CZ20002869A3 - Deriváty antigenů asociovaných s nádory z MAGE rodiny a sekvence nukleových kyselin kodující tyto deriváty, jejich použití pro přípravu fúzních proteinů a prostředků pro vakcinaci - Google Patents
Deriváty antigenů asociovaných s nádory z MAGE rodiny a sekvence nukleových kyselin kodující tyto deriváty, jejich použití pro přípravu fúzních proteinů a prostředků pro vakcinaci Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20002869A3 CZ20002869A3 CZ20002869A CZ20002869A CZ20002869A3 CZ 20002869 A3 CZ20002869 A3 CZ 20002869A3 CZ 20002869 A CZ20002869 A CZ 20002869A CZ 20002869 A CZ20002869 A CZ 20002869A CZ 20002869 A3 CZ20002869 A3 CZ 20002869A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- mage
- protein
- leu
- glu
- ala
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 44
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 44
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 44
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 16
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 title claims description 42
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 title claims description 41
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 title claims description 16
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 title claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 18
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 title description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 112
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 97
- 108050008953 Melanoma-associated antigen Proteins 0.000 claims abstract description 60
- 102000000440 Melanoma-associated antigen Human genes 0.000 claims abstract description 59
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 22
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims abstract description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 claims description 36
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 claims description 36
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 28
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 27
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 19
- 102100037840 Dehydrogenase/reductase SDR family member 2, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 15
- 101710188053 Protein D Proteins 0.000 claims description 15
- 101710132893 Resolvase Proteins 0.000 claims description 15
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 15
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 12
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 12
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 5
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 claims description 4
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 4
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 claims description 4
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 claims description 4
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims description 3
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 claims description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 2
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 claims 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 claims 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 claims 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 abstract description 17
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 abstract description 17
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 abstract description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 91
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 55
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 31
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 30
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 29
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 26
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 26
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 23
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 23
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 22
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 21
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 20
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 16
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 15
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 15
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 14
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 13
- 239000000463 material Substances 0.000 description 13
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 12
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 11
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 11
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 11
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 11
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 10
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 10
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 9
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 9
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 9
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 9
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 9
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 9
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 9
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 8
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 8
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 8
- BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N Glu-Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 7
- LJPIRKICOISLKN-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LJPIRKICOISLKN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 7
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 7
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 7
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 7
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 7
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 7
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 7
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 7
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 7
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 7
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 6
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 6
- ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 6
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 6
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 6
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 6
- SOBIAADAMRHGKH-CIUDSAMLSA-N Ala-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SOBIAADAMRHGKH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- SJPMNHCEWPTRBR-BQBZGAKWSA-N Glu-Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O SJPMNHCEWPTRBR-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- SVVULKPWDBIPCO-BZSNNMDCSA-N His-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SVVULKPWDBIPCO-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 5
- TUYOFUHICRWDGA-CIUDSAMLSA-N Ile-Met Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCSC TUYOFUHICRWDGA-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- HASRFYOMVPJRPU-SRVKXCTJSA-N Leu-Arg-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HASRFYOMVPJRPU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 5
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 5
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- HGNGAMWHGGANAU-WHOFXGATSA-N Phe-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 HGNGAMWHGGANAU-WHOFXGATSA-N 0.000 description 5
- KRDSCBLRHORMRK-JXUBOQSCSA-N Thr-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KRDSCBLRHORMRK-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 5
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 5
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 5
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 5
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 5
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 5
- DVEKCXOJTLDBFE-UHFFFAOYSA-N n-dodecyl-n,n-dimethylglycinate Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O DVEKCXOJTLDBFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- MHWLWQUZZRMNGJ-UHFFFAOYSA-N nalidixic acid Chemical compound C1=C(C)N=C2N(CC)C=C(C(O)=O)C(=O)C2=C1 MHWLWQUZZRMNGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960000210 nalidixic acid Drugs 0.000 description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 5
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 5
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 5
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QCVXMEHGFUMKCO-YUMQZZPRSA-N Asp-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O QCVXMEHGFUMKCO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- DWOGMPWRQQWPPF-GUBZILKMSA-N Asp-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O DWOGMPWRQQWPPF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 4
- RUFHOVYUYSNDNY-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O RUFHOVYUYSNDNY-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 4
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- MXJYXYDREQWUMS-XKBZYTNZSA-N Glu-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MXJYXYDREQWUMS-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 4
- PDAWDNVHMUKWJR-ZETCQYMHSA-N Gly-Gly-His Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 PDAWDNVHMUKWJR-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 4
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 4
- QSLKWWDKIXMWJV-SRVKXCTJSA-N His-Cys-Lys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N QSLKWWDKIXMWJV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- LXKNSJLSGPNHSK-KKUMJFAQSA-N Leu-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N LXKNSJLSGPNHSK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- UWKNTTJNVSYXPC-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN UWKNTTJNVSYXPC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 4
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 108010009297 diglycyl-histidine Proteins 0.000 description 4
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 4
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 4
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 description 4
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 4
- 108010047926 leucyl-lysyl-tyrosine Proteins 0.000 description 4
- 230000001320 lysogenic effect Effects 0.000 description 4
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M rubidium chloride Chemical compound [Cl-].[Rb+] FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 4
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 4
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 4
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 4
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 4
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 4
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 4
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 4
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 4
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 4
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- YLTKNGYYPIWKHZ-ACZMJKKPSA-N Ala-Ala-Glu Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O YLTKNGYYPIWKHZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 3
- SVBXIUDNTRTKHE-CIUDSAMLSA-N Ala-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SVBXIUDNTRTKHE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- JBGSZRYCXBPWGX-BQBZGAKWSA-N Ala-Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CCCN=C(N)N JBGSZRYCXBPWGX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- HXNNRBHASOSVPG-GUBZILKMSA-N Ala-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HXNNRBHASOSVPG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- XLWSGICNBZGYTA-CIUDSAMLSA-N Arg-Glu-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O XLWSGICNBZGYTA-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N Arg-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- MGSVBZIBCCKGCY-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MGSVBZIBCCKGCY-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 3
- CBEUFCJRFNZMCU-SRVKXCTJSA-N Glu-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CBEUFCJRFNZMCU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- SOEATRRYCIPEHA-BQBZGAKWSA-N Gly-Glu-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SOEATRRYCIPEHA-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N Glycyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- STOOMQFEJUVAKR-KKUMJFAQSA-N His-His-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 STOOMQFEJUVAKR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- XMAUFHMAAVTODF-STQMWFEESA-N His-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 XMAUFHMAAVTODF-STQMWFEESA-N 0.000 description 3
- KIAOPHMUNPPGEN-PEXQALLHSA-N Ile-Gly-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N KIAOPHMUNPPGEN-PEXQALLHSA-N 0.000 description 3
- FGBRXCZYVRFNKQ-MXAVVETBSA-N Ile-Phe-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N FGBRXCZYVRFNKQ-MXAVVETBSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N L-tryptophan-L-tyrosine Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 101150028693 LPD1 gene Proteins 0.000 description 3
- LLBQJYDYOLIQAI-JYJNAYRXSA-N Leu-Glu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O LLBQJYDYOLIQAI-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 3
- SQUFDMCWMFOEBA-KKUMJFAQSA-N Leu-Ser-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 SQUFDMCWMFOEBA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- HVAUKHLDSDDROB-KKUMJFAQSA-N Lys-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HVAUKHLDSDDROB-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- QTZXSYBVOSXBEJ-WDSKDSINSA-N Met-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O QTZXSYBVOSXBEJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 3
- FIRWJEJVFFGXSH-RYUDHWBXSA-N Phe-Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 FIRWJEJVFFGXSH-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 3
- HQPWNHXERZCIHP-PMVMPFDFSA-N Phe-Leu-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 HQPWNHXERZCIHP-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 3
- 101100525628 Picea mariana SB62 gene Proteins 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N Ser-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 3
- BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- JURQXQBJKUHGJS-UHFFFAOYSA-N Ser-Ser-Ser-Ser Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CO)C(O)=O JURQXQBJKUHGJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QYBRQMLZDDJBSW-AVGNSLFASA-N Ser-Tyr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O QYBRQMLZDDJBSW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- ASJDFGOPDCVXTG-KATARQTJSA-N Thr-Cys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ASJDFGOPDCVXTG-KATARQTJSA-N 0.000 description 3
- RFKVQLIXNVEOMB-WEDXCCLWSA-N Thr-Leu-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)O)N)O RFKVQLIXNVEOMB-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 3
- PJCYRZVSACOYSN-ZJDVBMNYSA-N Thr-Thr-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O PJCYRZVSACOYSN-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 3
- GDPDVIBHJDFRFD-RNXOBYDBSA-N Trp-Tyr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O GDPDVIBHJDFRFD-RNXOBYDBSA-N 0.000 description 3
- HSVPZJLMPLMPOX-BPNCWPANSA-N Tyr-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HSVPZJLMPLMPOX-BPNCWPANSA-N 0.000 description 3
- KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N Tyr-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 108010009111 arginyl-glycyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 3
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 230000009920 chelation Effects 0.000 description 3
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 3
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 101150002054 galE gene Proteins 0.000 description 3
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 3
- 108010056582 methionylglutamic acid Proteins 0.000 description 3
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 3
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 108700004896 tripeptide FEG Proteins 0.000 description 3
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 3
- IGXNPQWXIRIGBF-KEOOTSPTSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 IGXNPQWXIRIGBF-KEOOTSPTSA-N 0.000 description 2
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N Ala-Ala-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- JBVSSSZFNTXJDX-YTLHQDLWSA-N Ala-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)N JBVSSSZFNTXJDX-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 2
- ZIWWTZWAKYBUOB-CIUDSAMLSA-N Ala-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ZIWWTZWAKYBUOB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- YEELWQSXYBJVSV-UWJYBYFXSA-N Ala-Cys-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O YEELWQSXYBJVSV-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 2
- LJFNNUBZSZCZFN-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Cys Chemical compound N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O LJFNNUBZSZCZFN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ZPXCNXMJEZKRLU-LSJOCFKGSA-N Ala-His-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CN=CN1 ZPXCNXMJEZKRLU-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 2
- 108700023418 Amidases Proteins 0.000 description 2
- SGYSTDWPNPKJPP-GUBZILKMSA-N Arg-Ala-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SGYSTDWPNPKJPP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- MJINRRBEMOLJAK-DCAQKATOSA-N Arg-Lys-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N MJINRRBEMOLJAK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- DIIGDGJKTMLQQW-IHRRRGAJSA-N Arg-Lys-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N DIIGDGJKTMLQQW-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- MNBHKGYCLBUIBC-UFYCRDLUSA-N Arg-Phe-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MNBHKGYCLBUIBC-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 2
- KMFPQTITXUKJOV-DCAQKATOSA-N Arg-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KMFPQTITXUKJOV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- PJOPLXOCKACMLK-KKUMJFAQSA-N Arg-Tyr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PJOPLXOCKACMLK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RAUPFUCUDBQYHE-AVGNSLFASA-N Asn-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O RAUPFUCUDBQYHE-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- LGCVSPFCFXWUEY-IHPCNDPISA-N Asn-Trp-Tyr Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N LGCVSPFCFXWUEY-IHPCNDPISA-N 0.000 description 2
- HTOZUYZQPICRAP-BPUTZDHNSA-N Asp-Arg-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N HTOZUYZQPICRAP-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 2
- YNCHFVRXEQFPBY-BQBZGAKWSA-N Asp-Gly-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N YNCHFVRXEQFPBY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- KCOPOPKJRHVGPE-AQZXSJQPSA-N Asp-Thr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O KCOPOPKJRHVGPE-AQZXSJQPSA-N 0.000 description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- IZUNQDRIAOLWCN-YUMQZZPRSA-N Cys-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N IZUNQDRIAOLWCN-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 235000001815 DL-alpha-tocopherol Nutrition 0.000 description 2
- 239000011627 DL-alpha-tocopherol Substances 0.000 description 2
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 2
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 2
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZJICFHQSPWFBKP-AVGNSLFASA-N Glu-Asn-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZJICFHQSPWFBKP-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N Glu-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- AIGROOHQXCACHL-WDSKDSINSA-N Glu-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O AIGROOHQXCACHL-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- WDTAKCUOIKHCTB-NKIYYHGXSA-N Glu-His-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O WDTAKCUOIKHCTB-NKIYYHGXSA-N 0.000 description 2
- WTMZXOPHTIVFCP-QEWYBTABSA-N Glu-Ile-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 WTMZXOPHTIVFCP-QEWYBTABSA-N 0.000 description 2
- DWBBKNPKDHXIAC-SRVKXCTJSA-N Glu-Leu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O DWBBKNPKDHXIAC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N Glu-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N Gly-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- XQHSBNVACKQWAV-WHFBIAKZSA-N Gly-Asp-Asn Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XQHSBNVACKQWAV-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- JPVGHHQGKPQYIL-KBPBESRZSA-N Gly-Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 JPVGHHQGKPQYIL-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- OHUKZZYSJBKFRR-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OHUKZZYSJBKFRR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- JQFILXICXLDTRR-FBCQKBJTSA-N Gly-Thr-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCC(O)=O JQFILXICXLDTRR-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 2
- IDNNYVGVSZMQTK-IHRRRGAJSA-N His-Arg-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N IDNNYVGVSZMQTK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- DGYNAJNQMBFYIF-SZMVWBNQSA-N His-Glu-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 DGYNAJNQMBFYIF-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 2
- STGQSBKUYSPPIG-CIUDSAMLSA-N His-Ser-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 STGQSBKUYSPPIG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- 101001005719 Homo sapiens Melanoma-associated antigen 3 Proteins 0.000 description 2
- UQXADIGYEYBJEI-DJFWLOJKSA-N Ile-His-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N UQXADIGYEYBJEI-DJFWLOJKSA-N 0.000 description 2
- BBQABUDWDUKJMB-LZXPERKUSA-N Ile-Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C([O-])=O BBQABUDWDUKJMB-LZXPERKUSA-N 0.000 description 2
- UWBDLNOCIDGPQE-GUBZILKMSA-N Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN UWBDLNOCIDGPQE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- OVDKXUDMKXAZIV-ZPFDUUQYSA-N Ile-Lys-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N OVDKXUDMKXAZIV-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 2
- WLRJHVNFGAOYPS-HJPIBITLSA-N Ile-Ser-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N WLRJHVNFGAOYPS-HJPIBITLSA-N 0.000 description 2
- QGXQHJQPAPMACW-PPCPHDFISA-N Ile-Thr-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N QGXQHJQPAPMACW-PPCPHDFISA-N 0.000 description 2
- RWHRUZORDWZESH-ZQINRCPSSA-N Ile-Trp-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N RWHRUZORDWZESH-ZQINRCPSSA-N 0.000 description 2
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N L-lysyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- XIRYQRLFHWWWTC-QEJZJMRPSA-N Leu-Ala-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XIRYQRLFHWWWTC-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 2
- LAPSXOAUPNOINL-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O LAPSXOAUPNOINL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- HYMLKESRWLZDBR-WEDXCCLWSA-N Leu-Gly-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HYMLKESRWLZDBR-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 2
- AOFYPTOHESIBFZ-KKUMJFAQSA-N Leu-His-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O AOFYPTOHESIBFZ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- FAELBUXXFQLUAX-AJNGGQMLSA-N Leu-Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C FAELBUXXFQLUAX-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 2
- OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- WBRJVRXEGQIDRK-XIRDDKMYSA-N Leu-Trp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 WBRJVRXEGQIDRK-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 2
- PRSBSVAVOQOAMI-BJDJZHNGSA-N Lys-Ile-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN PRSBSVAVOQOAMI-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 2
- JHNOXVASMSXSNB-WEDXCCLWSA-N Lys-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O JHNOXVASMSXSNB-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 2
- WINFHLHJTRGLCV-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WINFHLHJTRGLCV-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- LMKSBGIUPVRHEH-FXQIFTODSA-N Met-Ala-Asn Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O LMKSBGIUPVRHEH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- ADHNYKZHPOEULM-BQBZGAKWSA-N Met-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O ADHNYKZHPOEULM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- YORIKIDJCPKBON-YUMQZZPRSA-N Met-Glu-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O YORIKIDJCPKBON-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- FZUNSVYYPYJYAP-NAKRPEOUSA-N Met-Ile-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FZUNSVYYPYJYAP-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 2
- AFFKUNVPPLQUGA-DCAQKATOSA-N Met-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O AFFKUNVPPLQUGA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- IMTUWVJPCQPJEE-IUCAKERBSA-N Met-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IMTUWVJPCQPJEE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- FXBKQTOGURNXSL-HJGDQZAQSA-N Met-Thr-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O FXBKQTOGURNXSL-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- IHRFZLQEQVHXFA-RHYQMDGZSA-N Met-Thr-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IHRFZLQEQVHXFA-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100342977 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-1 gene Proteins 0.000 description 2
- BKWJQWJPZMUWEG-LFSVMHDDSA-N Phe-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 BKWJQWJPZMUWEG-LFSVMHDDSA-N 0.000 description 2
- WMGVYPPIMZPWPN-SRVKXCTJSA-N Phe-Asp-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N WMGVYPPIMZPWPN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 108010003201 RGH 0205 Proteins 0.000 description 2
- LVVBAKCGXXUHFO-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O LVVBAKCGXXUHFO-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- XVAUJOAYHWWNQF-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asn-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XVAUJOAYHWWNQF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N Ser-Asp Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- BYIROAKULFFTEK-CIUDSAMLSA-N Ser-Asp-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO BYIROAKULFFTEK-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- YRBGKVIWMNEVCZ-WDSKDSINSA-N Ser-Glu-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O YRBGKVIWMNEVCZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- DSGYZICNAMEJOC-AVGNSLFASA-N Ser-Glu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O DSGYZICNAMEJOC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- NVNPWELENFJOHH-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)N NVNPWELENFJOHH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- SNXUIBACCONSOH-BWBBJGPYSA-N Ser-Thr-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNXUIBACCONSOH-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 2
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- JEDIEMIJYSRUBB-FOHZUACHSA-N Thr-Asp-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O JEDIEMIJYSRUBB-FOHZUACHSA-N 0.000 description 2
- YZUWGFXVVZQJEI-PMVVWTBXSA-N Thr-Gly-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N)O YZUWGFXVVZQJEI-PMVVWTBXSA-N 0.000 description 2
- MXFPBNFKVBHIRW-BZSNNMDCSA-N Tyr-Lys-His Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N)O MXFPBNFKVBHIRW-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- JXGUUJMPCRXMSO-HJOGWXRNSA-N Tyr-Phe-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 JXGUUJMPCRXMSO-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 2
- JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N Tyr-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 2
- HZDQUVQEVVYDDA-ACRUOGEOSA-N Tyr-Tyr-Leu Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HZDQUVQEVVYDDA-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 108010011559 alanylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- ZVDPYSVOZFINEE-BQBZGAKWSA-N alpha-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O ZVDPYSVOZFINEE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005922 amidase Human genes 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 108010052670 arginyl-glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010094001 arginyl-tryptophyl-arginine Proteins 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000006872 enzymatic polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 108010006664 gamma-glutamyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 2
- 108010079547 glutamylmethionine Proteins 0.000 description 2
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 2
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 2
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 2
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 description 2
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 2
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- OOYGSFOGFJDDHP-KMCOLRRFSA-N kanamycin A sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N OOYGSFOGFJDDHP-KMCOLRRFSA-N 0.000 description 2
- 229960002064 kanamycin sulfate Drugs 0.000 description 2
- 108010076756 leucyl-alanyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 230000001589 lymphoproliferative effect Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010045397 lysyl-tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 108010065135 phenylalanyl-phenylalanyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- 150000003248 quinolines Chemical class 0.000 description 2
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical compound NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- SSOORFWOBGFTHL-OTEJMHTDSA-N (4S)-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[2-[(2S)-2-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-5-carbamimidamido-1-[[(2S)-5-carbamimidamido-1-[[(1S)-4-carbamimidamido-1-carboxybutyl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-2-oxoethyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2,6-diaminohexanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CNC(=O)[C@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SSOORFWOBGFTHL-OTEJMHTDSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- XPALGXXLALUMLE-UHFFFAOYSA-N 2-(dimethylamino)tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC(N(C)C)C(O)=O XPALGXXLALUMLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGZSVBBLLGZHSF-UHFFFAOYSA-N 4,4-diethylpiperidine Chemical compound CCC1(CC)CCNCC1 DGZSVBBLLGZHSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N Acrylonitrile Chemical compound C=CC#N NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XAEWTDMGFGHWFK-IMJSIDKUSA-N Ala-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O XAEWTDMGFGHWFK-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- PBAMJJXWDQXOJA-FXQIFTODSA-N Ala-Asp-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PBAMJJXWDQXOJA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- JQDFGZKKXBEANU-IMJSIDKUSA-N Ala-Cys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O JQDFGZKKXBEANU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- PCIFXPRIFWKWLK-YUMQZZPRSA-N Ala-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N PCIFXPRIFWKWLK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- NBTGEURICRTMGL-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NBTGEURICRTMGL-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- CFPQUJZTLUQUTJ-HTFCKZLJSA-N Ala-Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](C)N CFPQUJZTLUQUTJ-HTFCKZLJSA-N 0.000 description 1
- QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N Ala-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- MFMDKJIPHSWSBM-GUBZILKMSA-N Ala-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MFMDKJIPHSWSBM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- VCSABYLVNWQYQE-SRVKXCTJSA-N Ala-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O VCSABYLVNWQYQE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- VCSABYLVNWQYQE-UHFFFAOYSA-N Ala-Lys-Lys Natural products NCCCCC(NC(=O)C(N)C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O VCSABYLVNWQYQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GKAZXNDATBWNBI-DCAQKATOSA-N Ala-Met-Lys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N GKAZXNDATBWNBI-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N Ala-Pro-Glu Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NCQMBSJGJMYKCK-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NCQMBSJGJMYKCK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- LSMDIAAALJJLRO-XQXXSGGOSA-N Ala-Thr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O LSMDIAAALJJLRO-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 1
