CZ288048B6 - Farmaceutická kompozice k indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů - Google Patents
Farmaceutická kompozice k indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů Download PDFInfo
- Publication number
- CZ288048B6 CZ288048B6 CZ1994150A CZ15094A CZ288048B6 CZ 288048 B6 CZ288048 B6 CZ 288048B6 CZ 1994150 A CZ1994150 A CZ 1994150A CZ 15094 A CZ15094 A CZ 15094A CZ 288048 B6 CZ288048 B6 CZ 288048B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- antigen
- microfluidized
- composition
- protein
- group
- Prior art date
Links
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 7
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 title description 13
- 230000007402 cytotoxic response Effects 0.000 title description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 167
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 167
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 164
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 128
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 92
- 230000004044 response Effects 0.000 claims abstract description 76
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 65
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 49
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 29
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 27
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims abstract description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 22
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims abstract description 21
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 18
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 103
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 83
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 60
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 22
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 19
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 16
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 14
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 13
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims description 12
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 12
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 claims description 9
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 8
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 claims description 8
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 8
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims description 8
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 claims description 6
- 108010069621 Epstein-Barr virus EBV-associated membrane antigen Proteins 0.000 claims description 6
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 claims description 6
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 claims description 6
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 claims description 6
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 claims description 6
- 101710192036 Sporozoite surface protein 2 Proteins 0.000 claims description 6
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 claims description 6
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 claims description 6
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 claims description 6
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 claims description 6
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 claims description 6
- 108010083021 Epstein-Barr virus glycoprotein 85 Proteins 0.000 claims description 5
- 102000000440 Melanoma-associated antigen Human genes 0.000 claims description 5
- 108050008953 Melanoma-associated antigen Proteins 0.000 claims description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 5
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 claims description 5
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 claims description 5
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 5
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 4
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 claims description 4
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 4
- 208000029433 Herpesviridae infectious disease Diseases 0.000 claims description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 claims 16
- 102100038358 Prostate-specific antigen Human genes 0.000 claims 6
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 claims 3
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 claims 3
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 claims 2
- 102100033270 Cyclin-dependent kinase inhibitor 1 Human genes 0.000 claims 1
- 101000596404 Homo sapiens Neuronal vesicle trafficking-associated protein 1 Proteins 0.000 claims 1
- 101000891649 Homo sapiens Transcription elongation factor A protein-like 1 Proteins 0.000 claims 1
- 101800001271 Surface protein Proteins 0.000 claims 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 14
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 abstract 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 abstract 1
- 230000003019 stabilising effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 73
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 35
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 32
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 27
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 26
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 26
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 25
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 22
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 22
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 21
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 21
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 20
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 19
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 19
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 17
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 16
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 16
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 16
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 15
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 14
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 14
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 11
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 11
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 11
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 10
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 9
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 9
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 9
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 8
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 8
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 8
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 8
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 7
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 4
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 3
- 229920002046 Pluronic® L 62 LF Polymers 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 3
- IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N lauryl sulfobetaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 3
- 229920002523 polyethylene Glycol 1000 Polymers 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N DDT Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C(C(Cl)(Cl)Cl)C1=CC=C(Cl)C=C1 YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 2
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 2
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 2
- 101000957351 Homo sapiens Myc-associated zinc finger protein Proteins 0.000 description 2
- 102100038750 Myc-associated zinc finger protein Human genes 0.000 description 2
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 description 2
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- 229920002359 Tetronic® Polymers 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 2
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Natural products C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 2
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- BRZYSWJRSDMWLG-DJWUNRQOSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-[(1r)-1-hydroxyethyl]oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]([C@@H](C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-DJWUNRQOSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical class OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- SPCONPVIDFMDJI-QSFUFRPTSA-N Asn-Ile-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SPCONPVIDFMDJI-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 1
- XJQRWGXKUSDEFI-ACZMJKKPSA-N Asp-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XJQRWGXKUSDEFI-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- -1 EICOSAN Natural products 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010048209 Human Immunodeficiency Virus Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- SVBAHOMTJRFSIC-SXTJYALSSA-N Ile-Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N SVBAHOMTJRFSIC-SXTJYALSSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 239000006237 Intermediate SAF Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 101150076359 Mhc gene Proteins 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- 241000187481 Mycobacterium phlei Species 0.000 description 1
- 108700020354 N-acetylmuramyl-threonyl-isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- RBRNEFJTEHPDSL-ACRUOGEOSA-N Phe-Phe-Lys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RBRNEFJTEHPDSL-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010061603 Respiratory syncytial virus infection Diseases 0.000 description 1
- 241001222774 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Minnesota Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 1
- MUAFDCVOHYAFNG-RCWTZXSCSA-N Thr-Pro-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O MUAFDCVOHYAFNG-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- MROIJTGJGIDEEJ-RCWTZXSCSA-N Thr-Pro-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 MROIJTGJGIDEEJ-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- VENKIVFKIPGEJN-NHCYSSNCSA-N Val-Met-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N VENKIVFKIPGEJN-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- SSKKGOWRPNIVDW-AVGNSLFASA-N Val-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N SSKKGOWRPNIVDW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 229940061607 dibasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000004992 fission Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 231100000171 higher toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- BWHLPLXXIDYSNW-UHFFFAOYSA-N ketorolac tromethamine Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)C1CCN2C1=CC=C2C(=O)C1=CC=CC=C1 BWHLPLXXIDYSNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 201000006512 mast cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000006971 mastocytoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000001483 mobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229940111688 monobasic potassium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 1
- 229940055036 mycobacterium phlei Drugs 0.000 description 1
- YDLYQMBWCWFRAI-UHFFFAOYSA-N n-Hexatriacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC YDLYQMBWCWFRAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KMXFZRSJMDYPPG-UHFFFAOYSA-N n-Tetratetracontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC KMXFZRSJMDYPPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- CBFCDTFDPHXCNY-UHFFFAOYSA-N octyldodecane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC CBFCDTFDPHXCNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 208000030925 respiratory syncytial virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- PXLIDIMHPNPGMH-UHFFFAOYSA-N sodium chromate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Cr]([O-])(=O)=O PXLIDIMHPNPGMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N squalene Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C\CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N 0.000 description 1
- 229940038774 squalene oil Drugs 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- OLTHARGIAFTREU-UHFFFAOYSA-N triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(C)CCCCCCCC OLTHARGIAFTREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001103—Receptors for growth factors
- A61K39/001106—Her-2/neu/ErbB2, Her-3/ErbB3 or Her 4/ErbB4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001148—Regulators of development
- A61K39/00115—Apoptosis related proteins, e.g. survivin or livin
- A61K39/001151—Apoptosis related proteins, e.g. survivin or livin p53
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001154—Enzymes
- A61K39/001164—GTPases, e.g. Ras or Rho
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001169—Tumor associated carbohydrates
- A61K39/00117—Mucins, e.g. MUC-1
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/00118—Cancer antigens from embryonic or fetal origin
- A61K39/001182—Carcinoembryonic antigen [CEA]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/00119—Melanoma antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/002—Protozoa antigens
- A61K39/015—Hemosporidia antigens, e.g. Plasmodium antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
- A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Popisuje se farmaceutická kompozice k indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů, která obsahuje antigen indukující v kombinaci s níže definovaným mikrofluidizovaným antigenním přípravkem cytotoxickou odpověď T-lymfocytů specifickou pro tento antigen, ve směsi s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím alespoň dvě složky vybrané ze skupiny zahrnující stabilizující detergent, agens vytvářející micely, a biodegradabilní a biokompatibilní olej, kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě, s tím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin. Tuto kompozici lze využít k léčení lidí a zvířat, například při léčení infekce HIV, malárie, chřipky, hepatitidy, rakoviny, infekce herpetickým virem nebo infekce syncyciálním virem respiračního traktu.ŕ
Description
Farmaceutická kompozice k indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů
Oblast techniky
Vynález se týká farmaceutických kompozic použitelných k indukci cytotoxické odpovědi Tlymfocytů u lidí, jakož i u domestikovaných nebo zemědělských zvířat.
Dosavadní stav techniky
Cytotoxické T-lymfocyty (CTL) jsou považovány za hlavní obranný mechanismus hostitele jako odpověď na různé virové infekce a neoplastické nebo nádorové bujení. Tyto buňky eliminují infikované nebo transformované buňky tím, že rozpoznávají antigenní fragmenty asociované s různými molekulami (nazývanými třídou I MHC molekul) na infikovaných nebo transformovaných buňkách. CTL mohou být indukovány experimentálně cytoplazmatickým zatížením specifických buněk jistými rozpustnými antigeny. Imunizace samotným rozpustným antigenem je obecně nedostačující pro specifickou cytotoxickou indukci T-lymfocytů.
Jedna metoda, pomocí která může být indukována CTL odpověď, zahrnuje použití rekombinantní techniky k začlenění kritických komponent dotyčného antigenu do genomu benigního infekčního agens. Účelem takovéto strategie je vytvoření antigen-specifícké cytotoxické T-lymfocytámí odpovědi na žádaný epitop vystavením hostitele mírné, sebeomezující infekci. Byly popsány chimérické vektory používající vaccinia, polio, adeno- a retro-virů, jakož i bakterií, jako je Listeria a BCG. Například Takahashi a sp. 85 Proč. Nati. Acad. Sci., USA 3105, 1988, popisují použití rekombinantního vaccinia viru exprimujícího HTV gpl60 obalový gen, jako účinného prostředku k indukci cytotoxických T-lymfocytů.
Druhá metoda, kterou lze indukovat buněčně zprostředkovanou odpověď se týká použití adjuvans. Ačkoli použití adjuvans bylo široce diskutováno, není dosud jasné jakým způsobem je buněčně zprostředkovaná imunita indukována, zda tato buněčně zprostředkovaná imunita zahrnuje v sobě cytotoxicitu, za níž odpovídají T-lymfocyty. V následujícím jsou uvedeny reprezentativní publikace v této oblasti.
Stover a sp., 351 Nátuře 456, 1991 (nepřijatelný jakožto prioritní způsob k současné aplikaci) popisují CTL odpověď na beta-galaktosidázu při použití rekombinantní BCG, která obsahuje gen beta-galaktosidázy. Použitím nekompletního Freudova adjuvans a beta-galaktosidázy nebyla detekována takováto odpověď.
Mitchell a sp., B. J. Clinical Oncology 856, 1990 (který není přijatelný jakožto prioritní způsob k současné aplikaci) popisují léčbu pacientů s metastázujícím melanomem pomocí adjuvans nazývaného „DETOX“ a allogeneickým lyzátem melanomu podávaným 5x během šesti týdnů. U malé části pacientů byl pozorován vzrůst počtu cytolytických T-buněk. Autoři popisují potřebu zvýšit hladinu produkce cytotoxických T-lymfocytů, a předpokládají úspěšnost kombinované terapie adjuvans s Interleukinem-2, jakož i předléčbu s cyklofosfamidem k snížení hladiny tumor-specifických T-supresorových buněk, které mohou existovat. DETUX obsahuje detoxikovaný endotoxin (monofosforyl lipid A) ze Salmonella minnesota, buněčné stěny z Mycobacterium phlei, squalenový olej a emulgátor.
Allison a Gregoriadis, 11 Immunology Todav 427, 1990 (nepřijatelný jakožto prioritní způsob k tomuto vynálezu) zaznamenali, že jediné adjuvans „autorizované pro použití“ v lidských vakcínách jsou soli hliníku (alum), který nevyvolává shodně buňkou zprostředkovanou imunitu. Allison a Gregoriadis tvrdí, že je nutné vyvinout adjuvans s účinností Freudova adjuvans a to kompletního, bez jeho různých vedlejších účinků, jako je tvorba granulomů. Autoři došli k závěru, že existují tři možné strategie, například užití liposomů; užití adjuvans nazývané
-1 CZ 288048 B6 imunostimulující komplexy (ISCOM, které obsahují saponin nebo Quil A - triterpenoid se dvěma karbohydrátovými řetězci - cholesterol a fosfatidyl cholin). Přípravek je autorizován pro použití ve chřipkové vakcíně pro koně (Morein a sp., Immunological Adiuvants and Vaccines, Plenům Press, 153); a použití emulze (SAF) squalenu nebo Squalanu (za přidání nebo bez přidání pluronic agens) a muramyl dipeptid (MDP). SAF vyvolává buněčnou imunitu u myší, ačkoliv se dlouho myslelo, že subjednotky antigenů nemohou vyvolávat cytotoxickou odpověď T-buněk.
Takahashi a sp., 344 Nátuře 873, 1990, popisují indukci II třídy restringovaných pomocných a cytotoxických T-lymfocytů za použití ISCOMu jednorázovou subkutánní imunizací myší. Konstatovali, že Freudovo adjuvans, nekompletní Freudovo adjuvans a fyziologický roztok pufrovaný fosfátem, neindukují cytotoxickou T-lymfocytámí aktivitu proti cílovým buňkám, na které byly zacíleny. Dále tvrdí, že v kontrastu k výsledkům získaným pomocí jiných forem exogenních rozpustných bílkovinných antigenů ukázali, že je možné senzibilizovat antigen specifickou MHC třídu I restringovaných CD8+ CD4+CTL imunizací exogenním intaktním proteinem za použití ISCOMu. Konstatují též, že popisované experimenty naznačují, že je možné vyvolat u člověka CTL indukci použitím ISCOMu obsahujícího HIV bílkoviny a že na ISCOMu založené vakcíny mohou vyvolat dlouhodobou indukci jak CTL, tak tvorby protilátek pomocí čištěného proteinu.
