TR201807756T4

TR201807756T4 - Sentetik adjuvan içeren aşı bileşimi.

Info

Publication number: TR201807756T4
Application number: TR2018/07756T
Authority: TR
Inventors: G Reed Steven; Carter Darrick
Original assignee: Infectious Disease Res Inst
Priority date: 2006-09-26
Filing date: 2007-09-26
Publication date: 2018-06-21
Also published as: PT2484375T; EP2486938B1; EP3403667A1; US20080131466A1; JP2014012698A; US8840908B2; US9907845B2; PT2468300T; SI2468300T1; SI2484375T1; CY1112943T1; CN103705919B; EP3795173A1; ES2675915T3; EP3403667B1; EP2068918B2; JP2018024656A; JP2019070007A; US20180236063A1; US20130084307A1

Abstract

Büyük ölçüde homojen formda sağlanan sentetik bir glukopiranosil lipid adjuvandaki (GLA) kullanışlı immünolojik adjuvan özelliklerin keşfine dayalı olarak bir immün tepkiyi indüklemek ya da arttırmak için bileşimler ve aşılar ve farmasötik bileşimler içeren metotlar ifşa edilmektedir. Kimyasal olarak tanımlı, sentetik GLA, doğal ürün adjuvanları riske atan kirleticiler ya da aktivite bakımından yığından yığına değişimler olmayan tutarlı bir aşı bileşeni sunmaktadır. Ayrıca GLA ve bir antijen, bir toll benzeri reseptör (TLR) agonisti, bir ko-adjuvan ve farmasötik bir taşıyıcı gibi bir taşıyıcıdan bir ya da daha fazlasını içren farmasötik bileşimler ve aşılar sağlanmaktadır.

Description

TARIFNAME SENTETIK ADJUVAN IÇEREN ASI BILESIMI Teknik Alan Mevcut bulus farmasötik ve as Fbilesimleri alan lýla ilgilidir. Daha spesifik olarak, burada tarif edilen yapüandmmalar farmasötik ve as jbilesimleri ve aynlîzamanda alakalîlprofilaktik ve terapötik metotlarla ilgili olup, içerisindeki bilesimler bir glukopiranozil lipid adjuvan (GLA) içermektedir. Önceki Teknik Gelismis organizmalarn immün sistemi bildik ya da “kendi” bilesenlerinin ajanlaanLn yabanc lajanlardan (ya da “kendinden olmayan” ajanlardan) aylnt edilmesiyle karakterize edilir, bu sekilde de yabanc !ajanlar immün tepkilere yol açarken, “kendi” bilesenleri yok sayîl`lya da tolare edilir. Immün tepkiler geleneksel olarak antijenlere özgü antikorlarlîi plazma hücreleri olarak bilinen farklühsmg B lenfositler taraf Eidan üretildigi humoral tepkiler olarak ya da T lenfositlerin çesitli tiplerinin çesitli mekanizmalar vasEasgIla antijenleri elimine etmek için islev gördügü hücre arac Jiîtepkiler olarak karakterize edilmistir. Örnegin, spesifik antijenleri tanßlabilen CD4+ yardEnc BT hücreler, bir immün tepkiye kat[[mas Diçin immün sistemin diger hücrelerini almak için sitokinler gibi çözünebilir arac Iarîlsalarak cevap verebilir. Ayrßa, yine spesifik antijenleri tanglabilen CD8+ sitotoksik T hücreler, antijen tas lyan bir hücre ya da partiküle baglanarak ve bunu yok ederek ya da zarar vererek cevap verebilir. Immünolojik tekniklerde genellikle bir konakta istenilen bir immün tepkinin indüklenmesi amaclyla çesitli formülasyonlara göre belirli asllar saglandlgl bilinmektedir.

Bir konaga bir asiîi uygulanmasEvasEfaslýla spesifik immün tepkilerin ortaya çEkartEImasü için çesitli stratejiler aras [Iida @Sila öldürülmüs ya da zay [filaühis canlübulasßEpatojenlerle, örnegin virüsler, bakteriler ya da belirli ökaryotik patojenlerle asllama; immün bir tepkinin istendigi antijeni (antijenleri) kodlayan genetik materyalin ekspresyonunu yönetebilen virülan olmayan bir enfektif ajanla as [[ama; ve patojene kars Eimmüniteyi indüklemek için belirli bir patojenden izole edilen immünojenleri (örnegin proteinleri) içeren alt birim as [[argl'la as Elhma bulunmaktadi. (Bkz, ör, Liu, 1998 Nature Medicine 4(5 suppl.):515.) Belirli antijenler için, insan immün yetmezlik virüsleri ya da diger bulas Il :patoj enler, kanser, otoimmün hastalEk ya da diger klinik durumlara kars leir konag Uimmünolojik olarak korumada etkili olan as Llaan gelistirilmesinde bu yaklasimlarin hiç birinin özellikle etkili olmad g lbir ya da daha fazla immünite çesidi bulunabilir.

Enterobakteriyel lipopolisakkaridin (LPS) immün sistemin potent bir stimülatörü oldugu, buna karsîi adjuvanlarda kullanlîhîiîi toksik etkilerinden dolayFsza kesildigi uzun süredir bilinmektedir. LPS”nin toksik olmayan bir türevi, çekirdek karbonhidrat grubunun ve fosfat& indirgeyici uç glikozaminden uzaklastîllnasüyoluyla üretilen monofosforil lipid A (MPL) Ribi ve arkadaslarlarafßdan tarif edilmistir (1986, Immunology and Immunopharmacology of Bacterial Endotoxins, Plenum Publ. Corp., NY, p407-419).

MPLanin toksinlerden arlîldlîElmS versiyonu, disakkarit omurgaslîllîl 3-pozisyonundan açil zincirinin uzaklastLrLlmasLndan kaynaklanLn ve 3-O-açil grubu uzaklastLrLlmLs monofosforil lipid A (3D-MPL) olarak adlandlrllln GB 2122204B say ll. ldokümanda aç klanan metotlarla saflast nlabilir ve haz iilanabilir, söz konusu referans ayn lzamanda difosforil lipid A ve bunun 3-O-açil grubu uzaklastlîllmls varyantlarîiîlifsa etmektedir. Örnegin, 3D-MPL, çap olarak 0.2 um”den daha az bir partikül büyüklügüne sahip olan bir emülsiyon formunda hazilanmßti ve bunun imalat metodu WO 94/21292 sayEUEdokümanda ifsa edilmektedir.

Monofosforil lipid A ve bir yüzey aktif madde içeren sulu formülasyonlar WO984367OA2 say Jljlokümanda tarif edilmistir.

Adjuvan kombinasyonlarEida formüle edilecek olan bakteriyel lipopolisakkarit türevi adjuvanlar bakteriyel kaynaklardan saIlastLriLlabilir ve islenebilir ya da alternatif olarak sentetik olabilirler. Örnegin, saflastlrllrnls monofosforil lipid A Ribi ve arkadaslarl ll986'da (yukarldaki referans) tarif edilmektedir ve Salmonella sp.”den türetilen 3-O-açi1 grubu dokümanlarda tarif edilmektedir. 3D-MPL ve ß(l-6) glukozamin disakkaritler ve aynü zamanda diger saflastlIEImE ve sentetik lipopolisakkaritler tarif edilmistir (WO 98/01139; 231B sayJJDdokümanda Quillqja Saponaria Molina agaç kabugundan elde edilen saponin adjuvanlar ve 3D-MPL kombinasyonlarE tarif edilmistir. WO 95/17210 saylIE doküman skualen, a-tokoferol, ve immünostimülan QSZl ile formüle edilen ve istege bagljolarak 3D- MPL içeren polioksietilen sorbitan monooleat (TWEENTM-8O)'e dayalE bir adjuvant emülsiyon sistemini ifsa etmektedir. Bu kombinasyonlarn erisilebilirligine karslii, dogal ürünlerden türetilen adjuvanlarn kullanim ila yüksek üretim maliyetleri, gruptan gruba tutarsztlk, büyük ölçekli üretimle iliskili güçlükler ve herhangi bir belirli preparatln kompozisyonel hazîlama isleminde yabanc ?maddelerin bulunmaslyla ilgili belirsizlik gibi sorunlar eslik etmektedir.

Açk bir biçimde, gelismis aSEIara ihtiyaç bulunmaktadi ve özellikle yüksek satlfkta, kimyasal olarak tanihlanmß, gruptan gruba tutarl 111 sergileyen ve istenmeyen ya da yap @al olarak tanßilanmamß kirletici maddeler dahil edilmeden endüstriyel bir ölçekte verimli bir biçimde imal edilebilen adjuvan bilesenleri içeren asühra ihtiyaç bulunmaktadi Mevcut bulus, bu as [[ar için bilesimler ve metotlar saglamakta ve baska iliskili avantajlar sunmaktad E. makalelerinde monofosforil lipit A”n|n adjuvan aktivitesini açlklamaktadlrlar. Ulrich J T ve ark, monofosforil lipit a,y l “Vaccine Design - Subunit and Adjuvant Approach, Pharmaceutical Biotechnology, New York, Plenum Press, US, Vol. Vol. 6, I January 1995, Aini altbirim analoglarlve bunlarîl muramil dipeptit türevleri ile birlestirilmesinin adjuvan aktivitelerini açEklamßlardEE. Kanegasaki S ve ark European Journal Of Biochemistry, Vol. endotoksik aktivitelerin revize edilmis yapßal model kgaslamas Ba kimyasal olarak dayandjjlan lipit A,nLn analoglaanLn biyolojik aktivitelerini aç LklamaktadLijlar. Johnson A G ve ark "A comparison of the immunomodulating properties oftwo forms of monophosphoryl bakteriyel hücre duvarlarîidan izole edilmis saflastlîrlrns monofosforil lipit A olan MPUye kSl'aslasentetik lipit A, bilesik 5049ün immünomodüle edici özelliklerini incelemektedirler.

BULUSUN KISA AÇIKLAMASI Mevcut bulus bir glikopitanosil lipit adjuvanßJ(GLA) içeren bir bilesimi ve bir konakta kanser, enfeksiyonlu hastalEk veya bir otoimmün hastalEgEi önlenmesi veya tedavi edilmesi yönteminde kullanma yönelik bir farmasötik olarak kabul edilebilir taslSIlEEveya eksipiyanE saglamaktad B, burada söz konusu yöntem anEida veya smalEblarak veya herhangi bir düzende bir konaka GLA veya sunlardan türetilen veya sunlarla immünolojik olarak çapraz reaksiyona giren bir antijenin uygulanmaslnl içermektedir, (i) kanserle iliskili en az bir epitop, biyomolekül, hücre veya doku, (ii) enfeksiyonlu hasta] lkla iliskili en az bir enfeksiyona neden olan patojen, veya (iii) bir otoimmün hastallkla iliskili olan en az bir epitop, biyomolekül, hücre veya doku, burada GLA asagldaki formüle sahiptir: ali` 0 R* ”ago“ burada R1, R3, R5 ve R6 undesile esittir ve R2 ve R4 ise tridesile esittir.

Bulus ayrBa bir veya birden fazla kap içerisinde GLA içeren bir as Ebilesimini içeren bir kiti saglamaktad 3, burada GLA yukar Ila belirtilen formüle ve glikopiranosil lipit adjuvan E(GLA) içeren bir bilesimi bir konakta bir antijene immün cevabîl tetiklenmesi veya arttEEmasD yönteminde kullanJInak için bir farmasötik olarak kabul edilebilir tasßllîiîveya eksipiyan saglamaktadii, burada söz konusu yöntem bir konaka söz konusu GLA ve söz konusu antijenin aynl l anda veya 5 rial l olarak veya herhangi bir sliialamada uygulanmaslnl l içermektedir, ve burada söz konusu antijen sunlardan türetilmekte veya sunlarla immünolojik olarak çapraz reaksiyona girmektedir, (i) kanserle iliskili en az bir epitop, biyomolekül, hücre veya doku, (ii) enfeksiyonlu bir hastalkla iliskili en az bir enfeksiyona neden olan patojen, veya (iii) otoimmün bir hastalüîla iliskili en az bir epitop, biyomolekül, hücre veya doku, burada GLA yukar Ela belirtilen formüla sahiptir.

Burada ayrîia sentetik glikopiranosil lipit adjuvanE(GLA) bir adjuvan ve asEbilesiminin avantajlJbir biçimde uygulandgEbilesimler ve yöntemler aç Eklanmaktad 1. Burada ayrßa bir antijen ve bir glikopiranosil lipit adjuvanLnU(GLA) içeren bir asleilesimi açLlstlanmaktadLr.

Bulusun çesitli yaplland limalar lve yukarida atlflta bulunulan diger bilesimler ve yöntemler asag da aç klanmlSt 11.

Baska yap [[andmmalarda, (a) bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve bir toll benzeri reseptör (TLR) agonisti içeren bir as Ebilesinii saglanmakta olup, içerisindeki diger yapLlandLrmalarda TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polil:C, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanln Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Baska bir uygulamada asagdakileri içeren bir asFlbilesimi saglanmaktad TI: bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanl (GLA); ve saponinler ve saponin mimetiklerinden seçilen en az bir ko-adjuvan. Baska bir uygulamada, bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanEKGLA); ve en az bir yag ve ISCOMATRIXTM içeren bir tasgIEE içeren bir as Jbilesimi saglanmaktadi. Baska bir uygulamada, bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvan HGLA); ve (i) en az bir ko-adj uvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik immün modifiye ediciden (double stem loop immune modifier; dSLIM) bir ya da daha fazlasElDiçeren bir asjbilesimi saglanmaktadE. Belirli baska yapEfandEmalarda (i) bulunmasihalinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi tomatinden seçilir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) bulunmasi halinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanm Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIF) ve en az bir hepatit C antijeni ve (iii) bulunmasj halinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan seçilir. Baska bir uygulamada asagBakileri içeren bir asÜ bilesimi saglanmaktadî: bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanE (GLA); ve bir ko-adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasßlîlilan en az birisi, içerisinde: ko-adjuvan bir sitokin, bir deterjan ve bir blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimerden seçilir ve farmasötik olarak kabul edilebilir taslyLdealsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir Iipozom, bir novosom, bir niosom ve bir mikropartikülden seçilen bir tas y d içerir. Bir liposom ya da benzer taslyldlnln kullan Tdfg`be1ir1i bir uygulamada, söz konusu GLA liposomun katmanlîlyapî`halindedir ya da kapsüllüdür. Bir mikropartikülün kullanEIîdfgübelirli baska bir uygulamada, mikropartikül polimer yag lipitlerine dayanan ya da bunlarEiçeren bir mikropartiküldür.

Belirli baska yapEandmmalarda, söz konusu sitokin GM-CSF, IL-2, IL-7, IL-12, TNF-u ve L121, CRL1005, PLGA, PLA, PLG, ve polil:C°den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir.

Baska yapLlandLrmalarda asagLdakileri içeren bir asJbilesimi saglanmaktadir: Bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekanslna uygulanabilir sekilde bagl blan bir baslatlcl içeren en az bir rekombinan ekspresyon yaplsll;l ve bir glukopiranosil lipid adjuvanl (GLA). Bir uygulamada, rekombinan ekspresyon yapîslîl belirli baska yapilandlîimalarda bir adenovirüs, bir adeno iliskili virüs, bir herpesvirüs, bir lentivirüs, bir poksvirüs ve bir retrovirüsten seçilen bir Virüste bulunan bir Viral vektörde bulunur.

Yukaera açüglanan belirli yapüandîmalara göre, GLA 3”-de-O-asilatlüdegildir. YukarEla açllanan belirli yaplandimalara göre GLA sunlarüiçermektedir: (i) indirgeyici terminus glikosaminin, heksosamin pozisyonu 6 ve indirgeyici olmayan terminus glikosaminin heksosamin pozisyonu 1 arasßdaki eter baglantßüiçerisinden indirgetici olmayan terminus glikosamine baglüindirgeyici terminus glikosamine sahip bir diglikosamin omurgasß (ii) indirgeyici olmayan terminus glikosaminin heksosamin pozisyonu 4”e baglibir O-fosforil grubu; ve (iii) altlya kadar yagll lasil zinciri, burada yagll asil zincirlerinden birisi bir ester baglantîsl içerisinden indirgeyici terminus glikosamlnln 3-hidroksisine baglldlr, burada yagll ' asil zinvirlerinden birisi bir amid baglantTSI_ içerisinden indirgeyici olmayan terminus glikosaminin 2-amin0suna baglîim ve bir ester baglantßüaracEEgEile 12 karbon atomundan daha fazla olan bir alkanoil zincirine baglübir tetradekanoyl zincirini içermektedir ve burada yagljasil zincirlerinden birisi bir ester baglantgjaracEEgEile indirgeyiciolmayan terminus glikosaminin 3-hidr0ksisine baglElm ve bir ester baglantEjiçerisinden 12 karbon atomundan fazla olan bir alkanoil zincirine baglüair teradekanoyl zincirini içermektedir.

Bir TLR agonisti içeren yukarda tarif edilen yap LllandLijmalarn herhangi birisine göre, TLR agonisti TLR-2, TLR-3, TLR-4, TLR-5, TLR-6, TLR-7, TLR-8 ve TLR-9,dan seçilen en az bir TLR ile etkileserek biyolojik bir sinyali verebilir. Belirli baska yapllandliimalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzc, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanEi Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. TLR-7 ve/veya TLR-8 agonistinin kullanEÜdEgjbelirli bir uygulamada, TLR-7 ve/veya TLR-8 agonisti bir vezikül içerisinde yakalan 3.

Bu bulusun yukarEla tarif edilen yap Jhndîlmalaridan herhangi birin göre, GLA asagElaki formüle sahiptir: burada: R', R3, RS ve R6 ifadeleri undesildir; ve R2 ve R4 ifadeleri tridesildir.

Yukarîla tarif edilen yarp Iandîlmalarîl herhangi birisine göre, asDbilesimi bir konakta bir immün tepkiyi ortaya çikartabilir. Belirli baska yapllandlnmalarda immün tepki antijene Özgüdür. Yukar da tarif edilen yapilandlrmalarln herhangi birisine göre, söz konusu antijen bir konakta humoral bir tepki ve bir hücre araclll tepkiden seçilen bir immün tepkiye neden olabilir. Yukaera tarif edilen yapühndmmalarîi herhangi birisine göre, söz konusu asü bilesimi bir konakta bir Tiil-tipi T lenfosit tepkisi, bir TUZ-tipi T lenfosit tepkisi, bir sitotoksik T lenfosit (CTL) tepkisi, bir antikor tepkisi, bir sitokin tepkisi, bir lenfokin tepkisi, bir kemokin tepkisi ve bir inflamatuar tepkiden seçilen en az bir immün tepkiye neden olabilir. YukarBa tarif edilen yapühndßmalari herhangi birisine göre, söz konusu asü bilesimi bir konakta (a) sitokinin interferon-gama (IFN-y), tümör nekroz faktörü-alfa (TNF- a)”dan seçildigi bir ya da birden daha fazla sitokinin üretimi, (b) interlökinin IL-l, IL-2, IL-3, daha fazla interlökinin üretimi, (0) kemokinin MlP-la, MlP-lß, RANTES, CCL4 ve CCL5,ten seçildigi bir ya da birden daha fazla kemokinin üretimi, ve (d) bir bellek T hücre tepkisi, bir bellek B hücre tepkisi, bir efektör T hücre tepkisi, bir sitotoksik T hücre tepkisi ve bir efektör B hücre tepkisinden seçilen bir lenfosit tepkisinden seçilen en az bir iinmune tepkiye neden olabilir.

Yukarîla tarif edilen yapEandEmalarEi herhangi birisine göre, söz konusu antijen bir bakteriyum, bir virüs ve bir mantardan seçilen en az bir bulasßEpatojenden elde edilir.

Belirli baska yap Iand Ilmalarda, söz konusu bakteri bir aktinobakteriyumdur ve yine belirli baska yapilandümalarda söz konusu aktinobakteriyum bir mikobakteriyumdur. Iliskili baska yapllandimalarda söz konusu mikobakteriyum M. tuberculosi's ve M. lepraelden seçilir.

Belirli baska alakalj yapEandEmalarda söz konusu bakteriyum Salmonella, Neisseri'a, Borreli'a, Chlamydz'a ve Bordetellwdan seçilir.

Belirli ve iliskili baska yapllandlnmalarda, söz konusu virüs bir herpes siinpleks Virüsü, bir insan immün yetmezlik virüsü (HIV), bir kedi immün yetmezlik Virüsü (FIV), sitomegalovirüs, Varisella Zoster Virüsü, hepatit Virüsü, Epstein Barr Virüsü (EBV), respiratuar sinsityal virüs, insan papillom virüsü (HPV) ve bir sitomegalovirüsten seçilir.

Yukarîla tarif edilen yapüandmmalarß herhangi birisine göre, söz konusu antijen belirli baska yap Jland Emalarda HIV-l ve HIV-?den seçilen bir insan immün yetmezlik virüsünden Belirli ve iliskili baska yathndimalarda, söz konusu mantar Aspergi'llus, Blastomyces, Cocci'dioi'des ve Pneumocysti's`ten seçilir. Belirli ve iliskili baska yapllandimalarda söz konusu mantar belirli baska yap Llandijmalarda bir Candi'da olan bir mayadLÜ, içerisinde yine belirli baska yapvlandnnalarda söz konusu Candida C. albicans, C. glabrata, C. krusei, C. lusitaniae, C. tropicalis ve C. parapsi'losiften seçilir.

Yukar Ela tarif edilen yap Jland Ilmalarîi herhangi birisine göre söz konusu antijen belirli baska yap Jland Emalarda bir protozoan olan, belirli baska yap [land Emalarda bir Plasmodyum olan, yine belirli baska yapüandîmalarda P. falci'parum, P. vivax, P. malariae ve P. ovale7den seçilen bir parazitten elde edilir. Belirli baska yapüandßmalarda söz konusu parazit Acanthamoeba, Entamoeba hz'stolytica, Angi'ostrongylus, Schi'stosoma mansoni'i', Schistosoma haematobium, Schistosoma japom'cum, Schistosoma mekongi, Cryptospori'di'um, Ancylostoma, Entamoeba hz'stolyti'ca, Entamoeba coli, Entamoeba dispar, Entamoeba hartmanni', Entamoeba polecki, Wuchereri'a bancrofti', Giardia, Laysmanya, Enterobi'us vermi'culari's, Ascaris lumbricoides, T richuri's trichuri'a, Necator americanus, Ancylostoma duodenale, Brugia malayi', Onchocerca volvulus, Dracanculus medinensis, T richinella spirali's, Strongyloi'des stercorali's, Opi'sthorchi's sinensis, Paragonimus sp, F asci'ola hepatica, F asciola magma, Fasciola giganti'ca), T aem'a sagi'nala ve T aem'a solium'dan seçilir.

Yukarîla tarif edilen yapEIandîmalarEi herhangi birisine göre, söz konusu antijen en az bir kanser hücresinden elde edilir. Belirli baska yap [[andîmalarda, söz konusu kanser hücresi bir primer katEtümörden kaynaklani ve belirli baska yaplIandEmalarda, söz konusu kanser hücresi metastatik ya da sekonder bir katjtümör olan bir kanserden kaynaklari] ve belirli baska yapEEandîmalarda, söz konusu kanser hücresi dolasEndaki bir tümör ya da bir asit tümörü olan bir kanserden kaynaklari lii Belirli ve iliskili baska yap lllandbimalarda, söz konusu kanser hücresi serviks kanseri, yumurtallk kanseri, meme kanseri, prostat kanseri, übrosarkom, miksosarkom, liposarkom, kondrosarkom, osteojenik sarkom, kordom, anjiyosarkom, endotelyosarkom, lenfanjiyosarkom, pseudomyxoma petitonei, lenfanjiyoendotelyosarkom, sinovyom, mezotelyoma, EWing tümörü, leiomiyosarkom, rabdomiyosarkom, kolon karsinomu, pankreatik kanser, skuamöz hücreli karsinom, bazal hücreli karsinom, adenokarsinom, ter bezi karsinomu, yagbezi karsinomu, papiller karsinom, papiller adenokarsinomlar, kistadenokarsinom, medüller karsinom, bronkojenik karsinom, renal hücre karsinomu, hepatom, safra kanal: karsinomu, koriyokarsinom, seminom, embriyonal karsinom ve Wilm,s tümöründen seçilen bir kanserden kaynaklanE. Belirli ve iliskili baska yap Ühndßmalarda, kanser hücresi testiküler tümör, akciger karsinomu, küçük hücreli akciger karsinomu, mesane karsinomu, epitelyal karsinom, gliyom, astrositom, medulloblastom, kraniyofaringiyom, ependimom, pinealom, hemanjiyoblastom, akustik nörom, oliodendrogliyom, meninjiyom, melanom, nöroblastom, retinoblastom, lösemi, lenfoma, multipl miyelom, Waldenstrom makroglobulinemi ve aglrl zincir hastallglndan seçilen bir kanserden kaynaklan lî'l.

Yukarîla tarif edilen yap [[andmmalarß herhangi birisine göre, söz konusu antijen otoimmün bir hastalügla iliskili olan en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da bir dokudan elde edilir ya da bunlarla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Belirli baska yap [lhnd Ilmalarda otoimmün bir hastalüîla iliskili olan epitop, biyomolekül, hücre ya da doku, otoimmün hastalk sistemik eritematöz oldugunda snRNP, otoimmün hastalik bir Graves hastalgj oldugunda tiroid epitelyal hücre, tiroglobulin, tirotropin reseptöründen en az birisi, otoimmün hastalik trombositopenik purpura oldugunda bir trombosit, otoimmün hastal k pemfigus oldugunda pemfigus antijen, desmoglein-3, desmoplakin, envoplakin ve büllöz peinfigoid antijen 1`den en az birisi, otoimmün hastallk multipl skleroz oldugunda iniyelin bazik protein, otoimmün hastalk tip 1 diyabet oldugunda bir pankreatik adacüî beta hücre ve otoimmün hastalEk miyasteni gravis oldugunda bir asetilkolin reseptörüdür.

Baska bir uygulamada, bir immün tepkinin indüklenmesi ya da arttmüinasüçin farmasötik bir bilesim saglanmakta olup, söz konusu bilesim istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanHGLA); ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasßtßüya da eksipiyan içerir.

Baska bir uygulamada, bir immün tepkinin indüklenmesi ya da arttßümas Eiçin farmasötik bir bilesim saglanmakta olup, söz konusu bilesim bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanL(GLA); ve fannasötik olarak kabul edilebilir bir taslyleya da eksipiyan içerir. Baska bir uygulamada, bir immün tepkinin indüklenmesi ya da arttlrllmasl için farmasötik bir bilesim saglanmakta olup, söz konusu bilesim bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanl-(GLA); bir toll benzeri reseptör (TLR) agonisti; ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir taslylcl ya da eksipiyan içerir. Baska bir uygulamada, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanîi Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIF) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Baska bir uygulamada bir immün tepkinin indüklenmesi ya da arttîIJInasj için farmasötik bir bilesim saglanmaktadE, söz konusu bilesim sunlarE içermektedir: bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanE (GLA); saponinler ve saponin mimetiklerinden seçilen en az bir ko-adjuvan; ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasßllfiEya da eksipiyan. Baska bir uygulamada, bir immün tepkinin indüklenmesi ya da arttLrLlmasLliçin farmasötik bir bilesim saglanmakta olup, söz konusu bilesim bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanl |(GLA); ve taslýölîiçerir. Baska bir uygulamada bir immün tepkinin indüklenmesi ya da arttlî"lFlmas`liçin farmasötik bir bilesim saglanmakta olup, söz konusu bilesim sunlarjiçermektedir: (a) bir antijen; (b) istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); (c) (i= en az bir ko-adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik modifiye edici (dSLIM); ve (d) farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasýßEya da eksipiyandan bir ya da daha fazlasü Belirli baska yap Jhndimalarda (i) bulunmas Ehalinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi tomatinden seçilir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) bulunmasi halinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polil:C, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanln Laysmanya hoinologu ve baslatma faktörü 4a (LeIF) ve en az bir hepatit C antijeni ve (iii) bulunmasi' halinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan seçilir.

