KR20040057973A

KR20040057973A - 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법 및 플레우로투스네브로덴시스를 포함하는 질환 예방 개선제

Info

Publication number: KR20040057973A
Application number: KR1020030095276A
Authority: KR
Inventors: 요시노부 기타지마; 후미오 에구치; 유타카 기타모토
Original assignee: 요시노부 기타지마; 후미오 에구치; 유타카 기타모토
Priority date: 2002-12-26
Filing date: 2003-12-23
Publication date: 2004-07-02
Also published as: TW200418363A; US20040137602A1; EP1433374A1; CN1511443A

Abstract

본 발명의 목적은 단기간에 충분한 양의 자실체를 수확할 수 있는 플레우로투스 네브로덴시스(Pleurotus nebrodensis)의 재배방법 및 플레우로투스 네브로덴시스를 포함하는 질환 예방 개선제를 제공하는 것으로, 본 발명에 관련된 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법에 의하면, 전기 임펄스를 부여하는 것, 및/또는 온도변화를 부여하는 것으로, 단기간에 충분한 양의 자실체를 수확할 수 있고, 또 본 발명에 관련된 플레우로투스 네브로덴시스를 포함하는 질환 예방 개선제는 우수한 질환 예방 개선효과를 갖는 것을 특징으로 한다.

Description

플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법 및 플레우로투스 네브로덴시스를 포함하는 질환 예방 개선제{A method for culturing a Pleurotus nebrodensis strain and an improving agent for prevention of disease comprising said strain}

본 출원은 2002년 12월 26일자 출원의 일본 특허출원 2002-378014호 및 2003년 5월 26일자 출원의 일본 특허출원 2003-147895호 우선권을 주장하고 있고, 여기에 기재한 것이다.

본 발명은 플레우로투스 네브로덴시스(Pleurotus nebrodensis)의 재배방법 및 플레우로투스 네브로덴시스를 포함하는 질환 예방 개선제, 특히 그 수확량의 개선에 관한 것이다.

근래, 식생활의 다양성이나 미식 붐에서 일반적으로 젊은 층부터 비만화의 경향에 있다. 또 초고령화 사회나 스트레스화 사회로의 돌입에 따라 가령(加齡)이나 생활습관에 관한 질환이 증가하는 것이 예측된다. 특히 고혈압증은 비만이나 운동부족에서 증가하는 경향에 있다. 또 고혈압증은 당뇨병이나 내당능(耐糖能)장해, 또는 고지혈증·지질대사이상, 비만 등의 성인병을 수반하기 쉬운 것이 알려졌다.

종래 고혈압증에 대한 치료법으로서는 Ca 길항약, β수용체 작동약, 안지오텐신 전환효소 저해약을 이용하는 방법이 효과적이고, 광범위하게 이용되고 있다. 그러나 이들 약물의 장기간에 걸친 투여에 의해 부작용이 문제가 되는 일도 많다. 또 비만의 개선방법으로서는 운동요법, 식사요법이 주류가 되고 있는데, 어느 것이나 계속은 곤란하다. 이 때문에 부작용을 일으킬 가능성이 낮고, 계속 섭취가 가능한 자연식품이나 건강식품(기능성 식품을 포함)에 대한 관심이 높아지고 있다.

한편, 식용 버섯류는 식문화의 다양화나 건강식품으로서의 인식에서 왕성한 수요가 있고, 생산량도 증대하고 있다. 따라서 생산기술도 각 버섯류에 대응한 형태로 발전해 왔다. 현재는 특수한 생태를 갖는 일부 버섯을 제외하고, 표고버섯, 팽이버섯, 느티만가닥 버섯, 입새버섯, 애느타리버섯, 맛버섯, 새송이버섯 등 대부분의 버섯의 인공재배가 가능하게 되고 있다.

식용 버섯의 재배방법은 표고버섯 등의 원목재배와, 팽이버섯, 애느타리버섯 등과 같이, 톱밥, 미당, 밀기울, 물 등을 혼합하여 배지(培地)로 하는 용기균상재배가 있다.

용기재배에서는 배지의 조성이 그 생육에 큰 영향을 주는 것에서 양질의 버섯을 많이 수확할 수 있도록, 종래부터 여러가지 재료가 배지로서 사용되고 있다.

예를 들면 홍조류의 분말을 배지에 첨가하는 방법(일본 특개평 06-113670), 및 달걀껍질의 분쇄물을 배지에 첨가하는 방법(일본 특개평 06-253677) 등이 있다.

그러나 플레우로투스 네브로덴시스에는 종래의 재배방법으로는 충분한 수확량을 얻을 수 없어, 보다 수확량의 증대를 꾀할 수 있는 재배방법이 요망되고 있다.

본 발명은 상기 종래 기술의 과제를 감안하여 이루어진 것으로, 그 목적은 단기간에 충분향 양의 자실체를 수확할 수 있는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법 및 플레우로투스 네브로덴시스를 포함하는 질환 예방 개선제를 제공하는 것에 있다.

도 1은 본 발명에 관련된 피검시약의 조제방법을 나타낸 플로우차트이다.

상기 목적을 달성하기 위해 본 발명자들이 예의검토를 실행한 결과, 전기 임펄스 및/또는 온도변화를 부여하는 것에 의해, 플레우로투스 네브로덴시스의 자실체의 발생이 촉진되는 것을 발견했다. 또 플레우로투스 네브로덴시스가 우수한 질환 예방 개선효과를 갖는 것을 발견하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

즉, 본 발명의 제 1 주제는 배지에 플레우로투스 네브로덴시스의 종균을 접종하고, 배양하여 균사를 배양기 내에 만연시키고, 그 후에 자실체를 발생시키는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법으로서, 상기 배양시에 배양 전기에 유지되고 있는 온도를 배양 중기에 일단 저하시키고, 배양 후기에 급격하게 상승시키는 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법이다.

