JP7339942B2 - サポニンを含むリポソーム製剤および使用方法 - Google Patents
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Description
本出願は、2017年9月8日出願の米国特許仮出願第62/556,257号の優先権の利益を主張し、その出願全体が、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
以下の用語は、別段示されない限り、以下の意味を有する。いかなる定義されていない用語も、それらの当該技術分野で認識される意味を有する。
本開示は、リポソーム製剤を提供する。リポソーム製剤は、サポニン、および任意でLPSを含む。加えて、リポソーム製剤は、任意で少なくとも1つのステロールおよび少なくとも1つのリン脂質を含み得る。
本明細書で考察されるように、本開示のリポソーム製剤は、サポニン、および任意でLPSを含む。サポニンおよびLPSは一般に、アジュバント活性を持つことが既知である。
サポニンは、例えば、米国特許第6,544,518号、Lacaille-Dubois,M and Wagner H.(1996 Phytomedicine2:363-386)、米国特許第5,057,540号、Kensil,Crit Rev Ther Drug Carrier Syst,1996,12(1-2):1-55、およびEP0362279B1に教示されている。Quil A(サポニン)の断片を含む、免疫刺激複合体(ISCOMS)と呼ばれる粒子性構造は、溶血性であり、ワクチン組成物の製造に使用されている(Morein,B.のEP0109942B1)。これらの構造は、アジュバント活性を有することが報告されている(EP0109942B1、WO96/11711)。溶血性サポニンQS21およびQS17(Quil AのHPLC精製断片)は、強力な全身アジュバントとして記載されており、それらの生成方法は、米国特許第5,057,540号およびEP0362279B1に開示されている。これらの参考文献には、全身ワクチン組成物のための強力なアジュバントとして作用するQS7(Quil-Aの非溶血性断片)の使用もまた記載されている。QS21の使用については、Kensilら(1991.J.Immunology146:431-437)にもさらに記載されている。QS21とポリソルベートまたはシクロデキストリンとの組み合わせもまた、既知である(WO99/10008)。QS21およびQS7のQuilAの断片を含む粒子性アジュバント系については、WO96/33739およびWO96/11711に記載されている。全身ワクチン接種研究で使用されている他のサポニンには、GypsophilaおよびSaponariaなどの他の植物種に由来するものが含まれる(Bomford et al.,Vaccine,10(9):572-577,1992)。
本発明の例示的な実施形態では、LPSは、免疫刺激剤である。換言すると、LPSは、単独で、または病状に関連する抗原との併用のいずれかで、対象における免疫応答を誘発することができる。特定の例示的な実施形態では、LPSは、TLR4アゴニストである。本明細書で使用される場合、「TLR4アゴニスト」は、TLR4とのその相互作用を通して、その生物学的活性に影響を与えるアゴニストを指す。特定の好ましい実施形態では、本開示の製剤中で使用されるTLR4アゴニストは、米国特許公開第US2007/021017号、同第US2009/045033号、および同第US2010/037466号に記載のものなどのグルコピラノシル脂質アジュバント(GLA)であり、それらの内容の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
L1、L2、L3、L4、L5、およびL6は、同じであるか、または異なり、独立して、-O-、-NH-、または-(CH2)-であり、
L7、L8、L9、およびL10は、同じであるか、または異なり、独立して、不在であるか、または-C(=O)-であり、
Y1は、酸官能基であり、
Y2およびY3は、同じであるか、または異なり、独立して、-OH、-SH、または酸官能基であり、
Y4は、-OHまたは-SHであり、
R1、R3、R5、およびR6は、同じであるか、または異なり、独立して、C8-13アルキルであり、
R2およびR4は、同じであるか、または異なり、独立して、C6-11アルキルである。
上述のとおり、本開示は、GLA化合物を提供する。本開示の代表的なGLA化合物は、既知の有機合成技術によって調製することができ、例えば、それらの全体が、参照により全ての目的のために本明細書に組み込まれる、米国特許第8,722,064号および同第8273,361号を参照されたい。