Byars a Allison, 5 Vacciness 223, 1987 popsali použití SAF-1, který obsahuje TWEEN 80, PLURONIC LI21 a Squalen nebo Squalan, za přidání nebo bez přidání muramyl dipeptidu, a předpokládají, že jejich výsledky prokazují, že přípravy obsahující muramyl dipeptid budou použitelné pro humánní a veterinární vakcíny. Poslední injekce adjuvans byly aplikovány bez přídavku muramyl dipeptidu. Muramyl dipeptid údajně významně zvyšuje produkci protilátek ve srovnání s použitím adjuvans bez muramyl dipeptidu. Buněčně zprostředkovaná imunita byla prokazována jako opožděný typ přecitlivělosti kožním testem pro stanovení indukce Tpomocných buněk. Tato přecitlivělost je průkaznější a protrahovaná, je-li muramyl dipeptid přidán do adjuvans. Podobné adjuvanty popsali Allison a sp., U.S. Patent 4 770 874 (kde je konstatováno, že kombinace muramyl dipeptidu a pluronového polyolů je základním předpokladem k vyvolání intenzivní buněčné a humorální odpovědi proti vaječnému albuminu); Allison a sp., U.S. Patent 4 772 466; Murphy-Corb a sp., 246 Science 1293, 1989 (kde je konstatováno, že užití kombinovaných adjuvans s muramyl dipeptidem může zvýšit indukci jak humorálního, tak buněčného způsobu imunitní odpovědi); Allison a Bars, 87 Vacciness 56, 1987 (kde je uvedeno, že imunita zprostředkovaná buňkou je vyvolávána pomocí SAF obsahující muramyl dipeptid, což bylo prokázáno pozdním typem přecitlivělosti, dále proliferativní odpovědí Tbuněk k antigenu, produkcí Interleukinu-2 a specifickou geneticky omezenou lyží cílových buněk nesoucích imunizující antigen); Allison a Byars, Immunopharmcology of Infectious Diseases; Vaccine Adjuvans and Modulators of Non-Specific Resistance 191-201, 1987; Morgan a sp., 29 J. Med. Virology 74, 1989; Kenney a sp., 121 J. Immunological Methods 157, 1989; Allison a Byars, 95 J. Immunological Methods 157, 1986 (kde je konstatováno, že hlinité soli a emulze minerálních olejů zvyšují tvorbu protilátek, nikoli však buňkami zprostředkovanou imunitu; a muramyl dipeptidové přípravky vyvolávají imunitu zprostředkovanou buňkami); Byars a sp., B Vaccine 49, 1990 (nepřijatelný jako prioritní způsob k současné aplikaci, kde je tvrzeno, že jejich přípravky adjuvans znatelně zvyšují humorální odpověď, a v menší míře zvyšují buněčně zprostředkovanou reakci na chřipkový hemaglutinační antigen); Allison a Byars, 28 Molecular Immunology 279, 1991 (nepřijatelný jako prioritní způsob ktéto aplikaci; kde soudí, že funkce muramyl dipeptidu je v expresi cytokinů, kterou tento indukuje, a vzrůstu exprese hlavních histokompatibilitních genů (MHC); a že lepší protilátkové odpovědi i buněčné odpovědi je dosaženo tímto způsobem než pomocí ostatních adjuvans. A věří, že bude prověřeno, zda podobná strategie je prospěšná u lidí); Allison a Byars, Technology Advances in Vaccine Development 401, 1988, (kde je popsána buněčně zprostředkovaná imunita za použití SAF); Epstein a sp., 4 Advances Drug Deliverv Reviews 223, 1990 (kteří předkládají přehled o různých adjuvans používaných v přípravě vakcín); Allison a Byars, 95 J. Immunological Methods 157, 1986 (kteří soudí, že přidání muramyl dipeptidu k adjuvans znatelně zvyšuje buněčně zprostředkovanou odpověď na různé antigeny, včetně monoklonálních imunoglobulinů a virových
-2CZ 288048 B6 antigenů); a Morgan a sp., 29 J. Medical Virology 74, 1989, kde je popsáno použití SAF-1 k přípravě vakcíny pro Epstein-Barr virus.
Kwak a sp., Idiotype Networks in Biology and Medicine, Elsevier Science Publishers, str. 163, 1990 (nepřijatelný jakožto prioritní článek k této aplikaci), popisuje použití SAF bez muramyl dipeptidu jako adjuvans pro B-buňky idiopatického lymfomu u lidí. Konkrétně, emulze Pluronic L121, Squalene, a 0,4% TWEEN-80 ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem byla podávána s idiotypem. Konstatují, že přídavek adjuvans by mohl dále zvyšovat humorální odpověď a může usnadňovat indukci buněčné odpovědi.
Ostatní imunologické preparáty, včetně liposomů (Allison a sp., U.S. Patents 4 053 585 a 4 117 113); Freudovo Kompletní Adjuvans (Asherson a sp., 22 Immunology 465, 1972; Berman a sp., Intemational J, Cancer 539, 1967; Allison, 18 Immunopotentiat. 73, 1973; a Allison, Non-Specific Factors Influencing Host Resistance 247, 1973); ISCOM (Letvin a sp., 87 Vaccines 209, 1987); adjuvans obsahující ne-iontový blok polymemích agens spojených s minerálními oleji, povrchově aktivními agens a TWEENem 80 (Hunter a Bennet, 133 J. Immunology 3167, 1984); a Hunter a sp., 127 J. Immunology 1244, 1981; adjuvans složené z minerálních olejů a emulgačních agens, spolu s nebo bez usmrcených mykobakterií (SanchezPescador a sp., 141 J, Immunology 1720, 1988); a ostatní adjuvans jako je lipofilní derivát muramyl tripeptidu a muramyldipeptid, kovalentně konjugovaný na rekombinovaný protein (id.).
Podstata vynálezu
Nyní byla nalezena bezpečná a výhodná farmaceutická kompozice, pomocí které mohou být indukovány CTL odpovědi u lidí a domestikovaných nebo zemědělských zvířat. V této kompozici se používá antigenního přípravku, který má nízkou nebo žádnou toxicitu vůči zvířeti a neobsahuje imunostimulační peptid (například muramyldipeptid), jehož přítomnost by snižovala požadovanou buněčnou odpověď. Navíc metodologie je při použití jednoduchá a nevyžaduje zdlouhavé práce in vivo, nutné pro změnu stávajících buněk na buňky imunogenní technikou genového inženýrství. Toto zjištění je překvapující, jelikož se neočekávalo, že CTL odpověď by mohla být indukována použitím antigenního přípravku prostého imunostimulačních peptidů nebo jejich ekvivalentů. Vynález umožňuje použití těchto farmaceutických kompozic u širokého spektra nemocí nebo jako profylaktického agens. Tyto kompozice lze použít například k léčení virových onemocnění, u kterých je důležitá CTL odpověď, například při léčbě infekce HTV nebo chřipky. Rovněž je lze široce využít k léčbě bakteriálních infekcí, rakoviny, parazitických infekcí apod. K profylatickým účelům lze tyto kompozice využít při prevenci virových onemocnění, zejména k profylaxi infekce HTV, a také k profylaxi u pacientů s rizikem rakoviny, například po resekci primárního tumoru.
Předmětem vynálezu je farmaceutická kompozice k indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů, která obsahuje antigen indukující v kombinaci s níže definovaným mikrofluidizovaným antigenním přípravkem cytotoxickou odpověď T-lymfocytů specifickou pro tento antigen, ve směsi s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím alespoň dvě složky vybrané ze skupiny zahrnující
a) stabilizující detergent udržující složky mikrofluidizovaného antigenního přípravku ve formě stabilní emulze,
b) agens vytvářející micely udržující v kombinaci s dalšími složkami obsaženými v mikrofluidizovaném antigenním přípravku stabilní emulzi a vytvářející strukturu podobnou micelám a
c) biodegradabilní a biokompatibilní olej,
-3CZ 288048 B6 kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě, stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidové složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
Jako antigen lze použít zejména antigen vybraný z antigenních částí HTV antigenů ze skupiny gpl20, gpl60, gag, pol, Nef, Tat a Rev, antigenů malárie ze skupiny zahrnující CS protein a Sporozoite povrchový protein 2, povrchových antigenů hepatitidy B ze skupiny Pre-Sl, PreS2, HBc Ag a HBe Ag, chřipkových antigenů ze skupiny HA, NP a NA, povrchových antigenů hepatitidy A, antigenů herpetického viru ze skupiny EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV časný bílkovinný produkt, cytomegalovirus gB, cytomegalovirus gH a IE protein gP72, antigenů syncyciálního viru respiračního traktu ze skupiny F protein, G protein a N protein, antigenů viru Herpes papiloma E4, E6 a E7 a tumorových antigenů ze skupiny zahrnující karcinom CEA, mucin asociovaný s karcinomem, karcinom P21, karcinom P53, melanom MPG, melanom p97, MÁGE antigen, onkogenní produkt Neu karcinomu, genový produkt karcinomu p53, specifický antigen prostaty (PSA) a s prostatou asociovaný antigen, a přeměněný (mutovaný) p21 ras protein, který je přítomen u řady zhoubných nádorů.
Kompozici podle vynálezu lze použít k indukci CTL odpovědi u člověka či domestikovaného zvířete (jako je například kočka a pes) nebo zemědělského zvířete (jako je například kůň, kráva nebo vepř) na antigen jiný než je antigen B-buněk, lymfomu nebo albumin. K tomuto účelu se kompozice podle vynálezu podává člověku nebo zvířeti v množství dostačujícím k vyvolání cytotoxické odpovědi T-lymfocytů u zmíněného člověka nebo zvířete.
Přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě, což znamená, že každá ze složek je zvolena tak, že emulze zůstane v emulgovaném stavu po dobu nejméně jednoho měsíce a výhodně po více než jeden rok, aniž by došlo k oddělení fází.
Podání kompozice podle vynálezu léčenému člověku nebo zvířeti je nutné pouze jednou.
Jako příklady stabilizujících detergentů obsažených v přípravku lze uvést polysorbitan, 80(TWEEN) (sorbitan-mono-9-oktadecenoát-poly-oxy-l,2-ethandiyl; vyrábí ICI Americas, Wilmington, SRN), TWEEN 40, TWEEN 20, TWEEN 60, Zwittergent 3-12, TEEPOL HB7 a SPÁN 85. Tyto detergenty jsou obvykle používány v množství přibližně 0,05 až 0,5 % hmotn., nejčastěji okolo 0,2 % hmotn.
Agens vytvářející micely obsažené v přípravku výhodně působí určité jisté dráždění na místě injekčního vpichu, čímž mobilizuje makrofágy ke zvýšení buněčné odpovědi. Jako příklady těchto agens lze uvést polymemí tenzidy popsané v publikacích BASF Wyandott, například Schmolka, 54 J. Am. Pil, Chem. Soc. 110, 1977, a Hunter a sp., 129 J. Immunol. 1244, 1981, PLURONIC L62LF, L101 a L64, L121, PEG1000, a TETRONIC 1501, 150R1, 701, 901, 1301 a 130R1. Chemické struktury těchto látek jsou v oboru dobře známé. Výhodně se používá agens s hydrofilně-lipofilní rovnováhou (HLB) mezi 0 a 2, jak definovali Hunter a Bennett, 133 Joumal of Immunology 3167, 1984. Agens vytvářející micely je výhodně přítomno v množství mezi 0,001 a 10 % hmotn., nejvýhodněji v množství mezi 0,001 a 5 % hmotn.
Biodegradabilní a biokompatibilní olej se volí tak, aby podporoval retenci antigenů v emulzi typu olej ve vodě, tj. aby zajišťoval vehikulum pro požadovaný antigen, přičemž tento olej má výhodně teplotu tání nižší než 65 °C, takže se emulze vytváří buď při teplotě místnosti (kolem 20 °C až 25 °C), nebo jakmile je teplota emulze snížena na teplotu místnosti. Mezi příklady takových olejů patří squalen, EICOSAN, tetratetracontan, glycerol a podzemnicový olej nebo jiné rostlinné oleje. Výhodně se olej používá v množství mezi 1 a 10 % hmotn. nejvýhodněji mezi 2,5
-4CZ 288048 B6 a 5% hmotn. Olej je biodegradabilní a biokompatibilní, takže organismus může olej časem rozštěpit a při používání oleje tak nejsou patrné nepříznivé účinky, jako granulomy.
Mikrofluidizovaný antigenní přípravek obsažený v kompozici podle vynálezu je prostý imunostimulující peptidické složky, zejména muramyldipeptidu (MDP). Takový peptid by interferoval s indukcí CTL odpovědi, pokud by byl podán v množství vyšším než zhruba 20 pg na normální podání u člověka. Bylo zjištěno, že ač takové peptidy mohou zvyšovat humorální odpověď, jsou nevýhodné, je-li požadována cytotoxická odpověď T-lymfocytů.
Kompozice podle vynálezu jsou výrazně výhodnější než známé kompozice (včetně ISCOMů, DETOXu a SAFu) pro použití u člověka. Na rozdíl od těchto známých kompozic antigenní přípravek v kompozicích podle vynálezu jednak obsahuje agens vytvářející micely a jednak neobsahuje peptidy, skelety buněčných stěn nebo složky bakteriálních buněk. Kompozice podle vynálezu rovněž indukuje CTL odpověď, která se buď u známých kompozic nevyskytuje, neboje u vynálezu ve srovnání se známými kompozicemi podstatně zvýšená.
Přípravek podle vynálezu je netoxický pro člověka nebo zvířata, kterým má být podáván. Termín „netoxický“ znamená, že byl u ošetřovaného zvířete nebo člověka pozorován pouze malý nebo vůbec žádný vedlejší účinek. Odborníkovi v oblasti lékařské nebo veterinární praxe je zřejmé, že tento výraz má široký význam. Například u zvířete nebo člověka v podstatě zdravého může být tolerována pouze slabá toxicita, zatímco u člověka nacházejícího se v terminálním stádiu nemoci (s předpokladem dalšího trvání života méně než tři roky) může být tolerována podstatně vyšší toxicita.
Antigenní přípravek může obsahovat všechny tři uvedené složky a), b) a c) nebo pouze dvě z těchto složek.
Při použití proti virové infekci spočívá aplikace kompozice v podstatě v jejím jediném podání člověku nebo zvířeti, infikovanému virem a trpícímu jedním nebo více symptomy virové infekce, jak určí lékař v daném oboru.
