DE3402642C2

DE3402642C2 -

Info

Publication number: DE3402642C2
Application number: DE3402642A
Authority: DE
Inventors: Hideaki Ichikawa Chiba Jp Hoshi; Jun Yokohama Jp Okumura; Yoshio Abe; Shimpei Tokyo Jp Aburaki; Takayuki Kawasaki Jp Naito
Original assignee: Bristol Myers Co
Current assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1983-01-28
Filing date: 1984-01-26
Publication date: 1989-11-09
Also published as: NO165027C; IT8419346A0; FI840300L; NL8400229A; ES529171A0; YU44393B; SE8400419D0; FI881929A0; NO840334L; GB8402255D0; DK35384A; SK61684A3; HK73690A; CZ280411B6; BE898778A; IE56784B1; FI81356B; NL190581B; FI81356C; FI840300A0

Description

Die Erfindung betrifft D-2-Aminoacyl-3-(Z)-propenylcephalosporin verbindungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und pharma zeutische Mittel, die diese Verbindungen enthalten. Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind zur Bekämpfung bakte rieller Infektionen brauchbar.

Eine Möglichkeit zur Herstellung der erfindungsgemäßen, in 3-Stellung substituierten Vinylcephalosporine besteht in der Verwendung von 3-Formylceph-3-em-Verbindungen als Zwischenprodukte. Diese Zwischenprodukte können durch Oxidation der entsprechenden 3-Hydroxymethylceph-3-eme, die durch enzymatische Hydrolyse der entsprechenden Cephalosporine erhältlich sind, hergestellt werden. Dieses Verfahren ist in der US-PS 33 51 596, in der unter anderem die Verbindungen II und III offenbart sind, beschrieben.

In dieser Patentschrift wurden auch Derivate der 3-CHO- Gruppe mit Carbonylreagenzien, wie Semicarbazid und Hydroxylamin, offenbart, eine Alkylierung des Kohlenstoffs der 3-CHO-Gruppe ist jedoch nicht beschrieben.

Die entsprechenden Sulfoxide sind stabiler und können in besserer Ausbeute hergestellt werden (GB-PS 13 41 712).

3-Alkenyl-substituierte Cephalosporine wurden zuerst in der GB-PS 13 42 241 (entsprechend den US-PS 37 69 277 und 39 94 884) beschrieben. Die Verbindungen IV und V finden sich auf den Seiten 25 und 29 der Britischen Pa tentschrift.

Diese Verbindungen wurden durch Umsetzung der entspre chenden 3-Triphenylphosphoniummethylcephalosporine mit Formaldehyd oder Acetaldehyd hergestellt. Das inverse Verfahren, nämlich die Umsetzung eines Phosphoranylidin derivats der Formel

R₃P=CR³R⁴

mit einem 3-CHO-Cephalosporin ist ebenfalls in dieser Patentschrift auf Seite 5 beschrieben. In der US-PS 41 07 431 wird erwähnt, daß die Verbindung IV nach oraler Verabreichung absorbiert wird.

Weiter wurden derartige Verbindungen von Webber et al., J. Med. Chem. 18 (10) 986-992, (1975), und in der US-PS 40 65 620 beschrieben, welche in den Spalten 3, 4 und 5 die Art von Verbindungen angibt, der die erfin dungsgemäßen Verbindungen angehören. Konkret offenbart wurden die Verbindungen der Formel VI:

Weitere Abwandlungen dieses Typs sind in den US-PS 40 94 978 und 41 12 087 beschrieben, worin die Verbin dungen VII und VIII aufgeführt sind.

US-PS 40 94 978, Spalte 44

US-PS 41 12 087, Spalte 31

Weitere 3-Alkenyl-substituierte Cephalosporine sind in den folgenden Publikationen offenbart:

US-PS 38 30 700:
3-(Nitrostyryl)cephalexinanaloga
US-PS 39 83 113 @	US-PS 40 40 806 @	US-PS 41 39 618:	3-(Heterocyclothio)propenylcephalosporine
US-PS 41 47 863:	3-(1-Methyl-5-tetrazolyl)vinylcephalosporine
DE-OS 30 19 445:	3-(Sulfonyloxy)vinylcephalosporine
FR-PS 24 60 302:	3-(Dimethylamino)vinylcephalexinanaloga
EU-PS 30 630:	7-[(3-Methansulfonamidophenyl)-α-aminoacetamido]-3-vinylceph-3-em-4-carbonsäure
US-PS 42 55 423 @	US-PS 43 90 693:	7-(2-Thienyl)acetamido-3-(3-acetoxy-1-propenyl) und -3-(Heterocyclovinyl)ceph-3-em-4-carbonsäuren und 7α-methoxyanaloga.

Die wichtigsten handelsüblichen, oral wirksamen Cephalos porine - die erfindungsgemäßen Verbindungen sind für den gleichen Verwendungszweck vorgesehen - sind Cepha lexin, Cefadroxil, Cephradin und Cefaclor. Diese Ver bindungen entsprechen den Formeln IX, X, XI und XII.

Diese Verbindungen sind Gegenstand folgender Patente:

Cephalexin
- US-PS 35 07 861
Cefadroxil	- US-PS 34 89 752 (Re 29, 164)
Cefaclor	- US-PS 39 25 372
Cephradin	- US-PS 34 85 819

Verbindungen mit ähnlicher Struktur sind 3-Chlorcefa droxin und 3-Hydroxycefadroxil, die in der US-PS 34 89 751 und in der GB-PS 14 72 174 beschrieben sind.

Gegenstand der Erfindung sind substituierte Vinylcepha losporine der allgemeinen Formeln I

worin

R¹ für ein Wasserstoffatom, OH, eine C₁-C₄-Alkoxy gruppe oder ein Chloratom steht,
R² für ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxygruppe steht,

sowie die Derivate mit üblichen Schutzgruppen an den Amino-, Carboxy- und/oder Hydroxygruppen und die pharma zeutisch verträglichen Salze.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind als oral wirksame Cephalosporinantibiotika mit starker Wirksamkeit gegen Gram-positive Bakterien brauchbar. Sie besitzen darüber hinaus im Vergleich zu Cephalexin, Cefadroxil, Cefaclor und Cephradin ein verbessertes Aktivitätsspektrum gegen Gram-negative Bakterien, schwierig zu bekämpfenden Bak terien und Anaerobiern. Weiter führen sie nach oraler Verabreichung zu einer länger anhaltenden Antibiotikum konzentration im Blutkreislauf und sind zur Verabreichung an Menschen auf der Basis von einer oder zweier Gaben pro Tag geeignet. Als solche werden sie in Dosen von 100 bis 5000 mg pro Tag in Abhängigkeit von der Größe des Patienten und dem Erkrankungszustand verabreicht. Sie können ebenso parenteral in ähnlichen Dosierungen verabreicht werden.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind daher zur Behandlung bakterieller Infektionen, die durch sensitive Organismen verursacht wurden, bei Säugetieren, einschließlich des Menschen, brauchbar. Zu diesem Zweck werden sie oral oder parenteral in einer antibakteriell wirksamen, nicht toxischen Dosis als solche oder in Form eines pharmazeu tisch verträglichen Säureadditionssalzes, pharmazeutisch verträglichen Metall- oder Aminsalzes oder eines phar mazeutisch verträglichen Esters verabreicht.

Pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze sind solche, bei denen das Anion nicht wesentlich zur Toxizi tät des Salzes beiträgt und die mit den üblichen pharma zeutischen Trägern verträglich und zur oralen oder paren teralen Verabreichung geeignet sind. Derartige Salze umfassen die Salze von Verbindungen der Formel I mit Mineralsäuren, wie Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Phosphorsäure und Schwefelsäure, mit organischen Carbonsäuren oder organischen Sulfon säuren, wie Essigsäure, Citronensäure, Maleinsäure, Bern steinsäure, Benzoesäure, Weinsäure, Fumarsäure, Mandel säure, Ascorbinsäure, Apfelsäure, Methansulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, sowie mit weiteren, auf dem Peni cillin- und Cephalosporingebiet bekannten und angewandten Säuren. Die Herstellung derartiger Salze erfolgt anhand üblicher Verfahren durch Umsetzung einer Verbindung der Formel I mit einer im wesentlichen äquivalenten Menge der Säure.

Pharmazeutisch verträgliche Metall- und Aminsalze sind diejenigen Salze der Verbindungen der Formel I, die unter Umgebungsbedingungen stabil sind und bei denen das Kation nicht wesentlich zur Toxizität oder biologischen Aktivität des Salzes beiträgt. Geeignete Metallsalze sind Natrium-, Kalium-, Barium-, Zink- und Aluminiumsalze. Natrium- oder Kaliumsalze sind bevorzugt. Aminsalze, die aus beispielsweise im Zusammenhang mit Benzylpenicillin verwendeten Aminen hergestellt werden und die in der Lage sind mit der sauren Carboxylgruppe stabile Salze zu bilden, sind Trialkylamine, wie Tri etylamin, Procain, Dibenzylamin, N-Benzyl-β-phenethyl amin, 1-Ephenamin, N,N′-Dibenzylethylendiamin, Dehydro abietylamin, N-Ethylpiperidin, Benzylamin und Dicyclo hexylamin.

Pharmazeutisch verträgliche Ester sind diejenigen Ester, die per se wirksam sind oder die pro-Drugs insofern dar stellen als sie im Körper unter Bildung des Antibiotikums per se hydrolysiert werden. Geeignete Ester der letzten Art sind Phenacyl-, Acetoxymethyl-, Pivaloyloxymethyl- α-Acetoxyethyl-, α-Acetoxybenzyl-, α-Pivaloyloxyethyl-, 3-Phthalidyl-, 5-Indanyl-, Methoxymethyl-, Benzoyloxy methyl-, α-Ethylbutyryloxymethyl-, Propionyloxymethyl-, Valeryloxymethyl-, Isobutyryloxymethyl-, Glycyloxymethyl ester und weitere auf dem Penicillin- und Cephalosporin gebiet bekannte Ester.

Die Verbindungen der Formel I und ihre wie oben definierten Salze können zur oralen oder parente ralen Anwendung in üblicher Weise unter Verwendung bekann ter pharmazeutischer Träger und Exzipienzien formuliert werden. Sie können in Einheitsdosisform oder in Mehrfach dosisbehältern dargeboten werden. Die pharmazeutischen Mittel können in Form von Tabletten, Kapseln, Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen vorliegen. Die Verbindungen können auch in Form von Suppositorien unter Verwendung üblicher Suppositoriengrundlagen, wie Kakaobutter oder anderen Fettmaterialien, formuliert werden. Falls ge wünscht, können die Verbindungen in Kombination mit ande ren Antibiotika, einschließlich Cephalosporinen, Peni cillinen und Aminoglykosiden, verabreicht werden.

Die Tabelle 1 enthält eine Zusammenfassung der Struktur merkmale der in den Beispielen beschriebenen Verbindungen.

