CN102143958A - 作为smo抑制剂的哒嗪衍生物 - Google Patents

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Abstract

概括而言，本发明涉及与诊断和治疗Hedgehog通路相关性病状有关的新化合物，所述病状包括但不限于肿瘤形成、癌症、瘤形成和非恶性过度增殖性障碍。本发明包括新化合物、新组合物、它们的使用方法和它们的制备方法，其中所述化合物在药理学上通常可以在其作用机理涉及采用抑制Hedgehog和Smo信号传导通路的活性剂来抑制肿瘤发生、肿瘤生长和肿瘤生存的方法的治疗中用作活性剂。

Description

作为SMO抑制剂的哒嗪衍生物
发明背景
Hedgehog(Hh)信号最初在果蝇中作为胚胎图式形成的重要调节机制或者作为胚细胞形成分化组织的有序立体排布的过程的重要调节机制被识别(Nusslein-Volhard等人(1980)Nature 287，795-801)。在哺乳动物细胞中已经识别了三种Hedgehog基因，即Sonic Hedgehog(Shh)、Indian Hedgehog(Ihh)和Desert Hedgehog(Dhh)。Hedgehog基因编码分泌性蛋白，所述分泌性蛋白进行翻译后修饰、包括自催化切割以及N-末端的脂修饰(棕榈酰化)和C-末端的胆甾醇修饰。
N-末端脂修饰的Hedgehog蛋白引发蛋白通路的信号传导活性，并且细胞间通讯通过由信号细胞发送可溶性Hedgehog蛋白和被应答细胞接收而引起。在应答细胞中，12-次跨膜受体Patched(Ptch)充当Hh信号的负调节物，7-次跨膜蛋白Smoothened(Smo)充当Hh信号的正调节物。在静止状态下，游离的Ptch(即未与Hh结合)以亚化学计量抑制由Smo诱导的通路活性(Taipale等(2002)Nature 418：892)；但是，一旦与配体Hh蛋白结合，Smo的抑制就被解除，并且所产生的信号级联放大导致Gli转录因子(Gli1、Gli2和Gli3)的活化和核易位。
Hh信号转录的下游靶基因包括Wnts、TGFβ、Ptc和Gli1，它们是正和负调节反馈环的元件。多种细胞周期和增殖调节基因如c-myc、细胞周期蛋白D和E也是Hh信号的靶基因。
已知Hh信号以组织特异性和剂量依赖的方式调节多种生物学过程，例如细胞增殖、分化和器官形成。在神经管的发育中，Shh在底板中表达并指导神经元的特定亚型(包括运动神经元和多巴胺能神经元)的分化。还已知Hh调节神经祖细胞如小脑颗粒细胞和神经干细胞的增殖。在肠道的发育中，低水平的Hh信号是胰脏发育所必需的，而高水平的Hh信号阻断胰脏器官形成。还已知Hh在皮肤、前列腺、睾丸和骨髓的干细胞增殖和器官形成中发挥重要作用。
通常，在细胞增殖、分化和胚胎图式形成期间，Hh信号受到严格的控制。但是，例如，由组成性激活通路的突变所引起的Hedgehog信号传导通路的异常活性可产生病理性后果。例如，在Gorlin’s综合征(一种具有高的皮肤癌和脑癌患病风险的遗传性综合征，还称为基底细胞痣综合征(BCNS))中发现了Patched的失功能突变；并且Smo和Gli的获功能突变与基底细胞癌和成胶质细胞瘤相关。基底细胞癌(BCC)是皮肤癌的最常见形式，每年有90,000以上的美国人患病。已发现，Hh的组成性活化可促进BCC、成神经管细胞瘤(最常见的儿童脑肿瘤)、横纹肌肉瘤、胰癌、小细胞肺癌、前列腺癌和乳癌中的肿瘤发生。除了在肿瘤发生中的作用外，Hh信号还在前列腺癌的转移中有牵涉。Hh信号可能在多种其它肿瘤类型中有牵涉，这种联系仍有待继续发现；在世界范围的许多癌症中心，这是一个活跃的研究领域。
这些癌细胞的增殖需要Hh通路的活化，阻断Hh信号传导通路通常会抑制癌细胞的增殖。确实，Hh拮抗剂环杷明(cyclopamine)和Gli1 siRNA可有效地阻断这些癌细胞的增殖并且在异种移植模型中可减小肿瘤的大小，这表明新的Hh拮抗剂能够提供新的用于治疗这些癌症的化学治疗剂。Hh拮抗剂环杷明已经显示出在动物模型中可抑制前列腺癌的转移。
除了在癌症中有牵涉外，Hh信号在正常组织的内稳态和再生中也起着重要作用。在小鼠模型中，Hh通路在视网膜、胆管、肺、骨和前列腺受损后被激活。Hh通路在毛囊、骨髓和中枢神经系统(CNS)的某些区域也是恒定有活性的，并且良性前列腺增生和湿性黄斑变性中的血管形成均需要Hedgehog通路活性。细胞再生过程可以被抗-Shh抗体和环杷明阻断。因此，Hh信号传导通路的小分子拮抗剂可能可用于治疗神经元增殖性疾病、良性前列腺增生、湿性黄斑变性、银屑病、骨髓增殖性疾病和白血病、骨硬化病和毛发去除。
Smo的组成性活化导致癌症(例如BCC)的证据以及Smo脱离Ptch的抑制时可能具有致癌性的证据提示了Smo拮抗剂在治疗这类疾病用作治疗剂的用处(Stone等人(1996)Nature 384：129)。因此，调节Hedgehog信号传导通路的活性的分子、例如调节Smo活性的分子在治疗上是有用的。
发明概述
概括而言，本发明涉及与诊断和治疗Hedgehog通路相关性病状有关的新化合物，所述病状包括但不限于肿瘤形成、癌症、瘤形成和非恶性过度增殖性障碍。本发明包括新化合物、新组合物、它们的使用方法和它们的制备方法，其中所述化合物通常可以在其作用机理涉及采用抑制Hedgehog和Smo信号传导通路的活性剂来抑制肿瘤发生、肿瘤生长和肿瘤生存的方法的治疗中用作活性剂。本发明的化合物和方法(例如式I化合物)涉及抑制Hedgehog信号传导通路活化，例如通过抑制由表型如Ptc失功能、Hedgehog获功能、Smoothened获功能或Gli获功能所引起的异常生长状态，包括将细胞与足以激动正常Ptc活性、拮抗正常Hedgehog活性或拮抗Smoothened活性的量的本发明的化合物(例如式I化合物)接触(例如以逆转或控制异常的生长状态)。
本发明涉及式(I)化合物或其可药用盐：
Figure BDA0000049063960000031
其中：
R1是C6-14芳基或5-14元杂芳基，其可以是未取代的或者被一个或多个C1-8烷基、C6-14芳基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基、卤素、NH2、CN、OCF3、OH、C(O)NR6R8、C(O)R6、NR6R8、NHC(O)R6、SO2R6或SO2NR6R8取代；
R2和R3独立地是C1-8烷基、C1-8烷基OH，或者R2和R3形成稠合的C3-14环烷基；
L是价键、C1-8亚烷基、-C(O)O-、-C(O)NR9-、-C1-8烷基OH-、-C1-8卤代烷基-、-C(O)-、-NH-或-O-；
X和W独立地是N或CR5，且X或W中至少一个是N；
R7是C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元环杂烷基；
R4是C1-8烷基、C2-8烯基、C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基、3-14元环杂烷基、C1-8烷氧基、卤素、NR6R8、C(O)OR6、C(O)NR6R8、C1-8卤代烷基、甲酰基、烷酯基、C1-8烷基OH、C(O)R6、SO2R6、C(O)NHC1-8烷基R6、NR6R8、SO2NR6R8、OCF3、NHC(O)R6、CH2OC(O)NR6R8、CH2NR6R8、NHC(O)OR6、NHC(O)NR6R8、CH2NHSO2R6、CH2NHC(O)OR6、OC(O)R6或NHC(O)R6，其可以是取代的或末取代的；
Z是C1-8烷基、CN、OH或卤素；
m和p独立地是0至3；
Y是价键、C1-8亚烷基、-C(O)-、-C(O)O-、-CH(OH)-或-C(O)NR10；
R5是H、卤素、CN、低级烷基、OH、OCH3或OCF3；
R9和R10独立地是C1-8烷基或H；
R6和R8独立地是H、C1-8烷基、C2-8烯基、C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基、3-14元环杂烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷基OH、C1-8烷氧基，或者一个原子上的两个R6或R6和R8可以形成含杂原子的环；且
其中R4、R6和R8可以是未取代的或者被一个或多个C1-8烷基、C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基、3-14元环杂烷基、C1-8烷基OH、OH、氧代基、C1-8卤代烷基、羧基C1-8烷基或SO2C1-8烷基、卤素、-OCH3、-OCF3、-OH、-NH2取代。
在一项实施方案中，本发明包括如下定义的式(I)化合物：其中R7是
Figure BDA0000049063960000041
Figure BDA0000049063960000051
在另一项实施方案中，本发明包括权利要求1的式(I)化合物：其中R1是
Figure BDA0000049063960000052
在另一项实施方案中，本发明包括如下定义的式(I)化合物：其中R7
Figure BDA0000049063960000053
且R1是
Figure BDA0000049063960000055
在另一项实施方案中，本发明包括如下定义的式(I)化合物：其中R4是C(O)OC1-8烷基、CF3、C(O)OR6、C(O)NR6R8、C1-8卤代烷基、C1-8烷基OH、C(O)R6、SO2R6、C(O)NHC1-8烷基R6、C(CH3)(CH3)(OH)、C(O)CH3、C(CH2)CH3或C(CH3)(CH2OH)OH；且R6和R8独立地是H、C1-8烷基、C1-8烯基、C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元环杂烷基。
在另一项实施方案中，本发明包括如下定义的式(I)化合物：其中R7是
Figure BDA0000049063960000056
Figure BDA0000049063960000061
R4是C1-8烷基，例如甲基、乙基、丙基或丁基；C2-8烯基，例如乙烯基或丙烯基；C3-14环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基；C6-14芳基，例如苯基；5-14元杂芳基，例如吡啶基或咪唑基；3-14元环杂烷基，例如哌啶基、吗啉基、吡咯烷基或哌嗪基；C1-8烷氧基，例如甲氧基、乙氧基或丙氧基；卤素，例如Cl、F、Br或I；NR6R8，例如NHC1-8烷基；C(O)OR6，例如C(O)OC1-8烷基或C(O)OH；C(O)NR6R8，例如C(O)NHC6-14芳基、C(O)NC6-14芳基C1-8烷基或C(O)-5-14元杂芳基或C(O)-3-14元环杂烷基；C1-8卤代烷基，例如CF3；甲酰基；烷酯基；C1-8烷基OH，例如CH2OH、在任意位置上被OH取代的乙基、在任意位置上被OH取代的丙基或在任意位置上被OH取代的丁基；C(O)R6，例如C(O)C1-8烷基；SO2R6，例如SO2C1-8烷基或SO2CF3；C(O)NHC1-8烷基R6，例如C(O)NHC1-8烷基OH或C(O)NHC1-8烷基CF3；SO2NR6R8，例如SO2NHC1-8烷基；OCF3；NHC(O)R6，例如NHC(O)C1-8烷基；CH2OC(O)NR6R8、CH2NR6R8、NHC(O)OR6、NHC(O)NR6R8、CH2NHSO2R6、CH2NHC(O)OR6、OC(O)R6或NHC(O)R6，其中R4可以是未取代或取代的；且p是0，1或2。
在另一项实施方案中，R6和R8独立地是H；C1-8烷基，例如甲基、乙基、丙基或丁基；C2-8烯基，例如烯基、丙烯基；C3-14环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基；C6-14芳基，例如苯基；5-14元杂芳基，例如吡啶基或嘧啶基；3-14元环杂烷基，例如吗啉基、哌啶基、吡咯烷基或哌嗪基；C1-8卤代烷基，例如CF3；C1-8烷基OH；C1-8烷氧基，例如甲氧基或乙氧基；或一个原子上的两个R6或R6和R8可以形成含杂原子的环，例如5-14元杂芳基或3-14元环杂烷基。
在本发明的另一项实施方案中，R4可以是未取代的或者被一个或多个如下基团取代：C1-8烷基，例如甲基、乙基、丙基、丁基或戊基；C3-14环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基；C6-14芳基，例如苯基；5-14元杂芳基，例如吡啶基或嘧啶基；3-14元环杂烷基，例如吗啉基、哌啶基、吡咯烷基或哌嗪基；C1-8烷基OH，例如CH3OH；OH；氧代基；C1-8卤代烷基，例如CF3；羧基C1-8烷基或SO2C1-8烷基；卤素，例如Cl、F、Br或I；-OCH3、-OCF3或-NH2。
在另一项实施方案中，R4是甲基、苯基、吡啶基、甲氧基、Cl、F、C(O)OC1-8烷基、C(O)OH、C(O)NHC6-14芳基、C(O)NC6-14芳基C1-8烷基、C(O)-5-14元杂芳基、C(O)-3-14元环杂烷基、CF3、CH2OH、CH2CH2OH、C(CH3)(CH3)OH、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、SO2C1-8烷基、SO2CF3、C(O)NHC1-8烷基OH、C(O)NHC1-8烷基CF3、SO2NHC1-8烷基、OCF3、NHC(O)CH3或CH2OC(O)NHCH3；其各自可以是未取代或取代的；且p是0、1或2。
在另一项实施方案中，R4是C(O)CH3、C(O)NH-苯基、C(O)OH、CF3、C(CH3)(CH3)OH、C(O)OCH3、CF3、C(O)OCH2CH3或C(O)NCH2CH3，其任选被哌嗪基、吗啉基或吡啶基取代。
在优选的实施方案中，R7是
Figure BDA0000049063960000071
且
R4是C(O)CH3、C(O)NH-苯基、C(O)OH、CF3、C(CH3)(CH3)OH、C(O)OCH3、CF3或C(O)OCH2CH3。
在另一项实施方案中，本发明包括如下定义的式(I)化合物：其中R1是
其各自可以是未取代的或者被一个或多个如下基团取代：C1-8烷基，例如甲基、乙基、丙基(例如异丙基)、丁基、戊基或己基；C6-14芳基，例如苯基；C1-8卤代烷基，例如CF3；C1-8烷氧基，例如甲氧基或乙氧基；卤素，例如Cl、F、Br或I；NH2、CN、OCF3、OH、C(O)NR6R8、C(O)R6、NR6R8、NHC(O)R6、SO2R6或SO2NR6R8。
在另一项实施方案中，R1是
Figure BDA0000049063960000081
其各自可以是未取代的或者被一个或多个如下基团取代：甲基、乙基、CF3、甲氧基、Cl、F、NH2、CN、OCF3或OH。在另一项实施方案中，R1可以是未取代的或者被CH3、Cl、F、甲氧基或CH取代。
在另一项实施方案中，本发明包括如下定义的式(I)化合物：其中R7是
且R1是
Figure BDA0000049063960000083
Figure BDA0000049063960000084
其可以是未取代的或者被一个或多个如下基团取代：甲基、乙基、异丙基、Cl、F、CN、甲氧基或CF3。
在另一项实施方案中，本发明包括如下定义的式(I)化合物：其中R4是C(O)OC1-8烷基、CF3、C(O)OR6、C(O)NR6R8、C1-8卤代烷基、C1-8烷基OH、C(O)R6、SO2R6、C(O)NHC1-8烷基R6、C(CH3)(CH3)(OH)、C(O)CH3、CH2-CH2-CH3或C(CH3)(CH2OH)OH。
在一项实施方案中，R6和R8独立地是H、甲基、乙基、环戊基、环己基、苯基、吡啶基、吗啉基、哌啶基、吡咯烷基或哌嗪基、CF3、甲氧基，一个原子上的两个R6或R6和R8可以形成含杂原子的环，例如5-14元杂芳基如吡啶基或嘧啶基；或3-14元环杂烷基如哌啶基或哌嗪基。
在另一项实施方案中，本发明包括如下定义的式(I)化合物：其中R4是
Figure BDA0000049063960000085
其可以是未取代或取代的。
在另一项实施方案中，本发明包括如下定义的式(I)化合物：其中R2和R3是C1-8烷基如甲基、乙基，或者与它们所连接的碳原子一起形成C4-7环烷基。在另一项实施方案中，R2和R3各自是甲基，或者形成环戊基或环己基。
在另一项实施方案中，本发明包括如下定义的式(I)化合物：其中R2和R3是CH3。
在另一项实施方案中，本发明包括如下定义的式(I)化合物：其中L是-O-、-NH-、-C(O)-、-CH(OH)-、-CH2-、-CF2-、-CHF-、-C(OH)-或价键。在另一项实施方案中，本发明包括其中L是-CH2-的式(I)化合物。在另一项实施方案中，本发明包括如下定义的式(I)化合物：其中X和W均是N，Z是CH3，且m是1。
在另一项实施方案中，p是0、1或2。在另一项实施方案中，p是0或1。在另一项实施方案中，p是1。
在另一项实施方案中，Y是价键、C1-8亚烷基如亚甲基、亚乙基、亚丙基、-C(O)-、-C(O)O-、-CH(OH)-或-C(O)NR10，其中R10是C1-8烷基如甲基、乙基、丙基或丁基或H。在另一项实施方案中，Y是价键、亚甲基、-C(O)O-或C(O)NH。在另一项实施方案中，Y是价键。
在另一项实施方案中，本发明包括式(Ia)化合物或其可药用盐：
Figure BDA0000049063960000091
其中：
R11是C1-8烷基、C2-8烯基、C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基、3-14元环杂烷基、C1-8烷氧基、卤素、NR13R14、C(O)OR13、C(O)NR13R14、C1-8卤代烷基、甲酰基、烷酯基、C1-8烷基OH、C(O)R13、SO2R13、C(O)NHC1-8烷基R13、NR13R14、SO2NR13R14、OCF3、NHC(O)R13、CH2OC(O)NR13R14、CH2NR13R14、NHC(O)OR13、NHC(O)NR13R14、CH2NHSO2R13、CH2NHC(O)OR13、OC(O)R13或NHC(O)R13，其可以是取代或未取代的；
R12是H、C1-8烷基、C6-14芳基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基、卤素、NH2、CN、OCF3、OH、C(O)NR13R14、C(O)R13、NR13R14、NHC(O)R13、SO2R13、SO2NR13R14；
R13和R14独立地是H、C1-8烷基、C2-8烯基、C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基、3-14元环杂烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷基OH、C1-8烷氧基，或者一个原子上的R13和R14可以形成含杂原子的环；且
其中R11、R13和R14可以是未取代的或者被一个或多个C1-8烷基、C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基、3-14元环杂烷基、C1-8烷基OH、OH、氧代基、C1-8卤代烷基、羧基C1-8烷基或SO2C1-8烷基、卤素、-OCH3、-OCF3、-OH、-NH2取代。
在另一项实施方案中，本发明包括选自如下的化合物：
2-[(R)-4-(4，5-二甲基-6-苯氧基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
2-{(R)-4-[6-(羟基-苯基-甲基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
2-[(R)-4-(4，5-二甲基-6-吡啶-4-基甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
2-[(R)-4-(4，5-二甲基-6-吡啶-2-基甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
2-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
2-[4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2’]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
2-[(S)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
2-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-乙基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
2-[4-(4-苄基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]哒嗪-1-基)-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
2-[(R)-4-(4-苄基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]哒嗪-1-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
1-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-乙酮；和
2-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-1，2-二醇。
本发明的一个方面提供了使用化合物来抑制Smo-依赖型通路活化的方法。本发明的另一个方面提供了使用化合物来抑制Hedgehog(配体)-非依赖型通路活化的方法。在一些实施方案中，本发明的方法可用于抵抗Hedgehog通路的不希望的活化(例如由Hedgehog获功能、Ptc失功能或Smoothened获功能突变引起)的表型作用。例如，本发明的方法可涉及将细胞(体外或体内)与足以拮抗Smoothened-依赖型和/或Hedgehog非依赖型活化通路的量的Smo拮抗剂、例如本发明的化合物(例如式I化合物)或其它小分子接触。
本发明的化合物和方法可用于体外和/或体内调节细胞增殖和/或分化(例如在由干细胞形成组织的过程中)，或者用于阻止过度增殖性细胞的生长。在另一项特定的实施方案中，将细胞与本发明的化合物(例如式I化合物)接触或将所述化合物引入细胞内引起了细胞增殖的抑制、肿瘤细胞生长和/或生存的抑制和/或肿瘤发生的抑制。因此，另一项特定的实施方案提供了通过在肿瘤细胞内应用本发明的化合物(例如式I化合物)来抑制和/或拮抗Hh通路的方法。
本发明的方法可以应用配制为包含可药用赋形剂或载体的药物制剂的本发明的化合物(例如式I化合物)，所述制剂可以施用于患者以治疗涉及不希望的细胞增殖的病症如癌症和/或肿瘤(例如成神经管细胞瘤、基底细胞癌等)和非恶性过度增殖性障碍。
本发明的一项实施方案提供了用于在体外或体内抑制细胞内的Smo蛋白的合成、表达、产生、稳定化、磷酸化、细胞内再定位和/或活性的化合物和方法，该方法包括将所述细胞与本发明的化合物(例如式I化合物)接触或将所述化合物引入所述细胞内。
本发明的另一个方面提供了在特征为Smo基因或基因产物(例如Smo蛋白)的存在和/或表达的哺乳动物中诊断、预防和/或治疗细胞虚弱(debilitations)、紊乱和/或功能障碍；增生性、过度增殖性和/或癌性疾病状态；和/或肿瘤细胞转移的化合物和方法，其包括式(I)化合物以及将其以治疗有效量施用于哺乳动物。
发明详述
在另一项实施方案中，本发明包括包含治疗有效量的式I或Ia化合物的药物组合物。在另一项实施方案中，本发明包括治疗患有Hedgehog通路相关性病状的哺乳动物的方法，该方法包括给需要治疗的所述哺乳动物施用治疗有效量的式I或Ia化合物。
在本说明书中，术语“治疗”包括预防性或阻止性治疗以及治愈性或疾病抑制性治疗，包括对有风险罹患本发明的障碍(例如Hedgehog相关性障碍(例如癌症))的患者以及患病患者的治疗。该术语还包括延迟疾病进展的治疗。
对于“抑制和/或逆转”例如Hedgehog相关性障碍(例如癌症)，申请人是指消除所述的Hedgehog相关性障碍(例如糖尿病)或者使所述病症的严重性低于治疗前或未治疗的情况。
本文所用的“治愈”指通过治疗使患者的Hedgehog相关性障碍(例如癌症)或其正在发生的发作减退。
术语“预防”或“阻止”指阻抗代谢性障碍如糖尿病的发作或复发。
“治疗”或“处置”指疗法、阻止和预防，尤其指就患者而言为了预防(阻止)或者在患者受侵扰的情况下治愈或减轻病况、疾病或病症或事件的程度或其发生可能性而施用药物或者实施药物操作。
“诊断”指诊断、预测、监测、表征、筛选患者(包括临床试验的参与者)以及识别有风险患特定障碍或临床事件或者患有它们的患者或者最可能对特定治疗性处置有响应的那些，或者评价或监测患者对特定治疗性处置的响应。
“受治疗者”或“患者”指需要对病症、障碍或疾病进行治疗的哺乳动物、优选人。
本文所用的“本发明的化合物”包括但不限于式I化合物(例如包括其所有变体在内的式(I)化合物)。本发明的化合物包括本文具体列出的化合物、包括在本申请的实施例中列出的那些化合物。
本文所用的“延迟......进展”指将本发明的化合物(例如式I化合物)施用于处于Hedgehog相关性障碍(例如癌症)的发病前阶段或早期的患者以防止疾病进一步发展或者与未施用该活性化合物的疾病的发展相比减缓疾病发展。
“Hedgehog获功能”指Ptc基因、Hedgehog基因或Smoothened基因的异常改变或突变或者所述基因的表达水平的改变(例如减少)，其产生了类似于将细胞与Hedgehog蛋白接触、例如Hedgehog通路异常激活的表型。获功能可以包括Ptc基因产物调节Gli基因如Gli1、Gli2和Gli3的表达水平的能力损失或者调节Gli蛋白如Gli1、Gli2和Gli3的加工、稳定、定位或活性的能力的损失。术语“Hedgehog获功能”在本文中还用于指由于Hedgehog信号转导通路的任意位置的改变(包括但不限于Hedgehog自身的改变或突变)而发生的任何类似的细胞表型(例如表现出过度增殖)。例如，由于Hedgehog信号传导通路的活化而具有异常高的增殖速率的肿瘤细胞将具有“Hedgehog获功能”表型，即使Hedgehog在该细胞内没有发生突变。
“Patched失功能”指Ptc基因的异常改变或突变或者该基因表达水平的降低，其产生了类似于将细胞与Hedgehog蛋白接触、例如Hedgehog通路异常激活的表型。失功能可以包括Ptc基因产物调节Gli基因和蛋白如Gli1、Gli2和Gli3的表达水平、加工、稳定、定位、调控或活性的能力的损失。
“Gli获功能”指Gli基因的异常改变或突变或者该基因表达水平的增加，其产生了类似于将细胞与Hedgehog蛋白接触、例如Hedgehog通路异常激活的表型。
“Smoothened获功能”指Smo基因的异常改变或突变或者该基因表达水平的增加，其产生了类似于将细胞与Hedgehog蛋白接触、例如Hedgehog通路异常激活的表型。
本文所用的“有机小分子”是分子量低于3千道尔顿、优选低于1.5千道尔顿的有机化合物(或与无机化合物(例如金属)复合的有机化合物)。
本文所用的“报道”基因可与术语“标记基因”互换使用，它是易于检测的和/或编码易于检测的基因产物如荧光素酶的核酸。
转录和翻译控制序列是为编码序列在宿主细胞中的表达而准备的DNA调节序列如启动子、增强子、终止子等。在真核细胞中，多腺苷酸化信号是控制序列。
“启动子序列”是能够在细胞内结合RNA聚合酶和启动下游(3′方向)编码序列的转录的DNA调节域。为了定义本发明，启动子序列通过转录起始位点在其3′末端界定并延伸上游(5′方向)以包括在可检测的高于背景的水平上引发转录所需的最少数目的碱基或元件。在启动子序列内，将发现转录起始位点(例如通过用S1核酸酶绘图来方便地定义)以及负责结合RNA聚合酶的蛋白质结合结构域(共有序列)。
当RNA聚合酶将编码序列转录成mRNA(其然后进行反式-RNA剪接并翻译成由编码序列编码的蛋白质)时，编码序列处于细胞内的转录和翻译控制序列的“控制之下”。
短语“可药用”指当施用于人时在生理学上是可耐受的并且通常不会产生过敏反应或类似的不良反应如胃扰乱(gastric upset)、头晕等的分子实体和组合物。本文所用的术语“可药用”优选指被联邦或州政府的管理机构所批准或者在美国药典或其它通常认可的药典中所列出的用于动物、更特别是人的物质。
术语“载体”指与化合物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。该药用载体可以是无菌液体如水和油，包括石油、动物油、植物油或合成来源的油，例如花生油、豆油、矿物油、芝麻油等。水或水性溶液盐水溶液和葡萄糖水溶液以及甘油溶液优选用作载体、尤其是用于注射溶液的载体。适宜的药用载体在E.W.Martin的《雷氏药学科学》(“Remington′s Pharmaceutical Sciences”)中有记载。
短语“治疗有效量”在本文中用于指足以使宿主在活动、功能和响应方面的临床上显著的缺陷减少至少约15％、优选至少50％、更优选至少90％、最优选阻止所述缺陷的量。或者，治疗有效量足以引起宿主的临床上显著的病症/症状改善。
“活性剂”指可用于制备药物组合物和诊断组合物的所有物质，或者可以是可以根据本发明独立地用于所述目的的化合物、核酸、多肽、片段、同工型、变体或其它物质。
本文所用的“类似物”指这样的小有机化合物、核苷酸、蛋白质或多肽：其具有与所述化合物、核苷酸、蛋白质或多肽或者与具有本发明的预期活性和治疗作用(例如抑制肿瘤生长)的化合物相似或相同的活性或功能，但是不一定包含与优选实施方案的序列或结构相似或相同的序列或结构。
“衍生物”指化合物、包含已经通过引入氨基酸序列取代、缺失或增加而改变的母体蛋白质或多肽的氨基酸序列的蛋白质或多肽或者已经通过引入核苷酸取代或缺失、增加或突变而改变的核酸或核苷酸。衍生的核酸、核苷酸、蛋白质或多肽具有与母体多肽相似或相同的功能。
“抑制剂”或“拮抗剂”指采用关于Hh通路功能的体外和体内分析所识别的抑制性分子，例如Smo拮抗剂。具体而言，抑制剂和拮抗剂指减少经由Hh通路而发生的信号的化合物或活性剂。抑制剂可以是减少、阻断或防止经由该通路的信号的化合物。
本文所用的“Hedgehog相关性障碍”包括与Hedgehog通路的破坏或异常有关的障碍以及与正常、但是是涉及Hedgehog通路活化的不希望的生长状态有关的障碍。“Hedgehog相关性障碍”包括但不限于肿瘤形成、癌症、瘤形成、恶性过度增殖性障碍和非恶性过度增殖性障碍。“Hedgehog相关性障碍”还包括良性前列腺增生、银屑病、湿性黄斑变性、骨硬化病和不希望的毛发生长。
本文所用的术语“癌症”包括哺乳动物实体瘤以及血液学恶性病。“哺乳动物实体瘤”包括头颈、肺、间皮瘤、纵隔、食管、胃、胰脏、肝胆系统、小肠、结肠、结肠直肠、直肠、肛门、肾、尿道、膀胱、前列腺、尿道、阴茎、睾丸、妇科器官、卵巢、乳房、内分泌系统、皮肤、中枢神经系统、包括脑的癌症；软组织和骨的肉瘤；以及皮肤和眼内来源的黑素瘤。术语“血液学恶性病”包括儿童白血病和淋巴瘤、霍奇金病、淋巴细胞和皮肤来源的淋巴瘤、急性和慢性白血病、浆细胞瘤以及与AIDS有关的癌症。此外，可以治疗处于任何发展阶段的癌症，例如初期、转移性和复发的癌症。有关各种类型癌症的信息可参见例如美国癌症协会(American Cancer Society)或例如Wilson等人(1991)Harrison’s Principles of Internal Medicine，第12版，McGraw-Hill，Inc.。人用和兽用都包括在内。
尤其可通过本发明的化合物和方法治疗的癌症包括但不限于神经胶质瘤、成神经管细胞瘤、原始神经外胚层瘤(PNETS)、基底细胞癌(BCC)、小细胞肺癌、大细胞肺癌、胃肠道肿瘤、横纹肌肉瘤、软组织肉瘤、胰脏肿瘤、膀胱肿瘤和前列腺肿瘤。
本文所用的术语“恶性过度增殖性障碍”包括但不限于癌症、神经元增殖性障碍、骨髓增殖性疾病和白血病。
本文所用的术语“非恶性过度增殖性障碍”包括但不限于非恶性和非瘤性的增殖性障碍，例如血管内平滑肌增生、皮肤瘢痕和肺纤维化。
本文所用的“卤代”或“卤素”指氟、氯、溴和碘。
本文所用的“烷基”指直链或支链饱和烃基。在一些实施方案中，烷基可以具有1-10个碳原子(例如1-8个碳原子)。烷基的实例包括甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如正丙基和异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基)、戊基(例如正戊基、异戊基、新戊基)等。低级烷基典型地具有至多4个碳原子。低级烷基的实例包括甲基、乙基、丙基(例如正丙基和异丙基)和丁基(例如正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基)。
