SK61684A3 - D-2-aminoacyl-3-(z)-propenyl cephalosporine derivatives, a method of preparation and pharmaceutical compositions containing the same - Google Patents

Description

Vynález sa týka skupiny cefalosporinových derivátov, j- obsahujúcich 3-(Z)-1-propenylovú a 7-fenylglycylamidovú skupinu, z ktorých posledne menovaná môže byť substituovaná, spôsobu ich výroby a spôsobov liečenia bakteriálnych infekcií s použitím týchto látok.

Doterajší stav techniky

3-alkenylsubstituované deriváty cefalosporinu popísali prvýkrát Clark a spol. v britskom patentovom spise 1 342 241 (03.01.1974), zodpovedajúcom americkým patentovým spisom 3 769 277 a 3 994 884 (30.10.1973 a 30.11.1976). Na str. 25 a 29 * uvedeného britského spisu sú popísané zlúčeniny vzorcov IV a V

COOH (IV)

Tieto zlúčeniny sa pripravujú reakciou zodpovedajúceho 3trifenylfosfóniummetylcefalosporínového derivátu s formaldehydom alebo acetaldehydom. ' Obrátený postup, pri ktorom sa vykonáva reakcia fosforanylidinového derivátu všeobecného vzorca

R₃P = CR³R⁴ s cefalosporinovým derivátom s formylovou skupinou v polohe -3-, je v tomto patentovom spise popísaný tiež, a to na str. 5. V americkom patentovom spise 4 107 431 je uvedené, že sa zlúčenina vzorca IV pri orálnom podávaní absorbuje.

Zlúčeniny tohto typu tiež popísali Webber a spol. v J. Med. Chem. 18, 986 - 992 (1975) a v americkom patentovom spise 4 065 620 (27.12.1977), kde je v stĺpcoch 3, 4 a 5 uvedená skupina látok, do ktorej spadajú i popisované zlúčeniny. Tieto látky zodpovedajú ďalej uvedenému všeobecnému vzorcu VI

COOH

CH=CHCOOH (cooc₂h₅) (CN) (VI)

Ďalšie obmeny látok tohto patentových spisoch 4 094 978 (09.09.1978) s tiež tam uvedenými typu sú popísané v amerických (13.06.1978) a 4 112 087 zlúčeninami všeobecných vzorcov

VII a VIII

s

COOH (VII) (americký patentový spis 4 094 978, stĺpec 44)

COOH

CH=CHCH₂OCH₃ (trahs) (VIII) (americký patentový spis 4 112 087, stĺpec 31).

Ďalšie substituované 3-alkenylcefalosporinové deriváty sú popísané v nasledujúcich patentových spisoch: americké patentové spisy: 3 830 700 (20.04.1974), 3 983 113 (28.09.1976), 4 049 806 (20.09.1977), 4 139 618 (13.02.1979), 4 147 863 '(03.04.1979)

3-(heterocyklotio)-propenylcefalosporíny, DE-OS 3 019 445 (12.1980), francúzsky patentový spis 2460 302 (23.01.1981), Európsky patentový spis 30 630 (24.06.1981), americké patentové spisy 4 255 423 (10.03.1981), 4 390 693 (28.06.1983).

Základnými komerčne dostupnými cefalosporinovými derivátmi s účinnosťou pri orálnom podávaní (s týmto použitím sa ráta i v prípade zlúčenín podľa tohto vynálezu) sú cefalexín, cefadroxil, cefradín a cefaclor. Tieto látky zodpovedajú vzorcom

IX, X, XI a XII:

COOH

R = H (cefalexin, IX)

R = OH (cefadroxil, X)

O

COOH cefaclor (XI)

COOH cefradin (XII)

Tieto zlúčeniny sú predmetom ďalej uvedených spisov: americký patentový spis 3 507 861 (21.04.1970) - cefalexín,

489 752 (13.01.1970) - cefadroxil, 3 925 372 (09.12.1975)

- cefaclor, 3 485 819 (23.12.1969) - cefradín.

Štruktúrne príbuzné látky, ktoré boli tiež popísané, sú 3chlórcefadroxil a 3-hydroxycefadroxil (americký patentový spis 3 489 751, 13.01.1970) a britský patentový spis 1 472 174 (04.05.1977).

Podstata vynálezu

Predmetom tohto vynálezu sú D-2-aminoacyl-3-(Z)-propenylcefalosporínové deriváty všeobecného vzorca I, spôsob ich výroby a farmaceutické prípravky, ktoré tieto zlúčeniny spolu s nosičmi a prísadami obsahujú.

COOH kde

R¹ znamená vodík, skupinu hydroxylovú alebo alkoxylovú s jedným až štyrmi atómami uhlíka alebo chlór, znamená vodík alebo hydroxylovú skupinu, ako i zodpovedajúce deriváty, kde aminoskupina, ďalej a/alebo hydroxylová je chránená skupinami, vybranými zo súboru, skupina karboxylová bežnými chrániacimi zahrňujúceho skupiny aralkylové až do skupina benzylová, alkylové - až do dvadsiatich uhlíkových atómov, hlavne p-metoxybenzylová či difenylmetylovú, desiatich atómov uhlíka, hlavne terc.-butylová alebo halogénalkylové skupiny až do dvoch uhlíkových atómov a s až do troch atómov halogénov, hlavne skupina trichlórmetylová a 2,2,2-trichlóretylová.

Tieto látky a ich farmaceutický vhodné soli sú zaujímavé ako cefalosporínové antibiotiká s účinnosťou pri orálnom podávaní a vyznačujú sa silnou účinnosťou voči gram-pozitivnym baktériám a zlepšeným spektrom účinnosti proti gram-negatívnym baktériám, ďalej rôznym druhom baktérií, vyvíjajúcich sa len za určitých podmienok, i voči anaeróbnym organizmom, v porovnaní s cefalexínom, cefadroxilom, cefaclorom a cefradínom. Tieto nové zlúčeniny zaisťujú po orálnom podaní dlhodobo antibiotický účinnú koncentráciu príslušnej látky v krvi a možno ju podávať v tomto zmysle v lekárskej praxi ľuďom raz až dvakrát denne. Uvedené zlúčeniny sa aplikujú v denných dávkach od 100 mg do 5 000 mg v závislosti od hmotnosti pacienta a od druhu i rozsahu choroby. Látky možno podávať i parenterálne.

Farmaceutický vhodné adičné soli s kyselinami sú tie soli, ktorých anión neprispieva nijako k toxicite soli a ktoré sú kompatibilné s bežnými farmaceutickými nosičmi a pomocnými látkami s tým, že ich možno upravovať do formy prostriedkov na orálne alebo parenterálne podávanie. Patria sem soli minerálnych kyselín, ako je kyselina chlorovodíková, bromovodíková, fosforečná a sírová, z organických karboxylových kyselín octová, citrónová, maleinová, jantárová, benzoová, vínna, fumarová, mandľová, askorbová, jablčná, metánsulfónová, p-toluénsulfónová, ba i sulfónové organické kyseliny ako sa bežne používajú v chémii penicilínov a cefalosporínov. Takéto soli sa pripravujú celkom bežnými postupmi, s použitím ekvivalentu kyseliny.

Medzi farmaceutický spôsobilé soli patria i soli kovov a amínov, pokiaľ katión neprispieva výrazne k toxicite vlastnej látky. Možno menovať soli sodné, draselné, bárnaté, zinočnaté, hlinité a z nich výhodné sú soli sodné a draselné. Z amínov možno použiť trialkylamíny ako je trietylamín, prokaín, ďalej dibenzylamín, N-benzyl-3~fenetylamín, 1-efenamín, N,N'

dibenzyletyléndiamín, dehydroabietylamín, N-etylpiperidín, benzylamín a dicyklohexylamín.

Do skupiny farmaceutický použiteľných esterov patria také látky, ktoré sú účinné ako také alebo sú prípadnými látkami, ktoré sa v tele hydrolyzujú za vzniku zodpovedajúceho antibiotika. Patria sem fenacylestery, acetoxymetylestery, pivaloyloxymetylestery, α-acetoxyetylestery, a-acetoxybenzylestery, α-pivaloyloxyetylestery, 3-ftalidylestery, 5-indanylestery, metoxymetylestery, benzoyloxyestery, propior.^ Icxymetylestery, valeryloxymetylestery, izobutyryloxymetylestery, glycyloxymetylestery a ďalšie estery známe z chémie penicilínov a cefalosporínov.

Zlúčeniny i soli možno upravovať do jednotkových dávkovacích foriem alebo na prostriedky umožňujúce aplikáciu i viacerých dávok. Môžu to byť tabletky, kapsule, roztoky, suspenzie alebo emulzie. Môžu sa upravovať i do formy čapíkov, s použitím bežných čipkových podkladov ako je kakaové maslo alebo iných materiálov na podklade tukov. Zlúčeniny možno aplikovať i v kombinácii s ďalšími antibiotikami vrátane cefalosporínov, penicilínov a aminoglykozidov.

V nasledujúcej tabuľke je uvedený prehľad štruktúr z príkladov a s prípadnými variáciami substitučnycn skupín.

Tabuľka 1

Zlúčenina	R1	R2	Konfigurácia
9 (BMY-28100)	H	OH	(Z)
12 (BBS-1058 )	H	OH	(Z)
14 (BBS-1076 )	H	OH	(Z)
20 (BBS-1065)	H	H	(Z)
8 (BBS-1067)	H	OH	(E)
28 (BMY-28060)	Cl	OH	(Z)
33 (BMY-28068)	OH	OH	(Z)
38 (BMY-28097)	ch3o	OH	(Z)

V nasledujúcej tabuľke 2 sú uvedené hodnoty antibakteriálnej účinnosti zlúčenín podľa tohto vynálezu in vitro. Uvedené sú minimálne inhibičné koncentrácie zistené s použitím zried’ovacieho radu na agare pre troj skupiny organizmov, označované Gp-Ia, Gp-IB a Ga-Ia. Každá z týchto skupín je tvorená vždy piatimi kmeňmi mikroorganizmov, ktoré sú uvedené v poznámkach za tabuľkou 2. Organizmy skupiny Gp-Ia sú grampozitívne stafylokoky citlivé na penicilín. Organizmy skupiny Gp-Ib sú grampozitívne stafylokoky rezistentné na penicilín a produkujúce penicilinázu. Organizmy skupina Ga-Ia sú gramnegatívne baktérie citlivé na ampicilín a cefalotín. Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sa vyznačujú všeobecne malou účinnosťou voči gramnegatívnym baktériám, rezistentným na ampicilín a cefalotín. Pokiaľ ide o antibakteriálnu aktivitu in vitro, je nevyhnutné z údajov uvedených v tabuľke 2 vyvodiť pre uvedené zlúčeniny tieto závery.

Všetky zlúčeniny majú dobrú účinnosť voči stafylokokom citlivým na penicilín (Gp-Ia). Tieto látky majú všeobecne len tretinovú alebo ešte nižšiu účinnosť voči stafylokokom rezistentným na penicilín (Gp-Ib). V každom prípade sú však tieto zlúčeniny niekoľkonásobne účinnejšie ako cefalexín a cefadroxil.

Iba tie zlúčeniny, ktoré nesú v polohe 3 nesubstituovanú cis (Z)-propenylovú skupinu, vykazujú dobrú účinnosť voči gramnegatívnym baktériám (Gn-Ia). Jedná sa o zlúčeniny č. 9, 20, 28 a 38. Trans(E)-propenylderivát, teda zlúčenina č. 8, je osemkrát menej aktívna voči gramnegatívnym baktériám ako zodpovedajúci cis-propenylderivát (zlúčenina č. 9). Zdá sa, že substitúcia na terminálnej metylovej skupine propenylového substituentu v polohe 3 vedie k zníženiu účinnosti voči gramnegatívnym organizmom. V tomto ohľade možno poukázať na zlúčeniny č. 12 a 14. Tieto zlúčeniny sú však viac-menej silné antibakteriálne činidlá, ktorých účinnosť je v podstate rovná účinnosti cefalexínu a cefadroxilu. Substitúcia kruhu nemá v žiadnom prípade nepriaznivý vplyv na antibakteriálnu účinnosť (porovnaj zlúčeniny č. 9, 20, 28 a 38). Zlúčenina č. 33 predstavuje, pokiaľ ide o hore uvedené závery, akúsi výnimku, je však viac-menej vysoko účinnou zlúčeninou ako voči grampozitívnym, tak proti gramnegatívnym baktériám, ako je zrejmé z nižšie uvedenej tabuľky č. 2.

