JP2003252780A

JP2003252780A - アポトーシス誘導剤

Info

Publication number: JP2003252780A
Application number: JP2002100638A
Authority: JP
Inventors: Hiroshige Himawari; 博重樋廻; Makoto Tsuboi; 誠坪井; Tadashi Okada; 忠司岡田; Hiromichi Murai; 弘道村井
Original assignee: Oryza Oil and Fat Chemical Co Ltd
Current assignee: Oryza Oil and Fat Chemical Co Ltd
Priority date: 2002-02-26
Filing date: 2002-02-26
Publication date: 2003-09-10

Abstract

(57)【要約】【課題】ライチ由来の安全性の高い新規なアポトーシ
ス誘導剤、並びにこれを含有する飲食品および薬品を提
供する。【解決手段】本発明のアポトーシス誘導剤は、ライ
チ、特に種子の抽出物を有効成分とすることを特徴とす
る。前記抽出物の抽出溶媒はエタノール濃度２０〜８５
％（ｗ／ｗ）のエタノール／水であるとよい。本発明の
アポトーシス誘導剤はライチ由来の成分を含有すること
を特徴とする。本発明の飲食品は、前記アポトーシス誘
導剤を含有していることを特徴とする。本発明の薬品は
前記アポトーシス誘導剤を含有していることを特徴とす
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、細胞死の一つのタ
イプであるアポトーシスを誘導するアポトーシス誘導剤
に関する。本発明のアポトーシス誘導剤は、例えば、癌
の治療・予防を目的とする飲食品、医薬品、医薬部外品
等に適用される。

【０００２】

【従来の技術】癌は死亡原因第一位の病気であり、その
予防に対する人々の関心は非常に高い。癌を予防する為
に日常的に有効成分を取り入れる方法が数多く提案され
ている。

【０００３】近年、癌研究の分野ではアポトーシス、す
なわち癌細胞自滅に関する研究が盛んになりつつある。
アポトーシスは生物個体発生における組織、臓器の形
成、また生体の恒常性維持や防御に重要な働きをしてい
る。さらには多くの病気の発生に深い関係があることが
解明されつつある。

【０００４】細胞のアポトーシスによる制御作用の異常
は、癌形成における一つの原因であると考えられてい
る。本来死滅すべき細胞が、アポトーシス、つまり細胞
自滅を起こすことなく生き残ると、その細胞が様々な刺
激を受けて染色体上に変異を重ね、最終的に癌細胞にな
るとされている。癌細胞は、アポトーシスの耐性機構を
獲得して初めて増殖を可能にするのである。つまり、種
々の遺伝子変異を伴う細胞の癌化はアポトーシスに対す
る耐性獲得と関連がある。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】このような背景の下、
本発明者らは、ライチの抽出成分ついて実験を行い、生
化学的・医学的な見地から鋭意研究に努めた結果、ライ
チ抽出物、特にライチ種子の抽出物が癌細胞に対して顕
著なアポトーシス誘導作用を示すことを見出し、本発明
を完成するに至ったものである。本発明の目的は、ライ
チ由来の安全性の高い新規なアポトーシス誘導剤、並び
にこれを含有する飲食品および薬品を提供することにあ
る。

【０００６】

【課題を解決するための手段】前記課題を解決するため
の本発明のアポトーシス誘導剤は、下記の特徴を有する
構成とした。（１）ライチの抽出物を有効成分とすることを特徴とす
る。（２）前記ライチがライチ種子であることを特徴とす
る。（３）前記抽出物の抽出溶媒がアルコール濃度２０〜８
５％（ｗ／ｗ）のエタノール／水であることを特徴とす
る。

【０００７】本発明の飲食品は、前記アポトーシス誘導
剤を含有してなることを特徴とする。

【０００８】

【発明実施の形態】レイシは、ムクロジ科の常緑高木
で、高さ８〜１５ｍになる。樹は生長するにつれて開張
し、枝は下垂して円形の樹冠を呈する。花は、大きな円
錐花序で、果実は数百個の小果のうち５０〜１００個が
結実し、数個ずつ房状に着生する。果皮は革質で、成熟
すると紅色〜朱紅色となる。果肉は透明な乳白色で、甘
味と酸味が適度に混ざり合って、独特の風味と芳香があ
る。種子は１個、稀に２個ある。また、前記特徴（１）
の「ライチ」は、ライチ樹木を意味し、葉、枝、幹、根
および果皮、果肉、種子を含む。