本文所用的“烯基”指具有一条或多条碳-碳双键的直链或支链烷基。在一些实施方案中，烯基可以具有2-10个碳原子(例如2-8碳原子)。烯基的实例包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、丁二烯基、戊二烯基、己二烯基等。所述的一条或多条碳-碳双键可以在内部(例如在2-丁烯中)或末端(例如在1-丁烯中)。
本文所用的“炔基”指具有一条或多条碳-碳三键的直链或支链烷基。在一些实施方案中，炔基可以具有2-10个碳原子(例如2-8碳原子)。炔基的实例包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔等。所述的一条或多条碳-碳三键可以在内部(例如在2-丁炔中)或末端(例如在1-丁炔中)。
本文所用的“烷氧基”指-O-烷基。烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如正丙氧基和异丙氧基)、叔丁氧基等。本文所用的“烷硫基”指-S-烷基。烷硫基的实例包括甲硫基、乙硫基、丙硫基(例如正丙硫基和异丙硫基)、叔丁硫基等。
术语“烷酯基”指烷氧羰基，其中通过羰基基(C(O))与主链连接。实例包括但不限于甲氧羰基、乙氧羰基等。
本文所用的“氧代基”指双键键合的氧(即＝O)。还应理解，术语C(O)指-C＝O基团，无论它是酮、醛还是酸或酸衍生物。类似地，S(O)指-S＝O基团。
本文所用的“卤代烷基”指具有一个或多个卤素取代基的烷基。在一些实施方案中，卤代烷基可以具有1-10个碳原子(例如1-8个碳原子)。卤代烷基的实例包括CF3、C2F5、CHF2、CH2F、CCl3、CHCl2、CH2Cl、C2Cl5等。全卤代烷基、即其中所有氢原子被卤原子替代的烷基(例如CF3和C2F5)包括在“卤代烷基”的定义内。例如，C1-10卤代烷基可以具有式-CiH2i+1-jXj，其中X是F、Cl、Br或I，i是1-10的整数，且j是0-21的整数，条件是j小于或等于2i+1。
当本文所用的烷基后面存在官能团时(例如烷基OH)，认可它指具有一个或多个官能团取代基的烷基，所述官能团取代基可以位于烷基链的任意位置。C1-8烷基OH的实例包括但不限于CH2OH、CH2CH2OH、C(CH3)(CH3)OH、C(CH3)(CH2OH)OH等。
本文所用的“环烷基”指非芳族碳环基，包括环状烷基、烯基和炔基。环烷基可以是单环(例如环己基)或多环(例如含有稠合、桥连和/或螺环系)，其中碳原子位于环系内侧或外侧。环烷基作为整体可以具有3-14个环原子(例如就单环环烷基而言具有3-8个碳原子，就多环环烷基而言具有7-14个碳原子)。环烷基的任意适宜的环位置可以与所定义的化学结构共价连接。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚三烯基、降冰片基、降蒎烷基(norpinyl)、降蒈烷基(norcaryl)、金刚烷基和螺[4.5]癸基及其同系物和异构体等。
本文所用的“杂原子”指除碳或氢以外的任意元素的原子，包括例如氮、氧、硫、磷和硒。
本文所用的“环杂烷基”指含有至少一个(例如1、2、3、4或5个)选自O、N和S的环杂原子且任选含有一条或多条(例如1、2或3条)双键或三键的非芳族环烷基。环杂烷基作为整体可以具有3-14个环原子并且含有1-5个环杂原子(例如就单环环杂烷基而言具有3-6个环原子，就多环环杂烷基而言具有7-14个环原子)。环杂烷基可以在产生稳定结构的任意杂原子或碳原子上与所定义的化学结构共价连接。环杂烷基环上的一个或多个N或S原子可以被氧化(例如吗啉N-氧化物、硫吗啉S-氧化物、硫吗啉S，S-二氧化物)。环杂烷基还可以含有一个或多个氧代基团，例如邻苯二酰亚氨基、哌啶酮基、
Figure BDA0000049063960000181
唑烷酮基、2，4(1H，3H)-二氧代-嘧啶基、吡啶-2(1H)-酮基等。环杂烷基的实例还包括吗啉基、硫吗啉基、吡喃基、咪唑烷基、咪唑啉基、
Figure BDA0000049063960000182
唑烷基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡咯烷基、吡咯啉基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、哌啶基、哌嗪基等。
本文所用的“芳基”指芳族单环烃环系或者其中环系中的至少一个环是芳族烃环且环系中的任意其它环仅包括烃的多环环系。在一些实施方案中，单环芳基可以具有6-14个碳原子，多环芳基可以具有8-14个碳原子。芳基可以在产生稳定结构的任意碳原子上与所定义的化学结构共价连接。在一些实施方案中，芳基可以仅具有芳族碳环，例如苯基、1-萘基、2-萘基、蒽基、菲基等。在其它实施方案中，芳基可以是其中至少一个芳族碳环与一个或多个环烷基或环杂烷基环稠合(即与之共有键)的多环环系。该芳基的实例还包括环戊烷的苯并衍生物(即茚满基，其为5，6-双环环烷基/芳族环系)、环己烷的苯并衍生物(即四氢萘基，其为6，6-双环环烷基/芳族环系)、咪唑啉的苯并衍生物(即苯并咪唑啉基，其为5，6-双环环杂烷基/芳族环系)和吡喃的苯并衍生物(即色烯基，其为6，6-双环环杂烷基/芳族环系)。芳基的其它实例包括苯并二
Figure BDA0000049063960000183
烷基、苯并二氧杂环戊烯基、色满基、二氢吲哚基等。
本文所用的“杂芳基”指含有至少一个选自O、N和S的环杂原子的芳族单环环系或者其中环系中至少一个环是芳族的且含有至少一个环杂原子的多环环系。杂芳基作为整体可以具有5-14个环原子和包含1-5个环杂原子。在一些实施方案中，杂芳基可以包括与一个或多个芳族碳环、非芳族碳环或非芳族环杂烷基环稠合的单环杂芳基环。杂芳基可以在产生稳定结构的任意杂原子或碳原子上与所定义的化学结构共价连接。通常来说，杂芳基环不含有O-O、S-S或S-O键。但是，杂芳基中的一个或多个N或S原子可以被氧化(例如吡啶N-氧化物、噻吩S-氧化物、噻吩S，S-二氧化物)。该杂芳基环的实例包括吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三唑基、四唑基、吡唑基、咪唑基、异噻唑基、噻唑基、噻二唑基、异
Figure BDA0000049063960000191
唑基、
Figure BDA0000049063960000192
唑基、
Figure BDA0000049063960000193
二唑基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、喹啉基、2-甲基喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、苯并三唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并异
Figure BDA0000049063960000194
唑基、苯并
Figure BDA0000049063960000195
二唑基、苯并
Figure BDA0000049063960000196
唑基、噌啉基、1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲嗪基、异苯并呋喃基、萘啶基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、
Figure BDA0000049063960000197
唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、咪唑并吡啶基、呋喃并吡啶基、噻吩并吡啶基、吡啶并嘧啶基、吡啶并吡嗪基、吡啶并哒嗪基、噻吩并噻唑基、噻吩并
Figure BDA0000049063960000198
唑基、噻吩并咪唑基等。杂芳基的其它实例包括4，5，6，7-四氢吲哚基、四氢喹啉基、苯并噻吩并吡啶基、苯并呋喃并吡啶基等。
当单独或组合使用时，本文所定义的术语“低级烷基”指含有1-6个碳原子的烷基。烷基可以是支链或直链的并且如上文所定义。
术语“低级烯基”指含有2-6个碳原子的烯基。烯基是含有至少一条碳-碳双键的烃基。如本文所定义，它可以是未取代的或者被本文所述的取代基所取代。碳-碳双键可以在烯基的任意两个碳原子之间。优选它含有1或2条碳-碳双键，更优选含有1条碳-碳双键。烯基可以是直链或支链的。其实例包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、2-甲基-1-丙烯基、1，3-丁二烯基等。
本文所用的术语“低级炔基”指含有2-6个碳原子的炔基。炔基是含有至少一条碳-碳三键的烃基。碳-碳三键可以在炔基的任意两个碳原子之间。在一项实施方案中，炔基含有1或2条碳-碳三键，更优选含有1条碳-碳三键。炔基可以是直链或支链的。其实例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基等。
本发明包括所有可药用的同位素标记的本发明的化合物，即式(I)化合物，其中一个或多个原子被具有相同原子数、但原子质量或质量数不同于自然界常发现的原子质量或质量数的原子所代替。
适于包含在本发明的化合物中的同位素的实例包括：氢的同位素，例如2H和3H；碳的同位素，例如11C、13C和14C；氯的同位素，例如36Cl；氟的同位素，例如18F；碘的同位素，例如123I和125I；氮的同位素，例如13N和15N；氧的同位素，例如I5O、17O和18O；磷的同位素，例如32P；和硫的同位素，例如35S。
一些同位素标记的式(I)化合物、例如掺入了放射性同位素的那些可用于药物和/或底物组织分布研究。考虑到其易于掺入和容易检测，放射性同位素氚(即3H)和碳-14(即14C)尤其可用于该目的。
用较重同位素如氘(即2H)取代由于较高的代谢稳定性可以提供一些治疗益处，例如体内半衰期增加或剂量需求降低，因此在一些情况中可以是优选的。
用发射正电子的同位素如11C、18F、15O和13N取代可用于正电子发射断层扫描(PET)研究，以检验底物受体占有率。
同位素标记的式(I)化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与所附实施例和制备例中所述方法类似的方法、采用适当的同位素标记的试剂代替以前使用的未标记的试剂来制备。
任意酸性的本发明的化合物的可药用盐是与碱形成的盐，即阳离子盐，例如碱金属和碱土金属盐，例如钠、锂、钾、钙、镁和铵盐，例如铵、三甲铵、二乙铵和三(羟基甲基)甲铵盐。
类似地，酸加成盐如矿物酸、有机羧酸和有机磺酸如盐酸、甲磺酸、马来酸的酸加成盐能够提供碱性基团如氨基或吡啶基，构成结构的一部分。
本发明涉及如下发现：通过本发明的化合物能够调控受Hh和/或Smo调节的信号转导通路。
在一项实施方案中，本发明的化合物和方法包含用于抑制Smo-依赖型通路活化的式(I)化合物。本发明的另一方面包括用于抑制Hedgehog(配体)-非依赖型通路活化的化合物和方法。在一些实施方案中，本发明的化合物和方法可用于抵抗Hedgehog通路的不希望的活化的表型作用，例如产生自Hedgehog获功能、Ptc失功能或Smoothened获功能突变的那些。例如，本发明的化合物和方法可涉及将细胞(体外或体内)与足以拮抗Smoothened-依赖型和/或Hedgehog非依赖型活化通路的量的Smo拮抗剂如式(I)化合物接触。
在一项实施方案中，本发明的化合物(例如式I化合物)通过将Smo蛋白的三维结构锁定在非活性构象或防止Smo变成活性构象来抑制Hh信号。在另一项实施方案中，本发明的化合物(例如式I化合物)通过防止Smo的内源性激活配体与Smo结合或使Smo活化(即通过与内源性激动剂的负协同起作用)来抑制Hh信号。在另一项实施方案中，本发明的化合物(例如式I化合物)通过增强Smo的内源性灭活配体与Smo结合或使Smo失活(即通过与内源性拮抗剂的正协同起作用)来抑制Hh信号。
在另一项实施方案中，本发明的化合物(例如式I化合物)通过防止Smo定位于质膜来抑制Hh信号。在另一项实施方案中，本发明的化合物(例如式I化合物)在存在或不存在Hh配体的情况下通过防止从Ptch发信号至Smo来抑制Hh信号。在另一项实施方案中，本发明的化合物(例如式I化合物)通过防止Smo的稳定化来抑制Hh信号。在另一项实施方案中，本发明的化合物(例如式I化合物)通过防止Smo在活化位点上的磷酸化来抑制Hh信号。在另一项实施方案中，本发明的化合物(例如式I化合物)通过增强Smo在抑制位点上的磷酸化来抑制Hh信号。
在另一项实施方案中，本发明的化合物(例如式I化合物)通过防止Smo活化下游靶点、例如转录因子Gli来抑制Hh信号。在另一项实施方案中，本发明的化合物(例如式I化合物)通过实行Smo的灭活、螯合和/或降解来抑制Hh信号。
在另一项实施方案中，本发明的方法可用于体外和/或体内调节细胞增殖和/或分化(例如在由干细胞形成组织的过程中)，或者用于阻止过度增殖性细胞的生长。在另一项特定的实施方案中，将细胞与本发明的化合物(例如式I化合物)接触或将所述化合物引入细胞内引起了细胞增殖的抑制、癌/肿瘤细胞生长和/或生存的抑制和/或肿瘤发生的抑制。因此，另一项特定的实施方案提供了通过在肿瘤细胞内应用本发明的化合物(例如式I化合物)来抑制和/或拮抗Hh通路的方法。
在另一项实施方案中，本发明的方法可以应用配制为包含可药用赋形剂或载体的药物制剂的本发明的化合物(例如式I化合物)，所述制剂可以施用于患者以治疗涉及不希望的细胞增殖的病症如癌症和/或肿瘤(例如成神经管细胞瘤、基底细胞癌等)和非恶性过度增殖性障碍。
本发明的一项实施方案提供了用于在体外或体内抑制细胞内的Smo蛋白的合成、表达、产生和/或活性的方法，该方法包括将所述细胞与本发明的化合物(例如式I化合物)接触或将所述化合物引入所述细胞内。
本发明的另一项实施方案提供了在特征为Smo基因或基因产物(例如Smo蛋白)的存在和/或表达的哺乳动物中诊断、预防和/或治疗细胞虚弱、紊乱和/或功能障碍；增生性、过度增殖性和/或癌性疾病状态；和/或肿瘤细胞转移的方法，该方法包括给哺乳动物施用治疗有效量的抑制或拮抗合成和/或表达和/或活性的活性剂本发明的化合物(例如式I化合物)。
因此，特别认定：与Hh、Ptc或Smoothened信号转导活性相干扰的式I化合物将同样能够抑制正常细胞和/或具有Patched失功能表型、Hedgehog获功能表型、Smoothened获功能表型或Gli获功能表型的细胞中的增殖(或其它生物学结果)。因此认定：在一些实施方案中，这些化合物可用于抑制正常细胞(例如，不具有激活Hedgehog通路的基因突变的细胞)中的Hedgehog活性。在优选的实施方案中，所述化合物能够抑制Hedgehog蛋白的生物学活性中的至少一些，优选特别是在靶细胞中。
因此，本发明的方法包括激动Hedgehog信号的Ptc抑制(例如通过抑制Smoothened或该信号通路的下游组件的活化)的式I化合物在调节各种细胞、组织和器官的修复和/或功能性能中的用途，所述细胞、组织和器官包括正常的细胞、组织和器官以及具有Ptc失功能、Hedgehog获功能、Smoothened获功能或Gli获功能表型的那些。例如，本发明的方法具有涵盖调节神经组织、骨和软骨的形成和修复、调节精子发生、调节良性前列腺增生、调节湿性黄斑变性、银屑病中的血管形成、调节平滑肌、调节肺、肝和源自原肠的其它器官、调节造血功能、调节皮肤和毛发生长等的治疗学和美容学应用。而且，本发明的方法还可在培养物所提供的细胞上(体外)或者在完整动物的细胞上(体内)进行。
在一些实施方案中，式I化合物可以通过与Smoothened或其下游蛋白结合来抑制Hedgehog通路的活化。
在另一项实施方案中，本发明提供了药物制剂的应用，所述药物制剂包含作为活性成分的Hedgehog信号调节剂如式I化合物、Smoothened拮抗剂如本文所述的那些，它们以足以在体内抑制Ptc失功能、Hedgehog获功能、Smoothened获功能或Gli获功能的增殖或其它生物学结果的量进行配制。
通过施用本发明的化合物(例如式I化合物)对受治疗者进行的治疗对于人和动物受治疗者都是有效的。本发明所适用的动物受治疗者包括作为宠物或为商业目的而饲养的驯养动物和家畜。其实例有狗、猫、牛、马、绵羊、猪、山羊和美洲驼。
本发明还提供了用于抑制Hedgehog信号传导通路活化的方法和化合物，例如抑制由Hedgehog信号传导通路的生理学活化所引起的正常、但是是不希望的生长状态、例如良性前列腺增生或湿性黄斑变性中的血管形成，其包括将细胞与足以拮抗Smoothened活性或拮抗Gli活性的量的式I化合物接触，例如为了逆转或控制正常的生长状态。
本发明提供了用于抑制Hedgehog信号传导通路活化的方法和化合物，例如抑制由表型如Ptc失功能、Hedgehog获功能、Smoothened获功能或Gli获功能引起的异常生长状态，其包括将细胞与足以激动Ptc活性、拮抗正常的Hedgehog活性、拮抗Smoothened活性或拮抗Gli活性的量的式I化合物接触，例如为了逆转或控制异常的生长状态。
信号分子的Hedgehog家族的成员在脊椎动物的发育过程中介导多种重要的短-和长-范围图式形成过程。图式形成是胚细胞形成分化组织的有序立体排列的活动。高等生物体的身体复杂性在胚胎发育过程中通过细胞内谱系和细胞外信号的相互作用而产生。在由最早的身体计划建立至器官系统的图式形成至组织分化期间多种细胞类型产生的脊椎动物发育中，诱导相互作用对于胚胎图式形成而言是必要的。发育细胞相互作用的作用是不同的：应答细胞通过诱导与应答细胞的未诱导和诱导状态均不同的细胞由一种细胞分化途径转向另一种细胞分化途径(诱导)。有时，细胞诱导与之相邻的细胞像它们自己一样分化(同源诱导)；在另一种情况下，细胞抑制与之相邻的细胞像它们自己那样分化。早期发育中的细胞相互作用可以是连续的，以便两种细胞类型之间的最初诱导导致多样性的逐渐放大。而且，诱导相互作用不仅发生在胚胎中，而且也发生在成人细胞中，并且可以起到建立和维持形态发生图式以及诱导分化的作用。
Hedgehog基因的脊椎动物家族包括存在于哺乳动物中的三个成员，称为Desert(Dhh)、Sonic(Shh)和Indian(Ihh)Hedgehogs，它们均编码分泌性蛋白。这些各种各样的Hedgehog蛋白由信号肽、高度保守的N-末端区和更趋异的C-末端结构域组成。生物化学研究已经表明：Hh前体蛋白的自我蛋白酶解通过内部的硫代酸酯中间体进行，该中间体随后在亲核取代中裂解。亲核试剂是小的亲脂性分子是可能的，其共价结合到N-肽的C-末端，将其束缚到细胞表面。生物学意义是极深的。作为束缚的结果，在产生Hedgehog的细胞的表面上生成了高局部浓度的N-末端Hedgehog肽。正是该N-末端肽对于短-和长-范围Hedgehog信号活动而言既是必要的又是足够的。
Smoothened(Smo)编码充当Hedgehog(Hh)信号的转导物的1024个氨基酸的跨膜蛋白。Smo蛋白具有7个疏水性跨膜结构域、一个细胞外氨基末端区和一个细胞内羧基末端区。Smo与G蛋白-偶联受体具有某些相似性，并且与蛇形蛋白(serpentine proteins)的Frizzled(Fz)家族是最同源的(Alcedo等人(1996)Cell 86：221)。
非活性Hedgehog信号传导通路是跨膜蛋白受体Patched(Ptc)抑制七次跨膜蛋白Smoothened(Smo)的活性的地方。转录因子Gli(为Hh信号的下游组件)被阻止经由与胞质蛋白、包括Fused和Suppressor of Fused(Sufu)的相互作用进入核内。结果，Hedgehog靶基因的转录活化被抑制。通过将三种哺乳动物配体(Dhh、Shh或Ihh)中的任一种与Ptc结合而引起通路活化。配体结合导致了Smo抑制的逆转，由此激活了导致转录因子Gli的活性形式易位至核的级联。核Gli激活了靶基因表达，包括Ptc和Gli自身。
Hh的配体结合改变了Smo和Ptc的相互作用，逆转了Smo的抑制，从而使Smo从细胞内的内部结构移至质膜。Smo定位至质膜以Hh-非依赖型的方式触发了Hh通路靶基因的活化。(Zhu等人(2003)Genes Dev.17(10)：1240)。Smo所激活的级联导致转录因子Gli的活性形式易位至核。经由易位的核Gli的Smo活化激活了Hh通路靶基因表达，包括Wnts、TGFβ以及Ptc和Gli自身的那些。
Hedgehog信号的水平增加足以引起癌症形成，并且对于肿瘤生存是必需的。这些癌症包括但不限于前列腺癌(“Hedgehog signailing in prostate regeneration，neoplasia and metastasis”，Karhadkar SS，Bova GS，Abdallah N，Dhara S，Gardner D，Maitra A，Isaacs JT，Berman DM，Beachy PA.，Nature.2004年10月7日；431(7009)：707-12；“Inhibition of prostate cancer proliferation by interference with SONIC HEDGEHOG-GLI1 signaling”，Sanchez P，Hernandez AM，Stecca B，Kahler AJ，DeGueme AM，Barrett A，Beyna M，Datta MW，Datta S，Ruiz i Altaba A.,Proc Natl Acad Sci USA.2004年8月24日；101(34)：12561-6)，(“Cytotoxic effects induced by a combination of cyclopamine andgefitinib，the selective hedgehog and epidermal growth factor receptor signaling inhibitors，in prostate cancer cells，”Mimeault M，Moore E，Moniaux N等人(2006)，International Journal of Cancer；118(4)：1022-31)、乳癌(“Hedgehog signaling pathway is new therapeutic target for patients with breast cancer”，Kubo M，Nakamura M，Tasaki A，Yamanaka N，Nakashima H，Nomura M，Kuroki S，Katano M.，Cancer Res.2004年9月1日；64(17)：6071-4)，(“Hedgehog signaling and Bmi-1regulate self-renewalof normal and malignant human mammary stem cells，”Liu S，Dontu G，Mantle ID等人(2006)Cancer Res；66(12)：6063-71)，(“Constitutive activation of smoothened(SMO)in mammary glands of transgenic mice leads to increased proliferation，altered differentiation and ductal dysplasia，”Moraes RC，Zhang XM，Harrington N等人(2007)，Development；134(6)：1231-42)、成神经管细胞瘤(“Medulloblastoma growth inhibition by hedgehog pathway blockade”，Berman DM，Karhadkar SS，Hallahan AR，Pritchard JI，Eberhart CG，Watkins DN，Chen JK，Cooper MK，Taipale J，Olson JM，Beachy PA.，Science.2002年8月30日；297(5586)：1559-61)、非黑素瘤皮肤癌(即鳞状细胞癌(SCC)和基底细胞癌(BCC))(“Identification of a small molecule inhibitor of the hedgehog signaling pathway：effects on basal cell carcinoma-like lesions”，Williams JA，Guicherit OM，Zaharian BI，Xu Y，Chai L，Wichterle H，Kon C，Gatchalian C，Porter JA，Rubin LL，Wang FY.，Proc Natl Acad Sci USA.2003年4月15日；100(8)：4616-21；“Activating Smoothened mutations in sporadic basal-cell carcinoma”，Xie J，Murone M，Luoh SM，Ryan A，Gu Q，Zhang C，Bonifas JM，Lam CW，Hynes M，Goddard A，Rosenthal A，Epstein EH Jr，de Sauvage FJ.，Nature.1998年1月1日；391(6662)：90-2)、胰癌、食管癌、胃癌和胆癌(“Hedgehog is an early and late mediator of pancreatic cancer tumorigenesis”，Thayer SP，di Magliano MP，Heiser PW，Nielsen CM，Roberts DJ，Lauwers GY，Qi YP，Gysin S，Fernandez-del Castillo C，Yajnik V，Antoniu B，McMahon M，Warshaw AL，Hebrok M.，Nature.2003年10月23日；425(6960)：851-6；“Widespread requirement for Hedgehog ligand stimulation in growth of digestive tract tumours”，Berman DM，Karhadkar SS，Maitra A，Montes De Oca R，Gerstenblith MR，Briggs K，Parker AR，Shimada Y，Eshleman JR，Watkins DN，Beachy PA.，Nature.2003年10月23日；425(6960)：846-51)，(“Nuclear factor-kappa B contributes to hedgehog signaling pathway activation through sonic hedgehog induction in pancreatic cancer，”Nakashima H，Nakamura M，Yamaguchi H等人(2006)，Cancer Research；66(14)：7041-9)，(“Blockade of hedgehog signaling inhibits pancreatic cancer invasion and metastases：Anew paradigm for combination therapy in solid cancers，”Feldmann G，Dhara S，Fendrich V等人(2007)Cancer Research；67(5)：2187-96)，(“Oncogenic KRAS suppresses Gli1 degradation and activates Hedgehog signaling pathway in pancreatic cancer cells，”Ji Z，Mei FC，Xie J等人(2007)，J Biol Chem；282(19)：14048-55)和小细胞肺癌(“Hedgehog signalling within airway epithelial progenitors and in small-cell lung cancer”，Watkins DN，Berman DM，Burkholder SG，Wang B，Beachy PA，Baylin SB.，Nature.2003年3月20日；422(6929)：313-7)，(“Hedgehog signaling in small-cell lung cancer：Frequent in vivo but a rare event in vitro，”Vestergaard J，Pedersen MW，Pedersen N等人(2006)，Lung Cancer；52(3)：281-90)。
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恶性淋巴瘤(ML)牵涉淋巴系统细胞，是美国第五最常见的癌症。ML包括霍奇金病和非霍奇金病，霍奇金病和非霍奇金病是淋巴样增殖性疾病的不同组。霍奇金病占所有恶性淋巴瘤的约14％。非霍奇金淋巴瘤是不同组的恶性病，其主要是B-细胞来源。在Working Formulation分类方案中，这些淋巴瘤已经根据其天然史被分为低-、中-和高-级别类型(参见”The Non-Hodgkin′s Lymphoma Pathologic Classification Project”，Cancer 49：2112-2135，1982)。低级别淋巴瘤是无痛的，存活中值为5-10年(Horning 和Rosenberg，N.Engl.J.Med.311：1471-1475，1984)。尽管化学治疗可引起大部分无痛的淋巴瘤消退，但是治愈是罕见的，并且大部分患者最终复发，需要进一步治疗。中-和高-级别淋巴瘤是更具有侵害性的肿瘤，但是它们具有更大的用化学治疗治愈的机会。然而，这些患者中显著比例的患者会复发并需要进一步治疗。
多发性骨髓瘤(MM)是由通常在骨髓中发现的类型的浆细胞组成的恶性肿瘤。这些恶性浆细胞在骨髓中蓄积，通常产生单克隆IgG或IgA分子。恶性浆细胞归巢于骨髓中并在其中扩展，由于缺少正常血细胞生成而导致贫血和免疫抑制。患有多发性骨髓瘤的个体通常发生贫血、溶骨损害、肾衰竭、高钙血和复发性细菌感染。MM代表了第二最常见的血液学恶性病。
本发明部分地基于如下发现：采用从转基因Eμ-Myc小鼠和Cdkn2a敲除小鼠的淋巴瘤和浆细胞瘤和发现hedgehog配体介导基质与淋巴瘤细胞之间的相互作用，发明人发现淋巴瘤和多发性骨髓瘤疾病依赖于hedgehog(Hh)信号传导通路。相同情况在从骨(多发性骨髓瘤)或者来自非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者的淋巴结、骨髓或脾的患者样品中分离的淋巴瘤和多发性骨髓瘤样品中发现。另外还发现：Hh信号传导通路的抑制诱导了基质依赖性淋巴瘤细胞的细胞凋亡，并且hedgehog通路成员的过表达体外抑制了环杷明诱导的淋巴瘤细胞的细胞凋亡。而且，发明人还发现：用hedgehog通路抑制剂治疗小鼠消除了体内淋巴瘤扩散。最后，发明人发现：在脾B-细胞和大部分对环杷明有响应的淋巴瘤中没有Gli3的表达，但是在所有对环杷明有抗性的淋巴瘤中有优势表达。
这些数据显示：Hh信号为通过c-Myc转化的初始步骤提供了重要的抗细胞凋亡信号，并且在淋巴瘤维持中发挥重要作用。因此，Hh信号传导通路的破坏提供了治疗淋巴瘤(例如NHL)、多发性骨髓瘤、CLL和其它血液学恶性病的新方式。另外，淋巴瘤中Gli3的表达提供了对Hh抑制的响应性的反向预测因子和患者分级的重要方式。
根据这些发现，本发明提供了抑制肿瘤细胞生长如淋巴瘤和骨髓瘤细胞生长的方法。本发明提供了在受治疗者中通过抑制肿瘤细胞生长来治疗淋巴瘤或骨髓瘤的方法和组合物。这些方法还可用于在受治疗者中防止肿瘤发生。一些方法针对于治疗相对于脾B细胞而言不具有显著Gli3表达的淋巴瘤。这些方法涉及给需要治疗的受治疗者施用含有Hh信号拮抗剂(例如式I化合物)的药物组合物。本发明的化合物向下调节Hh信号传导通路成员的细胞水平或抑制其生物活性。
本发明提供了预防性或治疗性处置血液和淋巴系统癌症、包括淋巴瘤、白血病和骨髓瘤的方法。这些方法采用hedgehog信号传导通路拮抗剂来抑制淋巴瘤细胞、白血病细胞或骨髓瘤细胞的生长和增殖。淋巴瘤是来源于B淋巴细胞的淋巴母细胞恶性肿瘤。骨髓瘤是由在骨髓中常发现的类型的浆细胞组成的恶性肿瘤。白血病是涉及血液形成器官的急性或慢性疾病。NHL的特征是身体组织中白细胞数异常增加且同时在循环血液中存在或不存在相应的白细胞数增加，其根据最主要涉及的白细胞类型进行分类。
