PT2318389E - Derivados de piridazina como inibidores de smo - Google Patents

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PT2318389E
PT2318389E PT97806962T PT09780696T PT2318389E PT 2318389 E PT2318389 E PT 2318389E PT 97806962 T PT97806962 T PT 97806962T PT 09780696 T PT09780696 T PT 09780696T PT 2318389 E PT2318389 E PT 2318389E
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Zhuoliang Chen
Feng He
Stefan Peukert
Karen Miller-Moslin
Naeem Yusuff
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Novartis Ag
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Description

ΡΕ2318389 1
DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE PIRIDAZINA COMO INIBIDORES DE SMO"
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A sinalização de Hedgehog (Hh) foi identificada pela primeira vez em Drosophila como um mecanismo de regulação importante para a formação do padrão embrionário, ou o processo pelo qual as células embrionárias formam arranjos espaciais ordenados de tecidos diferenciados (Nusslein-Volhard et al. (1980) Nature 287, 795-801). Em células de mamíferos, foram identificados três genes Hedgehog, Sonic Hedgehog (Shh), Indian Hedgehog (Ihh) e Desert Hedgehog (Dhh). Os genes Hedgehog codificam proteínas segregadas, que sofrem modificações pós-transducionais, incluindo a clivagem autocatalítica e modificação lipídica (palmitoilação) no terminal N e modificação de colesterol do terminal C. A proteína de Hedgehog modificada no terminal N por lípidos desencadeia a atividade de sinalização da via proteica e a comunicação de célula para célula é engendrada pelo envio de proteína de Hedgehog solúvel a partir de uma célula de sinalização e de recebimento por uma célula de resposta. Nas células com capacidade de resposta, o recetor da proteína de transmembrana de 12 passes Patched (Ptch) 2 ΡΕ2318389 atua como um regulador negativo da sinalização de Hh e a proteína de transmembrana de 7 passes Smoothened (Smo) atua como um regulador positivo da sinalização de Hh. No estado de repouso, o Ptch livre (i.e., não ligado por Hh) suprime sub-estequiometricamente a atividade da via induzida pelo Smo (Taipale et ai. (2002) Nature 418: 892); através da ligação à proteína Hh ligante, no entanto, a repressão de Smo é aliviada, e a cascata de sinalização resultante leva à ativação e translocação nuclear de fatores de transcrição Gli (Glil, Gli2 e Gli3).
Os genes-alvo a jusante da transcrição de sinalização de Hh incluem Wnts, TGFP, e Ptc e Glil, que são elementos da retroalimentação reguladora positiva e negativa. Vários ciclos celulares e genes reguladores de proliferação, tais como c-myc, ciclina D e E estão também entre os genes alvo de sinalização de Hh. A sinalização de Hh é conhecida por regular uma variada gama de processos biológicos, tais como a proliferação celular, diferenciação, e a formação de órgãos num tecido específico e de uma forma dependente da dose. No desenvolvimento de tubos neurais, o Shh é expresso na placa de fundo e dirige a diferenciação de subtipos específicos de neurónios, incluindo neurónios motores e dopaminérgicos. O Hh é também conhecido por regular a proliferação de células progenitoras neuronais, tais como as células granulares de cerebelos e as células estaminais neurais. No trato intestinal em desenvolvimento, é requerido um nível 3 ΡΕ2318389 de sinalização de Hh baixo para o desenvolvimento do pâncreas, enquanto um elevado nivel de sinalização de Hh bloqueia a organogénese pancreática. 0 Hh é também conhecido por desempenhar papéis importantes na proliferação de células estaminais e na organogénese na pele, próstata, testículos, e medula óssea.
Normalmente, a sinalização de Hh é rigorosamente controlada durante a proliferação celular, a diferenciação e a formação de padrão embrionário. Contudo, a atividade aberrante da via de sinalização de Hedgehog, devido a mutações que ativam constitutivamente a via, por exemplo, poderão ter consequências patológicas. A título de exemplo, as mutações de perda de função de Patched são encontradas na síndrome de Gorlin (uma síndrome hereditária com elevado risco de cancros da pele e do cérebro, também conhecido como Síndrome de Nevo Basocelular (BCNS)); e as mutações de ganho-de-função de Smo e Gli estão ligadas aoscarcinoma e glioblastoma basocelulares. 0 carcinoma basocelular (CBC) é a forma mais comum de cancro de pele, que afeta mais de 90 mil Americanos em cada ano. Descobriu-se que a ativação constitutiva de Hh promove a tumorigénese em BCC, meduloblastoma (o tumor cerebral mais comum na infância), rabdomiossarcoma, cancro pancreático, cancro de pulmão de pequenas células, cancro de próstata e cancro de mama. Para além dos papéis em tumorigénese, a sinalização de Hh está também implicada na metástase do cancro da próstata. A sinalização de Hh poderá estar envolvida em muitos tipos de tumores adicionais e é esperado que tais ligações continuem 4 ΡΕ2318389 a ser descobertas; esta é uma área de investigação ativa em muitos centros de cancro em todo o mundo. A proliferação destas células cancerosas requer ativação da via Hh, e bloqueando as vias de sinalização de Hh frequentemente inibe-se a proliferação das células cancerosas. Com efeito, a ciclopamina antagonista de Hh e Glil siRNA pode bloquear eficazmente a proliferação destas células cancerosas, e pode reduzir o tamanho do tumor em modelos de Xenoenxerto, sugerindo que novos antagonistas de Hh poderiam proporcionar novos agentes quimioterapêuticos para o tratamento destes cancros. A ciclopamina antagonista de Hh demonstrou suprimir a metástase do cancro da próstata em modelos animais.
Para além de ser envolvido no cancro, a sinalização de Hh desempenha um papel importante na homeostase e na regeneração de tecido normal. A via de Hh é ativada após a lesão de retina, do dueto biliar, pulmão, ossos e próstata em modelos de murganho. A via de Hh também está constantemente ativa nos foliculos pilosos, medula óssea, e em determinadas regiões do sistema nervoso central (CNS), e hiperplasia benigna da próstata e formação de vasos sanguíneos na degeneração macular húmida requerem a atividade da via de Hedgehog. Os processos de regeneração celular podem ser bloqueados pelo anticorpo anti-Shh e a ciclopamina. Consequentemente, os antagonistas de pequena molécula da via de sinalização de Hh podem ser úteis no tratamento de doenças neuronais proliferativas, hiperplasia 5 ΡΕ2318389 benigna da próstata, degeneração macular húmida, psoriase, doenças proliferativas da medula óssea e leucemias, osteo-petrose e depilação. A evidência de que a ativação constitutiva de Smo resulta em cancros (e.g., BCC) , e que o Smo pode ser oncogénico após a sua libertação a partir da inibição por Ptch, sugere utilidade dos antagonistas de Smo como agentes terapêuticos no tratamento de tais patologias. (Stone et al. (1996) Nature 384: 129). Concordantemente, as moléculas que modulam a atividade da via de sinalização de Hedgehog, e.g., que modulam a atividade de Smo, são terapeuticamente úteis. A WO-A-2007 127475 descreve compostos de piridazina substituídos por fenilo e grupos piperazinilo substituídos. A WO-A-2007 059157 descreve derivados de N,N'- dibenzoil-fenileno-1,3-diamina que são inibidores de sinalização de hedgedog. A WO-A-2007 127448 descreve derivados de N-pirimidn-2-il-N'-(6-fenil-pirazin-3-il)-piperazina.
Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, vol. 17, pp 414-418 (2007) descreve compostos baseados nas 3-fenil-6-((4-pirimidin-2-il)-piperazin-l-il)-piridazinas. A EP-A-0055583 descreve 1,4-bi-heteroaril-piperazinas 6 ΡΕ2318389 incluindo 3-fenoxi-6-piperazin-l-il-piridazina, em que a piperazina é substituída por quinazolina.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se genericamente a novos compostos relacionados com o diagnóstico e o tratamento de patologias relacionadas com a via de Hedgehog, incluindo mas não limitado à formação de tumor, cancro, neoplasia, e patologias hiperproliferativas não-malignas. A presente invenção inclui novos compostos, novas composições, métodos para a sua utilização e métodos para a sua fabricação, em que esses compostos são geralmente farmacologicamente úteis como agentes em terapias cujo mecanismo de ação envolve métodos de inibir a tumorigénese, o crescimento do tumor e a sobrevivência do tumor utilizando agentes que inibem a via de sinalização de Hedgehog e Smo. Os compostos e métodos da presente invenção (e.g., um composto de Fórmula I) referem-se à inibição da ativação da via de sinalização de Hedgehog, e.g., através da inibição de estados de crescimento aberrante resultantes de fenótipos, tais como perda de função Ptc, ganho-de-função de Hedgehog, ganho-de-função de Smoothened ou ganho-de-função de Gli, e compreendem contactar a célula com um composto da invenção (e.g., um composto de Fórmula I) numa quantidade suficiente para agonizar uma atividade de Ptc normal, antagonizar uma atividade normal de Hedgehog, ou antagonizar a atividade de Smoothened (e.g., para reverter ou controlar o estado de crescimento aberrante). ΡΕ2318389 7 A presente invenção refere-se a compostos de fórmula (I)
ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que RI é
ou cada um dos quais poderá ser não substituído ou substituído por um ou mais de Ci-salquilo, um grupo C6-i4arilo, Ci_8 halogenoalquilo, Ci-salcoxi, halogeno, NH2, CN, OCF3, OH, C(0)NR6R8, C(0)R6, NR6R8, NHC(0)R6, S02R6 ou S02NR6R8; R2 e R3 são independentemente Ci-salquilo, Ci-salquilOH, ou R2 e R3 formam um grupo C3-i4cicloalquilo fundido; L é uma ligação, Ci_8alcileno, -C (0) 0-,-C (0) NR9-,-Ci-salquilOH-,-Ci_8 halogenoalquilo,-C(0)-, -NH-ou -0-; X e W são independentemente N ou CR5, e pelo menos um de X ou W é N; ΡΕ2318389 R7 é
R4 é Ci-salquilo, C2-8alcenilo, C3-i4Cicloalquilo, um grupo C6-i4arilo, um grupo heteroarilo de 5-14 membros, um grupo ciclo-heteroarilo de 3-14 membros, Ci-salcoxi, halogeno, NR6R8, C(0)0R6, C(0)NR6R8, Ci-shalogenoalquilo, formilo, carbalcoxi, Ci-salquilOH, C(0)R6, SO2R6, C(0) NHCi-salquilRô, NR6R8, SO2NR6R8, OCF3, NHC(0)R6, CH2OC(0)NR6R8, CH2NR6R8, NHC(0)0R6, NHC(0)NR6R8, CH2NHS02R6, CH2NHC(0)0R6, 0C(0)R6, ou NHC(0)R6, que poderá ser substituído ou não substituído; Z é Ci-salquilo, CN, OH ou halogéneo; m é 0-3; p é 1; Y é uma ligação, Ci-galcileno, —C (0) —, -C(0)0-, -CH(OH)-, ou -C(0)NR10; R5 é H, halogéneo, CN, alquilo inferior, OH, OCH3 ou -0CF3; R9 e RIO são independentemente Ci-salquilo ou H; R6 e R8 são independentemente H, Ci_8alquilo, C2_8alcenilo, C3_i4CÍcloalquilo, um grupo C6-i4arilo, um grupo heteroarilo de 5-14 membros, um grupo ciclo-heteroalquilo de 3-14 membros, Ci-shalogenoalquilo, Ci-salquilOH, Ci-salcoxi, ou dois R6, ou um R6 e um R8 num átomo podem formar um anel contendo um heteroátomo; e em que R4, R6 e R8 podem ser não substituídos ou 9 ΡΕ2318389 substituídos por um ou mais de Ci-8alquilo, C3_ i4cicloalquilo, um grupo C6-i4arilo, um grupo heteroarilo de 5-14 membros, um grupo ciclo-heteroalquilo de 3-14 membros, Ci-salquilOH, OH, oxo, Ci-8halogenoalquilo, carboxCi-8 alquilo, ou S02Ci_8alquilo, halogeno, -OCH3, -OCF3, -OH, -NH2.
Numa forma de realizaçao, a presente invenção inclui compostos de fórmula (I) em que R7 é
RI é
< OU
Ainda Noutra forma de realização, a presente invenção inclui compostos de fórmula (I) em que R4 é C(0) 0 Ci-8alquilo, CF3, C(0)0R6, C(0)NR6R8, Ci-8halogenoalquilo, Ci-galquilOH, C (0) R6 , S02R6, C (0) NHCi_8alquilR6, C(CH3)(CH3)- (OH), C(0)CH3, C(CH2)CH3, ou C(CH3) (CH20H)0H, e R6 e R8 são independentemente H, Ci-8alquilo, Ci_8 alcenilo, C3-14CÍCI0-alquilo, um grupo C6-i4arilo, um grupo ciclo-heteroalquilo de 5-14 membros, ou um grupo ciclo-heteroalquilo de 3-14 membros.
Noutra forma de realizaçao, a presente invenção inclui compostos de fórmula (I) em que R7 é 10 ΡΕ2318389
e R4 é Ci-salquilo, tal como metilo, etilo, propilo, ou butilo; C2-8alcenilo, tal como etenilo ou propenilo, C3-14C1-cloalquilo, tal como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclo-pentilo ou ciclo-hexilo, um grupo Cg_i4arilo, tal como fenilo; um grupo heteroarilo de 5-14 membros, tal como piridinilo ou imidazolilo, um grupo ciclo-heteroalquilo de 3-14 membros, tal como piperidinilo, morfolinilo, pirro-lidinilo, ou piperazinilo; Ci_8alcoxi, tal como metoxi, etoxi, ou propoxi; halogeno, tal como Cl, F, Br, ou I; NR6R8, tal como NHCi-8alquilo; C(0)0R6, tal como C(0)0 Ci-8alquilo, ou C(0)0H, C(0)NR6R8, tal como C (O) NHC6-i4arilo, C (O) NHC6-i4arilCi-8alquilo, ou C (O)-grupo heteroarilo de 5-14 membros, ou C(O)- grupo ciclo-heteroarilo de 3-14 membros, Ci-8halogenoalquilo, tal como CF3; formilo, carbalcoxi, Ci_8-alquilOH, tal como CH2OH, etilo substituído com OH em qualquer posição, propilo substituído com OH em qualquer posição, ou butilo substituído por OH em qualquer posição, C(0)R6, tal como C (O) Ci-8alquilo; S02R6, tal como S02Ci_8al-quilo ou S02CF3; C (O) NHCi_8alquilR6, tal como C (O) NHCi_8al-quilOH, ou C (O) NHCi~8alquilCF3; S02NR6R8, tal como S02NHCi- 11 ΡΕ2318389 galquilo; OCF3, NHC(0)R6, tal como NHC (0) Ci-salquilo; CH20C(0)NR6R8, CH2NR6R8, NHC(0)0R6, NHC(0)NR6R8, CH2NHS02R6, CH2NHC(0)0R6, 0C(0)R6, ou NHC(0)R6, e em que R4 poderá ser substituído ou não substituído, e p é 1.
Noutra forma de realização, R6 e R8 são independentemente H, Ci-galquilo, tal como metilo, etilo, propilo, ou butilo; C2-salcenilo, tal como alcenilo, propenilo, C3-i4CÍcloalquilo, tal como ciclopropilo, ciclobutilo, ci-clopentilo, ou ciclo-hexilo, um grupo C6_i4arilo, tal como fenilo, um grupo heteroarilo de 5-14 membros, tal como piridinilo ou pirimidinilo; um grupo ciclo-heteroalquilo de 3-14 membros, tal como morfolinilo, piperidinilo, pirroli-dinilo, ou piperazinilo; Ci-shalogenoalquilo, tal como CF3; Ci-galquilOH, Ci-salcoxi, tal como metoxi ou etoxi, ou dois R6, ou R6 e R8 num átomo podem formar um anel contendo um heteroátomo, tal como um grupo heteroarilo de 5-14 membros ou um grupo ciclo-heteroarilo de 3 -14 -membros.
Noutra forma de realização da presente invenção, R4 poderá ser não substituído ou substituído com um ou mais de Ci-galquilo, tal como metilo, etilo, propilo, butilo, ou pentilo, C3-i4cicloalquilo, tal como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ou ciclo-hexilo, um grupo C6-i4arilo, tal como fenilo; um grupo heteroarilo de 5-14 membros, tal como piridinilo ou pirimidinilo; um grupo ciclo-heteroalquilo de 3-14 membros, tal como morfolinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, ou piperazinilo; Ci-salquilOH, tal como CH30H, OH, oxo, Ci-ghalogenoalquilo, tal como CF3; 12 ΡΕ2318389 carboxiCi-salquilo ou S02Ci_8alquilo, halogeno, tal como Cl, F, Br, ou I, -OCH3, -OCF3, OU-NH2.
Noutra forma de realização, e R4 é metilo, fenilo, piridinilo, metoxi, Cl, F, C (0) OCi_8alquilo, C(0)0H, C (0) NHC6-i4arilo, C (0) NC6-i4arilCi-8alquilo, C(0) -grupo hete-roarilo de 5-14 membros, C(0)-grupo ciclo-heteroalquilo de 3-14 membros, CF3, CH20H, CH2CH2OH, C (CH3) (CH3) OH, C(0)CH3, C(0)CH2CH3, -S02Ci_8alquilo, S02CF3, C (0) NHCi_8alquilOH, C (0) NHCi_8alquilCF3, S02NHCi-8alquilo, 0CF3, NHC(0)CH3, ou CH20C (0) NHCH3, cada um dos quais poderá ser substituído ou não substituído, e p é 1.
Noutra forma de realização, R4 é C(0)CH3, C(0)NH-fenilo, C (0) OH, CF3, C (CH3) (CH3) OH, C(0)0CH3, CF3, C(0)0CH2CH3, ou C (0) NCH2CH3, opcionalmente substituído com piperazinilo, morfolinilo, ou piridinilo.
Numa forma de realização preferida, R7 é
R4 é C(0)CH3, C (0) NH-f enilo, C(0)0H, CF3, C (CH3) (CH3) OH, C(0)0CH3, CF3, ou C(0)0CH2CH3.
Noutra forma de realização, a presente invenção inclui compostos de fórmula (I) em que RI é 13 ΡΕ2318389
cada um dos quais poderá ser não substituído ou substituído por um ou mais de Ci_8alquilo, tal como metilo, etilo, propilo (e.g., isopropilo), butilo, pentilo, ou hexilo; um grupo C6-i4arilo, tal como fenilo; Ci-8halogenoalquilo, tal como CF3; Ci-8alcoxi, tal como metoxi ou etoxi, halogénio, tal como Cl, F, Br, ou I, NH2, CN, OCF3, OH, C(0)NR6R8, C ( 0) R6, NR6R8, NHC(0)R6, S02R6 ou S02NR6R8 .
Numa forma de realização adicional, RI é
que poderá ser não substituído ou substituído com cada um dos quais poderá ser não substituído ou substituído com um ou mais de metilo, etilo, CF3, metoxi, Cl, F, NH2, CN, OCF3 ou OH. Noutra forma de realização, RI poderá ser não substituído ou substituído com CH3, Cl, F, metoxi, ou CH.
Noutra forma de realização, a presente invenção inclui compostos de fórmula (I) em que R7 é e RI é
14 ΡΕ2318389
* Ο» que poderá ser nao substituído ou substituído com um ou mais de metilo, etilo, isopropilo, Cl, F, CN, metoxi ou CF3.
Ainda noutra forma de realização, a presente invenção inclui compostos de fórmula (I) em que R4 é C (0) OCi-salquilo, CF3, C(0)0R6, C(0)NR6R8, Ci-shaloge- noalquilo, Ci-8alquilOH, C(0)R6, S02R6, C (0) NHCi_8alquilR6, C(CH3) (CH3) (OH) , C(0)CH3, CH2-CH2-CH3, ou C(CH3) (CH2OH)OH.
Numa forma de realização R6 e R8 são independentemente H, metilo, etilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, fenilo, piridinilo, morfolinilo, piperidinilo, pirroli-dinilo, ou piperazinilo, CF3, metoxi, dois R6, ou R6 e R8 num átomo podem formar um anel contendo heteroátomo, tal como um grupo heteroarilo de 5-14 membros, tal como piridinilo ou pirimidinilo, ou um grupo ciclo-heteroalquilo de 3-14 membros, tal como piperidinilo ou piperazinilo.
Noutra forma de realização, a presente invenção inclui compostos de fórmula (I) em que R4 é
que poderá ser nao substituído ou substituído. 15 ΡΕ2318389
Noutra forma de realização, a presente invenção inclui compostos de fórmula (I) em que R2 e R3 são Ci_ 8alquilo, tal como metilo, etilo, ou em conjunto com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados formam um grupo C4-7crcloalquilo. Noutra forma de realização, R2 e R3 são cada um metilo, ou formar um grupo ciclopentilo ou ciclo-hexilo.
Ainda Noutra forma de realização, a presente invenção inclui compostos de fórmula (I) em que R2 e R3 são ch3.
Noutra forma de realização, a presente invenção inclui compostos de fórmula (I) em que L é -0-,-NH-, -C(0)-, -CH(OH)-, —CH2 —, -CF2-, -CHF-,-C(OH)-, ou uma ligação.
Noutra forma de realização, a presente invenção inclui compostos de fórmula (I) em que L é-CH2-. Noutra forma de realização, a presente invenção inclui compostos de fórmula (I) em que ambos X e W são N, e Z é CH3, e m é 1.
Nos compostos de fórmula (I) p é 1.
Noutra forma de realização, Y é uma ligação, Ci-8-alcileno, tal como metileno, etileno, propileno -C(0)-, -C (0) 0-, -CH (OH) -, ou -C (0) NR10, em que RIO é Cb-salquilo, tal como metilo, etilo, propilo, ou butilo, ou H. Noutra forma de realização, Y representa uma ligação, metileno, 16 ΡΕ2318389 -C(0)0-, ou C(0)NH. Noutra forma de realizaçao, o símbolo Y representa uma ligação.
Noutra forma de realização, a presente invenção inclui um composto de fórmula (Ia):
ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que
Rll é um Ci-salquilo, C2_8alcenilo, C3-14CÍCI0-alquilo, um grupo C6_i4arilo, um grupo heteroarilo de 5-14 membros, um grupo ciclo-heteroalquilo de 3-14 membros, Ci_8-alcoxi, halogénio, NR13R14, C(0)0R13, C(0)NR13R14, Ci_8halo-genoalquilo, formilo, carbalcoxi, Ci-8alquilOH, C(0)R13, S02R13, C (0) NHCi_8alquilR13, NR13R14, S02NR13R14, 0CF3, NHC(0)R13, CH20C(0)NR13R14, CH2NR13R14, NHC(0)0R13, NHC (0) NR13R14, CH2NHS02R13, CH2NHC (0) 0R13, 0C(0)R13, ou NHC(0)R13, que poderá ser substituído ou não substituído; R12 é H, Ci_8alquilo, um grupo C6-i4arilo, Ci_ 8halogenoalquilo, Ci_8alcoxi, halogénio, NH2, CN, 0CF3, OH, C(0)NR13R14, C(0)R13, NR13R14, NHC(0)R13, S02R13, S02NR13R14; R13 e R14 são independentemente H, Ci-8alquilo, C2-8alcenilo, C3-i4cicloalquilo, um grupo C6-i4arilo, um grupo heteroarilo de 5-14 membros, um grupo ciclo-heteroalquilo 17 ΡΕ2318389 de 3-14 membros, Ci_8halogenoalquilo, Ci_8alquilOH, Ci_ 8alcoxi, ou R13 e R14 num átomo podem formar um anel contendo um heteroátomo; e em que Rll, R13, e R14 pode ser não substituído ou substituído por um ou mais de Ci_8ailquilo, C8_ 14cicloalquilo, um grupo C6-i4arilo, um grupo heteroarilo de 5-14 membros, um grupo ciclo-heteroalquilo de 3-14 membros, Ci-8alquilOH, OH, oxo, Ci-8halogenoalquilo, carboxCi_8alquilo, ou -S02Ci^8alquilo, halogeno, -OCH3, -OCF3, -OH, -NH2.
Noutra forma de realização, a presente invenção inclui um composto selecionado a partir de: 2-[(R)-4-(4,5-Dimetil-6-fenoxi-piridazin-3-il)-2-metil-3, 4, 5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol; 2 - [(R)-4-[6-(Hidroxil-fenil-metil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2]bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol; 2-[(R)-4-(4,5-Dimetil-6-piridin-4-il-metil-piridazin-3-i1)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5' -il]-propan-2-ol; 2-[(R)-4-(4,5-Dimetil-6-piridin-2-il-metil-piridazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol; 2-[(R)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol; 2-[4-(6-Benzi1-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil-5'il]-propan-2-ol; 18 ΡΕ2318389 2-[(S)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-3, 4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2'] bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol; 2-[(R)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-etil- 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol; 2-[4-(4-Benzil-6,7-di-hidro-5H-ciclopenta[d]piridazin-l-il) -3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'] bipirazinil-5'-il]-propan-2- ol; 2-[(R)-4-(4-Benzil-6,7-di-hidro-5H-ciclopenta[d] piridazin-l-il) -2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol; 1- [(R)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil- 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil5' -il]etanona; e 2- [(R)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil- 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2'] bipirazinil-5'-il]-propano- 1,2-diol.
Um aspeto da presente invenção torna disponíveis métodos que empregam os compostos para inibir a ativação da via dependente de Smo. Outro aspeto da presente invenção torna disponíveis métodos que empregam compostos para inibir a ativação da via independente de Hedgehog (ligando). Em certas formas de realização, os métodos presentes podem ser utilizados para neutralizar os efeitos fenotípicos de ativação indesejada de uma via de Hedgehog, tal como a resultante de ganho-de-função de Hedgehog, perda-de-função de Ptc ou mutações de ganho-de-função de Smoothened. Por exemplo, o método em causa pode envolver o 19 ΡΕ2318389 contacto de uma célula (in vitro ou in vivo) com um antagonista de Smo, tal como um composto da invenção (e.g., um composto de Fórmula I) ou outra molécula pequena numa quantidade suficiente para antagonizar uma via de ativação dependente de Smoothened e/ou independente de Hedgehog.
Os compostos e métodos da presente invenção poderão ser utilizados para regular a proliferação e/ou a diferenciação de células in vitro e/ou in vivo, e.g., na formação de tecido a partir de células estaminais, ou para impedir o crescimento das células hiperproliferativas. Noutra forma de realização particular, o contacto da célula com- ou a introdução na célula- de um composto do invenção (e.g., um composto de Fórmula I) resulta numa inibição da proliferação celular, na inibição do crescimento das células do tumor e/ou sobrevivência, e/ou inibição da tumorigénese. Assim, outra forma de realização particular providencia métodos para inibir e/ou antagonizar a via de Hh, através de empregar os compostos da invenção (e.g., um composto de Fórmula I), numa célula de tumor.
Os métodos da presente invenção poderão empregar compostos da invenção (e.g., um composto de Fórmula I), como formulados como preparações farmacêuticas que compreendem um excipiente ou veiculo farmaceuticamente aceitável, e as referidas preparações poderão ser administradas a um paciente para tratar estados que envolvem a proliferação de células indesejada, tais como cancros e/ou tumores (tais 20 ΡΕ2318389 como medulablastoma, carcinoma basocelular, etc.) , e patologias hiperproliferativas não-malignas.
Uma forma de realização da presente invenção proporciona um composto para inibir a síntese, expressão, produção, estabilização, fosforilação, mudança de lugar no interior da célula, e/ou atividade de uma proteína Smo numa célula in vitro ou in vivo, compreendendo, contactar a referida célula com, ou introduzir na referida célula, um composto da invenção (e.g., um composto de Fórmula I).
Outro aspeto da invenção providencia um composto útil num método de diagnosticar, prevenir e/ou tratar debilitações celulares, desarranjos e/ou disfunções; estados de doença hiperplásicos, hiperproliferativos e/ou cancerosos; e/ou metástase de células tumorais num mamífero caracterizado pela presença e/ou expressão de um gene ou produto de gene Smo (e.g., uma proteína Smo), que compreende os compostos de fórmula (I) para administração a um mamífero numa quantidade terapeuticamente eficaz.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
Noutra forma de realização, a presente invenção inclui uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a fórmula I ou IA. A presente invenção relaciona-se com um método de tratar um mamífero que sofre de uma patologia relacionada com a via de Hedgehog que compreende adminis- 21 ΡΕ2318389 trar ao referido mamífero com necessidade de tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a fórmula I ou IA.
Na presente descrição, o termo "tratamento" inclui tanto o tratamento profilático ou preventivo assim como o tratamento curativo ou supressor de doença, incluindo o tratamento de doentes em risco de uma doença da invenção (e.g., uma patologia relacionada com Hedgehog (e.g., cancro)), bem como pacientes doentes. Este termo inclui adicionalmente o tratamento para o atraso da progressão da doença.
Por "suprimir e/ou inverter", e.g., uma patologia relacionada com Hedgehog (e.g., cancro), os Requerentes pretendem abrogar a referida patologia relacionada com Hedgehog (e.g., diabetes), ou tornar o referido estado menos grave do que antes ou sem o tratamento. "Cura" tal como utilizado aqui significa conduzir à remissão da patologia relacionada com Hedgehog (e.g., cancro) num doente, ou de seus episódios em curso, através de tratamento.
Os termos "profilaxia" ou "prevenção" significam que dificultam o aparecimento ou a recorrência de patologias metabólicas, e.g., diabetes. "Tratamento" ou "tratar" refere-se a terapia, prevenção e profilaxia e particularmente refere-se à admi- 22 ΡΕ2318389 nistração de medicamentos ou a realização de procedimentos médicos no que diz respeito a um paciente, quer para a profilaxia (prevenção) ou para curar ou reduzir a extensão ou a probabilidade de ocorrência da enfermidade ou doença ou estado ou evento no caso em que o paciente sofre. "Diagnóstico" refere-se a diagnóstico, prognóstico, monitorizar, caracterizar, selecionar pacientes, incluindo participantes em ensaios clínicos, e identificar pacientes em risco de ou possuindo uma patologia particular ou evento clínico ou aqueles mais propensos a responder a um tratamento terapêutico particular, ou para avaliar ou monitorizar a resposta de um paciente a um tratamento terapêutico particular. "Sujeito" ou "paciente" refere-se a um mamífero, preferencialmente um ser humano, com necessidade de tratamento de um estado, patologia ou doença. "Um(ns) composto(s) da invenção", tal como utilizado aqui, inclui, mas não está limitado a compostos de Fórmula I (e.g., um composto de Fórmulas (I), incluindo todas as suas variantes). Um composto da invenção inclui os compostos especificamente listados aqui listados, incluindo aqueles listados nos Exemplos do presente pedido. "Atraso na progressão", tal como utilizado aqui, significa que a administração de um composto da invenção (e.g., um composto de Fórmula I) a pacientes de uma pré- 23 ΡΕ2318389 fase ou numa fase precoce de uma patologia relacionada com Hedgehog (e.g., cancro) impede que a doença evolua adicionalmente, ou retarda a evolução da doença em comparação com a evolução da doença sem a administração do composto ativo. "Ganho-de-função de Hedgehog" refere-se a uma modificação ou mutação aberrante de um gene Ptc, gene de Hedgehog, ou gene de Smoothened, ou a uma alteração (e.g., decréscimo) no nível de expressão de um tal gene, que resulta num fenótipo que se assemelha a contactar uma célula com uma proteína de Hedgehog, e.g., ativação aberrante de uma via de Hedgehog. 0 ganho-de-função poderá incluir uma perda da capacidade do produto do gene Ptc para regular o nível de expressão de genes de Gli, e.g., Glil, Gli2, e Gli3, ou uma perda da capacidade para regular o processamento, estabilidade, localização ou atividade das proteínas Gli, e.g., Glil, Gli2 e Gli3. 0 termo "ganho de função de Hedgehog" é também aqui utilizado para se referir a qualquer fenótipo celular semelhante (e.g., exibindo excesso de proliferação) que ocorre devido a uma alteração em qualquer local na via de transdução de sinal de Hedgehog, incluindo, mas não limitado a, uma modificação ou mutação do próprio Hedgehog. Por exemplo, uma célula de tumor com uma taxa de proliferação anormalmente elevada devido à ativação da via de sinalização de Hedgehog teria um fenótipo "ganho-de-função de Hedgehog", mesmo se o Hedgehog não for mutado nessa célula. 24 ΡΕ2318389 "A perda-de-função Patched" refere-se a uma modificação ou mutação aberrante de um gene Ptc, ou a uma diminuição do nível de expressão do gene, que resulta num fenótipo que se assemelha a contactar uma célula com uma proteína de Hedgehog, e.g., ativação aberrante de uma via de Hedgehog. A perda de função poderá incluir a perda da capacidade do produto do gene Ptc para regular o nível de expressão, processamento, estabilidade, localização, ou atividade de regulação de genes e proteínas Gli, e.g., Glil, Gli2 e Gli3. "Ganho-de-função Gli" refere-se a uma modificação ou mutação aberrante de um gene Gli, ou a um aumento do nível de expressão do gene, que resulta num fenótipo que se assemelha a contactar uma célula com uma proteína de Hedgehog, por exemplo, ativação aberrante de uma via de Hedgehog. "Ganho-de-função Smoothened" refere-se a uma modificação ou mutação aberrante de um gene Smo, ou a um nível aumentado de expressão do gene, que resulta num fenótipo que se assemelha a contactar uma célula com uma proteína de Hedgehog, e.g., ativação aberrante de uma via Hedgehog.
Tal como utilizado aqui uma "pequena molécula orgânica" é um composto orgânico (ou composto orgânico complexado com um composto inorgânico (e.g., metal)) que 25 ΡΕ2318389 tem um peso molecular inferior a 3 quilodaltons, e de preferência inferior a 1,5 quilodaltons.
Tal como utilizado aqui um gene "repórter" é utilizado alternadamente com o termo "gene marcador" e é um ácido nucleico que é prontamente detetável e/ou codifica um produto do gene que é prontamente detetável tal como a luciferase.
As sequências de controlo de transcrição e tradução são sequências reguladoras de ADN, tais como promotores, intensificadores, terminadores e semelhantes, que proporcionam a expressão de uma sequência de codificação numa célula hospedeira. Em células eucariotas, os sinais de poliadenilação são sequências de controlo.
Uma "sequência promotora" é uma região reguladora de ADN capaz de ligar RNA polimerase numa célula e iniciar a transcrição de uma sequência de codificação a jusante (direção 3'). Para propósitos de definição da presente invenção, a sequência promotora está ligada ao seu terminal 3' pelo local de iniciação da transcrição e prolonga-se a montante (direção 5') para incluir o número mínimo de bases ou elementos necessários para iniciar a transcrição a níveis detetáveis acima do ruído de fundo. Na sequência promotora será encontrado um local de iniciação de transcrição (convenientemente definido, por exemplo, por mapeamento com nuclease Sl), bem como domínios de ligação ΡΕ2318389 de proteína (sequências de consenso) responsáveis pela ligação da polimerase de ARN.
Uma sequência de codificação está "sob o controlo" de sequências de controlo de transcrição e tradução numa célula quando a RNA polimerase transcreve a sequência de codificação em mARN, que é depois trans-ARN sujeita a excisão e traduzida na proteína codificada pela sequência de codificação. A frase "farmaceuticamente aceitável" refere-se a entidades moleculares e composições que são fisiologica-mente toleráveis e que tipicamente não produzem uma reação alérgica ou semelhante inconveniente, tal como perturbação gástrica, tonturas e semelhantes, quando administradas a um ser humano. De preferência, tal como é utilizado aqui, o termo "farmaceuticamente aceitável" significa aprovado por uma agência reguladora do governo federal ou de um estado ou listado na Farmacopeia dos EUA ou noutra farmacopeia reconhecida geralmente para utilização em animais, e mais particularmente em seres humanos. 0 termo "veiculo" refere-se a um diluente, adjuvante, excipiente ou veículo com o qual o composto é administrado. Tais veículos farmacêuticos podem ser líquidos estéreis, tais como água e óleos, incluindo aqueles de origem petrolífera, animal, vegetal ou sintética, tais como óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de sésamo e semelhantes. As soluções salinas em água 27 ΡΕ2318389 ou em solução aquosa e dextrose aquosa e soluções de glicerol são preferencialmente empregues como veículos, particularmente para soluções injetáveis. Os veículos farmacêuticos apropriados estão descritos em "Remington's Pharmaceutical Sciences" por E.W. Martin. A frase "quantidade terapeuticamente eficaz" é usada aqui para significar uma quantidade suficiente para reduzir em pelo menos cerca de 15 por cento, preferencialmente em pelo menos 50 por cento, mais preferencialmente em pelo menos 90 por cento, e mais preferencialmente prevenir, um défice clinicamente significativo na atividade, função e resposta do hospedeiro. Alternativamente, uma quantidade terapeuticamente eficaz é suficiente para provocar um melhoramento clinicamente significativo num estado/ sintoma no hospedeiro. "Agente" refere-se a todos os materiais que poderão ser utilizados para preparar composições farmacêuticas e de diagnóstico, ou que poderão ser compostos, ácidos nucleicos, polipéptidos, fragmentos, isoformas, variantes, ou outros materiais que podem ser utilizadas de forma independente para tais fins, tudo em conformidade com a presente invenção. "Análogo", tal como utilizado aqui, refere-se a um pequeno composto orgânico, um nucleótido, uma proteína, ou um polipéptido que possui atividade ou função(ões) semelhante ou idêntica à do composto, nucleótido, proteína 28 ΡΕ2318389 ou polipéptido ou composto possuindo a atividade desejada e efeito terapêutico da presente invenção (e.g., inibição de crescimento do tumor), mas não tem necessariamente de compreender uma sequência ou estrutura que é similar ou idêntica à sequência ou à estrutura do modo de realização preferido. "Derivado" refere-se quer a um composto, uma proteína ou um polipéptido que compreende uma sequência de aminoácidos de um polipeptídeo ou proteína precursor que foi alterado pela introdução de substituições de resíduos de aminoácidos, deleções ou adições, ou um ácido nucleico ou nucleótido que tenha sido modificado por introdução de substituições ou deleções, adições ou mutações de nucle-ótidos. 0 derivado de ácido nucleico, nucleótido, proteína ou polipéptido possui uma função semelhante ou idêntica à do polipeptídeo precursor. "Inibidores" ou "antagonistas" refere-se a moléculas inibidoras identificadas usando ensaios in vitro e in vivo para a função de via Hh, e.g., antagonistas de Smo. Em particular, os inibidores e antagonistas referem-se a compostos ou agentes que diminuem a sinalização que ocorre através da via de Hh. Os inibidores poderão ser compostos que diminuem, bloqueiam ou impedem a sinalização, através desta via. "Patologia(s) relacionada(s) com Hedgehog", tal como utilizado aqui, inclui patologias associadas à inter- 29 ΡΕ2318389 rupção ou aberração da via de Hedgehog, bem como patologias associadas a estados de crescimento normais, mas indese-jados relacionados com a ativação da via de Hedgehog. A(s) "Patologia(s) relacionada(s) com Hedgehog" incluem mas não estão limitadas à formação de tumor, cancro, neoplasia, patologias hiperproliferativas neoplásicas e patologias hiperproliferativas não-malignas. A(s) "Patologia(s) relacionada (s) com Hedgehog" incluem também a hiperplasia benigna da próstata, psoríase, degeneração macular húmida, osteopetrose e crescimento capilar indesejado.
