SE466204B - Mellanprodukter foer framstaellning av substituerade vinylcefalosporiner - Google Patents

Description

40 -z Ålóaásözrgágen 1 '342 241, som pubfliserades den 3 januari 1974 (motsvarande de amerikanska patentskrifterna 3 769 277 och 3 994 884 av den 30 oktober 1973 respek- tive den 30 november 1976). Föreningarna IV och V avslö- jas på sidorna 25 och 29 i den brittiska patentansökningen. Ü-cz-xzconn--ï/ s Dessa föreningar framställdes genom omsättning av mot- svarande 3-trifenylfosfoniummetylcefalosporin med form- aldehyd eller acetaldehyd. Det omvända förfarandet, som innebär att man omsätter ett fosforanylidinderivat med formeln R3P=CR3R4 med en 3-CHO-cefalosporin, avslöjas åren i ansökningen¿gå,sid%5asFöreningenmlflëangesqahsorfifiß beras vid oral administrering enïïgt“amerfkanska patent-~ skriften 4 107 431.

Föreningar av denna typ har tidigt avslöjats även av Webber et al. J. Med. Chem. 18(10) (1975) 986-992 och i den amerikanska patentskriften 4 065 620 av den 27 decem- ber 1977, som i spalterna 3, 4 och 5 avslöjar den klass föreningar till vilken föreliggande föreningar hör. Spe- cifika föreningar som avslöjas representeras av formeln VI. 7 Gfiflwfifl--fswi i Q I Cïëfit) CD _ za (GW 18 40 -3 - 466 204 Andra variationer av denna typ avs1öjas.i de amerikanska patentskrifterna 4 094 978 (13 juni 1978) och 4 112 087 (5 september 1978), där föreningarna VII och VIII avslö- jas.

“Qam--fsï 1 åß- _N§ á7.n\f7-ææmgæ C028 VII _ u.s. 4,os4_97a æGï-äm s s.

I = VIII .spalt 44 Andra substituerade 3-alkenylcefalosporiner avslöjas i följande patentpublikationer.

US 3 830 700, O'Callaghan et al. (20 april 1974) 3-(nitrostyryl)-cefalexin-analoger.

US 3 983 113, Beeby (28 september 1976), US 4 049 806, Beeby (20 september 1977) och US 4 139 618, Beeby (13 februari 1979), 3-(heterocyklotio)propenyl-cefalosporiner.

US 4 147 863, Miyadera et al. (3 april 1979), 3-(1-metyl-5-tetrazolyl)vinyl-cefalosporiner.

DE-OS 3019445 (december 1980) 3-(sulfonyloxi)vinyl-cefalosporiner. -4 (23 januari 1981) 3-(dimetylamino)vinyl-cefalêxin-analoger¿ EP 30630 (24 juni 1981) 7-[Y3-metansulfonamidofenyl)-N-aminoacetamido]-3- vinylcef-3-em-4-karboxylsyra.

Us 4 zss 423, Beastie et a1.<(1o mars' 1ea1) US 4 390 693, Beattie et al. (28 juni 1983) 7-(2-tienyl)acetamido-3-(3-acetoxi-1-propenyl) och -3-(heterocyklovinyl)cef-3-em-4-karboxylsyror och Id-metoxi-analoger.

De viktiga kommersiellt tillgängliga, oralt aktiva ce- falosporiner för vilka föreliggande föreningar är av- sedda att användas är cefalexin, cefadroxil, cefradin och cefaklor.,Dessa substanser har formlerna IX, X, XI och_XII. m; cefalexin 'xx ' cefaklor :cr Raïícefamxmil X \ i s . _ O . °°2H cefraöin XII Dessa föreningar är föremål för följande patent. cefalexin - US 3 507 861 (21 april 1970) cefadroxil I- US 3 489 752 (13 januari 1970) (Re 29 164) 4d us 3 923 312 (9 aeceáláaó 121354 US 3 485.819 (23 december 1969) cefaklor f - cefradin - - Besläktade strukturer, som har avslöjats, är 3-klor- cefadroxil och 3-hydroxicefadroxil i US 3 489 751 (13 januari 1970) respektive brittiska patentet 1 472 174 (publiserat 4 maj 1977).

Föreliggande uppfinning avser föreningar med formlerna xIII och_xIv W -(O)n az c|:HcoNa___'/ š ' NHP1 o ,/ cH=cacn3' Ri . o// » 2 co2P ' formel XIII (mn I , cscons--__-I Napl /ík__n cH=caA1kx o formel_XIV vari n är heltalet 0 eller 1, R1 är väte, OP3, lägre alkoxi eller halogen inne- fattande klor, brom, fluor och jod, P1, P2 och P3 är väteatomer eller konventionella skyddsgrupper, som används inom cefalosporinkemin respektive med amino-, karboxi- och hydroxigrupper, R2 är väte, OP3 eller lägre alkoxi, Alk är en alkyliden- eller alkylengrupp med 1-4 kol- atomer och X är klor, brom eller jod.

I 40 -6 4Ét6fö2Ål4ngar vari n är 1 och P12 P2 och P3 är konven- tionella skyddsgrupper är mellanprodukter för framställ- ning av de biologiskt aktiva slutprodukterna enligt före- liggande uppfinning, vilka representeras av formeln XIII, där n är 0 och P1, P2 och P3 är väte. Dessa produkter är av intresse som oralt effektiva cefalosporinantibiotika med kraftig aktivitet mot grampositiva bakterier och ett förbättrat aktivitetsspektrum mot gramnegativa bakterier, olika granntyckta bakterier och anaerober relativt cefa- lexin, cefadroXil,'cefaklor och cefradin. De tillhanda- håller utsträckta antibiotiska koncentrationer i blod- strömmarna vid oral administrering och är lämpliga för administrering till människa en eller två gånger dagligen.

Som sådana administreras de i doser varierande från 100 mg till 5000 mg per dag beroende på patientens storlek och sjukdomstillståndet. De kan administreras parenteralt i liknande doseringsmängder.

Produkterna med formeln XIV är av intresse huvudsakligen som mellanprodukter. De föreningar vari n är 0 och P1, 22~Qcn.23 är väte uppvisa: emellertid_antibaxtatie1i_ak:s tivitetfoch,är.ävenfanvändbaraysom.antibiotika¿,¿f På grund av dessa egenskaper är föreningarna med formeln XIII och formeln XIV, vari n är 0 och P1, P2 och P3 är väte, användbara för behandling av bakterieinfektioner orsakade av känsliga organismer hos däggdjur. För detta ändamål administreras de oralt eller parenteralt i anti- bakteriellt effektiva, ogiftiga doser såsom sådana eller i form av ett farmaceutiskt godtagbart syraadditionssalt, farmaceutiskt godtagbart metall- eller aminsalt eller som en farmaceutiskt godtagbar ester.

De farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalterna är så- dana i vilka anjonen icke signifikant bidrar till saltets toxicitet och vilka salter är kompatibla med de sedvanli- ga farmaceutiska bärarna och är avsedda för oral eller parenteral administrering. De innefattar salterna av fö- reningarna med formlerna XIII och XIV, vari n = 0 och P1 är väte, med mineralsyror, såsom klorvätesyra, bromväte- 40 -1 .f fifl syra, fosforsyra och svavelsyra, med organíšiš kšrfioxyl- syror eller organiska sulfonsyror, såsom ättiksyra, cit- ronsyra, maleinsyra, bärnstenssyra, bensoesyra, vinsyra, fmuwm,mMflwm,æmmmWm,äæhflmmam- sulfonsyra, p-toluensulfonsyra och andra syror, som är kända och använda inom penicillin- och cefalosporinområ- det. Framställningen av dessa salter utförs medelst kon- ventionell teknik, som innefattar omsättning av en av sub- stanserna_med formlerna XIII eller XIV, vari n är 0 och P1 är väte, med syran i väsentligen ekvivalent mängd. uFarmaceutiskt godtagbara metall- och aminsalter är lika- ledes sådana salter av föreningarna med formlerna XIII och XIV, vari n är 0 och P2 är väte, vilka är stabila under omgivningens betingelser och i vilka katjonen icke bidrar signifikant till saltets toxicitet eller biologisk aktivitet. Lämpliga metallsalter innefattar natrium-, ka- lium-, barium-, zink- och aluminiumsalterna. Natrium- eller kaliumsalterna föredras. Aminsalter framställda ut- gående från aminer, som exempelvis används med bensyl- penicillinaochIsomwharlfiörmågaäattäbildaastahfla%sækfier%«=%*~ med den sura karboxylgruppen, innefattar trialkylaminer, såsom trietylamin, prokain, dibensylamin, N-bensyl1ß- fenetylamin, 1-efenamin, N,N'-dibensyletylendiamin, de- hydroabietylamin, N-etylpiperidin, bensylamin och di- cyklohexylamin.

Farmaceutiskt godtagbara estrar innefattar sådana estrar, som är aktiva som sådana eller som tjänar som förstadie- läkemedel genom att de hydrolyseras i kroppen för bild- ning av själva antibiotikumet. Lämpliga estrar av sist- nämnda typ är fenacyl-, acetoximetyl-, pivaloyloximetyl-, M-acetoxietyl-, flßacetoxibensyl-, akpivaloyloxietyl-, 3-ftalidyl-, 5-indanyl-, metoximetyl-, bensoyloximetyl-, aketylbutyryloximetyl-, propionyloximetyl-, valeryloxi- metyl-, isobutyryloximetyl- och glycyloximetylestrar och andra estrar som är kända inom penicillin- och cefalo- sporinområdet.

Föreningarna med formlerna XIII och XIV, vari n är 0 och 40 -s Pæooíh P3 är väteatomer, och deras salter enligt ovan _angivna definition kan beredas för oralt eller parenteralt bruk på konventionellt sätt under användning av kända farmaceutiska bärare och excipienter och de kan föreligga i form av enhetsdoser eller i multipeldosbehâllare. Kom- positionerna kan föreligga i form av tabletter, kapslar, lösningar, suspensioner eller emulsioner. Dessa föreningar kan även beredas som suppositoria under användning av kon- ventionella suppositoriumbaser, såsom kakaosmör eller andra -fettartade material. Föreningarna kan, om så önskas, admi- nistreras i kombination med andra antibiotika innefattan- de cefalosporiner, penicilliner och aminoglykosider.

Tabell 1 nedan innehåller en sammanfattning av strukturer- na av de produkter som avslöjas i utföringsexemplen 1-43.

De flesta av dessa föreningar är ¶B-{D-fenylglycylamido)- cefalosporiner med 1-propen-1-yl-gruppen i 3-ställningen.

Den ändstâende kolatomen i propenylsubstituenten i vissa av föreningarna uppbär en substituent, såsom en alkyl- grupp (metyl), halogen (klor eller jod), en arylgrupp (fenyll,aenßhemerocykiotiogzuppyífiflzaßätziaæolrfiæyltäolfi;f eller en aIkoxigrupp“(metoxi¶ï Fenylglycylämiñdgruppen ' kan vara osubstituerad eller mono- eller disubstituerad med hydroxi, alkoxi eller halogen.

Tabell 1.

Produkter avslöjade i utföringsexemplen 1-43.

R2 sncons 5 Rl N82 _ I-N / cH=cHR3 0.

Förening nr gl 33 23 R3 (konfiguration) 9 (BHY-281oo) H oH -cH3 (Z) 13 (BBs-1058) H oH -CZHS (Z) 11 (BBS-1064) H on -H - 24 (BBS-1065) H u -cH3 (z) 26 (Bas-1066) H H -cH2c1 (z) 8 (BBS-1067) H OH -CH3 (E) (Bas-1076) H oH -cH2c6H5 (z) 21 (Bas-1091) H '__ OH I ä: -CHZ-S-Lwg: (z) | H _,............ ---___ ...U Förening nr R1 R2 R3 äkššéiáàga i0fl) H 17 (BBs-1092) ou -cH2ocH3 (z) 32 (BMY-zsoso) c1 on -CHB (z) 37 (Buy-moss) Ho oH -cn3 (z) 42 (BmY-2s097) cH3o on -cna (z) Tabell 2 nedan ger en sammanfattning av den antibakte- riella aktiviteten in vitro av de substanser som avslö- jas i föreliggande patent. De minsta inhiberande koncen- trationerna, fastställda medelst agarutspädningstekniken för tre grupper av organismer betecknade Gp-Ia, Gp-Ib och Gn-Ia, anges. Var och en av dessa grupper av orga- nismer utgörs av fem individuella stammar av mikroorga- nismer, vilka är identifierade i en fotnot till tabellen.

Gp-Ia-organismerna är grampositiva stafylokocker, vilka är känsliga för penicillin. Gp-Ib-organismerna är gram- positiva stafylokocker, som är resistenta mot penicillin och producerar penicillinas. Gn-Ia-organismerna är gram- negativa bakterier, som är känsliga mot ampicillin och cefalotin. Föreliggande substanser har allmänt låg akti- vitet.motnampiciLlin:~och.cefialctinresfistentæwgramegæfiæsfifi tiva bakterier. Följande sIutsatserfkan“dras från"tabe1I' 2 beträffande den antibakteriella aktiviteten in vitro av dessa föreningar. ' Samtliga föreningar har god aktivitet mot penicillin- känsliga stafylokocker (Gp-Ia). De är allmänt mindre aktiva mot penicillinresistenta stafylokocker (Gp-Ib) med en faktor av 3 eller mera. Varje enskilt fall är emellertid föreningarna flera gånger aktivare än cefa- lexin och cefadroxil. ; Endast de föreningar med den osubstituerade cis(Z)- propenylgruppen i 3-ställningen har god aktivitet mot gramnegativa bakterier (Gn-Ia). Hänvisning sker till fö- reningarna 9, 24, 32 och 42. Trans(E)-propenylföreningen, förening nr 8, är mindre aktiv mot gramnegativa bakterier med en faktor 8 i förhållande till motsvarande cis-pro- penylförening, förening nr 9. Likaledes synes substi- tion på den ändstäende metylgruppen av propenylsubsti- 40 -10 llóótuzzfl-.gn i B-ställningen resultera i en minskning av den gramnegativa aktiviteten. Hänvisning sker till föreningar- na nr 13, 15, 21 och 17. Detta gäller även vinylföreningen nr 11. Dessa föreningar är icke desto mindre potenta anti- bakteriella medel och är i huvudsaklekvivalenta med cefa- lexin och cefadroxil. Ringsubstitution inverkar icke på något sätt menligt på den antibakteriella aktiviteten.

Se föreningarna nr 9, 24, 32 och 42. Föreningen nr 37 sy- nes vara ett undantag vad gäller var och en av ovan drag- na slutsatser men är i själva verket en synnerligen aktiv substans både mot grampositiva och gramnegativa bakterier, *såsom kommer att visas i tabell 3.

'Tabell 2.

