JP4527950B2 - 脂質測定試薬 - Google Patents
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Description
1.コレステロールエステラーゼ及びリポプロテインリパーゼから選択される1以上のエステラーゼ、界面活性剤、並びに、チオジグリコール及びメチオニンから選択される1以上の抗酸化剤を含有する脂質測定試薬、
2.前記界面活性剤が、非イオン界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤及び両性イオン界面活性剤から選択される1以上の界面活性剤である前項1に記載の脂質測定試薬、
3.前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン系界面活性剤である前項1または2に記載の脂質測定試薬、
4.前記界面活性剤が、ポリオキシエチレンイソオクチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレン2級アルキルエーテル、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテルから選択される前項3に記載の脂質測定試薬、
5.抗酸化剤の濃度が、1〜100mMである前項1〜4の何れかに記載の脂質測定試薬、
6.前記脂質測定試薬が、中性脂肪測定試薬である前項1〜5の何れかに記載の脂質測定試薬、
7.前記中性脂肪測定試薬が、検体と第1試薬を反応させた後、第2試薬を反応させることによって検体中の中性脂肪を定量する中性脂肪測定試薬であり、第1試薬はATP、グルコース−6−リン酸脱水素酵素およびグリセロールキナーゼを含有し、第2試薬はコレステロールエステラーゼ及びリポプロテインリパーゼから選択される1以上のエステラーゼ、界面活性剤、チオジグリコール及びメチオニンから選択される1以上の抗酸化剤、グルコース、NAD(P)並びにADP依存ヘキソキナーゼを含有する前項6に記載の脂質測定試薬、
8.前記脂質測定試薬が、総コレステロール測定試薬である前項1〜5の何れかに記載の脂質測定試薬、
9.前記総コレステロール測定試薬が、検体と第1試薬を反応させた後、第2試薬を反応させることによって検体中の総コレステロールを定量する総コレステロール測定試薬であり、第1試薬はコレステロールエステラーゼ及びリポプロテインリパーゼから選択される1以上のエステラーゼ、界面活性剤、チオジグリコール及びメチオニンから選択される1以上の抗酸化剤並びにNAD(P)を含有し、第2試薬はコレステロール脱水素酵素を含有する前項8に記載の脂質測定試薬、
10.前記脂質測定試薬が、高密度リポ蛋白質コレステロール測定試薬である前項1〜5の何れかに記載の脂質測定試薬、
11.前記高密度リポ蛋白質コレステロール測定試薬が、検体と第1試薬を反応させた後、第2試薬を反応させることによって検体中の高密度リポ蛋白質コレステロールを定量する高密度リポ蛋白質コレステロール測定試薬であり、第1試薬はNAD(P)を含有し、第2試薬はコレステロールエステラーゼ及びリポプロテインリパーゼから選択される1以上のエステラーゼ、界面活性剤、チオジグリコール及びメチオニンから選択される1以上の抗酸化剤並びにコレステロール脱水素酵素を含有する前項10に記載の脂質測定試薬、
12.前記脂質測定試薬が、低密度リポ蛋白質コレステロール測定試薬である前項1〜5の何れかに記載の脂質測定試薬、
13.前記低密度リポ蛋白質コレステロール測定試薬が、検体と第1試薬を反応させた後、第2試薬を反応させることによって検体中の低密度リポ蛋白質コレステロールを定量する低密度リポ蛋白質コレステロール測定試薬であり、第1試薬はコレステロールエステラーゼ及びリポプロテインリパーゼから選択される1以上のエステラーゼ、界面活性剤、チオジグリコール及びメチオニンから選択される1以上の抗酸化剤、NAD(P)並びにLDL反応阻害剤を含有し、第2試薬はコレステロール脱水素酵素を含有する前項12に記載の脂質測定試薬、
からなる。
ATP、グルコース−6−リン酸脱水素酵素およびグリセロールキナーゼを含有する第1試薬と、エステラーゼ、界面活性剤、抗酸化剤、グルコース、NAD(P)およびADP依存ヘキソキナーゼを含有する第2試薬とからなる中性脂肪測定試薬、エステラーゼ、界面活性剤、抗酸化剤およびNAD(P)を含有する第1試薬と、コレステロール脱水素酵素を含有する第2試薬とからなる総コレステロール測定試薬、NAD(P)を含有する第1試薬と、エステラーゼ、界面活性剤、抗酸化剤およびコレステロール脱水素酵素を含有する第2試薬とからなる高密度リポ蛋白質コレステロール測定試薬、エステラーゼ、界面活性剤、抗酸化剤、NAD(P)およびLDL反応阻害剤を含有する第1試薬と、コレステロール脱水素酵素を含有する第2試薬とからなる低密度リポ蛋白質コレステロール測定試薬を挙げることができる。
────────────────────────────────
Bicine 50.0mM
HEPES 23.3mM
塩化カリウム 100.0mM
塩化マグネシウム・6H2O 8.1mM
グルコース 27.0mM
トリトンX−100 0.208%
ATP・2Na 2.7mM
β−NADP(酸化型) 1.9mM
グリセロールキナーゼ 2.3U/mL
グルコース−6−リン酸脱水素酵素(G6PDH) 4.3U/mL
ADP依存性ヘキソキナーゼ 2.7U/mL
────────────────────────────────
──────────────────────────────
ハイレベルチェック・リピッド 9.0mLの精製水にて溶解
(製造販売元 国際試薬株式会社)
──────────────────────────────
───────────────────────
BES 939mg
Bis−Tris 320mg
HDAOS 24mg
