JP4391133B2

JP4391133B2 - Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ株、その栽培方法、及びそれを含む疾患予防改善剤

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Publication number: JP4391133B2
Application number: JP2003147895A
Authority: JP
Inventors: 文陽江口; 豊北本; 良信北島
Original assignee: Individual
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Priority date: 2003-05-26
Filing date: 2003-05-26
Publication date: 2009-12-24
Anticipated expiration: 2023-05-26
Also published as: JP2004344133A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ株、その栽培方法、及びそれを含む疾患予防改善剤、特に疾患予防改善効果を有するＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ株、その収穫量の改善に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、食生活の多様性や美食ブームから一般的に若年層から肥満化の傾向にある。また、超高齢化社会やストレス化社会への突入に従って、加齢や生活習慣に関わる疾患が増加することが予測される。特に、高血圧症は肥満や運動不足から増加する傾向にある。さらに高血圧症は、糖尿病や耐糖能障害、あるいは高脂血症・脂質代謝異常、肥満等の成人病を伴いやすいことが知られている。
【０００３】
従来、高血圧症に対する治療法としては、Ｃａ拮抗薬、β受容体作動薬、アンジオテンシン転換酵素阻害薬を用いる方法が効果的であり、広範に用いられている。しかし、これらの薬物の長期にわたる投与によって副作用が問題となることも多い。また、肥満の改善方法としては、運動療法、食事療法が主流となっているが、いずれも継続が困難である。このため、副作用を生じる可能性が低く、継続摂取が可能な自然食品や健康食品（機能性食品を含む）に対する関心が高まっている。
【０００４】
一方、食用キノコ類は、食文化の多様化や健康食品としての認識から旺盛な需要があり、生産量も増大している。よって、生産技術も各キノコ類に対応した形で発展してきた。現在では、特殊な生態を有する一部のキノコを除き、シイタケ、エノキタケ、ブナシメジ、マイタケ、ヒラタケ、ナメコ、エリンギ等、ほとんどのキノコの人工栽培が可能となっている。
食用キノコの栽培方法は、椎茸等の原木栽培と、エノキタケ、ヒラタケ等のように、おがくず、米糠、ふすま、水等を混合して培地とする容器菌床栽培とがある。
【０００５】
容器栽培では、培地の組成がその生育に大きな影響を与えることから、良質のキノコが増収できるよう、従来からいろいろな材料が培地として使用されている。
例えば、紅藻類の粉末を培地に添加する方法（特開平０６−１１３６７０）、及び卵殻の粉砕物を培地に添加する方法（特開平０６−２５３６７７）等がある。
【０００６】
【特許文献１】
特開平０６−１１３６７０号
【特許文献２】
特開平０６−２５３６７７号
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓにおいては、従来の栽培方法では、充分な収穫量を得ることができず、より収穫量の増大を図ることができる栽培方法が切望されている。
本発明は、上記従来技術の課題に鑑みなされたものであり、その目的は、優れた疾患予防改善効果を有するＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ株、及びそれを含む疾患予防改善剤、さらに、短期間で充分な量の子実体を収穫することのできるＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓの栽培方法を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