- WNHNMKOFKCHKKD-BFHQHQDPSA-N Ala-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O WNHNMKOFKCHKKD-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 1
- PGNNQOJOEGFAOR-KWQFWETISA-N Ala-Tyr-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=C(O)C=C1 PGNNQOJOEGFAOR-KWQFWETISA-N 0.000 description 1
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 1
- 241000272478 Aquila Species 0.000 description 1
- WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Ser Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- FSNVAJOPUDVQAR-AVGNSLFASA-N Arg-Lys-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FSNVAJOPUDVQAR-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N Arg-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- BKFXFUPYETWGGA-XVSYOHENSA-N Asn-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BKFXFUPYETWGGA-XVSYOHENSA-N 0.000 description 1
- VBKIFHUVGLOJKT-FKZODXBYSA-N Asn-Thr Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O VBKIFHUVGLOJKT-FKZODXBYSA-N 0.000 description 1
- VPPXTHJNTYDNFJ-CIUDSAMLSA-N Asp-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N VPPXTHJNTYDNFJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- LKIYSIYBKYLKPU-BIIVOSGPSA-N Asp-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)O LKIYSIYBKYLKPU-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- WEDGJJRCJNHYSF-SRVKXCTJSA-N Asp-Cys-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N WEDGJJRCJNHYSF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- SVABRQFIHCSNCI-FOHZUACHSA-N Asp-Gly-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SVABRQFIHCSNCI-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N Asp-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000040350 B family Human genes 0.000 description 1
- 108091072128 B family Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101100512078 Caenorhabditis elegans lys-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100459912 Caenorhabditis elegans ncs-1 gene Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000017897 Carcinoma of esophagus Diseases 0.000 description 1
- 101100499351 Chlorobaculum tepidum (strain ATCC 49652 / DSM 12025 / NBRC 103806 / TLS) lpd gene Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 238000011537 Coomassie blue staining Methods 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091029430 CpG site Proteins 0.000 description 1
- OXFOKRAFNYSREH-BJDJZHNGSA-N Cys-Ile-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N OXFOKRAFNYSREH-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101100402127 Escherichia coli (strain K12) moaA gene Proteins 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100039717 G antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000040452 GAGE family Human genes 0.000 description 1
- 108091072337 GAGE family Proteins 0.000 description 1
- JZDHUJAFXGNDSB-WHFBIAKZSA-N Glu-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JZDHUJAFXGNDSB-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- WZZSKAJIHTUUSG-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WZZSKAJIHTUUSG-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- VTTSANCGJWLPNC-ZPFDUUQYSA-N Glu-Arg-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O VTTSANCGJWLPNC-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- TUTIHHSZKFBMHM-WHFBIAKZSA-N Glu-Asn Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O TUTIHHSZKFBMHM-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- LGYZYFFDELZWRS-DCAQKATOSA-N Glu-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O LGYZYFFDELZWRS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- WVTIBGWZUMJBFY-GUBZILKMSA-N Glu-His-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WVTIBGWZUMJBFY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- HVYWQYLBVXMXSV-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HVYWQYLBVXMXSV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- PJBVXVBTTFZPHJ-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N PJBVXVBTTFZPHJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N Glu-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- FBEJIDRSQCGFJI-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FBEJIDRSQCGFJI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- AQNYKMCFCCZEEL-JYJNAYRXSA-N Glu-Lys-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 AQNYKMCFCCZEEL-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- QNJNPKSWAHPYGI-JYJNAYRXSA-N Glu-Phe-Leu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QNJNPKSWAHPYGI-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- UQHGAYSULGRWRG-WHFBIAKZSA-N Glu-Ser Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UQHGAYSULGRWRG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- MRWYPDWDZSLWJM-ACZMJKKPSA-N Glu-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MRWYPDWDZSLWJM-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- HZISRJBYZAODRV-XQXXSGGOSA-N Glu-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HZISRJBYZAODRV-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 1
- NTHIHAUEXVTXQG-KKUMJFAQSA-N Glu-Tyr-Arg Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O NTHIHAUEXVTXQG-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- YPHPEHMXOYTEQG-LAEOZQHASA-N Glu-Val-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YPHPEHMXOYTEQG-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- OGCIHJPYKVSMTE-YUMQZZPRSA-N Gly-Arg-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OGCIHJPYKVSMTE-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- OVSKVOOUFAKODB-UWVGGRQHSA-N Gly-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N OVSKVOOUFAKODB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- GNBMOZPQUXTCRW-STQMWFEESA-N Gly-Asn-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 GNBMOZPQUXTCRW-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- SUDUYJOBLHQAMI-WHFBIAKZSA-N Gly-Asp-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O SUDUYJOBLHQAMI-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- NTOWAXLMQFKJPT-YUMQZZPRSA-N Gly-Glu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)CN NTOWAXLMQFKJPT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- XMPXVJIDADUOQB-RCOVLWMOSA-N Gly-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)CNC(=O)C[NH3+] XMPXVJIDADUOQB-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- FQKKPCWTZZEDIC-XPUUQOCRSA-N Gly-His-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CN=CN1 FQKKPCWTZZEDIC-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- CQIIXEHDSZUSAG-QWRGUYRKSA-N Gly-His-His Chemical compound C([C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 CQIIXEHDSZUSAG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- ULZCYBYDTUMHNF-IUCAKERBSA-N Gly-Leu-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ULZCYBYDTUMHNF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N Gly-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CN UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- NNCSJUBVFBDDLC-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NNCSJUBVFBDDLC-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- VBOBNHSVQKKTOT-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VBOBNHSVQKKTOT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- ZZJVYSAQQMDIRD-UWVGGRQHSA-N Gly-Pro-His Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O ZZJVYSAQQMDIRD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LCRDMSSAKLTKBU-ZDLURKLDSA-N Gly-Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN LCRDMSSAKLTKBU-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- FKYQEVBRZSFAMJ-QWRGUYRKSA-N Gly-Ser-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FKYQEVBRZSFAMJ-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- WSWWTQYHFCBKBT-DVJZZOLTSA-N Gly-Thr-Trp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(O)=O WSWWTQYHFCBKBT-DVJZZOLTSA-N 0.000 description 1
- RIYIFUFFFBIOEU-KBPBESRZSA-N Gly-Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=C(O)C=C1 RIYIFUFFFBIOEU-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101001015673 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) Glycerophosphodiester phosphodiesterase Proteins 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 1
- ORERHHPZDDEMSC-VGDYDELISA-N His-Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N ORERHHPZDDEMSC-VGDYDELISA-N 0.000 description 1
- KAXZXLSXFWSNNZ-XVYDVKMFSA-N His-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KAXZXLSXFWSNNZ-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 1
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000886137 Homo sapiens G antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001005728 Homo sapiens Melanoma-associated antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001005716 Homo sapiens Melanoma-associated antigen 11 Proteins 0.000 description 1
- 101001057131 Homo sapiens Melanoma-associated antigen D4 Proteins 0.000 description 1
- VSZALHITQINTGC-GHCJXIJMSA-N Ile-Ala-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N VSZALHITQINTGC-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- UAVQIQOOBXFKRC-BYULHYEWSA-N Ile-Asn-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O UAVQIQOOBXFKRC-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- ZZHGKECPZXPXJF-PCBIJLKTSA-N Ile-Asn-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZZHGKECPZXPXJF-PCBIJLKTSA-N 0.000 description 1
- HUORUFRRJHELPD-MNXVOIDGSA-N Ile-Leu-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N HUORUFRRJHELPD-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- HQEPKOFULQTSFV-JURCDPSOSA-N Ile-Phe-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N HQEPKOFULQTSFV-JURCDPSOSA-N 0.000 description 1
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 125000002066 L-histidyl group Chemical group [H]N1C([H])=NC(C([H])([H])[C@](C(=O)[*])([H])N([H])[H])=C1[H] 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N Leu-Ala-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QPRQGENIBFLVEB-BJDJZHNGSA-N Leu-Ala-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O QPRQGENIBFLVEB-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- NTRAGDHVSGKUSF-AVGNSLFASA-N Leu-Arg-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O NTRAGDHVSGKUSF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- YKNBJXOJTURHCU-DCAQKATOSA-N Leu-Asp-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N YKNBJXOJTURHCU-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- XVSJMWYYLHPDKY-DCAQKATOSA-N Leu-Asp-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O XVSJMWYYLHPDKY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- WIDZHJTYKYBLSR-DCAQKATOSA-N Leu-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WIDZHJTYKYBLSR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- KGCLIYGPQXUNLO-IUCAKERBSA-N Leu-Gly-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O KGCLIYGPQXUNLO-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- KXODZBLFVFSLAI-AVGNSLFASA-N Leu-His-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CC1=CN=CN1 KXODZBLFVFSLAI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- SEMUSFOBZGKBGW-YTFOTSKYSA-N Leu-Ile-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O SEMUSFOBZGKBGW-YTFOTSKYSA-N 0.000 description 1
- IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N Leu-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- HVHRPWQEQHIQJF-AVGNSLFASA-N Leu-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HVHRPWQEQHIQJF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- ONPJGOIVICHWBW-BZSNNMDCSA-N Leu-Lys-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 ONPJGOIVICHWBW-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- BJWKOATWNQJPSK-SRVKXCTJSA-N Leu-Met-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N BJWKOATWNQJPSK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- GCXGCIYIHXSKAY-ULQDDVLXSA-N Leu-Phe-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GCXGCIYIHXSKAY-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- ARNIBBOXIAWUOP-MGHWNKPDSA-N Leu-Tyr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O ARNIBBOXIAWUOP-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N Lys-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LPAJOCKCPRZEAG-MNXVOIDGSA-N Lys-Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN LPAJOCKCPRZEAG-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- SLQJJFAVWSZLBL-BJDJZHNGSA-N Lys-Ile-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN SLQJJFAVWSZLBL-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- KYNNSEJZFVCDIV-ZPFDUUQYSA-N Lys-Ile-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KYNNSEJZFVCDIV-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- IPSDPDAOSAEWCN-RHYQMDGZSA-N Lys-Met-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IPSDPDAOSAEWCN-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- ZJSZPXISKMDJKQ-JYJNAYRXSA-N Lys-Phe-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZJSZPXISKMDJKQ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N Lys-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N Lys-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- NROQVSYLPRLJIP-PMVMPFDFSA-N Lys-Trp-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O NROQVSYLPRLJIP-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025050 Melanoma-associated antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100025083 Melanoma-associated antigen 11 Human genes 0.000 description 1
- 102100025082 Melanoma-associated antigen 3 Human genes 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- HUKLXYYPZWPXCC-KZVJFYERSA-N Met-Ala-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HUKLXYYPZWPXCC-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- OSOLWRWQADPDIQ-DCAQKATOSA-N Met-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OSOLWRWQADPDIQ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- HZVXPUHLTZRQEL-UWVGGRQHSA-N Met-Leu-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O HZVXPUHLTZRQEL-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- AXHNAGAYRGCDLG-UWVGGRQHSA-N Met-Lys-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O AXHNAGAYRGCDLG-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241001092142 Molina Species 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- KTHDTJVBEPMMGL-VKHMYHEASA-N N-acetyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(C)=O KTHDTJVBEPMMGL-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KTHDTJVBEPMMGL-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-L-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(C)=O KTHDTJVBEPMMGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N N-ethyl-succinimide Natural products CCN1C(=O)CCC1=O GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N N-ethylmaleimide Chemical compound CCN1C(=O)C=CC1=O HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N N-formyl-L-phenylalanine Chemical compound O=CN[C@H](C(=O)O)CC1=CC=CC=C1 NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N Nalpha-L-Leucyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 1
- DPUOLKQSMYLRDR-UBHSHLNASA-N Phe-Arg-Ala Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 DPUOLKQSMYLRDR-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- KIAWKQJTSGRCSA-AVGNSLFASA-N Phe-Asn-Glu Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N KIAWKQJTSGRCSA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- PSKRILMFHNIUAO-JYJNAYRXSA-N Phe-Glu-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N PSKRILMFHNIUAO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- KZRQONDKKJCAOL-DKIMLUQUSA-N Phe-Leu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O KZRQONDKKJCAOL-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- GKZIWHRNKRBEOH-HOTGVXAUSA-N Phe-Phe Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 GKZIWHRNKRBEOH-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 1
- KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N Phe-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 1
- 241001454523 Quillaja saponaria Species 0.000 description 1
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 description 1
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000009661 Repressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010034634 Repressor Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001222774 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Minnesota Species 0.000 description 1
- SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CO SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N Ser-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- YUSRGTQIPCJNHQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YUSRGTQIPCJNHQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VQBCMLMPEWPUTB-ACZMJKKPSA-N Ser-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VQBCMLMPEWPUTB-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N Ser-Gly-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- RIAKPZVSNBBNRE-BJDJZHNGSA-N Ser-Ile-Leu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RIAKPZVSNBBNRE-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N Ser-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- KCGIREHVWRXNDH-GARJFASQSA-N Ser-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N KCGIREHVWRXNDH-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- KQNDIKOYWZTZIX-FXQIFTODSA-N Ser-Ser-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N KQNDIKOYWZTZIX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N Ser-Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ILZAUMFXKSIUEF-SRVKXCTJSA-N Ser-Ser-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ILZAUMFXKSIUEF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- XQJCEKXQUJQNNK-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XQJCEKXQUJQNNK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- PYTKULIABVRXSC-BWBBJGPYSA-N Ser-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PYTKULIABVRXSC-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- LDEBVRIURYMKQS-WISUUJSJSA-N Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO LDEBVRIURYMKQS-WISUUJSJSA-N 0.000 description 1
- DYEGLQRVMBWQLD-IXOXFDKPSA-N Ser-Thr-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O DYEGLQRVMBWQLD-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- GSCVDSBEYVGMJQ-SRVKXCTJSA-N Ser-Tyr-Asp Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O GSCVDSBEYVGMJQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 101150006914 TRP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N Thr-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- CAGTXGDOIFXLPC-KZVJFYERSA-N Thr-Arg-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CCCN=C(N)N CAGTXGDOIFXLPC-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- UDQBCBUXAQIZAK-GLLZPBPUSA-N Thr-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UDQBCBUXAQIZAK-GLLZPBPUSA-N 0.000 description 1
- YSXYEJWDHBCTDJ-DVJZZOLTSA-N Thr-Gly-Trp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N)O YSXYEJWDHBCTDJ-DVJZZOLTSA-N 0.000 description 1
- IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N Thr-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N 0.000 description 1
- SGAOHNPSEPVAFP-ZDLURKLDSA-N Thr-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SGAOHNPSEPVAFP-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- HUPLKEHTTQBXSC-YJRXYDGGSA-N Thr-Ser-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 HUPLKEHTTQBXSC-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 1
- NHQVWACSJZJCGJ-FLBSBUHZSA-N Thr-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O NHQVWACSJZJCGJ-FLBSBUHZSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- CZWIHKFGHICAJX-BPUTZDHNSA-N Trp-Glu-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 CZWIHKFGHICAJX-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- UUIYFDAWNBSWPG-IHPCNDPISA-N Trp-Lys-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N UUIYFDAWNBSWPG-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N Trp-P-1 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C(C)=C(N)N=C2C LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JXNRXNCCROJZFB-RYUDHWBXSA-N Tyr-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 JXNRXNCCROJZFB-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- QZOSVNLXLSNHQK-UWVGGRQHSA-N Tyr-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 QZOSVNLXLSNHQK-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- JWHOIHCOHMZSAR-QWRGUYRKSA-N Tyr-Asp-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 JWHOIHCOHMZSAR-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- GIOBXJSONRQHKQ-RYUDHWBXSA-N Tyr-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GIOBXJSONRQHKQ-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- BGFCXQXETBDEHP-BZSNNMDCSA-N Tyr-Phe-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BGFCXQXETBDEHP-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- LMKKMCGTDANZTR-BZSNNMDCSA-N Tyr-Phe-Asp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 LMKKMCGTDANZTR-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- TYGHOWWWMTWVKM-HJOGWXRNSA-N Tyr-Tyr-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TYGHOWWWMTWVKM-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N [2-[3-[6-[3-[(5R,6aS,6bR,12aR)-10-[6-[2-[2-[4,5-dihydroxy-3-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]ethoxy]ethyl]-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxy-5-hydroxy-2,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4a-carbonyl]peroxypropyl]-5-[[5-[8-[3,5-dihydroxy-4-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]octoxy]-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxyoxan-2-yl]propoxymethyl]-5-hydroxy-3-[(6S)-6-hydroxy-2,6-dimethylocta-2,7-dienoyl]oxy-6-methyloxan-4-yl] (2E,6S)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-methylocta-2,7-dienoate Chemical compound C=C[C@@](C)(O)CCC=C(C)C(=O)OC1C(OC(=O)C(\CO)=C\CC[C@](C)(O)C=C)C(O)C(C)OC1COCCCC1C(O)C(O)C(OCC2C(C(O)C(OCCCCCCCCC3C(C(OC4C(C(O)C(O)CO4)O)C(O)CO3)O)C(C)O2)O)C(CCCOOC(=O)C23C(CC(C)(C)CC2)C=2[C@@]([C@]4(C)CCC5C(C)(C)C(OC6C(C(O)C(O)C(CCOCCC7C(C(O)C(O)CO7)OC7C(C(O)C(O)CO7)O)O6)O)CC[C@]5(C)C4CC=2)(C)C[C@H]3O)O1 FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 108010024078 alanyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010069926 arginyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 238000007623 carbamidomethylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000012468 concentrated sample Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000005619 esophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000012526 feed medium Substances 0.000 description 1
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000000459 head and neck squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 102000045750 human MAGEA3 Human genes 0.000 description 1
- 238000013095 identification testing Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N iodoacetic acid Chemical compound OC(=O)CI JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical group O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 101150040445 lpd gene Proteins 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 101150082581 lytA gene Proteins 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- RMAHPRNLQIRHIJ-UHFFFAOYSA-N methyl carbamimidate Chemical compound COC(N)=N RMAHPRNLQIRHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- FRZJZRVZZNTMAW-UHFFFAOYSA-N n,n-diethyl-3-(hydroxymethyl)benzamide Chemical compound CCN(CC)C(=O)C1=CC=CC(CO)=C1 FRZJZRVZZNTMAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- HMFAQQIORZDPJG-UHFFFAOYSA-N phosphono 2-chloroacetate Chemical compound OP(O)(=O)OC(=O)CCl HMFAQQIORZDPJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N phosphorous acid Chemical compound OP(O)O OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920002627 poly(phosphazenes) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M potassium chloride Inorganic materials [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 description 1
- 230000020978 protein processing Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010077037 tyrosyl-tyrosyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 108010000998 wheylin-2 peptide Proteins 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001184—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
- A61K39/001186—MAGE
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K14/245—Escherichia (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/285—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Pasteurellaceae (F), e.g. Haemophilus influenza
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/315—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
- C07K14/3156—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci from Streptococcus pneumoniae (Pneumococcus)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Deriváty antigenů asociovaných s nádory z MÁGE rodiny a sekvence nukleových kyselin kódující tyto deriváty, jejich použití pro přípravu fúzních proteinů a prostředků pro vakcinaci
• ·
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká proteinových derivátů obsahujících antigeny asociované s nádory, které mohu být použitelné při protinádorové vakcinaci. Přesněji, deriváty podle předkládaného vynálezu zahrnují fúsní proteiny obsahující antigen kódovaný rodinou MÁGE genů (například MAGE-3, MAGE-1) navázaný na imunologický fúsní partner, který dodává epitopy pro T-pomocné lymfocyty, jako je například lipidovaná forma proteinu D z Haemophilus influenzae B; chemicky modifikované MÁGE proteiny, ve kterých jsou disulfidové můstky redukovány a vzniklé .thioly jsou blokovány a geneticky modifikované MÁGE proteiny opatřené afinitní koncovkou a/nebo geneticky modifikované tak, aby bylo zabráněno tvorbě disulfidových můstků. Také jsou popsány způsoby pro přečištění MÁGE proteinů a pro přípravu vakcín. pro léčbu různých zhoubných nádorů, včetně například melanomu, karcinomu prsu, plic, NSCLC, spinocelulárních karcinomů hlavy a krku, karcinomu tlustého střeva a karcinomu jícnu.
Dosavadní stav techniky
Antigeny kódované rodinou MÁGE genů jsou exprimovány především na melanomových buňkách (včetně buněk maligního melanomu) a na buňkách některých jiných nádorů včetně·.NSCLC (nemalobuněčného karcinomu plic), spinocelulárního karcinomu hlavy a krku, uroteliálního karcinomu močového měchýře a karcinomu jícnu, ale nejsou detekovatelné na normálních tkáních s výjimkou varlat a placenty (Gaugler, 1994; Weynants, 1994, Patard, 1995) . MAGE-3 je exprimován v 69% melanomů (Gaugler, 1994) a může být také detekován ve 44% případů NSCLC (Yoshimatsu, 1988), 48% případů spinocelulárního karcinomu hlavy a krku, 34% případů uroteliálního karcinomu močového měchýře, 57% případů karcinomu jícnu, 32% případů karcinomu tlustého střeva a 24% případů karcinomu prsu (Van Pel, 1995; Inoue, 1995; Fujie, 1997; Nishimura, 1997). Nádory exprimující MÁGE proteiny jsou známé jako nádory asociované s MÁGE.
Imunogenicita lidských melanomových buněk byla elegantně prokázána v pokusech využívajících smíšených kultur melanomových buněk a autologních lymfocytů. Tyto kultury často vytvářejí specifické cytotoxické T-lymfocyty (CTL) schopné lyžovat výlučně autologní melanomové buňky, ale ne autologní fibroblasty ani autologní lymfocyty transformované EBV (Knuth, 1984; Anichini, 1987). Nyní bylo identifikován několik antigenů rozpoznávaných na autologních melanomových buňkách těmito CTL klony, včetně antigenů MÁGE rodiny.
První antigen, který mohl být definován pomocí rozpoznávání specifickými CTL na autologních melanomových buňkách, je označen MZ2-E (Van den Eynde, 1989) a je kódován genem MAGE-1 (Van der Bruggne, 1991). CTL namířené proti MZ2-E rozpoznávají a lyžují MZ2-E pozitivní autologní melanomové buňky, stejně jako buňky od jiných pacientů, pokud mají tyto buňky HLA.A1 alelu.
MAGE-1 gen náleží do rodiny 12 blízce příbuzných genů, MAGE1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE-4, MAGE-5, MAGE-6, MAGE-7, MAGE-8, MAGE-9, MAGE-10, MAGE-11, MAGE-12, umístěných na chromosomu X a majících 64-85% vzájemnou homologii v kódujících sekvencích (De Plaen, 1994). Tyto jsou někdy označovány jako MAGE-A1, MAGE-A2,
MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A5, MAGE-A6, MAGE-A7, MAGE-A8, MAGE-A9, MAGE-A10, MAGE-All, MAGE-A12 (MÁGE A rodina). Dvě další skupiny proteinů také náleží do MÁGE rodiny, ačkoliv jsou příbuzné o něco méně. Tyto patří do MÁGE B a MÁGE C rodiny. MÁGE B rodina zahrnuje MÁGE Bl (též známý jako MÁGE Xpl a DAM 10), MÁGE B2 (též známý jako MÁGE Xp2 a DAM 6), MÁGE B3 a MÁGE B4 - MÁGE C rodina v současnosti zahrnuje MÁGE Cl a MÁGE C2. Obecně může být MÁGE protein definován jako protein obsahující specifickou jadernou sekvenci umístěnou v oblasti C-konce proteinu (například pro MÁGE Al protein o 309 aminokyselinách odpovídá specifická jaderná sekvence aminokyselinám 195-279).
Společná specifická jaderná sekvence může být zapsána následujícím způsobem, kde x představuje jakoukoliv aminokyselinu, zbytky uvedené malými písmeny jsou konzervované (konzervativní varianty jsou možné) a zbytky uvedené velkými písmeny jsou zcela konzervované.
Specifická jaderná sekvence:
LixvL(2x)I(3x)g(2x)apEExiWexl(2x)m(3-4x)Gxe(34x)gxp(2x)lit(3x)VqexYLxYxqVPxsxP(2x)yeFLWGprA(2x)Et(3x)kv
Konzervativní substituce jsou dobře známé a obyčejně jsou zadávány jako chybové skorovací matrice v počítačových programech pro seřazování sekvencí. Mezi tyto programy patří PAM250 (Dayhoft M.O. et al., (1978) A model of evolutionary changes in proteins, v Atlas of Protein sequence and structure, 5(3) M.O.Dayhoft (ed.) 345-352), National Biomedical Research Foundation, Washington, a Blosum 6,2 (Steven Henikoft and Jorja G. Henikoft (1992), Amino acid substitution matrices from protein blocks), Proč. Nati. Acad. Sci. USA 89 (Biochemistry): 10915-10919.
Obecně, substituce v následujících skupinách jsou konzervativní substituce, ale substituce mezi skupinami jsou považovány za nekonzervativní substituce. Těmito skupinami jsou:
(i) aspartat/asparagin/glutamat/glutamin;
(ii) serin/threonin;
(iii) lysin/arginin;
(iv) fenylalanin/tyrosin/tryptofan;
(v) leucin/isoleucin/valin/methionin;
(vi) glycin/alanin.
Obecně a v kontextu předkládaného vynálezu bude MÁGE protein přibližně z 50% identický v tomto jaderném regionu s aminokyselinami 195-279 MÁGE Al.
Na MAGE-3 proteinu bylo identifikováno několik CTL epitopů. Jeden takový epitop, MAGE-3.Al, je nepeptidová sekvence umístěná mezi aminokyselinami 168 a 176 MAGE-3 proteinu, která tvoří epitop specifický pro CTL, pokud je presentována společně s MHC molekulou třídy I HLA.A1. Nově byly identifikována další CTL epitopy na peptidové sekvenci MAGE-3 proteinu podle své schopnosti vyvolat CTL odpověď ve smíšené kultuře melanomových buněk a autologních lymfocytů. Tyto dva epitopy mají specifické vazebné motivy pro HLA.A2 (Van der Bruggen, 1994) a HLA.B44 (Herman, 1996) alely, v příslušném pořadí.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje deriváty MÁGE proteinu. Takové deriváty jsou vhodné pro použití v terapeutických vakcinačních prostředcích, které jsou vhodné pro léčbu různých typů nádorů.
99 9
V jednom provedení předkládaného vynálezu je derivátem fúsní protein obsahující antigen z MÁGE proteinové rodiny navázaný na heterologní fúsní partner. Proteiny mohou být chemicky konjugované, ale výhodněji jsou exprimovány jako rekombinantní fúsní proteiny umožňující vyšší úroveň produkce v expresním systému ve srovnání s non-fúzními proteiny. Fúsní partner může napomáhat dodáním epitopů pro T-pomocné lymfocyty (imunologický fúsní partner), výhodně epitopy pro T-pomocné lymfocyty rozpoznávané člověkem, nebo může napomáhat v expresi proteinu (zesilovač exprese) ve vyšším množství ve srovnání s přirozeným rekombinantním proteinem. Výhodně je fúsní partner jak imunologickým fúzním partnerem, tak zesilovačem exprese.
Ve výhodném provedení vynálezu je imunologický fúsní partner odvozen od proteinu D, povrchového proteinu gram-negativní bakterie Haemophilus influenzae B (WO 91/18926). Výhodně obsahuje derivát proteinu D přibližně první 1/3 proteinu, přesněji ppřibližně prvních 100-110 N-koncových aminokyselin. Výhodně je derivát proteinu D lipidovaný. Výhodně je prvních 109 zbytků fúsního partnera tvořeného lipoproteinem D obsaženo na N-konci pro dodání potenciálního vakcinačního antigenu s dalšími exogenními epitopy pro T-lymfocyty a tento fúsní partner zvyšuje expresi v E. coli (takže působí jako zesilovač exprese). Lipidový konec zajišťuje optimální presentaci antigenu buňkám presentujícím antigen.
Mezi další fúsní partnery patří nestrukturální protein z chřipkového viru, NS1 (hemagglutinin). Obvykle je použito 81 Nterminální aminokyselin, ačkoliv mohou být použity jiné fragmenty, pokud obsahují epitopy pro T-lymfocyty.
V jiném provedení je imunologickým fúzním partnerem protein známý jako LYTA. Výhodně je použita C-koncová část molekuly.