Tal como aqui utilizado, o termo "cancro" inclui tumores sólidos de mamífero bem como doenças malignas hematológicas. Os "Tumores sólidos mamíferos" incluem cancros da cabeça e pescoço, pulmão, mesotelioma, mediastino, esófago, estômago, pâncreas, sistema hepatobiliar, intestino delgado, cólon, colo-rectal, do reto, ânus, rim, uretra, bexiga, próstata, uretra, pénis, testículos, órgãos ginecológicos, ovários, mama, sistema endócrino, pele, sistema nervoso central, incluindo o cérebro, sarcomas dos tecidos moles e osso, e melanoma de origem cutânea e intraocular. 0 termo "doenças hematológicas" inclui leucemia infantil e linfomas, doença de Hodgkin, linfomas de origem linfóide e cutânea, leucemia aguda e crónica, neoplasia de células plasmáticas e cancros associados ao SIDA. Além disso, um cancro em qualquer estágio de progressão pode ser tratado, tais como cancros primários, metastáticos, e recorrentes. A informação sobre numerosos tipos de cancro pode ser encontrada e.g., a partir da Sociedade Americana de Cancro, ou a partir de 30 ΡΕ2318389 e.g.r Wilson et al. (1991) Harrison's Principies of Internai Medicine, 12th Edition, McGraw-Hill, Inc. São contemplados tanto a utilização humana como veterinária.
Os cancros que são particularmente sensíveis ao tratamento pelos compostos e métodos da invenção incluem mas não estão limitados a gliomas, meduloblastomas, tumores neuroectodérmicos primitivos (PNETS), carcinoma baso-celeular (BCC), cancros do pulmão de célula pequena, cancros do pulmão de célula grande, tumores do trato gastrointestinal, rabdomiossarcoma, sarcomas dos tecidos moles, tumores do pâncreas, tumores da bexiga e tumores da próstata.
Tal como utilizado aqui, o termo "patologia(s) hiperproliferativa maligna" inclui mas não está limitado a cancros, patologias proliferativas neuronais, doenças proliferativas da medula óssea e leucemias.
Tal como utilizado aqui, o termo "patologia (s) hiperproliferativa não-maligna" inclui mas não está limitado a patologias proliferativas não-malignas e não-neoplásicas, tais como hiperplasia do músculo liso nos vasos sanguíneos, formação de cicatrizes cutâneas, e fibrose pulmonar.
Tal como usado aqui, "halogeno" ou "halogénio" refere-se a fluoro, cloro, bromo e iodo.
Tal como utilizado aqui, alquilo" refere-se a um 31 ΡΕ2318389 grupo hidrocarboneto saturado de cadeia linear ou ramificada. Em algumas formas de realização, um grupo alquilo pode ter desde 1 a 10 átomos de carbono (e.g., de 1 a 8 átomos de carbono). Os exemplos de grupos alquilo incluem metilo (Me), etilo (Et), propilo (por exemplo, n-propilo e isopropilo), butilo (e.g., n-butilo, isobutilo, s-butilo, t-butilo), pentilo (e.g., n-pentilo, isopentilo, neopentilo), e semelhantes. Um grupo alquilo inferior possui tipicamente até 4 átomos de carbono. Os exemplos de grupos alquilo inferiores incluem grupos metilo, etilo, propilo (e.g., n-propilo e isopropilo) e butilo (e.g., n-butilo, isobutilo, s-butilo, t-butilo).
Tal como utilizado aqui, "alcenilo" refere-se a um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada possuindo uma ou mais ligações duplas carbono-carbono. Em algumas formas de realização, um grupo alcenilo pode possuir de 2 a 10 átomos de carbono (e.g., de 2 a 8 átomos de carbono). Os exemplos de grupos alcenilo incluem grupos etenilo, propenilo, butenilo, pentenilo, hexenilo, butadienilo, pentadienilo, hexadienilo, e semelhantes. A uma ou mais ligações duplas carbono-carbono pode ser interna (tal como em 2-buteno) ou terminal (tal como em 1-buteno).
Tal como utilizado aqui, "alcinilo" refere-se a um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada possuindo uma ou mais ligações triplas carbono-carbono. Em algumas formas de realização, um grupo alcinilo pode possuir de 2 a 10 átomos de carbono (e.g., de 2 a 8 átomos de carbono) . 32 ΡΕ2318389
Exemplos de grupos alcinilo incluem etinilo, propinilo, butinilo, pentinilo, e outros semelhantes. A uma ou mais ligações triplas carbono-carbono pode ser interna (tal como em 2-butino) ou terminal (tal como no 1-butino) .
Tal como utilizado agui, "alcoxi" refere-se a um grupo-O-alguilo. Os exemplos de grupos alcoxi incluem grupos metoxi, etoxi, propoxi (e.g., n-propoxi e isopro-poxi), t-butoxi, e semelhantes. Tal como aqui utilizado, "alquiltio" refere-se a um grupo -S-alquilo. Os exemplos de grupos alquiltio incluem metiltio, etiltio, propiltio (e.g., n-propiltio e isopropiltio), t-butiltio, e semelhantes. 0 termo "carbalcoxi" refere-se a um grupo alco-xicarbonilo, em que a ligação à cadeia principal é através do grupo carbonilo (C(0)) . Os exemplos incluem mas não estão limitados a metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, e outros semelhantes.
Tal como utilizado aqui, "oxo" refere-se a um oxigénio ligado por uma ligação dupla (i.e., =0). É também para ser compreendido que a terminologia C(0) se refere a um grupo C=0, quer seja cetona, aldeído ou ácido ou derivado de ácido. Do mesmo modo, S(0) refere-se a um grupo -S=0.
Tal como utilizado aqui, "halogenoalquilo" refere-se a um grupo alquilo possuindo um ou mais 33 ΡΕ2318389 substituintes de halogéneo. Em algumas formas de realização, um grupo halogenoalquilo pode ter de 1 a 10 átomos de carbono (e.g., de 1 a 8 átomos de carbono) . Os exemplos de grupos halogenoalquilo incluem CF3, C2F5, CHF2, CH2F, CC13, CHC12, CH2C1, C2C15, e semelhantes. Os grupos perhalogenoalquilo, i.e., grupos alquilo em que todos os átomos de hidrogénio são substituídos com átomos de halogénio (e.g., CF3 e C2F5), estão incluídos na definição de "halogenoalquilo". Por exemplo, um grupo Ci_io halogenoalquilo pode ter a fórmula-CiH2í+i~jXj, em que X é F, Cl, Br, ou I, i é um número inteiro na gama de 1 a 10, e j é um número inteiro na gama de 0 a 21, desde que j seja menor do que ou igual a 2i + 1.
Tal como utilizado aqui, quando um grupo alquilo que é seguido por um grupo funcional, tal como alquilOH, reconhece-se que se refira a um grupo alquilo possuindo um ou mais dos grupos funcionais substituintes, que poderão estar localizados em qualquer local na cadeia alquilo. Os exemplos de grupos Ci-galquilOH incluem, sem limitação, CH2OH, CH2CH2OH, C(CH3) (CH3)OH, C(CH3) (CH2OH)OH, e outros semelhantes.
Tal como utilizado aqui, "cicloalquilo" refere-se a um grupo carbocíclico não aromático incluindo grupos alquilo, alcenilo, e alcinilo cíclicos. Um grupo cicloalquilo pode ser monocíclico (e.g., ciclo-hexilo) ou policíclico (e.g., contendo sistemas de anel fundidos, em ponte e/ou espiro) , em que os átomos de carbono estão 34 ΡΕ2318389 localizados no interior ou no exterior do sistema de anel. Um grupo cicloalquilo, como um todo, pode ter de 3 a 14 átomos de anel (e.g., de 3 a 8 átomos de carbono para um grupo cicloalquilo monocíclico e de 7 a 14 átomos de carbono por um grupo cicloalquilo policíclico). Qualquer posição adequada do anel do grupo cicloalquilo pode estar ligada covalentemente à estrutura química definida. Os exemplos de grupos cicloalquilo incluem grupos ciclopro-pilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, ciclopentenilo, ciclo-hexenilo, ciclo-hexadienilo, ciclo-heptatrienilo, norbornilo, norpinilo, norcarilo, ada-mantilo, e espiro[4.5]decanilo, bem como os seus homólogos, isómeros, e semelhantes.
Tal como utilizado aqui, "heteroátomo" refere-se a um átomo de qualquer elemento diferente de carbono ou hidrogénio e inclui, por exemplo, azoto, oxigénio, enxofre, fósforo e selénio. Tal como utilizado aqui, "ciclo-heteroalquilo" refere-se a um grupo cicloalquilo não aromático que contém pelo menos um (e.g., um, dois, três, quatro ou cinco) heteroátomo no anel selecionado a partir de 0, N e S, e opcionalmente contém um ou mais (e.g., um, dois, ou três) ligações duplas ou triplas. Um grupo ciclo-heteroalquilo, como um todo, pode possuir de 3 a 14 átomos de anel e contém desde 1 até 5 heteroátomos no anel (e.g., 3-6 átomos de anel para um grupo ciclo-heteroalquilo monocíclico e de 7 a 14 átomos de anel para um grupo ciclo-heteroalquilo policíclico). 0 grupo ciclo-heteroalquilo pode estar ligado covalentemente à estrutura química 35 ΡΕ2318389 definida em qualquer heteroátomo(s) ou átomo(s) de carbono que resulta numa estrutura estável. Um ou mais átomos de N ou S num anel ciclo-heteroalquilo poderá ser oxidado (e.g., N-óxido de morfolina, S-óxido de tiomorfolina, S,S-dióxido de tiomorfolina). Os grupos ciclo-heteroalquilo podem também conter um ou mais grupos oxo, tais como ftalimidilo, piperidonilo, oxazolidinonilo, 2,4(1H,3H)-dioxo-pirimidini-lo, piridin-2(1H)-onilo, e semelhantes. Os exemplos de grupos ciclo-heteroalquilo incluem, entre outros, morfo-linilo, tiomorfolinilo, piranilo, imidazolidinilo, imidazo-linilo, oxazolidinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, pirro-lidinilo, pirrolinilo, tetra-hidrofuranilo, tetra-hidrotie-nilo, piperidinilo, piperazinilo, e outros semelhantes.
Tal como utilizado aqui, "arilo" refere-se a um sistema de anel de hidrocarboneto monociclico aromático ou um sistema de anéis policiclicos em que pelo menos um dos anéis no sistema de anel é um anel de hidrocarboneto aromático e quaisquer outros anéis aromáticos no sistema de anel incluem apenas hidrocarbonetos. Em algumas formas de realização, um grupo arilo monociclico pode ter de 6 a 14 átomos de carbono e um grupo arilo policiclico pode ter 8-14 átomos de carbono. 0 grupo arilo pode estar ligado covalentemente à estrutura química definida em qualquer átomo(s) de carbono que resulte numa estrutura estável. Em algumas formas de realização, um grupo arilo pode ter apenas anéis carbocíclicos aromáticos, e.g., grupos fenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, antracenilo, fenantrenilo, e semelhantes. Em outras formas de realização, um grupo arilo 36 ΡΕ2318389 pode ser um sistema de anel policíclico em que pelo menos um anel carbocíclico aromático está fundido (i.e., possuindo uma ligação em comum com) a um ou mais anéis ciclo-alquilo ou ciclo-heteroalquilo. Os exemplos de tais grupos arilo incluem, entre outros, os derivados de benzociclo-pentano (i.e., um grupo indanilo, que é um sistema cicloalquilo 5,6-bicíclico/aromático), ciclo-hexano (i.e., um grupo tetra-hidronaftilo, que é um sistema de anel cicloalquilo 6,6-bicíclico/aromático), imidazolina (i.e., um grupo benzimidazolinilo, que é um sistema de anel ciclo-heteroalquilo 5,6-bicíclico/aromático), e pirano (i.e., um grupo cromenilo, que é um sistema de anel ciclo-heteroalquilo 6,6-bicíclico/aromático). Outros exemplos de grupos arilo incluem grupos benzodioxanilo, benzodioxolilo, cro-manilo, indolinilo, e semelhantes.
Tal como utilizado aqui, "heteroarilo" refere-se a um sistema de anel monocíclico aromático contendo pelo menos um heteroátomo no anel selecionado a partir de 0, N e S ou um sistema de anel policíclico em que pelo menos um dos anéis no sistema de anel é aromático e contém pelo menos um heteroátomo no anel. Um grupo heteroarilo, como um todo, pode ter desde 5 a 14 átomos de anel e contém de 1-5 heteroátomos de anel. Em algumas formas de realização, os grupos heteroarilo podem incluir anéis heteroarilo monocíclicos fundidos a um ou mais anéis carbocíclicos aromáticos, anéis carbocíclicos não aromáticos, ou anéis ciclo-heteroalquilo não aromáticos. 0 grupo heteroarilo pode estar ligado covalentemente à estrutura química 37 ΡΕ2318389 definida em qualquer heteroátomo ou átomo de carbono que resulte numa estrutura estável. Geralmente, os anéis heteroarilo não contêm ligações 0-0, S-S, ou S-0. No entanto, um ou mais átomos de N ou S num grupo heteroarilo pode ser oxidado (e.g., N-óxido de piridina, S-óxido de tiofeno, S,S-dióxido de tiofeno). Os exemplos de tais anéis heteroarilo incluem grupos pirrolilo, furilo, tienilo, piridilo, pirimidilo, piridazinilo, pirazinilo, triazolilo, tetrazolilo, pirazolilo, imidazolilo, isotiazolilo, tiazo-lilo, tiadiazolilo, isoxazolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, indolilo, isoindolilo, benzofurilo, benzotienilo, quino-lilo, 2-metilquinolilo, isoquinolilo, quinoxalilo, quina-zolilo, benzotriazolilo, benzimidazolilo, benzotiazolilo, benzisotiazolilo, benzisoxazolilo, benzoxadiazolilo, benzo-xazolilo, cinolinilo, lH-indazolilo, 2H-indazolilo, indoli-zinilo, isobenzofuilo, naftiridinilo, ftalazinilo, pteri-dinilo, purinilo, oxazolopiridinilo, tiazolopiridinilo, imidazopiridinilo, furopiridinilo, tienopiridinilo, pirido-pirimidinilo, piridopirazinilo, piridopiridazinilo, tieno-tiazolilo, tienoxazolilo, tienoimidazolilo, e semelhantes. Outros exemplos de grupos heteroarilo incluem 4,5,6,7-tetra-hidroindolilo, tetra-hidroquinolinilo, benzotienopi-ridinilo, grupos benzofuropiridinilo, e semelhantes.
Tal como aqui definido, o termo "alquilo inferior", quando utilizado isoladamente ou em combinação refere-se a alquilo que contém 1-6 átomos de carbono. 0 grupo alquilo pode ser ramificado ou de cadeia linear, e é tal como definido aqui anteriormente. 38 ΡΕ2318389 0 termo "alcenilo inferior" refere-se a um grupo alcenilo que contém 2-6 átomos de carbono. Um grupo alcenilo é um grupo hidrocarbilo contendo pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono. Tal como aqui definido, poderá ser não substituído ou substituído com os substituintes aqui descritos. As ligações duplas carbono-carbono podem estar entre quaisquer dois átomos de carbono do grupo alcenilo. Prefere-se que contenha 1 ou 2 ligações duplas carbono-carbono e mais preferencialmente uma ligação dupla carbono-carbono. 0 grupo alcenilo poderá ser de cadeia linear ou ramificada. Os exemplos incluem mas não estão limitados a etenilo, 1-propenilo, 2-propenilo, 1-butenilo, 2-butenilo, 2-metil-l-propenilo, 1,3-butadienilo, e semelhantes. 0 termo "alcinilo inferior", como utilizado aqui,
refere-se a um grupo alcinilo , contendo 2-6 átomos de carbono. Um grupo alcinilo é um grupo hidrocarbilo que contém pelo menos uma ligaçao tripla carbono-carbono . A ligação tripla carbono-carbono pode estar entre quaisquer dois átomos de carbono do grupo alcinilo. Numa forma de realização, o grupo alcinilo contém 1 ou 2 ligações triplas carbono-carbono e mais preferencialmente uma ligação tripla carbono-carbono. 0 grupo alcinilo poderá ser de cadeia linear ou ramificada. Os exemplos incluem mas não estão limitados a etinilo, 1-propinilo, 2-propinilo, 1-butinilo, 2-butinilo e semelhantes. A presente invenção inclui todos os compostos 39 ΡΕ2318389 marcados isotopicamente farmaceuticamente aceitáveis da invenção, i.e., compostos de fórmula (I), em que um ou mais átomos são substituídos por átomos que têm o mesmo número atómico, mas um número de massa ou uma massa atómica diferente da massa atómica ou número de massa usualmente encontrado na natureza.
Os exemplos de isótopos apropriados para inclusão nos compostos da invenção compreendem os isótopos de hidrogénio, tais como 2H e 3H, carbono, tais como 1:LC, 13C e 14C, cloro, como por exemplo 36C1, flúor, tal como 18F, iodo, tal como 123I e 125I, azoto, tal como 13N e 15N, oxigénio, como por exemplo 150, 170 e 180, fósforo, como por exemplo 32P, e enxofre, tal como 35S.
Certos compostos marcados isotopicamente de fórmula (I), por exemplo, aqueles que incorporam um isótopo radioativo, são úteis nos estudos de distribuição no tecido de fármaco e/ou substrato. Os isótopos radioativos trítio, i.e., 3H, e carbono-14, i.e., 14C, são particularmente úteis para esta finalidade devido à sua facilidade de incorporação e rápidos meios de deteção. A substituição com isótopos mais pesados tais como deutério, i.e., 2H, poderá originar certas vantagens terapêuticas resultantes de maior estabilidade metabólica, por exemplo, semi-vida in vivo aumentada ou reduzida necessidade de dosagem, e, consequentemente, poderão ser preferidos em algumas circunstâncias. 40 ΡΕ2318389 A substituição com isótopos emissores de positrão, tais como nC, 18F, 150 e 13N, pode ser útil em estudos de Topografia de Emissão de Positrão (PET) para examinar a ocupação do recetor de substrato.
Os compostos marcados isotopicamente de fórmula (I) podem geralmente ser preparados por técnicas convencionais conhecidas daqueles peritos na técnica ou por processos análogos aos descritos nos Exemplos e Preparações anexos utilizando uns reagentes isotopicamente marcados adequados em vez do reagente não-marcado empregue anteriormente.
Os sais farmaceuticamente aceitáveis de quaisquer compostos acídicos da invenção são sais formados com bases, nomeadamente sais catiónicos tais como sais de metais alcalinos e alcalino terrosos, tais como sódio, lítio, potássio, cálcio, magnésio, bem como sais de amónio, tais como sais de amónio, trimetilamónio, dietilamónio, e tris-(hidroximetil)-metilamónio.
Do mesmo modo os sais de adição de ácido, tais como de ácidos minerais, carboxilico orgânico, e ácidos sulfónicos orgânicos e.g., ácido clorídrico, ácido metanos-sulfónico, ácido maleico, são possíveis desde que um grupo básico, tal como amino ou piridilo, constitua parte da estrutura. A presente invenção relaciona-se com a descoberta 41 ΡΕ2318389 de que as vias de transduçao de sinal reguladas por Hh e/ou Smo podem ser moduladas pelos compostos da invenção.
Numa forma de realização, os compostos da presente invenção compreendem compostos de fórmula (I) para inibir a ativação da via dependente de Smo. Outro aspeto da presente invenção inclui compostos para inibir a ativação da via independente de Hedgehog (ligando). Em certas formas de realização, os presentes compostos e métodos podem ser usados para neutralizar os efeitos fenotipicos da ativação indesejada de uma via Hedgehog, tais como resultantes de ganho-de-função de Hedgehog, perda-de-função de Ptc ou mutações de ganho-de-função de smoothened. Por exemplo, os compostos e métodos em causa podem envolver contactar uma célula (in vitro ou in vivo) com um antagonista de Smo, tal como um composto de Fórmula (I) numa quantidade suficiente para antagonizar uma via de ativação dependente de smoothened e/ou independente de Hedgehog.
Numa forma de realização, os compostos da invenção (e.g., os compostos de Fórmula I) inibem a sinalização de Hh através do bloqueio da estrutura tridimensional da proteína Smo numa conformação inativa ou da prevenção de Smo adotar uma conformação ativa. Noutra forma de realização, os compostos da invenção (e.g., os compostos de Fórmula I) inibem a sinalização de Hh através do impedimento dos ligandos ativadores endógenos para Smo se ligarem a ou ativarem Smo (i.e., atuando através de coope-ratividade negativa com agonistas endógenos). Noutra forma 42 ΡΕ2318389 de realização, os compostos da invenção (e.g., os compostos de Fórmula I) inibem a sinalização de Hh, aumentando a ligação de ligandos inativadores endógenos para Smo a se ligarem ou inativarem Smo (i.e., atuando através de uma cooperatividade positiva com antagonista endógeno).
Noutra forma de realizaçao, os compostos da invenção (e.g., os compostos de Fórmula I) inibem a sinalização de Hh através do impedimento de Smo se localizar para a membrana plasmática. Noutra forma de realização, os compostos da invenção (e.g., os compostos de Fórmula I) inibem a sinalização de Hh através da prevenção da sinalização a partir de Ptch para Smo, na presença ou na ausência de ligando de Hh. Noutra forma de realização, os compostos da invenção (e.g., os compostos de Fórmula I) inibem a sinalização de Hh, impedindo a estabilização de Smo. Noutra forma de realização, os compostos da invenção (e.g., os compostos de Fórmula I) inibem a sinalização de Hh através da prevenção da fosforilação de Smo em locais ativos. Noutra forma de realização, os compostos da invenção (e.g., os compostos de Fórmula I) inibem a sinalização de Hh através do aumento da fosforilação de Smo em sítios inibidores.
Ainda noutra forma de realização, os compostos da invenção (e.g., os compostos de Fórmula I) inibem a sinalização de Hh através do impedimento de Smo ativar alvos a jusante, tais como o fator de transcrição Gli. Noutra forma de realização, os compostos da invenção (e.g., os compostos de Fórmula I) inibem a sinalização de Hh 43 ΡΕ2318389 efetuando a inativaçao, o sequestro e/ou a degradaçao de Smo.
Os métodos revelados poderão ser utilizados para regular a proliferação e/ou a diferenciação de células in vitro e/ou in vivo, e.g., na formação de tecido a partir de células estaminais, ou para impedir o crescimento de células hiperproliferativas. Noutra forma de realização particular, o contacto da célula com ou a introdução na célula de um composto da invenção (e.g., um composto de Fórmula I) resulta na inibição de proliferação celular, na inibição de cancro/crescimento de células de tumor e/ou sobrevivência, e/ou inibição de tumorigénese. Assim, são revelados métodos particulares para inibição e/ou antagonismo da via Hh, empregando os compostos da invenção (e.g., um composto de Fórmula I), numa célula de tumor.
Os métodos revelados utilizam compostos da invenção (e.g., um composto de Fórmula I), como formulados como uma preparação farmacêutica compreendendo um excipiente ou veiculo farmaceuticamente aceitável, e as referidas preparações poderão ser administradas a um paciente para tratar estados que envolvem a proliferação celular indesejada, tais como cancros e/ou tumores (tais como meduloblastoma, carcinoma basocelear, etc.), e patologias hiperproliferativas não-malignas. É revelado um método para inibir a síntese, expressão, produção e/ou atividade de uma proteína de Smo 44 ΡΕ2318389 numa célula in vitro ou in vivo, compreendendo, contactar a referida célula com, ou introduzir na referida célula, um composto da invenção (e.g., um composto de Fórmula I).
Outra revelação providencia um método para diagnosticar, prevenir e/ou tratar debilitações celulares, desarranjos e/ou disfunções; estados de doença hiper-plásica, hiperproliferativa e/ou cancerosa e/ou metástase de células tumorais num mamífero caracterizado pela presença e/ou expressão de um gene Smo ou produto de gene (e.g., uma proteína Smo), que compreende administrar a um mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente que inibe ou antagoniza a síntese e/ou a expressão e/ou atividade de um composto da invenção (e.g., um composto de Fórmula I). É, por conseguinte, especificamente contemplado que os compostos de Fórmula I que interferem com aspetos de atividade de transdução de sinal de Hh, Ptc, ou smoothened serão igualmente capazes de inibir a proliferação (ou outros efeitos biológicos) em células normais e/ou células que possuem um fenótipo de perda-de-função de patched, um fenótipo de ganho-de-função de Hedgehog, um fenótipo de ganho-de-função de smoothened ou um fenótipo de ganho-de-função de Gli. Assim, é contemplado que em certas formas de realização, estes compostos poderão ser úteis para inibir a atividade de Hedgehog em células normais, e.g., que não têm uma mutação genética que ativa a via de Hedgehog. Em formas de realização preferidas, os compostos são capazes de 45 ΡΕ2318389 inibir pelo menos algumas das atividades biológicas das proteínas de Hedgehog, de preferência especificamente em células alvo.
Assim, os métodos da presente invenção incluem a utilização de compostos de Fórmula I que agonizam a inibição Ptc da sinalização de Hedgehog, tal como através da inibição da ativação de componentes smoothened ou a jusante da via de sinal, na regulação de reparação e/ou de desempenho funcional de uma vasta gama de células, tecidos e órgãos, incluindo células, tecidos e órgãos normais, bem como aqueles que têm o fenótipo de perda-de-função de Ptc, ganho-de-função de Hedgehog, ganho-de-função de smoothened ou ganho-de-função de Gli. Por exemplo, o método da invenção tem aplicações terapêuticas e cosméticas que variam desde a regulação dos tecidos neurais, formação e reparação de ossos e cartilagem, regulação de espermato-génese, regulação da hiperplasia benigna da próstata, regulação da formação de vasos sanguíneos na degeneração macular húmida, psoríase, regulação do músculo liso, regulação do pulmão, fígado e outros órgãos provenientes do intestino primitivo, regulação da função hematopoiética, a regulação do crescimento da pele e do cabelo, etc. Além disso, os métodos presentes podem ser realizados em células que são providenciadas em cultura (in vitro) ou em células de um animal completo (in vivo).
Em certas formas de realização, um composto de fórmula I pode inibir a ativação de uma via de Hedgehog 46 ΡΕ2318389 através da ligaçao a smoothened ou às suas proteínas a jusante.
Noutra forma de realização, a presente invenção providencia a utilização de preparações farmacêuticas que compreendem, como um componente ativo, um modulador de sinalização de Hedgehog tal como um composto de Fórmula I, um antagonista de smoothened tal como aqui descrito, formulados numa quantidade suficiente para inibir, in vivo, a proliferação ou outras consequências biológicas da perda-de-função de Ptc, ganho-de-função de Hedgehog, ganho-de-função de smoothened ou ganho-de-função de Gli. 0 tratamento de doentes através da administração de compostos da invenção (e.g., os compostos de Fórmula I) pode ser eficaz para pacientes tanto humanos como animais. Os indivíduos animais para os quais a invenção é aplicável estendem-se a ambos os animais domésticos e gado, criados quer como animais de estimação ou para fins comerciais. Exemplos são cães, gatos, bovinos, equinos, ovinos, suínos, caprinos e lhamas. A presente invenção também torna disponíveis métodos e compostos para inibir a ativação da via de sinalização de Hedgehog, e.g., para inibir estados de crescimento normais, mas indesejados, por exemplo hiperplasia benigna da próstata ou a formação de vasos sanguíneos na degeneração macular húmida, resultante da ativação fisiológica da via de sinalização de Hedgehog, que compreende contactar a 47 ΡΕ2318389 célula com um composto de Fórmula I, numa quantidade suficiente para antagonizar a atividade de smoothened, ou antagonizar a atividade de Gli, e.g., para inverter ou controlar o estado de crescimento normal. A presente invenção torna disponíveis métodos e compostos para inibir a ativação da via de sinalização de Hedgehog, e.g., para inibir o crescimento aberrante de estados resultantes de fenótipos, tais como perda-de-função de Ptc, ganho-de-função de Hedgehog, ganho-de-função de smoothened ou ganho-de-função de Gli, que compreendem contactar a célula com um composto de Fórmula I, numa quantidade suficiente para agonizar uma atividade de Ptc normal, antagonizar uma atividade de Hedgehog normal, antagonizar a atividade de smoothened, ou antagonizar a atividade de Gli e.g., para inverter ou controlar o estado de crescimento aberrante.
As moléculas de sinalização membros da família de Hedgehog mediam muitos processos de padronização de curto e de longo alcance importantes durante o desenvolvimento dos vertebrados. A formação de padrões é a atividade através da qual as células embrionárias formam arranjos espaciais ordenados de tecidos diferenciados. A complexidade física dos organismos superiores surge durante a embriogénese através da interação da linhagem de célula-intrínseca e a sinalização de célula-extrínseca. As interações indutivas são essenciais para a padronização embrionária no desenvolvimento de vertebrados a partir do estabelecimento 48 ΡΕ2318389 precoce do plano corporal, para a padronização dos sistemas de órgãos, para a geração de diversos tipos celulares durante a diferenciação de tecidos. Os efeitos das interações celulares no desenvolvimento são variados: as células de resposta são desviadas de uma via de diferenciação celular para outra através da indução de células que diferem de ambos os estados não induzido das células de resposta (induções). Às vezes, as células induzem as suas vizinhas a se diferenciarem como elas próprias (indução homeogenética) ; noutros casos uma célula inibe as suas vizinhas de se diferenciarem como ela própria. As interações celulares no desenvolvimento precoce poderão ser sequenciais, de tal forma que uma indução inicial entre dois tipos celulares conduz a uma amplificação progressiva da diversidade. Além disso, as interações indutivas ocorrem não apenas em embriões, mas também em células adultas, e podem atuar para estabelecer e manter padrões morfogenéticos, bem como induzir a diferenciação. A família de genes de Hedgehog de vertebrados inclui três membros que existem em mamíferos, conhecidos como Hedgehogs Desert (Dhh), Sonic (Shh) e Indian (Ihh), todos os quais codificam para proteínas segregadas. Estas várias proteínas de Hedgehog consistem num peptídeo sinal, uma região N-terminal altamente conservada, e um domínio C-terminal mais divergente. Os estudos bioquímicos demonstraram que a clivagem autoproteolítica da proteína precursora de Hh prossegue através de um intermediário tioéster 49 ΡΕ2318389 interno que subsequentemente é clivado numa substituição nucleofilica. É provável que o nucleófilo seja uma molécula lipofilica pequena que se torna covalentemente ligado à extremidade C-terminal do N-péptido, fixando-o à superfície da célula. As implicações biológicas são profundas. Como resultado da fixação, é gerada uma elevada concentração local de péptido de Hedgehog N-terminal na superfície das células que produzem o Hedgehog. É este péptido N-terminal que é simultaneamente necessário e suficiente para as atividades de sinalização de Hedgehog de curto e longo alcance. 0 Smoothened (Smo) codifica uma proteína da transmembrana de 1024 aminoácidos que atua como um transdutor do sinal de Hedgehog (Hh). A proteína de Smo tem sete domínios hidrofóbicos que abrangem a membrana, uma região amino-terminal extracelular e uma região carboxi-terminal intracelular. O Smo tem alguma semelhança com os recetores acoplados à proteína G e é mais homólogo da família Frizzled (Fz) de proteínas em serpentina. (Alcedo et al. (1996) Cell 86: 221) .
Uma via de sinalização de Hedgehog inativa é quando o recetor de proteína da transmembrana de Patched (PTC) inibe a atividade do Smoothened (SMO), uma proteína de sete transmembranas. O fator de transcrição Gli, um componente a jusante de sinalização Hh, é impedido de entrar no núcleo através de interações com proteínas citoplasmáticas, incluindo Fused e Supressor de fused 50 ΡΕ2318389 (Sufu). Como uma consequência, a ativação da transcrição de genes alvo de Hedgehog é reprimida. A ativação da via é iniciada através da ligação de qualquer um dos três ligandos de mamíferos (Dhh, Ihh ou Shh) ao Ptc. A ligação do ligando resulta numa inversão da repressão de Smo, ativando uma cascata que conduz à translocação da forma ativa do fator de transcrição de Gli para o núcleo. O Gli nuclear ativa a expressão do gene alvo, incluindo a Ptc e o próprio Gli. A ligação do ligando por Hh altera a interação de Smo e Ptc, invertendo a repressão de Smo, após o que o Smo se move a partir de estruturas internas no interior da célula para a membrana plasmática. A localização de Smo na membrana plasmática desencadeia a ativação de genes alvo da via de Hh de um modo independente de Hh. (Zhu et al. (2003) Genes Dev. 17 (10): 1240) A cascata ativada pelo Smo leva à translocação da forma ativa do fator de transcrição de Gli para o núcleo. A ativação do Smo, através do Gli nuclear translocado, ativa a expressão do gene alvo da via de Hh, incluindo de Wnts, TGFp, e Ptc e os próprios Gli.
Os níveis aumentados de sinalização de Hedgehog são suficientes para iniciar a formação de cancro e são necessários para a sobrevivência do tumor. Estes cancros incluem, mas não estão limitados a, cancro da próstata ("Hedgehog signalling in prostate regeneration, neoplasia and metastasis", Karhadkar SS, Bova GS, Abdallah N, Dhara S, Gardner D, Maitra A, Isaacs JT, Berman DM, Beachy PA., 51 ΡΕ2318389
Nature. 2004 Oct 7; 431 (7009) :707-12; "Inhibition of prostate câncer proliferation by interference with SONIC HEDGEHOG-GLI1 signaling", Sanchez P, Hernandez AM, Stecca B, Kahler AJ, DeGueme AM, Barrett A, Beyna M, Datta MW, Datta S, Ruiz i Altaba A., Proc Natl Acad Sei USA. 2004 Aug 24; 101 (34):12561-6), ("Cytotoxic effects induced by a combination of cyclopamine and gefitinib, the selective hedgehog and epidermal growth factor receptor signaling inhibitors, in prostate câncer cells," Mimeault M, Moore E, Moniaux N, et ai. (2006), International Journal of Câncer; 118 (4):1022-31) cancro da mama ("Hedgehog signaling pathway is a new therapeutic target for patients with breast câncer", Kubo M, Nakamura M, Tasaki A, Yamanaka N, Nakashima H, Nomura M, Kuroki S, Katano M., Câncer 20 Res. 2004 Sep 1; 64 (17):6071-4), ("Hedgehog signaling and Bmi-1 regulate self-renewal of normal and malignant human mammary stem cells," Liu S, Dontu G, Mantle ID, et al (2006) Câncer Res; 66 (12):6063-71), ("Constitutive activation of smoothened (SMO) in mammary glands of transgenic mice leads to increased proliferation, altered differentiation and ductal dysplasia," Moraes RC, Zhang XM, Harrington N, et ai. (2007), Development; 134 (6):1231-42), meduloblastoma ("Medulloblastoma growth inhibition by hedgehog pathway blockade", Berman DM, Karhadkar SS, Hallahan AR, Pritchard JI, Eberhart CG, Watkins DN, Chen JK, Cooper MK, Taipale J, Olson JM, Beachy PA., Science. 2002 Aug 30; 297 (5586): 1559-61), cancro da pele diferente de melanoma, i.e. carcinoma espinocelular (CEC) e carcinoma basocelular (BCC) ("Identification of a small molecule inhibitor of the 52 ΡΕ2318389 hedgehog signaling pathway: effects on basal cell carcinoma-like lesions", Williams JA, Guicherit OM, Zaharian BI, Xu Y, Chai L, Wichterle H, Kon C, Gatchalian C, Porter JA, Rubin LL, Wang FY., Proc Natl Acad Sei USA. 2003 Apr 15; 100 (8):4616-21; "Activating Smoothened mutations in sporadic basal-cell carcinoma", Xie J, Murone M, Luoh SM, Ryan A, Gu Q, Zhang C, Bonifas JM, Lam CW, Hynes M, Goddard A, Rosenthal A, Epstein EH Jr, de Sauvage FJ., Nature. 1998 Jan 1; 391 (6662):90-2), cancros do pâncreas, esófago, estômago e das vias biliares ("Hedgehog is an early and late mediator of pancreatic câncer tumorigenesis", Thayer SP, di Magliano MP, Heiser PW, Nielsen CM, Roberts DJ, Lauwers GY, Qi YP, Gysin S, Fernandez-del Castillo C, Yajnik V, Antoniu B, McMahon M, Warshaw AL, Hebrok M., Nature. 2003 Oct 23; 425 (6960):851-6; "Widespread requirement for Hedgehog ligand stimulation in growth of digestive tract tumours", Berman DM, Karhadkar SS, Maitra A, Montes De Oca R, Gerstenblith MR, Briggs K, Parker AR, Shimada Y, Eshleman JR, Watkins DN, Beachy PA., Nature. 2003 Oct 23; 425(6960):846-51), ("Nuclear factor-kappa B contributes to hedgehog signaling pathway activation through sonic hedgehog induction in pancreatic câncer," Nakashima H, Nakamura M, Yamaguchi H, et al. (2006), Câncer Research; 66 (14):7041-9), ("Blockade of hedgehog signaling inhibits pancreatic câncer invasion and metastases: A new paradigm for combination therapy in solid cancers," Feldmann G, Dhara S, Fendrich V, et al. (2007) Câncer Research; 67 (5):2187-96), ("Oncogenic KRAS suppresses Glil degradation and activates Hedgehog 53 ΡΕ2318389 signaling pathway in pancreatic câncer cells," Ji Z, Mei FC, Xie J, et al. (2007), J Biol Chem; 282 (19):14048-55), e cancro de pulmão de célula pequena ("Hedgehog signalling within airway epithelial progenitors and in small-cell lung câncer", Watkins DN, Berman DM, Burkholder SG, Wang B, Beachy PA, Baylin SB., Nature. 2003 Mar 20; 422(6929):313-7), ("Hedgehog signaling in small-cell lung câncer: Frequent in vivo but a rare event in vitro," Vestergaard J, Pedersen MW, Pedersen N, et al. (2006), Lung Câncer; 52 (3) :281-90) .
Os cancros adicionais nos quais os níveis aumentados de sinalização de Hedgehog são suficientes para iniciar a formação de cancro e são necessários para a sobrevivência do tumor incluem, mas não estão limitados a cancro do cólon ("Sonic Hedgehog-dependent proliferation in a series of patients with colorectal câncer," Douard R, Moutereau S, Pernet P, et al. (2006) Surgery; 139 (5):665-70), ("Hedgehog signalling in colorectal tumour cells: Induction of apoptosis with cyclopamine treatment," Qualtrough D, Buda A, Gaffield W, et al. (2004), International Journal of Câncer; 110 (6):831-7), glioma, ("Cyclopamine-mediated Hedgehog pathway inhibition depletes stem-like câncer cells in glioblastoma," Bar EE, Chaudhry A, Lin A, et al., NeuroOncology; 2007, 9 (4):594), ("HEDGEHOG-GLI1 signaling regulates human glioma growth, câncer stem cell self-renewal, and tumorigenicity," Clement V, Sanchez P, de Tribolet N, et al., (2007) Current Biology 17 (2):165-72), ("Ligand-dependent activation of the 54 ΡΕ2318389 hedgehog pathway in glioma progenitor cells," Ehteshan M, Sarangi A, Valadez JG, et al. (2007) Oncogene; March 12, 2007, Epub ahead of print), melanoma ("Melanomas require HEDGEHOG-GLI signaling regulated by interactions between GLI1 and the RAS-MEK/AKT pathways," Stecca B, Mas C, Clement V, et al. (2007), Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America; 104 (14):5895-900), non small cell lung câncer (NSCLC) ("Frequent requirement of hedgehog signaling in non-small cell lung carcinoma," Yuan Z, Goetz JA, Singh S, et al. (2007), Oncogene; 26 (7):1046-55), do ovário, ("Hedgehog signal pathway is activated in ovarian carcinomas, correlating with cell proliferation: It's inhibition leads to growth suppression and apoptosis," Chen XJ, Horiuchi A, Kikuchi N, et al., Câncer Science; (2007) 98 (1):68-76), figado ("Activation of the hedgehog pathway in human hepatocellular carcinomas," Huang SH, He J, Zhang XL, et al. (2006), Carcinogenesis; 27 (7): 1334-40), ("Dysregulation of the Hedgehog pathway in human hepatocarcinogenesis," Sicklick JK, Li YX, Jayaraman A, et al. (2006), Carcinogenesis; 27 (4):748-57), renal ("Clear cell sarcoma of the kidney: Up-regulation of neural markers with activation of the sonic hedgehog and Akt pathways," Cutcliffe C, Kersey D, Huang CC, et al. (2005), Clinicai Câncer Research; 11 (22):7986-94), Rabdomiossarcoma, ("Rhabdomyosarcomas and radiation hypersensitivity in a mouse model of Gorlin syndrome, " Hahn H, Wojnowski L, Zimmer AM, et al. (1998), Nature Medicine; 4 (5):619-22), ("Deregulation of the hedgehog signalling pathway: a 55 ΡΕ2318389 possible role for the PTCH and SUFU genes in human rhabdomyoma and rhabdomyosarcoma development," Tostar U, Malm CJ, Meis-Kindblom JM, et al. (2006), Journal of Pathology; 208 (1):17-25), e Condrossarcoma ("Constitutive hedgehog signaling in chondrosarcoma up-regulates tumor cell proliferation, " Tiet TD, Hopyan S, Nadesan P, et al. (2006), American Journal of Pathology; 168 (1):321-30).
