirkt werden kann.
- Der Hauptvorteil des Verfahrens gemäß der Erfindung besteht in der angesichts des Stands der Technik unerwarteten Möglichkeit, die Transphosphatidylreaktion von Phosphatidylcholin und von ähnlichen Phosphatiden in einem wässrigen Medium durchzuführen, um Phosphatidylserin von guter Reinheit und in hoch zufriedenstellenden Ausbeuten zu erhalten.
- Die Merkmale und die Vorteile des Verfahrens der Erfindung werden durch die folgenden Beispiele weiter offenbart.
- Beispiel 1
- 5 g von Soja-Phosphatidylcholin 95%-iger Reinheit wurden zu 30 ml von 0,1 M Acetat-Puffer von pH 4,5 zugegeben. Die Mischung wurde für eine Stunde bei 40°C gerührt, um das Phospholipid in der wässrigen Phase homogen zu dispergieren. Die Enzymlösung bestand aus 80 ml einer Phospholipase D-Lösung von 2 U/g Aktivität, die erhalten wurde durch Fermentation des unter der Nummer ATCC55717 hinterlegten Mikroorganismus, dann wurde die rohe Enzymlösung durch eine Ultrafiltrationsmembran mit einer Ausschlußgrenze von 10.000 Dalton dialysiert, bis zur vollständigen Entfernung der Verunreinigungen niedrigen Molekulargewichts, was dann als Enzym verwendet wurde. Diese Enzymlösung wurde mit 40 g L-Serin und 2,9 g Calciumchlorid versetzt. Die resultierende Lösung wurde zu der Phosphatidylchiolin-Dispersion zugegeben, und die Mischung wurde auf 45°C erwärmt.
- Die Umsetzung wurde für sechs Stunden gerührt. Der Feststoff wurde filtriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Endgewicht: 4,24 g.
- HPLC-Zusammensetzung: PS 90,7%, PC 1,4%; PA (Phosphatidsäure) 6,2%.
- Beispiel 2
- 5 g von Soja-Phosphatidylcholin 95%-iger Reinheit wurden zu 30 ml von 0,1 M Acetat-Puffer von pH 4,5, das 0,08 g Tween 80(R) enthielt, zugegeben. Die Mischung wurde für eine Stunde bei 40°C gerührt, um das Phospholipid in der wässrigen Phase homogen zu dispergieren. 80 ml einer Phospholipase D-Lösung von 2 U/g Aktivität, die wie im Beispiel 1 beschrieben erhalten wurde, wurden mit 40 g L-Serin und 2,9 g Calciumchlorid versetzt.
- Die resultierende Lösung wurde zu der Phosphatidylcholin-Dispersion zugegeben, und die Mischung wurde auf 45°C erwärmt. Nach 90 Minuten zeigte die HPLC-Analyse die Zusammensetzung: PS 69,7%, PC 11,6%, PA 5,3%.
- Die Umsetzung wurde für weitere vier Stunden gerührt. Der Feststoff wurde filtriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Endgewicht: 4,76 g.
- HPLC-Zusammensetzung: PS 90,2%, PC 0,6%, PA 6,4%.
- Beispiel 3
- 5 g von Soja-Phosphatidylcholin 95%-iger Reinheit wurden zu 30 ml von 0,1 M Acetat-Puffer von pH 4,5, das 0,3 g von AOT enthielt, zugegeben. Die Mischung wurde für eine Stunde bei 40°C gerührt, um das Phospholipid in der wässrigen Phase homogen zu dispergieren. 80 ml einer Phospholipase D-Lösung von 2 U/ng Aktivität, die wie im Beispiel 1 beschrieben erhalten wurde, wurden mit 40 g L-Serin und 2,9 g Calciumchlorid versetzt. Die resultierende Lösung wurde zu der Phosphatidylchiolin-Dispersion zugegeben, und die Mischung wurde auf 45°C erwärmt.
- Nach der Umsetzung für sechs Stunden wurde der Feststoff abgefiltert, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Endgewicht: 4,16 g
- HPLC-Zusammensetzung: PS 88,8%, PC 0,6%, PA 4,1%.
