DE3402642A1 - Substituierte vinylcephalosporinverbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und sie enthaltende pharmazeutische mittel - Google Patents

Description

PROF. DR. DR. J. REITSTOTkER-" DR*. VV-ERKe"R klNZEBACH

Al

REITSTÖTTER. KINZEBACH a PARTNER POSTFACH 78Ο, D-BOOO MÜNCHEN »13 PATENTANWÄLTE
ZUGELASSENE VERTRETER BEIM EUROPÄISCHEN PATENTAMT EUROPEAN PATENT ATTORNEYS

BETREFF: RE

TELEFON: (ΟΘ9) 2 71 65 Θ3 CABLES: PATMONDIAL MÜNCHEN TELEX: Ο521Β2ΟΘ ISAR D TELEKOP: (Ο89) 271 6O 63 (GR. Il + III) BAUERSTRASSE 22. D-SOOO MÜNCHEN AO

München, 27. Januar 1984

UNSERE AKTE: M/24 279 OUR REF:

Bristol-Myers Company

3^5 Park Avenue New York NY 10154

Substituierte Vxnylcephalosporinverbxndungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und sie enthaltende pharmazeutische Mittel

POSTANSCHRIFT; D-8000 MÜNCHEN 43, POSTFACH 78Ο

M/24 279 -\-

Die Erfindung betrifft substituierte Vinylcephalosporinverbindungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und pharmazeutische Mittel, die diese Verbindungen enthalten- Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind zur Bekämpfung bakte-. rieller Infektionen brauchbar.

Eine Möglichkeit zur Herstellung der erfindungsgemäßen, 2Q in 3-Stellung substituierten Vinylcephalosporine besteht in der Verwendung von 3-Formylceph~3-em-Verbindungen als Zwischenprodukte. Diese Zwischenprodukte können durch Oxidation der entsprechenden 3-Hydroxymethylceph-3-eme, die durch enzymatische Hydrolyse der entsprechenden 2g Cephalosporine erhältlich sind, hergestellt werden. Dieses Verfahren ist in der US-PS 3 351 596, in der unter anderem die Verbindungen II und III offenbart sind, beschrieben.

30 RCONH

I I

CHO

CO₂CH₃

M/24 279

R =

CH-

NH.

II

III

In dieser Patentschrift wurden auch Derivate der 3-CHO-Gruppe mit Carbonylreagenzien, wie Semicarbazid und Hydroxylamin, offenbart, eine Alkylierung des Kohlenstoffs der 3-CHO-Gruppe ist jedoch nicht beschrieben.

Die entsprechenden Sulfoxide sind stabiler und können in besserer Ausbeute hergestellt werden (GB-PS 1 341 712).

3-Alkenyl-substituierte Cephalosporine wurden zuerst in der GB-PS 1 342 241 (entsprechend den US-PSen 3 769 277 und 3 994 884) beschrieben. Die Verbindungen IV und V finden sich auf den Seiten 25 und 29 der Britischen Patentschrift .

LJ-

IV

CH=CH.

-CH^CONH

M/24 279

/I¹S

Diese Verbindungen wurden durch Umsetzung der entsprechenden 3-Triphenylphosphoniuminethylcephalosporine mit Formaldehyd oder Acetaldehyd hergestellt. Das inverse Verfahren, nämlich die Umsetzung eines Phosphoranylidin· derivats der Formel

R₃P=CR³R⁴

mit einem 3-CHO-Cephalosporin ist ebenfalls in dieser Patentschrift auf Seite 5 beschrieben. In der US-PS 4 107 4 31 wird erwähnt, daß die Verbindung IV nach oraler Verabreichung absorbiert wird.

Weiter wurden derartige Verbindungen von Webber et al. , J. Med. Chem. l_8(10) 986-992, (1975), und in der US-PS 4 065 620 beschrieben, welche in den Spalten 3, 4 und 5 die Art von Verbindungen' angibt, der .die erfindungsgemäßen Verbindungen angehören. Konkret offenbart wurden die Verbindungen der Formel VI:

CHCONH

NH.

CH=CHCO₂H

(CO₂Et) (CN)

VI

Weitere Abwandlungen dieses Typs sind in den US-PS'en 4 094 978 und 4 112 087 beschrieben, worin die Verbindungen VII und VIII aufgeführt sind.

M/24

10

A\o

CHCONH

NH.

. ο

US-PS 4 094 978 _f Spalte 44

CH=CHCH₂OH

VII

15

20

CHCONH

NH.

CH=CHCH OCH₃ (trans)

VIII

CO₂H

US-PS 4 112 087 , Spalte 31

Weitere 3-Alkenyl-substituierte Cephalosporine sind in den folgenden Publikationen offenbart;

US-PS 3 830 700: 3-{Nitrostyryl)cephalexinanaloga

US-PS 3 983 US-PS 4 040 US-PS 4 139 618:

S-^HeterocyclothioJpropenylcephalosporine

US-PS 4 147 863:

3-(l-Methyl-5-tetrazolyl)vinylcephalosporine

M/24

DK-OS 30 19 445: 3-(SuIfonyloxy)vinylcephalospordne

FH-PS 24 60 302: 3-(Di methyl amino)vinylcephalexin-

analoga

EU-PS 30 630:

US-PS 4 255 US-PS 4 390 693:

7- [ ( 3-Methansulfonamidophenyl) -aaminoacetamido]-3-vinylceph-3-em-4-carbonsSure

7- (2-Thienyl)acetamido-3-(3-acetoxy_T 1-propenyl) und -3-(Heterocyclovinyl) ceph-3-em-4-carbonsauren und 7a-methoxyanaloga.

Die wichtigsten handelsüblichen, oral wirksamen Cephalosporine - die erfindungsgemäßen Verbindungen sind für den gleichen Verwendungszweck vorgesehen - sind Cephalexin, Cefadroxil, Cephradin und Cefaclor. Diese Verbindungen entsprechen den Formeln IX, X, XI und XII.

25 \—.

CO₂H

30 R=H Cephalexin R=OH Cetadroxil X

Cefaclor XI

Cephradin χττ

M/24

48

Diese Verbindungen sind Gegenstand folgender Patente:

Cephalexin Cefadroxil

Cefaclor Cephradin

- US-PS 3 507

- US-PS 3 489 (Re 29,164)

- US-PS 3 925

- US-PS 3 485

Verbindungen mit ähnlicher Struktur sind 3-Chlorcefadroxin und 3-Hydroxycefadroxil, die in der

US-PS 3 489 751 und in der GB-PS 1 472 174 beschrieben

sind.

Gegenstand der Erfindung sind substituierte Vinylcephalosporine der allgemeinen Formeln XIII und XIV:

XIII

M/24

CH=CHAIkX

XIV

worin

η für 0 oder 1 steht,

R ein Wasserstoffatom, OP , eine Niedrxgalkoxygruppe oder ein Halogenatom, nämlich ein Chlor-, Brom-, Fluoroder Jodatom,bedeutet,

20 ρ , ρ und P Wasserstoffatome oder in

der Cephalosporinchemie üblicherweise verwendete Schutzgruppen für Amino-, Carboxy- und Hydroxygruppen bedeuten,

25 R ein Wasserstoffatom, OP oder eine Niedrxgalkoxygruppe bedeutet,

Alk eine Alkyliden- oder Alkylengruppe mit 1 bis Kohlenstoffatomen bedeutet, und

X ein Chlor-, Brom- oder Jodatom bedeutet.

M/24 279 -Λ-

Im Rahmen der vorliegenden Erfindung bedeutet der Ausdruck "Niedrig" im Zusammenhang mit Alkyl-, Alkoxygruppen und dergleichen einen Kohlenwasserstoffrest mit 1-8 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise 1-6, am bevorzugtesten 1-4 Kohlenstoffatomen.

Diejenigen Verbindungen der obigen Formeln, in denen IQ η für 1 steht und P , P und P übliche Schutzgruppen bedeuten, sind Zwischenprodukte zur Herstellung der biologisch wirksamen, erfindungsgemäßen Endprodukte, die

durch die allgemeine Formel XIII beschrieben werden,

12 3 worin η für 0 steht, und P , P und P Wasserstoffatome

jg bedeuten. Diese Verbindungen sind als oral wirksame Cephalosporinantibiotika mit starker Wirksamkeit gegen Gram-positive Bakterien brauchbar. Sie besitzen darüber hinaus im Vergleich zu Cephalexin, Cefadroxil-, Cefaclor und Cephradin ein verbessertes Aktivitätsspektrum gegen Gram-negative Bakterien, schwierig zu bekämpfenden Bakterien und Anaerobiern. Weiter führen sie nach oraler Verabreichung zu einer langer anhaltenden Antibiotikumkonzentration im Blutkreislauf und sind zur Verabreichung an Menschen auf der Basis von einer oder zweier Gaben

25 pro Tag geeignet. Als solche werden sie in Dosen von 100 bis 5 000 mg pro Tag in Abhängigkeit von der Größe des Patienten und dem Erkrankungszustand verabreicht. Sie können ebenso parenteral in ähnlichen Dosierungen verabreicht werden.

Die Verbindungen der Formel XIV sind hauptsächlich als

Zwischenprodukte von Interesse. Diejenigen Verbindungen,

12 3

in denen η für 0 steht und P , P und P ein Wasserstoffatom bedeuten, besitzen jedoch antibakterielle Aktivität op: und sind ebenfalls als Antibiotika brauchbar.

• · 9

M/24 279 1

Im Hinblick auf diese Eigenschaften sind die Verbindungen der Formeln XIII und XIV, worin η für 0 steht und P ,

2 3

P und P ein Wasserstoffatom bedeuten, zur Behandlung bakterieller Infektionen, die durch sensitive Organismen verursacht wurden, bei Säugetieren, einschließlich des Menschen, brauchbar. Zu diesem Zweck werden sie oral oder parenteral in einer antibakteriell wirksamen, nicht ^O toxischen Dosis als solche oder in Form eines pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalzes, pharmazeutisch verträglichen Metall- oder Aminsalzes oder eines pharmazeutisch verträglichen Esters verabreicht.

Pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze sind solche, bei denen das Anion nicht wesentlich zur Toxizität des Salzes beiträgt und die mit den üblichen pharmazeutischen Trägern verträglich und zur oralen oder parenteralen Verabreichung geeignet sind. Derartige Salze umfassen die Salze von Verbindungen der Formeln XIII und XIV, worin η für 0 steht und P ein Wasserstoffatom bedeutet, mit Mineralsäuren, wie Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Phosphorsäure und Schwefelsäure, mit organischen Carbonsäuren oder organischen Sulfonsäuren, wie Essigsäure, Citronensäure, Maleinsäure, Bernsteinsäure, Benzoesäure, Weinsäure, Fumarsäure, Mandelsäure, Ascorbinsäure, Apfelsäure, Methansulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, sowie mit weiteren, auf dem Penicillin- und Cephalosporingebiet bekannten und angewandten

QQ Säuren. Die Herstellung derartiger Salze erfolgt anhand üblicher Verfahren durch Umsetzung einer der Verbindungen der Formeln XIII oder XIV, worin η für 0 steht und P ein Wasserstoffatom bedeuti
äquivalenten Menge der Säure.

P ein Wasserstoffatom bedeutet, mit einer im wesentlichen

35

Pharmazeutisch verträgliche Metall- und Aminsalze sind diejenigen Salze der Verbindungen der Formeln XIII und XIV, worin η für 0 steht und P ein Wasserstoffatom bedeutet, die unter Umgebungsbedingungen stabil sind und bei denen das Kation nicht wesentlich zur ToxizitSt oder biologischen Aktivität des Salzes beiträgt. Geeignete Metallsalze sind Natrium-, Kalium-, Barium-, Zink- und Aluminiumsalze. Natrium- oder Kaliumsalze sind bevorzugt. Aminsalze, die aus beispielsweise im Zusammenhang mit Benzylpenicillin verwendeten Aminen hergestellt werden und die in der Lage sind mit der sauren Carboxylgruppe stabile Salze zu bilden, sind Trialkylamine, wie Triethylamin, Procain, Dibenzylamin, N-Benzyl-ß-phenethylamin, 1-Ephenamin, N,N¹-Dibenzylethylendiamin, Dehydroabietylamin, N-Ethylpiperidin, Benzylamin und Dicyclohexylamin.

Pharmazeutisch verträgliche Ester sind diejenigen Ester, die per se wirksam sind oder die pro-Drugs insofern darstellen als sie im Körper unter Bildung des Antibiotikums per se hydrolysiert werden. Geeignete Ester der letzten Art sind Phenacyl-, Acetoxymethyl-, Pivaloyloxymethyla-Acetoxyethyl-, a-Acetoxybenzyl-, a-Pivaloyloxyethyl-, 3-Phthalidyl-, 5-Indanyl-, Methoxymethyl-, Benzoyloxymethyl-, a-Ethylbutyryloxymethyl-, Propionyloxymethyl-, Valeryloxymethyl-jlsobutyryloxymethyl-, Glycyloxymethylester und weitere auf dem Penicillin- und Cephalosporingebiet bekannte Ester.

Die Verbindungen der Formeln XIII und XIV, worin η für 0 steht und P , P und P Wasserstoff atome bedeuten, und ihre wie oben definiorten Salze können zur oralen oder parenteralen Anwendung in üblicher Weise unter Verwendung bekannter pharmazeutischer Träger und Exzipienzien formuliert

• ■ * »

Μ/24 279 -3S2- <λ~>

werden. Sie können in Einheitsdosisform oder in Mehrfachdosisbehältern dargeboten werden. Die pharmazeutischen Mittel können in Form von Tabletten, Kapseln, Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen vorliegen. Die Verbindungen können auch in Form von Suppositorien unter Verwendung üblicher Suppositoriengrundlagen, wie Kakaobutter oder anderen Fettmaterialien, formuliert werden. Falls ge-

Q wünscht, können die Verbindungen in Kombination mit anderen Antibiotika, einschließlich Cephalosporinen, Penicillinen und Aminoglykosiden, verabreicht werden.

Die obigen Ausführungen gelten in gleicher Weise für p- die Verbindungen der Formel XV.

Die Tabelle 1 enthält eine Zusammenfassung der Strukturmerkmale der in den Beispielen 1 bis 43 beschriebenen

2Q Verbindungen. Die meisten dieser Verbindungen sind 7ß-(D-Phenylglycylamido)cephalosporine mit einer 1-propen-1-yl-Gruppe in 3-Stellung. Das endständige Kohlenstoffatom der Propenylgruppe ist bei einigen Verbindungen substituiert, beispielsweise mit einer Alkylgruppe (Methyl), einem Halogenatom (Chlor- oder Jodatom), einer Arylgruppe (Phenylgruppe), einer Heterocyclothiogruppe (1,2,3-Triazol-5-yl-thio-Rest) oder einer Alkoxygruppe (Methoxygruppe). Die Phenylglycylamidogruppe kann unsubstituiert sein oder mit einer Hydroxy-,Alkoxy- oder Ha-

nn logengruppe mono- oder disubstituiert sein.

Μ/24 279

-iV

Tabelle 1

Verbindungen der Beispiele 1-4 3

CHCONH-NH.,

CH=CHR

(XV)

Verbindung Nr; 9 (BMY-28100)

13 (BBS-1058)

11 (BBS-1064) 24 (BBS-1065) 26 (BBS-1066)

8 (BBS-1067) 15 (BBS-1076)

21 (BBS-1091)

17 (BBS-1092) 32 (BMY-28060) 37 (BMY-28068) 42 (BMY-28097) OH

OH

R (Konfiguration) -CH₃ (Z)

-CH, (Z)

	H	-CH3	(Z)	(Z)
H	H	-CH2Cl	(Z)	(Z)
H	OH	-CH3	(E)	(Z)
H	OH	-CH2C6	.Hc (Z)
			π N
H	OH	-CH2-S-U^ rN
H	OH	t H
Cl	OH	-CH2OCH3 (Z)
HO	OH	-CH3
CH3O	OH	-CH3
-CH3

M/24 279 -X4-Q.9"

In Tabelle 2 sind in vitro-antibakterielle Aktivitäten von erfindungsgemäßen Verbindungen zusammengestellt. Die Aktivitäten sind in Form von minimalen Hemmkonzentrationen angegeben, die mit Hilfe der Agar-Verdünnungstechnik für drei, mit Gp-Ia, Gp-Ib und Gn-Ia bezeichneten Gruppen von Organismen bestimmt wurden. Jede dieser Organismusgruppen setzt sich aus fünf einzelnen Mikroorganismenstämmen zusammen, die in der Fußnote zu der Tabelle angegeben sind. Die Gp-Ia-Organismen sind Gram-positive Staphylococci, die Penicillin-sensitiv sind. Die Gp-Ib-Organismen sind Gram-positive Staphylococci, die Penicillinresistent sind und Penicillinase produzieren. Die Gn-Ia-Organismen sind Gram-negative Bakterien, die Ampicillin- und Cephalothin-sensitiv sind. Die erfindungsgemäßen Verbindungen haben im allgemeinen eine geringe Aktivität gegenüber Ampicillin- und Cephalothin-resistenten Gram-negativen Bakterien. Aus der Tabelle 2 können

on hinsichtlich der in vitro antibakteriellen Aktivität dieser Verbindungen die nachfolgenden Schlüsse gezogen werden.

Alle Verbindungen besitzen eine gute Aktivität gegenüber Penicillin-sensitiven Staphylococci (Gp-Ia). Die Aktivität gegenüber Penicillin-resistenten Staphylococci (Gp-Ib) ist im allgemeinen um den Faktor drei oder mehr geringer. In jedem Fall sind die Verbindungen jedoch um ein Mehrfaches wirksamer als Cephalexin und Cefadroxil.