Kompozice podle vynálezu lze využít například při léčení infekce HIV, malárie, chřipky, hepatitidy, rakoviny, infekce herpetickým virem nebo infekce syncyciálním virem respiračního traktu.
Vynález ilustrují následující příklady provedení vynálezu, jimiž se však rozsah vynálezu v žádném směru neomezuje.
Příklady provedení vynálezu
Nejprve budou popsány obrázky na připojených výkresech.
Popis obrázků
Obr. IA - 1C jsou grafickým zobrazením dat srovnávajících CTL indukci u různých ovalbuminových přípravků;
E:T představuje na všech obrázcích poměr působku k cílovým buňkám (osa x), na ose y jsou % cytotoxicity.
Obr. IA: imunizováno pomocí ova v HBSS.
Obr. 1B: cytoplazmatické zatížení s ova.
Obr. 1C: imunizováno pomocí ova v AF.
-5CZ 288048 B6
Obr. 2A a 2B jsou grafickým zobrazením dat srovnávajících CTL indukci pomocí různých betagalaktosidázových přípravků;
E:T jako na obr. 1 (osa x), na ose y jsou % cytotoxicity.
Obr. 2A: imunizováno pomocí beta-gal v HBSS.
Obr. 2B: imunizováno pomocí beta-gal v AF.
Obr. 3 je grafickým zobrazením dat srovnávajících CTL indukci ovalbuminem vliposomu (—o— ) a v antigenním přípravku (*“· );
E:T jako na obr. 1 (osa x), na ose y jsou % cytotoxicity.
Obr. 4 a 5 jsou grafickým zobrazením dat ukazujících vliv vyčerpání CD4 a CD8 na CTL indukci.
E:T. jako na obr. 1 (osa x), osa y jsou cytotoxicity v % vyčerpané, ( ® ) CD8 vyčerpané.
nevyčerpané, (—O—) CD4
Obr. 6 je grafickým zobrazením dat ukazujících CTL indukci směsí látek pluronic a TWEEN s antigenem.
E;T jako na obr. 1 (osa x), na ose y jsou % cytotoxicity; α ) buňky EL4, ( ♦ ) buňky
EG7.
Obr. 7 je grafickým zobrazením dat ukazujících CTL indukci směsí látek Squalane a TWEEN s antigenem.
E:T jako na obr. 1 (osa x), osa y jsou % cytotoxicity; EG7.
Obr. 8 je grafickým zobrazením dat ukazujících CTL indukci směsí látek Squalane a pluronic s antigenem.
E:T jako na obr. 1 (osa x), osa y jsou % cytotoxicity; EG7.
Obr. 9 je grafickým zobrazením indukce tvorby antigp 120111b protilátek u opice pomocí různých antigenních přípravků;
osa x je 1/zředění séra, osa y je naměřená absorbance při 405 nm; jednotlivé křivky (-D- -Λ- -θ' atd.) značí použité antigenní přípravky.
Obr. 10A- 1 OB jsou grafickým zobrazením dat srovnávajících gpl20 specifickou CTL odpověď u opic imunizovaných s vakcinia-gpl20 a gpl20-AF.
E:T jako na obr. 1 (osa x), osa y jsou % cytotoxicity.
Antigenní přípravek
Antigenní přípravky použité v tomto vynálezu jsou obecně popsány předtím. Ty běžně známé se projeví tím způsobem, že ekvivalentní přípravky se dají pohodlně připravit a lze předpokládat, že
-6CZ 288048 B6 mají ekvivalentní vlastnosti, co se týká indukce CTL odpovědi. Takové přípravky jsou testovány na jejich vlastnosti použitím technik, které jsou ekvivalentní technikám níže popsaným.
Následují příklady vynálezu s použitím antigenních přípravků (AF) složených cca z 15% Squalanu (0,6 % TWEEN 80) a (0,0045 - 3,75 % pluronic-u) ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem-Imed STP. Specificky taková emulze AF obsahuje: 150 mg Squalanu, 0,045-37,5 mg poloxamer 401 (PLURONIC L121), 6 mg TWEEN 80, 0,184 mg KC1, 7,36 mg chloridu sodného, 0,552 mg monobázického fosfátu draselného, 3,3 mg dibázického fosfátu sodného (bezvodého), na 1 ml vody, pH 7,4. Tato emulze byla mikrofluidizována použitím standardní techniky (Microfluidics Model Mil OF) s modulem zpětného tlaku 7,584.104 9,653.104 Pa s postupným návratem na atmosférický tlak, ochlazením a balením do suchého ledu.
V jiných příkladech byl antigen smíchán s mikrofluidizovanou směsí Squalanu (S), pluronic-u (P) a TWEENu 80 (T), aby bylo dosaženo konečné koncentrace Squalanu 5 %, 0,2 % TWEENu 80 a 0,0015-1,25 % pluronic-u, vzhledem ke každé látce. Aby byly definovány vlastnosti subkomponent nutných k indukci antigen-specifické imunitní odpovědi, byly připraveny směsi Squalan-TWEEN 80, pluronic-TWEEN 80 nebo Squalan-pluronic v téže koncentraci jako tomu bylo při přípravě tří-složkové směsi. Pluronic, Squalan nebo TWEEN 80 byly rovněž připraveny individuálně pro stanovení účinku jednotlivých složek na CTL indukci. Byly provedeny též substituce TWEENem 20, TWEENem 40 nebo Zwittergent-em za TWEEN 80, aby byl zjištěn vliv různých derivátů TWEENu na CTL indukci vova systému. Náhrada Squalanu ve tří— složkovém přípravku byla uskutečněna s Eicoson-em nebo Triacontonem a náhrada za kopolymer pluronic v témže tří-složkovém přípravku byla provedena použitím PEG 1000, Pluronic L62LF a Tetronic 1501 a 150R1. Různé analogy v různých kombinacích byly smíchány jako dvousložkové přípravky a testovány na ova specifickou CTL indukci. Byly to směsi cholesterol-TWEEN 80, Squalan-TWEEN 20, Pristan-TWEEN 80 nebo olivový olejTWEEN 80. V rámci stabilizační studie byla smíchána mikrofluidizovaná směs SqualanTWEEN 80 s dextrózou na konečnou koncentraci 5 %. Ve všech případech kombinace složek byla mixována v mikrofluidizačním zařízení za účelem přípravy stabilní emulze. V některých pokusech byly dvousložkové přípravky mixovány s různou koncentrací MDP k indukci CTL a humorální odpovědi. Tabulka 1 popisuje souhrnně seznam různých přípravků používaných v této studii.
Tabulka 1
Vliv různých substitucí ve tří- nebo dvousložkových systémech
| Substituce ve tříkomponentním přípravku | Pokus #1 Procent zabitých při E:T 100:1 | Pokus # 2 Procent zabitých při E:T 100:1 |
| STP | 88 | 10 |
| Tween 40 (T) | 66 | a |
| Tween 20 (T) | 48 | - |
| T1501(P) | 39 | - |
| T150R1 (P) | 30 | - |
| Pluronic L62LF (P) | 47 | - |
| Eicosane (S) | - | 47 |
| PEG 1000 (P) | - | 24 |
| Triacontane (S) | - | 30 |
| Zwittergent (T) | - | 0 |
Tabulka 1 - pokračování
| Substituce ve tříkomponentním přípravku | Pokus #1 Procent zabitých při E:T 100:1 | Pokus #2 Procent zabitých při E:T 100:1 |
| Substituce ve dvousložkovém přípravku ST | 82 | 44 |
| PT | 77 | — |
| SP | 69 | — |
| Cholesterol (S) + Tween 80 | 38 | — |
| Squalane + Tween 20 (T) | 65 | — |
| Přistane (S) + Tween 80 | 60 | — |
| Olivový olej (S) + Tween 80 | 69 | - |
| Jednosložkový přípravek Pluronic L121 | 0 | |
| Squalane | 0 | — |
| Tween 80 | 0 | — |
| Squalane + Tween 80 + 5% dextróza | 86 |
-a neupotřebitelný
Byl použit přípravek Syntex coby adjuvans (mikrofluidizovaný; SAFm) jako kontrola adjuvans a skládá se ze dvou částí. Část I obsahuje fyziologický roztok pufrovaný fosfátem a obsahující v konečné koncentraci 5 % Squalane, 1,25 % pluronic-u a 0,2 % TWEEN 80 (vehikulum nebo ISAF). Část II se skládá zN-acetylmuramyl-L-thronyl-D-izoglutaminu (Thr-MDP), derivatizované komponenty buněčných stěn mykobakterií. Pro účely imunizace je antigen mixován s mikrofluidizačním vehikulem (část I), k získání homogenní emulze. Přidáním MDP je připraven SAFm, krátce se zvíří. Koncentrace MPD ve směsi je měněna za účelem stanovení optima koncentrace pro CTL indukci. Jako kontrola adjuvans byly imunizovány myši rozpustným antigenem smíšeným s kamencem (alum), podle návodu výrobce (Pierce Chemical, Rockford, IL) nebo Kompletním Freudovým Adjuvans (CFA).
Přípravek STP antigenu je používán k indukci cytotoxické T-lymfocytámí odpovědi u myší. Běžné poznatky tohoto typu se projeví tak, že tento myší model je ukazatelem, že rovnocenné pokusy nebo léčebné aplikace budou podobně indukovat cytotoxickou T-lymfocytámí odpověď u lidí, domestikovaných, nebo zemědělských zvířat. Množství antigenního přípravku a antigenu užitečného k produkci žádané buněčné odpovědi může být stanoveno empiricky standardními postupy, dobře známými vzhledem k běžným poznatkům tohoto druhu, bez přílišného experimentování. Tak, je-li to žádoucí aby byly minimalizovány vedlejší účinky při aplikaci těchto směsí, běžné poznatky tohoto druhu dávají možnost stanovení minimální hladiny takové směsi pro podávání člověku a domestikovaným nebo zemědělským zvířatům, aby byla zjištěna CTL odpověď, a tím byla indukována imunita k vhodnému antigenu. Při běžném použití taková směs bude injikována jakýmkoliv z početných standardních způsobů, ale zvláště je preferována intramuskulámí injekce do místa, která dovolí emulzi zůstat ve stabilním stavu po dobu několika dní nebo týdnů.
Metody
Následující materiály a metody byly použity v příkladech uváděných níže, jestliže není jinak uvedeno:
-8CZ 288048 B6
Myši
Samičky myší C57BL/6 (H-2b) a BALB/c (H-2d) byly získány od Harlen Sprague (San Diego, Califomia).
Antigeny
Ovalbumin (ova, Grade VII; Sigma Chemical o., St. Louis, MO) byl použit v nativní formě. Beta-galaktosidáza (beta-gal, Grade VIII; BRL) byla použita v nativní formě a po převaření v 1 M NaOH po dobu dvou minut použita jako alkalický výluh. Rekombinantní gpl20 byl získán od Američan Biotechnology.
Tumorové buňky a transfektanty
Použité tumorové buňky byly Ia linie EL4/C57BL/6, H-2b thymoma/ a P815 /DBA/2, H2dmastocytoma/. Původ ova-produkujícího EL4 transfektantu, EG7-ova byl popsán dříve od Moore a sp., 54 Cell 777, 1988. Beta-gal-produkující transfektant, P13.1, byl odvozen elektroporací 107PB15 buněk v 1 ml fyziologického roztoku pufrovaného fosfátem (PBS) s 10 mg Pstl linearizovaných pCHllO (Pharmacia LKB Biotechnology lne., Piscatawy, NJ) a 1 mg Pvul linearizovaných pSV2 neo (Southem a sp., 1 J. Mol. Appl. Genet. 327, 1982), a následnou selekcí ve 400 pg/ml antibiotika G418. Transfektant C3^4 byl odvozen od BALB/c hybridomu Igm 662 transfekcí s plazmid-kódujícím beta-gal genem fúzovaném do třetího a čtvrtého exonu IgM těžkého řetězce (Rammensee a sp., 30 Immunogenetics 296, 1989). gp 160111b exprimující 3T3 fibroblast, 15-12, byl poskytnut Dr. Germain-em zNIH (Bethesda, MD). Kb transfektované L buněčné linie byly poskytnuty od Dr. Caroone, Monash University, Australia. Dd a Ld transfektované L buněčné linie poskytl Dr. Ted Hensen, Washington University, St. Louis.
Imunizace
Myši byly imunizovány intravenózně pomocí 200 μΐ suspenze 25 x 106splenocytů, po cytoplazmatickém zatížení, jak popsal Moore a sp., supra, a Cerbone a sp., J. Exp. Med, 169:603, 1989. Pro imunizaci ova-antigenovým přípravkem nebo beta-gal-antigenovým přípravkem bylo injikováno 30 pg každého bílkovinného antigenu na myš do tlapky a kořene ocasu subkutánně. Každá injekce obsahuje 67 pg mikrofluidizovaného antigenního přípravku (připraveného standardním postupem) a 30 pg bílkovinného antigenu v konečném objemu 200 pl. Konečný objem byl upraven vHBSS, viz Whittaker Manual (Welkersville, MD). MDP byl připraven v koncentracích mezi 0 a 300 pg. Tam kde bylo uvedeno, byly myši imunizovány rozpustnými antigeny v CFA nebo v kamenci celkovým objemem 200 pl.
Stimulace efektorových populací in vitro
Slezinné buňky (30x 106) z normálních a imunizovaných myší, které byly senzibilizovány nejméně 14 dní předem, byly inkubovány s 1,5 x 106 EG7 - ova (ozářené s 20,000 rad) pro ova odpověď nebo 1,6 x 106 C3-4 buněk (ozářených s 20,000 rad) pro beta-gal odpověď na 24jamkových deskách při 37 °C v 7 % CC^/vzduch. Všechny tkáňové kultury byly realizovány v kompletním médiu složeném zIMDM média, viz Whittaker Manual (Welkersville, MD), doplněném 10 % fetálního telecího séra (FCS), 2mM glutaminu, gentamycinem a 2 x 10“5 M 2merkaptoetanolu. Pro depleční experimenty in vitro, slezinné buňky, senzibilizované in vivo nebo stimulované in vitro, byly podrobeny účinku monoklonálních protilátek (mAbs) RL.172 (antiCD4) nebo mAbs 3.168 (anti-CD8) pro odstranění CD4+ nebo CD8+ T-buněk (Sarmiento asp., 125 J. Immunol. 2665, 1980, a Ceredig a sp., 314Nátuře 98, 1985). Monoklonální protilátky mAb RL.172 a mAb 3.168 byly získány od Dr. Jonathana, Sprent at Scripps Clinic and Research Foundation, La Jolla, CA.