Tabuľka 2 Minimálna inhibičná koncentrácia (gg/ml) s použitím zried’ovacej techniky na agare (Mueller-Hintonov agar)

Zlúčenina	Gp-	la3)	GP	Ib3)	Gn-	la3)
č.	1	2	1	2	1	2
9 (BMY-28100)	2.23	0.35	0.92	0.80	0.80	0.70
12 (BBS-1058)	0.40		1.40		4.10
20 (BBS-1065)	0.23	0.30	0.92	0.92	0.80	0.80
8 (BBS-1067)	0.26		1.40		6.30
14 (BBS-1076)	0.20		0.70 >	50
28 (BMY-28060)		0.13		0.53		1.10
33 (BMY-28068)		6.30		7.20		6.30
38 (BMY-28097)	1.20	1.10	3.60	4.10	8.30	8.30
cefalexín	1.20	0.70	4.10	3.60	6.20	4.10
cefadroxil	1.20	1.10	3.60	4.10	8.30	8.30

Poznámky: v stĺpcoch 1 a 2 sú uvedené výsledky separátnych vyhotovení testu sú uvádzané priemerné hodnoty zistené u skupín obsahujúcich vždy päť organizmov:

Gp-Ia: grampozitívne stafylokoky citlivé na penicilín, neprodukujúce penicilinázu

S.	aureus	Smith A9537
S.	aureus	A9497
S.	aureus	Teraj ima
S.	aureus	A9534
S.	aureus	A9601

Gp-Ib:

grampozitívne stafylokoky rezistentné na penicilín, produkujúce penicilinázu

S. aureus	193
S. aureus	B-1633-2 A9606
S. aureus	A15092
S. aureus	Russell
S. aureus	A9602

Gn-Ia: gramnegatívne baktérie citlivé na ampicilín a cefalotín

E. coli Juhl A15119

E. coli A9660

K. pneumoniae Dll

P. mirabilis A9554

P. mirabilis A9900 nejde o súčasť vyhotovenia 1 - testované oddelene.

V tabuľke 3 sú uvedené porovnávacie údaje antibakteriálnej in vitro proti rovnakým organizmom ako v tabuľke 2, prostredí. Mueller po x ué uvedené účinnosti s použitím

- Hintonov uvedených minimálnych testovaných prostredí a dvoch rozdielnych kultivačných agar je štandardné prostredie tabuľke 2. V tabuľke 3 inhibičných koncentrácií( zlúčenín, zistených až potom v živnom agare. Na

2.

v testoch porovnanie

MIC) troch

Hintonovom je ďalej len

Mueller účinnosť zlúčeniny č. 9, v ktorej je fenylový kruh substituovaný v polohe 4 hydroxyskupinou a zlúčeniny č. 38, v ktorej je fenylový kruh substituovaný v polohe 3 metoxyskupinou a v polohe 4 hydroxyskupinou, má zmena prostredia iba mierny vplyv, čo znamená, že sa hodnoty MIC odlišujú o menej ako trojnásobok. Účinnosti zlúčeniny č. 33, nesúce 3,4-dihydroxyfenylový substituent, šesťnásobne koncentrácie zistené v týchto dvoch prostrediach, sa odlišujú až dvanásťnásobne, pričom minimálne inhibičné v živnom agare sú oveľa nižšie ako minimálne inhibičné koncentrácie zistené v Mueller - Hintonovom prostredí. V súlade s tým sa predpokladá, že antibakte'riálna účinnosť zlúčeniny č. 33 je porovnateľná s účinnosťou iných cefalosporinov nesúcich v polohe 3 cis-propenylovú skupinu, uvedené v tabuľke 2. Tento jav, kedy antibiotikum vykazuje vyššiu účinnosť v jednom type živného prostredia ako v type inom, bol už prv popísaný a študovaný - pozri T. A. Pursiano a spol., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, zv. 3, č. 1, str. 33 až 39 (1973).

Tabuľka 3 Minimálne inhibičné koncentrácie MIC (gg/ml-porovnávací test v agarovom prostredí s použitím zried’ovacej techniky

Zlúčenina č.		Gp-Ia2)	Gp-Ib2)	Gn-la2)
9 (BMY-28100)	A1	0.23	0.92	0.70
	B	0.17	0.35	0.70
33 (BMY-28068)	A	4.80	6.30	5.50
	B	0.40	0.61	0.92
38 (BMY-28097)	A	0.35	1.20	0.53
	B	0.23	0.40	0.40

Poznámky:

A = Mueller - Hintonov agar, B = živný agar

2) priemerné hodnoty zistené u rovnakých skupín organizmov ako v tabuľke 2

Vzťahy štruktúry a účinnosti, vyplývajúce z predchádzajúcich štúdií in vitro, potvrdzujú výsledky štúdií účinnosti in vivo, vykonávaných na myšiach. V nasledujúcej tabuľke 4 sú uvedené protektívne dávky pre myši infikované letálnym inokulom príslušného organizmu. Pri týchto štúdiách sa používajú baktérie dvoch rozdielnych typov - jeden grampozitívny organizmus a jeden gramnegatívny organizmus. Uvádzaná protektívna dávka (Ρ0₅₀) predstavuje takú dávku, po ktorej aplikácii v skupine infikovaných myší po piatich dňoch prežíva 50 % pokusných zvierat. Neošetrené infikované myši normálne uhynú v priebehu 3 dní po injekcii letálneho inokula.

Tabulka 4 Protektívne dávky pre myši infikované letálnym inokulom¹) (orálna aplikácia)

Zlúčenina č.	S. aureus Smith	E. coli	Juhl
9	(BMY-28100)	0.14	(O.31)2)	1.2	(8.4)2)
12	(BBS-1058)	0.32	(0.31)	3.0	(8.4)
20	(BBS-1065)	0.18	(0.27)	1.5	(8.2)
8	(BBS-1067)	0.20	(0.31)	7.5	(8.2)
28	(BMY-28060)	0.17	(0.22)	3.04	(8.4)
3 3	(BMY-28068)	0.13	0.27)	0.44	(8.2)
38	(BMY-28097)	0.083	)

Poznámky:

-¹·) dávky sa uvádzajú v mg/kg a predstavujú vždy dávku chrániacu po dobu 5 dní pred smrťou 50 % pokusných zvierat zo skupiny 5 myší; jednotlivým skupinám myší sa v deň infikácie podajú rôzne dávky testovanej zlúčeniny a hodnota PD_5Q sa určí interpoláciou z krivky závislosti odpovede od dávky; neošetrené zvieratá umierajú v priebehu 3 dní ²) hodnoty v zátvorkách platia pre cefalexín (rovnaké vyhotovenie testu) pri tomto teste bola pre zlúčeninu BMY-28100 zistená hodnota 0,16 mg/kg, hodnoty pre cefalexín a cefadroxil nie sú k dispozícii.

Údaje uvedené v tabulke 4 boli zistené v niekoľkých rôznych pokusoch. V týchto pokusoch bol ako štandard používaný cefalexín. Hodnoty PD₅₀ zistené pre cefalexín v analogickom pokuse sú uvedené v zátvorkách za hodnotami PD^q pre testované zlúčeniny podľa vynálezu. Je zrejmé, že každý z cefalosporínov podľa vynálezu vykazuje dobrú účinnosť voči grampozitívnemu kmeňu Staphylococcus aureus a že zlúčeniny nesúce v polohe 3 cis-propenylovú skupinu sú účinnejšie proti gramnegatívnemu organizmu - pozri zlúčeniny č. 9, 20 a 33.

V tabulke 5 sú uvedené porovnávacie hodnoty hladín testovaných látok uvedených v tabulke 1 v krvi pokusných myší, ktorými boli testované zlúčeniny podávané orálne a intramuskulárne. Z uvedených hodnôt vyplýva, že sa testované látky po orálnej aplikácii rovnomerne dobre absorbujú. Mimoriadne vysokú koncentráciu v krvi pokusnej myši po orálnom podaní vykazuje zlúčenina č. 33. Bolo zistené, že táto zlúčenina sa v teste krysy metabolizuje na zlúčeninu č. 38 (pozri príklad 39). Zlúčeninou č. 33 je 3,4-dihydroxyfenylderivát a zlúčeninou č. 38 je 3-metoxy-4-hydroxyfenylderivát. Bolo zistené, že posledne zmienená látka má vysokú účinnosť in vitro a in vivo.

Yi

Tabulka 5 Hladina testovaných látok v krvi myší

Zlúčenina č.	100 rng/kq Der os	Dávka 20 mg/kq per os	20 mg/kg intramuskulárne
(Ä)	Tl/2 (h)	AUC (pg.h/ml)	Cmax Tl/2 (pg/nl) (h)	AUCX) (pg.h/ml)	(Ä) $	AUCX' (pg,h/ml)
Test 1
9 (BMY-28100) : (2. podiel)	56	1.9	106	15	1.9	26	28	0.88	32
12 (BBS-1058)	51	1.9	150	13	2.0	41	25	0.74	20
20 (BBS-1065)	40	1.1	84	7.8	1.3	15	31	0.50	22
8 (BBS-1067)	30	1.4	69	10	1.3	22	31	0.63	31
14 (BBS-1076)	41	2.7	81	12	2.7	38	31	0.99	52
cefalexínx>	47	1.4	57	11	1.3	14	26	0.40	16
cefadroxil	56	2.3	103	12	1.2	18	21	0.33	14
Test 2
9 (BMY-28100)	61	1.3	86	15	1.7	13	21	0.48	11
20 (BBS-1065)	33	1.1	46	9.5	0.69	13	16	0.58	13
28 (BMY-28060)	25	1.7	37	7.9	1.7	13	21	0.48	13
33 (BMY-28068)	180	2.5	666	58	5.1	270	86	1.20	233
cefadroxil	51	1.5	67	18	1.6	21	30	0.37	21

ŕ - A *** bM^AíÍ4 |>Q pvdam' •tuti ľne f na ý>oΙ^ι/ι^Al/d · pr»«s+vir |χ*Ί Vcrxvk-ou v \ - pH&V\n

B%.n« M ét|: x

V tabulke 6 sú zhrnuté ďalšie údaje účinnosti zlúčeniny č. 9 in vivo oproti štyrom ďalším organizmom, v porovnaní s cefalexínom, cefaclorom a cefadroxilom. Tabulky 7 a 8 obsahujú porovnávacie údaje účinnosti zlúčeniny č. 9 in vitro oproti cefalexinu, cefadroxilu a cefacloru, s použitím rodov Streptococcus, Neisseria, Haemophilis a rôznych anaeróbnych baktérií ako pokusných organizmov.

Pri izolácii účinných látok z moču bolo zistené, že po orálnom podaní krysám je po 24 hodinách množstva zlúčeniny č. 9 izolované ž moča pokusných zvierat porovnatelné s hodnotami získanými pre cefalexín a cefadroxil, a vyššie ako množstvo cefacloru. Ďalej boli vykonané porovnávacie štúdie stability zlúčeniny č. 9, cefalexinu a cefacloru v roztoku, s použitím fosfátového pufra s pH 6,5 a pH 7,0, ludského séra (pH 6,8), konského séra (pH 7,6) a hovädzieho séra (pH 8,2) ako nosného prostredia. Z týchto štúdií vyplýva, že zlúčenina č. 9 je výrazne stabilnejšia ako cefaclor a jej stabilita je . norovnateľná so stabilitou cefalexínu.

Tabuľka 6 Protektívna dávka PD_5Q pre myši infikované letálnym inokulom (orálne podanie) - mg/kg

i «	Organizmus	Zlúčenina č. 9 (BMY-28100)	Cefalexín	Cefaclor	Cefadroxil
r-	S. aureus BX-1633	2.2	17	2.2	7.2
	S. pyogenes A20201	0.1	1.74	0.14	0.25
	H. influenza A9729	1.8	18	1.6	25
	P. mirabilis A9554	1.8	12.5	1.8	14

Tabuľka 7 Účinnosť in vitro proti rodom Streptococcus, Neissera a Haemophilis, hodnoty MIC ^g/ml)

Organizmus	Zlúčenina č. (BMY-28100) (2. podiel)	9 Zlúčenina č. 14 (BBS-1076)	Cefalexín Cefadroxil Cefaclor
S. pyogenes S-23	0.05	0.2	0.8	0.8	0.2
S. pyogenes Diek	0.05	0.2	0.8	0.8	0.2
S. pyogenes A96O4	0.05	0.2	0.8	0.8	0.2
S. pyogenes A20065	0.05	0.2	0.8	0.8	0.2
S. pyogenes A15040	- 0.05	0.2	0.8	0.8	0.2
geometrický stred	0.050	0.20	0.80	0.70	0.2
S. pneumoniae typ II	0.2	0.2	3.1	1.6	1.6
S. pneumoniae typ I	0.2	0.2	3.1	1.6	1.6
S. pneumoniae typ III	0.2	0.2	3.1	1.6	-
S. pneumoniae A9585	0.2	0.4	3.1	1.6	1.6
S. pneumoniae A15069	0.2	0.2	3.1	1.6	0.8
geometrický stred	0.20	0.23	3.1	1.6	1.3
N. gonorrheae A15112	0.8	> 100	6.3	6.3	0.8
N. gonorrheae A20142	0.8	> 100	6.3	6.3	-
N. gonorrheae A20143	0.8	> 100	6.3	6.3	0.8
N. gonorrheae A2O154	0.8	> 100	6.3	6.3	Π. 8
N. gonorrheae A20155	0.8	> 100	6.3	6.3	Ó. 8
geometrický stred	0.80	> 100	6.3	6.3	0.8
N. meningitidis A20048	0.8	> 100	6.3	6.3	0.8
N. meningitidis A20049	-	-	-	-	0.8
N. meningitidis A21487	0.8	> 100	6.3	6.3	0.8
N. meningitidis A21496	0.8	> 100	6.3	6.3	0.8
N. meningitidis A21497	0.8	> 100	6.3	6.3	0.8
geometrický stred	0.80	> 100	6.3	6.3	0.8
B. influenzae A9729	0.8	> 100	6.3	6.3	0.8
B. influenzae A20177	0.8	> 100	6.3	6.3	0.8
B. influenzae A20193	0.8	> 100	6.3	6.3	0.8
B. influenzae A21523	0.8	> 100	6.3	6.3	0.8
B. influenžae A9833	0.8	> 100	6.3	6.3	0.8
B. influenzae A22483	0.8	> 100	6.3	6.3	0.4
B. influenzae A22482	0.8	> 100	6.3	6.3	0.4
geometrický stred	0.80	> 100	6.3	6.3	0.66
B. influenzae A22157	1.6	25	3.1	6.3	•
E. influenzae A22481	1.6	25	3.1	6.3	-
B. influenzae A22491	1.6	25	3.1	6.3	-
S. pyogenes A20201	0.1	0.2	0.8	0.4	-
S. pneumoniae A20759	0.2	0.4	3.1	3.1

Tabuľka 8 Účinnosť in vitro proti anaeróbnym organizmom

Organizmus	MIC (pg/ml)
p-laktamáza	Zlúčenina č. 9 (BMY-28100)	Cefalexín Cefaclor
Gn, tyčinky B. fragilis A20928-1	H	0.8	12.5	3.1
B. fragilis A21900	Hx	50	12.5	6.3
B. fragilis A20935	(-)	0.8	6.3	3.1
geometrický stred		3.2	9.9	3.9
Gn, tyčinky B. fragilis A22053	( + )	50	25	100
B. fragilis A22021	( + )	> 100	100	> 100
B. fragilis A22693	( + )	> 100	> 100	> 100
geometrický stred		> 100	> 75	> 100
B. fragilis A22695	( + )	> 100	100	100
B. fragilis A22533	(+)	> 100	> 100	> 100
geometrický stred		> 100	> 100	> 100
Gp, tyčinky C. difficils A21675	x)	6.3	100	25
C. perfringens A9645		0.4	12.5	. 1.6
Gp, koky P. acnes A21933		0.4	1.6	0.8
P. anaerobius A21905		0.8	6.3	0.4
geometrický stred		0.95	11