- Beispiel 4
- 25 g einer Phospholipidmischung, die erhalten wurde durch Anreicherung von Sojalecithin, dessen Hauptkomponenten PC 66%, PE 17% und PA 2% sind, wurden zu 100 ml 0,1 M Acetat-Puffer mit pH 4,5 zugegeben. Die Mischung wurde für eine Stunde bei 40°C gerührt, um das Phospolipid in der wässrigen Phase homogen zu dispergieren. Eine Lösung von 80 ml 0,1 M Acetat-Puffer mit pH 4,5, 40 g L-Serin und 2,9 g Calciumchlorid wurden getrennt davon hergestellt. Diese Lösung wurde mit 188 mg des Feststoffs versetzt, die aus der Gefriertrocknung der Phospholipase D-Lösung resultierte, die wie im Beispiel 1 beschrieben erhalten wurde; die Aktivität dieses Feststoffs beträgt 0,9 U/mg. Die resultierende Lösung wurde zu der Phospholipid-Dispersion zugegeben, und die Mischung wurde auf 45°C erwärmt.
- Die Mischung wurde für drei Stunden gerührt. Der Feststoff wurde abgefiltert, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Endgewicht: 22,8 g.
- HPLC-Zusammensetzung: PS 59,8%, PC 1,6%, PA 6,1%, PE 6,7%.
- Beispiel 5
- 25 g der im Beispiel 4 als Ausgangsmaterial verwendeten Phospholipidmischung wurden zu 100 ml 0,1 M Acetat-Puffer mit pH 4,5 zugegeben. Die Mischung wurde für eine Stunde bei 40°C gerührt, um das Phospolipid in der wässrigen Phase homogen zu dispergieren. Eine Lösung von 80 ml 0,1 M Acetat-Puffer mit pH 4,5, 10 g L-Serin und 2,9 g Calciumchlorid wurden getrennt davon hergestellt; diese Lösung wurde mit 90 mg des gefriergetrockneten Enzyms versetzt, das wie im Beispiel 4 beschrieben, hergestellt wurde. Die resultierende Lösung wurde zu der Phospholipid-Dispersion zugegeben, und die Mischung wurde auf 45°C erwärmt und für 16 Stunden gerührt. Die Endzusammensetzung wurde mittels HPLC bestimmt: PS 39,1%, PC 8,3%, PA 16,6%, PE 6,8 %.
- Beispiel 6
- Die Umsetzung wurde unter den selben Bedingungen wie im Beispiel 5 beschrieben durchgeführt, wobei jedoch eine Temperatur von 55°C während der Umsetzung gehalten wurde. Nach 16 Stunden wurde die Umsetzung unterbrochen. Die HPLC-Analyse zeigte die folgende Zusammensetzung: PS 41,7%, PC 8,3%, PA 11,0%, PE 9,9%.
- Beispiel 7
- Die Umsetzung wurde unter den selben Bedingungen wie im Beispiel 4 beschrieben durchgeführt, jedoch ohne der Zugabe von Calciumchlorid. Nach 20 Stunden wurde die Umsetzung unterbrochen. Die HPLC-Analyse zeigte die folgende Zusammensetzung: PS 41,2%, PC 15,9%, PA 10,9%, PE 7,4% .
- Beispiel 8
- 2 g der im Beispiel 4 als Ausgangsmaterial verwendeten Phospholipidmischung wurden zu einer Lösung von 3 g Calciumchlorid in 40 ml Wasser in einem Scheidetrenntrichter zugegeben; die Mischung wurde für eine Stunde bei 25°C gerührt; das Rühren wurde unterbrochen und nach drei Stunden des Stehenlassens wurden 36 ml der wässrigen Phase vom Bodenventil abgezogen. Eine Lösung von 6,5 ml 0,1 M Acetat-Puffer mit pH 4,5 und 3,2 g L-Serin wurde getrennt davon hergestellt; diese Lösung wurde mit 15 mg des gefriergetrockneten Enzyms versetzt, das wie im Beispiel 4 beschrieben hergestellt wurde. Die resultierende Lösung wurde zu der Phospholipid-Dispersion zugegeben, und die Mischung wurde auf 45°C erwärmt.