Agarutspädningsteknik (Mueller-Hinton-Agar) Minsta inhiberande koncentration (mcg/ml) _. Gp Ia3 §p Ib3 Gn Ia3 Förening nr _ 1 3 _l 2 1 2 9 (BMY-28100) 0,23 0,35 0,92 0,8 0,8 0,7 13 (BBS-1058) 0,40 1,4 4,1 11 (BBSfil064¥ua , Qfáüss 1. 1¿2wU" Iwíïfi” 24 (BBS-10651 ~ '0723"^0,8a 0;92“u;9z“ d;s' o,s 8 (BBS-1067) 0,26 1,4 6,3 (BBS-1076) 0,20 0,7 >50 21 (BBS-1091) 0,61 2,7 2,7 17 (BBS-1092) 0,53 2,1 2,7 32 (BMY~28060) 0,13 0,53 1,1 37 (BMY-28068) 6,30 7,2 6,3 42 (BMY-2sø97) 0,354 1,24 o,s34 cefalexin ' 1,2 0,70 4,1 3,6 6,2 4,1 cefadroxil 1,2 1,10 3,6 4,1 8,3 8,3 1. Spalterna 1 och 2 anger separata testförsök. 2. Spalterna 1 och 2 anger separata testförsök. 3. Medelvärde av fem organismer från varje grupp - Gp Ia gram+ stafylokocker; penicillinkänsliga; inget penicillinas produceras.

S. aureus Smith A9537 S. aureus A9497 S. aureus Terajima 40 -l I S. aureus A9534 466 29 S. aureus A9601 Gp Ib gram+ stafylokocker; penicillinresistenta; penicillinas produceras: S. aureus 193 S. aureus BX-1633-2 A9606 S. aureus A15092 S. aureus Russell S. aureus A9602 Gnhla gram- bakterier; ampicillin- och cefalotin-- känsliga - ' »i E. coli Juhl A]5J19ï E. coli A9660 K. pneumoniae D11 P. mirabilis A9554 P. mirabilis A9900 4. Ej del.av försök 1; testades separat.

Tabell 3 innehåller jämförelsedata för den antibakte- riella aktiviteten in vitro med avseende på samma orga- nismf soxnzafi . tabell; .Zz .undeza--utnyttiandanmrtwzärolikafihak-a-u :~ffi;:-~ teriologiska~odlingsmedier. MueIIer*Hiñton*agar är det standardmedium som användes vid de i tabell 2 angivna försöken. Tabell 3 innehåller en jämförelse mellan de minsta inhibérande koncentrationerna för tre av testfö- reningarna först genom bestämning i Mueller-Hinton-medium och därefter i näringsagar. Förening nr 9, som innehåller 4-hydroxisubstitution i fenylringen, och förening nr 42, som innehåller 3-metoxi-4-hydroxisubstitution i fenyl- ringen, uppvisar endast en måttlig mediumeffekt. Härmed avses att skillnaderna i MIK är mindre än=trefaldig. Fö- rening nr 37, den 3,4-dihydroxifenylsubstituerade före- ningen, uppvisar 6- till 12-faldiga aktivitetsskillnader mellan de tvâ medierna, varvid de minsta inhiberande kon- centrationerna i näringsagar är mycket lägre än de som bestämmas i Mueller-Hinton-agar. Följaktligen kan den slutsatsen dras att förening nr 37 är jämförbar i anti- bakteriell aktivitet med de övriga cefalosporinerna med cis-propenylgruppen i 3-ställningen, vilka beskrivs i tabell 2. Detta fenomen, vilket innebär att ett antibio- “lå 4Éåêum2&pgvisar större aktivitet i en typ av näringsme- dium än i en annan typ, har rapporterats och studerats tidigare. Hänvisning sker till T.A. Pursiano et al.

Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Vol. 3, No. 1, sia 33-se (1913).. ' Tabell 3.

Testmediumjämförelse Agarutspädningsteknik Minstä inhiberande koncentration (mcg/ml) Föreningšnr Gp Iaz Gp Ibz g Gn Ia2 9 (anY¿zs1oo) A' 0,23 0,92 0:70 B 0,17 0,35 0,70 37 (BMY-28068) A 4,8 6,3 o5,5 B 0,40 0,61 0,92 42 (BmY-zsosí) A 0,35 1,2 0,53 B 0,23 o,4o o,4o' 1 A Mueller-Hinton-agar B-Näringsagaragi 2 Medelvärden för samma grupp av organismer som i tabell 2.

De korrelationer mellan struktur och aktivitet som fram- går av ovan angivna undersökningar in vitro bekräftas av resultaten från undersökningar in vivo på möss. I tabell 4 återges skyddsdoserna för möss, som har infekterats med ett letalt inockulat av en bakterie. Två olika bakterier användes vid undersökningarna, en grampositiv organism och en gramnegativ organism. Skyddsdosen (PD50) är den dos som vid administrering till en grupp av infekterade möss resulterar i 50% överlevnad efter 5 dagar. Normalt dör obehandlade infekterade möss inom 3 dagar efter in- jektion av det letala inockulatet. 40 “IJ Tabell 4 466 204 Skyddsdos för möss infekterade med ett letalt inockulat.1 Oral behandling I Förening nr “S. aureus Smith E;-coli Juhl 9 (suv-28100) 0,14 (0,31)2 1,2 18,412 13 (nns-1058) 0,32 (o,31) ' 3,0 (8,4) 11 (Bas-1064) 0,18 (o,31) 3,8 (8,4) 24 (ass-10651 0,18 10,27) 1,5 (8,2) 8 1ßBs-10671 0,20 10,311 7,5 (8,2) az (suv-¿šos01 ' 0,11 10,221 3,04 (8,4) 37 (snyfåsoss) 0,13 10,27) 0,44 48,2) 42 (Buy-28091) 0,093 1 Dos i mg/kg som förhindrar död under 5 dagar hos 50% av djuren i grupper av 5 möss, som har be- handlats med olika doser av testföreningen på in- fektionsdagen; bestämd genom interpolation från dos/svarskurvan; obehandlade möss dör inom 3 dagar.

Värden inom parentes avser cefalexin vid samma försök. ' BMY-28100: kontrollvârden för cefaIexin“e11er"ce- fadroxil ej tillgängliga.

Data i tabell 4 härrör från flera olika försök. Vid des- sa försök användes cefalexin som kontrollbehandling. Det för cefalexin bestämda PD50-värdet i samma försök anges inom parentes efter PD50-värdena för testföreningarna.

Det är uppenbart att var och en av cefalosporinerna upp- visar god aktivitet mot infektion av grampositiv Staphylococcus aureus och att föreningarna,.som-uppbär cis-propenylgruppen i 3-ställningen, är mer aktiva mot gramnegativa infektioner; se föreningarna nr 9, 24 och 37.

Tabell 5 innehåller jämförande blodnivådata för möss, som har behandlats oralt och intramuskulärt med de i tabell 1 angivna testföreningarna. En jämngod oral absorption framgår med undantag av förening nr Å1, som uppbär en heterocyklotiosubstituent på 3-propenylgruppen. Före- ning nr 37 uppvisar exceptionellt höga blodnivâer hos I.detta>försökherhöl1s,ettsvändemavæ@pJfimmgßhgpförzwv -14 466 204 möss efter oral administreringf Denna förening har vi- sat sig metaboliseras till förening nr 42 hos råtta. Hän- visning sker till utföringsexempel 43. Förening nr 37 är 3,4-dihydroxifenylföreningen och förening nr 42 är 3- metoxi-4-hydroxifenylföreningen. Sistnämnda har visat sig uppvisa hög aktivitet in vitro och in vivo. 466 204 Or v~ vm.° mmw ~.v mv m«.° mv mm.° mv m«.° mv mm.° mv °«.° mv °m.° m ._«m.° Nm mm.° vm mm.o - om.° mv vm.° CN m>.° ~m mm.° om om vN mv vN vN um QN mv vm vm vm mw mm æw m > @\ 1- N oßm mv mv mv mv vv æN m om NN mv mv vw WN m.v mv v.m mm v.v _m.v mm.o m.m v.v mv ~.v ~v m.v vv m.v mv m.~ v.v v.~ ~v m.v ov m.v m.v «.v vv °.~ mv m.v mv xwmuflu m >m wUHw>Hm©®2 1 vw mmm ßm mv mo mov ßm ßmv mv væ mm wo mv omv mov m.v m.N ß.v v.v m.v B N Q § B flïNv-WPNPQOÛ 5 ä PPI-PN MPa-N Uï s '_ vm omv mN mm vm mm hv mn v_v vv om ow mv vm mm vvs\».m=. vsv«..va\mm.vvs\».m=. vsvm. .va\m=..vm\».mm. vsvu. .vs\ms. k. usa ~\va NNE .e.v mxwus ON U .i osm ~\va xmau .o.m mx\ms ON OD4 å; XME U .0.Q wM\UE Oov ~wwÛE WOS HOW>fiG¶QHm m Hfiwnmfi »NCC Hfixønflmwmu vmm°m~|>zm. vn vomomwnwzmo Nm .mm°v|mmm. v~ voovm~|»:m. m N xnmunm HHNOHÜMNUO cfixwanumo vwmmvzmmmo vv vvmov|mmm. vw vmvovammmo mv vvmov|mmm. m .mm°v|mmm. vw _«m°v|mmm. vv vmmovnmmmo mv .N vom. v°Qvm~|>=m. m v xnmunm H: mcflnwnwm \\ -16 466 204 Tabell 6 innehåller ytterligare data in vivo för förening nr.'9 med avseende på fyra andra organišmer vid jämfö- relse med cefalexin, cefaklor och cefadroxil. Tabeller- na 7 och 8 innehåller jämförande data in vitro för före- ning nr 9 i förhållande till cefalexin, cefadroxil och cefaklor med avseende på ett antal streptokocker, Neisseria, Haemophilis och olika anaerober.

Vid försök med råttor avseende utsöndringen i urinen är 24 timmars utsöndringen av förening nr 9 med urinen hos råttor, som har behandlats oralt, jämförbar med den av cefalexin och cefadroxil och större än den av cefa- klor. Stabilitetsundersökningar, som har jämfört före- ning nr 9 med cefalexin och cefaklor i lösning under an- vändning av fosfatbuffert vid pH 6,5 och pH 7,0, human- serum (pH 6,8), hästserum (pH 7,6) och kalvserum (pH 8,2) som bärare, har avslöjat att förening nr 9 är avsevärt stabilare än cefaklör och jämförbar med cefalexin.' Tabell 6.

Skydflsdøs Pn~5ü,¿ fasta-möss» ' ockulat. ' ' i I Oral behandling Organism 9(BMY-28100) Cefalexin Cefaklor Cefadroxil S. aureus BX-1633 2,2 17 2,2 7,2 S. pyogenes A20201 0,11 0,74 0,14 0,25 H. influenza A9729 1,8 18 1,6 25 P. mirabilis A9554 1,8 12,5 1,8 14 “1/ 466 204 i w, y . cwww w.o m.w m.w « oæ.° wwuw>Hmuwa uxmfluuwaoww m.° .m.m m.w Qmww w_° mm_°~< = æ.° m.w m.w °@Ww @.o «mP°~< = w_° m.w m.w omww w.o m«_o~< = 1» m.w m.w QQWW w.° ~«_°~< = m.° m.w m.w Qmwk @.° N~.m.< wmwnunonom .z m.P w._ P.m m~.= o~.o @w»w>~wwws uxwfiuuwaoww »Jo w.~ P.m ~.° ~.° mwomva = w.F w., P.m «.= ~_° mæmmm = nu w.~ P.m ~.o ~.° HHH mun = w.P w.P P.m ~.° ~.° H mæu = w., w_F F.m ~.o ~.° HH mä» mmflcosnwam .w ~.o °w.° °w.° °~.o Qm°.° @wuw>Hmwws »xmflnuwaomo ~.° w.° @.= N_° m°.o °«om.< = ~.° w.° @.° ~.° m°.o mwooma = ~.° w.Q æ.° ~.° mo.o wowmm = ~.= flæwb w.° ~.° mo_° xofin = ~.° w.° w.° ~.o_ mo.o m~|m mm:wwoæm.m uoflxmuwu Hflxøuwmmwu cfixwfimuwu .@ßoF .N wumw. amwmmwmm |mmm. nw. .oorwm . nwzm. m .Hs\@». MW: mflfiflnmofimmm non mfiuwmmfimz .flooooummnum #08 ouuflw cfl.umufl>fiux4 ß Hfiwama -18 466 204 |; P.m 1: «.o || m.w. nu m.m || m_w W 5D s s s s Ä ä S fi § § Üææææflfi' §f§ 5 OOOOOOOO MMMMMMMM ~~ s WWSDWKOWUDW Ii... II» i 1|..|». ...Fl .- § § t-f-'Pw 1- § 5 \ F) (WHOM § ß N Mmmffifflffimfl ß s Wkfll-Dßßßwïßßß w.° m.w m.w u.° m.@ m.w w.° ”m.w m.w @.° w.@ m.@ w.° || 11 w.° m.w m.w .HOHÅNMÜO .HfiXOHUMMÜU GfiunÜHMMQU mmflcoäflmcm .m mmcmmøæm .m OMNCUÜHHCH .I ÜßNGÜfl-.HNCH u mm mfiflfiuflwcflfiwš .Z EMHGNWHO «_@, ~.o mmßowm ~.Qw _.o _°~°~< mw w.F Fm«-< “W 0., .w«-< mm¶. m.P ßm_-< om.o wUHm>HmUwE uxmfluuwäomw m.° ~w«-« w.° mmvwwm w.° mmmmm w.o m~mP~< w.° mm_°~< w_o ßßpomm @.° m~>m< omww oæ.o wwum>flw©mE uxwfluumâomw. om- w.° >m«,~< °QH~ w_° @m«P~< °q~^ w.° ßæwpwm ww 11 m«°°~< °@- w.° @«°°~< .wßor »¶ .~ muwm.

Immm. WW AOQPQN nwzmv m ..m»uo«. > Hfiwnma 40 -19 Tabell 8 466 204 Aktivitet in vitro mot anaeroberï MIK'ug/ml -lak- 9(BMY- Cefalèxin:Cefaklor Organism tamas 28100) Gn,stavar B.fragilis A2o92a-1 (-) 0,8 12,5 3,1 B.fragilis A21900 (-)* 50 12,5 6,3 fn . fragnis 0120935 (-) o,s e,3_ 13,1 Geometriskt medel- t värde 3,2 9,9 3,9 Gn,stavar B.fragilis A22053 (+) 50 25 100 B.fragilis, A22021 (+) >100 100 >100 B.fragilis Azzssa (+) >1oo >1oo V>1oo Geometriskt medel- värde. >1oo > 75, >1op fiw, B-fragïlis^ A22695 (+) >100 100 100 B.fragilis A22533 (+) >100 >100 >100 Geometriskt medel- värde >100 >100 >100 Gp,stavar C.difficile A21675 * 6,3 100 25 C.perfringens A9645 0,4 12,5 1,6 Gp,køcker P.acnes A21933 0,4 1,6 0,8 P.anaerobius A21905 0,8 6,3 0,4 Geometrisk medelvärde 0,95 11 * Clindamycin-resistent 40 -20 466 204 Föreningarna enligt förevarande uppfinning framställes genom tillämpning av de syntesvägar som avslöjas i brit- tiska patentskriften 1 342 241 och de amerikanska patent- skrifterna 3 994 884 och 4 107 431 genom val av lämpliga utgângsmaterial. I huvuddrag innebär bildningen av den substituerade vinylgruppen i 3-ställningen av cefalospo- rinerna enligt föreliggande uppfinning omsättning av en halidreaktant med en triarylfosfin för erhâllnade av ett fosfoniumsalt, som vid behandling med bas ger en fosforanyl- mellanprddukt. Sistnämnda behandlas därefter med en kar- bonylreaktant för framställning av föreningen enligt fö- religgande uppfinning. Antingen halidreaktanten eller karbonylreaktanten innehåller cefalosporinkärnan. Detta åskådliggöres i följande reaktionsschema.