또, 배지에 플레우로투스 네브로덴시스의 종균을 접종하고, 배양하여 균사를 배양기 내에 만연시키고, 그 후에 자실체를 발생시키는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법으로서, 상기 발생시에 발생 전기에 저온으로 유지하는 것과 함께, 발생 후기에 그 온도를 상승시키는 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법이다.

또, 배지에 플레우로투스 네브로덴시스의 종균을 접종하고, 배양하여 균사를 배양기 내에 만연시키고, 그 후에 자실체를 발생시키는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법으로서, 상기 배양시에 배양 전기에 유지되고 있는 온도를 배양 중기에 일단 저하시키고, 배양 후기에 급격하게 상승시켜 상기 발생시에 발생 전기에 저온으로 유지하는 것과 함께 발생 후기에 그 온도를 상승시키는 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법이다.

상기 재배방법에서, 배양 종료 후, 5~60kV의 전기 임펄스를 부여하는 것이 적합하다.

상기 배양방법에서, 상기 배양 전기의 온도가 16~24℃이고, 배양 중기의 온도가 6~14℃이며, 배양 후기의 온도가 26~34℃인 것이 적합하다.

상기 재배방법에서, 상기 배양기간이 35~45일간의 배양 전기와, 5~15일간의 배양 중기와, 5~15일간의 배양 후기로 이루어지는 것이 적합하다.

상기 재배방법에서, 배양시에 습도가 65~75%로 유지되는 것이 적합하다.

상기 재배방법에서 상기 발생 전기의 온도가 -5~+3℃이고, 발생 후기의 온도가 14~22℃인 것이 적합하다.

상기 재배방법에서 발생 기간에서 상기 온도가 2단계로 상승되는 것이 적합하다.

상기 재배방법에서, 상기 발생시의 온도상승과 함께, 습도가 75~85%로 유지된 상태에서 90~100%로 상승되는 것이 적합하다.

상기 재배방법에서, 상기 발생시의 온도상승과 함께, 이산화탄소의 농도를 및/또는 조명의 광도를 상승시키는 것이 적합하다.

상기 재배방법에서, 상기 발생시의 온도상승 전에 사멸균층의 제거를 실행하는 것이 적합하다.

본 발명의 제 2 주제는 하기 (a)~(d) 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법이다.

(a) 배지에 플레우로투스 네브로덴시스의 종균을 접종하는 공정.

(b) (a) 공정 후, 온도 20~30℃의 조건하에서 배양하여 균사를 배지 내에 만연시키는 공정.

(c) (b) 공정 후, 5~60kV의 전기 임펄스를 부여하는 공정.

(d) (c) 공정 후, 온도 10~20℃의 조건하에서 자실체를 발생시키는 공정.

상기 재배방법에서 (d) 공정에서 온도를 일단 -1~2℃로 저하시킨 후, 10~20℃로 상승시키는 것이 적합하다.

본 발명의 제 3 주제는 플레우로투스 네브로덴시스를 주성분으로 하는 질환 예방 개선제이다.

상기 질환 예방 개선제에서 플레우로투스 네브로덴시스 건조분말 및/또는 그의 열수(熱水) 추출물을 포함하는 것이 적합하다.

상기 질환 예방 개선제에서 질환이 고혈압증, 고지혈증, 비만에서 선택되는1종 또는 2종 이상인 것이 적합하다.

이하, 본 발명의 적합한 실시형태를 상세하게 설명한다.

먼저 본 발명에 관련된 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법을 설명한다.

(1) 배지의 조정

본 발명에서 배지가 되는 원료는 본 발명의 효과를 방해하지 않는 한 특별히 한정되는 일은 없고, 종래 사용하고 있는 것을 사용할 수 있다. 예를 들면, 미당, 톱밥 등에 수분을 더하여 조정한 것이 이용된다. 또 균사활성제 등이 혼합되는 일도 있다.

배지를 충전하는 용기는 본 발명의 효과를 방해하지 않는 한, 특별히 한정되는 일은 없고, 적절한 용기에 충전하면 좋다. 통상은 위쪽에 개구를 갖는 병모양의 용기(배양병)나 자루형상의 용기(배양자루)가 이용된다.

(2) 배지의 살균

준비한 배지를 증기살균 등의 살균수단에 의해 살균한다. 살균조건은 종래와 같이 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면 100℃에서 4시간 정도로 할 수 있다.

(3) 종균의 접종

그 후, 20℃정도까지 냉각하고나서, 배지를 충전한 용기의 거의 중앙에 적절한 구멍을 뚫고, 플레우로투스 네브로덴시스의 종균을 접종한다. 종균의 접종에는 본 발명의 효과를 방해하지 않는 한 특별히 한정되지 않고, 통상대로의 방법으로 실행할 수 있다. 구멍의 깊이는 특별히 한정하는 것은 아니지만, 균 주위의 촉진을 고려하면, 용기의 바닥부 부근에 도달하기까지의 깊이로 하는 것이 바람직하다.

(4) 배양

종균의 접종 후, 배양하여 균사를 배지 내에 만연시킨다. 배양시의 실온은 20~30℃, 습도는 70~100%인 것이 바람직하고, 균사가 충분히 만연하기까지 배양시키는 것이 바람직하다.

배양조건은 상기 범위이면 특별히 한정되지 않지만, 신속하게 배양시키기 위해서는 실온을 배양 중기에 일단 저하시키고, 다시 상승시키는 것이 바람직하다.

