MXPA03003408A - Vacunas. - Google Patents

Abstract

La presente invencion proporciona formulaciones novedosas de auxiliar para utilizarse con antigenos de cancer. El auxiliar comprende una saponina y un oligonucleotido inmunoestimulante.

Description

VACUNAS DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención se refiere a una formulación novedosa que comprende una combinación de un antígeno de cáncer o derivado del mismo y una composición auxiliar combinada que comprende un oligonucleótido inmunoestimulante y una saponina. El antígeno de preferencia es un derivado Her 2 neu o un antígeno de próstata y consecuentemente las formulaciones de la invención tienen utilidad en el tratamiento y prevención de seres humanos que expresan tales antígenos. En una modalidad preferida, la composición auxiliar además comprende un lipopolisacárido. A pesar de ios enormes ingresos de recursos financieros y humanos, el cáncer permanece siendo una de las causas principales de muerte. Por ejemplo, el cáncer es la causa principal de muerte en mujeres entre las edades de 35 y 74 años. El cáncer de mama es la malignidad más común en mujeres y la incidencia para desarrollar cáncer de mama está en curso. Se estima que una de nueve mujeres será diagnosticada con la enfermedad. Aspectos estándares para curar cáncer de mama se han centrado alrededor de una combinación de cirugía, radiación y quimioterapia. Estos aspectos han dado como resultado algunos éxitos dramáticos en ciertas malignidades. Sin embargo, el cáncer de mama por lo general es casi incurable, cuando se diagnostica más allá de cierta etapa. Son necesarios aspectos alternativos para una diagnosis y terapia tempranas. Los oligonucleótidos inmunoestimuiantes que contienen dinucleótidos CpG no metilados ("CpG") son bien conocidos en la técnica como auxiliares cuando se administran tanto por rutas sistémica como mucosa (WO 96/02555, EP 468520, Davis y otros, J. Immunol, 1998 160(2):870-876; McCIuskie and Davis, J. Immunol., 1998, 16(9):4463-6). El CpG es la abreviatura para motivos de dinucleótido de citosina-guanosina presentes en el ADN. Históricamente, se ha observado que la fracción de ADN de BCG puede ejercer un efecto antitumoral. En más estudios, se mostró que los oligonucleótidos sintéticos derivados de secuencias del gen BCG son capaces de inducir efectos inmunoestimuiantes (tanto in vitro como in vivo). Los autores de estos estudios concluyeron que ciertas secuencias palindrómicas, incluyendo un motivo central CG, llevaban esta actividad. El papel principal del motivo CG en la inmunoestimulación fue posteriormente presentado en una publicación por Krieg, Nature 374, p546 1995. El análisis detallada ha mostrado que el motivo CG tiene que estar en cierto contexto de secuencia, y que tales secuencias son comunes en ADN bacteriano pero son raras en ADN de vertebrado. La secuencia inmunoestimulante es por lo general: purina, purina, C, G, pirimidina, pirimidina; en donde el motivo CG de dinucleótido no está metilado, pero otras secuencias de CpG no metiladas han mostrado ser inmunoestimuiantes y se pueden utilizar en la presente invención. En ciertas combinaciones de los seis nucleótidos, está presente una secuencia palindrómica. Varios de estos motivos, ya sea como repeticiones de un motivo o una combinación de diferentes motivos, , pueden estar presentes en el mismo oligonucleótido. La presencia de uno o más de estos oligonucleótidos que contienen una secuencia inmunoestimulante puede activar varios subgrupos inmunes, incluyendo células asesinas naturales (las cuales producen interferón ? y tienen actividad citolítica) y macrófagos (Wooldrige y otros Vol. 89 (no. 8), 1977). Aunque otras secuencias que contienen CpG no metilado no tienen esta secuencia de consenso, ahora han mostrado inmunomoduladoras. El CpG cuando se formula en vacunas, generalmente se administra en solución libre junto con antígeno libre (WO 96/02555; McCIuskie y Davis, supra) o covalentemente conjugado a un antígeno (publicación de PCT No. WO 98/16247), o formularse con un vehículo tal como hidróxido de aluminio ((antígeno de superficie de Hepatitis) Davis y otros, supra; Brazolot-Millan y otros, Proc. Nati. Acad. Sci., USA, 1998, 95(26), 15553-8). Las combinaciones auxiliares de la presente invención incluyen, en modalidades preferidas, por lo menos un auxiliar derivado de lipopolisacárido enterobacteriano. Durante mucho tiempo se ha sabido que el lipopolisacárido enterobacteriano (LPS) es un potente estimulante del sistema inmune, aunque su uso en auxiliares ha sido restringido por sus efectos tóxicos. Un derivado no tóxico de LPS, lípido A de monofosforilo (MPL), producido a través de la remoción del grupo carbohidrato de núcleo y el fosfato de la glucosamina de extremo reducido, ha sido descrito por Ribi y otros (1986, Immunoiogy and Immunopharmacology of bacterial endotoxins, Plenum Publ. Corp., NY, pág. 407-419), y tiene la siguiente estructura: Una versión dextosificada adicional de MPL resulta de la remoción de la cadena de acilo de la posición 3 de la estructura de base del disacárido, y se denomina como lípido A de monofosforilo 3- O-desacetilado (3D-MPL). Este puede ser purificado y preparado a través de los métodos enseñados por GB 2122204B, cuya referencia también describe la preparación del lípido A de difosforilo, y sus variantes 3-O-desacetiladas. Una forma preferida de 3D-MPL está en la forma de una emulsión que tiene un tamaño de partícula pequeño menor que 0.2 µ??-en diámetro, su método de fabricación se describe en WO 94/21292. En WO 98/43670A2 se han descrito formulaciones acuosas que comprenden lípido A de monofosforilo y un agente tensoactivo. Los auxiliares derivados de lipopolisacárido bacteriano que serán formulados en las combinaciones auxiliares de la presente invención pueden ser purificados y procesados a partir de fuentes bacterianas, o alternativamente pueden ser sintéticos. Por ejemplo, el lípido A de monofosforilo purificado se describe por Ribi y otros, 1986 (supra), y el lípido A de monofosforilo o difosforilo 3-0-desacilado derivado de Salmonella sp. se describe en GB 2220211 y US 4912094. Otros lipopolisacáridos purificados y sintéticos han sido descritos WO 98/01139; US 6,005,099 y EP 0 729 473 B1; Hilgers y otros, 1986, Int. Arch. Allergy Immunol, 79(4): 392-6; Hilgers y otros, 1987, Immunology, 60(1 ):141-6; y EP 0 549 074 B1). Los auxiliares de lipopolisacárido bacteriano particularmente preferidos son 3D-MPL y los ß(1 -6)glucosamina-disacáridos descritos en US 6,005,099 y EP 0 729 473 B1. Por consiguiente, los derivados de LPS que pueden ser utilizados en la presente invención son aquellos inmunoestimulantes que son similares en estructura a aquellos de LPS o MPL o 3D-MPL. En otro aspecto de la presente invención, los derivados de LPS pueden ser un monosacárido acilado, el cual es una sub-porción de la estructura anterior de MPL. Un auxiliar de disacárido preferido es un lípido A purificado o sintético de la siguiente fórmula: en donde R2 puede ser H o P03H2; R3 puede ser una cadena acilo < ß-hidroximiristoilo o un residuo de 3-aciloxiacilo que tiene la fórmula O II en donde R4 = R - -C-ÍCH^AT-CH,. y en donde X e Y tienen un valor de 0 hasta 20. Las combinaciones de 3D-MPL y auxiliares de saponina derivados de la corteza de Qui I laja Saponaria molina han sido descritos en EP 0 761 231B. WO95/17210 describe un sistema de emulsión de auxiliar basado en escualeno, a-tocoferon y monooleato de polioxietilensorbitán (TWEEN80), formulado con el inmunoestímulante QS21, opcionalmente con 3D-MPL.

Se sabe que las saponinas son auxiliares en vacunas para administración sistémica. El auxiliar y la actividad hemolitica de saponinas individuales han sido extensamente estudiados en la técnica (Lacaile-Dubois y Wagner, supra). Por ejemplo, Quil A (derivado de la corteza del árbol de América del Sur Quillaja Saponaria Molina), y sus fracciones, se describen en US 5,057,540 y "Saponins as vaccine adjuvants", Kensil, C. R. , Crit Rev Ther Drug Carrier Sist., 1996, 12 (1-2):1-55; y EP 0 362 279 B1. Se han estudiado estructuras particulares, denominadas Complejos I nmunoestimulantes (ISCOMS), comprendiendo fracciones de Quil A que son hemolíticas, en la fabricación de vacunas (Morein, B., EP 0 109 942 B1). Se ha reportado que estas estructuras tienen actividad auxiliar (EP 0 109 942 B1; WO 96/11711). Las saponinas hemolíticas QS21 y QS17 (fracciones de Quil A purificas por HPLC) han sido descritas como potentes auxiliares sistémicos, y el método de su producción se describe en la patente de E. U. A. No. 5,057,540 y en EP 0362279B1. También en estas referencias se describe el uso de QS7 (una fracción no hemolitica de Quil-A), el cual actúa como un potente auxiliar para vacunas sistémicas. El uso de QS21 se describe además por Kensil y otros, (1991, J. Immunology, vol. 146, 431-437). También se conocen combinaciones de QS21 y polisorbato o ciclodextrina (WO 99/10008). Los sistemas auxiliares en partículas que comprenden fracciones de Quil A, tales como QS21 y QS7 se describen en WO 96/33739 y WO 96/11711.

