JPS5991898A - リパ−ゼ活性測定用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はリパーゼ活性測定用組成物ｔこ関する。

詳しくは、高級脂肪酸を構成因子とするモノグリセライ
ドまたは７．２−ジグリセライド、および非イオン性界
面活性剤を含有してなるリパーゼ活性測定用組成物ｔこ
関する。

従来より血清中の膵臓由来のリパーゼの活性測定ｔこお
いて、古くからその基質としてトリグリセライドが用い
られてきた。また種々のリパーゼはトリグリセライドの
他ｔこモノグリセライドやジグリセライドにも作用する
ことは知られている。

またリパーゼ活性を測定するに当っては、基質たるトリ
グリセライドを主成分とするオリーブ油ｔこアラビアゴ
ムまたはポリビニルアルコールなどを加えて水中ｔこ乳
化分散させたいわゆるエマルジョンの組成物形態が用い
られ、この組成物は、リパーゼの作用後、生成物である
遊離脂肪酸の酸度を滴定ｅこより定量していた。しかし
この組成物はエマフレジョンに起因する強い濁度のため
ｔこ分光学的ｔこリパーゼ活性ケ測定しようとする場合
には使用できず、また組成物自体を長期間保存の場合に
相分離を起し易い欠点があり、再現性よくリパーゼ活性
を測定することは困難であった。

またこのよう【こ遊離した脂肪酸を定量する方法として
は、前述の脂肪酸の酸度の滴定法や、脂肪酸の暑τ抽出
液ｔこ銅試薬を作用せしめて定量する方法〔臨床検査第
ｉｓ巻（２）／９／　（／９７／　）：ｌ、アシル−Ｃ
ｏＡシンセターゼとミオキナーゼまたはアシル−ＣｏＡ
オキシダーゼを用いて分光学的定量する方法〔日本農芸
化学会講演要旨実弟３ｇ頁（昭和５．５′年度大会）〕
などが知られている。さらｅこ本発明の発明者らが見い
出したアシル−ＣｏＡシンセクーゼ、アシル−ＣｏＡオ
キンダーゼ、エノイル−ＣｏＡヒドヲターゼ、３−ヒド
ロキンアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、３−ケトアシ
ル−ＣｏＡチ願 オフーゼ全用いて分光学的定量する方法〔特許昭５６−
ｌグｇ３　／３号明細書〕もリパーゼ活性測定のため脂
肪酸を定量する方法として挙られるものである。さらｅ
こ基質であるトリグリセライドから遊離するグリセロ−
／ｌ／を測定する方法も種々知られている（　Ｎａｔｕ
ｒｅ　、　ｖｏｌ　／り６．９ど７一タ♂ｇ（／　９　
Ａ　２　）　、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、χ、＋　３２９号３
１３頁（ｌり３７　）　、　Ｃａｎ、　Ｊ、Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ　ａｎｄ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ。

ｖｏｌ４０．／　／２９　（１９６２）、米国特許第り
２１１１１７１号明細書〕 このようｔこリパーゼ活性測定のための方法は種々挙ら
れるものの、前述の如く用いる組成物の欠点があり、本
発明者らは」二記の種々の測定法ｔこ使用できる有用な
基質としての組成物を情意研究した結果、炭素数７２以
上の高級脂肪酸を構成因子とするモノグリセライドまた
は／、２−ジグリセライド紮非イオン性界面活性剤を用
いて水に可溶化法をこも使用でき、再現性の良好なリパ
ーゼ活性測定用としての基質組成物であることを見い出
した。

本発明は上記の知見に基いて完成されたもので。

高級脂肪酸を構成因子とするモノグリセライドまたは７
．２−ジグリセライド、および非イオン性界面活性剤を
含有してなるリパーゼ活性測定用組成物であり、また高
級脂肪酸としては炭素数１２以こ 上の高級脂肪酸を有したものであり、さら（こ＼の組成
物は水（こ可溶化せしめたものとして用いてもよく、さ
ら（こまた必要Ｑこ応じてリパーゼ活性ｔこよって遊離
される脂肪酸を定量するためのアシルＣｏ　Ａシンセタ
ーゼなどの必要とする種々の試薬を添加号、たものとし
て調製してもよく、リパーゼ活性測定用組成物として有
用なものを提供するものである。

まず本発明に用いられる高級脂肪酸を構成因子とするモ
ノグリセフィトまたは７．２−ジグリセライドとしては
、下記一般式（１） ％式％ （ただしＲ１は高級脂肪酸残基、ＲＱは水素原子または
高級脂肪酸残基を示す。） で表わされる化合物である。

また一般式ＣＩ）で表わされる化合物のＲ１またはＲ２
における高級脂肪酸残基としての構成因子である高級脂
肪酸は炭素数１２以上の高級脂肪酸であればよく１例え
ばツウリン酸（Ｃ１＋ｉ＋ｏ）−）リデシレン酸（Ｃ□
３．ｏ）、ミリスチン酸（Ｃ，Ｒ４，。）、ペンタデシ
レン酸（Ｃ１５＋ｏ）、パルミチン酸（Ｃよ。、０）、
マーガリン酸（０１υＯ）、ステアリン酸（Ｃ０８，。

）、ノナデＶＶ７酸（Ｃ１９＝Ｏ）、アフキン酸（Ｃ２
０，Ｏ）。

ベヘニン酸（Ｃ２１，Ｏ）、リグノセリン（Ｃ２２：Ｏ
）、などの飽和高級脂肪酸やパルミトオレイン酸（Ｃ１
６＝　１）、ターオクタデセン酸（Ｃ１ａ　：　１　ｉ
オレイン酸）。

ｌｌ−オクタデセン酸（Ｃユ。、１；バクセン酸）、１
２−オクタデセン酸（Ｃユ。：１）、ターアイコセン酸
（Ｃ２０：１）・ｌｌ−アイコセン酸（Ｃ２０＋１）・
／１−トコセン酸（Ｃ２２，、）、１３−トコセン酸（
Ｃ２２＋□；エルカ酸）、リノール酸（Ｃ１ａ　＋　２
　）−リルン酸（Ｃｘａ＋ａ）、／　／、／４−エイコ
サジエン酸（Ｃ２０＝２）１、！ｉ’、　／　／、　／
　９−エイコサトリエン酸（Ｃ２０；３）％！Ｌｇ。

／　／、　／　”％−エイコサトフエン酸（Ｃｚｏ＋ｔ
ｉアラキドン酸）などの不飽和高級脂肪酸が挙られる。

このＲ１またはＲ２の構成因子である高級脂肪酸ｔこお
いては、不飽和高級脂肪酸となすことが得られる組成物
の澄明度がよく、好ましいもので、炭素数１６以上の不
飽和高級脂肪酸を少なくとも１以上の構成因子とするモ
ノグリセフィトまたは７．２−ジグリセライドが好まし
い。従ってまた／、２−ジグリセライドにおいてへその
ＲユまたはＲＱのいずれか一方が不飽和高級脂肪酸、他
方が飽和高級脂肪酸の残基である化合物が好ましいもの
として使用できる。特に好ましくはＲよが不飽和高級脂
肪酸（Ｃ１６＋１＋　Ｃｘａ：、＋　Ｃｚｏ＋□＋　Ｃ
２２＋１１０１８＋２１Ｃｘａ＋ｓ＋　０２０＋２１０
２０＋３＋　Ｃ２０＋４）残基、Ｒ２が飽和高級脂肪酸
（Ｃ１２＋ｏ＊　Ｃ１４＋Ｏ＋　Ｃ１６＋ｏｌＣ：Ｌｌ
ｌｌＯ＋　Ｃ２０＋Ｏ）または不飽和高級脂肪酸（Ｃ１
６＋１＋　”ｒ８：’Ｌ＋　Ｃ２Ｑ＋ｌ＋　Ｃ２２１１
＋　Ｃｘｅ＋２＋ＣＩＢ＋３＋　Ｃ２（１２Ｉ　Ｃ２０
＋３＋　Ｃ２０＋４）　残基である／、象１−ジグリセ
フィドであり、例えばｌ−パルミトオレオイル−１−ツ
ウロイル−グリセロール、／−パルミトオレオイル−ス
ーパルミトイルーグリセロール グリセロール。

＃＝４ーー辷ト＝弄、／’Ｊルオイルーノーツウロイル
ーグリセロール，／−！Ｊ／レオイ／ｌ／　−　、：ｌ
　−ミリストイル−グリセロール、／−リルオイルー２
ーバルミトイル−グリセロール、ｌニリルオイルーヌテ
アロイルーグリセロール，ｌ−リルノイルーフウロイル
ーグリセロール、ｌ−リルノイルー！ーミリストイルー
グリセロール、ｌ−リルノイルー！ーバルミトイルーグ
リセロール、ｌ−リルノイ）Ｖ−、２−ヌテアロイルー
グリセロール、／　−（／　／．　／クーエイコセノイ
ル）−ノーミリヌトイルーグリセローｗ．／−（／／．
／グーエイコセノイル）−ノーバルミトイル−グリセロ
ール％／−（ど／　／．　／　ｌｌ−、／　７−ニイコ
サテトラエノイ）Ｖ）−ノーラウロイル−グリセロール
、／−（　ｇ．　／　／．　／≠１７−ニイコサテトフ
エノイル）−オイル−グリセロール、／．２−ジリルオ
イルークリセロール．／．２−シリルノイル−グリセロ
ールなどが挙られる。

また簡便なモノグリセフィトまたは７．２−ジグセライ
トを得るｔこ当っては、ホスホリパーゼＣとリゾレシチ
ンとの反応ｔこよって生成されるｌ−モノグリセライド
、ホスファチジン酸ホスファターゼとりゾホスファチジ
ン酸との反応をこよって生成されるｌ−モノグリセライ
ドやホスホリパーゼＤ。

ホスファチジン酸ホスファターゼとりゾレｙチンとの反
応によって生成されるｌ−モノグリセライド、ホスホリ
パーゼＣとレシチンとの反応ｔこよって生成される／．
２−ジグリセライド、ホスファチジン酸ホスファターゼ
とホスファチジン酸との反応によって生成される／．２
−ジグリセライド、ホスホリパーゼＤ，ホスファチジン
酸ホスファターゼとレシチンとの反応ｔこよって生成さ
れる７．２−ジグリセライドを用いてもよい。さらにこ
れらのモノグリセフィトや／．２−ジグリセライドは単
離、精製することなく、反応前のホスホリパーゼＣとリ
ゾレシチン含有物、ホスファチジン酸ホスファターゼと
りゾホスファチジン酸含有物、ホスホリパーゼＤ，ホス
ファチジン酸ホスファターゼとりゾレシチン含有物ｔ−
／−モノグリセライドの代ａｔコ用いてもよく，またホ
スホリパーゼＣとレシチン含有物、ホスファチジン酸ホ
スファターゼとホスファチジン酸含有物、ホスホリパー
ゼＤ，ホスファチジン酸ホスファターゼとレシチン含有
物を／．２−ジグリセライドの代りに用いてもよい。

