CN100346796C - 来自菌类的生理活性物质eem－s、其制造方法和药物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了通过分子筛法处理至少一种选自香菇、火菇、真姬菇、侧耳属、滑菇、奇果菌属、小包脚菇属、ハタケシメジ、エリンギ、蘑菇、灵芝和木层孔菌属的菌类的热水或低级醇萃取物，除去低分子和高分子部分得到的EEM-S及其制剂。该EEM-S显示抗癌作用、免疫赋活作用、抗氧化作用、降低血压和血糖作用等生理作用。

Description

来自菌类的生理活性物质EEM-S、其制造方法和药物
技术领域
本发明涉及至少一种选自香菇、火菇、真姬菇(ブナシメジ)、侧耳属、奇果菌属、小包脚菇属、滑菇(ナメコ)、旱田玉蕈(ハタケシメジ)、雪茸菌(エリン ギ)、蘑菇、多孔菌类的灵芝和木层孔菌属(メシマコブ)的食用菌类得到的，具有抗癌活性、抗变态反应活性、免疫赋活性、抗氧化活性等生理活性的物质及其制造方法，和含有该生理活性物质的制剂。
背景技术
本发明者经过长期对菌类生理活性进行的详细研究，其结果，得知在某种菌类中，显示抗癌作用、免疫赋活作用、抗氧化作用、降低血压和血糖作用等生理活性。但是，根据蘑菇的种类不同，没有这些活性，或活性非常弱，而且经常被过度宣传其效果并被销售。
从基于庞大的研究数据确实研究的结果得知，特别是菌类的抗癌作用，是由其含有的多糖决定的，本发明者对作为菌类多糖类的葡聚糖进行了研究。但是，判断出纯粹的单纯多糖类葡聚糖虽然通过注射显示活性，但是通过口服不显示效果。
通过注射给药只能在医院等进行，另外，由于口服给药对于接受给药的患者来说可大大减少痛苦，因此强烈需要提供口服有效的来自菌类的活性成分。
本发明的课题是选择高浓度含有通过口服给药具有抗癌作用、免疫赋活作用等生理活性物质的菌类，提供高效采集这些生理活性物质的方法，同时提供适用于使用这些得到的活性物质的制剂。
发明的公开
本发明者们，为解决上述课题进行了各种研究，结果发现，被供应于食用的菌类的子实体和/或菌丝体含有大量经口服有效的活性物质，这些菌类用水或水性溶剂或它们的混合溶剂的萃取物中含有口服有效的的活性物质，将这些萃取物进一步用分子筛法处理，除去低分子部分和高分子部分，在一定分子量范围内的物质，显示优秀的生理活性，并完成了本发明。
即，本发明提供了用水、亲水性溶剂或它们的混合溶剂萃取至少一种选自香菇、火菇、真姬菇、侧耳属、滑菇、奇果菌属、小包脚菇属、ハタケシメジ、エリンギ、蘑菇属、灵芝和木层孔菌属的菌类，然后，将该萃取物用分子筛法处理，通过采集分子量6,000～60,000和在水中的紫外线吸收最大值是255～260nm的部分得到生理活性物质EEM-S。
另外，本发明提供了上述生理活性物质EEM-S的制造方法。
附图的简要说明
图1是实施例1得到的生理活性物质EEM-SB的紫外可见吸收曲线图。溶剂是水。
图2是实施例2得到的生理活性物质EEM-SS的紫外可见吸收曲线图。溶剂是水。
图3是实施例3得到的生理活性物质EEM-SM的紫外可见吸收曲线图。溶剂是水。
图4是实施例4得到的生理活性物质EEM-SN的紫外可见吸收曲线图。溶剂是水。
图5是实施例5得到的生理活性物质EEM-SE的紫外可见吸收曲线图。溶剂是水。
图6是实施例1得到的生理活性物质EEM-SB用ATR法测定的红外吸收曲线图。
图7是实施例5得到的生理活性物质EEM-SE用ATR法测定的红外吸收曲线图。
图8是实施例1得到的生理活性物质EEM-SB的1H-NMR(D2O)的图。
图9是实施例5得到的生理活性物质EEM-SE的1H-NMR(D2O)的图。
图10是实施例1得到的生理活性物质EEM-SB的13C-NMR(D2O)的图。
图11是实施例5得到的生理活性物质EEM-SE的13C-NMR(D2O)的图。
实施发明的最佳方式
本发明的生理活性物质EEM-S是通过用水和/或亲水性溶剂萃取至少一种选自香菇、火菇、真姬菇、侧耳属、滑菇、奇果菌属、小包脚菇属、ハタケシメジ、エリンギ、蘑菇属、灵芝和木层孔菌属的被供于食用的菌类的子实体和/或菌丝体的细微粉碎物(以下记载为“菌”)得到的。作为该萃取中使用的亲水性溶剂，优选使用碳原子数1～4的低级醇。