Tabelle 1

In Tabelle 2 sind in vitro-antibakterielle Aktivitäten von erfindungsgemäßen Verbindungen zusammengestellt. Die Aktivitäten sind in Form von minimalen Hemmkonzentra tionen angegeben, die mit Hilfe der Agar-Verdünnungs technik für drei, mit Gp-Ia, Gp-Ib und Gn-Ia bezeichneten Gruppen von Organismen bestimmt wurden. Jede dieser Or ganismusgruppen setzt sich aus fünf einzelnen Mikroorganis menstämmen zusammen, die in der Fußnote zu der Tabelle angegeben sind. Die Gp-Ia-Organismen sind Gram-positive Staphylococci, die Penicillin-sensitiv sind. Die Gp-Ib- Organismen sind Gram-positive Staphylococci, die Penicllin- resistent sind und Penicillinase produzieren. Die Gn-Ia-Organismen sind Gram-negative Bakterien, die Ampi cillin- und Cephalothin-sensitiv sind. Die erfindungsge mäßen Verbindungen haben im allgemeinen eine geringe Aktivität gegenüber Ampicillin- und Cephalothin-resisten ten Gram-negativen Bakterien. Aus der Tabelle 2 können hinsichtlich der in vitro antibakteriellen Aktivität dieser Verbindungen die nachfolgenden Schlüsse gezogen werden.

Alle Verbindungen besitzen eine gute Aktivität gegenüber Penicillin-sensitiven Staphylococci (Gp-Ia). Die Akti vität gegenüber Penicillin-resistenten Staphylococci (Gp-Ib) ist im allgemeinen um den Faktor drei oder mehr geringer. In jedem Fall sind die Verbindungen jedoch um ein Mehrfaches wirksamer als Cephalexin und Cefadroxil.

Die Verbindungen besitzen auch gute Aktivität gegenüber Gram-negativen Bakterien (Gn-Ia).

Eine Ringsub stitution ist der antibakteriellen Aktivität in keiner Weise abträglich, vgl. Verbindungen 8, 12, 17 und 27. Verbindung Nr. 22 scheint hinsichtlich der obigen Schluß folgerungen eine Ausnahme darzustellen, sie ist jedoch, wie in Tabelle 3 gezeigt, eine stark wirksame Substanz sowohl gegenüber Gram-positiven als auch gegenüber Gram- negativen Bakterien.

Tabelle 2

Agar Verdünnungstechnik (Mueller-Hinton-Agar)

Minimale Hemmkonzentration (mcg/ml)

Die Tabelle 3 enthält Vergleichsdaten für die in vitro- antibakterielle Aktivität gegenüber den gleichen Organis men, wie in Tabelle 2 angegeben, wobei zwei verschiedene bakteriologische Kulturmedien verwendet wurden. Mueller- Hinton-Agar ist das Standardmedium, das in den in Tabelle 2 beschriebenen Tests verwendet wurde. Tabelle 3 enthält einen Vergleich der minimalen Hemmkonzentrationen von drei der Testverbindungen, welche zuerst in Mueller- Hinton-Medium und anschließend in Nährmittel-Agar bestimmt wurden. Die Verbindung Nr. 8, die in 4-Stellung des Phenylrings durch eine Hydroxygruppe substituiert ist, und die Verbindung Nr. 27, die ein 3-Methoxy-4-hydroxy- Substitutionsmuster am Phenylring aufweist, besitzen einen nur mäßigen Mediumeffekt. Damit soll zum Ausdruck gebracht werden, daß sich die MHK-Werte um weniger als den Faktor 3 unterscheiden. Die 3,4-Dihydroxyphenyl- substituierte Verbindung Nr. 22 ergibt eine um den Faktor 6 bis 12 verschiedene Aktivitätsdifferenz zwischen den beiden Medien, wobei die in Nährmittelagar bestimmten minimalen Hemmkonzentrationen weit niedriger liegen als die in Mueller-Hinton-Agar bestimmten. Infolgedessen ist die Verbindung Nr. 22 hinsichtlich ihres antibakteriel len Effektes mit den anderen in Tabelle 2 angegebenen Cephalosporinen vergleichbar, die in 3-Stellung eine cis-Propenylgruppe aufweisen. Das Phenomen einer unter schiedlichen antibiotischen Aktivität in verschiedenen Nährmedien wurde bereits früher untersucht und ver öffentlicht, vgl. T.A. Pursiano et al. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Teil 3, Nr. 1, Seiten 33-39 (1973).

Tabelle 3

Vergleich der Testmedien

Agar Verdünnungstechnik

Minimale Hemmkonzentrationen (mcg/ml)

Die anhand der voranstehenden in vitro-Untersuchungen abgeleiteten Struktur-Aktivitäts-Korrelationen werden durch in vivo-Untersuchungen an Mäusen bestätigt. In Tabelle 4 ist die jeweilige Schutzdosis für Mäuse zusam mengestellt, die mit einem letalen Bakterieninoculum infiziert wurden. Man verwendete dazu zwei verschiedene Bakterienarten, nämlich einen Gram-positiven Organismus und einen Gram-negativen Organismus. Die Schutzdosis (PD₅₀) ist diejenige Dosis, die nach Verabreichen an eine Gruppe von infizierten Mäusen nach fünf Tagen zu einer Überlebensrate von 50% führt. Normalerweise ster ben unbehandelte infizierte Mäuse innerhalb von drei Tagen nach der Injektion des lethalen Inoculums.

Tabelle 4

Schutzdosis für Mäuse, die mit einem letalen Inoculum¹) infiziert wurden

Orale Verabreichung

Die Daten in Tabelle 4 wurden anhand mehrerer unterschied licher Versuche erhalten. Dabei wurde Cephalexin als Vergleichsverbindung verwendet, die PD₅₀-Werte für diese Verbindung im gleichen Versuch sind in Klammern neben den PD₅₀-Werten der zu testenden Verbindungen angegeben. Es ist ersichtlich, daß alle Cephalosporine eine gute Aktivität gegenüber Infektionen mit Gram-positiven Staphylococcus aureus und gegenüber Infektionen mit Gram-negativen E. coli Juhl besitzen.

Die Tabelle 5 enthält vergleichende Blutspiegeldaten für Mäuse, die oral und intramuskulär mit den in Tabelle 1 aufgeführten Verbindungen behandelt wurden. Es ist ersichtlich, daß alle Verbindungen gleichmäßig gut oral absorbiert werden. Die Verbindung Nr. 22 ergibt nach oraler Verabreichung außergewöhnlich hohe Blutspiegel werte bei Mäusen. Es wurde gezeigt, daß diese Verbindung bei Ratten in die Verbindung Nr. 27 metabolisiert wird, vgl. Beispiel 28. Verbindung Nr. 22 ist die 3,4-Dihydroxy phenylverbindung, während die Verbindung Nr. 27 die ent sprechende 3-Methoxy-4-hydroxyphenylverbindung ist, die eine starke in vitro und in vivo-Aktivität besitzt.

Tabelle 5

Blutspiegelwerte bei Mäusen

Die Tabelle 6 enthält weitere in vivo-Daten für die Ver bindung Nr. 8 gegenüber vier weiteren Organismen im Ver gleich zu Cephalexin, Cefachlor und Cefadroxil. Die Ta bellen 7 und 8 enthalten in vitro Vergleichsdaten für Verbindung Nr. 8 gegenüber Cephalexin, Cefadroxil und Cefachlor bezüglich einer Reihe von Streptococci, Neisseria, Haemophilis und verschiedener Anaerobier.

In Versuchen zur Rückgewinnung der Verbindungen aus Rattenurin hat sich ergeben, daß der Wert für die Rück gewinnung der Verbindung Nr. 8 aus dem Urin oral behan delter Ratten nach 24 Stunden mit dem für Cephalexin und Cefadroxil erhaltenen Wert vergleichbar und größer als der für Cefachlor erhaltene Wert ist. Stabilitätsunter suchungen, bei denen die Verbindung Nr. 8 mit Cephalexin und Cefachlor in Lösung unter Verwendung von Phosphatpuf fer bei pH 6,5 und pH 7,0, Menschenserum (pH 6,8), Pferde serum (pH 7,6) und Kälberserum (pH 8,2) als Träger ver glichen wurde, haben erbracht, daß die Stabilität der Verbindung Nr. 8 größer ist als diejenige von Cefachlor und vergleichbar der Stabilität von Cephalexin ist.

Tabelle 6

Schutzdosis PD₅₀ bei Mäusen, die mit einem letalen Inoculum infiziert wurden

Orale Behandlung

Tabelle 7

In Vitro-Aktivität gegenüber Streptococci, Neisseria und Haemophilis

MHK (mcg/ml)

Tabelle 8

In Vitro Aktivität gegenüber Anaerobier

In den folgenden Tabellen IX und X sind die minimalen Hemmkonzentrationen folgender Verbindungen zusammengestellt:

Alle Verbindungen besaßen D-Konfiguration.

Tabelle 9

Gram Negative Bakterien

Geometrisches Mittel der minimalen Hemmkonzentrationen (mcg/ml)

Mueller-Hinton-Agar

Tabelle 10

Gram Positive Bakterien

Geometrisches Mittel der minimalen Hemmkonzentrationen (mcg/ml)

Mueller-Hinton-Agar

Tabelle 11

Geometrisches Mittel der minimalen Hemmkonzentrationen (mcg/ml)

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen erfolgt auf den Synthesewegen, die in den eingangs im Zusammen hang mit den geeigneten Ausgangsmaterialien erwähnten GB-PS 13 42 241, US-PS 39 94 884 und 41 07 431 be schrieben sind. Die Einführung der Propenyl gruppe in 3-Stellung der erfindungsgemäßen Verbindungen umfaßt im wesentlichen die Umsetzung einer Halogenid verbindung mit einem Triarylphosphin zu einem Phosphonium salz, das durch Behandeln mit einer Base in eine Phos phoranylverbindung überführt wird. Diese wird dann mit einer Carbonylverbindung zu den erfindungsgemäßen Ver bindungen umgesetzt. Dabei enthält entweder die Halogenid verbindung oder die Carbonylverbindung den Cephalosporin kern. Der Reaktionsablauf wird durch die nachfolgenden Reaktionsschemata erläutert.

In diesen Reaktionsschemata bedeutet R³ eine Methylgruppe Q steht für den 7-Amino-3-cephem-3-yl-4-carbonsäurekern, wobei die Ami no- und Carbonsäuregruppen Schutzgruppen aufweisen können, wie Silylgruppen oder weitere, dem Fachmann auf dem Ge biet der beta-lactam-Antibiotika bekannte Gruppen, oder einen 7-Acylamino-3-cephem-3-yl-4-carbonsäurerest, wobei die 7-Acylaminogruppe eine Gruppe darstellt, die üblicher weise in Cephalosporinantibiotika vorliegt, einschließ lich der erfindungsgemäß verwendeten, in der Formel I definierten α-Amino-α-substituierten Phenyl acetamidogruppe. Im einzelnen bedeutet Q einen Rest der folgenden Formeln:

worin

R¹ die oben angegebenen Bedeutungen besitzt,
n für 0 oder 1 steht und die Zahl der an den Schwefel gebundenen Sauerstoffatome betrifft,
Ac eine üblicherweise bei 7-Acylaminocephalosporinen vorliegende Acylgruppe bedeutet, wie Phenylacetyl oder Phenoxyacetyl, und
B eine von einem Aldehyd oder Keton abgeleitete Alky liden- oder Aralkylidenschutzgruppe bedeutet, wie die Benzylidengruppe, die in einer nachfolgenden Reak tionsstufe leicht, beispielsweise durch Hydrolyse unter Verwendung von Girard′s Reagens T, abgespalten wird, und
P¹, P² und P³ Wasserstoffatome oder üblicherweise in der Cephalosporinchemie verwendete Schutzgruppen für Amino-, Hydroxy- und Carboxylgruppen bedeuten.