Lediglich diejenigen Verbindungen, die eine unsubstitu-

ierte eis(Z)-Propenylgruppe in 3-Stellung aufweisen, besitzen gute Aktivität gegenüber Gram-negativen Bakterien (Gn-Ia). Dies ist anhand der Verbindungen Nr. 9, 24, Q5 32 und 42 ersichtlich. Die Aktivität der trans(E)-Propenylverbindung Nr. 8 ist im Vergleich zur entsprechenden

Μ/24 279 -ls5Ä\

cis-Propenylverbindung Nr. 9 um den Faktor 8 geringer. In ahnlicher Weise scheint eine Substitution an der end-Pj ständigen Methylgruppe des Propenylsubstituenten in 3-Stellung zu einer verringerten Aktivität gegenüber Gramnegativen Bakterien zu führen, vgl. Verbindungen Nr. 13, 15, 21 und 17. Dies trifft außerdem auf die Vinylverbindung Nr. 11 zu. Trotzdem sind diese Verbindungen

,Λ starke antibakterielle Mittel, die Cephalexin und Cefadroxil im wesentlichen gleichwertig sind. Eine Ringsubstitution ist der antibakteriellen Aktivität in keiner Weise abträglich, vgl. Verbindungen 9, 24, 32 und 42. Verbindung Nr. 37 scheint hinsichtlich der obigen Schluß-

. ρ- folgerungen eine Ausnahme darzustellen, sie ist jedoch, wie in Tabelle 3 gezeigt, eine stark wirksame Substanz sowohl gegenüber Gram-positiven als auch gegenüber Gramnegativen Bakterien.

Tabelle 2

Agar Verdünnungstechnxk (Mueller-Hinton Agar) Minimale Hemmkonzentration (mcg/ml)

	(BMY-28100)	GP	1	la3	Gd	Ib3	Gn	la3
	(BBS-1058 )	0.23	2_	I	2_	1.	2
Verbindung Nr.	(BBS-1064)	0.40	0.35	0.92	0.8	0.8	0.7
9	(BBS-1065)	0.40		1.4		4.1
13	(BBS-1067)	0.23		1.2		3.6
11	(B3S-1076)	0.26	0.3	0.92	0.92	0.8	0.8
24	(BBS-1091)·	0.20		1.4		6.3
8	(BES-1092)	0.61		0.7		>50
15	(B.MY-2S060)	0.53		2.7		2.7
21	(BMY-2B068)			2.1		2.7
17		0.13		0.53		1.1
32	6.30		7.2		6.3
37

M/24 279 -3S6- M

Gp Ia³ Gp Ib³ Gn Ib³

Verbindung Nr. I^ 2_ 1 2 12

42 (BMY-28097) 0.35 1.2* 0.53⁴

cephalexin -1-2 0.70 4.1 3.6 6.2 4.1 Cefadroxil 1.2 1.10 3.6 4.1 8.3 8.3

10 1· Die Spalten 1 und 2 bedeuten separate Tests.

2. Die Spalten 1 und 2 bedeuten separate Tests.

3. Mittelwert für fünf Organismen pro Gruppe:

Gp Ia Gram+ Staphylococcx; Penicillin-sensitiv; keine Penicxllinaseproduzenten: 15 S. aureus Smith A9537

S. aureus A 9497

S. aureus Terajima

S. aureus A9534

S. aureus A9601

Gp Ib Gram+ Staphylococcx; Penicillin-resistent;

Penicxllinaseproduzenten: S. aureus 193 S. aureus BX-1633-2 A9606 S. aureus A15092

S. aureus Russell S. aureus A9602

Gn Ia Gram-Bakterien; Ampicillin- und Cephalothingo sensitiv: ■

E. coli Juhl A15119

E. coli A9660

K. pneumoniae DIl

P. mirabilis A9554 _Qr P. mirabilis A9900

M/24 279 -N- »Χ

4. Nicht Teil des Versuchs 1; die Werte wurden separat erhalten .

Die Tabelle 3 enthält Vergleichsdaten für die in vitroantibakterielle Aktivität gegenüber den gleichen Organismen, wie in Tabelle 2 angegeben, wobei zwei verschiedene bakteriologische Kulturmedien verwendet wurden. Mueller-Hinton-Agar ist das Standardmedium, das in den in Tabelle 2 beschriebenen Tests verwendet wurde. Tabelle 3 enthält einen Vergleich der minimalen Hemmkonzentrationen von drei der Testverbindungen, welche zuerst in Mueller-Hinton-Medium und anschließend in Nährmittel-Agar bestimmt

J5 wurden. Die Verbindung Nr. 9, die in 4-Stellung des

Phenylrings durch eine Hydroxygruppe substituiert ist, und die Verbindung Nr. 42, die eirK 3~Methoxy-4-hydroxy-Substitutionsmuster am Phenylring aufweist, besitzen einen nur mäßigen Mediumeffekt. Damit soll zum Ausdruck

2Q gebracht werden, daß sich die MHK-Werte um weniger als den Faktor 3 unterscheiden. Die 3,4-Dihydroxyphenylsubstituierte Verbindung Nr. 37 ergibt eine um den Faktor 6 bis 12 verschiedene Aktivitätdifferenz zwischen den beiden Medien, wobei die in Nährmittelagar bestimmten minimalen Hemmkonzentrationen weit niedriger liegen als die in Mueller-Hinton-Agar bestimmten. Infolgedessen ist die Verbindung Nr. 37 hinsichtlich ihres antibakteriellen Effektes mit den anderen in Tabelle 2 angegebenen ' Cephalosporinen vergleichbar, die in 3-Stellung eine

OQ cis-Propenylgruppe aufweisen. Das Phenomen einer unterschiedlichen antibiotischen Aktivität in verschiedenen Nährmedien wurde bereits früher untersucht und veröffentlicht, vgl. T.A. Pursiano et al. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Teil 3, Nr. 1, Seiten 33-39 (1973).

Λ ft # «

Μ/24 279

Tabelle 3

Vergleich der Testmedien

Agar Verdünnungstechnik

Minimale Hemmkonzentrationen (mcg/ml)

Verbindung Nr.	A1	Gp Ia2	rn T. 2 Gp Ib	Gn Ia2
9 (BMY-28100)	B	0.23	0.92	0.70
	A	0.17	0.35	0.70
7 (BMY-28068)	B	4.8	6.3	5.5
	A	0.40	0.61	0.92
2 (BMY-28097)	B	0.35	1.2	0.53
	0.23	0.40	0.40

A Mueller-Hinton-Agar B Nährmittel-Agar

25 Mittelwerte für die gleichen Gruppen an Organismen wie in Tabelle 2.

Die anhand der voranstehenden in vitro-Untersuchungen abgeleiteten Struktur-Aktivitats-KorreJationen werden durch in vivo-Untersuchungen an Mäusen bestätigt. In Tabelle 4 ist die jeweilige Schutzdosis für Mäuse zusammengestellt, die mit einem letalen Baktorieninoculum infiziert wurden. Man verwendete dazu zwei verschiedene Bakterienarten, nämlich einen Gram-positiven Organismus und einen Gram-negativen Organismus. Die Schutzdosis (PD^_n) ist diejenige Dosis, die nach Verabreichen an

M/24

eine Gruppe von infizierten Mäusen nach fünf Tagen zu
einer Überlebensrate von 50 Ί führt. Normalerweise ster-5 ben unbehandelte infizierte Mause innerhalb von drei
Tagen nach der Injektion des lethalen Inoculums.

10

15

Tabelle 4

Schutzdosis für Mäuse, die mit einem letalen Inoculum

infiziert wurden
Orale Verabreichung

Verbindung Nr,

9 (BMY-28100)

13 (BBS-1058)

11 (BBS-1064)

24 (BBS-1065) 8 (BBS-1067)

32 {BMY-28060)

37 (BMY-28068)

42 (BMY-28097)

S. aureus Smith 0.14 (0.31)² 0.32 (0.31) 0.18 (0.31) 0.18 (0.27) 0.20 (0.31) 0.17 (0.22) 0.13 (0.27) 0.09³

E. coli Juhl 1.2 (8.4)² 3.0 (8.4) 3.8 (8.4) 1.5 (8.2) 7.5 (8.2) 3.04 (8.4) 0.44 (8.2)

Μ/24 279 -20- ?Λ

Dosis in mg/kg, die 5 Tage den Tod von 50 % der Tiere in Gruppen von 5 Mäusen, welche mit verschie- - denen Dosen der zu testenden Verbindungen am Tag der Infektion behandelt wurden, verhindert; die Werte wurden durch Interpolation aus der Dosis-Wirkungs-Kurve bestimmt; unbehandelte Tiere sterben innerhalb von 3 Tagen.

10 ₂

Die Werte in Klammern wurden im gleichen Versuch

für Cephalexin erhalten.

In diesem Versuch wurde für BMY-28100 ein Wert

von 0,16 mg/kg erhalten; Kontrollwerte für Cepha-15

lexin oder Cefadroxil stehen nicht zur Verfügung.

Die Daten in Tabelle 4 wurden anhand mehrerer unterschiedlicher Versuche erhalten. Dabei wurde Cephalexin als Vergleichsverbindung verwendet, die PD,- „-Werte für diese Verbindung im gleichen Versuch sind in Klammern neben den PD₁.,-.-Werten der zu testenden Verbindungen angegeben. Es ist ersichtlich, daß alle Cephalosporine eine gute Aktivität gegenüber Infektionen mit Gram-positiven

Staphylococcus aureus besitzen und daß die Verbindungen, 25

welche in 3-Stellung eine cis-Propenylgruppe besitzen, gegenüber einer Infektion mit Gram-negativen Bakterien wirksamer sind, vgl. Verbindungen 9, 24 und 37.

Die Tabelle 5 enthält vergleichende Blutspiegeldaten für Mäuse, die oral und intramuskulär mit den in Tabelle 1 aufgeführten Verbindungen behandelt wurden. Es ist ersichtlich, daß mit Ausnahme der Verbindung Nr. 21, die an der 3-Propenylgruppe einen Heterocyclothio-Substituenten aufweist, alle Verbindungen gleichmäßig gut oral absorbiert werden. Die Verbindung Nr. 37 ergibt nach

M/24 279 -&- O^

oraler Verabreichung außergewöhnlich hohe Blutspiegelwerte bei Mausen. Es wurde gezeigt, daß diese Verbindung bei Ratten in die Verbindung Nr. 42 metabolisiert wird, vgl. Beispiel 43. Verbindung Nr. 37 ist die 3,4-Dihydroxyphenylverbindung, während die Verbindung Nr. 42 die entsprechende 3-Methoxy-4-hydroxyphenylverbindung ist, die eine starke in vitro und in vivo-Aktivität besitzt.

Tabelle 5 Blutspiegelwerte bei Mäusen

Dosis

ρ·ο·

• 026	5	Verbindunq Nr.	max (mcg/ml)	T 1/2 Std.	AUC (mcg. Std/ml
-<r co * * > * ·		Versuch 1
f m · « » * * > · • * * •		9 (BMY-28100) (lot 2)	56	1.9	106
*■ ·		13 (BBS-1058)	51	1.9	150
# t ·■· * * * ·	10	11 (BBS-1064)	43	1.2	49
it«« ■·		24 (BBS-1065)	40	1.1	. 84
« » #1 · » » *		8 (BBS-1067)	30	1.4	69
		15 (BBS-1076)	41	2.7	81
	15	21 (BBS-1091)	4.4	3.2	19
		17 (BBS-1092)	73	1.7	197
		Cephalexin*	47	1.4	57
		Cefadroxil	56	2.3	103
		Versuch 2
	20	9 (BMY-28100)	61	1.3	86
		24 (BBS-1065)	33	1.1	46
279		32 (BMY-28060) 37 (BMY-28068)	25 180	1.7 2.5	37 666
(N	Cefadroxil	51	1.5	67

mg/kg, ρ.ο.

mg/kg, i.m.

C Τ_{Ί /o} AUC* C T₁ ,- AUC*

max 1/2 max 1/2

Std. (mcg. Std/ml (mcg/ml ( Std) (mcg» Std/ml) (mcg/ml) (Std) (mcg.. Std/ml)

15

1.9

26

13	2.0	41
11	1.4	13
7.8	1.3	15
10	1.3	22
12	2.7	38
1.7	2.6	6.6
18	1.6	28
11	1.3	14
12	1.2	18

15	.5	1.7	13
9	.9	0.69	13
7		1.7	13
58		5.1	270
18	1.6	21

28

0.88

32

25	0.74	20
23	0.37	15
31	0.50	■22
31	0.63	31
31	0.99	52
16	0.54	9.6
24	0.60	19
26	0.40	16
21	0.33	14

21	0.48	13
16	0.58	13
21	0.48	13
86	1.2	233
30	0.37	21

* Mittelwert aus 3 Versuchen

CD K> CD ■trhO

25

M/24 279 -2\?-

Die Tabelle 6 enthält weitere in vivo-Daten für die Verbindung Nr. 9 gegenüber vier weiteren Organismen im Vergleich zu Cephalexin, Cefachlor und Cefadroxil. Die Tabellen 7 und 8 enthalten in vitro Vergleichsdaten für Verbindung Nr. 9 gegenüber Cephalexin, Cefadroxil und Cefachlor bezüglich einer Reihe von Streptococci, Neisseria, Haemophilis und verschiedener Anerobier.

In Versuchen zur Rückgewinnung der Verbindungen aus

Rattenurin hat sich ergeben, daß der Wert für die Rückgewinnung der Verbindung Nr. 9 aus dem Urin oral behandelter Ratten nach 24 Stunden mit dem für Cephalexin und

. p. Cefadroxil erhaltenen Wert vergleichbar und größer als der für Cefachlor erhaltene Wert ist. Stabilitätsuntersuchungen, bei denen die Verbindung Nr. 9 mit Cephalexin und Cefachlor in Lösung unter Verwendung von Phosphatpuffer bei pH 6,5 und pH 7,0, Menschenserum (pH 6,8), Pferde-

„„ serum (pH 7,6) und Kälberserum (pH 8,2) als Träger verglichen wurde, haben erbracht, daß die Stabilität der Verbindung Nr. 9 größer ist als diejenige von Cephachlor und vergleichbar der Stabilität von Cephalexin ist.

CO CN CD

Tabelle

Schutzdosis PDcn ^Dei Mäusen, die mit einem

letalen Inoculum infiziert wurden Orale Behandlung

Organismus S. aureus BX-1633

S. pyogenes A20201

7 H. influenza A9729

P. mirabilis A9554

9 (BMY-281Q0) Cephalexin 2,2

0,

1,8"

1,8

0,74 18 12,5

Cefachlor	Cefadroxil
2,2	7,2
0,14	0,25
1,6	25

1,8

14

LO

LO

LO CN

CO

LO CO

CO -P--O hO

-er CD	279	Organismus	A9604	A9505	9 (BMY- 28100) (Lot 2)	k« ^ S.* XA ^h* ^ Λ \^k h.^ **^ ^~	MHK (mcg/ml)	k 1 ^m* «^ h·* h.^ ^w« ·*- —*- \~Λ· V« * * ^fc.	Cefachlor
3402	CN	S. pyogenes S-23	A20065 A15040	A15069		15 (BBS- 1076)	Cephalexin	Cefadroxil
	S	" Dick	Geometrisches Mittel	Geometrisches Mittel	0,05	0,2	0,0	0,0	0,2
β * * *			N. gonorrheae A15112	0,05	0,2	0,0	0,0	0,2
fc · · C- * -t	S. pneumoniae Typ II	A20142	0,05	0,2	0,0	0,0	0,2
t	Typ I	A20143	0,05 0,05	0,2 0,2	0,0 0,0	0,0 0,0	0,2 0,2
* * ((K * *	Typ III	A20154 A20155	0,050	0,20	0,00	0,00	0,2
C S-	Geometrisches Mittel
C « ^ a * Lf)		0,2	0,2	3,1	1,6	1,6
« C t ft 9 4 £ C *		0,2	0,2	3,1	1,6	1,6
e *	0,2	0,2	3,1	1,6	—
	0,2	0,4	3,1	1,6	1,6
	0,2	0,2	3,1	1,6	0,8
	0,20	0,23	3,1	1,6	1,3
	0,0	>100	6,3	6,3	0,8
	0,0	>100	6,3	6,3	—
	0,0	>100	6,3	6,3	0,8
	0,0 0,0	>100 >100	6,3 6,3	6,3 6,3	0,8 0,8
α, oo	>100	6,3	6,3	0,8

ω
cn

ω
ο

to
cn

bo ο

cn

Tabelle 7 (Fortsetzung)
Organismus

N. meningitidis

A20048
A20049

9 (BMY-28100)
!Lot 2)

0,8

15 (BBS-1076)

>100

Cephalexin

6,3 Cefadroxil Cefachlor

Il	A21487	A9729	A22157	0,8	>100	6,3
Il	A21496	A20177	A22481	0,8	>100	6,3
»	A21497	A20193	A22491	0,8	>100	6,3
Geometrisches Mittel	A21523	A20201	0,80	>100	6,3
H. influenzae	A9833	A20759	0,8	> 100	6,3
	A22483	0,8	>100	6,3
It	A22482	0,8	> 100	6,3
Il	Geometrisches Mittel	0,8	>100	6,3
Il	H. influenzae	0,8	>100	6,3
Il	»	0,8	>100	6,3
ti	11	0,8	>100	6,3
S. pyogenes	0,80	>100	6,3
S,pneumoniae	1,6 ■	25	3,1
1,6	25	3,1
1,6	25	3,1
0,1	0,2	0,8
0,2	0,4	3,1

6,3

6,3 6,3 6,3 6,3

6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 0,4 3,1

0,8 0,8

0,8 0,8 0,8 0,8

0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0,4 0,4 0,66

¹ .J·..¹

GO -Ρ-CD hO

CiD O

to αϊ

Tabelle 8 In Vitro Aktivität gegenüber Anaerobier

Organismus ß-Lac- MHK (mcg/ml)

ß-Lactamase

9 (BMY-28100) Cephalexin Cefachlor

Gn, Stäbchen B. fragilis

A20928-1 A21900 A20935 Geometrisches Mittel

Gn, Stäbchen B. fragilis

A22053 A22021 A22693 Geometrisches Mittel

A22695 A22533 Geometrisches Mittel

Gp, Stäbchen
Gp. cocci

C. difficile A21675

C. perfringens . A9645

P. acnes A21933

P. anaerobius A21905

Geometrisches Mittel

*Clindamycin-resistent

12,5

12,5

6,3

9,9

>100 >100 >100 25

100

>100

>75

>100 >100 >100 100
>100
>100

6,3 0,4 0,4 0,8 0,95 100
12,5
1,6
6,3
11

3,1 6,3 3,1 3,9

100 >100 >100 >100

100 >100 >100

25 1,6 0,8 0,4

CO O

M/24 279

Die Herstellung der erfindungsgemaßen Verbindungen erfolgt auf den Synthesewegen, die in den eingangs im Zusammenphang mit den geeigneten Ausgangsmaterialien erwähnten GB-PS 1 342 241, US-PS'en 3 994 884 und 4 107 431 beschrieben sind. Die Einführung der substituierten Vinylgruppe in 3-Stellung der erfindungsgemäßen Verbindungen umfaßt im wesentlichen die Umsetzung einer Halogenidverbindung mit einem Triarylphosphin zu einem Phosphoniumsalz, das durch Behandeln mit einer Base in eine Phosphorany!verbindung überführt wird. Diese wird dann mit einer Carbonylverbindung zu den erfindungsgemäßen Verbindungen umgesetzt. Dabei enthält entweder die Halogenidverbindung oder die Carbonylverbindung den Cephalosporinkern. Der Reaktionsablauf wird durch die nachfolgenden Reaktionsschemata erläutert.