Baska bir uygulamada bir immün tepkinin indüklenmesi ya da arttEÜInas Diçin farmasötik bir bilesim saglanmakta olup, söz konusu bilesim sunlarEiçermektedir: bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanD(GLA); ve bir ko-adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasýîiian en az birisi, içerisinde: ko-adjuvan bir sitokin, bir blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimer ve bir deterjandan seçilir ve farmasötik olarak kabul edilebilir taslchLkalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir lipozom ve bir mikropartikülden seçilen bir tas y (1 liçerir. Belirli baska yap land iimalarda, söz konusu sitokin GM-CSF, IL-2, lL-7, IL-12, TNF ve lFN-gamadan seçilir, blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir polimer Pluronik® Ll2l, CRLlOOS, PLGA, PLA, PLG, ve polilzC°den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir.

Baska bir uygulamada asag Elakileri içeren bir farmasötik bilesim saglanmaktad mi Bir antij eni kodlayan bir nükleik asit sekans ma uygulanabilir sekilde bagljolan bir baslatEEiçeren en az bir rekombinan ekspresyon yapßj istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvan3(GLA); ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasßißEya da eksipiyan. Belirli baska yapilandEmalarda, rekombinan ekspresyon yapßü belirli baska yap Jhndimalarda bir adenovirüs, bir adeno iliskili Virüs, bir herpesvirüs, bir lentivirüs, bir poksvirüs ve bir retrovirüsten seçilen bir Virüste bulunan bir Viral vektörde bulunur.

Yukarda tarif edilen farmasötik bilesimlerin belirli baska yapilandilmalarîida göre, söz konusu antijen ve GLA birbiriyle temas halindedir ve yukarEla tarif edilen farmasötik bilesimlerin belirli baska yapiiandmmalarßda göre söz konusu antijen ve GLA birbiriyle temas halinde degildir. Antijen ve GLA'nEi birbiriyle temas halinde olmadgjbelirli baska yaplandimalarda bunlar ayrj kaplarda bulunur. Baska yapiandîmalarda, bir immün tepkisinin indüklenmesi ya da arttüüinasjiçin farmasötik bir bilesim saglanmakta olup, söz konusu bilesim bir antij en ve bir ilk farmasötik olarak kabul edilebilir tasSIEiEya da eksipiyan içeren bir ilk kombinasyon; ve bir glukopiranosil lipid adjuvanL(GLA) ve içerisindeki antijen ve GLA birbiriyle temas halinde olmad g ikinci bir farmasötik olarak kabul edilebilir taslylcl ya da eksipiyan içeren ikinci bir kombinasyon içermektedir. Baska bir uygulamada, söz konusu antijen ve GLA ayn-kaplarda bulunur. Belirli iliskili yapilandi'malarda, farmasötik olarak kabul edilebilir ilk tasgiîijya da eksipiyan, farmasötik olarak kabul edilebilir ikinci tasßiBDya da eksipiyandan farklEllI. Belirli ve iliskili baska yapIand Bmalarda, farmasötik olarak kabul edilebilir ilk tasSiZiJya da eksipiyan, farmasötik olarak kabul edilebilir ikinci tasgiB Eya da eksipiyandan farklîdegildir.

Baska bir yapEiandEmada, bulasEiDhastaIJî tasEha riski oldugundan süphelenilen ya da tas ISlan bir sujede bulasßlir hastallgi tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir as LbilesimininuygulanmasmLve bu suretle de bulasLcLhastalLgLn tedavi edilmesi ya da önlenmesini içennektedir, söz konusu antijen bulasldl hastallkla iliskilendirilen en az bir bulasld lpatojenden türetilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir yapTandîlmada, bulaslöl`lhasta1lk tasîha riski oldugundan süphelenilen ya da tasýan bir sujede bulasd lbir hastallgln tedavi edilmesi ya da önlenmesi inetodunda, bu bulusun Glukopiranozil Iipid adjuvan-nil kullanîhîsaglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; ve (b) glukopiranosil Iipid adjuvan (GLA); ve (C) bir toll benzeri reseptör (TLR) agonisti içeren bir as jbilesimininuygulanmasmüve bu suretle de bulasßühastalEgEl tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antij en bulas B jiastallkla iliskilendirilen en az bir bulasîljpatojenden elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir.

Baska bir uygulamada, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polil:C, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanß Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Baska bir uygulamada, bulasoLhastalLk tas Lma riski oldugundan süphelenilen ya da tas yan bir sujede bulaslcl bir hastallgln tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil Iipid adjuvan (GLA); ve (c) saponinler ve saponin mimetiklerinden olusan gruptan seçilen en az bir ko-adjuvan içeren bir as Dbilesimininuygulanmasîiüve bu suretle de bulasß :hastalEgEi tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antij en bulasEE hastallla iliskilendirilen en az bir bulasEEpatojenden elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir uygulamada, bulasßEhastalE& tasma riski oldugundan süphelenilen ya da tas @an bir sujede bulasßübir hastalEgEi tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (c) bir yag ve ISCOMATRIXTM°den en az birisinden olusan bir tasly dl liçeren bir asl lbilesimininuygulanmaslnl ve bu suretle de bulas d lhastallg n tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen bulas d hastallkla iliskilendirilen en az bir bulasö`patojenden elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir.

Baska bir uygulamada, bulasßühastalüî taslîha riski oldugundan süphelenilen ya da tasßlan bir sujede bulasBJbir hastalgi tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil Iipid adjuvan (GLA); ve (c) (i) en az bir ko-adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik immün modifiye ediciden (dSLIM) bir ya da daha fazlasEiDiçeren bir as übilesimininuygulanmasîljve bu suretle de bulasEEhastalEgEl tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen bulasßjhastalügla iliskilendirilen en az bir bulasEEpatojenden elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Belirli baska yapLlandLIimalarda (i) bulunmasLhalinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi tomatinden seçilir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) bulunmasl halinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3MOO3, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanln Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LelF) ve en az bir hepatit C antijeninden olusan gruptan seçilir ve (iii) bulunmasîlhalinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan olusan gruptan seçilir.

Baska bir uygulamada, bulaslîlühastalüg tas ßia riski oldugundan süphelenilen ya da tas &an bir sujede bulasBJbir hastalgîi tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodunda, bu bulusun Glukopiranozil lipid adjuvanîlîl kullaniiEsaglanmakta olup, Söz konusu metot suj eye (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (0) bir ko-adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasylddan en az birisini içeren bir asl bilesimininuygulanmasn lve bu suretle de bulaslcl hastallgln tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu ko-adjuvan bir sitokin, bir blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimer ve bir deterjandan seçilir ve söz konusu farmasötik olarak kabul edilebilir tasSIEEkalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir liposom ve bir mikropartikülden olusan gruptan seçilen bir tasSlBZliçerir, söz konusu antijen bulasßühastallla iliskilendirilen en az bir bulasBJpatojenden elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir.

Belirli baska yapühndmmalarda, söz konusu sitokin GM-CSF, IL-2, IL-7, IL-l2, TNF-a ve L121, CRLlOOS, PLGA, PLA, PLG, ve polil: C7den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Spam 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir.

Baska bir uygulamada, bulaslölîhastallk tasEha riski oldugundan süphelenilen ya da taslýan bir sujede bulasîljbir hastalgi tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekans ma uygulanabilir bir biçimde baglüolan bir baslatlîlüiçeren en az bir rekombinan ekspresyon yapßß ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir as Dbilesimininuygulanmasßüve bu suretle de bulasß :hastaIEgß tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antij en bulasEE hastalîkla iliskilendirilen en az bir bulasßEpatojenden elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir uygulamada, rekombinan ekspresyon yapßü belirli baska yathndimalarda bir adenovirüs, bir adeno iliskili virüs, bir herpesvirüs, bir lentivirüs, bir poksvirüs ve bir retrovirüsten seçilen bir virüste bulunan bir viral vektörde bulunur. YukarLda tarif edilen metotlarla ilgili belirli yapilandlrlmalara göre, söz konusu antijen bir bakteriyum, bir virüs ve bir mantardan seçilen en az bir bulasldl patojenden elde edilir.

Baska bir uygulamada, otoimmün bir hastal lt tasima riski oldugundan süphelenilen ya da taslýan bir sujede otoimmün hastallgii tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir as Ebilesimininuygulanmasm:lve bu suretle de otoimmün hastalfgi tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen otoimmün hastalßla iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir uygulamada, otoimmün bir hastallk tasEna riski oldugundan süphelenilen ya da tasglan bir sujede otoimmün hastallgß tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (c) toll benzeri bir reseptör (TLR) agonisti içeren bir asl v bilesimininuygulanmas n lve bu suretle de otoimmün hastallgln tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen otoimmün hastalllla iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska yapllandîmalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanm Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Baska bir uygulamada, otoimmün bir hastalüî tas Era riski oldugundan süphelenilen ya da tasßian bir sujede otoimmün bir hastalîg'îl tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (c) saponinler ve saponin mimetiklerinden olusan gruptan seçilen en az bir ko-adjuvan içeren bir as lbilesimininuygulanmaslnl lve bu suretle de otoimmün hastal g n tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen otoimmün hastalllla iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir uygulamada, otoimmün bir hastallk tasEna riski oldugundan süphelenilen ya da tas Stan bir sujede otoimmün bir hastalEgEi tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (o) bir yag ve ISCOMATRIXTMlden en az birisini içeren bir taslSlElE içeren bir asEbilesimininuygulanmasElîlve bu suretle de otoimmün hastalEgi tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen otoimmün hastalßla iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir uygulamada, otoimmün hastalüç tasima riski oldugundan süphelenilen ya da taslyan bir sujede bulasldl [bir otoimmün hastal g ri tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (c) (i) en az bir ko-adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik immün modifiye ediciden (dSLIM) bir ya da daha fazlasîi`l içeren bir asl' bilesimininuygulanmasij ve bu suretle de otoimmün hastalEgEi tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen otoimmün hastalkla iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Belirli baska yapüandmmalarda (i) bulunmasEhalinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi tomatinden seçilir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) bulunmasE halinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanln Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIF) ve en az bir hepatit C antijeninden olusan gruptan seçilir ve (iii) bulunmasl lhalinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan olusan gruptan seçilir.

Baska bir uygulamada, bir otoimmün hastall taslîzna riski oldugundan süphelenilen ya da tas ISlan bir sujede otoimmün hastaltgß tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (o) bir ko-adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasSIEElan en az birisini içeren bir as UbilesimininuygulanmasmLve bu suretle de otoimmün hastalLgLn tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu ko-adjuvan bir sitokin, bir blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimer ve bir deterjandan seçilir ve söz konusu farmasötik olarak kabul edilebilir taslýÜH kalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su einülsiyonu, bir liposom ve bir mikropartikülden olusan gruptan seçilen bir tasglîljiçerir, söz konusu antijen otoimmün hastalEkla iliskilendirilen en az bir epitop, biyoinolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir uygulamada, söz konusu sitokin GM-CSF, IL-2, IL-7, IL-12, TNF-(x ve IFN-gamadan seçilir, blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir polimer Pluronik L121, CRL1005, PLGA, PLA, PLG, ve polil: C7den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir.

Baska bir uygulamada, bir otoimmün hastalk tasLma riski oldugundan süphelenilen ya da taslyan bir sujede otoimmün hastallgln tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekanslna uygulanabilir bir biçimde baglHolan bir baslatßriçeren en az bir rekombinan ekspresyon yapsl;lve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir asl bilesimininuygulanmaslnl ' ve bu suretle de otoimmün hastalgü tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen otoimmün hastalEkla iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir uygulamada, rekombinan ekspresyon yapîj belirli baska yapElandEmalarda bir adenovirüs, bir adeno iliskili virüs, bir herpesvirüs, bir lentivirüs, bir poksvirüs ve bir retrovirüsten seçilen bir virüste bulunan bir viral vektörde bulunur.

Bir otoimmün hastalgn tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu ile ilgili olarak yukarLda tarif edilen belirli yapllandlrmalarda, söz konusu otoimmün hasta] lt Tip 1 diyabet, romatoid artrit, multipl skleroz, sistemik lupus eritematöz, miyestani gravis, Crohn hastal g ,l Graves hastal'glîl trombositopenik purpura ve pemtigustan olusan gruptan seçilir. Bir otoimmün hastalgm tedavi edilmesi ya da önlenmesi metoduyla ilgili olarak yukarma tarif edilen baska yathndEmalarda otoimmün hastalîkla iliskili olan epitop, biyomolekül, hücre ya da doku, otoimmün hastalik sistemik eritematöz oldugunda snRNP, otoimmün hastalER bir Graves hastalgüoldugunda tiroid epitelyal hücre, tiroglobulin, tirotropin reseptöründen en az birisi, otoimmün hastalüî trombositopenik purpura oldugunda bir trombosit, otoimmün hastalüg pemfigus oldugunda pemtigus antijen, desmoglein-3, desmoplakin, env0plakin ve büllöz pemfigoid antijen 1°den en az birisi, otoimmün hastaltk multipl skleroz oldugunda miyelin bazik protein, otoimmün hastal lt tip 1 diyabet oldugunda bir pankreatik adacllt beta hücre ve otoimmün hastal lt miyasteni gravis oldugunda bir asetilkolin reseptöründen seçilir.

Baska yapIandmmalara göre, kanser taslîna riski oldugundan süphelenilen ya da taslýan bir sujede kanserin tedavi edilmesi ya da Önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir asE bilesimininuygulanmasij ve bu suretle de kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen kanserle iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska yap landimalara göre, kanser tas mia riski oldugundan süphelenilen ya da tas @an bir sujede kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (c) toll benzeri bir reseptör (TLR) agonisti içeren bir asi lbilesimininuygulanmasn lve bu suretle de kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen kanserle iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska yapllandlrmalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanüi Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Baska yap [[and Emalara göre, kanser tasEna riski oldugundan süphelenilen ya da taslSl'an bir sujede kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (c) saponinler ve saponin mimetiklerinden olusan gruptan seçilen en az bir ko-adjuvan içeren bir asübilesimininuygulanmasijve bu suretle de kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, Söz konusu antijen kanserle iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir.

Baska yap Tandlîlmalara göre, kanser taslîna riski oldugundan süphelenilen ya da taslýan bir sujede kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (0) bir yag ve ve bu suretle de kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen kanserle iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska yapÜhndEmalara göre, kanser tasEna riski oldugundan süphelenilen ya da tas lyan bir sujede bulasLdeanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (c) (i) en az bir ko-adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik immün modifiye ediciden (dSLlM) bir ya da daha fazlasij içeren bir asE bilesimininuygulanmasij ve bu suretle de kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen kanserle iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Belirli baska yap landimalarda (i) bulunmas Ehalinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan olusan gruptan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi tomatinden seçilir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) bulunmasEhalinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polil:C, CpG, 3M003, flagellim ökaryotik ribozomal uzamanln Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIF) ve en az bir hepatit C antijeninden olusan gruptan seçilir ve (iii) bulunmas lhalinde iinidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuiinod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan olusan gruptan seçilir.

Baska yapTandlîlmalara göre, kanser taslîna riski oldugundan Süphelenilen ya da taslýan bir sujede kanserin tedavi edilmesi ya da Önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen; (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (e) bir ko-adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasSlZiBan en az birisini içeren bir asü bilesimininuygulanmasij ve bu suretle de kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu ko-adjuvan bir sitokin, bir blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimer ve bir deterjandan seçilir ve söz konusu farmasötik olarak kabul edilebilir tasglßjkalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir liposom ve bir mikropartikülden olusan gruptan seçilen bir tasSlBJçerir, söz konusu antijen kanserle iliskilendirilen en az bir epitop, biyoinolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünoloj ik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir uygulamada, söz konusu sitokin GM- CSF, IL-2, IL-'7, IL-12, TNF-a ve IFN-gamadan seçilir, blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir polimer Pluronik L121, CRLlOOS, PLGA, PLA, PLG, ve polil: C5den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir. Baska yapüandmmalara göre, kanser tasEha riski oldugundan Süphelenilen ya da tasßlan bir sujede kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekansßa uygulanabilir bir biçimde baglüolan bir baslatßüiçeren en az bir rekombinan ekspresyon yapßü ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir as DbilesimininuygulanmasElDve bu suretle de kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen kanserle iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir uygulamada, rekombinan ekspresyon yaplsl, belirli baska yap land _rlmalarda bir adenovirüs, bir adeno iliskili virüs, bir herpesvirüs, bir lentivirüs, bir poksvirüs ve bir retrovirüsten seçilen bir virüste bulunan bir viral vektörde Kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metotlarßß belirli baska yap [Iandmmalarßda, söz konusu antijen, belirli baska yapIandEmalarda bir primer katDtümörden kaynaklanan ve belirli baska yap [[landßmalarda metastatik ya da sekonder bir katEtümör olan bir kanserden kaynaklanan ve belirli baska yapilandimalarda dolasßidaki bir tümör ya da bir asit tümör olan bir kanserden kaynaklanan en az bir kanser hücresinden elde edilir. Belirli yapllandnmalarda, söz konusu kanser hücresi serviks kanseri, yumurtalüt kanseri, meme kanseri, prostat kanseri, fibrosarkom, miksosarkom, liposarkom, kondrosarkom, 0ste0jenik sarkom, kordom, anjiyosarkom, endotelyosarkom, lenfanjiyosarkom, pseudomyxoma petitonei, lenfanjiyoendotelyosarkom, sinovyom, mezotelyoma, Ewing tümörü, leiomiyosarkom, rabdomiyosarkom, kolon karsinomu, pankreatik kanser, skuamöz hücreli karsinom, bazal hücreli karsinom, adenokarsinom, ter bezi karsinomu, yagbezi karsinomu, papiller karsinom, papiller adenokarsinomlar, kistadenokarsinom, medüller karsinom, bronkojenik karsinom, renal hücre karsinomu, hepatom, safra kanalE karsinomu, koriyokarsinom, seminom, embriyonal karsinom ve Wilms, tümöründen seçilen bir kanserden kaynaklani Belirli baska yapilandmmalarda, kanser hücresi testiküler tümör, akciger karsinomu, küçük hücreli akciger karsinomu, mesane karsinomu, epitelyal karsinom, gliyom, astrositom, medulloblastom, kraniyofaringiyom, ependimom, pinealom, hemanjiyoblastom, akustik nörom, oliodendrogliyom, meninjiyom, melanom, nöroblastom, retinoblastom, lösemi, lenfoma, multipl miyelom, Waldenstrom makroglobulinemi ve aglii zincir hastal glndan seçilen bir kanserden kaynaklanlr.

Bulasîijhastallk ya da otoimmün hastalüî ya da kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metotlarim herhangi birinin belirli baska yap Iand EmasEia göre, uygulama adEnEbir kez gerçeklestirilir, diger taraftan bu metotlarm diger belirli yap [[andîmalarlîida, uygulama adlînü en az iki kez gerçeklestirilir ve belirli baska yaplandîimalarida uygulama adinüüç kez gerçeklestirilir ve belirli baska yap [land imalar îlda uygulama adßiîdört ya da daha fazla kez gerçeklestirilir. Bulasßüiastalk ya da otoimmün hastalEk ya da kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi için yukarda tarif edilen metotlaan herhangi birinin belirli baska yap land limalar na göre, uygulama ad mindan önce, suje, bakteriyel bir ekstrakt, canll bir Virüs aslsl ,lantijeni kodlayan bir nükleik asit sekanslna uygulanabilir bir biçimde baglanan bir baslatîrliçeren en az bir rekombinan ekspresyon yapßlîve antijeni kodlayan bir nükleik asit sekans îia uygulanabilir bir biçimde baglanan bir baslatßjiçeren bir viral vektörden seçilen bir hazElayEEakanla hazm hale getirilir. Baska bir uygulamada, bakteriyel ekstrakt Baci'llus Calmet-Gueri'ri (BCG)°den elde edilir.

Baska bir uygulamada, bir sujede istenilen bir antijene özgü immün tepkisinin ortaya çItart Jinas :rya da arttEJInas Diçin olan bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen, ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir asE bilesimininuygulanmasBiçerir. Baska bir uygulamada, bir sujede istenilen bir antijene özgü immün tepkisinin ortaya çkartlinas Jya da arttijhnas Liçin olan bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen, (b) glukopiranosil lipid adjuvan (GLA), ve bir toll benzeri reseptör (TLR) agonisti içeren bir asl | bilesimininuygulanmasnl | içerir. Baska yapTandîlmalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polil:C, CpG, 3M003, tlagellin, ökaryotik ribozomal uzamanln Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelt) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Baska bir uygulamada, bir sujede istenilen bir antijene özgü immün tepkisinin ortaya çÜîartEmasEya da arttillnasüiçin olan bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen, (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA), ve (c) saponin ve saponin mimetiklerinden olusan gruptan seçilen en az bir ko- adjuvan içeren bir asDbilesimininuygulanmasß:içerir. Baska bir uygulamada, bir sujede istenilen bir antijene özgü immün tepkisinin ortaya çüîart [Ihlas Elya da arttilînas Elçin olan bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen, (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA), ve (c) bir yag ve ISCOMATRIXTM”den en az birisini içeren bir tasgiLdLiçeren bir asi bilesimininuygulanmastrtl içerir. Baska bir uygulamada, bir sujede istenilen bir antij ene özgü immün tepkisinin ortaya çlkartllmasl ya da arttlrtllmasl liçin olan bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen, (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) ve (e) (i) en az bir ko-adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az. bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik immün modifiye edici (dSLlM) içeren bir as :bilesimininuygulanmasßüçerir. Belirli baska yap land [Imalarda (i) bulunmas lalinde ko- adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan olusan gruptan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi tomatinden seçilir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) bulunmas Ehalinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, poliltC, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanLn Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIF) ve en az bir hepatit C antijeninden olusan gruptan seçilir ve (iii) bulunmasl l halinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan olusan gruptan seçilir.

Baska bir uygulamada, bir sujede istenilen bir antijene özgü immün tepkisinin ortaya çEait &nas Jya da arttEJInas Diçin olan bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijen, (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA), ve (e) bir ko-adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasßlßüan en az birisini içeren bir tasýBJ içeren bir asü bilesimininuygulanmasûjiçerir, söz konusu ko-adjuvan bir sitokin, bir blok kopolimer, biyolojik olarak parçalanabilir bir polimer ve bir deterjandan seçilir ve söz konusu farmasötik olarak kabul edilebilir tasßtîlükalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir liposom ve bir mikropartikülden olusan gruptan seçilen bir tasyndiçerir.

Belirli baska yapilandlnmalarda, söz konusu sitokin GM-CSF, IL-2, IL-7, IL-12, TNF-oi ve lFN-gamadan seçilir, blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir polimer Pluronik L121, CRLIOOS, PLGA, PLA, PLG, ve polil: C,den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir.

Baska bir uygulamada, bir sujede istenilen bir antijene özgü immün tepkisinin ortaya çJEtart Jinas :ya da arttilrnas Üiçin olan bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot sujeye (a) bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekansEia uygulanabilir bir biçimde baglanan bir baslatîljiçeren en az bir rekombinan ekspresyon yapßÇ ve (b) glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir asE bilesimininuygulanmasßE içerir. Belirli baska yapEandîmalarda, rekombinan ekspresyon yapEÇ belirli baska yaptiandlîmalarda bir adenovirüs, bir adeno iliskili virüs, bir herpesvirüs, bir lentivirüs, bir poksvirüs ve bir retrovirüsten seçilen bir Virüste bulunan bir viral vektörde bulunur.

Bir sujede istenilen bir antijene özgü cevablîi allîimaslîveya artm'lmaslîla iliskin yukari-da aç klanan yöntemlere ait belirli ilave yapElandmmalarda GLA 3,-de-O- asilatljdegildir. Bir sujede istenilen bir antijene özgü cevabß al [Iimasü veya art Elmas Ba iliskin yukarEla aç Elanan yöntemlere ait belirli ilave baska yaplandmmalarda GLA sunlarjiçermektedir: (i) indirgeyici terminus glikosaminin, heksosamin pozisyonu 6 ve indirgeyici olmayan terminus glikosaminin heksosamin pozisyonu l aras Eldaki eter baglantßE içerisinden indirgeyici olmayan terminus glikosamine baglündirgeyici terminus glikosamine sahip bir diglikosamin omurgasil (ii) indirgeyici olmayan terminus glikosaminin heksosamin pozisyonu 4”e bagll bir O-fosforil grubu; ve (iii) altýa kadar yaglîasil zinciri, yaglj asil zincirlerinden birisi bir ester baglantßE içerisinden indirgeyici terrninus glikosamîlîl 3-hidr0ksisine baglîii, burada yaglîasil zincirlerinden birisi bir amid baglantEE içerisinden indirgeyici olmayan terrninus glikosaminin 2-aminosuna baglan ve bir ester baglant sll laraclllgl lile 12 karbon atomundan daha fazla olan bir alkanoil zincirine bagl lbir tetradekanoyl zincirini içermektedir ve burada yagll lasil zincirlerinden birisi bir ester baglantîlîaracflfgl'ile indirgeyici olmayan terminus glikosaminin 3-hidroksisine bagldlîl ve bir ester baglantlsll içerisinden 12 karbon atomundan fazla olan bir alkanoil zincirine bagll bir teradekanoyl zincirini içermektedir.

Belirli ve iliskili baska yapühndmmalarda, bulunmasühalinde TLR agonisti TLR-2, TLR-3, TLR-4, TLR-5, TLR-6, TLR-7, TLR-8 ve TLR-9°dan seçilen en az bir TLR ile etkileserek biyolojik bir sinyali verebilir. Baska yapLlandLijmalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanln Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir.

Bir sujede istenilen bir antijene özgü tepkinin ortaya çkart JInas Jya da arttmülnas Ea yönelik yukar Ela tarif edilen yöntemlerin belirli ilave yap Elhnd [Ilmalar Eda, söz konusu GLA asag Baki formüle sahiptir: R1, R3, R5 ve R6 ifadeleri C1 i-Czo undesildir; ve R2 ve R4 ifadeleri Ciz-C20 tridesildir.

Bir sujede istenilen bir antijene özgü tepkinin ortaya çüîartütnasü ya da arttEEImasE metotlariß ilave yap Iand Emalarida, as :bilesimi bir konakta bir immün tepkisini ortaya çlgtartabilir. Belirli baska yapühndmmalarda immün tepki antijene özgüdür. Bir sujede istenilen bir antijene özgü tepkiyi ortaya çkartma ya da arttmmak için yukarlîla tarif edilen metotlari belirli baska yap Ühndmmalarßda, söz konusu antij en bir konakta humoral bir tepki ve bir hücre arac [llEtepkiden seçilen bir immün tepkiye neden olabilir. Bir sujede istenilen bir antijene özgü tepkinin ortaya çLkartLlrnasL ya da arttLrLltnasJ için yukarda tarif edilen metotlar Il belirli baska yapllandlrmalarlnda, asl [bilesimi bir konakta asagldakilerden olusan gruptan seçilen bir immün tepkisini ortaya çlkartabilir: bir THl-tipi T lenfosit tepkisi, bir TH2- tipi T lenfosit tepkisi, bir sitotoksik T lenfosit (CTL) tepkisi, bir antikor tepkisi, bir sitokin tepkisi, bir lenfokin tepkisi, bir kemokin tepkisi ve bir inflamatuar tepki. Bir sujede istenilen bir antijene özgü tepkinin ortaya çfkartlllnasîya da arttlîll'lrnaslîiçin yukarida tarif edilen metotlari belirli baska yapüandîmalarßda, asübilesimi bir konakta asagüakilerden olusan gruptan seçilen bir immün tepkisini ortaya çlkartabilir: (a) sitokinin interferon-gama (lFN-y) ve tümör nekroz faktörü-alfa (TNF-onfdan seçildigi bir ya da birden daha fazla sitokinin ve IL-23°ten seçildigi bir ya da birden daha fazla interlökinin üretimi, (c) kemokinin MIP-lu, MIP-lß, RANTES, CCL4 ve CCL57ten seçildigi bir ya da birden daha fazla kemokinin üretimi, ve ((1) bir bellek T hücre tepkisi, bir bellek B hücre tepkisi, bir efektör T hücre tepkisi, bir sitotoksik T hücre tepkisi ve bir efektör B hücre tepkisinden seçilen bir lenfosit tepkisi.