また本発明で用いる非イオン性界面活性剤としては、例
えばポリオキシエチレン（ＰＯＥ）ｊ旨肪アルコールエ
ーテル〔例えば花王アトラス社製ＥＭＵＬＧＥＮＩＯ乙
（ＰＯＥラウリルアルコ−！レエー　テ　ル　：ＨＬＢ
／　　０．５）　　、　ＥＭＵＬＧＥＮ／θＫ（ＰＯＥ
フウリルアルコールエーテ／ｌ／　：　Ｈ　ＬＢ／，？
．／　）、　ＥＭＵＬＧＥＮ２２０　（　ＰＯＥセチル
アルコールエーテル：ＨＬＢ／４４２）、ＥＭＵＬＧ　
ＥＮダ０ｇ（ＰＯＥオレイルアルコールエーテｔｖ：Ｈ
ＬＢｌＯ．０　）、Ｂｒ　ｉ　ｊｊｊ　（ＰＯＥ（２３
）ラウリルアルコールエーテ）Ｖ：　Ｈ　Ｌ　Ｂ　／乙
９）、Ｂｒｉｊ７ｆ（ＰＯＥ（、２０）アテアリ）Ｖア
　ｗ　　コ−）ｖｘ　−　　テ　ル　：　　ＨＬＢ　　
／　　ｒ３　　）ｓ　　　Ｂ　　ｒ　　ｉ　　ｊ９ｇ　
（ＰＯＥ　／２０　）オレイルアルコ−ｌレエ〒テ／ｌ
／：ＨＬＢ／．！；．３）、ＥＭＵＬＧＥＮ３’ＩＯ（
ＰＯＥステアリルエーテル’．ＨＬＢ／７３）、共栄社
油脂社製ノニオライトＡＬ−／／ＣＰＯＦフウリルエー
テ）Ｖ　：　Ｈ　Ｌ　Ｂ　／　’Ａθ）、ノニオフイト
ＡＯ−２０（ＰＯＥオレイルエーテｌし：ＨＬＢ／．５
′。

グ）、日光ケミカルズ社製ＮＩＫＫＯＬＢＢ−ノｏ（Ｐ
ＯＥベヘニルエーテル：ＨＬＢ１７）％ＮＩＫＫＯＬ　
　ＢＬ−９ＥＸ、ＢＯ−１０ＴＸ。

ＢＣ／Ｊ−ＴＸ、ＢＨＪ−％日本エマルジョン社製エマ
レックスＢＡｌＯ（ＰＯＥブチルアルコールエーテル：
ＨＬＢ／、４．り、エマレックスＢＡ／、！ｒ　（ＰＯ
Ｅブチルアルコールエーテル：　ＨＬ　Ｂ　／　、？、
　７）、エマレックス１３０（ＰＯＥセチルアルコール
エーテル： （　　ＰＯＥ　　セ　チルレア　ｌレコ　ールエー　テ
　ル　：ＨＬＢ／４４よ）、エマレックス！；ＪＯＣＰ
ＯＥオレイルアルコールエーテル：ＨＬＢ／Ｊ’，、２
）、１エマレツクス７００（ＰＯＥフウリルア！レコー
ルエーテ／ｌ／　：　ＨＬＢ／乙．７）、日本油脂社製
ノニオンＥ−２／３（　ＰＯＥオレイルアｌレコールエ
ーテル：ＨＬＢ／３、６）％ノニオンｇ−２２０（ＰＯ
ＥオレイルアＡ／：Ｉ−ｗｘ−テ）ｖ：　ＨＬＢ　／　
！ｉ３　）、ノニオンＰ−２２！；　　（　　ＰＯＥ　
　セ　チルレア　ル　コ　ー　！レエー　テ　ル　：　
ＨＬＢ／乙．グ）、ノニオンＳ−．２／Ｊ’（ＰＯＥヌ
テア　リ　ルア　ルコ　ー　ルエー　テ　ル　：ＨＬＢ
／　　ｌＡ　、２）、１　　ノニオンＴ　２０ｇ．３Ｃ
ＰＯＥトｙデンルアルコ−Ｂｙ　ｘ　−　７−　ｗ　：
　Ｈ　Ｌ　Ｂ　／　３．　０　）、ライオン油脂社製リ
ポノックスＯＣＳ　（ＰＯＥアルキルエーテ／Ｉ／：Ｈ
ＬＢｌｉ′０）、リポノックスＬＣＲ　（　ＰＯＥアル
キルエーテル：ＨＬＢ／乙２）、リポノックス０（ＰＯ
　　Ｅ　ア　ルキ　ル　ニー　テ　ル　：ＨＬＢ／４４
ｊ）。

や組型化工業社製Ａｄｅｋａｔｏｌ　Ｓｏ−／４０　（
　ＰＯＥ第２Ｐｔ．ａ鎖アルコールエトキンレート）、
Ａｄｅｋａｔｏｌ　Ｓｏ　　／４’ｊ　（ＰＯＥ第２第
２鎖直鎖アル　ー　ルエ　ト　キ　シ　レー　ト　）、
　　Ａｄｅｋａｔｏｌ　　ＬＯ　−９（ＰＯＥ第７級直
鎖アルコールエトキシレート）、Ａｄｅｋａｔｏｌ　Ｌ
Ｏ−／２　（　ＰＯＥ第１第１鎖直鎖アル　ー　ル　エ
　ト　キ　シ　レー　ト　）、　　Ａｄｅｋａｔｏｌ　
　ＬＯ−ｌ！；　（　ＰＯＥ第１級ｔｌｆｔＪｌアルコ
ールエトキンレート）など入 ＰＯＥアルキルアリールエーテル〔例えば花王アトラス
社製ＥＭＵＬＧＥＮｇｌｏ（ＰＯＥオクチルフェニール
エーテル：ＨＬＢ／３、／）、ＥＭＵＬＧＥＮ９／　／
　（　ＰＯＥノニルフェニールニー　チル：　Ｈ　Ｌ　
Ｂ　／　３．　７　）、ＥＭＵＬＧＥＮり３０（ＰＯＥ
ノニルフェニールエーテル：ＨＬＢ／よｌ）、ＥＭＵＬ
ＧＥＮ　９　３　０　（　Ｐ　Ｏ　Ｅ　７　：＝ｔｖ）
ｘ−＝−ｔｖエーテｔｖ　：　Ｈ　Ｌ　Ｂ　／　ｇ．　
２　）−共栄社油脂社製ノニオフィトＰＯ−７（ＰＯＥ
オクチルフエニールエ日 丸木エマルジョン社製エマレックスＮＰ−１ｊＣＰＯＥ
アルキルフエノールエーテル：ＨＬＢ／Ｊ。

２）、エマレックスＯＰ−２Ｊｉ（ＰＯＥアルキルフェ
ノールエーテル：　ＨＬＢ　／　、５：ｆ　）、日本油
脂社製ノニオンＮＳ−２１６　（ｐｏｇノニμフェノー
ルエーテル： ルフェノールエーテルＩｔ，、２”）％ライオン油脂社
製リポノックスＮＣＭ（ＰＯＥアルキルフェノ−ｗ　ニ
ー　ｆ　ｔｖ　：　Ｈ　Ｌ　Ｂ　／　ＩＩ−、　！ｒ　
）　ｂ　リボ／’／りｙ．ＮＣＮ　　（　　Ｐ　　Ｏ　
　Ｅ　　７　　ｔレキル　）　エ　ノ　ー　、ル・ニー
　テ　ル　：　　ＨＬＢｌｌＡど）、リポノックス［Ｃ
Ｏ（ＰＯＥアルキルフェノールエーテル： 製ＮｏｎｉｄｅｔＰ−’１０　（　ＰＯＥアルキルアリ
ール工ーテ／Ｌ／　）　、ローム・アンド・ハヌ社製ｆ
７）ＴｒｉｔｏｎＸ−　ｌ　０　０　（　Ｐ　Ｏ　Ｅ　
ア　ルキ　ルア　リ　−　ルエー　テ　ル　）、日光ケ
ミカルス社製ＮＩＫＫＯＬ　　ＮＰ−ＩＯ％ＮＰ−／！
ｒＴＸ，ＮＰー２０，ＯＰー１１０など〕ＰＯＥ脂肪酸
エステル〔例えば花王アトラス社製ＥＭＡＮＯＮ／　／
　／，ｚ　（　ＰＯＥモノラウレート：ＨＬＢ／３，７
）、ＥＭＡＮＯＮ４／／ｊ（ＰＯＥモノオレイト：　Ｈ
ＬＢ／．Ｒ’％　）、Ｍｙ　ｒ　ｊ　’ｌ！；　（ＰＯ
Ｅ　（に）ヌテアレート：ＨＬＢ／／．／）。