Geeignete Carbonylschutzgruppen (P²) sind beispielsweise Aralkylgruppen, wie eine Benzyl-, p-Methoxybenzyl-, p-Nitrobenzyl- und Diphenylmethyl-(benzhydryl)alkyl-Gruppen; Alkylgruppen, wie die t-Butylgruppe; Halogenalkylgruppen, wie die 2,2,2-Trichlorethylgruppe und weitere in der Literatur, beispielsweise in der GB-PS 13 99 086 beschrie bene Carboxylschutzgruppen. Vorzugsweise verwendet man Carboxylschutzgruppen, die sich leicht durch Behandlung mit Säuren entfernen lassen, insbesondere die Benzhydryl- oder t-Butylgruppe.

Amino- und Hydroxyschutzgruppen (P¹ und P³) sind dem Fachmann bekannt und umfassen beispielsweise die Trityl- und Acylgruppen, wie die Chloracetyl-, Formyl-, Trichlor ethoxycarbonyl-, t-Butoxycarbonyl- oder Carbobenzyloxy gruppe usw. Auch hier werden Aminoschutzgruppen bevorzugt, die sich leicht durch Behandlung mit Säuren entfernen lassen, insbesondere die t-Butoxycarbonylgruppe.

Wenn der Cephalosporinkern Q in den Reaktionsschemata 1 und 2 in Form des 1-Oxids (n=1) zur Anwendung kommt, stellt man diese Oxide anhand bekannter Verfahren, wie Oxidation des entsprechenden Cephalosporins (n=0) mit m-Chlorperbenzoesäure oder Peressigsäure, her. In einer späteren Synthesestufe wird das 1-Oxid mittels bekannter Verfahren reduziert, beispielsweise mit Jodidionen in wäßrigem Medium.

Die Umwandlung der Halogenidverbindung der Formel QCH₂X gemäß dem Schema 1 in die Phosphoranylverbindung wird vorzugsweise unter Verwendung eines Halogenids durch geführt, in dem X ein Jodatom bedeutet. Wenn man als Halogenidverbindung ein Chlorid oder Bromid verwendet, kann man dieses zuerst durch Behandlung mit Natriumjodid in Dimethylformamid oder Aceton in das entsprechende Jodid überführen. Die Jodidverbindung reagiert leicht mit einem Triarylphosphin, wie Triphenylphosphin, in einem organischen flüssigen Träger, der gegenüber den Reaktanten unter den Reaktionsbedingungen inert ist. Geeignete Bedingungen sind Raumtemperatur und eine Reak tionszeit, die kurz sein kann, die sich jedoch auch über mehrere Stunden erstrecken kann. Neben Triphenyl phosphin sind geeignete Triarylphosphine solche Verbin dungen, die leicht verfügbar sind und reaktionsverträg liche Arylgruppen besitzen, wie substituierte Phenyl gruppen, z. B. Tolyl-, Naphthyl-, substituierte Naphthyl- und heteroaromatische oder substituierte heteroaromatische Gruppen. Die erste Reaktionsstufe umfaßt die Bildung des Triarylphosphoniumsalzes, das üblicherweise aus der Lösung ausfällt und abfiltriert wird. Das Triarylphospho niumsalz wird dann in einem geeigneten flüssigen organi schen Lösungsmittel gelöst, das mit Wasser nicht misch bar und unter den Reaktionsbedingungen inert ist, bei spielsweise in Chloroform, Trichlorethylen oder anderen polychlorierten oder -bromierten Methan- oder Ethanver bindungen. Die Phosphoranylverbindung wird anschließend in situ durch Behandlung dieser Lösung mit wäßrigen Alkali metallcarbonat, -bicarbonat oder -hydroxid bei Raumtempe ratur hergestellt. Die organische Schicht, die die Phos phoranylverbindung enthält, wird abgetrennt, mit Wasser gewaschen und in üblicher Weise getrocknet. Anschließend gibt man zu der trockenen Lösung der Phosphoranylverbin dung die im Reaktionsschema aufgeführte Carbonylverbindung. Der letzte Reaktionsschritt erfolgt dann bei Raumtempera tur in relativ kurzer Zeit oder während ungefähr 2 bis 20 Stunden. Das gewünschte Produkt der Formel QCH=CHR³ wird anhand bekannter Laborverfahren, wie Chro matographie an einer Silikagelsäule gewonnen.

Die in Schema 1 angegebenen Halogenidverbindungen der Formel QCH₂X werden aus den entsprechenden 7-Amino- oder 7-Acylamino-3-hydroxymethyl-ceph-3-em-4-carbonsäurederi vaten anhand im Prinzip bekannter Verfahren gewonnen.

Die Umwandlung der Halogenidverbindung der Formel R³CH₂X in die Phosphoranylverbindung gemäß Schema 2 kann mit der entsprechenden Chlorid-, Bromid- oder Jodidver bindung (X=Cl, Br oder J) erfolgen. Gewünschtenfalls kann die Chlorid- oder Bromidverbindung wie oben beschrie ben in die Jodidverbindung überführt werden, dieser Schritt ist jedoch nicht wesentlich. Die Umsetzung mit dem Triarylphosphin, wie Triphenylphosphin, wird entwe der ohne Lösungsmittel oder in einem organischen flüssi gen Träger, der unter den Reaktionsbedingungen inert ist, durchgeführt. Die Reaktion kann bei Raumtemperatur oder erhöhten Temperaturen während 1 bis 24 Stunden bei 20 bis 150°C erfolgen. Das Triarylphosphoniumsalz fällt üblicherweise aus und wird abfiltriert. Es wird an schließend in einem geeigneten flüssigen organischen Lösungsmittel, wie Dimethylsulfoxid oder einem Lösungs mittel, das mit Wasser nicht mischbar ist, wie Äther, oder Tetrahydrofuran, gelöst und mit einer Base, wie Butyllithium, Phenyllithium, Natriummethoxid oder Natrium hydrid während eines Zeitraumes von einigen Minuten bis zu einigen Stunden bei einer Temperatur im Bereich von -40°C bis +50°C behandelt. Anschließend gibt man zu der trockenen Reaktionslösung die Carbonylverbindung und läßt bei -40°C bis +50°C eine bis mehrere Stunden rea gieren. Das gewünschte Produkt der Formel

wird wie oben beschrieben, gewonnen.

Die Reaktionsfolge gemäß Schema 1 eignet sich besonders zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen. In einer als Verfahren A bezeichneten Variation der Reaktionsfolge gemäß Schema 1 wird 7β-[-[α(N-t-Butoxy-carbonylamino)α-(p-hydroxyphenyl)- acetamido]-3-chlormethyl-3-cephem-4-carbonsäure als Halogenidverbindung verwendet. Dieses Verfahren wird anhand der Beispiele 4, 5 und 6 erläutert.

Eine weitere Variation der Reaktionsfolge gemäß Schema 1 wird als Verfahren B bezeichnet. Dabei stellt man, wie oben beschrieben, den 7-Amino-3-chlormethyl-3-cephem- 4-carbonsäurebenzhydrylester her und schützt die 7-Amino gruppe durch Umsetzung mit Benzaldehyd, wobei man die Benzyliden-Schutzgruppe erhält.

Die letztere Verbindung wird dann durch Behandlung mit Triphenylphosphin in das Phosphoniumsalz überführt, das anschließend mit einer Base in die entsprechende Phospho ranylverbindung umgewandelt wird. Diese behandelt man mit Acetaldehyd, wobei man die 3-Propenyl- 7-aminocephalosporensäure erhält, die dann zur Einführung der gewünschten Acylgruppe in 7-Stellung acyliert werden kann.

Von der Reaktionsfolge gemäß Schema 2 werden 2 Variatio nen vorgeschlagen. Gemäß der ersten, dem Verfahren C, stellt man, wie oben beschrieben, die 3-Hydroxymethyl- 7-phenylacetamido-3-cephem-4-carbonsäure her, wobei die Carbonsäure als Benzhydrylester geschützt wird und in die entsprechende 3-Formylverbindung überführt wird. Diese läßt man dann, gemäß Schema 2, mit der aus der Halogenidverbindung der Formel R³CH₂X erhaltenen Phos phoranylverbindung reagieren und führt die gewünschte 7-Acylaminogruppe mittels Acylaustausch ein.

Das Verfahren D ist eine weitere Variation des Reaktions schemas 2, wobei die blockierte 7-p-Hydroxyphenylglycyl amido-3-formyl-3-cephem-4-carbonsäure als Carbonylver bindung verwendet wird.

Die 7-Phenylacetamidocephalosporansäure ist ein geeigne tes Ausgangsmaterial, weil sie leicht verfügbar ist. Die Acetoxygruppe kann leicht enzymatisch unter Verwen dung von Weizenkleie als Enzymquelle zur 7-Phenyl acetamido-3-hydroxymethyl-ceph-3-em-4-carbonsäure hydro lysiert werden. Die Carbonsäuregruppe kann in Form des Benzhydrylesters geschützt werden, den man durch Behand lung der Säure mit Diphenyldiazomethan erhält. Der Ester wird dann mit Phosphorpentachlorid unter bekannten Reak tionsbedingungen behandelt, was zu einer Spaltung der 7-Phenylacetylgruppe und Umwandlung der 3-Hydroxmethyl gruppe in eine 3-Chlormethylgruppe führt. Die Herstellung des 7-Amino-3-chlormethyl-3-cephem-4-carbonsäurebenzhy drylesters gemäß diesen Verfahren ist in den Beispielen 1 und 2 erläutert.

Alternativ kann die 7-Phenylacetamido-3-hydroxymethylceph- 3-em-4-carbonsäure in die 3-Halogenmethylverbindung und anschließend in die Phosphoranylverbindung überführt werden. Daran anschließend erfolgt die Umsetzung mit Acetaldehyd zur Herstellung des 3-Propenylcephalosporins gemäß einer der Varianten des Reak tionsschemas 1.

Der Cephalosporin-3-carboxaldehyd der Formel QCH=O, der als Carbonylverbindung in Reaktionsschema 2 verwendet wird, wird durch Oxidation eines 7-Acylamino-3-hydroxy methyl-ceph-3-em-4-carbonsäureesters, wie in der erwähn ten US-PS 33 51 596 beschrieben, hergestellt. Das Reak tionsschema 2 beschreibt den weniger bevorzugten Synthe seweg.

Beispiel 1 Benzhydryl-3-hydroxymethyl-7β-phenylacetamido-3-cephem- 4-carboxylat (Verbindung 1)

Zu einer Suspension von Weizenkleie (20 g, trocken) in Phosphatpuffer (pH 7, 162,5 ml) gibt man unter Rühren bei Raumtemperatur 7-Phenylacetamidocephalosporansäure natriumsalz (5 g; 12,1 mMol) in einer Portion. Der Ver lauf der Reaktion wird mittels HPLC bis zur vollständi gen Hydrolyse verfolgt (5 h). Die Suspension wird zur Entfernung der Weizenkleie filtriert und das Filtrat auf 5 bis 10°C zur extraktiven Veresterung gekühlt. Zu der gekühlten Lösung gibt man Methylenchlorid (32 ml) und anschließend eine 0,5 M Lösung von Diphenyldiazo methan in Methylenchlorid (24 ml). Der pH wird mit 28%iger Phosphorsäure dann auf 3,0 eingestellt. Nach 1 h läßt man die Temperatur der Reaktionsmischung auf 20°C steigen. Man gibt Heptan (56 ml) langsam zu und iso liert die erhaltene, kristalline Titelverbindung durch Filtration. Die Ausbeute beträgt 3,0 g (50%).

