LU85184A1 - Vinylcephalosporines substituees - Google Patents

Description

VINYLCEPHALOSPORINES SUBSTITUEES

. L'invention concerne des dérivés de céphalosporines possédant les groupes 3-((Z)-l-propényl) et 7-phénylglycylamido, ces derniers pouvant 5 être substitués et elle concerne des procédés de traitement d'infection bactérienne utilisant ces composés.

Les dérivés de 3-formylceph-3-ëme utilisés comme intermédiaire dans un procédé de préparation des vinylcéphalosporines substituées en position 3 de la présente invention peuvent se préparer par oxydation 10 des 3-hydroxymêthylceph-3-èmes correspondants obtenus par hydrolyse ί enzymatique des céphalosporines correspondantes. Ce procédé est décrit dans l'art antérieur par Chamberlin, brevet des Etats Unis d'Amérique n° 3 351 596 (7 novembre 1976) qui décrit entre autres les dérivés II et III.

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j—1 O / “2=3 ' 20 *- ÇU, , - <Qwp>.

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Chamberlin (loc. cit.) décrit des dérivés sur le groupe 3-CHO obtenu avec des réactifs carbonylës tels que la semicarbazide et l'hydroxyla-mine, mais il n'y a aucune description d'une alkylation quelconque d'un 30 carbone du 3-CHO.

2

Les sulfoxydes correspondants sont plus stables et ils peuvent se préparer avec un meilleur rendement (Webber, brevet britannique n° 1 341 712 publié le 23 décembre 1973).

La première description de céphalosporines substituées par un 5 radical alkényle en position 3 a été faite par Clark et col 1. dans le brevet britannique 1 342 241 publié le 3 janvier 1974 (correspondant au ^ brevet des Etats Unis d'Amérique n° 3 769 277 et 3 994 884 publiés respectivement le 30 octobre 1973 et le 30 novembre 1976). Les composés IV et V sont décrits aux pages 25 et 29 du brevet britannique.

(/ y ÇHCONB-t-1^ JLch2CONK-|- NS2 E j-N\xÿL-eB-CHCH3

°°2Η CO,K

15 2

IV V

Ces composés se préparent en faisant réagir la 3-triphénylphosphonium-mêthyl céphalosporine avec le formaldéhyde ou l'acétaldéhyde. Le procédé inverse consistant à faire réagir un dérivé de phosphoranylidine de 3 4 20 formule R3P=CR R avec une 3-CHO céphalosporine est également décrit dans ce brevet à la page 5. Il est indiqué dans le brevet des Etats Unis d'Amérique n° 4 107 431 que le composé IV est absorbé lorsqu'on l'administre par voie orale.

Une autre description antérieure de composés de ce type a été , 25 faite par Webber et Coll., J. Med. Chem. 18(10) 986-992, (1975) et dans le brevet des Etats Unis d'Amérioue n° 4 065 620 du 27 décembre 1977 qui décrit dans ces colonnes 3, 4 et 5 le genre auquel appartiennent les présents composés. Les composés spécifiques décrits sont représentés par la formule VI.

30

O- CHCONH-j-N

o J

OO,K

35 2 (CW) 5 3 D'autres variantes de ce type sont décrites dans le brevet des Etats Unis d'Amérique n° 4 094 978 du 13 juin 1978 et 4 112 087 du 5 septembre 1978 oQ sont décrits les composés VII et VIII.

CHCCNH-p^^ S

- * //—N — CH=CHŒ2Œî

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10 C02H VII

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Jr— N CH=CHCH2OCH3 η I VI11 co2h (t=œs) 20 Ü.S. 4,112,087 Ccl. 31 D'autres céphalosporines substituées par un radical alkényle en position 3 sont décrites dans les brevets publiés suivants: 25 Brevet des Etats Unis d'Amérique n° 3 830 700, O'Callaghan et Coll.

- (20 avril 1974), composé analogue de la 3-(nitrostyryl)céphalexine

Brevet des Etats Unis d'Amérique n° 3 983 113, Beeby (28 septembre 1976)

Brevet des Etats Unis d'Amérique n° 4 049 806, Beeby (20 septembre 30 1977)

Brevet des Etats Unis d'Amérique n° 4 139 618, Beeby (12 février 1979) 3-(hétérocyclothi o)propényl-céphalospori nés.

Brevet des Etats Unis d'Amérique n° 4 147 863» Miyadera et Coll.

35 (3 avril 1979), 3-(l-méthyl-5-tëtrazolyl)vinyl-céphalosporines.

Demande de brevet allemand publié 3 019 445 (décembre 1980) 3-(sulfonyloxy)vinyl-céphalosporinés.

4

Brevet français 2 460 302 (23 janvier 1981), dérivés analogues de la 3-(diméthylamino)vinyl-céphalexine.

Européen n° 30630 (24 juin 1981), acide 7-{(3-méthanesulfonamido-phényl)-a-aminoacêtamido}-3-vinylceph-3-ème-4-carboxyliqufc.

5 Brevet des Etats Unis d'Amérique n° 4 255 423, Beattie et Coll.

(10 mars 1981)

Brevet des Etats Unis d'Amérique n° 4 390 693, Beattie et Coll.

(28 juin 1983)

Acides 7-(2-thiényl)acétamido-3-(3-acétoxy-l-propënyl) et 10 -3-(hêtërocyclovinyl)ceph-3-ème-4-carboxyliques et dérivés analogues 7a-méthoxy.

Les principales céphalosporines actives par voie orale disponibles dans le commerce, l'utilisation à laquelle sont destinés les présents composés, sont la céphaléxine, céphadroxyle, céphradine, et le cépha-15 chlore. Ces substances ont les formules IX, X, XI et XII.

20 ff 3 Nh2

œ2H 0 COjH

R=H céphalexine IX cénhachlore XI

R=Œî céfadroxile X

25 )r

o I

30 * C02H

céphradine χτχ

Ces composés font l'objet des brevets suivants: 35 - Céphalexine U.S. 3 507 861 (21 avril 1970) - Céphadroxyle U.S. 3 489 752 (13 janvier 1970) (Re 29,164) - Cêphachlore U.S. 3 925 372 (9 décembre 1975) - Céphradine U.S. 3 485 819 (23 décembre 1969) 5

Les structures correspondantes sont celles de la 3-chlorocépha-droxyle et de la 3-hydroxycêphadroxyle qui ont été respectivement décrites dans le brevet U.S. 3 489 751 du 13 janvier 1970 et le brevet britannique 1 472 174 (publié le 4 mai 1977).

5 La présente invention procure les composés de formule XIII et XI;.

(O)

R2-/ V- CHCONH._r——S'N

v=/ 1 i I

/ NHPX J_j!j Λ-CH=CHCE3 10 K1 // 'l co2s2

Formule XIII (O) 15 | n

R2-U \- CHCONH--S "N

>_/ i ! H

/ NHP i-N. -CH*CHA13cX

R1 // • Ο I 2

20 C02P

Formule XIV

Dans ces formules: 25 n est un entier égal à 0 ou 1 1 3 r R représente un hydrogène, OP , un alkoxy inférieur ou un halogène comprenant chlore, brome, fluor et iode; 12 3 P , P et P sont des atomes d'hydrogène ou des groupes protecteurs classiques utilisés dans la chimie de la céphalosporine avec res- 30 pectivement des groupes amino, carboxy et hydroxy; 2 3 R représente un hydrogène, OP ou un alkoxy inférieur;

Alk représente un groupe alkylidène ou alkylëne possédant de 1 à 4 v atomes de carbone; et X représente un chlore, un brome ou l'iode. · i 12 3 35 Ces dérivés dans lesquels n est égal à 1, et P , P et P repré sentent des groupes protecteurs classiques sont des intermédiaires de s 6 préparation des produits finaux biologiquement actifs de la présente invention qui sont représentés par la formule XIII lorsque n est égal à 0 et P , P , et P représentent de l'hydrogène. Ces produits sont intéressants en tant qu1 antibiotiques ä base de céphalosporine efficaces 5 par voie orale possédant une activité forte contre les bactéries gram-positives et un spectre d'activité amélioré contre les bactéries gram-négatives, diverses bactéries auxotrophes, et des anaérobies correspondantes à la céphaléxine, cephadroxyle, céphachlore et céphradine. Elle donne des concentrations prolongées d'antibiotiques dans le flux sanguin '10 à la suite de l'administration par voie orale et elles conviennent pour l'administration aux êtres humains sur une base mono ou bi-quotidienne

En tant que telles, elles sont administrées en dose allant de 100 mg à 5 000 mg/j selon la taille du patient et l'état de la maladie. On peut les administrer par voie parentérale avec des dosages sembla-15 blés.

Les produits de formule XIV sont intéressants principalement en tant qu'intermédiaires. Cependant, ceux dans lesquels n est égal à 0, et 12 3 * P , P et P représentent un hydrogène, possèdent une activité antibac térienne et ils sont également utiles comme antibiotiques.

- 20 Etant donné ces propriétés, les composés de formule XIII et de 12 3 formule XIV dans lesquels n est égal à 0 et P , P et P représentent un hydrogène, sont utiles au traitement d'infection bactérienne causée par < des organismes sensibles chez les mammifères. A cette fin, on les administre par voie orale ou parentale en doses non toxiques ayant une ' 25 efficacité antibactérienne en tant que tels ou sous la forme de l'un de leurs sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables, de sels de métal ou d'amine pharmaceutiquement acceptables ou sous la forme d'ester pharmaceutiquement acceptable.

Les sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables sont 30 ceux dans lesquels l'anion ne contribue pas de façon significative à la toxicité du sel et les sels qui sont compatibles avec les véhicules pharmaceutiques courants et sont adaptés à l'administration par voie orale ou parentérale. Ils comprennent les sels dé formules XIII et XIV dans lesquels n = 0 et P^ représente un hydrogène avec des acides 35 minéraux tels que l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique, l'acide phosphorique et l'acide sulfurique, avec des acides carboxyliques organiques ou des acides sulfoniques organiques tels que l'acide acétique, l'acide citrique, l'acide maléique, l'acide succinique, l'acide benzoïque, l'acide tartrique, l'acide fumarique, l'acide mandëlique, 7 l'acide ascorbique, l'acide malique, l'acide méthanesulfonique, l'acide paratoluènesulfonique et d'autres acides connus et utilisés dans la technique de la pénicilline et de la céphalosporine. La préparation de ces sels est effectuée à l'aide de techniques classiques comprenant la 5 réaction de l'une des substances de formules XIII ou XIV dans lesquelles n est égal à 0 et P* représente un hydrogène avec l'acide en quantité sensiblement équivalente.

De même, les sels de métal et d'ami de pharmaceutiquement accepta- ► blés sont ceux des composés de formules XIII et XIV dans lesquelles n ? 10 est égal à 0 et P représente un hydrogène, qui sont stables dans les ? conditions ambiantes et dans lesquels le cation ne contribue pas de façon significative à la toxicité ou à l'activité biologique du sel. Des sels de métaux convenables comprennent les sels de sodium, potassium, baryum, zinc et aluminium. On préfère le sels de sodium ou de potassium. 15 Les sels d'amine préparés à partir d'amines utilisés par exemple avec la benzyl pénicilline qui sont capables de former des sels stables avec le groupe acide carboxylique comprennent des trialkylamines tels que triëthylamine, procaine, dibenzylami ne, N-benzyl-g-phénëthylamine, 1-ëphénami ne, N,N'-dibenzyléthylènedi ami ne,déhydroabi éthylamine, 20 N-éthylpipéridine, benzylamine, et dicyclohexylamine.

Les esters pharmaceutiquement acceptables comprennent ceux qui sont actifs en soi ou qui servent comme pro-médicaments en étant hydro-lysês dans le corps pour procurer 1'antibiodique en soi. Des esters de ce dernier type pouvant convenir sont les phénacyl acétoxyméthyl, 25 pivaloyloxyméthyl, α-acétoxyêthyl, α-acétoxybenzyl, α-pivaloyloxyéthyl, 3-phtalidyl, 5-indanyl, méthoxyméthyl benzoyloxyméthyl, α-ëthylbutyryl-oxyméthyl, propionyloxyméthyl, valéryloxyméthyl, isobutyloxyméthyl, glycyloxyméthyl et d'autres connus dans les techniques de la pénicilline et de la céphalosporine.

30 Les composés de formules XIII et XIV dans lesquelles n est égal à 12 3 0 et P , P et P représentent des atomes d'hydrogène et leurs sels sont tels que définis ci-dessus, peuvent être formulés pour utilisation par voie orale ou parentérale de façon classique en utilisant des véhicules et des excipients pharmaceutiques connus et ils peuvent présentés sous 35 forme de dose unitaire ou sous forme de container de doses multiples.

Les compositions peuvent se présenter sous forme de tablettes, capsules, solutions, suspensions ou émulsions. Ces composés peuvent aussi être formulés sous la forme de suppositoires en utilisant les bases de 8 suppositoire classique telles que le beurre de cacao ou d'autres matières grasses. Les composés peuvent, si on le souhaite, être administrés en combinaison avec d'autres antibiotiques comprenant des céphalosporines, pënillicines et aminoglycosides.

5 Le tableau 1 contient un résumé des structures des produits décrits dans les modes opératoires 1 à 43. La plupart de ces composés sont des 73-(D-phénylglycylamido)cëphalosporines dans lesquels le v radical 1-propëne-l-yl est en position 3. L'atome de carbone terminal du „ substituant propényle de quelques uns de ceux-ci porte un substituant 10 tel qu'un groupe alkyle (méthyle), halogène (chlore ou iode), un groupe aryle (phényle), un groupe hétérocyclothio (l,2,3-triazol-5-ylthio) eu un groupe alkoxy (rnéthoxy). Le groupe phénylglycylamido peut être non substitué ou mono- ou disubstitué par un hydroxy, alkoxy ou un halogène.

TABLEAU 1 15 Produit décrit dans les modes opératoires 1 à 43

R2——ÇKC0NE—-Γ S N

Rl' NH2 i-N\^J—CH=CHR3

20 6 I

co2h

1 p O

Composé n° R_ R_ R_ (configuration) 25 9 (BMY-28100) H OH -CH3 (Z) 13 (BBS-1058) H OH -C^ (Z)

11 (BBS-1064) H OH -H

24 (BBS-1065) H H -CH3 (Z) 26 (BBS-1066) H H -CH2C1 (Z) 30 8 (BBS-1067) H 0H -CH3 (E) 15 (BBS-1076) H 0H "CH2C6H5 21 (BBS-1091 ) H 0H -CH2-S Ji jj

T

H

35 17 (BBS-1092) H 0H -CH20CH3 (Z) 32 (BMY-28060) Cl 0H -CH3 (Z) 37 (BMY-28068) HO 0H -CH3 (Z) 42 (BMY-28097) CH30 0H -CH3 (Z) 9

Le tableau 2 procure un résumé de l'activité antibactérienne in vitro des substances décrites dans la présente demande. Les concentrations inhibitrices minimum déterminées par la technique de dilution à l'agar-agar pour trois groupes d'organismes désignés Gp-Ia, GP-Ib et ? 5 Gn-Ia sont indiquées. Chacun de ces groupes d'organismes est constitué de cinq souches individuelles de micro-organismes qui sont identifiées dans une note de base du tableau. Les organismes Gp-Ia sont des staphylocoques gram+ sensibles à la pénicilline. Les organismes Gp-Ib sont des staphylocoques gram+ qui sont résistants à la pénilline et 10 produisent de la pénicillinase. Les organismes Gn-Ia sont des bactéries « gram- qui sont sensibles à l'ampicilline et à la céphalothine. Les présentes substances ont généralement une activité faible vis-à-vis des bactéries gram- résistantes à l'ampicilline et à la céphalothine. On peut tirer les conclusions suivantes du tableau 2 en ce qui concerne 15 l'activité antibactérienne in vitro de ces composés.

Tous ces composés présentent une bonne activité contre les staphy- · locoques sensibles à la pénicilline (Gp-Ia). Ils sont en général moins actifs contre les staphylocoques résistants à la pénicilline (Gp-Ib) d'un facteur de trois ou plus de trois. Dans chaque cas, cependant, les 20 composés sont plusieurs fois plus actifs que la céphalêxine et la ~ cêphadroxyle.

Seuls ceux de ces composés possédant le groupe cis(Z)-propényle non substitué en position 3 possèdent une bonne activité contre les bactéries gram- (Gn-Ia). Se référer aux composés n° 9, 24, 32 et 42. Le 25 composé trans(E)-propényle, composé n° 8, est moins actif contre les bactéries gram- d'un facteur de 8 par rapport au composé cis-propényl correspondant, composé n° 9. De même, la substitution du groupe méthyle terminal sur le substituant propényle en position 3 semble conduire à une réduction de l'activité gram-. Se référer aux composés n° 13, 15, 21 30 et 17. Ceci est également vrai du composé vinylique n° 11. Ces composés sont néanmoins de puissants agents anti-bactériens sensiblement équivalents à la céphalêxine et au cêphadroxyle. La substitution sur le cycle n'est en aucune façon préjudiciable à l'activité anti-bactérienne. A - titre de comparaison, voir les composés n° 9, 24, 32 et 42. Il semble 35 que le composé n° 37 soit une exception à chacune des conclusions précédentes mais en fait, c'est une substance hautement active à la fois vis-à-vis des bactéries gram+ et gram- contre le montre le tableau 3.