从上述菌类进行的含有生理活性物质EEM-S馏分的萃取，例如，可以向作为原料的菌类中添加适量水或低级醇等亲水性溶剂，例如，在80～98℃左右，在水的情况下优选在90～98℃的温度条件下，回流下，通过1至4小时，优选2至4小时的萃取进行。萃取后，相对于菌类的重量，可使用3至10倍重量左右的溶剂。
如上得到的萃取液，可根据需要通过过滤等分离固形杂质后，通过减压蒸除溶剂，可以固形物的形式收集萃取物。
这样得到的固形物，即使本身口服给药也可显示活性，可以直接使用，但是为了提高活性，可将萃取液用分子筛处理除去不需要的部分，将再次在减压下浓缩得到的分子量6,000～60,000的部分作为生理活性物质EEM-S使用。
作为上述目的中使用的分子筛，可列举分子筛膜(平膜)、中空过滤膜、透析膜、分子筛色谱等，生理活性物质EEM-S的分离获得可适当应用使用这些的方法。
下面，以使用模型(model type)中空过滤的情况为例对生理活性物质EEM-S的分离获得方法进行说明。即，将如前所述萃取得到的菌类的水和/或亲水性溶剂萃取液(含有生理活性物质EEM-S的馏分)，首先，用低分子划分膜模型，例如，AIP-3013、AIP-2013、或AIP-1010(旭化成工业社制)处理除去低分子量物质(分子量6,000以下的物质)。然后，将除去了低分子物质的浓缩液用高分子划分膜模型，例如，AHP-3013、AHP-2013、或AHP-1010(旭化成制)处理除去高分子物质(分子量60,000以上)，外液再次用低分子划分膜模型浓缩。通过划分，可得到分子量6,000～60,000的生理活性物质EEM-S。
另外，使用一般的分子筛法时，由于分子的形状导致在筛内的悬挂方式不同，可能与用其他方法求得的分子量不同。因此，本发明中，分子量是指用分子筛法求得的分子量，更准确地说，低分子侧的分子量是使用AIP-3013或与其同等的低分子划分膜模型测定的值。同样，高分子侧的分子量是使用AHP-3013或与其同等的低分子分化膜模型测定的值。
这样得到的菌类的生理活性物质，总体记为EEM-S，但是来自菌类的生理活性物质，将菌类菌丝体作为原料使用时，由于培养条件不同收率不同，选择最佳的培养基、培养温度等是必要的。另外，由于菌类的种类不同可能显示若干不同的物理化学性状。
例如，以真姬菇为原料制造的生理活性物质EEM-S(以下，有时称为“EEM-SB”)，显示后述实施例1中所示的物理化学性状。另外，以火菇为原料制造的生理活性物质EEM-S(以下，有时称为“EEM-SE”)，显示后述实施例5中所示的物理化学性状。另外，从香菇、奇果菌属和滑菇得到的生理活性物质EEM-S(以下，有时分别称为“EEM-SS”、“EEM-SM”、“EEM-SN”)，分别显示图1～图5的紫外线可见光吸收。
这样，在物理化学性质中，即使有一些不同，但如后述实施例6所示，与各种菌中单纯的热水萃取物相比都具有更高的生理活性，可以说保持有共通的性质。
以上说明的生理活性物质EEM-S，是通过口服给药可发挥生理活性的物质，但是为使其发挥所期望的效果的口服摄取量，根据人的年龄、体重、目的等变化，通常，成人每天以EEM-S计摄取200～5000mg的范围，优选1000～3000mg的范围，该剂量1天分数次服用是合适的。
另外，本发明的生理活性物质EEM-S，可通过常规方法制成散剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、液体制剂使用，但由于其直接在大气中放置的话会发生吸湿变色、变质，优选以施用了薄膜包衣的片剂使用。作为该目的中使用的薄膜包衣材料，优选大豆肽、贝壳树脂材料等，其他的薄膜包衣材料有不能充分防止吸湿的情况，会发生变色、变质。
实施例
下面实施例对本发明进行更具体的说明。另外，在实施例中，作为生理活性显示了抗癌效果，但是本申请的物质并不限于抗癌性，也可以说是具有前述生理活性的物质。
实施例1