例如，可以用本发明的方法治疗患有淋巴瘤(例如B-细胞淋巴瘤、胞浆母细胞瘤(plasmoblastoma)、浆细胞瘤或CLL)或有危险发生淋巴瘤的受治疗者。优选受治疗者是人。该方法要求给受治疗者施用含有有效量式I化合物的药物组合物以抑制hedgehog信号传导通路。受治疗者可以是被诊断患有淋巴瘤的、有或无转移的、处于该疾病任意阶段(例如I至IV阶段，Ann Arbor Staging System)的受治疗者。适于用本发明的方法治疗的淋巴瘤包括但不限于霍奇金病和非霍奇金病。霍奇金病是人体淋巴组织的恶性障碍(淋巴瘤)，其显示在特定淋巴结中原发并随后扩散至脾、肝和骨髓。它主要发生在15-35岁年龄的个体中。其特征是淋巴结、脾和全身淋巴组织进行性和无痛的扩大。典型的霍奇金病被分成四个亚型：(1)结节硬化性霍奇金病(NSHD)；(2)混合细胞型霍奇金病(MCHD)；(3)淋巴细胞消减型霍奇金病(LDHD)；和(4)淋巴细胞丰富型典型霍奇金病(cLRHD)。
在一些优选实施方案中，本发明的方法用于治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)。非霍奇金病还称作淋巴肉瘤，指在重要方面不同于霍奇金病并且根据癌细胞的微观外形进行分类的一组淋巴瘤。非霍奇金淋巴瘤包括但不限于：(1)生长缓慢的淋巴瘤和淋巴性白血病(例如慢性淋巴细胞白血病、小淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞样淋巴瘤(lymphoplasmacytoid lymphoma)、滤泡型中心性淋巴瘤(follicle center lymphoma)、滤泡型小裂细胞性、滤泡型混合细胞性、边缘区B-细胞淋巴瘤、多毛细胞白血病、浆细胞瘤、骨髓瘤、大颗粒淋巴细胞白血病、蕈样真菌病(mycosis fungoides)、szary综合征)；(2)中度进展的淋巴瘤和淋巴性白血病(例如幼淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤、滤泡型中心性淋巴瘤、滤泡型小裂细胞性、滤泡型中心性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/幼淋巴细胞白血病、血管中心性淋巴瘤(angiocentric lymphoma)、血管免疫母细胞性淋巴瘤(angioimmunoblastic lymphoma))；(3)进展的淋巴瘤(例如大B-细胞淋巴瘤、外周T-细胞淋巴瘤、肠T-细胞淋巴瘤、间变性大细胞性淋巴瘤)；和(4)高度进展的淋巴瘤和淋巴性白血病(例如B-细胞前体B-原始淋巴细胞性白血病/淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、高级B-细胞淋巴瘤(high-grade B-cell lymphoma)、伯基特样T-细胞前体T-原始淋巴细胞性白血病/淋巴瘤)。本发明的方法可用于成人或儿童形式的淋巴瘤以及处于任意阶段如I、II、III或IV阶段的淋巴瘤。本文所述的方法还可用于治疗其它形式的白血病如急性淋巴细胞白血病(ALL)。
本发明的一些治疗方法特别涉及治疗不表达Gli3的淋巴瘤或骨髓瘤。如下文实施例中所公开的那样，申请人观察到：虽然Gli1和Gli2在所有淋巴瘤中有表达，但是可检测到的Gli3表达主要存在于对通过环杷明抑制Hh通路有抗性的淋巴瘤中。在正常脾B-细胞和大多数对环杷明有响应的淋巴瘤中没有Gli3表达。因此，在用Hh拮抗剂治疗之前，可以首先对淋巴瘤受治疗者检查获自该受治疗者的淋巴瘤细胞样品中的Gli3表达。可以将样品中的Gli3表达水平与获自该受治疗者的正常B脾细胞中的Gli3表达水平进行比较。淋巴瘤或骨髓瘤样品中以及对照细胞中的Gli3表达水平可以采用本领域熟知的方法、例如下文实施例中所述的方法来确定。对本文所述的Hh拮抗剂治疗的可能响应性通过如下情况来指示：淋巴瘤或骨髓瘤样品中缺少可检测到的Gli3表达，或者不显著高于(例如不超过25％、50％或100％以上)正常B细胞中的Gli3表达水平的表达水平。除了作为本发明的治疗方法的额外步骤外，对缺少Gli3表达的预筛选可以独立地用作患者分级方法。
除淋巴瘤外，上述方法和组合物还适于治疗骨髓瘤。多发性骨髓瘤是一种致命性的肿瘤，其特征是浆细胞克隆蓄积，经常伴有Ig链分泌。肿瘤对骨髓的侵害涉及贫血、低γ球蛋白血症(hypogammaglobinemia)和粒细胞减少并伴随细菌感染。异常的细胞因子环境(主要是升高的IL-6和IL-1β水平)经常导致破骨增加，引起骨痛、骨折和高血钙。尽管存在侵害性的化学治疗和移植，但是多发性骨髓瘤通常是致命性的血浆增殖性疾病。
本发明的化合物可用于治疗Hedgehog相关性障碍，例如基底细胞痣综合征(也称作Gorlin’s综合征和/或痣样基底细胞癌)，它是一种罕见的常染色体显性癌症遗传性综合征。
本发明的化合物可用于治疗基底细胞癌(BCC或侵蚀性溃疡)、源自皮质或肾上腺髓质髓质部分的肾上腺肿瘤和卵巢肿瘤。
本发明的化合物可用于治疗骨过度生长障碍，包括但不限于肢端肥大症、大头畸形、索托斯综合征、进行性骨干发育不全(PDD或卡-恩病)、颅面骨干发育不全和骨内骨肥厚障碍、包括范布肯姆(Van Buchem)疾病(I型和II型)和硬化性狭窄。
本发明的化合物可用于治疗不想要的毛发生长如毛痣和在脱毛后美容性预防毛发再生长。
本发明的化合物可用于治疗肝纤维化。
因此，本发明的方法包括激动Hedgehog信号的Ptc抑制(例如通过抑制Smoothened或该信号通路的下游组件的活化)的本发明的化合物在调节各种细胞、组织和器官的修复和/或功能性能中的用途，所述细胞、组织和器官包括正常的细胞、组织和器官以及具有Ptc失功能、Hedgehog获功能、Smoothened获功能或Gli获功能表型的那些。例如，本发明的方法具有涵盖调节神经组织、骨和软骨的形成和修复、调节精子发生、调节良性前列腺增生、调节湿性黄斑变性、银屑病中的血管形成、调节平滑肌、调节肺、肝和源自原肠的其它器官、调节造血功能、调节皮肤和毛发生长等的治疗学和美容学应用。而且，本发明的方法还可在培养物所提供的细胞上(体外)或者在完整动物的细胞上(体内)进行。
根据上文，本发明还提供了在需要该治疗的受治疗者中预防或治疗任意所述疾病或障碍的方法，该方法包括给所述受治疗者施用有效量(参见下文的“施用和药物组合物”)的式I化合物或其药学可接受的盐。就任意上述应用而言，所需剂量将根据施用方式、所治疗的具体病症和预期效果而改变。
施用和药物组合物
本发明涉及包含式(I)化合物的药物组合物在治疗性处置(以及在本发明的更宽方面预防性处置)Hedgehog相关性障碍中的用途。
一般而言，可以经由本领域常用的和可接受的任意模式以治疗有效量单独或与一种或多种治疗剂组合来施用本发明的化合物。治疗有效量可根据疾病严重性、受治疗者的年龄和相关健康、所用化合物的效力和其它因素而宽泛地改变。一般而言，全身约0.03至2.5mg/kg体重的日剂量被指示获得满意的结果。较大型哺乳动物如人的指示日剂量为约0.5mg至约100mg，方便地以例如一天至多四次的分开剂量或以缓释形式施用。适于口服施用的单位剂量形式包含约1mg至50mg活性成分。
本发明的化合物可以作为药物组合物通过任意常规途径施用，特别是经肠内施用，例如口服(如以片剂或胶囊形式)；或胃肠道外施用，例如以可注射溶液或混悬液的形式；局部施用，例如以洗液、凝胶、软膏或乳膏剂的形式，或以经鼻施用或栓剂的形式。包含游离形式或可药用盐形式的本发明的化合物以及至少一种可药用载体或稀释剂的药物组合物可以以常规方式通过混合、制粒或包衣方法来制备。例如，口服组合物可以是包含活性成分以及如下物质的片剂或明胶胶囊：a)稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸及其镁或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂还包含c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果期望的话，还包含d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐或泡腾合剂；和/或e)吸收剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。注射用组合物可以是水性等张溶液或混悬液，栓剂可以由脂肪乳剂或混悬剂来制备。
组合物可以是灭菌的和/或含有佐剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，它们还可含有其它有治疗价值的物质。适于透皮应用的制剂包含有效量的本发明的化合物和载体。载体可以包含可吸收的药理学可接受的溶剂以帮助穿过宿主皮肤。例如，透皮装置是绷带剂的形式，其包含背衬膜、含有化合物和任选的载体的储库、任选的速率控制屏障(历经延长了的时间以受控和预定的速率递送化合物至宿主皮肤)和确保该装置于皮肤上的手段。还可以使用基质透皮制剂。适于局部应用、例如用于皮肤和眼的制剂优选是本领域熟知的水性溶液、软膏、乳膏剂或凝胶。这些制剂可含有助溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
本发明的化合物可以以治疗有效量与一种或多种治疗剂组合施用(药物组合产品)。例如，与免疫调节物质、抗炎物质、其它抗肿瘤治疗剂、化疗剂、去除法或其它治疗激素、抗肿瘤剂和/或可用于对抗淋巴瘤或骨髓瘤的单克隆抗体一起可产生协同作用。本领域记载了一些熟知的抗癌药，例如Cancer Therapeutics：Experimental and Clinical Agents，Teicher(编辑)，Humana Press(第1版，1997)；和Goodman and Gilman′s The Pharmacological Basis of Therapeutics，Hardman等人(编辑)，McGraw-Hill Professional(第10版，2001)。适宜抗癌药的实例包括5-氟尿嘧啶、硫酸长春花碱、磷酸雌莫司汀、舒拉明和锶-89。适宜化疗剂的实例包括门冬酰胺酶、硫酸博来霉素、顺铂、阿糖胞苷、磷酸氟达拉滨、丝裂霉素和链佐星。
当本发明的化合物与其它疗法组合施用时，共同施用的化合物的剂量当然根据共用药物的类型、所用具体药物以及所治疗的病症等而变化。
本发明的Hh抑制剂可以有用地与另一种药理学活性化合物或两种或多种其它药理学活性化合物联用，特别是用于治疗癌症。例如，如上文所定义的式(I)化合物或可药用盐可以与一种或多种选自如下的活性剂同时、依次或分别施用：化疗剂，例如有丝分裂抑制剂，例如紫杉烷、长春花生物碱、紫杉醇、多西他赛、长春花新碱、长春花碱、长春瑞滨或长春氟宁；和其它抗癌药，例如顺铂、5-氟尿嘧啶或5-氟-2-4(1H，3H)-嘧啶二酮(5FU)、氟他胺或吉西他滨。
该组合在治疗中可以提供显著的优势、包括协同活性。式(I)化合物还可以有利地与其它抗增殖化合物组合施用。这类抗增殖化合物包括但不限于：芳香酶抑制剂；抗雌激素剂；拓扑异构酶I抑制剂；拓扑异构酶II抑制剂；微管活性化合物；烷化化合物；诱导细胞分化过程的化合物；环加氧酶抑制剂；MMP抑制剂；mTOR抑制剂；抗肿瘤抗代谢药；铂化合物；靶向于/降低蛋白或脂质激酶活性的化合物和其它抗血管生成化合物；靶向于、降低或抑制蛋白或脂质磷酸酶活性的化合物；戈那瑞林激动剂；抗雄激素剂；甲硫氨酸氨肽酶抑制剂；二膦酸化合物；生物应答调节剂；抗增殖抗体；类肝素酶(heparanase)抑制剂；Ras致癌同工型抑制剂；端粒酶抑制剂；蛋白酶体抑制剂；用于治疗血液学恶性病的化合物；靶向于、降低或抑制Flt-3活性的化合物；Hsp90抑制剂，例如17-AAG(17-烯丙基氨基-格尔德霉素，NSC330507)、17-DMAG(17-二甲基氨基乙基氨基-17-脱甲氧基-格尔德霉素，NSC707545)、IPI-504、CNF1010、CNF2024、CNF1010，来自康福玛治疗公司(Conforma Therapeutics)；替莫唑胺(TEMODAL)；驱动蛋白纺锤体蛋白抑制剂，例如来自GlaxoSmithKline的SB715992或SB743921或来自CombinatoRx的喷他脒/氯丙嗪；PI3K抑制剂；RAF抑制剂；EDG结合剂、抗白血病化合物、核苷酸还原酶抑制剂、S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶抑制剂、抗增殖抗体或其它化疗化合物。而且，供选地或另外地，它们可以与其它肿瘤治疗手段、包括手术、电离放射、光动力疗法、植入物如含皮质类固醇、激素的植入物联用，或者它们可以用作放射致敏剂。而且，在抗炎和/或抗增殖治疗中，与抗炎药的组合被包括在内。与抗组胺药物物质、支气管扩张药、NSAID或趋化因子受体拮抗剂的组合也是可能的。
本发明还提供了药物组合产品，例如药盒，包含a)第一种药物，它是如本文所公开的游离形式或可药用盐形式的本发明的化合物，和b)至少一种共用药物。该药盒可以包含其施用说明书。
本文所用的术语“共同施用”或“组合施用”等囊括对单独患者施用所选择的治疗药物，并且意欲包括其中药物不一定以同一施用途径或在同一时间施用的治疗方案。
本文所用的术语“药物组合产品”指将多于一种活性成分混合或合并所得的产品，包括活性成分的固定和非固定组合产品。术语“固定组合”指活性成分、例如式I化合物和共用药物以单一实体或剂量同时施用于患者。术语“非固定组合”指活性成分、例如式I化合物和共用药物以单独的实体同时、共同或无特定时间限制地依次施用于患者，其中这种施用为患者体内提供了两种化合物的治疗有效水平。后者还用于鸡尾酒疗法，例如施用3种或3种以上的活性成分。
本发明的化合物的制备方法
合成本发明的化合物如式(I)化合物的代表性实例可参见本申请的实施例部分。
本发明的化合物可以通过使化合物的游离碱形式与可药用的无机或有机酸反应以可药用酸加成盐的形式制得。或者，本发明的化合物的可药用碱加成盐可通过使化合物的游离酸形式与可药用的无机或有机碱反应来制得。
或者，本发明的化合物的盐形式可以采用原料或中间体的盐制得。
本发明的化合物的游离酸或游离碱形式可以分别由相应的碱加成盐或酸加成盐形式制得。例如，酸加成盐形式的本发明的化合物可通过用适宜的碱(例如氢氧化铵溶液、氢氧化钠等)处理而转化成相应的游离碱。碱加成盐形式的本发明的化合物可通过用适宜的酸(例如盐酸等)处理而转化成相应的游离酸。
本发明的化合物的前药衍生物可通过本领域普通技术人员已知的方法制得(例如，进一步的细节参见Saulnier等人(1994)，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters，第4卷，第1985页)。
本发明的化合物的被保护的衍生物可通过本领域普通技术人员已知的方法制备。可用于产生保护基及其除去的技术的详细描述可参见T.W.Greene，“Protecting Groups in Organic Chemistry”，第3版，John Wiley and Sons，Inc.，1999。
本发明的化合物可以方便地制成或在本发明的方法期间形成溶剂合物(例如水合物)。本发明的化合物的水合物可以方便地通过用水性/有机溶剂混合物(采用有机溶剂如二氧芑、四氢呋喃或甲醇)重结晶而制得。
本发明的化合物可以如下制备为它们的单一立体异构体：使化合物的外消旋混合物与具有旋光活性的拆分剂反应以形成一对非对映异构化合物，分离非对映异构体，并回收旋光纯的对映异构体。虽然可以采用本发明的化合物的共价非对映异构衍生物进行对映异构体拆分，但是可离解的复合物是优选的(例如结晶性非对映异构盐)。非对映异构体具有不同的物理性质(例如熔点、沸点、溶解性、反应活性等)，利用这些不同可以容易地分离非对映异构体。非对映异构体可以通过色谱法或优选通过基于溶解性差异的分离/拆分技术来分离。然后通过任意不会导致外消旋化的实用手段回收旋光纯的对映异构体和拆分剂。可用于从外消旋混合物中拆分化合物的立体异构体的技术的更详细说明可以参见Jean Jacques，Andre Collet，Samuel H.Wilen，“Enantiomers，Racemates and Resolutions，”John Wiley And Sons，Inc.，1981。
实施例
本发明通过下文的代表性实施例非限制性地进行了进一步示例，这些实施例是用于解释本发明的，而不能解释为对本发明的限制。本文所述终产物的结构可通过标准分析方法如光谱法和分光镜法(例如MS、NMR)来确认。所用缩略语是本领域常规的那些。化合物通过标准方法如结晶、快速色谱法或反相HPLC纯化。
以下缩略语将用于实施例通篇中：
缩略语名单
BINAP          (±)-(1，1’-联萘-2-2’二基)双(二苯膦)
DAST           二乙氨基三氟化硫
Deoxofluor     双(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫
DCM            二氯甲烷
Di-tbu X-Phos  2-(二叔丁基膦基)2’，4’，6’-三异丙基-1，1’-联苯
DIEA           二乙胺
DIPEA          二异丙基乙胺
DMF            二甲基甲酰胺
HPLC           高压液相色谱法
HR MS          高分辨率质谱
HATU           1-[双(二甲氨基)-亚甲基]-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶鎓
-3-氧化物六氟磷酸盐
HBTU           O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HOBt           1-羟基-1H-苯并三唑
HMDS           六甲基二硅胺烷
MS             质谱
NBS            N-溴代琥珀酰亚胺
NMM            N-甲基吗啉
NMO            N-甲基吗啉-N-氧化物
NMP            N-甲基吡咯烷
NMR            核磁共振
n.a.           未得到
n.d.           未测定
RT，rt         室温
SEM            2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基
TFA            三氟乙酸
THF            四氢呋喃
X-Phos         2-(二环己基膦基)-2’，4’，6’-三异丙基-1，1’-联苯化合物合成
哒嗪-芳基醚类和-苯胺类
如流程1所示，式Ia化合物可以由中间体IIIa制得(如流程6所述的制备)，中间体IIIa可以通过直接加热的亲核置换或钯催化的亲核置换与苯酚或苯胺反应。化合物Ia可以通过R”官能团操作转化为其它实施例。
Figure BDA0000049063960000391
流程1
实施例1-5的合成
实施例1：(R)-4-(4，5-二甲基-6-苯氧基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯
Figure BDA0000049063960000392
在2鼓式螺旋盖小瓶中向(R)-4-(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯(化合物54，40mg，0.106mmol)在2mL甲苯中的溶液中加入苯酚(45mg，0.48mmol)、磷酸钾(40.6mg，0.19mmol)和二-tbu X-Phos(5.3mg，0.014mmol)。将小瓶抽真空，充氮气，然后添加乙酸钯(II)(2mg，0.01mmol)。再向反应混合物中充氮气，加热至100℃达16小时。通过硅藻土过滤混合物，将滤液浓缩，得到棕色油状物。通过HPLC、用15-95％乙腈水溶液洗脱(两个流动相均用3％n-PrOH改变)纯化粗产物，得到预期产物，为白色固体(9mg，22％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.69(s，1H)，8.39(s，1H)，7.40(t，J＝7.5Hz，2H)7.19(t，J＝7.5Hz，1H)，7.10(d，J＝7.5Hz，2H)，4.84-4.82(m，1H)，4.42-4.38(m，1H)，3.81(s，3H)，3.45-3.25(m，3H)，3.02-2.99(m，1H)，2.93-2.86(m，1H)，2.35(s，3H)，2.26(s，3H)，1.36(d，J＝6.6Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值435.2157，计算值435.2145
实施例2：2-[(R)-4-(4，5-二甲基-6-苯氧基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇
Figure BDA0000049063960000401
于-78℃、在氮气氛围中在2鼓式隔片盖小瓶中向(R)-4-(4，5-二甲基-6-苯氧基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯(98mg，0.226mmol)在2mL无水THF中的溶液中加入3M甲基溴化镁(600μL，1.8mmmol)。将反应混合物于-78℃搅拌1.5小时，然后温至0℃，再搅拌2小时。于-78℃用饱和NH4Cl水溶液使反应混合物淬灭，用DCM稀释。用盐水洗涤有机溶液，经Na2SO4干燥，浓缩，得到粗物质。通过制备型HPLC用10％-100％乙腈水溶液洗脱纯化所得固体(两个流动相均用3％n-PrOH改变)。合并包含预期产物的级分，冷冻干燥，得到白色固体(58mg，59％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.33(s，1H)，8.19(s，1H)，7.41(t，J＝7.6Hz，2H)7.20(t，J＝7.6Hz，1H)，7.11(d，J＝7.6Hz，2H)，5.09(s，1H)，4.64(m，1H)，4.16-4.13(m，1H)，3.44-3.41(m，2H)，3.02-2.99(m，1H)，2.89-2.85(m，1H)，2.34(s，3H)，2.25(s，3H)，1.41(s，6H)，1.28(d，J＝6.6Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值435.2508，计算值435.2508
实施例3：(R)-4-(4，5-二甲基-6-苯基氨基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯
Figure BDA0000049063960000402
和
实施例4：(R)-4-(4，5-二甲基-6-苯基氨基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸苯基酰胺
Figure BDA0000049063960000411
在微波试管内向(R)-4-(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯(化合物54，250mg，0.663mmol)中加入苯胺(2.4mL，26.5mmol)。将反应混合物在190℃在微波反应器中加热30分钟。将反应混合物上硅胶，通过快速色谱法纯化，用50％-100％EtOAc∶庚烷洗脱6个柱体积，然后用3％-10％MeOH的DCM溶液洗脱。收集实施例3和4，浓缩，得到白色固体。
实施例3：130mg，45％.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.83(s，1H)，8.16(s，1H)，7.41-7.32(m，4H)，7.14-7.10(m，1H)，4.79-4.77(m，1H)，4.39-4.35(m，1H)，3.96(s，3H)3.52-3.45(m，2H)，3.35-3.42(m，1H)，3.24-3.21(m，1H)，3.12-3.07(m，1H)，2.38(s，3H)，2.15(s，3H)，1.44(d，J＝6.7Hz，3H)。
MS(m/z，MH+)测定值434.4，计算值434.2
实施例4：30mg，9％
MS(m/z，MH+)测定值495.6，计算值495.2
实施例5：2-[(R)-4-(4，5-二甲基-6-苯基氨基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇
于-78℃、在氮气氛围中在2鼓式隔片盖小瓶中向(R)-4-(4，5-二甲基-6-苯基氨基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯(实施例3，360mg，0.14mmol)在2mL无水THF中的溶液中加入3M甲基溴化镁(554μL，1.7mmmol)。将反应混合物于-78℃搅拌1.5小时，然后温至0℃，再搅拌1小时。于-78℃用饱和NH4Cl水溶液使反应混合物淬灭，用DCM稀释。用盐水洗涤有机溶液，经Na2SO4干燥，浓缩，得到粗物质。通过制备型HPLC纯化所得固体，用10％-100％乙腈水溶液洗脱(两个流动相均用3％n-PrOH改变)。合并包含预期产物的级分，冻干，得到白色固体(25mg，42％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.25(s，1H)，8.04(s，1H)，7.49(d，J＝7.5Hz，2H)，7.31(t，J＝7.5Hz，2H)，7.02(t，J＝7.5Hz，1H)，6.59(b，1H)，4.63-4.61(m，1H)，4.16-4.12(m，1H)，3.44-3.09(m，5H)，2.36(s，3H)，2.18(s，3H)，1.56(s，6H)，1.39(d，J＝7.1Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值434.2667，计算值434.2668
芳基-哒嗪类
如流程2所示，式Ib化合物可以例如如下制得：由1，4-二氯哒嗪II用哌嗪进行氯置换，得到中间体III，中间体III与硼酸或酯以Suzuki偶联进行反应，得到化合物IV。用例如芳基氯在碱性条件下进行亲核芳香取代，得到实施例Ib(路径A)。或者，中间体II可以与取代的胺反应，得到化合物IIIa，化合物IIIa是与硼酸或酯类进行Suzuki偶联反应生成实施例Ib的底物(路径B，X＝N、CH)。化合物Ib可以通过R”的官能团操作、例如通过酯水解和酰胺形成或Grignard加成至酯官能团而转化为其它实施例。
Figure BDA0000049063960000421
流程2
中间体的合成：
3-(4-氟-苯基)-4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪(化合物1)
向圆底烧瓶中加入3-氯-4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪(500mg，2.07mmol)、4-氟苯基硼酸(580mg，4.15mmol)、碳酸钠(440mg，4.15mmol)、甲苯(16mL)和水(8mL)。给反应混合物充氮气20分钟。加入四(三苯膦)钯(50mg，0.103mmol)，将混合物加热至110℃达18小时。浓缩反应混合物，使其在乙酸乙酯与水之间分配。用乙酸乙酯萃取两次，经硫酸钠干燥合并的有机相，浓缩。通过柱色谱法纯化(0-25％甲醇/二氯甲烷)，得到480mg 3-(4-氟-苯基)-4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪(83％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝7.34-7.49(m，2H)7.07(t，J＝8.8Hz，2H)3.35(m，2H)2.84-3.13(m，4H)2.63(dd，J＝12.0Hz，10.0Hz，1H)2.20(s，3H)2.14(s，3H)1.67(brs，1H)1.05(d，J＝6.5Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值301.1824，计算值301.1829
3-(4-三氟甲基-苯基)-4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪(化合物2)
Figure BDA0000049063960000432
按照与化合物1类似的方式制得化合物2。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝7.69-7.80(m，2H)7.60-7.70(m，2H)3.38-3.52(m，3H)2.98-3.22(m，4H)2.69-2.83(m，1H)2.30(s，3H)2.23(s，3H)1.15(d，J＝6.4Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值351.1806，计算值351.1797
3-氯-4，5-二甲基-6-[4-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-哒嗪(化合物3)
Figure BDA0000049063960000433
将1-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪(10g，43.3mmol)与3，6-二氯-4，5-二甲基-哒嗪(14.4g，84.3mmol)、三乙胺(8.25mL)和NMP(40mL)合并。将反应混合物加热至180℃温度达25分钟，然后真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(0-8％MeOH/CH2Cl2)，得到标题化合物(13.2g，82％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.48-8.41(m，1H)7.84(dd，J＝9.1Hz，2.4Hz，1H)7.03(d，J＝9.1Hz，1H)3.88-3.76(m，4H)3.28-3.20(m，4H)2.31(s，6H)。
2-[4-(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-基]-4-三氟甲基-嘧啶-5-甲酸甲酯 (化合物4)
Figure BDA0000049063960000441
向圆底烧瓶中加入3-氯-4，5-二甲基-6-哌嗪-1-基-哒嗪(1g，4.41mmol)、2-氯-4-三氟甲基-嘧啶-5-甲酸甲酯(2.12g，8.82mmol)和二异丙基乙胺(2.3mL，13.23mmol)在二
Figure BDA0000049063960000442
烷(9mL)中的溶液，于室温搅拌18小时。过滤反应混合物，用水和乙酸乙酯冲洗，得到1.35g 2-[4-(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-基]-4-三氟甲基-嘧啶-5-甲酸甲酯(71％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.96(s，1H)，4.09-4.22(m，4H)，3.93(s，3H)，3.35(m，4H)，2.39(s，3H)，2.35(s，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值431.1206，计算值431.1210
通过路径A合成实施例6-9
实施例6：(R)-4-[6-(4-氟-苯基)-4，5-二甲基-哒嗪-3-基]-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2’]联吡嗪-5’-甲酸甲酯
Figure BDA0000049063960000443
在圆底烧瓶中合并3-(4-氟-苯基)-4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪(522mg，1.73mmol)、5-氯-吡嗪-2-甲酸甲酯(360mg，2.07mmol)、二异丙基乙胺(900μl，5.19mmol)和二烷(3mL)。加热至110℃达18小时。浓缩反应混合物，通过柱色谱法纯化(0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度)。将产物与乙腈一起研磨，得到480mg(R)-4-[6-(4-氟-苯基)-4，5-二甲基-哒嗪-3-基]-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2’]联吡嗪-5’-甲酸甲酯(63％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.87(s，1H)8.21(s，1H)7.46-7.60(m，2H)7.19(t，J＝8.5Hz，2H)4.84(br s，1H)4.43(d，J＝13.0Hz，1H)3.99(s，3H)3.68(d，J＝12.5Hz，1H)3.49-3.63(m，2H)3.39(dd，J＝12.8Hz，3.8Hz，1H)3.15-3.31(m，1H)2.41(s，3H)2.29(s，3H)1.50(d，J＝6.5Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值437.2097，计算值437.2101