Halidreaktant Fosforanyl- Karbonyl- mellanprodukt reaktant QCH X 2 'ÉFGHQQP _ H\ _ Qcnzx -ID-š--> [QcH-P(c6H5)3] RB/c-o Reaktionsschema 1 3 Reaktionsschema 2 QCH=CHR-å ígäïel s; ' _ _ v. p» _! silke-rf* /cHx (asus) 311'- ' c"=P^(c"6--1=r¿)š']" xIv 'i RB *rä-à RB 3 I ovan angivna reaktionsschema är R H, C1_4-alkyl, C1_4-alkoxi-C1_4-alkyl, C7_14-aralkyl eller gruppen Alkx, där Alk och X har ovan angivna betydelser. Symbolen Q avser 7-amino-3-cefem-3-yl-4-karboxylsyrakärnan, vari amino- och karboxylsyragrupperna kan uppbära skyddsgrup- per, såsom en silylgrupp eller någon annan grupp som är välkänd för fackmannen inom det kemiskalß-laktamantiobio- tika-omrâdet, eller också kan Q vara en 7-acylamino-3- cefem-3-yl-4-karboxylsyrakärna, där 7-acylaminogruppen kan vara en grupp, som konventionellt ingår i cefalosporin- antiobiotika innefattande den àëamino-àêsubstituerade fenylacetamidogruppen enligt föreliggande uppfinning, så- som den definierashmed avseende på formlerna XIII och XIV.

Ovan angivna sulfoxider har flera fördelar. Speciellt har Q någon av följande formleri ZQ1 40 4 6 6 2 O 4 (O) é “ (cpu PJNH-fi Hog > CE /5 áy-19 // yfigå _ N o l 2 , H1 /F / oozp f” 'æzg i _. f n “ïïn <9» i _ S s ß MG '-1 / B=N-___]/ F” - F” f '. o æzpz 0 2 vari Rïvfiarwovanßangivnafbetydeïsegy n är heltalet 0 eller 1 och avser antalet syreatomer, som är bundna till svavel; Ac avser en acylgrupp av den typ som vanligen ingår i 7- acylaminocefalosporiner, såsom fenylacetyl och fenoxi- acetyl; och _ B är en alkyliden- eller aralkylidenskyddande grupp, som härrör från en aldehyd eller keton, såsom bensylidengrup- pen, som lätt avlägsnas i ett efterföljande steg, exempel- vis genom hydrolys under användning av Girard's Reagens T.

P1, P2 och P3 är väteatomer eller skyddsgrupper av den typ som vanligen används inom cefalosporinkemin med aminogrup- per, hydroxigrupper och karboxylgrupper.

Lämpligå karbonylskyddande grupper (P2) innefattar aralkyl- grupper, såsom bensyl, p-metoxibensyl, p-nitrobensyl och difenylmetyl (benshydryl), alkylgrupper, såsom t-butyl, haloalkylgrupper, såsom 2,2,2-trikloretyl, och andra kar- boxylskyddande grupper, som beskrives i litteraturen, exem- pelvis i brittiska patentskriften 1 399 086. Det är före- i10 40 -22 466 204 draget att använda karboxylskvddande grupper, som lätt avlägsnas genom behandling med syra, speciellt benshyd- ryl eller t-butyl.

Amino- och hydroxiskyddande grupper (P1.och'P3) är väl- kända inom tekniken och innefattar trityl- och acylgrup- per, såsom kloracetyl, formyl, trikloretoxikarbonyl, tert.-butoxikarbonyl, karbobensyloxi, etc. Även i detta fall föredras aminoskyddande grupper, som lätt avlägsnas genom behandling med syra, speciellt tert.-butoxikarbonyl- gruppen. I I reaktionsschema 1 och 2 ovan framställs oxiderna, när cefalosporinkärnan Q används i form av 1-oxiden (n=1), medelst kända förfaranden, såsom genom oxidation av mot- svarande cefalosporin (n=0) med m-klorperbensoesyra eller perättiksyra. I senare skede av syntesen reduceras 1-oxi- den medelst kända förfaranden, exempelvis genom reduktion med jodidjoner i ett vattenhaltigt medium.

Omxandling.avihalidreaktantenwmedrfiormešm%QCHä§;enLigtäfsi reaktionsschema T tillsfosforanylmellanprbdukten utförs företrädesvis genom användning av en hàlidreaktant, där X är jodid. Om en klorid- eller bromidhalidreaktant använ- des kan den först'omvandlas till jodiden genom behandling med natriumjodid i dimetylformamid eller acetonlösning.

Jodidreaktanten reagerar lätt med en triarylfosfin, såsom trifenylfosfin, i en organisk flytande bärare, som är inert med avseende på reaktanterna under reaktionsbetingelserna.

Rumstemperatur under en kort tidsperiod av upp till flera timmar utgör lämpliga betingelser. Lämpliga triarylfos- finer förutom trifenylfosfin innefattar de lättillgängliga föreningarna med reaktionskompatibla arylgrupper, såsom substituerad fenyl, exempelvis tolyl, naftyl, substituerad naftyl och heteroaromatiska eller substituerade hetero- aromatiska grupper. Det första steget i reaktionen inne- fattar bildning av triarylfosfoniumsaltet, som vanligen ütfaller ur lösningen och tillvaratas på ett filter. Tri- arylfosfoniumsaltet upplöses därefter i ett lämpligt fly- tande organiskt lösningsmedel, som icke är blandbart med 40 -23 466 204 vatten och som är inert under reaktionsbetingelserna, så- som kloroform, trikloretylen eller annan polyklorerad el- ler -bromerad metan eller etan. Fosforanylmellanprodukten framställes därefter in situ genom behandling av lösningen med en vattenlösning av ett alkalimetallkarbonat, -bikar- bonat eller -hydroxid vid rumstemperatur. Det organiska skiktet, som innehåller fosforanylmellanprodukten, sepa- reras, tvättas med vatten och torkas på sedvanligt sätt.

Den i reaktionsschemat visade karbonylreaktanten sättes därefter till den torra lösningen av fosforanylmellanpro- dukten och slutsteget i reaktionen äger därefter rum vid rumstemperatur inom en relativt kort tid av från cirka 2 till 20 timmar. Den önskade produkten, som represente- ras av formeln QCH=CHR3, utvinnes medelst teknik, som är känd för fackmannen, som är förtrogen med organisk-kemiska laboratorieförfaranden, såsom kromatografi på en silikagel- kolonn.

Halidreaktanterna med formeln QCHZX i reaktionsschema 1 framställes utgående från motsvarande 7-amino- eller 7- acylamino-3-hydroximetyI-cef~8-em-4-karhoylsyradegäxafiß; medelst metoder, som i princip är kända.

Omvandling av halidreaktanten med formeln R3CH2X enligt reaktionsschema 2 till fosforanylmellanprodukten kan ut- föras antingen med kloriden, bromiden eller jodiden (X=Cl, Br eller I). Om så önskas kan kloriden eller bromiden om- vandlas till jodiden i förväg, men detta är icke väsent- ligt. Omsättning med triarylfosfinen, såsom trifenylfos- fin, utförs antingen utan lösningsmedel eller i en orga- nisk=vätskeformig~bärare, som är inert-under reaktionsbe- tingelserna. Rumstemperatur eller förhöjda temperaturer unaer en tiasryma av från 1 till 24 timmar vid 2o°c till 150°C kan användas. Triarylfosfoniumsaltet utfaller van- ligen och tillvaratas på ett filter. Det upplöses därefter i ett lämpligt flytande organiskt lösningsmedel, såsom di- metylsulfoxid, eller ett lösningsmedel, som icke är bland- bart med vatten, såsom eter, eller tetrahydrofuran och behandlas med en bas, såsom butyllitium, fenyllitium, natriummetoxid eller natriumhydrid, under en period av 40 -24 466 204 från flera minuter till flera timmar vid en temperatur inom intervallet från -40°C till +50°C. Karbonylreaktan- ten sättes därefter till den torra reaktionslösningen och reaktionen får äga rum vid en temperatur från -40°C till +50°C under 1 till flera timmar. Den önskade produkten, som representeras av formeln ' H QcH=c / R3 utvinnes såsom tidigare.

Reaktionsschema 1 har visat sig vara bekvämt för fram- ställning-av de substanser med formeln QCH=CHR3, där R3 är lägre alkyl, fenylalkyl, naftalkyl, haloalkyl eller alkoxialkyl i cis-(Z)-konfiguration. Enligt en variant av' reaktionsschema 1, som i det följande betecknas metod A, används som halidreaktant 25-Åk(N-t-butoxi-karbonylamino)- aß(p-hydroxifenyl)aææamidq]-3-klormetyl-3-cefem-4-karboxyl- syra-benshydrylester. Detta âskådliggörs i utföringsexem- pel 4, 5 och 6 nedan.

En ytterligare variant av reaktionsschema 1, som vi har funnit vara bekvämt, liknar metod A genom att ¶¿-[ä-(N-t- butoxikarbonylamino)-d-(p-hydroxifenyl)acetamidq]-3-klor- metyl-3-cefem-4-karboxylsyrabenshydrylester användes som utgångsmaterial men vid metod B användes kloracetaldehyd för framställning av den blockerade 7-aminocefalosporan- syran med 3-klor-1-propen-1-yl-gruppen i 3-ställningen.

Sistnämnda material uppvisar antibakteriell aktivitet men icke i någon överdriven utsträckning. Vid metod B utnytt- jas 3-klor-1-propen-1-yl-föreningen som en mellanprodukt och omvandlas först till motsvarande 3-jod-1-propen-1-yl- förening, som därefter omvandlas med heteroaromatiska te- oler till 3-heteroaryltioprop-1-en-1-yl-cefalosporinderi- vat.

En ytterligare variant av reaktionsschema 1 betecknas i det följande metod C. Vid denna variant framställes 7- amino-3-klormetyl-3-cefem-4-karboxylsyrabenshydrylestern såsom tidigare och 7-amino-gruppen skyddas genom omsätt- 40 466 204 ning med bensaldehyd för framställning av bensylidenskydds- gruppen. Q Sistnämnda behandlas därefter med trifenylfosfin för till- handahållande av fosfoniumsaltet, som därefter omvandlas med basen till fosforanylmellanprodukten, och sistnämnda behandlas med en aldehyd för erhållande av den 3-substi- tuerade vinyl-7-aminocefalosporansyran, som därefter acy- leras för införande av den önskade acylgruppen i 7-ställ- ningen. ß ' v \ Två variationer av reaktionsschema 2 föreslås. Enligt den första varianten, metod D, omvandlas 3-hydroximetyl-7-fenyl- acetamido-3-cefem-4-karboxylsyran, som har framställts så- som beskrivits ovan, varvid karboxylsyran skyddas som bens- hydrylestern, till motsvarande 3-formylförening. Sistnämn- da får därefter reagera med fosforanylmellanprodukten, som härrör från en halid med formeln R3CH2X, såsom visas i reaktionsschema 2, och den önskade 7-acylaminogruppen in- föres genom acylbyte.

Metod*E är en ytterligare variant av- reakticnsscñema 2,” där blockerad 7-p-hydroxifenylglycylamido-3-formyl-3- cefem-4-karboxylsyra användes som karbonylreaktant. 7-fenylacetamido-cefalosporansyraxär ett lämpligt utgångs- material på grund av dess lättillgänglighet. Acetoxigrup= pen däri kan lätt hydrolyseras enzymatiskt under utnyttjan- de av vetekli som enzymkälla för erhållande av 7-fenyl- acetamido-3-hydroximetyl-cef-3-em-4-karboxylsyra. Karboxyl- syragruppen kan skyddas genom omvandling till benshydryl- estern genom behandling av syran med difenyldiazometan.

Estern behandlas därefter med fosforpentaklorid under kända betingelser, vilket resulterar i en spjälkning av 7-fenyl- acetylgruppen och omvandling av 3-hydroximetylgruppen till en 3-klormetylgrupp. Framställningen av 7-amino-3-klor- metyl-3-cefem-4-karboxylsyrabenshydrylestern medelst des- sa metoder åskådliggörs i utföringsexemplèn 1 och 2.

Alternativt kan 7-fenylacetamido-3-hydroximetylcef-3-em- -26 466 204 4-karboxylsyran omvandlas till 3-halometylföreningen och följaktligen till fosforanylmellanprodukten, följt av omsättning med en aldehyd för framställning av den substituerade 3-vinylcefalosporinen enligt någon av va- rianterna av reaktionsschema 1.

Den cefalosporin-3-karboxaldehyd som representeras av formeln QCH=O i ovan angivna reaktionsschema och som tjä- nar som karbonylreaktant i reaktionssc ema 2 framställes genom omidation av en 7-acylamino-3-hydroximetyl;gef;§- em-4-kartoxylsyraester, såsom beskrives i ovan,angivna amerikanska patentskrift 3 351 596. Reaktionsschema 2 är mindre föredraget av de två visade syntesvägarna och synes icke vara lämpligt för propenylprodukterna med for- meln XIII.

Föreningarnafmed formeln QCH=CHR3 föreligger i cis-1Z)- och trans(E)-konfigurationerna. De föreningar som har _*/as cis(eller Z)-konfiguration föredras. De har större anti- bakteriell aktivitet än motsvarande substanser med trans- (eller El-konfignrationmsEöneuingarnagmeflsformeln:XEW«äna'á användbaraïsomwmellanprodukter-för*framstäIIfling*av“andra cefalosporiner med formeln QCH=CHR3, där R3 är en metylen- grupp substituerad med återstoden av en nukleofil grupp,' såsom en merkapto-, alkylmerkapto-, arylmerkapto- eller heteroarylmerkaptogrupp, exempelvis 1,2,3-triazol-5-yl- merkapto eller 2-metyl-6-pyridinylmerkapto. Detta åskåd- liggörs nedan i utföringsëxempel 20. Jodmetylföreningar- na föredras som mellanprodukter för nukleofila förträng- ningsprocesser.

Reaktionsschema 1 är anpassat till framställningen av en produkt med formeln XIV genom substitution av den visade R3CHO-reaktanten med den lämpliga karbonylreaktanten i- fråga med formeln XAlkCHO.

Uppfinningen åskådliggörs närmare medelst följande ut- föringsexempel. 40 Exemgel 1. 466 204 Benshydryl-3-hydroximetyl-Zb-fenylacetamido-3-cefem-4- karboxylat (förening 1) Till en omrörd suspension av 162,5 ml fosfatbuffert, pH 7 och 20 g torrt vetekli vid rumstemperatur sattes g (12,1 mmol) 7-fenylacetamidocefalosporansyranatrium- salt i en portion. Fortskridandet av reaktionen följdes medelst HPQC till dess hydrolysen var fullbordad (5 tim- mar). Suspensionen filtrerades för avlägsnande av veteklit ooh fi1tratot-..ky1aos till s-1o°c för oxtraktiv fçrostring.

Till den kylda lösningen sattes 32 ml metylenklorid, följt av en 0,5 M lösning av difenyldiazometan i metylenklorid (24 mlï. PH inställdes därefter på 3,0 med 28% fosforsyra.

Efter 1 timme fick reaktionsblandningens temperatur stiga till 20°C. 56 ml heptan tillsattes långsamt och den erhåll- na kristallinav i rubriken angivna produkten utvanns ge- nom filtrering. Produktutbytet var 3,0 g (50%).

Exemgel 2.