前記目的を達成するために、本発明者らが鋭意検討を行った結果、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ、特に寄託番号がＦＥＲＭＰ−１９３７０であるＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓが優れた疾患予防改善効果を有することを見出した。さらに電気インパルスを与えることにより、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓの子実体の発生が促進されることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明の第一の主題は、寄託番号がＦＥＲＭＰ−１９３７０であるＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ株である。
【０００９】
本発明の第二の主題は、下記の（ａ）〜（ｄ）工程を含むことを特徴とするＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓの栽培方法である。
（ａ）培地にＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓの種菌を接種する工程。
（ｂ）（ａ）工程後、温度２０〜３０℃の条件下で培養し、菌糸を培地内に蔓延させる工程。
（ｃ）（ｂ）工程後、５〜６０ｋＶの電気インパルスを与える工程。
（ｄ）（ｃ）工程後、温度１０〜２０℃の条件下で子実体を発生させる工程。
【００１０】
前記に栽培方法おいて、（ｄ）工程において、−１〜２℃の低温刺激を与えた後、１０〜２０℃に設定にすることが好適である。
前記栽培方法において、（ａ）工程において、寄託番号がＦＥＲＭＰ−１９３７０であるＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓの種菌を接種することが好適である。
【００１１】
本発明の第三の主題は、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓを主成分とする疾患予防改善剤である。
前記疾患予防改善剤において、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ乾燥粉末、及び/又はその熱水抽出物を含むことが好適である。
前記疾患予防改善剤において、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ株が、寄託番号がＦＥＲＭＰ−１９３７０であるＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ株であることが好適である。
前記疾患予防改善剤において、疾患が高血圧症、高脂血症、肥満から選択される１種又は２種以上であることが好適である。
【００１２】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の好適な実施形態を詳細に説明する。
初めに本発明にかかるＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓの栽培方法を説明する。
（１）培地の調整
本発明において培地となる原料は、本発明の効果を妨げない限り特に限定されることはなく、従来使用していたものを使用することができる。例えば、米糠、オガクズ等に水分を加えて調整したものが用いられる。また、菌糸活性剤等が混合されることもある。
培地を充填する容器は、本発明の効果を妨げない限り、特に限定されることはなく、適宜の容器に充填すればよい。通常は上方に開口を有する瓶形の容器（培養瓶）や袋状の容器（培養袋）が用いられる。
【００１３】
（２）培地の殺菌
用意した培地を、蒸気殺菌等の殺菌手段により殺菌する。殺菌条件は従来どおりで特に限定されないが、例えば１００℃で４時間程度とすることができる。
（３）種菌の接種
その後、２０℃程度まで冷却してから、培地を充填した容器のほぼ中央に適宜の穴を開け、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓの種菌を接種する。種菌の接種においては、本発明の効果を妨げない限り特に限定されず、通常通りの方法で行うことができる。穴の深さは特に限定するものではないが、菌周りの促進を考慮すると、容器の底部付近に達するまでの深さにすることが好ましい。
【００１４】
（４）培養
種菌の接種後、培養して菌糸を培地内に蔓延させる。培養時の室温は２０〜３０℃、湿度は７０〜１００％であることが好ましく、菌糸が十分蔓延するまで培養させることが好ましい。
培養条件は、上記の範囲であれば特に限定されないが、速やかに培養させるためには、室温を培養後期に一旦低下させ、再び上昇させることが好ましい。
【００１５】
具体的には、培養前期の室温は１８〜２２℃、培養後期に一旦低下させる温度は８〜１２℃、その後上昇させる温度は２３〜３２℃とすることが好ましい。
培養前期の期間は４０日程度が好ましく、培養後期の期間は２０日程度が好ましい。培養後期における室温上昇のタイミングは、８〜１２℃の室温を１０日程度維持した後、急激に２３〜３２℃に上昇させるのがよく、さらにその状態を１０日程度維持するのが良い。