Beispiel 2 Benzhydryl-7β-amino-3-chlormethyl-3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 2)

Zu einer Aufschlämmung von PCl₅ (8,3 g; 40 mMol) in CH₂Cl₂ (1000 ml) gibt man Pyridin (32, g; 40 mMol) und rührt die Mischung 20 min bei 20°C. Zu dieser Mischung gibt man auf einmal unter Rühren bei -40°C Benzhydryl- 3-hydroxymethyl-7-phenylacetamido-3-cephem-4-carboxylat (1) (5,1 g; 10 mMol). Die Mischung rührt man 15 min bei -10°C und läßt sie dann 7 h bei -10 bis -15°C stehen. Zu der gekühlten Lösung (1-20°C) gibt man Propan-1,3- diol (10 ml) und läßt die Mischung 16 h bei -20°C und anschließend 20 min bei Raumtemperatur unter Rühren ste hen. Die erhaltene Lösung wird mit Eis-Wasser (2×20 ml) und gesättigter, wäßriger NaCl (10 ml) gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Den gummi artigen Rückstand (12 g) löst man in einer Mischung von CHCl₃ und n-Hexan (2 : 1) und chromatographiert ihn an einer Kieselgelsäule (200 g), wobei man das gleiche Lö sungsmittel als Eluierungsmittel verwendet. Diejenigen Fraktionen, die die Titelverbindung enthalten, verdampft man im Vakuum. Der Rückstand wird mit n-Hexan verrieben, wobei man das Produkt 2 (2,1 g; 51%), Fp. 110°C (Zers.), erhält.

IR: ν _KBr 3400, 2800, 1785, 1725 cm^-1;
UV: λ 265 nm 160);
NMR: δ DMSO-d₆ + CDCl₃ ppm 3,69 (2 H, s), 4,43 (2 H, s), 5,09 (1 H, d, J=4,5 Hz), 5,24 (1 H, d, J=4,5 Hz), 6,87 (1 H, s), 7,3 (10 H, m).

Beispiel 3 Benzhydryl-7β-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxy phenyl)-acetamido]-3-chlormethyl-3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 3)

Zu einer Mischung von 20,7 g (0,05 Mol) Benzhydryl-7- amino-3-chlormethyl-3-cephem-4-carboxylat (2) und 20 g (0,075 Mol) D-2-(t-Butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxy phenyl)-essigsäure in 500 ml trockenem Tetrahydrofuran (THF) gibt man 15,45 g (0,075 Mol) N,N′-Dicyclohexyl carbodiimid (DCC) und rührt die Mischung 2 h bei Raum temperatur und verdampft dann zur Trockene. Den Rück stand löst man in 1 l Ethylacetat (AcOEt) und filtriert den unlöslichen Dicyclohexylharnstoff ab. Das Filtrat wird mit wäßriger Natriumbicarbonatlösung, Wasser und gesättigter, wäßriger Kochsalzlösung gewaschen, über was serfreiem Natriumsulfat getrocknet und die Lösung zur Trockene eingedampft. Der ölige Rückstand wird an ei ner Kieselgelsäule (Wako gel C-100, 500 g) chromatogra phiert, wobei man mit 4 l Chloroform und 6 l 1%igem Chloroform-Methanol eluiert. Die gewünschten Fraktionen werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Der ölige Rückstand wird mit Ether-Isopropylether verrieben, wo bei man 30,6 g (92%) der Verbindung (3) erhält.

IR: ν cm^-1 1790, 1710, 1670, 1500, 1360, 1230, 1150;
NMR: δ CDCl₃ ppm 1,45 (9 H, s. C-CH₃), 3,4 (2 H, br. s, 2-H), 4,28 (2 H, s, CH₂Cl), 4,86 (1 H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,12 (1 H, d, 6 Hz, CH-CO), 5,68 (1 H, dd, 8 und 4,5 Hz, 7-H), 6,63 (2 H, d, 9 Hz, Phenyl-H), 6,93 (1 H, s, CH-Ph₂), 7,08 (2 H, d, 9 Hz, Phenyl-H), 7,0-7,5 (10 H, m, Phenyl-H).

Der ölige Rückstand kann ohne weitere chromatographische Reinigung in Beispiel 4 eingesetzt werden.

Beispiel 4 Benzhydryl-7β-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxy phenyl)-acetamido]-3-jodmethyl-3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 4)

Eine Mischung von 26,6 g (0,04 Mol) 3 und 18 g (0,12 Mol) Natriumjodid in 400 ml Aceton wird 2 h bei Raumtempera tur gerührt und zur Trockene eingedampft. Den Rückstand extrahiert man mit 400 ml Ethylacetat und wäscht den Ex trakt mit wäßriger Na₂S₂O₃-Lösung, Wasser und gesättigter, wäßriger NaCl-Lösung. Nach dem Verdampfen des Lösungs mittels verreibt man den Rückstand mit Ether-Isopropyl ether, wobei man 27 g (89%) der Titelverbindung erhält. Falls gewünscht, kann die Ethylacetatlösung direkt in der nächsten Stufe (Verbindung 5) ohne Isolierung der Verbindung 4 eingesetzt werden.

IR: ν cm^-1 1790, 1710, 1670, 1500, 1360, 1220, 1150;
NMR: δ CDCl₃ ppm 1,47 (9 H, s, C-CH₃), 3,3-3,6 (2 H, m, 2-H), 4,20 (2 H, s, CH₂), 4,89 (1 H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,12 (1 H, d, 6 Hz, CH-CO), 5,68 (1 H, dd, 8 und 4,5 Hz, 7-H), 6,62 (2 H, d, 9 Hz, Phenyl-H), 6,92 (1 H, s, CHPh₂), 7,08 (2 H, d, 9 Hz, Phenyl-H), 7-7,5 (10 H, m, Phenyl-H).

Beispiel 5 Benzhydryl-7β-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxy phenyl)-acetamido]-3-(triphenylphosphonio)-methyl-3-ceph em-4-carboxylat-jodid (Verbindung 5)

Eine Mischung von 15,1 g (0,02 Mol) 4 und 15,7 g (0,06 Mol) Triphenylphosphin in 200 ml Ethylacetat rührt man 1 h bei Raumtemperatur. Der erhaltene Niederschlag wird abfiltriert, wobei man 17,4 g (85,5%) 5 mit einem Schmelzpunkt von 170 bis 180°C erhält. Das Filtrat wird auf 100 ml eingeengt und das Konzentrat mit 500 ml Ether verdünnt, wobei man einen zweite Fraktion (1,1 g) 5 er hält. Die Gesamtausbeute beträgt 18,5 g (91%). Die Ge samtausbeute an 5, ausgehend von Verbindung 2, beträgt 74,5%. Diese Ausbeute kann auf 87,5% gesteigert werden, wenn man die Reinigungs- und Isolierungsstufen, wie oben angegeben, wegläßt.

IR: ν cm^-1 1780, 1670, 1490, 1420, 1350, 1240, 1150, 1090;
NMR: δ DMSO ppm 1,42 (9 H, s, C-CH₃), 3,45 (2 H, br. s, 2-H), 5-5,4 (3 H, m, 3-H und 6-H), 5,7 (1 H, m, 7-H), 6,63 (2 H, d, 9 Hz, Phenyl-H), 7,1-7,45 (12 H, m, Phenyl-H), 7,5-7,9 (15 H, m, Phenyl-H).

Elementaranalyse: für C₅₂H₄₉N₃O₇SPJ
berechnet: C 61,36%; H 4,85%; N 4,13%; S 3,15%;
gefunden: C 61,26%; H 4,82%; N 4,11%; S 3,92%.

Beispiel 6 Benzhydryl-7β-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxy phenyl)-acetamido]-3-[(Z)-1-propen-1-yl]-ceph-3-em-4- carboxylat (Verbindung 6)

Zu einer Lösung von 1,8 g (1,77 mMol) 5 in 100 ml Chlo roform gibt man 100 ml Wasser, das 2 ml (2 mMol) N Natri umhydroxid enthält, und schüttelt die Mischung 5 min. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Wasser gewa schen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Die Chloroformlösung wird filtriert und das Filtrat unter vermindertem Druck auf 50 ml eingeengt. Zu dem Konzentrat gibt man 1 g Acetaldehyd und rührt die Mi schung 2 h bei Raumtemperatur und verdampft anschließend zur Trockene. Der ölige Rückstand wird an einer Silika gelsäule (Wako-gel C-200, 50 g) chromatographiert, wobei man mit Chloroform und Chloroform-Methanol (99 : 1) elu iert. Die gewünschten Fraktionen werden vereinigt und das Lösungsmittel verdampft, wobei man 318 mg (28%) der Verbindung 6, Fp. 120 bis 130°C (Zers.), erhält.

IR: ν cm^-1 1780, 1670, 1710, 1490, 1360, 1210, 1150;
NMR: δ CDCl₃ ppm 1,3-1,5 (12 H, m, C-CH₃), 3,22 (2 H, br. s, 2-H), 4,90 (1 H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,15 (1 H, br. d, CH-CO), 5,5-6,1 (3 H, m, CH=CH und 7-H), 6,63 (2 H, d, 9 Hz, Phenyl-H), 6,91 (1 H, s, CH-Ph), 7,09 (2 H, d, 9 Hz, Phenyl-H), 7,2-7,5 (10 H, m, Phenyl-H).

Beispiel 7 Natrium-7β-[D-2-amino-2-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-3- [(Z)-1-propen-1-yl]-3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 7, BMY-28100 Natriumsalz

Eine Mischung von 318 mg (0,48 mMol) 6 und 2,5 ml Tri fluoressigsäure (TFA) wird 1 h bei Raumtemperatur ge rührt und anschließend mit 50 ml Ether und 50 ml Iso propylether verdünnt. Der abgeschiedene Niederschlag wird abfiltriert und mit Ether gewaschen, wobei man 188 mg (77%) des Trifluoracetats von 7 erhält, das in 2 ml Methanol (MeOH) gelöst wird. Zu dieser Lösung gibt man 2 ml (2 mMol) einer Lösung von Natrium-2-ethyl hexanoat (SEH) in Ethylacetat und verdünnt die Mischung mit 30 ml Ethylacetat, um den Niederschlag abzuscheiden. Der Niederschlag wird abfiltriert, mit Ether gewaschen und im Vakuum über P₂O₅ getrocknet, wobei man 144 mg (73%, bezogen auf Verbindung 6) an roher Verbindung 7 erhält. Das Rohprodukt (135 mg) löst man in 10 ml Wasser und chromatographiert die Lösung an einer Säule (25 mm× 100 mm) unter Verwendung von etwa 20 ml PrepPak-500/C₁₈ (Waters) als Füllmaterial. Die Säule wird mit Wasser elu iert, das Eluat, das das gewünschte Produkt enthält, wird auf 5 ml konzentriert und lyophilisiert, wobei man 93 mg (69%) der Verbindung 7, Fp. 200°C (allmähliche Zers.), erhält. Die geschätzte Reinheit beträgt 60% (mittels HPLC).