Belirli baska yapîlhndimalara göre bir asübilesimin hazlîlamak için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot (a) bir antijen ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) kargtilnasîlîliçermektedir. Belirli baska yap [landßmalara göre, bir as Elbilesimi hazElamak için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot (a) bir antijen, (b) bir glukopiranosil lipid adjuvanJ (GLA) ve (c) bir toll benzeri reseptör (TLR) agonistinin karßtEEmasElD içermektedir. Baska yap Ühndßmalarda, TLR agonisti lip0polisakkarit, peptidoglikan, poliltC, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanLn Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Belirli baska yapllandlrmalara göre bir asi lbilesimi hazlrlamak için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot (a) bir antijen, (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA), ve (c) saponinler ve saponin mimetiklerinden olusan gruptan seçilen en az bir ko-adjuvanlîl kargtEJInasEiEiçermektedir.

Belirli baska yaplhndimalara göre bir asübilesimin hazlîlamak için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot (a) bir antijen, (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA), ve (e) bir yag ve ISCOMATRIXTM”den en az birisini içeren bir tasS/Elîiß kar Isltihnasßüçermektedir.

Belirli baska yapülandßmalara göre bir as :bilesimi hazilamak için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot (a) bir antijen; (b) bir glukopiranosil lipid adjuvanE(GLA); ve (i) en az bir ko-adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik immün modifiye ediciden (double stem loop immune modifier; dSLIM) bir ya da daha fazlasini karlstmlrnasmLiçermektedir. Belirli baska yapllandlrimalarda (i) bulunmasl halinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan olusan gruptan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi toinatinden seçilir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) bulunmasFlhalinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanîi Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LelF) ve en az bir hepatit C antijeninden olusan gruptan seçilir ve (iii) bulunmas Ehalinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan olusan gruptan seçilir.

Belirli baska yaplandîmalara göre, bir asEbilesimi hazmlamak için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot (a) bir antijen, (b) glukopiranosil lipid adjuvan (GLA), ve (0) bir ko- adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasßlßßß karStEÜInasEiüiçermektedir, söz konusu ko-adjuvan bir sitokin, bir blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimer ve bir deterjandan seçilir ve söz konusu farmasötik olarak kabul edilebilir taslslLcLl kalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir liposom ve bir mikropartikülden olusan gruptan seçilen bir tasly dl liçerir. Belirli baska yapllandlrlmalarda, söz konusu sitokin GM-CSF, IL-2, [L-7, [L-12, TNF-a ve IFN-gamadan seçilir, blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir polimer Pluronik L121, CRLIOOS, PLGA, PLA, PLG, ve polil: C3den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir.

Belirli baska yapiandîmalara göre, bir asEbilesimi hazmlamak için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot (a) bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekans Ela uygulanabilir bir biçimde baglanan bir baslatLdLliçeren en az bir rekombinan ekspresyon yapLsL,J ve (b) glukopiranosil lipid adjuvanln (GLA) karlstlrllmaslnl içermektedir. Belirli baska yapilandiimalarda, rekombinan ekspresyon yaplsl, belirli baska yapllandlrimalarda bir adenovirüs, bir adeno iliskili Virüs, bir herpesvirüs, bir lentivirüs, bir poksvirüs ve bir retrovirüsten seçilen bir Virüste bulunan bir viral vektörde bulunur. Belirli yap [land [Imalarda söz konusu GLA 37-de-O-açillenmis degildir. Belirli yap [land Malarda, TLR agonisti TLR-2, TLR-3, TLR-4, TLR-5, TLR-6, TLR-7, TLR-8 ve TLR-97dan seçilen en az bir TLR ile etkileserek biyolojik bir sinyali verebilir. Baska yapIandîlmalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3M003, Ilagellin, ökaryotik ribozomal uzamanß Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir.

Yukarda tarif edilen bir asLbilesimi hazliilama metotlaanLn belirli yapLlandlemalarUIa göre, söz konusu GLA asagidaki formüle sahiptir: +40- ;0 0 R1, R3, R5 ve R6 ifadeleri C1 i-Czo undesildir; ve R2 ve R4 ifadeleri Cm-C20 tridesildir.

Belirli baska yapllandlrtmalarda, karSt Iima adlml emülsiyon haline getirmeyi içermektedir ve belirli baska yap [lhnd Elmalarda, kar Isltima adlIhD belirli yap Elandmmalarda mikropartiküllerden olusan partiküller olusturulmaslîlü içermektedir. Belirli baska yap Jhnd Emalarda, karßtîma ad îhÜantijenin tamamEya da bir kîmijve GLA”nB tamamü ya da bir kîmßüçeren bir çökelti olusturulmas Büçermektedir.

Belirli baska yapEandîmalarda, asagElakileri içeren bir immünolojik adjuvan farmasötik bilesimi saglanmaktadi: istemlerde izah edildigi gibi bir glikopiranosil lipid adjuvanE(GLA); ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tas yld 1 ya da eksipiyan. Belirli baska yap land rtnalarda, immünolojik bir adjuvan bilesimi saglanmakta olup, söz konusu bilesim istemlerde izah edildigi gibi bir glikopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve bir toll benzeri reseptör (TLR) agonisti içermektedir. Belirli baska yapflandmmalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, p01i12C, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanß Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelt) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Belirli baska yapühndmmalarda, asagîlakileri içeren bir immünolojik adjuvan bilesimi saglanmaktadü: istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvan3(GLA); ve saponinler ve saponin mimetiklerinden seçilen en az bir ko-adjuvan.

Belirli baska yap [[andîmalarda, asag Elakileri içeren bir immünolojik adjuvan farmasötik bilesimi saglanmaktadii: istemlerde izah edildigi gibi bir glikopiranosil lipid adjuvanL(GLA); ve bir yag ve ISCOMATRIXTMiden en az birisini içeren farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasly d|.| Belirli baska yapllandlrmalarda, asag dakileri içeren bir immünolojik adjuvan bilesimi saglanmaktadlî: (a istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); (b) (i) en az bir ko-adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik modifiye ediciden (dSLlM) bir ya da daha fazlas] Belirli baska yap [Hand mrnalarda (i) bulunmas Ehalinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan olusan gruptan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi tomatindir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) bulunmasEhalinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polil:C, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanLn Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIF) ve en az bir hepatit C antijeninden olusan gruptan seçilir ve (iii) bulunmas lhalinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan olusan gruptan seçilir.

Belirli baska yap Jhndimalarda, asagElakileri içeren bir immünolojik adjuvan bilesimi saglanmaktadi: istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanD(GLA); ve bir ko-adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasßißßan en az birisi, içerisinde: söz konusu ko-adjuvan bir sitokin, bir blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimer ve bir deterjandan seçilir ve farmasötik olarak kabul edilebilir tasýßjkalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir lipozom ve bir mikropartikülden seçilen bir tasyndiçerir. Belirli baska yap Llandemalarda, söz konusu sitokin GM-CSF, IL-2, parçalanabilir polimer Pluronik LlZl , CRL1005, PLGA, PLA, PLG, ve polil: C'den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir.

Belirli baska yathndîlmalarda, bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmeye yönelik bir metot saglanmakta olup, söz konusu kullanEn sunlarEiçermektedir: konaga istemlerde izah edildigi gibi bir glikopiranosil lipid adjuvanE(GLA) ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasSlIi Ziya da eksipiyan içeren bir immünolojik adjuvan farmasötik bilesimi uygulanmasE ve bu suretle de konagi immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi. Belirli baska yapühndmmalarda, bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmek için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot sunlarL içermektedir: konaga (a) bir glikopiranosil lipid adjuvan (GLA) ve (b) toll benzeri bir reseptör (TLR) agonisti içeren bir immünolojik adjuvan bilesimi uygulanmasl ve bu suretle de konagln immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi. Baska yapilandîrlmalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polil:C, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanlîi Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Belirli baska yapüandmmalarda, bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmek için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot sunlarE içermektedir: konaga bir glikopiranosil lipid adjuvan (GLA) ve saponinler ve saponin mimetiklerinden olusan gruptan seçilen en az bir ko-adjuvan içeren bir immünolojik adjuvan bilesimi uygulanmasE ve bu suretle de konagîl immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi. Belirli baska yapmandßmalarda, bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmenin bir metodunda bu bulusun Glukopiranozil lipid adjuvanLnLn kullan ml l saglanmakta olup, söz konusu kullanim sunlarl . içermektedir: konaga bir glikopiranosil lipid adjuvan (GLA) ve bir yag ve ISCOMATRIXTMsden en az birisini içeren bir farmasötik olarak kabul edilebilir taslýlêlîiçeren bir immünolojik adjuvan bilesimi uygulanmas :lve bu suretle de konagîl immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi.

Belirli baska yapJJandEmalarda, bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmenin bir metodu saglanmakta olup, söz konusu kullanEn sunlarEiçermektedir: konaga bir glikopiranosil lipid adjuvan (GLA) ve (i) en az bir ko-adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik immün modifiye ediciden (DSLIM) bir ya da daha fazlasßEiçeren bir immünolojik adjuvan bilesimi uygulanmas Lve bu suretle de konagLn immünoloj ik cevap verme yeteneginin degistirilmesi.

Belirli baska yapl'landlîlmalarda bulunmas`lhalinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan olusan gruptan seçilmekte olup. içerisindeki bitki alkaloidi tomatindir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, bulunmas :halinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3MOO3, Ilagellin, ökaryotik ribozomal uzamanm Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIF) ve en az bir hepatit C antijeninden olusan gruptan seçilir ve bulunmasE halinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan olusan gruptan seçilir.

Belirli baska yap Jhnd Emalarda, bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmenin bir metodu saglanmakta olup, söz konusu kullanim sunlarL içermektedir: konaga bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve bir ko-adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir taslylcldan en az birisini içeren immünolojik bir adjuvan bilesimininuygulanmasl ve bu suretle konaglîi immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi, söz konusu ko- adjuvan bir sitokin, bir blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimer ve bir deterjandan seçilir ve söz konusu farmasötik olarak kabul edilebilir taslýTchalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir liposom ve bir mikropartikülden olusan gruptan seçilen bir tasßlßüiçerir. Belirli baska yap [land Walarda, söz konusu sitokin GM-CSF, IL-2, IL-7, IL-12, TNF-a ve IFN-gamadan seçilir, blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir polimer Pluronik LlZl, CRL1005, PLGA, PLA, PLG, ve polil: C°den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir.

Bir konakta immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi için yukar da tarif edilen yöntemlerin belirli baska yapilandlrmalarlnda, uygulama adlml lbir, iki, üç, dört ya da daha fazla kez gerçeklestirilir. Bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmek için yukarîla tarif edilen metotlari diger çesitli yap Iand Emalarlîida, konakta immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi bir immün tepkinin indüklenmesi ya da arttEErnasEiE içermektedir. Bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmek için yukarEla tarif edilen metotlarß diger çesitli yathndimalarBda, konakta immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi bir immün tepkinin asag] yönlü olarak regüle edilmesini içermektedir. Bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmek için yukarEla tarif edilen metotlaan belirli baska yaplandijmalarnda, söz konusu metot aerca immünolojik cevap verme yeteneginin indüklenmesi ya da arttiilmas listenen bir bulaslcl hastal kla iliskili olan en az bir bulaslcl patojenden elde edilen ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktif olan bir antijenin es zamanl`lolarak ya da sîlalFlolarak uygulanmaslîil' içermektedir. Bu yathndîlmalarda uygulama adîhübir, iki, üç, dört ya da daha fazla kez gerçeklestirilir. Bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmek için yukarEla tarif edilen metotlarß belirli baska yap [[andîmalarmda, söz konusu metot immünoloj ik cevap verme yeteneginin asagEyönlü olarak regüle edilmesi istenen bir otoimmün hastalERla iliskili olan en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilen ya da bunlarla immünolojik olarak çapraz reaktif olan bir antijenin es zamanlEolarak ya da sEalEolarak uygulanmasîjiçermektedir. Bu yapEandmmalarda uygulama adlînEbir, iki, üç, dört ya da daha fazla kez gerçeklestirilir. Bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmek için yukarkla tarif edilen metotlarm belirli baska yapllandhmalaanda, söz konusu metot immünolojik cevap verme yeteneginin indüklenmesi ya da arttlrllhiasl listenen bir kanserle iliskili olan en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilen ya da bunlarla immünolojik olarak çapraz reaktif olan bir antijenin es zamaanolarak ya da slî'alrolarak uygulanmas n' liçermektedir. Bu yapllandlrlmalarda uygulama adlml bir, iki, üç, dört ya da daha fazla kez gerçeklestirilir.

Baska bir uygulamada asagElakileri içeren bir kit saglanmaktad E: YukarEia tarif edildigi gibi bir ilk kapta immünolojik bir adjuvan bilesimi; ve ikinci bir kapta bir antijen, söz konusu immünolojik adjuvan bilesimi antijenle temas halinde degildir. Baska bir uygulamada asagîlakileri içeren bir kit saglanmaktad 3: Yukarma tarif edildigi gibi bir ilk kapta immünolojik bir adjuvan bilesimi; ve ikinci bir kapta bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekansna uygulanabilir bir biçimde baglanan bir baslatddiçeren en az bir rekombinan ekspresyon yap|51|,l söz konusu immünolojik adjuvan bilesimi rekombinan ekspresyon yapslyla temas halinde degildir. Yukarlda tarif edilen kitin diger belirli yap land nmalarlnda, söz konusu antijen bir bakteri, bir virüs, bir inaya ve bir protozoandan seçilen en az bir bulasßjpatojenden elde edilir. Yukarlîia tarif edilen kitin diger belirli yap Iland Bmalarlîida, söz konusu antijen en az bir kanser hücresinden elde edilir. YukarBa tarif edilen kitin diger belirli yap landlîmalarîida, söz konusu antijen otoimmün bir hastalügla iliskili olan en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da bir dokudan elde edilir ya da bunlarla immünolojik olarak çapraz reaktiftir.

Mevcut bulusun bu ve diger yönleri, asag daki detaylLtarifname ve ekteki çizimler referans al narak daha aç li bir biçimde anlas lacaktlit Ek olarak, burada bu bulusun çesitli yönlerini daha detayll blarak tarif eden ve bu nedenle kendi bütünlükleri içerisinde referans olarak dahil edilen çesitli referanslar aç lklanmaktad lî'.

SEKILLERIN ÇESITLI YÖNLERININ KISA AÇIKLAMASI Sekil 1, MPL-AF ve GLA-AF içerisindeki kirletici materyallerin saygßîlve miktarmEortaya koyan HPLC verilerini göstermektedir. Bu kromatogramlar bir Agilent 1100 sistemi ve bir ESA Corona CAD dedektörü kullanarak toplanm St E. Bu metot bir Waters Atlantis C18 kolon üzerinde metanoldan kloroforma gradiyent kullanarak gerçeklestirilmistir. Enjeksiyonlar sias Slla 2.5 ug GLA ve MPL ve bir çözündürücü ajan olarak kullanEIan 0.27 ug sentetik fosfokolin (POPC) içermistir.

Sekil 2, GLA stimülasyonuna tepki olarak Mono Mac 6 hücre hatt n n (a 7 e panelleri) ve PBMC türevi DC,nin (f - h panelleri) insan makrofajlarl taraflndan eksprese edilen sitokin ve kemokin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. Hücreler 24 saat boyunca GSK Biologicals MPL®”nin bir sulu formülasyonu (MPL-AF), GLA (GLA-AF), ya da tek bas îia AF ile 1 x 105 hücre / kuyucuk olacak sekilde kültive edilmistir. Süpematantlardaki MlP-l b, IP-lO, lL-6, lL-23 ve lL-lb düzeyleri sandwich ELISA ile ölçülmüstür.

Sekil 3, tek bas ma F luzone ile kars HastEEdEgEida GLA-AF ya da GLA-SE ile formüle edilen Fluzone asßm iki farklEdozu kullan Iarak her as [[madan bir hafta sonra (yani 7. günde, panel A; 28. günde panel B) farelerde indüklenen anti-Fluzone antikor üretiminin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. Panel A ve B, ilk (A) ya da ikinci (B) enjeksiyondan bir hafta sonra, GLA-AF, GLA-SE içeren ya da adjuvan içermeyen bir formülasyonda Fluzone (Flu) assmdan 20 ml (1.8 ug) ya da 2 ml (0.18 ug) ile 3 hafta aralLkla iki kez aslanan farelerin ELISA Ab titrelerini göstermektedir. Panel C, ikinci asllamadan sonra farelerin serumunda nötralize edici antikorun (HAl) titrelerini göstermektedir.

Sekil 4, tek basina SMT antijeni kullanarak ya da GLA-SE ile formüle edilen üçüncü asIamadan bir hafta sonra farelerde indüklenen anti-SMT antikor üretiminin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. C57BL/6 fareler, GLA (GLA-SE; her as [[ama için her hayvan için 20 ug) içeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilen SMT antijeni (her as Efama için her hayvan için 10 ug) ile üç haftalüg aralRlarla üç kez as Hanin @tm ya da tek basîla SMT proteini enjekte edilmistir. Her aSJhmadan bir hafta sonra kanatarak serum al img ve SMT'ye özgü IgGl ve IgG20 antikorlariîl serum düzeyleri ELISA ile incelenmistir. Kars Lllkljjitis noktas Jitrelerinin ortalamalar Jve SEM degeri gösterilmektedir.

Sekil 5, salin kontrollerle karsllastlnlldlglnda farkli GLA miktarlarl (40, 20, 5, ya da 1 ug) ile formüle edilen Leish-l lOf antijen kullanarak ilk asllamadan bir hafta sonra farelerde indüklenen anti-Leish-l lOf antikor üretiminin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. Balb/c fareler, 40, 20, 5, ya da 1 üg GLA (GLA-SE) içeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilen Leish-l lOf antijeni (her as Jhma için her hayvan için 10 ug) ile üç haftalüî aralüllarla üç kez as Ianm EtE ya da tek bas Eta salin enjekte edilmistir. Her as Iamadan bir hafta sonra kanatarak serum al img ve Leish-l 10f° ye özgü IgGl ve IgGZa antikorlarii serum düzeyleri ELISA ile incelenmistir. linci as Ühmadan 7 gün sonra toplanan serumlar için kars ]]]îl :bitis noktas :titrelerinin ortalamalar :ive SEM degeri gösterilmektedir.

Sekil 6, salin kontrollerle kars Hastßmdtgßda farliGLA miktarlarEile formüle edilen Leish- 110f antijen kullanarak üçüncü asjhmadan bir hafta sonra farelerde indüklenen anti-Leish- llOf IFN-y sitokin üretiminin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. 40, ya da 1 ug MPL (MPL-SE) ya da GLA (GLA-SE) içeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilen Leish-l lOf antijenle (lO ug) iki haftallk aral klarla üç kez asllanan Balb/c farelerden ya da bir salin solüsyonu enjekte edilen farelerden elde edilen splenositler, tek bas na ortamda ya da 10 mg/ml Leish-l lOf ya da 3 mg/ml Concanavalin A (ConA) içeren ortamda 3 gün boyunca in vitro olarak kültive edilmistir. Süpernatantlardaki lFN-g düzeyleri ELISA ile ölçülmüstür. Ortalama ve SEM degeri gösterilmektedir.

Sekil 7, tek basßa ya da GLA (GLA-SE), GLA+CpG (GLA/CpG-SE), veya GLA+GDQ (GLA/GDQ-SE) içeren formülasyonlarla adjuvant eklenen ID83 kullanarak üçüncü asIamadan bir hafta sonar farelerde indüklenen CD4+ ve CD8+ T hücreler üreten ID83- spesifik IFN-y, IL-2, ve TNF sitokinin frekanslarEiE ortaya koyan ICS verilerini göstermektedir. Üç haftalfll aralklarla üç kez GLA-SE, GLA/CpG-SE, GLA/Gardikuimod (GDQ)-SE ile formüle edilen M. tuberculosis ID83 füzyon proteini (8 ag) ile aslllanan ya da salin enjekte edilen C57BL/6 farelerden elde edilen splenositler, 12 saat boyunca 10 mg/ml ya da CD3+CD8+ geçitli T hücrelerin hücre düzeyleri intraselüler boyama yoluyla saptaans ve bir BD LSRll F ACS üzerinde akîsl sitometrisi ile Ölçülmüstür.

Sekil 8 panel A, salin ve saf kontrollerle kars IastBIdgîida CpG ya da Imikuimod (IMQ) içeren sulu formülasyonlarla ya da GLA (GLA-SE) içeren stabil bir yag emülsiyonuyla ya da bu üçünün karßünlS/la formüle edilen ML0276 antijen kullanührak üçüncü asüamadan bir hafta sonra farelerde indüklenen CD4+ T hücreleri üreten ML0276-spesifik IFN-y sitokinin frekanslariîbrtaya koyan ICS verilerini göstermektedir. Üç haftalk aralEklarla üç kez CpG, ML0276 antijen (10 ug) ile asllanan ya da salin enjekte edilen C57BL/6 farelerden elde edilen splenositler, 12 saat boyunca 10 mg/ml ML0276 içeren ortamda in vitro olarak kültive edilmistir. Panel A, intraselüler boyama yoluyla saptanan ve BD LSRII FACS üzerinde akl_s sitometrisi ile Ölçülen CD3+CD4+ T hücrelerde IFN-ylnüi hücre düzeylerini göstermektedir.

Panel B, bir koruma iliskisi olarak lenf bogumu selülarite boyamaslIiEgöstermektedir.

BULUSUN AYRINTILI AÇIKLAMASI Mevcut bulus, çesitli yapÜlandEmalarElda asEbilesimleri, adjuvan bilesimleri ve sentetik bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) kullanmißjkapsayan iliskili metotlar saglamaktadE.

GLA, önceki teknigin adjuvanlarEia göre ve özellikle dogal ürün adjuvanlara göre avantajlE bir biçimde büyük ölçüde homojen formda hazalanabilen sentetik bir immünolojik adjuvan saglamaktad ri. Bunun yani lslfa, GLA, dogal ürün türevi adjuvanlarri aksine verimli ve ekonomik bir biçimde büyük ölçekli sentetik kimyasal imalat yoluyla haz Iilanabilir. Nicelik ve nitelik bakîhlîidan yfglîidan ygîia tutarllllk sergileyen kimyasal olarak tanlînlîlbir ürün elde etmek için tan ml' lbaslanglç materyallerinden kimyasal olarak sentezlenen sentetik bir adjuvan olarak GLA, ürün kalite kontrolünde iyilesme gibi benzeri görülmemis faydalar saglamaktadi. SasmtEll: bir biçimde, 3-açillenmis monofosforile edilmis lipid A belirli toksisitelerle iliskilendirilmis olmas &a karslîl, 2 amin pozisyonu tek bir açil zinciri içerdiginde moleküllerin kabul edilebilir güvenlik profillerini korudugu saptanm Sti. Ayrßa, bu bilesiklerin sentezi kolaylastilînßtî çünkü 3 pozisyonunda spesifik deaçilasyon teknik güçlüklere yol açmaktadm. Dolayîlgtla, bu bulus güvenlik ve sentez kolaylgjbakînßdan ilave avantajlar sunmaktad 1 Burada tarif edildigi gibi, GLA içeren bilesimler ve bunlar ri kullanin metotlar lbazl l yapilandîrimalarda GLA”nln kendisinin immünolojik adjuvan aktivitesi için farmasötik olarak kabul edilebilir bir taslýlöWa da eksipiyanla birlikte kullanHnîiFkapsamakta olup, içerisinde bir sujeye GLA uygulamasü sujede ortaya çkartülnasüya da arttmflrnasüistenen bir immün tepkisinin (örnegin bir antijene özgü tepki) bir ya da daha fazla antijeninin sujeye uygulanmas Bdan tamamen baglhrsâ ve/veya geçici ve/veya kalBJolarak ayrErnE olabilir.

Baska yap [Band Emalar aynEzamanda bir immün tepkisinin böyle bir asSlla ortaya çügartühiak ya da arttEÜInak istendigi bir ya da birden fazla antijeni kapsayan bir as Dbilesiminde GLA kullanirß] kapsamaktadm Burada tarif edildigi gibi, bu asj bilesimleri belirli iliskili yaplandiimalarda ayanamanda bir ya da daha fazla toll benzeri reseptör (TLR) agonisti ve/veya bir veya daha fazla ko-adjuvan, bir imidazokuinolin immün tepkisi modifiye edici ve bir çift sap iplik immün modifiye ediciden (dSLIM) bir ya da birden daha fazlas ri liçerebilir.

Diger iliskili yapTand Tlmalarda, burada saglanan sekliyle bir asFlbilesimi GLA ve bir ya da daha fazla rekombinan ekspresyon yapßü içerebilir, bunlarEi her biri sujede ortaya çikart Dnas :lya da arttiüînas Üistenen bir immün tepkisinin (Örnegin bir antijene özgü tepki) antijenini kodlayan bir nükleik amino asit sekansßa uygulanabilir bir biçimde bagljbir baslat Zi içerir.

Yine yukarEla kaydedildigi gibi, kimyasal olarak sentezlenmis bir adjuvan olarak GLA, büyük ölçüde homojen bir formda hazmlanabilir, bu da bir GLA preparatnn GLA molekülüne göre en az % 80, tercih edilen sekliyle en az % 85, daha tercih edilen sekliyle en az % 90, daha tercih edilen sekliyle en az % 95 ve yine daha da tercih edilen sekliyle en az % 96, % 97, % 98 ya da % 99 saf oldugunu göstermektedir. Belirli bir GLA preparatlîilîi saflfk derecesinin belirlenmesi uygun analitik kimya metodolojilerine asina olan kimseler taraflndan örnegin gaz kromatografisi, SWF kromatografisi, kütle spektroskopisi ve/veya nükleer manyetik rezonans analizi vas îas Slla kolayca gerçeklestirilebilir.

Burada kullan Jan sekliyle bir GLA asag Ilaki genel yap @al formüle sahip olabilir: 2 & R3 )=0 o HN OH R5 OH OH burada R', R3, R5 ve R6 ifadeleri C1 1-C20 undesildir; ve R2 ve R4 ifadeleri (:iz-c20 tridesildir.

GLA ticari olarak örnegin Avanti Polar Lipids, Inc. sirketinden elde edilebilir (Alabaster. AL: ürün numaras 699800).

Antijen Burada tarif edilen GLA kullanElan as] bilesimlerinin ve metotlarlîlîl belirli yaplandîlmalarîda kullanlîn için bir antijen herhangi bir hedef epitop, molekül (bir biyomolekül gibi), moleküle kompleks (biyomoleküller içeren moleküler kompleksler dahil), subselüler düzenleme, hücre ya da doku olabilir ve bunlara karsJ bir sujede immünoreaktivitenin ortaya çlkartJInas Dya da arttßllhias Distenir. SlklEkla, antijen terimi söz konusu bir polipeptid antijenini gösterecektir. Bununla birlikte burada kullanian sekliyle antijen ifadesi ayn :Zamanda söz konusu bir polipeptid antijeni kodlayan bir rekombinan yapE olarak adlandEEabilir (örnegin bir ekspresyon yapi). Tercih edilen belirli yap Ühnd Emalarda, söz konusu antijen enfeksiyon, kanser, otoimmün hastalik, alerji, astii ya da antijen özgü bir immün tepkinin stimülasyonunun istenebildigi ya da yararonlacagLJdiger her türlü kosulla iliskilendirilen bulas O bir patojen ve/veya bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilebilir ya da bunlarla immünolojik olarak çapraz reaktif olabilir.

Tercih edilen sekliye ve belirli yapilandliimalarda, asl formülasyonlarl [bir insan ya da baska memeli patojenine kars `lbir immün tepki ortaya koyabilen bir antijen ya da antijenik bilesim içermektedir, söz konusu antijen ya da antijenik bilesim HIV-1 (örnegin tat, nef, gp120 ya da gpl60), insan herpes virüsleri, örnegin gD ya da bunun türevleri ya da lmmediate Early proteinler, örnegin HSVl ya da HSV23den ICP27, sitomegalovirüsten ((özellikle Insan) (örnegin gB ya da bunun türevleri), Rotavirüs (canlEzayEflatÜ'mS virüsler), EPstein Barr virüsü (örnegin gp350 ya da bunun türevleri), Varisella Zoster Virüsü (örnegin gpl, II ve bir türevi), `hepatit A virüsü, hepatit C virüsü ve 'hepatit E virüsü gibi bir hepatit virüsünden, ya da paramiksovirüsler gibi diger viral patojenlerden: Respiratuar Sinsitiyal virüs (örnegin F ve G proteinleri ya da bunun bir türevi), parainfluenza virüsü, klztamk virüsü, kabakulak virüsü, insan papilom virüsleri (örnegin HPV6, 11, 16, 18, vs.), flavivirüsler (örnegin Sarl' Humma Virüsü, Dang virüsü, keneyle tas [Ilan viral ensefalit virüsü, Japon Ensefalit Virüsü) ya da influenza viiüsü (tam canlüya da inaktive edilmis virüs, yumurtalarda ya da MDCK hücrelerde gelisen split influenza virüsü, ya da tam Ilu virosomlar](Gluck tarafßdan, rekombinan proteinleri, örnegin HA, NP, NA ya da M proteinleri ya da bunlarEi kombinasyonlar] elde edilen bir bilesimi kapsayabilir.

