JP7108397B2 - Gip上昇抑制剤 - Google Patents
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Description
そのため、GIPの上昇抑制は、食後の消化促進、胃もたれの改善、エネルギー代謝亢進、肥満の予防又は改善、抗疲労等に有効であると考えられている。
しかしながら、ツクリタケの圧搾物や抽出物とGIP分泌やFABPs活性との関係については何ら報告されていない。
(1)ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするGIP上昇抑制剤。
(2)ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするFABP5阻害剤。
(3)ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするGIP上昇抑制用食品。
(4)ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするFABP5阻害用食品。
(5)ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするエネルギー代謝亢進剤。
(6)ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするエネルギー代謝亢進用食品。
(7)ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする肥満予防又は改善剤。
(8)ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする肥満予防又は改善用食品
(9)ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする抗疲労剤。
(10)ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする抗疲労用食品。
ABP5阻害作用を有し、かつ安全性も高い医薬品、食品等として有用である。
抽出のための溶媒には、極性溶媒、非極性溶媒のいずれをも使用することができる。溶媒の具体例としては、例えば、水;1価、2価又は多価のアルコール類;アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類;酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類;ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等の鎖状又は環状のエーテル類;ポリエチレングリコール等のポリエーテル類;ヘキサン等の飽和又は不飽和の炭化水素類;ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類;ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類;ピリジン類;ジメチルスルホキシド;アセトニトリル;二酸化炭素、超臨界二酸化炭素;油脂、ワックス、その他のオイル類;ならびにこれらの混合物が挙げられる。好適には、水、アルコール類及びその水溶液が挙げられ、アルコール類としてはメタノール、エタノール、1,3-ブチレングリコール、n-プロパノール、イソプロパノール、n-ブタノール、イソブタノール、sec-ブタノール、t-ブタノール等が挙げられ、好ましくはエタノールである。
抽出手段は、特に限定されないが、例えば、固液抽出、液液抽出、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、ソックスレー抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、攪拌等の通常の手段を用いることができる。
また、さらに公知の分離精製方法を適宜組み合わせてこれらの純度を高めてもよい。精製手段としては、有機溶剤沈殿、遠心分離、限界濾過膜、高速液体クロマトグラフやカラムクロマトグラフ等が挙げられる。
したがって、ツクリタケの圧搾物又は抽出物は、GIP上昇抑制剤、FABP5阻害剤、エネルギー代謝亢進剤、肥満予防又は改善剤、さらには抗疲労剤(以下、GIP上昇抑制剤等とも称する)となり得、またこれらを製造するために使用できる。
また、ツクリタケの圧搾物又は抽出物は、GIP上昇抑制のため、FABP5を阻害するため、エネルギー代謝を亢進するため、肥満を予防又は改善するため、さらには抗疲労のために使用することができる。ここで、当該使用は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する検体における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。尚、「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。