10 TABLEAU 2

Technique de dilution à l'agar-agar (Agar-agar Mueller-Hinton) Concentration inhibitrice minimum (mcg/ml)

Gp la3 Gp Ib3 Gn la3 5 Composé n° 1_ 2 1 2 _1 _2 9 (BMY-28100) 0,23 0,35 0,92 0,8 0,8 0,7 13 (BBS-1058) 0,40 1,4 4,1 11 (BBS-1064) 0,40 1,2 3,6 24 (BBS-1065) 0,23 0,3 0,92 0,92 0,8 0,8 10 8 (BBS-1067) 0,26 1,4 6,3 15 (BBS-1076) 0,20 0,7 >50 21 (BBS-1091) 0,61 2,7 2,7 17 (BBS-1092) 0,53 2,1 2,7 32 (BMY-28060) 0,13 0,53 1,1 15 37 (BMY-28068) 6,30 7,2 6,3 42 (BMY-28097) 0,354 1,24 0,534 céphaléxine 1,2 0,70 4,1 3,6 6,2 4,1 céphadroxyle 1,2 1,10 3,6 4,1 8,3 8,3 1. les colonnes 1 et 2 indiquent des essais séparés.

20 2. les colonnes 1 et 2 indiquent des essais séparés.

- 3. moyenne de cinq organismes dans chaque groupe.

Gp-Ia staphylocoques gram+, sensibles à la pénicilline; aucune production de pênicillinase.

S. aureus Smith A9537 25 S. aureus A9497 S. aureus Terajima S. aureus A 9534 S. aureus A9601

Gp-Ib staphylocoques gram+, résistants à la pénicilline; 30 producteurs de pênicillinase.

S. aureus 193 S. aureus BX-1633-2 A9606 S. aureus A15092 S. aureus Russell 35 S. aureus A9602

Gn-Ia bactéries gram-; sensibles à l'ampicilline et à la céphalothine.

E. coli Juhl A15119 11 E. coli A9660 K. pneumoniae Dil P. mirabilis A9554 P. mirabilis A9900 « 5 4. ne fait pas partie de l'essai 1_, testé séparément.

Le tableau 3 contient des données comparatives pour l'activité antibactérienne in vitro contre les mêmes organismes que dans le tableau

V

2 en employant deux milieux de culture bactériologiques différents. L'agar-agar Mueller-Hinton est le milieu standard employé dans les tests 10 auxquels on se réfère dans le tableau 2. Le tableau 3 contient une comparaison des concentrations inhibitrices minimum de trois des composés essayés, déterminés tout d'abord dans le milieu Mueller-Hinton et ensuite dans l'agar-agar comme nutrient. Le composé n° 9 qui contient une substitution par un hydroxy en position 4 dans le cycle du phényle 15 et le composé n° 42 qui contient une substitution par un 3-mêthoxy-4-hydroxy dans le cycle du phênyl ne reflètent qu'un effet modéré du milieu. Ceci signifie que les différences dans le MIC sont inférieures à trois fois. Le composé n° 37, composé substitué par un 3,4-dihydroxy-phényle reflète des différences d'activités entre les deux milieux de 6 20 à 12 fois, les concentrations inhibitrices minimum dans l'agar-agar comme nutrient étant de beaucoup inférieures à celles déterminées dans l'agar-agar de Mueller-Hinton. Par conséquent, on en conclut que le composé n° 37 est comparable dans son effet antibactérien aux autres céphalosporines possédant le groupe cis-propënyle en position 3 auquel 25 on se réfère dans le tableau 2. Ce phénomène selon lequel un antibiotique manifeste une activité plus importante dans un type de milieu nutritif que dans un autre a été décrit et étudié auparavant. Confère T.

A. Pursiano et Coll., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Vol. 3, n° 1, pp 33-39 (1973).

30 TABLEAU 3

Comparaison du milieu de test Technique de dilution de l'agar-agar Concentration inhibitrice minimum (mcg/ml)

Composé n° Gp la2 Gp Ib^ Gn la2 35 9 (BMY-28100) A1 0,23 0,92 0,70 B 0,17 0,35 0,70 37 (BMY-28068) A 4,8 6,3 5,5 B 0,40 0,61 0,92 12

Composé n° Gp la2 Gp Ib2 Gn la2 42 (BMY-28097) A 0,35 1,2 0,53 B 0,23 0,40 0,40 1. A agar-agar Mueller-Hinton - 5 B agar-agar nutrient 2. valeur moyenne pour les mêmes groupes d'organismes que dans le tableau 2.

Les corrélations d'activité de structure que l'on déduit des études in vitro qui précèdent sont supportées par les résultats des 10 études in vivo sur les souris. Le tableau 4 donne une liste des doses protectrices pour les souris infectées par un inoculum léthal de bactéries. Deux bactéries différentes sont employées dans les études, l'une étant un organisme gram+ et l'autre un organisme gram-. La dose protectrice (PD5q) est celle qui donne une survie de 50¾ après cinq jours 15 lorsqu'on l'administre à un groupe de souris infectées. Normalement les souris infectées non traitées meurent dans les trois jours suivant l'injection de l'inoculum léthal.

TABLEAU 4

Dose protectrice pour des souris infectées par un inoculum'*' léthal 20 Traitement par voie orale - Composé n° S. aureus Smith E. coli Juhl 9 (BMY-28100) 0,14 (0,31)2 1,2 (8,4)2 13 (BBS-1058) 0,32 (0,31) 3,0 (8,4) 11 (BBS—1064) 0,18 (0,31) 3,8 (8,4) 25 23 (BBS-1065) 0,18 (0,27) 1,5 (8,2) 8 (BBS-1067) 0,20 (0,31) 7,5 (8,2) 32 (BMY-28060) 0,17 (0,22) 3,04 (8,4) 37 (BMY-28068) 0,13 (0,27) 0,44 (8,2) 42 (BMY-28097) 0,093 30 1 Dose en mg/kg empêchant la mort pendant cinq jours pour 50% des animaux dans des groupes de cinq souris traitées avec diverses doses du composé à essayer le jour de l'infection; déterminée par interpolation de la courbe dose/réponse; les animaux non traités meurent dans les trois jours.

35 2 les valeurs entre parenthèses sont celles de la céphaléxine dans le même essai.

3 dans cet essai, on obtient une valeur de 0,16 mg/kg pour le BMY-28100; les valeurs de contrôle pour la céphaléxine ou le céphadroxyle ne sont pas disponibles.

13

Les données du tableau 4 sont tirées de plusieurs expériences différentes. Dans ces expériences, on utilise la céphalëxine comme traitement de contrôle. La valeur PD^q déterminée par la céphalëxine dans la même expérience est donnée entre parenthèses à côté des valeurs 5 PDgQ des composés essayés. Il est évident que chacune des céphalosporines possède une bonne activité contre l'infection par le staphylocoque aureus gram+ et que les composés portant le groupe ci s- propényl en position 3, les composés 9, 24 et 37 sont plus actifs contre l'infection - par le gram-.

10 Le tableau 5 contient des données comparatives de niveaux sanguins r pour des souris traitées par voies orale et intramusculaire avec les composés à essayer énumérés dans le tableau 1. Ce tableau reflète une absorption par voie orale uniformément bonne sauf pour le composé n° 21 portant un substituant hétérocyclothio sur le groupe 3-propënyle. Le 15 composé n° 37 manifeste des niveaux sanguins exceptionnellement, élevés dans la souris à la suite de l'administration par voie orale. Il apparaît que ce composé s'est métabolisé dans le rat pour donner le composé n° 42. Confère le mode opératoire 43. Le composé n° 37 est le composé 7 3,4-dihydroxyphénol et le composé n° 42 est le composé 3-méthoxy-4- 20 hydroxyphényle. Il apparaît que ce dernier a une activité élevée in vitro et in vivo.

Le tableau 6 contient des données supplémentaires in vivo pour le composé n° 9 vis-à-vis de quatre autres organismes par comparaison avec la céphalëxine, le céphachlore et le céphadroxyle. Les tableaux 7 et 8 25 contiennent des données comparatives in vitro pour le composé 9 contre la cêphaléxine, le céphadroxyle et le céphachlore à l'égard d'un certains nombres de streptocoques Neisseria, Haemophilis et divers organismes anaérobies.

Dans des expériences de récupérations urinaires du rat, la rëcupë-30 ration en 24 heures du composé n° 9 de l'urine de rats traitée par voie orale est comparable à celle de la céphalëxine et du céphadroxyle et supérieure à celle du céphachlore. Les études de stabilité comparant le composé n° 9 avec la céphalëxine et le céphachlore dans une solution utilisant un tampon phosphaté à pH 6,5 et à pH 7,0, du sérum humain 35 (pH 6,8), du sérum de cheval (pH 7,6), et du sérum de veau (pH 8,2) comme véhicule a révélé que le composé n° 9 est remarquablement plus stable que le céphachlore et qu'il est comparable à la céphalëxine.

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17 TABLEAU 6

Dose PD^q protectrice pour des souris infectées par un inoculum léthal Traitement par voie orale : 5 Organisme 9 (BMY-28100) Céphaléxine Céphachlore Céphadroxyle S. aureus BX-1633 2,2 17 2,2 7,2 S. pyogenes A2Ü2Û1 0,11 0,74 0,14 0,25 H. influenza A9729 1,8 18 1,6 25 P. mirabilis A9554 1,8 12,5 1,8 14 10 TABLEAU 8

Activité in vitro contre les organismes anaérobies MIC (mcg/ml)

Organisme ß-Lac- 9(BMY- cépha- cépha- 25 tamase 28100) léxine chlore

Gn, bâtons B. fragilis A20928-1 (-) 0,8 12,5 3,1 B. fragilis A219Û0 (-) 50 12,5 6,3 B. fragilis A20935 (-) 0,8 6,3 3,1 moyenne géométrique 3,2 9,9 3,9 20

Gn, bâtons B. fragilis A22053 (+) 50 25 100 B. fragilis A22021 (+) >100 100 >100 B. fragilis A22693 (+) >100 >100 >100 moyenne géométrique >100 > 75 >100 25 B. fragilis A22695 (+) >100 100 100 B. fragilis A22533 (+) >100 >100 >100 moyenne géométrique >100 >100 >100 30 Gp, bâtons C. difficile A21675 * 6,3 100 25 C. perfringens A9645 0,4 12,5 1,6

Gp, coques P. acnes A21933 0,4 1,6 0,8 P. anaerobius A21905 0,8 6,3 0,4 moyenne géométrique 0,95 11 35___ * résistant à la clindamycine.

Les composés de la présente invention sont préparés en appliquant les voies de synthèse décrites dans le brevet britannique n° 1 342 241, 18 le brevet U.S. 3 994 884 et le brevet U.S. 4 107 431 cités ci-dessus à des matières premières choisies de façon convenable. Essentiellement, la formation du groupe vinyle substitué en position 3 des céphalosporines de la présente invention implique la réaction d'un réactif halogénure 5 avec une triarylphoèphine pour donner un sel de phosphonium qui, par traitement avec une base, donne un intermédiaire phosphoranylé. Ce dernier est alors traité avec un réactif carbonyle pour donner le ~ composé de la présente invention. Soit le réactif halogénure, soit le - réactif carbonylé, contient le noyau de céphalosporine. Ceci est illus-10 tré dans le schéma de réaction suivant.

" Réactif Intermédiaire Réactif halogénure phosphoranylé carbonylé R ^-jjj QCHnX tC6H5>3P , (QCH=P(C,H5)3) J^C-0 gjÿ 15 base o_«

Schéma de réaction 1 ^

Schéma de réaction 2 QCH=CHR3 —> formules S* XIII ou

H /QCH=0 XIV

20 ^CHX ^C6H5^3P H-y ^ / base C C-P(C6H5)33 3 v

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3

Dans le schéma de réaction précédent, R représente H, un alkyle en Cj_^, un alkoxy C^-alkyle C^, un aralkyle en ou le groupe 25 AlkX dans lequel Alk et X sont tels que définis ci-dessus. Le symbole Q se réfère au noyau de l'acide 7-amino-3-céphem-3-yl-4-carboxylique dans lequel les groupes ami no et acide carboxylique peuvent porter des groupes protecteurs tels que le groupe silyle ou d'autres groupes de l'homme de l'art de la chimie des antibiotiques à base de béta-lactame, 30 ou Q peut être un noyau d'acide 7-acilamino-3-céphem-3-yl-4~carboxylique ou le groupe 7-acylamino peut être un groupe apparaissant de façon classique dans les antibiotiques de céphalosporine comprenant le groupe phénylacétamido-a-amino-a-substitué de la présente invention tel que " défini par rapport aux formules XIII et IX. Les sulfoxydes des corps 35 précédents présentent des avantages. Spécifiquement, Q présente l'une des formules suivantes: 19 (Ο) \ η (Ο) S ( η 5 ^ j-Sv^ œ/ co2?2 (?)η (Ο) ίο I i * ΑώΐΞ-ζ > β=Ν—j_ r^f~ Y*^f~ ο ' _2 ο 1 °¥ Co/ 15 dans lesquels: R* a la même signification que ci-dessus; n est un entier égal à O ou 1, indiquant le nombre d'atome d'oxygène attaché au soufre;

Ac indique un groupe acyle de l'espèce que l'on trouve ordinairement dans les 7-acylaminocéphalosporines tels que phénylacétyle, phénoxyacëtyle; et B est un groupe protecteur alkylidène ou aralkylidène dérivant d'un aldéhyde ou d'une cétone tel que le groupe benzylidène que l'on * enlève facilement dans une étape ultérieure, par exemple par hydrolyse en utilisant le réactif T de Girard.

1 ? 3 P , P , et P représentent des atomes d'hydrogène ou des groupes protecteurs de l'espèce conventionnellement utilisée dans la chimie de la céphalosporine avec des groupes amino, des groupes hydroxy et le groupe carboxyle.

2

Les groupes carbonyles protecteurs (P ) convenables comprennent des groupes aralkyles tels que benzyle, p-méthoxybenzyle, p-nitrobenzyle et des groupes diphénylméthyl (benzhydryle) alkyle tels que t-butyle; des groupes haloalkyles tels que 2,2,2-trichloroéthyle et d'autres groupes carboxyles protecteurs décrits dans la littérature, par exemple dans le brevet britannique 1 399 086. On préfère utiliser des groupes 20 carboxyles protecteurs que l'on élimine facilement par traitement à l'acide particulièrement le benzhydryle ou le t-butyle.

Les groupes protecteurs amino et hydroxy (P et P ) sont bien connus dans l'état de la technique et ils comprennent les groupes 5 trityle et acyle tels que chloroacétyle, formyle, trichloroéthoxy-carbonyle, tert.-butoxycarbonyle, carbobenzyloxy, etc. De nouveau, on préfère Tes groupes protecteurs amino que l'on élimine facilement par “ traitement avec un acide, notamment le groupe tert.-butoxycarbonyle.

Dans les schémas de réaction 1 et 2, lorsque l'on utilise le noyau 10 K de céphalosporine sous la forme de l'oxyde-1 (ri=l), les oxydes sont s préparés par des modes opératoires connus tels que par oxydation de la céphalosporine correspondante (n=0) avec l'acide m-chloroperbenzoïque ou l'acide peracétique. Dans une étape ultérieure de la synthèse, l'oxyde-1 est réduit par des modes opératoires connus, par exemple par réduction 15 avec l'ion iodure dans un milieu aqueux.

La conversion du réactif halogénure de formule QCh^X selon le schéma 1 en intermédiaire phosphoranylë est de préférence effectuée en employant un réactif halogénure dans lequel X représente un iodure. Si l'on utilise un réactif halogénure, chlorure ou bromure, il peut être 20 transformé tout d'abord en iodure par traitement avec 1'iodure de sodium dans une solution dans le dimëthylformamide ou l'acétone. Le réactif iodure réagit facilement avec une triarylphosphine telle que la triphé-nylphosphine dans un véhicule liquide organique qui est inerte au réactif dans les conditions de la réaction. La température ambiante 25 pendant une brève période pouvant aller jusqu'à quelques heures constitue des conditions convenables. Les triarylphosphines convenables outre la triphénylphosphine comprennent les composés facilement disponibles possédant des groupes aryles compatibles avec la réaction tels que le phényle substitué par exemple tolyle, naphtyle, naphtyle substitué, et 30 des groupes hëtëroaromatiques ou hétéroaromatique substitués. La première étape de la réaction implique la formation du sel de phosphonium qui se précipite ordinairement de la solution et est recueilli sur un filtre. Le sel de triarylphosphonium est alors dissous dans un solvant organique liquide convenable, qui est non miscible à l'eau et inerte 35 dans les conditions de la réaction, tel que le chloroforme, le trichlo-roêthylène ou un autre méthane ou éthane polychloré ou bromé. L'intermédiaire phosphoranylë est alors produit in situ par traitement de la solution avec un carbonate, bicarbonate ou hydroxyde de métal alcalin 21 aqueux à la température ambiante. La couche organique contenant l'intermédiaire phosphoranylêe est séparée, lavée à l'eau et séchée de façon usuelle. Le réactif carbonylé représenté dans le schéma de réaction est alors ajouté à la solution sèche de l'intermédiaire phosphoranylé et 5 l'étape finale de la réaction a alors lieu à la température ambiante de nouveau en un temps de réaction relativement bref d'environ 2 à 20 heures. Le produit désiré représenté par la formule QCH=CHR est " récupéré par des techniques connues de 1'homme de l'art du laboratoire « de chimie organique, telles que la chromatographie sur colonne de gel de 10 silice.

