NO165027B

NO165027B - Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive propenyl-cefalosporinforbindelser.

Info

Publication number: NO165027B
Application number: NO840334A
Authority: NO
Inventors: Hideaki Hoshi; Yoshio Abe; Takayuki Naito; Jun Okumura; Shimpei Aburaki
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1983-01-28
Filing date: 1984-01-27
Publication date: 1990-09-03
Also published as: US4520022A; IL70773A; SE8703153D0; FI79540C; DK35384D0; IE56784B1; FI79540B; ZW1184A1; SU1407400A3; CA1233815A; DK162052C; AT383351B; AR240824A2; FI840300A0; LU85184A1; NL8400229A; FI840300A; GR79791B; AU2357584A; AR240824A1

Description

Foreliggende oppfinnelse angår en analogifremgangsmåte for fremstilling av en terapeutisk aktiv 7-(D-2-aminoacetamido)-3-(Z )-propenyl-cefalosporinforbindelse med virkning mot bakterielle infeksjoner.

3-formyl-cef-3-em-forbindelser, som benyttes som mellomprodukter ved en fremgangsmåte til fremstilling av 3-substituerte vincefalosporiner ifølge foreliggende oppfinnelse, kan fremstilles ved oksydasjon av de tilsvarende 3-hydroksymetyl-cef-3-emer, som fåes ved enzymatisk hydrolyse av de tilsvarende cefalosporiner. Denne fremgangsmåte er kjent fra Chamberlin, US-PS 3 351 596 som omhandler forbindelsene II og III.

Chamberlin (loe.sit.) beskrev derivater på 3-CHO-gruppen med karbonylreagenser, for eksempel semikarbazid og hydroksyl-amin, men det var ingen omtale av karbonalkylering på 3-CHO-gruppen .

De tilsvarende sulfoksyder er mer stabile og kan fremstilles i bedre utbytter (Webber, GB-PS 1 341 712).

Den første omtale av 3-alkenyl-substituerte cefalosporiner, var av Clark et al. i GB-PS 1 342 241 (svarende til US-PS

3 769 277 og 3 994 884). Forbindelsene IV og V er omtalt på side 25 og 29 i dette GB-PS.

Den fcJeiiDte teknikk som kommer nærmest foreliggende oppfinnelse er representert ved forbindelser med den ovenfor angitte formel IV. De ifølge foreliggende oppfinnelse fremstilte forbindelser oppviser i forhold til disse en overraskende gunstig virkning, både hva angår aktiviteten overfor gram-positive som overfor gram-negative bakterier, men også hva angår størrelsesordenen og varigheten av bl odspei Iverdiene.

Disse forbindelser ble fremstilt ved omsetning av det tilsvarende 3-trifenylfosfoniummetyl-cefalosporin med formaldehyd eller acetaldehyd. Den omvendte prosess bestående av omsetning av et fosforanyliden-derivat med formelen R3P=CR<3>r<4> med et 3-CHO-cefalosporin er også omtalt i denne patentbeskrivelse på side 5. I US-PS 4 107 431 er det bemerket at forbindelsen med formelen IV absorberes ved oral administrering.

En annen tidligere omtale av forbindelser av denne type er av Webber et al., "J. Med. Chem.", 18 (10) 985-992 (1975) og i US-PS 4 065 620, hvor det i spalte 3, 4 og 5 omtales den stoffgruppe som de foreliggende forbindelser tilhører. Spesialt omtalte forbindelser er vist "ormel VI.

Andre variasjoner av denne type omtales i US-PS 4 094 978 og 4 112 087, hvor forbindelsene VII og VIII er omtalt. US-PS 4 094 978 Col. 44

Andre substituerte 3-alkenyl-cefalosporiner er omtalt 1 følgende patenter:

US-PS 3 830 700: 3-(nitrostyryl)cefaleksin-analoger.

US-PS 3 983 113, 4 049 806, 4 139 618: 3-(heterocyklotio )-propenyl-cefalosporiner,

US-PS 4 147 863: 3-(heterocyklotio)propenyl-cefalosporiner,

DE-OS 3 019 445: 3 - ( li-me ty 1 - 5 -1 e t r azo 1 y 1 ) v 1 ny 1 - c e f al o -

sporiner,

FR-PS 2 460 302: 3-(dimetylamino)vlnyl-cefaleksln-analoger, EP-PS 0 030 630; 7-[ ( 3-metansulf onamldof enyl )-cx-aminoacet-amldo]-3-vinyl-cef-3-em-4-karboksylsyre, US-PS 4 255 423 og 4 390 693: 7-(2-tienyl)acetamido-3-(3-acetoksy-l-propenyl) og

-3-('heterocyklovinyl)-cef-3-em-4-karboksylsyrer, og

7a-metoksy-analoger.

De viktigste kommersielt tilgjengelige og oralt aktive cefalosporiner, som har samme anvendelse som den som forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse er ment til, er cefaleksin, cefadroksil, cefadrin og cefaklor. Disse forbindelsene har formlene IX, X, XI og XII.

Disse forbindelser er gjenstand for følgende patenter: Cefaleksin: US-PS 3 507 861

Cefadroksil: US-PS 3 489 752

(Re 29 164)

Cefaklor: US-PS 3 925 372

Cefadrin: US-PS 3 485 819

Beslektede forbindelser som er beskrevet er 3-klor-cefadroksil og 3-hydroksycefadroksil, henholdsvis i US-PS 3 489 751 og GB-PS 1 472 174.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer som nevnt innled-ningsvis en analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive 7-(D-2-aminoacetamido)-3-(Z)-propenyl-cefalosporinforbindelser med formelen

der R<1> er hydrogen, OH, C1_4-alkoksy eller klor, R<2> er hydrogen eller OH, eller farmasøytisk akseptable salter derav.

Forbindelsene med den ovenfor angitte formel kan fremstilles ved at man: a) omsetter en halogenreaktant med formelen QCHgX', der X' er jod, med et triarylfosfin for dannelse av det tilsvarende fosfoniumsalt, som deretter omdannes til et fosforanyl-mellomprodukt med formelen QCH=PAr3, hvor Ar betyr aryl, etterfulgt av omsetning av sistnevnte forbindelse med en karbonylreaktant med formelen CH3CHO idet Q er: hvori R<*>' betyr -OE** foruten de for R<1> anførte betydninger bortsett fra OH, R<2>' betyr -OE<4> foruten de for R<2> anførte betydninger bortsett fra OH, E<*>, E<2>, E<3> og E<4> er hydrogen eller ved cefalosporinsynteser konvensjonelle beskyttelsesgrupper på amino- og karboksygruppene,, hvoretter det dannede produkt omdannes til den ønskede forbindelse med formel (A) ovenfor ved en avspalting av ovenfor nevnte beskyttelsesgrupper med formlene E<1>, E<2>, E<3> og E<4>, eller b) ved en konvensjonell acyleringsreaksjon innfører en gruppe med formelen der R<1>', R<2>' og E<1> har den ovenfor angitte betydning, i en forbindelse med formelen

der E<2> har den ovenfor angitte betydning, og

deretter omdanner det oppnådde produkt til den ønskede forbindelse med formel (A) ovenfor ved å fjerne beskyttelses-gruppene med formel E<1>, E<2>, E<3> og E<4>, og deretter hvis

ønskelig å omdanne en forbindelse med formel (A) til et farmasøytisk akseptabelt salt derav eller et zwitterion.

Foretrukne forbindelser som fremstilles ifølge oppfinnelsen er 7ø-[D-2-amino-2-(4-hydroksyfenyl)-acetamido]-3-[(Z )-l-propen-1-yl]-3-cefem-4-karboksylsyre, 7p<->[D-2-amino-2-fenylacetamido]-3-[(Z)-l-propen-l-yl]-3-cefem-4-karboksylsyre og 7e-[D-2-amino-2-(3,4-dihydroksyfenyl)acetamido]-3-[(Z)-1-propen-l-yl]-3-cefem-4-karboksylsyre.

De farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter er de i hvilke anionet ikke bidrar signifikant til saltets toksisitet, og som er forenelig med de vanlige farmasøytiske bærere og tilpasset til oral eller parenteral administrering. De omfatter saltene av forbindelser med de generelle formler XIII og XIV hvor n er 0 og P 1 er hydrogen, med mineralsyrer som saltsyre, hydrobromsyre, fosforsyre og svovelsyre, med organiske karboksylsyrer eller organiske sulfonsyrer som eddik-, sitron-, malein-, rav-, benzo-, vin-, fumar-, mandel—, askorbin-, eple-, metansulfon-, p-toluensulfon- og andre kjente syrer, som benyttes i penicillin- og cefalo-sporinkjemien. Fremstillingen av disse salter skjer ved konvensjonell teknikk og involverer omsetning av en av forbindelsene med de generelle formler XIII og XIV, hvor n er 0 og pl er hydrogen, med syren i nesten ekvivalent mengde.

Farmasøytisk akseptable metall- og aminsalter svarer til de salter av forbindelser med de generelle formler XIII og XIV, hvor n er 0 og P<2> er hydrogen, som er stabile i det om-liggende miljø, og hvor kationet ikke bidrar signifikant til saltets toksisitet eller biologiske aktivitet. Egnede metallsalter er natrium-, kalium-, barium-, sink- og aluminiumsaltene. De foretrukne er natrium- og kalsium-saltene. Aminsalter fremstilt av aminer som for eksempel brukes sammen med benzylpenicillin og som er i stand til å danne stabile salter med den sure karboksylgruppe, omfatter trialkylaminer som trietylamin, prokain, dibenzylamin, N-benzyl-e-fenetylamin, 1-efenamIn, N,N'-dibenzyletylendi-amin, dehydroabietylamin, N-etylpiperidin, benzylamin og dicykloheksylamin.