-9CZ 288048 B6
Slezinné buňky (30x 106) z normálních a imunizovaných myší, které byly senzibilizovány nejméně 21 dní dříve, byly inkubovány s 1,5 x 106 15-12 buňkami (podrobeny po 45 minut účinku 200 pg mitomycinu C na 10* buněk), nebo s 500 pg 18111b peptidu obsahujícího dominantní CTL epitop Balb/c myší v kompletním IMDM médiu (Irvine Scientific, Santa Ana, CA) obsahující 10 % FCS (ICN Flow; ICN Biochemicals, lne., Costa Mesa, Ca), 2mM glutamin, gentamycin a 2 x 10“5 M 2-merkaptoetanolu. Pro stimulaci in vitro stimulované slezinné buňky byly kultivovány v kompletním IMDM obsahujícím 5 % ConA supematant. Pro depleční pokusy in vivo senzibilizované nebo in vitro stimulované slezinné buňky byly ošetřeny s mAb RL.172 (anti-CD4) nebo mAb 3.168 (anti-CD8) v přítomnosti králičího komplementu nízké toxicity (Cederlane Laboratories, Ltd., Homby Ontario, Canada) pro odstranění CD4+ nebo CD8+ Tbuněk (22, 23). Monoklonální protilátky mAb RL.172 a mAb 3.168 byly darovány Dr. Jonathanem Sprent at Scripps Clinic and Research Foundation, La Jolla, CA.
Zkouška cytotoxicity
Cílové buňky (1 x 106) byly značeny se 100 pCi 51Cr chromanem sodným po dobu 60 minut. U cílových buněk citlivých k peptidu bylo přidáno 50 pl roztoku peptidu o koncentraci 1 mg/ml HBSS během značení cílových buněk s 51Cr. Po promytí bylo inkubováno 104 značených cílových buněk spolu s efektorovými buňkami sériově ředěnými ve 200 pl RP10 po dobu 4 h při 37 °C. 100 pl supematantu bylo odděleno a byla stanovena specifická lyže jako: Procenta specifické lyže = 100 x uvolnění pomocí CTL minus spontánní uvolnění děleno maximální uvolnění minus spontánní uvolnění. Spontánní uvolnění v nepřítomnosti cytotoxických Tlymfocytů (CTL) bylo menší 25 % maximálního uvolnění detergentem a to u všech pokusů.
Stanovení protilátkové odpovědi na myších a opicích
Každá jamka v 96-jamkové destičce se dnem ve tvaru U (Costar, Cambridge, MA) byla pokryta 150 ng ova nebo gpl20 v 50 pl HBSS a inkubována přes noc při 4 °C. Pro stanovení anti-gpl20 a anti-ova protilátkové odpovědi u myší byly plotny blokovány 1% BSA po 1 h. Sériově ředěná séra byla přidávána v objemu 25 pl na jamku a inkubována po 2 h. Plotny byly promyty a 50 pl kozího anti-myšího IgG konjugátu s HRPO (SBT, Alabama) v 1% BSA, při ředění antiséra 1:1000, bylo přidáno na jednu jamku. Po 1 h inkubaci plotny byly promyty a bylo přidáno 100 pl substrátu na jamku. OD405 bylo stanoveno v intervalu mezi 10. a 15. minutou. Pro stanovení antigpl20 protilátkové odpovědi u opic všechny stupně byly obdobné s výjimkou blokády desek a ředění séra, což bylo prováděno v 5% normálním kozím séru v Hankově rovnovážném solném roztoku.
Syntéza peptidů
Syntetické peptidy korespondující aminokyselinové sekvenci 253-276 (Sekvenční zápis č. 1: EQLESIINFEKLTEWTSSNVMEER; kde je užit standardní jednopísmenový kód představující určitou aminokyselinu) ovalbuminu (ova 253-276), aminokyselinovou sekvenci 84-102 myelin basic proteinu (MBP 84—102) (Sekvenční zápis č. 2: DENPWHFFKNIVTPRTPP), a syntetické peptidy korespondující aminokyselinové sekvenci 308-322 (18IIIb sekvence) od gpl20IIIb, byly syntetizovány metodou syntézy peptidů na pevné fázi za užití přístroje Applied Biosystem 430A synthesizer. Aminokyseliny byly kopulovány pomocí přeformovaných symetrických anhydridů s výjimkou asparaginu, glutaminu a argininu, které byly kopulovány přes hydroxybenzotriazolové estery. Kopulační účinnost byla monitorována ninhydrinovou reakcí podle metody Kaiser a sp., 34 Anal. Biochem. 595, 1970. Peptidy byly uvolňovány z nosiče kapalným fluorovodíkem a „low-high“ procedurou popsanou Tamem a sp., 21 J. Am. Chem. Soc. 6442, 1983, a peptidy byly extrahovány z pryskyřice 10% kyselinou octovou. Po lyofilizaci byly peptidy odsoleny na sloupci Sephadexu G-25 a vzorky peptidů pak byly purifikovány HPLC chromatografií s reverzní fází na preparativním sloupci C-l 8 přístroje Vydac. Purifikované
-10CZ 288048 B6 peptidy (98%) byly rozpuštěny vHBSS na konečnou koncentraci 10 mg/ml a ředěny na požadovanou koncentraci v kompletním médiu.
CNBr štěpení
Na vzorky bílkovin (například beta-galaktosidázu) bylo působeno 100 násobným molámím přebytkem bromkyanu v roztoku 100 mM kyseliny trifluoroctové. Reakce probíhala po dobu 18 h při pokojové teplotě (asi 20 °C) za rotace. Po předepsaném reakčním čase fragmenty peptidů byly separovány od reakčních složek za použití přístroje SEP-PAK C-l 8 (Waters), eluovány s 95% acetonitrilem a lyofílizovány.
Alkalické štěpení
Bílkovinné vzorky (například beta-galaktosidáza) byly vystaveny účinku 1 N NaOH a povařeny po 2 min a výsledné peptidické fragmenty byly separovány od reakčních složek za použití přístroje C-l 8 SEP-PAK (Waters), a eluovány s 95% acetonitrilem a lyofílizovány.
Příklad 1:1. třída restringované CTL senzibilizace
Moore a sp., 113 UCLA Symp. Mol. Cell. Biol 1989 a Carbone a Bevan, 171 J. Exp. Medicine 377, 1990, ukázali, že myši imunizované slezinnými buňkami, které byly zatěžovány cytoplazmaticky rozpustným ova, byly senzibilizovány pro ova specifltu, I třída restringované CTL odpovědi. Ova-exprimující EL4 transfektanty EG7-ova byly použity pro in vitro stimulaci in vivo senzibilizovaných slezinných lymfocytů a také použity jako cílové buňky pro ova specifickou CTL zprostředkovanou schopnost zabíjení buněk. Tato studie též demonstruje, že CD8+ efektory indukované EG7-ova transfektantem nebo slezinnými buňkami cytoplazmaticky zatíženými s ova, prokazují determinant mapovaný peptidem ova 258-276 v kontextu s H-2Kb, lyžují EG7-ova, a také zabíjejí EL4 buňky povlečené s ova 258-276 peptidem. Tak, aby se dalo odhadnout, zda endogenní cesta I třídy restringované CD8+ T buněk je indukovatelná rozpustným antigenem, uvedený systém byl použit ke zjištění, zda jisté antigenní přípravky lze použít k řízení cesty I třídy restringovaných buněk pomocí rozpustných antigenů.
a) ova
Myši C57BL/6 byly imunizovány jedenkrát s proměnlivým množstvím ova (30 pg až 1 mg na myš) za přidání a bez přidání antigenního přípravku. Myším byly dávky injikovány subkutánně a do kořene ocasu. Slezinné buňky byly odebrány z imunizovaných myší nejméně 2 týdny po imunizaci a stimulovány in vitro s EG7-ova transfektanty. Koncentrace pouhých 30 pg EG7-ova byl stejně účinná jako lmg dávka. Proto v dalším byly CTL studie rutinně prováděny se slezinnými buňkami myší senzibilizovaných dávkou 30 pg ova. Po 5 dnech kultivace in vitro sEG7-ova senzibilizace byla hodnocena v přítomnosti ova specifických efektorů schopných lyžovat EG7-ova.
Myši injikované rozpustným ova v HBSS dávkou dosahující množství 1 mg, nevykazovaly znaky CTL senzibilizace (obr. 1A). Avšak myši imunizované s 30 pg ova v antigenním přípravku popsaném výše (ukázáno jako AF v obrázcích) vykázaly signifikantní transfektantní specifickou CTL odpověď (obr. 1C). Kromě toho, míra EG7-ova zabíjení pomocí ova-AF imunizovaných slezinných buněk byla porovnatelná s takovouto vlastností slezinných buněk imunizovaných myší zatížených ova (obr. 1B).
Okolnost, že specifíta CTL senzibilizace in vivo byla antigen-specifická bylo prokázáno z neschopnosti slezinných buněk myší imunizovaných beta-galaktosidázou manifestovat druhotnou CTL odpověď in vitro. jsou-li stimulovány s EG7-ova. V takovém případě nebyla pozorována ova specifická CTL indukce.
-11CZ 288048 B6
b) beta-galaktosidáza
Podobné výsledky byly získány s použitím jiného rozpustného bílkovinného antigenu, beta-gal. Pro stanovení beta-gal-specifické CTL odpovědi použité cílové buňky byly od BALB/c kmene odvozené beta-gal expresivní C3-4 transfektanty. Imunizace BALB/c myší rozpustným beta-gal dala podklad CTL odpovědi. Proto, pro stanovení specifické CTL odpovědi, byl odběr posunut nejméně o 8 týdnů před odebráním slezinných lymfocytů, které pak byly kultivovány 5 dnů v přítomnosti ozářených transfektantů C3-4.
Obr. 2B demonstruje, že 30 pg beta-galaktosidázy v AF indukovalo silně specifickou CTL odpověď proti transfektantů. Myši imunizované pomocí beta-gal-AF vykázaly kolem 80 % specificky zabitých buněk, při poměru efektoru k cílovým buňkám rovným 3:1 (E:T). Nicméně pouze 20% úmrtnosti stejných cílových buněk bylo dosaženo s efektory izolovanými z myší imunizovaných beta-gal v HBSS při stejném poměru E:T (obr. 2A). Ačkoli ani EL4, ani PB15 nepotlačují II třídu MHC genových produktů a lyže ukazuje syngenní restrikci, tyto ova a betagal specifické efektory jsou I třída MHC restringované buňky.
Aby byla demonstrována prospěšnost antigenního přípravku, byly myši imunizovány rozpustným ova inkapsulovaným do dvou typů liposomů, jeden z nichž byl pH citlivý liposom. Jeden týden nato byly slezinné buňky stimulovány in vitro. jak je shora popsáno, a buňky byly testovány proti 51Cr-značeným EG7-ova nebo EL4 buňkám. Obr. 3 ukazuje reprezentativní výsledek, který ukazuje, že ova v liposomů nemůže senzibilizovat myši pro podstatnou CTL indukci. Podobné výsledky byly pozorovány, když pomocí ova bylo imunizováno v kamenci.
Příklad 2: Rozpoznání epitopu pomocí CTL
Carbone a Bevan, supra, prokázali, že CTL indukovaná u myší C57BL/6 pomocí EG7-ova transfektantů a cestou cytoplazmaticky ova-zatížených splenocytů, je schopna rozpoznat EL4 buňky pokryté ova peptidem 253-276. Aby bylo prokázáno, že rozpustný ovalbumin vAF indukuje podobnou CTL odpověď, slezinné buňky byly připraveny z imunizovaných myší a stimulovány s EG7-ova. Efektory byly testovány proti EL4 buňkám pokrytým peptidem ova 253-276, nebo s kontrolním peptidem odvozeným od myelin basic proteinu (MBP 84—102). Výsledky ukázaly, že ova-AF senzibilizují CTL s podobnou specifitou jako pomocí transfektantů, nebo cytoplazmatickým zatížením ova (obr. ΙΑ, IB a 1C). Efektorové buňky senzibilizované pomocí ova-AF účinně lyžují EG7-ova a netransfektované EL4 buňky pokryté ova peptidem 253-276, (50 gg/108 buněk), ale neštěpí EL4 buňky pokryté 50 μg MBP peptidu na 10 buněk.
V beta-galaktosidázovém systému, Carbone a Bevan, supra, ukázali, že beta-gal exprimující transfektant a cytoplazmaticky zatížené splenocyty rozpustnou beta-galaktosidázou indukovaly CTL, když pak tyto buňky lyžovaly beta-gal expresivní transfektant- a nontransfektantní buňky P815 pokryté alkalicky natrávenou beta-galaktosidázou. Rozpustná beta-galaktosidáza indukuje CTL, které pak mají podobnou specifitu jako po imunizaci v AF (obr. 2).
Příklad 3: CTL efektory jsou CDB+ T buňky
Že rozpustné bílkovinné antigeny vAF indukují CD8+ efektor T buněk bylo prokázáno následovně. Splenocyty z imunizovaných myší byly kultivovány po pět dnů s transfektanty ozářenými in vitro. Nato byly buňky odebrány a zbaveny CD4+ nebo CD8+ buněk použitím monoklonálních anti-CD4 nebo anti-CD8 protilátek plus komplement. Vyčerpané populace byly nato testovány proti slCr-EG7-ova v ova systému nebo 51Cr-P13.1 v beta-gal systému. Údaje prezentované na obr. 4 ukazují, že v ova systému zbavení CD8+ buněk zrušilo cytolytickou
-12CZ 288048 B6 aktivitu propůjčenou kompletnímu efektoru buněčné populace. Nicméně vyčerpání CD4+ T buněčné populace nemělo jakýkoli vliv na lyzy EG7-ova.