Benshydryl-25-amino-3-klprmetyl-3-cefem-4-karboxylatkgg)_ S 1 “f F" / nzci 0 COOCH(Ph)2 Till en uppslamning av 8,3 q (40 mmol) PCl5 i 1000 ml CH2Cl2 sattes 3,2 g (40 mmol) pyridin och blandningen om- rördes 20 minuter vid 20°C. Till blandningen sattes 5,1 g (10 mmol) benshydryl-3-hydroximetyl-7-fenylacetamido-3- cefem-4-karboxylat (1) under omrörning vid -40°C i en por- tion. ßlandningon omrördos 15 minuter' vid -1o°c ooh fiok stå 7 timmar vid en temperatur av från -10°C till -15°C.

Till den kylda lösningen (1-20°C) sattes 10 ml propan-1,3- diol och blandningen fick stå 16 timmar vid -20°C och där- _ -wvrflof- H' 40 -_ -28 466 204 efter 20 minuter under omröring vid rumstemperatur. Den erhållna lösningen tvättades med 2 x 20 ml isvatten och ml av en mättad vattenlösning av natriumklorid, tor- kades över magnesiumsulfat och koncentrerades i vakuum.

Den gummiartade återstoden (12 g) upplöstes i en blandning av CHCl3 och n-hexan (2:1) och underkastades kromatogra- fi under användning av 200 g av en silikagelkolonn och samma lösningsmedel som elueringsmedel.-De fraktioner som innehöll den i rubriken angivna föreningen indunstades i vakuum och återstoden triturerades med n-hexan för erhål- lande av.föreningen 2 (2,1 g; 51%) med smältpunkten 110°C (sönderdelning). 1 In: v åäö 3400, zaoo, 1785, 1725 cm' . _ H 1% Uv. Å max zss nn (E1cm 160). nun: annso-as + cnc13 3,69 (za, S), 4,43 (za, S), s,o9 (1u, PP” a, J=4,s Hz), 5,24 (1n, a, J=4,s Hz), - 6,87 (1H, S), 7,3 (10H, m).

Exempel 3: Benshydryl-7 -/D-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(p-hydroxi- fenyl)-acetamido/-3-klormetyl-3-cefem-4-karboxylat (före- | TB dy' Ä cozc (caa) 3 GQ§3(C§%Q2 Till en blandning av 20,7 g (0,0S mol) benshydryl-7-amino- 3-klormetyl-3-cefem-4-karboxylat (2) och 20 g (0,075 mol) D-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(p-hydroxifenyl)-ättiksyra i 500 ml torr tetrahydrofuran (THF) sattes_15,44 g (0,07S mol) N,N'-dicyklohexylkarbodiimid (DCC) och blandningen omrördes 2 timmar vid rumstemperatur och indunstades till torrhet. Aterstoden upplöstes i 1 liter etylacetat (Ac0Et) och den olösliga dicyklohexylkarbamiden avlägsnades genom filtrering. Filtratet tvättades med en vattenlösning av natriumbikarbonat, vatten och en mättad vattenlösning av natriumklorid, torkades över vattenfritt natriumsulfat och indunstades till torrhet. Den oljiga återstoden kro- motagraferades på en silikagelkolonn (Wako-gel C-100, 500 g) genom eluering med 4 1 kloroform_och 6 1 1% kloro- form-metanol. Den önskade fraktionerna kombinerades och 466 204 indunstades till torrhet. Den“oljiga återstoden triture- rades med eter-isopropyleter för erhållande av 30,6 g (92%) av föreningen 3. i man: JCDCI: ppm 1,45 (sn, s, c-cu3), 3,4 (zu, br-s, 2-H), 4,28 (2H, s, CH2Cl), 4,86 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), ,12 (1H, d, 6'Hz, CH-CO), 5,68 (1H, d-d, 8 & 4,5 Hz, 7-H), 6,63 (2H, d, 9Hz, fenyl-H), 6,93 (1H, s, CH-Phz), 7,08 (2H, d,_9Hz, fenyl-H), 7,0-7,5 (10H, m, fenyl-H).

Den oljiga återstoden kan användas utan kromatografisk re- ning i exempel 4.

Exemgel 4.

Benshydryl-26-[Ö-2*(t-butoxikarbonylamino)-2*(p-hydroxi- -aw- fenyl)-acetamido]-3-jodmetyl-3-cefem-4-karboxylat (före- ningi4).

En blandning av 26,6 g (0,04 mol) av föreningen 3 och 18.g (Q,12-moll_natninmjodidpifl400,mlpacetonannräudqgnl,(,% timmar vid rumstemperatur och indunstades“tiI1'torrhet.“*«' Återstoden extraherades med 400 ml etylacetat och extrak- tet tvättades med en vattenlösning av Na2S203, vatten och en mättad vattenlösning av natriumklorid. Efter avdrivning av lösningsmedlet triturerades återstoden med eter-iso- propyleter för erhållande av 27 g (89%) av den i rubriken angivna föreningen. Etylacetatlösningen kan användas di- rekt i efterföljande steg (förening 5) utan isolering av förening 4, om så önskas. _ IR: Yâší cm_1 1790, 1710, 1670, 1500, 1360, 1220, 1150. nun: 6°°°13 ppm 1,41 (911, s, c-cn3), 3,3-3,s (za, m, z-n), 4,20 (2H, s, CH2), 4,89 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,12 (18, d, 6 Hz, CH-CO), 5,68 (1H, d-d, 8 & 4,5 Hz, 7-H), 6,62 (2H, d, 9 Hz, fenyl-H), 6,92 (1H, s, CHPh2), 7,08 (2H, d, 9Hz, fenyl-H), 7-7,5 (10H, m, fenyl-H).

I! 466 204' .I Exemggl 5: _ Benshydry1-1gUb-2-Lt-butoxikarbonvlamino)-2-(p-hydroxi- fenyl) -acetamidoJ-B- (trifengosfonio)metyl-B-oefem-l- karboxy1at;jodid (förening 5).

HO-Qr-oncoun S Q i EH fl-u / ca21à(c6H5)3 19 cozcnccsasb.

En blandning av 15,1 g (0,02 mol) av föreningen 4 och ,7 g (0,06 mol) trifenylfosfin i 200 ml etylacetat omv rördes 1 timme vid rumstemperatur. Den erhållna fällningen tillvaratogs genom filtrering, varvid man erhöll 17,4 g (85,5%) av föreningen 5 med smältpunkten 170-180°C. Fil- tratet koncentrerades till 100 ml och koncentratet späd- des med 500 ml eter för erhållande av en andra sats om 1,1 g av föreningen 5. Totalutbytet var 18,5 g (91%). To- talutbytet av föreningen 5 räknat på föreningen 2 var 7211.-, 51204,, Utbytet:kànäefi-“öláafiï av ovan angivna renings- och isoleringssteg.

IR: 9 šâí cm-1 1780, 1670, 1490, 1420, 1350, 1240, 1150, 1090. man: 8DMS° ppm 1,42 (en, s, c-cn3), 3,45 (211, br-s, z-m, -5,4 (3H, m, 3-H & 6-H), 5,7 (1H, m, 7-H), 6,63 (2H, d, 9 Hz, fenyl-H), 7,1-7,45 1125, m, fenyl-H), 7,5-7,9 (15H, m, fenyl-H).

Analys för C52H49N307SPI: Beräknat: C=61,36; H=4,85; N=4,13; S=3,15.

Funnet: C=61,26; H=4,82; N=4,11; S=3,92.

Exemgel 6.

Benshydryl-2ÃUÖ-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(p-hydroxi- fenyl)-acetami§9Z;3-132)-1-propen-1fylZcef-3-em-4-karbo- xylat (förening 6).

H° cHcoNH /S . l m: , / / cz-r-cncrš cozctcx-IB) 3 o OI! co2ca(c6H5)2 40 - 466 204 Till en lösning av 1,8 g (1,77'mmol) av föreningen 5 i 100 ml kloroform sattes 100 ml vatten, som innehöll 2 ml (2 mmol) 1N-natriumhydroxid, och blandningen skakades 5 minuter. Det organiska skiktet separerades, tvättades med vatten och torkades på vattenfritt natriumsulfat. Kloro- formlösningen filtrerades och filtratet koncentrerades till 50 ml under reducerat tryck. Till koncentratet sat- tes 1 g acetaldehyd och blandningen omrördes 2 timmar vid rumstemperatur och indunstades till torrhet. Den oljiga återstoden kromatograferades på en silikagelkolonn (Wake- gel C-200, 50 g) genom eluering med kloroform och kloro- form-metanol (99:1). De önskade fraktionerna tillvaratogs och indunstades för erhållande av 318 mg (28%) av produk- ten 6 med smaltpunkten 12o-13o°c (sönaeraelning).

IR:'Ü:š; cm-1 1780, 1670, 1710, 1490, 1360, 1210, 1150. man: Scnürppm 1,3-1,s (1261, m, c-cn3), 3,22 (za, br-s, zm,p4~,9o nu, a, 4,5 Hz, 6-11), s,1s (m, br-a, ca-co), s,s-6,1 (an, m, cn=cn 6 7-11), 6,63 (zn, a, 9112, fenyl-n), 6,91 (m, s, cn-Ph), 7,09 (za, a, 9:42, fenyl-n), 7,2- 7,5,(10H,_m¿,fenyl:HL-, Exemgel 7: Natrium-Z6-¿D-2-amino-2-(p-hydroxifenyl)acetamidq]-3- [(2)-1-propen-1êylj-3-cef-em-4-karboxylat. (förening 7, BMY-28100 natriumsalt) H alzncous- ï/S Ü / Na z 2 /c-N _ cs=cacs3 (c_i_s_ ) - C005 O En blandning av 318 mg (0,48 mmol) av föreningen 6 och 2,5 ml trifluorättiksyra (TFA) omrördes 1 timme vid rumstemperatur och späddes därefter med 50 ml eter och 50 ml isopropyleter. Den avskilda fällningen tillvara- togs genom filtrering och tvättades med eter för erhål- lande av av 188 mg (77%) av trifluoracetatet av före- ningen 7, som upplöstes i 2 ml metanol (MeDH). Till lös- 40 -32 466 204 ningen sattes 2 ml (2 mmol) av'en lösning av natrium- 2-etylhexanoat (SEB) i etylacetat och blandningen späd- des med 30 ml etylacetat för avskiljning av en fällning, som tillvaratogs genom filtrering, tvättades med eter och torkades i vakuum över fosforpentoxid, varvid man erhöll 144 mg (738, räknat på föreningen 6) av föreningen 7 i form av en råprodukt. Råprodukten (135 mg) upplöstes i ml vatten obhllösningen kromatograferades på en kolonn (25 mm x 100 mm) under användning av ca 20 ml av kolonn- fyllningen i PrepPak-500/C18 (Waters). Kolonnen eluera- des med vatten och eluatet, som innehöll den önskade produkten, koncentrerades till 5 ml och lyofiliserades för erhållande av 93 mg (69%) av föreningen 7 med smält- punkten 200°C (gradvis sönderdelning). Uppskattad ren- het 60% (enligt HPLC).

KBr -1 IR: 9 max cm 1760, 1660, 1590, 1400, 1360, 1250. ¿fosfathuffert pH 7 UV: max nm( ) 227 (11300), 280 (8200). ma; s°z° ppm 1,65 (an, a, s Hz, -c-cn3),-a,z1 (m, a, 'ia-lila .Zerflåfifn c .3a|,5«2f-.-ï«(~1ïH-»i5- I-:&3:~¥ HZ=).3.;~'=»=Z~f-¥H.lï¿=r.f¿z~ímïßèf: .rßflåfifififiaf ånaffÜi-míš- 1 f.. " Hz, s-n), s,-s"s"-(1'H, ~a',-'4f;s'=~'1rz; var", -sf,s=s'^,9'“(=1'n'"; m, d] d, 8 Hz, fenyl-H), 7,36 (2H, d, 8 Hz, fenyl-H).

Exempel 8: Zó-[D-2-amino-2-(p-hydroxifenyl)acetamidqj-3-ÅYE)-1- propen-1-ylZ;§-cefem-4-karboxylsyra (förening 8, BB-S1067) Den i exempel 7 erhållna råprodukten, 11,9 g oren före- ning 7 före kromatografisk rening, upplöstes i 50 ml av 0,01M fosfatbuffert (pH 7,2)-metanol (85:15) och lös- ningen inställdes på pH 6 med 6 N klorvätesyra. Denna lös- ning underkastades preparativ högprestandavätskekromato- grafi (HPLC) (prepPAK-500/C18, System 500, Waters) genom eluering med 0,01 M fosfatbuffert (pH 7,2), som innehöll % metanol. Eluatet övervakades medelst analytisk HPLC och den första fraktionen om 4 1 visade sig innehålla cis-isomeren (BMY-28100). Den andra fraktionen om 1 l in- nehöll trans-isomeren och tillvaratogs och koncentrerades .,..~.._-.........._ ..._...._.,.._._..__....._. _ | , 40 -33 466 204 till 500 ml. Koncentratet inställdes på pH 3 med utspädd klorvätesyra och kromatograferades på 100 ml HP-20-kolonn genom eluering med 1 1 vardera av vatten och 30! metanol.

Sistnämnda eluat med en volym av ca 300 ml koncentrera- aea t111 10 ml och iyeflilseraaes för erhållande av 290 mg av trans-isomeren i form av en råprodukt (renhet 55%).

Detta material upplöstes i 100 ml 50% metanol och behand- lades med aktivt kol. Filtratet koncentrerades till en volym av_20 ml och fick stå över natten vid 5°C. Produk- ten kristalliserade.som färglösa prismor, som tillvara- togs genom filtrering och torkades i vakuum i ett utbyte av 129 mg och med sma1cpunkten 23o°c tsönaeraelning).

IR: 'íšâí cm-1 1760, 1680, 1590, 1550, 1520, 1450, 1390, 1350, 1240. :nn A§::fatb“ff°rt (PH 7) nmz 1 zza 1130001, 292 116900). nun: 6°2°*"a2°°s ppm 1,89 (an, a, snz, c=c-cn3), 3,60 (zu, S, 2-H), 5,13 (1n, a, 4,5 Hz, 6-H1, s,2o (1n, S, en-co), 5.68 (1H, a, 4,5 az, 1-H), 5,99 (1H, a-q, 16 1 snz),=6,s4e11n;=a,:1emner,.s,9a~flznwadmfsvnzçffefiyr§aï¿¿f* 7,41 (2H, d, 9 Hz, fenyl-H).

Exemgel 9: Kristallin Z6-¿§-2-amino-(p-hydroxifenyl)acetamido]-3- 112)-1-proQen-1-yl]-3-cefem-4-karboxylsyra (förening 9, Buy-28100) Den första fraktionen om 4 1 som erhölls vid den prepara- tiva HPLC i exempel 8 innehöll cis-isomeren (BMY-28100) och koncentrefades'til1 en volym av 2 l och koncentratet. inställdes på pH 3 med utspädd klorvätesyra. Lösningen satsades på en kolonn innehållande 1 1 HP-20 och kolon- nen tvättades med 6 1 vatten till dess effluentens pH- värde var 7. Kolonnen eluerades därefter med 4 1 av en % vattenlösning av metanol. Eluatlösningen övervakades medelst HPLC och de lämpliga fraktionerna kombinerades (ca 2,5 l) och koncentrerades till 50 ml vid en tempera- tur mindre än 40°C under reducerat tryck. En kristallin fällning bildades. Koncentratet kyldes 2 timmar vid 0°C och den kristallina fällningen tillvaratogs genom filtre- .,- -34 466 204 ring, tvättades med en 80% vattenlösning av aceton, där- efter med 100% aceton och torkades därefter 1 vakuum över fosforpentoxid, varvid man erhöll 4,09 g av den önskade produkten 1 ren kristallin form med smältpunkten 218- 220°C (sönderdelning) 1 form av färglösa prismor; renhet 95% enligt HPLC-analys. m våg; mi' 175m, 1sao, 1sso, 1szo, 1460, 1390, 1350, 127o, 1235.