【００１６】
（５）子実体の発生
菌糸が培地内に蔓延した後、電気インパルスを与えることにより、子実体の発生が早まり、収穫量も増大する。電気インパルスは、５〜６０ｋＶ、特に２０〜３０ｋＶ、さらに２０ｋＶであることが好適である。５ｋＶ未満であると、本発明の効果が十分に発揮されないことがあり、６０ｋＶを超えると、逆に子実体が発生しにくくなることがあるため、好ましくない。電気インパルスを与えるタイミングは、培養終了後、子実体発生段階に入る時と同時であることが好適である。
【００１７】
（６）子実体の発生
子実体を発生させるためには、培養時よりも室温を低下させ、室温は１０〜２０℃、湿度は８０〜１００％であることが好ましい。
子実体発生にふさわしい温度、湿度条件は上述のとおりであるが、より子実体の発生を早め、収穫量を増大させるためには、室温を低温に維持し、途中で上昇させることが好ましい。具体的には、−１〜２℃の状態を５日程度維持し菌糸に低温刺激を与えた後、３〜７℃に上昇させて５日程度維持し、その後さらに１５〜２０℃に上昇させて維持することが好ましい。この期間は菌糸の状態によって適宜に調整しても良い。
【００１８】
さらには、二段階目の温度上昇とほぼ同時に、二酸化炭素濃度及び／又は照明光度を上昇させることが、特に好ましい。
具体的には、二酸化炭素濃度は、４００ｐｐｍ前後から２０００ｐｐｍ前後に上昇させるのが好ましく、照明光度は、１００Ｌｕｘ前後から４００Ｌｕｘ前後に上昇させるのが好ましい。
【００１９】
なお、本発明にかかるＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ株は、平成１５年５月２２日付で、本出願人である江口文陽により、工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託されており、寄託番号はＦＥＲＭＰ−１９３７０である。識別のための表示をPleurotus nebrodensis No.17という。科学的性質等は以下の通りである。
１．科学的性質…菌の特徴：炭素源と窒素源を含む栄養培地下において、白色のコロニーを形成する。また、光学顕微鏡下において、クランプコネクション（かすがい連結）が観察される。
【００２０】
２．分類学上の位置…担子菌
３．培養条件
▲１▼培地名…ＳＭＹＡ培地（S：サッカロース、M：マルトエキストラクト、Ｙ：イーストエキストラクト、Ａ：寒天）
Ｓ，Ａ→市販品Ｍ，Ｙ→ディフコ社製（Ｄｉｆｃｏ）
▲２▼培地の組成…培地１０００ｍｌ当たり
1％サッカロース１０ｇ
１％マルトエキストラクト１０ｇ
０．４％イーストエキストラクト４ｇ
２％寒天２０ｇ
【００２１】
▲３▼培地のｐＨ…５．０〜７．０（最適ｐＨ５．５）
▲４▼培地の殺菌条件…１２１℃ ２０分
▲５▼培地温度…２８℃
▲６▼培養期間…１０日間
▲７▼酸素要求性…好気性
【００２２】
４．保管条件
凍結法にて保管できる。
▲１▼凍結条件…−８０℃
▲２▼保護剤…１０〜２０％グリセリン水溶液（最適は２０％）
▲３▼凍結後の復元率…１年で１００％、３年で９９％
【００２３】
５．生存試験の条件
▲１▼微生物の復元…４０℃
▲２▼接種・培養・確認法…培養条件と同一条件による。
【００２４】
本発明のＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ株を使用して疾患予防改善剤を製造することができる。本発明の疾患予防改善剤は経口投与して、疾患、特に高血圧症、高脂血症、肥満の予防・改善のために適用する。疾患予防改善剤として用いる際の摂取量としては、症状等により異なり特に限定されないが、成人１日当たりＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ乾燥粉末に換算して１〜１５ｇ、特に６〜９ｇを摂取すれば十分に効果が期待できる。
【００２５】
Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓは、乾燥粉末の抽出物として摂取することも可能である。抽出液としては、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ子実体乾燥粉末を熱水で抽出したものが好ましい。また、抽出物は、抽出液でもその乾燥物でもよい。
【００２６】
本発明の疾患予防改善剤は、通常内服薬として投与される。
内服薬の場合には、常法により散剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、茶剤、懸濁化剤、流エキス剤、液剤、シロップ剤等とすることができる。なお、製剤化の際には、通常の製剤化担体、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤、賦香剤等を必要に応じて用いることができる。また、必要に応じて適当なコーティング剤等で剤皮を施すこともできる。