FABP5阻害活性は、例えば、疎水性環境下でFABP5との結合活性を有し、FABP5と結合することで蛍光を発する基質である1-anilinonaphthalene-8-sulfonic acid(1,8-ANS)を利用した方法により測定することが可能である(特許文献1参照)。
なお、当該食品には、肥満の予防又は改善、食後の消化促進、胃もたれ、胃酸分泌能の改善、エネルギー代謝亢進、さらには抗疲労をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した食品、機能性表示食品、特定保健用食品、病者用食品、サプリメントが包含される。
このような種々の剤型の医薬製剤を調製するには、本発明のツクリタケの圧搾物又は抽出物を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
種々の形態の食品を調製するには、本発明のツクリタケの圧搾物又は抽出物を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
<1>ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするGIP上昇抑制剤。
<2>ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするFABP5阻害剤。
<3>ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするGIP上昇抑制用食品。
<4>ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするFABP5阻害用食品。
<5>ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするエネルギー代謝亢進剤。
<6>ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするエネルギー代謝亢進用食品。
<7>ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする肥満予防又は改善剤。
<8>ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする肥満予防又は改善用食品。
<9>ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする抗疲労剤。
<10>ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする抗疲労用食品。
<12><1>~<10>において、抽出物はエタノール又はエタノール水溶液抽出物である。
<13><1>~<10>において、抽出物は30~99.5容量%エタノール水溶液抽出物である。
製造例1 ツクリタケ圧搾物の調製
ツクリタケ(Agaricus bisporus)の子実体11.3kg、室温条件下で、スロージューサー(商品名:HuromスロージューサーHU-400)にて圧搾抽出を行った。得られた圧搾物を凍結乾燥して、圧搾物粉末308.2gを得た。
ツクリタケ圧搾物100gに水1Lを加え、100℃下、1時間撹拌し、熱水抽出した。得られた抽出液を遠心分離(3000rpm、25℃、5分、himac CF 7D2(Hitachi))し、上清を回収、凍結乾燥した。得られた乾燥粉末74.7gのうち30.0gを、水300mLに懸濁させた。懸濁液に、98%エタノール900mLを加え、室温条件下、12時間静置し、抽出した。得られた抽出液を遠心分離(3000rpm、25℃、5分、himac CF 7D2(Hitachi))し、上清を回収した。上清中のエタノールは、減圧留去した。残った水分を凍結乾燥し、エタノール抽出物26.1gを得た。
(1)方法
製造例1で得たツクリタケ圧搾物を用いて、下記表1に示す組成の乳剤を調製し、試験サンプルとした。
血中GIP濃度の経時変化を図1Aに示す。60分までの相対GIP血中濃度-時間曲線下面積(AUC:area under the curve)を図1Bに示す。
各値は平均±標準偏差で示した。群間の統計学的有意差については、コントロール群に対するStudent’s t-testを行なった(*:p<0.05)。
(1)方法
一晩絶食したマウス(C57BL/6J、雄、8週齢、n=6-10)に粉末飼料(表2)を各群でカロリーが等しくなるように量り取り、30分間の自由摂餌の間に高脂肪食(HF)群は200mg、ツクリタケ群は252.6mgを摂取させた。なお、ツクリタケ圧搾物は製造例1のものを用い、カロリーは0と換算した。試験粉末飼料摂餌前、摂餌後30、60、120及び240分において、実施例1と同様に眼窩静脈叢採血し、血中GIPを測定した。
HF群と比較してツクリタケ群において、摂餌後30分の血中GIP濃度が有意に低値であった(図2A)。粉末飼料摂取後240分までのGIP濃度の曲線下面積はHF群と比較して、ツクリタケ群において有意に低値であった(図2B)。