Os inibidores da via de Hedgehog (e.g., ciclo-pamina) mostraram ser úteis no tratamento de psoríase ("Ciclopamina: inhibiting hedgehog in the treatament of psoríasis" Cutis, 2006, 78 (3) : 185 — 8; Br. J. Dermatology, 2006. Apr; 154(4) :619-23, "Psoriatic skin expresses the transcription factor Glil: possible contribution of decreased neurofibromin expression", Endo H, Momota Y, Oikawa A, Shinkai H.).
Linfoma maligno (ML) envolve as células do sistema linfático, e é o quinto cancro mais comum nos EUA. O ML inclui a doença de Hodgkin e doenças de não-Hodgkin, que são um grupo heterogéneo de doenças proliferativas linfóides. A doença de Hodgkin é responsável por aproximadamente 14% de todos os linfomas malignos. Os linfomas de não Hodgkin são um grupo diverso de doenças malignas que são predominantemente de origem nas células-B. No esquema de classificação Working Formulation, estes linfomas foram divididos em categorias de grau baixo, intermédio, e elevado, em virtude de suas histórias naturais (ver "The Non-Hodgkin's Lymphoma Pathologic 56 ΡΕ2318389
Classification Project," Câncer 49:2112-2135, 1982). Os linfomas de grau baixo são indolentes, com uma sobrevivência média de 5 a 10 anos (Homing and Rosenberg, N. Engl. J. Med. Chem. 311:1471-1475, 1984). Embora a quimioterapia possa induzir remissões na maioria dos linfomas indolentes, as curas são raras e a maioria dos pacientes eventualmente tem uma recaída, necessitando de terapia adicional. Os linfomas de grau intermédio e elevado são tumores mais agressivos, mas têm uma maior probabilidade de cura com quimioterapia. No entanto, uma proporção significativa destes pacientes irá ter uma recaída e requerer tratamento adicional. O mieloma múltiplo (MM) é o tumor maligno constituído por células de plasma do tipo normalmente encontrado na medula óssea. Estas células plasmáticas malignas acumulam-se na medula óssea e produzem normalmente moléculas monoclonais IgG ou IgA. As células malignas do plasma alojam-se e expandem-se na medula óssea causando anemia e imunossupressão devido à perda de hematopoiese normal. Os indivíduos que sofrem de mieloma múltiplo experimentam frequentemente anemia, lesões osteolíticas, insuficiência renal, hipercalcemia, e infeções bacterianas recorrentes. O MM representa a segunda malignidade hema-topoiética mais comum. A presente invenção é baseada em parte nas descobertas dos presentes inventores que as doenças de linfoma e o mieloma múltiplo sao dependentes da via de 57 ΡΕ2318389 sinalização de Hedgehog (Hh) que utiliza células de linfoma e plasmocitoma isoladas a partir de murganhos Εμ-Myc transgénicos e murganhos knockout Cdkn2a, e na descoberta de que os ligandos Hedgehog mediam a interação entre as células do estroma e do linfoma. 0 mesmo foi descoberto para as amostras de linfoma e de mieloma múltiplo isoladas a partir de amostras de pacientes a partir de osso (mieloma múltiplo) ou de gânglios linfáticos, medula óssea ou baços a partir de pacientes com linfoma de não-Hodgkin (NHL) e também de amostras de leucemia linfocitica crónica (CLL). Além disso, verificou-se que a inibição da via de sinalização Hh induz apoptose de células de linfoma dependentes de estroma e que a sobre-expressão de membros da via de Hedgehog inibe a apoptose induzida por ciclopamina de células de linfoma in vitro. Além disso, os inventores descobriram que tratar ratos com inibidores da via de Hedgehog anula a expansão do linfoma in vivo. Finalmente, os inventores descobriram que não há expressão de Gli3 em células B do baço e na maioria dos linfomas sensíveis a ciclopamina, mas que existe uma expressão predominante em todos os linfomas resistentes a ciclopamina. a ex-
Estes dados indicam que a sinalização de Hh providencia um sinal anti-apoptótico importante para as etapas iniciais de transformação por c-Myc e desempenha um papel importante para a manutenção do linfoma. Deste modo, a quebra da via de sinalização Hh proporciona novos meios para tratar linfomas (e.g., NHL), mielomas múltiplos, CLL e outras malignidades hematopoiéticas. Além disso, 58 ΡΕ2318389 pressão de Gli3 em linfomas providencia um fator preditivo negativo para a insensibilidade à inibição de Hh e um meio importante para a estratificação de pacientes.
De acordo com estas descobertas, a invenção providencia métodos para inibir o crescimento de células tumorais, e.g., as células de linfoma e mieloma. A invenção revela métodos e composições para tratar linfoma ou mieloma num indivíduo através da inibição do crescimento de células tumorais. Os métodos são também úteis para prevenir a tumorigénese num indivíduo. Alguns dos métodos são dirigidos para tratar linfomas que não têm expressão significativa de Gli3 relativamente às células B do baço. Os métodos envolvem administrar a um indivíduo necessitado de tratamento uma composição farmacêutica que contém um agente antagonizante de sinalização de Hh (e.g., um composto de Fórmula I). 0 composto da invenção sub-regula o nível celular ou inibe uma atividade biológica de um membro da via de sinalização de Hh.
Esta invenção revela métodos de tratamento profilático ou terapêutico de cancros dos sistemas sanguíneo e linfático, incluindo linfomas, leucemia, e mielomas. Os métodos utilizam um antagonista da via de sinalização de Hedgehog para inibir o crescimento e a proliferação de células de linfoma, células de leucemia, ou células de mieloma. 0 linfoma é um tumor maligno dos linfoblastos derivados dos linfócitos B. 0 mieloma é um tumor maligno constituído por células de plasma do tipo 59 ΡΕ2318389 normalmente encontrado na medula óssea. A leucemia é uma doença aguda ou crónica que envolve os órgãos formadores de sangue. Os NHLs são caracterizados por um aumento anormal no número de leucócitos nos tecidos do corpo com ou sem um aumento correspondente dos que estão no sangue em circulação e são classificados de acordo com o tipo de leucócito mais proeminentemente envolvido. A título de exemplo, os indivíduos que sofrem de ou em risco de desenvolvimento de linfoma (e.g., linfoma de célula B, plasmoblastoma, plasmacitoma ou CLL) podem ser tratados com os métodos da invenção. De preferência, o indivíduo é um ser humano. Os métodos envolvem administrar ao indivíduo uma composição farmacêutica que contém uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I para inibir a via de sinalização de Hedgehog. 0 indivíduo pode ser aquele que é diagnosticado com linfoma, com ou sem metástase, em qualquer fase da doença (e.g., fase I a IV, Sistema de Estágios de Ann Arbor) . Os linfomas adequados para tratamento com os métodos da invenção incluem mas não estão limitados à doença de Hodgkin e doença de não-Hodgkin. A doença de Hodgkin é uma patologia maligna humana do tecido linfático (linfoma), que parece tem origem num gânglio linfático em particular, e depois se espalha para o baço, fígado e medula óssea. Ocorre principalmente em indivíduos com idades entre 15 e 35 anos. É caracterizada por aumento progressivo, indolor dos gânglios linfáticos, baço e tecido linfático geral. A doença de Hodgkin clássica é dividida em quatro subtipos de: (1) doença de Hodgkin de esclerose 60 ΡΕ2318389 nodular (NSHD), (2) a doença de Hodgkin de celularidade mista (MCHD), (3) doença de Hodgkin de depleção de linfócitos (LDHD), e (4) doença de Hodgkin clássica rica em linfócitOS (cLRHD).
Em algumas formas de realização preferidas, os métodos presentes são utilizados para tratar de o Linfoma de não-Hodgkin (NHL). A doença de não-Hodgkin é também designada como linfossarcoma e refere-se a um grupo de linfomas que diferem em aspetos importantes da doença de Hodgkin e são classificados de acordo com a aparência microscópica das células cancerosas. O linfoma de não-Hodgkin inclui mas não está limitado a (1) linfomas de crescimento lento e leucemia linfóide (e.g., leucemia linfocitica crónica, leucemia linfocitica pequena, linfoma linfoplasmacitoide, linfoma de foliculo central, folicular de pequena célula clivada, folicular de célula mista, linfoma de célula B de zona marginal, leucemia de célula pilosa, plasmocitoma, mieloma, leucemia linfocitica granular grande, micose fungóide, sindrome de Szary); (2) linfomas moderadamente agressivos e leucemia linfóide (e.g., leucemia prolinfocitica, linfoma de células do manto, linfoma do centro do foliculo, célula clivada pequena folicular, linfoma de centro de foliculo, leucemia linfocitica crónica/leucemia prolinfocitica, linfoma angiocêntrico, linfoma angioimunoblástico); (3) linfomas agressivos (e.g., linfoma de célula B grande, linfomas de células T periféricas, linfomas de células T intestinais, linfoma de célula grande anaplásico); e (4) linfomas 61 ΡΕ2318389 altamente agressivos e leucemia linfóide (e.g., leucemia/ linfoma linfoblástico B precursor de célula B, linfoma de Burkitt, linfoma de célula B de grau elevado, leucemia/ linfoma linfoblástico T precursor de célula T de tipo Burkitt). Os métodos da presente invenção podem ser utilizados para formas de linfoma adultas ou infantis, bem como linfomas em qualquer fase, e.g., fase I, II, III ou IV. Os métodos aqui descritos podem também ser empregues para tratar outras formas de leucemia, e.g., leucemia linfocitica aguda (ALL).
Alguns dos métodos terapêuticos são particularmente dirigidos para tratar linfomas ou mielomas, que não expressam Gli3. Tal como revelado nos Exemplos adiante, verificou-se que, enquanto um Gli e Gli2 foram expressos em todos os linfomas, a expressão detetável de Gli3 esteve presente principalmente em linfomas que eram resistentes à inibição da via de Hh por ciclopamina. Não há expressão de Gli3 nas células B do baço normais e na maioria dos linfomas sensíveis a ciclopamia. Assim, antes do tratamento com os antagonistas de Hh, os indivíduos com linfomas pode ser analisado em primeiro lugar para a expressão de Gli3 em uma amostra de células de linfoma obtidas a partir do indivíduo. 0 nível de expressão de Gli3 na amostra pode ser comparado ao nível de expressão de Gli3 em células B de baço normais obtidas a partir do indivíduo.
Os níveis de expressão de Gli3 nas amostras de linfoma ou de mieloma e as células de controlo podem ser 62 ΡΕ2318389 determinados utilizando métodos bem conhecidos na técnica, e.g., como descrito nos Exemplos adiante. Uma provável recetividade ao tratamento com antagonistas de Hh aqui descrito é indicada pela falta de expressão de Gli3 detetável nas amostras de linfoma ou mieloma ou um nivel de expressão que não é significativamente mais elevado (e.g., não mais do que superior a 25%, 50% ou 100%) que o nivel de expressão de Gli3 na célula B normal. Além de ser um passo adicional dos métodos terapêuticos da invenção, o pré-rastreio para a falta de expressão de Gli3 pode ser usado independentemente como um método para a estratificação de pacientes.
Além de linfomas, os métodos e composições descritos acima são também adequados para o tratamento de mielomas. O mieloma múltiplo é um neoplasma fatal caracterizado por uma acumulação de um clone de células plasmáticas, frequentemente acompanhada pela secreção de cadeias de Ig. A invasão da medula óssea pelo tumor está associada a anemia, hipogammaglobinemia e granulocitopenia com infeções bacterianas concomitantes. Um ambiente anormal de citoquina, principalmente niveis de IL-6 e IL-Ιβ aumentados, resulta muitas vezes em osteoclasia aumentada conduzindo a dores ósseas, fraturas e hipercalcemia. Apesar da quimioterapia agressiva e transplante, o mieloma múltiplo é uma patologia proliferativa do plasma universalmente fatal.
Os compostos da invenção sao úteis no tratamento 63 ΡΕ2318389 de patologias relacionadas com Hedgehog tais como a sindrome do nevo basocelular (também chamada sindrome de Gorlin e/ou carcinoma basocelular nevóide), sindrome genética de cancro dominante autossómico raro.
Os compostos da invenção são úteis no tratamento de carcinoma de basocelular (BCC ou úlcera roedora), tumores das glândulas suprarrenais a partir do córtex ou a parte de medula da medula da glândula suprarrenal, e tumores do ovário.
Os compostos da invenção são úteis no tratamento de patologias de crescimento excessivo do osso incluindo, mas não limitadas a, acromegalia, macrocefalia, sindrome de Sotos, displasia diafisária progressiva (PDD ou doença de Camurati-Engelmann), displasia craniodiafisária, e patologias de hiperostose endosteal incluindo a doença de Van Buchem (tipos I e II) e esclerosteose.
Os compostos da invenção são úteis no tratamento de crescimento capilar indesejado, por exemplo, de verrugas peludas e na prevenção cosmética de recrescimento capilar após depilação. Os compostos da invenção são úteis no tratamento de fibrose do fígado.
Assim, os métodos incluem a utilização de compostos da invenção que agonizam a inibição por Ptc da sinalização de Hedgehog, tal como por inibição da ativação de smoothened ou de componentes a jusante da via de sinal, ΡΕ2318389 na regulação da reparação e/ou do desempenho funcional de uma vasta gama de células, tecidos e órgãos, incluindo células normais, tecidos e órgãos, bem como aqueles que têm o fenótipo de perda-de-função de Ptc, ganho-de-função de Hedgehog, ganho-de-função de smoothened ou ganho-de-função de Gli. Por exemplo, o presente método tem aplicações terapêuticas e cosméticas que variam desde a regulação de tecidos neurais, formação e reparação de osso e cartilagem, regulação de espermatogénese, regulação de hiperplasia benigna da próstata, regulação de formação de vasos sanguíneos na degeneração macular húmida, psoríase, regulação do músculo liso, regulação do pulmão, fígado e outros órgãos provenientes do intestino primitivo, regulação da função hematopoiética, regulação do crescimento da pele e do cabelo, etc. Além disso, os presentes métodos podem ser realizados em células que são providenciadas em cultura (in vitro) ou sobre células de um animal completo (in vivo).
De acordo com o exposto acima, é revelado um método para a prevenir ou tratar qualquer uma das doenças ou patologias acima descritas, num indivíduo com necessidade de tal tratamento, método esse que compreende administrar ao referido indivíduo uma quantidade terapeu-ticamente eficaz (Ver, "Administration and Pharmaceutical Compositions", infra) de um composto de Fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Para qualquer uma das utilizações anteriores, a dosagem requerida irá variar dependendo do modo de administração, do estado particular a ser tratado e do efeito desejado. 65 ΡΕ2318389
Administração e Composições Farmacêuticas: A invenção refere-se à utilização de composições farmacêuticas compreendendo compostos de Fórmula (I) na terapêutica (e, num aspeto mais amplo da invenção, profilático) no tratamento de uma(s) patologia(s) relacionada(s) com Hedgehog.
Em geral, os compostos da invenção serão administrados em quantidades terapeuticamente eficazes através de qualquer um dos modos habituais e aceitáveis e conhecidos na técnica, quer isoladamente ou em combinação com um ou mais agentes terapêuticos. A quantidade terapeuticamente eficaz poderá variar amplamente dependendo da gravidade da doença, da idade e da saúde relativa do individuo, da potência do composto utilizado e de outros fatores. Em geral, os resultados satisfatórios são indicados para serem obtidos sistemicamente a dosagens diárias de desde cerca de 0,03 a 2,5 mg/ por kg de peso corporal. Uma dosagem diária indicada no mamifero de maior porte, por exemplo em seres humanos, está na gama de cerca de desde 0,5 mg até cerca de 100 mg, administrada convenientemente, e.g., em doses divididas até quatro vezes por dia ou na forma retardada. As formas de dosagem unitária adequadas para administração oral compreendem desde ca. 1 até 50 mg de componente ativo.
Os compostos da invenção podem ser administrados 66 ΡΕ2318389 como composições farmacêuticas por qualquer via convencional, em particular por via entérica, e.g., por via oral, e.g., na forma de comprimidos ou cápsulas, ou parentericamente, e.g., na forma de soluções ou suspensões injetáveis, topicamente, e.g., na forma de loções, géis, unguentos ou cremes, ou numa forma nasal ou de supositório. As composições farmacêuticas que compreendem um composto da presente invenção na forma livre ou numa forma de sal farmaceuticamente aceitável em associação com pelo menos um veiculo ou diluente farmaceuticamente aceitável podem ser fabricadas de um modo convencional, por mistura, granulação ou métodos de revestimento. Por exemplo, as composições orais podem ser comprimidos ou cápsulas de gelatina compreendendo o componente ativo juntamente com a) diluentes, e.g., lactose, dextrose, sacarose, manitol, sorbitol, celulose e/ou glicina; b) lubrificantes, e.g., sílica, talco, ácido esteárico, o seu sal de magnésio ou de cálcio e/ou polietilenoglicol; para comprimidos também c) aglomerantes, e.g., silicato de magnésio e alumínio, pasta de amido, gelatina, tragacanta, metilcelulose, carboxi-metilcelulose de sódio e ou polivinilpirrolidona; se desejado d) desintegrantes, e.g., amidos, ágar-ágar, ácido algínico ou o seu sal de sódio, ou misturas efervescentes e/ou e) absorventes, corantes, aromatizantes e edulco-rantes. As composições injetáveis podem ser soluções ou suspensões isotónicas aquosas, e os supositórios podem ser preparados a partir de emulsões ou suspensões gordas.
As composições poderão ser esterilizadas e/ou ΡΕ2318389 conter adjuvantes, tais como agentes conservantes, estabi-lizantes, agentes molhantes ou emulsionantes, promotores de solução, sais para regular a pressão osmótica e/ou tampões. Além disso, poderão também conter outras substâncias terapeuticamente valiosas. As formulações adequadas para aplicações transdérmicas incluem uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção com um veiculo. Um veiculo pode incluir solventes absorvíveis farmacologicamente aceitáveis para auxiliar a passagem através da pele do hospedeiro. Por exemplo, os dispositivos transdérmicos estão na forma de uma ligadura compreendendo um membro de suporte, um reservatório contendo o composto opcionalmente com veículos, opcionalmente uma barreira controladora da velocidade para administrar o composto à pele do hospedeiro a uma taxa controlada e predeterminada ao longo de um prolongado período de tempo, e meios para segurar o dispositivo à pele. Podem também ser usadas formulações matriciais transdérmicas. As formulações adequadas para aplicação tópica, e.g., à pele e aos olhos, são preferencialmente soluções aquosas, unguentos, cremes ou géis bem conhecidos na técnica. Tais poderão conter solubi-lizantes, estabilizantes, agentes melhoradores da tonicidade, tampões e conservantes.
Os compostos da invenção podem ser administrados em quantidades terapeuticamente eficazes em combinação com um ou mais agentes terapêuticos (combinações farmacêuticas) . Por exemplo, podem ocorrer efeitos sinérgicos com imunomoduladores, substâncias anti-inflamatórias, outros ΡΕ2318389 agentes terapêuticos anti-tumorais, agentes quimiotera-pêuticos, hormonas de ablação ou outras hormonas terapêuticas, agentes antineoplásicos e/ou anticorpos mono-clonais úteis contra linfornas ou mielomas. Alguns dos bem conhecidos fármacos anti-cancro encontram-se descritos na técnica, e.g., Câncer Therapeutics: Experimental and Clinicai Agents, Teicher (Ed.), Humana Press (lst ed, 1997); e Goodman e Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, Hardman et al. (Eds.), McGraw-Hill Professional (10th ed., 2001). Exemplos de fármacos anti-cancro adequados incluem 5-fluorouracilo, sulfato de vinblastina, fosfato de estramustina, suramina e estroncio-89. Exemplos de agentes quimioterapêuticos adequados incluem sulfato de Asparaginase, Bleomicina, Cisplatina, Citarabina, Fosfato de Fludarabina, Mitomicina e Estreptozocina.
Quando os compostos da invenção são administrados em conjunção com outras terapias, as dosagens dos compostos co-administrados irá naturalmente variar dependendo do tipo de co-fármaco empregue, do fármaco especifico empregue, do estado a ser tratado e assim por diante.
Um inibidor de Hh da presente invenção poderá ser utilmente combinado com outro composto farmacologicamente ativo, ou com dois ou mais outros compostos farmacolo-gicamente ativos, em particular no tratamento de cancro. Por exemplo, um composto da fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como definido acima, poderá ser administrado simultaneamente, sequencialmente ou sepa- 69 ΡΕ2318389 radamente em combinação com um ou mais agentes selecionados a partir de agentes de quimioterapia, e.g., inibidores mitóticos tais como um taxano, alcaloides vinca, paclitxel, docetaxel, vincristina, vinblastina, vinorelbina ou vin-flunina, e outros agentes anti-cancerigenos, e.g., cis-platina, 5-fluorouracilo ou 5-fluoro-2-4(1H,3H)-pirimidino-diona(5-FU), flutamida ou gemcitabina.
Tais combinações poderão oferecer vantagens significativas, incluindo a atividade sinérgica, em terapia. Um composto de fórmula (I) poderá também ser utilizado com vantagem em combinação com outros compostos anti-proliferativos. Tais compostos anti-proliferativos incluem, mas não estão limitados a inibidores de aromatase; anti-estrogénios; inibidores de topoisomerase I; inibidores de topoisomerase II; compostos ativos de microtúbulos; compostos alquilantes; compostos que induzem processos de diferenciação celular; inibidores de ciclooxigenase; inibidores de MMP; inibidores de mTOR; antimetabolitos antineo-plásicos; compostos de platina; compostos de direciona-mento/diminuição da atividade de uma quinase proteica ou lipidica e outros compostos anti-angiogénicos; compostos que direcionam, diminuem ou inibem a atividade de uma fosfatase proteica ou lipidica; agonista de gonadorelina, anti-androgénios; inibidores de metionina aminopeptidase, bisfosfonatos; modificadores da resposta biológica, anticorpos antiproliferativos, inibidores de heparanase, inibidores de isoformas oncogénicas de Ras, inibidores de telomerase, inibidores de proteassoma, compostos utilizados 70 ΡΕ2318389 no tratamento de malignidades hematológicas, compostos que direcionam, diminuem ou inibem a atividade de Flt-3, inibidores de Hsp90 tais como 17-AAG (17-alilamino-gelda-namicina, NSC330507), 17-DMAG (17 dimetilaminoetilamino-17-demetoxi-geldana-micina, NSC707545), IPI-504, CNF1010, CNF2024, CNF1010 de Conforma Therapeutics; temozolomida (TEMODAL); inibidores da proteina de eixo de cinesina, tais como SB715992 ou SB743921 de GlaxoSmithKline, ou pentami-dina/clorpromazina de CombinatoRx, inibidores de PI3K, inibidores de RAF; ligandos de EDG, compostos antileucemia, inibidores de ribonucleótido redutase, inibidores da S-adenosilmetionina descarboxilase, anticorpos anti-prolife-rativos ou outros compostos quimioterapêuticos. Além disso, em alternativa ou adicionalmente poderão ser utilizados em combinação com outras abordagens de tratamento de tumor, incluindo cirurgia, radiação ionizante, terapia fotodinâ-mica, implantes, e.g., com corticoesteróides, hormonas, ou poderão ser usados como radiossensibilizadores. Também está incluída a combinação com fármacos anti-inflamatórios no tratamento anti-inflamatório e/ou anti-proliferativo. A combinação é também possível com substâncias de fármacos anti-histamínicos, fármacos broncodilatadores, NSAID ou antagonistas de recetores de quimiocinas. A invenção também providencia combinações farmacêuticas, e.g., um kit (conjunto), compreendendo a) um primeiro agente que é um composto da invenção, tal como aqui divulgado, na forma livre ou na forma de sal farmaceuti-camente aceitável, e b) pelo menos um co-agente. O kit 71 ΡΕ2318389 (conjunto) pode compreender instruções para a sua administração .
Os termos "coadministração" ou "administração combinada" ou outros semelhantes, como utilizados aqui destinam-se a englobar a administração dos agentes terapêuticos selecionados a um único paciente e destinam-se a incluir regimes de tratamento nos quais os agentes não são necessariamente administrados pela mesma via de administração ou ao mesmo tempo. 0 termo "combinação farmacêutica", como utilizado aqui, significa um produto que resulta da mistura ou combinação de mais do que um componente ativo e inclui tanto as combinações fixas e as não fixas dos componentes ativos. 0 termo "combinação fixa" significa que os componentes ativos, e.g., um composto de Fórmula I e um co-agente, são ambos administrados a um paciente simultaneamente na forma de uma única entidade ou dosagem. 0 termo "combinação não fixa" significa que os componentes ativos, e.g., um composto de Fórmula I e um co-agente, são ambos administrados a um paciente como entidades separadas quer simultaneamente, concorrentemente ou sequencialmente sem limites de tempo específicos, em que uma tal administração proporciona níveis terapeuticamente eficazes dos 2 compostos no corpo do paciente. Este último também se aplica à terapia de cocktail, e.g., à administração de 3 ou mais componentes ativos. 72 ΡΕ2318389
Processos para Preparar os Compostos da Invenção
Exemplos representativos de síntese dos compostos da invenção, e.g., os compostos de Fórmula (I), podem ser encontrados na secção de Exemplos do presente pedido.
Um composto da invenção pode ser preparado como um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável, fazendo reagir a forma de base livre do composto com um ácido inorgânico ou orgânico farmaceuticamente aceitável. Alternativamente, um sal de adição de base farmaceuticamente aceitável de um composto da invenção pode ser preparado por reação da forma de ácido livre do composto com uma base inorgânica ou orgânica farmaceuticamente aceitável.
Alternativamente, as formas de sal dos compostos da invenção podem ser preparadas utilizando sais dos materiais de partida ou intermediários.
As formas de ácido livre ou de base livre dos compostos da invenção podem ser preparadas a partir da correspondente forma de sal de adição de base ou de sal de adição de ácido, respetivamente. Por exemplo, um composto da invenção numa forma de sal de adição de ácido pode ser convertido na base livre correspondente por tratamento com uma base adequada (e.g., solução de hidróxido de amónio, hidróxido de sódio, e semelhantes). Um composto da invenção numa forma de sal de adição de base pode ser convertido no 73 ΡΕ2318389 ácido livre correspondente por tratamento com um ácido adequado (e.g., ácido clorídrico, etc.)
Os derivados de pró-fármaco dos compostos da invenção podem ser preparados por métodos conhecidos daqueles peritos comuns na técnica (e.g., para mais detalhes ver Saulnier et al., (1994), Bioorganic and
Medicinal Chemistry Letters, vol. 4, p.1985).
Os derivados protegidos dos compostos da invenção pode ser preparados por meios conhecidos daqueles peritos na técnica. Uma descrição detalhada de técnicas aplicáveis à criação de grupos protetores e sua remoção pode ser encontrada em T. W. Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry", 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999.
Os compostos da presente invenção podem ser convenientemente preparados, ou formados durante o processo da invenção, como solvatos (e.g., hidratos). Os hidratos de compostos da presente invenção podem ser convenientemente preparados por recristalização a partir de uma mistura de solventes aquoso/orgânico, utilizando solventes orgânicos tais como dioxina, tetra-hidrofurano ou metanol.
Os compostos da invenção podem ser preparados como os seus estereoisómeros individuais fazendo reagir uma mistura racémica do composto com um agente de resolução opticamente ativo para formar um par de compostos diaste-reoisoméricos, separando os diastereómeros e recuperando os 74 ΡΕ2318389 enantiómeros opticamente puros. Embora a resolução de enantiómeros possa ser realizada utilizando derivados diastereoméricos covalentes dos compostos da invenção, são preferidos complexos dissociáveis (e.g., sais diastereoméricos cristalinos). Os diastereómeros têm propriedades físicas distintas (e.g., pontos de fusão, pontos de ebulição, solubilidades, reatividade, etc.), e podem ser prontamente separados tirando vantagem destas dissimilaridades. Os diastereómeros podem ser separados por cromatografia, ou, de preferência, por técnicas de separação/resolução baseadas nas diferenças de solubilidade. 0 enantiómero opticamente puro é em seguida recuperado, juntamente com o agente de resolução, através de quaisquer meios práticos que não resultem em racemização. Uma descrição mais pormenorizada das técnicas aplicáveis à resolução de estereoisómeros de compostos a partir da sua mistura racémica pode ser encontrada em Jean Jacques, André Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates e Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981.
EXEMPLOS A presente invenção é exemplificada adicionalmente, mas não limitada, pelos seguintes exemplos representativos, os quais se destinam a ilustrar a invenção e não são para ser interpretados como sendo limitações dos mesmos. A estrutura dos produtos finais aqui descritos pode ser confirmada por métodos analíticos padrão, e.g., métodos espectrométricos e espectroscópicos (e.g., MS, RMN). As 75 ΡΕ2318389 abreviaturas utilizadas são as convencionais na técnica. Os compostos são purificados por métodos padrão, e.g. cristalização, cromatografia flash ou HPLC de fase reversa.
Os compostos dos exemplos 18 - 26, 34, 37, 62, 71, 72, 80 - 83, 85, 86, 96 -103, 107 - 110, 117 e 141 são providenciados para fins de referência.
As seguintes abreviaturas serão usadas ao longo dos exemplos:
LISTA DE ABREVIATURAS BINAP (+/-)-(1,1'-binaftaleno-2-2'il)bis(difenil-fosfina) DAST Trifluoreto de dietilaminoenxofre Deoxofluor Trifluoreto de bis(2-metoxietil)aminoenxofre DCM Diclorometano Di-tbu X-Phos 2-(Di-terc.Butilfosfino)2',4,6'-tri-isopropil-1,l'-bifenilo DIEA Dietilamina DIPEA Diisopropiletilamina DMF Dimetilformamida HPLC Cromatografia liquida de alta pressão HR MS Espectrometria de massa de alta resolução HATU Hexafluorofosfato de l-[bis (dimetilamino)-metileno]-lH-l,2,3-triazolo[4,5-b]piridínio-3-óxido HBTU Hexafluorofosfato de O-benzotriazol-l-il- N,N,N',N'-tetrametilurónio 76 ΡΕ2318389 HOBt 1-Hidroxi-lH-benzotriazole HMDS Hexametildisilazano MS Espectrometria de massa NBS N-Bromo-succinimida NMM N-metilmorfolina NMO N-metilmorfolina-N-óxido NMP N-metilpirrolidina RMN Ressonância magnética nuclear n. a. Não disponível n. d. Não determinado RT, rt Temperatura ambiente SEM 2-(Trimetilsilil)etoximetilo TFA Ácido trifluoroacético THF Tetra-hidrofurano X-Phos 2-(Diciclo-hexilfosfino)-2',4',6'-tri-isopropil-1,l'-bifenilo SÍNTESE DOS COMPOSTOS Piridazino-ariléteres e -anilinas
Como ilustrado no Esquema 1, compostos de Fórmula Ia podem ser preparados a partir de intermediários IIIA (preparação descrita no Esquema 6), que podem reagir quer com um fenol ou uma anilina por substituição nucleófila térmica direta ou por substituição nucleófila catalisada por paládio. Os compostos Ia podem ser convertidos em exemplos adicionais por manipulações de grupos funcionais de R" . 77ΡΕ2318389 Z(r
cu: ou Sd-eae. R2 taure R" X.
Β" X - Ν, CH, CR5 ν
Rl-Uí
R1^L t*0,NH esquema 1 Síntese dos Exemplos 1“5
Exemplo 1; Estar metílico do ácido (R)-4-(4,5-dimetil-6-fenoxi-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'] bipirazinil-5'-carboxílico
A uma solução de éster metílico do ácido (R)-4-(6-Cloro-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxílico (Composto 54, 40 mg, 0,106 mmol) em 2 mL de tolueno é adicionado fenol (45 mg, 0,48 mmol), fosfato de potássio (40,6 mg, 0,19 mmol) e di-'bu X-Phos (5,3 mg, 0,014 mmol) num frasco com tampa de rosca de 2 drarn (7,5 mL) . O frasco é evacuado e purgado com azoto, seguido da adição de acetato de paládio(II) (2 mg, 0,01 mmol). A mistura reacional é novamente purgada com azoto e aquecida até 100 °C durante 16 h. A mistura é filtrada através de Celite e o filtrado é concentrado para originar um óleo castanho. O produto bruto é purificado por 78 ΡΕ2318389
HPLC, eluindo com 15-95% de acetonitrilo em água (ambas as fases móveis modificadas com n-PrOH a 3%) para providenciar o produto desejado como um sólido branco (9 mg, 22%) . 1H RMN (400 MHz , DMSO- d6) δ = 8,69 (S, 1H) , 8 ,39 (s, : 1H) r 7, 40 (t, J = 7, 5 Hz, 2H) 7, 19 (t, J = 7,5 H z, 1H) , 7, 1( 3 ( d, J = 7,5 Hz, 2H ) , 4,84-4 , 82 (m, 1H) , 4,42-4, 38 (m, 1H) , 3, 81 (s, 3H) , . 3,45- 3, 25 (m, 3H ), 3,02-2 ,99 (m, 1H) , 2,93- -2, 86 (m, 1H) , . 2,35 (s , 3H) , 2,2 6 (s, 3H) , 1,36 (d, J = = 6,6 Hz r 3H) . RH MS (m/z, MH+) med. 435,2157, cale. 435,2145.
Exemplo 2: 2-[(R)-4-(4,5-Dimetil-6-fenoxi-piridazin-3-il)- 2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol
A uma solução de éster metálico do ácido (R)-4 -(4,5-dimetil-6-fenoxi-piridazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxílico (98 mg, 0,226 mmol) em 2 mL de THF anidro é adicionado brometo de metilmagnésio 3 M (600 μΕ, 1,8 mmol) num frasco com tampa de rosca de 2 dram (7,5 mL) a -78 °C sob uma atmosfera de azoto. A mistura reacional é agitada a -78 °C durante 1,5 h, antes de ser aquecida a 0 °C e agitada durante 2 h adicionais. A mistura reacional é extinta com NH4C1 aquoso saturado a -78 °C e diluída com DCM. A solução orgânica é lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre Na2S04 e concentrada para originar o material bruto. 0 sólido resultante é purificado por HPLC 79 ΡΕ2318389 preparativa, eluindo com 10%-100% de acetonitrilo em água (ambas as fases móveis modificadas por n-PrOH a 3%). As frações contendo o produto desejado são combinadas e liofilizadas para dar origem a um sólido branco (58 mg, 59%). XH RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,33 (s, 1H) , 8,19 (s, 1H), 7,41 (t, J = 7,6 Hz, 2H) 7,20 (t, J = 7,6 Hz, 1H) , 7,11 (d, J= 7,6 Hz, 2H), 5,09 (s, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,16- 4,13 (m, 1H), 3,44-3,41 (m, 2H), 3,02-2,99 (m, 1H), 2,89- 2,85 (m, 1H), 2,34 (s, 3H) , 2,25 (s, 3H) , 1,41 (s, 6H) , 1,28 (d, J = 6,6 Hz, 3H) . HR MS (m/z, MH+) med. 435, 2508, calc. 435,2508.
Exemplo 3: Éster metílico do ácido (R)-4-(4,5-dimetil-6-fenilamino-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxílico
e
Exemplo 4: Fenilamida do ácido (R)-4-(4,5-dimetil-6-fenil-amino-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxílico
Ao éster metílico do ácido (R)-4-(6-cloro-4, 5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4, 5, 6-tetra-hidro-2H- 80 ΡΕ2318389 [1,2']bipirazinil-5'-carboxílico (composto 54, 250 mg, 0,663 mmol) é adicionada anilina (2,4 mL, 26,5 mmol) num tubo de micro-ondas. A mistura reacional é aquecida a 190 °C durante 30 min num reator de micro-ondas. A mistura reacional é carregada em sílica gel e purificada por cromatografia flash, eluindo com 50%-100% de EtOAc:heptano para seis volumes da coluna, seguido de 3%-10% de MeOH em DCM. Ambos exemplos 3 e 4 são recolhidos e concentrados para originar sólidos brancos.
Exemplo 3 : 130 mg, 45%. RMN (400 MHz, CDC13) δ = 8, 83 (s, 1H) , 8, 16 (s, 1H) , 7, 41- -7,32 (m, 4H) , 7 ,14- -7, 10 (m, 1H) , 4, 79- -4, 77 (m, 1H) , 4, 39- -4,35 (m, 1H) , 3 , 96 (s r 3H) , 3,52- -3,45 (m, 2H) , 3,35- -3, 42 (m, 1H) , 3,24-3, r 21 (m r 1H) , 3,12- -3,07 (m, 1H) , 2,38 (s , 3H), 2 , 15 (s, 3H), 1, 44 (d ·, J = 6,7 Hz, 3H). MS (m/z, MH+) med. 434, 4, calc. 434, 2.
Exemplo 4: 30 mg, 9%. MS (m/z, MH+) med. 495, 6, calc. 495, 2.
Exemplo 5: 2-[(R)-4-(4,5-Dimetil-6-fenilamino-piridazin-3- il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-\1,2']bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol 81 ΡΕ2318389 A uma solução de éster metílico do ácido (R)-4-(4,5-dimetil-6-fenilamino-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil-5'-carboxílico (Exemplo 3, 360 mg, 0,14 mmol) em 2 mL de THF anidro é adicionado brometo de metilmagnésio 3 M (554 μ]ΐ, 1,7 mmol) num frasco com tampa de rosca de 2 dram (7,5 mL) a -78 °C, sob atmosfera de azoto. A mistura reacional é agitada a -78 °C durante 1,5 h, antes de ser aquecida até 0 °C e agitada durante 1 h adicional. A mistura reacional é extinta com NH4C1 aq. sat. a -78 °C e diluída com DCM. A solução orgânica é lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre Na2S04 e concentrada para originar o material bruto. O sólido resultante é purificado por HPLC preparativa, eluindo com 10%-100% de acetonitrilo em água (ambas as fases móveis modificadas por n-PrOH a 3%). As frações contendo o produto desejado são combinadas e liofilizadas para originar um sólido branco (25 mg, 42%) . RMN (400 MHz, CDCI3) δ = 8,25 (s, 1—1 8, 04 (s, t—1 7, 49 (d, J -- = 7,5 Hz, 2H), 7, 31 (t , J - = 7,5 Hz, 2H) , 7, 02 (t , J = 7,5 Hz, 1H), 6,59 (b, 1H) , 4,63- -4,61 (m, 1H) , 4 ,16- 4, 12 (m, 1H ), 3,44-3,09 (m, 5H) , 2,36 (s, 3H) , 2, 18 (s, 3H), 1,56 (s , 6 H), 1,39 (d, J = 7,1 Hz, 3H) . HR MS (m/z, MH+) med. 43 4,266 7 , cal< 0. 43 4,266 8 .
