JP2010070531A - 天然抽出物より得られた脱顆粒抑制剤、β−ヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤、抗アレルギー用または抗炎症用の食品、医薬、動物飼料用組成物および化粧品原料用組成物 - Google Patents
天然抽出物より得られた脱顆粒抑制剤、β−ヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤、抗アレルギー用または抗炎症用の食品、医薬、動物飼料用組成物および化粧品原料用組成物 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】ガラナ(Paullinia cupana Kunth.)植物の果実または種子の極性溶媒抽出物を有効成分とする好塩基球細胞脱顆粒抑制剤、肥満細胞脱顆粒抑制剤およびβ−ヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤であり、抗アレルギー用または抗炎症用の食品、医薬品、動物飼料用組成物、化粧品原料用組成物としての用途を有する。
【選択図】なし
Description
本発明におけるガラナ抽出物は、ガラナ(Paullinia cupana Kunth.)植物の果実または種子を原料に用いて製造する。
原料として乾燥後粉砕したガラナ(Paullinia cupana Kunth.)の種子100 gを50 %エタノール(エタノール:水= 50:50(重量比))0.9 Lに加え、2時間還流を行い、室温冷却後、濾過し、濾液を一晩冷蔵放置した。ついで、濾液をさらに濾過し、得られた濾液を減圧濃縮し、さらに凍結乾燥してガラナ抽出物を得た。
ラット白血病細胞(RBL-2H3)を24ウェルプレートに9.6×104 個/ウェル(400μlウェル)播種し、37℃で24時間培養した。培養後、RBL-2H3細胞をTyrode buffer(+)(137 mM NaCl, 5.6 mM Glucose, 11.9 mM NaHCO3, 2.7 mM KCl, 41.7 mM NaH2PO4, 1 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2)で洗浄した。脱顆粒を促すカルシウムイオノフォアA23187(SIGMA社,終濃度10μM)を加えて37 ℃下30 分間反応した。各サンプル液は、A23187を加える前に添加した。なお、各サンプル液は、ガラナ抽出物を含む表1に示す各抽出物およびカフェインの所定量をそれぞれ30 % エタノールに加えて調製した。
24 ウェルプレートを3 分間、1500 rpmで遠心して各上清100μlを96ウェルプレートへいれた。1 mM p-nitrophenyl-N-acetyl β-D-glucosaminide(PNAG)を加えて混和後、CO2インキュベーターにて37 ℃、90 分間反応し、反応溶液に、100μl stop buffer(0.2M グリシン,pH 11.0)を加えた。マイクロプレートリーダーModel550(BIO-RAD社)にて吸光度を測定し、以下の式によって竈−ヘキソサミニダーゼ遊離率を求めた(測定波長405 nm、参照波長610 nm)。また被験物質のみの吸光度も併せて測定し、補正した。それぞれ3ウェルずつ測定を行い、平均値を求めた。
細胞内全β−ヘキソサミニダーゼの測定には、2 % Triton X-100を加えて溶解した細胞を遠心分離した上清を用いた。
ガラナ抽出物等のサンプル添加によるβ−ヘキソサミニダーゼ遊離阻害率は以下の式によって求めた。
さらに、細胞のβ−ヘキソサミニダーゼ遊離を50%抑制するのに必要なサンプル量(IC50)を求め、IC50にて活性の強さを評価した。
ラット白血病細胞(RBL-2H3)を24ウェルプレートに4.8×104 個/ウェル(400μl/ウェル)播種し、37 ℃で24時間培養した。培養後、終濃度が1 μg/mlになるように抗ジニトロフェニルIgE抗体(SIGMA社)を培養液に加えた。37 ℃下1 時間さらに培養し、RBL-2H3細胞をTyrode bufferで洗浄した。ガラナ抽出物を含有したサンプル液を加え、ついで終濃度が1 μg/mlになるようDNP-HSA(SIGMA社)を添加した。37 ℃下2 時間培養した。ついで、試験例1と同じ方法を用いて培養上清のβ−ヘキソサミニダーゼ遊離率とガラナ抽出物のIC50を測定した。
ラット白血病細胞(RBL-2H3)を24ウェルプレートに3.6×105 個/ウェル(500μlウェル)ずつ播種した。ガラナ抽出物を含有したサンプル液(終濃度200,100,50,0μg/ml)を添加し、CO2インキュベーターで24時間培養した。細胞を回収した後に、PBSに懸濁し、0.5 %トリパンブルー(和光純薬工業)と1:1の割合で懸濁した。それらの生細胞数を血球計算板でカウントした。
コントロールに対する各サンプル濃度での生細胞数の割合(%)は次式で計算した。結果を生存率として表2に示す。
さらに、ガラナ抽出物がRBL-2H3細胞の生育に与える影響を調べるため、試験例3と同じ方法でガラナ抽出物濃度が400μg/mlであるときの生細胞数を測定した。ただし、ガラナ抽出物添加後の細胞の培養時間を試験例1と同様に30分とした。
Claims (7)
- ガラナ(Paullinia cupana Kunth.)植物の果実または種子の極性溶媒抽出物を有効成分とする好塩基球細胞脱顆粒抑制剤。
- ガラナ(Paullinia cupana Kunth.)植物の果実または種子の極性溶媒抽出物を有効成分とする肥満細胞脱顆粒抑制剤。
- ガラナ(Paullinia cupana Kunth.)植物の果実または種子の極性溶媒抽出物を有効成分とするβ−ヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤。
- ガラナ(Paullinia cupana Kunth.)植物の果実または種子の極性溶媒抽出物を含有する、抗アレルギー作用または抗炎症作用を有する食品。
- ガラナ(Paullinia cupana Kunth.)植物の果実または種子の極性溶媒抽出物を有効成分とする、抗アレルギー作用または抗炎症作用を有する医薬品。
- ガラナ(Paullinia cupana Kunth.)植物の果実または種子の極性溶媒抽出物を含有する、抗アレルギー作用または抗炎症作用を有する動物飼料。
- ガラナ(Paullinia cupana Kunth.)植物の果実または種子の極性溶媒抽出物を含有する、抗アレルギー作用または抗炎症作用を有する化粧品。
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