UV_ I fošfatbuffert (pH 7) nm ( ) 228 (12300), 279 (9800). 3 ppm 1,71 (3H, d, 6 Hz, C-CH3), 3,27 (1H, d, 18 Hz;.2-H), 3,59 (1H, d, 18 Hz, 2-H), 5,18 (1H, d, 4,5 H2, 6-H), 5,22 (1H, S, CHCO) 5,73 (1H, d, 4,5 Hz, 7-H), ,5-6,0 (1H, m, CH=C), 6,02 (1H, d, 11Hz, CH=C), 6,98 (2H, d, 9 Hz, fenyl-H), 7,41 (2H, d, 9 Hz, fenyl-H). mä! NHR: ¿D20+NaHC0 Analys för C18H19N305S 1/2 H29: Beräknat: C=54,26; H=5,06; N=10,55; S=8,05 Funnet: C=54,15, 54,19; H=5,13, 5,08; N=10,30, 10,42 S#$h3&¿§æ}@@&”“fiä7 Moderluten från föregående kristallisation koncentrerades till en volym av 10 ml och behandlades med 20 ml aceton.

Då lösningen fick stå i kylskåp över natten bildades en kristallin fällning, som tillvaratogs genom filtrering och torkades i vakuum över fosforpentoxid; vikt 670 mg (renhet 90% enligt HPLC). En portion av detta material, 560 mg, upplöstes i 200 ml av en 50% vattenlösning av metanol och lösningen behandlades med 0,5.g aktivt kol och filtrerades. Filtratet koncentrerades under reducerat tryck och vid 40°C till en volym av 20 ml och hölls där- efter 5 timmar vid 5°C. Produkten kristalliserade.och tillvaratogs genom filtrering, tvättades med aceton och torkades i vakuum över fosforpentoxid, varvid man erhöll 227 mg kristallin BMY-28100 (renhet 98% enligt HPLQ).

Lyofilisering av moderluten gav 181 mg BMY-28100, som hade en renhet av 95% (HPLC). 40 mæq§11m _ ' 465 204 n1feny;mety1-zAë/b-2-1:-butoxixarbonylamino1-2-fp- hvdroxi-fengl)acetamidoz-3-vinyl-3-cefem-4-karboxylat (förening'10) En lösning av 3 g (2193 mmol) benshydry1-7-[ï-(N-t- butoxikarbonylamino)-2-(p-hydroxifenyl)acetamidq]-3- (trifenylfosfonio)metyl-3-cefem-4-karboxylatjodid (5) i 50 ml kloroform skakades med en blandning av 3 ml (3 mmol) 1 N natriumhydroxid och 50 ml vatten 1 minut vid rumstemperatur. Det organiska skiktet separerades efter etillsats av 20 ml av en mättad natriumkloridlösning och tvättades med 3 x 30 ml vatten. Till den Organiska lös- ningen sattes 2,5 ml av en 35% vattenlösning av formalde- hyd under kraftig omrörning och under vattenkylning. Om- röringen fortsattes under 20 minuter. Det organiska skik- tet separerades, torkades över vattenfritt natriumsulfat och koncentrerades i vakuum. Koncentratet applicerades på en kolonn av silikagel, som eluerades med 600 ml CHCI3 och 800 ml 2% MeOH i CHCI3 för erhållande av 850 mg (45%) avadenmi:rubrikefifiangivnamfiöreningen@;TLGaiRfäüïßiwÅšiliwgT, kagel, neon-CHC13 (1=1U)].

Exempel.11: 14312;2-amino-2-ip-hyaroxifenyl1acetamiaq7-3-viny;]-3- ' cefem-4-karboxylsyra (förening 11; BB-S1064).

En blandning av 850 mg (1,32 mmol) av föreningen 10 och ml av en 90% vattenlösning av trifluorättiksyra (TFA) fick stå vid rumstemperatur 1 timme och koncentrerades till ca 1 ml i vakuumi Koncentratet triturerades med 20 ml diisopropyleter för erhållande av 679 mg av ett gult pul- ver, som upplöstes i 3 ml metanol och därefter späddes med 30 ml vatten. Lösningen fick passera en kolonn av HP- (50 ml), som tvättades med 200 ml vatten och eluerades med 250 ml 30% metanol. Det eluat som innehöll den önska- de föreningen,koncentrerades och lyofiliserades för erhål- lande av 197 mg (31%) av den i rubriken angivna före- ningen med en uppskattad renhet av 60% (enligt HPLC) och med smältpunkten 190°C (sönderdelning). 40 -36 466 204 _-IR: 9 gg: Cm-1 1760; 1680, 161% - 1570,'1520. vv: }»â::f“tb“ff°”t (PH 7) nm( ) 22a.(1asoo). äs: (144oo).

NHR: á sys s] y d., 5Hz| j ,73 d, 5 Hz' | d| 8 Hz] feny1"H) | 7|45 d| 9 Hz' a Exempel 12: Difenylmetyl-16-[Ö-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(p-hydroxi- fenyl)-acetamidq]-3-(YZ)-1-buten-1-ylZ;3-cefem-4-karboxy- lat (förening 12) En lösning av 3 g (2,95 mmol) av föreningen 5 i 50 ml CHCI3 blandades med en blandning av 3,2 ml (3,2 mmol) 1 N natriumhydroxid och 50 ml vatten och blandningen ska- kades 3 minuter vid rumstemperatur. Det organiska skiktet avskildes, tvättades med 3 x 30 ml vatten och en mättad lösning av natriumklorid och torkades över vattenfritt natriumsulfat. Till lösningen sattes 1,71 g (29,5 mmol) progionaïdehyäï*Bfändáäfigenäømmöäesmviäfimumsfiemeæatumamävï över natten och koncentrerades under reducerat tryck. Kon- centratet applicerades på en kolonn av silikagel, som eluerades med 1-2% metanol i CHCI3. De fraktioner som vi- sade en fläck vid Rf 0,30 (TLC, Me0H-CHCl3=1:10) kombine- rades och indunstades, varvid man erhöll 1,08 g (55%) av den i rubriken angivna föreningen. 1R= v :gi cm'1 1780, 1sso, 1soo.

Exempel 13: - Natrium-ze-1b-2-amino-2-cp-gyaroxifenyl)acetamiaq]-3- Älg)-1-buten-1-yl]-3-cefem-4-karboxylat (förening 13, BB-S10S8 natriumsalt).

En lösning av 1,08 g (1,61 mmol) av föreningen 12 i 11 ml TFA innehållande 1% vatten fick stå 1 timme vid rumstem- peratur. Blandningen koncentrerades till ca 2 ml i vakuum och den erhållna sirapen triturerades med ca 20 ml diiso- propyleter, varvid man erhöll 796 mg av ett gult pulver.

Pulvret upplöstes i 3 ml metanol och lösningen behandla- 40 466 204 aes med 3 mi 0,8 M san 1 etylaëetat (Aeost) för erhållan- de av en fällning, som filtrerades, tvättades med diiso- -propyleter och upplöstes i S ml vatten. Lösningen fick passera en kolonn, som var fylld med 80 ml av en prepPAK- 500/C18-patron (Waters), som tvättades med vatten och elu- erades i tur och ordning med 10% metanol, 20% metanol och % metanol. De önskade fraktionerna (vilka övervakades medelst HPLC) kombinerades, koncentrerades och lyofilise- rades för erhållande av 118 gg (9,4%) av den i rubriken angivna föreningen med en uppskattad renhet av 55% (medelst HPLC); produkten mörknade då den upphettades iaett glas- kapillärrör till en temperatur över 180°C.

In: v KB' em'1 17ss, 1660, 1sao. ma!! UV: Å fosfatbuffert (pH 7) max nm ( ) 228 (10900), 278 )7200). una: &D2° ppm o,s1 (an, t, 7,s Hz), 1,7-2,2 (za, m), 3,25 (zu, Aag), s,o1 (1n, a, s Hz), s,so (1n, a-t, 7,s ¿ 12 az), ,58 (1n, a, snz), 5,78 (1n, d, 12Hz), 6,86 (za, a, s Hz), 7,26 (zu, a, a Hz).

EXëm2EI\14:' Difenylmetyl-I5-[b-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(p-hydroxi- fenyl)acetamidQ]-§:1TZ)-3-fenyl-1-propen-1-yl]-3-cefem- 4-karboxylàt (förening 14): En lösning av 3 g (2,95 mmol) av föreningen 5 i S0 ml CHCI3 skakades med en blandning av 3,2 ml (3,2 mmol) 1 N natriumhydroxid och 50 ml vatten under 1 minut. Det orga- niska skiktet separerades efter tillsatsen av 20 ml av en mättad natriumkloridlösning, tvättades med 3 x 30 ml vat- *ten~och~en mättad lösning av natriumklorid och torkades med vattenfritt natriumsulfat. Till lösningen sattes 7,2 g (30 mmol) 50% fenylacetaldehyd och blandningen omrördes vid rumstemperatur över natten. Reaktionsblandningen koncentre- rades i vakuum och koncentratetzrenades på en kolonn av 75 g silikagel under användning av 1% MeOH/CHCI3 för er-- hâllande av 800 mg (37%) av den i rubriken angivna före- ningen. Tunnskiktskromatografi (TLC): Rf 0,33 (silikagel, neon-cnc13 1=1o). In (xsr)= 17so, 171o -16so em'1. Denna 40 -38 466 204 _ förening användes i exempel 15 utan ytterligare rening.

Exemgel'15: 1¿-lb-2-amino-2-(p-hydroxifenyl)acetamidglgšïéïz)-3- fenyl-1-propen-1-yI]-3-cefem-4-karboxylsyra'(fören1ng_j5, BB-ST076).

En lösning av 800 mg (1,09 mmol) av föreningen 14 i 4 ml 90% TFA gick stå 2 timmar. Reaktionsblandningen koncentre- 'rades och koncentratet triturerades med diisopropyleter för erhållande av 490 mg av ett gult pulver. En lösning av pulvret i 2 ml metanol blandades med 20 ml vatten och _applicerades på en kolonn av 50 ml HP-20, som tvättades' med 250 ml vatten och:èluerades i tur och ordning med 250 ml % metanol och 300 ml 75% metanol. Det 75% metanoleluatet koncenterades och lyofiliserades för erhållande av 302 mg råprodukt, som upplöstes i 10 ml 75% metanol och kromato- graferades på en kolonn under användning av 80 ml fyll- ning från en PrepPAK-500/C18-patron (Waters). Kolonnen - eluerades med 75% metanol för erhållande av 158 mg (31%) awadennäskadeaprcduäfienæiUggsfiafifiaäßnenhefifiäïifitmedeäâüäï HPLC). Produkten mörknade då den upphettades i ett kapil- lärrör till en temperatur över 175°C.

Im v KB* cm* 1760, 1680, 1600-1580, 1520. max Å fosfatbuffert (pH 7) UV: max nm ( ) 280 (8900).

NMR: ¿DMS°'D6/D2° (5/1) ppm 4,45 (211, d, 4 Hz, cgzph), 4:87 NH: S: CLND2)r 6:7 :(2111 d: 9 Hz: PIÜ: 6|9"7I5 (73: Exempel 16: Difenylmetyl-Z5-[b-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(p-hydroxi- fenyl)~acetamidQ]-3-ÅXZ)-3-metoxi-1-propen-1-yl]-3-cefem- 4-karboxylat (förening 16).

En lösning av 3,0 g (2,95 mmol) av föreningen 5 i 100 ml CHCI3 behandlades med en blandning av 1,8 ml 2 N natrium- hydroxid och 100 ml vatten 5 minuter vid rumstemperatur.

Den organiska fasen separerades, tvättades med 50 ml vatten 466 204 och 50 ml av en vattenlösning av natriumklorid och tor- kades och indunstades till ca 10 ml. Den erhållna röda ylidlösningen behandlades med 1,3 ml (15 mmol) metoxi- acetaldehyd 15 minuter.vid rumstemperatur. Efter avdriv- ning av lösningsmedlet kromatograferades återstoden på en kolonn av 100 g âilikagel och eluerades med toluen- AcOEt (3:1 och 1:1) för erhållande av den i rubriken an- givna föreningen (750 mg; 38%). - ' uun= .s°É°13*°2° ppm 1,45 (su, s, t-nu),-3,15 (sn, s, oca3), 3,27 (zgi S, 2-cn2>, ca 3,5 (zu, m, -cgzoue), 4,90 (1a, a, ,0 Hz, 6-H), 5,12 (1H, s, -CE-ND-), ca 5,5 (1H, m, =C§-CH2-), ,72 (1n, 0, 1-H), 6,10 (1n, a, 12 az, -cn=cn-caz-), 6,05-- & 7,10 (vardera 2H, vardera d, HO-ghf), 6,90 (1H, s, -cgphz), 1,3 (10H, S, Ph).

.Exem2el 17: _ 'Zá-[b-2-amino-2-(p-hydroxifenyl)acetamidqf-3~¿]Z)-3-metoxi- 11propen-1fyll-3-cefem-4-karboxylsyra (förening 17, BB-S1092).

Böreningenntfiwavblockerades@med03~mL.TEAn1¿timme0widnrumsflw¿0 temperatur. Avdrïvning av Iösningsmedlet; fö¶jt”áv“utfäI1= ning ur isopropyleter, gav trifluoracetatet av produkten, som renades medelst kolonnkromatografizpå HP-20. Kolonnen tvättades med 500 ml vatten och eluerades med 500 ml 30% MeOH för erhållande av 350 mg (75%) av den önskade produk- ten. Uppskattad renhet 90% (enligt HPLC). Smältpunkt 1s0°c (sönaeraelningy.

In: wffiší cm'1 3400, 3100, 1160, 1600.

UV_ ¿ fosfatbuffert pH 7 max nm ( ) 220 (11s00), 279 (9400).

NMn= 6°2° ppm 3,40 (sn, S, ocH3), 3,40 (zu, Aßq, 2-cuz), 4,0 (ZH, m, -C§2OMe), 5,19 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,25 (1H, s, -Cg-ND2), 5,77.(1H, d, 7-H), ca 5,8 (1H, m, =C§-CH2-), 6,20 (1H, Ö, 11 H2, -Q§=CH-CH2), 7,05 & 7,45 (vardera 2H, vardera d, H0-gg). 40 466 204 Exempel 18: Difen lmet 1-7 - D-2-(t-butoxikarbon lamino -2-( - hgdroxifenxll-acetamidgz-3-Å(2)-3-klor-1-propen-1-ylZ- 3-cefem-4-karboxylat (förening 18) En lösning av 5,0 (4,9 mmol) av föreningen 5 1 100 ml CHCl3 behandlades med en blandning av 2,9 ml (5,8 mmol) 2 N natriumhydroxid och 100 ml vatten 5 minuter vid rums- temperatur. Den organiska fasen separerades och tvättades med 50 ml vatten och 50 ml av en mättad natriumkloridlös- ning och torkades över vattenfritt natriumsulfat. Filtra- tet indunstades till ca 20 ml och 2,0 ml (25 mmol) klor- acetaldehyd tillsattes. Blandningen omrördes 30 minuter vid rumstemperatur och indunstades i vakuum. Den reste- rande sirapen kromatograferades på en kölonn av 100 g silikagel och eluerades med toluen-Ac0Et (3:1), varvid man erhöll den i rubriken angivna föreningen 18 (900 mg; 27%). ' NMR: 3 ppm 1,45 (9H, s, t-Bu), ca 3,3 (2H, m, 2-CH2), 3,5-4,0 (2H, m, -Qgz-Cl), 4,92 (1H, d, 5,0 Hz, 6-H), 5,12 (e_11i*,,-_~.,s;-,f_-G§_-8n;5f)i:,2._. oaf: f Äšf; (TH, d, 11 Hz, 3-C§=CH-CH2-), 6,63 & 7,10 (vardera 2H, vardera d, H0-gg-), 6,89 (1H, s, C§Ph2), 7,3 (10H, s, Ph).