Poznámky: ^x' rezistentné na clindamycín

Zlúčeniny podľa vynálezu sa pripravujú s použitím syntetických postupov popísaných v britskom patentovom spise č. 1 342 241, v americkom patentovom spise č. 3 994 884 a v americkom patentovom spise č. 4 107 431, citovaných vyššie. V podstate sa postupuje tak, že sa vytvára substituovaná vinylová skupina v polohe 3 cefalosporínov reakciou príslušného halogenidu s triarylfosfinom za vzniku fosfóniovej soli, ktorá reakciou s bázou poskytne intermediárny fosforanylový derivát. Na tento medziprodukt sa potom pôsobí karbonylovým reakčným činidlom za vzniku zlúčeniny podľa vynálezu. Hore zmienený postup ilustruje nasledujúcu reakciu schéma:

Reakčná schéma 1
halogenidové
reakčné	intermediárny	karbonylové
činidlo	fosforanylový	reakčné činidlo
	derivát
(C6H5)3P		H	odstránenie
qch2x --------	> [QCH=P(C6H5)3]	zc=o	chrániacich
báza		R3	skupín
		QCH=CHR3	-------------> I (XIII

acylácia alebo XIV) ľrit|gdc|

Príklad 1

Benzhydryl-3-hydroxymetyl-73-fenylacetamido-3-cefem-

4-karboxylát (zlúčenina 1)

K suspenzii fosfátového pufru v jedinej dávke g s pH 7 pridá suchých pšeničných sa za otrúb v 162,5 ml teplote miestnosti sodnej soli 7miešania pri (12,1 mmól) kyseliny. Nasledujúci priebeh g

fenylacetamidocefalosporínovej reakcie sa sleduje vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou až do skončenia hydrolýzy (5 hodín). Výsledná suspenzia sa sfiltruje kvôli odstráneniu pšeničných otrúb a filtrát sa pre extraktívnu esterifikáciu ochladí na 5 až 10 “C. K ochladenému roztoku sa pridá najprv 32 ml metylénchloridu a potom 24 ml 0,5M roztoku difenyldiazometánu v metylénchloride. Hodnota pH sa 28 % kyselinou fosforečnou upraví na 3,0. Po jednej hodine sa teplota reakčnej zmesi nechá vystúpiť na 20 “C, pomaly sa pridá 56 ml heptánu a vzniknutý kryštalický produkt uvedený v názve sa odfiltruje. Výťažok produktu je 3,0 g (50 %).

Príklad 2

Benzhydryl-73-amino-3-chlórmetyl-3-cefem-4-karboxylát (zlúčenina 2) h₂n

COOCH(C₆H₅)₂

K suspenzii 8,3 g (40 mmól) chloridu fosforečného v 1 000 ml dichlórmetánu sa pridá 3,2 g (40 mmól) pyridínu a zmes sa 20 minút mieša pri teplote 20 °C. K výslednej zmesi sa za miešania pri teplote -40 “C v jedinej dávke pridá 5,1 g (10 mmól) benzhydryl-3-hydroxymetyl-7-fenylacetamido-3-cefem-4-karboxylátu (1). Reakčná zmes sa 15 minút mieša pri teplote -10 ’C, potom sa nechá 7 hodín stáť pri teplote -10 až -15 ’C, k studenému reakčnému roztoku (1 až 20 ’C) sa pridá 10 ml propán-1,3-diolu a zmes sa nechá stáť najprv 16 hodín pri teplote -20 ’C, a potom sa 20 minút mieša pri teplote miestnosti. Výsledný roztok sa premyje dvakrát vždy 20 ml l’adovo chladnej vody, potom 10 ml nasýteného vodného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým a odparí sa vo vákuu. Živicový zvyšok s hmotnosťou 12 g sa rozpustí v zmesi chloroformu a n-hexánu (2 : 1) a chromatografuje sa na stĺpci 200 g silikagelu s použitím rovnakej zmesi rozpúšťadiel ako eluačného činidla. Frakcia obsahujúca zlúčeninu uvedenú v názve sa odparí vo vákuu a zvyšok sa trituruje s n-hexánom. Získa sa 2,1 g (51 %) zlúčeniny 2, topiacej za rozkladu pri 110 ’C.

IČ (KBr-technika, p_max): 3400, 2800, 1785, 1725 cm^-1.

UV: p _max etanol: 265 nm (E₁ ¹'^s cm 160.

- 2 Ó NMR (perdeuterodimetylsulfoxid + deuterochloroform, hodnoty 6 v ppm): 3,69 (2H, singlet), 4,43 (2H, singlet), 5,09 (1H, dublet, J = 4,5 Hz), 5,24 (1H, dublet, J = 4,5 Hz), 6,87 (1H, singlet), 7,3 (10H, multiplet).

Príklad 3

Benzhydryl-7p-[D-2-(terc. butoxykarbonylamino) -2(p-hydroxyfenyl)acetamido]-3-chlórmetyl-3-cefem-4karboxylát (zlúčenina 3)

K zmesi 20,7 g (0,05 mól) benzhydryl-7-amino-3-chlórmetyl3-cefem-4-karboxylátu (2) a 20 g (0,075 mól) D-2-(terc. butoxykarbonylamino)-2-(p-hydroxyfenyl)octovej kyseliny v 500 ml suchého tetrahydrofuránu sa pridá 15,45 g (0,075 mól) N,N'-dicyklohexylkarbodiimidu, reakčná zmes sa 2 hodiny mieša pri teplote miestnosti a potom sa odparí do sucha. Zvyšok sa rozpustí v 1 litri etylacetátu a nerozpustná dicyklohexylmočovina sa odfiltruje. Filtrát sa premyje vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, vodou a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, odparí sa do sucha a olejovitý odparok sa chromatografuje na stĺpci 500 g silikagélu s použitím 4 litrov chloroformu a 6 litrov 1 % chloroformu v metanole ako eluačného činidla. Žiadané frakcie sa spoja a odparia sa do sucha. Trituráciou olejovitého odparku so zmesou éteru a izopropyléteru sa získa 30,6 g (92 %) zlúčeniny 3.

*1

IČ (KBr-technika, 4^._max): 1790, 1710, 1670,

1150 cm^-1.

1500, 1360, 1230,

NMR (deuterochloroform, hodnoty δ v ppm): 1,45 (9H, singlet, C-CH₃), 3,4 (2H, široký singlet, 2-H), 4,28 (2H, singlet,

CH₂C1), 4,86 (1H, dublet, 4,5 Hz, 6-H), 5,12 (1H, dublet, 6

Hz, CH-CO), 5,68 (1H, dvojitý dublet, 8 a 4,5 Hz, 7-H), 6,63 (2H, dublet, 9 Hz, fenylové protóny), 6,93 (1H, singlet,

CH-Ph₂), 7,08 (2H, dublet, 9 Hz, fenylové protóny), 7,0

- 7,5 (10H, multiplet, fenylové protóny).

Hore získaný olejovitý zvyšok je možné bez chromatografického čistenia použiť v nasledujúcom príklade 4.

Príklad 4

Benzhydryl-7p-[D-2-(terc. butoxykarbonylamino) -2(p-hydroxyfenyl)acetamido]-3-jódmetyl-3-cefem-4karboxylát (zlúčenina 4)

Zmes 26,6 g (0,04 mól) zlúčeniny 3 a 18 g (0,12 mól) jodidu sodného v 400 ml acetónu sa 2 hodiny mieša pri teplote miestnosti a potom sa odparí do sucha. Zvyšok sa extrahuje 400 ml etylacetátu, extrakt sa premyje vodným roztokom tiosíranu sodného, vodou a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, rozpúšťadlo sa odparí a odparok sa trituruje so zmesou éteru a izopropyléteru. Získa sa 27 g (89 %) zlúčeniny uvedenej v názve. Etylacetátový roztok je možné, ak je to žiaduce, bez izolácie zlúčeniny 4 priamo použiť v nasledujúcom príklade na prípravu zlúčeniny 5.

IČ (KBr-technika, p _max): 1790, 1710, 1670, 1500, 1360, 1220, 1150 cm^-1.

NMR (deuterochloroform, hodnoty δ v ppm): 1,47 (9H, singlet,

C-CH₃), 3,3 - 3,6 (2H, multiplet, 2-H), 4,20 (2H, singlet,

CH₂), 4,89 (1H, dublet, 4,5 Hz, 6-H), 5,12 (1H, dublet, 6 Hz, CH-CO), 5,68 (1H, dvojitý dublet, 8 a 4,5 Hz, 7-H), 6,62 (2H, dublet, 9 Hz, fenylové protóny), 6,92 (1H, singlet,

CHPh₂), 7,08 (2H, dublet, 9 Hz, fenylové protóny), 7,0 - 7,5 (10H, multiplet, fenylové protóny).

Príklad 5

Benzhydryl-7p-[D-2-(terc. butoxykarbonylamino)-2(p-hydroxyfenyl)acetamido]-3-(trifenylfosfónio)-metyl3-cefem-4-karboxylát-jodid (zlúčenina 5)

^C6^H5^3 ¹

Zmes 15,1 g (0,02 mól) zlúčeniny 4 a 15,7 g (0,06 mól) trifenylfosfínu v 200 ml etylacetátu sa 1 hodinu mieša pri teplote miestnosti. Vylúčená zrazenina sa odfiltruje, čím sa získa 17,4 g (85,5 %) zlúčeniny 5, taviacej pri 170 až 180 ’C. Filtrát sa zahusti na objem 100 ml a koncentrát sa zriedi 500 ml éteru. Získa sa druhý podiel zlúčeniny 5, s hmotnosťou 1,1 g. Celkový výťažok produktu je 18,5 (91 %). Celkový výťažok sledu reakcií od zlúčeniny 2 k zlúčenine 5 je 74,5 %. Vypustením čistiacich a izolačných operácií, ako je uvedené vyššie, možno tento celkový výťažok zvýšiť na 87,5 %.

IČ (KBr-technika, Vmax^ 1780, 1670, 1490, 1420, 1350, 1240,

1150, 1090 cm^-1.

NMR (dimetylsulfoxid, hodnoty δ v ppm): 1,49 (9H, singlet,

C-CH₃), 3,45 (2H, široký singlet, 2-H), 5 - 5,4 (3H, multiplet, 3-H a 6-H), 5,7 (1H, multiplet, 7-H), 6,63 (2H, dublet, 9 Hz, fenylové protóny), 7,1 - 7,45 (12H, multiplet, fenylové protóny), 7,5 - 7,9 (15H, multiplet, fenylové protóny).

Analýza pre: ^C52^H49^N3°7^SPI vypočítané: 61,36 % C, 4,85 % H, 4,13 % N, 3,15 % S nájdené: 61,26 % C, 4,82 % H, 4,11 % N, 3,92 % S.

Príklad 6

Benzhydryl-7p-[D-2-(terc. butoxykarbonylamino)-2(p-hydroxyfenyl)acetamido]-3-[(Z)-1-propén-l-yl]cef-3-em-4-karboxylát (zlúčenina 6)

K roztoku 1,8 g (1,77 mmól) zlúčeniny 5 v 100 ml chloroformu sa pridá 100 ml vody obsahujúcich 2 ml (2 mmól) IN hydroxidu sodného a zmes sa 5 minút trepe. Organická vrstva sa oddelí,

- 24 premyje sa vodou a vysuší sa bezvodým síranom sodným. Chloroformový roztok sa sfiltruje a filtrát sa zahustí pri zníženom tlaku na objem 50 ml. Ku koncentrátu sa pridá 1 g acetaldehydu, zmes sa 2 hodiny mieša pri teplote miestnosti a potom sa odparí do sucha. Olejovitý zvyšok sa chromatografuje na stĺpci 50 g silikagelu, s použitím chloroformu a zmesou chloroformu a metanolu (99 : 1) ako eluačných činidiel. Žiadané frakcie sa spoja a odparením sa z nich získa 318 mg (28 %) zlúčeniny 6, taviacej sa pri rozklade pri 120 až 130 ’C.

IČ (KBr-technika, p _max)^: 1780, 1670, 1710, 1490, 1360, 1210,

1150 cm^-1.

NMR (deuterochloroform, hodnoty δ v ppm): 1,3 - 1,5 (12H, multiplet, C-CH₃), 3,22 (2H, široký singlet, 2H), 4,90 (1H, dublet, 4,5 Hz, 6-H), 5,15 (1H, široký dublet, CH-CO), 5,5

- 6,1 (3H, multiplet, CH=CH, 7-H), 6,63 (2H, dublet, 9 Hz, fenylové protóny), 6,91 (1H, singlet, CH-Ph) 7,09 (2H, dublet, 9 Hz, fenylové protóny), 7,2 - 7,5 (10H, multiplet, fenylové protóny).

Príklad 7

Nátrium-7p-[D-2-amino-2-(p-hydroxyfenyl)acetamido]

3-[(Z)-1-propén-l-yl]-3-cefem-4-karboxylát (zlúčenina 7, BMY-28100, sodná soí)

COOH

Zmes 318 mg (0,48 mmól) zlúčeniny 6 a 2,5 ml trifluóroctovej kyseliny sa 1 hodinu mieša pri teplote miestnosti a potom sa zriedi 50 ml éteru a 50 ml izopropyléteru. Vylúčená zrazenina sa odfiltruje a premyje sa éterom.

Získa sa

188 mg (77

%) trifluóracetátu zlúčeniny 7, ktorý sa rozpustí v 2 ml metanolu.