Forbindelsene med de generelle formler XIII og XIV, hvor n er 0 og P* , P<2> og P<3> er hydrogenatomer og deres salter, som definert ovenfor, kan formuleres til oral eller parenteral bruk på vanlig måte, Idet man benytter farmasøytiske bærere og drøyemidler, og de kan fremstilles som enhetsdoser eller i pakker med flere doser. Preparatene kan være i form av tabletter, kapsler, oppløsninger, suspensjoner eller emulsjoner. Disse preparater kan også formuleres som suppositorier, Idet man benytter, en konvensjonell supposi-toriebasis som kakaosmør eller andre fettholdige materialer. Disse forbindelser kan, om ønsket, administreres i kombi-nasjon med andre antibiotika, inklusive cefalosporiner, penicilliner og aminoglykosider.

Tabell I inneholder en oversikt over strukturene av de forbindelser som omtales i eksemplene 1 til 27. De fleste av disse forbindelser er 7g<->(D-fenylglycylamido)cefalosporiner med 1-propen-l-yl-gruppen i 3-stillingen. Det endestående karbonatom i propenyl-substituenten bærer I noen av seg en substituert som en alkylgruppe (metyl), halogen (klor eller jod), en arylgruppe (fenyl), en heterocyklisk tiogruppe (1,2,3-triazol-5-yl-tio) eller en alkoksygruppe (metoksy). Fenylglycylamidgruppen kan være usubstituert eller mono-eller disubstituert med hydroksy, alkoksy eller halogen.

Tabell I

Forbindelser som er omtalt i eksemplene 1 til 27

Tabell I gir en oversikt over den in vitro-antibakterielle aktivitet av de omhandlede forbindelser. De minimale inhibitoriske konsentrasjoner som bestemt ved agar-fortyn-ningsteknikken for de tre grupper av organismer, betegnet ved Gp-la, Gp-lb og Gn-la, er anført. Hver av disse gruppene av organismer består av fem individuelle stammer av mikro-organismer, som er beskrevet i en fotnote til tabellen. Gp-la-organismene er gram-positive stafylokokker som er følsomme over penicillin. Gp-lb-organismene er gram-positive stafylokokker som er resistente overfor penicillin og som produserer penicillinase. Gn-la-organismene er gram-negative bakterier som er følsomme overfor ampicillin og cefalotin. De foreliggende forbindelser har generelt lav aktivitet overfor ampicillin og cefalotin-resistente gram-negative bakterier. De følgende konklusjoner kan trekkes ut fra tabell II om disse forbindelsers in vitro-antlbakterielle aktivitet.

Alle forbindelser har god aktivitet overfor penicillin-følsomme stafylokokker (Gp-la). De er generelt mindre aktive overfor de penicillinresistente stafylokokker (Gp-lb) med en faktor tre eller mer. I hvert tilfelle er forbindelsene imidlertid flere ganger mer aktive enn cefaleksin og cefadroksil.

Kun de forbindelser, som har en usubstituert cis-(Z)-propenylgruppe i 3-stillingen, har en god aktivitet overfor de gram-negative bakterier (Gn-la). Se forbindelsene nr. 9, 24, 32 og 42. Disse forbindelser er ikke desto mindre kraftige antibakterielle midler, som i det vesentlige er ekvivalente med cefaleksin og cefadroksil. Ringsubstitusjon er på ingen måte ugunstig for den antibakterielle aktivitet. Se forbindelsene nr. 9, 24, 32 og 42. Forbindelse nr. 37 ser ut til å være en unntagelse til alle de ovenstående konklusjoner, men faktisk er det en sterk aktiv forbindelse overfor både gram-positive og gram-negative bakterier som det vil kunne sees i tabell III.;

Gn la gram-negative bakterier, ampicillin- og cefalotin-følsom.

E. coli Juhl A15119

E. coli A9660

K. pneumoniae Dll

P. mirabilis A9554

P. mirabilis A9900

4. Ikke del av forsøk 1, separat forsøk.

Tabell III inneholder sammenlignende data for den in vitro-antibakterielle aktivitet overfor samme organismer som i tabell II, idet man har benyttet to forskjellige bakterio-logiske dyrkningsmedier. Mueller-Hinton-agar er det standard-medium som benyttes i forsøkene som oppsummeres i tabell II. Tabell III Inneholder en sammenligning av de minimale inhibitoriske konsentrasjoner av tre av testforbindelsene, bestemt først i Mueller-Hinton-medium og så i en næringsagar. Forbindelse nr. 9, som inneholder en 4-hydroksy-substitusjon 1 fenylringen, og forbindelse nr. 42, som inneholder 3-metoksy-4-hydroksy-substltusjon i fenylringen, reflekterer kun moderat mediumeffekt. Med dette menes at forskjellen i minimal inhibitorisk konsentrasjon er mindre enn en faktor 3. Forbindelse nr. 37, den 3,4-dihydroksyfenyl-substituerte forbindelse, reflekterer forskjeller 1 aktiviteten mellom de to medier på fra 6-12 ganger, idet de minimale inhibitoriske konsentrasjoner i næringsagar er meget lavere enn dem, som er bestemt på Mueller-Hinton-agar. I overensstemmelse med dette konkluderes det at forbindelse 37 var sammenlignbar I antibakteriell effekt med de andre cefalosporiner som har cis-propenylgruppen i 3-stilling, hvilket er vist i tabell II. Dette fenomen, hvorved et antibiotikum viser større aktivitet i en slags næringsmedium enn i et annet, er blitt rapportert og studert tidligere. Se T.A. Pursiano et al., "Antimicrobial Agents and Chemotherapy", vol. 3, nr. 2, s. 33-39.

Strukturaktivitetskorrelasjonen som kan utledes av de ovenstående ln vitro-studier, finnes igjen ved in vivo-studier på mus. Tabell IV er en tabell over den beskyttende dose for mus infisert med letalt inokulum av en bakterie. To forskjellige bakterier benyttes i studiene, en gram-positiv organisme og en gram-negativ organisme. Den beskyttende dose PD50 er den dose som, når den administreres til en gruppe infiserte mus, resulterer i 5056 overlevelse etter fem dager. Normalt dør ubehandlede mus innen tre dager etter injeksjon av det letale inokulum.

Dataene i tabell IV er resultater fra mange forskjellige eksperimenter. I disse eksperimenter ble cefaleksin brukt til kontrollbehandling. PD5ø-verdiene bestemt for cefaleksin i det samme eksperiment står i parenteser ved siden av PD50-verdiene for testf orbindelsene. Det er klart at hver av cefalosporinene er i besittelse av en god aktivitet overfor den gram-positive Staphylococcus aureus-infeksjon, og at forbindelsene med cis-propenylgruppen i 3-stillingen er mer aktiv overfor den gram-negative infeksjon, se forbindelsene 9, 24 og 37.

Tabell V inneholder sammenlignende blodspeildata for mus behandlet oralt eller intramuskulært med testforbindelsene anført i tabell 1. Ensartet god oral absorpsjon reflekteres. Forbindelse nr. 37 viser eksepsjonelt høye konsentrasjoner i blodet på musene ved oral administrering. Det er blitt bevist at denne forbindelse metaboliseres til forbindelse nr. 42 i rotter. Forbindelse nr. 37 er 3,4-dihydroksyfenylderivatet, og forbindelse nr. 42 er 3-metoksy-4-hydroksyfenyl-derivatet. Det er blitt vist at det sistnevnte derivat har en høy in vitro- og in vivo-aktivitet.

Tabell VI inneholder ytterligere in vivo-data for forbindelse nr. 9 overfor fire andre organismer sammenlignet med cefaleksin, cefaklor og cefadroksil. Tabell VII og VIII Inneholder sammenlignende in vitro-data for forbindelse nr. 9 mot cefaleksin, cefadroksil og cefaklor med hensyn til et antall streptokokker, neisseria, haemofilis og forskjellige anaerober.

I rotteurin-gjenvlnningseksperlmenter er 24 timers gjen-vinningsraten av forbindelse nr. 9 i urin for rotter behandlet oralt, sammenligning med cefaleksin og cefadroksil, og større enn cefaklor-gjenvlnningsraten. Stablitetsstudier som sammenligner forbindelse nr. 9 med cefaleksin og cefaklor i oppløsning i fosfatbuffer med pH 6,5 og pH 7,0, humant serum pH 6,8, hesteserum pH 7,6 og kalveserum pH 8,2 som bærere, har avslørt at forbindelse nr. 9 er bemerkelsesverdig mer stabil enn cefaklor og sammenlignbar med cefaleksin.

De nedenfor i tabellene IX og X anførte data representerer minimale inhibitoriske konsentrasjoner, bestemt ved agar-fortynningsteknikk for den ifølge oppfinnelsen fremstilte forbindelse BMY-28100 sammenlignet med den i beskrivelsens innledning nevnte kjente forbindelse IV, heretter kalt BMY-280^^- ro^ci foT-mel en :

og de kjente forbindelser cefaleksin og cefadroksil.

Fra tabell IX fremgår at den ifølge oppfinnelsen fremstilte forbindelse BMY-28100 oppviser en meget uventet in vitro gram-negativ antibakteriell aktivitet 1 forhold til de kjente forbindelser BMY-28086, cefaleksin og cefadroksil.

Av tabell IX fremgår det at den ifølge oppfinnelsen fremstilte forbindelse BMY-28100 er 4-6 ganger mer aktiv mot gram-negative organismer enn de kjente forbindelser BMY-28086, cefaleksin og cefadroksil.

Av tabell X fremgår det at den fremstilte forbindelse BMY-28100 oppviser en aktivitet mot gram-positive forbindelser som er 2-4 ganger høyere enn aktiviteten av de kjente forbindelser BMY-28086, cefaleksin og cefadroksil.

Av tabell XI fremgår de blodspeil som oppnås etter oral administrering og Intramuskulær administrering av den ifølge oppfinnelsen fremstilte forbindelse BMY-28100. Disse data representerer resultatene av et enkelt testforløp.