LYTA je odvozen od Streptococcus pneumoniae, který syntetizuje N-acetyl-L-alanin amidasu, amidasu LYTA (kodovanou lytA genem (Gene, 43 (1986) str. 265-272), což je autolysin, který specificky degraduje některé vazby v peptidoglykanovém skeletu. C-koncová doména LYTA proteinu je odpovědná za afinitu k cholinu nebo k některým analogům cholinu, jako je DEAE. Tato vlastnost byla využita pro vývoj E.colí C-LYTA expresních plasmidů použitelných pro expresi fúzních proteinů. Přečištění hybridních proteinů obsahujících G-LYTA fragment na amino-konci bylo popsáno (Biotechnology, 10, (1986), str. 795-798). Výhodná provedení vynálezu využívají repetitivní část Lyta molekuly na C-konci začínající zbytkem 178. Zejména výhodná provedení obsahují zbytky 188-305.
Imunologické fúsní partnery uvedené výše jsou také výhodné v tom, že napomáhají expresi. Konkrétně, takové fúsní proteiny jsou exprimovány s vyšším výtěžkem než přirozené rekombinantní MÁGE proteiny.
Vynálezci demonstrovali, že při klinickém použití jsou takové konstrukty schopné léčit melanom. V jednom případě byl pacient s melanomem ve stadiu IV zbaven metastas po dvou dávkách lípo D 1/3 MÁGE 3 His proteinu bez adjuvans.
V jednom provedení předkládaný vynález proto obsahuje fúsní proteiny obsahující antigen asociovaný s nádory z MÁGE rodiny navázaný na imunologický fúsní partner. Výhodně je imunologický fúsní partner protein D nebo jeho fragment, nejlépe lipoprotein D. MÁGE proteiny jsou výhodně MÁGE Al nebo MÁGE A3. Složka lipoproteinu D je výhodně tvořena první 1/3 lipoproteinu D.
Proteiny podle předkládaného vynálezu jsou přednostně exprimovány v E. coli. Ve výhodném provedení jsou proteiny
Ί • · exprimovány s afinitní koncovkou, jako je například histidinová koncovka složená z 5 až 9, výhodně ze 6 histidinových zbytků. Tyto koncovky jsou výhodné v tom, že napomáhají při přečištění.
Předkládaný vynález také poskytuje nukleové kyseliny kódující proteiny podle předkládaného vynálezu. Takové sekvence mohou být insertovány do vhodného expresního vektoru a použity v DNA/RNA vakcinaci, nebo mohou být exprimovány ve vhodném hostiteli. Mikrobiální vektory exprimující nukleové kyseliny mohou být použity jako vakciny. Mezi takové vektory patří například poxvirus, adenovirus, alfavirus, listería a monarfág.
DNA sekvence kódující proteiny podle předkládaného vynálezu může být syntetizována za použití standardních technik syntézy DNA, jako je enzymatická ligace popsaná v D.M. Roberts et al. v Biochemistry. 1985., 24.: 5090-5098, chemická syntéza, enzymatická polymerizace in vitro nebo PCR technologie využívající například termostabilní polymerasu, nebo pomocí kombinace těchto technik.
Enzymatická polymerizace DNA může být provedena in vitro za použití DNA polymeras jako je DNA polymerasa I (Klenow fragment) ve vhodném pufru obsahujícím nukleosid-trifosfaty dATP, dCTP, dGTP a dTTP podle potřeb při teplotě 10-37 °C, obyčejně v objemu 50 μΐ nebo menším. Enzymatická ligace DNA fragmentů může být provedena za použití DNA ligasy, jako je T4 DNA ligasa, ve vhodném pufru, jako je 0,05 M Tris (pH 7,4),
0,01 M MgCl2, 0,01M dithiothreitol, 1 mM spermidin, 1 mM ATP a 0,1 mg/ml hovězí sérový albumin, při teplotě od 4 °C do teploty okolí, obyčejně v objemu 50 ml nebo menším. Chemická syntéza DNA polymeru nebo fragmentu může být provedena běžnou fosfotriesterovou, fosfitovou nebo fosforoamiditovou metodou, za použití techniky syntézy na pevné fázi, jak je popsána v ·· *···
Chemical and Enzymatic Synthesis ofo Gene Fragments - A Laboratory Manual (ed. H.G. Gassen and A. Lang), Verlag Chemie, Weinheim (1982), nebo v jiných vědeckých publikacích, jako je například M.J. Gait, H.W.D.Matthes, M.Singh, B.S.
Sproat a R.C. Titmas, Nucleic Acids Research, 1982, 10: 6243; B.S. Sproat a W. Bannwarth, Tetrahedron Letters, 1983, 24:
5771; M.D. Matteucci a M.H. Caruthers, Tetrahedron Letters, 1980, 21: 719; M.D. Matteuci a M.H. Caruthers, Journal of the American Chemical Society, 1981, 103: S.P. Adams et al.,
Journal of the American Chemical Society, 1983, 105: 661; N.D. Sinha, J. Biernat, J. McManus a H. Koester, Nucleic Acids Research 1984, 12: 4539; a H.W.D. Matthes et al., EMBO Journal, 1984, 3:801.
Způsob podle předkládaného vynálezu může být proveden za použití jakékoliv rekombinantní techniky, jako jsou například techniky popsané v Maniatis et al., Molecular Cloning - A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, 1982-1989.
Přesněji, způsob může obsahovat kroky:
(i) přípravu replikovatelného nebo integrovatelného expresního vektoru, který je schopen exprimovat v hostitelské buňce DNA polymer obsahující nukleotidovou sekvenci kódující protein nebo jeho ímunogenní derivát;
(ii) transformaci hostitelské buňky uvedeným vektorem;
(iii) kultivaci uvedené transformované hostitelské buňky za podmínek umožňujících expresi uvedeného DNA polymeru pro produkci uvedeného proteinu; a (iv) získání uvedeného proteinu.
Termín transformování, jak je zde použit, označuje vložení cizorodé DNA do hostitelské buňky. Toto může být provedeno pomocí transformace, transfekce nebo infekce vhodného plasmidu
0000
0 0 0 0 0000 00 0 000 000 0 0 00 nebo virového vektoru za použití běžných technik popsaných například v Genetics Engeneeríng, ed. S.M. Kingsman a A.J. Kingsman; Blackwell Scienptific Publications, Oxford, England, 1988. Termíny transformovaná nebo transformant jsou zde použity na výslednou hostitelskou buňku obsahující a exprimující vybraný cizorodý gen.
Expresní vektory jsou nové a tvoří také část předkládaného vynálezu.
Replikovatelné expresní vektory mohou být připraveny způsobem podle předkládaného vynálezu, štěpením vektoru kompatibilního s hostitelskou buňkou za zisku lineárního DNA segmentu majícího intaktní replikon a kombinováním uvedeného lineárního segmentu s jednou nebo více molekulami DNA, které spolu s uvedeným lineárním segmentem kódují požadovaný produkt, jako je například DNA polymer kódující protein podle předkládaného vynálezu nebo derivát, za vhodných ligačních podmínek.
Tak může být DNA polymer vytvořen před nebo během konstrukce vektoru.
Volba vektoru bude provedena podle hostitelské buňky, která může být prokaryotická nebo eukaryotická, ale výhodně se jedná o E. coli nebo CHO buňky. Mezi vhodné vektory patří plasmidy, bakteriofágy, kosmidy a rekombinantní viry.
Příprava replikovatelných expresních vektorů může být provedena běžnými způsoby za použití vhodných enzymů pro restrikci, polymerizaci a ligaci DNA, podle způsobů popsaných například v Maniatis et al., výše.
•99999 9 9 99 99
9 99 99 9999
999 9 9 9999
999 9 9 999999
999 9 9 9999
9 999 999 99 99
Rekombinantní hostitelská buňka je připravena ve způsobu podle předkládaného vynálezu transformováním hostitelské buňky replikovatelným expresním vektorem podle předkládaného vynálezu za transformačních podmínek. Výhodnými transformačními podmínkami jsou běžné podmínky a jsou popsány například v Maniatis et al., výše, nebo v DNA Cloning, svazek II, D.M. Glover ed., IRL Press Ltd., 1985.
Volba transformačních podmínek závisí na hostitelské buňce. Bakteriální buňka, jako je E. coli, může být ošetřena roztokem CaCl2 (Cohen et al., Proč. Nati. Acad. Sci., 1973, 69:2110) nebo roztokem obsahujícím směs RbCl, MnCÍ2ř octanu draselného a glycerolu, a potom kyselinou 3-[N-morfolino]-propansulfonovou, RbCl a glycerolem. Savčí buňky v kultuře mohou být transformovány vápníkovým vysrážením vektorové DNA do buněk. Vynález také zahrnuje hostitelské buňky transformovaná replikovatelným expresním vektorem podle předkládaného vynálezu.
Kultivace transformovaných hostitelských buněk za podmínek umožňujících expresi DNA polymeru je provedena běžným způsobem, jak je popsáno například v Maniatis et al. a v DNA Cloning, výše. Výhodně jsou buňkám dodávány živiny a kultivace probíhá při teplotách nižších než 50 °C.
Výsledný materiál může být získán za použití běžných metod vybraných podle hostitelských buněk a podle lokalizace exprímovaného materiálu (intracelulární nebo secernovaný do kultivačního media nebo do buněčné periplasmy). Když je hostitelská buňka bakteriální, jako je například E. coli, tak může být například provedena fyzikální, chemická nebo enzymatická lýza buňky a proteinový produkt může být izolován z výsledného lyzátu. Když je hostitelskou buňkou savčí buňka, tak fefe fefefefe · fe fefe fefe fe · « fefefefe fe fefe fe • ♦ » · fe fefefe* • fefe » fe fe fefefe fefe fe fefefefe·· fefe fefe může být produkt obvykle izolován z živného media nebo z bezbuněčných extraktů. Mezi běžné techniky pro izolaci proteinů patři selektivní srážení, adsorpční chromatografie a afinitní chromatografie včetně afinitní kolony s monoklonální protilátkou.
Proteiny podle předkládaného vynálezu jsou poskytnuty buď jako rozpuštěný materiál v kapalné formě nebo v lyofilizované formě.
Obecně se předpokládá, že každá dávka pro člověka bude obsahovat 1 až 1000 gg proteinu, výhodně 30-300 gg.
Předkládaný vynález také poskytuje farmaceutické prostředky obsahující protein podle předkládaného vynálezu ve farmaceuticky přijatelných přísadách. Výhodný vakcinační prostředek obsahuje alespoň lipoprotein D - MAGE-3. Taková vakcína může volitelně obsahovat jeden nebo více jiných antígenů asociovaných s nádory, například jiné antigeny náležící do MÁGE nebo GAGE rodiny. Mezi vhodné další antigeny asociované s nádory patří MAGE-1, GAGE-1 nebo tyrosinasa.
Příprava vakcín je obecně popsána v Vaccine Design (The subunit and adjuvant approach (ed. Powell M.F. and Newman, M.J.) (1995) Plenům Press New York). Obalení do liposomů je popsáno ve Fuilerton, U.S. patent č. 4235877.
Proteiny podle předkládaného vynálezu jsou výhodně obsaženy ve vakcinačních prostředcích podle předkládaného vynálezu společně s adjuvans. Mezi vhodná adjuvans patří soli hliníku, jako je hydroxid hlinitý ve formě gelu (kamenec) nebo fosforečnan hlinitý, ale patří mezi ně také soli vápníku, železa nebo zinku, nebo nerozpustné suspenze acylovaného •9 9*9·
9 9
9 9
9 9 9
9 9
9 • 99
999 *9 *· t * 9 • 9 9 »
9 9 9 • 9 9 *
9« 99 tyrosinu nebo acylované cukry, kationtové nebo aniontově derivatizované polysacharidy nebo polyfosfazeny. Mezi další známá adjuvans patří oligonukleotidy obsahující CpG. Oligonukleotidy se vyznačují tím, že CpG dinukleotid je nemethylovaný. Takové oligonukleotidy jsou dobře známé a jsou popsány například ve WO 96/02555.
V prostředcích podle předkládaného vynálezu je výhodné, aby adjuvans přednostně vyvolávalo imunitní odpověď Thl typu. Mezi vhodné adjuvantní systémy patří, například, kombinace monofosforyl-lipidu A, výhodně 3-de-O-acylovaného monofosforyl lipidu A (3D-MPL) se solí hliníku. CpG oligonukleotidy také přednostně vyvolávají Thl odpověď.
Zesílený systém obsahuje kombinaci monofosforyl-lipidu A a saponinového derivátu, přesněji kombinaci QS21 a 3D-MPL, jak j popsána ve WO 94/00153, nebo méně reaktogenní prostředek, ve kterém je QS21 utlumen cholesterolem, jak je popsáno ve WO 96/33739.
Zejména účinný adjuvantní prostředek obsahuje QS21 3D-MPL a tokoferol v olejové nebo vodní emulsy, jak je popsáno ve WO 95/17210, který je také přednostně použitým prostředkem.
V jednom provedení předkládaný vynález poskytuje vakcinační prostředek obsahující protein podle předkládaného vynálezu, nejlépe lipoprotein D (nebo jeho derivát) - MAGE-3 s adjuvans, kterým je monofosforyl-lipid A nebo jeho derivát.
Výhodně obsahuje vakcína dále saponin, nejlépe QS21.
Výhodný prostředek dále obsahuje emulsy olej ve vodě a tokoferol. Předkládaný vynález také obsahuje způsob přípravy • ·
vakcinačního prostředku obsahující smísení proteinu podle předkládaného vynálezu s farmaceuticky přijatelnou přísadou, jako je 3D-MPL.
V jednom aspektu vynález obsahuje způsob pro přečištění rekombinantně připraveného MAGE-proteinu. Tento způsob obsahuje solublizaci proteinu, například v silném chaotropním činidle (jako je například močovina, guanidiniumhydrochlorid) nebo v obojetném detergenčním činidle, jako je například Empigen BB n-dodecyl-N,N-dimethylglycin), redukci intra- a intermolekulových disulfidových můstků proteinu, blokování vzniklých thiolů pro prevenci oxidačního obnovení vazeb a zpracování proteinu v jednom nebo ve více chromatografických stupních.
Výhodně je blokovacím činidlem alkylační činidlo. Mezi taková blokovací činidla patří, například, alfa halogenkyseliny nebo alfa halogenamidy, například kyselina jodoctová a jodacetamid, které způsobují karboxymethylaci nebo karboxyamidaci (karbamidomethylaci) proteinu. Další blokovací činidla, která mohou být použita, jsou popsána v literatuře (viz například The Proteins, svazek II, ed. H. Neurath, R.L. Hill, a C.L. Boeder, Academie Press, 1976, a Chemical Reagents for Protein Modificaton, svazek , ed., R.L. Lunblad a C.M. Noyes, CRC Press, 1985). Mezi typické příklady takových dalších blokovacích činidel patří N-ethylmaleimid, chloracetylfosfat, O-methylisomočovina a akrylonitril. Použití blokovacích činidel je výhodné, protože brání agregaci vzniklého materiálu a zajišťuje stabilitu při dalším přečištění.
V provedení vynálezu jsou blokovací činidla vybrána tak, aby indukovala vznik stabilního kovalentního a ireversibilního derivátu (například je použito alfa-halogenky.seliny nebo alfa14 halogenamidu). Nicméně, mohou být použita i jiná blokovací činidla, která mohou být po přečištění odstraněna za uvolnění nederivatizovaného proteinu.
MÁGE proteiny mající derivatizované volné thiolové zbytky jsou nové a tvoří aspekt předkládaného vynálezu. Výhodným provedením vynálezu jsou karboxyamidované nebo karboxymethylované deriváty.
Ve výhodném provedení jsou proteiny podle předkládaného vynálezu opatřeny afinitní koncovkou, jako je CLYTA nebo polyhistidinová sekvence. V takových případech je protein po stupni blokování výhodně zpracován afinitní chromatografií. Pro proteiny s polyhistidinovou koncovkou může být použita afinitní chromatografíe s imobilizovaným iontem kovu (IMAC). Iontem kovu může být jakýkoliv vhodný iont, jako je například zinek, nikl, železo, hořčík nebo měď, ale výhodně je použít zinek nebo nikl. Výhodně obsahuje IMAC pufr obojetné detergenční činidlo, jako je Empigen BB (dále pouze Empigen), protože snižuje koncentrace endotoxinu v konečném materiálu.
Pokud je připraven protein s Clyta částí, tak může být přečištěn za využití své afinity k cholinu nebo k analogům cholinu, jako je DEAE. V jednom provedení vynálezu jsou proteiny připraveny s polyhistidinovou koncovkou a Clyta částí. Tyto proteiny mohou být přečištěny za použití jednoduchého dvoustupňového protokolu afinitní chromatografíe.
Vynález bude dále popsán v následujících příkladech.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: Příprava rekombinantního kmene E. coli
exprimujícího fúsní protein lipoprotein D-MAGE-3His (LPD 1/3MAGE-3-His nebo LpD MAGE-3-His)
1. Expresní systém E. coli
Pro produkci lipoproteinu D byla DNA kódující protein D klonována do expresního vektoru pMG 814. Tento plasmid využívá signály z DNA lambda fágu pro řízení transkripce a translace insertovaných cizorodých genů. Vektor obsahuje lambda PL promotor PL, operátor OL a dvě využitelná místa (NutL a NutR) pro odstranění efektů transkripční polarity při použití N proteinu (Gross et al., 1985, Mol. and Cell Biol. 5: 1015). Vektory obsahující PL promotor jsou vloženy do E. coli lysogenního hostitele pro stabilizaci plasmidové DNA. Lysogenní hostitelské kmeny obsahují replikon-deficientní lambda fágovou DNA integrovanou do genomu (Shatzman et al., 1983; v
Experimetal Manipulation of Gene Expression, Inouya (ed.), str. 1-14, Academie Press, NY). DNA lambda fágu řídí syntézu cl represorového proteinu, který se váže ná OL represor vektoru a brání vazbě RNA polymerasy na PL promotor a tak transkripci insertovaného genu. cl gen expresního kmene AR58 obsahuje teplotně sensitivní mutaci, takže transkripce řízená PL může být regulována teplotním posunem, to znamená, že zvýšení kultivační teploty inaktivuje represor a je zahájena syntéza cizorodého proteinu. Expresní systém umožňuje kontrolovanou syntézu cizorodých proteinů, zejména těch, které mohou být toxické pro buňku (Shimataka and Rosenberg, 1981, Nátuře 292; 128) .
2. E. coli, kmen AR58:
Lysogenní kmen Ε. coli AR58 použitý pro produkci LPD-MAGE-3His proteinu je derivát standardního NIH E.coli K12 kmene N99 (F-su-galK2, lacZ-, thr-). Obsahuje defektní lysogenní lambda fág (galE::TN10, 1 Kil- cl857 DH1). Kil- fenotyp brání ukončení makromolekulové syntézy hostitele. cI857 mutace způsobuje teplotní sensitivitu cl represoru. DH1 mutace odstraňuje pravý operon lambda fágu a bio, uvr3 a chlA lokusy hostitele. Kmen AR58 byl připraven transdukcí N99 P lambda fágem předem kultivovaným na SA500 derivátu (galE::TN10, 1 Kil- cI857 DH1) . Vložení defektního lysogenu do N99 buněk bylo selektováno tetracyklinem, protože TN10 transposon kódující resistenci na tetracyklin je umístěn v sousedství galE genu. N99 a SA500 jsou K12 kmeny E.coli získané od Dr. Martin Rosenberg's laboratoře v National Institute of Health.
3. Konstrukce vektoru navrženého pro expresi rekombínantního proteinu LPD-MAGE-3HÍS:
Cílem bylo exprimovat MÁGE 3 jako fúsní protein za použití N-koncové třetiny lipidovaného proteinu D jako fúzního partnera navázaného na N-konec MAGE-3 a sekvence několika histidinových zbytků (His koncovky) umístěné na jeho C-konci.
Protein D je lipoprotein (42 kDa vazebný protein pro imunoglobulin D umístěný na povrchu gram-negativní bakterie Haemophilus influenzae). Protein je syntetizován jako prekursor s 18 aminokyselinovou signální sekvencí, která obsahuje konvenční sekvenci pro bakteriální lipoprotein (WO 91/18926).
Po odstranění signální sekvence lipoproteinu během,sekrece se stává Cys (v pozici 19 molekuly prekursoru) amino-koncovým zbytkem a současně je modifikován kovalentním navázáním jak
esterovou vazbou vázaných, tak amidovou vazbou vázaných mastných kyselin.
Mastné kyseliny navázané na amino-koncový cysteinový zbytek potom působí jako membránové ukotvení.
Plasmid exprimující fúsní protein byl navržen tak, aby exprimoval prekursorový protein obsahující 18 aminokyselinovou signální sekvenci a prvních 109 zbytků zpracovaného proteinu D, dvě nepříbuzné aminokyseliny (Met a Asp), aminokyselinové zbytky 2 až 314 MAGE-3 a dva Gly zbytky působící jako pantový region pro navázání dalších sedmi His zbytků.
Takto připravený rekombinantní kmen produkoval lipidovaný fúsní protein s His koncovkou o 432 aminokyselinách (viz obr.
1) , s aminokyselinovou sekvencí SEQ ID NO: 1 a kódující sekvencí SEQ ID NO: 2.
4. Klonovací strategie pro přípravu LDP-MAGE-3-His fúzního proteinu (vektor pRITl4477).
Byly použity cDNA plasmid (od Dr. Thierry Boon z Ludwig Institute) obsahující kódující sekvenci pro MAGE-3 gen (Gaugler, B. et al., 1994) a vektor pRIT 14586, obsahující Nkoncovou část Lipo-D-1/3 kódující sekvence (připravený podle obr. 2). Klonovací strategie obsahovala následující kroky:
(a) PCR amplifikaci sekvencí přítomných v plasmidové cDNA pro MAGE-3 za použití kódujícího oligonukleotidu: 5’ gc gcc atg gat ctg gaa cag cgt agt cag cac tgc aag cct, a protismyslného oligonukleotidu 5' gcg tet aga tta atg gtg atg gtg atg gtg atg acc gcc ctc ttc ccc ctc tet caa; tato amplifikace vedla k následujícím modifikacím na N-konci: změnu prvních pěti kodonů • · ·· * • · · »»» β» 9 9 na kodony používané v E.coli; nahrazení Pro kodonu v pozici 1 Asp kodonem, vložení Ncol místa na 5' konci a adici 2 Gly kodonů a 7 His kodonů následovaných Xbal místem na C-konci;
(b) klonování výše uvedeného amplifikovaného fragmentu do TA klonovacího véktoru (Invitrogen) a přípravu pracovního vektoru pRIT14647;
(c) vystřižení Ncol-Xbal fragmentu z plasmidu pRIT14647 a klonování do vektoru pRIT 14586;
(d) transformaci hostitelského kmene AR58;
(e) selekci a charakterizaci transformantů E. coli obsahujících plasmid pRIT 14477 exprimujících LPD-MAGE-3-His fúsní protein.
Příklad 2: Příprava LPD1/3-MAGE-3-HÍS antigenu
1. Kultivace a indukce bakteriálního kmene - exprese LPDl/3-MAGE-3-His
Buňky AR5-8 transformované plasmidem pRIT14477 byly kultivovány ve 2 litrových nádobách obsahujících 400 ml LY12 media doplněného kvasinkovým extraktem (6,4 g/l) a kanamycinsulfatem (50 mg/1). Po inkubaci za třepání při 30 °C po dobu 8 ± 1 hodiny se z každé nádoby odebral malý vzorek pro mikroskopické vyšetření. Obsah dvou nádob se potom smísil za vzniku inokula pro 20 litrovou fermentační nádobu.
Inokulum (přibližně 800 ml) bylo přidáno do předem sterilizované 20 litrové (celkový objem) fermentační nádoby obsahující 7 litrů media doplněného 50 mg/1 kanamycin-sulfatem. pH bylo upraveno a udržováno na 6,8 pravidelným přidáváním NH4OH (25% obj./obj.) a teplota byla upravena a udržována na 30 °C. Provzdušňování bylo prováděno rychlostí 12 1/mín. a tlak rozpuštěného kyslíku byl udržován na 50% saturaci pomocí
zpětnovazebně kontroly rychlosti třepání. Přetlak ve fermentačním tanku byl udržován na 500 g/cm2 (0,5 baru).
Kultivace za přísunu živin byla provedena za kontrolovaného přidávání uhlíkového živného roztoku. Živný roztok byl přidáván počáteční rychlostí 0,04 ml/min a rychlost se exponenciálně zvyšovala během prvních 42 hodin pro dosažení rychlosti růstu 0,1 h1.
Po 42 hodinách byla teplota ve fermentačním tanku rychle zvýšena na 39 °C a rychlost podávání živného roztoku byla udržována na 0,005 ml/g DCW/min. během indukční fáze po dobu dalších 22-23 hodin, během kterých dosáhla intracelulární exprese LPD1/3-MAGE-3-HÍS maximální úrovně.
Alikvoty (15 ml) media byly odebírány v pravidelných intervalech během růstové/indukční fáze a na konci f-ermentace, aby bylo možno sledovat kinetiku růstu bakterií a intracelulární exprese produktu a dále pro získání vzorků pro identifikaci mikrobů/testy čistoty.