K roztoku sa pridajú 2 ml (2 mmól) roztoku nátrium-2-etylhexanoátu v etylacetáte a zmes sa zriedi ml etylacetátu, pričom sa vylúči zrazenina, ktorá sa odfiltruje a po premytí éterom sa vysuší vo vákuu nad oxidom fosforečným. Získa sa 144 mg (výťažok 73 % počítané od zlúčeniny 6) surovej zlúčeniny 7. 135 mg tohto surového produktu sa rozpustí v 10 ml vody a roztok sa chromatografuje na stĺpci (25 mm x 100 mm) naplnenom cca 20 ml adsorbentu PrepPAK-500/C_lg (Waters). Stĺpec sa vymýva vodou. Eluát obsahujúci žiadaný produkt sa zahustí na objem 5 ml a lyofilizuje sa. Získa sa 93 mg (69 %) zlúčeniny 7 taviacej za postupného rozkladu pri 200 ’C. Podľa vysokotlakovej kvapalinovej chromatografie je čistota produktu 60 %.

IČ (KBr-technika, κ max): cml.	1760,	1660,	1590,	1400, 1360, 1250
UV (fosfátový pufor s pH (8200).	7: P	max nm	(e):	227 (11300), 280

NMR (deuteriumoxid, hodnoty δ v ppm): 1,65 (3H, dublet, 6 Hz, -C-CH₃), 3,21 (1H, dublet, 18Hz, 2-H), 3,52 (1H, dublet, 18

Hz, 2-H), 5,12 (1H, dublet, 4,5 Hz, 6-H), 5,68 (1H, dublet,

4,5 Hz, 7-H), 5,5 - 5,9 (1H, m, protón vinylového zoskupenia),

5,95 (1H, dublet, 11,5 Hz, protón vinylového zoskupenia),

6,94 (2H, dublet,

Hz, fenylové protóny), 7,36 (2H, dublet,

Hz, fenylové protóny).

Príklad 8 β — [D-2-amino-2-(p-hydroxyfenyl)acetamido]-3-[(E)-1propén-l-yl]-3-cefem-4-karboxylová kyselina (zlúčenina 8, BB-S1067)

- 26 Surový produkt 7 vyrobený chromatografickým čistením (11,9 g sa 0,01 M fosfátového pufra (pH 7,2) a metanolu (85 sa 6N kyselinou chlorovodíkovou okyslí na pH 6. podrobí vysoko (PrepPAK-500/C_lg, M fosfátového pufra účinnej systém 500, (pH 7,2) v

rozpustí kvapalinovej

Waters) s obsahujúceho 15 pred zmesi roztok príklade 7 v 50 ml : 15) a

Tento roztok sa chromatograf ii použitím 0,01 % metanolu ako eluačného činidla. Obsah látok v eluáte sa sleduje vysoko účinnou analytickou kvapalinovou chromatografiou, podlá ktorej obsahuje prvá stvorlitrová frakcia cis-izomér (BMY-28100). Druhá frakcia objemu 1 liter, obsahujúca trans-izomér, sa zhromaždí a zahustí sa na objem 500 ml. Koncentrát sa zriedenou kyselinou chlorovodíkovou okyslí na pH 3 a chromatografuje sa na kolóne HP-20 (100 ml), ktorá sa vymýva 1 litrom vody a 1 litrom 30 % metanolu. Posledne vymytý eluát s objemom cca 300 ml sa zahustí na objem 10 ml a lyofilizáciou sa z neho získa 290 mg surového trans-izoméru s čistotou 55 %. Tento materiál sa rozpustí v 100 ml 50 % metanolu, roztok sa vyčerí aktívnym uhlím, sfiltruje sa, filtrát sa zahustí na objem 20 ml a nechá sa cez noc stáť pri teplote 5 ’C. Žiadaný produkt vykryštalizuje vo forme bezfarebných hranolkovitých kryštálov, ktoré sa odfiltrujú a vysušia sa vo vákuu. Získa sa 129 mg produktu taviaceho sa za rozkladu pri 230 ’C.

IČ (KBr-technika, _maxh 1760, 1680, 1590, 1550, 1520, 1450,

1390, 1350, 1240 cm^-1.

UV (fosfátový pufor s pH 7: _max nm (ε): 228 (13000), 292 (16900).

NMR (deuteriumoxid, uhličitan sodný, hodnoty δ v ppm): 1,89 (3H, dublet, 6 Hz, C=C-CH₃), 3,60 (2H, singlet, 2-H), 5,13 (1H, dublet, 4,5Hz, 6-H), 5,20 (1H, singlet, CH-CO), 5,68 (1H, dublet, 4,5 Hz, 7-H), 5,99 (1H, protón kvartetov, 16 a 6 Hz),

6,54 (1H, dublet, 16 Hz), 6,98 (2H, dublet, 9 Hz, fenylové protóny), 7,41 (2H, dublet, 9 Hz, fenylové protóny).

. . !.Í

- 27 Príklad 9

Kryštalická 7β-[D-2-amino-(p-hydroxyfenyl)acetamido]3-[(Z)-l-propén-l-yl]-3-cefem-4-karboxylová kyselina (zlúčenina 9, BMY-28100)

Prvá frakcia s objemom 4 litre, získaná pri preparatívnej vysoko účinnej kvapalinovej chromatografii v príklade 8 a obsahujúca cis-izomér (BMY-28100) sa zahustí na objem 2 litre Λ a zriedenou kyselinou chlorovodíkovou sa okysli na pH 3. Roztok sa nanesie na stĺpec 1 litra adsorbentu HP-20 a stĺpec sa vymýva 6 litrami vody, až eluát má hodnotu pH 7, načo sa potom vymyje litrami 30 % vodného metanolu. Priebeh chromatografie sa sleduje vysoko účinnou kvapalinovou chromatografiou. Príslušné frakcie sa spoja (cca 2,5 litra) a pri teplote pod 40 “C a pri zníženom tlaku sa zahustia na objem 50 ml, pričom sa vylúči kryštalická zrazenina. Výsledný koncentrát sa 2 hodiny chladí na 0 ’C, potom sa kryštalická zrazenina odfiltruje, premyje sa najprv 80 % vodným acetónom a potom 100 % acetónom a vysuší sa vo vákuu nad oxidom fosforečným. Získa sa 4,09 g čistého ^; kryštalického žiadaného produktu, taviaceho sa za rozklade pri

218 až 220 ’C. Produkt vo forme bezfarebných hranolkovitých kryštálov má podlá vysoko účinnej kvapalinovej chromatografie čistotu 95 %.

IČ (KBr-technika, p _nax): ¹⁷⁵⁰' ¹⁶⁸⁰> 1560, 1520, 1460, 1390,

1350, 1270, 1235 cm^-1.

UV (fosfátový pufor s pH ^7: max ^{nm 228} (¹²³⁰⁰)/ ²⁷⁹ (9800) .

NMR (deuteriumoxid + hydrogénuhličitan sodný, hodnoty 5 v ppm):

1,71 (3H, dublet, 6 Hz, C-CH₃), 3,27 (1H, dublet, 18 Hz,

2-H), 3,59 (1H, dublet, 18 Hz, 2-H), 5,18 (1H, dublet, 4,5

Hz, 6-H), 5,22 (1H, singlet, CHCO), 5,73 (1H, dublet, 4,5 Hz,

7-H), 5,5 - 6,0 (1H, multiplet, CH=C), 6,02 (1H, dublet, 11 v >’

- 28 Hz, CH=C), 6,98 (2H, dublet, 9 Hz, fenylové protóny), 7,41 (2H, dublet, 9 Hz, fenylové protóny).

Analýza pre: ^cj8^H19^N3^O5^S ’^1//2 H₂0

vypočítané:	54,26	%	C, 5,06 %	H, 10,55 % N,	8,05 % S
nájdené:	54,14	a	54,19 % C,	5,13 a 5,08 %	H,
	10,30	a	10,42 % N,	8,38 a 8,04 %	S.

r.

Matečný lúh z predchádzajúcej kryštalizácie sa zahustí na objem 10 ml a pridá sa k nemu 20 ml acetónu. Roztok sa nechá cez noc stáť v chladničke, potom sa vylúčená kryštalická zrazenina odfiltruje a vysuší sa vo vákuu nad oxidom fosforečným. Získa sa

670 mg produktu s čistotou 90 % (podľa vysoko účinnej kvapalinovej chromatografie). 560 mg sa rozpustí v 200 ml rozmieša s 0,5 g aktívneho zahustí pri zníženom tlaku a a 5 hodín sa chladí na 5 odfiltruje, premyje sa fosforečným. Získa sa

Časť tohto materiálu s hmotnosťou % vodného metanolu, roztok sa uhlia a sfiltruje sa. Filtrát sa pri teplote 40 °C na objem 20 ml ’C. Vykryštalizovaný produkt sa vákuu nad oxidom čistotou 98 % acetónom a vysuší sa vo

227 mg kryštalickej látky s (podľa vysoko účinnej kvapalinovej chromatografie), tvorenej produktom BMY-28100. Lyofilizáciou matečných lúhov sa získa ďalších 181 mg zlúčeniny BMY-28100, ktorej čistota podľa vysoko účinnej kvapalinovej chromatografie je 95 %.

Príklad 10

Difenylmetyl—7β-[D-2-(terc.butoxykarbonylamino)-2(p-hydroxyfenyl)acetamido]-3-vinyl-3-cefem-4-karboxylát (zlúčenina 10)

Roztok 3 g (2,95 mmól) benzhydryl-7-[2-(N-terc.butoxykarbonylamino )-2-(p-hydroxyfenyl)-acetamido]-3-(trifenylfosfonio) metyl-3-cefem-4-karboxylát-jodidu (5) v 50 ml chloroformu sa 1 minútu trepe so zmesou 3 ml (3 mmól) INhqcŕm^sodného a 50 ml vody pri teplote miestnosti. Po pridaní 20 ml nasýteného roztoku

- 29 /..-/ '. '7 chloridu sodného sa organická vrstva oddelí a premyje sa trikrát vždy 30 ml vody. K tomuto organickému roztoku sa za intenzívneho miešania a chladenia vodou pridá 2,5 ml 35 % vodného formaldehydu a v miešaní sa pokračuje ešte po dobu 20 minút. Organická fáza sa oddelí, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa číry filtrát zahustí vo vákuu. Koncentrát sa nanesie na stĺpec silikagelu, ten sa vymyje použitím 600 ml chloroformu a 800 ml 2 %-ného roztoku metanolu v chloroforme a získa sa tak 850 mg (45 % zlúčeniny), ktorej zloženie je uvedené v nadpise. Produkt má pri chromatografovaní na tenkej vrstve silikagelu v systéme metanol - chloroform (1 : 1) Rg 0,48.

Príklad 11

Difenylmetyl—7β-[D-2-(terc.butoxykarbonylamino)-2(p-hydroxyfenyl)acetamido]-3-[(Z)-1-butén-l-yl]3-cefem-4-karboxylát (zlúčenina 11)

Roztok 3 g zmieša so zmesou a výsledná zmes Organická vrstva a nasýteným roztokom (2,95 mmól) zlúčeniny

3,2 ml (3,2 mmól) IN sa 3 minúty trepe sa oddelí, premyje :

chloridu sodného a vysuší lúhu ml chloroformu sa sodného a 50 ml vody teplote miestnosti.

ml vody sa bezvodým pri sa trikrát vždy síranom sodným. K tomuto roztoku sa pridá 1,71 g (29,5 mmól) propiónaldehydu, zmes sa cez noc mieša pri teplote miestnosti a potom sa zahustí pri zníženom tlaku. Koncentrát sa nanesie na stĺpec silikagelu, ktorý sa vymýva 1 - 2 % metanolom v chloroforme. Frakcie, ktoré pri chromatografii na tenkej vrstve v systéme metanol - chloroform (1 : 10) dávajú škvrnu s R_f 0,30, sa spoja a odparia sa. Získa sa 1,08 g (55 %) zlúčeniny uvedenej v názve.

IČ (KBr-technika max) ^{: 1780} <

1680, 1500 cm

Príklad 12

Nátrium-7p-[D-2-amino-2-(p-hydroxyfenyl)acetamido]-3-[(Z) -

1-butén-l-yl]-3-cefem-4-karboxylát (zlúčenina 12, BB-S1058, sodná sol)

Roztok 1,08 g (1,61 mmól) zlúčeniny 12 v 11 ml trifluóroctovej kyseliny obsahujúci 1 % vody sa nechá 1 hodinu stáť pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zahustí vo vákuu na objem cca 2 ml a sirupovitý zvyšok sa trituruje s cca 20 ml diizopropyléteru. Získa sa 796 mg žltého p--=-=ku, ktorý sa rozpustí v 3 ml metanolu a k roztoku sa pridajú 3 ml 0,8M nátrium-2-etylhexanoátu v etylacetáte, čím sa vylúči zrazenina, ktorá sa odfiltruje a po premytí diizopropyléterom sa rozpustí v 5 ml vody. Roztok sa nanesie na stĺpec 80 ml adsorbentu PrepPAK-500/C₁₈ (Waters), ktorý sa premyje vodou a potom sa postupne vymýva 10 % metanolom, 20 % metanolom a 30 % metanolom.

Priebeh chromatografie sa sleduje vysoko účinnou kvapalinovou chromatografiou. Žiadané frakcie sa spoja, zahustia sa a zvyšok sa podrobí lyofilizácii. Získa sa 118 mg (9,4 %) zlúčeniny uvedenej v názve, ktorá má podlá vysoko účinnej kvapalinovej chromatografie čistotu 55 % a pri zahrievaní v sklenenej kapiláre stmavne pri teplote nad 180 ’C.

IČ (KBr-technika, _max): ¹⁷⁵⁵ / 1680, 1580 cm^-1.

UV (fosfátový pufor s pH 7): _max nm (e): 228 (10900), 279 (7200).