Aril-niridazinas
Tal como ilustrado no Esquema 2, os compostos de Fórmula Ib, podem ser preparados, e.g., por substituição do 82 ΡΕ2318389 cloreto a partir de 1,4-dicloropiridazina II com uma piperazina para originar os intermediários III, que reagem com um ácido ou éster borónico num acoplamento de Suzuki para originar os compostos IV. A substituição nucleofilica aromática com, e.g., arilcloretos sob condições básicas originam os exemplos Ib (Via A). Alternativamente, os intermediários II podem reagir com aminas substituidas a compostos Illa que são substratos para as reações de acoplamento de Suzuki com os ácidos ou ésteres borónicos para originar os exemplos Ib (Via B, X = N, CH) . Os compostos Ib podem ser convertidos em exemplos adicionais por manipulações de grupos funcionais de R" e.g., por hidrólise do éster e formação de amida ou adição de Grignard para funcionalidades éster.
ci
ESQUEMA. 2 R"-CI, base 83 ΡΕ2318389 Síntese de intermediários: 3-(4-Fluoro-fenil)-4,5-dimetil-6-((R)-3-metil-piperazin-l-il)-piridazina (composto 1)
A um balão de fundo redondo é adicionado 3-cloro-4,5-dimetil-6-((R)-3-metil-piperazin-l-il)-piridazina (500 mg, 2,07 mmol), ácido 4-fluorofenilborónico (580 mg, 4,15 mmol), carbonato de sódio (440 mg, 4,15 mmol), tolueno (16 mL) e água (8 mL). A mistura reacional é purgada com azoto durante 20 min. É adicionado tetraquis (trifenilfosfi-na)paládio (50 mg, 0,103 mmol) e a mistura é aquecida até 110 °C durante 18 h. A mistura reacional é concentrada e dividida entre acetato de etilo e água. É extraída com acetato de etilo duas vezes e as fases orgânicas combinadas são secas com sulfato de sódio e concentradas. É purificada por cromatografia em coluna (0-25% de metanol/cloreto de metileno) para originar 480 mg de 3-(4-fluoro-fenil)-4,5-dimetil-6-((R)-3-metil-piperazin-l-il)-piridazina (83%). ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ = 7,34-7, 49 (m, 2H), 7,07 (t, J = 8,8 Hz, 2H) 3,35 (m, 2H), 2,84-3,13 (m, 4H), 2,63 (dd, J= 12,0 Hz, 10,0 Hz, 1H) 2,20 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 1,67 (s largo, 1H) 1,05 (d, J = 6,5 Hz, 3H). HR MS (m/z, MH+) med. 301,1824, calc. 301,1829. 84 ΡΕ2318389 3-(4-Trifiuorometil-fenil)-4,5-dimetil-6-((R)-3-metil-piperazin-l-il)-piridazina (composto 2)
0 Composto 2 é preparado de forma análoga ao composto 1. ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13 ) δ = 7,69-7,80 (m, 2H) , 7,60- 7, 70 (m, 2H) , 3,38-3,52 (m, 3 H) 2,98 - 3,22 (m, 4H) , 2,69- 2,83 (m, 1H) , 2,30 (s, 3H) , 2,23 (s, 3H), 1, 15 (d, J = 6,4 Hz, 3H) . HR MS (m/z, MH+) med. 351,1806, calc. 351,1797. 3-Cloro-4,5-dimetil-6-[4-(5-trifIuorometil-piridin-2-il)-piperazin-l-il]-piridazina (composto 3)
1-(5-Trifiuorometil-piridin-2-il)-piperazina (10 g, 43,3 mmol) é combinada com 3,6-dicloro-4,5-dimetil-piridazina (14,4 g, 84,3 mmol), trietilamina (8,25 mL) , e NMP (40 mL). A mistura reacional é aguecida até uma temperatura de 180 °C durante 25 min, e seguidamente concentrada in vacuo. O resíduo é purificado por cromatografia flash em sílica gel (0-8% MeOH/CH2Cl2) para originar o composto intitulado (13,2 g, 82%).
ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,48-8,41 (m, 1H) 7,84 (dd, J = 9,1 Hz, 2,4 Hz, 1H) 7,03 (d, J = 9,1 Hz, 1H) 3,88-3,76 (m, 4H), 3,28-3,20 (m, 4H), 2,31 (s, 6H). 85 ΡΕ2318389 Éster metílico do ácido 2-[ 4-(6-cloro-4,5-dimetil-pirida-zin-3-il)-piperazin-l-il]4-trifluorometil-pirimidino-5-carboxílico (composto 4)
N=N H jt~\N f v .. ..
Me02c—^ X)-N^_
F.C A um balão de fundo redondo é adicionado 3-cloro- 4.5- dimetil-6-piperazin-l-il-piridazina (1 g, 4,41 mmol), éster metílico do ácido 2-cloro-4-trifluorometil-pirimidi-no-5-carboxílico (2,12 g, 8,82 mmol) e diisopropiletilamina (2,3 mL, 13,23 mmol) numa solução de dioxano (9 mL) , e agitada durante 18 h à temperatura ambiente. Filtra-se a mistura reacional e enxagua-se com água e acetato de etilo para dar 1,35 g de éster metílico do ácido 2-[4-(6-cloro- 4.5- dimetil-piridazin-3-il)-piperazin-l-il] -4-trifluorometil-pirimidino-5-carboxílico (71%). ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ = 8,96 (s, 1H) , 4, 09-4, 22 (m, 4H) , 3,93 (s, 3H), 3,35 (m, 4H) , 2,39 (s, 3H) , 2,35 (s, 3H) . HR MS (m/z, MH+) med. 431,1206, calc. 431,1210. Síntese dos exemplos 6-9 através da Via A.
Exemplo 6: Éster metílico do ácido (R)-4-[6-(4-fluoro-fenil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il]-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-5'-carboxílico ΡΕ2318389 86
Me02C
F
Combinar num balao de fundo redondo 3-(4-fluoro- fenil)-4,5-dimetil-6-((R)-3-metil-piperazin-l-il)-piridazi-na (522 mg, 1,73 mmol), éster metílico do ácido 5-cloro-pirazino-2-carboxílico (360 mg, 2,07 mmol), diisopropil-etilamina (900 μ]!., 5,19 mmol) e dioxano (3 mL) . Aquecer até 110 °C durante 18 h. Concentrar a mistura reacional e purificar por cromatografia em coluna (gradiente 0-100% de acetato de etilo/heptano). Triturar o produto com aceto-nitrilo para originar 480 mg de éster metilico do ácido (R)-4-[6-(4-fluoro-fenil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il]-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil-5'-carboxílico (63%). ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ = 8,87 (s, 1H) , 8,21 (s, 1H) , 7,46-7,60 (m, 2H), 7,19 (t, J= 8,5 Hz, 2H) 4,84 (s largo, 1H) 4,43 (d, J = 13,0 Hz, 1H) 3,99 (s, 3H) , 3,68 (d, J= 12,5 Hz, 1H) 3,49-3,63 (m, 2H), 3,39 (dd, J= 12,8 Hz, 3,8
Hz, 1H) 3,15-3,31 (m, 1H), 2,41 (s, 3H) , 2,29 (s, 3H) , 1,50 (d, J = 6,5 Hz, 3H). HR MS (m/z, MH+) med. 437, 2097, calc. 437, 2101.
Exemplo 7: Éster metílico de ácido (R)-4-[6-(4-trifluorome-til-fenil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il]-2-metil-3,4, 5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxílico
MeOsC
87 ΡΕ2318389 0 Exemplo 7 é preparado de uma maneira análoga à descrita no exemplo 6 a partir do composto 2. 1h RMN (400 MHz, CDC13) δ= 8,87 (s, 1H) , 8,21 (d, J = 1,3
Hz , 1H), 7, 72-7, 82 (m , 2H), 7,68 (d, J : = 8,1 Hz, 2H) , 4, 85 (s largo r 1H) , 4, 44 (d, J = 13,3 Hz, 1H) , 4, 00 (s, 3H) , 3, 70 (d, j = 14, 1 Hz, 1H), 3,50-3,64 (m, 2H) , 3,41 (dd, J = 12 , 6 Hz, 3, 6 Hz, 1H) , 3,18-3,31 (m, 1H), 2,42 (s, 3H) , 2,29 (s , 3H), 1, 50 (d , J = 6,7 Hz, 3H). HR MS {m/z, MH+) med. 487,2050, calc. 48 7,2069 • Exemplo 8 : Ác: ido (R)-4-[6-(4-trifluorometil-fenil)- -4,5- dimetil-piridazin-3-il]-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxílico h0iC~íj^....../").. A uma solução do exemplo 7 (0,26 g, 0,53 mmol) e metanol (10 mL) é adicionado LiOH aquoso a 50% (10 mL) . A mistura é agitada à temperatura ambiente durante a noite. O solvente é removido. 0 resíduo é dissolvido em água e acidificado com HC1 3 N até pH cerca de 7 e extraído com acetato de etilo. A fase de acetato de etilo é concentrada para originar o composto intitulado (0,25 g, 98%) como um sólido amarelo. RMN (400 MHz, CD2C12) δ = 8,90 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 1 (d , J = 8,0 Hz, 2H) f 7,69 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,88 1H) , 4,48 (d, J = 13, . 0 Hz, 1H), 3,66 (m, 3H) , 3, 40 (m, 1H), 3,23 (m, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 1,53 (d, J = 6,5 Hz, 3H). HR MS (m/z, MH +) med. 473,1900. ΡΕ2318389
Exemplo 9: Ácido (R)-4-[6-(4-fluoro-fenil)-4, 5-dimetil-piridazin-3-il]-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'] bipirazinil-5'-carboxílico
A uma solução do exemplo 6 (0,74 g, 1,31 mmol) e metanol (10 mL) é adicionado hidróxido de sódio (100 mg). A mistura é agitada à temperatura ambiente durante a noite. O solvente é removido e o resíduo é dissolvido em água e acidificado com HC1 3 N até pH cerca de 7, e extraído com acetato de etilo. A fase de acetato de etilo é concentrada para originar o composto intitulado (0,68 g, 96%) como um sólido amarelo. ΤΗ RMN (400 MHz, CD2C12) δ = 8, 90 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7, 52 (m, 2H) , 7, 22 (m, 2H), 4,67 (m, 1H), 4,48 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,65 (m, 3H), 3,40 (m, 1H), 3,26 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 2,32 (s, 3H) , 1,53 (d, J = 6,5 Hz, 3H). HR MS (m/z, MH+) med. 423,1941. Síntese dos exemplos 10-40 através da Via B. PROTOCOLO GERAL PARA O ACOPLAMENTO SUZUKI DE ÁCIDOS BORÓNICOS A CLORETOS DE PIRIDAZINILO Illa.
Método A
Num balao de fundo redondo, combinar 3-cloro ΡΕ2318389 piridazina (0,268 mmol), ácido borónico (0,537 mmol) e carbonato de sódio (57 mg, 0,537 mmol) em 1 mL de água e 1,8 mL de THF. Purgar a mistura reacional com azoto durante 20 min, seguidamente adicionar tetraquis (trifenilfos-fina)paládio (10 mg) e aquecer até 110 °C durante 18 h. Purificar por cromatografia em coluna de silica gel com um gradiente 0%-70% de acetato de etilo/ heptano. Triturar os produtos com metanol e acetonitrilo para remover outras impurezas dos produtos desejados.
Método B
Num balão de fundo redondo combinar 3-cloro-piridazina (0,268 mmol), ácido borónico (0,536 mmol) e carbonato de césio (175 mg, 0,536 mmol) em 2 mL de 1,4-dioxano. Purgar a mistura reacional com azoto durante 1 min e adicionar traquis-(trifenilfosfino)paládio (30 mg, 0,026 mmol) . Aquecer até 115 °C durante 18 h. Filtrar a mistura reacional através de Celite e concentrar. Repartir entre acetato de etilo e água, recolhendo a fase orgânica. Extrair de novo com acetato de etilo e combinar as fases orgânicas. Secar com sulfato de sódio, filtrar e concentrar. Triturar o material com acetonitrilo, seguido por recristalização a partir de acetonitrilo quente para originar os produtos desejados.
Método C
Num frasco de piridazina (0,080 mmol) micro-ondas, combinar 3-cloro-ácido borónico (0,096 mmol), 90 ΡΕ2318389 fosfato de potássio (34 mg, 0,161 mmol) e X-Phos (1,3 mg) numa solução de n-butanol (1,5 mL). Purgar com azoto durante 1 minuto e adicionar acetato de paládio (1 mg), seguidamente aquecer num reator de micro-ondas durante 45 min a 150 °C. Filtrar e concentrar a mistura reacional, seguido por purificação por HPLC preparativa (água/ace-tonitrilo com hidróxido de amónio a 1%) para originar os produtos desejados.
Método D
Num frasco de micro-ondas, combinar 3-cloro-piridazina (0,268 mmol), ácido borónico (0,322 mmol), fosfato de potássio (110 mg, 0,537 mmol) e X-Phos (5 mg) numa solução de n-butanol (2,5 mL ). Purgar com azoto durante 1 min e adicionar acetato de paládio (3,5 mg), seguidamente aquecer num reator de micro-ondas durante 45 min a 150 °C. Filtrar e concentrar a mistura reacional. Repartir entre acetato de etilo e água, recolhendo a fase orgânica. Extrair novamente e combinar os orgânicos, secar com sulfato de sódio e concentrar. Purificar por cromatografia de coluna num gradiente 0-100% de acetato de etilo/heptano para originar os produtos desejados.
Exemplos 10-31: A tabela seguinte (Tabela 1) lista exemplos de compostos preparados pela via B usando os métodos gerais A - D descritos acima: ΡΕ2318389
Tabela 1
Exemplo Estrutura HR MS [m/z, MH+] med. 10 F .r-N /—v N-N /=x >-N N—í' J-CF. P \—-/ Xnnn^-f W/ V V ^ A 482,1757 (calc. 482,1779) 11 F k-H r~\ N-N /a» ihn n—^ tf P \***y \__ / \g^/ ^_ff A 414,1904 (calc. 414,1906) 12 F rN /—v N'N A 432,1807 (calc. 432,1811) 13 F N N~N /»«\ ^t~0~ \_,N B 444,208 (calc. 444,2011) 14 0- Jlf~~Vf4 /"\ f/ B 456,2366 (calc. 456,2375) 15 F <f~N jr^s. N-N /=í\ f vn n-h; V“í ) f Xsss/ \_/ \xxJ / x Cl B 448,1513 (calc. 448,1516) 16 F j«~N /—v, N-N /=ν ^O nwn C 415,1859 (calc. 415,1858) 17 £ N"N y-™V y ~N_NF 4°^ CN D 457,1746 (calc. 457,1764) 18 yf-N ,-\ N-N /sssa MeO^C < V-N H-tf VA ,) F,C s C! B 507,1503 (calc. 507,1523) 19 λγ~Ν ,---\ N-N MeOX-f Vn m-4 >-~4 >OMe >N W FaC / λ B 503,1996 (calc. 503,2018) 20 /T*N /*\ N‘M /3S5X Me02C'^3~NwN'^l=^'\-f~F F,C ^ Cl B 525,1407 (calc. 525,1429) 21 Λ-Ν f-—\ HH /zx\ BuOX-f Vn n-< >~4 N * \awjT \..../ t.. Λ "../> /---> jT /V FjC / / x D 530,2487 (calc. 530,2487) 22 <s-N ,—s N-N /s=\ 8o02c'ij''fO F,C / / \ D 530,2482 (calc. 530,2491) 23 jS~ H n-n /=\ fe°íí)"VNV\rF F,C * ' X D 548,2383 (calc. 548,2397) 24 OMe R,c /Λ D 546,2433 (calc. 546,2440) 25 .y-*N Ν'Ν /χ*\ F.p / % CN D 558,2236 (calc. 558,2241) 26 yp~M *—v, N*N /*®\ / b FSC ^ D 557,2830 (calc. 557,2852) 27 B 471,1700 (calc. 471,1712) 92 ΡΕ2318389 (continuação)
Exemplo Estrutura HR MS [m/z, MH+] med. 28 B 449,2304 (calc. 449,2304) 29 B 471,1721 (calc. 471,1712) 30 4 λ—«t —·, «satt \™. }j B 495,2520 (calc. 495,2508) 31 D 420,2498 (calc. 420,2512) Síntese dos exemplos 32—34 através da adição de Grignard a ésteres
PROTOCOLO GERAL PARA A ADIÇÃO DE GRIGNARD A um balão de fundo redondo, arrefecido até -78 °C, contendo uma solução de éster (1 mmol) em THF anidro (4 mL) é adicionada uma solução de brometo de metilmagnésio 3 M (8 mmol) em éter dietílico, gota a gota. Deixar aquecer até 0 °C e após 20 minutos de agitação, extinguir com uma solução saturada de cloreto de amónio aquoso. Extrair duas vezes com acetato de etilo e recolher as fases orgânicas. Secar com sulfato de sódio e concentrar. Purificar por cromatografia em coluna num gradiente de acetato de etilo/ heptano 0-100%. Triturar o produto com acetonitrilo e filtrar para originar 2-propan-ol. 93 ΡΕ2318389
Exemplos 32—34: A tabela seguinte (Tabela 2) lista os exemplos dos compostos preparados pelo procedimento geral descrito acima:
Tabela 2
Exemplo Estrutura HR MS [m/z, MH+1] med. 32 HO t—v Ν·Ν /o*v 437,2453 (calc. 437,2465) 33 HO /“N t—\ N"N /=\ V~f VN N~< V·* λ s 487,2430 (calc. 487,2433) 34 HO /rN /—\ NS /ss\ V-í Vn. /-Ofcte M Sw1 \aw FaC ' X 503,2406 (calc. 503,2382) Síntese dos exemplos 35-40 através da formação de amida
PROTOCOLO GERAL PARA A FORMAÇÃO DE AMIDA A mistura do Exemplo 8 (40,0 mg, 0,08 mmol), HATU (64,0 mg, 0,17 mmol), diisopropiletilamina (44,0 mg, 0,34 mmol), dimetilacetamida (1,5 mL) e a amina (0,13 mmol) é agitada à temperatura ambiente durante 10 h. 0 produto bruto é purificado por HPLC (coluna C18, acetonitrilo/ água (3% de propanol), 30% ~ 100%) para originar os exemplos 35 a 40 (74% ~ 82%).
Exemplos 35 - 40: A tabela seguinte (Tabela 3) lista exemplos de compostos preparados pelo procedimento geral descrito acima: ΡΕ2318389 94
Tabela 3
Exemplo Estrutura HR MS [m/z, MH+] med. 35 ^ O tÇji cr 604,2988 36 '“N /TN /—\ N-N /*es\ 5-n n-í Vcf, 0 Ν’" ^—' /Λ, 542,2468 37 Cl ΗΉ /sa*v 598,2762 38 N NN Vn N-í hcf, o ti "r 590,2831 39 583,2758 40 ap “Si N-y L N jg~H /—v N*N /sa\ y~H >cf3 o n® )-* 619,2410
Piperidin-4-il-piridazinas
Como é ilustrado no Esquema 3, os compostos de Fórmula Ic podem ser preparados por acoplamento de Suzuki de ácidos 1,2,3,6-tetra-hidro-piridino-borónicos protegidos com cloretos de piridazina V, para originarem os intermediários VI que, após remoção do grupo protetor e substituição nucleófila providenciam os intermediários VII. A hidrogenação fornece os exemplos Ic. 95 ΡΕ2318389
ESQUEMA 3 Síntese de intermediários:
Ester terc-butílico do ácido 4-(6-benzil-4,5-dimetil-piri-dazin-3-il)-3,6-di-hidro-2H-piridino-l-carboxílico (compos to 5)
A uma solução de 3-benzil-6-cloro-4,5-dimetilpi-ridazina (800 mg, 3,44 mmol) em 20 mL de DMF é adicionado 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-5,6-di-hidropiridino-1(2H)-carboxilato de terc-butilo (1,3 g, 4,1 mmol), seguido por carbonato de potássio (1,43 g, 10,3 mmol) e Pd(PPh3)4 (397 mg; 0,344 mmol) num balão de fundo redondo. O frasco é evacuado e purgado com azoto. A mistura reacional é aquecida até 100 °C durante 16 h. A mistura é filtrada através de Celite e o filtrado é concentrado para originar o material bruto. A mistura é purificada por cromatografia flash em sílica gel, eluindo com MeOH:DCM 3% - 15%. As frações contendo o produto desejado são combinadas e concentradas para originar um sólido castanho (1,0 g, 96 ΡΕ2318389 77 %) · RMN (400 MHz, CD2C12 ) δ = 7, 30-7, 21 (m, 5H) , 5,84- -5, 82 (s , 1H) , 4,43 (s, r 2H), 4, 13 -4, i: L (m, 2H ), 3, .69 (t, J -- = 5,5 Hz , 1H) , 2, 56- -2, 54 (m, 2 H) , 2, 26 (s, 3 H) , 2,20 (s, 3 H) , 1, 49 (s , 9H) • MS (m/z , MH + ) med. 380 ,7, calc. 380, 23 . 5-(4-(6-Benzi1-4,5-dimetilpiridazin-3-il)-5,6-di-hidropiri-din-1(2H)-il)-pirazino-2-carboxilato de metilo (composto 6)
É adicionado ao éster terc-butilico do ácido 4-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-3,6-di-hidro-2H-piridino-l-carboxilico (170 mg, 0,358 mmol) TFA a 50% em DCM. A mistura reacional é agitada durante 10 min e concentrada para originar a 3-benzil-4,5-dimetil-6-(1,2, 3,6-tetra-hidropiridin-4-il)piridazina, como um sólido amarelo pegajoso (125 mg, 100 %). É adicionado a uma solução de 3-benzil-4,5-dimetil-6-(1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il) piridazina (180 mg, 0,644 mmol) em dioxano, metil-5-cloropirazina-2-carboxilato (222 mg, 1,29 mmol) e TEA (0,45 mL, 3,22 mmol) num tubo de micro-ondas. A mistura reacional é aquecida até 160 °C durante 40 min num reator de micro-ondas. A mistura é concentrada para originar um óleo castanho e purificado por HPLC preparativa, eluindo com 10% -100% de acetonitrilo:água (ambas as fases móveis modificadas com 3% de n-PrOH). 97 ΡΕ2318389
As frações contendo o produto desejado sao combinadas e liofilizadas para originar um sólido branco (80 mg, 30%) . MS (m/z, MH+) med. 416,5, calc. 416,2. 3-Benzi1-4,5-dimetil-6-(1-(5-(trifiuorometil)piridin-2-il)-1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)piridazina (composto 7)
A uma solução de 3-benzil-4,5-dimetil-6-(1,2,3,6- tetra-hidropiridin-4-il) piridazina (70 mg, 0,175 mmol) em 2 mL de dioxano é adicionada 2-cloro-5-(trifIuorometil) piridina (64 mg, 0,35 mmol) e TEA (0,122 mL, 0,88 mmol) num tubo de micro-ondas. A mistura reacional é aquecida até 160 °C durante 40 min num reator de micro-ondas. A mistura é concentrada para originar um óleo castanho e purificada por HPLC preparativa, eluindo com acetonitrilo:água 10%-100% (ambas as fases móveis modificadas com n-PrOH a 3%). As frações contendo o produto desejado são combinadas e liofilizadas para originar um sólido branco (33 mg, 42%). ΤΗ RMN (400 MHz, DMS0-d6) δ = 8,44 (s, 1H) , 7,83 (dd, J =
6,99-6,97 (d, J= 9,1 Hz, 1H), 5,96-5,94 (m, 1H), 4,32 (s 2H), 4,27-4,26 (m, 2H), 3,97 (t, J= 5,6 Hz, 2H) , 2,60-2,58 (m, 2H), 2,22 (s, 3H), 2,16 (s, 3H). HR MS (m/z, MH+) med. 425, 1958, calc. 425, 1953. 98 ΡΕ2318389 Síntese dos exemplos 41-44
Exemplo 41; 5-(4-(6-Benzil-4,5-dimetilpiridazin-3-il)-pipe-ridin-l-il)pirazino-2-carboxilato de metilo
A uma solução de 5-(4-(6-benzil-4,5-dimetilpiri dazin-3-il)-5,β-di-hidropiridin-l(2H)-il)-pirazino-2-carbo-xilato de metilo (60 mg, 0,144 mmol ) em 20 mL de EtOH é adicionado Pd-C a 10% (77 mg, 72 mmol). A mistura reacional é agitada sob atmosfera de hidrogénio durante 16 h. A mistura é filtrada através de Celite e o filtrado é concentrado para originar um sólido amarelo (60 mg, 100%). ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,66 (s, 1H) , 8,43 (s, 1H) , 7,28-7,26 (m, 2H) , 7,19-7,15 (m, 3H) , 4, 67-4, 64 (m, 2H) , 4,27 (s, 2), 3,81 (s, 3H) , 3,43-3,39 (m, 1H), 3,26-3,17 (m, 2H), 2,27 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 1,92-1,86 (m, 4H). HR MS (m/z, MH+) med. 418,2247, calc. 418,2243.
Exemplo 42: 2-{5-[4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)- piperidin-l-il]-pirazin-2-il}-propan-2-ol e
99 ΡΕ2318389
Exemplo 43: 3-Benzil-6-{1-[5-(1-metoxi-l-metil-etil)-pira-zin-2-il]-piperidin-4-il} - 4,5-dimetil-piridazina
A uma solução de 5-(4-(6-benzil-4,5-dimetilpiri-dazin-3-il)-piperidin-l-il)-pirazino-2-carboxilato de meti-lo (30 mg, 0,07 mmol) em 2 mL de THF anidro é adicionado CHsMgBr 3 M (287 μ]0, 0,862 mmol) a -78 °C, sob atmosfera de azoto. A mistura reacional é agitada a -78 °C durante lhe agitada a 0 °C durante 1 h adicional. A mistura é extinta com cloreto de amónio aquoso saturado à temperatura de -78 °C e a mistura é dividida entre DCM e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica é seca sobre Na2SC>4 e concentrada para originar um óleo castanho. A mistura é purificada por HPLC preparativa, eluindo com acetonitrilo:água 10% - 100% (ambas as fases móveis modificadas por n-PrOH a 3%) . Ambos os exemplos 42 e 43 são recolhidos como sólido branco.
Exemplo 42 (8 mg, 27%): ΧΗ RMN (400 MHz, DMS0-d6) δ = 8,33 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,28-7,24 (m, 2H) , 7, 19- 7, 15 (m, 3H), 5,08 (s, 3H) , 5,08 ! (s, 1H), 4,45-4, 41 (m, 2H) , 4,27 (s, 2H), 3,34- -3,24 (m, 2H), 2,27 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H), 1,92- 1,83 (m, 4 H), 1,42 (s, 6H). HR MS (m/z, MH+) med. 418,2625, calc. 418,2607. 100 ΡΕ2318389
Exemplo 43 (6 mg, 20%) : XH RMN (400 MHz, DMSO-de) δ = 8,30 (s, 1H), 8 ,20 (s, 1H) , 7,28-7,25 (m, 2H ), 7,19- 7, 15 (m, 3H) , 4,49- 4, 45 (m, 2H ), 4,27 (s, 2 H) , 3 ,34-3,26 (m, 1H) , 3,09-3,03 (m, 2H) , 3, 05 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2, 14 (s, 3H), 1,91 - 1,84 (m, 4H) , 1,45 (s, 6H). HR MS {m/z, 2M + H+) med. 863,5453, calc. 863,5448.
Exemplo 44 :: 3-Benzil-6-(1-[5-(trifluorometil)piridin-2- il]-piperidin-4-il-4,5-dimetil-piridazina F f N y_y/ \n f
A uma solução de 3-benzil-4,5-dimetil-6-(1-(5-(trifluorometil)piridin-2-il)-1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il) piridazina (20 mg, 0, 047 mmol) em 8 mL de EtOH é adicionado Pd-C a 10% (25 mg, 19 mmol). A mistura reacional é agitada sob atmosfera de hidrogénio durante 16 h. A mistura é filtrada através de Celite e o filtrado é concentrado para originar um sólido creme. A mistura é purificada por HPLC preparativa, eluindo com acetonitri-lorágua 10%-100% (ambas as fases móveis modificadas com n-PrOH a 3%) . As frações contendo o produto desejado são combinadas e liofilizadas para originar um sólido branco (8 mg, 40%). MS (m/z, MH+) med. 427,4, calc. 427,48.
Arilacil-, arilhidroximetil- e arilmetil-piridazinas as dicloro-
Como ilustrado no Esquema 4, 101 ΡΕ2318389 piridazinas II podem ser feitas reagir com acetonitrilo substituído com arilo após desprotonação e subsequente oxidação (e.g., com ar) para originar os compostos arilacilo VIII. A substituição nucleófila do cloro com aminas providencia os exemplos Id que podem ser adicionalmente reduzidos com e.g. NaBH4 para originar os exemplos Ie (Via A) . A reação dos intermediários VIII com piperazinas providencia os compostos IX, que após a redução de Wolf-Kishner originam os intermediários X que após uma reação de substituição nucleófila fornecem os exemplos If (via B) . As transformações de grupos funcionais adicionais em R" podem providenciar exemplos adicionais. Os exemplos Id e Ie podem também ser transformados em exemplos com um ligante -CF2- e -CHF- entre Ar e uma unidade piridazina por permuta de oxigénio-flúor.
As i fttíti.Vs, ESQUEMA. 4 102 ΡΕ2318389 Síntese de intermediários: Éster metílico do ácido (R)-2-metil-4-boc-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil-5'-carboxílico (composto 8)
Vn N-boc
A (R)-1-Boc-metilpiperazina (1 g, 5,0 mmol) em DMF (20mL) é adicionado éster metílico de ácido 5-cloro-pirazino-2-carboxílico (862 mg, 5,0 mmol) e Na2CC>3 (2,1 g, 20,0 mmol). A mistura reacional é agitada num reator de micro-ondas a 140 °C durante 3 h. Seguidamente, a mistura é arrefecida até à temperatura ambiente e o solvente orgânico é removido in vacuo para originar um sólido de cor castanha como o produto (1,7 g, quant.). MS (m/z, MH+) med. 33 7. Éster metílico do ácido (R)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil-5'-carboxílico (composto 9) r\ ó"'a
A uma solução de éster metílico do ácido (R)-2-metil-4-boc-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil-5'-carboxílico (2 g, 5,94 mmol) em MeOH (17 mL) é adicionado HC1 (4 M em dioxano, 4,5 mL, 18 mmol). A mistura reacional é agitada a 70 °C durante 1 h. A solução reacional é 103 ΡΕ2318389 concentrada, dissolvida em DCM e a fase orgânica é lavada com Na2CC>3 para ajustar o valor do pH a 8,0. Os solventes são removidos sob pressão reduzida para originar um óleo castanho (1,2 g, 77%). ΧΗ RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,81 (s, 1H) , 8,11 (s, 1H) , 4,58 (m, 1H), 4,22 (d, J = 13 HZ, 1H) , 3,96 (s, 3H), 3,21 (m, 2H), 3,17 (m, 1H), 3,07 (m, 1H), 2,18 (m, 1H), 1,35 (d, J = 6,5 Hz, 3H). MS (m/z, MH+) med. 237. 2-((R)-2-Meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il)-propan-2-ol (composto 10)
A uma solução de éster metilico do ácido (R)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil-5'-carbo-xilico (60 mg, 0,24 mmol) em THF (3 mL) a -78 °C é adicionado MeMgBr (solução 3 M em Et20, 640 μΗ, 1,9 mmol). A mistura reacional é agitada a 0 °C durante 2 h. A mistura reacional é extinta com solução aquosa saturada de NH4C1 (3 mL). É adicionada água adicional e a mistura é extraída com EtOAc; a fase orgânica é lavada com NaHCCb. A purificação por HPLC do produto bruto com acetonitrilo em água (desde 5% até 80%, com 1-propanol a 3%) a uma deteção de comprimento de onda de 220 nm providencia o produto desejado na forma de óleo de cor amarela (20 mg, 35%). ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,30 (s, 1H) , 8,10 (s, 1H) , 104 ΡΕ2318389
5, 06 (s, 1H) , 4,40 (m, 1H) , 3,91 (m, 1H) , 3, 98 (m, 2, 85 (m, 2H) , 2,65 (m, 1H), 1, 40 (s, 6H), 1, 13 (d, J Hz , 3H) . MS (m/z, MH+) med. 237. (6 -Cloro- -4,5- dimet il-pi: ridazin — 3 — i1)-fenil- metanona (composto 11) São dissolvidos 3,6-dicloro-4,5-dimetil-pirida-zina (1,00 g, 5,65 mmol) e fenilacetonitrilo (652 mL, 5,65 mmol) em tolueno (17,5 mL) , arrefecidos até 0 °C e carregados com NaHMDS (5,65 mL, 2M em THF, 11,3 mmol). A mistura reacional é agitada durante 16 h, aquecendo lentamente desde 0 °C até à temperatura ambiente. A mistura é agitada vigorosamente aberta ao ar durante 24 h adicionais. A mistura é extinta pela adição de uma solução aquosa de NaHCCb, as fases são separadas e a fase aquosa é extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas são concentradas para originar o composto intitulado como um sólido castanho (1,4 g, quant.) . ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ = 7,82 (m, 2H) , 7,55 (m, 1H) , 7,40 (m, 2H), 2,39 (s, 3H), 2,28 (s, 3H). MS {m/z, MH+) med. 247, 4. (6-Cloro-4 ,5-dimetil-piridazin-3-il)-piridin-4-il-metanona (composto 12) 105 ΡΕ2318389
Cl
De acordo com o protocolo descrito abaixo, 3,6-dicloro-4,5-dimetil-piridazina (1,00 g, 5,65 mmol) e cloridrato de 4-piridilacetonitrilo (1,05 g, 6,79 mmol) originaram o composto intitulado como um sólido branco (822 mg, 59%). (6-Cloro-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piridin-3-il-metanona
É adicionada 3,6-dicloro-4,5-dimetil-piridazina (1,00 g, 5,65 mmol) a um balão fundo redondo de 250 mL seco no forno sob N2, seguida por THF (50 mL) e piridin-3-il-acetonitrilo (800 mg, 7,68 mmol). A mistura reacional é desgaseif içada com um fluxo de N2 durante 30 min. É adicionado NaHMDS (14,13 mL, 1,0 M, 14,13 mmol) e a reação é agitada durante 16 h. A mistura reacional é seguidamente transferida para um copo e agitada vigorosamente sob atmosfera aberta durante várias horas. A reação é extinta com bicarbonato de sódio saturado, e os orgânicos são extraídos com diclorometano. As fases orgânicas combinadas são lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2SC>4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O material bruto é purificado por meio de 106 ΡΕ2318389 cromatografia flash em sílica gel (0-20% de metanol em CH2CI2) para originar o composto intitulado (1,3 g, 93%). 2H RMN (400 MHz, DMSO-de) δ = 8,97 (s, 1H) , 8,80 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,25 (d, J= 8,0 Hz, 1H) , 7, 60-7, 64 (m, 1H) , 2,44 (s, 3H), 2,33 (s, 3H). (6-Cloro-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piridin-2-il-metanona (composto 14)
Cl·
E adicionada 3,6-dicloro-4,5-dimetil-piridazina (1,00 g, 5,65 mmol) a um balão fundo redondo de 250 mL seco sob N2, seguida por THF (50 mL) e piridin-3-il-acetonitrilo (800 mg, 7,68 mmol) . A reação é desgaseifiçada durante 30 min. É adicionado NaHMDS (1,0 M, 14,13 mL, 14,13 mmol) e a reação é agitada durante a noite. A mistura reacional é transferida para um copo e agitada ao ar durante várias horas. A mistura reacional é extinta com bicarbonato de sódio saturado. Os orgânicos são extraídos com dicloro-metano. As fases orgânicas combinadas são lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O material bruto é purificado por meio de cromatografia flash em sílica gel (0-20% de metanol em CH2CI2) para originar o composto intitulado (616 mg, 44%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d = 8,68 (m, 1H) , 8,26 (m, 1H) , 8,16 (m, 1H), 7,76 (m, 1H), 2,45 (s, 3H); 2,21 (s, 3H). 107 ΡΕ2318389 [4,5-Dimetil-6-((R)-3-metil-piperazin-l-il)-piridazin-3-il]-piridin-4-il-metanona (composto 15)
/—\ N~N!^ O
De acordo com o protocolo descrito abaixo, (6-cloro-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piridin-4-il-metanona (750 mg, 3,03 mmol) e (R)-2-metil-piperazina (364 mg, 3,63 mmol) originaram o composto intitulado na forma de um sólido bege (778 mg, 83%).
[4,5-Dimetil-6-((R)-3-metil-piperazin-l-il)-piridazin-3-il]-piridin-3-il-metanona (composto 16)
(6-Cloro-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piridin-3- il-metanona (1,2 g, 4,84 mmol) e (R)-2-metil-piperazina (485 mg, 4,84 mmol) são adicionados a um frasco de micro-ondas seguido por NMP (17 mL) e trietilamina (2,01 mL, 14,49 mmol). O frasco é selado e irradiado no micro-ondas a 170 °C durante 30 min. O material bruto é purificado diretamente por meio de cromatografia flash em sílica gel (0-20% de metanol em CH2CI2) . O óleo resultante foi co-evaporado com CH2C12 e heptano para se obter o composto intitulado como um pó (1350 mg, 90%). ΤΗ RMN (400 MHz, DMS0-d6) δ = 9,56 (s largo, 1H), 8,96 (s, 108 ΡΕ2318389 1Η), 8,84-8,86 (m, 1H), 8,21-8,24 (m, 1H), 7,60- 7,63 (m 1H), 3,72 (s, 1H), 3,69 (s, 1H), 3,45-3,50 (m, 1H), 3,26-3,31 (m, 4H), 2,30 (s, 6H), 1,32 (d, J= 6,5 Hz, 3H).