Otras saponinas que han sido utilizadas en estudios de vacunación sistémica incluyen aquellas derivadas de otras especies vegetales tales como Gypsophila y Saponaria (Bomford y otros, Vaccine, 10(9):572-577, 1992). También se sabe que las saponinas han sido estudiadas en estudios de vacunas aplicados en la mucosa, los cuales han tenido éxito variable en la inducción de respuestas inmunes. La saponina Quil-A previamente ha mostrado no tener ningún efecto sobre la inducción de una respuesta inmune cuando el antígeno administrado intranasalmente (Gizurarson y otros, 1994, Vaccine Research 3, 23-29). Mientras tanto, otros autores han estudiado este auxiliar con éxito (Maharaj y otros, Can. J. Microbiol, 1986, 32(5):414-20; Chavali y Campbell, Immunobiology, 174(3):347-59). Los ISCOMs que comprenden la saponina Quil A han sido estudiados en formulaciones de vacunas intragástricas e intranasales y exhibieron una actividad auxiliar (Mcl Mowat y otros, 1991, Immunology, 72, 317-322; Mcl Mowat and Donachie, Immunology Today, 12, 383-385). QS21, la fracción no tóxica de Quil A, también ha sido descrita como un auxiliar oral o intranasal (Sumino y otros, J. Virol., 1998, 72(6):4931-9; WO 98/56415). Las saponinas son enseñadas por Lacaille-Dubois, M y Wagner H. (1996, una revisión de las actividades biológicas y farmacológicas de saponinas, Phytomedicine, vol. 2, págs. 363-386). Las saponinas son esferoides o glicósidos de triterpeno ampliamente distribuidos en los reinos vegetal y animal marino. Las saponinas se caracterizan por la formación de soluciones coloidales en agua, las cuales hacen espuma al agitarse, y precipita colesterol. Cuando las saponinas están cerca de membranas celulares, estas crean estructuras de tipo poro en las membranas, las cuales hacen que la membrana reviente. La hemolisis de eritrocitos es un ejemplo de este fenómeno, el cual es una propiedad de ciertas, pero no de todas las saponinas. La presente invención se refiere al hallazgo sorprendente de que los oligonucleótidos inmunoestimulantes (CpG) y saponina y opcionalmente una combinación de lipopolisacárido con auxiliares extremadamente potentes. Por consiguiente, se proporciona una combinación de vacuna que comprende una combinación de saponina y un oligonucleótido inmunoestimulante y opcionalmente un lipopolisacárido, con un antígeno de cáncer o derivado del mismo. En una modalidad preferida, la formulación auxiliar comprende una saponina, preferiblemente QS21, un oligonucleótido inmunoestimulante, y una 3D-MPL. Preferiblemente, la vacuna de la presente invención además puede comprender un vehículo. En una forma preferida de la presente invención, los oligonucleótidos en las composiciones de auxiliar y de vacuna actúan sinerg ísticamente con la saponina/lipopolisacárido combinados en la inducción de respuestas inmunes específicas a antígeno conduciendo a la regresión mejorada del tumor. Las formulaciones son potentes en la inducción de respuestas inmunes convencionalmente asociadas con el sistema inmune de tipo Th1. De esta manera, las combinaciones de auxiliar no solamente son adecuadas para la inmunoprofilaxis de enfermedades, sino que también para la inmunoterapia de enfermedades tales como cáncer. Las formulaciones contienen un antígeno anti-tumoral y son útiles para el tratamiento inmunoterapéutico de cánceres. Por ejemplo, la formulación de auxiliar encuentra utilidad con antígeno de rechazo de tumor tales como aquellos para cánceres de próstata, de mama, colo-rectal, de pulmón, pancreático, renal o melanoma. Los antígenos ilustrativos incluyen MAGE 1, 3 y MAGE 4, u otros antígenos MAGE tales como los descritos en WO 99/40188, PRAME, BAGE, Lage (también conocida como NY eos 1) SAGE .y Hage (WO 99/53061) o GAGE (Robbins and Kawakami, 1996, Current Opinions in Immunology 8, pps 628-636; Van den Eunde y otros, International Journal of Clinical & Laboratory Research (submitted 1997); Corréale y otros (1997), Journal of the National Cáncer Institute 89, p293. En realidad estos antígenos son expresados en una amplia variedad de tipos de tumores tales como melanoma, carcinoma de pulmón, sarcoma y carcinoma de vejiga. Los antígenos de MAGE para utilizarse en la presente invención pueden ser expresados como una proteína de fusión con un mejorador de expresión o un patrón de fusión inmunológica. En una modalidad de la presente invención, el derivado es una proteína de fusión que comprende un antígeno de la familia de la proteína MAGE enlazado a un patrón heterólogo, preferiblemente MAGE 3. Las proteínas pueden ser químicamente conjugadas, pero de preferencia son expresadas como proteínas de fusión recombinantes permitiendo la producción de niveles elevados en un sistema de expresión según comparado con una proteína no fusionada. De esta manera, el patrón de fusión puede ayudar a proporcionar epítopes auxiliares T (patrón de fusión inmunológ ico), preferiblemente epítopes auxiliares T reconocidos por seres humanos, o ayudar en la expresión de la proteína (mejorador de expresión) a rendimientos más altos que la proteína recombinante nativa. De preferencia, el patrón de fusión será tanto un patrón de fusión inmunológica como un patrón mejorador de expresión. En una forma preferida de la invención, el patrón de fusión inmunológica se deriva de la proteína D, una proteína de superficie de la bacteria gram-negativa, Haemophilus influenza B (W091/18926). Preferiblemente, en derivado de proteína D comprende aproximadamente el primer tercio de la proteína, y en particular aproximadamente los primeros 100-110 aminoácidos N-terminales. De preferencia, el derivado de proteína D está lipidado. De preferencia, los primeros 109 residuos del patrón de fusión de la lipoproteína D están incluidos en el término N para proporcionar el antígeno candidato de vacuna con epítopes de célula T exógenos adicionales e incrementar el nivel de expresión en E-coli (actuando así también como un mejorador de expresión). La cola de lípido asegura una presentación óptima del antígeno a células de presentación de antígeno. Otros patrones de fusión incluyen la proteína no estructural del virus de influenzae, NS1 (hemaglutinina). Típicamente, se utilizan los 81 aminoácidos N-terminales, aunque se pueden utilizar diferentes fragmentos siempre que estos incluyen epítopes auxiliares T. En otra modalidad, el patrón de fusión inmunológica es la proteína conocida como LYTA. Preferiblemente, se utiliza la porción C-terminal de la proteína. Lyta se deriva de Streptococcus pneumoniae, que sintetiza una N-acetil-L-alanina-amidasa, amidasa LYTA (codificada por el gen lytA {Gene, 43 (1986) págs. 265-272} una autolisina que específicamente degrada ciertos enlaces en la estructura de base de peptidoglican. El dominio C-terminal de la proteína LYTA es responsable de la afinidad a la colina o a algunos análogos de colina tales como DEAE. Esta propiedad ha sido explotada para el desarrollo de plásmidos de expresión de C-LYTA de E. coli útiles para la expresión de proteínas de fusión. La purificación de proteínas híbridas conteniendo el fragmento C-LYTA en su término amino ha sido descrita {Biotechnology: 10, (1992) pág. 795-798}. Como se utiliza aquí, una modalidad preferida usa la porción de repetición de la molécula Lyta encontrada en el extremo C-terminal empezando en el residuo 178. Una forma particularmente preferida incorpora los residuos 188-305. Los patrones de fusión inmunológica observados anteriormente también son ventajosos para ayudar a la expresión. En particular, tales fusiones son expresadas a rendimientos más altos que las proteínas de MAGE recombinantes nativas. Dichas construcciones se describen en WO 99/40188.