IR: ν cm^-1 1760, 1660, 1590, 1400, 1360, 1250;
UV: λ nm (ε) 227 (11300), 280 (8200);
NMR: δ D₂O ppm 1,65 (3 H, d, 6 Hz, -C-CH₃), 3,21 (1 H, d, 18 Hz, 2-H), 3,52 (1 H, d, 18 Hz, 2-H), 5,12 (1 H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,68 (1 H, d, 4,5 Hz, 7-H), 5,5-5,9 (1 H, m, Vinyl-H), 5,95 (1 H, d, 11,5 Hz, Vinyl-H), 6,94 (2 H, d, 8 Hz, Phenyl-H), 7,36 (2 H, d, 8 H 7, Phenyl-H).

Man löst 11,9 g des oben hergestellten Roh produktes 7 in dem Zustand, in dem es sich vor der chro matographischen Reinigung befindet, in 50 ml 0,01 M Phosphatpuffer (pH 7,2)-Methanol (85 : 15) und stellt mit 6 N Chlorwasserstoffsäure den pH der Lösung auf 6 ein. Diese Lösung wird mittels Hochdruck-Flüssigkeitschro matographie (HPLC) (prepPAK-500/C₁₈, System 500, Waters) unter Verwendung eines 0,01 M Phosphatpuffers (pH 7,2), der 15% Methanol enthält, behandelt. Das Eluat wird mittels analytischer HPLC untersucht, wobei festgestellt wird, daß die erste 4-l-Fraktion das cis-Isomer BMY- 28100 enthält. Die zweite 1-l-Fraktion enthält das trans- Isomer und wird auf 500 ml eingeengt. Das Konzentrat stellt man mittels verdünnter Chlorwasserstoffsäure auf pH 3 ein und chromatographiert es an einer HP-20-Säule (100 ml) und eluiert mit jeweils 1 l Wasser und 30%igem Methanol. Das letztere Eluat mit einem Volumen von un gefähr 300 ml wird auf 10 ml eingeengt und lyophili siert, wobei man 290 mg des rohen trans-Isomeren (55% Reinheit) erhält. Dieses Material wird in 100 ml 50%igem Methanol gelöst und mit Aktivkohle behandelt. Das Fil trat engt man auf ein Volumen von 20 ml ein und läßt es über Nacht bei 5°C stehen. Das Produkt kristallisiert in Form farbloser Prismen, die abfiltriert und im Va kuum getrocknet werden. Man erhält 129 mg, Fp. 230°C (Zers.). Es handelt sich um die E-Propenylverbindung.

Beispiel 8 Kristalline 7β-[D-2-Amino-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]- 3-[(Z)-1-propen-1-yl]-3-cephem-4-carbonsäure (Verbin dung 8, BMY-28100)

Die erste 4-l-Fraktion, die gemäß dem oben be schriebenen präparativen HPLC-Verfahren erhalten wurde und die das cis-Isomer (BMY-28100) enthält, wird auf ein Volumen von 2 l eingeengt. Den pH des Konzentrats stellt man mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure auf 3 ein. Die Lösung gibt man auf eine HP-20 (1 l) enthaltende Säule und wäscht die Säule mit 6 l Wasser, bis der pH der ab laufenden Flüssigkeit 7 beträgt. Die Säule wird dann mit 4 l 30%igem wäßrigem Methanol eluiert. Das Eluat wird mittels HPLC untersucht. Die entsprechenden Fraktionen werden vereinigt (etwa 2,5 l) und bei einer Temperatur von weniger als 40°C und bei verringertem Druck auf 50 ml eingeengt. Es bildet sich ein kristalliner Nieder schlag. Das Konzentrat kühlt man 2 h auf 0°C und fil triert den kristallinen Niederschlag ab, wäscht ihn mit 80%igem wäßrigem Aceton, anschließend mit 100%igem Aceton und trocknet ihn dann im Vakuum über P₂O₅, wobei man 4,09 g der reinen, kristallinen, angestrebten Verbin dung, Fp. 218 bis 220°C (Zers.), in Form farbloser Prismen erhält, die gemäß HPLC-Untersuchung eine Rein heit von 95% aufweisen.

IR: ν cm^-1 1750, 1680, 1560, 1520, 1460, 1390, 1350, 1270, 1235;
UV: λ nm (ε) 228 (12300), 279 (9800);
NMR: δ D₂O+NaHCO₃ ppm 1,71 (3 H, d, 6 Hz, C-CH₃), 3,27 (1 H, d, 18 Hz, 2-H), 3,59 (1 H, d, 18 Hz, 2-H), 5,18 (1 H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,22 (1 H, s, CHCO), 5,73 (1 H, d, 4,5 Hz, 7-H), 5,5-6,0 (1 H, m, CH=C), 6,02 (1 H, d, 11 Hz, CH=C), 6,98 (2 H, d, 9 Hz, Phenyl-H), 7,41 (2 H, d, 9 Hz, Phenyl-H).

Elementaranalyse: für C₁₈H₁₉N₃O₅s · ½ H₂O
berechnet:
C 54,26%; H 5,06%; N 10,55%; S 8,05%;
gefunden:
C 54,15%; H 5,13%; N 10,30; S 8,38;
C 54,19%; H 5,08%; N 10,42; S 8,04.

Die nach der Kristallisation erhaltene Mutterlauge wird auf ein Volumen von 10 ml eingeengt und mit 20 ml Aceton behandelt. Beim Aufbewahren der Lösung über Nacht im Kühlschrank bildet sich ein kristalliner Niederschlag, der abfiltriert und im Vakuum über P₂O₅ getrocknet wird; die Menge beträgt 670 mg (Reinheit 90% gemäß HPLC). 560 mg dieses Materials löst man in 200 ml 50%igem wäßri gem Methanol und behandelt die Lösung mit 0,5 g Aktiv kohle und filtriert ab. Das Filtrat wird bei vermindertem Druck und bei 40°C auf ein Volumen von 20 ml konzen triert und anschließend 5 h bei 5°C gehalten. Das Pro dukt kristallisiert, es wird abfiltriert, mit Aceton ge waschen und im Vakuum über P₂O₅ getrocknet, wobei man 227 mg kristallines BMY-28100 (98% Reinheit, mittels HPLC bestimmt) erhält. Lyophilisierung der Mutterlauge ergibt 181 mg BMY-28100, das eine Reinheit von 95% (HPLC) aufweist.

Beispiel 9 Benzhydryl-7β-[D-2-(6-butoxycarbonylamino)-2-phenylacet amido]-3-(triphenylphosphonio)-methyl-3-cephem-4-carb oxylat-jodid (Verbindung 9)

Eine Mischung von 14,5 g (0,0196 mMol) Benzhydryl-7-[D- (-)-α-(t-butoxycarbonylamino)-α-phenylacetamido]-3-jod methyl-3-cephemm-4-carboxylat und 5,24 g (0,02 Mol) Tri phenylphosphin in 300 ml Ethylacetat wird 2 h bei Raum temperatur gerührt. Zu der Reaktionsmischung gibt man 200 ml Ether, wobei sich ein Niederschlag bildet, der abfiltriert und mit Ether gewaschen wird. Man erhält 14,3 g (73%) der Titelverbindung. Das Filtrat engt man auf 50 ml ein und verdünnt das Konzentrat mit Ether, wo bei man 2,4 g einer zweiten Fraktion des Produktes er hält. Die Gesamtausbeute beträgt 16,7 g (85%).

IR: ν cm^-1 1780, 1690, 1480, 1420, 1350, 1240, 1150.

Beispiel 10 Benzhydryl-7β-[D-2-(6-butoxycarbonylamino)-2-phenylacet amido]-3-[(Z)-1-propen-1-yl]-3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 10)

Zu einer Lösung von 5 g (5 mMol) Verbindung 9 in 200 ml Chloroform gibt man eine Mischung von 100 ml Wasser und 5 ml (5 mMol) N Natriumhydroxid und schüttelt die Mi schung 3 min. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Wasser und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Die Chloro formlösung filtriert man, das Filtrat wird unter ver mindertem Druck auf 100 ml eingeengt. Zum Konzentrat gibt man 3 ml Acetaldehyd und rührt die Mischung 1,5 h bei Raumtemperatur und verdampft zur Trockene. Der ölige Rückstand wird an einer Silikalgelsäule (Kieselgel 60, 50 g) unter Eluierung mit Chloroform chromatographiert. Die gewünschten Fraktionen werden vereinigt und zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wird mit n-Hexan ver rieben, wobei man 990 mg (31%) der Titelverbindung (10) erhält.

IR: ν cm^-1 1780, 1710, 1660, 1510, 1490, 1360, 1240, 1210, 1150;
NMR: δ CDCl₃ ppm 1,3-1,5 (12 H, m, -C-CH₃), 3,22 (2 H, s, 2-H), 4,93 (1 H, d, 4,5 H7, 6-H), 5,23 (1 H, d, 8 Hz, CH-CO), 5,5-6,2 (3 H, m, 7-H u. Vinyl-H), 6,94 (1 H, s, CHPh), 7,2-7,5 (15 H, m, Phenyl-H).

Beispiel 11 Natrium-7β-[D-2-amino-2-phenylacetamido]-3-[(Z)-1-pro penyl]-3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 11, BB-S1065)

Eine Mischung aus 0,94 g (1,47 mMol) Verbindung 23 und 3 ml TFA wird 30 min bei Raumtemperatur gerührt, und dann verdünnt man die Mischung mit 50 ml einer 1 : 1-Mi schung von Ether-Isopropylether, wobei sich ca. 800 mg eines Niederschlags abscheiden, der abfiltriert und in 3 ml Methanol gelöst wird. Zu der Lösung gibt man 4,5 ml (4,5 mMol) 1 M Natrium-2-ethylhexanoat (SEH) in Ethyl acetat und verdünnt die Mischung nacheinander mit 50 ml Ether und 50 ml Isopropylether. Abfiltrieren des Nieder schlages ergibt 710 mg Rohprodukt 24, das in 20 ml Wasser gelöst und an einer Säule mit 50 ml PrepPAK/C₁₈ (Waters) chromatographiert wird. Die Säule wird mit Wasser und 10%igem Methanol eluiert. Die Fraktionen, welche das gewünschte Produkt enthalten, werden gesammelt, wo bei man den Ablauf der Chromatographie mittels HPLC ver folgt, und auf 5 ml eingeengt und lyophilisiert. Man er hält 182 mg (31%) des gewünschten Produktes, Fp. 200°C, mit einer mittels HPLC geschätzten Reinheit von 50%.
IR: ν cm^-1 1760, 1660, 1600, 1400, 1180, 1100;
UV: λ nm (ε) 282 (5500);
NMR: δ D₂O ppm 1,60 (3 H, d, 6 Hz, -C-CH₃), 3,12 (1 H, d, 18 Hz, 2-H), 3,48 (1 H, d, 18 Hz, 2-H), 5,03 (1 H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,62 (1 H, d, 4,5 Hz, 7-H), 5,93 (1 H, d, 10 Hz, Vinyl-H), 5,2-5,8 (1 H, m, Vinyl-H), 7,41 (5 H, s, Phenyl-H).

Beispiel 12 7β-[D(-)-2-Amino-2-phenylacetamido]-3-[(Z)-1-propen-1- yl]-3-cephem-4-carbonsäure (Verbindung 12, BB-S1065) in zwitterionischer Form

Diphenylmethyl-7β-[D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-phenyl acetamido]-3-(1-propenyl)-3-cephem-4-carboxylat (Ver bindung 10; 1,5 g; 2,34 mMol) behandelt man mit 3 ml Tri fluoressigsäure und rührt die Mischung 20 min bei Raum temperatur. Man verdünnt mit 100 ml Ether, wobei man 1,15 g (96%) des rohen Trifluoracetats von BB-S1065 er hält.