구체적으로는 배양 전기의 실온은 20℃ 전후(16~24℃), 배양 중기에 일단 저하시킨 온도는 10℃ 전후(6~14℃), 배양 후기에 상승시키는 온도는 30℃ 전후(26~34℃)로 하는 것이 바람직하다.

배양 전기의 기간은 40일 정도, 배양 중기의 기간은 10일 정도, 배양 후기의 기간은 10일 정도가 바람직하다. 습도는 70% 전후(65~75%)로 유지하는 것이 바람직하다.

(5) 자실체의 발생

균사가 배지 내에 만연한 후, 전기 임펄스를 부여하는 것에 의해, 자실체의 발생이 빨라지고, 수확량도 증대한다. 전기 임펄스는 5~60kV, 특히 20~30kV, 가장 바람직하게는 20kV인 것이 적합하다. 5kV 미만이면, 본 발명의 효과가 충분히 발휘되기 힘들게 되는 일이 있고, 60kV를 넘으면, 반대로 자실체가 발생되기 힘들게 되는 일이 있기 때문에, 바람직하지 않다. 전기 임펄스를 부여하는 타이밍은 배양종료 후, 자실체 발생단계에 들어갈 때와 동시인 것이 적합하다.

자실체를 발생시키기 위해서는 배양시보다도 실온을 저하시키고, 실온은10~20℃, 습도는 80~100%인 것이 바람직하다.

자실체 발생에 바람직한 온도, 습도 조건은 상기한 바와 같은데, 보다 자실체의 발생을 보다 빠르게 하고, 수확량을 증대시키기 위해서는 실온을 저온으로 유지하고, 도중에 상승시키는 것이 바람직하다. 구체적으로는 -1℃ 전후(-5~3℃)의 상태를 5일 정도 유지하여 균사에 저온 자극을 부여한 후, 5℃ 전후(1~9℃)로 상승시켜 5일 정도 유지하고, 그 후 또 18℃ 전후(14~22℃)로 상승시켜 유지하는 것이 바람직하다. 이 기간은 균사의 상태에 의해 적절히 조정해도 좋다. 또 습도는 온도상승과 거의 동시에 80% 전후(75~85%)부터 95% 전후(95~100%)로 상승시키는 것이 바람직하다. 또 그 때에 배지 표면의 사멸균층을 제거하는 것이 바람직하다. 그 깊이는 15mm 정도가 좋다.

또 온도상승과 거의 동시에 이산화탄소 농도 및/또는 조명광도를 상승시키는 것이 특히 바람직하다.

구체적으로는 이산화탄소 농도는 400ppm 전후에서 2000ppm 전후로 상승시키는 것이 바람직하고, 조명광도는 100Lux 전후에서 400Lux 전후로 상승시키는 것이 바람직하다. 조명램프의 색은 청색이 좋다.

본 발명의 플레우로투스 네브로덴시스를 사용하여 질환 예방 개선제를 제조할 수 있다. 본 발명의 질환 예방 개선제는 경구투여하여, 질환, 특히 고혈압증, 고지혈증, 비만의 예방·개선을 위해 적용한다. 질환 예방 개선제로서 이용할 때의 섭취량으로서는 증상 등에 따라 달라, 특별히 한정되지 않지만, 성인 1일당 플레우로투스 네브로덴시스 건조분말로 환산하여 1~15g, 특별히 6~9g을 섭취하면 충분히 효과를 기대할 수 있다.

플레우로투스 네브로덴시스는 건조분말의 추출물로서 섭취하는 것도 가능하다. 추출액으로서는 플레우로투스 네브로덴시스 자실체 건조분말을 열수로 추출한 것이 바람직하다. 또 추출물은 추출액이나, 그 건조물이어도 좋다.

본 발명의 질환 예방 개선제는 통상 내복약으로서 투여된다.

내복약의 경우에는 상법에 의해 산제, 정제, 캡슐제, 과립제, 다제(茶劑), 현탁화제, 유엑기스제, 액제, 시럽제 등으로 할 수 있다. 또 제제화시에는 통상의 제제화 담체, 예를 들면 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 착색제, 교미교취제, 부향제 등을 필요에 따라 이용할 수 있다. 또 필요에 따라 적당한 코팅제 등으로 제피(劑皮)를 실시할 수도 있다.

이하, 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세하게 설명하는데, 본 발명은 이것에 한정되는 것은 아니다.

톱밥 150 중량부, 밀기울 100g 중량부, 콘밀 10중량부, 균사활성제 15중량부로 이루어지는 배지를 준비하고, 함수율을 약 65%로 조정했다.

폴리프로필렌제 배양병(구경 52mm, 용량 850ml)에 준비한 배지를 약 650g씩 채워 뚜껑을 덮는다.

배지 중앙에 직경 약 10mm의 접종구멍을 바닥부까지 마련하고, 증기살균 가마로 121℃에서 4시간 살균했다. 살균 후, 배지의 온도가 20℃ 이하가 되기까지 냉각하고, 플레우로투스 네브로덴시스의 종균 15g을 접종했다.

종균을 접종한 병을 실온 21℃/상대습도 70%로 설정한 배양실에 40일간 두었다. 다음에 실온 10℃/상대습도 70%로 설정한 배양실에 10일간 두고, 또 실온 30℃/상대습도 70%로 설정한 배양실에 10일간 두었다. 이것에 의해 균사가 배지 내에 충분 만연하여 균사가 완숙했다.