ＭｙｒｊｊＪ（ＰＯＥ（ｌｌ。）ステ７レー）：ＨＬ　
Ｂ　／　ｌ，り）、Ｍｙｒ　ｊｊ３（ＰＯＥ（５（７）
ステアレー）：ＨＬＢ／’７り）、共栄社油脂社製ノニ
オライトＳ−１００（ＰＯＥステアレート；ＨＬＢ／よ
る）、ノニオライトＴ−ｌｌ（７（ＰＯＥトール油脂肪
酸エステル：ＨＬＢ／／．ｊ　）、日本ｃマルジョン社
製エマレックス２０２　（　ＰＯＥｉレ−）：ＨＬＢ／
よｌ）％エマレックス２０３ｃＰＯＥオレート：ＨＬＢ
１７乙）、エマレックスど００　（　ＰＯＥモノフウレ
ー）：ＨＬＢ／．１’）、ノニオンＰ−１０（ＰＯＥモ
ノパルミテート：ＨＬＢ／　、５ニア　）、ノニオンＳ
−１０（ＰＯＥモノヌテアート：ＨＬＢ／よ２）、ノニ
オンＳ−ダ０（ＰＯＥモノヌテアレー）　：ＨＬＢ／ど
２）や日光ケミカルズ社製ＭＹＬ−１０、ＭＹＯ−１０
など〕ＰＯＥソルビタンＪＩＷ肪酸エステル〔例えば花
王アトラス社製ＥＭＡＳ　ＯＬ／　／３０　（ＰＯＥソ
ルビタンモノフウレー）：ＨＬＢ／乙、３　）、ＥＭＡ
ＳＯＬ３１３０　（ＰＯＥソルビタンモノヌテアレート
　：ＨＬＢ／　　４４　タ　）、　　Ｔｗｅｅｎ　　２
０　　（ＰＯＥ　　Ｃ２０）ソルビタンモノステレート
：　ＨＬＢ／　、４．７　）、Ｔｗｅｅｎ　１１０　（
ＰＯＥ　Ｃ２０）ソルビタンモノパルミテート　：ＨＬ
Ｂ／ｊＪ）、Ｔｗｅｅｎ　、！ｔ’　０　（ＰＰ０Ｅ　
Ｃ２０）ソルビタンモノフウレート：ＨＬＢ／乙、２）
、ノニオフィトＴＷＳ−１３（ＰＯＥ（／３）ソルビタ
ンモノステアレート：ＨＬＢｉｌ、２．３；）、第一工
業製薬社製５ＯＬＧＥＮ　　ＴＶ２Ｑ　（ＰＯＥソルビ
タンモノラウレー）：ＨＬＢｉｌ、７）、５ＯＬＧＥＮ
　　ＴＷＩＯ（ＰＯＥｙルビタンモノオレー）　：ＨＬ
Ｂ／ｊＯ）、日光ケミカルズ社製ＮＩＫＫＯＬＴＳＤＬ
−２０２０ＬＣＰＯＥソルビクンオリーブ脂肪酸：ＨＬ
Ｂｉｌ、、ｓ）、ＴＬ−１０、Ｔｏ−１０６１日本エマ
ルジョレ ン社製エマヘツクスＥＴ−２ｏｏｏ（ｐｏＥツルテアレ
ート：　ＨＬＢ　／４４り）、ノニオンＯＴ−，２、！
／　（ＰＯＥｙｚｙビタン、ｔレ−）　：ＨＬＢ／、５
；。

）、東邦化学工業社製５ｏｒｂｏｎ　　Ｔ−、：ｌ　Ｏ
（Ｐ　ＯＥソルビタンモノラウレート：ＨＬＢ／４．．
７）。

Ｓｏｒ’ｂｏｎ　　Ｔ−’１０　（ＰＯＥｙ　）ｖビタ
ンモノパ！レミテー）　：　ＨＬＢ　／　３７　）、５
ｏｒｂｏｎ　　Ｔ−、！ｉ’０（ＰＯＥソルビタンモノ
オレー）：ＨＬＢ／よ０）など〕 ＰＯＥソルビ）　−／し脂肪酸エヌテル〔例えば花王７
）ラヌ社製Ａｔ１ｏｘ１０’％ｊＡ（ＰＯＥｙｙビトー
ルオレイトーラウレー）：ＨＬＢ／３．．２）。

Ａｔ１ｏｘ／／り乙（ＰＯＥソルビトールオレイト：Ｈ
ＬＢｉｌ、ダ）、Ｇ−１０りｊ　（ＰＯＥソルビトール
ラウレー）　：　ＨＬＢ　／　／、！；　）　、Ｇ−／
４！グｌｔｙ− （ＰＯＥソルビトールフッリン誘導体：ＨＬＢ／ＩＩ　
）　、　日光ケミｔｙ　ｙｘ社製ＮＩ　ＫＫＯＬ　　Ｔ
ＳＯＬ−ｉｏコＯＬ　（ＰＯＥソルビトールオリーブ脂
肪酸：ｒ−ヌテｔｖ：ＨＬＢ１１．０）やＧＬ−１など
〕ＰＯＥヒマン油誘油体導体ＯＥ硬化硬化ヒマシ油体導
体えば花王アトラス社製Ｇ−１．ｌｌ＃ｃヒマシ油酸化
エチレン付加物：ＨＬＢ／乙、０）、Ｇ−１２りｊ（硬
化ヒマン油酸化エチレン付加物：ＨＬＢ／７３−）、Ｇ
−／２り２（硬化ヒマン油酸化エチレン付加物：ＨＬＢ
１０゜ｇ）、日光ケミカルズ社製ＮＩＫＫＯＬ　　Ｃｏ
−４０ＴＸ（ＰＯＥ（６０）ヒマン油：　ＨＬＢ／４４
／　）など〕ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル〔例えば
日光ケミヵルズ社製ＮＩＫＫＯＬ　　ＴＧＳＯ２／ｊ（
ＰＯＥグリセリン植物油脂肪酸エステｔｖ　：　ＨＬ　
Ｂ１１ＡＯ）、ＴＧＳｏ、２２０ＣＰＯＥグリセリン植
物油脂肪酸エステル：ＨＬＢ／よｊ）、ＴＤＧＯＬ−２
０１０（ＰＯＥジグリセリンオリーブ脂肪酸エステ／ｌ
／：ＨＬＢメ２．ｊ）など〕やＰＯＥフッリン誘導体〔
例えば花王アトラ゛ヌ社製Ｇ−／７りＯ１２０− Ｇ−／７りｊ１日光ケミカルズ社製ＢＷＡ−５など〕、
ＰＯＥアルキルチオエーテル、ＰＯＥプロピレングリコ
ールモノ脂肪酸エヌテルなどのＰ。

Ｅ形非イオン性界面活性剤、ポリオキシプロピレンブロ
ックとＰＯＥブロックを有するブロック形非イオン性界
面活性剤〔例えば組型化工業社製ＰｌｕｒｏｎｉｃＬ／
２／、Ｌ１２２など〕、ソルヒタン、マンニトール、ソ
ｌレビトール、ショ１ａｆｘトの炭素数６以上の多価ア
ルコールとラウリン酸。

パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、その
他の天然油脂の脂肪酸の炭素数１２以上の高級脂肪酸と
のエヌテルである多価アルコール形非イオン性界面活性
剤などが挙られる。

これらの非イオン性界面活性剤ｔこおいて特ｔこ／。

また用いる非イオン性界面活性剤は１通常ＨＬ程 Ｂ１０〜度以上、好ましくはＨＩ、Ｂ　／　／程度以上
のものを用いることが好ましく、二種以上の非イオン性
界面活性剤を併用してＨＬＢｌｏ程度以上ｔこ調製して
用いてもよい。

次いで目的とする組成物を調製するｔこ当っては例えば
まず一定量のモノグリセライドまたは／、ノージグリセ
ライドｔこ、非イオン性界面活性剤のｌ〜ｊ　ｗ／ｗ％
水溶液を加えて加温溶解せしめればよい。この際、用い
られるモノグリセライドまたは／、２−ジグリセライド
５〜１００重量部当り、非イオン性界面活性剤１００〜
５００重量部を用いればよい。また得られる水溶液状の
組成物としては溶液ｊｔ当りｏ、５−ｉｏｙのモノグリ
セライドまたは／、ノージグリセライド、１０〜ｊＯｔ
の非イオン性界面活性剤を含有せしめた溶液が好ましい
。

さらｔここの組成物をそのままリパーゼ活性測定用の基
質溶液として用いてもよく、さらにこの組遊 放物とともに、リパーゼの作用１こで基質からへ離する
脂肪酸またはグリセロールを定量するための必要な試薬
を添加してもよい。

これらの添加し得る試薬としては、脂肪酸またはグリセ
ロ−１しを定量する公知の種々の方法の試薬が使用でき
る。

即ち、組成物Ｑこ含有されている一般式ＣＩ）で表わさ
れる化合物は、被検液中のリパーゼの作用により、下記
（ＩＩ）で表わされる反応を生じ、脂肪酸およびグリセ
ロールを遊離する。

ＣＨ２０Ｈリパーゼ　　　　　　　　　ＣＨ２０Ｈ（１
）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　グリセロールの （ただしＲｏおよびＲ２が高級脂肪酸残基へ場合にｎ−
２を示し、Ｒよが高級脂肪酸残基、Ｒ２が水素原子の場
合ｔこはｎ　＝　／を示す）Ｒ２０Ｈ（タタＬ　Ｒ２が
高級脂肪酸残基金示す場合；詳しくはＲ２Ｃ０ＯＨ）　
（以下、これらをＲＣＨ２ＣＨ２Ｃ００Ｈとして表わす
〕を定量する方法の概略を例示するが伺んら限定するも
のではない。

＋１）　　アテノンントリホスフエート（ＡＴＰ）、コ
エンチームＡ　（Ｃｏ　ＡＳＨ）アシルＣｏＡシンセタ
ーゼ（ＥＣ乙、２．／、３）、アｖｔｖＣｏ　Ａ　、ｔ
　キシダーゼ（米国特許第７３４６１７３号明細書）を
用いる方法 ＲＣＨ２ＣＨ２ＣＯ８ＣｏＡ＋ＡＭＰ＋ピロリン酸ＲＣ
Ｈ−ＣＨＣＯ８ＣｏＡ＋Ｈ２Ｏ２ Ｃ工程＝０２消費量またはＨ２Ｏ２の生成量の定量（２
）　　ＡＴＰ、ＣｏＡＳＨ，７Ｖ／Ｉ／ＣｏＡシンセタ
ーゼ、アン／Ｌ／ＣＯＡオキシダーゼ、　エノイＡ／Ｃ
ＯＡヒドラターゼ（ＥＣＩＡ、２．／、　／　７　）、
　３−ヒドロキシＣｏＡデヒドロゲナーせ（Ｅ　Ｃ／、
　／、　／、　３　ｊｔ　）　、　３−ケトアンＡ／Ｃ
ＯＡチオラーゼＣＥＣ２，３，／、１６）、ニコチンア
デニンヌクレオチド（ＮＡＤ十χ必要に応じてカタラー
ゼを用いる方法、またはエノイルＣｏＡヒドラターゼ、
３−ヒドロキンＣｏ　Ａ　７ヒドロゲナーゼおよび３−
ケトアンルＣｏＡチオフーゼの各活性を同−蛋白上に有
する複合活性酵素（例えばＲｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆ
ｒａｇｉＢ−０７７１，ＦＥＲＭ−Ｐ扁３７０／菌株か
らの酵素；英国時へ願番号と２１に６３２号明細書参照
）全上記の各酵素の代り１こ用いる方法。

ＲＣＨ２ＣＨＱＣＯ８ＣｏＡ＋ＡＭＰ＋ピロリン酸ＲＣ
Ｈ＝Ｃ’ＨＣＯ８ＣｏＡ＋Ｈ２Ｏ２Ｃ工程：ＲＣＨ−Ｃ
ＨＣＯ８ＣｏＡ　十Ｈ２０エノイルＣｏＡヒドフクーゼ ＲＣＯ８ＣｏＡ　＋ＣＨ３ＣＯ８ＣｏＡｒ頂：　（ｅ　
工程で生じたＲＣＯ８ＣｏＡはｂ工程の反応系ｔこサイ
クリングする）０２消費量、■２０２生成量または還元
型ＮＡＤ生成量の定量 （３）　　Ａ　Ｔ　Ｐ　、　ＣｏＡＳＨ，７ｖｔｖｃｏ
Ａシンセターゼ。