Na konci fermentace byla optická hustota kultury mezi 80 a 120 (což odpovídá koncentraci buněk mezi 48 a 72 g DCW/1) a celkový objem kapaliny byl přibližně 12 litrů. Kultury byly rychle ochlazeny na teplotu 6-10 °C a buňky ECK32 byly separovány z kultivačního media odstředěním při 5000 x g při 4 °C během 30 minut. Koncentrované buňky ECK32 byly rychle uskladněny v plastových vacích a ihned zmrazený při -80 °C.
2. Extrakce proteinu
Zmrazené koncentrované buňky ECK32 se nechaly roztát při 4 °C a potom byly resuspendovány v pufru pro rozrušení buněk v konečné optické hustotě 60 (která odpovídá koncentraci buněk přibližně 36 g DCW/1).
Buňky byly rozrušeny dvěma průchody přes vysokotlaký homogenizační přístroj (1000 barů). Suspenze rozrušených buněk byla odstředěna (10000 x g při 4 °C, 30 minut) a peletová frakce byla promyta dvakrát Triton X100 (1% hmot./obj.) + EDTA (1 mM) a potom fosfátem pufrovaným salinickým roztokem (PBS) + Tween 20 (0,1% obj./obj.) a nakonec PBS. Před každým stadiem promývání byla suspenze odstředěna při 10000 x g podobu 30 minut při 4 °C, supernatant byl odstraněn a peleta byla použita v dalším promývání.
Příklad 3: Charakterizace fúzního proteinu lípo D - MAGE-3
1. Přečištění:
LPD-MAGE-3-His byl přečištěn z buněčného homogenátu za použití následující sekvence kroků:
(a) solubilizace promyté peletové frakce z procesu destrukce buněk;
(b) chemická redukce intra- a inter-proteinových disulfidových můstků, po které následovalo blokování thiolových skupin pro zabránění oxidativnímu obnovení vazeb;
(c) mikrofiltrace reakční směsí pro odstranění částic a snížení obsahu endotoxinů;
i (d) zachycení a primární přečištění LPD-MAGE-3-His pomocí využití afinitní interakce mezi polyhistidinovou koncovkou a chelatační sepharosou obsahující zinek;
(e) odstranění kontaminujících proteinů aniontovou iontoměničovou chromatografií.
Přečištěný LPD-MAGE-3-His byl zpracován v několika dalších krocích:
(f) výměna pufru/odstranění močoviny pomocí chromatografie s vylučováním podle velikosti za použití Superdex 75;
(g) filtrací během procesu;
(h) výměnou pufru/odsolením pomocí chromatografie s vylučováním podle velikosti za použití Sephadex G25.
Každý z těchto kroků bude nyní popsán podrobněji.
1.1) Solubilizace pelety buněčného homogenátu
Peleta z posledního promytí (jak je popsáno výše) byla resolubilizována přes noc v 800 ml roztoku guanidinhydrochloridu (6M) a fosforečnanu sodného (0,1 M, pH 7,0) při 4 °C.
1.2) Redukce a karboxymethylace
Solubilizovaný materiál (světle žlutá, kalná suspenze) se probublala argonem pro odstranění jakéhokoliv zbývajícího kyslíku a přidal se zásobní roztok 2-merkaptoethanolu (14 M) na konečnou koncentraci 4,3 M (která odpovídá 0,44 ml 2merkaptoethanolu na ml roztoku).
Vzniklý roztok se rozdělil a přenesl se do dvou skleněných zkumavek, které se zahřály na 95 °C ve vodní lázni. Po 15 minutách při 95 °C se zkumavky odstranily z vodní lázně a nechaly se vychladnout a potom se jejich obsah slil do folií pokryté kádinky (5 1), která se umístila na led a za důkladného míchání se přidal jodacetamid v pevném stavu v množství nutném pro dosažení konečné koncentrace 6 M (která odpovídá 1,11 g jodacetamídu na ml roztoku). Směs se ponechala na ledu ve tmě po dobu 1 hodiny pro zajištění úplné solubilizace jodacetamídu a potom byla neutralizována (za stálého důkladného třepání a •9 ·#*· * * » « M • 9 · »· 9 9 · * · · • 9 9 9 · 9 9 9 9 • 9 9 9 · ♦····· ·♦· 9 9 9 9 9 9 • · · ··9 99 9 ·· ·· kontinuálního sledování pH) přidáním přibližně 1 litru hydroxidu sodného (5 M) za dosažení konečného pH 7,5-7,8.
Získané směs se ponechala na ledu ve tmě po dobu dalších 30 minuta potom se pH opět upravilo na pH 7,5-7,8.
1.3) Mikrofiltrace
Směs se mikrofiltrovala na Amicon Proflux M12 jednotce s tangenciálním průtokem vybavené Minikos náplní z dutého vlákna (ref. č. M22M-600-01N; plocha 5600 cm2, 0,2 μπι). Filtrát byl použit v následném chromatografickém přečištění.
1.4) Chelatační chromatografie za použití kovu (Zn2+) (IMAC)
Chelatační chromatografie za použití kovu byla provedena za použití Chelating Sepharose FF (Pharmacia Biotechnology kat. č. 17-0575-01) naplněné do BPG 100/500 kolony (Pharmacia Biotechnology kat. č. 18-1103-01). Rozměry náplně byly: průměr 10 cm; plocha na příčném řezu 79 cm2; délka náplně 19 cm; objem 1500 ml. Prázdná kolona byla ošetřena hydroxidem sodným (0,5 M) a potom byla promyta přečištěnou vodou.
Nosič (aplikovaný ve 20% obj./obj. ethanolu) byl promyt přečištěnou vodou (8 litrů) na Buchnerově nálevce (ve vakuu) a byl naplněn zinkem pomocí průchodu alespoň 15 1 roztoku ZnCl2 (0,1 M). Nadbytek zinku byl odstraněn promýváním nosiče 10 1 přečištěné vody, dokud pH kapaliny na výstupu nedosáhlo pH roztoku ZnCl2 (pH 5,0). Nosič byl potom uveden do rovnováhy 4 1 roztoku obsahujícího guanidin hydrochlorid (6M) a fosforečnan sodný (0,1 M, pH 7,0).
Filtrát z mikrofiltrace obsahující LPD-MAGE-3-His byl smísen s nosičem (vazba ve vsádce) před naplněním BPG kolony roztokem ·· ·« » » ♦ 4 > · · 4 obsahujícím guanidinhydrochlorid (6M) a fosforečnan sodný (0,1 M, pH 7,0).
Další stadia chelatační chromatografie za použití kovu byla provedena za průtoku eluens 60 ml/min. Kolona byla promývána nejprve roztokem obsahujícím guanidinhydrochlorid (6M) a fosforečnan sodný (0,1 M, pH 7,0), potom roztokem obsahujícím močovinu (6M) a fosforečnan sodný (0,lM, pH 7,0), dokud nedosáhl eluens kolony nulové absorbance při OD280 nm (základní hodnota).
Semi-přečištěná LPD-MAGE-3-His proteinová frakce byla eluována 2 objemy kolony roztoku obsahujícího močovinu (6M), fosforečnan sodný (0,lM, pH 7,0) a imidazol (0,5M). Vodivost této frakce byla přibližně 16 mS/cm.
1·. 5) Aniontová iontoměničová chromatograf ie
Před prove^gním aniontové iontoměničové chromatografie se vodivost semi-přečištěné LPD-MAGE-3-His proteinové-frakce snížila na přibližně 4 mS/cm pomocí naředění roztokem obsahujícím močovinu (6M) a Tris-HCl (20 mM, pH 8,0).
Aniontová iontoměničová chromatografie byla provedena za použití Q-Sepharose FF (Pharmacia Biotechnology, kat. č. 170510-01) naplněné v BPG 200/500 koloně (Pharmacia Biotechnology kat. č. 18-1103-11). Rozměry náplně byly: průměr 10 cm; plocha na příčném řezu 314 cm2; délka náplně 9 cm; objem náplně 3900 ml.
Kolona byla naplněna (20% obj./obj. ethanolem) a byla promyta 9 1 přečištěné vody při průtoku eluens 70 ml/min. Naplněná kolona byla ošetřena 3 litry hydroxidu sodného (0,5 Μ) , byla promyta 30 litry přečištěné vody a potom byla uvedena • 9 9 9 9 9
9 *
99 ♦ · 9 9 «9 ♦
9 9 9
9 9 9
9 99 do rovnováhy 6 litry roztoku obsahujícího močovinu (6M) a TrisHC1 (20 mM, pH 8,0). Ředěný, semi-přečištěný LPD-MAGE-3-His byl vnesen do kolony a potom byl promýván 9 litry roztoku obsahujícího močovinu (6M), Tris-HCl (20 mM, pH 8,0), EDTA (1 mM) a Tween (0,1%), dokud absorbance (280 nm) eluens neklesla na nulu.
Další promytí bylo provedeno za použití roztoku obsahujícího močovinu (6M) a Tris-HCl (20 mM, pH 8,0).
Přečištěný LPD-MAGE-3-His byl eluován z kolony roztokem obsahujícím močovinu (6M), Tris-HCl (20 mM, pH 8,0) a NaCl (0,25M).
1.6) Chromatografie s vylučováním podle velikosti
Odstranění močoviny z přečištěného LPD-MAGE-3-His a výměna pufru byly provedeny za použití chromatografie s vylučováním podle velikosti. Tato byla provedena za použití Superdex 75 (Pharmacia Biotechnology, kat. č. 17-1044-01) naplněné v XK 50/100 koloně (Pharmacia Biotechnology kat. č.'18-8753-01). Rozměry náplně byly: průměr 5 cm; plocha na příčném řezu 19,6 cm2; objem 18 00 ml.
Kolona byla naplněna ethandlem (20%) a byla promyta 5 litry přečištěné vody při průtoku 20 ml/min. Kolona byla ošetřena 2 litry hydroxidu sodného (0,5 Μ), byla promyta 5 litry i přečištěné vody a potom byla uvedena do rovnováhy 5 litry fosfátem pufrovaného salinického roztoku obsahujícího Tween 80 (0,1% obj./obj.).
Přečištěná LPD-MAGE-3-His frakce (maximum 500 ml/jedno odsolování) byla vnesena do kolony při průtoku eluens 20 • * 9 9 9 9
9
0
9
9 ml/min. Odsolený přečištěný LPD-MAGE-3-His byl eluován z kolony 3 litry PBS obsahujícího Tween 80 (0,1% obj./obj.) .
Frakce obsahující LPD-MAGE-3-His eluovala při volném objemu kolony.
1.7) Filtrace během procesu
LPD-MAGE-3-His z chromatografie s vylučováním podle velikosti se filtruje přes 0,22 pm membránu v digestoři s laminárním prouděním (třída 10000). Filtrovaný materiál se zmrazí při -80 °C a uskladní se do kroku odsolení.
1.8) Odsolovací chromatografie
Protože osmolalita konečného materiálu by měla být nižší než 400 mOsM, je nutný pro snížení koncentrací solí další výměna pufru. Tato výměna pufru se provede odsolovací chromatografií za použití Sephadex G25 (Pharmacia Biotechnology, kat. č. 170033-02) naplněné v BPG 100/950 koloně (Pharmacia Biotechnology kat. č. 18-1103-03). Rozměry náplně byly: průměr 10 cm; plocha na příčném řezu 78,6 cm ; délka náplně 85 cm ; objem 6500 ml.
Sephadex G25 se hydratovala 7 litry přečištěné vody a nechala se bobtnat přes noc při 4 °C. Gel byl potom naplněn do kolony s čistou vodou při průtoku eluens 100 ml/mín.
Kolona byla ošetřena 6 litry hydroxidu sodného (0,5 M) a potom byla uvedena do rovnováhy 10 litry roztoku obsahujícího fosforečnan sodný (10 mM, pH 6,8), NaCl (20 mM) a Tween 80 (0,1% obj./obj.).
Přečištěná LPD-MAGE-3-His frakce (maximum 1500 ml/jedno odsolování) byla vnesena do kolony při průtoku eluens 100 ml/min. Odsolený přečištěný LPD-MAGE-3-His byl eluován při ♦ ·· ·
99
9 9 9
9 9 9
9 9 · • 9 9 9
99 volném objemu kolony, byl sterilně filtrován přes 0,22 pm membránu a byl uskladněn při -80 °C. Výsledný proteinový materiál se nechal roztát při 4 °C před rozdělením do zkumavek a lyofilizací s laktosou (3,2%).
2. Analýza SDS-polyakrylamidových gelů barvených Coomasie modří
Přečištěný LPD-MAGE-3-His antigen byl analyzován SDS-PAGE na 12,5% akrylamidovém gelu za redukčních podmínek.
Pro barvení Coomasie modří byl obsah proteinu 50 pg a pro barvení dusičnanem stříbrným byl obsah proteinu 5 pg. Byla analyzována klinická šarže 96K19 a pilotní šarže 96J22. Byl vizualizován jeden hlavní proužek odpovídající molekulové hmotnosti 60 kDa. Také byly pozorovány dva vedlejší proužky odpovídající přibližně 45 kDa a 35 kDa.
3. Analýza westernovým přenosem
Peptidy získané při SDS-PAGE analýze LPD-MAGE-3-His proteinu byly identifikovány westernovým přenosem za použití myších monoklonálních protilátek. Tyto protilátky byly připraveny v myších za použití přečištěného přípravku MAGE-3-His proteinu (tento protein neobsahuje LPD část LPD-MAGE-3-His).
Podle vhodnosti pro analýzu westernovým přenosem byly vybrány dva přípravky monoklonálních protilátek (MAb 22 a MAb 54) a byly použity testy identifikace. Obr. 4 ukazuje charakter proužků získaných pro šarže 96K19 a 96J22 po barvení MAb 32 a 54. 600 ng proteinu bylo izolováno na 12,5% SDS-PAGE, tento materiál byl přenesen na nylonovou membránu, reagoval s MAb 32 a 54 (60 gg/ml) a tyto byly detekovány pomocí anti-myších protilátek navázaných na peroxidasu.
• ••«fefe · · fefe fe· ·· fe · fe fefe « fe · · • fefe fe fe fefe·· • fefe · fe fefefe··· • fefe · · fefe·· • fe · fefefe fefefe fefe fefe kDa a 30 kDa peptid detekovaný SDS-PAGE byl detekován oběma mAb.
Příklad 4
1. Příprava vakciny za použití LPD-MAGE-3-His proteinu
Vakcína použitá v těchto pokusech byla připravena z rekombinantní DNA kódující lipoprotein D 1/3-MAGE-3-HÍS, exprimované v E. coli kmene AR58, a obsahovala nebo neobsahovala adjuvans. Jako adjuvans prostředek obsahoval směs
3-de-O-acylovaného monofosforyllipidu A (3D-MPL) a QS21 v emulsi olej ve vodě. Adjuvantní systém SBAS2 byl popsán dříve ve WO 95/17210.
3D-MPL je imunostimulační činidlo odvozené od lipopolysacharidu (LPS) gram-negativní bakterie Salmonella minnesota. MPL byl deacylován a postrádá fosfátovou skupinu na skupině lipidu A. Toto chemické zpracování dramaticky snižuje toxicitu za zachování imunostimulačních vlastností (Ribi,
1986) . Ribi Immunochemistry vyrábí a dodává MPL do SBBiologicals. Pokusy provedené ve Smith Kline Beecham Biologicals ukázaly, že 3D-MPL v kombinaci s různými vehikuly významně zvyšuje jak protilátkovou imunitu, tak Thl typ imunitní reakce.
QS21 je přirozená saponinová molekula extrahovaná z kůry jihoamerického stromu Quillaja saponaria Molina. Technika přečištění vyvinutá pro separaci jednotlivých saponinů ze surových extraktů z kůry umožňuje izolaci saponinů QS21, který je triterpenovým glykosidem vykazujícím silnou adjuvantní aktivitu a nízkou toxicitu ve srovnání s původním materiálem.
4
4
4
Bylo prokázáno, že QS21 aktivuje CTL restrihované MHC třídy I k několika podjednotkovým Ag, stejně jako bylo prokázáno, že stimuluje Ag specifickou proliferaci lymfocytů (Kensil, 1992). Aquila (formálně Cambridge Biotech Corporation) vyrábí a dodává QS21 do SB Biologicals.
Pokusy provedené ve SmithKline Beecham Biologicals prokázaly jasný synergní efekt kombinace MPL a QS21 v indukci jak protilátkové imunity, tak Thi typu imunitní reakce.
Emulse olej/voda je složena z organické fáze tvořené 2 oleji (tokoferolem a skvalenem) a vodné fáze tvořené PBS obsahující Tween 8 0 j*apfe®^semulgační činidlo. Emulse obsahuje 5% skvalenu,
5% tokoferolu, 0,4% Tween 80 a má průměrnou velikost částic 180 nm a je známá jako SB62 (viz WO 95/17210).
Pokusy provedené ve SmithKline Beecham Biologicals prokázaly, že přidání této emulse olej/voda k 3D-MPL/QS21 (SBAS2) dále zvyšuje imunostimulační vlastnosti 3D-MPL/QS21 pro různé podjednotkové antigeny.
2. Příprava emulse SB62 (2-násobný koncentrát)
Tween 80 se rozpustí ve fosfátem pufrovaném salinickém roztoku (PBS) za zisku 2% roztoku v PBS. Pro získání 100 ml 2krát koncentrované emulse se 5 g DL alfa tokoferolu a 5 ml skvalenu důkladně promísí. Přidá se 90 ml roztoku PBS/Tween a směs se důkladně promísí. Vzniklá emulse se potom protlačí stříkačkou a nakonec se mikrofluidizuje za použití M110S mikrofluidizačního přístroje. Výsledné olejové kapičky mají velikost přibližně 180 nm.
3. Příprava lipoprot. Dl/3-MAGE-3-His QS21/3D MPL emulze olej «··*
0 0
0t ve vodě (SBAS2)
Adjuvans je připraveno jako kombinace MPL a QS21, v emulsi olej ve vodě. Tento prostředek je aplikován do fiol o objemu 0,7 ml, ve kterých je smísen s lyofilizovaným antigenem (fiolly obsahují od 30 do 300 μg antigenu).
Složení ředidla obsahujícího adjuvans pro lyofilizovanou vakcinu je následující:
Složka | Množství (na dávku) |
Adjuvans | |
Emulse SB62 | 250 μΐ |
- skvalen | 10,7 mg |
- DL a-tokoferol | 11,9 mg |
- Tween 80 | 4,8 mg |
Monofosforyl lipid A | 100 μg |
QS21 | 100 μς |
Konzervační činidlo | |
Thiomersal | |
25 μg | |
Pufr | |
q.s. 0,5 ml | |
Voda pro injekce | |
- hydrogenfosforečnan sodný | 57 5 μg |
- dihydrogenfosforečnan sodný | 100 μg |
- chlorid draselný | 100 μg |
- chlorid sodný | 4,0 mg |
Konečný vakcinační prostředek je získán po rekonstituci lyofilizovaného LPD-MAGE-3-His přípravku pomocí adjuvans nebo PBS samotným.
φφ φφφφ » φ φ φ « · ♦ * · φφ · φφ φφ ► φ φ φ φφφ φφφ
Kontroly obsahující adjuvans bez antigenu byly připraveny nahrazením proteinu PBS.
4. Vakcinační antigen: fúsní protein lipoprotein D1/3-MAGE-3-His
Lipoprotein D je lipoprotein přítomný na povrchu gramnegativní bakterie Haemophilus influenzae.
Použití prvních 109 zbytků zpracovaného proteinu D jako fúzního partnera poskytuje vakcinačnímu antigenu epitopy pro Tlymfocyty. Kromě LPD skupiny obsahuje protein dvě nepříbuzné aminokyseliny (Met a Asp), aminokyselinové zbytky 2 až 314 MAGE-3 a dva Gly zbytky působící jako pantový region pro navázání dalších sedmi His zbytků.
Příklad 5
1. Imunogenicita LPD-MAGE-3-His u myší a opic
Pro testování antigenicity a imunogenicity lidského MAGE-3 proteinu byla připravená vakcína injikována 2 různým kmenům myší (C57BL/6 a Balb/C), které se liší svým genetickým základem a MHC alelami. Pro oba kmeny myší byly teoreticky stanoveny peptidové motivy MHC-třídy I a MHC-třídy II pro MÁGE část LPDMAGE-3-His fúzního proteinu.
(a) Imunizační protokol myším každého kmene bylo injekčně podáno 2-krát ve 2týdenních intervalech do nohy 5 gg LPD-MAGE-3-His připraveného nebo nepřipraveného v SBAS2 v koncentraci rovné 1/10 koncentrace použité u člověka.
• tt ·*· · • · · • · tt • tttt • tt · ·· · ··· ··· ♦ tt tttt tt tttt · tt tttt tt • tttt · • tttt « • tt tttt (b) Proliferační test
Lymfocyty byly připraveny rozdrcením sleziny nebo popliteálních lymfatických uzlin od myší, 2 týdny po poslední injekci. 2 x 105 buněk bylo umístěno trojmo jamek 96-jamkové plotny a buňky byly restimulovány in vitro po dobu 72 hodin různými koncentracemi (1-0,1 Hg/ml) His-MAGE-3, který byl použit samotný nebo potažený na latexové mikrokorálky.
Zvýšená MAGE-3 specifická lymfoproliferativní aktivita byla pozorována jak u buněk sleziny (viz obr. 5 a 7), tak u buněk lymfatických uzlin (viz obr. 6 a 8) jak od C57BL/6 myší, tak od Balb/C myší, kterým byl injekčně podán LPD-MAGE-3-His protein, ve srovnání s lymfoproliferativní odpovědí myší, kterým byl podán přípravek SBAS2 samotný nebo PBS.
Kromě toho, významně vyšší proliferativní odpověď byla získána pro lymfocyty od myší imunizovaných LPD-MAGE-3-His v adjuvantním SBAS2 (viz obr. 6 a 8).
(c) Závěr
LPD-MAGE-3-His je imunogenní u myší a tato imunogenicita může být zvýšena použitím SBAS2 jako adjuvans.
2. Protilátková odpověď (a) Imunizační protokol:
Balb/C nebo C57BL/6 myši byly imunizovány 2 injekcemi do nohy ve 2-týdenních intervalech za použití buď PBS, nebo SBAS2, nebo 5 pg LPD-MAGE-3-His, nebo 5 gg LPD-MAGE-3-His + SBAS2. Tři zvířata byla použita v kontrolní skupině a pět zvířat bylo použito v testovací skupině.
(b) Nepřímá ELISA ·· »···
• · · • · « • · · · • · · • 0 ·
Dva týdny po druhé injekci byla zvířatům odebrána séra a byla analyzována v nepřímém ELISA testu. 2 Hg/ml přečištěného His MÁGE 3 byly použity jako potahový antigen. Po saturaci po dobu 1 hodiny při 37 °C v PBS + 1% fetální telecím séru byla séra sériově ředěna (od 1/1000) v saturačním pufru a byla inkubována přes noc při 4 °C nebo po dobu 90 minut při 37 °C.
Po promytí PBS/Tween 20,01% byla biotinylovaná kozí protilátka proti celkovému myšímu IgG (1/1000) nebo kozí protilátky proti myšímu IgGl, IgG2a, IgG2b (1/5000) použity jako sekundární protilátky. Po 90 minutové inkubaci při 37 °C byl přidán streptavidin navázaný na peroxidasu a TMB (tetra-methylbenzidin-peroxid) byl použit jako substrát. Po 10 minutách byla reakce blokována přidáním 0,5 M H2SO4 a byla stanovena OD.
(c) Výsledky
Obr. 9 srovnává různé skupiny myší (n = 5/skupinu), relativní průměrný střední titr séra, který je průměrným ředěním nutným pro dosažení středního bodu křivky.
Tyto výsledky ukazují, že u obou testovaných kmenů myší je přítomná slabá Ab odpověď po 2 injekcích LPD-MAGE-3-His samotného, ale že vyšší koncentrace protilátek proti MAGE-3 je přítomná v případě, že LPD-MAGE-3-His je injikován společně s SBAS2. Pouze 2 injekce LPD-MAGE-3-His + SBAS2 ve 2-týdenních intervalech, jsou dostatečné pro dosažení pozorované vysoké protilátkové odpovědi.
Lepší protilátková odpověď pozorovaná u Balc/c myší ve srovnání s odpovědí pozorovanou u C57BL/6 myší může být vysvětlena rozdíly v haplotypu nebo v genetickém základu mezi těmito dvěma kmeny, i když protilátkový titr dosažený u C57BL/6 myší je také vyšší po injekcích LPD-MAGE-3-His + SBAS2 než po injekcích LPD-MAGE-3-His samotného.
Anti-MAGE-3 odpovědi ve specifických podtřídách Ig po vakcinaci v různých skupinách myší jsou uvedeny na obr. 10 a 11, které uvádějí srovnání průměrných středních ředění séra.
Ani IgA, ani IgM nebyly detekovány v žádném vzorku séra, ani u myší vakcinovaných LPD-MAGE-3-His + SBAS2.
Naopak, celkové koncentrace IgG byly o něco vyšší v séru myší vakcinovaných LPD-MAGE-3-His samotným a významně vyšší v séru myší vakcinovaných LPD-MAGE-3-His v SBAS2.
