JP2009263344A - 脂肪細胞分化促進剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】分化した脂肪細胞の働きにより、糖尿病のみならず、高脂血症の予防や治療に繋がる、ハラタケ科マッシュルームの水またはエタノール水溶液による抽出物である、細胞分化促進活性を有する脂肪細胞分化促進剤、及びそれを有効成分として含有する糖尿病及び高脂血症の予防や治療が可能な医薬品または食品。
【選択図】図1
Description
(抽出物1〜7の調製方法・条件)
市販のマッシュルーム(Agaricus bitorquis)200gを包丁にて細断後、600mlの溶媒を加えて攪拌し、有効成分の抽出を行った。なお、抽出条件(抽出温度、時間及び溶媒の種類)を下記表1に示す。なお、抽出に用いた水は、蒸留水であり、pH調整は行っていない。その後、不溶物をろ過し、得られた上澄み液をエバポレーターで部分濃縮後、凍結乾燥機にて処理を行い、粉末を得た。
市販のマッシュルーム(Agaricus bitorquis)200gを包丁にて細断後、pH1に調整した水を600ml加えて、攪拌し、有効成分の抽出を行った。なお、抽出条件(抽出温度、時間など)を下記表1に示す。抽出後、不溶物をろ過し、得られた上澄み液のpHを水酸化ナトリウム水溶液により7とした。該上澄み液をエバポレーターで部分濃縮後、凍結乾燥機にて処理を行い、粉末を得た。
市販のマッシュルーム(Agaricus bitorquis)200gを包丁にて細断後、水を600ml加えて、オートクレーブ処理による抽出を行った。なお、抽出条件(抽出温度、時間及び溶媒の種類)を下記表1に示す。オートクレーブ終了後、不溶物をろ過し、得られた上澄み液をエバポレーターで部分濃縮後、凍結乾燥機にて処理を行い、粉末を得た。
マッシュルーム抽出物のマウス前駆脂肪細胞(3T3−L1)の分化促進活性の評価
マウス前駆脂肪細胞(3T3−L1)は、通常培養の条件下においては、線維芽細胞様の形態を示す。しかし、インスリン刺激を与えることにより、3T3−L1細胞は、その細胞内に脂肪粒を形成し、脂肪細胞に分化する。よって、前駆脂肪細胞内への脂肪の取り込み量を指標として、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化促進活性を評価することができる。
<試験動物及び飼育条件>
試験には、薬効薬理試験に一般的に用いられている動物種で、その系統維持が明らかな雄性マウスであるKK−Ay Ta/Jcl(SPF、日本クレア株式会社)を使用した。動物は、5週齢を入手した。入手後1日の体重範囲は、23.3〜28.9gであった。入手した動物は、5日間の検疫期間、その後3日間の馴化期間を設け、この間に体重測定を3回、一般状態の観察を1日1回行って、これらに異常の認められなかった動物を試験に用いた。
群分けは、コンピュータを用いた無作為法により、群分け日の血中グルコース(Glu)及び群分け日の体重がほぼ等しくなるよう、投与開始日に行った。なお、群分け時には、Gluの低値または高値を示した動物を群分け対象から除外した。
投与は、上記の抽出物を混合した飼料を、マウス用粉末給餌器を用いて自由に摂取させた。投与期間は、投与開始日を投与1日とし、33日間とした。
試験群等の詳細について、下記表4にまとめて示す。
共通事項として、投与期間中は1日1回、一般状態の観察を行った。以下、各試験方法及びその結果について具体的に説明する。
上記の混餌(経口)投与後32日目に実施した。前日より給水下にて18時間以上絶食させた動物に対して眼窩静脈叢から約50μL採血し、グルコースCII−テストワコー(和光純薬工業株式会社)を使用し、分光光度計(U−3010、日立ハイテクフィールディング)にてGluを測定した。
投与33日に実施した。4%ペントバルビタール麻酔(1mL/kg,i.p.)後、注射針を取り付けたポリプロピレン製注射筒を用いてヘパリン存在下で、腹大動脈から採血(約0.8mL)した。そして、生化学自動分析装置(AU400、オリンパス株式会社)を用いて、遠心分離後の残渣についてHbA1cを測定した。
<ヒトのモニター試験用の抽出物の調製方法>
市販の生マッシュルーム70kgを測り採り、水洗したものに、等量の水道水70kgを加え、マスコロイダーにて破砕し、マッシュルーム破砕物を得た。得られたマッシュルーム破砕物に、水道水140kgを加えた。その後、生マッシュルームの質量に対して、1.05質量%となるようにクエン酸735g添加し、pHを4とした。その後、マッシュルーム破砕物の細胞壁を部分的に分解し、且つ殺菌工程として85℃で10分間加熱して、マッシュルーム破砕加熱物を得た。
下記の表7に試験項目及び試験内容を纏める。
空腹時血糖値は、ヘキソキナーゼUV法を用いて測定した。その際、機器としてJCA−BMシリーズ 自動分析装置 クリナライザ(JCA−BM9020、日本電子株式会社)を用い、試薬としてクイックオート ネオGLU−HK(シノテスト社)を用いた。
中性脂肪(TG)は、酵素法(GK−GPO・遊離グリセロール)を用いて測定した。その際、機器として日立7600を用い、試薬としてピュアオートS TG−N(積水メディカル株式会社)を用いた。
Claims (3)
- マッシュルームに由来する抽出物から得られ、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への細胞分化促進活性を有する、脂肪細胞分化促進剤。
- 前記抽出物は、水またはエタノール水溶液により抽出されたものである、請求項1に記載の脂肪細胞分化促進剤。
- 前記脂肪細胞分化促進剤を有効成分として含有する、医薬品または食品。
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