Halogenid-	Phosphorany1-	Carbonyl	R \
verbindung	verbindung	verbindung	\
		H,
QCH-X (C,Hp)-P	[QCH=P (C6Hg)3]
Base
Reaktionsschema 1

Reaktionsschema 2

QCH=ClUr

CHX

Base

3\

QCH = CH R

Deblockierung Acylierung

Verbindungen der Formeln XIII oder XIV₁XV

M/24 279

In diesen Reaktionsschemata bedeutet R ein Wasserstoffatom, eine C₁-C₄-AIkYl-, C₁-C₄-AIkOXy-C₁- C^Alkyl-, C₇-C₁.-Aralkyl-, oder AlkX-Gruppe, wobei Alk und X die oben angegebenen Bedeutungen besitzen. Q steht für den 7-Amino-3-cephem-3-yl-4-carbonsäurekern, wobei die Amino- und Carbonsäuregruppen Schutzgruppen aufweisen können, wie Silylgruppen oder weitere, dem Fachmann auf dem Ge-

IQ biet der beta-lactam-Antibiotika bekannte Gruppen, oder einen 7-Acylamino-3-cephem-3-yl-4-carbonsäurerest, wobei die 7-Acylaminogruppe eine Gruppe darstellt, die üblicherweise in Cephalosporxnantibiotika vorliegt, einschließlich der erfindungsgemäß verwendeten, in den Formeln XIII und IX definierten a-Amino-a-substituierten Phenylacetamidogruppe. Die Sulfoxide der erwähnten Verbindungen besitzen Vorteile. Im einzelnen bedeutet Q einen Rest der folgenden Formeln:

(O)

CHCONII NHP'

AcNH

(0)

Β=Ν·

(0)

M/24 279 -3"O-

worm

5 R die oben angegebenen Bedeutungen besitzt,

η für 0 oder 1 steht und die Zahl der an den Schwefel gebundenen Sauerstoffatome betrifft,

^Ac eine üblicherweise bei T-Acylaminocephalosporinen vorliegende Acylgruppe bedeutet, wie Phenylacetyl oder Phenoxyacetyl, und

B eine von einem Aldehyd oder Keton abgeleitete Alkyjg liden- oder Aralkylidenschutzgruppe bedeutet, wie die Benzylidengruppe, die in einer nachfolgenden Reaktionsstufe leicht, beispielsweise durch Hydrolyse unter Verwendung von Girard's Reagens T, abgespalten

wird, und

12 3

2Q P , P und P Wasserstoffatome oder üblicherweise in der Cephalosporincheihie verwendete Schutzgruppen für Amino-, Hydroxy- und Carboxylgruppen bedeuten.

Geeignete Carbonylschutzgruppen (P ) sind beispielsweise Aralkylgruppen, wie eine Benzyl-, p-Methoxybenzyl-, p-Nitrobenzyl- und Diphenylmethyl-(benzhydryl)alkyl-Gruppen; Alkylgruppen, wie die t-Buty!gruppe; Halogenalkylgruppen, wie die 2,2,2-Trichlorethylgruppe und weitere in der Literatur, beispielsweise in der GB-PS 1 399 086 beschriegO bene Carboxylschutzgruppen. Vorzugsweise verwendet man Carboxylschutzgruppen, die sich leicht durch Behandlung mit Säuren entfernen lassen, insbesondere die Benzhydryl- oder t-Butylgruppe.

M/24 279 -h.-

Amino- und Hydroxyschutzgruppen (P und P ) sind dem Fachmann bekannt und umfassen beispielsweise die Trityl- und Acylgruppen, wie die Chloracetyl-, Formyl-, Trichlorethoxycarbonyl-, t-Butoxycarbonyl- oder Carbobenzyloxygruppe usw. Auch hier werden Aminoschutzgruppen bevorzugt, die sich leicht durch Behandlung mit Säuren entfernen lassen, insbesondere die t-Butoxycarbonylgruppe.

Wenn der Cephalosporinkern Q in den Reaktionsschemata

1 und 2 in Form des 1-Oxids (n=l) zur Anwendung kommt, stellt man diese Oxide anhand bekannter Verfahren, wie Oxidation des entsprechenden Cephalosporins (n=O) mit ^g m-Chlorperbenzoesaure oder Peressigsäure, her. In einer späteren Synthesestufe wird das 1-Oxid mittels bekannter Verfahren reduziert, beispielsweise mit Jodidionen in wäßrigem Medium.

2Q Die Umwandlung der Halogenidverbindung der Formel

QCHpX gemäß dem Schema 1 in die Phosphoranylverbindung wird vorzugsweise unter Verwendung eines Halogenids durchgeführt, in dem X ein Jodatom bedeutet. Wenn man als Halogenidverbindung ein Chlorid oder Bromid verwendet, OC kann man dieses zuerst durch Behandlung mit Natriumjodid in Dimethylformamid oder Aceton in das entsprechende Jodid überführen. Die Jodidverbindung reagiert leicht mit einem Triarylphosphin, wie Triphenylphosphin, in einem organischen flüssigen Träger, der gegenüber den QQ Reaktanten unter den Reaktionsbedingungen inert ist.

Geeignete Bedingungen sind Raumtemperatur und eine Reaktionszeit, die kurz sein kann, die sich jedoch auch über mehrere Stunden erstrecken kann. Neben Triphenylphosphin sind geeignete Triarylphosphine solche Verbinde düngen, die leicht verfügbar sind und reaktionsverträglicho Arylgruppen besitzen, wie substituierte Phenyl-

M · * t

M/24 279 -$2-

H^

gruppen, z.B. Tolyl-, Naphthyl-, substituierte Naphthyl- und heteroaromatische oder substituierte heteroaromatische Gruppen. Die erste Reaktionsstufe umfaßt die Bildung des Triarylphosphoniumsalzes, das üblicherweise aus der Lösung ausfällt und abfiltriert wird. Das Triarylphosphoniumsalz wird dann in einem geeigneten flüssigen organischen Lösungsmittel gelöst, das mit Wasser nicht mischbar ^ur»d unter den Reaktionsbedingungen inert ist, beispielsweise in Chloroform, Trichlorethylen oder anderen polychlorierten oder -bromierten Methan- oder Ethanverbindungen. Die Phosphoranylverbindung wird anschließend in situ durch Behandlung dieser Lösung mit wäßrigen Alkalimetallcarbonat-bicarbonat, oder -hydroxid bei Raumtemperatur hergestellt. Die organische Schicht, die die Phosphoranylverbindung enthält, wird abgetrennt, mit Wasser gewaschen und in üblicher Weise getrocknet. Anschließend gibt man zu der trockenen Lösung der Phosphoranylverbindung die im Reaktionsschema aufgeführte Carbonylverbindung. Der letzte Reaktionsschritt erfolgt dann bei Raumtemperatur in relativ kurzer Zeit oder während ungefähr 2 bis

20 Stunden. Das gewünschte Produkt der Formel

3
QCH=CHR wird anhand bekannter Laborverfahren, wie Chro-

25 matographie an einer Silikagelsäule gewonnen.

Die in Schema 1 angegebenen Halogenidverbindungen der Formel QCH„X werden aus den entsprechenden 7-Amino- oder 7-Acylamino-3-hydroxymethy1-ceph-3-em-4-carbonsäurederigO vaten anhand im Prinzip bekannter Verfahren gewonnen.

Die Umwandlung der Halogenidverbindung der Formel R CH-X in die Phosphoranylverbindung gemäß Schema 2 kann mit der entsprechenden Chlorid-, Bromid- oder Jodidverbindung (X=Cl, Br, oder J) erfolgen. Gewünschtenfalls kann die Chlorid- oder Bromidverbindung wie oben beschrie-

M/24 279 -3\3-

ben in die jodidverbindung überführt werden, dieser Schritt ist jedoch nicht wesentlich. Die Umsetzung mit dem Triarylphosphin, wie Triphenylphosphin, wird entweder ohne Lösungsmittel oder in einem organischen flüssigen Träger, der unter den Reaktionsbedingungen inert ist, durchgeführt. Die Reaktion kann bei Raumtemperatur oder erhöhten Temperaturen während 1 bis 24 Stunden bei 20 bis 15O⁰C erfolgen. Das Triarylphosphoniumsalz fällt üblicherweise aus und wird abfiltriert. Es wird anschließend in einem geeigneten flüssigen organischen Lösungsmittel, wie Dimethylsulfoxid oder einem Lösungsmittel, das mit Wasser nicht mischbar ist, wie Äther,

15 oder Tetrahydrofuran, gelöst und mit einer Base, wie

Butyllithium, Phenyllithium, Natriummethoxid oder Natriumhydrid während eines Zeitraumes von einigen Minuten bis zu einigen Stunden bei einer Temperatur im Bereich von -40⁰C bis +5O⁰C behandelt. Anschließend gibt man zu der

20 trockenen Reaktionslösung die Carbonylverbindung und

läßt bei -4O⁰C bis +5O⁰C eine bis mehrere Stunden reagieren. Das gewünschte Produkt der Formel

25 ^R

wird wie oben beschrieben, gewonnen.

Die Reaktionsfolge gemäß Schema 1 eignet sich besonders gO zur Herstellung derjenigen Verbindungen der Formel

QCH=CIIR³, worin R³ für Niedrigalkyl, Phenylalkyl, Naphth alkyl, Halogenalkyl oder Alkoxyalkyl mit cis-(Z)-Konfiguration steht. In einer als Verfahren A bezeichneten Variation der Reaktionsfolge gemäß Schema 1 wird Q5 7ß-[-[a(N-t-Butoxy-carbonylamino)-α-(ρ-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-chlormethyl-3-cephem-4-carbonsäure als

M/24 279 -3M-

Halogen lötverbindung verwendet. Dieses Verfahren wird anhand der Beispiele 4, 5 und 6 erläutert.

Eine weitere, dem Verfahren A ähnliche Variation der Reaktionsfolge gemäß Schema 1 besteht darin, daß man 7ß-[a-(N-t-Butoxycarbonylamino)-a-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-chlormethy1-3-cephem-4-carbonsäurebenzhydrylester als Ausgangsmaterial verwendet, aber in dieser als Verfahren B bezeichneten Reaktion setzt man Chloracetaldehyd ein, um die blockierte 7-Aminocephalosporansäure mit der 3-Chlor-l-propen-l-yl-Gruppe in 3-Stellung herzustellen. Diese letztere Verbindung besitzt antibakterielle Aktivität, wenn auch keine hervorragende. In Verfahren B verwendet man die 3-Chlor-l-propen-l-yl-Verbindung als Zwischenprodukt und überführt sie zuerst in die entsprechende 3-Jod-1-propen-l-yl-Verbindung, die dann wiederum mit einem heteroaromatischen Thiol zu den 3-Heteroarylthioprop-l-en-l-yl-cephalosporinderivativen umgesetzt wird.

Eine weitere Variation der Reaktionsfolge gemäß Schema wird als Verfahren C bezeichnet. Dabei stellt man, wie oben beschrieben, den 7-Amino-3-chlormethyl-3-cephem-4-carbonsäurebenzhydrylester her und schützt die 7-Aminogruppe durch Umsetzung mit Benzaldehyd, wobei man die Benzyliden-Schutzgruppe erhält.

letztere Verbindung wird dann durch Behandlung mit Triphenylphosphin in das Phosphoniumsalz überführt, das anschließend mit einer Base in die entsprechende Phosphoranylverbindung umgewandelt wird. Diese behandelt man mit einem Aldehyd, wobei man die 3-substituierte Vinyl-7-aminocephalosporansäure erhält, die dann zur Einführung der gewünschten Acylgruppe in 7-Stc.llung acylierl. worden kann.

M/24 279 -^5-

Von der Reaktionsfolge gemäß Schema 2 werden 2 Variationen vorgeschlagen. Gemäß der ersten, dem Verfahren D, stellt man, wie oben beschrieben, die 3-Hydroxymethyl-7-phenylacetamido-3-cephem-4-carbonsäure her, wobei die Carbonsäure als Benzhydrylester geschützt wird und in die entsprechende 3-Formy!verbindung überführt wird. Diese läßt man dann, gemäß Schema 2, mit der aus der Halogenidverbindung der Formel R CH-X erhaltenen Phosphoranylverbindung reagieren und führt die gewünschte 7-Acylaminogruppe mittels Acylaustausch ein.

Das Verfahren E ist eine weitere Variation des Reaktions-Schemas 2, wobei die blockierte 7-p-Hydroxyphenylglycylamido-3-formyl-3-cephem-4-carbonsäure als Carbonylverbindung verwendet wird.

Die 7-Phenylacetamidocephalosporansäure ist ein geeignetes Ausgangsmaterial, weil sie leicht verfügbar ist. Die Acetoxygruppe kann leicht enzymatisch unter Verwendung von Weizenkleie als Enzymquelle zur 7-Phenylacetamido-3-hydroxymethy1-ceph-3-em-4-carbonsSure hydrolysiert werden. Die Carbonsäuregruppe kann in Form des Benzhydrylesters geschützt werden, den man durch Behandlung der Säure mit Diphenyldiazomethan erhält. Der Ester wird dann mit Phosphorpentachlorid unter bekannten Reaktionsbedingungen behandelt, was zu einer Spaltung der 7-Phenylacetylgruppe und Umwandlung der 3-Hydroxmethylgruppe in eine 3-Chlormethylgruppe führt. Die Herstellung des 7-Amino-3-chlormethyl-3-cephem-4-carbonsäurebenzhydrylesters gemäß diesen Verfahren ist in den Beispielen 1 und 2 erläutert.

Alternativ kann die 7-Phenylacetamido-3-hydroxymethylceph-3-em-4-carbonsaure in die 3-Halogenmethy!verbindung und

M/24 279 -3ξ-

anschließend in die Phosphoranylverbindung überführt werden. Daran anschließend erfolgt die Umsetzung mit einem Aldehyd zur Herstellung des substituierten 3-Vinylcephalosporins gemäß einer der Varianten des Reaktionsschemas 1.

Der dephalosporin-3-carboxaldehyd der Formel QCH=O, der IQ als Carbonylverbindung in Reaktionsschema 2 verwendet

wird, wird durch Oxidation eines V-Acylamino-3-hydroxymethyl-ceph-3-em-4-carbonsäureesters, wie in der erwähnten US-PS 3 351 596 beschrieben, hergestellt. Das Reaktionsschema 2 beschreibt den weniger bevorzugten Synthejg seweg und scheint nicht zur Herstellung der Propenylverbindungen der Formel XIII geeignet zu sein.

Die Verbindungen der Formel QCH-CHR existieren in der cis(Z)- und trans (E)-Konfiguration. Bevorzugt sind die

2Q Verbindungen mit eis (oder Z)-Konfiguration. Sie besitzen eine größere antibakterielle Aktivität als die entsprechenden Verbindungen mit trans (oder E)-Konfiguration. Die Verbindungen der Formel XIV sind als Zwischenprodukt brauchbar für die Herstellung weiterer Cephalosporine der Formel QCH=CHR , worin R' eine Methylengruppe bedeutet, die mit einem nukleophilen Rest substituiert ist, wie einer Mercapto-, Alkylmercapto-, Arylmercapto- oder Heteroarylmercaptogruppe, z.B. einer 1,2,3-Triazol-5-yl-mercapto und 2-Methyl-6-pyridinylmercaptogruppe. Dieses

2Q Verfahren wird in Beispiel 20 erläutert. Die Jodmethylverbindungen sind die bevorzugten Zwischenprodukte für die nukleophilen Substitutionsreaktionen .

M/24 279 -3<7-

Das Schema 1 umfaßt auch die Herstellung einer Verbindung der Formol XIV, wobei man die entsprechende Carbonylverbindung der Formel XAIkCHO anstelle der dargestellten R CHO-Verbindung verwendet.

M/24 279

-36-

10 15

25

Beispiel 1

Benzhydryl^-hydroxymethyl^ß-phenylacetamido^-cephem-4-carboxylat (Verbindung 1)

Zu einer Suspension von Weizenkleie (20 g, trocken) in Phosphatpuffer (pH 7_t 162,5 ml) gibt man unter Rühren bei Raumtemperatur 7-Phenylacetamidocephalosporansäurenatriumsalz (5 g; 12,1 mMol) in einer Portion. Der Verlauf der Reaktion wird mittels HPLC bis zur vollständigen Hydrolyse verfolgt (5 h). Die Suspension wird zur Entfernung der Weizenkleie filtriert und das Filtrat auf 5 bis 10⁰C zur extraktiven Veresterung gekühlt. Zu der gekühlten Lösung gibt man Methylenchlorid (32 ml) und anschließend eine 0,5 M Lösung von Diphenyldiazomethan in Methylenchlorid (24 ml). Der pH wird mit 28%iger Phosphorsäure dann auf 3,0 eingestellt. Nach 1 h läßt man die Temperatur der Reaktionsmischung auf 20⁰C steigen. Man gibt Heptan (56 ml) langsam zu und isoliert die erhaltene, kristalline Titelverbindung durch Filtration. Die Ausbeute beträgt 3,0 g (50%).