【０００９】従来、ライチは、その果肉が食用として広
く知られている。果肉は、ビタミンＣ、ニコチン酸、リ
ボフラビン、葉酸、クエン酸、リンゴ酸を含み、さらに
多量の遊離したアギニンとトリプトファンを含むことな
どから、滋養強壮に優れた果実として、古来より広く珍
重されている。

【００１０】ライチ種子の成分についての生理活性研究
は、ほとんど行われていない。また、果肉商品の製造過
程で生じる種子は、一部が漢方薬や飼料として利用され
る他、産業廃棄物として処理されるのが現状である。本
発明によれば、ライチ種子の機能については、われわれ
が特願２００１−３０８０６３で示した機能の他、あま
り研究されていない。未利用の種子が新たな機能を見出
し、これを有効に利用することは、きわめて有意義なこ
とである。

【００１１】本発明で使用するライチ種子の抽出物は、
ライチ種子より既知の方法で得ることができる。例えば
ライチ種子を乾燥、粉砕し、水または有機溶媒で抽出
し、乾燥させる。

【００１２】ライチの抽出に使用する溶媒は特に限定さ
れず、例えば、抽出溶媒として水、メタノール、エタノ
ール等の１級アルコール、プロピレングリコール、１，
３−ブチレングリコール等の液状高価アルコール、酢酸
エチルエステルなどの低級アルキルエステル、ベンゼ
ン、ヘキサン等の炭化水素、エチルエーテル、アセト
ン、塩化メチレン、二酸化炭素等の公知の溶媒などが挙
げられる。またこれら溶媒は、一種または二種以上を組
合わせて使用することができる。そのうちで、好ましい
抽出溶媒としては、水と混和する溶媒の水溶液、例え
ば、エタノール、メタノール、アセトンなどの水溶液が
挙げられる。

【００１３】特に、含水エタノールを抽出溶媒とするの
が望ましい。含水エタノールによれば、効率よく有効成
分を抽出することができるためである。含水エタノール
は、エタノール濃度２０〜８５％（ｗ／ｗ）のエタノー
ル／水であるとよい。エタノール濃度２０〜８５％（ｗ
／ｗ）としたのは、２０％（ｗ／ｗ）未満であると、抽
出収量が減少し、また、８５％（ｗ／ｗ）を超えると、
有効成分の抽出量が不十分になるからである。

【００１４】前記ライチ種子の抽出物は、シアニジン、
シアニジン配糖体、マルビジン、マルビジン配糖体、ロ
イコシアニジン、プロシアニジンＡ２、ヘテラゲニン配
糖体、Ｌ−２−メチレンシクロプロピルグリシンなどが
含まれる。これらの化合物による作用で優れたアポトー
シス誘導作用が発現しているとも考えられる。

【００１５】本発明の「飲食品」には、飲料および固形
食品が含まれる。飲食品の形態としては、例えば、特定
の保健効果が認められる食品、あるいは生体調整成分の
機能を生かして作られる、機能性食品とすることができ
る。

【００１６】本発明のアポトーシス誘導剤を飲食品に適
用する場合、ライチの抽出物をそのまま製剤の形態にし
てもよいが、所要量のアポトーシス誘導剤を食品原料に
加えて一般の製造法により加工製造することができる。
例えばアポトーシス誘導剤を飲料に添加物として直接添
加するか、あるいはビスケットのような固形食品に添加
して癌予防の食品、健康食品あるいは機能性食品等とし
て提供することができる。

【００１７】また、本発明のアポトーシス誘導剤を、例
えば、油脂、エタノール、プロピレングリコール、グリ
セリンあるいはこれらの混合物に溶解して液状にし、飲
料に添加するか、固形食品に添加することが可能であ
る。さらに、必要に応じてアラビアガム、デキストリン
等のバインダーと混合して粉末状あるいは顆粒状にし、
飲料に添加するか固形食品に添加することも可能であ
る。本発明のアポトーシス誘導剤を添加する飲食品の
種類は特に限定されない。

【００１８】飲食品にライチ抽出物を添加する場合、ラ
イチ抽出物の使用量に特に制限はないが、健康食品、機
能性食品としての摂取は、病気予防、健康維持に用いら
れるので、含有する飲食品に対してライチ抽出物が合計
０．０５〜２０重量％であるのが好ましい。