¿CDC1 Avblockering av denna substans med TFA, såsom beskrivits i föregående exempel (exempelvis exempel 7, 11, etc.), gav 7-[Ö-2-amino-2-(p-hydroxifenyl)acetamidqf-3-[(2)- 3-klor-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-karboxylsyra.

Exempel 19: Difenylmety1-75-lb-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(p-hydroxi- fenyl)acetamidq]-3-IYE)-3-jod-1-propen-1-yl]-3-cefem-4- karboxylat (förening 19).

En blandning av 900 mg (1,3 mmol) av föreningen 18 och 590 mg (3,9 mmol) natriumjodid i 18 ml aceton omrördes 1 timme vid rumstemperatur. Efter avdrivning av lösnings- medlet upplöstes återstoden i 100 ml Ac0Et, tvättades i tur och ordning med vatten, en vattenlösning av Na2S203 och en vattenlösning av natriumklorid, torkades och in- 40 ' man: 6 °°°13"°2° -41 466 204 dunetades för erhållande av 1,02 g av den i rubriken an- givna föreningen. I - ppm 1,45 (93, e, t-Bu), ca 3,4 (28, m, 2-CH2), ca 3,8 (2H, m, -Cgz-I), 4,90 (1H, d, 5,0 Hz, 6-H), ,14 (1H, s, -Qg-ND-), 5,73 (1H, d, 7-H), ca 5,5-6,0 (1H, m, =C§-CH2-), 6,68 5 7,10 (vardera 23, vardera d, H0-Ph-1, 6,78 (1H, d, 15 Hz, 3-C§=CH-C82-), 6,99 (1H, 8, Q§Ph2), 7,35 (10H, s, Ph).

.- Exempel 20: _ _ Difenylmetyl-Zó-[Ö-2-(t-butoxikarbonylamino)-2:Yp-hydroxi- fenyl ) acetamidoj-s-[s- (111-1 , 2 , a-tria zo1-s-y1 ) 510-1 -propen- '1-1l7-3-cefem-4-karboxyíat (förening 20).

Till en lösning av 1,0 g (1,3 mmol) av föreningen 19 i ml etylacetat sattes 0,27 ml (3,8 mmol) propylenoxid och 19 ml 0,1'M (1H-1,2,3-triazol-4-yl)tiol i etylacetat.

Blandningen omrördes 30 minuter vid rumstemperatur och indunstades under reducerat tryck. Den resterande sirapen kromatograferades.på en kolonn av 50 g silikagel C-200-5 Demmönskade*prodfiktenzelueradesïmediCHCI¿~MeOH¥{ïGff[*'Vi för erhållande av 800 mg (83%) av den i rubriken angivna föreningen. Q man: 6°°°13*H2° ppm 1,45 (an, s, t-Bun, ca 3,3 (421, m, 2-CH2-'& -C§2-S-) 4,80 (1H, d, 5,0 Hz, 6-H), 5,20 (1H, s, -cg-nnq, 5,70 (m, (LJ-H), ca 5,95 (m, m, =c_1g-ca2-), 6,68 (2H, d, HO-åh-), 6,90 (1H, S, -C§Ph2), 7,25 (10H, S, Ph), 7,52 (1H, s, triazol-4-H).

Exempel 21: Z6¥[Û-2-amino-2-(p-hydroxifenyl)acetamido]-3-[13-(1H- 1,2,3-triazol-5-yl)tio-1-propen-1-ylZ-3-cefem-4-karboxyl- syra (förening 21, BB~S1091).

En blandning av 800 mg av föreningen 20 och 2 ml TFA hölls 1 timme vid rumstemperatur och indunstades därefter till torrhet. Till återstoden sattes isopropyleter för er- hållande av 600 mg av en;gulTfällning, som upplöstes i 1 ml vatten och applicerades på en HP-20-kolonn (100 ml).

Kolonnen tvättades med 500 ml vatten och eluerades med 40 -42 466 204 % Me0H och därefter med 50% Éeofl. Den fraktion som innehöll den önskade föreningen tillvaratogs, indunsta- destoch lyofiliserades för erhållande av 170 mg (33%) av den önskade produkten med en uppskattad renhet av 50% (enligt HPLC) och en smältpunkt av 180°C (sönder- delning).

KB: -1 IR: V max cm 3360, 3280, 1755, 1670. uv= Aflgifëtbüfert m: 1 zas (14100), zsz uzaoo). mun ADgÜDCI ppm ca 3,4 ma, m, z-cnf, -cgz-sfl, 5,43 (1H, å, 4,5 Hz, 6-H), 5,15 (1H, S, -Cg-ND2), ca 5,95 (2H, m, 7-H och ¶C§-CH2-), 6,70 a 7,15 (vardera 2H, var- dera d, H0-gh-), 8,75 (1H, s, triazol-4-H).

Exemgel 22: Benshydryl-Záïéfi;2-(t-butoxikarbonylamino)-2-fenylacet- amidQ]-3-(trifenylfosfonio)metyl-3-cefem-4-karboxyljodid (förening 22). m a e blandning, ; 1,4......ssngnzfncoz.gamer-Immuä.áníérmagfs; .w're-bufiøxikarbonyïaminof-æ-fënyïacetamiaojïßjodnetyïës- cefem-4-karboxylat och 5,24 g (0,02 mol) trifenylfosfin i 300 ml etylacetat omrördes 2 timmar vid rumstemperatur.

Till reaktionsblandningen sattes 200 ml eter för bildning av en fällning, som tillvaratogs genom filtrering och tvät- tades med eter för erhållande av 14,3 g (73%) av den i rub- riken angivna föreningen. Filtratet koncentrerades till 50 ml och koncentratet späddes med eter för erhållande av 2,4 g av en andra sats av produkten. Totalt utbyte 16,7 Q (85%).

IR: Ü :gi cm-1 1780, 1690, 1480, 1420, 1350, 1240, 1150.

Exemgel 23: Benshydryl-Z¿-[b-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-feny1acet- amidg]-3-112)-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-karboxylat (före- ning 23).

Till en lösning av 5 g (5 mmol) av föreningen 22 i 200 ml kloroform sattes en blandning av 100 ml vatten och 5 ml 40 'IJ (5 mmol) 1 N natriumhydrokid och blandningéhéäíahzdkg 3 ni- nuter. Det organiska skiktet separerades och tvättades ned vatten och en mättad natriumkloridlösning och torkade: över vattenfritt magnesiumsulfat. Kloroformlösningen filtrerade: och filtratet koncentrerades till 100 ml under reducerat tryck. Till koncentratet.sattes 3 ml acetaldehyd och bland- ningen omrördes 1,5 timmar vid rumstemperatur och indunsta- des till torrhet. Den oljiga återstoden kromatograferades på en kolonn av silikagel (Kiesel gel 60, S0 g) genom elu- ering medflkloroform. De önskade fraktionerna tillvaratogs och indunstades till torrhet och återstoden triturerades med n-hexan, varvid man erhöll 990 mg (31%) av'den i rubri- ken angivna föreningen 23.

Im våg; em* 11so,.171o, 1sso, 1s1o, 149o, 1360, 1240, 1210, 1150.

NMR: _3 ppm 1,3-1,5 (12n, m, -c-cga). 3,22 (zn, s, 2-5), 4,93 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,23 (1H, d, 8Hz, Cg-CO), 5,5-6,2 (3H, m, 7-H a-vinyl-H), 6,94 (1H, s, C§Ph), 7,2-7,5 (15H, m, fenyl-H). ' » Exempel 24: Natrium-ZA-[D-2-amino-fenylacetamidoZ-3-Å(Z) cefem-#*karboxylaüsfförenfngwätï*HE-Slgâšlåšä;1.y :V En blandning av 0,94 g (1,47 mmol) av föreningen 23 och 3 ml TFA omrördes 30 minuter vid rumstemperatur och späddes därefter med 50 ml av en 1:1-blandning av eter-isopropyl- eter för att avskilja ca 800 mg fällning, som tillvaratogs genom filtrering och upplöstes i 3 ml metanol. Till lös- ningen sattes 4,5 ml (4,5 mmol) 1 M natrium-2-etylhexanoat (SEB) i etylacetat och blandningen späddes i tur och ord- ning med 50 ml eter och 50 ml isopropyleter..Fällningen tillvaratogs genom filtrering, varvid man erhöll 710 mg av råprodukten 24, som upplöstes i.20 ml vatten och kromatogra- ferades på en kolonn under användning av 50 ml av fyllningen i en PrepPAK/C18-patron (Waters). Kolonnen eluerades med vatten och 10% metanol. De fraktioner som innehöll den önska- de produkten tillvaratogs; varvid övervakning skedde medelst HPCL, och koncentrerades till 5 ml och lyofiliserades för erhållande av 182 mg (31%) av den önskade produkten med smältpunkt 200°C. Uppskattad renhet 50% enligt HPLC.

KBr -1 IR: V max cm 1760, 1660, 1400, 1180, 1100. _ fosfatbuffert (pH 7) UV' 'amax 6 CDC1 nm ( ) 282 (5500). 'kpfäPeßêflí-B' l h 40 -44 466 204 nun, ¿°z° ppm 1,so (an, a,.s aš, -c-ena), 3,12 (13, a, 1s az, 2-a), 3,48 <1n, a, 1a Hz, 2-ap, s;o3 (13, a, 4,5 az, s-H), s,s2 (1s, a, 4,5 az, 1-uy, 5,93 (13, a, 1ouz, vlnyi- H), 5,2-5,8 (1H, m, vinyl-H), 7,41 (SH, s, fenyl-H).

Exemggl 25: Benshydryl-Zß-[b-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-fenylacet- am1aq]-3;[1ir-3-k1or-1-propen-1-y;1¿3-cefem-4-karb°xy1at (förening“25).

Till en_lösning av_2 g (2 mmol) av föreningen 22 i S0 ml kloroform sattes S0 ml vatten, som innehöll 2 ml (2 mmol) 1 N natriumhydroxid, och blandningen skakades 3 minuter.

Det organiska skiktet separerades och tvättades i tur och ordning med vatten och en mättad natriumkloridlösning.

Den torkade kloroformlösningen koncentrerades till 30 ml under reducerat tryck. Till koncentratet.sattes 2 ml klor- acetaldehyd och blandningen omrördes 1 timme vid rumstem- peratur, tvättades med vatten och därefter med en mättad natriumkloridlösning. Den organiska lösningen torkades ochßindunstadesmtmhlätorrhetæmnenfioliigimåtémstødenäklflkš3 matograferades på en kolonn av silikagel (Wake-gel C-200, 50 g) genom eluering med kloroform. De önskade fraktio- nerna tillvaratogs och indunstades till torrhet för erhål- lande av 534 mg av råprodukten.

IR: 9 ââš om-1 1780, 1710, 1660, 1500, 1490, 1360, 1240,' 1210, 1150.

Strukturen hos detta prov bekräftades ej på grund av dessi dåliga NMR-spektrum.

Exemgel 26: Natrium-Z8-(D-2-amino-2-fenylacetamido)-3-[(2)-3-klor-1- gropen-1-yl]-3-cefem-4-karboxylat (förening 26, BB-S1066).

En blandning av 472 mg (0,7 mmol) av föreningen 25 och 1,5 m1 TFA omröraes 1s minuter via 1o-1s°c och spaaaas med 30 ml av en blandning av eter och isopropyleter (1:1) för erhållande av 330 mg av en blekgul fällning, som till- varatogs genom filtrering. Till en lösning av fällningen i 40 -ca “ ; 466 204 3 ml metanol sattes 2 ml (2 mmol) SEB i etylacetat och blandningen späddes med 50 ml etylacetatfi Den erhållna fällningen tillvaratogs genom'filtrering och tvättade: med eter för erhållande av 244 mg râprodukt. En lösning av râprodukten i 10 ml vatten kromatograferades på en kolonn under användning av 50 ml av fyllningen i en PrepPAK~500/C18-patron (Waters). Kolonnen eluerades med vatten och 10% metanol. De önskade fraktionerna av 10% metanol kgmbinerades och koncentrerades till 5 ml samt lyofiliserades för erhållande av 60 mg av en fast pro- dhkt med smältpunkten 200°C (gradvis sönderdelning)., m: väg; om”. 1160, 1660, 1630, 1360, 1120, 1070.

Uv= Aš§§f“tb“ff°”t mn ( 1 243 (12100), zoosk (4200).

Exempel 27: lá:(D(-)-2-amino-2-fenylacetamido)-3-[(2)-1-propen-1-ylzz 3-cefem-4*karboxylsyra (förening 24, BB-S 1065, zwitter- jonform).

(Z) 1,5 g (2,34 mmol) difenylmetyl-77å-[Ö-2-(t-butoxikarbonyl- amino)-2-feny1acetamidq]-3-(1-propenyl)-3-cefem-4-karbo- xylat (förening 23) behandlades med 3 ml trifluorättiksyra och blandningen omrördes 20 minuter vid rumstemperatur och späddes med 100 ml eter för erhållande av 1,15 g (96%) av det orena trifluoracetatet av BB-S106S. m: vmax (mar) i om" 1760, 1670, 1200, 1130. vv; Amax (pH 'lzfosfatbuffel-t) 233 mn ( =s30o) 1,1 g (2,25 mmol) av trifluoracetatet upplöstes i 20 ml vatten och lösningen kromatograferades på en kolonn under användning av 100 ml av fyllningen i en prepPAK/C18-patron 2G 40 466 204 W -46 (Waters). Kolonnen eluerades med vatten, 10% metanol och ! metanol. Eluatet med 30% metanol koncentrerade: till ml. Den kristallina produkten avskildes. Brodukten till- varatogs och tvättade: med aceton och torkades i vakuum över fosforpentoxid för erhållande av 505mg (46%) ren BB-S 1065 (zwitterjonform) med smältpunkten 180-183°C (sönder- delning). Uppskattad renhet 95%.

IR: v max (KBr) i cm-1 1750, 1690, 1590, 1400, 1350. uv= A ma; (pa 7 fesfacbuffert) 282 nm ( =.asoo). una. 6(n2o+NaHco3) 1 ppm 1,58 (an, a, J=6 Hz, c-cH3), 3,3 (za, a, 2-H), s,o3 (1H, a, J=4,s az, 6-H), s,2o (1n, S, en-co), 5,1-5,8 (1H, m, cH=c), 5,63 (1n, a, J=4,s Hz, 7-H), ,92 (1H, d, J=12 Hz, CH=C), 7,4 (SH, s, fenyl-H).