Podobně v beta-gal systému vyčerpání CD8+ T buněk rušilo cytolytický účinek slezinných buněk vyvolaný imunizací beta-gal-antigenovým přípravkem (data nejsou uvedena).
Příklad 4: Rozpustný ova v AF senzibilizuje CD8+ T buňky
Aby bylo demonstrováno, že ova-AF senzibilizuje CD8+ buněčnou populaci in vivo a je kritickým faktorem pro druhotnou odpověď in vitro, CD4+ nebo CD8+ populace byly vyčerpány ze slezin myší imunizovaných ova-AF a přirozených myší. Ošetřené populace pak byly stimulovány in vitro se samotným EG7-ova, nebo v kombinaci CD4+ a CD8+ T buněk z myší imunizovaných pomocí ova-AF, nebo v různých kombinacích CD4+ nebo CD8+ T buněk z přirozených myší. Obr. 5 ukazuje, že senzibilizované CD8+ buňky jsou dominantní pro manifestaci sekundární CTL odpovědi in vitro. Tato data také ukazují, že pro účinnou sekundární CTL odpověď jsou vyžadovány CD4+ T buňky. CD4+ buňky nejsou nutné k senzibilizaci.
Uvedené příklady demonstrují účinek antigenního přípravku na indukci I třídy restringované CTL odpovědi proti rozpustným bílkovinným antigenům. Antigenní přípravek zprostředkoval CTL senzibilizaci rozpustným antigenem, která je podobné povahy jako je aktivita indukovaná transfektanty a splenocyty cytoplazmaticky zatíženými rozpustným ova nebo beta-gal. V ovalbuminovém systému, EG7-ova, cytoplazmaticky zatížené splenocyty a ova-AF vyvolávají: (a) I třídu restringovaných CD8+ CTL; (b) CTL, které rozpoznávají cílové buňky senzibilizované pomocí ova 253-276 syntetického peptidu; a (c) dlouho přežívající CTL po pouhé jediné imunizaci. V beta-gal systému, beta-gal-AF indukovaná CTL rozpozná beta-gal expresivní transfektant C3-4, a též netransfektované senzibilizované P815 buňky s alkalicky štěpenou beta-galaktosidázou. To je analogické k případu pozorovaného při CTL indukci cestou imunizace pomocí slezinných buněk cytoplazmaticky zatížených beta-galaktosidázou. Indukce ova specifické CTL antigenním přípravkem je unikátní, protože ani ova inkapsulovaná do pH citlivých liposomů ani do kamence (data nejsou ukázána), nemůže indukovat senzibilizaci in vivo.
Tyto příklady ukazují, že antigenní přípravek shora použitý a jeho ekvivalenty jsou použitelné v humánní terapii a vývoji vakcín k indukci CTL u různých karcinomů a virových onemocnění.
Příklad 5
Toto je specifický příklad prokazující použití výše uvedeného AF na produkční třídu I restringovaných CTL senzibilizaci rozpustným gpl20 z HIV.
Linie expresních buněk gpl60 IIIB (15-12) byla produkována v Balb/c fíbroblastech, v odvozené linii 3T3. Ta byla získána od Dr. Ron Germain-a a Dr. Jay Berzovsky-ho, National Institute of Helath, Bethesda, M. D. Linie expresivních buněk gpl60 byla použita pro in vitro stimulaci slezinných lymfocytů senzibilizovaných in vivo, a též použita jako cílové buňky. V mnoha pokusech byl použit peptid 18IIIb, který obsahuje dominantní CTL epitop, pro stimulaci in vitro. Pro peptidickou restimulaci v kultuře byl do média přidáván IL-2. Balb/c myši byly imunizovány jedenkrát s 1 pg gpI20 na myš za přidání AF, nebo bez jeho přidání. Myši byly injikovány subkutánně nebo do ocasu. Slezinné buňky byly odebrané z imunizovaných myší tři týdny po imunizaci a stimulovány in vitro pomocí ozářených gpl60 transfektantů nebo peptidem 18111b. Po pěti dnech kultivace in vitro bylo dosaženo senzibilizace přítomností specifických efektorů schopných lyžovat gpl60 transfektanty, a nikoli netransfektované buněčné linie. V některých experimentech byly použity vac:gpl60 infikované P815 buňky jako buňky cílové. Výsledky jsou ukázány v tabulce 4 A, kde CTL odpověď je potencovaná pomocí AF a gpl20. Je hodno
-13CZ 288048 B6 zaznamenání, že vgpl20 systému je jediný případ, kde optimum AF působení na gpl20 specifickou CTL indukci (jedinou imunizací s 1 gg gpl20 vAF) neobsahovalo vůbec, nebo obsahovalo pouze minimum pluronic-u. Avšak, když byly myši imunizovány opakovaně s 5 gg gpl20 vAF obsahujícím vyšší koncentraci pluronic-u (3,75%), byla pozorována výrazná indukce CTL (data neuvedena).
Následující příklad demonstruje použití antigenního přípravku tohoto vynálezu za použití pouze jedné nebo dvou komponent. Tyto příklady prokazují, že CTL-odpovědi mohou být indukovány s pouhými dvěma komponentami ze tří komponent, které byly používány dříve.
Příklad 6: Stanovení kritických komponent nutných pro CTL indukci
Aby mohlo být stanoveno, zda všechny shora zmíněné komponenty jsou nutné pro specifickou indukci antigenem, byly myši imunizovány ovalbuminem v mikrofluidizovaném přípravku různých kombinací dvou ze tří složek přítomných v AF. Třetí komponenta je substituována PBS. Dvousložková kombinace byla použita následovně: Squalane/TWEEN v PBS, Squlane/Pluronic v PBS nebo Pluronic/TWEÉN v PBS. Jiné sestavení skupin bylo tam, kde myši byly imunizovány pomocí ova v jednosložkovém systému, to je Squalane v PBS, Pluronic v PBS nebo jen TWEEN v PBS.
Shora zmíněné třísložkové antigenní přípravky mají toto složení: 0,300 g TWEEN 80 (Aldrich, WI), 1,875 g Pluronic L121 (BASF, NJ), a 7,5 g Squalene (Aldrich, WI), doplněno do 50 ml přidáním PBS.
Dvousložkové přípravky byly tohoto složení:
Squalane/TWEEN: 0,300 g TWEEN 80 a 7,5 g Squalane, doplněno na 50 ml s PBS. Pluronic/TWEEN: 1,875 g Pluronic L121 a 0,300 g TWEEN 80, doplněno na 50 ml s PBS. Pluronic/Squalane: 1,875 g Pluronic L121 a 7,5 g Squalane, doplněno do 50 ml s PBS.
Třísložkové přípravky s proměnlivou koncentrací pluronic-u byly tyto:
Squalane a TWEEN koncentrace byly zachovány jako předtím, ale koncentrace pluronic-u byly měněny:
Pro 50 ml objemy:
| S (gramy) | T (gramy) | P (gramy) | P |
| 7,5 | 0,300 | 0,75 | 1,5% |
| 0,075 | 0,15% | ||
| 0,0075 | 0,015% | ||
| 0,00075 | 0,0015% | ||
| 0,00091 | 0,0018% | ||
| 0,00045 | 0,0009% | ||
| 0,00017 | 0,0003% |
Vzorky pak byly zpracovány pomocí mikrofluidizačního přístroje, model 110T, Microfluid. Corp, dány do lahviček a skladovány při 4 °C do použití.
Ovalbumin (ova, Sima, MO) byl navážen a dán do roztoku 0,3 mg/ml v HBSS (Whittaker), supra. Zásobní roztok 0,3 mg/ml byl kombinován s dvou-složkovými přípravky v následujících poměrech: 5 dílů ovalbuminového roztoku (0,3 mg/ml), 3,3 částí dvousložkového přípravku a 1,7 částí HBSS. Podobně i beta-gal a HIV gpl20 byly smíchány s AF.
-14CZ 288048 B6
Přípravek byl protřepán a uložen v ledu do doby injekování. Všechny roztoky byly kombinovány těsně před aplikací.
Každá myš obdržela 200 μΐ jednoho přípravku obsahujícího 30 μΐ ova subkutánní injekcí a do kořene ocasu. Myši pak byly ponechány v klidu nejméně dva až čtyři týdny před odběrem sleziny.
Dva týdny po imunizaci byly slezinné buňky vypreparovány a stimulovány in vitro ozářenými EG7-ova. Po pěti dnech kultivace byla stanovena přítomnost ova specifických CTL testováním proti 51Cr-EG7-ova nebo 5,Cr-EL4 ve čtyřhodinové analýze sledováním 51Cr. Získané výsledky jsou prezentovány na obr. 6-8 a ukazují, že ovalbumin připravený v mikrofluidizovaném dvousložkovém systému může senzibilizovat ova specifické CTL in vivo.
Později byl hodnocen relativní přínos jednotlivých komponent na jejich schopnost indukovat CTL, když jsou kombinovány s bílkovinným antigenem. Pro účely imunizace byl rozpustný antigen mixován s mikrofluidizovanými vehikuly tak, aby byla získána stabilní homogenní emulze s částicemi o rozměrech od 250 do 300 nm. Pro další definování komponent SqualaneTWEEN 80-pluronic (STP) přípravku zodpovědného za CTL indukci, byly myši imunizovány ova ve Squalane-TWEEN 80 směsi, pluronic-TWEEN 80 (PT) směsi nebo Squalane-pluronic (SP) směsi a jako kontrola ve Squalanu (S), TWEENu 80 (T) nebo pluronic-u (P). Myši byly též imunizovány s ova-SAFm (obsahující 70 pg MDP) nebo ova-kamenec jako kontroly adjuvans. Za účelem pozitivní kontroly byly myši imunizovány slezinnými buňkami cytoplazmaticky zatíženými rozpustným ova. Byly též použity další kombinace a náhrady a výsledky jsou prezentovány v tabulce 1. Výsledky ukazují, že 30 pg ova v kombinaci s STP nebo ST senzibilizuje I třídu restringované CTL odpovědi u myší. Senzibilizace ova specifických CTL pomocí ova v STP nebo ova v ST se zdá být lepší než ta, která je indukována slezinnými buňkami cytoplazmaticky zatíženými rozpustným ova. Přípravky ova v PT nebo v SP mohly indukovat ova specifickou CTL odpověď u myší pouze nedůsledně a spoře. Na rozdíl od SAFm, přidání MDP k ST přípravku nemůže vyrovnat ova specifickou CTL indukcí u myší (tabulka 2). Specifická CTL indukce se nevyskytovala, když byly myši imunizovány s ova-SAFm nebo ovakamencem, ani když byly myši imunizovány s jednotlivými složkami S, P nebo T smíchány s ova. Myši imunizované s ova v množství do 1 mg v (a) HBSS, v (b) SAFm nebo (c) po absorpci na kamenec nesenzibilizují ova specifickou CTL odpověď.
Tabulka 2
Indukce ova specifické CTL odpovědi není blokována ST + MDP
| Stimulátor | Cílové buňky | E-T | % cytotoxicity u myší imunizovaných sx | |||
| ova-ST | ova-ST | ova-ST MDP myš 300 pg | ova-ST MDP myš 72 pg | |||
| EG7-ova | EG7-ova | 100:1 | 0 | 100 | 82 | 76 |
| 33:1 | 0 | 86 | 67 | 62 | ||
| 11:1 | 0 | 33 | 39 | 25 | ||
| 3:1 | 0 | 6 | 13 | 3 | ||
| 1:1 | 0 | 0 | 0 | 0 | ||
| 3:1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
x myši byly imunizovány s ova v různých přípravcích (30 pg), “ % cytotoxicity byla vypočítána odečtením procent zabitých buněk od antigen-neexprimovaných buněčných linií.
-15CZ 288048 B6
Příklad 7: Komponenty nutné pro ova specifickou produkci protilátek
Myši byly imunizovány třikrát ve dvoutýdenních intervalech s 30 pg ova v HBSS, STP, PT nebo SP. Jako pozitivní kontroly byly myši imunizovány s ova-SAFm, protože je známo, že SAFm indukuje silnou protilátkovou odpověď.
Sedm dní po druhé a třetí imunizaci byly myši vykrváceny a získaná séra byla testována na ova specifickou protilátkovou odpověď. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3. Tyto ukazují, že myši imunizované s ova v STP, ST nebo SAFm projeví podobné anti-ova odpovědi po třech imunizacích.
Tabulka 3
Indukce anti-ova protilátkové odpovědi
| Imunizováno sa ováv | Počet myší s odpovědí/celkový počet injikovaných myší | Anti-ova protilátkový titrb 1/sérové zředění |
| Pokus č.1 HBSS | 0/3 | <1/20; <1/20; >15,360 |
| STP | 3/3 | > 1/15,360; > 1/15,360; > 1/15,360 |
| ST | 3/3 | 1/3840; 1/15,360; 1/3840 |
| PT | 3/3 | > 1/15,360; > 1/15,360; > 1/15,360 |
| SP | 3/3 | > 1/15,360; > 1/15,360; > 1/15,360 |
| SAFm | 3/3 | > 1/15,360; > 1/15,360; 1/3840 |
| Pokus č. 2 STP.0015% | 3/3 | > 1/4860; > 1/4860; > 1/4860 |
| STP.015 % | 3/3 | > 1/4860; > 1/4860; > 1/4860 |
| STP. 15 % | 3/3 | > 1/4860; > 1/4860; 1/1620 |
| STP 1.5% | 3/3 | > 1/4860; > 1/4860; 1/1620 |
| HBSS | 1/3 | < 1/20; 1/180; < 1/20 |
| ST | 3/3 | > 1/4860; > 1/4860; > 1/4860 |
| STP | 3/3 | > 1/4860; > 1/4860; > 1/4860 |
a Myši byly imunizovány třikrát s 30 pg ova v různých přípravcích.
b Titr protilátek byl vypočítán jako ředění séra, které dávalo OD405 větší než OD405 + 2SD získané s pre-imunními séry.