【００１９】本発明の「薬品」は、医薬品および医薬部
外品を含む。ライチ抽出物のアポトーシス誘導能を利用
することにより癌治療薬とすることができる。

【００２０】本発明による薬品の投与方法は経口投与す
ることが望ましい。一般的には錠剤、丸剤、カプセル
剤、散剤、穎粒剤等の形態とすることができる。

【００２１】本発明による薬品を非経口剤として投与し
てもよい。非経口剤として投与する場合、溶液の状態、
または分散剤、懸濁剤、安定剤などを添加した状態で、
注射剤、坐剤などに調製することができる。

【００２２】有効成分の投与量は、年齢、体重、症状、
治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常
成人一人あたり、１回に１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲
で、１日１回から数回経口投与されるか、または、１回
に１００μｇ〜１００ｍｇの範囲で、１日１回から数回
非経口投与される。なお、投与量は種々の条件で変動す
るので、上記投与量より少ない量で十分な場合もある
し、また、範囲を超えて投与する必要のある場合もあ
る。

【００２３】本発明の有効成分である抽出物は、従来食
品中より見出した抽出物であり、安全性の面からも優れ
ているのは明らかである。

【００２４】［アポトーシス阻害剤の製造］原料には、
ライチ種子を、乾燥、粉砕して使用した。まず、ライチ
種子に、６０％（ｗ／ｗ）含水エタノールで還流し、エ
タノール抽出液を濃縮する。この濃縮液の固形分と同量
のデキストリンを加え、乾燥粉末とし、ライチ種子エキ
ス−Ｐ（実施例１）を得た。

【００２５】［試験例１：ヒト胃ガン細胞に対する増殖
抑制活性］実施例１について、ヒト胃ガン細胞に対する
増殖抑制活性を試験した。ヒト胃ガン細胞を１０％牛胎
児血清含有ＲＰＭＩ−１６４０培地で培養した。５×１
０^５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調整したヒト胃ガン細胞に、
所定濃度のサンプル（実施例１）をそれぞれ添加し、こ
れらを３７℃、９５％ａｉｒ−５％ＣＯ_２の条件下で３
日間培養し、細胞数を数え、細胞の増殖阻害率を求め
た。なお、対照として、蒸留水のみを添加したものにつ
いて同様な条件で試験を行った。結果を表１に示す。

【００２６】

【表１】

【００２７】表１に示すように、実施例１において、優
れた細胞増殖抑制効果が認められた。

【００２８】［試験例２：ヒト胃ガン細胞に対するアポ
トーシス誘導作用］実施例１について、ヒト胃ガン細胞
に対するアポトーシス誘導作用を確認するため、細胞が
形態変化する様子を観察した。ヒト胃ガン細胞を１０％
牛胎児血清含有ＲＰＭＩ−１６４０培地で培養した。５
×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調整したヒト胃ガン細胞に
サンプル２ｍｇ／ｍｌを添加した。これらを３７℃、９
５％ａｉｒ−５％ＣＯ_２の条件下で３日間培養し、遠
心分離により細胞を集めた。集めた細胞の核を染色し、
蛍光顕微鏡で形態を観察した。なお、対照として、溶媒
のみを添加したものについて同様な条件で細胞の形態を
観察した。

【００２９】図１（Ａ）に示すように、無添加の対照に
は細胞の形態変化が見られないのに対し、実施例１（ラ
イチ種子エキス−Ｐ）を添加したものは、アポトーシス
誘導の特徴であるアポトーシス小体が認められた（図１
（Ｂ）参照）。

【００３０】［試験例３：ＤＮＡ断片化の解析］細胞に
アポトーシスが誘導されるとＤＮＡの断片化が生じる。
試験例３では、実施例１を添加した細胞からＤＮＡを抽
出して電気泳動を行い、ＤＮＡの断片化を観察した。