IR: ν cm^-1 1760, 1670, 1200, 1130;
UV: λ Phosphatpuffer (pH 7) nm (ε) 283 (8300).

Das Trifluoracetat (1,1 g; 2,25 mMol) löst man in 20 ml Wasser und chromatographiert die Lösung an einer Säule unter Verwendung von 100 ml prepPAK/C₁₈-Füllung (Waters). Die Säule wird mit Wasser, 10%igem Methanol und 30%igem Methanol eluiert. Die Eluate mit 30%igem Methanol werden auf 10 ml konzentriert. Das kristalline Produkt scheidet sich ab, es wird isoliert und mit Aceton gewaschen und im Vakuum über P₂O₅ getrocknet. Man erhält 505 mg (46%) an reinem BB-S1065 (in zwitterionischer Form), Fp. 180 bis 183°C (Zers.), mit einer geschätzten Reinheit von 95%.

IR: ν cm^-1 1750, 1690, 1590, 1400, 1350;
UV: λ nm (ε) 282 (8800);
NMR: δ D₂O+NaHCO₃ ppm 1,58 (3 H, d, J=6 Hz, C-CH₃), 3,3 (2 H, d, 2-H), 5,03 (1 H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,20 (1 H, s, CH-CO), 5,1-5,8 (1 H, m, CH=C), 5,63 (1 H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,92 (1 H, d, J=12 Hz, CH=C), 7,4 (5 H, s, Phenyl-H).

Beispiel 13 D(-)-2-(t-Butoxycarbonylamino)-2-(3-chlor-4-hydroxyphe nyl)-essigsäure (Verbindung 13)

Eine Mischung von 6 g (0,03 Mol) 3-Chlor-4-hydroxy phenylglycin und 9,8 g (0,045 Mol) Di-t-butyldicarbo nat, gelöst in 120 ml 50%igem wäßrigem Tetrahydrofuran (THF), das 10 ml (0,071 Mol) Triamin enthält, wird 3 h bei Raumtemperatur gelöst. Die Mischung wird auf 60 ml eingeengt und das Konzentrat mit Ether gewaschen. Die wäßrige Schicht wird mit 6 N Chlorwasserstoffsäure ange säuert und mit 200 ml Ether extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und zur Trockene verdampft, wobei man 10 g eines öligen Rückstandes erhält, der auch beim Verreiben mit Ether-n-Hexan nicht fest wird.

Beispiel 14 Benzhydryl-7β-(D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(3-chlor-4- hydroxyphenyl)-acetamido]-3-chlormethyl-3-cephem-4-carb oxylat (Verbindung 14)

Zu einer Lösung von 6,2 g (0,015 Mol) Verbindung 2 und 5,4 g (0,018 Mol) Verbindung 13 in 150 ml trockenem THF gibt man 3,7 g (0,018 Mol) DCC und rührt die Mischung 1 h bei Raumtemperatur. Der während des Rührens ausge fallene Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert, das Fil trat wird zur Trockene eingedampft. Den Rückstand ex trahiert man mit 200 ml Ethylacetat, den Extrakt wäscht man dann mit wäßriger NaHCO₃-Lösung, Wasser und gesät tigter NaCl-Lösung und trocknet ihn über MgSO₄. Das Filtrat wird zur Trockene verdampft und der erhaltene, ölige Rückstand wird an einer Silikagelsäule (Wako gel C-200; 140 g) unter Eluierung mit Toluol-Ethylacetat (10 : 1) chromatographiert. Die gewünschten Fraktionen wer den gesammelt und zur Trockene verdampft, wobei man 10 g des Produkts 14 erhält.

IR: ν cm^-1 1790, 1720, 1680, 1500, 1370, 1240, 1160.

Beispiel 15 Benzhydryl-7β-(D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(3-chlor-4- hydroxyphenyl)-acetamido]-3-(triphenylphosponio)-methyl- 3-cephem-4-carboxylat-jodid (Verbindung 15)

Zu einer Lösung von 10 g (0,0143 Mol) Verbindung 14 in 100 ml Aceton gibt man 11,2 g (0,075 Mol) Natriumjodid und rührt die Mischung 30 min bei Raumtemperatur. Die Mischung wird auf 30 ml eingeengt. Zu dem Konzentrat werden 200 ml Ethylacetat gegeben und die Mischung wird mit wäßriger Na₂S₂O₃-Lösung, Wasser und gesättigter NaCl- Lösung gewaschen und über MgSO₄ getrocknet. Die Ethyl acetatlösung wird filtriert und das Filtrat auf die Hälfte des Volumens eingeengt. Zu dem Konzentrat gibt man 3,9 g (0,015 Mol) Triphenylphosphin und rührt die Mischung 2 h bei Raumtemperatur. Zu der Lösung gibt man 300 ml Ether, wobei sich ein Niederschlag abscheidet, der abfiltriert und getrocknet wird. Man erhält 9,2 g des Phosphoniumjodids 15.
IR: ν cm^-1 1780, 1680, 1490, 1350, 1240, 1150.

Beispiel 16 Benzhydryl-7β-(D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(3-chlor-4- hydroxyphenyl)-acetamido]-3-[(Z)-1-propen-1-yl)-3-ceph em-4-carboxylat (Verbindung 16)

Eine Lösung von 9,5 g (9 mMol) Verbindung 15 in 200 ml Chloroform wird mit einer Mischung aus Wasser (100 ml) und N NaOH (10 ml) überschichtet und die Mischung 3 min geschüttelt. Die organische Schicht wird mit Wasser und einer gesättigten NaCl-Lösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und auf etwa die Hälfte des Volumens einge engt. Zu dem Konzentrat gibt man 20 ml 90%igen Acet aldehyd und rührt die Mischung 3 h bei Raumtemperatur, behandelt sie mit wasserfreiem MgSO₄ und filtriert. Das Filtrat wird zur Trockene verdampft und der Rückstand wird an Kieselgel 60 (Merck, 120 g) unter Eluierung mit Toluol-Ethylacetat (4 : 1) chromatographiert. Die ge wünschten Fraktionen werden gesammelt und zur Trockene verdampft. Der Rückstand wird mit einer Mischung aus Ether, Isopropylether und n-Hexan verrieben, wobei man 1,33 g des blockierten Produktes 16 erhält.

IR: ν cm^-1 1770, 1700, 1660, 1480, 1350, 1210, 1150.

Beispiel 17 7β-[D-2-Amino-2-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)-acetamido]-3- [(Z)-1-propen-1-yl)-3-cephem-4-carbonsäure (Verbin dung 17, BMY-28060)

Eine Mischung von 1,33 g (1,93 mMol) Verbindung 16 und 3 ml Trifluoressigsäure wird 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Die Mischung wird mit 50 ml Ether-Isopropyl ether (1 : 1) verdünnt, wobei man 1,072 g des rohen Tri fluoracetats von Verbindung 17 erhält, das an einer mit prepPAK-C₁₈ (Waters) gefüllten Säule (80 ml) chromato graphiert wird. Die Säule wird mit Wasser und 10%igem Methanol eluiert. Das Eluat mit 10%igem Methanol wird auf ein Volumen von 10 ml eingeengt, wobei sich ein kri stalliner Niederschlag abscheidet, der abfiltriert und mit Aceton gewaschen und im Vakuum über P₂O₅ getrocknet wird. Man erhält 238 mg der Verbindung 17 (95% Reinheit), Fp. 180-185°C (allmähl. Zers.). Das Filtrat wird auf 5 ml eingeengt und lyophilisiert, wobei man 154 g einer zweiten Fraktion erhält, die, mittels HPLC bestimmt, eine Reinheit von 80% aufweist.

IR: ν cm^-1 1760, 1680, 1570, 1410, 1390, 1350, 1290, 1270;
UV: λ nm (ε) 232 (10 000), 280 (10 500);
NMR: δ D₂O+NaHCO₃ ppm 1,68 (3 H, d, J=6 Hz, C=C-CH₃), 3,25 (1 H, d, J=18 Hz, 2-H), 3,57 (1 H, d, J=18 Hz, 2-H), 4,90 (1 H, s, CH-CO), 5,18 (1 H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,72 (1 H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,5-5,9 (1 H, m, CH=C), 5,97 (1 H, d, J=12 Hz, CH=C), 7,02 (1 H, d, J=8 Hz, Phenyl-H), 7,30 (1 H, dd, J=8 u. 1,5 Hz, Phenyl-H), 7,50 (1 H, d, J=1,5 Hz, Phenyl-H).

Beispiel 18 D(-)-2-(t-Butoxycarbonylamino)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)- essigsäure (Verbindung 18a) in Mischung mit deren 3-(und 4)-Mono-O-butoxycarbonylderivaten (Verbindung 18b)

Eine Mischung von 3,66 g (0,02 Mol) 3,4-Dihydroxyphenyl glycin und 9,24 g (0,04 Mol) Di-t-butyldicarbonat, ge löst in 120 ml 50%iger wäßriger THF-Lösung, enthaltend 10 ml (0,071 Mol) Triethylamin, wird 16 h bei Raumtempe ratur gerührt. Man konzentriert die Mischung auf 60 ml und wäscht das Konzentrat mit 100 ml Ether, säuert mit N Chlorwasserstoffsäure an und extrahiert mit Ether (100×2 ml). Die vereinigten Extrakte werden mit Wasser und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen, über MgSO₄ ge trocknet und zur Trockene eingedampft, wobei man 8 g eines öligen Rückstands erhält, der eine Mischung aus dem gewünschten 3,4-Dihydroxyphenylderivat und den 3- und 4-Mono-O-BOC-geschützten Derivaten darstellt (BOC bedeutet t-Butoxycarbonyl).

Beispiel 19 Benzhydryl-7β-[D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(3,4- dihydroxyphenyl)-acetamido]-3-chlormethyl-3-cephem-4- carboxylat (Verbindung 19a) in Mischung mit den 3-(und 4)-Mono-O-butoxycarbonylderivaten (Verbindung 19b)

Eine Mischung von 8 g (0,0193 Mol) Verbindung 2,8 g der Mischung gemäß Beispiel 18 und 4,12 g (0,02 Mol) DCC in 200 ml trockenem THF wird 1 h bei Raumtemperatur ge rührt. Die Reaktionsmischung wird zur Trockene einge dampft. Den Rückstand löst man in 200 ml Ethylacetat und filtriert unlösliches Material (Dicyclohexylharn stoff) ab. Das Filtrat wird mit wäßriger NaHCO₃-Lösung, Wasser und gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trocke ne eingedampft. Den öligen Rückstand chromatographiert man an einer Silikagelsäule (Kieselgel 60, 130 g), wobei man mit Toluol-Ethylacetat (5 : 1) und Toluol-Ethylacetat (2 : 1) eluiert. Das Eluat mit Toluol-Ethylacetat (5 : 1) wird gesammelt und zur Trockene eingedampft, wobei man 9,5 g einer Mischung der Mono-O-BOC-N-BOC-digeschütz ten Derivate (19b) erhält. Das Eluat mit Toluol-Ethyl acetat (2 : 1) wird gesammelt und zur Trockene eingedampft, wobei man 3 g des 3,4-Dihydroxyphenylderivats (19a) er hält.