Beispiel 2

Benzhydryl-7ß-amino-3-chlormethyl-3-cephem-4-carboxylat (2)

30

COOCH(Ph)j

35

• * % ft

M/24 279

Zu einer Aufschlämmung von PCl₅ (8,3 g; 40 mMol) in CH₂Cl₂ (1000 ml) gibt man Pyridin (3,2 g; 40 mMol) und rührt die Mischung 20 min bei 20⁰C. Zu dieser Mischung gibt man auf ein Mal unter Rühren bei -40⁰C Benzhydryl-3-hydroxymethyl-7-phenylacetamido-3-cephem-4-carboxylat (1) (5,1 g; 10 mMol). Die Mischung rührt man 15 min bei -10⁰C und läßt sie dann 7 h bei -10 bis -15⁰C stehen.

Zu der gekühlten Lösung (1-20⁰C) gibt man Propan-1,3-diol (10 ml) und läßt die Mischung 16 h bei -20⁰C und anschließend 20 min bei Raumtemperatur unter Rühren stehen. Die erhaltene Lösung wird mit Eis-Wasser (2 χ 20 ml) und gesättigter, wäßriger NaCl (10 ml) gewaschen, über MgSO₁^ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Den gummiartigen Rückstand (12 g) löst man in einer Mischung von CHCl₁, und n-Hexan (2:1) und chromatographiert ihn an einer Kieselgelsäule (200 g), wobei man das gleiche Lösungsmittel als Eluierungsmittel verwendet. Diejenigen Fraktionen, die die Titelverbindung enthalten, verdampft man im Vakuum. Der Rückstand wird mit η-Hexan verrieben, wobei man das Produkt 2 (2,1 g; 51%), Fp. 110⁰C (Zers.), erhält.

25 IR: 0_KBv 3400, 2800, 1785, 1725cm"¹

NMR:6 DMS0-d₆ + CDCl, ppm

3,69 (2H, s), 4,43 (2H, s), 5,09 (1H, d, J=4,5 Hz), 5,24 (1H, d, J=4,5 Hz), 6,87 (1H, s), 7,3(10H, m).

Beispiel 3

Benzhydryl-7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-chlormethyl-3-cephem»4-carboxylat (Verbindung 3)

Μ/24 279

CH₀Cl

Zu einer Mischung von 20,7 g (0,05 Mol) Benzhydryl-7-amino-3-chlormethyl-3-cephem-4-carboxylat (2) und 20 g (0,075 Mol) D-2-(t-Butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxyphenyl)-essigsäure in 500 ml trockenem Tetrahydrofuran (THF) gibt man 15,45 g (0,075 Mol) N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) und rührt die Mischung 2 h bei Raumtemperatur und verdampft dann zur Trockene. Den Rückstand löst man in 1 1 Ethylacetat (AcOEt) und filtriert den unlöslichen Dicyclohexylharnstoff ab. Das Filtrat wird mit wäßriger Natriumbicarbonatlösung, Wasser und gesättigter, wäßriger Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und die Lösung zur Trockene eingedampft. Der ölige Rückstand wird an; einer Kieselgelsäule (Wako gel C-100, 500 g) chromatographiert, wobei man mit 4 1 Chloroform und 6 1 1tigern Chloroform-Methanol eluiert. Die gewünschten Fraktionen werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Der ölige Rückstand wird mit Ether-Isopropylether verrieben, wobei man 30,6 g (92%) der Verbindung (3) erhält.

IR: ^ 5^ cm"¹ 1790, 1710, 1670, 1500, 1360, 1230, 1150

NMR:6^CdC13 ppm 1,45 (9H, s, C-CH₅), 3,4 (2H, br.s, 2-H), 4,28 (2H, s, CH₂Cl), 4,86 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,12 (1H, d, 6 Hz, CH-CO), 5,68 (1H, dd, 8 und 4,5 Hz, 7-H), 6,63 (2H, d, 9 Hz, Phenyl-H), 6,93 (1H, s, CH-Ph₂), 7,08 (2H, d, 9 Hz, Phenyl-H), 7,0-7,5 (1OH, m, Phenyl-H).

if * *

Μ/24 279 -²M-

Der ölige Rückstand kann ohne weitere chromatographische Reinigung in Beispiel 4 eingesetzt werden.

Beispiel 4

Benzhydryl-7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxyphenyl) -acetamido ]-3-oodiöe"thyl-3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 4)

Eine Mischung von 26,6 g (0,04 Mol) 3. und 18 g (0,12 Mol) Natriumiodid in 400 ml Aceton wird 2 h bei Raumtemperatur gerührt und zur Trockene eingedampft. Den Rückstand extrahiert man mit 400 ml Ethylacetat und wäscht den Extrakt mit wäßriger Na₂S₂0,-Lösung, Wasser und gesättigter, wäßriger NaCl-Lösung. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels verreibt man den Rückstand mit Ether-Isopropylether, wobei man 27 g (89%) der Titelverbindung erhält. Falls gewünscht, kann die Ethylacetatlösung direkt in der nächsten Stufe (Verbindung 5) ohne Isolierung der Verbindung 4 eingesetzt werden.

IR: v^ K?£ cm"¹ 1790, 1710, 1670, 1500, 1360, 1220, 1150

IUgL λ

NMR:<5^CDC13 ppm 1,47 (9H, s, C-CH₃), 3,3-3,6 (2H,m,2-H), 4,20 (2H, s, CH₂), 4,89 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,12 (1H, d, 6 Hz, CH-CO), 5,68 (1H, dd, 8 und 4,5 Hz, 7-H), 6,62 (2H, d, 9 Hz, Phenyl-H), 6,92 (1H, s, CHPh₂), 7,08 (2H, d, 9Hz, Phenyl-H),

30 7-7,5 (10H, m, Phenyl-H).

Beispiel 5

Benzhydryl-7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-(triphenylphosphonio)-methyl-3^cephem-4-carboxYlat-.iodid (Verbindung 5)

It » ·

Μ/24 279 -$E-

CHCONH I NH

CO₂C(CH₃)

CH₂P (C₆H₅)

CO₂CH

Eine Mischung von 15,1 g (0,02 Mol) 4 und 15,7 g (0,06 Mol) Triphenylphosphin in 200 ml Ethylacetat rührt man 1 h bei Raumtemperatur. Der erhaltene Niederschlag wird abfiltriert, wobei man 17,4 g (85,5%) 5, mit einem Schmelzpunkt von 170 bis 180°C erhält. Das Filtrat wird auf 100 ml eingeengt und das Konzentrat mit 500 ml Ether verdünnt, wobei man eine zweite Fraktion (1,1 g) 5_ erhält. Die Gesamtausbeute beträgt 18,5 g (91%). Die Gesamtausbeute an 5, ausgehend von Verbindung 2, beträgt 74,5%. Diese Ausbeute kann auf 87,5% gesteigert werden, wenn man die Reinigungs- und Isolierungsstufen, wie oben angegeben, wegläßt.

^IR:^max ^cm~^{1 178}°» ¹⁶⁷°» ¹⁴⁹°» ^{i42Of 135O> 1240>} 1150, 1090

NMR:S ^DMS0 ppm 1,42 (9H, s, C-CH₃), 3,45 (2H, br.s,2-H), 5-5,4 (3H, m, 3-H und 6-H), 5,7 (1H, m, 7-H), 6,63 (2H, d, 9Hz, Phenyl-H), 7,1-7,45 (12H, m, Phenyl-H), 7,5-7,9 (15H, m, Phenyl-H)

Elementaranalyse: für Cc₂H₄QN₃O₇SPJ berechnet: C 61,36% H 4,85% N 4,13% S 3,15% gefunden : 61,26 4,82 4,11 3,92

M/24 279 -43-

B e i s V i e 1

Benzhydryl~7ß~[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxy phenyl)-acetamido]-3-[(Z)-I-propen-1-yl]-ceph-3-em-4-carboxylat (Verbindung 6)

10 I

CO₂C(CH₃)₃

Zu einer Lösung von 1,8 g (1,77 mMol) £ in 100 ml Chloroform gibt man 100 ml Wasser, das 2 ml (2 mMol) N Natriumhydroxid enthält, und schüttelt die Mischung 5 min. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet.

Die Chloroformlösung wird filtriert und das Filtrat unter vermindertem Druck auf 50 ml eingeengt. Zu dem Konzentrat gibt man 1 g Acetaldehyd und rührt die Mischung 2 h bei Raumtemperatur und verdampft anschließend zur Trockene. Der ölige Rückstand wird an einer Silikagelsäule (Wako-gel C-200, 50 g) chromatographiert, wobei man mit Chloroform und Chloroform-Methanol (99:1) eluiert. Die gewünschten Fraktionen werden vereinigt und das Lösungsmittel verdampft, wobei man 318 mg (28%) der Verbindung 6, Fp. 120 bis 130°C (Zers.), erhält.

IRi^Si cm"¹ 1780, 1670, 1710, 1490, 1360, 1210, 1150

NMRrS ^CDC13 pp_m 1,3-1,5 (12H, m, C-CH₅), 3,22 (2H, br.s,

2-H), 4,90 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,15 (1H, br.d, CH-CO), 5»5-6,1 (3H, m, CH=CH und 7-H), 6,63 (2H, d, 9 Hz, Phenyl-H), 6,91 (1H, s, CH-Ph), 7,09 (2H, d, 9 Hz, Phenyl-H), 7,2-7,5(10H, m,Phenyl-H).

Μ/24 279

Beispiel

Natrium-7ß-[D-2~amino-2-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-[(Z)-1-propen-1-yl]-3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 7, EMY-28100 Natriumsalz)

CHCONH I

10 ^NH2 /Γ- ¹V^ CH=CHCH₃

COOH

Eine Mischung von 318 mg (0,48 mMol) 6 und 2,5 ml Trifluoressigsäure (TFA) wird 1 h bei Raumtemperatur gerührt und anschließend mit 50 ml Ether und 50 ml Isopropylether verdünnt. Der abgeschiedene Niederschlag wird abfiltriert und mit Ether gewaschen, wobei man 188 mg (77%) des Trifluoracetats von J. erhält, das in 2 ml Methanol (MeOH) gelöst wird. Zu dieser Lösung gibt man 2 ml (2 mMol) einer Lösung von Natrium-2-ethylhexanoat (SEH) in Ethylacetat und verdünnt die Mischung mit 30 ml Ethylacetat, um den Niederschlag abzuscheiden. Der Niederschlag wird abfiltriert, mit Ether gewaschen und im Vakuum über P0O5 getrocknet, wobei man 144 mg (73%, bezogen auf Verbindung 6) an roher Verbindung 7 erhält. Das Rohprodukt (135 mg) löst man in 10 ml Wasser und chromatographiert die Lösung an einer Säule (25 mm χ 100 mm) unter Verwendung von etwa 20 ml PrepPak-500/C.g (Waters) als Füllmittel. Die Säule wird mit Wasser eluiert, das Eluat, das das gewünschte Produkt enthält, wird auf 5 ml konzentriert und lyophilisiert, wobei man 93 mg (69%) der Verbindung 7, Fp. 200°C (allmähliche Zers.), erhält. Die geschätzte Reinheit beträgt 6096

35 (mittels HPLC).

, e * « β ι

M/24 279 -A6-

: ν) 5?ϊ cm"¹ 1760, 1660, 1590, 1400, 1360, 1250

^{i /λ} ^°^{Sphatpuf f er ρΗ 7} nm (t ) 227 (11300) ,280(8200)

NMR:^^D2° ppm 1,65 (3H, d, 6 Hz, -C-CH₃), 3,21 (1H, d, 18 Hz, 2-H), 3,52 (1H, d, 18 Hz, 2-H), 5,12 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,68 (1H, d, 4,5 Hz, 7-H),

5,5-5,9 (1H, m, Vinyl-H), 5,95 (1H, d, 11,5 Hz, Vinyl-H), 6,94 (2H, d, 8 Hz, Phenyl-H), 7,36 (2H, d, 8 H7, Phenyl-H).

15 Beispiel 8

7ß-[D-2-Amino-2-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-[(E)-I-propen-1-yl]-3-cephem-4-carbonsäure (Verbindung 8, BB-S1067)

Man löst 11,9 g des gemäß Beispiel 7 hergestellten Rohproduktes 7 in dem Zustand, in dem es sich vor der chromatographischen Reinigung befindet, in 50 ml 0,01 M Phosphatpuffer (pH 7,2)-Methanol (85:15) und stellt mit 6N Chlorwasserstoffsäure den pH der Lösung auf 6 ein.

Diese Lösung wird mittels Hochdruck-Flüssigkeitschromatographie (HPLC)(prepPAK-500/C₁₈, System 500, Waters) unter Verwendung eines 0,01 M Phosphatpuffers (pH 7,2), der "\5% Methanol enthält, behandelt. Das Eluat wird mittels analytischer HPLC untersucht, wobei festgestellt

30 wird, daß die erste 4 1-Fraktion das cis-Isomer BMY-

28100 enthält. Die zweite 1 1-Fraktion enthält das transisomer und wird auf 500 ml eingeengt. Das Konzentrat stellt man mittels verdünnter Chlorwasserstoffsäure auf pH 3 ein und chromatographiert es an einer HP-20 Säule (100 ml) und eluiert mit jeweils 1 1 Wasser und 30%igem

Μ/24 279 -46-

Methanol. Das letztere Eluat mit einem Volumen von ungefähr 300 ml wird auf 10 ml eingeengt und lyophilisiert, wobei man 290 mg des rohen trans-Isomeren (55% Reinheit) erhält. Dieses Material wird in 100 ml 5O90igem Methanol gelöst und mit Aktivkohle behandelt. Das FiI-trat engt man auf ein Volumen von 20 ml ein und läßt es über Nacht bei 5⁰C stehen. Das Produkt kristallisiert in Form farbloser Prismen, die abfiltriert und im Vakuum get:
(Zers.).

kuum getrocknet werden. Man erhält 129 mg, Fp. 230⁰C

IR: \? ^ cm"¹ 1760, 1680, 1590, 1550, 1520, 1450, 1390, 1350, 1240

_m. _Λ Phosphatpuffer (pH7)_{m(£) 228 (13}ooo), 292 (16900)

NMR:o^D2^0+Na2^C03 ppm 1,89 (3H, d, 6 Hz, C=C-CH₃),

3,60 (2H, s, 2-H)₁ 5,13 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,20 (1H, s, CH-CO), 5,68 (1H, d, 4,5 Hz, 7-H), 5,99 (1H, dq, 16 und 6 Hz), 6,54 (1H, d, 16 Hz), 6,98 (2H, d, 9 Hz, Phenyl-H), 7,41 (2H, d, 9 Hz,

25 Phenyl-H).

Beispiel 9

Kristalline 7ß-[D-2-Amino-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-[(Z)-1-propen-1-yl]-3-cephem-4-carbonsäure (Verbindung 9. BMY-28100)

Die erste 4 1-Fraktion, die gemäß dem in Beispiel 8 beschriebenen präparativen HPLC-Verfahren erhalten wurde und die das cis-Isomer (BMY-28100) enthält, wird auf ein Volumen von 2 1 eingeengt. Den pH des Konzentrats stellt

* fr # it ti t

M/24 279

man mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure auf 3 ein· Die Lösung gibt man auf eine HP-2O (11) enthaltende Säule und wäscht die Säule mit 6 1 Wasser, Ms der pH der ablaufenden Flüssigkeit 7 beträgt. Die Säule wird dann mit 4 1 30%igem wäßrigem Methanol eluiert. Das Eluat wird mittels HPLC untersucht. Die entsprechenden Fraktionen werden vereinigt (etwa 2,5 1) und bei einer Temperatur von weniger als 40⁰C und bei verringertem Druck auf 50 ml eingeengt. Es bildet sich ein kristalliner Niederschlag. Das Konzentrat kühlt man 2 h auf O⁰C und filtriert den kristallinen Niederschlag ab, wäscht ihn mit 80%igem wäßrigem Aceton, anschließend mit 100%igem Aceton und trocknet ihn dann im Vakuum über P₂°5» ^{wobei man} 4,09 g der reinen, kristallinen, angestrebten Verbindung, Fp. 218 bis 220⁰C (Zers.), in Form farbloser Prismen erhält, die gemäß HPLC-Untersuchung eine Reinheit von 95% aufweisen.

I^R: ^ Si ^cm~¹ 1750, 1680, 1560, 1520, 1460, 1390, 1350, 1270, 1235

^{(pH 7)} nm ( i) 228 (12300), 25 279 (9800)

NMR: (5^D2^O+NaHCO3 ppm 1,71 (3H, d, 6 Hz, C-CH₃), 3,27 (1H, d, 18 Hz, 2-H), 3,59 (1H, d, 18 Hz, 2-H), 5,18 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H),5,22 (1H, s, CHCO), 5,73 (1H, d, 4,5 Hz, 7-H), 5,5-6,0 (1H, m, CH=C), 6,02 (1H, d, 11 Hz, CH=C), 6,98 (2H, d, 9 Hz, Phenyl-H), 7,41 (2H, d, 9 Hz, Phenyl-H) Elementaranalyse: für C₁₈H₁^N₃O₅S.

berechnet: C 54,26% H 5,06% N 10,55% S 8,05%

³⁵ gefunden : 54,15 5,13 10,30 8,38

54,19 5,08 10,42 8,04

ft 1 *· f 4

M/24 279

Die nach der Kristallisation erhaltene Mutterlauge wird auf ein Volumen von 10 ml eingeengt und mit 20 ml Aceton behandelt. Beim Aufbewahren der Lösung über Nacht im Kühlschrank bildet sich ein kristalliner Niederschlag, der abfiltriert und im Vakuum über P?^5 g^e"t^rocknet wird; die Menge beträgt 670 mg (Reinheit 90% gemäß HPLC). 560 mg dieses Materials löst man in 200 ml 50%igem wäßrigern Methanol und behandelt die Lösung mit 0,5 g Aktivkohle und filtriert ab. Das Filtrat wird bei vermindertem Druck und bei 4O⁰C auf ein Volumen von 20 ml konzentriert und anschließend 5 h bei 5⁰C gehalten. Das Produkt kristallisiert, es wird abfiltriert, mit Aceton gewaschen und im Vakuum über P?^5 getrocknet, wobei man 227 mg kristallines BMY-28100 (98% Reinheit,mittels HPLC bestimmt) erhält. Lyophilisierung der Mutterlauge ergibt 181 mg BMY-28100, das eine Reinheit von 95% (HPLC) aufweist.