【００２７】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
電気インパルスの影響
１．オガクズ１５０重量部、フスマ１００重量部、コーンミール１０重量部、及び菌糸活性剤１５重量部からなる培地を用意し、含水率を約６５％に調整した。ポリプロピレン製栽培瓶（口径５２ｍｍ、容量８５０ｍｌ）に、用意した培地を約６５０ｇずつ満たし、蓋をした。
２．１２１℃で４時間、蒸気殺菌器により殺菌し、培地の温度が２０℃以下になるまで冷却した。
３．培地中央に直径約２０ｍｍの接種孔を底部まで設け、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ（寄託番号：ＦＥＲＭＰ−１９３７０）の種菌１５ｇを接種した。
４．種菌を接種した瓶を、室温２５℃／相対湿度７０％に設定した培養室に６０日間置いた。これにより、菌糸が培地内に充分蔓延し、菌糸が完熟した。
５．菌培養した瓶に、所定の電圧の電気インパルスを与える。
６．室温１０℃／相対湿度９０％に設定された生育室に移し、隔日で子実体の発生を観察した。
【００２８】
培養瓶は、各電圧につき１００本用意した。各日数における子実体が発生した培養瓶の数、平均収量を表１に示す。なお、平均収量は、各電圧において子実体が発生した培養瓶１本当たりの子実体収量の平均を示す。また、日数は電気インパルスを与えた日（培養室から生育室に移した日）から起算した。
【００２９】
【表１】
試験例１２３４５６７
電圧 (kV) ０５ 10 15 20 25 30
14日目００００１３８
16日目００２４９ 14 24
18日目０３７８ 17 28 39
20日目０ 11 19 32 26 25 29
22日目０ 23 34 29 23 30 ０
24目目０ 25 19 25 24 ００
26 日目１ 14 ７２０００
合計１ 76 88 100 100 100 100
平均収量 (g) 73 94 107 135 172 164 159
【００３０】
表１より、電気インパルスを与えると、子実体の発生日が早まり、収量が増加することが確認された。子実体の発生日は、電圧が強いほど早まり、２０〜３０ｋＶでは１４日目から、１０〜１５ｋＶでは１６日目から、５ｋＶでは１８日目から子実体が発生し、１５ｋＶでは２６日目までに、２０ｋＶでは２４日目までに、２５ｋＶでは２２日目までに、３０ｋＶでは２０日目までにすべての培養瓶で子実体が発生した。
【００３１】
また収量は、２０ｋＶにおいて最も多く、２０〜３０ｋＶでは電気インパルスを与えない時の２倍以上の収量があった。さらに高い電圧を与えて試験したところ、６０ｋＶにおいても、子実体発生日が早まり、収量が増加する効果が確認された。
よって、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓを短期間で多量に収穫するためには、培養終了時に５〜６０ｋＶ、特に１５〜３０ｋＶの電気インパルスを与えることが好ましく、収量の点では２０ｋＶが最適であることが確認された。
【００３２】
さらに、温度条件を以下のようにしたところ、さらに短期間でより多くの子実体を収穫できた。よって、電気インパルスに加えて、低温刺激を与えることが好ましいことが確認された。
温度条件：室温−１℃／相対湿度９０％で５日間維持し、室温を５℃に上昇させ５日間維持し、その後、室温を１８℃に上昇させた。
【００３３】
１．高血圧予防改善剤
（１）試験ラットの飼育、及び被験薬の投与方法
▲１▼予備飼育（６〜７週齢）
日本チャールスリバー（株）より購入した６週齢の雄性自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）、及び正常血圧のウィスター京都ラット（ＷＫＹ）を、室温２２±１℃、湿度６０±１０％に調節された飼育室において、白色蛍光灯で１日１２時間（７〜１９時明期）の光調節を行い、飼料及び水道水を自由摂取させ１週間予備飼育した。
予備飼育後、各個体の体重及び血圧の測定を行い、１群８頭とし、血圧値の平均値がほぼ等しくなるようにＳＨＲラットをＡ〜Ｈ群に、ＷＫＹラットをＩ〜Ｊ群に分類した。
【００３４】
▲２▼Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ抽出物の調製方法
Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ（寄託番号：ＦＥＲＭＰ−１９３７０）子実体の乾燥物を粉砕し、１６メッシュのふるいにかけて粉末とした。また、この粉末３、６、９，１２ｇをそれぞれ６００ｍｌの熱水（８０℃）中で２時間抽出し、熱水抽出液を得た。以下、それぞれを３ｇ抽出物、６ｇ抽出物、９ｇ抽出物、１２ｇ抽出物という。