Analýza koncentrací různých podtříd IgG ukázala, že u myší byla indukována smíšená protilátková odpověď, protože koncentrace všech testovaných podtříd IgG (IgGl, IgG2a, IgG2b) byly vyšší u myší vakcinovaných antigenem s adjuvans než u myší vakcinovaných antigenem samotným nebo adjuvans samotným.
Nicméně se zdá, že charakter této smíšené protilátkové odpovědi po vakcinaci LipoD-MAGE-3 za přítomnosti SBAS2 závisí na myším kmenu, protože v séru myší Balb/C převládal IgGl a v séru myší C57BL/6 převládal IgG2b.
3. Imunogenicita lipoprotein D 1/3-MAGE-3 + SBAS2 adjuvans u, opic makak
Byly vybrány tři skupiny opic makak (Macaca Mulatta). RTS,S a gpl20 byly použity jako pozitivní kontroly.
Skupiny
Skupina 1 levá noha: RTS,S/SBAS2 pravá noha: GP120/SBAS2
• · · • · · • · · ·
Skupina 2 levá noha: RTS,S/SB26T pravá noha: GP120/SB26T
Skupina 3 pravá noha: LipoDl/3 MÁGE 3 His/SBAS2
Zvířatům byla podána vakcína v den 0 a dosycovací dávka v den 28 a 84 den a byla jim odebírána krev pro stanovení jejich protílátkové odpovědi na MAGE-3 a protein D. Vakcíny byly podávány intramuskulárně jako bolusové injekce (0,5 ml) do zadní části pravé nohy.
Malé vzorky krve byly odebírány každých 14 dní. Neheparizované vzorky krve objemu 3 ml byly odebírány z véna femoralis, krev se nechala srážet po dobu nejméně 1 hodiny a odstředila se při teplotě okolí během 10 minut při 2500 rpm.
Sérum se odebralo, zmrazilo se při -20 °C a odeslalo se pro stanovení koncentrace protilátek pomocí specifické ELISA.
96-jamkové mikroplotny (Maxisorb Nunc) se potáhly přes noc při 4 °C bud' 5 μς His MAGE-3 nebo Proteinem D. Po 1 hodině saturace při 37 °C s PBS NCS 1% se přidalo sériové ředění králičího séra na dobu 1,5 hodiny při 37 °C (počáteční ředění 1/10) a po 3 promytích v PBS Tween se přidalo anti-králičí biotynylované sérum (1/5000, Amersham, ref. RPN 1004, šarže 88). Plotny se promyly a na dobu 30 minut při 37 °C se přidala peroxidasa navázaná na streptavidin (1/5000) . Po promytí se na dobu 7 minut přidalo 50 μΐ TMB (BioRad) a reakce se ukončila 0,2 M H2SO4. OD se měřila při 450 nm. Střední ředění byla vypočítána za použití SoftmaxPro.
Protilátková odpověď
Malé vzorky krve byly odebírány každých 14 dnů pro stanovení kinetiky protilátkové odpovědi na MAGE-3 pomocí ELISA. Výsledky ukazují, že po 1 injekci LPD-MAGE-3-His + SBAS2 byl titr celkových Ig specifických pro MAGE3 nízký a jasné zvýšení bylo pozorováno u 3 z 5 zvířat po druhé a třetí injekci LipoDl/3 MÁGE - 3 + adjuvans u stejných opic. Zvířata vykazující špatnou odpověď zůstávala negativní i po 3 injekcích. 28 dnů po II nebo po III dávce se titry protilátek navrátily na základní hodnoty. Mezi těmito protilátkami převládaly podtřídy IgG a nikoliv IgM. Přesmyk na IgG ukazuje na spuštění odpovědi T-lymfocytů. Specifická odpověď pro protein D, ačkoliv byla slabá, měla paralelní průběh s protilátkovou odpovědí k MAGE-3.
Příklad 6
1. LPD-MAGE-1 His
Analogickým způsobem byl připraven LPD-MAGE-l-His. Aminokyselinová sekvence a DNA sekvence jsou uvedeny na SEQ ID NO; 3 a 4. Získaný protein byl přečištěn stejně jako LPD-MAGE3-His protein. Stručně, buněčná kultura byla homogenizována a zpracována 4M guanidin HC1 a 0,5 M β-merkaptoethanolem za přítomnosti 0,5% Empigen detergenčního činidla. Materiál byl filtrován a filtrát byl zpracován 0,6 M jodacetamidem. Karboxyamidovaná frakce byla zpracována IMAC (zinková chelatační sepharosa FF) chromatografií. Kolona byla nejprve uvedena do rovnováhy a promyta roztokem obsahujícím 4M guanidin HC1 a fosforečnan sodný (20 mM, pH 7,5) a 0,5% Empigen, potom byla kolona promyta roztokem obsahujícím 4M močovinu ve fosforečnanu sodném (20 mM, pH 7,5) za přítomnosti 0,5%
Empigen. Protein byl eluován ve stejném pufru, ale se stoupající koncentrací imidazolu (20 mM, 400 mM a 500 mM).
• 4 4 • · · • · 4 · ·
Eluat byl ředěn 4M močovinou. Q-sepharosová kolona byla uvedena do rovnováhy a byla promyta 4M močovinou ve 20 mM fosfátovém pufru (pH 7,5) za přítomnosti 0,5% Empigen. Druhý výplach byl proveden ve stejném pufru, ale bez detergenčního činidla. Protein byl eluován ve stejném pufru, ale se stoupající koncentrací imidazolů (150 mM, 400 mM, 1M). Eluát byl potom ultra-filtrován.
Příklad 7: Konstrukce expresního plasmidu pRIT14426 a transformace hostitelského kmene AR58 pro produkci NSl-MAGE-3-His
Složení proteinu
Složení fúzního proteinu NS-l-MAGE-3-His, který je exprimován v E.coli, je uvedeno na obr. 12.
Primární struktura výsledného proteinu má sekvenci uvedenou v SEQ ID NO: 5.
Kódující sekvence (SEQ ID NO: 6) odpovídající výše uvedenému proteinu byla umístěna pod kontrolu XpL promotoru v E-coli expresním plasmidu.
Klonovací strategie pro výrobu NSl-MAGE-3-His fúsního proteinu
Výchozím materiálem byl cDNA plasmid získaný od Dr. Thierry Boon z Ludwig Institute obsahující kódující sekvenci pro MAGE-3 gen a vektor pMG81 obsahující kódující region pro 81 aminokyselinový NS1 (nestrukturální protein) z Influenza.
Klonovací strategie obsahovala následující kroky:
(a) PCR amplifikaci sekvencí přítomných v plasmidové cDNA pro MAGE-3 za použití kódujícího oligonukleotidu: 5' gc gcc atg gat ctg gaa cag cgt agt cag cac tgc aag cct, a protismyslného oligonukleotidu 5' gcg tet aga tta atg gtg atg gtg atg gtg atg acc gcc ctc ttc ccc ctc tet caa; tato amplifikace vedla k následujícím modifikacím na N-konci: změnu prvních pěti kodonů na kodony používané v E.coli; nahrazení Pro kodonu v pozici 1 Asp kodonem, vložení Ncol místa na 5' konci a adici 2 Gly kodonů a 7 His kodonů následovaných Xbal místem na C-konci;
(b) klonování výše uvedeného amplifikovaného fragmentu do TA klonovacího vektoru (Invitrogen) a přípravu pracovního vektoru pRIT14647;
(c) vystřižení Ncol-Xbal fragmentu z plasmidu pRIT14647 a klonování do vektoru pRIT PMG81;
(d) transformaci hostitelského kmene AR58;
(e) selekci a charakterizaci transformantů E. coli obsahujících plasmid pRIT 14426 exprimujících NSl-MAGE-3-His fúsní protein.
Charakterizace rekombinantního NSl-MAGE-3-His (pRIT14426)
Bakterie byly kultivovány na LB mediu doplněném 50 gg/ml kanamycinem při 30 °C. Poté, co kultura dosáhla OD = 0,3 (při 620 nm), byla provedena teplotní indukce zvýšením teploty na 42 °C.
Po 4 hodinové indukci byly buňky sklízeny, byly resuspendovány v PBS a byly lyžovány (desintegrací) trojím stlačením na French lisu. Po odstředění (60 minut, 100000 x g) byly supernatant pelety a celkový extrakt analyzovány ..SDS-PAGE. Proteiny byly vizualizovány v gelech barvených Coomasie Bl, kde fúsní protein představuje přibližně 1% celkových proteinů E. coli. Rekombinantní protein se objevil jako jediný proužek s molekulovou hmotností 44,9 kD. Fúsní protein byl identifikován westernovou analýzou za použití anti-NSl monoklonální protilátky.
Příklad 8: Přečištění NSl-MAGE-3-His (E. coli) pro imunizaci králíků/myší
Schéma přečištění
Následující přečišťovací schéma bylo použito pro přečištění antigenu:
Lýza buněk + odstředění
4Solubilizace antigenu + odstředění
4Ni2+ + NTA agarosa
Φ koncentrování
Φ
Preparativní elektroforesa
Srážení TCA a solubilizace v PBS (a) Lýza buněk
Bakteriální buňky byly lyžovány ve 203 ml 50 mM PO4 pufru (pH 7,0) za použití homogenizačního přístroje (Rannie) a lyzát byl odstředěn na JA20 odstředivce při 15000 rpm po dobu 30 minut. Supernatant byl odstraněn.
(b) Solubilizace antigenu
·· 9
1/3 pelety byla resolubilizována 0/N při 4 °C ev 34 ml 100 mM PO4 - 6M GuHCl, pH 1. Po odstředění na JA20 odstředivce při 15000 rpm po dobu 30 minut byla peleta odstraněna a supernatant byl dále přečištěn IMAC.
(c) Afinitní chromatografie: Ni2+ + -NTA agarosa (Qiagen)
Objem kolony: 15 ml (16 mm x 7,5 cm)
Plnící pufr: 0,1 Μ PO4 - 6M GuHCl, pH 7 Vzorkový pufr: idem
Promývací pufr: 0,1 Μ PO4 - 6M GuHCl, pH 7
0,1 Μ PO4 - 6M močovina, pH 7
Eluce: imidazolový gradient (0 -> 250 mM) v 0,1 M PO4 pufru, pH 7, doplněném 6M močovinou.
Průtok: 2 ml/min
a. Koncentrování
Antigen-pozitivní frakce IMAC eluatu (160 ml) byly odebrány a koncentrovány na 5 ml v Amicon míchací kyvetě na Filtron membráně (typ Omega s limitem 10000). Čistota v tomto stadiu byla přibližně 70% podle SDS-PAGE.
b. Preparativní elektroforesa (Prep Cell BioRad)
2,4 koncentrovaného vzorku byla zahříváno při teplotě varu v 0,8 ml redukčního vzorkového pufru a tento materiál byl vnesen na 10% akrylamidový gel. Antigen byl eluován v Tris-Glycinovém pufru , pH 8,3, doplněném 4% SDS a NS1-MAGE 3 His-pozitivní frakce byly odebrány.
c. TCA srážení
Antigen byl srážen TCA a po odstředění na JA20 odstředivce při 15000 rpm po dobu 20 minut byl supernatant odstraněn. Peleta byla resolubilizována v PBS pufru, pH 7,4.
Protein je solubilní v PBS a po zmrazení/rozmražení nevykazuje známky jakékoliv degradace při skladování po dobu 3 hodin při 37 °C a má zřetelnou molekulovou hmotnost přibližně 50000 Daltonů, jak je určeno SDS (12,5% PAGE).
Příklad 9: Příprava kmene E. coli exprimujícího fúsní protein CLYTA-MAGE-l-His koncovka
1. Konstrukce expresního plasmidu pRIT14426 a transformace hostitelského kmene AR58 pro produkci NSl-MAGE-3-His
Složení proteinu
Složení fúsního proteinu Clyta-MAGE-l-His, který je exprimován v E.coli, je uvedeno na obr. 15.
Primární struktura výsledného proteinu má sekvenci uvedenou v SEQ ID NO: 7.
Kódující sekvence (SEQ ID NO: 8) odpovídající výše uvedenému proteinu byla umístěna pod kontrolu XpL promotoru v E-colí expresním plasmidu.
Klonování:
Výchozím materiálem byl vektor PCUZ1, který obsahuje 117 Ckoncových kodonů LytA kódujícího regionu ze Streptococcus pneumoniae a vektor pRIT14518, do kterého jsme předtím klonovali MAGE-1 genovou cDNA z plasmidu získaného od Dr. Thierry Boon z Ludwig Institute.
Klonovací strategie pro expresi CLYTA-Mage-l-His proteinu (viz schéma na obr. 16) obsahovala následující kroky:
2. Příprava modulu CLYTA-Mage-l-His kódující sekvence (a) Prvním krokem byla PCR amplifikace, která přidávala ke CLYTA sekvenci Ndel-AflIII restrikční místa na obou stranách. PCR amplifikace byla provedena za použití plasmidu PCUZ1 jako templátu a kódujícího oligonukleotidového primeru 5' tta aac cac acc tta agg agg ata taa cat atg aaa ggg gga att gta cat tca gac; a protismyslného oligonukleotidového primeru 5' GCC AGA CAT GTC CAA TTC TGG CCT GTC TGC CAG. Tato amplifikace vedla k zisku 378 nukleotidů dlouhé CLYTA sekvence.
(b) Druhým krokem bylo navázání CLYTA sekvence na MAGE-l-His sekvenci za získání kódující sekvence pro fúsní protein. Tento krok obsahoval excisí Ndel-AflIII Clyta fragmentu a jeho inserci do vektoru pRIT14518, který byl předem natráven Ndel a Ncol (Ncol a AflIII kompatibilními) restrikčními enzymy a tento postup vedl k zisku plasmidu pRITl4613.
(c) Transformace hostitelského kmene AR58.
(d) Selekce a charakterizace transformantů E.colí (KAN resistentních) obsahujících plasmid pRIT14613 (viz obr. 16) .
1. Charakterizace rekombinantního proteinu CLYTA-MAGE-l-His (pRIT14613)
Bakterie byly kultivovány na LB mediu doplněném 50 .pg/ml kanamycinu při 30 °C. Když dosáhla kultura OD = 0,3 (při 620 nm), byla provedena teplotní indukce zvýšením teploty na 38 °C.
• · « · • · » · • · · « « • · · · • ·· ·♦
Po 4 hodinové indukci byly buňky sklízeny, byly resuspendovány v PBS a byly lyžovány (desintegraci) jedním stlačením. Po odstředění byly supernatant pelety a celkový extrakt analyzovány SDS-PAGE. Proteiny byly vizualizovány v gelech barvených Coomasie Bl, kde fúsní protein představuje přibližně 1% celkových proteinů E. coli. Rekombinantní protein se objevil jako jediný proužek s molekulovou hmotností 49 kD. Fúsní protein byl identifikován westernovou analýzou za použití anti-Mage-1 monoklonální protilátky.
Obnovení expresní jednotky složené z dlouhého λ pL promotoru (použitelného pro indukci kyselinou nalidixovou) a CLYTA-Magel-His kódující sekvence pRIT14614
EcoRI-NCOl restrikční fragment obsahující dlouhý pL promotor a část CLYTA sekvence byl připraven z plasmidu pRIT DVA6 a byl insertován mezi ECORI-NCO1 místa plasmidu pRIT14613.
Byl ziskán rekombinantní plasmid pRIT14614.
Rekombinantní plasmid pRIT14614 (viz obr. 17) kódující fúsní protein CLYTA-Mage-l-His byl použit pro transformaci E.coli AR120. Byl selektován a charakterizován Kan resistentní kmen.
Charakterizace rekombinantního proteinu
Bakterie byly kultivovány na LB mediu doplněném 50 mg/ml kanamycinu při 30 °C. Když dosáhla kultura OD = 400 (při 620 nm) , byla přidána kyselina nalidixová v konečné koncentraci 60 mg/ml.
Po 4 hodinové indukci byly buňky sklizeny, byly resuspendovány v PBS a byly lyžovány (desintegraci jedním nárazem). Po odstředění byly supernatant pelety a celkový extrakt analyzovány SDS-PAGE. Proteiny byly vizualizovány v gelech barvených Coomasie Bl, kde fúsní protein představuje přibližně 1% celkových proteinů E. coli. Fúsní protein byl identifikován westernovou analýzou za použití králičích antiMage-1 polyklonálních protilátek. Rekombinantní protein se objevil jako jediný proužek s molekulovou hmotností 49 kD.
Příklad 10: CLYTA-Mage-3-His
A. Rekombinantní antigen způsobující rejekci nádoru: fúsní protein CLYTA-Mage-3-His, kde je fúsním partnerem C-lyt A, který způsobuje expresi solubilního proteinu, působí jako afinitní koncovka a je epitopem pro T-pomocné lymfocyty.
Příprava kmene E.coli exprimujícího fúsní protein CLYTA-Mage-3His
Konstrukce expresního plasmidu pRIT14646 a transformace hostitelského kmene AR120.:
Složení proteinu
Složení fúsního proteinu Clyta-MAGE-3-His, který je exprimován v E.coli, je uvedeno na obr. 18.
Primární struktura výsledného proteinu má sekvenci uvedenou v SEQ ID NO: 9 a kódující sekvence je uvedena v SEQ ID NO: 10.
Kódující sekvence odpovídající výše uvedenému proteinu byla umístěna pod kontrolu XpL promotoru v E-coli expresním plasmidu.
Klonování :
Výchozím materiálem byl vektor PCUZ1, který obsahuje 117 Ckoncových kodonů LytA kódujícího regionu ze Streptococcus pneumoniae (Gene 43, (1986), str. 265-272) a vektor pRITl4426, do kterého jsme předtím klonovali MAGE-3 genovou cDNA z plasmidu získaného od Dr. Thierry Boon z Ludwig Institute.
Klonovací strategie pro expresi CLYTA-Mage-3-His proteinu (viz schéma na obr. 19) obsahovala následující kroky:
1. Příprava modulu CLYTA-Mage-3-His kódující sekvence
1.1 Prvním krokem byla PCR amplifikace, která přidávala ke CLYTA sekvenci AflII a AflIII restrikční místa na obou stranách. PCR amplifikace byla provedena za použití plasmidu PCUZ1 jako templátu a kódujícího oligonukleotidového primeru 5' tta aac cac acc tta agg agg ata taa cat atg aaa ggg gga att gta cat tea gac; a protismyslného oligonukleotidového primeru 5' ccc aca tgt cca gac tgc tgg cca att ctg gcc tgt ctg cca gtg. Tato amplifikace vedla k zisku 472 nukleotidů dlouhé CLYTA sekvence. Tento amplifikovaný fragment byl klonován do TA klonovacího vektoru (Invitrogen) za vzniku pracovního vektoru pRIT14661.
1.2 Druhým krokem bylo navázání CLYTA sekvence na MAGE-3-His sekvenci za získání kódující sekvence pro fúsní protein. Tento krok obsahoval excisí AflII-AflIII Clyta fragmentu á jeho inserci do vektoru pRITl4426, který byl předem natráven AflII a Ncol (Ncol a AflII kompatibilními) restrikčními enzymy a tento postup vedl k zisku plasmidu pRIT14662.
2. Obnovení expresní jednotky složené z dlouhého λ pL promotoru • · » * ©
• 9 9 9 9 9
9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 • · · 9 9
99 99 99 (použitelného pro indukci kyselinou nalidixovou) a CLYTA-Mage3-His kódující sekvence
BglII-Xbal restrikční fragment obsahující dlouhý pL promotor a CLYTA-Mage-3-His kódující sekvenci byl připraven z plasmidu pRIT14662 a byl insertován mezi BglII-Xbal místa plasmidu TCM67 (derivát pBR322 obsahující gen pro resistenci na ampicilin a dlouhý λ pL promotor, popsaný v mezinárodní přihlášce PCT/EP 92/01827). Byl získán plasmid pRIT14607.
Rekombinantní plasmid pRIT146607 kódující fúsní protein CLYTA-Mage-3-His byl použit pro transformaci E.coli AR120 (Mott et al., 1985, Proč. Nati. Acad. Sci. 82: 88). Byl selektován a charakterizován kmen resistentní na ampicilin.
3. Příprava plasmidu pRIT14646
Nakonec byl připraven plasmid podobný pRIT14607, ale obsahující resistenci na kanamycin (pRIT 14646).
Charakterizace rekombinantního proteinu
Bakterie byly kultivovány na LB mediu doplněném 50 mg/ml kanamycinu při 30 °C. Když dosáhla kultura OD = 400 (při 620 nm), byla přidána kyselina nalidixová v konečné koncentraci 60 mg/ml.
Po 4 hodinové indukci byly buňky sklízeny, byly resuspendovány v PBS a byly lyžovány (desintegrací jedním nárazem). Po odstředění byly supernatant pelety a celkový extrakt analyzovány SDS-PAGE. Proteiny byly vizualizovány v gelech barvených Coomasie Blue, kde fúsní protein představuje
9999 *
»« • 9 9 9 • 9 9 9
9 9 9
99 přibližně 1% celkových proteinů E. coli. Fúsní protein byl identifikován westernovou analýzou za použití králičích antiMage-3 polyklonálních protilátek. Rekombinantní protein se objevil jako jediný proužek s molekulovou hmotností 58 kD.
Příklad 11: Přečištění rekombinantního proteinu CLYTA-Mage-3-His
Rekombinantní bakterie AR120 (pRIT14646) byly kultivovány ve 20 litrovém fermentačním tanku za doplňování živin při 30 °C. Exprese rekombinantního proteinu byla indukována přidáním kyseliny nalidixové v konečné koncentraci 60 mg/ml. Buňky byly sklízeny na konci fermentace a byly lyžovány při 60 OD./6Q® pomocí dvou průchodů French lisem (20000 psi) . Lyžované buňky byly peletovány během 20 minut při 15000 g při 4 °C.
Suepernatant obsahující rekombinantní prtoein byl vnesen do iontoměničové DEAE Sepharose CL6B pryskyřice (Pharmacia) předem uvedené do rovnováhy v pufru A (0,3 M NaCl, 2 0 mM Tris HCI, pH 7,6) . Po promytí kolony pufrem A byl fúsní protein eluován 2% cholinem v pufru A. Byly odebrány frakce pozitivní na antigen, jak byly stanoveny westernovým přenosem za použití anti-Mage-3 protilátky. Antigen eluovaný z DEAE byl přenesen do 0,5%
Empigen BB (obojetné detergenční činidlo) a do 0,5 M NaCl před tím, než byl vnesen do afinitní chromatografické kolony využívající iont kovu, která byla předem uvedena do rovnováhy v pufru B (0,5% Empigen BB, 0,5 M NaCl, 50 mM fosfátový pufr, i pH 7,6) .
IMAC kolona byla promývána pufrem B do té doby, než dosáhla absorbance při 280 nm základní hodnoty. Druhé promytí pufrem B bez Empigen BB (pufr C) pro eliminaci detergenčního činidla byl proveden před elucí antigenu imidazolovým gradientem 0-250 mM imidazolů v pufru C.
·· 44 • · 9 9
9 9 4 • «,
0,090 - 0,250 M imidazolové frakce byly shromážděny a byly koncentrovány na 10 kDa Filtrom omega membráně před dialýzou proti PBS pufru.
Závěr
Prokázali jsme, že fúsní protein LPD-MAGE-3-His je imunogenní. u myší a že tato imunogenicita (proliferativní odpověď a protilátková odpověď) může být dále zvýšena použitím adjuvans popsaného výše. Přečištění může být zlepšeno derivatizací thiolů, které tvoří disulfidové můstky.
Také jsme prokázali, že lepší protilátková odpověď je spouštěna vakcinací LPD-MAGE-3-His za přítomnosti adjuvans. Převládající izotyp nacházený v séru C57BL/6 je IgG2b, což naznačuje, že byla vyvolána imunitní odpověď Thi typu.
U člověka byl popsán případ pacienta léčeného LPD-MAGE-3-His v prostředku bez adjuvans, který byl vyléčen z maligního melanomu.
·« ··»· • · · • · · • · · • » · ·· · *«· • 0 ·· • 9 · · • ·· >
· · · · ♦ e · ·
99
Odkazy:
- Anichini A., Fossati G., Parmiani G. ImmunoL Today, 8: 385 (1987).
- De Plaen E., Arden K., Traversari C., et al. Immunogenetics, 40: 360 (1994).
- Gaugler B., Van den Eynde B., van der Bruggen P., et al. J. Exp. Med.,
179: 921 (1994).
- Herman J., van der Bruggen P., Immanuel F., et al. Immunogenetics,
43: 377 (1996).
- Inoue H., Moři M., Li J., etai. Int. J. Cancer, 63: 523 (1995).
- Kensil C.R., Soltysik S., Patel U., et al. in: Channock R.M. , Ginsburg H.S., Brown F., et al., (eds.), Vaccines 92, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.),
36-40: (1992).
- Knuth A., Danowski B., Oettgen H.F., et al. Proč. Nati. Acad. Sci. USA,
81: 3511 (1984).
- Patard J.J., Brasseur F., Gil-Diez S., et al. Int. J. Cancer, 64: 60 (1995).
- Ribi E., et al. in: Levine L., Bonventre P.F., Morello J., et al. (eds)., American Society for Microbioiogy, Washington DC, Microbiology 1986, 9-13; (1986).