NMR (deuteriumoxid, hodnoty δ v ppm): 0,81 (3H, triplet, 7,5 Hz),

1,7 - 2,2 (2H, multiplet), 3,25 (2H, AB kvartet), 5,01 (1H, dublet, 5 Hz), 5,50 (1H, dublet tripletov, 7,5 a 12 Hz), 5,58 (1H, dublet, 5 Hz), 5,78 (1H, dublet, 12 Hz), 6,86 (2H, dublet, 8 Hz), 7,26 (2H, dublet, 8 Hz).

Príklad 13

Difenylmetyl—7 β-[D-2-(terc.-butoxykarbonylamino)-2-(phydroxyfenyl)acetamido]-3-[(Z)-3-fenyl-l-propén-l-yl]3-cefem-4-karboxylát (zlúčenina 13)

Roztok 3 g (2,95 mmól) zlúčeniny 5 v 50 ml chloroformu sa 1 minútu trepe so zmesou 3,2 ml (3,2 mmól) IN lúhu sodného a 50 ml vody. Po pridaní 20 ml nasýteného roztoku chloridu sodného sa organická vrstva oddelí, premyje sa trikrát vždy 30 ml vody a nasýteným roztokom chloridu sodného a vysuší sa bezvodým síranom sodným. K tomuto roztoku sa pridá 7,2 g (30 mmól) 50 % fenylacetaldehydu a zmes sa cez noc mieša pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zahustí vo vákuu a zvyšok sa vyčistí chromatografiou na stĺpci 75 g silikagelu s použitím 1 % metanolu

v chloroforme ako	eluačného činidla.	Získa sa 800 mg (37 %)
zlúčeniny uvedenej	v názve, ktorá pri	chromatografii	na	tenkej
vrstve silikagelu	v systéme metanol	chloroform	1 :	10	má
hodnotu Rf 0,33.
IČ (KBr-technika):	1780, 1710 - 1680 cm“	•1.

Táto zlúčenina sa bez ďalšieho čistenia používa k reakcii podlá príkladu 14.

Príklad 14

7β-[D-2-amino-2-(p-hydroxyfenyl)acetamido]-3-[(Z)-3fenyl-l-propén-l-yl]-3-cefem-4-karboxylová kyselina (zlúčenina 14, BB-S1076)

Roztok 800 mg (1,09 mmól) zlúčeniny 13 v 4 ml 90 % kyseliny trifluóroctovej sa nechá 2 hodiny stáť, potom sa reakčná zmes zahustí a koncentrát sa trituruje s diizopropyléterom. Získa sa 490 mg žltého práškového produktu, ktorý sa rozpustí v 2 ml metanolu, roztok sa zmieša s 20 ml vody a nanesie sa na stĺpec ml adsorbentu HP-20, ktorý sa premyje vodou a potom sa postupne vymýva 250 ml 30 % metanolu a 300 ml 75 % metanolu. Eluát vymytý 75 % metanolom sa zahustí a zvyšok sa lyofilizuje, čím sa získa 302 mg surového produktu, ktorý sa rozpustí v 10 ml % metanolu a podrobí sa chromatografii na kolóne (80 ml) s náplňou PrepPAK-500/C₁₈ (Waters). Eluáciou kolóny 75 % metanolom sa získa 158 mg (31 %) žiadaného produktu, ktorého čistota podlá vysoko účinnej kvapalinovej chromatografie je 65 %. Tento produkt pri zahrievaní v sklenenej kapiláre tmavne pri teplote nad 175 ’C.

IČ (KBr-technika, _max): 1760, 1680, 166 -1580, 1520 cm^-1.

UV (fosfátový pufor s pH 7): p _max nm (e): 280 (8900).

NMR (perdeuterodimetylsulfoxid hodnoty δ v ppm): 4,45 (1H, singlet, CHND₂), protóny), 6,9 - 7,5 (7H, deuteriumoxid v pomere 5:1, (2H, dublet, 4 Hz, ΟΗ₂-ΟθΗ₅), 4,87

6,7 (2H, dublet, 9 Hz, fenylové multiplet, fenylové protóny).

Príklad 15

Difenylmetyl-7 β-[D-2-(terc.-butoxykarbonylamino)-2-(phydroxyfenyl)acetamidoJ -3- [(Z)-3-metoxy-l-propén-l-yl]3-cefem-4-karboxylát (zlúčenina L5) ó

Roztok 3,0 g (2,95 mmól) zlúčeniny 5 v 100 ml chloroformu teplote miestnosti so zmesou 1,8 Organická fáza sa oddelí, premyje roztoku chloridu sodného, vysuší ml. Výsledný červeno sfarbený roztok pri teplote miestnosti s 1,3 ml odparení rozpúšťadla sa odparok g silikagélu.

:1a 1:1) sa ml sa ša nechá 5 minút reagovať pri i^idu sodného a 100 ml vody.

ml vody a 50 ml vodného a odparí sa na objem cca 10 ylidu sa nechá 15 minút reagovať (15 mmól) metoxyacetaldehydu. Po chromatografuje zmesami toluénu (38 %) zlúčeniny na stĺpci 100 a etylacetátu (3 uvedenej v názve.

Eluáciou stĺpca sa získa 750 mg

- 33 NMR (deuterochloroform - deuteriumoxid, hodnoty δ v ppm): 1,45 (9H, singlet, terc.butylová skupina), 3,15 (3H, singlet,

CCH₃), 3,27 (2H, singlet, 2-CH₂), cca 3,5 (2H, m,

-CH₂-OCH₃), 4,90 (1H, dublet, 5,0 Hz, 6-H), 5,12 (1H, singlet, -CH-ND-), cca 5,5 (1H, multiplet, =CH-CH₂-), 5,72 (1H, dublet, 7-H), 6,18 (1H, dublet, 12 Hz, -CH=CH-CH₂-),

6,65 a 7,10 (vždy 2H, dublety, HO-C_gH₄), 6,90 (1H, singlet, -CH(C₂H₆)₂), 7,3 (10H, singlet, fenylové protóny).

Príklad 16

Difenylmetyl-7β-[D-2-(terc.-butoxykarbonylamino)-2-(phydroxyfenyl)acetamido]-3-[(Z)-3-chlór-l-propén-l-yl]3-cefem-4-karboxylát (zlúčenina 16)

Na roztok 5,0 g (4,9 mmól) zlúčeniny 5 v 100 ml chloroformu s pôsobí 5 minút za teploty miestnosti zmesou 2,9 ml (5,8 mmól) 2N roztoku hydroxidu sodného a 100 ml vody. Organická fáza sa oddelí, premyje sa s použitím 50 ml vody a 50 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa bezvodým síranom sodným a filtruje. Filtrát sa zahustí zhruba a objem 20 ml a k odparku sa pridá 2,0 ml (25 mmól) chlóracetaldehydu. Zmes sa 30 minút mieša pri teplote miestnosti, potom sa odparí vo vákuu a sirupovitý odparok sa chromatografuje na stĺpci 100 g silikagelu. Eluáciou zmesí toluénu a etylacetátu (3 : 1) sa získa 900 mg (27 %) zlúčeniny 16, uvedenej v názve.

NMR (deuterochloroform + deuteriumoxid, hodnoty δ v ppm): 1,45 (9H, singlet, terc.butylová skupina), cca 3,3 (2H, multiplet,

2- CH₂), 3,5 - 4,0 (2H, multiplet, -CH₂-C1), 4,92 (1H, dublet, 5,0 Hz, 6-H), 5,12 (1H, singlet, -CH-ND-), cca 5,7 (2H, multiplet, 7-H a =CH-CH₂), 6,15 (1H, dublet, 11 Hz,

3- CH=CH-CH₂-), 6,63 a 7,10 (vždy 2 H, vždy dublet,

HO-C₆H₄-), 6,89 (1H, singlet, CH(C_gH₅)₂), 7,3 (10H, singlet, fenylové protóny).

Odstránením chrániacich skupín z tejto zlúčeniny pôsobením kyseliny trifluóroctovej, ako je popísané v predchádzajúcich príkladoch (pozri napríklad príklady 7, 11 a pod.) sa získa 7β[D-2-amino)-2-(p-hydroxyfenyl)acetamido]-3-[(Z)-3-chlór-l-propén -1-y1]-3-cefem-4-karboxylová kyselina.

Príklad 17

Difenylmetyl-7 β-[D-2-(terc.-butoxykarbonylamino)-2-(phydroxyfenyl)acetamido]-3-[(E)-3-j ód-l-propén-l-yl]3-cefem-4-karboxylát (zlúčenina 17)

Zmes 900 mg (1,3 mmól) zlúčeniny 16 a 590 mg (3,9 mmól) jodidu sodného v 18 ml acetónu sa 1 hodinu mieša pri teplote miestnosti. Po odparení rozpúšťadla sa zvyšok rozpustí v 100 ml etylacetát, roztok sa postupne premyje vodou, vodným roztokom tiosíranu sodného a vodným roztokom chloridu sodného a po vysušení sa odparí. Získa sa 1,02 g zlúčeniny uvedenej v názve.

NMR (deuterochloroform + deuteriumoxid, hodnoty 8 v ppm): 1,45 (9H, singlet, terc.butylová skupina), cca 3,4 (2H, multiplet,

2- CH₂), cca 3,8 (2H, multiplet, -CH₂-I), 4,90 (1H, dublet,

5,0 Hz, 6-H), 5,14 (1H, singlet, -CH-ND-), 5,73 (1H, dublet,

7-H), cca 5,5 - 6,0 (1H, multiplet, =CH-CH₂-), 6,68 a 7,10 (vždy 2H, vždy dublet, HO-C₆H₄-), 6,78 (1H, dublet, 15 Hz,

3- CH=CH-CH₂), 6,99 (1H, singlet, CH(C₆H₅)₂), 7,35 (10H, singlet, fenylové protóny).

Príklad 18

Ββηζ^ιγάΓνΙ-Τβ- [ D- (2-) terc. -butoxykarbonylamino-2-f enylacetamido]-3-(trifenylfosfónio)-metyl-3-cefem-4karboxylát-j odid (zlúčenina 18)

- 35 Zmes 14,5 g (0,0196 mmól) benzhydryl 7-[D-(-)-a-(terc.-butoxykarbonylamino)a-fenylacetamido]-3-jódmetyl-3-cefem-4-karboxylátu a 5,24 g (0,02 mól) trifenylfosfínu sa mieša v prostredí 300 ml etylacetátu 2 hodiny za teploty miestnosti, k reakčnej zmesi sa pridá 200 ml éteru, vylúčená zrazenina sa odsaje a premyje éterom. Získa sa tak 14,3 g (73 %) zlúčeniny, uvedenej v názve. Filtrát sa zahustí na objem 50 ml a koncentrát sa zriedi pridaním éteru a získa sa tak ďalší podiel produktu (2,4 g). Celkový výťažok je 16,7 g (85 %).

IČ (KBr-technika), p _max: 1780, 1690, 1480, 1420, 1350, 1240,

1150 cm^-1.

Príklad 19

Benzhydryl-7p-[D-2-(terc.-butoxykarbonylamino)-2-fenylacetamido]-3-[(Z)-l-propén-l-yl]-3-cefem-4-karboxylát (zlúčenina 19)

K roztoku 5 g (5 mmól) zlúčeniny 22 v 200 ml chloroformu sa pridá zmes 100 ml vody a 5 ml (5 mmól) hydroxidu sodného a výsledná zmes sa 3 minúty trepe. Organická vrstva sa oddelí, premyje sa vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného a vysuší sa bezvodým síranom horečnatým. Chloroformový roztok sa sfiltruje a filtrát zahustí za zníženého tlaku na objem 100 ml. K odparku sa pridajú 3 ml acetaldehydu, zmes sa 1,5 hodiny mieša pri teplote miestnosti a potom sa odparí do sucha. Olejovitý zvyšok sa podrobí chromatografii na stĺpci 50 g silikagelu, ktorý sa vymýva chloroformom. Frakcie obsahujúce žiadaný produkt sa spoja, odparia sa do sucha a zvyšok sa trituruje s n-hexánom. Získa sa 990 mg (31 %) zlúčeniny 19, uvedenej v názve.

IČ (KBr-technika, p _nax): 1780, 1710, 1660, 1510, 1490, 1360,

1240, 1210, 1150 cm^-1.

NMR (deuterochloroform, hodnoty δ v ppm): 1,3 - 1,5 (12H, multiplet, -CCH₃), 3,22 (2H, singlet, 2-H), 4,93 (1H, dublet,

4,5 Hz, 6-H), 5,23 (1H, dublet, 8 Hz, CH-CO), 5,5 - 6,2 (3H, multiplet, 7-H a protón vinylového zvyšku), 6,94 (1H, singlet, <2ΗΟθΗ₅), 7,2 - 7,5 (15H, multiplet, fenylové protóny).

Príklad 20

Nátrium-7p-[D-2-amino-2-fenylacetamido]-3-[ (Z )-lpropenyl]-3-cefem-4-karboxylát (zlúčenina 20, BB-S1065)

Zmes 0,94 (1,47 mmól) zlúčeniny 23 a 3 ml trifluóroctovej kyseliny sa 30 minút mieša pri teplote miestnosti a potom sa zriedi 50 ml zmesi rovnakých dielov éteru a izopropyléteru. Vylúči sa cca 800 mg zrazeniny, ktorá sa odfiltruje a rozpustí sa v 3 ml metanolu. K roztoku sa pridá 4,5 ml (4,5 mmól) IN nátrium-2-etylhexanoátu v etylacetáte a zmes sa postupne zriedi 50 ml éteru a 50 ml izopropyléteru. Odfiltrovaním vylúčenej zrazeniny sa získa 710 mg surového produktu 24, ktorý sa rozpustí v 20 ml vody a chromatografuje sa na kolóne s 50 ml náplne PrepPAK/Cjg (Waters). Kolóna sa vymýva vodou a 10 % metanolom, pričom priebeh chromatografie sa sleduje vysoko účinnou kvapalinovou chromatografiou. Frakcie obsahujúce žiadaný produkt sa spoja, zahustia sa na objem 5 ml a zvyšok sa podrobí lyofilizácii. Získa sa 182 mg (31 %) žiadaného produktu s teplotou topenia 200 ’C. Podía vysoko účinnej kvapalinovej chromatografie je čistota produktu 50 %.