实施例7：(R)-4-[6-(4-三氟甲基-苯基)-4，5-二甲基-哒嗪-3-基]-2-甲基-3，4，5，6- 四氢-2H-[1，2’]联吡嗪-5’-甲酸甲酯
Figure BDA0000049063960000451
按照与实施例6类似的方式由化合物2制得实施例7。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.87(s，1H)，8.21(d，J＝1.3Hz，1H)，7.72-7.82(m，2H)，7.68(d，J＝8.1Hz，2H)，4.85(br s，1H)，4.44(d，J＝13.3Hz，1H)，4.00(s，3H)，3.70(d，J＝14.1Hz，1H)，3.50-3.64(m，2H)，3.41(dd，J＝12.6Hz，3.6Hz，1H)，3.18-3.31(m，1H)，2.42(s，3H)，2.29(s，3H)，1.50(d，J＝6.7Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值487.2050，计算值487.2069
实施例8：(R)-4-[6-(4-三氟甲基-苯基)-4，5-二甲基-哒嗪-3-基]-2-甲基-3，4，5，6- 四氢-2H-[1，2’]联吡嗪-5’-甲酸
Figure BDA0000049063960000452
向实施例7(0.26g，0.53mmol)和甲醇(10mL)的溶液中加入50％LiOH水溶液(10mL)。将混合物于室温搅拌过夜。除去溶剂，将残余物溶于水，用3N HCl酸化至pH约7，用乙酸乙酯萃取。浓缩乙酸乙酯层，得到标题化合物(0.25g，98％)，为黄色固体。
1H NMR(400MHz，CD2Cl2)δ＝8.90(s，1H)，8.12(s，1H)，7.81(d，J＝8.0Hz，2H)，7.69(d，J＝8.0Hz，2H)，4.88(m，1H)，4.48(d，J＝13.0Hz，1H)，3.66(m，3H)，3.40(m，1H)，3.23(m，1H)，2.43(s，3H)，2.27(s，3H)，1.53(d，J＝6.5Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值473.1900
实施例9：(R)-4-[6-(4-氟-苯基)-4，5-二甲基-哒嗪-3-基]-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2’]联吡嗪-5’-甲酸
Figure BDA0000049063960000461
向实施例6(0.74g，1.31mmol)和甲醇(10mL)的溶液中加入氢氧化钠(100mg)。将混合物于室温搅拌过夜。除去溶剂，将残余物溶于水，用3NHCl酸化至pH约7，用乙酸乙酯萃取。浓缩乙酸乙酯层，得到标题化合物(0.68g，96％)，为黄色固体。
1H NMR(400MHz，CD2Cl2)δ＝8.90(s，1H)，8.11(s，1H)，7.52(m，2H)，7.22(m，2H)，4.67(m，1H)，4.48(d，J＝12.0Hz，1H)，3.65(m，3H)，3.40(m，1H)，3.26(m，1H)，2.46(s，3H)，2.32(s，3H)，1.53(d，J＝6.5Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值423.1941
通过路径B合成实施例10-40
硼酸与哒嗪基氯IIIa的SUZUKI偶联的通用方法
方法A
在圆底烧瓶中，在1mL水和1.8mL THF中合并3-氯-哒嗪(0.268mmol)、硼酸(0.537mmol)和碳酸钠(57mg，0.537mmol)。用氮气将反应混合物净化20分钟，然后加入四(三苯膦)钯(10mg)，加热至110℃达18小时。通过硅胶柱色谱法使用0％-70％乙酸乙酯/庚烷梯度进行纯化。将产物与甲醇和乙腈一起研磨以除去其它杂质，得到预期产物。
方法B
在圆底烧瓶中，在2mL 1，4-二
Figure BDA0000049063960000462
烷中合并3-氯-哒嗪(0.268mmol)、硼酸(0.536mmol)和碳酸铯(175mg，0.536mmol)。用氮气将反应混合物净化1分钟，然后加入四(三苯膦)钯(30mg，0.026mmol)，加热至115℃达18小时。通过硅藻土过滤反应混合物，浓缩。在乙酸乙酯与水之间分配，收集有机层。再用乙酸乙酯萃取，合并有机层。经硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将物质与乙腈一起研磨，然后从热乙腈中重结晶，得到预期产物。
方法C
在微波小瓶中，在正丁醇溶液(1.5mL)中合并3-氯-哒嗪(0.080mmol)、硼酸(0.096mmol)、磷酸钾(34mg，0.161mmol)和X-Phos(1.3mg)。用氮气净化1分钟，加入乙酸钯(1mg)，然后在微波反应器中于150℃加热45分钟。将反应混合物过滤和浓缩，然后用制备型HPLC纯化(含1％氢氧化铵的水/乙腈)，得到预期产物。
方法D
在微波小瓶中，在正丁醇溶液(2.5mL)中合并3-氯-哒嗪(0.268mmol)、硼酸(0.322mmol)、磷酸钾(110mg，0.537mmol)和X-Phos(5mg)。用氮气净化1分钟，加入乙酸钯(3.5mg,)，然后在微波反应器中于150℃加热45分钟。将反应混合物过滤和浓缩，在乙酸乙酯与水之间分配，收集有机层。再次萃取，合并有机层，经硫酸钠干燥，浓缩。通过柱色谱法用0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度进行纯化，得到预期产物。
实施例10-31：下表(表1)列出了通过路径B、使用上述通用方法A-D制得的实施例化合物：
表1
Figure BDA0000049063960000471
Figure BDA0000049063960000481
Figure BDA0000049063960000491
通过Grignard加成至酯来合成实施例32-34
Grignard加成的通用方案
向含有酯(1mmol)在无水THF(4mL)中的溶液的冷却至-78℃的圆底烧瓶中滴加甲基溴化镁(8mmol)在乙醚中的3M溶液。使其温至0℃，搅拌20分钟后用饱和氯化铵水溶液淬灭。用乙酸乙酯萃取两次，收集有机层。经硫酸钠干燥，浓缩。通过柱色谱法用0-100％乙酸乙酯/庚烷梯度进行纯化。将产物与乙腈一起研磨，过滤，得到2-丙醇。
：下表(表2)列出了通过上述通用方法制得的实施例化合物：
表2
Figure BDA0000049063960000492
通过酰胺形成来合成实施例35-40
酰胺形成的通用方案
将实施例8(40.0mg，0.08mmol)、HATU(64.0mg，0.17mmol)、二异丙基乙胺(44.0mg，0.34mmol)、二甲基乙酰胺(1.5mL)和胺(0.13mmol)的混合物于室温搅拌10小时。通过HPLC纯化粗产物(C18柱，乙腈/水(3％丙醇)，30％～100％)，得到实施例35-40(74％～82％)。
实施例35-40：下表(表3)列出了通过上述通用方法制得的实施例化合物：
表3
Figure BDA0000049063960000501
哌啶-4-基-哒嗪类
如流程3所示，式Ic的化合物可以如下制得：使被保护的1，2，3，6-四氢吡啶-4-硼酸与哒嗪氯V进行Suzuki偶联，得到中间体VI，中间体VI在除去保护基和亲核置换后得到中间体VII。氢化得到实施例Ic。
Figure BDA0000049063960000511
流程3
中间体的合成：
4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(化合物5)
Figure BDA0000049063960000512
在圆底烧瓶中向3-苄基-6-氯-4，5-二甲基哒嗪(800mg，3.44mmol)在20mL DMF中的溶液中加入4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(1.3g，4.1mmol)，然后加入碳酸钾(1.43g，10.3mmol)和Pd(PPh3)4(397mg，0.344mmol)。将小瓶抽真空，充氮气。将反应混合物加热至100℃达16小时。通过硅藻土过滤混合物，将滤液浓缩，得到粗物质。通过硅胶快速色谱法用3％-15％MeOH∶DCM洗脱纯化混合物。合并包含预期产物的级分，浓缩，得到棕色固体(1.0g，77％)。
1H NMR(400MHz，CD2Cl2)δ＝7.30-7.21(m，5H)，5.84-5.82(s，1H)，4.43(s，2H)，4.13-4.11(m，2H)，3.69(t，J＝5.5Hz，1H)，2.56-2.54(m，2H)，2.26(s，3H)，2.20(s，3H)，1.49(s，9H)。
MS(m/z，MH+)测定值380.7，计算值380.23
5-(4-(6-苄基-4，5-二甲基哒嗪-3-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-基)吡嗪-2-甲酸甲酯 (化合物6)
Figure BDA0000049063960000513
向4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(170mg，0.358mmol)中加入TFA在DCM中的50％溶液。将反应混合物搅拌10分钟，浓缩，得到3-苄基-4，5-二甲基-6-(1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)哒嗪，为黄色粘稠固体(125mg，100％)。在微波试管中向3-苄基-4，5-二甲基-6-(1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)哒嗪(180mg，0.644mmol)在二
Figure BDA0000049063960000521
烷中的溶液中加入5-氯吡嗪-2-甲酸甲酯(222mg，1.29mmol)和TEA(0.45mL，3.22mmol)。在微波反应器中将反应混合物在160℃加热40分钟。浓缩混合物，得到棕色油状物，通过制备型HPLC用10％-100％乙腈∶水(两个流动相均被3％n-PrOH改变)洗脱纯化。合并包含预期产物的级分，冷冻干燥，得到白色固体(80mg，30％)。MS(m/z，MH+)测定值416.5，计算值416.2
3-苄基-4，5-二甲基-6-(1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)哒 嗪(化合物7)
Figure BDA0000049063960000522
在微波试管中向3-苄基-4，5-二甲基-6-(1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)哒嗪(70mg，0.175mmol)在2mL二
Figure BDA0000049063960000523
烷中的溶液中加入2-氯-5-(三氟甲基)吡啶(64mg，0.35mmol)和TEA(0.122mL，0.88mmol)。在微波反应器中将反应混合物在160℃加热40分钟。浓缩混合物，得到棕色油状物，通过制备型HPLC用10％-100％乙腈∶水(两个流动相均被3％n-PrOH改变)洗脱纯化。合并包含预期产物的级分，冷冻干燥，得到白色固体(33mg，42％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.44(s，1H)，7.83(dd，J＝2.5Hz，9.1Hz，2H)，7.30-7.26(m，2H)，7.20-7.16(m，3H)，6.99-6.97(d，J＝9.1Hz，1H)，5.96-5.94(m，1H)，4.32(s，2H)，4.27-4.26(m，2H)，3.97(t，J＝5.6Hz，2H)，2.60-2.58(m，2H)，2.22(s，3H)，2.16(s，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值425.1958，计算值425.1953
实施例41-44的合成
实施例41：5-(4-(6-苄基-4，5-二甲基哒嗪-3-基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲酸甲酯
Figure BDA0000049063960000531
向5-(4-(6-苄基-4，5-二甲基哒嗪-3-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-基)吡嗪-2-甲酸甲酯(60mg，0.144mmol)在20mL EtOH中的溶液中加入10％Pd-C(77mg，72mmol)。将反应混合物在氢气氛围中搅拌16小时。通过硅藻土过滤混合物，浓缩滤液，得到黄色固体(60mg，100％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.66(s，1H)，8.43(s，1H)，7.28-7.26(m，2H)，7.19-7.15(m，3H)，4.67-4.64(m，2H)，4.27(s，2)，3.81(s，3H)，3.43-3.39(m，1H)，3.26-3.17(m，2H)，2.27(s，3H)，2.14(s，3H)，1.92-1.86(m，4H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值418.2247，计算值418.2243
实施例42：2-{5-[4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-1-基]-吡嗪-2-基}- 丙烷-2-醇
Figure BDA0000049063960000532
和
实施例43：3-苄基-6-{1-[5-(1-甲氧基-1-甲基-乙基)-吡嗪-2-基]-哌啶-4- 基}-4，5-二甲基-哒嗪
Figure BDA0000049063960000533
于-78℃、在氮气氛围中向5-(4-(6-苄基-4，5-二甲基哒嗪-3-基)哌啶-1-基)吡嗪-2-甲酸甲酯(30mg，0.07mmol)在2mL无水THF中的溶液中加入3MCH3MgBr(287μL，0.862mmol)。将反应混合物于-78℃搅拌1小时，于0℃再搅拌1小时。于-78℃用饱和氯化铵水溶液使混合物淬灭，使混合物在DCM与盐水之间分配。经Na2SO4干燥有机层，浓缩，得到棕色油状物。通过制备型HPLC用10％-100％乙腈∶水(两个流动相均被3％n-PrOH改变)洗脱纯化混合物。收集实施例42和43，为白色固体。
实施例42(8mg，27％)：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.33(s，1H)，8.26(s，1H)，7.28-7.24(m，2H)，7.19-7.15(m，3H)，5.08(s，3H)，5.08(s，1H)，4.45-4.41(m，2H)，4.27(s，2H)，3.34-3.24(m，2H)，2.27(s，3H)，2.15(s，3H)，1.92-1.83(m，4H)，1.42(s，6H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值418.2625，计算值418.2607
实施例43(6mg，20％)：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.30(s，1H)，8.20(s，1H)，7.28-7.25(m，2H)，7.19-7.15(m，3H)，4.49-4.45(m，2H)，4.27(s，2H)，3.34-3.26(m，1H)，3.09-3.03(m，2H)，3.05(s，3H)，2.27(s，3H)，2.14(s，3H)，1.91-1.84(m，4H)，1.45(s，6H)。
HR MS(m/z，2M+H+)测定值863.5453，计算值863.5448
实施例44：3-苄基-6-{1-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-哌啶-4-基}-4，5-二甲基-哒 嗪
向3-苄基-4，5-二甲基-6-(1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)哒嗪(20mg，0.047mmol)在8mL EtOH中的溶液中加入10％Pd-C(25mg，19mmol)。将反应混合物在氢气氛围中搅拌16小时。通过硅藻土过滤混合物，浓缩滤液，得到灰白色固体。通过制备型HPLC用10％-100％乙腈∶水(两个流动相均被3％n-PrOH改变)洗脱纯化混合物。合并包含预期产物的级分，冷冻干燥，得到白色固体(8mg，40％)。
MS(m/z，MH+)测定值427.4，计算值427.48
芳基酰基-、芳基羟基甲基-和芳基甲基-哒嗪类
如流程4所示，二氯-哒嗪II可以与芳基-取代的乙腈在脱质子化和随后氧化(例如用空气)后反应生成芳基酰基化合物VIII。用胺对氯进行亲核置换，得到实施例Id，其可以用例如NaBH4进一步还原成实施例Ie(路径A)。中间体VIII与哌嗪反应，生成化合物IX，然后化合物IX进行Wolf-Kishner还原，生成中间体X，然后中间体X进行亲核置换反应，得到实施例If(路径B)。在R”进一步进行官能团转化可以提供其它实施例。
实施例Id和Ie还可以通过氧-氟交换而转化为在Ar与哒嗪部分之间具有-CF2-和-CHF-连接基的实施例。
Figure BDA0000049063960000551
流程4
中间体的合成：
(R)-2-甲基-4-boc-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯(化合物8)
Figure BDA0000049063960000552
向在DMF(20mL)中的(R)-1-boc-甲基哌嗪(1g，5.0mmol)中加入5-氯-吡嗪-2-甲酸甲酯(862mg，5.0mmol)和Na2CO3(2.1g，20.0mmol)。将反应混合物在微波反应器中于140℃搅拌3小时。然后将混合物冷却至室温，真空除去有机溶剂，得到棕色固体，为产物(1.7g，定量)。
MS(m/z，MH+)测定值337
(R)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯(化合物9)
Figure BDA0000049063960000553
向(R)-2-甲基-4-boc-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯(2g，5.94mmol)在MeOH(17mL)中的溶液中加入HCl(4M的二
Figure BDA0000049063960000561
烷溶液，4.5mL，18mmol)。将反应混合物于70℃搅拌1小时。浓缩反应溶液，溶于DCM，用Na2CO3洗涤有机层，将pH值调整至8.0。减压除去溶剂，得到棕色油状物(1.2g，77％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.81(s，1H)，8.11(s，1H)，4.58(m，1H)，4.22(d，J＝13.1Hz，1H)，3.96(s，3H)，3.21(m，2H)，3.17(m，1H)，3.07(m，1H)，2.18(m，1H)，1.35(d，J＝6.5Hz，3H)。
MS(m/z，MH+)测定值237
2-((R)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2’]联吡嗪-5’-基)-丙烷-2-醇(化合物10)
Figure BDA0000049063960000562
于-78℃向(R)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯(60mg，0.24mmol)在THF(3mL)中的溶液中加入MeMgBr(3M的Et2O溶液，640μl，1.9mmol)。将反应混合物于0℃搅拌2小时。用饱和NH4Cl水溶液(3mL)使反应混合物淬灭。再加入水，用EtOAc萃取混合物；用NaHCO3洗涤有机层。通过在220nm检测波长处用乙腈的水溶液(含3％1-丙醇的5％-80％)对粗产物进行HPLC纯化，得到预期产物，为黄色油状物(20mg，35％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.30(s，1H)，8.10(s，1H)，5.06(s，1H)，4.40(m，1H)，3.91(m，1H)，3.98(m，2H)，2.85(m，2H)，2.65(m，1H)，1.40(s，6H)，1.13(d，J＝6.6Hz，3H)。
MS(m/z，MH+)测定值237
(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-苯基-甲酮(化合物11)
Figure BDA0000049063960000563
将3，6-二氯-4，5-二甲基-哒嗪(1.00g，5.65mmol)和苯基乙腈(652mL，5.65mmol)溶于甲苯(17.5mL)，冷却至0℃，加入NaHMDS(5.65mL，2M的THF溶液，11.3mmol)。将反应混合物搅拌16小时，同时从0℃缓慢温至室温。将混合物在开放空气中剧烈搅拌另外24小时。通过添加NaHCO3水溶液使混合物淬灭，分离各层，用DCM萃取水相。浓缩合并的有机相，得到标题化合物，为棕色固体(1.4g，定量)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝7.82(m，2H)，7.55(m，1H)，7.40(m，2H)，2.39(s，3H)，2.28(s，3H)。
MS(m/z，MH+)测定值247.4
(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-吡啶-4基-甲酮(化合物12)
Figure BDA0000049063960000571
根据下述方案，由3，6-二氯-4，5-二甲基-哒嗪(1.00g，5.65mmol)和4-吡啶基乙腈盐酸盐(1.05g，6.79mmol)得到标题化合物，为白色固体(822mg，59％)。
(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-吡啶-3-基-甲酮(化合物13)
Figure BDA0000049063960000572
在N2氛围中将3，6-二氯-4，5-二甲基-哒嗪(1.00g，5.65mmol)加入到烘干的250-mL圆底烧瓶中，然后加入THF(50mL)和吡啶-3-基-乙腈(800mg，7.68mmol)。用N2气流使反应物脱气30分钟。加入NaHMDS(14.13mL，1.0M，14.13mmol)，将反应物搅拌16小时。然后将反应混合物转入烧杯中，在开放气氛下剧烈搅拌数小时。用饱和碳酸氢钠溶液使反应物淬灭，用二氯甲烷萃取有机相。用盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化粗物质(0-20％甲醇的CH2Cl2溶液)，得到标题化合物(1.3g，93％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.97(s，1H)，8.80(d，J＝4.5Hz，1H)，8.25(d，J＝8.0Hz，1H)，7.60-7.64(m，1H)，2.44(s，3H)，2.33(s，3H)。
(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-吡啶-2-基-甲酮(化合物14)
Figure BDA0000049063960000581
在N2氛围中将3，6-二氯-4，5-二甲基-哒嗪(1.00g，5.65mmol)加入到干燥的250-mL圆底烧瓶中，然后加入THF(50mL)和吡啶-3-基-乙腈(800mg，7.68mmol)。使反应物脱气30分钟。加入NaHMDS(1.0M，14.13mL，14.13mmol)，将反应物搅拌过夜。然后将反应混合物转入烧杯中，在空气中剧烈搅拌数小时。用饱和碳酸氢钠溶液使反应物淬灭，用二氯甲烷萃取有机相。用盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化粗物质(0-20％甲醇的CH2Cl2溶液)，得到标题化合物(616mg，44％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.68(m，1H)，8.26(m，1H)，8.16(m，1H)，7.76(m，1H)，2.45(s，3H)，2.21(s，3H)。
[4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪-3-基]-吡啶-4-基-甲酮(化合物 15)
Figure BDA0000049063960000582
根据下述方案，由(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-吡啶-4-基-甲酮(750mg，3.03mmol)和(R)-2-甲基-哌嗪(364mg，3.63mmol)得到标题化合物，为浅褐色固体(778mg，83％)。
[4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪-3-基]-吡啶-3-基-甲酮(化合物 16)
Figure BDA0000049063960000583
将(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-吡啶-3-基-甲酮(1.2g，4.84mmol)和(R)-2-甲基-哌嗪(485mg，4.84mmol)加入到微波小瓶中，然后加入NMP(17mL)和三乙胺(2.01mL，14.49mmol)。密封小瓶，在170℃用微波照射30分钟。直接通过硅胶快速色谱法(0-20％甲醇的CH2Cl2溶液)纯化粗物质。将所得油状物与CH2Cl2和庚烷一起共蒸发，得到标题化合物，为粉末(1350mg，90％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝9.56(br s，1H)，8.96(s，1H)，8.84-8.86(m，1H)，8.21-8.24(m，1H)，7.60-7.63(m，1H)，3.72(s，1H)，3.69(s，1H)，3.45-3.50(m，1H)，3.26-3.31(m，4H)，2.30(s，6H)，1.32(d，J＝6.5Hz，3H)。
[4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基-甲酮(化合物 17)
将(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-吡啶-2-基-甲酮(550mg，2.22mmol)、(R)-2-甲基-哌嗪(320mg，3.20mmol)加入到微波小瓶中，然后加入NMP(6mL)和三乙胺(0.92mL，6.66mmol)。密封小瓶，在180℃用微波照射1小时。直接通过硅胶快速色谱法(20-70％甲醇的CH2Cl2溶液)纯化粗物质，得到标题化合物(671mg，97％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝9.57(br s，1H)，8.66(d，J＝5.0Hz，1H)，8.10-8.17(m，2H)，7.69-7.73(m，1H)，3.65(m，1H)，3.62(m，1H)，3.45-3.50(m，1H)，3.12-3.33(m，4H)，2.29(s，3H)，2.15(s，3H)，1.32(d，J＝6.5Hz，3H)。
4，5-二甲基-3-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-6-吡啶-4-基甲基-哒嗪(化合物18)
Figure BDA0000049063960000592
根据下述方案，由4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪-3-基]-吡啶-4-基-甲酮(550mg，1.77mmol)、一水合肼(0.43mL，8.84mmol)和KOH颗粒(495mg，8.82mmol)得到标题化合物(372mg，71％)。
4，5-二甲基-3-((RR)-3-甲基-哌嗪-1-基)-6-吡啶-3-基甲基-哒嗪(化合物19)
Figure BDA0000049063960000601
在圆底烧瓶中加入4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪-3-基]-吡啶-3-基-甲酮(1300mg，4.17mmol)、一水合肼(1045mg，20.88mmol)、KOH颗粒(1171.4mg，20.88mmol)和二甘醇(26mL)，将反应物在190℃加热4小时。将反应混合物温至室温，倾入水中。用二氯甲烷萃取有机相。用盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法(50/40/10CH2Cl2/MeOH/NH4OH))纯化粗物质，得到标题化合物(1.17g，94％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.47(s，1H)，8.41-8.42(m，1H)，7.54-7.56(m，1H)，7.29-7.32(m，1H)，4.25(s，2H)，4.12(br s，1H)，3.17-3.22(m，3H)，2.72-2.94(m，4H)，2.17(s，3H)，2.13(s，3H)，0.99(d，J＝6.0Hz，3H)。
实施例45-55的合成
实施例45：(R)-4-(6-苯甲酰基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2’]联吡嗪-5’-甲酸甲酯
Figure BDA0000049063960000602
向在DMF(5mL)中的(R)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2]联吡嗪-5’-甲酸甲酯(100mg，0.403mmol)中加入(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-苯基-甲酮(100mg，0.402mmol)和碳酸钠(170.7mg，1.61mmol)，将反应混合物在180℃在微波反应器中加热4小时。然后用DCM(25mL)稀释反应混合物，用NaHCO3和水洗涤。萃取和减压除去有机溶剂。通过在220nm检测波长处使用乙腈的水溶液(含3％1-丙醇的20％-100％)的HPLC纯化粗产物，收集预期产物，为灰白色粉末(58mg，32％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.65(s，1H)，8.35(s，1H)，7.48-7.65(m，5H)，4.39(d，J＝13.1Hz，1H)，3.54(d，J＝12.6Hz，1H)，3.29(m，2H)，3.17(m，3H)，2.31(s，3H)，2.18(s，3H)，1.30(s，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值446.5098，计算值446.5104
实施例46：(6-{(R)-4-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基]-3-甲基-哌嗪-1-基}-4，5- 二甲基-哒嗪-3-基)-苯基-甲酮
Figure BDA0000049063960000611