本明細書に記載のリポソーム製剤の例示的な態様では、サポニン対LPSの比は、約1対2.5である。サポニン対LPSの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、1用量当たり約1μgであり、LPSの濃度は、1用量当たり約2.5μgである。サポニン対LPSの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、1用量当たり約2μgであり、LPSの濃度は、1用量当たり約5μgである。サポニン対LPSの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、1用量当たり約3μgであり、LPSの濃度は、1用量当たり約7.5μgである。サポニン対LPSの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、1用量当たり約4μgであり、LPSの濃度は、1用量当たり約10μgである。サポニン対LPSの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、1用量当たり約約5μgであり、LPSの濃度は、1用量当たり約12.5μgである。サポニン対LPSの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、1用量当たり約6μgであり、LPSの濃度は、1用量当たり約15μgである。サポニン対LPSの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、1用量当たり約7μgであり、LPSの濃度は、1用量当たり約17.5μgである。サポニン対LPSの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、1用量当たり約8μgであり、LPSの濃度は、1用量当たり約20μgである。サポニン対LPSの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、1用量当たり約9μgであり、LPSの濃度は、1用量当たり約22.5μgである。サポニン対LPSの比を有するいくつかの実施形態では、サポニンの濃度は、1用量当たり約10μgであり、LPSの濃度は、1用量当たり約25μgである。
ステロールとともにそのクエンチ形態で提示されるサポニンは、ヒト対象におけるT細胞応答を促進する上で有効である。ステロールは、ステロイドアルコールであり、ステロイドに特徴的な4員環構造、および3炭素位にヒドロキシ(-OH)置換またはエステル(-OR)置換を有する任意の分子を指す。ステロールは、植物、動物、および微生物の膜内に天然に存在し、それぞれ植物ステロール、動物ステロール、および菌類ステロールと呼ばれる。ステロールは、他の環炭素の1つ以上でさらに置換されてもよく、また、環内に様々な二重結合を含有してもよい。ステロールの非限定的な例には、コレステロール、クロロギ酸コレステリル、スチグマステロール、シトステロール、エルゴステロール、ラノステロール、デスモステロール、またはカンペステロールが含まれ得る。ステロールは一般に、サポニンと会合して、安定した不溶性複合体を形成する。本明細書に記載の組成物の特定の実施形態では、リポソーム製剤は、サポニン、および任意でLPSを含み、サポニンは、ステロールに複合体化されている。例示的な実施形態では、リポソーム製剤は、サポニン、および任意でLPSを含み、サポニンは、コレステロールに複合体化されている。
リポソームは、サブユニットタンパク質ワクチン組成物およびアジュバントの送達に用いられている。リポソームは、所望の脂質濃度、電荷、サイズ、ならびに抗原およびアジュバントの分布または標的化を達成するようにリポソーム製剤を適合させる能力のために、魅力的な送達ビヒクルである。アニオン性、カチオン性、および中性リポソームを含む、多数のリポソームに基づく系が、評価されている。リポソーム製剤の脂質構成成分は、(リン脂質を含む)任意の脂質の少なくとも1つを構成して、安定したリポソーム構造を形成することができることが本明細書で企図される。
サイズ
本開示は、リポソーム製剤を提供する。本明細書で提供されるリポソームは、X線およびレーザー回折、動的光散乱(DLS)、CryoEM、またはMalvern Zetasizeを含むがこれらに限定されない、当該技術分野における既知の技術によって評価することができる。いくつかの実施形態では、リポソームのサイズは、Z平均直径を指す。
本開示の特定の実施形態は、サポニンおよびLPSを含むリポソーム製剤を企図し、製剤は、ヒト用量での使用に好適な体積である。いくつかの実施形態では、製剤の体積は、約0.5ml~約1.5mlである。特定の実施形態では、製剤の体積は、約0.5ml、約0.6ml、約0.7ml、約0.8ml、約0.9ml、約1.0ml、約1.1ml、約1.2ml、約1.3ml、約1.4ml、または約1.5mlである。特定の実施形態では、製剤の体積は、約0.5ml~約0.75ml、約0.75ml~約1.0ml、約1.0ml~約1.25ml、または約1.25ml~約1.5mlである。
本明細書で提供されるリポソーム製剤は、安定しており、使用の容易さ、製造性、輸送性、および保管を可能にする。リポソームサイズを含むがこれに限定されない、リポソーム製剤の生理化学的な特徴が、様々な温度で、および様々な条件下で経時的に維持される。