Verbindung 19a

IR: ν cm^-1 1770, 1720, 1690, 1500, 1370, 1240, 1150;
NMR: δ CDCl₃ ppm 1,42 (9 H, s. C-CH₃), 3,4 (2 H, br. s, 2-H), 4,30 (2 H, br. s, CH₂-Cl), 4,85 (1 H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,07 (1 H, d, J=6 Hz, CH-NH), 5,74 (1 H, dd, J=9 u. 4,5 Hz, 7-H), 6,6-6,9 (3 H, m, Phenyl-H), 6,93 (1 H, s, CHPh), 7,3 (10 H, s, Phenyl-H).

Mischung 19b

IR: ν cm^-1 1770, 1720, 1690, 1500, 1370, 1240, 1150;
NMR: δ CDCl₃ ppm 1,42 (9 H, s, C-CH₃), 1,55 (9 H, s, C-CH₃), 3,4 (2 H, br. s, 2-H), 4,35 (2 H, br. s, CH₂-Cl), 6,9-7,1 (4 H, m, CHPh und Phenyl-H), 7,3 (10 H, s, Phenyl-H).

Beispiel 20 Benzhydryl-7β-[D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(3,4- dihydroxyphenyl)-acetamido]-3-triphenylphosponiomethyl- 3-cephem-4-carboxylat-jodid (Verbindung 20a)

Eine Mischung von 3 g (4,4 mMol) Verbindung 19a und 3,3 g (22 mMol) Natriumjodid in 50 ml Aceton wird 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Die Mischung wird zur Trockene eingeengt. Den Rückstand extrahiert man mit 100 ml Ethyl acetat und wäscht den Extrakt mit wäßriger Na₂S₂O₃-Lö sung, Wasser und gesättigter NaCl-Lösung. Nach dem Trock nen über MgSO₄ wird der Extrakt auf 60 ml eingeengt. Zum Konzentrat gibt man 1,4 g (5,3 mMol) Triphenylphosphin und rührt die Mischung 1 h bei Raumtemperatur. Zu der Mischung gibt man 100 ml Ether, wobei sich ein Nieder schlag abscheidet, der abfiltriert und mit Ether gewa schen wird. Man erhält 3,2 g (70%) des Phosphonium jodids (20a).

IR: ν cm^-1 1780, 1680, 1480, 1430, 1360, 1240, 1150.

In ähnlicher Weise läßt man 9,5 g (12 mMol) der Mischung der Mono-O-BOC-geschützten Derivate (19b) mit Natrium jodid und anschließend mit Triphenylphosphin reagieren, wobei man 10,7 g (77%) einer Mischung der entsprechen den Mono-O-BOC-N-BOC-triphenylphosphoniomethylderivate (20b) erhält.

IR: ν cm^-1 1770, 1720, 1680, 1480, 1360, 1240, 1140.

Beispiel 21 Benzhydryl-7β-[D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(3,4- dihydroxyphenyl)-acetamido]-3-[(Z)-1-propen-1-yl]-3-ceph em-4-carboxylat (Verbindung 21a)

Zu einer gerührten Lösung von 3,15 g (3 mMol) Verbin dung 20a und 10 ml Acetaldehyd in 50 ml Chloroform tropft man unter Rühren während 10 min 8 ml (4 mMol) 0,5 N Natriumhydroxid und rührt die Mischung 1 h bei Raum temperatur. Die Reaktionsmischung wird mit Wasser und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen, über MgSO₄ getrock net und bei vermindertem Druck verdampft. Den öligen Rückstand chromatographiert man an einer Silikagelsäule (Wako gel C-200; 60 g), wobei man mit Chloroform (2 l) und 2%igem Methanol in Chloroform unter Kontrolle mit tels TLC (Chloroform/Methanol=10 : 1) eluiert. Die ge wünschten Fraktionen des Eluats mit 2%igem Methanol werden gesammelt und zur Trockene eingedampft, wobei man 0,8 g (40%) des Propenylderivats 21a erhält.

NMR: δ CDCl₃ ppm 1,28 (3 H, d, J=6 Hz, C-CH₃), 1,42 (9 H, s, C-CH₃), 3,25 (2 H, s, 2-H), 4,92 (1 H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,08 (1 H, d, J=6 Hz, CH-NH), 5,3-5,8 (1 H, m, CH=C), 5,80 (1 H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 6,04 (1 H, d, J=11 Hz, CH=C), 6,70 (2 H, s, Phenyl-H), 6,82 (1 H, s, Phenyl-H), 6,92 (1 H, s, CHPh), 7,3 (10 H, s, Phenyl-H).

Ähnlich dem oben beschriebenen Verfahren läßt man 10,5 g (9,3 mMol) der Mischung aus 3- und 4-O-BOC-N-BOC-di- geschützten Derivaten 20b mit Acetaldehyd reagieren, wo bei man 3,3 g (46%) des entsprechenden 3-Propenylderi vats 21b erhält.

IR: ν cm^-1 1770, 1700, 1500, 1370, 1240, 1150;
NMR: w CDCl₃ ppm 1,4 (9 H, s, C-CH₃), 1,55 (9 H, s, C-CH₃), 3,25 (2 H, s, 2-H), 6,07 (1 H, d, J=11 Hz, CH=C), 6,9-7,1 (4 H, m, CH-Ph und Phenyl-H), 7,3-7,5 (10 H, m, Phenyl-H).

Beispiel 22 7β-[D(-)-2-Amino-2-(3,4-dihydroxyphenyl)-acetamido]-3- [[Z)-1-propen-1-yl]-3-cephem-4-carbonsäure (Verbindung 22, BMY-28068)

Eine Mischung von 0,8 g (1,2 mMol) Verbindung 21a, 0,8 ml Anisol und 3 ml Trifluoressigsäure wird 5 min bei Raumtemperatur gerührt und mit 25 ml Ether und 25 ml Isopropylether verdünnt. Der erhaltene Niederschlag wird abfiltriert und mit Isopropylether gewaschen, wobei man 557 mg des rohen Trifluoracetatsalzes der Verbindung 22 erhält. Eine Lösung des rohen Produktes in 10 ml Wasser reinigt man mittels Säulenchromatographie unter Ver wendung von 100 ml einer Füllung aus prepPAK-C₁₈ (Waters). Die Säule wird nacheinander mit Wasser und 5%igem Me thanol eluiert. Das Eluat mit 50%igem Methanol, das das gewünschte Produkt enthält, wird auf 5 ml eingeengt und lyophilisiert, wobei man 231 mg (47%) der Verbin dung 22 (in zwitterionischer Form, 90%ige Reinheit), Fp. 200°C (allmähl. Zers.), erhält,

IR: ν cm^-1 1760, 1690, 1580, 1530, 1400, 1360, 1290, 1270;
UV: λ nm (ε) 233 (9200), 281 (11 000);
NMR: δ D₂O ppm 1,68 (3 H, d, J=6 Hz, C-CH₃), 3,26 (1 H, d, J=18 Hz, 2-H), 3,58 (1 H, d, J=18 Hz, 2-H), 5,18 (1 H, s, CHNH), 5,22 (1 H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,5-5,9 (2 H, m, CH=C u. 7-H), 5,97 (1 H, d, J=11 Hz, CH=C), 7,05 (3 H, m, Phenyl-H).

In ähnlicher Weise ergeben 3,3 g (4,3 mMol) der N,O-Di- t-BOC-geschützten Derivatmischung 21b 1,3 g (75%) der Verbindung 22 in zwitterionischer Form (90% Reinheit), deren Spektraldaten identisch mit den oben angegebenen Daten sind.

Beispiel 23 D(-)-2-(t-Butoxycarbonylamino)-2-(4-hydroxy-3-methoxy phenyl)-essigsäure (Verbindung 23)

Eine Mischung von 2,96 g (0,015 Mol) D(-)-2-Amino-2- (4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-essigsäure und 3,6 g (0,0165 Mol) Di-t-butyldicarbonat in 100 ml 50%igem wäßrigen THF, das 4,2 ml (0,03 Mol) Triethylamin enthält, rührt man 16 h bei Raumtemperatur und engt die Reak tionsmischung auf 50 ml ein. Das Konzentrat wird mit 50 ml Ether gewaschen, mit N Chlorwasserstoffsäure an gesäuert und zweimal mit Ether (2×100 ml) extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden mit Wasser und gesät tigter NaCl-Lösung gewaschen. Die getrockneten Extrakte werden zur Trockene eingeengt, wobei man 4,38 g der Ver bindung 23 als schaumigen Feststoff erhält.

NMR: δ CDCl₃ ppm 1,4 (9 H, s, -C-CH₃), 3,8 (3 H, s, OCH₃), 5,15 (1 H, d, J=6 Hz, CH-NH), 6,85 (3 H, s, Phenyl-H).

Beispiel 24 Benzhydryl-7β-(D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4- hydroxy-3-methoxyphenyl)-acetamido]-3-chlormethyl-3- cephem-4-carboxylat (Verbindung 24)

Eine Mischung von 4,3 g Verbindung 23, 5 g (0,012 Mol) Verbindung 2 und 3 g (0,015 Mol) DCC in 150 ml trockenem THF wird 2 h bei Raumtemperatur gerührt. Den ausgefalle nen Harnstoff filtriert man ab, das Filtrat wird zur Trockene eingeengt. Eine Lösung des Rückstandes in 200 ml Ethylacetat wird mit wäßriger NaHCO₃-Lösung, Was ser und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und zur Trockene eingedampft. Den öligen Rückstand chromatographiert man an einer Silikagelsäule (Kieselgel 60; 100 g), wobei man mit Toluol-Ethylacetat (4 : 1) unter Kontrolle der Chromatographie mittels TLC [Toluol-Ethylacetat (1 : 1) oder Chloroform-Methanol (50 : 1)] eluiert. Die gewünschten Fraktionen werden gesammelt und zur Trockene eingeengt, wobei man 7 g der gewünsch ten 3-Chlormethylcephem-Verbindung 24 als schaumigen Feststoff erhält.

NMR: δ, ppm 1,4 (9 H, s, C-CH₃), 3,45 (2 H, br. s, 2-H), 3,83 (3 H, s, OCH₃), 4,32 (2 H, s, -CH₂Cl), 4,92 (1 H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,13 (1 H, d, J=6 Hz, CH-NH), 5,65 (1 H, d, J=6 Hz, NH), 5,80 (1 H, dd, J=8 u. 4,5 Hz, 7-H), 6,85 (3 H, s, Phe nyl-H), 6,95 (1 H, s, CH-Ph), 7,2-7,5 (10 H, m, Phenyl-H).

Beispiel 25 Benzhydryl-7β-[D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4- hydroxy-3-methoxyphenyl)-acetamido]-3-triphenylphospho niomethyl-3-cephem-4-carboxylat-jodid (Verbindung 25)

Eine Mischung von 7 g (0,01 Mol) Verbindung 24 und 7,5 g (0,05 Mol) Natriumjodid in 100 ml Aceton wird 30 min bei Raumtemperatur gerührt und zur Trockene ein gedampft. Eine Lösung des Rückstands in 200 ml Ethyl acetat wird mit wäßriger Na₂S₂O₃-Lösung, Wasser und ge sättigter NaCl-Lösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und auf 100 ml eingeengt. Zum Konzentrat gibt man 3,1 g (0,012 Mol) Triphenylphosphin und rührt die Mischung 1 h bei Raumtemperatur. Zu der Reaktionsmischung gibt man dann 100 ml Ether und filtriert den ausgeschiede nen Feststoff ab, wäscht ihn mit Ether und trocknet ihn, wobei man 5,8 g des Triphenylphosphoniumderivats 23 er hält. Das etherische Filtrat engt man auf 10 ml ein und gibt zum Konzentrat 300 ml Ether, wobei man 0,9 g einer zweiten Fraktion des Produktes erhält. Die Gesamtaus beute beträgt 6,7 g.