Příklad 8: Specifické CTL indukce s HTV gpl20
HIV gpl20 IIIB byl použit jako třetí antigenní systém k prokázání CTL indukce v STP nebo jiných dvou- a třísložkových obdobách přípravku. Myši byly imunizovány s 1 pg gpl20 IDb v HBSS, STP, PT nebo ST. Jako kontrolní skupina byly myši imunizovány s 1 pg gp 120 IIIB v SAFm nebo CFA (kompletní Freudovo adjuvans) (tabulka 4B). Tři týdny po imunizaci byly slezinné buňky vypreparovány a stimulovány in vitro transfektantními buňkami po jejich ovlivnění mitomycinem nebo po ovlivnění těchto transfektantů 15-12 peptidem 18IIIB. Po pětidenní kultivaci byly rezultující efektorové buňky testovány proti vaccinia gpl60 ΙΠΒ, nebo parenterálně vaccinia-infíkovaným P815 jako cílovým buňkám. Výsledky demonstrují, že gpl20-Squalane-TWEEN 80 shodně indukovaly gpl20 specifickou CTL odpověď u myší (tabulky 4A a 4B). CFA nebo SAFm byly jakkoli neschopné indukovat gpl20 specifickou CTL odpověď (tabulka 4B). V separátní studii byly testovány gpl20 v ST s proměnlivými dávkami od 0,0015 % do 1,5 % na indukci CTL.
-16CZ 288048 B6
Tabulka 4A
Indukce gp!20 specifické CTL odpovědi u myší
| Stimulátor | cílové buňky** | E-T | gpl20-HBSS | % cytotoxicity u myší imunizovaných pomocí* | |
| gpl20-ST | gpl20-STP | ||||
| 18IIIb/II.2 | vac:gpl20 | 100:1 | 23 | 42 | NA*** |
| 33:1 | 23 | 38 | NA | ||
| 11:1 | 0 | 0 | NA | ||
| 3:1 | 0 | 35 | NA | ||
| 18IIIb/II.2 | 15-12 | 100:1 | 0 | 50 | 0 |
| 33:1 | 0 | 35 | 0 | ||
| 11:1 | 0 | 27 | 0 | ||
| 3:1 | 0 | 18 | 0 | ||
| 18IIIb/II.2 | ST3 + 18IIIb | 100:1 | 0 | 59 | 13 |
| 33:1 | 0 | 59 | 2 | ||
| 11:1 | 0 | 57 | 0 | ||
| 3:1 | 0 | 29 | 0 | ||
| 15-12 | vac:gpl20 | 100:1 | 35 | 84 | NA |
| 33:1 | 19 | 65 | NA | ||
| 11:1 | 12 | 37 | NA | ||
| 3:1 | 0 | 22 | NA | ||
| 1:1 | 0 | 0 | NA |
* myši byly imunizovány pomocí 1 pg gpl20III v různých přípravcích, ** % cytotoxicity byla vypočítána dělením % zabitých buněk antigenem neexprimovanými buněčnými liniemi, *** NA; není k dispozici - neupotřebitelné.
Tabulka 4B
Indukce gpl20 specifické CTL odpovědi u myší®
| % cytotoxicity u myší infikovaných pomocíb | |||||||
| gpl20-HBSS | gpl20-ST | gpl20-CFA | gpl20-Saf-M | ||||
| Έ:Τ | % | E:T | % | E:T | % | E:T | % |
| 100:1 | 16 | 67:1 | 94 | 17:1 | 0 | 100:1 | 3 |
| 33:1 | 14 | 22:1 | 91 | 6:1 | 0 | 33:1 | 2 |
| 11:1 | 2 | 7:1 | 58 | 2:1 | 0 | 11:1 | 0 |
| 3:1 | 0 | 2.5:1 | 57 | .7:1 | 0 | 3:1 | 0 |
| 1:1 | 0 | .8:1 | 12 | .2:1 | 0 | 1:1 | 0 |
| 3:1 | 0 | .3:1 | 7 | .07:1 | 0 | .3:1 | 0 |
Myši byly imunizovány s 1 pg gpl20IIIb v různých přípravcích.
Slezinné buňky od různých skupin myší byly stimulovány in vitro s 18IIIB peptidem a IL-2. Cytotoxicita byla testována proti 51Cr značeným 3T3 nebo 15-12 buňkám; % cytotoxicity byla vypočítána dělením % zabitých buněk antigenem neexprimovanými buněčnými liniemi.
-17CZ 288048 B6
Příklad 9: Indukce gpl20 specifické humorální odpovědi u myší
Pro indukci gpl20 specifických humorálních odpovědí byly myši imunizovány s 1 pg gp 120111b třikrát ve dvoutýdenních intervalech. Zvířata byla vykrvácena a testována na přítomnost IgG protilátek detekcí gpl20IIIb za užití ELISA analýzy na pevné fázi. Výsledky experimentu 1 demonstrují, že gpl20-ST nebo -PT jsou lepší imunogeny než gpl20-HBSS, gpl20SAFm (tabulka 5) nebo gpl20-STP. Nicméně, výsledky v experimentu 2 demonstrují, že gpl20 v ST nebo STP (obsahující koncentrace pluronic-u 1,5 % nebo 3,75 %) mohou indukovat protilátkovou odpověď vysokého titru.
Tabulka 5
Indukce anti-gpl20 protilátkové odpovědi
| Imunizováno sa gpl20 v | počet myší s odpovědí/celkový počet infikovaných myší | anti-gpl20 protilátkový titrb (1/ředění séra) |
| Pokus č. 1 HBSS | 2/3 | 1/60; < 1/20; 1/60 |
| STP | 1/3 | < 1/20; > 1/4860; < 1/20 |
| ST | 3/3 | > 1/4860; > 1/4860; > 1/4860 |
| PT | 3/3 | > 1/4860; > 1/4860; > 1/4860 |
| SP | 2/3 | < 1/20; 1/540; 1/540 |
| SAFm | 3/3 | 1/180; > 1/4860; 1/540 |
| Pokus č. 2 STP 0.0015% | 2/3 | 1/180; 1/1620; < 1/20 |
| STP 0.015% | 0/3 | < 1/20; < 1/20; < 1/20 |
| STP 0.15% | 2/3 | > 1/4860; 1/1620; < 1/20 |
| STP 1.5% | 3/3 | > 1/4860; > 1/4860; < 1/4860 |
| HBSS | 1/3 | < 1/20; < 1/20; > 1/4860 |
| ST | 3/3 | > 1/4860; > 1/4860; > 1/4860 |
| STP | 2/3 | > 1/4860; > 1/4860; 1/20 |
Myši byly imunizovány s 1 pg gp 120111b třikrát v různých přípravcích. Anti-gpl20 protilátkový titr byl vypočítán stejně jako je uvedeno v tabulce 3.
Příklad 10:gpl20 specifická protilátková odpověď u opic
Opice (2 na skupinu) byly imunizovány s gpl20-SAFm, gpl20-SPT, gpl20-ST nebo gpl20HBSS. Jako kontrolní skupina byly imunizovány opice s rekombinantní vakcinií obsahující gp 160111b. Opice byly imunizovány ve dvoutýdenních intervalech a vykrváceny 2 týdny a 3 týdny po druhé imunizaci. Pre-imunní a imunní séra z každé opice byla sériově ředěna a analyzována na anti-gpl20 aktivitu metodou ELISA, jak bylo popsáno v materiálech a metodách. Údaje (obr. 9) ukazují, že opice imunizované sgpl20-STP nebo gpl20-SAFm vykazují podobnou odpověď. Jedna opice imunizovaná s gpl20-ST, vykazuje anti-gpl20 odpověď, podobnou jako u gpl20-SAFm nebo gpl20-SPT imunizované skupiny. Jedna opice imunizovaná s gpl20-ST nebyla schopna indukovat silnou anti-gpl20 odpověď ani po dvou imunizacích.
-18CZ 288048 B6
Příklad 11: gp 120 specifické CTL odpovědi u opic
Opice byly několikrát imunizovány s 30-50 pg HTV gpl20 v AF nebo v HBSS. Jako kontrolní skupina byly imunizovány opice s rekombinantní vakcinií gpl60. Naše předběžné výsledky ukazují, že 1/2 opic imunizovaných sgpl20-AF a 1/2 opic imunizovaných s gpl60:vakcinií preferenčně zabíjela autologní cílové buňky infikované s vac:gp!60 (obr. 10A a 10B).
Charakteristika sekvencí:
(2) INFORMACE PRO SEQ ID č.: 1:
(i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:
(A) DÉLKA:
(B) TYP:
(C) SŘETĚZENÍ:
(D) TOPOLOGIE:
aminokyselina jednoduché lineární (ii) SEKVENČNÍ POPIS: SEQ ID č. 1:
Glu Gin Leu Glu Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu Thr Glu Trp Thr
Ser Ser Asn Val Met Glu Glu Arg (2) INFORMACE PRO SEQ ID č.: 2:
(i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:
(A) DÉLKA:
(B) TYP:
(C) SŘETĚZENÍ:
(D) TOPOLOGIE:
aminokyselina jednoduché lineární (ii) SEKVENČNÍ POPIS: SEQ ID č. 2:
Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Ile Val Thr Pro Arg 16
Thr Pro Pro
Claims (10)
1. Farmaceutická kompozice k indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů, vyznačující se tím, že obsahuje antigen indukující v kombinaci s níže definovaným mikrofluidizovaným antigenním přípravkem cytotoxickou odpověď T-lymfocytů specifickou pro tento antigen, ve směsi s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím alespoň dvě složky vybrané ze skupiny zahrnující
a) stabilizující detergent udržující složky mikrofluidizovaného antigenního přípravku ve formě stabilní emulze,
-19CZ 288048 B6
b) agens vytvářející micely udržující v kombinaci s dalšími složkami obsaženými v mikrofluidizovaném antigenním přípravku stabilní emulzi a vytvářející strukturu podobnou micelám a
2. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že antigen je vybrán z antigenních částí HTV antigenů ze skupiny gpl20, gpl60, gag, pol, Nef, Tat a Rev, antigenů malárie ze skupiny zahrnující CS protein a Sporozoite povrchový protein 2, povrchových antigenů hepatitidy B ze skupiny Pre-Sl, Pre-S2, HBc Ag a HBe Ag, chřipkových antigenů ze skupiny HA, NP a NA, povrchových antigenů hepatitidy A, antigenů herpetického viru ze skupiny 20 EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV časný bílkovinný produkt, cytomegalovirus gB, cytomegalovirus gH a IE protein gP72, antigenů syncyciálního viru respiračního traktu ze skupiny F protein, G protein a N protein, antigenů viru Herpes papiloma E4, E6 a E7 a tumorových antigenů ze skupiny zahrnující karcinom CEA, mucin asociovaný s karcinomem, karcinom P21, karcinom P53, melanom MPG, melanom p97, MÁGE antigen, 25 onkogenní produkt Neu karcinomu, genový produkt karcinomu p53, specifický antigen prostaty, tedy PSA, a s prostatou asociovaný antigen, a přeměněný p21 ras protein.
3. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje antigen ve směsi s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím
a) stabilizující detergent, definovaný v nároku 1,
b) agens vytvářející micely, definované v nároku 1, a
35 c) biodegradabilní a biokompatibilní olej, kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě,
40 stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
45
4. Kompozice podle nároku 3, vyznačující se tím, že antigen je vybrán z HTV antigenů ze skupiny gpl20, gpl60, gag, pol, Nef, Tat a Rev, antigenů malárie ze skupiny zahrnující CS protein a Sporozoite povrchový protein 2, povrchových antigenů hepatitidy B ze skupiny Pre-Sl, Pre-S2, HBc Ag a HBe Ag, chřipkových antigenů ze skupiny HA, NP a NA, povrchových antigenů hepatitidy A, antigenů herpetického viru ze skupiny EBV gp340, EBV
50 gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV časný bílkovinný produkt, cytomegalovirus gB, cytomegalovirus gH a IE protein gP72, antigenů viru Herpes papiloma E4, E6 a E7, antigenů syncyciálního viru respiračního traktu ze skupiny F protein, G protein a N protein a tumorových antigenů ze skupiny zahrnující karcinom CEA, mucin asociovaný s karcinomem, karcinom P21, karcinom P53, melanom MPG, melanom p97, MÁGE antigen, onkogenní produkt Neu
-20CZ 288048 B6 karcinomu, genový produkt karcinomu p53, specifický antigen prostaty, tedy PSA, a s prostatou asociovaný antigen, a přeměněný p21 ras protein.
5 stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
5. Kompozice podle nároku 1 pro použití k léčení infekce HIV, vyznačující se tím, 5 že obsahuje HIV antigen ve směsi s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím
a) stabilizující detergent, definovaný v nároku 1,
b) agens vytvářející micely, definované v nároku 1, a
c) biodegradabilní a biokompatibilní olej, kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě, stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
5 c) biodegradabilní a biokompatibilní olej, kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě,
10 stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
15
6. Kompozice podle nároku 5, vyznačující se tím, že HTV antigen je vybrán ze skupiny zahrnující gpl20, gpI60, gag, pol, Nef, Tat a Rev.
7. Kompozice podle nároku 1 pro použití kléčení malárie, vyznačující se tím, že 25 obsahuje antigen asociovaný s malárií ve směsi s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím
a) stabilizující detergent, definovaný v nároku 1,
30 b) agens vytvářející micely, definované v nároku 1, a
c) biodegradabilní a biokompatibilní olej, kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve 35 vodě, stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
8. Kompozice podle nároku 7, vyznačující se tím, že antigen asociovaný s malárií je vybrán ze skupiny zahrnující CS protein a Sporozoite povrchový protein 2.