다음에 실온 -1℃/상대습도 80℃에서 수일간 저온자극을 부여하고, 실온 5℃/상대습도 80%로 하고 7일간 유지했다. 이 시점에서 균 바닥 표면을 직경 35mm, 깊이 15mm 제거했다(균긁기). 다음에 실온 18℃/상대습도 95℃로 하여 이산화탄소 농도를 400ppm에서 2000ppm으로 상승시키는 것과 함께, 청색 형광 램프의 광도를 100Lx에서 400Lx로 상승시켜 자실체를 발생시켰다. 이 결과, 균긁기를 실행하고나서 21일째에 1개의 재배병 당 210g의 자실체를 채취할 수 있었다.

또 배양종료시에 5~60kV, 특히 15~30kV의 전기 임펄스를 부여한 바, 또 단기간에 보다 많은 자실체를 수확할 수 있었다. 따라서 온도변화에 더하여 전기 임펄스를 부여하는 것이 바람직한 것이 확인되었다.

전기 임펄스의 영향

1. 톱밥 150중량부, 밀기울 100중량부, 콘밀 10중량부 및 균사 활성제 15중량부로 이루어지는 배지를 준비하고, 함수율을 약 65%로 조정했다. 폴리프로필렌제 재배병(구경 52mm, 용량 850ml)에 준비한 배지를 약 650g씩 채워 뚜껑을 덮었다.

2. 121℃에서 4시간, 증기살균기에 의해 살균하고, 배지의 온도가 20℃ 이하가 되기까지 냉각했다.

3. 배지 중앙에 직경 약 20mm의 접종구멍을 바닥부까지 설치하고, 플레우로투스 네브로덴시스의 종균 15g을 접종했다.

4. 종균을 접종한 병을 실온 25℃/상대습도 70%로 설정한 배양실에 60일간 두었다. 이것에 의해 균사가 배지 내에 충분히 만연하여 균사가 완숙되었다.

5. 균배양한 병에 소정의 전압의 전기 임펄스를 부여한다.

6. 실온 10℃/상대습도 90%로 설정된 생육실에 이동하여 격일로 자실체의 발생을 관찰했다.

배양병은 각 전압당 100개 준비했다. 각 일수에서의 자실체가 발생한 배양병의 수, 평균수량을 표 1에 나타낸다. 또 평균수량은 각 전압에서 자실체가 발생한 배양병 1개당 자실체 수량의 평균을 나타낸다. 또 일수는 전기 임펄스를 부여한 날(배양실에서 생육실로 옮긴 날)에서 기산했다.

표 1에서 전기 임펄스를 부여하면, 자실체의 발생일이 빨라지고, 수량이 증가하는 것이 확인되었다. 자실체의 발생일은 전압이 강할수록 빠르고, 20~30kV에서는 14일째부터, 10~15kV에서는 16일째부터, 5kV에서는 18일째부터 자실체가 발생하고, 15kV에서는 26일째까지, 20kV에서는 24일째까지, 25kV에서는 22일째까지, 30kV에서는 20일째까지 모든 배양병에서 자실체가 발생했다.

또 수량은 20kV에서 가장 많고, 20~30kV에서는 전기 임펄스를 부여하지 않을 때의 2배 이상의 수량이 있었다. 또 높은 전압을 부여하여 시험한 바, 60kV에서도 자실체 발생일이 빠르고, 수량이 증가하는 효과가 확인되었다.

따라서 플레우로투스 네브로덴시스를 단기간에 다량으로 수확하기 위해서는 배양종료시에 5~60kV, 특히 15~30kV의 전기 임펄스를 부여하는 것이 바람직하고, 수량의 점에서는 20kV가 최적인 것이 확인되었다.

또 온도조건을 이하와 같이 한 바, 더욱 단기간에 보다 많은 자실체를 수확할 수 있었다. 따라서 전기 임펄스에 더하여 저온자극을 부여하는 것이 바람직한 것이 확인되었다.

온도조건: 실온 -1℃/상대습도 90%에서 5일간 유지하고, 실온을 5℃로 상승시켜 5일간 유지하고, 그 후 실온을 18℃로 상승시켰다.

1. 고혈압 예방개선제

(1) 시험 래트(Rat)의 사육 및 피험약의 투여방법

① 예비사육(6~7 주령)

일본 찰스리버(주)에서 구입한 6주령의 웅성 자연발증 고혈압 래트(SHR), 및정상 혈압의 위스터 교토 래트(WKY)를 실온 22±1℃, 습도 60±10%로 조절된 사육실에서 백색형광등으로 1일 12시간(7~19시 명기)의 광조절을 실행하고, 사료 및 수도물을 자유섭취시켜 1주간 예비사육했다.

예비사육 후, 각 개체의 체중 및 혈압의 측정을 실행하고, 1군 8마리로 하여 혈압값의 평균값이 거의 같아지도록 SHR 래트를 A~H군으로, WKY 래트를 I~J군으로 분류했다.

② 플레우로투스 네브로덴시스 추출물의 조제방법

플레우로투스 네브로덴시스 자실체의 건조물을 분쇄하고, 16메시의 체에 걸러 분말로 했다. 또 이 분말 3, 6, 9, 12g을 각각 600ml의 열수(80℃) 속에서 2시간 추출하여 열수 추출액을 얻었다. 이하 각각을 3g 추출물, 6g 추출물, 9g 추출물, 12g 추출물이라 한다.

③ 피험약 투여방법(8~18주령)

하기 요령으로 각 군의 래트에 피험약 투여를 실행하고, 8주령에서 12주간, 20주령까지 사육했다. 사료와 수도물을 각 군 모두 자유 섭취시켰다. 사육실의 환경은 온도 22±1℃, 습도 60±10%, 백색형광등으로 1일 12시간의 채광하(7~19시 명기)로 했다.

각 추출물은 모두 경구투여하고, 매일 오전 10시부터 시행하며, 추출물 투여후는 멸균수를 자유 섭취시켰다.

