JPS6211307B2 - - Google Patents

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JPS6211307B2
JPS6211307B2 JP54044409A JP4440979A JPS6211307B2 JP S6211307 B2 JPS6211307 B2 JP S6211307B2 JP 54044409 A JP54044409 A JP 54044409A JP 4440979 A JP4440979 A JP 4440979A JP S6211307 B2 JPS6211307 B2 JP S6211307B2
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JP
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detergent
alkyl
turbidity
complex
reaction mixture
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JP54044409A
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Kurooze Jikumaaru
Busheku Heruberuto
Shurumuberugaa Herumuuto
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Roche Diagnostics GmbH
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Boehringer Mannheim GmbH
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/96—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood or serum control standard
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • G—PHYSICS
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Description

【発明の詳細な説明】
本発明は試料物質、有利に生物学的試料物質、
例えば血清又は血漿により濁つている反応混合物
中の混濁を除去するための方法及び試薬に関す
る。これらは、特に臨床化学分析に、食品化学分
析に並びに水及び下水分析に使用される。高い特
異性を達成するために、この際しばしば酵素が使
用される。 光度測定分析の公知の問題点は、空試験値なし
で測定を行なう時、分析結果に対する試料液の混
濁物、例えば血清又は血漿の影響である。試料空
試験値の測定の回避は、試薬消費量を減少させる
ため、測定過程及び評価過程を簡素化するため、
又試料使用量を減少させるためにも望ましい。そ
れどころか、すべての反応性成分を混合で含有す
る一浴試薬を使用する際、試料空試験値の測定は
原理的にも不可能である。この種の混濁は種々の
原因により、しばしば高いトリグリセリド含量に
よつて生じる。 混濁は試料・試薬混合物中での固有吸光を高め
る。この場合、総吸光は、測定すべき基質の濃度
に直接比例する色成分と濁り成分とから構成され
ているので、必然的に不正な結果が得られる。 そのような混濁を、清浄剤の添加によつて、総
吸光における濁り成分を無視することができる程
度に澄明にすることは公知である（西ドイツ国特
許出願公告第2327894号公報）。 この方法の主な欠点は、非常に高い清浄剤量を
必要とすることにある。高濃度を必要とすること
も欠点である。それというのも、この際しばしば
使用した酵素の活性が減少し、更に、このような
混合物はもはや、乾燥し流動性であるべき固体混
合物に混入することはできない。特に、このこと
は一浴試薬において重要である。 本発明の課題は、前記欠点を除去し、前記混濁
を除去できる方法及び試薬を提供することであ
る。ここで“除去”とは、この種の混濁の阻止又
は減少をも意味する。 この課題は、本発明によれば試料物質により濁
つた反応混合物、特に光度測定用反応混合物中の
混濁を清浄剤を添加して除去するための方法であ
つて、反応混合物に (a) １種以上の低分子有機化合物及び (b) 反応混合物に自体澄明に可溶性であり、添加
物(a)と一緒になつて僅かに可溶性の錯体を形成
する１種以上の清浄剤を、 錯体の沈殿が出現するのに十分な量で添加し、
次いで更に清浄剤を、沈殿した錯体が再び溶解す
るまで添加することを特徴とする方法によつて解
決される。 本発明は、それ単独では透明な水溶液で前記混
濁に対して全然もしくは常に僅かな透明化作用し