I tabell XII er det oppført data for den urinære gjenvinning av den ifølge oppfinnelsen fremstilte forbindelse BMY-28100 etter oral administrering av en dose på 20 mg/kg til mus. I tabellen er det likeledes anført data som oppnås ved samme forsøk med den kjente forbindelse cefaklor. Resultatene synes å vise at den angjeldende forbindelse BMY-28100 og den kjente forbindelse cefaklor utskilles med samme hastighet av mus over en 24 timers periode.

De anførte antimikrobielle data for de ifølge oppfinnelsen fremstilte forbindelser viser at de oppviser en uventet sterk anti-gram-negativ antibakteriell aktivitet og en forbedret gram-positiv antibakteriell aktivitet sammenlignet med de fra teknikken kjente forbindelser BMY-28086, cefaleksin og cefadroksil. Systemisk absorpsjon av de ifølge oppfinnelsen fremstilte forbindelser er på samme måte påvist ved målinger av blodspeil og urinær utskillelse hos mus.

Forbindelsene som her beskrives fremstilles ved anvendelse av den syntese som er omtalt i GB-PS 1 342 241, US-PS 3 994 884 og US-PS 4 107 431, nevnt ovenfor, med hensiktsmessige utvalgte utgangsmaterfaler. I det vesentlige medfører dannelsen av den substituerte vinylgruppe i 3-stillingen i cefalosporiner som fremstilles ifølge foreliggende oppfinnelse en reaksjon av en halogenidreaktant med et triarylfosfin, som gir et fosfoniumsalt, som igjen ved behandling med base gir et fosforanyl-mellomprodukt. Sistnevnte behandles så med en karbonylreaktant, hvilket gir en forbindelse ifølge oppfinnelsen. Dette illustreres i de følgende reaksjonsskjemaer.

Reaksjonsskjema 1

I ovenfor angitte reaksjonsskjema er R er metyl.

Omdannelsen av halogenidreaktanten med formelen QCH2X ifølge skjema 1 til fosforanyl-mellomproduktet skjer fortrinnsvis ved å benytte en halogenidreaktant hvor X er jodid. Hvis en klor- eller bromhalogenid-reaktant benyttes, skal den først omdannes til jodidet ved behandling med natriumjodid 1 dlmetylformamid eller acetonoppløsning. Jodreaktanten reagerer lett med et triarylfosfin som trifenylfosfin i et organisk flytende medium som er inert overfor reaktantene ved reaksjonsbetingelsene. Romtemperatur i en kort periode opp til mange timer er passende betingelser. Egnede triaryl-fosf iner er, ut over trifenylfosfln, lett tilgjengelige arylforbindelser som er forenelige ved reaksjonen, for eksempel substituerte fenyler som tolyl, naftyl, substituert naftyl og heteroaromatiske eller substituerte heteroaromatiske grupper. Det første trinn i reaksjonen er dannelsen av triarylfosfoniumsaltet som normalt bunnfelles i oppløsningen og oppsamles på et filter.

Triarylfosfoniumsaltet oppløses så i et passende flytende, organisk oppløsningsmiddel som er ikke-blandbart med vann og inert ved reaksjonsbetingelsene, for eksempel kloroform, trikloretylen eller andre polyklorerte eller bromerte metaner eller etaner. Fosforanyl-mellomproduktet fremstilles så in situ ved behandling av oppløsningen med vandig alkalimetall-karbonat, -bikarbonat eller -hydroksyd ved romtemperatur. Den organiske fase som inneholder fosforanyl-mellomproduktet separeres, vaskes med vann og tørkes på den vanlige måten. Karbonylreaktanten som er vist i reaksjonsskjemaet, settes så til den tørre oppløsning av fosforanyl-mellomproduktet, og det siste trinn av reaksjonen skjer så igjen ved romtemperatur, innen en relativt kort reaksjonstid på ca. 2 til 20 timer. Det ønskede produkt, beskrevet av formelen 0CH=CHR<3>, separeres ved kjente metoder som kromatografi på silikagel-kolonne.

Halogenidreaktantene med formelen QCH2X i skjema 1, fremstilles ut fra det tilsvarende 7-amino- eller 7-acylamino-3-hydroksymetyl-cef-3-em-4-karboksylsyrederivat ved fremgangsmåter som i prinsippet er kjente.

Ifølge en variasjon av skjema 1, sonr det heretter refereres til som metode A, benyttes 7p-[oc-(N-t-butoksykarbonylamino )-a- (p-hydroksyf enyl )acetamido] -3-klormetyl-3-cefem-4-karbok-sylsyre-benzhydrylester som utgangsmateriale.

En ytterligere variasjon av skjema 1 kalles metode C. I denne variant fremstilles 7-amino-3-klormetyl-3-cefem-4-karboksyl-syre-benzhydrylesteren som før, og 7-aminogruppen beskyttes ved en reaksjon med benzaldehyd, og dette danner benzyliden-beskyttelsesgruppen.

Den sistnevnte behandles heretter med'trifenylfosfin, som gir fosfoniumsaltet, som så omdannes ved hjelp av base til fosforanyl-mellomproduktet, og sistnevnte behandles med en aldehyd, hvilket gir den 3-substituerte vinyl-7-aminocefalo-sporansyre, som deretter kan acyleres for å innføre den ønskede acylgruppe i 7-stilling.

7-fenylacetamidocefalosporansyre er et bekvemt utgangsstoff i betraktning av den lette tilgjengelighet. Acetoksygruppen i dette kan lett hydrolyseres enzymatisk ved å benytte hvetekli som enzymkilde, og det gir 7-fenylacetamido-3-hydroksymetyl-cef-3-em-4-karboksylsyre. Karboksylsyregruppen kan beskyttes ved omdannelse til benzhydrylesteren ved behandling av syren med difenyldiazometan. Esteren behandles deretter med fosforpentaklorid under kjente betingelser, hvilket resulterer i fraspalting av 7-fenylacetylgruppen og omdannelse av 3-hydroksymetylgruppen til en 3-klormetylgruppe. Fremstilling av 7-amino-3-klormetyi-3-cefem-4-karboksylsyre-benzhydroksy-ester ved disse fremgangsmåter illustreres i eksempel 1 og 2.

Alternativt kan 7-f enylacetamido-3-hydroksymetyl-:cef-3-em-4-karboksylsyre omdannes til 3-halogenmetylforbindelsen og derfra til fosforanyl-mellomproduktet, etterfulgt av en reaksjon med en aldehyd til fremstilling av det substituerte 3-vinyl-cefalosporin ifølge en av variasjonene av reaksjons-skjerna 1.

MELLOMPRODUKTER

Eksempel 1

Benzhvdrvl- 3 - hy dr oks yrne tyl - 7g- f enylacetamido- 3- cef em- 4 - karboksylat ( forbindelse 1)

Til en suspensjon av 162,5 ml fosfatbuffer pH 7 og 20 g tørr hvetekli ved romtemperatur ble det tilsatt 5 g (12,1 mmol) 7-fenylacetamidocefalosporinsyre.natriumsalt på en gang. Reaksjonens fremgang kontrolleres ved HPLC, inntil hydrolysen var tilendebragt, 5 timer. Suspensjonen ble filtrert for å fjerne hvetekliet og ble avkjølt til 5 til 10°C til ekstrak-sjonsforestring. Til den avkjølte oppløsning ble det tilsatt 32 ml metylenklorid etterfulgt av en 0,5M oppløsning av difenyldiazometan i 24 ml metylenklorid. Deretter ble pH justert til 3,0 med 28% fosforsyre. Etter en time fikk reaksjonsblandingens temperatur lov til å stige til20°C. 56 ml heptan ble tilsatt langsomt, og det resulterende krystallinske tittelprodukt ble utvunnet ved filtrering. Utbytte av produktet var 3,0 g tilsvarende 50%.

Eksempel 2

Benzhydryl- 7g- amino- 3- klormetyl- 3- cefem- 4- karboksylat

( forbindelse 2)

Til en oppslemming av 8,3 g (40 mmol) PC15 i 1000 ml CH2C12 ble det satt 3,2 g (40 mmol) pyridin, og blandingen ble omrørt i 20 minutter ved 20°C. Til blandingen ble det tilsatt 5,1 g (10 mmol) benzhydryl-3-hydroksymetyl-7-fenylacetamido-3-cefem-4-karboksylat, 1, på en gang under omrøring ved -40°C. Blandingen ble omrørt i 15 minutter ved -10°C og fikk stå i 7 timer ved -10 til -15°C. Til den avkjølte oppløsning 1 til 20°C, ble det tilsatt 10 ml propan-1,3-diol, og blandingen fikk stå i 16 timer ved -20" C og deretter i 20 minutter ved romtemperatur under omrøring. Den resulterende oppløsning ble vasket med 2 x 20 ml isvann, og 10 ml mettet, vandig NaCl, tørket over MgS04 og konsentrert i vakuum. Den gummiaktige rest, 12 g, oppløses i CHCI3:n-heksan 2:1, og ble underkastet kromatografi under anvendelse av en, silikagel-kolonne (200 g), og det samme oppløsnlngsmiddel som elu-eringsmiddel. Fraksjoner, som inneholdt tittelforbindelsen, ble dampet inn i vakuum og resten trlturert med n-heksan til dannelse av 2, 2,1 g tilsvarende 51$, og med smeltepunkt 110-C.

IR :vKBr: 3400, 2800, 1785, 1725 cm-<1>.

UV: xg<tQH.> 265 nm E^m 160.

NMR: 5 DMS0-d6 + CDCI3, ppm: 3,69 (2H, s), 4,43 (2H, s),

5,09 (1H, d, J=4,5 Hz), 5,24 (1H, d, J=4,5 Hz);

6,87 (1H, s), 7,3 (10H, m).