45
9. Kompozice podle nároku 1 pro použití kléčení chřipky, vyznačující se tím, že obsahuje antigen asociovaný s chřipkou ve směsi s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím
a) stabilizuj ící detergent, definovaný v nároku 1,
b) agens vytvářející micely, definované v nároku 1, a
c) biodegradabilní a biokompatibilní olej,
-21CZ 288048 B6 kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě, stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
10. Kompozice podle nároku 9, vyznačující se tím, že antigen asociovaný s chřipkou je vybrán ze skupiny zahrnující HA, NP a NA.
11. Kompozice podle nároku 1 pro použití k léčení hepatitidy, vyznačující se tím, že obsahuje antigen asociovaný s hepatitidou ve směsi s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím
a) stabilizující detergent, definovaný v nároku 1,
b) agens vytvářející micely, definované v nároku 1, a
c) biodegradabilní a biokompatibilní olej, kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě, stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
12. Kompozice podle nároku 11, vyznačující se tím, že antigen asociovaný s hepatitidou je vybrán ze skupiny zahrnující povrchový antigen hepatitidy A nebo Pre-Sl, Pre-S2, HBc Ag a HBE Ag.
13. Kompozice podle nároku 1 pro použití k léčení rakoviny, vyznačující se tím, že obsahuje antigen asociovaný s rakovinou ve směsi s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím
a) stabilizující detergent, definovaný v nároku 1,
b) agens vytvářející micely, definované v nároku 1, a
c) biodegradabilní a biokompatibilní olej, kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě, stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
14. Kompozice podle nároku 13, vyznačující se tím, že antigen asociovaný s rakovinou je vybrán ze skupiny zahrnující karcinom CEA, mucin asociovaný s karcinomem, karcinom P21, karcinom P53, melanom MPG, melanom p97, onkogenní produkt Neu karcinomu, genový produkt karcinomu p53, a přeměněný p21 ras protein.
-22CZ 288048 B6
15. Kompozice podle nároku 1 pro použití kléčení infekce herpetickým virem, vyznačující se tím, že obsahuje herpetický antigen ve směsi smikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím
a) stabilizující detergent, definovaný v nároku 1,
b) agens vytvářející micely, definované v nároku 1, a
c) biodegradabilní a biokompatibilní olej, kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě, stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
16. Kompozice podle nároku 15, vyznačující se tím, že herpetický antigen je vybrán ze skupiny zahrnující EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV časný bílkovinný produkt, cytomegalovirus gB, cytomegalovirus gH a IE protein gP72.
17. Kompozice podle nároku 1 pro použití k léčení infekce syncyciálním virem respiračního traktu, vyznačující se tím, že obsahuje antigen syncyciálního viru respiračního traktu ve směsi s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím
a) stabilizující detergent, definovaný v nároku 1,
b) agens vytvářející micely, definované v nároku 1, a
c) biodegradabilní a biokompatibilní olej, kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě, stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
18. Kompozice podle nároku 17, vyznačující se tím, že antigen syncyciálního viru respiračního traktuje vybrán ze skupiny zahrnující F protein, G protein a N protein.
19. Kompozice podle nároku 1 pro použití k indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů učlověka nebo domácího či zemědělského zvířete, vyznačující se tím, že obsahuje směs antigenu s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím dvě složky vybrané ze skupiny zahrnující
a) stabilizující detergent, definovaný v nároku 1,
b) agens vytvářející micely, definované v nároku 1, a
c) biodegradabilní a biokompatibilní olej,
-23CZ 288048 B6 kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě, stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
20. Kompozice podle nároku 19, vyznačující se tím, že je určena k indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů u člověka nebo u domácího či zemědělského zvířete infikovaného virem a trpícího jedním nebo několika symptomy infekce tímto virem.
21. Kompozice podle nároku 19, vyznačující se tím, že antigen je vybrán zantigenních částí HTV antigenů ze skupiny gpl60, gag, pol, Nef, Tat a Rev, antigenů malárie ze skupiny zahrnující CS protein a Sporozoite povrchový protein 2, povrchových antigenů hepatitidy B ze skupiny Pre-Sl, Pre-S2, HBc Ag a HBe Ag, chřipkových antigenů ze skupiny HA, NP a NA, povrchových antigenů hepatitidy A, antigenů herpetického viru ze skupiny EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV časný bílkovinný produkt, cytomegalovirus gB, cytomegalovirus gH a IE protein gP72, antigenů viru Herpes papiloma E4, E6 a E7, antigenů syncyciálního viru respiračního traktu ze skupiny F protein, G protein a N protein a tumorových antigenů ze skupiny zahrnující karcinom CEA, mucin asociovaný s karcinomem, karcinom P21, karcinom P53, melanom MPG, melanom p97, MÁGE antigen, onkogenní produkt Neu karcinomu, genový produkt karcinomu p53, specifický antigen prostaty, tedy PSA, a s prostatou asociovaný antigen, a přeměněný p21 ras protein.
22. Kompozice podle nároku 1 pro použití k léčení infekce HTV, vyznačující se tím, že obsahuje HTV antigen ve směsi s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím dvě složky vybrané ze skupiny zahrnující
a) stabilizující detergent, definovaný v nároku 1,
b) agens vytvářející micely, definované v nároku 1, a
c) biodegradabilní a biokompatibilní olej, kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě, stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
23. Kompozice podle nároku 22, vyznačující se tím, že HIV antigen je vybrán ze skupiny zahrnující gpl60, gag, pol, Nef, Tat a Rev.
24. Kompozice podle nároku 1 pro použití k léčení malárie, vyznačující se tím, že obsahuje antigen asociovaný s malárií ve směsi s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím dvě složky vybrané ze skupiny zahrnující
a) stabilizující detergent, definovaný v nároku 1,
b) agens vytvářející micely, definované v nároku 1, a
c) biodegradabilní a biokompatibilní olej,
-24CZ 288048 B6 kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě, stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
25. Kompozice podle nároku 24, vyznačující se tím, že antigen asociovaný s malárií je vybrán ze skupiny zahrnující CS protein a Sporozoite povrchový protein 2.
26. Kompozice podle nároku 1 pro použití kléčení chřipky, vyznačující se tím, že obsahuje antigen asociovaný s chřipkou ve směsi s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím dvě složky vybrané ze skupiny zahrnující
a) stabilizující detergent, definovaný v nároku 1,
b) agens vytvářející micely, definované v nároku 1, a
c) biodegradabilní a biokompatibilní olej, kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě, stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
27. Kompozice podle nároku 26, vyznačující se tím, že antigen asociovaný s chřipkou je vybrán ze skupiny zahrnující HA, NP a NA.
28. Kompozice podle nároku 1 pro použití k léčení hepatitidy, vyznačující se tím, že obsahuje antigen asociovaný s hepatitidou ve směsi s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím dvě složky vybrané ze skupiny zahrnující
a) stabilizující detergent, definovaný v nároku 1,
b) agens vytvářející micely, definované v nároku 1, a
c) biodegradabilní a biokompatibilní olej, kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě, stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
29. Kompozice podle nároku 28, vyznačující se tím, že antigen asociovaný s hepatitidou je vybrán ze skupiny zahrnující povrchové antigeny hepatitidy A a povrchové antigeny hepatitidy B ze skupiny Pre-Sl, Pre-S2, HBc Ag a HBE Ag.
-25CZ 288048 B6
30. Kompozice podle nároku 1 pro použití k léčení rakoviny, vyznačující se tím, že obsahuje antigen asociovaný s rakovinou ve směsi s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím dvě složky vybrané ze skupiny zahrnující
a) stabilizující detergent, definovaný v nároku 1,
b) agens vytvářející micely, definované v nároku 1, a
c) biodegradabilní a biokompatibilní olej, kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě, stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
31. Kompozice podle nároku 30, vyznačující se tím, že antigen asociovaný s rakovinou je vybrán ze skupiny zahrnující karcinom CEA, mucin asociovaný s karcinomem, karcinom P21, karcinom P53, MÁGE, melanom MPG, melanom p97, onkogenní produkt Neu karcinomu, genový produkt karcinomu p53, a přeměněný p21 ras protein.
32. Kompozice podle nároku 1 pro použití kléčení infekce herpetickým virem, vyznačující se tím, že obsahujeherpetickýantigen ve směsi smikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím dvě složky vybrané ze skupiny zahrnující
a) stabilizující detergent, definovaný v nároku 1,
b) agens vytvářející micely, definované v nároku 1, a
c) biodegradabilní a biokompatibilní olej, kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě, stím, že tento mikrofluidizovaný antigenní přípravek neobsahuje další součásti způsobující indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů a je prostý imunostimulující peptidické složky, a antigenem není antigen B-buněk lymfomu nebo albumin.
33. Kompozice podle nároku 32, vyznačující se tím, že herpetický antigen je vybrán ze skupiny zahrnující EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV časný bílkovinný produkt, cytomegalovirus gB, cytomegalovirus gH a IE protein gP72.
34. Kompozice podle nároku 1 pro použití k léčení infekce syncyciálním virem respiračního traktu, vyznačující se tím, že obsahuje antigen syncyciálního viru respiračního traktu ve směsi s mikrofluidizovaným antigenním přípravkem obsahujícím dvě složky vybrané ze skupiny zahrnující
a) stabilizující detergent, definovaný v nároku 1,
b) agens vytvářející micely, definované v nároku 1, a
c) biodegradabilní a biokompatibilní olej,
-26CZ 288048 B6 kterýžto mikrofluidizovaný antigenní přípravek je formulován jako stabilní emulze typu olej ve vodě,
10 35. Kompozice podle nároku 34, vyznačující se tím, že antigen syncyciálního viru respiračního traktuje vybrán ze skupiny zahrnující F protein, G protein a N protein.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US73506991A | 1991-07-25 | 1991-07-25 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ15094A3 CZ15094A3 (en) | 1994-07-13 |
| CZ288048B6 true CZ288048B6 (cs) | 2001-04-11 |
Family
ID=24954233
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ1994150A CZ288048B6 (cs) | 1991-07-25 | 1992-07-24 | Farmaceutická kompozice k indukci cytotoxické odpovědi T-lymfocytů |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5585103A (cs) |
| EP (1) | EP0596032B2 (cs) |
| JP (1) | JP3939746B2 (cs) |
| KR (1) | KR100198868B1 (cs) |
| AT (1) | ATE166578T1 (cs) |
| AU (1) | AU666127B2 (cs) |
| BG (1) | BG62240B1 (cs) |
| BR (1) | BR9206310A (cs) |
| CA (1) | CA2113720A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ288048B6 (cs) |
| DE (1) | DE69225710T3 (cs) |
| DK (1) | DK0596032T4 (cs) |
| ES (1) | ES2117052T5 (cs) |
| FI (2) | FI108114B (cs) |
| HU (2) | HU220295B (cs) |
| IE (1) | IE922436A1 (cs) |
| IL (1) | IL102639A (cs) |
| MX (1) | MX9204376A (cs) |
| NO (1) | NO317203B1 (cs) |
| OA (1) | OA09880A (cs) |
| PH (1) | PH30906A (cs) |
| RO (1) | RO116459B1 (cs) |
| RU (1) | RU2129439C1 (cs) |
| SK (1) | SK282920B6 (cs) |
| TW (1) | TW349867B (cs) |
| WO (1) | WO1993001831A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA925614B (cs) |
Families Citing this family (80)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6197311B1 (en) * | 1991-07-25 | 2001-03-06 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses |
| US5709860A (en) * | 1991-07-25 | 1998-01-20 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses |
| AU6363094A (en) * | 1993-03-15 | 1994-10-11 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | Peptide coated dendritic cells as immunogens |
| GB9314623D0 (en) | 1993-07-14 | 1993-08-25 | Nordion Int Inc | Localization and therapy with agents directed against prostate specific antigen in breast cancer |
| GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| AUPM446594A0 (en) * | 1994-03-16 | 1994-04-14 | Csl Limited | Cytotoxic t-cell epitopes identified within epstein-barr virus |
| GB9620795D0 (en) * | 1996-10-05 | 1996-11-20 | Smithkline Beecham Plc | Vaccines |
| US5820880A (en) * | 1995-06-07 | 1998-10-13 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Liposomal formulation |
| DK0991403T3 (da) * | 1997-01-30 | 2003-07-28 | Chiron Corp | Anvendelse af mikropartikler med adsorberet antigen til stimulering af immunresponser |
| US6884435B1 (en) * | 1997-01-30 | 2005-04-26 | Chiron Corporation | Microparticles with adsorbent surfaces, methods of making same, and uses thereof |
| EP0983086B1 (en) * | 1997-02-05 | 2007-08-29 | Jean-Claude Bystryn | pH-SENSITIVE LIPOSOMES AND OTHER TYPES OF ENCAPSULATED VACCINES CONTAINING IMMUNOMODULATORS, AND METHODS FOR MAKING AND USING SAME |
| AT405939B (de) | 1997-02-24 | 1999-12-27 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von lipidumhüllten viren |
| US6632619B1 (en) * | 1997-05-16 | 2003-10-14 | The Governors Of The University Of Alberta | Microfluidic system and methods of use |
| DE69823347T2 (de) * | 1997-05-16 | 2005-05-12 | Alberta Research Council, Edmonton | Mikrofluidisches system und verfahren zu dessen betrieb |
| GB9718901D0 (en) | 1997-09-05 | 1997-11-12 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| EP1279401B1 (en) | 1997-09-05 | 2008-01-09 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Oil in water emulsions containing saponins |