か示さない前記有機化合物が、それ自体既に公知
の清浄剤の澄明化作用を相乗的に非常に強化する
という事実の驚異的確認に基づく。この事によ
り、多くの場合に澄明化が可能となるだけでな
く、混濁を完全に除去することができるようにな
り、この際同時にこのために必要な清浄剤量は急
激に減少する。(a)項の使用可能な化合物の例は次
のとおりである： (a) 芳香族（縮合又は非縮合の）アルコール及び
アミン、有利に強い電気陰性置換分（有利な電
気陰性置換分はハロゲンである）を有するも
の、例えばベンジルアルコール、フエノール、
モノクロフエノール、ジクロルフエノール及び
トリクロルフエノール、ジブロムフエノール及
びトリプロムフエノール、クレゾール、ナフト
ール、ジヒドロキシナフトール、アニリン及び
クロルアニリン、メチルアニリン、 (b) アリール酸及びアルキル酸のエステル、例え
ばｐ‐ヒドロキシ安息香酸エチルエステル、酢
酸エチルエステル、酢酸ブチルエステル、プロ
ピオン酸エチルエステル、トリクロル酢酸エチ
ルエステル並びに類似物、 (c) 炭素原子数が３よりも大きい直鎖状及び環状
及び分枝鎖状脂肪族アルコール、例えばアミル
アルコール、オクタノール、ドデカノール、シ
クロヘキサノール及び類似物； (d) 短鎖のハロゲン化脂肪族化合物、例えばジク
ロルエタン、トリクロルエチレン、テトラクロ
ルメタン、ジクロルブテン、テトラクロルジフ
ルオルエタン及び類似物； (e) 脂肪族ケトン、例えばブタノン―(2)、シクロ
ヘキサノン及び類似物； (f) アルデヒド、例えば桂皮アルデヒド又はベン
ズアルデヒド、 (g) カルボン酸、例えばオクタン酸、 (h) エーテル、例えば、２―メトキシフエノー
ル、 (i) ベンゾール 特定の場合に対するこのような化合物（以
後、助剤と記載）のそれぞれの量は、予備実験
により求められる。 一般に、0.5〜300ミリモル、有利に２〜10ミリ
モルの間の濃度が良好な結果をもたらすことが判
明した。 前記助剤と僅かに可溶性の錯体を形成する清浄
剤（単独では反応混合物中に透明に可溶）には非
イオン性、イオン性及び両性清浄剤の代表例が存
在する。非イオン性のポリエチレンオキシド付加
物が有利に使用される。特に良好な結果は、ポリ
オキシエチレングリコールのアルキルエーテル、
アルアルキルエーテル及びアルキルチオエーテル
並びにアルキルエステル及びアルアルキルエステ
ルで得られる。該清浄剤において、アルキル基は
一般に炭素原子数８〜22個を有し、アリール基は
有利にフエニル基である。この清浄剤のグリコー
ル残基中には、一般にエチレンオキシド単位３〜
25個が縮合した形で存在する。この特にすぐれた
清浄剤群の典型的な例は、テジツト（Thesit）、
ジエナポール（Genapol）、タージトール
（Tergitol）、トライトン（Triton）X100、レンソ
デル（Lensodel）及びブリジ（Brij）35である。 それと共に、イオン性清浄剤、特に塩化アルキ
ルジメチルベンジルアンモニウムを使用すること
もできる。アルキル基には、前記ポリエチレンオ
キシド付加物の際に述べたことがあてはまる。ア
ルキル基が前記定義に一致する第二アルキルサル
フエートも使用可能であることが判明した。両性
清浄剤のうち、Ｎ−ラウリルジエタノールアミド
が好適であることが判明した。 本発明においては、すでに述べたように、必要
な清浄剤量は技術水準に比して極めて減少する。
一般に0.05〜１％の間の量で十分である。0.2〜
0.8％の間の清浄剤の添加量が有利である。もち
ろん、より高い濃度を使用することもできるが、
この場合には使用した酵素が不利な影響を受ける
危険が高くなる。これに対し、前記西ドイツ国特
許出願公告公報によれば、澄明化のために清浄剤
10容量％が使用される。 清浄剤と助剤とから成る錯体の溶解が、錯体中
に含有される清浄剤とは異なる清浄剤の添加によ
り行なわれる場合には、特に低い清浄剤濃度を使
用することができる。 換言すれば、この本発明のすぐれた実施形にお
いては、少なくとも２種の異なつた清浄剤を使用
する。この際、２番目の清浄剤として、助剤と難
溶性錯体を形成（これは混濁により認めることが
できる）することのできない清浄剤をも使用する
ことができる。 本発明のもう一つの目的は、分析法、特に光度
測定用の、試料物質により濁つた反応混合物用
の、清浄剤を含有する澄明化剤であり、 (a) １種以上の低分子有機化合物及び (b) 同様に成分(a)と僅かに可溶性の錯体を形成す
る、それ自体澄明に可溶性の１種以上の清浄剤
から成るか又はこれらを含有することを特徴と
する。 この澄明化剤にも、使用した清浄剤及び助剤の
種類及び量につき上述したことがそのままあては
まる。 本発明方法は、出現する混濁が測定の誤り又は
妨害を生じる、すべての種類の測定と関連して使
用できる。これは特に、光度測定用の反応混合物
である。この種の反応混合物は一般に専門家には
公知であり、多数の測定すべき物質の例は、ベル