- Die Umsetzung wurde für eine Stunde gerührt. Die Endzusammensetzung wurde mittels HPLC bestimmt: PS 55,7%, PC 9,4%, PA 4,0%, PE 9,0%. Die Bildung von Phosphatidylethanol in dieser Umsetzung war unter der TLC-detektierbaren Grenze (0,1%).
- Beispiel 9
- 5 g DiMyristoylPhosphatidylcholin (DMPC), 1,6 g Tween 80(R) und 30 ml 0,1 M Natrium-Acetat-Puffer mit pH 4,5 wurden für eine Stunde bei 45°C gerührt. Die Dispersion wurde zu einer Lösung von 80 ml der wie im Beispiel 1 beschrieben erhaltenen, wässrigen Phospholipase D-Lösung, 40 g L-Serin und 2,9 g Calciumchlorid zugegeben, und die Temperatur wurde unter Aufrechterhaltung des Rührens für 17 Stunden auf 50°C gebracht. Der Feststoff wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Endgewicht: 5,4 g.
- HPLC-Zusammensetzung: PS 83,2%, PC 4,3%, PA 11,7%.
- Beispiel 10
- 5 g DiMyristoylPhosphatidylcholin (DMPC), 1,0 g AOT und 30 ml 0,1 M Natrium-Acetat-Puffer mit pH 4,5 wurden für 45 Minuten bei 50°C gerührt. Die Dispersion wurde mit einer Lösung von 80 ml der wie im Beispiel 1 beschrieben erhaltenen, wässrigen Phospholipase D-Lösung, 40 g L-Serin und 2,9 g Calciumchlorid versetzt, und die Temperatur wurde unter Aufrechterhaltung des Rührens für 20 Stunden auf 50°C gebracht. Der Feststoff wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Endgewicht: 3,66 g.
- HPLC-Zusammensetzung: PS 85,2%, PC 10,5%, PA 3,5%.
- Beispiel 11
- 10 g einer an PC angereicherten, nicht entölten Sojalecithin-Fraktion (Zusammensetzung: Triglyceride 50%, PC 35%, PE 8%) wurden zu 30 ml Natrium-Acetat-Puffer mit pH 4,5 zugegeben und für eine Stunde bei 25°C unter Rühren gelassen. Die Mischung wurde zu einer Lösung von 80 ml der wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellten Lösung des Phospholipase-Enzyms, 40 g L-Serin und 2,9 g Calciumchlorid zugegeben. Die Umsetzung wurde für 11 Stunden bei 45°C gerührt, die wässrige Phase wurde abgetrennt, und der gummiartige Feststoff wurde mit 100 ml Aceton versetzt. Nach der Filtration und Trocknung wurden 3,9 g des Produkts erhalten. HPLC-Analyse: PS 58%, PC 2,0%, PA 17,0%, PE 1,8%.
Claims (22)
- Verfahren zur Herstellung von Phosphatidylserinen der Formel (I)worin R1 und R2 unabhängig voneinander gesättigte, einfach ungesättigte oder vielfach ungesättigte C10–C30-Acylreste, X = OH oder OM, wobei M = Alkali- oder Erdalkalimetall, Ammonium, Alkylammonium (einschließlich des inneren Salzes), umfassend die Umsetzung von Phosphatiden der allgemeinen Formel (II)
worin R1, R2 und X die oben definierten Bedeutungen aufweisen und R3 = CH2-CH2-NH2 oder CH2-CH2-N+ (CH3)3. mit racemischem oder enantiomerreinem Serin, vorzugsweise mit (L)-Serin, in Gegenwart einer Phospholipase D (PLD), dadurch gekennzeichnet, daß das Reaktionsmedium eine wässrige Dispersion ist, und daß die Umsetzung in Gegenwart von einem oder mehreren oberflächenaktiven Mittel(n) in Mengen von weniger als 0,4 g pro Gramm Phosphatide durchgeführt wird.