| ZA988461B (en) * | 1997-09-18 | 1999-03-30 | Idec Pharma Corp | Synergistic composition and methods for treating neoplastic or cancerous growths and for restoring or boosting hematopoiesis |
| US6858386B1 (en) * | 1998-05-21 | 2005-02-22 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating colon cancer |
| US6949339B1 (en) | 1998-05-21 | 2005-09-27 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, and staging colon cancer |
| MXPA01004310A (es) * | 1998-10-30 | 2003-06-06 | Cbr Lab Inc | Inhibicion de diferenciacion de celulas t citotoxicas mediante antagonistas de ligando de p-selectina (psgl). |
| EP1131430B1 (en) * | 1998-11-10 | 2007-01-17 | Emory University | Mitogenic regulators |
| US7198920B1 (en) | 1999-01-29 | 2007-04-03 | Corika Corporation | HER-2/neu fusion proteins |
| US20050226890A1 (en) * | 1999-08-12 | 2005-10-13 | Cohen David I | Tat-based vaccine compositions and methods of making and using same |
| CA2394914A1 (en) * | 1999-11-22 | 2001-05-31 | Susana Salceda | A novel method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating cancer |
| US7238471B1 (en) | 1999-11-23 | 2007-07-03 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating breast cancer |
| US20020048777A1 (en) * | 1999-12-06 | 2002-04-25 | Shujath Ali | Method of diagnosing monitoring, staging, imaging and treating prostate cancer |
| JP2004510408A (ja) * | 2000-05-26 | 2004-04-08 | ディアデクサス インコーポレーテッド | 大腸癌の診断、モニタリング、ステージング、イメージングおよび処置の方法 |
| US7229623B1 (en) * | 2000-08-03 | 2007-06-12 | Corixa Corporation | Her-2/neu fusion proteins |
| US20080044435A1 (en) * | 2004-03-16 | 2008-02-21 | Cohen David I | Tat-Based Tolerogen Compositions and Methods of Making and Using Same |
| AU2002231621A1 (en) | 2000-11-09 | 2002-05-21 | Immunolex Laboratories | Method of producing antibodies by immunization with conjugates of molecules coupled to charge-modified proteins |
| RU2303264C2 (ru) * | 2001-02-19 | 2007-07-20 | Мерк Патент Гмбх | Способ идентификации эпитопов т-клеток и его применение для получения молекул со сниженной иммуногенностью |
| WO2003104429A2 (en) * | 2002-06-10 | 2003-12-18 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Genes overexpressed by ovarian cancer and their use in developing novel therapeutics |
| EP1545575A4 (en) | 2002-09-19 | 2006-04-05 | Us Gov Health & Human Serv | P. ARIASI POLYPEPTIDE, P. PERNICIOSUS POLYPEPTIDES AND METHOD OF USE |
| MXPA05004714A (es) | 2002-10-29 | 2006-03-17 | Us Gov Health & Human Serv | Polipeptidos de lutzomyia longipalpis y metodos de uso. |
| RU2005130646A (ru) * | 2003-04-04 | 2006-01-27 | Пфайзер Продактс Инк. (Us) | Микрофлюидизированные эмульсии масло в воде и композиции вакцины |
| KR101146545B1 (ko) * | 2003-07-24 | 2012-07-05 | 메리얼 리미티드 | 수중유 에멀젼을 포함하는 백신 제형물 |
| US7927580B2 (en) * | 2004-03-16 | 2011-04-19 | Nanirx, Inc. | Tat-based immunomodulatory compositions and methods of their discovery and use |
| ES2423663T3 (es) | 2005-08-08 | 2013-09-23 | Oregon Health And Science University | Inactivación de patógenos con peróxido de hidrógeno para la producción de vacunas |
| US20100130425A1 (en) | 2005-09-09 | 2010-05-27 | Oregon Health & Science University | Use of toll-like receptor ligands in treating excitotoxic injury, ischemia and/or hypoxia |
| CA2649688A1 (en) | 2006-03-14 | 2007-09-20 | Oregon Health & Science University | Methods for detecting a mycobacterium tuberculosis infection |
| JP2009536818A (ja) | 2006-04-20 | 2009-10-22 | ザ ヘンリー エム． ジャクソン ファウンデーション フォー ザ アドヴァンスメント オブ ミリタリー メディシン インコーポレイテッド | 志賀毒性１型タンパク質に基づく方法および組成物 |
| US20090181078A1 (en) | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| US8273361B2 (en) | 2006-09-26 | 2012-09-25 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| TWI441648B (zh) * | 2007-01-03 | 2014-06-21 | Oncotherapy Science Inc | Ｆｏｘｐ３胜肽疫苗 |
| US8188214B2 (en) | 2007-02-28 | 2012-05-29 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Brachyury polypeptides and methods for use |
| KR101648087B1 (ko) * | 2007-10-18 | 2016-08-17 | 버베리안 노딕 에이/에스 | 전립선 암 치료를 위한 ｍｖａ의 용도 |
| EP2324049B1 (en) | 2008-08-04 | 2016-05-25 | The Government of the U.S.A. as represented by The Secretary of the dept. of Health & Human Services | Membrane proximal region of hiv gp41 anchored to the lipid layer of a virus-like particle vaccine |
| WO2010099472A2 (en) | 2009-02-27 | 2010-09-02 | The U.S.A. Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Spanx-b polypeptides and their use |
| JP5692933B2 (ja) | 2009-03-23 | 2015-04-01 | ナニアールエックス セラピューティックス インコーポレイテッド | 免疫刺激ＨＩＶＴａｔ誘導体ポリペプチドによる腫瘍治療 |
| CN105131051B (zh) | 2009-06-05 | 2020-07-10 | 传染性疾病研究院 | 合成的吡喃葡萄糖脂佐剂 |
| CA2776922A1 (en) | 2009-10-07 | 2011-04-14 | Uvic Industry Partnerships Inc. | Vaccines comprising heat-sensitive transgenes |
| US9181306B2 (en) | 2009-10-16 | 2015-11-10 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Insertion of foreign genes in rubella virus and their stable expression in a live, attenuated viral vaccine |
| WO2011063283A2 (en) | 2009-11-20 | 2011-05-26 | Oregon Health & Science University | Methods for detecting a mycobacterium tuberculosis infection |
| WO2011112599A2 (en) | 2010-03-12 | 2011-09-15 | The United States Of America, As Represented By The Secretary. Department Of Health & Human Services | Immunogenic pote peptides and methods of use |
| EP3187585A1 (en) | 2010-03-25 | 2017-07-05 | Oregon Health&Science University | Cmv glycoproteins and recombinant vectors |
| AU2012243039B2 (en) | 2011-04-08 | 2017-07-13 | Immune Design Corp. | Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses |
| ES2667425T3 (es) | 2011-06-10 | 2018-05-10 | Oregon Health & Science University | Glucoproteínas y vectores recombinantes de CMV |
| RS61594B1 (sr) | 2011-07-18 | 2021-04-29 | The United States Of America As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services | Postupci i kompozicije za inhibiranje patologije povezane sa poliomavirusom |
| EP2568289A3 (en) | 2011-09-12 | 2013-04-03 | International AIDS Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
| US9402894B2 (en) | 2011-10-27 | 2016-08-02 | International Aids Vaccine Initiative | Viral particles derived from an enveloped virus |
| WO2013152352A1 (en) | 2012-04-06 | 2013-10-10 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Servic | Live, attenuated rubella vector to express vaccine antigens |
| DK2850431T3 (en) | 2012-05-16 | 2018-07-16 | Immune Design Corp | Vaccines against HSV-2 |
| MX2014014683A (es) | 2012-06-06 | 2015-02-24 | Bionor Immuno As | Peptidos derivados de proteinas virales para usarse como inmunogenos y reactivos de dosificacion. |
| ES2631608T3 (es) | 2012-06-27 | 2017-09-01 | International Aids Vaccine Initiative | Variante de la glicoproteína Env del VIH-1 |
| WO2014043518A1 (en) | 2012-09-14 | 2014-03-20 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Brachyury protein, non-poxvirus non-yeast vectors encoding brachyury protein, and their use |
| WO2014062778A1 (en) | 2012-10-19 | 2014-04-24 | Bavarian Nordic, Inc. | Methods and compositions for the treatment of cancer |
| BR112015025709A2 (pt) | 2013-04-18 | 2017-07-18 | Immune Design Corp | monoterapia com gla para uso em tratamento de câncer |
| US9463198B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
| EP2848937A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-18 | International Aids Vaccine Initiative | Methods of identifying novel HIV-1 immunogens |
| AU2014329393B2 (en) | 2013-10-04 | 2020-04-30 | Pin Pharma, Inc. | Immunostimulatory HIV Tat derivative polypeptides for use in cancer treatment |
| EP2873423B1 (en) | 2013-10-07 | 2017-05-31 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers |
| US10286050B2 (en) | 2013-12-13 | 2019-05-14 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Multi-epitope TARP peptide vaccine and uses thereof |
| WO2015095770A1 (en) | 2013-12-20 | 2015-06-25 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Immunogenic jc polyomavirus compositions and methods of use |
| US10174292B2 (en) | 2015-03-20 | 2019-01-08 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| US9931394B2 (en) | 2015-03-23 | 2018-04-03 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| CN108289940B (zh) | 2015-08-03 | 2023-01-13 | 美国卫生和人力服务部 | Brachyury缺失突变体、编码brachyury缺失突变体的非酵母载体及其用途 |
| CA3022603A1 (en) | 2016-05-10 | 2017-11-16 | Najit Technologies, Inc. | Inactivating pathogens and producing highly immunogenic inactivated vaccines using a dual oxidation process |
| US11235046B2 (en) | 2017-11-04 | 2022-02-01 | Nevada Research & Innovation Corporation | Immunogenic conjugates and methods of use thereof |
| CN113454100B (zh) | 2018-12-04 | 2024-08-23 | 洛克菲勒大学 | Hiv疫苗免疫原 |
| WO2021160887A1 (en) | 2020-02-14 | 2021-08-19 | Immunor As | Corona virus vaccine |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3083142A (en) * | 1958-02-27 | 1963-03-26 | Glaxo Group Ltd | Improved swine erysipelas vaccine |
| US3790665A (en) * | 1968-02-23 | 1974-02-05 | Haver Lockhart Labor Inc | Injectable adjuvant,method of preparing same and compositions including such adjuvant |
| US3919411A (en) * | 1972-01-31 | 1975-11-11 | Bayvet Corp | Injectable adjuvant and compositions including such adjuvant |
| GB1502774A (en) * | 1974-06-25 | 1978-03-01 | Nat Res Dev | Immunological preparations |
| US4117113A (en) * | 1974-06-25 | 1978-09-26 | National Research Development Corporation | Immunological preparations |
| US4770874A (en) * | 1983-08-22 | 1988-09-13 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
| US4772466A (en) * | 1983-08-22 | 1988-09-20 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Vaccines comprising polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
| JPS6147500A (ja) * | 1984-08-15 | 1986-03-07 | Res Dev Corp Of Japan | キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法 |
| US4707443A (en) * | 1985-04-19 | 1987-11-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Soluble interleukin-2 receptor as a disease indicator and a method of assaying the same |
| EP0289550B1 (en) * | 1986-10-20 | 1996-04-10 | Chiron Corporation | Vaccine for use in the therapeutic treatment of hsv |
| US4778784A (en) * | 1987-01-07 | 1988-10-18 | Baylor College Of Medicine | Cyclic peptide and method of use for inducing an immunological response to hepatitis B virus |
| US4963354A (en) * | 1987-01-21 | 1990-10-16 | Genentech, Inc. | Use of tumor necrosis factor (TNF) as an adjuvant |
| IL162181A (en) * | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
| CA2017507C (en) * | 1989-05-25 | 1996-11-12 | Gary Van Nest | Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion |
| DE69021791T2 (de) * | 1989-06-30 | 1996-05-02 | American Cyanamid Co | Verwendung eines phagozytise-aktievierenden Stoffes : LPS oder IL-2 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Staphylococcus-aureus-Infektionen bei Kühen. |
| AU1025692A (en) * | 1991-02-06 | 1992-08-13 | Ciba-Geigy Ag | Novel chimeric antiidiotypic monoclonal antibodies |
-
1992
- 1992-07-24 CZ CZ1994150A patent/CZ288048B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 MX MX9204376A patent/MX9204376A/es not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 AT AT92917479T patent/ATE166578T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 BR BR9206310A patent/BR9206310A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-07-24 IL IL102639A patent/IL102639A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 KR KR1019940700218A patent/KR100198868B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-24 DK DK92917479T patent/DK0596032T4/da active
- 1992-07-24 HU HU9400202A patent/HU220295B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 PH PH44711A patent/PH30906A/en unknown
- 1992-07-24 ES ES92917479T patent/ES2117052T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 IE IE243692A patent/IE922436A1/en not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 SK SK89-94A patent/SK282920B6/sk unknown
- 1992-07-24 CA CA002113720A patent/CA2113720A1/en not_active Abandoned
- 1992-07-24 EP EP92917479A patent/EP0596032B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 US US07/919,787 patent/US5585103A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 AU AU24338/92A patent/AU666127B2/en not_active Ceased
- 1992-07-24 JP JP50307193A patent/JP3939746B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-24 WO PCT/US1992/006193 patent/WO1993001831A1/en not_active Ceased
- 1992-07-24 RO RO94-00094A patent/RO116459B1/ro unknown
- 1992-07-24 RU RU94038046/14A patent/RU2129439C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 DE DE69225710T patent/DE69225710T3/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-27 ZA ZA925614A patent/ZA925614B/xx unknown
- 1992-08-27 TW TW081105966A patent/TW349867B/zh not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-01-21 NO NO19940218A patent/NO317203B1/no unknown
- 1994-01-24 BG BG98410A patent/BG62240B1/bg unknown
- 1994-01-24 OA OA60461A patent/OA09880A/en unknown
- 1994-01-24 FI FI940335A patent/FI108114B/fi active
-
1995
- 1995-05-24 US US08/449,728 patent/US6270769B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-22 HU HU95P/P00339P patent/HU211299A9/hu unknown
-
2001
- 2001-06-05 FI FI20011187A patent/FI109335B/fi active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5585103A (en) | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses | |
| AP661A (en) | Induction of cytotoxic T- lymphocite responses. | |
| US6197311B1 (en) | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses | |
| KR100478617B1 (ko) | 세포독성t-림프구반응을유도하는방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20080724 |