将1000g真姬菇粉碎细化后，用热水萃取，用PS-88膜(大塚实业社制)从所得萃取液中除去沉淀物。从该热水萃取液使用低分子划分用模型中空过滤膜AIP-3013(旭化成工业社制)，浓缩含有高分子物质(分子量6,000以上)的馏分。从该浓缩液用高分子划分用模型中空过滤膜AHP-3013(旭化成工业社制)，除去高分子物质(分子量50,000以上)，该外液再次用低分子划分膜模型AIP-3013浓缩。通过这样的连续处理，得到分子量6,000～50,000的生理活性物质EEM-SB。
[EEM-SB的物理化学性质]
(1)紫外线吸收(测定水溶液中370～190nm的UV吸收)：
   最大值：258.0nm(吸收曲线用图1表示)
(2)红外线吸收(用ATR法测定)：
   最大值(cm-1)：218、1560、1396、1032(每个都包括±50cm-1以内的误差)
   (吸收曲线用图6表示)
(3)1H-NMR(在D2O中测定)：
   图谱用图8表示。
(4)1C-NMR(在D2O中测定)：
   图谱用图10表示。
(5)蛋白含量：
   20％～30％，优选24.3％
(6)糖含量：
   22％～32％，优选27.0％
(7)主要糖构成比：
   葡萄糖∶半乳糖∶甘露糖＝18∶2∶1
(8)氨基酸组成
天冬氨酸：9.0％、谷氨酸：16.1％、甘氨酸：9.1％、丙氨酸：12.5％、缬氨酸：5.7％、精氨酸；5.6％、鸟氨酸：7.8％(每个都包括±3％以内的误差)
(9)元素分析：
   C：36.2％、H：6.0％、N：5.8％
这样得到的EEM-SB，通过冷冻干燥可制成固体粉末，进一步通过将其压片，可制成可口服给药的片剂。
实施例2
将500g香菇粉碎后，用热水萃取，用PS-88膜(大塚实业社制)从所得萃取液中除去沉淀物。从该热水萃取液使用低分子划分用模型中空过滤膜AIP-3013(旭化成工业社制)，浓缩含有高分子物质的馏分。从该浓缩液用高分子划分用模型中空过滤膜AHP-3013(旭化成工业社制)，除去高分子物质，该外液再次用低分子划分膜模型AIP-3013浓缩。这样得到的生理活性物质EEM-SS的水溶液中的紫外线吸收曲线如图2所示。
这样得到的EEM-SS，通过冷冻干燥可制成固体粉末，进一步通过将其压片，可制成片剂。
实施例3
将1000g奇果菌属用热水萃取，用分子筛膜(PM-2、大塚实业社制)抽滤，除去菌体。接着，用透析膜进行流水透析，除去低分子级分(分子量6,000)以下)。然后从其内液，连续使用中空分子筛膜(AHP-3013)，除去高分子级分，得到活性物质EEM-SM。
所得的生理活性物质EEM-SM的水溶液中的紫外线吸收曲线如图3所示。
实施例4
将1000g滑菇用热水萃取，用分子筛膜(PM-2、大塚实业社制)抽滤，除去菌体，用透析膜进行流水透析，除去低分子级分(分子量6,000)以下)。然后从其内液，连续使用中空分子筛膜(AHP-3013)，除去高分子级分，得到活性物质EEM-SN。
所得的生理活性物质EEM-SN的水溶液中的紫外线吸收曲线如图4所示。
实施例5
将1000g火菇用热水回流的同时萃取，得到热水萃取物107g。将其溶解在水中后，放入透析管中进行透析，得到透析内膜的含有高分子物质(分子量6,000以上)的级分。将该含高分子物质的级分用分子筛膜PM-10处理，除去高分子物质(50,000以上)，冷冻干燥，得到分子量6,000～50,000的EEM-SE高含有物质。将其制成粉末剂。
[EEM-SE的物理化学性质]
生理活性物质EEM-SE的物理化学性质：
(1)紫外线吸收(测定水溶液中370～190nm的UV吸收)：
   最大值：258.4nm(吸收曲线用图5表示)
(2)红外线吸收(用ATR法测定)：
最大值(cm-1)：3279、2927、1578、1400、1043(每个都包括±50cm-1以内的误差)(吸收曲线用图7表示)
(3)1H-NMR(在D2O中测定)：
   图谱用图9表示。
(4)1C-NMR(在D2O中测定)：
   图谱用图11表示。
(5)蛋白含量：
   8％～18％，优选12.7％
(6)糖含量：
   5％～10％，优选9.8％
(7)主要糖构成比：
   葡萄糖∶半乳糖∶甘露糖＝16∶3∶1
(8)氨基酸组成
天冬氨酸：9.1％、谷氨酸：17.7％、甘氨酸：14.8％、丙氨酸：21.9％、缬氨酸：11.8％、精氨酸；6.8％、鸟氨酸：12.6％(每个都包括±3％以内的误差)