[4,5-Dimetil-6-((R)-3-metil-piperazin-l-il)-piridazin-3-il]-piridin-2-il-metanona (composto 17)
/—>s N-N O
(6-Cloro-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piridin-2- il-metanona (550 mg, 2,22 mmol), (R)-2-metil-piperazina (320 mg, 3,20 inmol) são adicionados a um frasco de micro-ondas seguido por NMP (6 mL) e trietilamina (0,92 mL, 6,66 mmol) . O frasco é selado e irradiado no micro-ondas a 180 °C durante 1 h. O material bruto é purificado diretamente por meio de cromatografia flash em sílica gel (20-70% de metanol em CH2CI2) para originar o composto intitulado (671 mg, 97%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9,57 (s largo, 1H) , 8,66 (d, J= 5,0 Hz, 1H), 8,10-8,17 (m, 2H) , 7,69-7, 73 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,62 (m, 1H) , 3,45-3,50 (m, 1H) , 3,12-3,33 (m, 4H), 2,29 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 1,32 (d, J= 6,5 Hz, 3H) . 4,5-Dimetil-3-((R)-3-metil-piperazin-l-il)-6-piridin-4-il-metil-piridazina (composto 18)
109 ΡΕ2318389
De acordo com o protocolo descrito abaixo, 4,5-dimetil-6-((R)-3-metil-piperazin-l-il))-piridazin-3-il]-piridin-4-il-metanona (550 mg; 1,77 mmol), monohidrato de hidrazina (0,43 mL, 8,84 mmol), e grânulos de KOH (495 mg, 8,82 mmol) originaram o composto intitulado (372 mg, 71%). 4,5-Dimetil-3-((R)-3-metil-piperazin-l-il)-6-piridin-3-il-metil-piridazina (composto 19)
São adicionados 4,5-dimetil-6-((R)-3-metil-pipe-razin-l-il)-piridazin-3-il]-piridin-3-il-metanona (1,300 mg, 4,17 mmol), monohidrato de hidrazina (1045 mg, 20,88 mmol), grânulos de KOH (1171,4 mg, 20,88 mmol), e dietilenoglicol (26 mL) a um balão de fundo redondo e a reação é aquecida a 190 °C durante 4 h. A mistura reacional é deixada aquecer até à temperatura ambiente e colocada em água. Os orgânicos são extraídos com diclorometano. As fases orgânicas combinadas são lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O material bruto é purificado através de cromatografia flash em sílica gel (CH2Cl2/MeOH/NH4OH) 50/40/10) para originar o composto intitulado (1,17 g, 94%). ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,47 (s, 1H) , 8,41-8,42 (m, 110 ΡΕ2318389 1H) , 7,54-7,56 (m, 1H) , 7,29-7,32 (m, 1H) , 4, 25 (s, 2H) 4, 12 (s largo, 1H) , 3,17· -3,22 (m, 3H) , 2, 72- -2,94 (m, 4H) 2,17 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 0,99 (d, J= 6,0 Hz, 3H). Síntese dos exemplos 45 - 55.
Exemplo 45: Éster metílico do ácido (R)-4-(6-benzoil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxílico
Me02C
Ao éster metílico do ácido (.R)-2-metil-3, 4, 5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2]-bipirazinil-5'-carboxílico (100 mg, 0,403 mmol) em DMF (5 mL) é adicionada (6-cloro-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-fenil-metanona (100 mg, 0,402 mmol) e carbonato de sódio (170,7 mg, 1,61 mmol) e a mistura reacional é aquecida num reator de micro-ondas durante 4 h a 180 °C. Seguidamente a mistura reacional é diluída com DCM (25 mL) e lavada com NaHCCb e água. O solvente orgânico é extraído e removido sob pressão reduzida. O produto bruto é purificado por HPLC com acetonitrilo em água (de 20% até 100%, com 1-propanol a 3%) a uma deteção de 220 nm de comprimento de onda para recolher o produto desejado como um pó creme (58 mg, 32%). ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,65 (s, 1H) , 8,35 (s, 1H) , 7, 48-7,65 (m, 5H) , 4,39 (d, J= 13,1 Hz, 1H) , 3,54 (d, J = 111 ΡΕ2318389 12,6 Hz, 1H), 3,29 (m, 2H) , 3,17 (m, 3H) , 2,31 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H), 1,30 (s, 3H). HR MS (m/z, MH+) med. 446,5098, calc. 446,5104.
Exemplo 46: (6 —((R)-4-[4-(1-Hidroxi-l-metil-etil)-fenil]-3- metil-piperazin-l-il}-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-fenil-metanona O N—^
HQ A (6-cloro-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-fenil-me-tanona (50 mg, 0,20 mmol) em DMF (3 mL) foi adicionado 2-[4-(R)-2-metil-piperazino-l-il]-fenil]-propan-2-ol (47,4 mg, 0,20 mmol) e carbonato de sódio (86,2 mg, 0,81 mmol), a mistura reacional foi aquecida num reator de micro-ondas durante 4 h a 180 °C. Seguidamente a mistura reacional é diluída com DCM (15 mL) e lavada com NaHCCb e água. O solvente orgânico é extraído e removido sob pressão reduzida. A purificação por HPLC do produto bruto com ACN em água (de 20% até 100%, com 1-propanol a 3%), deteção por UV a 220 nm, providencia o produto desejado na forma de um pó creme (25 mg, 28%). XH RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,42 (s, 1H) , 8,23 (s, 1H) , 7,61-7,89 (m, 5H), 4,77 (m, 1H), 4,25 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 3,75 (d, J= 12,6 Hz, 1H), 3,65 (d, J= 12,6 Hz, 1H), 3,29 (m, 2H), 3,11 (m, 1H), 2,50 (s, 3H), 2,32 (s, 3H) , 1,47 (s, 6H), 1,35 (d, J= 6,6 Hz, 3H). HR MS (m/z, MH+) med. 444, 2256, calc. 444, 2651. 112 ΡΕ2318389
Exemplo 47: Éster metílico do ácido (R)-4[6-(hidroxi-fenil-metil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il]-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2]bipirazinil-5'-carboxílico
/r~N, y—v N~N pH MeO^C—p 3·— N
Ao éster metílico do ácido (R)-4-(6-benzoil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxílico (8 mg, 0,017 mmol) em MeOH (2 mL) é adicionado borohidreto de sódio (170 μρ, 0,004 mmol) em 15 minutos e a mistura reacional é agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura reacional é diluída com DCM e lavada com NaHCCg e água. O solvente orgânico é separado e o solvente é removido sob pressão reduzida. A purificação por HPLC do produto bruto com acetonitrilo em água (de 10% até 100%, com 1-propanol a 3% de) ao comprimento de onda de deteção de 220 nm providencia o produto desejado como um pó creme (6 mg, 79%). ΤΗ RMN (40 0 MHz, DMSO-d6: ) δ = 8, 77 (s, 1H) , 8, 47 (s, 1H) 7,29-7,38 (m, 5H) , 6,15 (s, 1H) , 4, 92 (m, 1H) , 4, 50 (m 1H), 3,89 (s, 3H), 3,49- -3,61 (m, 3H) , 3,17-3,02 (m, 2H) 2,30 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 1,43 (d, J= 6,6 Hz, 3H). MS (m/z, MH+) med. 449.
Exemplo 48: 2-{(R)-4-[6-(Hidroxil-fenil-metil-4,5-dimetil- piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2] bipirazinil-5'— i1]-propan-2-ol
113 ΡΕ2318389
Ao éster metílico do ácido (R)-4[6-(hidroxi-fe-nil-metil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il]-2-metil-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2]-bipirazinil-5'-carboxílico (15 mg, 0,032 mmol) em THF (2 mL) é adicionado brometo de met ilmagnésio (32 μΐϋ, 0,095 mmol) a -78 °C e a mistura reacional é agitada a 0 °C durante 2 h. A mistura reacional é diluída com DCM e lavada com NH4C1 e água. O solvente orgânico é separado, extraído e concentrado sob pressão reduzida. A purificação por HPLC do produto bruto com acetonitrilo em água (de 10% até 100%, com 1-propanol a 3%) a um comprimento de onda de deteção de 220 nm providencia o produto desejado como um pó creme (11 mg, 77%). ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,27 (s, 1H) , 8,07 (s, 1H) , 7,29- -7,34 (m, 5H) , 5, 88 (s, 1H), 4,67 (m , 1H) , 4, 19 (m, 1H) , 3,61 (m, 1H), 3 , 52- 3,31 (m, 3H), 3, 19 (tt, J = 3,5 Hz, 12, 7 Hz, 1H) , 2,29 (s, 3H) , 2,05 (s, 3H) , 1,57 (s, 6H), 1, 40 (d, J = 6 ,6 Hz, 3H) e HR MS (jjj/z, MH+) med. 449,2649, calc. 444, 2665.
Exemplo 49: Éster metílico do ácido (R)-4-(4,5-dimetil-6-piridin-4-il-metil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxílico
"vo-
De acordo com o protocolo descrito abaixo, para o exemplo 46, 4,5-dimetil-3-((R)-3-metil-piperazin-l-il)-6- 114 ΡΕ2318389 piridin-4-il-metil-piridazina (155 mg, 0,51 mmol ) e éster metílico do ácido 5-cloro-pirazino-2-carboxílico (99 mg, 0,56 mmol) originaram o composto intitulado como um óleo alaranjado (123 mg, 56%).
Exemplo 50: 2-[(-R)-(4,5-Dimetil-6-piridin-4-ilmetil-pirida-zin-3-il)-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazi- nil-5'-il]-propan-2-ol
De acordo com o protocolo descrito abaixo, o éster metílico do ácido (R)-4-(4,5-dimetil-6-piridin-4-il-metil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']-bipirazinil-5'-carboxílico (110 mg, 0,25 mmol) e MeMgl (0,660 mL, 1,98 mmol) originaram o composto intitulado como um pó amarelo (40 mg, 37%). λΕ RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,47 (d, J = 5,5 Hz, 2H) , 8,36 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,21 (d, J= 5,5 Hz, 2H), 5,15 (s, 1H) , 4,68 (s largo, 1H) , 4,29 (s, 2H) , 4,17 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 3,21-3,59 (m, 3H), 3,07 (dd, J= 12,5 Hz, 3,5 Hz, 1H), 2,89-3,00 (m, 1H) , 2,28 (s, 3H) , 2,13 (s, 3H) , 1,42 (s, 6H), 1,28 (d, J= 6,5 Hz, 3H). HR MS (m/z, MH+) med. 434,2650, calc. 434,2668.
Exemplo 51: Éster metílico do ácido (R)-4-(4,5-dimetil-6-piridin-3-ilmetil-piridazin-3-il)-2-metil-3, 4, 5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxílico 115 ΡΕ2318389
São adicionados 4, 5-dimetil-3-((R)-3-metil-pipe-razin-l-il)-6-piridin-3-ilmetil-piridazina (350 mg, 1,18 mmol) e éster metilico do ácido 5-cloro-pirazino-2-carboxílico (243,7 mg, 1,41 mmol) a um frasco de micro-ondas seguido por NMP (7 mL) e trietilamina (0,49 mL, 3,54 mmol) . O frasco é selado e irradiado no micro-ondas a 145 °C durante 30 min. O material bruto é diretamente purificado através de cromatografia flash em silica gel (0-20% de metanol em CH2C12) para originar o composto int i tulado (30 mg, 6%) . ΧΗ RMN (400 MH z, DMSO-de) δ = 8, 71 (s, 1H) , 8,52 (d, J = 6 Hz, 1H) , 8, . 48 (s, 1H) , 8,42 (s, 1H) , 7,57 (d, J = 8 Hz, 1H) , 7, 30-7 ,33 (m, 1H) , 4, 85 (m, IH) , 4, 45 (d, J = 12 Hz, 1H) , 4, 29 ( s, 2H) , 3, 79 (s, 3H) , 3,41 -3,55 (m, 3H) , 3,08 (m, 1H) , 2, r 93- -2,99 (m, 1H) , 2,28 (s, 3H) , 2,17 (s , 3H) , 1,36 (d , J = 7 Hz, 3H) . Exemplo 52: 2- [ (R)~ -4-(4, 5-Dimetil- 6-pir idin- 3-ilmet il -piri- dazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazi-nil-5'-il]-propan-2-ol
É adicionado éster metilico do ácido (R)-4-(4,5- 116 ΡΕ2318389 dimetil-6-piridin-3-ilmetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6 -tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil-5'-carboxílico (25 mg, 0,058 mmol) a um balão de fundo redondo seco num forno, sob N2, seguido de THF (0,6 mL) . A reação é seguidamente colocada num banho de gelo seco durante 15 min. É adicionado MeMgl (0,15 mL, 3,0 M, 0,461 mmol) gota a gota e a reação é agitada a -78 °C durante 30 min. A reação é aquecida até 0 °C e agitada 30 minutos ou até que a conversão completa é observada. A mistura reacional é extinta com solução saturada de cloreto de amónio. Os orgânicos são extraídos com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas são secas sobre Na2S04, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O material bruto é purificado através de cromatografia flash em sílica gel (2% CH2CI2, 98% (50/30/20 acetato de etilo/heptano/MeOH) para originar o composto intitulado (3,5 mg, 14%). 1R RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,49 (s, 1H) , 8,42 (d, J = 6, 7 Hz, 1H), £ 5,36 (s, 1H) , 8, 21 (s , 1H) , 7,57 (d , J II > Hz, 1H) , 7,32 (m, 1H) , 5, 13 (s , 1H), 4 :, 67 (s largo, 1H) , 4, 29 (s , 2H), 4,17 (d, J = 12 ,5 Hz, 1H) , 3,51 (d, J = 12,5 Hz, 1H) , 3,34- -3,42 (m, 2H) t 3, 07 (dd, J = 12,1 Hz, 1H) , 2,93 -2, 97 (dt, J = 3,4 Hz, 12, 5 Hz, 1H) , 2,28 (s, 3H) , 2,17 (s, 3H), 1,43 (s, 6H), 1,28 (d, J= 6,5 Hz, 3H). HR MS (m/z, MH+) med. 434,2663, calc. 434,2668.
Exemplo 53: Éster metílico do ácido (R)-4-(4,5-dimetil-6-piridin-2-ilmetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-5'-carboxílico 117 ΡΕ2318389
Passo 1: Preparação de 2,4-dimetil-3-piridin-2-ilmetil-pen-tan-3-ol (composto 20)
2-Metil-piridina (1,86 g, 20 mmol) é dissolvida em THF (20 mL) e arrefecida até -30 °C. É adicionado terc-butil-lítio (11,8 mL, 1,7 M em pentano, 20 mmol) gota a gota à solução, e a reação é agitada durante 30 minutos à temperatura de -30 °C. É adicionada 2,4-dimetil-pentan-3- ona (3,4 mL, 24 mmol) e a reação é aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 2 h. Adicionar H2O (30 mL) e extrair com EtOAc. Lavar as fases orgânicas combinadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e concentrar in vacuo. O resíduo é purificado por cromatogra-fia flash em sílica gel (EtOAc/Heptano) para originar 2,4-dimetil-3-piridin-2-ilmetil-pentan-3-ol (4,14 g, quant.).
Passo 2: Éster metílico do ácido (R)-4-(4,5-dimetil-6-piridin-2-ilmetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil-5'-carboxílico (exemplo 53) O éster metílico do ácido (R)-4-(6-cloro-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H[1,2']- bipirazinil-5'-carboxílico (250 mg, 0,663 mmol) é 118 ΡΕ2318389 combinado com 2,4-dimetil-3-piridin-2-ilmetil-pentan-3-ol (114,6 mg, 0,553 mmol), carbonato de césio (216,2 mg, 0,664 mmol), triflato de paládio (6,2 mg, 0,028 mmol), triciclo-hexil fosfina (15,5 mg, 0,055), e tolueno (2 mL). A mistura reacional é aquecida até 110 °C durante 65 horas para alcançar uma conversão de 10%. Adicionar H20 e extrair com EtOAc. Concentrar as fases orgânicas combinadas in vacuo. O resíduo é purificado por cromatografia flash em sílica gel (MeOH/ CH2CI2) para originar o composto intitulado (13 mg, 5,4%) . 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,71 (d, J = 1,3 Hz, 1H) , dazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazi-nil]-propan-2-ol
co 1 co 43 (m, 1H), 8, 41 (d, J = 1 ,3 Hz, 1H) , 7, 71 (td, J = 7,7 Hz, 1, 8 Hz , 1H), 7,27-7, 18 (m, 2H), 4,86 (s largo, 1H) , 4,41 (s , 2H) , 4,48-4 ,38 (m, , 1H) , 3 ,83 (s, 3H) r 3,59- 3,38 (m, 3H) , 3 , 08 (dd, J = 12,6 Hz , 3 , 7 Hz, 1H) , 2, 95 (td, J = 12,2 Hz , 3 ,2 Hz, 1H), 2,28 (s, 3H ) , 2,16 (s , 3H ), 1,36 (d, J = 6,6 Hz , 3 H) . HR MS (] m/ z , MH + ) med. 434.2236, ca lc . 434,23 04. Exemplo 54 : 2- [(R)-4- (4,5-Dimetil- 6- piridin- 2-ilmetil-p 'ir i- O exemplo 54 é preparado a partir do exemplo 53 por adição de MeMgl como descrito para o exemplo 52. HR MS (m/z, MH+) med. 434,2666, cale. 434,2668. 119 ΡΕ2318389
Exemplo 55: 2-{(R)-4-[6-(Difluoro-fenil-metil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il]-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi-razinil-5'-il}-propan-2-ol
Passo 1: 3-Cloro-4,5-dimetil-6-(2-fenil-[1,3]ditiolan-2- il)-piridazina (composto 21)
Cl
A uma solução de DCM (6-cloro-4,5-dimetil-piri dazin-3-il)-fenil-metanona (300 mg, 1,22 mmol) é adicionado 1.2- etanditiol (0, 408 mL, 4,86 mmol) e BF3'OEt2 (0,154 mL, 1,216 mmol) a 0 °C sob atmosfera de azoto. A mistura reacional é agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A reação foi carregada com BF3-OEt2 (0,154 mL, 1,216 mmol) e 1.2- etanditiol (0,408 mL, 4,86 mmol), e aquecida até 40 °C durante 6 h. A reação é extinta com NaHCCg sat. a 0 °C e a fase orgânica é lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica é seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada para originar um sólido amarelo. O resíduo foi carregado em sílica gel e purificado por cromatografia flash, eluindo com EtOAc: heptano 20-80%. As frações contendo o produto desejado são combinadas e concentradas para originar um sólido branco (280 mg, 73%) . 120 ΡΕ2318389 ΤΗ RMN (400 ΜΗζ, CDC13) δ = 7, 54-7, 53 (m, 2Η) , 7,28-7,22 (m, 3Η), 3,46-3,34 (m, 4H), 2,30 (s, 3H), 1,94 (s, 3H). MS (m/z, MH+) med. 323,0, calc. 322,88.
Passo 2: 3-Cloro-6-(difluoro-metil-fenil)-4,5-dimetil-piri-dazina (composto 22)
A uma solução de NBS (49,6 mg, 0,279 mmol) em DCM (1 mL)é adicionado DAST (0,147 mL, 1,115 mmol). A mistura reacional é arrefecida até 0 °C antes é adicionada 3-cloro-4,5-dimetil-6-(2-fenil-[l,3]ditiolan-2-il)-piridazina (90 mg, 0,279 mmol). A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 3 h. São adicionados 2 eq. adicionais de DAST (73,7 μΐϋ, 0,558 mmol) e a mistura agitada durante mais 2 h. A mistura reacional é extinta com NaHC03 aq. a 0 °C. A fase aquosa é lavada com DCM e as fases orgânicas combinadas são secas sobre Na2S04 e concentradas para originar a mistura bruta. O resíduo é carregado em sílica gel e purificado por cromatografia flash, eluindo com EtOAc:heptano 15-45%. As frações contendo o produto desejado são combinadas e concentradas para originar um óleo amarelo (15 mg, 20%). XH RMN (400 ΜΗζ, CDC13) δ = 7,54-7,52 (m, 2H) , 7,47-7,43 (m, 3H), 2,42-2,41 (m, 6H). 19F RMN (400 ΜΗζ, CDC13) δ = -89,9. MS (m/z, MH+) med. 269,2, calc. 269, 06. 121 ΡΕ2318389
Passo 3: 2-1{(R)-4-[6-(Difluoro-fenil-metil) - 4,5-dimetil- piridazin-3-il]-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi-razinil-5'-il}-propan-2-ol (exemplo 55) 0 exemplo 55 é preparado a partir dos compostos 10 e 22 como descrito para o exemplo 46.
Piperidin-l-il-piridazinas
Como ilustrado no Esquema 5, as piperidin-l-il-piridazinas podem ser preparadas por uma multiplicidade de vias. De acordo com a via A as piperidinas funcionalizadas podem reagir com os intermediários V para originar os exemplos Ig. Os exemplos Ih e li podem ser preparados através da via B. A reação de V com um éster 4-piperidinil-carboxilico providencia após hidrólise do éster os intermediários Xla que podem reagir quer para originar os exemplos de imidazol substituído Ih ou podem ser condensados com orto-dianilinas nos exemplos li. A via C providencia os exemplos Ij, fazendo reagir os intermediários V, com 4-cianopiperidina e subsequente reação catalisada por Pd de Xlb com R"-Br. Os exemplos de imidazol substituído adicionais Ik podem ser preparados a partir dos intermediários XIc (por reação de condensação na presença de amoníaco e de um precursor de ceto-aldeído) , que estão disponíveis por reação de 4-hidroximetil-piperidinas com V e oxidação subsequente da funcionalidade álcool (Via D) . A via E providencia cetonas Xld que podem atuar como electrófilos para reagentes organometálicos, tais como R"-Li para providenciar os exemplos de álcool terciário II. A 122 ΡΕ2318389 transformação do grupo hidroxilo com reagentes de fluoração, e.g. deoxoflúor origina os exemplos adicionais ln. As cetonas Xld podem ser usadas em reações de aminação redutiva com aminas, e.g. NaBH(0Ac)3 como agente de redução para originar os exemplos lo.
ESQUEMA 5 Síntese do exemplo 56 por Via A:
Exemplo 56: 2-[ 1-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-pi- peridin-4-il]-2,3-di-hidro-lH-isoindole
123 ΡΕ2318389
Passo 1: 8-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-1,4-dioxa-8-aza-espiro[4.5]decano (compostos 23)
0 composto 23 é preparado a partir de 3-benzil-6-cloro-4,5-dimetilpiridazina e 1,4-dioxa-8-aza-espiro[4.5] decano seguindo um procedimento semelhante ao que foi descrito para o composto 3. 1H-RMN (400 MHz, CDC13) δ = 1,89 (4H, m), 2,08 (3H, s 2,17 (3H, s), 3,33 (4H, m) , 4, 00 (4H, s), 4,29 (2H, s 7,22 (5H, m) . MS (m/z, MH+) med. 340,4.
Passo 2: 1-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperidina -4-ona (composto 24)
Ao composto 23 (917 mg, 2,46 mmol) em acetona (50 mL) é adicionado ácido clorídrico (1,2 N, 20 mL). A mistura 124 ΡΕ2318389 é agitada durante 46 h, seguidamente tratada com bicarbonato de sódio saturado até ficar ligeiramente básica, e extraída com acetato de etilo (3 x) . Os extratos orgânicos são lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos para originar um óleo que providencia 24 puro como um óleo espesso (565 mg; 78%), após purificação por cromatografia em sílica gel (40% acetato de etilo em heptano). 1H-RMN (400 MHz, CDC13) δ = 2,1 (3H, s), 2,2 (3H, s), 2,7 (4H, m), 3,6 (4H, m), 4,3 (2H, s), 7,3 (5H, m). HR MS (m/z, MH+) med. 296,1763.
Passo 3: 2-[l-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-pipe-ridin-4-il]-2,3-di-hidro-lH-isoindole (exemplo 56) A cetona 24 (43 mg, 0,15 mmol) em THF/CH2C12 anidro (1,5 mL/1,5 mL) é adicionada isoindolina (25 μΗ, 0,22 mmol) e ácido acético glacial (3 μΜ e borohidreto de triacetoxil de sódio (98 mg, 0,44 mmol). A mistura é agitada durante 2 h, extinta com bicarbonato de sódio saturado, e extraída com CH2C12. A fase orgânica é seca, sujeita a evaporador rotativo, e foi sujeita a purificação por HPLC (aetonitrilo-água-TFA a 0,1%) para originar o composto intitulado como um sal de TFA (67 mg; 89%). ^-RMN (400 MHz, CDC13) δ = 2,2 (4H, m) , 2,3 (3H, s), 2,4 (3H, s), 3,2 (2H, m), 3,6 (1H, m), 3,8 (2H, m), 4,5 (4H, s largo), 5,1 (2H, s largo), 7,3 (9H, m). HR MS {m/z, MH+) med. 399,2547. 125 ΡΕ2318389 Síntese dos exemplos 57-59 por Via B:
Exemplo 57: 3-Benzil-6-[4-(5-cloro-lH-imidazol-2-il)-pipe-ridin-l-il]-4,5-dimetil-piridazina
Passo 1: 1-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperidi- no-4-carboxílico (composto 25) A uma solução de 3-benzil-6-cloro-4,5-dimetil-piridazina (1,0 g, 4,31 mmol) em NMP (10 mL) é adicionado éster metílico do ácido piperidino-4-carboxílico (2,0 g, 12,9 mmol) e DIPEA (3,7 mL, 21,6 mmol). A mistura é aquecida num micro-ondas a 210 °C durante 1,5 h. A mistura é concentrada a 80 °C por evaporação em evaporador rotativo. O produto bruto é purificado por HPLC (CH3CN/H2O: 22%- 45%, com TFA a 0,1%) para originar o éster etílico do ácido 1-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperidino-4-carboxílico (0,94 g, 61%). 1H-RMN (400 MHz, CDC13) δ = 1,28 (3H, t) , 1,90 (2H, q) 2,07 (2H, d), 2,23 (3H, s), 2,33 (3H, s) , 2,54 (1H, m) 3,03 (2H, t), 3,57 (2H, d), 4,17 (2H, q), 4,50 (2H, s) 7,19 (2H, d), 7,24 (1H, d), 7,29 (2H, t). HR MS (m/z, MH+) med. 354,2179.
Passo 2: Ácido 1-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperidino-4-carboxílico (composto 26) 126 ΡΕ2318389 A uma solução de ácido 1-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperidino-4-carboxílico (0,88 g, 2,5 mmol) em EtOH (8 mL) , é adicionada uma solução de hidróxido de sódio (0,8 g, 20,1 mmol) em H20 (8 mL) . Depois de ser agitada a 25 °C durante 2 h, a mistura é concentrada, e extraída com CH2CI2 (2 x 10 mL) para remover impurezas. A fase aquosa é acidificada com HC1 IN até pH ~ 5, e extraída com CH2C12 (6 x 20 mL). A solução orgânica combinada é seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada para originar o ácido 1-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperidino-4- carboxílico (0,68 g, 83%). 1H-RMN (400 MHz, CDCI3) δ = 1,92 (2H, q), 2,08 (2H, d) , 2,25 (3H, s), 2,35 (3H, s) , 2,64 (1H, m) , 3,11 (2H, t) , 3,60 (2H, d), 4,49 (2H, S) , 7,20 (2H, d) , 7, 26 (1H, t) , 7,31 (2H, t) . HR MS (m/z, MH+) med. 326 , 1870 .
Passo 3: Cianometil-amida do ácido 1-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperidino-4-carboxílico (composto 27) A uma solução de ácido 1-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperidino-4-carboxílico (350 mg, 1,08 mmol) em DMF (10 mL) é adicionada DIPEA (0,94 mL, 5,4 mmol) e HATU (490 mg, 1,29 mmol). Após ser agitada a 25 °C, é adicionado cloridrato de aminoacetonitrilo (119 mg, 1,29 mmol). A mistura é agitada durante 2 h, e diluída com EtOAc (20 mL) e lavada com H20 (3 x 10 mL) . A fase orgânica é seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada. O produto bruto 127 ΡΕ2318389 é purificado por cromatografia (CH2Cl2/MeOH: 97%/ 3%) para originar a cianometilamida do ácido 1-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperidino-4-carboxílico (280 mg, 72%) . 1H-RMN (400 MHz, CDC13) δ = 1,97 (4H, m) , 2,25 (3H, s), 2,36 (3H, s), 2,58 (1H, m) , 3,07 (2H, t), 3,67 (2H, d), 4,12 (2H, d), 4,44 (2H, s), 7,14 (2H, d), 7,31 (3H, m). MS (m/z, MH+) med. 36 4,3.
Passo 4: 3-Benzil-6-[4-(5-cloro-lH-imidazol-2-il)-piperidin -1-il]-4,5-dimetil-piridazina (exemplo 57) A uma solução de cianometil-amida do ácido l-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperidino-4-carboxílico (20 mg, 0,055 mmol) e trifenilfosfina em acetonitrilo (1 mL) , a 25 °C, é adicionado tetracloreto de carbono (42 mg, 0,28 mmol). Após ser agitada a 50 °C durante 3 h, a mistura é concentrada e diluída com CH2CI2 (10 mL) e lavada com hidróxido de sódio (2 mL, 1 N) e H20 (2 mL) , seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada. O produto bruto é purificado por HPLC (CH3CN/H20: 22% ~ 45%, com TFA a 0,1%) para originar a 3-benzil-6-[4-(5-cloro-lH-imidazol-2-il)-piperidin-l-il]-4,5-dimetil-piridazina (11,8 mg, 56%). -RMN ' (400 MHz, MeOH-d4) d = = 2,09 (2H, m) , 2, ,20 (2H, d) 2, 35 (3H, s ), 2,50 (3H, s) , 3,20 (3H, m) , 3, 87 (2H, d) 4, 46 (2H, s ), 7,25 (2H, d) , 7,34 (1H, t) , 7, 35 (1H, s) 7,39 (2H, t). HR EM (m/z, MH+) calc. 382,1794. 128 ΡΕ2318389
Exemplo 58: 2-[1-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-pi- peridin-4-il]-lH-imidazo[ 4,5-b]piridina
A uma solução de ácido 1-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperidino-4-carboxílico (Composto 26, 50 mg; 0,15 mmol) e 2,3-diaminopiridina (33 mg, 0,30 mmol) em CH2CI2 (0,5 mL) é adicionado ácido polifosfórico (1 mL) . A mistura é concentrada para remover CH2CI2. Após ser agitada a 150 °C durante 1,5 h, a mistura é arrefecida até 25 °C, diluída com água (10 mL) , e basificada com uma solução aquosa a 10% de hidróxido de sódio até pH ~ 8. A solução aquosa é extraída com CH2CI2 (5 x 15 mL) . As fases orgânicas combinadas são concentradas e purificadas por HPLC (CH3CN/H2O: 22% ~ 45%, com TFA a 0,1%) para originar 2-[1-(6-benzi1-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperidino-4- il]-lH-imidazo[4,5-b] piridina (33, 8 mg, 55%) • 1H-RMN (400 MHz, MeOH -cU) δ = 2,28 (2H, qd) , 2, 36 (3H, s) , 2,38 (2H, dd), 2,53 (3H, s) , 3,29 (2H, t) , 3, 56 (1H, m) , 3,93 (2H, d), < 1, 48 ( 2H, s) , 7,25 (2H, d) , 7, 32 (1H, t) , 7,39 (2H, t), 7, 70 (1H, dd), 8 ,46 ( 1H, d) , 8, 62 (1H , d) • HR MS (m/z, MH+) med. 399, 2294 , Exemplo 59: 2- - [1-(6- -Ben; zil-4 ,5-dimetil- -pir i .da z in- 3-il ) -4- metil-piperidin-4-il]-lH-imidazo[4,5-c]piridina 129 ΡΕ2318389
Passo 1: Éster etílico do ácido 1-(6-benzil-4,5-dimetil-pi-ridazin-3-il)-4-metil-piperidino-4-carboxílico (composto 28) A uma solução de 3-benzil-6-cloro-4,5-dimetil-piridazina (1,0 g, 4,3 mmol) em NMP (10 mL) é adicionado o éster etílico do ácido 4-metil-piperidino-4-carboxílico (2,0 g, 8,6 mmol) e DIPEA (3,7 mL, 21,6 mmol). A mistura é aquecida num micro-ondas a 210 °C durante 1,5 h. A mistura é concentrada a 80 °C num evaporador rotativo. O produto bruto é purificado por HPLC (CH3CN/H2O: 22% ~ 45%, com TFA a 0,1%) para originar o éster etílico do ácido l-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-4-metil—piperidino-4- carboxílico (0,64 g, 41%). 1H-RMN (400 MHz, CDCI3) δ = 1,27 (3H, s) , 1,29 (3H, t) , 1,62 (2H, t ), 2,24 (3H, s), 2,27 (2H, d) , 2,34 (3H, s) , 3,13 (2H, t ), 3,47 (2H, d), 4,20 (2H, q), 4, 42 (2H, s) , 7, 11 (2H, d) , 7,28 (3H, m). HR MS (m/z, MH+) med. 368,2335.
Passo 2: Ácido 1-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-4-metil-piperidino-4-carboxílico (composto 29) A uma solução de do éster etílico do ácido l-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-4-metil-piperidino-4-carboxílico (0,60 g, 1,6 mmol) em EtOH (5 mL) é adicionado 130 ΡΕ2318389 hidróxido de sódio (0,5 g, 13,2 iranol) em H20 (5 mL) . Após ser agitada a 25 °C durante duas horas, a mistura é concentrada, e extraída com CH2CI2 (2 x 10 mL) para remover as impurezas. A fase aquosa é acidificada com HC1 1 N até pH~5, e extraída com CH2C12 (6 x 20 mL). A solução orgânica combinada é seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada para originar o ácido 1-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-4-metil-piperidino-4-carboxílico (0,49 g, 89% ). ^-RMN (400 MHz, CDCI3) δ = 1,33 (3H, s), 1,60 (2H, t 2,13 (3H, s), 2,23 (3H, s) , 2,31 (2H, d), 3,17 (2H, t 3,38 (2H, d), 4,42 (2H, s), 7,21 (2H, d), 7,27 (3H, t). HR MS (m/z, MH+) med. 340,2028.
Passo 3: 2-[1-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-4-metil -piperidin-4-il]-lH-imidazo[4,5-c]piridina (exemplo 59) A uma solução do ácido 1-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-4-metil-piperidino-4-carboxílico (50 mg, 0,15 mmol) e 2,3-diaminopiridina (32 mg, 0,29 mmol) em CH2CI2 (0,5 mL) é adicionado ácido polifosfórico (1 mL). A mistura é concentrada para remover o CH2C12. Após ser agitada a 150 °C durante 3,5 h, a mistura é arrefecida até 25 °C, diluída com água (3 mL) e basificada com uma solução aquosa de hidróxido de sódio a 10% até pH ~ 8. A fase aquosa é extraída com CH2C12 (3 x 10 mL) . As fases orgânicas combinadas são concentradas e purificadas por HPLC (CH3CN/H2O: 15% ~ 40% com TFA a 0,1%) para originar a 2-[1-(6-benzi1-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-4-metil-piperi-din-4-il]-lH-imidazo[4,5-c]piridina (21 mg, 27%). 131 ΡΕ2318389 -RMN (40 0 MHz, MeOH-d4) δ = 1,60 (3H, s) , 2,15 (2H, t) , 2, 34 (3H, s), 2,49 (3H, s) , 2,65 (2H, d) , 3,35 (2H, d) , 3, 65 (2H, d), 4,43 (2H, s), 7,22 (2H, d) , 7,31 (1H, t) , 7, 37 (2H, t), 8,12 (1H, d) , 8,56 (1H, d) , 9, 23 (1H, S) . HR MS (m/z, MH+) med. 413,2446. Síntese do exemplo 60 Via C:
Exemplo 60: 1'(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazion-3-il)-5-(1- hidroxi-l-metil-etil)-2',3',5',6'-tetra-hidro-l'H[2,4']-bipiridinil-4'-carbonitrilo
HO λ-“Ν —& %
Passo 1: 1-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperidino -4-carbonitrilo (composto 30)
O composto 30 é preparado a partir do composto 10 e piperidino-4-carbonitrilo seguindo um procedimento semelhante ao descrito para o composto 3. 1H-RMN (400 MHz, CDC13) δ = 2,0-2,2 (4H, m) , 2,1 (3H, s), 132 ΡΕ2318389 2,2 (3Η, s), 2,8 (1H, m) , 3,1 (2H, m) , 3,4 (2H, m) , 4,3 (2H, s), 7,2 (5H, m). HR MS (m/z, MH +) med. 307,1930.
Passo 2: 2-(6-Bromo-piridin-3-il)-propan-2-ol (composto 31)
Br A 2-bromo-5-iodo-piridina (2,974 g, 10,2 iranol) numa mistura de THF (15 mL) e éter (20 mL) a -78 °C é adicionado gota a gota n-butil-lítio (2,5 M em hexano, 4 L, 10,2 mmol) . A mistura é agitada a -78 °C durante 30 min, seguidamente é adicionada acetona (anidro, 0,749 μΗ, 10,2 mmol) gota a gota. A mistura é aguecida lentamente até -50 °C durante 1,5 h e é extinta com cloreto de amónio saturado, extraída com acetato de etilo. A fase orgânica é separada, seca e sujeita a evaporador rotativo. O resíduo é purificado por cromatografia em sílica gel (10-20% de acetato de etilo em heptano) para dar origem ao composto intitulado como um sólido branco (1,40 g, 64%). 1H-RMN (40 0 MHz, CDC13) δ = 1,60 (6H, s) , 1,96 (1H, s), 7, 45 (1H, d, J = 8 Hz), 7,70 (1H, dd, J = 4; 8 Hz), 8,47 (1H, s) . HR MS (m/z, MH+) med. 216,0034.
Passo 3: 1'-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazion-3-il)-5-(1- hidroxi-l-metil-etil)-2',3',5',6'-tetra-hidro-l'H[2,4']-bipiridinil-4'-carbonitrilo (Exemplo 60) 133 ΡΕ2318389 A uma mistura de composto 30 (122 mg, 0,398 mmol) e do composto 31 (103 mg, 0,478 mmol) em tolueno anidro (3 mL) é adicionado Pd2(dba)3 (18 mg, 0,020 mmol). A mistura é borbulhada com azoto durante 7 minutos, ao qual é adicionada tri-t-butilfosfina (1,0 M em tolueno, 40 μΗ, 0,040 mmol) e hexametildisilazida de litio (1,0 M em tolueno, 0,995 μι, 0,995 mmol). A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 15 min, seguidamente a 60 °C durante 3 h, e arrefecida até à temperatura ambiente. São adicionados adicionalmente Pd2(dba)3 (18 mg), tri-t-butilfosfina (40 μΙΟ e hexametildisilazida de litio (0,995 μΜ à mistura reacional. Após ter sido agitada durante 17 h, a mistura é extinta com cloreto de amónio saturado e extraída com acetato de etilo. A fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e seca, sujeita a evaporador rotativo e purificada através de HPLC preparativa (acetonitrilo-água-THF a 0,1%) para originar o composto intitulado na forma de um sal de TFA (24 mg, 11 %) · ^-RMN (40 0 MHz, CDC13) δ = 1,63 (6H, s ), 2,23 (2H, m) , 2,27 (3H, s), 2,41 (3H, s), 2,58 (2H, m ), 3,57 (2H, m) , 3,81 (2H, m), 4,52 (2H, s), 7 , 30 (5H, m), 7,68 (1H, d, J = 12 Hz), 7,96 (1H, m) >, 8,79 (1 H, s) . HR MS (m/z, MH+) med. 442,2600. Síntese de exemplo 61 através da via D: Síntese dos intermediários: (5'-Benzi1-3',4'-dimetil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2] bipiridinil-4-il)-metanol (composto 32) ΡΕ2318389 134 Ν«Ν
ΗΟν /"Λ λ™{ A uma solução de piperidin-4-il-metanol (125 mg, 1,03 mmol) em NMP (3 mL) é adicionado 3-benzil-6-cloro-4,5-dimetil-piridazina (60 mg, 0,258 mmol) e TEA. A mistura reacional é agitada a 210 °C num reator de micro-ondas durante 2 h. Seguidamente a mistura reacional é diluída com DCM (15 mL) e lavada com NaHCCL e água. O solvente orgânico é separado e removido sob pressão reduzida. A purificação por HPLC do produto bruto com acetonitrilo em água (de 20% até 100%, com 1-propanol a 3%) ao comprimento de onda de deteção de 220 nm providencia o produto desejado como pó creme (200 mg, 62%) . 0 MHz , DMSO-de) δ = 7,23-7 ,36 (m, 5H) , 4, 55 (t, J 1H) , 4,29 (s, 2H) , 3,45 (m, 2H) , 2, 85 (m, 2H) , 1H) , 2,21 (s, 3H) , 2, 14 (s, 3H) , i, 84 (m, 2H) , 1,62 (m, 1H), 1,40 (m, 2H). HR MS (m/z, MH+) med. 312,2069, calc. 312,2076. 1-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperidino-4-carbaldeído (composto 33) A 5'-benzil-3',4'-dimetil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H- 135 ΡΕ2318389 [1,2]bipiridinil-4-il)-metanol (1 55 mg, 0,473 mmol) em DCM (5 ml) é adicionado o reagente de Dess-Martin (257 mg, 0,59 mmol), a mistura reacional é agitada à temperatura ambiente durante 2 h. Seguidamente a mistura reacional é diluída com DCM e lavada com NaHCCt e água. A fase orgânica é separada e o solvente removido sob pressão reduzida. A purificação por HPLC do produto bruto com acetonitrilo em água (de 20% até 95%, com 1-propanol a 3%) ao comprimento de onda de deteção de 220 nm providencia o produto desejado como um pó creme (120 mg, 78%). MS (m/z, MH+) med. 310.