Tercih edilen belirli baska yapllandliimalarda asl formülasyonlar lbir insan ya da baska memeli patojene kars lbir immün tepki ortaya çlkartabilen bir antijen ya da antijenik bir bilesim içerir, söz konusu antijen ya da antijenik bilesim Neisseri'a spp, örnegin N. gonorrhea ve N. mem'ngi'ti'di's (örnegin kapsüler polisakkaritler ve bunun konjugatlarü transferin baglayBIproteinler, laktoferrin baglayßEproteinler, PilC, adezinler); S. pyogenes (örnegin M proteinleri ya da bunun fragmanlarü C5A proteaz, lipoteikoik asitler), S. agalactz'ae, S. mulans: H. ducreyi'; Moraxella Spp, örnegin aynEzamanda Branhamella calarrhalis olarak bilinen M catarrhali's (örnegin yüksek ve düsük moleküler agilkljadezinler ve invazinler); Bordetella Spp, örnegin B. pertussis (örnegin pertaktin, pertussis toksini ya da bunun türevleri, filamentöz hemaglutinin, adenilat siklaz, fimbriae), B. parapertussis ve B. bronchisepri'ca; Mycobacteri'um spp., örnegin M. tuberculosi's (örnegin ESAT6, Antijen 85A, -B ya da -C), M bovi's, M. lepme, M. avium, M. pai'azuberculosi'si M smegmati's; Legi'onella spp. örnegin L. pneumophila; Escherz'chia Spp, örnegin enterotoksik E. 0011' (örnegin kolonizasyon faktörleri, sl yla kararslz hale gelen toksin ya da bunun türevleri, s yla stabil hale gelen toksin ya da bunun türevleri), enterohemorajik E. coli', enteropatojenik E. coli' (örnegin shiga toksin benzeri toksin ya da bunun türevleri); Vibri'o spp, örnegin V. cholera (örnegin kolera toksini ya da bunun türevleri); Shi'gella Spp, örnegin S. sonnei', S. dysenteriae, S. flexneri'i', Yeminia spp, örnegin Y. enterocoli'tica (örnegin bir Yop proteini), Y. pesti's, Y. pseudotuberculosis; Campylobacter spp. örnegin C. jejimi' (örnegin toksinler, adezinler ve invasinler) ve C. 0011'; Salmonella spp. örnegin S. typhi', S. paratyphi', S. choleraesuz's, S. enteriti'di's; Listeri'a spp., örnegin L. monocytogenes; Helicobacter spp, örnegin H. pylori (örnegin üreaz, katalaz, bosluk Olusturucu toksin); Pseudomonas spp, örnegin P. aeruginosa; Staphylococcus spp., örnegin S. aureus, S. epidermidis; Enterococcus spp., örnegin E. faecali's, E. faeci'um; Clostri'di'um spp., örnegin C. tetani' (örnegin tetanoz toksini ve bunun türevleri), C. botulinum (örnegin botulinum toksini ve bunun türevleri), C. dijßci'le (örnegin clostridium toksinleri A ya da B ve bunun türevleri); Baci'llus spp., örnegin B. anthraci's (örnegin botulinum toksini ve bunun türevleri); Corynebacterium spp., örnegin C. di'phtheri'ae (örnegin difteri toksini ve bunun türevleri); Borreli'a spp., örnegin B. burgdorferi' (örnegin OspA, OspC, Dpr, DbpB), B. garini'i' (örnegin OspA, OspC, Dpr, DbpB), B. qf'zeli'i' (örnegin OspA, OspC, Dpr, DbpB), B. andersonii' (örnegin OspA, OspC, Dpr, DbpB), B. hermsi'i'; Ehrlichia spp. , örnegin E. equi ve Insan Granülositik Ehrlichiosis ajanlî, Rickettsia spp, örnegin R. rickettsii; Chlamydia spp. örnegin C. trachomatis (örnegin MOMP, heparin- baglayEEproteinler), C. pneumoniae (örnegin MOMP, heparin-baglayßE proteinler), C. psittaci; Leptospira spp., örnegin L. interroganlar; Treponema spp., örnegin T. pallidum (örnegin nadir ds membran proteinleri), T. denticola, T. hyodysenteriae; ya da baska bakteriyel patojenler gibi bir ya da daha fazla patojenden elde edilen bir bilesim içerebilir.

Tercih edilen belirli baska yapilhndîlmalarda, aSEformülasyonlarübir insan ya da baska meineli patojenine kars :lbir immün tepki ortaya koyabilen bir antijen ya da antijenik bilesim içerir, söz konusu antijen ya da antijenik bilesim bir ya da daha fazla parazitten elde edilen bir bilesim içerebilir (Bkz, ör. , John, D.T. and Petri, W.A., Markell and Voge”s Medical Parasitology-9th Ed., 2006, WB Saunders, Philadelphia; Bowman, DD., Georgis' Parasitology for Veterinarians-8th Ed., 2002, WB Saunders, Philadelphia), örnegin Plasmodium spp., örnegin P. falciparum; Toxoplasma spp., örnegin T. gondii (örnegin SAG2, SAG3, Tg34); Entamoeba spp., örnegin E. hi'stolyti'ca; Babesi'a Spp., örnegin B. microtz'; Tiypanosoma spp., örnegin T. cruzi'; Giardi'a spp., örnegin G. lambli'a; Leshmam'a spp., örnegin L. major; Pneumocystis spp., örnegin P. carinii; Trichomonas spp., örnegin T. vaginalz's;ya da bir memeliyi enfekte edebilen bir parazitten elde edilen bir bilesim içerebilir, örnegin: (i) nematod enfeksiyonlarF(bunlarla slîiîllîolmamak kaydýla örnegin Enterobi'us vermiculari's, Ascaris lumbricoides, T richuris trichuri'a, Necator americanus, Ancylostoma duodenale, Wuchereria bancrofîi', Brugi'a malayi, Onchocerca volvulus, Dracanculus medinensi's, T richinella spiralis, ve Strongyloides stercorali's) ; (ii) trematod enfeksiyonlarE (bunlarla slhßlEolmamak kayd Slla örnegin Schi'stosoma mansoni, Schistosoma haematobium, Schistosoma japonicum, Schistosoma mekongi, Opi'sthorchi's sinensi's, Paragoni'mus sp, Fasciola hepatica, Fasciola magna, Fasci'ola gigantica) ; ve (iii) bagEsak kurdu enfeksiyonlar Xbunlarla sîlüllîblmamak kayd Slla örnegin T aenia saginata ve T aem'a solium) .

Bu nedenle belirli yapülandßmalarda Schisostoma spp., Schistosoma mansonii, Schistosoma haematobi'um, ve/veya Schistosoma japoni'cum”dan elde edilen ya da örnegin Candida spp., Örnegin C. albi'cans; Cryptococcus spp., örnegin C. neoformans gibi mayalardan elde edilen bir antijen içeren as' bilesimleri düsünülebilir.

M. tuberculosi's için tercih edilen diger spesifik antijenler örnegin Th Ra12, Tb H9, Tb Ra35, için proteinler aynEzamanda füzyon proteinleri ve bunun varyantlarßEkapsamaktadE, burada M. tuberculosisin en az iki, tercih edilen sekliyle üç polipeptidi büyük bir proteine kaynastîli. Tercih edilen füzyonlar Ra12-TbH9-Ra35, Erd14-DPV-MTI, DPV-MTI-MSL, Erd14DPV-MTI-MSL-mTCC2, Erd14-DPV-MTI-MSL, DPV-MTI-MSL-mTCCZ, TbH9- DPV-MTIiyJWO 99151748) kapsamaktadLr.

Chlamydia için en çok tercih edilen antijenler örnegin Yüksek Molekül Aglrllkll Protein kapsamaktad E. ASE formülasyonunun diger Chlamydia antijenleri WO 9912875 sayEIE dokümanda tarif edilen gruptan seçilebilir. Tercih edilen bakteriyel as Jhr Streptococcus spp, örnegin S. pneumoni'ae (örnegin kapsüler polisakkaritler ve bunun konjugatlarü PsaA, PspA, streptolisin, kolin baglayßüproteinler) ve protein antijen Pnömolisin (Biochem Biophys toksinleri giderilmis türevlerinden elde edilen antijenleri kapsamaktadE (WO 90/06951; WC 99/03884). Tercih edilen diger bakteriyel as lar Haemophi'lus spp., örnegin H. influenzae tip B (örnegin PRP ve bunlari konjugatlarü, non typeable H. influenzae, örnegin OMP26, yüksek molekül aghilLklLladesinler, P5, P6, protein D ve lipoprotein D, ve fimbrin ve fimbrin türevi peptidleri (U.S. Pat. NO. 5,843,464) içermektedir.

Hepatit B Yüzey antijen türevleri teknik iyi bilinmektedir ve diger seylerin yanl'lslî'a EP-A414 ParsZ S antijenleri kapsamaktad lî. Tercih edilen bir baks açlêîldan asl_l formülasyonu özellikle CHO hücrelerde eksprese edildiginde HIV-l antijeni, gplZO içerir. Baska bir uygulamada, as :formülasyonu burada daha önce tan Enlandgîgibi gD2t içerir.

Tercih edilen bir uygulamada, ileri sürülen adjuvanüiçeren asühr, fenital sigillerden (HPV 6 ya da HPV 11 ve digerleri) sorumlu oldugu düsünülen Insan Papillom Virüsünden (HPV) ve serviks kanserinden (HPV 16, HPV18 ve digerleri) sorumlu olan HPV virüslerinden elde edilen antijen içermektedir. Özellikle tercih edilen genital sigil formlaanda profilaktik ya da terapötik asl,.HPV 6 ve HPV 11 proteinleri E6, E7, L1, ve L2`den seçilen bir ya da daha fazla antijen içeren füzyon proteinleri, Ll partiküller ya da kapsomerleri içermektedir. Füzyon proteininin çesitli tercih edilen formlar`|WO 96/26277 sayillîdokümanda ifsa edildigi gibi L sayEIE dokümanda ifsa edildigi gibi proteinD(l/3)-E7,yi kapsamaktadîl Tercih edilen bir HPV servikal enfeksiyon ya da kanserde, profilaksi ya da terapötik asübilesimi HPV 16 ya da 18 antijenlerini içerebilir. Örnegin, Ll ya da L2 antijen monomerler ya da Ll ya da L2 antijenler birlikte bir virüs benzeri partikül (VLP) olarak sunulmustur ya da tek basîla Ll proteini bir VLP ya da kapsomer yapßßda sunulmustur. Bu antijenler, virüs benzeri partiküller ve kapsomer aslBda Ilave erken proteinler tek bas da ya da E7, E2 ya da tercih edilen sekliyle F5 gibi füzyon proteinleri olarak dahil edilebilir; özellikle tercih edilen yap Tandîlmalar L1E7 füzyon proteinlerini içeren bir VLP”yi kapsamaktadE (WO 96/11272). Özellikle tercih edilen HPV 16 antijenleri, Protein D-E6 ya da E7 tîizyonlarßEblusturmak için HPV l6idan bir protein D tasßlißlla birlikte füzyonda erken proteinler E6 ya da F 7”yi ya da bunlar& kombinasyonlarmE HPV 16 ya da 18 erken proteinleri E6 ve E7, tekli bir molekül, tercih edilen sekliyle bir Protein D-E6/E7 füzyon halinde sunulabilir. Bu asü istege baglEolarak tercih edilen sekliyle bir Protein D-E6 ya da Protein D-E7 füzyon proteini ya da Protein D E6/E7 füzyon proteini formunda E6 ve E7 proteinleri ön HPV 18 içerebilir. AsEilave olarak diger HPV suslarßdan, tercih edilen sekliyle HPV 31 ya da 33 suslar ndan antijenleri içerebilir.

As lar ayr da 5 tinaya yola açan parazitlerden elde edilen antijenleri içerir. Örnegin, Plasmodi'a falci'parumidan elde edilen tercih edilen antijenler RTS,S ve TRAPTl kapsamaktad'ii. RTS, Hepatit B yüzeyi antijeninin preSZ k dmlnln dört amino asidi vasltaslyla hepatit B virüsünün yüzey (S) antijenine baglanan, Pfalciparimfun sirkumsporozoit (CS) proteininin büyük ölçüde tüm C-terminal kßmüijiçeren bir hibrit proteindir. Tam yapED yay ilanan Uluslararas Üatent Basvurusu No. PCT/EP92/025913de ifsa edilmektedir. Mayada eksprese edildiginde, bir lipoprotein partikülü olarak RTS üretilir ve HBVlden S antijeni ile birlikte eksprese edildiginde, RTS.S olarak bilinen karma bir partikül üretir.

Patent Basvurusunda tarif edilmektedir. Tercih edilen bir yapilandliima bir sltma as Sl dii ve içerisindeki antijenik preparat, RTS,S ve TRAP antijenlerinin bir kombinasyonunu içermektedir. Çok asamall'bir sFtina asTslîilîi bilesenleri olarak muhtemel adaylar olan diger plazmodia antijenleri P. faciparum MSPl, AMAl, MSP3, EBA, GLURP, RAPl, RAPZ, Sekuestrin, PfEMPl, Pf332, LSAl, LSA3, STARP, SALSA, PfEXPl, Pfs25, PfsZS, Buna göre, burada ifsa edilen belirli bir uygulamada bir bakteriyum, bir virüs ya da bir mantar gibi en az bir bulasEE patojenden elde edilen bir antijen düsünülmektedir, örnegin Aktinobakterium, örnegin M. tuberculosis ya da M. leprae ya da baska bir mycobacterium; bir bakteriyum, örnegin Salmonella, Neisseri'a, Borreli'a, Chlamydz'a ya da Bordetella cinsi; bir Virüs örnegin bir herpes simpleks Virüsü, bir insan immün yetmezlik Virüsü (HIV), bir kedi immün yetmezlik virüsü (FIV), sitomegalovirüs, Varicella Zoster Virüsü, hepatit Virüsü, Epstein Barr Virüsü (EBV), respiratuar sinsitiyal Virüs, insan papillom Virüsü (HPV) ve bir sitomegaloviiüs; HIV örnegin HIV-l ya da HIV-2; bir mantar örnegin Aspergi'llus, Blastomyces, Cocci'dioi'des ve Pneumocysti' ya da bir maya örnegin Candi'da türleri, örnegin C. albicans, C. glabrata, C. krusei', C. lusi'tam'ae, C. tropicalis ve C. parapsi/osis; bir parazit örnegin protozoan, örnegin bir Plasmodium: türü, P. falci'parum, P. vi'vax, P. malariae ve P. ovale; ya da baska bir parazit, örnegin bir ya da daha fazla Acanthamoeba, Entamoeba histolytica, Angiostrongylus, Schistosoma mansoni'i, Schistosoma haematobi'um, Schistosoma japom'cum, Ciyptospori'di'um, Ancylostoma, Entamoeba histolytica, Entamoeba call', Entamoeba dispar, Entamoeba hartmanni, Entamoeba polecki, Wuchereria bancrofti', Giardi'a, ve Leishmania. Örnegin, Borrelia sp.,den elde edilen antijenleri içeren GLA içeren aslîyapllandlîmalarilda, söz konusu antijenler nükleik asit, patojen türevi antijen ya da antijenik preparatlar, rekombinan olarak üretilen protein ya da peptidler ve kimerik füzyon proteinleri içerebilir.

Böyle bir antijen OspA”dE OspA, konak bir hücrede kendi biyosentezi sayesinde lipide edilmis bir formda tam matür bir protein olabilir (Lipo-OspA) ya da alternatif olarak lipide edilmemis bir türev olabilir. Böyle lipide edilmemis türevler influenza virüsünün yagßal olmayan proteininin (NSl) ilk 81 N-terminal amino asitlerine sahip olan lipide edilmemis NSl-OspA füzyon proteinini ve tam OspA proteinini kapsamaktadî ve diger, MDP-OspA, 3 ilave N-terminal amino asidini tas San lipide edilmemis bir OspA formudur.

Teknikte burada tarif edildigi gibi bulasldl bir patojenle bir enfeksiyona sahip olan ya da riski tasldgndan süphe edilen sujeleri tan mlamak için bilesimler ve metotlar bilinmektedir. Örnegin, Mycobacterium tuberculosis bakterisi tüberküloza (TB) yol açar. Bakteriler genellikle akcigerlere saldîm fakat aynEzamanda böbrek, dalak ve beyne de saldlîabilir.

Dogru bir biçimde tedavi edilmemesi durumunda tüberküloz hastalßgüölümcül olabilir. Bu hastalE bulasan kimse hapslîdEgEida ya da öksürdügünde hava yoluyla kisiden kisiye tasEiE. 2003 yJJElda Birlesik Devletlerde 14.000°den fazla tüberküloz vakas Erapor edilmistir.

Tüberküloz genel olarak uzatltnls antibiyotik terapisi kullanilarak kontrol edilebilmesine kars 11, bu tedavi hastall g n yayllmaslnl önlemek için yeterli degildir ve antibiyotik dirençli suslar ri potansiyel seçimine iliskin endiseler bulunmaktad ri. Enfekte olan bireyler asemptomatik, fakat bazen bulasîiîolabilir. Ek olarak, tedavi rejimiyle uyum kritik olmaslîla kars It, hasta davranßlîiß izlenmesi güçtür. Baz Ehastalar tedavi seyrini tamamlamaz ve bu da etkisiz tedaviye ve ilaç direnci gelismesine yol açabilir. (ör, U.S. Patent 7,087,713) Su anda, canljaakterilerle as Iama tüberküloza kars :koruyucu baggllgüindüklemek için en etkili metottur. Bu amaçla kullanühn en yayglîi mikobakteriyum, Mikobakteriyum bovisiin avirulan bir susu olan Bacillus Calmette-Guerin (BCG)°dir. Bununla birlikte, BCG,nin güvenlik ve efikasitesi tartßma konusudur ve Birlesik Devletler gibi baz Eülkeler genel nüfusu as Jhmamaktadi Teshisi genel olarak bir deri testi kullan Jhrak yap [IE ve tüberkülin PPD`ye (saflastijlms protein türevi) intradermal olarak tutulmasLnLgerektirir. Antijene özgü T hücre tepkileri enjeksiyondan 48 ila 72 saat sonraslna kadar enjeksiyon alan nda ölçülebilir sertlesme ile sonuçlann ve bu da mikobakteriyel antijenlere maruziyeti gösterir. Bununla birlikte sensitivite ve spesifite bu testte sorun olmustur ve BCG ile asflanan bireyler enfekte olan bireylerden ay'iit edilemez. (ör, U.S. Patenti 7,087,713) Makrofajlari M. Tuberculosis bagsklfgiüetkileyen temel etmenler olarak islev gördügü gösterilmis olmas& kars El, T hücreler bu bagßmlfgß en etkili indükleyicileridir. T hücrelerin M. tuberculosis enfeksiyonuna kars Jkorumadaki zaruri rolü, insan immün yetmezlik virüsü (HIV) enfeksiyonu ile iliskilendirilen CD4 T hücrelerin tüketiminden dolayE AIDS hastalarîlda M. tuberculosisîn sEk meydana gelmesiyle açklanmaktadîl. Mikobakteriyum- reaktif CD4 T hücrelerin, farelerde makrofajlarîl anti-mikobakteriyel etkilerini tetikledigi gösterilen gama-interferonun (IFN-gama) potent üreticileri oldugu gösterilmistir. Insanlarda tümör nekroz faktörü alfa ile kombinasyon hakinde 1,23-dihidroksi-vitamin D3'in M. tuberculosis enfeksiyonunu inhibe edecek sekilde insan makrofajlarlîiîl aktive ettigini göstermektedir. Bunun yanüsma, IFN-gamanEi 1,25-dihidr0ksi-vitamin D3,ü yapmasüiçin insan makrofajlarüstimüle ettigi bilinmektedir. Benzer sekilde, lL-12”nin M. tuberculosis enfeksiyonuna kars] direnci stimüle etmede rol oynadfgü gösterilmistir. M. tuberculosis enfeksiyonunun immünolojisine iliskin bir inceleme için, bkz. Chan and Kaufmann, Tuberculosis: Pathogenesis, Protection and Control, Bloom (ed), ASM Press. Washington, Tüberküloz teshisi için ve tüberküloza kars lkoruyucu baglslkllgl indüklemek için mevcut bilesikler ve metotlar aras nda bir ya da daha fazla Mikobakteriyum proteinin en az bir immünojenik kîmlîirl içeren polipeptidlerin ve bu polipeptidleri kodlayan DNA moleküllerinin kullanlînübulunmaktad E. Bu polipeptidleri ya da DNA sekanslarEiEve uygun bir saptama ayßacülîiçeren tanßal kitler, hastalarda ve biyolojik örneklerde Mikobakteriyum enfeksiyonunun saptanmas Diçin kullan [[abilir. Bu polipeptidlere kars Elyöneltilen antikorlar da saglanmaktadi Ek olarak, bu bilesikler Mikobakteriyum enfeksiyonuna karsüasüama için as lar ve/veya farmasötik bilesimler seklinde formüle edilebilir. (U.S. Patent No. 6,949,246 ve 6,555,653).

Sina dünyanEl çogu kßmEida 1960°larda elimine edilmistir, bununla birlikte bu hastalü& devam etmektedir ve hatalLgLd mevcut ilaçlara kars Ldirençli yeni suslarLortaya çLkmaktade.

S tma 90idan fazla ülkede temel bir halk sagligi sorunudur. Sltma vakalarlnln onda dokuzu Sahra altl lAfrika ülkelerinde görülmektedir. Dünya nüfusunun üçte birinden fazlas lrisk altîtdadi ve her yili 350 ila 500 milyon kisiye sftlna bulasmaktadlîl. Bu yol klîlkbes milyon gebe kadln s tlna bulasma riski taslmaktadlrt Her ylll zaten enfekte olan bireylerden 1 milyondan fazlasüönlenebilir bir hastaliktan ölmektedir. Bu ölümlerin çogunlugu Afrika,daki çocuklard E.

Sîma, genellikle bir kimse enfekte bir disi anofel sivrisinegi tarafmdan @EEÜdEgBda bulasmaktad i Bulasmas Eiçin, sivrisinek zaten sEfma tas &an bir kimseden kan almas Eyoluyla enfekte olmalElE. SEmaya bir parazit neden olmaktadE ve hastalgîl klinik semptomlarE araslîlda ates ve grip benzer hastallk, örnegin titreme, bas agrßj kas agrflarüve bitkinlik bulunmaktadii Bu semptomlara bulant; kusma ve ishal eslik edebilir. Sinia, kLnanLkan hücrelerinin kayblndan dolayl ayn lzamanda anemi ve sar lllga da neden olabilir. Bir sltma tipi, yani Plasmodi'umfalciparum ile enfeksiyon, derhal tedavi edilmezse böbrek yetinezligi, krizler, kafa karskl `g_,lk0ma ve ölüme neden olabilir.

Bir bireyde smna için in vitro bir tanßal metot bilinmektedir ve bir molekül ya da polipeptid bilesimiyle temas halinde bir bireyden allîian bir doku ya da biyolojik bir SIS/Elm yerlestirilmesini içermektedir, söz konusu molekül ya da polipeptid bilesimi, dokuda ya da biyolojik sîlîla bulunabilen bahsedilen bilesim ve antikorlar aras îlda in vitro immünolojik reaksiyona ve olusan antijen-antikor komplekslerinin in vitro olarak saptanmasEia imkan tan yan kosullar altnda, bulasLcLP. falcz'parum aktivitesinden kaynaklanan proteinlerin bir ya da daha fazla T epitopunun tamaml ya da bir kldmlnl ltaslyan bir ya da daha fazla peptid sekans içermektedir (Bkz. Öm. U.S. Patenti 7,087,231).

Rekombinan Plasmodium falciparum (3D7) AMA-l ektodomain ekspresyonu ve saflastBJInasjtarif edilmistir. Önceki metotlar, dogal molekülün katlanmasE ve disülfit köprüsünü koruyan son derece saf bir protein üretmistir. Rekombinan AMA-1, tanßal bir ay Eaç olarak ve ayn [zamanda antikor üretiminde ve tek bas ßa veya sîmay Eönlemek için bir asim parçasjolarak kullanßlßî (ör, U.S. Patenti 7,029,685). Teknikte, türlere özgü P.

Vivax malaryal peptid antijenlerini kodlayan polinükleotidler tarif edilmistir, bunlar bu antijenlere karsj yöneltilen monoklonal ya da poliklonal antikorlara sahip oldugundan, enfeksiyondan sonra duyarlübir memeli konagm plazmas Jiçerisine sekrete edilen proteinler ya da protein fragmanlartdii Peptid antijenleri, monoklonal antikorlar ve/veya poliklonal antikorlardan, sltma teshisi ve ayni lzamanda Plasmodium vivax, n enfeksiyondan sorumlu olup olmad g nin belirlenmesi için kullanllan analizlerde yararlanlllln. (U.S. Patenti 6,706, 872) Türlere özgü P. Vivax malaryal peptid antijenleri rapor da edilmistir ve bunlar bu antijenlere kars Iyöneltilen monoklonal ya da poliklonal antikorlara sahip oldugundan, enfeksiyondan sonra duyarllîbir memeli konaglîi plazmas _Iiçerisine sekrete edilen proteinler ya da protein fragmanlarßi. Peptid antijenleri, monoklonal antikorlar ve/veya poliklonal antikorlardan, sEEtna teshisi ve aynüzamanda Plasmodium Vivaxii enfeksiyondan sorumlu olup olmadEgmEi belirlenmesi için kullanüan analizlerde yararlanEE (bkz. örn. U.S. Patenti 6,231,861).

Rekombinan bir Plasmodium falcz'parum (3D7) AMA-1 ectodomain aynüzamanda dogal bir molekülün katlanmavae disülfit köprüsünü koruyan son derece saf bir protein üreten bir metotla da eksprese edilmistir. Rekombinan AMA-1, tanlsal bir aylraç olarak antikor üretiminde ve bir as` lolarak kullanlm için kullanlslldlri. (U.S. Patenti 7,060,276) Benzer sekilde, dogal molekülün katlanmaslî ve disüliit köprüsünü koruyan rekombinan bir Plasmodium fâlciparum (3D7) MSP-l42'nin ekspresyonu ve saflastEÜ'masta bilinmektedir.

Rekombinan MSP-l42, tanßal bir aylîaç olarak antikor üretiminde ve bir as Üolarak kullanEn Bir sEEma bulasîijpatojenle enfeksiyona sahip olan ya da risk tasîlgîldan süphelenilen bir sujeyi teshis etmek için, insan sErna enfeksiyonlarßü saptanmas Eiçin tanßal metotlar, bu ve iliskili patent açtklamalarma göre bilinmektedir. Spesifik olarak, örnegin kan örnekleri 3- asetil piridin adenin dinükleotid (APAD), bir substrat (örnegin bir laktat tuzu ya da Iaktik asit) içeren bir ay riaçla kombine edilir. Söz konusu aylrlaç sltma paraziti taraflndan üretilen benzersiz bir glikolitik enzimin varlfglîiîsaptamak için dizayn edilmistir. Bu enzim, parazit laktik asit dehidrojenaz (PLDH) olarak bilinmektedir. PLDH, yukarEla tarif edilen ayEaç kullanJhrak konak LDH,den kolayca ayEt edilebilir. Ayiacîi parazitli bir kan örnegiyle kombinasyonu APADWII azalmasü ile sonuçlanm. Bununla birlikte APAD konak LDH tarafidan azaltJInaz. AzaltEIan APAD, daha sonra spektral, florimetrik, elektroforetik ya da kolorimetrik analiz gibi çesitli tekniklerle saptanabilir. Yukarîlaki sekilde azalan APADiß saptanmasjsßlna enfeksiyonunun pozitif bir göstergesini saglar (örn. U.S. Patenti 5,124,141).