1 Les réactifs halogénures de formule QCl^X du schéma 1 sont pro duits à partir des dérivés d'acide 7-amino ou 7-acylamino-3-hydr'oxy-méthyl-ceph-3-ème-4-carboxylique par des méthodes en principe connues.

3

La conversion de l'halogénure réactif de formule R CH2X selon le 15 schéma 2 en intermédiaire phosphoranylé peut s'effectuer avec le chlorure, le bromure ou l'iodure (X = Cl, Br, ou I). Si on le souhaite, le chlorure ou le bromure peuvent être transformés en iodure comme ci-dessus, mais ceci n'est pas essentiel. La réaction avec la triaryl-phosphine telle que la triphénylphosphine est effectuée soit sans 20 solvant, soit dans un véhicule liquide organique inerte dans les condi-tions de la réaction. On peut employer la température ambiante ou des températures élevées de 20 à 150°C, pendant une période de 1 à 24 heures. Ordinairement, le sel de triarylphosphonium précipite et on le recueille sur un filtre. On le dissout alors dans un solvant orga-25 nique liquide convenable tel que le dimêthylsulfoxyde ou un solvant non miscible à l'eau, tel que l'éther ou le tétrahydrofuranne et on le traite avec une base telle que butyl lithium, phényl lithium, mëthoxyde de sodium ou hydrure de sodium pendant une période allant de quelques minutes à quelques heures à une température dans l'intervalle de -40°C â 30 +50°C. Le carbonylé réactif est alors ajouté à la solution réactionnelle sèche et on laisse la réaction avoir lieu à une température de -40°C à +50°C pendant 1 à quelques heures. Le produit désiré, représenté par la formule: /

35 QCH=C

est récupéré comme ci-dessus.

\3 22

On a trouvé que le schéma 1 était convenable pour la préparation des substances de formule: QCH=CHR3 dans laquelle: 5 R représente un'alkyle inférieur, phénylalkyle, naphtalkyle, haloalkyle ou alkoxyalkyle ayant la configuration cis-(Z).

Selon une variante du schéma 1, à laquelle on se référera sous le nom de méthode A, on utilise comme halogénure réactif l'ester de benzhydryle de * l'acide 7ß-{a(N-t-butyxy-carbonylamine)-a-(p-hydroxyphenyl)acétamia'o}-10 3-chlorométhyl-3-céphem-4-carboxylique. Ceci est illustré dans les modes * opératoires 4, 5 et 6.

On a trouvé qu'une autre variante du schéma 1 pouvant convenir était semblable à la méthode A, en ce sens que l'on employait comme matière de départ l'ester de benzhydryle de l'acide 73-{a-(N-t-butoxy-15 carbonylami no)-a-(p-hydroxyphényl )acétami do}-3-chlorométhyl-3-céphem- 4-carboxylique mais, dans la méthode B, on emploie le chloroacétaldéhyde pour produire l'acide 7-aminocéphalosporanique bloqué possédant le groupe 3-chloro-l-propen-l-yl en position 3. Cette dernière substance possède une activité antibactérienne mais pas dans une mesure 20 extraordinaire. Dans la méthode B, on emploie comme intermédiaire le composé 3-chloro-l-propen-l-yl et on le transforme tout d'abord en composé 3-iodo-l-propen-l-yl correspondant que l'on transforme alors avec des thios hëtéroaromatiques pour produire des dérivés de la * 3-hëtéroarylthi oprop-l-èn-l-yl-céphalospori ne.

25 On se référera à une autre variante du schéma 1 sous le nom de méthode C. Dans cette variante, Tester de benzhydryle de l'acide 7-amino-3-chlorométhyl-3-céphem-4-carboxylique est préparé comme ci-dessus et le groupe 7-amino est protégé par réaction avec le benzaldéhyde pour produire le groupe benzylidène protecteur.

30 Ce dernier est alors traité avec de la triphënylphosphine pour procurer le sel de phosphonium que Ton transforme alors avec une base en intermédiaire phosphoranylé et ce dernier est traité avec un aldéhyde pour donner l'acide vinyl-7-aminocéphalosporanique substitué en position 3 que Ton peut alors acylé pour introduire le groupe acyle 35 désiré en position 7.

On propose deux variantes du schéma 2. Dans la première, la méthode D, l'acide 3-hydroxymëthyl-7-phénylacétamido-3-céphem-4- 23 carboxylique préparé comme décrit ci-dessus dans lequel l'acide carboxy- lique est protégé sous la forme d'ester de benzhydryle, est converti en composé 3-formyle correspondant. On laisse alors ce dernier réagir avec 3 l'intermédiaire phosphoranylë dérivé d'un halogénure de formule R Ch^X, 5 comme représenté dans le schéma 2, et le groupe 7-acylamino désiré est introduit par un échange d'acyle.

La méthode E est une autre variante du schéma de réaction 2 dans lequel on utilise comme carbonyle réactif, l'acide 7-p-hydroxyphényl-glycylamido-3-formyl-3-cëphem-4-carboxylique.

10 Etant donné qu'il est facilement disponible, l'acide 7-phényl- acêtamidocéphalosporanique est une matière de départ convenable. Le groupe acétoxy de cet acide peut être facilement hydrolysé par voie enzymatique en utilisant du son de blé comme source d'enzyme pour donner 1'acide 7-phënylacétamido-3-hydroxyméthyl-ceph-3-ëme-4-carboxylique. Le 15 groupe acide carboxylique peut être protégé par conversion en ester de benzhydryle par traitement de l'acide avec du diphényldiazométhane. L'ester est alors traité avec du pentachlorure de phosphore dans des conditions connues conduisant au clivage du groupe 7-phénylacétyle et à la conversion du groupe 3-hydroxyméthyl en un groupe 3-chlorométhyle. La 20 production de l'ester de benzhydryle de l'acide 7-amino-3-chlorométhyl- 3-cëphem-4-carboxylique par ces méthodes, est illustrée dans les modes opératoires 1 et 2.

On peut encore transformer l'acide 7-phénylacétamido-3-hydroxy-méthylceph-3-ème-4-carboxylique en composé 3-halomëthyle et de là en 25 intermédiaire phosphoranylë, ce que l'on fait suivre d'une réaction avec un aldéhyde pour produire la 3-vinylcêphalosporine substituée selon l'une des variantes du schéma de réaction 1.

Le céphalosporine-3-carboxaldéhyde représenté par la formule QCH=0 dans le schéma de réaction ci-dessus servant comme carbonyle réactif 30 dans le schéma de réaction 2, est produit par oxydation d'un ester de l'acide 7-acylamino-3-hydroxyméthyl-ceph-3-ème-4-carboxylique tel que décrit dans le brevet U.S. n° 3 351 596 cité ci-dessus. Le schéma de réaction 2 est celle des deux voies que l'on préfère le moins et il ne semble pas convenir au produit propényle de formule XIII.

3 35 Les composés ayant la formule QCH=CHR existent sous les configu rations cis(Z)- et trans(E). On préfère les composés ayant la figuration cis(ou Z). Ils ont une activité antibactérienne plus importante que les substances correspondantes ayant la configuration trans(ou E). Les 24 composés de formule XIV sont utiles en tant qu'intermédiaires pour la préparation d'autres céphalosporines ayant la formule QCH=CHR dans laquelle R représente le groupe méthylène substitué par le résidu d'un groupe nucléophilique tel que des groupes mercapto, alkylpercapto, 5 arylmercapto ou hëtëroarylmercapto tels que le l,2,3-triazol-5-yl-mercapto et le 2-mêthyl-6-pyridinylmercapto. Ceci est illustré ci-dessous dans la mode opératoire 20. Les composés d'iodométhyle sont préférés en tant qu'intermédiaires pour les procédés de déplacement nucléophiliques.

10 Le schéma 1 est adapté à la préparation d'un produit de formule

* XIV par substitution du carbonyle réactif approprié de formule XAlkCHO

3 par le réactif R CHO représenté.

Modes opératoires des préparations Mode opératoire n° 1 15 3-hydroxymëthyl-7s-phën,ylacétamido-3-céphem-4-carboxylate de benzhydryle (composé 1) A une suspension de tampon de phosphate (pH 7, 162,5 ml) et de son de blé (20 g, sec) à la température ambiante, on ajoute du sel de sodium > de l'acide 7-phënylacétamidocëphalosporanique (5 g, 12,1 mmole) en une 20 seule portion. On surveille l'avancement de la réaction par HPLC jusqu'à ce que l'hydrolyse soit complète (5 heures). On filtre la suspension pour éliminer le son de blé et on refroidit le filtrat à 5-10°C pour une estérification extractive. A la solution refroidie, on ajoute du chlorure de méthylène (32 ml) et ensuite une solution 0,5M de 25 diphënyldiazomëthane dans le chlorure de méthylène (24 ml). Le pH est alors ajusté à 3,0 avec de l'acide phosphorique à 28%. Après 1 heure, on laisse le mélange réactionnel remonter à 20°C. On ajoute lentement 56 ml d'heptane et le produit du titre cristallin qui en résulte est récupéré par filtration. Rendement en produit: 3,0 g (50%).

30 Mode opératoire n° 2 73-amino-3-chloromëthy1-3-céphern-4-carboxylate de benzhydryle (2) H2N--1 ^

’ 3S

COOCH(Ph)2 25 A une bouillie de PCI^ (8,3 g, 40 mmoles) dans CH^C^ (1 000 ml), on ajoute de la pyridine (3,2 g, 40 mmoles) et l'on agite le mélange pendant 20 minutes à 20°C. On ajoute au mélange du 3-hydroxyméthyl-7-phénylacétamido-3-céphem-4-carboxylate de benzhydryle (1), 5,1 g, 5 10 mmoles, tandis que l'on agite à -40°C en une seule portion. Le mélange est agité à -10°C pendant 15 minutes et on le laisse reposer à -10°C à -15°C pendant 7 heures. A la solution refroidie (1-2Û°C), on ajoute du propane 1,3-diol (10 ml) et on laisse le mélange reposer à -20°C pendant 16 heures et ensuite à la température ambiante pendant 10 20 minutes tout en agitant. La solution qui en résulte est lavée avec de l'eau glacée (2 x 20 ml) et du NaCl aqueux saturé (10 ml), on sèche sur MgSO^ et on concentre sous vide. Le résidu à consistance de gomme (12 g) est dissous dans un mélange de CHC13 et de n-hexane (2/1), et on le soumet à une chromatographie en utilisant une colonne sur gel de silice 15 (200 g) et le même solvant comme ëluant. Les fractions contenant le composé du titre sont évaporées sous vide et le résidu est trituré avec du n-hexane pour donner (2) (2,1 g, 51%), fondant à 110°C (déc.).

Les données de l'analyse sont les suivantes: IR : vKBr 3400, 2800, 1785, 1725 cm"1.

20 UV : λ™ 265 nm (E1* 160) max 1cm ' RMN : Æ°"D6 + CDC1, 3,69 (2H, s); 3,43 (2H, s); 5,09 (1H, d, ppm J J = 4,5 Hz); 5,24 (1H, d, J = 4,5 Hz), 6,87 (1H, s); 7,3 (10H, m).

s 25 Mode opératoire n° 3 7ß-(D-2-(t-butoxycarbonylami no)-2-(p-hydroxyphënyl)-acëtamido}-3-chlorométhyl-3-céphem-4-carboxy1ate de benzhydryle (composé 3) 30 H°~^\ Τ’—'y303'5--

NH

GQ-C(CE,), I

2 3 3 CD2Œ(C6E5)2 A un mélange de 20,7 g (0,05 mole) de 7-amino-3-chlorométhyl-3-cépham-4-carboxylate de benzhydryle (2) et 20 g (0,075 mole) d'acide D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxyphényl)acêtique dans 500 ml de 35 26 tëtrahydrofuranne sec (THF), on ajoute 15,45 g (0,075 mole) de Ν,Ν'-dicyclohexylcarbodiimide (DCC) et l'on agite le mélange à la température ambiante pendant 2 heures et on évapore à siccitë. Le résidu est dissous dans 1 1 d'acétate d'éthyle (AcOEt) et la dicyclohexylurée 5 insoluble est éliminée par filtration. Le filtrat est lavé avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium, de l'eau et une solution aqueuse saturée de NaCl, on sèche sur sulfate de sodium anhydre et on évapore à siccitë. Le résidu huileux est passé en chromatographie sur une colonne de gel de silice (Wako gel C-100, 500 g) par élution avec 10 4 1 de chloroforme et 6 1 d'un mélange ehloroforme-méthanol à 1%. Les fractions que l'on souhaite sont rassemblées et évaporées à siccitë. Le résidu huileux est trituré avec un mélange éther-éther isopropylique pour donner 30,6 g (92%) de 3.

Les données de l'analyse sont les suivantes: 15 IR : vKB: cm"1 1790, 1710, 1670, 1500, 1360, 1230, 1150. max RMN . δ0ϋ013 ppm 1,45 (9H, s, C-CH3); 3,4 (2H, br-s, 2-H); 4,28 (2H, s, CH2C1), 4,86 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H); 5,12 (1H, d, 6 Hz, CH-C0); 5,68 (1H, d-d, 8 & 4,5 Hz, 7-H); 6,63 90 (2H, d, 9 Hz, phényl-H); 6,93 (1H, s, CH-Phg); 7,08 (2H, d, 9 Hz, phényl-H); 7,0-7,5 (10H, m, phényl-H).

Le résidu huileux peut être utilisé dans purification chromatogra- phique dans le mode opératoire 4.

Mode opératoire n° 4 25 ; 7ß-{D-2-(t-butoxycarbonylami no)-2-(p-hydroxyphényl)-acétami do>-3- iodomëth,yl-3-céphem-4-carboxy1ate de benzhydryle (composé 4)

Un mélange de 26,6 g (0,04 mole) de 3^ et 18 g (0,12 mole) d'iodure de sodium dans 400 ml d'acétone, est agité à la température ambiante pendant 2 heures et on évapore à siccité. On extrait le résidu avec 30 400 ml d'acétate d'éthyle et l'extrait est lavé avec une solution aqueuse de Na2S203, de l'eau et une solution aqueuse saturée de NaCl. Après évaporation du solvant, le résidu est trituré avec un mélange éther-éther isopropylique pour donner 27 g (89%) du composé du titre. La solution dans l'acétate d'éthyle peut êter utilisée directement dans 35 l'étape suivante (composé 5) sans isoler le composé 4 si on le souhaite. Les données de l'analyse sont les suivantes: IR : vmax ^-1 1790s 1710> 1670> 1500> 1360’ 1220> 1150· 27 RMN 6CDC13 ppm 1,47 (9Hj s’ C"CH3^ 3>3"3’6 (2H’m’ 2-H); 4,20 (2h, s, CH2), 4,89 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H); 5,12 (1H, d, 6 Hz, CH-CO); 5,68 (1H, d-d, 8 & 4,5 Hz, 7-H); 6,62 (2H, d, 9 Hz, phényl-H); 6,92 (1H, s, CHPh2); 7,08 5 (2H, d, 9 Hz, phényl-H); 7-7,5 (10H, m, phényl-H).

Mode opératoire n° 5

Iodure de 7g-{D-2-(t-butoxycarbonylanrino)-2-(p-h.ydroxyphényl )-acétamido}-3-(triphénylphosphonio)méthyl-3-céphem-4-carboxylate de benzhydryle (composé 5) θ |H CH2P(C6H5>3 1

co2c(ch3)3 O Y

15 COjCHlCgH^^

Un mélange de 15,1 g (0,02 mole) de 4 et 15,7 g (0,06 mole) de triphénylphosphine dans 200 ml d'acétate d'éthyle est agité à la tempé-20 rature ambiante pendant 1 heure. Le précipité qui en résulte est recueilli par filtration, ce qui donne 17,4 g (85,5¾) de 5^, fondant à - 170-180°C. On concentre le filtrat à 100 ml et le concentré est dilué avec 500 ml d'éther, ce qui donne la seconde récolte (1,1 g) de jj. Le rendement total est de 18,5 g (91¾). Le rendement d'ensemble en 5 à 25 partir de 2 est de 74,5¾. Ceci peut être augmenté jusqu'à 87,5¾ en omettant les étapes de purification et d'isolement, tel qu'indiqué « ci-dessus.

Les données de l'analyse sont les suivantes: 30 IR : Æ 0111-1 1780> 167û> 1490’ 1420> 1350> 124°» 1150> 1190· ΓΠαΧ RMN . 6DMS0 ppm 1,42 (9H, s, C-CH3); 3,45 (2H,br-s, 2-H); 5-5,4 (3H, m, 3-H & 6-H); 5,7 (1H, m, 7-H); 6,63 (2H, d, 9 Hz, phényl-H); 7,1-7,45 (12H, m, phényl-H); 7,5-7,9 35 (15H, m, phényl-H).

