JP5063040B2 - 血管新生阻害剤 - Google Patents
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M.S.オレイリー(O'Reilly), L.ホルムグレン(Holmgren), C.チェン(Chen) and J.ホークマン(Folkman),「アンギオスタチンはマウスにおける原発腫瘍の休眠を誘導・維持させる(Angiostatininduces and sustains dormancy of human primary tumors in mice).」, ネイチャー メディスン(Nature Med.), (1996), 2:689-692 B.K.シム(Sim), M.S.オレイリー(O'Reilly), H.リアン(Liang), A.H.フォティア(Fortier), W.ヒ(He), J.W.マドセン(Madsen), R.ラプセビッヒ(Lapcevich) and C.A.ネイシー(Nacy),「組み換え型ヒトアンギオスタチンは実験的原発癌及び転移癌を抑制する(A recombinant human angiostatin protein inhibits experimental primary and metastatic cancer).」, キャンサー リサーチ(Cancer Res.), (1997), 57:1329-1334 M.S.オレイリー(O'Reilly), T.ボエム(Boehm), Y.シン(Shing), N.フカイ(Fukai), G.バシオス(Vasios), W.S.レーン(Lane), E.フリン(Flynn), J.R.バークヘッド(Birkhead), B.R.オルセン(Olsen) and J.ホークマン(Folkman), 「エンドスタチン:外因性の血管新生及び腫瘍増殖阻害剤(Endostatin: an endogenous inhibitor of angiogenesis and tumor growth).」, セル(Cell), (1997), 88:277-285 D.イングバー(Ingber), T.フジタ(Fujita), S.キシモト(Kishimoto), K.スドウ(Sudo), T.カナマル(Kanamaru), H.ブレム(Brem) and J.ホークマン(Folkman), 「血管新生と腫瘍増殖を阻害するフマギリンの合成アナログ(Synthetic analogues of fumagillin that inhibit angiogenesis and suppress tumour growth).」 ネイチャー(Nature), (1990), 348:555-557 T.オイカワ(Oikawa), M.ササキ(Sasaki), M.イノセ(Inose), M.シマムラ(Shimamura), H.クボキ(Kuboki), S.ヒラノ(Hirano), H.クマガイ(Kumagai), M.イシズカ(Ishizuka) and T.タケウチ(Takeuchi), 「新規の微生物由来産物であるサイトゲニンの、イン・ビボにおける胚性及び腫瘍誘導血管新生に対する影響(Effects of cytogenin, a novel microbial product, on embryonic and tumor cell-induced angiogenic responses in vivo).」, アンチキャンサー リサーチ(Anticancer Res.), (1997), 17:1881-1886 G.タラボレッティ(Taraboletti), A.ガロファロ(Garofalo), D.ベロッティ(Belotti), T.ドルディス(Drudis), P.ボルソッティ(Borsotti), E.スカンジアニ(Scanziani), P.D.ブラウン(Brown) and R.ギアバッジ(Giavazzi), 「マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤であるバチマスタットによる血管新生及びマウス血管腫の阻害(Inhibition of Angiogenesis and Murine Hemangioma Growth by Batimastat, a Synthetic Inhibitor of Matrix Metalloproteinases).」, ジャーナル オブ ザ ナショナル キャンサー インスティテュート(J. Natl. Cancer Inst.), (1995), 87:293-298 「マリマスタット:BB2516, TA2516(Marimastat: BB 2516, TA 2516).」, ドラッグス イン アール アンド ディー(Drugs R.D.), (2003), 4(3):198-203. S.イクバル(Iqbal) and H.J.レンズ(Lenz), 「直腸結腸癌の治療における新規物質の調和的利用(Integration of novel agents in the treatment of colorectal cancer).」, キャンサー ケモセラピー アンド ファーマコロジー(Cancer Chemother. Pharmacol.( (2004), 54 Suppl. 