向在DMF(3mL)中的(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-苯基-甲酮(50mg，0.20mmol)中加入2-[4-(R)-2-甲基-哌嗪-1-基]-苯基]-丙烷-2-醇(47.4mg，0.20mmol)和碳酸钠(86.2mg，0.81mmol)，将反应混合物在180℃在微波反应器中加热4小时。然后用DCM(15mL)稀释反应混合物，用NaHCO3和水洗涤。萃取和减压除去有机溶剂。通过在220nm UV检测波长处使用ACN的水溶液(含3％1-丙醇的20％-100％)的HPLC纯化粗产物，得到预期产物，为灰白色粉末(25mg，28％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.42(s，1H)，8.23(s，1H)，7.61-7.89(m，5H)，4.77(m，1H)，4.25(d，J＝12.6Hz，1H)，3.75(d，J＝12.6Hz，1H)，3.65(d，J＝12.6Hz，1H)，3.29(m，2H)，3.11(m，1H)，2.50(s，3H)，2.32(s，3H)，1.47(s，6H)，1.35(d，J＝6.6Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值444.2256，计算值444.2651
实施例47：(R)-4[6-(羟基-苯基-甲基)-4，5-二甲基-哒嗪-3-基]-2-甲基-3，4，5，6- 四氢-2H-[1，2]联吡嗪-5’-甲酸甲酯
Figure BDA0000049063960000612
在15分钟内向在MeOH(2mL)中的(R)-4-(6-苯甲酰基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2’]联吡嗪-5’-甲酸甲酯(8mg，0.017mmol)中加入硼氢化钠(170μg，0.004mmol)，将反应混合物于室温搅拌1h。用DCM稀释反应混合物，用NaHCO3和水洗涤。分离有机溶剂，减压除去溶剂。通过在220nm检测波长处使用乙腈的水溶液(含3％1-丙醇的10％-100％)的HPLC纯化粗产物，得到预期产物，为灰白色粉末(6mg，79％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.77(s，1H)，8.47(s，1H)，7.29-7.38(m，5H)，6.15(s，1H)，4.92(m，1H)，4.50(m，1H)，3.89(s，3H)，3.49-3.61(m，3H)，3.17-3.02(m，2H)，2.30(s，3H)，2.14(s，3H)，1.43(d，J＝6.6Hz，3H)。
MS(m/z，MH+)测定值449
实施例48：2-{(R)-4-[6-(羟基-苯基-甲基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基 -3，4，5，6-四氢-2H-[1，2]联吡嗪-5’-基]-丙烷-2-醇
Figure BDA0000049063960000621
于-78℃向在THF(2mL)中的(R)-4[6-(羟基-苯基-甲基)-4，5-二甲基-哒嗪-3-基]-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2]联吡嗪-5’-甲酸甲酯(15mg，0.032mmol)中加入甲基溴化镁(32μl，0.095mmol)，将反应混合物于0℃搅拌2小时。用DCM稀释反应混合物，用NH4Cl和水洗涤。将有机溶剂分离、萃取和减压浓缩。通过在220nm检测波长处使用乙腈的水溶液(含3％1-丙醇的10％-100％)的HPLC纯化粗产物，得到预期产物，为灰白色粉末(11mg，77％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.27(s，1H)，8.07(s，1H)，7.29-7.34(m，5H)，5.88(s，1H)，4.67(m，1H)，4.19(m，1H)，3.61(m，1H)，3.52-3.31(m，3H)，3.19(tt，J＝3.5Hz，12.7Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.05(s，3H)，1.57(s，6H)，1.40(d，J＝6.6Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值449.2649，计算值444.2665
实施例49：(R)-4-(4，5-二甲基-6-吡啶-4-基甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6- 四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯
Figure BDA0000049063960000622
根据下述对实施例46所述的方案，由4，5-二甲基-3-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-6-吡啶-4-基甲基-哒嗪(155mg，0.51mmol)和5-氯-吡嗪-2-甲酸甲酯(99mg，0.56mmol)得到标题化合物，为橙色油状物(123mg，56％)。
实施例50：2-[(R)-4-(4，5-二甲基-6-吡啶-4-基甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6- 四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇
Figure BDA0000049063960000631
根据下述方案，由(R)-4-(4，5-二甲基-6-吡啶-4-基甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯(110mg，0.25mmol)和MeMgI(0.660mL，1.98mmol)得到标题化合物，为黄色粉末(40mg，37％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.47(d，J＝5.5Hz，2H)，8.36(s，1H)，8.21(s，1H)，7.21(d，J＝5.5Hz，2H)，5.15(s，1H)，4.68(br s，1H)，4.29(s，2H)，4.17(d，J＝12.5Hz，1H)，3.21-3.59(m，3H)，3.07(dd，J＝12.5Hz，3.5Hz，1H)，2.89-3.00(m，1H)，2.28(s，3H)，2.13(s，3H)，1.42(s，6H)，1.28(d，J＝6.5Hz，3H)。HR MS(m/z，MH+)测定值434.2650，计算值434.2668
实施例51：(R)-4-(4，5-二甲基-6-吡啶-3-基甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6- 四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯
Figure BDA0000049063960000632
将4，5-二甲基-3-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-6-吡啶-3-基甲基-哒嗪(350mg，1.18mmol)和5-氯-吡嗪-2-甲酸甲酯(243.7mg，1.41mmol)加入到微波小瓶中，然后加入NMP(7mL)和三乙胺(0.49mL，3.54mmol)。密封小瓶，在145℃用微波照射30分钟。直接通过硅胶快速色谱法纯化粗物质(0-20％甲醇的CH2Cl2溶液)，得到标题化合物(30mg，6％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.71(s，1H)，8.52(d，J＝6Hz，1H)，8.48(s，1H)，8.42(s，1H)，7.57(d，J＝8Hz，1H)，7.30-7.33(m，1H)，4.85(m，1H)，4.45(d，J＝12Hz，1H)，4.29(s，2H)，3.79(s，3H)，3.41-3.55(m，3H)，3.08(m，1H)，2.93-2.99(m，1H)，2.28(s，3H)，2.17(s，3H)，1.36(d，J＝7Hz，3H)。
实施例52：2-[(R)-4-(4，5-二甲基-6-吡啶-3-基甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6- 四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇
Figure BDA0000049063960000641
在N2氛围中将(R)-4-(4，5-二甲基-6-吡啶-3-基甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯(25mg，0.058mmol)加入到烘干的圆底烧瓶中，然后加入THF(0.6mL)。然后将反应物放入干冰浴达15分钟。滴加MeMgI(0.15mL，3.0M，0.461mmol)，将反应物于-78℃搅拌30分钟。将反应物温至0℃，搅拌30分钟或直到观察到反应完全。用饱和氯化铵溶液使反应混合物淬灭。用乙酸乙酯萃取有机相。经Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化粗物质(2％CH2Cl2，98％(50/30/20乙酸乙酯/庚烷/MeOH))，得到标题化合物(3.5mg，14％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.49(s，1H)，8.42(d，J＝6.7Hz，1H)，8.36(s，1H)，8.21(s，1H)，7.57(d，J＝7.9Hz，1H)，7.32(m，1H)，5.13(s，1H)，4.67(s，br，1H)，4.29(s，2H)，4.17(d，J＝12.5Hz，1H)，3.51(d，J＝12.5Hz，1H)，3.34-3.42(m，2H)，3.07(dd，J＝12.1Hz，1H)，2.93-2.97(dt，J＝3.4Hz，12.5Hz，1H)，2.28(s，3H)，2.17(s，3H)，1.43(s，6H)，1.28(d，J＝6.5Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值434.2663，计算值434.2668
实施例53：(R)-4-(4，5-二甲基-6-吡啶-2-基甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6- 四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯
Figure BDA0000049063960000642
步骤1：2，4-二甲基-3-吡啶-2-基甲基-戊烷-3-醇(化合物20)的制备
将2-甲基-吡啶(1.86g，20mmol)溶于THF(20mL)，冷却至-30℃。向溶液中滴加叔丁基锂(11.8mL，1.7M的戊烷溶液，20mmol)，将反应物于-30℃搅拌30分钟。加入2，4-二甲基-戊烷-3-酮(3.4mL，24mmol)，将反应物温至室温，搅拌2小时。加入H2O(30mL)，用EtOAc萃取。用盐水洗涤合并的有机相，真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(EtOAc/庚烷)，得到2，4-二甲基-3-吡啶-2-基甲基-戊烷-3-醇(4.14g，定量)。
步骤2：(R)-4-(4，5-二甲基-6-吡啶-2-基甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯(实施例53)
将(R)-4-(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯(250mg，0.663mmol)与2，4-二甲基-3-吡啶-2-基甲基-戊烷-3-醇(114.6mg，0.553mmol)、碳酸铯(216.2mg，0.664mmol)、三氟乙酸钯(6.2mg，0.028mmol)、三环己基膦(15.5mg，0.055)和甲苯(2mL)合并。将反应混合物加热至110℃达65小时，以达到10％转化率。加入H2O，用EtOAc萃取。真空浓缩合并的有机相。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(MeOH/CH2Cl2)，得到标题化合物(13mg，5.4％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.71(d，J＝1.3Hz，1H)，8.46-8.43(m，1H)，8.41(d，J＝1.3Hz，1H)，7.71(td，J＝7.7Hz，1.8Hz，1H)，7.27-7.18(m，2H)，4.86(br s，1H)，4.41(s，2H)，4.48-4.38(m，1H)，3.83(s，3H)，3.59-3.38(m，3H)，3.08(dd，J＝12.6Hz，3.7Hz，1H)，2.95(td，J＝12.2Hz，3.2Hz，1H)，2.28(s，3H)，2.16(s，3H)，1.36(d，J＝6.6Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值434.2236，计算值434.2304
实施例54：2-[(R)-4-(4，5-二甲基-6-吡啶-2基甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6- 四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇
如实施例52所述，通过添加MeMgI由实施例53制得实施例54。
HR MS(m/z，MH+)测定值434.2666，计算值434.2668
实施例55：2-{(R)-4-[6-(二氟-苯基-甲基)-4，5-二甲基-哒嗪-3-基]-2-甲基 -3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基}-丙烷-2-醇
Figure BDA0000049063960000652
步骤1：3-氯-4，5-二甲基-6-(2-苯基-[1，3]二硫戊环-2-基)-哒嗪(化合物21)
Figure BDA0000049063960000661
于0℃、在氮气氛围中向(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-苯基-甲酮(300mg，1.22mmol)的DCM溶液中加入1，2-乙二硫醇(0.408ml，4.86mmol)和BF3·OEt2(0.154ml，1.216mmol)。将反应混合物于室温搅拌16小时。向反应物中加入BF3·OEt2(0.154ml，1.216mmol)和1，2-乙二硫醇(0.408ml，4.86mmol)，于40℃加热6小时。于0℃用饱和NaHCO3使反应物淬灭，用盐水洗涤有机相。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到黄色固体。将残余物上硅胶，通过快速色谱法用20-80％EtOAc∶庚烷洗脱纯化。合并含有预期产物的级分，浓缩，得到白色固体(280mg，73％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝7.54-7.53(m，2H)，7.28-7.22(m，3H)，3.46-3.34(m，4H)，2.30(s，3H)，1.94(s，3H)。
MS(m/z，MH+)测定值323.0，计算值322.88
步骤2：3-氯-6-(二氟-苯基-甲基)-4，5-二甲基-哒嗪(化合物22)
Figure BDA0000049063960000662
向NBS(49.6mg，0.279mmol)的DCM(1mL)溶液中加入DAST(0.147ml，1.115mmol)。将反应混合物冷却至0℃，然后加入3-氯-4，5-二甲基-6-(2-苯基-[1，3]二硫戊环-2-基)-哒嗪(90mg，0.279mmol)。将混合物于室温搅拌3小时。再加入2当量DAST(73.7μL，0.558mmol)，将混合物再搅拌2小时。于0℃用饱和NaHCO3使反应混合物淬灭。用DCM洗涤水层，经Na2SO4干燥合并的有机层，浓缩，得到粗混合物。将残余物上硅胶，通过快速色谱法用15-45％EtOAc∶庚烷洗脱纯化。合并含有预期产物的级分，浓缩，得到黄色油状物(15mg，20％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝7.54-7.52(m，2H)，7.47-7.43(m，3H)，2.42-2.41(m，6H)。
19F NMR(400MHz，CDCl3)δ＝-89.9
MS(m/z，MH+)测定值269.2，计算值269.06
步骤3：2-{(R)-4-[6-(二氟-苯基-甲基)-4，5-二甲基-哒嗪-3-基]-2-甲基-3，4，5，6- 四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基}-丙烷-2-醇(实施例55)
如实施例46所述由化合物10和22制得实施例55。
哌啶-1-基-哒嗪类
如流程5所示，哌啶-1-基-哒嗪类可以通过多种路径制得。根据路径A，可以使官能化哌啶与中间体V反应，得到实施例Ig。实施例Ih和Ii可以通过路径B制得。V与4-哌啶基甲酸酯反应，在酯水解后提供了中间体XIa，中间体XIa可以反应生成咪唑-取代的实施例Ih或者可以与邻位-二苯胺缩合生成实施例Ii。路径C通过使中间体V与4-氰基哌啶反应和随后使XIb与R”-Br进行Pd-催化反应提供了实施例Ij。进一步的咪唑-取代的实施例Ik可以由中间体XIc制备(通过在氨和酮-醛前体的存在下进行缩合反应)，中间体XIc可通过4-羟基甲基-哌啶与V反应和然后使醇官能团氧化而得到(路径D)。路径E提供了酮XId，酮XId可以作为金属-有机试剂如R”-Li的亲电体以提供叔醇实例II。用氟化试剂如Deoxofluor对羟基进行转化，又得到实施例In。酮XId可以用于与胺和例如作为还原剂的NaBH(OAc)3进行还原性胺化，得到实施例Io。
Figure BDA0000049063960000681
流程5
通过路径A合成实施例56：
实施例56：2-[1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-基]-2，3-二氢-1H-异 吲哚
Figure BDA0000049063960000682
步骤1：8-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸烷(化 合物23)
Figure BDA0000049063960000691
按照与对化合物3所述类似的方法由3-苄基-6-氯-4，5-二甲基哒嗪和1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸烷制得化合物23。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.89(4H，m)，2.08(3H，s)，2.17(3H，s)，3.33(4H，m)，4.00(4H，s)，4.29(2H，s)，7.22(5H，m)。
MS(m/z，MH+)测定值340.4
步骤2：1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-酮(化合物24)
Figure BDA0000049063960000692
向在丙酮(50mL)中的化合物23(917mg，2.46mmol)中加入盐酸(1.2N，20mL)。将混合物搅拌46小时，然后用饱和碳酸氢钠处理至略碱性，用乙酸乙酯萃取(3x)。用盐水洗涤有机萃取物，干燥，得到油状物，在通过硅胶色谱法纯化(40％乙酸乙酯的庚烷溶液)后得到纯24，为粘稠油状物(565mg，78％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝2.1(3H，s)，2.2(3H，s)，2.7(4H，m)，3.6(4H，m)，4.3(2H，s)，7.3(5H，m)。
HR MS(m/z，MH+)测定值296.1763
步骤3：2-[1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-基]-2，3二氢-1H-异吲哚 (实施例56)
向在无水THF/CH2Cl2(1.5ml/1.5mL)中的酮24(43mg，0.15mmol)中加入异二氢吲哚(25μL，0.22mmol)和冰醋酸(3μL)和三乙酰氧基硼氢化钠(98mg，0.44mmol)。将混合物搅拌2小时，用饱和碳酸氢钠淬灭，用CH2Cl2萃取。干燥有机相，旋转蒸发，进行HPLC纯化(乙腈-水-0.1％TFA)，得到标题化合物，为TFA盐(67mg，89％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝2.2(4H，m)，2.3(3H，s)，2.4(3H，s)，3.2(2H，m)，3.6(1H，m)，3.8(2H，m)，4.5(4H，bs)，5.1(2H，bs)，7.3(9H，m)。
HR MS(m/z，MH+)测定值399.2547
通过路径B合成实施例57-59：
实施例57：3-苄基-6-[4-(5-氯-1H-咪唑-2-基)-哌啶-1-基]-4，5-二甲基-哒嗪
Figure BDA0000049063960000701
步骤1：1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-甲酸乙酯(化合物25)
向3-苄基-6-氯-4，5-二甲基-哒嗪(1.0g，4.31mmol)在NMP(10mL)中的溶液中加入哌啶-4-甲酸乙酯(2.0g，12.9mmol)和DIPEA(3.7mL，21.6mmol)。将混合物在210℃在微波中加热1.5小时。在80℃通过旋转蒸发浓缩混合物。通过HPLC纯化粗产物(含有0.1％TFA的CH3CN/H2O：22％～45％)，得到1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-甲酸乙酯(0.94g，61％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.28(3H，t)，1.90(2H，q)，2.07(2H，d)，2.23(3H，s)，2.33(3H，s)，2.54(1H，m)，3.03(2H，t)，3.57(2H，d)，4.17(2H，q)，4.50(2H，s)，7.19(2H，d)，7.24(1H，d)，7.29(2H，t)。
HR MS(m/z，MH+)测定值354.2179
步骤2：1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-甲酸(化合物26)
向1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-甲酸乙酯(0.88g，2.5mmol)在EtOH(8mL)中的溶液中加入氢氧化钠(0.8g，20.1mmol)在H2O(8mL)中的溶液。在25℃搅拌2小时后，浓缩混合物，用CH2Cl2(2x10mL)萃取以除去杂质。用1N HCl将水层酸化至pH～5，用CH2Cl2(6x20mL)萃取。经Na2SO4干燥合并的有机溶液，过滤，浓缩，得到1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-甲酸(0.68g，83％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.92(2H，q)，2.08(2H，d)，2.25(3H，s)，2.35(3H，s)，2.64(1H，m)，3.11(2H，t)，3.60(2H，d)，4.49(2H，s)，7.20(2H，d)，7.26(1H，t)，7.31(2H，t)。
HR MS(m/z，MH+)测定值326.1870
步骤3：1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-甲酸氰基甲基酰胺(化合物 27)
向1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-甲酸(350mg，1.08mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入DIPEA(0.94mL，5.4mmol)和HATU(490mg，1.29mmol)。于25℃搅拌后，加入氨基乙腈盐酸盐(119mg，1.29mmol)。将混合物搅拌2小时，用EtOAc(20mL)稀释，用H2O(3x10mL)洗涤。经Na2SO4干燥有机层，过滤，浓缩。通过色谱法纯化粗产物(CH2Cl2/MeOH：97％/3％)，得到1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-甲酸氰基甲基酰胺(280mg，72％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.97(4H，m)，2.25(3H，s)，2.36(3H，s)，2.58(1H，m)，3.07(2H，t)，3.67(2H，d)，4.12(2H，d)，4.44(2H，s)，7.14(2H，d)，7.31(3H，m)。
MS(m/z，MH+)测定值364.3
步骤4：3-苄基-6-[4-(5-氯-1H-咪唑-2-基)-哌啶-1-基]-4，5-二甲基-哒嗪(实施 例57)
向1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-甲酸氰基甲基酰胺(20mg，0.055mmol)和三苯膦在乙腈(1mL)中的25℃溶液中加入四氯化碳(42mg，0.28mmol)。在50℃搅拌3小时后，浓缩混合物，用CH2Cl2(10mL)稀释，用氢氧化钠(2mL，1N)和H2O(2mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过HPLC纯化粗产物(含有0.1％TFA的CH3CN/H2O：22％～45％)，得到3-苄基-6-[4-(5-氯-1H-咪唑-2-基)-哌啶-1-基]-4，5-二甲基-哒嗪(11.8mg，56％)。
1H-NMR(400MHz，MeOH-d4)δ＝2.09(2H，m)，2.20(2H，d)，2.35(3H，s)，2.50(3H，s)，3.20(3H，m)，3.87(2H，d)，4.46(2H，s)，7.25(2H，d)，7.34(1H，t)，7.35(1H，s)，7.39(2H，t)。
HR MS(m/z，MH+)计算值382.1794
实施例58：2-[1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-基]-1H-咪唑 并[4，5-b] 吡啶
向1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-甲酸(化合物26，50mg，0.15mmol)和2，3-二氨基吡啶(33mg，0.30mmol)在CH2Cl2(0.5mL)中的溶液中加入聚磷酸(1mL)。浓缩混合物以除去CH2Cl2。在150℃搅拌1.5小时后，将混合物冷却至25℃，用水(10mL)稀释，用10％氢氧化钠水溶液碱化至pH～8。用CH2Cl2(5x15mL)萃取水溶液。浓缩合并的有机层，通过HPLC纯化(含有0.1％TFA的CH3CN/H2O：22％～45％)，得到2-[1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-基]-1H-咪唑并[4，5-b]吡啶(33.8mg，55％)。
1H-NMR(400MHz，MeOH-d4)δ＝2.28(2H，qd)，2.36(3H，s)，2.38(2H，dd)，2.53(3H，s)，3.29(2H，t)，3.56(1H，m)，3.93(2H，d)，4.48(2H，s)，7.25(2H，d)，7.32(1H，t)，7.39(2H，t)，7.70(1H，dd)，8.46(1H，d)，8.62(1H，d)。
HR MS(m/z，MH+)测定值399.2294
实施例59：2-[1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-4-甲基-哌啶-4-基]-1H-咪唑 并[4，5-c]吡啶
Figure BDA0000049063960000722
步骤1：1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-4-甲基-哌啶-4-甲酸乙酯(化金物 28)
向3-苄基-6-氯-4，5-二甲基-哒嗪(1.0g，4.3mmol)在NMP(10mL)中的溶液中加入4-甲基-哌啶-4-甲酸乙酯(2.0g，8.6mmol)和DIPEA(3.7mL，21.6mmol)。将混合物在210℃在微波中加热1.5小时。在80℃通过旋转蒸发浓缩混合物。通过HPLC纯化粗产物(含有0.1％TFA的CH3CN/H2O：22％～45％)，得到1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-4-甲基-哌啶-4-甲酸乙酯(0.64g，41％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.27(3H，s)，1.29(3H，t)，1.62(2H，t)，2.24(3H，s)，2.27(2H，d)，2.34(3H，s)，3.13(2H，t)，3.47(2H，d)，4.20(2H，q)，4.42(2H，s)，7.11(2H，d)，7.28(3H，m)。
HR MS(m/z，MH+)测定值368.2335
步骤2：1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-4-甲基-哌啶-4-甲酸(化合物29)
向1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-4-甲基-哌啶-4-甲酸乙酯(0.60g，1.6mmol)在EtOH(5mL)中的溶液中加入氢氧化钠(0.5g，13.2mmol)的H2O(5mL)溶液。在25℃搅拌2小时后，浓缩混合物，用CH2Cl2(2x10mL)萃取以除去杂质。用1N HCl将水层酸化至pH～5，用CH2Cl2(6x20mL)萃取。经Na2SO4干燥合并的有机溶液，过滤，浓缩，得到1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-4-甲基-哌啶-4-甲酸(0.49g，89％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.33(3H，s)，1.60(2H，t)，2.13(3H，s)，2.23(3H，s)，2.31(2H，d)，3.17(2H，t)，3.38(2H，d)，4.42(2H，s)，7.21(2H，d)，7.27(3H，t)。
HR MS(m/z，MH+)测定值340.2028
步骤3：2-[1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-4-甲基-哌啶-4-基]-1H-咪唑并 [4，5-c]吡啶(实施例59)
向1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-4-甲基-哌啶-4-甲酸(50mg，0.15mmol)和2，3-二氨基吡啶(32mg，0.29mmol)在CH2Cl2(0.5mL)中的溶液中加入聚磷酸(1mL)。浓缩混合物以除去CH2Cl2。在150℃搅拌3.5小时后，将混合物冷却至25℃，用水(3mL)稀释，用10％氢氧化钠水溶液碱化至pH～8。用CH2Cl2(3x10mL)萃取水溶液。浓缩合并的有机层，通过HPLC纯化(含有0.1％TFA的CH3CN/H2O：15％～40％)，得到2-[1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-4-甲基-哌啶-4-基]-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶(21mg，27％)。
1H-NMR(400MHz，MeOH-d4)δ＝1.60(3H，s)，2.15(2H，t)，2.34(3H，s)，2.49(3H，s)，2.65(2H，d)，3.35(2H，d)，3.65(2H，d)，4.43(2H，s)，7.22(2H，d)，7.31(1H，t)，7.37(2H，t)，8.12(1H，d)，8.56(1H，d)，9.23(1H，s)。
HR MS(m/z，MH+)测定值413.2446
通过路径C合成实施例60：