IČ (KBr-technika, _max): 1760, 1660, 1600, 1400, 1180, 1100 cm^-1.

UV (fosfátový pufor s pH 7): p _max nm (e): 282 (5500).

NMR (deuteriumoxid, hodnoty 8 v ppm): 1,60 (3H, dublet, 6 Hz, -C-CH₃), 3,12 (1H, dublet, 18 Hz, 2-H), 3,48 (1H, dublet, 18 Hz, 2-H), 5,03 (1H, dublet, 4,5 Hz, 6-H), 5,62 (1H, dublet,

4,5 Hz, 7-H), 5,93 (1H, dublet, 10 Hz, vinylový protón), 5,2

- 5,8 (1Η, multiplet, vinylový protón), 7,41 (5H, singlet, fenylové protóny).

Príklad 21

Benzhydryl-7p-[D-2-(terc.butoxykarbonylamino)-2-fenylacetamido]-3-[(Z)-3-chlór-l-propén-l-yl]-3-cefem-4karboxylát

/. (zlúčenina 21) * K roztoku 2 g (2 mmól) zlúčeniny 22 v 50 ml chloroformu sa pridá 50 ml vody obsahujúcich 2 ml (2 mmól) IN hydroxidu sodného a zmes sa 3 minúty trepe. Organická vrstva sa oddelí a postupne sa premyje vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného. Vysušený chloroformový roztok sa pri zníženom tlaku zahustí na objem 30 ml, ku koncentrátu sa pridajú 2 ml chlóracetaldehydu, zmes sa 1 hodinu mieša pri teplote miestnosti, načo sa premyje vodou a potom nasýteným roztokom chloridu sodného. Organický roztok sa vysuší, odparí sa do sucha a olejovitý zvyšok sa chromatografuje

- na stĺpci 50 g silikagelu, s použitím chloroformu ako eluačného činidla. Žiadané frakcie sa zhromaždia a odparia sa do sucha.

• Získa sa 534 mg surového produktu.

IČ (KBr-technika, p _max)^: 1780, 1710, 1660, 1500, 1490, 1360,

1240, 1210, 1150 cm^-1.

Vzhíadom k zlému NMR spektru nebola štruktúra tejto vzorky potvrdená.

Príklad 22

Nátrium-7p-[D-2-amino-2-fenylacetamido]-3-[(Z)-3-chlór-lpropen-l-yl]-3-cefem-4-karboxylát (zlúčenina 22, BB-S1066)

Zmes 472 mg (0,7 mmól) zlúčeniny 25 a 1,5 ml trifluóroctovej kyseliny sa 15 minút mieša pri teplote 10 až 15 “C a potom sa zriedi 30 ml zmesi rovnakých dielov éteru a izopropyléteru. Vylúči sa 330 mg svetložltej zrazeniny, ktorá sa odfiltruje a rozpustí sa v 3 ml metanolu. K tomuto roztoku sa pridajú 2 ml (2 mmól) nátrium-2-etylhexanoátu v etylacetáte a zmes sa zriedi 50 ml etylacetátu. Vylúčená zrazenina sa odfiltruje a premyje sa éterom. Získa sa 244 mg surového produktu, ktorý sa rozpustí v 10 ml vody a chromátografuje sa na kolóne (50 ml) s náplňou v patróne PrepPAK-500/C^g (Waters). Kolóna sa vymýva vodou a potom 10 % metanolom. Žiadané frakcie vymyté 10 % metanolom sa spoja, zahustia sa na objem 5 ml a zvyšok sa lyofilizuje. Získa sa 60 mg pevného produktu topiaceho sa za postupného rozkladu pri 200 ’C.

IČ (KBr-technika, H_max): 1760, 1660, 1630, 1360, 1120, 1070 cm ^x.

UV (fosfátový pufor): p _nax nm (e): 243 (12700), 200 (rameno) (4200).

Príklad 23

7β-[ D-(-)-2-amino-2-fenylacetamido]-3-[(Z)-1-propen-l-yl] -3-cefem-4-karboxylová kyselina (zlúčenina 23, BB-S1065 vo forme vnútorného iónu)

co₂h

K 1,5 g (2,34 mmól) difenylmetyl-7p-[D-2-(terc.butoxykarbonylamino) -2-fenylacetamido ] -3- (1-propenyl ] -3-cef em-4-karboxylátu (zlúčenina 19) sa pridajú 3 ml trifluóroctovej kyseliny a zmes sa 20 minút mieša pri teplote miestnosti. Zriedením reakčnej zmesi 100 ml éteru sa získa 1,15 g (96 %) surového trifluóracetátu BB-S1065.

IČ (KBr-technika, < _max): 1760, 1670, 1200, 1130 cm^-1.

UV (fosfátový pufor s pH 7): _max nm (ε): 293 (8300).

1,1 g (2,25 mmól) tohto trifluóracetátu sa rozpustí v 20 ml vody a roztok sa chromatografuje na kolóne s použitím 100 ml náplne získanej z patróny PrepPAK/C₁₈ (Waters). Kolóna sa vymýva vodou, 10 % metanolom a 30 % metanolom. Eluát vymytý 30 % metanolom sa zahustí na objem 10 ml, kryštalický produkt sa oddelí, zhromaždí sa, premyje sa acetónom a vysuší sa vo vákuu nad oxidom fosforečným. Získa sa 505 mg (46 %) čistej zlúčeniny

BB-S1065 (vo forme obojakého iónu), topiaceho sa za rozkladu pri 180 až 183 °C. Čistota produktu je 95 %.

IČ (KBr-technika, p_max): 1750, 1690, 1590, 1400, 1350 cm^-1.

UV (fosfátový pufor s pH 7):

p max nm : 282 (ε 8800).

NMR (deuteriumoxid + hydrogénuhličitan sodný, hodnoty δ v ppm): 1,58 (3H, dublet, J = 6 Hz, C-CH₃), 3,3 (2H, dublet, 2-H), 5,03 (1H, dublet, J = 4,5 Hz, 6-H), 5,20 (1H, singlet,

CH-CO), 5,1 - 5,8 (1H, multiplet, CH=C), 5,63 (1H, dublet, J = 4,5 Hz, 7-H), 5,92 (1H, dublet, J = 12 Hz, CH=C), 7,4 (5H, singlet, fenylové protóny).

Príklad 24

D- (-)-2-(terc.butoxykarbonylamino)-2-(3-chlór-4-hydroxy fenyl)octová kyselina (zlúčenina 24)

Zmes 6 g (0,03 mól) 3-chlór-4-hydroxyfenyl-glycínu a 9,8 g (0,045 mól) di-terc.butyl-dikarbonátu v 120 ml 50 % vodného roztoku tetrahydrofuránu s obsahom 10 ml (0,071 mól) trietylaminu sa 3 hodiny mieša pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zahustí na objem 60 ml a koncentrát sa premyje éterom. Vodná vrstva sa okyslí 6N kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje sa 200 ml éteru. Extrakt sa premyje vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým a odparí sa do sucha. Získa sa 10 g olejovitého odparku, ktorý nestuhne ani po intenzívnej triturácii so zmesou éteru a n-hexánu.

Príklad 25

Benzhydryl-78-[D-2-(terc.butoxykarbonylamino)-2-(3-chlór-

4-hydroxyfenyl)acetamido]-3-chlórmetyl-3-cefem-4karboxylát (zlúčenina 25)

K roztoku 6,2 g (0,015 mól) zlúčeniny 2 a 5,4 g (0,018 mól) zlúčeniny 24 v 150 ml suchého tetrahydrofuránu sa pridá 3,7 g (0,018 mól) dicyklohexylkarbodiimidu a zmes sa 1 hodinu mieša pri teplote miestnosti. Dicyklohexylmočovina, ktnvá sa v priebehu miešania vylúči, sa odfiltruje a filtrát sa odparí do sucha.

Zvyšok sa extrahuje 200 ml etylacetátu, extrakt sa premyje vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného a vysuší sa síranom horečnatým. Filtrát sa odparí do sucha a olejovitý zvyšok sa chromatografuje na stĺpci 140 g silikagelu za použitia zmesi toluénu a etylacetátu (10 : 1) ako eluačného činidla. Frakcie obsahujúce žiadaný produkt sa spoja a odparia sa do sucha. Získa sa 10 g zlúčeniny 25.

IČ (KBr-technika, p_max): 1790, 1720, 1680, 1500, 1370, 1240,

1160 cm^-1.

Príklad 26

Benzhydryl-7 β-[D-2-(terc.butoxykarbonylamino)-2-(3-chlór-

4-hydroxyfenyl)acetamido]-3-(trifenylfosfónio)metyl3-cefem-4-karboxylát-jodid (zlúčenina 26)

K roztoku 10 g (0,0143 mól) zlúčeniny 25 v 100 ml acetónu sa pridá 11,2 g (0,075 mól) jodidu sodného a zmes sa 30 minút mieša pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zahustí na objem 30 ml, ku koncentrátu sa pridá 200 ml etylacetátu, zmes sa premyje vodným roztokom tiosiranu sodného, vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného a vysuší sa síranom horečnatým. Etylacetátový roztok sa sfiltruje a filtrát sa zahustí na polovičný objem. K tomuto koncentrátu sa pridá 3,9 g (0,015 mól) trifenylfosfínu a zmes sa 2 hodiny mieša pri teplote miestnosti. Z výsledného roztoku sa pridaním 300 ml éteru vyzráža zrazenina, ktorá sa odfiltruje a vysuší. Získa sa 9,2 g príslušného fosfónium-jodidu (26).

IČ (KBr-technika, p_max): 1780, 1680, 1490, 1350, 1240, 1150 cm ^Λ.

Príklad 27

ΒβηζΗγάΓγ1-7β-[d-2- (terc.butoxykarbonylamino)-2-(3-chlór-

4-hydroxyfenyl)acetamido]-3-[(Z)-1-propén-l-yl]-3-cefem4-karboxylát (zlúčenina 27)

Roztok 9,5 g (9 mmól) zlúčeniny 30 v 200 ml chloroformu sa prevrstvi zmesou 100 ml vody a 10 ml IN sodného a výsledná zmes sa 3 minúty trepe. Organická vrstva sa premyje vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým a zahustí sa zhruba na polovičný objem. Ku koncentrátu sa pridá 20 ml 90 % acetaldehydu, zmes sa 3 hodiny mieša pri teplote miestnosti, potom sa rozmieša s bezvodým síranom horeónatým a sfiltruje sa. Filtrát sa odparí do sucha a odparok sa chromatografuje na 120 g silikagelu s použitím zmesi toluénu a etylacetátu (4 : 1) ako eluačného činidla. Žiadané frakcie sa spoja a odparia sa do sucha. Trituráciou zvyšku so zmesou éteru, izopropyléteru a n-hexánu sa získa 1,33 g chráneného produktu 27.

IČ (KBr-technika, 1770, 1700, 1660, 1480, 1350, 1210,

1150 cm^-1.

Príklad 28 β—[D-2-amino-2-(3-chlór-4-hydroxyfenyl)acetamido]3-[(Z)-1-propén-l-yl]-3-cefem-4-karboxylová kyselina (Zlúčenina 28, BMY 28060)

Zmes 1,33 g (1,93 mmól) zlúčeniny 27 a 3 ml trifluóroctovej kyseliny sa 30 minút mieša pri teplote miestnosti a potom sa zriedi 50 ml zmesi rovnakých dielov éteru a izopropyléteru. Získa sa 1,072 g surového trifluóracetátu zlúčeniny 28, ktorý sa chromatografuje na náplni PrepPAK-C_lg (80 ml). Stĺpec sa vymýva vodou a 10 % metanolom. Eluát vymytý 10 % metanolom sa zahustí na objem 10 ml, pričom sa z neho vylúči kryštalická zrazenina, ktorá sa odfiltruje, premyje sa acetónom a vysuší sa vo vákuu nad oxidom fosforečným. Získa sa 238 mg zlúčeniny 28 (čistota 95 %), topiaceho sa za postupného rozkladu pri 180 až 185 ’C. Filtrát sa zahustí na objem 5 ml a podrobí sa lyofilizácii. Ako druhý podiel sa získa 154 mg produktu, ktorého čistota podía vysoko účinnej kvapalinovej chromatografie je 80 %.

IČ	(KBr-technika, max): 1760, 1680, 1570,	1410, 1390, 1350,
1290, 1270 cm-1.
UV	(fosfátový pufor s pH 7): max nm: 232 10500).	(e 10000) , 280 (e
NMR	(deuteriumoxid + hydrogénuhličitan sodný,	hodnoty δ v ppm):
	1,68 (3H, dublet, J = 6 Hz, C=C-CH3), 3,25	(1H, dublet, J =
	18 Hz, 2-H), 3,57 (1H, dublet, J = 18 Hz	, 2-H), 4,90 (1H,
	singlet, CH-CO), 5,18 (1H, dublet, J =	4,5 Hz, 6-H), 5,72
	(1H, dublet, J =4,5 Hz, 7-H), 5,5- 5,	9 (1H, multiplet,
	CH=C), 5,97 (1H, dublet, J = 12 Hz, CH=C),	7,02 (1H, dublet,
	J = 8 Hz, fenylový protón), 7,30 (1H,	dvojitý dublet,
	J = 8 a 1,5 Hz, fenylový protón), 7,50 (1H	dublet, J =1,5

Hz, fenylový protón).

Príklad 29

D- (-)-2-(terc.butoxykarbonylamino)-2-(3,4-dihydroxyfenyl)octová kyselina (29a) v zmesi so zodpovedajúcimi 3- (a 4)-mono-0-terc.butoxykarbonylderivátmi (29b)

Zmes 3,66 g (0,02 mól) 3,4-dihydroxyfenylglycínu a 9,24 (0,04 mól) di-terc.butylkarbonátu v 120 ml 50 % vodného roztoku tetrahydrofuránu obsahujúceho 10 ml (0,071 mól) trietylamínu sa 16 hodín mieša pri teplote miestnosti a potom sa zahustí na objem 60 ml. Koncentrát sa premyje 100 ml éteru, okyslí sa IN kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje sa dvakrát vždy 100 m? éteru. Spojené extrakty sa premyjú vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného, vysušia sa síranom horečnatým a odparia sa do sucha. Získa sa 8 g olejovitého zvyšku, ktorý je tvorený zmesou žiadaného

3,4-dihydroxyfenyl derivátu a zodpovedajúcich zlúčenín chránených v polohe 3 a 4 terc.-butoxykarbonylovou skupinou.