【００３５】
▲３▼被験薬投与方法（８〜１８週齢）
下記の要領で、各群のラットに被験薬投与を行い、８週齢からさらに１２週間、２０週齢まで飼育した。飼料と水道水を各群とも自由摂取させた。飼育室の環境は、温度２２±１℃、湿度６０±１０％、白色蛍光灯で１日１２時間の採光下（７〜１９時明期）とした。
各抽出物はすべて経口投与とし、毎日午前１０時より施行し、抽出物投与後は滅菌水を自由摂取させた。
【００３６】
Ａ群：ＳＨＲラット（無投与）
Ｂ群：ＳＨＲラット（３ｇ抽出物投与）・・・１日に体重１ｋｇ当たり前記３ｇ抽出物１０ｍｌを投与する。
Ｃ群：ＳＨＲラット（６ｇ抽出物投与）・・・１日に体重１ｋｇ当たり前記６ｇ抽出物１０ｍｌを投与する。
Ｄ群：ＳＨＲラット（９ｇ抽出物投与）・・・１日に体重１ｋｇ当たり前記９ｇ抽出物１０ｍｌを投与する。
Ｅ群：ＳＨＲラット（１２ｇ抽出物投与）・・・１日に体重１ｋｇ当たり前記１２ｇ抽出物１０ｍｌを投与する。
Ｆ群：ＳＨＲラット（乾燥粉末３％）・・・飼料に３％のＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ乾燥粉末を混合し、自由摂取させる。
Ｇ群：ＳＨＲラット（乾燥粉末６％）・・・飼料に６％のＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ乾燥粉末を混合し、自由摂取させる。
Ｈ群：ＳＨＲラット（乾燥粉末９％）・・・飼料に９％のＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ乾燥粉末を混合し、自由摂取させる。
Ｉ群：ＷＫＹラット（無投与）
Ｊ群：ＷＫＹラット（乾燥粉末６％）・・・飼料に６％のＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ乾燥粉末を混合し、自由摂取させる。
【００３７】
（２）結果
▲１▼血圧検査
血圧検査は２週間に１回、被験薬投与前に行い、各群ラットの平均値を求めた。
結果を表２に示す。
【表２】

【００３８】
自然発症高血圧ラットであるＳＨＲラット（Ａ〜Ｈ群）はＷＫＹラット（Ｉ〜Ｊ群）と比較して、血圧値が高かった。しかしながら、ＳＨＲラットにおいて、無投与群（Ａ群）と比較して、６，９，１２ｇ投与群（Ｃ〜Ｅ群）、６、９％群（Ｇ，Ｈ群）では１４週齢当たりから、血圧上昇の抑制が確認された。さらに驚くべきことに、６％群（Ｇ群）では１４週齢から、９、１２ｇ投与群（Ｄ，Ｅ群）及び９％群（Ｈ群）では１６週齢から、６ｇ投与群（Ｃ群）では１８週齢から、血圧の降下が確認された。
血圧上昇抑制及び血圧降下の作用は、用量が多い群ほど高い傾向にあった。１２ｇ投与群（Ｅ群）において血圧の降下作用が、９ｇ投与群（Ｄ群）よりも高くなかったのは、薬効用量に伴う生物曲線の発現と考えられる。また、元々正常血圧であるＷＫＹラットにおいては、血圧の降下（異常）は起こらなかった。
【００３９】
以上より、本発明のＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓには、用量依存的に高血圧症予防改善効果があることがわかった。また、正常血圧である場合には血圧降下作用を示さないことから、従来の高血圧治療薬のように単に血圧を下げるのではなく、血圧を正常値に近づける効果があり、より安全に服用できることがわかる。また、乾燥粉末でも、その抽出物でも効果があることがわかった。
【００４０】
▲２▼血液検査
実験最終日の前日に全ラットを絶食させ、翌日に深麻酔（ネンブタール,45mg/kg,i.p.）し、左心室から20Ｇ採血針で可能な限り採血を行った。
採取した血液を用いて、下記の項目において生化学的検査（自動化学分析装置：Auto Lab, Radio lmmuno Assay 法）を行い、平均値を求めた。
結果を表３に示す。
【００４１】
【表３】

【００４２】
ＳＨＲラット（Ａ〜Ｈ群）はＷＫＹラット（Ｉ〜Ｊ群）と比較して、ＬＤＬコレステロール、βリポタンパク、中性脂肪、アルブミン、尿素窒素、クレアチニン、尿酸、アンジオテンシンの値が高く、総コレステロール、ＨＤＬコレステロール、総タンパク、Ａ／Ｇ比、白血球数の値が低いことがわかった。しかしながら、ＳＨＲラットにおいて、無投与群（Ａ群）と比較して、投与群（Ｂ〜Ｈ群）では各項目において著明な改善が確認された。
【００４３】
アンジオテンシン
アンジオテンシンは、肝臓で産生されるレニン基質に、腎糸球体より分泌されるレニンが作用し生成される活性ペプチドである。高値を示す疾患としては、腎血管性高血圧症、悪性高血圧症等が挙げられる。よって、アンジオテンシン値は、高血圧症の指標に用いられる。
Ａ群と比較して、Ｂ〜Ｈ群ではアンジオテンシンが低下し、正常なＩ群の値に近づき、特にＢ〜Ｅ、Ｇ，Ｈ群ではほぼＩ群の値に等しくなった。このようにアンジオテンシン値においても、高血圧予防改善効果が確認された。