实施例60：1′-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-5-(1-羟基-1-甲基-乙 基)-2′，3′，5′，6′-四氢-1′H-[2，4′]联吡啶-4′-甲腈
Figure BDA0000049063960000741
步骤1：1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-甲腈(化合物30)
Figure BDA0000049063960000742
按照与对化合物3所述类似的方法由化合物10和哌啶-4-甲腈制得化合物30。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝2.0-2.2(4H，m)，2.1(3H，s)，2.2(3H，s)，2.8(1H，m)，3.1(2H，m)，3.4(2H，m)，4.3(2H，s)，7.2(5H，m)。
HR MS(m/z，MH+)测定值307.1930
步骤2：2-(6-溴-吡啶-3-基)-丙烷-2-醇(化合物31)
Figure BDA0000049063960000743
于-78℃向在THF(15mL)和乙醚(20mL)混合物中的2-溴-5-碘-吡啶(2.974g，10.2mmol)中滴加正丁基锂(2.5M的己烷溶液，4L，10.2mmol)。将混合物于-78℃搅拌30分钟，然后滴加丙酮(无水，0.749uL，10.2mmol)。将混合物历经1.5小时缓慢温至-50℃，用饱和氯化铵淬灭，用乙酸乙酯萃取。分离有机相，干燥，旋转蒸发。通过硅胶色谱法纯化残余物(10-20％乙酸乙酯的庚烷溶液)，得到标题化合物，为白色固体(1.40g，64％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.60(6H，s)，1.96(1H，s)，7.45(1H，d，J＝8Hz)，7.70(1H，dd，J＝4，8Hz)，8.47(1H，s)。
HR MS(m/z，MH+)测定值216.0034
步骤3：1′-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-2′，3′，5′，6′- 四氢-1′H-[2，4′]联吡啶-4′-甲腈(实施例60)
向化合物30(122mg，0.398mmol)和化合物31(103mg，0.478mmol)在无水甲苯(3mL)中的混合物中加入Pd2(dba)3(18mg，0.020mmol)。给混合物充氮气7分钟，向其中加入三叔丁基膦(1.0M的甲苯溶液，40μL，0.040mmol)和六甲基二硅基胺基锂(1.0M的甲苯溶液，0.995uL，0.995mmol)。将混合物于室温搅拌15分钟，然后于60℃搅拌3小时，冷却至室温。向反应混合物中再加入Pd2(dba)3(18mg)、三叔丁基膦(40μL)和六甲基二硅基胺基锂(0.995μL)。搅拌17小时后，用饱和氯化铵使混合物淬灭，用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机相，干燥，旋转蒸发，通过制备型HPLC纯化(乙腈-水-0.1％THF)，得到标题化合物，为TFA盐(24mg，11％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.63(6H，s)，2.23(2H，m)，2.27(3H，s)，2.41(3H，s)，2.58(2H，m)，3.57(2H，m)，3.81(2H，m)，4.52(2H，s)，7.30(5H，m)，7.68(1H，d，J＝12Hz)，7.96(1H，m)，8.79(1H，s)。
HR MS(m/z，MH+)测定值442.2600
通过路径D合成实施例61：
中间体的合成：
(5’-苄基-3’，4’-二甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2]联吡啶4-基)-甲醇(化合物32)
Figure BDA0000049063960000751
向哌啶-4-基-甲醇(125mg，1.03mmol)在NMP(3mL)中的溶液中加入3-苄基-6-氯-4，5-二甲基-哒嗪(60mg，0.258mmol)和TEA。将反应混合物于210℃在微波反应器中搅拌2小时。然后用DCM(15mL)稀释反应混合物，用NaHCO3和水洗涤。分离有机溶剂，减压除去。通过用乙腈的水溶液(含3％1-丙醇的20％-100％)、在220nm检测波长的HPLC纯化粗产物，得到预期产物，为灰白色粉末(200mg，62％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝7.23-7.36(m，5H)，4.55(t，J＝5.3Hz，1H)，4.29(s，2H)，3.45(m，2H)，2.85(m，2H)，2.57(s，1H)，2.21(s，3H)，2.14(s，3H)，1.84(m，2H)，1.62(m，1H)，1.40(m，2H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值312.2069，计算值312.2076
1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-甲醛(化合物33)
Figure BDA0000049063960000761
向在DCM(5mL)中的5’-苄基-3’，4’-二甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2]联吡啶4-基)-甲醇(155mg，0.473mmol)中加入Dess-Martin试剂(257mg，0.59mmol)，将反应混合物于室温搅拌2小时。然后用DCM稀释反应混合物，用NaHCO3和水洗涤。分离有机相，减压除去溶剂。通过用乙腈的水溶液(含3％1-丙醇的20％-95％)、在220nm检测波长的HPLC纯化粗产物，得到预期产物，为灰白色粉末(120mg，78％)。
MS(m/z，MH+)测定值310
实施例61：3-苄基-4，5-二甲基-6-[4-(4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-哌啶-1-基]- 哒嗪
Figure BDA0000049063960000762
向三水合乙酸钠(50mg，0.615mmol)在水(5mL)中的溶液中加入1，1-二溴-3，3，3-三氟丙酮(83.5mg，0.307mmol)。将溶液在100℃浴温加热45分钟，然后冷却。将溶液加入到1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-甲醛(100mg，0.31mmol)在MeOH(5mL)中的溶液和浓氨水在MeOH中的溶液(1.7mL，7M，12mmol)中。将反应混合物于室温静置3.5小时，然后减压浓缩反应混合物，得到半固体，使其从庚烷中重结晶，得到粗产物。用乙腈的水溶液(含3％1-丙醇的10％-100％)、在220nm检测波长的HPLC纯化粗产物，得到预期产物，为灰白色粉末(28mg，22％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝7.72(s，1H)，7.23-7.36(m，5H)，4.29(s，2H)，3.52(m，1H)，3.37(m，2H)，2.97(m，2H)，2.24(s，3H)，2.20-1.97(m，4H)，2.14(s，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值416.2050，计算值416.2062
通过路径E合成实施例62-64：
实施例62：2-[1-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌啶-4-基]-1，2，3，4-四氢-异 喹啉
Figure BDA0000049063960000771
按照实施例56使用的方法由化合物24和1，2，3，4-四氢-异喹啉制得化合物，为TFA盐
1H-NMR(400MHz，MeOH-d4)δ＝2.1(2H，m)，2.3(3H，s)，2.3(2H，m)，2.4(3H，s)，3.1-3.9(9H，m)，4.4(2H，s)，4.6(2H，s)，7.3(9H，m)。
HR MS(m/z，MH+)测定值413.2689
实施例63：1′-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-5-(1-羟基-1-甲基-乙 基)-2′，3′，5′，6′-四氢-1′H-[2，4′]联吡啶4′-醇
Figure BDA0000049063960000772
步骤1：2-溴-5-[1-甲基-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲氧基)-乙基]-吡啶(化 合物34)
Figure BDA0000049063960000773
于0℃向在无水DMF(5mL)中的化合物31(532mg，2.46mmol)中加入氢化钠(60％的矿物油混悬液，138mg，3.45mmol)。将混合物于室温搅拌1小时，然后冷却至0℃，向其中加入SEMCl(0.564uL，3.2mmol)。将混合物于室温搅拌16小时，于50℃搅拌1小时，冷却至室温，用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机相，干燥，旋转蒸发。通过硅胶色谱法纯化油状残余物(10-15％乙酸乙酯的庚烷溶液)，得到标题化合物，为澄清油状物(474mg，56％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.0(9H，s)，0.84(2H，m)，1.59(6H，s)，3.60(2H，m)，4.60(2H，s)，7.43(1H，d，J＝8Hz)，7.61(1H，m)，8.42(1H，s)。
HR MS(m/z，MH+)测定值346.0822
步骤2：1′-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-5-[1-甲基-1-(2-三甲基甲硅烷基- 乙氧基甲氧基)-乙基]-2′，3′，5′，6′-四氢-1′H-[2，4′]联吡啶4′-醇(化合物35)
Figure BDA0000049063960000781
于-78℃向在THF(6mL)中的化合物34(272mg，0.786mmol)中加入叔丁基锂(1.7M的戊烷溶液，1.0mL，1.7mmol)。将混合物于-78℃搅拌30分钟，于-78℃向其中加入在THF(2mL)中的化合物24(209mg，0.707mmol)。搅拌混合物，在1小时内缓慢温至-40℃，然后于-40℃用饱和氯化铵淬灭。除去THF，用乙酸乙酯萃取残余物(3x)。用盐水洗涤有机相，用无水Na2SO4干燥，浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物(40-60％乙酸乙酯的庚烷溶液)，得到回收的化合物24(103mg，49％)和标题化合物35(106mg，27％)，为白色固体。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.0(9H，s)，0.87(2H，t，J＝8Hz)，1.64(6H，s)，1.74(2H，m)，2.10(3H，s)，2.22(3H，s)，2.28(2H，m)，3.57(6H，m)，4.31(2H，s)，4.66(2H，s)，4.95(1H，s)，7.27(5H，m)，7.43(1H，m)，7.80(1H，m)，8.62(1H，m)。
HR MS(m/z，MH+)测定值563.3392
步骤3：1′-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-2′，3′，5′，6′- 四氢-1′H-[2，4′]联吡啶4′-醇(实施例63)
于0℃向在CH2Cl2(1.5mL)中的化合物35(44mg，0.078mol)中加入TFA(0.15μL)。将混合物于0℃搅拌2小时，用25％乙酸铵淬灭，用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机相，干燥，浓缩，得到黄色残余物，通过硅胶色谱法纯化(0-5％甲醇的CH2Cl2溶液)，得到预期产物(17mg，50％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.62(6H，s)，1.72(2H，m)，2.09(3H，s)，2.21(3H，s)，2.25(2H，m)，3.50(4H，m)，4.30(2H，s)，7.20(5H，m)，7.42(1H，m)，7.86(1H，m)，8.66(1H，b.s)。
HR MS(m/z，MH+)测定值433.2590
实施例64：2-[1′-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-4′-氟-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢 -[2，4′]联吡啶5-基]-丙烷-2-醇
步骤1：1′-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-4′-氟-5-[1-甲基-1-(2-三甲基甲硅 烷基-乙氧基甲氧基)-乙基]-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[2，4′]联吡啶(化合物36)
Figure BDA0000049063960000792
于0℃向化合物35(39mg，0.069mmol)中加入冷Deoxofluor(50％的THF溶液，665μL，1.38mmol)。将混合物于室温搅拌4小时，用饱和NaHCO3洗涤，用CH2Cl2(3x)萃取。用盐水洗涤有机相，干燥，浓缩，得到棕色油状物。通过硅胶色谱法纯化，得到标题化合物(21mg，48％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.0(9H，s)，0.9(2H，t，J＝8Hz)，1.6(6H，s)，2.0(2H，m)，2.1(3H，s)，2.2(3H，s)，2.6(2H，m)，3.4(4H，m)，3.6(2H，t，J＝8Hz)，4.3(2H，s)，4.7(2H，s)，7.2(5H，m)，7.6(1H，m)，7.8(1H，m)，8.6(1H，b.s)。
HR MS(m/z，MH+)测定值565.3369
步骤2：2-[1′-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3基)-4′-氟-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[2，4′] 联吡啶5-基]-丙烷-2-醇(实施例64)
Figure BDA0000049063960000793
按照实施例63所述的方法由化合物36和TFA制得本实施例。
1H-NMR(600MHz，CDCl3)δ＝1.63(6H，s)，2.05(2H，m)，2.19(3H，s)，2.32(3H，s)，2.55(2H，m)，3.94(4H，m)，4.53(2H，b.s)，7.25(5H，m)，7.59(1H，d，J＝6Hz)，7.90(1H，m)，8.71(1H，b.s)。
HR MS(m/z，MH+)测定值435.2554
哌嗪基-哒嗪类
流程6显示了制备式Ip化合物的通用合成流程。取代的1，4-二氯哒嗪II可以与有机锌试剂在钯催化下反应，形成中间体XII。在碱存在下用哌嗪置换剩余的氯，得到化合物XIII。根据取代基Z的位置，可能需要施用N-保护基来阻断哌嗪氮之一的反应活性。根据预期的连接基Y，中间体XIII可以与R3-Cl在亲核置换反应中在碱性条件下反应，与R-CHO在还原性胺化中用例如NaBH(OAc)3反应，在酰化反应中与R3-OC(O)Cl或R3-NCO、R3-COCl在碱性条件下反应，或者与R3-CO2H在酰胺偶联中用例如HATU作为偶联试剂反应，得到实施例Ip。另外，在碱存在下用官能化的哌嗪置换中间体XII中剩余的氯可以直接产生实施例Ip(路径A)。或者，可以采用路径B和C制备实施例Ip，其中哌嗪部分首先通过亲核置换反应装配，随后进行Negishi偶联。
Figure BDA0000049063960000811
流程6
中间体II和XII的合成：
4，5-二甲基-1，2-二氢-哒嗪-3，6-二酮(化合物36)
Figure BDA0000049063960000812
将盐酸肼(58g，552mmol)溶于热水(300mL)，分批加入二甲基马来酸酐(58g，460mmol)，将混悬液于回流搅拌16小时。将混悬液冷却至室温，过滤沉淀，用水洗涤，在40℃真空干燥，得到4，5-二甲基-1，2-二氢-哒嗪-3，6-二酮(36)(64g，99％)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11(br s，2H)，2.01(s，6H)。
MS(m/z，MH+)测定值141.1
4，5-二甲基-1，4-二氯-哒嗪(化合物37)
Figure BDA0000049063960000821
将4，5-二甲基-1，2-二氢-哒嗪-3，6-二酮(50g，357mmol)加入到1升烧瓶中，缓慢加入POCl3(250mL)。搅拌混悬液，加热至回流，全部原料溶解，约2小时后，真空除去150mL POCl3。将粘性棕色溶液在搅拌下分小批缓慢倾入1.5升烧杯中的冰中。用28％氨水在外部冷却下中和橙色混悬液。用布氏漏斗过滤产物，用水洗涤，在40℃真空干燥，得到灰白色粉末(59g，93％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝2.44(s，6H)。
MS(m/z，MH+)测定值177.1
2，3，6，7-四氢-5H-环戊二烯并[d]哒嗪-1，4-二酮(化合物38)
Figure BDA0000049063960000822
将盐酸肼(2.4g，22.8mmol)和1-环戊烯-1，2-二甲酸酐(3.0g，21.7mmol)在水(10mL)中的溶液加热至回流3小时。将反应混合物冷却至室温，通过过滤收集沉淀。将黄色固体与15mL 1N NaOH混合，搅拌2小时，过滤，真空干燥，得到2，3，6，7-四氢-5H-环戊二烯并[d]哒嗪-1，4-二酮(38)(2.2g，67％)。MS(m/z，MH+)测定值153.1
1，4-二氯-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]哒嗪(化合物39)
Figure BDA0000049063960000823
按照与化合物37类似的方式由化合物36制得化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝2.74-2.61(m，4H)，2.00(m，1H)，1.85(m，1H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值188.9986
2，3，5，6，7，8-六氢-酞嗪-1，4-二酮(化合物40)
向肼(392μL，13.1mmol)在水(6mL)和HOAc(2mL)中的溶液中加入4，5，6，7-四氢-异苯并呋喃-1，3-二酮(2g，13.1mmol)。将反应混合物回流3小时，然后冷却至室温，通过过滤收集沉淀，用水洗涤，真空干燥，得到2，3，5，6，7，8-六氢-酞嗪-1，4-二酮(40)(2.09g，96％)。
MS(m/z，MH+)测定值167.05
1，4-二氯-5，6，7，8-四氢-酞嗪(化合物41)
Figure BDA0000049063960000832
将化合物40(2.09g，12.6mmol)在POCl3(10mL)中的混悬液回流1小时，冷却，倾入冰中。通过过滤收集沉淀，真空烘箱干燥，得到1，4-二氯-5，6，7，8-四氢-酞嗪(41)(2.23g，87％)。
HR MS(m/z，MH+)测定值203.0139
3-苄基-6-氯-4，5-二甲基-哒嗪(化合物42)
Figure BDA0000049063960000833
使4，5-二甲基-1，4-二氯-哒嗪(10g，56.5mmol)、四(三苯膦)钯(0)(3.3g，2.80mmol)和THF(200mL)的混合物脱气，然后加入苄基溴化锌(147mL，0.5M的THF溶液，73.40mmol)。将反应溶液加热至65℃过夜。除去溶剂。加入水，用EtOAc萃取水层。浓缩有机层，得到粗产物，通过硅胶色谱法纯化(EtOAc/庚烷：0％～50％)，得到标题化合物(9.5g，67％)。
1H NMR(400MHz，CD2Cl2)δ＝7.27(m，5H)，4.38(s，2H)，2.36(s，3H)，2.21(s，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值233.0839
3-氯-6-(4-氟-苄基)-4，5-二甲基-哒嗪(化合物43)
Figure BDA0000049063960000841
按照与上述化合物42类似的方式由4，5-二甲基-1，4-二氯-哒嗪和对氟苄基溴化锌制得3-氯-6-(4-氟-苄基)-4，5-二甲基-哒嗪。
MS(m/z，MH+)测定值251.1
1-苄基-4-氯-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]哒嗪(化合物44)
Figure BDA0000049063960000842
向1，4-二氯-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]哒嗪(化合物39，500mg，2.64mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(383mg，0.33mmol)。使混合物脱气，加入苄基溴化锌(11mL，0.5M的THF溶液，5.6mmol)。将混合物在60℃加热5小时。将反应混合物冷却至室温，加入饱和NaHCO3水溶液，用EtOAc萃取混合物。用水、盐水洗涤合并的有机层，用NaSO4干燥，过滤，浓缩。通过快速色谱法纯化粗产物(EtOAc/庚烷10％-30％)，得到化合物44(490mg，76％)。
1H-NMR(400MHz，CD2Cl2)δ＝7.30-7.21(m，5H)，4.28(s，2H)，2.97(m，2H)，2.84(m，2H)，2.09(m，2H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值245.0848
1-氯-4-(4-氟-苄基)-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]哒嗪(化合物45)
Figure BDA0000049063960000851
按照与上述化合物44类似的方式由1，4-二氯-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]哒嗪(化合物39)和对氟苄基溴化锌为原料制得化合物45。
1H-NMR(400MHz，CD2Cl2)δ＝7.23(m，2H)，6.99(m，2H)，4.27(s，2H)，2.98(m，2H)，2.84(m，2H)，2.11(m，2H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值263.0752
1-氯-4-(4-氟-苄基)-5，6，7，8-四氢-酞嗪(化合物46)
Figure BDA0000049063960000852
向1，4-二氯-5，6，7，8-四氢-酞嗪(化合物41，0.50g，2.46mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入4-氟-苄基氯化锌(0.5M的THF溶液)(6.40mL，3.20mmol)和四(三苯膦)钯(0.36g，0.31mmol)。使混合物脱气，在50℃搅拌过夜。然后将反应混合物冷却至室温，加入饱和NaHCO3和水，用EtOAc萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过色谱法纯化粗产物(EtOAc/庚烷：10％～40％)，得到1-氯-4-(4-氟-苄基)-5，6，7，8-四氢-酞嗪(46)(0.51g，30％)。
MS(m/z，MH+)测定值277.11
中间体XIII的合成
用哌嗪使氯化物XII胺化得到化合物48-53的通用方案(路径A)
向XII(0.4mmol)在NMP或DMF/二
Figure BDA0000049063960000853
烷(2mL)中的溶液中加入哌嗪(0.6mmol)。将反应混合物于190℃在微波反应器中加热4小时。将其冷却至室温，用DCM稀释，用NaHCO3水溶液洗涤，取出有机层，得到粗产物。用EtOAc/庚烷(20％-50％)、然后用MeOH/DCM(5％-20％)将粗产物进行快速色谱法，除去溶剂，得到产物，为黄色固体(～50％-70％)。
3-苄基-4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪(化合物47)
Figure BDA0000049063960000861
制备A：
在微波小瓶中将3-氯-4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪(400mg，1.66mmol，1当量)加入到苄基溴化锌(12.3mL 0.5M的THF溶液，6.64mmol，4当量)和四(三苯膦)钯(100mg，0.08mmol，0.05当量)的溶液中。密封小瓶，在100℃用微波照射40分钟(高吸收设置)。浓缩反应混合物，通过硅胶色谱法纯化(5-20％EtOAc/庚烷)，得到预期化合物(324mg，66％)。
制备B：
向3-苄基-6-氯-4，5-二甲基-哒嗪(100mg，0.41mmol)在NMP(2mL)中的溶液中加入2-(R)-甲基-哌嗪(62mg，0.61mmol)。将反应混合物于190℃在微波反应器中加热4小时。将其冷却至室温，用DCM稀释，用NaHCO3水溶液洗涤，取出有机层，得到粗产物。用EtOAc/庚烷(20％-50％)、然后用MeOH/DCM(5％-20％)将粗产物进行快速色谱法，除去溶剂，得到产物，为黄色固体(74mg，61％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝7.22-7.34(m，2H)，7.11-7.22(m，3H)，4.22(s，2H)，3.13-3.26(m，2H)，2.81-2.99(m，3H)，2.70-2.80(m，1H)，2.38-2.48(m，1H)，2.15(s，3H)，2.08(s，3H)，1.00(d，J＝6.5Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值297.2089
化合物46-53：下表(表4)列出了通过如上所述的胺化制得的化合物：
表4
Figure BDA0000049063960000871
Figure BDA0000049063960000881
来自路径B的中间体：
3-氯-4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪(化合物54)
Figure BDA0000049063960000882
将固体K2CO3(10g，72.4mmol，1.8当量)加入到(R)-2-甲基-哌嗪(4.00g，40mmol，1当量)和3，6-二氯-4，5-二甲基-哒嗪(8g，45.2mml，1.1当量)在DMF(50mL)中的溶液中，将所得溶液在60℃搅拌48小时。将反应混合物减压浓缩至1/2体积，加入溶解固体盐所需的最少量的水(约15mL)，然后加入二氯甲烷(100mL)。分离有机层，经硫酸钠干燥，减压浓缩，然后通过硅胶柱色谱法纯化(2％-20％MeOH/CH2Cl2)，得到预期化合物，为白色固体(4.7g，49％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝3.08-3.21(m，2H)，2.73-2.92(m，4H，)2.47(dd，J＝12.4Hz，10.2Hz，1H)，2.13(s，3H)，2.07(s，3H)，0.93(d，J＝6.3Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)：测定值241.1218
3-氯-4，5-二甲基-6-(哌嗪-1-基)-哒嗪(化合物55)
Figure BDA0000049063960000883
由哌嗪和3，6-二氯-4，5-二甲基-哒嗪如上所述制得化合物55。
MS(m/z，MH+)测定值227
(R)-4-(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′- 甲酸甲酯(化合物56)
Figure BDA0000049063960000891
在安装了回流冷凝器的100mL圆底烧瓶中合并3-氯-4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪(1.20g，4.88mmol)、5-氯-吡嗪-2-甲酸甲酯(946mg，5.37mmol)、三乙胺(3.40mL，24.4mmol)和1，4-二
Figure BDA0000049063960000892
烷(10mL)，加热至80℃达24小时。然后将反应物冷却至室温，搅拌48小时。在此过程中通过过滤分离浅褐色固体沉淀，用H2O冲洗。真空干燥沉淀，得到标题化合物(1.30g，71％)。MS(m/z，MH+)测定值377.3
2-[(R)-4-(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪 -5′-基]-丙烷-2-醇(化合物57)
Figure BDA0000049063960000893
将(R)-4-(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯(400mg，1.04mmol)混悬于THF(12mL)中，冷却至78℃。滴加甲基碘化镁(2.8mL，3M的乙醚溶液，8.4mmol)。将反应物搅拌30分钟，温至0℃，再搅拌30分钟。加入饱和NH4Cl水溶液(10mL)使反应物淬灭，然后加入H2O(40mL)。用EtOAc(3x50mL)萃取有机相，干燥，浓缩，得到预期产物，为浅褐色粉末(415mg，定量)。MS(m/z，MH+)测定值359.3
2-[(R)-4-(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-4-三氟甲基-嘧啶 -5-甲酸甲酯(化合物58)
Figure BDA0000049063960000894
将三乙胺(2.0mL，14.4mmol，2.9当量)加入到2-氯-4-三氟甲基-嘧啶-5-甲酸甲酯(1.25g，5.0mmol，1当量)、3-氯-4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪(1.20g，5.0mmol，1当量)在二氯甲烷(40mL)中的溶液中，将所得溶液于室温搅拌2小时。用二氯甲烷(50mL)稀释反应混合物，用水(25mL)、然后用盐水(25mL)洗涤。分离有机层，经硫酸钠干燥，减压浓缩，得到白色残余物。通过硅胶色谱法分离预期化合物(10-75％EtOAc/庚烷)，为白色固体(1.83g，82％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝9.00(s，1H)，4.92-5.15(m，1H)，4.54-4.76(m，1H)，3.84(s，3H)，3.59(d，J＝14.0Hz，1H)，3.50(t，J＝12.8Hz，2H)，3.08(dd，J＝12.8Hz，3.3Hz，1H)，2.89-2.99(m，1H)，2.36(s，3H)，2.33(s，3H)，1.39(d，J＝7.0Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)：测定值445.1373
2-[(R)-4-(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-4-三氟甲基-嘧啶 -5-甲酸乙酯(化合物59)
Figure BDA0000049063960000901