28 A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule

C52H49N3°7SPI

et on obtient les valeurs suivantes:

C H N S

5 - calculées .......... 61,36 4,85 4,13 3,15 - trouvées ........... 61,26 4,82 4,11 3,92

Mode opératoire n° 6 L 73-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxyphényl)-acëtamido}- S-KZ^l-propen-l-yllceph-S-ême-^-carboxylate de benzhydryle (composé 6) 10 HO—^-ÇHCONH--|^s ^

J—iL -CH^CHCH

co2c(ch3)3 o 15 C02CH(C6H5)2 A une solution de 1,8 g (1,77 mmole) de 5^ dans 100 ml de chloro-20 forme, on ajoute 100 ml d'eau contenant 2 ml (2 mmole) d'hydroxyde de sodium et on agite le mélange pendant 5 minutes. La couche organique est séparée, on lave à l'eau et on sèche sur sulfate de sodium anhydre. La solution dans le chloroforme étant filtrée, on concentre le filtrat à 50 ml sous pression réduite. Au concentré, on ajoute 1 g d'acétaldéhyde 25 et le mélange est agité à la température ambiante pendant 2 heures et l'on évapore à siccité. Le résidu huileux est passé en chromatographie sur une colonne de gel de silice (Waco-gel C-200, 50 g) en éluant avec du chloroforme et un mélange chloroforme-méthanol (99/1). Les fractions désirées sont recueillies et évaporées, ce qui donne 318 mg (28%) du 30 produit j6, point de fusion 120-130°C (déc.).

Les données de l'analyse sont les suivantes: IR : Vüüv cm_1 1780> 1670> 1710, 1490, 1360, 1210, 1150.

ΙίΙαΛ ΓΠΓ1 35 RMN : δυυυι3 ppm 1,3-1,5 (12H, m, C-CH3); 3,22 (2H,br-s, 2H); 4,90 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H); 5,15 (1H, br-d, CH-C0), 5,5-6,1 (3H, m, CH-CH & 7-H); 6,63 (2H, d, 9 Hz, phényl-H); 6;91 (1H, s, CH-Ph); 7,09 (2H, d, 9 Hz, phényl-H); 7,2-7,5 (10H, m, phényl-H).

29

Mode opératoire n° 7 7e-{D-2-‘amino-2-(p-h,ydroxyphény1 )acétamido}-3-{(Z)-l-propen-l-y1 }- 3-ceph-ême-4-carboxylate de sodium (composé 7, sel de sodium de BMY-28100).

5

KO^O- ÇHCOKH-p-^N

NH2 J—-CH=CKCH3 (Cisÿ)

10 0 COOK

Un mélange de 318 mg (0,48 mmole) de 6_ et 2,5 ml d'acide trifluoroacétique (TFA) est agité à la température ambiante pendant 15 1 heure et on dilue ensuite avec 50 ml d'éther et 50 ml d'éther isopropylique. Le précipité séparé est recueilli par filtration et lavé à l'éther, ce qui donne 188 mg (77%) du trifluoroacëtate de 7^ que l'on dissout dans 2 ml de méthanol (MeOH). A la solution, on ajoute 2 mlg (2 mnioles) d'une solution de 2-éthylhexanoate de sodium (SEH) dans 20 l'acétate d'éthyle et le mélange est dilué avec 30 ml d'acétate d'éthyle pour séparer le précipité que l'on recueille par filtration, lave à l'éther et on sèche sous vide sur P2^5» ce qui donne 144 mg (73% à partir de 6) du produit brut ]_. Le produit brut (135 mg) est dissous dans 10 ml d'eau et la solution est passée en chromatographie sur une 25 colonne (25 mm x 100 mm) en utilisant environ 20 ml du garnissage de la PrepPak-500/C18 (Waters). La colonne est éluée à l'eau et l'ëluat contenant le produit désiré est concentré à 5 ml et on lyophilise, ce qui donne 93 mg (69%) de ]_. Point de fusion: 200°C (déc. prog.), pureté estimée 60% (par HPLC).

30 Les données de l'analyse sont les suivantes: IR : vKB: cm"1 1760, 1660, 1590, 1400, 1360, 1250. max uv . λtampon de phosphate (ph 7) m (113oo)s 280 (8200) max 35 RMN : δ°2° ppm 1,65 (3H, d, 6 Hz, -C-CH3); 3,21 (1H, d, 18 Hz, 2-H); 3,52 (1H, d, 18 Hz, 2-H); 5,12 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H); 5,68 (1H, d, 4,5 Hz, 7-H); 5,5-5,9 (1H, m, vinyl-H); 30 5,95 (1H, d, 11,5 Hz, vinyl-H); 6,94 (2H, d, 8 Hz, phényl-H); 7,36 (2H, d, 8 Hz, phënyl-H).

Mode opératoire n° 8

Acide 7ß-{D-2-amino-2-(p-hydroxyphenyl )acëtamido}-3-{(E)-l-propen-5 1-yl}-3-cöphem-4-carboxylique (composé 8, BB-S1067).

Le produit brut ]_, 11,9 g, est avant la purification par chromatographie, dissous dans 50 ml de tampon de phosphate 0,01 M (pH 7,2)-méthanol (85/15) et la solution est ajustée à pH 6 avec de l'acide chlorhydrique 6 jl. Cette solution est soumise à une 10 chromatographie liquide préparative de haute performance (HPLC) (prepPak-500/C18, System 500, Uaters) par élution avec du tampon de phosphate 0,01 M (pH 7,2) contenant 15% de méthanol. L'ëluat est contrôlé par HPLC analytique et l'on trouve que la première fraction de 4 1 contient l'isomère ci s (BMY-28100). La seconde fraction de 1 1 15 contenant l'isomère trans est recueillie et concentrée à 500 ml. Le concentré est ajusté à pH 3 avec de l'acide chlorhydrique dilué et elle est passée en chromatographie sur une colonne HP-20 (100 ml) par élution avec chaque fois 1 1 d'eau et de méthanol à 30%. Le dernier éluat d'un volume d'environ 300 ml est concentré à 10 ml et on lyophilise, ce qui 20 donne 290 mg de l'isomère trans brut (à 55% de pureté). Cette matière est dissoute dans 100 ml de méthanol à 50% et on traite avec du charbon actif. Le filtrat est concentré à un volume de 20 ml et on laisse se reposer pendant la durée d'une nuit à 5°C. Le produit cristallise sous forme de prismes incolores que l'on recueille par filtration et que l'on 25 sèche sous vide, 129 mg, point de fusion 230°C (déc.).

Les données de l'analyse sont les suivantes: IR : vKBr cm"1 1760, 1680, 1590, 1550, 1520, 1450, 1390, 1350, maX 1240t 30 UV : λ^ροη de PhosPhate (Ph 7) nm(e) 228 (13000), 292 (16900) RMN : ôD20+Na2C03 ppm 1,89 (3H, d, 6 Hz, C=C-CH3); 3,60 (2H, s, 2-H); 5,13 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H); 5,20 (1H, s, CH-C0); 5,68 (1H, d, 4,5 Hz, 7-H); 5,99 (1H, 35 d-q, 16 & 6 Hz); 6,54 (1H, d, 16 Hz); 6,98 (2H, d, 9 Hz, phényl-H); 7,41 (2H, d, 9 Hz, phënyl-H).

31

Mode opératoire n° 9

Acide 7 - D-2-amino-(p-h.ydroxyphényl )acétamido -3- (Z)-l-propen- 1-yl -3-céphem-4-carboxylique cristallin (composé 9, BMY-28100).

La première fraction de 4 1, obtenue par HPLC préparative dans le 5 mode opératoire 8 et contenant l'isomère cns est concentrée à un volume de 2 1 et le concentré est ajusté à pH 3 avec de l'acide chlorhydrique dilué. La solution est chargée dans une colonne contenant du HP-20 (1 1) et la colonne est lavée avec 6 1 d'eau jusqu'à ce que le pH de l'effluent soit égal à 7. La colonne est alors éluëe avec 4 1 de méthanol 10 aqueux à 30%, la solution de Vêluat est surveillée par HPLC et l'on « combine les fractions appropriées (environ 2,5 1) et Ton concentre à 50 ml à une température inférieure à 40°C, sous pression réduite. Il se forme un précipité cristallin. Le concentré est refroidi à 0°C pendant 2 heures et le précipité cristallin est recueilli par filtration, lavé 15 avec de l'acétone aqueuse à 100% puis avec de l'acétone à 100% et on sèche ensuite sous vide sur ^2^5’ ce 9U1* ^onne 9 ^ Pr°duit cristallin désiré pur, point de fusion 218-220°C (déc.), primes incolores d'une pureté de 95% tel que déterminé par un essai de HPLC.

Les données de l'analyse sont les suivantes: 20 IR : vKBr cm“1 1750, 1680, 1560, 1520, 1460, 1390, 1350, 1270, max 1235.

υν λtampon de phosphate (ph 7) ηιφ) 228 (12300), 279 (9800) max ' ' 25 RMN : 5D20+NaHC03 ppm 1,71 (3H, d, 6 Hz, C-CH3); 3,27 (1H, d, 18 Hz, 2-H) ; 3,59 (1H, d, 18 Hz, 2-H); 5,18 (1H, d, 4.5 Hz, 6-H); 5,22 (1H, s, CHC0); 5,73 (1H, d, 4.5 Hz, 7-H); 5,5-6,0 (1H, m, CH=C); 6,02 (1H, d, 11 Hz, CH=C); 6,98 (2H, d, 9 Hz, phênyl-H); 30 7,41 (2H, d, 9 Hz, phényl-H).

A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule C18H19N3°5S-1/2H2° et on obtient les valeurs suivantes:

C H · N S

35 - calculées .......... 54,26 5,06 10,55 8,05 - trouvées ........... 54,15-54,19 5,13-5,08 10,30-10,42 8,38-8,04

La liqueur mère provenant de la cristallisation ci-dessus est concentée à un volume de 10 ml et traitée avec 20 ml d'acétone. Après avoir maintenue la solution pendant la durée d'une nuit dans le 32 réfrigérateur, il se forme un précipité cristallin que Ton recueille par filtration et que Ton sèche sous vide sur ^2^5’ Ρ0Ίε·δ 670 mg (pureté de 90%) par HPLC. Une portion de cette matière, 560 mg, est dissoute dans 200 ml de méthanol aqueux à 50% et la solution est traitée 5 avec 0,5 g de charbon actif et filtrée. Le filtrat est concentré sous pression réduite à 40°C, à un volume de 20 ml, et on le maintient ensuite pendant 5 heures à 5°C. Le produit se cristalline et on le recueille par filtration, on lave à l'acétone et on sèche sous vide sur P2Ûg, ce qui donne 227 mg de BMY-28100 cristallin (à 98% de pureté par 10 HPLC). La lyophilisation de la liqueur mère donne 181 mg de BMY-28100 * qui a une pureté de 95% (HPLC).

Mode opératoire n° 10 7 β- {D-2- ( t-butoxycarbonyl ami no) 2-( p-hydrox.yphënyl )acetami do }- 3-viriyl-3-céphem-4-carboxy1ate de diphénylméthyl (composé 10) 15 Une solution de 3 g (2,95 mmoles) d'iodure de 7-(2-(N-t-butoxy- carbonylamino)-2-(p-hydroxyphényl)acétamido)-3-triphênylphosphonio)-méthyl-3-céphem-4-carboxylate de benzhydryle (5) dans 50 ml de chloroforme est agitée avec un mélange de 3 ml (3 mmoles) de NaOH 1 et 50 ml d'eau à la température ambiante pendant 1 minute. La couche organique 20 est séparée après addition d'une solution saturée de NaCl (20 ml) et lavée avec de l'eau (3 x 30 ml). A la solution organique, on ajoute 2,5 ml de formaldéhyde aqueux à 35% tout en agitant vigoureusement sous refroidissement à l'eau. On poursuit l'agitation pendant 20 minutes. La couche organique est séparée, on sèche sur f^SO^ anhydre et Ton 25 concentre sous vide. Le concentré est placé sur une colonne de gel de silice et on élut avec CHCl^ (600 ml) et du MeOH à 2% dans le CHCl^ (800 ml), ce qui donne 850 mg (45%) du composé du titre. TLC: Rf 0,48 (gel de silice, MeOH-CHCl^ (1/10)).

Mode opératoire n° 11 30 Acide 7g-{D-2-amino-2-(p-h.ydroxyphén.yl )acétamido}-3-vinyl-3- céphem-4-carboxyligue (composé 11, BB-1064).

On laisse un mélange de 850 mg (1,32 mmoles) de JL0, et 5 ml d'acide trifluoroacétique aqueux à 90% (TFA) séjourner à la température ambiante pendant 1 heure et on le concentre à environ 1 ml sous vide. Le 35 concentré est trituré avec 20 ml d'éther diisopropylique, ce qui donne 679 mg de poudre jaune que Ton dissout dans 3 ml de méthanol et que Ton dilue ensuite avec 30 ml d'eau. On fait passer la solution à travers une colonne de HP-20 (50 ml), qui est lavée avec 200 ml d'eau et 33 éluée avec 250 ml de méthanol à 30¾. L'ëluat contenant le composé désiré est concentré et lyophilisé, ce qui donne 197 mg (31¾) du composé du titre dont la pureté estimée par HPLC est de 60%, point de fusion 190°C (déc.).

5 Les données de l'analyse sont les suivantes: IR : vKBr cm“1 1760, 1680, 1615-1570, 1520.

^ max UV : xmaxPOn ^ ph0SphatS ^Ph nm(e) 228 (13500), 283 (14400) • 10 RMN : δ°2° ppm 3,6 (2H, s, SCH2); 5,51 (1H, d, 5 Hz, 6-H); 5,73 (1H, d, 5 Hz, 7-H); 7,03 (2H, d, 8 Hz, phényl-H); 7,45 (2H, d, 9 Hz, phényl-H).

Mode opératoire n° 12 7ß-{D-2-(t-butoxycarbony1 ami no)-2-(p-hydroxyphény1)-acétami do}-15 3-{(Z)-l-buten-l-yl}-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyl (composé 12).

Une solution de 3 g (2,95 mmoles) de 5^ dans 50 ml de CH3 est mélangée avec un mélange de 3,2 ml (3,2 mmoles) de NaOH 1 N et 50 ml d'eau et on secoue le mélange à la température ambiante pendant 3 mi-20 nutes. La couche organique est séparée, lavée à l'eau (3 x 30 ml) et avec une solution saturée de MaCl, et on sèche sur Na2S0^ anhydre. A la solution, on ajoute 1,71 g (29,5 mmoles) de propionaldéhyde. Le mélange est agité pendant la nuit à la température ambiante et on concentre sous pression réduite. Le concentré est chargé sur une colonne de gel de * 25 silice que l'on élue avec 12% de méthanol dans CHCl^. Les fractions présentant une tâche à RF 0,30 (TLC, MeOH-CHCl^ = 1/10) sont combinées et évaporées, ce qui donne 1,08 g (55%) du composé du titre.

Les données de l'analyse sont les suivantes: 30 IR ; vKBr cm"1 1780, 1680, 1500. max

Mode opératoire n° 13 7B-{D-2-amino-2-(p-hydroxyphényl )acétamido}.-3-{ (Z)-l)buten-l-yl}~ 3-céphem-4-carbox.ylate de sodium (composé 13, BB-S1058, sel de sodium). 35 On laisse une solution de 1,08 g (1,61 mmoles) de 12 dans 11 ml de TFA contenant 1% d'eau séjourner pendant 1 heure à la température 34 ambiante. Le mélange est concentré â environ 2 ml sous vide et le sirop qui en résulte est trituré avec environ 20 ml d'éther diisopropylique, ce qui donne 796 mg de poudre jaune. La poudre est dissoute dans 3 ml de mëthanol et la solution est traitée avec 3 ml de SEH 0,8 M dans 5 l'acétate d'éthyle (AcOEt), ce qui donne un précipité que l'on filtre, que l'on lave avec de l'éther diisopropylique et que l'on dissout dans 5 ml d'eau. On fait passer la solution à travers une colonne garnie avec un garnissage (80 ml d'une cartouche de prepPAK-500/Clg (Waters) qu’on lave avec de l'eau et que l'on élue successivement avec du méthanol à 10 10%, du méthanol à 20% et du méthanol à 30%. Les fractions souhaitées » (contrôlées par HPLC) sont rassemblées, concentrées et lyophilisées, ce qui donne 118 mg (9,4%) du composé du titre, dont la pureté est estimée à 55% (par HPLC), composé qui brunit lorsqu'on le chauffe dans un tube capillaire en verre à une température > à 180°C.

15 Les données de l'analyse sont les suivantes: IR : vKBr cm"1 1755, 1660, 1580. max uv . ^tampon de phosphate (ph 7) nm( ) 228 (10900), 278 (7200)

lïlaX

20 RMN : <5D2° ppm 0,81 (2H, t, 7,5 Hz); 1,7-2,2 (2H, m); 3,25 (2H, ABq); 5,01 (1H, d, 5 Hz); 5,50 (1H, d-t, 7,5 & 12 Hz); 5,58 (1H, d, 5 Hz); 5,78 (1H, d, 12 Hz); 6,86 (2H, d, 8 Hz); 7,26 (2H, d, 8 Hz).

Mode opératoire n° 14 • 25 7g-{D-2-(t-butox.ycarbonylamino)-2-(p-hydroxyphënyl )acëtamidoi·- 3-{(Z)-3-phën,yl-l-propen-l-y1}-3-céphem-4-carboxylate de diphénylmëthyl (composé 14).