Exemggl 28: D(-)fi2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(3-klor-4-hydroxifenyl)- ättiksyra (förening 28).

Eu>bEändningf*avm6*g~ffläfiäämdfiïäšfißïorfiêflfiyäroxifënyï*fl* glycin och 9,8 g (0,045 mol) di-t-butyldikarbonat i 120 ml av en 50% vattenlösning av tetrahydrofuran (TFA) innehål- lande 10 ml (0,07jmol) trietylamin omrördes 3 timmar vid rumstemperatur. Blandningen koncentrerades till 60 ml och koncentratet tvättades med eter. Vattenskiktet surgjordes med 6 N klorvätesyra och extraherades med 200 ml eter.

Extraktet tvättades med vatten och en mättad natriumklorid- lösning, torkades över magnesiumsulfat och indunstades till torrhet för erhållande av 10 g av en oljig aterstod, som icke solidifierade vid försök att triturera med eter- n-hexan.

Exemgel 29: senshydry1-z4¿¿b-2-(c-bueoxikarbenylamino)-2-(3-k1or-4- hydroxifenyl)acetamidgz-3-klormetyl=3-cefem-4-karboxylat (förenin¶'29). s 20"::=.f*> 40 HO e! Till en lösning av 6,2 g (0,015 mol) av föreningen 2 och 5,4 g 10,018 mol) av föreningen 28 i 150 ml torr IHF sattes 3,7 g (0,018 mol) DCC och blandningen omrör- des 1 timme vid rumstemperatur. Dicyklohexylkarbamid, som separerade under omrörning, avlägsnades genom filtrering och filtratet indunstades till torrhet. Aterstoden extra- herades med 200 ml etylacetat och extraktet tvättades med en vattenlösning av natriumbikarbonat, vatten och en mät- tad natriumkïoridlösning och torkades över magnesiumsulfat.

Filtratet indunstades till torrhet och den oljiga åter- stoden kromatograferades på en silikagelkolonn (Wako-gel C-200, 140 gl genom eluering med toluen-etylacetat (10:1).

Desönskaddïfraßtïoñernautiïfväratagsfiocäüfindunstädd¶%ttLfië“v”1 torrhet för erhållande av produkten 29.

IR: 9 max (KBI) i cm-1 1790, 1720, 1680, 1500, 1370, 1240, 1160.

Exempel 30: Benshydryl-Z5-jb-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(3-klor-4- hydroxifenyl)acetamidgZ;3-(trifenylfosfonio)metyl-3-cefem- 4-karboxylatjodid (förening 30). 1 s - so 'zcows- l/ ' . a e Na ._11 cssfc s 2 1 cf l / i s s a co cm: 2 3 s _.

Till en lösning av 10 g (0,0143 mol) av föreningen 29 i 100 ml aceton sattes 11,2 g (0,075 mol) natriumjodid och blandningen omrördes 30 minuter vid rumstemperatur. Bland- ningen koncentrerades till 30 ml. Till koncentratet sattes 200 ml etylacetat och blandningen tvättades med en vatten- 'G5 466 204 lösning av Na2S203, vatten och'en mättad natriumklorid- lösning och torkades över magnesiumsulfat. Btylacetatlös- ningen filtrerades och filtratet koncentrerades till halva volymen. Till koncentratet sattes 3,9 g 10,015 mol) tri- fenylfosfin och blandningen omrördes 2 timmar vid rumstem- peratur. Till lösningen sattes 300.ml eter.för separation av en fällning, som tillvaratogs genom filtrering och torkades för erhållande av 9,2 g av fosfoniumjodiden 30. m. v max (xar) 1 en* 1180, 1sso, 1490, 1350, mo, 11so.

Exempel 31: . __ senshyaiyi-vßzb-z- (t-butoxikarbonylamino) -2- (a-klor-ia- hydroxifenyl)acetamidq]-3-IYZ)-1-propen-1-yl)-3-cefem-4- karboxylat (förening 31).

I i 'H0 aco ___-rs f _ fm m. si” _ | of" / cs=cscs3 _ (z) ”za (C535) 2 En'lösning=av“9)5*gfFäömmolffavfföreningéno30”i@200"m1'* kloroform beskiktades med en blandning av 100 ml vatten och 10 ml 1 N natriumhydroxid och blandningen skakades 3 minuter. Det organiska skiktet tvättades med vatten och en mättad natriumkloridlösning, torkades över magne- siumsulfat och koncentrerades till ca halva volymen. Till koncentratet sattes 20 ml 90% acetaldehyd och blandningen omrördes 3 timmar vid rumstemperatur, behandlades med vat- 1 tenfritt magnesiumsulfat och filtrerades. Filtratet in- dunstades till torrhet och återstoden kromatograferades på Kiesel gel 60 (Merck, 120 g) genom eluering med toluen- etylacetat (4:1). De önskade fraktionerna tillvaratogs §~ och indunstades till torrhet och återstoden.triturerades med en blandning av eter, isopropyleter och n-hexan för erhållande av 1,33 g av den blockerade produkten 31.

TR: 9 ax (KBr) i cm-1 1770, 1700, 1660, 1480, 1350, 1210, 1150. m "13 n' 466 204 Exemgel 32: 7 D-2-amino-2-(3-klor-4-h droxifen 1 abetamid -3- (2 -1- ro en-1- -3-cefem-4-karbo ln ra (förenin 32, BMY28060) a I Hcoxva...__.(s i N32 cl U cfV"N 1” g; - 1 028 BICHCE3 En blandning av 1,33 g (1,93 mmol) av föreningen 31 och 3 ml trifluorättiksyra omrördes 30 minuter vid rumstem- peratur och blandningen späddes med 50 ml eter-isopropyl- eter (1:1) för erhållande av 1,072 g av trifluoracetatet av föreningen 32 som en råprodukt, som kromatograferades på en kolonngfylld med fyllningen i en prepPAKfC18- patron (Waters).(80 ml). Kolonnen eluerades med vatten och 10% metanol. Eluatet med 10% metanol koncentrerades till 10 ml av volymen för att separera en kristallin fäLIning¿;somßfliklvaratogsçgenamwfiiltneringgochrtmäfltasna” des med aceton och torkades i vakuum över fosforpentoxid för erhållande av 238 ml av föreningen 32 (renhet 95%) med smältpunkten 180-18S°C (gradvis sönderdelning). Fil- tratet koncentrerades till 5 ml och lyofiliserades för erhållande av 154 mg av en andra sats, som hade en ren- het av 80% enligt HPLC.

IR: v (xßrx 1 cm'1 max 1760, 1680, 1570, 1410, 1390, 1350, 1290, 1270. vv: A max (pa 7 føsfotbuffert) 1 um K ) 232 (1oooo), zso (1osoo). nun: ¿(n2o + NaHco3) 1 ppm 1,66 (au, d, J=s Hz, c=c-CH3), 3,25 (1H, a, J=1s Hz, 2-H) 3,57 (1H, a, J=1s Hz, 2-H), 4,90 (1n, S, ca-co), 5,18 (1n, a, J=4,5 Hz, 6-H), 5,72 (1n, d, J=4,s az, 7-H), 5,5-5,9 (1H, m, cH=c), 5.97 (1n, d, J=12 Hz, cH=c). 7,02 (1H, d, J=s az, fenyl-H), 7,30 (1n, a-a, J=a a 1,5 Hz, fenyi-H), 7,50 (1n, d, J=1,s Hz, fenyl-H). vi 40 466 204 *50 Exemggl 33: _ n (- ) -2- (t-bueøxixarbonylamino) -z- (s, 4-alnyarexifeny1 ) - ättiksyra'(33a) blandning med 6688 3-Joch 4)-mono-O- butoxikarbonyl-derivat (33b).

En blandning av 3,66 g (0,02 mol) 3,4-dihydroxifenyl- glycin och 9,24 g (0,04 mol) di-t-bytyldikarbonat i 120 ml av en 50% vattenlösning av THF innehállande 10 ml (0,071 mol) trietylamin omrördes 16 timmar vid rumstem- peratur och blandningen koncentrerades till_60 ml. Kon- centratet tvättades med 100 ml eter, surgjordeš med' 1 N klorvätesyra och extraherades med 100 x 2 ml eter.

De kombinerade extrakten tvättades med vatten och en mät- tad natriumkloridlösning, torkades med magnesiumsulfat och indunstades till torrhet för erhållande av 8 g av en oljig återstod, som var en blandning av det önskade 3,4- dihydroxifenylderivatet och de 3- och 4-mono-O-BOC-skyd- dade derivaten (BOC avser t-butoxikarbonyl).

Exemgel 34; Benshydryl-15% dihydroxifenyl)acetamidgZ;§-klormetyl-3-cefem-4-karbo- gylat (34a) och blandning av dess 3-(och 4-)mono-0- butoxikarbonyl-derivat (34b).

I conn---Ä|/s - na __w HO I 6, / cazc: BO CO (CS ) , - f 3 3 cozcs (csxslz En blandning av 8 g (0,0193 mol) av föreningen 2, 8 g av blandprodukten enligt exempel 33 och 4,12 g (0,02 mol) DCC i 200 ml torr THF omrördes 1 timme vid rumstempera- tur. Reaktionsblandningen indunstades till torrhet. Ater- stoden upplöstes i 200 ml etylacetat och olösligt mate- rial (dicyklohexylkarbamid) avlägsnades genom filtrering.

Filtratet tvättades med en vattenlösning av natriumbi- karbonat, vatten och en mättad natriumkloridlösning, tor- kades över magnesiumsulfat och indunstades till torrhet nxëi-ßfrff-z-'ffiefi-sufoxfxersonyramsneffi-Wessmang_ 1 3-5 40 ~ under reducerat tryck. Den oljiga återetodeí qcêomgtgoârafe- rades på en eilikagelkolonn (Kiesel gel 60, 130 9) genom eluering med toluen-etylacetat (5:1) ocfl toluen-etylacetat (2:1). Eluatet med toluen-etylacetat (5:1) tillvaratogs och indunstades till torrhet för erhållande av 9,5 g av en blandning av de tvifaldigt skyddade mono-O-BOC-N-BOC- derivaten (34b). Eluatet med toluen-etylacetat (2:1) till- varatogs och indunstades till torrhet för erhållande av 3 g av 3,4-dihydroxifenylderivatet (34a). p: FöreningÉ34a: , -1 IR. v max (KBr) i om 1170, 1720, 1690, 1soo,“137o, 1240, . 11so. nun, ¿(cnc13; 1 ppm 1,42 (su, 5, c-ca), 3,4 (za, br-S, 2-ny, 4,30 (zu, br-s, cnz-c1), 4,es <1n, a, J=4,s Hz, s-H), 5,07 (1n, a, J=s az, cg=Nn), 5,14 (1u, a-a, J=9 r 4,5 az, 1-ny, l6,6-6,9 (3H, m, fenyl-H), 6,93 (1H, S, CHPh), 7,3 (10H, S, fenyl-H).

Blandning 34b: In: v max (nar) 1 cm'1 177o, 1720, 1690, 1soo, 1370, 1240, 1150. ,.&í,fcncr¿)' i'f-ppm~,,,...1+;4:2~" “<.¿'9~n=»,~::_..,;*;e,¿. fc-cnf¿.r<,afv_~1,;~, fc-f» ; - CH3), 3,4 (2H, br-s, 2-H), 4,35 (ZH, br-s, CH2-Cl), 6,9- 7,1 (4H, m, CHPh & fenyl-H), 7,3 (10H, s, fenyl-H).

Exemggl 35: ßensnyaryl-¶¿§¿§¿-)-2-(t-but°x1karbony1am1no)-2-43,4-a1- gydroxifenyl)acetamidq]-3-trifenylfosfoniometyl-3-cefem- 4-karboxylatjodid (35a). s A ' H0 acoNa-m-f ~ : 5 9 I .

Ta --N /,/ 'C32P(C6E5)3 I /' ao _ 6' coc(cH J 2 3 3 . co2cs(c625)2 En blandning av 3 g (4,4 mmol) av föreningen 34a och 3,3 g (22 mmol) natriumjodid i 50 ml aceton omrördes 30 minu- ter vid rumstemperatur och blandningen koncentrerades till torrhet. Återstoden extraherades med 100 ml etylacetat och extraktet tvättades med en vattenlösning av Na2S203, vat- ten och en mättad natriumkloridlösning. Efter torkning med magnesiumsulfat koncentrerades extraktet till 60 ml. 40 466 204 Till koncentratet sattes 1,4 g;(S,3 mmol) trifenylfosfin och blandningen omrördes 1 timme vid rumstemperatur. Till blandningen sattes 100 ml eter för avskiljning av en fäll- ning, som tillvaratogs genom filtrering och tvättades med eter, varvid man erhöll 3,2 g (70%) av fosfoniumjodiden (35a).

IR: v max (KBr) i cm'1 1780, 1680, 1480, 1430, 1360, 1240, 1150.

Medelst ett liknande förfarande omsattes 9,5 g (12 mmol) av blandningen av mono-O-BOC-skyddade derivat (34b) med natriumjodid och därefter med trifenylfosfin, varvid man erhöll 10,7 g (77%) av en blandning av motsvarande mono- O-BOC-N-BOC-trifenylfosfoniometylderivat (35b).

IR: 1 max (KBr) i cm-1 1770, 1720, 1680, 1480, 1430, 1360, 1240, 1140.

Exempel 36: Benshydryl-7é-[D(é)-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(3,4-di- hydroxifenyl)acetamidgzzåzllg)-1-propen-1-yl7-3-cefem-4- karboxylàt (förening 36a),p_g / =czacs3 (z) ”za (C635) 2 Till en omrörd lösning av 3,15 g (3 mmol) av föreningen 35a och 10 ml acetaldehyd i 50 ml kloroform sattes dropp- vis 8 ml (4 mmol) 0,5 N natriumhydroxid under 10 minuter och blandningen omrördes 1 timme vid rumstemperatur. Reak- tionsblandningen tvättades med vatten och en mättad nat- riumkloridlösning, torkades över magnesiumsulfat och in- dunstades under reducerat tryck. Den oljiga återstoden kromatograferades på en silikagelkolonn (Wako gel C-200, 60 g), som eluerades med 2 1 kloroform och 2% metanol i kloroform under övervakning medelst TLC (kloroform: metanol = 10:1). De önskade fraktionerna från eluatet med 2% metanol tillvaratogs och indunstades till torrhet m' 40 “ÖJ 466 204 för erhållande av 0,8 g (40%) av propenylderivatet 36a. man: 6(coc13) 1 ppm 1,26 (aa, a, a-s az, c-çHB), 1,42 (9a, a, c-ca3), 3,25 (za, a, z-a), 4,92 (1a, a, a-4,s az, .s-a), s,oe (m, a, J=s az, cg-ua), s,a-s,a (m, m, ca-m, s,ao (m, a, J=4,s az, 'z-a), 6,04 (mha, .m1 az, ca-c), 6,10 (za, a, faayi-a), 6,32' (m, s, fanyl-a), 6,92 (m, s, CHPh), 7,3 (108, s, fenyl-H).

Medelst ett förfarande liknande det ovan beskrivna omsat- cas 1o,s¿'g (9,3 m1) av biananiagan av aa tvåa-mama saya- dade 3-/och 4-0-BOC-N-BOC-derivaten 35b med acetaldehyd för erhållande av 3,3 g (46%) av motsvarande 3-propenyl- derivata36b.