Exemplo 61: 3-Benzil-4,5-dimetil-6-[4-(4-trifluorometil-lH-imidazol-2-il)-piperidino-l-il]-piridazina
A uma solução de acetato de sódio trihidratado (50 mg, 0,615 mmol) em água (5 mL) é adicionada 1,1-dibro-mo-3,3,3-trifluoroacetona (83,5 mg, 0,307 mmol). A solução é aquecida 45 min a uma temperatura de banho de 100 °C e seguidamente arrefecida. A solução é adicionada a uma solução de 1-(6-benzil-4, 5-dimetil-piridazin-3-il)-piperi-dino-4-carbaldeído (100 mg, 0,31 mmol) em MeOH (5 mL) e amoníaco aquoso concentrado em MeOH (1,7 mL, 7M, 12 mmol). A mistura reacional é deixada em repouso durante 3,5 h à temperatura ambiente e a mistura reacional é seguidamente 136 ΡΕ2318389 concentrada sob pressão reduzida para originar um semi-sólido que é recristalizado a partir de heptano para originar o produto bruto. A purificação por HPLC do produto bruto com acetonitrilo em água (de 10% até 100%, com 1-propanol a 3%) ao comprimento de onda de deteção de 220 nm providencia o produto desejado 22%) . na forma de pó creme (28 mg, 1E RMN (40 0 MHz, DMSO-d6) δ = 7, 72 (s, 1H) , 7,23-7,36 (m, 5H) , 4,29 (s, 2H) , 3,52 (m, 1H) , 3,37 (m, 2H), 2,97 (m, 2H) , 2,24 (s, 3H), 2,20-1, 97 (m, 4H), 2,14 (s, 3H) . HR MS (m/z, MH+) med. 416,2050, calc. 416,2062. Síntese dos exemplos 62-64 através da via E:
Exemplo 62: 2-[1-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-pi- peridin-4-il]-1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina
N-N
Este composto como um sal de TFA é preparado a partir do composto 24 e 1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina seguindo um procedimento utilizado no exemplo 56. 1H-RMN (400 MHz, MeOH-d4) δ = 2,1 (2H, m) , 2,3 (3H, s), 2,3 (2H, m) , 2,4 (3H, s), 3,1-3,9 (9H, m) , 4,4 (2H, s), 4,6 (2H, s), 7,3 (9H, m). HR MS (m/z, MH+) med. 413,2689. 137 ΡΕ2318389
Exemplo 63: 1'-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-5-(1-hidroxi-l-metil-etil)-2',3',5',6'-tetra-hidro-1Ή[2,4']-bi-piridinil-4'-ol
Passo 1: 2-Bromo-5-[1-metil-1-(2-trimetilsilanil-etoximeto-xi)-etil]-piridina (composto 34)
Br
Ao composto 31 (532 mg, 2,46 mmol) em DMF anidro (5 mL) a 0 °C é adicionado hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 138 mg, 3,45 mmol). A mistura é agitada à temperatura ambiente durante lhe seguidamente arrefecida até 0 °C, à gual é adicionado SEMCI (0,564 μΕ, 3,2 mmol). A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 16 h, a 50 °C durante 1 h, arrefecida até à temperatura ambiente e extinta com água, extraída com acetato de etilo. A fase orgânica é lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca e sujeita a evaporador rotativo. O resíduo oleoso é purificado através de cromatografia em sílica gel (10-15% acetato de etilo em heptano) para originar o composto intitulado como um óleo límpido (474 mg, 56%). 1H-RMN (400 MHz, CDC13) δ = 0,0 (9H, s), 0,84 (2H, m), 1,59 138 ΡΕ2318389 (6Η, s), 3,60 (2H, m) , 4,60 (2H, s), 7,43 (1H, d, J = 8
Hz), 7,61 (1H, m), 8,42 (1H, s). HR MS {m/z, MH+) med. 346,0822.
Passo 2: 1'-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-5-[1- metil-1-(2-trimetilsilanil-etoximetoxi)-etil]-2',3',5',6'-tetra-hidro-1'H[2,4']-bipiridinil-4'-ol (composto 35)
Ao composto 34 (272 mg, 0,786 mmol) em THF (6 mL) a -78 °C é adicionado t-butil-lítio (1,7 M em pentano, 1,0 mL, 1,7 mmol) . A mistura é agitada a -78 °C durante 30 minutos, à qual é adicionado o composto 24 (209 mg, 0,707 mmol) em THF (2 mL) a -78 °C. A mistura é agitada e aquecida lentamente até -40 °C, durante uma 1 h, seguidamente extinta a -40 °C com cloreto de amónio saturado. O THF é removido e o resíduo foi extraído com acetato de etilo (3 x). A fase orgânica é lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre Na2S04 anidro e concentrada. O resíduo é purificado por cromatografia em sílica gel (40— 60% de acetato de etilo em heptano) para providenciar o 139 ΡΕ2318389 composto recuperado 24 (103 mg, 49%) e o composto intitulado 35 (106 mg, 27%) como um sólido branco. ^-RMN (400 MHz, CDC13) δ = 0,0 (9H, s), 0,87 (2H, t, J = 8
Hz) , 1,64 (6H, s ) , 1,74 (2H, m) , 2,10 (3H, s) , 2 CM CM (3H, s) , 2 ,28 (2H, m), 3, 57 (6H, m) , 4,31 (2H t s) , 4,66 (2H, s) , 4, 95 (1H, s) , 7, 27 (5H, m) , 7,43 (1H, m) , 7, 80 (1H, m) , 8,62 (1H, m). HR MS (m/z, MH+) med. 563,3392.
Passo 3: 1'-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-5-(1-hi- droxi-l-metil-etil)-2',3',5',6'-tetra-hidro-l'H[2,4']-bipiridinil-4'-ol (composto 63)
Ao composto 35 (44 mg, 0, 078 mol) em CH2C12 (1,5 mL) a 0 °C é adicionado TFA (0,15 μ]1) . A mistura é agitada a 0 °C durante 2 horas e é extinta com acetato de amónio a 25%, extraida com acetato de etilo. A fase orgânica é lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca e concentrada para originar um resíduo amarelo que é purificado por cromatografia em sílica gel (0-5% de metanol em CH2C12) para originar o produto desejado (17 mg, 50%). ^-RMN (40 0 MHz, CDCI3) δ = 1,62 (6H, s) , 1, 72 (2H, m) 2,09 (3H, s), 2,21 (3H, s) , 2,25 (2H, m) , 3,50 (4H, m) 4,30 (2H, s), 7,20 (5H, m) , 7, 42 (1H, m) , 7, 86 (1H, m) 8,66 (1H, s largo). HR MS (m/z, MH+) med. 433,2590.
Exemplo 64: 2-[1'-(6-Benzil-4, 5-dimetil-piridazin-3-il)-4 fluoro-1',2',3',4',5',6'-hexa-hidro-[2,4']-bipiridinil-5-il]-propan-2-ol 140 ΡΕ2318389
Passo 1: 1'-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-4'-fluo- ro-5-[1-metil-l-[2-trimetilsilanil-etoximetoxi]-etil]-1',2',3',4',5',6'-hexa-hidro-[2,4']-bipiridinil-5-il]-pro-pan-2-ol (composto 36)
Ao composto 35 (39 mg, 0,069mmol), a 0 °C é adicionado desoxoflúor frio (50% em THF, 665 μι, 1,38 mmol). A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 4 h, lavada com NaHC03 saturado, extraída com CH2CÍ2 (3 x) . A fase orgânica é lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca e concentrada para originar um óleo castanho. A purificação por cromatografia em sílica gel origina o composto intitulado (21 mg, 48%). 1H-RMN (400 MHz, CDC13) δ = 0,0 (9H, s), 0,9 (2H, t, J = 8 Hz), 1,6 (6H, s) , 2,0 (2H, m) , 2,1 (3H, s), 2,2 (3H, s) , 2,6 (2H, m), 3,4 (4H, m), 3,6 (2H, t , J = 8 Hz) , 4,3 (2H, s), 4,7 (2H, s), 7,2 (5H, m) , 7,6 (1H , m) , 7,8 (1H , m) , co (?) (1H, s largo). HR MS (m/z, MH+) med. 565,3369. 141 ΡΕ2318389
Passo 2: 1'-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-4'-fluo- ro-1' , 2 ' ,3 ' ,4',5',6'-hexa-hidro-[2,4']-bipiridinil-5-il]-propan-2-ol (Exemplo 64)
/—v N- \J / \ / b
Este exemplo foi preparado a partir do composto 36 e TFA seguindo um procedimento descrito para o exemplo 63. 1H-RMN (600 MHz, CDC13) δ = 1,63 (6H, s), 2,05 (2H, m) , 2,19 (3H, s), 2,32 (3H, s), 2,55 (2H, m) , 3,94 (4H, m) , 4,53 (2H, s largo), 7,25 (5H, m) , 7,59 (1H, d, J = 6 Hz), 7,90 (1H, m), 8,71 (1H, s largo). HR MS (m/z, MH+) med. 435,2554.
Piperazinil-piridazinas
O Esquema 6 mostra um esquema geral de síntese para a preparação de compostos de Fórmula Ip. As 1,4-dicloropiridazinas substituídas II podem ser feitas reagir com reagentes organo-zinco sob catálise de paládio para formar os intermediários XII. A substituição do cloro remanescente com uma piperazina na presença de base origina os compostos XIII. Dependendo da posição do(s) substi-tuinte(s) Z pode ser requerida a utilização de um grupo de proteção de N para bloquear a reatividade de um dos átomos de azoto da piperazina. Os intermediários XIII podem reagir dependendo do ligante desejado Y com R3-C1 numa reação de substituição nucleófila sob condições básicas, com R-CHO 142 ΡΕ2318389 numa aminação redutiva com, e.g. NaBH(OAc)3, em reações de acilação com R3-0C(0)C1 ou R3-NC0, R3-C0C1, sob condições básicas ou com R3-CO2H num acoplamento de amida com e.g., HATU como reagente de acoplamento para originar os exemplos Ip. Adicionalmente, a substituição do cloro remanescente no intermediário XII, com uma piperazina funcionalizada na presença de base pode originar diretamente os exemplos Ip. (via A). Alternativamente, os exemplos Ip podem ser preparados utilizando a Via B e C, em que a unidade piperazina é primeiro instalada por reações de substituição nucleófila e o acoplamento de Negishi é realizado subseguentemente.
Via A
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Cloridrato de hidrazina (58 g, 552 mmol) é dis- 143 ΡΕ2318389 solvido em água quente (300 mL) e é adicionado anidrido dimetilmaleico (58 g, 460 mmol) em porções e a suspensão agitada ao refluxo durante 16 h. A suspensão é arrefecida até à temperatura ambiente e o precipitado é filtrado, lavado com água e seco a 40 °C sob vácuo para originar a 4.5- dimetil-1,2-di-hidro-piridazino-3,6-diona (36) (64 g, 99%) . 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11 (s largo, 2H) , 2,01 (s, 6H) . MS (m/z, MH+) med. 141,1. 4.5- Dimetil-1,4-dicloro-piridazina (composto 37)
o 4,5-Dimetil-l,2-di-hidro-piridazino-3,6-diona (50 g, 357 mmol) é adicionada a um balão de 1 L e é adicionado lentamente POCI3 (250 mL). A suspensão é agitada e aquecida ao refluxo e todo o material de partida se dissolve. Após 2 h, aproximadamente 150 mL de POCI3 são removidos sob vácuo. A solução viscosa castanha é vertida lentamente em pequenas porções sobre gelo num copo de 1,5 L sob agitação. A suspensão laranja é neutralizada com amónia aquosa a 28% sob arrefecimento externo. O produto é filtrado com um funil de Buchner, lavado com água e seco a 40 °C sob vácuo para originar um pó creme (59 g, 93%). 1H-RMN (400 MHz, CDC13) δ = 2,44 (s, 6H) . MS (m/z, MH+) med. 177,1. 144 ΡΕ2318389 2,3,6, 7-Tetra-hidro-5H-ciclopenta[d]piridazino-1,4-diona (composto 38)
Uma solução de cloridrato de hidrazina (2,4 g, 22,8 mmol) e anidrido 1-ciclopenteno-l,2-dicarboxílico (3,0 g, 21,7 mmol) em água (10 mL) é aguecida ao refluxo durante 3 h. A mistura reacional é arrefecida até à temperatura ambiente e o precipitado é recolhido por filtração. O sólido amarelo é misturado com 15 mL de NaOH 1 N e agitado durante 2 h, filtrado e seco sob vácuo, para originar a 2,3,6,7-tetra-hidro-5H-ciclopenta[d]piridazino-1,4-diona (38) (2,2 g, 67%). MS (m/z, MH+) med. 153,1 1,4-Dicloro-6,7-di-hidro-5H-ciclopenta[djpiridazino (composto 39)
Cl O composto é preparado de forma análoga ao composto 37 partindo do composto 36. 1H-RMN (400 MHz, DM-SO-d6) δ = 2,74-2,61 (m, 4H) , 2,00 (m, 1H) , 1,85 (m, 1H) . HR MS (m/z, MH+) med. 188,9986. 145 ΡΕ2318389 2,3,5,6,7,8_Hexa hidro ftalazin-i, 4-diona (composto 40)
m Y o
NH A uma solução de hidrazina (392 μί, 13,1 mmol) em água (6 mL) e HOAc (2 mL) é adicionada 4,5,6,7- tetrahodroisobenzofuran-1,3-diona (2 g, 13,1 mmol). A mistura reacional é submetida ao refluxo durante 3 h, seguidamente arrefecida até à temperatura ambiente e o precipitado é recolhido por filtração, lavado com água e seco sob vácuo para originar a 2,3,5,6,7,8-hexa- hidroftalazin-1,4-diona (40) (2,09 g, 96%). MS (m/z, MH+) med. 167, 05. 1,4 Dicloro 5,6,7,8 tetra hidro-ftalazina (Composto 41)
A suspensão do composto 40 (2,09 g, 12,6 mmol) em POCI3 (10 mL) é submetida ao refluxo durante 1 hora, arrefecida, e vertida em gelo. O precipitado é recolhido por filtração e seco num forno de vácuo para originar a 1,4—dicloro—5,6,7,8—tetra—hidroftalazina (41) (2,23 g, 87%) . HR MS (m/z, MH+) med. 203,0139. 146 ΡΕ2318389 3-Benzil-6-cloro-4,5-dimetil-piridazina (composto 42) ct
Uma mistura de 4,5-dimetil-l,4-dicloro-piridazina (10 g, 56,5 mmol), tetraquis(trifenilfosfino)paládio(0) (3,3 g, 2,80 mmol) e THF (200 mL) é desgaseif içada e seguidamente é adicionado brometo de benzilzinco (147 mL, 0,5 M em THF, 73,40 mmol). A solução reacional é aquecida até 65 °C durante a noite. O solvente é removido. É adicionada água e a fase aquosa é extraída com EtOAc. A fase orgânica é concentrada para originar um produto bruto que é purificado por cromatografia em sílica gel (EtOAc/ Heptano: 0%-50%) para originar o composto intitulado (9,5 g, 67%). ΧΗ RMN (400 MHz, CD2C12) δ = 7,27 (m, 5H), 4,38 (s, 2H) , 2,36 (s, 3H), 2,21 (s, 3H). HR MS (m/z, MH+) med. 233,0839. 3-Cloro-6-(4—fluoro-benzil)-4,5-dimetil-piridazina (composto 43)
147 ΡΕ2318389
De forma análoga ao composto 42, a 3-cloro-6-(4-fluoro-benzil)-4,5-dimetil-piridazina é preparada a partir de 4,5-dimetil-l,4-dicloro-piridazina e brometo de para-flúor benzil zinco. MS (m/z, MH+) med. 251,1. l-Benzil-4-cloro-6,7-di-hidro-5H-ciclopenta[djpiridazina (composto 44)
Cl f
.5= A uma solução de 1, 4-dicloro-6,7-di-hidro-5H-ciclopenta[d]piridazina (composto 39, 500 mg, 2,64 mmol) em THF (5 mL) é adicionado Pd(PPh3)4 (383 mg, 0,33 mmol). A mistura é desgaseifiçada e é adicionado brometo de benzil zinco (11 mL, 0,5 M em THF, 5,6 mmol). A mistura é aquecida a 60 °C durante 5 h. A mistura reacional é arrefecida até à temperatura ambiente e é adicionada uma solução aquosa saturada de NaHC03 e a mistura é extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas são lavadas com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre NaS04, filtradas e concentradas. O produto bruto é purificado por cromatografia flash (AcOEt/heptano 10% - 30%) para originar o composto 44 (490 mg, 76%). ^-RMN (400 MHz, CD2C12) δ = 7,30-7,21 (m, 5H) , 4,28 (s, 2H), 2,97 (m, 2H), 2,84 (m, 2H), 2,09 (m, 2H). HR MS {m/z, MH+) med. 245, 0848 . 148 ΡΕ2318389 1-Cloro-4-(4-fluoro-benzil)-6,7-di-hidro-5H-ciclopenta[d] piridazina (composto 45)
Ci i rs 0 composto 45 é preparado de forma análoga ao composto 44 partindo de 1,4-dicloro-6,7-di-hidro-5H-ciclo-penta[d]piridazina (composto 39) e brometo de para-fluorobenzilo zinco. 1H-RMN (400 MHz, CD2C12) δ = 7,23 (m, 2H) , 6,99 (m, 4,27 (s , 2H) , 2,98 (m, 2H), 2,84 (m, 2 H) ', 2,11 (m, 2H) . HR MS (m/z, MH+) med. 263,0752. 1-Cloro-4-(4-fluoro-benzil)-5,6,7,8-tetra-hidro-ftalazina (Composto 46)
A uma solução de 1,4-dicloro-5,6,7,8-tetra-hidro-ftalazina (Composto 41, 0,50 g, 2,46 mmol) em THF (5 mL) são adicionados cloreto de 4-fluoro-benzil zinco (0,5 M em THF) (6,40 mL, 3,20 mmol) e tetraquistrifenilfosfinapaládio (0,36 g, 0,31 mmol). A mistura é desgaseifiçada e agitada a 50 °C durante a noite. Seguidamente a mistura reacional é arrefecida até à temperatura ambiente, são adicionados NaHCCb sat. e água e a mistura é extraída com EtOAc. As 149 ΡΕ2318389 fases orgânicas combinadas são lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04, filtradas e concentradas. 0 produto bruto é purificado por cromatografia (EtOAc/heptano: 10% ~ 40%) para originar a 1-cloro-4-(4-fluoro-benzil)-5,6,7,8-tetra-hidro-ftalazina (46) (0,51 g, 30%). MS (m/z, MH+) med. 277, 11 .
Síntese dos intermediários XIII PROTOCOLO GERAL PARA A AMINAÇÃO DOS CLORETOS XII COM PIPERAZINAS PARA ORIGINAR COMPOSTOS 48-53 (VIA A) A uma solução de XII (0,4 mmol) em NMP ou DMF/ dioxano (2 mL) é adicionada a piperazina (0,6 mmol). A mistura reacional é aquecida a 190 °C durante 4 h num reator de micro-ondas. É arrefecida até à temperatura ambiente, diluída com DCM, lavada com uma solução de NaHC03 aquosa e as fases orgânicas são removidas para originar o produto bruto. A cromatografia flash do produto bruto com EtOAc/ heptano (20% até 50%) e, seguidamente MeOH/DCM (5% até 20%) providencia o produto como um sólido amarelo após a remoção dos solventes (~50% — 70%) 3-Benzi1-4,5-dimetil-6-((R)-3-metil-piperazin-l-il)-piridazina (composto 47)
150 ΡΕ2318389
Preparação A: 3-Cloro-4,5-dimetil-6-((R)-3-metil-piperazin-l-il)-piridazina (400 mg, 1,66 mmol, 1 eq) é adicionada a uma solução de brometov de benzilzinco (12,3 mL, 0,5 M em THF, 6,64 mmol, 4 eq) e tetraquis(trifenilfosfino)paládio (100 mg, 0,08 mmol, 0,05 eq) num frasco de micro-ondas. O frasco é selado e irradiado no micro-ondas a 100 °C (posição de absorção elevada) durante 40 min. A mistura reacional é concentrada e purificada por cromatografia em sílica gel (5 - 20% de EtOAc/heptano) para originar o composto desejado (324 mg, 66%).
Preparação B: A uma solução de 3-benzil-6-cloro-4,5-dimetil-piridazina (100 mg, 0,41 mmol) em NMP (2 mL) é adicionada 2-(R)-metil-piperazina (62 mg, 0,61 mmol). A mistura reacional é aquecida a 190 °C durante 4 h num reator de micro-ondas. É arrefecida até à temperatura ambiente, diluída com DCM, lavada com uma solução de NaHC03 aq. e as fases orgânicas são removidas para originar o produto bruto. A cromatografia flash do produto bruto com EtOAc/heptano (20% até 50%) e, seguidamente MeOH/DCM (5% até 20%) providencia o produto como um sólido amarelo após remoção dos solventes (74 mg, 61%). ΤΗ RMN (400 MHz , DMSO-de) δ = 7,22-7,34 (m, 2 H), 7,11-7, 22 (m, 3 H), 4,22 (s, 2H), 3 ,13 - 3,26 (m, 2H), 2.81 - 2,99 (m, 3 H) , 2,70 - 2,80 (m, 1H), 2,38-2,48 (m, 1H), 2,15 (s , 3 H), 2,08 (s, 3 H), 1,00 (d, J = 6,5 Hz, 3 H) . HR MS (m/z, MH+) med. 297,2089. 151 ΡΕ2318389 seguinte (Tabela 4) aminação, tal como
Composto 46-53: A tabela lista os compostos preparados por descrito acima: TABELA 4
Composto Estrutura HR MS [m/z, MH+] med. 48 V "t^N 283,1918 49 Λ Y o 294,4028 50 "Ή' /•"τ. N vJUn Ό 308 (MS) 51 H õ vdUN VF 326 (MS) 52 H T) ^ X t N So 297,2088 53 H ΥΓ "YS ___yN 311,5 (MS) 152 ΡΕ2318389
Intermediários da Via B: 3-Cloro-4,5-dimetil-6-((R)-3-metil-piperazin-l-il)-piridazina (composto 54)
É adicionado K2C03 sólido (10 g, 72,4 mmol, 1,8 eq) a uma solução de (R) -2-metil-piperazina (4,00 g, 40 mmol, 1 eq) e 3,6-dicloro-4,5-dimetil-piridazina (8 g, 45,2 mmol, 1,1 eq) em DMF (50 mL) , e a solução resultante é agitada a 60 °C durante 48 h. A mistura reacional é concentrada até 1/2 do volume sob pressão reduzida e é adicionado o mínimo de água (cerca de 15 mL) necessário para dissolver os sais sólidos, seguida pela adição de diclorometano (100 mL) . A fase orgânica é separada, seca sobre sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida, seguidamente purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (2% - 20% de MeOH/CH2Cl2) para originar o composto desejado como um sólido branco (4,7 g, 49%). ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ = 3,08-3,21 (m, 2H) , 2,73-2,92 (m, 4H), 2,47 (dd, J= 12,4 Hz, 10,2 Hz, 1H) , 2,13 (s, 3H) ; 2,07 (s, 3H), 0,93 (d, J= 6,3 Hz, 3H). HR MS (m/z, MH+): med. 241,1218. 3-Cloro-4,5-dimetil-6-(piperazin-l-il)-piridazina (composto 55)
ΡΕ2318389 153 0 composto 55 é preparado tal como descrito acima a partir de piperazina e 3,6-dicloro-4,5-dimetil-piri-dazina. MS (m/z, MH+) med. 227. Éster metílico do ácido (R)-4-(6-cloro-4,5-dimetil-piri-dazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'jbipirazi-nil-5'-carboxilico (composto 56)
3-Cloro-4,5-dimetil-6-( (R)-3-metil-piperazin-1- il)-piridazina (1,20 g, 4,88 mmol), éster metílico do ácido 5-cloro-pirazina-2-carboxílico (946 mg, 5,37 mmol), tri-etilamina (3,40 mL, 24,4 mmol), e 1,4-dioxano (10 mL) são combinados num balão de fundo redondo de 100 mL equipado com um condensador de refluxo e aquecido até 80 °C durante 24 h. A reação é seguidamente deixada arrefecer até à temperatura ambiente e agitada durante 48 h. Precipita um sólido bege durante este tempo, que é isolado por filtração, lavado com H2O. O precipitado é seco in vacuo para originar o composto intitulado (1,30 g, 71%). MS (m/z, MH+) med. 377, 3. 2-[(R)-4-6-Cloro-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol (Composto 57)
HO 154 ΡΕ2318389 0 éster metílico do ácido (R)-4-(6-cloro-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxílico (400 mg, 1,04 mmol) é suspenso em THF (12 mL) e arrefecido até -78 °C. É adicionado gota a gota iodeto de metilmagnésio (2,8 mL, 3 M em éter dietilico, 8,4 mmol). A reação é agitada durante 30 min, aquecida até 0°C, e agitada 30 min adicionais. É adicionado NH4C1 aq. (10 mL) para extinção, seguido de H2O adicional (40 mL). Os orgânicos são extraídos com EtOAc (3 x 50 mL) , secos e concentrados para originar o produto desejado na forma de um pó bege (415 mg, quant.). MS (m/z, MH+) med. 359,3. Éster metílico do ácido 2-[(R)-4-(6-cloro-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-piperazin-l-il]-4-trifluorometil-pirimidino-5-carboxílico (composto 58)
Cl É adicionada trietilamina (2,0 mL, 14,4 mmol, 2,9 eq) a uma solução de éster metílico do ácido 2-cloro-4-trifluorometil-pirimidino-5-carboxílico (1,25 g, 5,0 mmol, 1 eq) , 3-cloro-4,5-dimetil-6-((R)-3-metil-piperazin-l-il)-piridazina (1,20 g, 5,0 mmol, 1 eq) em diclorometano (40 155 ΡΕ2318389 mL) e a solução resultante é agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura reacional é diluída com dicloro-metano (50 mL) e lavada com água (25 mL) , seguidamente solução aquosa saturada de cloreto de sódio (25 mL). A fase orgânica é separada, seca sobre sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida para originar um resíduo branco. O composto desejado é isolado por cromatografia em sílica gel (10 - 75% de EtOAc/heptano) como um sólido branco (1,83 g, 82%). ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9,00 (s, 1H) , 4,92-5,15 (m, 1H), 4,54-4,76 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,59 (d, J= 14,0 Hz, 1H), 3,50 (t, J= 12,8 Hz, 2H), 3,08 (dd, J= 12,8 Hz, 3,3 Hz, 1H), 2, 89-2,99 (m, 1H) , 2,36 (s, 3H) , 2,33 (s, 3H) , 1,39 (d, J = 7, 0 Hz, 3H) . HR MS (m/z, MH+) : med. 445, 1373. Éster etílico do ácido 2-[(R)-4-(6-cloro-4,5-dimetil-piri-dazin-3-il)-2-metil-piperazin-l-il]-4-trifluorometil-pirimidino-5-carboxílico (composto 59)
F
1
Seguindo o protocolo acima, com o éster etílico do ácido 2-cloro-4-trifluorometil-pirimidino-5-carboxílico (400 mg, 1,57 mmol, 1 eq) e 3-cloro-4,5-dimetil-6-((R)-3- 156 ΡΕ2318389 metil-piperazin-l-il)-piridazina (400 mg, 1,66 mmol, 1 eq) originam-se 700 mg do produto desejado como um sólido branco (97%). XH RMN (400 MHz, DMS0-d6) δ = 8,94 (s, 1H) , 5,12-5,18 (m, 1H), 4, 70-4, 85 (m, 1H) , 4,35 (q, J= 7,0 Hz, 2H), 3,48-3,56 (m, 2H), 3,40 (d, J= 12,5 Hz, 1H), 3,21 (d, J= 10,5 Hz, 1H), 3,02-3,14 (m, 1H), 2,36 (s, 3H) , 2,35 (s, 3H), 1,44 (d, J = 7,0 Hz, 3H) , 1,37 (t, J= 7,0 Hz, 3H) . 3-Cloro-4,5-dimetil-6-[(R)-3-meti1-4-(5-trifluorometil-piridin-2-il)-piperazin-l-il]-piridazina (composto 60) 7 \f T~N V-Ct “ ^.....^
Combinar 3,6-dicloro-4,5-dimetil-piridazina (100 mg, 0,554 mmol), (R)-2-metilpiperazina (85 mg, 0,831 mmol), carbonato de potássio (383 mg, 2,77 mmol) e DMF (1 mL) num frasco. Aquecer num micro-ondas a 120 °C durante 3,25 h. Adicionar 2-cloro-5-trifluorometilpiridina (181 mg, 0,997 mmol) e aquecer a 180 °C durante 30 min. A mistura reacional bruta é purificada diretamente por cromatografia flash em sílica gel (0-40% de EtOAc em heptano) para originar o composto intitulado como um sólido amarelo claro (78 mg, 37%) . MS (m/z, MH+) med. 386,4
Intermediários de Via C: 3-Cloro-4,5-dimetil-6-[4-(5-trifluorometil-piridin-2-il)-piperazin-l-il]-piridazina (composto 61) 157 ΡΕ2318389 ρ
C! 1-(5-Trifluorometil-piridin-2-il)-piperazina (10 g, 43,3 mmol) é combinada com 3,6-dicloro-4,5-dimetil-piridazina (14,4 g, 84,3 mmol), trietilamina (8,25 mL) , e NMP (40 mL) . A mistura reacional é irradiada a uma temperatura de 180 °C durante 25 min, e seguidamente concentrada in vacuo. O resíduo é purificado por cromatografia flash em sílica gel (0-8% MeOH/CH2Cl2) para originar o composto intitulado (13,2 g, 82%). RMN (400 MHz, DMSO-de) δ = 8,48-8,41 (m, 1H) , 7,84 (dd, J = 9,1 Hz, 2,4 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 9,1 Hz, 1H) , 3,88-3,76 (m, 4H), 3,28-3,20 (m, 4H) , 2,31 (s, 6H) . l-Cloro-4-[4-(5-trifluorometil-piridin-2-il)-piperazin-1-il]-6,7-di-hidro-5H-ciclopenta[d]piridazina (Composto 62)
A uma solução de 4-dicloro-6,7-di-hidro-5H-ciclo-penta[d]piridazina (composto 39, 500 mg, 2,64 mmol) em NMP (5 ml) é adicionada 1-[5-trifluorometil)- pirid-2-il)-piperazina (581 mg, 2,51 mmol) seguida por trietilamina (1,1 mL, 7,9 mmol) . A mistura foi aquecida num reator de micro-ondas a 170 °C durante 60 min. Foi adicionada água à 158 ΡΕ2318389 mistura reacional e extraída com EtOAc. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos sobre Na2S04, filtrados e concentrados. 0 produto bruto foi titulado com metanol para providenciar o composto intitulado (483 mg, 48%). ΤΗ NMR (CD2C12) δ = 8,41 (s, 1H) , 7,68 (dd, J= 8,9 Hz, 2,5 Hz, 1H), 6,73 (d, J= 8,9 Hz, 1H) , 3,80 (m, 4H) , 3,60 (m, 4H), 3,04 (m, 2H), 2,95 (m, 2H), 2,16 (m, 2H). HR MS (m/z, MH+) : med. 384, 1190. l-Cloro-4-[4-(5-trifluorometil-piridin-2-il)-piperazin-1-il]-5,6,7,8-tetra-hidro-ftalazina (Composto 63)
A uma solução de 1, 4-dicloro-5,6,7,8-tetra-hidro-ftalazina (Composto 25, 100 mg, 0,492 mmol) em NMP (3 mL) é adicionada 1-[5-trifluorometil)-pirid-2-il)-piperazina (114 mg, 0, 492 mmol) seguida de trietilamina (218 μΐϋ, 1,57 mmol) . A mistura foi aquecida num reator de micro-ondas a 140 °C durante 60 min. Foi adicionada água à mistura reacional e extraída com EtOAc. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos sobre Na2S04, filtrados e concentrados. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (EtOAc/heptano 10% a 70%) para originar 96 mg (49%) do composto intitulado. 159 ΡΕ2318389 XH RMN (400 MHz, CD2C12) δ = 8,41 (s, 1H) , 7,73 (dd, J = 9,0 Hz, 2,5 Hz, 1H) , 6,79 (d, J = 9,0 Hz, 1H) , 3,85 (m, 4H) , 3,40 (m, 4H) , 2, 76-2, 68 (m, 4H) , 1,93 (m, 2H) , 1,80 (m, 2H) . HR MS (m/z, MH+) med. 398,1359. Éster etílico do ácido 6-[ 4-(4-cloro-5,6,7,8-tetra-hidro-ftalazin-l-il)-piperazin-l-il]-nicotínico (composto 64) r\ \=/
α
etOjC O composto é preparado de uma forma semelhante à descrita acima. MS (m/z, MH+) med. 402,2. Éster metílico do ácido 6-[(S)-4-(4-cloro-6,7-di-hidro-5H-ciclopenta[d]piridazin-l-il)-3-metil-piperazin-l-il]-nicotínico (Composto 65)
A uma solução de 1,4-dicloro-6,7-di-hidro-5H-ciclopenta[d]piridazina (150 mg, 0,79 mmol) em NMP (5 mL) é adicionado o éster etílico do ácido (S)-3-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxílico (297 mg, 1,19 mmol) e trietilamina (332 μΐ,, 2,39 mmol). A mistura 160 ΡΕ2318389 reacional é aquecida num reator de micro-ondas a 195 °C durante 4 h. É adicionada água e EtOAc. As fases são separadas e a fase aquosa é extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas são lavadas com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04, filtradas e concentradas. O produto bruto é purificado por cromatografia flash (EtOAx/heptano 10% até 70%) para originar 50 mg (16%) do composto intitulado. Éster metílico do ácido 4-(6-cloro-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil-5'-carboxíli-co (composto 66)
A uma solução do éster metílico do ácido 3,4,5,6 tetra-hidro-2H-[1,2]-bipirazinil-5'-carboxílico (250 mg, 1,07 mmol) em NMP (5 mL) é adicionado 3,6-dicloro-4,5-dimetil-piridazina (237 mg, 1,33 mmol) e TEA (446 μ]1, 3,21 mmol), a mistura reacional é agitada a 190 °C durante 60 min. É adicionada água à mistura e extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas são lavadas com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04, filtradas e concentradas. O produto bruto é purificado por HPLC (acetonitrilo/água: 10% ~ 95%, com 1-propanol a 3%) para originar um pó branco (165 mg, 43%). 161 ΡΕ2318389 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,69 (s, 1H) , 8,44 (s, 1H), 3,92 (t, J = 5,0 Hz, 4H), 3,83 (s, 3H) , 3,27 (m, 4H), 2,41 (s, 3H), 2,32 (s, 3H) . MS (m/z, MH+) med. 363. Síntese dos exemplos 65-72 PROTOCOLO GERAL PARA 0 ACOPLAMENTO DE NEGISHI DOS CLORETOS DE PIRIDAZINA IIIA COM BROMETOS DE ARIL ZINCO PARA ORIGINAR OS EXEMPLOS 65-69 (VIA B/C) A uma solução de cloropiridazina Illa (0,15 inmol, 1 eq. ) em THF (5 mL) é adicionado Pd(PPh3)4 (12,5% molar). A mistura é desgaseifiçada e é adicionado brometo de aril zinco (0,225, 1,5 eq., e.g. como uma solução 0,5 M em THF) e a mistura é aquecida num reator de micro-ondas a 80 °C durante 30 min. A mistura reacional é arrefecida até à temperatura ambiente, é adicionada água e a mistura é extraída com EtOAc. Os extratos orgânicos combinados são lavados com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados. O produto bruto é purificado por cromatografia flash em sílica gel com EtOAc/heptano como eluente para originar os exemplos Ip. A tabela seguinte (Tabela 5) lista os compostos preparados pelo acoplamento de Negishi como descrito acima: ΡΕ2318389 TABELA 5
Exemplo Estrutura HR MS [m/z, MH+] med. 65 Q, Λ N ν'— \A*n 474,1670 66 CFa Çn Λ \Jyfi fYY p 476,1865 67 Qh ίγύ Λ N ηήκ vAJ§ 458,1974 68 X5 Çn viSL V vJLn 454,2226 69 co2a N'S «^N Λ V'" ΓΥ4^ VA^N 492 (MS) CSJU 163 ΡΕ2318389
Exemplo 70: 2-(6-{(S)-4-[4-(2-Cloro-benzil)-6,7-di-hidro-5H-ciclopenta[d]piridazin-3-il]-3-metil-piperazin-l-il}-pi-ridin-3-il)-propan-2-ol
A uma solução de éster etílico do ácido (S)—4—[4 -(2-cloro-benzil)-6,7-di-hidro-5H-ciclopenta[d]piridazin-1-il]-3-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxílico (35 mg, 0,071 mmol) em THF (5 mL) é adicionado iodeto de metil-magnésio (3 M em éter, 0,19 mL, 0,57 mmol) a 0 °C e a mistura é agitada à temperatura ambiente durante 30 min. É adicionada uma solução de NaHCCb sat. e EtOAc. As fases são separadas e a fase aquosa é extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas são lavadas com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04, filtradas e concentradas. O produto bruto é purificado por HPLC (acetonitrilo/água com 0,1% de TFA, 10% até 50%) . O produto é isolado como a base livre após tratamento do sal com solução de Na2CC>3 (11 mg, 32%) HR MS (m/z, MH+) med. 478,2367.