用2-氯-4-三氟甲基-嘧啶-5-甲酸乙酯(400mg，1.57mmol，1当量)和3-氯-4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪(400mg，1.66mmol，1当量)进行上述方案，得到700mg预期产物，为白色固体(97％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.94(s，1H)，5.12-5.18(m，1H)，4.70-4.85(m，1H)，4.35(q，J＝7.0Hz，2H)，3.48-3.56(m，2H)，3.40(d，J＝12.5Hz，1H)，3.21(d，J＝10.5Hz，1H)，3.02-3.14(m，1H)，2.36(s，3H)，2.35(s，3H)，1.44(d，J＝7.0Hz，3H)，1.37(t，J＝7.0Hz，3H)。
3-氯-4，5-二甲基-6-[(R)-3-甲基-4-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-哒嗪 (化合物60)
Figure BDA0000049063960000902
在小瓶中合并3，6-二氯-4，5-二甲基-哒嗪(100mg，0.554mmol)、(R)-2-甲基哌嗪(85mg，0.831mmol)、碳酸钾(383mg，2.77mmol)和DMF(1mL)。在120℃在微波中加热3.25小时。加入2-氯-5-三氟甲基吡啶(181mg，0.997mmol)，在180℃加热30分钟。通过硅胶快速色谱法直接纯化粗反应物(0-40％EtOAc的庚烷溶液)，得到标题化合物，为浅黄色固体(78mg，37％)。MS(m/z，MH+)测定值386.4
来自路径C的中间体：
3-氯-4，5-二甲基-6-[4-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-哒嗪(化合物61)
Figure BDA0000049063960000911
将1-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪(10g，43.3mmol)与3，6-二氯-4，5-二甲基-哒嗪(14.4g，84.3mmol)、三乙胺(8.25mL)和NMP(40mL)合并。将反应混合物照射至180℃达25分钟，然后真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(0-8％MeOH/CH2Cl2)，得到标题化合物(13.2g，82％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.48-8.41(m，1H)，7.84(dd，J＝9.1Hz，2.4Hz，1H)，7.03(d，J＝9.1Hz，1H)，3.88-3.76(m，4H)，3.28-3.20(m，4H)，2.31(s，6H)。
1-氯-4-[4-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-67-二氢-5H-环戊二烯并[d]哒 嗪(化合物62)
Figure BDA0000049063960000912
向4-二氯-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]哒嗪(化合物39，500mg，2.64mmol)在NMP(5mL)中的溶液中加入1-[5-三氟甲基)-吡啶-2-基)-哌嗪(581mg，2.51mmol)，然后加入三乙胺(1.1mL，7.9mmol)。将混合物在170℃在微波反应器中加热60分钟。向反应混合物中加入水，用EtOAc萃取。用水、盐水洗涤合并的有机萃取物，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩。将粗产物与甲醇一起研磨，得到标题化合物(483mg，48％)。
1H NMR(CD2Cl2)δ＝8.41(s，1H)，7.68(dd，J＝8.9Hz，2.5Hz，1H)，6.73(d，J＝8.9Hz，1H)，3.80(m，4H)，3.60(m，4H)，3.04(m，2H)，2.95(m，2H)，2.16(m，2H)。
HR MS(m/z，MH+)：测定值384.1190
1-氯-4-[4-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-5，6，7，8-四氢-酞嗪(化合物63)
Figure BDA0000049063960000921
向1，4-二氯-5，6，7，8-四氢-酞嗪(化合物25，100mg，0.492mmol)在NMP(3mL)中的溶液中加入1-[5-三氟甲基)-吡啶-2-基)-哌嗪(114mg，0.492mmol)，然后加入三乙胺(218μL，1.57mmol)。将混合物在140℃在微波反应器中加热60分钟。将水加入反应混合物中，用EtOAc萃取。用水、盐水洗涤合并的有机萃取物，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化粗产物(EtOAc/庚烷10％-70％)，得到96mg(49％)标题化合物。
1H NMR(400MHz，CD2Cl2)δ＝8.41(s，1H)，7.73(dd，J＝9.0Hz，2.5Hz，1H)，6.79(d，J＝9.0Hz，1H)，3.85(m，4H)，3.40(m，4H)，2.76-2.68(m，4H)，1.93(m，2H)，1.80(m，2H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值398.1359
6-[4-(4-氯-5，6，7，8-四氢-酞嗪-1-基)-哌嗪-1-基]-烟酸乙酯(化合物64)
Figure BDA0000049063960000922
按照与如上所述类似的方式制得化合物。
MS(m/z，MH+)测定值402.2
6-[(S)-4-(4-氯-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]哒嗪-1-基)-3-甲基-哌嗪-1-基]-烟 酸甲酯(化合物65)
Figure BDA0000049063960000923
向1，4-二氯-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]哒嗪(150mg，0.79mmol)在NMP(5mL)中的溶液中加入(S)-3-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸乙酯(297mg，1.19mmol)和三乙胺(332μL，2.39mmol)。将反应混合物在195℃在微波反应器中加热4小时。加入水和EtOAc。分离各层，用EtOAc萃取水层。用水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过快速色谱法纯化粗产物(EtOAx/庚烷10％-70％)，得到50mg(16％)标题化合物。
4-(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯(化 合物66)
Figure BDA0000049063960000931
向3，4，5，6-四氢-2H-[1，2]联吡嗪-5’-甲酸甲酯(250mg，1.07mmol)在NMP(5mL)中的溶液中加入3，6-二氯-4，5-二甲基-哒嗪(237mg，1.33mmol)和TEA(446μl，3.21mmol)，将反应混合物在190℃搅拌60分钟。将水加入到混合物中，用EtOAc萃取。用水、盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过HPLC纯化粗产物(含有3％1-丙醇的乙腈/水：10％～95％)，得到白色粉末(165mg，43％)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.69(s，1H)，8.44(s，1H)，3.92(t，J＝5.0Hz，4H)，3.83(s，3H)，3.27(m，4H)，2.41(s，3H)，2.32(s，3H)。
MS(m/z，MH+)测定值363
实施例65-72的合成
哒嗪氯化物IIIA与芳基溴化锌进行Negishi偶联生成实施例65-69的通用方案(路径B/C)
向氯哒嗪IIIa(0.15mmol，1当量)在THF(5ml)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(12.5mol％)。使混合物脱气，加入芳基溴化锌(0.225，1.5当量，例如为0.5M的THF溶液)，将混合物于80℃在微波反应器中加热30分钟。将反应混合物冷却至室温，加入水，用EtOAc萃取混合物。用水、盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩。通过硅胶快速色谱法使用EtOAc/庚烷作为洗脱剂纯化粗产物，得到实施例Ip。
下表(表5)列出了通过如上所述的Negishi偶联制得的化合物：
表5
Figure BDA0000049063960000951
实施例70：2-(6-｛(S)-4-[4-(2-氯-苄基)-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]哒嗪-1- 基]-3-甲基-1-基}-吡啶-3-基)-丙烷-2-醇
Figure BDA0000049063960000952
于0℃向(S)-4-[4-(2-氯-苄基)-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]哒嗪-1-基]-3-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸乙酯(35mg，0.071mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入甲基碘化镁(3M的乙醚溶液，0.19mL，0.57mmol)，将混合物于室温搅拌30分钟。加入饱和NaHCO3溶液和EtOAc。分离各层，用EtOAc萃取水层。用水、盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过HPLC纯化粗产物(含有0.1％TFA的乙腈/水，10％-50％)。用Na2CO3溶液处理盐后，分离出作为游离碱的产物(11mg，32％)
HR MS(m/z，MH+)测定值478.2367
实施例71：2-｛(R)-4-[6-(2，4-二氟-苄基)-4，5-二甲基-哒嗪-3-基]-2-甲基-哌嗪 -1-基}-4-三氟甲基-嘧啶-5-甲酸乙酯
Figure BDA0000049063960000961
在微波小瓶中向2-[(R)-4-(6-氯-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-4-三氟甲基-嘧啶-5-甲酸乙酯(229mg，0.50mmol，1当量)和THF(1.4mL)的溶液中加入2，4-二氟苄基溴化锌(2.0mL 0.5M的THF溶液，2.0mmol，4当量)和四(三苯膦)钯(25mg，0.03mmol，0.05当量)。密封小瓶，在微波中于60℃加热(高吸收设置)25分钟。再加入等分试样的2，4-二氟苄基溴化锌(1.0mL 0.5M的THF溶液，1.0mmol，2当量)，将反应混合物在100℃在微波中加热(高吸收设置)5分钟。用水(10mL)使反应混合物淬灭，然后用EtOAc(2x25mL)萃取。用硫酸镁干燥合并的有机级分，浓缩，通过硅胶色谱法纯化(25-75％EtOAc/庚烷)，得到预期化合物(225mg，81％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.86(s，1H)，7.12(t，J＝7.3Hz，1H)，6.76-6.83(m，2H)，4.99-5.07(m，1H)，4.64-4.73(m，1H)，4.28(q，J＝7.0Hz，2H)，3.35-3.46(m，2H)，3.31(d，J＝12.5Hz，1H)，3.10(d，J＝10.5Hz，1H)，2.90-3.02(m，1H)，2.25(s，3H)，2.24(s，3H)，1.36(d，J＝7.0Hz，3H)，1.29(t，J＝7.0Hz，3H)。
实施例72：2-(2-{(R)-4-[6-(2，4-二氟-苄基)-4，5-二甲基-哒嗪-3-基]-2-甲基-哌 嗪-1-基}-4-三氟甲基-嘧啶-5-基)-丙烷-2-醇
向在冰浴中冷却的2-{(R)-4-[6-(2，4-二氟-苄基)-4，5-二甲基-哒嗪-3-基]-2-甲基-哌嗪-1-基}-4-三氟甲基-嘧啶-5-甲酸乙酯(220mg，0.40mmol，1当量)在THF(1.0mL)中的溶液中加入MeMgBr溶液(2mL，3M的乙醚溶液，6mmol，15当量)。将溶液温至室温达30分钟。小心加入饱和NH4Cl使反应物淬灭，然后用EtOAc萃取。经硫酸钠干燥有机层，然后浓缩。通过硅胶柱色谱法分离产物(25-75％EtOAc/庚烷)，得到预期化合物，为白色固体(27mg，13％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.74(s，1H)，7.21(tt，J＝8.3Hz，6.5Hz，1H)，6.85-6.94(m，1H)，4.95-5.05(m，1H)，4.64(dd，J＝12.5Hz，3.3Hz，1H)，4.26(s，2H)，3.49(d，J＝12.4Hz，1H)，3.36-3.44(m，2H)，3.19(dd，J＝12.5Hz，3.8Hz，1H)，3.05(td，J＝12.0Hz，3.3Hz，1H)，2.35(s，3H)，2.33(s，3H)，1.70(s，6H)，1.42(d，J＝6.7Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值537.2408
实施例73-87的合成
胺XIII与芳族氯化物进行胺化生成实施例74-86的通用方案(路径A)
向胺XIII(0.5mmol，1当量)和芳族卤化物(1mmol，2当量)在NMP(2.5ml)中的溶液中加入三乙胺(1.5mmol，3当量)。将混合物在微波反应器中加热至140℃-190℃温度(取决于芳族卤化物的反应活性)达30分钟。LCMS显示反应完全后，加入水和EtOAc，分离各层，用EtOAc萃取水层。用水、盐水洗涤合并的有机层，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩。通过硅胶快速色谱法用EtOAc/庚烷作为洗脱剂纯化产物，得到实施例Ip。
实施例73：(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯
Figure BDA0000049063960000971
将化合物47(6.0g，20.27mmol)、5-氯吡嗪-2-甲酸甲酯(5.3g，30.30mmol)、Et3N(6.2g，60.60mmol)和二烷(100mL)的混合物加热至回流过夜。除去溶剂。加入饱和NH4Cl溶液，用EtOAc萃取。浓缩有机层，得到粗产物，通过硅胶色谱法纯化(EtOAc/庚烷：50％～100％)，得到标题化合物(6.6g，76％)，为黄色固体。
1H NMR(400MHz，CD2Cl2)δ＝8.81(s，1H)，8.21(s，1H)，7.29(m，5H)，4.83(m，1H)，4.43(m，1H)，4.33(s，2H)，3.94(s，3H)，3.52(m，3H)，3.27(m，1H)，3.14(m，1H)，)，2.31(s，3H)，2.17(s，3H)，1.49(d，J＝6.5Hz，3H)。
HR MS(m/z.MH+)测定值433.2348
实施例74-86：下表(表6)列出了通过如通用方案中所述的胺化制得的实施例化合物：
表6
实施例87：3-苄基-4，5-二甲基-6-[(R)-3-甲基-4-(4-三氟甲磺酰基苯基)-哌嗪 -1-基]-哒嗪
Figure BDA0000049063960000992
向3-苄基-4，5-二甲基-6-((R)-3-甲基-哌嗪-1-基)-哒嗪(80mg，0.257mmol)在二烷(5mL)中的溶液中加入1-氯-4-三氟甲磺酰基-苯(95.2mg，0.385mmol)、氢氧化钾颗粒(101mg，1.55mmol)、萘醌咪唑啉-2-亚基-Pd(0)(175mg，0.129mmol)。将混合物在微波反应器中在100℃加热120分钟。向混合物中加入水，用EtOAc萃取。用水、盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过HPLC纯化粗产物(含有3％1-丙醇的乙腈/水：10％～95％)，得到浅黄色粉末(55mg，89％)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.81(d，J＝9.1Hz，2H)，7.17-7.30(m，7H)，4.51(m，1H)，4.26(s，2H)，3.97(d，J＝12.6Hz，1H)，3.55(d，J＝12.2Hz，1H)，3.42(m，2H)，3.14(m，1H)，3.00(m，1H)，2.26(s，3H)，2.13(s，3H)，1.31(d，J＝6.5Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值505.1872计算值505.1885
实施例88-115的合成
用酯进行Grignard反应的通用方案
于-78℃向酯(0.5mmol，1当量)在THF(3mL)中的溶液中加入烷基溴化镁或碘化镁(4mmol，8当量，在乙醚中的溶液)。将反应混合物于0℃搅拌2小时，然后用DCM稀释，用NH4Cl和水洗涤。用水、盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过使用乙腈水溶液的HPLC对粗产物进行纯化，在较少量相应的甲基酮之后得到叔醇(主要产物)。用冷冻干燥器除去溶剂，得到产物，为白色粉末。
实施例88：2-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四 氢 -2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇
于-78℃向(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2’]联吡嗪-5’-甲酸甲酯(840mg，1.85mmol)在THF(12mL)中的溶液中加入甲基溴化镁(5mL，15mmol，3M的乙醚溶液)。将反应混合物于0℃搅拌2小时，然后用DCM稀释，用NH4Cl和水洗涤。用水、盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过使用乙腈水溶液(含有3％1-丙醇的10％-95％)的在220nm检测波长的HPLC纯化粗产物，在较少量相应的甲基酮(实施例95)之后得到预期的醇(400mg，50％)。用冷冻干燥器除去溶剂，得到产物，为白色粉末。
1H NMR(400MHz，CD2Cl2)δ＝8.28(s，1H)，8.10(s，1H)，7.25(m，5H)，4.83(m，1H)，4.33(s，2H)，4.20(m 1H)，3.78(s，1H)，3.57(m，1H)，3.44(m，2H)，3.29(m，1H)，3.14(m，1H)，2.31(s，3H)，2.16(s，3H)，1.56(s，6H)，1.40(d，J＝6.5Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值433.2713，计算值433.2716
实施例89-111：下表(表7)列出了通过如上所述的Grignard加成制得的实施例化合物：
表7
Figure BDA0000049063960001011
Figure BDA0000049063960001021
实施例112：2-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2’]联吡嗪-5’-基]-2，2-二甲氧基-乙醇
Figure BDA0000049063960001031
于0℃向KOH(33mg，0.38mmol)和甲醇(5mL)的溶液中分批加入在甲醇(1mL)中的实施例95(20mg，0.048mmol)、然后分批加入二乙酸碘苯(23mg，0.072mmol)。将混合物于室温搅拌过夜。除去溶剂，得到粗产物，通过HPLC纯化(乙腈/水(1％NH4OH)，30％～100％)，得到标题化合物(12mg，52％)，为黄色固体。
1H NMR(400MHz，CD2Cl2)δ＝8.42(s，1H)，8.18(s，1H)，7.29(m，5H)，4.72(m，1H)，4.32(s，2H)，4.30(m，1H)，3.94(d，J＝6.0Hz，2H)，3.58(m，1H)，3.47(m，2H)，3.28(m，1H)，3.26(s，6H)，3.13(m，1H)，2.31(s，3H)，2.16(s，3H)，1.44(d，J＝6.5Hz，3H)。
实施例113：1-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-乙醇
Figure BDA0000049063960001032
于0℃向实施例95(50mg，0.12mmol)和MeOH(3mL)的溶液中加入NaBH4(10mg，0.24mmol)，然后将反应混合物于室温再搅拌0.5小时。除去溶剂，加入水，然后用DCM萃取。浓缩有机层，得到标题化合物(38mg，76％)，为白色固体。
1H NMR(400MHz，CD2Cl2)δ＝8.04(s，1H)，8.01(s，1H)，7.15(m，5H)，4.73(m，1H)，4.57(m，1H)，4.21(s，2H)，4.07(m，1H)，3.46(m，1H)，3.33(m，2H)，3.15(m，1H)，3.01(m，2H)，2.19(s，3H)，2.05(s，3H)，1.39(d，J＝6.5Hz，3H)，1.30(d，J＝6.5Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值419.2543
实施例114：1-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2’]联吡嗪-5’-基)-2-羟基-乙酮
Figure BDA0000049063960001041
于0℃向KOH(224mg，4.0mmol)和CH3OH(10mL)的溶液中分批加入在CH3OH(10mL)中的1-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2’]联吡嗪-5’-基)-乙酮(400mg，1.0mmol)，然后分批加入二乙酸碘苯(464mg，1.5mmole)。将混合物于室温搅拌过夜。除去溶剂，然后用DCM萃取。用NH4Cl水溶液洗涤有机层，然后浓缩，得到粗的实施例112。将物质溶于水，然后加入6N HCl(5mL)。将混合物于室温搅拌3小时。然后用NaHCO3使其呈碱性，用DCM萃取。浓缩有机层，得到粗产物，通过硅胶色谱法纯化(EtOAc/庚烷：50％～100％)，得到标题化合物(240mg，58％)，为黄色固体。
1H NMR(400MHz，CD2Cl2)δ＝8.82(s，1H)，8.15(s，1H)，7.27(m，5H)，4.91(s，2H)，4.86(m，1H)，4.48(m，1H)，4.33(s，2H)，3.57(m，2H)，3.46(m，1H)，3.30(m，2H)，3.14(m，1H)，2.31(s，3H)，2.17(s，3H)，1.50(d，J＝6.5Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值433.2340
实施例115：1-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2’]联吡嗪-5’-基)-乙烷-1，2-二醇
Figure BDA0000049063960001042
于0℃向1-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2’]联吡嗪-5’-基)-2-羟基-乙酮(实施例114，110mg，0.25mmol)和EtOH(20ml)的溶液中加入NaBH4(14mg，0.38mmol)。将混合物温至室温，搅拌3小时。用3N HCl将反应溶液酸化至pH～7，除去有机溶剂。将残余物溶于饱和NaHCO3溶液，用DCM萃取。浓缩有机层，得到标题化合物(96mg，91％)，为白色固体。
1H NMR(400MHz，CD2Cl2)δ＝8.09(s，1H)，8.00(s，1H)，7.18(m，5H)，4.64(m，1H)，4.57(m，1H)，4.26(s，2H)，4.10(m，1H)，3.60(m，2H)，3.48(m，1H)，3.34(m，2H)，3.18(m，1H)，3.02(m，1H)，2.21(s，3H)，2.06(s，3H)，1.30(d，J＝6.5Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值435.2511
实施例116和117的合成
实施例116：(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸
Figure BDA0000049063960001051
将(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲酯(1.8g，4.16mmol)与LiOH(998mg，42mmol)、H2O(20mL)、THF(20mL)和MeOH(10mL)合并。将合并的混合物于室温搅拌16小时。真空浓缩以除去有机溶剂。再加入水，用HCl或磷酸盐缓冲液将pH调节至4.0。用EtOAc萃取溶液，用盐水洗涤合并的有机萃取物。经硫酸钠干燥萃取物，过滤以除去干燥剂。浓缩滤液，得到标题化合物(1.46g，84％)。
1H NMR(400MHz，CD2Cl2)δ＝8.89(s，1H)，8.10(s，1H)，7.27(m，5H)，4.84(m，1H)，4.44(m，1H)，4.34(s，2H)，3.58(m，3H)，3.31(m，1H)，3.16(m，1H)，2.32(s，3H)，2.18(s，3H)，1.50(d，J＝6.5Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值419.2200
实施例117：2-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-4- 三氟甲基-嘧啶-5-甲酸
Figure BDA0000049063960001052
向2-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-4-三氟甲基-嘧啶-5-甲酸甲酯(500mg，1.0mmol，1.0当量)在THF(5mL)中的溶液中加入LiOH水溶液(1M，2.0mL，2.0mmol，2.0当量)，将所得溶液加热至75℃达4小时。用EtOAc(50mL)稀释反应混合物，用水(3x15mL)洗涤。用HCl水溶液(1M)将合并的水洗涤液调节至pH6，然后用二氯甲烷(3x50mL)萃取。经硫酸钠干燥合并的有机层，减压浓缩，得到预期产物，为白色固体(470mg，96％)。
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)δ＝8.97(s，1H)，7.23-7.30(m，2H)，7.10-7.22(m，3H)，5.11-5.23(m，1H)，4.77-4.86(m，1H)，4.31(s，2H)，3.52-3.64(m，2H)，3.50(d，J＝12.5Hz，1H)，3.17(dd，J＝12.5Hz，3.5Hz，1H)，2.97-3.09(m，1H)，2.37(s，3H)，2.17(s，3H)，1.47(d，J＝6.5Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值487.2088
实施例118-144的合成
用酸实施例116进行酰胺形成以生成其它实施例118-140的通用方案
方法A：
将实施例116(40mg，0.10mmol)和SOCl2(10mL)的混合物加热至回流达1小时，然后除去溶剂。将残余物溶于DCM(2mL)，转入胺(0.14mmole)和DCM(3mL)的溶液中。将反应混合物于室温搅拌2小时。加入水(10mL)，用DCM(3x20mL)萃取混合物。浓缩有机层，得到粗产物，通过HPLC纯化[乙腈/水(1％NH4OH)，30％～100％]，得到产物(实施例118-132，20％～84％)。
方法B：
将实施例116(40mg，0.10mmol)、HATU(73mg，0.14mmole)、二异丙基乙胺(37mg，0.29mmol)、二甲基乙酰胺(1.5ml)和胺(0.14mmole)的混合物于室温搅拌10小时。通过HPLC纯化粗产物(乙腈/水(3％丙醇)，30％～100％)，得到产物(实施例133-140，37％～55％)。
实施例118-140：下表(表8)列出了通过如上所述的酰胺形成制得的实施例化合物：
表8
Figure BDA0000049063960001071
Figure BDA0000049063960001081
实施例141：2-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-4- 三氟甲基-嘧啶-5-甲酸(2-羟基-乙基)-甲基-酰胺
Figure BDA0000049063960001082
向2-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-4-三氟甲基-嘧啶-5-甲酸(45mg，0.1mmol，1当量)在THF(2mL)中的溶液中加入过量草酰氯(100μL，1.2mmol，12当量)和催化量的DMF，将所得溶液于室温搅拌45分钟，此时加入N-2-羟基乙基，N-甲基胺(200μL，2.5mmol，25当量)，将反应物再搅拌1小时。用EtOAc(50mL)稀释反应混合物，用水(2x10mL)、然后用盐水(2x10mL)洗涤。经硫酸钠干燥有机层，减压浓缩，得到白色残余物。通过硅胶色谱法分离预期化合物(CH2Cl2-20％MeOH/CH2Cl2)，为白色固体(43mg，79％)。
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)δ＝8.55(d，J＝2.6Hz，1H)，7.22-7.29(m，2H)，7.11-7.20(m，3H)，5.05-5.15(m，1H)，4.69-4.79(m，1H)，4.30(s，2H)，3.80(t，J＝5.7Hz，2H)，3.66(t，J＝5.6Hz，2H)，3.50-3.60(m，2H)，3.43-3.50(m，2H)，3.15(dt，J＝12.6Hz，4.2Hz，1H)，2.97-3.07(m，1H)，2.35(s，3H)，2.16(s，3H)，1.45(d，J＝8.3Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值544.2647
实施例142：(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲氧基-甲基-酰胺
Figure BDA0000049063960001091
将(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸(50mg，0.120mmol)溶于CH2Cl2(300μL)中。将混合物冷却至0℃，加入草酰氯(32μL，0.358mmol)，然后加入DMF(3滴)。搅拌时，将反应物历经3小时温至室温。滴加二异丙基乙胺(209μL，1.2mmol)，然后加入N，O-二甲基羟胺盐酸盐(14mg，0.144mmol)。将反应物搅拌16小时。真空浓缩粗混合物。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(MeOH/CH2Cl2)，得到标题化合物(42mg，76％)。
制备实施例95的供选路径：
实施例95：1-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-乙酮
Figure BDA0000049063960001101
将(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-甲酸甲氧基-甲基-酰胺(实施例142，450mg，0.975mmol)溶于THF(1mL)中，冷却至0℃。滴加甲基碘化镁(325μL，0.975mmol)。将反应物温至室温，继续搅拌16小时。加入H2O(1滴)，真空浓缩反应混合物。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(60-100％EtOAc/庚烷和0-8％MeOH/EtOAc)，得到标题化合物(350mg，86％)。