A군: SHR 래트(무투여)

B군: SHR 래트(3g 추출물 투여)…1일에 체중 1kg당 상기 3g 추출물 10ml를투여한다.

C군: SHR 래트(6g 추출물 투여)…1일에 체중 1kg당 상기 6g 추출물 10ml를 투여한다.

D군: SHR 래트(9g 추출물 투여)…1일에 체중 1kg당 상기 9g 추출물 10ml를 투여한다.

E군: SHR 래트(12g 추출물 투여)…1일에 체중 1kg당 상기 12g 추출물 10ml를 투여한다.

F군: SHR 래트(건조분말 3%)…사료에 3%의 플레우로투스 네브로덴시스 건조분말을 혼합하고, 자유섭취시킨다.

G군: SHR 래트(건조분말 6%)…사료에 6%의 플레우로투스 네브로덴시스 건조분말을 혼합하고, 자유섭취시킨다.

H군: SHR 래트(건조분말 9%)…사료에 9%의 플레우로투스 네브로덴시스 건조분말을 혼합하고, 자유섭취시킨다.

I군: WKY 래트(무투여)

J군: WKY 래트(건조분말 6%)…사료에 6%의 플레우로투스 네브로덴시스 건조분말을 혼합하고, 자유섭취시킨다.

(2) 결과

① 혈압검사

혈압검사는 2주간에 1회, 피험약 투여전에 실행하고, 각 군 래트의 평균값을 구했다.

결과를 표 2에 나타낸다.

자연발증 고혈압 래트인 SHR 래트(A~H군)는 WKY 래트(I~J군)와 비교하여 혈압값이 높아졌다. 그러나, SHR 래트에서 무투여군(A군)과 비교하여 6, 9, 12g 투여군(C~E군), 6, 9%군(G, H군)에서는 14주령 무렵부터, 혈압상승의 억제가 확인되었다. 또 놀랍게도 6%군(G군)에서는 14주령부터, 9, 12g 투여군(D, E군) 및 9%군(H군)에서는 16주령부터, 6g 투여군(C군)에서는 18주령부터 혈압의 강하가 확인되었다.

혈압상승억제 및 혈압강하의 작용은 용량이 많은 군일수록 높은 경향에 있었다. 12g 투여군(E군)에서 혈압의 강하작용이 9g 투여군(D군)보다도 높지 않은 것은 약효용량에 수반하는 생물곡선의 발현으로 생각할 수 있다. 또, 원래 정상혈압인 WKY 래트에서는 혈압의 강하(이상)는 일어나지 않았다.

이상에서 본 발명의 플레우로투스 네브로덴시스에는 용량 의존적으로 고혈압증 예방개선효과가 있는 것을 알 수 있었다. 또 정상혈압인 경우에는 혈압강하작용을 나타내지 않는 점에서 종래의 고혈압 치료약과 같이 단지 혈압을 내리는 것이아니라, 혈압을 정상값에 가깝게 하는 효과가 있어, 보다 안전하게 복용할 수 있는 것을 알 수 있다. 또 건조분말이나, 그 추출물이어도 효과가 있는 것을 알 수 있었다.

② 혈액검사

실험최종일의 전날에 전체 래트를 금식시키고, 다음 날 심마취(深痲醉)(넴뷰탈(Nembutal), 45mg/kg, i.p.)하고, 좌심실에서 20G 채혈침으로 가능한한 채혈을 실행했다.

채취한 혈액을 이용하여 하기의 항목에서 생화학적 검사(자동화학 분석장치: Auto Lab, Radio lmmuno Assay 법)를 실행하여 평균값을 구했다.

결과를 표 3에 나타낸다.

SHR 래트(A~H군)는 WKY 래트(I~J군)와 비교하여 LDL 콜레스테롤, β리포단백, 중성지방, 알부민, 요소질소, 크레아티닌, 요산, 안지오텐신의 값이 높고, 총콜레스테롤, HDL 콜레스테롤, 총 단백, A/G비, 백혈구 수의 값이 낮은 것을 알 수 있었다. 그러나, SHR 래트에서, 무투여군(A군)과 비교하여 투여군(B~H군)은 각 항목에서 현저한 개선이 확인되었다.

안지오텐신

안지오텐신은 간장에서 생산되는 레닌 기질에 신사구체로부터 분비(分泌)되는 레닌이 작용하여 생성되는 활성 펩티드이다. 높은 값을 나타내는 질환으로서는 신혈관성(腎血管性) 고혈압증, 악성 고혈압증 등을 들 수 있다. 따라서 안지오텐신값은 고혈압증의 지표에 이용된다.

A군과 비교하여 B~H군에서는 안지오텐신이 저하하고, 정상적인 I군의 값에 근접하며, 특히 B~E, G, H군에서는 거의 I군의 값과 같아졌다. 이와 같이 안지오텐신값에서도 고혈압 예방개선효과가 확인되었다.

콜레스테롤

콜레스테롤은 생체세포막의 구성성분 등으로서 필수성분이고, 선옥(善玉) 콜레스테롤(HDL)과, 악옥(惡玉) 콜레스테롤(LDL)로 나뉜다. LDL은 동맥경화를 촉진하고, HDL은 혈관벽에 부착된 LDL을 제거하는 작용을 한다. 따라서 이들 콜레스테롤값을 측정하는 것에 의해 지질대사이상을 초래하는 질환을 추측할 수 있다.

A군과 비교하여 B~H군에서는 HDL의 상승 및 LDL의 저하가 보이고, I군의 값에 근접하며, 특히 D~E, G, H군에서는 거의 I군의 값과 같아졌다. 또 총콜레스테롤값도 정상인 I군의 값에 근접했다. 따라서 고혈압 예방 개선효과에 수반하여 지질대사 이상의 예방개선효과를 갖는 것이 확인되었다.