Beispiel 10

Diphenylmethyl-7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(phydroxyphenyl)-acetamido]-3-vinyl-3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 10)

Eine Lösung von 3 g (2,95 mMol) Benzhydryl-7-[2-(N-tbutoxycarbonylamino)-2-(ρ-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-(triphenylphosphonio) -inethyl^-cephem^-carboxylat jodid (5) in 50 ml Chloroform schüttelt man 1 min mit einer Mischung von 3 ml (3 mMol) 1N NaOH und 50 ml Wasser bei Raumtemperatur. Die organische Schicht wird nach Zugabe von gesättigter NaCl-Lösung (20 ml) abgetrennt und mit Wasser (3 x 30 ml) gewaschen. Zu der organischen Lösung gibt man unter heftigem Rühren und unter Kühlen mit Wasser 2,5 ml 35>%iges wäßriges Formaldehyd und rührt

Μ/24 279 -49-

weitere 20 min. Die organische Schicht wird abgetrennt, über wasserfreiem Na₂SO^ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Das Konzentrat gibt man auf eine Silikagelsäule, die mit CHCl₃ (600 ml) und 2% MeOH in CHCl₃ (800 ml) eluiert wird, wobei man 850 mg (4596) der Titelverbindung erhält. TLC: Rf 0,48 [Silikagel, MeOH-CHCl₃ (1:10)].
10

Beis-piel 11

7ß-[D-2-Amino-2-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-vinyl]-

3-cephem-4-carbonBäure (Verbindung 11. BB-S1064)

Eine Mischung von 850 mg (1,32 mMol) der Verbindung 10 und 5 ml 90%iger wäßriger Trifluoressigsäure (TFA) läßt man 1 h bei Raumtemperatur stehen und konzentriert auf ca. 1 ml im Vakuum. Das Konzentrat wird mit 20 ml Diisopropylether verrieben, wobei man 679 mg eines gelben Pulvers erhält, das in 3 ml Methanol gelöst und anschließend mit 30 ml Wasser verdünnt wird. Die Lösung wird über eine HP-20-Säule (50 ml) geleitet, die mit 200 ml Wasser gewaschen und mit 250 ml 3O90igem Methanol eluiert wird. Das die gewünschte Verbindung enthaltende Eluat wird konzentriert und lyophilisiert, wobei man 197 mg (31#) der Titelverbindung mit einer mittels HPLC geschätzten Reinheit von 60% und mit einem Schmelzpunkt von 190⁰C (Zers.) erhält.

30 IR: ^ 5Ϊ cm""¹ 1760, 1680, 1615-1570, 1520

⁷> nm(eJ 228(13500),283(14400)

NMR:cT^D2° ppm 3,6 (2H, s, SCH₂), 5,51 (1H, d, 5Hz, 6-H), 5,73 (1H, d, 5 Hz, 7-H), 7,03 (2H, d, 8 Hz, Phenyl-H), 7,45 (2H, d, 9 Hz, Phenyl-H).

M/24 279

Beispiel 12

Diphenylmethyl-7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(phydroxyphenyl)-acetamido]-3-[(Z)-1-buten-1-yl]-3-ceph- em-4-carboxylat (Verbindung 12)

Eine Lösung von 3 g (2,95 mMol) der Verbindung 5 in 50 ml CHCl, vermischt man mit einer Mischung aus 3,2 ml (3,2 mMol) 1N NaOH und 50 ml Wasser und schüttelt die Mischung 3 min bei Raumtemperatur. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Wasser (3 x 30 ml) und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen und über wasserfreiem Na₂SO^ getrocknet. Zu dieser Lösung gibt man 1,71 g (29,5 mMol) Propionaldehyd. Die Mischung wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und bei vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wird auf eine Silikagelsäule gegeben, die mit 1 bis 2%igem Methanol in CHCl₃ eluiert wird. Diejenigen Fraktionen, die einen Fleck bei Rf 0,30 (TLC, MeOH-CHCl, = 1:10) zeigen, werden vereinigt und verdampft, wobei man 1,08 g (55%) der Titelverbindung erhält.

IRs^S^ cm*"¹ 1780, 1680, 1500. 25

Beispiel 13

Natrium-7ß-[D-2-amino-2-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-[(Z)-I-buten-1-yl]-3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 13, BB-S1058 Natriumsalz) .

Eine Lösung von 1,08 g (1,61 mMol) Verbindung 12 in 11 ml TFA, das 1% Wasser enthält, läßt man 1 h bei Raumtemperatur stehen. Die Mischung engt man im Vakuum auf etwa 2 ml ein und verreibt den erhaltenen Sirup mit etwa 20 ml Diisopropylether, wobei man 796 mg eines gelben

• · β <

Μ/24 279 -^l -

Pulvers erhält. Das Pulver löst man in 3 ml Methanol und behandelt die Lösung mit 3 ml 0,8 M SEH in Ethylacetat (AcOEt), wobei sich ein Niederschlag bildet, der abfiltriert, mit Diisopropylether gewaschen und in 5 ml Wasser gelöst wird. Die Lösung wird auf eine Säule gegeben, die mit prepPAK-500/C_1Q (Waters) gefüllt ist. Die Säule wird dann mit Wasser gewaschen und nacheinander mit 10%igem Methanol, 20%igem Methanol und 30%igem Metha-. nol aluiert. Die gewünschten Fraktionen (verfolgt mittels HPLC) werden vereinigt, konzentriert und lyophilisiert, wobei man 118 mg (9,4%) der Titelverbindung mit einer geschätzten Reinheit von 55% (mittels HPLC) erhält. Diese Verbindung färbt sich dunkel, wenn man sie in einer Glaskapillare auf >180°C erhitzt.

^cm~^{1 1}?55, ¹⁶⁶°» ¹580

20 W: α Phosphatpuffer (pH7)_{m(g) 228 (1O9}oo), 278 (7200)

NMR:r5^D2° ppm 0,81 (3H, t, 7,5 Hz), 1,7-2,2 (2H, m),

3,25 (2H, ABq), 5,01 (1H, d, 5 Hz), 5,50 (1H, dt, 7,5 und 12 Hz), 5,58 (1H, d, 5 Hz), 5,78 (1H,

d, 12 Hz), 6,86 (2H, d, 8 Hz), 7,26 (2H, d, 8 Hz)

Beispiel 14

Diphenylmethyl-7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(phydroxyphenyl)-acetamido]-3-[(Z)-3-phenyl-1-propen-1- yl ]-3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 14)

Eine Lösung von 3 g (2,95 mMol) Verbindung 5 in 50 ml CHCl-, schüttelt man 1 min mit einer Mischung aus 3,2 ml (3,2 mMol) 1N NaOH und 50 ml Wasser. Die organische

M/24 279 -52-

Schicht wird nach Zugabe einer gesättigten NaCl-Lösung (20 ml) abgetrennt, mit Wasser (3 χ 30 ml) und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen und über wasserfreiem Na₉SO. getrocknet. Zu dieser Lösung gibt man dann 7,2 g (30 mMol) 5O$6igen Phenylacetaldehyd und rührt die Mischung über Nacht bei Raumtemperatur. Die Reaktionsmischung engt man dann im Vakuum ein und reinigt das Konzentrat an einer Silikagelsäule (75 g) unter Verwendung von 196 MeOH/CHClj, wobei man 800 mg (3796) der Titelverbindung erhält. Dünnschichtchromatographie (TLC): Rf 0,33 (Silikagel, MeOH-CHCl, 1:10); IR (KBr): 1780, 1710-1680 cm"*".

Diese Verbindung wird ohne weitere Reinigung in Beispiel 15 eingesetzt.

Beispiel 15

7ß-[D-2-Amino-2-(ρ-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-[(Z)-3-phenyl-1-propen-1-yl]-3-cephem-4-carbonsäure (Verbindung 15. BB-S1O76)

Eine Lösung von 800 mg (1,09 mMol) Verbindung 14 in 4 ml 9O$6iger TFA läßt man 2 h stehen. Die Reaktionsmischung konzentriert man und verreibt das Konzentrat mit Diisopropylether, wobei man 490 mg eines gelben Pulvers erhält. Eine Lösung des Pulvers in 2 ml Methanol vermischt man mit 20 ml Wasser und gibt die Mischung auf eine HP-20-Säule (50 ml), die mit Wasser (250 ml) gewasehen und nacheinander mit 30%igem Methanol (250 ml) und 75%igen Methanol (300 ml) eluiert wird. Das Eluat mit 75%igem Methanol wird eingeengt und lyophilisiert, wobei man 302 mg des Rohproduktes erhält, das in 10 ml 75%igem Methanol gelöst und an einer Säule unter Verwendung von PrepPAK-500/C₁₈ (Waters) (80 ml) als Füllung

Μ/24 279 -5%3-

chromatographiert wird. Eluierung der Säule mit 75%igem Methanol ergibt 158 mg (31%) des gewünschten Produktes. Die geschätzte Reinheit (mittels HPLC) beträgt 65%. Das Produkt färbt sich dunkel, wenn man es in einem Kapillarröhrchen > 175⁰C erhitzt.

IR: ν/ £?£ cm"¹ 1760, 1680, 1600-1580, 1520

^: λ «weP^P^·¹·*¹- ^P" η nm ( £ ) 280 (8900) max

Jj₁₁J₁. _ό W^w-D₆Zb₂O (5/1) _{ppm 4>45}

4,87 (1H, s, CHND₂), 6,7 (2H, d, 9 Hz, Ph), 15 6,9-7,5 (7H, m, Ph).

Beispiel 16

Diphenylmethyl-7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(phydroxyphenyl)-acetamido]-3-[(Z)-3-methoxy-i-propen-1-yl ]-3-cer>hem-4-carboxvlat (Verbindung 16)

Eine Lösung von 3,0 g (2,95 mMol) Verbindung 5 in CHCl, (100 ml) behandelt man mit einer Mischung aus 2N NaOH (1,8 ml) und Wasser (100 ml) 5 min bei Raumtemperatur.

Die organische Phase wird abgetrennt, mit Wasser (50 ml) und wäßriger NaCl-Lösung (50 ml) gewaschen, getrocknet und auf ca. 10 ml eingeengt. Die erhaltene, rote Ylid-Lösung wird 15 min bei Raumtemperatur mit Methoxyacetaldehyd (1,3 ml; 15 mMol) behandelt. Nach dem Abziehen des Lösungsmittels wird der Rückstand an einer Silikagelsäule (100 g) unter Verwendung von Toluol-AcOEt (3:1 und 1:1) als Eluierungsmittel chromatographiert, wobei man die Titelverbindung erhält (750 mg;

M/24 279 -54-

NMR:<5 ^CDC13^+D2° ppm 1,45 (9H, s, t-Bu), 3,15 (3H, s, OCH₃), 3,27 (2H, s, 2-CH₂), ca.3,5 (2H, m, -CH₂-OMe), 4,90 (1H, d, 5,0 H7, 6-H), 5,12 (1H,

s, -CH-ND-), ca.5,5 (1H, m, =CH-CH₂-), 5,72 (1H, d, 7-H), 6,18 (1H, d, 12 Hz, -CH=CH-CH₂-), 6,65 und 7,10 (jeweils 2H, jeweils d, HO-Hi-), 6,90 (1H, s, -CHPh₂), 7,3 (10H, s, Ph). 10

Beispiel 17

7ß-[ D-2-Amino-2-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-[(Z)-3-methoxy-1-propen-1-yl]-3-cephem-4-carbonsäure, Verbindung 17. BB-S1092)

Verbindung 16 wird durch 1 stündige Behandlung bei Raumtemperatur mit TFA (3 ml) deblockiert. Verdampfen des Lösungsmittels und anschließendes Ausfällen aus Isopropylether ergibt das Trifluoracetat, das mittels HP-'20-Säulenchromatographie gereinigt wird. Die Säule wird mit H₂O (500 ml) gewaschen und mit 30%igem MeOH (500 ml) eluiert, wobei man 350 mg (75%) des gewünschten Produktes mit einer geschätzten Reinheit von 90% (mittels HPLC), Fp. 16O°C (Zers.), erhält.
25

^ ^Z ¹ 3400, 3180, 1760, 1680

: ^Λ *J°^sP^ha^^uffer (P^{H 7}Wi:) 228(11500),279(9400)

JuBlX

NMR:^ ^D2° ppm 3,40 (3H, s, OCH₅), 3,40 (2H, ABq, 2-CH₂), 4,0 (2H, m, -CH₂OMe), 5,19 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,25 (1H, s, -CH-ND₂), 5,77 (1H, d, 7-H), ca.5,8 (1H, m, =CH-CH₂-), 6,20 (1H, d, 11 Hz₁-CH=CH-CH₂), 7,05 \md 7,45 (jeweils 2H, jeweils d, HO-Ph-).

Μ/24 279 -56-

Beispiel 18

Diphenylmethyl-7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(phydroxyphenyl)-acetamido]~3-[(Z)-3-chlor-1-propen-1-yl]- 3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 18)

Eine Lösung aus Verbindung 5 (5,0 g; 4,9 mMol) in CHCl, (100 ml) wird 5 min bei Raumtemperatur mit einer Mischung aus 2N NaOH (2,9 ml; 5,8 mMol) und Wasser (100 ml) behandelt. Die organische Phase wird abgetrennt und mit Wasser (50 ml) und gesättigter NaCl-Lösung (50 ml) gewaschen und über wasserfreiem Na₂SO₄ getrocknet. Das Filtrat wird auf ca. 20 ml eingeengt und mit Chloracetaldehyd (2,0 ml,; 25 mMol) versetzt. Die Mischung wird 30 min bei Raumtemperatur gerührt und im Vakuum verdampft. Der sirupartige Rückstand wird an einer Silikagelsäule (100 g) unter Verwendung von Toluol-AcOEt (3/1) als Eluierungsmittel chromatographiert, wobei man die

20 Titelverbindung 18 erhält (900 mg; 27%).

NMR: 6 CDC1₃+D₂O _{ppm 1}^₄₅ (_{9H> gj t}__Bu)^ _ca#3f3 (₂h, m, 2-CH₂), 3,5-4,0 (2H, m, -CH₂-Cl), 4,92 (1H, d, 5,0 Hz, 6-H), 5,12 (1H, s, -CH-ND-), ca.5,7 (2H, m, 7-H u. =CH-CH₂), 6,15 (1H, d, 11 Hz, 3-CH=CH-CH₂-), 6,63 u.7,10 (jeweils 2H, jeweils d, HO-Ph-), 6,89 (1H, s, CHPh₂), 7,3 (IOH, s, Ph).

Die Deblockierung dieser Verbindung mit TFA gemäß den in den vorhergehenden Beispielen beschriebenen Verfahren (z.B. Beispiele 7, 11, usw.) ergibt die 7-[D-2-Amino-2-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-3~[(Z)-3-chlor-ipropen-1-yl)-3-cephem-4-carbonsäure.

M/24 279 -56-

i Gl

Beispiel 19

Diphenylmethyl-7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(phydroxyphenyl)~acetamido]-3-[(E)-3-jod-1-propen-1-yl]- 3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 19)

Eine Mischung von Verbindung 18 (900 mg; 1,3 mMol) und NaJ (590 mg; 3,9 mMol) in Aceton (18 ml) wird 1 h bei Raumtemperatur gerührt. Nach Verdampfen des Lösungsmittels löst man den Rückstand in AcOEt (100 ml), wäscht nacheinander'mit Wasser, wäßriger Na₂S₂O,- und wäßriger NaCl-Lösung, trocknet die Lösung und verdampft das Lösungsmittel, wobei man die Titelverbindung (1,02 g) er-

15 hält.

NMR:ci ^CDC13-^D2° ppm 1,45 (9H, s, t-Bu), ca.3,4 (2H, m, 2-CH₂), ca.3,8 (2H, m, -CH₂-J), 4,90 (1H, d, 5,0 Hz, 6-H), 5,14 (1H, s, -CH-ND-), 5,73 (1H, d, 7-H), ca.5,5-6,0 (1H, m, =CH-CH₂->, 6,68 u. 7,10 (jeweils 2H, jeweils d, HO-Ph-), 6,78 (1H, d, 15 Hz, 3-CH=CH-CH₂-), 6,99 (1H, s, CHPh₂), 7,35 (1H, s, Ph).

25 Beispiel 20

Diphenylmethyl-7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(phydroxyphenyl)-acetamido]-3-[3-(iH-1,2,3-triazol-5-yl)-thio-1-propen-1-ylj-3-cephem-4-carboxylat(Verbindung 20)

Zu einer Lösung der Verbindung 19 (1,0 gj 1,3 mMol) in Ethylacetat (20 ml) gibt man Propylenoxid (0,27 ml; 3,8 mMol) und 0,1 M (1H-1,2,3-Triazol-4-yl)-thiol in Ethylacetat (19 ml). Die Mischung wird 30 min bei Raumtemperatur gerührt und unter vermindertem Druck verdampft. Den sirupartigen Rückstand chromatographiert man an einer Silikagelsäule C-200 (50 g). Das gewünschte

M/24 279 -57-

Produkt wird mit CHCl,-MeOH (10:1) eluiert, wobei man 800 mg (83%) der Titelverbindung erhält. 5

WlRzS ^CDC13^+H2° ppm 1,45 (9H, s, t-Bu), ca.3,3 (4H, m, 2-CH₂- u.-CH₂-S)₁ 4,80 (1H, d, 5,0 Hz, 6-H), 5,20 (1H, s, -CH-ND-), 5,70 (1H, d, 7-H), ca.5,95 (1H, m, SCH-CH₂-), 6,68 (2H, d, HO-Ri-), 6,90 (1H, s, -CHPh₂), 7,25 (1OH, s, Ph), 7,52 (1H, s, Triazol-4-H).