Otros antígeno específicos de tumor son adecuados para utilizarse con los auxiliares de la presente invención e incluyen, pero no se limitan a, gangliósidos específicos de tumor tales como GM 2 y G 3 o conjugados de los mismos para lievar proteínas; o el antígeno puede ser una hormona de péptido independiente tal como la hormona de liberación de la hormona de gonadotrofina de longitud completa (GnRH, WO 95/20600), un péptido de 10 aminoácidos de longitud corta, útil en el tratamiento de muchos cánceres, o en inmunocastración. En una modalidad preferida adicional, se utilizan otros antígenos de próstata, tales como el antígeno específico de próstata (PSA), PAP, PSCA 95(4) 1735-1740 1998), PSMA o, en una modalidad preferida, un antígeno conocido como prostasa. La prostasa es una proteasa de cerina específica de próstata (de tipo tripsina), con una longitud de 254 aminoácidos, con una triada catalítica de proteasa de cerina conservada, H-D-S, y una secuencia de pre-propéptido amino-terminal, indicando una función de secreción potencial (P. Nelson, Lu Gan, C. Ferguson, P. Moss, R. Gelinas, L. Hood & K. Wand "Molecular cloning and characterisation of prostase, and androgen-regulated serine protease with prostate restricted expresión", In Proc. Nati. Acad. Sci. USA (1999) 96, 3114-3119). También se ha descrito un sitio de glicosilación putativo. La estructura pronosticada es muy similar a otras proteasas de serina conocidas, mostrando que el polipéptido maduro se duplica en un dominio individual. La proteína madura tiene una longitud de 224 aminoácidos, con un epítope A2 mostrado como naturalmente procesado. La secuencia de nucleótido de prostasa y la secuencia de polipéptido deducida y homólogos se describen por Ferguson y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 1999 96, 3114-3119) y en las solicitudes de patente internacional No. 98/12302 (y también la patente otorgada correspondiente de E. U. A. 5,955,306), WO 98/20117 (y también las patentes otorgadas correspondientes E. U. A. 5,840,871 y E. U. A. 5,786,148) (calilcreína específica de próstata) y WO 00/04149 (P703P). La presente invención proporciona formulaciones que comprenden fusiones de proteína de proteasa basándose en la proteína de proteasa y fragmentos y homólogos de la misma ("derivado"). Dichos derivados son adecuados para utilizarse en formulaciones de vacunas terapéuticas, las cuales son adecuadas para el tratamiento de tumores de próstata. Típicamente, el fragmento contendrá por lo menos 20, de preferencia 50, muy preferiblemente 100 aminoácidos contiguos como se describió en la patente y solicitudes de patente anteriormente mencionadas. En una modalidad se proporciona un antígeno de proteasa mutada, en donde la mutación ocurre en el sitio activo de la proteína. El derivado de antígeno de prostasa o sus fragmentos y homólogos llevan una mutación en el sitio activo de la proteína, para reducir substancialmente, o de preferencia eliminar su actividad biológica de proteasa. Las mutaciones preferidas involucran reemplazar los residuos catalíticos de histidina y aspartato de la proteasa de cerina. En una modalidad preferida, la prostasa contiene una mutación de histidina-alanina en el sitio activo, por ejemplo, en el residuo 71 de la secuencia de prostasa Ferguson y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 1999 96, 3114-3119). Expresamente se contempla la mutación correspondiente en proteínas homologas, por ejemplo, como se describe en WO00/041949. Por ejemplo, esta mutación corresponde a la posición 43 en P703P. Esta mutación puede conducir a una disminución importante en la eficiencia catalítica (expresada, en actividad específica enzimática) de la proteína. Preferiblemente, la reducción en la eficiencia catalítica es de por lo menos un factor de 103, muy preferiblemente por lo menos un factor de 106. La proteína que ha experimentado una mutación de histidina-alanina, de aquí en adelante se denomina como * (estrella). En una modalidad, la prostasa ya sea mutada o no mutada, es parte de una proteína de fusión, comprendiendo la prostasa asociada con tumor o fragmentos u homólogos de la misma, y una proteína heteróloga o una parte de una proteína que actúa como un patrón de fusión. La proteína y el patrón de fusión pueden ser químicamente conjugados, pero de preferencia son expresados como proteínas de fusión recombinante en un sistema de expresión heterólogo. En una modalidad preferida de la invención, se proporciona una proteína de fusión de prostasa o fragmento u homólogos de la misma, enlazada a un patrón de fusión inmunológico puede ayudar a proporcionar epítopes auxiliares T. De esta manera, el patrón de fusión puede actuar a través de un efecto auxiliar circunstante en lazado a la secreción de señales de activación a través de un gran número de células T específicas a la proteína o péptido extraño, mejorando así la inducción de inmunidad al componente de prostasa según comparado con la proteína no fusionada. De preferencia, el patrón heterólogo se selecciona para poder ser reconocido por células T en la mayoría de los seres humanos. En otra modalidad, la invención proporciona una proteína de prostasa o fragmento u homólogos de la misma, enlazada a un patrón de fusión que actúa como un mejorar de expresión. De esta manera, el patrón de fusión puede ayudar a la expresión de prostasa en un sistema heterólogo, permitiendo la producción de niveles incrementados en un sistema de expresión según comparado con la proteína recombinante nativa. Preferiblemente, el patrón de fusión será tanto un patrón de fusión inmunológica como un patrón mejorador de expresión. Por consiguiente, la presente invención proporciona proteínas de fusión comprendiendo una prostasa específica de tumor mutada o un fragmento de la misma, enlazada a un patrón de fusión. De preferencia, el patrón de fusión está actuando tanto como un patrón de fusión inmunológica como un patrón mejorador de expresión. Por consiguiente, en una forma . preferida de la invención, el patrón de fusión es la proteína no estructural del virus de influenzae, NS1 (hemaglutinina) o un fragmento de la misma. Típicamente, se utilizan los 81 aminoácidos N-terminales, aunque se pueden utilizar diferentes fragmentos provistos, los cuales incluyen epitopes auxiliares T (C. Hackett, D. Horowitz, M. Wysocka & S. Dillon, 1992, J. Gen. Virology, 73, 1339-1343. Cuando NS1 es el patrón de fusión inmunológico, este tiene la ventaja adicional de que permite producciones de expresión más altas. En particular, tales fusiones son expresadas a niveles mucho más altos que las proteínas de prostasa recombinante nativas. En una modalidad muy preferida, la proteína de fusión comprende los 81 aminoácidos N-terminales de NS1, proteína no estructural, fusionada a los 5 a 226 aminoácidos carboxi-terminales. Los patrones de expresión alternativos incluyen, por ejemplo, la proteína D y sus fragmentos, y C-Lyta, según utilizados en el contexto de antígenos AGE. Un antígeno de próstata preferido adicional es conocido como P501S, secuencia IDNO 113 de WO 98/37814. Los fragmentos inmunogénicos y sus porciones que comprenden por lo menos 20, de preferencia 50, muy preferiblemente 100 aminoácidos contiguos son como se describieron en la solicitud de patente anterior. Ver, por ejemplo, PS108 (WO 98/50567). Otros antígenos específicos de próstata son conocidos de WO 98/37418 y WO/004149. Otro es STEAP PNAS 96 14523 14528-7-12 1999. Otros antígenos asociados con tumor útiles en el contexto de la presente invención incluye Plu-1 J. Biol. Chem 274 (22) 15633-15645, 1999, HASH-1, HasH-2, Cripto (Salomón y otros, Bioessays 199, 21 61-70, patente de E. U. A. 5654140) Criptin patente de E. U. A. 5,981 215. Además, los antígenos particularmente importantes para vacunas en la terapia de cáncer también comprenden tirosinasa y survivina. Los péptidos derivados de mucina, tales como ud, se pueden encontrar en, por ejemplo, E. U. A. 5744,144 E. U. A. 5827, 666 WO 8805054, E. U. A. 4,963,484. Específicamente contemplados son péptidos derivados de Mud que comprenden por lo menos una unidad de repetición del péptido Mud, preferiblemente en por lo menos dos de estas repeticiones y que se reconocen por el anticuerpo SM3 (E. U. A. 6,054,438). Otros péptidos derivados de mucina incluyen el péptido de Muc 5. La presente invención también es útil en una combinación con antígenos de cáncer de mama tales como Her 2 neu, mamaglobina (patente de E. U. A. 5668267) o aquellos descritos en WO/00 52165, W099/33869, W099/19479, W098/45328. Los antígenos de Her 2 neu se describen, entre otros, en la patente de E. U. A. 5,801,005. Preferiblemente, el Her 2 neu comprende el dominio extracelular completo (comprendiendo alrededor del 1-645 aminoácidos) o sus fragmentos, y por lo menos una porción inmunogénica de o todo el dominio intracelular, aproximadamente (los 580 aminoácidos C-terminales. En particular, la porción intracelular debe comprender el dominio de fosforilación o sus fragmentos. Dichas construcciones se describen en WO 00/44899. Una construcción particularmente preferida se conoce como ECD PD, y una segunda es conocida como ECD APD ver WO 00/44899. La Her 2 neu, como se utiliza en la presente, puede derivarse de rata, ratón o ser humano. El antígeno Her 2 neu puede ser el antígeno completo de Her 2 neu de un dominio de transmembrana funcional o sus porciones. Las porciones preferidas comprenden el domino extracelular. En una modalidad muy preferida, se proporciona una proteína de fusión que comprende un dominio extracelular enlazado a una porción del dominio intracelular, como se describe en WO 00/44899 (e incorporada aquí por referencia). La presente invención está dirigida a formulaciones capaces de modular, de preferencia a producir o mejorar, la inmunidad para el producto de proteína de la expresión de oncogén Her 2 neu, incluyendo para malignidades en un animal de sangre caliente en donde un gen Her 2 neu amplificado con una malignidad, no requiere que el producto de expresión de proteína del gen esté presente en el tumor. Por ejemplo, la sobre-expresión del gen puede estar involucrada con el inicio y etapas tempranas de la formación del tumor, pero la expresión de proteína subsecuentemente puede ser reducida o quedar ausente. La presente invención puede ser utilizada para producir o mejorar una respuesta inmune efectiva para convertir un tumor positivo a Her 2 neu a un negativo a Her 2 neu, además de evitar el establecimiento de tumores positivos Her 2 neu y provocar la regresión de tumores positivos a Her 2 neu existentes. Se utilizaron la siguientes abreviaturas a través de toda la especificación: "ECD" se refiere al dominio extracelular, "ICD" se refiere al dominio intracelular, "PD" se refiere al dominio de fosforilación (es decir, el dominio que está fosforilado) que está dentro del dominio intracelular, "APD" se refiere a un fragmento del dominio de fosforilación que está dentro del dominio de fosforilación, y "KD" se refiere al dominio de cinasa que está dentro del dominio intracelular. El producto de expresión del gen Her 2 neu se denomina aquí como la "proteína Her 2 neu", también conocida y denominada como "p185" o "c-erbB2". La "proteína de fusión de Her 2 neu ECD-ICD", también se denomina aquí como "ECD-ICD" o "proteína de fusión ECD-ICD", se refiere a una proteína de fusión (o sus fragmentos) comprendiendo el dominio extracelular (o sus fragmentos) y el dominio intracelular (o sus fragmentos) de la proteína Her 2 neu. Estos representan los antígenos preferidos para utilizarse en el contexto de la presente invención. Como se utiliza aquí, la