【００３１】ヒト胃ガン細胞を１０％牛胎児血清含有Ｒ
ＰＭＩ１６４０培地で培養した。５×１０^５ｃｅｌｌｓ
／ｍｌに調整したヒト胃ガン細胞に所定濃度のサンプル
（実施例１）を添加した。これらを３７℃、９５％ａｉ
ｒ−５％ＣＯ_２の条件下で３日間培養し、遠心分離して
上清を除き細胞をＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆ
ｆｅｒｅｄｓａｌｉｎｅ）で洗浄した。細胞ペレット
にｌｙｓｉｓｂｕｆｆｅｒを加え、細胞を懸濁させ
た。ここにＲＮａｓｅを加え５０℃で２．５時間反応さ
せてからプロテアーゼＫ溶液を加え、５０℃で２．５時
間反応させた。ＤＮＡ断片を抽出し、ＤＮＡ抽出液とゲ
ルローディング液を混合して２％アガロースゲル板のウ
ェルに添加し、１００Ｖで電気泳動を行った。ゲルを水
に浸しＵＶトランスイルミネーターでエチジウムブロマ
イド蛍光を発したＤＮＡを検出した。なお、対照とし
て、溶媒（蒸留水）のみを添加したものについて同様な
条件でＤＮＡ断片化の様子を観察した。結果を図２に示
す。

【００３２】図２において、「Ｍ」はＤＮＡマーカー、
「（１）」は対照（無添加）、「（２）」は実施例１
（ライチ種子エキス−Ｐ）を１ｍｇ／ｍｌ添加したも
の、「（３）」は実施例１（ライチ種子エキス−Ｐ）を
２ｍｇ／ｍｌ添加したもの、「（４）」は実施例１（ラ
イチ種子エキス−Ｐ）を３ｍｇ／ｍｌ添加したものであ
る。実施例１（ライチ種子エキス−Ｐ）を２ｍｇ／ｍｌ
添加したものはＤＮＡの断片化が見られる。濃度が大き
くなるにしたがいＤＮＡの断片化の程度が大きくなるこ
とが判る。

【００３３】図３において、「Ｍ」はＤＮＡマーカー、
「（１）」は対照（無添加）、「（２）」、「（３）」
および「（４）」は実施例１（ライチ種子エキス−Ｐ）
を３ｍｇ／ｍｌ添加したものについて、培養１目目、２
日目および３日目のＤＮＡの断片化の様子を観察したも
のである。実施例１（ライチ種子エキス−Ｐ）を添加し
たものは培養日数の経過に伴い、ＤＮＡの断片化の程度
が大きくなることが判る。

【００３４】［製造例：飲食品への適用］例えば、次の
処方により癌予防に有効な飲食品を製造することができ
る。

【００３５】

【００３６】

【００３７】

【００３８】

【発明の効果】以上説明したように、本発明によれば、
次のように優れた効果を奏する。（ａ）ライチ由来の安全性の高いアポトーシス誘導剤を
得ることができる。（ｂ）副作用のない癌予防食品や癌治療薬を容易に製造
することができる。（ｃ）癌予防の有効成分を飲食品または薬品として日常
的に摂取しやすい。

【図面の簡単な説明】

【図１】ヒト胃ガン細胞の形態変化の様子を示す蛍光顕
微鏡写真である。

【図２】ヒト胃ガン細胞のＤＮＡ断片化の様子を示す電
気泳動写真である。

【図３】ヒト胃ガン細胞のＤＮＡ断片化の様子を示す電
気泳動写真である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者岡田忠司愛知県一宮市北方町北方字沼田一番地オリザ油化株式会杜内 (72)発明者村井弘道愛知県一宮市北方町北方字沼田一番地オリザ油化株式会社内Ｆターム(参考） 4B018 LB01 LB08 LE01 MD48 ME08 MF01 4C088 AB12 AC04 BA08 CA08 MA52 NA14 ZB21 ZB26

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ライチの抽出物を有効成分とするアポトー
シス誘導剤。
【請求項２】前記ライチがライチ種子である請求項１記
載のアポトーシス誘導剤。
【請求項３】前記ライチが脱脂ライチ種子である請求項
１記載のアポトーシス誘導剤。
【請求項４】前記抽出物の抽出溶媒がエタノール濃度２
０〜８５％（ｗ／ｗ）のエタノール／水である請求項１
〜３のいずれか一項記載のアポトーシス誘導剤。
【請求項５】請求項１〜４のいずれか一項記載のアポト
ーシス誘導剤を含有してなる飲食品。
【請求項６】請求項１〜４のいずれか一項記載のアポト
ーシス誘導剤を含有してなる薬品。