Une solution de 3 g (2,95 mmoles) de 5^ dans 50 ml de CHC1^ est secouée avec un mélange de 3,2 ml (3,2 mmoles) de NaOH 1 _N et 50 ml 30 d'eau pendant 1 minute. La couche organique est séparée avec addition d'une solution saturée de NaCl (20 ml), lavée avec de l'eau (3 x 30 ml) et une solution de NaCl saturé et on sèche sur Na2S0^ anhydre. A la solution, on ajoute 7,2 g (30 mmoles) de phénylacétaldéhyde à 50% et le mélange est agité pendant la nuit à la température ambiante. Le mélange 35 réactionnel est concentré sous vide et le concentré est purifié sur une colonne de gel de silice (75 g) en utilisant 1% de Me0H/CHClg, ce qui 35 donne 800 mg (37%) du composé du titre. La chromatographie en couche mince (TLC): Rf 0,33 (gel de silice, MeOH-CHCU 1/10). IR (KBr): 1780, -1 0 1710-1680 cm . Ce composé est utilisé dans le mode opératoire 15 sans autre purification.

5 Mode opératoire n° 15

Acide 7g-{D-2-amino-2-(p-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-3-phényl-l-propen-l-yl}-3-céphem-4-carboxylique (composé 15, BB-S1076).

On laisse une solution de 800 mg (1,09 mmoles) de 1£ dans 4 ml de TFA à 90% séjourner pendant 2 heures. Le mélange réactionnel est concen-10 tré et le concentré est trituré avec de l'éther diisopropylique, ce qui donne 490 mg de poudre jaune. Une solution de la poudre dans 2 ml de méthanol est mélangée avec 20 ml d'eau et on la charge sur une colonne deHP-20 (50 ml) que l'on lave avec de l'eau (250 ml) et on élue avec du méthanol à 30% (250 ml) et avec du méthanol à 75% (300 ml) successive-15 rnent. L'éluat du méthanol à 75% est concentré et lyophilisé, ce qui donne 302 mg du produit brut que l'on dissout dans 10 ml de méthanol à 75% et que l'on soumet à une chromatographie sur colonne en utilisant le garnissage (80 ml) d'une cartouche de prepPAK-500/Cjg (Waters). La colonne est éluée avec du méthanol à 75%, ce qui donne 158 mg (31%) du 20 produit désiré. Pureté estimée, 65% (par HPLC). Le produit brunit lorsqu'on le chauffe dans un tube capillaire au-dessus de 175°C.

Les données de l'analyse sont les suivantes: IR : vKBr cm“1 1760, 1680, 1600-1580, 1520.

25 max UV tampon de phosphate (ph 7) ( } 280 (8900).

max RMN : 00Μ50-ν°20 (5/1) ppm 4,45 (2H, d, 4 Hz, CH2Ph), 4,87 (1H, s, CHND2); 6,7 (2H, d, 9 Hz, Ph); 6,9-7,5 30 (7H, m Ph).

Mode opératoire n° 16 7β-{D-2-(t-butoxycarbony1 ami no)-2-(p-hydroxyphény1)acëtami doj-3-{(Z)-3-méthoxy-l-propen-l-y1}-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyl (composé 16).

35 Une solution de 3,0 g (2,95 mmoles) de 5^ dans CHClg (100 ml) est traitée avec un mélange (1,8 ml) de NaOH 2 fi et de l'eau (100 ml) à la température ambiante pendant 5 minutes. La phase organique est séparée, on lave avec de l'eau (50 ml) et du NaCl aqueux (50 ml), on sèche et on 36 évapore à environ 10 ml. La solution rouge qui en résulte est traitée avec du méthoxyacëtaldéhyde (1,3 ml, 15 mmoles) à la température ambiante pendant 15 minutes. Après évaporation du solvante, le résidu est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel de silice (100 g), 5 on élue avec un mélange toluène-AcOEt (3/1 et 1/1), ce qui donne le composé du titre (750 mg, 38%).

Les données de l'analyse sont les suivantes: RMN : ÔCDC13+D2° ppm 1,45 (I H, s, t-Bu); 3,15 (3H, s, OCH3); 3,27 10 (2H, s, 2-CH2), ca. 3,5 (2H, m, -CH2-0Me); 4,90 (1H, d, 5,0 Hz, 6-H); 5,12 (1H, s, -CH-ND-); ca. 5,1 (1H, m, =CH-CH2~); 5,72 (1H, d, 7-H); 6,18 (1H, d, 12 Hz, -CH=CH-CH2-) ; 6,65 & 7,10 (chaque fois 2H, chaque fois d, 15 H0-Ph-); 6,90 (1H, s, -CHPhg); 7,3 (10H, s,

Ph).

Mode opératoire n° 17

Acide 7ß-{D-2-amino-2-(p-hydroxyphenyl)acétamido}-3-{(Z)-3-méthoxy-l-propen-l-yl}-3-céphem-4-carboxylique (composé 17, BB-S1092).

20 Le composé 16 est débloqué avec du TFA (3 ml) à la température ambiante pendant 1 heure. L'évaporation du solvant suivie d'une précipitation dans l'éther isopropylique, donne le trifluoroacëtate du produit que l'on purifie par chromatographie sur colonne HP-20. La colonne est lavée avec H20 (500 ml) et on élue avec MeOH à 30% (500 ml), 25 ce qui donne 350 mg (75%) du produit désiré. Pureté estimée 90% (par HPCL). Point de fusion 160° (déc.)

Les données de l'analyse sont les suivantes: IR : cm"1 3400, 3180, 1760, 1680.

3 0 niâ λ uv . λ tampon de phosphate pH 7 nm^j 228 (11500), 279 (9400).

fi'oX

NMR: <sD2° ppm 3,40 (3H, s, 0CH3), 3,40 (2H, ABq, 2-CH2), 4,0 (2H, m, -CH20Me), 5,19 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 35 5,25 (1H, s, -ÇH-NDg), 5,77 (1H, d, 7-H), ca. 5,8 (1H, m, =CH-CH2-), 6,20 (1H, d, 11 Hz, -CH=CH-CH2), 7,05 & 7,45 (chaque fois 2H, chaque fois d, H0-Pb-), 37

Mode opératoire n°18 7ß-{D-2-(t-butoxycarbonylami no)-2-(p-h,ydroxyphény1)-acétami do>-3“{(Z)-3-chloro-l-propen-l-yl}-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyle (composé 18) 5 Une solution de 5^ (5,0 g, 4,9 mmoles) dans CHCl^ (100 ml) est traitée avec un mélange de NaOH 2 N_ (2,9 ml, 5,8 mmoles) et d'eau (100 ml) à la température ambiante pendant 5 minutes. La phase organique est séparée et lavée avec de l'eau (50 ml) et une solution saturée de * NaCl (50 ml), et on sèche sur Na-pSO^ anhydre. Le filtrat est évaporé à 10 environ 20 ml et l'on ajoute du chloroacétaldéhyde (2,0 ml, 25 mmoles). Le mélange est agité à la température ambiante pendant 30 minutes et l'on évapore sous vide. Le sirop résiduaire est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel de silice (100 g), on élue avec un mélange toluène-AcOEt (3/1), ce qui donne le composé du titre 18^ 15 (900 mg, 27%).

Les données de l'analyse sont les suivantes: NMR: ôcdc13+D2° ppm 1,45 (9H, s, t-Bu), ca 3,3 (2H, ni, 2-CH2),

3,5 - 4,0 (2H, m, -CH^-Cl), 4,92 (1H, d, 5,0 Hz, 20 6-H), 5,12 (1H, s, -CH-ND-), ca 5,7 (2H, m, 7-H

& =CH-CH2), 6,15 (1H, d, 11 Hz, 3-CH=CH-CH2-), 6,63 & 7,10 (chaque fois 2H, chaque fois d, H0-Ph-), 6,89 (1H, s, CHPhg), 7,3 (10H, s,

Pb).

25 Le déblocage de cette substance avec TFA tel que décrit dans les exemples précédents (par exemple modes opératoires 7, 11, etc.) donne l'acide 7-{D-2-amino-2-(p-hydroxyphényl)acétamido }-3-{(Z)-3-chloro-l-propen-l-yl }-3-céphem-4-carboxyl i que.

Mode opératoire n° 19 30 7 ß- {D-2-( t-butoxycarbonyl ami no)-2-(p-!iydroxyphënyl ) acétami do }- 3-{(E)-3-iodo-l-propen-l-yl }-3-cephem-4-carboxylate de diphénylméthyle „ (composé 19)

Un mélange de 18 (900 mg, 1,3 mmole) et Nal (590 mg, 3,9 mmoles) dans l'acétone (18 ml) est agité a la température ambiante pendant une 35 heure. Après évaporation du solvant, le résidu est dissous dans AcOEt (100 ml), on lave successivement avec de l'eau, Na^Og aqueux et NaCl aqueux, on sèche et on évapore, ce qui donne le composé du titre (1,02 g).

38

Les données de l'analyse sont les suivantes: NMR: <sCDC13+D20 pprn 1,45 (9H, s, t-Bu), ca 3,4 (2H, m, 2-CHg), ca 3,8 (2H, m, -CH^-I), 4,90 (1H, d, 5,0 Hz, 6-H), 5,14 (1H, s, -CH-ND-), 5,73 (1H, d, 7-H), 5 ' ca. 5,5 - 6,0 (1H, m, =CU_^^2)s 6»68 & 7,10 (chaque fois 2H, chaque fois d, HO-Pb), 6,78 (1H, d, 15 Hz, 3-CH=CH-CH2-), 6,99 (1H, s, r CHPb2), 7,35 (10H, s, Pb).

Mode opératoire n° 20 10 7ß-{D-2-(t-butoxycarbonylami no)-2-(p-hydroxyphënyl)acëtamido>- 3“{3-(lH-l,2,3-triazol-5-yl )thio-l-propen-l-y1 }-3-cephem-4-carboxylate de diphénylméthyle (Composé 20) A une solution de 19 (1,0 g, 1,3 mmole) dans l'acétate d'éthyle 15 (20 ml) on ajoute de l'oxyde de propylène (0,25 ml, 3,8 mmoles) et du (lH-l,2,3-triazol-4-yl)thiol à 0,1 M dans l'acétate d'éthyle (19 ml). Le mélange est agité à la température ambiante à la température ambiante pendant 30 minutes et l'on évapore sous pression réduite. Le sirop résiduaire est soumis à une chromatographie sur colonne de gel de silice 20 C-200 (50 g). Le produit désiré est ëluë avec un mélange CHCl^-MeOH (10/1), ce qui donne 800 mg (83%) du composé du titre.

Les données de l'analyse sont les suivantes: NMR: «sCDC13+H2° ppm 1,45 (9H, s, t-Bu), ca 3,3 (4H, m, 2-CH2- & 25 -CH2-S-), 4,80 (1H, d, 5,0 Hz, 6-H), 5,20 (1H, s, -CH-ND-), 5,70 (1H, d, 7-H), ca 5,95 (1H, m, =CH-CH2), 6,68 (2H, d, HO-Pb), 6,90 (1H, s, -CHPb2), 7,25 (10H, s, Ph), 7,52 (1H, s, triazole-4-H).

30 Mode opératoire n° 21

Acide 7ß-{D-2-amino-2-(p-hydroxypheny1)acétamido}-3-{3-(lH-l,2,3,-, triazol-5-yl )thio-l-propen-l-.yl }-3-cêphem-4-carbox,y1 ique (Composé 21, BB-S1091)

Un mélange de 20 (800 mg) et de TFA (2 ml) est maintenu à la 35 température ambiante pendant une heure et on évapore ensuite à siccité. Au résidu, on ajoute de l'éther isopropylique, ce qui donne un précipité jaune (600 mg) que l'on dissous dans l'eau (1 ml) et que l'on charge dans une colonne HP-20 (100 ml). La colonne est lavée à l'eau (500 ml) et on élue avec du MeOH à 30% et ensuite avec du MeOH à 50%. La fraction 39 contenant le composé désiré est recueillie, évaporée et lyophilisée, ce qui donne 170 mg (33%) du produit désiré, pureté estimée 50% (par HPLC), point de fusion 180°C (déc.).

Les données de l'analyse sont les suivantes: 5 IR :vmv cm“1 3360, 3280, 1755, 1670.

ITIâX

~ UV : λ tamP°n de PhosPhatG nm( ) 235 (14100), 252 (12300).

rnax NMR: 6D20+DC1 ppm ca. 3,4 (4H, m, 2-CH2-, -CH2-S-), 5,43 (1H, d, j10 4,5 Hz, 6-H), 5,15 (1H, s, -CH-ND2), ca. 6,0 (2H, m, 7-H et =CH-CH2-), 6,70 & 7,15 (chaque fois 2H, chaque fois d, HO-Pb-), 8,05 (1H, s, triazol-4-H).

Mode opératoire n° 22 15 Iodure de 7g-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-phënylacëtamido}-3- (triphénylphosphonio)mëthyl-3-cephem-4-carboxylate de benzhydryle (composé 22)

Un mélange de 14,5 g (0,0196 mmole) de 7-{D(-)-a -(t-butoxycarbonyl-amino)-α-phénylacëtamido}-3-iodométhyl-3-cephem-4-carboxylate de benzhy-20 dryle et 5,24 g (0,02 mole) de triphënylphosphine dans 300 ml d'acétate d'éthyle est agité à la température ambiante pendant 2 heures. Au mélange réactionnel, on ajoute 200 ml d'éther, ce qui forme un précipité que l'on recueille par filtration et qu'on lave à l'éther, ce qui donne 14,3 g (73%) du composé du titre. Le filtrat est concentré à 50 ml et le ,25 concentré est dilué à l'éther, ce qui donne 2,4 g de la seconde récolte du produit. Rendement total 16,7 g (85%).

Les données de l'analyse sont les suivantes: IR :vmax cnrl 1780 ’ 1690 ’ 1480 ’ 1420’ 1350 ’ 1240’ 1150* 30

Mode opératoire n° 23 - 73-{D-2-(t-butoxycarbonylami no)-2-phénylacëtamido}-3-{(Z)-l- propen-l-y1}-3-cephem-4-carboxy1ate de benzhydryle (composé 23) A une solution de 5 g (5 mmoles) de 22 dans 200 ml de chloroforme, 35 on ajoute un mélange de 100 ml d'eau et 5 ml (5 mmoles) d'hydroxyde de sodium 1 N_ et le mélange est secoué pendant 3 minutes. La couche organique qui se sépare est lavée ä l'eau et avec une solution saturée de NaCl et on sèche sur sulfate de magnésium anhydre. La solution dans le 40 chloroforme étant filtrée, le filtrat est concentré à 100 ml sous pression réduite. Au concentré, on ajoute 3 ml d'acétaldéhyde et le mélange est agité à la température ambiante pendant 1,5 heure et évaporé à siccitë. Le résidu huileux est soumis à une chromatographie sur une 5 colonne de gel de silice (Kiesel gel 60, 50 g) par élution au chloroforme. Les fractions désirées sont recueillies et évaporées à siccité et le résidu est trituré avec du n-hexane, ce qui donne 990 mg (31%) du composé du titre (23).

Les données de l'analyse sont les suivantes: 10 IR : vKB: cm"1 1780, 1710, 1660, 1510, 1490, 1360, 1240, 1210, max 1150.

NMR: 6CDC13 ppm 1,3-1,5 (12H, m, -C-CHg), 3,22 (2H, s, 2-H-), 4,93 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,23 (1H, d, 8 Hz, CH-CO), 5,5-6,2 (3H, m, 7-H & vinyl-H), 6,94 (1H, s, CHPh), 15 7,2-7,5 (15H, m, phényl-H).

Mode opératoire n° 24 76-{D-2-amino-2-phénylacëtamido}-3-{(Z)-l-propény1}-3-cephem-4-carboxylate de sodium (composé 24, BB-S1065)

Un mélange de 0,94 g (1,47 mmole) de 23 et 3 ml de TFA est agité à 20 la température ambiante pendant 30 minutes, puis on dilue avec 50 ml d'un mélange 1/1 éther-isopropyle éther pour séparer environ 800 mg de précipité que l'on rcueille par filtration et que l'on dissous dans 3 ml de méthanol. A la solution, on ajoute 4,5 ml (4,5 mmoles) de 2-êthyl-hexanoate de sodium 1 (SEH) dans l'acétate d'éthyle et on dilue le - 25 mélange avec 50 ml d'éther et 50 ml d'éther isopropylique successivement. Le précipité est recueilli par filtration, ce qui donne 710 mg du produit brut 2A_ que l'on dissous dans 20 ml d'eau et que l'on soumet à une chromatographie sur colonne en utilisant 50 ml du garnissage d'une colonne PrepPAK/C^g (Waters). La colonne est éluëe avec de l'eau et du 30 méthanol à 10%. Les fractions contenant le produit désiré sont recueillies en étant contrôlées par HPLC et on les concentre à 5 ml et on lyophilise, ce qui donne 182 mg (31%) du produit désiré fondant à 200°C. Pureté estimée 50% par HPLC.

Les données de l'analyse sont les suivantes: 35 IR : yPrv cm"1 1760, 1660, 1600, 1400, 1180, 1100.

max uv tampon de phosphate (pH 7) , , m (5600).

max v ' 41 NMR: δ°2° ppm 1,60 (3H, d, 6 Hz, -C-CH3), 3,12 (1H, d, 18 Hz, 2-H), 3,48 (1H, d, 18 Hz, 2-H), 5,03 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,62 (1H, d, 4,5 Hz, 7-H), 5,93 (1H, d, 10 Hz, vinyl-H)-, 5,2-5,8 (1H, m, vinyl-H), 7,41 (5H, s, 5 phényl-H).