ミオキナーゼ（Ｅｃ、２．７１Ａｊ）、塩化マグネシウ
ム、ホスホエノールピルビン酸（ｐＥｐ　）、ピルベー
トキナーゼＣＥＣ２，７／、グ０）、還元５ＮＡＤ、Ｌ
−ツクテートデヒドロゲナーゼ（Ｅ　Ｃ／、　／、　／
、　２７　）ｔ−用いる方法ＲＣＨ２ＣＨ２ＣＯ８Ｃｏ
Ａ十ＡＭＰ＋ピロリン酸す工程：ＡＭＰ＋ＡＴＰ−一→
２ＡＤＰミオキナーゼ 、！ＡＴＰ＋、２ピルビン酸 ２Ｌ−乳酸＋２ＮＡが− ｅ　］Ｊ！　：還元型ＮＡＤ消費量の定量（４）上記（
３）の方法のｄ工程の還元型ＮＡＤおよびツクテートデ
ヒドロゲナーゼの代りｔこピルベートオキシダーゼ（Ｅ
Ｃ／、、２．３．３　）を用いる方法ｄ工程：２ピルビ
ン酸＋２０２−一一一一−−−−−→ビルペートオキン
ダーゼ コアセチルホヌフエート＋２ＣＯ２＋２Ｈ２０２ｅ、Ｔ
ｌ：０２消費量、ＣＯ２生成ｉｔ　＊　タハＨ２Ｏ２生
成Ｈの定量 （５１ＡＴ　Ｐ１ＣｏＡＳＨ１アシルｃｏＡシンセター
ゼ、ＡＭＰデアミナーゼ（Ｅ　Ｃ３，よ１Ａ６）を用い
る方法 ＲＣＨ２ＣＨ２ＣＯ８ＣｏＡ＋ＡＭＰ＋ピロリン酸Ｃ工
程：ＮＨ３生成量の定量 （６）　　ＡＴＰ、ＣｏＡＳＨ，アシ／ｌ／ＣＯＡ　シ
ンセターゼ。

ＡＭＰヌクレオシダーゼ（ＥＣ３，２，２，ダ）、アデ
ニンデアミナーゼ（Ｅ　Ｃ３，よ≠２）を用いる方法 ａ工程：　ＲＣＨ，ｐＨ２ＣＯＯＨ＋ＡＴＰ＋ＣｏＡＳ
Ｈ−一−−−−−−−−→アＺルＣｏＡｙンセタービ 一　　ｄ　ｌ　　− ＲＣＨ２ＣＨ２ＣＯ８ＣｏＡ＋ＡＭＰ＋ピロリΔ駿アデ
ニン十Ｄ−リポース−ｊ′−ホスフェートＣ１：アデニ
ン十Ｈ２０ヒ本°へ７ンテン啼ＮＨ３アデニンデアミナ
ーゼ １鴫 ｄｒＪｌ！：ＮＨ，生成量の定量 （７）　　ＡＴＰ、ＣｏＡＳＨ，７シＡ／ｃｏＡＶンセ
ターゼ。

ミオキナーゼ、塩化マグネシウム、ＡＤＰデアミナーゼ
（Ｅ　Ｃ３，よ４４７）を用いる方法ＲＣＨｐＨ２ＣＯ
８ＣｏＡ＋ＡＭＰ＋ピロリン酸す工程：ＡＭＰ十ＡＴＰ
−ン２　ＡＤＰミオキナーゼ ｄ工程：ＮＨ，生成量の定量 （８）　　Ａ　Ｔ　Ｐ　、　ＣｏＡｓＨ，アシルＣｏＡ
シンセターゼ。

ミオキナーゼ、塩化マグネンウム％ＧＴＰ−アゾニレイ
トキナーゼＣＥＣ２，７，４４１０＞％イノー　２タ　
−　　　　　　　　　　　　ｔ＾＾　２ｇ　− シンジホスフエー）（ＩＤＰ）、ヘキソキナーゼＣＥＣ
２，７／、１）、グルコース、グルコース−６−ホヌフ
エートデヒドロゲナーゼ（Ｅ　Ｃ／。

／、　／、　＋　９　）　、ニコチンアデニンジヌクレ
オチドホスフェ−）（ＮＡＤＰ　　）を用いる方法ａ　
工程：　ＲＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ＋ＡＴＰ−）−ＣｏＡ
ＳＨ−アシルＣｏＡシンセターゼ ｍ−−→　ＲＣＨ２ＣＨ２ＣＯ８ＣｏＡ　十ＡＭＰ＋ピ
ロリン酸す工程：ＡＭＰ十ＡＴＰ−）　２ＡＤＰミオヘ
ナーゼ ｍ−→　２ｋＭＰ＋２ＩＴＰ ｄ工程：２工ＴＰ＋２グルコース ヘキソキナーゼ コゲルコース−６−ホスフェート＋２ＩＤｐｅ工程＝２
グルコース−６−ホスフェ−）＋、２ＮＡＤＰ　　−り
〃コーヌー６−ホスフエートデヒドロゲナーゼｆ　ｌ１
ｉｌ！　：還元型ＮＡＤＰ生成量の定量＋９）　　Ａ　
ＴＰ、ＣｏＡＳＨ，アシルＣｏＡシンセターゼ、−３０
− ＡＭＰピロホヌホリラーゼ（ＥＣ，！、ｌＡｊ、７）。

ＡＭＰ、アテニンデアミナーゼを用いる方法−一一一→
　ＲｃＨ２ＣＨＱＣＯ８ＣｏＡ＋ＡＭＰ＋ピロリン酸−
一一一→　アテニン十、針−ホス巾−Ｄ−リボンノは泊
ホスフェートｄ１１ＮＨ３生成量の定量 また用いる一般式（１）で表わされる化合物から遊離さ
れるグリセロールを定量する方法の概略を例示するが何
んら限定するものではない。

（１０）塩化マグネシウム、ＡＴＰ、グリセロールキナ
ーゼＣＥＣ２，７／、３０）、グリセロホスフェートオ
キシダーゼ（米国特許第４１６６００５号明細書、米国
特許第’ｔ２７！；Ｉｔ、１号明細書）を用いる方法 一一一→グリセロー３−ホスフェー）＋ＡＤＰ−−−→
　ジヒドロキシアセトンホスフエート＋Ｈ２Ｏ２ｅ　頂
：０２消費量またはＨ２０□生成量の定量（Ｕ）塩化マ
グネシウム、ＡＴＰ、グリセロールキナーゼ、グリセロ
ホスフェ−トチヒドロゲナーゼ（ＥＣ／、／、タタｊ）
、水素受容体（フェナジンメトスルファ−′Ｐｊ′″ヲ
用いる方法−−−→　グリセロ−３−ホスフェート十Ａ
ＤＰｂ　趨：　グリセロ−３−ホスフェート＋７エナジ
ンメトースＩレフアート□グリセロホヌフエートテヒド
ロク９−一ビーーーーー）ジヒドロキシアセトンホスフ
ェ−）十ＥθＷフェナジンメトスルファ′−ト Ｃゴ１呈：道し宅地フェナジンメトサルファー）＋”Ａ
Ｏ２□−ｍ−）　　フエナジメントス！レフアート＋Ｈ
２０ｄ珂：０□消費量の定量 ０２）グリセロールデヒドロゲナーゼ（Ｅ　Ｃ／、　／
、　／。

６　）、　ＮＡＤ　　を用いる方法 −一→　ジヒドロキンアセトン＋還元型ＮＡＤｂ工程：
１唾ＮＡＤ生成量の定量 Ｃ’Ｊ３＞ｍ化マグネシウム、ＡＴＰ、グリセロ−μキ
ナーゼ、ＰＥＰ、　ピルベートキナーゼ、ピルベートオ
キシダーゼを用いる方法 ａ工程：グリセロール＋ＡＴＰ−−−−−−−−−一一
−−−グリセローｙキナーゼ ーーー→グリセロー３−ホスフェ−）＋ＡＤＰ−アセチ
ルホスフェート＋ＣＯＱ十Ｈ２ＯＱｄ工程：０２消費量
、ＣＯＱ生成量またはＨ２０Ｑ生成量の定量 ０４）塩化マグネンウム、ＡＴＰ、グリセロ−μキナー
ゼ、ＰＥＰ、ピルベートキナーゼ、Ｌ−ツクテートデヒ
ドロゲナーゼ、還元型ＮＡＤを用いる方法 一一−→グリセロー３−ホスフェート＋ＡＤＰ−うＬ−
乳酸十ＮＡＤ” ｄｌ：還元型ＮＡＤ消費量の定量 （１５）塩化マグネシウム、ＡＴＰ、グリセロ−μキア ナーゼ％ＡＤＰデ＼ミナーゼを用いる方法−一一→グリ
セロー３−ホスフェート＋ＡＤＰｅ　１：　ＮＨａ生成
量を定量する また前記の（３）の方法のＣ工程で生じるピルビン酸、
Ｑ３）の方法のｂ工程やα４）の方法のｂ工程で生じる
ピルビン酸にヒドフジン化合物、例えはλ、ダージニト
ロフェニルヒドフジンを作用せしめて極大吸収波長ＱＱ
Ｏｎｍ付近の色素形成をせしめてもよく、さらに（１１
）の方法における水素受容体としてはフェナジンメトス
ルフアートの他ｔこチトクロームＣ，メチレンブレーや
フェリシアン化物などを用いてもよく、さらｔこまだ（
２）の方法ｔこおいてカタラーゼを用いる場合をこはそ
のｂ工程で生じるＨ２Ｏ２は分解されるため、ｆ工程で
は還元型ＮＡＤ生成量の定量を行なうことが好ましく、
前記の種々の方法ｅこおいて可能な変法を用いることが
できる。

なお前記の方法におけるＡＭＰとはアデノンンモノホヌ
フェート％ＲＣＨ２ＣＨ２Ｃ０８ＣｏＡとはアンルＣｏ
　Ａ　、　ＲＣＨ＝ＣＨＣＯ８ＣｏＡ　トは２．３−デ
ヒトロア５ｙｔｖＣｏ　Ａ　、　ＲＣＨＣ［（２ＣＯ８
ＣｏＡとはヒドロキシアシ／ｌ／　Ｃｏ入署 Ｒ ＲＣＣＨ２ＣＯＳ　Ｃｏ　Ａとは３−ケトアＳ／／Ｌ／
ＣＯＡ％ＡＤＰ１ とはアデノンンジホスフエー）、ＩＴＰとはイノシント
リホヌフエートを意味するものである。