β리포단백, 중성지방

β리포단백의 주된 기능은 콜레스테롤을 간장에서 각 장기에 이송하는 것이다. 따라서 β리포단백 값은 지질대사이상 질환의 지표가 된다.

A군과 비교하여 B~H군에서는 용량의존적으로 β리포단백값의 저하가 보이고, 정상값에 근접했다.

또 A군과 비교하여 B~H군에서는 용량의존적으로 중성지방의 저하도 보였다. 따라서 β리포단백, 중성지방값에서도 지질대사이상의 예방개선이 확인되었다.

요소질소, 크레아티닌, 요산

요소질소, 크레아티닌, 요산의 측정은 간·신장 기능의 지표에 이용된다.

A군과 비교하여 D, E, G, H군에서는 요소질소, 크레아티닌, 요산값이 저하하고, 정상인 I군의 값에 근접했다. 따라서 고혈압예방 개선효과에 수반하여 간·신장 기능의 개선효과도 갖는 것이 확인되었다.

총단백, 알부민, A/G비, 백혈구 수

또 A군과 비교하여 B~H군에서는 용량의존적으로 총단백, A/G비, 백혈구 수의 값의 상승 및 알부민 값의 저하가 보이고, 정상인 I군의 값에 근접했다.

이상의 것에서 플레우로투스 네브로덴시스의 투여에 의해 고혈압 예방개선작용에 수반하여, 지질대사이상의 개선효과, 간·신장 기능의 개선효과가 발휘되는 것이 확인되었다. 또 정상 래트에서는 투여에 의해 이들 값에는 눈에 띄는 변화(이상)를 나타내지 않는 것에서 안전성이 높은 것을 알 수 있다.

2. 고지혈증 예방개선제·비만예방개선제

Zucker 래트의 유전형식은 상염색체성의 단순열성 유전양식을 취하고, 병인유전자(fa유전자)를 호모로 갖는 개체(fa/fa)만이 비만을 나타내고(Zucker-fatty 래트:(ZUC)-fa/fa), 헤테로접합체(fa/+) 및 야생형(+/+)은 비만을 나타내지 않는다(Zucker-lean 래트:(ZUC)-lean). Zucker-fatty 래트는 생후 4주령경부터 체중증가 및 외관에 의해 비만상태가 인식되고, 10주령경까지 급속하게 비만이 진행되며, 그 후에도 서서히 진행한다. 또 고지혈증, 고인슐린혈증, 고렙틴혈증 및 내당성(耐糖性)의 이상을 나타내는 것이 알려져 있다. 이 Zucker-fatty 래트 및 비교로서 Zucker-lean 래트를 사용하고, 고지혈증예방 개선효과 및 비만예방 개선효과에 대해 시험을 실행했다.

(1) 시험래트의 사육 및 피험약의 투여방법

① 예비사육(5~6주령)

일본 찰스리버(주)에서 구입한 5주령의 웅성 Zucker-fatty 래트 및 웅성 Zucker-lean 래트를 실온 22±1℃, 습도 60±10%로 조절된 사육실에서, 백색형광등으로 1일 12시간(7~19시 명기)의 광조절을 실행하고, 사료 및 수도물을 자유섭취시켜 1주간 예비사육했다.

예비사육후, 각 개체의 체중측정 및 당부하시험을 실행하고, 1군 5마리로 하여 체중의 평균값이 거의 같아지도록 Zucker fatty 래트를 K~O군으로, Zucker-lean 래트를 P~Q군으로 분류했다.

② 플레우로투스 네브로덴시스 추출물의 조제방법

상기한 바와 같다.

③ 피험약 투여방법(6~16주령)

하기 요령으로 각 군의 래트에 피험약 투여를 실행하고, 또 10주간, 16주령까지 사육했다. 사료와 수도물을 각 군 모두 자유섭취시켰다. 사육실의 환경은 온도 22±1℃, 습도 60±10%, 백색형광등으로 1일 12시간의 채광하(7~19시 명기)로 했다.

각 피험약은 모두 경구투여로 하고, 매일 오전 10시부터 시행하고, 투여후는 멸균수를 자유 섭취시켰다.

K군: Zucker-fatty 래트(무투여)

L군: Zucker-fatty 래트(3g 추출물 투여)…1일 체중 1kg당 상기 3g 추출물 10ml를 투여한다.

M군: Zucker-fatty 래트(6g 추출물 투여)…1일 체중 1kg당 상기 6g 추출물 10ml를 투여한다.

N군: Zucker-fatty 래트(9g 추출물 투여)…1일 체중 1kg당 상기 9g 추출물 10ml를 투여한다.

O군: Zucker-fatty 래트(12g 추출물 투여)…1일 체중 1kg당 상기 12g 추출물 10ml를 투여한다.

P군: Zucker-lean 래트(무투여)

Q군: Zucker-lean 래트(9g 추출물 투여)…1일에 체중 1kg당 상기 9g 추출물 10ml를 투여한다.

(2) 결과

① 체중변동

체중측정은 주 1회, 피험약 투여전에 실행하고, 각 군 래트의 평균값을 구했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

Zucker-fatty 래트(K~O군)는 Zucker-lean 래트(P~Q군)와 비교하여 체중의 증가가 격렬했다. 그러나, Zucker-fatty 래트에서, 무투여군(K군)과 비교하여 투여군(L~O군)에서는 10주령 무렵부터 체중증가의 억제가 보였다. 체중증가의 억제효과는 용량이 많은 군일수록 높았다.