Exemplo 71: Éster etílico do ácido 2-{(R)-4-[6-(2,4-difluoro-benzil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il]-2-metil-piperazin-l-il}-4-trifluorometil-pirimidino-5-carboxílico 164 ΡΕ2318389
A uma solução de éster etílico do ácido 2-[(R)-4-[6-cloro-4,5-dimetil-piridazin-3-il]-2-metil-piperazin-l-il]-4-trifluorometil-pirimidino-5-carboxílico (229 mg, 0,50 mmol, 1 eq) e THF (1,4 mL) num frasco de micro-ondas é adicionado 2,4-brometo de difluorobenzilzinco (2,0 mL de solução 0,5 M em THF, 2,0 mmol, 4 eq) e tetraquis (trifenilfosfina) paládio (25 mg, 0,03 mmol, 0,05 eq) . O frasco é selado e aquecido no micro-ondas a 60 °C (posição de absorção elevada) durante 25 min. É adicionada uma alíquota adicional de brometo de 2,4-diflorobenzilzinco (1,0 mL de solução 0,5 M em THF, 1,0 mmol, 2 eq) e a
mistura reacional é aquecida no micro-ondas a 100 °C (posição de absorção elevada) durante 5 min. A mistura reacional é extinta com água (10 mL) e seguidamente extraída com EtOAc (2 x 25 mL) . As frações orgânicas combinadas são secas sobre sulfato de magnésio, concen tradas e purificadas por cromatografia em sílica gel (25 -75% de EtOAc/heptano) para originar o composto desejado (225 mg, 81%). XH RMN (400 MHz, CDC13) δ = 8,86 (s, 1H) , 7,12 (t, J= 7,3 Hz, 1H), 6,76-6,83 (m, 2H), 4,99-5,07 (m, 1H), 4, 64-4, 73 (m, 1H) , 4,28 (q, J= 7,0 Hz, 2H) , 3,35-3,46 165 ΡΕ2318389 (m, 2H) , 3,31 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 3,10 (d, J = 10,5 Hz, 1H) , 2, 90-3,02 (m, 1H), 2,25 (s, 3H ), 2,24 (s, 3H), 1,36 (d, J = 7,0 Hz, 3H: I , 1,29 (t, J = 7,0 Hz, 3H) φ
Exemplo 72: 2-(2-{(R)-4-(6-(2,4-difluoro-benzil)-4,5-dime-til-piridazin-3-il)-piperazin-l-il}-4-trifluorometil-piri-din-5-il)-propan-2-ol
A uma solução de éster etílico do ácido 2-{(R)-4-[6-(2,4-difluoro-benzil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il ]-2-me-til-piperazin-l-il}-4-trifluorometil-pirimidino-5-carboxí-lico, (220 mg, 0,40 mmol, 1 eq) em THF (1,0 mL) , arrefecido num banho de gelo, é adicionada uma solução de MeMgBr (2 mL, 3 M em éter, 6 mmol, 15 eq.). A solução é deixada aquecer até à temperatura ambiente durante 30 min. A reação é extinta com a adição cuidadosa de NH4C1 saturado, seguidamente extraída com EtOAc. A fase orgânica é seca sobre sulfato de sódio, seguidamente concentrada. O produto é isolado por cromatografia em coluna de sílica gel (25— 75% de EtOAc/heptano) para originar o composto desejado como um sólido branco (27 mg, 13%). RMN (400 MHz, CDC13) δ = 8,74 (s, 1H), 7,21 (tt, J = 8,3 Hz, 6, 5 Hz, 1H), 6,85-6,94 (m, 1H), 4,95-5,05 (m, 1H), 4,64 166 ΡΕ2318389 (dd, J = 12,5 Hz, 3,3 Hz, 1H) , 4,26 (s, 2H) , 3,49 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,36-3, 44 (m, 2H) , 3,19 (dd, J= 12,5 Hz, 3,8
Hz, 1H), 3,05 (td, J= 12,0 Hz, 3,3 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 1,70 (s, 6H), 1,42 (d, J= 6,7 Hz, 3 H) . HR MS (m/z, MH+) med. 537,2408. Síntese dos exemplos 73-87 PROTOCOLO GERAL PARA A AMINAÇÃO DOS CLORETOS AROMÁTICOS COM AMINAS XIII PARA ORIGINAR OS EXEMPLOS 74 A 86 (VIA A) A uma solução de amina XIII (0,5 inmol, 1 eq.) e o halogeneto aromático (1 mmol, 2 eq. ) em NMP (2,5 mL) é adicionada trietilamina (1,5 mmo1, 3 eq.). A mistura é aquecida num reator de micro-ondas a temperaturas entre 140 °C e 190 °C (dependendo da reatividade do halogeneto aromático) durante 30 min. Após a LC MS mostrar a conclusão da reação, é adicionada água e EtOAc e as fases são separadas e a fase aquosa é extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas. O produto é purificado por cromatografia flash em sílica gel com EtOAc/heptano como eluente para originar os exemplos Ip.
Exemplo 73: Éster metílico do ácido (R)-4-(6-benzil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazin-5'-carboxílico 167 ΡΕ2318389 -Ο Η" Ν“Ν Ο Ν / V~~f V~N ' ν==/ ^ /
Uma mistura do composto 47 (6,0 g, 20,27 mmol), éster metílico do ácido 5-cloropirazino-2-carboxílico (5,3 g, 30,30 mmol), Et3N (6,2 g, 60,60 mmol) e dioxano (100 mL) é aquecida ao refluxo durante a noite. O solvente é removido. É adicionada solução saturada de NH4C1 e extraída. A fase orgânica é concentrada para originar o produto bruto que é purificado por cromatografia em sílica gel (EtOAc/ heptano: 50-100%) para originar o composto intitulado (6,6 g, 76%) como um sólido amarelo. RMN (400 MHz, CD2C12) δ = 8, 81 (s, n t—1 8,21 (s, 1H) 7, 29 (m, 5H ), 4,83 (m, 1H), 4, 43 (m, 1H) , 4,33 (S, 2H) 3, 94 (s, 3H ) , 3,52 (m, 3H) , 3,27 (m, 1H) , 3,14 (m, 1H) 2, 31 (s, 3H) , 2,17 (s, 3H), 1, 49 (d, J = 6,5 Hz, 3H ) · HR MS (m/z, MH+) med. 433,2348.
Exemplos 74 -86: A tabela seguinte (Tabela 6) lista os exemplos de compostos preparados por aminação, como descrito no procedimento geral: TABELA 6
Exemplo Estrutura HR MS [m/z, MH+] med. 74 o jtH r~\ >~í μ-e «O W V«v, ' ' O vsçcv 419 (MS) 75 KK>Ch ' M <3 433,2341 76 VAhTVO- -O *»»· y—' 447,6 (MS) 168 ΡΕ2318389 (continuação)
Exemplo Estrutura HR MS [m/z, MH+] med. 77 V-M N-? \^/ w V... o o 431 (MS) 78 vk Vf -o H- 445,2353 79 417,4825 80 513,2225 81 °^V“v-fVN -o ^ W / / \ f % * 519,2140 82 vH-o-ru ~~o y~f VAVJ' 501,2207 83 l3e, w 515,2383 84 0. ,í~N f—. H~n F' 463 (MS) 85 KH>ck ·* ' ^ O 512 (MS) 86 WV)-TU “'V.cd ^ Wh H 530 (MS)
Exemplo 87: 3-Benzil-4,5-dimetil-6-[(R)-3-metil-4-(4-tri-fluoro-metanossulfonilfenil)-piperazin-l-il]-piridazina
O y-f r( A uma solução de 3-benzil-4,5-dimetil-6-((R)-3-metil-piperazin-l-il)-piridazina (80 mg, 0,257 mmol) em di-oxano (5 mL) é adicionado l-cloro-4-trifluoro- metanossul- - 16 9 - ΡΕ2318389 fonil-benzeno (95,2 mg, 0,385 mmol), pastilhas de hidróxido de potássio (101 mg, 1,55 mmol), naftoquinona imidazolin-2-ilideno-Pd(0) (175 mg, 0,129 mmol). A mistura é aquecida num reator de micro-ondas a 100 °C durante 120 min. É adicionada água à mistura e extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas são lavadas com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2SC>4, filtradas e concentradas. O produto bruto é purificado por HPLC (acetonitrilo/água: 10% ~ 95%, com 1-propanol a 3%), para originar um pó de cor amarelo claro (55 mg, 89%). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7,81 (d, J = 9,1 Hz, 2H) , 7,17-7,30 (m, 7H), 4,51 (m, 1H), 4,26 (s, 2H), 3,97 (d, J= 12,6 Hz, 1H), 3,55 (d, J= 12,2 Hz, 1H), 3,42 (m, 2H), 3,14 (m, 1H), 3,00 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,13 (s, 3H) , 1,31 (d, J = 6,5 Hz, 3H). HR MS (m/z, MH+) med. 505,1872 calc. 505,1885. Síntese dos exemplos 88-115
PROTOCOLO GERAL PARA A REAÇÃO DE GRIGNARD COM ÉSTERES A uma solução do éster (0,5 mmol, 1 eq.) em THF (3 mL) é adicionado brometo ou iodeto de alquil magnésio (4 mmol, 8 eq., solução em éter) a -78 °C. A mistura reacional é agitada a 0 °C durante 2 h, seguidamente diluída com DCM e lavada com NH4C1 e água. As fases orgânicas combinadas são lavadas com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04, filtradas e concentradas. A purificação por HPLC do produto bruto com acetonitrilo em 170 ΡΕ2318389 água providencia os álcoois terciários (produto principal) juntamente com pequenas quantidades das metilcetonas correspondentes. Os solventes são removidos com um liofi-lizador para providenciar os produtos como pós brancos.
Exemplo 88: 2-((R)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil-5’— i1] — propan-2-ol
A uma solução de éster metilico de ácido (R)-4-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4, 5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil-5'-carboxilico (840 mg, 1,85 mmol) em THF (12 mL) é adicionado brometo de metilmagnésio (5 mL, 15 mmol, 3 M em éter) a -78 °C. A mistura reacional é agitada a 0°C durante 2 h, seguidamente diluída com DCM e lavada com NH4C1 e água. As fases orgânicas combinadas são lavadas com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04, filtradas e concentradas. A purificação por HPLC do produto bruto com acetonitrilo em água (de 10% até 95%, com 1-propanol a 3%) ao comprimento de onda de deteção de 220 nm providencia o álcool desejado (400 mg, 50%) juntamente com pequenas quantidades da correspondente metilcetona (exemplo 95) . Os solventes são removidos com um liofilizador para providenciar os produtos como pós brancos. ΧΗ RMN (400 MHz, CD2C12) δ = 8,28 (s, 1H) , 8,10 (s, 1H) . 7,25 (m, 5H) , 4,83 (m, 1H) , 4,33 (s, 2H) , 4,20 (m, 1H) , 171 ΡΕ2318389 3, 78 (s, 1H) , 3,57 (m, 1H) , 3, 44 (m, 2H) , 3,29 (m, 1H) 3, 14 (m, 1H) , 2,31 (s, 3H) , 2, 16 (s, 3H) , 1,56 (s, 6H) 1, 40 (d, J = 6,5 Hz, 3H) * HR MS (m/z, MH+) med. 433,2713, calc. 433,2716.
Exemplos 89-111: A tabela seguinte (Tabela 7) lista exemplos de compostos preparados por adição de Grignard, como descrito acima: TABELA 7
Exemplo Estrutura HR MS [m/z; MH+] med. 89 419,2546 90 VOO«3-v / \ 4 ·% 433,2716 91 .rt /—v /C? V» %_~ y t-;.. - "" ' ' CJ' 447,2865 92 VVvfV 'x ««/ w y-f v™ 421,2559 93 445,2710 94 O -- /Λ H-N --7-^ «b 431,5 (MS) 95 ---__ ' · w 417,2395. 96 ^CXK, v-** t* r< f> 501,2599 97 H fs -------------- ""“V 519,2485 98 Λ~\ t»-N -^ Vb 513,2584 99 Wt 7/ w —--- ÍP 531,2509 172 ΡΕ2318389 (continuação)
Exemplo Estrutura HR MS [m/z; MH+] med. 100 0_ Λ-Η V”? y—% W* Γ\ t'% ' Xssa/ 485,2271 101 O /—\ H-N • ** ^ n Q F 503,2163 102 Λ /~-v f=c / o tJ 497,2258 103 V/-VO--fVo ^ y o Q ψ 515 (MS) 104 «O, /-'S /-Λ / \ # \ F 462,2679 105 m /rH r~\ N"« V*« «“*$ V-λ > w/ V---. n / ^ n··- \,^y f 448,2250 106 MO >'*! , N--ÍÍ V}—^ Vn V-f í 'osk/ \««·’ Sitt^ ΐ"Λ ! \ $ \ Vw/ F 436,2532 107 «3. .r*t r~\ í*~íl 'ΙΛ^ν^ν-Γ'Ν·^ FC / / > / % ^ ^ w 512 (MS) 108 M5M-/p3v '« ' o o 496 (MS) 109 'WKKK -i“ r 0 73 F 530,2543 110 0 í-W ,·*^ M-íí hO-O-Ο-Λ w ^ D 7) 514,2247 111 HQ /—v **~H / ) Vy r* H py 461,3036
Exemplo 112: 1-[(R)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3- il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil-5'-il]-2,2-dimetoxi-etanol
173 ΡΕ2318389 A uma solução de KOH (33 mg, 0,38 mmol) e metanol (5 mL) é adicionado o composto do exemplo 95 (20 mg, 0,048 mmol) em metanol (1 mL) e seguidamente diacetato de iodo-benzeno (23 mg, 0,072 mmol) em porções a 0 °C. A mistura é agitada à temperatura ambiente durante a noite. O solvente é removido para originar um produto bruto que é purificado por HPLC (acetonitrilo/água (1% de NH4OH), 30% ~ 100%) para originar o composto intitulado (12 mg, 52%) como um sólido amarelo. HO N- n )r\ w ΤΗ RMN (400 MHz, CD2C12) δ = 8 ,42 (s, 1H) , 8, 18 (s, 1H) , 7,29 (m, 5H) , - 4, 72 (m, 1H) , 4 ,32 (S, 2H) , 4, 30 (m, 1H) , 3,94 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 3, , 58 (m, 1H) , 3,47 (m, 2H) , 3,28 (m, 1H), 3,26 (s, 6H), 3, 13 (m, 1H) , 2, 31 (s, 3H) , 2, 16 (s, 3H), 1,44 (d, J = 6,5 Hz, 3H ) . Exemplo 113 : 1 -[(R)-4- (6- Ben: zil- -4,5- dimet i 1-pir idazi n-3- il)-2-met il-3 , 4,5 ,6-tetra -hi dro- -2H- [1,2 :']-bip iraz i nil-5 I _ il]-etanol
N /—% NN >~K N-f >"~ A uma solução do exemplo 95 (50 mg, 0,12 mmol) e MeOH (3 mL) é adicionado NaBH4 (10 mg, 0,24 mmol) a 0 °C, a seguir a mistura reacional é agitada à temperatura ambiente 0,5 h adicionais. O solvente é removido e é adicionada água, seguidamente extraída com DCM. A fase orgânica é concentrada para originar o composto intitulado (38 mg, 76%) como um sólido branco. 174 ΡΕ2318389 XH RMN ( 400 MHz, . CD2C12 ) δ = 8,04 (s, 1H) , 8, 01 (s, 1H) 7, 15 (m, 5H) , 4 ,73 (m, 1H) , 4,57 (m, 1H) , 4, 21 (s, 2H) 4, 07 (m, 1H) , 3 ,46 (m, 1H) , 3,33 (m, 2H) , 3, 15 (m, 1H) 3, 01 (m, 2H) , 2, 19 (s, 3 H) , 2 λ 0 5 (s , 3H), 1, 39 (d, J = 6, Hz f 3H) , 1,30 (d , J = 6 , 5 Hz, 3H) . HR MS {m/z, MH+) med. 419,2543.
Exemplo 114: 1 [(R) 4—(6 Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil-5'-il]-2-hidroxi-etanona A uma solução de KOH (224 mg, 4,0 mmol) e CH3OH (10 mL) é adicionada 1-[(R)-4-(6-benzil-4,5-dimetil-piri-dazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazi-nil-5'-il)-etanona (400 mg, 1,0 mmol) em CH3OH (10 mL) e seguidamente diacetato de iodobenzeno (464 mg, 1,5 mmol) em porções a 0 °C. A mistura é agitada à temperatura ambiente durante a noite. O solvente é removido e seguidamente extraída com DCM. A fase orgânica é lavada com NH4C1 aguoso e a seguir concentrada para originar o exemplo 112 bruto. Este material é dissolvido em água e seguidamente é adicionado HC1 6 N (5 mL) . A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 3 h. A seguir é tornada básica com NaHC03 e extraída com DCM. A fase orgânica é concentrada para originar um produto bruto que é purificado por cromato-grafia em sílica gel (EtOAc/Heptano: 50% ~ 100%) para 175 ΡΕ2318389 originar o composto intitulado (240 mg, 58%) como um sólido amarelo. 2h RMN (400 MHz, r CD2C12 ) δ = 8,82 (s, i—1 8, 15 (s, 1H) 7, 27 (m , 5H) , 4, r 91 (s, 2H) , 4, 86 (m, 1 H) , 4, 48 (m, 1H) 4, 33 (s , 2H) , 3 ,57 (m, 2H) , 3,46 (m, 1H) , 3, 30 (m, 2H) 3, 14 (m, - 1H) , 2, 31 (s, 3H) , 2,17 ( s, 3H ), 1, 50 (d, , J = 6,
Hz, 3H). HR MS (m/z, MH+) med. 433,2340.
Exemplo 115: 1-[(R)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)- 2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il)-etano-1,2-diol HO'
HO ν/“ν-/Λ ^-/
N-N
A uma solução de 1-[(R)-4-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil-5'-il]-2-hidroxi-etanona (Exemplo 114, 110 mg, 0,25 mmol) e EtOH (20 mL) é adicionado NaBH4 (14 mg, 0,38 mmol) a 0 °C. A mistura é aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 3 h. A solução reacional é acidificada com HC1 3 N até pH ~ 7, e o solvente orgânico é removido. O resíduo é dissolvido em solução saturada de NaHC03 e extraído com DCM. A fase orgânica é concentrada para originar o composto intitulado (96 mg, 91%) como um sólido branco. ΤΗ RMN (400 MHz, CD2C12) δ = 8,09 (s, 1H), 8,00 (s, 1H) , oo \—1 r- (m, 5H) , 4,64 (m, 1H) , 4,57 (m, 1H) , 4,26 (s, 2H) , o \—1 (M, 1H) , 3,60 (m, 2H) , 3,48 (m, 1H) , 3,34 (m, 2H) , 176 ΡΕ2318389 3,18 (m, 1H), 3,02 (m, 1H) , 2,21 (s, 3H) ; 2,06 (s, 3H) , 1,30 (d, J = 6,5 Hz, 3H). HR MS (m/z, MH+) med. 435,2511. Síntese dos exemplos 116 e 117
Exemplo 116: Ácido (R)-4-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-5'-carboxílico
O éster metílico do ácido (R)-4-(6-benzil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'] bipirazin-5'-carboxílico (1,8 g, 4,16 mmol) é combinado com LiOH (998 mg, 42 mmol), H2O (20 mL) , THF (20 mL), e MeOH (10 mL). A mistura combinada é deixada a agitar à temperatura ambiente durante 16 h. É concentrada para remover os solventes orgânicos in vacuo. É adicionada água adicional e o pH é ajustado a 4,0 com HC1 ou tampão fosfato. A solução é extraída com EtOAc e os extratos orgânicos combinados são lavados com solução aguosa saturada de cloreto de sódio. O extrato é seco sobre sulfato de sódio e filtrado para remover o agente de secagem. O filtrado é concentrado para originar o composto intitulado (1,46 g, 84%) . ΤΗ RMN (400 MHz, CD2C12) δ = 8,89 (s, 1H) , 8,10 (s, 1H) 7,27 (m, 5H) , 4,84 (m, 1H) , 4, 44 (m, 1H) , 4,34 (s, 2H) 3,58 (m, 3H), 3,31 (m, 1H) , 3,16 (m, 1H) , 2,32 (s, 3H) 177 ΡΕ2318389 2,18 (s, 3H), 1,50 (d, J= 6,5 Hz, 3H). HR MS (m/z, MH+) med. 419,2200.
Exemplo 117; Ácido 2-[(R)-4-(6-benzil-4,5-dimetil-pirida-zin-3-il)-2-metil-piperazin-l-il]-trifluorometil-pirimidi-no-5-carboxílico
F»C
A uma solução de 2-[(R)-4-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-piperazin-l-il]-4-trifluorometil-pirimidino-5-carboxilato de metilo (500 mg, 1,0 mmol, 1,0 eq) em THF (5 mL) é adicionada uma solução aquosa de LiOH (1 M, 2,0 mL, 2,0 mmol, 2,0 eq) e a solução resultante é aquecida até 75°C durante 4 h. A mistura reacional é diluída com EtOAc (50 mL) e lavada com água (3 x 15 mL). As lavagens aquosas combinadas foram ajustadas até pH 6 com HC1 aquoso (1 M) , seguidamente extraídas com diclorometano (3 x 50 mL). As fases orgânicas combinadas são secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para originar o produto desejado como um sólido branco (470 mg, 96%) . ΤΗ RMN (400 MHz, MeOH-d4) δ = 8,97 (s, 1H) , 7,23-7,30 (m, 2H), 7,10-7,22 (m, 3H) , 5,11-5,23 (m, 1H) , 4, 77-4, 86 (m, 1H), 4,31 (s, 2H), 3,52-3,64 (m, 2H), 3,50 (d, J= 12,5 Hz, 1H), 3,17 (dd, J= 12,5 Hz, 3,5 Hz, 1H), 2,97-3,09 (m, 1H), 2,3 7 (s, 3H) , 2,17 (s, 3H) , 1,4 7 (d, J = 6,5 Hz, 3H) . HR MS (m/z, MH+) med. 487,2088. 178 ΡΕ2318389 Síntese dos exemplos 118 - 144
PROTOCOLO GERAL PARA A FORMAÇÃO DA AMIDA COM ÁCIDO DO EXEMPLO 116 PARA ORIGINAR OS EXEMPLOS 118 ATÉ 140 ADICIONAIS Método A:
Uma mistura do exemplo 116 (40 mg, 0,10 mmol) e SOCI2 (10 mL) é aquecida até ao refluxo durante 1 hora e seguidamente o solvente é removido. O resíduo é dissolvido em DCM (2 mL) e transferido para uma solução da amina (0,14 mmol) e DCM (3 mL) . A mistura reacional é agitada à temperatura ambiente durante 2 h. É adicionada água (10 mL) e a mistura extraída com DCM (3 x 20 mL). A fase orgânica é concentrada para originar um produto bruto que é purificado por HPLC [acetonitrilo/água (1% de NH4OH), 30% ~ 100%] para originar o produto (exemplos 118 até 132, 20% ~ 84%). Método B:
Uma mistura do exemplo 116 (40 mg, 0,10 mmol), HATU (73 mg, 0,14 mmol), diisopropiletilamina (37 mg, 0,29 mmol), dimetilacetamida (1,5 mL) e a amina (0,14 mmol) é agitada à temperatura ambiente durante 10 h. O produto bruto é purificado por HPLC (acetonitrilo/água (propanol a 3%), 30% ~ 100%) para originar o produto (exemplos 133 até 140, 37% ~ 55%). 179 ΡΕ2318389
Exemplos 118-140: A tabela seguinte (Tabela 8), lista os exemplos de compostos preparados por formação da amida, tal como descrito acima: TABELA 8
Exemplo Estrutura HR MS [m/z, MH+] med. 118 >~f H-í f-~\ ,—>{ j—/ /"% W 516,3076 119 , VfWVV. H r* n Vee/ 460,2810 120 VjÍ SVm jK"f ,'-ν' )&»/ j—' f“^x f 501,3091 121 WO-TK ζ*ϊ / ' Λ £) 486,2969 122 η H >»-/ w 529,3404 123 OH ^ 476,2772 124 Οι w / } t ( > \«*r 515,3204 125 VAOCh V./ w / NO 530,3240 126 Vf*W"P V\ w w 488,2773 127 vno-CK- R ^ r> «0 ON 492,2732 128 , VTKtCH, ^ ^ r r\ ¢) 458,2668 129 502,2933 130 0 4~* ,··' « 490,2907 131 IT 501,2723 180 ΡΕ2318389 (continuação)
Exemplo Estrutura HR MS [m/z, MH+] med. 132 es ,,-n ,—\ m-h W j~“\ /-4 W y~> W HO~/ \ / \ ^ * 476,2763 133 N M-lí 474,2962 134 8 N / / \ f \ W/ 500,2369 135 Q \: V-K «w M / / \ ( y 490,2918 136 Ο, λ«·Ν }-*·. p~~í y~\ ^../"8 »“· /- r\ r\ HO 476,2776 137 O c('"W"S5 N / H ^ 531,3190 138 vy 523,2917 139 ^ r' A A 544,3489 140 <t /-s 5“-N 5—s c>/-s v- r h 0 515,3224
Exemplo 141: (2-Hidroxi-etil)-metil-amida do ácido 2-[(R)~ 4-(6-benzil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-piperazin-1 — i1]-4-trifluorometil-pirimidino-5-carboxílico
NO J'
H %
N*N
Saoa/ A uma solução de ácido 2-[(R)-4-(6-benzil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-piperazin-l-il]-4-trifluo-rometil-pirimidino-5-carboxilico (45 mg, 0,1 mmol, 1 eq) em THF (2 mL) é adicionado um excesso de cloreto de oxalilo (100 μΕ, 1,2 mmol, 12 eq) e uma quantidade catalítica de DMF e a solução resultante é agitada à temperatura ambiente durante 45 min, altura em que é adicionada N-2- 181 ΡΕ2318389 hidroxietil, N-metil-amina (200 μΐ^ 2,5 mmol, 25 eq) , e a reação é agitada durante 1 h adicional. A mistura reacional é diluída com EtOAc (50 mL) e lavada com água (2 x 10 mL), seguida de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 10 mL). A fase orgânica é seca sobre sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida a um resíduo branco. O composto desejado é isolado por cromatografia em sílica gel (CH2CI2 - 20% de MeOH/CH2Cl2) como um sólido branco (43 mg, 79%). XH RMN (400 MHz, MeOH-d4) δ = 8,55 (d, J = 2, 6 Hz, 1H) , 7, 22- 7, 29 (m, 2H) , 7,11-7, 20 (m, 3H), 5, 05- -5, 15 (m, 1H) , 4, 69- 4, 79 (m, IH) , 4,30 (s# , 2H), 3,! 30 (t , J = 5 , 7 Hz, 2H) , 3, 66 (t r J = 5,6 Hz, 2H), 3,50-3,60 (m, 2H) , 3, 43- -3, 50 (m, 2H ) , 3, 15 (dt , J = 12,6 Hz, 4,2 Hz, 1H) , 2,97 -3, 07 (m, 1H) , 2, 35 (s r 3H) , 2,16 (s, 3H), 1,45 (d, J = 8,3 Hz, 3H) . HR MS (m/z, MH+) med. 544,2647.
Exemplo 142: Metoxi-metil-amida do ácido (R)-4-(6-benzil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxílico
O ácido (R)-4-(6-benzil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxílico (50 mg, 0,120 mmol) é dissolvido em CH2CI2 (300 μί). A mistura é arrefecida até 0 °C e é adicionado cloreto 182 ΡΕ2318389 de oxalilo (32 μΕ, 0,358 mmol) seguido por DMF (3 gotas). Durante a agitação, a reação é aquecida até à temperatura ambiente durante 3 h. É adicionada diisopropiletilamina (209 μ]1ι, 1,2 mmol) gota a gota seguida pela adição de cloridrato de N,O-dimetil-hidroxilamina (14 mg, 0,144 mmol). Deixar a reação a agitar durante 16 h. Concentrar a mistura bruta in vacuo. O resíduo é purificado por cromatografia flash em sílica gel (MeOH/CH2Cl2) para originar o composto intitulado (42 mg, 76%).
Via alternativa para preparar o Exemplo 95:
Exemplo 95: 1-[(R)-4-(6-Benzil)-4,5-dimetil-piridazin-3- il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il]-etanona
A metoxi-metil-amida do ácido (R)-4-(6-benzi1)-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinil-5'-carboxílico (exemplo 142, 450 mg, 0,975 mmol) é dissolvida em THF (1 mL) e arrefecida até 0 °C. É adicionado gota a gota iodeto de metil-magnésio (325 μΐϋ, 0,975 mmol). A reação é aquecida até à temperatura ambiente e continuada a agitação durante 16 h. Adicionar H20 (1 gota) e concentrar mistura reacional in vacuo. O resíduo é purificado por cromatografia flash em sílica gel (60-100% de EtOAc/heptano e 0-8% de MeOH/EtOAc) para originar o composto intitulado (350 mg, 86%). 183 ΡΕ2318389
Exemplo 143: (R)-4-(6-Benzil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-5'-isopropeni1-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinilo
Iodeto de metiltrifenilfosfónio (410 mg, 1,010 mmol) é adicionado a THF (5,5 mL) e arrefecido até 5 °C. É adicionado gota a gota terc-butóxido de potássio (1,1 mL, 1 M em THF, 1,1 mmol) e a reação é agitada durante 30 min. É adicionada 1-[(R) -4-(6-benzil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il]-etanona (350 mg, 0,841 mmol) em THF (1,5 mL) à reação. A reação é deixada a agitar durante 1 h, a 5 °C, e seguidamente é removido o banho de gelo e a reação é deixada a agitar durante 16 h à temperatura ambiente. Remover o THF in vácuo. O resíduo é purificado por cromatograf ia flash em sílica gel (60 - 90% de EtOAc/ heptano) para originar o composto intitulado (130 mg, 37%).
Exemplo 144: 2-[(R)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)- 2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il]-propano-1,2-diol
(R)-4-(6-benzil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il) - 5 ' -isopropeni1-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazi- 184 ΡΕ2318389 nilo (Exemplo 143, 120 mg, 0,290 mmol) é suspenso em acetona (2 mL), terc-butanol (1 mL) , e H2O (1 mL) . A esta suspensão é adicionado K2OSO4 (9,6 mg, 0,029 mmol) e NMO (37,4 mg, 0,319 mmol). A reação é agitada à temperatura ambiente durante 16 h. É concentrada in vacuo. Adicionar H20 e extrair com EtOAc. Lavar os orgânicos combinados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e concentrar in vacuo. O resíduo é purificado por cromatografia flash em sílica gel (MeOH/CH2Cl2) para originar o composto intitulado (49,2 mg, 38%). 1R RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,32 (d, J = 1,4 Hz, 1H) , 8,27 -8, 16 (m, 1H) , 7, 33-7, 23 I [m, 2H) , 7, 22-' 7, 13 (m, 3H) ; 4, 98 (d r J = 1 , 0 Hz, 1H), 4,74- -4,62 (m, 1H) , 4, 58 (td, J = 6,2 Hz, 1 , 0 Hz , 1H), 4,25 (s, 2H), 4,18 (dm, J = 12,9 Hz, 1H) , 3, 55 -3,46 (m, 1H), 3,49 (d , J = 5,8 Hz, 2H), 3,40 (dm, J = 12, 4 Hz, 1H), 3, 29 (td, J = = 12,5 Hz, 3,2 Hz, 1H) , 3,07 (dd, J = 12,3 Hz, 3, 5 Hz, 1H), 2,95 (td, J = 12,3 , 3,2 Hz, 1H) , 2, 26 (S, 3H) , 2 ,12 (s, 3H) , 1,36 (s r 3H) , 1, 28 (d , J= 6,4 Hz, 3 H) . HR MS {m/ z, MH' H) med. 449,2667, calc. 449 , 2665 φ Síntese dos exemplos 145-158 PROTOCOLO GERAL PARA A AMINAÇAO DOS CLORETOS DE PIRIDAZINA XII COM AMINAS PARA PRODUZIR OS EXEMPLOS 145 ATÉ 154 (VIA A) A uma solução dos cloretos de piridazina XII (0,34 mmol) em NMP ou dioxano/DMF (3 mL) é adicionada a piperaz ina substituída (0,49 mmol) e TEA (0,15 mL, 1, 08 185 ΡΕ2318389 mmol). A mistura é aquecida num sintetizador de micro-ondas a 210 °C durante 60 min. É adicionada água e a mistura resultante é extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas são lavadas com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2SC>4, filtradas e concentradas. O produto bruto é purificado por cromatografia em sílica gel (EtOAc/Hexano: 10% ~ 70%), para originar os exemplos Ip.
Exemplos 145-154: A tabela seguinte (Tabela 9) lista os exemplos de compostos preparados por aminação, tal como descrito acima: TABELA 9
Exemplo Estrutura HR MS [m/z, MH+] med. 145 + V X» 433,2760 146 $ 459,2924 Λ V cCa 147 0’ Φ YU 428,2062 ΡΕ2318389 (continuação)
Exemplo Estrutura HR MS [m/z, MH+] med. 148 A? ífN y Ό 440,2065 149 CF, 0 Λ 'N Ό, 446,1960 150 CFa 0 rNi V CÒ Of 458,1984 151 CF. ¢. Á ''fi r'rAH Χ5'ρ 472,2124 152 co,et 0 0 /V^N xA?n \xr 462 (MS) 153 COM lÁ *^N fj V 3¾ 450,2307 187 ΡΕ2318389 (continuação)
Exemplo 155: Ester fenílico de ácido 4-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il-piperazino-l-carboxílico
N
A uma solução de 3-benzil-4,5-dimetil-6-pipera-zin-l-il-piridazina (60 mg, 0,21 mmol) e cloroformato de fenilo (40 mg, 0,26 mmol) em CH2CI2 (3 mL) a 25 °C, é adicionada N-metil morfolina (0,07 mL, 0,60 mmol). Depois de ser agitada a 25 °C durante 3 h, a mistura é diluída com CH2CI2 (10 mL) , e lavada com bicarbonato de sódio saturado (1 mL) e água (2x5 mL) . A fase orgânica é concentrada e purificada por HPLC (CH3CN/H2O: 22% ~ 45% com 0,1% de TFA) para originar o éster fenílico do ácido 4-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperazino-l-carboxílico (69 mg, 81%) . 1H-RMN (400 MHz, CDCI3) δ = 2,28 (3H, s), 2,41 (3H, s), 3,40 (4H, d), 3,81 (4H, d), 4,50 (2H, s), 7,13 (2H, d), ΡΕ2318389 7,20 (2Η, d), 7,27 (2H, m), 7,33 (2H, m), 7,38 (2H, m). HR MS (m/z, MH+) med. 403,2115.
Exemplo 156: Fenilamida do ácido 4-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il-piperazino-l-carboxílico
H
KJ V"'
IJ A uma solução de 3-benzil-4,5-dimetil-6-pipera-zin-l-il-piridazina (60 mg, 0,21 mmol) ) em CH2CI2 (5 mL) a 25 °C é adicionado isocianato de fenilo (33 mg, 0,28 mmol). Depois de ser agitada a 25 °C durante 2 h, a mistura reacional é concentrada e purificada por HPLC (CH3CN/H2O: 22% ~ 45% com 0,1% de TFA) para originar a fenilamida do ácido 4-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperazino-1- carboxilico (49 mg, 58%). 1H-RMN (400 MHz, CDCI3) δ = 2, 12 (3H, s), 2,21 (3H, s 3,27 (4H, t ), 3,67 (4H, t), 4,30 (2H, s), 7, 01 (1H, t 7,19 (3H, m), 7,25 (4H, m), 7,39 (2H, d). HR MS {m/z, MH+) med. 402,2279.
Exemplo 157: Benzilamida do ácido 4-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperazino-l-carboxilico ΡΕ2318389 ο
r,N 'Ν Ί
A uma solução de 3-benzil-4,5-dimetil-6-pipera-zin-l-il-piridazina (60 mg, 0,21 mmol) ) em CH2CI2 (5 mL) a 25 °C é adicionado isocianato de benzilo (37 mg, 0,28 mmol) . Após de ser agitada a 25 °C durante 2 h, a mistura reacional é concentrada e purificada por HPLC (CH3CN/H2O: 22% ~ 45% com 0,1% de TFA) para originar a benzilamida do ácido 4-(6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperazino-1-carboxílico (46 mg, 60%). 1H-RMN (400 MHz, CDCI3) δ = 2,24 (3H, s), 2,34 (3H, s 3,33 (4H, t ), 3,58 (4H, t: >, 4,44 (2H, s), 4,49 (2H, s 7,19 (2H, d) , 7,26 (2H, m), 7,30 (2H, m) , 7,32 (4H, m) . HR MS {m/z, MH+) med. 416,2437.
Exemplo 158: 3-Benzil-6-(4-benzil-piperazin-l-il)-4,5-dime-til-piridazina
f
A uma solução de 3-benzil-4,5-dimetil-6-pipe-razin-l-il-piridazina (40 mg, 0,14 mmol)) em CH2CI2 (1,6 190 ΡΕ2318389 mL) e THF (1,6 mL) a 25 °C é adicionado benzaldeído (23 mg, 0,21 mmol), ácido acético (2 gotas) e triacetoxiborohidreto de sódio (90 mg, 0,43 mmol). Após de ser agitada a 25 °C durante 2 h, a mistura é diluída com CH2C12 (10 mL) e lavada com bicarbonato de sódio saturado (2 mL) e água (5 ml) . A fase orgânica é concentrada e purificada por HPLC (CH3CN/H20: 22% ~ 45% com 0,1% de TFA) para originar a 3- benzil-6-(4-benzil-piperazin-l-il)-4,5-dimetil-piridazina (20 mg, 37%). 1H-RMN (40 0 MHz, MeOH-d4) δ = 2,00 (3H, s), i—1 \—1 CM (3H, s) 2,56 (4H, t), 3,12 (4H, t), 3,51 (2H, s), \—1 (2H, s) 7,05 (3H, m), 7,15 (3H, m), 7,25 (4H, m). HR MS (m/z, MH+) med. 373,2378.