Príklad 30

Benzhydryl-7p- [ D- (-) -2- (terc. butoxykarbonylamino) -

2- (3,4-dihydroxyfenyl)acetamido]-3-chlórmetyl-3-cefem4-karboxylát (30a) a jeho zmes so zodpovedajúcimi

3- (a 4)-mono-0-terc.butoxykarbonylderivátmi (30b)

CO₂C(CH₃)₃

co₂ch<c₆h )

Zmes 8 g (0,0193 mól) zlúčeniny 2,8 g zmesi produktov z príkladu 29 a 4,12 g (0,02 mól) dicyklohexylkarbodiimidu v 200 ml suchého tetrahydrofuránu sa 1 hodinu mieša pri teplote miestnosti, reakčná zmes sa odparí do sucha, zvyšok sa rozpustí v 200 ml etylacetátu a nerozpustný materiál (dicyklohexylmočovina) sa odfiltruje. Filtrát sa premyje vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým a odparí sa za zníženého tlaku do sucha. Olejovitý zvyšok sa podrobí chromatografii na stĺpci 130 g silikagelu s použitím zmesi toluénu a etylacetátu (5:1) a zmesi toluénu a etylacetátu (2 : 1) ako eluačných činidiel. Eluát vymytý zmesou toluénu a etylacetátu (5 : 1) sa zhromaždí a odparí sa do sucha, čím sa získa 9,5 g zmesi derivátov chránených na kyslíku a dusíku terc.-butoxykarbonylovými skupinami (30b). Zhromaždením a odparením eluátu vymytého zmesou toluénu a etylacetátu (2 : 1) sa získajú 3 g 3,4-dihydroxyfenylderiváty (30a).

Zlúčenina 30a:

IČ (KBr-technika, ^_max): 1770, 1720, 1690, 1500, 1370, 1240,

1150 cm^-1.

NMR (deuterochloroform, hodnoty δ v ppm): 1,42 (9H, singlet, C-CHg), 3,4 (2H, široký singlet, 2-H), 4,30 (2H, široký singlet, CH₂-C1), 4,85 (1H, dublet, J = 4,5 Hz, 6-H), 5,07 (1H, dublet, J =6 Hz, CH-NH) , 5,74 (1H, dvojitý dublet,

J = 9a 4,5 Hz, 7-H), 6,6 - 6,9 (3H, multiplet, fenylové protóny), 6,93 (1H, singlet, CHCgH₅), 7,3 (10H, singlet, fenylové protóny).

Zmes 30b:

IČ (KBr-technika, _max): ¹⁷⁷⁰· 1150 cm^-1.

1720, 1690,

1500, 1370, 1240,

NMR (deuterochloroform, hodnoty δ v ppm):

1,42 (9H, singlet,

C-CH₃), 1,55 (9H, singlet, C-CH₃), 3,4 (2H, široký singlet, 2-H), 4,35 (2H, široký singlet, CH₂-C1), 6,9 - 7,1 (4H, multiplet, CHC₆H₅ a fenylové protóny), 7,3 (10H, singlet, fenylové protóny).

Príklad 31

Benzhydryl-7p-[D-(-)-2-(terc.butoxykarbonylamino)-

2- (3,4-dihydroxyfenyl)acetamido ]-3-trifenylfosfóniometyl-

3- cefem-4-karboxylát-jodid (31a)

co₂c(ch₃)₃ co₂ch(c₆h₅)₂

Zmes 3 g (4,4 mmól) zlúčeniny 30a a 3,3 g (22 mól) jodidu sodného v 50 ml acetónu sa 30 minút mieša pri teplote miestnosti a potom sa zahustí do sucha. Zvyšok sa extrahuje 100 ml etylacetátu, extrakt sa premyje vodným roztokom tiosíranu sodného, vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým a zahustí sa na objem 60 ml. K odparku sa pridá 1,4 g (5,3 mmól) trifenylfosfínu, zmes sa 1 hodinu mieša pri teplote miestnosti a potom sa k nej pridá 100 ml éteru, čim sa vylúči zrazenina, ktorá sa odfiltruje a premyje éterom. Získa sa 3,2 g (70 %) príslušného fosfóniumjodidu (31a).

IČ (KBr-technika, _max)^: 1780, 1680, 1480, 1430, 1360, 1240,

1150 cm^-·’’.

Analogickým postupom sa 9,5 g (12 mmól) zmesi derivátov chránených terc, butoxykarbonylovou skupinou na kyslíku (34b) sa nechá reagovať s jodidom sodným a potom s trifenylfosfinom, za vzniku 10,7 g (77 %) zmesi zodpovedajúcich trifenylfosfóniometylderivátov chránených terc, butoxykarbonylovou skupinou ako na kyslíku, tak na dusíku (31b).

IČ (KBr-technika, _max)= 1770, 1720, 1680, 1480, 1430, 1360,

1240, 1140 cm^-1.

Príklad 32

Benzhydryl-7p-[D-(-)-2-(terc.butoxykarbonylamino)-

2- (3,4-dihydroxyfenyl)acetamido]-3-[(Z)-1-propén-l-yl]-

3- cefem-4-karboxylát (32a)

K roztoku 3,15 g (3 mmól) zlúčeniny 31a a 10 ml acetaldehydu v 50 ml chloroformu sa za miešania prikvapká 8 ml (4 mmól) 0,5 N hydroxidu sodného (v priebehu 10 minút), reakčná zmes sa 1 hodinu mieša pri teplote miestnosti, potom sa premyje vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým a odparí sa pri zníženom tlaku. Olejovitý zvyšok sa chromatografuje na stĺpci 60 g silikagelu, ktorý sa vymýva najprv 2 litrami chloroformu a potom 2 % metanolom v chloroforme, pričom priebeh stĺpcovej chromatografie sa sleduje chromatografiou na tenkej vrstve (chloroform - metanol 10 : 1). Žiadané frakcie vymyté 2 % metanolom v chloroforme sa spoja a odparia sa do sucha, čím sa získa 0,8 g (40 %) žiadaného propenylderivátu (32a).

NMR (deuterochloroform, hodnoty ó v ppm): 1,28 (3H, dublet, J =

Hz, C-CH₃), 1,42 (9H, singlet, C-CH₃), 3 />5 (2H, singlet,

2-H), 4,92 (1H, dublet, J = 4,5 Hz, 6-H), 5,08 (1H, dublet,

J = 6 Hz, CH-NH), 5,3 - 5,8 (1H, multiplet, CH=C), 5,80 (1H, dublet, J = 4,5 Hz, 7-H), 6,04 (1H, dublet, J = 11 Hz,

CH=C), 6,70 (2H, singlet, fenylové protóny), 6,82 (1H, singlet, fenylový protón), 6,92 (1H, singlet, CHC₆H₅), 7,3 (10Η, singlet, fenylové protóny).

Analogickým postupom ako vyššie sa 10,5 g (9,3 mmól) zmesi derivátov chránených na kyslíku v polohe 3 a 4 a na dusíku terc, butoxykarbonylovou skupinou (32b) nechá reagovať s acetaldehydom za vzniku 3,3 g (46 %) zodpovedajúceho 3-propenylderivátu 32b.

IČ (KBr-technika, _max): ¹⁷⁷⁰' 1700, 1500, 1370, 1240, 1150 .·» cm¹.

NMR (deuterochloroform, hodnoty δ v ppm): 1,4 (9H, singlet,

C-CH₃), 155 (9H, singlet, C-CH₃), 3,25 (2H, singlet, 2-H),

6,07 (1H, dublet, J = 11 Hz, CH=C), 6,9 - 7,1 (4H, multiplet, CH-C₆H₅ a fenylové protóny), 7,3 - 7,5 (10H, multiplet, fenylové protóny).

Príklad 33

7β-[D-(-)-2-amino-2-(3,4-dihydroxyfenyl)acetAmido ]3-[(Z)-1-propén-l-ylJ-3-cefem-4-karboxylová kyselina (zlúčenina 33, BMY 28068)

(Z) ch=chch₃

Zmes 0,8 g (1,2 mmól) zlúčeniny 32a, 0,8 rr.l anizolu a 3 ml trifluóroctovej kyseliny sa 5 minút mieša pri teplote miestnosti, načo sa zriedi 25 ml éteru a 25 ml izopropyléteru. Vylúčená zrazenina sa odfiltruje a premyje sa izopropyléterom, čim sa získa 557 mg surového trifluóracetátu zlúčeniny 37. Roztok tohto surového produktu v 10 ml vody sa vyčistí stĺpcovou chromatografiou na 100 ml náplne PrepPAK-C_lg (Waters). Stĺpec sa vymýva vodou a potom 5 % metanolom. Eluát vymytý 5 % metanolom, obsahujúci žiadaný produkt, sa zahustí na objem 5 ml a podrobí sa lyofilizácii. Získa sa 231 mg (47 %) zlúčeniny 33 vo forme obojakého iónu,, s 90 % čistotou. Produkt sa topí za postupného rozkladu pri 200 ’C.

IČ ( _max): 1760, 1690, 1580, 1530, 1400, 1360, 1290, 1270 cm^-1.

UV (fosfátový pufor s pH 7): _max 233 (e 9200), 281 (e 11000).

NMR (deuteriumoxid, hodnoty 8 v ppm): 1,68 (3H, dublet, J = 6 Hz, C-CH₃), 3,26 (1H, dublet, J = 18 Hz, 2-H), 3,58 (1H, dublet,

J = 18 Hz, 2-H), 5,18 (1H, singlet, CHNH), 5,22 (1H, dublet,

J = 4,5 HZ, 6-H), 5,5 - 5,9 (2H, multiplet, CH=C s 7-H) ,

5,97 (1H, dublet, J = 11 Hz, CH=C), 7,05 (3H, multiplet, fenylové protóny).

Analogickým postupom sa z 3,3 g (4,3 mmól \ zmesi derivátov chránených na kyslíku a dusíku terc.butoxykarbonylovými skupinami (32b) získa 1,3 g (75 %) zlúčeniny 33 vo forme obojakého iónu (čistota 90 %). Tento produkt má rovnaké spektroskopické údaje ako zlúčenina uvedená vyššie.

Príklad 34

D-(-)-2-(terc.butoxykarbonylamino)-2-(4-hydro-3metoxyfenyl) octová kyselina (zlúčenina 34)

Zmes 2,96 g (0,015 mól) D-(-)-2-amino-2-(4-hydroxy- 3metoxyfenyl)octovej kyseliny a 3,6 g (0,0165 mól) di-terc.butyldikarbonátu v 100 ml 50 % vodného tetrahydrofuránu obsahujúceho 4,2 ml (0,03 mól) trietylamínu sa 16 hodín mieša pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zahustí na objem 50 ml, koncentrát sa premyje 50 ml éteru, okyslí sa IN kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje sa dvakrát vždy 100 ml éteru. Spojené extrakty sa premyjú vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného, vysušia sa a odparia sa do sucha. Získa sa tak 4,38 g zlúčeniny 34 vo forme penovítej pevnej hmoty.

NMR (deuterochloroform, hodnoty δ v ppm): 1,4 (9H, singlet,

-C-CH₃), 3,8 (3H, singlet, OCH₃), 5,15 (1H, dublet, J = 6 Hz, CH-NH), 6,85 (3H, singlet, fenylové protóny).

Príklad 35

Benzhydryl-7p-[D-(-)-2-(terc.butoxykarbonylamino)-

2- (4-hydroxy-3-metoxyfenyl)acetamido]-3-chlórmetyl-

3- cefem-4-karboxylát (zlúčenina 35) r η ·*..· r- 52 -

COOCH(C₆H₅)₂ cooc(ch₃)₃

Zmes 4,3 g zlúčeniny 34, 5g (0,012 mól) zlúčeniny 2 a 3 g (0,015 mól) dicyklohexylkarbodimiidu sa mieša v prostredí 150 ml suchého tetrahydrofuránu 2 hodiny za teploty miestnosti, potom sa vyzrážaný derivát močoviny odfiltruje a filtrát sa zahustí do sucha. Zvyšok sa rozpustí v 200 ml etylacetátu, roztok sa premyje vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného a po vysušení bezvodým síranom horečnatým a filtráciou so zahustením filtrátu do sucha získa olejovitý zvyšok, ten sa chromatografuje na stĺpci 100 g silikagelu, ktorý sa eluuje zmesou toluénu a etylacetátu (4 : 1), pričom priebeh chromatografovania na stĺpci sa sleduje chromatografiou na tenkej vrstve (toluén/etylacetát 1 : 1 alebo chloroform/metanol 50 : 1). Frakcie, obsahujúce žiadaný produkt, sa spoja a všetko sa zahustí do sucha. Získa sa tak 7 g žiadaného 3-chlórmetylcefemderivátu (zlúčenina 35) vo forme penovitej pevnej hmoty.

NMR (hodnoty δ v ppm): 1,4 (9H, singlet, C-CH₃), 3,45 (2H, široký singlet, 2-H), 3,83 (3H, singlet, OCH₃), 4,32 (2H, singlet,

-CH₂C1), 4,92 (1H, dublet, J = 4,5 Hz, 6-H), 5,13 (1H, dublet, J = 6 Hz, CH-NH), 5,65 (1H, dublet, J = 6 Hz, NH),

5,80 (1H, dvojitý dublet, J = 8, 4,5 Hz, 7-H), 6,85 (3H, singlet, fenylové protóny), 6,95 (1H, singlet, CH-C₆H₅), 7,2

- 7,5 (10H, multiplet, fenylové protóny).