- Van den Eynde B., Hainaut P., Hérin M. et al. Int. J. Cancer, 44: 634 (1989).
- Van der Bruggen P., Traversari C., Chomez P., et al. Science, 254: 1643 (1991).
- Van der Bruggen P., Bastin J., Gajewski T., et al. Eur. J. Immunol.,
24: 3038 (1994).
- Van Pel A., van der Bruggen P., Coulie P.G. , et al., Immunol. Rev.,
145: 229 (1995).
- Weynants P., Léthé B., Brasseur F., et al. Int. J. Cancer, 56: 826 (1994).
- Nishimura S, Fujita M, Terata N, Táni T, Kodama M, Itoh K, Nihon Rinsho Meneki Gakkai Kaishi 1997, Apr, 20 (2): 95-101.
Fuijie T et al, Ann Oncol 1997 Apr, 8 (4): 369-72.
Seznam sekvencí (1) Obecné informace (i) Přihlašovatel: SmitKline Beecham Biologicals (ii) Název vynálezu: Deriváty antigenu asociovaných s nádory z MÁGE rodiny a sekvence nukleových kyselin kódující tyto deriváty, jejich použití pro přípravu fúsních proteinů a prostředků pro vakcinaci (iii) Počet sekvencí: 10 (iv) Adresa pro korespondenci:
(A) Adresa: SmithKline Beecham (B) Ulice: 2 New Horizons Court, Great West Road, B (C) Město: Middx (D) Země (E) Stát: UK (F( ZIP: TW8 9EP (v) Počítačová čtecí forma:
(A) Typ media: disketa (B) Počítač: IBM kompatibilní (C) Operační systém: DOS (D) Software: FastSEQ pro Windows verze 2.0 (vi) Data současné přihlášky:
(A) Číslo přihlášky:
(B) Datum podání:
(C) Klasifikace:
(vii) Data předchozí přihlášky:
(A) Číslo přihlášky:
(B) Datum podání:
(viii) Zástupce/Agent - informace (A) Jméno: Dalton, Marcus J (B) Registrační číslo:
(C) Reference/č. rejstříku: B45126 (ix) Telekomunikační informace:
(A) Telefon: 0181 9756348 (B) Telefax: 0181 9756177 (C) Telex:
(2) Informace pro SEQ ID NO: 1:
(i) Charakteristiky sekvence (A) Délka: 452 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina ·· ·· • · · « • * · · • · · · • · · · • · · · (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: protein
(xi! | l Popis | sekvence: | SE( | ) ID NO: 1: | |||||||||||
Met | Asp | Pro | Lys | Thr ' | Leu | Ala | Leu | Ser | Leu | Leu | Ala | Ala | Gly | Val | Leu |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ala | Gly | Cys | Ser | Ser | His | Ser | Ser | Asn | Met | Ala | Asn | Thr | Gin | Met | Lys |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Ser | Asp | Lys | Ile | Ile | Ile | Ala | His | Arg | Gly | Ala | Ser | Gly | Tyr | Leu | Pro |
35 | 40. | 45 | |||||||||||||
Glu | His | Thr | Leu | Glu | Ser | Lvs | Ala | Leu | Ala | Phe | Aia | Gin | Gin | Ala | Asp |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Tyr | Leu | Glu | Gin | Asp | Leu | Ala | Met | Thr | Lys | Aso | Gly | Arg | Leu | Val | Val |
65 | 70 | 75‘ | 80 | ||||||||||||
Ile | His | Asp | His | Phe | Leu | Asp | Gly | Leu | Thr | Asp | Val | Ala | Lys | Lys | Phe |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Pro | His | Arg | His | Arg | Lys | Asp | Gly | Are | Tyr | Tyr | Val | Ile | Aso | Phe | Thr |
100 | 105 | lib’ | |||||||||||||
Leu | Lys | Glu | Ile | Gin | Ser | Leu | Glu | Met | Thr | Glu | Asn | Phe | Glu | Thr | Met |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Asp | Leu | Glu | Gin | Arg | Ser | Gin | His | Cys | Lys | Pro | Glu | Glu | Gly | Leu | Glu |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Ala | Arg | Gly | Glu | Ala | Leu | Gly | Leu | Val | Gly | Ala | Gin | Ala | Pro | Ala | Thr |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Glu | Glu | Gin | Glu | Ala | Ala | Ser | Ser | Ser | Ser | Thr | Leu | Val | Glu | Val | Thr |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Leu | Gly | Glu | Val | Pro | Ala | Ala | Glu | Ser | Pro | Asp | Pro | Pro | Gin | Ser | Pro |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Gin | Gly | Ala | Ser | Ser | Leu | Pro | Thr | Thr | Met | Asn | Tyr | Prc | Leu | Trp | Ser |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Gin | Ser | Tyr | Glu | Asp | Ser | Ser | Asn | Gin | Glu | Glu | Glu | Gly | Pro | Ser | Thr |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Phe | Pro | Asp | Leu | Glu | Ser | Glu | Phe | Gin | Ala | Ala | Leu | Ser | Arg | Lys | Val |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Ala | Glu | Leu | Val | His | Phe | Leu | Leu | Leu | Lys | Tyr | Arg | Ala | Arg | Glu | Pro |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Val | Thr | Lys | Ala | Glu | Met | Leu | Gly | Ser | Val | Val | Gly | Asn | Tro | Gin | Tyr |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Phe | Phe | Pro | Val | Ile | Phe | Ser | Lys | Ala | Ser | Ser | Ser | Leu | Gin | Leu | Val |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Phe | Gly | Ile | Glu | Leu | Met | Glu | Val | Asp | Pro | Ile | Gly | His | Leu | Tyr | „Ile |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Phe | Ala | Thr | Cys | Leu | Gly | Leu | Ser | Tyr | Asp | Glv | Leu | Leu | Gly | Asp | Asn |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Gin | Ile | Met | Pro | Lvs | Ala | Gly | Leu | Leu | Ile | Ile | Val | Leu | Ala | Ile | Ile |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Ala | Arg | Glu | Gly | Asp | Cys | Ala | Pro | Glu | Glu | Lys | X 1.3 | Trp | Glu | Glu | Leu |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Ser | Val | Leu | Glu | Val | Phe | Glu | Gly | Arg | Glu | Asp | Ser | Ile | Leu | Gly | Asp |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Pro | Lys | Lys | Leu | Leu | Thr | Gin | His | Phe | Val | Gin | Glu | Asn | Tyr | Leu | Glu |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Tyr | Arg | Gin | Val | Pro | Gly | Ser | Asp | Pro | Ala | Cys | Tyr | Glu | Phe | Leu | Tro |
385 | 390 | 395 | 4 00 | ||||||||||||
Gly | Pro | Arg | Ala | Leu | Val | Glu | Thr | Ser | Tyr | Val | Lys | Val | Leu | His | His |
405 | 410 | 415 |
« ·
Met | Val | Lys | Ile 420 | Ser | GLy Gly | Pro | His 425 | Ile Ser Tyr Pro | Pro Leu 430 | His | |||
Glu | Trp | Val | Leu | Arg | Glu | Gly | Glu | Glu | Thr Ser | Gly Gly | His | His | His |
435 | 440 | 445 | |||||||||||
His | His | His | |||||||||||
4 50 |
(2) Informace pro SEQ ID NO: 2:
(i) Charakteristiky sekvence (A) Délka: 1353 párů baží (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 2:
ATGGATCCAA AAACTTTAGC CC7TTCTTTA AGCCATTCAT CAAATATGGC GAATACCCAA CGTGGTGCTA GCGGTTATTT ACCAGAGCAT CAACAGGCTG ATTATTTAGA GCAAGATTTA ATTCACGATC ACTTTTTAGA TGGCTTGACT CGTAAAG.ATG GCCGTTACTA TGTCATCGAC ATGACAGAAA ACTTTGAAAC CATGGATCTG GAAGGCCTTG AGGCCCGAGG AGAGGCCCTG GAGGAGCAGG AGGCTGCCTC CTCCTCTTCT CCTGCTGCCG AGTCACCAGA TCCTCCCCAG ACCATGAACT ACCCTCTCTG GAGCCAATCC GGGCCAAGCA CCTTCCCTGA CCTGGAGTCC GCCGAATTGG TTCA7TTTCT GCTC.CTCAAG GAAATGCTGG GGAGTGTCGT CGGAAATTGG GCTTCCAGTT CCTTGCAGCT GGTCTTTGGC CACTTG7ACA TCTTTGCCAC CTGCCTGGGC CAGATCATGC CCAAGGCAGG CCTCCTGATA GACTGTGCCC CTGAGGAGAA AATCTGGGAG AGGGAAGACA GTATCTTGGG GGATCCCAAG AACTACCTGG AGTACCGGCA GGTCCCCGGC GGTCCAAGGG CCCTCGTTGA AACCAGCTAT agtggaggac ctcacatttc ctacccaccc GAGGGCGGTC ATCACCATCA CCATCACCAT
TTAGCAGGTG GCGTACTAGC AGGTTGTAGC 60 ATGAAATCAG ACAAAATCAT TATTGCTCAC 120 ACGTTAGAAT CTAAAGCACT TGCGTTTGCA ISO GCAATGACTA AGGATGGTCG TTTAGTGGTT 240 GATGTTGCGA AAAAATTCCC ACATCGTCAT 300 TTTACCTTAA. AAGAAATTCA AAGTTTAGAA 3 60 GAACAGCGTA. GTCAGCACTG CAAGCCTGAA 420 GGCCTGGTGG GTGCGCAGGC TCCTGCTACT 430 ACTCTAGTTG AAGTCACCCT GGGGGAGG7G 54 0 AGTCCTCAGG GAGCCTCCAG CCTCCCCACT 600 TATGAGGACT CCAGCAACCA AGAAGAGGAG 660 GAG7TCCAAG CAGCACTCAG TAGGAAGGTG 720 TATCGAGCCA GGGAGCCGGT CACAAAGGCA 780 CAGTATTTCT TTCCTGTGAT CTTCAGCAAA 840 ATCGAGCTGA TGGAAGTGGA CCGCATCGGC 900 CTC7CCTACG ATGGCCTGCT GGGTGACAAT 960 ATCGTCC7GG CCATAATCGC AAGAGAGGGC 1020 GAGCTGAGTG TGTTAGAGGT G7TTGAGGGG 1080 AAGCTGCTCA CCCAACATTT CGTGCAGGAA 1140 AGTGATCCTG CATGTTATGA ATTCCTGTGG. 1200 .GTGAAAGTCG TGCACCATAT GGTAAAGATC 1260 CTGCATGAGT GGGTTTTGAG AGAGGGGGAA 1320 TAÁ 1353 (2) Informace pro SEQ ID NO: 3:
(i) Charakteristiky sekvence (A) Délka: 1341 párů baží (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 3:
ATGGÁTČCAA AAACTŤTÁGC 'CCTTTCTTTA TTAGČAGCTG GCGTACTAGC AGGTTGTAGC 60 AGCCATTCAT CAAATATGGC GAATACCCAA ATGAAA7CAG ACAAAATCAT TATTGCTCAC 120 CGTGGTGCTA GCGGTTATTT ACCAGAGCAT ACGTTAGAA7 CTAAAGCACT TGCGTTTGGA 180 CAACAGGCTG ATTATTTAGA GCAAGATTTA GCAATGACTA AGGATGGTCG TTTAGTGG7T ‘24 0 ATTCACGATC ACTTTTTAGA TGGCTTGACT GATGTTGCGA AAAAATTCCC ACATCGTCAT 300 CGTAAAGATG GCCGTTACTA TGTCATCGAC TTTACCTTAA AAGAAATTCA AAGTTTAGAA 360 ATGACAGAAA ACTTTGAAAC CATGGGCTCT CTGGAACAGC GTAGTCTGCA CTGCAAGCCT 420 GAGGAAGCCC TTGAGGCCCA ACAAGAGGCC CTGGGCCTGG TGTGTGTGCA GGCTGCCACC 480 TCCTCCTCCT CTCCTCTGGT CCTGGGCACC CTGGAGGAGG TGCCCACTGC TGGGTCAACA 540 GATCCTCCCC AGAGTCGTCA GGGAGCCTCC GCCTTTCCCA CTACCATCAA CTTCACTCGA 600 CAGAGGCAAC CCAGTGAGGG TTCCAGCAGC CGTGAAGAGG AGGGGCCAAG CACCTC7TGT 660 ATCCTGGAGT CCTTGTTCCG AGCAGTAATC ACTAAGAAGG TGGCTGATTT GG7TGGTTTT 720 CTGCTCCTCA AATATCGAGC CAGGGAGCCA GTCACAAAGG CAGAAATGCT GGAGAGTGTC 780 ATCAAAAATT ACAAGCACTG TTTTCCTGAG ATCTTCGGCA AAGCCTCTGA GTCCTTGCAG 840 CTGGTCTTTG GCATTGACGT GAAGGAAGCA GACCCCACCG GCCACTCCTA TGTCCTTGTC 900 ACCTGCCTAG GTCTCTCCTA TGATGGCCTG CTGGGTGATA ATCAGATCAT GCCCAAGACA 960 GGCTTCCTGA TAATTGTCCT GGTCATGATT GCAATGGAGG GCGGCCATGC TCCTGAGGAG 1020 GAAATCTGGG AGGAGCTGAG TGTGATGGAG GTGTATGATG GGAGGGAGCA CAGTGCCTAT 1080 GGGGAGCCCA GGAAGCTGCT CACCCAAGAT TTGGTGCAGG AAAAGTACCT GGAGTACCGG 1140 CAGGTGCCGG ACAGTGATCC CGCACGCTAT GAGTTCCTGT GGGGTCCAAG GGCCCTCGCT 1200 GAAACCAGCT ATGTGAAAGT CCTTGAGTAT GTGA7CAAGG TCAGTGCAAG AGTTCGCTTT 1260 TTCTTCCCAT CCCTGCGTGA AGCAGCTTTG AGAGAGGAGG AAGAGGGAGT CGGCGGTCAT 1320 CACCATCACC ATCACCATTA A 1341 (2) Informace pro SEQ ID NO: 4:
(i) Charakteristiky sekvence (A) Délka: 466 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: protein
( | xi) | Popis | sekvence: | SEQ | ID | NO: | 4 : | ||||||||
Met | Asp | Pro | Lys | Thr | Leu | Ala | Leu | Ser | Leu | Leu | Ala | Ala | Gly | Val | Leu |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ala | Gly | Cys | Ser | Ser | His | Ser | Ser | Asn | Met | Ala | Asn | Thr | C-ln | Met | Lys |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Ser | Asp | Lys | Ile | Ile | Ile | Ala | His | Arg | Gly | Ala | Ser | Gly | Tyr | Leu | Pro |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Glu | His | Thr | Leu | Glu | Ser | Lvs | Ala | Leu | Ala | Phe | Ala | Gin | Gin | Ala | Asp |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Tvr | Leu | Glu | Gin | Asp | Leu | Ala | Met | Thr | Lys | Asp | Gly | Arg | Leu | Val | Val |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Ile | His | Asp | His | Phe | Leu | Asp | Gly | Leu | Thr | Asp | Val | Ala | Lys | Lvs | Phe |
85 | 90 | 95 |
Pro | His | Arg | His 100 | Arg | Lys | Asp | Gly | Arg 105 | Tyr | Tyr | Val | Ile | A.SO 110 | Phe | Thr |
Leu | Lys | Glu | Ile | Gin | Ser | Leu | Glu | Met | Thr | Glu | Asn | Phe | Glu | Thr | Met |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Gly | Ser | Leu | Glu | Gin | Arg | Ser | Leu | His | Cys | Lys | Pro | Glu | Glu | Ala | Leu |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Glu | Ala | Gin | Gin | Glu | Ala | Leu | Gly | Leu | Val | Cys | Val | Gin | Ala | Ala | Thr |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Ser | Ser | Ser | Ser | Pro | Leu | Val | Leu | Gly | Thr | Leu | Glu | Glu | Val | Pro | Thr |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Ala | Gly | Ser | Thr | Asp | Pro | Pro | Gin | Ser | Pro | Gin | Gly | Ala | Ser | Ala | Phe |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Pro | Thr | Thr | Ile | Asn | Phe | Thr | Arg | Gin | Arg | Gin | Pro | Ser | Glu | Gly | Ser |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Ser | Ser | Arg | Glu | Glu | Glu | C-iv | Pro | Ser | Thr | Ser | Cvs | Ile | Leu | Glu | Ser |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Leu | Phe | Arg | Ala | Val | Ile | Thr | Lys | Lys | Val | Ala | Asp | Leu | Val | Gly | Ph.e |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Leu | Leu | Leu | Lys | Tvr | Arg | Ala | Arg | Glu | Pro | Val | Thr | Lys | Ala | Glu | Met |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Leu | Glu | Ser | Val | Ile | Lys | Asn | Tyr | Lys | His | Cys | Phe | Pro | Glu | Ile | Phe |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Gly | Lys | Ala | Ser | Glu | Ser | Leu | Gin | Leu | Val | Phe | Gly | Ile' | Asp | Val | Lys |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Glu | Ala | Asp | Pro | Thr | Gly | His | Ser | Tyr | Val | Leu | Val | Thr | Cys | Leu | Gly |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Leu | Ser | Tyr | Asp | Gly | Leu | Leu | Gly | Asp | Asn | Gin | Ile | Met | Pro | Lys | Thr |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Gly | Phe | Leu | Ile | Ile | Val | Leu | Val | Met | Ile | Ala | Met | Glu | Gly | Glv | His |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Ala | Pro | Glu | Glu | Glu | Ile | Tr? | Glu | Glu | Leu | Ser | Val | Met | Glu | Val | Tyr |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Asp | Gly | Arg | Glu | His | Ser | Ala | Tyr | Gly | Glu | Pro | Arg | Lvs | Leu | Leu | Thr |
355 | 360 | 3 65 | |||||||||||||
Gin | Asp | Leu | Val | Gin | Glu | Lvs | Tyr | Leu | Glu | Tyr | Arg | Gin | Val | Pro | Asp |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Ser | Asp | Pro | Ala | Arg | Tyr | Glu | Phe | Leu | Trp | Gly | Pro | Arg | Ala | Leu | Ala |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Glu | Thr | Ser | Tyr | Val | Lys | Val | Leu | Glu | Tyr | Val | Ile | Lys | Val | Ser | Ala |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Arg | Val | Arg | Phe | Phe | Phe | Pro | Ser | Leu | Arg | Glu | Ala | Ala | Leu | Arg | Glu |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Glu | Glu | Glu | Gly | Val | Gly | Gly | His | His | His | His | His | His | His | ||
435 | 440 | 445 | - |
(2) Informace pro SEQ ID NO: 5:
(i) Charakteristiky sekvence (A) Délka: 404 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý • * (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: protein
( | Xi) | Popis | sek- | vence: | SEQ | ID | NO: | 5: | |||||||
Met | Asp | Pro | Asn | Thr | Val | Ser | Ser | Phe | Gin | Val | Asp | Cys | Phe | Leu | Trp |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
His | Val | Arg | Lys | Arg | Val | Ala | Asp | Gin | Glu | Leu | Gly | Asp | Ala | Pro | Phe |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Leu | Asp | Arg | Leu | Arg | Arg | Asp | Gin | Lys | Ser | Leu | Arg | Glv | Arg | Gly | Ser |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Thr | Leu | Gly | Leu | Asp | T ' a | Glu | Thr | Ala | Thr | Arg | Ala | Gly | Lys | Gin | Ile |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Val | Glu | Arg | Ile | Leu | Lvs | Giu | Glu | Ser | Asp | Glu | Ala | Leu | Lys | Met | Thr |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Met | Asp | Leu | Glu | Gin | Arg | Ser | Gin | His | Cys | Lys | Pro | Glu | Glu | Gly | Leu |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Giu | Ala | Arg | Gly | Glu | Ala | Leu | Gly | Leu | Val | Gly | Ala | Gin | Ala | Pro | Ala |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Thr | Glu | Glu | Gin | Glu | Ai-O. | Ala | Ser | Ser | Ser | Ser | Thr | Leu | Val | Glu | Val |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Thr | Leu | Gly | Glu | Val | Pro | Ala | Ala | Glu | Ser | Pro | Asd | Pro | Pro | Gin | Ser |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Pro | Gin | Gly | Ala | Ser | Ser | Leu | Pro | Thr | Thr | Met | Asn | Tyr | Pro | Leu | Tro |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Ser | Gin | Ser | Tyr | Glu | As? | Ser | Ser | Asn | Gin | Glu | Glu | Glu | Glv | Pro | Ser |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Thr | Phe | Pro | Asd | Leu | Glu | Ser | Glu | Phe | Gin | Ala | Ala | Leu | Ser | Arg | Lys |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Val | Ala | Glu | Leu | Val | His | Phe | Leu | Leu | Leu | Lys | Tyr | Arg | Ala | Arg | Glu |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Pro | Val | Thr | Lys | Ala | Giu | Met | Leu | Gly | Ser | Val | Val | Gly | Asn | Trp | Gin |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Tyr | Phe | Phe | Pro | Val | Ile | Phe | Ser | Lys | Ala | Ser | Ser | Ser | Leu | Gin | Leu |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Val | Phe | Gly | Ile | Glu | Leu | Met | Giu | Val | As o | Pro | Ile | Gly | His | Leu | Tyr |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Ile | Phe | Ala | Thr | Cys | Leu | Gly | Leu | Ser | Tyr | Asp | Gly | Leu | Leu | Gly | Asp |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Asn | Gin | Ile | Met | Pro | Lys | Ala | Glv | Leu | Leu | Ile | Ile | Val | Leu | Ala | Ile |
275 | 28C | 285 | |||||||||||||