グマイヤー（H.U.Bergmeyer）著“メトーデ
ン・デル・エンチマーテイツシエン・アナリユー
ゼ（Methoden der enzymatischen Analyse）”
（Verlag Chemie、Weinheim／Bergstrasse）中
に記載されている。従つて、この種の反応混合物
の詳細な説明はここでは割愛する。 例 １〜36 混濁澄明化系 下記の本発明による組成物は、１分〜最高２時
間以内に系中の混濁の除去を生じた。 試験混合物２ml＋脂肪分3.5％の飲用ミルク20
μ層厚１cm、546nm、25℃ (a) 助剤の変換 MgSO4・7H2O2％を有する0.1mトリス／
HCl−緩衝剤中
【表】 (b) 清浄剤の変換 MgSO4・7H2O2％及び添加物として２，４
−ジクロルフエノール８mM/を有する0.1m
トリス／HCl―緩衝剤（PH8.0）中で、次の系
で良好な澄明化が得られた。
【表】
【表】 例 37 血清中の尿酸測定用試薬 処 方 K4P2O7 0.05Mol／ エタノール 10容量％ HClでPH8.5に調整 NADP １mg/ml アルコールデヒドロゲナーゼEC1.2.1.5
１単位／ml カタラーゼEC1.11.1.6 1000単位／ml 蓚酸 Na2塩 0.05モル／ ピラゾール 0.05モル／ 所定測定波長及び比較的高い試料所要量によ
り、脂肪血症性混濁試料物質においては測定が困
難になるかもしくは不可能になる。 この混濁の除去のために次の添加物を加えた： (1) 酢酸ブチルエステル ２％ テジト 1.5％ (2) （参考） ジクロルエタン 0.5％ ヘキサノール 0.5％ ジエナポールＸ−80（イソトリデカノール−
ポリグリコールエーテル） 0.5％ ジエナポールX100（イソトリデカノールポ
リグリコールエーテル） 0.9％ テジト 0.6％ 試験配合物： 試薬 ２ml（添加物(1)又は(2)） 試料 0.1ml ウリカーゼEC1.7.3.3. 0.6単位で開始25℃、
340nmで終点を測定。 前記添加物は、脂肪血症で濁つた試料物質によ
り強く高められた初期吸光を短時間でとりのぞく
作用をする。 試薬空試験値に対し、吸光約2.0の混濁は約10
分間以内に吸光約0.2の安定なレベルに減少す
る。これにより補正が可能となり、次いで反応を
開始することができる。 例 38 血清中のコレステリンの測定用試薬 処方： KH2PO4 2.5g/ K2HPO4 31.60g/ Na2SO4 ８g/ ４―アミノアンチピリン 200mg/ フエノール 282mg/ PH7.90 パーオキシダーゼEC1.11.1.7 ３単位／ml コレステリン―エステラーゼEC3.1.1.13
0.3単位／ml コレステリン―オキシダーゼEC1.1.3.6
0.3単位／ml 該試薬は一浴混合物として予定されており、し
たがつて試料空試験値の測定なしに使用可能でな
くてはならない。この要求の満足は、強い脂肪血
症性混濁試料物質においても次の添加物により保
証される： 混濁澄明化添加物： (1)〓 （参考） ３，４―ジクロルフエノール
815mg/ ジエナポールOx−100 ４g/ デスオキシコール酸ナトリウム ３g/ (2) ヘプタノール ２g/ テジト ８g/ (3) 酢酸エチルエステル １g/ テジト ７g/ (4) PH 7.0でK+／Na+−燐酸塩緩衝剤 80mM パラヒドロキシ―安息香酸エチルエステル
1.5g/ テジト ４g/ (5)〓 （参考）0.2m燐酸カリウム緩衝剤中PH7.50
で色素形成に必要なフエノール
３ミリモル／ に付加的に更に フエノール35ミリモル／ ジエナポールOx−100 1.5g/ ツウイーン 20 1.5g/ コール酸ナトリウム 1.0g/ 配合物： 試薬２ml＋試料20μ、546nm、25℃試料物質
による吸光≧1.5の混濁は、反応に必要な時間以
内に完全に又は無視可能な程度に消失する。 例 39（参考） 血清中のグルコースの測定用試薬 処方： Na2HPO4 14.9g/ KH2PO4 13.2g/ Na2SO4 8.0g/ グルコースオキシダーゼEC1.1.3.4
30単位／ml パーオキシダーゼEC1.11.1.7 1.8単位／ml エステラーゼEC3.1.1.13 0.2単位／ml フエノール 470mg/ ４―アミノアンチピリン 156mg/ PH 7.0 混濁澄明化付加物： (1)〓 ３・４―ジクロルフエノール 814mg/ ジエナポールOx−100 3.6g/ タウログリコーコール酸 3.0g/ (2)〓 ３・４―ジクロルフエノール 814mg/ テジト 2.5g/ タウログリコーコール酸 3.9g/ (3)〓 燐酸カリウム―緩衝剤（PH7.0）0.2m中 付加的にフエノール 1.35g/ ３，４―ジクロルフエノール 489mg/ ジエナポールOx−100 3.0g/ コール酸ナトリウム 2.8g/ この場合、測定は578nmで行なわれる。例38中