【００４４】
コレステロール
コレステロールは、生体細胞膜の構成成分等として必須の成分であり、善玉コレステロール（ＨＤＬ）と、悪玉コレステロール（ＬＤＬ）とに分けられる。ＬＤＬは動脈硬化を促進し、ＨＤＬは血管壁に付着したＬＤＬを取り除く働きをする。よって、これらのコレステロール値を測定することにより、脂質代謝異常をきたす疾患の推測ができる。
【００４５】
Ａ群と比較してＢ〜Ｈ群では、ＨＤＬの上昇、及びＬＤＬの低下が見られ、Ｉ群の値に近づき、特にＤ〜Ｅ、Ｇ，Ｈ群ではほぼＩ群の値に等しくなった。また総コレステロール値も正常なＩ群の値に近づいた。よって、高血圧予防改善効果に伴い、脂質代謝異常の予防改善効果を有することが確認された。
【００４６】
βリポタンパク、中性脂肪
βリポタンパクの主な機能は、コレステロールを肝臓から各臓器に移送することである。よってβリポタンパク値は脂質代謝異常疾患の指標とされる。
Ａ群と比較して、Ｂ〜Ｈ群では用量依存的にβリポタンパク値の低下が見られ、正常値に近づいた。
さらに、Ａ群と比較してＢ〜Ｈ群では、用量依存的に中性脂肪の低下も見られた。よって、βリポタンパク、中性脂肪値においても、脂質代謝異常の予防改善が確認された。
【００４７】
尿素窒素、クレアチニン、尿酸
尿素窒素、クレアチニン、尿酸の測定は、肝・腎機能の指標に用いられる。
Ａ群と比較して、Ｄ、Ｅ、Ｇ，Ｈ群では尿素窒素、クレアチニン、尿酸値が低下し、正常なＩ群の値に近づいた。よって、高血圧予防改善効果に伴い、肝・腎機能の改善効果も有することが確認された。
【００４８】
総タンパク、アルブミン、Ａ／Ｇ比、白血球数
さらに、Ａ群と比較してＢ〜Ｈ群では、用量依存的に総タンパク、Ａ／Ｇ比、白血球数の値の上昇、及びアルブミン値の低下が見られ、正常なＩ群の値に近づいた。
【００４９】
以上のことから、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓの投与により、高血圧予防改善作用に伴い、脂質代謝異常の改善効果、肝・腎機能の改善効果が発揮されることが確認された。また、正常ラットにおいては、投与によりこれらの値には目立った変化（異常）を示さないことから、安全性が高いことがわかる。
【００５０】
２．高脂血症予防改善剤・肥満予防改善剤
Zuckerラットの遺伝形式は常染色体性の単純劣性遺伝様式を取り、病因遺伝子（fa遺伝子）をホモに持つ個体（fa/fa）のみが肥満を呈し（Zucker-fattyラット：(ZUC)-fa/fa）、ヘテロ接合体（fa/+）及び野生型（+/+）は肥満を呈さない（Zucker-leanラット：(ZUC)-lean）。Zucker-fattyラットは、生後４週齢頃より体重増加及び外観によって肥満状態が認められ、１０週齢頃までに急速に肥満が進行し、その後も徐々に進行する。さらに高脂血症、高インシュリン血症、高レプチン血症及び耐糖性の異常を示すことが知られている。このZucker-fattyラット及び比較としてZucker-leanラットを使用し、高脂血症予防改善効果及び肥満予防改善効果について試験を行った。
【００５１】
（１）試験ラットの飼育、及び被験薬の投与方法
▲１▼予備飼育（５〜６週齢）
日本チャールスリバー（株）より購入した５週齢の雄性Zucker-fattyラット、及び雄性Zucker-leanラットを、室温２２±１℃、湿度６０±１０％に調節された飼育室において、白色蛍光灯で１日１２時間（７〜１９時明期）の光調節を行い、飼料及び水道水を自由摂取させ１週間予備飼育した。
予備飼育後、各個体の体重測定及び糖負荷試験を行い、１群５頭とし、体重の平均値がほぼ等しくなるようにZucker fattyラットをＫ〜Ｏ群に、Zucker-leanラットをＰ〜Ｑ群に分類した。
【００５２】
▲２▼Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ抽出物の調製方法
前述の通りとする。
▲３▼被験薬投与方法（６〜１６週齢）
下記の要領で、各群のラットに被験薬投与を行い、さらに１０週間、１６週齢まで飼育した。飼料と水道水を各群とも自由摂取させた。飼育室の環境は、温度２２±１℃、湿度６０±１０％、白色蛍光灯で１日１２時間の採光下（７〜１９時明期）とした。
各被験薬はすべて経口投与とし、毎日午前１０時より施行し、投与後は滅菌水を自由摂取させた。
【００５３】
Ｋ群：Zucker-fattyラット（無投与）
Ｌ群：Zucker-fattyラット（３ｇ抽出物投与）・・・１日に体重１ｋｇ当たり前記３ｇ抽出物１０ｍｌを投与する。
Ｍ群：Zucker-fattyラット（６ｇ抽出物投与）・・・１日に体重１ｋｇ当たり前記６ｇ抽出物１０ｍｌを投与する。
Ｎ群：Zucker-fattyラット（９ｇ抽出物投与）・・・１日に体重１ｋｇ当たり前記９ｇ抽出物１０ｍｌを投与する。