또, 정상체중인 Zucker-lean 래트에서도 정상인 범위 내에서의 체중증가의 억제가 확인되었다.

이상에서 본 발명의 플레우로투스 네브로덴시스에는 용량의존적으로 비만을 억제하는 효과가 보이고, 정상인 경우에 대해서도 적절한 지방침착 억제효과가 있는 것을 알 수 있었다.

② 혈액검사

실험최종일의 전날에 전체 래트를 금식시키고, 다음 날에 심마취(넴뷰탈, 45mg/kg,i.p.)하고, 좌심실로부터 20G 채혈침으로 가능한한 채혈을 실행했다.

채취한 혈액을 이용하여 하기 항목에서 생화학적 검사(자동화학 분석장치: Auto Lab, Radio lmmuno Assay법)를 실행하여 평균값을 구했다.

결과를 표 5에 나타낸다.

표 5에서 Zucker-fatty 래트(K~O군)는 Zucker-lean 래트(P~Q군)와 비교하여 총콜레스테롤, 유리 콜레스테롤, β리포단백, 중성지방, 인지질, 총지질, 요소질소, AST(GOT), AST(GPT), 인슐린의 값이 높고, HDL 콜레스테롤, 유리지방산, 크레아티닌, 요산의 값이 낮은 것을 알 수 있었다. 그러나, Zucker-fatty 래트에서 무투여군(K군)과 비교하여 투여군(L~O군)은 각 항목에서 현저한 예방개선효과가 확인되었다.

중성지방, 유리지방산, 인지질, 총지질

K군과 비교하여 L~O군에서는 용량의존적으로 중성지방, 인지질, 총지질이 저하하고, 유리지방산이 상승하는 경향이 보였다. 유리지방산은 대부분이 지방조직에 축적된 중성지방이 분해되어 혈중에 방출된 것으로, 심근, 골격근, 신장 등의 주요 장기에서 연소되고, 말초조직에서 에너지원으로서 이용된다. 따라서 이 결과는 비만의 개선을 나타낸다. 또 중성지방, 총지질의 현저한 저하에 비교하여 세포막의 구성성분으로서 중요한 인지질은 저하가 적고, 정상인 P군의 값 이하가 되는 일은 없었다. 또 상기 작용은 정상 래트에서도 정상 범위 내에서 확인되었다. 이상에서 고지혈증, 비만의 예방개선작용이 확인되었다.

콜레스테롤

상기한 바와 같이 콜레스테롤값은 지질대사이상의 지표가 된다.

K군과 비교하여 L~O군은 선옥 콜레스테롤인 HDL이 상승하는 것에 대해 총콜레스테롤, 유리 콜레스테롤은 용량의존적으로 저하하는 경향이 있었다. 이상에서 콜레스테롤 값에서 지질대사의 개선효과가 확인되었다.

β리포단백

상기한 바와 같이 β리포단백값은 지질대사이상 질환의 지표가 된다.

K군과 비교하여 L~O군에서는 용량의존적으로 β리포단백값이 저하하고, 정상인 P군의 값에 근접했다. 따라서 β리포단백값에서도 지질대사의 개선이 확인되었다.

인슐린

인슐린은 췌장의 β세포로부터 분비되는 호르몬으로, 근육·지방조직에서의 글루코스의 흡수촉진 및 간에서의 당방출 억제 등을 통해 혈당을 강하시킨다. 또글리코겐 축적, 지방축적, 케톤체 저하, 단백합성 등에도 관여하고 있다. 따라서 인슐린의 측정은 당대사이상의 지표가 된다.

K군과 비교하여 L~O군에서는 용량의존적으로 인슐린값의 저하가 보이고, 정상인 P군의 값에 근접했다. 따라서 비만예방 개선효과에 수반하여 당대사의 개선도 확인되었다.

요소질소, 크레아티닌, 요산, AST

요소질소, 크레아티닌, 요산, AST는 간·신장 기능의 지표에 이용된다.

K군과 비교하여 L~O군에서는 용량의존적으로 요산질소, AST값이 저하하고, 크레아티닌, 요산값이 상승하는 경향이 보이고, O군에서는 정상인 P군과 거의 같은 값이 되었다. 따라서 비만예방 개선효과에 수반하여 간·신장 기능의 개선도 확인되었다.

또 추출액 투여에 의해 원래 정상이었던 총단백, 알부민, A/G비 등에는 이상을 초래하는 일은 없었다.

이상의 것에서 플레우로투스 네브로덴시스의 투여에 의해 고지혈증 예방개선효과, 비만예방 개선효과 및 그것에 수반하는 지질대사이상의 개선효과, 당대사의 개선효과, 간·신장 기능의 개선효과가 발휘되는 것이 확인되었다.

3. 사람 임상검사

다음에 본 발명의 질환 예방 개선제에서의 사람 임상검사에 대해 설명한다.

피험시약의 조제(도 1)

플레우로투스 네브로덴시스 건조분말 100g과 멸균수 1L를 삼각 플라스크에넣고, 95℃의 탕욕(湯浴) 중에서 1시간 추출후, 실온까지 방냉(放冷)했다. 감압여과에 의해 제 1 여액과 잔사로 분리한다. 잔사에 멸균수 500mL를 더하고, 95℃의 탕욕 중에서 1시간 추출후, 실온까지 방냉하고, 감압여과에 의해 제 2 여액과 잔사로 분리한다. 제 1 여액과 제 2 여액을 혼합하고, 60℃로 감압농축한다. 또 95℃에서 10분 살균 후, 고형분 50%가 되기까지 60℃로 농축한다. 고형분에 대해 50%의 부형제를 첨가하고, 가열용해, 동결건조로 분말화한다. 60메시의 체에 걸러 압출 조립(granulation)법으로 과립화한다.