ですでに説明したように、ここでも添加物は、試
料物質により生じた試験配合物中の混濁を非常に
短時間に除去する作用をする。 記載した例は、 (a) 添加物とより僅かに可溶性の錯体を形成する
ことができ、それ自体澄明に可溶性の１種以上
の清浄剤、及び (b) (a)に対し付加的に、反応混合物中での条件下
に混和物とより僅かに可溶性の錯体を形成する
ことのない少なくとも１種の清浄剤（〓で示し
た）を使用するようなものを含む。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 試料物質により濁つている、特に光度測定用
    反応混合物中の混濁を清浄剤を添加して除去する
    方法において、反応混合物に、 (a) 芳香族アルコール、芳香族アミン、アリール
    酸又はアルキル酸のエステル、炭素原子数が３
    よりも大きい直鎖状又は環状又は分枝鎖状脂肪
    族アルコール、短鎖のハロゲン化脂肪族化合
    物、脂肪族ケトン、芳香族アルデヒド、脂肪族
    カルボン酸、エーテル又はベンゾールの群から
    選ばれた１種以上の低分子有機化合物及び (b) 反応混合物に自体澄明に可溶性であり、添加
    物(a)と一緒になつて僅かに可溶性の錯体を形成
    する１種以上の清浄剤 を、錯体の沈殿が出現するのに十分な量で添加
    し、次いで更に清浄剤を、沈殿した錯体が再び溶
    解するまで添加することを特徴とする、混濁除去
    法。 ２ 成分(a)として、電気陰性置換分を有する芳香
    族アルコール又は芳香族アミンを使用する、特許
    請求の範囲第１項記載の方法。 ３ １個以上のハロゲン原子又は／及びヒドロキ
    シル基 で置換されているフエノール又はナフトールを使
    用する、特許請求の範囲第２項記載の方法。 ４ ジハロゲンフエノール又はトリハロゲンフエ
    ノール又はジヒドロキシナフトールを使用する、
    特許請求の範囲第３項記載の方法。 ５ 清浄剤として非イオン性ポリエチレンオキシ
    ド付加物又は陽イオン性清浄剤を使用する、特許
    請求の範囲第１項から第４項までのいずれか１項
    記載の方法。 ６ アルキル基中に炭素原子数８〜22個を有し、
    エチレンオキシド単位５〜25個を有するポリオキ
    シエチレングリコールのアルキルエーテル、アル
    アルキルエーテル又はアルキルチオエーテル又は
    アルキルエステル又はアルアルキルエステルを使
    用する、特許請求の範囲第５項記載の方法。 ７ アルキル基中に炭素原子数８〜22個を有する
    塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウムを使
    用する、特許請求の範囲第５項記載の方法。 ８ 生じた錯体を溶解するために、沈殿した錯体
    中に含有されている清浄剤とは異なる清浄剤を添
    加する、特許請求の範囲第１項から第７項までの
    いずれか１項に記載の方法。 ９ 試料物質により濁つている分析法、特に光度
    測定用の反応混合物に対する、清浄剤を含有する
    澄明化剤において、これが (a) 芳香族アルコール、芳香族アミン、アリール
    酸又はアルキル酸のエステル、炭素原子数が３
    よりも大きい直鎖状又は環状又は分枝鎖状脂肪
    族アルコール、短鎖のハロゲン化脂肪族化合
    物、脂肪族アルデヒド、脂肪族カルボン酸、エ
    ーテル又はベンゾールの群から選ばれた１種以
    上の低分子有機化合物及び (b) 反応混合物に自体澄明に可溶性であり、成分
    (a)と一緒になつて僅かに可溶性の錯体を形成す
    る１種以上の清浄剤から成るか又はこれらを含
    有することを特徴とする混濁除去剤。 １０ 電気陰性置換分を有する芳香族アルコール
    又は芳香族アミン又はこれらの混合物を含有す
    る、特許請求の範囲第９項記載の混濁除去剤。 １１ 清浄剤としてポリオキシエチレングリコー
    ルのアルキルエーテル、アルアルキルエーテル又
    はアルキルチオエーテル又はアルキルエステル又
    はアルアルキルエステル及び／又は塩化アルキル
    ジメチルベンジルアンモニウム又はこれらの混合
    物を含有する、特許請求の範囲第９項又は第１０
    項記載の混濁除去剤。
JP4440979A 1978-04-14 1979-04-13 Method and chemical agent for eliminating turbidity Granted JPS54138493A (en)

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EP (1) EP0004857A3 (ja)
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