Beispiel 26 Benzhydryl-7β-[D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(4- hydroxy-3-methoxyphenyl)-acetamido]-3-[(Z)-1-propen-1- yl]-3-cephem-4-carboxylat (Verbindung 26)

Zu einer gerührten Mischung von 5,8 g (5,5 mMol) Ver bindung 25 und 10 ml 90%igem Acetaldehyd in 100 ml Chlo roform tropft man unter Rühren während 25 min 11 ml (5,5 mMol) 0,5 N Natriumhydroxid. Die Mischung wird dann 2 h bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wird mit Wasser, anschließend mit gesättigter NaCl- Lösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und zur Trockene eingeengt. Den öligen Rückstand chromatographiert man an einer Silikagelsäure (Kieselgel 60; 130 g), wobei man mit einer Mischung aus Toluol und Ethylacetat [das Mi schungsverhältnis wurde schrittweise geändert; 4 : 1 (1,3 l), 3 : 1 (1,1 l), 2 : 1 (1,0 l)] eluiert. Das Eluat wird in 20-ml-Fraktionen aufgefangen. Die Fraktionen Nr. 26 bis 59 werden vereinigt und zur Trockene eingeengt, wobei man 830 mg des gewünschten 3-Propenylderivats 26 als schaumigen Feststoff erhält.

NMR: δ CDCl₃ ppm 1,35 (3 H, d, =CH-CH₃), 1,4 (9 H, s, C-CH₃), 3,85 (3 H, s, O-CH₃), 6,07 (1 H, d, J=11 Hz, -CH=C).

Beispiel 27 7β-[D(-)-2-Amino-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-acet amido]-3-[(Z)-1-propen-1-yl]-3-cephem-4-carbonsäure (Verbindung 27; BMY-28097)

Eine Mischung von 830 mg (1,2 mMol) Verbindung 26, 0,5 ml Anisol und 2 ml Trifluoressigsäure wird 5 min bei Raumtemperatur gerührt. Die Mischung wird dann mit 30 ml Ether und 30 ml Isopropylether verdünnt. Der erhaltene Niederschlag wird abfiltriert, mit Isopropyl ether gewaschen und getrocknet, wobei man 437 mg des rohen Trifluoracetats der Verbindung 27 erhält. Das Roh produkt wird an einer mit 100 ml prepPAK-C₁₈ (Waters) gefüllten Säule chromatographiert, wobei man mit Wasser und 5%igem Methanol eluiert. Das Eluat mit 5%igem Methanol wird auf 5 ml eingeengt und lyophilisiert, wo bei man 225 mg der Verbindung 27 (in zwitterionischer Form, 90% Reinheit), Fp. 176 bis 180°C (Zers.), erhält.

IR: ν _max cm^-1 1760, 1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280;
UV: λ nm (ε) 235 (10 000), 280 (11 000);
NMR: δ D₂O ppm 1,68 (3 H, d, J=6 Hz, C-CH₃), 3,25 (1 H, d, J=18 Hz, 2-H), 3,57 (1 H, d, J=18 Hz, 2-H), 4,01 (3 H, s, OCH₃), 5,10 (1 H, s, CH-CO), 5,19 (1 H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,78 (1 H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,5-5,9 (1 H, m, CH=C), 5,98 (1 H, d, J=11 Hz, CH=C), 7,07 (2 H, s, Phenyl-H), 7,17 (1 H, br. s, Phenyl-H);
HPLC: Retentionszeit=9,3 min (0,02 M Acetatpuffer (pH 4), enthaltend 15% Acetonitril).

Beispiel 28 Isolierung der Verbindung 27 aus dem Urin von Ratten, denen Verbindung 22 verabreicht wurde

6 männliche Wistar-Ratten (400-600 g) wurden nach oraler Verabreichung der Verbindung 22 in einer Dosis von 100 mg/kg in Stoffwechselkäfige gebracht. Der Urin wur de über einen Zeitraum von 14 Stunden aufgefangen. Die Ratten wurden während des Versuchs, wie üblich, mit Nahrung und Wasser versorgt. Die nachfolgende Tabelle zeigt die in den verschiedenen Zeiträumen gesammelte Urinmenge.

Der Urin (ca. 90 ml) wurde mit N Chlorwasserstoffsäure auf pH 3 eingestellt und zur Entfernung eines Nieder schlags filtriert. Das Filtrat wurde an einer mit 300 ml HP-20 gefüllten Säule chromatographiert, wobei man mit 2 l Wasser und 2 l 30%igem Methanol unter Verfolgung der Chromatographie mittels HPLC eluierte. Diejenigen Fraktionen, welche die bioaktiven Bestandteile des Eluats mit 30%igem Methanol enthielten, wurden gesam melt, auf 10 ml eingeengt und lyophilisiert, wobei man 390 mg eines braunen Feststoffs erhielt. Eine Lösung dieses Feststoffs in 20 ml Wasser wurde an einer Säule chromatographiert, die mit 200 ml prepPAK-C₁₈ (Waters) gefüllt war. Man eluierte nacheinander mit Wasser, 5%igem Methanol und 10%igem Methanol. Die erste Hälfte des Eluats mit 5%igem Methanol wurde auf 5 ml eingeengt und lyophilisiert, wobei man 44 mg der Verbindung 22 (70% Reinheit) erhielt, die vom Urin stammende Verunreini gungen enthielt. Die zweite Hälfte des Eluats mit 5%igem Methanol wurde auf 5 ml eingeengt und lyophilisiert, wobei man 36 mg Produkt erhielt, das eine Mischung aus den Verbindungen 22 und 27 und vom Urin stammenden Verunreinigungen war. Das Eluat mit 10%igem Methanol (ca. 600 ml) wurde auf 5 ml eingeengt und lyophilisiert, wobei man 38 mg der Verbindung 27 (70% Reinheit, be stimmt mittels HPLC) erhielt. Dieses Produkt wurde er neut an einer Säule, die wie oben gefüllt war (40 ml), unter Eluierung mit Wasser, 5%igem Methanol und 10%igem Methanol chromatographiert. Die mit 10%igem Methanol eluierten, gewünschten Fraktionen wurden vereinigt und auf 5 ml eingeengt und lyophilisiert, wobei man 16 mg der Verbindung 27 erhielt, die eine mittels HPLC be stimmte Reinheit von 90% aufwies [0,02 M Acetatpuffer (pH 4)-Acetonitril (85 : 15)]; Fp. 180°C (allmähl. Zers).

IR: ν cm^-1 1760, 1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280;
UV: λ nm (ε) 233 (8200), 280 (8800);
NMR: δ D₂O ppm 1,68 (3 H, d, J=6 Hz, -C-CH₃), 3,26 (1 H, d, J=18 Hz, 2-H), 3,58 (1 H, d, J=18 Hz, 2-H), 4,01 (3 H, s, OCH₃), 5,12 (1 H, s, CH-CO), 5,21 (1 H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,78 (1 H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,5-5,9 (1 H, m, CH=C-), 5,98 (1 H, d, J=11 Hz, CH=C-), 7,07 (2 H, s, Phenyl-H), 7,17 (1 H, br. s, Phenyl-H).

Die Struktur des Metaboliten ergab sich aufgrund von Vergleichen (NMR, IR, UV, HPLC) mit der gemäß den Bei spielen 23 bis 27 hergestellten Verbindung 27 zu 7β-[D(-)-2-Amino-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-acet amido]-3-[(Z)-1-propen-1-yl]-3-cephem-4-carbonsäure.

Claims

1. D-2-Aminoacyl-3-(Z)-propenyl-cephalosporinverbindungen der allgemeinen Formel: worin
R¹ für ein Wasserstoffatom, OH, eine C₁-C₄-Alkoxy gruppe oder ein Chloratom steht,
R² für ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxygruppe steht,
sowie die Derivate mit üblichen Schutzgruppen an den Amino-, Carboxy- und/oder Hydroxygruppen und die pharma zeutisch verträglichen Salze.

2. Verbindungen nach Anspruch 1, nämlich
7β-(D-2-Amino-2-(4-hydroxyphenyl)acetamido]-3-((Z)-1- propen-1-yl)-3-cephem-4-carbonsäure,
7β-(D-2-Amino-2-phenylacetamido]-3-((Z)-1-propen- 1-yl)-3-cephem-4-carbonsäure,
7β-(D-2-Amino-2-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)acetamido)- 3-((Z)-1-propen-1-yl)-3-cephem-4-carbonsäure,
7β-(D-2-Amino-2-(3,4-dihydroxyphenyl)acetamido]- 3-((Z)-1-propen-1-yl)-3-cephem-4-carbonsäure,
7β-(D-2-Amino-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acetamido]- 3-((Z)-1-propen-1-yl)-3-cephem-4-carbonsäure
und die Salze davon.

3. Verfahren zur Herstellung der Cephalosporin verbindungen der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekenn zeichnet, daß man jeweils in an sich bekannter Weise

A) ein Halogenid der allgemeinen Formeln: QCH₂X oder CH₃CH₂Xworin X für Cl, Br oder J steht, mit einem Triaryl phosphin in einem reaktionsinerten, organischen flüs sigen Träger bei 20 bis 150°C zu einem Phosphonium salz umsetzt,
B) das Phosphoniumsalz in einem mit Wasser nicht mischbaren, flüssigen, organischen Lösungsmit tel mit einer wäßrigen Base zu einer Phosphoranyl verbindung der allgemeinen Formeln: QCH=PAr₃ oder CH₃CH=PAr₃umsetzt.
C) eine Verbindung der allgemeinen Formel: QCH=PAr₃unter wasserfreien Bedingungen bei -40°C bis +50°C in dem erwähnten, mit Wasser nicht misch baren, flüssigen organischen Lösungsmittel mit Acetaldehyd oder unter den gleichen Reaktionsbedingungen eine Verbindung der allgemeinen Formel:CH₃CH=PAr₃mit einer Carbonylverbindung der allgemeinen Formel:QCHOzur Reaktion bringt,
wobei Q einen Rest der Formeln: bedeutet, worin
R¹ die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzt und P¹, P² und P³ übliche Schutzgruppen bedeuten und n für 0 oder 1 steht,
Ac eine bei Cephalosporinverbindungen üblicherweise vorhandene Acylgruppe bedeutet, und
B eine Alkyliden- oder Aralkylidenschutzgruppe be deutet,
D) in die so erhaltene 3-substituierte-7-Aminoceph- 3-em-Verbindung, erforderlichenfalls nach Abspal ten von einer oder mehrerer der Schutzgruppen P¹, P², P³, Ac und B oder nach Reduktion der S-Oxide, den 7-Acylrest der allgemeinen Formel: worin R¹ und R² die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, einführt und
E) die so erhaltene Verbindung gewünschtenfalls in ein Säureadditions- oder Metallsalz überführt.

4. Pharmazeutisches Mittel, enthaltend wenigstens eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 2, ge gebenenfalls in Kombination mit pharmazeutisch ver träglichen Trägern und Hilfsstoffen.