Ile | Ala | Arg | Glu | Gly | Asp | Cvs | Ala | Pro | Glu | Glu | Lvs | Ile | Trp | Glu | Glu |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Leu | Ser | Val | Leu | Glu | Val | Phe | Glu | Gly | Arg | Glu | Asp | Ser | lie | Leu | Gly |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Asp | Pro | Lys | Lys | Leu | Leu | Thr | Gin | His | Phe | Val | Gin | Glu | Asn | Tyr | Leu |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Glu | Tyr | Arg | Gin | Val | Pro | Gly | Ser | Asp | Pro | Ala | Cys | Tyr | Giu | Phe | Leu |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Trp | Gly | Pro | Arg | Ala | Leu | Val | Glu | Thr | Ser | Tyr | Val | Lys | Val | Leu | His |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
His | Met | Val | Lys | Ile | Ser | Gly | Gly | Pro | His | Ile | Ser | Tyr | Pro | Pro | Le'u |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
His | Glu | Trp | Val | Leu | Arg | Glu | Gly | Glu | Glu | Gly | Gly | His | His | His | His |
385 390 395 400
His His His ···♦·· ♦ tt ·· ·· ·* · ·« · · «««« • •tt · tt ·««« • tt · · tt · · · ♦ ··· tt·· ·· tttt (2) Informace pro SEQ ID NO: 6:
(i) Charakteristiky sekvence (A) Délka: 1212 párů baží (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 6:
ATGGATCCAA ACACTGTGTC AAGCTTTCAG GTAGATTGGT TTGTTTGGCA TGTCCGCAAA 60 CGAGTTGCAG ACCAAGAACT AGGTGATGCC CCATTCCTTG ATCGGCTTCG CCGAGATCAG 120 AAATCCCTAA GAGGAAGGGG CAGCACTCTT GGTCTGGACA TCGAGACAGC CACACGTGCT 180 GGAAAGCAGA TAGTGGAGCG GATTCTGAAA GAAGAATCGG ATGAGGCACT TAAAATGACC 2 40 ATGGATCTGG AACAGCGTAG TCAGCACTGC AAGCCTGAAG AAGGCCTTGA GGCCCGAGGA 300 GAGGCCCTGG GCCTGGTGGG TGCGCAGGCT CCTGCTACCG AGGAGCAGGA GGCTGCCTCC 3 60 TCCTCTTCTA CTCTAGTTGA AGTCACCCTG GGGGAGGTGC CTGCTGCCGA GTCACCAGAT 4 20 CCTCCCCAGA GTCCTCAGGG AGCCTCCAGC CTCCCCACTA CCATGAACTA CCCTCTCTGG 4 80 AGCCAATCCT ATGAGGACTC CAGCAACCAA GAAGAGGAGG GGCCAAGCAC CTTCCCTGAC 5 40 CTGGAGTCCG AGTTCCAAGC AGCACTCAGT AGGAAGGTGG CCGAATTGGT TCATTTTCTG 600 CTCCTCAAGT ATCGAGCCAG GGAGCCGGTC ACAAAGGCAG AAATGCTGGG GAGTGTCGTC 660 GGAAATTGGC AGTATTTCTT TCCTGTGATC TTCAGCAAAG CTTCCAGTTC CTTGCAGCTG 720 GTCTTTGGCA TCGAGCTGAT GGAAGTGGAC CCCATCGGCC ACTTGTACAT CTTTGCCACC 7 80 TGCCTGGGCC TCTCCTACGA TGGCCTGCTG GGTGACAATC AGATCATGCC CAAGGCAGGC 840 CTCCTGATAA TCGTCCTGGC CATAATCGCA AGAGAGGGCG ACTGTGCCCC TGAGGAGAAA 900 ATCTGGGAGG AGCTGAGTGT GTTAGAGGTG TTTGAGGGGA GGGAAGACAG TATCTTGGGG 960 GATCCCAAGA AGCTGCTCAC CCAAČATTTC GTGCAGGAAA ACTACCTGGA GTACCGGCAG 1020 GTCCCCGGCA GTGATCCTGC ATGTTATGAA TTCCTGTGGG GTCCAAGGGC CCTCGTTGAA 1080 ACCAGCTATG' TGAAAGTCCT GCACCATATG GTAAAGATCA GTGGAGGACC TCACATTTCC 1140 TACCCACCCC TGCATGAGTG GGTTTTGAGA GAGGGGGAAG AGGGCGGTCA TCACCATCAC 1200 CATCACCATT AA 1212 (2) Informace pro SEQ ID NO: 7:
(i) Charakteristiky sekvence (A) Délka: 445 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: protein (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 7:
Met | Lys | Gly | Gly | Ile | Val | His | Ser | Asp | Gly | Ser | Tyr | Pro | Lys | Aso | Lys |
1 | 5 | 10 | 15' | ||||||||||||
Phe | Glu | Lys | Ile | Asn | Gly | Thr | Trp | Tvr | Tyr | Phe | Asp | Ser | Ser | Gly | Tyr |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Met | Leu | Ala | Asp | Arg | Trp | Arg | Lys | His | Thr | Asp | Gly | Asn | Trp | Tyr | Trp |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Phe | Asp | Asn | Ser | Gly | Glu | Met | Ala | Thr | Gly | Trp | Lvs | Lys | Ile | Ala | Asp |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Lvs | Trp | Tyr | Tyr | Phe | Asn | Glu | Glu | Gly | Ala | Mor | Lys | Thr | Gly | Trp | Val |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Lys | Tyr | Lys | Asp | Thr | Trp | Tyr | Tyr | Leu | As o | Ala | Lys | Glu | Gly | Ala | Met |
85 | 90' | 95 | |||||||||||||
Val | Ser | Asn | Ala | Phe | Ile | Gin | Ser | Ala | Asp | Gly | Thr | Gly | Trp | Tyr | Tyr |
100 | 105 | 110 |
• * * · · · · · * ♦ · · « • · « » · ··«· ¢-7 ·»····♦««··
0/ · · · «·····
Leu Lys | Pro Asp 115 | Gly | Thr Leu Ala Asp Arg Pro Glu Leu Asp Met | Gly | |||||||||||
120 | 125 | ||||||||||||||
Ser | Leu | Glu | Gin | Arg | Ser | Leu | His | Cys | Lys | Pro | Glu | Glu | Ala | Leu | Glu |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Ala | Gin | Gin | Glu | Ala | Leu | Gly | Leu | Val | Cys | Val | Gin | Ala | Ala | Thr | Ser |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Ser | Ser | Ser | Pro | Leu | Val | Leu | Gly | Thr | Leu | Glu | Glu | Val | Pro | Thr | Ala |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Gly | Ser | Thr | Asp | Pro | Pro | Gin | Ser | Pro | Gin | Gly | Ala | Ser | Ala | Phe | Pro |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Thr | Thr | Ile | Asn | Phe | Thr | Arg | Gin | Arg | Gin | Pro | Ser | Glu | Gly | Ser | Ser |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Ser | Arg | Glu | Glu | Glu | Gly | Pro | Ser | Thr | Ser | Cys | Ile | Leu | Glu | Ser | Leu |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Phe | Arg | Ala | Val | Ile | Thr | Lys | Lys | Val | Ala | Asp | Leu | Val | Gly | Phe | Leu |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Leu | Leu | Lys | Tyr | Arg | Ala | Arg | Glu | Pro | Val | Thr | Lys | Ala | Glu | Met | Leu |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Glu | Ser | Val | Ile | Lys | Asn | Tyr | Lys | His | Cys | Phe | Pro | Glu | Ile | Phe | Gly |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Lys | Ala | Ser | Glu | Ser | Leu | Gin | Leu | Val | Phe | Gly | Ile | Asp | Val | Lys | Glu |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Ala | Asp | Pro | Thr | Gly | His | Ser | Tyr | Val | Leu | Val | Thr | Cys | Leu | Gly | Leu |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Ser | Tyr | Asp | Gly | Leu | Leu | Gly | Asp | Asn | Gin | Ile | Met | Pro | Lys | Thr | Gly |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Phe | Leu | Ile | Ile | Val | Leu | Val | Met | Ile | Ala | Met | Glu | Gly | Gly | His | Ala |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Pro | Glu | Glu | Glu | Ile | Trp | Glu | Glu | Leu | Ser | Val | Met | Glu | Val | Tyr | Asp |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Gly | Arg | Glu | His | Ser | Ala | Tyr | Gly | Glu | Pro | Arg | Lys | Leu | Leu | Thr | Gin |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Asp | Leu | Val | Gin | Glu | Lys | Tyr | Leu | Glu | Tyr | Arg | Gin | Val | Pro | Asp | Ser |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Asp | Pro | Ala | Arg | Tyr | Glu | Phe | Leu | Trp | Gly | Pro | Arg | Ala | Leu | Ala | Glu |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Thr | Ser | Tyr | Val | Lys | Val | Leu | Glu | Tyr | Val | Ile | Lys | Val | Ser | Ala | Arg |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Val | Arg | Phe | Phe | Phe | Pro | Ser | Leu | Ara | Glu | Ala | Ala | Leu | Arg | Glu | Glu |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Glu | Glu | Gly | Val | Gly | Gly | His | His | His | His | His | His | His | |||
435 | 440 | 445 |
(2) Informace pro SEQ ID NO: 8:
(i) Charakteristiky sekvence (A) Délka: 1338 párů baží (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ··«»
120
180
240
300 (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 8:
ATGAAAGGGG GAATTGTACA TTCAGACGGC TCTTATCCAA AAGACAAGTT TGAGAAAATC
AATGGCACTT GGTACTACTT TGACAGTTCA GGCTATATGC TTGCAGACCG CTGGAGGAAG
CACACAGACG GCAACTGGTA CTGGTTCGAC AACTCAGGCG AAATGGCTAC AGGCTGGAAG
AAAATCGCTG ATAAGTGGTA CTATTTCAAC GAAGAAGGTG CCATGAAGAC AGGCTGGGTC
AAGTACAAGG ACACTTGGTA CTACTTAGAC GCTAAAGAAG GCGCCATGGT ATCAAATGCC
TTTATCCAGT CAGCGGACGG AACAGGCTGG TACTACCTCA AACCAGACGG AACACTGGCA 360
GACAGGCCAG AATTGGACAT GGGCTCTCTG GAACAGCGTA GTCTGCACTG CAAGCCTGAG 420
GAAGCCCTTG AGGCCCAACA AGAGGCCCTG GGCCTGGTGT GTGTGCAGGC TGCCACCTCC 480
TCCTCCTCTC CTCTGGTCCT GGGCACCCTG GAGGAGGTGC CCACTGCTGG GTCAACAGAT 540
CCTCCCCAGA GTCCTCAGGG AGCCTCCGCC TTTCCCACTA CCATCAACTT CACTCGACAG 600
AGGCAACCCA GTGAGGGTTC CAGCAGCCGT GAAGAGGAGG GGCCAAGCAC CTCTTGTATC 660
CTGGAGTCCT TGTTCCGAGC AGTAATCACT AAGAAGGTGG CTGATTTGGT TGGTTTTCTG 720
CTCCTCAAAT A.TCGAGCCAG GGAGCCAGTC ACAAAGGCAG AAATGCTGGA GAGTGTCATC 780
AAAAATTACA AGCACTGTTT TCCTGAGATC TTCGGCAAAG CCTCTGAGTC CTTGCAGCTG 840
GTCTTTGGCA TTGACGTGAA GGAAGCAGAC CCCACCGGCC ACTCCTATGT CCTTGTCACC 900
TGCCTAGGTC TCTCCTATGA TGGCCTGCTG GGTGATAATC AGATCATGCC CAAGACAGGC 960
TTCCTGATAA TTGTCCTGGT CATGATTGCA ATGGAGGGCG GCCATGCTCC TGAGGAGGAA 1020
ATCTGGGAGG AGCTGAGTGT GATGGAGGTG TATGATGGGA GGGAGCACAG TGCCTATGGG 1080
GAGCCCAGGA AGCTGCTCAC CCAAGATTTG GTGCAGGAAA AGTACCTGGA GTACCGGCAG 114 0
GTGCCGGACA GTGATCCCGC ACGCTATGAG TTCCTGTGGG GTCCAAGGGC CČTCGCTGAA 1200
ACCAGCTATG TGAAAG-TCCT TGAGTATGTG ATCAAGGTCA GTGCAAGAGT TCGCTTTT7C 1260
TTCCCATCCC TGCGTGAAGC AGCTTTGAGA GAGGAGGAAG AGGGAGTCGG CGGTCATCAC 1320 ČATCACCATC ACCATTAA 1338 (2) Informace pro SEQ ID NO: 9:
(i) Charakteristiky sekvence (A) Délka: 454 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: protein (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 9:
Met tys 1 | Gly | Gly Ile 5 | Val | His | Ser | Asp | Gly 10 | Ser | T vx | Pro | Lys | Asp 15 | Lys | ||
Phe | Glu | Lys | Ile | Asn | Gly | Thr | Trp | Tyr | Tyr | Phe | Asp | Ser | Ser | Gly | Tyr |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Met | Leu | Ala | Asp | Arg | Trp | Arg | Lys | His | Thr | Asp | Gly | Asn | Trp | Tyr | Trp |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Phe | Asp | Asn | Ser | Gly | Glu | Met | Ala | Thr | Gly | Trp | Lys | Lys | Ile | Ala | Asp |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Lys | Trp | Tyr | Tyr | Phe | Asn | Glu | Glu | Gly | Ala | Met | Lys | Thr | Gly | Trp | Val |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Lys | Tyr | Lys | Asp | Thr | Trp | Tyr | Tyr | Leu | Asp | Ala | Lys | Glu | Gly | Ala | Met |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Val | Ser | Asn | Ala | Phe | Ile | Gin | Ser | Ala | Asp | Gly | Thr | Gly | Trp | Tyr | Tyr |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
'Leu | Lys | Pro | Asp | Gly | Thr | Leu | Ala | Asp | Arg | Pro | Glu | Leu | Ala | Ser | Met |
115 | 120 | 125 |
Leu | Asp | Met | Asp | Leu | Glu | Gin | Arg | Ser | Gin His | Cvs | Lys | Pro | Glu | Glu |
130 | 135 | 140 | ||||||||||||
Gly | Leu | Glu | Ala | Arg | Gly | Glu | Ala | Leu | Gly Leu | Val | Gly | Ala | Gin | Ala |
145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||
Pro | Ala | Thr | Glu | Glu | Gin | Glu | Ala | Ala | Ser Ser | Ser | Ser | Thr | Leu | Val |
165 | 170 | 175 | ||||||||||||
Glu | Val | Thr | Leu | Gly | Glu | Val | Pro | Ala | Ala Glu | Ser | Pro | Asd | Pro | Pro |
180 | 185 | 19*0 | ||||||||||||
Gin | Ser | Pro | Gin | Gly | Ala | Ser | Ser | Leu | Pro Thr | Thr | Met | Asn | Tyr | Pro |
195 | 200 | 205 | ||||||||||||
Leu | Trp | Ser | Gin | Ser | Tyr | Glu | Asp | Ser | Ser Asn | Gin | Glu | Glu | Glu | Gly |
210 | 215 | 220 | ||||||||||||
Pro | Ser | Thr | Phe | Pro | Asp | Leu | Glu | Ser | Glu Phe | Gin | Ala | Ala | Leu | Ser |
225 | 230 | 235 | 240 | |||||||||||
Arg | Lys | Val | Ala | Glu | Leu | Val | His | Phe | Leu Leu | Leu | Lys | Tyr | Arg | Ala |
245 | 250 | 255 | ||||||||||||
Arg | Glu | Pro | Val | Thr | Lys | Ala | Glu | Met | Leu Gly | Ser | Val | Val | Gly | Asn |
260 | 265 | 270 | ||||||||||||
Trp | Gin | Tyr | Phe | Phe | Pro | Val | Ile | Phe | Ser Lys | Ala | Ser | Ser | Ser | Leu |
275 | 280 | 285 | ||||||||||||
Gin | Leu | Val | Phe | Gly | Ile | Glu | Leu | Met | Glu Val | Asp | Pro | Ile | Gly | His |
290 | 295 | 300 | ||||||||||||
Leu | Tyr | Ile | Phe | Ala | Thr | Cys | Leu | Gly | Leu Ser | Tyr | Asp | Gly | Leu | Leu |
305 | 310 | 315 | 320 | |||||||||||
Gly | Asp | Asn | Gin | Ile | Met | Pro | Lys | Ala | Giv Leu | Leu | Ile | Ile | Val | Leu |
325 | 330 | 335 | ||||||||||||
Ala | Ile | Ile | Ala | Arg | Glu | Gly | Asp | Cvs | Ala Pro | Glu | Glu | Lvs | Ile | Ty-r-v |
340 | 345 | 350 | ||||||||||||
Glu | Glu | Leu | Ser | Val | Leu | Glu | Val | Phe | Glu Gly | Arg | Glu | Asp | Ser | Ile |
355 | 360 | 365 | ||||||||||||
Leu | Gly | Asp | Pro | Lys | Lys | Leu | Leu | Thr | Gin His | Phe | Val | Gin | Glu | Asn |
370 | 375 | 380 | ||||||||||||
Tyr | Leu | Glu | Tyr | Arg | Gin | Val | Pro | Giv | Ser Asp | Pro | Ala | Cys | T vr | Glu |
385 | 390 | 395 | 400 | |||||||||||
Phe | Leu | Trp | Gly | Pro | Arg | Ala | Leu | Val | Glu Thr | Ser | Tyr | Val | Lys | Val |
405 | 410 | 415 | ||||||||||||
Leu | His | His | Met | Val | Lys | Ile | Ser | Giv | Gly Pro | His | Ile | Ser | Tyr | Pro |
420 | 425 | 430 | ||||||||||||
Pro | Leu | His | Glu | Trp. | Val | Leu | Arg | Glu | Gly Glu | Glu | Gly | Gly | His | His |
435 | 440 | 445 | ||||||||||||
His | His | His | His | His | ||||||||||
450 |
fe · fefefefe fe fe · fefefe • fefe (2) Informace pro SEQ ID NO: 10:
(i) Charakteristiky sekvence (A) Délka: 1362 párů baží (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 10:
ATGAAAGGGG GAATTGTACA AATGGCACTT GGTACTACTT CACACAGACG GCAACTGGTA AAAATCGCTG ATAAGTGGTA AAGTACAAGG ACACTTGGTA TTTATCCAGT CAGCGGACGG GACAGGCCAG AATTGGCCAG AAGCCTGAAG AAGGCCTTGA CCTGCTACTG AGGAGCAGGA GGGGAGGTGC CTGCTGCCGA CTCCCCACTA CCATGAACTA GAAGAGGAGG GGCCAAGCAC AGGAAGGTGG CCAAGTTGGT ACAAAGGCAG AAATGCTGGG TTCAGCAAAG CTTCCGATTC CCCATCGGCC ACGTGTACAT GGTGACAATC AGATCATGCC .AAAGAGGGCG ACTGTGCCCC TTTGAGGGGA GGGAAGACAG GTGCAGGAAA ACTACCTGGA TTCCTGTGGG GTCCAAGGGC GTAAAGATCA GTGGAGGACC GAGGGGGAAG AGGGCGGTCA
TTCAGACGGC TCTTATCCAA AAGACAAGTT TGAGAAAATC 60 TGACAGTTCA GGCTATATGC TTGCAGACCG CTGGAGGAAG 120 CTGGTTCGAC AACTCAGGCG AAATGGCTAC AGGCTGGAAG 180 CTATTTCAAC GAAGAAGGTG CCATGAAGAC AGGCTGGGTC 240 CTACTTAGAC GCTAAAGAAG GCGCCATGGT ATCAAATGCC 300 AACAGGCTGG TACTACCTCA AACCAGACGG AACACTGGCA. 360 CATGCTGGAC ATGGATCTGG AACAGCGTAG TCAGCACTGC 420 GGCCCGAGGA GAGGCCCTGG GCCTGGTGGG TGCGCAGGCT 480 GGCTGCCTCC TCCTCTTCTA CTCTAGTTGA AGTCACCCTG 540 GTCACCAGAT CCTCCCCAGA GTCCTCAGGG AGCCTCCAGC 600 CCCTCTCTGG AGCCAATCCT ATGAGGACTC CAGCAACCAA 660 CTTCCCTGAC CTGGAGTCTG AGTTCCAAGC AGCACTCAGT 720 TCATTTTCTG CTCCTCAAGT ATCGAGCCAG GGAGCCGGTC 780 GAGTGTCGTC GGAAATTGGC AGTACTTCTT TCCTGTGATC 840 CTTGCAGCTG GTCTTTGGCA TCGAGCTGAT GGAAGTGGAC 900 CTTTGCCACC TGCCTGGGCC TCTCCTACGA TGGCCTGCTG 960 CAAGACAGGC TTCCTGATAA TCATCCTGGC CATAATCGCA 1020 TGAGGAGAAA ATCTGGGAGG AGCTGAGTGT GTTAGAGGTG 1080 TATCTTCGGG GATCCCAAGA AGCTGCTCÁC CGAATATTTC 114 0 GTACCGGCAG GTCCCCGGCA GTGATCCTGC ATGCTATGAG 1200 CCTCATTGAA ACCAGCTATG TGAAAGTCCT GCÁCCATATG 1260 TCGCATTTCC TACCCACTCC TGCATGAGTG GGCTTTGAGA 1320 TCACCATCAC CATCACCATT AA 1362
Claims (16)
1. Derivát antigenu asociovaného s nádory z MÁGE rodiny vyznačující se tím, že je vybrán ze skupiny zahrnuj ící:
- MÁGE antigen obsahující derivatizované thiolové zbytky;
- rekombinantně exprimovaný MÁGE fúzní protein, ve kterém je partner pro fúzi vybrán ze skupiny zahrnující: protein D nebo jeho fragment, NS1 protein z influenzy nebo jeho fragment a C-lyta ze Streptococcus pneumoniae nebo jeho fragment.
2. Antigen podle nároku lvyznačující se tím, že derivatizované volné thioly jsou karboxyamidované nebo karboxymethylované.
3. Antigen podle nároků 1 nebo 2 vyznačující se tím, že antigen obsahuje afinitní koncovku.
4. Antigen podle jakéhokoliv z nároků 1 až 3 vyznačující se tím, že protein D nebo jeho fragment je lipidovaný.
5. Antigen podle jakéhokoliv z nároků 1 až 4
6. Sekvence nukleové kyseliny kódující fúsní protein podle jakéhokoliv z nároků 1 až 5.
·«*·«· · · *· ·» * * · * · ♦ · 9 9 9 9
9 9 9 · · 9 9 9 9
9 9 9 · · 9 9 9 9 9 9
ΟΖ 9 9 9 9 9 9 9 9 9
99 9 999 999 ·« 99
Ί. Vektor obsahující nukleovou kyselinú podle nároku 6.
8. Hostitelská buňka transformovaná nukleovou kyselinou podle nároku 6 nebo vektorem podle nároku 7.
9. Vakcína vyznačující se tím, že obsahuje protein podle jakéhokoliv z nároků 1 až 5.
10. Vakcína podle nároku 9vyznačující se tím, že dále obsahuje adjuvans a/nebo imunostimulační cytokin nebo chemokin.
11. Vakcína podle nároku 9 nebo 10 vyznačuj ící se tím, že protein je připraven ve vehikulu, kterým je emulze olej ve vodě.
12. Vakcína podle nároku 10 nebo 11 v y z n a č u j 1 c 1 se tím, že adjuvans obsahuje 3D-MPL, QS21 nebo CpG oligonukleotid.
13. Vakcína podle jakéhokoliv z předešlých nároků vyznačující se tím, že dále obsahuje jeden nebo více dalších antigenu.
14. Vakcína podle jakéhokoliv z předešlých nároků vyznačující se tím, že je určena pro použití v medicíně.
15. Použití proteinu nebo nukleové kyseliny podle předcházejících nároků pro výrobu vakcíny pro imunoterapeutickou léčbu pacientů trpících melanomem nebo jinými nádory asociovanými s MÁGE.
φφ φφφφ
16. Způsob přečištění MÁGE proteinu nebo jeho derivátu vyznačující se tím, že obsahuje redukci disulfidových vazeb, blokování vzniklých volných thiolových skupin blokovací skupinou a zpracování získaného derivátu v jednom nebo více stupních chromatografického přečištění.