Eksempel 3

Benzhydryl- 7 3- fD- 2-( t- butoksykarbonylamino )- 2-( p- hvdroksv-fenvl )- acetamido] - 3- klormet. vl- 3- cefem- 4- karboksylat

( forbindelse 3)

Til en blanding av 20,7 g (0,05 mol) benzhydryl-7-amino-3-klormetyl-3-cefem-4-karboksylat 2 og 20 g (0,075 mol D-2-(t-butoksykarbonylamin )-2-(p-hydroksyfenyl)-eddiksyre i 500 ml tørr tetrahydrofuran (THF) ble det tilsatt 15,45 g (0,075 mol) N,N'-dicykloheksylkarbodiimid (DCC), og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer og dampet inn til tørrhet. Resten ble oppløst ill etylacetat (AcOEt), og det oppløse-lige dlcykloheksylurinstoff ble fjernet ved filtrering. Filtratet ble vasket med en vandig natriumbikarbonatoppløs-ning, vann og mettet vandig NaCl-oppløsning, tørket over vannfri natriumsulfat og dampet inn til tørrhet. Den oljeaktige resten ble kromatografert på en silikagel-kolonne ("Wakogel C-100", 500 g) ved eluering med 4 1 kloroform og 6 1 1% kloroform-metanol. De ønskede fraksjoner kombineres og dampes inn til tørrhet. Den oljeaktige rest tritureres med eter-isopropyleter til dannelse av 30,6 g tilsvarende 92%, av 3.

IR: v§|<g>s> cm-<1>: 1790, 1710, 1670, 1500, 1360, 1230, 1150.

NMR: 5 CDC13 ppm: 1,45 (9H, s, C-CH3); 3,4 (2H, br-s, 2-H),

4.28 (2H, s, CH2C1), 4,86 (1H, d, 4,5Hz, 6-H), 5,12 (1H, d, 6Hz, CH-CO), 5,68 (1H, dd, 8 & 4,5 Hz, 7-H), 6,63 (2H, d, 9Hz, fenyl-H), 6,93 (1H, s, CH-Ph2), 7,08 (2H, d, 9Hz, fenyl-H), 7,0-7,5 (10H, m, fenyl-H).

Den oljeaktige resten kan benyttes I eksempel 4 uten kromatografisk opprensning.

Eksempel 4

Benzhydryl- 7g- fD- 2-( t- butoksvkarbonylamino )- 2-( p- hvdroksy-fenyl ) acetaml do1 - 3-. 1odmetvl- 3- cefem- 4- karboksvlat

( forbindelse 4)

En blanding av 26,6 g (0,04 mol) av 3 og 18 g (0,12 mol) natriumjodld i 400 ml aceton omrøres ved romtemperatur i 2 timer og dampes inn til tørrhet. Resten ekstraheres med 400 ml etylacetat og ekstraktet vaskes med en vandig NaCl-oppløsning, Etter inndamping av oppløsningsmldlet tritureres med eter-isopropyleter til dannelse av 27 g tilsvarende 89% av tittelproduktet. Etylacetatoppløsningen kan om ønskes, anvendes direkte i neste trinn, forbindelse 5.,, uten isolering

av forbindelse 4..

IR: ^il£s. cm-<1>: 1790, 1710, 1670, 1500, 1360, 1220, 1150.

NMR: S CDC13 ppm: 1,47 (9H, s, C-CH3), 3,3-3,6 (2H, m, 2-H),

4,20 (2H, s, CH2), 4,89 (1H, d, 4, 5Hz, 6-H), 5,12 (1H, d, 6Hz, CH-CO), 5,68 (1H, dd, 8 & 4,5 Hz, 7-H), 6,62 (2H, d, 9Hz, fenyl-H), 6,92 (1H, s, CH-Ph2), 7,08 (2H, d, 9Hz, fenyl-H), 7-7,5 (10H, m, fenyl-H).

Eksempel 5

Benzhvdrvl - 7g- rD- 2-( t- butoksykarbonylamlno )- 2-( p- hydroksyfenyl) acetamldol- 3-( trifenylfosfonio) metyl- 3- cefem- 4-karboksylat. lodld ( forbindelse 5)

En blanding av 15,1 g (0,02 mol) av 4 og 15,7 g (0,06 mol) trifenylfosfin i 200 ml etylacetat omrøres ved romtemperatur i en time. Det resulterende utfellingsprodukt samles ved filtrering til dannelse av 17,4 g tilsvarende 85,5$ av 5, som smelter ved 170 til 180°C. Filtratet konsentreres til 100 ml, og konsentratet fortynnes med 500 ml eter til dannelse av den andre høsting (1,1 g) av 5. Det samlede utbyttet var 18,5 g tilsvarende 91$. Det totale utbyttet av 5. fra 2 er 74,5$. Dette kan økes til 87,5$ ved utelatelse av opprensningen og i solasjonstrinnene som er angitt ovenfor.

Analyse for Cs^q^OySPI:

Eksempel 6

Benzhydryl - 7p- fD- 2-( t- butoksykarbonylamino )- 2-( p- hydroksyfenyl ) acetamidol - 3-( Z )- 1 - propen- l- yl- cef- 3- em- 4- karboksylat

( forbindelse 6)

Til en oppløsning av 1,8 g (1,77 mmol) av 5 i 100 ml kloroform tilsettes 100 ml vann som inneholder 2 ml (2 mmol) IN natriumhydroksyd, og blandingen rystes i 5 minutter. Den organiske fase skilles fra, vaskes med vann og tørkes over vannfri natriumsulfat. Samtidig med at kloroformoppløsningen filtreres, konsentreres filtratet til 50 ml under redusert trykk. Til konsentratet settes 1 g acetaldehyd, og blandingen omrøres i romtemperatur 1 2 timer og dampes inn til tørrhet. Den oljeaktige rest kromatograferes på en silikagel-kolonne ("Wakogel C-200", 50 g) ved eluering med kloroform:kloroform-metanol 99:1. De ønskede fraksjoner samles og dampes inn til dannelse av 318 mg tilsvarende 28* av produktet 6 med smeltepunkt 120 til 130°C.

IR: ^l^s,, cm-<1>:1780, 1670, 1710, 1490, 1360, 1210, 1150.

NMR: S CDC13 ppm: 1,3-1,5 (12H, m, C-CH3); 3,22 (2H, br-s,

2-H), 4,90 (1H. d, 4,5Hz, 6-H), 5,15 (1H, br-d, CH-CO), 5,5-6,1 (3H, ra, CH=CH & 7-H), 6,63 (2H, d, 9Hz, fenyl-H), 6,91 (1H, s, CH-Ph), 7,09 (2H, d, 9Hz, fenyl-H), 7,2-7,5 (10H, m, fenyl-H).

SLUTTPRODUKTER

Eksempel 7

Natrium- 7p- rD- 2- amlno- 2-( p- hydroksvfenvl) acetamldol- 3- r( Z )- l-propen- l- vll- 3- cefem- 4- karboksvlat. natriumsalt

( forbindelse 7. BMY- 28100)

En blanding av 318 mg (0,48 mmol) av 6 og 2,5 ml trifluoreddiksyre, TFA, omrøres ved romtemperatur i en time og fortynnes deretter med 50 ml eter og 50 ml isopropyleter. Det utskilte bunnfall samles ved hjelp av filtrering og vaskes med eter til det ble dannet 188 mg tilsvarende 77$ av trifluoracetatet av 7, som ble oppløst i 2 ml metanol (MeOH). Oppløsningen ble tilsatt 2 ml (2 mmol) natrium-2-etyl-heksanoat (SEH) oppløst i etylacetat, og blandingen ble fortynnet med 30 ml etylacetat for å utskille bunnfallet, som ble samlet ved hjelp av filtrering, ble vasket med eter og tørket i vakuum over P2°5 til dannelse av 144 mg (73$ fra 6) uren 7. Råproduktet, 135 mg, ble oppløst i 10 ml vann og oppløsningen ble kromatografert på en kolonne, 25 mm x 100 mm, ved anvendelse av ca. 20 ml av pakningen i PrepPAK-500/Cig, Waters. Kolonnen elueres med vann, og eluatet som inneholdt det ønskede produkt, ble konsentrert til 5 ml og ble lyofilisert for å danne 93 mg tilsvarende 69$ av 7 med smeltepunkt 200°C. Oppnådd renhet 60$ ved HPLC.

IR: <v>ma£s. cm-<1>: 1760, 1660, 1590, 1400, 1360, 1250.

UV: <x>måis<atbufff>er pH 7 nm (c): 227 (11300), 280 (8200).

NMR: S D20 ppm: 1,65 (3H, d, 6Hz, C-CH3), 3,21 (1H, d, 18Hz,

2-H), 3,52 (1H, d, 18Hz, 2-H), 5,12 (1H, d,

4,5Hz, 6-H), 5,68 (1H, d, 4,5Hz, 7-H), 5,5-5,9 (1H, m, vinyl-H), 5,95 (1H, d, 11,5Hz, vinyl-H), 6,94 (2H, d, 8Hz, fenyl-H), 7,36 (2H, d, 8Hz, feny1-H).

Eksempel 8

Krystallinsk 7p- rD- 2- amino-( p- hydroksyfenyl) acetamido]-3-f( Z )- l- propen- l- vl1- 3- cefem- 4- karboksylsyre ( forbindelse 9.

BMY- 28100)

En første 4 liters fraksjon, oppnådd ved preparativ HPLC og inneholdende cis-isomeren (BMY-28100), ble konsentrert til et volum på 2 1, og konsentratet ble justert til pH 3 med fortynnet saltsyre. Oppløsningen ble overført til en kolonne som inneholdt HP-20 (11), og kolonnen ble vasket med 6 1 vann, inntil avløpets pH-verdi var 7. Kolonnen ble deretter eluert med 4 1 30$ vandig metanol. Eluatoppløsningen ble undersøkt ved HPLC, og de passende fraksjoner ble kombinert (ca. 2,5 1) og konsentrert til 50 ml ved en temperatur under 40'C ved redusert trykk. Et krystallinsk utfelt produkt var dannet. Konsentratet ble avkjølt ved 0'C i 2 timer, og det krystallinske bunnfall ble samlet ved filtrering, vasket med 80$ vandig aceton, deretter med 100$ aceton, og så tørket under vakuum over P2°5. noe som ga et utbytte på 4,09 g av det ønskede urene krystallinske produktet med smeltepunkt 218-22CC i form av farveløse prismer med en renhet på 95$, bestemt ved HPLC-analyse.