Sîtna teshisi için baska bir metodolojide, Plasmodium falciparum antijeni GLURP'tan elde edilen karakteristik bir amino asit sekans Jiçeren bir polipeptid, polipeptide karsjkullanühn spesifik bir antikor taraf ndan bir test örneginde tannii (U.S. Patenti 5,231,168) Laysmanyaz Hint Yar madasl, Afrika ve Latin Amerika”da yaygln bir parazitik salgln hasta] 11th ve Dünya Saglik Örgütü'nün as Flgelistirme önceliklerindendir. Fark] l`1hastal klarlîl bir kompleksi olan Laysmanya parazitleri iç organlarda ölümcül enfeksiyonlara ve aynl' zamanda ciddi deri hastalfglîla neden olur. Laysmanyazîi en yklîiTormlarlîidan birisi, burun ve agâdaki biçim bozan bir enfeksiyondur. Laysmanyaz vakalarülîl sayEEartmaktadB ve simdi çogu bölgelerde kontrolden çkmaktad B. Laysmanyaz HIV enfeksiyonunun sonucunda Özellikle güney Avrupa gibi bazügelismis ülkelerde de artßtadE. Mevcut ilaçlar toksik ve pahalîli ve uzun dönemli günlük enjeksiyonlar gerektirir.

Laysmanya, makrofajlarda ve immün sistemin beyaz kan hücrelerinde yasayan protozoan parazitlerdir. Parazitler küçük kan emici böceklerin (kum sinekleri) SLijinaslyla bulasLij ve gezegenin büyük bir k Smlnda yasad klar ndan kontrol edilmesi güçtür.

Iç organlardaki laysmanyaz, hastalfglîi üç belirtisinden en tehlikeli olanldlî. Her y11 iç organlarda görülen formdan (kala-azar ya da “öldürücü hastalk'i) yaklasüî 500.000 yeni vaka meydana geldigi tahmin edilmektedir. Iç organlardaki laysmanyaz riski tas @an 200 milyonda fazla insan bulunmaktadm. Iç organlardaki laysmanyaz vakalarîlß yüzde 90”Eidan fazlasE Hindistan, Banglades, Sudan, Brezilya ve Nepal°da meydana gelmektedir. Ölçümlerin çogunlugu çocuklarda meydana gelmektedir. Kütanöz formlarüolanlar genellikle kalElDbir biçimde biçim bozukluguna maruz kalmaktad E.

Laysmanta enfeksiyonlarnn teshisi güçtür ve tipik olarak doku biyopsi numunelerinin histopatolojik analizin gerektirir. Bununla birlikte çesitli serolojik ve immünolojik tanlsal 43:632 639). Promastigoatlar uygun hale getirilmis ortam üretmek için kültür ortamEiçerisine metabolik ürünlerini salmaktadü Bu metabolik ürünler konaga bagßtklüg saglar. Bkz.

Dünya genelinde 40 milyon civarlîida insan AIDS'e yol açan virüs olan HIV enfeksiyonu taslmaktad 11. Her yîll bu hastallktan 3 milyon civarinda insan ölmektedir ve bunlarln yüze 95°i gelismekte olan dünyadad li. Her yFI, 5 milyona yakîi insana HIV bulasmaktad E. Günümüzde, hastalgß en ag& yükünü alt Sahra AfrikasEtas Bias îia karsEl Hindistan, Çin ve Rusya gibi baska ülkelere süratli bir biçimde yay Jhiaktad B. Bu salgß en hlîlEbiçimde az 311 nüfuslarE olmustur. AIDS insanlarüen üretken y]llar3da vurmaktadm. Kad ilar, hem biyolojik hem de sosyal nedenlerle yüksek bir HIV/AIDS riski tas haktad i AIDS,e vücudun immün sisteminin hücrelerini öldüren ve zarar veren ve vücudun enfeksiyonlarla ve belirli kanserlerle savasma yetenegini dereceli olarak ortadan kaldlran insan immün yetmezlik virüsü (HIV) neden olur. HIV virüsü en yaygln sekliyle enfeksiyonlu bir partnerle korunmaslî cinsel iliskiyle yayFIFr. Sorunla ilgili en sagllklrçözüm virüsün yay JInas iii engellenmesidir. Bu amaca ulasmanEi bir yolu güvenli, etkili ve uygun maliyetli bir HIV asßEhazmlanmasBB. Dünya genelinde, yüksek HIV enfeksiyon riski olan bes kimseden birisinden daha azîiîi etkin korumaya erisimi yardm HIV enfeksiyonlarßß teshis edilmesi için virüs kültürü, hasta numunelerinden eksiksiz nükleik asit sekanslarZile PCR ve hasta serumunda anti-HIV antikorlarßEi varlgüçin antikor Burada ifsa edildigi gibi belirli baska yaplTandlîimalara göre, asi-lbilesimleri ve iliskili formülasyonlarj ve kullanii metotlarÇ iminünoterapötik kanser tedavisi için kullanßlE olabildiginden bir kanserden elde edilen bir antijeni kapsayabilir. Örnegin, adjuvan formülasyonu prostat, meme, kolorektal, akciger, pankreatik, renal ya da melanom kanserler için olanlar gibi tümör rejeksiyon antijenleriyle kullanBi alanEbulabilir. Örnek niteligindeki kanser ya da kanser hücresi türevi antijenler MAGE 1, 3 ve MAGE 4 ya da baska MAGE antijenlerin kapsamaktadî, örnegin WO99/40188, PRAME, BAGE, Lage (aynjzamanda NY Eos 1 olarak bilinmektedir) SAGE ve HAGE (WO 99/53061) ya da GAGE (Robbins and (1997), Journal of the National Cancer Institute 89, p. 293 gibi yaylnlarda ifsa edilenleri kapsamaktad n. Kanser antijenlerinin bu kislt1ayld||01mayan örnekleri melanom, akciger karsinomu, sarkom ve mesane karsinomu gibi çesitli tümör tiplerinde eksprese edilmektedir.

Bkz, ör. , U.S. Patent No. 6,544,518.

Su anda ifsa edilen belirli yapIandBmalara göre GLA ile kullanîh için uygun olan diger tümöre özgü antijenler, bunlarla kîslmlüolmamak kaydßtla tümöre özgü ya da tümörle iliskili GMz, ve GM3 gibi gangliyozidler ya da bunlar& konjugatlarübulunmaktadß; ya da bir anti kanser immün tepkisi ortaya çüîarmak ya da arttîmak için bir GLA as :bilesiminde kullanEn için bir antijen tam uzunluklu Gonimmuneofin hormon salßi hormunu (GnRH, WO 95/20600) gibi bir self peptid hormon, kEa bir 10 amino asit uzunlugunda peptid olabilir.

Baska bir uygulamada prostata özgü antijen (PSA), PAP, PSCA (örn. Proc. Nat. Acad. Sci. uygulamada Prostaz olarak bilinen bir antijen kullanlllnaktad 11. (ön. Nelson, et al., Proc. Natl.

Mevcut bulusun baglamüiçerisinde kullanîslljolan diger tümörle iliskili antijenler sunlarE Pat. No. 5,981,215). Ilave olarak, kanser terapisindeki asilar için özellikle uygun olan antijenler tirosinaz ve survivini de kapsamaktad 11.

Burada ifsa edilen bir kanser antijeni içeren GLA içeren as: bilesiinleri ile ilgili yap Jhnd imalar, HER-Z/neu ekspresyonu gibi tümörle iliskili antij en ekspresyonu ya da diger kansere özgü ya da kanserle iliskili antijenler tarafßdan karakterize edilen her türlü kansere kars :kullan Isll :blacakt i.

Kanseri olan ya da kanser olma riski oldugundan süphelenilen bir sujedeki kanser tanEEklinik görünüm, kanserin ilerleme derecesi, kanserin tipi ve diger etmenler gibi çesitli etmenlere dayaljolarak degisebilen, teknikte kabul edilen çesitli metodolojilerden herhangi birisi ile yap 11abilir. Kanser tanlSLßrnekleri aras [nda hasta numunelerinin (örnegin kan, deri biyopsisi, diger doku biyopsisi, cerrahi numuneler, vs.) histopataolojik, histokimyasal, immünohistokimyasal ve immünohistopatolojik incelemesi, tanlmll [genetik (örnegin nükleik asit) markerlarFliçin PCR testleri, bu antijenleri taslýan hücreler ya da dolas îhdaki kanserle iliskili antijenler için ve taniml' Spesifiteye sahip antikorlar için serolojik testler ya da teknikte uzman olan kimselerin asina oldugu baska metodolojiler bulunmaktad Ir. Bkz, örn. U.S. Patent 211 (7):18.

Mevcut bulusun çesitli yathndEmalarîla göre asübilesimleri ve metotlarüaynüzamanda otoimmün hastalEklarlIi profilaksisi ya da terapisi için de kullanEIabilir, söz konusu hastalEklar bir konagtn ya da sujenin immün sisteminin “seli” dokulara, hücrelere, biyomoleküllere (örnegin peptidler, polipeptidler, proteinler, glikoproteinler, lipoproteinler, proteolipidler, lipidler, glikolipidler, nükleik asitler, örnegin RNA ve DNA, oligosakkaritler, polisakkaritler, proteoglikanlar, glikozaminoglikanlar ya da benzerle ve suje hücreleri ve dokularlîilîi diger moleküler bilesenleri) ya da epitoplara (örnegin bir antikor degisken bölgesi tamamlayEEIÜg belirleme bölgesi (CDR) tarafßdan ya da bir T hücre reseptör tamamlayEEIEk belirleme bölgesi tarafîidan tanßanlar gibi spesifik immünolojik olarak tanlînlütanEna yapEIarE) karsE yöneltilen bir immün tepkisine zararlEbir biçimde arac [[Üg ettigi hastalERlarÇ kosullarEya da bozukluklar :kap samaktad E.

Dolayswla otoimmün hastalklar her durumda normal otolog dokulara karsiyöneltilen hücreleri ya da antikorlar lkapsayan bir anormal immün tepki ile karakterize edilir.

Memelilerdeki otoimmün hastallklar genel olarak iki farkl 1 kategoriden birisinde sîiîllandîll'labilir: hücre aracllll`lhastal`k (yani T-hücre) ya da antikor aracl'llFlbozukluklar.

Hücre araclIEotoimmün hastalklarîl klIsElayEEolmayan örnekleri multipl skleroz, romatoid artrit, Hashimoto tiroidit, tip 1 diyabetes mellitus (Juvenil baslangElEdiyabet) ve otoimmün uvoretiniti kapsamaktadî. Antikor arac 1Dotoimmün bozukluklar, bunlarla sßmlüolmamak kayd &la miyasteni gravis, sistemik lupus eritematöz (ya da SLE), Graves hastalEgJotoimmün hemolitik anemi, otoimmün trombositopeni, otoimmün astEn, kriyoglobulinemi, trombik trombositopenik purpura, primer biliyer skleroz ve pernisyöz anemiyi kapsamaktadE.

Antijen(ler) sunlarla iliskilidir: sistemik lupus eritematöz küçük nükleer ribonükleik asit proteinleridir (snRNP); Graves hastalEgEtirotropin reseptörü, trioglobulin ve diger tiroid and Texier et al., 1992); pemfigus kaderin benzeri pemfigus antijenleri, örnegin demoglein 3 Hashimoto, 1993); ve trombik trombositopenik purpura tormbositlerin antijenleridir. (Bkz, Publishers, Norwell, MA; Radbruch and Lipsky, P.E. (Eds.) Current Concepts in Autoiininunity and Chronic lnflainmation (Curr. Top. Microbiol. and lmmunol.) 2001, Springer, NY.) Otoimmünite tip 1 diyabet, multipl skleroz, lupus, romatoid artrit, skleroderma ve tiroid hastalllarîgibi 80”den fazla farklEhastalEkta rol oynamaktad E. Çogu otoimmün hastalEk için güçlü kantitatif morbidite tahminleri bulunmamaktadi 199071arîlda sonunda yathn en yakit zamanlLlçalLsmalar otoimmün hastallklarij Birlesik Devletlerdeki en yaygn üçüncü büyük hastallk oldugunu ve en yaygn otoimmün hastaliklarln 8.5 milyondan fazla Amerika] y Etkiledigini ortaya koymaktadlr. Hastal gîn su anki yayglnllk tahminleri Birlesik Devletler nüfusunun yüzde 5 ila 8,i aralîglîidadlî. Çogu otoimmün hastalfk orantsß olarak kad Illarjetkilemektedir. Kad lîilarüi bir otoimmün hastalEga yakalanma riski erkeklerden 2.7 kat daha fazladm Kad [Illar otoimmün hastaliklara karsj daha duyarlElm; erkeklerin kad ilardan daha yüksek dogal katil hücre aktivitesi düzeylerine sahip oldugu görülmektedir.

Otoimmün hastalklar, immün sistem self dokularünonself sandEgEida meydana gelir ve uygun olmayan bir saldleLhaznlgna girisir. Vücut otoimmün hastalklardan örnegin bagLrsak (Crohn hastallgl) ve beyin (multipl skleroz) gibi farkll l sekillerde etkilenebilir. Bir otoantikorun, fonksiyonlarlna zarar vermek için seli`` hücreler ya da self dokulara saldlrdlgl ?ve sonuç olarak otoimmün hastallklara neden oldugu ve otoantikorun, bir otoimmün hastal'glîl as11 meydana çlkßlîldan (örnegin klinik belirtiler ve semptomlarlîl görülinesinden) önce hastani serumunda saptanabildigi bilinmektedir. Dolayßglla, bir otoantikorun saptanmas [bir otoimmün hastaltgß gelismesi riskinin ya da varlEgßß erken teshisine ya da farkma varlînas fta imkan tarim. Bu bulgulara dayaljolarak otoantijenlere karsüçesitli otoantikorlar kesfedilmistir ve klinik testlerde otoantijenlere karsjotoantikorlar ölçülmüstür (örn. U.S. metabolitin saptanmasE(örn. , U.S. Pat. No. 4,659,659) ya da immünolojik bir reaktivitenin Belirli yap land nmalarda, bu bulusun kullan ma yönelik bilesimleri özellikle yasllarln tedavisinde ve/veya böbrek diyalizi yapilan sujeler, kemoterapi alan sujeler ve/veya radyasyon terapisi alan sujeler gibi immünosupresyona ugramis transplant alldllari Ive benzerlerinin tedavisinde uygulanabilecektir. Bu bireyler genel olarak as Tara azalan immün tepkiler verir ve bu nedenle de bu bulusun kullan iha yönelik bilesimleri, bu sujelerde elde edilen immün tepkileri artt îlabilir.

Baska yap [landîmalarda, bu bulusun bilesimlerinde kullanüan antijen ya da antijenler, respiratuar hastalItlarla, örnegin kronik obstrüktif pulmoner hastalk (COPD) gibi kosullarß terapisi ve profilaksisi için bakteriyel enfeksiyonun (örnegin pnömokokal) neden oldugu ya da siddetlenen hastalLklarla iliskili antijenleri kapsamaktadLr. COPD, fizyolojik olarak kronik bronsiti ve/veya amfizemi olan hastalarda tersinemeyen ya da kslmen tersinebilen hava yolu obstrüksiyonunun varl glyla tanlmlanlr (Am J Respir Crit Care Med. 1995 Nov;152(5 Pt Burada tarif edildigi gibi, mevcut bulusun belirli yathndEmalarJ bir ya da daha fazla toll benzeri reseptör agonisti (TLR agonisti) içeren farmasötik bilesimler gibi asEbilesimleri ve immünolojik adjuvan bilesimleri düsünmektedir. Toll benzeri reseptörler (TLR), çok sayLda bulasld lpatojende ya da bunlar üzerinde bulunabilenler gibi çesitli korunmus mikrobiyal moleküler yapllar için konak hücrelere erken asamada tanlma yetenegi veren dogustan Immün sistemin hücre yüzeyi transmembran reseptörlerini kapsamaktad lî'l. ((irn., Armant et al., 2002 Dogustan immün sistem vasEasßzla immün tepkilerin baslatüînasijhgland Emak için TLR aracljsinyal transdüksiyonunun indüklenmesi, hücre yüzeyi TLR7sini mesgul eden TLR agonistleri tarafLijdan gerçeklestirilebilir. Örnegin, lipopolisakkarit (LPS) TLR2 ya da TLR4 CpG sekanslar |(örnegin metillenmemis sitozin-guanozin ya da "CpG" dinükleotid motifleri peptidoglikanlar TLR2 ve/veya TLR6 agonistleri olabilir (Soboll et al., 2006 Biol. Reprod. 3M Pharmaceuticals, St. Paul, MN, ayn Zamanda iliskili bilesikler 3M001 ve 3M002,nin de 2005); Ilagellin bir TLR5 agonisti olabilir (Feuillet et al., 2006 Proc. Nat. Acad. Sci. USA 103:l2487); ve hepatit C antijenleri TLR7 ve/veya TLR9 vastfasßl'la TLR agonistleri olarak Hepatol. 42:724).Baska TLR agonistleri de bilinmektedir (örnegin Schirmbeck et al., 2003 J. Örnegin ve arka plan olarak (bkz. örn. U.S. Patent No. 6,544,518), hem sistemik hem de mukozal rotalar vas taslyla uygulandlglnda adjuvan olarak metillenmemis CpD dinükleotidler ("CpG") içeren immünostimülatör oligonükleotidler bilinmektedir (WO 96/02555, EP kEaltmadîL CG motifinin immünostimülasyondaki merkezi rolü, Krieg tarafßdan Nature baglam Ilda olmas Igerektigini ve bu sekanslarß bakteriyel DNAada yaygi olmakla birlikte omurgalJDNA'sßda nadir oldugunu göstermistir. Immünostimülatör sekans sEktE: Purin, Purin C, G, primidin, pirimidin; içerisinde dinükleotid CG motifi metillenmez fakat diger metillenmemis CpG sekanslarßß immünostimülatör olduklarD bilinmektedir ve mevcut bulusun belirli yapühndmmalarßda kullanJhbilir. Asülar seklinde formüle edildiginde CpG, serbest antijenle birlikte serbest solüsyon halinde uygulanabilir () ya da kovalent olarak bir antijene konjuge edilebilir (WO 96/02555; McCluskie and Davis, supra) ya da alüminyum hidroksit gibi bir taslyld` yla formüle edilebilir (örnegin Davis et al. supra, Brazolot-Millan et Burada aç Fklanan adjuvanlar ya da asiTarda kullanîh için tercih edilen oligonükleotidler tercih edilen sekliyle en az üç, daha tercih edilen sekliyle en az altDya da daha fazla nükleotidle ayrIan iki ya da daha fazla dinükleotid CpG motifi içerir. Oligonükleotidler, tipik olarak deoksinükleotidlerdir. Tercih edilen bir uygulamada, oligonükleotiddeki internükleotid fosforoditioat ya da daha tercih edilen sekliyle bir fosforotioat bagüî, buna karsß fosfodiester ve diger internükleotid baglarîlîl kullanßijbu bulusun kapsamjiçerisindedir, örnegin karma internükleotid baglantülarü olan oligonükleotidler bu bulusun kapsamD içerisindedir. Fosforotioat oligonükleotidler ya da fosforoditioat üretmek için metotlar U.S.

Tercih edilen oligonükleotid örnekleri asaglîlaki yaylîilarda ifsa edilen sekanslara sahiptir; burada ifsa edilen çesitli yapEIandlImalar için sekanslar tercih edilen sekliyle fosforotioat modifiye edilmis internükleotid baglant Jhri :içermektedir: CPG 7909: Cooper et al., "CPG 7909 adjuvant improves hepatitis B virus vaccine seroprotection in antiretroviral-treated HIV-infected adults." AIDS, 2005 Sep CpG 10101: Bayes et al., "Gateways to clinical trials." Methods Find. Exp. Clin.

Vollmer J., "Progress in drug development of immunostimulatory CpG oligodeoxynucleotide ligands for TLR9." Expert Opinion on Biological Therapy. 2005 Alternatif CpG oligonükleotidler, yukarîla sayIan yayEllarda tarif edilen tercih edilen sekanslari önemsiz nükleotid sekans omatmalarü yerlestirmeleri, silmeleri ve/veya eklemeleri bakiimdan faklEÜg gösteren varyantlarE içerebilir. Mevcut bulusun belirli yaplhndimalarûda kullaHJhn CpG oligonükleotidler teknikte bilinen her türlü metotlar sentezlenebilir (örnegin EP 468520). Uygun bir biçimde, bu oligonükleotidler otomatiklestirilmis bir sentezleyiciden yararlanarak sentezlenebilir. Oligonükleotidler tipik olarak deoksinükleotidlerdir. Tercih edilen bir uygulamada, oligonükleotid içerisindeki internükleotid bag lfosforoditioattln ya da daha tercih edilen sekliyle fosforotioat bagldlr, bununla birlikte fosfodiesterler de su anda düsünülen yapllandlrimalarln kapsaml içerisindedir. Örnegin karstlîilllns fosforotioat fosfodiesterler gibi farkll'internükleotid baglantllarFiçeren oligonükleotidler de düsünülmektedir. Oligonükleotidi stabilize eden baska internükleotid baglar _da kullan Tabilir.

Ko-adi'uvan Burada saglanan sekliyle belirli yapIandîmalar asDbilesimlerini ve immünolojik adjuvan bilesimlerini, örnegin GLA”ya ilave olarak bu bilesimlerin adjuvan aktiviteye sahip olan fakat GLA dEîldaki bir bilesenini gösteren en az bir ko-adjuvan içeren farmasötik bilesimleri kapsamaktad Ji Böyle bir adjuvan aktiviteye sahip olan bir ko-adjuvan, bir insan (örnegin bir insan hasta), insan olmayan bir primat, bir memeli ya da tan nan bir immün sisteme sahip olan baska bir gelismis ökaryotik organizma gibi bir sujeye uygulandlg nda, bir immün tepkinin potensini ve/veya ömrünü degistirebilen (yani istatistiksel olarak anlamll' bir biçimde arttiabilen ya da azaltabilen ve tercih edilen belirli yathndimalarda arttiabilen ya da yükseltebilen) bir bilesimi kapsamaktad E. (Bkz. örn. Powell and Newman, "Vaccine design - The Subunit and Adjuvant Approach", 1995, Plenum Press, New York) Burada ifsa edilen çesitli yap Iand îImalarda, GLA ve istenilen bir antijen ve istege baglüolarak bir ya da daha fazla ko-adjuvan, GLA ile ayn Ehamanda uygulanabilen ya da zaman ve/veya bosluk (örnegin farkljbir anatomik alanda) ayr]hbilen istenilen antijene kars :yöneltilen bir immün tepkiyi degistirebilir, örnegin ortaya çkartabilir ya da arttiiabilir, fakat belirli bulus yap land limalar n 11 bu sekilde slnlrllanmasl amaçlanmamaktadm ve dolaylslyla belirtilen bir antijeni içermeyen fakat aynl zamanda bir ya da aha fazla TLR agonisti, ko-adjuvan, bir imidazokuinolin, immün tepkisi modifiye edici ve çift sap iplik immün modifiye edici (dSLlM) içerebilen bir bilesimde GLAlnEi uygulamasEiEda düsünmektedir.

Buna göre ve yukarEla kaydedildigi gibi, ko-adjuvanlar adjuvan etkilere sahip olan GLA,dan baska bilesimleri, örnegin saponinler ve saponin mimetiklerini, örnegin QSZl ve QSZ] alkaloidleri, örnegin tomatin, deterj anlar, örnegin (bunlarla kEîlîblmamak kayd Sila) saponin, polisorbat 80, Span 85 ve stearil tirosin, bir ya da daha fazla sitokin (örnegin GM-CSF, IL-2, kapsamaktad 11.

Saponinler gibi deterjanlara iliskin bilgiler örnegin U.S. Patent 6,544,518; Lacaille-Dubois, M (saponin) içeren Immün Stimüle edici kompleksler (lmmune Stimulating Complexes (lSCOMS)) olarak adlandEEan partikülat yapührü hemolitiktir ve asEüirB üretiminde kullanJInsti (Morein, B., EP 0 109 942 B1). Bu yapÜJarB adjuvan aktiviteye sahip olduklarü (HPLC ile saflastmÜInS Quil A fraksiyonlarü potent sistemik adjuvanlar olarak tarif patentlerde ifsa edilmektedir. Bu referanslarda aerda sistemik asLlar için potent bir adjuvan olarak islev gören QS7'nin kullanml itarif edilmektedir (hemolitik olmayan bir Quil-A fraksiyonu). QSZl kullanin layr da Kensil ve arkadaslar itaraf ndan da tarif edilmektedir da bilinmektedir (WC 99/ 10008). QSZl ve QS7 gibi QuilA fraksiyonlarüjiçeren partikülat Sistemik as lama çal Emalarida kullanIrnß olan diger saponinler, Gypsophi'la ve Saponari'a gibi baska bitki türlerinden elde edilenleri kapsamaktadi (Bomford et al., Vaccine, 10(9):572- 577, 1992).

Escin, burada ifsa edilen yap ilandtijmalarn adjuvan bilesimlerinde kullanLm için saponinlerle iliskili deger bir deterjandlii. Escin Merck indeksinde (12. Bas m: giris no 3737) at kestanesi agac ,l Aesculus hi'ppocastanum'un tohumunda meydana gelen bir saponin karlSlm lolarak tan înlanmaktad î. Kromatografi ve saflastlîima (Fiedler, Arzneimittel-Forsch. 4, 213 (1953)) ve iyon degisim reçineleri (Erbring et al., U.S. Pat. No. 3,238,190) vas [fas @la izolasyonu tarif edilmektedir. Escin fraksiyonlarü(aynJzamanda escin olarak da bilinir) saflastmmnîsltm ve biyolojik olarak aktif olduklarü gösterilmistir (Yoshikawa M, et al. (Chem Pharm Bull no 3204) bir saponin olarak tanßilanan, Digitalis purpureddan elde edilen ve Gisvold et al., 621 ”de tarif edilen prosedüre göre saflastmühn baska bir deterj and E.

Burada ifsa edilen belirli baska yap landnmalara göre kullanlni için diger ko-adjuvanlar bir blok ko-polimer ya da ilgili teknikteki kimselerin asina olacag bir polimerik bilesik slnlflnl gösteren biyolojik olarak parçalanabilir bir polimeri kapsamaktadln. Bir GLA as lbilesimi ya da bir GLA immünolojik adjuvan içerisine dahil edilebilen bir blok ko-polimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimerin örnekleri aras'nda Pluronic® L121 (BASF Corp., (PLGA), poli(laktik asit) (PLA), poli-(D,L-laktit-k0-glikolit) (PLG), ve polil:C bulunmaktadi (Bkz, örn., Powell and Newman, "Vaccine design - The Subunit and Adjuvant Approach", 1995, Plenum Press, New York) Çesitli yapIlandimalar bir yag içeren GLA asiarü ve GLA immünolojik adjuvanlarE düsünmektedir, bunlar bu türden baziyapllandnmalarda ko-adjuvan aktivitesine katdea bulunabilir ve bu türden baska yap land Iimalarda ilave olarak ya da alternatif olarak farmasötik olarak kabul edilebilir bir taslylcl ya da eksipiyan saglayabilir. Mevcut patent açklamaslîia dayan-l olarak çok saylîla uygun yag bilinmektedir ve asîbilesimlerin ve immünolojik adjuvan bilesimlerin dahil etmek için seçilebilir. Bu gibi yaglarîl örnekleri, Örnek olarak ve kßmama olinadan skualen, skualan, mineral yagü zeytinyagü kolesterol ve mannid monooleat :kapsamaktad E.