Mode opératoire n° 25 7B-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-phénylacétamido}-3-{(Z)-3 -chloro-l-propen-l-yl }-3-cephem-4-carbox,ylate de benzhydryle (composé 25) 10 A une solution de 2 g (2 mmoles) de 22^ dans 50 ml de chloroforme, ? on ajoute 50 ml d'eau contenant 2 ml (2 mmoles) d'hydroxyde de sodium 1 K et le mélange est secoué pendant 3 minutes. La couche organique est séparée et lavée avec de l'eau et une solution saturée de NaCl successivement. La solution de chloroforme séchée est concentrée à 30 ml sous 15 pression réduite. Au concentré, on ajoute 2 ml de chlorcacétaldéhyde et le mélange est agité à la température ambiante pendant une heure, lavé avec de l'eau et ensuite avec une solution saturée de NaCl. La solution organique est séchée et évaporée à siccité. Le résidu huileux est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel de silice (Wako-gel C-200), 20 50 g) par élution au chloroforme. Les fractions désirées sont recueil lies et évaporées à siccité, ce qui donne 534 mg du produit brut.

Les données de l'analyse sont les suivantes: IR : vKBr cm"1 1780, 1710, 1660, 1500, 1490, 1360, 1240, 1210, 25 max 1150.

La structure de cet échantillon n'est pas confirmée à cause de son spectre RMN de mauvaise qualité.

Mode opératoire n° 26 7g-(D-2-amino-2-phënylacëtamido)-3-{ (Z)-3-chloro-l-propen-l-.yll-3-30 cephem-4-carboxylate de sodium (composé 26, BB-S1066)

Un mélange de 472 mg (0,7 mmole) de 25 et 1,5 ml de TFA est agité à 10-15°C pendant 15 minutes et on dilue avec 30 ml d'un mélange ëther-isopropyle éther (1/1), ce qui donne 330 mg d'un précipité jaune pâle que l'on recueille par filtration. A une solution du précipité dans 3 ml 35 de méthanol, on ajoute 2 ml (2 mmoles) de SEH dans l'acétate d'éthyle et le mélange est dilué avec 50 ml d'acétate d'éthyle. Le précipité qui en résulte est recueilli par filtration et lavé avec de l'éther, ce qui 42 donne 244 mg de produit brut. Une solution du produit brut dans 10 ml d'eau est soumise à une chromatographie sur colonne en utilisant 50 ml du garnissage dans une cartouche de PrepPAK-500/Cjg (Waters). La colonne est éluée avec de l'eau et du méthanol à 10%. Les fractions désirées de 5 méthanol à 10% sont combinées et concentrées à 5 ml et lyophilisées, ce ^ qui donne 60 mg du produit solide fondant à 200°C (déc.prog.).

Les données de l'analyse sont les suivantes: IR : Æ cm“1 1760> 1660» 1630> 1360> 1120> 1070· * max 10 UV : ÀmaxPOn ^ ph°Sphate (pH nm(e) 243 (12700), 200sh (4200)

Mode opératoire n° 27

Acide 73-(D(-)-2-amino-2-phénylacëtamido)-3-{(Z)-l-propen-l-yl}-3-cephem-4-carboxylique (composé 24, BB-S 1065 forme dipolaire) 15 )-CH CONE-r^S ^ // I, \ 2 jÿ——C5=CHCH3 (2) 20 ° !

C02H

Le 7-3-(D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-phénylacétamido>3-(l-25 propényl)-3-cephem-4-carboxylate (composé 23) 1,5 g (2,34 mmoles), est traité avec 3 ml d'acide trifluoroacétique et le mélange est agité à la température ambiante pendant 20 minutes et il est dilué avec 100 ml d'éther, ce qui.donne 1,15 g (96%) du trifluoroacétate brut de BB-S1065.

Les données de l'analyse sont les suivantes: 30 ÏR : vmax (KBr) en cm"1 1760, 1670, 1200, 1130.

UV : Àmax (pH 7 tampon de phosphate) 283 nm (ε: 8300).

Le trifluoroacétate (1,1 g, 2,25 mmoles) est dissous dans 20 ml 35 d'eau et la solution est soumise à une chromatographie sur colonne en utilisant 100 ml du garnissage obtenu à partir de la cartouche de PrePAK/Clß (Waters). La colonne est éluée avec de l'eau, du méthanol à 10% et du méthanol à 30%. L'éluat avec du méthanol à 30% est concentré à 43 10 ml. Le produit cristallin est séparé. Le produit est recueilli et lavé à l'acétone et séché sous vide sur ^2^5’ ce 1U1 donne 505 mg (46¾) de BB-S 1065 pur (forme dipolaire) fondant à 180-183°C (déc.). Pureté estimée 95%.

5 Les données de l'analyse sont les suivantes: IR : v (KBr) en cm"1 1750, 1690, 1590, 1400, 1350. max : UV : Amax (pH 7 tampon de phosphate) 282 nm (ε: 8800).

NMR: 6(D20 + NaHC03) en ppm 1,58 (3H, d, 1=6 Hz, C-CH3), 10 3,3 (2H, d, 2-H), 5,03 (1H, d, 1=4,5 Hz, 6-H), 5,20 (1H, s, CH-C0), 5,1-5,8 (1H, m, CH=C), 5,63 (1H, d, 1=4,5 Hz, 7-H), 5,92 (1H, d, 1=12 Hz, CH=C), 7,4 (5H, s, phényl-H).

Mode opératoire n° 28 15 Acide D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(3-chloro-4-hydroxy- phényl)-acétique (composé 28)

Un mélange de 6 g (0,03 mole) de 3-chloro-4-hydroxyphénylglycine et de 9,8 g (0,045 mole) de dicarbonate de di-t-butyle dans 120 ml d'une solution de tétrahydrofuranne (THF) aqueuse à 50% contenant 10 ml 20 (0,71 mole) de triéthylamine est agité à la température ambiante pendant 3 heures. Le mélange est concentré à 60 ml et le concentré est lavé à l'éther. La couche aqueuse est acidifiée avec de l'acide chlorhydrique 6 N_ et on extrait avec 200 ml d'éther. L'extrait est lavé à l'éther et avec une solution saturée de NaCl, on sèche sur MgSO^, et on évapore à 25 siccitë, ce qui donne 10 g d'un résidu huileux qui ne se solidifie pas lorsque l'on essaie de le triturer avec un mélange éther-n-hexane.

Mode opératoire n° 29 73-{D-2-(t-butoxycarbon.ylaniino)-2-(3-chloro-4-h,ydroxyphënyl ) acëtamido}-3-chlorométh.yl-3-cephem-4-carbüx.ylate de benzh.ydryle 30 (composé 29) HO-_ ^—ÇHCONE-^ NH _N Λ-CE,Cl 35 Cl | 6 2

CO-C (CH,) , I

C02CE{CgH5)2 44 A une solution de 6,2 g (0,015 mole) de composé 2 et 5,4 g (0,018 mole) de composé 2l8 dans 150 ml de THF sec, on ajoute 3,7 g (0,018 mole) de DCC et Ton agite le mélange à la température ambiante pendant une heure. La dicyclohexylurée qui se sépare pendant l'agitation 5 est éliminée par filtration et le filtrat est évaporé à siccité. Le w résidu étant extrait avec 200 ml d'acétate d'éthyle, l'extrait est lavé avec une solution aqueuse de NaHCO^, de l'eau et une solution saturée de NaCl et on sèche sur MgSO^. Le filtrat est évaporé à siccité et le résidu huileux est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel 10 de silice (Wako gel C-200, 140 g) par élution avec un mélange toluène-acétate d'éthyle (10/1). Les fractions désirées sont recueillies et évaporées à siccité, ce qui donne 10 g du produit 2!9.

Les données de l'analyse sont les suivantes: 15 IR : v av (KBr) en cm“1 1790, 1720, 1680, 1500, 1370, 1240, 1160.

ïïïaX

Mode opératoire n° 30

Iodure 73-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(3-chloro-4-hydroxy phériyl)acétamido}-3-triphénylphosphonio)méthy1 -3-cephem-4-carboxylate de 20 benzhydryle (composé 30) / \ HO-( )-C2C0NE—-f \ _/ I ' © ^ 9 25 cï>- m 1

- * CO-C(CB-), J

~ co2ce(c6e5)2 30 A une solution de 10 g (0,0143 mole) de composé 29_ dans 100 ml d'acétone, on ajoute 11,2 g (0,075 mole) d'iodure de sodium et le mélange est agité à la température ambiante pendant 30 minutes. Le mélange est concentré à 30 ml. Au concentré, on ajoute 200 ml d'acétate 35 d'éthyle et le mélange est lavé avec une solution aqueuse de Na2S203, de l'eau et une solution saturée de NaCl et on sèche sur MgSO^. La solution d'acétate d'éthyle est filtrée et le filtrat est concentré à la moitié de son volume. Au concentré, on ajoute 3,9 g (0,015 mole) de 45 triphénylphosphine et le mélange est agité à la température ambiante pendant deux heures. A la solution, on ajoute 300 ml d'éther pour séparer un précipité que Ton recueille par filtration et que Ton sèche, ce qui donne 5 9,2 g de l'iodure de phosphonium 30.

Les données de l'analyse sont les suivantes: IR :vmav (KBr) en cm"1 1780, 1680, 1490, 1350, 1240, 1150.

lïlaX

, Mode opératoire n° 31 10 73-{D-2-(t-butox.ycarbon,ylamino)-2-(3-chloro-4-hydroxyphényl ) » acétamido}-3-{(Z)-l-propen-l-yl)j-3-cephem-4-carbox,ylate de benzhydryle (composé 31) // \ /S.

15 HO-( )-ÇHCONB—-^ γ —ch=chce3 (2)

co2c(ce,)3 I

z ~ ύ CO CB (C "R ) 20

Une solution de 9,5 g (9 mrnoles) du composé 30 dans 200 ml de chloroforme est traitée avec un mélange d'eau (100 ml) et de NaOH 1 (10 ml) et le mélange est secoué pendant 3 minutes. La couche organique . est lavée avec de l'eau et avec une solution saturée de NaCl, séchée sur 25 MgSO^ et concentrée jusqu'à environ la moitié de son volume. Au concen-- tré, on ajoute 20 ml d'acétaldéhyde à 90¾ et le mélange est agité à la température ambiante pendant 3 heures, traité avec MgSO^ anhydre et filtré. Le filtrat est évaporé à siccité et le résidu est passé en chromatographie sur gel de silice 60 (Merck, 120 g) par êlution avec un 30 mélange toluène-acétate d'éthyle (4/1). Les fractions désirées sont recueillies et évaporées à siccité et le résidu est trituré avec un mélange éther-éther isopropylique et n-hexane, ce qui donne 1,33 g du produit bloqué 31.

Les données de l'analyse sont les suivantes: IR : vmav (KBr) en cm“1 1770, 1700, 1660, 1480, 1350, 1210, 1150.

Πια λ 35 46

Mode opératoire n° 32

Acide 78-{D-2-amino-2-(3-chloro-4-hydroxyphényl )acétamido}-3-{(Z)-l-propen-l-yl }-3-céphem-4-carbox,y1 ique (composé 32, BMY-281060) - HO-(I )-ÇHCONH-^ \ S / i—N. J—CH=CHCE_ (2)

Cl -v 3 -

CO,H

10 2

Un mélange de 1,33 g (1,93 mmoles) de composé 31_ et 3 ml d'acide trifluoroacëtique est agité à la température ambiante pendant 30 minutes et le mélange est dilué avec 50 ml d'un mélange éther-éther isopropy-15 1i que (1/1) pour donner 1,072 g du trifluoroacétate de 32 brut, que l'on soumet à une chromatographie sur une colonne garnie du garnissage d'une cartouche prepPAK/C^g (Waters) (80 ml). La colonne est éluée avec de l'eau et du méthanol à 10¾. L'éluat au méthanol à 10% est concentré à un volume de 10 ml pour séparer un précipité cristallin que l'on recueille 20 par filtration et que l'on lave à 1'acétone. On sèche sous vide sur P^Og, ce qui donne 238 mg de 32 (pur à 95%), fondant à 180-185°C (déc. prog.). Le filtrat est concentré à 5 ml et lyophilisé, ce qui donne 154 mg d'une seconde récolte qui est pure à 80% par HPLC.

Les données de l'analyse sont les suivantes: 25 , IR : v (KBr) en cm"1 1760, 1680, 1570, 1410, 1390, 1350, 1290, 1270.

UV : λ (pH 7 tampon de phosphate) en nm (ε) 232 (10000), 280 (10500).

30 NMR: <$(D20 + NaHCOg) en ppm 1,68 (3H, d, 1=6 Hz, C=C-CH3), 3,25 (1H, d, I = 18 Hz, 2-H); 3,57 (1H, d, I = 18 Hz, 2-H); 4,90 (1H, s, CH-CO); 5,18 (1H, d, I = 4,5 Hz, 6-H) ; 5,72 q(lH, d, I = 4,5 Hz, 7-H); 5,5-5,9 (1H, m, CH=C); 35 5,97 (1H, d, I = 12 Hz, CH=C); 7,02 (1H, d, I = 8 Hz, phényl-H); 7,30 (1H, d-d, I = 8 & 1,5 Hz, phényl-H); 7,50 (1H, d, I = 1,5 Hz, phényl-H).

47

Mode opératoire n° 33 Mélange d'acide D(-)-2-(t-butoxycarbonylami no)-2-(3,4-dihydroxy-phériyl )acétique (33a) avec ses dérivés 3- (et 4)-mono-0-butoxycarbonyle (33b) 5 Un mélange de 3,66 g (0,02 mole) de 3,4-dihydroxyphénylglycine et u 9,24 g (0,04 mole) de dicarbone de di-t-butyle dans 120 ml d'une solu tion aqueuse de THF à 50% contenant 10 ml (0,071 mole) de triëthylamine est agité à la température ambiante pendant 16 heures et le mélange est concentré à 60 ml. Le concentré est lavé avec 100 ml d'éther, acidifié 10 avec de l'acide chlorhydrique N et extrait avec de l'éther (100 x 2 ml).

„ Les extraits combinés sont lavés à l'eau et avec une solution saturée de NaCl, séchés sur MgSO^ et évaporés à siccité, ce qui donne 8 g d'un résidu huileux qui est un mélange du dérivé souhaité de 3,4-dihydroxy-phériyl et des dérivés de 3- et 4-mono-0-B0C-protégé (B0C indique le 15 t-butoxy carbonyle).

Mode opératoire n° 34 7[3-{D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(3,4-dihydroxyphényl ) acétamido}-3-chlorométhyl-3-céphem-4-carbox,ylate de benzhydryle (34a) et mélange de ces dérivés 3- (et 4)-mono-0-butoxycarbonyle (34b).

20 H°-^'y-ÇHCONH-^ S ^ NE ,_N A-CH «Cl ho i è 2 25 au i y COf(CE3)3 do2CH(C6H5)2

Un mélange de 8 g (0,0193 mole) du composé 2, 8 g du produit 30 mélangé du mode opératoire 33 et 4,12 g (0,02 mole) de DCC dans 200 ml de THF sec, est agité à la température ambiante pendant 1 heure. Le mélange réactionnel est évaporé à siccité. Le résidu est dissous dans 200 ml d'acétate d'éthyle et la matière insoluble (dicyclohexylurée) est éliminée par filtration. Le filtrat est lavé avec une solution de NaHCOg 35 aqueuse, de l'eau et une solution saturée de NaCl, on sèche sur MgSO^ et on évapore à siccité sous pression réduite. Le résidu huileux est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel de Sicile (gel de silice 48 60, 130 g) par élution avec un mélange toluène-acétate d'éthyle (5/1) et un mélange toluène-acétate d'éthyle (2/1). L'éluat au mélange toluène-acétate d'éthyle (5/1) est recueilli et évaporé à siccité, ce qui donne 9,5 g d'un mélange des dérivés mono-0-B0C-N-B0C di-protégés (34b).

5 L'éluat au mélange toluène-acétate d'éthyle 2/1 est recueilli, évaporé à * siccité, ce qui donne 3 g du dérivé 3,4-dihydroxyphényl (34a).

Composé 34a

Les données de l'analyse sont les suivantes: 10 IR : vmav (KBr) en cm"1 1770, 1720, 1690, 1500, 1370, 1240, 1150.

iïiaX

NMR: δ(CDC13) en ppm 1,42 (9H, s, C-CH^); 3,4 (2H, br-s, 2-H); 4,30 (2H, br-s, CH2-C1); 4,85 (1H, d, I = 4,5 Hz, 6-H); 5,07 (1H, d, I = 6 Hz, 15 CH-NH); 5,74 (1H, d-d, I = 9 & 4,5 Hz, 7-H); 6,6-6,9 (3H, m, phényl-H); 6,93 (1H, s, CHPh); 7,3 (10H, s, phényl-H).

Composé 34b IR : vmav (KBr) en cm'1 1770, 1720, 1690, 1500, 1370, 1240, 1150.

ÎTiaX

20 NMR: S(CDC13) en ppm 1,42 (9H, s, C-CH3); 1,55 (9H, s, C-CH3); 3,4 (2H, br-s, 2-H); 4,35 (2H, br-s, CH2-C1); 6,9-7,1 (4H, m, CHPh & phényl-H); 7,3 (10H, s,phényl-H).