Beispiel 21

7ß-[D-2-Amino-2-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-[3-(1H-1^^-triazol^-yl^thio-i-propen-i-ylj^-cephem^-car- bonsäure (Verbindung 21, BB-S1091)

Eine Mischung von Verbindung 20 (800 mg) und TFA (2 ml) wird 1 h bei Raumtemperatur gehalten und anschließend zur Trockene verdampft. Zum Rückstand gibt man Isopropylether, wobei man einen gelben Niederschlag erhält (600 mg), der in Wasser (1 ml) gelöst und auf eine HP-20-Säule (100 ml) gegeben wird. Die Säule wird mit Wasser (500 ml) gewaschen und mit 30%igem MeOH und anschließend mit 50%igem MeOH eluiert. Die Fraktionen, welche die gewünschte Verbindung enthalten, werden vereinigt, verdampft und lyophilisiert, wobei man 170 mg (33%) des gewünschten Produktes mit einer geschätzten Reinheit von 50% (mittels HPLC), Fp. 180⁰C (Zers.), er-

30 hält.

IR: v? ™£ cm"¹ 3360, 3280, 1755, 1670 . _χ Phosphatpuffer _{nm (e)235} ^₄₁₀₀), 252 (123ΟΟ)

Μ/24 279

NMR: & ^⁰⁺⁰⁰¹ ppm ca. 3,4 (4H, m, 2-CH₂-, -CH₂-S-), 5,43 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,15 (1H, s, -CH-ND₂), ca.6,0 (2H, m, 7-H und =CH-CH₂-), 6,70 u. 7,15

(jeweils 2H, jeweils d, HO-Ph-), 8,05 (1H, s, Triazol-4-H).

Beispiel 22

Benzhydryl-7ß-[d-2-(6-butoxycarbonylamino)-2-phenylacetamido ]-3-(triphenylphosphonlo) -methyl^-cephera^-carboxylat-.Iodid (Verbindung 22)

Eine Mischung von 14,5 g (0,0196 mMol) Benzhydryl-7-[D-(-)-a-(t-butoxycarbonylamino)-a-phenylacetaraido]-3-jod- methyl-3-cephem-4-carboxylat und 5,24 g (0,02 Mol) Triphenylphosphin in 300 ml Ethylacetat wird 2 h bei Raumtemperatur gerührt. Zu der Reaktionsmischung gibt man 200 ml Ether, wobei sich ein Niederschlag bildet, der abfiltriert und mit Ether gewaschen wird. Man erhält 1^,3 g (73%) der Titelverbindung. Das Filtrat engt man auf 50 ml ein und verdünnt das Konzentrat mit Ether, wobei man 2,4 g einer zweiten Fraktion des Produktes erhält. Die Gesamtausbeute beträgt 16,7 g (85%). 25

cm"¹ 1780, 1690, 1480, 1420, 1350, 1240, 1150.

Beispiel 23

Benzhydryl-7ß-[D-2-(6-butoxycarbonylamino)-2-phenylacetamido]-3-[(Z)-1~propen-1-yl]-3-cephem-4-carboxylat

(Verbindung 23)

Zu einer Lösung von 5 g (5 mMol) Verbindung 22 in 200 ml Chloroform gibt man eine Mischung von 100 ml Wasser und 5 ml (5 mMol) N Natriumhydroxid und schüttelt die Mi-

M/24 279
l -}0

schung 3 min. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Wasser und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Die Chloroformlösung filtriert man, das Filtrat wird unter vermindertem Druck auf 100 ml eingeengt. Zum Konzentrat gibt man 3 ml Acetaldehyd und rührt die Mischung 1,5 h bei Raumtemperatur und verdampft zur Trockene. Der Ölige Rückstand wird an einer Silikagelsäule (Kieselgel 60, 50 g) unter Eluierung mit Chloroform chromatographiert. Die gewünschten Fraktionen werden vereinigt und zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wird mit η-Hexan verrieben, wobei man 990 mg (31%) der Titelverbindung (23)

15 erhält.

^IR: v> JSv ^cm~^{1 1780}» ¹?¹⁰> 1660, 1510, 1490, 1360, 1240, 1210, 1150

NMR:^^CDC13 ppm 1,3-1,5 (12H, m, -C-CH₃), 3,22 (2H, s, 2-H), 4,93 (1H, d, 4,5 H7, 6-H)/ 5,23 (1H, d, 8 Hz, CH-CO), 5,5-6,2 (3H, m, 7-H u.Vinyl-H), 6,94 (1H, s, CHPh), 7,2-7,5 (15H, m, Phenyl-H).

25 Beispiel 24

Natrium-7ß-[D-2-amlno-2-phenylacetamido]-3-[(Z)-1-propenyl]-j5-cephem-4-carboxylat (Verbindung 24. BB-S1065)

Eine Mischung aus 0,94 g (1,47 mMol) Verbindung 23 und 3 ml TFA wird 30 min bei Raumtemperatur gerührt, und dann verdünnt man die Mischung mit 50 ml einer 1:1-Mischung von Ether-Isopropylether, wobei sich ca.800 mg eines Niederschlags abscheiden, der abfiltriert und in 3 ml Methanol gelöst wird. Zu der Lösung gibt man 4,5 ml (4,5 mMol) 1 M Natriura-2-ethylhexanoat (SEH) in Ethylacetat und verdünnt die Mischung nacheinander mit 50 ml

Μ/24 279 -ÖQ-

Ether und 50 ml Isopropylether. Abfiltrieren des Niederschlages ergibt 710 mg Rohprodukt 24, das in 20 ml Wasser gelöst und an einer Säule mit 50 ml PrepPAK/C_1Q (Waters) chromatographiert wird. DieSäule wird mit Wasser und 10%igem Methanol eluiert. Die Fraktionen, welche das gewünschte Produkt enthalten, werden gesammelt, wobei man den Ablauf der Chromatographie mittels HPLC verfolgt, und auf 5 ml eingeengt und lyophilisiert. Man erhält 182 mg (31%) des gewünschten Produktes, Fp.200°C, mit einer mittels HPLC geschätzten Reinheit von 50%.

-1 xrt: ν __„ er

max

^IR: ^ 5ί ^cm~¹ 1760, 1660, 1600, 14OO, 1180, 1100 Phosphatpuffer (pH 7) _{m(£) 282 (55Oo)}

WSi-J ^D2° ppm 1,60 (3H, d, 6 Hz, -C-CH₃), 3,12 (1H, d,

18 Hz, 2-H), 3,48 (1H, d, 18 Hz, 2-H), 5,03 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,62 (1H, d, 4,5 Hz, 7-H),

5,93 (1H, d, 10 Hz, Vinyl-H), 5,2-5,8 (1H, m, Vinyl-H), 7,41 (5H, s, Phenyl-H).

Beispiel 25

5 Benzhydryl-7ß-[D-2-(6-butoxycarbonylamino)-2-phenylacetamido]-3-[(Z)-3-chlor-1-propen-1-yl]-3-cephem-4-carboxvlat (Verbindung 25)

Zu einer Lösung von 2 g (2 mMol) Verbindung 22 in 50 ml Chloroform gibt man 50 ml Wasser, das 2 ml (2 mMol) N Natriumhydroxid enthält, und schüttelt die Mischung 3 min. Die organische Schicht wird abgetrennt und nacheinander mit Wasser und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen. Die getrocknete Chloroformlösung wird unter vermindertem Druck auf 30 ml eingeengt. Zu dem Konzentrat

M/24 279 -Öl-

gibt man 2 ml ChIoracetaldehyd _tund rührt die Mischung 1 h bei Raumtemperatur. Man wäscht mit Wasser und anschließend mit gesättigter NaCl-Lösung. Die organische Lösung wird getrocknet und zur Trockene eingedampft. Den erhaltenen, öligen Rückstand chromatographiert man an einer Silikagelsäule (Wako-gel C-200; 50 g) unter Eluierung mit Chloroform. Die gewünschten Fraktionen werden gesammelt und zur Trockene verdampft, wobei man 534 mg Rohprodukt erhält.

IRi <? J^ cm"¹ 1780, 1710, 1660, 1500, 1490, 1360,

1240, 1210, 1150.

Die Struktur dieser Probe ist aufgrund des schlechten NMR-Spektrums nicht bestätigt.

Beispiel 26

Natrium-7ß-(D-2-amino-2-pheny!acetamido)-3-[(Z)-3-chlor-1-propen-1-yl]-3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 26, BB-S1066)

Eine Mischung von 472 mg (0,7 mMol) Verbindung 25 und 1,5 ml TFA rührt man 15 min bei 10 bis 15⁰C und verdünnt mit 30 ml einer Mischung von Ether und Isopropylether (1ii), wobei man 330 mg eines schwach gelben Niederschlags erhält, der abfiltriert wird. Zu einer Lösung des Niederschlags in 3 ml Methanol gibt man 2 ml (2 mMol) SEH in Ethylacetat und verdünnt die Mischung mit 50 ml Ethylacetat. Der erhaltene Niederschlag wird abfiltriert und mit Ether gewaschen, wobei man 244 mg Rohprodukt erhält. Eine Lösung des Rohproduktes in 10 ml Wasser chromatographiert man an einer Säule unter Ver-Wendung von 50 ml einer PrepPAK-500/C_1Q (Waters)-Füllung.

* Jt

Μ/24 279 -Ö2-

1 "tt

Die Säule wird mit Wasser und 10bigem Methanol eluiert. Die gewünschten Fraktionen von 10bigem Methanol werden vereinigt, auf 5 ml eingeengt und lyophilisiert, wobei man 50 mg eines festen Produktes, Pp. 200⁰C (allmähl. Zers.)» erhält.

I^RJ^Si cm"¹ 1760, 1660, 1630, 1360, 1120, 1070 10

l^^hatpuffer mn (£) 243(12700), 200Sch. (4200) .

Beispiel 27

7ß-[D(-)-2-Amino-2-phenylacetamido]-3-[(Z)-I-propen-1-yl]-3-cephem-4-carbonsäure (Verbindung 24, BB-S1O65 in zwitterionischer Form

² J,—N^ ^J—CB=CHCH₃ (2)

Diphenylmethyl-7ß- [D-2- (t-butoxycarbonylamino ) -2-phenylacetamido]-3-(1-propenyl)-3-cephem~4-carboxylat (Verbindung 23; 1,5 g; 2,34 mMol) behandelt man mit 3 ml Trifluoressigsäure und rührt die Mischung 20 min bei Raumtemperatur. Man verdünnt mit 100 ml Ether, wobei man 1,15 g (96?6) des rohen Trifluoracetats von BB-SIO65 erhält.

^IRi d Si ^cm~^{1 1}760, 1670, 1200, II30

_λ Phosphatpuffer (pH 7) ^ _{u) 283} (₈₃oo). 35

Μ/24 279 -Ö5-

Das Trifluoracetat (1,1 g; 2,25 mMol) löst man in 20 ml Wasser und chromatographiert die Lösung an einer Säule unter Verwendung von 100 ml prepPAK/C-g-Füllung (Waters). Die Säule wird mit Wasser, 10%igem Methanol und 30%igem Methanol eluiert. Die Eluate mit 30%igem Methanol werden auf 10 ml konzentriert. Das kristalline Produkt scheidet sich ab, es wird isoliert und mit Aceton gewaschen und im Vakuum über Pp^c getrocknet. Man erhält 505 mg (46%) an reinem BB-S1O65 (in zwitterionischer Form), Fp. 180 bis 183⁰C (Zers.), mit einer geschätzten Reinheit von 95%.

15 IR: v? ??£ cm"¹ 1750, 1690, 1590, 1400, 1350

Phosphatpuffer (pH 7) _{m(O 282 (8800)}

lUclA

NMR:^^D2^0+NaHC03 ppm 1,58 (3H, d, J=6 Kz, C-CH₃), 3,3 (2H, d, 2-H), 5,03 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,20 (1H, s, CH-CO), 5,1-5,8 (1H, m, CH=C), 5,63 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,92 (1H, d, J= 12 Hz, CH=C), 7,4 (5H, s, Phenyl-H).

25 Beispiel 28

D (-)_2-(t-Butoxycarbonylamino)-2-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)-essigsäure (Verbindung 28)

Eine Mischung von 6 g (0,03 Mol) 3-Chlor-4-hydroxyphenylglycin und 9,8 g (0,045 Mol) Di-t-butyldicarbonat, gelöst in 120 ml 50%igem wäßrigem Tetrahydrofuran (THF), das 10 ml (0,071 Mol) Triamin enthält, wird 3 h bei Raumtemperatur gelöst. Die Mischung wird auf 60 ml eingeengt und das Konzentrat mit Ether gewaschen. Die

M/24 279

wäßrige Schicht wird mit 6N Chlorwasserstoffsäure angesäuert und mit 200 ml Ether extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen, über MgSO. getrocknet und zur Trockene verdampft, wobei man 10 g eines öligen Rückstandes erhält, der auch beim Verreiben mit Ether-n-Hexan nicht fest wird.

10 Beispiel 29

Benzhydryl-7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(3-chlor-4-hydroxyphenyl) -acetamido J^-chlormethyl-^-cephem^-carboxvlat (Verbindung 29)

CHCONH
NH

CO₂C

CH₂Cl

CO₂CH(C₆H₅)₂

Zu einer Lösung von 6,2 g (0,015 Mol) Verbindung 2 und 5,4 g (0,018 Mol) Verbindung 28 in 150 ml trockenem THF gibt man 3,7 g (0,018 Mol) DCC und rührt die Mischung 1 h bei Raumtemperatur. Der während des Rührens ausgefallene Dieyelohexy!harnstoff wird abfiltriert, das FiI-trat wird zur Trockene eingedampft. Den Rückstand extrahiert man mit 200 ml Ethylacetat, den Extrakt wäscht man dann mit wäßriger NaHCO,-Lösung, Wasser und gesättigter NaCl-Lösung und trocknet ihn über MgSO^. Das Filtrat wird zur Trockene verdampft und der erhaltene, ölige Rückstand wird an einer Silikagelsäule (Wako gel C-200; 140 g) unter Eluierung mit Toluol-Ethylacetat (10:1) Chromatograph!ert. Die gewünschten Fraktionen werden gesammelt und zur Trockene verdampft, wobei man 10 g des Produkts 29 erhält.

M/24 279

-65-

"¹

max

ein"¹ 1790, 1720, 1680, 1500, 1370, 1240, 1160.

10

Beispiel 30

Benzhydryl-7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-(triphenylphosponio)-methyl-3-cephem-4-carboxylat-.1odid (Verbindung 30)

CHCONH NH

CO₂C(CH₃),

CO₂CH(C₆H₅)₂

Zu einer Lösung von 10 g (0,0143 Mol) Verbindung 29 in 100 ml Aceton gibt man 11,2 g (0,075 Mol) Natriumiodid und rührt die Mischung 30 min bei Raumtemperatur/Die Mischung wird auf 30 ml eingeengt. Zu dem Konzentrat werden 200 ml Ethylacetat gegeben und die Mischung wird mit wäßriger Na₂S₂0₃-Lösung, Wasser und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen und über MgSO^ getrocknet. Die Ethylacetatlösung wird filtriert und das Filtrat auf die Hälfte des Volumens eingeengt. Zu dem Konzentrat gibt man 3,9 g (0,015 Mol) Tripheny!phosphin und rührt die Mischung 2 h bei Raumtemperatur. Zu der Lösung gibt man 300 ml Ether, wobei sich ein Niederschlag abscheidet, der abfiltriert und getrocknet wird. Man erhält 9,2 g des Phosphoniumjodids 30.

^cm~^{1 1}780, 1680, 1490, 1350, 1240, 1150.

M/24 279

-56-

Beispiel 31

Benzhydryl-7ß~[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-[(Z)-1-propen-1-yl)-3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 31)

CHCONH NH

CH=CHCH₃ (Z)

CO₂C(CH₃).

CO₂CH(C₆H₅)

Eine Lösung von 9,5 g (9 mMol) Verbindung 30 in 200 ml Chloroform wird mit einer Mischung aus Wasser (100 ml) und N NaOH (10 ml) überschichtet und die Mischung 3 min geschüttelt. Die organische Schicht wird mit Wasser und einer gesättigten NaCl-Lösung gewaschen, über MgSO^ getrocknet und auf etwa die Hälfte des Volumens eingeengt. Zu dem Konzentrat gibt man 20 ml 90&Lgen Acetaldehyd und rührt die Mischung 3 h bei Raumtemperatur, behandelt sie mit wasserfreiem MgSO^ und filtriert. Das Filtrat wird zur Trockene verdampft und der Rückstand wird an Kieselgel 60 (Merck, 120 g) unter Eluierung mit Toluol-Ethylacetat (4:1) chromatographiert. Die gewünschten Fraktionen werden gesammelt und zur Trockene verdampft. Der Rückstand wird mit einer Mischung aus Ether, Isopropylether und η-Hexan verrieben, wobei man 1,33 g des blockierten Produktes 31 erhält.

IR;

??Jl cm"¹ 1770, 1700, 1660, 1480, 1350, 1210, 1150.

Beispiel 32

7ß-[D-2-Amino-2-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)-acetamido]-3· [(Z)-I -propen-1 -yl)-3-cephem-4-carbonsäure (Verbindung 32. BMY-28060)

M/24 279

-Ö7-

B=CHCE.

Eine Mischung von 1,33 g (1,93 mMol) Verbindung 31 und 3 ml Trifluoressigsaure wird 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Die Mischung wird mit 50 ml Ether-Isopropylether (1:1) verdünnt, wobei man 1,072 g des rohen Trifluoracetats von Verbindung 32 erhält, das an einer mit prepPAK-Cj_Q(Waters) gefüllten Säule (80 ml) chromatographiert wird. Die Säule wird mit Wasser und 10bigem Methanol eluiert. Das Eluat mit 10bigem Methanol wird auf ein Volumen von 10 ml eingeengt, wobei sich ein kristalliner Niederschlag abscheidet, der abfiltriert und mit Aceton gewaschen und im Vakuum über P2O5 getrocknet wird. Man erhält 238 mg der Verbindung 32 (95% Reinheit), Fp. 180-185⁰C (allmähl.Zers.). Das Filtrat wird auf 5 ml eingeengt und lyophilisiert, wobei man 154 g einer zweiten Fraktion erhält, die, mittels HPLC bestimmt, eine Reinheit von 80?£ aufweist.