さらｔこ前記の方法において、まず０２消費量の定量の
場合ｔこは酸素電極を用いる電気化学的手段ｔこて測定
する方法が簡便である。またＨ２Ｏ２生成量の定量の場
合には過酸化水素電極を用いる電気化学的手段ｔこて測
定するか、過酸化水素と反応し℃指 検出できる生成物ｔこ変化する過酸化水素入水薬組成物
を用いて定量すればよい。またこの過酸化水素指示薬組
成物としては２通常色調の変化を可視にて生ずる過酸化
水素呈色試薬、紫外線照射をこより螢光を発する過酸化
水素螢光試薬や発色する過酸化水素発光試薬である分光
光学的手段１こよりその変化を定量し得る試薬組成物が
用いられ、簡便ｔこは過酸化水素呈色試薬が用いられ、
例えばその試薬としてはペルオキシダーゼ作用を有する
物質と染料前駆体との含有物が用いられる。このペルオ
キシダーゼ作用を有する物質としては、西洋ワサビ由来
のペルオキシダーゼ（Ｅ　Ｃ／、　／　／、　／、　７
　）が通常よく用いられ、また通常ｌテスト当り００５
単位以」二、好ましくは０．　／　−５００単位用いれ
ばよく、また染料前駆体としては電子受答体とカプラー
の組合せが通常よ（用いられ、またこれらはＱ、／　ｒ
ｎ　Ｍ以上の濃度にて適宜量用いられる。電子受容体と
しては、例えばグーア）゛ノアンチピリン、ｔ−アミノ
ー３−ヒドヲジノーｊ−メルカプ）　−／、　２．　Ｉ
Ｉ−トリアシーツｖ、２−ヒドフジノベンゾチアゾール
、３−メチル−２−ベンゾチアゾリドン％コーアミノベ
ンゾチアゾーμなどが挙られ、またカプラーとしてはフ
ェノ−ＩＶ％３−メチル−Ｎ−エチル−Ｎ−（β−ヒド
ロキシニー？　ｔｖ　）　７二リン、Ｐ−ヒドロキシ安
息香酸％ｐ−クロロフェノ−Ｊｖ、２．ｌＩ−ジクロロ
フェノール、ｌＩＬ、６−ジクロロ−〇−クレゾール、
Ｊ、４−ジブロムフェノ−１２％３．５−ジクロロ−ノ
ーヒドロキシベンゼンスルホン酸％Ｎ、Ｎ−ジエチル−
ｍ−ト）レイジン、Ｎ、Ｎ−ジエタノーｌレーｍ−１−
ルイジン、Ｎ、Ｎ−ジメチル−ｍ−メトキシアニリン、
Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−ｍ−トμイシン、Ｎ
−工ｆ）レ−Ｎ−（３−メチｐフエニｔｖ　）　−Ｎ’
−アセチルエチレンジアミン、３−アセトアミノ−Ｎ、
Ｎ−ジエチルアニリン、３．３−キクレノール、Ｎ、Ｎ
−シメチルアニリ／などが挙られる。また過酸化水素螢
光試薬や発光試薬１こおける発螢光基質としては公知の
種々のものが挙られ、例えばビス（コ、ダ、乙−トリク
ロロフエノー）Ｖ）オキザレイト、フェニルチオヒダン
トイン、ホモバニリン酸、ｑ−ヒドロキＶフェニル酢酸
、バニリルアミン％３−メトキシチラミン、フロレチン
酸、ホルデニン、ルミノールモノアニオン、　ＪＶンゲ
ニンなどが挙うれ、必要ｔこ応じて電子受答体とともな
こ用いてもよい。さ波長３’ｌＯｎｍ−こよる吸光度の
測定を行なうか。

または還元型ＮＡＤ　（Ｐ　）呈色試薬を用いて呈色測
定を行なう分光光学的手段にて定量することが簡便であ
る。またこの還元型ＮＡＤ　（Ｐ　）呈色試薬としては
、通常ジアホツーゼ（ＮＡＤＨ）（ＥＣ／、Ａ、９９１
やｓ）７ホラーゼ（ＮＡＤＰＨ）（ＥＣ／、１．９９．
）をｌテヌト当り０．Ｏ１単位以上、好ましくは０．　
／　−／　０単位程度と０．０１ｍＭ以上の濃度Ｏ，Ｏ
Ｓ〜Ｑ、　ｊ　ｍｌのテトラゾリウム塩とを用いるホノ
Ｖマザン色素形成のための試薬が用いられ。

テトラゾリウム塩としては１例えばニトロブルーテトラ
ゾリウムクロリド、３−（４’ｊ’−ジメチルートＵ　
７　ソＩＪ　／シー２）　−、ｚ、ｔｔ−シフェニルー
テトツソリウムプロミド、２−（Ｐ−ヨードフェニル）
−３−（ｐ−二トロフエニル）−ｊ−フェニル−テトラ
ゾリウムクロリド、　２．　二ｊ、　ｊ’−テトラ−（
Ｐ−ニトロフェニル）−３，３’−（３−ジメトキンー
ダーフエニレン）−ジテトフゾリワムクロリド、２，３
．！−）リフェニルテトラゾリウムクロリド、ネオテト
ラゾリウムクロリドなどが挙られる。またジアホツーゼ
の代りｔこフエナジンメトヌルファート％ど−ジメチル
アミノー２，３．−ベンゾフェノキサジンやｌ−メトキ
ン−５−メチルフエナジニウムーメチルスルファートヲ
用いてモヨい。さらｔこＮＨ，生成量の定量に当っては
、アンモニア電極やアンモニウムイオンとして測定でき
るイオン電極による電気化学的変化として定量すること
が簡便である。Ｃ０２生成量の定量ｔこおいても炭酸ガ
スまたは炭酸イオンとして測定できる電気化学的変化と
して定量することが簡便である。このように種々の方法
ｔこおける最終工程での０２消費量、Ｈ２Ｏ２生成量、
還元型ＮＡＤ　（Ｐ　）の消費量または生成量、ＮＨ３
生成量やＣＯ２生成量などの反応において検出できる変
化の量の定量は、電気化学的手段または分光光学的手段
を適宜組合せて用いることｔこより実施される。

またこれらの種々の脂肪酸やグリセロールを定ｔこ 量する方法を用いる試薬およびその際に検出できる る変化の量であへ０２消費量、Ｈ２Ｏ２生成量、還元型
ＮＡＤ　（Ｐ　）の消費量または生成量ＮＨ３生成量や
Ｃ０２生成量などを定量するための装置や分光光学的ｔ
こ定量するための試薬を前省のモノグリセライ例えばナ
トリウム塩としてのデオキシコレイトおよびコ・リパー
ゼを添加するものであり、これらの添加ｔこより測定す
べきリパーゼの活性を安定かつ感度よく測定できるもの
である。用いられるデオキシコレイトの濃度としては、
リパーゼ活性を測定するときｔこ用いられる反応基質溶
液の組成物ｔこおいてＱ、ｊ；ｍＭ以上の濃度として調
製すればよく、好ましくは／　−２９ｍ　Ｍ程度で通常
ｌテスト当り０．ｌ〜Ｑ、　ｊ　ｍＪ用いる。またコー
　リパーゼとしては、同様ｔこ反応基質溶液の組成物に
おいてｌテヌト当り通常５００単位以上を含有せしめれ
ばよく、好ましくは２０００〜１ｌ−ＣＯ０単位程度で
ある。従ってまた前記のモノグリセライドまたは４コー
ジグリセフイドおよび非イオン性界面活性剤さらに好ま
しくはデオキシコレイトおよびコ曳リパーゼを含有する
組成物に、さらに前記の脂肪酸やグリセロ−Ｉしを定量
する方法に用いられる試薬やさらには検出できる変化の
量を分光光学的手段にて定量するｔこ必要な試薬を適宜
組合せて、リパーゼ活性を測定するときに用いられる反
応基質溶液の組成物として調製してもよい。さらにこの
反応基質ｌ溶液の組成物においては、あらかじめモノグ
リセフィトまたは７．２−ジグリセライドおよび非イオ
ン性界面活性剤を含有する組成物１例えばその水溶液を
、それらの各濃度ｔこ基いて適宜量用いて調製すること
が簡便であり、例えば全量に対してモノグリセライドま
たは／、２−ジグリセライドおよび非イオン性界面活性
剤を含有する組成物１ のτ〜肋の範囲のＭｌこて使用すればよく、この？ 反応基質溶液の組成物におけるモノグリセライドまたは
ジグリセライドの使用量としては０．　！；　ｍ　Ｍ以
上の濃度含有量をこて調製すればよく、好ましくは／、
　！；　−！；　ｍ　Ｍ程度である。また非イオン性界
面活性剤の使用量としては、０１％以上の濃度含有量に
て調製すればよく、好ましくは０．２〜Ｏｊ％程度であ
る。