一態様では、リポソーム製剤は、サポニン、および任意でLPSを含有する。別の態様では、リポソーム製剤は、ステロールに複合体化されたサポニン、および任意でLPSを含有する。別の態様では、リポソーム製剤は、サポニンおよびLPSを含有し、サポニンは、ステロールに複合体化されている。
特定の態様では、本明細書に記載のリポソーム製剤は、薬学的組成物またはワクチン組成物に組み込まれる。本明細書に記載のポリペプチド、抗原、ポリヌクレオチド、部分、変異体、融合ポリペプチドなどもまた、薬学的組成物またはワクチン組成物に組み込まれ得る。薬学的組成物は一般に、生理学的許容される担体と組み合わせて、リポソーム製剤を含む。免疫原性組成物とも称されるワクチン組成物は一般に、本明細書に記載のポリペプチド、抗原、およびポリペプチド、ポリヌクレオチド、部分、変異体、融合タンパク質などの1つ以上を含む。
抗原は、任意の標的エピトープ、分子(生体分子を含む)、分子複合体(生体分子を含有する分子複合体を含む)、細胞内組み立て体、対象における免疫反応性の誘発または増強が所望される細胞または組織であり得る。頻繁に、抗原という用語は、目的のポリペプチド抗原を指す。しかしながら、本明細書で使用される場合、抗原はまた、ポリペプチド抗原をコードする核酸分子(例えば、DNAまたはRNA)も指し得る。抗原はまた、目的のポリペプチド抗原をコードする組み換え構築物(例えば、発現構築物)であり得る。好適な抗原には、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、原虫抗原、植物抗原、がん抗原、またはそれらに対する組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。本明細書に記載の抗原は、例えば、感染性疾患、がん、自己免疫疾患、アレルギー、喘息、または抗原特異的免疫応答の刺激が望ましいかもしくは有利である、任意の他の病態に関与し得るか、またはそれに由来し得る。
本開示の薬学的組成物およびワクチン組成物は、様々な周知の貂順のいずれかを使用して製剤化することができる。特定の実施形態では、薬学的組成物およびワクチン組成物は、安定したエマルジョン(例えば、水中油型エマルジョン)または水溶液として調製される。
特定の実施形態では、本明細書に記載のリポソーム製剤、薬学的組成物、およびワクチン組成物を含有するキットもまた企図され、これは、1つ以上の容器内に提供され得る。一実施形態では、リポソーム製剤の全ての構成成分は、単一の容器内にともに存在する。特定の実施形態では、薬学的組成物の全ての構成成分は、単一の容器内にともに存在する。特定の実施形態では、ワクチン組成物の全ての構成成分は、単一の容器内にともに存在する。他の実施形態では、薬学的組成物およびワクチン組成物の構成成分は、2つ以上の容器内に存在し得る。好ましい実施形態では、リポソーム製剤は、1つの容器内に提供され、抗原は、別の容器内に提供される。
本発明者らは、サポニン(および任意のLPS)を事前形成されたリポソームと混合して、本明細書に記載の製剤を作製するプロセスにおいて、サポニン含有リポソームを作製することができることを有利に発見した。
対象における免疫応答の誘発または増強方法であって、免疫応答の誘発または増強を必要とする対象に、本明細書に記載のリポソーム製剤、薬学的組成物、またはワクチン組成物を投与するステップを含む、方法が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、製剤または組成物は、抗原をさらに含み、抗原は、ポリペプチド抗原、またはポリペプチド抗原をコードする核酸分子である。いくつかのそのような実施形態では、製剤または組成物は、ポリペプチド抗原、またはポリペプチド抗原をコードする核酸分子との混合に好適である。
この研究の目的は、BCGで準備刺激したモルモットにおけるID93ワクチンとの使用に最適なアジュバント製剤を決定することである。ID93ワクチンは、病原性および潜在性に関連する4つのMtbタンパク質(Rv2608、Rv3619、Rv3620、およびRv1813)由来の融合タンパク質として製剤化される、組み換えサブユニットワクチン抗原である。最終的な891個のアミノ酸の融合タンパク質は、93KDaの予測質量を有する。ID93を、2つの異なるアジュバント製剤、GLA*-SEおよびGLA*-LSQと併用して試験し、BCGで準備刺激したモルモットにおけるこのワクチンの防御有効性を決定した。BCGで皮内に準備刺激し、3ヶ月間休ませた80匹の雌のモルモットを、研究に使用した。ID93ワクチンを用いた免疫化は、3週間間隔で3回(0日目、21日目、および42日目)であった。3回目の免疫化の10週間後、低用量のエアロゾル(1.17×107cfu/ml)のM.tuberculosis Beijing4619に曝露する。ID93の用量は、10ugであった。アジュバントAは、5ugのGLA*および2ugのQS21を有するGLA*-LSQであった。アジュバントBは、GLA-SE(5ugのGLA)であった。群1は、BCGで準備刺激しない唯一の群であり、食塩水を単独で投与し、群2には、食塩水を投与し、群3には、アジュバントAを投与し、群4には、ID93およびアジュバントAを投与し、群5には、ID93およびアジュバントBを投与した。
表1
Claims (35)