Ｏ群：Zucker-fattyラット（１２ｇ抽出物投与）・・・１日に体重１ｋｇ当たり前記１２ｇ抽出物１０ｍｌを投与する。
Ｐ群：Zucker-leanラット（無投与）
Ｑ群：Zucker-leanラット（９ｇ抽出物投与）・・・１日に体重１ｋｇ当たり前記９ｇ抽出物１０ｍｌを投与する。
【００５４】
（２）結果
▲１▼体重変動
体重測定は週１回、被験薬投与前に行い、各群ラットの平均値を求めた。結果を表４に示す。
【表４】

【００５５】
Zucker-fattyラット（Ｋ〜Ｏ群）は、Zucker-leanラット（Ｐ〜Ｑ群）と比較して、体重の増加が激しかった。しかしながら、Zucker-fattyラットにおいて、無投与群（Ｋ群）と比較して、投与群（Ｌ〜Ｏ群）では１０週齢当たりから体重増加の抑制が見られた。体重増加の抑制効果は、用量が多い群ほど高かった。
また、正常体重であるZucker-leanラットにおいても、正常な範囲内での体重増加の抑制が確認された。
以上より、本発明のＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓには、用量依存的に肥満を抑制する効果が見られ、正常な場合に対しても、適度な脂肪沈着抑制効果があることがわかった。
【００５６】
▲２▼血液検査
実験最終日の前日に全ラットを絶食させ、翌日に深麻酔（ネンブタール,45mg/kg,i.p.）し、左心室から20Ｇ採血針で可能な限り採血を行った。
採取した血液を用いて、下記の項目において生化学的検査（自動化学分析装置：Auto Lab, Radio lmmuno Assay 法）を行い、平均値を求めた。
結果を表５に示す。
【００５７】
【表５】

【００５８】
表５より、Zucker-fattyラット（Ｋ〜Ｏ群）はZucker-leanラット（Ｐ〜Ｑ群）と比較して、総コレステロール、遊離コレステロール、βリポタンパク、中性脂肪、リン脂質、総脂質、尿素窒素、ＡＳＴ（ＧＯＴ）、ＡＳＴ（ＧＰＴ）、インスリンの値が高く、ＨＤＬコレステロール、遊離脂肪酸、クレアチニン、尿酸の値が低いことがわかった。しかしながら、Zucker-fattyラットにおいて、無投与群（Ｋ群）と比較して、投与群（Ｌ〜Ｏ群）では各項目において、著明な予防改善効果が確認された。
【００５９】
中性脂肪、遊離脂肪酸、リン脂質、総脂質
Ｋ群と比較してＬ〜Ｏ群では、用量依存的に中性脂肪、リン脂質、総脂質が低下し、遊離脂肪酸が上昇する傾向が見られた。遊離脂肪酸は、大部分が脂肪組織に蓄積された中性脂肪が分解され血中に放出されたもので、心筋、骨格筋、腎等の主要臓器で燃焼され、末梢組織でエネルギー源として利用される。よってこの結果は、肥満の改善を示す。また、中性脂肪、総脂質の著しい低下に比べて、細胞膜の構成成分として重要であるリン脂質は低下が少なく、正常なＰ群の値以下になることはなかった。また上記の作用は、正常ラットにおいても、正常な範囲内で確認された。以上より、高脂血症、肥満の予防改善作用が確認された。
【００６０】
コレステロール
前述のようにコレステロール値は、脂質代謝異常の指標となる。
Ｋ群と比較してＬ〜Ｏ群では、善玉コレステロールであるＨＤＬが上昇するのに対し、総コレステロール、遊離コレステロールは用量依存的に低下する傾向があった。以上より、コレステロール値において、脂質代謝の改善効果が確認された。
【００６１】
βリポタンパク
前述のように、βリポタンパク値は脂質代謝異常疾患の指標とされる。
Ｋ群と比較してＬ〜Ｏ群では、用量依存的にβリポタンパク値が低下し、正常なＰ群の値に近づいた。よって、βリポタンパク値においても、脂質代謝の改善が確認された。
【００６２】
インスリン
インスリンは、膵臓のβ細胞から分泌されるホルモンで、筋肉・脂肪組織でのグルコースの取り込み促進、及び肝での糖放出抑制等を介して血糖を降下させる。またグリコーゲン蓄積、脂肪蓄積、ケトン体低下、蛋白合成等にも関与している。よってインスリンの測定は、糖代謝異常の指標となる。
Ｋ群と比較して、Ｌ〜Ｏ群では用量依存的にインスリン値の低下が見られ、正常なＰ群の値に近づいた。よって、肥満予防改善効果に伴い、糖代謝の改善も確認された。
【００６３】
尿素窒素、クレアチニン、尿酸、ＡＳＴ
尿素窒素、クレアチニン、尿酸、ＡＳＴは、肝・腎機能の指標に用いられる。Ｋ群と比較してＬ〜Ｏ群では、用量依存的に尿酸窒素、ＡＳＴ値が低下し、クレアチニン、尿酸値が上昇する傾向が見られ、Ｏ群においては、正常なＰ群とほぼ同じ値となった。よって、肥満予防改善効果に伴い、肝・腎機能の改善も確認された。
【００６４】
また、抽出液投与によって、元々正常であった総タンパク、アルブミン、Ａ／Ｇ比等には異常をきたすことはなかった。