17. Způsob přípravy vakcíny vyznačující se tím, že obsahuje stupně přečištění MÁGE proteinu nebo jeho derivátu způsobem podle nároku 19 a zpracování získaného proteinu jako vakcíny.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB9802543.0A GB9802543D0 (en) | 1998-02-05 | 1998-02-05 | Vaccine |
GBGB9802650.3A GB9802650D0 (en) | 1998-02-06 | 1998-02-06 | Vaccine |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ20002869A3 true CZ20002869A3 (cs) | 2001-01-17 |
CZ298364B6 CZ298364B6 (cs) | 2007-09-05 |
Family
ID=26313069
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ20002869A CZ298364B6 (cs) | 1998-02-05 | 1999-02-02 | Deriváty antigenu asociovaných s nádory z MAGE rodiny a sekvence nukleových kyselin kodující tyto deriváty, jejich použití pro prípravu fúzních proteinu a prostredku pro vakcinaci |
CZ20060442A CZ298347B6 (cs) | 1998-02-05 | 1999-02-02 | Fúzní protein z rodiny MAGE, kódová sekvence nukleové kyseliny, vektor, hostitelská bunka, vakcina a použití fúzního proteinu pro výrobu vakciny |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ20060442A CZ298347B6 (cs) | 1998-02-05 | 1999-02-02 | Fúzní protein z rodiny MAGE, kódová sekvence nukleové kyseliny, vektor, hostitelská bunka, vakcina a použití fúzního proteinu pro výrobu vakciny |
Country Status (25)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US8097257B2 (cs) |
EP (4) | EP1659178B1 (cs) |
JP (2) | JP4768121B2 (cs) |
KR (2) | KR100633212B1 (cs) |
CN (1) | CN1227360C (cs) |
AR (1) | AR018064A1 (cs) |
AT (4) | ATE315088T1 (cs) |
AU (1) | AU737337B2 (cs) |
BR (1) | BR9907691B1 (cs) |
CA (2) | CA2584482C (cs) |
CY (4) | CY1105685T1 (cs) |
CZ (2) | CZ298364B6 (cs) |
DE (3) | DE69943359D1 (cs) |
DK (4) | DK1659178T3 (cs) |
ES (2) | ES2342416T3 (cs) |
HU (1) | HU228467B1 (cs) |
IL (4) | IL137442A0 (cs) |
NO (2) | NO328507B1 (cs) |
NZ (1) | NZ506086A (cs) |
PT (4) | PT1053325E (cs) |
SA (1) | SA99200126B1 (cs) |
SI (4) | SI1053325T1 (cs) |
TR (1) | TR200002284T2 (cs) |
TW (1) | TWI238853B (cs) |
WO (1) | WO1999040188A2 (cs) |
Families Citing this family (89)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CZ298364B6 (cs) | 1998-02-05 | 2007-09-05 | Smithkline Beecham Biologicals S. A. | Deriváty antigenu asociovaných s nádory z MAGE rodiny a sekvence nukleových kyselin kodující tyto deriváty, jejich použití pro prípravu fúzních proteinu a prostredku pro vakcinaci |
JP2002526419A (ja) | 1998-10-05 | 2002-08-20 | ファーメクサ エイ/エス | 治療上のワクチン注射のための新規な方法 |
ID28387A (id) * | 1998-10-05 | 2001-05-17 | M & E Biotech As | Metoda baru untuk vaksinasi terapeutik |
GB9908885D0 (en) * | 1999-04-19 | 1999-06-16 | Smithkline Beecham Biolog | Vccine |
DK1650221T3 (da) | 2000-02-23 | 2012-09-03 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Nye forbindelser |
EP1385541B1 (en) * | 2000-04-13 | 2008-06-18 | Corixa Corporation | Immunostimulant compositions comprising an aminoalkyl glucosaminide phosphate and qs-21 |
DK1282702T3 (da) * | 2000-05-10 | 2007-04-02 | Sanofi Pasteur Ltd | Immunogene polypeptider, som er kodet af KAGE-minigener, og anvendelser deraf |
AUPQ761200A0 (en) | 2000-05-19 | 2000-06-15 | Hunter Immunology Limited | Compositions and methods for treatment of mucosal infections |
ATE452909T1 (de) * | 2000-06-05 | 2010-01-15 | Brigham & Womens Hospital | Für ein homologes des humanen, für mehrfachresistenz verantwortlichen, p- glykoproteins auf chromosom 7p15-21 kodierendes gen sowie verwendungen dafür |
AU2001268678B2 (en) | 2000-06-20 | 2006-11-16 | Corixa Corporation | Fusion proteins of mycobacterium tuberculosis |
US20050019340A1 (en) * | 2000-10-18 | 2005-01-27 | Nathalie Garcon | Vaccines |
MXPA03003408A (es) * | 2000-10-18 | 2005-06-30 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacunas. |
GB0109297D0 (en) | 2001-04-12 | 2001-05-30 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
AU2002364161A1 (en) | 2001-12-12 | 2003-06-23 | Aventis Pasteur Limited | Enhancement of the immune response using cd36-binding domain |
ES2359473T3 (es) | 2003-07-21 | 2011-05-23 | Transgene S.A. | Citoquinas multifuncionales. |
CA2537140A1 (en) * | 2003-08-29 | 2005-03-10 | The Nottingham Trent University | Gastric and prostate cancer associated antigens |
WO2005037190A2 (en) * | 2003-09-03 | 2005-04-28 | Dendritherapeutics, Inc. | Multiplex vaccines |
GB0321615D0 (en) | 2003-09-15 | 2003-10-15 | Glaxo Group Ltd | Improvements in vaccination |
GB0409940D0 (en) * | 2004-05-04 | 2004-06-09 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
US20090022755A1 (en) | 2005-03-31 | 2009-01-22 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vaccines against chlamydial infection |
SI2457926T1 (sl) | 2005-04-29 | 2015-01-30 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Nov postopek za preprečevanje ali zdravljenje infekcije z M. tuberculosis |
ATE515566T1 (de) * | 2005-05-26 | 2011-07-15 | Cytos Biotechnology Ag | Skalierbares fermentationsverfahren |
US7700567B2 (en) | 2005-09-29 | 2010-04-20 | Supergen, Inc. | Oligonucleotide analogues incorporating 5-aza-cytosine therein |
ATE545708T1 (de) * | 2005-11-14 | 2012-03-15 | Univ Laval | Krebsantigen mage-a9 und verwendungen davon |
TWI457133B (zh) | 2005-12-13 | 2014-10-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | 新穎組合物 |
JP5170976B2 (ja) * | 2006-04-11 | 2013-03-27 | 株式会社イミュノフロンティア | タンパク質複合体およびその製造方法 |
CL2007001571A1 (es) | 2006-06-02 | 2008-05-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Perfil genico indicativo de probabilidad aumentada de que un paciente responda o no a una inmunoterapia; uso de dicho perfil; procedimiento de identificacion del perfil; uso de sonda para identificar la expresion diferencial de al menos un gen de act |
GB0612342D0 (en) * | 2006-06-21 | 2006-08-02 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Method |
US20090181078A1 (en) | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
AU2007354917B2 (en) | 2006-09-26 | 2013-06-06 | Access To Advanced Health Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
GB0700284D0 (en) * | 2007-01-08 | 2007-02-14 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Combination therapy |
JP5391080B2 (ja) | 2007-01-15 | 2014-01-15 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | ワクチン |
WO2009039985A2 (en) * | 2007-09-11 | 2009-04-02 | Mondobiotech Laboratories Ag | Therapeutic uses of urocortin ii |
EP2188017A2 (en) * | 2007-09-11 | 2010-05-26 | Mondobiotech Laboratories AG | Use of glucagon (1-29) alone or in combination with neuropeptide w30 as a therapeutic agent |
CN101932723B (zh) | 2007-09-17 | 2014-09-10 | 肿瘤甲基化科学公司 | 改进的对mage-a表达的检测 |
US20100285069A1 (en) * | 2007-10-19 | 2010-11-11 | Mario Contorni | Meningococcal vaccine formulations |
WO2010105815A2 (en) | 2009-03-17 | 2010-09-23 | Oncomethylome Sciences S.A. | Improved detection of gene expression |
NZ596501A (en) | 2009-05-27 | 2013-11-29 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Casb7439 constructs |
TWI494125B (zh) | 2009-06-05 | 2015-08-01 | Infectious Disease Res Inst | 合成的葡萄吡喃糖基脂質佐劑 |
GB0910046D0 (en) | 2009-06-10 | 2009-07-22 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel compositions |
GB0917457D0 (en) | 2009-10-06 | 2009-11-18 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Method |
BR112012018669A2 (pt) | 2010-01-27 | 2017-09-05 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Proteína rv3616c modificada, uso de uma proteína rv3616c modificada, polinucleotídeo, uso de um polinucleotídeo, composição farmacêutica, composição imunogênica, proteína de fusão, e, polipeptídeo. |
GB201022007D0 (en) | 2010-12-24 | 2011-02-02 | Imp Innovations Ltd | DNA-sensor |
SG192759A1 (en) | 2011-02-15 | 2013-09-30 | Immune Design Corp | Methods for enhancing immunogen specific immune responses by vectored vaccines |
BRPI1100857A2 (pt) * | 2011-03-18 | 2013-05-21 | Alexandre Eduardo Nowill | agente imunomodulador e suas combinaÇÕes, seu uso e mÉtodo imunoterÁpico para a recontextualizaÇço, reprogramaÇço e reconduÇço do sistema imune em tempo real |
NZ616304A (en) | 2011-04-08 | 2016-01-29 | Immune Design Corp | Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses |
CN102251034B (zh) * | 2011-07-05 | 2012-11-21 | 北京大学人民医院 | 基于mage-c2/ct10基因辅助诊断多发性骨髓瘤患者的定量检测试剂盒 |
EP2750768B1 (en) | 2011-08-30 | 2018-10-03 | Astex Pharmaceuticals, Inc. | Decitabine derivative formulations |
GB201116248D0 (en) | 2011-09-20 | 2011-11-02 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Liposome production using isopropanol |
JP2015503503A (ja) * | 2011-12-22 | 2015-02-02 | グラクソスミスクライン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーGlaxoSmithKline LLC | Braf阻害剤および/またはmek阻害剤とともにmagea3免疫療法薬を用いた癌の治療方法 |
WO2013119856A1 (en) | 2012-02-07 | 2013-08-15 | Infectious Disease Research Institute | Improved adjuvant formulations comprising tlr4 agonists and methods of using the same |
MX350274B (es) | 2012-05-16 | 2017-08-31 | Immune Design Corp | Vacunas para hsv-2. |
EP2912069B1 (en) | 2012-10-23 | 2019-07-31 | Emory University | Gm-csf and il-4 conjugates, compositions, and methods related thereto |
CN105025884B (zh) | 2013-03-01 | 2019-08-20 | 阿斯泰克斯制药公司 | 药物组合 |
HK1214510A1 (zh) | 2013-04-18 | 2016-07-29 | Immune Design Corp. | 用於癌症治疗的gla单一疗法 |
US9849066B2 (en) | 2013-04-24 | 2017-12-26 | Corning Incorporated | Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients |
US9463198B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
WO2015092710A1 (en) | 2013-12-19 | 2015-06-25 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Contralateral co-administration of vaccines |
BR112016015422A2 (pt) | 2013-12-31 | 2017-10-24 | Infectious Disease Res Inst | formulações de vacina de frasco único |
SG11201606625RA (en) | 2014-02-14 | 2016-09-29 | Immune Design Corp | Immunotherapy of cancer through combination of local and systemic immune stimulation |
CA2955015A1 (en) | 2014-07-15 | 2016-01-21 | Immune Design Corp. | Prime-boost regimens with a tlr4 agonist adjuvant and a lentiviral vector |
WO2017004538A1 (en) | 2015-07-02 | 2017-01-05 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Lyophilized pharmaceutical compositions |
CN105181966B (zh) * | 2015-09-02 | 2017-08-11 | 南通大学附属医院 | 一种mage‑a9的用途 |
KR102566134B1 (ko) | 2015-12-07 | 2023-08-10 | 삼성전자주식회사 | 반도체 소자의 3d 프로파일링 시스템 및 이의 동작 방법 |
WO2017176076A1 (en) | 2016-04-06 | 2017-10-12 | Ewha University - Industry Collaboration Foundation | A peptide with ability to penetrate cell membrane |
US11162945B2 (en) | 2016-04-11 | 2021-11-02 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for detecting single T cell receptor affinity and sequence |
IL319503A (en) | 2016-05-16 | 2025-05-01 | Access To Advanced Health Inst | PEGylated liposomes and methods of use |
EP4112638A1 (en) | 2016-05-16 | 2023-01-04 | Access to Advanced Health Institute | Formulation containing tlr agonist and methods of use |
MX393217B (es) | 2016-06-01 | 2025-03-11 | Infectious Disease Res Inst | Particulas de nanoalumbre que contienen un agente de dimensionamiento |
ES3003260T3 (en) | 2017-06-15 | 2025-03-10 | Access To Advanced Health Inst | Nanostructured lipid carriers and stable emulsions and uses thereof |
SG11202000932XA (en) | 2017-08-03 | 2020-02-27 | Otsuka Pharma Co Ltd | Drug compound and purification methods thereof |
JP7339942B2 (ja) | 2017-09-08 | 2023-09-06 | アクセス ツー アドバンスト ヘルス インスティチュート | サポニンを含むリポソーム製剤および使用方法 |
CA3097396A1 (en) | 2018-04-19 | 2019-10-24 | Baylor College Of Medicine | Reprogramming cd4 t cells into cytotoxic cd8 cells by forced expression of cd8ab and class 1 restricted t cell receptors |
EP3883955A1 (en) | 2018-11-19 | 2021-09-29 | Board of Regents, The University of Texas System | A modular, polycistronic vector for car and tcr transduction |
AU2019386140A1 (en) | 2018-11-28 | 2021-06-24 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Multiplex genome editing of immune cells to enhance functionality and resistance to suppressive environment |
MX2021006393A (es) | 2018-11-29 | 2021-10-13 | Univ Texas | Metodos para expansion ex vivo de celulas exterminadoras naturales y uso de las mismas. |
EP3976092A1 (en) | 2019-05-25 | 2022-04-06 | Infectious Disease Research Institute | Composition and method for spray drying an adjuvant vaccine emulsion |
WO2021167908A1 (en) | 2020-02-17 | 2021-08-26 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for expansion of tumor infiltrating lymphocytes and use thereof |
CN116057067A (zh) * | 2020-04-17 | 2023-05-02 | 弗朗西斯·克里克研究所有限公司 | 用于治疗黑素瘤的ctl抗原的融合蛋白 |
US20230310323A1 (en) | 2020-09-04 | 2023-10-05 | Access To Advanced Health Institute | Co-lyophilized rna and nanostructured lipid carrier |
CA3173951A1 (en) | 2020-09-04 | 2022-03-10 | Emily VOIGT | Genetically-adjuvanted rna vaccines |
AU2021377699A1 (en) | 2020-11-13 | 2023-06-15 | Catamaran Bio, Inc. | Genetically modified natural killer cells and methods of use thereof |
US20220162288A1 (en) | 2020-11-25 | 2022-05-26 | Catamaran Bio, Inc. | Cellular therapeutics engineered with signal modulators and methods of use thereof |
AU2021406131A1 (en) | 2020-12-23 | 2023-08-03 | Access To Advanced Health Institute | Solanesol vaccine adjuvants and methods of preparing same |
WO2022226522A1 (en) | 2021-04-22 | 2022-10-27 | Baylor College Of Medicine | Methods of engineering immune cells having reduced fratricidal activity |
EP4169513A1 (en) | 2021-10-19 | 2023-04-26 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Adjuvant composition comprising sting agonists |
EP4436595A1 (en) | 2021-11-22 | 2024-10-02 | Pfizer Inc. | Reducing risk of antigen mimicry in immunogenic medicaments |
WO2023211972A1 (en) | 2022-04-28 | 2023-11-02 | Medical University Of South Carolina | Chimeric antigen receptor modified regulatory t cells for treating cancer |
IL319329A (en) | 2022-09-09 | 2025-05-01 | Access To Advanced Health Inst | Immunogenic vaccine composition incorporating saponin |
Family Cites Families (48)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4302386A (en) | 1978-08-25 | 1981-11-24 | The Ohio State University | Antigenic modification of polypeptides |
US4526716A (en) | 1981-11-20 | 1985-07-02 | The Ohio State University | Antigenic modification of polypeptides |
US4384995A (en) | 1980-01-16 | 1983-05-24 | The Ohio State University | Antigenic modification of polypeptides |
US5833975A (en) | 1989-03-08 | 1998-11-10 | Virogenetics Corporation | Canarypox virus expressing cytokine and/or tumor-associated antigen DNA sequence |
AR241713A1 (es) | 1984-08-30 | 1992-11-30 | Smithkline Beckman Corp | Molecula de dna con una secuencia de bases que codifica la proteina c13 y preparacion de vacunas contra la gripe. |
ZA896627B (en) * | 1988-08-31 | 1991-03-27 | Smithkline Beecham Corp | Vaccinal polypeptides |
GB8824496D0 (en) | 1988-10-19 | 1988-11-23 | Beecham Group Plc | Process |
US6780407B1 (en) | 1989-03-08 | 2004-08-24 | Aventis Pasteur | Pox virus comprising DNA sequences encoding CEA and B7 antigen |
CA2022752C (en) | 1989-08-11 | 1998-07-07 | Naomi Kitamura | Hepatic parenchymal cell growth factor, gene encoding the same, process for producing the factor, and transformants producing the factor |
GB8927546D0 (en) | 1989-12-06 | 1990-02-07 | Ciba Geigy | Process for the production of biologically active tgf-beta |
SE466259B (sv) | 1990-05-31 | 1992-01-20 | Arne Forsgren | Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal |
EP0547064B1 (en) | 1990-07-23 | 1994-06-22 | ZymoGenetics, Inc. | Protease resistant pdgf and methods of use |
US5925729A (en) | 1991-05-23 | 1999-07-20 | Ludwig Institute For Cancer Research | Tumor rejection antigen precursors, tumor rejection antigens and uses thereof |
US5541104A (en) | 1991-05-23 | 1996-07-30 | Ludwig Institute For Cancer Research | Monoclonal antibodies which bind to tumor rejection antigen precursor mage-1 |
US5342774A (en) | 1991-05-23 | 1994-08-30 | Ludwig Institute For Cancer Research | Nucleotide sequence encoding the tumor rejection antigen precursor, MAGE-1 |
US6235525B1 (en) | 1991-05-23 | 2001-05-22 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid molecules coding for tumor rejection antigen precursor MAGE-3 and uses thereof |
DK1023900T3 (da) | 1991-11-14 | 2005-06-06 | Brigham & Womens Hospital | Farmaceutisk præparat indeholdende S-nitroso-lipoproteiner og anvendelse deraf |
ATE156710T1 (de) | 1992-06-25 | 1997-08-15 | Smithkline Beecham Biolog | Adjuvantien enthaltende impfstoffzusammensetzung |
GB9213559D0 (en) | 1992-06-25 | 1992-08-12 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
CA2143335C (en) | 1992-08-31 | 2000-03-14 | Thierry Boon-Falleur | Isolated nonapeptide derived from mage-3 gene and presented by hla-a1, and uses thereof |
CA2168582A1 (en) * | 1993-08-06 | 1995-02-16 | John D. Fikes | Cloning and characterization of the complete mage-1 gene |
GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
KR100316209B1 (ko) | 1994-03-01 | 2002-06-26 | 에드워드 에이. 맥더모 2세, 로이드 제이. 오울드 | Mage유전자발현에의한암상태의결정 |
US5879687A (en) * | 1994-04-22 | 1999-03-09 | Corixa Corporation | Methods for enhancement of protective immune responses |
DE69535036T3 (de) | 1994-07-15 | 2011-07-07 | The University of Iowa Research Foundation, IA | Immunomodulatorische oligonukleotide |
CN1159759A (zh) * | 1994-09-30 | 1997-09-17 | 路德维格癌症研究所 | 含有肿瘤排斥抗原前体或肿瘤排斥抗原以及佐剂和/或生长因子的组合物 |
US5612030A (en) * | 1995-01-17 | 1997-03-18 | University Of Kentucky Research Foundation | Anti-idiotype monoclonal antibody 1A7 and use for the treatment of melanoma and small cell carcinoma |
US6017705A (en) | 1995-03-14 | 2000-01-25 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid molecules which are members of the MAGE-B family and uses thereof |
UA56132C2 (uk) | 1995-04-25 | 2003-05-15 | Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. | Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини |
JPH11508767A (ja) | 1995-06-29 | 1999-08-03 | ルードヴィッヒ・インスティテュート・フォア・キャンサー・リサーチ | マウス腫瘍拒絶抗原前駆体smage−3をコードする単離核酸分子 |
WO1997013858A2 (en) | 1995-10-12 | 1997-04-17 | Chiron Corporation | Baboon mage-3 homologs, dna encoding the homologs, and a process for their use |
US6265215B1 (en) | 1996-09-13 | 2001-07-24 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated peptides which complex with HLA-Cw16 and uses thereof |
US5908778A (en) | 1996-10-03 | 1999-06-01 | Ludwig Institute For Cancer Research | Mage-10 encoding cDNA, the tumor rejection antigen precursor mage-10, antibodies specific to the molecule, and uses thereof |
CA2218456A1 (en) | 1996-10-15 | 1998-04-15 | The Rockefeller University | Purified stat proteins and methods of purifying thereof |
WO1998020165A2 (en) | 1996-11-06 | 1998-05-14 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Biallelic markers |
US7157089B1 (en) | 1996-11-26 | 2007-01-02 | Stressgen Biotechnologies Corporation | Immune responses using compositions containing stress proteins |
US6340461B1 (en) | 1996-12-17 | 2002-01-22 | David Stephen Terman | Superantigen based methods and compositions for treatment of diseases |
US6287569B1 (en) | 1997-04-10 | 2001-09-11 | The Regents Of The University Of California | Vaccines with enhanced intracellular processing |
US6027924A (en) | 1997-04-25 | 2000-02-22 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid molecule coding for tumor rejection antigen precursor MAGE-C1 and uses thereof |
US20020176865A1 (en) | 1997-04-25 | 2002-11-28 | Sophie Lucas | Isolated nucleic acid molecules coding for tumor rejection antigen precursors of members of the MAGE-C and MAGE-B families and uses thereof |
US6680191B1 (en) | 1997-04-25 | 2004-01-20 | Ludwig Institute For Cancer | Isolated nucleic acid molecules coding for tumor rejection antigen precursors of members of the MAGE-C and MAGE-B FAMILIES and uses thereof |
US6043084A (en) | 1997-10-10 | 2000-03-28 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid molecules associated with colon cancer and methods for diagnosing and treating colon cancer |
US5965535A (en) | 1997-09-12 | 1999-10-12 | Ludwig Institute For Cancer Research | Mage-3 peptides presented by HLA class II molecules |
US6291430B1 (en) | 1997-09-12 | 2001-09-18 | Ludwig Institute For Cancer Research | Mage-3 peptides presented by HLA class II molecules |
US6716809B1 (en) | 1997-09-12 | 2004-04-06 | Ludwig Institute For Cancer Research | Mage-A3 peptides presented by HLA class molecules |
CZ298364B6 (cs) | 1998-02-05 | 2007-09-05 | Smithkline Beecham Biologicals S. A. | Deriváty antigenu asociovaných s nádory z MAGE rodiny a sekvence nukleových kyselin kodující tyto deriváty, jejich použití pro prípravu fúzních proteinu a prostredku pro vakcinaci |
EP1068354A2 (en) | 1998-04-09 | 2001-01-17 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Biallelic markers |
US6686147B1 (en) | 1998-07-15 | 2004-02-03 | Ludwig Institute For Cancer Research | Cancer associated antigens and uses therefor |
-
1999
- 1999-02-02 CZ CZ20002869A patent/CZ298364B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-02-02 ES ES06075362T patent/ES2342416T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-02 AU AU27220/99A patent/AU737337B2/en not_active Ceased
- 1999-02-02 PT PT99907476T patent/PT1053325E/pt unknown
- 1999-02-02 PT PT06075363T patent/PT1659179E/pt unknown
- 1999-02-02 JP JP2000530602A patent/JP4768121B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-02 HU HU0102639A patent/HU228467B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1999-02-02 PT PT05076599T patent/PT1584685E/pt unknown
- 1999-02-02 IL IL13744299A patent/IL137442A0/xx active IP Right Grant
- 1999-02-02 TR TR2000/02284T patent/TR200002284T2/xx unknown
- 1999-02-02 AT AT99907476T patent/ATE315088T1/de active
- 1999-02-02 EP EP06075362A patent/EP1659178B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-02 BR BRPI9907691-8A patent/BR9907691B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1999-02-02 SI SI9930879T patent/SI1053325T1/sl unknown
- 1999-02-02 DE DE69943359T patent/DE69943359D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-02 WO PCT/EP1999/000660 patent/WO1999040188A2/en active Application Filing
- 1999-02-02 DK DK06075362.1T patent/DK1659178T3/da active
- 1999-02-02 NZ NZ506086A patent/NZ506086A/xx not_active IP Right Cessation
- 1999-02-02 DK DK05076599.9T patent/DK1584685T3/da active
- 1999-02-02 CN CNB998046043A patent/CN1227360C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-02 DK DK99907476T patent/DK1053325T3/da active
- 1999-02-02 CA CA2584482A patent/CA2584482C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-02 EP EP99907476A patent/EP1053325B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-02 DK DK06075363.9T patent/DK1659179T3/da active
- 1999-02-02 AT AT06075362T patent/ATE462788T1/de active
- 1999-02-02 PT PT06075362T patent/PT1659178E/pt unknown
- 1999-02-02 DE DE69929310T patent/DE69929310T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-02 ES ES99907476T patent/ES2255248T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-02 CZ CZ20060442A patent/CZ298347B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-02-02 KR KR1020007008550A patent/KR100633212B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-02 AT AT06075363T patent/ATE513042T1/de active
- 1999-02-02 EP EP06075363A patent/EP1659179B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-02 DE DE69942214T patent/DE69942214D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-02 SI SI9931061T patent/SI1659179T1/sl unknown
- 1999-02-02 SI SI9931053T patent/SI1584685T1/sl unknown
- 1999-02-02 EP EP05076599A patent/EP1584685B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-02 SI SI9931044T patent/SI1659178T1/sl unknown
- 1999-02-02 AT AT05076599T patent/ATE505542T1/de active
- 1999-02-02 CA CA2319309A patent/CA2319309C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-02 KR KR1020067008476A patent/KR100824105B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-04 AR ARP990100475A patent/AR018064A1/es active IP Right Grant
- 1999-02-12 TW TW088102224A patent/TWI238853B/zh not_active IP Right Cessation
- 1999-05-16 SA SA99200126A patent/SA99200126B1/ar unknown
-
2000
- 2000-07-21 IL IL137442A patent/IL137442A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-08-04 NO NO20003958A patent/NO328507B1/no not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-03-07 CY CY20061100310T patent/CY1105685T1/el unknown
- 2006-11-02 IL IL179010A patent/IL179010A0/en unknown
-
2008
- 2008-01-17 IL IL188875A patent/IL188875A/en not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-04-27 NO NO20091665A patent/NO331719B1/no not_active IP Right Cessation
- 2009-05-18 JP JP2009120409A patent/JP2009201510A/ja active Pending
- 2009-12-17 US US12/640,306 patent/US8097257B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-03-12 US US12/722,691 patent/US8044183B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-06-10 CY CY20101100509T patent/CY1110180T1/el unknown
-
2011
- 2011-07-08 CY CY20111100663T patent/CY1111672T1/el unknown
- 2011-09-14 CY CY20111100885T patent/CY1111831T1/el unknown
- 2011-12-13 US US13/324,509 patent/US8597656B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CZ20002869A3 (cs) | Deriváty antigenů asociovaných s nádory z MAGE rodiny a sekvence nukleových kyselin kodující tyto deriváty, jejich použití pro přípravu fúzních proteinů a prostředků pro vakcinaci | |
ES2367998T3 (es) | Derivados antígenos asociados a tumores de la familia mage, y secuencias de ácidos nucleicos que los codifican, usados para la preparación de proteínas de fusión y de composiciones para vacunación. | |
MXPA00007677A (en) | Tumor-associated antigen derivatives from the mage family, and nucleic acid sequences encoding them, used for the preparation of fusion proteins and of compositions for vaccination | |
HK1093521B (en) | Tumor-associated antigen derivatives from the mage family, and nucleic acid sequences encoding them, used for the preparation of fusion proteins and of compositions for vaccination | |
HK1033838B (en) | Tumor-associated antigen derivatives from the mage family, and nucleic acid sequences encoding them, used for the preparation of fusion proteins and of compositions for vaccination | |
HK1083026B (en) | Tumor-associated antigen derivatives from the mage family, used for the preparation of fusion proteins with t-helper epitopes and of compositions for vaccination | |
HK1093522B (en) | A process for the purification or production of a mage protein | |
PL203658B1 (pl) | Bia lko fuzyjne zawieraj ace antygen kodowany przez rodzin e genów MAGE oraz jego zastosowanie, sekwencja kwasu nukleinowego i jego zastosowanie, wektor, komórka gospodarza i szczepionka | |
PL203645B1 (pl) | Pochodna antygenu zwi azanego z nowotworem z rodziny MAGE i jej zastosowanie, sekwencja kwasu nukleinowego i jego zastosowanie, wektor, komórka gospodarza, szczepionka, sposób oczyszczania bia lka MAGE albo jego pochodnej, oraz sposób wytwarzania szczepionki |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20150202 |