またこの反応基質溶液の組成物として、好ましくは％Ａ
　Ｔ　Ｐ、　ＣｏＡＳ　Ｈ，デオキシコレイト、コ・リ
パーゼ、アシルＣｏＡシンセターゼ、アシルＣｏＡオキ
ンダーゼ、モノグリセフィトまたは／、　２−ジグリセ
ライド、非イオン性界面活性剤および過酸化水素呈色試
薬、さらに好ましくはマレイミド、Ｎ−メチルマレイミ
ド　Ｎ−１−エチルマレイＸＦ、Ｎ−フェニルマレイミ
ドなどのＳＨ試薬を組合せて用いてなる組成物、ＡＴＰ
％ＣｏＡＳＨ，デオキシコレイト、コ・リパーゼ、アシ
ル−ＣｏＡシンセターゼ、アＶ／Ｌ／ＣＯＡオキンダー
ゼ、エノイｌしＣｏＡヒドラターゼ、３−ヒドロキシア
シルＣｏＡ７’ヒドロゲナーゼ、３−ケトアシ／ｌ／Ｃ
ＯＡチオフーゼ、モノグリセライドまたは／、２−ジグ
リセライド、非イオン性界面活性剤およびＮＡＤ（Ｐ）
、さらｔこ好ましくはカタラーゼ、フフビンアデニンジ
ヌクレチド、ＮＡＤ　（Ｐ　）呈色試薬を組合せて用い
てなる組成物、塩化マグネシウム、ＡＴＰ、デオキンコ
レイド、コ→−リパーゼ、グリセロールキナーゼ、グリ
七ロホスフエートオキシダーゼ、モノグリセフィトまた
は／、２−ジグリセライド、非イオン性界面活性剤、お
よび過酸化水素呈色試薬なμ合せてなる組成物、塩化マ
グネシウム、ＡＴＰ、デオキシコレイト、コーリパーゼ
、グリセロールキナーゼ、グリセロホスフェートデヒド
ロゲナーゼ、モノグリセライドまたは７．２−ジグリセ
ライド、非イオン性界面活性剤および水素受容体を組合
せて用いてなる組成物、デオキシコレイト、ツー１リパ
ーゼ、グリセロ−μデヒドロゲナーゼ、ＮＡＤ（Ｐ）、
モノグリセフィトまたは／、２−ジグリセライド、非イ
オン性界面活性剤、およびＮＡＤ　（Ｐ　’）呈色試薬
を組合せて用いてなる組成物が挙られる。これらの組成
物ｔこおいて用いられるＡＴＰやＣｏＡＳＨ，使用量と
しては、前記の反応に基いて決定できるもので遊離する
脂肪酸に比べて数倍上ｌし以上使用すればよく１通常過
剰量用いるもので、例えば０．６−　、ｆＱ　ｍＭ濃度
の溶液を用いてｌテスト当り０．Ｏｊμｍｏｌｅ以上好
ましくは２μｍｏｌｅ以上含有せしめればよい。またＮ
ＡＤ　（Ｐ　）の使用量も、前記の定量に基いて決定で
きるもので１通常過剰量用いればよく、例えば０．！；
−３；ＯｍＭ濃度の溶液を用いてｌテスト当り０．０５
　ｐ　ｍｏｌｅ以上、好ましくは２μｍｏｌｅ以上含有
せしめればよい。−また塩化マグネシウムは例えばｊ〜
５９　ｍ　Ｍ濃度の溶液をンテスト当り。

Ｏ１〜Ｑ、　３　ｍｌ程度用いればよい。また用いる酵
素ｅこおいて、アシＡ／ＣＯＡシンセターゼはｌテスト
当り通常Ｏ７単位以上、好ましくは０．３−／単位、ア
シ／ｌ／ＣＯＡオキシダーゼはｌテスト当り通常ｌ単位
以上、好ましくは５〜２０単位程度、エノイルＣｏＡヒ
ドラターゼ、３−ヒドロキシアシ）ｖＣｏ　Ａデヒドロ
ゲナーゼ、３−ケトアシｙｃｏＡチオフーゼはｌテスト
当り通常Ｏ０！単位以上、好ましくは１〜２ｊ単位程度
、グリセロールキナーゼはｌテスト当り通常０．０　／
単位以上、好ましくはＯ，ＯＳ〜ｊ単位程度、グリセロ
ホヌフエートオキシダーゼはｌテスト当り通常Ｏ０ｊ単
位以上、好ましくは１〜２０単位程度グリセロールデヒ
ドロゲナーゼはｌテスト当り通常０．ｊ単位以上、好ま
しくは１〜λＯ単位程度を用いればよい。さらｔここれ
らの種々の試薬は１通常ｐＨ７〜り程度の緩衝液に溶解
して用いればよい。緩衝液としては、リン酸緩衝液、グ
リシルグリシン緩衝液、トリス−塩酸緩衝液、ジメチル
グルタレート緩衝液、イミダゾ−〃−塩酸緩衝液、グツ
ドの緩衝液例えばピヘペヌーＮａＯＨ緩衝液、グリンン
緩衝液などの／ＱｍＭ〜３００ｍＭ濃度のものを用いれ
ばよい。以上の種々の試薬の使用量は何んら限定するも
のではなく、単なる例示であって、適宜１こ使用量、濃
度などを変更して使用してもよいものであり、さらに必
要に応じて塩化ナトリウム（ＮａＣ１）、酵素の安定化
剤、保存料などを悪影響のない程度にて添加してもよい
。なお前記の検出できる変化の量の定量ｔこおいて、過
酸化水素指示薬組成物をごて過酸化水素を定量しようき
する場合、例えば前記の（１）の方法では反応において
生成する過酸化水素が、その前工程で用いるＣｏＡＳＨ
などの還元性物質と反応して過酸化水素の定量性を欠く
こととなるため、その前工程後残存するＣｏＡＳＨをＳ
Ｈ試薬にて封じることが好ましいものである。それ故（
１）の方法のａ工程とそのｂ工程、Ｃ工程の反応のため
の各々の試薬は別々に調製して用いることが好ましい。

このようｔこモノグリセライドまたは／、２−ジグリセ
ライドおよび非イオン性界面活性剤を含有してなるリパ
ーゼ活性測定用組成物、さら１こ好ましくはこれｔこデ
オキシコレイドおよびコケリパーゼを含有してなる組成
物、さらｔここれに脂肪酸またの組成物として調製して
もよい。このように調製され、また好ましい組成物であ
る反応基質溶液は通常０．　／　−３ｍｌが被検液、例
えば血清、その他のリパーゼ活性を有する溶液０．　／
　”　ｊ；　ｍｌ　ｐこ対してｌテスト用として用いら
れ、通常３７℃ｅこて１分以上反応を行なえばよい。こ
の反応に応じて、検出できる変化の量を分光光学的手段
または電気化学的手段ｅこて定量することｅこより、被
検液中のリパーゼ活性を測定してなるものである。

このようｔこして得られる本発明のリパーゼ活性測定用
組成物は、長期間保存ｔこおいても相分離を生ずること
なく安定であり、かつ何んら濁りのない良好なもので、
再現性よ（リパーゼ活性を測定し得る優れたものであっ
た。

次いで本発明の実施例を挙げて詳しく述べるが−ダ７− その結果を第１表１こした。

実施例 １）リパーゼ活性測定用組成物の調製 リパーゼの基質である種々のグリセフィト（市販品購入
、有機溶媒ｔこ溶解保存しである基質は。

ロータリーエバポレーターｅこより溶媒ヲ除去して使用
した）を、２〜ｊ％（Ｗ／Ｖ）濃度の非イオン性界面活
性剤の水溶液ｌＱｍｌｋこ添加し、３７℃で３０分間加
温溶解後ノＯｍＭ濃度の基質溶液を調製した。またトリ
グリセライドの場合ｔこは非イオン性界面活性剤を添加
した後７０分間超音波処理してエマルジョンとし、これ
をリパーゼ反応【コ供した。

２）基質溶液の濁度の測定 ｌ）テ調製した２０ｍＭの基質溶液１ｏｏｐｔ。

Ｑ２Ｍピヘｙ−（ＰＩＰＥＳ　）　−Ｎａ　ＯＨ緩衝液
（ｐＨ７５）２００ｐＬ、　２ＭＮａＣ１１００ｐ１．
３０ｍＭＩＶ１ｇＣ１２３０ｐ　Ｌ、　／　、：ｌ　Ｏ
ｍ　ＭＮａデオキシコレイト２ｊμｔ、精製水ｊダｊμ
Ｌからなるリパーゼ反応基質溶液を調製し、これを３グ
ｏｎｍの波長ｔこて吸光度（Ａ　　　　）を測定した。

４０ｒａｎ −ダと　− グリセロールや／１２−ジグリセライドである４２−ジ
オレオイル−グリセロールやｌ−リルオイルーノーパル
ミトイルーグリセロールに比べて極めて高い吸光度を示
したもので、紫外部の波長領域を用いる分光光学的なリ
パーゼ活性測定ｔこは適当でないものであった。これに
対しモノグリセライドおよび７．２−ジグリセライドは
極めて透明度が高く水１こよく可溶化されたものであっ
た。

３）／、２−ジグリセライドを基質としたリパーゼ活性
測定例 反応液Ｉ Ｑ、１ＭピペスーＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７５）　　　　
０．、；１０ｍ１．２　Ｍ　Ｎａ１ｌ　　　　　　　　
　　　　Ｏ，１０ｒ１１１！；　Ｏｍ　Ｍ　ＭｇＣＩ　
２０．０２！；ｌ１１２０　ｍＭ　Ａ　Ｔ　Ｐ　　　　
　　　　　　０．０６Ｍｊ　Ｑ　ｍ　Ｍ　Ｃｏ　Ａ　Ｓ
　ＨＱ、ＯＪ　！；Ｎ／２ｍＭＮａデオキンコレイト　
　０．２６ｒｌＬｌコ・リパーゼ（ペーリンガー社製２
７０００Ｕ、情ハθ、ｌ□ｍｌ／ｇｍＭ／、２−ジオレ
オイＩＶグリセａ−ｔｖ％３．ｓ％Ｎｏｎ１ｄｅｔｐ−
ｙｏ含有水溶液　　　　　　　　　０．１０ｍ１アンＪ
ｖ　Ｃｏ　Ａシンセターゼ（東洋醸造社製／　ＯＵ／ｍ
ｌ　）　　　　　　　　　　　　　　０．１０ｍｌ精製
水　　　　　　　　　　　　　０．０！１Ｉｎｌ計　　
／、００ｍ１ 反応液■ ０．２Ｍビペヌー　Ｎａ　ＯＨ緩衝液（ｐ）（７Ｊ　）
　０．／　ｍ１０３％グーアミノアンチピリン　　０．
３ｍ１Ｏ，２％フェア　−Ａ／　　　　　　　　　　Ｑ
、３Ｔｎｌペルオキシダーゼ（シグマ社製 １１　ｊ　ＵＡｎＩ　）　　　　　　　　　　　　　　
０．１ｍ１１％Ｔｒｉもｏｎ　　Ｘ　−／　　００　　
　　　　　　　　　Ｑ、１ｍｌアシ／ｌ／ＣＯＡオキシ
ダーゼ（東洋−造社製ｉｓθＵ／ｍｌ　）　　　　　　
　　　　　　（７，１ｍｌ精製水　　　　　　　　　　
　　　ｏ、ｓｍｌ計／、ｊ；ｍｌ 上記の組成を有する反応液１／、００ｔｎｌに、プタ膵
臓リパーゼ（０，／　！；　Ｕ／ｍｌ　、オリーブ油エ
マｌレジョンを基質として滴定した活性値）２０μｔを
加え、３７℃でＩＯ０分間反応しめた。反応終了後、１
０ｍＭＮ−エチルマレイミドＱ、　５　ｍｌを加えて反
応を停止した。反応液中で／、コージグリセワイドから
遊離したオレイン酸は１次いで以下の脂肪酸の定量法ｔ
こて定量される。即ち、上記の反応停止液ｔこ、上記組
成を有する反応液Ｕ／、３−ｍ１を添加終 しＬ３７℃、５分間反応せしめた。反応液７後その呈色
色調を波長ｓｏｏ　ｎｍにて吸光度測定した結果吸光度
□　Ｄ　　　　＝　０．０７６であり、この値００ｎｍ からりパーゼ活性は０．　／　９　Ｕ／ｍｌ　と算出さ
れた。