以上のことから、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓの投与により、高脂血症予防改善効果、肥満予防改善効果、及びそれに伴う脂質代謝異常の改善効果、糖代謝の改善効果、肝・腎機能の改善効果が発揮されることが確認された。
【００６５】
３．ヒト臨床検査
次に本発明の疾患予防改善剤におけるヒト臨床検査について説明する。
被検試薬の調製（図１）
Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ（寄託番号：ＦＥＲＭＰ−１９３７０）乾燥粉末１００ｇと滅菌水１Ｌを三角フラスコに加え、９５℃の湯浴中で１時間抽出後、室温まで放冷した。減圧濾過により第一濾液と残渣とに分離する。残渣に滅菌水５００ｍＬを加え、９５℃の湯浴中で１時間抽出後、室温まで放冷し、減圧濾過により第二濾液と残渣とに分離する。第一濾液と第二濾液を混合し、６０℃にて減圧濃縮する。さらに、９５℃で１０分殺菌後、固形分５０％となるまで６０℃にて濃縮する。固形分に対して、５０％の賦形剤を添加し、加熱溶解、凍結乾燥にて粉末化する。６０メッシュのふるいにかけ、押出し造粒法にて顆粒化する。
【００６６】
３３歳、４２歳、５０歳の３人の男性に、前記方法にて調製した被検試薬を１日６ｇずつ毎日服用してもらい、服用前、服用１ヶ月目、服用３ヶ月目、服用６ヶ月目にそれぞれ血液検査を行った。結果を表６に示す。
【００６７】
【表６】

【００６８】
なお、正常値は、総コレステロール：１２０〜２２０ｍｇ/ｄｌ、ＨＤＬコレステロール：４１〜８４ｍｇ/ｄｌ、中性脂肪：３０〜１８０ｍｇ/ｄｌ、β−リポタンパク：１５０〜５００ｍｇ/ｄｌとされている。服用前はどの男性も、総コレステロール、中性脂肪、β−リポタンパクの値が正常値を超えており、１人を除いてＨＤＬが正常値以下であった。
しかしながら、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ乾燥粉末を服用することにより、これらの値に改善が見られ、服用６ヶ月目には３人ともすべての値が正常範囲内に改善された。よって、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓはヒトに対しても疾患予防改善作用を持つことが確認された。また服用によって、下痢、嘔吐、排尿異常等の副作用は一切起こらなかった。
【００６９】
【発明の効果】
本発明にかかるＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ、特に寄託番号がＦＥＲＭＰ−１９３７０であるＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓは、優れた疾患予防改善効果を有する。
また、本発明にかかるＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓの栽培方法によれば、培養終了直後に電気インパルスを与えることでより、短期間で充分な量の子実体を収穫することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明にかかる披検試薬の調製方法を示すフローチャートである。

Claims

寄託番号がＦＥＲＭＰ−１９３７０であるＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ株。
下記の（ａ）〜（ｄ）工程を含むことを特徴とするＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓの栽培方法。
（ａ）培地に寄託番号がＦＥＲＭＰ−１９３７０であるＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓの種菌を接種する工程。
（ｂ）（ａ）工程後、温度２０〜３０℃の条件下で培養し、菌糸を培地内に蔓延させる工程。
（ｃ）（ｂ）工程後、５〜６０ｋＶの電気インパルスを与える工程。
（ｄ）（ｃ）工程後、温度１０〜２０℃の条件下で子実体を発生させる工程。
請求項２に記載の栽培方法において、（ｄ）工程において、−１〜２℃の低温刺激を与えた後、１０〜２０℃に設定することを特徴とするＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓの栽培方法。
寄託番号がＦＥＲＭＰ−１９３７０であるＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓを主成分とする疾患予防改善剤。
請求項４に記載の疾患予防改善剤において、寄託番号がＦＥＲＭＰ−１９３７０であるＰｌｅｕｒｏｔｕｓｎｅｂｒｏｄｅｎｓｉｓ乾燥粉末、及び／又はその熱水抽出物を含むことを特徴とする疾患予防改善剤。
請求項４または５に記載の疾患予防改善剤において、疾患が高血圧症、高脂血症、肥満から選択される１種又は２種以上であることを特徴とする疾患予防改善剤。