proteína de fusión ECD-ICD no incluye una porción substancial del dominio de transmembrana Her 2 neu y de preferencia no incluye ningún dominio de transmembrana Her 2 neu. Los términos "proteína de fusión Her 2 neu ECD-ICD" y "proteína de fusión Her 2 neu ECD-PD" y sus términos relacionados también se entiende que se refiere a fragmentos de los mismos, homólogos para los mismos y sus equivalentes funcionales (colectivamente denominados como "variantes"), tales como aquellos en donde uno o más aminoácidos que, en modalidades preferidas de la invención, tanto (i) incrementan la producción o mejoramiento de una respuesta inmune según comparado con la proteína Her 2 neu, o (¡i) no afecta substancialmente la producción o mejoramiento de una respuesta inmune según comparado con la proteína Her 2 neu (por ejemplo, la variante estimula una respuesta por células T auxiliares o células T citotóxicas o estimula la producción de anticuerpo). Los ejemplos específicos no limitantes de variantes incluyen fragmentos ilustrativos, homólogos y equivalentes funcionales de la proteína de fusión Her 2 neu ECD-ICD, y la proteína de Her 2 neu ECD-PD se describe con mayor detalle aquí. Las variantes pueden ser "substancialmente idénticas" o "substancialmente similares" a una proteína de fusión que comprende componentes de polipéptido nativo, y retiene la habilidad para estimular una respuesta inmune. El Her 2 neu PD tiene una longitud de 268 aminoácidos, es intracelular, y puede ser fosforilado a través de cinasas de tirosina de proteína. La región no comparte ninguna identidad con la parte correspondiente de otros receptores de cinasa de tirosina. De esta manera, el carácter específico y la individualidad de este dominio hace que sea particularmente preferido para utilizarse como una vacuna de tumor. Sin embargo, la expresión de este dominio sólo en células bacterianas y de mamífero es problemática. Por ejemplo, la proteína PD resultante es muy lábil y no es apropiada para la producción a gran escala. En una modalidad, esta invención de esta manera preferiblemente utiliza una fusión que comprende todo o parte del dominio intracelular o el dominio de fosforilación para todo o parte del dominio extraceluiar de Her 2 neu. Las proteínas de fusión ECD-ICD y las proteínas de fusión ECD-PD de la invención son solubles, son secretadas y son estables en medios de cultivo. Las vacunas de la invención serán útiles contra cualquier cáncer caracterizado por expresión de antígeno asociado con tumor, tal como la expresión de Her 2 neu. Además de permitir la expresión incrementada del dominio intracelular o dominio de fosforilación, o sus variantes, como una proteína de fusión con ei domino extraceluiar o sus variantes, las proteínas de fusión ECD-ICD y ECD-PD proporcionan una formulación mejorada de vacuna. Por consiguiente, la presente invención proporciona una formulación de vacuna que comprende una composición auxiliar, el auxiliar comprendiendo una saponina y un oligonucleótido inmunoestimulante y un antígeno Her 2 neu carente de este dominio de transmembrana. La molécula Her 2 neu, puede ser de rata, ratón, humana o un híbrido de los mismos. De preferencia, la molécula her 2 comprende substancialmente todo el dominio extraceluiar. Por substancialmente todo, se quiere dar a entender que no más de 100 aminoácidos son eliminados del dominio extraceluiar, de preferencia menos de 75, muy preferiblemente menos de 50 aminoácidos. Se prefiere que todo el dominio extraceluiar esté presente. El dominio extraceluiar en la construcción humana de Her 2 neu de la presente invención, de preferencia comprende substancialmente los 600 aminoácidos N-terminales, de preferencia los 630 aminoácidos N-terminales, y muy preferiblemente alrededor de 650 aminoácidos. La ICD humana va del aminoácido 676 hasta Val 1255. El dominio de fosforilación está ubicado en la porción N-terminal de la ICD. Se prefiere que las construcciones utilizadas en la presente invención comprendan el dominio de fosforilación, pero no incluyen un dominio de transmembrana funcional. Preferiblemente, el dominio de transmembrana es eliminado totalmente. Las construcciones que son particularmente adecuadas para utilizarse en la presente invención se describen en WO/0044899. Es una modalidad preferida que el antígeno Her 2 neu sea formulado con 3D-MPC, QS21 y el oligonucleótido CpG junto con un liposoma o vehículo de emulsión de aceite en agua. Dichas formulaciones producen una respuesta mediata tanto humoral como celular. En comparaciones con formulaciones de auxiliares que comprenden justamente QS21 y 3D-MPL, la formulación de la invención aduce, en ratones, ventajosamente una respuesta TH1 más fuerte. Las formulaciones solamente con CpG no producen una respuesta inmune mediada celular importante. Las formulaciones pueden contener antígenos asociados con mecanismos de soporte de tumor (por ejemplo, angiogénesis, invasión de tumor), por ejemplo, la unión 2, VEGF. Los oligonucleótidos preferidos para utilizarse en auxiliares o vacunas de la presente invención de preferencia contienen dos o más motivos de CpG de dinucleótido separados por lo menos por 3, muy preferiblemente al menos 6 o más nucleótidos. Los oligonucleótidos de la presente invención son típicamente desoxinucleótidos. En una modalidad preferida, el internucleótido en el nucleótido es fosforoditioato, o muy preferiblemente un enlace de fosforotioato, aunque el fosfodiéster y otros enlaces de internucleótido están dentro del alcance de la invención, incluyendo oligonucleótidos con enlaces de internucleótido mezclados. Los métodos para producir oligonucleótidos de fosforotioato o fosforoditioato se describen en patente de E. U. A. 5,666,153, patente de E. U. A. 5,278,302 y WO 95/26204. Ejemplos de oligonucleótidos preferidos tienen las siguientes secuencias. Las secuencias de preferencia contienen enlaces de internucleótidos modificados con fosforotioato. OLIGO 1 (SEC ID NO:1): TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (CpG 1826) OLIGO 2 (SEC ID NO:2): TCT CCC AGC GTG CGC CAT (CpG 1758) OLIGO 3 (SEC ID NO:3) ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACG OLIGO 4 (SEC ID NO:4): TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (CpG 2006) OLIGO 5 (SEC ID NO:5): TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT (CpG 1668) Los oligonucleótidos de CpG alternativos pueden comprender las secuencias preferidas anteriores ya que tienen eliminaciones inconsecuenciales o adiciones a las mismas. Los oligonucleótidos de CpG utilizados en la presente invención pueden ser sintetizados a través de cualquier método conocido en la técnica (por ejemplo, EP 468520). Convenientemente, tales oligonucleótidos pueden ser sintetizados utilizando un sintetizador automático. Estos típicamente tienen una longitud de entre 10-50 bases. Los oligonucleótidos utilizados en la presente invención son típicamente desoxinucleótidos. En una modalidad preferida, el enlace de internucleótido en el oligonucleótido es fosfoditioato, o muy preferiblemente un enlace de fosforoditioato, aunque los fosforodiéstes están dentro del alcance de la presente invención. Se contemplan oligonucleótidos que comprenden diferentes enlaces de internucleótido, por ejemplo, fosfodiésteres de fosforotioato mixtos. Se pueden utilizar otros enlaces de internucleótido, los cuales estabilizan al oligonucleótido. Las saponinas que pueden ser utilizadas en las combinaciones auxiliares de la presente invención incluyen aquellas derivadas de la corteza de Quillaja Saponaria Molina, denominada Quil A, y sus fracciones, como se describen en la patente de E. U. A. 5,057,540 y en "Saponins as vaccine adjuvants", Kensil, C. R., Crit. Rev Ther Drug Carrier Sist., 1996, 12 (1 -2): 1-55; y EP 0 362 279 B1. Las fracciones particularmente preferidas de Quil A son QS21, QS7 y QS17. La ß-Escina es otra de las saponinas emolíticas preferidas para utilizarse en las composiciones auxiliares de la presente invención. La escina se describe en Merck índex (12o. ed. Entry 3737) como una mezcla de saponinas de existencia en las semillas del árbol de castaña de indias Lat: Aesculus hippocastanum . Su aislamiento se describe a través de cromatografía y purificación (Fiedler, Arzneimittel-Forsch, 4,213 (1953)), y a través de resinas de intercambio de ión (Erbring y otros, patente de E. U. A. 3,238,190). Las fracciones escina, a y ß han sido purificadas y han mostrado ser biológicamente activas (Yoshikawa M. y otros, (Chem. Pharm Bull (Tokio) 1996 Agosto; 44(8): 1454-1464)) . La ß-escina también es conocida como aescina. Otra saponina emolítica preferida para utilizarse en la presente invención es digitonina. La digitonina se describe en Merck index (12o. Edición, entry 3204) como una saponina que se deriva de las semillas de Digitalis purpurea y se purifica de acuerdo con el procedimiento descrito por Gisvold y otros, J. Am. Pharm. Assoc, 1934, 23, 664; y Ruhenstroth-Bauer, Physiol. Chem., 1955, 301, 621. Su uso se describe como siendo un reactivo clínico para la determinación de colesterol. Las combinaciones de auxiliar de la presente invención además pueden comprender un vehículo, de manera que la saponina o CpG, o el lipopolisacárido se pueden asociar con una entidad de vehículo en partículas para mejorar la capacidad de auxiliar de la combinación. Las vacunas sistémicas particularmente preferidas, por ejemplo, comprenden una molécula de vehículo. La CpG utilizada en combinaciones de auxiliar de la presente invención puede estar en solución libre o puede estar en complejo con vehículos en partículas tales como sales minerales (por ejemplo, pero no se restringe a sales de aluminio o calcio), liposomas, ICSOMs, emulsiones (de aceite en agua, agua en aceite, agua en aceite en agua), polímeros (tales como pero no limitándose a polilácticos, poliglicólicos, polifosfacina, poliaminoácido, alginato, quitosán), o micropartículas. De preferencia, tales vehículos son catiónicos. Las vacunas de la presente invención además comprenden un antígeno que puede estar asociado con el complejo de CpG-vehículo, o no pueden estar asociadas con el complejo de CPG-vehículo. En este caso, el antígeno puede estar libre en suspensión o asociado con un vehículo separado. Las saponinas que forman parte de la presente invención pueden estar separadas en la forma de micelas, o pueden estar en la forma de estructuras ordenas grandes tales como ISCOMs (EP 0 109 942 B1) o liposomas (WO 96/33739) cuando se formulan con colesterol y lípido, o en la forma de una emulsión de aceite en agua (WO 95/17210). Las saponinas de preferencia pueden estar asociadas con una sal metálica, tal como hidróxido de aluminio o fosfato de aluminio (WO 98/15287). Alternativamente, la saponina puede estar asociada con un vehículo en partículas tal como quitosán. La saponina también puede estar en un estado seco tal como un polvo. Las formulaciones finales en la forma como son administradas a la superficie de la mucosa de la vacuna preferiblemente son hemolíticas por naturaleza. La saponina puede o no estar asociada físicamente con el antígeno ya sea a través de un enlace directo o a través de co-interacción con la misma molécula de vehículo en partículas (GB9822712; WO 98/16247). La CpG y la saponina y el lipopolisacárido en los auxiliares o vacunas de la presente invención por sí mismos pueden estar separados o asociados. Por ejemplo, la CpG y la saponina pueden estar libres en suspensión o pueden estar asociadas a través de un vehículo, muy preferiblemente un vehículo en partículas tal como hldróxido de aluminio o a través de un liposoma catiónico o ISCOM.