- ヒト対象に投与するための、QS21であるサポニンと、グルコピラノシル脂質A(GLA)であるリポ多糖と、リン脂質とを含むリポソーム製剤であって、リポ多糖対サポニンの重量比が、2.5対1であり、前記サポニンが、コレステロールに複合体化しており、サポニン対コレステロールの重量比が、1:125である、製剤。
- 前記サポニンが、合成である、請求項1に記載の製剤。
- 前記リン脂質が、DLPC、DMPC、DPPC、DSPC、DOPC、POPC、DLPG、DMPG、DPPG、DSPG、DOPG、DSTAP、DPTAP、DSPE、DPPE、DMPE、およびDLPEからなる群から選択される、請求項1に記載の製剤。
- 前記リポ多糖が、以下の式を有し、
またはその薬学的に許容される塩である、請求項1~3のいずれか1項に記載の製剤。 - 前記リポ多糖が、式、
- 前記リポ多糖が、以下の式を有し、
またはその薬学的に許容される塩である、請求項1~5のいずれか1項に記載の製剤。 - 前記製剤が、ヒト用量での使用に好適な体積である、請求項1~6のいずれか1項に記載の製剤。
- 前記体積が、約0.5ml~約1.5mlである、請求項7に記載の製剤。
- 請求項1~8に記載の製剤のいずれか1つを含む、薬学的組成物。
- 抗原をさらに含む、請求項9に記載の薬学的組成物。
- 請求項1~8に記載の製剤のいずれか1つ、および抗原を含む、ワクチン組成物。
- 前記抗原が、(i)感染性疾患に関連する少なくとも1つの感染性病原体、(ii)がんに関連する少なくとも1つのエピトープ、生体分子、細胞、もしくは組織、または(iii)自己免疫疾患に関連する少なくとも1つのエピトープ、生体分子、細胞、もしくは組織に由来するか、またはそれと免疫学的に交差反応性であることにより、免疫応答を誘発または増強する、請求項10または11に記載の組成物。
- 請求項10~12に記載の組成物から成る、対象における免疫応答の誘発または増強剤。
- 抗原と併用して投与される、請求項13記載の免疫応答の誘発または増強剤。
- 対象が、がん、感染性疾患、または自己免疫疾患に苦しんでいる、請求項13または請求項14に記載の免疫応答の誘発または増強剤。
- 対象が、ヒトである、請求項13~15のいずれか1項に記載の免疫応答の誘発または増強剤。
- ウエストナイルウイルスの治療に使用するためのものではない、請求項1~8のいずれかに記載の製剤。
- ウエストナイルウイルスの治療に使用するためのものではない、請求項9~12のいずれかに記載の組成物。
- ウエストナイルウイルスの治療に使用するためのものではない、請求項13~16のいずれかに記載の免疫応答の誘発または増強剤。
- 抗原と混合され、前記抗原が、ウエストナイルウイルスに関連しないか、またはそれに由来しない、請求項1~8のいずれかに記載の製剤。
- 抗原と混合され、前記抗原が、ウエストナイルウイルスに関連しないか、またはそれに由来しない、請求項9~12のいずれかに記載の組成物。
- 抗原と混合され、前記抗原が、ウエストナイルウイルスに関連しないか、またはそれに由来しない、請求項13~16のいずれかに記載の免疫応答の誘発または増強剤。
- TB、HIV、またはマラリアの治療に使用するためのものである、請求項1~8のいずれかに記載の製剤。
- TB、HIV、またはマラリアの治療に使用するためのものである、請求項9~12のいずれかに記載の組成物。
- TB、HIV、またはマラリアの治療に使用するためのものである、請求項13~16のいずれかに記載の免疫応答の誘発または増強剤。
- 抗原と混合され、前記抗原が、TB、HIV、またはマラリアに関連するか、またはそれに由来する、請求項1~8のいずれかに記載の製剤。
- 抗原と混合され、前記抗原が、TB、HIV、またはマラリアに関連するか、またはそれに由来する、請求項9~12のいずれかに記載の組成物。
- 抗原と混合され、前記抗原が、TB、HIV、またはマラリアに関連するか、またはそれに由来する、請求項13~16のいずれかに記載の免疫応答の誘発または増強剤。
- 前記抗原が、ID93、ID91、またはID97である、請求項26に記載の製剤。
- 前記抗原が、ID93、ID91、またはID97である、請求項27に記載の組成物。
- 前記抗原が、ID93、ID91、またはID97である、請求項28に記載の免疫応答の誘発または増強剤。
- 請求項1~8のいずれか1項に記載のサポニン含有リポソーム製剤の製造方法であって、前記サポニンを事前形成されたステロール含有リポソームと混合することを含む、方法。
- 前記サポニンが、QS21であり、前記粗サポニン混合物Quil Aを精製して、前記サポニンが得られる、請求項32に記載の方法。
- 前記サポニンが、リポソームとの混合前に緩衝液中に可溶化される、請求項32または33に記載の方法。
- 前記事前形成されたステロール含有リポソームが、前記リン脂質および前記ステロールを混合することと、高圧均質化を介して結果として得られる前記リポソームの粒径を低減することと、によって調製される、請求項32~34のいずれか1項に記載の方法。
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