33세, 42세, 50세의 3인 남성에게 상기 방법으로 조제한 피험시약을 1일 6g씩 매일 복용시키고, 복용전, 복용 1개월째, 복용 3개월째, 복용 6개월째에 각각 채혈검사를 실행했다. 결과를 표 6에 나타낸다.

또 정상값은 총콜레스테롤: 120~220mg/dl, HDL 콜레스테롤: 41~84mg/dl, 중성지방: 30~180mg/dl, β-리포단백: 150~500mg/dl로 되어 있다. 복용전은 어느 남성이나, 총콜레스테롤, 중성지방, β-리포단백의 값이 정상값을 넘고, 1인을 제외하고 HDL이 정상값 이하였다.

그러나, 플레우로투스 네브로덴시스 건조분말을 복용하는 것에 의해, 이들 값에 개선이 보이고, 복용 6개월째에는 3인 모두 모든 값이 정상범위 내로 개선되었다. 따라서 플레우로투스 네브로덴시스는 사람에 대해서도 질환 예방 개선작용을 갖는 것이 확인되었다. 또 복용에 의해 설사, 구토, 배뇨이상 등의 부작용은일절 일어나지 않았다.

이상 설명한 바와 같이, 본 발명에 관련된 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법에 의하면, 전기 임펄스 및/또는 온도변화를 부여하는 것으로, 단기간에 충분한 양의 자실체를 수확할 수 있다.

또 본 발명에 관련된 플레우로투스 네브로덴시스를 포함하는 질환 예방 개선제는 우수한 질환 예방 개선효과를 가진다.

본 발명에 관련된 플레우로투스 네브로덴시스를 투여함에 의해, 고지혈증 예방 개선효과, 비만 예방 개선효과 및 그에 수반되는 지질대사 이상의 개선효과, 당대사의 개선효과, 간·신장 기능의 개선효과가 발휘되며, 본 발명의 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법에 의해 단기간에 충분한 양의 자실체를 수확할 수 있다.

Claims

배지에 플레우로투스 네브로덴시스의 종균을 접종하고, 배양하여 균사를 배양기 내에 만연시키고, 그 후에 자실체를 발생시키는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법으로서, 상기 배양시에 배양 전기에 유지되고 있는 온도를 배양 중기에 일단 저하시키고, 배양 후기에 급격하게 상승시키는 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법.
배지에 플레우로투스 네브로덴시스의 종균을 접종하고, 배양하여 균사를 배양기 내에 만연시키고, 그 후에 자실체를 발생시키는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법으로서, 상기 발생시에 발생 전기에 저온으로 유지하는 것과 함께, 발생 후기에 그 온도를 상승시키는 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법.
배지에 플레우로투스 네브로덴시스의 종균을 접종하고, 배양하여 균사를 배양기 내에 만연시키고, 그 후에 자실체를 발생시키는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법으로서, 상기 배양시에 배양 전기에 유지되고 있는 온도를 배양 중기에 일단 저하시키고, 배양 후기에 급격하게 상승시켜 상기 발생시에 발생 전기에 저온으로 유지하는 것과 함께 발생 후기에 그 온도를 상승시키는 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,

배양 종료 후, 5~60kV의 전기 임펄스를 부여하는 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법.
제 1 항 또는 제 3 항에 있어서,

상기 배양 전기의 온도가 16~24℃이고, 배양 중기의 온도가 6~14℃이며, 배양 후기의 온도가 26~34℃인 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법.
제 5 항에 있어서,

상기 배양기간이 35~45일간의 배양 전기와, 5~15일간의 배양 중기와, 5~15일간의 배양 후기로 이루어지는 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법.
제 1 항 또는 제 3 항에 있어서,

배양시에 습도가 65~75%로 유지되는 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법.
제 2 항 또는 제 3 항에 있어서,

상기 발생 전기의 온도가 -5~+3℃이고, 발생 후기의 온도가 14~22℃인 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법.
제 8 항에 있어서,

발생 기간에서 상기 온도가 2단계로 상승되는 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법.
제 2 항 또는 제 3 항에 있어서,

상기 발생시의 온도상승과 함께, 습도가 75~85%로 유지된 상태에서 90~100%로 상승되는 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법.
제 2 항 또는 제 3 항에 있어서,

상기 발생시의 온도상승과 함께, 이산화탄소의 농도를 및/또는 조명의 광도를 상승시키는 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법.
제 2 항 또는 제 3 항에 있어서,

상기 발생시의 온도상승 전에 사멸균층의 제거를 실행하는 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법.
하기 (a)~(d) 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법.

(a) 배지에 플레우로투스 네브로덴시스의 종균을 접종하는 공정.

(b) (a) 공정 후, 온도 20~30℃의 조건하에서 배양하여 균사를 배지 내에 만연시키는 공정.

(c) (b) 공정 후, 5~60kV의 전기 임펄스를 부여하는 공정.

(d) (c) 공정 후, 온도 10~20℃의 조건하에서 자실체를 발생시키는 공정.
제 13 항에 있어서,

(d) 공정에서 온도를 일단 -1~2℃로 저하시킨 후, 10~20℃로 상승시키는 것을 특징으로 하는 플레우로투스 네브로덴시스의 재배방법.
플레우로투스 네브로덴시스를 주성분으로 하는 것을 특징으로 하는 질환 예방 개선제.
제 15 항에 있어서,

플레우로투스 네브로덴시스 건조분말 및/또는 그의 열수 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 질환 예방 개선제.
제 15 항에 있어서,

질환이 고혈압증, 고지혈증, 비만에서 선택되는 1종 또는 2종 이상인 것을특징으로 하는 질환 예방 개선제.