Una combinación de auxiliar preferida de acuerdo con la presente invención está compuesta de uno o más oligonucleótidos de CpG conteniendo por lo menos 3, de preferencia por lo menos 6 nucleótidos entre dos motivos CG adyacentes, junto con QS21 y un vehículo en partículas seleccionado del grupo que comprende una emulsión de aceite en agua o DQ. Se prefiere que el lipopolisacárido sea un derivado de lípido di- o monofosforilo, de preferencia 3-des-o-acilado, en particular lípido A de monofosforilo 3-des-o-acilado. Muy preferiblemente, la combinación de auxiliar comprende CpG 2006 (SEC ID NO:4), o CpG 1758 (SEC ID NO:2) o CpG 1826 CpG 1826 (SEC ID NO:1) mezclado con QS21, y un vehículo en partículas seleccionado del grupo que comprende una emulsión de aceite en agua o DQ. Por consiguiente, las vacunas particularmente preferidas, por ejemplo, comprenden tales combinaciones de auxiliar y un antígeno. La vacuna preferida de la presente invención se utiliza para generar respuestas inmunes sistémicas después de administrarse a un individuo a través de la ruta sistémica. Las combinaciones de auxiliar de la presente invención pueden comprender una emulsión a base de aceite. Durante muchos años se han conocido los auxiliares de emulsión de aceite, incluyendo el trabajo en auxiliares de emulsión de aceite mineral completo e incompleto de Freund. Desde ese tiempo mucho trabajo fue realizado para diseñar alternativas estables más toleradas para estas formulaciones de auxiliar, potentes pero reactogénicas. Se han descrito muchos sistemas de emulsión de fase individual o de fases múltiples. Se han sugerido auxiliares de emulsión de aceite en agua per se como útiles para composiciones de auxiliar (EP O 399 843B), también se han descrito combinaciones de emulsiones de aceite en agua y otros agentes activos como auxiliares para vacunas (WO 95/17210; WO 98/56414; WO 99/12565; WO 99/11241). Se han descrito otros auxiliares de emulsión en aceite, tales como emulsiones de agua en aceite (patente de E. U. A. 5,422,109; EP 0 480 982 B2) y emulsiones de agua en aceite en agua (patente de E. U. A. 5,424,067; EP 0 480 981 B). Los auxiliares de emulsión de aceite para utilizarse en la presente invención pueden ser naturales o sintéticos, y pueden ser minerales u orgánicos. Ejemplos de aceites minerales y orgánicos serán fácilmente evidentes para aquellos expertos en la técnica. Con el fin de que cualquier composición de aceite en agua sea adecuada para administración humana, la fase de aceite del sistema de emulsión de preferencia comprende un aceite metabolizable. El significado del término aceite metabolizable es conocido en la técnica. Metabolizable puede ser definido como "ser capaz de ser transformado a través de metabolismo" (Dorland's lllustrated Medical Dictionary, W. B. Sanders Company, 25o. edición (1974)). El aceite puede ser cualquier aceite vegetal, aceite de pescado, aceite de animal o un aceite sintético, que no sea tóxico al receptor y sea capaz de ser transformado mediante metabolismo. Las nueces (tales como aceite de cacahuate), semillas y granos son fuentes comunes de aceites vegetales. Los aceites sintéticos también son parte de esta invención y pueden incluir aceites comercialmente disponibles tales como NEOBEE®, y otros. El (2,6,10,15,19, 23-hexametil-2,6, 10,14, 18,22-tetracosahexaeno) de escualeno es un aceite insaturado que se encuentra en grandes cantidades en aceite de hígado de tiburón, y en cantidades más pequeñas en aceite de oliva, aceite de germen de trigo, aceite de arroz, y levadura, y un aceite particularmente preferido para utilizarse en esta invención. El escualeno es un aceite metabolizable en virtud del hecho de que es un intermediario en la biosíntesis de colesterol (Merck index, 10o. edición, entrada No. 8619). Las emulsiones de aceite particularmente preferidas son emulsiones de aceite en agua, y en particular emulsiones de escualeno en agua. Además, los auxiliares de emulsión de aceite muy preferidos de la presente invención comprenden un antioxidante, el cual preferiblemente es un aceite de a-tocoferol (vitamina E, EP 0 382 271 B1). WO 95/17210 y WO 99/11241 describen auxiliares de emulsión a base de escualeno, a-tocoferol y TWEEN 80, opcionalmente formulados con los inmunoestimulantes QS21 y/o 3D-MPL. WO 99/12565 describe una mejora para estas emulsiones de escualeno con la adición de un esterol a la fase oleosa. Además, se puede agregar un triglicérido, tal como tricaprílína (C27H50O6), a la fase oleosa con el fin de estabilizar la emulsión (WO 98/56414). El tamaño de las gotas de aceite encontradas dentro de la emulsión de aceite en agua estable preferiblemente es menor que una miera, y puede estar en la escala de substancialmente 30-600 nm, de preferencia substancialmente con un diámetro alrededor de 30-500 nm y muy preferiblemente con un diámetro substancialmente de 150-500 nm, y en particular un diámetro de aproximadamente 150 nm según medido a través de espectroscopia de correlación de fotón. A este respecto, el 80% de las gotas de aceite en número debe estar dentro de las escalas preferidas, de preferencia más de 90% y muy preferiblemente más de 95% de las gotas de aceite en numero están dentro de las escalas de tamaño definidas. Las cantidades de los componentes presentes en las emulsiones de aceite de la presente invención convencionalmente están en la escala de 2 a 10% de aceite, tal como escualeno; y cuando está presente, de 2 a 10% de -tocoferol; y de 0.3 a 3% de agente tensoactivo, tal como monooleato de polioxietilensorbitan. Preferiblemente, la relación de aceite:a-tocoferol es igual a o menor que 1 ya que esto proporciona una emulsión más estable. La extensión a 85 también puede estar presente a un nivel de aproximadamente 1%. En algunos casos, puede ser ventajoso que las vacunas de la presente invención además contengan un estabilizador. El método para producir emulsiones de aceite en agua es bien conocido para aquellos expertos en la técnica. Comúnmente, el método comprenden mezclar la fase oleosa con un agente tensoactivo tal como una solución de PBS/TWEEN80™ , seguido por la homogenización utilizando un homogenizador, podría ser evidente para aquellos expertos en la técnica que un método que comprenda hacer pasar la mezcla dos veces a través de una aguja de jeringa podría ser adecuado para homogenizar pequeños volúmenes de líquido. Igualmente, el procedimiento de emulsificación en un microfluidizador (máquina de microfluido M110S, máximo de 50 pasos, durante un período de 2 minutos a una entrada de presión máxima de 6 barias (presión de salida de aproximadamente 850 barias)) puede ser adaptado por algún experto en la técnica para producir volúmenes más grandes o más pequeños de emulsión. Esta adaptación puede lograrse a través de experimentación de rutina que comprende la medición de la emulsión resultante hasta que se obtiene una preparación con gotas de aceite del diámetro requerido. Las combinaciones de auxiliar de la presente invención se pueden utilizar como un auxiliar tanto sistémico como de mucosa. En una forma particular de la invención, se proporciona una vacuna sistémica que será administrada a través de la ruta sistémica o parenteral tal como administración intramuscular, intradérmica, transdérmica, subcutánea, ¡ntraperitoneal o intravenosa. Una ruta preferida de administración es a través de la ruta transdérmíca, por ejemplo, a través de parches para la piel. Las preparaciones de vacuna sistémica de la presente invención se pueden utilizar para proteger o tratar a un mamífero susceptible de, o que padece la enfermedad, a través de la administración de dicha vacuna mediante administración intramuscular, intraperitoneal, intradérmica, transdérmíca, intravenosa o subcutánea. Los métodos de administración sistémica de las preparaciones de vacuna pueden incluir jeringas y agujas convencionales, o dispositivos diseñados para suministro balístico de vacunas sólidas (WO 99/27961), o un dispositivo de chorro de líquido de presión sin aguja (patente de E. U. A. 4,596,556; patente de E. U. A. 5,993,412), o parches transdérmicos (WO 97/48440; WO 98/28037). La presente invención también se puede utilizar para mejorar la inmunogenicidad de antígenos aplicados a la piel (suministro transdérmico o subcutáneo, WO 98/20734; WO 98/28037). La presente invención, por lo tanto, proporciona un dispositivo de suministro para administración sistémica, prellenado con la vacuna o composiciones de auxiliar de la presente invención. Por consiguiente, se proporciona un método para incluir una respuesta inmune en un individuo, que comprende la administración de una vacuna comprendiendo un antígeno y un oligonucleótido inmunoestimulante, una saponina, y un vehículo, al individuo, en donde la vacuna es administrada a través de la ruta parenteral o sistémica. Los métodos preferidos para inducir una respuesta inmune comprenden la administración de una vacuna contra, por ejemplo, un derivado Her 2 neu, con una saponina derivada de Quil A, tal como QS21, y un vehículo, tal como una emulsión de aceite en agua, un liposoma conteniendo colesterol o alumbre. Alternativamente, las preparaciones de vacuna de la presente invención se pueden