４）／、２−ジグリセライドを基質としたリパーゼ活性
測定例 ０、４　Ｍビペス−ＮａＯＨ緩衝液（ＰＨ７５）　　０
．１ｍｌ、：ｌ　Ｍ　ＮａＣｌ　　　　　　　　　　　
　　　Ｑ、ｌ　ｍｌ！；　Ｏｍ　Ｍ　ＭｇＣｌ　２０．
０２！；ｍ１１００ｍＭ　ＡＴＰ　　　　　　　　　　
Ｏ，０ｊｍｌ！；　ｑ　ｍＭ　ＮＡＤ　　　　　　　　
　　　Ｏ，０２３ｍ１３　（）　ｍ　Ｍ　Ｃｏ　Ａ　Ｓ
Ｈ０，０２ｊ’／　２　ｍ　Ｍ　Ｎａデオキｖコｖイト
０．２６　ｍｌコ・リパーゼ（ベーリンガー社製、２Ｚ
θ００　Ｕ／ｍｌ　）０．１０ｍ１ ／、！ｉ’ｍＭ／−ＩＪルオイル−ノーパルミトイルグ
リセロー）ＶＯ，１０ｍ１ （３，５％Ｎｏｎ１ｄｅｔ　Ｐ−ｐＱ水ｍ液に−ｍ解）
アシｔｖ　Ｃｏ　Ａンンセターゼ（東洋醸造社製。

アシルＣｏＡ箋賢Ｎダーゼ（東洋醸造社製。

３００　Ｕ／ｍｌ　）　　　　　　　　　　　　　０．
０！；ｍ１ＨＤＴ（エノイルＣｏＡヒドラターゼ、３−
ヒドロキンＣＯＡ　　デヒドロゲナーゼ、３ケトアシＡ
／ＣＯＡチオラーゼの各活性を同−蛋白上ｔこ有する俵
合活性酵素：デヒドロゲナーゼ活性とｔ、て１１００　
Ｕ／ｍｌ　）０．０ｊ；ｍｌ カタラーゼ（ベーりンガー社製、２１−０，０ＯＯＵ／
ｍ１）Ｑ、Ｑ２ｍｌ ／　ｍ　Ｍ　　Ｆ’　Ａ　Ｄ　　　　　　　　　　　　
Ｏ，０２”精製水　　　　　　　　　　　　　　０．０
７！；罰計／、００　ｍｌ ｆｘ　オ／　−ＩＪルオイル−２−バルミトイルグリセ
ロール トリルオイルーコーパルミトイＩｖ−　ｓ　ｎ　−グリ
セロ−３−ホスホリルコリン）ｔこホスホリパーゼＣ（
東洋醸造社製）を作用させて調製した。

上記組成を有する反応液ｉ．ｏｏｍｔ＋こ，ブタ膵臓リ
パーゼ（　０．１３Ｕ／ｍｌ＞２０ｐＬを加え、３７℃
で反応を行ない、連続的ｔこ還元型ＮＡＤ生成量を波長
３’ｌＯｎｍｔこて吸光度を測定した結果、反応時間ｔ
こ比例して吸光度の増加が観察された。１分間当りの吸
光度の増加は０．　０　ｆ　ｊであった。

用いた４２−ジグリセライドからは膵リパーゼ活性？こ
より，リノール酸が遊離、生成され，このリノール酸は
アシ）ｖＣＯＡシンセターゼ、アシルＣｏＡオキシダー
ゼ、ＨＤＴのサイクリング反応によって５モル比の還元
型ＮＡＤが生成され、この還元型Ｎ　Ａ　Ｄのミリモル
吸光係数（乙．／）Ｘ５モル比＝３０５の値からリノー
ル酸の量を求め，下式ｔこよりリパーゼ活性が計算され
る。

５）モノグリセフィトを基質としたリパーゼ活性測定例 ０、２Ｍトリス−塩酸緩衝液（　ｐＨ７２　）　　０．
３ｍ１０、３％ダーアミノアンチビリ：／　　　　０３
ｍ１０、２　％　フ　ｘ　　／　　−　ｗ　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｑ，３ｍｌ！；
　Ｏ　ｍ　Ｍ　ＭｇＣｌ　２０．１ｍｇ、：ｌＯｍＭ　
ＡＴＰ　　　　　　　　　　　Ｏ．／ｍｌ／２ｍＭＮａ
デオキｓｙコｖ　イ）　　　　０．２！ｒ＋＋＋１コ・
リパーゼ＜２’７０００Ｕ／ｍｌ）　　　　　０．１ｍ
ｌ（１０Ｕ／ｍＪ）り！Ｊ　セａ−７１／　キｆ−　−
　セ０．０！；ｍｌＣｊｆＯＵ／ｒｄ＞グリセロホヌフ
エートオキシダーゼ０、１，Ｊ （！；ＯＵ／ｍｌ）ぺＪＶオキＶダーゼ　　　　　Ｑ．
／　ｍｌ＋２０ｍＭｌ−オレオイルグリセａ　−　）ｖ
　Ｑ，７ｍｇ（３％トリトンｘ−ｉｏｏ水溶液ｔこ溶解
）精製水　　　　　　　　　　　　　　／．００ｍｌ計
３．Ｑｒｎｌ 上記組成を有する反応液３．　０　ｍＡ’　ｔこクロモ
パクテリウム・ビスコサムから得られたリパーゼ（３，
ＯＵ／ｍｌ　）　２０　ｐ　Ｌを加え、３７℃で１０分
間反応後直ちに！；００　ｎｍの吸光度（ＯＤ５００ｎ
ｍ）を測定した。その結果ＯＤ５ｏｏｎｍは０．　ＯＩ
Ｉ　３であり、この値からリパーゼ活性は０．　／　０
７　Ｕ／ｍｌと算出された。

６）ホヌホリパーゼＣ％レンチン組放物による４−コー
ジグリセライドを基質としたリパーゼ活性測定例 ０．２Ｍジメチルグルタル酸−ＮａＯＨ゛（ｐＨ７，５
）Ｑ、２ｍｌ ／　ｊｒｍＭ／−リルオイルー！−バルミトイルレシチ
ン　　　　　　　　　　　　　　　Ｏ９ｌプ（３，７％
Ｎ１ｋｋｏｌ　ＯＰ　−／　Ｏｋこ溶解）ＣＪＯＩＪ／
ｍｌ）ホスホリパーゼＣ（東洋醗造社製）Ｏ，ＯＳプ （１０Ｕ／ｍ）アｙ　／Ｌ／Ｃｏ　Ａ　ｖ　７セターゼ
　０．１ｍ１５　Ｑ　ｍ　Ｍ　ＭｇＣ１２０，０３ｍ１
／　２　ｍ　Ｍ　ＮａデオキＶコＶイ）　　　　　　０
．２５ｍ１コ・リパーゼ（２７ＯＯＯＵ／ｍ１）０．Ｉ
ｒｎ１２０　ｍ　Ｍ　　Ｃｏ　Ａ　Ｓ　Ｈ０，０３ｍＩ
１０ｍＭ　　　ＡＴＰ　　　　　　　　　　　　　　　
　　０．０！；ｍｌ精製水　　　　　　　　　　　　　
　０．０７ｍ１計７．Ｑｍｌ 上記の組成を有する反応液／、　Ｑ　ｍｌを３７℃で３
０分間反応して、ｌ−リルオイルー２−バルミトイルレ
シチンからホスホリパーゼＣの作用により４．！−ジグ
リフイド（ｌ−リルオイルー２−バルミトイルグリセロ
ールを生成せしめた。

次いでこの反応液ｖこクロモバクテリウム・ビスコサム
から得られたリパーゼ（０，ｌ、　Ｕ／ｍｌ、オリーブ
油アデカトール５ｏ−１２０エマルジョンを基質として
滴定法ｔこて求めた活性値）２０μｔを添加し、３７℃
でＩＯ分間反応を行なった。反応終了後、２０ｍＭＮ−
エマルＸレイミドＱ、　３　ｍｌを加工て反応を停止し
た。その後、前記３項１こ記載した反応液Ｍ１．！；ｍ
ｌを加え、３７℃で５分間反応し九次いで波長３ＱＱｎ
ｍで吸光度を測定したところ０．０りｌであり、この値
からリパーゼ活性は。

０、２３　Ｕ／ｍｌ　　と算出された。

−５７− ７）ホヌホリパーゼＣ，リゾレシチン組成物によるｌ−
モノグリセフィトを基質としたリパーゼ活性測定例 ０．２ジメチルグＡ／　夕）ｖ酸−ＮａＯＨ（ｐＨ７５
）０．２Ｍ １７、ｍａｌ−；ｔｖｙ？イノｖｖｖｆン　　０．１ｍ
１（３，ｊ％トリトンＸ−１００水溶液に溶解）ＣＩ２
０Ｕ／ｍｌ）ホスホリパーゼｃ　　　　ｏ、ｏｓｒｄＣ
ＩＯＵ／ｍｌ）ア５ｙｐｙ　　ＣｏＡシンセターゼｏ、
１ｍ１ｊ　Ｏｍ　Ｍ　ＭｇＣｌ２０．０３ｍ１２０　ｍ
　Ｍ　ＣｏＡＳ　Ｈ０，０！ｎｌＬ１１０ｍＭ　　ＡＴ
Ｐ　　　　　　　　　　　Ｏ，０３ＷＬ’／、２ｍＭＮ
ａデオｄｔＶコＶイト０．．１３ｍ１コ・リパーゼＣ２
’１０００Ｕ／ｍｌ）　　　　　０．１プ精製水　　　
　　　　　　　　　　　０．０７ＷＬｌ計　　ｉ、ｏｍ
ｌ 上記の組成を有する反応液／、０ゴを３７℃で３０分間
反応して、ｌ−オレオイルレシチンからホスホリパーゼ
Ｃの作用ｔこより、ｌ−モノグリセリドを生成せしめた
。次いでこの反応液に前記６−５５ｉ′−、、、、。