IR: v^|gs> cm-<1>: 1270, 1235.

LTV: <x>måis<atb>Ufffer pH 7 nm (c): 228 (12300), 279 (9800).

NMR: 5 D20 + NaHC03 ppm: 1,71 (3H, d, 6Hz, C-CH3), 3,27 (1H,

d, 18Hz, 2-H), 3,59 (1H, s, 18Hz, 2-H), 5,18 (1H, d, 4,5Hz, 6-H), 5,22 (1H. s, CHCO), 5,73 (1H, d, 4,5Hz, 7-H), 5,5-6,0 (1H, m, CH=C),

6,02 (1H, d, 11Hz, CH=C), 6,98 (2H, d, 9Hz, fenyl-H), 7,41 (2H, d, 9Hz, fenyl-H).

Analyse for C18Hi9N305-ViH20:

Moderluten fra den foregående krystal1Iserlng konsentreres til et volum på 10 ml og behandles med 20 ml aceton. Etter at oppløsningen har fått stå i kjøleskap over natten har det dannet seg et krystallinsk bunnfall, som samles ved hjelp av filtrering, og tørket under vakuum over P2O5, vekt 670 mg (90$ rent ifølge HPLC). En del av dette materialet (560 mg) ble oppløst i 200 ml 50$ vandig metanol, og oppløsningen ble behandlet med 0,5 g aktivt kull og filtrert. Filtratet konsentreres ved redusert trykk ved 40"C til et volum på 20 ml og fikk deretter stå i 5 timer ved 5°C. Produktet ble utkrystallisert og samlet ved hjelp av filtrering, vasket med aceton og tørket under vakuum over P2°5. dette ga et utbytte på 227 mg krystallinsk BMY-28100 (98$ rent ifølge HPLC). Lyof ilisering av moderluten ga et utbytte på 181 mg BMY-28100, som hadde en renhet på 95$ (HPLC).

Eksempel 9

Benzhydryl- 7p- rD- 2-( t- butoksykarbonylamino)- 2- fenylacet-amidol- 3-( trlfenylfosfonio ) me tyl- 3- cef em- 4- karboksyl at jod id

( forbindelse 22)

En blanding av 14,5 g (0,0196 mmol) benzhydryl-7-[D-(-)-a-(t-butoksykarbonylamlno)-a-fenylacetamido]-3-jodmetyl-3-cefem-4-karboksylat og 5,24 g (0,02 mol) tr ifenylfosf in i 300 ml etylacetat omrøres ved romtemperatur i 2 timer. Til reaksjonsblandingen settes 200 ml eter for å danne et bunnfall, som samles ved filtrering og vaskes med eter til dannelse av 14,3 g tilsvarende 73$ av tittelforbindelsen. Filtratet konsentreres til 50 ml, og konsentratet fortynnes med eter for å danne ytterligere 2,4 g av produktet. Samlet utbytte 16,7 g tilsvarende 85$.

IR: v|<B>j<r>g> cm-l: 1780, 1690, 1480, 1420, 1350, 1240, 1150.

Eksempel 10

Benzh ydryl- 7p- fD- 2-( t- butoksykarbonylamlno)- 2- f enylacet-amidol - 3- T ( Z )- l- propen- l- vl1 - 3- cef em-4-ka rboksylat

( forbindelse 23)

Til en blanding av 5 g (5 mmol) av 22 i 200 ml kloroform tilsettes en blanding av 100 ml vann og 5 ml (5 mmol) IN natriumhydroksyd, og blandingen rystes i 3 minutter. Den utskilte organiske fasen vaskes med vann og en mettet NaCl-oppløsning, og tørkes over vannfri magnesiumsulfat. Idet kloroformoppløsningen filtreres, konsentreres filtratet til 100 ml under redusert trykk. Konsentratet tilsettes 3 ml acetaldehyd, og blandingen omrøres ved romtemperatur i VA time og dampes inn til tørrhet. Den oljeaktige resten kromatograferes på en silikagel-kolonne (kieselgel 60, 50 g) ved eluering med kloroform. De ønskede fraksjoner samles og dampes inn til tørrhet, og resten tritureres med n-heksan for å danne 990 mg tilsvarende 31$ av tittel forbindelsen (.23).

IR: vK||s cm-<1>: 1780, 1710, 1660, 1510, 1490, 1360, 1240,

1210, 1150.

NMR: S CDC13 ppm: 1,3-1,5 (12H. m, C-CH3). 3,22 (2H, s.

2-H), 4,93 (III, d, 4,5Hz, 6-H), 5,23 (1H. d, 8Hz. CH--C0), 5,5-6.2 (3H, m, 7-H & vinyl-H), 6,94 (1H, s, CHPh), 7.2-7,5 (15H, m, fenyl-H),

Eksempel 11

Natrlum- 7g- rD- 2- amlno-2-fen vlacetamldo1- 3- f( Z)-1-propenyll-3-cefem- 4- karboksylat ( forbindelse 24. BB- S1065)

En blanding av 0,94 g (1,47 mmol) av 23 og 3 ml TFA omrøres ved romtemperatur i 30 minutter og fortynnes deretter med 50 ml av en l:l-blanding av eter: isopropyleter for å skille ut 800 mg bunnfall, som samles ved filtrering og oppløses i 3 ml metanol. Til oppløsningen ble det satt 4,5 ml (4,5mmol) IM natrium-2-etylheksanoat (SEH) i etylacetat, og blandingen fortynnes med 50 ml eter og deretter med 50 ml isopropyleter. Bunnfallet samles ved filtrering for å danne. 710 mg av råproduktet 24 som så oppløses i vann og kromatograferes på en kolonne under anvendelse av 50 ml av pakningen i en PrepPAK/Cig-patron "Waters". Kolonnen elueres med vann og 10$ metanol. De fraksjoner som inneholder det ønskede produkt, samles ved overvåkning av HPLC og konsentreres til 5 ml og lyoflliseres for å danne 182 mg tilsvarende 31$ av det ønskede produkt med smeltepunkt 200°C. Oppnådd renhet 50$ ved

HPLC.

IR: v£Bgs> cm-<1>: 1760, 1660, 1600, 1400, 1180, 1100.

UV: xmåisatbufffer pH 7 nm (c): 282 (5500).

NMR: 5 D20 ppm: 1,60 (3H, d, 6Hz, C-CH3), 3,12 (1H, d,

18Hz, 2-H), 3,48 (1H, d, 18Hz, 2-H), 5,03 (1H, d, 4,5Hz, 6-H), 5,62 (1H, d, 4,5Hz, 7-H), 5,93 (1H, d, 10Hz, vlnyl-H), 5,2-5,8 (1H, m, vinyl-H), 7,41 (5H, s, fenyl-H).

Eksempel 12

7g-( D-(- )- 2- amino- 2- fenvlacetamldo)- 3- f( Z)- l- propen- l- vll- 3-cefem- 4- karboksylsyre ( forbindelse 24. BB- S1065 zwitterion-f orm

Difenylmetyl-7p-[D-2-( t-butoksykarbonylamino )-2-f enylacet-amldo]-3-( 1-propenyl )-3-cefem-4-karboksylat (forbindelse 23) 1,5 g (2,34 mmol) ble behandlet med 3 ml trifluoreddiksyre. Blandingen omrøres ved romtemperatur i 20 minutter og fortynnes med 100 ml eter for å danne 1,15 g tilsvarende 96$ av det urene trifluoracetat av BB-S1065.

IR: \><Kgg>s> cm-<1>: 1760, 1670, 1200, 1130.

UV: <*>malsatb<ufff>er pH 7 nm (c)s 283 (8300).

1,1 g (2,25 mmol) trifluoracetat ble oppløst i 20 ml vann og oppløsningen ble kromatografert på en kolonne under anvendelse av 100 ml av pakningen oppnådd fra PrepPAR/C^g" patron "Waters". Kolonnen elueres med vann, 10$ metanol og 30$ metanol. Eluatet med 30$ metanol konsentreres tllO ml. Det krystallinske produkt separeres. Produktet samles og vaskes med aceton og tørkes i vakuum over P2O5 for å danne 505 mg tilsvarende 46$ rent BB-S1065 (zwitterionform), som smelter ved 180-183°C. Oppnådd renhet 95$.

IR: vgjg£s> cm-<1>: 1750, 1690, 1590, 1400, 1350.

UV: xmåisatbufffeF PH 7 nm (c): 282 (8800).

NMR: S D20 + NaHC03 ppm: 1,58 (3H, d, J=6Hz, C-CH3), 3,3

(2H, d, 2-H), 5,03 (1H, d, J=4,5Hz, 6-H), 5,20 (1H, s, CH-C0), 5,1-5,8 (1H, m, CH=C), 5,63 (1H, d, J = 4,5Hz, 7-H), 5,92 (1H, d, J=12Hz, CH-C), 7,4 (5H, s, fenyl-H).