Imidazokuinolin immün tepki modifiye ediciler gibi immün tepki modifiye ediciler de teknikte bilinmektedir ve aynjzamanda su anda ifsa edilen belirli yathndimalarda ko- adjuvanlar olarak dahil edilebilirler. Tercih edilen belirli imidazokuinolin immün tepki modifiye ediciler, klsltlayld lolmayan örnek olarak resikuimod (R848), imikuimod ve imidazokuinolin immün tepki modifiye ediciler, uygun kosullar altEida aynELzamanda burada tarif edildigi gibi TLR agonist aktivitesine sahiptir. Diger immün tepki modifiye ediciler, nükleik asit esaleçift sap iplik immün modifiye edicilerdir (dSLIM). Su anda ifsa edilen belirli yaplandimalarda kullanii için düsünülen spesifik dSLIM örnekleri su yayßlarda December 6, , ve Mologen AG (Berlin, FRG: Yine yukarida kaydedildigi gibi, burada tarif edildigi gibi GLA ile kullanin için bir ko- adjuvan tipi genel olarak “sap” olarak adlandliillan alüminyum ko-adjuvanlarl olabilir. Sap ko- adjuvanlar`| asaglîiakilere dayanmaktadî: alüminyum oksi-hidroksit; alüininyuin hidroksifosfoat; ya da çesitli tescilli tuzlar. Sap ko-adjuvanlarl kullanan asllar burada tarif edildigi gibi tetanöz suslarü HPV, hepatit A, inaktive edilmis polio Virüsü ve diger antijenler için as Iarjkapsayabilir. Iyi bir güvenlik kaydia sahip olduklarEidan, antikor tepkilerini arttidklaridan, antijenleri stabilize ettiklerinden ve büyük ölçekli üretimi nispeten kolay Etkili immün stimülasyonu için GLA ile kombine edilebilen diger ko-adjuvanlar, saponinleri ve saponin mimetiklerini, örnegin QSZl ve QS213e benzer etkiler veren yap sal olarak iliskili olan ve QSZl mimetikleri olarak adlandlrllan bilesikleri kapsamaktad ri. QS21, tercih edilen bir ko-adjuvan olarak kabul edilmistir. QS21, Quillaja Saponaria Molina agaç kabugundan elde edilen HPLC yöntemi ile saflastniinls toksik olinayan bir fraksiyon içerebilir. QS21 üretimi U.S. Pat. No. 5,057,540 sayEIEdokümanda ifsa edilmektedir. (Bkz. aynîtamanda U.S.

GLA aynü zamanda belirli yapmandmmalarda ICOMS (örn. U.S. Patent No. 6,869,607, Sweden) ve CSL Ltd. (Parkville, Victoria, Australia),dan tedarik edilebilen saponin türevi Burada ifsa edilen belirli yapFlandlîmalara göre, GLA aslîbilesimi bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekansEia uygulanabilir bir biçimde baglanan bir baslatBDiçeren en az bir rekombinan ekspresyon yap ED içerebilir. Belirli baska yapilandEmalarda, rekombinan ekspresyon yapîslîlbir viral vektörde, örnegin bir adenovirüs, adeno iliskili virüs, herpesvirüs, lentivirüs, poksvirüs ya da retrovirüs vektöründe bulunur. Örnegin Molecular Biology, 2006 John Wiley & Sons, NY yaymEida Ausubel et al. (Eds.), Current Protocolsie göre burada saglandgj gibi polipeptid antijenlerinin ekspresyonu için bu ekspresyon yapEarE ve vektörlerini hazElamak ve kullanmak için bilesimler ve metotlar teknikte bilinmektedir.

Rekombinan ekspresyon yapülarElEl kßîlayîljolmayan örnekleri genel olarak U.S. Patent 6,770,445 ve baska yaylrtlarda ve su anda ifsa edilen belirli yapllandlrmalarda kullanim için burada saglanan sekliyle polipeptid antijenlerinin ekspresyonuna adapte edilebilen ögretilerle birlikte bulunabilir. lmmün Tepki Bu bulus dolayîýla bir immün tepkiyi düzenleyebilen bir konaktaki immün tepkileri degistirmek (yani örnegin teknikte uzman olan kimselerce bilinen uygun bir kontrole göre istatistiksel olarak anlamljbir biçimde arttîlmak ya da azaltmak) için bilesimlerin kullanmqü saglanmaktadi Teknikte sßadan uzmanlga sahip olan kimselerce bilenecegi üzere, bir immün tepki bir konaglîl immün statüsündeki her türlü aktif` degisim olabilir ve konaglîi immün statüsünün korunmasLnda ve/veya regülasyonunda rol oynayan bir ya da daha fazla doku, organ, hücre ya da molekülün yaplSI lya da fonksiyonundaki her türlü degisimi kapsayabilir. Tipik olarak, iinmün tepkiler iyi bilinen çesitli parametrelerle saptanabilir, örnegin bunlarla slîllîil`l olmamak kaydlýla in vivo ya da in vitro olarak çözünebilir immünoglobulinler ya da antikorlarEi; sitokinler, lenfokinler, kemokinler, hormonlar, büyüme faktörleri ve benzerleri gibi çözünebilir aracflhr ve aynEzaman baska çözünebilir peptid, karbonhidrat, nükleotid ve/veya lipid aracüarî immün sistemin hücrelerinin degisen fonksiyonel ya da yapßal özellikleriyle belirlenen sekliyle selüler aktivasyon durumundaki degisimler, örnegin hücre proliferasyonu, degisen motilite, spesifik gen ekspresyonu ya da sitolitik davran& gibi uzmanlasllhig aktivitelerin indüklenmesi; immün sistemin hücreleri tarafndan selüler farklLlasma, örnegin degismis yüzey antijen ekspresyon profilleri ya da apoptoz baslanglcl (programll hücre Ölümü); ya da bir immün tepkinin varllglnln saptanabildigi her türlü baska kriterin saptanmasi .l lmmün tepkiler genellikle örnegin konagEi immün sisteminin hücreleri ve dokularEtarafEidan moleküler ve selüler düzeylerde self ve non-self yap lar aras Iidaki ayrii olarak farz edilebilir, fakat bulus bunlarla siilanmamalßß. Örnegin, immün sistem bilesenlerinin tipik regülasyonu gibi çesitli normal kosullar eslik edebildiginden ya da otoimmün ve dejenereatif hastalltlarda gözlenen uygun otoimmün tepkiler gibi patolojik kosullarda bulunabildiginden, immün tepkiler aynüzamanda self moleküllerin, hücre ya da dokularîl immün sistemce tan imas idari kaynaklanan immün sistemdeki durum degisimlerini de kapsayabilir. Baska bir örnek olarak, belirli immün sistem aktivitelerinin (örnegin antikor ve/veya sitokin üretimi ya da hücre aracLlLimmünitenin aktivasyonu) yukardyönlü regülasyonuyla indüklemeye ek olarak, immün tepkiler aynl lzamanda seçilen antijen, antijen uygulamas n n sekli, spesifik tolerans indüksiyonu ya da baska etmenlerin sonucu olabilen saptanabilir immünitenin supresyonunu, zay Tllamas îFdiger her türlü asag _yönlü regülasyonunu da kapsayabilir.

Burada açlillanan as Tarlýla bir immün tepkinin indüklenmesinin belirlenmesi, teknikte SBadan uzmanlîga sahip olanlarîl kolayca anlayacaglîüzere iyi bilinen çesitli immünolojik analizlerle saptanabilir. Bu gibi analizler bunlarla sEiElEolmamak kaydßlla in vivo ya da in vitro olarak çözünebilir antikorlarm; sitokinler, lenfokinler, kemokinler, hormonlar, büyüme faktörleri ve benzerleri gibi çözünebilir aracÜhr ve aynEzaman baska çözünebilir peptid, karbonhidrat, nükleotid ve/veya lipid aracührj immün sistemin hücrelerinin degisen fonksiyonel ya da yaplîsal özellikleriyle belirlenen sekliyle selüler aktivasyon durumundaki degisimler, örnegin hücre proliferasyonu, degisen motilite, spesifik gen ekspresyonu ya da sitolitik davranlsl gibi uzmanlasllms aktivitelerin indüklenmesi; immün sistemin hücreleri taraf` ndan selüler farklllasma, örnegin degismis yüzey antijen ekspresyon profilleri ya da apoptoz baslanglclîllîi (programlîhücre Ölümü) saptanmaslîll'kapsamaktadlî. Bu ve benzer analizleri gerçeklestirmek için prosedürler yaygEi bir biçimde bilinmektedir ve örnegin Lefkovits yaymßda bulunabilir (Immunology Methods Manual: The Comprehensive Sourcebook of Techniques, 1998; see also Current Protocols in Immunology; see also, ag., Weir, Handbook of Experimental Immunology, 1986 Blackwell Scientific, Boston, MA; Mishell and Shigii (eds.) Selected Methods in Cellular Immunology, 1979 Freeman therein) Antijen-reaktif T hücrelerin proliferasyonunun saptanmasl, bilinen çesitli teknikler vasltaslyla gerçeklestirilebilir. Örnegin, T hücre proliferasyonu DNA sentezinin hßlîilîi ölçülmesi yoluyla saptanabilir ve aday antijen-reaktif T hücrelerin maruz kaldEgEantijen spesifitesi uyaranlari (örnegin istenen spesifik antijen- ya da kontrol antijen pulslu antijen sunan hücreler) kontrol edilmesi yoluyla belirlenebilir. Çogalmas Jiçin uyarEünß T hücreler, artan bir DNA sentez hâE sergiler. DNA sentezinin hâmlîi ölçülmesi için tipik bir yol, yeni sentezlenmis DNA içerisine dahil edilen bir nükleosit prekürsörü olan tritiye timidinle örnegin T hücrelerinin puls etiketleme kültürleri vasîas Slladm. Dahil edilen tritiye timidin miktarj bir sE/E sintilasyon spektrofotometre kullanarak belirlenebilir. T hücre proliferasyonunun saptanmas Diçin diger yollar interlökin-2 (IL-2) üretimi, Ca2+ flux ya da 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil-tetrazolyum gibi boya albnliidaki artSlarii ölçülmesini kapsamaktad 11. Alternatif olarak, lenfokinlerin (örnegin interferon-gama) sentezi ölçülebilir ya da belirli bir antijene tepki verebilen T hücrelerin sayls belirlenebilir.

Antijene özgü antikor üretiminin saptanmas örnegin radyoimmünoanaliz (RIA), enzim bagll ' immünosorbent analizi (ELISA), denge diyalizi ya da Western blotting gibi kat fazll' immünoblotting gibi in vitro metodolojiler kullanarak bir asßlla isleme tabi tutulan bir konaktan bir örnegin (örnegin serum, plazma ya da kan gibi örnek içeren bir immünoglobulin) analiz edilmesi yoluyla gerçeklestirilebilir. Tercih edilen yap [Bandmmalarda, ELISA analizler ayera örnegin analizin duyarlllgßüarttîmak için antijen özgü bir katüfazlümonoklonal antikorla hedef antijenin antijen-yakalama immobilizasyonunu kapsayabilir. Çözünebilir arac Jlarîl (örnegin sitokinleri, kemokinler, lenfokinler, prostaglandinler, vs.) detaylarüaynE zamanda örnegin ticari kaynaklardan (örn. Sigma, St. Louis, M0; see also R & D Systems 2006 Catalog, R & D Systems, Minneapolis, MN) kolayca tedarik edilebilen metotlar, aparatlar ve aylraçlar kullanllarak enzim bagl limmünosorbent analizi (ELISA) vasltaslyla kolayca belirlenebilir.

Teknikte iyi bilinen rutin analizler kullanarak diger her türlü immünolojik parametre izlenebilir. Bunlar arasElda örnegin antikora bagiilü hücre aracEE sitotoksisite (ADCC) analizler, sekonder in vitro antikor tepkileri, çesitli periferik kan ve yerlesik marker antijen sistemleri, immünohistokimya ya da baska analizler kullanlarak lenfoid mononükleer hücre alt popülasyonlarßi akß immünositoflorimetrik analizi bulunabilir. Bu ve diger analizler örnegin Rose et al. (Eds.), Manual of Clinical Laboratory Immunology, 5th Ed., 1997 American Society of Microbiology, Washington, DC yaylnlnda bulunabilir.

Buna göre, burada saglanan asi-Ive adjuvan bilesimlerinin bir konakta bir THl-tipi T lenfosit tepkisi, bir TH2-tipi T lenfosit tepkisi, bir sitotoksik T lenfosit (CTL) tepkisi, bir antikor tepkisi, bir sitokin tepkisi, bir lenfokin tepkisi, bir kemokin tepkisi ve bir intlamatuar tepkiden seçilen en az bir immün tepkiyi ortaya çlartabilecegi ya da arttEabilecegi düsünülmektedir.

Belirli yap [land imalarda, söz konusu immün tepki sitokinin interferon-gama (IFN-y), tümör nekroz faktörü-alfa (TNF-u)°dan seçildigi bir ya da birden daha fazla sitokinin üretimi,, seçildigi bir ya da birden daha fazla interlökinin üretimi, kemokinin MIP-ld, MIP-lß, RANTES, CCL4 ve CCL57ten seçildigi bir ya da birden daha fazla kemokinin üretimi, ve bir bellek T hücre tepkisi, bir bellek B hücre tepkisi, bir efektör T hücre tepkisi, bir sitotoksik T hücre tepkisi ve bir efektör B hücre tepkisinden seçilen bir lenfosit tepkisinden seçilen en az 6,375,944.

Farmasötik Bilesimler Farmasötik bilesimler genel olarak GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL'den tedarik edilebilir, ürün numaras _699800) içermektedir ve ayrda burada saglanan sekliyle farmasötik olarak kabul edilebilir bir taslyldl,1eksipiyan ya da seyreltici ile kombinasyon halinde antijen, TLR agonisti, ko-adjuvan (istege bagli olarak bir sitokin, bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici ve/Veya bir dSLlM), ve/veya rekombinan bir ekspresyon yapîîidan seçilen bir ya da daha fazla bilesen içerebilir.

Bu nedenle, belirli baklIs aç [[arEida, mevcut bulus GLA “monoterapisine” yöneltilmekte olup, içerisindeki GLA, burada tarif edildigi gibi, diger antijenlerden büyük ölçüde yoksun olan bir bilesim içerisinde formüle edilir ve bir organizma tarafßdan enfeksiyon gibi bir durum ya da bir hastalEgEtedavi etme ya da önleme amacgtla örnegin spesifik olmayan bir immün tepki gibi bir immün tepkiyi stimüle etmek için bir sujeye uygulantr. Bir uygulamada, bilesimler ve metotlar bir sujede bir immün tepkiyi stimüle etmek için monofosforile edilmis bir disakkarit kullan 11. Belirli baska bir uygulamada, söz konusu bilesimler ve metotlar bir sujede bir immün tepkiyi stimüle etmek için Lipid A2nlîi 2-mon0aç11 formunu ku11an|îi Baska bir belirli uygulamada, söz konusu GLA istege baglü olarak bir kit içerisinde saglanan bir sprey formundad IL Söz konusu GLA tercih edilen sekliyle stabil bir emülsiyon seklinde formüle edilebilir. Belirli bir uygulamada, örnegin diger antijenlerden büyük ölçüde yoksun olan stabil bir emülsiyonda bir lipid A türevi içeren bir bilesim saglanE. Baska bir belirli uygulamada, memelilerde kullanii için uygun olan bir 3-açillenmis monofosforile edilmis lipid A türevi içeren bir bilesim saglanmakta olup, içerisindeki 2 amin pozisyonu tekli bir açil zincirine sahiptir ve büyük ölçüde diger antijenlerden yoksundur.

Belirli baska yap land itmalarda, farmasötik bilesim hem GLA hem de burada saglanan sekliyle farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasýîiîl eksipiyan ya da seyreltici ile kombinasyon halinde TLR agonisti, ko-adjuvan (örnegin bir sitokin, bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici ve/veya bir dSLIM) ve benzerleri ve/veya rekombinan bir ekspresyon yapîleidan seçilen bir ya da daha fazla bilesen içerebilen bir as Dailesimidir. Örnek niteligindeki tasß/ßüar kullanman dozaj ve konsantrasyonlarda alBIar için toksik olmayacakti GLA artEnükleik asit esaslîlas lar için ya da GLA artübir antijen içeren as lar için, tipik olarak intradermal, subkütanöz, intramüsküler ya da intravenöz yoldan ya da diger yollardan yaklasR 0.01 tig/kg ila yaklasER 100 mg/kg°l[l?t dozaj uygulanacaktlî.

Tercih edilen bir dozaj yaklaslk 1 tig/kg ila yaklask l mg/kgidlit ve yaklaslk 5 tig/kg ila yaklask 200 ug/kg tercih edilir. Teknikte uzman olan kimseler için, uygulama saylsl ve skllgîilîl konaglîi tepkisini baglFblacagßçFRtl'rL Terapötik kullanîh için “Farmasötik olarak kabul edilebilir taslSHZlÜhr” farmasötik tekniginde iyi bilinmektedir ve Örnegin Remingtons Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A.R. Gennaro edit. 1985) yaylîlßda tarif edilmektedir. Örnegin, fizyolojik bir pH degerine sahip olan steril bir salin ve fosfat tamponlu salin kullanEIabilir. Farmasötik bilesimde koruyucular, stabilizatörler, boyalar ve hatta tatlandEBJajanlar saglanabilir. Koruyucu olarak örnegin, sodyum benzoat, sorbik asit ve p- hidroksibenzoik asidin esterleri eklenebilir. Ek olarak, antioksidanlar ve süspansiyon haline getirici ajanlar kullan labilir. ya da inorganik asidin (asit ekleme tuzlarî ya da bir organik ya da inorganik bazîl (baz ekleme tuzlar] kombinasyonundan elde edilen mevcut bulusun bilesiklerinin tuzlarlîiü göstermektedir. Bilesiinler serbest baz ya da tuz formlarEida kullanElabilir ve her iki form mevcut bulusun kapsam Eiçerisinde olarak düsünülür.

Farmasötik bilesimler,bilesimin bir hastaya uygulanmasma imkan tanS/an herhangi bir formda olabilir. Örnegin, söz konusu bilesim bir katü sßljya da gaz (aerosol) formunda olabilir. Tipik uygulama yollarj kßîlama olmaksîîl oral, topikal, parenteral (örnegin sublingual ya da bukkal), rektal, vajinal ve intranazal (örnegin bir sprey olarak) uygulamayü kapsamaktadi Burada kullanIan sekliyle parenteral terimi iyontoferetik (örnegin U.S. yaplandîinalarî ve aynîlzamanda subkütanöz enjeksiyonlarl] intravenöz, intramüsküler, intrasternal, intrakavernöz, intratekal, intrameatal, intraüretral enjeksiyon ya da infüzyon tekniklerini kapsamaktadm. Belirli bir uygulamada, burada tarif edilen bir bilesim (asjve farmasötik bilesimleri içeren) iyontoforez, mikrokavitasyon, sonoforez ya da mikroignelerden seçilen bir teknik vas Ias Stla intradermal olarak uygulan 3.

Söz konusu farmasötik bilesim, bilesimin bir hastaya uygulanmaslîidan sonra içerisinde bulunan aktif bilesenlerin biyoyararlanLm saglamasi için formüle edilir. Bir hastaya uygulanacak olan bilesimler,bir ya da daha fazla dozaj birimi formunu alii ve burada örnegin bir tablet tek bir dozaj birimi olabilir ve bu aerosol formundaki bir ya da birden daha fazla bilesiginin bir kab _Çok say _da dozaj birimini tutabilir.

Oral uygulama için, bir eksipiyan ve/veya baglayßübulunabilir. Örnekler sükroz, kaolin, gliserin, nisasta dekstrinler, sodyum aljinat, karboksimetil selüloz ve etil selülozdur.

Renklendirici ve/veya tatlandeJ ajanlar bulunabilir. Bir kaplama kabugundan yararlan Jhbilir.

Söz konusu bilesim örnegin bir iksir, surup, solüsyon, emülsiyon ya da süspansiyon gibi bir V formunda olabilir. S v örnegin oral uygulama için ya da enjeksiyon yoluyla dagltlma için olabilir. Oral uygulama için tasarlandlglnda, tercih edilen bilesimler tatland Ild. lajan, koruyucular, boya/renklendirici ve tat artlîlean bir ya da daha fazlaslîiîiçerir. Enjeksiyon yoluyla uygulanmasütasarlanan bir bilesime bir yüzey aktif madde, koruyucu, sulandlîlma maddesi, dispersleme maddesi, süspansiyon haline getirici ajan, tampon, stabilizatör ve izotonik ajandan bir ya da daha fazlas :dahil edilebilir.

Burada kullanlan sekliyle sîtübir farmasötik bilesim, ister bir solüsyon, süspansiyon ya da baska bir benzer formda olsun, su tasßtBDya da eksipiyanlardan bir ya da daha fazlasEiE içerebilir: steril seyrelticiler, örnegin enjeksiyon amaçlEsu, salin solüsyonu, tercih edilen sekliyle fizyolojik salin, Ringer solüsyonu, izotonik sodyum klorür, skualen, skualan, mineral yaga bir mannid monooleat, kolesterol ve/veya solvent ya da süspansiyon haline getirici ortam olarak islev görebilen sentetik mono ya da digliseritler, polietilen glikoller, gliserin, propilen glikol ya da baska solventler; benzil alkol ya da metil paraben gibi antibakteriyel ajanlar; askorbik asit ya da sodyum bisültît gibi antioksidanlar; etilendiamintetraasetik asit gibi selatlama ajanlarl; asetatlar, sitratlar ya da fosfatlar gibi tamponlar ve sodyum klorür ya da dekstroz gibi tonisite ayarlama amaçlFajanlar. Parenteral preparat cam veya plastikten yathn ampüller, tek kullanEhltk siigalar ya da çok dozlu siselere kapatIabilir. Enjekte edilebilir bir farmasötik bilesim tercih edilen sekliyle sterildir.

Belirli bir uygulamada, bu bulusun farmasötik ya da as Ebilesimi 0.2 um”dan az stabil bir sulu süspansiyon ve ayrîla fosfolipidler, yag asitleri, yüzey aktif maddeler, deterjanlar, saponinler, florlanms lipidler ve benzerlerinden olusan gruptan seçilen en az bir bilesen içerir.

Baska bir uygulamada, bu bulusun bir bilesimi aerosol haline getirilebilen bir tarzda formüle Ayni zamanda, bir asj ya da farmasötik bilesime bunlarla sîiilj olmamak kayd Sila alüminyum tuzlarü yagda su emülsiyonlarü biyolojik olarak parçalanabilir tasßlüüar, suda yag emülsiyonlarÇ biyolojik olarak parçalanabilir mikrokapsüller ve lipozomlar gibi dagmüia araçlarîgibi baska bilesenlerin dahil edilmesi istenebilir. Bu gibi araçlarda kullanii için ilave immünostimülatör maddelerin (ko-adjuvanlar) örnekleri de yukarma tarif edilmistir ve N- asetilmuramil-L-alanin-D-izo-glutamin (MDP), glukan, IL-12, GM-CSF, gama interferon ve Teknikte uzman olan kimselerce bilinen her türlü taslylcl , bu bulusun farmasötik bilesimlerinde kullan Tabilmesine kars Ti, taslýölîilîi tipi uygulama sekline ve sürekli bir sallîn istenip istenmedigine bagljolarak degisiklik gösterecektir. Parenteral uygulama için, örnegin subkütanöz enjeksiyon için, söz konusu tasßlßüercih edilen sekliyle su, salin, alkol, bir yag, bir mum ya da bir tampon içermektedir. Oral uygulama için, yukaeraki tasßlBEar ya da katü bir tasglBD örnegin mannitol, laktoz, nisasta, magnezyum stearat, sodyum sakarin, talk, selüloz, sükroz ve magnezyum karbonattan herhangi birisi kullanülabilir. Biyolojik olarak parçalanabilir mikrosferler (örnegin polilaktik galaktid) ayn :tamanda bu bulusun farmasötik bilesimleri için tasglîimar olarak kullanÜJabilir. Biyolojik olarak parçalanabilir uygun bak mdan, mikrosferin yaklask olarak 25 mikrodan büyük olmas Ltercih edilmektedir.

Farmasötik bilesimler (Örnegin GLA aslarl Ne GLA immünolojik adjuvanlar )| aynl Zamanda tamponlar gibi seyrelticiler, antioksidanlar, örnegin askorbik asit, düsük molekül aglîllkll' (yaklasîk 10 kal nt dan aZ|)l polipeptidler, proteinler, amino asitler, glikoz, sükroz ya da dekstrin gibi karbonhidratlar, selatlaina ajanlarîl örnegin EDTA, glutatyon ve diger stabilizatörler ve eksipiyanlarEiçerebilir. Nötr tamponlu salin ya da spesifik olmayan serum albüminle karEtEJInE salin örnek niteliginde uygun seyrelticilerdir. Tercih edilen sekliyle, ürün, seyreltici olarak uygun eksipiyan solüsyonlarüömegin sükroz) kullanarak bir liyof'ilizat seklinde formüle edilebilir.

Yukarîla tarif edildigi gibi, bu bulusun belirli yap [[andlîmalarEistenilen antijenleri kodlayan nükleik asit moleküllerini dagLtabilen bilesimleri kapsamaktadLr. Bu bilesimler rekombinan kompleks haline getirilen rekombinan ekspresyon yapßEnükleik asit molekülleri (bkz. WO 93/03709), ve lipozomlarla iliskilendirilen nükleik asitleri (bkz. Wang et al., Proc. Natl. Acad. öldürülen ya da inaktive edilen adenovirüse baglanabilir (bkz. Curiel et al., Hum. Gene Ther.

. Diger uygun kapsainaktad i.

Dogrudan in vivo prosedürlere ilave olarak, hücrelerin bir konaktan çEkartEIdEgÇ modifiye edildigi ve ayni ya da baska bir konak hayvana yerlestirildigi ex vivo prosedürler kullan Jhbilir. YukarEia kaydedilen bilesimlerden herhangi birisinin, antijeni kodlayan nükleik asit moleküllerinin bir ex vivo baglamda doku hücrelerine dahil edilmesi için kullan Jhbilecegi aç [ktî Viral, fiziksel ve kimyasal a131 metotlarüçin protokoller teknikte iyi bilinmektedir.

Buna göre, mevcut bulus bir konak, bir hasta ya da bir hücre kültüründe bir immün tepkinin arttitltnas lya da ortaya ç kart lmas liçin kullanlslldlr. Burada kullanilan sekliyle, “hasta” terimi tercih edilen sekliyle bir insan gibi her türlü slcak kanl. lhayvanl göstermektedir. Bir hasta bulaslcl'bir hastalk, kanser, örnegin meme kanseri ya da otoimmün bir hastallktan muzdarip olabilir ya da normal (yani saptanabilir hastal k ve/veya enfeksiyondan baglmslz) olabilir. Bir “hücre kültürü”, immün bakmadan yeterli hücreler ya da izole edilmis immün sistem hücreleri içeren her türlü preparattm (örnegin bunlarla sßmlüolmamak kaydßlla T hücreler, makrofajlar, monositler, B hücreler ve dendritik hücreler). Bu hücreler teknikte siadan uzmanlEga sahip olan kimselerce iyi bilinen çesitli tekniklerden herhangi birisi vasîasStla izole edilebilir (örnegin Ficoll-hypaque yogunluk santrifujasyonu). Söz konusu hücreler kanserden muzdarip olan bir hastadan izole edilebilir (fakat zorunlu degildir) ve tedaviden sonra bir hastaya geri verilebilir.

Belirli yapllandlrmalarda, parenteral ya da oral uygulama için tasarlanan bir 5 v. lbilesim, uygun bir dozaj elde edilecek sekilde GLA asl lbilesimininuygun bir miktarlnl içermelidir.

Tipik olarak, bu miktar bilesimdeki antijenden aglrllfltça en az % 0.01 °dir. Oral uygulama için tasarlandîgîida, bu miktar bilesimin agEIEgElüi % 0.1 ve yaklasEE 70,i aras Eda degisebilir.

Tercih edilen oral bilesimler antij enin yaklastk % 4 ve yaklas E % 50'si araltgßüçerir. Tercih edilen bilesimler ve preparatlar, parenteral dozaj biriminin aktif bilesenden agilkça % 0.01 ila 1 aral :g' 3 :içerecegi sekilde haz ilan B.

Farmasötik bilesim topikal uygulama için tasarlanabilir ve bu durumda söz konusu tasSIEE uygun bir biçimde bir solüsyon, emülsiyon, merhem ya da jel baz içerebilir. Söz konusu baz örnegin asagldakilerden bir ya da daha fazlas 11 l içerebilir: vazelin, lanolin, polietilen glikoller, balmumu, mineral yag ,lsu ve alkol gibi seyrelticiler ve emülsiyon haline getiriciler ve stabilizatörler. KIT/am arttlîllörajanlar topikal uygulama için farmasötik bir bilesimde bulunabilir. Transdermal uygulama için tasarlanmas [halinde, söz konusu bilesim transdermal bir yama ya da iyontoforez cihazjiçerebilir. Topikal formülasyonlar yaklasüg % 0.] ila yaklas] 10 ag Elm/hacim konsantrasyonuyla bir antijen (örnegin GLA-antijen as Ebilesimi) ya da GLA (örnegin immünolojik adjuvan bilesimi; GLA, Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL°den 699800 ürün numaras &la tedarik edilebilir) içerebilir.