5?£

JXl el X.

^cm~¹ 1760, 1680, 1570, 1410, 1390, 1350,

1290, 1270 30 UV:\ Phosphatpuffer (pH

IUcLjC

^D2^0+NaHC0

₂₃₂ (10000) ,280(10500)

NMR:£^D2^0+NaHC03 ppm 1,68 (3H, d, J=6 Hz, C=C-CH₃), 3,25 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 3,57 (1H, d, J=18 Hz, 2-H); 4,90 (1H, s, CH-CO), 5,18 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,72 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,5-5,9 (1H,

Μ/24 279 -Ö8-

m, CH=C), 5,97 (1H, d, J=12 Hz, CH=C), 7,02 (1H, d, J= 8 Hz, Phenyl-H), 7,30 (1H, dd, J=8 u.1,5 Hz, Phenyl-H), 7,50 (1H, d, J=1,5 Hz, Phenyl-H).

Beispiel 55

D(-)-2-(t-Butoxycarbonylamino)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)-essigsäure (Verbindung 33a) in Mischung mit deren 3-(und 4)-Mono-0-butoxvcarbonylderivaten(Verbindung 35b)

Eine Mischung von 3,66 g (0,02 Mol) 3,4-Dihydroxyphenylglycin und 9,24 g (0,04 Mol) Di-t-butyldicarbonat, gelöst in 120 ml 50%iger wäßriger THF-Lösung, enthaltend 10 ml (0,071 Mol) Triethylamin, wird 16 h bei Raumtemperatur gerührt. Man konzentriert die Mischung auf 60 ml und wäscht das Konzentrat mit 100 ml Ether, säuert mit N Chlorwasserstoffsäure an und extrahiert mit Ether (100 χ 2 ml). Die vereinigten Extrakte werden mit Wasser und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen, über MgSO^ getrocknet und zur Trockene eingedampft, wobei man 8 g eines öligen Rückstands erhält, der eine Mischung aus dem gewünschten 3,4-Dihydroxyphenylderivat und den 3- und 4-Mono-O-BOC-geschützten Derivaten darstellt (BOC

25 bedeutet t-Butoxycarbonyl).

Beispiel 34

Benzhydryl-7ß-[D(-)-2-(t-butoxy carbonylamino)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)-acetamido]-3-chlormethyl-3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 34a) in Mischung mit den 3-(und 4)-Mono-0-butoxycarbony!derivaten (Verbindung 54b)

M/24 279

HO

CO₂CH(C₆H₅),

Eine Mischung von 8 g (0,0193 Mol) Verbindung 2, 8 g der Mischung gemäß Beispiel 33 und 4,12 g (0,02 Mol) DCC in 200 ml trockenem THF wird 1 h bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wird zur Trockene eingedampft. Den Rückstand löst man in 200 ml Ethylacetat und filtriert unlösliches Material (Dicyclohexylharnstoff) ab. Das Filtrat wird mit wäßriger NaHCO^-Lösung, Wasser und gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO^ getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Den öligen Rückstand chromatographiert man an einer Silikagelsäule (Kieselgel 60, 130 g), wobei man mit Toluol-Ethylacetat (5:1) und Toluol-Ethylacetat (2:1) eluiert. Das Eluat mit Toluol-Ethylacetat (5:1) wird gesammelt und zur Trockene eingedampft, wobei man 9,5 g einer Mischung der Mono-0-BOC-N-BOC-digeschützten Derivate (34b) erhält. Das Eluat mit Toluol-Ethylacetat (2:1) wird gesammelt und zur Trockene eingedampft, wobei man 3 g des 3,4~Dihydroxyphenylderivats (34a) erhält.

Verbindung 34a

cm"¹ 1770, 1720, I69O, 1500, 1370, 1240, 1150

NMRsc$^CDC13 ppm 1,42 (9H, s, C-CH₃), 3,4 (2H, br.s, 2-H), 4,30 (2H, br.s, CH₂-Cl), 4,85 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,07 (1H, d, J=6 Hz, CH-NH), 5,74 (1H, dd,

M/24 279

J=9 u.4,5 Hz, 7-H), 6,6-6,9 (3H, m, Phenyl-H), 6,93 (1H, s, CHPh), 7,3 (1OH, s, Phenyl-H).

Mischung 34b

* V?

cm"¹ 1770, 1720, 1690, 1500, 1370, 1240, 1150

^CDC1

NMR:<$"^CDC13 ppm 1,42 (9H, s, C-CH₃), 1,55 (9H, s, C-CH₃), 3,4 (2H, br.s, 2-H), 4,35 (2H, br.s, CH₂-Cl), 6,9-7,1 (4H, m, CHPh und Phenyl-H), 7,3 (10H, s, Phenyl-H).

Beispiel 35

Benzhydryl-7ß-[D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)-acetamido]-3-triphenylphosponiomethyl-3-cephem-4-carboxylat-.jodid (Verbindung 35a)

CHCONH NH

CO₂C(CH₃)₃ CO₂CH(C₆H₅)₂

Eine Mischung von 3 g (4,4 mMol) Verbindung 34a und 3,3 g (22 mMol) Natriumiodid in 50 ml Aceton wird 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Die Mischung wird zur Trockene eingeengt. Den Rückstand extrahiert man mit 100 ml Ethylacetat und wäscht den Extrakt mit wäßriger Na₂S₂O₃-Losung, Wasser und gesättigter NaCl-Lösung. Nach dem Trocknen über MgSO^ wird der Extrakt auf 60 ml eingeengt. Zum Konzentrat gibt man 1,4 g (5,3 mMol) Triphenylphosphin und rührt die Mischung 1 h bei Raumtemperatur. Zu der Mischung gibt man 100 ml Ether, wobei sich ein Nieder-

M/24 279

-fo-

schlag abscheidet, der abfiltriert und mit Ether gewaschen wird. Man erhält 3,2 g (70%) des Phosphoniumjodids (35a).

v???i cm"¹ 1780, 1680, 1480, 1430, 1360, 1240, 1150.

IHoL)C

In ähnlicher Weise läßt man 9,5 g (12 mMol) der Mischung der Mono-0-BOC-geschützten Derivate (34b) mit Natriumiodid und anschließend mit Triphenylphosphih reagieren, wobei man 10,7 g (77%) einer Mischung der entsprechenden Mono-O-BOC-N-BOC-triphenylphosphoniomethylderivate (35b) erhält.

cm"¹ 1770, 1720, 1680, 1480, 1430, 1360, 1240, 1140.

Bei spiel

36

Benzhydry l~7ß- [D (- ) -2- (t-butoxycarbonylamino) -2- (3,4-dihydroxyphenyl)-acetamido ]-3-[ (Z)-1-propen-1 -yl]-3-cephem-4-carboxvlat (Verbindung 36a)

HO

CHCONH NH

CO₂C(CH

CHi=CHCH, (Z)

Zu einer gerührten Lösung von 3,15 g (3 mMol) Verbindung 35a und 10 ml Acetaldehyd in 50 ml Chloroform tropft man unter Rühren während 10 min 8 ml (4 mMol) 0,5N Natriumhydroxid und rührt die Mischung 1 h bei Raumtemperatur. Die Reaktionsmischung wird mit Wasser und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen, über MgSO^ getrock-

net und bei vermindertem Druck verdampft. Den öligen Rückstand chromatographiert man an einer Silikagelsäule (Wako gel C-200; 60 g), wobei man mit Chloroform (2 l) und 2%igem Methanol in Chloroform unter Kontrolle mittels TLC (Chloroform/Methanol = 10:1) eluiert. Die gewünschten Fraktionen des Eluats mit 2%igem Methanol werden gesammelt und zur Trockene eingedampft, wobei man 0,8 g (40%) des Propenylderivats 36a erhält.

NMR:<$^CDC13 ppm 1,28 (3H, d, J=6 Hz, C-CH₃), 1,42 (9H, s, C-CH₃), 3,25 (2H, s, 2-H), 4,92 (1H, d, J= 4,5 Hz, 6-H), 5,08 (1H, d, J=6 Hz, CH-NH), 5,3-5,8 (1H, m, CH=C), 5,80 (1H, d, J=4,5 Hz,

7-H), 6,04 (1H, d, J=11 Hz, CH=C), 6,70 (2H, s, Phenyl-H), 6,82 (1H,s, Phenyl-H), 6,92 (1H, s, CHPh), 7,3 (1OH, s, Phenyl-H).

Ähnlich dem oben beschriebenen Verfahren läßt man 10,5 g (9,3 mMol) der Mischung aus 3- und 4-0-BOC-N-BOC-digeschützten Derivaten 35b mit Acetaldehyd reagieren, wobei man 3,3 g (46%) des entsprechenden 3-PropentyIderiva ts 36b erhält.

25

cm""¹ 1770, 1700, 1500, 1370, 1240, 1150

NMR:h ^CDC13 ppm 1,4 (9H, s, C-CH₃), 1,55 (9H, s, C-CH₃),

3,25 (2H, s, 2-H), 6,07 (1H, d, J=11 Hz, CH=C), 6,9-7,1 (4H, m, CH-Ph und Phenyl-H), 7,3-7,5 (1OH, m, Phenyl-H).

35

Μ/24 279 -Ϋ3-

Beispiel

7ß-[D(-)-2-Amino-2-(3,4-dihydro:xyphenyl)-acetamido]-3-[(Z)-1-propen-1-yl]-3-cephem-4-carbonsäure (Verbindung 37. BMY-2806B)

HO

S ' "~2 J₇-N. ^_xL-CB=CHCB, (2)

Eine Mischung von 0,8 g (1,2 mMol) Verbindung 36a, 15 0,8 ml Anisol und 3 ml Trifluoressigsäure wird 5 min

bei Raumtemperatur gerührt und mit 25 ml Ether und 25 ml Isopropylether verdünnt. Der erhaltene Niederschlag wird abfiltriert und mit Isopropylether gewaschen, wobei man 557 mg des rohen Trifluoracetatsalzes der Verbindung 37 erhält. Eine Lösung des rohen Produktes in 10 ml Wasser reinigt man mittels Säulenchromatographie unter Verwendung von 100 ml einer Füllung aus prepPAK-C₁₈(Waters). Die Säule wird nacheinander mit Wasser und 5%igem Methanol eluiert. Das Eluat mit 50%igem Methanol, das
das gewünschte Produkt enthält, wird auf 5 ml eingeengt und lyophilisiert, wobei man 231 mg (47%) der Verbindung 37 (in zwitterionischer Form, 90&Lge Reinheit),
Fp. 2008c (allmähl.Zers.), erhält.

30 IR: v) cm'¹ 1760, 169O₉ 1580, 1530, 1400, 1360, 1290, 1270

: ^ Phosphatpuff er (pH Y)_{111n (g} ) 233(9200) ,281 (11000)

max

H/24 279 -Wi-

NMR: cS ^D2° ppm 1,68 (3H, d, J=6 Hz, C-CH₃), 3,26 (1H, d,

J=18 Hz, 2-H), 3,58 (1H, d, J=18 Hz, 2-H)₁ 5,18 (1H, s, CHNH), 5,22 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,5-5,9 (2H, m, CH=C u. 7-H), 5,97 (1H, d, J= 11 Hz, CH=C), 7?o5 (3H, m, Phenyl-H).

In ähnlicher Weise ergeben 3,3 g (4,3 inMol) der N,O-Dit-BOC-geschützten Derivatmischling 36b 1,3 g (75%) der Verbindung 37 in zwitterionischer Form (90% Reinheit), deren Spektraldaten identisch mit den oben angegebenen Daten sind.

15 Beispiel 38

D(-)-2-(t-Butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-essigsaure (Verbindung 38)

20 HO—\' ) CHCO ,H

-TV-

CO₂C (CH₃)

Eine Mischung von 2,96 g (0,015 Mol) D(-)-2-Amino-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-essigsaure und 3,6 g (0,0165 Mol) Di-t-butyldicarbonat in 100 ml 50%igem •wäßrigen THF, das 4,2 ml (0,03 Mol) Triethylamin enthält, rührt man 16 h bei Raumtemperatur und engt die Reaktionsmischung auf 50 ml ein. Das Konzentrat wird mit 50 ml Ether gewaschen, mit N Chlorwasserstoffsäure angesäuert und zweimal mit Ether (2 χ 100 ml) extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden mit Wasser und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen. Die getrockneten Extrakte werden zur Trockene eingeengt, wobei nan 4,38 g der Verbindung 38 als schaumigen Feststoff erhält.

-fc-

M/24 279

NMR:,·)' ^CDC13 ppm 1,4 (9H, s, -C-CH₃), 3,8 (3H, s, OCH₃), 5,15 (1H, d, J=6 Hz, CH-Mi), 6,85 (3H, s, Phenyl-H).

Beispiel 39

Benzhydryl-7ß-[D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-acetamido]-3-chlormethyl-3-cephem-4-carboxvlat (Verbindung 39)

HO-

CHCONH NH

CH₂Cl

CO₂C(CH₃).

CO₂CH(C₆H₅).

Eine Mischung von 4,3 g Verbindung 38, 5 g (0,012 Mol) Verbindung 2 und 3 g (0,015 Mol) DCC in 150 ml trockenem THB¹ wird 2 h bei Raumtemperatur gerührt. Den ausgefallenen Harnstoff filtriert man ab, das Filtrat wird zur Trockene eingeengt. Eine Lösung des Rückstandes in 200 ml Ethylacetat wird mit wäßriger NaHCO₃-Lösung, Wasser und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen, über MgSO^ getrocknet und zur Trockene eingedampft. Den öligen Rückstand chromategraphiert man an einer Silikagelsäule (Kieselgel 60; 100 g), wobei man mit Toluol-Ethylacetat (4:1) unter Kontrolle der Chromatographie mittels TLC [Toluol-Ethylacetat (lsi) oder Chloroform-Methanol (50:1)] eluiert. Die gewünschten Fraktionen werden gesammelt und zur Trockene eingeengt, wobei man 7 g der gewünschten 3-Chlormethylcephem-Verbindung 39 als schaumigen Feststoff erhält.

M/24 279 NMR

: S, ppm 1,4 (9H, s, C-CH₃), 3,45 (2H, br.s, 2-H), 3,83 (3H, s, OCH₃), 4,32 (2H, s, -CH₂Cl), 4,92 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,13 (1H, d, J= 6 Hz, CH-NH), 5,65 (1H, d, J=6 Hz, NH), 5,80 (1H, dd, J=8 u.4,5 Hz, 7-H), 6,85 (3H, s, Phenyl-H), 6,95 (1H, s, CH-Ph), 7,2-7,5 (10H, m, Phenyl-H).

Beispiel 40

Benzhydryl-7ß-[D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-acetamido]-3-triphenylphosphoniomethvl-3-cephem-4-carboxylat-.iodid (Verbindung 40)

CHCONH
NH

CO₂C(CH₃

CH₂P(C₆H₅)₃J CO₂CH(C₆H₅)₂

Eine Mischung von 7 g (0,01 Mol) Verbindung 39 und 7,5 g (0,05 Mol) Natriumiodid in 100 ml Aceton wird 30 min bei Raumtemperatur gerührt und zur Trockene eingedampft. Eine Lösung des Rückstands in 200 ml Ethylacetat wird mit wäßriger Na₂S₂0₃-Lösung, Wasser und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen, über MgSO^ getrocknet und auf 100 ml eingeengt. Zum Konzentrat gibt man 3,1 g (0,012 Mol) Tripheny!phosphin und rührt die Mischung 1h bei Raumtemperatur. Zu der Reaktionsmischung gibt man dann 100 ml Ether und filtriert den ausgeschiedenen Feststoff ab, wäscht ihn mit Ether und trocknet ihn, wobei man 5,8 g des Triphenylphosphoniumderivats 40 erhält. Das etherische Filtrat engt man auf 10 ml ein und gibt zum Konzentrat 300 ml Ether, wobei man 0,9 g einer

M/24 279

-h-

zweiten Fraktion des Produktes erhält. Die Gesamtausbeute beträgt 6,7 g.

Beispiel 41

Benzhydryl-7ß-[D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxy-3-methoxypheny])-acetamido ]-3- [(Z)-I -propen-1 Vl 1-»3~cephem-4-carboxylat (Verbindung 41)

CHCOxMH NH

H₃CO

CH=CHCH, (Z)

Nv^ ^jj^ \uii—v^iiwxi·,

CO₂CH(C₆H₅)₂

Zu einer gerührten Mischung von 5,8 g (5,5 mMol) Verbindung 40 und 10 ml 90&Lgem Acetaldehyd in 100 ml ChIoroform tropft man unter Rühren während 25 min 11 ml (5,5 mMol) 0,5N Natriumhydroxid. Die Mischung wird dann 2 h bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wird mit Wasser, anschließend mit gesättigter NaCl-Lösung gewaschen, über MgSO^ getrocknet und zur Trockene eingeengt. Den öligen Rückstand chromatographiert man an einer Silikagelsäure (Kieselgel 60; 130 g), wobei man mit einer Mischung aus Toluol und Ethylacetat [das Mischungsverhältnis wurde schrittweise geändert; 4:1 (1,3 l), 3:1 (1,1 1), 2:1 (1,0 1)Jeluiert. Das Eluat wird in 20 ml-Fraktionen aufgefangen. Die Fraktionen Nr. 26 bis 59 werden vereinigt und zur Trockene eingeengt, wobei man 830 mg des gewünschten 3-Propentylderivats 41 als schaumigen Feststoff erhält.

M/24 279

NMR:

^CDC1

3 ppm 1,35 (3H, d, ^H-CH₃), 1,4 (9H, s, C-CH₃), 3,85 (3H, s, 0-CH₃), 6,07 (1H, d, J=11 Hz, -CH=C).