25 Mode opératoire n° 35 ; Iodure de 7ß-{0(-)-2-(t-butoxycarbonyl ami no)-2-(3,4-dihydroxy- phényl)acétamido}-3-triphën.ylphosphoniométhyl-3-céphem-4-carboxy1ate de benzhydryle (35a).

30 // \ HO-(' )-CHCONB-f η \_/ I · I 6 e >- f 1

HO I O

COC(CH,), I

a 33 C02CH.(CgH5)2

Un mélange de 3 g (4,4 mmoles) de 34a et 3,3 g (22 mmoles) d'iodure de sodium dans 50 ml d'acétone est agité à la température ambiante 35 49 pendant 30 minutes et le mélange est concentré à siccitë. Le résidu est extrait avec 100 ml d'acétate d'éthyle et l'extrait est lavé avec une solution aqueuse de NaO^, de l'eau, et une solution saturée de NaCl. Après séchage sur MgSO^, l'extrait est concentré à 60 ml. Au concentré, 5 on ajoute 1,4 g (5,3 mmoles) de triphénylphosphine et le mélange est ^ agité à la température ambiante pendant 1 heure. Au mélange, on ajoute 100 ml d'éther pour séparer un précipité que l'on recueille par filtration et on lave à l'éther, ce qui donne 3,2 g (70%) de l'iodure de phosphonium (35a).

10 Les données de l'analyse sont les suivantes: « IR : vmav (KBr) en cm"1 1780, 1680, 1480, 1430, 1360, 1240, 1150.

ΓΠαΧ

Avec une façon de procéder semblable, on fait réagir 9,5 g 15 (12 mmoles) du mélange des dérivés mono-0-B0C-protégës (34b) avec de l'iodure de sodium et ensuite avec la triphénylphosphine, ce qui donne 10,7 g (77%) d'un mélange des dérivés correspondants mono-0-B0C-N-BÜC-triphénylphosphoniométhyl (35b).

Les données de l'analyse sont les suivantes: 20 IR : vmav (KBr) en cm"1 1770, 1720, 1680, 1480, 1430, 1360, 1240,

iïlaX

1140.

Mode opératoire n° 36 . 7β -{D(-)-2-(t-butox,ycarbon.ylamino)-2-(3,4-dihydrox.yphényl ) 25 acétamido}-3-{(Z)-l-propen-l-yl}-3-cépheni-4-carboxylate de benzhydryle : (composé 36a) 30 BO-^^\-pcONE_- / ΝΞ i-N /J-CE=CHCH. (2) BO I Ο

COC (CEO , I

* 3 3 C02CH(C6£5)2 A une solution agitée de 3,15 g (3 mmoles) de composé 35a et 10 ml d'acétaldéhyde dans 50 ml de chloroforme, on ajoute goutte à goutte 8 ml 35 50 > (4 mmol es) d'hydroxyde de sodium 0,5 N sur une période de 10 minutes et le mélange est agité à la température ambiante pendant 1 heure. Le mélange réactionnel est lavé à l'eau et avec une solution saturée de NaCl, séché sur MgSO^ et évaporé sous pression réduite. Le résidu 5 huileux est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel de silice (Wako gel C-200, 60 g), qui est éluée avec du chloroforme (2 1) et du méthanol à 21 dans le chloroforme sous surveillance par TLC (chlorofornie/méthanol = 10/1). Les fractions désirées provenant de l'ëluat au méthanol à 2% sont recueillies et évaporées à siccité, ce qui 10 donne 0,8 g (40¾) du dérivé propényle 36a.

Les données de l'analyse sont les suivantes: s NMR: δ(CDC13) en ppm 1,28 (3H, d, I = 6 Hz, C-CH3); 1,42 (9H, s, C-CH3); 3,25 (2H, s, 2-H); 4,92 (1H, d, 15 I = 4,5 Hz, 6-H); 5,08 (1H, d, I = 6 Hz, CH-NH); 5.3- 5,8 (1H, m, CH=C); 5,80 (1H, d, I = 4,5 Hz, 7-H); 6,04 (1H, d, I = 11 Hz, CH=C); 6,70 (2H, s, phënyl-H); 6,82 (1H, s, phënyl-H); 6,92 (1H, s, CHPh); 7,3 (10H, s, phênyl-H).

20 Par une méthode semblable à celle décrite ci-dessus, on fait réagir 10,5 g (9,3 mmoles) du mélange des dérivés di-protégës 3- et 4-0-B0C-N-B0C (35b) avec l'acétaldéhyde, ce qui donne 3,3 g (46%) du dérivé 3-propënyle correspondant 36b.

Les données de l'analyse sont les suivantes: 25 IR :vm3V (KBr) en cm“1 1770, 1700, 1500, 1370, 1240, 1140.

» FildX

NMR: (CDC13) en ppm 1,4 (9H, s, C-CH3); 1,55 (9H, s, C-CH3); 3,25 (2H, s, 2-H); 6,07 (1H, d, I = 11 Hz, 30 CH=C); 6,9-7,1 (4H, m, CH-Ph & phényl-H); 7.3- 7,5 (10H, m, phényl-H).

Mode opératoire n° 37 " Acide 7g-{D(-)-2-amino-2-(3,4-dihydroxyphényl)acëtamido}-3- {(Z)-l-propen-l-yl}-3-céphem-4-carboxylique (composé 37, BMY-28068).

35 / s HO—(! J-CHCONB-^ \ / h—N. ^J—CH=CHCH. (2)

H° O J

c°2 B

51 . Un mélange de 0,8 g (1,2 mmoles) de composé 36a, 0,8 ml d'anisole et 3 ml d'acide trifluoroacétique est agité à la température ambiante pendant 5 minutes, et dilué avec 25 ml d'éther et 25 ml d'éther isopro-pylique. Le précipité qui en résulte est recueilli par filtration et 5 lavé avec de l'éther isopropylique, ce qui donne 557 mg du sel de trifluoroacétate brut du composé 37. Une solution du produit brut dans 10 ml d'eau est purifiée par chromatographie sur colonne en utilisant 100 ml du garnissage d'une cartouche prepPAK/C18 (Waters) et la colonne est éluée avec de l'eau et du mëthanol à 5% successivement. L'éluat du 10 méthanol à 5% contenant le produit désiré est concentré à 5 ml et lyophilisé, ce qui donne 231 mg (47%) du composé 37 (forme dipolaire, pur à 90%). Point de fusion 200°C (déc. prog.).

Les données de l'analyse sont les suivantes: 15 IR : v „ (KBr) en cm“1 1760, 1690, 1580, 1530, 1400, 1360, 1290,

ITlâX

1270.

UV : λ (pH 7 tampon de phosphate) en nm (ε) 233 (9200), 281 (11000).

NMR: δ(D^O) en ppm 1,68 (3H, d, 1=6 Hz, C-CH^), 3,26 (1H, d, 20 I = 18 Hz, 2-H); 3,58 (1H, d, I = 18 Hz, 2-H) 5,18 (1H, s, CHNH); 5,22 (1H, d, I = 4,5 Hz, 6-H); 5,5-5,9 (2H, m, CH=C & 7-H); 5,97 (1H, d, I = 11 Hz, CH=C); 7,05 (3H, m, phényl-H).

Selon une méthode semblable, 3,3 g (4,3 mmoles) du mélange de 25 dérivé Ν,Ο-di-t-BOC protégé 36b donne 1,3 g (75%) du composé 37 sous sa forme dipolaire (pur à 90%), qui donne des données spectrales identiques à celles indiquées ci-dessus.

Mode opératoire n° 38

Acide D(-)-2-(t-butox,ycarbonylamino)-2-(4-hydroxy-3-méthoxy-30 phën.yl )acëtique (composé 38) v . Ho—y-chco2h y-' nh - 35 ' t cs3° C02C(CÏÏ3)3 52

Un mélange de 2,96 g (0,015 mole) d'acide D(-)-2-amino-2-(4-hydroxy-3-méthoxyphênyl)acêtique et 3,6 g (0,165 moles) de di-t-butyl-dicarbonate dans 100 ml de THF aqueux à 50% contenant 4,2 ml (0,03 mole) de triéthylamine est agité à la température ambiante pendant 16 heures 5 et le mélange réactionnel est concentré à 50 ml. Le concentré est lavé avec 50 ml d'éther, acidifié avec de l'acide chlorhydrique N et il est extrait deux fois avec de l'éther (100 x 2 ml). Les extraits combinés sont lavés avec de l'eau et avec une solution saturée de NaCl. Les extraits secs sont évaporés à siccitë, ce qui donne 4,38 g du composé 38 ‘ 10 sous la forme de solides mousseux.

Les données de l'analyse sont les suivantes: NMR: ö(CDC13) en ppm 1,4 (9H, s, -C-CHg); 3,8 (3H, s, 0CH3); 5,15 (1H, d, I = 6 Hz, CH-NH); 6,85 (3H, s, phényl-H)

Mode opératoire n° 39 15 73-{D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxy-3-méthoxyphënyl) acëtamido}-3-chlorométhyl-3-céphem-4-carbox.y1ate de benzh.ydryle (composé 39) 20 HO—fl y—ÇHCOKH——^

CE3° CO.C(CEO, I

- C02CE(CsH5)2 25 5

Un mélange de 4,3 g de composé 38, 5 g (0,012 mole) de composé 2 et 3 g (0,015 mole) de DCC dans 150 ml de THF sec est agité à la température ambiante pendant 2 heures. L'urée qui se précipite est 30 éliminée par filtration et le filtrat est évaporé à siccité. Une solution du résidu dans 200 ml d'acétate d'éthyle est lavée avec une solution aqueuse de NaHCO^, de l'eau et une solution saturée de NaCl, séchée sur MgSO^ et évaporée à siccité. Le résidu huileux est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel de silice (Kiesel gel 60, 35 100 g), qui est ëluëe avec un mélange toluène-acétate d'éthyle (4/1) sous surveillance par TLC (mélange toluène-acétate d'éthyle 1/1 ou chloroforme-méthanol 50/1). Les fractions désirées sont recueillies et 53 évaporées à siccitë, ce qui donne 7 g du composé 39 désiré, le 3-chlorométhylcéphem sous la forme de solides mousseux.

Les données de l'analyse sont les suivantes: NMR: 6en ppm 1,4 (9H, s, C-CH3); 3,45 (2H, br-s, 2-H); 3,83 (3H, s, 5 0CH3); 4,32 (2H, s, -CH2C1); 4,92 (1H, d, I = 4,5 Hz, ; 6-H) ; 5,13 (1H, d, I = 6 Hz, CH-NH), 5,65 (1H, d, * I = 6 Hz, NH); 5,80 (1H, d-d, I = 8 & 4,5 Hz, 7-H); 6,85 (3H, s, phënyl-H); 6,95 (1H, s, CH-Ph); 7,2-7,5 (10-H, m, phényl-H).

10 Mode opératoire n° 40

Iodure de 7ß-{ D-(-)-2-(t-butoxycarbonylami no)-2-(4-hydroxy-3-mëthoxyphën.yl )acétainido}-3-tri phënyl phosphoniométh.yl-3-céphem-4-carboxylate de benzhydryle (composé 40).

HO-( )-CBCONS—-f ] \_/ I > © ? Θ /- f SVsf^_CH2P(C6H5,3 1

Cd2° CO,C(CE,), J

20 C02C2(C6S5)2

Un mélange de 7 g (0,01 mole) de composé 39 et 7,5 g (0,05 mole) d1 iodure de sodium dans 100 ml d'acétone est agité à la température 25 ambiante pendant 30 minutes et évaporé à siccitë. Une solution du résidu dans 200 ml d'acétate d'éthyle est lavée avec une solution aqueuse de Na^SoO^, de l'eau et une solution saturée de NaCl, séchée sur MgSO^ ét concentrée à 100 ml. Au concentré, on ajoute 3,1 g (0,012 mole) de triphënylphosphine et le mélange est agité à la température ambiante 30 pendant 1 heure. Au mélange réactionnel, on ajoute 100 ml d'éther et le solide séparé est recueilli par filtration, lavé avec de l'éther et séché, ce qui donne 5,8 g du dérivé triphënylphosphonium composé 40. Le s»- filtrat éthéré est concentré à 10 ml et au concentré, on ajoute 300 ml d'éther, ce qui donne 0,9 g du produit en tant que seconde récolte. Le 35 rendement total est de 6,7 g.

54

Mode opératoire n° 41 76-{D- (-)-2-( t-butoxycarbonyl ami no) -2- (4-hydrox.y-3-méthox.yphënyl -acétaniido}-3-{(Z)-l-propen-l-y1 }-3-céphem-4-carbox.ylate de benzhydryle (composé 41).

5 >-y / EO-Γ )-CBCONE—j-Ç NS '1_N Λ-CH=CSCH, (Z) / I δ

'C^‘3° CO-C(CS,), I

10 C02CE(C6E5)2 A un mélange agité de 5,8 g (5,5 mmoles) de composé 40 et 10 ml d’acétaldéhyde à 90% dans 100 ml de chloroforme, on ajoute goutte à goutte 11 ml (5,5 mmoles) d'hydroxyde de sodium 0,5 N sur une période de 15 25 minutes et on agite le mélange à la température ambiante pendant 2 heures. Le mélange réactionnel est lavé avec de l'eau, ensuite avec une solution saturée de NaCl. séché avec MgSO^ et évaporé à siccité. Le résidu huileux est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel de silice (Kiesel gel 60, 130 g) par élution avec un mélange de toluène 20 et acétate d'éthyle (le mélange est changé par étape: 4/1 (1,3 1), 3/1 (1,1 1), 2/1 (1,0 1)) et l'éluat est recueilli par fraction de 20 ml.

Les fractions n° 26 à la fraction n° 59 sont combinées et évaporées à siccité, ce qui donne 830 g du dérivé désiré de 3-propényle, le composé 41 sous la forme de solides mousseux.

25 Les données de l'analyse sont les suivantes: NMR de 41: 6(CDC13) en ppm 1,35 (3H, d, =CH-CH3); 1,4 (9H, s, C-CH3); 3,85 (3H, s, 0-CH3); 6,07 (1H, d, I = 11 Hz, -CH=C).

Mode opératoire n° 42 30 Acide 7ß-{D(-)-2-amino-2-(4-hydroxy-3-methox,ypheny1 )acétarnido>- 3-{(Z)-l-propen-l-yl}-3-céphem-4-carboxylique (composé 42, BMY-28097).

/ \ /S .

HO-r V—ÇBCONS-^ ^ 35 /=~^ ^2 l-N. J—CB-C3CH3 (2) CE-, O o

j I

co2e 55

Un mélange de 830 mg (1,2 mmoles) du composé 41, 0,5 ml d'anisole et 2 ml d'acide trifluoroacétique est agité à la température ambiante pendant 5 minutes et le mélange est dilué avec 30 ml d'éther et 30 ml d'éther isopropylique. Le précipité qui en résulte est recueilli par 5 filtration, lavé avec de l'éther isopropylique et séché, ce qui donne 437 g du trifluoroacétate brut du composé 42. Le produit brut est soumis à une chromatographie sur une colonne garnie de 100 ml de garnissage d'une colonne prepPAK/C^g (Waters) qui est éluée avec de l'eau et du mëthanol à 5%. L'éluat au méthanol à 5% est concentré à 5 ml et lyophi- 10 lise, ce qui donne 225 mg du composé 42 (dipolaire, pur à 90%), point de fusion 176-180°C (déc.).

Les données de l'analyse sont les suivantes: IR : vBa ' en cm"1 1760, 1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280. max 15 UV : (pH 7 tampon de phosphate) en nni (ε) 235 (10000), 280 (11000).

NMR: δ(D20) en ppm 1,68 (3H, d, 1=6 Hz, C-CHg), 3,25 (1H, d, I = 18 Hz, 2-H); 3,57 (1H, d, I = 18 Hz, 2-H); i 20 4,01 (3H, s, 0CH3); 5,10 (1H, s, CH-C0); 5,19 (1H, d, I = 4,5 Hz, 6-H); 5,78 (1H, d, I = 4,5 Hz, 7-H); 5,5-5,9 (1H, m, CH=C); 5,98 (1H, d, I = 11 Hz, CH=C); 7,07 (2H, s, phënyl-H); 7,17 (1H, br-s, phényl-H).

25 HPLC: temps de rétention 9,3 minutes (tampon d'acétate 0,02 M (pH 4) contenant de 1'acétonitrile à 15%).

Mode opératoire n° 43

Isolement du composé 42 provenant de l'urine de rat auquel on a donné du composé 37.

30 Six rats Wister mâles (400-600 g) sont placés dans des cages d'acier métabolique après administration orale du composé 37^ à la dose de 100 mg/kg et l'urine est recueillie sur une période de 24 heures. On donne aux rats leur régime normal et on leur donne de l'eau pendant l'expérience. Le tableau suivant montre le volume d'urine recueilli en 35 fonction du temps.