- Verfahren wie im Anspruch 1 beansprucht, wobei die Umsetzung in Gegenwart von Calciumsalzen, vorzugsweise in Gegenwart von Calciumchlorid durchgeführt wird.
- Verfahren wie im Anspruch 1 beansprucht, wobei die Calciumsalze Calciumchlorid sind und in Konzentrationen im Bereich zwischen 0,05 und 0,5 M vorliegen.
- Verfahren wie im Anspruch 1 beansprucht, wobei die Menge des Serins im Bereich von 4 bis 20 Mol pro Mol Phospholipide liegt.
- Verfahren wie in irgendeinem der obigen Ansprüche beansprucht, wobei die Phosphatide Alkohole als Verunreinigungen in Mengen von weniger als 0,1% enthalten.
- Verfahren wie im Anspruch 5 beansprucht, wobei der Alkohol Ethanol ist.
- Verfahren wie im Anspruch 5 beansprucht, wobei die Phospholipide, bevor deren Umsetzung mit Serin vollzogen wird, von den Alkoholen gereinigt werden, indem die Phospholipide in einer wässrigen Salzlösung suspendiert werden und anschließend die flüssige Phase dekantiert wird.
- Verfahren wie im Anspruch 7 beansprucht, wobei die wässrige Salzlösung eine Calciumchlorid- und/oder eine Essigsäure/Natriumacetat-Pufferlösung ist.
- Verfahren wie in irgendeinem der obigen Ansprüche beansprucht, wobei die wässrige Dispersion der Phosphatide auf einen pH im Bereich zwischen 4 und 9 gepuffert wird, vorzugsweise zwischen 4 und 4,5.
- Verfahren wie in irgendeinem der obigen Ansprüche beansprucht, wobei die Umsetzung bei Temperaturen im Bereich zwischen 25 und 60°C, vorzugsweise zwischen 40 und 50°C, durchgeführt wird.
- Verfahren wie in irgendeinem der obigen Ansprüche beansprucht, wobei die Phospholipase D erhalten wurde aus zentrifugierten Fermentationskulturflüssigkeiten von Mikroorganismen-Stämmen, die extrazelluläres PLD mit großer Transphosphatidylierungsfähigkeit produzieren.
- Verfahren wie im Anspruch 11 beansprucht, wobei die Phospholipase D durch den Stamm Streptomyces ATCC 55717 produziert wurde.
- Verfahren wie im Anspruch 11 beansprucht, wobei die Phospholipase D mittels Ultrafiltration einer Lösung davon gereinigt wurde.
- Verfahren wie im Anspruch 13 beansprucht, wobei die Ultrafiltration unter Verwendung einer Membran mit einem Cut-Off von 10.000 Daltons durchgeführt wurde.
- Verfahren wie im Anspruch 13 beansprucht, wobei die ultrafiltrierte Lösung einer Gefriertrocknung unterzogen wurde, um eine Phospholipase D in fester Form zu ergeben.
- Verfahren wie in irgendeinem der obigen Ansprüche beansprucht, wobei die wässrige Dispersion der Phosphatide erhalten wurde, indem die Phosphatide mit 3–10 Volumina Wasser oder Salzlösungen vermischt wurden und die resultierende Mischung bei 20–50°C unter Rühren für 1–10 Stunden gehalten wurde.
- Verfahren wie im Anspruch 1 beansprucht, wobei das eine oder die mehreren oberflächenaktive(n) Mittel in Mengen von 0,01–0,4 g pro Gramm an Phosphatiden vorliegt (vorliegen).
- Verfahren wie im Anspruch 1 beansprucht, wobei das eine oder die mehreren oberflächenaktive(n) Mittel bis-(2-Ehtylhexyl)sulfosuccinat (AOT) oder Polyoxyethylen-Sorbitanmonooleat (Tween 80 (R)) ist bzw. sind.
- Verfahren wie in irgendeinem der obigen Ansprüche beansprucht, wobei das Phosphatidylserin der Formel (I) aus der Reaktionsmischung mittels Filtration und Waschen mit Wasser zurückgewonnen wird.