Beispiel 42

7ß-[D(-)-2-Amino-2-(4-hydroxy-3~niethoxyphenyl)-acetamido ]-3-[(Z)-1-propen-1-yl]-3-cephem-4-carbonsäure (Verbindung 42: BMY-28Q97)

CH=CHCH,, (Z)

CO₂H

Eine Mischung von 830 mg (1,2 mMol) Verbindung 41, 0,5 ml Anisol und 2 ml Trifluoressigsäure wird 5 min bei Raumtemperatur gerührt. Die Mischung wird mit dann mit 30 ml Ether und 30 ml Isopropylether verdünnt. Der erhaltene Niederschlag wird abfiltriert, mit Isopropylether gewaschen und getrocknet, wobei man 437 mg des rohen Trifluoracetats der Verbindung 42 erhält. Das Rohprodukt wird an einer mit 100 ml prepPAK-C^g (Waters) gefüllten Säule chromatographiert, wobei man mit Wasser und 5%igem Methanol eluiert. Das Eluat mit 5%igem Methanol wird auf 5 ml eingeengt und lyophilisiert, wobei man 225 mg der Verbindung 42 (in zwitterionischer Form, 90% Reinheit), Fp. 176 bis 180°C (Zers.), erhält.

cm"¹ 1760, 1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280

235(10000),280(11000)

M/24 279

NMR: & ^D2° ppm 1,68 (3H, d, J=6 Hz, C-CH₃), 3,25 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 3,57 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 4,01 (3H, s, OCH₃), 5,10 (1H, s, CH-CO),

5,19 (HI, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,78 (1H, d, J= 4,5 Hz, 7-H), 5,5-5,9 (1H, m, CH=C), 5,98 (1H, d, J=11 Hz, CH=C), 7,07 (2H, s, Phenyl-H), 7,17 (1H, br.s, Phenyl-H).

HPLC: Retentionszeit = 9,3 min (0,02 M Acetatpuffer (pH 4), enthaltend 15% Acetonitril). -

Beispiel 43

Isolierung der Verbindung 42 aus dem Urin von Ratten, denen Verbindung $7 verabreicht wurde

6 männliche Wistar-Ratten (400-600 g) wurden nach oraler Verabreichung der Verbindung 37 in einer Dosis von 100 mg/kg in Stoffwechselkäfige gebracht. Der Urin wurde über einen Zeitraum von 14 Stunden aufgefangen. Die Ratten wurden während des Versuchs, wie üblich, mit Nahrung und Wasser versorgt. Die nachfolgende Tabelle zeigt die in den verschiedenen Zeiträumen gesammelte

25 Urinmenge.

0-2 h 2-4 h 4-6 h 6-24 h Insgesamt

Urinvolumen (ml) 18 19,5 13 42 92,5

Der Urin (ca. 90 ml) wurde mit N Chlorwasserstoffsäure auf pH 3 eingestellt und zur Entfernung eines Niederschlags filtriert. Das Filtrat wurde an einer mit 300 ml HP-20 gefüllten Säule chromatographiert, wobei man mit 2 1 Wasser und 2 1 30%igem Methanol unter Verfolgung der Chromatographie mittels HPLC eluierte» Diejenigen

Μ/24 279 -QQ-

Fraktionen, welche die "bioaktiven Bestandteile des Eluats mit 30%igem Methanol enthielten, wurden gesammelt, auf 10 ml eingeengt und lyophilisiert, wobei man 390 mg eines braunen Feststoffs erhielt. Eine Lösung dieses Feststoffs in 20 ml Wasser wurde an einer Säule chromatographiert, die mit 200 ml prepPAK-C.g (Waters) gefüllt war. Man eluierte nacheinander mit Wasser, 5%igem Methanol und 10%igem Methanol. Die erste Hälfte des Eluats mit 5%igem Methanol wurde auf 5 ml eingeengt und lyophilisJart, wobei man 44 mg der Verbindung 37 (70% Reinheit) erhielt, die vom Urin stammende Verunreinigungen enthielt. Die zweite Hälfte des Eluats mit 5%igem Methanol wurde auf 5 ml eingeengt und lyophilisiert, wobei man 36 mg Produkt erhielt, das eine Mischung aus den Verbindungen 37 und 42 und vom Urin stammenden Verunreinigungen war. Das Eluat mit 10%igem Methanol (ca. 600 ml) wurde auf 5 ml eingeengt und lyophilisiert, wobei man 38 mg der Verbindung 42 (70% Reinheit, bestimmt mittels HPLC) erhielt. Dieses Produkt wurde erneut an einer Säule, die wie oben gefüllt war (40 ml), unter Eluierung mit Wasser, 5%igem Methanol und 10%igem Methanol chromatographiert. Die mit 10%igem Methanol eluierten, gewünschten Fraktionen wurden vereinigt und auf 5 ml eingeengt und lyophilisiert, wobei man 16 mg der Verbindung 42 erhielt, die eine mittels HPLC bestimmte Reinheit von 90% aufwies [0,02 M Acetatpuffer (pH 4)-Acetonitril (85:15)]; Fp. 180⁰C (allmähl.Zers.).

_mav cm""¹ 1760, 1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280

_W:APhosphatpuffer (pH 7) ^) 233(8200), 280(8800)

max

M/24 279

NMR: <■> ^D2° ppm 1,68 (3H, d, J=6 Hz, -C-CH₃), 3,26 (1H,

d, J=18 Hz, 2-H), 3,58 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 4,01 (3H, s, OCH₃), 5,12 (1H, s, CH-CO),

5,21 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,78 (1H, d, J= 4,5 Hz, 7-H), 5,5-5,9 (1H, m, CH=C-), 5,98 (1H, d, J=11 Hz, CH=C-), 7,07 (2K, s, Phenyl-H), 7^17 (1H, br.s, Phenyl-H). 10

Die Struktur des Metaboliten ergab sich aufgrund von Vergleichen (NMR, IR, UV, HPLC) mit der gemäß den Beispielen 38 bis 42 hergestellten Verbindung 42 zu 7ß-[D(-)-2-Amino-2-(4-hydroxy~3-methoxyphenyl)-acetamido]-3-[(Z)-I-propen-1-yl]-3-cephem-4-carbonsäure.

20 25 30 35

Claims (1)

1. M/24 279

   Patentansprüche

   l.J Substituierte Vinylcephalosporinverbxndungen mit Z-Konfiguration an der exocyclischen Doppelbindung der allgemeinen Formel:

   CHCONH

   worin

   η für 0 oder 1 steht',

   R ein Wasserstoffatom, OP , eine Niedrigalkoxygrup-

   pe oder ein Halogenatom bedeutet, P , P und P Wasserstoffatome oder übliche, in der Cephalosporinchemie verwendete Schutzgruppen für Amino-, Carboxy- und Hydroxygruppen bedeuten,

   2 3

   R ein Wasserstoffatom, OP oder eine niedrige

   Alkoxygruppe bedeutet, und

   M/24 279 -2-

   R ein Wasserstoffatom, eine C₁-C.-Alkyl-, C₇-C₁.-Aralkyl-, Heterocyclothio-C.-C.-Alkyl- und C₁-C.-AIkOXy-C₁-C.-alkylgruppe bedeutet,

   1 2 wobei wenigstens einer der Substituenten R , R und

   3
   R von Wasserstoff verschieden ist, und die pharmazeutisch vertraglichen Säureadditionssalze und pharmazeutisch verträglichen Metallsalze der Verbindungen der obigen Formel,in der η für 0 steht und

   12 3
   P , P , P ein Wasserstoffatom bedeuten.

   Verbindungen nach Anspruch 1, worin η für 0 steht und

   12 3
   P , P und P Wasserstoffatome bedeuten.

   3. Verbindung nach Anspruch 1, nämlich 7ß-[D-2-Amino-2-(4-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-[(Z)-1-buten-l-yl]-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.

   4. Verbindung nach Anspruch 1, nämlich 7ß-[D-2-Amino-2-

   (4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-vinyl-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.

   5. Verbindung nach Anspruch 1, nämlich 7ß-[D-2-Amino-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido 1-3-[(Z)-3-phenyl-l-propen-1-yl]-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.

   6. Verbindung nach Anspruch 1, nämlich 7ß-[D-2-Amino-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-[(Z)-3-(IH-I,2,3-tria- zol-5-yl)thio-1-propen-l-yl]-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.

   M/24 279

   7. Verbindung nach Anspruch 1, nämlich 7ß-[D-2-Amino-2-

   (4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-[(Z) -3-methoxy-1-propen-1-yl]-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.

   8. Substituierte Vinylcephalosporinverbindungen der allgemeinen Formel

   CH=CHAIkX

   worin

   η für 0 oder 1 steht,

   R ein Wasserstoffatom, OP , eine Niedrigalkoxygruppe oder ein Halogenatom bedeutet,

   12 3
   P , P und P Wasserstoffatome oder übliche, in der Cephalosporinchemie verwendete Schutzgruppen für Amino-, Carboxy- und Hydroxygruppen bedeuten,

   2 3

   R ein Wasserstoffatom, OP oder eine-Niedrigalkoxygruppe bedeutet,

   Alk einen Alkyliden- oder Alkylenrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeutet, und

   X ein Brom-, Chlor- oder Jodatom bedeutet,

   und

   die Säureadditionssalze und Metallsalze der Verbindungen der obigen Formel, in der η für 0 steht und

   12 3
   P , P , P ein Wasserstoffatom bedeuten.

   M/24 279

   Verbindung nach Anspruch 8, worin Alk eine Methylengruppe und X ein Chloratom bedeuten.

   10. Verbindung nach Anspruch 9,nämlich 7ß-[D-2-Amino-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-[(Z)-3-chlor-lpropen-1-yl]-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.

   11. Verbindung nach Anspruch 9, nämlich Diphenylmethyl 7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-[(Z)-3-chlor-l-propen-1-yl]-3-cephem-4-carboxylat und dessen Salze.

   12. Verbindung nach Anspruch 9, nämlich Diphenylmethyl 7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-[3-jod-1-propen-l-yl ]-3-cephem-4-carboxylat und dessen Salze.

   13. Substituierte Vinylcephalosporinverbindungen mit Z-Konfiguration an der exocyclischen Doppelbindung der allgemeinen Formel:

   (P)

   CH=CHCH.

   worin η für 0 oder 1 steht,

   1

   R ein Wasserstoffatom, OP , eine Niedrigalkoxygruppe oder ein Halogenatom bedeutet.

   P , P und P Wasserstoffatome oder übliche, in der Cephalosporinchemie verwendete Schutzgruppen für

   Amino-, Carboxy- und Hydroxygruppen bedeuten, ein Wasserstoffatom,
   gruppe bedeutet, und

   R ein Wasserstoffatom, OP oder eine Niedrigalkoxy-

   die pharmazeutisch vertraglichen Säureadditionssalze und die pharmazeutisch verträglichen Metallsalze der Verbindungen der obigen Formel, in der η für 0 steht

   12 3

   und P , P und P ein Wasserstoffatom bedeuten.

   14. Verbindungen nach Anspruch 13, worin η für 0 steht und P , P und P Wasserstoff atome bedeuten.

   15. Verbindung nach Anspruch 13, nämlich 7ß-[D-2-Amino-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido 3-3-[(Z)-1-propen-l-yl] 3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.

   16. Verbindung nach Anspruch 13, nämlich

   7ß-[D-2-Amino-2-phenylacetamido]-3-[(Z)-1-propen-1-yl]-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.

   ok 17. Verbindung nach Anspruch 13, nämlich

   7ß-[D-2-Amino-2-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)acetamido] 3-t(Z)-l-propen-l-yl]-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.

   oQ 18. Verbindung nach Anspruch 13, nämlich

   7ß-[D-2-Amino-2-(3,4-dihydroxyphenyl)acetamido]-3-[(Z)-1-propen-l-yl]-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.

   M/24 279

   19. Verbindung nach Anspruch 13, nämlich 7ß-[D-2-Amino-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acetamido ] 3-[(Z)-1-propen-l-yl]-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze.

   20. Verbindungen nach Anspruch 13, worin η für 0 steht

   1 und wenigstens einer der Substituenten P

   3
   P eine übliche Schutzgruppe bedeutet.

   2
   P und

   21. Verbindungen nach Anspruch 20, worin, wenn P und

   P eine Schutzgruppe bedeuten, diese unabhängig voneinander ausgewählt sind unter Trityl, Chloracetyl, Formyl, Trichlorethoxycarbonyl, t-Butoxycarbonyl

   2 und Benzyloxycarbonyl und, wenn P eine Schutzgruppe bedeutet, dieses ausgewählt ist unter Benzyl, p-Methoxybenzyl, p-Nitrobenzyl, Diphenylmethyl, t-Butyl, und 2,2,2-Trichlorethyl.

   22. Verbindung nach Anspruch 21, nämlich Diphenylmethyl TB-[2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-[(Z)-1-propen-l-yl]-ceph-3-em-4-carboxylat und dessen Salze.

   23. Verfahren zur Herstellung von substituierten Vinylcephalosporinverbindungen mit Z-Konfiguration an der exocyclischen Doppelbindung gemäß den Ansprüchen 1-22 der allgemeinen Formel:

   CHCONH NKP¹

   /J

   Μ/24 279 -7-

   worin

   5 η für 0 oder 1 steht,

   1 3

   R ein Wasserstoffatom, OP , eine Niedrigalkoxy-

   gruppe oder ein Halogenatom bedeutet,

   12 3
   P , P und P Wasserstoffatome oder übliche, in

   der Cephalosporinchemie verwendete Schutzgruppen

   ^O ^rür Amino-, Carboxy- und Hydroxygruppen bedeuten,

   2 3

   R ein Wasserstoffatom, OP oder eine Niedrig-

   alkoxygruppe bedeutet und R ein Wasserstoffatom, eine C.-C.-Alkyl-,

   C₇-C₁₄~Aralkyl-, Heterocyclothio-C,-C.-Alkyl-, C₁-C.-Alkoxy-C^-C.-alkylgruppe oder die

   Gruppe AIkX bedeutet, wobei

   Alk einen Alkyliden- oder Alkylenrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeutet, und
   ^ ^eiⁿ Brom-, Chlor- oder Jodatom bedeutet

   und

   der pharmazeutisch verträglichen Säureadditxonssalze

   und Metallsalze davon,

   dadurch gekennzeichnet , daß

   man

   M/24 279 -B-

   A) ein Halogenid der allgemeinen Formeln:

   QCH₂X oder R³CH₂X

   worin X für Cl, Br oder J steht, mit einem Triarylphosphin in einem reaktionsinerten, organischen flüssigen Träger bei 20 bis 150⁰C zu einem Phasphonium-10 salz umsetzt,

   B) das Phosphoniumsalz in einem mit Wasser nicht mischbaren, flüssigen, organischen Lösungsmittel mit einer wäßrigen Base zu einer Phosphoranyl-Ig verbindung der allgemeinen Formeln:

   QCH=PAr₃ oder R³CH=PAr₃

   umsetzt,

   C ) eine Verbindung der allgemeinen Formel:

   QCH=PAr-,

   unter wasserfreien Bedingungen bei -40⁰C bis

   +50⁰C in dem erwähnten, mit Wasser nicht mischbaren, flüssigen organischen Lösungsmittel mit einer Carbonylverbindung der allgemeinen Formel

   ^r

   oder'

   unter den gleichen Reaktionsbedingungen eine Verbindung der allgemeinen Formel:

   R³CH=PAr₃ "

   M/24 279

   mit einer Carbonylverbindung der allgemeinen Formel:

   QCHO

   zur Reaktion bringt,

   wobei Q einen Rest der Formeln:

   P¹NH.

   NHP"

   (0)

   AcNH

   (0)

   B=N-

   (0)

   ^C02

   bedeutet, η, R¹, P¹ Bedeutungen besitzen und

   η, R , P , P , P und R die oben angegebenen

   Ac eine bei Cephalosporinverbindungen üblicherweise vorhandene Acylgruppe bedeutet, und

   B eine Alkyliden- oder Aralkylidenschutzgruppe bedeutet, worin

   M/ AA A /⁽J

   D) in die so erhaltene 3-substituierte-7-Aminoceph-3-em-Verbindung, erforderlichenfalls nach Abspalten von einer oder mehrerer der Schutzgruppen

   P³. P². P³.

   nen · Formel:

   12 3
   P , P', P , Ac und B, den 7-Acylrest der allgemei·

   1 2
   worin R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, einführt und

   E) die so erhaltene Verbindung gewünschtenfalls in ein Säureadditions- oder Metallsalz überführt.

   24. Pharmazeutisches Mittel, enthaltend wenigstens eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 22, gegebenenfalls in Kombination mit pharmazeutisch verträglichen Trägern und Hilfsstoffen.

   25. Pharmazeutisches Mittel nach Anspruch 24 in Dosiseinheitsform, enthaltend eine antibakteriell wirksame, nicht-toxische Menge wenigstens einer Verbindung nach Anspruch 14 in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger.

   26. Diphenylmethyl 7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-

   (4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-chlormethyl-3-cephem-4-carboxylat.

   27. Diphenylmethyl 7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-jodmethyl-3-cephem-4-carboxylat.

   * ■

   » * ft

   3A02642

   28. Diphenylmethyl 7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(triphenylphosphonio)-methyl-3-cephem-4-carboxylatjodid.

   29. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen gemäß den Ansprüchen 26-28, nämlich
   Diphenylmethyl 7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido]-S-chlormethyl-S-cephem-4-carboxylat (I),

   Diphenylmethyl 7ß-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphenyl)acetamidoJ-3-jodo-3-cephem-4- carboxylat (II) und

   Diphenylmethyl 7ß-£D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-(triphenylphosphonio)-methyl-3-cephem-4-carboxylatjodid (III)

   dadurch gekennzeichnet , daß

   man

   Benzyhydry1-7-amino-3-chlormethy1-3-cephem-4-carboxy-

   lat und D-2-(t-Butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxy-

   phenyl)-essigsäure zur Verbindung I umsetzt,

   anschließend die Verbindung I mit Natriumjodid zur Verbindung II umsetzt, und

   die Verbindung II dann mit Triphenylphosphin zur Verbindung III umsetzt.