Söz konusu bilesim rektal uygulama için örnegin rektumda eriyecek ve ilac ESalacak olan bir suppozituar formunda tasarlanabilir. Rektal uygulama için bilesim, uygun bir irrite edici olmayan eksipiyan olarak bir yagldbaz içerebilir. Bu bazlar kLSLtlama olmakslztm lanolin, kakao yagl ve polietilen glikolü kapsamaktadlr. Burada açlklanan metotlar asl bilesimleri/adjuvanlar linsert(ler), kürecik(ler), zamanla sallnan formülasyon(lar), yama(lar) ya da h 21 _Sal îh formülasyon(lar“)l kullan Tarak uygulanabilir.

Belirli yapTandlîlmalarda, ayanamanda burada tarif edilen bir ya da daha fazla kapta saglanabilen GLA asEbilesimlerini ve/veya GLA immünolojik adjuvan bilesimlerini içeren kitler de düsünülmektedir. Bir uygulamada, GLA asübilesimleri ve/veya GLA immünolojik adjuvan bilesimlerinin tüm bilesenleri tek bir kap içerisinde birlikte bulunur, fakat yathndimalarîl bu sekilde k@ElanmasEtasarlanmamaktadE ve aynEzamanda örnegin bir GLA immünolojik adjuvan bilesimininayrEbir formda oldugu ve antijen bileseni ile temas etmedigi iki ya da daha fazla kap da düsünülmektedir. KßmaylîiEolmayan teoriyle, bazü durumlarda yalan GLA immünolojik adjuvan bilesimininuygulanmasLnLyararlLJbir biçimde gerçeklestirilebildigine, diger taraftan baska durumlarda bu uygulamanln yararll [bir biçimde antijenin uygulamaslndan geçici ve/veya yersel olarak (örnegin fark] lbir anatomik alanda) ayrîolabildigi, yine baska durumlarda sujeye yap Tan uygulamanîi yararlFbir biçimde burada tarif edildigi gibi hem antij en hem de GLA7yEve ayn :Zamanda istege baglEblarak burada tarif edilen diger bilesenleri içeren bir GLA as :bilesimiyle gerçeklestirildigine inan Jinaktadm.

Bu kit yap [land imalaria göre bir kap her türlü uygun kap, ufak sise, ampül, tüp, kap, kutu, sise, dar boyunlu sise, kavanoz, tabak, tek kuyucuklu ya da çok kuyucuklu aygmarEi kuyucugu, rezervuar, tank ya da benzerleri veya burada ifsa edilen bilesimlerin yerlestirilebilecegi, saklanabilecegi ve/veya tas Lnabilecegi ve içeriklerini çlkartmak için erisilebilecegi baska bir düzenek olabilir. Tipik olarak, söz konusu kap tasarlanan kullanlmla uyumlu olan ve içerisinde bulunan içeriklerin allnmasln | kolay olan bir materyalden yapTabilir. Bu gibi kaplarlîi tercih edilen Örnekleri, bir igne ve slîiîlga kullanarak içeriklerinin çekilmesine uygun olan cam ve/veya plastik kaplDya da geri kapatEIabilir tüpler ve ampüller, Örnegin kauçuk bir bölmeye veya baska süld imal] araçlarma sahip olanlarEkapsamaktadE.

Bu gibi kaplar örnegin kaptan materyallerin verimli bir biçimde alimas Ba imkan tanßzan ve/veya materyali örnegin as ijmorötesi 31 ya da sßaklk kosullarßdan ya da mikrobiyal kirleticiler gibi istenmeyen kirleticilerin girmesinden koruyan bir materyalden yap Jhbilen ya da kaplanabilen cam ya da kimyasal olarak uyumlu plastik ya da reçineden olabilir. Kaplar tercih edilen sekliyle sterildir ya da sterilize edilebilir ve her türlü tasglîi J eksipiyan, solvent, tasßlBDya da benzerleriyle uyumlu olacak sekilde yapim, örnegin burada tarif edilen asE bilesimleri ve/veya immünolojik adjuvan bilesimleri ve/veya antijenleri ve/veya rekombinan ekspresyon yap lar n ivs. süspansiyon haline getirmek ya da çözündürmek için kullanilabilir.

Emülsiyon sistemleri de mevcut bulusta kullan l'llnak üzere bilesimlerde formüle etmede kullan labilir. Örnegin, birçok tek ya da çok evreli emülsiyon sistemi tarif edilmistir. Suda yag emülsiyon adjuvanlarlîilîi tek basîia adjuvan bilesimi olarak kullanlsllî oldugu ileri sün'ilmüstür (EP 0 399 843B) aynElzamanda suda yag emülsiyonlarEve diger aktif ajanlarEi emülsiyon adjuvanlarü tarif edilmistir. Mevcut bulusta kullanEn için yag emülsiyon adjuvanlar Jiogal ya da sentetik olabilir ve mineral ya da organik olabilir. Mineral ve organik yaglarii örnekleri teknikte uzman olan kimselerce açLlst bir biçimde bilinmektedir.

Belirli bir uygulamada, bu bulusun kullanimlna yönelik bir bilesimi su içerisinde bir yag emülsiyonu içerinekte olup, içerisinde GLA yag fazlîida dahil edilir. Baska bir uygulamada, bu bulusun kullanEhßa yönelik bir bilesimi su içerisinde bir yag emülsiyonu içermekte olup, içerisinde GLA yag fazmda dahil edilir ve içerisinde burada tarif edildigi gibi ilave bir bilesen, örnegin bir ko-adjuvan, TLR agonisti ya da benzeri bulunur.

Her türlü su içerisinde yag bilesiminininsana uygulama için uygun olmasüiçin, emülsiyon sisteminin yag fazE tercih edilen sekliyle metabolize edilebilir bir yag içermektedir.

Metabolize edilebilir yag teriminin anlamdteknikte iyi bilinmektedir. Metabolize edilebilir terimi, “metabolizma tarafindan dönüstürülebilen” anlamlna gelmektedir (D0r1and°s illustrated Medical Dictionary, W. B. Saunders Company, 25th edition (1974)). Söz konusu yag, allî:|_|için toksik olinayan ve metabolizma tarafindan dönüstürülebilen her türlü nebati yag, balik yagü hayvan yagElya da sentetik yag olabilir. Kabuklu yemisler (örnegin yerfßtEgE yap 31, tohumlar ve tahülar yayglîi nebati yag kaynaklarlîli Sentetik yaglar da bu bulusun bir parçasîlîl ve NEOBEE® ve digerleri gibi ticari olarak tedarik edilebilen yaglar :kapsayabilir` karaciger yagßda büyük miktarlarda ve zeytinyagEida, bugdayEl embriyon kIslmEJda, pirinç kepegi yagmda ve mayada az miktarlarda bulunan doymamß bir yagdm ve bu bulusta kullanîn için özellikle tercih edilen bir yagd E. Skualen, kolesterol biyosentezinde bir ara ürün oldugundan metabolize edilebilir bir yagdLr (Merck index, 10th Edition, entry n0.8619). Özellikle tercih edilen yag emülsiyonlar | suda yag emülsiyonlar | ve özellikle su emülsiyonlarndaki skualendir. Ek olarak, mevcut bulusta kullanlma yönelik en çok tercih edilen yag emülsiyon adjuvanlarFtercih edilen sekliyle yag .alfa.-t0k0fer01 (vitainin E, EP 0 dokümanlar, istege baglFolarak iminünostimülanlar QSZl ve/veya 3D-MPL ile formüle edilen skualen, alfa-tokoferol ve TWEEN® 80,e dayalE emülsiyon adjuvanlarE ifsa etmektedir. WO 99/ 12565 saymüdoküman, yag fazüia bir sterol eklenmesiyle bu skualen emülsiyonlaridaki bir ilerlemeyi ifsa etmektedir. Ilave olarak, emülsiyonu stabilize etmek Stabil suda yag emülsiyonlar içerisinde bulunan yag damlaciklarEiEi büyüklügü, foton korelasyon spektroskopisi yoluyla ölçülen sekliyle tercih edilen sekliyle 1 mikrondan azdLr, -600 nm arallgl liçerisinde bulunabilir, tercih edilen sekliyle çap olarak büyük ölçüde 30- 500 nm arallglnda olabilir ve en çok tercih edilen sekliyle çap olarak büyük ölçüde 150-500 nm aralfglîidadlî ve özellikle çap olarak yaklasik 150 nm,dir. Bu bakîhdan, damlaclklarlîi say Ba % 803i, daha tercih edilen sekliyle % 90,dan fazlasEtercih edilen aralüîlar içerisinde bulunmalîli ve en çok tercih edilen sekliyle yag damlacüîlarlîiß sayßa % 95'ten fazlasü tanlilj büyüklük aralEklarl: içerisindedir. Mevcut bulusta kullanBia yönelik yag emülsiyonlarida bulunan bilesenlerin miktarlarü uygun bir biçimde % 2 ila 10 yag, örnegin skualen aralgîldad 3; ve bulunmas :halinde % 2 ila 10 alfa tokoferol; ve % 0.3 ila 3 oran Elda yüzey aktif madde, örnegin polioksietilen sorbitan monooleattE. Tercih edilen sekliyle yag: alfa tokoferol orandl'e esit ya da daha azdn çünkü bu oran daha stabili bir emülsiyon saglamaktad 11. Yaklaslk % 1 düzeyinde Span 85 de bulunabilir. Baz ldurumlarda, mevcut bulusun asllarn n ayr da bir stabilizatör içermesi avantajl. olabilir.

Su emülsiyonlarE içerisinde yag üretme inetodu teknikte uzman olan kimselerce iyi bilinmektedir. Genel olarak, bu metot yag fazEiEi bir PBS /TWEEN80® solüsyonu gibi bir yüzey aktif madde ile karßtEEmasEiE ve bunu takiben bir homojenizatör kullanarak homojenize edilmesini içermektedir. Örnegin, karßinß bir smßgalüigne içerisinden bir, iki ya da daha fazla kez geçirilmesini içeren bir metot, küçük sütühacimlerinin homojenize edilmesi için uygun olacakti. Esit sekilde, daha küçük ya da daha büyük emülsiyon hacimleri üretmek için bir mikro sßlüastmkîtiçerisindeki emülsifikasyon prosesi adapte edilebilir (6 barlk maksimum basElç girisiyle 2 dakikalEk bir zaman dilimi boyunca maksimum 50 geçislik MIIOS microfluidics makine (çkls basanLyaklask 850 bar)). Gerekli çapa sahip olan yag damlac l ölçümünü içeren rutin deneyler vas taslyla bu adaptasyon saglanabilir.

Asag daki örnekler örnek olarak verilmistir ve k'slîtlama amac tasmamaktad I`I. ÖRNEKLER GLA SULU FORMÜLASYONU Bu örnek GLA içeren bir adjuvan sulu forinülasyonunun hazLrilanrnasmJarif etmektedir. Sulu GLA formülasyonu (GLA-AF) enjeksiyon amaçli su (WFI), GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras' içerir. Bu formülasyon önceden belirlenen bir GLA miktarîia bir etanol ve POPC solüsyonu eklenmesi yoluyla hazmlanm Isltm. Islatüan bu GLA, GLA”y3mümkün oldugunca dagEmak için 10 dakika boyunca ultrasonik banyoda tutulmustur. GLA daha sonra nitrojen gaz EaltEida kurutulmustur. Kurutulan GLA ve POPC, dogru hacme gelecek sekilde enjeksiyon amaçlü suyla sulandiüîngt m. Bu solüsyon, GLA ve POPC solüsyon haline gelene kadar 15-30 dakika boyunca 60 °C°de ultrasonik banyoya tabi tutulmustur. Uzun dönemli saklama için, GLA-AF formülasyonlarjliyofilize edilmelidir. Liyofilizasyon islemi, toplam hacmin % 2'si olana kadar solüsyona gliserol eklenmesinden olusmustur. Daha sonra bu solüsyon 1-10 mL”lik siselere yerlestirilmistir. Bu siseler daha sonra solüsyonun dondurulmas tve daha sonra donan suyun sublimlesme yoluyla çekilmesi için vakuma yerlestirilmesinden olusan liyofilizasyon isleminden geçirilmistir.

GLA HPLC ANALIZI Bu örnek GLA içeren bir adjuvan sulu fonnülasyonunun HPLC analizini tarif etmektedir.

Formülasyon üretildikten sonra (yukarîla Örnek lie hakli), ürün kalitesi ve çogaltJhbilirligini saglamak için çesitli salEn ve stabilite testleri gerçeklestirilmistir. Tüm formülasyonlar Yüksek PerformanslLSNUKromatografisi (HPLC). Dinamik Islst SaçLUnhL (DSL) ve görsel inceleme kullanilarak sallm ve uzun dönemli stabilite için test edilmistir.

HPLC kromatogramlarl bir Agilent 1100 sistemi ve bir ESA Corona CAD dedektörü kullanarak toplanmstîl. Bu metot bir Waters Atlantis Cl8 kolon üzerinde metanoldan kloroforma gradiyent kullanarak gerçeklestirilmistir. Enjeksiyonlar 2.5 ug GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaraslT ya da MPL® (GSK Biologicals, Rixensart, Belgium. MPL-AF) ve bir çözündürücü ajan olarak kullan ]lan 0.27 ug sentetik fosfokolin (POPC) içermistir.

Sekil 1, MPL-AF ve GLA-AF içerisindeki kirletici materyallerin saygßjve miktarEiEortaya koyan HPLC verilerini göstermektedir.

HPLC profilleri, GLA-AF”nin büyük ölçüde MPL-AF”den daha saf oldugunu göstermistir.

Yani, GLA-AF içerisinde MPL-AF adjuvan formülasyonundan daha az kirletici madde doruk degerleri bulunmustur. Daha saf bir baslanglç ürünü arastlnmac lara muazzam fayda saglamaktadîl çünkü elde edilen biyolojik tepki, GLA formülasyonlarîida kullan Han baslîîa tek bilesenden elde edilmektedir.

GLA YAG FORMÜLASYONU Bu örnek GLA içeren bir adjuvan yag formülasyonundan bir mililitre hazLiilanmasLnUtarif etmektedir. GLA (100 mikrogram; Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numarasi Corp., Mount Olive, NJ) ya da benzer bir blok ko-polimeri (0.364 mg) ile birlikte 25 milimolar amonyum fosfat tampon (pH = 5.1) içerisinde bir antioksidan olarak 0.5 mg D,L- alfa-tokoferol kullanElarak skualen (34.3 mg) içerisine emülsiyon haline getirilmistir. Bu kargiq, ayrîslmayan ve 180 nmsden az bir ortalama partikül büyüklügüne sahip olan bir emülsiyon olusana kadar yüksek bas mç altßda islenmistir. Söz konusu emülsiyon daha sonra cam tek dozluk siseler içerisine steril olarak filtrelenmis ve uzun dönemli saklama için kapatJInßt 1. Bu preparat 2-8 °C7de saklandEgElda en az üç yÜJboyunca kullan Iabilir.

MURIN MAKROFAJLAR VE DENDRITIK HÜCRELERIN GLA STIMÜLASYONU Bu örnek, GLA'nlîi adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vitro modeli tarif etmektedir. Standart doku kültür metodolojileri ve aylriaçlarl lkullanllm Stlrt Murin J774 hücreleri ve RAW267.4 makrofaj hüre hattl`l (Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu, Manassas, VA), tedarikçinin önerilerine göre saklanmß ve çok kuyucuklu kaplarda yapßüg hücre monokatmanlarüolarak protokolü izlenerek kemik iligi progenitör hücrelerden dendritik hücreler elde edilmistir.

Hücre kültür ortamßda (% 10 fotal bovin serumu içeren DMEM) sulu bir adjuvan preparat seyreltilerek çesitli sentetik GLA adjuvan konsantrasyonlarü (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numarasE 699800) elde edilmistir ve hücreler hücresiz kültür süpernatantlaritoplanmadan önce % 5 C02 içeren nemli bir atmosfer içerisinde 37 °C”de 24 saat boyunca tutulmustur. Süpernatant aklskanlarl lL-12, IL-6 ve TNF gibi çözünebilir murin sitokinleri ve RANTES gibi kemokinler için, üreticinin talimatlarlria uygun olarak spesifik sandviç ELISA analiz kitleri (sitokinler için eBiosciences, San Diego, CA, ve kemokinler için R&D Systems, Minneapolis, MN) kullanarak analiz edilmistir.

Fare makrofaj hücre hatlar îlda ve primer murin DC”de GLA-AF indüklü doza bag ßilümmün tepkiler IL-12p40, IL-6, ve TNF gibi sitokinlerin ve RANTES gibi kemokinlerin sekresyonu ile karakterize edilmistir.

INSAN MAKROFAJLAR VE DENDRITIK HÜCRELERIN GLA STIMÜLASYONU Bu örnek, GLA'nîl adjuvan etkilerini ortaya koyan bir in vitro modeli tarif etmektedir.

Standart doku kültür metodoloj ileri ve ay Eaçlar lullan [ün Et 3.

Insan Mono Mac 6 makrofaj hücre hattmüi hücreleri (Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu, Manassas, VA), tedarikçinin önerilerine göre saklanmg ve çok kuyucuklu plakalarda yapßüî hücre monokatmanlarE olarak kültive edilmistir. Dendritik hücreler standart bir protokol izlenerek periferik kan mononükleer hücrelerden (PBMC) elde edilmistir. Hücre kültür ortam Eda (MonoMac 6 için % 10 fötal bovin serumu ve DC için % 10 insan serumu içeren DMEM) sulu bir adjuvan preparat seyreltilerek çesitli sentetik GLA adjuvan (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün nuinaras l699800) ya da dogal ürün (GSK Biologicals, Rixensart, Belgium) konsantrasyonlarl | elde edilmistir ve hücreler hücresiz kültür süpernatantlar`ltoplanmadan önce % 5 COZ içeren nemli bir atmosfer içerisinde 37 °C”de 24 saat boyunca tutulmustur. Süpematant aklskanlarl IL-lß, lL-23, ve lL-6 gibi çözünebilir insan sitokinleri ve lP-lO, RANTES ve MlP-lß gibi kemokinler için, üreticinin talimatlarlîia uygun olarak spesifik sandviç ELISA analiz kitleri (sitokinler için eBiosciences, San Diego, CA, ve kemokinler için R&D Systems, Minneapolis, MN) kullanarak analiz edilmistir.

Sekil 2, GLA stimülasyonuna tepki olarak Mono Mac 6 hücre hattiß (a - e panelleri) ve monosit türevi DC”nin (f - h panelleri) insan makrofajlarEtarafEidan eksprese edilen sitokin ve kemokin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir.

Insan makrofaj hücre hatt. lMono Mac 6 (SEKIL 2, panel a - e) ve primer DC (SEKIL 2, panel f -h)”taki GLA-AF indüklü doza baglmll lbir immün tepki, IL-lß, lL-6, lL-23 gibi sitokinlerin ve RANTES, lP-lO, MlP-lß gibi kemokinlerin sekresyonu ile karakterize edilmistir. GLA-AF, test edilen tüin sitokinler ve kemokinler için MPL-AF ile kars JhstBJJdgida 5-500 düsük konsantrasyonlarda aktif olmustur.

INSAN KAN HÜCRELERININ GLA STIMÜLASYONU Bu örnek, GLA'nn adjuvan etkilerini ortaya koyan bir in vitro modeli tarif etmektedir.

Standart doku kültür metodolojileri ve ay rlaçlar kullanllmlst n.

Hücre kültür ortamEida (% 10 fötal bovin serumu içeren DMEM) sulu bir adjuvan preparat seyreltilerek elde edilen çesitli sentetik GLA adjuvan (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras D konsantrasyonlarýla insan tam kan hücreleri kültive edilmistir. Kan hücreleri kültür süpernatantlar:toplanmadan önce % 5 COz içeren nemli bir atmosfer içerisinde 37 °C3de 16 saat boyunca tutulmustur. Süpernatant akEkanlarJ insan sitokin IL-lß için, üreticinin talimatlaria uygun olarak spesifik sandviç ELISA analiz kitleri (eBiosciences, San Diego, CA) kullanarak analiz edilmistir.

Insan tan kan hücrelerinde GLA-AF indüklü doza bagimli [bir immün tepki IL-l ß sitokinin sekresyonu ile karakterize edilmistir. Bu analizde, 92 nM GLA potens olarak 57,000 nM MPL-AFlye esdeger olmustur.

IN VIVO OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, InIluenza'ya karsEbir as Ela GLA'ni adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünolojik metodolojiler ve ayEaçlardan yararlanûmßtî (Current Protocols in Immunology, Coligan et al. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY).

Fareler (her grup için üç Balb/c hayvan), yukarda Örnek 3'te kullanilan prosedüre göre bas îia, ya da (i) yukarlîla Örnek 1”de kullanilan prosedüre göre GLA (Avanti Polar Lipids, AF "), ya da (ii) GLA içeren stabil bir emülsiyon içerisinde forinüle edilmistir (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras E699800; her as [[ama için her hayvan için 20 ug) üç haftalk aralERlarla iki kez as [Ianrn Stm Her as Eamadan bir hafta sonra hayvanlardan kanatarak serum al Eimß ve yay ilanan metotlara (Id.) göre ELISA vas Ias Slla Fluzona özgü toplam IgG antikorlarîlîl serum düzeyleri incelenmistir. Virüsü nötralize eden antikorlarB serum düzeyleri de yay Lnlanan metotlara göre Hemaglutinasyon Inhibisyon Analizi (HAI) vas tas yla incelenmistir.

Sekil 3, tek baslîia Fluzone ile karsllastlîlldfglîida GLA-AF ya da GLA-SE ile formüle edilen Fluzone aslîilîi iki farklEdozu kullan Ihrak her as [[rnadan bir hafta sonra (yani 7. günde, panel A; 28. günde panel B) farelerde indüklenen anti-Fluzone antikor üretiminin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. Her grupta/zaman noktas Eida kars [IJERlElbitis noktasE titrelerinin ortalamalarE ve SEM degeri gösterilmektedir. Sekil 3, tek bas Ela Fluzone ile kars Iastildgîlda GLA-AF ya da GLA-SE ile formüle edilen Fluzone asßß iki farklüdozu kullanJhrak ikinci asüamadan bir hafta sonra farelerde indüklenen virüsü nötralize eden antikor üretiminin düzeylerini ortaya koyan HAI verilerini göstermektedir. Her grupta/zaman noktas Elda kars 1111 :bitis noktas :titrelerinin ortalamalar :lve SEM degeri gösterilmektedir.

Fluzone as lamaya tepki olarak toplam IgG ve nötralize edici antikor titreleri sulu ya da stabil bir yag formülasyonunda GLA eklenerek arttlnllrmStlr. GLASnln adjuvan etkisi 2 ulalik Fluzone asFldozuyla daha belirgin olmus ve tek bas ila 20 ul Fluzone asl'slîia benzer (GLA- AF) ya da daha fazla (GLA-SE) antijene özgü humoral tepkileri indüklemistir. Bu sonuçlar, GLA içeren formülasyonlarla desteklenerek Fluzone asl'slîiii dozunun azaltlllnasîlîi mümkün oldugunu ve yine yüksek lgG düzeylerini indükledigini ve antikor titrelerini nötralize ettigini düsündürmektedir. Bu durum Kus gribi gibi dünya genelindeki salgß bir enfeksiyon baglam îida özellikle önemlidir.

IN VIVO OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Laysmanya antijeni içeren bir aslda GLA'nln adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünoloj ik metodolojiler ve aylî'açlardan yararlan Jinßti (Current Protocols in Immunology, Coligan et al. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY).

Fareler (her grup için üç C57BL/6 hayvan), yukarüa Örnek 3`te kullanüan prosedüre göre tek bas îla kullanman SMT antijeni (her as Jhma için her hayvan için 10 ug) ile ya da GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras E699800; her as Iama için her hayvan için 20 ug) içeren stabil bir emülsiyon seklinde formüle edilerek üç haftalLk aralLklarla üç kez as lanmlslt 11. Üçüncü asllamadan bir hafta sonra hayvanlardan kanatarak serum allnmls ve SMT antijenine özgü IgGl ve IgG2c antikorlar n n seruin düzeyleri yaylnlanan metotlara göre ELISA ile incelenmistir.

Sekil 4, tek basEla SMT antijeni kullanarak ya da GLA-SE ile formüle edilen üçüncü as Jhmadan bir hafta sonra farelerde indüklenen anti-SMT antikor üretiminin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. Her grup karsülüllübitis noktasÜtitrelerinin ortalamalar Eve SEM degeri gösterilmektedir. iliskilidir. THl tepkisinin Laysmanya enfeksiyonuna karsEkoruma için gerekligi oldugu ortaya konulmustur. Tek basma SMT aslama, genellikle SMT'ye özgü IgGl antikorunu indüklemistir. SMT+ GLA-SE as lama, daha yüksek antikor titrelerini indüklemis ve fenotipi agvnlkl lolarak hastallga kars lkoruma ile iliskilendirilen lgGZC antijene özgü antikor tepkisine döndürmüstür.

IN VIVO OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Laysmanya antijeni içeren bir asEla GLA'nEi adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünoloj ik metodolojiler ve ay Eaçlardan yararlanlhißti (Current Protocols in Immunology, Coligan et al. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY).

Fareler (her grup için üç Balb/c hayvan) GLA'nIn (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras `l699800; yukarila Örnek 3'te kullanllan prosedüre göre her as lama için her hayvan için 40, 20, 5 ya da 1 pg, GLA-SE) farkllîmiktarlarülüiçeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilen Leish-l lOf antijenle (her asEIama için her hayvan için 10 lig) iki haftall aralüglarla üç kez as Ianmßt E. Ilk as [Ramadan bir hafta sonra hayvanlardan kanatarak serum al imîsl ve yay Blanan metotlara (Id.) göre ELISA vaslîas @la Leish-l 10f'ye özgü IgGl ve IgG2a antikorlarîlîl serum düzeyleri incelenmistir.

Sekil 5, salin kontrollerle kars LllastLndtlLgLnda farklLGLA miktarlarL(40, 20, 5, ya da 1 tig) ile formüle edilen Leish-llOf antijen kullanarak ilk asllamadan bir hafta sonra farelerde indüklenen anti-Leish-llOf antikor üretiminin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. Her grup karsl'lllkllîbitis n0ktas|`ltitrelerinin ortalamalari-We SEM degeri gösterilmektedir.

Leish-llOf ye özgü IgGl ve IgGZa antikor titreleri GLA dozuna bagiilüolmustur. THl ile iliskili IgGZa antikorunun agilgjest edilen tüm GLA konsantrasyonlarßda gözlenmistir.

IN VIVO OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, Spesifik bir Laysmanya antijeni içeren bir aslda GLA'nln adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünolojik metodolojiler ve aylraçlardan yararlan llnlêtîl (Current Protocols in lmmunology, Coligan et al. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY).

Fareler (her grup için üç Balb/c hayvan) GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras 399800; yukarEla Örnek 3”te kullanman prosedüre göre her as [[ama için her hayvan için 20 ug, GLA-SE) içeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilen Leish-l 1 If antijenle (her as Ühma için her hayvan için 10 ug) iki haftalüg aralüglarla üç kez as Ühnmßtî.

Son enjeksiyondan iki hafta sonra, fareler öldürülmüs ve yayEilanan metotlara göre ELISA vas Ias Slla in vitro antijen stimülasyonuna T-hücre baglînlEIFN-y ve IL-4 sitokin tepkilerini analiz etmek için dalaklarLaanm LstLii digerleri, THl tepkisinin Laysmanya enfeksiyonuna karsFkomma için gerekli oldugunu ortaya koyduk. Tüm hayvanlar potent bir mitojen olan ConAlya iyi tepki vermistir. Leish- 111f+GLA-SE as [[ama, Leish-l 1 If antijene özgü sitokin tepkilerini indüklemistir, diger taraftan salin kontrol grubunda hiç tepki gözlenmemistir. ConA ile kars [[astEEdEgEida, Leish- 111f+GLA-SE as Jbma, IL-4,ten çok daha fazla IFN- y indüklemistir, bir THl :TH2 oranDya da fenotipi bu hastalga kars :korumayla iliskilendirilmistir.