utilizar para proteger o tratar un mamífero susceptible a, o que padece la enfermedad, a través de la administración de dicha vacuna mediante una ruta de mucosa, tal como la ruta oral/alimentaria o nasal. Las rutas de mucosa alternativas son intravaginal e intra-rectal. La ruta de administración de mucosa preferida es a través de la ruta nasal, denominada vacunación intranasal. En la técnica son bien conocidos los métodos de vacunación intranasal, que incluyen la administración de una gota, aspersión, o forma en polvo seca de la vacuna a la nasofaringe del individuo que será inmunizado. Las formulaciones de vacuna nebulizadas o en aerosol también forman parte de esta invención. Las formulaciones entéricas tales como cápsulas resistentes a gastritis y gránulos para administración oral, supositorios para administración rectal o vaginal, también forman parte de esta invención. Las combinaciones de auxiliar de la presente invención representan una clase de auxiliares de mucosa adecuados para aplicarse en seres humanos para reemplazar la vacunación sistémica por vacunación de mucosa. En una forma preferida de la presente invención, se pueden utilizar saponinas puras tales como Quil A, o sus derivados, incluyendo QS21; escina; digitonina, o saponinas Gypsophila o Chenopodium quinoa en combinación con oligonucléeótidos ¡nmunoestimulantes, como auxiliares para la administración de mucosa de antígenos para lograr una respuesta inmune sistémica. Las combinaciones auxiliares de la presente invención se utilizan en la formulación de vacunas, dichas vacunas pueden ser administradas a través de ruta sistémica o mediante mucosa. Preferiblemente, cuando se utilizan las vacunas para la administración mediante mucosa, la combinación de auxiliar comprende una saponina hemolítica. Para administración a través de mucosa, preferiblemente la composición de la invención comprende una saponina hemolítica. La saponina hemolítica, o preparación de saponina, dentro del significado de esta invención va a ser determinada con referencia al siguiente ensayo. 1. Se lavó sangre fresca de conejillos de indica con salina regulada en su pH con fosfato (PBS) tres veces una centrífuga de escritorio. Después se volver a suspender al volumen original, la sangre se diluyó adicionalmente 10 veces en PBS. 2. 50 µ? de esta suspensión de sangre se agregaron a 800 µ? de PBS conteniendo dobles diluciones de agente tensoactivo o saponina. 3. Después de 8 horas, se determinó la hemolisis visualmente o midiendo la densidad óptica del sobrenadante. La presencia de un sobrenadante rojo, el cual absorbe luz a 570 nm, indica la presencia de hemólisis. 4.- Los resultados son expresados como la concentración de la primera dilución de saponina a la cual ya ocurre más la hemólisis. Para los propósitos de esta invención, la preparación de auxiliar de saponina es hemolítica si lisa los eritrocitos a una concentración de menos de 0.1%. Como una referencia, las muestras substancialmente puras de QuilA, QS21, QS7, Digitonina, y ß-escina todas son saponinas hemolíticas como se define en este ensayo. Dentro de la variabilidad experimental inherente de dicho ensayo biológico, las saponinas de la presente invención de preferencia tienen una actividad hemolítica, de aproximadamente de entre 0.5-0.0001%, de preferencia de entre 0.05-0.00001%, preferiblemente de entre 0.005-0.00001%, y muy preferiblemente de entre 0.001-0.0004%. Idealmente, dichas saponinas deben tener una actividad hemolítica similar (es decir, dentro de una diferencia de 10 veces) a aquellas de QS21. Las vacunas de la presente invención también se pueden administrar a través de ia ruta oral. En dichos casos, el excipiente farmacéuticamente aceptable también puede incluir reguladores de pH alcalinos, o cápsulas entéricas o microgránulos. La vacuna de la presente invención también puede ser administrada a través de ruta vaginal. En tales casos, los excipientes farmacéuticamente aceptables también pueden incluir emulsificantes, polímeros tales como CARBOPOL®, y otros estabilizadores conocidos de cremas y supositorios vaginales. Las vacunas de la presente invención también pueden ser administradas a través de ia ruta rectal. En tales casos, los excipientes también pueden incluir ceras y polímeros conocidos en la técnica para formar supositorios rectales. Las preparaciones de más de una saponina en las combinaciones de auxiliar de la presente invención también forman parte de la presente invención. Por ejemplo, las combinaciones de por lo menos dos del grupo siguiente comprendiendo QS21, QS7, Quil A, ß-escina, o digitonina. Además, ias composiciones de la presente invención pueden comprender combinaciones de más de un oligonucleótido inmunoestimulante. Alternativamente, las formulaciones pueden ser combinadas con vehículos de vacuna compuestos de quitosán y otros polímeros policatiónicos, polactida y partículas de polilactida-co-glicolida, matriz de polímero a base de poli-n-acetilglucosamina, partículas compuestas de polisacáridos o polisacáridos químicamente modificados, liposomas y partículas a base de lípidos, partículas compuestas de glicerol monoésteres, etc. Las saponinas también pueden ser formuladas en presencia de colesterol para formar estructuras en partículas, tales como liposomas o ISCOMs. Además, las saponinas pueden ser formuladas junto con un polioxietilenéter o éster, ya sea en una solución que no está en partículas o suspensión, o en una estructura en partículas tal como un liposoma paucilaminar o ISCO . Las saponinas también pueden ser formuladas con excipientes tales como Carbopol® para incrementar la viscosidad, o pueden ser formuladas en una forma de polvo seco con un excipiente de polvo tal como lactosa. Los auxiliares particularmente preferidos son combinaciones de 3D-MPL y QS21 (EP 0 671 948 B1), emulsiones de aceite en agua comprendiendo 3D-MPL y QS21 (WO 95/17210, WO 98/56414), o 3D-MPL formulado con otros vehículos (EP 0 689 454 B1) en combinación con los oligonucleótidos CpG como se describe aquí. La cantidad de oligonucleótidos CpG o inmunoestimulantes en los auxiliares o vacunas de la presente invención generalmente es pequeña, pero dependiendo de la formulación de vacuna puede estar en la escala de 1-1000 pg por dosis, de preferencia 1-500 pg por dosis, y muy preferiblemente de entre 1 a 100 pg por dosis. La cantidad de saponina para utilizarse en los auxiliares de la presente invención puede estar en la escala de 1-1000 pg por dosis, de preferencia 1-500 pg por dosis, preferiblemente 1-250 pg por dosis, y muy preferiblemente de entre 1 a 100 pg por dosis. La relación de CpG:saponina (p/p), por lo tanto, estará en la escala de 1:1000 a 1000:1, y típicamente estará en la escala de 1:100 a 100:1, y de preferencia en la escala de 1:10 a 1:1 o 1:1 a 10:1 y muy preferiblemente 1:1, 4:1, o 10:1. Las formulaciones de la presente invención pueden ser utilizadas para propósitos tanto profilácticos como terapéuticos. Por consiguiente, se proporciona el uso de una combinación de una saponina, un lipopolisacárido y una molécula de CpG en la fabricación de una vacuna para la profilaxis y el tratamiento de cáncer, en particular carcinomas de mama y próstata. Por consiguiente, la presente invención proporciona un método para tratar a un mamífero susceptible a o que padece una enfermedad infecciosa o cáncer o alergia, o una enfermedad autoinmune. En un aspecto más de la presente invención, se proporciona una combinación de vacuna o auxiliar, que comprende un iipopolisacárido, una saponina y CpG, como se describe aquí para utilizarse como un medicamento. La preparación de vacuna generalmente se describe en New Trends and Developments un Bacines, edited by Volter y otros, University Park Press, Baltimore, Maryland, U. S. A. 1978. La invención, por lo tanto, proporciona un método para prevenir que un individuo contraiga una enfermedad seleccionada del grupo que consiste de cánceres de próstata, de mama, colo-rectal, de pulmón, pancreático, renal, de ovario o melanoma; que comprende la administración de una composición como substancialmente se describe aquí a través de la ruta sistémica de dicho individuo. Alternativamente, la presente invención proporciona una composición de vacuna a través de mucosa que comprende un antígeno y una saponina hemolítica. Por consiguiente, se proporciona un método para el tratamiento de individuo susceptible a o que padece una enfermedad, a través de la administración de una composición como substancialmente se describe aquí a una superficie de mucosa de dicho individuo. Además, se describe un método para inducir una respuesta inmune específica de antígeno sistémica en un mamífero, que comprende administrar a la superficie de la mucosa de dicho mamífero una composición que comprende un antígeno y una saponina hemolítica. Además de proporciona un método para fabricar una vacuna o un auxiliar, comprendiendo tomar una saponina y tomar una molécula de CpG y mezclarlas con un antígeno. Ejemplos de excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados para utilizarse en las combinaciones de la presente invención incluyen agua, salina regulada en su pH con fosfato, soluciones reguladoras de pH isotónicas.