IR: 9 max (KBr) i cm- 1770, 1700, 1500, 1370, 1240, 1150.

NMR: å(DCD13) i ppm 1,4 (911, s, C-CH3), 1,55 (9H, s, C-CH3), 3,25 (2H, S, 2-H), 6,07 (1H, d, J-11 Hz, CH=C), 6,9-7,1 (4H, m, CH-Ph 5 fenyl-H), 7,3-7,5 (10H, m, fenyl- H). 1 Exemgel 37: -[Ö1f1fi2*amifiO-2*" T-propen-1-yli?3-cefem>4-karboxylsyra (förening 37,"ÉåY- 28068).

I .I ncoaa- s . ao I _ _ na 47-N I/ =CBCB3 (Z) o _ H0 En blandning av 0,8 g (1,2 mmoll av_föreningen 36a, 0,8 ml anisol och 3 ml trifluorättiksyra omrördes 5 minuter vid rumstemperatur och späddes med 25 ml eter och 25 ml isopropyleter. Den erhållna fällningen tillvaratogs genom filtrering och tvättades med isopropyleter för erhållande av 557 mg av det orena trifluoracetatsaltet av föreningen 37. En lösning av råprodukten i 10 ml vatten renades ge- nom kolonnkromatografering under användning av 100 ml av fyllningen i en prepPAK-C18-patron (Waters) och kolonnen elüerades 1 tur och ordning med vatten och 5% metanol. 40 -54 466 204 Eluatet med 5% metanol innehållande den önskade produkten koncentrerade: till 5 ml och lyofiliserades för erhållan- de av 231 mg (47t) av föreningen 37 (zwitterjonform, ren- het 90%) med.smältpunkten 200°C. (Gradvis sönderdelning).

IR: 9 max i cm-1 1760, 1690, 1580, 1530, 1400, 1360, 1290, 1270.

UV: Ruax (pH 7 fosfatbuffert) i nm () 233 (9200), 281 (11000). g NHR: 6(B¿0) i ppm 1,68 (3H, d, J=6 Hz, C-CH3), 3,26 (1H, a, J=1s Im, z-H), 3,58 (m, a, J=1s az, 2-H),i_s,1s (m, s, egna), 5,22 un, a, J=4,s Hz, s-m, s,s-s,9 (zâ, m, cn=c a. 7-21), 5,97 (m, d, J=11 Hz, cH=c), 7,05 (311, m, fenyl-H).

Enligt ett liknande förfarande gav 3,3 g (4,3 mmol) av den N,O-di-t-BOC-skyddade derivatblandningen 36b 1,3 g (75%) av föreningen 37 i zwitterjonformen (renhet 90%), som uppviaade spektraldata, vilka var identiska med de ovan angivna. 1 Exempel 38; vf-ï -'241%:nmoxixearsanynsafiinnya»zwflwfiyaeuxf-iaë-meeaxiie -i ' fenylï-ättiksyrai(förening'38).

BO CHCOZH fí-í-u. .f 0 I :B30 co zc (cs a)a_ En blandning av 2,96 g (0,015 mol) D(-)-2-amino-2-(4- hydroxi-3-metoxifenyl)ättiksyra och 3,6 g (0,0165 mol) di-t-butyldikarbonat i 100 ml av en 50% vattenlösning av THF innehållande 4,2 ml (0,03 mol) trietylamin omrördes 16 timmar vid rumstemperatur och reaktionsblandningen. koncentrerades till 50 ml. Koncentratet tvättades med 50 ml eter, surgjordes med 1 N klorvätesyra och extrahe- rades 2 gånger med 100 x 2 ml eter. De kombinerade extrak- ten tvättades med vatten och en mättad natriumkloridlös- ning. De torkade extrakten indunstades till torrhet för erhållande av 4,38 g av föreningen 38 som ett skummigt fast material. n...- . -.~.... ..._.... ._ ._ 466 204 man: 6(coc13) 1 ppm 1,4 (sa, s, -c-cga), 3,8 (an, s, d; H2 s; Exem2g1e39: aenshyaryl-vrß-jb 0-1 -2- (t-butøxikarbonylaming -2- (4- hydroxi-3-metoxifenyl)-acetamidq]-3-klormetyl-3-cefem- 4-karboxylat (förening 39). s 1 ao _ lacona-fl-f ' . rr'- " c” cl E. / f / ”2 °B3° cozc (C23) 3 cozcs (essä) 2 En blandning av 4,3 g av föreningen 38,.5 g (0,012 mol) av föreningen 2 och 3 g 10,015 mol) DCC i 150 ml torr THF omrördes 2 timmar vid rumstemperatur. Den utfällda karb- amiden avlägsnades genom filtrering och filtratet indunsta- des till torrhet. En lösning av återstoden i 200 ml etyl- acetat tvättades med en vattenlösning av natriumbikarbonat och~ennmättadmnatriumklonidhösningm»torkadesmöverwmagnewwa__ siumsulfat och indunstades till*torrhet; Den oljïga åter* stoden kromatograferades på en silikagelkolonn (Kiesel gel 60, 100 g), som eluerades med toluen-etylacetat (4:1) under övervakning medelst TLC (toluen-etylacetat (1:1) eller kloroform-metanol (50:1)). De önskade fraktionerna tillvaratogs och indunstades till torrhet för erhållande av 7 g av den önskade 3-klormetyl-cefem-föreningen 39 som ett skummigt fast material.

NMR: Ä i ppm 1,4 (9H, s, C-CH3), 3,45 (2H, br-s, 2-H), 3,83 (3H, s, OCH3), 4,32 (2H, s, -CH2C1), 4,92 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,13 (1H, d, J=6 Hz Cg-NH), 5,65 (1H, d, J=6 Hz, NH), 5,80 (1H, d-d, J=8 & 4,5 Hz, 7-H), 6,85 (3H, s, fenyl-H), 6,95 (1H, s, CH-Ph), 7,2-7,5 (10-H, m, fenyl-H). 40 466 204 Exemggl 40:_ _ 3engnydry1-z¿-[b(-)-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(4- nydroxi-3-metoxifenyl)-acetamid -3-trifen lfosfonio- metyl-3-cefem-4-karboxylatjodid (förening 40). s 80 acoNs--q/ :E Q e / __ I ä-fl / cazrtcsash 1 3 . co2c(cs3)3 .« coz-cr-:tcssyz f En blandning av-7 g (0,01 mol) av föreningen 39 och 7,5 g (0,05 mol) natriumjodid i 100 ml aceton omrördes 30 mi- nuter vid rumstemperatur och indunstades till torrhet.

En lösning av återstoden i 200 ml etylacetat tvättades med en vattenlösning av Na2S203, vatten och en mättad natriumkloridlösning, torkades med magnesiumsulfat och koncentrerades till 100 ml. Till koncentratet sattes 3,1 g (0,012 mol) trifenylfosfin och blandningen omrör- des 1 timme vid rumstemperatur. Till reaktionsblandningen Sàttaäwïüfl*mßletënßOflüflåetïEtfiäšiåäåfflfifiåímäfiéßiâfiëäåtåïïëï' varatogs genom filtrering, tvättades med eter och torka- des för erhållande av 5,8 g av trifenylfosfoniumderiva- tet 40. Eterfiltratet koncentrerades till 10 ml och till koncentratet sattes 30 ml eter för erhållande av 0,9 g av produkten som en andra sats. Totalutbytet var 6,7 g.

Exemgel 41: senshyaryl-vß-[a (- > -2- (t-butoxikarbonylamino) -2- whyaroài- -3-metoxiïenyl-acetamidq)-3-lïz)-1-propen-1-yL]-3-cefem- '4-karboxylat (förening 41). f s ao lacom--j/ g . ns °' J: ' =csc2 (2): .cs/o | / 3 f s co2c(cs3)3 cozcszcssshz Till en omrörd blandning av 5,8 g (5,5 mmol) av föreningen 40 och l0 ml 90% acetaldehyd i 100 ml kloroform sattes .........:..'..;.._._...,.._.,!,. '^ 40 '57 466 204 droppvis 11 ml (5,5 mmol) 0,5 N natriuhydroxid under minuter och blandningen omrördes 2 timmar vid rums- temperatur. Reaktionsblandningen tvlttadel med vatten, därefter med en mättad natriumkloridlösning, torkades över magnesiumsulfat och indunstades till torrhet. Den oljiga återstoden kromatograferades på en silikagelkolonn (Kiese1 gel 60, 130 g) genom eluering med en blandning av toluen och etylacetat (förhållandet ändrades stegvis; 4:1 (1,3 l), 3:1 (1,1 1), 2:1 (1,0 l))roch eluatet till- varatogs i fraktioner om 20 ml. Fraktionerna 26-S9 kom- binerades och indunstades till torrhet för erhållande av 830 mg av den önskade 3-propenylföreningen 41 som ett skummigt fast material.

NHR; §(CDCl3) i ppm 1,35 (3H, , =CH-CÉ3), 1,4 (9H, S, C-CH3) 3,85 (3H, s, O-CH3), 6,07 (1H, d, J=11 Hz, -CH=C).

Exemgel 42: 7§-¿D(-)-2-amino-2-(4-hydroxi-3-metoxifenyl)acetamidq7- 3-[(2)-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-karboxylsyra (förening 42, BMY-28097). f (Z) En blandning av 830 mg (1,2 mmol) av föreningen 41, 0,5 ml anisol och 2 ml trifluorâttiksyra omrördes 5 minu- ter vid rumstemperatur och blandningen späddes med 30 ml eter och 30 ml isopropyleter. Den erhållna fällningen tillvaratogs genom filtrering, tvättades med isopropyl- eter och torkades för erhållande av 437 mg av det orena trifluoracetatet av föreningen 42. Râprodukten kromato- graferades på en kölonn fylld med 100 ml'av fyllningen i en prepPAK-C18-atron (Waters), som eluerades med vatten och 5% metanol. Eluatet med 5% metanol koncentrerades till ml och lyofiliserades för erhållande av 225 mg av före- ningen 42 (zwitcerjon, renhet eos). sma1tpunkt 116-1ao°c (sönderdelning). 40 466 204 'I -58 IR: max 1 cm'1 1760, 1690, 1090, 1530, 1400, 1360, 1280.

UV: Q max (pH 7 fosfatbuffert) 1 nm ( ) 235 110000), 280 (11000). ma; 6 (nzo) 1 ppm 1,55 (an, a, a-enz, c-cn3), 3,25 un, d, J=18 Hz, 2-H), 3,57 (1H, d, J=18_Bz, 2-H), 4,01 (3H, a, ocua), 5,10 (m, a, cu-co), 5,19' nu, a, J=4,s az, s-n), ,78 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,5-5,9 (1H, m, CH=C), 5,98 (1H, d, J=11 Hz, CH=C), 7,07 (23, s, fenyl-H), 7,17 (1H, br-s, fenyl-H).

HPLC: retentionstid 9,3 min. (0,02 M acetatbuffert (pH 4) innehållande 15% acetonitril).

Exemggl 43: Isolering av förening 42 från urinen från råttor till vilka föreningen 37 har administrerats.

Sex Wistar-râttof (400-600 g) av hankön infördes i meta- bolismkorgar av stål efter oral administrering av före- ningen 37 i en dos av 100 mg/kg och urinen tillvaratogsg underïen”fiidPav'2&“timmärhäRåftórfiäáutfdrdradsfimeäkäínäfl. normala diet och tillfördes vatten under försöket. Föl- jande tabell visar volymen urin som tillvaratogs vid olika tidpunkter. 0-2' 2-4 4-6 6-24 totalt timmar Urdnvølym lml) 18 19,5 “13'- '42 92,5 Urinen (ca 90 ml) inställdes på pH 3 med 1 N klorväte- syra och filtrerades för avlägsnande av en fällning. Fil- tratet kromatogfafërades på en kolonn fylld med 300 ml HP-20 genom eluering-med 2 L vatten-och 2 1-30% metanol under övervakning medelst HPLC. De fraktioner som inne- höll de bioaktiva komponenterna av eluatet med 30% meta- nol tillvaratogs, koncentrerades till 10 ml och lyofili- serades för erhållande av 390 mg av ett brunt fast mate- rial. En lösning av det fasta materialet i 20 ml vatten kromatograferades på en kolonn fylld med 200 ml av fyll- ningen från en prepPAK-C18-patron (Waters) genom elüering i tur och ordning med vatten, 5% metanol och 10% metanol.

Den första hälften av eluatet med 5% metanol koncentrera- -ss 466 204 des till 5 ml och lyofiliserades för erhållande av 44 mg av föreningen 37 (renhet 70%) innehållande föroreningar hårrörande från urinen. Den andra hälften av eluatet med % metanol koncentrerades till 5 ml och lyofiliserades för erhållande av 36 mg produkt, som var en blandning av förening 37, förening 42 och föroreningar härrörande från urinen. Eluatet med 10% metanol (ca 600 ml) koncentrera- des till 5 ml och lyofiliserades för erhållande av 38 mg av föreningen 42 170% renhet enligt HPLC), som återhroma- tograferades på en kolonn med samma fyllning som ovan (40 ml)fgenom eluering med vatten, 5% metanol öch 10% metanol. De önskade fraktionerna, som eluerades med 10% metanol, kombinerades och koncentrerades till 5 ml och lyofiliserades för erhållande av 16 mg av föreningen 42, som hade en renhet av 90% enligt HPLC (0,02 M acetat- buffert (pa 4)-aceten1tr11 (asnsvsmaltpunxt 1so°c (gradvis sönderdelning). m: v max (mar) i cm" 17so, 1e9ø, 1590, 1s3o, 1400, 1360, 1280. uv: lmaxg (pa 1 fosfatbuffert) 1 mn ( 1» 233 (szoo). zao 188001;-~“f nun: 6 (D20) 1 ppm 11,68 (an, a, J=s az, -c-cHB), 3,26 (1H, d, J=18 Hz,-2èH), 3,58 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 4,01 (3H, S, OCH3), 5,12 (1H, s, CH-CO), 5,21 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,78 (1H, d, J=4,S Hz, 7-H), 5,5-5,9 (1H, m, CH=C+)f ,98 (1H, d, J=11 Hz, CH=C), 7,07 (2H, s, fenyl-H), 7,17 (1H, br-s, fenyl-H).

Metabolitens struktur fastställdes som 7å-[Ö(-)-2-amino- 2-( 4-hydroxi-3-metoxifenyl)acetamidq]-3-[YZ)-1-propen- 1-yl]-3-cefem-4-karboxylsyra genom jämförelse (NMR, IR, UV, HPLC) med föreningen 42 framställd medelst förfarandena 38-42.

Claims (1)

1. - eo 466 204 PATENTKRAV Föreningar med formeln (i) n 2 u 1 _ ÉÜP /f-N ,/ ca-caa3 _ al ' ! cozrz § med z(cis)-konfiguration vid den exocykliska dubbelbindningen, i vilkenríormelfif f n är-heltalet 0 eller T; R1 är väte, OP3, lägre alkoxi eller halogen; P1, P2 och P3 är konventionella skyddsgrupper, som används inom cefalosporinkemin respektive med amino-, karboxi- och hydroxigrupper; R2 är väte OP3 eller lägre alkoxi; och R3 är c1_4-aikyl, c7_14-araikyi eller Alkx, där Aik är alkyliaen eller alkylen innehållande 1-4 kolatomer och X är brom, klor eller jod.