Arilmetil-piridazinas de 5 membros O Esquema 7 mostra um esquema de síntese geral para a preparação de compostos de fórmula geral Iq até Is. As piridazinas cloro substituídas Illa podem ser feitas reagir com acetonitrilo sob tratamento com uma base forte (e.g. LiHMDS) para formar os intermediários XlVa. A hidrólise da funcionalidade nitrilo providencia os intermediários ácidos XlVb e subsequente acoplamento de amida com hidrazidas ácidas originando os intermediários XIVc. Os intermediários XlVa podem ser feitos reagir com hidroxilamina e N,N-dimetilformamida-dimetilacetal a exemplos Iq ou podem providenciar exemplos de tetrazole Ir por reação com azida de sódio seguida de alquilação (e.g. brometos ou iodetos). Os intermediários XIVc podem ser condensados e.g. com trifenilfosfina para os exemplos Is. 191 ΡΕ2318389
£3 j: «3 i 1 r 'i Sr R2·. A-, Ti '*t \ j xsr uwíssds ? -.........- R2, A MeCN ’Ί dl ,/M ns' γ j Cl ) llla XlVa NC HCI; ága<i j -- WsyL
R2 1
XlVb h°2C
ESQUEMA 7
RS
Síntese dos intermediários XIV 4,5-Dimetil-6-[4-5-trifluorometil-piridin-2-il)-piperazin-1-il]-piridazin-3-il-acetonitrilo (composto 67) ψ
VA
3-Cloro-4,5-dimetil-6-[4-(5-trifluorometil-piri-din-2-il)-piperazin-l-il]-piridazina (1,0 g, 2,64 mmol), acetonitrilo (0,225 mL , 4,22 mmol), e tolueno (5 mL) são combinados e arrefecidos até 0 °C. É adicionado LiHMDS (8,4 mL, 1,0 M, 8,4 mmol) gota a gota durante 5 min. A reação é 192 ΡΕ2318389 agitada a 0 °C durante 1 h, seguidamente aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 16 h adicionais. A reação é extinta pela adição de solução aquosa saturada de NH4C1, e os orgânicos são extraídos com EtOAc. As fases orgânicas combinadas são secas sobre MgSCq e concentradas. 0 resíduo é purificado por meio de cromatografia flash em sílica gel (0-100% EtOAc em heptanos) para originar o composto intitulado como um sólido laranja (500 mg, 50%). ΧΗ RMN (400 MHz, CDCI3) δ = 8,36 (s, 1H) , 7,60 (dd, J O OA II Hz, 2,5 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 3,96 (s, 2H) , 3,72-3,78 (m, 4H), 3,26-3,37 (m, 4H), 2,26 (d, J= 13,1 Hz, 6H) . MS (m/z, MH+) med. 377,2 . Ácido {4,5-dimetil-6-[4-(5-trifluorometil-piridin-2-il)-pi-perazin-l-il]-piridazin-3-il}-acético (composto 68)
OH {4,5-Dimetil-6-[4-(5-trifluorometil-piridin-2-il)-piperazin-l-il]-piridazin-3-il}-acetonitrilo (210 mg, 0,56 mmol) e HC1 6 M (1,0 mL) são adicionados a um tubo selado e seguidamente aquecidos até 100 °C durante 16 h. Os orgânicos são extraídos com CH2C12. A porção aquosa é neutralizada até pH ~ 7 com solução de bicarbonato de sódio e extraída com EtOAc. O composto alvo permanece na fase aquosa. Esta fase é concentrada sob pressão reduzida e o resíduo é triturado várias vezes com MeOH e seguidamente 193 ΡΕ2318389 seco in vacuo para originar o composto intitulado (280 mg, quant). N'-(2-{4,5-Dimetil-6-[4-(5-trifluorometil~pinidin-2-il)-pi-perazin-3-il}-piridazin-3-il}-actil-hidrazida do ácido acético (Composto 69)
A hidrazida do ácido acético (20,6 mg, 0,28 inmol) é adicionada a um balão de fundo redondo sob N2, seguido de DMF (5 mL). É adicionada diisopropiletilamina (0,25 mL) e a reação é agitada durante 30 min. É adicionado ácido {4,5— dimetil-β-[4-(5-trifluorometilpiridin-2-il)-piperazin-1-il]-piridazin-3-il}-acético (110 mg, 0,28 mmol) e a reação é agitada durante 1 h. São adicionados HOBT (42 mg, 0,311 mmol) e HBTU (116,8 mg, 0,31 mmol) e a reação é deixada a agitar durante 16 h. A mistura reacional bruta é purificada através de cromatografia flash em sílica gel (0-30% de metanol em diclorometano) para originar o composto intitulado (114 mg, 90%). Síntese dos exemplos 159-162
Exemplo 159: 4,5-Dimetil-3-(5-metil-(1,2,4)oxadiazol-3-il- metil)-6-[4-(5-trifluorometil-piridin-2-il)-piperazin-1-il]-piridazina 194 ΡΕ2318389
4,5-Dimetil-6-[4-(5-trifluorometil-piridin-2-il)-piperazin-l-il]-piridazin-3-il-acetonitrilo (120 mg, 0,32 mmol) é combinado com hidroxilamina (63 mg, 0,96 mmol) e THF (2 mL) . A mistura reacional é aquecida até ao refluxo durante 3 h. Concentrar a reação e redissolver o resíduo em dimetilacetamida dimetilacetal (500 mL). Aquecer esta solução durante 16 h ao refluxo. Concentrar a mistura resultante in vacuo. O resíduo é purificado por cromatografia flash em sílica gel (MeOH/CH2Cl2) para originar o composto intitulado (62,3 mg, 45%). 2Η RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,44 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 7, 83 (dd, J = = 9,1 Hz, 2,5 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 9, 1 Hz, 1H) , 4,34 (S, 2H) , 3, 86-3, 76 (m, 4H) , 3, 26-3,18 (m, 4H) , 2,54 (s, 3H), 2,27 (s, 3H) , 2,22 (s, 3H). HR MS (m/z, MH+) : med. 434, 1913 calc. 434, 1916.
Exemplos 160 e 161: 4,5-Dimetil-3-(l-metil-lH-tetrazol-5- ilmetil)-6-[4-(5-trifluorometil-piridin-2-il)-piperazin-l-il ]-piridazino & 4,5-Dimetil-3-(2-metil-2H-tetrazol-5-ilme-til)-6-[4-(5-trifluorometil-piridin-2-il)-piperazin-l-il]-piridazina
F
N \ ,H— 195 ΡΕ2318389 4,5-Dimetil-6-[4-(5-trifluorometil-piridin-2-il) -piperazin-l-il]-piridazin-3-il-acetonitrilo (120 mg, 0,32 mmol) é combinado com cloreto de zinco (II) (43,5 mg, 0,32 mmol) e azida de sódio (25 mg, 0,38 mmol) em H20 (5 mL) . A mistura é aquecida até ao refluxo durante 4 h, e seguidamente arrefecida até à temperatura ambiente. O tetrazole livre é isolado por filtração, dissolvido em DMF (4,2 mL) e utilizado sem purificação adicional. É adicionado carbonato de césio (128,5 mg, 0,395 mmol) e a mistura reacional é arrefecida até 0 °C. É adicionado gota a gota iodeto de metilo (16 μΗ, 0,263 mmol), e a reação é agitada e deixada aquecer até à temperatura ambiente durante 16 h. Arrefecer novamente até 0 °C e adicionar iodeto de metilo adicional (24 \ih, 0,3 95 mmol). Deixar a reação aquecer até à temperatura ambiente durante 16 h. Concentrar a reação in vacuo e remover por filtração os sólidos. Lavar com MeOH. 0 sólido restante é dissolvido em H20 e TFA e purificado através de HPLC (CH3CN/H20) para originar os compostos intitulados como uma mistura 57:43 de regioisómeros (22,2 mg, 20%). ΤΗ RMN (mistura de compostos, a 600 MHz, DMSO-de) δ = 8,44 (s, 1H), 7,83 (d, J= 9,1 Hz, 1H), 7, 07-6, 99 (m, 1H) , 4,62 (s, 1,1 H), 4,50 (s, 0,9 H) , 4,30 (s, 1,3 H) , 4,00 (s, 1,7 H), 3,85-3, 76 (m, 4 H), 3,24-3,16 (m, 4H); 2,29 (s, 1,7 H) , 2,26 (s, 3H), 2,21 (s, 1,3 H) . HR MS (m/z, MH+) med. 434.2035, calc. 434,2029.
Exemplo 162: 4,5-Dimetil-3-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il- metil)-6-[4-(5-trifluorometil-piridin-2-il)-piperazin-l-il ] -piridazina 196 ΡΕ2318389
γ ,Χ-Ν >aj/ U Ν— / \ Ν'-(2-{4,5-dimetil-6-[4-(5-trifluorometil-piridin -2-il)-piperazin-3-il}-piridazin-3-il}-acetil-hidrazida do ácido acético (114 mg, 0,248 mmol) é adicionada a um balão de fundo redondo sob N2, seguido por acetonitrilo (3 mL), diisopropiletilamina (0,27 mL, 1,43 mmol) e trifenilfosfina (115,5 mg, 0,44 mmol) e a reação é agitada durante 30 min. É seguidamente adicionado hexacloroetano (77,5 mg, 0,329 mmol) e a reação é agitada durante 16 h. A mistura bruta é purificada por HPLC (hidróxido de amónio como um modificador) para originar o composto intitulado (8 mg, 7%). HR MS (m/z, MH+) med. 434, 1934, cale. 434, 1916.
Sintese dos exemplos 163 e 164
Os exemplos 163 e 164 são preparados a partir de incubação de 200 mg do exemplo 88, com o CYP3A4 recom-binante humano para originar após isolamento e purificação os compostos mencionados abaixo como sólidos brancos.
Exemplo 163: 2-[(R)-4-(6-Benzil-5-hidroximetil-4-metil-pi- ridazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bi-pirazinil-5'-il]-propan-2-ol
197 ΡΕ2318389
Rendimento: 6,5 mg
Exemplo 164: 2-[(R)-4-(6-Benzil-4-hidroximetil-5-metil- piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'] bipirazinil]-propan-2-ol
Rendimento: 8,2 mg
Os compostos da presente invenção são espécies de um género de compostos mostrados na publicação dos Estados Unidos US-A-2010 069368. Os dados comparativos seguintes mostram as melhorias na potência e solubilidade através de uma comparação dos exemplos mais próximos, e.g., os compostos nos. 92, 93, 93a, b, c a partir da publicação US-A-2010 069368 com exemplos da presente invenção:
Pedido 60/89499
Exenplo no. RG& (agonista de Smo 1 riM) IC® [nM] RG& (agonista de Smo 25 riM) IC® [nM] Lig. a Smo de murganho 1¾ [nM] Lig. a Smo de ser humano ICso [riM] Solubilidade em equilíbrio a pH 6,8 [μΜ] 92 266 7558 197 247 <5 93 367 42 <5 93a 211 356 61 <5 93b 168 529 139 204 <5 93C 22 236 62 101 <5 ΡΕ2318389
Exemplos da presente invenção
Exatplo RGA. (agonista de RGA. (agonista de Lig. a Smo Lig. a Smo de Solubilidade em no. Smo 1 riM) IC50 Smo 25 riM) IC50 de murganho ser humano equilíbrio a pH [riM] [riM] 1¾ [riM] 1¾ [riM] 6,8 [|JM] 2 2 23 8 4 48 2 25 8 5 425 50 6 114 32 29 > 1000 54 7 83 30 22 619 88 1 14 3 9 44 89 2 60 15 11 11 90 1 34 7 6 18 91 5 57 8 8 92 4 58 10 10 93 1 14 3 1 20 95 8 110 9 8 96 6 62 4 3 97 3 35 2 2 98 11 69 6 6 99 5 72 3 2 104 5 70 9 14 105 3 35 6 7 106 5 76 5 7 107 2 23 3 3 108 4 33 109 3 38 2 2 111 1 18 2 1 144 5 83 19 24 270
ATIVIDADE BIOLOGICA A atividade dos compostos foi avaliada utilizando um ensaio de gene repórter (RGA) em células TMHhl2. 0 IC50 199 ΡΕ2318389 para antagonismo de atividade de Gli-luciferase foi testado na presença de concentrações crescentes de um agonista de molécula pequena que se liga a Smo com uma afinidade de 1 nM e ativa a via de Hh (Frank-Kamenetsky et al. 2002, Journal of Biology 1, 10.1-10.19). Os compostos antagonistas do rastreio que demonstraram IC50s aumentados para Gli-luc à medida que a dose agonista é aumentada poderão estar a interatuar diretamente com Smo (quer através de competição para o mesmo sitio de ligação no Smo, ou através de competição entre um estado conformacional ativo de Smo que é induzido pelo agonista e um estado inativo que é induzido pelo antagonista de teste). Em experiências de validação, uma variedade de antagonistas de Smo de pequena molécula demonstram um comportamento de "desvio de IC5o". A Tabela 10 lista o IC50 de antagonistas determinados na presença de diferentes concentrações (1 nM e 25 nM) de um pequeno agonista de Smoothened (Frank-Kamenetsky et al. 2002, Journal of Biology 1, 10.1-10.19).
Foi desenvolvido um ensaio de ligação a Smo utilizando um agonista de smoothened radiomarcado para competição de composto. A Tabela 10 lista o IC50 para a substituição de um agonista de Smoothened de molécula pequena determinado num formato de ligação a filtro para o receptor de Smoothened no murganho e no ser humano. ΡΕ2318389 200 TABELA 10
Exaiplo RGA (agonista de RGA (agonista de Lig. a Smo de Lig. a Smo de ser no. ano 1 riM) 1¾ [μΜ] Smo 25 riM) 1¾ [μΜ] murganho 1¾ [μΜ] humano 1¾ [μΜ] 2 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 3 0,1-1 1-10 0,1-1 0,1-1 4 0,1-1 1-10 0,1-1 0,1-1 5 <0,1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 6 1-10 1-25 <0,1 <0,1 7 1-10 1-25 <0,1 <0,1 8 1-10 1-25 0,1-1 0,1-1 9 1-10 1-25 1-10 1-10 10 <0,1 <0,1 <0,1 11 <0,1 1-10 <0,1 12 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 13 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 14 1-10 1-25 0,1-1 1-10 15 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 16 <0,1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 17 0,1-1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 18 0,1-1 1-10 <0,1 <0,1 19 0,1-1 0,1-1 <0,1 <0,1 20 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 21 0,1-1 1-10 <0,1 <0,1 22 0,1-1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 23 0,1-1 0,1-1 <0,1 0,1-1 24 0,1-1 0,1-1 25 0,1-1 1-10 <0,1 <0,1 26 0,1-1 1-10 0,1-1 0,1-1 27 1-10 1-10 0,1-1 0,1-1 28 1-10 1-10 <0,1 <0,1 29 1-10 1-10 <0,1 <0,1 30 1-10 1-10 1-10 1-10 31 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 32 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 ΡΕ2318389 201 (continuação) Ξχιεπρίο FGA. (agonista de FGA. (agonista de Lig. a Smo de Lig. a Smo de ser no. Smo 1 nM) 1¾ [|JM] aro 25 ríM) IC® [μΜ] murganho 1¾ [μΜ] humano 1¾ [μΜ] 33 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 34 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 35 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 36 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 37 <0,1 0,1-1 0,1-1 <0,1 38 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 39 <0,1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 40 <0,1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 41 0,1-1 1-25 <0,1 0,1-1 42 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 43 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 44 <0,1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 45 0,1-1 0,1-1 <0,1 <0,1 46 <0,1 <0,1 <0,1 0,1-1 47 <0,1 <0,1 48 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 49 <0,1 1-10 0,1-1 0,1-1 50 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 51 52 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 53 <0,1 1-10 0,1-1 <0,1 54 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 55 56 0,1-1 1-10 1-10 1-10 57 0,1-1 1-25 1-10 1-10 58 0,1-1 1-10 0,1-1 0,1-1 59 1-10 1-25 1-25 1-10 60 0,1-1 1-10 0,1-1 1-10 61 0,1-1 1-10 1-10 1-10 62 0,1-1 1-25 1-10 1-10 63 0,1-1 1-10 0,1-1 0,1-1 64 <0,1 0,1-1 65 0,1-1 0,1-1 <0,1 0,1-1 ΡΕ2318389 202 (continuação) Ξχιεπρίο FGA. (agonista de FGA. (agonista de Lig. a Smo de Lig. a Smo de ser no. Smo 1 nM) 1¾ [|JM] aro 25 ríM) 1¾ [μΜ] murganho 1¾ [μΜ] humano 1¾ [μΜ] 66 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 67 0,1-1 1-10 <0,1 0,1-10 68 0,1-1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 69 70 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 72 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 73 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 75 0,1-1 1-10 <0,1 <0,1 78 <0,1 1-10 <0,1 <0,1 79 0,1-1 1-10 1-10 1-25 80 0,1-1 0,1-1 <0,1 <0,1 81 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 83 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 87 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 88 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 89 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 90 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 91 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 92 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 93 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 94 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 95 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 96 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 97 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 98 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 99 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 100 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 101 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 102 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 104 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 105 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 106 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 107 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 ΡΕ2318389 203 (continuação) Ξχιεπρίο FGA. (agonista de FGA. (agonista de Lig. a Smo de Lig. a Smo de ser no. Smo 1 nM) 1¾ [|JM] aro 25 ríM) 1¾ [|M] murganho IC50 [|JM] humano 1¾ [μΜ] 108 <0,1 <0,1 109 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 110 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 111 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 112 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 113 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 114 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 115 0,1-1 1-10 0,1-1 0,1-1 116 1-10 1-25 1-25 0,1-1 117 1-10 1-25 1-10 1-10 118 <0,1 0,1-1 <0,1 0,1-1 119 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 120 <0,1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 121 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 122 0,1-1 1-10 0,1-1 0,1-1 123 <0,1 0,1-1 <0,1 0,1-1 125 <0,1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 126 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 127 <0,1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 128 <0,1 0,1-1 <0,1 0,1-1 129 <0,1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 130 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 131 0,1-1 1-10 0,1-1 0,1-1 132 <0,1 0,1-1 <0,1 0,1-1 133 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 134 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 135 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 136 <0,1 0,1-1 <0,1 0,1-1 137 0,1-1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 138 <0,1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 139 0,1-1 1-10 1-10 1-10 140 <0,1 1-10 0,1-1 0,1-1 141 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 ΡΕ2318389 204 (continuação)
Exenplo FGA. (agonista de RG& (agonista de Lig. a Smo de Lig. a Smo de ser no. Smo 1 riM) 1(¾ [|M] Smo 25 nM) 1(¾ [μΜ] murganho 1¾ [μΜ] humano 1(¾ [μΜ] 143 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 144 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 145 0,1-1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 146 <0,1 <0,1 0,1-1 0,1-1 147 <0,1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 148 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 149 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 150 <0,1 0,1-1 <0,1 <0,1 151 <0,1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 153 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 154 0,1-1 1-10 <0,1 <0,1 155 <0,1 0,1-1 0,1-1 0,1-1 156 <0,1 0,1-1 <0,1 0,1-1 157 <0,1 0,1-1 <0,1 0,1-1 158 1-10 1-25 1-10 1-10 159 0,1-1 1-10 1-10 1-10 160/161 1-10 1-25 1-10 1-10 162 0,1-1 1-25 1-25 1-25 163 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 164 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1
Assim, embora tivessem sido descritas as formas de realização que presentemente se creem ser as preferidas da invenção, aqueles peritos na técnica compreenderão que poderão ser efetuadas alterações e modificações as estas sem se afastar do espírito da invenção, e pretende-se reivindicar todas essas alterações e modificações que caem no verdadeiro âmbito da invenção.
Lisboa, 16 de setembro de 2013

Claims (20)

  1. ΡΕ2318389 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de Fórmula (I):
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que RI é
    cada um dos quais poderá ser não substituído ou substituído por um ou mais de Ci-salquilo, um grupo C6-i4arilo, Ci-s halogenoalquilo, Ci-salcoxi, halogeno, NH2, CN, OCF3, OH, C(0)NR6R8, C(0)R6, NR6R8, NHC(0)R6, S02R6 ou S02NR6R8; R2 e R3 são independentemente Ci-salquilo, Ci-salquilOH, ou R2 e R3 formam um grupo C3_i4cicloalquilo; L é uma ligação, Ci-salcileno, -C (0) 0-,-C (0) NR9-,-Ci-sal-quilOH-,-Ci_8 halogenoalquilo,-C(0)-, -NH- ou -0-;
  2. 2 ΡΕ2318389 X e W sao independentemente N ou CR5 e pelo menos um de X ou W é N; R7 é
    R4 é Ci-salquilo, C2-salcenilo, C3-i4Cicloalquilo, um grupo C6-i4arilo, um grupo heteroarilo de 5-14 membros, um grupo ciclo-heteroarilo de 3-14 membros, Ci-galcoxi, halogeno, NR6R8, C(0)0R6, C(0)NR6R8, Ci-shalogenoalquilo, formilo, carbalcoxi, Ci-salquilOH, C(0)R6, S02R6, C(0) NHCi-8alquilR6, NR6R8, S02NR6R8, OCF3, NHC(0)R6, CH2OC (0) NR6R8, CH2NR6R8, NHC (0) 0R6 , NHC (0) NR6R8, CH2NHS02R6, CH2NHC (0) 0R6, 0C(0)R6, ou NHC(0)R6, que poderá ser substituído ou não substituído; Z é Ci-salquilo, CN, OH ou halogéneo; m é 0-3; p é 1; Y é uma ligação, Ci-salcileno, -C(0)-, -C(0)0-, -CH(OH)-, ou -C(0)N(RIO)-; R5 é H, halogéneo, CN, Ci_4alquilo, OH, OCH3 ou -0CF3; R9 e RIO são independentemente Ci-salquilo ou H; R6 e R8 são independentemente H, Ci-salquilo, C2_8alcenilo, C3_i4cicloalquilo, um grupo C6_i4arilo, um grupo heteroarilo de 5-14 membros, um grupo ciclo-heteroalquilo de 3-14 membros, Ci-shalogenoalquilo, Ci-8alquilOH, Ci-salcoxi, ou R6 e R8 num átomo podem formar um anel contendo um heteroátomo; 3 ΡΕ2318389 e em que R4, R6 e R8 podem ser não substituídos ou substituídos por um ou mais de Ci-8alquilo, C3-i4cicloalquilo, um qrupo C6-i4arilo, um grupo heteroarilo de 5-14 membros, um grupo ciclo-heteroalquilo de 3-14 membros, Ci_8alquilOH, OH, oxo, Ci_8halogenoalquilo, carboxCi_8 alquilo, ou S02Ci_8al-quilo, halogeno, -OCH3, -OCF3, -OH, -NH2 . 2. 0 composto de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, em que R4 é C (0) OCi_8alquilo, CF3, C(0)0R6, C(0)NR6R8, Ci_8halogenoalquilo, Ci_8alquilOH, C(0)R6, S02R6, C(0)NHCi-8 alquilRô, C (CH3) (CH3) (OH) , C(0)CH3, CH2-CH2-CH3, ou C(CH3) (CH20H)0H; e R6 e R8 são independentemente H, Ci-8alquilo, Ci_8alcenilo, C3_i4CÍcloalquilo, um grupo C6-i4arilo, um grupo heteroarilo de 5-14 membros, ou um grupo ciclo heteroarilo de 3-14 membros.
  3. 3. 0 composto de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-2, em que RI pode ser não substituído ou substituído com um ou mais de metilo, etilo, isopropilo, Cl, F, CN, metoxi ou CF3; e R4 é C(0)CH3, C (0) NH-f enilo, C(0)0H, CF3, C (CH3) (CH3) OH, C(0)0CH3, CF3, C(0)0CH2CH3, ou C(0)NCH2CH3, opcionalmente substituído com piperazinilo, morfolinilo, ou piridinilo.
  4. 4. 0 composto de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, em que R4 é metilo, fenilo, piridinilo, metoxi, Cl, F, C (0) OCi-salquilo, C(0)0H, C (0) NHC6-i4arilo, 4 ΡΕ2318389 C (0) NC6-i4arilCi_8alquilo, grupo heteroarilo de 5-14 membros, ou um grupo ciclo heteroarilo de 3-14 membros, CF3, CH2OH, CH2CH2OH, C(CH3) (CH3)OH, C(0)CH3, C(0)CH2CH3, -S02Ci-8alquilo, SO2CF3, C(0)NHCi-8alquilOH, C (0) NHCi-8alquilCF3, S02NHCi_8al-quilo, 0CF3, NHC(0)CH3, ou CH20C (0) NHCH3 .
  5. 5. 0 composto de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, em que R4 é 00 o
    que poderá ser não substituído ou substituído.
  6. 6. 0 composto de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, em que R2 e R3 são Ci_ 8alquilo.
  7. 7. 0 composto de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-6 em que R2 e R3 são CH3.
  8. 8. 0 composto de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-7, em que L é -0-,-NH-, -C(0)-,-CH OH) -,-CH2-,-CF2-,-CHF-,-C(OH)-, ou uma ligação.
  9. 9. 0 composto de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-8, em que L é -CH2-. ΡΕ2318389 5
  10. 10. O composto de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-9, em que ambos X e W sao N, e Z é CH3, e m é 1.
  11. 11. O composto de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-10 em que R7 é H
    e R4 é C(0)CH3, C (O) NH-f enilo, C(0)0H, CF3, C (CH3) (CH3) OH, C(0)0CH3, CF3, ou C(0)0CH2CH3.
  12. 12. Um composto de acordo com a reivindicação 1 de fórmula (Ia):
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que Rll é um Ci-salquilo, C2-8alcenilo, C3-i4cicloalquilo, um grupo C6-i4arilo, um grupo heteroarilo de 5-14 membros, um grupo ciclo-heteroalquilo de 3-14 membros, Ci_8alcoxi, halogénio, NR13R14, C(0)0R13, C(0)NR13R14, Ci_8halo- genoalquilo, formilo, carbalcoxi, Ci-8alquilOH, C(0)R13, S02R13, C(0)NHCi_8alquilR13, NR13R14, S02NR13R14, OCF3, NHC(O)R13, CH2OC(0)NR13R14, CH2NR13R14, NHC(0)0R13, NHC(O)- 6 ΡΕ2318389 NR13R14, CH2NHS02R13, CH2NHC(0)0R13, 0C(0)R13, ou NHC(0)R13, que poderá ser substituído ou não substituído; R12 é H, Ci-salquilo, um grupo C6-i4arilo, Ci-shalogenoalqui-lo, Ci-8alcoxi, halogénio, NH2, CN, 0CF3, OH, C(0)NR13R14, C(0)R13, NR13R14, NHC(0)R13, S02R13, S02NR13R14; R13 e R14 são independentemente H, Ci-8alquilo, C2-salcenilo, C3_i4CÍcloalquilo, um grupo C6-i4arilo, um grupo heteroarilo de 5-14 membros, um grupo ciclo-heteroalquilo de 3-14 membros, Ci-shalogenoalquilo, Ci-salquilOH, Ci-8alcoxi, ou R13 e R14 num átomo podem formar um anel contendo heteroátomo; e em que Rll, R13, e R14 pode ser não substituído ou substituído por um ou mais de Ci-8alquilo, C3-i4CÍcloalquilo, um grupo C6-i4arilo, um grupo heteroarilo de 5-14 membros, um grupo ciclo-heteroalquilo de 3-14 membros, Ci-salquilOH, OH, oxo, Ci_8halogenoalquilo, carboxCi-salquilo, ou -S02Ci-sa-quilo, halogeno, -0CH3, -0CF3, -OH, -NH2.
  13. 13. Um composto da reivindicação 1 selecionado a partir de: Éster metílico do ácido (R)-4-(4,5-dimetil-6-fenoxi-piri-dazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazi-nil-5'-carboxílico; Éster metílico do ácido (R)-4-(4,5-dimetil-6-fenilamino-piridazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi-razinil-5'-carboxílico; 7 ΡΕ2318389 Fenilamida do ácido (R)-4-(4,5-dimetil-6-fenilamino-pirida-zin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinil-5'-carboxilico; 2-[(R)-4-(4,5-Dimetil-6-fenilamino-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'— i1]-propan-2-ol; Éster metilico do ácido (R)-4-[6-(4-fluoro-fenil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il]-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxilico ; Éster metilico do ácido (R)-4-[6-(4-trifluorometilfenil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il]-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxilico; Ácido (R)-4-[6-(4-trifluorometil-fenil)-4,5-dimetil-pirida-zin-3-il]-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxilico; Ácido (R)-4-[6-(4-fluorofenil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il]-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxilico; 5-(4-(6-Benzil-4,5-dimetilpiridazin-3-il)piperidin-1-il)pirazino-2-carboxilato de metilo; 2-{5-[4-(6-Benzi1-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-pirazin-2-il}-propan-2-ol; ΡΕ2318389 3-Benzi1-6-{1-[5-(1-metoxi-l-metil-etil)-pirazin-2-il]-piperidin-4-il}-4,5-dimetil-piridazina; 3-Benzi1-6-{1-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]-piperidin-4-il}-4,5-dimetil-piridazina; Éster metilico do ácido (R)-4-(6-benzoil-4,5-dimetil-piri-dazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazi-nil-5'-carboxilico; (6-{ (R)—4—[4—(1-Hidroxi-l-metil-etil)-fenil]-3-metil-piperazin-l-il}-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-fenil-metanona; Éster metilico do ácido (R)-4[6-(hidroxil-fenil-metil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il]-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2] bipirazinil-5'-carboxilico; Éster metilico do ácido (R)-4-(4,5-dimetil-6-piridin-4-ilmetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxilico; Éster metilico do ácido (R)-4-(4,5-dimetil-6-piridin-3-ilmetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxilico; 2-[(R)-4-(4,5-Dimetil-6-piridin-3-ilmetil-piridazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol; Éster metilico do ácido (R)-4-(4,5-dimetil-6-piridin-2- 9 ΡΕ2318389 ilmetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'] bipirazinil-5'-carboxílico; 2- {(R)-4-[6-(Difluoro-fenilmetil)-4,5-dimeti1-piridazin-3-il]-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H[l,2']bipirazinil-5'-il} propan-2-ol; 3- Benzi1-6-[4-(5-cloro-lH-imidazol-2-il)-piperidin-l-il]-4,5-dimetil-piridazina; 1'-(6-Benzi1-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-5-(l-hidroxi-l-metil-etil)-2',3',5',6'-tetra-hidro-1'H-[2,4']bipiridinil-4'-carbonitrilo; 3-Benzi1-4,5-dimeti1-6-[4-(4-trifluorometil-lH-imidazol-2-il)-piperidin-l-il]-piridazina; 1'-(6-Benzi1-4,5-dimeti1-piridazin-3-i1)-5-(1-hidroxi-l-metil-etil)-2',3',5',6'-tetra-hidro-1'H-[2,4']bipiridinyl-4'-ol; 2-[1'-(6-Benzi1-4,5-dimeti1-piridazin-3-i1)-4'-fluoro-1',21,3',4',5',6'-hexa-hidro-[2,4']bipiridinil-5-il]- propan-2-ol; 2 — (6 —{ (S)—4—[4—(2-Cloro-benzil)-6,7-di-hidro-5H-ciclopenta[d]piridazin-l-il]-3-metil-piperazin-l-il}-piridin-3-il)-propan-2-ol; Éster metilico do ácido (R)-4-(6-benz il-4,5-dimeti1-pir i 10 ΡΕ2318389 dazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazi-nil-5'-carboxílico; 3-Benzi1-4,5-dimetil-6-[(R)-3-meti1-4-(4-trifluoro-metanossulfonilfenil)-piperazin-l-il]-piridazina; 2-[(R)-4-(6-Benzi1-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-meti1- 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'—il] —2,2 — dimetoxi-etanol; 1-[(R)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil- 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5 * — i1]-etano1; 1-[(R)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil- 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il)-2-hidroxi-etanona; 1- [(R)-4-(6-Benzi1-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-meti1- 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5’-il)-etano-1,2-diol; Ácido (R)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-carboxílico; Metoxi-metil-amida do ácido (R)-4-(6-benzil-4,5-dimetil piridazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi-razinil-5'-carboxílico; (R)-4-(6-Benzi1-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-5'-isopropenil 2- meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinilo; 4,5-Dimetil-3-(5-metil-[1,2,4]oxadiazol-3-il-metil)-6-[4- 11 ΡΕ2318389 (5-trifluoro-metil-piridin-2-il)-piperazin-l-il]-piridazina; 4.5- Dimetil-3-(1-metil-lH-tetrazol-5-ilmetil)—6—[4—(5— trifluorometil-piridin-2-il)-piperazin-l-il]-piridazina; 4.5- Dimetil-3-(2-metil-2H-tetrazol-5-ilmetil)-6-[4—(5— trifluorometil-piridin-2-il)-piperazin-l-il]-piridazina; 4.5- Dimetil-3-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-ilmetil)—6—[4—(5— trifluorometil-piridin-2-il)-piperazin-l-il]-piridazina; 2-[(R)-4-(6-Benzil-5-hidroximetil-4-metil-piridazin-3-il)-2metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol; 2-[(R)-4-(6-Benzil-4-hidroximetil-5-metil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol;
    ΡΕ2318389 12
    Ο r\ Ν'Ν Ν Ν
    ΡΕ2318389 13
    ΡΕ2318389 14
    ΗΟ
    Η Η λ-'
    ΡΕ2318389 15
    ΡΕ2318389 16 —Ν
    F
  14. 14. Os compostos de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, em que o referido composto é selecionado a partir de: 2-[(R)-4-(4,5-Dimetil-6-fenoxi-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'— i1]-propan-2-ol; 2-[(R)-4-[6-(Hidroxil-fenil-metil)-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2]bipirazinil-5'—i1]— propan-2-ol; 2-[(R)-4-(4,5-Dimetil-6-piridin-4-il-metil-piridazin-3-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol; 17 ΡΕ2318389 2-[(R)-4-(4,5-Dimetil-6-piridin-2-il-metil-piridazin-3-il) -2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'— i1] — propan-2-ol; 2-[(R)-4-(6-Benzi1-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-meti1- 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'— i1]-propan-2-ol; 2-[4-(6-Benzi1-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil-5'il]-propan-2-ol; 2-[(S)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil- 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2'] bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol; 2-[(R)-4-(6-Benzi1-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-etil- 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol; 2-[4-(4-Benzil-6,7-di-hidro-5H-ciclopenta[d]piridazin-l-il) -3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'] bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol; 2-[(R)-4-(4-Benzil-6,7-di-hidro-5H-ciclopenta[d] piridazin-1-il)-2-meti1-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-5'-il]-propan-2-ol; 1- [(R)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil- 3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinil5'-il]etanona; e 2- [(R)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil- 18 ΡΕ2318389 3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5'— i1]-propano-1,2-diol.
  15. 15. 0 composto 2-[(R)-4-(6-Benzi1-4,5-dimetil- piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-5 ' -il ] -propan-2-ol ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  16. 16. Uma composição farmacêutica compreendendo um composto, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-15 e um veiculo farmaceuticamente aceitável.
  17. 17. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-15 para utilização na profilaxia ou no tratamento de cancro.
  18. 18. Um composto para utilizar de acordo com a reivindicação 17, em que o cancro é selecionado a partir de carcinoma basocelular, meduloblastoma, cancro pancreático, da próstata, do estômago ou do pulmão de célula não pequenas.
  19. 19. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 - 15, em combinação com um ou mais agentes terapêuticos. Lisboa, 16 de setembro de 2013 1 ΡΕ2318389 REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descrição * WO 2907127475 A * EP £5055583 A ♦ WO 2037059 í 57 A ♦ US 2013089388 A « WO 2967127448 A Literatura que não é de patentes citada na Descrição HUSSLEiM-VQLHARD st ai fttefaí®, 1880, voi. 287, 795-801 TAiPALE et aí, ?s‘siur&. 2082, voL 418, 882 ST0NE 81 ai Nskifs, 1998, vot 384» 129 Bktotganic and Medicinal ChmnMfy La itera, 2Ô07. voi. 17, 4Η-4·δ WILSON at ai. HaiTisoiVs Principies cf inferna] Medicine. McGrerw-Hil, inc, 1981 ALCEDO et aí. Ceií, 1898, voL 88, 221 zm et aí. Genes Dev., 2DQ0, voL 17 {19}, 1240 KÀRHADKAR SS : BOVA GS; ASDALLAH U ; DHARA S; GARDNER D ; MAITOA A; ÍSAACS JT ; BERMA» DM ; BEACHY PA, Hedgehog sígsasi-Sng írc próstata regsnenafÍGn, neppiasfa and meias-tasía. «Mure, 07 Qcteber 2004» voi 431 {7098}, 707-12 SAHCHEZ P; HERRANDEZ AM ; STECCA 8 ; KAHLERAJ ; DEGUEME AM ; BARREI! A; BEY-UA M ; DATTA SW: DATTA S ; RUSZ í ALTABA A. tahibftíssn: of pfisstaie câncer proSferaisers by ircíerfer-erscs wtíh SONiC HEDGEHOG-Gt! 1 signafeg, Pmc fiMAcadSciUSA, 24 August 2004, voi, 101 (34), 12561-6 MliMEAULT M ; MOORE E; 8SOMIAUX H et aí, Cy-totoiK effeeis snduced by a combinafcion of cy-cfopacRine and gefôínsb, th» seíecfive hedgehog and epidetrosi growih fector receptor sígnafeg inhíhitars, írs prasists câncer ceiis. intemstim&t Journal of Câncer; «596, voL 118 (4). 1022-31 KUBG M; NAKASIÍ7RA M; TASAK! A; YAMAHA-KA U: MAKASHIMA H : MOMURA M ; KUROKf S ; KATAMG H. Hedgehog signaliog paihway ís a new íheraimífc isrget for paSenís tssih isreast câncer. Car.mr Res,, 01 Septsmber 2004, ssi, 84 (17), 6071-4 UU S ; DG»TU G ; MAMTLE ÍO ei ai, Hedgehog stgnsisng arsd Smi-í reguiais ssii-rersewsí of normas and fTtaiignant huntan mammarystem ceiis. Câncer Res, 28G8. voi. 66 (12), 6063-71j MORAES RC; ZHAHG XM ; HÂ8RSNGTON N st aí. Coristltuísve scftvahen of smoothened (SMO) in tnananaey gíands of transgemc rofee ieads fe irv creased proiSferatían, affsrsd dsffareriiiatfen arsd duc-tai dyspiasfe. BaveSopmant, 2007, so*. 134 {§}, 1231-42 BERMA» DM; KARHADKAR SS ; HALLAHAN AR ; FRiTCHARD Jt r EBERHART CG ; WATKSNS DN ; CHEff M : COOPER MK ; TAiPALE 3 ; OL- SON JM. Msddtofciastoma »growih iohibiísoa fey hetdgehog pathsiísy blockade. Scfencç, .30 Asgust 2902, voi. 297 {5586), 1559-61 WILLIAMS JA; GUÍCHERFF OM ; ZAHARÍAH BI; XU Y ; CHAÍ L ; WICHTERLE H ; KOR C ; GATCH-ALÍAR C ; PORTER JA ; RU8SM LL. ÈdsnSftaatten of b smalí mdactde lnhfcit<»rof«ss hsdgshog slignal·' Ing pathway: effects on bssai celí camnoma4Sce le-síons, P/oc Na8 Acacf Sd U S A, 15 Ajsti 2093, vol, 100 (8), 4616-21 XIS J ; MURONE M ; LUOH SM ; RYA» A ; GU Q; ZHARG C : BGISISFAS JM : LAM CW : HYMES M ; GODDARD A. Acisvattcg Smocthenad anáaticns In sparsdíc basai-csil carcinoma, Nsiom, 01 Jaeoary 1998, voi. 391 (6862), 90-2 TH AYER SP ; Dí MlAGLiANO MP; HESSER PW; MÍELSER CM ; ROBERTS DJ ; LAUWERS SY; QS VP ; GYSiff S ; FERRANDEZ-DEL CASTiLLO C ; YAJRSK V. Hedgabog is an eariy and tata tnedwtor of paecreaífc câncer tímorigenesis. Nsture, 23 Oc-tcber 2093, voi 425 (6980), 851-6 BERMA» DM : KARHADKAR SS ; MAÍTRA Â; MG»TES DE OCA R; GERSTENBLÍTH h'iR; BRiGGS K ; PARKER AR; SHIMADA Y : ESHLE-MAN JR ; WATKiíiS D», Widespread reguirsínenf for Hedgehog iigand sSíínaiaiísn irt grswlh of dig estiva trsct Sii!Tto>;rs Metam 23 Ociober 2903. voi, 425 (696Q), 846-51 NAKASHtMA H; RAKAMURAM ; YAMAGUCHI H eí aí. MÍKÍsarfecior-kappa Bcoritribiitesfei hedgehog sigrsaSng pathway ac.f tvstion: Sonic bsdgshog indaslion so panoreaSc câncer. Câncer Resesrsh, 2906, voi. 86 (14), 7041-9 2 - ΡΕ2318389 * FELDMANN δ; QHARÂ S : FENDRiCH V et a!. &adkaáe oí hsdgehog signalfRg fnhiijiis jjancrsa& cases? írsvasion and metastases: A new paraásgtTí for comisirsation toerspy to sola oancers, Câncer Re-seerch, 2087, voi, 87 (¾ 2187-96 * <f i Z: MSI FC ; XÍE J st ai, Onoogenic KRA3 sup-presses GK1 degradatton and actotales Bedgshog signaitog pathway in psncresiic câncer ceiis. J B&? Gfesíív 2007, vcsl. 282 {19}, 14048-55 * WATKSNS DN; BERMAM DM; BURKHOLDER SS } WANG B ; BEACHY PA ; BAYUR SB. Hedge-hog aigaalllng witoírs sirway spiihsíiaj; progenitors and sm smsii-efeii lung câncer. Nsh/m,
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