0-2 h 2-4 h 4-6 h 6-24 h Total volume d'urine (ml) 18 19,5 13 42 92,5 56 L'urine (environ 90 ml) est ajustée à pH 3 avec de l'acide hydrochlorhydrique N et filtrée pour éliminer un précipité. Le filtrat est soumis à une chromatographie sur une colonne garnie de 300 ml de HP-20 par élution avec 2 1 d'eau et 2 1 de méthanol à 30% sous surveillance 5 par HPLC. Les fractions contenant les composants bioactifs de l'éluat au méthanol à 30% sont recueillies, concentrées ä 10 ml et lyophilisées, ce qui donne 390 ni g de solide brun. Une solution du solide dans 20 ml d'eau est passée en chromatographie sur une colonne garnie de 200 ml du garnissage du colonne prepPAK/Clg (Waters) par élution avec de l'eau, du 10 méthanol à 5% et du méthanol à 10% successivement. La première moitié de l'éluat du méthanol à 5% est concentrée à 5 ml et lyophilisée, ce qui donne 44 mg du composé 37 (pur à 70%), contenant des impuretés provenant de l'urine. La seconde moitié de l'éluat au méthanol à 5% est concentrée à 5 ml et lyophilisée, ce qui donne 36 mg du produit, qui est un mélange 15 du composé 37, du composé 42 et des impuretés provenant de l'urine.

L'éluat au méthanol à 10% (environ 600 ml) est concentré à 5 ml et lyophilisé, ce qui donne 38 mg du composé 42 (pur à 70% par HPLC), que l'on fait repasser en chromatographie sur une colonne ayant le même garnissage que ci-dessus (40 ml) par élution avec de l'eau, du méthanol • 20 â 5% et du méthanol à 10%. Les fractions désirées êluëes au méthanol à 10% sont combinées et concentrées à 5 ml et lyophilisées, ce qui donne 16 mg du composé 42 qui est pur à 90% par HPLC (tampon d'acétate 0,02 M (pH 4-)-acétonitrile (81/15)). point de fusion 180°C (déc. prog.).

Les données de l'analyse sont les suivantes: 25 IR : v (KBr) en cm"1 1760, 1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280. max UV : λ (pH 7 tampon de phosphate) en nm (ε) 233 (8200), max 280 (8800).

30 NMR: 6(0^0) en ppm 1,68 (3H, d, I = 6 Hz, -C-CH3), 3,26 (1H, d, I = 18 Hz, 2-H); 3,58 (1H, d, I = 18 Hz, 2-H); 4,01 (3H, S, 0CH3); 5,12 (1H, s, CH-CO); 5,21 (1H, d, I = 4,5 Hz, 6-H); 5,78 (1H, d, I = 4,5 Hz, 7-H); 5,5-5,9 (1H, m, CH=C-); 5,98 (1H, d, 35 I = 11 Hz, CH=C-); 7,07 (2H, s, phényl-H); 7,17 (1H, br-s, phényl-H).

57

La structure du métabolite est établie comme étant celle de 1'acide 7ß-{D(-)-2-amino-2-(4-hydroxy-3-mdthoxyphenyl)acétamido}-3-{(Z)-l-propen-l-yl}-3-céphem-4-carboxylique par comparaison (NMR, IR, UV, HFLC) avec le composé 42 préparé par les modes opératoires 38, 42.

ï i-" cv'

Claims (28)

1. 58
2. 1.- Composé choisi dans le groupe constitué par ceux ayant la formule: 5 (0)n R2_(f \-CHCONK-.-j/SN )=^ L1 Li. J—«=racs3 / /-T7 10 co2P a et la configuration Z autour de la double liaison hexocyclique dans laquelle: 15. est un entier égal à 0 ou 1; 3 R représente hydrogène, OP , alkoxy inférieur ou halogène; 12 3 P , P et P sont des atomes d'hydrogène ou des groupes protecteurs classiques utilisés dans la chimie de la céphalosporine respectivement avec des groupes ami no, carboxy et hydroxy; *"2 3 20. représente un hydrogène, OP ou un alkoxy inférieur, ainsi que d'une part les sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables des substances précédentes dans lesquelles n est égal à 0 et 12 3 P , P et P sont l'hydrogène et, d'autre part les sels métalliques pharmaceutiquement acceptables des substances précédentes dans les- 12 3 25 quelles n est égal à 0 et P , p et P sont un hydrogène.
3. 2. Composé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que n 12 3 est égal à 0 et P , p et P représentent des atomes d'hydrogène ainsi que leurs sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables et leurs sels métalliques pharmaceutiquement acceptables. 30 3.- Composé suivant la revendication 1, consistant en l'acide 7ß- {D-2-amino-2-(4-hydroxyphênyl)acëtamido}-3-((Z)-l-propen-l-yll-3-céphem -4-carboxylique.
4. 4. Composé suivant la revendication 1, consistant en l'acide 76-{D-2-amino-2-phênylacétamido}-3-{(Z)-l-propen-:l-yl}-3-cêphem-4- 35 carboxylique.
5. 5. Composé suivant la revendication 1, consistant en l'acide 7MD-2-amino-2-(3-chloro-4-hydroxyphényl )acétamido)-3-{(Z)-l-propen- 1-yl}-3-céphem-4-carboxylique. 59
6. 6. Composé suivant la revendication 1, consistant en l'acide 7b-{D-2-amino-2-(3,4-dihydroxyphênyl)acétamido}-3-{(Z)-l-propen- l-yl}-3-céphem-4-carboxylique.
7. 7. Composé suivant la revendication 1, consistant en l'acide 5 7$-{D-2-amino-2-(4-hydroxy-3-méthoxyphênyl)acétamido}-3-{(Z)- l-propen-l-yl}-3-céphem-4-carboxylique.
8. 8. Composition pharmaceutique sous forme de dosage unitaire contenant une quantité non toxique antibactérienne efficace d'un composé revendiqué dans la revendication 2 et un véhicule pharmaceutiquement 10 acceptable pour cette composition.
9. 9. Composé choisi dans le groupe constitué par ceux ayant la formule: 15 <0)n R2_/ \_ CHCOK’K-,-S '"S I ! H / NH? J_X)-CE=CHAlkX s1 7 20 0 cc/ dans laquelle: 25. est un entier égal à 0 ou 1; 1 3 R représente un hydrogène, OP , un alkoxy inférieur ou un halogène; 12 3 P , P et P sont des atomes d'hydrogène ou des groupes protecteurs classiques utilisés dans la chimie de la céphalosporine respectivement avec des groupes ami no, carboxy et hydroxy; 2 3 30. est un hydrogène, OP ou un alkoxy inférieur; Alk représente un alkylidëne ou un alkylène possédant de 1 à 4 atomes de carbone; et, X représente un brome, un chlore ou un iode, ainsi que les sels d'addition d'acides et les sels métalliques des 12 3 35 substances précédentes dans lesquelles n est égal à 0 et P , P et P représentent un hydrogène.
10. 10.- Composé suivant la revendication 9, caractérisé en ce que Alk est un méthylène et X est le chlore. 60 11, - Composé suivant la revendication 10, consistant en l'acide 73-{D-2-amino-2-(4-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-3-chloro-l-propen-1—y1}-3-céphem-4-carboxyli que. 12, - Composé suivant la revendication 10, consistant en l'acide 7b-5 {D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-3- .¾ chloro-l-propen-l-yl}-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyle. 13, - Composé suivant la revendication 10, consistant en l'acide 73-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphênyl)acétamido}-3-(3-iodo--1-propen-l-yl)-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyle. 10 14.- 7ß-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphänyl)acétamido}- i 3-chlorométhyl-3-cêphem-4-carboxylate de diphénylméthyle. 15. - 7g-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphényl)acétamido}-3-iodométhyl-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyle.
11. 16. Iodure de 73-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphényl) 15 acétamido}-3-(triphénylphosphonio)méthyl-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyle.
12. 17. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que n est 12 3 égal à 0 et au moins l'un d'entre P , P et P représente un groupe protecteur classique. " 13 20 18.- Composé selon la revendication 17, dans lequel P et P , dans lequel les groupes protecteurs sont indépendamment choisis dans le groupe constitué par trityle, chloroacétyle, formyle, trichloroéthoxy- 2 carbonyle et t-butoxycarbonyl, benzyloxycarbonyle et P est un groupe „ protecteur choisi dans le groupe constitué de benzyle, p-méthoxybenzyle, 25 p-nitrobenzyle, diphénylméthyle, t-butyle et 2,2,2-trichloroéthyle.
13. 19. Le composé de la revendication 17, connu sou: le nom chimique de 7ß-{2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)- l-propen-l-yl}ceph-3-ème-4-carboxylate de diphénylméthyle.
14. 20.- Composé choisi dans le groupe constitué de ceux ayant la 30 formule: (0)n " R2—(/ η— CHCONH—-S s ^ ^Hpl n——CH=CHR2 35 r1 0 Xp2 61 et la configuration Z autour de la double liaison hexocyclique dans laquelle: n est un entier égal à 0 ou 1; 1 3 R est un hydrogène, OP , alkoxy inférieur ou un halogène; 12 3
15. 5 P , P et P sont des atomes d'hydrogène ou des groupes protecteurs * classiques utilisés dans la chimie de la céphalosporine respecti- ,;1 vement avec des groupes ami no, carboxy et hydroxy, 2 3 R représente un hydrogène, OP ou un alkoxy inférieur; et, 3 « R est choisi dans le groupe constitué par hydrogène, alkyle en C^, 10 aralkyle en Cy_^, hëtérocyclothioalkyle en C^, et alkoxy C^- 8 alkyle C, -, 123 dans laquelle au moins l'un d'entre d'eux R , R , R est différent de l'hydrogène ainsi que les sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables des substances précédentes dans lesquelles n est égal à 0 et 12 3
16. 15 P , P et P sont des atomes d'hydrogène et les sels de métaux pharmaceutiquement acceptables des substances précédentes dans lesquelles n est 12 3 égal à 0, et P , P et P sont des atonies d'hydrogène.
17. 21.- Composé selon la revendication 20, caractérisé en ce que n 12 3 égal 0 et P , P et P sont des atomes d'hydrogène. 20 22.- Composé selon la revendication 20, consistant en l'acide 7$- {D-2-amino-2-(4-hydroxyphënyl)-acétamido}-3-{(Z)-l-buten-l-yl}-3-céphem- 4-carboxylique.
18. 23.- Composé selon la revendication 20, consistant en l'acide 78-, {D-2-ami no-2-(4-hydroxyphényl)acétami do}-3-vinyl-3-céphem-4-carboxyli que. 25 24.- Composé selon la revendication 20, consistant en l'acide 78- - (D-2-amino-2-(4-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-3-phényl-l-propen-l-yl} -3-céphem-4-carboxyli que.
19. 25. Composé selon la revendication 20, consistant en l'acide 78-{D-2-amino-2-(4-hydroxyphényl)acêtamido}-3-{(Z)-3-(lH-l,2,3-triazol-5-yl)- 30 thio-l-propen-l-yl}-3-céphem-4-carboxylique. 26, - Composé selon la revendication 20, consistant en l'acide 78- - {D-2-amino-2-(4-hydroxyphênyl)acétamido}-3-{(Z)-3-méthoxy-l-propen-l-yl} -3-céphem-4-carboxylique. 62
20. 27.- Procédé de préparation d'une céphalosporine de formule: /T~\ ‘î’n 5 r2-\ /— CHC0NS—I-f S '"'l - ' “iP1 J-Nv^J-CH^HR3
21. 0 C02P2 c 10 » ayant la configuration Z autour de la double liaison hexocyclique dans laquelle: n est un entier égal à 0 ou 1; 1 3 R représente un hydrogène, OP , un alkoxy inférieur ou un halogène; 12 3
22. 15 P , P et P sont des atomes d'hydrogène ou des groupes protecteurs classiques utilisés dans la chimie de la céphalosporine, respectivement avec des groupes ami no, carboxy et hydroxy; 2 3 R représente un hydrogène, OP ou un alkoxy inférieur; et 3 ^ R est choisi dans le groupe constitué par hydrogène, alkyle en C^, 20 aralkyle en Cy_^, hétérocyclothioalkyle en C^, et alkoxy C^- alkyle C^, caractérisé en ce que Ton fait réagir dans un véhicule liquide organique inerte réactionnel à 150°C un halogënure réactif de formule QCI^X » et R^CI^X dans laquelle: 25. représente Cl, Br ou I, - avec une triarylphosphine pour donner un sel de phosphonium et conversion de ce dernier dans un solvant organique liquide non miscible à l'eau avec une base organique en un intermédiaire phosphoranylê de 3 formule QCITPAr^ ou R DTPAr^, ce qu'on fait suivre de la réaction de ce 30 dernier dans les conditions à sec à -40°C à +50°C dans ledit solvant organique liquide non miscible à l'eau avec un carbonyle réactif de 3 - formule QCHO et R CHO dans laquelle un et seulement un desdits halogé-nures réactif et dudit carbonyle réactif contient le groupe Q et Q est ~ choisi dans le groupe constitué par les formules -suivantes: 63 T11 (0)n i /Γ\ /K ?Tv3"i—\ h:«// 'Vchccnh—.—r η = s PV-. >^JV
23. 0 X 7 O .1.2' ~ CO,? GDJ?
24. 2 J. k AcNH-.-j^S^j Ξ^-j- , >*y- IR 0 ΓΏ-Ρ2 0 2
25. 15 CD2? dans lesquelles: 1 1 0 O O n, R , P , P , P et R ont les mêmes significations que ci-dessus; , 20 et, : Ac indique un groupe acyle de l'espèce habituellement trouvée dans une céphalosporine; et B est un groupe protecteur alkylidène ou aralkylidène et , ce après quoi on transforme ledit produit en le produit désiré ayant la 25 formule donnée tout d'abord ci-dessus en éliminant si nécessaire un ou 12 3 * plusieurs de ces groupes de blocage de formule P , P , P , Ac et B et en introduisant le groupe 7-acyle de formule: —CHCO-
26. 30 Rl/ NH2 - dans le composé 3-substitué-7-aminoceph-3-ème qui en résulte dans lequel 1 2 R et R sont tels que définis ci-dessus.
27. 28,- Procédé selon la revendication 27, caractérisé en ce qu'il 35 s'applique à la préparation des composés a à n suivants: a) acide 7ß-{D-2-amino-2-(4-hydroxyphenyl)acëtamido}-3-{(Z)-l-propen- 1-yl}-3-céphem-4-carboxylique ; 64 b) acide 73-{D-2-amino-2-phénylacëtamido}-3-{(Z)-l-propen-l-yl}-3-cëphem-4-carboxylique; c) acide 7ß-{D-2-amino-2-(3-chloro-4-hydroxyphenyl)acétamido}-3-{(Z)-l-propen-l-y }-3-céphem-4-carboxylique; 5 d) acide 73-{D-2-amino-2-(3,4-dihydroxyphényl)acêtamido}-3- ^ {(Z)-l-propen-l-yl}-3-céphem-4-carboxylique; 7 e) acide 73-{D-2-amino-2-(4-hydroxy-3-méthoxyphënyl)acëtamido}-3- {(Z)-l-propen-l-yl}-3-céphem-4-carboxylique; « f) acide 73-{D-2-amino-2-(4-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-3-chloro~ 10 1-propen-l-yl}-3-céphem-4-carboxylique; * g) 73-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphényl)acétamido}-3- {(Z)-3-chloro-l-propen-l-yl}~3~céphem-4-carboxylate de diphénylméthyle; h) 73-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphënyl)acétamido}-3- 15 {3-iodo“l-propen-l*-yl}-3-cëphem-4-carboxylate de diphénylméthyle. i) 73-{2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-1-propen-l-yl}ceph-3-ème-4-carboxylate de diphënylmëthyle; j) acide 73-{D-2-amino-2-(4-hydroxyphényl-acétamido}-3-{(Z)-l- ^ buten-l-yi}-3-céphem-4-carboxylique; 20 k) acide 73-{D-2-anrino-2-(4-hydroxyphényl)acétamido}-3-vinyl-3- céphem-4-carboxyli que ; 1. acide 73-{D-2-amino-2-(4-hydroxyphënyl)acétamido}-3-{(Z)-3-phényl-1-propen-l-yl}-3-cëphem-4-carboxylique; « m) acide 73-{D-2-amino-2-(4-hydroxyphényl)acëtamido}-3-{(Z)-3-(lH- 25 l,2,3-triazol-5-yl)thio-l-propen-l-yl}-3-cëphem-4-carboxylique; et * n) acide 73-{D-2-amino-2-(4-hydroxyphényl)acétarnido}-3-((Z)-3- méthoxy-l-propen-l-yl}-3-céphem-4-carboxylique.
28. 29. Procédé de préparation de: 73-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxyphényl)acétamido}-3-30 chloromêthyl-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyle (I), 73-{D-2-(t-butoxycarbonylann'no)-2-(4-hydroxyphényl)acétamido}-3-iodomëthyl-3-cëphem-4-carboxylate de diphénylméthyle (II), et 7 iodure de 73-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)~2-(4-hydroxyphényl) acêtamido}-3“(triphénylphosphonio)mëthyl-3-céphem-4-carboxate de diphë-35 nylméthyle (III), caractérisé en ce que l'on fait réagir le 7-amino-3-chloromëthyl-3-céphem-4-carboxylate de berizhydryle et l'acide D-2-(t-butoxycarbonyl-amino)-2-(p-hydroxyphényl)acétique pour donner le composé I, en ce s* 65 qu'ensuite on fait réagir le composé I avec l'iodure de sodium pour donner le composé II, et on fait ensuite réagir le composé II avec la triphénylphosphine pour former le composé III. « j >