Eksempel 13

Benzhvdrvl- 7e- rD- 2-( t- butoksykarbonylamino)- 2-( 3- klor- 4-hydroksyf enyl ) acetamidol - 3- klormetvl- 3- cefem- 4- karboksylat

( forbindelse 29)

Til en oppløsning av 6,2 g (0,015 mol) av forbindelse 2 og 5,4 g (0,018 mol) av forbindelse 28 i 150 ml tørr tetrahydrofuran ble det tilsatt 3,7 g (0,018 mol) DOC, og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i en time. Dicykloheksylurinstoff, som ble utskilt under omrøringen, fjernes ved filtrering, og filtratet dampes Inn til tørrhet. Resten ekstraheres med 200 ml etylacetat, ekstraktet vaskes med en vandig NaHC04-oppløsning. Filtratet dampes inn til tørrhet, og den oljeaktige resten kromatograferes på en silikagel-kolonne "Wakogel C-200", 140 g, ved eluerlng med toluen:etylacetat 10:1. De ønskede fraksjoner samles og dampes inn til tørrhet for dannelse av produktet 29.

IR: v<K>|gS- cm-<1>: 1790, 1720, 1680, 1500, 1370, 1240, 1160.

Eksempel 14

Benzhydryl- 7p- rP- 2-( t- butoksykarbonylamino)- 2-( 3- klor- 4-hydroksvfenvl) acetamldol- 3-( trlfenylfosfonlo) metyl- 3- cefem- 4-karboksvlatjodid ( forbindelse 30)

Til en oppløsning av 10 g (0,0143 mol) av forbindelse 29 i 100 ml aceton ble det tilsatt 11,2 g (0,075 mol) natriumjodid og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 30 minutter. Blandingen ble konsentrert til 30 ml. Til konsentratet ble det satt 200 ml etylacetat, og blandingen ble vasket med en vandig Na2S2C"3-oppløsnIng, vann og en mettet NaCl-oppløsning, og ble tørket med MgS04. Etylacetatoppløsningen ble filtrert, og filtratet konsentrert til det halve volum. Til konsentratet ble det satt 3,9 g (0,015 mol) trif enylfosf in, og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer. Oppløs-ningen ble tilsatt 300 ml eter for å skille ut et bunnfall, som ble samlet ved hjelp av filtrering og så tørket for å danne 9,2 g fosfoniumjodidet 30.

IR: v<g>|<g>s< cm-<1>: 1780, 1680, 1490, 1350, 1240, 1150.

Eksempel 15

Benzhydryl- 7g- rP- 2-( t- butoksykarbonylamino)- 2-( 3- klor- 4-hydroksyf enyl ) acetamldo" l- 3- l"( Z )- l- propen- l- yll - 3- cef em- 4-karboksylat ( fo rbindelse 31)

Til en oppløsning av 9,5 g (9 mmol) av forbindelse 30 I 200 ml kloroform ble det satt en blanding av 100 ml vann og 10 ml IN NaOH, og blandingen ble rystet i 3 minutter. Den organiske fase ble vasket med vann og en mettet NaCl-oppløsning, tørket over MgS04 og konsentrert til ca. det halve volum. Til konsentratet ble det satt 20 ml 90$ acetaldehyd, og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i ca. 3 timer, behandlet med vannfri MgS04 og filtrert. Filtratet dampes inn til tørrhet og resten kromatograferes på "Kieselgel 60", Merck, 120 g, ved eluering med toluen:etylacetat 4:1. De ønskede fraksjoner ble samlet og dampes inn til tørrhet, og resten tritureres med en blanding av eter, isopropyleter og n-heksan til dannelse av 1,33 g av det blokkerte produktet 31.

IR: vg|gs- cm-<1>: 1770, 1700, 1660, 1480, 1350, 1210, 1150.

Eksempel 16

7p- rD- 2- amlno- 2-( 3- klor- 4- hydroksvfenvl) acetamidol- 3-[( Z)- l-pr open- 1- yll - 3- cef em- 4- karboksyl syre ( forbindelse 32 , BMY- 28060)

En blanding av 1,33 g (1,93 mmol) av forbindelse 31 og 3 ml trifluoreddiksyre ble omrørt ved romtemperatur 1 30 minutter, og blandingen ble fortynnet med 50 ml eter:isopropyleter 1:1 for å danne 1,072 g av det urene trif luoracetat av 32, som kromatograferes på en kolonne pakket med pakningen av en PrepPAK/C^g-patron "Waters" (80 ml). Kolonnen elueres med vann og 10$ metanol. Eluatet med 10$ metanol ble konsentrert til 10 ml av volumet for å utskille et krystallinsk bunnfall, som ble samlet ved filtrering, og ble vasket med aceton og tørket i vakuum over P2°5 f°r å danne 238 mg av 32 (95$ rent), som smelter ved 180-185°C. Filtratet konsentreres til 5 ml og lyofiliseres for dannelse av 154 mg av en annen høst, som hadde en renhet på 80$ ifølge HPLC.

IR: v<K>|gs> cm-<1>: 1760, 1680, 1570, 1410, 1390, 1350, 1290,

1270.

UV; <x>måis<atbUfff>er pH 7 nm (c); 232 (10000), 280 (10500).

NMR: S D20 + NaHC03 ppm: 1,68 (3H, d, J=6Hz, C=C-CH3), 3,25

(1H, d, J-=18Hz, 2-H), 3,57 (1H, d, J=18Hz, 2H), 4,90 (1H, s, CH-CO), 5,18 (1H, d, J=»4,5Hz, 6H), 5,72 (1H, d, J=4,5Hz, 7-H), 5,5-5,9 (1H, m, CH=C), 5,97 (1H, d, J=12Hz, CH=C), 7,02 (1H, d, J=8Hz, fenyl-H), 7,30 (1H, d-d, J«8&l,5Hz, fenyl-H), 7,50 (1H, d, J=l,5Hz, fenyl-H).

Eksempel 17

D- ( - )- 2-( t- butoksykarbonvlamlno )-2-( 3 . 4- dih. vdroksyfenyl )-eddlksyre ( 33a) blandet med dets 3- ( og 4-) mono- 0- butoksy-karbonylderivater ( 33b)

En blanding av 3.66 g (0,02 mol) 3,4-dIhydroksyfenylglycin og 9,24 g (0,04 mol) di-t-butyldikarbonat i 120 ml av en 50$ vandig tetrahydrofuranoppløsning som inneholder 10 ml (0,071 mol) trietylamin omrøres ved romtemperatur i 16 timer, og blandingen konsentreres til 60 ml. Konsentratet ble vasket med 100 ml eter, gjort ur med IN saltsyre og ekstrahert med 100 x 2 ml eter. De kombinerte ekstrakter vaskes med vann og en mettet NaCl-oppløsning, tørkes over MgS04 og dampes inn til tørrhet for dannelse av 8 g av en oljeaktig rest, som var en blanding av det ønskede 3,4-dihydroksyfenylderivat og de 3- og 4-mono-0-B0C-beskyttende derivater (BOC betyr t-butoksy-karbonyl).

Eksempel 18

Berizhydryl- 7p- rD-(- )- 2-( t- butoksykarbonylamino )- 2-( 3 . 4-dihydrok syfenyl ) acetamldol- 3- klor metyl- 3- cefem- 4- karboksylat ( 34a) of! blanding av dets 3- ( og 4-) mono- 0- butoksykarbonyl-derivater ( 34b)

En blanding av 8 g (0,0193 mol) av forbindelse 2, 8 g av det blandede produkt ifølge eksempel 33 og 4,12 g (0,02 mol) DCC i 200 ml tørr tetrahydrofuran omrøres ved romtemperatur 1 en time. Reaksjonsblandingen dampes inn til tørrhet. Besten oppløses i 200 ml etylacetat, og uoppløselig materiale (dicykloheksylurinstoff) ble fjernet ved filtrering. Filtratet vaskes med en vandig NaHC03-oppløsning, vann og en mettet NaCl-oppløsning, tørkes over MgS04 og dampes inn til tørrhet under redusert trykk. Den oljeaktige resten kromatograferes på en silikagel-kolonne ("Kieselgel 60", 130 g) ved eluering med toluen:etylacetat 5:1 og toluen:etylacetat 2:1. Eluatet med toluen:etylacetat 5:1 samles og dampes inn til tørrhet for å danne 9,5 g av en blanding av mono-0-B0C-N-B0C-av beskyttede derivater (34b). Eluatet med toluen:etylacetat 2:1 samles og dampes inn til tørrhet for å danne 3 g 3,4-dihydroksyfenylderivat (34a).

Forbindelse 34a

IR: vg|gs> cm-<1>: 1770, 1720, 1690, 1500, 1370, 1240, 1150.

NMR: S CDC13 ppm: 1,42 (9H, s, C-CH3), 3,4 (2H, br-s, 2-H),

4,30 (2H, br-s, CH2-C1), 4,85 (1H, d, J=4,5Hz, 6-H), 5,07 (1H, d, J=6Hz, CH-NH), 5,74 (1H, d-d, J=9&4,5Hz, 7-H), 6,6-6,9 (3H, m, fenyl-H), 6,93 (1H, s, CHPh), 7,3 (10H, s, fenyl-H).

Blanding 34b

IR: v||gs> cm-<1>: 1770, 1720, 1690, 1500, 1370, 1240, 1150.

NMR: S CDCI3 ppm: 1,42 (9H, s, C-CH3), 1,55 (9H, s, C-CH3);

3,4 (2H, br-s, 2-H), 4,35 (2H, br-s, CH2-C1), 6,9-7,1 (4H, m, CHPh & fenyl-H), 7,3 (10H, s, fenyl-H).

Eksempel 19

Benzhvdrvl- 7P- rD-(-)- 2-( t- butoksykarbonylamino)- 2- ( 3. 4-dihydroksyfenyl ) acetamido~ l- S- trifenylfosfoniometyl- S- cefem^-karboksvlatlodid ( 35a)

En blanding av 3 g (4,4 mmol) av 34a og 3,3 g ( 22 mmol) natriumjodid 1 5 0 ml aceton omrøres ved romtemperatur i 30 minutter, og blandingen konsentreres til tørrhet. Sesten ekstraheres med 1.00 ml etylacetat, og ekstraktet vaskes med en vandig Na2S203-oppløsnlng, vann og en mettet $aCl-oppløsning. Etter tørking over MgSC^ blir ekstraktet konsentrert til 60 ml. Til konsentratet settes 1,4 g (5,3 mmol) trifenylfosfin, og blandingen omrøres ved romtemperatur i en time. Til blandingen settes 100 ml eter for å skille ut bunnfallet, som ble samlet ved filtrering og så vasket med eter for å danne 3,2 g tilsvarende 70$ f osf onium.lodid (35a).