- Verfahren wie in einem der obigen Ansprüche beansprucht, wobei die Phosphatide der Formel (II) Mischungen sind von Phosphatidylcholin und/oder Phosphatidylethanolamin natürlichen Ursprungs, ausgewählt aus Soja- und Ei-Lecithinen, mit einem Phospholipidgehalt im Bereich von 20% bis 95%.
- Verfahren wie im Anspruch 1 beansprucht, wobei die Phosphatide der Formel (II) synthetische Phosphatidylcholine sind.
- Verfahren wie in irgendeinem der obigen Ansprüche beansprucht, wobei Serin zu einer gepufferten wässrigen Dispersion von Phosphatiden zugegeben wird.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ITMI990895 | 1999-04-28 | ||
| IT1999MI000895A IT1311929B1 (it) | 1999-04-28 | 1999-04-28 | Procedimento per la preparazione di fosfatidilserine. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE60005241D1 DE60005241D1 (de) | 2003-10-23 |
| DE60005241T2 true DE60005241T2 (de) | 2004-07-01 |
Family
ID=11382830
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE60005241T Expired - Lifetime DE60005241T2 (de) | 1999-04-28 | 2000-04-20 | Verfahren zur Herstellung von Phosphatidylserinen |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6492146B1 (de) |
| EP (1) | EP1048738B1 (de) |
| JP (1) | JP4792154B2 (de) |
| AT (1) | ATE250136T1 (de) |
| DE (1) | DE60005241T2 (de) |
| DK (1) | DK1048738T3 (de) |
| ES (1) | ES2206099T3 (de) |
| IT (1) | IT1311929B1 (de) |
| PT (1) | PT1048738E (de) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102004038443A1 (de) * | 2004-08-07 | 2006-03-16 | Bioghurt Biogarde Gmbh & Co. Kg | Verfahren zur enzymatischen Herstellung und/oder Modifikation von Phospholipiden |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4298902B2 (ja) * | 2000-08-09 | 2009-07-22 | 株式会社ヤクルト本社 | リン脂質の製造法 |
| IT1319679B1 (it) * | 2000-12-05 | 2003-10-23 | Chemi Spa | Processo di purificazione di fosfatidilserina. |
| JP3697189B2 (ja) * | 2001-01-11 | 2005-09-21 | 日清オイリオグループ株式会社 | リン脂質の塩基交換方法 |
| JP2002218991A (ja) * | 2001-01-23 | 2002-08-06 | Nof Corp | ホスファチジルセリンの製造方法 |
| ITPD20010031A1 (it) * | 2001-02-09 | 2002-08-09 | Fidia Farmaceutici | Procedimento per la preparazione di fosfatidi puri e loro impiego in campo cosmetico, farmaceutico ed alimentare. |
| US6635456B2 (en) | 2001-02-09 | 2003-10-21 | Fidia Farmaceutici S.P.A. | Procedure for the preparation of pure phosphatides with phospholipase D |
| KR20030084200A (ko) * | 2002-04-25 | 2003-11-01 | 주식회사 두산 | 비 유기용매시스템에서의 포스파티딜에탄올아민 및리소포스파티딜에탄올아민의 제조방법 및 그 방법으로제조된 리소포스파티딜에탄올아민을 포함하는 수용성 조성물 |
| KR20030086128A (ko) * | 2002-05-03 | 2003-11-07 | 주식회사 두산 | 효소 및 세린의 재사용을 포함하는 포스파티딜세린 및리소포스파티딜세린의 제조방법 |
| US6878532B1 (en) | 2003-04-28 | 2005-04-12 | Sioux Biochemical, Inc. | Method of producing phosphatidylserine |
| DE102004002053A1 (de) * | 2004-01-15 | 2005-08-04 | Bioghurt Biogarde Gmbh & Co. Kg | Verfahren zur Herstellung von Phosphatidylserin und dessen Reinigung durch Extraktion |
| JP2005318827A (ja) * | 2004-05-07 | 2005-11-17 | Nisshin Oillio Group Ltd | セリンの回収方法 |
| KR100598222B1 (ko) | 2004-12-16 | 2006-07-07 | 주식회사 두산 | 포스파티딜세린 및 리조포스파티딜세린의 제조방법 |