IN VIVO OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Laysmanya antijeni içeren bir asEla GLA'nlIi adjuvan etkisini ortaya koyan bir in Vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünoloj ik metodolojiler ve ay Eaçlardan yararlanlmßtî (Current Protocols in Immunology, Coligan et al. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY).

Fareler (her grup için üç Balb/C hayvan), (i) yukarEla Örnek 37te kullanman prosedüre göre GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras E699800; her as lama için her hayvan için 40, 5, ya da 1 ug) ya da (ii) üretici tarafßdan saglanan bir emülsiyon içerisinde MPL® (her asllama için her hayvan için 40, 5, ya da 1 ug) ("MPL-SE", GSK Biologicals, Rixensart, Belgium) farkli lmiktarlarlnl liçeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilen Leish-l lOf antijen (her asllama için her hayvan için 10 ug) ya da salinle iki haftallk arallklarla üç kez asTlanmstîL Son enjeksiyondan bir hafta sonra, fareler öldürülmüs ve yaylîllanan metotlara (Id.) göre ELISA vasltaslyla in vitro antijen stimülasyonuna T-hücre baglmll IFN-y sitokin tepkilerini analiz etmek için dalaklarFallîim Tstlî. IFN- y sitokin tepkileri, Laysmanya enfeksiyonuna kars Ebir TH] koruyucu fenotip ile iliskilendirilmistir.

Sekil 6, salin kontrollerle kars Hastmmdtgüida farliGLA miktarlarEile formüle edilen Leish- llOf antijen kullanarak üçüncü asglhmadan bir hafta sonra farelerde indüklenen anti-Leish- 110f IFN-y sitokin üretiminin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. Her grupta ortalama ve SEM degerleri gösterilmektedir.

Tüm hayvanlar potent bir hücre aktivatörü ve mitojen olan ConA°ya iyi tepki vermistir.

Leish-l lOf+GLA-SE asllama, Leish-l lOf antijene özgü sitokin tepkilerini doza bag Ihll lbir biçimde indüklemistir, diger taraftan salin kontrol grubunda hiç tepki gözlenmemistir. Test edilen tüm konsantrasyonlarda, GLA-SE antijene özgü T hücreler tarafßdan sekrete edilen daha yüksek IF N- y düzeylerini indüklemede MPL-SEden daha potent olmustur.

Sonuç olarak, Laysmanya asßßa stabil bir yag formülasyonu içerisinde GLA eklenmesi, koruyucu TH] fenotipi ile iliskilendirilen selüler tipte (T hücre) agîlklîblarak antijene özgü immün tepkilerini indüklemistir. Ek olarak, GLA-SE, IFN- y gibi sitokinlerle iliskili korumayü indükleme MPL-SEsden daha potent olmustur.

IN vivo OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Laysmanya antijeni içeren bir asEla GLA'nlIi adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünoloj ik metodolojiler ve ay Eaçlardan yararlanllnßlti (Current Protocols in Immunology, Coligan et al. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY).

Fareler (her grup için üç Balb/c hayvan), (i) yukarEla Örnek 3'te kullanman prosedüre göre GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras L699800; her as lama için her hayvan için 20 ya da 5 ug (GLA-815)) ya da (ii) üretici taraflndan saglanan bir emülsiyon içerisinde MPL® (her asllama için her hayvan için 20 ya da 5 ug) ("MPL-SE", GSK Biologicals, Rixensart, Belgium) farkll'miktarlariilîiçeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilen Leish-l 101" antijen (her as lama için her hayvan için 10 ug) ya da salinle iki haftalk araliklarla üç kez asflanmlstlî. Son enjeksiyondan bir hafta sonra, fareler öldürülmüs ve yaymlanan metotlara (Id.) göre intraselüler hücre boyama (ICS) ve Ak& sitometrisi vas îasgl'la in vitro antijen stimülasyonuna T-hücre baglilleN-y, IL-2, ve TNF sitokin tepkilerini analiz etmek için dalaklarjalßmîsltm. Bu üç sitokin, Laysmanya enfeksiyonuna kars jair THl koruyucu fenotiple iliskilendirilmistir.

Tek hücre düzeyinde analiz edildiginde, tüm IFN-y, IL-2, ve TNF sitokinlerini ya da bir IFN- y ve IL-2 kombinasyonunu eksprese eden CD4+ T hücrelerin frekansL, Leish-110f+MPL-SE grubu ile kars last 11 lü glrtda Le,sh-110f+GLA-SE grubunda daha yüksek olmustur ve bu durum hem 20 hem de 5 ug dozlarda gözlenmistir. lFN-y, lL-2, ve TNF sitokinlerinin hepsini eksprese eden CD4+ T hücrelerin yüksek frekanslîlîl, Laysmanya enfeksiyonuna karsi' korumayla iliskili oldugu rapor edilmistir (Seder et aL).

Sonuç olarak, Laysmanya asßßa stabil bir yag formülasyonu içerisinde GLA eklenmesi, koruyucu TH] fenotipi ile iliskilendirilen selüler tipte (T hücre) agîlkliblarak antijene özgü immün tepkilerini indüklemistir. Ek olarak, GLA-SE, IFN-y, IL-2, ve TNF gibi sitokinlerle iliskili korumayEindüklernede MPL-SE”den daha potent olmustur.

IN vîvo OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Mycobacterium tuberculasi's antijeni içeren bir as Ela GLA'ni adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünolojik metodolojiler ve ay Eaçlardan yararlanJInIsltE (Current Protocols in Immunology, Coligan et al. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY).

Fareler (her grup için üç C57BL/6 hayvan), tek bas lîna kullanHan ya da GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras E699800; yukarIla Örnek 3,te kullanman prosedüre göre her asLlama için her hayvan için 20 ug) içeren stabil bir emülsiyon seklinde formüle edilen ID83 antijeni (her asilama için her hayvan için 8 ug) ile üç haftallk arallklarla üç kez aslanmISt Il. Üçüncü asllamadan bir hafta sonra hayvanlardan kanatarak serum allnmls ve yayîllanan metotlara (Id.) göre ELlSA vaslfaslýla ID83,e Özgü lgGl ve IgGZc antikorlarlîilîi serum düzeyleri incelenmistir. IgGl ya da IgGZC antikor izotipinin hakim olmasl slraslyla TH2 ya da THl tepkileri ile iliskilidir. THl tepkisinin Mycobacteri'um tuberculosi's enfeksiyonuna kars Ekoruma için gerekligi oldugu ortaya konulmustur.

Tek bas ia ID83 ile as Jama, aglîl 111 :olarak antijene özgü IgGl antikorunu indüklemistir.

Bunun aksine, ID83+ GLA-SE as Eama, daha yüksek antikor titrelerini indüklemis ve fenotipi agilklj olarak hastalEga karsj koruma ile iliskilendirilen IgGZC antijene özgü antikor tepkisine döndürmüstür.

IN vivo OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Mycobacterium tuberculosi's antijeni içeren bir as Ela GLA'ni adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünolojik metodolojiler ve ay iaçlardan yararlanJInEtE (Current Protocols in Immunology, Coligan et al. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY).

Fareler (her grup için üç C57BL/6 hayvan) tek bas Lna kullanLlan ya da GLA (GLA-SE), GLA + CpG (CpGigzÖ, Coley Pharmaceutieals, 25 ug) (GLA/CpG-SE), ya da GLA + Gardikuimod (GDQ) (Invivogen, 20 ug) (GLA/GDQ-SE) içeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilen ID83 antijenle (her as Tama için her hayvan için 8 ug) üç haftalik araliklarla üç kez as Ianmßti. Son enjeksiyondan üç hafta sonra, fareler öldürülmüs ve yaylîilanan metotlara göre intraselüler hücre boyama (ICS) ve AkE sitometrisi vasEaslýla in vitro lD83 antijen stimülasyonuna CD4+ ve CD8+ T hücre bagEnlElIFN-y, IL-2, ve TNF sitokin tepkilerini analiz etmek için dalaklarüalimgti IFN-y, IL-2, ve TNF sitokinlerin ekspresyonu, M. tuberculosi's enfeksiyonuna kars üçoruyucu TH] tepkileri ile iliskilendirilmistir.

Sekil 7, tek basßa ya da GLA (GLA-SE), GLA+CpG (GLA/CpG-SE), ya da GLA+GDQ (GLA/GDQ-SE) içeren formülasyonlarla adjuvant eklenen ID83 kullanarak üçüncü aslamadan bir hafta sonra farelerde indüklenen CD4+ ve CD8+ T hücreler üreten ID83- spesifik IFN-y, lL-2, ve TNF sitokinin frekanslarlnl ortaya koyan ICS verilerini göstermektedir.

CD4+ ya da CD8+ T hücreler üreten ID83`e özgü sitokinin frekanslarl,lsa1in ve tek basina üzere T hücreler üreten lD83 antijene özgü sitokin lD83+GLA-SE as Jlama ile indüklenmistir ve bunlarlîl frekans EGDQ (TLR gibi ikinci bir TLR ligandÜeklenerek daha da artm Etm. IFN-y + TNF ya da IFN-y + IL-2 eksprese eden T hücreler, hakim olan popülasyonlar olmustur.

Sonuç olarak, M tuberculosis”e kars :Ibir antijenin GLA-SE ile desteklenmesi, IFN-y, lL-2, ve/veya TNF eksprese eden T hücrelerin frekanslarLtile ölçülen sekliyle antijene özgü selüler tepkiyi (T hücreler) önemli ölçüde arttlrmlsltlr. GLA-SE”nin baska bir TLA ligandl lile kombine edilmesi, bu hastallga karsl korumayla iliskili bir fenotipi, hücreleri üreten antijene özgü sitokin frekans îi _daha da arttîlmlstl'rl.

IN VIVO OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Mycobacterium leprae antijeni içeren bir as ß& GLA'nEi adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünolojik metodolojiler ve ay iiaçlardan yararlan im sltln (Current Protocols in Immunology, Coligan et al. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY).

Fareler (her grup için üç C57BL/6 hayvan) CpG (CpGigzÖ, Coley Pharmaceutical, her as [lama için her hayvan için 25 ug), ya da Imikuimod (IMQ) (3M Pharma, her as [lama için her hayvan için 25 ug), ya da GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numarasE699800; yukarîla örnek 3ste kullan Jhn prosedüre göre her as [lama için her hayvan için 25 ug, GLA- SE), bu üçünün bir kargünüya da negatif kontrol olarak salin içeren sulu forrnülasyonlarla desteklenen ML0276 antijeni (her asülama için her hayvan için 10 tig) ile üç haftalEk aralklarla üç kez as &anmßt E. Ikinci as Ramadan üç hafta sonra hayvanlardan kanatarak serum alîimg ve yayîllanan metotlara (Id.) göre ELISA vasEasS/la ML0276”ya özgü IgG serum düzeyleri incelenmistir.

Salin grubundan elde edilen hayvanlar ML0276”ya Özgü IgG sergilememistir ve ML0276+CpG ve ML0276+IMQ gruplarîidan elde edilenler çok düsük bir antijene özgü antikor düzeyi sergilemistir. Bunun aksine, ML0276+GLA-SE, üç adjuvant birlikte kullan Tldfg îida daha da artmlg olan ML02769ya özgü yüksek bir IgG düzeyini indüklemistir.

Sonuç olarak, bu veriler, antijene özgü antikorlari indüklenmesi için antijen ML0276 ile birlikte kullanlldgida, ilave TLR ligandlarüile GLA-SE kombinasyonu ve/veya GLA- SE”nin destekleyici etkisini desteklemektedir.

IN VIVO OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Mycabacterium leprae antijeni içeren bir aslîla GLA'nm adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünolojik metodolojiler ve ay îaçlardan yararlanJInEtm (Current Protocols in lmmunology, Coligan et al. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY).

Fareler (her grup için üç C57BL/6 hayvan) CpG (CpGigzg, Coley Pharmaceutical, her as Ühma için her hayvan için 25 ug), ya da Imikuimod (IMQ) (3M Pharma, her as [[ama için her hayvan için 25 ug), ya da GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numarasL699800; yukar da örnek 3,te kullan lan prosedüre göre her asllama için her hayvan için 25 ug, GLA- SE), bu üçünün bir karlslml lya da negatif kontrol olarak salin içeren sulu formülasyonlarla desteklenen ML0276 antijeni (her asilama için her hayvan için 10 ug) ile üç haftall'k aralklarla üç kez as [[anmßtm. Son enjeksiyondan üç hafta sonra, fareler öldürülmüs ve yay Elanan metotlara göre intraselüler hücre boyama (lCS) ve Akß sitometrisi vas &as Sila in vitro ML0276 antijen stimülasyonuna CD4+ T hücre bagßilülFN- y sitokin tepkilerini analiz etmek için dalaklarEalßmEtE. IFN- y sitokinin ekspresyonu, M. leprae enfeksiyonuna karsE koruyucu THl tepkileri ile iliskilendirilmistir.

Sekil S panel A, salin ve saf kontrollerle kars Iastilkigida CpG ya da Imikuimod (IMQ) içeren sulu forinülasyonlarla ya da GLA (GLA-SE) içeren stabil bir yag emülsiyonuyla ya da bu üçünün karLsLmlyla formüle edilen ML0276 antijen kullanüarak üçüncü asLlamadan bir hafta sonra farelerde indüklenen CD4+ T hücreleri üreten ML0276-spesifik IFN-y sitokinin frekanslarn lortaya koyan ICS verilerini göstermektedir. Her grupta ortalama degerleri gösterilmektedir.

Sekil 8, panel B, salin ve saf kontrollerle karsTastFrHTtl'glîida, CpG ya da linikuiinod (IMQ) içeren sulu formülasyonlarla ya da GLA (GLA-SE) veya bu üçünün bir karIslßiEiEiçeren stabil bir emülsiyonla formüle edilen ML0276 antijeni ile aSJhnan farelerde M. Laprae enfeksiyon alanEiÜ bosaltan lenf bogumlarßm selüleritesini ortaya koyan verileri göstermektedir. Her grupta ortalama ve SEM degerleri gösterilmektedir.

Salin grubundan hayvanlar, % 0.04 pozitif hücreden olusan bir arka plan frekans Bila ML0276'ya özgü IFN tepkileri sergilememistir. CpG ve IMQ gruplarlndan elde edilenler s iias yla % 0.17 ve % 0.11 oranlarlyla antijene özgü sitokin üreten hücre frekanslar nda hafif bir artls` sergilemistir. Bunun aksine, bir adjuvan olarak GLA-SE kullanîltllglnda, önemli ölçüde yüksek say _da ML gözlenmistir, bu frekans üç adjuvant birbiriyle karßtEEldEgEida daha da yükselmistir (% 2.14). Daha sonra M. Laprae ile bir fare alt kümesi karsü karsgla getirilmis ve enfekte olan salin kontrollerle karslastîllldgida karslasma alanmjbosaltan lenf bogumlarßdaki hücrelerin sayßEidaki azalmaya ölçülen sekliyle ML0276+GLA-SE taraflîndan korundugu saptanmßtî ML0276+CpG ve ML0276+IMQ ile asülama, salinle kars Jhstmligîlda hücre sayßüida yalnE az miktarda azalmay ündüklemistir.

Sonuç olarak, bu veriler, antijene özgü selüler tepkilerin indüklenmesi için antijen ML0276 ile birlikte kullanllldlglnda, ilave TLR liaganlar lile GLA-SE kombinasyonu ve/veya GLA- SEinin destekleyici etkisini desteklemektedir.

Claims

ISTEMLER

1. Bir glikopiranosil lipit adjuvanLi(GLA) ve bir konakta kanserin, bir enfeksiyonlu hastalik veya bir otoimmün hastaliginin tedavi edilmesi veya önlenmesi yönteminde kullanima yönelik bir farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyidi iveya eksipiyan içeren bir bilesim olup; burada söz konusu yöntem ayn`ianda veya smalîolarak ve istenilen herhangi bir sFrada konaga, sunlardan türetilen, veya sunlarla çapraz reaksiyona giren GLA”nin ve antijenin uygulaninasîlîiçerinektedir (i) kanserle iliskili en az bir epitop, biyomolekül, hücre veya doku, (ii) enfeksiyonlu bir hastalEkla iliskilendirilen en az bir enfeksiyona neden olan patojen veya (iii) bir otoimmün hastalÜîla iliskili en az bir epitop, biyomolekül, hücre veya doku; burada GLA asag Ilaki formüle sahiptir: R1, R3, R5 ve R6 undesile esittir ve R2 ve R4 ise tridesile esittir.

2. Uygulamaniîi uzamsal veya temporal olarak ayrilliEgDIstem l°e göre kullanîha yönelik bilesim.

3. Uygulamanß aynEanda oldugu ama uzamsal olarak ayrEdEgEIstem Z`ye göre kullanEna yönelik bilesim.

4. Uygulaman'n temporal olarak ayrild gi Istem ?ye göre kullanima yönelik bilesim.

5. Antijenin, ilgili polipeptit antijenini kodladlgüair rekombinant ekspresyon yap ßEbiçiminde saglandgjstem lse göre kullan Era yönelik bilesim.

6. Rekombinant ekspresyon yaplsllnln bir viral vektörde mevcut oldugu Istem 5'e göre kullan ma yönelik bilesim.

7. Söz konusu vektörün bir adenovirüs, adeno iliskili virüs, herpesvirüs, lentivirüs, poksvirüs, veya retrovirüs vektörü oldugu Istem 6”ya göre kullan ina yönelik bilesim.

8. Kanserin serviks kanseri, yumurtalEEt kanseri, meme kanseri, prostat kanseri, fibrosarkom, miksosarkom, liposarkom, kondrosarkom, osteojenik sarkom, kordom, anjiyosarkom, endotelyosarkom, lenfanjiyosarkom, pseudomyxoma petitonei, lenfanjiyoendotelyosarkom, sinovyom, mezotelyoma, Ewing tümörü, leiomiyosarkom, rabdomiyosarkom, kolon karsinomu, pankreas kanseri, skuamöz hücreli karsinom, bazal hücreli karsinom, adenokarsinom, ter bezi karsinomu, yagbezi karsinomu, papiller karsinom, papiller adenokarsinomlar, kistadenokarsinom, medüller karsinom, bronkojenik karsinom, renal hücre karsinomu, hepatom, safra kanal. l karsinomu, koriyokarsinom, seminom, embriyonal karsinom ve Wilm°s tümörü, testiküler tümör, akciger karsinomu, küçük hücreli akciger karsinomu, mesane karsinomu, epitelyal karsinom, gliyom, astrositom, medulloblastom, kraniyofaringiyom, ependimom, pinealom, hemanjiyoblastom, akustik nörom, oliodendrogliyom, meninjiyom, melanom, nöroblastom, retinoblastom, lösemi, lenfoma, multipl miyelom, Waldenstrom makroglobulinemi ve agm zincir hastalEgEoldugu Istem lie göre kullan 3121 yönelik bilesim.

9. Antijenin MAGE l, 3 ve MAGE 4, PRAME, BAGE, Lage (aynLlzamanda NY Eos 1 olarak bilinmektedir), SAGE, HAGE, veya GAGE,den, tümörle iliskili gangliosidden, bir self-peptit hormonundan, bir prostat antijeninden, Plu -1,HASH -l , HasH-Z, Kripto, Kriptin, tirosinaz ve sürvivinden seçilen bir kanser antijeni oldugu Istem 1 ”e göre kullan lîna yönelik bilesim.

10. Tümörle iliskilendirilmis gangliosidin GM2 veya GM3 oldugu; selfpeptit hormonunun Gonadotrofin hormonu salan hormon oldugu veya prostat antijeninin bir Prostata özgü antij en (PSA), PAP, PSCA, PSMA STEAP veya Protaz oldugu Istem 9,a göre kullan Ela yönelik bilesim.

11. Söz konusu antijenin HIV-1, insan herpes virüsü, sitomegalovirüs, Rotavirüs, Epstein Barr virüsü, Varieella Zoster Virüsü, bir hepatit virüsü, bir paramiksovirüs, solunuma ait sinsitiyal Virüsü, bir parainfluenza Virüsü, kabakulak, kZamUi Virüsü, insan papillom virüsü, sarLhumma Virüsü, Dengue virüsü, Kenenin neden oldugu ensefalit Virüsü, Japon ensefalit Virüsü veya influenza Virüsü oldugu Istem lse göre kullan ma yönelik bilesim.

12. Söz konusu antijenin Neisseria gonorrhoea, 0r N. meningitides; S. pyogenes, S. agalactiae, veya S. mutans: H. ducreyi; Moraxella catarrhalis; Branhamella catarrhalis; Bordetella pertussis, B. parapertussis veya B. bronchiseptica; Mycobacterium tuberculosis, M. bovis, M. Ieprae, M. avium, M. paratuberculosis, veya M. smegmatis; Legionella pneumophila; Escherichia. COII, enterohemorragic E. COII, enteropathogenic E. coli, Vibrio cholera; Shigella. sonnei, S. dysenteriae, veya S. flexnerii; Yersinia enterocolitica, Y. pestis, veya Y. pseudotuberculosis; Campylobacter jejuni, veya C. coli; Salmonella typhi, S. paratyphi, S. choleraesuis, veya S. enteritidis; Listeria monocytogenes; Helicobacter pylori; Pseudomonas aeruginosa; Staphylococcus aureus, veya S.epidermidis; Enterococcus. faecalis, veya E. faecium; Clostridium tetani, C. botulinum, veya C. difficile; Bacillus anthracis; Corynebacterium diphtheria; Borrelia burgdorferi, B. garinii, B. afzelii, B. andersonii, veya B. hermsii; Ehrlichia Equi; Rickettsia rickettsii; Chlamydia trachomatis, C. pneumoniae, veya C. psittaci; Leptospira interrogans; Treponema pallidum T. denticola, veya T. Hyodysenteriae”den seçildigi Istem l”e göre kullan ila yönelik bilesim.

13. Söz konusu antijenin Plazmodyum alt türü; Toksoplazma alt türü; Entamoeba alt türü; Babesia alt türü; Tripanosoma alt türü; Giardia alt türü; Laysmanya alt türü; Pnömosistis alt türü; Trikomonas alt türü; veya bir memelinin enfekte olmas &13 neden olabilen bir helmintten oldugu Istem 1”e göre kullanlma yönelik bilesim.

14. Plazmodyum alt türünün P. Falciparum oldugu, Toksoplazma alt türünün T. gondII oldugu; Entamoeba alt türünün E. histolytica; Babesia alt türünün B. microti; Tripanosoma alt türünün T. cruzi; Giardia alt türünün G. lamblia; Laysmanya alt türünün L. major; Pnömosistis alt türünün P. carinii; Trikomonas alt türünün T. Vaginalis oldugu Istem 13”e göre kullan 113 yönelik bilesim.

15. Antijenin romatoid artrit, Hashimoto tiroidit, tip I diyabetes mellitus, otoimmün uvoretinit, miyasteni gravis, sistemik lupus, eritematozus, Graves°hastlaEg3 otoimmün hemolitik anemi, otoimmün trombositopeni, otoimmün astEn, kriyoglobulinemi, trombik trombositopenik purpura, primer safra sklerozisi, ve pernisyöz anemi hastalEgEidan seçilen bir hastal k oldugu Istem 1”e göre kullan ma yönelik bilesim.

16. Konakta bir THl-tip T lenfosit cevab|n|,| bir antikor cevab ri ,| bir sitotoksik T lenfositi (CTL) cevablîilî bir antikor cevablîllII bir sitokin cevabîiîlbir lenfokin cevablîilîlbir kemokin cevab ri`,l veya bir enflamatuar cevablnl lortaya koyan, Istem l,e göre kullanima yönelik bilesim.

17. Sujenin bir bakteriyel ekstrakt, bir canlu virüs asßÇ antijeni kodlayan bir nükleik asit sekans Ba çalßm sekilde baglanabilen bir promotörü içeren en az bir rekombinant ekspresyon yapIslD ve antijeni kodlayan bir nükleik asit sekans ßa çalßm sekilde baglanabilen bir promotörü içeren bir viral vektöründen seçilen bir hazßlama maddesi ile haz ilandgîlönceki istemlerden herhangi birine göre kullan îna yönelik bilesim.

18. Önceki istemlerden herhangi birine göre kullanlma yönelik bilesim olup, bilesim, (a) bir tel] benzeri reseptör (TLR) agonisti; (b) bir saponin veya saponin mimetik; (0) en az bir yag ve ISCOMATRIXTM'den birini içeren bir tasýîlîl (d) bir imidazokuinolin immün cevap modifiye edicisi; (e) bir çift dal halka immün modifiye edicisi (dSLlM); veya (O bir ko- adjuvan içermektedir.

19. Asag Eakilerden meydana gelen gruptan seçilen en az bir adet ilave bileseni içeren önceki istemlerden herhangi birine göre kullan ha yönelik bilesim: (i) sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan seçilen bir ko-adjuvan burada bitki alkaloidi tomatinden seçilir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) TLR agonisti, lipopolisakkarit, peptidoglikan, polile, CpG, 3MOO3, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanîi Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LelF) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir (iii) halinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan seçilir; (iv) ko-adjuvan, bir sitokin, bir deterjan ve bir blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimerden seçilir ve (v) kalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir lipozom ve bir mikropartikülden meydana gelen grup içerisinden seçilen bir tasSlB 3

20. Önceki istemlerden herhangi birine göre kullan mayönelik bilesim olup, burada GLA asag dakileri içermektedir: (i) indirgeyici terminus glikosaminin, heksosamin pozisyonu 6 ve indirgeyici olmayan terminus glikosaminin heksosamin pozisyonu 1 arasîldaki eter baglanthl' içerisinden indirgetici olmayan terminus glikosamine baglE indirgeyici terminus glikosamine sahip bir diglikosainin omurgasü (ii) indirgeyici olmayan terminus glikosaminin heksosamin pozisyonu 49e bagllir O- fosforil grubu; ve (iii) altgla kadar yaglEasil zinciri; burada yaglLl asil zincirlerinden birisi bir ester baglantLsLiçerisinden indirgeyici terminus glikosamn n 3-hidr0ksisine baglldln, burada yagll .asil zinvirlerinden birisi bir amid baglantlsl 'içerisinden indirgeyici olmayan terminus glikosaminin 2-aminosuna bagldlîl ve bir ester baglanthFaracllFgF ile 12 karbon atomundan daha fazla olan bir alkanoil zincirine baglEbir tetradekanoyl zincirini içermektedir ve burada yagl] asil zincirlerinden birisi bir ester baglantßEaracmgDile indirgeyici olmayan terminus glikosaminin 3-hidr0ksisine baglüE ve bir ester baglantßE içerisinden 12 karbon atomundan fazla olan bir alkanoil zincirine baglj bir teradekanoyl zincirini içerrnektedir.

21. GLAlnln asagldaki formüle sahip oldugu bir ya da daha fazla kap içerisinde GLA,y| l içeren bir as bilesimini ihtiva eden bir kit: R1, R3, R5 ve R6 undesile esittir ve R2 ve R4 tridesile esittir.

22. Glikopiranosil lipit adjuvan (GLA), ve bir farmasötik olarak kabul edilebilir tas &ß :lveya eksipiyan Jiçeren, bir konakta bir antijene olan immün cevabß tetiklenmesi veya artEEImasD yönteminde kullan îna yönelik bilesim olup; burada söz konusu yöntem söz konusu GLA”nEi ve söz konusu antijenin bir konaga ayn Ehnda veya sital lolarak ve istenilen herhangi bir düzende uygulanmaslnl içermektedir, ve burada söz konusu antijen sunlardan türetilmekte, veya sunlarla çapraz reaksiyona girmektedir, (i) kanserle iliskili olan en az bir epitop, biyomolekül, hücre veya doku, (ii) enfeksiyonlu hastal 11121 iliskili en az bir enfeksiyonlu patojen, veya (iii) bir otoimmün hastaltkla iliskili en az bir epitop, biyomolekül, hücre veya doku; burada GLA asag Ilaki formüle sahiptir: R1, R3, R5 ve R6 undesile esittir, ve R2 ve R4 tridesile esittir.