牛血清アルブミン(BSA) 200mg
───────────────────────
合計 100mL
───────────────────────
BES 375.6mg
Bis−Tris 128.0mg
4−アミノアンチピリン 130.4mg
BSA 80.0mg
ペルオキシダーゼ 1500U
───────────────────────
合計 40mL
この結果から、界面活性剤の酸化により生成される酸化物質がリポプロテインリパーゼの安定性を低下せしめること、また酸化を受ける条件下でも酸化物質を生成しない界面活性剤を用いることによりリポプロテインリパーゼの安定性を保持できることが分かった。
中性脂質測定試薬の第1試薬はHEPES 50mM、塩化マグネシウム 10mM、ノニオンA−10R 3.5%、トライトンX−100 1.2%、ホスホエノールピルビン酸 3mM、ATP 3mM、G6PDH 4U/mL、ピルビン酸キナーゼ 3U/mL、グリセロールキナーゼ1.5U/mLからなる溶液(pH8.0)
第2試薬はMES 50mM、シュウ酸 100mM、グルコース 80mM、β−NADP 6.0mM、アジ化ナトリウム 0.1%、ADP依存ヘキソキナーゼ 10U/ML、リポプロテインリパーゼ 1500U/ML、トリトンX−100(Rohm&Hass社)0.5(W/V)%、BHT 5mM(pH6.5)から構成される。
また、総コレステロール測定試薬の第1試薬はPIPES 25mM、二塩化ヒドラジニウム 100mM、ノニオンA−10R 3%、トライトンX−100 4%、コール酸ナトリウム 20mM、β−NAD 6mM、コレステロールエステラーゼ 2.5U/mL、BHT 5mMを含む溶液(pH7.0)、第2試薬はTAPSHEPES 50mM、コール酸ナトリウム 5mM、コレステロール脱水素酵素 14U/mL(pH8.5)から構成される。
また組成を以下の表に示す。
Claims (13)
- コレステロールエステラーゼ及びリポプロテインリパーゼから選択される1以上のエステラーゼ、界面活性剤、並びに、チオジグリコール及びメチオニンから選択される1以上の抗酸化剤を含有する脂質測定試薬。
- 前記界面活性剤が、非イオン界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤及び両性イオン界面活性剤から選択される1以上の界面活性剤である請求項1に記載の脂質測定試薬。
- 前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン系界面活性剤である請求項1または2に記載の脂質測定試薬。
- 前記界面活性剤が、ポリオキシエチレンイソオクチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレン2級アルキルエーテル、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテルから選択される請求項3に記載の脂質測定試薬。
- 抗酸化剤の濃度が、1〜100mMである請求項1〜4の何れかに記載の脂質測定試薬。
- 前記脂質測定試薬が、中性脂肪測定試薬である請求項1〜5の何れかに記載の脂質測定試薬。
- 前記中性脂肪測定試薬が、検体と第1試薬を反応させた後、第2試薬を反応させることによって検体中の中性脂肪を定量する中性脂肪測定試薬であり、第1試薬はATP、グルコース−6−リン酸脱水素酵素およびグリセロールキナーゼを含有し、第2試薬はコレステロールエステラーゼ及びリポプロテインリパーゼから選択される1以上のエステラーゼ、界面活性剤、チオジグリコール及びメチオニンから選択される1以上の抗酸化剤、グルコース、NAD(P)並びにADP依存ヘキソキナーゼを含有する請求項6に記載の脂質測定試薬。
- 前記脂質測定試薬が、総コレステロール測定試薬である請求項1〜5の何れかに記載の脂質測定試薬。
- 前記総コレステロール測定試薬が、検体と第1試薬を反応させた後、第2試薬を反応させることによって検体中の総コレステロールを定量する総コレステロール測定試薬であり、第1試薬はコレステロールエステラーゼ及びリポプロテインリパーゼから選択される1以上のエステラーゼ、界面活性剤、チオジグリコール及びメチオニンから選択される1以上の抗酸化剤並びにNAD(P)を含有し、第2試薬はコレステロール脱水素酵素を含有する請求項8に記載の脂質測定試薬。
- 前記脂質測定試薬が、高密度リポ蛋白質コレステロール測定試薬である請求項1〜5の何れかに記載の脂質測定試薬。
- 前記高密度リポ蛋白質コレステロール測定試薬が、検体と第1試薬を反応させた後、第2試薬を反応させることによって検体中の高密度リポ蛋白質コレステロールを定量する高密度リポ蛋白質コレステロール測定試薬であり、第1試薬はNAD(P)を含有し、第2試薬はコレステロールエステラーゼ及びリポプロテインリパーゼから選択される1以上のエステラーゼ、界面活性剤、チオジグリコール及びメチオニンから選択される1以上の抗酸化剤並びにコレステロール脱水素酵素を含有する請求項10に記載の脂質測定試薬。
- 前記脂質測定試薬が、低密度リポ蛋白質コレステロール測定試薬である請求項1〜5の何れかに記載の脂質測定試薬。
- 前記低密度リポ蛋白質コレステロール測定試薬が、検体と第1試薬を反応させた後、第2試薬を反応させることによって検体中の低密度リポ蛋白質コレステロールを定量する低密度リポ蛋白質コレステロール測定試薬であり、第1試薬はコレステロールエステラーゼ及びリポプロテインリパーゼから選択される1以上のエステラーゼ、界面活性剤、チオジグリコール及びメチオニンから選択される1以上の抗酸化剤、NAD(P)並びにLDL反応阻害剤を含有し、第2試薬はコレステロール脱水素酵素を含有する請求項12に記載の脂質測定試薬。
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