−ｓｇ　　− 項に記載した方法でリパーゼ活性を測定したところ０．
０　、！；　Ｕ／ｍｌ　と算出された。

フ ８）ホヌファチジン酸ホス夷アターゼが、ホスファチジ
ン酸組成物による１、２−ジグリセライドを基質とした
リパーゼ活性測定例 ０．２Ｍトリヌー塩酸（ｐ　Ｈ７！；　）　　　０．２
ｍ１２０ｍＭホスファチジン酸　　　　　Ｑ、／　ｍｌ
（ダ％Ｎｏｎ１ｄｅｔ　ｐ−ダ０水溶液に溶解）（／　
３　Ｕ／ｍｌ　）ホスファチジン酸ホヌファターゼｏ、
１ｍ１ Ｃ２０Ｕ／ＷＬＩ）アシ）ｖ−ＣｏＡｙンセターゼ　０
，０．ｆｍｌｊ　ＯｍＭ　ＭｇＣ１２Ｑ、Ｑ３ｍｌ ノθｍ　Ｍ　Ｃｏ　Ａ　Ｓ　Ｈ０，０！；ｍ１１０ｍＭ
　　ＡＴＰ　　　　　　　　　　　０．０！ｍ１７２ｍ
ＭＮａデオキシコレイト　　　０．２３ｍ１コ・リパー
ゼ（２ｚＯＯＯＵ／ｍｌ　）　　　　０．１０ｍ１精製
水　　　　　　　　　　　　　　０．０７ｍ１計　　／
、０１１１ 上記組成を有する反応液７．０１を３７℃でＩＯ分間反
応して、ホスファチジン酸からホスファチ　６０− ジン酸ホスファターゼの作用により／、２−ジグリセラ
イドを生成させた。

次いでこの反応液にブタ膵臓リパーゼ（ｏ、ｉｓＵ／ｍ
ｌ　）　２０μｔを加え、３７℃でｌθ０分間反応しめ
た。反応終了後、ｌＱｍＭＮ−エチルマレイミ波長３０
０ｎｍにて吸光度を測定した結果、ＯＤ５００ｎｍ　”
　０．０　ｇ　Ｏであり、この値から０．．２０Ｕ／−
と算出された。

９）ホスファチジン酸ホヌファターゼ、リゾホスリ ファチジン酸組成物ｔこよるｌ−モノグリセ＼ドを基質
としたリパーゼ活性測定例 前項８）記載のホスファチジン酸をリゾホスファチジン
酸に変え、同様の方法でリパーゼ活性を測定した結果０
．θ３　Ｕ／ｍｌと算出された。

１０）ホスホリパーゼＤ、ホスファチジン酸ホスファ、
−ゼ、レシチン組成物ｔこよる４２−ジグリセツイドを
基質としたリパーゼ活性測定例０．２Ｍピペｙ、　−Ｎ
ａＯＨ（ｐＨ７Ｊ　）　　　　０．２ｍ１２０　ｍ　Ｍ
　／、　、、ｌ　−Ｓ）オレオイルレシチン（４ｔ％Ｎ
ｏｎ１ｄｅｔ　Ｐ−４０水溶液に溶解）０．ハフホスホ
リパーゼＤ　Ｃ２０Ｕ／ｍｌ　：東洋醸造柱＃）０．０
りａ ホスファチジン酸ホスファターゼ（＃Ｕ／＋ｎ／）ｏ、
１ｍ１ ７　シｗｃｏ　Ａ　シンセＩＩ　−セ（２０Ｕ／ｍ１）
Ｑ、Ｏｊ；ｍｌ！；　Ｏｍ　Ｍ　ＭｇＣ１２０，０３ｍ
１、：ｌ　ＯｍＭＣｏＡＳ　Ｈ１，Ｑ、！；ｌ１１１０
ｍＭ　　ＡＴＰ　　　　　　　　　　Ｑ、０３ｍ１／２
ｍＭＮａデオキＳ’：Ｉ　Ｖイト　　　Ｑ、２３ｍｌコ
・リパーゼ（２’７０００　Ｕ／ｍｌ　）　　　　　０
．１０ｙ精製水　　　　　　　　　　　　　　０．０２
ｍｌ計７．Ｑ　ｍｌ 上記の組成を有する反応液ＺＱ　ｍｌを３７℃でｌｊ分
間反応して、レシチンからホスホリパーゼＤとホスファ
チジン酸ホスファターゼの作用をこより／１２−ジグリ
セリドを生成させた。

次いでこの反応液１こブタ膵臓リパーゼ（０，／　ｊＵ
／ｍｌ）ノＯμｔを加え、３７℃でｉｏ分間反応せしめ
た。反応終了後２０ｍＭエチルマレイミドＱ、　ｊ　ｍ
ｌを加えて反応を停止した。生成された脂肪酸を前項３
）記載の反応液■１こより呈色せしめ、波長！；００ｎ
ｍｔこて吸光度を測定した結果、ＯＤ５００ｎｍ　＝　
０．０７　、ｌ　であシ、この値からｏ、ｉざ’　　Ｕ
／ｍ／と算出された。

１１）ホスホリパーゼＤ、ホスファチジン酸ホヌファタ
ーゼ、リゾレシチン組成物によるｌ−モノグリセライド
を基質としたリパーゼ活性側定例前記１０）に記載した
組成の反応液のレシチンをｌ−モノオレオイルレンチン
に変えて、このリゾレシチンからホヌホリパーゼＤ、ホ
スファチジン酸ホスファターゼ反応によりモノグリセラ
イドを生成せしめた。以後同様の操作ｔこよりリパーゼ
活性を求めたところ０．０　、ｌ　、！ｉ’　Ｕ／−と
算出された。

特許出願人　東洋醸造株式会社 代表者　　伊東富士馬 ＋絖補正簀 昭和５９年ａ月／メ日 昭和５７年物肝願第−〇３ｇ７３号 ２−発明の名称 リパーゼ活性測定用組成物 ３〜補正をする者 事件との関係　特許出願人 住Ｐｌ′ｒ　　静岡系田方郡大仁町三福６３２管地の／
’Ｉｓ袖正命令の日付 自　　）打 ＳＳ補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の掴 乙＼補正の内容 明細書第２ｇ頁第ａ行の ［λピルビン酸　＋　２０．　　、　　　　　　　　　
Ｊ２　ヒルヘートオキシダーゼ を　「ａピルビン酸　十　コＯ十　、２ＰｉＢ仄−ｔ−
７＊４−ｃ　」と訂正する。

一　− ６３０−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （］）高級脂肪酸を構成因子とするモノグリセライドま
   たは７．２−ジクリセフィド、および非イオン性界面活
   性剤を含有してなるリパーゼ活性測定用組成物。 （２）高級脂肪酸が、炭素数１２以上の高級脂肪酸であ
   る特許請求の範囲第１項記載の組成物。 組成物。 （４）　　モノグリセライドまたは／、２−ジクリセフ
   イドが１組成物製度として０．６　ｍ　Ｍ以上である特
   許請求の範囲第１項記載の組成物。 （５）非イオン性界面活性剤が、ポリオキンエチレン形
   非イオン性界面活性剤、多価アルコール形非イオン性界
   活性剤またはグロックポリマー形非イオン性界面活性剤
   である特許請求の範囲第１項記載の組成物。 （６）　　ポリオキンエチレン型非イオン性界面活性ア 剤が、ポリオキンエチレン脂肪醜ルコールエーテル、ポ
   リオキシエチレンアルキルアリルエーテル、ポリオキシ
   エチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタ
   ン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビトール脂
   肪酸エステル、ホリオキシエチレンヒマン油誘導体また
   はポリオキシエチレン硬化ヒマシ油誘導体である特許請
   求の範囲第５項記載の組成物。 （７）多価アルコール形非イオン性界面活性剤がソルビ
   タン、マンニド−１し、ソルビトールまたはショ糖の多
   価アルコールと炭素数１２以上の高級脂肪酸とのエヌテ
   ｌしである特許請求の範囲第５項記載の組成物。 （８）　　ブロックポリマー形非イオン性界面活性剤が
   、ポリプロピレンブロックとポリオキシエチレンブロッ
   クを有するブロックポリマー形非イオン性界面活性剤で
   ある特許請求の範囲第５項記載の組成物。 （９）非イオン性界面活性剤が、組成物濃度として０１
   ６以上である特許請求の範囲第１項記載の組成物。 （ｌＯ）非イオン性界面活性剤が、ＨＬＢＩＯ以上であ
   る非イオン性界面活性剤である特許請求の範囲第１項記
   載の組成物。 （１１）・デオキシコレイト、コ・リパーゼを含有して
   なる特許請求の範囲第１項記載の組成物。 （１２）　　アデノシントリホスフェート、コエンチー
   ムＡ、デオキンコレイト、コ・リパーゼ、アシル−Ｃｏ
   Ａ　　シンセターゼ、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ、過
   酸化水素呈色試薬を含有してなる特許請求の範囲第１項
   または第１１項記載の組成物。 ンルーＣｏＡオキンダーゼ、エノイルニＣｏＡヒドラタ
   ーゼ、３−ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ
   、３−ケトアシル−ＣｏＡチオ　３− ラーゼ、ニコチンアデニンジヌクレオチド、を含有して
   なる特許請求の範囲第１項または第１／項記載の組成物
   。 （１４）塩化マグネシウム、アデノシントリホスフェー
   ト、チオキシコレイト、コ・リパーゼ、グリセロールキ
   ナーゼ、グリセロホヌフエートオキシダーゼ、過酸化水
   素呈色試薬孕含有してなる特許請求の範囲第１項または
   第１１項記載の組成物。 （１４５）　　塩化マグネシウム、アデノシントリホス
   フェート、デオキシコレイト、コ・リパーゼ、グリセロ
   ールキナーゼ、グリセロホヌフェートデヒドロゲナーゼ
   、水素受容体を含有してなる特許請求の範囲第１項また
   は第１１項記載の組成物。 （１５）　　デオキシコレイト、コ・リパーゼ、グリセ
   ロールテヒドロゲナーゼ、ニコチンアデニンジヌクレオ
   チド全含有してなる特許請求の範囲第１項または第１１
   項記載の組成物。 因 （１７）高級脂肪酸を構成＼子とするモノグリセラー＋
   − イドが、ホスホリパーゼＣとリゾレシチン含有物、ホス
   ファチジン酸ホスファターゼとりソホスファチジン酸含
   有物またはホスホリパーゼＤ、ホスファチジン酸ホスフ
   ァターゼとリゾレシチン含有物由来のモノグリセライド
   である特許請求の範囲第１項ないし第１６項のいずれか
   の項記載の組成物。 ａＢ）　　高級脂肪酸を構成因子とする／、２−ジグリ
   セライドが、ホスホリパーゼＣとレンチン含有物、ホヌ
   ファチジン酸ホスファターゼとホスファチジン酸含有物
   またはホヌホリパーゼＤ％ホスファチジン酸ホスファタ
   ーゼとレシチン含有物由来の７．２−ジグリセライドで
   ある特許請求の範囲第１項ないし第１６項のいずれかの
   項記載の組成物。