| ITPD20050164A1 (it) | 2005-05-30 | 2006-11-30 | Fidia Farmaceutici | Processo per la preparazione e l'isolamento di fosfatidi |
| RU2482186C2 (ru) | 2008-05-15 | 2013-05-20 | Лодерс Кроклан Б.В. | Способ получения фосфатидилсерина |
| RU2472351C2 (ru) | 2008-05-15 | 2013-01-20 | Лодерс Кроклан Б.В. | Способ получения фосфолипазы d |
| WO2010004597A1 (en) | 2008-07-08 | 2010-01-14 | Chemi Spa | Rocess for the production of n-acyl-phosphatidyl-etanolamine |
| US8546104B2 (en) | 2008-08-07 | 2013-10-01 | Lipogen Ltd. | Processes for the preparation of phosphatide salts |
| US8846338B2 (en) | 2008-08-07 | 2014-09-30 | Lipogen Ltd. | Processes for the preparation of phosphatides |
| KR101122388B1 (ko) * | 2009-05-23 | 2012-03-23 | 주식회사 고센바이오텍 | 배추 포스포리파아제 d에 의한 난황 인지질로부터 포스파티딜세린의 생합성 방법 |
| KR101055094B1 (ko) * | 2009-05-23 | 2011-08-08 | 주식회사 고센바이오텍 | 양배추 포스포리파아제 d에 의한 난황 인지질로부터 포스파티딜세린의 생합성 방법 |
| ITPD20120021A1 (it) | 2012-01-26 | 2013-07-27 | Fidia Farmaceutici | "nuove composizioni farmaceutiche contenenti fosfatidilserina e curcumina". |
| ES2899762T3 (es) | 2014-07-25 | 2022-03-14 | Frutarom Ltd | Composiciones nutricionales que contienen fosfatidilserina en polvo |
| US20190015435A1 (en) * | 2016-01-21 | 2019-01-17 | Enzymotec Ltd. | Methods using phosphatidylserine powder |
| CN109486790B (zh) * | 2018-12-10 | 2021-08-03 | 南通励成生物工程有限公司 | 一种以磷脂酶d转化制备磷酯酰丝氨酸的方法 |
| CN112352051A (zh) * | 2019-12-31 | 2021-02-09 | 邦泰生物工程(深圳)有限公司 | 一种提高磷脂酶d转脂活性的方法以及用其生产磷脂酰丝氨酸的方法 |
| WO2021134440A1 (zh) * | 2019-12-31 | 2021-07-08 | 邦泰生物工程(深圳)有限公司 | 一种磷脂酰丝氨酸酶催化生产中抗黏性的方法以及用其生产磷脂酰丝氨酸的方法 |
| CN114854801A (zh) * | 2022-05-18 | 2022-08-05 | 翁源广业清怡食品科技有限公司 | 一种无有机溶剂制备磷脂酰丝氨酸的方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5991898A (ja) * | 1982-11-19 | 1984-05-26 | Toyo Jozo Co Ltd | リパ−ゼ活性測定用組成物 |
| DE3671630D1 (de) * | 1985-07-03 | 1990-07-05 | Cl Pharma | Glycero-3(2)-phospho-l-serinderivate und diese enthaltende pharmazeutischen praeparate. |
| JP3791951B2 (ja) | 1995-11-08 | 2006-06-28 | 株式会社ヤクルト本社 | 多価不飽和脂肪酸含有ホスファチジルセリンを含む油脂組成物の製造方法 |
| US5700668A (en) | 1995-12-08 | 1997-12-23 | Italfarmaco Sud S.P.A. | Process for the industrial preparation of phosphatidylserine |
| DE19917249C2 (de) * | 1999-02-26 | 2001-09-27 | Meyer Lucas Gmbh & Co | Verfahren zur Herstellung von Phosphatidylserin-Produkten |
-
1999
- 1999-04-28 IT IT1999MI000895A patent/IT1311929B1/it active
-
2000
- 2000-04-18 US US09/550,819 patent/US6492146B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-20 DE DE60005241T patent/DE60005241T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-20 ES ES00108605T patent/ES2206099T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-20 AT AT00108605T patent/ATE250136T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-04-20 PT PT00108605T patent/PT1048738E/pt unknown
- 2000-04-20 DK DK00108605T patent/DK1048738T3/da active