实施例143：(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-5′-异丙烯基-2-甲基 -3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪
将甲基三苯基碘化
Figure BDA0000049063960001103
(410mg，1.010mmol)加入到THF(5.5mL)中，冷却至5℃。滴加叔丁醇钾(1.1mL，1M的THF溶液，1.1mmol)，将反应物搅拌30分钟。向反应物中加入在THF(1.5mL)中的1-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-乙酮(350mg，0.841mmol)。将反应物于5℃搅拌1小时，然后除去冰浴，将反应物于室温再搅拌16小时。真空除去THF。通过硅胶色谱法纯化残余物(60-90％EtOAc/庚烷)，得到标题化合物(130mg，37％)。
实施例144：2-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢 -2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-1，2-二醇
Figure BDA0000049063960001104
将(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-5′-异丙烯基-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪(实施例143，120mg，0.290mmol)混悬于丙酮(2mL)、叔丁醇(1mL)和H2O(1mL)中。向混悬液中加入K2OsO4(9.6mg，0.029mmol)和NMO(37.4mg，0.319mmol)。将反应物于室温搅拌16小时。真空浓缩。加入H2O，用EtOAc萃取。用盐水洗涤合并的有机层，真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(MeOH/CH2Cl2)，得到标题化合物(49.2mg，38％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.32(d，J＝1.4Hz，1H)，8.27-8.16(m，1H)，7.33-7.23(m，2H)，7.22-7.13(m，3H)，4.98(d，J＝1.0Hz，1H)，4.74-4.62(m，1H)，4.58(td，J＝6.2Hz，1.0Hz，1H)，4.25(s，2H)，4.18(dm，J＝12.9Hz，1H)，3.55-3.46(m，1H)，3.49(d，J＝5.8Hz，2H)，3.40(dm，J＝12.4Hz，1H)，3.29(td，J＝12.5Hz，3.2Hz，1H)，3.07(dd，J＝12.3Hz，3.5Hz，1H)，2.95(td，J＝12.3，3.2Hz，1H)，2.26(s，3H)，2.12(s，3H)，1.36(s，3H)，1.28(d，J＝6.4Hz，3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值449.2667，计算值449.2665
实施例145-158的合成
用胺使哒嗪氯化物XII胺化生成实施例145-154的通用方案(路径A)
向哒嗪氯化物XII(0.34mmol)在NMP或二
Figure BDA0000049063960001111
烷/DMF(3mL)中的溶液中加入取代的哌嗪(0.49mmol)和TEA(0.15mL，1.08mmol)。将混合物于210℃在微波合成仪中加热60分钟。加入水，用EtOAc萃取所得混合物。用水、盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过硅胶色谱法纯化粗产物(EtOAc/己烷：10％～70％)，得到实施例Ip。
实施例145-154：下表(表9)列出了通过如上所述的胺化制得的实施例化合物：
表9
Figure BDA0000049063960001121
Figure BDA0000049063960001131
Figure BDA0000049063960001141
实施例155：4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸苯基酯
Figure BDA0000049063960001142
于25℃向3-苄基-4，5-二甲基-6-哌嗪-1-基-哒嗪(60mg，0.21mmol)和氯甲酸苯基酯(40mg，0.26mmol)在CH2Cl2(3mL)中的溶液中加入N-甲基吗啉(0.07mL，0.60mmol)。于25℃搅拌3小时后，用CH2Cl2(10mL)稀释混合物，用饱和碳酸氢钠(1mL)和水(2x5mL)洗涤。浓缩有机层，通过HPLC纯化(含有0.1％TFA的CH3CN/H2O：22％～45％)，得到4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸苯基酯(69mg，81％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝2.28(3H，s)，2.41(3H，s)，3.40(4H，d)，3.81(4H，d)，4.50(2H，s)，7.13(2H，d)，7.20(2H，d)，7.27(2H，m)，7.33(2H，m)，7.38(2H，m)。
HR MS(m/z，MH+)测定值403.2115
实施例156：4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸苯基酰胺
Figure BDA0000049063960001143
于25℃向3-苄基-4，5-二甲基-6-哌嗪-1-基-哒嗪(60mg，0.21mmol))在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入异氰酸苯基酯(33mg，0.28mmol)。于25℃搅拌2小时后，浓缩反应混合物，通过HPLC纯化(含有0.1％TFA的CH3CN/H2O：22％～45％)，得到4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸苯基酰胺(49mg，58％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝2.12(3H，s)，2.21(3H，s)，3.27(4H，t)，3.67(4H，t)，4.30(2H，s)，7.01(1H，t)，7.19(3H，m)，7.25(4H，m)，7.39(2H，d)。
HR MS(m/z，MH+)测定值402.2279
实施例157：4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸苄基酰胺
Figure BDA0000049063960001151
于25℃向3-苄基-4，5-二甲基-6-哌嗪-1-基-哒嗪(60mg，0.21mmol))在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入异氰酸苄基酯(37mg，0.28mmol)。于25℃搅拌2小时后，浓缩反应混合物，通过HPLC纯化(含有0.1％TFA的CH3CN/H2O：22％～45％)，得到4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸苄基酰胺(46mg，60％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝2.24(3H，s)，2.34(3H，s)，3.33(4H，t)，3.58(4H，t)，4.44(2H，s)，4.49(2H，s)，7.19(2H，d)，7.26(2H，m)，7.30(2H，m)，7.32(4H，m)。
HR MS(m/z，MH+)测定值416.2437
实施例158：3-苄基-6-(4-苄基-哌嗪-1-基)-4，5-二甲基-哒嗪
Figure BDA0000049063960001161
于25℃向3-苄基-4，5-二甲基-6-哌嗪-1-基-哒嗪(40mg，0.14mmol))在CH2Cl2(1.6mL)和THF(1.6mL)中的溶液中加入苯甲醛(23mg，0.21mmol)、乙酸(2滴)和三乙酰氧基硼氢化钠(90mg，0.43mmol)。于25℃搅拌2小时后，用CH2Cl2(10mL)稀释混合物，用饱和碳酸氢钠(2mL)和水(5mL)洗涤。浓缩有机层，通过HPLC纯化(含有0.1％TFA的CH3CN/H2O：22％～45％)，得到3-苄基-6-(4-苄基-哌嗪-1-基)-4，5-二甲基-哒嗪(20mg，37％)。
1H-NMR(400MHz，MeOH-d4)δ＝2.00(3H，s)，2.11(3H，s)，2.56(4H，t)，3.12(4H，t)，3.51(2H，s)，4.16(2H，s)，7.05(3H，m)，7.15(3H，m)，7.25(4H，m)。
HR MS(m/z，MH+)测定值373.2378
5-元芳基甲基-哒嗪类
流程7显示了制备式Iq至Is化合物的通用合成流程。取代的氯哒嗪IIIa可以与乙腈在用强碱(例如LiHMDS)处理下反应，形成中间体XIVa。水解腈官能团得到酸中间体XIVb，随后与酰肼进行酰胺偶联，得到中间体XIVc。中间体XIVa可以与羟胺和N，N-二甲基甲酰胺-二甲基缩醛反应生成实施例Iq；或者通过与叠氮化钠反应、然后进行烷基化(例如溴化物或碘化物)提供四唑实施例Ir。中间体XIVc可以与例如三苯膦缩合，生成实施例Is。
Figure BDA0000049063960001171
流程7
中间体XIV的合成
4，5-二甲基-6-[4-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-哒嗪-3-基-乙腈(化合物 67)
Figure BDA0000049063960001172
合并3-氯-4，5-二甲基-6-[4-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-哒嗪(1.0g，2.64mmol)、乙腈(0.225mL，4.22mmol)和甲苯(5mL)，冷却至0℃。历经5分钟滴加LiHMDS(8.4mL，1.0M，8.4mmol)。将反应物于0℃搅拌1小时，然后温至室温，再搅拌16小时。通过添加饱和NH4Cl水溶液使反应物淬灭，用EtOAc萃取有机相。用MgSO4干燥合并的有机层，浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(0-100％EtOAc的庚烷溶液)，得到标题化合物，为橙色固体(500mg，50％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.36(s，1H)，7.60(dd，J＝9.0Hz，2.5Hz，1H)，6.65(d，J＝9.0Hz，1H)，3.96(s，2H)，3.72-3.78(m，4H)，3.26-3.37(m，4H)，2.26(d，J＝13.1Hz，6H)。
MS(m/z，MH+)测定值377.2
{4，5-二甲基-6-[4-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-哒嗪-3-基}-乙酸(化合 物68)
Figure BDA0000049063960001181
将{4，5-二甲基-6-[4-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-哒嗪-3-基}-乙腈(210mg，0.56mmol)和6M HCl(1.0mL)加入到密封试管内，然后加热至100℃达16小时。用CH2Cl2萃取有机相。用碳酸氢钠溶液将水部分中和至pH～7，用EtOAc萃取。目标化合物保留在水层中。减压浓缩水层，将残余物与MeOH一起研磨数次，然后真空干燥，得到标题化合物(280mg，定量)。
乙酸N′-(2-{4，5-二甲基-6-[4-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-哒嗪-3-基}- 乙酰基)-酰肼(化合物69)
Figure BDA0000049063960001182
在N2氛围中将乙酸酰肼(20.6mg，0.28mmol)加入到圆底烧瓶中，然后加入DMF(5mL)。加入二异丙基乙胺(0.25mL)，将反应物搅拌30分钟。加入{4，5-二甲基-6-[4-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-哒嗪-3-基}-乙酸(110mg，0.28mmol)，将反应物搅拌1小时。加入HOBT(42mg，0.311mmol)和HBTU(116.8mg，0.31mmol)，将反应物搅拌16小时。通过硅胶快速色谱法纯化粗反应混合物(0-30％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到标题化合物(114mg，90％)。
实施例159-162的合成
实施例159：4，5-二甲基-3-(5-甲基-[1，2，4] 二唑-3-基-甲基)-6-[4-(5-三氟甲 基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-哒嗪
Figure BDA0000049063960001192
将4，5-二甲基-6-[4-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-哒嗪-3-基-乙腈(120mg，0.32mmol)与羟胺(63mg，0.96mmol)和THF(2mL)合并。将反应混合物加热至回流达3小时。浓缩反应物，再将残余物溶于二甲基乙酰胺二甲基缩醛(500μL)中。将溶液回流加热16小时。真空浓缩所得混合物。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(MeOH/CH2Cl2)，得到标题化合物(62.3mg，45％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.44(d，J＝1.6Hz，1H)，7.83(dd，J＝9.1Hz，2.5Hz，1H)，7.03(d，J＝9.1Hz，1H)，4.34(s，2H)，3.86-3.76(m，4H)，3.26-3.18(m，4H)，2.54(s，3H)，2.27(s，3H)，2.22(s，3H)。
HR MS(m/z，MH+)：测定值434.1913计算值434.1916
实施例160和161：4，5-二甲基-3-(1-甲基-1H-四唑-5-基甲基)-6-[4-(5-三氟甲 基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-哒嗪 & 4，5-二甲基-3-(2-甲基-2H-四唑-5-基甲 基)-6-[4-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-哒嗪
Figure BDA0000049063960001193
将4，5-二甲基-6-[4-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-哒嗪-3-基-乙腈(120mg，0.32mmol)与氯化锌(II)(43.5mg，0.32mmol)和叠氮化钠(25mg，0.38mmol)在H2O(5mL)中合并。将混合物加热至回流达4小时，然后冷却至室温。通过过滤分离游离的四唑，溶于DMF(4.2mL)中，不进行进一步纯化。加入碳酸铯(128.5mg，0.395mmol)，将反应混合物冷却至0℃。滴加碘甲烷(16μL,0.263mmol)，搅拌反应物，历经16小时温至室温。冷却回0℃，再加入碘甲烷(24μL，0.395mmol)。将反应物历经16小时温至室温。真空浓缩反应物，过滤出固体。用MeOH洗涤。将剩余固体溶于H2O和TFA中，通过HPLC纯化(CH3CN/H2O)，得到标题化合物，为区域异构体的57∶43混合物(22.2mg，20％)。
1H NMR(化合物的混合物，600MHz，DMSO-d6)δ＝8.44(s，1H)，7.83(d，J＝9.1Hz，1H)，7.07-6.99(m，1H)，4.62(s，1.1H)，4.50(s，0.9H)，4.30(s，1.3H)，4.00(s，1.7H)，3.85-3.76(m，4H)，3.24-3.16(m，4H)，2.29(s，1.7H)，2.26(s，3H)，2.21(s，1.3H)。
HR MS(m/z，MH+)测定值434.2035，计算值434.2029
实施例162：4，5-二甲基-3-(5-甲基-[1，3，4]
Figure BDA0000049063960001201
二唑-2-基甲基)-6-[4-(5-三氟甲基 -吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-哒嗪
Figure BDA0000049063960001202
在N2氛围中将乙酸N′-(2-{4，5-二甲基-6-[4-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-哒嗪-3-基}-乙酰基)-酰肼(114mg，0.248mmol)加入圆底烧瓶中，然后加入乙腈(3mL)、二异丙基乙胺(0.27mL，1.43mmol)和三苯膦(115.5mg，0.44mmol)，将反应物搅拌30分钟。然后加入六氯乙烷(77.5mg，0.329mmol)，将反应物搅拌16小时。通过HPLC纯化粗混合物(氢氧化铵作为调节剂)，得到标题化合物(8mg，7％)。
HR MS(m/z，MH+)测定值434.1934，计算值434.1916
实施例163和164的合成
通过使200mg实施例88与重组人Cyp3A4一起孵育、在分离和纯化后获得下文提及的化合物，从而制得实施例163和164，为白色固体。
实施例163：2-[(R)-4-(6-苄基-5-羟基甲基-4-甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6- 四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇
Figure BDA0000049063960001211
收率：6.5mg
实施例164：2-[(R)-4-(6-苄基-4-羟基甲基-5-甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6- 四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇
Figure BDA0000049063960001212
收率：8.2mg
本发明的化合物是美国临时申请60/89499中所示的化合物类别的种类。下文的对比数据显示了将来自申请60/89499的最接近实施例、例如化合物编号92、93、93a、b、c与本发明的实施例相比较在效力和溶解性方面的改善。
申请60/89499
Figure BDA0000049063960001213
本发明的实施例
Figure BDA0000049063960001221
生物学活性
在TMHh12细胞中采用报道基因试验(RGA)评价了化合物的活性。在增加浓度的小分子激动剂的存在下测试了Gli-荧光素酶活性拮抗的IC50，所述小分子激动剂以1nM亲和力与Smo结合并激活Hh通路(Frank-Kamenetsky等人，2002，Journal of Biology 1，10.1-10.19)。用于筛选当增加激动剂剂量时显示出对Gli-荧光素酶而言增加的IC50的那些的激动剂化合物可直接与Smo相互作用(通过竞争Smo上的相同结合位点，或者通过由激动剂所诱导的Smo的活性构象状态和由测试拮抗剂所诱导的非活性状态之间的竞争)。在验证试验中，Smo的各种小分子拮抗剂显示出“IC50改变”(IC50shift)行为。
表10列出了在不同浓度的Smoothened小分子激动剂(1nM和25nM)的存在下测定的拮抗剂的IC50(Frank-Kamenetsky等人，2002，Journal of Biology 1，10.1-10.19)。
采用用于化合物竞争的放射性标记的Smoothened激动剂进行了Smo结合分析。表10列出了在用于小鼠和人Smoothened受体的滤器结合模式中测定的Smoothened小分子激动剂的置换的IC50。
表10
Figure BDA0000049063960001231
Figure BDA0000049063960001241
Figure BDA0000049063960001251
Figure BDA0000049063960001261
Figure BDA0000049063960001281
因此，尽管已经描述了目前据信是本发明的优选实施方案，但是本领域技术人员将认识到可以在不背离本发明的宗旨的情况下对其进行改变和变通，并且意欲要求保护所有这些改变和变通作为在本发明的范围内。

Claims (23)

1.式(I)化合物或其可药用盐，
其中：
R1是C6-14芳基或5-14元杂芳基，其各自可以是未取代的或者被一个或多个C1-8烷基、C6-14芳基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基、卤素、NH2、CN、OCF3、OH、C(O)NR6R8、C(O)R6、NR6R8、NHC(O)R6、SO2R6或SO2NR6R8取代；
R2和R3独立地是C1-8烷基、C1-8烷基OH，或者R2和R3形成C3-14环烷基；
L是价键、C1-8亚烷基、-C(O)O-、-C(O)NR9-、-C1-8烷基OH-、C1-8卤代烷基、-C(O)-、-NH-或-O-；
X和W独立地是N或CR5，且X和W中至少一个是N；
R7是C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元环杂烷基；
R4是C1-8烷基、C2-8烯基、C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基、3-14元环杂烷基、C1-8烷氧基、卤素、NR6R8、C(O)OR6、C(O)NR6R8、C1-8卤代烷基、甲酰基、烷酯基、C1-8烷基OH、C(O)R6、SO2R6、C(O)NHC1-8烷基R6、NR6R8、SO2NR6R8、OCF3、NHC(O)R6、CH2OC(O)NR6R8、CH2NR6R8、NHC(O)OR6、NHC(O)NR6R8、CH2NHSO2R6、CH2NHC(O)OR6、OC(O)R6或NHC(O)R6，其可以是取代的或未取代的；
Z是C1-8烷基、CN、OH或卤素；
m和p独立地是0至3；
Y是价键、C1-8亚烷基、-C(O)-、-C(O)O-、-CH(OH)-或-C(O)N(R10)-；
R5是H、卤素、CN、低级烷基、OH、OCH3或OCF3；
R9和R10独立地是C1-8烷基或H；
R6和R8独立地是H、C1-8烷基、C2-8烯基、C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基、3-14元环杂烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷基OH、C1-8烷氧基，或者一个原子上的R6和R8可以形成含杂原子的环；且
其中R4、R6和R8可以是未取代的或者被一个或多个C1-8烷基、C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基、3-14元环杂烷基、C1-8烷基OH、OH、氧代基、C1-8卤代烷基、羧基C1-8烷基或SO2C1-8烷基、卤素、-OCH3、-OCF3、-OH、-NH2取代。
2.权利要求1的式(I)化合物，其中R7是
Figure FDA0000049063950000021
3.权利要求1-2任一项的式(I)化合物，其中R1是
Figure FDA0000049063950000022
4.权利要求1-3任一项的式(I)化合物，其中R7是
Figure FDA0000049063950000023
且R1是
Figure FDA0000049063950000024
Figure FDA0000049063950000025
5.权利要求1-4任一项的式(I)化合物，其中R4是C(O)OC1-8烷基、CF3、C(O)OR6、C(O)NR6R8、C1-8卤代烷基、C1-8烷基OH、C(O)R6、SO2R6、C(O)NHC1-8烷基R6、C(CH3)(CH3)(OH)、C(O)CH3、CH2-CH2-CH3或C(CH3)(CH2OH)OH；且
R6和R8独立地是H、C1-8烷基、C1-8烯基、C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基或3-14元环杂烷基。
6.权利要求1-5任一项的式(I)化合物，其中R1可以未取代的或者被一个或多个甲基、乙基、异丙基、Cl、F、CN、甲氧基或CF3取代；
R4是C(O)CH3、C(O)NH-苯基、C(O)OH、CF3、C(CH3)(CH3)OH、C(O)OCH3、CF3、C(O)OCH2CH3或C(O)NCH2CH3，其任选被哌嗪基、吗啉基或吡啶基取代；且
p是0、1或2。
7.权利要求1-5任一项的式(I)化合物，其中R4是甲基、苯基、吡啶基、甲氧基、Cl、F、C(O)OC1-8烷基、C(O)OH、C(O)NHC6-14芳基、C(O)NC6-14芳基C1-8烷基、C(O)-5-14元杂芳基、C(O)-3-14元环杂烷基、CF3、CH2OH、CH2CH2OH、C(CH3)(CH3)OH、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、SO2C1-8烷基、SO2CF3、C(O)NHC1-8烷基OH、C(O)NHC1-8烷基CF3、SO2NHC1-8烷基、OCF3、NHC(O)CH3或CH2OC(O)NHCH3。
8.权利要求1-7任一项的式(I)化合物，其中R4是
Figure FDA0000049063950000031
其可以是未取代或取代的。
9.权利要求1-8任一项的式(I)化合物，其中R2和R3是C1-8烷基。
10.权利要求1-9任一项的式(I)化合物，其中R2和R3是CH3。
11.权利要求1-10任一项的式(I)化合物，其中L是-O-、-NH-、-C(O)-、-CH(OH)-、-CH2-、CF2-、-CHF-、-C(OH)-或价键。
12.权利要求1-11任一项的式(I)化合物，其中L是-CH2-
13.权利要求1-12任一项的式(I)化合物，其中X和W均为N，且Z是CH3，且m是1。
14.权利要求1-12任一项的式(I)化合物，其中R7是
Figure FDA0000049063950000041
且
R4是C(O)CH3、C(O)NH-苯基、C(O)OH、CF3、C(CH3)(CH3)OH、C(O)OCH3、CF3或C(O)OCH2CH3。
15.式(Ia)化合物或其可药用盐，
Figure FDA0000049063950000042
其中：
R11是C1-8烷基、C2-8烯基、C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基、3-14元环杂烷基、C1-8烷氧基、卤素、NR13R14、C(O)OR13、C(O)NR13R14、C1-8卤代烷基、甲酰基、烷酯基、C1-8烷基OH、C(O)R13、SO2R13、C(O)NHC1-8烷基R13、NR13R14、SO2NR13R14、OCF3、NHC(O)R13、CH2OC(O)NR13R14、CH2NR13R14、NHC(O)OR13、NHC(O)NR13R14、CH2NHSO2R13、CH2NHC(O)OR13、OC(O)R13或NHC(O)R13，其可以是取代或未取代的；
R12是H、C1-8烷基、C6-14芳基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基、卤素、NH2、CN、OCF3、OH、C(O)NR13R14、C(O)R13、NR13R14、NHC(O)R13、SO2R13、SO2NR13R14；
R13和R14独立地是H、C1-8烷基、C2-8烯基、C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基、3-14元环杂烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷基OH、C1-8烷氧基，或者一个原子上的R13和R14可以形成含杂原子的环；且
其中R11、R13和R14可以是未取代的或者被一个或多个C1-8烷基、C3-14环烷基、C6-14芳基、5-14元杂芳基、3-14元环杂烷基、C1-8烷基OH、OH、氧代基、C1-8卤代烷基、羧基C1-8烷基或SO2C1-8烷基、卤素、-OCH3、-OCF3、-OH、-NH2取代。
16.药物组合物，包含治疗有效量的权利要求1和权利要求15的式(I)或(Ia)化合物。
17.与Smoothened抑制相关的疾病、障碍或综合征的治疗方法，该方法包括给需要其的受治疗者施用权利要求1-15任一项的式(I)或(Ia)化合物或其前药或者包含式I化合物或其前药和可药用赋形剂的药物组合物。
18.权利要求17的治疗方法，其中所述疾病、障碍或综合征是受治疗者的过度增殖，其中所述受治疗者是包括人在内的动物，所述过度增殖选自癌症和炎症。
19.用于预防或治疗如本文所述的疾病状态的权利要求1-15任一项的化合物。
20.权利要求1-15任一项的化合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于本文所定义的任意一种或多种用途。
21.药物组合物，包含权利要求1-15任一项的化合物和可药用载体。
22.适于口服施用的形式的药物组合物，包含权利要求1-15任一项的化合物和可药用载体。
23.权利要求1的式(I)化合物，其中所述化合物选自：
2-[(R)-4-(4，5-二甲基-6-苯氧基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
2-{(R)-4-[6-(羟基-苯基-甲基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2]联吡嗪-5’-基]-丙烷-2-醇；
2-[(R)-4-(4，5-二甲基-6-吡啶-4-基甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
2-[(R)-4-(4，5-二甲基-6-吡啶-2-基甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
2-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
2-[4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2’]联吡嗪-5’-基]-丙烷-2-醇；
2-[(S)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
2-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-乙基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
2-[4-(4-苄基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]哒嗪-1-基)-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
2-[(R)-4-(4-苄基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]哒嗪-1-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-2-醇；
1-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-乙酮；和
2-[(R)-4-(6-苄基-4，5-二甲基-哒嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6-四氢-2H-[1，2′]联吡嗪-5′-基]-丙烷-1，2-二醇。
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