IK: vf£|jr>, cm™<1>: .1780, 1680, 1480, 1430, 1360, 1240, 1150,

På lignende måte fikk 9,5 g (12 mmol) av blandingen s\ v mono-0-BOC-beskyttede derivater (34b) lov til å. reagere med iiatrluiajodAii og deretter med tri f enylf ouf in for å danne 10,7 g tilsvarende 77$ av en blanding av de tilsvarende mono-0-B0C-N-B0C-tr1fenyIfosfon i orne ty1de r i vater (35b ).

IR: vg!£s. cm-<1>: 1770, 1720, 1680, 1480, 1.430.. 1360, 1240,

1140.

Eksempel 20

Benzhydryl- 7e- rD-(- )- 2 -( t- butoksvkarbonylamlno)- 2-( 3, 4-dihydroksyf enyl ) acetamido" l- 3-["( Z )- l- propen- l- yl~ V- 3- cef em- 4-karboksylat ( forbindelse 36a)

Til en omrørt oppløsning av 3,15 g (3 mmol) av forbindelse 35a og 10 ml acetaldehyd i 50 ml kloroform settes dråpevis 8 ml (4 mmol) 0,5N natriumhydroksyd over et tidsrom på 10 minutter, og blandingen omrøres ved romtemperatur i en time. Reaksjonsblandingen ble vasket med vann og en mettet NaCl-oppløsning, tørket over MgS04 og dampet inn under redusert trykk. Den oljeaktige resten kromatograferes på en silikagel-kolonne "Wakogel C-200", 60 g, som elueres med 2 1 kloroform og 2$ metanol i kloroform i forbindelse med undersøkelse ved TLC (kloroform:metanol 10:1). De ønskede fraksjoner fra 2$ metanol-eluatet ble samlet og dampet inn til tørrhet for å danne 0,8 g tilsvarende 40$ propenylderivat 36a.

NMR: S CDC13 ppm: 1,28 (3H, d, J=6Hz, C-CH3), 1,42 (9H, s,

C-CH3), 3,25 (2H, s, 2-H), 4,92 (1H, d, J=4,5Hz, 6-H), 5,08 (1H, d, J=6Hz, CH-NH), 5,3-5,8 (1H, m, CH-C) , 5,80 (1H, d, J = 4,5Hz, 7-H), 6,04 (1H, d, J=llHz, CH=C), 6,70 (2H, s, fenyl-H), 6,82 (1H, s, fenyl-H), 6,92 (1H, s, CHPh), 7,3 (10H, s, fenyl-H).

På lignende måte som beskrevet ovenfor fikkl0,5 g (9,3 mmol) av blandingen av de 3- og 4-0-BOC-N-BOC-beskyttede derivater 35b lov til å reagere med acetaldehyd for å danne 3,3 g tilsvarende 46$ av det tilsvarende 3-propenylderlvat 36b.

IR: v*j!£Si cm-<1>: 1770, 1700, 1500, 1370, 1240, 1150.

NMR: S CDC13 ppm: 1,4 (9H, s, C-CH3), 1,55 (9H, s, C-CH3),

3,25 (2H, s, 2-H), 6,07 (1H, d, J=llHz, CH-C), 6,9-7,1 (4HS m, CH-Ph & fenyl-H), 7,3-7,5 (10H, m, fenyl-H).

Eksempel 21

7p- rD-(-)- 2- amlno- 2-( 3. 4- dihvdroksvfenyl) acetamido" l- 3- f ( Z )- l-propen- l- yll- 3- cefem- 4- karboksylsyre ( forbindelse 37, BMY-28068)

En blanding av 0,8 g (1,2 mmol) av forbindelsen 36a, 0,8 ml anisol og 3 ml trifluoreddiksyre omrøres ved romtemperatur i 5 minutter og fortynnes med 25 ml eter og 25 ml isopropyleter. Det resulterende bunnfall samles ved filtrering og vaskes med isopropyleter for å danne 557 mg av det urene trifluoracetatsalt av forbindelse J37. En oppløsning av det urene produkt i 10 ml vann renses ved kolonnekromatograf1 under anvendelse av 100 ml av pakningen av en PrepPAK/C^g-patron "Waters", og kolonnen elueres med vann og dernest med 5$ metanol. 5$ metanoleluatet som inneholder det ønskede produkt konsentreres til 5 ml og lyofiliseres for å danne 231 mg tilsvarende 47$ av forbindelsen 37 (zwitterionform, 90$ rent). Smeltepunkt 200°C.

IR: v<K>g£s> cm-<1>:1760, 1690, 1580, 1530, 1400, 1360, 1290,

1270.

UV: <x>maisa<tbufff>er pH 7 nm (c): 232 (9200), 281 (11000).

NMR: 5 D20 ppm: 1,68 (3H, d, J=6Hz, C-CH3), 3,26 (1H, d,

J=18Hz, 2-H), 3,58 (1H, d, J=18Hz, 2-H), 5,18 (1H, s, CHNH), 5,22 (1H, d, J=4,5Hz, 6-H), 5,5-5,9 (2H, m, CH=C & 7-H), 5,97 (1H, d, J=llHz, CH-C), 7,05 (3H, m, fenyl-H).

På lignende måte ga 3,3 g (4,3 mmol) av den N,0-dl-t-B0C-beskyttede derivatblanding 36b 1,3 g tilsvarende 75$ av forbindelsen 37 som zwltterlonformen (90$ rent), hvilket ga spektraldata som var identiske med de ovenfor angitte.

Eksempel 22

D-(- )- 2-( t- butoksykarbonylamino)- 2-( 4- hydroksy- 3- metoksv-fenyl Veddiksvre ( forbindelse 38)

En blanding av 2,96 g (0,015 mmol D-(-)-2-amino-2-(4-hydroksy-3-metoksyfenyl)eddiksyre og 3,6 g (0,0165 mol) di-t-butyl-dikarbonat i 100 ml 50$ vandig tetrahydrofuran som inneholdt 4,2 ml (0,03 mol) trietylamin ble omrørt ved romtemperatur i 16 timer, og reaksjonsblandingen ble konsentrert til 50 ml. Konsentratet ble vasket med 50 ml eter, surgjort med IN saltsyre og ekstrahert to ganger med eter (2 x 100 ml). De kombinerte ekstrakter ble vasket med vann og en mettet NaCl-oppløsning. De tørkede ekstrakter ble dampet inn til tørrhet for å danne 4,38 g av forbindelsen 38 som et skumaktig fast stoff.

NMR: S CDC13 ppm: 1,4 (9H, s, C-CH3), 3,8 (3H, s, 0CH3),

5,15 (1H, d, J=6Hz, CH-NH), 6,85 (3H, s, fenyl-H).

Eksempel 23

Benzhvdrvl- 76- D-(-)- 2-( t- butoksykarbonylamlno)- 2-( 4- hydroksy-3- metoksyfenvl ) acetaroidol- 3- klormetyl- 3- cefem- 4- karboksylat

( forbindelse 39)

En blanding av 4,3 g av forbindelsen 38, 5 g (0,012 mol) av forbindelse 2 og 3 g (0,015 mol) DCC i 150 ml tørr tetrahydrofuran ble fjernet ved romtemperatur i 2 timer. Det utfelte urinstoff ble fjernet ved filtrering, og filtratet dampet inn til tørrhet. En oppløsning av resten 1200 ml etylacetat ble vasket med en vandig NaHCC^-oppløsning, vann og en mettet NaCl-oppløsning, tørket over MgS04 og dampet inn til tørrhet. Den oljeaktige resten kromatograferes på en silikagel-kolonne "Kieselgel 60", 100 g, som ble eluert med toluen:etylacetat 4:1 under analyseringen med TLC [toluen:etylacetat 1:1 eller kloroform:metanol 50:1]. De ønskede fraksjoner ble samlet og dampet Inn til tørrhet for å danne 7 g av det ønskede 3-klormetyl-cefem, forbindelse 39, som et skumaktig fast stoff.

NMR: S ppm: 1,4 (9H, s, C-CH3), 3,45 (2H, br-s, 2-H), 3,83

(3H, s, 0CH3), 4,32 (2H, S, -CH2C1 ) , 4,92 (1H, d, J=45Hz, 6-H), 5,13 (1H, d, J=6Hz, CH-NH), 5,65 (1H, d, J=6Hz, NH), 5,80 (1H, d-d, J=8 & 4,5Hz, 7-H), 6,85 (3H, s, fenyl-H), 6,95 (1H, s, CH-Ph), 7,2-7,5 (10-H, m, fenyl-H).

Eksempel 24

Benzhydryl- 7P- rD-(-)- 2-( t- butoksykarbonylamino)- 2-( 4-hydroksy- 3- metoksvfenvl) acetamido1- 3- trifenylfosfoniometyl- 3-cefem- 4- karboksylat. 1odid ( forbindelse 40)

En blanding av 7 g (0,01 mol) av forbindelse 39 og 7,5 g (0,05 mol) natriumjodid 1100 ml aceton omrøres ved romtemperatur i 30 minutter og dampes inn til tørrhet. En oppløsning av resten i 200 ml etylacetat ble vasket med en vandig Na2S203-oppløsning, vann og en mettet NaCl-oppløsnlng, tørket med MgS04 og ble konsentrert til 100 ml. Til konsentratet ble det satt 3,1 g (0,012 mol) trifenylfosfin, og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i en time. Til reaksjdnsblandingen ble det satt 100 ml eter, og det utskilte faststoff ble samlet ved filtrering, så vasket med eter og tørket til dannelse av 5,8 gav trifenylfosfoniumderivatet, forbindelse 40. Det eteriske filtrat ble konsentrert til 10 ml, og til konsentratet ble det satt 300 ml eter for å danne 0,9 g av produktet som en andre høst. Det samlede utbyttet var 6,7 g.