(9)元素分析：
C：36.5％、H：6.6％、N：3.5％
实施例6
使用实施例1、2、3或5得到的生理活性物质EEM-S制备粉末剂，如下进行抗癌试验。将在抗癌试验中的生存率与对照组比较，决定抗癌活性。该结果如表1所示。
(抗癌试验)
将路易斯肺癌活细胞移植到BDF1雌性小鼠的皮下，从第二天分别使用实施例得到的生理活性物质EEM-S以1天1次500mg/kg悬浮在纯净水中口服给药20天。然后对于只用纯净水给药的对照组和用菌类热水萃取物给药组和实施例1、2、3和5得到的活性物质给药组，分别从各组小鼠的平均生存天数计算出寿命延长率，结果如表1所示。
(结果)
表1
试样  平均存活天数(日)  寿命延长率(％)
对照组真姬菇热水萃取物香菇热水萃取物奇果菌属热水萃取物火菇热水萃取物实施例1的生理活性物质EEM-SB给药组实施例2的生理活性物质EEM-SS给药组实施例3的生理活性物质EEM-SM给药组实施例5的生理活性物质EEM-SE给药组  26.230.230.029.830.238.236.035.236.8 15.314.513.915.145.837.434.440.6
发明效果
通过本发明，可从食用菌类高效简单地得到生理活性强的物质，可得到作为药品或保健品有用的制品。

Claims (9)

1.生理活性物质EEM-S，是用水、碳原子数1～4的低级醇或它们的混合溶剂萃取至少一种选自香菇、火菇、真姬菇、侧耳属、滑菇、奇果菌属、小包脚菇属、旱田玉蕈、雪茸菌、蘑菇、灵芝和木层孔菌属的菌类，并用分子筛法处理萃取物收集分子量6,000～60,000和在水中的紫外线吸收最大值是255～260nm的部分。
2.生理活性物质EEM-SB，是将真姬菇用水、碳原子数1～4的低级醇或它们的混合溶剂萃取，并用分子筛法处理萃取物得到的，生理活性物质EEM-SB具有分子量6,000～50,000，在水溶液中的紫外线吸收的最大值是255～260nm，红外线吸收的最大吸收波数为1560、1396、1032cm-1，其中每个都包括±50cm-1以内的误差；蛋白含量是20％～30％，糖含量是22％～32％，氨基酸的组成摩尔比是天冬氨酸：9.0％、谷氨酸：16.1％、甘氨酸：9.1％、丙氨酸：12.5％、缬氨酸：5.7％、精氨酸：5.6％、鸟氨酸：7.8％，其中每个都包括±3％以内的误差，作为构成糖主要是葡萄糖。
3.生理活性物质EEM-SE，是将火菇用水、碳原子数1～4的低级醇或它们的混合溶剂萃取，并用分子筛法处理萃取物得到的，生理活性物质EEM-SE具有分子量6,000～50,000，在水溶液中的紫外线吸收的最大值是255～260nm，红外线吸收的最大吸收波数为3279、2927、1578、1400、1043cm-1，其中每个都包括±50cm-1以内的误差；蛋白含量是8％～18％，糖含量是5％～10％，氨基酸的组成摩尔比是天冬氨酸：9.1％、谷氨酸：17.7％、甘氨酸：14.8％、丙氨酸：21.9％、缬氨酸：11.8％、精氨酸：6.8％、鸟氨酸：12.6％，其中每个都包括±3％以内的误差，作为构成糖主要是葡萄糖。
4.生理活性物质EEM-S的制造方法，其特征在于包括：是用水、碳原子数1～4的低级醇或它们的混合溶剂萃取至少一种选自香菇、火菇、真姬菇、侧耳属、滑菇、奇果菌属、小包脚菇属、旱田玉蕈、雪茸菌、蘑菇、灵芝和木层孔菌属的菌类，并用分子筛法处理萃取物收集分子量6,000～60,000和在水中的紫外线吸收最大值是255～260nm的部分。
5.权利要求4记载的生理活性物质EEM-S的制造方法，其中分子筛法是使用平膜分子筛膜、中空过滤膜、透析膜或分子筛色谱的方法。
6.含有权利要求1至3任一项中记载的生理活性物质作为有效成分的药物。
7.权利要求6记载的药物，它是抗癌剂。
8.权利要求6或7记载的药物，它是片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂或液体制剂。
9.权利要求6或7记载的药物，它是用大豆肽和/或贝壳树脂薄膜包衣剂包衣的片剂。
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