EJEMPLO 1 • Se produjo ECD-PD en células CHO de acuerdo con los métodos de WO 00/44899. Las formulaciones se probaron en ratones y conejos. • Se compararon formulaciones contra un número de controles SBAS1 + SBAS7 Se formuló ECD-PD con el oligonucleótido de CpG 2006 3D- MPL, QS21 en liposomas.

Formulación de SBAS1 La solución de preparó comprendiendo QS21 en liposomas y 3D-MPL asociado con liposomas, de acuerdo con los procedimientos de EP 0822831 Formulación de SBAS1 +SBAS7 A la formulación anterior, se le agregó el oiigonucleótido 2006 de CpG. El antígeno se mezcló en la formulación de auxiliar antes de uso.

Formulaciones a base de SBAS7 + SBAS2 (ratones) Para una dosis de 50 µ? de vacuna, la proteína ECD-PD (25 µ?) se diluyó en PBS 10 veces concentrada, pH 6.8, y H20 antes de la adición consecutiva de una emulsión de aceite en agua comprendiendo SB62: la cual se preparó a través de y comprende 5% de escualeno, 5% de tocoferol, 2.0% de tween 80; el tamaño de partícula fue de 180 nm.

Preparación de la emulsión SB62 (concentrado de dos veces) Se disolvió el Tween 80 en salina regulada en su pH con fosfato (PBS) para dar una solución de 2% en la PBS. Para proporcionar 100 mi de un concentrado de dos veces, se revolvió una emulsión de 5 g de DL a-tocoferol y 5 mi de escualeno y se mezclaron concienzudamente. Se agregó una solución de 90 mi de PBS/Tween y se mezcló concienzudamente. La emulsión resultante después se hizo pasar a través de una jeringa y finalmente fue microfluidizada utilizando una máquina de microfluido M110S. Las gotas de aceite resultantes presentan un tamaño de aproximadamente 180 nm, 3D-MPL (10 pg), QS21 (10 pg). Después se agregaron 50 pg de CpG ODN 2006 seguido por 30 minutos después de la adición de 50 pg/ml de tiomersal como conservador. Todas las incubaciones se realizaron a temperatura ambiente con agitación. Se prepararon 2 formulaciones de SBAS como se hizo anteriormente, pero sin la adición del oligonucleótido CpG. SBAS7 es el oligonucleótido 2006 de CpG.

Formulaciones a base de SBAS7 + SBAS2 (conejo) Para una dosis de 500 µ? de vacuna, la proteína ECD-PD (100 pg) se diluyó en PBS 10 veces concentrada, pH 6.8, y H20 antes de la-adición consecutiva de SB62 250 pl, 3D-MPL (100 pg), QS21 (100 pl) y 500 pg de CpG ODN 2006, seguido por 30 minutos después por la adición de 50 pg/tiomersal como conservador. Todas las incubaciones se realizaron a temperatura ambiente con agitación.

EJEMPLO 2 Experimentos de ataque de tumor Se inyectaron grupos de ratones F1 (C57 x Balb c) (8 ratones/grupo) con 1/10 de la dosis humana de antígeno (25 pg) en los días 0-14-28-42 y se atacaron en el día 56 con células TC1 expresando Her2 a una cercanía de 2 10e6 TC1 Her2 cell/animal administrados subcutáneamente. Se reunieron las células TC1 para la mitad de los bazos de los animales en el día 56 y los animales se sangraron. Como se muestra en ia Figura 1, la adición de un oligonucleótido de CpG a una formulación de 3D-MPL/QS21 sinergísticamente mejora la regresión del tumor y solamente estas formulaciones produjeron una regresión completa del tumor en los ratones.

EJEMPLO 3 Inmunogenicidad de ECD-PD en diferentes auxiliares en conejos Se inmunizaron 6 grupos de 4 conejos en los días 0, 21 y 42, respectivamente con 100 pg de ECD-PD en AS02, AS01, AS05, AS06 (CpG 2006 absorbido en alumbre), AS07 y AS02B + AS07. Se analizó la serología 14 días después de III y el Cuadro 1 muestra que las formulaciones de la presente invención fueron superiores a otras formulaciones probadas en el surgimiento de respuestas de anticuerpo de alta titulación.

CUADRO 1 pre 14postlII AS02B 50 96923 AS01 B 173 196637 AS5 144 76221 AS6 142 741180 AS07A 480 3904 AS02B + AS07A 94 362713 EJEMPLO 4 Inmunoqenicidad de Her 2 neu, ECD-PD en monos Rhesus adultos Se inmunizaron monos Rhesus adultos con ECD-PD en varias formulaciones auxiliar: AS02 B - QS21, 3DMPL, en emulsión de aceite en agua AS01 - QS21 3D-MPL en liposoma AS05 - QS21 en liposoma AS06 - CpG 2006 alumbre AS07 - CpG 2006 AS02B + AS07 - ver Ejemplo 1 para detalles La vacunación produjo una respuesta de anticuerpo superior en las formulaciones de la presente invención (AS)2 + AS07). Ver Figura 1. Otro análisis mostró que la respuesta de anticuerpo es policlonal y demuestra una actividad inhibidora en el crecimiento in vitro de una línea de célula cancerosa de mama humana (SKBR3) sobre expresando la molécula Iter 2 neu. La herceptina, un anticuerpo monoclonal para el tratamiento de tumores que expresan Her 2 neu, es capaz de inhibir el crecimiento de esta línea de célula.

Los anticuerpos generados después de la vacunación activa con la formulación de esta manera se pueden ver como funcionales.

EJEMPLO 5 Inmunización de ratones con el antíqeno ECD-PD Este experimento se diseñó para investigar una escala de formulaciones auxiliar con el antígeno, es el cual es una fusión del dominio extracelular de Her 2 neu enlazado al dominio de fosforilación (ECF-PD) el cual se produjo en células CHO de acuerdo con los métodos WO 00/44899.

Grupo Antígeno Auxiliar (25 Mg) 1 ECD-PD ninguno (salina regulada en su pH con fosfato (PBS)) 2 ECD-PD liposomas con QS21 y 3D-MPL en membrana 3 ECD-PD emulsión de aceite en agua conteniendo tocol con QS21 y 3D-MPL 4 ECD-PD CpG 5 ECD-PD liposomas con QS21 y 3D-MPL en membrana + CpG 6 ECD-PD emulsión de aceite en agua conteniendo tocol QS21 y 3D-MPL + CpG 7 ECD-PD 3D-MPL + CpG 8 ECD-PD QS21 + CpG 9 ECD-PD emulsión de aceite en agua conteniendo tocol + CpG 10 ECD-PD liposomas con QS21 en membrana + CpG 11 ECD-PD liposomas con 3D-MPL en membrana + CpG Las emulsiones de aceite en agua que contienen tocol utilizadas en los grupos anteriores usario D, L, -tocoferol (CAS No. 10191-41-0; nombre químico (2RS, 4'RS, 8"RS)-2, 5, 7, 8-tetrametil-2-(4\ 8', 12'-trimetil-tridecil)-6-cromanol)); que está comercialmente disponible de ROCHE™. Si el tocol está presente en una emulsión de aceite en agua comprendiendo 2.5% en volumen, en combinación con escualeno al 2.5% en volumen. Ambos aceites se mezclaron y se agregó monooleato de polioxietilen sorbitan (Tween 80 ™), antes de la microfluidización (máquina de microfluido M110S, máximo de 50 pasos, durante un período de 2 minutos a una entrada de presión máxima de 6 barias (presión de salida de aproximadamente 850 barias) como se describe en WO 95/17210). Por consiguiente, los grupos 3, 6 y 9 se basaron en la emulsión de tocol anterior con la adición de QS21 acuoso, 3D-MPL o CpG. QS21 y 3D-MPL si están presentes en cualquiera de los grupos de vacuna anteriores fueron incluidos a una dosis de 5 pg/dosis; CpG (OLIGO 4 (SEC ID NO:4): TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT se agregó a una dosis de 50 pg. Los auxiliares utilizados para los grupos 2, 5, 10 se prepararon de acuerdo con las técnicas descritas en EP 0 822 831 B1 (los contenidos de la cual se incorporan aquí por referencia). El grupo 11 comprendión 3D-MPL en la membrana de un liposoma. En resumen, el 3D-MPL, dioleilfosfatidilcolina y co\estero¡ se mezclaron conjuntamente y se microfluidizaron en liposomas unilaminares (como se describe en EP 0 822 831 B1 con la omisión de QS21). Los auxiliares utilizados en los grupos 4, 7 y 8 estuvieron en suspensión o solución acuosa.