Eksempel 25

Benzhvdrvl- 7e- rD-(-)- 2-( t- butoksvkarbonylamino)- 2-( 4-hydroksv- 3- metoksyf envl ) acetamldol - 3- 1" ( Z )- l- propen- l- yl~ l - 3-cefem- 4- karboksvlat ( forbindelse 41)

Til en omrørt blanding av 5,8 g (5,5 mmol) av forbindelse 40 og 10 ml 90$ acetaldehyd i 100 ml kloroform ble det dråpevis satt 11 ml (5,5 mmol) 0.5N natriumhydroksyd i løpet av 25 minutter, og blandingen omrøres ved romtemperatur i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble vasket med vann, deretter med mettet NaCl-oppløsning, tørket over MgS04 og dampet inn til tørrhet. Den oljeaktige resten ble kromatografert på en silikagel-kolonne "Kieselgel 60", 130 g, ved eluering med toluenretyl-acetat [forholdet forandres trinnvis: 4:1 (1,3 1), 3:1 (1,1 1), 2:1 (1,0 1)], og eluatet samles i 20 ml fraksjoner. Fraksjonene nr. 26 til 59 kombineres og dampes inn til tørrhet for å danne 830 mg av det ønskede 3-propenylderivat, forbindelse 4_1, som et skumaktig fast stoff.

NMR: S CDC13 ppm: 1,35 (3H, d, =CH-CH3), 1,4 (9H, s, C-CH3),

3,85 (3H, s, O-CH3), 6,07 (1H, d, J=l.lHz,

-CH=C).

Eksempel 26

7B- rD-( - )- 2- amino- 2-( 4- hydroksv- 3- metoksyfenvl) acetamido" l- 3-f( Z)- l- propen- l- yll- 3- cefem- 4- karboksvlsyre ( forbindelse 42.

BMY- 28097 )

En blanding av 830 mg (1,2 mmol) av forbindelse 41, 0,5 ml anisol og 2 ml trifluoreddiksyre omrøres ved romtemperatur i 5 minutter, og blandingen fortynnes med 30 ml eter og 30 ml isopropyleter. Det resulterende bunnfall samles ved filtrering, vaskes med isopropyleter og tørkes for å danne 437 mg av det urene trifluoracetat av forbindelsen 42. Råproduktet kromatograferes på en kolonne pakket med 100 ml av en PrepPAK/Cig-patron-kolonne "Waters", som elueres med vann og 5$ metanol. Eluatet med 5$ metanol konsentreres til 5 ml og lyofiliseres for å danne 225 mg av forbindelsen .42 (zwitterion) (90$ rent). Smeltepunkt 176-180"C.

IR: vg|gs> cm-<1>: 1760, 1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280.

UV: <x>måisatb<Ufffer> pH 7 nm (c): 235 (10000), 280 (11000).

NMR: S D20 ppm: 1,68 (3H, d, J=6Hz, C-CH3), 3,25 (1H, d,

J=18Hz, 2-H), 3,57 (1H, d, J=18Hz, 2-H), 4,01 (3H, s, 0CH3), 5,10 (1H, s, CH-CO), 5,19 (1H, s, J=4,5Hz, 6-H), 5,78 (1H, s, CH-CO), 5,10 (1H, d, J=4,5Hz, 6-H), 5,78 (1H, s, J=4,5Hz, 7-H), 5,5-5,9 (1H, m, CH=C), 5,98 (1H, d, J=llHz, CH-C), 7,07 (2H, s, fenyl-H), 7,17 (1H, br-s, fenyl-H).

HPLC: retensjonstid 9,3 minutter (0,02M acetatbuffer (pH 4) inneholdende 15$ acetonitril.

Eksempel 27

Isolering av forbindelse 42 fra urinen av rotter foret med forbindelse 37

6 Wistar-rotter av hannkjønn (400-600 g) ble anbragt i metaboliske bur i stål etter ora administrering av forbindelse 37 i en dose på 100 mg/kg, og urinen ble samlet i løpet av 24 timer. Rottene ble foret med den vanlige kost og fikk vann under forsøket. Den følgende tabell viser volum av urin samlet i intervaller.

Urinen (ca. 90 ml) ble justert til en pH-verdi på 3 med IN saltsyre og ble filtrert for å fjerne bunnfallet. Filtratet ble kromatografert på en kolonne pakket med 300 ml HP-20 ved eluering med 2 1 vann og 2 1 30$ metanol under analysering med HPLC.

De fraksjoner som Inneholdt de bioaktive komponenter av 30$ metanoleluat ble samlet og konsentrert til 10 ml og lyofilisert til dannelse av 390 mg fast brunt stoff. En oppløsning av det faste stoff i 20 ml vann ble kromatografert på en kolonne pakket med 200 ml av pakningen av en PrepPAK/Cig-patron "Waters" ved eluering med vann, 5$ metanol og deretter med 10$ metanol. Den første halvdel av 5$ metanoleluatet ble konsentrert til 5 ml og lyofillsert for å danne 44 mg av forbindelsen 37 (70$ rent), som inneholdt urenheter som kom fra urinen. Den andre halvdelen av 5$ metanoleluatet ble konsentrert til 5 ml og lyofillsert for å danne 36 mg produkt, som var en blanding av forbindelse 37, forbindelse 42 og urenheter, som stammet fra urinen. Eluatet med 10$ metanol (ca. 600 ml) ble konsentrert til 5 ml og lyofillsert for å danne 38 mg av forbindelse 42 (70$ rent ifølge HPLC), som ble rekromatografert på en kolonne av den samme pakning som ovenfor (40 ml) ved eluering med vann, 5$ metanol og 10$ metanol. De ønskede fraksjoner, som var eluert med 10$ metanol, ble kombinert og konsentrert til 5 ml og lyofillsert for å danne 16 mg av forbindelse 4_2, som hadde en renhet på 90$ ved HPLC [0.02M acetatbuffer (pH 4) : acetonitril 85:15]. Smeltepunkt 180°C.

IR: vjjjlgg. cm-<1>: 1760, 1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280.

UV: xmåfs<atbufff>er pH 7 nm (c): 233 (8200), 280 (8800).

NMR: S D20 ppm: 1,68 (3H, d, J=6Hz, C-CH3), 3,26 (1H, d,

J=18Hz, 2-H), 3,58 (1H, d, J=18Hz, 2-H), 4,01 (3H, s, 0CH3), 5,12 (1H, s, CH-CO), 5,21 (1H, d, J = 4,5Hz, 6-H), 5,78 (1H, d, J=4,5Hz, 7-H), 5,5-5,9 (1H, m, CH=C), 5,98 (1H, d, J=llHz, CH-C-), 7,07 (2H, s, fenyl-H), 7,17 (1H, br-s, fenyl-H).

Metabolittens struktur ble bestemt til å være 7p-[D-(-)-2-amino-2 - ( 4 -hydroksy-3-metoksyfenyl)acetamido]-3-[(Z)-l-propen-l-yl]-3-cefem-4-karboksylsyre ved sammenligning (NMR, IR, UV, HPLC) med forbindelse 42 fremstilt etter eksempel 22 til 26.

Claims

1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av en terapeutisk aktiv 7-(D-2-aminoacetamido)-3-(Z)-propenyl-cefalosporinforbindelse mon formelen der R<1> er hydrogen, OH, C]_4-alkoksy eller klor, R<2> er hydrogen eller OH, eller farmasøytisk akseptable salter derav, karakterisert ved at man: a) omsetter en halogenreaktant med formelen OCH2X' , der X' er jod, med et triarylfosfin for dannelse av det tilsvarende fosfoniumsalt, som deretter omdannes til et fos-foranylmellomprodukt med formelen QCH=PAr3, hvor Ar betyr aryl, etterfulgt av omsetning av sistnevnte forbindelse med en karbonylreaktant med formelen CH3CHO idet 0 er: hvori R<1>' betyr -OE<3> foruten de for R<1> anførte betydninger bortsett fra OH, R<2>' betyr -OE<4> foruten de for R<2> anførte betydninger bortsett fra OH, E<1>, E<2>, E<3> og E<4> er hydrogen eller ved cefalosporinsynteser konvensjonelle beskyttelsesgrupper på amino- og karboksygruppene, hvoretter det dannede produkt omdannes til den ønskede forbindelse med formel (A) ovenfor ved en avspaltlng av ovenfor nevnte beskyttelsesgrupper med formlene E<1>, E<2>, E<3> og E<4>, eller b) ved en konvensjonell acyleringsreaksjon innfører en gruppe med formelen der R<1>', R<2>' og E<1> har den ovenfor angitte betydning, i en forbindelse med formelen der E<2> har den ovenfor angitte betydning, og deretter omdanner det oppnådde produkt til den ønskede forbindelse med formel (A) ovenfor ved å fjerne beskyttelses-gruppene med formel E1, E<2>, E<3> og E4 , og deretter hvis ønskelig å omdanne en forbindelse med formel (A) til et farmasøytisk akseptabelt salt derav eller et zwitterion.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av 7g<->[D-2-amino-2-(4-hydroksyfenyl)-acetamido]-3-[(Z)-l-propen-l-yl]-3-cefem-4-karboksylsyre, 7p<->[D-2-amino-2-fenylacetamido]-3-[(Z)-l-propen-l-yl]-3-cefem-4-karboksylsyre eller 7e-[D-2-amino-2-(3, 4 - di hyd r ok sy f enyl )acetamido] - 3- [ (Z )-l-propen-l-yl]-3-cefem-4-karboksylsyre, karakterisert ved at man omsetter de tilsvarende utgangsforbindelser.