各値は平均±標準偏差で示した。群間の統計学的有意差については、HF群に対するStudent’s t-testを行なった(*:p<0.05)。
(1)方法
一晩絶食したマウス(C57BL/6J、雄、11週齢、n=6-8)に粉末飼料(表3)を各群でカロリーが等しくなるように量り取り、30分間の自由摂餌の間にHF群は200mg、25%ツクリタケ添加群は250mg、10%ツクリタケ添加群は220mg、5%ツクリタケ添加群は210mgを摂取させた。なお、ツクリタケ圧搾物は製造例1のものを用い、カロリーは0と換算した。試験粉末飼料摂餌前、摂餌後30、60及び120分において、実施例1と同様に眼窩静脈叢採血し、血中GIPを測定した。
摂餌後30分における血中GIP濃度がHF群と比較して5%ツクリタケ添加群及び10%ツクリタケ添加群において低い傾向が認められ、25%ツクリタケ添加群では有意に低値であり、用量依存性が認められた(図3A)。摂餌後、120分までのGIP濃度の曲線下面積はHF群と比較して、ツクリタケ添加群において有意に低値であった(図3B)。
各値は平均±標準偏差で示した。群間の統計学的有意差については、対照群に対するStudent’s t-testを行なった(*:p<0.05)。
組換蛋白質発現用大腸菌株BL21にFlagタグ付きのヒトFABP5遺伝子を挿入したpGEX-6P2ベクターをトランスフォームし、シングルコロニーを得た。コロニーを100μg/mLのアンピシリンを含有するLB液体培地にピックアップし37℃で5時間振盪培養した。その後終濃度が1mMとなるようにIPTGを添加し、37℃で3時間振盪培養し、菌体を回収した。得られた菌体はB-PER bacterial protein extraction regentにより可溶化、可溶性画分を回収した。組換蛋白質を含む大腸菌可溶性画分は、GSTrap HP及びPreScission proteaseを用い、GSTタグの切断及び組換蛋白質の精製を行った。96穴プレートに、精製したFABP5蛋白質(20μg)を含む溶媒(50mM Tris-HCl、150mM NaCl、1mM EDTA、1mM DTT、pH7.5)に製造例1で調製したツクリタケ圧搾物(凍結乾燥物)を終濃度0.01%となるように添加した。その後、1-anilinonaphthalene-8-sulfonic acid(1,8-ANS)を終濃度5μMとなるように添加し、室温にて15分間静置した後、プレートリーダーにて蛍光強度(励起波長:355nm、蛍光波長:480nm)を測定した。
FABP5と1,8-ANSが共存した際に観察される蛍光強度を100とし、サンプルを添加した際の蛍光消失について評価した。結果を表4に示す。
ツクリタケ抽出物のGIP上昇抑制作用(単回食餌試験)
(1)方法
一晩絶食したマウス(C57BL/6J、雄、13週齢、n=10)に粉末飼料(表5)を各群でカロリーが等しくなるように量り取り、30分間の自由摂餌の間に高脂肪食(HF)群は200mg、ツクリタケ抽出物群は232.5mgを摂取させた。なお、ツクリタケ抽出物は製造例2のものを用い、カロリーは0と換算した。試験粉末飼料摂餌前、摂餌後30において、実施例1と同様に眼窩静脈叢採血し、血中GIPを測定した。
HF群と比較してツクリタケ抽出物群において、摂餌後30分の血中GIP濃度が有意に低値であった(図4)。
各値は平均±標準偏差で示した。群間の統計学的有意差については、HF群に対するStudent’s t-testを行なった(*:p<0.05)。
Claims (9)
- ツクリタケの75~98容量%エタノール水溶液抽出物を有効成分とするGIP上昇抑制剤。
- ツクリタケの75~98容量%エタノール水溶液抽出物を有効成分とするGIP上昇抑制用食品。
- ツクリタケの75~98容量%エタノール水溶液抽出物を有効成分とするエネルギー代謝亢進剤。
- ツクリタケの75~98容量%エタノール水溶液抽出物を有効成分とするエネルギー代謝亢進用食品。
- ツクリタケの75~98容量%エタノール水溶液抽出物を有効成分とする肥満予防又は改善剤。
- ツクリタケの75~98容量%エタノール水溶液抽出物を有効成分とする肥満予防又は改善用食品。
- ツクリタケの75~98容量%エタノール水溶液抽出物を有効成分とする抗疲労剤であって、疲労がエネルギー代謝の低下に伴う疲労である、抗疲労剤。
- ツクリタケの75~98容量%エタノール水溶液抽出物を有効成分とする抗疲労用食品であって、疲労がエネルギー代謝の低下に伴う疲労である、抗疲労用食品。
- GIP上昇抑制が、油脂や脂肪酸の摂取に起因するGIP上昇の抑制である、請求項1記載の剤又は請求項2記載の食品。
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宮川潤一郎 ほか,消化管由来ホルモン、GIP、GLP-1とインスリン抵抗性,Adiposcience,2007年,Vol. 4, No. 1,pp. 17-24, ISSN 1349-1318 |
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