Príklad 36

Benzhydryl-7p-[D-(-)-2-(terc.butoxykarbonylamino)2- ( 4-hydroxy-3-metoxyfenyl)acetamido]-3-trifenylfosfóniometyl-3-cefem-4-karboxylát-jodid (zlúčenina 36)

Zmes 7 g (0,01 mól) zlúčeniny 35 a 7,5 g (0,05 mól) jodidu sodného sa mieša v prostredí 100 ml acetónu 30 minút za teploty * miestnosti, načo sa odparí do sucha. Zvyšok sa rozpustí v 200 ml etylacetátu, roztok sa premyje vodným roztokom tiosíranu sodného, • vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa roztok zahustí na objem 100 ml. Po pridaní 3,1 g (0,012 mól) trifenylfosfínu sa mieša reakčná zmes hodinu za teploty miestnosti, zriedi sa pridaním 100 ml éteru, vylúčený pevný podiel sa odsaje a po premytí éterom sa vysuší. Získa sa tak 5,8 g trifenylfosfóniového derivátu (zlúčenina 40). Éterický filtrát sa zahustí na objem 10 ml, k zvyšku sa pridá 300 ml éteru a ako druhý podiel sa takto izoluje 0,9 produktu. Celkový výťažok: 6,7 g.

Príklad 37

Benzhydryl-7 β-[D-(-)-2-(terc.butoxykarbonylamino)2- ( 4-hydroxy-3-metoxyfenyl)acetamido]-3-[(Z)-1-propén1-yl]-3-cefem-4-karboxylát (zlúčenina 37) (Z)

cooc(ch₃)₃

Do zmesi 5,8 g (5,5 mmól) zlúčeniny 36 a 10 ml 90 % ného acetaldehydu v 100 ml chloroformu sa prikvapkáva počas 25 minút 11 ml (5,5 mmól) 0,5 N roztoku hydroxidu sodného a reakčná zmes sa mieša za teploty miestnosti 2 hodiny. Premýva sa potom vodou, nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a zahustí do sucha. Olejovitý zvyšok sa chromatografuje na stĺpci 130 g silikagelu, eluovanie sa vykoná zmesou toluénu a etylacetátu s postupne sa meniacim pomerom zložiek 4 : 1 (1,3 litra), 3 : 1 (1,1 litra), 2 : 1 (1 liter).

Odoberajú sa frakcie po 20 ml, frakcie č. 26 až 59 sa spoja a všetko sa zahustí do sucha. Získa sa tým 830 mg žiadaného 3propenylderivátu (zlúčenina 37). Produkt tvorí penovitá látka.

NMR (deuterochloroform, hodnoty δ v ppm): 1,35 (3H, dublet, =CH-CH₃), 1,4 (9H, singlet, C-CH₃), 3,85 (3H, singlet,

O-CH₃), 6,07 (1H, dublet, J = 11 Hz, -CH-C).

Príklad 38

7β-[D-(-)-2-amino-2-(4-hydroxy-3-metoxyfenyl)acetamido]3-[(Z)-1-propén-l-yl]-3-cefem-4-karboxylová kyselina (zlúčenina 38, BMY-28097)

CH₃O COOH

Zmes 830 mg (1,2 mmól) zlúčeniny 37, 0,5 ml anizolu a 2 ml trifluóroctovej kyseliny sa mieša 5 minút za teploty miestnosti, potom sa zriedi pridaním 30 ml éteru a 30 ml izopropyléteru. Vylúčená zrazenina sa odsaje, premyje sa izopropyléterom a vysuší sa. Získa sa 437 mg surového trifluóracetátu zlúčeniny 42. Tento surový produkt sa chromatografuje na stĺpci 100 ml náplne

PrepPÄK-C18	(Waters), stĺpec sa premýva	vodou	a 5	%-ným
metanolom.	Týmto	rozpúšťadlom získaný eluát	sa ’ahustí na	objem
5 ml a lyofilizuje. Získa sa tak 225 mg zlúčeniny	4 2 vo	forme
obojakého	iónu s	čistotou 90 %. Produkt	sa topí	za rozkladu
v rozmedzí	176 až	180 ’C.
IČ <	1760,	1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280	cm 1.

UV (fosfátový pufor, pH 7): _nax nm: 235 (ε10000), 280 (ε

11000) .

NMR (deuteriumoxid, hodnoty δ v ppm): 1,68 (3H, dublet, J = 6 Hz,

C-CH₃), 3,25 (1H, dublet, J = 18 Hz, 2-H), 3,57 (1H, dublet,

J = 18 Hz, 2-H), 4,01 (1H, singlet, OCH₃), 5,10 (1H, singlet, CH-CO), 5,19 (1H, dublet, J = 4,5 Hz, H-6), 5,78 (1H, dublet,

J = 4,5 Hz, 7-H), 5,5 - 5,9 (1H, multiplet, CH=C), 5,98 (1H, dublet, J = 11 Hz, CH=C), 7,07 (2H, rir.glet, fenylové protóny), 7,17 (1H, široký singlet, fenylový protón).

Vysoko účinná kvapalinová chromatografia, retenčná doba 9,3 min. (0,02 M acetátový pufor, pH 4, obsahujúci 15 % acetonitrilu).

Príklad 39

Izolácia zlúčeniny 38 z moču krýs, kŕmených zlúčeninou 33 samcom krýs (Wistar) s hmotnosťou 400 až 600 g sa orálne podá zlúčenina 33 v dávke 100 mg/kg, krysy sa umiestnia v oceľových klietkach kvôli metabolickým testom a po dobu 24 hodín sa zhromažďuje ich moč. V priebehu pokusu sa krysám podáva bežná potrava, príjem vody nie je obmedzovaný. V nasledujúcom prehľade sú uvedené objemy moču, ako boli zachytené v uvedených časových intervaloch.

	0-2	Hodín 2-4 4-6	6-24	celkom
objem moču (ml)	18	19.5 13	42	92.5
Moč (objem	približne 90 ml)	sa uprav·	í pridaním IN
chlorovodíkovej	kyseliny	na pH 3,	zrazenina	sa odfiltruje,

filtrát sa chromatografuje na stĺpci 300 ml adsorbentu HP-20, ten sa vymýva použitím 2 litrov vody a 2 litrov 30 %-ného metanolu, pričom sa priebeh chromatografie sleduje vysoko účinnou kvapalinovou chromatografiou. Frakcie s obsahom bioaktívnej zložky vymyté 30 % metanolom sa spoja, všetko sa zahustí na objem 10 ml a po lyofilizácii tohto zvyšku sa získa 390 mg hnedej pevnej látky, ktorá sa rozpustí v 20 ml vody a roztok sa chromatografuje na stĺpci 200 ml náplne PrepPÄK-C₁₈ (Waters). Stĺpec sa postupne vymýva vodou, 5 %-ným a 10 %-ným metanolom. Prvá polovica eluátu po vymytí 5 %ným metanolom sa zahustí na objem 5 ml, lyofilizuje sa, získa sa tým 44 mg zlúčeniny 33 (čistota 70 %), obsahujúca nečistoty z moču. Druhá polovica eluátu po vymytí 5 %-ným metanolom sa zahustí na objem 5 ml a lyofilizáciou sa získa 36 mg produktu (zmes zlúčenín 33, 38 a nečistôt z moču). Eluát po vymytí 10 %ným metanolom (asi 600 ml) sa zahustí na objem 5 ml a lyofilizáciou sa z neho získa 38 mg zlúčeniny 38 (čistota 70 % podlá vysoko účinnej kvapalinovej chromatografie), ktorá sa opäť chromatografuje na 40 ml náplne, ako to bolo uvedené vyššie. Eluovanie sa vykonáva vodou, 5 %-ným a 10 %-ným metanolom, frakcie vymyté 10 %-ným metanolom sa spoja a zahustia na objem 5 ml. Lyofilizovaním tohto odparku sa získa 16 mg zlúčeniny 38 (čistota 90 % podlá vysoko účinnej kvapalinovej chromatografie, 0,02 M acetátový pufor, pH 4, acetonitril 85 : 15). Produkt sa topí za postupného rozkladu pri 180 °C.

IČ (KBr-technika, 1280 cm^-1.

_max): 1760, 1690, 1590, 1530, 1400, 1360,

UV (fosfátový pufor, pH 7): _max nm: 233 (e8200), 280 (ε 8800).

* NMR (deuteriumoxid, hodnoty S v ppm): 1,68 (3H, dublet, J = 6 Hz,

-C-CH₃), 3,26 (1H, dublet, J = 18 Hz, 2-H), 3,58 (1H, dublet, ^c J = 18 Hz, 2-H), 4,01 (3H, singlet, OCH₃), 5,12 (1H, singlet,

CH-CO), 5,21 (1H, dublet, J = 4,5 Hz, 6-H), 5,78 (1H, dublet, J = 4,5 Hz, 7-H), 5,5 - 5,9 (1H, multiplet, CH=C-) 5,98 (1H, dublet, J = 11 Hz, CH=C-), 7,07 (2H, singlet, fenylové protóny), 7,17 (1H, široký singlet, fenylový protón).

Porovnaním spektier NMR, IČ a UV a výsledkov, dosiahnutých pri vysoko účinnej kvapalinovej chromatografii so zlúčeninou 38, pripravenou v príkladoch potvrdená štruktúra hore uvedeného metabolitu, tohto metabolitu 34 až 38 bola totiž 7β—[D—(—)—

2-amino-2-(4-hydroxy-3-metoxyfenyl)acetamido]-3-[(Z)-1-propén-lyl]-3-cefem-4-karboxylovéj kyseliny.

Claims (4)

1. D-2-aminoacyl-3-(Z)-propenylcefalosporínové deriváty všeobecného vzorca I,

CH=CH-CH₃

COOH (I) í, kde

R¹ znamená vodík, skupinu hydroxylovú alebo alkoxylovú s jedným až štyrmi atómami uhlíka alebo chlór,

R² znamená vodík alebo hydroxylovú skupinu, ako i zodpovedajúce deriváty, kde aminoskupina, d’alej skupina karboxylová a/alebo hydroxylová je chránená chrániacimi skupinami, vybranými zo súboru, zahrňujúceho skupiny aralkylové až do dvadsiatich uhlíkových atómov, hlavne skupinu benzylovú, p-metoxybenzylovú či difenylmetylovú, alkylové až do desiatich atómov uhlíka, hlavne terc.-butylovú alebo halogénalkylové skupiny až do dvoch uhlíkových atómov a s až do troch atómov halogénov, hlavne trichlórmetylovú a 2,2,2-trichlóretylovú, ako i vhodné zodpovedajúce farmaceutický spôsobilé soli.

2. Cefalosporínové deriváty podľa nároku 1, ktorými sú

7p-[D-2-amino-2-(4-hydroxyfenyl)-acetamido]-3-[(Z)-l-propén1-yl]-3-cefem-4-karboxylová kyselina,

7β-[D-2-amino-2-fenylacetamido]-3-[(Z)-1-propén-l-yl]-3-cefem4-karboxylová kyselina, * 7β-[D-2-amino-(3-chlór-4-hydroxyfenyl)-acetamido]-3[(Z)-1-propén-l-yl]-3-cefem-4-karboxylová kyselina,

7 β—[D-2-amino-2-(3,4-dihydroxyfenyl)-acetamido]-3-[(Z)-1propén-l-yl]-3-cefem-4-karboxylová kyselina, alebo

7 β — [D-2-amino-2-(4-hydroxy-3-metoxyfenyl)-acetamino]-3[(Z)-l-propén-l-yl]-3-cefem-4-karboxylová kyselina, * či zodpovedajúca farmaceutický vhodná soľ.

3. Spôsob výroby cefalosporinových derivátov všeobecného vzorca I podľa nároku 1 alebo 2, vyznačujúci sa tým, že sa

A. vykoná v prostredí inertného organického rozpúšťadla za teploty 20 až 150 °c reakcia halogenidu všeobecného vzorca

QCH₂X alebo CH₃.CH₂.X kde X znamená chlór, bróm alebo jód a Q znamená niektorú z d’alej uvedených skupín íl kde R¹ má významy uvedené v nároku 1,

P¹, P² a P³ znamenajú chrániacu skupinu karboxylovej funkcie, ako to bolo uvedené v nároku 1, n = 1,

Ac znamená acylovú skupinu,

B znamená alkylidénovú alebo aralkylidénovú skupinu, s triarylfosfinom Ar₃P, hlavne trifenylfosfinom, čím sa získa fosfóniová soľ,

B. tá sa prevedie v prostredí kvapalného organického rozpúšťadla, nemiešatelného s vodou, pôsobením vodného roztoku bázy na fosforanylový derivát ako medziprodukt všeobecného vzorca

QCH=PAr₂ alebo CH₃CH=PAr₃ s tým, že všeobecné symboly majú významy uvedené v stupni A. nároku 3,

C. vykoná sa reakcia zlúčeniny zo stupňa B. v bezvodom prostredí za teploty od -40 do +50 ’C v uvedenom organickom rozpúšťadle, nemiešateľnom s vodou, s acetaldehydom, alebo sa vykoná za tých istých reakčných podmienok reakcia zlúčeniny všeobecného vzorca CH₂CH=PAr₃ s karbonylovým derivátom všeobecného vzorca QCHO, kde Q má významy, uvedené v stupni A. ,

D. a potom sa zavedie do takto získaného 3-substituovaného derivátu 7-aminocef-3-ému, ak je to žiaduce, tak po odstránení jednej či viacerých z chrániacich skupín P¹, R², P³, Ac a B, ako boli definované v stupni A., alebo po redukcii S-oxidov 7-acylová skupina všeobecného vzorca kde R¹ a R² majú významy podľa nároku 1, a

E. prípadne sa prevedie takto získaná zlúčenina na zodpovedajúcu adičnú soľ kyseliny alebo na soľ kovu.

4. Farmaceutický prípravok, obsahujúci najmenej jednu zlúčeninu podľa nárokov 1 alebo 2 spolu s farmaceutický vhodným nosičom či riedidlom.