- 2000-04-20 EP EP00108605A patent/EP1048738B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-27 JP JP2000127684A patent/JP4792154B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102004038443A1 (de) * | 2004-08-07 | 2006-03-16 | Bioghurt Biogarde Gmbh & Co. Kg | Verfahren zur enzymatischen Herstellung und/oder Modifikation von Phospholipiden |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4792154B2 (ja) | 2011-10-12 |
| IT1311929B1 (it) | 2002-03-20 |
| US6492146B1 (en) | 2002-12-10 |
| DE60005241D1 (de) | 2003-10-23 |
| PT1048738E (pt) | 2004-02-27 |
| ITMI990895A1 (it) | 2000-10-28 |
| EP1048738A1 (de) | 2000-11-02 |
| JP2000333689A (ja) | 2000-12-05 |
| EP1048738B1 (de) | 2003-09-17 |
| ATE250136T1 (de) | 2003-10-15 |
| ES2206099T3 (es) | 2004-05-16 |
| DK1048738T3 (da) | 2004-01-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE60005241T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Phosphatidylserinen | |
| DE69616834T3 (de) | Ein Verfahren zur Reinigung von Phosphatidylserin | |
| DE1900959C3 (de) | ||
| EP0054770B1 (de) | Verfahren zur Abtrennung von Öl und/oder Phosphatidylethanolamin aus diese enthaltenden alkohollöslichen Phosphatidylcholin-Produkten | |
| EP1427839A1 (de) | Verfahren zur herstellung von phospholipiden | |
| DE60017563T2 (de) | Enzymatische herstellung von phospholipiden in wässrigen medien | |
| DE60100565T2 (de) | Verfahren zur Reinigung von Phosphatidylserin | |
| DE69025371T2 (de) | Verwendung von Lysophospholipiden als OBERFLÄCHENAKTIVE MITTEL | |
| JP5113042B2 (ja) | ホスファチドの調製および単離方法 | |
| DE19917249A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Phosphatidylserin (PS) undd PS in Weichgelatinekapseln | |
| DE69725969T2 (de) | Phospholipid-zusammensetzung | |
| WO2005068644A1 (de) | Verfahren zur herstellung von phosphatidylserin und dessen reinigung durch extraktion | |
| EP1531182B1 (de) | Verfahren zur Gewinnung von Sterolen und polaren Lipiden aus Lecithin durch Ultrafiltration und Vorbehandlung mit Amylasen und Glucosidasen | |
| DE2437832C2 (de) | Phospholipide, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung | |
| DE2411531A1 (de) | Reinigungsverfahren fuer glycero-lipid spaltendes enzym | |
| DE4027334A1 (de) | Verfahren zur herstellung von phosphatidylinosit hoher reinheit | |
| EP0002062A1 (de) | Phosphororganische Ringverbindungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung | |
| Ramesh et al. | Selective extraction of phospholipids from egg yolk | |
| DE1948826A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Ribonucleinsaeureprodukten | |
| DE2346335A1 (de) | Auf mikrobiellem weg hergestellte lipase, sowie verfahren zu deren herstellung | |
| EP0288569A1 (de) | Verfahren zur herstellung von phosphatidilinosit aus einem biologischen objekt | |
| AT382623B (de) | Verfahren zur herstellung von kephalinen und kephalin analogen verbindungen und phosphatidyl- glykolverbindungen und deren analogen | |
| JPH0662648B2 (ja) | 高純度レシチンの製造方法 | |
| DE2745810A1 (de) | Synthetische phosphatide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung | |
| JP3650168B2 (ja) | リゾ化リン脂質組成物及びその製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8363 | Opposition against the patent | ||
| 8365 | Fully valid after opposition proceedings |