1:S32-39 八木田旭邦、「新免疫療法(仮称)(Novel Immunotherapy for Cancer; NITC)における血管新生阻害剤の役割」, バイオセラピー(Biotherapy), (2000), 14(10):973-982 Y.キャオ(Cao) and R.キャオ(Cao), 「お茶によって阻害される血管新生(Angiogenesis inhibited by drinking tea).」, ネイチャー(Nature), (1999), 398:381 T.フォトシス(Fotsis), M.ペッパー(Pepper), H.アドレークルーズ(Adlercreutz), G.フレイシュマン(Fleischmann), T.ヘイス(Hase), R.モンテサノ(Montesano) and L.シュウェイゲラー(Schweigerer), 「イン・ビトロで血管新生を阻害する食品由来成分ゲニステインについて(Genistein, a Dietary-Derived Inhibitor of in vitro Angiogenesis).」, プロシーディングス オブ ナショナル アカデミー オブ サイエンス ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ(Proc. Natl. Acad. Sci. USA), (1993), 90:2690-2694 三浦健人、袁嵐、孫歩祥ら、「製品図解 天然抗腫瘍物質GCPの開発」, ニュー フード インダストリー(New Food Industry), (2001), 43(3):17-22
ハナビラタケ子実体を以下のようにして製造した。カラマツの大鋸屑、小麦粉、栄養分(バナナ、蜂蜜、エビオス、ペプトン、塩化カルシウム、ハイポネックス)及び水を、大鋸屑:小麦粉:栄養分:水=100:11.5:1.9:51の重量比で含む菌床基材を準備した。この菌床基材(520g)を、850ml容のポリプロピレン製の培養瓶に入れ、常法に従って培養瓶を滅菌した後に、ハナビラタケの種菌(16g)を接種した。その後、この培養瓶を、23℃の温度下で、56日間放置することによりハナビラタケ子実体を収穫した。子実体の重量は培養瓶1本当たり140gであった。
ハナビラタケ菌糸体を以下のようにして製造した。イーストエキス0.4質量%、グルコース2質量%、リン酸2水素カリウム0.1質量%、リン酸水素2ナトリウム0.1質量%となるように水に溶解し、1Nの塩化水素でpH5.0に調製し、500ml容三角フラスコにそれぞれ200ml入れ、常法に従って滅菌した。この液体培地にハナビラタケの種菌を生育させた平板培地から径6mmの寒天片を打ち抜き、その一片を接種し、24℃の暗黒下で、21日間振とう培養(100rpm)することによりハナビラタケ菌糸体を収穫した。菌糸体の乾燥重量は三角フラスコ1本当たり2gであった。
ハナビラタケ子実体から血管新生阻害成分を以下のようにして調製した。ハナビラタケ子実体乾燥粉末30gを純水1000mlに懸濁し、100℃で2時間抽出した。この抽出液を遠心分離することによって上清と残渣に分離し、残渣について同じ操作をもう一度繰り返した。得られた上清については凍結乾燥を行い、熱水抽出物(FH)(10.9g)を得た。さらに、この熱水抽出物を純水に再溶解し、分画分子量が8000の透析膜を用いて4℃下で透析を行った。透析外液を回収し、凍結乾燥することによって低分子画分(FHL)(4.2g)を得た。
前記の特開2004−196791号公報に準じ、シイタケ菌糸体抽出物を調製した。すなわち、バガスと脱脂米糠を基材とする固体培地上にシイタケ菌を接種し、次いで菌糸体を増殖して得られる菌糸体を含む固体培地を12メッシュ通過分が30重量%以下となるよう解束した。この解束された固体培地に水、セルラーゼ及びプロテアーゼを、前記固体培地を30〜55℃の温度に保ちながら添加するとともに粉砕し、バガス繊維の少なくとも70重量%以上が12メッシュ通過分であるようにした。次いで95℃までの温度に加熱することにより酵素を失活させるとともに滅菌し、得られた懸濁液を濾過及び凍結乾燥することによってシイタケ菌糸体抽出物を得た。
製造例3に従って調製したFH及びFHLの分子量分布をGPC法(前記)によって確認したところ、FHの分子量はメインピークが約5万の幅広い分布を取り、FHLはメインピークを5000前後とした分子量8000以下の成分を含むことが示された。チャートを図1に示した。
製造例3で得られた抽出物のin vitroにおける血管新生阻害作用を検討するため、ヒト血管内皮細胞とヒト線維芽細胞を24ウェルプレートで共培養してある血管新生キット(クラボウ製)を用いた。
製造例1及び製造例3で得られたハナビラタケ子実体の乾燥粉末及びFHLのin vivoにおける血管新生阻害作用を検討するため、マウスを用いて検討を行った。なお、比較として、血管新生阻害効果が既知であるシイタケ菌糸体抽出物(比較例1)と活性を比較した。
製造例1及び製造例2で得られたハナビラタケ子実体と菌糸体につき、マウスを用いた肝転移モデルにより、転移抑制作用を検討した。
Claims (2)
- ハナビラタケの子実体及び/又は菌糸体から熱水を用いて抽出される画分を有効成分として含有することを特徴とする血管新生阻害剤。
- ハナビラタケの子実体及び/又は菌糸体から熱水を用いて抽出される画分が、分子量8000以下の画分である請求項1記載の血管新生阻害剤。
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