Procedimiento de vacunación Se vacunaron grupos de ratones B6F1 en cuatro ocasiones (en volúmenes de 50 µ?), íntramuscularmente, 14 días de separación. Catorce días después de la cuarta dosis de vacuna, los ratones fueron atracados subcutáneamente con una célula de tumor 2X106 TC1 expresando Her 2 neu. Las líneas de célula de tumor Her 2 neu-TC1 se produjeron a través de la transducción de células TC1 a través de vectores retrovirales codificando para Her 2 neu. Después de un período de selección con blastocidina, se aislaron los clones resistentes y se clasificaron mediante FACS para la expresión de Her 2 neu. El clon con la expresión más alta de Her 2 neu fue seleccionado, y se identificó una dosis de ataque de 2X106 teniendo una cinética similar de crecimiento como las células TC1 de tiposilvestre para dar surgimiento al desarrollo de tumor en 100% de los animales de control. El tamaño de los tumores individuales se midió dos veces a la semana y se expresó como un grupo medio.

Resultados La Figura 3 muestra los resultados de crecimiento de tumor para los grupos 1, 3, 4, 5 y 6. La Figura 4 muestra los resultados de crecimiento de tumor para los grupos 1, 5, 6, 7 y 11. La Figura 5 muestra los resultados de crecimiento de tumor para los grupos 1, 5, 6, 8, 9 y 10. Las únicas vacunas que indujeron una completa regresión del tumor fueron las vacunas que contienen un oligonucleótido inmunoestimulante como una saponina. Las Figuras 6 y 7 muestran la linfoproliferación de espenocitos in vitro después de la incubación con 5 g/ml de inmunógeno (ECD-PD) o dominio extracelular (ECD) o dominio intraceluiar (ICD) o Her 2 neu. Las Figuras 8 y 9 muestran la respuesta inmune humoral al inmunógeno (ECD-PD) en términos de Ig total según medido mediante ELISA (Figura 8) o distribución del isotipo IgG dentro de estas respuestas (Figura 9).

Conclusión Después de 3 inyecciones, la inducción del anticuerpo AS02B + AS07A > AS01B > AS02B = AS06 = AS05 > AS07A Conclusión general El auxiliar probado (AS1, AS2, AS7) tienen efectos similares. Sin embargo, la combinación de AS1 y AS7 o AS2 y AS7 presenta auxiliares más efectivos. CMI claramente se muestra después de 4 vacunaciones en animales que reciben el auxiliar combinado en la molécula entera ECD-PD, pero también en cada parte separadamente (ECD e ICD). Las formulaciones de la presente invención son muy efectivas para inducir regresión tumoral.

EJEMPLO 6 Inmunización de ratones con el antíqeno P703P Este experimento fue diseñado para investigar una escala de formulaciones auxiliares con el antígeno que es una fusión del antígeno prostasa Ferguson y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 1999 96, 3114-3119) y el fragmento 1-81 N-terminal de NS1 del virus de influenza (P703P-NS1).

Las emulsiones de aceite en agua que contienen tocol utilizadas en los grupos anteriores utilizaron D, L a-tocoferol (CAS No. 10191-41-0; nombre químico: (2RS, 4'RS. 8'RS)-2, 5,7,8-tetrametil-2-(4', 8', 12'-tr¡metil-tridecil)-6-cromanol)); que está comercialmente disponible de ROCHE™. Si el tocol está presente en una emulsión de aceite en agua comprendiendo 2.5% en volumen, en combinación con escualeno al 2.5% en volumen. Ambos aceites se mezclaron y se agregó monooleato de polioxietilen sorbitan (Tween 80 ™), antes de la microf luidización (máquina de microfluido M110S, máximo de 50 pasos, durante un período de 2 minutos a una entrada de presión máxima de 6 barias (presión de salida de aproximadamente 850 barias) como se describe en WO 95/17210). Por consiguiente, los grupos 5 y 6 se basaron en la emulsión de tocol anterior con la adición de QS21, 3D-MPL y/o CpG acuoso. QS21 y 3D-MPL si están presentes en cualquiera de los grupos de vacuna anteriores, fueron incluidos 5 g/dosis; CpG (OLIGO 4 (SEC ID NO:4): TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT se agregó a una dosis de 50 pg. Los auxiliares utilizados para los grupos 3 y 4 se prepararon de acuerdo con las técnicas descritas en EP 0 822 831 B1 (los contenidos de la cual se incorporan aquí por referencia).

Procedimiento de vacunación Grupos de ratones B6F1 fueron vacunados en cuatro ocasiones (en volumen de 50 µ?), intramuscularmente, 14 días.

Resultados Las Figuras 10 y 11 muestran ia linfoproliferación in vitro de esplenocitos después del segundo y 14 días después de cuatro vacunaciones, después de la incubación in vitro con 3 pg/ml de inmunógeno (NS1-P703P) o pichia expresada en P703P (15 pg/ml) o una proteína de fusión no específica NS1-OspA. Las Figuras 12 y 13 muestran la respuesta inmune humoral al inmunógeno (NS1-P703P) en términos de Ig total, según medido a través de ELISA de titulación de punto medio (Figura 10) o distribución del isotipo IgG dentro de estas respuestas (Figura 11).

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. - Una composición inmunogénica que comprende un antígeno de cáncer seleccionado del grupo que consiste de: i) un antígeno de la familia de la proteína MAGE enlazado a un patrón de fusión heteróloga; ii) un antígeno de prostasa enlazado a un patrón de fusión heteróloga; iii) fragmentos de prostasa opcionalmente enlazados a un patrón de fusión heteróloga; iv) P501S; v) Cripto; vi) derivado de antígeno Her-2/neu carente de una porción substancial del dominio de transmembrana Her-2/neu, y una composición auxiliar que comprende una saponina junto con un oligonucleótido ínmunoestimulante.

2. - Una composición de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende además un lipopoiisacárido.

3. - Una composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la saponina es QS21.

4. - Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 o 3, en donde el lipopoiisacárido se selecciona del grupo que consiste de: i. Lípido A de monofosforilo; ii. Lípido A de monofosforilo 3-O-desacilado; y iii. Lípido A de difosforilo. 5.- Una composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el oligonucleótido ¡nmunoestimulante contiene por lo menos dos motivos CpG. 6.- Una composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el oligonucleótido ¡nmunoestimulante se selecciona del grupo que consiste de: SEC ID NO:1 - TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (CpG 1826) SEC ID NO:2 - TCT CCC AGC GTG CGC CAT (CpG 1758) SEC ID NO:3 - ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACG SEC ID NO:4 - TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (CpG 2006) SEC ID N0.5 - TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT (CpG 1668). 7. - Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la saponina se formula para formar ISCOMS o liposomas. 8. - Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la saponina está presente en una emulsión de aceite en agua. 9. - Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que comprende substancialmente todo el dominio extracelular de Her 2 neu. 10. - Una composición de acuerdo con la reivindicación 8, en donde la molécula Her 2 neu está carente de un dominio de transmembrana funcional. 11.- Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, que comprende además el dominio de fosforilación de Her 2 neu. 12. - Un método para tratar un paciente que sufre de o es susceptible de un cáncer que expresa Her 2 neu o antígeno específico de próstata/tumor, que comprende administrar una cantidad segura y efectiva de una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11. 13. - Un método para tratar un paciente que sufre de o es susceptible de un cáncer que expresa cualquiera de MAGE, prostasa, P501S o Cripto, que comprende administrar una cantidad segura y efectiva ,de una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11. 14. - El uso de una combinación de una saponina, un oligonucleótido inmunoestimulante y un antígeno de cáncer, seleccionado del grupo que consiste de: i) un antígeno de la familia de la proteína MAGE enlazado a un patrón de fusión heteróloga; i¡) un antígeno de prostasa enlazado a un patrón de fusión heteróloga; iii) fragmentos de prostasa opcionalmente enlazados a un patrón de fusión heteróloga; iv) P501S; v) Cripto; vi) derivado de antígeno Her-2/neu carente de una porción substancial del dominio de transmembrana Her-2/neu, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento profilaxis de tumores. 15.- Un método para fabricar una composición de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 11, que comprende administrar un antígeno de cáncer seleccionado del grupo que consiste de: i) un antígeno de la familia de la proteína MAGE enlazado a un patrón de fusión heteróloga; ii) un antígeno de prostasa enlazado a un patrón de fusión heteróloga; ¡ii) fragmentos de prostasa opcionalmente enlazados a un patrón de fusión heteróloga; iv) P501S; v) Cripto; vi) derivado de antígeno Her-2/neu carente de una porción substancial del dominio de transmembrana Her-2/neu, con una saponina y una molécula de CpG.